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EP4532660A1 - Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität - Google Patents

Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität

Info

Publication number
EP4532660A1
EP4532660A1 EP23731940.5A EP23731940A EP4532660A1 EP 4532660 A1 EP4532660 A1 EP 4532660A1 EP 23731940 A EP23731940 A EP 23731940A EP 4532660 A1 EP4532660 A1 EP 4532660A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
amino acid
positions
protease
seq
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP23731940.5A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Shohana ISLAM
Christian DEGERING
Susanne Wieland
Ayhan AYDEMIR
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henkel AG and Co KGaA
Original Assignee
Henkel AG and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel AG and Co KGaA filed Critical Henkel AG and Co KGaA
Publication of EP4532660A1 publication Critical patent/EP4532660A1/de
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/20—Organic compounds containing oxygen
    • C11D3/2075—Carboxylic acids-salts thereof
    • C11D3/2079—Monocarboxylic acids-salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/20—Organic compounds containing oxygen
    • C11D3/2075—Carboxylic acids-salts thereof
    • C11D3/2082—Polycarboxylic acids-salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/20—Organic compounds containing oxygen
    • C11D3/2093—Esters; Carbonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/26—Organic compounds containing nitrogen
    • C11D3/32—Amides; Substituted amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38663—Stabilised liquid enzyme compositions

Definitions

  • proteases are used to break down protein-containing dirt on the items to be cleaned. However, they also hydrolyze themselves (autoproteolysis) and all other proteins contained in the products in question, i.e. in particular other enzymes contained in the detergents and cleaning products. This happens particularly during the cleaning process, i.e. in the aqueous washing or cleaning liquor, when comparatively favorable reaction conditions exist.
  • subtilisin-type proteases preferably used in detergents and cleaning agents are the subtilisins BPN' from Bacillus amyloliquefaciens and Carlsberg from Bacillus licheniformis, the protease PB92, the subtilisins 147 and 309, the protease from Bacillus lentus, in particular from Bacillus lentus DSM 5483, subtilisin DY and the enzymes thermitase, proteinase K and the proteases TW3 and TW7, which can be assigned to the subtilases but no longer to the subtilisins in the narrower sense, as well as variants of the proteases mentioned which have an amino acid sequence that is changed compared to the original protease.
  • Further aspects of the invention relate to methods for producing such a detergent or cleaning agent, methods for cleaning textiles and/or hard surfaces, in particular dishes, using an agent according to the invention.
  • At least one means one or more, i.e., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or more.
  • “Substantially free of” means that the composition or agent contains less than 2% by weight, preferably less than 1% by weight, more preferably less than 0.5% by weight and particularly preferably contains less than 0.1% by weight of the corresponding substance, based on the total weight of the composition/agent.
  • Liquid as used herein includes liquids and gels as well as pasty compositions. It is preferred that the liquid compositions be flowable and pourable at room temperature, but it is also possible that they have a yield point.
  • a substance for example a composition or an agent, is solid according to the definition of the invention if it is in the solid state at 25 ° C and 1013 mbar.
  • Liquid also includes gel form.
  • an “improvement in the stability of an enzyme” within the meaning of the invention occurs when the presence of a compound (B) defined herein with the formula (I) or (II) causes a detergent or cleaning agent comprising at least one protease defined herein ( A) and at least one compound (B) defined herein with the formula (I) or (II) (detergent or cleaning agent according to the invention) after storage a higher enzymatic activity of the protease and / or possibly others contained in the detergent or cleaning agent Has enzymes in comparison to a control preparation which differs from the detergent or cleaning agent according to the invention only by the absence of the compound defined herein with the formula (I) or (II) (control).
  • the present invention is based in particular on the surprising finding of the inventors that a protease which comprises an amino acid sequence which is at least 70% identical to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its entire length and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i) at least three, preferably four of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions, preferably four amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at least one in at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 161, 163, 171, 181, 183, 185, 200, 203, 209, 212 or 256 Amino acid substitution consisting of N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R
  • such compounds defined herein have the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, have not yet been associated with improved stability of other enzymes contained in the detergent or cleaning agent when used together with the protease described herein present in the detergent or cleaning agent.
  • the present invention is further based in particular on the surprising finding of the inventors that a protease which comprises an amino acid sequence which is at least 70% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i) at least three, preferably four of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions, preferably four amino acid substitutions, selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I are selected, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 161, 163, 171, 181, 183, 185, 200, 203, 209, 212 or 256, at least an amino acid substitution consisting of N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D,
  • the protease contained in the agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71% of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length, 72 %, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5% , 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i).
  • the protease contained in the agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71% of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length, 72 %, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5% , 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions which are from S3T, V
  • the protease contained in the agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71% of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length, 72 %, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5% , 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i).
  • the agent according to the invention comprises
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least four amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises (A) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% are identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) in at least three of the positions corresponding to positions 3 , 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least four amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises (A) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% are identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4 , 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V
  • a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% identical is, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at least one of the positions corresponding
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least four amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • A a protease having one of the following amino acid substitution variants: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least four amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • A a protease having one of the following amino acid substitution variants: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises (A) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% are identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4 , 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V
  • the agent according to the invention comprises
  • A a protease having one of the following amino acid substitution variants: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least four amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • Methyl 3-benzoylpropionate (B) Methyl 3-benzoylpropionate, and (C) at least one further enzyme, wherein the further enzyme is different from the at least one protease and is preferably selected from amylase, cellulase and lipase, preferably cellulase.
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% identical is, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at least four of the positions corresponding
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • Methyl 3-benzoylpropionate (B) Methyl 3-benzoylpropionate, and (C) at least one further enzyme, wherein the further enzyme is different from the at least one protease and is preferably selected from amylase, cellulase and lipase, preferably cellulase.
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • A a protease having one of the following amino acid substitution variants: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • 185, 200, 203, 209 or 256 has at least four amino acid substitutions selected from the group consisting of S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K and L256E,
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • the agent according to the invention comprises
  • a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% identical is, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at least five of the positions corresponding
  • the agent according to the invention comprises
  • A a protease having one of the following amino acid substitution variants: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212
  • the detergent or cleaning agent comprises, based on the total weight of the detergent or cleaning agent, the enzyme, i.e. the protease, in an amount of 0.005 to 5% by weight, preferably from 0.05 to 2 % by weight, more preferably from 0.01 to 0.5% by weight and even more preferably from 0.02 to 0.2% by weight, and the reversible inhibitor (i.e. the compound defined herein having the formula ( I) or (II)) in an amount of 0.01 to 15% by weight, preferably from 0.05 to 5% by weight, more preferably from 0.1 to 1% by weight, even more preferably from 0.3 to 1.5% by weight and particularly preferably from 0.2 to 0.75% by weight.
  • the enzyme i.e. the protease
  • the reversible inhibitor i.e. the compound defined herein having the formula ( I) or (II)
  • the enzyme and the reversible inhibitor may be preformulated in an enzyme composition.
  • the enzyme protein only forms a fraction of the total weight of common enzyme preparations.
  • Protease preparations which are preferably used contain between 0.1 and 40% by weight, preferably between 0.2 and 30% by weight, particularly preferably between 0.4 and 20% by weight and in particular between 0.8 and 10% by weight .-% of enzyme protein.
  • the reversible inhibitor may be present in an amount of from 0.05 to 35% by weight, preferably from 0.05 to 10% by weight, more preferably from 0.1 to 1% by weight, even more preferably from 0.3 to 1.5% by weight and particularly preferably from 0.2 to 0.75% by weight, based on the total weight in the enzyme composition.
  • This enzyme composition which is also a component of the present invention, can then be used in detergents or cleaning agents according to the invention, in amounts which lead to the final concentrations in the detergent or cleaning agent specified herein.
  • a protease has the specified substitutions means that it contains one (of the specified) substitution(s) at the respective position, i.e. at least the specified positions are not otherwise mutated or, for example, by fragmentation of the protease , are deleted.
  • the proteases described herein have the sequence of SEQ ID NO:1, with the exception of the explicitly mentioned substitutions, i.e. apart from the substituted positions, they are 100% identical to the sequence according to SEQ ID NO:1.
  • sequence comparison The identity of nucleic acid or amino acid sequences is determined by sequence comparison. This sequence comparison is based on the BLAST algorithm established and commonly used in the prior art (cf. e.g. Altschul et al. (1990) Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215:403-410, and Altschul et al (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402) and is basically done by similar sequences of nucleotides or amino acids in the nucleic acid or amino acid sequences be assigned. A tabular assignment of the relevant positions is called alignment. Another algorithm available in the art is the FASTA algorithm.
  • Such a comparison also allows a statement to be made about the similarity of the compared sequences to one another. It is usually given in percent identity, i.e. the proportion of identical nucleotides or amino acid residues in the same positions or in positions corresponding to one another in an alignment.
  • percent identity i.e. the proportion of identical nucleotides or amino acid residues in the same positions or in positions corresponding to one another in an alignment.
  • homology includes conserved amino acid exchanges in amino acid sequences, i.e. amino acids with similar chemical activity, since these usually exert similar chemical activities within the protein. Therefore, the similarity of the compared sequences can also be indicated as percent homology or percent similarity. Identity and/or homology statements can be made about entire polypeptides or genes or just about individual regions. Homologous or identical regions of different nucleic acid or amino acid sequences are therefore defined by similarities in the sequences.
  • P9T describes the substitution of proline at position 9 by threonine
  • P9TH describes the insertion of histidine after the amino acid threonine at position 9
  • P9* or AP9 describes the deletion of proline at position 9.
  • Advantageous positions for sequence changes, in particular substitutions, of the protease according to SEQ ID NO:1, which are preferably important when transferred to homologous positions of the proteases according to the invention and give the protease advantageous functional properties, are therefore the positions that are in an alignment with the positions described herein correspond, i.e. in the count according to SEQ ID NO:1.
  • the following amino acid residues are located in the wild-type molecule of the protease at the positions mentioned: 3S, 4V, 74N, 99R, 136A, 143R, 154S, 160S, 161Y, 163A, 171V, 181A, 183F, 185Q, 199V, 200Q, 203Y, 209A, 212 N and 256L.
  • Preferred embodiments are those in which the enzyme is stabilized in several ways, since several stabilizing mutations act additively or synergistically.
  • DNA and/or amino acid sequences to generate the corresponding nucleic acids, including complete genes, using methods that are generally known today, such as chemical synthesis or the polymerase chain reaction (PCR) in conjunction with standard molecular biological and/or protein chemical methods to produce.
  • PCR polymerase chain reaction
  • Such methods are, for example, from Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. 2001. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd Edition Cold Spring Laboratory Press, known.
  • the protease used according to the invention is characterized in that its cleaning performance is not significantly reduced compared to that of a protease which comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1, i.e. has at least 80% of the reference washing performance , preferably at least 100%, more preferably at least 110% or more.
  • Washing or cleaning performance is understood to mean the ability of a detergent or cleaning agent to partially or completely remove existing soiling, in particular the whitening performance of one or more soilings on textiles. Examples of such soiling are blood on cotton or chocolate-milk/soot on cotton, cocoa on cotton or porridge on cotton.
  • both the washing or cleaning agent which comprises the protease, or the washing or cleaning liquor formed by this agent, as well as the protease itself have a respective cleaning performance. The cleaning performance of the protease thus contributes to the cleaning performance of the agent or the washing or cleaning liquor formed by the agent.
  • the cleaning performance can be determined in a washing system that contains a detergent in a dosage of between 2.0 and 8.0 grams per liter of washing liquor and the enzyme.
  • the enzymes to be compared are used in the same concentration (based on active protein). The use of the respective enzymes with the same activity ensures that even if there is a discrepancy in the ratio of active substance to total protein (the values of the specific activity), the respective enzymatic properties, i.e. the cleaning performance on certain types of soiling, can be compared. In general, low specific activity can be compensated for by adding a larger amount of protein.
  • the enzymes to be examined can also be used in the same amount or weight if the enzymes to be examined have a different affinity for the test substrate in an activity test.
  • the expression “same amount of substance” in this context refers to the same molar use of the enzymes to be examined.
  • the expression “equal weight” refers to an equal weight use of the enzymes to be examined.
  • Preferred embodiments of proteases according to the invention achieve such advantageous cleaning performance even at low temperatures, in particular in the temperature ranges between 10 ° C and 60 ° C, preferably between 15 ° C and 50 ° C and particularly preferably between 20 ° C and 40 ° C.
  • the protein concentration can be determined using known methods, for example the BCA method (bicinchoninic acid; 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid) or the biuret method (Gornall et al., 1948, J. Biol. Chem. , 177:751-766).
  • the detergents and cleaning agents in the context of the invention also include washing aids which are added to the actual detergent when washing textiles manually or by machine in order to achieve a further effect .
  • detergents and cleaning agents within the scope of the invention also include textile pre- and post-treatment agents, i.e. those agents with which the item of laundry is brought into contact before the actual laundry, for example to dissolve stubborn dirt, and also those agents that are in one of the actual The step after textile washing gives the laundry other desirable properties such as a pleasant feel, crease resistance or low static charge.
  • the last-mentioned agents include fabric softeners.
  • the detergents according to the invention are in liquid form, they preferably contain, based on their total weight, more than 40% by weight, preferably 50 to 90% by weight and particularly preferably 60 to 80% by weight of water.
  • the sulfonate-type surfactants that can be used include, for example, Cg-u-alkylbenzene sulfonates, alkane sulfonates, which are obtained from Ci2-is alkanes, for example by sulfochlorination or sulfoxidation with subsequent hydrolysis or neutralization, and Ci2-18-olefin sulfonates, which are obtained in the reaction of corresponding Monoolefins with sulfur trioxide are formed, mixtures of alkene and hydroxyalkane sulfonates, disulfonates, such as those produced from Ci2-18 monoolefins with terminal or internal double bond is obtained by sulfonation with gaseous sulfur trioxide and subsequent alkaline or acid hydrolysis of the sulfonation products, as well as a-sulfofatty acid esters (ester sulfonates), which are formed during the sulfonation of fatty acid methyl or ethyl
  • sulfuric acid monoesters of the straight-chain or branched Cy-2i alcohols ethoxylated with 1 to 6 moles of ethylene oxide such as 2-methyl-branched Cg-n alcohols with an average of 3.5 moles of ethylene oxide (EO) or Ci2-18 fatty alcohols with 1 up to 4 EO are suitable.
  • Suitable alkyl ether sulfates are, for example, compounds of the formula
  • R 1 represents a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, particularly preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred radicals R 1 are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, eicosyl radicals and mixtures thereof, the representatives having an even number of C -atoms are preferred.
  • X + stands for a monovalent cation or the nth part of an n-valent cation, preference being given to the alkali metal ions and among them Na + or K + , with Na + being extremely preferred.
  • the stated degree of ethoxylation represents a statistical average, which can be a whole or a fractional number for a specific product.
  • the alkoxylation levels reported represent statistical averages, which may be a whole or a fractional number for a specific product.
  • Preferred alkoxylates/ethoxylates have a narrow homolog distribution (narrow range ethoxylates, NRE).
  • the nonionic surfactants used are preferably alkoxylated, advantageously ethoxylated, in particular primary alcohols with preferably 8 to 18 carbon atoms and an average of 1 to 12 moles of ethylene oxide (EO) per mole of alcohol, in which the alcohol residue can be linear or preferably methyl-branched in the 2-position or linear and methyl-branched residues in the mixture, as are usually present in oxo alcohol residues.
  • EO ethylene oxide
  • alcohol residue can be linear or preferably methyl-branched in the 2-position or linear and methyl-branched residues in the mixture, as are usually present in oxo alcohol residues.
  • alcohol ethoxylates with linear residues from alcohols of native origin with 12 to 18 carbon atoms for example from coconut, palm, tallow or oleyl alcohol, and an average of 2 to 8 EO per mole of alcohol are preferred.
  • Nonionic surfactants of the amine oxide type for example N-cocoalkyl-N,N-dimethylamine oxide and N-tallow alkyl-N,N-dihydroxyethylamine oxide, and the fatty acid alkanolamides may also be suitable.
  • the amount of these nonionic surfactants is preferably not more than that of the ethoxylated fatty alcohols, in particular not more than half of it.
  • R'" is an alkyl radical, optionally interrupted by heteroatoms or heteroatom groups, with 8 to 25, preferably 10 to 21, carbon atoms and R iv and R v of the same type or various alkyl radicals with 1 to 3 carbon atoms, in particular C10-18-alkyldimethylcarboxymethylbetaine and Cn-17-alkylamidopropyldimethylcarboxymethylbetaine.
  • Suitable cationic surfactants include the quaternary ammonium compounds of the formula (R vi )(R vii )(R viii )(R ix )N + X-, in which R vi to R ix represent four identical or different, in particular two long and two short-chain alkyl radicals and
  • Other suitable cationic surfactants are the quaternary surface-active compounds, in particular with a sulfonium, phosphonium, iodonium or arsonium group, which are also known as antimicrobial active ingredients.
  • the agent can be designed with an antimicrobial effect or its antimicrobial effect, which may already be present due to other ingredients, can be improved.
  • the preferred aminoalkane phosphonates are ethylenediaminetetramethylene phosphonate (EDTMP), diethylenetriaminepentamethylene phosphonate (DTPMP) and their higher homologues. They are preferably used in the form of the neutrally reacting sodium salts, for example as the hexasodium salt of EDTMP or as the hepta- and octa-sodium salt of DTPMP.
  • HEDP from the phosphonate class is preferably used as the builder.
  • aminoalkane phosphonates also have a pronounced heavy metal binding capacity. Accordingly, particularly if the agents also contain bleach, it may be preferred to use aminoalkane phosphonates, in particular DTPMP, or to use mixtures of the phosphonates mentioned.
  • a detergent preferred in this application contains one or more phosphonate(s) from the group aminotrimethylenephosphonic acid (ATMP) and/or salts thereof; Ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (EDTMP) and/or their salts;
  • DTPMP Diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid) and/or their salts; 1-Hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid (HEDP) and/or its salts; 2-Phosphonobutane-1,2,4-tricarboxylic acid (PBTC) and/or its salts; Hexamethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (HDTMP) and/or their salts; Nitrilotri(methylenephosphonic acid) (NTMP) and/or their salts.
  • HEDP 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid
  • DTPMP diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid)
  • the detergents according to the invention can contain two or more different phosphonates.
  • Preferred detergents according to the invention are characterized in that the detergent contains at least one complexing agent from the group of phosphonates, preferably 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonate, the proportion by weight of the phosphonate in the total weight of the detergent preferably being 0.1 and 8.0 wt .-%, preferably 0.2 and 5.0% by weight, more preferably 0.3 and 3.0% by weight and particularly preferably 0.5-2.0% by weight.
  • the detergents according to the invention also preferably contain builders, preferably at least one water-soluble and/or water-insoluble, organic and/or inorganic builder.
  • the builders include in particular silicates, carbonates and organic cobuilders.
  • organic cobuilders examples include, in particular, polycarboxylates/polycarboxylic acids, polymeric polycarboxylates, aspartic acid, polyacetals, dextrins, other organic cobuilders and phosphonates. These substance classes are described below. If desired, organic cobuilder substances can be contained in amounts of up to 40% by weight, in particular up to 25% by weight and preferably from 1 to 8% by weight. Useful organic builders are, for example, those that can be used in the form of the free acid and/or its sodium salts Polycarboxylic acids, whereby polycarboxylic acids are understood to mean those carboxylic acids that carry more than one acid function.
  • these are citric acid, adipic acid, succinic acid, glutaric acid, malic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, sugar acids and carboxymethylinulins, monomeric and polymeric aminopolycarboxylic acids, in particular glycinediacetic acid, methylglycinediacetic acid, glutamic diacetic acid, nitrilotriacetic acid (NTA), iminodisuccinate such as ethylenediamine-N,N'-disuccinic acid and hydroxyiminodisucainate, ethylendiamintetra vinegar acid as well as polyas paragic acid, polyphosphonic acids, especially aminotris (methylene phosphonic acid), ethylendiamintetrakis (methylene phosphonic acid), lysintetra (methylene phosphosic acid) and 1-hydroxyetics 1, 1-1-di Phosphonic acid, polymers hydroxy compounds such as dextrin and polymers
  • MGDA methyl glycine dieside acid
  • GLDA glutamic acid diacetate
  • ASDA aspartic acid diacetate
  • HEIDA hydroxyethyliminodiacetate
  • IDS imino disuccinate
  • EDDS ethylene diamine disuccinate
  • carboxymethyl inulin and polyaspartate methyl glycine dieside acid
  • GLDA glutamic acid diacetate
  • ASDA aspartic acid diacetate
  • HEIDA hydroxyethyliminodiacetate
  • IDS imino disuccinate
  • EDDS ethylene diamine disuccinate
  • Citric acid/citrate can each be used in the form of their hydrates, for example citric acid can be used in the form of the monohydrate and citrate can be used in the form of trisodium citrate dihydrate.
  • Polymeric polycarboxylates are also suitable as builders, for example the alkali metal salts of polyacrylic acid or polymethacrylic acid, for example those with a relative molecular mass of 500 to 70,000 g/mol.
  • the molecular weights specified for polymeric polycarboxylates are weight-average molecular weights Mw of the respective acid form, which were basically determined using gel permeation chromatography (GPC), using a UV detector. The measurement was carried out against an external polyacrylic acid standard, which provides realistic molecular weight values due to its structural similarity to the polymers examined. This information differs significantly from the molecular weight information in which polystyrene sulfonic acids are used as the standard.
  • Suitable polymers are in particular polyacrylates, which preferably have a molecular mass of 2000 to 20,000 g/mol. Due to their superior solubility, the short-chain polyacrylates, which have molecular weights of 2000 to 10,000 g/mol, and particularly preferably of 3000 to 5000 g/mol, can be preferred from this group.
  • Copolymeric polycarboxylates are also suitable, in particular those of acrylic acid with methacrylic acid and acrylic acid or methacrylic acid with maleic acid.
  • a solid agent according to the invention preferably contains at least one water-soluble and/or water-insoluble, organic and/or inorganic builder.
  • the water-soluble organic builder substances include the above-mentioned organic builders.
  • compositions of the invention can also contain inorganic water-soluble builders.
  • Suitable water-soluble inorganic builder materials are, in particular, alkali metal silicates, alkali metal carbonates, alkali metal hydrogen carbonates, alkali metal phosphates and/or sesquicarbonates, which can be present in the form of their alkaline, neutral or acidic sodium or potassium salts. Small amounts of calcium carbonates may also be contained in solid textile detergents.
  • water-soluble crystalline and/or amorphous alkali metal silicates are suitable.
  • the alkali metal silicates that can be used as builders in the agents according to the invention preferably have a molar ratio of alkali metal oxide to SiO2 of less than 0.95, in particular from 1:1.1 to 1:12, and can be amorphous or crystalline.
  • Preferred alkali metal silicates are the sodium silicates, in particular the amorphous sodium silicates, with a molar ratio Na2O:SiO2 of 1:2 to 1:2.8.
  • the crystalline silicates used, which can be present alone or in a mixture with amorphous silicates are preferably crystalline layered silicates of the general formula Na2Si 1, 9 to 4 and y is a number from 0 to 33 and preferred values for x are 2, 3 or 4.
  • Preferred crystalline layered silicates are those in which x assumes the values 2 or 3 in the general formula mentioned.
  • both ß- and ⁇ -sodium disilicates Na2Si2Os • y H2O
  • Practically anhydrous crystalline alkali metal silicates of the above-mentioned general formula, in which x is a number from 1.9 to 2.1, produced from amorphous alkali metal silicates can also be used in agents according to the invention.
  • a crystalline sodium layered silicate with a modulus of 2 to 3 is used, as can be produced from sand and soda.
  • Crystalline sodium silicates with a modulus in the range from 1.9 to 3.5 are used in a further embodiment of agents according to the invention.
  • the weight ratio of amorphous alkali metal silicate to crystalline alkali metal silicate is preferably 1:2 to 2:1 and in particular 1:1 to 2:1.
  • Crystalline layered silicates of the formula (I) given above are sold by Clariant GmbH under the trade name Na-SKS, e.g.
  • Na-SKS-1 Na2Si22O45 • x H2O, Kenyaite
  • Na-SKS-2 Na2Sii4O29 • x H2O , magadiite
  • Na-SKS-3 Na2SisOi7 • x H2O
  • Na-SKS-4 Na2Si4Og • x H2O, makatite
  • Na-SKS-5 a-Na 2 Si 2 O5
  • Na-SKS-7 ß-Na 2 Si 2 O 5 , natrosilite
  • Na-SKS-9 NaHShOs • 3 H 2 O
  • Na- SKS-10 NaHShOs • 3 H 2 O, kanemite
  • Na-SKS-11 t-Na 2 Si 2 O 5
  • Na-SKS-13 NaHSi 2 O 5
  • Na-SKS-6 ö-Na 2 Si 2 Os.
  • a granular compound of crystalline layered silicate and citrate, of crystalline layered silicate and the above-mentioned (co-)polymeric polycarboxylic acid, or of alkali metal silicate and alkali metal carbonate is used, as is commercially available, for example, under the name Nabion® 15.
  • Such water-soluble inorganic builder materials are preferably contained in the agents according to the invention in amounts of 1 to 20% by weight, in particular 5 to 15% by weight.
  • the carbonates (and hydrogen carbonates), in particular sodium carbonate, and the phosphonic acids/phosphonates are also important as water-soluble inorganic builder substances.
  • the agents according to the invention are preferably free of phosphate builders, i.e. contain less than 1% by weight, preferably no deliberately added phosphate builders.
  • the agents can also contain water-insoluble builder substances.
  • Water-insoluble inorganic builder materials are in particular crystalline or amorphous water-dispersible alkali alumosilicates, in amounts of up to 50% by weight, preferably not more than 40% by weight, in particular from 3 to 20% by weight and particularly preferably from 1 to 15% by weight. -%, used.
  • these are the crystalline sodium aluminosilicates in detergent quality, in particular zeolite A, zeolite P, zeolite MAP and possibly zeolite Condea Augusta S.p.A.), preferred.
  • Amounts close to the upper limit mentioned are preferably used in solid, particulate agents.
  • Suitable aluminosilicates in particular have no particles with a grain size of over 30 pm and preferably consist of at least 80% by weight of particles with a size of under 10 pm.
  • Their calcium binding capacity which can be determined according to DE 2412837 A1, is usually in the range of 100 to 200 mg CaO per gram.
  • Peroxygen compounds suitable for use in agents according to the invention include, in particular, organic peracids or peracid salts of organic acids, such as phthalimidopercaproic acid, perbenzoic acid or salts of diperdodecanedioic acid, hydrogen peroxide and inorganic salts that release hydrogen peroxide under the washing conditions, including perborate, percarbonate, persilicate and/or persulfate such as caroate, as well as hydrogen peroxide inclusion compounds such as H 2 G 2 urea adducts. Hydrogen peroxide can also be produced using an enzymatic system, ie an oxidase and its substrate.
  • solid peroxygen compounds are to be used, they can be used in the form of powders or granules, which can also be coated in a manner known in principle.
  • the peroxygen compounds can be added to the wash liquor as such or in the form of agents containing them, which in principle can contain all common washing, cleaning or disinfectant components.
  • Particularly Alkaline percarbonate or alkali perborate monohydrate is preferably used.
  • an agent according to the invention contains peroxygen compounds, these are present in amounts of preferably up to 50% by weight, in particular from 5 to 30% by weight, more preferably from 0.1 to 20% by weight.
  • Compounds which, under perhydrolysis conditions, produce aliphatic peroxocarboxylic acids with preferably 1 to 10 carbon atoms, in particular 2 to 4 carbon atoms, and/or optionally substituted perbenzoic acid can be used as bleach activators in the agents.
  • Substances which carry O- and/or N-acyl groups of the stated number of carbon atoms and/or optionally substituted benzoyl groups are suitable.
  • acylated alkylenediamines in particular tetraacetylethylenediamine (TAED), acylated triazine derivatives, in particular 1,5-diacetyl-2,4-dioxohexahydro-1,3,5-triazine (DADHT), acylated glycolurils, in particular tetraacetylglycoluril (TAGU), N- Acylimides, in particular N-nonanoylsuccinimide (NOSI), acylated phenol sulfonates or carboxylates or the sulfonic or carboxylic acids of these, in particular nonanoyl or isononanoyloxybenzenesulfonate or laroyloxybenzenesulfonate (NOBS or iso-NOBS or LOBS), 4- (2-decanoyloxyethoxycarbonyloxy )-benzenesulfonate (DECOBS) or de
  • N-benzoylcaprolactam nitriles from which perimide acids are formed, in particular aminoacetonitrile derivatives quaternized nitrogen atom, and/or oxygen-transferring sulfonimines and/or acylhydrazones.
  • the hydrophilically substituted acyl acetals and the acyllactams are also preferably used. Combinations of conventional bleach activators can also be used.
  • Such bleach activators can, especially in the presence of the above-mentioned hydrogen peroxide-producing bleaching agents, be present in the usual amount range, preferably in amounts of 0.5 to 10% by weight, in particular 1 to 8% by weight, based on the total agent, are missing Use of percarboxylic acid as the sole bleaching agent, however, preferably entirely.
  • solid agents can also contain sulfonimines and/or bleach-enhancing transition metal salts or transition metal complexes as so-called bleaching catalysts.
  • Suitable graying inhibitors or soil release active ingredients are cellulose ethers, such as carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxyalkylcelluloses and mixed cellulose ethers, such as methylhydroxyethylcellulose, methylhydroxypropylcellulose and methylcarboxymethylcellulose. Sodium carboxymethylcellulose, hydroxyporpylmethylcellulose and their mixtures and, if appropriate, their mixtures with methylcellulose are preferably used.
  • Commonly used soil release active ingredients include copolyesters containing dicarboxylic acid units, alkylene glycol units and polyalkylene glycol units.
  • the proportion of graying inhibitors and/or soil release active ingredients in agents according to the invention is: Generally not more than 2% by weight and is preferably 0.5 to 1.5% by weight, particularly preferably 0.5 to 2% by weight.
  • Derivatives of diaminostilbenedisulfonic acid or its alkali metal salts can be included as optical brighteners for textiles made of cellulose fibers (e.g. cotton).
  • Salts of 4,4'-bis(2-anilino-4-morpholino-1,3,5-triazin-6-yl-amino)-stilbene-2,2'-disulfonic acid or compounds of similar structure which are suitable are, for example the morpholino group carries a diethanolamino group, a methylamino group or a 2-methoxyethylamino group.
  • the usual foam regulators that can be used in the agents according to the invention include, for example, polysiloxane-silica mixtures, the finely divided silica contained therein preferably being silanized or otherwise hydrophobic.
  • the polysiloxanes can consist of linear compounds as well as cross-linked polysiloxane resins and mixtures thereof.
  • Other defoamers are paraffin hydrocarbons, in particular micro paraffins and paraffin waxes, whose melting point is above 40 ° C, saturated fatty acids or soaps with in particular 20 to 22 carbon atoms, e.g. sodium behenate, and alkali metal salts of phosphoric acid mono- and / or dialkyl esters in which the Alkyl chains each have 12 to 22 carbon atoms.
  • the proportion of foam regulators can preferably be 0.2 to 2% by weight, particularly preferably not more than 1% by weight.
  • the proportion by weight of these organic solvents in the total weight of detergents according to the invention is preferably 0.1 to 10% by weight, preferably 0.2 to 8.0% by weight and more preferably 0.5 to 5.0% by weight.
  • a particularly preferred organic solvent that is particularly effective in terms of stabilizing the detergents is glycerin and 1,2 propylene glycol.
  • Liquid detergents preferably comprise at least one polyol, preferably from the group of glycerol and 1,2-propylene glycol, based on the total weight of the detergent, preferably 0.1 to 10% by weight, preferably 0.2 to 8.0% by weight. % and more preferably 0.5 to 5.0% by weight.
  • Further preferred organic solvents are the organic amines and alkanolamines.
  • Further enzymes are advantageously contained in the agent in an amount of 1 x 10 -8 to 5 percent by weight based on active protein. Increasingly preferred is each further enzyme in an amount of 1 x 10 -7 to 3% by weight, from 0.00001 to 1% by weight, from 0.00005 to 0.5% by weight, from 0.0001 up to 0.1% by weight and particularly preferably from 0.0001 to 0.05% by weight in agents according to the invention, based on active protein.
  • the enzymes particularly preferably show synergistic cleaning performance against certain dirt or stains, ie the enzymes contained in the agent composition support each other in their cleaning performance.
  • Amylases are preferably used which have an amino acid substitution at two, preferably three, of the positions mentioned above, in particular a substitution at position 202 selected from M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, a substitution at position 255, in particular S255N , and a substitution at position 172, particularly R172Q.
  • the M202L and M202T mutants are particularly preferred.
  • the amylase comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:3 over its total length to at least 60% and increasingly preferably to at least 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66 %, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical and optionally at least one amino acid substitution at one of positions 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231, 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295
  • Synonymous names can be used for cellulases, in particular endoglucanase, endo-1,4-ß-glucanase, carboxymethylcellulase, endo-1,4-ß-D-glucanase, ß-1,4-glucanase, ß-1,4-endoglucan hydrolase , celludextrinase or avicelase.
  • the determining factor as to whether an enzyme is a cellulase within the scope of the invention is its ability to hydrolyze 1,4-ß-D-glucoside bonds in cellulose.
  • cellulases examples include cellulases described in EP 0495257, EP 0531372, WO 96/11262, WO 96/29397 and WO 98/08940.
  • Other examples are cellulase variants such as those in WO 94/07998, EP 0531315, EP 3212777, EP 3502243, EP 3653705, EP 3653706, US 5457046, US 5686593, US 5763254, WO 95/24471, WO 98 /12307 and WO 99/01544 and WO 2019/122520 are described.
  • lipase variants such as those in EP 0407225, WO 92/05249, WO 94/01541, WO 94/25578, WO 95/14783, WO 95/30744, WO 95/35381, WO 95/22615, WO 96 /00292, WO 97/04079, WO 97/07202, WO 2000/034450, WO 2000/060063, WO 2001/092502, WO 2007/087508 and WO 2009/109500 are described.
  • Preferred commercial lipase products include LipolaseTM, LipexTM, LipolexTM and LipocleanTM (Novozymes A/S), Lumafast (Genencor/DuPont) and Lipomax (Gist-Brocades).
  • Methods for cleaning textiles are generally characterized by the fact that various cleaning-active substances are applied to the items to be cleaned in several process steps and washed off after the exposure time, or that the items to be cleaned are treated in some other way with a detergent or a solution or dilution of this agent.
  • Another subject of the invention is the use of a compound with the formula (I) or
  • R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 are the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, to improve the stability, in particular the storage stability, of enzymes, preferably proteases, cellulases and/or amylases, in a protease-containing Detergent and cleaning agent, wherein the protease comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76 %, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 8
  • Another subject of the invention is the use of a compound with the formula (I) or where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, to prevent and/or reduce the autoproteolysis of a protease contained in the detergent and cleaning agent, the protease comprising an amino acid sequence corresponding to that in SEQ ID NO:1 specified amino acid sequence over their total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81% , 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%
  • Another subject of the invention is the use of a compound with the formula (I) or
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • Detergents and cleaning agents in particular liquid detergents and cleaning agents, particularly preferably liquid textile detergents, comprising
  • A a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% are identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4 , 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at at least one and increasingly
  • A a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% are identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4 , 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at at least one and increasingly
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) (II), where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 are the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • A a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5 %, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% are identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 3, 4 , 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (ii) at at least one and increasingly
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising
  • Detergents and cleaning agents in particular liquid detergents and cleaning agents, particularly preferably liquid textile detergents, comprising
  • (B) at least one compound with the formula (I) or (II) where R is each selected from -COOH, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-6-dicarboxylic acids, Ci-e-alkyl-substituted or unsubstituted C2-e-carboxylic acids and -OOC-NR 2 2, where R 2 is the same or different and selected from Ci-e-alkyl or H, as well as salts, esters or derivatives thereof, and
  • Detergents and cleaning agents according to one of the points to 12, wherein the at least one further from amylases, cellulases, hemicellulases, mannanases, tannases, xylanases, xanthanases, xyloglucanases, ß-glucosidases, pectinases, carrageenases, perhydrolases, oxidases, oxidoreductases , lipases, proteases and combinations thereof, preferably at least one amylase and/or at least one cellulase and/or at least one lipase.
  • SEQ ID NO:5 180+181, 181+182, 182+183 and 183+184 in the count according to SEQ ID NO:5, particularly preferably at positions 183+184 in the count according to SEQ ID NO:5, and/or at least one substitution one of positions 405, 421, 422 and 428 in the count, SEQ ID NO:5, which is selected from the group consisting of I405L, A421H, A422P, A428T and combinations thereof.
  • the protease has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72% of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO: 1 over its entire length. 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% , 90%, 90.5%, 91%, 91 .5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96 %, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions , corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (i)
  • the protease has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72% of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO: 1 over its entire length. 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% , 90%, 90.5%, 91%, 91 .5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96 %, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions , corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I and (i)
  • the activity of the protease is determined by the release of the chromophore para-nitroaniline from the substrate succinyl alanine-alanine-proline-phenylalanine-para-nitroanilide (AAPF-pNA; Bachem L-1400).
  • AAPF-pNA succinyl alanine-alanine-proline-phenylalanine-para-nitroanilide
  • Protease 1 SEQ ID NO:1 -S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W-L256E
  • Protease 3 SEQ ID NQ:1 -S3T-V4l-R99E-V199l-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E
  • the activity of the protease before storage was normalized to 100%.
  • the difference values of the residual activity (RA) of the protease of the respective approach with inhibitor (formula B, C or D) compared to the approach without inhibitor (formula A) are given below. A difference >5 is considered significant.
  • the activity of cellulase before storage was normalized to 100%.
  • the difference values of the residual activity (RA) of the cellulase of the respective approach with inhibitor (formula B, C or D) compared to the approach without inhibitor (formula A) are given below.
  • a difference >5 is considered significant.

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Abstract

Die Erfindung betrifft Wasch- und Reinigungsmittel, umfassend (A) mindestens eine Protease, die mindestens 70% Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161, 163, 171, 181, 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, aufweist, (B) mindestens eine einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, C1-6-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Dicarbonsäuren, C1-6-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Carbonsäuren und -OOC-NR2 2, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus C1-6-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, (C) optional mindestens ein weiteres Enzym und (D) mindestens einen Inhaltsstoff. Ebenfalls Bestandteil der Erfindung sind die entsprechenden Wasch- und Reinigungsverfahren, die Verwendung der hierin beschriebenen Mittel sowie die Verwendung eines erfindungsgemäßen Inhibitors zur Verbesserung der Stabilität einer Protease und/oder optional weiterer Enzyme in Wasch- oder Reinigungsmittel.

Description

WASCH- UND REINIGUNGSMITTEL MIT VERBESSERTER ENZYMSTABILITÄT
Die Erfindung liegt auf dem Gebiet der Enzymtechnologie. Die Erfindung betrifft Wasch- oder Reinigungsmittel, umfassend mindestens eine Protease, mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor und optional mindestens ein weiteres Enzym. Ebenfalls Bestandteil der Erfindung sind die entsprechenden Wasch- und Reinigungsverfahren, die Verwendung der hierin beschriebenen Mittel sowie die Verwendung erfindungsgemäßer reversibler Proteaseinhibitoren zur Verbesserung der Stabilität einer Protease in Wasch- oder Reinigungsmittel.
Der Einsatz von Enzymen in Waschmitteln ist seit Jahrzehnten im Stand der Technik etabliert. Sie dienen dazu, das Leistungsspektrum der betreffenden Mittel entsprechend ihren speziellen Aktivitäten zu erweitern. Hierzu gehören insbesondere hydrolytische Enzyme wie Proteasen, Amylasen, Lipasen und Cellulasen. Die ersten drei genannten hydrolysieren Proteine, Stärke und Fette und tragen somit unmittelbar zur Schmutzentfernung bei. Cellulasen werden insbesondere wegen ihrer Gewebewirkung eingesetzt. Eine weitere Gruppe von Waschmittelenzymen sind oxidative Enzyme, insbesondere Oxidasen, die ggf. im Zusammenspiel mit anderen Komponenten vorzugsweise dazu dienen, Anschmutzungen zu bleichen oder die bleichenden Agentien in situ zu erzeugen. Neben diesen Enzymen, die einer fortwährenden Optimierung unterworfen werden, werden laufend weitere Enzyme für den Einsatz in Waschmitteln bereitgestellt, um insbesondere spezielle Anschmutzungen optimal angehen zu können, wie z.B. Pektinasen, ß-Glucanasen, Mannanasen oder weitere Hemicellulasen (Glykosidasen) zur Hydrolyse insbesondere spezieller pflanzlicher Polymere.
Proteasen gehören zu den technisch bedeutendsten Enzymen. Für Wasch- und Reinigungsmittel sind sie die am längsten etablierten und in praktisch allen modernen, leistungsfähigen Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme. In Wasch- und Reinigungsmitteln dienen Proteasen dem Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Allerdings hydrolysieren sie auch sich selbst (Autoproteolyse) und alle anderen in den betreffenden Mitteln enthaltenen Proteine, d.h. insbesondere weitere in den Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme. Dies geschieht besonders während des Reinigungsvorgangs, d.h. in der wässrigen Wasch- bzw. Reinigungsflotte, wenn vergleichsweise günstige Reaktionsbedingungen vorliegen. Dies geschieht in geringerem Ausmaß aber auch während der Lagerung der betreffenden Mittel, weshalb mit einer langen Lagerung immer auch ein gewisser Verlust der Proteaseaktivität sowie der Aktivität der weiteren Enzyme einhergeht. Durch das Einbüßen enzymatischer Aktivität zeigen sie keine optimale Reinigungsleistung mehr. Besonders problematisch ist dies in gelförmigen oder flüssigen und insbesondere in wasserhaltigen Rezepturen, weil in diesem mit dem enthaltenen Wasser sowohl das Reaktionsmedium als auch das Hydrolyse-Reagenz zur Verfügung stellen.
Generell sind nur ausgewählte Proteasen für den Einsatz in flüssigen tensidhaltigen Zubereitungen überhaupt geeignet. Viele Proteasen zeigen in derartigen Zubereitungen keine ausreichende katalytische Leistung oder aber sie sind nicht ausreichend stabil. Für die Anwendung von Proteasen in Reinigungsmitteln ist daher eine hohe katalytische Aktivität und Stabilität unter Bedingungen, wie sie sich während eines Waschvorgangs darstellen, besonders wünschenswert. Beispiele für die in Wasch- und Reinigungsmitteln bevorzugt eingesetzten Proteasen vom Subtilisin- Typ sind die Subtilisine BPN' aus Bacillus amyloliquefaciens und Carlsberg aus Bacillus licheniformis, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die Protease aus Bacillus lentus, insbesondere aus Bacillus lentus DSM 5483, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7, sowie Varianten der genannten Proteasen, die eine gegenüber der Ausgangsprotease veränderte Aminosäuresequenz aufweisen. Proteasen werden durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren gezielt oder zufallsbasiert verändert und so beispielsweise für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln optimiert. Dazu gehören Punkt-, Deletions- oder Insertionsmutagenese oder Fusion mit anderen Proteinen oder Proteinteilen. So sind für die meisten aus dem Stand der Technik bekannten Proteasen entsprechend optimierte Varianten bekannt. In EP 2016175 ist beispielsweise eine für Wasch- und Reinigungsmittel vorgesehene Protease aus Bacillus pumilus offenbart. In WO 2013/060621 und EP 3660151 sind für Wasch- und Reinigungsmittel optimierte Proteasevarianten der alkalischen Protease aus Bacillus lentus beschrieben.
Ein Ziel bei der Entwicklung von Wasch- und Reinigungsmittelrezepturen besteht daher darin, die enthaltenen Enzyme insbesondere während der Lagerung zu stabilisieren und sie zudem insbesondere während Lagerung und/oder Anwendung des Wasch- oder Reinigungsmittels vor Denaturierung und/oder Spaltung bzw. Abbau und/oder Zerfall durch physikalische Einflüsse oder Oxidation etc. zu schützen. Ein Schwerpunkt dieser Entwicklungen besteht im Schutz der enthaltenen Proteine und/oder Enzyme gegen (auto-)proteolytische Spaltung. Diese kann durch den Aufbau physikalischer Barrieren erfolgen, etwa durch Verkapselung der Enzyme in speziellen Enzymgranulaten oder durch Konfektionierung der Mittel in Zwei- oder Mehrkammersystemen. Der andere vielfach beschrittene Weg besteht darin, chemische Verbindungen zuzusetzen, die die Proteasen inhibieren und somit insgesamt als Stabilisatoren bzw. Inhibitoren für Proteasen und die weiteren enthaltenen Proteine und Enzyme wirken. Es muss sich dabei jedoch um reversible Proteaseinhibitoren handeln, da die Proteaseaktivität nur vorübergehend, insbesondere während der Lagerung, nicht aber mehr während des Reinigungsprozesses unterbunden werden soll.
Im Stand der Technik sind verschiedene reversible Proteaseinhibitoren beschrieben, z.B. Polyole, insbesondere Glycerin und 1 ,2-Propylenglykol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester. Bekannt ist auch, Borsäurederivate zusammen mit Polyolen einzusetzen. Auch 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA) ist ein aus dem Stand der Technik bekannter Proteaseinhibitor. Ferner sind Peptidaldehyde, d.h. Oligopeptide mit reduziertem C- Terminus, insbesondere solche aus 2 bis 50 Monomeren, zu diesem Zweck beschrieben. Zu den peptidischen reversiblen Proteaseinhibitoren gehören unter anderem Ovomucoid und Leupeptin. Auch spezifische, reversible Peptidinhibitoren sowie Fusionsproteine aus Proteasen und spezifischen Peptidinhibitoren werden hierfür eingesetzt.
Es besteht jedoch weiterhin Bedarf, die Reinigungsleistung von enzymhaltigen Wasch- und Reinigungsmitteln zu verbessern sowie die in den Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme besser zu stabilisieren. Insbesondere ist es eine zunehmende Anforderung auf borsäurehaltige Verbindungen, d.h. insbesondere borhaltige Proteaseinhibitoren, in Wasch- und Reinigungsmittel zu verzichten.
Überraschenderweise wurde nun festgestellt, dass bestimmte Verbindungen mit der Formel (I) oder wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, eine Protease vorteilhaft stabilisieren und reversibel inhibieren können und daher besonders für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln geeignet sind. Insbesondere wurde überraschenderweise festgestellt, dass eine Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, durch bestimmte Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, vorteilhaft stabilisiert werden kann und diese Kombination daher besonders für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln geeignet ist.
Gegenstand der Erfindung ist daher in einem ersten Aspekt ein Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere ein flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt ein flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(C) optional mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels, und
(D) mindestens einen Inhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere ein flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt ein flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(B) mindestens eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3- Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(C) optional mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels, und
(D) mindestens einen Inhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels.
Weitere Aspekte der Erfindung betreffen Verfahren zur Herstellung eines solchen Wasch- oder Reinigungsmittels, Verfahren zur Reinigung von Textilien und/oder harten Oberflächen, insbesondere Geschirr, unter Verwendung eines erfindungsgemäßen Mittels.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung mit der Formel
(I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Enzymen, vorzugsweise Proteasen, Cellulasen und/oder Amylasen, in einem proteasehaltigen Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease die hierin definierte Protease ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C, sowie die Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease die hierin definierte Protease ist, sowie die Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei die Protease die hierin definierte Protease ist. Vorzugsweise ist die Verbindung aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3- Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt.
Bevorzugt ist das erfindungsgemäße Waschmittel ein flüssiges Textilwaschmittel. Weiter bevorzugt weist das erfindungsgemäße Textilwaschmittel in 1 Gew.-%-iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9, auf.
Erfindungsgemäße Textilwaschmittel zeigen insbesondere auch dann Leistungsvorteile gegenüber anderen Textilwaschmitteln, wenn die Textilwaschmittel mindestens ein zusätzliches Enzym derselben oder einer anderen Art, also z.B. Amylase, Cellulase, Lipase, Mannanase oder Pektinase enthalten, wobei die Auflistung der weiteren Enzyme nicht vollständig ist. Daher ist es bevorzugt, dass die erfindungsgemäßen Textilwaschmittel mindestens ein zusätzliches Enzym derselben Art (also eine weitere Protease) oder einer anderen Art enthalten, vorzugsweise ausgewählt aus Amylase, Cellulase und Lipase, bevorzugt Cellulase.
Diese und weitere Aspekte, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden für den Fachmann aus dem Studium der folgenden detaillierten Beschreibung und Ansprüche ersichtlich. Dabei kann jedes Merkmal aus einem Aspekt der Erfindung in jedem anderen Aspekt der Erfindung eingesetzt werden. Ferner ist es selbstverständlich, dass die hierin enthaltenen Beispiele die Erfindung beschreiben und veranschaulichen sollen, diese aber nicht einschränken und insbesondere die Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt ist.
Alle Prozentangaben sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozent (Gew.-%).
Numerische Bereiche, die in dem Format "von x bis y" angegeben sind, schließen die genannten Werte ein. Wenn mehrere bevorzugte numerische Bereiche in diesem Format angegeben sind, ist es selbstverständlich, dass alle Bereiche, die durch die Kombination der verschiedenen Endpunkte entstehen, ebenfalls erfasst werden.
"Mindestens eine", wie hierin verwendet, bedeutet eine oder mehrere, d.h. 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14 oder mehr.
Der Begriff "Wasch- und Reinigungsmittel" bzw. "Wasch- oder Reinigungsmittel", wie hierin verwendet, ist gleichbedeutend mit dem Begriff "Mittel" und bezeichnet eine Zusammensetzung zum Reinigen von Textilien und/oder harten Oberflächen, insbesondere Geschirr, wie in der Beschreibung erläutert.
"Etwa", "ca." oder "ungefähr", wie hierin in Bezug auf einen Zahlenwert verwendet, beziehen sich auf den entsprechenden Zahlenwert ±10%, vorzugsweise ±5%.
"Im Wesentlichen frei von" bedeutet, dass die Zusammensetzung bzw. das Mittel weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 1 Gew.-%, weiter bevorzugt weniger als 0,5 Gew.-% und besonders bevorzugt weniger als 0,1 Gew.-%, der entsprechenden Substanz, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung/des Mittels, enthält.
"Flüssig", wie hierin verwendet, schließt Flüssigkeiten und Gele sowie auch pastöse Zusammensetzungen ein. Es ist bevorzugt, dass die flüssigen Zusammensetzungen bei Raumtemperatur fließfähig und gießbar sind, es ist aber auch möglich, dass sie eine Fließgrenze aufweisen. Ein Stoff, z.B. eine Zusammensetzung oder ein Mittel ist gemäß Definition der Erfindung festförmig, wenn sie bei 25°C und 1013 mbar im festen Aggregatzustand vorliegt. Ein Stoff, z.B. eine Zusammensetzung oder ein Mittel ist gemäß Definition der Erfindung flüssig, wenn sie bei 25°C und 1013 mbar im flüssigen Aggregatzustand vorliegt. Dabei umfasst flüssig auch gelförmig.
"Variante", wie hierin verwendet, bezieht sich auf natürliche oder artifiziell erzeugte Variationen einer nativen Protease, die eine gegenüber der Referenzform abgewandelte Aminosäuresequenz aufweist.
Eine "Verbesserung der Stabilität eines Enzyms" im Sinne der Erfindung liegt vor, wenn die Anwesenheit einer hierin definierten Verbindung (B) mit der Formel (I) oder (II) bewirkt, dass ein Wasch- oder Reinigungsmittel umfassend mindestens eine hierin definierte Protease (A) und mindestens eine hierin definierte Verbindung (B) mit der Formel (I) oder (II) (erfindungsgemäßes Wasch- oder Reinigungsmittel) nach einer Lagerung eine höhere enzymatische Aktivität der Protease und/oder ggf. weiterer in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme aufweist im Vergleich zu einer Kontrollzubereitung, die sich nur durch die Abwesenheit der hierin definierten Verbindung mit der Formel (I) oder (II) von dem erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel unterscheidet (Kontrolle). Nach Lagerung weist das erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel daher eine höhere Restaktivität der enthaltenen Protease und/oder ggf. weiterer enthaltener Enzyme auf im Vergleich zur Kontrolle, wobei das erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel und die Kontrolle die gleiche enzymatische Ausgangsaktivität bei Lagerbeginn aufweisen, beide Mittel auf die gleiche Art und Weise behandelt werden, insbesondere betreffend die Bedingungen der Lagerung und die Bestimmung der Enzymaktivität. Zunehmend bevorzugt erfolgt die Lagerung für mindestens 1 Woche, 2 Wochen, 3 Wochen oder 4 Wochen. Weiter bevorzugt erfolgt die Lagerung bei einer Temperatur von 20°C, 25°C, 30°C oder 40°C.
Die vorliegende Erfindung basiert auf der überraschenden Erkenntnis der Erfinder, dass die hierin beschriebenen Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, eine verbesserte Lagerstabilität von hierin definierten Proteasen in Wasch- und Reinigungsmittel bewirken. Das ist insoweit besonders überraschend, da diese hierin definierten Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, bisher nicht in Zusammenhang mit einer reversiblen Proteasehemmung in Verbindung gebracht wurden. Insbesondere wurden sie bisher nicht in Zusammenhang mit den hierin beschriebenen Proteasen und einer verbesserten Lagerstabilität und/oder verminderten Autoproteolyse gebracht. Ferner wurden die hierin beschriebenen Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, nicht mit einer reversiblen Hemmung der hierin beschriebenen Protease in Verbindung gebracht.
Die vorliegende Erfindung basiert insbesondere auf der überraschenden Erkenntnis der Erfinder, dass eine Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, durch Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, vorteilhaft in Wasch- und Reinigungsmittel stabilisiert bzw. reversibel inhibiert werden. Das ist insbesondere insoweit überraschend, als keine dieser hierin definierten Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, bisher mit einer verbesserten Stabilität bzw. reversiblen Inhibition einer solchen Protease in Wasch- oder Reinigungsmittel in Verbindung gebracht wurde. Ferner wurden solche hierin definierten Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, bisher nicht mit einer verbesserten Stabilität weiterer in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme in Verbindung gebracht, wenn sie zusammen mit der hierin beschriebenen Protease in dem Wasch- oder Reinigungsmittel vorliegen.
Die vorliegende Erfindung basiert weiter insbesondere auf der überraschenden Erkenntnis der Erfinder, dass eine Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, durch eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorteilhaft in Wasch- und Reinigungsmittel stabilisiert werden. Das ist insbesondere insoweit überraschend, als keine dieser Verbindungen bisher mit einer verbesserten Stabilität einer solchen Protease in Wasch- oder Reinigungsmittel in Verbindung gebracht wurde. Ferner wurden solche Verbindungen bisher nicht mit einer verbesserten Stabilität weiterer in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme in Verbindung gebracht, wenn sie zusammen mit der hierin beschriebenen Protease in dem Wasch- oder Reinigungsmittel vorliegen.
Erfindungsgemäß werden Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, als reversible Proteaseinhibitoren eingesetzt. In bevorzugten Ausführungsformen sind solche Verbindungen borfrei, enthalten also keine borhaltigen Substituenten. Vorzugsweise ist die Verbindung aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt.
Die erfindungsgemäßen Mittel können einen oder mehrere reversible Proteaseinhibitor(en) umfassen.
Die erfindungsgemäßen Mittel können den/die reversiblen Proteaseinhibitor(en) in einer Konzentration von 0,1 bis 2 Gew.-%, vorzugsweise 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%. Falls mehrere Inhibitoren enthalten sind, beziehen sich diese Angaben auf die Gesamtkonzentration.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist. In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In besonders bevorzugten Ausführungsformen enthält das erfindungsgemäße Waschmittel eine Protease mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten:
(i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W;
(ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S;
(iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D;
(iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E;
(v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E;
(vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W;
(vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E;
(viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S;
(ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E;
(x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W;
(xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E;
(xii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L;
(xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W;
(xiv) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E;
(xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L;
(xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E;
(xvii)S3T-V4l-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L;
(xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E;
(xix) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E;
(xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 .
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise
S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S1540- Al 81 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) eine Verbindung, die aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) Benzoesäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) Phenylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S1540- Al 81 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) Benzylmalonsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) Phenylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel (A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, (B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) Benzylbernsteinsäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) Methyl-3-Benzoylpropionat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S1540- Al 81 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ,
(B) (S)-3-Phenylbuttersäure, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183,
185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und (C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel
(A) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: (i) S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; (xix) S3T- V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (B) Benzylcarbamat, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, bevorzugt Cellulase.
In erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln umfasst das Wasch- oder Reinigungsmittel, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- oder Reinigungsmittel, das Enzym, d.h. die Protease, in einer Menge von 0,005 bis 5 Gew.-%, bevorzugt von 0,05 bis 2 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,01 bis 0,5 Gew.-% und noch weiter bevorzugt von 0,02 bis 0,2 Gew.-%, und der reversible Inhibitor (d.h. die hierin definierte Verbindung mit der Formel (I) oder (II)) in einer Menge von 0,01 bis 15 Gew.-%, bevorzugt von 0,05 bis 5 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,1 bis 1 Gew.-%, noch weiter bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,2 bis 0,75 Gew.-%.
In verschiedenen Ausführungsformen können das Enzym und der reversible Inhibitor in einer Enzymzusammensetzung vorformuliert vorliegen. Wie aus den vorherigen Ausführungen ersichtlich, bildet das Enzym-Protein nur einen Bruchteil des Gesamtgewichts üblicher Enzym-Zubereitungen. Bevorzugt eingesetzte Protease-Zubereitungen enthalten zwischen 0,1 und 40 Gew.-%, bevorzugt zwischen 0,2 und 30 Gew.-%, besonders bevorzugt zwischen 0,4 und 20 Gew.-% und insbesondere zwischen 0,8 und 10 Gew.-% des Enzymproteins. In solchen Zusammensetzungen kann der reversible Inhibitor in einer Menge von 0,05 bis 35 Gew.-%, vorzugsweise von 0,05 bis 10 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,1 bis 1 Gew.-%, noch weiter bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,2 bis 0,75 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht in der Enzymzusammensetzung, enthalten sein. Diese Enzymzusammensetzung, die ebenfalls ein Bestandteil der vorliegenden Erfindung ist, kann dann in erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln eingesetzt werden, und zwar in Mengen, die zu den hierin angegebenen Endkonzentrationen im Wasch- oder Reinigungsmittel führen.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Proteasen weisen enzymatische Aktivität auf, d.h., sie sind zur Hydrolyse von Peptiden und Proteinen befähigt, insbesondere in Wasch- oder Reinigungsmittel. Eine erfindungsgemäß eingesetzte Protease ist daher ein Enzym, welches die Hydrolyse von Amid/Peptidbindungen in Protein/Peptid-Substraten katalysiert und dadurch in der Lage ist, Proteine oder Peptide zu spalten. Ferner handelt es sich bei einer erfindungsgemäß eingesetzten Protease vorzugsweise um eine reife (mature) Protease, d.h. um das katalytisch aktive Molekül ohne Signal- und/oder Propeptid(e). Soweit nicht anders angegeben beziehen sich auch die angegebenen Sequenzen auf jeweils reife (prozessierte) Enzyme.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung ist die Protease ein frei vorliegendes Enzym. Dies bedeutet, dass die Protease mit allen Komponenten eines Mittels direkt agieren kann und, falls es sich bei dem Mittel um ein Flüssigmittel handelt, dass die Protease direkt mit dem Lösungsmittel des Mittels (z.B. Wasser) in Kontakt steht. In anderen Ausführungsformen kann ein Mittel Proteasen enthalten, die einen Interaktionskomplex mit anderen Molekülen bilden oder die eine "Umhüllung" enthalten. Hierbei kann ein einzelnes oder mehrere Protease Moleküle durch eine sie umgebende Struktur von den anderen Bestandteilen des Mittels getrennt sein. Eine solche trennende Struktur kann entstehen durch, ist allerdings nicht beschränkt auf, Vesikel, wie etwa eine Micelle oder ein Liposom. Die umgebende Struktur kann aber auch ein Viruspartikel, eine bakterielle Zelle oder eine eukaryotische Zelle sein. In verschiedenen Ausführungsformen kann ein Mittel Zellen von Bacillus pumilus oder Bacillus subtilis, die die erfindungsgemäßen Proteasen exprimieren, oder Zellkulturüberstände solcher Zellen enthalten.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet das Merkmal, dass eine Protease die angegebenen Substitutionen aufweist, dass sie an der jeweiligen Position eine (der angegebenen) Substitution(en) enthält, d.h. zumindest die angegebenen Positionen nicht anderweitig mutiert oder, beispielsweise durch Fragmentierung der Protease, deletiert sind. In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen weisen die hierin beschriebenen Proteasen mit Ausnahme der explizit erwähnten Substitutionen die Sequenz von SEQ ID NO:1 auf, d.h. sind abgesehen von den substituierten Positionen 100% identisch zu der Sequenz gemäß SEQ ID NO:1.
Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (vgl. z.B. Altschul et al. (1990) Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215:403-410, und Altschul et al. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. Sequenzvergleiche (Alignments), insbesondere multiple Sequenzvergleiche, werden mit Computerprogrammen erstellt. Häufig genutzt werden beispielsweise die Clustal-Serie (vgl. z.B. Chenna et al. (2003) Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Res., 31 :3497-3500), T-Coffee (vgl. z.B. Notredame et al. (2000) T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments, J. Mol. Biol., 302:205-217) oder Programme, die auf diesen Programmen bzw. Algorithmen basieren. Ferner möglich sind Sequenzvergleiche (Alignments) mit dem Computer-Programm Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Kalifornien, USA) mit den vorgegebenen Standardparametern, dessen AlignX-Modul für die Sequenzvergleiche auf ClustalW basiert, oder Clone Manager 10 (Verwendung der Scoring Matrix BLOSUM 62 für Sequenz-Alignment auf Aminosäureebene). Soweit nicht anders angegeben, wird die hierin angegebene Sequenzidentität mit dem BLAST-Algorithmus bestimmt.
Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Proteins meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Proteins essenzielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, ggf. kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitäts- oder Homologieangaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet die Angabe, dass eine Aminosäureposition einer numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 entspricht daher, dass die entsprechende Position der numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 in einem wie oben definierten Alignment zugeordnet ist. Weiterhin richtet sich die Zuordnung der Positionen nach dem reifen (maturen) Protein. Diese Zuordnung ist insbesondere auch anzuwenden, wenn die Aminosäuresequenz einer erfindungsgemäßen Protease eine höhere Zahl von Aminosäureresten umfasst als die Protease gemäß SEQ ID NO:1 . Ausgehend von den genannten Positionen in der Aminosäuresequenz der Protease gemäß SEQ ID NO:1 sind die Veränderungspositionen in einer erfindungsgemäßen Protease diejenigen, die eben diesen Positionen in einem Alignment zugeordnet sind.
Für die Beschreibung von Substitutionen, die genau eine Aminosäureposition betreffen (Aminosäureaustausche), wird hierin folgende Konvention angewendet: zunächst wird die natürlicherweise vorhandene Aminosäure in Form des international gebräuchlichen Einbuchstaben- Codes bezeichnet, dann folgt die zugehörige Sequenzposition und schließlich die eingefügte Aminosäure. Mehrere oder alternative Austausche innerhalb derselben Polypeptidkette werden durch Schrägstriche voneinander getrennt. "130DA/" bedeutet somit, dass die Position 130 zu D oder V mutiert ist. Bei Insertionen sind nach der Sequenzposition zusätzliche Aminosäuren benannt. Bei Deletionen ist die fehlende Aminosäure durch ein Symbol, beispielsweise einen Stern oder einen Strich, ersetzt oder vor der entsprechenden Position ein A angegeben. Beispielsweise beschreibt P9T die Substitution von Prolin an Position 9 durch Threonin, P9TH die Insertion von Histidin nach der Aminosäure Threonin an Position 9 und P9* oder AP9 die Deletion von Prolin an Position 9. Diese Nomenklatur ist dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie bekannt.
Vorteilhafte Positionen für Sequenzveränderungen, insbesondere Substitutionen, der Protease gemäß SEQ ID NO:1 , die übertragen auf homologe Positionen der erfindungsgemäßen Proteasen bevorzugt von Bedeutung sind und der Protease vorteilhafte funktionelle Eigenschaften verleihen, sind demnach die Positionen, die in einem Alignment den hierin beschriebenen Positionen entsprechen, d.h. in der Zählung gemäß SEQ ID NO:1 . An den genannten Positionen liegen in dem Wildtypmolekül der Protease folgende Aminosäurereste: 3S, 4V, 74N, 99R, 136A, 143R, 154S, 160S, 161Y, 163A, 171V, 181A, 183F, 185Q, 199V, 200Q, 203Y, 209A, 212 N und 256L.
In einerweiteren Ausführungsform der Erfindung ist eine zuvor beschriebene Protease zusätzlich stabilisiert, insbesondere durch eine oder mehrere Mutationen, beispielsweise Substitutionen, oder durch Kopplung an ein Polymer. Eine Erhöhung der Stabilität bei der Lagerung und/oder während des Einsatzes, beispielsweise beim Waschprozess, führt dazu, dass die enzymatische Aktivität länger anhält und damit die Reinigungsleistung verbessert wird. Grundsätzlich kommen alle im Stand der Technik beschriebenen und/oder zweckmäßigen Stabilisierungsmöglichkeiten in Betracht. Bevorzugt sind solche Stabilisierungen, die über Mutationen des Enzyms selbst erreicht werden, da solche Stabilisierungen im Anschluss an die Gewinnung des Enzyms keine weiteren Arbeitsschritte erfordern. Beispiele für hierfür geeignete Sequenzveränderungen sind vorstehend genannt. Weitere geeignete Sequenzveränderungen sind aus dem Stand der Technik bekannt.
Weitere Möglichkeiten der Stabilisierung sind beispielsweise:
Veränderung der Bindung von Metallionen, insbesondere der Calcium-Bindungsstellen, beispielsweise durch Austauschen von einer oder mehreren der an der Calcium-Bindung beteiligten Aminosäure(n) gegen eine oder mehrere negativ geladene Aminosäuren und/oder durch Einführen von Sequenzveränderungen in mindestens einer der Folgen der beiden Aminosäuren Arginin/Glycin;
Schutz gegen den Einfluss von denaturierenden Agentien wie Tensiden durch Mutationen, die eine Veränderung der Aminosäuresequenz auf oder an der Oberfläche des Proteins bewirken;
Austausch von Aminosäuren, die nahe dem N-Terminus liegen, gegen solche, die vermutlich über nicht-kovalente Wechselwirkungen mit dem Rest des Moleküls in Kontakt treten und somit einen Beitrag zur Aufrechterhaltung der globulären Struktur leisten.
Bevorzugte Ausführungsformen sind solche, bei denen das Enzym auf mehrere Arten stabilisiert wird, da mehrere stabilisierende Mutationen additiv oder synergistisch wirken.
Ergänzend kann auch mindestens eine weitere Inhibitorverbindung, die aus der aus Polyolen, insbesondere Glycerin und 1 ,2-Propylenglykol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, enthalten sein.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird unter "Phenylboronsäurederivat" eine Verbindung mit der Formel (III) verstanden. Die Verbindung der Formel (III) weist folgende Strukturformel auf: wobei R Wasserstoff, eine Hydroxyl-, eine C1-6 Alkyl-, eine substituierte C1-6 Alkyl-, eine C1-6 Alkenyl oder eine substituierte C1-6 Alkenyl-Gruppe ist. Bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat eine C1-6 Alkyl-Gruppe und hierunter weiter bevorzugt -CH3, -CH3CH2 oder - CH3CH2CH2 sein. Weiter bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat Wasserstoff. Besonders bevorzugt ist das Phenylboronsäurederivat 4-Formyl-phenylboronsäure (4-FPBA).
Die eingesetzte weitere Inhibitorverbindung kann Borsäure sein.
Vorzugsweise ist das erfindungsgemäße Mittel im Wesentlichen frei von weiteren Inhibitorverbindungen. Ganz besonders bevorzugt umfasst das erfindungsgemäße Mittel neben den erfindungsgemäßen Verbindungen mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC- NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, keine der genannten weiteren Inhibitorverbindungen.
In besonders bevorzugten Ausführungsformen ist das erfindungsgemäße Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen. "Im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen" bedeutet in diesem Zusammenhang, dass die erfindungsgemäßen Mittel weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 1 Gew.-%, weiter bevorzugt weniger als 0,5 Gew.-% und besonders bevorzugt weniger als 0,1 Gew.-%, borhaltige Verbindungen, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, enthalten. In ganz besonders bevorzugten Ausführungsformen sind die erfindungsgemäßen Wasch- und Reinigungsmittel frei von borhaltigen Verbindungen, d.h. sie enthalten insbesondere keine Borsäure und/oder Phenylboronsäurederivate.
Dem Fachmann ist es über heutzutage allgemein bekannte Methoden, wie beispielsweise die chemische Synthese oder die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Verbindung mit molekularbiologischen und/oder proteinchemischen Standardmethoden möglich, anhand bekannter DNA- und/oder Aminosäuresequenzen die entsprechenden Nukleinsäuren bis hin zu vollständigen Genen herzustellen. Derartige Methoden sind beispielsweise aus Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. 2001. Molecular cloning: a laboratory manual, 3. Edition Cold Spring Laboratory Press, bekannt.
In einerweiteren Ausführungsform der Erfindung ist die erfindungsgemäß eingesetzte Protease dadurch gekennzeichnet, dass ihre Reinigungsleistung gegenüber derjenigen einer Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz entspricht, nicht signifikant verringert ist, d.h. mindestens 80% der Referenzwaschleistung besitzt, vorzugsweise mindestens 100%, weiter bevorzugt mindestens 110% oder mehr.
Unter wasch- bzw. Reinigungsleistung wird das Vermögen eines Wasch- oder Reinigungsmittels, eine vorhandene Anschmutzung teilweise oder vollständig zu entfernen, insbesondere die Aufhellungsleistung an einer oder mehreren Anschmutzungen auf Textilien, verstanden. Beispiele für solche Anschmutzungen sind Blut auf Baumwolle oder Schokolade-Milch/Ruß auf Baumwolle, Kakao auf Baumwolle oder Porridge auf Baumwolle. Im Rahmen der Erfindung weisen sowohl das Waschoder Reinigungsmittel, welches die Protease umfasst, bzw. die durch dieses Mittel gebildete Wasch- bzw. Reinigungsflotte, als auch die Protease selbst eine jeweilige Reinigungsleistung auf. Die Reinigungsleistung der Protease trägt somit zur Reinigungsleistung des Mittels bzw. der durch das Mittel gebildeten Wasch- bzw. Reinigungsflotte bei.
Unter wasch- bzw. Reinigungsflotte wird diejenige das Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltende Gebrauchslösung verstanden, die auf die Textilien bzw. harten Oberflächen einwirkt und damit mit den auf den Textilien bzw. harten Oberflächen vorhandenen Anschmutzungen in Kontakt kommt. Üblicherweise entsteht die Wasch- bzw. Reinigungsflotte, wenn der Wasch- bzw. Reinigungsvorgang beginnt und das Wasch- oder Reinigungsmittel z.B. in einer Wasch- oder Spülmaschine oder in einem anderen geeigneten Behältnis mit Wasser verdünnt wird.
Die Reinigungsleistung kann in einem Waschsystem bestimmt werden, das ein Waschmittel in einer Dosierung zwischen 2,0 und 8,0 Gramm pro Liter Waschflotte sowie das Enzym enthält. Die zu vergleichenden Enzyme werden konzentrationsgleich (bezogen auf aktives Protein) eingesetzt. Durch den aktivitätsgleichen Einsatz der jeweiligen Enzyme wird sichergestellt, dass auch bei einem etwaigen Auseinanderklaffen des Verhältnisses von Aktivsubstanz zu Gesamtprotein (die Werte der spezifischen Aktivität) die jeweiligen enzymatischen Eigenschaften, also z.B. die Reinigungsleistung an bestimmten Anschmutzungen, verglichen werden. Generell gilt, dass eine niedrige spezifische Aktivität durch Zugabe einer größeren Proteinmenge ausgeglichen werden kann. Ferner können die zu untersuchenden Enzyme auch in gleicher Stoffmenge oder Gewichtsmenge eingesetzt werden, falls die zu untersuchenden Enzyme in einem Aktivitätstest eine unterschiedliche Affinität an das Testsubstrat aufweisen. Der Ausdruck "gleiche Stoffmenge" bezieht sich in diesem Zusammenhang auf eine molgleiche Verwendung der zu untersuchenden Enzyme. Der Ausdruck "gleiche Gewichtsmenge" bezieht sich auf einen gewichtsgleichen Einsatz der zu untersuchenden Enzyme.
Die Konzentration der Protease in dem für ein solches Waschsystem bestimmten Waschmittel beträgt 0,001 bis 0,1 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 0,06 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein.
Ein flüssiges Referenzwaschmittel für ein solches Waschsystem kann z.B. wie folgt zusammengesetzt sein (alle Angaben in Gewichts-Prozent (Gew.-%)): 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% weitere anionische Tenside, 2,4% C12-18 Na-Salze von Fettsäuren (Seifen), 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1 ,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01 % Entschäumer, 2% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1 % Ethanol, Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 6,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,7, 4,9 oder 5,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 7 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 8 und pH 9.
Die Reinigungsleistung wird gegenüber einer Anschmutzung auf Baumwolle durch Messung des Reinigungsgrades der gewaschenen Textilien bestimmt. Beispielsweise kann der Waschvorgang für 60 Minuten bei einer Temperatur von 40°C erfolgen und das Wasser eine Wasserhärte zwischen 15,5°dH und 16,5°dH (deutsche Härte) aufweisen.
Der Weißegrad, d.h. die Aufhellung der Anschmutzungen, als Maß für die Reinigungsleistung wird mit optischen Messverfahren bestimmt, bevorzugt photometrisch. Ein hierfür geeignetes Gerät ist beispielsweise das Spektrometer Minolta CM508d. Üblicherweise werden die für die Messung eingesetzten Geräte zuvor mit einem Weißstandard, bevorzugt einem mitgelieferten Weißstandard, kalibriert.
Bevorzugte Ausführungsformen erfindungsgemäßer Proteasen erzielen solche vorteilhaften Reinigungsleistungen auch schon bei niedrigen Temperaturen, insbesondere in den Temperaturbereichen zwischen 10°C und 60°C, bevorzugt zwischen 15°C und 50°C und besonders bevorzugt zwischen 20°C und 40°C. Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2‘-Bichinolyl-4,4‘-dicarbonsäure) oder dem Biuret- Verfahren (Gornall et al., 1948, J. Biol. Chem., 177:751-766) bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration kann diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors und Bestimmung der Restaktivität (Bender et al., 1966, J. Am. Chem. Soc. 88, 24:5890-5913) erfolgen.
Unter einem Wasch- oder Reinigungsmittel sind erfindungsgemäß alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsmittelarten zu verstehen, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder bei der Handwäsche bzw. -reinigung. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Dazu gehören beispielsweise auch Geschirrspülmittel für Geschirrspülmaschinen (maschinelle Geschirrspülmittel) oder manuelle Geschirrspülmittel oder Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder, für die die Bezeichnung Reinigungsmittel verwendet wird, also neben manuellen und maschinellen Geschirrspülmitteln beispielsweise auch Scheuermittel, Glasreiniger, WC-Duftspüler, usw. Zu den Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung zählen ferner Waschhilfsmittel, die bei der manuellen oder maschinellen Textilwäsche zum eigentlichen Waschmittel hinzudosiert werden, um eine weitere Wirkung zu erzielen. Ferner zählen zu Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung auch Textilvor- und Nachbehandlungsmittel, also solche Mittel, mit denen das Wäschestück vor der eigentlichen Wäsche in Kontakt gebracht wird, beispielsweise zum Anlösen hartnäckiger Verschmutzungen, und auch solche Mittel, die in einem der eigentlichen Textilwäsche nachgeschalteten Schritt dem Waschgut weitere wünschenswerte Eigenschaften wie angenehmen Griff, Knitterfreiheit oder geringe statische Aufladung verleihen. Zu letztgenannten Mittel werden u.a. die Weichspüler gerechnet.
Die erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel, die als pulverförmige oder granuläre Feststoffe, in verdichteter oder nachverdichteter Teilchenform, als homogene Lösungen oder Suspensionen vorliegen können, können neben einer erfindungsgemäßen Protease alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Die erfindungsgemäßen Mittel können insbesondere Tenside, Builder (Gerüststoffe), Polymere, Glaskorrosionsinhibitoren, Korrosionsinhibitoren, Bleichmittel wie Persauerstoffverbindungen, Bleichaktivatoren oder Bleichkatalysatoren enthalten. Ferner können sie wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Enzymstabilisatoren, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren und/oder weitere Hilfsstoffe wie optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Färb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthalten.
Vorteilhafte Inhaltsstoffe erfindungsgemäßer Mittel sind offenbart in der internationalen Patentanmeldung WO 2009/121725, dort beginnend auf Seite 5, vorletzter Absatz, und endend auf Seite 13 nach dem zweiten Absatz. Auf diese Offenbarung wird ausdrücklich Bezug genommen und der dortige Offenbarungsgehalt in die vorliegende Patentanmeldung einbezogen. Ein erfindungsgemäßes Mittel enthält die erfindungsgemäße Protease vorteilhafterweise in einer Menge von 2 pg bis 20 mg, vorzugsweise von 5 pg bis 17,5 mg, besonders bevorzugt von 20 pg bis 15 mg und ganz besonders bevorzugt von 50 pg bis 10 mg pro g des Mittels. In verschiedenen Ausführungsformen beträgt die Konzentration der hierin beschriebenen Protease (aktives Enzym) in dem Mittel >0 bis 1 Gew.-%, vorzugsweise 0,0001 oder 0,001 bis 0,1 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels oder der Zusammensetzung.
Ein erfindungsgemäßes Mittel enthält die Protease zunehmend bevorzugt in einer Menge von 1 x 10-8 bis 5 Gew.-%, von 0,0001 bis 1 Gew.-%, von 0,0005 bis 0,5 Gew.-%, von 0,001 bis 0,1 Gew.-%, jeweils bezogen auf aktives Protein und bezogen auf das Gesamtgewicht des Waschmittels.
Die Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle festen, pulverförmigen, flüssigen, gelförmigen oder pastösen Darreichungsformen erfindungsgemäßer Mittel, die ggf. auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. Das Mittel kann als rieselfähiges Pulver vorliegen, insbesondere mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l. Zu den festen Darreichungsformen des Mittels zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches. Alternativ kann das Mittel auch flüssig, gelförmig oder pastös sein, beispielsweise in Form eines nicht-wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Flüssige Mittel sind generell bevorzugt. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt.
Wenn die erfindungsgemäßen Waschmittel in flüssiger Form vorliegen, enthalten sie vorzugsweise bezogen auf ihr Gesamtgewicht mehr als 40 Gew.-%, vorzugsweise 50 bis 90 Gew.-% und besonders bevorzugt 60 bis 80 Gew.-% Wasser.
Die erfindungsgemäßen Mittel können ein oder mehrere Tenside enthalten, wobei insbesondere anionische Tenside, nichtionische Tenside und deren Gemische in Frage kommen, aber auch kationische, zwitterionische und/oder amphotere Tenside können enthalten sein. Die Mittel enthalten vorzugsweise 5 bis 70 Gew.-% Tensid, bevorzugt 5 bis 60 Gew.-% und weiter bevorzugt 5 bis 50 Gew.-% Tensid.
Geeignete anionische Tenside sind insbesondere Seifen und solche, die Sulfat- oder Sulfonat- Gruppen mit bevorzugt Alkaliionen als Kationen enthalten. Verwendbare Seifen sind bevorzugt die Alkalisalze der gesättigten oder ungesättigten Ci2-18-Fettsäuren. Derartige Fettsäuren können auch in nicht vollständig neutralisierter Form eingesetzt werden. Zu den brauchbaren Tensiden des Sulfat- Typs gehören die Salze der Schwefelsäurehalbester von Ci2-18-Fettalkoholen und die Sulfatierungsprodukte der genannten nichtionischen Tenside mit niedrigem Ethoxylierungsgrad. Zu den verwendbaren Tensiden vom Sulfonat-Typ gehören z.B. Cg-u-Alkylbenzolsulfonate, Alkansulfonate, die aus Ci2-is-Alkanen z.B. durch Sulfochlorierung oder Sulfoxidation mit anschließender Hydrolyse bzw. Neutralisation gewonnen werden, Ci2-18-Olefinsulfonate, die bei der Umsetzung entsprechender Monoolefine mit Schwefeltrioxid entstehen, Gemische aus Alken- und Hydroxyalkansulfonaten, Disulfonaten, wie man sie z.B. aus Ci2-18-Monoolefinen mit end- oder innenständigen Doppelbindung durch Sulfonieren mit gasförmigem Schwefeltrioxid und anschließende alkalische oder saure Hydrolyse der Sulfonierungsprodukte erhält, sowie a-Sulfofettsäureester (Estersulfonate), die bei der Sulfonierung von Fettsäuremethyl- oder -ethylestern entstehen, z.B. a- sulfonierte Methylester der hydrierten Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren.
Vorzugsweise weist das Mittel 2 bis 55 Gew.-%, vorzugsweise 3 bis 35 Gew.-%, Aniontensid auf. Ganz besonders bevorzugt weist das Mittel 3 bis 25 Gew.-% Alkylbenzolsulfonat auf. Darüber hinaus kann das Mittel vorzugsweise noch weitere anionische Tenside, insbesondere Alkylethersulfate, sowie nichtionische Tenside, insbesondere Fettalkoholalkoxylate, enthalten. Diese können dann den Rest der Tenside ausmachen.
Geeignete Alkylbenzolsulfonate sind vorzugsweise ausgewählt aus linearen oder verzweigten Alkylbenzolsulfonaten der Formel in der R' und R" unabhängig H oder Alkyl sind und zusammen 6 bis 19, vorzugsweise 7 bis 15 und insbesondere 9 bis 13 C-Atome enthalten. Ein ganz besonders bevorzugter Vertreter ist Natriumdodecylbenzylsulfonat.
Als Alk(en)ylsulfate werden die Alkali- und insbesondere die Natriumsalze der Schwefelsäurehalbester der Ci2-18-Fettalkohole, z.B. aus Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder der Cw-20-Oxoalkohole und diejenigen Halbester sekundärer Alkohole dieser Kettenlängen bevorzugt. Weiterhin bevorzugt sind Alk(en)ylsulfate der genannten Kettenlänge, welche einen synthetischen, auf petrochemischer Basis hergestellten geradkettigen Alkylrest enthalten, die ein analoges Abbauverhalten besitzen wie die adäquaten Verbindungen auf der Basis von fettchemischen Rohstoffen. Aus waschtechnischem Interesse sind die Ci2-ie-Alkylsulfate und Ci2-15-Alkylsulfate sowie Cu-is-Alkylsulfate bevorzugt.
Auch die Schwefelsäuremonoester der mit 1 bis 6 Mol Ethylenoxid ethoxylierten geradkettigen oder verzweigten Cy-2i-Alkohole, wie 2-Methyl-verzweigte Cg-n-Alkohole mit im Durchschnitt 3,5 Mol Ethylenoxid (EO) oder Ci2-18-Fettalkohole mit 1 bis 4 EO, sind geeignet.
Geeignete Alkylethersulfate sind z.B. Verbindungen der Formel
R1-O-(AO)n-SO3- X+.
In dieser Formel steht R1 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R1 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl-, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R1 sind abgeleitet von Ci2-is-Fettalkoholen, z.B. von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von Cw-20-Oxoalkoholen. AO steht für eine Ethylenoxid-(EO) oder Propylenoxid-(PO)-Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung. Der Index n steht für eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt steht n für die Zahlen 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. X+ steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen X+ können ausgewählt sein aus NF , % Zn2+, % Mg2+, % Ca2+, % Mn2+ und deren Mischungen.
In verschiedenen Ausführungsformen kann das Alkylethersulfat ausgewählt sein aus Fettalkoholethersulfaten der Formel mit k = 11 bis 19, n = 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. Ganz besonders bevorzugte Vertreter sind Na-Ci2-14- Fettalkoholethersulfate mit 2 EO (k = 11-13, n = 2). Der angegebenen Ethoxylierungsgrad stellt einen statistischen Mittelwert dar, der für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein kann. Die angegebenen Alkoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. Bevorzugte Alkoxylate/Ethoxylate weisen eine eingeengte Homologenverteilung auf (narrow range ethoxylates, NRE).
Es hat sich für die Kaltwaschleistung als vorteilhaft erwiesen, wenn die Waschmittel zusätzlich Seife(n) enthalten. Bevorzugte Waschmittel sind daher dadurch gekennzeichnet, dass sie Seife(n) enthalten. Geeignet sind gesättigte Fettsäureseifen, wie die Salze der Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, hydrierte Erucasäure und Behensäure sowie insbesondere aus natürlichen Fettsäuren, z.B. Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren, abgeleitete Seifengemische.
Geeignete nichtionische Tenside sind insbesondere Alkylglykoside und Ethoxylierungs- und/oder Propoxylierungsprodukte von Alkylglykosiden oder linearen oder verzweigten Alkoholen mit jeweils 8 bis etwa 18 C-Atomen im Alkylteil und 3 bis 20, vorzugsweise 4 bis 10 Alkylethergruppen. Weiterhin sind entsprechende Ethoxylierungs- und/oder Propoxylierungsprodukte von N-Alkylaminen, vicinalen Diolen, Fettsäureestern und Fettsäureamiden, die hinsichtlich des Alkylteils den genannten langkettigen Alkoholderivaten entsprechen, sowie von Alkylphenolen mit 5 bis 12 C-Atomen im Alkylrest brauchbar.
Als nichtionische Tenside werden vorzugsweise alkoxylierte, vorteilhafterweise ethoxylierte, insbesondere primäre Alkohole mit vorzugsweise 8 bis 18 C-Atomen und durchschnittlich 1 bis 12 Mol Ethylenoxid (EO) pro Mol Alkohol eingesetzt, in denen der Alkoholrest linear oder bevorzugt in 2- Stellung methylverzweigt sein kann bzw. lineare und methylverzweigte Reste im Gemisch enthalten kann, so wie sie üblicherweise in Oxoalkoholresten vorliegen. Insbesondere sind jedoch Alkoholethoxylate mit linearen Resten aus Alkoholen nativen Ursprungs mit 12 bis 18 C-Atomen, z.B. aus Kokos-, Palm-, Talgfett- oder Oleylalkohol, und durchschnittlich 2 bis 8 EO pro Mol Alkohol bevorzugt. Zu den bevorzugten ethoxylierten Alkoholen gehören z.B. Ci2-14-Alkohole mit 3 EO oder 4 EO, Cg-n-Alkohol mit 7 EO, C -is-Alkohole mit 3 EO, 5 EO, 7 EO oder 8 EO, Ci2-is-Alkohole mit 3 EO, 5 EO oder 7 EO und Mischungen aus diesen, wie Mischungen aus Ci2-14-Alkohol mit 3 EO und C12-18- Alkohol mit 5 EO. Die angegebenen Ethoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. Bevorzugte Alkoholethoxylate weisen eine eingeengte Homologenverteilung auf (narrow range ethoxylates, NRE). Zusätzlich zu diesen nichtionischen Tensiden können auch Fettalkohole mit mehr als 12 EO eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind Talgfettalkohol mit 14 EO, 25 EO, 30 EO oder 40 EO.
Eine weitere Klasse bevorzugt eingesetzter nichtionischer Tenside, die entweder als alleiniges nichtionisches Tensid oder in Kombination mit anderen nichtionischen Tensiden eingesetzt werden, sind alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder ethoxylierte und propoxylierte Fettsäurealkylester, vorzugsweise mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette, insbesondere Fettsäuremethylester.
Eine weitere Klasse von nichtionischen Tensiden, die vorteilhaft eingesetzt werden kann, sind die Alkylpolyglycoside (APG). Einsetzbare Alkylpolyglycoside genügen der allgemeinen Formel
RO(G)z, in der R für einen linearen oder verzweigten, insbesondere in 2-Stellung methylverzweigten, gesättigten oder ungesättigten, aliphatischen Rest mit 8 bis 22, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen bedeutet und G das Symbol ist, das für eine Glykoseeinheit mit 5 oder 6 C-Atomen, vorzugsweise für Glucose, steht. Der Glycosidierungsgrad z liegt dabei zwischen 1 und 4, vorzugsweise zwischen 1 und 2 und insbesondere zwischen 1 ,1 und 1 ,4. Bevorzugt eingesetzt werden lineare Alkylpolyglycoside, also Alkylpolyglycoside, in denen der Polyglycosylrest ein Glucoserest und der Alkylrest ein n-Alkylrest ist.
Auch nichtionische Tenside vom Typ der Aminoxide, z.B. N-Kokosalkyl-N,N-dimethylaminoxid und N-Talgalkyl-N,N-dihydroxyethylaminoxid, und der Fettsäurealkanolamide können geeignet sein. Die Menge dieser nichtionischen Tenside beträgt vorzugsweise nicht mehr als die der ethoxylierten Fettalkohole, insbesondere nicht mehr als die Hälfte davon.
Geeignete Amphotenside sind z.B. Betaine der Formel
(Riii)(Riv)(Rv)N+CH2COO-, in der R'" einen ggf. durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und Riv sowie Rv gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere C10-18- Alkyldimethylcarboxymethylbetain und Cn-17-Alkylamidopropyldimethylcarboxymethylbetain.
Geeignete kationische Tenside sind u.a. die quartären Ammoniumverbindungen der Formel (Rvi)(Rvii)(Rviii)(Rix)N+X-, in der Rvi bis Rix für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X- für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, z.B. Didecyldimethylammoniumchlorid, Alkylbenzyldidecylammoniumchlorid und deren Mischungen. Weitere geeignete kationische Tenside sind die quaternären oberflächenaktiven Verbindungen, insbesondere mit einer Sulfonium-, Phosphonium-, Jodonium- oder Arsoniumgruppe, die auch als antimikrobielle Wirkstoffe bekannt sind. Durch den Einsatz von quaternären oberflächenaktiven Verbindungen mit antimikrobieller Wirkung kann das Mittel mit einer antimikrobiellen Wirkung ausgestaltet werden bzw. dessen ggf. aufgrund anderer Inhaltsstoffe bereits vorhandene antimikrobielle Wirkung verbessert werden. Ein weiterer bevorzugter Bestandteil erfindungsgemäßer Waschmittel sind Komplexbildner. Besonders bevorzugte Komplexbildner sind die Phosphonate, sofern ihr Einsatz regulatorisch zulässig ist. Die komplexbildenden Phosphonate umfassen neben der 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure eine Reihe unterschiedlicher Verbindungen, wie z.B. Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP). In dieser Anmeldung bevorzugt sind insbesondere Hydroxyalkan- bzw. Aminoalkanphosphonate. Unter den Hydroxyalkanphosphonaten ist das 1-Hydroxyethan-1 ,1- diphosphonat (HEDP) von besonderer Bedeutung als Cobuilder. Es wird vorzugsweise als Natriumsalz eingesetzt, wobei das Dinatriumsalz neutral und das Tetranatriumsalz alkalisch (pH 9) reagiert. Als Aminoalkanphosphonate kommen vorzugsweise Ethylendiamintetramethylenphosphonat (EDTMP), Diethylentriaminpentamethylenphosphonat (DTPMP) sowie deren höhere Homologe in Frage. Sie werden vorzugsweise in Form der neutral reagierenden Natriumsalze, z.B. als Hexanatriumsalz der EDTMP bzw. als Hepta- und Octa-Natriumsalz der DTPMP, eingesetzt. Als Builder wird dabei aus der Klasse der Phosphonate bevorzugt HEDP verwendet. Die Aminoalkanphosphonate besitzen zudem ein ausgeprägtes Schwermetallbindevermögen. Dementsprechend kann es, insbesondere wenn die Mittel auch Bleiche enthalten, bevorzugt sein, Aminoalkanphosphonate, insbesondere DTPMP, einzusetzen, oder Mischungen aus den genannten Phosphonaten zu verwenden. Ein im Rahmen dieser Anmeldung bevorzugtes Waschmittel enthält ein oder mehrere Phosphonat(e) aus der Gruppe Aminotrimethylenphosphonsäure (ATMP) und/oder deren Salze; Ethylendiamintetra(methylenphosphonsäure) (EDTMP) und/oder deren Salze;
Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP) und/oder deren Salze; 1-Hydroxyethan-1 ,1- diphosphonsäure (HEDP) und/oder deren Salze; 2-Phosphonobutan-1 ,2,4-tricarbonsäure (PBTC) und/oder deren Salze; Hexamethylendiamintetra(methylenphosphonsäure) (HDTMP) und/oder deren Salze; Nitrilotri(methylenphosphonsäure) (NTMP) und/oder deren Salze. Besonders bevorzugt sind Waschmittel, welche als Phosphonate 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure (HEDP) oder Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP) enthalten. Selbstverständlich können die erfindungsgemäßen Waschmittel zwei oder mehr unterschiedliche Phosphonate enthalten. Bevorzugte erfindungsgemäße Waschmittel sind dadurch gekennzeichnet, dass das Waschmittel mindestens einen Komplexbildner aus der Gruppe der Phosphonate, vorzugsweise 1-Hydroxyethan- 1 ,1-diphosphonat, enthält, wobei der Gewichtsanteil des Phosphonat am Gesamtgewicht des Waschmittels vorzugsweise 0,1 und 8,0 Gew.-%, bevorzugt 0,2 und 5,0 Gew.-%, weiter bevorzugt 0,3 und 3,0 Gew.-% und besonders bevorzugt 0, 5-2,0 Gew.-% beträgt.
Die erfindungsgemäßen Waschmittel enthalten weiterhin vorzugsweise Gerüststoff (Builder), vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder. Zu den Gerüststoffe zählen dabei insbesondere die Silikate, Carbonate und organische Cobuilder.
Als organische Cobuilder sind insbesondere Polycarboxylate/Polycarbonsäuren, polymere Polycarboxylate, Asparaginsäure, Polyacetale, Dextrine, weitere organische Cobuilder sowie Phosphonate zu nennen. Diese Stoffklassen werden nachfolgend beschrieben. Organische Cobuildersubstanzen können gewünschtenfalls in Mengen bis zu 40 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-% und vorzugsweise von 1 bis 8 Gew.-% enthalten sein. Brauchbare organische Gerüstsubstanzen sind z.B. die in Form der freien Säure und/oder ihrer Natriumsalze einsetzbaren Polycarbonsäuren, wobei unter Polycarbonsäuren solche Carbonsäuren verstanden werden, die mehr als eine Säurefunktion tragen. Beispielsweise sind dies Citronensäure, Adipinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Zuckersäuren und Carboxymethylinuline, monomere und polymere Aminopolycarbonsäuren, insbesondere Glycindiessigsäure, Methylglycindiessigsäure, Glutamindiessigsäure, Nitrilotriessigsäure (NTA), Iminodisuccinat wie Ethylendiamin-N,N'-dibernsteinsäure und Hydroxyiminodisuccinate, Ethylendiamintetraessigsäure sowie Polyasparaginsäure, Polyphosphonsäuren, insbesondere Aminotris(methylenphosphonsäure), Ethylendiamintetrakis(methylenphosphonsäure), Lysintetra(methylenphosphosäure) und 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure, polymere Hydroxyverbindungen wie Dextrin sowie polymere (Poly)carbonsäuren, insbesondere durch Oxidation von Polysacchariden bzw. Dextrinen zugängliche Polycarboxylate, und/oder polymere Acrylsäuren, Methacrylsäuren, Maleinsäuren und Mischpolymere aus diesen, die auch geringe Anteile polymerisierbarer Substanzen ohne Carbonsäurefunktionalität einpolymerisiert enthalten können. Derartige organische Buildersubstanzen können gewünschtenfalls in Mengen bis zu 50 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-%, vorzugsweise von 10 bis 20 Gew.-% und besonders bevorzugt von 1 bis 5 Gew.-% enthalten sein. Die freien Säuren besitzen neben ihrer Builderwirkung typischerweise auch die Eigenschaft einer Säuerungskomponente und dienen somit auch zur Einstellung eines niedrigeren und milderen pH-Wertes von Waschmitteln. Insbesondere sind hierbei Citronensäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Gluconsäure und beliebige Mischungen aus diesen zu nennen. Mit besonderem Vorzug wird als Gerüstsubstanz die Citronensäure oder Salze der Citronensäure eingesetzt. Weitere besonders bevorzugte Gerüstsubstanzen sind ausgewählt unter Methylglycindiessidsäure (MGDA), Glutaminsäurediacetat (GLDA), Asparaginsäurediacetat (ASDA), Hydroxyethyliminodiacetat (HEIDA), Iminodisuccinat (IDS) und Ethylendiamindisuccinat (EDDS), Carboxymethylinulin und Polyaspartat. In bevorzugten Ausführungsformen wird als wasserlöslicher, organischer Builder Citronensäure und/oder Citrat eingesetzt. Besonders bevorzugt ist der Einsatz von 0,5 bis 25 Gew.-%, vorzugsweise 0,75 bis 12,5 Gew.-%, weiter bevorzugt 1 bis 4 Gew.-% Citronensäure und/oder 0,5 bis 25 Gew.-%, vorzugsweise 0,75 bis 12,5 Gew.-%, weiter bevorzugt 1 bis 4 Gew.-% Citrat, vorzugsweise Alkalicitrat, noch bevorzugter Natriumcitrat. Citronensäure/Citrat können jeweils in Form ihrer Hydrate eingesetzt werden, so kann z.B. Citronensäure in Form des Monohydrats, Citrat in Form des Trinatriumcitratdihydrats eingesetzt werden.
Als Gerüststoffe sind weiter polymere Polycarboxylate geeignet, dies sind z.B. die Alkalimetallsalze der Polyacrylsäure oder der Polymethacrylsäure, z.B. solche mit einer relativen Molekülmasse von 500 bis 70000 g/mol. Bei den für polymere Polycarboxylate angegebenen Molmassen handelt es sich im Sinne dieser Anmeldung um gewichtsmittlere Molmassen Mw der jeweiligen Säureform, die grundsätzlich mittels Gelpermeationschromatographie (GPC) bestimmt wurden, wobei ein UV-Detektor eingesetzt wurde. Die Messung erfolgte dabei gegen einen externen Polyacrylsäure-Standard, der aufgrund seiner strukturellen Verwandtschaft mit den untersuchten Polymeren realistische Molgewichtswerte liefert. Diese Angaben weichen deutlich von den Molgewichtsangaben ab, bei denen Polystyrolsulfonsäuren als Standard eingesetzt werden. Die gegen Polystyrolsulfonsäuren gemessenen Molmassen sind in der Regel deutlich höher als die in dieser Anmeldung angegebenen Molmassen. Geeignete Polymere sind insbesondere Polyacrylate, die bevorzugt eine Molekülmasse von 2000 bis 20000 g/mol aufweisen. Aufgrund ihrer überlegenen Löslichkeit können aus dieser Gruppe wiederum die kurzkettigen Polyacrylate, die Molmassen von 2000 bis 10000 g/mol, und besonders bevorzugt von 3000 bis 5000 g/mol, aufweisen, bevorzugt sein. Geeignet sind weiterhin copolymere Polycarboxylate, insbesondere solche der Acrylsäure mit Methacrylsäure und der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Maleinsäure. Als besonders geeignet haben sich Copolymere der Acrylsäure mit Maleinsäure erwiesen, die 50 bis 90 Gew.-% Acrylsäure und 50 bis 10 Gew.-% Maleinsäure enthalten. Ihre relative Molekülmasse, bezogen auf freie Säuren, beträgt im Allgemeinen 2000 bis 70000 g/mol, vorzugsweise 20000 bis 50000 g/mol und insbesondere 30000 bis 40000 g/mol.
Ein erfindungsgemäßes festes Mittel enthält vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder. Zu den wasserlöslichen organischen Buildersubstanzen gehören die oben genannten organischen Gerüstsubstanzen.
Zusätzlich zu den vorstehend genannten wasserlöslichen organischen Buildern, können die Mittel der Erfindung weiterhin auch anorganische wasserlösliche Builder enthalten. Als wasserlösliche anorganische Buildermaterialien kommen insbesondere Alkalisilikate, Alkalicarbonate, Alkalihydrogenbarbonate, Alkaliphosphate und/oder Sesquicarbonate, die in Form ihrer alkalischen, neutralen oder sauren Natrium- oder Kaliumsalze vorliegen können, in Betracht. Ggf. können auch geringe Mengen an Calciumcarbonate in festen Textilwaschmitteln enthalten sein. Geeignet sind z.B. wasserlöslichen kristalline und/oder amorphe Alkalisilikate. Die in den erfindungsgemäßen Mitteln als Gerüststoffe brauchbaren Alkalisilikate weisen vorzugsweise ein molares Verhältnis von Alkalioxid zu SiO2 unter 0,95, insbesondere von 1 :1 ,1 bis 1 :12 auf und können amorph oder kristallin vorliegen. Bevorzugte Alkalisilikate sind die Natriumsilikate, insbesondere die amorphen Natriumsilikate, mit einem molaren Verhältnis Na2O:SiO2 von 1 :2 bis 1 :2,8. Als kristalline Silikate, die allein oder im Gemisch mit amorphen Silikaten vorliegen können, werden vorzugsweise kristalline Schichtsilikate der allgemeinen Formel Na2SixO2x+i • y H2O eingesetzt, in der x, das sogenannte Modul, eine Zahl von 1 ,9 bis 22, insbesondere 1 ,9 bis 4 und y eine Zahl von 0 bis 33 ist und bevorzugte Werte für x 2, 3 oder 4 sind. Bevorzugte kristalline Schichtsilikate sind solche, bei denen x in der genannten allgemeinen Formel die Werte 2 oder 3 annimmt. Insbesondere sind sowohl ß- als auch ö-Natriumdisilikate (Na2Si2Os • y H2O) bevorzugt. Auch aus amorphen Alkalisilikaten hergestellte, praktisch wasserfreie kristalline Alkalisilikate der oben genannten allgemeinen Formel, in der x eine Zahl von 1 ,9 bis 2,1 bedeutet, können in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt werden. In einer weiteren Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel wird ein kristallines Natriumschichtsilikat mit einem Modul von 2 bis 3 eingesetzt, wie es aus Sand und Soda hergestellt werden kann. Kristalline Natriumsilikate mit einem Modul im Bereich von 1 ,9 bis 3,5 werden in einer weiteren Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel eingesetzt. In Mitteln, die sowohl amorphe als auch kristalline Alkalisilikate enthalten, beträgt das Gewichtsverhältnis von amorphem Alkalisilikat zu kristallinem Alkalisilikat vorzugsweise 1 :2 bis 2:1 und insbesondere 1 :1 bis 2:1 . Kristalline schichtförmige Silikate der oben angegebenen Formel (I) werden von der Fa. Clariant GmbH unter dem Handelsnamen Na-SKS vertrieben, z.B. Na-SKS-1 (Na2Si22O45 • x H2O, Kenyait), Na-SKS-2 (Na2Sii4O29 • x H2O, Magadiit), Na- SKS-3 (Na2SisOi7 • x H2O) oder Na-SKS-4 (Na2Si4Og • x H2O, Makatit). Von diesen eignen sich vor allem Na-SKS-5 (a-Na2Si2O5), Na-SKS-7 (ß-Na2Si2O5, Natrosilit), Na-SKS-9 (NaHShOs • 3 H2O), Na- SKS-10 (NaHShOs • 3 H2O, Kanemit), Na-SKS-11 (t-Na2Si2O5) und Na-SKS-13 (NaHSi2O5), insbesondere aber Na-SKS-6 (ö-Na2Si2Os). In einer Ausgestaltung erfindungsgemäßer Mittel setzt man ein granuläres Compound aus kristallinem Schichtsilikat und Citrat, aus kristallinem Schichtsilikat und oben genannter (co-)polymerer Polycarbonsäure, oder aus Alkalisilikat und Alkalicarbonat ein, wie es z.B. unter dem Namen Nabion® 15 im Handel erhältlich ist. Derartige wasserlösliche anorganischen Buildermaterialien sind in den erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise in Mengen von 1 bis 20 Gew.-%, insbesondere 5 bis 15 Gew.-%, enthalten. Des Weiteren sind als wasserlösliche anorganische Buildersubstanzen noch die Carbonate (und hyodrogencarbonate), insbesondere Natriumcarbonat, und die Phosphonsäuren/Phosphonate von Bedeutung.
Die erfindungsgemäßen Mittel sind vorzugsweise frei von Phosphat-Builder, d.h. enthalten weniger als 1 Gew.-%, bevorzugt keinen bewusst zugegebenen Phosphat-Builder.
Die Mittel können ferner auch wasserunlösliche Buildersubstanzen enthalten. Als wasserunlösliche anorganische Buildermaterialien werden insbesondere kristalline oder amorphe wasserdispergierbare Alkalialumosilikate, in Mengen von bis zu 50 Gew.-%, vorzugsweise nicht über 40 Gew.-%, insbesondere von 3 bis 20 Gew.-% und besonders bevorzugt von 1 bis 15 Gew.-%, eingesetzt. Unter diesen sind die kristallinen Natriumalumosilikate in Waschmittelqualität, insbesondere Zeolith A, Zeolith P, Zeolith MAP und ggf. Zeolith X, allein oder in Mischungen, z.B. in Form eines Co-Kristallisats aus den Zeolithen A und X (Vegobond® AX, ein Handelsprodukt der Condea Augusta S.p.A.), bevorzugt. Mengen nahe der genannten Obergrenze werden vorzugsweise in festen, teilchenförmigen Mitteln eingesetzt. Geeignete Alumosilikate weisen insbesondere keine Teilchen mit einer Korngröße über 30 pm auf und bestehen vorzugsweise zu wenigstens 80 Gew.-% aus Teilchen mit einer Größe unter 10 pm. Ihr Calciumbindevermögen, das gemäß DE 2412837 A1 bestimmt werden kann, liegt in der Regel im Bereich von 100 bis 200 mg CaO pro Gramm.
In Ergänzung zu den zuvor beschriebenen Gerüststoffen können in dem Waschmittel reinigungsaktive Polymere enthalten sein. Der Gewichtsanteil der reinigungsaktiven Polymere am Gesamtgewicht erfindungsgemäßer Waschmittel beträgt vorzugsweise 0,1 bis 20 Gew.-%, vorzugsweise 1 ,0 bis 15 Gew.-% und weiter bevorzugt 2,0 bis 12 Gew.-%.
Als für den Einsatz in erfindungsgemäßen Mitteln geeignete Persauerstoffverbindungen kommen insbesondere organische Persäuren bzw. persaure Salze organischer Säuren, wie Phthalimidopercapronsäure, Perbenzoesäure oder Salze der Diperdodecandisäure, Wasserstoffperoxid und unter den Waschbedingungen Wasserstoffperoxid abgebende anorganische Salze, zu denen Perborat, Percarbonat, Persilikat und/oder Persulfat wie Caroat gehören, sowie Wasserstoffperoxid-Einschlussverbindungen, wie H2G2-Harnstoffaddukte, in Betracht. Wasserstoffperoxid kann dabei auch mit Hilfe eines enzymatischen Systems, d.h. einer Oxidase und ihres Substrates, erzeugt werden. Sofern feste Persauerstoffverbindungen eingesetzt werden sollen, können diese in Form von Pulvern oder Granulaten verwendet werden, die auch in im Prinzip bekannter Weise umhüllt sein können. Die Persauerstoffverbindungen können als solche oder in Form diese enthaltender Mittel, die prinzipiell alle üblichen Wasch-, Reinigungs- oder Desinfektionsmittelbestandteile enthalten können, zu der Waschlauge zugegeben werden. Besonders bevorzugt wird Alkalipercarbonat oder Alkaliperborat-Monohydrat eingesetzt. Falls ein erfindungsgemäßes Mittel Persauerstoffverbindungen enthält, sind diese in Mengen von vorzugsweise bis zu 50 Gew.-%, insbesondere von 5 bis 30 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,1 bis 20 Gew.-% vorhanden.
Als Bleichaktivatoren können in den Mitteln Verbindungen, die unter Perhydrolysebedingungen aliphatische Peroxocarbonsäuren mit vorzugsweise 1 bis 10 C-Atomen, insbesondere 2 bis 4 C- Atomen, und/oder ggf. substituierte Perbenzoesäure ergeben, eingesetzt werden. Geeignet sind Substanzen, die O- und/oder N-Acylgruppen der genannten C-Atomzahl und/oder ggf. substituierte Benzoylgruppen tragen. Bevorzugt sind mehrfach acylierte Alkylendiamine, insbesondere Tetraacetylethylendiamin (TAED), acylierte Triazinderivate, insbesondere 1 ,5-Diacetyl-2,4- dioxohexahydro-1 ,3,5-triazin (DADHT), acylierte Glykolurile, insbesondere Tetraacetylglykoluril (TAGU), N-Acylimide, insbesondere N-Nonanoylsuccinimid (NOSI), acylierte Phenolsulfonate oder - carboxylate bzw. die Sulfon- oder Carbonsäuren von diesen, insbesondere Nonanoyl- oder Isononanoyloxybenzolsulfonat oder Laroyloxybenzolsulfonat (NOBS bzw. iso-NOBS bzw. LOBS), 4- (2-Decanoyloxyethoxycarbonyloxy)-benzolsulfonat (DECOBS) oder Decanoyloxybenzoat (DOBA), Carbonsäureanhydride, insbesondere Phthalsäureanhydrid, acylierte mehrwertige Alkohole, insbesondere Triacetin, Ethylenglykoldiacetat, 2,5-Diacetoxy-2,5-dihydrofuran und Enolester sowie acetyliertes Sorbitol und Mannitol bzw. deren beschriebene Mischungen (SORMAN), acylierte Zuckerderivate, insbesondere Pentaacetylglukose (PAG), Pentaacetylfruktose, Tetraacetylxylose und Octaacetyllactose, acetyliertes, ggf. N-alkyliertes Glucamin und Gluconolacton, N-acylierte Lactame, z.B. N-Benzoylcaprolactam, Nitrile, aus denen sich Perimidsäuren bilden, insbesondere Aminoacetonitrilderivate mit quaterniertem Stickstoffatom, und/oder sauerstoffübertragende Sulfonimine und/oder Acylhydrazone. Die hydrophil substituierten Acylacetale und die Acyllactame werden ebenfalls bevorzugt eingesetzt. Auch Kombinationen konventioneller Bleichaktivatoren können eingesetzt werden. Derartige Bleichaktivatoren können, insbesondere bei Anwesenheit obengenannter Wasserstoffperoxid-Iiefernder Bleichmittel, im üblichen Mengenbereich, vorzugsweise in Mengen von 0,5 bis 10 Gew.-%, insbesondere 1 bis 8 Gew.-%, bezogen auf gesamtes Mittel, enthalten sein, fehlen bei Einsatz von Percarbonsäure als alleinigem Bleichmittel jedoch vorzugsweise ganz.
Zusätzlich zu den konventionellen Bleichaktivatoren oder an deren Stelle können in festen Mitteln auch Sulfonimine und/oder bleichverstärkende Übergangsmetallsalze bzw. Übergangsmetallkomplexe als sogenannte Bleichkatalysatoren enthalten sein.
Geeignete Vergrauungsinhibitoren bzw. soil-release-Wirkstoffe (soil release polymer) sind Celluloseether, wie Carboxymethylcellulose, Methylcellulose, Hydroxyalkylcellulosen und Cellulosemischether, wie Methylhydroxyethylcellulose, Methylhydroxypropylcellulose und Methylcarboxymethylcellulose. Vorzugsweise werden Natriumcarboxymethylcellulose, Hydroxyporpylmethylcellulose und deren Gemische und ggf. deren Gemische mit Methylcellulose eingesetzt. Zu den üblicherweise eingesetzten Soil-release-Wirkstoffen gehören Copolyester, die Dicarbonsäureeinheiten, Alkylenglykoleinheiten und Polyalkylenglykoleinheiten enthalten. Der Anteil an Vergrauungsinhibitoren und/oder soil-release-Wirkstoffen in erfindungsgemäßen Mitteln liegt im Allgemeinen nicht über 2 Gew.-% und beträgt vorzugsweise 0,5 bis 1 ,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,5 bis 2 Gew.-%.
Als optische Aufheller für insbesondere Textilien aus Cellulosefasern (z.B. Baumwolle) können z.B. Derivate der Diaminostilbendisulfonsäure bzw. deren Alkalimetallsalze enthalten sein. Geeignet sind z.B. Salze der 4,4’-Bis(2-anilino-4-morpholino-1 ,3,5-triazin-6-yl-amino)-stilben-2,2’-disulfonsäure oder gleichartig aufgebaute Verbindungen, die anstelle der Morpholinogruppe eine Diethanolaminogruppe, eine Methylaminogruppe oder eine 2-Methoxyethylaminogruppe tragen. Weiterhin können Aufheller vom Typ des substituierten 4,4’-Distyryl-diphenyl anwesend sein, z.B. 4,4’- Bis-(4-chlor-3-sulfostyryl)-diphenyl. Auch Gemische von Aufhellern können verwendet werden. Für Polyamidfasern eignen sich besonders gut Aufheller vom Typ der 1 ,3-Diaryl-2-pyrazoline, z.B. 1-(p- Sulfoamoylphenyl)-3-(p-chlorphenyl)-2-pyrazolin sowie gleichartig aufgebaute Verbindungen. Der Gehalt des Mittels an optischen Aufhellern bzw. Aufhellergemischen liegt im Allgemeinen nicht über 1 Gew.-%, vorzugsweise 0,05 bis 0,5 Gew.-%. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Mittel frei von derartigen Wirkstoffen.
Zu den in den erfindungsgemäßen Mitteln einsetzbaren üblichen Schaumregulatoren gehören z.B. Polysiloxan-Kieselsäure-Gemische, wobei die darin enthaltene feinteilige Kieselsäure vorzugsweise silaniert oder anderweitig hydrophobiert ist. Die Polysiloxane können sowohl aus linearen Verbindungen wie auch aus vernetzten Polysiloxan-Harzen sowie aus deren Gemischen bestehen. Weitere Entschäumer sind Paraffinkohlenwasserstoffe, insbesondere Mikro paraffine und Paraffinwachse, deren Schmelzpunkt oberhalb 40°C liegt, gesättigte Fettsäuren bzw. Seifen mit insbesondere 20 bis 22 C-Atomen, z.B. Natriumbehenat, und Alkalisalze von Phosphorsäuremono- und/oder -dialkylestern, in denen die Alkylketten jeweils 12 bis 22 C-Atome aufweisen. Unter diesen wird bevorzugt Natriummonoalkylphosphat und/oder -dialkylphosphat mit Cis-is-Alkylgruppen eingesetzt. Der Anteil der Schaumregulatoren kann vorzugsweise 0,2 bis 2 Gew.-%, besonders bevorzugt nicht mehr als 1 Gew.-% betragen.
Zur Einstellung des gewünschten pH-Werts können die erfindungsgemäßen Mittel system- und umweltverträgliche Säuren, insbesondere Citronensäure, Essigsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Milchsäure, Glykolsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure und/oder Adipinsäure, aber auch Mineralsäuren, insbesondere Schwefelsäure oder Alkalihydrogensulfate, oder Basen, insbesondere Ammonium- oder Alkalihydroxide, vorzugsweise Natriumhydroxid, enthalten. Derartige pH- Regulatoren sind in den erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise nicht über 10 Gew.-%, insbesondere von 0,5 bis 6 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,3 bis 2 Gew.-% enthalten.
Als einen weiteren Bestandteil können die erfindungsgemäßen Waschmittel ein organisches Lösungsmittel enthalten. Der Zusatz organischer Lösungsmittel wirkt sich vorteilhaft auf die Enzymstabilität und die Reinigungsleistung dieser Mittel aus. Bevorzugte organische Lösungsmittel stammen aus der Gruppe ein- oder mehrwertigen Alkohole, Alkanolamine oder Glykolether. Vorzugsweise werden die Lösungsmittel ausgewählt aus Ethanol, n- oder i-Propanol, Butanol, Glykol, Propandiol, Butandiol, Glycerin, Diglykol, Propyldiglykol, Butyldiglykol, Hexylenglycol, Ethylenglykolmethylether, Ethylenglykolethylether, Ethylenglykolpropylether, Etheylenglykolmono-n- butylether, Diethylenglykolmethylether, Di-ethylenglykolethylether, Propylenglykolmethylether, Propylenglykolethylether, Propylenglykolpropylether, Dipropylenglykolmethylether, Dipropylenglykolethylether, Methoxytriglykol, Ethoxytriglykol, Butoxytriglykol, 1-Butoxyethoxy-2- propanol, 3-Methyl-3-methoxybutanol, Propylenglykol-t-butylether sowie Mischungen dieser Lösungsmittel. Der Gewichtsanteil dieser organischen Lösungsmittel am Gesamtgewicht erfindungsgemäßer Waschmittel beträgt vorzugsweise 0,1 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,2 bis 8,0 Gew.-% und weiter bevorzugt 0,5 bis 5,0 Gew.-%. Ein besonders bevorzugtes und in Bezug auf die Stabilisierung der Waschmittel besonders wirksames organisches Lösungsmittel ist das Glycerin sowie das 1 ,2 Propylenglykol. Flüssige Waschmittel umfassen vorzugsweise mindestens ein Polyol, vorzugsweise aus der Gruppe Glycerin und 1 ,2-Propylenglycol, bezogen auf das Gesamtgewicht des Waschmittels, vorzugsweise zu 0,1 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,2 bis 8,0 Gew.-% und weiter bevorzugt 0,5 bis 5,0 Gew.-%. Weitere bevorzugte organische Lösungsmittel sind die organischen Amine und Alkanolamine. Die erfindungsgemäßen Waschmittel enthalten diese Amine vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 10 Gew.-%, bevorzugt von 0,2 bis 8,0 Gew.-% und weiter bevorzugt von 0,5 bis 5,0 Gew.-%, jeweils bezogen auf ihr Gesamtgewicht. Ein besonders bevorzugtes Alkanolamin ist das Ethanolamin.
Erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel können ausschließlich eine Protease enthalten. Alternativ können sie auch weitere hydrolytische Enzyme oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration enthalten. Eine weitere Ausführungsform der Erfindung stellen somit Mittel dar, die ferner eines oder mehrere weitere Enzyme umfassen. Als weitere Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in dem erfindungsgemäßen Mittel eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere eine Lipase, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, Xyloglucanase, ß-Glucosidase, Pektinase, Carrageenase, Perhydrolase, Oxidase, Oxidoreduktase oder andere - von den erfindungsgemäßen Proteasen unterscheidbare - Protease, sowie deren Gemische. Weitere Enzyme sind in dem Mittel vorteilhafterweise jeweils in einer Menge von 1 x 10-8 bis 5 Gewichts-Prozent bezogen auf aktives Protein enthalten. Zunehmend bevorzugt ist jedes weitere Enzym in einer Menge von 1 x 10-7 bis 3 Gew.-%, von 0,00001 bis 1 Gew.-%, von 0,00005 bis 0,5 Gew.-%, von 0,0001 bis 0,1 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,0001 bis 0,05 Gew.-% in erfindungsgemäßen Mitteln enthalten, bezogen auf aktives Protein. Besonders bevorzugt zeigen die Enzyme synergistische Reinigungsleistungen gegenüber bestimmten Anschmutzungen oder Flecken, d.h. die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig. Ganz besonders bevorzugt liegt ein solcher Synergismus vor zwischen der erfindungsgemäß enthaltenen Protease und einem weiteren Enzym eines erfindungsgemäßen Mittels, darunter insbesondere zwischen der genannten Protease und einer Amylase und/oder einer Lipase und/oder einer Mannanase und/oder einer Cellulase und/oder einer Pektinase. Synergistische Effekte können nicht nur zwischen verschiedenen Enzymen, sondern auch zwischen einem oder mehreren Enzymen und weiteren Inhaltsstoffen des erfindungsgemäßen Mittels auftreten.
Erfindungsgemäß bevorzugte Textilwaschmittel weisen mindestens eine Protease und mindestens eine Amylase auf. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease und mindestens eine Cellulase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease und mindestens eine Lipase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease, mindestens eine Amylase und mindestens eine Lipase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease, mindestens eine Amylase und mindestens eine Cellulase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease, mindestens eine Amylase, mindestens eine Cellulase und mindestens eine Lipase auf. Besonders bevorzugt sind Textilwaschmittel, welche 3 bis 10 verschiedene Enzyme aufweisen, wobei Textilwaschmittel, welche 3 bis 10 unterschiedliche Enzymarten aufweisen, im Hinblick auf die Reinigungsleistung gegenüber einem sehr großen Fleckenspektrum von besonderer Bevorzugung sein können.
Beispiele für Proteasen sind die Subtilisine BPN' aus Bacillus amyloliquefaciens und Carlsberg aus Bacillus liehen! formis, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die Protease aus Bacillus lentus, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Subtilisin Carlsberg ist in weiterentwickelter Form unter dem Handelsnamen Alcalase® von dem Unternehmen Novozymes erhältlich. Die Subtilisine 147 und 309 werden unter den Handelsnamen Esperase® bzw. Savinase® von dem Unternehmen Novozymes vertrieben. Von der Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 leiten sich Proteasevarianten ab. Weitere brauchbare Proteasen sind z.B. die unter den Handelsnamen Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym®, Natalase®, Kannase®, Progress Uno 101 L® und Ovozyme® von dem Unternehmen Novozymes, die unter den Handelsnamen, Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime, Excellase®, Properase®, Preferenz P100® und Preferenz P300® von dem Unternehmen Danisco/DuPont, das unter dem Handelsnamen Lavergy pro 104 LS® von dem Unternehmen BASF, das unter dem Handelsnamen Protosol® von dem Unternehmen Advanced Biochemicals Ltd., das unter dem Handelsnamen Wuxi® von dem Unternehmen Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., die unter den Handelsnamen Proleather® und Protease P® von dem Unternehmen Amano Pharmaceuticals Ltd., und das unter der Bezeichnung Proteinase K-16 von dem Unternehmen Kao Corp, erhältlichen Enzyme. Besonders bevorzugt eingesetzt werden auch die Proteasen aus Bacillus gibsonii und Bacillus pumilus, die offenbart sind in WO 2008/086916, WO 2007/131656, WO 2017/215925, WO 2021/175696 und WO 2021/175697. Weitere vorteilhaft einsetzbare Proteasen sind offenbart in z.B. WO 91/02792, WO 2008/007319, WO 93/18140, WO 01/44452, GB 1243784 A, WO 96/34946, WO 02/029024 und WO 03/057246. Weitere verwendbare Proteasen sind diejenigen, die in den Mikroorganismen Stenotrophomonas maltophilia, insbesondere Stenotrophomonas maltophilia K279a, Bacillus intermedius sowie Bacillus sphaericus natürlicherweise vorhanden sind.
Beispiele für Amylasen sind die a-Amylasen aus Bacillus liehen! formis, Bacillus amyloliquefaciens oder Bacillus stearothermophilus sowie insbesondere auch deren für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln verbesserte Weiterentwicklungen. Das Enzym aus Bacillus licheniformis ist von dem Unternehmen Novozymes unter dem Namen Termamyl® und von dem Unternehmen Danisco/DuPont unter dem Namen Purastar® ST erhältlich. Weiterentwicklungsprodukte dieser a- Amylase sind unter den Handelsnamen Duramyl® und Termamyl® ultra (beide von Novozymes), Purastar® OxAm (Danisco/DuPont) und Keistase® (Daiwa Seiko Inc.) erhältlich. Die a-Amylase von Bacillus amyloliquefaciens wird von dem Unternehmen Novozymes unter dem Namen BAN® vertrieben, und abgeleitete Varianten von der a-Amylase aus Bacillus stearothermophilus unter den Namen BSG® und Novamyl®, ebenfalls von dem Unternehmen Novozymes. Des Weiteren sind für diesen Zweck die a-Amylase aus Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368) und die Cyclodextrin- Glucanotransferase (CGTase) aus Bacillus agaradherens (DSM 9948) hervorzuheben. Ferner sind die amylolytischen Enzyme einsetzbar, die in WO 95/26397, WO 96/23873, WO 99/23211 , WO 00/60060, WO 2003/002711 , WO 2003/054177, WO 2006/002643, WO 2007/079938, WO 2011/100410 und WO 2013/003659 offenbart sind. Ebenso sind Fusionsprodukte aller genannten Moleküle einsetzbar. Darüber hinaus sind die unter den Handelsnamen Fungamyl® von dem Unternehmen Novozymes erhältlichen Weiterentwicklungen der a-Amylase aus Aspergillus niger und A. oryzae geeignet. Weitere vorteilhaft einsetzbare Handelsprodukte sind z.B. die Amylase-LT® und Stainzyme® oder Stainzyme® ultra bzw. Stainzyme® plus sowie Amplify™ 12L oder Amplify Prime™ 100L, letztere ebenfalls von dem Unternehmen Novozymes, sowie die PREFERENZ S® Serie von dem Unternehmen Danisco/DuPont, umfassend z.B. PREFERENZ S100®, PREFERENZ S1000® oder PREFERENZ S210®. Auch durch Punktmutationen erhältliche Varianten dieser Enzyme können erfindungsgemäß eingesetzt werden.
Bevorzugte Amylasen umfassen a) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:2 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe; und/oder b) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:3 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378, 383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:3 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, und/oder besonders bevorzugt mindestens eine Aminosäuresubstitution oder -deletion, die aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist; und/oder c) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:4 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 116, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:4, aufweist, vorzugsweise Aminosäuredeletionen an den Positionen 183 und 184; und/oder d) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:5 angegeben Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und mindestens eine Deletion an einer der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5 aufweist, vorzugsweise Deletionen an mindestens zwei Positionen ausgewählt aus den Positionen 180+181 , 181 +182, 182+183 und 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, besonders bevorzugt an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, und/oder mindestens eine Substitution an einer der Positionen 405, 421 , 422 und 428 in der Zählung gemäße SEQ ID NO:5 aufweist, die aus der aus I405L, A421 H, A422P, A428T und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:2 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe. Bevorzugt werden Amylasen eingesetzt, die an zwei, bevorzugt drei, der vorstehend genannten Positionen eine Aminosäuresubstitution aufweisen, insbesondere eine Substitution an Position 202 ausgewählt aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, eine Substitution an Position 255, insbesondere S255N, und eine Substitution an Position 172, insbesondere R172Q. Ganz besonders bevorzugt sind die M202L und M202T Mutanten.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:3 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378, 383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:3 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, besonders bevorzugt aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt. In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen weist die Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:3 Aminosäuresubstitutionen an drei oder mehr der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345 und optional eine oder mehrere, vorzugsweise alle, der Substitutionen und/oder Deletionen an den Positionen: 118, 183, 184, 195, 320 und 458, besonders bevorzugt R118K, D183*, G184*, N195F, R320K und/oder R458K, auf. In besonders bevorzugten Ausführungsformen weist die Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:3 folgende Aminosäuresubstitutionen und/oder Deletionen auf: M9L-M323T; M9L-M202L/T/V/I-M323T; M9L- N195F-M202L/T/V/I-M323T; M9L-R118K-D183*-G184*-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*- G184*-M202L/T/V/l-R320K-M323T-R458K; M9L-G149A-G182T-G186A-M202L-T257I-Y295F-N299Y- M323T-A339S-E345R; M9L-G149A-G182T-G186A-M202I-T257I-Y295F-N299Y-M323T-A339S- E345R; M9L-R118K-G149A-G182T-D183*-G184*-G186A-M202L-T257I-Y295F-N299Y-R320K- M323T-A339S-E345R-R458K; M9L-R118K-G149A-G182T-D183*-G184*-G186A-N195F-M202L- T257I-Y295F-N299Y-R320K-M323T-A339S-E345R-R458K; M9L-R118K-G149A-G182T-D183*- G184*-G186A-M202I-T257I-Y295F-N299Y-R320K-M323T-A339S-E345R-R458K; M9L-R118K-D183*- D184*-N195F-M202L-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*-D184*-N195F-M202T-R320K- M323T-R458K; M9L-R118K-D183*-D184*-N195F-M202I-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*- D184*-N195F-M202V-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-N150H-D183*-D184*-N195F-M202L- V214T-R320K-M323T-R458K; oder M9L-R118K-D183*-D184*-N195F-M202L-V214T-R320K-M323T- E345N-R458K.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:4 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 116, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:4, aufweist. Diesbezüglich bevorzugte Aminosäuresubstitutionen umfassen: E260A/D/C/Q/L/M/F/P/S/W/V/G/H/I/K/N/R/T7Y, G304R/K/E/Q, W140Y/F, W189E/G/T, D134E, F262G/P, W284D/H/F/Y/R, W347H/F/Y, W439R/G, G476E/Q/R/K, G477E/Q/K/M/R, N195F/Y, N197F/L, Y198N, Y200F, Y203F, I206H/L/N/F/Y, H210Y, E212V/G, V213A, M116T, Q129L, G133E, E134Y, K142R, P146S, G147E, G149R, N151 R, Y152H, Q169E, N174R, A186R, Y243F, S244Q, G303V, R320N, R359I, N418D und A447V.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:5 angegebenen Sequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% oder 99% identisch ist und in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5 an einer oder mehreren der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 eine Deletion aufweist. Besonders bevorzugt ist eine Deletion von zwei Positionen ausgewählt aus 180+181 , 181+182, 182+183 und 183+184, ganz besonders bevorzugt sind Deletionen an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, insbesondere bevorzugt die Deletionen H183*+G184*. Vorzugsweise weist eine solche a-Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5 weiterhin eine Aminosäuresubstitution an einer oder mehreren der Positionen 405, 421 , 422 und 428 auf. Besonders bevorzugt sind dabei eine oder mehrere der Substitutionen I405L, A421 H, A422P und A428T. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform weist die a-Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5 die Deletionen H183*+G184* und zusätzlich die Substitutionen I405L, A421 H, A422P und A428T auf.
Der Begriff "Cellulase", wie hierin verwendet, bezeichnet ein Enzym, das die Hydrolyse von 1 ,4-ß- D-Glucosidbindungen in Cellulose (Cellobiose), und/oder Lichenin und/oder ß-D-Glucanen katalysiert. Sie sind oft auch in der Lage, die 1 ,4-Bindungen in ß-D-Glucanen zu hydrolysieren, die neben den 1 ,4-Bindungen auch 1 ,3-Bindungen besitzen. Cellulasen sind in der Lage, Cellulose zu ß-Glucose zu spalten. Folglich wirken Cellulasen insbesondere auf cellulosehaltige oder cellulosederivathaltige Reste und katalysieren deren Hydrolyse. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist die Cellulase eine Endoglucanase (EC 3.2.1.4). Für Cellulasen können synonyme Bezeichnungen verwendet werden, insbesondere Endoglucanase, Endo-1 ,4-ß-Glucanase, Carboxymethylcellulase, Endo-1 ,4-ß-D-Glucanase, ß-1 ,4-Glucanase, ß-1 ,4-Endoglucanhydrolase, Celludextrinase oder Avicelase. Der entscheidende Faktor, ob ein Enzym eine Cellulase im Rahmen der Erfindung ist, ist seine Fähigkeit, 1 ,4-ß-D-Glucosidbindungen in Cellulose zu hydrolysieren.
Der Begriff "Cellulase-Aktivität" ist hier definiert als ein Enzym, das die Hydrolyse von 1 ,4-ß-D- Glucosidbindungen in ß-1 ,4-Glucan (Cellulose) katalysiert. Die Celluloseaktivität wird mit einer Standardmethode gemessen, z. B. wie folgt: Cellulasen setzen Glucose aus CMC (Carboxymethylcellulose) frei. Die Proben werden unter definierten Reaktionsbedingungen (100 mM Natriumphosphatpuffer pH 7,5, 40°C, 15 min) mit einem Substrat (1 ,25% CMC) inkubiert. Bei der Reaktion mit p-Hydroxybenzoesäurehydrazid (PAHBAH) in Gegenwart von Wismut entsteht ein gelber Farbstoff, der photometrisch bei 410 nm bestimmt werden kann. Voraussetzung ist ein alkalischer pH- Wert während der Farbreaktion. Die der Färbung entsprechende Menge an freigesetztem Zucker ist ein Maß für die Enzymaktivität (Lever, Anal. Biochem., 1972, 47 & 1977, 81).
Geeignete Cellulasen umfassen solche bakterieller oder pilzlicher Herkunft. Chemisch modifizierte oder proteintechnisch veränderte Mutanten sind eingeschlossen. Geeignete Cellulasen sind Cellulasen aus den Gattungen Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, z. B. die Pilzcellulasen aus Humicola insolens, Myceliophthora thermophila und Fusarium oxysporum, die in US 4435307, US 5648263, US 5691178, US 5776757 und WO 89/09259 offenbart sind. Besonders geeignete Cellulasen sind die alkalischen oder neutralen Cellulasen mit farbpflegenden Eigenschaften. Beispiele für solche Cellulasen sind Cellulasen, die in EP 0495257, EP 0531372, WO 96/11262, WO 96/29397 und WO 98/08940 beschrieben sind. Andere Beispiele sind Cellulase- Varianten, wie sie in WO 94/07998, EP 0531315, EP 3212777, EP 3502243, EP 3653705, EP 3653706, US 5457046, US 5686593, US 5763254, WO 95/24471 , WO 98/12307 und WO 99/01544 und WO 2019/122520 beschrieben sind.
Beispiele für Cellulasen mit Endo-1 ,4-Glucanase-Aktivität (EC 3.2.1 .4) sind in WO 2002/099091 beschrieben, z.B. solche mit einer Sequenz von mindestens 97% Identität zu der Aminosäuresequenz der Positionen 1 bis 773 von SEQ ID NO:2 der WO 2002/099091 . Ein weiteres Beispiel kann eine GH44-Xyloglucanase umfassen, z.B. ein Xyloglucanase-Enzym mit einer Sequenz von mindestens 60% Identität zu den Positionen 40 bis 559 der SEQ ID NO:2 der WO 2001/062903.
Andere Beispiele für Cellulasen umfassen die in WO 96/29397 beschriebenen GH45-Cellulasen und insbesondere Varianten davon mit Substitution, Insertion und/oder Deletion an einer oder mehreren der Positionen, die den folgenden Positionen in SEQ ID NO:8 der WO 2002/099091 entsprechen: 2, 4, 7, 8, 10, 13, 15, 19, 20, 21 , 25, 26, 29, 32, 33, 34, 35, 37, 40, 42, 42a, 43, 44, 48, 53, 54, 55, 58, 59, 63, 64, 65, 66, 67, 70, 72, 76, 79, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 91 , 93, 95, 95d, 95h, 95j, 97, 100, 101 , 102, 103, 113, 114, 117, 119, 121 , 133, 136, 137, 138, 139, 140a, 141 , 143a, 145, 146, 147, 150e, 150j, 151 , 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160c, 160e, 160k, 161 , 162, 164, 165, 168, 170, 171 , 172, 173, 175, 176, 178, 181 , 183, 184, 185, 186, 188, 191 , 192, 195, 196, 200, und/oder 20, vorzugsweise ausgewählt aus P19A, G20K, Q44K, N48E, Q119H oder Q146R.
Zu den kommerziell verfügbaren Cellulasen gehören Celluzyme™, Carezyme™, Carezyme Premium™, Celluclean™ (z.B. Celluclean™ 5000L ans Celluclean™ 4000T), Celluclean Classic™, Cellusoft™, Endolase®, Renozyme® und Whitezyme™ (Novozymes A/S), Clazinase™ und Puradax HA™ (Genencor International Inc.), KAC-500(B)™ (Kao Corporation), Revitalenz™ 1000, Revitalenz™ 2000 und Revitalenz™ 3000 (DuPont), sowie Ecostone® und Biotouch® (AB Enzymes).
Als weitere Enzyme einsetzbar sind z.B. Lipasen oder Cutinasen, insbesondere wegen ihrer Triglycerid-spaltenden Aktivitäten, aber auch, um aus geeigneten Vorstufen in situ Persäuren zu erzeugen.
Geeignete Lipasen und Cutinasen sind solche bakteriellen oder pilzlichen Ursprungs. Chemisch modifizierte oder durch Proteinengineering erzeugte mutierte Enzyme sind eingeschlossen. Beispiele sind Lipase aus Thermomyces, z.B. aus T. lanuginosus (früher Humicola lanuginosa genannt), wie in EP 0258068 und EP 0305216 beschrieben, Cutinase aus Humicola, z.B. H. insolens (WO 96/13580), Lipase aus Stämmen von Pseudomonas (einige davon jetzt umbenannt in Burkholderia), z.B. P. alcaligenes oder P. pseudoalcaligenes (EP 0218272), P. cepacia (EP 0331376), P. sp. Stamm SD705 (WO 95/06720 & WO 96/27002), P. wisconsinensis (WO 96/12012), Streptomyces-Lipasen vom GDSL-Typ (WO 2010/065455), Cutinase aus Magnaporthe grisea (WO 2010/107560), Cutinase aus Pseudomonas mendocina (US 5389536), Lipase aus Thermobifida fusca (WO 2011/084412), Lipase aus Geobacillus stearothermophilus (WO 2011/084417), Lipase aus Bacillus subtilis (WO 2011/084599), und Lipase aus Streptomyces griseus (WO 2011/150157) und S. pristinaespiralis (WO 2012/137147).
Zu bevorzugten Lipasen gehören z.B. die ursprünglich aus Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus) erhältlichen bzw. daraus weiterentwickelten Lipasen, insbesondere solche mit einem oder mehreren der folgenden Aminosäureaustausche ausgehend von der genannten Lipase in den Positionen D96L, T213R und/oder N233R, besonders bevorzugt T213R und N233R. Lipasen werden z.B. von dem Unternehmen Novozymes unter den Handelsnamen Lipolase®, Lipolase® Ultra, LipoPrime®, Lipozyme® und Lipex® vertrieben. Eine weitere vorteilhaft einsetzbare Lipase ist unter dem Handelsnamen Lipoclean® von dem Unternehmen Novozymes erhältlich. Des Weiteren sind z.B. die Cutinasen einsetzbar, die ursprünglich aus Fusarium solani pisi und Humicola insolens isoliert worden sind. Ebenso brauchbare Lipasen sind von dem Unternehmen Amano unter den Bezeichnungen Lipase CE®, Lipase P®, Lipase B® bzw. Lipase CES®, Lipase AKG®, Bacillus sp. Lipase®, Lipase AP®, Lipase M-AP® und Lipase AML® erhältlich. Von dem Unternehmen Danisco/DuPont sind z.B. die Lipasen bzw. Cutinasen einsetzbar, deren Ausgangsenzyme ursprünglich aus Pseudomonas mendocina und Fusarium solanii isoliert worden sind. Als weitere wichtige Handelsprodukte sind die von dem Unternehmen Danisco/DuPont vertriebenen Präparationen M1 Lipase® und Lipomax® und die von dem Unternehmen Meito Sangyo KK unter den Namen Lipase MY-30®, Lipase OF® und Lipase PL® vertriebenen Enzyme zu erwähnen, ferner das Produkt Lumafast® von dem Unternehmen Danisco/DuPont.
Weitere Beispiele sind Lipasen, die auch als Acyltransferasen oder Perhydrolasen bezeichnet werden, z.B., Acyltransferasen mit Homologie zu Candida antarctica Lipase A (WO 2010/111143), Acyltransferase aus Mycobacterium smegmatis (WO 2005/056782), Perhydrolasen aus der CE 7- Familie (WO 2009/067279) und Varianten der M. smegmatis Perhydrolase, insbesondere die S54V- Variante, die in dem kommerziellen Produkt Gentle Power Bleach von Huntsman Textile Effects Pte Ltd (WO 2010/100028) verwendet wird. Weitere Beispiele sind Lipase-Varianten, wie sie in EP 0407225, WO 92/05249, WO 94/01541 , WO 94/25578, WO 95/14783, WO 95/30744, WO 95/35381 , WO 95/22615, WO 96/00292, WO 97/04079, WO 97/07202, WO 2000/034450, WO 2000/060063, WO 2001/092502, WO 2007/087508 und WO 2009/109500 beschrieben sind.
Zu den bevorzugten kommerziellen Lipaseprodukten gehören Lipolase™, Lipex™, Lipolex™ und Lipoclean™ (Novozymes A/S), Lumafast (Genencor/ DuPont) und Lipomax (Gist-Brocades).
Zur Erhöhung der bleichenden Wirkung können erfindungsgemäß Oxidoreduktasen, z.B. Oxidasen, Oxygenasen, Katalasen, Peroxidasen, wie Halo-, Chloro-, Bromo-, Lignin-, Glucose- oder Manganperoxidasen, Dioxygenasen oder Laccasen (Phenoloxidasen, Polyphenoloxidasen) eingesetzt werden. Vorteilhafterweise werden zusätzlich vorzugsweise organische, besonders bevorzugt aromatische, mit den Enzymen wechselwirkende Verbindungen zugegeben, um die Aktivität der betreffenden Oxidoreduktasen zu verstärken (Enhancer) oder um bei stark unterschiedlichen Redoxpotentialen zwischen den oxidierenden Enzymen und den Anschmutzungen den Elektronenfluss zu gewährleisten (Mediatoren).
In den hierin beschriebenen Reinigungsmitteln können die einzusetzenden Enzyme ferner zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation, konfektioniert sein. In flüssigen Formulierungen werden die Enzyme bevorzugt als Enzymflüssigformulierung(en) eingesetzt.
Die Enzyme werden in der Regel nicht in Form des reinen Proteins, sondern vielmehr in Form stabilisierter, lager- und transportfähiger Zubereitungen bereitgestellt. Zu diesen vorkonfektionierten Zubereitungen zählen beispielsweise die durch Granulation, Extrusion oder Lyophilisierung erhaltenen festen Präparationen oder, insbesondere bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren oder weiteren Hilfsmitteln versetzt. Alternativ können die Enzyme sowohl für die feste als auch für die flüssige Darreichungsform verkapselt werden, beispielsweise durch Sprühtrocknung oder Extrusion der Enzymlösung zusammen mit einem vorzugsweise natürlichen Polymer oder in Form von Kapseln, beispielsweise solchen, bei denen die Enzyme wie in einem erstarrten Gel eingeschlossen sind oder in solchen vom Kern-Schale- Typ, bei dem ein enzymhaltiger Kern mit einer Wasser-, Luft- und/oder Chemikalien-undurchlässigen Schutzschicht überzogen ist. In aufgelagerten Schichten können zusätzlich weitere Wirkstoffe, beispielsweise Stabilisatoren, Emulgatoren, Pigmente, Bleich- oder Farbstoffe aufgebracht werden. Derartige Kapseln werden nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise durch Schüttel- oder Rollgranulation oder in Fluid-bed-Prozessen aufgebracht. Vorteilhafterweise sind derartige Granulate, beispielsweise durch Aufbringen polymerer Filmbildner, staubarm und aufgrund der Beschichtung lagerstabil.
Weiterhin ist es möglich, zwei oder mehrere Enzyme zusammen zu konfektionieren, so dass ein einzelnes Granulat mehrere Enzymaktivitäten aufweist.
Die Enzyme können auch in wasserlösliche Filme, wie sie beispielsweise bei der Konfektionierung von Wasch- und Reinigungsmitteln in Einheitsdosisform verwendet werden, eingebracht werden. Ein derartiger Film ermöglicht die Freisetzung der Enzyme nach Kontakt mit Wasser. Wie hierin verwendet, bezieht sich „wasserlöslich“ auf eine Filmstruktur, die vorzugsweise vollständig wasserlöslich ist. Bevorzugt besteht ein solcher Film aus (vollständig oder teilweise hydrolysiertem) Polyvinylalkohol (PVA).
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen, das dadurch gekennzeichnet ist, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet wird. In verschiedenen Ausführungsformen zeichnet sich das oben beschriebene Verfahren dadurch aus, dass die Protease bei einer Temperatur von 0°C bis 100°C, bevorzugt 20°C bis 60°C, weiter bevorzugt 20°C bis 40°C und am meisten bevorzugt bei 30°C eingesetzt wird.
Hierunter fallen sowohl manuelle als auch maschinelle Verfahren, wobei maschinelle Verfahren aufgrund ihrer präziseren Steuerbarkeit, was z.B. die eingesetzten Mengen und Einwirkzeiten angeht, bevorzugt sind. Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im Allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung oder Verdünnung dieses Mittels behandelt wird.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Protease und sie enthaltende Mittel beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehenden erfindungsgemäßen Verfahren gilt.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder
(II) (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Enzymen, vorzugsweise Proteasen, Cellulasen und/oder Amylasen, in einem proteasehaltigen Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder
(II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, bevorzugt Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Protease und sie enthaltende Mittel beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehende erfindungsgemäße Verwendung gilt. BEVORZUGTE AUSFÜHRUNGSFORMEN
1. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist.
2. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
3. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 1 1 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
4. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
5. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs, Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist.
6. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
7. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 1 1 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist. 8. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
9. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I- N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E- V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E- V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W- A209K-S154D-L256E; (xix) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, und
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist.
10. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I- N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E- V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E- V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W- A209K-S154D-L256E; (xix) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, und
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist. 11. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I- N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E- V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E- V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W- A209K-S154D-L256E; (xix) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, und
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
12. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; (iii) S3T-V4I- R99E-V199I-N74D; (iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; (v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-S154D-L256E; (vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; (vii) S3T-V4I-R99E-V199I- N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; (viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; (ix) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; (x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; (xi) S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; (xii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; (xiii) S3T-V4I-R99E- V199I-S154D-Q200L-Y203W; (xiv) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; (xv) S3T-V4I-R99E- V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; (xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; (xvii) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; (xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W- A209K-S154D-L256E; (xix) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; (xx)
S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E, und
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und
(C) mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist und vorzugsweise aus Amylase, Cellulase und Lipase ausgewählt ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
13. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Punktei bis 12, wobei das mindestens eine weitere aus der aus Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, Xyloglucanasen, ß-Glucosidasen, Pektinasen, Carrageenasen, Perhydrolasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen, Lipasen, Proteasen und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise mindestens eine Amylase und/oder mindestens eine Cellulase und/oder mindestens eine Lipase.
14. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Punkte 1 bis 12, wobei das mindestens eine weitere Enzym eine Cellulase ist.
15. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Punkte 1 bis 12, wobei das mindestens eine weitere Enzym eine Amylase ist, wobei die Amylase amylolytische Aktivität aufweist und ausgewählt ist aus a) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:2 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe; und/oder b) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:3 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378, 383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:3 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, und/oder besonders bevorzugt mindestens eine Aminosäuresubstitution oder -deletion, die aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist; und/oder c) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:4 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 1 16, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:4, aufweist, vorzugsweise Aminosäuredeletionen an den Positionen 183 und 184; und/oder d) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:5 angegeben Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und mindestens eine Deletion an einer der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5 aufweist, vorzugsweise Deletionen an mindestens zwei Positionen ausgewählt aus den Positionen
180+181 , 181 +182, 182+183 und 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, besonders bevorzugt an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, und/oder mindestens eine Substitution an einer der Positionen 405, 421 , 422 und 428 in der Zählung gemäße SEQ ID NO:5 aufweist, die aus der aus I405L, A421 H, A422P, A428T und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
16. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Enzymen, vorzugsweise Proteasen, Cellulasen und/oder Amylasen, in einem proteasehaltigen Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
17. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Enzymen, vorzugsweise Proteasen, Cellulasen und/oder Amylasen, in einem proteasehaltigen Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
18. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
19. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
20. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
21 . Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
22. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist. 23. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
24. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
25. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
26. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC-NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei, vorzugsweise vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist. 27. Verwendung nach einem der Punkte 16 bis 26, wobei das weitere Enzym Cellulase ist.
28. Verwendung nach einem der Punkte 16 bis 26, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
29. Verwendung nach einem der Punkte 16 bis 28, wobei die Verbindung aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt Benzylmalonsäure.
30. Verwendung nach einem der Punkte 16 bis 29, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und die Verbindung aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt Benzylmalonsäure. BEISPIELE
Verwendete Waschmittelmatrix
In der folgenden Tabelle ist eine handelsübliche flüssige Waschmittelmatrix, die für die folgenden Versuche verwendet wurde, angegeben:
Protease-Aktivitätsassay
Die Aktivität der Protease wird durch die Freisetzung des Chromophors para-Nitroanilin aus dem Substrat Succinyl Alanin-Alanin-Prolin-Phenylalanin-para-Nitroanilid (AAPF-pNA; Bachem L-1400) bestimmt. Die Freisetzung des pNA verursacht eine Zunahme der Extinktion bei 410 nm, deren zeitlicher Verlauf ein Maß für die enzymatische Aktivität ist.
Die Messung erfolgte bei einer Temperatur von 25°C, bei pH 8,6 und einer Wellenlänge von 410 nm. Die Messzeit betrug 5 min bei einem Messintervall von 20 bis 60 Sekunden. Messansatz:
10 pL AAPF-Lösung (70 mg/mL)
1000 pL Tris/HCI (0,1 M; pH 8,6 mit 0,1 % Brij 35)
10 pL verdünnte Proteaselösung
Kinetik erstellt über 5 min bei 25°C (410 nm)
Cellulase-Aktivitätsassay
Die Aktivität der Cellulase wird durch die PAHBAH (para-Hydroybenzoesäurehydrazid)-Methode bestimmt. Cellulasen setzen aus Carboxymethylcellulose (CMC) Glucose frei und diese reagiert mit PAHBAH zu einem gelben Farbstoff, der bei 410 nm kolorimetrisch nachgewiesen werden kann.
Messansatz:
250 pL CMC Lösung (2,5%ige)
250 pL verdünnte Cellulase-Lösung
1 ,5 mL PAHBAH Lösung (1 % ig mit 1 mM Bismuth und in 0,5 NaOH)
250 pL CMC Lösung und 250 pL verdünnte Cellulase-Lösung wurden zusammengeführt und 15 minutenlang im Wasserbad bei 40°C inkubiert. Nach der Inkubation wurden 1 ,5 mL PAHBAH Lösung zugegeben und die Probe 10 minutenlang bei 70°C im Heizblock zum Anfärben inkubiert. Nach dem Erhitzen wurde die gesamte Probe 1-2 min im Eisbad abgekühlt. Die abgekühlte Probe wurde dann in eine Einwegküvette überführt und die Messung erfolgte bei 410 nm.
Beispiel 1 : Bestimmung der Laqerstabilität von Protease
Die folgenden Proteasevarianten wurden aktivproteingleich (jeweils 20 mg/Job aktives Enzymprotein) bei 30°C in der Formula A, B, C und D für 1 , 2 und 4 Wochen gelagert und ihre Restaktivität mittels AAPF-pNA-Messung bestimmt.
Protease 1 (P1): SEQ ID NO:1 -S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W-L256E
Protease 2 (P2): SEQ ID NQ:1 -S3T-V4l-R99E-V199l-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W- L256E
Protease 3 (P3): SEQ ID NQ:1 -S3T-V4l-R99E-V199l-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W- L256E
Die Aktivität der Protease vor Lagerung wurde auf 100% normiert. Im Folgenden sind die Differenzwerte der Restaktivität (RA) der Protease des jeweiligen Ansatzes mit Inhibitor (Formel B, C oder D) im Vergleich zum Ansatz ohne Inhibitor (Formel A) angegeben. Eine Differenz >5 wird als signifikant angesehen.
Anhand der Ergebnisse sieht man, dass sowohl Benzylmalonsäure als auch Borsäure zu einer signifikant höheren Restaktivität der Protease nach Lagerung führen, d.h. die Lagerstabilität der Protease verbessern. Insbesondere ist erfreulich, dass Benzylmalonsäure geeignet scheint Borsäure als Inhibitor in Waschmittel zu ersetzen.
Beispiel 2: Bestimmung der Laqerstabilität von Cellulase
Eine kommerziell erhältliche Cellulase (ex. AB Enzymes) wurde aktivproteingleich (jeweils 2 mg/Job aktives Enzymprotein) bei 30°C in der Formula A, B, C und D für 1 , 2, und 4 Wochen gelagert (zusammen mit Protease 1 , 2 oder 3 wie in Beispiel 1 angegeben) und ihre Restaktivität mittels PAHBAH-Messung bestimmt.
Die Aktivität der Cellulase vor Lagerung wurde auf 100% normiert. Im Folgenden sind die Differenzwerte der Restaktivität (RA) der Cellulase des jeweiligen Ansatzes mit Inhibitor (Formel B, C oder D) im Vergleich zum Ansatz ohne Inhibitor (Formel A) angegeben. Eine Differenz >5 wird als signifikant angesehen.
Anhand der Ergebnisse sieht man, dass sowohl Benzylmalonsäure als auch Borsäure zu einer signifikant höheren Restaktivität der Cellulase nach Lagerung führen, d.h. die Lagerstabilität verbessern. Insbesondere ist erfreulich, dass Benzylmalonsäure geeignet scheint Borsäure als Inhibitor in Waschmittel zu ersetzen.

Claims

PATENTANSPRÜCHE
1 . Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend
(A) mindestens eine Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die mindestens 70% Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens zwei, vorzugsweise drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise drei Aminosäuresubstitutionen, ausgewählt aus den Aminosäuresubstitutionen 3T, 4I, 99E und 199I, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, insbesondere ausgewählt aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, aufweist, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(B) mindestens eine Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC- NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(C) optional mindestens ein weiteres Enzym, wobei das weitere Enzym von der mindestens einen Protease verschieden ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels,
(D) mindestens einen Inhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels.
2. Wasch- und Reinigungsmittel nach Anspruch 1 , wobei die Protease eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
3. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Protease eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist:
(i) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W;
(ii) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S;
(iii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D;
(iv) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E;
(v) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E;
(vi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W;
(vii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E;
(viii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S;
(ix) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E;
(x) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W;
(xi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E;
(xii) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L;
(xiii) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W;
(xiv) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E;
(xv) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L;
(xvi) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E;
(xvii)S3T-V4l-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L;
(xviii) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E;
(xix) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E;
(xx) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E.
4. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Verbindung (B) aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
5. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das mindestens eine weitere Enzym aus der aus Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, Xyloglucanasen, ß-Glucosidasen, Pektinasen, Carrageenasen, Perhydrolasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen, Lipasen, Proteasen und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise mindestens eine Amylase und/oder mindestens eine Cellulase und/oder mindestens eine Lipase und/oder mindestens eine Mannanase.
6. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das mindestens eine weitere Enzym eine Amylase ist und wobei die Amylase ausgewählt ist aus (a) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:2 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe; und/oder
(b) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:3 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270,
272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378,
383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:3 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, und/oder besonders bevorzugt mindestens eine Aminosäuresubstitution oder - deletion, die aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist; und/oder
(c) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:4 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 116, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:4, aufweist, vorzugsweise Aminosäuredeletionen an den Positionen 183 und 184; und/oder
(d) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:5 angegeben Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und 100% identisch ist und mindestens eine Deletion an einer der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5 aufweist, vorzugsweise Deletionen an mindestens zwei Positionen ausgewählt aus den Positionen 180+181 , 181+182,
182+183 und 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, besonders bevorzugt an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:5, und/oder mindestens eine Substitution an einer der Positionen 405, 421 , 422 und 428 in der Zählung gemäße SEQ ID NO:5 aufweist, die aus der aus I405L, A421 H, A422P, A428T und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
7. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das mindestens eine weitere Enzym eine Cellulase ist.
8. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei a) die mindestens eine Protease eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 3 ist, b) das mindestens ein weitere Enzym eine Amylase nach Anspruch 6 und/oder eine Cellulase ist.
9. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Waschmittelinhaltsstoff aus der aus Tensiden, Buildern, Komplexbildnern, Polymeren, Glaskorrosionsinhibitoren, Korrosionsinhibitoren, Bleichmitteln wie Persauerstoffverbindungen, Bleichaktivatoren oder Bleichkatalysatoren, wassermischbaren organischen Lösungsmitteln, Enzymstabilisatoren, Sequestrierungsmitteln, Elektrolyten, pH-Regulatoren und/oder weiteren Hilfsstoffen wie optischen Aufhellern, Vergrauungsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Färb- und Duftstoffen sowie Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
10. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
11 . Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei es in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
12. Verfahren zur Reinigung von Textilien und/oder harten Oberflächen, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein Wasch- oder Reinigungsmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 11 angewendet wird, wobei das Verfahren vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt von etwa 30°C, durchgeführt wird.
13. Verwendung eines Wasch- oder Reinigungsmittels nach einem der Ansprüche 1 bis 11 zur Reinigung von Textilien und/oder harten Oberflächen, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C ganz besonders bevorzugt von etwa 30°C.
14. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Carbonsäuren und -OOC- NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Enzymen, vorzugsweise Proteasen, Cellulasen und/oder Amylasen, in einem Wasch- und Reinigungsmittel, vorzugsweise in einem Wasch- oder Reinigungsmittels nach einem der Ansprüche 1 bis 11 .
15. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten
C2-6-Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC- NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Proteolyse von weiteren im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Enzymen, vorzugsweise Amylasen und/oder Cellulasen, bevorzugt Cellulasen, durch eine im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltene Protease, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel vorzugsweise ein Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 11 ist.
16. Verwendung einer Verbindung mit der Formel (I) oder (II) (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-e-Carbonsäuren und -OOC- NR22, wobei R2 gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel vorzugsweise ein Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 11 ist.
17. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche 14 bis 16, wobei die Verbindung aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
18. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche 14 bis 17, wobei a) die eine Protease eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 3 ist, b) das mindestens ein weitere Enzym eine Amylase nach Anspruch 6 und/oder eine Cellulase ist.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102023211308A1 (de) * 2023-11-14 2025-05-15 Henkel Ag & Co. Kgaa Reinigungsmittel enthaltend protease
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1234445A (de) 1967-10-03 1971-06-03
AT330930B (de) 1973-04-13 1976-07-26 Henkel & Cie Gmbh Verfahren zur herstellung von festen, schuttfahigen wasch- oder reinigungsmitteln mit einem gehalt an calcium bindenden substanzen
DK187280A (da) 1980-04-30 1981-10-31 Novo Industri As Ruhedsreducerende middel til et fuldvaskemiddel fuldvaskemiddel og fuldvaskemetode
JPH0697997B2 (ja) 1985-08-09 1994-12-07 ギスト ブロカデス ナ−ムロ−ゼ フエンノ−トチヤツプ 新規の酵素的洗浄剤添加物
ES2058119T3 (es) 1986-08-29 1994-11-01 Novo Nordisk As Aditivo detergente enzimatico.
US5389536A (en) 1986-11-19 1995-02-14 Genencor, Inc. Lipase from Pseudomonas mendocina having cutinase activity
DE3854249T2 (de) 1987-08-28 1996-02-29 Novonordisk As Rekombinante Humicola-Lipase und Verfahren zur Herstellung von rekombinanten Humicola-Lipasen.
JP3079276B2 (ja) 1988-02-28 2000-08-21 天野製薬株式会社 組換え体ｄｎａ、それを含むシュードモナス属菌及びそれを用いたリパーゼの製造法
EP0406314B1 (de) 1988-03-24 1993-12-01 Novo Nordisk A/S Cellulosezubereitung
US5776757A (en) 1988-03-24 1998-07-07 Novo Nordisk A/S Fungal cellulase composition containing alkaline CMC-endoglucanase and essentially no cellobiohydrolase and method of making thereof
GB8915658D0 (en) 1989-07-07 1989-08-23 Unilever Plc Enzymes,their production and use
DE69033388T2 (de) 1989-08-25 2000-05-11 Henkel Research Corp., Santa Rosa Alkalisches proteolytisches enzym und verfahren zur herstellung
AU639570B2 (en) 1990-05-09 1993-07-29 Novozymes A/S A cellulase preparation comprising an endoglucanase enzyme
DK115890D0 (da) 1990-05-09 1990-05-09 Novo Nordisk As Enzym
DK0548228T3 (da) 1990-09-13 1999-05-10 Novo Nordisk As Lipasevarianter
SG52693A1 (en) 1991-01-16 1998-09-28 Procter & Gamble Detergent compositions with high activity cellulase and softening clays
DK28792D0 (da) 1992-03-04 1992-03-04 Novo Nordisk As Nyt enzym
DK88892D0 (da) 1992-07-06 1992-07-06 Novo Nordisk As Forbindelse
EP1431389A3 (de) 1992-10-06 2004-06-30 Novozymes A/S Zellulase Variante
AU673078B2 (en) 1993-04-27 1996-10-24 Genencor International, Inc. New lipase variants for use in detergent applications
JP2859520B2 (ja) 1993-08-30 1999-02-17 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ リパーゼ及びそれを生産する微生物及びリパーゼ製造方法及びリパーゼ含有洗剤組成物
JPH07143883A (ja) 1993-11-24 1995-06-06 Showa Denko Kk リパーゼ遺伝子及び変異体リパーゼ
ATE222604T1 (de) 1994-02-22 2002-09-15 Novozymes As Methode zur herstellung einer variante eines lipolytischen enzymes
DE69536145D1 (de) 1994-03-08 2011-04-07 Novozymes As Neuartige alkalische Zellulasen
DE69534464T2 (de) 1994-03-29 2006-09-28 Novozymes A/S Alkalische amylase aus bacellus
WO1995030744A2 (en) 1994-05-04 1995-11-16 Genencor International Inc. Lipases with improved surfactant resistance
WO1995035381A1 (en) 1994-06-20 1995-12-28 Unilever N.V. Modified pseudomonas lipases and their use
WO1996000292A1 (en) 1994-06-23 1996-01-04 Unilever N.V. Modified pseudomonas lipases and their use
EP1995303A3 (de) 1994-10-06 2008-12-31 Novozymes A/S Ein Enzympräparat mit Enduglucanase-Aktivität
BE1008998A3 (fr) 1994-10-14 1996-10-01 Solvay Lipase, microorganisme la produisant, procede de preparation de cette lipase et utilisations de celle-ci.
AU3697995A (en) 1994-10-26 1996-05-23 Novo Nordisk A/S An enzyme with lipolytic activity
AR000862A1 (es) 1995-02-03 1997-08-06 Novozymes As Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del
JPH08228778A (ja) 1995-02-27 1996-09-10 Showa Denko Kk 新規なリパーゼ遺伝子及びそれを用いたリパーゼの製造方法
CN1182451A (zh) 1995-03-17 1998-05-20 诺沃挪第克公司 新的内切葡聚糖酶
BR9608149B1 (pt) 1995-05-05 2012-01-24 processos para efetuar mutação no dna que codifica uma enzima de subtilase ou sua pré- ou pré-pró-enzima e para a manufatura de uma enzima de subtilase mutante.
WO1997007202A1 (en) 1995-08-11 1997-02-27 Novo Nordisk A/S Novel lipolytic enzymes
WO1997004078A1 (en) 1995-07-14 1997-02-06 Novo Nordisk A/S A modified enzyme with lipolytic activity
WO1998008940A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Novo Nordisk A/S A novel endoglucanase
DE69735767T2 (de) 1996-09-17 2007-04-05 Novozymes A/S Cellulasevarianten
EP1002061A1 (de) 1997-07-04 2000-05-24 Novo Nordisk A/S Varianten der 6 endo-1,4-beta-glukanase und diese enthaldende reinigungszusammensetzungen
JP4426094B2 (ja) 1997-10-30 2010-03-03 ノボザイムス アクティーゼルスカブ αアミラーゼ変異体
WO2000034450A1 (en) 1998-12-04 2000-06-15 Novozymes A/S Cutinase variants
KR20010108379A (ko) 1999-03-31 2001-12-07 피아 스타르 리파제 변이체
ES2532606T3 (es) 1999-03-31 2015-03-30 Novozymes A/S Polipéptidos con actividad de alfa-amilasa alcalina y ácidos nucleicos que los codifican
CN101974375B (zh) 1999-12-15 2014-07-02 诺沃奇梅兹有限公司 对蛋渍具有改进洗涤性能的枯草杆菌酶变体
ES2322690T3 (es) 2000-02-24 2009-06-25 Novozymes A/S Xiloglucanasas de la familia 44.
DE60112928T2 (de) 2000-06-02 2006-06-14 Novozymes As Cutinase-varianten
AU2001291649A1 (en) 2000-10-02 2002-04-15 Novozymes A/S Nucleic acids encoding polypeptides having proteolytic activity
DK1399543T3 (da) 2001-06-06 2014-11-03 Novozymes As Endo-beta-1,4-glucanase
DE10131441A1 (de) 2001-06-29 2003-01-30 Henkel Kgaa Eine neue Gruppe von alpha-Amylasen sowie ein Verfahren zur Identifizierung und Gewinnung neuer alpha-Amylasen
DE10163748A1 (de) 2001-12-21 2003-07-17 Henkel Kgaa Neue Glykosylhydrolasen
AU2002353178C1 (en) 2001-12-31 2011-02-03 Genencor International, Inc. Proteases producing an altered immunological response and methods of making and using the same
EP2295554B1 (de) 2003-12-03 2012-11-28 Danisco US Inc. Perhydrolase
CA2854912A1 (en) 2004-07-05 2006-01-12 Novozymes A/S Alpha-amylase variants with altered properties
US8518675B2 (en) 2005-12-13 2013-08-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of peracids using an enzyme having perhydrolysis activity
DE102006038448A1 (de) 2005-12-28 2008-02-21 Henkel Kgaa Enzym-haltiges Reinigungsmittel
ES2629332T3 (es) 2006-01-23 2017-08-08 Novozymes A/S Variantes de lipasa
DE102006022224A1 (de) 2006-05-11 2007-11-15 Henkel Kgaa Subtilisin aus Bacillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin
MX288855B (es) 2006-07-07 2011-07-28 Procter & Gamble Una composicion que comprende una celulasa y un catalizador de blanqueador.
DE102007003143A1 (de) 2007-01-16 2008-07-17 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
DE102007011236A1 (de) * 2007-03-06 2008-09-11 Henkel Ag & Co. Kgaa Carboxylgruppen tragende Benzophenon-oderBenzoesäureanilid-Derivate als Enzymstabilisatoren
EP2250259B1 (de) 2008-02-29 2016-08-31 Novozymes A/S Polypeptide mit lipase-aktivität und diese kodierende polynukleotide
US20090258810A1 (en) * 2008-04-01 2009-10-15 Brian Xiaoqing Song Gel automatic dishwashing detergent composition
DE102008017103A1 (de) 2008-04-02 2009-10-08 Henkel Ag & Co. Kgaa Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend Proteasen aus Xanthomonas
EP2367923A2 (de) 2008-12-01 2011-09-28 Danisco US Inc. Enzyme mit lipaseaktivität
MX2011008656A (es) 2009-03-06 2011-09-06 Huntsman Adv Mat Switzerland Metodos de decoloracion-blanqueo enzimatico de textiles.
WO2010107560A2 (en) 2009-03-18 2010-09-23 Danisco Us Inc. Fungal cutinase from magnaporthe grisea
US20120058527A1 (en) 2009-03-23 2012-03-08 Danisco Us Inc. Cal a-related acyltransferases and methods of use, thereof
BR112012017056A2 (pt) 2009-12-21 2016-11-22 Danisco Us Inc "composições detergentes contendo lipase de bacillus subtilis e métodos para uso das mesmas"
BR112012017062A2 (pt) 2009-12-21 2016-11-29 Danisco Us Inc "composições deterfgentes contendo lipase de geobacillus stearothermophilus e métodos para uso das mesmas"
BR112012017060A2 (pt) 2009-12-21 2016-11-29 Danisco Us Inc "composições detergentes contendo lipase de thermobifida fusca, método para hidrolisar um lipídio presente em uma sujeira ou mancha sobre uma superfície e método para realizar uma reação de transesterificação
EP2357220A1 (de) 2010-02-10 2011-08-17 The Procter & Gamble Company Reinigungszusammensetzungen mit Amylasevarianten mit hoher Stabilität in Gegenwart eines Chelatwirkstoffs
AR081423A1 (es) 2010-05-28 2012-08-29 Danisco Us Inc Composiciones detergentes con contenido de lipasa de streptomyces griseus y metodos para utilizarlas
DE102010038502A1 (de) * 2010-07-27 2012-02-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Stabilisierte flüssige enzymhaltige Tensidzubereitung
MX2013011617A (es) 2011-04-08 2013-11-21 Danisco Us Inc Composiciones.
EP2540824A1 (de) 2011-06-30 2013-01-02 The Procter & Gamble Company Reinigungszusammensetzungen mit Amylasevariantenreferenz zu einem Sequenzprotokoll
DE102011118021A1 (de) 2011-10-28 2013-05-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Leistungsverbesserte und temperaturstabile Proteasevarianten
DE102013219467A1 (de) * 2013-09-26 2015-03-26 Henkel Ag & Co. Kgaa Stabilisierte Inhibitor-Proteasevarianten
DE102014212640A1 (de) * 2014-06-30 2015-12-31 Henkel Ag & Co. Kgaa Reinigungsmittel enthaltend Amylasen
FI127093B (en) 2014-10-27 2017-11-15 Ab Enzymes Oy Fungal-derived endoglucanase variants, their production and use
DE102016210628A1 (de) 2016-06-15 2017-12-21 Henkel Ag & Co. Kgaa Bacillus gibsonii Protease und Varianten davon
DE102016211115A1 (de) * 2016-06-22 2017-12-28 Henkel Ag & Co. Kgaa Enzymstabilisatoren
CN111670250B (zh) 2017-12-21 2024-02-13 生化酶股份有限公司 真菌纤维素酶的变体
EP3502243B1 (de) 2017-12-21 2024-10-09 AB Enzymes Oy Varianten von pilzcellulase
EP3653706A1 (de) 2018-11-13 2020-05-20 AB Enzymes Oy Fusionsprotein
EP3653705A1 (de) 2018-11-13 2020-05-20 AB Enzymes Oy Pilzcellulasevarianten mit verbesserter stabilität
DK3660146T5 (da) * 2018-11-29 2024-08-26 Henkel Ag & Co Kgaa Ydelsesforbedrede og opbevaringsstabile proteasevarianter
EP3660151B1 (de) 2018-11-29 2023-07-19 Henkel AG & Co. KGaA Leistungsverbesserte und lagerstabile protease-varianten
DE102020105720A1 (de) 2020-03-03 2021-09-09 Henkel Ag & Co. Kgaa Stabilitätsverbesserte Proteasevarianten VI
DE102020105721A1 (de) 2020-03-03 2021-09-09 Henkel Ag & Co. Kgaa Leistungsverbesserte Proteasevarianten VII
DE102020205400A1 (de) * 2020-04-29 2021-11-04 Henkel Ag & Co. Kgaa Hochalkalisches Textilwaschmittel mit Protease
WO2022074037A2 (en) * 2020-10-07 2022-04-14 Novozymes A/S Alpha-amylase variants

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Publication number Publication date
WO2023232194A1 (de) 2023-12-07
DE112023002502A5 (de) 2025-09-18
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