DK158662B - Benzamidinderivater, der har antimikrobiel virkning, farmaceutisk middel, kosmetisk produkt, desinfektionsmiddel og anvendelse som konserveringsmidler - Google Patents

Description

DK 158662 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte benzamidin-derivater med den almene formel -v®"'“ nh2 hvor A er en lineser eller forgrenet alkylkæde indeholdende fra 3 til 9 carbonatomer, og X er et oxygenatom eller en direkte 10 binding, forudsat at hvis X er en direkte binding, er benzami-dinen i parastilling i forhold til a 1 kano!gruppen, samt de farmaceutisk anvendelige salte af derivaterne.

Opfindelsen angår endvidere et farmaceutisk middel til udvort-15 es anvende Ise med antimikrobiel og desinficerende virkning, som er ejendommelig ved, at det indeholder en effektiv mængde af en forbindelse I samt anvendelse af forbindelser I som konserveringsmidler i farmacien, kosmetologien og næringsmiddelindustrien, et kosmetisk produkt, som er ejendomme!i gt ved, 20 at det indeholder som konserveringsmiddel en forbindelse I og et desinfektionsmiddel til indiferente overflader, som er ejendommelig ved, at det indeholder en effektiv mængde af en forbindelse I.

25 Disse forbindelser har en antimikrobiel virkning, og de kan anvendes især som antiseptiske lægemidler til humane eller veterinære formål eller som desinfektionsmidler på indifferente overflader. De kan også anvendes som konserveringsmidler for produkter til udvortes anvendelse.

30

Forbindelserne ifølge opfindelsen fremstilles af nitrophenyl-alkanoler eller nitrophenoxyalkanoler (IV). Ved katalytisk hydro-drogenering får man de tilsvarende anilinderivater (V), og tilsætning af natriumnitrit i et surt medium giver så diazonium-35 forbindelserne. Indvirkning af cuprocyanid fører derefter til benzonitrilderivaterne (VI) ved Sandmeyers reaktion.

Endelig syntetiseres amidinerne (I) ved en i og for sig kendt reaktion, som omfatter den mellemliggende dannelse af en imino-

DK 158662B

2 ester.

<2>- ..Æ)-" (ID uS (III>

Λ0 \ XAOH

HO Ά J

(IV)

V

< U) )-XAOH

-h/CV

(V) i' j^y~:*** (VI)

V

(i) 3

DK 158662 B

Når X er en direkte binding, fremstiller man nitrophenyl-alkanolen (IV) ud fra phenylalkanolen (II) „ Hydroxylgruppen beskyttes på forhånd ved acetylering under anvendelse af acetylchlorid. Efter nitrering med rygende salpetersyre frigøres alkoholen ved reaktion med en opløsning af hydrogen-5 chlorid i methanol.

Phenylalkanolerne (II) kan fås i handelen, hvor det drejer sig om lineære alkoholer. Ellers kan de fremstilles på forskellige fremgangsmåder. For eksempel fremstilles de sekun-10 dære phenylalkoholer af phenylacetaldehyd ved reaktion med et magniumderivat, efterfulgt af hydrolyse: C6H5-CH2-CHO 1 /RlMgBr „ CgH5-CH2-CH-R1 (II»)

15 2°/H20 7 OH

R^: Alkyl med 1-8 carbonatomer.

De primære forgrenede phenylalkanoler fås af benzylcyanid: 20 l°/NaH *1

C,H[.-CH9-CN —-^ C^H.-C-CN

6 5 2 2°/RlBr 6 5 - •i X\^ 25 l°OH~, glycol fl ——t--V C-Η,- -C-C0oH (VII) 2°/H+ 65,2 R1 30 i°/soci2 R1 —--^ C-H--C-C09Et (VIII)

2°/C2H5OH,pyridin R

35 4

DK 158662B

*1 blandet hydrid C6H5-C-CH2OH (II")

* K

Efter reaktion med natrumhydrid i vandfrit medium kan man 5 tilsætte et alkylhalogenid, f.eks. et alkylbromid, til dannelse af et symmetrisk dialkyleret phenylacetonitril. Denne forbindelse omdannes til syren ved .reaktion med em base i et alkoholisk medium, efterfulgt af syrning.

Reaktion med thionylchlorid og derefter med ethylalkohol i et vandfrit medium i nærværelse af en katalysator, f.eks. pyridin eller dimethylaminopyridin, gør det muligt at få ethyl-esteren (VIII). Man fremstiller derefter den tilsvarende alkohol (II") ved reduktion ved hjælp af et blandet anhydrid i et vandfrit opløsningsmiddel.

Når X er oxygen, fremstilles nitrophenoxyalkanolen (IV) ud fra nitrophenol (III) . Reaktion af et alkyldihalogenid med (III) i et basisk medium gør det muligt at få et nitrophenoxy-20 alkylhalogenid (IX). Dette produkt acetyleres i et surt medium, og (IV)frigøres så ved forsæbning.

/ (s ) >—OH -~( \s) >—O AH al VO / OH- 7 : 25 NO„ ''X_/ NO_ '_/ (III) (IX)

30 \ OH

CH3COONa (if ) >—0a0C0CH3 ->* (IV) ch3cooh no2\. .-/ (X) 35

DK 158662 B

5

De følgende eksempler illustrerer opfindelsen -Når produktet fås i form af en olie, karakteriseres det ved sit kernemagnetiske resonansspektrum (NMR).

Dette registreres ved 60 MHz i deuterochloroform, idet hexa-5 methyldisiloxan anvendes som indre standard.

Til beskrivelse af spektret anvendes følgende forkortelser: S: singlet, 10 D: dublet, T: triplet, Q: quadruplet, M: multiplet, J: koblingskonstant.

15 EKSEMPEL 1.

4-(3-hydroxypropyl)benzamidin, hydrochlorid: SR 41326 A.

20 a) 3-(4-nitrophenyl)propan-l-ol.

95 ml acetylchlorid sættes til 171,5 g 3-phenylpropan-l-ol i løbet af en time under omrøring. Blandingen opvarmes under tilbagesvaling i 2 timer, og det udviklede hydrogenchlorid og overskud af acetylchlorid fjernes. Når reaktionsmediet er vendt tilbage til omgivelsernes temperatur, sættes det dråbevis under omrøring til 800 ml rygende salpetersyre (D = 1,49), afkølet til -25°C. Tilsætningen tager en time, hvorunder 30 o temperaturen holdes mellem -15 og -20 C. Blandingen hældes derefter i 1,5 liter vand, hvortil der er sat knust is, og ekstraktion udføres tre gange med ether, og ekstrakterne vaskes tre gange med vand, tre gange med en 10% opløsning af natrium- carbonat og derefter tre gange med vand. Etherfaserne tørres 35

DK 158662B

6 over magniumsulfat og inddampes så til tørhed under reduceret tryk. Remanensen optages i 800 ml methanol, og hydrogen bobles igennem i en time ved 0°C, og blandingen opvarmes derefter under tilbagesvaling i 14 timer. Efter afdampning af 5 opløsningsmidlet optages remanensen i en blanding af vand og ether, den vandige fase dekanteres, og den organiske fase vaskes to gange med vand, tre gange med en mættet opløsning af natriumbicarbonat og derpå tre gange med vand. Etherfasen tørres så over magniumsulfat og inddampes til tørhed under 10 reduceret tryk.

Man får 259 g af en orange olie, som renses ved kromatografi på 3 kg silicagel i chloroform. Der udvindes 218 g af en orange olie. Udbytte 95%.

15 b) 4-:(3 -hydroxy pr opy 1) ani 1 in.

218 g 3-(4-nitrophenyl)propan-l-ol opløses i 500 ml methanol, og der tilsættes 10 g 10% palladium-på-trækul,der forud er 20 fugtet med 10 ml vand. Hydrogeneringen udføres under et tryk på 40 bar under omrøring og varer 1 time og 30 minutter. Blandingen filtreres så på cellit, og materialet på filteret skylles med methanol·, og filtratet inddampes til tørhed under reduceret tryk til dannelse af 168 g af en brun olie. Denne 25 renses ved kromatografi tre gange i træk på ialt 6 kg aluminiumoxid, idet der anvendes methylenchlorid som eluent. Man får 49,2 kg af et lysebrunt pulver. Smeltepunkt 43 - 45°C, udbytte 27%.

30 c) 4-(3-hydroxypropyl)benzonitril.

49,07 g af det i det foregående fremstillede produkt hældes i 87 ml koncentreret saltsyre, hvortil der er sat 400 g knust is. Med temperaturen holdt mellem 0 og 5°C tilsættes dråbe-35 vis en opløsning af 23,15 g natriumnitrit i 80 ml vand, og efter omrøring i 10 minutter neutraliseres blandingen så med 7

DK 158662B

300 ml af en 10% opløsning af natriumcarbonat.

D.er fremstilles desuden en opløsning af cuprocyanid: 40,35 g cuprochlorid suspenderes i 150 ml vand, og der tilsættes en 5 opløsning af 54 g natriumcyanid i 80 ml vand. Der iagttages en varmeudvikling, cuprochloridet opløses, og opløsningen affarves. Denne opløsning afkøles til 0°C, og der tilsættes 200 ml benzen, hvorefter diazoniumopløsningen, afkølet til 0°C, tilsættes dråbevis i løbet af 40 minutter under kraftig 10 omrøring. Efter omrøring i yderligere 40 minutter får blandingen lov at vende tilbage til omgivelsernes temperatur under fortsat omrøring og opvarmes så til 50°C uden omrøring og bringes tilbage til omgivelsernes temperatur.

15 Man ekstraherer tre gange med ether og to gange med vand og derefter med en mættet opløsning af natriumchlorid. Ether-faserne tørres på magniumsulfat og inddampes til tørhed under reduceret tryk. Dette giver 51 g af en mørkebrun olie, som renses ved kromatografi på 1500 g silicagel, idet søjlen 20 tilberedes i toluen, og eluenten er en blanding af toluen og ether (9/1 efter rumfang). Man får 41,6 g rent produkt i form af en rød olie. Udbytte 79%.

Produktet er karakteriseret ved dets NMR-spektrum: 25 2H mellem 1,7 og 2,2 ppm (M, - CH2-CH2-CH2-OH) , IH ved 2,4 ppm (S, -OH), 2H ved 2,8 ppm (T, J = 7 Hz, CN-C^-CI^-CH^, 2H ved 3,6 ppm (T, J = 6 Hz, -CH2-CH2“0H), 30 2H ved 7,3 ppm (D, J = 9 Hz, H ortho CH2), 2H ved 7,6 ppm (D, J = 9 Hz, H ortho CNj.

35

DK 158662B

8 d) Ethyl-4-(3-hydroxypropyl)phenylformimidat, hydrochlorid.

30,6 g af det i det foregående fremstillede produkt opløses i 300 ml absolut alkohol, og hydrogenchlorid bobles igen-5 nem ved 0°C i 5 timer, og blandingen får så lov at henstå i 24 timer ved omgivelsernes temperatur, opløsningsmidlerne afdampes til tørhed ved reduceret tryk, og remanensen hældes i 1 liter ether. Blandingen omrøres i en time ved 0°C og filtreres så, og materialet på filteret vaskes med ether og tørres i en vakuumekssikkator over phosphorpentoxid. Derved fås 40 g af et lyserødt pulver. Smeltepunkt 104 - 105°C under dekomponering, udbytte 86%.

e) SR 41326 A.

15 40 g af det i det foregående fremstillede produkt opløses i 400 ml absolut alkohol. Luftformig ammonik bobles igennem ved 0°C i 5 timer, og blandingen omrøres så ved omgivelsernes temperatur og henstilles i 48 timer. Opløsningsmidlerne af-2Q dampes så til tørhed under reduceret tryk, og remanensen op tages i 500 ml destilleret vand. Blandingen omrøres i en time med 450 ml "Amberlite" IRA 400-harpiks i acetatform og filtreres så, og materialet på filteret vaskes tre gange med 300 ml vand. Filtraterne omrøres derpå med 400 ml"Bio-Rex" 25 70-harpiks i syreform og filtreres så, og materialet på fil teret vaskes tre gange med 500 ml vand.

Amidinen elueres af harpiksen med 500 ml portioner af 5% vandig saltsyre. Opløsningsmidlet afdampes så under reduceret tryk til dannelse af gule krystaller, og disse optages i alkohol, og alkoholen afdampes (gentages tre gange). Remanensen optages i 1 liter ether og tritureres i kulden til dannelse af et gult pulver, der frafiltreres, vaskes med ether og tørres i vakuumekssikkator over phosphorpentoxid. Man får 20,1 g af det forventede produkt i form af et lysegult 35 o pulver. Smeltepunkt 195 - 205 C, udbytte 57%.

9

DK 158662B

EKSEMPEL 2.

4-(2-hydroxybutyl)benzamidin, hydrochlorid: CM 41092 A.

5 a) l-phenylbutan-2-ol.

En opløsning af 7,5 ml ethylbromid i 50 ml vandfri ether sættes dråbevis under nitrogen til 2,92 g magniumspåner med en hastighed tilstrækkelig til at opretholde mild tilbagesvaling. 10 Stadig under nitrogen omrøres blandingen i 2 timer ved omgivelsernes temperatur, og derefter tilsættes dråbevis 9,4 ml phenylacetaldehyd, og blandingen omrøres i 2 timer ved omgivelsernes temperatur.

15 Blandingen hældes derpå på 200 ml 20% ammoniumchlorid, der er afkølet til 0°C, og man ekstraherer tre gange med ether. Efter tre ganges vask med vand tørres etherfaserne på magniumsulfat og inddampes til tørhed under reduceret tryk. Man får 12,2 g af en lysegul olie.

20 b) 4-(2-hydroxybutyl)benzonitril.

Ved at gå frem som i eksempel 1 a) fremstilles derefter 1-(4-nitrophenyl)butan-2-ol, som karakteriseres ved sit NMR-25 spektrum: 3H ved 0,9 ppm (T, asymmetrisk, J = 7 Hz, -CEL·) J f 3H mellem 1,2 og 1,8 ppm (massiv, -CH(OH)-CH2-CH3), 2H mellem 2,6 og 2,9 ppm (M, CN-CgH^-CH2), 30 IH mellem 3,4 og 3,9 ppm (M, CH2-CH(OH)-CH2) 2h ved 7,3 ppm (D, J = 9 Hz, H ortho CH2), 2H ved 8,1 ppm (D, J = 9 Hz, H ortho CN).

35 10

DK 158662B

4-(2-hydroxybutyl)benzonitril fremstilles så som i eksempel 1 b) og c) og karakteriseres ligeledes ved sit NMR-spektrum: 3H ved 0,8 ppm (T asymmetrisk, J = 6 Hz, -CH^CH^) , 2H ved 1,25 ppm (Q,J = 6 Hz, -CH(OH) -CI^-CH^) , 5 2H mellem 2,5 og 2,8 ppm (M, CN-CgH4-CH2), IH mellem 3,2 og 3,8 ppm (M, CH^CH(OH)-CH2) , IH ved 4,5 ppm (D, J = 6 Hz, -OH), 2H ved 7,4 ppm (D, J = 9.Hz, H ortho CH2), 2H ved 7,7 ppm (D, J = 9 Hz, H ortho CN).

10 c) Ethyl-4-(2 hydroxybutyl)phenylformimidat, hydrochlorid.

Dette produkt fremstilles ved den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksempel 1 d) og omkrystalliseres af en blanding 15 af ethanol og ether. Smeltepunkt 118 - 122°C under dekompone-ring.

d) CM 41092 A.

20 Det forventede produkt fremstilles ifølge eksempel 1 e) .

Smeltepunkt 159 - 161°C, omkrystallisations-opløsningsmiddel: ethano1/ether.

EKSEMPEL 3.

25 ----------- 4-(2-hydroxy-l,l-di-n-propylethyl)benzamidin, hydrochlorid: SR 41946 A.

30 a) 1,1-di-n-propylphenylacetonitril.

Man fremstiller en suspension af 52,4 g natriumhydrid i 250 ml dimethyl.formamid. Under nitrogen og opretholdelse af meka nisk omrøring tilsættes 47 ml benzylcyanid, og efter 35 minut-35 ter afkøles i et isbad, og derpå tilsættes meget langsomt

DK 158662B

11 145 ml n-propyIbromid. Omrøringen fortsættes i 3 timer ved omgivelsernes temperatur.

Blandingen hældes i 2 liter vand blandet med is, og der eks-^ traheres to gange med ether, og etherfaserne vaskes tre gange med vand og tørres over magniumsulfat efter afdampning af etheren. Remanensen destilleres i vakuum. Kogepunkt 72 - 80°C under 0,01 mm Hg. Man får 50,4 g af en gul olie. Udbytte 63%.

10 b) 1,1-di-n-propylphenyleddikesyre.

25,1 g af det i det foregående fremstillede produkt opløses i 65 ml glycol, og der tilsættes 15,5 g kaliumhydroxidkugler.

Ved opvarmning under omrøring destilleres først 2 ml vand, og opvarmningen fortsættes så under tilbagesvaling i 40 timer under omrøring, og der indhældes 1,5 liter vand, hvortil der er sat is. Man ekstraherer to gange med hexan, filtrerer den vandige fase på "Celite" og syrner til pH 1 med koncentreret 2q saltsyre. Det dannede hvide bundfald henstilles i køleskab i 48 timer, filtreres, vaskes med vand og omkrystalliseres af en blanding af methanol og vand (50/50 efter rumfang).

De dannede krystaller filtreres, vaskes med vand og tørres i vakuum.

25 o

Man får 18,75 g gråhvide krystaller. Smeltepunkt 97 - 100°C, udbytte 68%.

c) Ethy1-1,1-di-n-propylphenylacetat.

30

Den følgende reaktion udføres under nitrogen. 10 ml thionyl-chlorid sættes dråbevis under omrøring til 8,8 g af det foregående produkt. Omrøring fortsættes i 2 timer ved omgivelsernes temperatur., og blandingen afkøles så, og overskud af thionylchlorid afdrives under reduceret tryk. 50 ml absolut ΟΌ q alkohol og 3,5 ml vandfri pyridin tilsættes så ved 0 C, og ef- 12

DK 158662B

ter omrøring i en time opvarmes blandingen under tilbagesvaling i 15 timer og afkøles såf alkoholen afdampes, og remanensen optages i en blanding af vand og ether, og der ekstra-heres tre gange med ether, og ekstrakterne vaskes to gange med 5 en mættet opløsning af natriumbicarbonat, én gang med vand, to gange med normal saltsyre og derpå tre gange med vand. Etherfaserne tørres over magniumsulfat og inddampes til tørhed under reduceret tryk.

10 Der fås 9,82 g af en orange olie. Udbytte 99%. Produktet karakteriseres ved dets NMR-spektrum: 13H mellem 0,6 og 1,4 ppm (massiv, -CO^-CR^-CR^, (-CR^-CR^-CH3)2)) , 15 4H mellem 0,8 og 2,2 ppm (massiv, -CH2-CH2-CH3)2), 2H ved 4,1 ppm (Q, J = 7 Hz, -C02-CH2-CH3), 5H ved 7,3 ppm (S, H aromatisk).

d) 1,1-di-n-propylphenylethanol.

20 3,2 g lithiumaluminiumhydrid suspenderes i 50 ml vandfri tetra-hydrofuran under nitrogen. Under opretholdelse af mild tilbagesvaling tilsættes dråbevis en opløsning af 9,8 g af det under c) fremstillede produkt i 50 ml tetrahydrofuran, og der-25 efter opvarmes i 4 timer under tilbagesvaling, stadig under nitrogen. Efter afkøling dekomponerer man med 10 ml vand og 100 ml 15% svovlsyre. Man ekstraherer tre gange med ether, vasker tre gange med vand, etherfaserne tørres på magniumsulfat og inddampes til tørhed under reduceret tryk.

30

Man får 8,30 g af en gul olie, som renses ved kromatografi på 250 g silicagel under anvendelse som elueringsmiddel af en blanding af chloroform og hexan (50/50 efter rumfang). Man opsamler så 7,91 g lysegul olie. Udbytte 97%. Produktet ka-35 rakteriseres ved dets NMR-spektrum: 13

DK 158662B

15H mellem 0,5 og 1,8 ppm i(massiv, 14H af alifatiske kæder + OH) , 2H ved 3,7 ppm (S, -C^-OH) , 5H ved 7,25 ppm (S, H aromatisk).

5 e) SR 41946 A.

Man udfører derefter de syntesetrin, der er Ibeskrevet i eksempel 1 til fremstilling af SR 41946 A. Smeltepunkt 110 - λ 10 1.15 C,, OBfajstallisaitions-opløsiningsmiddel: ethanol/ether.

EKSEMPEL 4.

15 4-(4-hydroxybutoxy)benzamidin: CM 40847 A.

a) 1-(4-nitrophenoxy)-4-brombutan.

83 ml 1,4-dibrombutan sættes til en opløsning af 4-nitro-20 phenol i 275 ml vand, og derefter tilsættes dråbevis under omrøring 49„S ml 10N natriumhydroxidopløsning. Blandingen opvarmes under fcOJbagesvaling i 24 timer under omrøring.

Efter afkøling ekstraheres ttre gange med ether, vaskes seks 25 gange med normal natriumhydroxidopløsning og derpå tre gange med vand. Etherfaserne tørres på matriumsulfat og inddampes, og uopløseligt stof f r af il trer es. nitratet inddampes til tørhed, og remanensen udpumpes i vakuum (0/05 mm Hg). Efter triturering i hexan fås krystaller, som frafiltreres, vaskes 30 med hexan og tørres i vakuum-ekssikkator„

Derved fås 75 g af et pasituagtigt flødefarvet produkt. Udbytte 55%.

35 b) 1-(4-nitrophenoxy)-4-acetyloxybutan.

DK 158662B

14 75 g af det foregående produkt opløses i 80 ml iseddike, 45 g vandfri natriumacetat tilsættes, og blandingen opvarmes så under tilbagesvaling i 15 timer under omrøring. Reaktions-blandingen hældes i 1 liter isvand, hvortil der er sat 500 ml 5 ether, og neutraliseres til pH 7,5 med fast natriumcarbonat.

Efter at der er foretaget tre ekstraktioner med ether, og ekstrakterne er vasket tre gange med vand, tørres ether-faserne over magniumsulfat og inddampes til tørhed, og remanensen udpumpes i vakuum.

10

Der fås 70 g af en orange olie. Udbytte 100%.

c) 1-(4-nitrophenoxy)butan-4-ol.

15 70 g af det i det foregående fremstillede produkt opløses i 300 ml methanol, der tilsættes 30 ml 10N natriumhydroxidopløsning, og blandingen opvarmes så under tilbagesvaling i 4 timer under omrøring. Efter at methanolen er blevet af-dampet, optages remanensen i en blanding af vand og ether, 20 og der ekstraheres tre gange med ether, og ekstrakterne vaskes tre gange med en mættet opløsning af natriumchlorid.

Etherfaserne tørres over magniumsulfat og inddampes til tørhed. De dannede krystaller tritureres i hexan, frafiltreres, 25 vaskes med hexan og tørres i vakuum-ekssikkator.

Der fås 48,8 g lysegule krystaller. Smeltepunkt 53 - 55°C.

d) CM 40847.

30

Ved at gå frem som i eksempel 1 fremstilles derefter følgende forbindelser: 4-(4-hydroxybutoxy)anilin (smeltepunkt 56 - 58°C), 35 4-(4-hydroxybutoxy)benzonitril (smeltepunkt 54 - 58°C), 15

DK 158662B

og derefter CM 40847 A (smeltepunkt 210 - 213°C).

Ved at anvende analoge fremstilling,smider fremstilles de for-5 bindeiser ifølge opfindelsen, der er beskrevet i følgende tabel 1. De er karakteriseret ved deres smeltepunkt, målt efter omkrystallisation af en blanding af ethanol og ether.

TABEL 1.

10 ________

Lt~^o)-x - a - °h (i) 15

Frem- 2® Produkt Stil- stillet nr. ling X A - OH iflg. eks. Smeltepunkt

SR 41613 A p (CH2)4OH 1 178-180°C

SR 41947 A p i(GH2)5OH 1 210-215°C

25 SR 41149 A p CH,2-CH (OH) nC3M? 2 85- 90°C

CM 40721 A p 0 -fCH^OH 4 161-163°C

CM 40940 A p 0 -(CH2)5OH 4 180-185°C

SR 41579 A m 0 -(OH2)4OH 4 141-143°C

SR 41616 A o 0 -(CH^OH 4 152-154°C

30 SR 42748 A p - -C (CH^) 2CH2‘ØH 3 181°C

35

DK 158662B

16

Den baktericide aktivitet af f oprindelserne ifølge opfindelsen blev undersøgt på forskellige stammer ved følgende metode:

Et bakterielt podemateriale bringes i kontakt i begrænset tid 5 med forskellige fortyndinger af produktet, der skal afprøves. Efter endt kontaktperiode anbringes en portion af blandingen af bakteriel suspension og produkt på overfladen af et gelose-kulturmedium indeholdende et neutraliseringsmiddel for produktets antibakterielle aktivitet.

10

Den bevarede baktericide koncentration er den minimale koncentration af produktet, over hvilken bakterierne ikke længere vokser. Denne koncentration er udtrykt i ug/ml.

15 De bakteriestammer, der blev valgt til undersøgelsen, er: 1 - Escherichia coli CNCM 54125, 2 - indkapslet Klebsiella pneumoniae RO 30, 3 - Pseudomonas aeruginosa CNCM A 22, 20 4 - Streptococcus faecalis CNCM 5855, 5 - Staphylococcus aureus CNCM 53154.

Den anden stamme vedligeholdes på Worgel Fergusson's medium og de andre på tryptisk soja-agar-Difco (TSA).

25

Efter 24 timers dyrkning ved 37°C høstes den mikrobielle vækst ved hjælp af glasstænger og 10 ml fortyndingsmiddel indeholdende 1 g trypton og 8,5 g natriumchlorid i 1000 ml destilleret vand. Man omrører den dannede suspension og må-30 ler med spektrofotometer den procentiske lystransmission ved 620 nm?

Stamme 1: 70S, " 2: 80%, 35 "3: 70%, 17

DK 158662B

·.* ·,

Stamme 4: 60%.

Stamme 5: 60%.

Det bakterielle podemateriale .-s-wrarer til && suspension, hvis 5 koncentration er JL/^O af damme bakteriesuspension.

Plader med fordybninger modtager forskellige fortyndinger af produktet, der skal undersøges. Disse fortyndinger af produktet, der skal undersøges, bringes i kontakt med forskelli-10 ge bakteriesuspensioner ved ftrj-ælp nf et -multipelt podeapparat af Steers-itypen,. Effiber 2% minutters kontakt overføres portionerne ved hjælp af dette podeapparat til overfladen af et gelose-medium (TSA), anbragt i Petri-skåle og indeholdende et neutraliserimgsmiddel for aktiviteten, nemlig 20 g "Lubrol" W,

15 2,5 g “'Tween" 80 og 2,5 g natriumthiosulfat i 1000 ml TSA

(Difco). En kontrol for effektiviteten af neutraliserings-midlet fremstilles for hvert produkt, der undersøges,ved på overfladen af kulturmediet at anbringe en portion af fortyndingen af produktet, der skal undersøges. Efter tørring anbringes 20 det tilsvarende podemateriale på samme sted. En podemateriale-kontrol fremstilles på gelosemedium med og uden .neutraliseringsmiddel. Resultaterne bedømmes efter inkubation :i 48 timer ved 37°C.

25 Resultaterne er sammenfattet i nedenstående tabe-l 2.

30 35 TABEL 2.

18

DK 158662B

Minimal baktericid koncentration (CMB) i pg/ml.

Bakteriestamme c Produkt ------------------------------------------------- b nr. 12345 SR 41613 A 10.000 10.000 15.000 10.000 5.000 SR 41946 A 4.000 5.000 4.000 2.000 2.000 10 SR 42748 A 10.000 10.000 $5.000 20.000 10.000 SR 41149 A 5.000 6.000 6.000 20.000 20.000 CM 40721 A 8.000 8.000 8.000 8.000 8.000 CM 40847 A 5.000 5.000 5.000 5.000 5.000 SR 41616 A 7.500 5.000 5.000 15.000 15.000 15 CM 40940 A 16.000 15.000 15.000 20.000 15.000 SR 41579 A 8.000 8.000 8.000 10.000 15.000

Resultaterne viser, at produkterne ifølge opfindelsen har et 20 sammenligneligt aktivitetsniveau for alle de afprøvede bakteriestammer.

Sammenlignet med phenylethylalkohol, som er et baktericidt produkt, der anvendes både som antiseptikum og konserverings-25 middel, har produkterne ifølge opfindelsen et højere gennemsnitligt aktivitetsniveau og er endvidere opløselige i vand, hvilket gør dem lettere at anvende, især i galeniske præpara ter.

30 Tolerancen af produkterne ifølge opfindelsen blev undersøgt på marsvin. Dyrene barberes på begge sider af midterlinien af ryggen, og barberingen gentages hveranden dag. Grupper på 6 dyr modtager 0,2 ml af en vandig eller alkoholisk opløsning 35 19

DK 158662 B

af produktet ifølge opfindelsen på det barberede område.

Hvis produkterne er i alkoholisk opløsning, får en kontrolgruppe af dyr alkohol på den ene side.

For at undersøge den foreløbige hudtolerance påføres behandlingen én gang om dagen, 6 dage ud af 7, i 3 uger,. Iagttagelsen af huden vedrører tilstedeværelse af erythem, hud-eruption eller hyperkeratose, hvis styrke gradueres efter en bestemt skala.

10

HurdføJLsomhedsprøven udføres på de samme dyr efter 2 ugers hvile,. Behandlingen varer en uge og er identisk med den foregående behandling,» Bedømmelsen foretages efter samme kriterier og samme skala som anvendt til den lokale tolerance.

IS

Produkterne ifølge opfindelsen blev også undersøgt for at bestemme, om de havde en fototoksisk eller fotoallergisk virkning på marsvin. Den anvendte teknik er den af J.Unkovic, G.Mazue & J.Girard beskrevne i "Sciences et Techniques de 2Q 1'Animal de Laboratoire", bind 8 (3), 149 - 160 (1983). Dette er en tilpasning af den teknik, der er beskrevet af L.C.Harber m.fl., Arch.Dermatol., 1967, bind 96, side 646 — 656, og L.J.Vinson m.fl., J.Soc.Cosm.Chem., 1966, bind 17, side 123 -130.

25

Ingen af de undersøgte produkter udviste dårlig tolerance, sensibiliserende virkning eller fototoksisk eller fotoallergisk virkning på marsvin.

Produkterne ifølge opfindelsen, der har -god antlimikrobiel virkning og tåles godt, kan anvendes på flere forskellige måder som antiseptika, konserveringsmidler eller desinfektionsmidler til humane formål i kosmetica og terapi eller til veterinære formål eller inden for fødevareområdet.

35 20

DK 158662 B

Især kan de anvendes som antiseptika i præparater beregnet til terapi, f.eks. til behandling af impetigo, acne, inficerede former af dermatose, inficerede åbne sår, lukkede infektioner såsom furuncler, panaritium, inpetiginøs skab etc. Man kan 5 ligeledes tænke sig en anvendelse til præventive formål, f.eks. til tilberedelse af et kirurgisk område eller til kirurgens eller assistenternes hænder.

Produkterne ifølge opfindelsen kan anvendes til veterinære for-10 mål, enten som antiseptika (f.eks. til forhindring af mammitis) eller som desinfektionsmidler (desinfektion af udstyr, stalde etc.), og også inden for fødevareområdet.

Endelig muliggør deres gode tolerance og lave toksicitet, at 15 de kan anvendes som konserveringsmidler, ikke blot inden for det farmakologiske og kosmetiske område, men også inden for fødevareområdet.

Forskellige galeniske præparater af produkterne ifølge opfin-20 delsen kan fremstilles afhængende af den valgte anvendelse.

EKSEMPEL 5.

25 Skummende, rensende, antiseptisk flydende præparat: SR 41613 A 3 g

Alkyldimethylcarboxymethylamin 15 g (30% opløsning) 30 Dinatriumtetracemat 0,1 g

Propylenglycol 10 g

Natriumhydroxid eller mælkesyre til ........ pH 5,8

Renset vand til ............................. 100 g 35

DK 158662B

21 EKSEMPEL 6.

Skummende/ rensende, antiseptisk flydende præparat: 5 SR 41946 A 2 g

Natriumparaffinsulfonat 15 g

Natriumhydroxid eller mælkesyre til .......... pH 5,2

Renset vand til ............... 100 g 1© EKSEMPEL 7-

Desinfektionsmiddel til en indifferent overflade: 15 SR 41579 A 5 g

Dodecyldimethylcarboxydimethylamin 20 g

Dinatriumtetracemat 2 g Mælkesyre til ................................ pH 3,5 20 Renset vand til .............................. 100 g EKSEMPEL 8.

25 Antiseptisk alkoholisk opløsning: SR 41946 A 2 g

Alkyldimethylcarboxymethylamin 0,5 g (30% opløsning) 30 Kondensat af ethylenoxid og propylenglyeol Ι»δ2 1 g

Natriumhydroxid til........................... pH 6,5 70% ethylalkohol til ...... 100 g 35

DK 158662 B

22 EKSEMPEL 9.

Et produkt ifølge opfindelsen kan anvendes som konserverings-5 middel i et hårvaskemiddel:

Palmitat af kalium og aminosyrer 20 g

Natriumalkylsulfater 2 g

Copra-diethanolamid 5 g 10 Linolylacetat 0,200 g SR 41946 A 0,150 g

Natriumhydroxid til ...................... pH 7

Renset vand til .......................... 100 g 15 EKSEMPEL 10.

Et produkt ifølge opfindelsen kan anvendes som konserveringsmiddel i en emuisionscreme: 20

Tyk vaselineolie 6 g

Blanding af cetostearylalkohol og methoxy- leret cetostearylalkohol 9 g

Vandfrit mononatriumphosphat 0,300 g 25 Dinatriumtetracemat 0,010 g

Vaseline 15 g SR 41946 A 0,150 g

Phopshonsyre til ........................ pH 4,5

Renset vand til ................. 100 g 30 EKSEMPEL 11.

Et produkt ifølge opfindelsen kan anvendes som konserverings-35 middel i en creme til kosmetisk formål:

Claims (7)

1. Benzamidinderivater med den almene formel ^ ' A ' 08 (I) nh2 20 ^vor A er en lineær eller forgrenet alkylkæde indeholdende fra 3 til 9 carbonatomer, og X er et oxygenatom eller en direkte binding, forudsat at hvis X er en direkte binding, er benzami-dinen i parastilling i forhold til al kano 1 gruppen, samt de farmaceutisk anvendelige salte af derivaterne. 25

2. Derivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at X er en direkte binding, og A-OH er valgt blandt følgende grupper : 30 (-CH2)30H, -CH2-CH0H-C2H.5 , -C ( C3H7 " ( CH2) 4OH, -(CH2)50H, CH2-CH(0H)nC3H7, -C ( CH3:);2CH20H .

3. Derivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at X er oxygen, og A-OH er valgt blandt -(CH2)3OH, -(CH2)aOH og 35 -(CH2)5OH. DK 158662B

4. Farmaceutisk middel til udvortes anvendelse med anti-mikrobiel og desinficerende virkning, kendetegnet ved, at det indeholder en effektiv mængde af en forbindelse 5 ifølge krav 1,

5. Anvendelse af forbindelser ifølge krav 1 som konserveringsmidler i farmacien, kosmetologien og næringsmiddelindustrien . 10

5 Polymethoxyleret sorbit-monopalmitat 2 g SR 41946 A 0,150 g Mælkesyre eller natriumhydroxid til ...... pH 6/5 Renset vand til .......................... 100 g 10 Patentkrav.

6. Kosmetisk produkt, kendetegnet ved, at det indeholder som konserveringsmiddel en forbindelse af formlen I ifølge krav 1. 15

7. Desinfektionsmiddel til indifferente overflader, kendetegnet ved, at det indeholder en effektiv mængde af et derivat ifølge krav 1. 20 25 30 35