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CN1867350A - 重组润滑素分子及其用途 - Google Patents

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CN1867350A
CN1867350A CNA2004800299041A CN200480029904A CN1867350A CN 1867350 A CN1867350 A CN 1867350A CN A2004800299041 A CNA2004800299041 A CN A2004800299041A CN 200480029904 A CN200480029904 A CN 200480029904A CN 1867350 A CN1867350 A CN 1867350A
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C·J·科尔科兰
B·A·弗里曼
L·A·拉西
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Original Assignee
Wyeth LLC
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Abstract

重组润滑素分子及其用途。本发明提供了新的重组润滑素分子及其作为润滑剂、抗粘连剂和/或关节内补充物应用于例如滑膜关节、半月板、腱、腹膜、心包和胸膜的用途。

Description

重组润滑素分子及其用途
[001]本发明涉及新的重组润滑素分子及其作为润滑剂、抗粘连剂和/或关节内补充物应用于例如，滑膜关节、半月板、腱、腹膜、心包和胸膜的用途。
                        发明背景
[002]滑膜关节的最佳功能性依赖于关节组织间极低的摩擦系数。通常，关节软骨上保持了一个邻接且润滑良好的表面。但在骨关节炎(OA)期间，润滑程度的降低促使了软骨基质降解和原纤维形成；这随后促成了关节功能异常和疼痛。润滑程度的降低也可以导致包括风湿性关节炎(RA)在内的关节功能障碍和其它关节炎形式的疼痛。
[003]润滑表面也有助于其它组织(例如腱)实现最佳功能性。正常腱功能除必需润滑表面外，还必需防止腱表面的细胞粘连。例如，在屈肌腱的损伤和修复中，腱粘连的形成是最常见的并发症。
[004]天然润滑素蛋白与巨核细胞刺激因子(MSF)前体蛋白相关。PRG4(蛋白聚糖4)是对MSF的命名，已被UCL/HGNC/HUGO人基因命名数据库采用。US6433142和US20020137894(本文所引用的全部专利和专利申请均被完整引入作为参考)描述了PRG4蛋白(即MSF前体蛋白)。由PRG4基因的外显子6编码的多肽被强糖基化后，似乎对PRG4-相关蛋白在例如，关节软骨表面之间充当润滑剂而言必不可少。
[005]有研究指出覆盖腱鞘的内膜滑膜细胞也可合成PRG4糖蛋白；该糖蛋白也很可能来源于腱细胞(Rees et al.，2002)。该糖蛋白主要存在于腱的纤维软骨区。作为对其滑液功能的补充，该糖蛋白可能通过阻止细胞粘连腱表面，以及通过在腱行使正常功能期间提供润滑，从而对腱起重要的细胞保护作用。
[006]PRG4(也被称为“润滑素”)基因的外显子6编码大约76-78个重复的KEPAPTT样序列和6个重复的XXTTTX样序列。改变本发明所述重组润滑素蛋白中可比重复序列的数目有助于研发在提高关节内润滑程度和抵消组织间不良粘连方面有所修饰的生物疗法。
                   发明概述
[007]本发明涉及新的重组润滑素(lubricin)分子及其作为润滑剂、抗粘连剂和/或关节内补充物的用途。
[008]为了最优化表达参数和研究全部大约76-78个KEPAPTT样序列的功能必要性，设计了能够使得能够合成具有不同O-连接的寡糖取代程度的重组润滑素蛋白的润滑素表达构建体。该设计是通过将可变数目的KEPAPTT样序列整合进包括外显子1-5、外显子6的5′-和3′-侧翼区以及外显子7-12在内的“核心”cDNA构建体中而得以实现。重复插入编码多个KEPAPTT样序列的“合成cDNA盒”有助于生成不同大小的重组润滑素构建体。这些研究最初集中在构建体PRG4-Lub：1(含合成“cDNA盒-1”的DNA(SEQ ID NO：1)，编码4个KEPAPTT序列)。
[009]本发明重组润滑素蛋白与若干种天然人润滑素同工型共有一级结构(参见US6743774、US20040072741和WO0064930)。在已表征的同工型中，编码同工型一级结构的PRG4基因外显子的组成各不相同。例如，PRG4基因的外显子1-12编码V0同工型，即全长同工型，外显子1-4和6-12则编码V1同工型，该同工型仅缺少由外显子5编码的片段。外显子1-3和6-12编码V2同工型，该同工型缺少由外显子4和5编码的片段。最后，外显子1、3和6-12则编码V3同工型，该同工型缺少由外显子2、4和5编码的片段。也可能存在其它同工型，已有报道公开了若干种相关的突变蛋白(参见US20020086824)。
[010]具体而言，本发明提供了具有重复的KEPAPTT样序列的重组润滑素蛋白。在优选实施方案中，本发明提供了包括SEQ IDNOS：9、13、17、21或25所示序列的分离蛋白。在相关实施方案中，本发明提供了包括SEQ ID NOS：7、11、15、19或23所示序列的分离蛋白。在进一步的相关实施方案中，本发明提供了含有重组润滑素蛋白的编码核酸序列的分离的多核苷酸。在优选实施方案中，本发明提供了含有上述蛋白的编码核酸序列的分离的多核苷酸。在进一步的相关实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NOS：6、1O、14、18或22所示序列在序列的全长上具有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的分离的多核苷酸。
[011]本发明的相关方面还提供了包含与SEQ ID NO：27的(N-2)个重复连接的SEQ ID NO：26的分离的蛋白，其中N为3-200的整数。在进一步的相关实施方案中，本发明提供了分离的蛋白，包含SEQ IDNO：26加SEQ ID NO：2加[SEQ ID NO：27的(N-2)个重复]加SEQ IDNO：29，其中N为3-200的整数。在该节所指出的本发明相关方面的实施方案中，N更优选地为5-50的整数，还要更优选的是N为10-30的整数。
             [012]表1.对具有序列标志符的序列的鉴定
 SEQ ID NO： 鉴定
  1 合成cDNA盒-1的核苷酸序列：155个碱基
  2 SEQ ID NO：1的翻译序列：51个氨基酸
  3 合成cDNA盒-2的核苷酸序列：125个碱基
  4 SEQ ID NO：3的翻译序列：41个氨基酸
  5 含有重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体的pTmed2载体：8049个碱基
  6 重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体：2946个碱基
  7 完整PRG4-LUB：1蛋白的氨基酸序列：981个氨基酸
  8 合成cDNA盒-1来源的Lub：1 DNA插入片段：157个碱基
  9 由Lub：1 DNA插入片段编码的51个氨基酸(在SEQ ID NO：7中位于S373-E425之间有4个KEPAPTT序列)
  10 重组PRG4-Lub：2 cDNA构建体：3024个碱基
  11 完整PRG4-LUB：2蛋白的氨基酸序列：1007个氨基酸
 SEQ ID NO：   鉴定
  12   合成cDNA盒-1来源的Lub：2 DNA插入片段和1个合成cDNA盒-2序列：235个碱基
  13   由Lub：2 DNA插入片段编码的77个氨基酸(在SEQ ID NO：11中位于S373-EA51之间有6个KEPAPTT序列)
  14   重组PRG4-Lub：3 cDNA构建体：3117个碱基
  15   完整PRG4-LUB：3蛋白的氨基酸序列：1038个氨基酸
  16   合成cDNA盒-1来源的Lub：3 DNA插入片段和2个合成cDNA盒-2序列：328个碱基
  17   由Lub：3 DNA插入片段编码的108个氨基酸(在SEQ ID NO：15中位于S373-E482之间有9个KEPAPTT序列)
  18   重组PRG4-Lub：4 cDNA构建体：3210个碱基
  19   完整PRG4-LUB：4蛋白的氨基酸序列：1069个氨基酸
  20   cDNA盒-1来源的Lub：4 DNA插入片段和3个合成cDNA盒-2盒：421个碱基
  21   由Lub：4 DNA插入片段编码的139个氨基酸(在SEQ ID NO：19中位于S373-E513之间有12个KEPAPTT序列)
  22   重组PRG4-Lub：5 cDNA构建体：3303个碱基
  23   完整PRG4-LUB：5蛋白的氨基酸序列：1100个氨基酸
  24   cDNA盒-1来源的Lub：5 DNA插入片段和4个合成cDNA盒-2序列：514个碱基
  25   由Lub：5 DNA插入片段编码的170个氨基酸(在SEQ ID NO：23中位于S373-E544之间有15个KEPAPTT序列)
 SEQ ID NO：   鉴定
  26   优选PRG4-LUB：N蛋白中的氨基酸序列″APTTPKEPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTT KEPAPTTPKEPAPTTTK″(45个氨基酸)
  27   优选PRG4-LUB：N蛋白中重复N-1次的氨基酸序列″KEPAPTTTKEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTP″(31个氨基酸)
  28   优选PRG4-LUB：N蛋白中使SEQ ID NO：26与SEQ ID NO：27的(N-2)个重复连接的氨基酸序列″EPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTP″(22个氨基酸)，其中N≥3。
  29   优选PRG4-LUB：N蛋白中的氨基酸序列″KEPKPAPTTP″(10个氨基酸)，其中N≥2。
[013]本发明的相关实施方案还提供了含有药学可接受载体中的治疗有效量的重组润滑素蛋白组合物。在某些实施方案中，该组合物还含有乙酰透明质酸或hylan。
[014]本发明进一步提供了治疗被试者的方法，包括：获得重组润滑素蛋白组合物；并将该组合物施用于被试者的组织。在本发明该方法的相关实施方案中，所述组织选自软骨、滑膜、半月板、腱、腹膜、心包和胸膜。在本发明该方法的进一步相关实施方案中，该方法还包括选自下列的步骤：向被试者提供麻醉剂；向被试者提供抗炎症药物；向被试者提供抗生素；从被试者抽吸液体；清洗被试者的组织；并对被试者的组织成像。在其它相关实施方案中，所述被试者选自小鼠、大鼠、猫、狗、马和人。
[015]在其它实施方案中，本发明还提供了含有编码重组润滑素蛋白的多核苷酸的表达载体，其中该多核苷酸与表达控制序列可操作连接。在相关实施方案中，本发明提供了制备重组润滑素蛋白的方法，包括：在液体培养基内培养由所述表达载体转化的细胞；和从该培养基中收集重组润滑素蛋白。蛋白收集步骤可进一步包括：通过膜过滤培养基使所述蛋白浓缩；收集被截留在膜上的蛋白；和将收集到的蛋白溶解在含有浓度范围为0.1-2.0M的L-精氨酸盐酸盐的缓冲盐溶液中。
[016]在另一种相关实施方案中，本发明提供了对重组润滑素蛋白具有特异性的分离抗体。
[017]下述优选实施方案和权利要求的内容有助于理解本发明的其它特征和优势。
                     发明详述
[018]被用于生成重组润滑素蛋白的碱基DNA构建体可能在PRG4基因外显子6的5′和3′具有可变排列的序列。例如，该碱基DNA构建体可能包括编码生长调节素B样结构域(外显子2-4)或血红素结合蛋白样结构域(外显子7-9)的序列的可变排列。
[019]在外显子6的3’具有不同外显子排列的碱基DNA构建体的实施方案可能包括分别仅具有外显子7、8、9、10、11或12，或外显子对(7和8)、(7和9)、(7和10)、(7和11)、(7和12)、(8和9)、(8和10)、(8和11)、(8和12)、(9和10)、(9和11)、(9和12)、(10和11)、(10和12)或(11和12)，或外显子三联体(7、8和9)、(7、8和10)、(7、8和11)、(7、8和12)、(7、9和10)、(7、9和11)、(7、9和12)、(7、10和11)、(7、10和12)、(7、11和12)、(8、9和10)、(8、9和11)、(8、9和12)、(8、10和11)、(8、10和12)、(8、11和12)、(9、10和11)、(9、10和12)、(9、11和12)或(10、11和12)，或外显子四联体(7、8、9和10)、(7、8、9和11)、(7、8、9和12)、(7、8、10和11)、(7、8、10和12)、(7、8、11和12)、(7、9、10和11)、(7、9、10和12)、(7、9、11和12)、(7、10、11和12)、(8、9、10和11)、(8、9、10和12)、(8、9、11和12)、(8、10、11和12)或(9、10、11和12)，或外显子五联体(7、8、9、10和11)、(7、8、9、10和12)、(7、8、9、11和12)、(7、8、10、11和12)、(7、9、10、11和12)或(8、9、10、11和12)或外显子六联体(7、8、9、10、11和12)的碱基DNA构建体。
[020]此外，在外显子6的5’具有不同外显子排列的碱基DNA构建体的实施方案可能包括分别仅具有外显子1、2、3、4或5，或外显子对(1和2)、(1和3)、(1和4)、(1和5)、(2和3)、(2和4)、(2和5)、(3和4)、(3和5)或(4和5)，或外显子三联体(1、2和3)、(1、2和4)、(1、2和5)、(1、3和4)、(1、3和5)、(1、4和5)、(2、3和4)、(2、3和5)、(2、4和5)或(3、4和5)，或外显子四联体(1、2、3和4)、(1、2、3和5)、(1、2、4和5)、(1、3、4和5)或(2、3、4和5)，或外显子五联体(1、2、3、4和5)的碱基DNA构建体。
[021]本发明还包括由碱基DNA构建体编码的蛋白质，即其中缺失了外显子6序列-编码多肽的部分或全部，并且未加入由合成cDNA盒来源的插入片段所编码的任何氨基酸。
[022]本发明还包括与本文所述的特定实施方案具有同源性的多核苷酸，例如，与所述特定DNA序列具有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的序列同一性。本发明进一步包括具有特定核酸序列的多核苷酸，该核酸序列能够在高严格性条件下以其功能结构域长度与上述特定DNA序列的互补序列杂交。本发明还包括由上述同源或杂交多核苷酸编码的蛋白质。
[023]为了更清楚地描述本发明实施方案，下文提供了若干相关定义。
[024]定义.短语“重复的KEPAPTT样序列”指与(a)“APTTPKEPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTTKEPAPTTPKEPAPTTTK”(SEQ ID NO：26；45个氨基酸)并具有至少一个O-连接的取代的序列；(b)“KEPAPTTTKEPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTP”(SEQ ID NO：27；31个氨基酸)并具有至少一个O-连接的取代的序列；或(c)“EPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTP”(SEQ ID NO：28；22个氨基酸)并具有至少一个O-连接的取代的序列，具有至少90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。重复的KEPAPTT样序列可能优选具有2、3、4个或更多O-连接的取代。
[025]有很多方法可测定两个多核苷酸或多肽序列之间的同一性，术语“同一性”是技术人员熟知的，并具有与特定方法对应的确定意义。本文所述的序列同一性是利用可通过NCBI( http：//www.ncbi.nlm.nih，gov/blast/；也可参考Tatusova和Madden(1999)的报道)获得的BLAST 2 SEQUENCES工具测定的。对氨基酸序列而言所用的参数为 预期值＝1000； 字长＝2； 过滤器＝关；其它参数设定为默认值。这三个参数也被应用于核酸序列同一性的测定，但 字长＝8。被用于比较氨基酸序列的默认值为： 矩阵＝BLOSUM62； 开放空位＝11； 延伸空位＝罚1分；和 gap×dropoff＝50。被用于比较核酸序列的默认值为： 匹配奖分＝1； 错配罚分＝-2；链选择＝两条链； 开放空位＝5； 延伸空位＝罚2分；和 gap×dropoff＝50。
[026]重组润滑素的O-连接的取代可以是用润滑寡糖β-(1-3)-Gal-GalNac或其它部分，包括人工或天然存在的糖部分(诸如硫酸角质素或硫酸软骨素)进行的取代。在某些实施方案中，O-连接的取代可以是对重组润滑素充当表面活性磷脂(SAPL)或表面活性剂的载体的能力起作用的部分(Hills，2002)。糖基化或取代百分比根据重量(干重)确定。
[027]在与DNA：DNA杂交有关的内容中应用的高严格性条件包括与下述条件等同的条件，即当所用探针长度约为500个核苷酸长时，于42℃在由5X SSPE(43.8g/l NaCl、6.9g/l NaH2PO4·H2O和1.85g/lEDTA、用NaOH将pH调整为7.4)、0.5％SDS、5X Denhardt试剂和100μg/ml变性鲑精DNA组成的溶液中进行结合或杂交后，于42℃在含有0.1X SSPE，1.0％SDS的溶液中进行洗涤。
[028]本文所述多肽或其它化合物在制剂中所占重量(干重)百分比至少为50％时被描述为是“分离的”。本文所述多肽或其它化合物在制剂中所占重量(干重)百分比至少为80％时被描述为是“基本上纯的”。本文所述多肽或其它化合物在制剂中所占重量(干重)百分比至少为95％和优选99％时被描述为是“均质的”。纯度通过下述步骤测定，即进行还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和增强考马斯蓝染色后，对条带进行光密度描迹(即通过光密度测定法测定蛋白纯度)。
[029]“无致热原”指不含可导致发热的污染物，包括内毒素。对污染物的测定可通过美国食品药物管理局制订的适用标准检验方法进行。
[030]本文所用术语“治疗有效量”指相关药物组合物或方法中的各活性成分足以对患者产生具有意义的益处，即治疗、治愈、预防或改善所述相关医学状况或加快了治疗、治愈、预防或改善所述状况的速度的量。当该术语被应用在单独施用单个有效成分的情况中时，则仅与该有效成分有关。当被应用在组合施用情况中时，该术语指可导致获得疗效的有效成分的组合量，而不考虑该组合中各有效成分的施用顺序是序贯还是同时。
[031]本发明的实施方案可被用作关节内补充物。用并非来源于润滑素的化合物进行关节内补充已被作为关节疗法获得了实践。例如，利用聚合乙酰透明质酸(HA)和更高分子量的hylans(诸如SYNVISC弹粘性液″Hylan G-F 20″--由WYETHPharmaceuticals分销)进行的“粘度补充疗法”在临床上被用于治疗与OA有关的膝关节疼痛。该粘度补充疗法尤其是在缓解患者负重疼痛方面已显示具有重要的治疗价值(Wobig et al.，1998)。
[032]Hylan G-F 20是通过将从公鸡或小鸡鸡冠获得的若干种HA分子交联而得以生成。与利用较低分子量HA进行的粘度补充疗法相比，利用Hylan G-F 20进行的粘度补充疗法可更显著地有效缓解疼痛(Wobig et al.，1999)。此外，在缓解疼痛方面，不耐受NSAIDs的患者尤其优选利用Hylan G-F 20进行的粘度补充疗法，而不施用NSAIDs(例如，在具有胃肠并发症高风险的患者中；Espallargues and Pons，2003)。尽管Hylan G-F 20粘度补充疗法是安全和易耐受的疗法，可短期(即治疗后维持3-6个月)减轻疼痛症状的同时还可改善关节功能，但该疗法并不能显著地使OA患者避免最终更换膝关节的需要(Espallargues and Pons，2003)。
                实施例1：重组润滑素的克隆
[033]构建体.在某些实施方案中，被用于生成重组润滑素 分子的碱基DNA构建体包括SEQ ID NO：6中从蛋氨酸密码子(ATG)到BssHII限制位点( G^CGCGC)的序列(即碱基1-1123)和从SEQ IDNO：6的BspEI限制位点( T^CCGGA)到终止密码子(TAA)的序列(即碱基1269-2946)。这些序列，即SEQ ID NO：6中的碱基1-1123和1269-2946编码天然全长润滑素(即PRG4)中的氨基酸M1-S373(由外显子1-5和位于外显子6中5′-密码子侧翼的大约174个碱基编码)和E848-P1404(由位于外显子6中3′-密码子侧翼的大约293个碱基和外显子7-14编码)。外显子6在该碱基DNA构建体中被缺失的部分与编码天然PRG4中的氨基酸A374-P847的DNA序列对应(由外显子6编码的大约940个氨基酸中缺失了474个氨基酸)。该缺失氨基酸序列富含KEPAPTT样序列。
[034]将合成cDNA盒-1的DNA序列(SEQ ID NO：1)加至所述碱基构建体的BssHII/BspEI(位点)，可获得重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体(SEQ ID NO：6)。SEQ ID NO：6包括位于两个特定DNA序列之间的Lub：1 DNA插入片段(SEQ ID NO：8；其编码具有4个KEPAPTT序列的SEQ ID NO：9的51个氨基酸)，其中一个DNA序列编码天然PRG4中的氨基酸M1-S373，另一个DNA序列则编码天然PRG4中的E848-P1404。换言之，重组润滑素PRG4-LUB：1包括了可形成4个完全KEPAPTT序列和大约3个不完全KEPAPTT序列的51个氨基酸，取代了天然PRG4中从A374到P847(474个氨基酸)的序列。
[035]将合成cDNA盒-2的DNA序列(SEQ ID NO：3)加至PRG4-Lub：1构建体的Bsu36I/BspEI(位点)，可获得PRG4-Lub：2 cDNA构建体(SEQ ID NO：10)。该PRG4-Lub：1 cDNA构建体具有一个Bsu36I限制位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：6中的碱基1225-1231)。当把合成cDNA盒-2加入PRG4-Lub：1 cDNA构建体中时，该Bsu36I位点被破坏了，但合成盒-2含有另一个内部Bsu36I限制位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：3中的碱基92-98)。因此，可通过将合成cDNA盒-2 Bsu36I/BspEI加至上述PRG4-Lub：N构建体中由合成cDNA盒-2提供的内部Bsu36I限制位点，以制备PRG4-Lub：N+1构建体。
[036]所述cDNA盒被合成为单链寡核苷酸形式，并可杂交在一起，生成具有粘性末端的双链DNA片段。这是末端BssHII、Bsu36I和BspEI位点不完整的原因。在合成cDNA盒-1(SEQ ID NO：1)中，与位于BssHII( G^CGCGC)和BspEI( T^CCGGA)限制位点两侧的残留部分结合的序列包括内部Bsu36I限制位点( CC^TNAGG，即CC^TAAGG)；该限制位点如下划线部分所示：
CGCGCCCACAACTCCAAAAGAGCCCGCACCTACCACGACAAAGTCAGC
TCCTACTACGCCCAAAGAGCCAGCGCCGACGACTACTAAAGAACCGGC
ACCCACCACG CCTAAGGAGCCAGCTCCTACTACAACGAAACCGGCACC
AACCAC TCCGG
[037]SEQ ID NO：2是SEQ ID NO：1的翻译序列，包括4个完全匹配的KEPAPTT序列(如突出部分所示)：
Figure A20048002990400151
[038]合成cDNA盒-2(SEQ ID NO：3)同样具有残留的5′-末端Bsu36I限制位点(即 CC^TNAGG，仅由TAA序列证实)、3′-末端残留BspEI限制位点( T^CCGGA)和内部Bsu36I限制位点( CC^TNAGG)；这些限制位点如下划线部分所示：
TAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCAC
GAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACT CCTAA
GGAACCCAAACCGGCACCAACCAC TCCGG
[039]SEQ ID NO：4是SEQ ID NO：3的翻译序列，包括3个完全匹配的KEPAPTT序列(如突出部分所示)：
Figure A20048002990400152
[040]在pTmed2载体(构建体外加载体等同于SEQ ID NO：5)中，重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体(SEQ ID NO：6)的侧翼为SalI( G^TCGAC；SEQ ID NO：5中的碱基1027-1032)和NotI( GC^GGCCGC；SEQ ID NO：5中的碱基3984-3991)限制位点。SalI位点将修饰的Kozak翻译起始序列( CCCACC；SEQ ID NO：5中的碱基1032-1037)整合在翻译起始密码子 ATG(SEQ ID NO：5中的碱基1038-1040)之前。BssHII( G^CGCGC；SEQ ID NO：5中的碱基2155-2160)和BspEI( T^CCGGA；SEQ ID NO：5中的碱基2306-2311)限制位点之间具有上述内部Bsu36I克隆位点( CC^TNAGG，即CC^TAAGG；SEQ ID NO：5中的碱基2262-2268)。
[041]PRG4-Lub：1 cDNA构建体(SEQ ID NO：6)被翻译进PRG4-LUB：1蛋白(SEQ ID NO：7)中。介于完整PRG4-LUB：1蛋白(SEQ ID NO：7)中S373-E425(即天然PRG4的E848)之间的插入片段是如SEQ ID NO：9所示的51个氨基酸。这些氨基酸从Lub：1 DNA插入片段(SEQ ID NO：8)翻译，包括4个完全的KEPAPTT序列。BssHII限制位点( G^CGCGC；SEQ ID NO：6中的碱基1118-1123)和BspEI限制位点( T^CCGGA；SEQ ID NO：6的碱基1269-1274)之间具有内部Bsu36I克隆位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：6中的碱基1225-1231)。
[042]与重组PRG4-Lub：1构建体被包含在pTmed2载体中的情况一样，在pTmed2载体中，重组PRG4-Lub：2 cDNA构建体(SEQ ID NO：10)的侧翼为SalI( G^TCGAC)和NotI( GC^GGCCGC)限制位点；SalI位点将修饰的Kozak翻译起始序列( CCCACC)整合在翻译起始密码子 ATG(SEQ ID NO：10中的碱基1-3)之前。同样，在pTmed2载体中，重组PRG4-Lub：3 cDNA构建体(SEQ ID NO：14)、重组PRG4-Lub：4 cDNA构建体(SEQ ID NO：18)和重组PRG4-Lub：5 cDNA构建体(SEQ ID NO：22)的侧翼均为SalI( G^TCGAC)和NotI( GC^GGCCGC)限制位点；SalI位点将修饰的Kozak翻译起始序列( CCCACC)整合在翻译起始密码子 ATG(分别为SEQ ID NO：14、18和22中的碱基1-3)之前。
[043]PRG4-Lub：2 cDNA构建体中的内部Bsu36I克隆位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：10中的碱基1318-1324)位于BssHlI( G^CGCGC；碱基1118-1123)和BspEI( T^CCGGA；碱基1347-1352)限制位点之间。PRG4-Lub：2构建体(SEQ ID NO：10)被翻译进PRG4-LUB：2蛋白(SEQ ID NO：11)中。介于完整PRG4-LUB：2蛋白(SEQ ID NO：11)中S373-E451(即天然PRG4的E848)之间的插入片段是如SEQ ID NO：13所示的77个氨基酸。这些氨基酸从Lub：2 DNA插入片段(SEQ ID NO：12)翻译。重组润滑素PRG4-LUB：2中取代了天然PRG4内A374-P847(474个氨基酸)的77个氨基酸形成了6个完全的KEPAPTT序列和大约4个不完全的KEPAPTT序列。
[044]PRG4-Lub：3 cDNA构建体中的内部Bsu36I克隆位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：14中的碱基1411-1417)位于BssHII( G^CGCGC；碱基1118-1123)和BspEI( T^CCGGA；碱基1440-1445)限制位点之间。PRG4-Lub：3构建体(SEQ ID NO：14)被翻译进PRG4-LUB：3蛋白(SEQ ID NO：15)中。介于完整PRG4-LUB：3蛋白(SEQ ID NO：15)中S373-E482(即天然PRG4的E848)之间的插入片段是如SEQ ID NO：17所示的108个氨基酸。这些氨基酸从Lub：3 DNA插入片段(SEQ ID NO：16)翻译。重组润滑素PRG4-LUB：3中取代了天然PRG4内A374-P847(474个氨基酸)的108个氨基酸形成了9个完全KEPAPTT序列和大约5个不完全的KEPAPTT序列。
[045]PRG4-Lub：4 cDNA构建体中的内部Bs36I克隆位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：18中的碱基1504-1510)位于BssHII( G^CGCGC；碱基1118-1123)和BspEI( T^CCGGA；碱基1533-1538)限制位点之间。PRG4-Lub：4构建体(SEQ ID NO：18)被翻译进PRG4-LUB：4蛋白(SEQ ID NO：19)中。完整PRG4-LUB：4蛋白(SEQ ID NO：19)中介于S373-E513(即天然PRG4的E848)之间的插入片段是如SEQ ID NO：21所示的139个氨基酸。这些氨基酸从Lub：4 DNA插入片段(SEQ ID NO：20)翻译。重组润滑素PRG4-LUB：4中取代了天然PRG4内A374-P847(474个氨基酸)的139个氨基酸形成了12个完全KEPAPTT序列和大约6个不完全KEPAPTT序列。
[046]PRG4-Lub：5 cDNA构建体中的内部Bsu36I克隆位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：22中的碱基1597-1603)位于BssHII( G^CGCGC；碱基1118-1123)和BspEI( T^CCGGA；碱基1626-1631)限制位点之间。PRG4-Lub：5构建体(SEQ ID NO：22)被翻译进PRG4-LUB：5蛋白(SEQ ID NO：23)中。介于完整PRG4-LUB：5蛋白(SEQ ID NO：23)中S373-E544(即天然PRG4的E848)之间的插入片段是如SEQ ID NO：25所示的170个氨基酸。这些氨基酸从Lub：5 DNA插入片段(SEQ ID NO：24)翻译。重组润滑素PRG4-LUB：5中取代了天然PRG4内A374-P847(474个氨基酸)的170个氨基酸形成了15个完全KEPAPTT序列和大约6个不完全KEPAPTT序列。
[047]重要的是，插入合成cDNA盒-2的过程可以无限重复。每次重复可加入3个完全KEPAPTT序列。与通过该方式利用插入序列而得以构建的重组润滑素PRG4-LUB：2到PRG4-LUB：5一样，也可构建重组润滑素PRG4-LUB：6-PRG4-LUB：N。表2为BssHII/BspEl插入序列的概括。
[048]表2.BssHII/BspEl插入序列
  LUB插入   SEQ IDNo：   序列(DNA插入序列中的限制位点如下划线所示；蛋白质插入序列中的KEPAPTT序列如加粗部分所示)
  Lub：1   8   GCGCGCCCACAACTCCAAAAGAGCCCGCACCTACCACGACAAAGTCAGCTCCTACTACGCCCAAAGAGCCAGCGCCGACGACTACTAAAGAACCGGCACCCACCACG CCTAAGGAGCCAGCTCCTACTACAACGAAACCGGCACCAACCAC TCCGGA
  LUB：1   9   APTTP KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTP KEPAPTTTKPAPTTP
  Lub：2   12   GCGCGCCCACAACTCCAAAAGAGCCCGCACCTACCACGACAAAGTCAGCTCCTACTACGCCCAAAGAGCCAGCGCCGACGACTACTAAAGAACCGGCACCCACCACGCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAGGAACCCAAACCGGCACCAACCAC TCCGGA
  LUB：2   13   APTTP KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPPTTT KEPAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPKPAPTTP
  Lub：3   16   GCGCGCCCACAACTCCAAAAGAGCCCGCACCTACCACGACAAAGTCAGCTCCTACTACGCCCAAAGAGCCAGCGCCGACGACTACTAAAGAACCGGCACCCACCACGCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACT CCTAAGGAACCCAAACCGGCACCAACCAC TCCGGA
  LUB：3   17   APTTP KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTP KEPAPTTTKEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPKPAPTTP
  Lub：4   20   GCGCGCCCACAACTCCAAAAGAGCCCGCACCTACCACGACAAAGTCAGCTCCTACTACGCCCAAAGAGCCAGCGCCGACGACTACTAAAGAACCGGCACCCACCACGCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACT CCTAAGGAACCCAAACCGGCACCAACCAC TCCGGA
  LUB：4   21   APTTP KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPKPAPTTP
  Lub：5   24   GCGCGCCCACAACTCCAAAAGAGCCCGCACCTACCACGACAAAGTCAGCTCCTACTACGCCCAAAGAGCCAGCGCCGACGACTACTAAAGAACCGGCACCCACCACGCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACTCCTAAAGAACCAGCCCCTACTACGACAAAGGAGCCTGCACCCACAACCACGAAGAGCGCACCCACAACACCAAAGGAGCCGGCCCCTACGACT CCTAAGGAACCCAAACCGGCACCAACCAC TCCGGA
  LUB：5   25   APTTP KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTP KEPAP TTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTPKEPKPAPTTP
[049]虽然我们已经例证了具有包含了全部12个外显子(减去外显子6的中央部分)的全长PRG4的碱基DNA构建体，但根据所需要的不同活性和长度还可应用PRG4的剪接变体。此外，可在类似方案中应用不同的限制酶，使它们方便地定位在PRG4蛋白的编码核酸序列内。在另一些实施方案中，所述碱基DNA构建体缺失了天然外显子6序列，但却包括了选自天然PRG4基因的外显子1-5或外显子7-12中的一个或多个外显子。在另一些实施方案中，所述碱基DNA构建体与US6433142或US20020137894所公开的重组MSF序列一致，但缺失了外显子6的部分或全部序列。
[050]本发明提供的优选实施方案是编码重组润滑素并被克隆进真核表达载体pTmed2的SalI( G^TCGAC；SEQ ID NO：5中的碱基1027-1032)和NotI( GC^GGCCGC；SEQ ID NO：5中的碱基3984-3991)限制位点中的cDNA构建体(例如，pTmed2表达载体中的重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体位于SEQ ID NO：5中的碱基1038-3983之间)。SalI位点将修饰的Kozak翻译起始序列的第一个碱基( CCCACC；SEQ ID NO：5的碱基1032)整合在蛋氨酸起始密码子(ATG；SEQ ID NO：5中的碱基1038-1040)之前。本发明的另一些实施方案包括其它限制位点组合和其它表达载体。
[051]在一种优选实施方案中，所述重复方法利用了位于表达载体pTmed2中，且侧翼为用于BssHII( G^CGCGC)和BspEI( T^CCGGA)的限制位点的合成cDNA盒-1(SEQ ID NO：1)，以及包括内部Bsu36I限制位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：1中的碱基107-113)的合成cDNA盒-1。对在该优选实施方案中重复生成的含有KEPAPTT样序列的重组润滑素构建体而言，合成cDNA盒-2(SEQ IDNO：3)被插入在该重组构建体的Bsu36I和BspEI位点之间。合成cDNA盒-2(SEQ ID NO：3)的侧翼为经过修饰的残留Bsu36I位点( TAAAG)和残留BspEI(AC TCCGG)位点。还包括内部Bsu36I位点( CC^TNAGG，即 CC^TAAGG；SEQ ID NO：3中的碱基92-98)。在将合成cDNA盒-2克隆进重组润滑素构建体的Bsu36I和BspEI位点中的基础上，原始构建体的Bsu36I克隆位点被破坏了，在新构建体中仅残留了一个Bsu36I克隆位点。
[052]在该优选实施方案中，氨基酸序列“APTTP KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTT KEPAPTTP KEPAPTTTK”(SEQ ID NO：26；45个氨基酸)保留了各PRG4-LUB：N蛋白(其中N＝1或更大的整数)中的一个部分。此外，氨基酸序列“ KEPAPTTT KEPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTP”(SEQ ID NO：27；31个氨基酸)由特定DNA插入片段编码，该插入片段通过将合成cDNA盒-2Bsu36I/BsuEI加入PRG4-Lub：N cDNA构建体而得以成为各PRG4-Lub：N+1 cDNA构建体的一部分。在优选实施方案中，对N为大于或等于3的整数的PRG4-LUB：N蛋白而言，氨基酸序列“ EPAPTTTKSAPTTP KEPAPTTP”(SEQ ID NO：28；22个氨基酸)将SEQ ID NO：26与SEQ ID NO：27的(N-2)个重复连接起来。此外，在N为大于或等于2的整数的PRG4-LUB：N蛋白优选实施方案中，氨基酸序列“KEPKPAPTTP”(SEQ ID NO：29；10个氨基酸)直接位于最后一个SEQ ID NO：27的插入重复之后。
[053]由于SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28形成了至少2个KEPAPTT序列，本文将它们均称为“重复的KEPAPTT样序列”(SEQ ID 28的N-末端与K残基相连，因此SEQ ID NO：28在PRG4-LUB：N蛋白中形成了2个KEPAPTT序列)。
[054]因此，对重组润滑素蛋白PRG4-LUB：N(其中N为等于1或大于1的整数)而言，优选实施方案中的PRG4-LUB：N蛋白包括SEQID NO：26。此外，对重组润滑素蛋白PRG4-LUB：N(其中N为等于2或大于2的整数)而言，优选实施方案中的PRG4-LUB：N蛋白还包括SEQ ID NO：27。SEQ ID NO：27在这些优选实施方案的各PRG4-LUB：N蛋白内重复了(N-1)次。在PRG4-LUB：2中，SEQ ID NO：26和SEQ IDNO：27重叠(即它们共有一个KEPAPTT序列)
[055]在N为大于或等于3的整数的另一些优选实施方案(例如，N等于3-200的整数，或更优选的实施方案中，即在N等于5-50的整数，或在还要更优选的实施方案中，即N等于10-30的整数)中，重组润滑素蛋白包括SEQ ID NO：28所示的22个氨基酸，这些氨基酸将SEQ ID NO：26的N-末端方向的45个氨基酸与SEQ ID NO：27所示31个氨基酸的(N-2)个重复连接在一起，其中SEQ ID NO：29所示10个氨基酸位于SEQ ID NO：27的最后一个31个氨基酸的重复的C-末端。
[056]表3.优选PRG4-LUB蛋白中的序列频率
PRG4-LUB蛋白   SEQ ID NO：26N-末端插入片段  SEQ ID NO：28>--<  SEQ ID NO：27>--<   SEQ ID NO：29插入C-末端片段 KEPAPTT重复
  -LUB：1   1   0   0   0   4
  -LUB：2   1   0   1   1   6
  -LUB：3   1   1   1   1   9
  -LUB：4   1   1   2   1   12
  -LUB：5   1   1   3   1   15
  -LUB：N   1   1   N-2   1   3×N
[057]在N等于重复KEPAPTT样序列数目的优选实施方案中，PRG4-LUB：N蛋白通常具有(3×N)个重复的KEPAPTT序列。重组润滑素PRG4-LUB：5(在优选实施方案中具有3×N＝3×5＝15个拷贝的KEPAPTT序列)是最大的重组润滑素PRG4-LUB：N，其序列由本文具体公开。不过，对本发明的重组润滑素而言，N值可能大于5，诸如7、10、12、15、20、25、30、40、50、100、150、200或更大值。
[058]具体而言，本文具体描述的蛋白质PRG4-LUB：1、PRG4-LUB：2、PRG4-LUB：3、PRG4-LUB：4和PRG4-LUB：5分别具有4、6、9、12和15个完全的KEPAPTT序列。但通过连续进行本文所述的重复Lub：N插入方法使添加的KEPAPTT序列数不断增加是可能的。我们具体描述了与天然PRG4/润滑素蛋白相比，所具有的KEPAPTT或KEPAPTT样序列数相对较少的PRG4-LUB：N重组润滑素，因为较小的蛋白质易于合成和操纵。
[059]使KEPAPTT样序列的数目超过天然PRG4蛋白所含该序列数也可能是理想的。这可通过下述两种方法实现，即连续进行本文所述的重复Lub：N插入方法，使重组润滑素PRG4-LUB：N蛋白中含有78个以上的KEPAPTT样序列，或者首先利用完整PRG4 cDNA，而不是外显子6-缺失或外显子6-不完整形式的PRG4 cDNA。因此，加入的任意KEPAPTT样序列的数目均应超过其存在于天然PRG4蛋白中的数目。本发明包括了从完整PRG4 cDNA生成较大重组润滑素蛋白的插入方法，以及利用外显子6-缺失或外显子6-不完整形式的PRG4cDNA的插入方法。
             实施例2：′LUB′蛋白的表达和纯化
[060]如下所述，在经过稳定转染和预适应的CHO DUKX细胞系内表达PRG4-Lub：1 cDNA构建体(SEQ ID NO：6；含有合成cDNA盒-1序列)，并从条件培养基中将其纯化后，溶解在含有500mM L-精氨酸盐酸盐的PBS中。
[061]在经过稳定转染的CHO DUKX细胞系内表达PRG4-Lub：1cDNA构建体，并收集条件培养基。利用安装了10kDa标称分子量截留极限(NMWL)、30kDa NMWL或100kDa NMWL PALLFILTRONOMEGATM圆盘膜的AMICONM2000TM过滤设备在压缩氮气(40psi)条件下过滤浓缩2升体积的该条件培养基。从圆盘膜上抽吸获得浓缩体积约为100ml的培养基。接着将该圆盘膜从AMICONM2000TM过滤设备上移除。利用细胞刮棒收集圆盘膜表面积聚的“粘液”存留物，转移进微量离心管中。以12,000xg离心微量离心管中的样品10分钟，除去水性上清液。将存留的“润滑素-富集的”沉淀溶解在含有500mM L-精氨酸盐酸盐的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中。L-精氨酸盐酸盐的浓度范围可以是100mM-2.0M。
[062]利用上述方法，直接从圆盘膜上获得了从PRG4-LUB：2到PRG4-LUB：5糖蛋白(和PRG4-LUB：N蛋白，其中N＝6或大于6的非负整数，以及含有KEPAPTT样序列的其它糖蛋白)，即未纯化圆盘膜上截留的浓缩液。也就是说，直接从10kDa NMWL、30kDa NMWL或100kDa NMWL PALL FILTRONOMEGATM过滤设备的圆盘膜上分离出了这些重组润滑素糖蛋白。在某些情况中，也可通过层析技术或电泳技术或二者的组合从圆盘膜上截留的浓缩液中纯化出这些糖蛋白。也可利用层析法和本领域已知的其它技术纯化重组润滑素蛋白和糖蛋白(正如例如，US6433142有关MSF蛋白的描述；也可参考Deutscher，1990和Scopes，1994)。
                实施例3：免疫组织化学
[063]进一步利用免疫组织化学技术研究正常和骨关节炎关节中润滑素的细胞来源。此外，根据下述方法还检查了包括胸膜、心包、腹膜和脑膜在内的其它组织表面是否存在润滑素。
[064]在接受膝关节更换手术的患者同意的情况下获得了骨关节炎软骨和滑膜。接受检查的其它组织为正常人滑膜和正常非人灵长类动物(NHP)滑膜、软骨、胸膜、心包、腹膜、脑膜、脑、腱和韧带，以及犬科动物的正常和骨关节炎半月板、软骨、滑膜、韧带和腱。在采集后或在不含和含有补充莫能菌素(5μM)的培养基中温育24小时后，立即将这些组织固定在4％多聚甲醛中。为进行免疫组织化学研究，将这些组织固定在4％多聚甲醛中24小时后制备6-8微米厚的石蜡切片。将少部分组织冷冻在光学相干性X射线断层术(OCT)冷冻化合物中，并以5-10微米的间距切片后进行丙酮固定。
[065]免疫组织化学和免疫荧光分析利用的是通过用截短形式的重组润滑素免疫生成并利用蛋白A柱纯化后获得的纯化多克隆兔抗人润滑素抗体(Ab 06A10)。CD16抗体(NEOMARKERS，Fremont CA)被用于鉴定巨噬细胞(Fcy受体III)。CD106/VCAM-1抗体(NEOMARKERS)被用于标记恒冷箱切片内的成纤维细胞。对照切片则连续利用了等浓度的RIgG(VECTOR LABSTM，CA)、MIgG1(DAKO)和MIgG2a(DAKO)。采用Dextran Technology System(ENVISION+TM；DAKO)使抗体结合显影，并用Mayer的明矾苏木精对切片进行复染。利用上述初级抗体进行免疫荧光检验，并用第二抗体(Alexa Dyes-MOLECULAR PROBESTM，Oregon)山羊抗兔Alexa染料于546nm和山羊抗小鼠Alexa染料于488nm波长处探测。抗体的荧光结合用NIKON荧光显微镜检测。
[066]沿人正常和骨关节炎关节软骨和滑膜的表面检测润滑素。原纤维化的骨关节炎表面被厚润滑素层完全包被。CD106免疫荧光检验结果显示滑膜的内膜成纤维细胞的细胞膜染色深；滑膜细胞内染色也显示存在润滑素蛋白。对CD106+润滑素双重免疫染色的结果清晰显示二者共同定位于滑膜的内膜成纤维细胞内。对滑膜巨噬细胞的CD16染色结果证实这些细胞存在于整个滑膜层中，但未与润滑素共同定位。
[067]用润滑素抗体对NHP和犬科动物关节组织(正常和OA)的染色结果显示润滑素包被了滑膜、软骨、半月板和腱的表面。在未加入莫能菌素以提高所述糖蛋白的细胞内含量的情况下，NHP软骨的浅区细胞和移行区细胞中都显示具有强免疫反应性。沿腹膜、心包和胸膜分布的细胞也显示存在润滑素表达，但在脑膜或脑内未观测到免疫反应性。
[068]概括而言，正常和骨关节炎滑膜、腱、半月板和软骨均包被了充实的润滑素层。该糖蛋白明显地存在于OA关节内的组织上。对人OA滑膜双重免疫荧光染色的结果证实内膜成纤维细胞滑膜细胞负责了润滑素的合成。
[069]尚无与润滑素蛋白在关节组织外部的定位有关的报道。在肺胸膜、心包和腹膜上明确证实存在润滑素表层。一般认为润滑素在滑膜关节内具有润滑功能，但在其它组织内还可能具有多重作用，包括但不限于润滑和抗粘连功能。用润滑素补充这些其它组织是本发明包括的生物疗法。
         实施例4：作为机械润滑剂的重组润滑素
[070]重组润滑素可作为润滑剂，通常与例如密封垫或轴承等一起应用。例如，标题为“Self-lubricating seal”的US3973781、标题为“Grooved mechanical face seal”的US4491331、标题为“Multi lip seal”的US4560174，以及标题为“Differential surface roughness dynamic sealsand bearings”的US4973068均描述了不同设计形式的密封垫。重组润滑素可作为润滑剂与这些密封垫一起应用。
[071]具体而言，重组润滑素可被用作医疗设备、假体和植入物的润滑剂尤其是在必需生物相容性润滑剂的情况下。此外，其应用不仅限于医疗，还包括在对环境要求敏感的情况中的应用，即应用生物相容性润滑剂可能是理想的情况。
              实施例5：重组润滑素组合物
[072]本发明所述重组润滑素可与药学可接受载体组合应用在药物组合物中。这种组合物(除含有上述蛋白质和载体外)还可含有稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂及本领域熟知的其它物质。术语“药学可接受的”指不干扰有效成分的生物学活性作用效果的无毒物质。所述载体的特征取决于给药途径。本发明所述药物组合物还可含有细胞因子、淋巴因子或其它造血因子，诸如M-CSF、GM-CSF、TNF、IL-1、IL-2、IL-3、IL4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、TNF1、TNF2、G-CSF、Meg-CSF、血小板生成素、干细胞生长因子和促红细胞生成素。该药物组合物可进一步含有可增强所述蛋白活性或对其在治疗中的活性或用途起补充作用的其它物质。这些其它的因子和/或物质可被包括在该药物组合物中，从而与本发明所述蛋白产生协同作用，或将副作用减至最少。反过来，本发明所述蛋白也可被包括在上述特定细胞因子、淋巴因子、其它造血因子、溶栓剂或抗凝因子，或抗炎症剂的制剂中，从而将副作用减至最少。
[073]将重组润滑素蛋白与上述聚合乙酰透明质酸(HA)和较高分子量的hylans组合应用于关节内补充是尤其优选的。可应用于关节内补充的另一些优选组合包括重组润滑素蛋白与麻醉剂(例如利多卡因)、类固醇(例如丙酮缩去炎松己酸酯)或放射性同位素(例如钇)的组合应用。可应用于关节内补充的另一些优选组合可包括自体或异源细胞制剂(例如培养的软骨细胞、滑膜细胞或干细胞的细胞制剂，而无论其来源为自身或异源)。
[074]本发明所述重组润滑素可以多聚体(例如异二聚体或同二聚体)或与其本身或其它蛋白复合的形式发挥作用。因此，本发明所述药物组合物可能包括这种多聚或复合形式的本发明蛋白。
[075]本发明所述药物组合物可能为复合形式，即由本发明所述重组润滑素蛋白和蛋白或肽抗原复合而成。该蛋白和/或肽抗原可将刺激信号送递至B和T淋巴细胞。B淋巴细胞通过其表面免疫球蛋白受体应答抗原。T淋巴细胞则在MHC蛋白呈递抗原后通过其T细胞受体(TCR)应答该抗原。包括那些由宿主细胞上的I和II类MHC基因编码的MHC和结构相关蛋白在内的MHC和结构相关蛋白可将所述肽抗原呈递给T淋巴细胞。抗原组分也可被作为纯化MHC-肽复合物单独提供，或与可直接向T细胞传递信号的共同刺激分子一起被组合提供。能够结合B细胞上的表面免疫球蛋白和其它分子的可选抗体和能够结合T细胞上的TCR和其它分子的抗体均可与本发明所述药物组合物组合。
[076]本发明所述药物组合物可为脂质体形式，其中除其它药学可接受载体外，还组合含有本发明所述蛋白和两亲剂，诸如可以胶束、不溶性单层、液晶或薄层的聚集形式存在于水性溶液的脂质。适用于脂质体制剂的合适脂质包括，但不限于甘油单酯、甘油二酯、硫苷酯、溶血卵磷脂、磷脂、皂苷、胆酸等。这种脂质体制剂的制备方法是本领域熟知的，被公开在例如US4235871、US4501728、US4837028和US4737323中。
[077]在实施本发明所述治疗或应用方法的过程中，是将治疗有效量的本发明蛋白施用于存在待治疗状况的被试者(例如哺乳动物)。根据本发明方法，可单独施用本发明所述蛋白，或与其它疗法组合施用，诸如应用细胞因子、淋巴因子、其它造血因子或以细胞为基础的补充物所进行的治疗。当与一种或多种细胞因子、淋巴因子、其它造血因子或以细胞为基础的补充物共同施用时，施用本发明蛋白和这些细胞因子、淋巴因子、其它造血因子、溶栓剂或抗凝因子，或以细胞为基础的补充物的顺序可为同时或序贯。如为序贯施用，则由主治医师决定组合施用本发明蛋白和细胞因子、淋巴因子、其它造血因子、溶栓剂或抗凝因子，或以细胞为基础的补充物的顺序。
[078]被应用在本发明所述药物组合物中或被用于实施本发明所述方法的本发明蛋白的施用可通过多种常规方法实现，诸如皮肤、皮下、腹膜内、肠胃外或静脉注射，或在某些情况中采用口服、吸入、体表应用的施用方法。通常优选通过注射进入关节组织内而实现对患者给药的方法(Schumacher，2003)。
[079]当通过口服方式施用治疗有效量的本发明蛋白时，其形式可为片剂、胶囊、粉剂、溶液或酏剂。当以片剂形式被施用时，本发明药物组合物可另外含有诸如明胶的固体载体或佐剂。该片剂、胶囊和粉剂含有大约5-95％的本发明蛋白，优选地含有大约25-90％的本发明蛋白。当以液体形式被施用时，可加入液体载体，诸如水、石油、动物或植物来源的油，诸如花生油、矿物油、大豆油或芝麻油，或合成的油。液体形式的药物组合物可进一步含有生理盐水、葡萄糖或其它糖溶液，或诸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇的二元醇。当以液体形式被施用时，按重量计算，该药物组合物含有大约0.5-90％的本发明蛋白，优选含有大约1-50％的本发明蛋白。
[080]当通过静脉内、皮肤或皮下注射施用治疗有效量的本发明蛋白时，本发明蛋白应为无致热原、肠胃外可接受的水性溶液形式。这种肠胃外可接受蛋白溶液的制备方法在本领域技术范围内，应考虑pH、等渗性、稳定性等因素。适用于静脉内、皮肤或皮下注射的优选药物组合物除含有本发明蛋白外，还应含有等渗载体，诸如氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、乳酸化林格氏注射液或本领域已知的其它载体。本发明药物组合物还可含有稳定剂、防腐剂、缓冲剂、抗氧化剂或本领域技术人员已知的其它添加剂。例如，与利多卡因或其它局部麻醉剂、类固醇或肾上腺类固醇、HA和/或hylans，或放射性同位素联合或组合在一起的注射方法均被包括在本发明中。
[081]本发明蛋白在本发明药物组合物中的量取决于待治疗状况的性质和严重程度，以及患者之前已接受的治疗的性质。最终由主治医师决定治疗个体患者所需本发明蛋白的量。最初，主治医师应施用低剂量的本发明蛋白，并观察患者的反应。直到对该患者在不进一步提高剂量的情况下已获得理想治疗效果时才可施用较大剂量的本发明蛋白。根据施用方法和实施的准确疗程，预期被用于实施本发明方法的多种药物组合物的施用剂量应为每公斤体重施用大约0.01μg-大约100mg(优选大约0.1μg-大约10mg，更优选大约0.1μg-大约1mg)的本发明蛋白。
[082]如果通过静脉内途径施用，利用含有本发明重组润滑素的药物组合物进行静脉内治疗的持续时间应根据待治疗疾病的严重程度和个体患者的状况和潜在特异体质反应的不同进行调整。预期每次连续静脉内施用本发明蛋白的持续时间应为12-24个小时。最终由主治医师决定利用本发明药物组合物进行静脉内治疗的合适持续时间。
[083]对有助于治疗骨、软骨、腱或韧带的本发明组合物而言，治疗方法包括将该组合物局部、系统地施用或作为植入物或装置局部施用。应用于本发明的治疗组合物被施用时应为生理学可接受形式，且必须不含致热原。此外，该组合物可能需要被胶囊化或以粘质形式注射，以送递至骨、软骨或组织损伤部位。体表施用可能适用于某些伤口愈合和组织修复状况。在本发明方法中，可选或另外地，可将还可任选地被包括在上述组合物中并有助于治疗的物质与含本发明重组润滑素蛋白的组合物同时或序贯施用。该组合物优选地应包括能够将含有所述蛋白的组合物送递至骨和/或软骨损伤部位、可能能够使发育中的骨和软骨具有结构，以及任选地能够被吸收进体内的基质。这种基质可由目前应用于其它移植医学应用的材料制成。
[084]如应用上述基质，应基于生物相容性、生物降解力、机械特性、外观和界面特性选择基质材料。本发明所述组合物的这一特殊应用相应限定了合适的制剂。可能适用于该组合物的基质可能是生物可降解和已被化学定义的硫酸钙、磷酸三钙、羟磷灰石、聚乳酸、聚乙醇酸和聚酐。另一些可能适用的材料是生物可降解和已被生物学具体定义的材料，诸如骨或皮肤胶原。所述基质进一步包括纯蛋白或胞外基质组分。另一些可能适用的基质是非生物可降解和已被化学定义的基质，诸如烧结羟磷灰石、生物玻璃、铝酸盐或其它陶瓷。所述基质可包括上述任意类型材料的组合，诸如聚乳酸和羟磷灰石或胶原和磷酸三钙。生物陶瓷的组分可以变化，诸如钙-铝酸盐-磷酸盐的各组分比例可以变化，并可经过加工，从而改变孔的大小、颗粒大小、颗粒形状和生物降解力。
[085]在进一步的组合物中，本发明蛋白可与有助于治疗骨和/或软骨缺陷、伤口或存在问题的组织的其它物质组合在一起。这些物质包括多种生长因子，诸如表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-α和TGF-β)，以及胰岛素样生长因子(IGF)。
[086]目前，该治疗组合物也具有兽医应用价值。除人以外，尤其是诸如猫和狗的家畜、诸如小鼠和大鼠的实验室动物，以及马均是尤其适合接受利用本发明重组润滑素蛋白进行的这种治疗的被试者或患者。
[087]含有所述蛋白的药物组合物被应用于组织再生方面时的给药方案应由主治医师根据下述多种可改变所述蛋白作用效果的要素确定，例如希望形成的组织的重量、受损部位、受损组织的状况、伤口大小、受损组织类型(例如软骨或腱)、患者的年龄、性别、饮食、所有感染的严重程度、给药时间及其它临床要素。剂量可随着重构所应用基质的类型和所述药物组合物中包含的其它蛋白的改变而调整。例如，在最终组合物中加入其它已知的生长因子，诸如IGF I(胰岛素样生长因子I)也可能影响该剂量。通过例如，X-射线、组织形态测定和四环素标记法定期评估组织/骨生长和/或修复状况，以监测再生过程。
[088]本发明多核苷酸还可被用于基因治疗。该多核苷酸可通过体内或离体方法被导入被试者(例如哺乳动物)的细胞内，并在其中表达。本发明多核苷酸还可通过其它已知适用于将核酸导入细胞或生物内的方法被施用(包括但不限于，以病毒载体或裸DNA的形式)。
[089]也可在存在本发明核酸或蛋白的条件下体外培养细胞，使该细胞增殖或对其产生预期作用或使其具有预期活性。接着可将经过处理的细胞导入体内用于治疗。
                实施例6：抗-润滑素抗体
[090]本发明所述重组润滑素蛋白还可被用于免疫动物，以获得可与其或在某些实施方案中与其天然对应物特异性反应的多克隆和单克隆抗体。以完整重组润滑素蛋白或其片段作为免疫原便可获得这种抗体。所述肽免疫原的羧基末端还可含有半胱氨酸残基，并可与诸如匙孔血蓝蛋白(KLH)的半抗原结合。本领域已知这种肽的合成方法(例如Merrifield，1963和Krstenansky et al.，1987所述方法)。可与本发明重组润滑素蛋白结合的单克隆抗体可能是有助于免疫检测相关蛋白的诊断剂。中和可与这些相关蛋白结合的单克隆抗体也可能是有助于治疗与润滑素相关病症或在某些情况中是有助于治疗可能涉及润滑素异常表达的某些癌症形式(例如滑膜瘤)的疗法。
[091]除了可导向重组润滑素蛋白多肽核心的抗体外，可导向重组润滑素蛋白的糖部分或糖蛋白复合体的抗体也是理想的抗体。为生成可与糖基化重组润滑素结合(而不结合其去糖基化形式)的抗体，免疫原优选氨基酸序列跨重组润滑素的高度糖基化部分，例如重复KEPAPTT样序列的糖肽。也可以将在该高度糖基化区域范围内的较短糖肽，例如8-15个氨基酸长度的糖肽作为免疫原。生成高度糖基化生物分子的抗体的方法是本领域已知的(例如Schneerson et al.，1980所述方法)。
                 实施例7：重组润滑素送递
[092]送递重组润滑素采用了标准方法。对关节内施用而言，是将浓度范围为20-500μg/ml的重组润滑素送递进滑膜腔，且单次注射体积为大约0.1-2ml。例如，利用细(例如14-30号，优选18-26号)针将浓度为200-300μg/ml的1ml重组润滑素注射进膝关节。本发明组合物还适用于肠胃外施用，诸如静脉内、皮下、肌内或腹膜内施用，在优选实施方案中则是被施用于腹膜、心包或胸膜的表面。
[093]正确的施针位置对关节治疗中通过注射送递重组润滑素蛋白的效能而言具有关键作用(Schumacher，2003)。可通过利用超声技术帮助正确施针定位。在成功抽吸液体后，更易实现成功的注射。业已提出一种进入髌上囊的外上侧方法，可提供进入膝关节关节间隙的最可靠通路。关节内注射除了可以施用重组润滑素外，还可将编码重组润滑素的核酸(例如在基因治疗应用中)送递至滑膜腔。
[094]为避免手术粘连，本文所述重组润滑素被施用时的形式为凝胶、泡沫、纤维或织物。以该方式配制的重组润滑素被置于受损或暴露的组织界面上方和之间，以避免相对表面之间的粘连形成。为了能够生效，所述凝胶或薄膜必须持续足够长的时间保持固定并阻止组织接触，从而在其最终消散时使所述组织得以接触并不再有粘连倾向。在大鼠盲肠磨损模型(Goldberg et al.，1993)中评估了被配制用于抑制或预防粘连形成的重组润滑素(例如，以膜、织物、泡沫或凝胶的形式)在预防手术后粘连方面的效果。所述组合物被置于通过外科方法磨损的大鼠盲肠周围，并与未经治疗的对照动物进行对比(其盲肠已磨损但未接受任何治疗的动物)。与缺乏重组润滑素制剂条件下大鼠模型内的粘连形成量相比，该制剂存在条件下粘连形成量的减少表明该制剂在临床上可有效减少组织粘连的形成。但在需要组织粘连的状况中(例如需使软骨裂缝愈合的状况)则最好避免采用重组润滑素。使软骨表面润滑将有损于软骨间的整合(Schaefer et al.，2004)。
[095]重组润滑素也可被用于包被将被移植进哺乳动物体内的假肢和人工关节。例如，可将这种装置浸入或浸没在重组润滑素溶液中，例如，遵照US5709020或US5702456所述方法。但在体内应用重组润滑素以在假体周围提供润滑效果时应多加注意。据报道，PRG4基因表达(即MSF基因表达)出现的显著上调与假体松动有关；润滑素可破坏骨与假体之间紧密的相互作用，从而使假体松动(Morawietz etal.，2003)。
                   实施例8：OA模型
[096]为评估关节内施用润滑素制剂的效能，制备了骨关节炎/软骨侵蚀的小鼠模型。为外科诱发骨关节炎，通过腹膜内施用250mg/kg三溴乙醇(SIGMAChemical)麻醉小鼠，并对其膝关节进行无菌外科手术。从髌骨韧带的中间将其纵向切开，打开关节囊，并确定半月板胫骨韧带(将内侧半月板固定在胫骨坪上)的位置。对一部分动物不进行其它操作，并认为该组接受了假手术。对试验组动物则横切其内侧半月板胫骨韧带，使其内侧半月板失去稳定状态(DMM)。分别将接受假手术和DMM的动物的关节囊和皮下层缝合紧密，并通过应用NEXABANDS/C组织粘合剂(Abbott，North Chicago，IL)将该部分的皮肤关闭。在手术前和手术后施用Buprenorphine(BUPRENEX；Reckitt & Coleman，Kingston-upon-Hull，UK)。
[097]通过利用30号针关节内注射施用重组润滑素制剂。手术后一周对每个膝关节关节注射施用5-10毫升。以每周一次为基础任选地进行其它注射。在手术后第4周和第8周用二氧化碳处死动物。
[098]为评估骨关节炎的进展和严重程度，将完整膝关节置入4％的多聚甲醛中24小时后，在EDTA/聚乙烯吡咯烷酮中脱钙5天。石蜡包埋关节并从完整关节中获得6-μm额向切片。用Safranin O-fastgreen染色载玻片，并利用修饰的的半定量评分系统(Chambers et al.，2001)以70-μm间距对整个关节评级，其中“0”＝正常软骨；“0.5”＝丧失Safranin O且无结构变化；“1”＝关节表面粗糙并有小的原纤维形成；“2”＝原纤维形成下至表层下的紧邻层中，并丧失部分表层；“3”＝轻度(＜20％)；“5”＝中度(20-80％)；和“6”＝重度(＞80％)丧失未钙化软骨。评分“4”(侵蚀至骨)不是该模型的特征。分别对关节的所有四分体(内侧胫骨坪、内侧股骨髁、外侧胫骨坪和外侧股骨髁)进行评分。由不知道该试验内容的观测者对各膝关节关节进行评分，最少分为12个级别。评分以在各关节内观测到的最大组织评分或总组织评分表示。总评分表示对整个关节各组织切片上的各关节四分体的累计评分。该分析方法可对损伤的严重程度以及被OA样病变所影响的软骨表面积进行评估(Glasson et al.，2004)。
[099]参考文献：(1)Chambers et al.，2001，Arthritis Rheum.44：1455-65；(2)Deutscher，1990，Methods in Enzymology，Vol.182：Guide to Protein Purification，AcademicPress；(3)Espallargues and Pons，2003，Iht′l J.Tech.Assess.Health Care 19：41-56；(4)Flannery et al.，1999，Biochem.Biophys.Res.Comm.254：535-41；(5)Glasson et al.，2004，Arthritis Rheum.50：2547-58；(6)Goldberg et al.，1993，In：Gynecologic Surgery andAdhesion Prevention，Willey-Liss，pp.191-204；(7)Hills，2002，J.Rheumatology 29：200-01；(8)Ikegawa et al.，2000，Cytogenet.Cell Genet.90：291-297；(9)Jay et al.，2001，J.Orthopaedic Research 19：677-87；(10)Jay et al.，2002，Glycoconjugate Journal 18：807-15；(11)Krstenansky et al.，1987，FEBS Lett.211：10-16；(12)Marcelino et al.，1999，Nature Genetics 23：319-322；(13)Merberg et al.，1993，Biology of Vitronectins and theirReceptors，Pressner et al.(编辑)：Elsevier Science Publishers，pp.45-53；(14)Merrifield，1963，J.Amer.Chem.Soc.85：2149-54；(15)Morawietz et al.，2003，Virchows Arch.443：57-66；(16)Rees et al.，2002，Matrix Biology 21：593-602；(17)Schneerson et al.，1980，J.Exp.Med 152：361-76；(18)Scopes，1994，Protein Purification：Principles and Practice(第3版)，Springer Verlag；(19)Schaefer et al.，2004，Biorheology 41：503-508；(20)Schumacher，2003，Arthritis & Rheumatism 49：413-20；(21)Tatusova and Madden，1999，FEMS Microbiol Lett.174：247-50；(22)Wobig et al.，1998，Clin.Ther.20：410-23；和(23)Wobig et al.，1999，Clin.Ther.21：1549-62.
                               序列表
<110>Wyeth
     Flannery，Carl R
     Corcoran，Christopher J
     Freeman，Bethany A
     Racie，Lisa A
<120>重组润滑素分子及其用途
<130>50657-01404WOPT
<160>29
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>155
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成cDNA盒-1的核苷酸序列。
<400>1
cgcgcccaca actccaaaag agcccgcacc taccacgaca aagtcagctc ctactacgcc     60
caaagagcca gcgccgacga ctactaaaga accggcaccc accacgccta aggagccagc    120
tcctactaca acgaaaccgg caccaaccac tccgg                               155
<210>2
<211>51
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：1的翻译序列。
<400>2
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Pro Ala Pro
        35                  40                  45
Thr Thr Pro
    50
<210>3
<211>125
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成cDNA盒-2的核苷酸序列。
<400>3
taaagaacca gcccctacta cgacaaagga gcctgcaccc acaaccacga agagcgcacc     60
cacaacacca aaggagccgg cccctacgac tcctaaggaa cccaaaccgg caccaaccac    120
tccgg                                                                125
<210>4
<211>41
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：3的翻译序列。
<400>4
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr
1               5                   10                  15
Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys
            20                  25                  30
Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
        35                  40
<210>5
<211>8049
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>含有重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体的pTmed2载体。
<400>5
catatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgtact     60
gagtcattag ggactttcca atgggttttg cccagtacat aaggtcaata ggggtgaatc    120
aacaggaaag tcccattgga gccaagtaca ctgagtcaat agggactttc cattgggttt    180
tgcccagtac aaaaggtcaa tagggggtga gtcaatgggt ttttcccatt attggcacgt    240
acataaggtc aataggggtg agtcattggg tttttccagc caatttaatt aaaacgccat    300
gtactttccc accattgacg tcaatgggct attgaaacta atgcaacgtg acctttaaac    360
ggtactttcc catagctgat taatgggaaa gtaccgttct cgagccaata cacgtcaatg    420
ggaagtgaaa gggcagccaa aacgtaacac cgccccggtt ttcccctgga aattccatat    480
tggcacgcat tctattggct gagctgcgtt ctacgtgggt ataagaggcg cgaccagcgt    540
cggtaccgtc gcagtcttcg gtctgaccac cgtagaacgc agagctcctc gctgcagccc    600
aagctctgtt gggctcgcgg ttgaggacaa actcttcgcg gtctttccag tactcttgga    660
tcggaaaccc gtcggcctcc gaacggtact ccgccaccga gggacctgag cgagtccgca    720
tcgaccggat cggaaaacct ctcgactgtt ggggtgagta ctccctctca aaagcgggca    780
tgacttctgc gctaagattg tcagtttcca aaaacgagga ggatttgata ttcacctggc    840
ccgcggtgat gcctttgagg gtggccgcgt ccatctggtc agaaaagaca atctttttgt    900
tgtcaagctt gaggtgtggc aggcttgaga tctggccata cacttgagtg acaatgacat    960
ccactttgcc tttctctcca caggtgtcca ctcccaggtc caactgcaga cttcgaattc   1020
tactgagtcg acccaccatg gcatggaaaa cacttcccat ttacctgttg ttgctgctgt   1080
ctgttttcgt gattcagcaa gtttcatctc aagatttatc aagctgtgca gggagatgtg   1140
gggaagggta ttctagagat gccacctgca actgtgatta taactgtcaa cactacatgg   1200
agtgctgccc tgatttcaag agagtctgca ctgcggagct ttcctgtaaa ggccgctgct   1260
ttgagtcctt cgagagaggg agggagtgtg actgcgacgc ccaatgtaag aagtatgaca   1320
agtgctgtcc cgattatgag agtttctgtg cagaagtgca taatcccaca tcaccaccat    1380
cttcaaagaa agcacctcca ccttcaggag catctcaaac catcaaatca acaaccaaac    1440
gttcacccaa accaccaaac aagaagaaga ctaagaaagt tatagaatca gaggaaataa    1500
cagaagaaca ttctgtttct gaaaatcaag agtcctcctc cagtagcagt tcaagtagtt    1560
cgtcgtcgac aatttggaaa atcaagtctt ccaaaaattc agctgctaat agagaattac    1620
agaagaaact caaagtaaaa gataacaaga agaacagaac taaaaagaaa cctaccccca    1680
aaccaccagt tgtagatgaa gctggaagtg gattggacaa tggtgacttc aaggtcacaa    1740
ctcctgacac gtctaccacc caacacaata aagtcagcac atctcccaag atcacaacag    1800
caaaaccaat aaatcccaga cccagtcttc cacctaattc tgatacatct aaagagacgt    1860
ctttgacagt gaataaagag acaacagttg aaactaaaga aactactaca acaaataaac    1920
agacttcaac tgatggaaaa gagaagacta cttccgctaa agagacacaa agtatagaga    1980
aaacatctgc taaagattta gcacccacat ctaaagtgct ggctaaacct acacccaaag    2040
ctgaaactac aaccaaaggc cctgctctca ccactcccaa ggagcccacg cccaccactc    2100
ccaaggagcc tgcatctacc acacccaaag agcccacacc taccaccatc aagagcgcgc    2160
ccacaactcc aaaagagccc gcacctacca cgacaaagtc agctcctact acgcccaaag    2220
agccagcgcc gacgactact aaagaaccgg cacccaccac gcctaaggag ccagctccta    2280
ctacaacgaa accggcacca accactccgg aaacacctcc tccaaccact tcagaggtct    2340
ctactccaac taccaccaag gagcctacca ctatccacaa aagccctgat gaatcaactc    2400
ctgagctttc tgcagaaccc acaccaaaag ctcttgaaaa cagtcccaag gaacctggtg    2460
tacctacaac taagacgccg gcggcgacta aacctgaaat gactacaaca gctaaagaca    2520
agacaacaga aagagactta cgtactacac ctgaaactac aactgctgca cctaagatga    2580
caaaagagac agcaactaca acagaaaaaa ctaccgaatc caaaataaca gctacaacca    2640
cacaagtaac atctaccaca actcaagata ccacaccatt caaaattact actcttaaaa    2700
caactactct tgcacccaaa gtaactacaa caaaaaagac aattactacc actgagatta    2760
tgaacaaacc tgaagaaaca gctaaaccaa aagacagagc tactaattct aaagcgacaa    2820
ctcctaaacc tcaaaagcca accaaagcac ccaaaaaacc cacttctacc aaaaagccaa    2880
aaacaatgcc tagagtgaga aaaccaaaga cgacaccaac tccccgcaag atgacatcaa    2940
caatgccaga attgaaccct acctcaagaa tagcagaagc catgctccaa accaccacca    3000
gacctaacca aactccaaac tccaaactag ttgaagtaaa tccaaagagt gaagatgcag    3060
gtggtgctga aggagaaaca cctcatatgc ttctcaggcc ccatgtgttc atgcctgaag    3120
ttactcccga catggattac ttaccgagag tacccaatca aggcattatc atcaatccca    3180
tgctttccga tgagaccaat atatgcaatg gtaagccagt agatggactg actactttgc    3240
gcaatgggac attagttgca ttccgaggtc attatttctg gatgctaagt ccattcagtc    3300
caccatctcc agctcgcaga attactgaag tttggggtat tccttccccc attgatactg    3360
tttttactag gtgcaactgt gaaggaaaaa ctttcttctt taaggattct cagtactggc    3420
gttttaccaa tgatataaaa gatgcagggt accccaaacc aattttcaaa ggatttggag    3480
gactaactgg acaaatagtg gcagcgcttt caacagctaa atataagaac tggcctgaat    3540
ctgtgtattt tttcaagaga ggtggcagca ttcagcagta tatttataaa caggaacctg    3600
tacagaagtg ccctggaaga aggcctgctc taaattatcc agtgtatgga gaaatgacac    3660
aggttaggag acgtcgcttt gaacgtgcta taggaccttc tcaaacacac accatcagaa    3720
ttcaatattc acctgccaga ctggcttatc aagacaaagg tgtccttcat aatgaagtta    3780
aagtgagtat actgtggaga ggacttccaa atgtggttac ctcagctata tcactgccca    3840
acatcagaaa acctgacggc tatgattact atgccttttc taaagatcaa tactataaca    3900
ttgatgtgcc tagtagaaca gcaagagcaa ttactactcg ttctgggcag accttatcca    3960
aagtctggta caactgtcct taagcggccg ccgcaaattc taacgttact ggccgaagcc    4020
gcttggaata aggccggtgt gcgtttgtct atatgttatt ttccaccata ttgccgtctt    4080
ttggcaatgt gagggcccgg aaacctggcc ctgtcttctt gacgagcatt cctaggggtc    4140
tttcccctct cgccaaagga atgcaaggtc tgttgaatgt cgtgaaggaa gcagttcctc    4200
tggaagcttc ttgaagacaa acaacgtctg tagcgaccct ttgcaggcag cggaaccccc    4260
cacctggcga caggtgcctc tgcggccaaa agccacgtgt ataagataca cctgcaaagg    4320
cggcacaacc ccagtgccac gttgtgagtt ggatagttgt ggaaagagtc aaatggctct    4380
cctcaagcgt attcaacaag gggctgaagg atgcccagaa ggtaccccat tgtatgggat    4440
ctgatctggg gcctcggtgc acatgcttta catgtgttta gtcgaggtta aaaaacgtct    4500
aggccccccg aaccacgggg acgtggtttt cctttgaaaa acacgattgc tcgagccatc    4560
atggttcgac cattgaactg catcgtcgcc gtgtcccaaa atatggggat tggcaagaac    4620
ggagacctac cctggcctcc gctcaggaac gagttcaagt acttccaaag aatgaccaca    4680
acctcttcag tggaaggtaa acagaatctg gtgattatgg gtaggaaaac ctggttctcc    4740
attcctgaga agaatcgacc tttaaaggac agaattaata tagttctcag tagagaactc    4800
aaagaaccac cacgaggagc tcattttctt gccaaaagtt tggatgatgc cttaagactt    4860
attgaacaac cggaattggc aagtaaagta gacatggttt ggatagtcgg aggcagttct    4920
gtttaccagg aagccatgaa tcaaccaggc cacctcagac tctttgtgac aaggatcatg    4980
caggaatttg aaagtgacac gtttttccca gaaattgatt tggggaaata taaacttctc    5040
ccagaatacc caggcgtcct ctctgaggtc caggaggaaa aaggcatcaa gtataagttt    5100
gaagtctacg agaagaaaga ctaacaggaa gatgctttca agttctctgc tcccctccta    5160
aagctatgca ttttttataa gaccatggga cttttgctgg ctttagatca taatcagcca    5220
taccacattt gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct    5280
gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt taacttgttt attgcagctt ataatggtta    5340
caaataaagc aatagcatca caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag    5400
ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc ttatcatgtc tggatccccg gccaacggtc    5460
tggtgacccg gctgcgagag ctcggtgtac ctgagacgcg agtaagccct tgagtcaaag    5520
acgtagtcgt tgcaagtccg caccaggtac tgatcatcga tgctagaccg tgcaaaagga    5580
gagcctgtaa gcgggcactc ttccgtggtc tggtggataa attcgcaagg gtatcatggc    5640
ggacgaccgg ggttcgaacc ccggatccgg ccgtccgccg tgatccatcc ggttaccgcc    5700
cgcgtgtcga acccaggtgt gcgacgtcag acaacggggg agcgctcctt ttggcttcct    5760
tccaggcgcg gcggctgctg cgctagcttt tttggcgagc tcgaattaat tctgcattaa    5820
tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg    5880
ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag    5940
gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa    6000
ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc    6060
cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca    6120
ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg    6180
accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct    6240
caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt    6300
gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag    6360
tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc    6420
agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac    6480
actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga    6540
gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc    6600
aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg    6660
gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca    6720
aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt    6780
atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca    6840
gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg    6900
atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca    6960
ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt    7020
cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt    7080
agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca    7140
cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca    7200
tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga    7260
agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact    7320
gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga    7380
gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg    7440
ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc    7500
tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga    7560
tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat    7620
gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt    7680
caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt    7740
atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac    7800
gtctaagaaa ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc    7860
tttcgtctcg cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag    7920
acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca    7980
gcgggtgttg gcgggtgtcg gggctggctt aactatgcgg catcagagca gattgtactg    8040
agagtgcac                                                            8049
<210>6
<211>2946
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>重组PRG4-Lub：1 cDNA构建体。
<400>6
atggcatgga aaacacttcc catttacctg ttgttgctgc tgtctgtttt cgtgattcag     60
caagtttcat ctcaagattt atcaagctgt gcagggagat gtggggaagg gtattctaga    120
gatgccacct gcaactgtga ttataactgt caacactaca tggagtgctg ccctgatttc    180
aagagagtct gcactgcgga gctttcctgt aaaggccgct gctttgagtc cttcgagaga    240
gggagggagt gtgactgcga cgcccaatgt aagaagtatg acaagtgctg tcccgattat    300
gagagtttct gtgcagaagt gcataatccc acatcaccac catcttcaaa gaaagcacct    360
ccaccttcag gagcatctca aaccatcaaa tcaacaacca aacgttcacc caaaccacca    420
aacaagaaga agactaagaa agttatagaa tcagaggaaa taacagaaga acattctgtt    480
tctgaaaatc aagagtcctc ctccagtagc agttcaagta gttcgtcgtc gacaatttgg    540
aaaatcaagt cttccaaaaa ttcagctgct aatagagaat tacagaagaa actcaaagta    600
aaagataaca agaagaacag aactaaaaag aaacctaccc ccaaaccacc agttgtagat    660
gaagctggaa gtggattgga caatggtgac ttcaaggtca caactcctga cacgtctacc    720
acccaacaca ataaagtcag cacatctccc aagatcacaa cagcaaaacc aataaatccc    780
agacccagtc ttccacctaa ttctgataca tctaaagaga cgtctttgac agtgaataaa    840
gagacaacag ttgaaactaa agaaactact acaacaaata aacagacttc aactgatgga    900
aaagagaaga ctacttccgc taaagagaca caaagtatag agaaaacatc tgctaaagat    960
ttagcaccca catctaaagt gctggctaaa cctacaccca aagctgaaac tacaaccaaa   1020
ggccctgctc tcaccactcc caaggagccc acgcccacca ctcccaagga gcctgcatct   1080
accacaccca aagagcccac acctaccacc atcaagagcg cgcccacaac tccaaaagag   1140
cccgcaccta ccacgacaaa gtcagctcct actacgccca aagagccagc gccgacgact   1200
actaaagaac cggcacccac cacgcctaag gagccagctc ctactacaac gaaaccggca   1260
ccaaccactc cggaaacacc tcctccaacc acttcagagg tctctactcc aactaccacc   1320
aaggagccta ccactatcca caaaagccct gatgaatcaa ctcctgagct ttctgcagaa   1380
cccacaccaa aagctcttga aaacagtccc aaggaacctg gtgtacctac aactaagacg   1440
ccggcggcga ctaaacctga aatgactaca acagctaaag acaagacaac agaaagagac   1500
ttacgtacta cacctgaaac tacaactgct gcacctaaga tgacaaaaga gacagcaact   1560
acaacagaaa aaactaccga atccaaaata acagctacaa ccacacaagt aacatctacc    1620
acaactcaag ataccacacc attcaaaatt actactctta aaacaactac tcttgcaccc    1680
aaagtaacta caacaaaaaa gacaattact accactgaga ttatgaacaa acctgaagaa    1740
acagctaaac caaaagacag agctactaat tctaaagcga caactcctaa acctcaaaag    1800
ccaaccaaag cacccaaaaa acccacttct accaaaaagc caaaaacaat gcctagagtg    1860
agaaaaccaa agacgacacc aactccccgc aagatgacat caacaatgcc agaattgaac    1920
cctacctcaa gaatagcaga agccatgctc caaaccacca ccagacctaa ccaaactcca    1980
aactccaaac tagttgaagt aaatccaaag agtgaagatg caggtggtgc tgaaggagaa    2040
acacctcata tgcttctcag gccccatgtg ttcatgcctg aagttactcc cgacatggat    2100
tacttaccga gagtacccaa tcaaggcatt atcatcaatc ccatgctttc cgatgagacc    2160
aatatatgca atggtaagcc agtagatgga ctgactactt tgcgcaatgg gacattagtt    2220
gcattccgag gtcattattt ctggatgcta agtccattca gtccaccatc tccagctcgc    2280
agaattactg aagtttgggg tattccttcc cccattgata ctgtttttac taggtgcaac    2340
tgtgaaggaa aaactttctt ctttaaggat tctcagtact ggcgttttac caatgatata    2400
aaagatgcag ggtaccccaa accaattttc aaaggatttg gaggactaac tggacaaata    2460
gtggcagcgc tttcaacagc taaatataag aactggcctg aatctgtgta ttttttcaag    2520
agaggtggca gcattcagca gtatatttat aaacaggaac ctgtacagaa gtgccctgga    2580
agaaggcctg ctctaaatta tccagtgtat ggagaaatga cacaggttag gagacgtcgc    2640
tttgaacgtg ctataggacc ttctcaaaca cacaccatca gaattcaata ttcacctgcc    2700
agactggctt atcaagacaa aggtgtcctt cataatgaag ttaaagtgag tatactgtgg    2760
agaggacttc caaatgtggt tacctcagct atatcactgc ccaacatcag aaaacctgac    2820
ggctatgatt actatgcctt ttctaaagat caatactata acattgatgt gcctagtaga    2880
acagcaagag caattactac tcgttctggg cagaccttat ccaaagtctg gtacaactgt    2940
ccttaa                                                               2946
<210>7
<211>981
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>完整PRG4-LUB：1蛋白的氨基酸序列。
<400>7
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Set Val
1               5                   10                  15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Gln Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly
            20                  25                  30
Arg Cys Gly Glu Gly Tyr Ser Arg Asp Ala Thr Cys Asn Cys Asp Tyr
        35                  40                  45
Asn Cys Gln His Tyr Met Glu Cys Cys Pro Asp Phe Lys Arg Val Cys
    50                  55                  60
Thr Ala Glu Leu Ser Cys Lys Gly Arg Cys Phe Glu Ser Phe Glu Arg
65                  70                  75                  80
Gly Arg Glu Cys Asp Cys Asp Ala Gln Cys Lys Lys Tyr Asp Lys Cys
                85                  90                  95
Cys Pro Asp Tyr Glu Ser Phe Cys Ala Glu Val His Asn Pro Thr Ser
            100                 105                 110
Pro Pro Ser Ser Lys Lys Ala Pro Pro Pro Set Gly Ala Ser Gln Thr
        115                 120                 125
Ile Lys Ser Thr Thr Lys Arg Ser Pro Lys Pro Pro Asn Lys Lys Lys
    130                 135                 140
Thr Lys Lys Val Ile Glu Ser Glu Glu Ile Thr Glu Glu His Ser Val
145                 150                 155                 160
Ser Glu Asn Gln Glu Ser Ser Set Ser Ser Ser Set Ser Ser Set Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Ile Trp Lys Ile Lys Set Ser Lys Asn Ser Ala Ala Asn Arg
            180                 185                 190
Glu Leu Gln Lys Lys Leu Lys Val Lys Asp Asn Lys Lys Asn Arg Thr
        195                 200                 205
Lys Lys Lys Pro Thr Pro Lys Pro Pro Val Val Asp Glu Ala Gly Ser
    210                 215                 220
Gly Leu Asp Asn Gly Asp Phe Lys Val Thr Thr Pro Asp Thr Ser Thr
225                 230                 235                 240
Thr Gln His Asn Lys Val Ser Thr Ser Pro Lys Ile Thr Thr Ala Lys
                245                 250                 255
Pro Ile Asn Pro Arg Pro Ser Leu Pro Pro Asn Ser Asp Thr Ser Lys
            260                 265                 270
Glu Thr Ser Leu Thr Val Asn Lys Glu Thr Thr Val Glu Thr Lys Glu
        275                 280                 285
Thr Thr Thr Thr Asn Lys Gln Thr Ser Thr Asp Gly Lys Glu Lys Thr
    290                 295                 300
Thr Ser Ala Lys Glu Thr Gln Ser Ile Glu Lys Thr Ser Ala Lys Asp
305                 310                 315                 320
Leu Ala Pro Thr Ser Lys Val Leu Ala Lys Pro Thr Pro Lys Ala Glu
                325                 330                 335
Thr Thr Thr Lys Gly Pro Ala Leu Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
            340                 345                 350
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Ser Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
        355                 360                 365
Thr Thr Ile Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
    370                 375                 380
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
385                 390                 395                 400
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
                405                 410                 415
Thr Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro Glu Thr Pro Pro Pro Thr Thr Ser
            420                 425                 430
Glu Val Ser Thr Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Thr Thr Ile His Lys
        435                 440                 445
Ser Pro Asp Glu Ser Thr Pro Glu Leu Ser Ala Glu Pro Thr Pro Lys
    450                 455                 460
Ala Leu Glu Asn Ser Pro Lys Glu Pro Gly Val Pro Thr Thr Lys Thr
465                 470                 475                 480
Pro Ala Ala Thr Lys Pro Glu Met Thr Thr Thr Ala Lys Asp Lys Thr
                485                 490                 495
Thr Glu Arg Asp Leu Arg Thr Thr Pro Glu Thr Thr Thr Ala Ala Pro
            500                 505                 510
Lys Met Thr Lys Glu Thr Ala Thr Thr Thr Glu Lys Thr Thr Glu Ser
        515                 520                 525
Lys Ile Thr Ala Thr Thr Thr Gln Val Thr Ser Thr Thr Thr Gln Asp
    530                 535                 540
Thr Thr Pro Phc Lys Ile Thr Thr Leu Lys Thr Thr Thr Leu Ala Pro
545                 550                 555                 560
Lys Val Thr Thr Thr Lys Lys Thr Ile Thr Thr Thr Glu Ile Met Asn
                565                 570                 575
Lys Pro Glu Glu Thr Ala Lys Pro Lys Asp Arg Ala Thr Asn Ser Lys
            580                 585                 590
Ala Thr Thr Pro Lys Pro Gln Lys Pro Thr Lys Ala Pro Lys Lys Pro
        595                 600                 605
Thr Ser Thr Lys Lys Pro Lys Thr Met Pro Arg Val Arg Lys Pro Lys
    610                 615                 620
Thr Thr Pro Thr Pro Arg Lys Met Thr Ser Thr Met Pro Glu Leu Asn
625                 630                 635                 640
Pro Thr Ser Arg Ile Ala Glu Ala Met Leu Gln Thr Thr Thr Arg Pro
                645                 650                 655
Asn Gln Thr Pro Asn Ser Lys Leu Val Glu Val Asn Pro Lys Ser Glu
            660                 665                 670
Asp Ala Gly Gly Ala Glu Gly Glu Thr Pro His Met Leu Leu Arg Pro
        675                 680                 685
His Val Phe Met Pro Glu Val Thr Pro Asp Met Asp Tyr Leu Pro Arg
    690                 695                 700
Val Pro Asn Gln Gly Ile Ile Ile Asn Pro Met Leu Ser Asp Glu Thr
705                 710                 715                 720
Asn Ile Cys Asn Gly Lys Pro Val Asp Gly Leu Thr Thr Leu Arg Asn
                725                 730                 735
Gly Thr Leu Val Ala Phe Arg Gly His Tyr Phe Trp Met Leu Ser Pro
            740                 745                 750
Phe Ser Pro Pro Ser Pro Ala Arg Arg Ile Thr Glu Val Trp Gly Ile
        755                 760                 765
Pro Ser Pro Ile Asp Thr Val Phe Thr Arg Cys Asn Cys Glu Gly Lys
    770                 775                 780
Thr Phe Phe Phe Lys Asp Ser Gln Tyr Trp Arg Phe Thr Asn Asp Ile
785                 790                 795                 800
Lys Asp Ala Gly Tyr Pro Lys Pro Ile Phe Lys Gly Phe Gly Gly Leu
                805                 810                 815
Thr Gly Gln Ile Val Ala Ala Leu Ser Thr Ala Lys Tyr Lys Asn Trp
            820                 825                 830
Pro Glu Ser Val Tyr Phe Phe Lys Arg Gly Gly Ser Ile Gln Gln Tyr
        835                 840                 845
Ile Tyr Lys Gln Glu Pro Val Gln Lys Cys Pro Gly Arg Arg Pro Ala
    850                 855                 860
Leu Asn Tyr Pro Val Tyr Gly Glu Met Thr Gln Val Arg Arg Arg Arg
865                 870                 875                 880
Phe Glu Arg Ala Ile Gly Pro Ser Gln Thr His Thr Ile Arg Ile Gln
                885                 890                 895
Tyr Ser Pro Ala Arg Leu Ala Tyr Gln Asp Lys Gly Val Leu His Asn
            900                 905                 910
Glu Val Lys Val Ser Ile Leu Trp Arg Gly Leu Pro Asn Val Val Thr
        915                 920                 925
Ser Ala Ile Ser Leu Pro Asn Ile Arg Lys Pro Asp Gly Tyr Asp Tyr
    930                 935                 940
Tyr Ala Phe Ser Lys Asp Gln Tyr Tyr Asn Ile Asp Val Pro Ser Arg
945                 950                 955                 960
Thr Ala Arg Ala Ile Thr Thr Arg Ser Gly Gln Thr Leu Ser Lys Val
                 965                 970                 975
Trp Tyr Asn Cys Pro
             980
<210>8
<211>157
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>来源于合成cDNA盒-1的Lub：1 DNA插入片段。
<400>8
gcgcgcccac aactccaaaa gagcccgcac ctaccacgac aaagtcagct cctactacgc     60
ccaaagagcc agcgccgacg actactaaag aaccggcacc caccacgcct aaggagccag    120
ctcctactac aacgaaaccg gcaccaacca ctccgga                             157
<210>9
<211>51
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>由Lub：1 DNA插入片段编码的51个氨基酸(在SEQ ID NO：7中位于S373-E425之间有4个KEPAPTT序列)。
<400>9
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Pro Ala Pro
        35                  40                  45
Thr Thr Pro
    50
<210>10
<211>3024
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>重组PRG4-Lub：2 cDNA构建体。
<400>10
atggcatgga aaacacttcc catttacctg ttgttgctgc tgtctgtttt cgtgattcag     60
caagtttcat ctcaagattt atcaagctgt gcagggagat gtggggaagg gtattctaga    120
gatgccacct gcaactgtga ttataactgt caacactaca tggagtgctg ccctgatttc    180
aagagagtct gcactgcgga gctttcctgt aaaggccgct gctttgagtc cttcgagaga    240
gggagggagt gtgactgcga cgcccaatgt aagaagtatg acaagtgctg tcccgattat    300
gagagtttct gtgcagaagt gcataatccc acatcaccac catcttcaaa gaaagcacct    360
ccaccttcag gagcatctca aaccatcaaa tcaacaacca aacgttcacc caaaccacca    420
aacaagaaga agactaagaa agttatagaa tcagaggaaa taacagaaga acattctgtt    480
tctgaaaatc aagagtcctc ctccagtagc agttcaagta gttcgtcgtc gacaatttgg    540
aaaatcaagt cttccaaaaa ttcagctgct aatagagaat tacagaagaa actcaaagta    600
aaagataaca agaagaacag aactaaaaag aaacctaccc ccaaaccacc agttgtagat    660
gaagctggaa gtggattgga caatggtgac ttcaaggtca caactcctga cacgtctacc    720
acccaacaca ataaagtcag cacatctccc aagatcacaa cagcaaaacc aataaatccc    780
agacccagtc ttccacctaa ttctgataca tctaaagaga cgtctttgac agtgaataaa    840
gagacaacag ttgaaactaa agaaactact acaacaaata aacagacttc aactgatgga    900
aaagagaaga ctacttccgc taaagagaca caaagtatag agaaaacatc tgctaaagat    960
ttagcaccca catctaaagt gctggctaaa cctacaccca aagctgaaac tacaaccaaa   1020
ggccctgctc tcaccactcc caaggagccc acgcccacca ctcccaagga gcctgcatct   1080
accacaccca aagagcccac acctaccacc atcaagagcg cgcccacaac tccaaaagag   1140
cccgcaccta ccacgacaaa gtcagctcct actacgccca aagagccagc gccgacgact   1200
actaaagaac cggcacccac cacgcctaaa gaaccagccc ctactacgac aaaggagcct   1260
gcacccacaa ccacgaagag cgcacccaca acaccaaagg agccggcccc tacgactcct    1320
aaggaaccca aaccggcacc aaccactccg gaaacacctc ctccaaccac ttcagaggtc    1380
tctactccaa ctaccaccaa ggagcctacc actatccaca aaagccctga tgaatcaact    1440
cctgagcttt ctgcagaacc cacaccaaaa gctcttgaaa acagtcccaa ggaacctggt    1500
gtacctacaa ctaagacgcc ggcggcgact aaacctgaaa tgactacaac agctaaagac    1560
aagacaacag aaagagactt acgtactaca cctgaaacta caactgctgc acctaagatg    1620
acaaaagaga cagcaactac aacagaaaaa actaccgaat ccaaaataac agctacaacc    1680
acacaagtaa catctaccac aactcaagat accacaccat tcaaaattac tactcttaaa    1740
acaactactc ttgcacccaa agtaactaca acaaaaaaga caattactac cactgagatt    1800
atgaacaaac ctgaagaaac agctaaacca aaagacagag ctactaattc taaagcgaca    1860
actcctaaac ctcaaaagcc aaccaaagca cccaaaaaac ccacttctac caaaaagcca    1920
aaaacaatgc ctagagtgag aaaaccaaag acgacaccaa ctccccgcaa gatgacatca    1980
acaatgccag aattgaaccc tacctcaaga atagcagaag ccatgctcca aaccaccacc    2040
agacctaacc aaactccaaa ctccaaacta gttgaagtaa atccaaagag tgaagatgca    2100
ggtggtgctg aaggagaaac acctcatatg cttctcaggc cccatgtgtt catgcctgaa    2160
gttactcccg acatggatta cttaccgaga gtacccaatc aaggcattat catcaatccc    2220
atgctttccg atgagaccaa tatatgcaat ggtaagccag tagatggact gactactttg    2280
cgcaatggga cattagttgc attccgaggt cattatttct ggatgctaag tccattcagt    2340
ccaccatctc cagctcgcag aattactgaa gtttggggta ttccttcccc cattgatact    2400
gtttttacta ggtgcaactg tgaaggaaaa actttcttct ttaaggattc tcagtactgg    2460
cgttttacca atgatataaa agatgcaggg taccccaaac caattttcaa aggatttgga    2520
ggactaactg gacaaatagt ggcagcgctt tcaacagcta aatataagaa ctggcctgaa    2580
tctgtgtatt ttttcaagag aggtggcagc attcagcagt atatttataa acaggaacct    2640
gtacagaagt gccctggaag aaggcctgct ctaaattatc cagtgtatgg agaaatgaca    2700
caggttagga gacgtcgctt tgaacgtgct ataggacctt ctcaaacaca caccatcaga  2760
attcaatatt cacctgccag actggcttat caagacaaag gtgtccttca taatgaagtt  2820
aaagtgagta tactgtggag aggacttcca aatgtggtta cctcagctat atcactgccc  2880
aacatcagaa aacctgacgg ctatgattac tatgcctttt ctaaagatca atactataac  2940
attgatgtgc ctagtagaac agcaagagca attactactc gttctgggca gaccttatcc  3000
aaagtctggt acaactgtcc ttaa                                         3024
<210>11
<211>1007
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>完整PRG4-LUB：2蛋白的氨基酸序列。
<400>11
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1               5                   10                  15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Gln Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly
            20                  25                  30
Arg Cys Gly Glu Gly Tyr Ser Arg Asp Ala Thr Cys Asn Cys Asp Tyr
        35                  40                  45
Asn Cys Gln His Tyr Met Glu Cys Cys Pro Asp Phe Lys Arg Val Cys
    50                  55                  60
Thr Ala Glu Leu Ser Cys Lys Gly Arg Cys Phe Glu Ser Phe Glu Arg
65                  70                  75                  80
Gly Arg Glu Cys Asp Cys Asp Ala Gln Cys Lys Lys Tyr Asp Lys Cys
                85                  90                  95
Cys Pro Asp Tyr Glu Ser Phe Cys Ala Glu Val His Asn Pro Thr Ser
            100                 105                 110
Pro Pro Ser Ser Lys Lys Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Ser Gln Thr
        115                 120                 125
Ile Lys Ser Thr Thr Lys Arg Ser Pro Lys Pro Pro Asn Lys Lys Lys
    130                 135                 140
Thr Lys Lys Val Ile Glu Ser Glu Glu Ile Thr Glu Glu His Ser Val
145                 150                 155                 160
Ser Glu Asn Gln Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Ile Trp Lys Ile Lys Ser Ser Lys Asn Ser Ala Ala Asn Arg
            180                 185                 190
Glu Leu Gln Lys Lys Leu Lys Val Lys Asp Asn Lys Lys Asn Arg Thr
        195                 200                 205
Lys Lys Lys Pro Thr Pro Lys Pro Pro Val Val Asp Glu Ala Gly Ser
    210                 215                 220
Gly Leu Asp Asn Gly Asp Phe Lys Val Thr Thr Pro Asp Thr Ser Thr
225                 230                 235                 240
Thr Gln His Asn Lys Val Ser Thr Ser Pro Lys Ile Thr Thr Ala Lys
                245                 250                 255
Pro Ile Asn Pro Arg Pro Ser Leu Pro Pro Asn Ser Asp Thr Ser Lys
            260                 265                 270
Glu Thr Ser Leu Thr Val Asn Lys Glu Thr Thr Val Glu Thr Lys Glu
        275                 280                 285
Thr Thr Thr Thr Asn Lys Gln Thr Ser Thr Asp Gly Lys Glu Lys Thr
    290                 295                 300
Thr Ser Ala Lys Glu Thr Gln Ser Ile Glu Lys Thr Ser Ala Lys Asp
305                 310                 315                 320
Leu Ala Pro Thr Ser Lys Val Leu Ala Lys Pro Thr Pro Lys Ala Glu
                325                 330                 335
Thr Thr Thr Lys Gly Pro Ala Leu Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
            340                 345                 350
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Ser Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
        355                 360                 365
Thr Thr Ile Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
    370                 375                 380
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
385                 390                 395                 400
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
                405                 410                 415
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro
            420                 425                 430
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr
        435                 440                 445
Thr Pro Glu Thr Pro Pro Pro Thr Thr Ser Glu Val Ser Thr Pro Thr
    450                 455                 460
Thr Thr Lys Glu Pro Thr Thr Ile His Lys Ser Pro Asp Glu Ser Thr
465                 470                 475                 480
Pro Glu Leu Ser Ala Glu Pro Thr Pro Lys Ala Leu Glu Asn Ser Pro
                485                 490                 495
Lys Glu Pro Gly Val Pro Thr Thr Lys Thr Pro Ala Ala Thr Lys Pro
            500                 505                 510
Glu Met Thr Thr Thr Ala Lys Asp Lys Thr Thr Glu Arg Asp Leu Arg
        515                 520                 525
Thr Thr Pro Glu Thr Thr Thr Ala Ala Pro Lys Met Thr Lys Glu Thr
    530                 535                 540
Ala Thr Thr Thr Glu Lys Thr Thr Glu Ser Lys Ile Thr Ala Thr Thr
545                 550                 555                 560
Thr Gln Val Thr Ser Thr Thr Thr Gln Asp Thr Thr Pro Phe Lys Ile
                565                 570                 575
Thr Thr Leu Lys Thr Thr Thr Leu Ala Pro Lys Val Thr Thr Thr Lys
            580                 585                 590
Lys Thr Ile Thr Thr Thr Glu Ile Met Asn Lys Pro Glu Glu Thr Ala
        595                 600                 605
Lys Pro Lys Asp Arg Ala Thr Asn Ser Lys Ala Thr Thr Pro Lys Pro
    610                 615                 620
Gln Lys Pro Thr Lys Ala Pro Lys Lys Pro Thr Ser Thr Lys Lys Pro
625                 630                 635                 640
Lys Thr Met Pro Arg Val Arg Lys Pro Lys Thr Thr Pro Thr Pro Arg
                645                 650                 655
Lys Met Thr Ser Thr Met Pro Glu Leu Asn Pro Thr Ser Arg Ile Ala
            660                 665                 670
Glu Ala Met Leu Gln Thr Thr Thr Arg Pro Asn Gln Thr Pro Asn Ser
        675                 680                 685
Lys Leu Val Glu Val Asn Pro Lys Ser Glu Asp Ala Gly Gly Ala Glu
    690                 695                 700
Gly Glu Thr Pro His Met Leu Leu Arg Pro His Val Phe Met Pro Glu
705                 710                 715                 720
Val Thr Pro Asp Met Asp Tyr Leu Pro Arg Val Pro Asn Gln Gly Ile
                725                 730                 735
Ile Ile Asn Pro Met Leu Ser Asp Glu Thr Asn Ile Cys Asn Gly Lys
            740                 745                 750
Pro Val Asp Gly Leu Thr Thr Leu Arg Asn Gly Thr Leu Val Ala Phe
        755                 760                 765
Arg Gly His Tyr Phe Trp Met Leu Ser Pro Phe Ser Pro Pro Ser Pro
    770                 775                 780
Ala Arg Arg Ile Thr Glu Val Trp Gly Ile Pro Ser Pro Ile Asp Thr
785                 790                 795                 800
Val Phe Thr Arg Cys Asn Cys Glu Gly Lys Thr Phe Phe Phe Lys Asp
                805                 810                 815
Ser Gln Tyr Trp Arg Phe Thr Asn Asp Ile Lys Asp Ala Gly Tyr Pro
            820                 825                 830
Lys Pro Ile Phe Lys Gly Phe Gly Gly Leu Thr Gly Gln Ile Val Ala
        835                 840                 845
Ala Leu Ser Thr Ala Lys Tyr Lys Asn Trp Pro Glu Ser Val Tyr Phe
    850                 855                 860
Phe Lys Arg Gly Gly Ser Ile Gln Gln Tyr Ile Tyr Lys Gln Glu Pro
865                 870                 875                 880
Val Gln Lys Cys Pro Gly Arg Arg Pro Ala Leu Asn Tyr Pro Val Tyr
                885                 890                 895
Gly Glu Met Thr Gln Val Arg Arg Arg Arg Phe Glu Arg Ala Ile Gly
            900                 905                 910
Pro Ser Gln Thr His Thr Ile Arg Ile Gln Tyr Ser Pro Ala Arg Leu
        915                 920                 925
Ala Tyr Gln Asp Lys Gly Val Leu His Asn Glu Val Lys Val Ser Ile
    930                 935                 940
Leu Trp Arg Gly Leu Pro Asn Val Val Thr Ser Ala Ile Ser Leu Pro
945                 950                 955                 960
Asn Ile Arg Lys Pro Asp Gly Tyr Asp Tyr Tyr Ala Phe Ser Lys Asp
                965                 970                 975
Gln Tyr Tyr Asn Ile Asp Val Pro Ser Arg Thr Ala Arg Ala Ile Thr
            980                 985                 990
Thr Arg Ser Gly Gln Thr Leu Ser  Lys Val Trp Tyr Asn  Cys Pro
        995                 1000                 1005
<210>12
<211>235
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>来源于合成cDNA盒-1的Lub：2 DNA插入片段和一个合成cDNA盒-2序列。
<400>12
gcgcgcccac aactccaaaa gagcccgcac ctaccacgac aaagtcagct cctactacgc     60
ccaaagagcc agcgccgacg actactaaag aaccggcacc caccacgcct aaagaaccag    120
cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc acaacaccaa    180
aggagccggc ccctacgact cctaaggaac ccaaaccggc accaaccact ccgga         235
<210>13
<211>77
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>由Lub：2 DNA插入片段编码的77个氨基酸(在SEQ ID NO：11中位于S373-E451之间有6个KEPAPTT序列)。
<400>13
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
        35                  40                  45
Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro
    50                  55                  60
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
65                  70                  75
<210>14
<211>3117
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>重组PRG4-Lub：3 cDNA构建体。
<400>14
atggcatgga aaacacttcc catttacctg ttgttgctgc tgtctgtttt cgtgattcag     60
caagtttcat ctcaagattt atcaagctgt gcagggagat gtggggaagg gtattctaga    120
gatgccacct gcaactgtga ttataactgt caacactaca tggagtgctg ccctgatttc    180
aagagagtct gcactgcgga gctttcctgt aaaggccgct gctttgagtc cttcgagaga    240
gggagggagt gtgactgcga cgcccaatgt aagaagtatg acaagtgctg tcccgattat    300
gagagtttct gtgcagaagt gcataatccc acatcaccac catcttcaaa gaaagcacct    360
ccaccttcag gagcatctca aaccatcaaa tcaacaacca aacgttcacc caaaccacca    420
aacaagaaga agactaagaa agttatagaa tcagaggaaa taacagaaga acattctgtt    480
tctgaaaatc aagagtcctc ctccagtagc agttcaagta gttcgtcgtc gacaatttgg    540
aaaatcaagt cttccaaaaa ttcagctgct aatagagaat tacagaagaa actcaaagta    600
aaagataaca agaagaacag aactaaaaag aaacctaccc ccaaaccacc agttgtagat     660
gaagctggaa gtggattgga caatggtgac ttcaaggtca caactcctga cacgtctacc     720
acccaacaca ataaagtcag cacatctccc aagatcacaa cagcaaaacc aataaatccc     780
agacccagtc ttccacctaa ttctgataca tctaaagaga cgtctttgac agtgaataaa     840
gagacaacag ttgaaactaa agaaactact acaacaaata aacagacttc aactgatgga     900
aaagagaaga ctacttccgc taaagagaca caaagtatag agaaaacatc tgctaaagat     960
ttagcaccca catctaaagt gctggctaaa cctacaccca aagctgaaac tacaaccaaa    1020
ggccctgctc tcaccactcc caaggagccc acgcccacca ctcccaagga gcctgcatct    1080
accacaccca aagagcccac acctaccacc atcaagagcg cgcccacaac tccaaaagag    1140
cccgcaccta ccacgacaaa gtcagctcct actacgccca aagagccagc gccgacgact    1200
actaaagaac cggcacccac cacgcctaaa gaaccagccc ctactacgac aaaggagcct    1260
gcacccacaa ccacgaagag cgcacccaca acaccaaagg agccggcccc tacgactcct    1320
aaagaaccag cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc    1380
acaacaccaa aggagccggc ccctacgact cctaaggaac ccaaaccggc accaaccact    1440
ccggaaacac ctcctccaac cacttcagag gtctctactc caactaccac caaggagcct    1500
accactatcc acaaaagccc tgatgaatca actcctgagc tttctgcaga acccacacca    1560
aaagctcttg aaaacagtcc caaggaacct ggtgtaccta caactaagac gccggcggcg    1620
actaaacctg aaatgactac aacagctaaa gacaagacaa cagaaagaga cttacgtact    1680
acacctgaaa ctacaactgc tgcacctaag atgacaaaag agacagcaac tacaacagaa    1740
aaaactaccg aatccaaaat aacagctaca accacacaag taacatctac cacaactcaa    1800
gataccacac cattcaaaat tactactctt aaaacaacta ctcttgcacc caaagtaact    1860
acaacaaaaa agacaattac taccactgag attatgaaca aacctgaaga aacagctaaa    1920
ccaaaagaca gagctactaa ttctaaagcg acaactccta aacctcaaaa gccaaccaaa    1980
gcacccaaaa aacccacttc taccaaaaag ccaaaaacaa tgcctagagt gagaaaacca    2040
aagacgacac caactccccg caagatgaca tcaacaatgc cagaattgaa ccctacctca    2100
agaatagcag aagccatgct ccaaaccacc accagaccta accaaactcc aaactccaaa    2160
ctagttgaag taaatccaaa gagtgaagat gcaggtggtg ctgaaggaga aacacctcat    2220
atgcttctca ggccccatgt gttcatgcct gaagttactc ccgacatgga ttacttaccg    2280
agagtaccca atcaaggcat tatcatcaat cccatgcttt ccgatgagac caatatatgc    2340
aatggtaagc cagtagatgg actgactact ttgcgcaatg ggacattagt tgcattccga    2400
ggtcattatt tctggatgct aagtccattc agtccaccat ctccagctcg cagaattact    2460
gaagtttggg gtattccttc ccccattgat actgttttta ctaggtgcaa ctgtgaagga    2520
aaaactttct tctttaagga ttctcagtac tggcgtttta ccaatgatat aaaagatgca    2580
gggtacccca aaccaatttt caaaggattt ggaggactaa ctggacaaat agtggcagcg    2640
ctttcaacag ctaaatataa gaactggcct gaatctgtgt attttttcaa gagaggtggc    2700
agcattcagc agtatattta taaacaggaa cctgtacaga agtgccctgg aagaaggcct    2760
gctctaaatt atccagtgta tggagaaatg acacaggtta ggagacgtcg ctttgaacgt    2820
gctataggac cttctcaaac acacaccatc agaattcaat attcacctgc cagactggct    2880
tatcaagaca aaggtgtcct tcataatgaa gttaaagtga gtatactgtg gagaggactt    2940
ccaaatgtgg ttacctcagc tatatcactg cccaacatca gaaaacctga cggctatgat    3000
tactatgcct tttctaaaga tcaatactat aacattgatg tgcctagtag aacagcaaga    3060
gcaattacta ctcgttctgg gcagacctta tccaaagtct ggtacaactg tccttaa       3117
<210>15
<211>1038
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>完整PRG4-LUB：3蛋白的氨基酸序列。
<400>15
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1               5                   10                  15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Gln Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly
            20                  25                  30
Arg Cys Gly Glu Gly Tyr Ser Arg Asp Ala Thr Cys Asn Cys Asp Tyr
        35                  40                  45
Asn Cys Gln His Tyr Met Glu Cys Cys Pro Asp Phe Lys Arg Val Cys
    50                  55                  60
Thr Ala Glu Leu Ser Cys Lys Gly Arg Cys Phe Glu Ser Phe Glu Arg
65                  70                  75                  80
Gly Arg Glu Cys Asp Cys Asp Ala Gln Cys Lys Lys Tyr Asp Lys Cys
                85                  90                  95
Cys Pro Asp Tyr Glu Ser Phe Cys Ala Glu Val His Asn Pro Thr Ser
            100                 105                 110
Pro Pro Ser Ser Lys Lys Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Ser Gln Thr
        115                 120                 125
Ile Lys Ser Thr Thr Lys Arg Ser Pro Lys Pro Pro Asn Lys Lys Lys
    130                 135                 140
Thr Lys Lys Val Ile Glu Ser Glu Glu Ile Thr Glu Glu His Ser Val
145                 150                 155                 160
Ser Glu Asn Gln Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Ile Trp Lys Ile Lys Ser Ser Lys Asn Ser Ala Ala Asn Arg
            180                 185                 190
Glu Leu Gln Lys Lys Leu Lys Val Lys Asp Asn Lys Lys Asn Arg Thr
        195                 200                 205
Lys Lys Lys Pro Thr Pro Lys Pro Pro Val Val Asp Glu Ala Gly Ser
    210                 215                 220
Gly Leu Asp Asn Gly Asp Phe Lys Val Thr Thr Pro Asp Thr Ser Thr
225                 230                 235                 240
Thr Gln His Asn Lys Val Ser Thr Ser Pro Lys Ile Thr Thr Ala Lys
                245                 250                 255
Pro Ile Asn Pro Arg Pro Ser Leu Pro Pro Asn Ser Asp Thr Ser Lys
            260                 265                 270
Glu Thr Ser Leu Thr Val Asn Lys Glu Thr Thr Val Glu Thr Lys Glu
        275                 280                 285
Thr Thr Thr Thr Asn Lys Gln Thr Ser Thr Asp Gly Lys Glu Lys Thr
    290                 295                 300
Thr Ser Ala Lys Glu Thr Gln Ser Ile Glu Lys Thr Ser Ala Lys Asp
305                 310                 315                 320
Leu Ala Pro Thr Ser Lys Val Leu Ala Lys Pro Thr Pro Lys Ala Glu
                325                 330                 335
Thr Thr Thr Lys Gly Pro Ala Leu Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
            340                 345                 350
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Ser Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
        355                 360                 365
Thr Thr Ile Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
    370                 375                 380
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
385                 390                 395                 400
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
                405                 410                 415
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro
            420                 425                 430
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr
        435                 440                 445
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys
    450                 455                 460
Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr
465                 470                 475                 480
Pro Glu Thr Pro Pro Pro Thr Thr Ser Glu Val Ser Thr Pro Thr Thr
                485                 490                 495
Thr Lys Glu Pro Thr Thr Ile His Lys Ser Pro Asp Glu Ser Thr Pro
            500                 505                 510
Glu Leu Ser Ala Glu Pro Thr Pro Lys Ala Leu Glu Asn Ser Pro Lys
        515                 520                 525
Glu Pro Gly Val Pro Thr Thr Lys Thr Pro Ala Ala Thr Lys Pro Glu
    530                 535                 540
Met Thr Thr Thr Ala Lys Asp Lys Thr Thr Glu Arg Asp Leu Arg Thr
545                 550                 555                 560
Thr Pro Glu Thr Thr Thr Ala Ala Pro Lys Met Thr Lys Glu Thr Ala
                565                 570                 575
Thr Thr Thr Glu Lys Thr Thr Glu Ser Lys Ile Thr Ala Thr Thr Thr
            580                 585                 590
Gln Val Thr Ser Thr Thr Thr Gln Asp Thr Thr Pro Phe Lys Ile Thr
        595                 600                 605
Thr Leu Lys Thr Thr Thr Leu Ala Pro Lys Val Thr Thr Thr Lys Lys
    610                 615                 620
Thr Ile Thr Thr Thr Glu Ile Met Asn Lys Pro Glu Glu Thr Ala Lys
625                 630                 635                 640
Pro Lys Asp Arg Ala Thr Asn Ser Lys Ala Thr Thr Pro Lys Pro Gln
                645                 650                 655
Lys Pro Thr Lys Ala Pro Lys Lys Pro Thr Ser Thr Lys Lys Pro Lys
            660                 665                 670
Thr Met Pro Arg Val Arg Lys Pro Lys Thr Thr Pro Thr Pro Arg Lys
        675                 680                 685
Met Thr Ser Thr Met Pro Glu Leu Asn Pro Thr Ser Arg Ile Ala Glu
    690                 695                 700
Ala Met Leu Gln Thr Thr Thr Arg Pro Asn Gln Thr Pro Asn Ser Lys
705                 710                 715                 720
Leu Val Glu Val Asn Pro Lys Ser Glu Asp Ala Gly Gly Ala Glu Gly
                725                 730                 735
Glu Thr Pro His Met Leu Leu Arg Pro His Val Phe Met Pro Glu Val
            740                 745                 750
Thr Pro Asp Met Asp Tyr Leu Pro Arg Val Pro Asn Gln Gly Ile Ile
        755                 760                 765
Ile Asn Pro Met Leu Ser Asp Glu Thr Asn Ile Cys Asn Gly Lys Pro
    770                 775                 780
Val Asp Gly Leu Thr Thr Leu Arg Asn Gly Thr Leu Val Ala Phe Arg
785                 790                 795                 800
Gly His Tyr Phe Trp Met Leu Ser Pro Phe Ser Pro Pro Ser Pro Ala
                805                 810                 815
Arg Arg Ile Thr Glu Val Trp Gly Ile Pro Ser Pro Ile Asp Thr Val
            820                 825                 830
Phe Thr Arg Cys Asn Cys Glu Gly Lys Thr Phe Phe Phe Lys Asp Ser
        835                 840                 845
Gln Tyr Trp Arg Phe Thr Asn Asp Ile Lys Asp Ala Gly Tyr Pro Lys
    850                 855                 860
Pro Ile Phe Lys Gly Phe Gly Gly Leu Thr Gly Gln Ile Val Ala Ala
865                 870                 875                 880
Leu Ser Thr Ala Lys Tyr Lys Asn Trp Pro Glu Ser Val Tyr Phe Phe
                885                 890                 895
Lys Arg Gly Gly Ser Ile Gln Gln Tyr Ile Tyr Lys Gln Glu Pro Val
            900                 905                 910
Gln Lys Cys Pro Gly Arg Arg Pro Ala Leu Asn Tyr Pro Val Tyr Gly
        915                 920                 925
Glu Met Thr Gln Val Arg Arg Arg Arg Phe Glu Arg Ala Ile Gly Pro
    930                 935                 940
Ser Gln Thr His Thr Ile Arg Ile Gln Tyr Ser Pro Ala Arg Leu Ala
945                 950                 955                 960
Tyr Gln Asp Lys Gly Val Leu His Asn Glu Val Lys Val Ser Ile Leu
                965                 970                 975
Trp Arg Gly Leu Pro Asn Val Val Thr Ser Ala Ile Ser Leu Pro Asn
            980                 985                 990
Ile Arg Lys Pro Asp Gly Tyr Asp  Tyr Tyr Ala Phe Ser  Lys Asp Gln
        995                 1000                 1005
Tyr Tyr  Asn Ile Asp Val Pro  Ser Arg Thr Ala Arg  Ala Ile Thr
    1010                 1015                 1020
Thr Arg  Ser Gly Gln Thr Leu  Ser Lys Val Trp Tyr  Asn Cys Pro
    1025                 1030                 1035
<210>16
<211>328
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>来源于合成cDNA盒-1的Lub：3 DNA插入片段和2个合成cDNA盒-2序列。
<400>16
gcgcgcccac aactccaaaa gagcccgcac ctaccacgac aaagtcagct cctactacgc     60
ccaaagagcc agcgccgacg actactaaag aaccggcacc caccacgcct aaagaaccag    120
cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc acaacaccaa    180
aggagccggc ccctacgact cctaaagaac cagcccctac tacgacaaag gagcctgcac    240
ccacaaccac gaagagcgca cccacaacac caaaggagcc ggcccctacg actcctaagg    300
aacccaaacc ggcaccaacc actccgga                                       328
<210>17
<211>108
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>由Lub：3 DNA插入片段编码的108个氨基酸(在SEQ ID NO：15中位于S373-E482之间有9个KEPAPTT序列)。
<400>17
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
        35                  40                  45
Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro
    50                  55                  60
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro
65                  70                  75                  80
Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
                85                  90                  95
Thr Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
            100                 105
<210>18
<211>3210
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>重组PRG4-Lub：4 cDNA构建体。
<400>18
atggcatgga aaacacttcc catttacctg ttgttgctgc tgtctgtttt cgtgattcag     60
caagtttcat ctcaagattt atcaagctgt gcagggagat gtggggaagg gtattctaga    120
gatgccacct gcaactgtga ttataactgt caacactaca tggagtgctg ccctgatttc    180
aagagagtct gcactgcgga gctttcctgt aaaggccgct gctttgagtc cttcgagaga    240
gggagggagt gtgactgcga cgcccaatgt aagaagtatg acaagtgctg tcccgattat    300
gagagtttct gtgcagaagt gcataatccc acatcaccac catcttcaaa gaaagcacct    360
ccaccttcag gagcatctca aaccatcaaa tcaacaacca aacgttcacc caaaccacca    420
aacaagaaga agactaagaa agttatagaa tcagaggaaa taacagaaga acattctgtt    480
tctgaaaatc aagagtcctc ctccagtagc agttcaagta gttcgtcgtc gacaatttgg    540
aaaatcaagt cttccaaaaa ttcagctgct aatagagaat tacagaagaa actcaaagta    600
aaagataaca agaagaacag aactaaaaag aaacctaccc ccaaaccacc agttgtagat    660
gaagctggaa gtggattgga caatggtgac ttcaaggtca caactcctga cacgtctacc    720
acccaacaca ataaagtcag cacatctccc aagatcacaa cagcaaaacc aataaatccc    780
agacccagtc ttccacctaa ttctgataca tctaaagaga cgtctttgac agtgaataaa    840
gagacaacag ttgaaactaa agaaactact acaacaaata aacagacttc aactgatgga    900
aaagagaaga ctacttccgc taaagagaca caaagtatag agaaaacatc tgctaaagat     960
ttagcaccca catctaaagt gctggctaaa cctacaccca aagctgaaac tacaaccaaa    1020
ggccctgctc tcaccactcc caaggagccc acgcccacca ctcccaagga gcctgcatct    1080
accacaccca aagagcccac acctaccacc atcaagagcg cgcccacaac tccaaaagag    1140
cccgcaccta ccacgacaaa gtcagctcct actacgccca aagagccagc gccgacgact    1200
actaaagaac cggcacccac cacgcctaaa gaaccagccc ctactacgac aaaggagcct    1260
gcacccacaa ccacgaagag cgcacccaca acaccaaagg agccggcccc tacgactcct    1320
aaagaaccag cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc    1380
acaacaccaa aggagccggc ccctacgact cctaaagaac cagcccctac tacgacaaag    1440
gagcctgcac ccacaaccac gaagagcgca cccacaacac caaaggagcc ggcccctacg    1500
actcctaagg aacccaaacc ggcaccaacc actccggaaa cacctcctcc aaccacttca    1560
gaggtctcta ctccaactac caccaaggag cctaccacta tccacaaaag ccctgatgaa    1620
tcaactcctg agctttctgc agaacccaca ccaaaagctc ttgaaaacag tcccaaggaa    1680
cctggtgtac ctacaactaa gacgccggcg gcgactaaac ctgaaatgac tacaacagct    1740
aaagacaaga caacagaaag agacttacgt actacacctg aaactacaac tgctgcacct    1800
aagatgacaa aagagacagc aactacaaca gaaaaaacta ccgaatccaa aataacagct    1860
acaaccacac aagtaacatc taccacaact caagatacca caccattcaa aattactact    1920
cttaaaacaa ctactcttgc acccaaagta actacaacaa aaaagacaat tactaccact    1980
gagattatga acaaacctga agaaacagct aaaccaaaag acagagctac taattctaaa    2040
gcgacaactc ctaaacctca aaagccaacc aaagcaccca aaaaacccac ttctaccaaa    2100
aagccaaaaa caatgcctag agtgagaaaa ccaaagacga caccaactcc ccgcaagatg    2160
acatcaacaa tgccagaatt gaaccctacc tcaagaatag cagaagccat gctccaaacc    2220
accaccagac ctaaccaaac tccaaactcc aaactagttg aagtaaatcc aaagagtgaa    2280
gatgcaggtg gtgctgaagg agaaacacct catatgcttc tcaggcccca tgtgttcatg    2340
cctgaagtta ctcccgacat ggattactta ccgagagtac ccaatcaagg cattatcatc    2400
aatcccatgc tttccgatga gaccaatata tgcaatggta agccagtaga tggactgact    2460
actttgcgca atgggacatt agttgcattc cgaggtcatt atttctggat gctaagtcca    2520
ttcagtccac catctccagc tcgcagaatt actgaagttt ggggtattcc ttcccccatt    2580
gatactgttt ttactaggtg caactgtgaa ggaaaaactt tcttctttaa ggattctcag    2640
tactggcgtt ttaccaatga tataaaagat gcagggtacc ccaaaccaat tttcaaagga    2700
tttggaggac taactggaca aatagtggca gcgctttcaa cagctaaata taagaactgg    2760
cctgaatctg tgtatttttt caagagaggt ggcagcattc agcagtatat ttataaacag    2820
gaacctgtac agaagtgccc tggaagaagg cctgctctaa attatccagt gtatggagaa    2880
atgacacagg ttaggagacg tcgctttgaa cgtgctatag gaccttctca aacacacacc    2940
atcagaattc aatattcacc tgccagactg gcttatcaag acaaaggtgt ccttcataat    3000
gaagttaaag tgagtatact gtggagagga cttccaaatg tggttacctc agctatatca    3060
ctgcccaaca tcagaaaacc tgacggctat gattactatg ccttttctaa agatcaatac    3120
tataacattg atgtgcctag tagaacagca agagcaatta ctactcgttc tgggcagacc    3180
ttatccaaag tctggtacaa ctgtccttaa                                     3210
<210>19
<211>1069
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>完整PRG4-LUB：4蛋白的氨基酸序列。
<400>19
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1               5                   10                  15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Gln Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly
            20                  25                  30
Arg Cys Gly Glu Gly Tyr Ser Arg Asp Ala Thr Cys Asn Cys Asp Tyr
        35                  40                  45
Asn Cys Gln His Tyr Met Glu Cys Cys Pro Asp Phe Lys Arg Val Cys
    50                  55                  60
Thr Ala Glu Leu Ser Cys Lys Gly Arg Cys Phe Glu Ser Phe Glu Arg
65                  70                  75                  80
Gly Arg Glu Cys Asp Cys Asp Ala Gln Cys Lys Lys Tyr Asp Lys Cys
                85                  90                  95
Cys Pro Asp Tyr Glu Ser Phe Cys Ala Glu Val His Asn Pro Thr Ser
            100                 105                 110
Pro Pro Ser Ser Lys Lys Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Ser Gln Thr
        115                 120                 125
Ile Lys Ser Thr Thr Lys Arg Ser Pro Lys Pro Pro Asn Lys Lys Lys
    130                 135                 140
Thr Lys Lys Val Ile Glu Ser Glu Glu Ile Thr Glu Glu His Ser Val
145                 150                 155                 160
Ser Glu Asn Gln Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Ile Trp Lys Ile Lys Ser Ser Lys Asn Ser Ala Ala Asn Arg
            180                 185                 190
Glu Leu Gln Lys Lys Leu Lys Val Lys Asp Asn Lys Lys Asn Arg Thr
        195                 200                 205
Lys Lys Lys Pro Thr Pro Lys Pro Pro Val Val Asp Glu Ala Gly Ser
    210                 215                 220
Gly Leu Asp Asn Gly Asp Phe Lys Val Thr Thr Pro Asp Thr Ser Thr
225                 230                 235                 240
Thr Gln His Asn Lys Val Ser Thr Ser Pro Lys Ile Thr Thr Ala Lys
                245                 250                 255
Pro Ile Asn Pro Arg Pro Ser Leu Pro Pro Asn Ser Asp Thr Ser Lys
            260                 265                 270
Glu Thr Ser Leu Thr Val Asn Lys Glu Thr Thr Val Glu Thr Lys Glu
        275                 280                 285
Thr Thr Thr Thr Asn Lys Gln Thr Ser Thr Asp Gly Lys Glu Lys Thr
    290                 295                 300
Thr Ser Ala Lys Glu Thr Gln Ser Ile Glu Lys Thr Ser Ala Lys Asp
305                 310                 315                 320
Leu Ala Pro Thr Ser Lys Val Leu Ala Lys Pro Thr Pro Lys Ala Glu
                325                 330                 335
Thr Thr Thr Lys Gly Pro Ala Leu Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
            340                 345                 350
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Ser Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
        355                 360                 365
Thr Thr Ile Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
    370                 375                 380
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
385                 390                 395                 400
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
                405                 410                 415
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro
            420                 425                 430
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr
        435                 440                 445
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys
    450                 455                 460
Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys
465                 470                 475                 480
Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu
                485                 490                 495
Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
            500                 505                 510
Glu Thr Pro Pro Pro Thr Thr Ser Glu Val Ser Thr Pro Thr Thr Thr
        515                 520                 525
Lys Glu Pro Thr Thr Ile His Lys Ser Pro Asp Glu Ser Thr Pro Glu
    530                 535                 540
Leu Ser Ala Glu Pro Thr Pro Lys Ala Leu Glu Asn Ser Pro Lys Glu
545                 550                 555                 560
Pro Gly Val Pro Thr Thr Lys Thr Pro Ala Ala Thr Lys Pro Glu Met
                565                 570                 575
Thr Thr Thr Ala Lys Asp Lys Thr Thr Glu Arg Asp Leu Arg Thr Thr
            580                 585                 590
Pro Glu Thr Thr Thr Ala Ala Pro Lys Met Thr Lys Glu Thr Ala Thr
        595                 600                 605
Thr Thr Glu Lys Thr Thr Glu Ser Lys Ile Thr Ala Thr Thr Thr Gln
    610                 615                 620
Val Thr Ser Thr Thr Thr Gln Asp Thr Thr Pro Phe Lys Ile Thr Thr
625                 630                 635                 640
Leu Lys Thr Thr Thr Leu Ala Pro Lys Val Thr Thr Thr Lys Lys Thr
                645                 650                 655
Ile Thr Thr Thr Glu Ile Met Asn Lys Pro Glu Glu Thr Ala Lys Pro
            660                 665                 670
Lys Asp Arg Ala Thr Asn Ser Lys Ala Thr Thr Pro Lys Pro Gln Lys
        675                 680                 685
Pro Thr Lys Ala Pro Lys Lys Pro Thr Ser Thr Lys Lys Pro Lys Thr
    690                 695                 700
Met Pro Arg Val Arg Lys Pro Lys Thr Thr Pro Thr Pro Arg Lys Met
705                 710                 715                 720
Thr Ser Thr Met Pro Glu Leu Asn Pro Thr Ser Arg Ile Ala Glu Ala
                725                 730                 735
Met Leu Gln Thr Thr Thr Arg Pro Asn Gln Thr Pro Asn Ser Lys Leu
            740                 745                 750
Val Glu Val Asn Pro Lys Ser Glu Asp Ala Gly Gly Ala Glu Gly Glu
        755                 760                 765
Thr Pro His Met Leu Leu Arg Pro His Val Phe Met Pro Glu Val Thr
    770                 775                 780
Pro Asp Met Asp Tyr Leu Pro Arg Val Pro Asn Gln Gly Ile Ile Ile
785                 790                 795                 800
Asn Pro Met Leu Ser Asp Glu Thr Asn Ile Cys Asn Gly Lys Pro Val
                805                 810                 815
Asp Gly Leu Thr Thr Leu Arg Asn Gly Thr Leu Val Ala Phe Arg Gly
            820                 825                 830
His Tyr Phe Trp Met Leu Ser Pro Phe Ser Pro Pro Ser Pro Ala Arg
        835                 840                 845
Arg Ile Thr Glu Val Trp Gly Ile Pro Ser Pro Ile Asp Thr Val Phe
    850                 855                 860
Thr Arg Cys Asn Cys Glu Gly Lys Thr Phe Phe Phe Lys Asp Ser Gln
865                 870                 875                 880
Tyr Trp Arg Phe Thr Asn Asp Ile Lys Asp Ala Gly Tyr Pro Lys Pro
                885                 890                 895
Ile Phe Lys Gly Phe Gly Gly Leu Thr Gly Gln Ile Val Ala Ala Leu
            900                 905                 910
Ser Thr Ala Lys Tyr Lys Asn Trp Pro Glu Ser Val Tyr Phe Phe Lys
        9l5                 920                 925
Arg Gly Gly Ser Ile Gln Gln Tyr Ile Tyr Lys Gln Glu Pro Val Gln
    930                 935                 940
Lys Cys Pro Gly Arg Arg Pro Ala Leu Asn Tyr Pro Val Tyr Gly Glu
945                 950                 955                 960
Met Thr Gln Val Arg Arg Arg Arg Phe Glu Arg Ala Ile Gly Pro Ser
                965                 970                 975
Gln Thr His Thr Ile Arg Ile Gln Tyr Ser Pro Ala Arg Leu Ala Tyr
            980                 985                 990
Gln Asp Lys Gly Val Leu His Asn  Glu Val Lys Val Ser  Ile Leu Trp
        995                 1000                 1005
Arg Gly  Leu Pro Asn Val Val  Thr Ser Ala Ile Ser  Leu Pro Asn
    1010                 1015                 1020
Ile Arg  Lys Pro Asp Gly Tyr  Asp Tyr Tyr Ala Phe  Ser Lys Asp
    1025                 1030                 1035
Gln Tyr  Tyr Asn Ile Asp Val  Pro Ser Arg Thr Ala  Arg Ala Ile
    1040                 1045                 1050
Thr Thr  Arg Ser Gly Gln Thr  Leu Ser Lys Val Trp  Tyr Asn Cys
    1055                 1060                 1065
Pro
<210>20
<211>421
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>来源于cDNA盒-1的Lub：4 DNA插入片段和3个合成cDNA盒-2序列。
<400>20
gcgcgcccac aactccaaaa gagcccgcac ctaccacgac aaagtcagct cctactacgc     60
ccaaagagcc agcgccgacg actactaaag aaccggcacc caccacgcct aaagaaccag    120
cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc acaacaccaa    180
aggagccggc ccctacgact cctaaagaac cagcccctac tacgacaaag gagcctgcac    240
ccacaaccac gaagagcgca cccacaacac caaaggagcc ggcccctacg actcctaaag    300
aaccagcccc tactacgaca aaggagcctg cacccacaac cacgaagagc gcacccacaa    360
caccaaagga gccggcccct acgactccta aggaacccaa accggcacca accactccgg    420
a                                                                    421
<210>21
<211>139
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>由Lub：4 DNA插入片段编码的139个氨基酸(在SEQ ID NO：19中位于S373-E513之间有12个KEPAPTT序列)。
<400>21
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
        35                  40                  45
Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro
    50                  55                  60
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro
65                  70                  75                  80
Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
                85                  90                  95
Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr
            100                 105                 110
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
        115                 120                 125
Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
    130                 135
<210>22
<211>3303
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>重组PRG4-Lub：5 cDNA构建体。
<400>22
atggcatgga aaacacttcc catttacctg ttgttgctgc tgtctgtttt cgtgattcag     60
caagtttcat ctcaagattt atcaagctgt gcagggagat gtggggaagg gtattctaga    120
gatgccacct gcaactgtga ttataactgt caacactaca tggagtgctg ccctgatttc    180
aagagagtct gcactgcgga gctttcctgt aaaggccgct gctttgagtc cttcgagaga    240
gggagggagt gtgactgcga cgcccaatgt aagaagtatg acaagtgctg tcccgattat    300
gagagtttct gtgcagaagt gcataatccc acatcaccac catcttcaaa gaaagcacct    360
ccaccttcag gagcatctca aaccatcaaa tcaacaacca aacgttcacc caaaccacca    420
aacaagaaga agactaagaa agttatagaa tcagaggaaa taacagaaga acattctgtt    480
tctgaaaatc aagagtcctc ctccagtagc agttcaagta gttcgtcgtc gacaatttgg     540
aaaatcaagt cttccaaaaa ttcagctgct aatagagaat tacagaagaa actcaaagta     600
aaagataaca agaagaacag aactaaaaag aaacctaccc ccaaaccacc agttgtagat     660
gaagctggaa gtggattgga caatggtgac ttcaaggtca caactcctga cacgtctacc     720
acccaacaca ataaagtcag cacatctccc aagatcacaa cagcaaaacc aataaatccc     780
agacccagtc ttccacctaa ttctgataca tctaaagaga cgtctttgac agtgaataaa     840
gagacaacag ttgaaactaa agaaactact acaacaaata aacagacttc aactgatgga     900
aaagagaaga ctacttccgc taaagagaca caaagtatag agaaaacatc tgctaaagat     960
ttagcaccca catctaaagt gctggctaaa cctacaccca aagctgaaac tacaaccaaa    1020
ggccctgctc tcaccactcc caaggagccc acgcccacca ctcccaagga gcctgcatct    1080
accacaccca aagagcccac acctaccacc atcaagagcg cgcccacaac tccaaaagag    1140
cccgcaccta ccacgacaaa gtcagctcct actacgccca aagagccagc gccgacgact    1200
actaaagaac cggcacccac cacgcctaaa gaaccagccc ctactacgac aaaggagcct    1260
gcacccacaa ccacgaagag cgcacccaca acaccaaagg agccggcccc tacgactcct    1320
aaagaaccag cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc    1380
acaacaccaa aggagccggc ccctacgact cctaaagaac cagcccctac tacgacaaag    1440
gagcctgcac ccacaaccac gaagagcgca cccacaacac caaaggagcc ggcccctacg    1500
actcctaaag aaccagcccc tactacgaca aaggagcctg cacccacaac cacgaagagc    1560
gcacccacaa caccaaagga gccggcccct acgactccta aggaacccaa accggcacca    1620
accactccgg aaacacctcc tccaaccact tcagaggtct ctactccaac taccaccaag    1680
gagcctacca ctatccacaa aagccctgat gaatcaactc ctgagctttc tgcagaaccc    1740
acaccaaaag ctcttgaaaa cagtcccaag gaacctggtg tacctacaac taagacgccg    1800
gcggcgacta aacctgaaat gactacaaca gctaaagaca agacaacaga aagagactta    1860
cgtactacac ctgaaactac aactgctgca cctaagatga caaaagagac agcaactaca    1920
acagaaaaaa ctaccgaatc caaaataaca gctacaacca cacaagtaac atctaccaca    1980
actcaagata ccacaccatt caaaattact actcttaaaa caactactct tgcacccaaa    2040
gtaactacaa caaaaaagac aattactacc actgagatta tgaacaaacc tgaagaaaca    2100
gctaaaccaa aagacagagc tactaattct aaagcgacaa ctcctaaacc tcaaaagcca    2160
accaaagcac ccaaaaaacc cacttctacc aaaaagccaa aaacaatgcc tagagtgaga    2220
aaaccaaaga cgacaccaac tccccgcaag atgacatcaa caatgccaga attgaaccct    2280
acctcaagaa tagcagaagc catgctccaa accaccacca gacctaacca aactccaaac    2340
tccaaactag ttgaagtaaa tccaaagagt gaagatgcag gtggtgctga aggagaaaca    2400
cctcatatgc ttctcaggcc ccatgtgttc atgcctgaag ttactcccga catggattac    2460
ttaccgagag tacccaatca aggcattatc atcaatccca tgctttccga tgagaccaat    2520
atatgcaatg gtaagccagt agatggactg actactttgc gcaatgggac attagttgca    2580
ttccgaggtc attatttctg gatgctaagt ccattcagtc caccatctcc agctcgcaga    2640
attactgaag tttggggtat tccttccccc attgatactg tttttactag gtgcaactgt    2700
gaaggaaaaa ctttcttctt taaggattct cagtactggc gttttaccaa tgatataaaa    2760
gatgcagggt accccaaacc aattttcaaa ggatttggag gactaactgg acaaatagtg    2820
gcagcgcttt caacagctaa atataagaac tggcctgaat ctgtgtattt tttcaagaga    2880
ggtggcagca ttcagcagta tatttataaa caggaacctg tacagaagtg ccctggaaga    2940
aggcctgctc taaattatcc agtgtatgga gaaatgacac aggttaggag acgtcgcttt    3000
gaacgtgcta taggaccttc tcaaacacac accatcagaa ttcaatattc acctgccaga    3060
ctggcttatc aagacaaagg tgtccttcat aatgaagtta aagtgagtat actgtggaga    3120
ggacttccaa atgtggttac ctcagctata tcactgccca acatcagaaa acctgacggc    3180
tatgattact atgccttttc taaagatcaa tactataaca ttgatgtgcc tagtagaaca    3240
gcaagagcaa ttactactcg ttctgggcag accttatcca aagtctggta caactgtcct    3300
taa                                                                  3303
<210>23
<211>1100
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>完整PRG4-LUB：5蛋白的氨基酸序列。
<400>23
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1               5                   10                  15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Gln Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly
            20                  25                  30
Arg Cys Gly Glu Gly Tyr Ser Arg Asp Ala Thr Cys Asn Cys Asp Tyr
        35                  40                  45
Asn Cys Gln His Tyr Met Glu Cys Cys Pro Asp Phe Lys Arg Val Cys
    50                  55                  60
Thr Ala Glu Leu Ser Cys Lys Gly Arg Cys Phe Glu Ser Phe Glu Arg
65                  70                  75                  80
Gly Arg Glu Cys Asp Cys Asp Ala Gln Cys Lys Lys Tyr Asp Lys Cys
                85                  90                  95
Cys Pro Asp Tyr Glu Ser Phe Cys Ala Glu Val His Asn Pro Thr Ser
            100                 105                 110
Pro Pro Ser Ser Lys Lys Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Ser Gln Thr
        115                 120                 125
Ile Lys Ser Thr Thr Lys Arg Ser Pro Lys Pro Pro Asn Lys Lys Lys
    130                 135                 140
Thr Lys Lys Val Ile Glu Ser Glu Glu Ile Thr Glu Glu His Ser Val
145                 150                 155                 160
Ser Glu Asn Gln Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Ile Trp Lys Ile Lys Ser Ser Lys Asn Ser Ala Ala Asn Arg
            180                 185                 190
Glu Leu Gln Lys Lys Leu Lys Val Lys Asp Asn Lys Lys Asn Arg Thr
        195                 200                 205
Lys Lys Lys Pro Thr Pro Lys Pro Pro Val Val Asp Glu Ala Gly Ser
    210                 215                 220
Gly Leu Asp Asn Gly Asp Phe Lys Val Thr Thr Pro Asp Thr Ser Thr
225                 230                 235                 240
Thr Gln His Asn Lys Val Ser Thr Ser Pro Lys Ile Thr Thr Ala Lys
                245                 250                 255
Pro Ile Asn Pro Arg Pro Ser Leu Pro Pro Asn Ser Asp Thr Ser Lys
            260                 265                 270
Glu Thr Ser Leu Thr Val Asn Lys Glu Thr Thr Val Glu Thr Lys Glu
        275                 280                 285
Thr Thr Thr Thr Asn Lys Gln Thr Ser Thr Asp Gly Lys Glu Lys Thr
    290                 295                 300
Thr Ser Ala Lys Glu Thr Gln Ser Ile Glu Lys Thr Ser Ala Lys Asp
305                 310                 315                 320
Leu Ala Pro Thr Ser Lys Val Leu Ala Lys Pro Thr Pro Lys Ala Glu
                325                 330                 335
Thr Thr Thr Lys Gly Pro Ala Leu Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
            340                 345                 350
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Ser Thr Thr Pro Lys Glu Pro Thr Pro
        355                 360                 365
Thr Thr Ile Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
    370                 375                 380
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
385                 390                 395                 400
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
                405                 410                 415
Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro
            420                 425                 430
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr
        435                 440                 445
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys
    450                 455                 460
Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys
465                 470                 475                 480
Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu
                485                 490                 495
Pro Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu
            500                 505                 510
Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro
        515                 520                 525
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro Glu
    530                 535                 540
Thr Pro Pro Pro Thr Thr Ser Glu Val Ser Thr Pro Thr Thr Thr Lys
545                 550                 555                 560
Glu Pro Thr Thr Ile His Lys Ser Pro Asp Glu Ser Thr Pro Glu Leu
                565                 570                 575
Ser Ala Glu Pro Thr Pro Lys Ala Leu Glu Asn Ser Pro Lys Glu Pro
            580                 585                 590
Gly Val Pro Thr Thr Lys Thr Pro Ala Ala Thr Lys Pro Glu Met Thr
        595                 600                 605
Thr Thr Ala Lys Asp Lys Thr Thr Glu Arg Asp Leu Arg Thr Thr Pro
    610                 615                 620
Glu Thr Thr Thr Ala Ala Pro Lys Met Thr Lys Glu Thr Ala Thr Thr
625                 630                 635                 640
Thr Glu Lys Thr Thr Glu Ser Lys Ile Thr Ala Thr Thr Thr Gln Val
                645                 650                 655
Thr Ser Thr Thr Thr Gln Asp Thr Thr Pro Phe Lys Ile Thr Thr Leu
            660                 665                 670
Lys Thr Thr Thr Leu Ala Pro Lys Val Thr Thr Thr Lys Lys Thr Ile
        675                 680                 685
Thr Thr Thr Glu Ile Met Asn Lys Pro Glu Glu Thr Ala Lys Pro Lys
    690                 695                 700
Asp Arg Ala Thr Asn Ser Lys Ala Thr Thr Pro Lys Pro Gln Lys Pro
705                 710                 715                 720
Thr Lys Ala Pro Lys Lys Pro Thr Ser Thr Lys Lys Pro Lys Thr Met
                725                 730                 735
Pro Arg Val Arg Lys Pro Lys Thr Thr Pro Thr Pro Arg Lys Met Thr
            740                 745                 750
Ser Thr Met Pro Glu Leu Asn Pro Thr Ser Arg Ile Ala Glu Ala Met
        755                 760                 765
Leu Gln Thr Thr Thr Arg Pro Asn Gln Thr Pro Asn Ser Lys Leu Val
    770                 775                 780
Glu Val Asn Pro Lys Ser Glu Asp Ala Gly Gly Ala Glu Gly Glu Thr
785                 790                 795                 800
Pro His Met Leu Leu Arg Pro His Val Phe Met Pro Glu Val Thr Pro
                805                 810                 815
Asp Met Asp Tyr Leu Pro Arg Val Pro Asn Gln Gly Ile Ile Ile Asn
            820                 825                 830
Pro Met Leu Ser Asp Glu Thr Asn Ile Cys Asn Gly Lys Pro Val Asp
        835                 840                 845
Gly Leu Thr Thr Leu Arg Asn Gly Thr Leu Val Ala Phe Arg Gly His
    850                 855                 860
Tyr Phe Trp Met Leu Ser Pro Phe Ser Pro Pro Ser Pro Ala Arg Arg
865                 870                 875                 880
Ile Thr Glu Val Trp Gly Ile Pro Ser Pro Ile Asp Thr Val Phe Thr
                885                 890                 895
Arg Cys Asn Cys Glu Gly Lys Thr Phe Phe Phe Lys Asp Ser Gln Tyr
            900                 905                 910
Trp Arg Phe Thr Asn Asp Ile Lys Asp Ala Gly Tyr Pro Lys Pro Ile
        915                 920                 925
Phe Lys Gly Phe Gly Gly Leu Thr Gly Gln Ile Val Ala Ala Leu Ser
    930                 935                 940
Thr Ala Lys Tyr Lys Asn Trp Pro Glu Ser Val Tyr Phe Phe Lys Arg
945                 950                 955                 960
Gly Gly Ser Ile Gln Gln Tyr Ile Tyr Lys Gln Glu Pro Val Gln Lys
                965                 970                 975
Cys Pro Gly Arg Arg Pro Ala Leu Asn Tyr Pro Val Tyr Gly Glu Met
            980                 985                 990
Thr Gln Val Arg Arg Arg Arg Phe  Glu Arg Ala Ile Gly  Pro Ser Gln
        995                 1000                 1005
Thr His  Thr Ile Arg Ile Gln  Tyr Ser Pro Ala Arg  Leu Ala Tyr
    1010                 1015                 1020
Gln Asp  Lys Gly Val Leu His  Asn Glu Val Lys Val  Ser Ile Leu
    1025                 1030                 1035
Trp Arg  Gly Leu Pro Asn Val  Val Thr Ser Ala Ile  Ser Leu Pro
    1040                 1045                 1050
Asn Ile  Arg Lys Pro Asp Gly  Tyr Asp Tyr Tyr Ala  Phe Ser Lys
    1055                 1060                 1065
Asp Gln  Tyr Tyr Asn Ile Asp  Val Pro Ser Arg Thr  Ala Arg Ala
    1070                 1075                 1080
Ile Thr  Thr Arg Ser Gly Gln  Thr Leu Ser Lys Val  Trp Tyr Asn
    1085                 1090                 1095
Cys Pro
    1100
<210>24
<211>514
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>来源于cDNA盒-1的Lub：5 DNA插入片段和4个合成cDNA盒-2序列。
<400>24
gcgcgcccac aactccaaaa gagcccgcac ctaccacgac aaagtcagct cctactacgc     60
ccaaagagcc agcgccgacg actactaaag aaccggcacc caccacgcct aaagaaccag    120
cccctactac gacaaaggag cctgcaccca caaccacgaa gagcgcaccc acaacaccaa    180
aggagccggc ccctacgact cctaaagaac cagcccctac tacgacaaag gagcctgcac    240
ccacaaccac gaagagcgca cccacaacac caaaggagcc ggcccctacg actcctaaag    300
aaccagcccc tactacgaca aaggagcctg cacccacaac cacgaagagc gcacccacaa    360
caccaaagga gccggcccct acgactccta aagaaccagc ccctactacg acaaaggagc    420
ctgcacccac aaccacgaag agcgcaccca caacaccaaa ggagccggcc cctacgactc    480
ctaaggaacc caaaccggca ccaaccactc cgga                                514
<210>25
<211>170
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>由Lub：5 DNA插入片段编码的170个氨基酸(在SEQ ID NO：23中位于S373-E544之间有15个KEPAPTT序列)。
<400>25
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
        35                  40                  45
Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro
    50                  55                  60
Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro
65                  70                  75                  80
Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr
                85                  90                  95
Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr
            100                 105                 110
Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
        115                 120                 125
Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr
    130                 135                 140
Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro
145                 150                 155                 160
Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
                165                 170
<210>26
<211>45
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优选PRG4-LUB：N蛋白中的氨基酸序列″APTTPKEPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTTKEPAPTTPKEPAPTTTK″(45个氨基酸)
<400>26
Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala
1               5                   10                  15
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala
            20                  25                  30
Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys
        35                  40                  45
<210>27
<211>31
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在优选PRG4-LUB：N蛋白中重复N-1次的氨基酸序列″KEPAPTTTKEPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTP″(31个氨基酸)
<400>27
Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr
1               5                   10                  15
Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu Pro Ala Pro Thr Thr Pro
            20                  25                  30
<210>28
<211>22
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在优选PRG4-LUB：N蛋白中使SEQ ID NO：26与SEQ ID NO：27的(N-2)个重复连接的氨基酸序列″EPAPTTTKSAPTTPKEPAPTTP″(22个氨基酸)，其中N＝3或更高数值。
<400>28
Glu Pro Ala Pro Thr Thr Thr Lys Ser Ala Pro Thr Thr Pro Lys Glu
1               5                   10                  15
Pro Ala Pro Thr Thr Pro
            20
<210>29
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>优选PRG4-LUB：N蛋白中的氨基酸序列″KEPKPAPTTP″(10个氨基酸)，其中N＝2或更高数值。
<400>29
Lys Glu Pro Lys Pro Ala Pro Thr Thr Pro
1               5                   10

Claims (32)

1.分离的蛋白，包括SEQ ID NOS：9、13、17、21或25。
2.分离的蛋白，包括与SEQ ID NO：27的N-2个重复连接的SEQID NO：26，其中N为3-200的整数。
3.权利要求2所述的蛋白，其中N为5-50的整数。
4.权利要求2所述的蛋白，其中N为10-30的整数。
5.分离的蛋白，包括SEQ ID NO：26加SEQ ID NO：28加[SEQ IDNO：27的N-2个重复]加SEQ ID NO：29，其中N为10-30的整数。
6.分离的多核苷酸，含有编码权利要求1所述蛋白的核酸序列。
7.分离的多核苷酸，含有编码权利要求2所述蛋白的核酸序列。
8.分离的多核苷酸，含有编码权利要求3所述蛋白的核酸序列。
9.分离的多核苷酸，含有编码权利要求4所述蛋白的核酸序列。
10.分离的多核苷酸，含有编码权利要求5所述蛋白的核酸序列。
11.分离的蛋白，包括SEQ ID NOS：7、11、15、19或23。
12.分离的多核苷酸，含有编码权利要求11所述蛋白的核酸序列。
13.权利要求6所述的多核苷酸，其中该多核苷酸包括SEQ IDNOS：8、12、16、20或24。
14.权利要求12所述的多核苷酸，其中该多核苷酸包括SEQ IDNOS：6、10、14、18或22。
15.分离的多核苷酸，包括与SEQ ID NOS：6、10、14、18或22在序列的全长上具有至少80％同一性的多核苷酸。
16.权利要求15所述的多核苷酸，包括具有至少90％同一性的多核苷酸。
17.权利要求15所述的多核苷酸，包括具有至少95％同一性的多核苷酸。
18.权利要求15所述的多核苷酸，包括具有至少99％同一性的多核苷酸。
19.权利要求1或2所述的蛋白，其中该蛋白与β-(1-3)-Gal-GalNac为O连接。
20.组合物，含有药学可接受载体中的治疗有效量的权利要求19所述的蛋白。
21.权利要求20所述的组合物，还包括乙酰透明质酸或hylan。
22.治疗被试者的方法，包括：
获得权利要求20所述的组合物；和
对被试者的组织施用该组合物。
23.权利要求22所述的方法，其中所述组织选自软骨、滑膜、半月板、腱、腹膜、心包和胸膜。
24.权利要求23所述的方法，其中所述组织为软骨。
25.权利要求22所述的方法，还包括选自下列的步骤：向被试者提供麻醉剂；向被试者提供抗炎症药物；向被试者提供抗生素；从被试者抽吸液体；清洗被试者的组织；并对被试者的组织成像。
26.权利要求22所述的方法，其中被试者选自小鼠、大鼠、猫、狗、马和人。
27.权利要求26所述的方法，其中被试者为人。
28.表达载体，含有与表达控制序列可操作连接的权利要求6或7所述的多核苷酸。
29.制备重组蛋白的方法，包括：
在液体培养基内培养由权利要求28所述的表达载体转化的细胞；并
从该培养基中收集重组蛋白。
30.权利要求29所述的方法，其中蛋白收集步骤还包括：
通过膜过滤培养基使所述蛋白浓缩；
从膜上收集被截留的蛋白；并
将收集到的蛋白溶解在含有浓度范围为0.1-2.0M的L-精氨酸盐酸盐的缓冲盐溶液中。
31.权利要求30所述的方法，其中L-精氨酸盐酸盐的浓度为0.5M。
32.对权利要求1或2所述的蛋白具有特异性的分离抗体。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105664136A (zh) * 2008-05-07 2016-06-15 加利福尼亚大学董事会 眼表润滑的治疗性补充和富集
CN113573724A (zh) * 2019-01-15 2021-10-29 康奈尔大学 重组润滑素和组合物以及其使用方法

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6743774B1 (en) * 1999-04-23 2004-06-01 Rhode Island Hospital Tribonectins
CA2575086A1 (en) * 2004-07-23 2006-02-02 Mucosal Therapeutics Llc Compositions and methods for viscosupplementation
US20090068247A1 (en) * 2007-09-12 2009-03-12 Mucosal Therapeutics Biocompatible devices coated with a tribonectin and methods for their production
US20090104148A1 (en) * 2007-09-18 2009-04-23 Jay Gregory D Treatment and prevention of joint disease
US8506944B2 (en) 2008-05-07 2013-08-13 The Regents Of The University Of California Replenishment and enrichment of ocular surface lubrication
US8980840B2 (en) 2009-01-13 2015-03-17 Schepens Eye Research Institute Therapeutic modulation of vaginal epithelium boundary lubrication
WO2010135736A2 (en) * 2009-05-22 2010-11-25 Singularis Inc. Application and uses of prg4 and therapeutic modulation thereof
ES2627103T3 (es) * 2010-01-19 2017-07-26 Lubris Llc Composiciones de cuidado bucal y métodos
US8716204B2 (en) 2010-07-27 2014-05-06 Zimmer, Inc. Synthetic synovial fluid compositions and methods for making the same
US20130116186A1 (en) * 2011-10-04 2013-05-09 Rhode Island Hospital, A Lifespan Partner Lubricin injections to maintain cartilage health
EP2948553B1 (en) 2013-01-25 2020-04-01 Baylor College Of Medicine A helper-dependent adenoviral gene therapy delivery and expression system
US20150010606A1 (en) * 2013-07-08 2015-01-08 Arthrex, Inc. Intra-articular injection and implant attachment of molecule consisting of lubricin and extracellular superoxide dismutase or hyaluronic acid and extracellular superoxide dismutase
WO2015057993A1 (en) * 2013-10-16 2015-04-23 Ensisheim Partners Llc Protein-specific formulations
WO2015060935A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Lubris, Llc Control of rheological properties of mixed hyaluronate/lubricin solutions
AU2014354859B2 (en) 2013-11-26 2020-04-09 Lubris Llc Compositions and methods for inhibiting intercellular interactions
ES2808199T3 (es) 2015-01-26 2021-02-25 Lubris Llc Uso de PRG4 como un agente antiinflamatorio
AR108683A1 (es) 2016-01-13 2018-09-19 Merial Inc Vectores aav recombinantes que expresan genes osteoprotectores que incluyen has2 y lubricina, de utilidad en el tratamiento de la osteoartritis y afecciones articulares relacionadas en mamíferos
US11028410B2 (en) 2016-01-27 2021-06-08 Just-Evotec Biologics, Inc. Hybrid promoter and uses thereof
WO2019246522A1 (en) * 2018-06-21 2019-12-26 Lubris Llc Lubricin for use in wound healing
BR112022016481A2 (pt) * 2020-02-24 2022-10-25 Novartis Ag Purificação de polipeptídeos recombinantemente produzidos
IT202000022636A1 (it) 2020-09-25 2022-03-25 Ente Ospedaliero Specializzato In Gastroenterologia Istituto Nazionale Di Ricovero E Cura A Caratter “terapia di combinazione di sorafenib e/o regorafenib con la proteina ricombinante umana proteoglicano-4 per il trattamento dell'epatocarcinoma”

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2734862A (en) 1956-02-14 Synthetic casein fiber elastic grease
US2487377A (en) 1948-04-17 1949-11-08 Socony Vacuum Oil Co Inc Lubricant
US2878184A (en) 1953-12-29 1959-03-17 Rockwell Mfg Co Hydrocarbon resistant glycerol base lubricant
AR207237A1 (es) 1974-02-25 1976-09-22 Thomas A Procedimiento para obtener extractos biologicos estables liofilizados solubles constituidos por complejos proteicos termorresistentes
EP0050644B1 (en) 1980-04-25 1985-09-18 A/S Orthana Kemisk Fabrik Sterilized, preserved, stable mucine-containing solutions and sterilization method
US5403592A (en) 1987-08-25 1995-04-04 Macnaught Pty Limited Lubricant composition for rheumatism
GB8803697D0 (en) 1988-02-17 1988-03-16 Deltanine Research Ltd Clinical developments using amniotic membrane cells
US5510418A (en) 1988-11-21 1996-04-23 Collagen Corporation Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates
US5260417A (en) 1989-04-03 1993-11-09 Genetics Institute, Inc. Megakaryocyte growth promoting activity protein
US6433142B1 (en) 1989-08-08 2002-08-13 Genetics Institute, Llc Megakaryocyte stimulating factors
US5326558A (en) 1989-08-08 1994-07-05 Genetics Institute, Inc. Megakaryocytopoietic factor
CA2060223C (en) 1991-02-12 1999-07-20 Clarence C. Lee Injectable medical lubricating fluid composition and method of use
US5605938A (en) 1991-05-31 1997-02-25 Gliatech, Inc. Methods and compositions for inhibition of cell invasion and fibrosis using dextran sulfate
CN1107891A (zh) 1994-03-04 1995-09-06 上海贝特生物技术有限公司 人促巨核细胞生成素及其分离纯化和基因克隆方法及应用
US5515590A (en) 1994-07-19 1996-05-14 University Of Kentucky Research Foundation Method for reducing the generation of wear particulates from an implant
US5709020A (en) 1994-07-19 1998-01-20 University Of Kentucky Research Foundation Method for reducing the generation of wear particulates from an implant
US5510122A (en) 1994-09-28 1996-04-23 The Research Foundation Of State University Of New York Preparation and use of whole saliva
US6960562B2 (en) 1999-04-23 2005-11-01 Rhode Island Hospital, A Lifespan Partner Tribonectin polypeptides and uses thereof
US6743774B1 (en) 1999-04-23 2004-06-01 Rhode Island Hospital Tribonectins
US7001881B1 (en) 1999-04-23 2006-02-21 Rhode Island Hospital Tribonectins
AU6366100A (en) * 1999-07-23 2001-02-13 Case Western Reserve University Novel methods and reagents for the treatment of osteoarthritis
US20030180948A1 (en) 2000-12-29 2003-09-25 Hutchins Jeff T. Superficial zone protein and methods of making and using same
EP1440981A3 (en) * 2003-01-21 2005-11-23 Research Association for Biotechnology Full-length human cdna

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105664136A (zh) * 2008-05-07 2016-06-15 加利福尼亚大学董事会 眼表润滑的治疗性补充和富集
CN113573724A (zh) * 2019-01-15 2021-10-29 康奈尔大学 重组润滑素和组合物以及其使用方法

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