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ES2268706T3 - Dispositivos y procedimientos para separar componentes celulares de la sangre de la porcion liquida de la sangre. - Google Patents

Dispositivos y procedimientos para separar componentes celulares de la sangre de la porcion liquida de la sangre. Download PDF

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ES2268706T3
ES2268706T3 ES96915543T ES96915543T ES2268706T3 ES 2268706 T3 ES2268706 T3 ES 2268706T3 ES 96915543 T ES96915543 T ES 96915543T ES 96915543 T ES96915543 T ES 96915543T ES 2268706 T3 ES2268706 T3 ES 2268706T3
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ES96915543T
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Wayne H. Schrier
Corey L. Jaseph
Ronald J. Schoengold
Franco Ruggeri
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Beckman Coulter Inc
Original Assignee
Beckman Coulter Inc
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Publication date
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Abstract

UN DISPOSITIVO PARA LA SEPARACION DE LA PORCION LIQUIDA DE SANGRE DE LOS COMPONENTES CELULARES DE LA SANGRE QUE COMPRENDE: UNA ALMOHADILLA DE UN MATERIAL POROSO (12) PERMEABLE A LA PORCION LIQUIDA DE SANGRE PERO CAPAZ DE ATRAPAR LOS COMPONENTES CELULARES DE LA SANGRE; UN SUSTRATO QUE SOPORTA LA ALMOHADILLA (16); Y UN ELEMENTO (14) ACOPLADO A LA ALMOHADILLA, PARA FACILITAR EL FLUJO DE LA PORCION LIQUIDA DE SANGRE: (I) A TRAVES DE UNOS INTERSTICIOS DISPUESTOS ALREDEDOR DE LOS COMPONENTES ATRAPADOS DE LA SANGRE Y (II) DESDE LA ALMOHADILLA DE MATERIAL POROSO. LA SEPARACION DE LA PORCION LIQUIDA DE SANGRE DE LOS COMPONENTES CELULARES DE LA SANGRE SE PRODUCE MEDIANTE EL FLUJO A TRAVES DE LA ALMOHADILLA DE MATERIAL POROSO SIN UNA HEMOLISIS SIGNIFICATIVA. EL DISPOSITIVO SE PUEDE INCORPORAR EN UN DISPOSITIVO PARA LA REALIZACION DE ENSAYOS DE AGLUTINACION ESPECIFICOS TALES COMO INMUNOENSAYOS. LA ALMOHADILLA DE MATERIAL POROSO PUEDE CONTENER UN AGENTE AGLUTINANTE TAL COMO LECTINA O UN ANTICUERPO CELULAR ANTISANGUINEO, O UN CARBOHIDRATO TAL COMO MANITOL. TAMBIEN SE PRESENTAN OTROS DISPOSITIVOS Y METODOS PARA LA SEPARACION DE LA PORCION LIQUIDA DE SANGRE DE LOS COMPONENTES CELULARES DE LA SANGRE.

Description

Dispositivos y procedimientos para separar componentes celulares de la sangre de la porción líquida de la sangre.
Antecedentes de la invención
La presente invención se dirige a procedimientos y dispositivos para separar elementos celulares de la sangre de la porción líquida de la sangre, particularmente en conexión con la determinación de las características de muestras de sangre.
Entre los numerosos sistemas analíticos usados para detección y/o determinación de analitos, particularmente parámetros analíticos de interés biológico, están los sistemas cromatográficos de ensayo.
Dichos sistemas cromatográficos son usados frecuentemente por los médicos y los técnicos médicos para diagnóstico rápido en consulta y monitorización terapéutica de una variedad de dolencias y trastornos. Se usan también crecientemente por los propios pacientes para monitorización en su domicilio de dichas dolencias y trastornos.
Entre los más importantes de dichos sistemas están el sistema de "capa fina" en el que un disolvente se desplaza a través de un medio absorbente liso y fino. Entre las pruebas más importantes que pueden realizarse con dichos sistemas de capa fina están los inmunoensayos, que dependen de la interacción específica entre un antígeno o hapteno y el anticuerpo correspondiente para formar complejos antígeno-anticuerpo. El antígeno que ha de detectarse puede ser en sí un anticuerpo, tal como en ensayos serológicos de anticuerpos específicos de H. pylori. En dichos casos, el anticuerpo que ha de detectarse puede estar ligado a un antígeno específico. Alternativamente, el antígeno que ha de detectarse puede detectarse indirectamente usando un segundo anticuerpo marcado que se une al primer anticuerpo al par que ha de detectarse. Estos inmunoensayos como medio de probar la presencia y/o cantidad de moléculas clínicamente importantes se conocen desde hace algún tiempo. Ya en 1956, J.M. Singer comunicó el uso de una prueba de aglutinación de látex de base inmune para detectar un factor asociado con artritis reumatoide (Singer y col. Am. J. Med. 22:888-892 (1956)). Los inmunoensayos se han usado con procedimientos y dispositivos cromatográficos; esta combinación se conoce como inmunocromatografía.
Los ensayos inmunocromatográficos se encuadran en dos categorías principales: "en sándwich" y "competitivos", según la naturaleza del complejo antígeno-anticuerpo que ha de detectarse y la secuencia de reacciones requeridas para producir ese complejo.
Se describen ejemplos de inmunoensayos en sándwich realizados en tiras de prueba en la patente US nº 4.168.146 de Grubb y col. y la patente US nº 4.366.241 de Tom y col.
En inmunoensayos competitivos, el reactivo que se desvela está acoplado normalmente a un analito o análogo de analito que compite por la unión con un anticuerpo con cualquier analito no marcado presente en esta muestra. Los inmunoensayos competitivos se usan normalmente para detección de parámetros analíticos tales como haptenos, siendo cada hapteno monovalente y capaz de unir sólo una molécula de anticuerpo. Los ejemplos de haptenos incluyen fármacos terapéuticos tales como teofilina y digoxina y drogas de abuso como cocaína y heroína y sus metabolitos. Se desvelan ejemplos de dispositivos de inmunoensayos competitivos en la patente US nº 4.235.601 de Deutsch y col., la patente US nº 4.442.204 de Liotta y la patente US nº 5.208.535 de Buechler y col.
Una de las muestras sometidas más frecuentemente a ensayo para un analito que usa tiras de prueba o dispositivos similares es la sangre. Lo más normal es que el analito que se va a someter a ensayo sea un componente soluble en la porción líquida de la sangre, es decir, suero o plasma. Las composiciones de ambos son similares, con la salvedad de que el suero, obtenido de una muestra de sangre que se ha dejado coagular, carece de fibrinógeno y algunos otros factores de coagulación que se agotan como resultado del proceso de coagulación.
Lo más normal es que el médico o técnico extraiga una muestra de sangre, que a menudo es una muestra bastante pequeña. Sería preferible poder usar la muestra de sangre completa para el ensayo, evitando la necesidad de una preparación en volumen de suero o plasma de la muestra de sangre. Sin embargo, con la mayoría de las tiras de prueba y dispositivos analíticos similares es indeseable el uso de sangre completa como una muestra, o incluso una muestra de sangre de la que se han eliminado parcialmente las células, particularmente los eritrocitos.
Las células sanguíneas, particularmente los eritrocitos, ralentizan primero el flujo del suero o plasma a lo largo de la membrana y finalmente lo detienen por coagulación en los poros de la membrana. Esto produce una prueba no válida. La migración de glóbulos rojos u otras células sanguíneas puede crear también altos fondos o interferir de otra manera con la realización de la prueba efectuada por el dispositivo de ensayo. Aunque las células sanguíneas pueden eliminarse por filtrado a través de filtros microporosos, la acción de dichos filtros es generalmente demasiado lenta para permitir el ensayo eficaz de sangre sin células.
Además, incluso si las células sanguíneas se eliminan con eficacia, los procedimientos para hacerlo producen frecuentemente hemólisis. La aparición de hemólisis es indeseable porque produce la liberación de enzimas, hemoglobina, otros pigmentos y estromas en la parte libre de células sanguíneas. Esto causa interferencia con muchas pruebas clínicas.
Procedimientos para la separación de células sanguíneas incluyen el descrito la patente WO-94/24.555 que describe un procedimiento y aparato para la separación de glóbulos rojos en el que los glóbulos rojos se eliminan de la sangre completa o una fracción de la misma por contacto de la sangre completa con una combinación de un agente de aglutinación y partículas de nucleación para volver a formar grupos de glóbulos rojos. Se describe además que puede añadirse polietilenglicol de alto peso molecular para potenciar más la aglutinación. Los grupos de glóbulos rojos son mucho mayores que el tamaño de los glóbulos rojos individuales, de manera que los grupos pueden filtrarse fácilmente a través de un medio poroso. El plasma que está sustancialmente libre de glóbulos rojos se hace pasar además a través de un filtro que contiene opcionalmente un agente de aglutinación adicional.
La patente EP-0.597.577 describe la separación de plasma o suero de la sangre completa usando un componente de unión de glóbulos rojos y un polímero que contiene múltiples sitios catiónicos. Se describe particularmente un reactivo para formar glóbulos rojos acumulados y estabilizados, que comprende un componente de unión de glóbulos rojos y un componente de polímero policatiónico. También se describe un procedimiento para separar plasma o suero de la sangre completa, que comprende puesta en contacto de la sangre completa con un componente de unión de glóbulos rojos y un componente de polímero policatiónico para formar glóbulos rojos acumulados estabilizados y a continuación la eliminación de los glóbulos rojos acumulados estabilizados del plasma o suero. También se describe un dispositivo para separar plasma o suero de la sangre completa que comprende una capa de acumulación, que comprende un componente de unión de glóbulos rojos y un componente de polímero policatiónico, una capa reductora de hematocrito y una capa de eliminación de células libres y un procedimiento para usar dicho dispositivo, que comprende la introducción de sangre completa en el dispositivo y hace que la sangre completa pase a través del dispositivo.
La patente WO-94/233.300 describe un dispositivo cromatográfico para su uso con inmunoensayos el cual permite ensayos rápidos y cómodos de parámetros analíticos de interés biológico. Sin embargo, este documento no describe una constelación de elementos que separan específicamente la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la misma.
Se describen varios procedimientos para la separación de células sanguíneas de la porción líquida de la sangre, por ejemplo en la patente US nº 3.768.978 de Grubb y col., la patente US nº 3.902.964 de Greenspan, la patente US nº 4.477.575 de Vogel y col., la patente US nº 4.594.372 de Zuk, la patente US nº 4.753.776 de Hillman y col., la patente US nº 4.816.224 de Vogel y col., la patente US nº 4.933.092 de Aunet y col., la patente US nº 5.055.195 de Trasch y col., la patente US nº 5.064.541 de Jeng y col., la patente US nº 5.076.925 de Roesink y col., la patente US nº 5.118.428 de Sand y col., la patente US nº 5.118.472 de Tanaka y col., la patente US nº 5.130.258 de Makino y col., la patente US nº 5.135.719 de Hillman y col., la patente US nº 5.209.904 de Forney y col., la patente US nº 5.212.060 de Maddox y col., la patente US nº 5.240.862 de Koenheu y col., la patente US nº 5.262.067 de Wilk y col., la patente US nº 5.306.623 de Kiser y col., la patente US nº 5.364.533 de Ogura y col. y la patente US nº 5.397.479 de Kass y col.
Sin embargo, existe todavía una necesidad de un procedimiento mejorado de separación de los componentes celulares de la sangre de la porción líquida de la sangre para un ensayo rápido y preciso de los parámetros analíticos contenidos en la porción líquida de la sangre. Particularmente, existe una necesidad de un dispositivo integrado que incorpore un elemento de ensayo y un medio para separar las porciones líquidas de la sangre de los componentes celulares de la sangre de manera que un analito presente en las porciones líquidas de la sangre pueda someterse a ensayo fácilmente en un solo dispositivo. Dicho dispositivo mejorado evitaría la necesidad de una extracción preliminar de suero o plasma con su necesidad relacionada de la eliminación segura de las fracciones de sangre. Esto se ha convertido en un serio problema debido a la difusión aumentada de enfermedades hematógenas como la hepatitis y el SIDA. Un dispositivo mejorado sería capaz de dirigir el ensayo del analito deseado cuando se aplica una muestra de sangre completa al dispositivo.
Preferentemente, dicho dispositivo debe ser capaz de realizar una amplia gama de inmunoensayos, incluyendo inmunoensayos en sándwich y competitivos.
Resumen
Los autores de la invención han desarrollado dispositivos y procedimientos para separar las porciones líquidas de la sangre completa de los componentes celulares de la sangre, así como dispositivos y procedimientos de ensayo para su uso, que satisfacen estas necesidades.
Un aspecto del dispositivo es un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende:
(1)
una almohadilla de material poroso permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre;
(2)
un sustrato como soporte de la almohadilla; y
(3)
medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre: (i) a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados en la almohadilla y (ii) desde la almohadilla de material poroso.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de la almohadilla sin hemólisis significativa.
Normalmente, la almohadilla de material poroso contiene un aglutinante para los componentes celulares de la sangre. Si el aglutinante es un anticuerpo anticélulas sanguíneas, es preferentemente un anticuerpo antieritrocitos. Si el aglutinante es una lectina, existen diversos tipos de lectinas adecuadas para su uso.
Alternativamente, la almohadilla puede impregnarse con un carbohidrato capaz de agregar células sanguíneas. Una serie de carbohidratos son adecuados para su uso. Preferentemente, el carbohidrato es manitol.
La almohadilla de material poroso en este dispositivo puede incluir dos sectores: (i) un primer sector permeable a la porción líquida de la sangre y a los componentes celulares de la sangre; y (ii) un segundo sector permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre.
Alternativamente, la almohadilla de material poroso permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre puede incluir una membrana asimétrica con una primera superficie y una segunda superficie, teniendo la membrana un gradiente de tamaños de poro tal que el tamaño de poro disminuye desde la primera superficie a la segunda superficie, siendo capaz la membrana asimétrica de atrapar los componentes celulares de la sangre en su interior y permitiendo que los componentes líquidos de la sangre pasen a su través.
El medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre incluye normalmente una membrana para separación cromatográfica; la membrana para separación cromatográfica tiene normalmente una zona de captura para unión de un miembro de un par de unión específico.
Este dispositivo, y otros dispositivos análogos descritos a continuación, pueden usarse en un procedimiento de separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre. Si se incluye una membrana para separación cromatográfica, el dispositivo puede usarse en un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre.
Según un primer aspecto de la presente invención se proporciona un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende:
(a)
un primer componente oponible que incluye:
(i)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(ii)
una segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar a través de la segunda matriz porosa; y
(b)
un segundo componente oponible que puede fijarse al primer componente oponible de tal manera que los componentes oponibles primero y segundo puedan ponerse en oposición para transferir un reactivo desde el segundo componente oponible al primer componente oponible por presión; y en el que dicho segundo componente oponible incluye también un absorbedor posicionado durante el uso para invertir el flujo de fluido en dicho dispositivo;
por medio de lo cual la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices primera y segunda del primer componente oponible.
Según un aspecto más de la presente invención se proporciona un procedimiento para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende:
(a)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa en el primer componente oponible del dispositivo de la reivindicación 1;
(b)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(c)
permitir que la porción líquida de la muestra de sangre fluya a través de la segunda matriz de separación porosa en una primera dirección,
(d)
poner los componentes oponibles primero y segundo en oposición para transferir fluido desde el primer componente oponible al segundo componente oponible por presión; y
(e)
permitir adicionalmente que la muestra de sangre fluya a través de la segunda matriz de separación porosa en una segunda dirección opuesta a la primera dirección.
Las formas de realización preferidas de los aspectos anteriores de la invención se definen en las reivindicaciones subordinadas adjuntas.
También se describe un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende:
(1)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(2)
una segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices primera y segunda sin hemólisis significativa.
En esta versión del dispositivo según la presente invención, la segunda matriz es normalmente una membrana para separación cromatográfica, produciendo así un dispositivo de ensayo. La membrana para separación cromatográfica tiene normalmente una zona de captura para unión con un miembro de un par de unión específico.
Si la segunda matriz es una membrana para separación cromatográfica, un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre puede comprender las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa del dispositivo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(3)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares atrapados de la sangre como resultado de la acción de la segunda matriz; y
(4)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de la segunda matriz de manera que se realice un ensayo en la segunda matriz, realizándose el ensayo por unión de un miembro de un par de unión específico para la zona de captura de la segunda matriz para detectar y/o determinar el al menos un analito.
La primera matriz de separación puede ser una membrana asimétrica con una primera superficie y una segunda superficie. La membrana tiene un gradiente de tamaños de poro de tal manera que el tamaño de poro disminuye desde la primera superficie a la segunda superficie; la membrana asimétrica es capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre en su interior y permitir que los componentes líquidos de la sangre pasen a su través.
Normalmente, el dispositivo comprende además un soporte sólido impermeable al cual se fija permanentemente la segunda matriz.
Otro dispositivo más para la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre comprende tres matrices. Dicho dispositivo puede comprender:
(1)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre;
(2)
una segunda matriz de separación porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(3)
una tercera matriz porosa en contacto operativo con la segunda matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices de separación porosas primera y segunda sin hemólisis significativa.
Otro dispositivo más tiene múltiples segundas matrices porosas. Dicho dispositivo comprende:
(1)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(2)
al menos dos segundas matrices porosas, permitiendo cada segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa.
También se describe un dispositivo de dos componentes para separar la porción líquida de una muestra de sangre de los componentes celulares. Este dispositivo comprende:
(1)
un primer componente oponible que incluye:
(a)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(b)
una segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa; y
(2)
un segundo componente oponible que puede fijarse al primer componente oponible de tal manera que los componentes oponibles primero y segundo pueden ponerse en oposición para transferir fluido desde uno de los componentes oponibles al otro por presión.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices primera y segunda del primer componente oponible sin hemólisis significativa.
El segundo componente oponible puede incluir una zona de preparación de muestra, el cual puede incluir al menos un reactivo para tratamiento de la muestra o una pareja de unión específica marcada con una marca detectable, teniendo la pareja de unión específica afinidad de unión específica por al menos un componente seleccionado entre el analito y una pareja de unión específica para el analito en una forma que puede volverse a solubilizar por la adición de una muestra acuosa a la zona de preparación de muestra.
Un dispositivo de dos componentes adaptado particularmente a ensayos bidireccionales puede comprender:
(1)
un primer componente oponible que incluye:
(a)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(b)
una segunda matriz porosa que incluye una membrana para separación cromatográfica en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya en una primera dirección por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa; y
(2)
un segundo componente oponible que puede fijarse al primer componente oponible de tal manera que los componentes oponibles primero y segundo pueden ponerse en oposición para transferir un reactivo desde el segundo componente oponible al primer componente oponible por presión de manera que poner los componentes oponibles primero y segundo en oposición provoca que el reactivo transferido desde el segundo componente oponible al primer componente oponible migre a través de la segunda matriz porosa en una segunda dirección opuesta a la primera dirección.
En esta versión, la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices primera y segunda del primer componente oponible sin hemólisis significativa.
Otro es un procedimiento para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende las etapas de:
(1)
añadir una sustancia de reticulación para los componentes celulares de la sangre a una muestra de sangre completa, estando seleccionada la sustancia de reticulación del grupo que consiste en una lectina, un anticuerpo anticélulas sanguíneas y un carbohidrato capaz de agregar células sanguíneas:
(2)
mezclar la sustancia de reticulación y la muestra de sangre para formar una mezcla de la sustancia de reticulación y la muestra de sangre;
(3)
aplicar la mezcla de la sustancia de reticulación y la muestra de sangre a un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre, comprendiendo el dispositivo:
(a)
una almohadilla de material poroso permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre agregados por la reacción entre la sustancia de reticulación y la muestra de sangre;
(b)
un sustrato de soporte de la almohadilla; y
(c)
medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre: (i) a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y (ii) desde la almohadilla de material poroso, por medio de lo cual la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de la almohadilla sin hemólisis significativa; y
(d)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de la almohadilla para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre.
Preferentemente, el procedimiento comprende además la adición de un anticoagulante junto con la sustancia de reticulación. Normalmente, el anticoagulante es heparina o EDTA.
Preferentemente, se usa una concentración de sustancia de reticulación que es suficiente para reticular sustancialmente todos los elementos celulares de la sangre.
Un procedimiento alternativo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre comprende las etapas de:
(1)
añadir una muestra de sangre a un tubo capilar recubierto con una sustancia de reticulación según se ha descrito anteriormente;
(2)
permitir que la sustancia de reticulación se disuelva en la muestra de sangre para formar una mezcla de la sustancia de reticulación y la muestra de sangre;
(3)
aplicar la mezcla de la sustancia de reticulación y la muestra de sangre a un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre según se ha descrito anteriormente; y
(4)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de la almohadilla para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre.
Preferentemente, el tubo capilar está recubierto también con un anticoagulante.
Breve descripción de los dibujos
Estas y otras características, aspectos y ventajas de la presente invención se comprenderán mejor con referencia la siguiente descripción, reivindicaciones adjuntas y dibujos acompañantes, en los que:
la Figura 1 es un dibujo de un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre, empleando una almohadilla de material poroso;
la Figura 2 es otro dibujo del dispositivo mostrado en la Figura 1, que muestra la migración de la sangre a través del dispositivo;
la Figura 3 es un dibujo de otra forma de realización de un dispositivo de ensayo según la presente invención que emplea una almohadilla porosa con dos sectores;
la Figura 4 es un dibujo de otra forma de realización de un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre, que emplea tres matrices;
la Figura 5 es un dibujo de otra forma de realización más de un dispositivo de ensayo según la presente invención con dos segundas matrices, que pueden incorporar elementos de ensayo;
la Figura 6 es un dibujo de una forma de realización de un dispositivo de dos componentes según la presente invención;
la Figura 7 es un dibujo de otra forma de realización de un dispositivo de dos componentes según la presente invención; y
la Figura 8 es un diagrama esquemático de un procedimiento según la presente invención para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre, que emplea separación externa, con adición de sangre a un tubo capilar que contiene una sustancia de reticulación para los componentes celulares de la sangre.
Descripción Definiciones
En el contexto de esta descripción, se definen los términos siguientes del modo propuesto a continuación, salvo que se indique lo contrario:
Pareja de unión específica: Un miembro de un par de moléculas que interaccionan por medio de interacciones no covalentes específicas que dependen de las estructuras tridimensionales de las moléculas implicadas. Los pares típicos de compañeros de unión específicos incluyen antígeno-anticuerpo, hapteno-anticuerpo, hormona-receptor, cadena de ácido nucleico-cadena de ácido nucleico complementario, sustrato-enzima, análogo de sustrato-enzima, inhibidor-enzima, carbohidrato-lectina, biotina-avidina y virus-receptor celular.
Contacto operativo: Dos componentes sólidos están en contacto operativo cuando se encuentran en contacto, directa o indirectamente, de tal manera que un líquido acuoso pueda fluir desde uno de los dos componentes al otro sustancialmente sin interrupción, por capilaridad o de otro modo. "Contacto directo" significa que los dos elementos están en contacto físico, como en borde-borde o delante-detrás. Normalmente, cuando dos componentes están en contacto directo, se solapan con un solapamiento de aproximadamente 0,5 mm a aproximadamente 5 mm. Sin embargo, los componentes pueden colocarse con bordes colindantes. "Contacto indirecto" significa que los dos elementos no están en contacto físico, pero están puenteados por uno o más conductores.
Analito: El término "analito" incluye tanto la molécula real que se va a someter a ensayo como los análogos y derivados de la misma cuando dichos análogos y derivados se unen a otra molécula usada en el ensayo de una manera sustancialmente equivalente a la del analito en sí.
Anticuerpo: El término "anticuerpo" incluye tanto moléculas de anticuerpo intactas de la especificidad apropiada como fragmentos de anticuerpos (que incluyen fragmentos Fab, F(ab'), y F(ab')_{2}), así como moléculas de anticuerpo y fragmentos de anticuerpo intactos modificados químicamente, que incluyen anticuerpos híbridos ensamblados por reasociación in vitro de subunidades y moléculas de anticuerpo monocatenarias producidas por ingeniería genética. También se incluyen en la definición anticuerpos antiidiotípicos que unen específicamente sitios de combinación con antígenos de anticuerpos.
Sin hemólisis significativa: El término "sin hemólisis significativa" significa la ausencia de hemólisis en un grado tal que el plasma o suero resultante no muestra enrojecimiento aparente sobre un fondo blanco por inspección
visual.
Con soporte: El término "con soporte" puede incluir soporte directo o indirecto, ya sea directamente por un sustrato sólido o indirectamente por un sustrato sólido a través de uno o más elementos interpuestos.
Sustancia de reticulación: El término "sustancia de reticulación" se usa genéricamente en el presente documento para incluir sustancias que son capaces de reticular, aglutinar o agregar los componentes celulares de la sangre. Específicamente, este término incluye lectinas y anticuerpos anticélulas sanguíneas, así como carbohidratos que pueden agregar células sanguíneas haciéndolas adherentes y provocando que se acumulen.
Los procedimientos y dispositivos según la presente invención usan una de dos técnicas posibles para separar los elementos celulares (elementos formados) de la sangre a partir de la porción líquida de la sangre (suero o plasma, que contiene los elementos solubles), para su uso en un formato de prueba inmunocromatográfico.
La primera de estas técnicas es separación activa de los elementos celulares de la sangre a partir de la porción líquida de la sangre en o como parte integral del dispositivo de prueba, referida generalmente como procesamiento interno. La segunda de estas técnicas es separación o procesamiento de la muestra de sangre antes de que la muestra se añada al dispositivo de prueba, referida generalmente como procesamiento externo.
I. Dispositivos y procedimientos para procesamiento interno A. Descripción general del procesamiento interno
En el presente documento se describen dispositivos para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre en o como parte integral del dispositivo de prueba. Los componentes celulares de la sangre incluyen eritrocitos (glóbulos rojos), leucocitos (glóbulos blancos) y plaquetas. La porción líquida de la sangre incluye el resto de la sangre y se conoce generalmente como suero si la sangre se ha coagulado, formando un coágulo que contiene fibrina y las células sanguíneas. Se conoce generalmente como plasma si se obtiene de sangre no coagulada. El ingrediente principal presente en plasma pero ausente en suero es fibrinógeno, el precursor de la fibrina.
En general, dicho dispositivo comprende:
(1)
una almohadilla de material poroso permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre;
(2)
un sustrato que soporta la almohadilla; y
(3)
medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre: (i) a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y (ii) desde la almohadilla de material poroso.
En general, un procedimiento para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre usando este dispositivo comprende:
(a)
aplicar una muestra de sangre a la almohadilla de material poroso del dispositivo;
(b)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la almohadilla de material poroso para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre; y
(c)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y desde la almohadilla de material poroso.
Dentro del ámbito de la presente invención se encuentran varias configuraciones y elaboraciones de este dispositivo, según se describe en detalle a continuación.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de la almohadilla sin hemólisis significativa.
Normalmente, el sustrato es un sustrato sólido sustancialmente plano. Normalmente, el flujo a través de la almohadilla se produce en una dirección sustancialmente paralela a o a lo largo del sustrato.
El medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre puede incluir aquí una membrana para separación cromatográfica; normalmente, la membrana tiene una zona de captura para la unión de un miembro de un par de unión específico. En esta configuración, el dispositivo puede usarse en un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre que comprende las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la almohadilla de material poroso del dispositivo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la almohadilla de material poroso para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(3)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados como consecuencia de la acción del medio fijo a la almohadilla; y
(4)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través del medio cromatográfico de tal manera que un ensayo se realice en el medio cromatográfico, realizándose el ensayo por unión de un miembro de un par de unión específico para la zona de captura del medio cromatográfico para detectar y/o determinar el al menos un analito.
Las condiciones que son óptimas para la realización de dichos ensayos, como la elección del miembro del par de unión específico, el uso de tampones o sales, el tiempo requerido y la temperatura óptima, son bien conocidos en la técnica y no es preciso describirlos en detalle en el presente documento.
La almohadilla porosa, también referida como almohadilla de muestra porque normalmente se aplica la muestra en ella, puede ser una tela tejida o no tejida, papel, celulosa, fibra de vidrio, poliéster, otros polímeros o mezclas de estos materiales para conservar los componentes celulares de la sangre. La almohadilla porosa tiene normalmente un aglutinante para los componentes celulares de la sangre incorporados en ella.
El aglutinante para los componentes celulares de la sangre es normalmente una lectina o un anticuerpo anticélulas sanguíneas. Cuando el aglutinante es un anticuerpo anticélulas sanguíneas, es normalmente un anticuerpo antieritrocitos. Dichos anticuerpos son bien conocidos en la técnica y no es preciso describirlos en detalle en el presente documento. Normalmente, se obtienen por la inyección de glóbulos rojos o fracciones de glóbulos rojos en una especie diferente. Si el anticuerpo deseado es anticuerpo antiglóbulos rojos humanos, los animales adecuados para la producción de dichos anticuerpos incluyen cabras, conejos, caballos y ovejas. Pueden usarse anticuerpos policlonales o monoclonales. Alternativamente o además de anticuerpo antiglóbulos rojos, pueden usarse anticuerpos antileucocitos o antiplaquetas si se desea garantizar la eliminación de aquellos componentes celulares.
El aglutinante para los componentes celulares de la sangre puede estar unido de forma no covalente a la almohadilla de muestra. Alternativamente, puede estar reticulado de forma covalente a la almohadilla de muestra; las técnicas para reticular proteínas a soportes sólidos como celulosa, papel y otros materiales típicos de almohadilla de muestra son bien conocidos en la técnica y no es preciso describirlos aquí en detalle. La almohadilla de muestra, que contiene anticuerpos o lectinas, puede tratarse además con aglutinantes de poliéster para capturar elementos celulares, según se describe, por ejemplo, en la patente US nº 4.816.224 de Vogel y col. Pueden usarse también otros tipos de aglutinantes de polímeros.
Cuando el aglutinante es una lectina, normalmente la lectina es una de las siguientes, pero sin limitarse a ellas: concanavalina A, abrina, fitohemaglutinina, limulina o una de las lectinas producidas por las siguientes especies: Agaricus bisporus, Anguilla anguilla, Arachis hypogaea, Bandeiraea simplicifolia, Bauhinia purpurea, Caragana arborescens, Cicer arietinum, Codium fragile, Datura stramonium, Dolichos biflorus, Erythrina corallodendron, Erythrina cristagalli, Euonymus europaeus, Glycine max, Helix aspersa, Helix pomatia, Lathyrus odoratus, Lens culinaris, Lycopersicon esculentum, Maclura pomifera, Momordica charantia, Mycoplasma gallisepticum, Naja mocambique, Naja kaouthia, Perseau americana, Phaseolus coccineus, Phaseolus limensis, Phaseolus vulgaris, Phytolacca americana, Pisum sativum, Pseudomonas aeruginosa, Psophocarpus tetragonolobus, Ptilota plumosa, Ricinus communis, Robinia pseudoacacia, Sambucus nigra, Solanum tuberosum, Sophora japonica, Tetragonolobus purpureas, Triticum vulgaris, Ulex europaeus, Vicia faba, Vicia sativa, Vicia villosa, Vigna radiata, Viscum album y Wisteria floribunda. Las lectinas son proteínas producidas por plantas y algunas especies animales que se unen específicamente y de forma no covalente a grupos de azúcares que están presentes en la superficie de las células sanguíneas.
Preferentemente, la lectina es capaz de unirse a eritrocitos y leucocitos y no es específica de un grupo de células sanguíneas. Se conocen otros muchos ejemplos de lectinas y no es preciso describirlos en detalle en el presente documento.
La almohadilla de material poroso puede impregnarse alternativamente con un carbohidrato capaz de agregar células sanguíneas, como los carbohidratos desvelados en la patente US nº 4.678.757 de Rapkin y col., incorporados en la presente memoria descriptiva como referencia. Estos carbohidratos incluyen, pero no se limitan necesariamente a, manitol, sorbitol, inosita, \beta-D-glucosa, \alpha-D-glucosa, D(+)xilosa, D(+)maranosa, D(-)arabinosa, L(+)arabinosa, D(+)galactosa, L(-)xilosa, D-glucoheptosa, L-xilosa, lactosa, maltosa y sacarosa. Un carbohidrato preferido particularmente es manitol. Aunque los solicitantes no pretenden estar limitados por esta teoría, se cree que estos carbohidratos actúan mediante unión de forma no covalente a la superficie de los eritrocitos, haciéndolos adherentes y provocando que se acumulen o agreguen.
Se aplica un carbohidrato en solución a una matriz permeable tal como una fibra no tejida (por ejemplo, celulosa, vidrio o poliéster) en una concentración de hasta el 20% (p/v) para producir una matriz tratada. La solución puede aplicarse por varios medios tales como impregnación, impresión o rociado para conseguir la concentración deseada en la matriz. El carbohidrato funciona como un agente de retención, acumulación o aglutinación que separa preferentemente las células del líquido circundante que es libre de migrar a través de la matriz.
El volumen de la sangre separada es una función de la capacidad absorbente de la matriz tratada, el medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y desde la almohadilla, y el grado y área de adherencia entre la matriz tratada y el medio para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre.
B. Formas particulares de realización de dispositivos para procesamiento interno
Un dispositivo para procesamiento interno comprende:
(1)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(2)
una segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa sin hemólisis significativa.
En dicho dispositivo la segunda matriz porosa comprende el medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y desde la almohadilla de material poroso. La segunda matriz porosa puede ser una membrana tal como una membrana adecuada para separación cromatográfica. Los materiales típicos para dichas membranas incluyen, pero no se limitan a, la nitrocelulosa, celulosa, otros derivados de celulosa, nailon, rayón, papel, sílice, poliésteres y polisulfonas. Un material preferido generalmente para dichas membranas es la nitrocelulosa. El medio cromatográfico puede estar pretratado o modificarse según se necesite.
Esta segunda matriz porosa puede tener una zona de capturas en la misma para unir miembros de un par de unión específico, tal como antígenos, haptenos o anticuerpos. Por ejemplo, la segunda matriz porosa puede tener, inmovilizado en la zona de captura, un primer anticuerpo para unión a analito, que a continuación se detecta por medio de un segundo anticuerpo marcado en una reacción en sándwich. Alternativamente, la segunda matriz porosa puede tener un antígeno inmovilizado en la zona de captura para unión de un anticuerpo. En la misma segunda matriz porosa puede estar presente más de una zona de captura; si está presente más de una zona de captura, pueden tener los mismos o diferentes miembros de un par de unión específico unidos a las mismas. Si está presente más de una zona de captura, una zona de captura puede usarse como control para garantizar que el ensayo se ha realizado apropiadamente. En la técnica son bien conocidas muchas configuraciones y no es preciso volverlas a enumerar en detalle. Por tanto, la segunda matriz porosa puede comprender un elemento de ensayo cromatográfico, que puede usarse para la realización de un ensayo inmunocromatográfico. Cuando la segunda matriz porosa es un elemento de ensayo cromatográfico, el dispositivo es capaz de realizar separación interna de los componentes celulares de la sangre a partir de la porción líquida de la sangre y un ensayo para un analito en la porción líquida de la sangre en un dispositivo unitario. El ensayo puede efectuarse aplicando la muestra de sangre a la primera matriz de separación y posteriormente leyendo el resultado.
Normalmente, el elemento de ensayo cromatográfico realiza o bien un inmunoensayo competitivo o bien un inmunoensayo en sándwich, ya que estos formatos son conocidos generalmente en la técnica.
El componente marcado unido al medio cromatográfico, en el caso de un inmunoensayo en sándwich, es normalmente un anticuerpo marcado para el analito. Si el analito es él mismo un anticuerpo, como en el caso de un ensayo para la detección de anticuerpo en suero humano para la bacteria Helicobacter pylori, sospechoso de ser el agente causante de úlceras de estómago, el componente marcado puede ser un segundo anticuerpo que se une al primer anticuerpo sobre la base de la especificidad de especie, clase o subclase. La especificidad de clase también se conoce como especificidad de isotipo, tal como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE para anticuerpos humanos. La especificidad de subclase se refiere a diferencias antigénicas dentro de las clases, tales como IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, que son subclases de IgG. Se prefiere encarecidamente que la pareja de unión específica marcada usada para detección de un analito de anticuerpo se una a la región constante del analito de anticuerpo, con el fin de evitar interferencia.
En algunas aplicaciones, es deseable emplear marcado indirecto. Por ejemplo, en las pruebas del antígeno de Giardia, puede usarse un anticuerpo de IgM que puede ser difícil de marcar directamente. En ese caso, puede marcarse una pareja de unión específica secundaria específica para la primera pareja de unión específica móvil. Normalmente, la pareja de unión específica secundaria marcada se une al anticuerpo que es la primera pareja de unión específica sobre la base de la especificidad de especie, clase o subclase. La primera pareja de unión específica tiene afinidad de unión específica por el analito. Como una alternativa al uso de una pareja de unión específica secundaria, la primera pareja de unión específica puede conjugarse con biotina y puede usarse una marca conjugada con avidina.
Cuando se realiza un inmunoensayo competitivo, la marca es normalmente un analito o análogo de analito. Sin embargo, en la técnica se conocen otros esquemas de marcado; en algunos de estos esquemas de marcado, la marca es un anticuerpo marcado para el analito o una pareja de unión específica secundaria. En algunos casos, pueden usarse anticuerpos antiidiotípicos para inmunoensayos competitivos.
Puede interponerse un elemento o elementos adicionales entre la primera matriz de separación porosa y la segunda matriz porosa. Estos elementos, que son normalmente conductores, pueden actuar como un puente entre la primera matriz de separación porosa y la segunda matriz porosa, es decir, el elemento de ensayo cromatográfico.
Opcionalmente, y preferentemente, la segunda matriz porosa se une de manera fija a un soporte sólido que es impermeable. La segunda matriz porosa puede estar laminada en el soporte o fundida en él. El soporte sólido puede estar fabricado con materiales tales como plástico o cartón laminado.
Dicho dispositivo se muestra en la Figura 1. El dispositivo 10 incluye una primera matriz de separación porosa 12, una segunda matriz porosa 14 en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa 12 y un soporte sólido 16. La primera matriz de separación porosa 12 tiene una primera superficie 18 y una segunda superficie 20. La segunda matriz porosa 14 puede ser un elemento de ensayo cromatográfico.
En uso, se añade una muestra de sangre 22 a la primera superficie 18 de la primera matriz de separación porosa 12, y la porción líquida de la muestra de sangre 22 migra a la segunda matriz porosa 14 como consecuencia del contacto entre la segunda superficie 20 de la primera matriz de separación porosa 12 y la segunda matriz porosa 14 después de que los elementos celulares estén atrapados dentro de la primera matriz de separación porosa 12. Puede realizarse un ensayo cromatográfico dentro de la segunda matriz porosa 14.
La Figura 2 muestra el dispositivo de la Figura 1 después de que la porción líquida de la muestra de sangre haya migrado a la segunda matriz porosa 14. Las regiones rayadas de la Figura 2 representan las áreas de flujo del líquido a través de la primera matriz porosa 12 y la segunda matriz porosa 14.
En una versión alternativa de este dispositivo, la primera matriz de separación puede ser una membrana asimétrica no tratada. La membrana asimétrica no tratada se construye de tal manera que tiene un gradiente decreciente de tamaño de poro dentro de la membrana. La membrana asimétrica tiene una primera superficie y una segunda superficie; la muestra de sangre se aplica a la primera superficie. El tamaño de poro disminuye desde la primera superficie a la segunda superficie. La membrana asimétrica es capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre en su interior y dejar pasar los componentes líquidos de la sangre a su través. La primera matriz de separación permite que la porción líquida de la sangre fluya a través en contacto con la segunda matriz, según se ha descrito anterior-
mente.
Este dispositivo se representa también por medio de los dibujos de las Figuras 1 y 2, con la primera superficie 18 y la segunda superficie 20 de la membrana asimétrica como la primera matriz porosa de separación 12. El flujo sanguíneo va desde la primera superficie 18 a la segunda superficie 20 de la membrana asimétrica.
Pueden prepararse membranas asimétricas adecuadas para su uso en dispositivos de separación internos a partir de combinaciones de polímeros hidrófobos e hidrófilos, tal como se desvela en la patente US nº 5.240.862 de Koenhen y col. y la patente US nº 5.076.925 de Roesink y col. El polímero hidrófobo puede ser polisulfona, polietersulfona, poliimida o polieterimida, y el polímero hidrófilo puede ser polivinilpirrolidona, poli(ácido acrílico), poli(alcohol vinílico), poli(acetato de vinilo) o polietilenglicol.
En otra versión alternativa más de este dispositivo, la primera matriz puede construirse de tal modo que sólo una porción de la almohadilla es capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre. En otras palabras, la almohadilla puede dividirse en dos sectores, un primer sector que permite el flujo pero no es capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre y un segundo sector que es capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre. El segundo sector puede contener anticuerpos, lectinas o carbohidratos según se ha descrito anteriormente. El primer sector contiene normalmente reactivos para pretratamiento de la muestra de sangre que pueden mezclarse previamente en la muestra de sangre cuando la sangre migra a través del primer sector.
Esta versión alternativa del dispositivo se representa en la Figura 3. El dispositivo 40 tiene una primera matriz de separación 42 con una primera superficie 44 y una segunda superficie 46, con dos sectores, un primer sector 48 que no es capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre y un segundo sector 50 que es capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre. El dispositivo tiene también una segunda matriz porosa 52 y un soporte sólido 54.
Durante el uso, se añade una muestra de sangre 56 a la primera superficie 44 de la primera matriz de separación 42, y migra desde el primer sector 48 al segundo sector 50, normalmente mezclando previamente los reactivos presentes en el primer sector 48 en la muestra de sangre 56 para pretratamiento de la muestra de sangre 56. La porción líquida de la muestra de sangre 56 migra a continuación a la segunda matriz porosa 52 desde el segundo sector 50; puede realizarse un ensayo cromatográfico en la segunda matriz porosa 52.
En aun otra versión alternativa de este dispositivo se usan tres elementos:
(1)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre;
(2)
una segunda matriz de separación porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(3)
una tercera matriz porosa en contacto operativo con la segunda matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices de separación porosas primera y segunda sin hemólisis significativa.
En esta versión alternativa, la tercera matriz comprende el medio para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre: (i) a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y (ii) desde la segunda matriz. La tercera matriz puede incluir un elemento de ensayo cromatográfico.
Opcionalmente, y preferentemente, la tercera matriz se une de manera fija a un soporte sólido que es impermeable, según se ha descrito anteriormente.
Las matrices primera y segunda pueden ser iguales o diferentes; pueden comprender cualquiera de las alternativas descritas anteriormente en la Sección I(B), que incluye matrices que contienen un aglutinante para los componentes celulares de la sangre tal como una lectina o un anticuerpo anticélulas sanguíneas, matrices que contienen un carbohidrato capaz de agregar células sanguíneas y matrices que contienen una membrana asimétrica para atrapar células sanguíneas. Pueden usarse matrices con dos sectores.
Para esta alternativa del dispositivo, un procedimiento para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre puede comprender las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa del dispositivo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa y la segunda matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre; y
(3)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados como consecuencia de la acción de la tercera matriz.
Cuando la tercera matriz incluye una membrana para separación cromatográfica con una zona de captura, un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre puede comprender las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa del dispositivo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de las matrices de separación porosas primera y segunda para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(3)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados como resultado de la acción de la tercera matriz; y
(4)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de la tercera matriz de manera que se realice un ensayo en la segunda matriz, realizándose el ensayo por unión a un miembro de un par de unión específico para la zona de captura de la tercera matriz para detectar y/o determinar el al menos un analito.
Esta versión alternativa del dispositivo se muestra en la Figura 4. El dispositivo 60 tiene una primera matriz 62, una segunda matriz 64, una tercera matriz 66 y un soporte sólido 68. Una muestra de sangre 70, aplicada a la primera matriz 62, fluye a través de la primera matriz 62 y la segunda matriz 64; la porción líquida de la muestra de sangre migra a continuación a la tercera matriz 66. Puede realizarse un ensayo cromatográfico en la tercera matriz
66.
En aun otra versión alternativa de este dispositivo, el dispositivo puede incluir múltiples segundas matrices porosas, estando cada segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa. Cada segunda matriz porosa puede comprender un elemento de ensayo cromatográfico, con una zona de captura, según se ha descrito anteriormente. Cuando las segundas matrices porosas incluyen elementos de ensayo cromatográficos con zonas de captura, un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre puede comprender las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa del dispositivo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(3)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados como consecuencia de la acción de las segundas matrices; y
(4)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de las segundas matrices de manera que se realice un ensayo en al menos una de las segundas matrices, realizándose el ensayo por unión a un miembro de un par de unión específico para la zona de captura de al menos una de las segundas matrices para detectar y/o determinar el al menos un analito.
En una configuración, representada en la Figura 5, el dispositivo incluye dos segundas matrices porosas, una en contacto operativo con cada extremo de la primera matriz porosa. En esta configuración, la sangre se aplica cerca del centro de la primera matriz porosa y migra al exterior a los extremos. Alternativamente, pueden usarse tres o más segundas matrices porosas, cada una en contacto operativo con la primera matriz porosa. Las segundas matrices porosas pueden disponerse circunferencialmente alrededor de la primera matriz porosa, como los radios de una rueda. En esta alternativa, la primera matriz porosa puede ser cualquiera de las primeras matrices porosas descritas anteriormente, que incluyen la membrana asimétrica sin tratar.
En la Figura 5, el dispositivo 80 comprende una primera matriz porosa de separación 82, con una primera superficie 84 y una segunda superficie 86 y extremos primero y segundo 88 y 90, y dos segundas matrices 92 y 94, así como un soporte sólido 96. Las dos segundas matrices 92 y 94 están en contacto con los extremos 88 y 90 de la primera matriz porosa de separación 82. Se añade una muestra de sangre 98 a la primera superficie 84 de la primera matriz porosa de separación 82 y migra a través de la primera matriz porosa de separación 82, con las porciones líquidas de la muestra de sangre migrando a las dos segundas matrices 92 y 94.
C. Dispositivo de dos componentes de ensayo
Un dispositivo de dos componentes incorpora las matrices primera y segunda. Dicho dispositivo comprende en general:
(1)
un primer componente oponible que incluye:
(a)
una primera matriz de separación porosa según se ha descrito anteriormente; y
(b)
una segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa según se ha descrito anteriormente; y
(2)
un segundo componente oponible que puede fijarse al primer componente oponible de manera que los componentes oponibles primero y segundo pueden ponerse en oposición para transferir fluido de uno de los componentes oponibles al otro por presión.
Existe un gran número de dispositivos que usan dos componentes oponibles. En las Figuras 6 y 7 más adelante se representan varias alternativas. Estas alternativas son ilustrativas y no exclusivas; existe un gran número de formas del dispositivo de ensayo, y se han descrito, por ejemplo, en la patente US pendiente de tramitación nº 5.877.028.
Por ejemplo, el segundo componente oponible puede incluir una zona de preparación de muestra, que puede incluir entonces al menos un reactivo para tratamiento de la muestra. Este reactivo puede usarse para tratamiento de la muestra antes de la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre.
Alternativamente, la zona de preparación de muestra puede incluir una pareja de unión específica marcada con una marca detectable. La pareja de unión específica puede tener afinidad de unión específica por al menos un componente seleccionado entre el analito y una pareja de unión específica para el analito en una forma que puede resolubilizarse por la adición de una muestra acuosa a la zona de preparación de muestra. En otras palabras, puede aplicarse una pareja de unión específica marcada a la zona de preparación de muestra en forma líquida y secarse de modo que se vuelva a disolver. Normalmente, cuando el dispositivo se usa para un inmunoensayo en sándwich, la pareja de unión específica marcada con la marca detectable tiene afinidad de unión específica para el analito.
Alternativamente, el primer componente oponible puede incluir además una zona de preparación de muestra, que puede incluir una pareja de unión específica marcada con una marca detectable en forma resolubilizable. Según se indica más adelante, en este caso, la zona de preparación de muestra en el primer componente oponible estaría en contacto por un elemento en el segundo componente oponible cuando los componentes oponibles primero y segundo se ponen en oposición. Esto producirá la transferencia de la muestra; a continuación se aplican la muestra y la pareja de unión específica marcada resolubilizada a la almohadilla porosa.
Alternativamente, en un dispositivo de dos componentes, la almohadilla porosa puede estar en el componente opuesto desde el medio cromatográfico. A continuación, en la Figura 6, se muestra un ejemplo de esta configu-
ración.
Un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre puede comprender las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa en el primer componente oponible del dispositivo de dos componentes de ensayo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(3)
facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre a través de los intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados como resultado de la acción de la segunda matriz;
(4)
poner los componentes oponibles primero y segundo en oposición para transferir fluido desde uno de los componentes oponibles al otro por presión; y
(5)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de la segunda matriz de manera que se realice un ensayo en la segunda matriz, realizándose el ensayo por unión a un miembro de un par de unión específico para la zona de captura de la segunda matriz para detectar y/o determinar el al menos un analito.
Se muestran varios ejemplos de dispositivos de ensayo de dos componentes.
En la Figura 6 se muestra una configuración general. El dispositivo de ensayo 200 tiene un primer componente oponible 202 y un segundo componente oponible 204. El primer componente oponible 202 incluye una almohadilla porosa 206 para aplicación de la muestra. El segundo componente oponible 204 contiene un medio cromatográfico 208. El medio para retirar una porción líquida de la sangre del material poroso se forma por el solapado entre la almohadilla porosa 206 y el medio cromatográfico 208 cuando los componentes oponibles primero y segundo 202 y 204 se ponen en oposición. El medio cromatográfico 208 puede incluir una zona de detección 210 y una zona de control 212. El primer componente oponible 202 y el segundo componente oponible 204 están unidos por una bisagra 214. El medio cromatográfico 208 está sostenido en una cavidad 216. El primer componente oponible 202 puede incluir una ventana 218 para visualizar el medio cromatográfico 208, que incluye el área de la zona de detección 210 y la zona de control 212. Los componentes oponibles primero y segundo 202 y 204 pueden mantenerse juntos por medio de engranajes, como los formados por un borde biselado 220 en el primer componente oponible 202 y un borde inferior 222 en el segundo componente oponible 204. Pueden usarse también otros tipos de engranajes. Puede accederse al dispositivo a través de una muesca 224 formada en el segundo componente oponible 204.
Otra forma de realización de un dispositivo de ensayo según la presente invención comprende un dispositivo capaz de efectuar cromatografía bidireccional. Esta forma de realización se muestra en la Figura 7. El dispositivo de ensayo 300 tiene un primer componente oponible 302 y un segundo componente oponible 304. El primer componente oponible 302 incluye un absorbedor 306, el cual puede ser una almohadilla absorbente, y un aplicador 308. El segundo componente oponible 304 tiene un medio cromatográfico 310 que tiene un primer extremo 312 y un segundo extremo 314, con una zona de detección 316 y una zona de control 318. El segundo componente oponible 304 tiene también un conductor 320 en contacto operativo con el segundo extremo 314 del medio cromatográfico 310; el conductor 320 se usa para aplicación de un reactivo en el aplicador 308 al medio cromatográfico 310 cuando los componentes oponibles primero y segundo 302 y 304 se ponen en oposición. El segundo componente oponible 304 tiene también una almohadilla de material poroso 322 permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de unirse a los componentes celulares de la sangre según se ha descrito anteriormente. La almohadilla de material poroso 322 está en contacto operativo con el primer extremo 312 del medio cromatográfico 310; este contacto operativo forma el medio para retirar la porción líquida de la sangre de la almohadilla de material poroso 322. Los componentes oponibles primero y segundo 302 y 304 están unidos por una bisagra 324. El medio cromatográfico 310 y la almohadilla de material poroso 322 se apoyan en una cavidad 326. El primer componente oponible 302 puede incluir una ventana 328 para visualizar el medio cromatográfico 310, que incluye el área de la zona de detección 316 y la zona de control 318. Los componentes oponibles primero y segundo 302 y 304 pueden mantenerse juntos mediante engranajes, como los formados por un borde biselado 330 en el primer componente oponible 302 y un borde inferior 332 en el segundo componente oponible 304. Pueden usarse también otros tipos de engranajes. Puede accederse al dispositivo a través de una muesca 334 formada en el segundo componente oponible 304.
En uso, se aplica una muestra de sangre a la almohadilla porosa 322 para separar los componentes celulares de la sangre. La porción líquida de la muestra de sangre migra a continuación a través del medio cromatográfico 310; en ese punto, los componentes oponibles primero y segundo 302 y 304 se ponen en oposición, y se aplica un reactivo en el aplicador 308 al medio cromatográfico 310 y migra a través del medio cromatográfico 310 en dirección opuesta desde el flujo de la porción líquida de la muestra de sangre a través del medio cromatográfico 310, invirtiendo así el flujo. La inversión del flujo es impulsada por el absorbedor 306.
Esta forma de realización es particularmente adecuada para la realización de ensayos serológicos para detectar anticuerpos en muestras de sangre. Por ejemplo, si el analito que ha de detectarse es anticuerpo humano para la bacteria Helicobacter pylori, que se cree la causa de úlceras de estómago, puede aplicarse una muestra de sangre sospechosa de contener el anticuerpo a la almohadilla porosa 322 para separar los componentes celulares de la muestra de sangre a partir de la porción líquida de la muestra de sangre. La porción líquida de la muestra de sangre migra a continuación desde la almohadilla porosa 322 al medio cromatográfico 310. La zona de detección 316 puede contener antígeno inmovilizado de H. pylori, de manera que todo anticuerpo específico para H. pylori antígeno se una en la zona de detección. El aplicador 308 contiene entonces un anticuerpo marcado que se une a anticuerpo de inmunoglobulina G humana, tal como un anticuerpo de inmunoglobulina G antihumana de cabra marcado con oro, en forma resolubilizable. El contenido del aplicador 308 se resolubiliza por la adición de un líquido acuoso al aplicador 308. Cuando los componentes oponibles primero y segundo 302 y 304 se ponen en oposición, el aplicador 308 se pone en contacto con el medio cromatográfico 310 para aplicar el anticuerpo IgG antihumano marcado al medio cromatográfico 310. El absorbedor 306 provoca entonces que el anticuerpo IgG antihumano marcado migre a través del medio cromatográfico 310 en una dirección opuesta al flujo de la porción líquida de la muestra de sangre a través del medio cromatográfico 310. Entonces, cualquier anticuerpo anti-H. pylori unido en la zona de detección 316 queda marcado. Si se usa anticuerpo marcado con oro, la presencia de anticuerpo anti-H. pylori puede detectarse visualmente. El flujo inverso, impulsado por el absorbedor 306, actúa como un lavado para eliminar otro anticuerpo presente en la muestra que no sea específico del antígeno de H. pylori y no se una en la zona de detección 316 pero que, en caso contrario, reaccionaría con el anticuerpo IgG antihumano marcado y produciría un fondo. El uso de flujo bidireccional reduce, por tanto, el fondo y aumenta la sensibilidad y fiabilidad de la prueba.
Estas configuraciones son ilustrativas y no son exhaustivas; otras configuraciones de dispositivos de ensayo unidireccionales y bidireccionales según la presente invención que incorporan la almohadilla porosa para unirse a los componentes celulares de la sangre están también dentro del ámbito de la presente invención. Estas configuraciones pueden incluir una serie de elementos.
Por ejemplo, en una serie de dispositivos según la presente invención, los absorbedores están en contacto operativo con un extremo del medio cromatográfico, normalmente el extremo opuesto desde el extremo con el que se establece el contacto con la almohadilla de material poroso. Los absorbedores pueden estar fabricados con cualquier material muy absorbente que retenga un líquido lo suficiente para que el líquido pueda ser arrastrado a través del medio cromatográfico y acumulado en el absorbedor. Los materiales típicos para los absorbedores incluyen, pero no se limitan a, papel de filtro.
Además, los dispositivos pueden incluir uno o más conductores. Los conductores pueden servir como puente entre la almohadilla de material poroso y el medio cromatográfico constituyendo así el medio para retirar la porción líquida de la sangre del material poroso. Estos conductores se preparan con medios hidrófilos que dejan pasar los líquidos sin absorberlos sustancialmente. Dichos materiales son bien conocidos en la técnica. Pueden usarse celulosa y derivados de celulosa.
En dispositivos que emplean componentes oponibles, los cuerpos de los componentes oponibles están hechos preferentemente de cartón laminado que sean suficientemente impenetrables a la humedad para retener los líquidos implicados en la realización del ensayo efectuado por el dispositivo. Pueden usarse también otros materiales basados en celulosa, tales como cartón o sulfito blanqueado sólido (SBS), Alternativamente, los cuerpos de los componentes oponibles pueden estar hechos de plástico que sea impenetrable a la humedad. Un plástico adecuado es un plástico de policarbonato tal como Lexan^{TM}.
Los componentes oponibles están unidos por una bisagra, fabricada preferentemente de un material impermeable para los líquidos, tal como un plástico que puede unirse de forma compatible o es del mismo material usado para los componentes oponibles primero y segundo.
Una versión adaptada particularmente para la realización de ensayos bidireccionales puede comprender:
(1)
un primer componente oponible que incluye:
(a)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(b)
una segunda matriz porosa que incluye una membrana para separación cromatográfica en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya en una primera dirección por acción capilar o separación cromatográfica a través de la segunda matriz porosa; y
(2)
un segundo componente oponible que puede fijarse al primer componente oponible de manera que los componentes oponibles primero y segundo pueden ponerse en oposición para transferir un reactivo desde el segundo componente oponible al primer componente oponible por presión de manera que poner los componentes oponibles primero y segundo en oposición provoca que el reactivo transferido desde el segundo componente oponible al primer componente oponible migre a través de la segunda matriz porosa en una segunda dirección opuesta a la primera dirección.
Normalmente, en esta versión, la membrana para separación cromatográfica incluye en la misma una zona de captura para unión a un analito y el reactivo transferido desde el segundo componente oponible al primer componente oponible es una pareja de unión específica marcada para el analito.
Un procedimiento para realizar un ensayo para detectar y/o determinar al menos un analito en la porción líquida de una muestra de sangre usando esta versión puede comprender las etapas de:
(1)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa en el primer componente oponible del dispositivo;
(2)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(3)
permitir que la porción líquida de la muestra de sangre fluya a través de la membrana para separación cromatográfica en la primera dirección;
(4)
poner los componentes oponibles primero y segundo en oposición para transferir la pareja de unión específica marcada para el analito desde el segundo componente oponible al primer componente oponible por presión; y
(5)
permitir que la pareja de unión específica marcada para el analito fluya a través de la membrana para separación cromatográfica en la segunda dirección de manera que se realice un ensayo en la segunda matriz, realizándose el ensayo por unión de la pareja de unión específica marcada a la zona de captura de la segunda matriz para detectar y/o determinar el al menos un analito.
La descripción de los dispositivos anteriores se dirige a dispositivos de ensayo que realizan un ensayo cada vez. Sin embargo, pueden construirse también dispositivos de ensayo que pueden realizar múltiples ensayos al mismo tiempo. Los ensayos pueden realizarse para el mismo analito o parámetros analíticos diferentes. Esto permite la aplicación de múltiples muestras de sangre a un solo dispositivo con la realización de ensayos múltiples.
II. Dispositivos y procedimientos para procesamiento externo
También se describe un procedimiento para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre por la preadición de un aglutinante para los componentes celulares de la sangre a una muestra de sangre completa antes de aplicar la mezcla a un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre.
Dicho procedimiento comprende:
(1)
añadir una sustancia de reticulación para los componentes celulares de la sangre a una muestra de sangre completa, siendo seleccionada la sustancia de reticulación del grupo que consiste en una lectina, un anticuerpo anticélulas sanguíneas y un carbohidrato capaz de agregar células sanguíneas;
(2)
mezclar la sustancia de reticulación y la muestra de sangre para formar una mezcla de la sustancia de reticulación y la muestra de sangre, o dejar tiempo para que se produzca el mezclado,
(3)
aplicar la mezcla de la sustancia de reticulación y la muestra de sangre a un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre, comprendiendo el dispositivo:
(a)
una almohadilla de material poroso permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre agregados por la reacción entre la sustancia de reticulación y la muestra de sangre;
(b)
un sustrato que soporta la almohadilla; y
(c)
medio, fijo a la almohadilla, para facilitar el flujo de la porción líquida de la sangre: (i) a través de intersticios en torno a los componentes celulares de la sangre atrapados y (ii) desde la almohadilla de material poroso; y
(4)
permitir que la porción líquida de la sangre fluya a través de la almohadilla para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre.
La separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre unida al aglutinante se produce por flujo a través de la almohadilla sin hemólisis significativa. Este procedimiento difiere de los procedimientos descritos anteriormente en que la almohadilla de material poroso no necesita contener una sustancia de reticulación tal como un anticuerpo o una lectina; en su lugar, la almohadilla actúa como un filtro para eliminar componentes celulares de la sangre agregados por unión previa a la sustancia de reticulación, produciéndose la unión antes de que se aplique la muestra a la almohadilla.
Preferentemente, se añade un anticoagulante con la sustancia de reticulación. Un anticoagulante típico es EDTA o heparina, aunque en la técnica son conocidos otros anticoagulantes.
Preferentemente, se usa una concentración de sustancia de reticulación que sea suficiente para reticular sustancialmente todos los elementos celulares de la sangre.
El dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre puede ser cualquiera de las alternativas descritas anteriormente en la Sección I, con la diferencia de que la almohadilla de material poroso actúa como un filtro para eliminar componentes celulares de la sangre ya aglutinados o agregados en vez de proporcionar medios para aglutinación o agregación de los componentes celulares.
La porción líquida separada de la sangre puede someterse a ensayo a continuación para un analito según se ha descrito anteriormente, normalmente por un procedimiento inmunocromatográfico. Si el dispositivo usado para separar las porciones líquidas de la sangre de los componentes celulares de la sangre incluye un medio cromatográfico, según se ha descrito anteriormente, el ensayo puede realizarse en el dispositivo: esto se prefiere por lo general. En caso contrario, la porción líquida separada de la sangre puede extraerse para un ensayo en otro dispositivo. Estos ensayos pueden realizarse en dispositivos de ensayo tales como los desvelados en la patente pendiente de tramitación US nº 5.877.028 de Howard M. Chandler y col. titulada "Opposable-Element Chromatographic Assay Device". Estos dispositivos incluyen dispositivos de ensayos unidireccionales y bidireccionales.
Alternativamente, en vez de añadir la sustancia de reticulación a una muestra de sangre completa, puede añadirse una muestra de sangre a un tubo capilar recubierto con una sustancia de reticulación, con o sin un anticoagulante. La sustancia de reticulación y anticoagulante, si están presentes, se dejan disolver a continuación en la muestra de sangre. La muestra de sangre con la sustancia de reticulación y anticoagulante disuelta en la misma se aplica a continuación al dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre según antes se ha descrito. De nuevo, el dispositivo actúa como un filtro para las células sanguíneas aglutinadas o agregadas. Un ensayo puede realizarse según se ha descrito anteriormente.
Esta alternativa se muestra generalmente en la Figura 8. La muestra de sangre 400 se añade al tubo capilar 402 y, después de mezclado, se aplica el tubo capilar al dispositivo de separación 404.
Ventajas de la invención
La presente invención proporciona un medio rápido, eficaz y sencillo de separar células sanguíneas de la porción líquida de la sangre para la realización de un ensayo de unión específica como inmunoensayos, así como otras pruebas. En particular, la presente invención proporciona un dispositivo integrado que incorpora un elemento de ensayo y medio para separar las porciones líquidas de la sangre de los componentes celulares de la sangre de manera que pueda someterse a ensayo fácilmente un analito presente en las porciones líquidas de la sangre. Esto evita la necesidad de una extracción preliminar de suero o plasma de la sangre con la necesidad pretendida de una eliminación segura de las fracciones de sangre. El uso de un dispositivo de ensayo según la presente invención permite la eliminación cómoda y segura de dispositivos de prueba usados. Además, el dispositivo mejorado es capaz de un ensayo directo de un analito deseado cuando se aplica al dispositivo una muestra de sangre completa.
Los dispositivos de ensayo según la presente invención pueden realizar una amplia gama de inmunoensayos, que incluyen inmunoensayos en sándwich y competitivos. En particular, los dispositivos de ensayo según la presente invención son adecuados para la detección y/o determinación de antígenos y anticuerpos.
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Aunque la presente invención se ha descrito con considerable detalle, con referencia a ciertas variaciones preferidas de la misma, son posibles otras versiones y formas de realización. Estas versiones incluyen otras configuraciones de dispositivos de dos componentes que operan según los principios básicos descritos en el presente documento. Estas versiones incluyen dispositivos de ensayo adaptados para inmunoensayos competitivos, así como inmunoensayos en sándwich en varias configuraciones. En particular, los dispositivos según la presente invención pueden adaptarse para hacer uso de flujo radial o circunferencial a través de un medio cromatográfico en vez de flujo lineal. Los dispositivos según la presente invención pueden adaptarse también para realizar múltiples ensayos simultáneamente, con múltiples segundas matrices porosas, dispuestas circularmente o como los radios de una rueda, o en otras configuraciones. Aunque los dispositivos según la presente invención se adaptan particularmente para la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre y la realización de ensayos en la porción líquida de la sangre, los dispositivos según la presente invención pueden usarse también para la eliminación de células sanguíneas de otros líquidos corporales que pueden contenerlos, tal como líquido cefalorraquídeo, y para ensayos en dichos líquidos después de la eliminación de células sanguíneas de ellos. Los dispositivos según la presente invención pueden adaptarse también para realizar otros ensayos, como ensayos enzimáticos y ensayos colorimétricos.
Los dispositivos de la presente invención pueden abarcar variaciones en las cuales los dos componentes del dispositivo no se mantienen en una configuración fija permanentemente, sino que pueden separarse y reunirse para realizar el ensayo, como por fuerzas eléctricas y magnéticas o usando un fiador separable tal como una tela de gancho y ojal, por ejemplo Velcro^{TM}. Además se contemplan dispositivos que presentan tres componentes en una configuración plegable.

Claims (8)

1. Un dispositivo para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende:
(a)
un primer componente oponible que incluye:
(i)
una primera matriz de separación porosa permeable a la porción líquida de la sangre pero capaz de atrapar los componentes celulares de la sangre; y
(ii)
una segunda matriz porosa en contacto operativo con la primera matriz de separación porosa que permite que la porción líquida de la sangre fluya por acción capilar a través de la segunda matriz porosa; y
(b)
un segundo componente oponible que puede fijarse al primer componente oponible de manera que los componentes oponibles primero y segundo pueden ponerse en oposición para transferir un reactivo del segundo componente oponible al primer componente oponible por presión; y en que dicho segundo componente oponible incluye también un absorbedor posicionado durante el uso para invertir el flujo de fluido en dicho dispositivo;
por medio de lo cual la separación de la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre se produce por flujo a través de las matrices primera y segunda del primer componente oponible.
2. El dispositivo de la reivindicación 1 en el que la primera matriz de separación porosa contiene un aglutinante para los componentes celulares de la sangre.
3. El dispositivo de la reivindicación 2, en el que el aglutinante es un anticuerpo anticélulas sanguíneas.
4. El dispositivo de la reivindicación 3 en el que el anticuerpo anticélulas sanguíneas es un anticuerpo antieritrocitos.
5. El dispositivo de la reivindicación 2, en el que el aglutinante es una lectina.
6. El dispositivo de la reivindicación 1 en el que la segunda matriz es una membrana para separación cromatográfica.
7. El dispositivo de la reivindicación 1 en el que la primera matriz de separación porosa se impregna con un carbohidrato capaz de agregar células sanguíneas.
8. Un procedimiento para separar la porción líquida de la sangre de los componentes celulares de la sangre que comprende:
(a)
aplicar una muestra de sangre a la primera matriz de separación porosa en el primer componente oponible del dispositivo de la reivindicación 1;
(b)
permitir que la muestra de sangre fluya a través de la primera matriz de separación porosa para separar la porción líquida de la muestra de sangre de los componentes celulares de la muestra de sangre;
(c)
permitir que la porción líquida de la muestra de sangre fluya a través de la segunda matriz de separación porosa en una primera dirección;
(d)
poner los componentes oponibles primero y segundo en oposición para transferir fluido desde el primer componente oponible al segundo componente oponible por presión; y
(e)
permitir adicionalmente que la muestra de sangre fluya a través de la segunda matriz de separación porosa en una segunda dirección opuesta a la primera dirección.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100241928B1 (ko) * 1997-03-31 2000-03-02 박종근 다공성 박막 위에 전극이 일체로 형성된 정량장치 및 이를 이용한 정량방법
AU738143B2 (en) * 1997-10-07 2001-09-13 Neogen Corporation Assay device for determining analytes in a liquid dairy product
GB9821526D0 (en) * 1998-10-02 1998-11-25 Genosis Inc Capture assay
US6036659A (en) 1998-10-09 2000-03-14 Flexsite Diagnostics, Inc. Collection device for biological samples and methods of use
US6511814B1 (en) * 1999-03-26 2003-01-28 Idexx Laboratories, Inc. Method and device for detecting analytes in fluids
US6551842B1 (en) 1999-03-26 2003-04-22 Idexx Laboratories, Inc. Method and device for detecting analytes in fluids
GB9929272D0 (en) * 1999-12-10 2000-02-02 Diagnology Limited Assay
US6316205B1 (en) * 2000-01-28 2001-11-13 Genelabs Diagnostics Pte Ltd. Assay devices and methods of analyte detection
AU2001241158A1 (en) * 2000-03-17 2001-09-24 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Test paper
CN1161612C (zh) 2000-06-01 2004-08-11 松下电器产业株式会社 生物传感器及血液成分分析方法
CN1175269C (zh) * 2000-06-28 2004-11-10 松下电器产业株式会社 生物传感器
US6612447B1 (en) * 2000-07-24 2003-09-02 Baxter International Inc. Blood collection systems and filters using a porous membrane element
US20020036170A1 (en) * 2000-08-11 2002-03-28 Harvey Michael A. Lateral flower plasma separation device
CA2450632A1 (en) * 2001-01-12 2002-07-18 Toray Industries, Inc. Selectively hybridizable substance immobilization fiber, fiber array compsiring bundle of such fibers, selective hybridizing method, device therefor, and base
WO2002084291A1 (fr) 2001-04-12 2002-10-24 Arkray, Inc. Instrument d'analyse de prelevement
US7011852B2 (en) * 2001-05-07 2006-03-14 Hemogenesis, Llc Separation of platelets from whole blood for use as a healant
US8101077B2 (en) * 2001-05-07 2012-01-24 Sivaprasad Sukavaneshvar Device for separating platelets from fluid suspensions
KR20010085007A (ko) * 2001-07-12 2001-09-07 김희태 반정량 멤브레인 면역 크로마토그래프 기법 및 이의제조방법.
US7569184B2 (en) * 2002-04-23 2009-08-04 Home Access Health Corporation Quantitative analysis of a biological sample of unknown quantity
US7611670B2 (en) * 2002-04-23 2009-11-03 Home Access Health Corporation Quantitative analysis of a biological sample of unknown quantity
ATE520034T1 (de) * 2002-04-23 2011-08-15 Home Access Health Corp Quantitative analyse einer biologischen probe unbekannter menge
WO2004008146A2 (en) * 2002-07-12 2004-01-22 Strategic Diagnostics Inc. Test strips moveable by magnetic fields
JP4339570B2 (ja) * 2002-10-25 2009-10-07 株式会社エスアールエル 血液検体キャリアー構成体
JP4742183B2 (ja) * 2003-03-10 2011-08-10 アークレイ株式会社 血球分離膜およびこれを用いた血液保持用具
US8454566B2 (en) * 2003-07-10 2013-06-04 Medtronic Minimed, Inc. Methods and compositions for the inhibition of biofilms on medical devices
US20050025823A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-03 Fong Andy A.T. Methods of use of herbal compositions
US8465696B2 (en) * 2004-02-03 2013-06-18 Polymer Technology Systems, Inc. Dry test strip with controlled flow and method of manufacturing same
US7625721B2 (en) * 2004-02-03 2009-12-01 Polymer Technology Systems, Inc. Non-precipitating bodily fluid analysis system
US20060062688A1 (en) * 2004-02-03 2006-03-23 Polymer Technology Systems, Inc. Bodily fluid analysis system
CN100359314C (zh) * 2004-02-17 2008-01-02 陈格 液体样品的干燥保存方法
DE602005024965D1 (de) 2004-06-07 2011-01-05 Denka Seiken Kk Chromatographische nachweisvorrichtung
JP4956705B2 (ja) * 2004-07-02 2012-06-20 株式会社三和化学研究所 免疫測定装置及び方法
US20060019406A1 (en) * 2004-07-23 2006-01-26 Ning Wei Lateral flow device for the detection of large pathogens
US7896167B2 (en) * 2004-08-05 2011-03-01 Akers Biosciences, Inc. Blood separator and method of separating a fluid fraction from whole blood
US20060062690A1 (en) * 2004-08-17 2006-03-23 Polymer Technology Systems, Inc. Apparatus and method of manufacturing bodily fluid test strip
US20060068500A1 (en) * 2004-09-28 2006-03-30 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detecting yeast infections using a lateral flow assay
US7442557B1 (en) 2004-10-22 2008-10-28 Idexx Laboratories, Inc. Bi-directional flow assay device with reagent bridge
JP2006133143A (ja) * 2004-11-08 2006-05-25 Japan Vilene Co Ltd 血漿又は血清の保持材及び血液分離用具
NL1027737C2 (nl) * 2004-12-14 2006-06-16 Teststrip B V Chromatografische analyse-inrichting en test kit.
DE602006018595D1 (de) * 2005-04-08 2011-01-13 Medical Discovery Partners Llc Verfahren zum anreichern von subpopulationen seltener zellen aus dem blut
CA2608162C (en) * 2005-05-23 2013-11-12 Phadia Ab Two step lateral flow assay methods and devices
EP1896851B1 (en) 2005-06-28 2013-08-21 ZBx Corporation Membrane array and analytical device
US7618810B2 (en) * 2005-12-14 2009-11-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Metering strip and method for lateral flow assay devices
US8377379B2 (en) * 2006-12-15 2013-02-19 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device
JP2008249606A (ja) * 2007-03-30 2008-10-16 Sysmex Corp クロマトグラフィー用試験具
JP4990692B2 (ja) * 2007-06-22 2012-08-01 株式会社ビーエル イムノクロマトグラフィー測定法及びキット
US8535617B2 (en) * 2007-11-30 2013-09-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Blood cell barrier for a lateral flow device
EP2227269B1 (en) * 2007-12-12 2021-04-28 Micropoint Bioscience Inc. Rapid and efficient filtering whole blood in a capillary flow device
US9968931B2 (en) * 2007-12-12 2018-05-15 Nan Zhang Rapid and efficient filtering whole blood in capillary flow device
US8613214B2 (en) * 2008-01-09 2013-12-24 Orono Spectral Solutions, Inc. Apparatus and method for determining analyte content in a fluid
US8393198B2 (en) * 2008-01-09 2013-03-12 OronoSpectral Solutions, Inc. Apparatus and method for determining analyte content in a fluid
JP4428670B2 (ja) * 2008-03-06 2010-03-10 Ｔａｎａｋａホールディングス株式会社 免疫学的測定法、キット及び展開溶媒
US8470259B2 (en) 2008-03-07 2013-06-25 Advanced Microdevices Pvt Ltd Method and device for particle removal and droplet preparation for qualitative and quantitative bioanalysis
JP2009236685A (ja) * 2008-03-27 2009-10-15 Sysmex Corp クロマトグラフィー用試験具
WO2009121043A2 (en) * 2008-03-27 2009-10-01 President And Fellows Of Harvard College Cotton thread as a low-cost multi-assay diagnostic platform
JP5117928B2 (ja) * 2008-05-27 2013-01-16 富士フイルム株式会社 イムノクロマトグラフデバイス
US9952211B2 (en) 2008-06-29 2018-04-24 Realbio Technologies Ltd. Liquid-transfer device particularly useful as a capturing device in a biological assay process
KR101032691B1 (ko) * 2009-04-17 2011-05-06 (주)디지탈옵틱 신속한 혈구분리가 가능한 질병진단용 바이오센서
WO2010129302A1 (en) * 2009-04-28 2010-11-11 Innovative Laboratory Technologies, Inc. Lateral-flow immuno-chromatographic assay devices
US9475914B2 (en) * 2010-01-08 2016-10-25 University Of Tasmania Porous polymer monoliths, processes for preparation and use thereof
BR112013002064B1 (pt) * 2010-07-27 2020-11-24 Northwestern University Dispositivo e metodos para filtragem do plasma sanguíneo
US8956859B1 (en) 2010-08-13 2015-02-17 Aviex Technologies Llc Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines
CN102375055A (zh) * 2010-08-19 2012-03-14 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 一种多重检测免疫层析芯片
EP2785429A4 (en) 2011-11-30 2015-10-28 Wellstat Diagnostics Llc FILTRATION MODULE
US20130164193A1 (en) * 2011-12-22 2013-06-27 Life Technologies Corporation Sequential lateral flow capillary device for analyte determination
AU2013203281A1 (en) 2012-02-03 2013-08-22 Axxin Pty Ltd Nucleic acid amplification and detection apparatus and method
EP3422000A1 (en) * 2012-03-30 2019-01-02 Sekisui Medical Co., Ltd. Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting object in red blood cell-containing sample
US9075042B2 (en) 2012-05-15 2015-07-07 Wellstat Diagnostics, Llc Diagnostic systems and cartridges
US9213043B2 (en) 2012-05-15 2015-12-15 Wellstat Diagnostics, Llc Clinical diagnostic system including instrument and cartridge
US9625465B2 (en) 2012-05-15 2017-04-18 Defined Diagnostics, Llc Clinical diagnostic systems
US10048262B2 (en) 2012-06-13 2018-08-14 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Method for detecting specific substance in milk
EP2883048A1 (en) * 2012-08-08 2015-06-17 Koninklijke Philips N.V. Plasma separation using a drop of blood
US9285336B2 (en) * 2012-08-09 2016-03-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Sensing platform for quantum transduction of chemical information
US10248765B1 (en) 2012-12-05 2019-04-02 Theranos Ip Company, Llc Systems, devices, and methods for bodily fluid sample collection, transport, and handling
SG11201507325XA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Theranos Inc Methods and devices for sample collection and sample separation
US10101293B2 (en) 2013-08-09 2018-10-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junio Sensing platform for transduction of information
EP3114451B1 (en) * 2014-03-05 2022-10-19 Labrador Diagnostics LLC Device for sample separation
CA2953755C (en) 2014-07-03 2022-05-03 Abionic Sa Capsule for rapid molecular quantification of a fluid sample such as whole blood
WO2016073415A2 (en) 2014-11-04 2016-05-12 Wainamics, Inc. Microscale plasma separator
ES2809600T3 (es) 2014-11-14 2021-03-04 Axxin Pty Ltd Conjunto de recogida y almacenamiento de muestras biológicas
CN107567306B (zh) * 2015-05-14 2020-06-26 通用电气公司 用于血浆的分离和收集的装置
EP3325156A4 (en) 2015-07-17 2019-01-16 Axxin Pty Ltd DIAGNOSTIC TEST ASSEMBLY, APPARATUS, METHOD
US10371606B2 (en) 2015-07-21 2019-08-06 Theraos IP Company, LLC Bodily fluid sample collection and transport
US11247208B2 (en) 2015-09-09 2022-02-15 Labrador Diagnostics Llc Methods and devices for sample collection and sample separation
CN105445454B (zh) * 2015-11-20 2016-11-30 广州瑞博奥生物科技有限公司 一种可定量的免疫层析装置
US10983119B2 (en) * 2016-01-25 2021-04-20 General Electric Company Device for rapid diagnostic tests to detect antigens with improved sensitivity
CN117214272A (zh) 2016-04-28 2023-12-12 小利兰·斯坦福大学董事会 中等规模系统反馈诱发的耗散和噪声抑制
JP6366025B2 (ja) * 2016-10-03 2018-08-01 セルスペクト株式会社 血漿分離装置及び血漿分離方法
WO2020049569A2 (en) 2018-09-05 2020-03-12 Hero Scientific Ltd. Testing for particulates
GB201703383D0 (en) 2017-03-02 2017-04-19 Gargle Tech Ltd Testing for particulates
US11857966B1 (en) 2017-03-15 2024-01-02 Labrador Diagnostics Llc Methods and devices for sample collection and sample separation
WO2018175169A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 Wainamics, Inc. Small volume self-metered blood separation device
CA3076836A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Axxin Pty Ltd Diagnostic test system and method
CN109541215A (zh) * 2018-12-20 2019-03-29 中国人民解放军陆军军医大学 一种肿瘤检测物及其制备方法与应用
US11885568B2 (en) 2019-01-09 2024-01-30 Lawrence Livermore National Security, Llc Systems and methods for periodic nodal surface based reactors, distributors, contactors and heat exchangers
US11389765B2 (en) * 2019-01-09 2022-07-19 Lawrence Livermore National Security, Llc Hierarchical triply periodic minimal surface structures as heat exchangers and reactors
EP3983127A4 (en) * 2019-06-12 2022-07-20 Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. PLASMA SEPARATION AND SAMPLE MEASURING DEVICE, KITS AND METHODS OF USE THEREOF
CN111721880B (zh) * 2020-07-02 2023-01-10 江中药业股份有限公司 一种双柱串联hplc-ms肿节风指纹图谱建立方法
CN116438435A (zh) * 2020-11-25 2023-07-14 株式会社普欧威盖特 用于将血浆或血清分离并保管的介质、其制造方法、器件、试剂盒和糖化蛋白的测定方法
WO2022149135A2 (en) 2021-01-06 2022-07-14 Hero Scientific Ltd. Filtration sampling devices
WO2023039536A1 (en) * 2021-09-10 2023-03-16 Quidel Corporation Agglutinating agents, devices and methods for whole blood assays
US12030045B1 (en) 2023-01-05 2024-07-09 Sequitur Health Corp. Devices, methods, and systems for deriving ammonia gas from whole blood
US12140534B2 (en) * 2023-01-05 2024-11-12 Sequitur Health Corp. Devices, methods, and systems for deriving a permeate from a feed solution

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3768978A (en) * 1971-03-01 1973-10-30 Hamilton Co Disposable pipette
US3723064A (en) * 1971-07-26 1973-03-27 L Liotta Method and device for determining the concentration of a material in a liquid
BE792129A (fr) 1971-12-06 1973-05-30 Takeda Chemical Industries Ltd Derives de pyrimido(4,5-d)pyridazine et leur procede de production
US3902964A (en) 1971-12-13 1975-09-02 U S Medical Research And Dev I Method of and apparatus for chemically separating plasma or serum from formed elements of blood
CA1054034A (en) 1975-06-20 1979-05-08 Barbara J. Bruschi Multilayer analytical element
US3990850A (en) * 1976-01-06 1976-11-09 Akzona Incorporated Diagnostic test card
US4110079A (en) * 1977-06-09 1978-08-29 Eastman Kodak Company Analytical element for clinical analysis
US4160008A (en) * 1978-01-26 1979-07-03 Miles Laboratories, Inc. Multilayered test device for determining the presence of a liquid sample component, and method of use
JPS587332Y2 (ja) * 1978-06-06 1983-02-08 富士写真フイルム株式会社 多層血液化学分析材料
DE2932973A1 (de) * 1978-08-14 1980-02-28 Fuji Photo Film Co Ltd Integrales mehrschichtiges material fuer die chemische analyse des blutes
JPH0142041Y2 (es) * 1978-12-11 1989-12-11
US4288228A (en) * 1979-01-31 1981-09-08 Technicon Instruments Corporation Whole blood analyses and diffusion apparatus therefor
US4271119A (en) 1979-07-23 1981-06-02 Eastman Kodak Company Capillary transport device having connected transport zones
US4816224A (en) 1980-08-05 1989-03-28 Boehringer Mannheim Gmbh Device for separating plasma or serum from whole blood and analyzing the same
DE3029579C2 (de) 1980-08-05 1985-12-12 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut
US4426451A (en) * 1981-01-28 1984-01-17 Eastman Kodak Company Multi-zoned reaction vessel having pressure-actuatable control means between zones
DE3323973A1 (de) * 1983-07-02 1985-01-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Erythrozyten-rueckhaltesubstrate
US4594327A (en) 1983-11-02 1986-06-10 Syntex (U.S.A.) Inc. Assay method for whole blood samples
US4678757A (en) * 1985-04-11 1987-07-07 Smithkline Diagnostics, Inc. Device and method for whole blood separation and analysis
DE3523439A1 (de) * 1985-06-29 1987-01-08 Boehringer Mannheim Gmbh Testtraeger
US4790979A (en) 1986-08-29 1988-12-13 Technimed Corporation Test strip and fixture
DE3630999A1 (de) * 1986-09-12 1988-03-17 Boehringer Mannheim Gmbh Mehrschichtiger testtraeger
US4753776A (en) * 1986-10-29 1988-06-28 Biotrack, Inc. Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter
US5135719A (en) * 1986-10-29 1992-08-04 Biotrack, Inc. Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter
DE3643516A1 (de) 1986-12-19 1988-06-30 Boehringer Mannheim Gmbh Testtraeger fuer die analytische bestimmung von bestandteilen von koerperfluessigkeiten
DE3715485A1 (de) * 1987-05-09 1988-11-17 Boehringer Mannheim Gmbh Stabilisierung von ss-galactosidase
US4943522A (en) * 1987-06-01 1990-07-24 Quidel Lateral flow, non-bibulous membrane assay protocols
US4987085A (en) * 1987-06-22 1991-01-22 Chemtrak Inc. Blood filtering metering device
US5215886A (en) * 1987-06-22 1993-06-01 Patel P Jivan HDL determination in whole blood
JPH0623759B2 (ja) * 1987-07-08 1994-03-30 富士写真フイルム株式会社 全血分析要素
US4883764A (en) 1987-07-20 1989-11-28 Kloepfer Mary A Blood test strip
US5209904A (en) * 1987-12-23 1993-05-11 Abbott Laboratories Agglutination reaction device utilizing selectively impregnated porous material
NL8800796A (nl) * 1988-03-29 1989-10-16 X Flow Bv Werkwijze voor de chemische analyse van bestanddelen van een lichaamsvloeistof, alsmede een testinrichting en testpakket voor een dergelijke analyse.
DE3814370A1 (de) * 1988-04-28 1989-11-09 Boehringer Mannheim Gmbh Testtraeger fuer die analyse einer probenfluessigkeit, verfahren zur durchfuehrung einer solchen analyse und herstellungsverfahren
US4963325A (en) * 1988-05-06 1990-10-16 Hygeia Sciences, Inc. Swab expressor immunoassay device
US5096809A (en) * 1988-07-25 1992-03-17 Pacific Biotech, Inc. Whole blood assays using porous membrane support devices
US5418129A (en) * 1989-01-30 1995-05-23 The Biomembrane Institute Blood treatment method
US5064541A (en) * 1989-04-07 1991-11-12 Abbott Laboratories Devices and methods for the collection of a predetermined volume of plasma or serum
US4933092A (en) * 1989-04-07 1990-06-12 Abbott Laboratories Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood
NL8901090A (nl) 1989-04-28 1990-11-16 X Flow Bv Werkwijze voor het vervaardigen van een microporeus membraan en een dergelijk membraan.
DE3922495A1 (de) * 1989-07-08 1991-01-17 Miles Inc Analyseverfahren fuer substanzen aus biologischen fluessigkeiten, insbesondere vollblut
US5306623A (en) * 1989-08-28 1994-04-26 Lifescan, Inc. Visual blood glucose concentration test strip
EP0427534B1 (en) * 1989-11-08 1995-08-02 Chemtrak, Inc. Improvement in non-instrumental diagnostic assay distance determination
US5435970A (en) * 1989-12-18 1995-07-25 Environmental Diagnostics, Inc. Device for analysis for constituents in biological fluids
JP2618727B2 (ja) 1990-01-19 1997-06-11 富士写真フイルム株式会社 全血中の被検成分の定量方法
US5212060A (en) 1990-04-27 1993-05-18 Genesis Labs, Inc. Dry test strip comprising a dextran barrier for excluding erythrocytes
DE4015589A1 (de) * 1990-05-15 1991-11-21 Boehringer Mannheim Gmbh Vorrichtung und deren verwendung zur abtrennung von plasma aus vollblut
US5118428A (en) * 1990-11-13 1992-06-02 Quidel Method to remove red blood cells from whole blood samples
US5468648A (en) * 1991-05-29 1995-11-21 Smithkline Diagnostics, Inc. Interrupted-flow assay device
US5877028A (en) * 1991-05-29 1999-03-02 Smithkline Diagnostics, Inc. Immunochromatographic assay device
DE69220871T2 (de) * 1991-10-03 1997-11-20 Bayer Ag Vorrichtung und Verfahren zur Auftrennung und Analyse von Vollblut
US5215102A (en) * 1991-10-25 1993-06-01 La Mina Ltd. Capillary blood antigen testing apparatus
JPH05188053A (ja) * 1992-01-10 1993-07-27 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 血液から血清又は血漿成分を分離する器具
JP2948318B2 (ja) * 1992-03-10 1999-09-13 クイデル コーポレイション 特異的結合アッセイ用の赤血球の分離方法
GR1002549B (el) * 1992-05-12 1997-01-28 Lifescan Inc. Λωρις εξετασεως με μεταφορικο μεσο δια μεταφορα ρευστου.
CA2104976A1 (en) * 1992-09-02 1994-03-03 Stephan D. Daubney Separation of plasma or serum from whole blood using a red blood cell binding component and a polymer containing multiple cationic sites
US5354692A (en) * 1992-09-08 1994-10-11 Pacific Biotech, Inc. Analyte detection device including a hydrophobic barrier for improved fluid flow
US5460974A (en) * 1992-10-13 1995-10-24 Miles Inc. Method of assaying whole blood for HDL cholesterol
WO1994018559A1 (en) * 1993-02-11 1994-08-18 Radiometer Medical A/S Asymmetric membrane sensor
US5652148A (en) * 1993-04-20 1997-07-29 Actimed Laboratories, Inc. Method and apparatus for red blood cell separation
US5397479A (en) * 1993-04-26 1995-03-14 International Remote Imaging Systems, Inc. Composition and method for enrichment of white blood cells from whole human blood
US5441698A (en) 1993-09-10 1995-08-15 Beckman Instruments, Inc. Bevel closure and device

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