CZ286750B6 - Peptide antagonistic to bombesin and pharmaceutical preparation containing thereof - Google Patents
Peptide antagonistic to bombesin and pharmaceutical preparation containing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CZ286750B6 CZ286750B6 CZ19942807A CZ280794A CZ286750B6 CZ 286750 B6 CZ286750 B6 CZ 286750B6 CZ 19942807 A CZ19942807 A CZ 19942807A CZ 280794 A CZ280794 A CZ 280794A CZ 286750 B6 CZ286750 B6 CZ 286750B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- leu
- group
- alkyl
- peptide
- carbon atoms
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 246
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 title description 31
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 title description 3
- 102000013585 Bombesin Human genes 0.000 title 1
- DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N bombesin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC2=CC=CC=C2C=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CN=CN1 DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N 0.000 title 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 71
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 46
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 38
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 33
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims abstract description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract 30
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims abstract 2
- 125000001326 naphthylalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 104
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 65
- 239000002790 bombesin antagonist Substances 0.000 claims description 50
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 33
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 24
- 229940123804 Bombesin antagonist Drugs 0.000 claims description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 13
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 abstract 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 abstract 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 110
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 110
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 101
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 94
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 71
- 102100036519 Gastrin-releasing peptide Human genes 0.000 description 45
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 37
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 34
- QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 31362-50-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CNC=N1 QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 0.000 description 33
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 32
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 30
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 30
- BIJDDZBDSJLWJY-PJODQICGSA-N Trp-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BIJDDZBDSJLWJY-PJODQICGSA-N 0.000 description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- -1 (D-Arg 1 Chemical class 0.000 description 23
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 19
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 17
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 17
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 13
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 11
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 10
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 10
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 10
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 8
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NTFTULBKHJJQAW-HNNXBMFYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[(2s)-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NTFTULBKHJJQAW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 4
- RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxob Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(C)C)C1=CN=CN1 RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N 0.000 description 4
- PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 3-aminoalanine Chemical compound [NH3+]CC(N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101800001638 Neuromedin-C Proteins 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 4
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 4
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N Di-tert-butyl dicarbonate Substances CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 208000035823 Non-specific autoimmune cerebellar ataxia without characteristic antibodies Diseases 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 3
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 3
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical class C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLBCSWWZSSVXRQ-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CN=C1 JLBCSWWZSSVXRQ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 2
- OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl] Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N 0.000 description 2
- XXFIWKDBCZWORZ-YQZUKWOLSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl] Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)C1=CN=CN1 XXFIWKDBCZWORZ-YQZUKWOLSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- JRCASHGTXZYSPW-XIRDDKMYSA-N Asn-His-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JRCASHGTXZYSPW-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 2
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010060377 Hypergastrinaemia Diseases 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N bis(2-methylpropyl)aluminum Chemical compound CC(C)C[Al]CC(C)C SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]prop-2-enoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=C(O)C=C1 JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N 0.000 description 1
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- FSNCEEGOMTYXKY-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydro-beta-carboline-3-carboxylic acid Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1CNC(C(=O)O)C2 FSNCEEGOMTYXKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYBURMLGGDRMDL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]butanoic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)N(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O LYBURMLGGDRMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- GNPISAHACGIXLZ-UHFFFAOYSA-N 3-(4-methylphenoxy)propanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(OCCC(O)=O)C=C1 GNPISAHACGIXLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALKYHXVLJMQRLQ-UHFFFAOYSA-N 3-Hydroxy-2-naphthoate Chemical compound C1=CC=C2C=C(O)C(C(=O)O)=CC2=C1 ALKYHXVLJMQRLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMQQFSDIECYOQV-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-3-ium-4-carboxylate Chemical compound CC1(C)SCNC1C(O)=O PMQQFSDIECYOQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000005544 Acinos arvensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000207178 Acinos arvensis Species 0.000 description 1
- VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N Ala-Val-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 241000269339 Bombina bombina Species 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N Cys-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N D-Proline Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 238000010159 Duncan test Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- ZQNCUVODKOBSSO-XEGUGMAKSA-N Glu-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZQNCUVODKOBSSO-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- UIRUVUUGUYCMBY-KCTSRDHCSA-N His-Trp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N UIRUVUUGUYCMBY-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 1
- 229940122957 Histamine H2 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000766306 Homo sapiens Serotransferrin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- IWZRODDWOSIXPZ-IRXDYDNUSA-N Phe-Phe-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=CC=C1 IWZRODDWOSIXPZ-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 201000008629 Zollinger-Ellison syndrome Diseases 0.000 description 1
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000011292 agonist therapy Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 1
- 208000016644 chronic atrophic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 229960001380 cimetidine Drugs 0.000 description 1
- CCGSUNCLSOWKJO-UHFFFAOYSA-N cimetidine Chemical compound N#CNC(=N/C)\NCCSCC1=NC=N[C]1C CCGSUNCLSOWKJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N dicarbonic acid Chemical compound OC(=O)OC(O)=O ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004188 enterochromaffin-like cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 229940050411 fumarate Drugs 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 208000017211 gastric neuroendocrine tumor G1 Diseases 0.000 description 1
- 201000000052 gastrinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- QWXYZCJEXYQNEI-OSZHWHEXSA-N intermediate I Chemical compound COC(=O)[C@@]1(C=O)[C@H]2CC=[N+](C\C2=C\C)CCc2c1[nH]c1ccccc21 QWXYZCJEXYQNEI-OSZHWHEXSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 108010061043 litorin Proteins 0.000 description 1
- OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N litorin Natural products C=1N=CNC=1CC(NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1NC(=O)CC1)C(C)C)C(=O)NC(C(=O)NC(CCSC)C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N mecn acetonitrile Chemical compound CC#N.CC#N BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- ZYZLPKLFRXOVCY-FQEVSTJZSA-N methyl (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)C3=CC=CC=C3C2=C1 ZYZLPKLFRXOVCY-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084525 phenylalanyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M potassium cyanate Chemical compound [K]OC#N GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 238000013094 purity test Methods 0.000 description 1
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- ZNJHFNUEQDVFCJ-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OCCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 ZNJHFNUEQDVFCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 229940075620 somatostatin analogue Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N substance P Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=CC=C1 ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical class OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- DZLNHFMRPBPULJ-UHFFFAOYSA-N thioproline Chemical compound OC(=O)C1CSCN1 DZLNHFMRPBPULJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
- C07K7/086—Bombesin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Tento vynález byl učiněn s vládní podporou, poskytnutou N.C.I. (NIH). Vláda Spojených států má určitá práva k této přihlášce.
Oblast techniky
Vynález je zaměřen na nové peptidy, které ovlivňují růst rakovinných nádorů u člověka. Konkrétně se vynález týká bombesinových antagonístů, kterými jsou psF9 pseudopeptidy, obsahující v C-terminální poloze zbytek Tac, MTac nebo DMTac, jejich solí a farmaceutických prostředků, způsobů syntézy těchto peptidů a způsobů použití těchto peptidů. Tyto peptidy mají antagonistické vlastnosti vůči bombesinu nebo peptidům podobným bombesinu.
Dosavadní stav techniky
Vynález se týká polypeptidických sloučenin, které mají antagonistické vlastnosti vůči bombesinu nebo peptidům podobným bombesinu (jako je peptid uvolňující gastrin GRP, Neuromedin C apod.), označované zde jako vlastnosti antagonistů bombesinu, a které jsou cenné například při léčbě maligních onemocnění u teplokrevných organismů, jako je člověk. Vynález zahrnuje nové polypeptidické sloučeniny a způsoby jejich výroby; nové farmaceutické prostředky obsahující uvedené polypeptidické sloučeniny a způsoby výroby léčiv, obsahujících je, pro použití k vyvolání účinku antagonistů bombesinu u teplokrevných živočichů, jako je člověk.
Bombesin je tetradekapeptidamid, který byl poprvé izolován z kůže žáby Bombina bombina (Anastasi, Erspamar a Bucci, Experientia, 1971, 27, 1966). Je známo, že bombesin je účinným mitogenem pro myší fíbroblastové buňky Swiss 3T3 (Rozengurt a Sinnett-Smieth, Proč. Nati. Acad. Sci USA, 1983, 80, 2936) a že stimuluje sekreci amylasy z morčecích pankreatických acinů (Jensen, Jones, Folkers a Gardner, Nátuře, 1984, 309, 61). Je rovněž známo, že buňky lidské plicní rakoviny (SCLC) produkují a vylučují peptidy podobné bombesinu (Moody, Pert, Gazdar, Camey a Minna, Science, 1981, 214, 1246), že exogenně dodané peptidy podobné bombesinu mohou stimulovat růst lidských buněk SCLC in vitro (Camey, Cuttia, Moody a Minna, Cancer Research, 1987, 47, 821) a že monoklonální protilátka, specifická pro C-koncovou oblast bombesinu a GRP, může blokovat vazbu GRP kjeho receptorům a zamezovat růst lidských buněk SCLC n vitro i in vivo (Cuttia, Camey, Mulshine, Moody, Fedorko, Fischler a Minna, Nátuře, 1985, 316, 823).
GRP, který má vlastnosti analogické bombesinu, je široce rozšířený peptidamid s 27 aminokyselinami, izolovanými z vepřového střeva (McDonald, Jomvall, Nillson, Vagne, Ghatei, Bloom a Mutt, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1979, 90, 227), kde C-terminální sekvence aminokyselin je téměř shodná s bombisinem. Neuromedin C je dekapeptidamid, jehož struktura je identická s posledními deseti aminokyselinami C-koncové oblasti GRP a který byl izolován ze psího tenkého střeva (Reeve, Walsh, Chew, Clark, Hawke a Shively, J. Biol. Chem., 1983, 258, 5582). GRP stimuluje různé biologické odpovědi včetně uvolňování gastrinu do systémového oběhu. Funguje také jako růstový faktor u myších fíbroblastech 3T3 a buňkách plicní rakoviny SCLC. Byl tedy vysloven návrh, že GRP hraje přímou patofyziologickou roli při vývoji SCLC prostřednictvím autokrinního růstového mechanismu.
Bombesin, Neuromedin C a C-terminální nonapeptid GRP mají tuto strukturu:
Bombesin:
pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-Met-NH2
-1 CZ 286750 B6
Neuromedin C:
H-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2
C-terminální nonapeptid GRP:
Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2
Výzkum v oblasti peptidů typu bombesinu u obojživelníků vedl k izolaci litorinu, nonapeptidu vzorce pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2 z kůže žáby z Papuy a Nové Guineje, který se ukázal být velmi účinným analogem bombesinu (Yasukara a d., Chem. Parm. Bull. 1979, 27, 492). Studie analogů bombesinu ukázaly, že úplné spektrum bombesinové účinnosti má minimální segment 9 aminokyselinových zbytků v polohách 6 až 14 bombesinu.
Nyní bylo charakterizováno několik typů antagonistů bombesinu. Substance P
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2 která má mírnou homologii aminokyselinové sekvence s bombesinem, neinhibuje vazbu bombesinu a bombesinu podobných peptidů, ale analogy substance P, modifikované náhradou několika L-aminokyselin D-aminokyselinami, jako je (D-Arg1, D-Pro2, D-Trp7’9, Leu11) substance P aíD-Arg1, D-Phe5, D-Trp7’9, Leu11) substance P (Moody a d., Fed. Proceedings, 1987, 46, 2201), jak se zjistilo, blokují sekreci bombesinu v pankreatických acinámích buňkách a antagonizují růst podporující účinky bombesinu u buněk Swiss 3T3. Dva typy antagonistů bombesinu, odvozených od bombesinu, například (D-Phe6, D-Phe 12)bombesin a [LeuI3-/wz'-LeuI4]bombesin (Coy a d., J. Biol. Chem., 1988, 263, 5056 a peptidy, 1989, 10, 597) prokázaly účinnost in vivo jako inhibitory odpovědi bombesinu.
Jiným typem antagonisty bombesinu, popsaným Heimbrookem a d., {Bio. Chem. 1989, 264, 11258), je N-acetyl-GRP(20-26) a jeho analogy, kde je z analogů GRP(20-27) vypuštěn Cterminální methioninový zbytek. Coy [J. Biol. Chem. 264, 1989, 25, 14691] uvádí, že někteří antagonisté bombesinu s krátkým řetězcem na bázi litorinové sekvence, jako je [D-Phe6, Leu13/tfz-PheI4]bombesin(6-14) a [D-Phe6, Leu13-p.sz'-Leu14] bombesin(6-14), vykazují mnohem vyšší účinnost než odpovídající původní peptid [Leu13-psz-Leu14]bombesin.
Lineární (necyklické) bombesinové analogy GRP a bombesin z obojživelníků, obsahující popřípadě nepeptidickou vazbu CH2-NH, jsou popsány v patentové přihlášce PCT č. WO 90/03980 (a příbuzné analogy v WO 91/02746). Tyto analogy, o nichž se uvádí, že působí jako inhibitory přirozených bombesinových peptidů, mají vzorec
Ri > A-A^A^Trp-A-A^-A^-W
R2 kde Rt i R2 je vodík, A° může být vypuštěno; mezi mnoha možnými aminokyselinami v každé poloze A1 může být D-Phe, D-Trp nebo D-Nal., A2 může být Gin, A4 může být Ala, A5 může být Val, A6 může být Gly, A7 může být His a W má vzorec
-2CZ 286750 B6
Re Z] Z2 O
II II
-N-CH-R4-CH-C-V kde R4 je CH2-NH; v určitých případech Z] může být identifikační boční řetězec Leu, tj. -CH2CH(CH3)2; Z2 může být identifikační boční řetězec Cys nebo Met, tj. -CH2-SH nebo (CH2)2-S-CH3; V je N(Ré)R7, kde R^, R7 a Rs mohou být vodík; Ri a R2 mohou být vodík nebo COEi, kde Ei může být C]_20alkyl.
Lineární peptidické analogy bombesinu jsou rovněž popsány v EP 0 309 297. Tyto peptidy mohou mít C-terminální zbytek Met a pseudopeptidíckou vazbu [CFL-NH] mezi C-koncem a sousedním zbytkem.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou nové polypeptidy, které jsou účinnými antagonisty bombesinu, způsoby syntézy těchto polypeptidů, medicínské aplikace včetně farmaceutických prostředků, obsahujících tyto polypeptidy, a těchto polypeptidů a farmaceutických prostředků jako farmaceuticky účinných látek.
A. Syntetické peptidy
Konkrétně jsou prvním předmětem vynálezu pseudopeptidy, antagonistické bombesinu, vzorce I
X-A^-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psí-A9-^ (I) kde
X je vodík, jednoduchá vazba spojující α-aminoskupinu A1 s gtwwza-karboxylovou skupinou na 3propionylové skupině A2, je-li A2 Glu, nebo skupina vzorce R'CO—, kde R1 je zvoleno ze skupin zahrnujících
a) vodík, C]_iOalkyl, fenyl, fenyl-Ci_iOalkyl, 72-Hl-fenyl, /?-Hl-fenyl-C]_ioalkyl, naftyl, naftyl-Ci_ioalkyl, indolyl, indolyl-Ci_10alkyl, pyridyl, pyridyl—C| ]Oalkyl, thienyl, thienylCi_ioalkyl, cyklohexyl nebo cyklohexyl-Ci_ioalkyl, například kde H1 je F, Cl, Br, OH, CH3 nebo OCH3,
b) R2 >NR3 kde R2 je vodík, Ci_I0alkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_iOalkyl, R3 je vodík nebo Ci_]Oalkyl,
c) R4-O, kde R4 je Ci_10alkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_iOalkyl,
A1 je zbytek D-, L- nebo DL-aminokyseliny zvolené ze skupiny zahrnujíc Phe, /T-Hl-Phe, pGlu, Nal, Pal, Tpi, nesubstituovaný Trp nebo Trp substituovaný nebo benzenovém kruhu jedním nebo více členy skupiny zahrnující F, Cl, Br, NH2 nebo Ci_3alkyl, nebo peptidická vazba spojující acylovou skupinu R'CO- s α-aminoskupinu A2,
-3CZ 286750 B6
A2 je Gin, Glu [-], Glu (Y) nebo His, kde [-] je jednoduchá vazba, je-li X jednoduchá vazba a A2 je Glu, spojující ga/nmo-karboxylovou skupinu 3-propionylové skupiny A2 s α-aminoskupinou A1,
Y je
a) -OR5, kde R5 je vodík, C]_3alkyl nebo fenyl, nebo
b) R6 >NR7 kde R6 je vodík nebo C]_3alkyl, R7 je vodík, Ci_3alkyl nebo -NHCONH2, a
Leu-psz je redukovaná forma Leu, kde místo skupiny C=O v Leu je -CH2-, takže vazba této skupiny-CH2- s α-aminoskupinou sousedního zbytku A9 je pseudopeptidická,
A9 je Tac, Mtac, DMTac, Cys nebo Pen a
Q je NH2 nebo -OQ1, kde Q1 je vodík, Ci_10alkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_10alkyl, a jejich farmaceuticky přijatelné kyseliny nebo soli.
Je-li A1 jednoduchá vazba, jde v případě pseudopeptidu vzorce I o oktapeptid, ale je-li A1 aminokyselina nebo její analog, jedná se o nonapeptid.
Je-li A9 Tac, Mtac nebo DMTac, pak je v A9 přítomen 5členný heterocyklus. Tento kruh obvykle vzniká oxidací postranního řetězce zbytku A9 v některém okamžiku syntézy nonapeptidu vzorce I, výhodně cyklizací postranního řetězce s α-aminoskupinou A9 pomocí formaldehydu nebo acetaldehydu. Identita vzniklého cyklizovaného zbytku A9 závisí na identitě původního neoxidovaného A9 a použitém oxidačním činidle.
Například jestliže skupina -CH2-SH Cys9 cyklizuje s α-aminoskupinou Cys9, sousedící s pseudopeptidickou vazbou Leu-psí, reakcí s formaldehydem, má vzniklý kruh strukturu vzorce HA (znázorněnou zde jako -Leu8-psí-Tac9-NH2-fragment nonapeptidu vzorce I)
S
A h2c ch2
I I
...NH-CH-CH2-N-CH-CO-NH2 (IIA)
I
CH2-CH(CH3)2
Tyto pseudopeptidy mají větší biologickou aktivitu a delší stabilitu než nekruhové varianty, kde A9 je Cys nebo Pen. Nicméně v určitých výhodných variantách peptidů vzorce I, kde A9 je necyklické, X, A2 a Q mají výše uvedený význam, A9 je Cys nebo Pen a A1 je přirozeně se nevyskytující aminokyselina, vybraná ze skupiny zahrnující L- nebo D-Pal, L- nebo D-Tpi nebo Hca.
-4CZ 286750 B6
V určitých výhodných provedeních X je R'CO, R1 je vodík nebo Ci_iOalkyl (výhodně methyl), A1 je D-Cpa, D-Nal, D-Phe, D- nebo L-Tpi nebo D-Trp, A2 je Gin, A9 je Tac nebo DMTac a Q je NH2.
Je-li však vjiných výhodných provedeních A1 peptidická vazba spojující acylovou skupinu R’CO s α-aminoskupinou A2, pak A2 je Gin nebo His, A9 je Tac, Μ-Tac nebo DM-Tac a Q je NH2. ve výhodné formě těchto peptidů X znamená Hca, Hna, Paa, Mpp, Hpp nebo Naa, A2 je Gin a A9 je Tac.
B. Syntetické metody
Antagonisty bombesinu vzorce I je možno syntetizovat metodou v pevné fázi. Podle prvního protokolu se navazují postupně všechny aminokyseliny jedna po druhé poté, co byl C-terminální zbytek navázán na nosičovou fázi pryskyřice. Jakmile jsou k pryskyřici navázány všechny aminoacylové zbytky, vytvoří se 5členný heterocyklus pseudopeptidu reakcí bočního řetězce Cterminálního zbytku s oxidačním činidlem. Pseudopeptid se pak podrobí působení HF k oddělení od nosiče. Touto reakcí se zároveň odstraní chránící skupiny bočních řetězců.
Podle druhého protokoluje možno pseudopeptidy vzorce I syntetizovat jako dva fragmenty, které jsou vybudovány syntézou v pevné nebo kapalné fázi. Tripeptid, obsahující C-konec, se naváže k oligopeptidu za vzniku celého bombesinového antagonisty vzorce I.
5členný heterocyklus se vytváří reakcí bočního řetězce A9 s oxidačním činidlem. Peptid se pak podrobí působení HF, kterým se odstraní všechny chránící skupiny bočních řetězců aminoacylových zbytků a peptid se odštěpí od piyskyřice.
C. Léčebné aplikace
Pseudopeptidy vzorce I je možno používat ve farmaceutických prostředcích k léčbě určitých typů savčí rakoviny a rovněž dalších stavů, podáváním účinné dávky pseudopeptidu nebo jeho terapeuticky přijatelné kyseliny nebo soli ve farmaceutickém nosiči. Mohou být podávány s farmaceuticky přijatelným nosičem v dávkách asi 1 až 1000 pg na kg tělesné hmotnosti denně. Takový prostředek může být podáván parenterálně, intravenózně, subkutánně, intramuskulámě, intranasálně, ve formě plicního aerosolu nebo v deportní formě.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 graficky znázorňuje účinek podávání určitých antagonistů bombesinu na myší rakovinu mléčné žlázy MXT na základně údajů z tabulky 2 z příkladu 7.
Obr. 2 graficky znázorňuje účinek podávání určitých antagonistů bombesinu na objem nádoru SCLC u nahých myší na základě údajů z tabulky 4 z příkladu 8.
Obr. 3 graficky znázorňuje účinek podávání určitých antagonistů bombesinu na objem pankreatického nádoru MIA PACA-2 u nahých myší na základě údajů z tabulky 5 z příkladu 9.
Obr. 4 graficky znázorňuje účinek podávání určitých antagonistů bombesinu na objem pankreatického nádoru CAPAN-2 u nahých myší na základě údajů z tabulky 6 z příkladu 10.
-5CZ 286750 B6
Popis výhodných provedení
A. Syntetické peptidy
1. Názvosloví
Pro účely popisu tohoto vynálezu se používají konvenční zkratky aminokyselin, peptidů a jejich derivátů, obecně přijímané v oblasti peptidů a doporučené komisí IUPAC-IUB pro biochemickou nomenklaturu [European J. Biochem., 1984, 138, 9-37.
Zkratky pro jednotlivé zbytky aminokyselin jsou založeny na triviálním názvu aminokyseliny, například Ala je alanin, Cys je cystein, Gin je glutamin, Glu je kyselina glutamová, pGlu je kyselina pyroglutamová, Gly je glycin, His je histidin, Leu je leucin, Phe je fenylalanin, Trp je tryptofan a Val je valin. Glu může mít na svém ga/Mwa-karboxylovém bočním řetězci napojeny výše definované funkční skupiny [-] nebo Y. Dpa je kyselina 2,3-diaminopropionová. Má-li zbytek aminokyselin isomemí formy, je zastoupena L-forma, není-li jinak před symbolem aminokyseliny uvedeno D- nebo DL-.
V popisu jsou použity tyto zkratky neobvyklých aminokyselin:
Cpa /7-chlorfenylalanin
Dpa kyselina 2,3-diaminopropionová pGlu kyselina pyroglutamová
Nal 3-(2-naftyl)-alanin
Pal 3-(3-pyridyl)-alanin
Pen penicilamin
Tpi kyselina 2,3,4,9-tetrahydro-l/7-pyrido[3,4-b]indol-3-karboxylová
Tac kyselina tiazolidin-4-karboxylová
MTac kyselina 2-methylthiazolidi—4-karboxylová
DMTac kyselina 5,5-dimethyltiazolidin-4—karboxylová
Zkratky analogů aminokyselin:
Hca kyselina hydroskořicová, des-amino-fenylalanin
Hna kyselina 3-hydroxy-2-naftoová
Hpp kyselina 3-(4-hydroxyfenyl)propionová
Mpp kyselina 3-(4-methoxyfenyl)propionová
Naa kyselina naftyloctová
Paa kyselina fenyloctová
Další použité zkratky:
AC Ac
AcOH BHA Boc (BOC)2O
Bom But Bzl
BSA acyl acetyl kyselina octová benzhydrylamin terč .butoxykarbonyl diterc.butyldikarbonát benzyloxymethyl butyl benzyl hovězí sérový albumin
-6CZ 286750 B6
| DIC | 1,3-diisopropylkarbodiimid |
| DMEM | Dulbeccovo modifikované Eagleovo médium |
| DMF | dimethylformamid |
| Et | ethyl |
| EDTA | kyselina ethylendiamintetraoctová |
| FCBS | fetální telecí sérum |
| Fmoc | 9-fluorenylmethyloxykarbonyl |
| For | formyl |
| HITES | médium RPMI 16 4D plus ΙΟ’8 M hydrokortisonu, 5 μΐ/ml hovězího insulinu, 10 μg/ml lidského transferrinu, ΙΟ'8 M β-estradiolu a 3.1Ο’8 M Na2SeO3 |
| HOBt | 1 -hydroxybenzotriazol |
| HPLC | vysokoúčinná kapalinová chromatografie |
| Leu-/?sz | redukovaná forma Leu, kde skupina C=O Leu je nahrazena skupinou -CH2takže vazba této skupiny -CH2- s aminoskupinou A9 tvoří pseudopeptidickou vazbu |
| Me | methyl |
| MeCN | acetonitril |
| MeOH | methylalkohol |
| PBS | fosfátem tlumený fyziologický roztok |
| TEA | triethylamin |
| TFA | kyselina trifluoroctová |
Peptidické sekvence jsou zapisovány podle konvence, přičemž N-terminální aminokyselina je na levém konci a C-terminální aminokyselina na pravém konci. Je však nutno upozornit, že se zde nedodržuje konvence ohledně číslování aminokyselinových zbytků ve fragmentámím peptidu podle odpovídající polohy v úplném tetradekapeptidu antagonisty bombesinu, není-li uvedeno jinak. Kdyby byla tato konvence dodržována, byly by zbytky ve zde popisovaném nonapeptidu vzorce I číslovány od 6 do 14 a jádro bombesinového antagonisty Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu by bylo číslováno A8-A9-A10-AH-A12-A13. Aby nedošlo k omylu, jsou zde místo toho antagonisté bombesinu číslováni takto: zbytek N-terminální aminokyseliny (nebo analogu aminokyseliny) je A1, zbytek C-terminální aminokyseliny (nebo analogu aminokyseliny) je A9 a mezilehlé zbytky jsou číslovány postupně od A2 (sousedícího s N-terminálním zbytkem A1) vzestupně do A8 (sousedícího s C-terminálním zbytkem A9).
2. Výhodná provedení
Výhodná provedení představuje antagonistické peptidy bombesinu vzorce I
X-A-A^Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-TwzJV-Q (I) kde X, A1, A2, Leu-psí, A9 a Q mají výše uvedený význam.
Tyto pseudopeptidy, antagonistické bombesinu, jsou charakterizovány sekvencí aminokyselin, zejména ve zbytcích A1, A2 a A9, dále přítomností pseudopeptidické vazby mezi A8 a A9 a popřípadě 5členným heterocyklem v A9. Kruhová struktura je určována identitou zbytku A9 a sloučeniny použité kjeho oxidaci. Například je-li použit formaldehyd a A9 je Cas, má vzniklý kruh strukturu Tac vzorce IIA, znázorněnou zde jako fragment Leu8-/wí-Tac9-Q peptidu vzorce I, kdeQjeNH2:
S
A h2c ch2
...NH-CH-CH,-N-CH-CO-NH2 (IIA)
I
CH2-GH(CH3)2
Je-li Cys místo toho oxidován acetaldehydem, má vzniklý 5členný heterocyklus strukturu MTac vzorce IIB (znázorněnou zde jako fragment Leu8-/wz-MTac9-Q peptidu vzorce I, kde Q je NH2):
S
Λ ch3hc ch2
I I
...NH—CH-CH2—N-CH-CO—NIL· (IIB)
CH2-CH(CH3)2
Je-li místo toho A9 Pen a je oxidován formaldehydem, má vzniklý kruh strukturu DMTac vzorce IIC (znázorněnou zde jako fragment -Leu8-psz-DMTac9-Q nonapeptidu vzorce I, kde Q je NH2):
S
A
H2C C(CH3)2
I I
...NH-CH-CHt-N-€H-CO-NH2 (IIA)
I
CH2-CH(CH3)2
V těchto výhodných provedeních je žádoucí, je-li X vodík nebo AC, A1 je D-Phe, A2 je Gin a Q jeNH2.
Zvlášť výhodné pseudopeptidy, antagonistické bombesinu, jsou uvedeny dále:
č. struktura
D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/zsz-Tac-NH2
D-Phe-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-psí-T ac-NH2
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/>5z-MTac-NH2
Ac-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-GIy-His-Leu-/wz'-Tac-NH2
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5Z-Tac-NH2
D-Cpa-Gln-Trp-A!a-Val-Gly-His-Leu-/?5/-MTac-NH2
D-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-Tac-NH2
Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-Tac-NH2
D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-ps z-Tac-NH2
D—Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-jP5z-Tac-NH2
Ac-D-Trp-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-^íz-T ac-NH2
Tpi-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-psz-T ac-NH2
D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/wz'-Tac-NH2
Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-Tac-NH2
-8CZ 286750 B6
D-Phe-His-Trj>-Ala-Val-Gly-His-Leu-/>5/-Tac-NH2
D-Phe-Glu(OMe)-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-/wz-T ac-NH2 c---------------1
D-Phe-Glu[-]-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- /wz'-Tac-NH2
D-Phe-Gln-Trp-A!a-Val-Gly-His-Leu-psí-DMTac-NH2
Ac-D-Phe-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-DMTac-NH2
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/75z'-DMTac-NH2
Tpi-Gln-Trp-AIa-Val-Gly-His-Leu-psz-DMTac-NHi
D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-DMTac-NH2
Zvlášť výhodná provedení zahrnují:
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-Tac-NH2
D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-j>sí-Tac-NH2
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/wz-DMTac-NH2
B. Syntetické metody
1. Přehled
Pseudopeptidy vzorce I je možno připravovat kteroukoli z metod, známých odborníkům v oboru peptidů. Souhrn takto dostupných metod je možno nalézt v M. Bodanszky, Principles ofPeptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg, 1984.
Všechny pseudopeptidy vzorce I je možno syntetizovat postupy syntézy v pevné fázi. Zvlášť výhodnou metodou přípravy těchto peptidů a jejich peptidických meziproduktů je syntéza v pevné fázi. Metody syntézy výlučně v pevné fázi jsou uvedeny v učebnici J.M. Stewarta J.D. Younga, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chem. Co., Rockford, IL, 1984 (2. vyd.) a v přehledu G. Baranyho a d., Int. J. Peptide protein Res., 30, 705-739, 1987. (Dodatečný krok oxidace C-terminálního zbytku A9 kcyklizaci charakteristického bočního řetězce zbytku sjeho α-aminokyselinou může být prováděn v jednom nebo několika bodech syntézy peptidů vzorce I).
Při výrobě pseudopeptidů, antagonistických bombesinu, vzorce I je možno postupovat podle alespoň dvou protokolů. Podle prvního protokolu se navazují postupně všechny aminokyseliny jedna ke druhé poté, co byl C-terminální zbytek A9 navázán na nosičovou fázi pryskyřice. Podle druhého protokolu se na pryskyřici vybuduje tripeptid. Ten se pak naváže k oligopeptidu, nesoucímu zbylé aminokyseliny, za vzniku bombesinového antagonisty. Podle obou protokolů syntéza začíná C-terminálním zbytkem A9 a postupně se přidávají zbytky aminokyselin směrem k N-terminálnímu zbytku.
1. a) První protokol. Nosičovou fázi pryskyřice, použitou při syntéze pseudopeptidů v pevné fázi, může představovat benzhydrylaminová (BHA) pryskyřice nebo chlormethylovaná polystyrénová pryskyřice, zesítěná 1 % divinylbenzenu, které jsou obě komerčně dostupné. C-terminál zbytek A9 se k této pryskyřici připojuje přes svou karboxylovou skupinu. Vzájemné reakci mezi dvěma těmito zbytky se zamezuje navázáním chemické chránící skupiny na α-aminoskupinu každého zbytku A9 před jeho navázáním na pryskyřici. Chrániči skupinou pro α-aminoskupinu zbytku A9 i každého následně navázaného aminokyselinového zbytku může být buď 9-fluorenyImethyloxykarbonylová (Fmoc), nebo terc.butoxykarbonylová (Boc) skupina. Fmoc je výhodná při kondenzaci zbytků od C-terminálního A9 do A2, poněvadž reakcí, kterou se odštěpuje Boc, se odštěpí rovněž skupina chránící boční řetězec C-terminálního zbytku A9. Během těchto vazebních reakcí mohou být charakteristické funkční skupiny bočních řetězců určitých aminokyselinových zbytků navázáním chemické chránící skupiny (pro A9 výhodně But) před kondenzační reakcí rovněž chráněny před nežádoucími chemickými reakcemi.
-9CZ 286750 B6
Poté, co je C-terminál zbytek Fmoc-A9 (But) navázán na nosičovou fázi, odštěpí se chránící skupina z jeho α-aminoskupiny a naváže se na něj Fmoc-Leu-CHO za vzniku pseudopeptidické vazby.
Zbývající zbytky A5, A4, A3 a A2, výhodně chráněné Fmoc, a A1, výhodně chráněný Boc, se pak přidávají postupně v obráceném číselném pořadí (A7, A6 atd.), a tak se konstruuje požadovaný pseudopeptid.
Je-li v pseudopeptidu přítomen His nebo Glu, mohou jejich boční řetězce být ohroženy nežádoucími chemickými reakcemi během jejich vazebních reakcí nebo vazebních reakcí ostatních zbytků. Proto je možno před vazbou těchto aminokyselin vazební reakcí zavést do těchto bočních řetězců chemickou chránící skupinu.
Jakmile jsou k pryskyřici BHA navázány všechny aminoacylové zbytky, je možno z pseudopeptidu odštěpit Boc na N-konci. 5členný heterocyklus Tac, MTac nebo DMTac se vytvoří reakcí přístupné skupiny -CH2-SH Cys (nebo -C(CH3)2SH zbytku Pen) a sekundární aminoskupiny redukované vazby, spojující zbytky A8 a A9 (tj. α-aminoskupinu zbytku A9), s oxidačním činidlem, jako je formaldehyd nebo acetaldehyd. Pseudopeptidický meziprodukt, dosud nesoucí chránící skupiny bočních řetězců, se pak podrobí působení HF k oddělení od nosičové fáze pryskyřice a zároveň k odstranění chránících skupin bočních řetězců.
1. b) Druhý protokol. Podle druhého protokolu metod syntézy v pevné fázi se na BHA pryskyřici vybuduje tripeptid za vzniku pryskyřice s navázaným chráněným tripeptidem:
Boc-His(Bom)7-Leu8-/wz'-Cys(But)9-BHA pryskyřice.
Skupina Boc1 a skupina But se odštěpí a skupina -CH2-SH zbytku Cys se cyklizuje se sekundářním aminem redukované vazby, spojující zbytky A a A , za vzniku His(Bom) -Leu -psí-Tac BHA pryskyřice. Po zpracování HF se získá volný tripeptid His7-Leu8-/wz-Tac9-NH2. Boc-A1A2-Trp-Ala-Val-Gly-OCH2-pryskyřice se vybudují postupně na Gly-OCH2-pryskyřici standardními metodami syntézy v pevné fázi a pak se na 12 h podrobí působení 95% methanolu, obsahujícího 1% K.CN k odštěpení Boc-oligopeptidu. Po zkonstruování obou fragmentů se Boc-oligopeptid pomocí činidla BOP spojí s volným tripeptidem His7-Leus-/?sí-Tac9-NH2. Pak se odštěpí skupina BOC za vzniku požadovaného peptidu.
Před podrobným popisem syntézy antagonistů bombesinu vzorce I se popisuje několik syntetických operací, běžných projeden nebo oba výše popsané protokoly.
2. Obecné operace při syntéze polypeptidů
Operace 1: Tvorba určitých syntetických zbytků nebo činidel
a) L- a D-Tpi: 2,04 g (10 mM) L-Trp se rozpustí ve 25 ml vroucí vody, obsahující 2,1 g kyseliny citrónové. Přidá se 0,5 ml 40% vodného formaldehydu a okamžitě začnou vznikat pevné látky. Směs se chladí na ledové lázni a odebírá se sraženina, která se promyje studenou vodou a vzduchem a pak suší při teplotě místnosti na 2,14 g 99% pevné látky o teplotě tání (za roztoku) cca 310 °C. D-isomer vzniká stejným způsobem z D-Trp a má také teplotu tání (rozklad) cca 310 °C.
b) L- a D-Boc-Tpi: K míchané suspenzi 10,8 g (50 mM)D-Tpi ve 250 ml 0,2 N NaOH a 7,5 ml triethylaminu se přidá 10 g diterc.butyldikarbonátu, směs se míchá 4 h a pak se přidá dalších 10 g dikarbonátu a pak dalších 10 g po dalších 3 h míchání. Směs se míchá přes noc a extrahuje
-10CZ 286750 B6 (2 x 100 ml) etherem; extrakt se zničí. K vodné vrstvě se přidá kyselina citrónová do pH 3 až 5. Pevný podíl se shromáždí, promyje vodou a přes noc suší vzduchem.
Pevný podíl se suspenduje ve 100 ml tetrahydrofuranu. Rozpustí se téměř veškerý pevný podíl. Nerozpustný podíl se odfiltruje a THF se odstraní ve vakuu, zbytek se trituruje s etherem a poskytne 9,20 g, tj. 58%. Tato látka má stejnou teplotu tání jako výchozí látka, ale liší se rozpustností a TLC na silikagelu s použitím CHCl3:MeOH:HOAc 85:15:0,5.
2,55 g L-Tpi poskytuje stejnou metodu 2,22 g, tj. 59 % Boc-Tpi.
c) Fmoc-Leu-CHO
Fmoc-leucinmethylester (35 g, 134 mmol) v suchém toluenu (250 ml) pod N2 se chladí směsí suchý led/aceton a během 30 min se přidá 150 ml 25% diisobutylaluminiumhydridu v toluenu. Směs se po přídavku diisobutylaluminiumhydridu míchá 20 min v lázni suchý led/aceton, pak se opatrně přidá methanol (15 ml). Směs se vlije do 1000 ml ledově studené vody, protřepe a přefiltruje. Toluen se oddělí a vodná fáze se reextrahuuje etherem (3 x 300 ml). Toluenový a etherový extrakt se spojí a suší nad Na2SO4. Vzniklý olej se nechá rychle projít sloupcem silikagelu (3 x 50 cm) v 1500 ml 15% EtOAc/benzín. Jako pevná látka se získá Fmoc-Leu-CHO (27,6 g).
d) Syntetické aminokyseliny nebo analogy aminokyselin, zabudovávané do pseudopeptidů, antagonistických bombesinu, jsou obvykle dostupné z komerčních zdrojů. Například Hca je obchodně dostupný od Aldrich Co., 1001 St. Paul Avenue, Milwaukee, W1 53233. Boc- nebo Fmoc-chráněné aminokyseliny jsou obchodně dostupné od Advenced ChemTech, 5609 Fem Valley Road, Louisville, KY 40228, nebo Bachem Califomia, 3132 Kaschiwa Street, Torrance, CA 90505.
Operace 2: Příprava pryskyřice a přídavek zbytku A9.
Pryskyřice BHA se připraví dvojím 3min působením 10% TEA v CH2C12 (neutralizace) a šestinásobným promytím CH2C12. Zbytek Fmoc-A9 (But) se na pryskyřici naváže přídavkem 1,35 mmol Fmoc-A9 (But) a 1,500 mmol 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) v DMF a 3 min promícháním. Přidá se 20% 1,3-diisopropylkarbodiimid (DIC) s 1,3 mmol vCH2Cl2. Směs se třepe 60 min při teplotě místnosti. Vzniklá Fmoc—A9 (But)-BHA pryskyřice se promyje vždy dvakrát CH2C12 a methanolem a třikrát CH2C12 a pak se podrobí Kaiserovu testu (Anal. Biochem. 34, 595 (1970)).
V případě neúplné kondenzace se procedura opakuje.
Operace 3. Tvorba pseudopeptidické vazby
Odštěpení chránící skupiny Fmoc z A9 se provádí přídavkem 50% piperidinu v DMF a mícháním po dobu 30 min; směs se promyje DMF (6 x 1 min), pak i) se přidá Fmoc-Leu-CHO (3 ekv.) v DMF, obsahujícím 1 % AcOH a ii) se přidá NaBH3CN (3,5 ekv.) v DMF a třepe se 60 min. Nato se provede promytí 50% MeOH (3 x 1 min), 100% MeOH (3 x 1 min) a DMF (3 x 1 min).
Operace 4: Kondenzace aminokyselin a tvorba peptidické vazby
Chrániči skupino pro α-aminoskupinu zbytku A9 a každého následně navázaného aminokyselinového zbytku může být buď 9-fluorenylmethyloxykarbonyIová (Fmoc), nebo terc.butoxykarbonylová (Boc) skupina. Fmoc je výhodná pro kondenzaci od zbytku A9 po zbytek aminokyseliny přímo sousedící s N-terminálním zbytkem aminokyseliny, poněvadž reakcí, kterou se odštěpuje Boc, se zároveň odštěpuje chránící skupina bočního řetězce A9.
-11CZ 286750 B6
A. Použití Fmoc-aminokyseliny
Při zavádění Fmoc-aminokyseliny do Fmoc-peptidového meziproduktu se používá tento postup:
1) Z Fmoc-peptidového meziproduktu se odstraní chránící skupina a provede se neutralizace, pak se promyje CH2C12 (3 x 1 min) a DMF (3 x 1 min).
2) Fmoc-aminokyselina se kondenzuje s peptidovým meziproduktem i) přídavkem Fmoc-aminokyseliny (3 ekv.) a HOBt (3,3 ekv.) v DMF (3 min) k peptidovému meziproduktu, ii) přídavkem 3 ekv. DIC (jako 20% roztok v CH2C12) a třepáním směsi po dobu 90 min.
3) Směs se pak promyje ethanolem (3 x 1 min) a DMF (3x1 min).
Za účelem kondenzace s ostatními zbytky se z nově kondenzované Fmoc-aminokyseliny odstraní chránící skupiny působením 50% piperidinu v DMF po dobu 30 min a promyje se DMF (6 x 1 min). Další kondenzace probíhají jako ve stupni 2.
Pokaždé, když je s pryskyřicí nebo peptidem kondenzována nová aminokyselina, provádí se Kaiserům test; dojde-li k neúplné kondenzaci, reakce se opakuje.
Pro kondenzaci Fmoc-Gly a Fmoc-Gln je stupeň 2 této operace modifikován takto: 3 ekv. DIC (jako 20% CH2C12) se přidají ke směsi DMF-roztoku Fmoc-aminokyseliny (3,0 ekv.) a HOBt (3,3 ekv.) a směs se ponechá 15 min při 0 °C a 15 min při teplotě místnosti. Reakční směs se přidá k peptidové pryskyřici a třepe se 1 h v případě Fmoc-Gly a 2 h, jde-li o Fmoc-Gln.
B. Použití Boc-aminokyseliny
Při zavádění Boc-aminokyseliny do Fmoc-peptidového meziproduktu se postupuje tímto způsobem:
1) Odstraní se Boc skupina přídavkem 50% TFA v Ch2Cl2,
2) po dobu 25 min se přidává 50% TFA v CH2C12 obsahující 5 % merkaptoethanolu a 5 % anisolu a
3) promývá se CH2C12 (2x1 min), MeOH (2 x 1 min) a DMF (3 x 1 min).
4) Navázání zbytku Boc-aminokyseliny se provádí přídavkem 3 ekv. Boc-aminokyseliny a 3,3 ekv. HOBt a DMF a mícháním po dobu 3 min. Pak se přidají 3 ekv. 20% diisopropylkarbodiimidu v CH2CI2 a směs se 90 min třepe. Reakční směs se pak promyje MeOH (3x1 min) a pak CH2C12 (3 x 1 min).
5) Skupina Boc se odštěpí promytím produktu stupně 5 50% TFA v CH2C12 s obsahem 5 % merkaptoethanolu (5 min) a 5 % anisolu (25 min). Pak následuje promývání CH2C12 (2x1 min), MeOH (2x1 min) a DMF (3 x 1 min).
Je třeba mít na paměti, že odštěpením skupiny Boc se současně odstraní i chránící skupina But, případně navázaná na boční řetězec A9. Proto se skupina Boc obvykle odštěpuje až těsně před cyklizací zbytku A9.
-12CZ 286750 B6
Operace 5: Tvorba 5členného heterocyklu
Kruhová struktura vzorce IIA se vytvoří třepáním peptidického meziproduktu s chránící skupinou odstraněnou z Cys9 ve směsi 50% AcOH, 3,7% HCHO a DMF (1:1:8) po dobu 3 min při teplotě místnosti a přefiltrováním. Produkt se promyje vždy třikrát DMF, MeOH a CH2CL.
Kruhová struktura vzorce IIB se vytvoří třepáním peptidického meziproduktu s chránící skupinou odstraněnou z Cys9 ve směsi 50% AcOH, 10% CH3CHO a DMF (1,5:0,5:8) po dobu 10 min při teplotě místnosti a přefiltrováním. Produkt se promyje vždy třikrát DMF, MeOH a CH2CI2.
Kruhová struktura vzorce IIC se vytvoří třepáním peptidického meziproduktu s chránící skupinou odstraněnou zPen9 ve směsi 50% AcOH, 3,7% HCHO a DMF (1:1:18) po dobu 10 min při teplotě místnosti a přefiltrováním. Produkt se promyje vždy třikrát DMF, MeOH a CH2C12.
Operace 6: Odštěpení peptidu od pryskyřice
Poté, co byly navázány všechny požadované aminokyselinové zbytky, působí se na peptidový meziprodukt na pryskyřici kapalným HF v přítomnosti anisolu za účelem odštěpení polypeptidu z nosičové fáze. Touto reakcí se rovněž odstraní chránící skupiny bočních řetězců. Při použití pryskyřice BHA je ve výsledném peptidu Q = NH2.
Je-li X jiné než vodík, je skupina X umístěna na N-konci buď zavedením aminokyseliny již nesoucí skupinu X (například Ac-D-Phe), nebo reakcí volné α-aminoskupiny na N-terminálním A1 pseudopeptidického meziproduktu s vhodným činidlem. Například kompletní peptid po oddělení od nosičové fáze může výhodně reagovat s KOCN a pak X = NH2CO-.
Operace 7: Čištění peptidů
Pseudopeptidy vzorce I se obvykle čistí vysokoúčinnou kapalinovou chromatografíi (HPLC) v koloně s reverzními fázemi v systému Rainin HPLC (Rainin lne., Wobum, MA), tvořeném třemi čerpadly Reinin Rabbit HP HPLC, řízenými počítačem Apple Macintosh Plus, injektorem Rheodyne a monitorem UV s měnitelnou vlnovou délkou Knauer model 87. Surové peptidy (10 až 40 mg) se nastříknou do kolony Dynamax Macro (21,2 x 250 mm), plněnou sférickým silikagelem Cig (velikost pórů 300 Á, velikost částic 12 pm, Rainin lne. Co.) a vymývají lineárním gradientem s použitím rozpouštědlového systému, tvořeného (A) 1% TFA a (B) 0,1% TFA v 70% vodném acetonitrilu, s průtokem 2,0 ml/min. U všech frakcí se zjišťuje pomocí dále popsané analytické HPLC čistota a retenční doba.
Kvalita a eluční charakteristiky surového a čištěného peptidu se zjišťují analytickou HPLC na kapalinovém chromatografu Hewlett-Packard model 1090, vybaveném detektorem s diodovým polem, nastaveným na 220 a 280 nm a kolonou s reverzními fázemi 4,6 x 250 mm W-porex C]8 (velikost pórů 300 A, velikost částic 5 pm). Udržuje se průtok 1,2 ml/min systému výše popsaných rozpouštědel (A) a (B) a separace se provádějí při teplotě místnosti.
Ve většině případů byli pseudopeptidičtí antagonisté bombesinu dále čištěni rechromatografií na stejné koloně s mírnou modifikací podmínek gradientu. Analytickou HPLC prokázala homogenita čištěných peptidů čistotu nad 97 %.
Je-li to žádoucí, je možno provést analýzu aminokyselin v pseudopeptidech vzorce I v analyzátoru aminokyselin Beckman 6300 na vzorcích, hydrolyzovaných 20 h při 110 °C v zatavených evakuovaných zkumavkách se 4 M kyselinou methansulfonovou s obsahem 0,2 % 3-(2aminoethyl)-indolu.
-13CZ 286750 B6
C. Syntetické meziprodukty
1. Chránící skupiny postranních řetězců
Při syntéze v pevné fázi je obvyklé chránit reaktivní funkční skupiny v postranních řetězcích různých aminokyselinových zbytků nebo peptidových fragmentů. Tyto funkční skupiny postranních řetězců mohou být chráněny proti nežádoucí chemické reakci na těchto řetězcích. Proto je běžné vyrobit peptidický meziprodukt, který obsahuje v peptidickém řetězci všechny aminokyselinové zbytky v požadované sekvenci a s chránícími skupinami postranních řetězců navázanými na příslušných zbytcích.
Při volbě konkrétní chránící skupiny postranního řetězce při syntéze peptidů se obvykle dodržují tato pravidla: a) chránící skupina si obvykle podržuje své chránící vlastnosti za podmínek kondenzace, b) chránící skupina by měla být stabilní vůči kondenzačním činidlům, výhodně je stabilní za podmínek kondenzační reakce zvolených k odstranění chránící skupiny a-aminoskupiny v každém stupni syntézy a c) chránící skupina postranního řetězce musí být odštěpitelná po dokončení syntézy požadované sekvence aminokyselin za reakčních podmínek, které nebudou nežádoucím způsobem ovlivňovat peptidický řetězec.
Chrániči skupiny postranního řetězce se navazuj í na aminokyselinové zbytky známými metodami. Vhodné chránící skupiny postranního řetězce His zahrnují Bom a pro Glu a Cys zahrnují But.
2. Syntetické meziprodukty
Za spadající do rozsahu vynálezu se rovněž považují peptidické meziprodukty v následujících stupních syntézy. Zde jsou znázorněny peptidické meziprodukty peptidů 2 ve třech stupních:
stupeň A: po navázání všech aminokyselin a pryskyřice:
Boc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-p5Í-Cys(But)-BHA pryskyřice ( 1/02/A) stupeň B: po odstranění N-terminální skupiny Boc:
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys(But)-BHA pryskyřice ( 1 /02/B) stupeň C: po cyklizaci A9:
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?5/-Tac-BHA pryskyřice ( 1/02/C)
Existuje jeden další stupeň, stupeň D, znázorněný dále v syntéze peptidů č. 17 v příkladu 2. Meziprodukt stupně D se odštěpí z pryskyřice, avšak nemá ještě jednoduchou vazbu X, spojující A1 s A2.
TERAPEUTICKÉ APLIKACE
Sloučeniny antagonistické bombesinu jsou vhodné k léčbě hypergastrinemických stavů, například pemiciosní anemie, chronické atrofické gastritidy, Zollinger-Ellisonova syndromu a vitiliga, spojených s difusní hyperplasií gastrických buněk podobných enterochromaffinu a se zvýšeným rizikem vývinu multifokálních gastrických karcinoidních tumorů. Hyperplasie buněk podobných enterochromaffinu navíc snadno vzniká u hypergasrinemických zvířat.
-14CZ 286750 B6
Taková léčba je oproti současným léčivům výhodná, poněvadž H2-antagonisté, jako je cimetidin, vyvolávají hypergastrinemii a mohou vést u lidí ke karcinoidním tumorům. Navíc přerušení léčby H2-antagonisty vyvolává okamžitý návrat vředů v důsledku trvající hypergastrinemie.
Protože sloučeniny podle vynálezu jsou antagonistické receptorům bombesinu/GRP, je možno je používat při léčbě rakoviny plic, rakoviny tlustého střeva a rakoviny žaludku.
Antagonisty bombesinu vzorce I podle vynálezu je možno podávat ve formě farmaceuticky přijatelných netoxických kyselin nebo solí, jako jsou adiční soli s kyselinami. Příklady takových adičních solí s kyselinami jsou hydrochlorid, hydrobromid, síran, fosforečnan, fumarát, glukonát, sůl kyseliny tříslové, maleát, acetát, citrát, benzoát, sukcinát, alginát, pamoát, malát, askorbát, tartrát apod.
Tyto farmaceutické přípravky obsahují pseudopeptidy vzorce I ve spojení s běžným farmaceuticky přijatelným nosičem, například fyziologickým solným roztokem; je však možno použít i jiných známých nosičů.
Léčbu subjektů těmito farmaceutickými přípravky je možno provádět stejným způsobem jako klinické ošetření s použitím jiných agonistů a antagonistů LHRH nebo analogů somatostatinu. Antagonisty bombesinu vzorce I je tedy možno podávat intravenózně, subkutánně, intramuskulámě, intranasálně, formou plicního aerosolu nebo v depotní formě (například jako mikrokapsle, mikrogranule nebo válcovité tyčinkovité implantáty), formulované z vhodného biodegradabilního polymeru (jako je DL-laktid-koglykolid). Do rozsahu vynálezu spadají i jiné rovnocenné způsoby podávání, tj. trvalá kapačka, infuzní pumpa a systémy s časovým uvolňováním, jako jsou mikrokapsle apod.
Účinná dávka peptidů vzorce I se liší podle formy podávání a konkrétního druhu ošetřovaného savce. Dávka činí asi 1 až asi 1000 pg peptidu na kg tělesné hmotnosti hostitele za den při parenterálním podání. Tato rozmezí dávek jsou pouze výhodná a za příslušných podmínek je možno volit vyšší dávky. Je možno podávat fyziologický solný roztok, umožňující dávkování v rozmezí asi 0,01 až 0,20 pg/kg tělesné hmotnosti za den, s výjimkou depotních forem, kde se injekčně aplikované množství počítá tak, aby vydrželo asi 15 až asi 30 dní nebo déle.
Příklady provedení vynálezu
V následujících příkladech se k označení peptidických meziproduktů v určitých stupních syntézy používá třímístný kód. Peptid, kódovaný jako 1/01/A, je peptidický meziprodukt peptidu „01“, vyráběného v příkladu „1“, po dokončení stupně A syntézy. Podobně „2/08/B“ a „4/19/C“ jsou meziprodukty peptidu „08“, resp. „19“, v příkladu 2, resp. 4, po dokončení stupně B, resp. C syntézy.
Příklad 1 peptid #
D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/wz-Tac-NH2
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psí-Tac-NH2
Ac-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-Tac-NH2
D-Cpa-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-/xsz-T ac-NH2
D—Nal-Gln-Trp—Ala-Val—Gly-His-Leu—psř-Tac—NH2
Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/75z-Tac-NH2
-15CZ 286750 B6
D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/zs7-Tac-NH2
D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-Tac-NH2
Ac-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-Tac-NH2
Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z-Tac-NH2
D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-Tac-NH2
Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5z'-Tac-NH2
Tyto peptidy mohou být výhodně syntetizovány ze společného meziproduktu 1-1
Fmoc-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-£>sz-Cys(But)-BHA pryskyřice, a postupuje se následujícím způsobem.
Fmoc-Leu-/25z'-Cys(But)-BHA pryskyřice se připraví takto: 2,0 g pryskyřice BHA (0,55 mmol NH2/g) se preparuje působením 20 ml 10% TEA v CH2C12 (neutralizace) dvakrát vždy po 3 min a promytí šestkrát 20 ml CH2C12; pak se 3 min míchá s 3,3 mmol Fmoc-Cys(But) a 3,6 mmol HOBt v DMF. Přidá se 3 ekv. DIC (jako 20% roztok v CH2C12). Směs se třepe 90 min při teplotě místnosti. Vzniklá Fmoc-Cys(But)-BHA pryskyřice se promyje vždy dvakrát CH2C12 a methanolem a třikrát CH2C12 a pak podrobí Kaiserovu testu.
Navázání Fmoc-Lue-CHO za vzniku pseudopeptidické vazby se provádí následujícím způsobem. Odštěpení skupiny Fmoc z A9 se provede přídavkem 15 ml 50% piperidinu v DMF, mícháním po dobu 30 min a promytím 15 ml DMF (6 x 1 min). Pak se přidá 3,3 mol Fmoc-LeuCHO (3 ekv.) v DMF s obsahem 1 % AcOH a pak NaBH3CN (3,5 ekv.) v DMF a třepe se 1 h. Pak se provede promytí 15 ml 50% meOH (3 x 1 min), 15 ml 100% MeOH (3 x 1 min) a 15 ml DMF (3 x 1 min).
Odštěpení skupiny Fmoc z Fmoc-Leu-/?5z'-Cys(But)-BHA pryskyřice se provede operací 4A.
Po odštěpení skupiny Fmoc z Fmoc-Leu-/zsz'-Cys(But)-BHA pryskyřice a neutralizaci se provede navázání Fmoc-His(Bom) podle operace 4A.
Navázání Fmoc-Gly se provádí podle operace 4. K DMF roztoku 3,3 mmol Fmoc-Gly a 3,6 mmol HOBt o teplotě 0 °C se přidá 20% 1,3-diisopropylkarbodiimidu (3,3 mmol) v CH2C12 a míchá se 15 min za chlazení a 15 min při teplotě místnosti, sraženina se odfiltruje a přidá k pryskyřici a třepe se 60 min. Pak se postupně stejným způsobem naváží následující aminokyselinové zbytky Fmoc-Val, Fmoc-Ala a Fmoc-Trp za vzniku 3,80 g meziproduktu I—1, tj. chráněného peptidů navázaného na pryskyřici se strukturou Fmoc-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/uz-Cys(But)-BHA pryskyřice.
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-pGlu na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?5z'-Cys(But)-GHA pryskyřice (1/01/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Phe na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-D-Phe-Gln—Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys(But)-BHA pryskyřice (1/02/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Ac-D-Phe na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Ac-D-Phe-Gln-T rp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/wz-Cys(But)-BHA pryskyřice ( 1/04/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Cpa na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?sz'-Cys(But)-BHA pryskyřice (1/05/A).
-16CZ 286750 B6
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Nal na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-E>-Nal-Gln-Trp-Ala-Vla-Gly-His(Bom)-Leu-psř-Cys(But)-BHA pryskyřice ( 1/07/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-Pal na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys(But}-BHA pryskyřice ( 1/08/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Pal na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz'-Cys(But)-BHA pryskyřice (ΓΊ/09/Α).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Trp na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys(But)-BHA pryskyřice (1/10/A”).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Ac-D-Trp na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Ac-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?sz-Cys(But)-BHA pryskyřice (1/11/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-Tpi na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-ps/-Cys(But)-BHA pryskyřice ( 1/12/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Tpi na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Vla-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys(But)-BHA pryskyřice (1/13/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Hca na peptidický meziprodukt 1-1 se získá Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz'-Cys(But)-BHA pryskyřice ( 1/14/A).
N-terminální skupina Boc peptidického meziproduktu 1/01/A se pak odštěpí působením 50% TFA v CH2C12 s obsahem 5 % merkaptoethanolu a 5 % anisolu nejprve po dobu 5 min a pak znovu po dobu 25 min. Peptidický meziprodukt se pak promyje CH2C12 (2krát 1 min), MeOH (2 krát 1 min) a DMF (3krát 1 min). Tím se současně odštěpí chránící skupina But z Cys a získá se peptidický meziprodukt
D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/>sz'-Cys-BHA pryskyřice ( 1/01/B), který se pak promyje CH2C12, MeOH a DMF, vždy třikrát po dobu 1 min.
V tomto okamžiku se cyklizuje postranní řetězec Cys peptidického meziproduktu 1/01/B oxidací za vzniku 5členného heterocyklu, znázorněného vzorcem IIA, operací 5. Přidá se 10 ml směsi AcOH, 3,7 % HCHO a DMF (1:1:8). Reakční směs se třepe 3 min při teplotě místnosti, promyje vždy třikrát vodou DMF a CH2C12 a získá se peptidický meziprodukt 1/01 PC D-pGlu-Gln-Trp-AIa-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Tac-BHA pryskyřice.
Na peptidický meziprodukt 1/01/C se pak působí HF a anisolem podle operace 6 za účelem odstranění chránící skupiny Bom z His a současného odštěpení nonapeptidu z nosičové fáze pryskyřice, načež je C-terminální Q skupinou -NH2. Peptid se v operaci 7 čistí HPLC. Získá se tak bombesinu antagonistický peptid č. 1.
Stejné stupně, při nichž se odštěpuje skupina Boc a But a skupina -CH2-SH Cys se cyklizuje sekundárním aminem redukované vazby, se provedou u peptidických meziproduktů 1/02/A, 1/05/A, 1/07/A, 1/08/A, 1/09/A, 1/10/S a 1/12/A za vzniku následujících peptidických meziproduktů:
1/02/B D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-jp5/-Tac-BHA prysk.
1/04/B Ac-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bomý-Leu-/>sí-Tac-BHA prysk.
1/05/B D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/zsz-Tac-BHA prysk.
-17CZ. 286750 B6
1/07/B D-Nal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?5z-Tac-BHA prysk.
1/08/B Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Tac-BHA prysk.
1/09/B D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/25z-Tac-BHA prysk.
1/10/B D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-7?5z-Tac-BHA prysk.
1/11/B Ac-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/wz-Tac-BHA prysk.
1/12/B Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?5z-Tac-BHA prysk. 1/13/B D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Tac-BHA prysk.
1/14/B Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/25z-Tac-BHA prysk.
Surové peptidy se odštěpí od BHA pryskyřice a pak se v operacích 6 a 7 čistí za vzniku čistých peptidů 2, 4, 5 a 7 až 14.
Retenční časy těchto peptidů jsou následující:
Analytické údaje HPLC
| č. peptidů | gradient % B/min | retenční čas na koloně D |
| 1 | 25-65 | 14,40 |
| 2 | 25-65 | 14,20 |
| 4 | 25-75 | 15,17 |
| 5 | 25-65 | 16,11 |
| 7 | 20-60 | 23,75 |
| 8 | 20-60 | 13,19 |
| 9 | 25-65 | 12,00 |
| 10 | 25-65 | 16,98 |
| 11 | 25-65 | 24,50 |
| 12 | 25-65 | 19,91 |
| 13 | 25-65 | 16,99 |
| 14 | 40-80 | 13,68 |
Alternativně je možno 5ělenný heterocyklus vytvořit v roztoku následujícím postupem:
mg peptidického meziproduktu, zahrnujícího strukturu Leu-/J5z'-Cys-NH2, získaného syntézou v pevné fázi, v 0,8 ml ledové kyseliny octové se míchá 30 s při teplotě místnosti se 100 μΐ 1% formaldehydu (hm. koncentrace roztoku ve vodě) a pak se přidá 20 μΐ 50% roztoku acetátu amonného. Reakční směs se podrobí čištění a poskytne požadovaný peptid, který obsahuje strukturu -Leu-psz-Tac-NH2.
Příklad 2 peptid #
D-Phe-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/»5z-Tac-NH2
D-Phe-Glu(OMe)-Trp-Ala-V al-Gly-His-Leu-psz-Tac-NH2
E--------------1
D-Phe-Glu[-]-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- psz-Tac-NH2
Peptidy v tomto příkladu je možno výhodně syntetizovat ze společného meziproduktu 1-2 Fmoc-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?sz'-Cys(But)-BHA pryskyřice, vybudovaného postupně na 0,5 g BHA pryskyřice (0,55 mmol NH2/g). Peptidický meziprodukt 1-2 se připraví s použitím operací a postupů uvedených v příkladu 1. Podíl 150 mg meziproduktu 1-2 se pak rozdělí na 3 elikvoty a podrobí se dvěma dalším kondenzacím postupem, popsaným v operaci 4, za vzniku finálních nonapeptidů navázaných na pryskyřici.
-18CZ 286750 B6
Postupným navázáním Fmoc-His(Bom) a Boc-D-Phe na peptidický meziprodukt 1-2 se získá Boc-D-Phe-His(Bom)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psA-Cys(But)-BHA pryskyřice (2/15/A).
Postupným navázáním Fmoc-Glu(OMe) a Boc-D-Phe na peptidický meziprodukt 1-2 se získá Boc-D-Phe-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/75z-Cys(But)-BHA pryskyřice (2/16/A).
Postupným navázáním Fmoc-Glu(But) a Boc-D-Phe na peptidický meziprodukt 1-2 se získá Boc-D-Phe-Glu(But}-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz'-Cys(But)-BHA pryskyřice (2/17/A).
Odštěpení skupiny Boc z peptidického meziproduktu 2/15/A se provede působením 50% TFA v CH2CI2 s obsahem 5 % merkaptoethanolu a 5% anisolu podle operace 4. Touto reakcí se současně odštěpí skupina But ze zbytku A9 a získá se peptidický meziprodukt 2/15/B: D-Phe-His(Bom)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/wZ-Cys-BHA pryskyřice ( 1/01/B).
V tomto okamžiku se cyklizuje postranní řetězec Cys peptidického meziproduktu 2/15/B oxidací za vzniku 5členného heterocyklu, znázorněného vzorcem IIA, operací 5. Přidá se 10 ml směsi AcOH, 3,7 % HCHO a DMF (1:1:8). Reakční směs se třepe 3 min při teplotě místnosti, promyje vždy třikrát vodou, DMF a CH2CI2 a získá se peptidický meziprodukt 2/15/C: D-Phe-His(Bom)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/>5z-Tac-BHA pryskyřice.
Na peptidický meziprodukt 2/15/C se pak působí 1 h při 0 °C čerstvě předestilovaným HF (5 ml) a anisolem (0,25 ml), čímž se odstraní chránící skupina Bom z His. Ve vakuu se odpaří rozpouštědlo a zbytek se promyje ethylacetátem, extrahuje 70-80% vodnou kyselinou octovou a lyofilizuje. Po přečištění se získá bombesinu antagonistický peptid č. 15.
Stejné stupně, při nichž se odštěpuje N-terminální skupina Boc, cyklizuje se Cys9, peptidický meziprodukt se odštěpuje od BHA pryskyřice a provádí se čištění HPLC, se provedou u peptidických meziproduktů 2/16/A a 2/17/A a získá se peptid č. 16 a peptidický meziprodukt 2/17/D: D-Phe-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?5/-Tac-NH2.
Směs 15 mg 2/17/D a 15 mg HOBt v 0,8 ml DMF o teplotě 0 °C se přidá k 50 μΐ 25% diisopropylkarbodiimidu v CH2C12 a směs se 2 h míchá při 0 °C. V peptidů 17 se vytvoří jednoduchá vazba, spojující α-aminoskupinu D-Phe1 s gíwwwa-karboxylovou skupinou 3-propionylové skupiny Glu2 LD-Phe-Glu[-!-]-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-píř'-Tac-NH2.
Reakční směs se podrobí čištění HPLC podle operace 7.
Retenční časy těchto peptidů jsou následující:
Analytické údaje HPLC
| peptidů | gradient % B/min | retenční čas na koloně D |
| 15 | 20-60 | 17,23 |
| 16 | 25-65 | 19,13 |
| 17 | 20-60 | 20,34 |
-19CZ 286750 B6
Příklad 3 peptid #
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-MTac-NH2
D-Cpa-G ln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-píz-MTac-NH2
Tyto antagonisty bombesinu je možno syntetizovat ze společného meziproduktu 1-3, tj.
Fmoc-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-p5/-Cys(But)-BHA pryskyřice. Ten se vybuduje na 1,0 g BHA pryskyřice (0,55 mmol) NH2/g) postupnou kondenzací metodou v pevné fázi, popsanou v příkladu 1 počínaje s Fmoc-Cys(But) přes Fmoc—Leu-CHO (s NaBH3CN) a FmocHis(Bom) atd. podle příkladu 1. Podle operace 4 se na N-nakonec naváže Fmoc-Gln za vzniku meziproduktu 1-3. Konečná kondenzace Boc-D-Phe nebo Boc-D-Cpa s meziproduktem 1-3 se provádí postupy, uvedenými v operaci 4, za vzniku peptidických meziproduktů 3/3/A, resp.
3/6/A.
Odštěpení skupiny Boc se provádí pomocí 50% TA v CH2C12 s obsahem 5 % merkaptoethanolu a 5 % anisolu podle operace 4.
V tomto okamžiku se cyklizuje postranní řetězec Cys peptidického meziproduktu 3/3/B oxidací za vzniku 5členného heterocyklu, znázorněného ve vzorci IIB, podle operace 5. Přidá se 10 ml směsi 50% AcOH, 10% CH3CHO a DMF (1,5:0,5:5,8). Reakční směs se třepe 10 min při teplotě místnosti, promyje vždy třikrát vodu, DMF a CH2C12 a získá se peptidický meziprodukt 3/3PC: D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/7s/-MTac-BHA pryskyřice.
Meziprodukty 3/3/C a 3/6/C se od pryskyřice odštěpí podle operace 6 působením HF (5 ml) a anisolu (0,25 ml) při 0 °C po dobu 1 h. Tímto postupem se rovněž odštěpí chránící skupina Bom z His a získají se finální nonapeptidy 3 a 6.
Peptidy se čistí HPLC podle operace 7; jejich retenční časy jsou následující:
Analytické údaje HPLC
č. peptidů gradient % B/min retenční čas na koloně D
25-65 15,71
25-65 17,37
Alternativně je možno 5členný heterocyklus vytvořit v roztoku tak, že se 25 ml peptidického meziproduktu, obsahujícího strukturu Leu-psí-Cys-NH2, v 0,8 ml ledové kyseliny octové míchá při teplotě místnosti se 100 μΐ 10% acetaldehydu. Směs se míchá 5 min; pak se přidá 100 μΐ acetátu amonného. Reakční směs se podrobí čištění a poskytne požadovaný peptid, který obsahuje strukturu Leu-psz-MTac-NH2.
Příklad 4 peptid #
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-DMTac-NH2
Ac-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-DMTac
D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/?sz'-DMTac-NH2
Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz'-DMTa-NH2
D-Tp i-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-DMTac-NH2
-20CZ 286750 B6
Tyto polypeptidy je možno výhodně syntetizovat ze společného meziproduktu 1-4 Fmoc-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/wí-Pen(But)-BHA pryskyřice. Tento meziprodukt se postupně vybuduje na benzhydrylaminové (BHA) pryskyřici standardními metodami syntézy v pevné fázi, popsanými v příkladech 1 a 2.
Přitom se podle operace 2 připraví 1,0 g BHA pryskyřice (0,55 mmol NH2/g) působením dvakrát vždy po dobu 3 min 10 ml 10% TEA v CH2CI2 (neutralizace); pak se míchá 3 min s 1,6 mmol Fmoc-Pen(But) a 1,8 mmol 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) vDMF. Přidá se 1,6 mmol 20% 1,3-diisopropylkarbodiimidu (DIC) v CH2CI2. Směs se třepe 90 min při teplotě místnosti. Vzniklá Fmoc-Pen(But)-BHA pryskyřice se promyje vždy dvakrát CH2CI2 a methanolem a třikrát CH2C12 a pak se podrobí Kaiserovu testu.
Odštěpení chránící skupiny Fmoc z Fmoc-Pen(But)-BHA pryskyřice se provádí podle operace A4.
Kondenzace s Fmoc-Leu-CHO se provádí podle operace 3. A9 (But)-BHA pryskyřice se promyje 2krát DMF. Pak se přidá 1,6 mmol Fmoc-Leu-CHO v DMF s obsahem 1 % AcOH a pak 1,8 mmol NaBH3CN v DMF. Reakční směs se 60 min třepe a pak se promyje 2krát 50% methanolem v H2O, 2 krát 100% MeOH a 3 krát CH2CI2, vždy po dobu 1 min.
Po odštěpení skupiny Fmoc z Fmoc-Leu-psú-Pen(But)-BHA pryskyřice a neutralizaci se podle operace 4 provede kondenzace s Fmoc-His(Bom).
Kondenzace s Fmoc-Gly se provede podle operace 4. KDMF roztoku 1,5 mmol Fmoc-Gly a 1,65 mmol HOBt o teplotě 0 °C se přidá 20% 1,3-diisopropylkarbodiimid (1,5 mmol) VCH2CI2, směs se míchá 15 min za chlazení a 15 min při teplotě místnosti, sraženina se odfiltruje a přidá k pryskyřici a třepe se 60 min. Pak se stejným způsobem naváží následující zbytky Fmoc-Val, Fmoc-Ala a Fmoc-Trp a získá se 1,9 g meziproduktu 1-4, tj. chráněného peptidů na pryskyřici o struktuře Fmoc-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/>s/-Pen(But)-BHA pryskyřice.
0,91 g meziproduktu 1-4 se rozdělí na pět alikvotů (po asi 200 mg), které se použijí k syntéze chráněných peptidů na pryskyřici postupy popsanými v operaci 4:
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Phe na peptidický meziprodukt 1-4 se získá Boc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psí-Pen(But)-BHA pryskyřice (4/18/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Ac-D-Phe na peptidický meziprodukt 1—4 se získá Ac-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Pen(But)-BHA pryskyřice (4/19/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-D-Cpa na peptidický meziprodukt 1-4 se získá Boc-D-Cpa-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psí-Pen(But)-BHA pryskyřice (4'720/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-Tpi na peptidický meziprodukt 1-4 se získá Boc-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/w/-Pen(But)-BHA pryskyřice (4/21/A).
Postupným navázáním Fmoc-Gln a Boc-Tpi na peptidický meziprodukt 1-4 se získá Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val—Gly—His(Bom)-Leu-/?5z-Pen(But)-BHA pryskyřice (4/22/A).
Z peptidického meziproduktu 4/18/A se pak odštěpí skupina Boc pomocí 50% TFA v CH2CI2 s obsahem 5 % merkaptoethanolu a 5 % anisolu za vzniku peptidického meziproduktu 4/18/B:
-21CZ 286750 B6
D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-j?5Í-Pen BHA pryskyřice.
V tomto okamžiku se podle operace 5 cyklizuje postranní řetězec Pen v peptidickém meziproduktu 4/18/B oxidací za vzniku 5členného heterocyklu znázorněného ve vzorci IIC. Přidá se 10 ml směsi AcOH, 3,70 HCHO a DMF (1:1:8) za vzniku reakční směsi, která se 3 min třepe při teplotě místnosti, promyje vždy 3krát vodou, DMF a CH2CI2 a získá se peptidický meziprodukt 4/18/C:
D-Phe-Gl n-T rp-Ala-V al-G ly-His(Bom)-Leu-psz-DMT ac-BHA pryskyřice.
Peptidický meziprodukt 4/18/C se pak promyje vždy třikrát 5 ml CH2C12, methanolem a CH2C12 a pak se na něj 1 h působí čerstvě předestilovaným HF (5 ml) a anisolem při 0 °C. Ve vakuu se odpaří rozpouštědlo, zbytek se promyje etherem nebo ethylacetátem a pak extrahuje 70-80% kyselinou octovou a lyofilizuje na surový nonapeptid na pryskyřici. Přečištěním reakční směsi se získá bombesinu antagonistický peptid č. 18.
Stejné stupně, při nichž se odstraňují chránící skupiny, cyklizuje se nechráněný A9 a peptidický meziprodukt se odštěpuje od pryskyřice, se provedou na peptidických meziproduktech 4/19/A, 4/20/A, 4/21/A a 4/22/A za vzniku peptidů č. 19, 20, 21 a 22.
Čištění se provádí pomocí HPLC s rozpouštědlovým systémem tvořeným (A) 0,1% TFA a (B) 1% TFA v 70% acetonitrilu podle operace 7. Přečištěné peptidy vykazují při analytické HPLC čistotu nad 97 %. Retenční časy těchto peptidů jsou následující:
Analytické údaje HPLC
| peptidu | gradient % B/min | retenční čas na koloně D |
| 18 | 25-65 | 14,01 |
| 19 | 25-65 | 22,96 |
| 20 | 25-65 | 15,97 |
| 21 | 25-65 | 19,19 |
| 22 | 25-65 | 16,53 |
Alternativně je možno zbytek A9 cyklizovat v roztoku tak, že se 25 mg volného peptidu, obsahujícího strukturu -Leu-/wz-Pen-NH2, přidá k 25 mg HOBt v 0,8 ml ledové kyseliny octové, smísí se se 100 μΐ 10% formaldehydu a míchá 30 min při 0 °C za vzniku peptidu s 5člennou kruhovou strukturou Leu-psz-DMTac-NH2.
Příklad 5
Pal-GIn-Trp—Ala-Val-Gly-His-Leu-psz'-Cys-NH2 D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-^z-Cys-NHi Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/wz-Cys-NH2 D-T pi-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-/?sz'-Cy s-NH2 Hca-Oln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-p5z'-Cys-NH2
Tyto peptidy je možno syntetizovat ze společného meziproduktu 1-5 Fmoc-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-p5z'-Cys(But)-BHA pryskyřice.
Fmoc-Leu-psz-Cys(But)-BHA pryskyřice se získá takto: 1,0 g BHA pryskyřice (0,55 mmol NH2/g) se kondenzuje způsob uvedeným v operacích 2 a 3 postupně s Fmoc-Cys(But) a FmocLeu-CHO.
-22CZ 286750 B6
Postupnou kondenzací s Fmoc-His(Bom), Fmoc-Gly, Fmoc-Val, Fmoc-Ala, Fmoc-Trp a Fmoc-Gln se získá peptidický meziprodukt 1-5:
Fmoc-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psí-Cys(But)-BHA pryskyřice.
Alikvot 150 mg tohoto meziproduktu 1-5, společného všem peptidům v tomto příkladu, se podrobí postupy popsanými v operaci 4 jedné další kondenzaci za vzniku konečných peptidů na pryskyřici.
Postupným navázáním Boc-Pal na peptidický meziprodukt 1-5 se získá Boc-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/wz'-Cys(But)-BHA pryskyřice (5/08/A).
Postupným navázáním Boc-D-Pal na peptidický meziprodukt 1-5 se získá Boc-D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz'-Cys(But)-BHA pryskyřice (5/09/A).
Postupným navázáním Boc-Tpi na peptidický meziprodukt 1-5 se získá Boc-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys(But)-BHA pryskyřice (5/12/A).
Postupným navázáním Boc-D-Tpi na peptidický meziprodukt 1-5 se získá Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-JD5Í-Cys(But)-BHA pryskyřice (5/13/A).
Postupným navázáním Hca na peptidický meziprodukt 1-5 se získá Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-p5z'-Cys(But)-BHA pryskyřice (5/14/A).
N-terminální skupina Boc se z peptidického meziproduktu 5/01/A odštěpí nejprve 5min a pak 25 min působením 50% TFA v CH2C12 s obsahem 5 % merkaptoethanolu a 5 % anisolu. Tímto zpracováním se odštěpí i chránící skupina Cys. Peptid se pak promyje podle operace 4 CH2C12, MeOH a DMF za vzniku peptidického meziproduktu 5/08/B: Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz-Cys-BHA pryskyřice.
Na peptidický meziprodukt 5/08/B se pak působí 1 h čerstvě předestilovaných HF (5 ml) a anisolem (0,25 ml) při 0 °C, čímž se současně odštěpí chránící skupina Bom z His. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se zbytek promyje ethylacetátem, extrahuje 70-80% kyselinou octovou a lyofilizuje za vzniku peptidů Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-jzw-Cys-NH^
Z peptidických meziproduktů 5/08/A, 5/09/A, 5/11/A, 5/12/A, 5/13/A a 5/14/A se odštěpí chránící skupina a BHA pryskyřice za vzniku peptidů uvedených v úvodu příkladu. Ty se podrobí testu čistoty podle operace 7.
Analytické údaje HPLC
| peptidů | gradient % B/min | retenční čas na koloně D |
| 5/08 | 20-60 | 5,56 |
| 5/09 | 25-65 | 4,60 |
| 5/12 | 25-65 | 12,78 |
| 5/13 | 25-65 | 9,62 |
| 5/14 | 40-80 | 7,39 |
Alternativně je možno tyto peptidy výhodně vybudovat postupně na BHA pryskyřici standardními metodami syntézy v pevné fázi s Boc-chráněnými aminokyselinami a s ochranou skupiny -SH v Cys9 skupinou Bz, za vzniku následujících peptidických meziproduktů: Boc-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-p5z'-Cys(Bz)-BHA pryskyřice (5/08/A) Boc-D-Pal-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-psz'-Cys(Bz)-BHA pryskyřice (5/09/A) Boc-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/wz-Cys(Bz)-BHA pryskyřice (5/12/A)
-23CZ 286750 B6
Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Bom)-Leu-/?5z-Cys(Bz)-BHA pryskyřice (5/13/A”) Hca-Gln-Trp-AIa-V al-Gly-His(Bom)-Leu-/wz'--Cys(Bz)-BHA pryskyřice ( 5/14/A).
Skupina Boc se odštěpí působením 50% TFA v CH2C12 s obsahem 5 % merkaptoethanolu a 5 % anisolu a pak se působením HF a anisolu odštěpí peptid od pryskyřice a současně se odstraní chránící skupina Bom z His a Bz z Cys za vzniku peptidů uvedených na začátku příkladu.
Příklad 6 - zkušební postupy
A) Test vazby na receptory
Vazba 125I-Tyr4-bombesinu a jeho odštěpení antagonistickými pseudopeptidy se testuje na 24jamkových tkáňových kultivačních plotnách (GIBCO) s použitím buněk Swiss 3T3. Myší fibroblasty Swiss 3T3 se udržují každotýdenním průchodem DMEM s obsahem 10% FCBS a antimykotik. Kultury se inkubují při 37 °C ve vzduchu s 5% CO2. Jamky se očkují 105 buněk/jamku (životnost > 95 %) a kultivují do souvislého nárůstu a klidového stavu. Vazebná procedura se provádí 7 dní po zaočkování. Buňky se promyjí 2krát 0,5 ml vazebního pufru (Dulbeccovo modifikované Eagleovo médium s obsahem 20 nM HEPES-NaOH o pH 7,4, 0,2 % BSA a 100 pg/ml bacitracinu). Buňky se pak inkubují s 0,2nM 125I-Tyr4-bombesinem v přítomnosti nebo nepřítomnosti různých koncentrací antagonistů (6.10'11 až 6.1 θ'6 M, celkový objem 0,4 ml).
Buňky se inkubují 30 min při 37 °C, poněvadž vazba 125I-GRP při 37 °C dosahuje po 30 min maxima a pak klesá, jak uvádí Zachary a Rozengurt (1985) a Layton a d. (1988). Potom se buňky promyjí 2krát ledovým (4 °C) vazebním pufrem a 2krát ledovým fosfátem pufrovaným fyziologickým roztokem (PBS, mM): NaCl 138, KC1 2,8, Na2HPO4 8, KH2PO4 1,45, CaCl2 0,91, MgCl2 0,49. Pro měření se promyté kultury extrahují 0,5 ml 0,5M NaOH a přenesou do zkumavek. Jamky se promyjí jednou 0,5 ml destilované vody (sterilní) a tento roztok se přidá do příslušných zkumavek. Pak se měří na automatickém gamma čítači (Micromedic Systém, lne., Huntsville, Ala.) radioaktivita vzorků.
S pomocí komputerizovaného programu aproximace křivky Ligand-PC se stanoví typy vazby receptor, disociační konstanta (Kd), asociační konstanta (Ka) a maximální vazebná kapacita receptorů (Bmax).
Vazebné údaje pro polypeptidy podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce I. Různé dávky neznačeného peptidů byly použity ke stanovení schopnosti potlačení specifické vazby 125I-Tyr4bombesinu. Pro každý peptid je uvedena střední hodnota z 2 až 3 nezávislých testů (každý proveden třikrát).
Tabulka 1. Inhibice vazby 125I-Tyr4-bombesinu na Swiss 3T3
| č. peptidů | buňky při antagonistech bombesinu KJnM] |
| 01 | 5,0 |
| 02 | 0,078 |
| 03 | 13 |
| 04 | 13 |
| 05 | 0,007 |
| 06 | 4,3 |
| 07 | 0,009 |
| 08 | 4,5 |
| 09 | 8,8 |
-24CZ 286750 B6
Tabulka 1. Inhibice vazby 125I-Tyr4-bombesinu na Swiss 3T3 - pokračování
č. peptidu
D-T pi-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-psz-Leu -NH2 bombesinb buňky při antagonistech bombesinu K;[nM]
0,11
5,4 <0,001 <0,001 <0,01
0,26
213
0,93
0,07
0,074
0,20
0,28 a: střední hodnota ze 6 testů b: střední hodnota z 11 testů
Příklad 7
Vliv léčby antagonisty bombesinu na objem nádoru u estrogenně nezávislé rakoviny mléčné žlázy MXT u myší se zjišťuje takto: 40 samic myší B6D2F] se získá z National Cancer Institute, Frederick Cancer Research Facility (Frederick, Maryland) a udržuje při teplotě 21 ± 1 °C a vlhkosti 55 + 5 %. Zvířatům se automaticky udržuje rozvrh 12 h světla a 12 h tmy a podává se laboratorní krmivo pro hlodavce 50001 a vodovodní voda ad libitum. Kryo-konzervované tkáň karcinomu mléčné žlázy MXT (3.2)/Ovex, nezávislého na estrogenu, získaná od Dr. A.E. Bogdena (Biomeasure lne., Hopkinton, MA), se v množství 1 mm3 nádoru MXT (3.2)/Ovex subkutánně injekčně aplikuje dospělým myším samicím.
Po 2 dnech od transplantace nádorů se myši náhodně rozdělí do čtyř skupina a zahájí se terapie pomocí systémů dlouhodobého uvolňování peptidů (mikrokapsle). Vytvoří se tyto čtyři skupiny:
1. kontrola, pouze injekční vehikulum
2. [D-Tpi6, Leu,3-/wz-Leu14]Bn(6-14)
3. [D-Phe6, Leu13-/wz-Tacl4]Bn(6-14)
4. chirurgická oboustranná ovariektomie
Ve zkratkách pro antagonisty bombesinu je použito konvenční číslování zbytků v peptidickém fragmentu: každý zbytek se čísluje podle polohy v kompletním fragmentu. Antagonisté bombesinu se však zde snadněji srovnávají s ostatními peptidy, jsou-li číslovány tak, že N-konec má číslo 1.
,,[D-Tpi-LeuI3-psí-Leu14]Bn(6-14)“ je tedy D-TpiI-Gln2-Trp3-AIa4-Val5-Gly6-His7-Leu8-psz'-Leu9-NH2 (dále ,31“), zatímco ,,[D-Phe6Leu13-/wz-Tac14]Bn(6-14)“ je totéž jako výše uvedený peptid č. 2.
-25CZ 286750 B6
Oba antagonisté bombesinu se syntetizují v pevné fázi. Skupina 2 myší dostávala dlouhodobým uvolňováním formulaci „Bl“ a skupina 3 formulaci svýše uvedeným peptidem č. 2. Tato formulace s dlouhodobým uvolňováním udržuje konstantní uvolňování Bl nebo peptidu č. 2 po dobu 15 dní na hodnotě 25 pg/den.
Pro dlouhodobé uvolňování se používají osmotická čerpadla Alzet (Alzo Co., Palo Alto, CA). Čerpadlo Alzet model 2002, uvolňující 0,48 μΐ/h, se implantuje subkutánně na spodní boční části zad. Do osmotických miničerpadel se peptidy rozpustí v 50% (obj./obj.) propylenglykolu ve vodě.
Poté, co jsou nádory viditelné a hmatatelné, měří se jejich objem a výpočet se provede podle Szendeho a d., „Growth Inhibition of MXT Mammary Carcinoma by Enhancing Programmed Cell Depth“ (appoptosis), s analogy LH-RH a somatostatinu (Breast Cancer Res. Treat. 14, 307314(1989)).
Experimenty se ukončí v exponenciální fázi růstu nádoru. První měření objemu nádoru se provádí po 10 dnech. Rozdíly v objemu nádoru mezi kontrolou a ošetřením oběma antagonisty bombesinu stejně jako mezi oběma antagonisty navzájem jsou statisticky významné. Výsledky měření objemu nádorů jsou uvedeny v tabulce 2 a znázorněny na obr. 1.
Tabulka 2. Vliv antagonistů bombesinu na objem nádoru při estrogenně nezávislé rakovině myší mléčné žlázy MXT peptid kontrola [D-Tpi6-Leu13-psz-Leu14]Bn(6-14) („Bl“) [D-Phe-Leu13-psz-Tac14]Bn(6-14) (č. 2( objem nádoru v čase (dny)
| 10 | 14 | 17 |
| 729 | 2565 | 5000 |
| 363* | 2437 | 3742* |
| 360* | 1477* | 3323** |
bilaterální ovariektomie * p < 0,05 ** p < 0,01
Po skončení experimentů se myši nechají vykrvácet pod anestesií Metofenem, pak se změří hmotnost nádoru a podrobí se statistické analýze Duncanovým testem a Studentovým testem. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.
Tabulka 3
| sloučenina podaná myši s estrogenně nezávislým nádorem mléčné žlázy MXT kontrola [D-Tpi6-Leu13-/wz-Leu14]Bn(6-l 4) peptid č. 2 střední hodnoty ± stát. obch. | hmotnost nádoru (g) 8,45 ± 0,23 7,36 ± 0,46 5,48 ± 1,00** |
**p0,01
-26CZ 286750 B6
Příklad 8
Účinek jednoho analogu somatostatinu a tří antagonistů bombesinu na lidský malobuněčný plicní karcinom u nahé myši se testuje takto: Athymičtí samci nahé myši o stáří přibližně 6 týdnů při 5 příchodu se získají zNational Cancer Institute (Bethesda, MD) a udržují se v limitovaných patogenních podmínkách.
Lidský malobuněčný plicní karcinom (SCLC, linie H69) se pěstuje jako monovrstva v rpmi 1640 (Gibco, Grand Island, NY), doplněném 10 % hovězího sérového albuminu, antibiotik 10 a antimykotik, při 37 °C ve zvlhčené atmosféře s 5% CO2. Cizí štěpy se iniciují subkutánní injekcí 1.107 buněk z exponenciálně rostoucích buněk buněčné tkáňové kultury do pravého boku pěti nahých myší. Vzniklé nádory se po třech týdnech asepticky vyříznou a mechanicky rozmělní. Kousky nádorové tkáně 3 mm3 se pak subkutánně transplantují Trocarovou jehlou 60 zvířatům. Po dvou týdnech po transplantaci vzrostly nádory na objem přibližně 10 mm3 a zvířata 15 byla náhodně rozdělena do 5 experimentálních skupin, ošetřovaných pěti různými sloučeninami počínaje dnem, kdy uplynuly dva týdny od transplantace. Nádory se pak měří každý týden po dobu pěti týdnů. Objem národu se vypočte jako (délka x šířka x výška x pi)/6. Osm zvířat v každé skupině se usmrtí za účelem měření hmotnosti nádoru.
První z terapeutických léčivých sloučenin, podávaných nahé myši, je analog samotostatinu D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NIL, zde označovaný „Sl“.
První ze tří bombesinových antagonistů je D-Tpi^ln^Trp-Ala-Vař-Gly-His-Leu^z-Leu-NHj,tj. Bl.
Druhým antagonistou bombesinu je [Tpi6-Leu13-p5z-Tpi14]Bn(6-14), tj.
D-Tpi’-Gln2-Trp3-Ala4-Val5-Gly6-His7-Leu8-/)5z'-Tpi9-NH2, označovaný „B2“, a třetím antagonistou je peptid 2.
Mikrogranule pamoátu Sl v poly(DL-laktid-koglykolid) se připraví pomocí Cytotech SA tak, aby uvolňovaly z alikvotu 16 mg po dobu 2 týdnů asi 100 pg/den. Tyto mikrogranule se každých 15 injekčně subkutánně vpravují na opačné straně než je nádor. Každý z antagonistů bombesinu se rozpustí v 0,1 % dimethylsulfoxidu ve fyziologickém rozsahu a dvakrát denně subkutánně injekčně aplikuje v dávce 20 pg/den.
Účinek této léčebné terapie na objem nádoru je uveden v tabulce 4 a znázorněn na obr. 2.
Tabulka 4. Účinek antagonistů bombesinu na objem nádoru SCLD peptid objem nádoru v čase (dny)
| 0 | 7 | 14 | 21 | 28 | 35 | |
| kontrola | 10,5 + 0,5 | 19,3 ± 1,4 | 31,6 ±5,6 | 63,8 ± 10,6 | 142,8 | 249,7 |
| ±37,5 | ±74,3 | |||||
| Sl | 9,8 ± 0,8 | 14,4 ± 1,5 | 15,8 ± 1,3 | 18,4 ±2,9 | 33,2 | 66,0 |
| ±9,0 | ±12,1 | |||||
| Bl | 11,2 ±0,8 | 13,3 ± 1,2 | 17 ±3,4 | 24,7 ± 8,2 | 55 | 80,2 |
| ±24,5 | ±27,2 | |||||
| B2 | 10+1,1 | 11,7 ± 1,2 | 14,7 ±2,4 | 24,5 ± 7,9 | 45 | 74,1 |
| ±15 | ±31,8 | |||||
| peptid | 11,6 ± 1,7 | 7,4 ±1,8 | 8,9 ± 2,3 | 14,3 ± 6,3 | 19,2 | 49,0 |
| č.2 | ±9,4 | ±21,0 |
-27CZ 286750 B6
Příklad 9
Účinek antagonistů bombesinu na nádory rakoviny slinivky MIA PACA-2 se zjišťuje takto.
Nahým myším, podobným jako v příkladu 8, se subkutánně injekčně vpraví buňky lidské rakoviny slinivky MIA PACA-2, odvozené z tkáňové kultury, pěstované jako v případě SCLC v příkladu 8. Objem nádorů se měří u obou experimentálních skupin jako v příkladu 8.
Dvě experimentální skupiny tvoří: skupina myší, jimž se podává peptid č. 2, antagonistický bombesinu, a kontrolní skupina, dostávající pouze injekční vehikulum. Každé myši se dvakrát denně injekčně subkutánně vpravuje 50 pg injekčního vehikula nebo peptidu č. 2.
Výsledky měření objemu nádorů jsou uvedeny v tabulce 5 a znázorněny na obr. 3.
Tabulka 5. Účinek antagonistů bombesinu na objem (mm3) slinivkových nádorů MIA PACA-2
| peptid | objem nádoru v čase (dny) 0 7 11 15 |
| kontrola peptid č. 2 | 45,6 ±7,9 254,2 ±59,8 645,1 ± 128,6 855,9 ±145,4 29,8 ± 4,3 252,3 ± 98,9 427,9 ± 122,6 634,1 ± 174,0 |
Příklad 10
Účinek léčby antagonisty bombesinu na nahou myš s lidskou rakovinou slinivky CAPAN-2 se zjišťuje takto:
Nahým myším, podobným jako v příkladu 7, se implantují nádory lidské rakoviny slinivky CAPAN-2, odvozené z tkáňové kultury, pěstované jako v příkladu 7. Myši se rozdělí na dvě skupiny, z nichž kontrolní dostává pouze injekční vehikulum a druhá bombesinu antagonistický peptid č. 2, z něhož se denně podává subkutánní injekcí 50 mg.
Objem nádorů se měří jako v příkladu 8 a výsledky měření objemu nádorů jsou uvedeny v tabulce 6 a znázorněny na obr. 4.
Tabulka 6. Účinek antagonistů bombesinu na objem (mm3) slinivkových nádorů CAPAN
| peptid | objem nádoru v čase (dny) 0 7 14 21 28 |
| kontrola peptid č. 2 | 21,2 ± 1,7 28,3 ±2,3 43,0 ± 3,6 51,4 ±8,9 78,8 ±16,7 19,7 ± 1,7 27,8 ±3,3 32,3 ± 3,5 46,4 ±3,0 50,5 ± 17,8 |
Přestože je vynález popsán s ohledem na výhodná provedení, je třeba jej chápat tak, že je možno provádět odborníkům zřejmé změny a modifikace bez překročení jeho rozsahu, který je uveden v připojených patentových nárocích, ve vynálezu je možnou použít známé substituce, které významně nesnižují jeho účinnost.
-28CZ 286750 B6
SEZNAM SEKVENCÍ (1) OBECNÁ INFORMACE:
(i) PŘIHLAŠOVATEL: Schally, Andrew V.
Cai, Renzhi (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: POLYPEPTIDIČTÍ ANTAGONISTÉ
BOMBESINU (iii) POČET SEKVENCÍ: 37 (iv) KONTROLNÍ ADRESA:
(A) ADRESÁT: OMRIM. BEHR, ESQ (B) ULICE. 325 PIERSON AVENUE (C) MĚSTO: EDISON (D) STÁT: NEW JERSEY (E) ZEMĚ: USA (F) PSČ: 08827 (v) STROJNĚ ČITELNÁ FORMA:
(A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) POČÍTAČ: PC IBM kompatibilní (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release #1,0, verse #1,25 (vi) ÚDAJE O TÉTO PŘIHLÁŠCE:
(A) ČÍSLO PŘIHLÁŠKY: US 08/031, 325 (B) DATUM PODÁNÍ: 15. 3. 1993 (C) ZATŘÍDĚNÍ:
(vii) ÚDAJE O DŘÍVĚJŠÍCH PŘIHLÁŠKÁCH:
(A) ČÍSLO PŘIHLÁŠKY: us 07/619, 747 (B) DATUM PODÁNÍ: 29. 11. 1990 (viii) INFORMACE O ZÁSTUPCI/AGENTOVI:
(A) JMÉNO: BEHR, OMRI m.
(B) REGISTRAČNÍ ČÍSLO: 22, 940 (C) ZNAČKA/ČÍSLO SPISU: SHAL3,0-0,14 (ix) TELEKOMUNIKAČNÍ INFORMACE:
(A) TELEFON: (908) 494-5240 (B) TELEFAX: (908) 494-0428 (C) TELEX: 511642 BEPATEDIN (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscfeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-pGlu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“
-29CZ 286750 B6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 1: Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-pGlu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 2: Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = MTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 3:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5
-30CZ 286750 B6 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc.feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Ac-D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 4:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Cpa“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 5:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid
-31CZ 286750 B6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscfeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Cpa“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ . (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = MTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 6:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Nal“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 7:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 8:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Pal“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“
-32CZ 286750 Β6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 80:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Pal“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: mise Jeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 9:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 10:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Trp“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 10:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5
-33CZ 286750 B6 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Ac-D-Trp“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 11:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 12:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 12:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 13:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (Β) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid
-34CZ 286750 B6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 - redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH,“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 13:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 14:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 8 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Hca-Gln“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 7 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 14:
Xaa Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 15:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“
-35CZ 286750 B6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 15:
Xaa His Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 16:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 2 = Glu(OMe)“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 16:
Xaa Xaa Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 17:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 2 = Glu[-J“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8
-36CZ 286750 B6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 17: Xaa Xaa Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 18:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = DMTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 18:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 19:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Ac-D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = DMTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 19:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5
-37CZ 286750 B6 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 20:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Cpa“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc jeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = DMTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 20:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 21:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc jeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc jeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = DMTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 21:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 22:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid
-38CZ 286750 B6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = DMTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 22:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 23:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 14 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = pGlu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 14 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 14 = Met-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 23:
Xaa Gin Arg Leu Gly Asn Gin Trp Ala Val Gly His Leu Xaa
5 10 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 24:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = H-Gly“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 10 = Met-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 24:
Xaa Asn His Trp Ala Val Gly His Leu Xaa
5 10
-39CZ 286750 B6 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 25:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Met-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 25:
Asn His Trp Ala Val Gly his Leu Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 26:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 11 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 11 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 11 = Met-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 26:
Arg Pro Lys Pro Gin Gin Phe Phe Gly Leu Xaa
5 10 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 27:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 8 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = (R^^j-A^A1, kde A° = delece, A1 = D-Phe, D-Trp nebo D-Nal, R1 a R2 * = H“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = A8-W, kde W = -N(R8)-CH(Z1)-R4 *CH(Z2)-CO-V, kde R4 = CH2NH; Z1 = -CH2CH(CH3)2; Z2 = -CH2SH nebo (CH2)2-S-CH3; V = N(R6)R7, kde R6, R7 a R8 může být H; R1 a R2 = H nebo COE1, kde E1 = C^alkyl“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 27:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa
5
-40CZ 286750 B6 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 28:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = X-Al, kde X = H, jednoduchá vazba spojující α-aminoskupinu A1 s gamwa-karboxylem na 3-propionylu Glu, je-li Res 2 = Glu; nebo R'CO, kde R1 = H, Cj_ioalkyl, fenyl fenyl-Ci_ioalkyl, p-Hlfenyl, p-hl-fenyl-Ci_iOalkyl, naftyl, naftyl-C]_ioalkyl, indolyl, indolyl-Ci_ loalkyl, pyridyl, pyridyl-Ci_iOalkyl, thienyl, thienyl-Ci_I0alkyl, kde Hl = F, Cl, Br, ON, CH3 nebo OCH3; nebo R1 = N(R2)(R3), kde R2 = H, Ci_10alkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_10alkyl, R3 = H nebo Ci_iOalkyl; nebo R1 = R4O, kde R4 = Ct_ iOalkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_10alkyl; a A1 * * * = zbytek D-, L- nebo DLaminokyseliny zvolené zPhe, /z-Hl-Phe, pGlu, Nal, Pal, Tpi, Nesubstituovaného Trp nebo Trp substituovaného na benzenovém kruhu jedním nebo několika členy souboru zahrnujícího F, Cl, Br, NH2 nebo Ci_3alkyl; nebo peptidická vazba spojující acylovou skupinu R’Co s α-aminoskupinou Res 2“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc jeature (B) UMÍSTĚNÍ: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 2 = Gin, Glu[~], Glu (Y) nebo His“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = A9-Q, kde A9 = Tac, MTac nebo DMTac; a Q = NH2 nebo OQ1, kde Q1 = H, fenyl nebo fenyl-Ci_ioalkyl“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 28:
Xaa Xaa Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 29:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (Β) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“
-41CZ 286750 B6 (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 29:
Xaa Glu Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 30:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Leu-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 30:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 31:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 8 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Phe“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 4 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 4 = D-Trp“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8
-42CZ 286750 B6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = Trp-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 31:
Xaa Cys Tyr Xaa Lys Val Cys Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 32:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tpi-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 32:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 33:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = X-A1, kde X ~ H nebo Ac; A1 D-Phe, L- nebo D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 33:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5
-43CZ 286750 B6 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 34:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscfeature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = X-A1, kde X = H nebo Ac; A1 = D-Phe, L- nebo D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = DMTac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 34:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 35:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = X-A1, kde X = H, jednoduchá vazba spojující α-aminoskupinu A1 sga/M/na-karboxylem na 3-propionylu Glu, je-li Res 2 = Glu; nebo R'CO, kde R1 = H, Ci_i0 alkyl, fenyl, fenyl-Ci_]oalkyl; nebo R1 = N(R2)(R3), kde R2 = H, Ci_iOalkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_]Oalkyl, R3 = H nebo Ci_ioalkyl; nebo R1 = R4O, kde R4 = Ci_ioalkyl, fenyl nebo fenylCi-ioalkyl a A1 = L- nebo D-Pal nebo L- nebo D-Tpi“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 2 = Gin, Glu[-], Glu(Y) nebo His“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: miscjeature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = A9-Q, kde A9 = Cys nebo Pen; a Q =
-44CZ 286750 B6
NH2 nebo OQ1, kde Q1 = H, Ci_iOalkyl, fenyl nebo fenyl-Ci_iOalkyl“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 35:
Xaa Xaa Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 36:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 8 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = Χ-Α'-Gln, kde X = Hca, Hna, Paa, Mpp, Hpp nebo Naa; a A1 = peptidická vazba spojující acylovou skupinu X s α-aminoskupinou Gin“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: Ί (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 7 = redukovaný isoster Leu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 8 = Tac-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 36:
Xaa Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
5 (2) INFORMACE O SEKV. ID. Č. 37:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) VLÁKNO: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 1 = pGlu“ (ix) ZNAK:
(A) NÁZEV/KLÍČ: misc_feature (B) UMÍSTĚNÍ: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /pozn. „Res 9 = Met-NH2“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKV. ID. Č. 37:
Xaa Gin Trp Ala Val Gly His Leu Xaa
5
-45CZ 286750 B6
Claims (15)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Bombesinu antagonistický peptid obecného vzorce:X-A^A^Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psí-A9ve kterém:X je vodík, jednoduchá vazba spojující α-aminoskupinu A1 s gazno-karboxylovou skupinou na 3-propionylové skupině A2, je-li A2 Glu[-J, nebo skupina vzorce R’CO~, kde R1 je zvoleno ze souboru, do kterého náleží:(a) vodík, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenyl, fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, p-Hl-fenylová skupina, p-Hl-fenylakylová skupina obsahující v alkylová části 1 až 10 atomů uhlíku, naftylová skupina, naftylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, indolylová skupina, indolylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, pyridylová skupina, pyridylalkylová skupina obsahující v alkylová části 1 až 10 atomů uhlíku, thienylová skupina, thienylalkylová skupina obsahující v alkylová části 1 až 10 atomů uhlíku, cyklohexylová skupina nebo cyklohexylalkylová skupina obsahující v alkylová části 1 až 10 atomů uhlíku, kde H1 je F, Cl, Br, OH, CH3 nebo OCH3, (b)R2 >NR3 ve které:R2 je vodík, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, aR3 je vodík nebo alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, (c) skupina R4-O, ve které: R4 znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylalkylovou skupinu obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku,A1 je zbytek D- nebo L-aminokyseliny zvolené ze souboru zahrnujícího Phe,/?-Hl-Phe, pGlu, Nal, Pal, Tpi, nesubstituovaný Trp nebo Trp substituovaný na benzenovém kruhu jedním nebo více členy souboru zahrnujícího F, Cl, Br, NH2 nebo alkylové skupiny obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, nebo peptidická vazba spojující acylovou skupinu R*CO- s α-aminoskupinou A2, pokud X = R’CO;-46CZ 286750 B6A2 je Gin, Glu[—], Glu(Y) nebo His, kde [-] je jednoduchá vazba, je-li X jednoduchá vazba a A2 je Glu[-J, přičemž toto [-] spojuje ga?Míz-karboxylovou skupinu 3-propionylové skupiny tohoto zbytku A2 s α-aminoskupinou A1,Y je (a) -OR5, kde R5 je vodík, alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo fenylová skupina, nebob) R6 >NR7 ve kterém:R6 je vodík nebo alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku,R7 je vodík, alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo -NHCONH2,Leu-/wz' je redukovaná forma Leu, kde místo skupiny C=O v Leu je -CH2-, takže vazba této skupiny-CH2- s α-aminoskupinou sousedního zbytku A9 je pseudopeptidická,A9 je Tac, MTac, DMTac, Cys nebo Pen, aQ je NH2 nebo -OQ1, kde Q1 je vodík, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, a jeho farmaceuticky přijatelné kyseliny nebo soli.
- 2. Peptid podle nároku 2, ve kterém X je vodík nebo R’CO, kde R1 je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, A1 je D-Cpa, D-Nal, L- nebo D-Pal, D-Phe, L- nebo D-Tpi nebo D-Trp, A2 je Gin nebo His a Q je NH2.
- 3. Peptid podle nároku 2, ve kterém A9 je Tac.
- 4. Peptid podle nároku 2, ve kterém A9 je DMTac.
- 5. Peptid podle nároku 3, kde X je atom vodíku nebo Ac, A1 je D-Phe, L- nebo D-Tpi a A2 je Gin.
- 6. Peptid podle nároku 4, kde X je H nebo Ac, A1 je D-Phe, L- nebo D-Tpi a A2 je Gin.
- 7. Peptid podle nároku 3 obecného vzorceD-Phe-G ln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-ps z-T ac-NH2.
- 8. Peptid podle nároku 3 obecného vzorceD-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psz-Tac-NH2.-47CZ 286750 B6
- 9. Peptid podle nároku 4 obecného vzorceD-Phe-Gln-T rp-Ala-V al-G ly-His-Leu-psz-DMT ac-NH2.
- 10. Bombesinu antagonistický peptid podle nároku 1, obecného vzorceX-A1-A2-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-/wz'-A9-Q ve kterém:X je atom vodíku, jednoduchá vazba spojující α-aminoskupinu A1 s gíz/wo-karboxylovou skupinou na 3-propionylové skupině A2, je-li A2 Glu[-], nebo skupina vzorce R’CO_, kde R1 je zvoleno ze souboru, do kterého náleží (a) vodík, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylová skupina, fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, (b)R2 >NR3 ve které:R2 je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku,R3 je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, (c) skupina R4-O ve které R4 je alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku,A1 je přirozeně se nevyskytující aminokyselina zvolená ze skupiny zahrnující L- nebo D-Pal nebo L- nebo D-Tpi,A2 je Gin, Glu[-], Glu(Y) nebo His, kde [-] je jednoduchá vazba, je-li X jednoduchá vazba a A2 je Glu[-], přičemž [-] spojuje gamakarboxylovou skupinu 3-propionylové skupiny tohoto zbytku A2 s α-aminoskupinou A1,Y je (a) -OR5, kde R5 je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo fenylová skupina, nebo-48CZ 286750 B6 (b)R6 >NR7 ve které:R6 je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, aR7 je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo -NHCONH2, aLeu-jPxz' je redukovaná forma Leu, kde místo skupiny C=O v Leu je -CH2-, takže vazba této skupiny-CH2- s α-aminoskupinou sousedního zbytku A9 je pseudopeptidická,A9 je Cys nebo Pen aQ je NH2 nebo -OQ1, kde Q1 je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 10 atomů uhlíku, a jeho farmaceuticky přijatelné kyseliny nebo soli.
- 11. Bombesinu antagonistický peptid podle nároku 1, kde X je R’CO-, A1 je peptidická vazba spojující acylovou skupinu R^O- s α-aminoskupinou A2, A2 je Gin nebo His a Q je NH2.
- 12. Peptid podle nároku 11, ve kterém X je Hca, Hna, Paa, Mpp, Hpp nebo Naa, A2 je Gin a A9 je Tac.
- 13. Peptid podle nároku 12, obecného vzorceHca-Gln-T rp-Ala-V al-Gly-His-Leu-psz-T ac-NH2.
- 14. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle nároku 1, jeho terapeuticky přijatelnou adiční sůl nebo komplex a farmaceuticky přijatelný kapalný nebo pevný nosič.
- 15. Polypeptid podle nároku 1 nebo jeho terapeuticky přijatelné kyseliny nebo soli pro léčbu rakoviny u savců.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/031,325 US5369094A (en) | 1990-11-29 | 1993-03-15 | Polypeptide bombesin antagonists |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ280794A3 CZ280794A3 (en) | 1995-07-12 |
| CZ286750B6 true CZ286750B6 (en) | 2000-06-14 |
Family
ID=21858823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19942807A CZ286750B6 (en) | 1993-03-15 | 1994-03-07 | Peptide antagonistic to bombesin and pharmaceutical preparation containing thereof |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5369094A (cs) |
| EP (1) | EP0646127B1 (cs) |
| JP (1) | JP3838656B2 (cs) |
| KR (1) | KR100306506B1 (cs) |
| AT (1) | ATE167874T1 (cs) |
| AU (1) | AU666270B2 (cs) |
| BR (1) | BR9404341A (cs) |
| CA (1) | CA2135787C (cs) |
| CZ (1) | CZ286750B6 (cs) |
| DE (1) | DE69411342T2 (cs) |
| DK (1) | DK0646127T3 (cs) |
| EE (1) | EE03180B1 (cs) |
| ES (1) | ES2120615T3 (cs) |
| FI (1) | FI945378A0 (cs) |
| HR (1) | HRP940164B1 (cs) |
| HU (1) | HU218288B (cs) |
| IL (2) | IL108851A (cs) |
| NO (1) | NO313418B1 (cs) |
| NZ (2) | NZ299913A (cs) |
| PL (1) | PL180372B1 (cs) |
| RU (1) | RU2114118C1 (cs) |
| SI (1) | SI9420001B (cs) |
| SK (1) | SK282267B6 (cs) |
| TW (1) | TW325478B (cs) |
| UA (1) | UA34456C2 (cs) |
| WO (1) | WO1994021674A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA941767B (cs) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5877277A (en) | 1987-09-24 | 1999-03-02 | Biomeasure, Inc. | Octapeptide bombesin analogs |
| US5723578A (en) * | 1987-09-24 | 1998-03-03 | The Administrators Of Tulane Educational Fund | Peptide analogs of bombesin |
| US5650395A (en) * | 1995-03-13 | 1997-07-22 | Hurel; Steven | Treatment of pulmonary hypertension |
| US6989371B1 (en) | 1996-08-16 | 2006-01-24 | Dabur Research Foundation | Bombesin analogs for treatment of cancer |
| DE69840647D1 (de) * | 1997-04-22 | 2009-04-23 | Curator Of The University Of M | Konjugate aus peptiden, die liganden von gastrinrezeptoren sind |
| IL155814A0 (en) * | 2000-11-17 | 2003-12-23 | Warner Lambert Co | Treatment of sexual dysfunction using bombesin antagonist |
| US20060239923A1 (en) * | 2003-01-13 | 2006-10-26 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US8420050B2 (en) * | 2003-01-13 | 2013-04-16 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7611692B2 (en) * | 2003-01-13 | 2009-11-03 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7922998B2 (en) * | 2003-01-13 | 2011-04-12 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7850947B2 (en) | 2003-01-13 | 2010-12-14 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| EP1583564B1 (en) * | 2003-01-13 | 2009-07-01 | Bracco Imaging S.p.A | Improved linkers for radiopharmaceutical compounds |
| US7226577B2 (en) * | 2003-01-13 | 2007-06-05 | Bracco Imaging, S. P. A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| MXPA05011233A (es) | 2003-04-22 | 2005-12-14 | Conseils De Rech S Et D Aplica | Vectores peptidicos. |
| US7795385B2 (en) * | 2004-12-17 | 2010-09-14 | Bexar Global, Inc. | Use of bombesin/gastrin-releasing peptide antagonists for the treatment of inflammatory conditions, acute lung injury and bipolar disorder |
| FR2918566B1 (fr) * | 2007-07-11 | 2009-10-09 | Pierre Fabre Medicament Sa | Composition pharmaceutique stable d'un sel hydrosoluble de vinflunine. |
| EP2100900A1 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-16 | Universitätsspital Basel | Bombesin analog peptide antagonist conjugates |
| EP2198878A1 (en) * | 2008-12-18 | 2010-06-23 | University Of Miami | Polypeptide bombesin antagonists |
| WO2011043954A1 (en) | 2009-10-07 | 2011-04-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel trpa1 antagonists |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989002897A1 (en) * | 1987-09-24 | 1989-04-06 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Therapeutic peptides |
| US5084555A (en) * | 1989-08-21 | 1992-01-28 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | An octapeptide bombesin analog |
| US5162497A (en) * | 1987-09-24 | 1992-11-10 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Bradykinin analogs with non-peptide bond |
| AU618029B2 (en) * | 1987-11-02 | 1991-12-12 | Imperial Chemical Industries Plc | Polypeptide compounds |
| GB8813356D0 (en) * | 1988-06-06 | 1988-07-13 | Ici Plc | Polypeptide compounds |
| GR1000608B (el) * | 1988-07-21 | 1992-08-31 | Erba Carlo Spa | Μεθοδος για την παρασκευη ανταγωνιστων bombesin. |
| JP2919889B2 (ja) * | 1988-10-14 | 1999-07-19 | アドミニストレイターズ オブ ザ テューレイン エデュケイショナル ファンド | 治療用ペプチド |
| US5217955A (en) * | 1989-09-15 | 1993-06-08 | Biomeasure, Inc. | Treatment of cancer with peptide analog of bombesin, grp, litorin or neuromedin |
| US5244883A (en) * | 1990-11-29 | 1993-09-14 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Nonapeptide bombesin antagonists |
-
1993
- 1993-03-15 US US08/031,325 patent/US5369094A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-02-23 TW TW083101048A patent/TW325478B/zh not_active IP Right Cessation
- 1994-03-03 IL IL10885194A patent/IL108851A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 EP EP94912199A patent/EP0646127B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-07 BR BR9404341-8A patent/BR9404341A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-03-07 ES ES94912199T patent/ES2120615T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-07 SK SK1364-94A patent/SK282267B6/sk unknown
- 1994-03-07 NZ NZ299913A patent/NZ299913A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 CZ CZ19942807A patent/CZ286750B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 KR KR1019940704104A patent/KR100306506B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 SI SI9420001A patent/SI9420001B/sl not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 AT AT94912199T patent/ATE167874T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 NZ NZ263668A patent/NZ263668A/en unknown
- 1994-03-07 WO PCT/US1994/002511 patent/WO1994021674A1/en active IP Right Grant
- 1994-03-07 CA CA002135787A patent/CA2135787C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-07 HU HU9403244A patent/HU218288B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 RU RU94046091A patent/RU2114118C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 PL PL94306209A patent/PL180372B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 DK DK94912199T patent/DK0646127T3/da active
- 1994-03-07 UA UA94119008A patent/UA34456C2/uk unknown
- 1994-03-07 AU AU64446/94A patent/AU666270B2/en not_active Ceased
- 1994-03-07 JP JP52109194A patent/JP3838656B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-07 DE DE69411342T patent/DE69411342T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-10 HR HR08/031,325A patent/HRP940164B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-03-14 ZA ZA941767A patent/ZA941767B/xx unknown
- 1994-11-10 NO NO19944293A patent/NO313418B1/no unknown
- 1994-11-15 FI FI945378A patent/FI945378A0/fi unknown
- 1994-11-23 EE EE9400166A patent/EE03180B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-03-19 IL IL15499503A patent/IL154995A0/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ286750B6 (en) | Peptide antagonistic to bombesin and pharmaceutical preparation containing thereof | |
| EP0559756B1 (en) | Nonapeptide bombesin antagonists | |
| WO1995000542A1 (en) | Bombesin receptor antagonists and uses thereof | |
| WO1994021674A9 (en) | Polypeptide bombesin antagonists | |
| EP2198878A1 (en) | Polypeptide bombesin antagonists | |
| JP3040166B2 (ja) | ノナペプチドのボンベシン拮抗薬 | |
| JP3743794B2 (ja) | ボンベシン類似体 | |
| HRP921277A2 (en) | Nonapeptide bombestin antagonists |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20080307 |