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ES2234144T3 - Analogos de peptidos inhibidores de la hepatitis c. - Google Patents

Analogos de peptidos inhibidores de la hepatitis c.

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Publication number
ES2234144T3
ES2234144T3 ES98939997T ES98939997T ES2234144T3 ES 2234144 T3 ES2234144 T3 ES 2234144T3 ES 98939997 T ES98939997 T ES 98939997T ES 98939997 T ES98939997 T ES 98939997T ES 2234144 T3 ES2234144 T3 ES 2234144T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
formula
alkyl
carboxy
group
Prior art date
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Expired - Lifetime
Application number
ES98939997T
Other languages
English (en)
Inventor
Montse Llinas-Brunet
Murray Douglas Bailey
Teddy Halmos
Marc-Andre Poupart
Youla Tsantrizos
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boehringer Ingelheim Canada Ltd
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Canada Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Canada Ltd filed Critical Boehringer Ingelheim Canada Ltd
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Expired - Lifetime legal-status Critical Current

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    • C07ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
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    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
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    • AHUMAN NECESSITIES
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Abstract

Un compuesto de **fórmula** en la que B es un derivado de acilo de fórmula R11-C(O)- en que R11 es alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con carboxilo; o R11 es arilo C6 o C10 o arilalquilo C7-16 opcionalmente sustituido con un alquilo C1-6; R6 es la cadena lateral de Asp o Glu; R5 es la cadena lateral de D-Asp, D-Val o D-Glu; Y es H o alquilo C1-6; R4 es alquilo C1-10; cicloalquilo C3-10; R3 es alquilo C1-10; cicloalquilo C3-10.

Description

Análogos de péptidos inhibidores de la hepatitis C.
Campo del invento
El presente invento se refiere a compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de una infección por el virus de la hepatitis C (HCV). En particular, el presente invento proporciona nuevos péptidos y sus análogos, composiciones farmacéuticas que contienen dichos péptidos, y métodos para usar dichos péptidos en el tratamiento de una infección por HCV.
Antecedentes del invento
El virus de la hepatitis C (HCV) es el agente etiológico principal de la hepatitis no A no B posterior a una transfusión y adquirida en comunidades por todo el mundo. Se estima que más de 100 millones de personas por todo el mundo son infectadas por el virus. Un alto porcentaje de los portadores resultan infectados crónicamente y muchos progresan hasta una enfermedad crónica hepática, la denominada hepatitis C crónica. Este grupo se encuentra a su vez en alto riesgo de con-traer una grave enfermedad hepática tal como la cirrosis hepática, el carcinoma hepatocelular y la enfermedad hepática terminal que conduce a la muerte.
El mecanismo mediante el cual el HCV establece la persistencia vírica y causa una alta tasa de enfermedades hepáticas crónicas, no ha sido explicado todavía a fondo. No se conoce cómo el HCV interactúa con el sistema inmunitario de un organismo hospedante y lo evade. Además, los papeles de las respuestas inmunitarias celulares y humorales en la protección frente a una infección y una enfermedad de HCV han de ser todavía demostrados. Se ha informado acerca de inmunoglobulinas adecuadas para la profilaxis de la hepatitis vírica asociada con una transfusión. Sin embargo, el Centro de Control de Enfermedades no recomienda actualmente las inmunoglobulinas para esta finalidad.
La falta de una respuesta inmunitaria protectora eficaz está obstaculizando el desarrollo de una vacuna o de adecuadas medidas de profilaxis posteriores a la exposición, de manera tal que, a corto plazo, las esperanzas están firmemente puestas en las intervenciones antivíricas.
Se han realizado diversos estudios clínicos con la meta de identificar agentes farmacéuticos que sean capaces de tratar eficazmente una infección por HCV en pacientes afligidos con una hepatitis C crónica. Estos estudios han implicado el uso del interferón-alfa, a solas y en combinación con otros agentes antivíricos. Dichos estudios han demostrado que un número sustancial de los participantes en ellos no responden a estas terapias, y entre los que sí responden favorablemente, se encontró que una gran proporción de ellos recaen después de la terminación del tratamiento.
Hasta una época reciente, el interferón (IFN) constituía la única terapia disponible con beneficio demostrado que había sido aprobada a escala clínica para pacientes con hepatitis C crónica. Sin embargo, la tasa de respuestas prolongadas es baja, y un tratamiento con interferón induce también graves efectos colaterales (a saber, retinopatía, tiroiditis, pancreatitis aguda, depresión) que disminuyen la calidad de vida de los pacientes tratados. Recientemente, el interferón en combinación con ribavirina ha sido aprobado para pacientes que no responden al IFN a solas. Sin embargo, los efectos colaterales causados por el IFN no son aliviados con esta terapia combinada.
Por lo tanto, existe una necesidad del desarrollo de eficaces agentes antivíricos para el tratamiento de infecciones causadas por el HCV, que solventen las limitaciones de las terapias farmacéuticas existentes.
El HCV es un virus de ARN de cadena positiva con envoltura de la familia de los Flaviviridae. El genoma del ARN del HCV de una única cadena presenta una longitud de aproximadamente 9.500 nucleótidos y tiene un único cuadro de lectura abierto (ORF, de open reading frame) que codifica una única proteína grande de aproximadamente 3.000 aminoácidos. En células infectadas, esta poliproteína es cortada en sitios múltiples por proteasas celulares y víricas para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS, non-structural). En el caso del HCV, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) es efectuada por dos proteasas víricas. La primera de ellas, todavía mal caracterizada, corta en la unión entre NS2 y NS3; la segunda de ellas es una proteasa de serina contenida dentro de la región terminal de N de la NS3 (en lo sucesivo citada como proteasa de NS3) y media en todos los cortes subsiguientes realizados secuencia abajo de la NS3, tanto en cis, en el sitio de corte de NS3-NS4A, como en trans, para restantes sitios de NS4A-NS4B, NSAB-NS5A y NS5A-NS5B. La proteína NS4A manifiesta servir para funciones múltiples, actuando como un cofactor para la proteasa de NS3 y ayudando posiblemente a la localización en membranas de la NS3 y otros componentes de replicasas víricas. La formación de un complejo de la proteína NS3 con NS4 parece ser necesaria para los episodios de tratamiento, intensificando la eficiencia proteolítica en todos los sitios. La proteína NS3 exhibe también actividades de nucleósido-trifosfatasas y de ARN-helicasas. La NS5B es una polimerasa de ARN dependiente de ARN, que está implicada en la replicación del HCV.
Una estrategia general para el desarrollo de agentes antivíricos consiste en desactivar las enzimas codificadas por virus que son esenciales para la replicación de los virus. En este contexto, la solicitud de patente WO 97/06804 describe al enantiómero (-) del compuesto análogo a nucleósido citosina-1,3-oxatiolano (también conocido como 3TC) como activo contra el HCV. Este compuesto, aunque se ha informado como seguro en pruebas clínicas anteriores contra los HIV y HBV, todavía ha de probarse a escala clínica que es activo contra el HCV y su mecanismo de acción contra el virus ha de ser informado todavía.
Intensos esfuerzos para descubrir compuestos que inhiban a la proteasa de NS3 o a la helicasa de ARN del HCV han conducido a las siguientes descripciones:
\bullet
La patente de los EE.UU. 5.633.388 describe carboxamidas sustituidas con radicales heterocíclicos y compuestos análogos a ellas como siendo activas contra el HCV. Estos compuestos están dirigidos contra la actividad de helicasa que presenta la proteína NS3 del virus, pero todavía no se ha informado sobre ensayos clínicos.
\bullet
Se ha informado por Chu y colaboradores (Tet. Lett., (1996), 7.229-7.232) acerca de una fenantreno-quinona como poseedora de actividad contra la proteasa NS3 del HCV in vitro. No se ha informado de ningún desarrollo ulterior sobre este compuesto.
\bullet
Un artículo presentado en la Novena Conferencia Internacional sobre Investigación Antivírica, en Urabandai, Fukyshima, Japón (1996) (Antiviral Research, 30, 1, 1996; A23 (resumen 19)) informa de que ciertos derivados de tiazolidina son inhibidores de la proteasa del HCV.
\bullet
Mori, Biochem. Biophys. Res. Common., vol. 231, nº 3, 1997, páginas 738-742 describe la inhibición de la proteasa NS3 mediante el péptido de escisión GEAGDDIVPC en el extremo terminal de N.
Varios estudios han informado sobre compuestos inhibidores de otras proteasas de serina, tales como la elastasa de leucocitos humanos. Una familia de estos compuestos es informada en el documento de patente PCT WO 95/33764 (Hoechst Marion Roussel, 1995). Los péptidos descritos en esa solicitud son compuestos análogos a péptidos morfolinilcarbonil-benzoil-péptidos que son estructuralmente diferentes de los péptidos del presente invento.
\bullet
El documento WO 98/17679 de Vertex Pharmaceuticals Inc. describe inhibidores de una proteasa de serina, particularmente la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C. Estos inhibidores son compuestos análogos a péptidos basados en el substrato natural NS5A/5B que contiene aldehídos en el extremo terminal de C, \alpha-cetoamidas y cetonas fluoradas.
\bullet
Hoffman LaRoche ha informado también acerca de hexapéptidos que son inhibidores de proteinasas útiles como agentes antivíricos para el tratamiento de una infección por HCV. Estos péptidos contienen un aldehído y un ácido borónico en el extremo terminal de C.
\bullet
Steinkühler y colaboradores, e Ingallinella y colaboradores han publicado acerca de la inhibición del producto NS4A-4B (Biochemistry (1998), 37, 8.899-8.905 y 8.906-8.914). Estos péptidos y compuestos análogos a péptidos fueron publicados después de la fecha de prioridad de la presente solicitud.
Una ventaja del presente invento consiste en que proporciona péptidos que son inhibidores de la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C.
Sumario del invento
Los autores del presente invento hemos investigado sobre péptidos que son potencialmente inhibidores de la proteasa de NS3. El descubrimiento de que el producto de corte en el extremo terminal de N (Ac-D-D-I-V-P-C-OH) de un compuesto análogo a un substrato natural de la proteasa de NS3 era inhibidor nos condujo a los compuestos análogos a péptidos del presente invento.
Se incluyen en el alcance del invento los compuestos de fórmula (I):
1
en la que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en que R_{11} es alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; o R_{11} es arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con un alquilo C_{1-6};
R_{6} es la cadena lateral de Asp o Glu;
R_{5} es la cadena lateral de D-Asp, D-Val o D-Glu;
Y es H o alquilo C_{1-6};
R_{4} es alquilo C_{1-10}; cicloalquilo C_{3-10};
R_{3} es alquilo C_{1-10}; cicloalquilo C_{3-10};
W es un grupo de fórmula II':
2
en la que X es CH o N; y
R_{2'} es la cadena lateral de prolina y está sustituido con R_{17} en la posición 4 con la estereoquímica mostrada en la fórmula III':
3
en donde R_{17} es arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior); conteniendo opcionalmente dicho arilo o arilalquilo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; estando dicho arilo o arilalquilo opcionalmente condensado con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o un heterociclo, estando dicho anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior); conteniendo opcionalmente dicho segundo anillo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; R_{17} es OR_{12}, en donde R_{12}, es arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} estando dicho primer arilo o arilalquilo opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, NH_{2}, OH, SH, halo, alcoxi C_{1-6}, carboxilo, carboxi-alquilo (inferior) o un segundo arilo o arilalquilo;
conteniendo opcionalmente dichos primero y segundo arilos o aralquilos al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N;
Q es un grupo de la fórmula:
4
en donde Z es CH o N;
X es O o S;
R_{1} es H, alquilo C_{1-6} o alquenilo C_{1-6} ambos opcionalmente sustituidos con tio o halo;
y
cuando Z es CH, entonces R_{13} es H; CF_{3}; CF_{2}CF_{3}; CH_{2}-R_{14}; CH(F)-R_{14}, CF_{2}-R_{14}; NR_{14}R_{14'}; S-R_{14}; o CO-NH-R_{14} en donde
R_{14} y R_{14'} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{3-10} cíclico o alquilo C_{1-10} acíclico, o alquenilo C_{3-10} cíclico o alquenilo C_{2-10} acíclico, estando dicho alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo o carboxilo; conteniendo opcionalmente dicho alquilo o alquenilo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; o R_{14} y R_{14'} son independientemente arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior), o está sustituido con un cicloalquilo C_{3-7}, arilo C_{6} o C_{10} o heterociclo adicional; conteniendo opcionalmente dicho arilo o aralquilo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; estando dicho alquilo cíclico, alquenilo cíclico, arilo o arilalquilo opcionalmente condensados con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o heterociclo, estando dicho segundo anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior), o está sustituido con un cicloalquilo C_{3-7}, arilo C_{6} o C_{10} o heterociclo adicional; conteniendo opcionalmente dicho segundo anillo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; o R_{14} y R_{14'} son independientemente alquilo C_{1-4} que, cuando están unidos junto con el N, forman un anillo de 3 a 6 miembros, que está opcionalmente condensado con un cicloalquilo C_{3-7}, arilo C_{6} o C_{10} o heterociclo adicional;
con la condición de que, cuando Z es CH, entonces R_{13} no es un \alpha-aminoácido o un éster del mismo;
cuando Z es N, entonces R_{13} es H; carboxi; alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxi; CH_{2}-R_{14}; CHR_{14}R_{14'}; CH(F)-R_{14}; O-R_{14}; NR_{14}R_{14'} o S-R_{14} en donde R_{14} y R_{14'} son como se definen anteriormente; o
Q es un grupo de fosfonato de la fórmula:
5
en donde R_{15} y R_{16} son independientemente ariloxi C_{6-20}; y R_{1} es como se define anteriormente.
Se incluye dentro del alcance de este invento una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, en mezcla con un medio de soporte o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable.
Un importante aspecto del invento implica a un método para tratar una infección causada por el virus de la hepatitis C en un mamífero, por administración al mamífero de una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, o de una composición como antes se ha descrito.
Otro aspecto importante implica a un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C, exponiendo a este virus a una cantidad inhibidora de la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, o de una composición como antes se ha descrito.
Todavía otro aspecto implica a un método para tratar una infección causada por el virus de la hepatitis C en un mamífero, por administración a éste de una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C de una combinación del compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, y de un interferón. Una composición farmacéutica que comprende la combinación en mezcla con un medio de soporte o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable se encuentra también dentro del alcance de este invento.
Descripción detallada del invento
Como se usa en el presente contexto, se aplican las siguientes definiciones, a menos que se señale otra cosa distinta:
Con referencia a los casos en los que se use (R) o (S) para designar la configuración de un radical, p.ej. R_{4} del compuesto de fórmula I, la designación se hace en el contexto del compuesto y no en el contexto del radical a solas.
Los aminoácidos naturales, con excepción de la glicina, contienen un átomo de carbono quiral. A menos que se indique específicamente otra cosa distinta, se prefieren los compuestos que contienen aminoácidos naturales con la configuración L. Sin embargo, los solicitantes consideran que, cuando se especifique, algunos aminoácidos de la fórmula I pueden ser de configuración D o L o pueden ser mezclas de isómeros D y L, inclusive las mezclas racémicas.
La designación "P1, P2, P3, etc." como se usa en el presente contexto, se refiere a la posición de los residuos de aminoácidos comenzando desde el extremo terminal de C de los compuestos análogos a péptidos y extendiéndose hacia el extremo terminal de N (es decir, P1 se refiere a la posición 1 desde el extremo terminal de C; P2 es la segunda posición desde el extremo terminal de C, etc.) (véase Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264 (1970)).
Las abreviaturas para los \alpha-aminoácidos se exponen en la Tabla A.
TABLA A
6
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Como se usa en el presente contexto, el término "ácido aminobutírico" se refiere a un compuesto de fórmula:
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8
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Como se usa en el presente contexto, el término "alilglicina" se refiere a un compuesto de fórmula:
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9
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Como se usa en el presente contexto, el término "terc.-butilglicina" se refiere a un compuesto de fórmula:
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10
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El término "residuo", haciendo referencia a un aminoácido o derivado de aminoácido, significa un radical derivado del correspondiente \alpha-aminoácido eliminando el hidroxilo del grupo carboxi y un hidrógeno del grupo \alpha-amino. Por ejemplo, los términos Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar y Tyr representan a los "residuos" de L-glutamina, L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, L-ácido aspártico, L-fenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteína, L-asparagina, sarcosina y L-tirosina, respectivamente.
El término "cadena lateral", haciendo referencia a un aminoácido o residuo de aminoácido, significa un grupo unido al átomo de carbono \alpha del \alpha-aminoácido. Por ejemplo, la cadena lateral grupo R para glicina es hidrógeno, para alanina es metilo, para valina es isopropilo. Para los grupos R o cadenas laterales específicos de los \alpha-aminoácidos se hace referencia al texto de A.L. Lehninger sobre bioquímica (véase el capítulo 4).
El término "halo", como se usa en el presente contexto, significa un radical de halógeno seleccionado entre bromo, cloro, fluoro o yodo.
El término "alquilo C_{1-6}" o "alquilo (inferior)", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa radicales alquilo de cadena lineal o ramificada que contienen hasta seis átomos de carbono e incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, hexilo, 1-metil-etilo, 1-metil-propilo, 2-metil-propilo, 1,1-dimetil-etilo.
Similarmente, los términos "alquilo C_{1-3}", "alquilo C_{1-4}" y "alquilo C_{1-10}" se usan para designar radicales alquilo que contienen hasta tres, cuatro y diez átomos de carbono, respectivamente.
El término "cicloalquilo C_{3-7}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical cicloalquilo que contiene de tres a siete átomos de carbono, e incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
El término "(alquilcicloalquilo) C_{4-10}", como se usa en el presente contexto, significa un radical cicloalquilo que contiene de tres a siete átomos de carbono enlazado a un radical alquilo, conteniendo los radicales enlazados hasta diez átomos de carbono; por ejemplo ciclopropilmetilo, ciclopentiletilo, ciclohexilmetilo, ciclohexiletilo o ciclohep-
tiletilo.
El término "alquenilo C_{2-10}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical alquilo como se ha definido anteriormente que contiene de 2 a 10 átomos de carbono, y contiene además por lo menos un doble enlace. Por ejemplo, alquenilo incluye el alilo.
El término "alquileno C_{3-4}", como se usa en el presente contexto, significa un radical alquilo divalente obtenido por la eliminación de dos átomos de hidrógeno a partir de un hidrocarburo alifático de cadena lineal o ramificada, que contiene de tres a cuatro átomos de carbono e incluye, por ejemplo, -CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, -CH(CH_{3})CH_{2}CH_{2}-, -CH_{2}C
(CH_{3})_{2}- y -CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-.
El término "alcoxi C_{1-6}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa el radical -O-alquilo C_{1-6} en el que el alquilo es como antes se ha definido, que contiene hasta seis átomos de carbono. El alcoxi incluye metoxi, etoxi, propoxi, 1-metil-etoxi, butoxi y 1,1-dimetil-etoxi. Este último radical es conocido corrientemente como terc.-butoxi.
El término "arilo C_{6} o C_{10}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa o bien un sistema monocíclico aromático que contiene 6 átomos de carbono o un sistema cíclico aromático que contiene 10 átomos de carbono.
El término "arilalquilo C_{7-16}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical arilo como antes se ha definido enlazado a través de un grupo alquilo, en que el alquilo es como se ha definido anteriormente que contiene de 1 a 6 átomos de carbono. El arilalquilo incluye, por ejemplo, bencilo y butilfenilo.
El término "carboxi-alquilo (inferior)", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un grupo carboxilo (COOH) enlazado a través de un grupo alquilo (inferior) como antes se ha definido e incluye por ejemplo ácido butírico o los grupos:
\vskip1.000000\baselineskip
11
\vskip1.000000\baselineskip
El término "cíclico" o "sistema cíclico", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical monovalente obtenido por eliminación de un hidrógeno a partir de un hidrocarburo cíclico saturado o insaturado, que contiene de tres a siete átomos de carbono, a menos que se indique otra cosa distinta, y que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos. El término cíclico o sistema cíclico incluye, por ejemplo, ciclopropano, ciclopentano, ciclohexano, ciclohexeno, decalina, tetralina, indeno y naftaleno.
El término "heterociclilo", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical monovalente obtenido por eliminación de un hidrógeno a partir de un heterociclo saturado o insaturado de cinco, seis o siete miembros, que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Ejemplos de heterociclos apropiados incluyen: pirrolidina, tetrahidrofurano, tiazolidina, pirrol, tiofeno, diazepina, 1H-imidazol, 1-metil-1H-imidazol, isoxazol, tiazol, 2-metil-tiazol, 2-amino-tiazol, piperidina, 1,4-dioxano, 4-morfolina, piridina, 2-metil-piridina, pirimidina, 4-metil-pirimidina y 2,4-dimetil-pirimidina.
El término "sistema heterocíclico", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un heterociclo como antes se ha definido, condensado con uno o más de otros ciclos, ya se trate de un heterociclo o de cualquier otro tipo de ciclo. Ejemplos de sistemas heterocíclicos apropiados incluyen: tiazolo[4,5-b]-piridina, quinolina o indol.
Realizaciones preferidas
Otro grupo preferido adicional de compuestos es el de los representados por la fórmula I en la que B es preferiblemente un derivado de acilo de fórmula R_{11}C(O)-, en que R_{11} es:
alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};
cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, MeOC(O), EtOC(O) o BnOC(O);
3-carboxi-propionilo (DAD) o 4-carboxi-butirilo (DAE); o
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12
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Más preferiblemente B es acetilo, 3-carboxi-propionilo, 4-carboxi-butirilo, AcOCH_{2}C(O), Me_{3}COC(O),
13
Todavía más preferiblemente, B es acetilo, 3-carboxi-propionilo (DAD), 4-carboxi-butirilo (DAE), AcOCH_{2}C(O),
14
Lo más preferiblemente, B es acetilo o 4-carboxi-butirilo (DAE). Preferiblemente, B es acetilo.
Preferiblemente, R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp.
Preferiblemente, R_{5} es la cadena lateral de D-Asp, D-Val o D-Glu.
Más preferiblemente, R_{5} es la cadena lateral de D-Glu.
Preferiblemente, Y es H o alquilo C_{1-3}.
Más preferiblemente, Y es Me.
Alternativamente, de modo más preferible Y es H.
Preferiblemente, R_{4} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Val, ciclohexilglicina (Chg), Tbg, Ile o Leu.
Más preferiblemente, R_{4} es la cadena lateral de Chg o Ile.
Lo más preferiblemente, R_{4} es la cadena lateral de Chg.
Preferiblemente, R_{3} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Ile, Chg, Cha, Val o Glu.
Más preferiblemente, R_{3} es la cadena lateral de Val o Chg.
Lo más preferiblemente, R_{3} es la cadena lateral de Val.
Preferiblemente, W es un grupo de fórmula II:
15
en la que R_{2} es alquilo C_{1-8} o cicloalquilo C_{3-6} opcionalmente sustituido con carboxilo; o bencilo. Más preferiblemente, R_{2} es la cadena lateral de Asp, ácido aminobutírico (Abu) o Val.
W es un grupo de fórmula II':
16
en que, preferiblemente, X es CH o N, y
R_{2'} es la cadena lateral de la prolina (como se muestra en negro) sustituida con R_{17} en la posición 4 con la estereoquímica mostrada en la fórmula III':
17
Preferiblemente, R_{17} es Bn; PhCH_{2}CH_{2}; PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}; O-Bn; o-tolilmetoxi; m-tolilmetoxi; p-tolilmetoxi; 1-naftiloxi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi; 2-naftalenilmetoxi; (4-terc.-butil)metoxi; (3I-Ph)CH_{2}O; (4Br-Ph)O; (2Br-Ph)O; (3Br-Ph)O; (4I-Ph)O; (3Br-Ph)CH_{2}O; (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O;
18
19
Todavía más preferiblemente, R_{17} es Bn; PhCH_{2}CH_{2}; PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}; O-Bn; 1-naftiloxi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi; 2-naftalenilmetoxi;
20
Incluso lo más preferiblemente, R_{17} es O-Bn, 1-naftalenilmetoxi ó 2-naftalenilmetoxi.
Preferiblemente Q es:
21
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en que Z es preferiblemente CH o N.
Preferiblemente, cuando Z es CH:
R_{13} es H; CF_{3}; CF_{2}CF_{3}; CH_{2}-R_{14}; C(O)NH-R_{14}, NR_{14}R_{14'} en que R_{14} y R_{14'} son como se han definido anteriormente, con la condición de que R_{13} no ha de ser un \alpha-aminoácido ni uno de sus ésteres. Más preferiblemente, R_{13} es H; NH-R_{14} o C(O)NH-R_{14}. Lo más preferiblemente, R_{13} es H; o C(O)NH-R_{14}. Preferiblemente, R_{14} es fenilo o arilalquilo C_{7-16}. Más preferiblemente, R_{14} es bencilo o CH(Me)Ph.
Alternativamente, cuando Z es N:
R_{13} es preferiblemente fenilo o arilalquilo C_{7-16},
22
Más preferiblemente, R_{13} es naftilo, NH-CH(Me)Ph, NH-CH(Et)Ph,
23
Lo más preferiblemente, R_{13} es NH-CH(Me)Ph, o
24
Alternativamente, Q es de modo preferible un grupo de fosfonato de la fórmula:
25
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en la que R_{15} y R_{16} son independientemente de modo preferible ariloxi C_{6-12}. Más preferiblemente, R_{15} y R_{16} son cada uno fenoxi.
En todos los anteriores casos, R_{1} es preferiblemente alquilo C_{1-6} o alquenilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con halo. Más preferiblemente, R_{1} es alquilo C_{1-5} o alquenilo C_{1-4} opcionalmente sustituido con fluoro. Lo más preferiblemente, R_{1} es etilo, propilo, isopentilo o alilo.
De acuerdo con una realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de este invento pueden comprender adicionalmente un agente antivírico. Ejemplos de agentes antivíricos incluyen ribavirina y amantadina.
De acuerdo con otra realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de este invento pueden comprender adicionalmente otros inhibidores de la proteasa de HCV.
De acuerdo con todavía otra realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de este invento pueden comprender adicionalmente un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del HCV, tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa.
Las composiciones farmacéuticas de este invento se pueden administrar por vía oral, parenteral o a través de un reservorio implantado. Nosotros preferimos la administración por vía oral o la administración por inyección. Las composiciones farmacéuticas de este invento pueden contener cualesquiera de los soportes, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables y no tóxicos. En algunos casos, el pH de la formulación se puede ajustar con ácidos, bases o tampones farmacéuticamente aceptables para intensificar la estabilidad del compuesto formulado o de su forma de suministro. El término parenteral incluye, tal como se usa en el presente contexto, técnicas de inyección o infusión subcutáneas, intracutáneas, intravenosas, intramusculares, intraarticulares, intrasinoviales, intraesternales, intratecales e intralesionales.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una preparación inyectable estéril, por ejemplo, en la de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con técnicas conocidas en el sector de la tecnología usando apropiados agentes dispersantes o humectantes (tales como, por ejemplo, Tween 80) y agentes suspendedores.
Las composiciones farmacéuticas de este invento se pueden administrar por vía oral en cualquier forma de dosificación aceptable por vía oral, inclusive, pero sin limitarse a, cápsulas, tabletas, así como suspensiones y soluciones acuosas. En el caso de las tabletas para uso oral, los soportes que se usan corrientemente incluyen lactosa y almidón de maíz. Se añaden también típicamente agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. Para la administración por vía oral en la forma de una cápsula, diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran por vía oral suspensiones acuosas, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes y suspendedores. Si se desea, se pueden añadir ciertos agentes edulcorantes y/o saboreantes y/o colorantes.
Otros vehículos o soportes apropiados para las formulaciones y composiciones antes señaladas pueden encontrarse en textos farmacéuticos clásicos, p.ej. en la obra "Remington's Pharmaceutical Sciences", The Science and Practice of Pharmacy, 19ª edición Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).
Unos niveles de dosificación comprendidos entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, con preferencia entre alrededor de 0,5 y alrededor de 75 mg/kg de peso corporal por día de los compuestos inhibidores de proteasas descritos en el presente texto son útiles en una monoterapia para la prevención y el tratamiento de una enfermedad mediada por el HCV. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de este invento se administrarán entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 veces por día o, alternativamente, en forma de una infusión continua. Dicha administración se puede usar como una terapia crónica o aguda. La cantidad del ingrediente activo que se puede combinar con los materiales de soporte para producir una única forma de dosificación variará dependiendo del hospedante tratado y del modo particular de administración. Una preparación típica contendrá entre aproximadamente 5% y aproximadamente 95% de compuesto activo (en peso/peso = p/p). Preferiblemente, tales preparaciones contienen entre aproximadamente 20% y aproximadamente 80% del compuesto activo.
Como lo apreciará un profesional experto, se pueden requerir dosis menores o mayores que las citadas anteriormente. Los específicos regímenes de dosificación y de tratamiento para cualquier paciente particular dependerán de una diversidad de factores, inclusive la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, el estado general de salud, el sexo, la dieta, el momento de administración, el régimen de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad y el curso de la infección, la disposición del paciente para la infección y el criterio del médico que esté realizando el tratamiento. Generalmente, el tratamiento es iniciado con pequeñas dosificaciones sustancialmente menores que la dosis óptima del péptido. Después de ello, la dosificación es aumentada por pequeños incrementos hasta que se alcance el efecto óptimo dentro de las circunstancias. En general, el compuesto se administra de modo sumamente deseable en un nivel de concentraciones que generalmente proporcionará resultados eficaces antivíricamente sin causar ningún efecto colateral perjudicial o deletéreo.
Cuando las composiciones de este invento comprenden una combinación de un compuesto de fórmula I y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deberán estar presentes en unos niveles de dosificación comprendidos entre aproximadamente 10 y 100%, y más preferiblemente entre alrededor de 10 y 80% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia.
Cuando estos compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables se formulan conjuntamente con un soporte farmacéuticamente aceptable, la composición resultante se puede administrar in vivo a mamíferos, tales como seres humanos, para inhibir a la proteasa de NS3 del HCV o para tratar o prevenir una infección causada por el virus del HCV. Dicho tratamiento se puede conseguir también usando los compuestos de este invento en combinación con agentes que incluyen, pero no se limitan a: agentes moduladores de la inmunidad, tales como interferones \alpha, \beta o \gamma; otros agentes antivíricos tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de la proteasa de NS3 del HCV; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del HCV tales como helicasa, polimerasa, metaloproteasa, o la entrada de ribosomas internos; o combinaciones de éstos. Los agentes adicionales se pueden combinar con los compuestos de este invento para crear una única forma de dosificación. Alternativamente, estos agentes adicionales se pueden administrar por separado a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple.
Correspondientemente, otra realización de este invento proporciona métodos para inhibir la actividad de la proteasa de NS3 del HCV en mamíferos por administración de un compuesto de la fórmula I, en que los sustituyentes son como se han definido anteriormente.
En una realización preferida, estos métodos son útiles para disminuir la actividad de la proteasa de NS3 del HCV en un mamífero. Si la composición farmacéutica comprende solamente un compuesto de este invento como el componente activo, dichos métodos pueden comprender adicionalmente la operación de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado entre un agente modulador de la inmunidad, un agente antivírico, un inhibidor de una proteasa del HCV, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del HCV tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa. Tal agente adicional se puede administrar al mamífero antes de, concurrentemente con, o a continuación de la administración de las composiciones de este invento.
En una realización preferida alternativa, estos métodos son útiles para inhibir la replicación de virus en un mamífero. Dichos métodos son útiles para tratar o prevenir una enfermedad causada por el HCV. Si la composición farmacéutica comprende solamente un compuesto de este invento como el componente activo, dichos métodos pueden comprender adicionalmente la operación de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado entre un agente modulador de la inmunidad, un agente antivírico, un inhibidor de una proteasa del HCV, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del HCV. Dicho agente adicional se puede administrar al mamífero antes de, concurrentemente con o a continuación de la administración de la composición de acuerdo con este invento.
Los compuestos que se exponen en el presente texto se pueden usar también como reactivos de laboratorio. Los compuestos de este invento se pueden usar para tratar o prevenir una contaminación por virus de materiales y por lo tanto reducir el riesgo de una infección por virus del personal de laboratorio o médico o de los pacientes que entren en contacto con dichos materiales (p.ej. sangre, tejidos, instrumentos quirúrgicos y prendas de vestir quirúrgicas, instrumentos y prendas de vestir de laboratorios y aparatos y materiales para la recogida de sangre).
Procedimiento Síntesis de los fragmentos P6-P2
Los fragmentos P2-P6 de los compuestos del presente invento se sintetizaron de acuerdo con el procedimiento que se ilustra en el esquema I (en que PG1 es un grupo protector de carboxilo y PG2 es un grupo protector de amino):
Esquema I
26
Brevemente, los P2, P3, P4, P5 y P6 se pueden enlazar por técnicas bien conocidas de acoplamiento de péptidos. Los restos P2, P3, P4, P5 y P6 se pueden enlazar conjuntamente en cualquier orden siempre y cuando el compuesto final corresponda a péptidos de fórmula I. Por ejemplo, P6 puede ser enlazado a P5 para dar P5-P6 que está enlazado a P4-P3-P2; o P6 se puede enlazar a P5-P4-P3 y luego enlazar a un P2 protegido apropiadamente en el extremo terminal de C.
Generalmente, los péptidos son alargados desprotegiendo el grupo \alpha-amino del residuo terminal de N y acoplando el grupo carboxilo sin proteger del siguiente aminoácido apropiadamente protegido en N a través de un enlace peptídico usando los métodos que se han descrito. Este proceso de desprotección y acoplamiento se repite hasta que se obtenga la secuencia deseada. Este acoplamiento se puede realizar con los aminoácidos constituyentes de una manera escalonada, tal como se describe en el Esquema I, o por condensación de fragmentos (de dos o más aminoácidos) o una combinación de ambos procedimientos, o mediante una síntesis de péptidos en fase sólida de acuerdo con el método originalmente descrito en la cita de Merrifield, J. Am. Chem. Soc. (1963), 85, 2.149-2.154, cuya divulgación se incorpora a la presente por su referencia.
El acoplamiento entre dos aminoácidos, un aminoácido y un péptido, o dos fragmentos peptídicos se puede llevar a cabo usando procedimientos de acoplamiento clásicos tales como el método de la azida, el método de anhídrido mixto de ácido carbónico y un ácido carboxílico (cloroformiato de isobutilo), el método de una carbodiimida (diciclohexil-carbodiimida, diisopropil-carbodiimida, o una carbodiimida soluble en agua), el método de un éster activo (éster p-nitrofenílico, imido-éster N-hidroxi-succínico), el método del reactivo K de Woodward, el método del carbonil-diimidazol, reactivos con fósforo o métodos de oxidación-reducción. Algunos de estos métodos (especialmente el método de la carbodiimida) se pueden mejorar añadiendo 1-hidroxi-benzotriazol. Estas reacciones de acoplamiento se pueden llevar a cabo o bien en fase de solución (fase líquida) o en fase sólida.
Más explícitamente, la operación de acoplamiento implica el acoplamiento deshidrogenante de un carboxilo libre de un reaccionante con el grupo amino libre del otro reaccionante en la presencia de un agente de acoplamiento para formar un enlace de amida engarzador. Descripciones de dichos agentes de acoplamiento se encuentran en libros de texto generales sobre la química de los péptidos, por ejemplo el de M. Bodanszky, "Peptide Chemistry" 2ª edición revisada, editorial Springer, Berlín, Alemania, (1993). Ejemplos de apropiados agentes de acoplamiento son N,N'-diciclohexil-carbodiimida, 1-hidroxi-benzotriazol en la presencia de N,N'-diciclohexil-carbodiimida o N-etil-N'-[(3-dimetilamino)propil]carbodiimida. Un agente de acoplamiento muy práctico y útil es el hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio comercialmente disponible, o bien por sí solo o en la presencia de 1-hidroxi-benzotriazol. Otro agente de acoplamiento muy práctico y útil es el tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio comercialmente disponible. Todavía otro agente de acoplamiento muy práctico y útil es el hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio comercialmente disponible.
La reacción de acoplamiento se realiza en el seno de un disolvente inerte, p.ej. diclorometano, acetonitrilo o dimetil-formamida. Un exceso de una amina terciaria, p.ej. diisopropil-etil-amina, N-metil-morfolina o N-metil-pirrolidina, se añade para mantener la mezcla de reacción a un pH de aproximadamente 8. La temperatura de reacción fluctúa usualmente entre 0ºC y 50ºC y el tiempo de reacción fluctúa entre 15 min y 24 h.
Cuando se emplea un enfoque de síntesis en fase sólida, el ácido carboxílico terminal de C es unido a un soporte insoluble (usualmente poliestireno). Estos soportes insolubles contienen un grupo que reaccionará con el grupo carboxílico para formar un enlace que es estable frente a las condiciones de alargamiento pero que se desdobla con facilidad más adelante. Ejemplos de éstos son: una cloro- o bromo-metil-resina, una hidroxi-metil-resina y una amino-metil-resina. Muchas de estas resinas se encuentran comercialmente disponibles con el deseado aminoácido terminal de C ya incorporado. Además de los señalados anteriormente, otros métodos de síntesis de péptidos están descritos en las citas de Stewart y Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", 2ª edición, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, coordinadores de edición, "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", volúmenes 1, 2, 3, 5 y 9, Academic Press, Nueva York, (1980-1987); Bodansky y colaboradores, "The Practice of Peptide Synthesis", editorial Springer, Nueva York (1984), cuyas divulgaciones se incorporan a la presente por su referencia.
Los grupos funcionales de los aminoácidos constituyentes deben generalmente ser protegidos durante las reacciones de acoplamiento para evitar la formación de enlaces indeseados. Los grupos protectores que se pueden usar se enumeran en las citas de Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, Nueva York (1981) y "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", volumen 3, Academic Press, Nueva York (1981), cuyas divulgaciones se incorporan a la presente por su referencia.
El grupo \alpha-carboxilo del residuo terminal de C es protegido usualmente en forma de un éster (PG1) que puede ser desdoblado para dar el ácido carboxílico. Grupos protectores que se pueden usar incluyen: 1) ésteres de alquilo tales como los de metilo, trimetil-silil-etilo y t-butilo, 2) ésteres de arilalquilo tales como los de bencilo y bencilo sustituido, ó 3) ésteres que se pueden desdoblar por tratamiento con una base débil o con medios reductores débiles tales como los ésteres de tricloroetilo y fenacilo.
El grupo \alpha-amino de cada aminoácido que se ha de acoplar a la cadena de péptido en crecimiento debe de ser protegido (PG2). Puede usarse cualquier grupo protector conocido en el sector de la tecnología. Ejemplos de dichos grupos incluyen:
1) grupos acilo tales como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo y p-toluenosulfonilo;
2) grupos de carbamatos aromáticos tales como benciloxicarbonilo (Cbz o Z) y benciloxicarbonilos sustituidos, y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc);
3) grupos de carbamatos alifáticos tales como terc.-butiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo y aliloxicarbonilo;
4) grupos de alquil-carbamatos cíclicos tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo;
5) grupos alquilo tales como trifenilmetilo y bencilo;
6) trialquilsililo tales como trimetilsililo; y
7) grupos que contienen tiol tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoílo.
El grupo protector de \alpha-amino preferido es o bien Boc o Fmoc. Están comercialmente disponibles para la síntesis de péptidos muchos derivados de aminoácidos apropiadamente protegidos.
El grupo protector de \alpha-amino del residuo de aminoácido que se acaba de añadir es separado antes del acoplamiento del siguiente aminoácido. Cuando se usa el grupo Boc, los métodos a seleccionar son los que usan ácido trifluoroacético, puro o disuelto en diclorometano, o HCl en dioxano o acetato de etilo. La resultante sal de amonio es luego neutralizada o bien antes del acoplamiento o in situ con soluciones de carácter alcalino tales como tampones acuosos, o aminas terciarias en diclorometano o acetonitrilo o dimetilformamida. Cuando se usa el grupo Fmoc, los reactivos a seleccionar son piperidina o una piperidina sustituida en el seno de dimetilformamida, pero se puede usar cualquier amina secundaria. La desprotección se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 0ºC y la temperatura ambiente (TA).
Cualquiera de los aminoácidos que tengan funcionalidades de cadenas laterales deben de ser protegidos durante la preparación del péptido usando cualesquiera de los grupos antes descritos. Los expertos en el sector de la tecnología apreciarán que la selección y el uso de apropiados grupos protectores para estas funcionalidades de cadenas laterales dependen del aminoácido y de la presencia de otros grupos protectores en el péptido. La selección de tales grupos protectores es importante, puesto que el grupo no debe de ser eliminado durante la desprotección y el acoplamiento del grupo \alpha-amino.
Por ejemplo, cuando se usa Boc como el grupo protector de \alpha-amino, el p-toluenosulfonilo (tosilo) es apropiado para proteger a la cadena lateral amino de aminoácidos tales como Lys y Arg; se pueden usar restos acetamidometilo, bencilo (Bn), o t-butilsulfonilo para proteger a la cadena lateral que contiene sulfuro de la cisteína; se pueden usar éteres de bencilo (Bn) para proteger a las cadenas laterales que contienen hidroxi de serina, treonina o hidroxi-prolina; y se pueden usar ésteres de bencilo para proteger a las cadenas laterales que contienen carboxi de ácido aspártico y ácido glutámico.
Cuando se escoge Fmoc para la protección de \alpha-amino, usualmente son aceptables grupos protectores basados en terc.-butilo. Por ejemplo, se puede usar Boc para lisina y arginina, terc.-butil-éter para serina, treonina e hidroxi-prolina, y éster terc.-butílico para ácido aspártico y ácido glutámico. Se puede usar el resto trifenilmetilo (tritilo) para proteger a la cadena lateral que contiene sulfuro de la cisteína.
Una vez que se ha completado el alargamiento del péptido se elimina la totalidad de los grupos protectores. Cuando se usa una síntesis en fase líquida, los grupos protectores se eliminan de cualquiera de las maneras que sea dictada por la elección de grupos protectores. Estos procesos son bien conocidos por los expertos en el sector de la tecnología.
Cuando se usa una síntesis en fase sólida, el péptido es separado con respecto de la resina simultáneamente con la eliminación de los grupos protectores. Cuando se usa en la síntesis el método de protección con Boc, el tratamiento con HF anhidro que contiene aditivos tales como sulfuro de dimetilo, anisol, tioanisol o p-cresol a 0ºC constituye el método preferido para separar el péptido con respecto de la resina. La separación del péptido se puede conseguir mediante otros reactivos ácidos tales como mezclas de ácido trifluorometanosulfónico y ácido trifluoroacético. Si se usa el método de protección con Fmoc, el grupo Fmoc situado en el extremo terminal de N es separado con los reactivos que se han descrito anteriormente. Los otros grupos protectores y el péptido son separados con respecto de la resina usando una solución de ácido trifluoroacético y diversos aditivos tales como anisol, etc.
Síntesis del grupo de remate B y de restos P6, P5, P4 y P3
Diferentes grupos de remate B se introducen para proteger a P6, P5, P4, a todo el péptido o a cualquier segmento de péptido con un apropiado cloruro de acilo, que o bien está disponible comercialmente o para el que la síntesis es bien conocida en el sector de la tecnología.
Diferentes restos de P6 a P3 están disponibles comercialmente o su síntesis es bien conocida en el sector de la tecnología.
Síntesis de restos P2 1. Síntesis de precursores A) Síntesis de derivados de haloarilmetano
La preparación de una halometil-8-quinolina IId se realizó de acuerdo con el procedimiento de K.N. Campbell y colaboradores, J. Amer. Chem. Soc., (1946), 68, 1.844.
Esquema II
27
Dicho brevemente, el ácido 8-quinolina-carboxílico IIa se convirtió en el correspondiente alcohol IIc por reducción del correspondiente haluro de acilo IIb con un agente reductor tal como hidruro de litio y aluminio. El tratamiento del alcohol IIb con el apropiado hidrácido halogenado da el deseado derivado de halo IId. Una realización específica de este procedimiento se presenta en el Ejemplo 1.
2. Síntesis de P2
A) La síntesis de una prolina sustituida en posición 4 (en la que R_{17} está unido al anillo a través de un átomo de carbono) (con la estereoquímica que se muestra):
28
se realiza como se muestra en el Esquema III de acuerdo con los procedimientos descritos por J. Ezquerra y colaboradores (Tetrahedron, (1993), 38, 8.665-8.678) y C. Pedregal y colaboradores (Tetrahedron Lett., (1994), 35, 2.053-2.056).
Esquema III
29
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Dicho brevemente, el ácido Boc-piroglutámico se protege como un éster de bencilo. El tratamiento con una base fuerte tal como diisopropil-amiduro de litio, seguido por la adición de un agente alquilante (Br-R_{17} o I-R_{17}) da los deseados compuestos IIIe después de reducción de la amida y desprotección del éster. Una realización específica de este procedimiento se presenta en el Ejemplo 2.
B) La síntesis de una 4(R)-hidroxi-prolina alquilada en O:
30
se puede llevar a cabo usando los diferentes procedimientos que se describen seguidamente.
B.1)
Cuando R_{12} es arilalquilo, el proceso se puede llevar a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito por E.M. Smith y colaboradores (J. Med. Chem. (1988), \underline{31}, 875-885). Dicho brevemente, la Boc-4(R)-hidroxi-prolina comercialmente disponible se trata con una base tal como hidruro de sodio y el alcóxido resultante se hace reaccionar con un agente alquilante (Br-R_{12} o I-R_{12}) para dar los deseados compuestos. Realizaciones específicas de este procedimiento se presentan en los Ejemplos 3 y 4.
B.2)
Cuando R_{12} es arilo, los compuestos se pueden preparar por medio de una reacción de Mitsunobu (Mitsunobu (1981), Synthesis, Enero, 1-28; Rano y colaboradores, (1995), Tet. Lett. \underline{36(22)}, 3779-3792; Krchnak y colaboradores, (1995), Tet. Lett. \underline{36(5)}, 62193-6196; Richter y colaboradores, (1994), Tet. Lett. \underline{35(27)}, 4705-4706). Dicho brevemente, el éster metílico de Boc-4(S)-hidroxi-prolina comercialmente disponible se trata con el apropiado aril-alcohol o -tiol en la presencia de trifenil-fosfina y azo-dicarboxilato de dietilo (DEAD) y el éster resultante se hidroliza para dar el ácido. Realizaciones específicas de este procedimiento se presentan en el Ejemplo 5.
Esquema IV
31
Alternativamente, la reacción de Mitsunobu se puede realizar en fase sólida (como se muestra en el Esquema IV). El bloque de 96 pocillos del sintetizador Modelo 396 (Advanced ChemTech) es provisto de partes alícuotas del compuesto (IVa) fijado a una resina y se añaden una diversidad de aril- alcoholes o -tioles y apropiados reactivos. Después de la incubación, cada producto (IVb) fijado a una resina se lava, se seca y se separa con respecto de la resina.
B.2.a)
Una reacción de Suzuki (Miyaura y colaboradores, (1981), Synth. Comm, \underline{11}, 513; Sato y colaboradores, (1989), Chem. Lett., 1405; Watanabe y colaboradores, (1992), Synlett., 207; Takayuki y colaboradores, (1993), J. Org. Chem. \underline{58}, 2201; Frenette y colaboradores, (1994), Tet. Lett. \underline{35(49)}, 9177-9180; Guiles y colaboradores, (1996), J. Org. Chem. \underline{61}, 5169-5171) se puede usar también para funcionalizar adicionalmente al sustituyente arilo.
C) La síntesis de compuestos de fórmula I en la que Q es
32
en la que Z es CH; R_{1} es como antes se ha definido y R_{13} es CF_{3}, CF_{2}CF_{3} o C(O)NH-R_{14}; se realizó como se describe en el Esquema VIII.
La síntesis de los requeridos restos P1 se realizó de la siguiente manera:
i)
Para la síntesis de alcoholes trifluorometílicos de la fórmula Vd el procedimiento descrito por J.W. Skiles y colaboradores (J. Med. Chem. (1992), 35, 641-662) se usó como se ilustra:
Esquema V
33
en que R_{1} es como se ha definido anteriormente.
Dicho brevemente, una condensación entre el etil-hemiacetal de trifluoro-acetaldehído Va comercialmente disponible y el apropiado nitro-alcano proporciona el correspondiente nitro-alcohol Vb. El grupo nitro fue reducido (preferiblemente con Ra-Ni) y protegido en forma del derivado con Boc Vc para permitir una más fácil purificación del fragmento. El tratamiento de la Boc-amina con HCl anhidro proporciona la sal hidrocloruro Vd.
ii) Para la síntesis de alcoholes pentafluoroetílicos de fórmula VId, se usó el procedimiento descrito por M.R. Angelastro y colaboradores (J. Med. Chem. (1994), 37, 4538-4554) como se ilustra en el Esquema VI:
Esquema VI
34
en que R_{1} es como se ha definido anteriormente.
Dicho brevemente, el Boc-aminoácido VIa se convirtió en la amida de Weinreb VIb de acuerdo con el procedimiento descrito por Castro, B. y colaboradores (Synthesis, (1983), 676-678) y se trató con litio-pentafluoroetano. La resultante pentafluoroetil-cetona VIc se redujo y el grupo protector Boc se eliminó con HCl anhidro para dar la sal hidrocloruro del deseado amino-alcohol VId.
iii) Para la síntesis de hidroxi-amidas de fórmula VIIf se usó el procedimiento descrito por Peet y colaboradores (Tet. Lett. (1988), 3433) como se ilustra en el Esquema VII:
Esquema VII
35
en que R_{1} es como se ha definido anteriormente.
Dicho brevemente, la condensación entre el glioxilato de etilo VIIa y un nitro-alcano en condiciones básicas proporcionó el correspondiente nitro-alcohol VIIb. El grupo nitro se redujo (preferiblemente con Ra-Ni) y protegió en forma del derivado de Boc VIIc. La saponificación del grupo éster seguida por un acoplamiento clásico con una amina dio la hidroxi-amida VIIe. La eliminación del grupo protector Boc con HCl anhidro proporcionó la sal hidrocloruro de la deseada amino-hidroxi-amida VIIf.
iv) El acoplamiento a P2-P6 se llevó a cabo como se ilustra en el Esquema VIII:
Esquema VIII
36
a) El fragmento de P6 a P2 se puede enlazar al grupo amino libre del derivado de amino-alcohol VIIIa como se ha descrito anteriormente en el Esquema I para dar el péptido-alcohol VIIIb.
b) La funcionalidad de alcohol del péptido-alcohol VIIIb es luego oxidada por técnicas y procedimientos bien conocidos y apreciados por una persona que tiene experiencia ordinaria en el sector de la tecnología, tal como la oxidación de Swerm (Tidwell, T.T., Synthesis, (1990), 857-870), o más específicamente la oxidación de Pfitzner-Moffatt (K.E. Pfitzner, y J.G. Moffatt, J. Am. Chem. Soc., (1965), 5670-5678) y el método del peryodinano de Dess-Martin (D.B. Dess o J.C. Martin, (J. Org. Chem. (1983), 48, 4155-4156) para dar los compuestos de fórmula I en la que Q contiene un carbonilo activado.
D) La síntesis de compuestos de fórmula I en la que Q es
37
en que Z es N; y R_{13} es NHR_{14}, NR_{14}R_{14'}, CH_{2}-R_{14}, CHR_{14}R_{14'} u O-R_{14}; en que R_{14} y R_{1} son como se han definido anteriormente, se realizó como se describe en el Esquema X.
i)
Para la síntesis de los fragmentos P1 que contienen aza, se siguió el procedimiento descrito por A.S. Dutta y colaboradores (J. Chem. Soc. Perkin I, (1975), 1712) como se ilustra:
Esquema IX
38
en la que R_{1} y R_{14} son como se han definido anteriormente en esta memoria descriptiva.
Dicho brevemente, la Boc-hidrazina IXa comercialmente disponible se trató con un apropiado aldehído o cetona para proporcionar la correspondiente hidrazona IXb. La hidrazona se redujo (preferentemente con DIBAL) para dar el alquil-carbazato IXc. El tratamiento del alquil-carbazato con isocianatos proporciona el correspondiente fragmento de aza-péptido (IXd, en que z = NH). El tratamiento del alquil-carbazato con cloruros de carbamoílo proporciona el correspondiente fragmento de aza-péptido (IXd, en que z = NR_{14}R_{14'}). El tratamiento del alquil-carbazato con cloroformiatos proporciona el aza-carbonato (IXd, en que z = O), mientras que el tratamiento con cloruros de ácido proporciona los compuestos análogos con carbono (IXd, en que z = CH_{2}).
Alternativamente, el tratamiento del alquil-carbazato con ácidos carboxílicos utilizando condiciones de acoplamiento clásicas proporciona el correspondiente fragmento de aza-péptido (IXd, en que z = CHR_{14'} o CH_{2}). Finalmente, el grupo protector Boc se eliminó con HCl anhidro para dar los correspondientes aza-derivados IXe.
ii) El acoplamiento de P2-P6 se llevó a cabo de acuerdo con el Esquema X:
Esquema X
39
en que z es O, NH, CH_{2}, CHR_{14'} o NR_{14'}.
El fragmento de P6 a P2 puede ser enlazado al grupo amino libre del derivado Xa como se ha descrito anteriormente en el Esquema I para dar los aza-derivados de fórmula I, en la que Z es N.
E) La síntesis de compuestos de fórmula I en la que Q es
40
en la que R_{15} y R_{16} son como se han definido anteriormente, se usó el procedimiento descrito por J. Oleksyszyn y colaboradores (Synthesis, (1979), 985-986) como se ilustra en el Esquema XI:
Esquema XI
41
en que R_{1} es como se ha definido anteriormente en esta memoria.
Dicho brevemente, se realizó una síntesis en dos operaciones del éster difenílico por condensación de un apropiado aldehído XIa, carbamato de bencilo XIb, y fosfito de trifenilo, en la presencia de ácido acético. La eliminación del grupo protector benciloxicarbonilo de XIc usando una mezcla de HBr y AcOH proporcionó la deseada sal hidrobromuro XId.
El fragmento de P6 a P2 puede ser enlazado al grupo amino libre del derivado de fosfonato de fórmula XId como se ha descrito anteriormente en el Esquema I para dar el fosfono-péptido de fórmula I en que Q es un resto de fosfonato.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para describir el invento con mayor detalle. Estos ejemplos que exponen el mejor modo actualmente considerado para llevar a cabo el invento se destinan a ilustrar y no a limitar el invento.
Ejemplos
El presente invento se ilustra con mayor detalle mediante los siguientes Ejemplos no limitativos.
Las temperaturas se dan en grados Celsius (ºC). Los porcentajes de las soluciones expresan una relación de peso a volumen, y las relaciones de las soluciones expresan una relación de volumen a volumen, a menos que se señale otra cosa distinta. Los espectros de resonancia magnética nuclear (NMR) se registraron en un espectrómetro Bruker a 400 MHz; los desplazamientos químicos (\delta) se informan en partes por millón. La cromatografía de resolución rápida se llevó a cabo sobre gel de sílice (SiO_{2}) de acuerdo con la técnica de cromatografía de resolución rápida de Still (W.C. Still y colaboradores, J. Org. Chem. (1978), 43, 2923).
Las abreviaturas usadas en los Ejemplos incluyen Bn: bencilo; Boc: terc.-butiloxicarbonilo {Me_{3}COC(O)}; BSA: albúmina de suero bovino; CHAPS: 3-[(3-colamido-propil)-dimetilamonio]-1-propano-sulfonato; DBU: 1,8-diazabiciclo [5.4.0]undec-7-eno; CH_{2}Cl_{2} = DCM: cloruro de metileno; DIAD: azo-dicarboxilato de diisopropilo; DIPEA: diisopropil-etil-amina; DMAP: dimetilamino-piridina; DCC: 1,3-diciclohexil-carbodiimida; DME: 1,2-dimetoxi-etano; DMF: dimetil-formamida; DMSO: dimetil-sulfóxido; DTT: ditiotreitol o treo-1,4-dimercapto-2,3-butanodiol; EDTA: ácido etilendiamina-tetraacético; Et: etilo; EtOH: etanol; EtOAc: acetato de etilo; Et_{2}O: dietil-éter; HPLC: cromatografía de líquido de alto rendimiento; MS: espectrometría de masas (MALDI-TOF: Ionización-Desorción por Láser Asistida por Matriz-Tiempo de Vuelo, FAB: Bombardeo con Átomos Rápidos); LAH: hidruro de litio y aluminio; Me: metilo; MeOH: metanol; MES: ácido (2-{N-morfolino}etano-sulfónico); NaHMDS: bis(trimetil-silil)-amiduro de sodio; NMM: N-metil-morfolina; NMP: N-metil-pirrolidina; Pr: propilo; Succ: 4-hidroxi-1,4-dioxo-butilo; PNA: 4-nitro-fenilamino o p-nitro-anilida; TBAF: fluoruro de tetra-n-butil-amonio; TCEP: hidrocloruro de tris(2-carboxi-etil)fosfina; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; TIS: triisopropil-silano; TLC: cromatografía de capa fina; TMSE: trimetil-silil-etilo; Tris/HCl: hidrocloruro de tris(hidroximetil)-aminometano.
Ejemplo 1 Síntesis de bromometil-8-quinolina (1)
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A un ácido 8-quinolina-carboxílico comercialmente disponible (2,5 g, 14,4 mmol) se le añadió cloruro de tionilo puro (10 ml, 144 mmol). Esta mezcla se calentó a 80ºC durante 1 h antes de que el cloruro de tionilo en exceso fuera separado por destilación a presión reducida. Al sólido de color parduzco resultante se le añadió EtOH absoluto (15 ml), lo que se calentó a 80ºC durante 1 h antes de ser concentrado en vacío. El residuo se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3} acuoso saturado, y la fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar un aceite de color parduzco (2,8 g). Este material (aproximadamente 14,4 mmol) se añadió gota a gota durante 35 min a una suspensión de LAH (0,76 g, 20,2 mmol)/Et_{2}O que se enfrió a -60ºC. La mezcla de reacción se calentó lentamente a -35ºC durante 1,5 h antes de que la reacción fuese completa. La mezcla de reacción se sofocó con MgSO_{4}.10H_{2}O lentamente en el transcurso de 30 min y luego con THF húmedo. La mezcla se repartió entre Et_{2}O y NaHCO_{3} acuoso al 10%. La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar un sólido de color amarillento (2,31 g, 80% en el transcurso de dos etapas) correspondiente al alcohol. El alcohol (2,3 g, 11,44 mmol) se disolvió en una mezcla de AcOH y HBr (20 ml, solución al 30% procedente de Aldrich) y se calentó a 70ºC durante 2,5 h. La mezcla se concentró en vacío hasta sequedad, se repartió entre EtOAc (100 ml) y NaHCO_{3} acuoso saturado, antes de ser secada (sobre MgSO_{4}), filtrada y concentrada para dar el compuesto (1) deseado como un sólido de color parduzco (2,54 g, 100%).
Ejemplo 2 Síntesis de Boc-4(R)-(3-fenil-propil)prolina (2d)
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43
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a) Síntesis del compuesto 2b
A una solución del éster bencílico de ácido Boc-piroglutámico (2a) (preparado como se ha descrito por A.L. Johnson y colaboradores, J. Med. Chem. (1985), 28, 1596-1602) (500 mg, 1,57 mmol) en THF (10 ml) a -78ºC, se le añadió lentamente hexametil-disilil-aziduro de litio (1,72 ml, solución 1 M en THF). Después de haber agitado durante 1 h a -78ºC, se añadió bromuro de cinamilo (278 \mul, 1,88 mmol) y la agitación se continuó durante 2 h adicionales. La mezcla de reacción se sofocó con una solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con dietil-éter (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en columna de resolución rápida (en una mezcla de hexano y acetato de etilo 8:2) para dar el compuesto 2b como un sólido de color blancuzco (367 mg, rendimiento 54%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,35-7,19 (m, 10H), 6,43 (d, J= 15 Hz, 1H), 6,11 (ddd, J=15, J'=J''= 8 Hz, 1H), 5,26 (d, J=16 Hz, 1H), 5,17 (d, J=16 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=9,5, J'=2 Hz, 1 H), 2,83-2,70 (m, 2H), 2,41-2,34 (m, 1H), 2,22-2,16 (m, 1H), 2,10-2,02 (m, 1H) 1,42 (s, 9 H).
b) Síntesis del compuesto 2c
A -78ºC, se añadió trietil-borohidruro de litio (solución 1 M en THF, 1,01 ml, 1,01 mmol) a una solución del compuesto 2b (367 mg, 0,843 mmol) en THF (5 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 30 min, la mezcla de reacción se sofocó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 ml) y se calentó a 0ºC. Se añadió H_{2}O_{2} al 30% (5 gotas) y la mezcla se agitó a 0ºC durante 20 min. Los materiales volátiles orgánicos se eliminaron en vacío, y la capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. A una solución fría (a -78ºC) del residuo y trietil-silano (134 \mul, 0,843 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) se le añadió gota a gota trifluoruro de boro-eterato (118 \mul, 0,927 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 30 min se añadieron cantidades adicionales de trietil-silano (134 \mul) y trifluoruro de boro-eterato (118 \mul). Después de haber agitado durante 2 h a -78ºC, la mezcla de reacción se sofocó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 ml) y se extrajo con DCM (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna de resolución rápida (en una mezcla de hexano y acetato de etilo 8:2) para dar el compuesto 2c como un aceite incoloro (140 mg, rendimiento 40%). La ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) indicó la presencia de dos rotámeros: \delta 7,34-7,22 (m, 10H), 6,38 (d, J=15,5 Hz, 1H), 6,15-6,08 (m, 1H), 5,29-5,07 (m, 2H), 4,44 (d, J=7 Hz, 1/3H), 4,33 (d, J'=7 Hz, 2/3H), 3,76 (dd, J=10,5, J'=8,5 Hz, 2/3H), 3,69 (dd, J=10,5, J'=8,5 Hz, 1/3H), 3,13 (dd, J=9, J'=8,5 Hz, 2/3H), 3,05 (dd, J'=9, J'=8,5 Hz, 1/3H), 2,47-2,40 (m, 1H), 2,35-2,22 (m, 2H), 2,15-1,85 (m, 2H) 1,45 (s, (3,9) 9H), 1,33 (s, (6/9) 9H).
c) Síntesis del compuesto 2d
A una solución del compuesto 2c (140 mg, 0,332 mmol) en etanol (4 ml) se le añadió paladio al 10% sobre carbón orgánico (30 mg). La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 2 h. El catalizador se eliminó haciendo pasar la mezcla a través de un filtro Millipore: Millex - HV de 0,45 \mum. La solución transparente se concentró para dar el compuesto deseado 2d como un aceite incoloro (115 mg, rendimiento cuantitativo). La ^{1}H-NMR (en DMSO-d_{6}) indicó la presencia de dos rotámeros: \delta 7,28-7,14 (m, 5H), 4,33 (br.s, 1H), 4,06-4,10 (m, 1H), 3,56-3,42 (m, 3H), 2,89-2,79 (m, 1H), 2,53-2,49 (m, 1H, bajo DMSO-d_{6}), 2,24-2,10 (m, 1H), 2,03-1,93 (m, 1H), 1,87-1,75 (m, 1H), 1,62-1,45 (m, 2H) 1,38 (s, (3/9) 9H), 1,33 (s, (6/9) 9H).
Ejemplo 3 Síntesis de Boc-4(R)-(naftalen-1-ilmetoxi)prolina (3)
44
Una Boc-4(R)-hidroxi-prolina comercialmente disponible (5,00 g, 21,6 mmol) se disolvió en THF (100 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió en porciones durante 10 minutos hidruro de sodio (dispersión al 60% en un aceite, 1,85 g, 45,4 mmol) y la suspensión se agitó a TA durante 1 h. Luego se añadió 1-(bromometil)naftaleno (8,00 g, 36,2 mmol) (preparado como se ha descrito en E.A. Dixon y colaboradores, Can. J. Chem., (1981), 59, 2629-2641) y la mezcla se calentó a reflujo durante 18 h. La mezcla se vertió en agua (300 ml) y se lavó con hexano. La capa acuosa se acidificó con HCl acuoso al 10% y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida (en una mezcla de hexano, acetato de etilo y ácido acético 49:49:2), para dar el compuesto del título como un aceite incoloro (4,51 g, rendimiento 56%). La ^{1}H-NMR (en DMSO-d_{6}) indicó la presencia de dos rotámeros: \delta 8,05 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,29 (d, J=14 Hz, 1H), 7,55-7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (s ancho, 1H), 4,12 (dd, J=J=8 Hz, 1H), 3,54-3,42 (m, 2H), 2,45-2,34 (m, 1H), 2,07-1,98 (m, 1H), 1,36 (s, (3/9) 9H), 1,34 (s, (6/9) 9H).
Ejemplo 4 Síntesis de Boc-4(R)-(8-quinolina-metiloxi)prolina (4)
45
La Boc-4(R)-hidroxi-prolina (1,96 g, 8,5 mmol) en THF anhidro (20 ml) se añadió a una suspensión de NaH (1,4 g, al 60% en un aceite, 34 mmol) en THF (100 ml). Esta mezcla se agitó durante 30 min antes de que se añadiese bromometil-8-quinolina procedente del Ejemplo 1 (2,54 g, 11,44 mmol) en THF (30 ml). La mezcla se reacción se calentó a 70ºC (durante 5 h) antes de que el NaH en exceso fuera destruido cuidadosamente con THF húmedo. La mezcla de reacción se concentró en vacío y el material resultante se disolvió en EtOAc y H_{2}O. La fase acuosa alcalina se separó y acidificó con HCl acuoso al 10% a pH \sim5, antes de ser extraída con EtOAc (150 ml). La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar un aceite de color pardo. La purificación por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezcla de 10% de MeOH y CHCl_{3}) dio el compuesto deseado como un sólido de color amarillo pálido (2,73 g, 86%). La HPLC (97,5%); y la ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) muestran poblaciones de rotámeros en una relación de 6:4, \delta 12-11,4 (bs, 1H), 8,92 (2 x d, J = 4,14 y 4,14 Hz, 1H), 8,38 (2 x d, J = 8,27 y 8,27 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,63-7,54 (m, 2H), 5,14 (2 x s, 2H), 4,32-4,29 (m, 1H), 4,14-4,07 (m, 1H), 3,52-3,44 (m, 2H), 2,43-2,27 (m, 1H), 2,13-2,04 (m, 1H), 1,36 y 1,34
(2 x s, 9H).
Ejemplo 5 Preparación de Boc-4(R)-(7-cloro-quinolina-4-oxo)prolina (5)
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Un éster metílico de Boc-4-(S)-hidroxi-prolina (500 mg, 2,04 mmol) comercialmente disponible y 7-cloro-4-hidroxi-quinolina (440 mg, 2,45 mmol) se dispusieron en THF seco (10 ml) a 0ºC. Se añadió trifenil-fosfina (641 mg, 2,95 mmol) seguida por una lenta adición de DIAD (426 mg, 2,45 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 20 h. Luego la mezcla de reacción se concentró, se recogió en acetato de etilo y extrajo tres veces con HCl 1 N. La fase acuosa se alcalinizó con Na_{2}CO_{3} y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar un aceite de color amarillo. El aceite se purificó por cromatografía de resolución rápida para dar el éster metílico del compuesto (5) como un sólido de color blanco, 498 mg, rendimiento 58%.
Este éster metílico (400 mg, 0,986 mmol) se hidrolizó con hidróxido de sodio acuoso 1 M (1,7 ml, 1,7 mmol) en metanol (4 ml), a 0ºC, durante 3 h. La solución se concentró para eliminar el metanol y se neutralizó con HCl acuoso 1 M. La suspensión se concentró hasta sequedad y se recogió en metanol (20 ml), las sales se separaron por filtración y el material filtrado se concentró para dar el compuesto (5) deseado como un sólido de color blanco, 387 mg, rendimiento cuantitativo.
^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) (mezcla aprox. 1:1 de rotámeros) \delta 8,74 (d, J=5 Hz, 1 H), 8,13-8,09 (m, 1 H), 7,99 y 7,98 (s, 1 H), 7,58 (d, J = 9 Hz, 1 H), 7,02 (d, J = 5 Hz, 1 H), 5,26-5,20 (m, 1 H), 4,10-4,01 (m, 1H), 3,81-3,75 (m, 1 H), 3,59 (dd, J = 12, 10 Hz, 1 H), 2,41-2,31 (m, 2 H), 1,34 y 1,31 (s, 9H).
Ejemplo 6 Procedimiento general para reacciones de acoplamiento realizadas sobre un soporte sólido
La síntesis se realizó en un sintetizador paralelo del Modelo ACT396 procedente de Advanced ChemTech® con el bloque de 96 pocillos. Típicamente, se sintetizaron en paralelo 24 péptidos usando técnicas clásicas en fase sólida. La Fmoc-Nva-resina de Wang de partida y la ácido 1-(Fmoc-amino)-ciclopropano-carboxílico-resina de Wang se prepararon por el método de acoplamiento con DCC y DMAP (Atherton, E; Scheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach; IRL Press; Oxford (1989); páginas 131-148). Se obtuvieron otros aminoácido-resinas de Wang a partir de fuentes comerciales.
Cada pocillo se cargó con 100 mg de la resina de partida (aproximadamente 0,05 mmol). Las resinas se lavaron consecutivamente con porciones de 1,5 ml de NMP (1x) y de DMF (3x). El grupo protector Fmoc se eliminó por tratamiento con 1,5 ml de una solución al 25% v/v de piperidina en DMF durante 20 min. Las resinas se lavaron con porciones de 1,5 ml de DMF (4x), MeOH (3x) y DMF (3x). El acoplamiento se realizó en DMF (350 \mul), usando 400 \mul (0,2 mmol) de una solución 0,5 M de una mezcla de Fmoc-aminoácido y HOBt hidrato en DMF, 400 \mul (0,4 mmol) de una solución 0,5 M de DIPEA en DMF y 400 \mul (0,2 mmol) de una solución 0,5 M de TBTU en DMF. Después de haber agitado durante 1 h, los pocillos se vaciaron, las resinas se lavaron con 1,5 ml de DMF y se repitió el acoplamiento una vez más en las mismas condiciones. Luego las resinas se lavaron como antes se ha descrito y el ciclo se repitió con el siguiente aminoácido.
Los grupos de remate se introdujeron de dos maneras:
1. En la forma de un ácido carboxílico usando el protocolo antes descrito (por ejemplo ácido acético), o
2. Como un agente acilante tal como un anhídrido o un cloruro de ácido. El siguiente ejemplo ilustra el remate con anhídrido succínico: Después de la desprotección respecto del Fmoc y del subsiguiente protocolo de lavado, se añadió DMF (350 \mul), seguida por 400 \mul de una solución en DMF de anhídrido succínico (0,5 M, 0,2 mmol) y DIPEA (1,0 M, 0,4 mmol). Las resinas se agitaron durante 2 h y se realizó una operación de reacopla-
miento.
Al final de la síntesis la resina se lavó con porciones de 1,5 ml de DCM (3x), de MeOH (3x), de DCM (3x) y éstas se secaron bajo vacío durante 2 h.
La separación con respecto de la resina y la desprotección concomitante de cadenas laterales se efectuaron mediante la adición de 1,5 ml de una mezcla de TFA, H_{2}O, DTT y TIS (92,5:2,5:2,5:2,5). Después de haber agitado durante 2,5 h, la resina se filtró y se lavó con 1,5 ml de DCM. Los materiales filtrados se combinaron y se concentraron por centrifugación en vacío.
Cada compuesto se purificó mediante HPLC de fase inversa preparativa usando una columna de C18 (de 22 mm por 500 mm). Las fracciones que contenían productos se identificaron por espectrometría de masas MALDI-TOF, se combinaron y se liofilizaron.
Ejemplo 7 Procedimiento general para reacciones de acoplamiento realizadas en solución {véase también R. Knorr y colaboradores, Tetrahedron Letters, (1989), 30, 1927.}
Los reaccionantes, es decir una amina libre (1 eq.) (o su sal hidrocloruro) y el ácido carboxílico libre (1 eq.) se disolvieron en CH_{2}Cl_{2}, CH_{3}CN o DMF. Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añadieron a la solución agitada cuatro equivalentes de N-metil-morfolina y 1,05 equivalentes del agente de acoplamiento. Después de 20 min, se añadió un equivalente del segundo reaccionante, a saber un ácido carboxílico libre. (Reactivos de acoplamiento prácticos y eficientes para esta finalidad son hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris-(dimetilamino)fosfonio (HOBT) o preferiblemente tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (TBTU) o tetrafluoroborato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HATU). La reacción se vigiló por TLC. Después de haberse completado la reacción, el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La solución se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10%, con NaHCO_{3} acuoso saturado y con salmuera. La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. Cuando el residuo había sido purificado, esto se realizó por cromatografía de resolución rápida como antes se ha
definido.
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(Esquema pasa a página siguiente)
Ejemplo 8 Síntesis del segmento: Ac-Chg-Chg-Pro-(4(R)-naftalen-1-ilmetoxi)-OH (8g)
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El compuesto 8a (4,45 g, 11,98 mmol) se disolvió en CH_{3}CN anhidro (60 ml). Se añadieron consecutivamente DBU (2,2 ml, 14,38 mmol) y bromuro de alilo (1,1 ml, 13,18 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a TA. La mezcla se concentró, el aceite resultante se diluyó con EtOAc y con agua y se lavó consecutivamente con agua (2x = 2 veces) y con salmuera (1x = 1 vez). La capa de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El aceite de color amarillo se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezclas de hexano y EtOAc desde 90:10 hasta 85:15) para proporcionar el producto 8b como un aceite de color amarillo (2 ml, 4,17 g, rendimiento 85%);
MS (FAB) 412 MH^{+}
^{1}H NMR (CDCl_{3}), mezcla de rotámeros aprox. 1:2 \delta (d, J=8Hz, 1H), 7,87 (d, Z= 8Hz, 1H), 7,82 (d, J= 8Hz, 1H), 7,55-7,41 (m, 4H), 5,95-5,85 (m, 1H), 5,34-5,21 (m, 2H), 5,03-4,88 (m, 2H), 4,70-4,56 (m, 2H), 4,48 & 4,39 (t, J= 8, 15Hz, 1H), 4,28-4,23 (m, 1H), 3,81-3,55 (m, 2H), 2,46-2,36 (m, 1H), 2,13-2,05 (m, 1H), 1,44 y 1,41 (s, 9H).
El compuesto 8b (2,08 g, 5,05 mmol) se trató durante 30 min a TA con una mezcla de HCl 4 N y dioxano. La evaporación hasta sequedad proporcionó el correspondiente compuesto amina\cdotHCl en forma de un aceite. Se añadieron consecutivamente el amina\cdotHCl 8c se disolvió en DCM anhidro (25 ml), NMM (2,2 ml, 20,22 mmol), Boc-Chg-
OH \cdot H_{2}O (1,53 g, 5,56 mmol) y TBTU (1,95 g, 6,07 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche, luego se diluyó con EtOAc y se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x). La capa de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad para proporcionar el producto bruto 8d como una espuma de color blanco-amarillento (aproximadamente 2,78 g, rendimiento 100%). MS (FAB) MH^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,03 (d, J=8Hz, 1H), 7,86 (b d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,84 (d, J= 8Hz, 1H), 7,56-7,40 (m, 4H), 5,92-5,85 (m, 1H), 5,31 (dd, J=1, 17Hz, 1H), 5,22 (dd, J=1, 10Hz, 1H), 5,17 (d, J= 9Hz, 1H), 5,05 (d, J= 12Hz, 1H), 4,91 (d, J= 12Hz, 1H), 4,67-4,60 (m, 3H), 4,31-4,27 (m, 2H), 4,16 (b d, J= 11Hz, 1H), 3,71 (dd, J= 4, 11Hz, 1H), 2,47-2,41 (m, 1H), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,85-1,63 (m, 5H), 1,44-1,40 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,28-1,00 (m, 5H).
El dipéptido bruto 8d (aproximadamente 5,05 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (25 ml) como se ha descrito para el compuesto 8c. La sal hidrocloruro bruta se acopló a Boc-Chg-OH \cdot H_{2}O (1,53 g, 5,55 mmol) con NMM (2,22 ml, 20,22 mmol) y TBTU (1,95 g, 6,07 mmol) en DCM (25 ml) como se ha descrito para el compuesto 8d con el fin de proporcionar el tripéptido bruto en forma de una espuma oleosa de color amarillo. El material bruto se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezclas de hexano y EtOAc desde 80:20 hasta 75:25) para proporcionar el tripéptido 8e como una espuma de color blanco (2,75 g; rendimiento 79%) en el transcurso de 2 etapas). MS (FAB) 690,5 MH^{+}, ^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,06 (d, J=8Hz, 1H), 7,87 (b d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J= 8Hz, 1H), 7,57-7,40 (m, 4H), 6,41 (d, J= 8,5Hz, 1H), 5,92-5,84 (m, 1H), 5,31 (dd, J=1, 17Hz, 1H), 5,23 (dd, J=1, 10 5Hz, 1H), 5,04 (d, J= 12Hz, 1H), 4,98 (b d, J= 7Hz, 1H), 4,93 (d, J=12Hz, 1H), 4,63-4,58 (m, 4H), 4,29-4,25 (m, 1H), 4,10-4,07 (m, 1H), 3,90-3,84 (m, 1H), 3,72 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2,48-2,40 (m, 1H), 2,07-1,99 (m, 1H), 1,83-1,55 (m, 12H), 1,43 (s, 9H), 1,23-0,89 (m, 10H).
El tripéptido 8e (2,75 g, 3,99 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (20 ml) como se ha descrito para el compuesto 8c. La sal hidrocloruro bruta se disolvió en DCM anhidro (20 ml). Se añadieron consecutivamente NMM (1,75 ml, 15,94 mmol) y anhídrido acético (752 \mul, 7,97 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, y luego se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad para proporcionar el tripéptido bruto 8f como una espuma de color blanco (2,48 g, rendimiento 98%). MS (FAB) 632,4 MH^{+1}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,06 (b d, J=8Hz, 1H), 7,87 (b d, J= 8Hz, 1H), 7,83 (d, J'= 8Hz, 1H), 7,58-7,40 (m, 4H), 6,36 (d J= 9Hz, 1H), 6,01 (d, J= 9Hz, 1H), 5,94-5,83 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 5,25-5,21 (m, 1H), 5,05 (d, J= 12Hz, 1H), 4,94 (d, J= 12Hz, 1H), 4,64-4,57 (m, 4H), 4,30-4,23 (m, 2H), 4,12-4,08 (m, 1H), 3,73 (dd, J= 4, 11Hz, 1H), 2,49-2,42 (m, 1H), 2,08-2,01 (m, 1H), 1,99 (s, 3H), 1,85-1,53 (m, 11H), 1,25-0,88 (m, 11H).
El tripéptido bruto 8f (2,48 g, 3,93 mmol) se disolvió en una mezcla anhidra de CH_{3}CN y DCM (20 ml). Se añadieron consecutivamente trifenil-fosfina (53,5 mg, 0,200 mmol) y un catalizador de tetraquis(trifenil-fosfina)-paladio(0) (117,9 mg, 0,102 mmol), seguidos por pirrolidina (353,9 \mul, 4,24 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 18 h. Posteriormente, el disolvente se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc y ácido cítrico acuoso al 10%, luego se realizaron lavados adicionales dos veces más con ácido cítrico acuoso al 10%, con agua (2x) y con salmuera (1x). La capa orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó. El producto bruto se trituró en una mezcla de Et_{2}O y DCM (85:15) para proporcionar después de filtración el tripéptido 8g como un sólido de color blanco (2,09 g, rendimiento 90%). MS (FAB) 592,4 MH^{+} 614,3 (M+Na)^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,08 (d, J= 8Hz, 1H), 7,93 (b d, J= 9Hz, 1H), 7,88 (b d, J= 8Hz, 1H), 7,82 (d, J= 8Hz, 1H), 7,57-7,41 (m, 4H), 6,47 (d, J= 8,5Hz, 1H), 5,05 (d, J= 12,5Hz, 1H), 4,94 (d, J= 12,5Hz, 1H), 4,73 (t, J= 9,5, 19Hz, 1H), 4,44-4,35 (m, 2H), 4,26 (b s, 1H), 4,19 (d, J= 11,5Hz, 1H), 3,75 (dd, J= 4, 11Hz, 1H), 2,47 (b dd, J= 5,5, 13,5Hz, 1H), 2,20-2,11 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,88-1,41 (m, 11H), 1,30-0,80 (11H).
Ejemplo 9 Síntesis del segmento: Ac-Chg-Val-Pro(4(R)-naftalen-1-ilmetoxi)-OH (9e)
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El compuesto 9a (2,89 g, 7,02 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 8c. La sal hidrocloruro bruta se acopló a Boc-Val-OH (1,53 g, 7,73 mmol) con NMM (3,1 ml, 28,09 mmol) y TBTU (2,71 g, 8,43 mmol) en DCM (35 ml) durante 3,5 h como se ha descrito para el compuesto 3 con el fin de proporcionar el dipéptido bruto 9b como una espuma oleosa de color marfil (aproximadamente 3,60 g, rendimiento 100%). MS (FAB) 509,3 MH^{-}511,3 MH^{+}533,2 (N+Na)^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,04 (b d, J= 8Hz, 1H), 7,87 (b d, J= 7Hz, 1H), 7,82 (d, J= 8Hz, 1H), 7,56-7,40 (m, 4H), 5,93-5,85 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 5,24-5,19 (m, 2H), 5,04 (d, J= 12Hz, 1H), 4,92 (d, J= 12Hz, 1H), 4,67-4,60 (m, 3H), 4,31-4,26 (m, 2H), 4,11-4,09 (m, 1H), 3,72 (dd, J= 4, 11Hz, 1H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,07-1,99 (m, 1H), 1,44-1,36 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,01 (d, Z= 7H, 3H), 0,93 (d, J= 7Hz, 3H).
El dipéptido bruto 9b (aproximadamente 7,02 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 7c. La sal hidrocloruro bruta se acopló a Boc-Chg-OH \cdot H_{2}O (2,13 g, 7,73 mmol) con NMM (3,1 ml, 28,09 mmol) y TBTU (2,71 g, 8,43 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (35 ml) como se ha descrito para el compuesto 3 con el fin de proporcionar el tripéptido bruto 9c como una espuma de color marfil (aproximadamente 4,6 g, rendimiento 100%). MS (FAB) 648,5 MH^{-} 672 4 (M+Na)'. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,06 (b d, J'= 8Hz, 1H), 7,87 (b d, J= 7,5Hz, 1H), 7,82 (b d, J'= 8Hz, 1H), 7,57-7,40 (m, 4H), 6,46 (b d, J= 8,5Hz, 1H), 5,94-5,84 (m, 1H), 5,31 (dd, J= 1, 17Hz, 1H), 5,23 (dd, J= 1, 10,5Hz, 1H), 5,03 (d, J= 12Hz, 1H), 5,00-4,97 (m, 1H), 4,93 (d, J=, 12Hz, 1H), 4,63-4,59 (m, 4H), 4,29-4,27 (m, 1H), 4,10-4,07 (m, 1H), 3,92-3,86 (m, 1H), 3,75 (dd, J= 5, 11Hz, 1H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,10-1,99 (m, 1H), 1,76-1,57 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,20-0,92 (m, 6H), 1,00 (d, J= 7Hz, 3H), 0,93 (d, J'= 7Hz,
3H).
El tripéptido bruto 9c (aproximadamente 7,02 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 8c. La sal hidrocloruro bruta se trató adicionalmente con anhídrido acético (1,33 ml, 14,05 mmol) y NMM (3,1 ml, 28,09 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (35 ml) como se ha descrito para el compuesto 8f. El producto bruto se purificó por resolución rápida (eluyente: mezcla de hexano y EtOAc 30:70) para proporcionar el tripéptido protegido acetilado 9d como una espuma de color blanco (3,39 g, rendimiento 81% en el transcurso de 3 etapas). MS (FAB) 590,3 MH^{-}, 592,4 MH^{+} 614,4 (M+Na)^{+}.
^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,06 (d, J= 8Hz, 1H), 7,88 (b d, J= 8Hz, 1H), 7,83 (d, J= 8Hz, 1H), 7,58-7,41 (m, 4H), 6,37 (d, J= 9Hz, 1H), 5,97 (d, J= 8,5Hz, 1H), 5,94-5,84 (m, 1H), 5,31 (dd, J= 1, 17Hz, 1H), 5,24 (dd, J= 1, 10,5 Hz, 1H), 5,05 (d, J= 12Hz, 1H), 4,94 (d, J= 12Hz, 1H), 4,66-4,57 (m, 4H), 4,31-4,22 (m, 2H), 4,11-4,05 (m, 1H), 3,73 (dd, J= 4,5, 11Hz, 1H), 2,50-2,43 (m, 1H), 2,09-2,01 (m, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,68-1,55 (m, 5H), 1,15-0,89 (m, 6H), 0,99 (d, J= 7Hz, 3H), 0,91 (d, J= 7Hz, 3H).
El tripéptido acetilado 9d (3,39 g, 5,73 mmol) se desprotegió mediante el catalizador tetraquis(trifenilfosfina)-paladio(0) (172,1 mg, 0,149 mmol) con trifenil-fosfina (78,1 mg, 0,298 mmol) y pirrolidina (516 \mul, 6,19 mmol) en una mezcla 1:1 de CH_{3}CN anhidro y DCM (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 8g. El producto bruto en forma de espuma de color amarillo claro se trituró en una mezcla de Et_{2}O y DCM (85:15) para proporcionar después de filtración el tripéptido 9e como un sólido de color blancuzco (3,0 g; rendimiento 95%). MS (FAB) 550,3 MH^{-1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,08 (d, J= 8Hz, 1H), 8,04 (b d, J= 9Hz, 1H), 7,88 (b d, J= 7,5Hz, 1H), 7,82 (d, J= 8Hz, 1H), 7,58-7,37 (m, 5H), 5,05 (d, J= 12Hz, 1H), 4,94 (d, J= 12Hz, 1H), 4,61 (t, J= 9,5, 19,5Hz, 1H), 4,46-4,37 (m, 2H), 4,27 (b s, 1H), 4,17 (d, J= 11Hz, 1H), 3,74 (dd, J= 4, 11Hz, 1H), 2,49 (b dd, J= 7,5, 13Hz, 1H), 2,17-2,09 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 2,03-1,94 (m, 1H), 1,79 (b d, J= 12,5Hz, 1H), 1,62-1,43 (m, 5H), 1,00 (d, J= 7Hz, 3H), 0,90 (d, J =
7Hz, 3H).
\newpage
Ejemplo 10 Síntesis del pentapéptido 10h
La síntesis fue hecha como sigue:
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a) Síntesis del compuesto 10b
A una solución de la Boc-4(R)-benciloxiprolina (10a) comercialmente disponible (20,0 g, 62,2 mmol) en acetonitrilo (250 ml) a 0ºC se le añadieron consecutivamente DBU (10,3 ml, 68,87 mmol) y bromuro de alilo (6,0 ml, 69,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, luego el acetonitrilo se evaporó y el residuo se disolvió en EtOAc. La mezcla se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), agua, NaHCO_{3} acuoso saturado, agua (2x) y salmuera. La solución de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para proporcionar el deseado éster 10b (21,84 g, 60,42 mmol, rendimiento 97%) como un aceite incoloro.
b) Síntesis del compuesto 10c
El éster alílico 10b (21,84 g, 60,42 mmol) se trató con una solución 4 N de HCl en dioxano (453 ml, 1.812,0 mmol) durante 30 min antes de ser concentrada en vacío. El hidrocloruro de amina se sometió a las condiciones de reacción descritas en el Ejemplo 3. La sal hidrocloruro bruta se combinó con Boc-Val-OH (13,13 g, 60,43 mmol), NMM (26,6 ml, 241,93 mmol) y TBTU (23,3 g, 72,56 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (300 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 16 h a TA y luego se concentró en vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con agua, con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera. La capa orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para proporcionar el dipéptido bruto 10c (30,23 g). MS (FAB) 461 (MH^{+}).^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,36-7,28 (m, 5H), 5,91-5,84 (m, 1H), 5,35-5,21 (m, 2H), 5,19 (bs, 1H), 4,66-4,62 (m, 3H), 4,56 (d, J= 11,8 Hz, 1H), 4,49 (d, J= 11,4 Hz, 1H), 4,28-4,24 (m, 2H), 4,04 (bd, J= 11,1 Hz, 1H), 3,70 (dd, J= 4,5, 11,1 Hz, 1H), 2,25-2,42 (m, 1H), 2,08-1,98 (m, 1H), 1,45-1,40 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,01 (d, J= 6,7Hz, 3H), 0,93 (d, J= 6,7Hz, 3H).
c) Síntesis del compuesto 10d
El dipéptido bruto 10c (aproximadamente 60 mmol) se trató con una solución 4 N de HCl en dioxano (453 ml). La sal hidrocloruro bruta se combinó con Boc-Ile-OH (14,0 g, 60,5 mmol), TBTU (23,3 g, 72,6 mmol) y NMM (26,6 ml, 241,9 mmol, 4,0 eq.) en CH_{2}Cl_{2} (300 ml) como se ha descrito para el compuesto 10c a fin de proporcionar el tripéptido bruto 10d. La purificación por cromatografía de resolución rápida (usando una mezcla de EtOAc al 30% en hexano) dio el deseado compuesto 10d (25,61 g, 44,64 mmol, rendimiento 72% a partir del compuesto 10a). MS (FAB) 574 (MH^{+}); ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,37-7,28 (m, 5H), 6,44 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 5,95-5,84 (m, 1H), 5,35-5,23 (m, 2H), 5,99 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,65-4,47 (m, 3H), 4,56 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,27-4,21 (m, 1H), 4,03 (bd, J= 10,8 Hz, 1H), 3,97-3,88 (m, 1H), 3,71 (dd, J 4,1 Hz, J = 10,8 Hz, 1H), 2,49-2,41 (m, 1H), 2,12-2,00 (m, 2H), 1,85-1,74 (m, 1H), 1,55-1,40 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,16-1,04 (m, 1H), 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,89-0,82 (m, 6H).
d) Síntesis del compuesto 10e
El tripéptido 10d (25,60 g; 44,62 mmol) se trató con una solución 4 N de HCl en dioxano (durante 30 min) antes de ser concentrado en vacío para dar 22,64 g de la sal hidrocloruro. La sal hidrocloruro (14,97 g, 29,35 mmol) se combinó con Boc-(D)Glu(OTMSE)-OH (10,2 g, 29,35 mmol), TBTU (11,30 g, 35,23 mmol) y NMM (11,30 g, 35,23 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (150 ml) como se ha descrito para el compuesto 10c. El compuesto 10e se obtuvo en forma de una espuma de color blancuzco (23,6 g). MS (FAB) 803,5 (MH'); ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,34-7,2S (m, 5H), 6,74 (d, J= 8,26 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 8,90 Hz, 1H), 5,93-5,86 (m, 1H), 5,44-5,36 (m, 1H), 5,35-5,22 (m, 2H), 4,64-4,48 (m, 6H), 4,27-4,15 (m, 4H), 4,02 (d, J= 11,13 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 11,13, 4,45 Hz, 2H), 2,49-2,41 (m, 2H), 2,40-2,34 (m, 1H), 2,18-2,00 (m, 3H), 1,96-1,71 (m, 2H), 1,50-1,40 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,15-1,04 (m, 1H), 1,02-0,95 (m, 1H), 0,97 (d, 8,27 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 7,00 Hz, 3H), 0,87-0,82 (m, 1H), 0,84 (d, J = 6,67 Hz, 6H), 0,04 (s, 9H).
e) Síntesis del compuesto 10f
El tetrapéptido bruto 10e (aproximadamente 28,91 mmol) se trató durante 30 min con una solución 4 N de HCl en dioxano (150 ml). La sal hidrocloruro bruta se combinó con Boc-Asp(OTMSE)-OH (10,15 g, 30,44 mmol), NMM (12,7 ml, 115,6 mmol) y TBTU (11,14 g, 34,70 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (150 ml) como se ha descrito para el compuesto 10c. El pentapéptido 10f se obtuvo como una espuma de color amarillo claro (aproximadamente 29,5 g). MS (FAB) 1018 (MH'); ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,36-7,28 (m, 6H), 6,78 (d, u = 8,90 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,58 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 5,93-5,83 (m, 1H), 5,33-5,21 (m, 2H), 4,62-4,57 (m, 6H), 4,49-4,36 (m, 2H), 4,30 (dd, J = 8,90, 6,35 Hz, 1H), 4,23-4,14 (m, 5H), 3,72 (dd, J= 11,13, 4,77 Hz, 2H), 2,89 (dd, J = 16,85, 6,36 Hz, 1H), 2,79 (dd, J 16,85, 6,36 Hz, 1H), 2,48-2,27 (m, 3H), 2,21-1,94 (m, 5H), 1,46-1,42 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,17-1,07 (m, 1H), 1,00-0,86 (m, 4H), 0,99 (d, Z = 6,68 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,68 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,67 Hz, 6H), 0,04 (S, 9H), 0,02 (s, 9H).
f) Síntesis del compuesto 10g
El Boc-pentapéptido 10f (aproximadamente 28,91 mmol) se trató con una solución 4 N de HCl en dioxano (150 ml) durante 30 min antes de ser concentrado en vacío. La sal hidrocloruro bruta se disolvió en DMF anhidra (150 ml), seguida por la adición sucesiva de piridina (51,4 ml, 636,2 mmol) y anhídrido acético (51,6 ml, 546,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, luego se vertió en salmuera y se extrajo con EtOAc (3x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), NaHCO_{3} saturado (2x), agua (2x) y salmuera (1x). La capa orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El residuo en forma de aceite/espuma se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezcla de hexano y EtOAc; 4:6) para proporcionar el pentapéptido acetilado 10g como un sólido amorfo de color blanco (17,56 g, rendimiento 63% a partir del compuesto 10d). MS (FAB) 960,7 (MH') 982,9 (MNa'); H-NMR (CDCl_{3}) \delta 7,72 (d, J = 9,22 Hz, 1H), 7,35-7,28 (m, 6H), 7,12 (d, J= 9,54 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 8,26 Hz, 1H), 5,91-5,81 (m, 1H), 5,32-5,22 (m, 2H), 5,20-4,96 (m, 1H), 4,68-4,54 (m, SH), 4,49-4,36 (m, 3H), 4,28-4,20 (m, 3H), 4,19-4,12 (m, 2H), 3,74 (dd, J= 11,76, 5,40 Hz, 2H), 2,93 (dd, J = 17,48, 4,45 Hz, 1H), 2,81 (dd, J = 17,49, 6,36 Hz, 1H), 2,47-2,39 (m, 2H), 2,33-2,24 (m, 1H), 2,14-1,95 (m, 5H), 2,03 (s, 3H), 1,52-1,42 (m, 1H), 1,17-1,07 (m, 1H), 1,02-0,88 (m, 16H), 0,04 (s, 9H), 0,03 (s, 9H).
g) Síntesis del compuesto 10h
El pentapéptido 10g (16,01 g, 16,67 mmol) se suspendió en acetonitrilo anhidro (100 ml) y se trató consecutivamente con trifenil-fosfina (227,4 mg, 0,87 mmol) y un catalizador de tetraquis(trifenil-fosfina)-paladio(O) (501 mg, 0,433 mmol) seguido por pirrolidina (1,5 ml, 18,01 mmol). La mezcla de reacción se agitó mecánicamente durante 4 h a TA y luego se concentró en vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (3x), agua (3x) y salmuera (1x). La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente HOAc al 1%, MeOH al 2,3% en CHCl_{3}) para proporcionar el pentapéptido 10h como un sólido amorfo de color blanco (11,45 g, rendimiento 75%). (MH ), 942 (MNa'), 958 6 (M+K); ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,53 (d, J = 8,90 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 7,35-7,28 (m, 5H), 7,22-7,17 (m, 1H), 6,83 (d, 7,31 Hz, 1H), 5,00-4,94 (m, 1H), 4,64-4,61 (m, 2H), 4,53-4,44 (m, 3H), 4,35 (dd, J = 8,26, 6,04 Hz, 1H), 4,28-4,24 (m, 1H), 4,18-4,09 (m, 5H), 3,72 (dd, J 10 81, 4,14 Hz, 1H), 2,87-2,84 (m, 2H), 2,47-2,41 (m, 2H), 2,34-2,24 (m, 1H), 2,16-1,97 (m, 5H), 2,06 (s, 3H), 1,52-1,42 (m, 1H), 1,17-1,08 (m, 1H), 1,01-0,84 (m, 16H), 0,04 (s, 9H), 0,03 (s, 9H).
Ejemplo 11 Síntesis del compuesto 102 (Tabla 1)
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La síntesis se realizó como se muestra seguidamente:
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a) Síntesis del compuesto 11b
Una solución fría (a -78ºC) de yoduro de pentafluoro-etilo comercialmente disponible (6,4 g, 26,02 mmol) en éter seco (16,7 ml) se canuló lentamente (durante 10 min) dentro de una solución a -78ºC de MeLi.LiBr en éter (14,0 ml de una solución 1,5 M en éter, 21,0 mmol). Después de 10 min adicionales a -78ºC se añadió la amida de Weinreb 11a (preparada a partir de Boc-Nva-OH comercialmente disponible de acuerdo con el procedimiento de Castro, B. y colaboradores, Synthesis, (1983), 676-678.) (2,02 g, 7,76 mmol) en éter (5 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a -78ºC y luego a -40ºC durante 15 min. Se añadió luego una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl. La mezcla se extrajo 3 veces con EtOAc y el extracto orgánico combinado se lavó con salmuera. La solución de EtOAc se secó finalmente sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró. La pentafluoroetil-cetona bruta se disolvió en una mezcla de THF (38 ml) y MeOH (9,5 ml) y la solución resultante se enfrió a 0ºC para la adición de borohidruro de sodio (323 mg, 8,54 mmol, 1,1 eq.). Después de 15 min., se añadió éter y la mezcla se lavó con una solución acuosa al 10% de ácido cítrico. La capa acuosa se extrajo 3 veces con éter y la capa orgánica combinada se lavó consecutivamente con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2x), agua y salmuera. La solución en éter se secó (sobre Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. El residuo se cromatografió con resolución rápida usando una mezcla de EtOAc (15%) y hexano (85%) para proporcionar los deseados alcoholes (1,30 g, 4,05 mmol, rendimiento 52% a partir de la amida 11a). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) (mezcla de 2 diastereoisómeros en una relación 1:1). \delta 4,75 (bs, 1/2H), 4,54 (bs, 1/2H), 4,21-4,13 (m, 1H), 3,92 (dd, J= 6,0 Hz, J'= 14,6 Hz, 1H), 1,65-1,29 (m, 4H), 1,45 (m, 9H), 0,98-0,93 (m, 3H).
b) Síntesis del compuesto 11c
El compuesto 11b (96 mg, 0,30 mmol) se trató con una solución 4 N de HCl en dioxano durante 30 min antes de ser concentrado en vacío. La sal hidrocloruro bruta se disolvió en DMF seca (1 ml). Se añadieron luego consecutivamente el pentapéptido 10h (204 mg, 0,22 mmol), NMM (0,1 ml, 0,91 mmol, 4 eq.) y TBTU (85 mg, 0,26 mmol, 1,2 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, luego se vertió en salmuera y se extrajo 3 veces con EtOAc. El extracto orgánico combinado se lavó consecutivamente con una solución acuosa al 10% de ácido cítrico (2x), con agua, con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, con agua (2x) y con salmuera. La solución de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida usando una mezcla de EtOAc (de 75 a 80%) y hexano (de 25 a 20%) para proporcionar el deseado compuesto 11c (154 mg, 0,137 mmol, rendimiento 62%). MS (FAB) 1123 (MH^{+}).
c) Síntesis del compuesto 11d
A la mezcla de alcoholes 11c (52 mg, 0,47 mmol) en una solución de DMSO (0,5 ml) y tolueno (0,5 ml) se le añadieron consecutivamente ácido dicloroacético (11,5 ml, 0,139 mmol) y EDAC (89 mg, 0,464 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, se vertió en salmuera (30 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). El extracto orgánico combinado se lavó consecutivamente con NaHCO_{3} acuoso saturado, con agua (2x) y con salmuera. La solución de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida usando una mezcla de EtOAc (de 75 a 80%) y hexano (de 25 a 20%) para proporcionar la deseada cetona 11d (37 mg, 0,032 mmol, rendimiento 70%). MS (FAB) 1121 (MH^{+}).
d) Síntesis del compuesto 102
La mezcla de la cetona 11d (37 mg, 0,032 mmol) se disolvió en TFA (1 ml) y la solución resultante se agitó durante 1 h a TA. Después de haber eliminado los materiales volátiles en vacío, se obtuvo el deseado péptido (29 mg, 0,031 mmol, 97%). MS (FAB) 921 (MH^{+}), 943 (MNa^{+}). ^{1}H NMR (CDCl_{3} (mezcla de 2 diastereoisómeros en una relación de 1,35:1) d, 8,14 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,07-8,02 (m, 2H), 7,80-7,78 (m, 1H), 7,35-7,26 (m, SH), 4,77-4,56 (m, 1H), 4,56-4,38 (m, 5H), 4,34-4,09 (m, 5H), 2,68-2,59 (m, 2H), 2,26-2,15 (m, 3H), 2,02-1,82 (m, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,78-1,28 (m, 6H), 1,07-0,95 (m, 1H), 0,92-0,80 (m, 10H), 0,77-0,68 (m, 8H).
Ejemplo 12 Síntesis del compuesto 205 (Tabla 2)
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El compuesto 205 se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:
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a) Síntesis del compuesto 12a
A una solución de Boc-hidrazina (3,0 g, 22,6 mmol) en tolueno (42 ml) se le añadió propionaldehído (1,8 ml, 24,9 mmol). La solución se calentó a 50ºC durante 1 h y luego se agitó a TA durante 24 h. La mezcla se concentró para dar el compuesto 12a como un sólido de color blanco (3,70 g, 95%) que era homogéneo según la HPLC analítica (97,5%). MS (FAB) 173,1 (MH'); ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) d 10,33 (hs, 1H), 7,28 (bs, 1H), 2,19-2,09 (m, 2H), 1,42 y 1,41 (2 x s, 9H), 0,97 (dt, Z = 7,6, 1,6 Hz, 3H).
b) Síntesis del compuesto 12b
A la hidrazona 12a (3,7 g, 21,48 mmol) en THF (80 ml) a -78ºC se añadió DIBAL (31 ml, 47,25 mmol) como una solución 1,5 M en tolueno. La mezcla de reacción se mantuvo a -78ºC durante 2 h y luego a -40ºC durante 2 h. Se añadió la sal de Rochelle (tartrato de potasio y sodio acuoso) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con Et_{2}O (2 x 75 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (sobre Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron en vacío. La purificación por cromatografía de resolución rápida sobre gel de sílice dio el compuesto 12b como un aceite incoloro (3,4 g, 91%). MS (CI-NH_{3}) 175,2 (MH'); H-NMR (DMSO-d_{6}) d 8.10 (bs, 1H), 4,25 (bs, 1H), 2,6 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,45-1,29 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 0,85 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
c) Síntesis del compuesto 12c
La hidrazina 12b (0,20 g, 1,15 mmol) se combinó con (S)-(-)-feniletil-isocianato (0,162 g, 1,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2,4 ml) con DIPEA (0,44 ml, 2,52 mmol) y se agitó a 0ºC durante 1 h, y luego a TA durante 3 h. La mezcla se concentró en vacío para dar un sólido de color blanco que se purificó por cromatografía de resolución rápida para dar el compuesto 12c (0,25 g, 68%). MS (FAB) 322,3 (MH'); ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) d 8,90 y 8,48 (2 x bs, 1H), 7,35-7,23 (m, 5H), 6,84 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 6,50 (bs, 1H), 4,79 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,36 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 0,81 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
d) Síntesis del compuesto 12d
El compuesto 12c (77 mg, 0,24 mmol) se trató con una mezcla de HCl y dioxano 4 N (1,2 ml) durante 20 min antes de ser concentrado en vacío. La sal hidrocloruro se combinó con el pentapéptido 10h (0,20 g, 0,22 mmol), TBTU (85 mg, 0,26 mmol) y diisopropil-etil-amina (0,13 ml, 0,73 mmol) en DMF (2,5 ml) a TA durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se disolvió en EtOAc y se lavó consecutivamente con NaHCO_{3} acuoso saturado, con HCl acuoso al 10% y con salmuera, antes de ser secado (sobre MgSO_{4}), filtrado y concentrado en vacío. La purificación por cromatografía de resolución rápida dio el compuesto 12d como un sólido de color blanco (80 mg, 33%).
e) Síntesis del compuesto 205
El péptido protegido 12d (75 mg, 0,067 mmol) se trató con TFA puro (1,5 ml) durante 1,5 h antes de ser concentrado en vacío. La purificación por HPLC preparativa dio el compuesto 205 como un sólido de color blanco (17 mg, 27%). HPLC (98%); MS (FAB) 923,6 (MH^{+}); HRMS calculado para C_{46}H_{66}N_{8}O_{12} (MH^{+}) 923,48785, encontrado: 923,49097. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) d 12,5-11,9 (hs, 2H), 10,31 (bs, 1H), 8,26 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,26 Hz, 1H), 7,78 (d, J = B.SB Hz, 1H), 7,42-7,26 (m, 10H), 7,20 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 6,86 (bd, 1H), 4,85-4,77 (m, 1H), 4,55 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 4,46 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,36-4,20 (m, 6H), 3,7S-3,68 (m, 1H), 3,48-3,34 (bs, 1H), 3,18-3,07 (bs, 1H), 2,62 (dd, Z = 16. 5, 5. 7Hz, 1H), 2,44 (dd, J = 16,5, 5,7 Hz, 1H), 2,30, 2,22 (m, 1H), 2,17 (t, J = 7,95 Hz, 2H), 2,06-1,84 (m, 2H), 1,81 (s, 3H), 1,80-1,59 (m, 2H), 1,42-1,30 (m, 6H), 1,06-0,98 (m, 1H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 6H), 0,78 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 0,71 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
Ejemplo 13 Síntesis del compuesto 231
El compuesto 231 se preparó de acuerdo con el procedimiento indicado para el compuesto 205 excepto que el isocianato se reemplazó por el correspondiente isocianato preparado a partir de piperonil-amina de la siguiente manera.
A una solución de fosgeno en tolueno (0,2 ml, 0,38 mmol, 4 eq.) y THF (0,7 ml) a 0ºC se le añadió piperonil-amina (12 \mul, 0,095 mmol) en THF (0,7 ml) que contenía diisopropil-etil-amina (53 \mul, 0,30 mmol) gota a gota durante un período de tiempo de 15 min. La mezcla se agitó a 0ºC durante 30 min antes de ser concentrada. El isocianato generado se acopló como se ha descrito para el compuesto 12c. El grupo Boc se eliminó (con HCl 4 N en dioxano) y la sal hidrocloruro del fragmento P1/P1' se acopló de la manera usual con HATU, diisopropil-etil-amina y el pentapéptido 10h (0,10 g, 0,095 mmol) en DMF. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y luego a TA durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se disolvió en EtOAc y se lavó consecutivamente con NaHCO_{3} acuoso saturado, con HCl acuoso al 10% y con salmuera antes de ser secado (sobre MgSO_{4}), filtrado y concentrado en vacío. La purificación por cromatografía de resolución rápida dio el deseado péptido protegido (67 mg, 62,5%).
El péptido protegido (63 mg, 0,056 mmol) se trató como para la síntesis del compuesto 12d para dar después de purificación por HPLC preparativa el compuesto 231 en forma de un sólido de color blanco (17 mg, 32%). HPLC (100%); MS (FAB) 953,05 (MH^{+}); HRMS calculado para C_{46}H_{64}N_{8}O_{14} (MH^{+}) 953,46204, encontrado: 953,46680. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 10,35 (bs, 1H), 8,17 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,40-7,25 (m, 5H), 7,23-7,13 (bs, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,79 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,95 (s, 2H), 4,57-4,43 (m, 3H), 4,34-4,18 (m, 6H), 4,13-4,08 (m, 2H), 3,70 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 3,67 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 2,68-2,58 (m, 2H), 2,48-2,42 (m, 1H), 2,34-2,24 (m, 2H), 2,2-2,13 (m, 2H), 2,05-1,94 (m, 1H), 1,94-1,82 (m, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,75-1,61 (m, 2H), 1,45-1,30 (m, 3H), 1,03-0,94 (m, 1H), 0,87-0,75 (m, 9H), 0,74-0,67
(m, 6H).
Ejemplo 14 Síntesis del compuesto 232
El compuesto 12b se acopló al apropiado ácido carboxílico (procedente de Maybridge) usando TBTU y diisopropil-etil-amina en DMF de la manera usual. El grupo Boc procedente del fragmento P1/P1' se eliminó (con HCl 4 N en dioxano, durante 30 min) y la correspondiente sal hidrocloruro (0,104 mmol) acoplada al péptido 10h (0,10 g, 0,095 mmol) de la manera usual con HATU (39,5 mg, 0,104 mmol) y diisopropil-etil-amina (0,07 ml, 0,04 mmol) en DMF (0,95 ml) durante 16 h. La mezcla se concentró y el residuo se extrajo en EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado, con HCl acuoso al 10% y con salmuera, antes de ser secado (sobre MgSO_{4}), filtrado y concentrado en vacío para dar el péptido protegido (110 mg, 100%). La desprotección final de este péptido se realizó por saponificación. El péptido protegido (0,105 mg, 0,09 mmol) se disolvió en THF (1,3 ml), MeOH (0,7 ml) y H_{2}O (0,7 ml) antes de ser tratado con NaOH acuoso (0,18 ml de una solución 2 N, 0,36 mmol). La mezcla se agitó durante 3,5 h antes de ser concentrada en vacío. El residuo bruto se purificó por HPLC preparativa para dar el compuesto 232 como un sólido de color blanco (33 mg, 36%). HPLC (97%); MS (FAB) 977,4 (MH^{+}), 999,4 (MNa^{+}); HRMS calculado para C_{47}H_{64}N_{10}O_{13} (MH^{+}) 977,47327, encontrado: 977,47620. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 10,61 (bs, 1H), 8,75 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,02-7,90 (m, 3H), 7,87 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,60-7,56 (m, 1H), 7,35-7,26 (m, 5H), 4,57-4,43 (m, 4H), 4,42-4,34 (m, 2H), 4,33-4,25 (m, 2H), 4,25-4,17 (m, 2H), 3,70 (dd, J = 10,5, 10,5 Hz, 1H), 3,21-3,10 (m, 2H), 2,96-2,80 (m, 1H), 2,69-2,60 (m, 2H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,35-2,25 (m, 1H), 2,22-2,15 (m, 2H), 2,05-1,90 (m, 2H), 1,88-1,81 (m, 1H), 1,80 (s, 3H), 1,77-1,61 (m, 2H), 1,53-1,40 (m, 2H), 1,39-1,28 (m, 1H), 1,06-0,95 (m, 1H), 0,91-0,81 (m, 7H), 0,79 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 0,75-0,67 (m, 6H).
Ejemplo 15 Síntesis del compuesto 233
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Síntesis del compuesto 15b
Se disolvió Boc-alanina (15a) (5 g, 26,42 mmol) en DMF anhidra (63 ml) a 0ºC antes de que se añadiesen 3-amino-propionitrilo (1,9 ml, 26,42 mmol) y HOBt (3,5 g, 26,42 mmol). A esta solución se le añadió DCC (26,4 ml, 26,4 mmol, 1,0 M en diclorometano) a través de una jeringa. La mezcla se agitó a 0ºC durante 24 h. La DCU generada se separó por filtración a través de una almohadilla de Celite y se lavó con diclorometano frío. El material filtrado se concentró en vacío y el residuo se volvió a disolver en EtOAc y se lavó con HCl 1 N (acuoso), con NaHCO_{3} saturado y con salmuera saturada. La fase orgánica se secó (sobre Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró en vacío para dar 6,3 g de un sólido de color parduzco pálido. La purificación por cromatografía de resolución rápida usando una mezcla de EtOAc y hexano (7/3) dio el compuesto 15b como un sólido de color blanco. (3.94 g, 62%). HPLC (95%); MS (FAB) 242,1 (MH^{+}), 264,1 (MNa^{+}); ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,10 (bs, 1H), 6,88 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,86 (m, 1H), 3,35-3,2 (m, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,18 (d, J = 7,3 Hz, 2H).
Síntesis del compuesto 15c
A una solución del compuesto 15b (3,92 g, 17,5 mmol) en THF (350 ml) a 0ºC se le añadieron consecutivamente trifenil-fosfina (7,2 g, 35,4 mmol), DEAD (5,5 ml, 35,1 mmol) y trimetilsilil-azida (4,66 ml, 35,1 mmol). La mezcla de reacción se calentó a TA y se dejó en agitación durante 16 h. Luego la mezcla se calentó a 70ºC durante 4 h y se agitó durante 48 h adicionales a TA. La solución se enfrió a 0ºC y se trató con un exceso de solución acuosa al 5,5% de (NH_{4})_{2}Ce(NO_{3})_{6} [con precaución, añadir lentamente gota a gota]. La mezcla bruta se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml) y se lavó con salmuera saturada antes de ser secada (sobre Na_{2}SO_{4}), filtrada y concentrada en vacío. La purificación por cromatografía de resolución rápida entre EtOAc y hexano (6/4) dio el compuesto 15c como un sólido de color blanco. (3,3 g, 76%). MS (FAB) 267,1 (MH^{+}); ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 7,75 (d, J = , 1H), 5,1-5,02 (m, 1H), 4,73 (t, J = 2H), 3,18 (t, J = 2H), 1,49 (d, J = X, 3H), 1,36 (s, 9H).
La desprotección final de las funcionalidades de tetrazol y de éster se realizó por saponificación. El péptido protegido 15d (38 mg, 0,033 mmol) se disolvió en THF (0,5 ml), MeOH (0,25 ml) y H_{2}O (0,25 ml) antes de ser tratado con NaOH acuoso (0,1 ml de una solución 2 N, 0,198 mmol) durante 4 h. La mezcla se concentró en vacío y el producto bruto se purificó por HPLC preparativa para dar después de liofilización el compuesto 233 como un sólido de color blanco (7,5 mg, 255%). HPLC (98%); MS (FAB) 913,5 (M-H^{-}); HRMS calculado para C_{41}H_{62}N_{12}O_{12} (MH^{+}) 915,4688, encontrado: 915,47250. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 10,32 (bs, 1H), 8,23 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,35-7,27 (m, 5H), 6,99 (m, 1H), 5,12 (m, 1H), 4,56-4,42 (m, 4H), 4,41-4,34 (m, 1H), 4,34-4,17 (m, 5H), 3,70 (dd, J = 10,5, 10,5 Hz, 1H), 3,15 (bm, 1H), 2,67-2,61 (m, 2H), 2,48-2,40 (m, 1H), 2,30-2,23 (m, 1H), 2,22-2,15 (m, 2H), 2,02 -1,92 (m, 2H), 1,87-1,81 (m, 1H), 1,80 (s, 3H), 1,77-1,67 (m, 1H), 1,67-1,57 (m, 1H), 1,51 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,45-1,27 (m, 3H), 1,06-0,94 (m, 1H), 0,87 (dd, J = 6,4, 6,4 Hz, 6H), 0,82 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 0,72-0,62 (m, 6H).
Ejemplo 16 Síntesis del compuesto 107
A Boc-(L)Nvl-OH (0,28 g, 1,28 mmol) se le añadieron bencil-amina (0,163 g, 1,53 mmol), TBTU (0,45 g, 1,41 mmol) y diisopropiletil-amina (0,45 ml, 2,56 mmol) en DMF (10 ml) durante 10 h. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se disolvió en EtOAc (80 ml) y se lavó consecutivamente con NaHCO_{3} acuoso saturado, HCl acuoso al 10% y salmuera, antes de ser secado (sobre MgSO_{4}), filtrado y concentrado en vacío para dar un sólido de color blanco (0,18 g, 46%) que era homogéneo en un 91% según la HPLC analítica. Este material (37 mg, 0,12 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (5 ml) durante 30 min antes de ser concentrado en vacío. La sal hidrocloruro (0,12 mmol) se combinó con el pentapéptido 10h (0,10 g, 0,11 mmol), TBTU (39 mg, 0,12 mmol) y diisopropil-etil-amina (0,07 g, 0,38 mmol) en DMF (8 ml) y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se disolvió en EtOAc y se lavó consecutivamente con NaHCO_{3} acuoso saturado, HCl acuoso al 10% y salmuera, antes de ser secado (sobre MgSO_{4}), filtrado y concentrado en vacío para dar un sólido de color blanco (0,12 g, 89%). El péptido se desprotegió con TFA puro (5 ml) durante 1 h, antes de ser concentrado. El compuesto se purificó por HPLC preparativa para dar el compuesto 107 (39 mg, 39%). HPLC (98,5%); FAB MS m/z: 908 (MH^{+}); HRMS calculado para C_{46}H_{65}N_{7}O_{12} (MH^{+}) 908,47693, encontrado: 908,47230; AAA OK; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 12,5-11,9 (bs, 2H), 8,30 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,02 (m, 3H), 7,79 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,37-7,19 (m, 10H), 4,57-4,39 (m, 3H), 4,33-4,14 (m, 6H), 4,11 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 3,68 (dd, J = 10,8, 4,1 Hz, 1H), 2,63 (dd, J = 16,2, 6,2 Hz, 1H), 2,45 (dd, J = 16,2, 6,2 Hz, 1H), 2,23-2,15 (m, 3H), 2,02-1,85 (m, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,79-1,67 (m, 2H), 1,66-1,48 (m, 2H), 1,40-1,23 (m, 3H), 1,08-0,97 (m, 1H), 0,92-0,81 (m, 11H), 0,73 (t, J = 7,95 Hz, 6H).
Ejemplo 17 Síntesis del compuesto 108
El compuesto 108 se preparó de acuerdo con el procedimiento señalado para el compuesto 107.
HPLC (99,9%); FAB MS m/z: 922 (MH^{+}); HRMS calculado para C_{47}H_{67}N_{7}O_{12} (MH^{+}) 922,49261, encontrado: 922,49560; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) . 12,5-11,9 (bs, 2H), 8,21 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,91 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 7,79 (8,9 Hz, 1H), 7,36-7,25 (m, 10H), 7,23-7,17 (m, 1H), 4,92-4,83 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,51 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,33-4,25 (m, 2H), 4,24-4,14 (m, 3H), 4,11 (d, J = 11 Hz, 1H), 3,71 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 11,0, 4,0 Hz, 1H), 2,45 (dd, J = 11,0, 4,0 Hz, 1H), 2,23-2,14 (m, 3H), 2,04-1,86 (m, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,80-1,66 (m, 2H), 1,62-1,42 (m, 2H), 1,33 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,30-1,17 (m, 2H), 1,07-0,96 (m, 1H), 0,88 (m, 6H), 0,81 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 0,73 (t, J = 7,6 Hz, 6H).
Ejemplo 18 Análisis radiométrico de la proteasa de NS3 del HCV recombinante a) Clonación, expresión y purificación de la proteasa tipo 1 de NS3 del HCV recombinante
Se obtuvo el suero de un paciente infectado por HCV mediante una colaboración externa (Bernard Willems MD, Hôpital St-Luc, Montréal, Canadá y Dr. Donald Murphy, Laboratoire de Santé Publique du Québec, Ste-Anne de Bellevue, Canadá). Se construyó un molde de ADNc de plena longitud tratado por ingeniería genética del genoma del HCV a partir de fragmentos de ADN obtenidos mediante una reacción en cadena de polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR, de reverse transcription-polymerase chain reaction) de un ARN de suero y usando cebadores específicos seleccionados sobre la base de la homología entre otras cepas del genotipo 1b. A partir de la determinación de toda la secuencia genómica, se asignó un genotipo 1b al material aislado de HCV de acuerdo con la clasificación de Simmonds y colaboradores (J. Clin. Microbiol. (1993), 31, 1493-1503). Se mostró que la secuencia de aminoácidos de la región no estructural NS2-NS4B era idéntica en más de 93% al genotipo 1b del HCV (materiales aislados BK, JK y 483) e idéntica en un 88% al genotipo 1a del HCV (material aislado del HCV-1). Se generó por PCR un fragmento de ADN que codificaba el precursor de poliproteína (NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS5B) y se introdujo en vectores de expresión eucarióticos. Después de una transfección transitoria, se demostró el tratamiento de una poliproteína mediado por la proteasa de NS3 del HCV por la presencia de la proteína NS3 madura usando un análisis por transferencia Western. La proteína NS3 madura no fue observada con expresión de un precursor de poliproteína que contenía la mutación S1165A, que desactiva a la proteasa de NS3, confirmando la funcionalidad de la proteasa de NS3 del HCV.
El fragmento de ADN que codificaba la proteasa de NS3 del HCV recombinante (aminoácidos 1.027 a 1.206) fue clonado en el vector de expresión bacteriana pET11d. La expresión de la proteasa de NS3 en E. coli BL(DE3)pLysS se indujo por incubación con IPTG 1 mM durante 3 h a 22ºC. Una típica fermentación (de 18 l) proporcionó aproximadamente 100 g de una pasta celular húmeda. Las células se volvieron a suspender en un tampón para lisis (3,0 ml/g) que consistía en fosfato de sodio 25 mM, pH 7,5, glicerol al 10% (v/v), EDTA 1 mM y NP-40 al 0,01%, y se almacenó a -80ºC. Las células se descongelaron y homogeneizaron a continuación de la adición de DTT 5 mM. Se añadieron luego cloruro de magnesio y DNasa al material homogeneizado en concentraciones finales de 20 mM y 20 \mug/ml, respectivamente. Después de una incubación durante 25 min a 4ºC, el material homogeneizado se trató con ultrasonidos y se centrifugó a 15.000 x g durante 30 min a 4ºC. El pH del material sobrenadante se ajustó luego a 6,5 usando una solución 1 M de fosfato de sodio.
Una etapa adicional de cromatografía con filtración a través de gel se añadió al proceso de purificación de 2 etapas que se ha descrito en el documento de patente mundial WO 95/22985 (incorporado a la presente por su referencia). Dicho brevemente, el material sobrenadante procedente del extracto bacteriano se cargó sobre una columna con SP HiTrap (Pharmacia) previamente equilibrada a un caudal de 2 ml/min en el tampón A (fosfato de sodio 50 mM, pH 6,5, glicerol al 10%, EDTA 1 mM, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%). Luego la columna se lavó con el tampón A que contenía NaCl 0,15 M y la proteasa se eluyó aplicando 10 volúmenes de columna de un gradiente lineal de NaCl desde 0,15 hasta 0,3 M. Las fracciones que contenían la proteasa de NS3 se agruparon y se diluyeron hasta una concentración final de NaCl de 0,1 N. La enzima se purificó adicionalmente en una columna con HiTrap Heparin (Pharmacia), equilibrada en el tampón B (fosfato de sodio 25 mM, pH 7,5, glicerol al 10%, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%). La muestra se cargó a un caudal de 3 ml/min. Luego la columna se lavó con el tampón B que contenía NaCl 0,15 M a un caudal de 1,5 ml/min. Se realizaron lavados en dos etapas en la presencia del tampón B que contenía NaCl 0,3 ó 1 M. La proteasa se recuperó en el material lavado con NaCl 0,3 M, se diluyó a 3 veces con el tampón B, se volvió a aplicar sobre la columna con HiTrap Heparin y se eluyó con el tampón B que contenía NaCl 0,4 M. Finalmente, las fracciones que contenían la proteasa de NS3 se aplicaron sobre una columna con Superdex 75 HiLoad 16/60 (Pharmacia) equilibrada en el tampón B que contenía NaCl 0,3 M. Se estimó que la pureza de la proteasa de NS3 del HCV, obtenida a partir de las fracciones agrupadas era mayor que 95% por un SDS-PAGE seguido por un análisis densitométrico.
La enzima se almacenó a -80ºC y se descongeló sobre hielo, y se diluyó justamente antes de su uso.
Ejemplo 19 Análisis radiométrico de una mezcla de la proteasa de NS3 del HCV recombinante y del péptido cofactor de NS4A
La enzima se clonó, expresó y preparó de acuerdo con el protocolo descrito en el Ejemplo 18. La enzima se almacenó a -80ºC, se descongeló sobre hielo y se diluyó justamente antes de su uso en el tampón de análisis que contenía el péptido cofactor de NS4A.
El substrato usado para el análisis radiométrico de la mezcla de proteasa de NS3 y el péptido cofactor de NS4A, DDIVPC-SMSYTW, es cortado por la enzima entre los residuos de cisteína y de serina. La secuencia DDIVPC-SMSYTW corresponde al sitio de corte natural en NS5A/NS5B en el que el residuo de cisteína en P2 ha sido reemplazado por una prolina. El substrato de péptido DDIVPC-SMSYTW y el trazador biotina-DDIVPC-SMS[^{125}I-Y]TW se incuban con la proteasa de NS3 recombinante y el péptido cofactor de NS4A KKGSVVIVGRIILSGRK (relación molar de enzima a cofactor 1:100) en la ausencia o presencia de inhibidores. La separación del substrato con respecto de los productos se realiza añadiendo glóbulos de agarosa revestidos con avidina a la mezcla de análisis, seguido por filtración. La cantidad del producto SMS[^{125}I-Y]TW encontrado en el material filtrado permite el cálculo del porcentaje de conversión del substrato y del porcentaje de inhibición.
A. Reactivos
El Tris y el Tris-HCl (UltraPure) se obtuvieron de Gibco-BRL. El glicerol (UltraPure), el MES y el BSA se adquirieron de Sigma. El TCEP se obtuvo de Pierce, el DMSO se obtuvo de Aldrich y el NaOH se obtuvo de Anachemia.
Tampón de análisis: Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, glicerol al 30% (p/v), BSA 1 mg/ml, TCEP 1 mM (el TECP se añadió justamente antes de su uso a partir de una solución de reserva 1 M en agua).
Substrato: DDIVPCSMSYTW, concentración final 25 \muM (a partir de una solución de reserva 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC para evitar la oxidación).
Trazador: Substrato mono-yodado reducido (biotina-DDIVPC-SMS[^{125}I-Y]TW) (concentración final \sim 1 nM).
Proteasa de tipo 1b de NS3 del HCV, concentración final 25 nM (a partir de una solución de reserva en fosfato de sodio 50 mM, pH 7,5, glicerol al 10%, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%).
Péptido cofactor de NS4A: KKGSVVIVGRIILSGRK, concentración final 2,5 \muM (procedente de una solución de reserva 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC).
B. Protocolo
El análisis se realizó en una placa de polipropileno de 96 pocillos procedente de Costar. Cada pocillo contenía:
\bullet
20 \mul de una mezcla de substrato y trazador en tampón de análisis;
\bullet
10 \mul \pm inhibidor en una mezcla de 20% de DMSO y tampón de análisis;
\bullet
10 \mul de una mezcla de proteasa 1 b de NS3 y péptido cofactor de NS4 (relación molar 1:100).
Se prepararon también una muestra en vacío (sin inhibidor y sin enzima) y una muestra testigo (sin inhibidor) sobre la misma placa de análisis.
La reacción enzimática se inició por la adición de la solución de enzima y péptido de NS4A, y la mezcla de análisis se incubó durante 40 min a 23ºC mediando suave agitación. Se añadieron diez (10) \mul de NaOH 0,05 N y 10 \mul de MES 1 M, de pH 5,8 para sofocar la reacción enzimática.
Se añadieron veinte (20) \mul de glóbulos de agarosa revestidos con avidina (adquiridos de Pierce) en una placa de filtración de Millipore MADP N65. La mezcla de análisis sofocada se transfirió a la placa de filtración, y se incubó durante 60 min a 23ºC mediando suave agitación.
Las placas se filtraron usando un aparato de filtración en múltiple distribuidor de vacío Millipore MultiScreen Vacuum Manifold Filtration y se transfirieron 40 \mul del material filtrado a una placa opaca de 96 pocillos que contenía 60 \mul de un fluido de escintilación por pocillo.
Los materiales filtrados se recontaron en un instrumento Packard TopCount usando un protocolo de ^{125}I-líquido durante 1 minuto.
El % de inhibición se calculó con la siguiente ecuación:
100-[(cómputo_{inh}-cómputo _{\text{vacío}})/(cómputo_{inh}-cómputo _{\text{vacío}}) \ x \ 100]
Se aplicó un ajuste de curva no lineal con el modelo de Hill a los datos de inhibición y concentración y se calculó la concentración efectiva de 50% (CI_{50}) por el uso de un software de SAS (Statistical Software Systems, SAS Institute, Inc., Cary, N.C.).
Ejemplo 20 Análisis de la especificidad
Se determinó la especificidad de los compuestos frente a una diversidad de proteasas de serina: elastasa de leucocitos humanos, elastasa pancreática porcina y \alpha-quimotripsina pancreática bovina y una proteasa de cisteína: catepsina B de hígado humano. En todos los casos se usó un protocolo con el formato de placas de 96 pocillos usando un substrato colorimétrico de p-nitroanilida (pNA) específico para cada enzima. Cada análisis incluía una pre-incubación a 30ºC de la mezcla de enzima e inhibidor durante 1 h a 30ºC, seguida por adición del substrato e hidrólisis a una conversión \approx30%, como se midió en un lector de microplacas UV Thermomax®. Las concentraciones del substrato se mantuvieron lo más bajas que fuera posible en comparación con K_{M} para reducir la competencia del substrato. Las concentraciones del compuesto variaron entre 300 y 0,06 \muM dependiendo de su potencia. Las condiciones finales para cada análisis fueron como sigue:
Tris-HCl 50 mM, pH 8, Na_{2}SO_{4} 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, DMSO al 3%, Tween-20 al 0,01% con:
[Succ-AAPF-pNA 100 \muM y \alpha-quimotripsina 250 pM],
[Succ-AAA-pNA 133 \muM y elastasa porcina 8 nM],
[Succ-AAV-pNA 133 \muM y elastasa de leucocitos 8 nM], o
[NaHPO_{4} 100 \muM, pH 6, EDTA 0,1 mM, DMSO al 3%, TCEP 1 mM, Tween-20 al 0,01%, Z-FR-pNA 30 \muM y catepsina B 5 nM (la enzima de reserva fue activada en un tampón que contenía TCEP 20 mM antes del uso)].
Se resume seguidamente un ejemplo representativo para la elastasa pancreática porcina.
En una placa de 96 pocillos de fondo plano de poliestireno se añadieron usando un manipulador de líquidos Biomek® (de Beckman):
\bullet
40 \mul del tampón de análisis (Tris-HCl 50 mM, de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM);
\bullet
20 \mul de una solución de enzima (Tris/HCl 50 mM, de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Tween-20 al 0,02%, elastasa pancreática porcina 40 nM; y
\bullet
20 \mul de una solución del inhibidor (Tris-HCl 50 mM, de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Tween-20 al 0,02%, inhibidor 1,5 mM-0,3 \muM, DMSO al 15% v/v).
Después de una pre-incubación durante 60 min a 30ºC, se añadieron a cada pocillo 20 \mul de una solución de substrato (Tris-HCl 50 mM, de pH 8, Na_{2}SO_{4} 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Succ-AAA-pNa 665 \muM) y la mezcla de reacción se incubó adicionalmente a 30ºC durante 60 min, tiempo después del cual se leyó la absorbancia en el lector de placas UV Thermomax®. Se asignaron filas de pocillos para muestras testigos (sin inhibidor) y para muestras en vacío (sin inhibidor y sin enzima).
Las diluciones a 2 veces secuenciales de la solución de inhibidor se realizaron sobre una placa dispuesta por separado mediante el manipulador de líquidos, usando Tris-HCl 50 mM de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Tween-20 al 0,02%, DMSO al 15%. Todos los otros análisis de especificidad se realizaron de una manera similar.
El porcentaje de inhibición se calculó usando la fórmula:
[1-((UV_{inh}-UV_{\text{vacío}})/(UV_{ctl}-UV_{\text{vacío}}))] \ x \ 100
Un ajuste de curva no lineal con el modelo de Hill se aplicó a los datos de inhibición y concentración, y la concentración efectiva de 50% (CI_{50}) se calculó por el uso de un software de SAS (Statistical Software Systems; SAS Institute, Inc., Cary, N.C.).
Ejemplo 22 Tablas de compuestos
Las siguientes tablas enumeran en lista los valores de IC_{50} de los compuestos representativos del invento.
Se usan las siguientes abreviaturas:
CI_{50}: La concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis radiométrico de la mezcla de proteasa de NS3 y del péptido cofactor de NS4, de acuerdo con el Ejemplo 19.
HLE: La concentración requerida para obtener una inhibición de 50% en el análisis de elastasa de leucocitos humanos; PPE: La concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis de elastasa pancreática porcina; Otros: Los datos sin marcar indican la concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis de \alpha-quimotripsina pancreática bovina; los datos marcados con ** indican la concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis de catepsina B de hígado humano; MS: Datos de espectrometría de masas (MH^{+} a partir de FAB); AAA: Datos de análisis de aminoácidos expresados en % de recuperación de péptidos; Acpr: ácido 1-amino-ciclopropilcarboxílico; Acpe: ácido 1-amino-ciclopentilcarboxílico; Abu: ácido 2-amino-butírico; Chg: ciclohexilglicina (ácido 2-amino-2-ciclohexil-acético); Hyp: 4(R)-hidroxi-prolina; Hyp(4-Bn): 4(R)-benciloxiprolina; Pip: ácido pipecólico (es decir, homoprolilo); Tbg: terc.-butilglicina; Ac: acetilo; Bn: bencilo; O-Bn: benciloxi; DAD: 3-carboxi-propionilo; y DAE: 4-carboxi-butirilo.
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Claims (35)

1. Un compuesto de fórmula I:
64
en la que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en que R_{11} es alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; o R_{11} es arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con un alquilo C_{1-6};
R_{6} es la cadena lateral de Asp o Glu;
R_{5} es la cadena lateral de D-Asp, D-Val o D-Glu;
Y es H o alquilo C_{1-6};
R_{4} es alquilo C_{1-10}; cicloalquilo C_{3-10};
R_{3} es alquilo C_{1-10}; cicloalquilo C_{3-10};
W es un grupo de fórmula II':
65
en la que X es CH o N; y
R_{2'} es la cadena lateral de prolina y está sustituido con R_{17} en la posición 4 con la estereoquímica mostrada en la fórmula III':
66
en donde R_{17} es arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior); conteniendo opcionalmente dicho arilo o arilalquilo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; estando dicho arilo o arilalquilo opcionalmente condensado con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o un heterociclo, estando dicho anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior); conteniendo opcionalmente dicho segundo anillo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; R_{17} es OR_{12}, en donde R_{12}, es arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} estando dicho primer arilo o arilalquilo opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, NH_{2}, OH, SH, halo, alcoxi C_{1-6}, carboxilo, carboxi-alquilo (inferior) o un segundo arilo o arilalquilo; conteniendo opcionalmente dichos primero y segundo arilos o aralquilos al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N;
Q es un grupo de la fórmula:
67
en donde Z es CH o N;
X es O o S;
R_{1} es H, alquilo C_{1-6} o alquenilo C_{1-6} ambos opcionalmente sustituidos con tio o halo;
y
cuando Z es CH, entonces R_{13} es H; CF_{3}; CF_{2}CF_{3}; CH_{2}-R_{14}; CH(F)-R_{14}, CF_{2}-R_{14}; NR_{14}R_{14'}; S-R_{14}; o CO-NH-R_{14} en donde
R_{14} y R_{14'} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{3-10} cíclico o alquilo C_{1-10} acíclico, o alquenilo C_{3-10} cíclico o alquenilo C_{2-10} acíclico, estando dicho alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo o carboxilo; conteniendo opcionalmente dicho alquilo o alquenilo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; o R_{14} y R_{14'} son independientemente arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior), o está sustituido con un cicloalquilo C_{3-7}, arilo C_{6} o C_{10} o heterociclo adicional; conteniendo opcionalmente dicho arilo o aralquilo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; estando dicho alquilo cíclico, alquenilo cíclico, arilo o arilalquilo opcionalmente condensados con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o heterociclo, estando dicho segundo anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior), o está sustituido con un cicloalquilo C_{3-7}, arilo C_{6} o C_{10} o heterociclo adicional; conteniendo opcionalmente dicho segundo anillo al menos un heteroátomo seleccionado independientemente del grupo que consiste en: O, S y N; o R_{14} y R_{14'} son independientemente alquilo C_{1-4} que, cuando están unidos junto con el N, forman un anillo de 3 a 6 miembros, que está opcionalmente condensado con un cicloalquilo C_{3-7}, arilo C_{6} o C_{10} o heterociclo adicional;
con la condición de que, cuando Z es CH, entonces R_{13} no es un \alpha-aminoácido o un éster del mismo;
cuando Z es N, entonces R_{13} ha de ser H; carboxi; alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxi; CH_{2}-R_{14}; CHR_{14}R_{14'}; CH(F)-R_{14}; O-R_{14}; NR_{14}R_{14'} o S-R_{14} en que R_{14} y R_{14'} son como se han definido anteriormente; o
Q es un grupo de fosfonato de la fórmula:
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68
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en la que R_{15} y R_{16} son independientemente ariloxi C_{6-20}; y R_{1} es como se define anteriormente.
2. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en la que Q es un grupo de la fórmula:
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69
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en la que Z es CH o N;
R_{1} es hidrógeno, alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con tiol, o alquenilo C_{1-6};
y
cuando Z es CH, entonces R_{13} ha de ser H; CF_{3}; CF_{2}CF_{3}; CH_{2}-R_{14}; CH(F)-R_{14}, CF_{2}-R_{14}; NR_{14}R_{14'}; S-R_{14}; CHR_{14}R_{14'} o CO-NH-R_{14}, en que
R_{14} y R_{14'} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{3-10} cíclico o alquilo C_{1-10} acíclico o alquenilo C_{3-10} cíclico o alquenilo C_{2-10} acíclico, estando dichos alquilo o alquenilo opcionalmente sustituidos con NH_{2}, OH, SH, halo o carboxilo; conteniendo dichos alquilo o alquenilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N; o
R_{14} y R_{14'} son independientemente arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior); conteniendo dichos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N;
estando dichos alquilo cíclico, alquenilo cíclico, arilo o arilalquilo opcionalmente condensados con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o heterociclo, estando dicho segundo anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (inferior); conteniendo dicho segundo anillo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N;
con la condición de que cuando Z es CH, entonces R_{13} no ha de ser un \alpha-aminoácido ni uno de sus ésteres;
cuando Z es N, entonces R_{13} ha de ser H; CH_{3}; NH_{2}; CH_{2}-R_{14}; CH(F)-R_{14}; CHR_{14}R_{14'}; O-R_{14}; NH-R_{14}; NR_{14}R_{14'} o S-R_{14} en que
R_{14} y R_{14'} son como se han definido anteriormente.
3. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}C(O)- en que R_{11} es:
alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};
cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, MeOC(O), EtOC(O) o BnOC(O);
3-carboxi-propionilo (DAD) ó 4-carboxi-butirilo (DAE);
o
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70
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4. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 3, en el que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo, 4-carboxi-butirilo, AcOCH_{2}C(O), Me_{3}COC(O),
71
5. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 4, en el que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo (DAD), 4-carboxi-butirilo (DAE), AcOCH_{2}C(O),
72
6. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 5, en el que B es acetilo ó 4-carboxi-butirilo (DAE).
7. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 6, en el que B es acetilo.
8. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{6} es la cadena lateral de D-Glu.
9. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{4} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Val, ciclohexilglicina (Chg), Tbg, Ile o Leu.
10. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 9, en el que R_{4} es la cadena lateral de Chg o Ile.
11. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 10, en el que R_{4} es la cadena lateral de Chg.
12. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{3} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Ile, Chg, Cha, Val o Glu.
13. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{3} es la cadena lateral de Val o Chg.
14. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 13, en el que R_{3} es la cadena lateral de Val.
15. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{17} es Bn, PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}, O-Bn, o-tolilmetoxi, m-tolilmetoxi, p-tolilmetoxi, 1-naftalenilmetoxi, 2-naftalenilmetoxi, (4-terc.-butil)metoxi, (3I-Ph)CH_{2}O, (4Br-Ph)O, (2Br-Ph)O, (3Br-Ph)O, (4I-Ph)O, (3Br-Ph)CH_{2}O, (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O,
73
16. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 15, en el que R_{17} es O-Bn, 1-naftalenilmetoxi, 2-naftalenilmetoxi,
74
75
17. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 15, en el que R_{17} es O-Bn, 1-naftalenilmetoxi ó 2-naftalenilmetoxi.
18. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Q es:
76
en la que Z es preferiblemente CH o N;
cuando Z es CH: R_{13} es H; CF_{3}; CF_{2}CF_{3}; CH_{2}-R_{14}; C(O)NH-R_{14}, NR_{14}R_{14'}, en que R_{14} y R_{14'} son como antes se han definido con la condición de que R_{13} no ha de ser un \alpha-aminoácido ni uno de sus ésteres; y
cuando Z es N: R_{13} es fenilo o arilalquilo C_{7-16},
77
19. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 18, en el que cuando Z es CH: R_{13} es H; NH-R_{14} o C(O)NH-R_{14}; en que R_{14} es fenilo o arilalquio C_{7-16}.
20. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 19, en el que R_{13} es H; o C(O)NH-R_{14}; y R_{14} es bencilo o CH(Me)Ph.
21. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 18, en el que cuando Z es N: R_{13} es naftilo, NH-CH(Me)Ph, NH-CH(Et)Ph,
78
23. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Q es un grupo de fosfonato de la fórmula:
79
en la que R_{15} y R_{16} son independientemente de modo preferible ariloxi C_{6-12}.
24. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R_{15} y R_{16} son cada uno fenoxi.
25. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{1} es alquilo C_{1-6} o alquenilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con halo.
26. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 25, en el que R_{1} es alquilo C_{1-5} o alquenilo C_{1-4} opcionalmente sustituido con fluoro.
27. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 26, en el que R_{1} es etilo, propilo, isopentilo o alilo.
28. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}C(O)- en la que R_{11} es: alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} o alcoxi C_{1-6}; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, MeOC(O), EtOC(O)) o BnOC(O); 3-carboxi-propionilo (DAD) o 4-carboxi-butirilo (DAE); o
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80
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R_{6} es la cadena lateral de Asp o Glu; R_{5} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Val, L-Val, D-terc.-butilglicina (Tbg) y L-Tbg;
Y es H o alquilo C_{1-3};
R_{4} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Val, ciclohexilglicina (Chg), Tbg, Ile o Leu;
R_{3} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Ile, Chg, Cha, Val o Glu;
W es:
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81
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en la que R_{17} es OR_{12} en que R_{12} es un arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16}, estando dichos primeros arilo o arilalquilo opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, NH_{2}, OH, SH, halo, alcoxi C_{1-6}, carboxilo, carboxi-alquilo (inferior) o un segundo arilo o arilalquilo; conteniendo dichos primeros y segundos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N; Q es:
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82
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en que Z es N; y R_{13} es fenilo, arilalquilo C_{7-16},
83
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y R_{1} es alquilo C_{1-6} o alquenilo C_{1-6} sustituido opcionalmente con halo.
29. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 28, en el que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo (DAD), 4-carboxi-butirilo (DAE), AcOCH_{2}C(O),
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84
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R_{6} es la cadena lateral de Asp,
o R_{6} está ausente;
R_{5} es la cadena lateral de D-Glu;
R_{4} es la cadena lateral de Chg;
R_{3} es la cadena lateral de Val;
W es
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85
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en la que R_{17} es Bn; PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}, O-Bn, 1-naftil-oxi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi, 2-naftalenilmetoxi;
86
Q es:
87
en que R_{13} es NH-CH(Me)Ph, o
88
R_{1} es etilo, propilo, isopentilo o alilo.
30. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para uso como un medicamento.
31. El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 para el tratamiento de una infección por la hepatitis C en un mamífero, que comprende administrar a éste una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1.
32. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, en mezcla con un medio de vehículo o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable.
33. Un método in-vitro de inhibir la replicación del virus de la hepatitis C por exposición del virus a una cantidad inhibidora de la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables.
34. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 32, que comprende un agente modulador de inmunidad adicional seleccionado entre el grupo que consiste en: interferones \alpha, \beta y \delta.
35. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 32, que comprende un agente antivírico adicional seleccionado entre el grupo que consta de: ribavirina y amantadina.
36. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 32, que comprende adicionalmente otros inhibidores de la proteasa de HCV.
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Families Citing this family (323)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA79749C2 (en) 1996-10-18 2007-07-25 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
GB9806815D0 (en) * 1998-03-30 1998-05-27 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
EP1066247B1 (en) * 1998-03-31 2006-11-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
GB9809664D0 (en) * 1998-05-06 1998-07-01 Hoffmann La Roche a-Ketoamide derivatives
UA74546C2 (en) * 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
EP1206449A1 (en) * 1999-07-26 2002-05-22 Bristol-Myers Squibb Company Lactam inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US7122627B2 (en) 1999-07-26 2006-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Lactam inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protease
US7026469B2 (en) 2000-10-19 2006-04-11 Wake Forest University School Of Medicine Compositions and methods of double-targeting virus infections and cancer cells
US6986892B1 (en) 1999-11-24 2006-01-17 Chiron Corporation Immunogenic Hepatitis C virus non-structural polypeptides
WO2001038360A2 (en) * 1999-11-24 2001-05-31 Chiron Corporation Novel hcv non-structural polypeptide
CA2390349A1 (en) 1999-12-03 2001-06-07 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Alpha-ketoamide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US6613507B1 (en) 2000-03-21 2003-09-02 Yu-an Chang Boraadamantane compounds for the treatment of pathogenic viruses and other medical applications
MXPA02009920A (es) 2000-04-05 2003-03-27 Schering Corp Inhibidores macrociclicos de la ns3-serina proteasa, del virus de la hepatitis c9 que comprenden partes p2 n-ciclicas.
CZ20023473A3 (cs) * 2000-04-19 2003-01-15 Schering Corporation Makrocyklická sloučenina a farmaceutický prostředek
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
KR20080021797A (ko) 2000-05-26 2008-03-07 이데닉스(케이만)리미티드 플라비바이러스 및 페스티바이러스의 치료방법 및 조성물
KR100904788B1 (ko) 2000-07-21 2009-06-25 쉐링 코포레이션 C형 간염 바이러스의 ns3-세린 프로테아제억제제로서의 신규한 펩티드
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
RU2003105221A (ru) 2000-07-21 2004-09-20 Шеринг Корпорейшн (US) Новые пептиды, как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита с
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US20030087873A1 (en) 2000-10-18 2003-05-08 Lieven Stuyver Modified nucleosides for the treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
GEP20053601B (en) 2001-01-22 2005-08-10 Merck & Co Inc Nucleoside Derivatives as Inhibitors of RNA-Dependent RNA Viral Polymerase
MXPA04000293A (es) 2001-07-11 2004-05-04 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasa biciclica de puente.
MXPA04003825A (es) 2001-10-24 2004-07-08 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasa, en particular la ns3-ns4a proteasa del virus de hepatitis c, que incorpora un sistema de anillo fusionado.
JP2005511572A (ja) * 2001-11-02 2005-04-28 グラクソ グループ リミテッド Hcv阻害剤としてのアシルジヒドロピロール誘導体
US20030176689A1 (en) * 2001-12-14 2003-09-18 Michael Joyce Inhibitors of hepatitis C virus protease
KR20040077767A (ko) 2002-01-23 2004-09-06 쉐링 코포레이션 C형 간염 바이러스 감염 치료용 ns3-세린 프로테아제억제제로서의 프롤린 화합물
US7119072B2 (en) 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7091184B2 (en) 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
KR20040099425A (ko) 2002-04-11 2004-11-26 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 세린 프로테아제, 특히 c형 간염 바이러스 ns3-ns4프로테아제의 억제제
US6878722B2 (en) 2002-05-20 2005-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Substituted cycloalkyl P1′ hepatitis C virus inhibitors
ES2361011T3 (es) 2002-05-20 2011-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c.
EP1506000B9 (en) 2002-05-20 2011-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclicsulfonamide hepatitis c virus inhibitors
MY140680A (en) 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
MY140819A (en) 2002-06-28 2010-01-29 Idenix Caymans Ltd Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviviridae
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7824851B2 (en) 2002-11-15 2010-11-02 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2′-branched nucleosides and Flaviviridae mutation
MY143076A (en) * 2003-05-21 2011-02-28 Boehringer Ingelheim Int Hepatitis c inhibitors compounds
PT2604620T (pt) 2003-05-30 2016-08-18 Gilead Pharmasset Llc Analogos de nucleósido fluorados modificados
AU2004258750A1 (en) 2003-07-25 2005-02-03 Centre National De La Recherche Scientifique -Cnrs Purine nucleoside analogues for treating diseases caused by flaviviridae including hepatitis C
MXPA06002250A (es) 2003-08-26 2006-05-17 Schering Corp Inhibidores peptidomimeticos novedosos de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
AR045596A1 (es) 2003-09-05 2005-11-02 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina en particular proteasa ns3-ns4a del vhc
MXPA06003141A (es) 2003-09-22 2006-06-05 Boehringer Ingelheim Int Peptidos macrociclicos activos contra el virus de la hepatitis c.
RU2006113880A (ru) 2003-09-26 2007-11-20 Шеринг Корпорейшн (US) Макроциклические ингибиторы сериновой протеиназы ns3 вируса гепатита с
KR20120010278A (ko) 2003-10-10 2012-02-02 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 세린 프로테아제, 특히 hcv ns3-ns4a 프로테아제의 억제제
OA13315A (en) 2003-10-14 2007-04-13 Intermune Inc Macrocyclic carboxylic acids and acylsulfonamides as inhibitors of HCV replication.
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
CN1894276B (zh) 2003-10-27 2010-06-16 威特克斯医药股份有限公司 Hcv ns3-ns4a蛋白酶抗药性突变体
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP1689770A1 (en) 2003-11-20 2006-08-16 Schering Corporation Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US7309708B2 (en) 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
ES2358333T3 (es) 2004-01-21 2011-05-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Péptidos macrocíclicos con acción contra el virus de la hepatitis c.
US7671032B2 (en) 2004-01-30 2010-03-02 Medivir Ab HCV NS-3 serine protease inhibitors
EP1711515A2 (en) 2004-02-04 2006-10-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
SG150511A1 (en) 2004-02-20 2009-03-30 Boehringer Ingelheim Int Viral polymerase inhibitors
US20070049593A1 (en) 2004-02-24 2007-03-01 Japan Tobacco Inc. Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
DK1719773T3 (da) 2004-02-24 2009-06-29 Japan Tobacco Inc Kondenserede heterotetracykliske forbindelser og anvendelse deraf som HCV-polymeraseinhibitor
EP1737881B1 (en) 2004-02-27 2009-06-24 Schering Corporation Novel compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
AR048413A1 (es) 2004-02-27 2006-04-26 Schering Corp Compuestos prolina 3,4- (ciclopentil) - fusionados , como inhibidores de serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c
DK1730110T3 (da) 2004-02-27 2010-09-27 Schering Corp Svovlforbindelser som inhibitorer af hepatitis C-virus NS3-serinprotease
TW200536528A (en) 2004-02-27 2005-11-16 Schering Corp Novel inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
CA2557247A1 (en) 2004-02-27 2005-09-22 Schering Corporation Compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
JP2008502718A (ja) 2004-05-20 2008-01-31 シェーリング コーポレイション C型肝炎ウイルスns3セリンプロテアーゼのインヒビターとしての置換型プロリン
CA2568379A1 (en) 2004-06-15 2005-12-29 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
EP1773355B1 (en) 2004-06-24 2014-06-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
WO2006007708A1 (en) 2004-07-20 2006-01-26 Boehringer Engelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
MX2007002371A (es) 2004-08-27 2007-04-23 Schering Corp Compuestos de acilsulfonamida como inhibidores de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
EP1809301B1 (en) 2004-09-14 2019-11-06 Gilead Pharmasset LLC 2-fluoro-2-alkyl-substituted d-ribonolactone intermediates
KR20130083938A (ko) 2004-10-01 2013-07-23 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Hcv ns3-ns4a 프로테아제 저해
US7659263B2 (en) 2004-11-12 2010-02-09 Japan Tobacco Inc. Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7323447B2 (en) 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP4705164B2 (ja) 2005-05-02 2011-06-22 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション Hcvns3プロテアーゼ阻害剤
US7592336B2 (en) 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AU2006246227B2 (en) 2005-05-13 2011-04-28 Virochem Pharma Inc. Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
PE20070011A1 (es) 2005-06-02 2007-03-08 Schering Corp Formulaciones farmaceuticas de compuestos inhibidores de proteasa del vhc o catepsina
US8119602B2 (en) 2005-06-02 2012-02-21 Schering Corporation Administration of HCV protease inhibitors in combination with food to improve bioavailability
BRPI0613142A2 (pt) 2005-06-17 2010-12-21 Novartis Ag uso de sangliferina em hcv
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TWI387603B (zh) 2005-07-20 2013-03-01 Merck Sharp & Dohme Hcv ns3蛋白酶抑制劑
US20090148407A1 (en) 2005-07-25 2009-06-11 Intermune, Inc. Novel Macrocyclic Inhibitors of Hepatitis C Virus Replication
MY139988A (en) 2005-07-29 2009-11-30 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
BRPI0614242A2 (pt) 2005-07-29 2011-03-15 Medivir Ab inibidores macrocìclicos do vìrus da hepatite c, combinação e composição farmacêutica compreendendo os mesmos, bem como uso e processo para a preparação dos referidos inibidores
JO2768B1 (en) 2005-07-29 2014-03-15 تيبوتيك فارماسيوتيكالز ليمتد Large cyclic inhibitors of hepatitis C virus
DK1913015T3 (en) 2005-07-29 2014-03-10 Janssen R & D Ireland Macrocyclic inhibitors of hepatitis C virus
JP5426164B2 (ja) 2005-07-29 2014-02-26 ヤンセン・アールアンドデイ・アイルランド C型肝炎ウイルスの大環式インヒビター
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
JP5230415B2 (ja) 2005-07-29 2013-07-10 テイボテク・フアーマシユーチカルズ C型肝炎ウイルスの大員環状阻害剤
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
EP1912997B1 (en) 2005-07-29 2011-09-14 Tibotec Pharmaceuticals Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
EP1913016B1 (en) 2005-08-01 2013-01-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Macrocyclic peptides as hcv ns3 protease inhibitors
MX2008001528A (es) 2005-08-02 2008-04-04 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasas.
AU2006280175B2 (en) 2005-08-09 2011-09-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
CA2618682C (en) 2005-08-12 2011-06-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
KR20130110236A (ko) 2005-08-19 2013-10-08 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 방법 및 중간체
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
CN101415705B (zh) 2005-10-11 2011-10-26 因特蒙公司 抑制丙型肝炎病毒复制的化合物和方法
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
KR20140098867A (ko) 2005-11-11 2014-08-08 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 C형 간염 바이러스 변이체
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
TW200800265A (en) * 2006-02-09 2008-01-01 Schering Corp Combinations comprising HCV protease inhibitor(s) and HCV polymerase inhibitor(s), and methods of treatment related thereto
WO2007098270A2 (en) 2006-02-27 2007-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals comprising vx-950 and pharmaceutical compositions comprising the same
EP2194039A1 (en) * 2006-03-16 2010-06-09 Vertex Pharmceuticals Incorporated Process for preparing optically enriched compounds
JP2009530382A (ja) * 2006-03-23 2009-08-27 シェーリング コーポレイション Hcvプロテアーゼインヒビターとcyp3a4インヒビターとの組み合わせ、および関連する処置方法
NZ571826A (en) 2006-04-11 2012-01-12 Novartis Ag HCV/HIV inhibitors and their uses
US8017612B2 (en) 2006-04-18 2011-09-13 Japan Tobacco Inc. Piperazine compound and use thereof as a HCV polymerase inhibitor
GB0609492D0 (en) 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
EP2027143A2 (en) 2006-05-23 2009-02-25 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
GB0612423D0 (en) 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
EP2049474B1 (en) 2006-07-11 2015-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
JP2010500978A (ja) 2006-08-17 2010-01-14 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウイルスポリメラーゼインヒビター
JP5345941B2 (ja) 2006-10-24 2013-11-20 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Hcvns3プロテアーゼ阻害剤
AU2007309544B2 (en) 2006-10-24 2012-05-31 Msd Italia S.R.L. HCV NS3 protease inhibitors
AU2007309546A1 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
JP5352464B2 (ja) 2006-10-27 2013-11-27 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Hcvns3プロテアーゼ阻害剤
BRPI0718161A2 (pt) 2006-10-27 2013-11-26 Merck & Co Inc Composto, composição farmacêutica, e, uso do composto.
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
US7772180B2 (en) 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
KR20090086081A (ko) 2006-11-15 2009-08-10 바이로켐 파마 인코포레이티드 플라비바이러스 감염의 치료 또는 예방용 티오펜 유사체
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20100081672A1 (en) * 2006-12-07 2010-04-01 Schering Corporation Ph sensitive matrix formulation
GB0625349D0 (en) 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
GB0625345D0 (en) 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
WO2008075103A1 (en) 2006-12-20 2008-06-26 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Antiviral indoles
US8546420B2 (en) 2006-12-22 2013-10-01 Merck Sharp & Dohme Corp. 4, 5-ring annulated indole derivatives for treating or preventing of HCV and related viral infections
CN101631773A (zh) 2006-12-22 2010-01-20 先灵公司 治疗或预防hcv和相关病毒感染的4,5-环化吲哚衍生物
ATE543808T1 (de) 2006-12-22 2012-02-15 Schering Corp 5,6-ring-annelierte indolderivate und ihre verwendung
EP2118091B1 (en) 2007-02-08 2015-04-15 Janssen Sciences Ireland UC Pyrimidine substituted macrocyclic hcv inhibitors
AU2008214217B2 (en) 2007-02-09 2011-10-13 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
WO2008106058A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
KR20090115970A (ko) 2007-02-27 2009-11-10 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 공-결정 및 그를 포함하는 제약 조성물
ATE525068T1 (de) 2007-02-28 2011-10-15 Conatus Pharmaceuticals Inc Verfahren zur behandlung von chronischer viraler hepatitis c mithilfe von ro 113-0830
WO2008118332A2 (en) * 2007-03-23 2008-10-02 Schering Corporation Hydrazido-peptides as inhibitors of hcv ns3-protease
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
CA2686051A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Combination therapy for the treatment of hcv infection
EA025794B1 (ru) 2007-06-29 2017-01-30 Джилид Сайэнс, Инк. Противовирусные соединения
AP2009005073A0 (en) 2007-06-29 2009-12-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
JP2010533698A (ja) 2007-07-17 2010-10-28 イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー C型肝炎感染症の治療のための大環状インドール誘導体
CN101754974B (zh) 2007-07-19 2016-02-03 Msd意大利有限公司 作为抗病毒剂的大环化合物
CA2693997C (en) 2007-08-03 2013-01-15 Pierre L. Beaulieu Viral polymerase inhibitors
BRPI0816116A2 (pt) 2007-08-29 2015-03-03 Schering Corp Derivados de indol 2,3-substituídos para o tratamento de infecções virais.
ATE541845T1 (de) 2007-08-29 2012-02-15 Schering Corp 2,3-substituierte azaindolderivate zur behandlung von virusinfektionen
AR068106A1 (es) 2007-08-29 2009-11-04 Schering Corp Derivados de indol 2-carboxi sustituidos y una composicion farmaceutica
TW200922933A (en) 2007-08-30 2009-06-01 Vertex Pharma Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
CN102099351A (zh) 2007-11-16 2011-06-15 先灵公司 3-杂环取代的吲哚衍生物及其使用方法
JP5416708B2 (ja) 2007-11-16 2014-02-12 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 3−アミノスルホニル置換インドール誘導体およびそれらの使用方法
WO2009076173A2 (en) 2007-12-05 2009-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Fluorinated tripeptide hcv serine protease inhibitors
MX2010006313A (es) 2007-12-19 2010-06-25 Boehringer Ingelheim Int Inhibidores de la polimerasa virica.
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
KR20100118991A (ko) 2008-02-04 2010-11-08 아이데닉스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 매크로시클릭 세린 프로테아제 억제제
TW200946541A (en) 2008-03-27 2009-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8461107B2 (en) 2008-04-28 2013-06-11 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7964560B2 (en) 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102046648A (zh) 2008-05-29 2011-05-04 百时美施贵宝公司 丙型肝炎病毒抑制剂
CN102159579B (zh) 2008-06-13 2015-03-25 默沙东公司 三环吲哚衍生物及其使用方法
CN102177172A (zh) 2008-07-02 2011-09-07 埃迪尼克斯医药公司 用于治疗病毒感染的化合物和药物组合物
EA019327B1 (ru) 2008-07-22 2014-02-28 Мерк Шарп Энд Домэ Корп. Макроциклическое хиноксалиновое соединение в качестве ингибитора протеазы вгс ns3
TW201020245A (en) 2008-08-20 2010-06-01 Schering Corp Ethynyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
US8470834B2 (en) 2008-08-20 2013-06-25 Merck Sharp & Dohme Corp. AZO-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
US8697694B2 (en) 2008-08-20 2014-04-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
CA2734489C (en) 2008-08-20 2016-11-08 Southern Research Institute Ethenyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
US8207341B2 (en) 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP3025727A1 (en) 2008-10-02 2016-06-01 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating liver disease
DK2373172T3 (da) 2008-12-03 2013-10-21 Presidio Pharmaceuticals Inc Hcv-ns5a-hæmmere
US9120779B2 (en) 2008-12-03 2015-09-01 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of HCV NS5A
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
SG194404A1 (en) 2008-12-23 2013-11-29 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
AU2009329917B2 (en) 2008-12-23 2016-03-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
AR074897A1 (es) 2008-12-23 2011-02-23 Pharmasset Inc Fosforamidatos de nucleosidos
MX2011007195A (es) 2009-01-07 2013-07-12 Scynexis Inc Derivado de ciclosporina para el uso en el tratamiento de infección de virus de hepatitis c (vhc) y virus de inmunodeficiencia humana (vih).
WO2010082050A1 (en) 2009-01-16 2010-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス,インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールhcvポリメラーゼ阻害剤
CN102448458B (zh) 2009-03-18 2015-07-22 小利兰·斯坦福大学理事会 治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物
PE20120773A1 (es) 2009-03-27 2012-07-19 Presidio Pharmaceuticals Inc Anillos triciclicos fusionados sustituidos como inhibidores del virus de hepatitis c
JP2012523419A (ja) 2009-04-08 2012-10-04 イデニク プハルマセウティカルス,インコーポレイテッド 大環状セリンプロテアーゼ阻害剤
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
JP5639155B2 (ja) 2009-05-13 2014-12-10 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド C型肝炎ウイルスインヒビターとしての大環状化合物
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
EP2435424B1 (en) 2009-05-29 2015-01-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral compounds composed of three linked aryl moieties to treat diseases such as hepatitis c
WO2011014487A1 (en) 2009-07-30 2011-02-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
EP2461811B1 (en) 2009-08-05 2016-04-20 Idenix Pharmaceuticals LLC. Macrocyclic serine protease inhibitors useful against viral infections, particularly hcv
AU2009352688B2 (en) 2009-09-15 2014-04-17 Taigen Biotechnology Co., Ltd. HCV protease inhibitors
WO2011063076A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Itherx Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis c virus with oxoacetamide compounds
CA2781614A1 (en) 2009-11-25 2011-06-09 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 5-alkynyl-thiophene-2-carboxylic acid derivatives and their use for the treatment or prevention of flavivirus infections
CA2782024A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Schering Corporation Fused tricyclic compounds and derivatives thereof useful for the treatment of viral diseases
AU2010330862B2 (en) 2009-12-18 2015-06-25 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis C virus inhibitors
AU2010341537A1 (en) 2009-12-22 2012-08-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Fused Tricyclic Compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
CN102883718A (zh) 2009-12-24 2013-01-16 顶点制药公司 用于治疗或预防黄病毒感染的类似物
NZ601629A (en) 2010-01-27 2014-11-28 Pharma Ltd Ab Polyheterocyclic compounds highly potent as hcv inhibitors
EP2536410B1 (en) 2010-02-18 2015-09-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
WO2011112516A1 (en) 2010-03-08 2011-09-15 Ico Therapeutics Inc. Treating and preventing hepatitis c virus infection using c-raf kinase antisense oligonucleotides
JP2013522202A (ja) 2010-03-09 2013-06-13 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 縮合三環式シリル化合物およびウイルス疾患の治療のためのその使用方法
TW201139438A (en) 2010-03-24 2011-11-16 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011119860A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011119870A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
CN102869657A (zh) 2010-03-24 2013-01-09 沃泰克斯药物股份有限公司 用于治疗或预防黄病毒感染的类似物
PT2609923T (pt) 2010-03-31 2017-08-30 Gilead Pharmasset Llc Processo para a cristalização de 2-(((s)- (perfluorofenoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de (s)-isopropilo
CA2795054A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8877707B2 (en) 2010-05-24 2014-11-04 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of HCV NS5A
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
WO2011159826A2 (en) 2010-06-15 2011-12-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b protease mutants
EP2585447A2 (en) 2010-06-28 2013-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
EP2585448A1 (en) 2010-06-28 2013-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
US20140377223A1 (en) 2010-07-26 2014-12-25 Joseph A. Kozlowski Substituted biphenylene compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
AR082619A1 (es) 2010-08-13 2012-12-19 Hoffmann La Roche Inhibidores del virus de la hepatitis c
JP2013534249A (ja) 2010-08-17 2013-09-02 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス科ウイルス感染の処置または予防のための化合物および方法
KR101894704B1 (ko) 2010-09-21 2018-09-05 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 매크로사이클릭 프롤린 유도된 hcv 세린 프로테아제 억제제
WO2012050848A1 (en) 2010-09-29 2012-04-19 Schering Corporation Fused tetracycle derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2012048235A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Novartis Ag Vitamin e formulations of sulfamide ns3 inhibitors
EP2646453A1 (en) 2010-11-30 2013-10-09 Gilead Pharmasset LLC Compounds
AR085352A1 (es) 2011-02-10 2013-09-25 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa, sus composiciones farmaceuticas y su uso para tratar infecciones por hcv
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
JP2014514295A (ja) 2011-03-31 2014-06-19 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
EP2697242B1 (en) 2011-04-13 2018-10-03 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2857705A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compounds for inhibiting hepatitis c virus and preparation and use thereof
WO2012175700A1 (en) 2011-06-23 2012-12-27 Digna Biotech, S. L. Treatment of chronic hepatitis c with ifn-a5 combined with ifn-a2b in a cohort of patients
US20120328565A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 Brinkman John A Antiviral compounds
AU2012286853A1 (en) 2011-07-26 2013-05-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Thiophene compounds
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
WO2013033899A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted benzofuran compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033901A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Heterocyclic-substituted benzofuran derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033900A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
EP2755985B1 (en) 2011-09-12 2017-11-01 Idenix Pharmaceuticals LLC Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
AR088441A1 (es) 2011-09-12 2014-06-11 Idenix Pharmaceuticals Inc Compuestos de carboniloximetilfosforamidato sustituido y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales
EP2755981A4 (en) 2011-09-14 2015-03-25 Merck Sharp & Dohme SILICULAR HETEROCYCLIC DERIVATIVES AND METHOD FOR THEIR USE FOR THE TREATMENT OF VIRUS DISEASES
KR101621181B1 (ko) 2011-10-10 2016-05-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 항바이러스성 화합물
US8507460B2 (en) 2011-10-14 2013-08-13 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3′,5′-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
WO2013074386A2 (en) 2011-11-15 2013-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
CN107898790B (zh) 2011-11-30 2024-06-21 埃默里大学 用于治疗或预防逆转录病毒和其它病毒感染的抗病毒jak抑制剂
EP2787999B1 (en) 2011-12-06 2019-01-23 The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for treating viral diseases
WO2013087743A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibitors of hcv ns5a
AU2012357940B2 (en) 2011-12-20 2017-02-16 Riboscience Llc 2',4'-difluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of HCV RNA replication
PL2794628T3 (pl) 2011-12-20 2017-09-29 Riboscience Llc 4'-azydo-3'-fluoro podstawione pochodne nukleozydów jako inhibitory replikacji RNA HCV
US8809354B2 (en) 2011-12-31 2014-08-19 Sheikh Riazuddin 3-amino-2-(4-nitrophenyl)-4-(3H)-quinazolinone or derivatives thereof for treating or preventing antiviral infections
WO2013106344A1 (en) 2012-01-12 2013-07-18 Ligand Pharmaceuticals, Inc. 2 '-c-methyl nucleosides containing a cyclic phosphate diester of 1, 3-propanediol (2-oxo-[1, 3, 2]-dioxaphosphorinane) at position 5'
WO2013133927A1 (en) 2012-02-13 2013-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate]
BR112014015582A8 (pt) 2012-02-24 2017-07-04 Hoffmann La Roche compostos antivirais
EP2827876A4 (en) 2012-03-22 2015-10-28 Alios Biopharma Inc PHARMACEUTICAL COMBINATIONS WITH A THIONUCLEOTIDE ANALOG
MX355708B (es) 2012-05-22 2018-04-27 Idenix Pharmaceuticals Llc Compuestos de d-aminoacidos para enfermedades del higado.
US9109001B2 (en) 2012-05-22 2015-08-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphoramidate prodrugs for HCV infection
US9296778B2 (en) 2012-05-22 2016-03-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphate prodrugs for HCV infection
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
EP2906579B1 (en) 2012-10-08 2018-04-18 Idenix Pharmaceuticals LLC. 2'-chloro nucleoside analogs for hcv infection
US20140112886A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotide compounds for hcv infection
EP2909205B1 (en) 2012-10-19 2016-11-23 Bristol-Myers Squibb Company 9-methyl substituted hexadecahydrocyclopropa(e)pyrrolo(1,2-a)(1,4)diazacyclopentadecinyl carbamate derivatives as non-structural 3 (ns3) protease inhibitors for the treatment of hepatitis c virus infections
WO2014066239A1 (en) 2012-10-22 2014-05-01 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
US9598433B2 (en) 2012-11-02 2017-03-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2914598B1 (en) 2012-11-02 2017-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP2914614B1 (en) 2012-11-05 2017-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP2938624A1 (en) 2012-11-14 2015-11-04 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
US20140140951A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-Alanine Ester of Rp-Nucleoside Analog
US9211300B2 (en) 2012-12-19 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
RU2015132550A (ru) 2013-01-23 2017-03-02 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Противовирусные производные триазола
WO2014121418A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
WO2014121417A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
WO2014134251A1 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
EP2970358B1 (en) 2013-03-04 2021-06-30 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
KR20150114566A (ko) 2013-03-05 2015-10-12 에프. 호프만-라 로슈 아게 항바이러스 화합물
EP2964664B1 (en) 2013-03-07 2017-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
MA46490A1 (fr) 2013-05-16 2021-04-30 Riboscience Llc Dérivés de nucléosides 4'- fluoro-2' - méthyle substitués
MA38678A1 (fr) 2013-05-16 2017-07-31 Riboscience Llc Dérivés nucléosidiques 4'-azido, 3'désoxy-3'-fluoro substitués
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
US10005779B2 (en) 2013-06-05 2018-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV
WO2015017713A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
PT3038601T (pt) 2013-08-27 2020-06-30 Gilead Pharmasset Llc Formulação combinada de dois compostos antivirais
EP3046924A1 (en) 2013-09-20 2016-07-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
US10167298B2 (en) 2013-10-30 2019-01-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Pseudopolymorphs of an HCV NS5A inhibitor and uses thereof
EP3063165A1 (en) 2013-11-01 2016-09-07 Idenix Pharmaceuticals LLC D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
US10683321B2 (en) 2013-12-18 2020-06-16 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-or nucleosides for the treatment of HCV
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
CN106061984A (zh) 2014-02-13 2016-10-26 配体药物公司 前药化合物及其用途
WO2015134561A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
US20170066779A1 (en) 2014-03-05 2017-03-09 Idenix Pharmaceuticals Llc Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
US10202411B2 (en) 2014-04-16 2019-02-12 Idenix Pharmaceuticals Llc 3′-substituted methyl or alkynyl nucleosides nucleotides for the treatment of HCV
EP3164136A4 (en) 2014-07-02 2018-04-04 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and uses therof
EP3423467B1 (en) 2016-03-04 2021-04-28 F. Hoffmann-La Roche AG New difluoroketamide derivatives as htra1 inhibitors
EP3423469A1 (en) 2016-03-04 2019-01-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag New trifluoromethylpropanamide derivatives as htra1 inhibitors
US10526315B2 (en) 2016-06-21 2020-01-07 Orion Ophthalmology LLC Carbocyclic prolinamide derivatives
WO2017222915A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 Inception 4, Inc. Heterocyclic prolinamide derivatives
CN109415330A (zh) 2016-07-18 2019-03-01 豪夫迈·罗氏有限公司 作为htra1抑制剂的新型二氟酮酰胺衍生物
WO2018036942A1 (en) 2016-08-23 2018-03-01 F. Hoffmann-La Roche Ag New difluoroketamide derivatives as htra1 inhibitors
EP3504197B1 (en) * 2016-08-23 2021-11-17 F. Hoffmann-La Roche AG New trifluoromethylpropanamide derivatives as htra1 inhibitors
TWI860279B (zh) 2017-09-21 2024-11-01 美商里伯賽恩斯有限責任公司 作為hcv rna複製抑制劑之經4'-氟-2'-甲基取代之核苷衍生物
JP2021509907A (ja) 2018-01-09 2021-04-08 リガンド・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド アセタール化合物およびその治療的使用
JP7584418B2 (ja) 2018-12-04 2024-11-15 ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー 多重反応同位体分子種反応モニタリングによる、サンプル内検量線を用いた分析方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3481913D1 (de) * 1983-04-27 1990-05-17 Ici America Inc Prolin-derivate.
GB9517022D0 (en) * 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
US5633388A (en) * 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
UA79749C2 (en) * 1996-10-18 2007-07-25 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
GB9623908D0 (en) * 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
WO1998046597A1 (en) * 1997-04-14 1998-10-22 Emory University Serine protease inhibitors
GB9707659D0 (en) * 1997-04-16 1997-06-04 Peptide Therapeutics Ltd Hepatitis C NS3 Protease inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
CA2294562A1 (en) 1999-02-18
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HUP0100100A2 (hu) 2001-11-28
DE69827956T2 (de) 2005-04-14
CA2294562C (en) 2005-07-26

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