EA028535B1

EA028535B1 - Способы лечения с применением липидных соединений

Info

Publication number: EA028535B1
Application number: EA201390659A
Authority: EA
Inventors: Рагнар Ховланд; Торе Скьерет; Дэвид А. Фрейзер
Original assignee: Пронова Биофарма Норге Ас
Priority date: 2010-11-05
Filing date: 2011-11-03
Publication date: 2017-11-30
Also published as: MX350720B; EP2635270A1; TW201233388A; TW201701875A; IL226116B; AR083772A1; KR20200034814A; US20130345269A1; NZ610705A; SG10201509127YA; CA2816949C; CO6771414A2; KR102265409B1; MX2013005022A; KR20190072661A; AU2011324909A1; IL226116A0; PH12013500893A1; EP2635270B1; JP2014505017A

Abstract

Раскрыт способ снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, включающий введение индивиду фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой(ого) соли или сложного эфира, где Rи Rнезависимо выбирают из атома водорода или линейных, разветвленных и/или циклических C-Салкильных групп при условии, что оба Rи Rне являются водородом. Также изобретение относится к применению фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира, где Rи Rимеют значения, указанные выше, для снижения повышенных уровней Аро В у индивида.

Description

Эта заявка притязает на приоритет предварительной заявки США № 61/410445, поданной 5 ноября 2010 г., раскрытие которой включено в этот документ посредством ссылки в полном объеме.

Настоящее раскрытие относится к способу снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира, где К₁ и К₂ независимо выбирают из атома водорода или линейных разветвленных и/или циклических С₁-С₆алкильных групп с условием, что К₁ и К₂ оба не являются водородом.

Пищевые полиненасыщенные жирные кислоты (ΡϋΕΑδ), включая омега-3 жирные кислоты, имеют воздействия на разнообразные физиологические процессы, которые влияют на нормальное здоровье и хронические заболевания, например на регуляцию уровней липидов в плазме, на функции сердечнососудистой и иммунной систем, на работу инсулина, на нейрональное развитие и на функцию зрения.

Омега-3 жирные кислоты, например, (52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаеновая кислота (ЕРА) и (42,72,102,132,162,192)докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (ΌΗΑ) регулируют уровни липидов в плазме, функции сердечно-сосудистой и иммунной систем, работу инсулина и нейрональное развитие, и функцию зрения. Омега-3 жирные кислоты, как было показано, оказывают благоприятное действие на факторы риска в отношении сердечно-сосудистых заболеваний, например артериальной гипертензии и гипертриглицеридемии (НТО), и на активность комплекса фосфолипида и фактора VII коагуляции. Омега-3 жирные кислоты, как было показано, также снижают уровень сывороточных триглицеридов, увеличивают уровень сывороточного холестерина липопротеинов высокой плотности (ΗΌΕ), снижают систолическое и диастолическое кровяное давление и/или частоту пульса и понижают активность комплекса фосфолипида - фактора VII коагуляции крови.

У людей холестерин и триглицериды входят в состав липопротеиновых комплексов в кровотоке, которые могут быть разделены с помощью ультрацентрифугирования на фракцию липопротеина высокой плотности (ΗΌΕ = ЛПВП), на фракцию липопротеина промежуточной плотности (Ш1. = ЛППП), на фракцию липопротеина низкой плотности (БЭЕ = ЛПНП), на фракцию липопротеина очень низкой плотности (VI .1)1. = ЛПОНП). В печени синтезируются холестерин и триглицериды, внедряются в УБОЕ и высвобождаются в плазму. Состояния, характеризующиеся аномально высокими значениями холестерина и/или липидов в крови, включают гиперхолестеролемию, гиперлипидемию (гиперлипопротеинемию), НТО (гипертриглицеридемию) и смешанную дислипидемию. Высокие уровни общего холестерина (общий-Х), холестерин ЛПНП (БЭЕ-С = холестерин липопротеинов низкой плотности) и аполипопротеин В 100 (мембранный комплекс с ЛПНП и ЛПОНП) могут промотировать ишемическую болезнь сердца у человека (СНО). Фактически, в докладе комиссии ΝΟΕΡ АТР III (национальная образовательная программа по холестерину) особо определено снижение холестерина липопротеинов невысокой плотности как основное лечебное требование в первичном предупреждении ишемической болезни сердца.

Сниженные уровни холестерина ЛПВП (ΗΌΕ-С = холестерин липопротеинов высокой плотности) и его транспортного комплекса - аполипопротеина А, также связаны с развитием С1II). Клинические проявления сердечно-сосудистых заболеваний и смертность от сердечно-сосудистых заболеваний у людей коррелируют с уровнем общего холестерина и холестерина ЛПНП, обратно пропорциональны уровню холестерина ЛПВП.

Такие факторы, как высокий холестерин липопротеинов низкой плотности/липопротеинов невысокой плотности, гипертриглицеридемия (ΗΤΟ) и низкий холестерин ЛПВП, составляют признаки метаболического синдрома, который представляет множество липидных и нелипидных (например, артериальная гипертензия) факторов риска метаболической природы.

Метаболический синдром тесно связан с генерализованным метаболическим расстройством, называемым как инсулиновая резистентность, в котором нормальная работа инсулина ухудшена.

Комиссия ΝΟΕΡ АТР III (Комиссия Национальной образовательной программы по холестерину) рекомендует лечение липидных и нелипидных факторов, связанных с метаболическим синдромом, таких как снижение ΗΤΟ (гипертриглицеридемии) и холестерина невысокой плотности в качестве вторичной мишени в первичном предупреждении С1II).

Длинноцепочечные омега-3 жирные кислоты, ЕРА и ΌΗΑ, хорошо установлены в лечении ΗΤΟ и имеют благотворное влияние на другие факторы риска, связанные с ΟΗΌ, такие как артериальная гипертензия и протромботичнское состояние. Однако вследствие их ограниченного биологического действия на другие факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, такие как липопротеин низкой плотности, существует потребность в улучшении их биологического действия. Несколько исследовательских групп изучили химическую модификацию омега-3 жирных кислот в отношении влияния на их биологическое

- 1 028535 действие. См., например, Ко88ше1§1 е! а1. (ОЪезйу, Дай. 15, 2009); Е1оек е! а1. (Ле1а Сйеш1еа Зеапбтау1еа, 53:436, 1999); Ρϊίί е! а1. (Зуп1йе§1§, 1240-42, 1997).

Настоящее раскрытие в целом относится к снижению повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

или его фармацевтически приемлемой(ого) соли или сложного эфира, где К₁ и К₂ независимо выбирают из атома водорода или линейных, разветвленных и/или циклических С₁-С₆алкильных групп при условии, что оба К₁ и К₂ не являются водородом.

Настоящее раскрытие также включает способ снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, где способ включает введение индивиду фармацевтически эффективного количества 2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутановой кислоты

или ее фармацевтически приемлемой(ого) соли или сложного эфира.

Настоящее изобретение также относится к применению фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира для снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, где К₁ и К₂ независимо выбраны из атома водорода или линейных, разветвленных и/или циклических С₁-С₆алкильных групп при условии, что оба К₁ и К₂ не являются водородом.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает уровни холестерина и триглицерида у мышей АРОЕ*3Ье1беп после введения соединения А (0,3 ммоль/кг) в соответствии с настоящим раскрытием или Ошаеог™ (3,3 ммоль/кг);

фиг. 2 - уровни холестерина и триглицерида у мышей АРОЕ*3Ье1беп.СЕТР после введения соединения А в соответствии с настоящим раскрытием или фенофибрата;

фиг. 3 - уровни ЛПВП у мышей АРОЕ*3Ее1беп.СЕТР после введения соединения А, в соответствии с настоящим раскрытием, или фенофибрата;

фиг. 4 - уровни общего холестерина у мышей АРОЕ*3Ее1беп.СЕТР после введения соединения А, в соответствии с настоящим раскрытием, фенофибрата, или отрицательного контроля;

фиг. 5 - уровни ЛПВП у мышей АРОЕ*3Ее1беп.СЕТР после введения соединения А, в соответствии с настоящим раскрытием, фенофибрата или отрицательного контроля;

фиг. 6 - затронутый поражением участок у мышей АРОЕ*3Ее1беп.СЕТР после введения соединения А, в соответствии с настоящим раскрытием, фенофибрата или отрицательного контроля;

фиг. 7 - незатронутый поражением участок у мышей АРОЕ*3Ее1беп.СЕТР после введения соединения А, в соответствии с настоящим раскрытием, фенофибрата или контроля.

Описание

Конкретные аспекты раскрытия описаны более подробно ниже. Подразумевается, что термины и определения, которые используются в настоящей заявке и которые разъясняются в этом документе, показывают значение в рамках настоящего раскрытия.

Термины приблизительно и около означают примерно то же самое, что и упоминаемое число или значение. Используемые в этом документе термины приблизительно и около, как следует в общем и целом понимать, охватывают ± 5% заданного количества, частоты или значения.

Термины лечить, проведение лечения и лечение включают любое лечебное применение, которое может благотворно влиять на млекопитающего-человека или на млекопитающего-нечеловека. Лечение как людей, так и животных входит в рамки объема настоящего раскрытия. Лечение может реагировать на существующее состояние или оно может быть профилактическим, т.е. предупреждающим.

Термины вводить, введение и проведение введения, которые используют в этом документе, относятся к (1) обеспечению, предоставлению и/или назначению либо врачом, либо его представителем,

- 2 028535 либо под его руководством, соединения или композиции в соответствии с настоящим раскрытием, и (2) осуществлению приема, к принятию или к потреблению пациентом-человеком или индивидуумом самим по себе, или млекопитающим-нечеловеком, соединения или композиции в соответствии с настоящим раскрытием.

Термин фармацевтически эффективное количество означает количество, достаточное для получения желаемых фармакологических и/или терапевтических эффектов, т.е. количество раскрываемого соединения, которое является эффективным для достижения предполагаемой цели. Хотя отдельно взятый субъект/пациент, который нуждается в лечении, может варьироваться, определение оптимальных диапазонов для эффективных количеств раскрываемого соединения соответствует компетентности в данной области. Как правило, схема приема лекарственного средства для лечения заболевания и/или состояния с помощью соединений, раскрываемых в настоящей заявке, может быть определена в соответствии с набором факторов, таких как тип, возраст, масса, пол, диета и/или медицинское состояние субъекта/пациента.

Термин фармацевтическая композиция означает соединение в соответствии с настоящим раскрытием в любой форме, подходящей для медицинского применения.

Соединения формулы (I) могут существовать в различных стереоизомерных формах, включая энантиомеры, диастереомеры или их смеси. Будет ясно, что изобретение охватывает все оптические изомеры соединений формулы (I) и их смеси. Следовательно, соединения формулы (I), которые существуют в качестве диастереомеров, рацематов и/или энантиомеров, входят в объем настоящего раскрытия.

Настоящее раскрытие включает способ лечения или предупреждения по меньшей мере одного заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в таком лечении или предупреждении, включающий в себя введение субъекту фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

или его фармацевтически приемлемой(ого) соли или сложного эфира, где Κι и К₂ независимо выбирают из атома водорода или линейных, разветвленных и/или циклических С1-С₆алкильных групп с условием, что Κ и К₂ - оба не являются водородом.

По меньшей мере в одном варианте осуществления Κ₁ и К₂ выбирают из водорода, метила, этила, нпропила и изопропила.

По меньшей мере в одном варианте осуществления соединение присутствует в его различных стереоизомерных формах, таких как энантиомер (Κ или 8), диастереомер или его смеси.

По меньшей мере в одном варианте осуществления соединение присутствует в рацемической форме.

В тех случаях, где соединение согласно формуле (I) представляет собой соль противоиона по меньшей мере с одним стереогенным центром, или сложный эфир спирта по меньшей мере с одним стереогенным центром, соединение может иметь несколько стереоцентров. В тех ситуациях соединения настоящего раскрытия могут существовать как диастереомеры. Таким образом по меньшей мере в одном варианте осуществления, соединения настоящего раскрытия присутствуют в форме по меньшей мере одного диастереомера.

По меньшей мере в одном варианте осуществления соединение настоящего раскрытия представляет собой 2-((57,87,117,147,177)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутановую кислоту

По меньшей мере в одном варианте осуществления по меньшей мере одно заболевание или состояние выбирают из атеросклероза, периферической инсулиновой резистентности, диабетического состояния или дислипидемического состояния.

По меньшей мере в одном варианте осуществления снижают уровни холестерина в крови, снижают триглицериды, увеличивают ЛПВП и/или снижают число случаев атеросклеротических поражений.

Соединения формулы (I) могут быть получены таким образом, как описано, например, в заявке согласно РСТ №РСТ/ГО 10/001251, поданной 7 мая 2010 г., и в соответствии с примерами 1-11, представленными ниже. Примеры 1-11 являются иллюстративными, и специалисту в данной области будет понятно, как применить эти общие способы для получения других соединений в рамках объема, охватываемого формулой (I). Соединения настоящего раскрытия могут находиться в форме фармацевтически приемлемой(ого) соли или сложного эфира. Например, соединения формулы (I) могут быть в форме сложных эфиров, таких как фосфолипид, триглицерид, 1,2-диглицерид, 1,3-диглицерид, 1-моноглицерид или 2-моноглицерид.

Соли, подходящие для настоящего раскрытия, включают соли ΝΗ₄ ⁺; соли ионов металлов, таких

- 3 028535 как Ы+, Ыа+, К+, Мд²+ или Са²⁺; соли протонированного первичного амина, такие как трет-бутиламмоний, (35,5,75)-адамантан-1-аммоний, 1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-аммоний, соли протонированного аминопиридина (например, пиридин-2-аммоний); соли протонированного вторичного амина, такие как диэтиламмоний, 2,3,4,5,6-пентагидрокси-Ы-метилгексан-1-аммоний, Ы-этилнафталин-1аммоний, соли протонированного третичного амина, такие как 4-метилморфолин-4-ий и соли протонированного гуанидина, такие как амино((4-амино-4-карбоксибутил)амино)метаниминий или соли протонированного гетероциклического соединения, такие как 1Н-имидазол-3-ий, но не ограничиваются этим. Дополнительные примеры подходящих солей включают соли дипротонированного диамина, такие как этан-1,2-диаммоний или пиперазин-1,4-диий. Другие соли в соответствии с настоящим раскрытием могут включать протонированный хитозан

Настоящее раскрытие предусматривает способы лечения и/или предупреждения по меньшей мере одного заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в таком лечении или предупреждении, включающие в себя введение субъекту фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I). Субъект может быть млекопитающим-человеком или млекопитающим-нечеловеком.

Соединения, раскрываемые в настоящей заявке, могут быть введены в форме лекарственного препарата, такого как фармацевтическая композиция.

Композиция, раскрываемая в настоящей заявке, может содержать по меньшей мере одно соединение формулы (I) и необязательно по меньшей мере один неактивный фармацевтический ингредиент, т.е. эксципиент. Неактивные ингредиенты могут солюбилизировать, суспендировать, сгущать, разбавлять, эмульгировать, стабилизировать, консервировать, защищать, окрашивать, ароматизировать и/или формовать активные ингредиенты с образованием такого применимого и эффективного препарата, который может быть безопасным, удобным и/или в других отношениях приемлемым для применения. Примеры эксципиентов включают растворители, носители, разбавители, связывающие вещества, наполнители, подслащивающие вещества, ароматизирующие вещества, модификаторы рН, модификаторы вязкости, антиоксиданты, удешевляющие вещества, влагоудерживающие вещества, разрыхляющие вещества, растворение-замедляющие добавки, ускорители поглощения, смачивающие вещества, абсорбенты, скользящие вещества, окрашивающие вещества, диспергирующие вещества и консерванты, но не ограничиваются этим. Эксципиенты могут иметь более одной роли или функции, или могут быть распределены на две и более групп; распределения на группы являются лишь описательными и не предназначены для ограничения. В некоторых вариантах осуществления, например, по меньшей мере один эксципиент может быть выбран из кукурузного крахмала, лактозы, глюкозы, микрокристаллической целлюлозы, стеарата магния, поливинилпирролидона, лимонной кислоты, винной кислоты, воды, этанола, глицерина, сорбита, полиэтиленгликоля, пропиленгликоля, цетилстеарилового спирта, карбоксиметилцеллюлозы и жировых веществ, таких как твердый жир, или из подходящих смесей. В некоторых вариантах осуществления композиции, раскрываемые в настоящей заявке, содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый антиоксидант, например токоферол и 3-ВНА (бутилированный гидроксианизол).

Композиции, раскрываемые в настоящей заявке, могут быть составлены в формах для перорального введения, например в таблетках или желатиновых мягких или твердых капсулах. Лекарственная форма может иметь любую форму, подходящую для перорального введения, такую как сферическая, овальная, эллипсоидная, кубическая, правильная и/или неправильная форма. Стандартные методы приготовления составов, известные в данной области, могут быть использованы для введения в составы соединений согласно настоящему раскрытию. В некоторых вариантах осуществления композиция может иметь форму желатиновой капсулы или таблетки.

Подходящая суточная дозировка соединения формулы (I) может варьироваться в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 3 г. Например, в некоторых вариантах осуществления суточная доза находится в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 1 г, от приблизительно 10 мг до приблизительно 1 г, от приблизительно 10 до приблизительно 800 мг, от приблизительно 10 до приблизительно 600 мг, от приблизительно 10 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг. По меньшей мере в одном варианте осуществления суточная доза колеблется в диапазоне от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг. Соединения могут быть введены, например, однократно, дважды, или три раза в день. По меньшей мере в одном варианте осуществления соединение формулы (I) вводят в количестве, находящемся в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 500 мг на дозу. По меньшей мере в одном варианте осуществления соединение формулы (I) вводят один раз в день.

Соединения формулы (I), раскрываемые в этом документе, могут быть введены для лечения и/или для предупреждения по меньшей мере одного заболевния, состояния или фактора риска, связанные с ишемической болезнью сердца (СНО). Например, в некоторых вариантах осуществления по меньшей

- 4 028535 мере одно заболевание или состояние выбирают из атеросклероза; периферической инсулиновой резистентности и/или диабетического состояния, такого как сахарный диабет 2 типа; дислипидемического состояния, такого как гипертриглицеридемия (НТО), повышенного уровня общего холестерина, повышенного уровня холестерина липопротеинов невысокой плотности, повышенного уровня холестерина липопротеинов низкой плотности, повышенного уровня Аро В, низкого уровня холестерина липопротеинов высокой плотности, первичной гиперхолестеролемии (гетерозиготной семейной и несемейной), смешанной дислипидемии (Фредриксоновских Типов 11а и ПЬ), первичной дисбеталипопротеинемии (Фредриксоновского Типа III); метаболического синдрома; ожирения или состояния при наличии избыточного веса; и заболевания, связанного с жировой дистрофией печени, такого как неалкогольная жировая болезнь печени (ΝΆΤΈΌ).

По меньшей мере в одном варианте осуществления по меньшей мере одно заболевание или состояние представляет собой атеросклероз. Например, настоящее раскрытие дополнительно охватывает способ снижения и/или замедления прогрессирования развития атеросклероза. Способы, раскрываемые в настоящей заявке, могут, например, снижать по меньшей мере один показатель, выбираемый из инсулина плазмы, глюкозы крови и сывороточных триглицеридов у субъекта, нуждающегося в таком снижении. Настоящее раскрытие также предусматривает способ лечения и/или предупреждения по меньшей мере одного из состояний, выбираемых из повышенных уровней триглицеридов, повышенных уровней холестерина ЛПОНП/ЛПНП и низких уровней холестерина ЛВП, у субъекта, нуждающегося в таком лечении и/или предупреждении.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединения формулы (I), такие как 2((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутановая кислота имеют заметно хорошую фармацевтическую активность. Соединения формулы (I), раскрываемые в настоящей заявке, могут показывать улучшенную биологическую активность в сравнении с омега-3 жирными кислотами природного происхождения, такими как ЕРА ((5Ζ,8Ζ,11Ζ, 14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаеновая кислота) и ΌΗΆ ((4Ζ,7Ζ, 10Ζ, 13Ζ,16Ζ, 19Ζ)докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота).

В некоторых вариантах осуществления, например, соединения формулы (I) могут показывать сравнимую или более высокую биологическую активность, чем другие холестерин-понижающие фармацевтические средства, например, фенофибрат, без побочных эффектов, связанных с фибратами, таких как миопатия, камни в желчном пузыре и диспепсия.

Примеры

Настоящее раскрытие может быть дополнительно описано с помощью следующих неограничивающих примеров, в которых могут быть использованы, при необходимости, стандартные методы, известные специалисту-химику, и методы, аналогичные описанным в этих примерах методам. Понятно, что специалист в данной области предусмотрит дополнительные варианты осуществления, согласующиеся с раскрытием, предоставленным в этом документе.

Если не установлено иное, реакции проводят при комнатной температуре, обычно в диапазоне между 18-25°С, в растворителях с хроматографической степенью чистоты в безводных условиях. Выпаривание проводят путем испарения на роторном испарителе в вакууме. Колоночную хроматографию осуществляют с применением флэш-методики на силикагеле. Значения химических сдвигов Ядерного магнитного резонанса (ЯМР) записывают на приборе Вгикег Ауапее ΌΡΧ 200 или 300 с пиковыми мультиплетностями, описанными следующим образом: з, синглет; б, дублет; άά, дублет дублетов; ί, триплет; ς, квадруплет; р, пентет; т, мультиплет; Ьг, широкий сигнал. Масс-спектры записывают на массспектрометре О1956А (электро-спрей-ионизация, 3000 В) с переключением режима ионизации положительных и отрицательных ионов. Представленные выходы являются иллюстративными и необязательно отражают максимально достигаемый выход.

Пример 1. Получение трет-бутил 2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутаноата

Тетрабутиламмонийхлорид (0,55 г, 1,98 ммоль) добавляют к раствору (5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза5,8,11,14,17-пентаен-1-ола (3,50 г, 12,1 ммоль) в толуоле (35 мл) при температуре окружающей среды под азотом. При энергичном перемешивании при комнатной температуре добавляют водный раствор гидроксида натрия (50% (мас./мас.), 11,7 мл), после этого - трет-бутил-2-бромбутират (5,41 г, 24,3 ммоль). Получающуюся в результате смесь нагревают до 50°С и добавляют дополнительный трет-бутил2-бромбутират по истечении 1,5 ч (2,70 г, 12,1 ммоль), 3,5 ч (2,70 г, 12,1 ммоль) и 4,5 ч (2,70 г, 12,1 ммоль) и перемешивают в течение 12 ч в целом. После охлаждения до комнатной температуры добавляют ледяную воду (25 мл) и получающиеся в результате две фазы разделяют. Органическую фазу промывают смесью ΝαΟΗ (5%) и рассолом, сушат (Μ§δΟ₄), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента все в большей мере полярных смесей гептана и этилацетата (100:0^95:5). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет

- 5 028535

1,87 г (выход 36 %) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,851,10 (м, 6Н), 1,35-1,54 (м, 11Н), 1,53-1,87 (м, 4Н), 1,96-2,26 (м, 4Н), 2,70-3,02 (м, 8Н), 3,31 (дт, 1Н), 3,513,67 (м, 2Н), 5,10-5, 58 (м, 10Н).

Пример 2. Получение 2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутановой кислоты (соединение А)

трет-Бутил 2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутаноат (19,6 г, 45,5 ммоль) растворяют в дихлорметане (200 мл) и помещают в атмосферу азота. Добавляют трифторуксусную кислоту (50 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа. Добавляют воду и водную фазу экстрагируют дважды дихлорметаном. Объединенный органический экстракт промывают рассолом, сушат (Па₂8О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток подвергают флэш-хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента все, в большей мере, полярных смесей гептана, этилацетата и муравьиной кислоты (90:10:1^80:20:1). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 12,1 г (выход 71 %) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,90-1,00 (м, 6Н), 1,50 (м, 2Н), 1,70 (м, 2Н), 1,80 (м, 2Н), 2,10 (м, 4Н), 2,80-2,90 (м, 8Н), 3,50 (м, 1Н), 3,60 (м, 1Н), 3,75 (т, 1Н), 5,30-5,50 (м, 10Н); Масс-спектрометрия (электро-спрейионизация): 373,2 [М-Н]^-.

Пример 3. Получение (48,5К)-3-((8)-2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5-фенилоксазолидин-2-она и (48,5Κ)-3-((Κ)-2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5-фенилоксазолидин-2-она

ΏΜΑΡ (диметиламинопиридин) (1,10 г, 8,90 ммоль) и ОСС (дициклогексилкарбодиимид) (1,90 г,

9,30 ммоль) добавляют к смеси 2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси) бутановой кислоты (3,20 г, 8,50 ммоль) в сухом дихлорметане (100 мл), выдержанной при 0°С под азотом. Получающуюся в результате смесь перемешивают при 0°С в течение 20 мин. Добавляют (48,5К)-4-метил-5фенилоксазолидин-2-он (1,50 г, 8,50 ммоль) и получающуюся в результате мутную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение пяти дней. Смесь фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, что дает сырой продукт, содержащий желаемый продукт в виде смеси двух диастереомеров. Остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента 15%-ного раствора этилацетата в гептане. Два диастереомера разделяют и соответствующие фракции концентрируют. (48,5Κ)-3-((8)-2-((5Ζ,8Ζ, 11Ζ,14Ζ, 17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутаноил)-4метил-5-фенилоксазолидин-2-он, элюированный первым, получают в количестве 1,1 г (выход 40%) в виде масла. (48,5Κ)-3-((Κ)-2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5фенилоксазолидин-2-он получают в количестве 0,95 г (выход 34%) в виде масла.

(48,5Κ)-3-((8)-2-((5Ζ,8Ζ, 11Ζ,14Ζ, 17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5фенилоксазолидин-2-он (Е1):

¹Н-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,90 (д, 3Н), 1,00 (т, 3Н), 1,07 (т, 3Н), 1,45-1,57 (м, 2Н), 1,62-1,76 (м, 3Н), 1,85-1,95 (м, 1Н), 2,05-2,15 (м, 4Н), 2,87 (м, 8Н), 3,39 (м, 1Н), 3,57 (м, 1Н), 4,85-4,92 (м, 2Н), 5,30-5,45 (м, 10Н), 5,75 (д, 1Н), 7,32 (м, 2Н), 7,43 (м, 3Н).

(48,5Κ)-3-((Κ)-2-((5Ζ,8Ζ, 11Ζ,14Ζ, 17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5фенилоксазолидин-2-он (Е2):

¹Н-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,90 (д, 3Н), 0,99 (т, 3Н), 1,08 (т, 3Н), 1,40-1,52 (м, 2Н), 1,55-1,75 (м, 3Н), 1,80-1,90 (м, 1Н), 2,05-2,15 (м, 4Н), 2,84 (м, 8Н), 3,39 (м, 1Н), 3,56 (м, 1Н), 4,79 (пент.1Н), 4,97 (дд.1Н), 5,30-5,45 (м, 10Н), 5,71 (д, 1Н), 7, 33 (м, 2Н), 7,43 (м, 3Н).

Пример 4. Получение (8)-2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутановой кислоты (соединение В)

Пероксид водорода (35%-ный раствор в воде, 0,75 мл, 8,54 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (0,18 г, 4,27 ммоль) добавляют к раствору (48,5Κ)-3-((8)-2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5-фенилоксазолидин-2-она (1,10 г, 2,13 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл) и воде (4 мл), выдержанному при 0°С под азотом. Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 30 мин. Добавляют 10%-ный водный раствор Па₂8О₃ (30 мл), регулируют рН с доведением до ~2

- 6 028535 с помощью 2М-го раствора НС1 и смесь экстрагируют дважды гептаном (30 мл). Объединенный органический экстракт сушат (Ыа₂8О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток подвергают флэшхроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента все, в большей мере, полярных смесей гептана и этилацетата (98 : 8^ 1:1). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 0,48 г (выход 60 %) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 0,90-1,00 (м, 6Н), 1,48 (м, 2Н), 1,65 (м, 2Н), 1,85 (м, 2Н), 2,10 (м, 4Н), 2,80-2,90 (м, 8Н), 3,55 (м, 1Н), 3,60 (м, 1Н), 3,88 (т, 1Н), 5,35-5,45 (м, 10Н); Масс-спектрометрия (электро-спрей-ионизация): 373,3 [М-Н]^-; [δ]ο+37° (с=0,104, этанол).

Пример 5. Получение (К)-2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)бутановой кислоты (соединение С) \

Пероксид водорода (35%-ный раствор в воде, 0,65 мл, 7,37 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (0,15 г, 3,69 ммоль) добавляют к раствору (48, 5К)-3-((К)-2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17пентаенилокси)бутаноил)-4-метил-5-фенилоксазолидин-2-она (0,95 г, 1,84 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл) и воде (4 мл), выдержанному при 0°С под азотом. Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 30 мин. Добавляют 10%-ный водный раствор Ыа₂8О₃ (30 мл), регулируют рН с доведением до ~2 с помощью 2М-го раствора НС1 и смесь экстрагируют дважды гептаном (30 мл). Объединенный органический экстракт сушат (Ыа₂8О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток подвергают флэшхроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента все в большей мере полярных смесей гептана и этилацетата (98:8^50:50). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 0,19 г (выход 29 %) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 0,90-1,00 (м, 6Н), 1,48 (м, 2Н), 1,65 (м, 2Н), 1,85 (м, 2Н), 2,10 (м, 4Н), 2,80-2,90 (м, 8Н), 3,55 (м, 1Н), 3,60 (м, 1Н), 3,88 (т, 1Н), 5,35-5,45 (м, 10Н); Масс-спектрометрия (электро-спрей-ионизация): 373,3 [М-Н]^-; [δ]ο-31° (с=0,088, этанол).

Пример 6. Получение трет-бутил 2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)пропаноата

Смесь (5Ζ, 8Ζ, 11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-ол) а (1,00 г, 3,47 ммоль), тетрабутиламмоний-хлорида (0,24 г, 0,8 7 ммоль) и трет-бутил δ-бром-пропионата (3,62 г, 17,3 ммоль) растворяют в толуоле (36 мл) и помещают в атмосферу азота. При энергичном перемешивании медленно добавляют водный раствор гидроксида натрия (50%, 8 мл) и получающуюся в результате смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение двадцати часов. Добавляют воду и смесь экстрагируют три раза простым эфиром. Объединенный органический экстракт промывают рассолом, сушат (Ыа₂8О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента 2%-ного раствора этилацетата в гептане. Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 1,40 г (выход 90%) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,95 (т, 3Н), 1,41 (д, 3Н), 1,48 (с, 9Н), 1,48-1,66 (м, 4Н), 2,05 (м, 4Н), 2,83 (м, 8Н), 3,35 (м, 1Н), 3,55 (м, 1Н), 3,79 (кв., 1Н), 5,32-5,44 (м, 10Н).

Пример 7. Получение 2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)пропановой кислоты

Трифторуксусную кислоту (2 мл) добавляют к раствору 2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17пентаенилокси)пропаноата (1,40 г, 3,36 ммоль) в дихлорметане (10 мл), выдержанному в атмосфере азота и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение трех часов. Добавляют диэтиловый эфир (50 мл) и органическую фазу промывают водой (30 мл), сушат (Ыа₂8О₄) и концентрируют. Остаток подвергают флэш-хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента все в большей мере полярных смесей гептана, этилацетата и муравьиной кислоты (95:5:0,25^80:20:1). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 0, 67 г продукта с небольшим количеством примеси. Этот материал растворяют в гептане (15 мл), промывают три раза водой (5 мл), сушат (Ыа₂8О₄), фильтруют и концентрируют с предоставлением 0,50 г (выход 41%) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС^): δ 0,99 (т, 3Н), 1,40-1,48 (м, 5Н), 1,67 (м, 2Н), 2,09 (м, 4Н), 2,802,60 (м, 8Н), 3,53 (м, 2Н), 4,01 (кв., 1Н), 5,31-5,47 (м, 10Н); Масс-спектрометрия (электро-спрейионизация): 359,2 [М-Н]^-.

Пример 8. Получение трет-бутил 2-((5Ζ,8Ζ,11Ζ,14Ζ,17Ζ)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)-2- 7 028535 метилпропаноата

Смесь (5Ь,87,117,147,177)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-ола (0,83 г, 3,14 ммоль), тетрабутиламмоний-хлорида (0,24 г, 0,85 ммоль) и трет-бутил δ-бром-изобутирата (3,50 г, 15,7 ммоль) растворяют в толуоле (15 мл) и помещают в атмосферу азота. При энергичном перемешивании при комнатной температуре медленно добавляют водный раствор гидроксида натрия (50%, 5 мл). Получающуюся в результате смесь нагревают до 60°С и перемешивают в течение шести часов. Смесь охлаждают, добавляют воду и экстрагируют три раза простым эфиром. Объединенный органический экстракт промывают рассолом, сушат (Ыа₂5О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента раствора этилацетата в гептане с градиентом концентрации 5-10%. Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 0,60 г (выход 44%) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. Масс-спектрометрия (электро-спрей-ионизация): 453,3 [М+Ыа]+.

Пример 9. Получение 2-((5Я,87,117,147,17Я)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаенилокси)-2-метилпропановой кислоты

Трифторуксусную кислоту (5 мл) добавляют к раствору трет-бутил 2-((57,87,117,147,17Я)эйкоза5,8,11,14,17-пентаенилокси)-2-метилпропаноата (600 мг, 1,39 ммоль) в дихлорметане (20 мл) под азотом и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение двух часов. Добавляют воду и водную фазу экстрагируют дважды дихлорметаном. Объединенный органический экстракт промывают рассолом, сушат (Ыа₂5О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси гептана, этилацетата и муравьиной кислоты (80:20:1). Соответствующие фракции концентрируют и остаток (135 мг) дополнительно очищают флэшхроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси этилацетата и муравьиной кислоты (95:5) в гептане с градиентом концентрации 5-10%. Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 80 мг слегка загрязненного продукта. Этот материал растворяют в гептане (5 мл), промывают дважды водой (5 мл), сушат (Ыа₂5О₄), фильтруют и концентрируют с предоставлением 40 мг (выход 8%) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,99 (т, 3Н), 1,47 (с, 6Н), 1,64 (м, 2Н), 2,07 (м, 4Н), 2,81-2,88 (м, 8Н), 3,46 (т, 2Н), 5,29-5,44 (м, 10Н); Массспектрометрия (электро-спрей-ионизация): 373,3 [М-Н]^-.

Пример 10. Получение трет-бутил 2-этил-2-((5Я,87,117,147,17Я)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1илокси)бутаноата

трет-Бутил 2-((57,87,117,147,17Я)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутаноат (480 мг, 1,11 ммоль) добавляют по каплям в течение 30 мин к раствору литий-диизопропиламина (БЭЛ) (2,0М, 750 мкл, 1,50 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (10 мл), выдержанному при -70°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин. Одной порцией добавляют этилиодид (312 мг, 2,00 ммоль) и получающейся в результате смеси дают нагреться до температуры окружающей среды в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 17 ч. Смесь выливают в насыщенный водный раствор ПН₄С1 (50 мл) и экстрагируют гептаном (2x50 мл). Объединенные органические фазы промывают последовательно рассолом (50 мл), 0,25М-ным раствором НС1 (50 мл) и рассолом (50 мл), сушат (М§5О₄), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэшхроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента все в большей мере полярных смесей гептана и этилацетата (100:0^95:5). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 343 мг (выход 67%) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 0,84 (т, 6Н), 0,99 (тд, 3Н), 1,35-1,55 (м, 11Н), 1,54-1,69 (м, 2Н), 1,68-1,87 (м, 4Н), 1,99-2,24 (м, 4Н), 2,74-2,99 (м, 8Н), 3,31 (т, 2Н), 5,23-5,52 (м, 10Н); Масс-спектрометрия (электро-спрей-ионизация): 401,3 [М-1]^-.

Пример 11. Получение 2-этил-2-((57,87,117,147,17Я)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутаноновой кислоты

Смесь муравьиной кислоты (5 мл) и трет-бутил 2-этил-2-((5Я,87,117,147,17Я)эйкоза-5,8,11,14,17- 8 028535 пентаен-1-илокси)бутаноата (250 мг, 0,55 ммоль) перемешивают энергично в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 4,5 ч. Муравьиную кислоту удаляют в вакууме. Остаток очищают флэшхроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента все в большей мере полярных смесей гептана и этилацетата (100:0^80:20). Концентрирование соответствующих фракций предоставляет 163 мг (выход 74 %) соединения, указанного в заглавии, в виде масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃): δ 0,86 (т, 6Н), 0,99 (т, 3Н), 1,36-1,57 (м, 2Н), 1,68 (дд, 2Н), 1,73-1,98 (м, 4Н), 2,11 (тт, 4Н), 2,70-3,01 (м, 8Н), 3,39 (т, 2Н), 5,20-5,56 (м, 10Н); Масс-спектрометрия (электро-спрей-ионизация): 481,4 | АЕ\а|'.

Пример 12. Оценивание активации ΡΡΑΚ-рецепторов (рецептор, активируемый пролифератором пероксисом) ΐη νίίτο.

Соединения (А)-(С) и положительный контроль испытывают при шести различных концентрациях

Положительные контроли представляют собой 0Υ7647 (ΡΡΑΚΏ), 0Υ501516 (ΡΡΑΚΏ и розиглитазон (ΡΡΆΚΏ). Эффективность контрольных образцов принимают за 100%.

Анализы выполняют ΐη νΐίΓΟ с использованием проб млекопитающих-1-гибрида (М1Н), содержащих слитые структуры ОАЬ4-ДНК-связывающий домен - ΡΡΑΚ-лиганд-связывающий домен в комбинации со структурами гена-репортера люциферазы ΡΙιοίίηΐΕ ругайз, стимулированными 5хСАЬ4-сайтами, во временно трансфицированных клетках НЕК293. Клетки трансфицируют 4-6 ч и выращивают в течение ночи перед добавлением соединений. Инкубирование соединений длится 16-20 ч. Люциферазу Кеш11а гешГогш1§, стимулированную конститутивным промотором, включают в качестве внутреннего контроля для повышения точности эксперимента. Результаты показаны в таблице.

Таблица. Активация ΡΡΑΚ-рецепторов ΐη νίίτο

	РРАКп (рецептор, активируемый пролифератором пероксисом)	РРАКп	РРАКп
Соединение	ес₅₀	Эффектив -ность	ес₅₀	Эффектив- ность	ес₅₀	Эффектив- ность
Положи- тельный контроль	0,45 нМ	100%	0,33 нМ	100%	22 нМ	100%
А	307 нМ	82%	Неактивное	Неактивное	806 нМ	22%
В	405 нМ	86%	неактивное	неактивное	644 нМ	27%
С	167 нМ	54%	неактивное	Неактивное	515 нМ	25%

Пример 13. Оценивание эффектов в отношении липидного метаболизма ΐη νίνο в экспериментальной модели дислипидемии на мышах (трансгенные мыши ,ΑΡΟΕ*3Ι .еНеи).

Экспериментальная модель дислипидемии на мышах, как было показано, отражает положение в отношении уровней липопротеина плазмы и отвечаемости на гиполипидемические лекарственные средства, такие как статины и фибраты и в отношении введения добавок в рацион питания у человека. Кроме того, в зависимости от уровня холестерина плазмы мыши .ΑΡΟΕ*3ΙχκΕ'η развивают атеросклеротические поражения аорты, напоминающие поражения, обнаруживаемые у людей в отношении состава клетки и морфологических и иммуногистохимических характеристик.

Мышей-самок ΑΡΟΕ*1χκΕ'η выдерживают на полусинтетической диете западного типа (ΑΥΤΙ), 15% масла какао, 40% сахарозы и 0,25% холестерина; все в расчете мас./мас.). В результате этой диеты уровень холестерина в плазме достигает слегка повышенных уровней приблизительно 12-15 ммоль/л. По истечении 4-недельного подготовительного периода мышей поделили на группы по 10 мышей в каждой, имеющих одинаковые показатели для холестерина плазмы, триглицеридов и массы тела (ί=0).

Испытуемые вещества вводят перорально в качестве добавки в диету западного типа. Для облегчения смешения соединений добавляют подсолнечное масло к общему объему масла 10 мл/кг диеты. соединение (А) из вышеприведенного примера 2 испытывают при концентрации 0,3 ммоль/кг живого веса/день. Эталонное соединение из этиловых сложных эфиров омега-3 кислоты (Отасог¹⁴¹/!.оха/а™) испытывают в концентрации 3,3 ммоль/кг живого веса/день. В моменты времени ί=0 и 4 недели берут об- 9 028535 разцы крови после 4-часового голодания для измерения холестерина плазмы и триглицеридов. Результаты показаны на фиг. 1.

Пример 14. Оценивание эффектов в отношении липидного метаболизма ίη νίνο в экспериментальной модели дислипидемии на мышах (трансгенные мыши АРОЕ*3Ье1Йеп.СЕТР).

Трансгенная мышь АРОЕ*3Ье1Йеп.СЕТР представляет собой модель, где транспортный белок сложных эфиров холестерина человека введен трансгенной мыши АРОЕ*3Ье1йеп. Она дает в результате более похожий на человеческий профиль липопротеина и хорошо подходит для испытания действия лекарственных средств на уровни ЛПВП плазмы и триглицеридов.

Мышей-самок АРОЕ*Ье1Йеп.СЕТР выдерживают на полусинтетической модифицированной диете западного типа (\УТБ. 0,15% холестерина и 15% насыщенного жира; все в расчете мас./мас.). В результате этой диеты уровень холестерина в плазме достигает умеренно повышенных уровней приблизительно 13-15 ммоль/л и уровни триглицеридов достигают значения приблизительно 3 ммоль/л. По истечении 4недельного подготовительного периода мышей поделили на группы по 6 мышей в каждой, имеющих одинаковые показатели, в первую очередь, - для холестерина плазмы, триглицеридов и массы тела и, во вторую очередь, - для холестерина ЛПВП (ΐ=0).

Испытуемые вещества вводят перорально в качестве добавки в диету западного типа. В моменты времени ΐ=0 и 4 недели берут образцы крови после 4-часового голодания для измерения холестерина плазмы, холестерина ίίί ПВП и триглицеридов. соединение (А) из вышеприведенного примера 2 испытывают при концентрации 0,18 ммоль/кг живого веса/день. Эталонное соединение (Фенофибрат) испытывают в концентрации 10 мг/кг живого веса/день. Результаты показаны на фиг. 2 и 3.

Пример 15. Оценивание эффектов в отношении развития атеросклероза в экспериментальной модели на мышах (трансгенные мыши АРОЕ*3Ье1йеп.СЕТР).

Трансгенная мышь ЛРОЕ*3Ее1йеп.СЕТР, как было показано, отражает положение в отношении уровней липопротеина плазмы и ее отвечаемости на гиполипидемические лекарственные средства (такие как статины, фибраты и так далее) и в отношении введения добавок в рацион питания у человека. Мыши ЛРОЕ*3Ье1Йеп.СЕТР развивают атеросклеротические поражения аорты, напоминающие поражения, обнаруживаемые у людей в отношении состава клетки и морфологических и иммуногистохимических характеристик.

Мышей-самок ЛРОЕ*Ье1Йеп.СЕТР выдерживают на диете западного типа (\УТБ) с 0,15% холестерина и 15% насыщенного жира; что дает в результате уровни холестерина в плазме, достигающие приблизительно 13-15 мМ. По истечении 3-недельного подготовительного периода на \УТБ мышей делят на 4 группы по 15 мышей в каждой: контрольную группу (без лечения), группу, обрабатываемую соединением А из вышеупомянутого примера 2, группу, обрабатываемую фенофибратом и группу, выдерживаемую на диете с низким холестерином. Группы подбирают по одинаковым показателям массы тела, общего холестерина плазмы (ТС), холестерина ίίί ПВП (НБЬ-С) и триглицеридов (ТО) после 4-часового голодания (ΐ=0).

Испытуемые вещества вводят перорально в качестве добавки в диету западного типа. Для облегчения смешения соединений добавляют подсолнечное масло к общему объему масла 10 мл/кг диеты. соединение (А) вначале испытывают при концентрации 0,1 ммоль/кг живого веса/день и снижают его концентрацию до 0,04 ммоль/кг живого веса/день за 4 недели; исходная доза основана на предварительном исследовании подбора дозы, в результате которого устанавливают требуемую дозировку, которая могла бы снизить холестерин ЛПОНП/ЛПНП на 25-30%. Доза фенофибрата первоначально составляет 10 мг/кг живого веса/день, далее ее снижают до 4,2 мг/кг живого веса/день одновременно со снижениями холестерина ЛПОНП/ЛПНП, вызванными соединением А.

В моменты времени ΐ=0 и ΐ=17 недель берут образцы крови после 4-часового периода голодания для измерения холестерина плазмы и триглицеридов. Результаты показаны на фиг. 1. Развитие атеросклероза в корне аорты (общий очаг поражения) измеряют при умерщвлении подопытных животных.

Результаты по общему холестерину (мМ), холестерину ЛПВП (мМ), по площади очага поражения (мкм²*1000) и по незатронутым поражением сегментам (%) показаны на фиг. 4-7 соответственно.

Как показано на фиг. 4 и 5, соединение А значительно снижает общий холестерин (р<0,001) и значительно снижает холестерин ί ПЛ ПВП (р<0,003) в сравнении с данными контрольной группы. соединение А также значительно уменьшает очаг поражения (р<0,003) и значительно увеличивает незатронутые поражением сегменты (р<0,003) в сравнении с данными контрольной группы (фиг. 6 и 7).

Эти результаты позволяют предположить, что соединение А благотворно влияет на липидные профили и подавляет развитие атеросклероза у трансгенных мышей АРОЕ*3Ье1Йеп.СЕТР.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, включающий введение индивиду фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

- 10 028535 или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира, где Κι и К₂ независимо выбраны из атома водорода или линейных, разветвленных и/или циклических С1-С₆алкильных групп, при условии, что оба Κι и К₂ не являются водородом.
2. Способ по п.1, где соединение находится в форме энантиомера, диастереомера или их смеси.
3. Способ по п.1, где К₁ и К₂ выбраны из водорода, метильной группы, этильной группы, нпропильной группы и изопропильной группы.
4. Способ по п.2, где соединение находится в К-форме.
5. Способ по п.2, где соединение находится в 8-форме.
6. Способ по п.2, где соединение находится в рацемической форме.
7. Способ по п.1, где К₁ представляет собой водород и К₂ представляет собой этил, а формула представляет собой
8. Способ по п.7, где соединение находится в 8- и/или К-форме, представленной формулами
9. Способ по п.1, где фармацевтически эффективное количество соединения формулы (I) находится в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 3 г на дозу.
10. Способ по п.1, где индивидом является человек.
11. Способ по п.1, где соединение вводят один раз в день.
12. Способ по п.1, где соединение вводят в состав фармацевтической композиции для перорального введения.
13. Способ по п.12, где фармацевтическая композиция находится в форме желатиновой капсулы или таблетки.
14. Способ по п.13, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно связывающее вещество, эксципиент, разбавитель или их любые комбинации.
15. Способ по п.12, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит антиоксидант.
16. Способ по п.15, где антиоксидант представляет собой токоферол или ВНА.
17. Способ снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, включающий введение индивиду фармацевтически эффективного количества 2-((52,82,112,142,172)эйкоза5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира.
18. Способ по п.17, где фармацевтически эффективное количество 2-((52,82,112,142,172)эйкоза5,8,1 1,14,17-пентаен-1-илокси)бутановой кислоты находится в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 3 г на дозу.
19. Способ по п.18, где 2-((52,82,112,142,172)эйкоза-5,8,11,14,17-пентаен-1-илокси)бутановую кислоту вводят один раз в день.
20. Применение фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

- 11 028535 или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира для снижения повышенных уровней Аро В у индивида, нуждающегося в этом, где К! и К₂ независимо выбраны из атома водорода или линейных, разветвленных и/или циклических С₁-С_б алкильных групп при условии, что оба К! и К₂ не являются водородом.