CN111235044B

CN111235044B - 合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法及用途

Info

Publication number: CN111235044B
Application number: CN201911424045.0A
Authority: CN
Inventors: 宋浩; 孙鸿; 杨景丽
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2019-12-31
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2022-01-04
Anticipated expiration: 2039-12-31
Also published as: CN111235044A

Abstract

本发明公开了合成δ‑生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法及用途，方法为：将外源基因hpd,hpt和vte1整合到酿酒酵母BY4742菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株VE01；在重组菌株VE01基因组δ位点整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重组菌株VE02，本发明构建的一种合成δ‑生育三烯酚重组酿酒酵母菌株，能够以葡萄糖为碳源重头合成δ‑生育三烯酚，代替植物提取的方法。这种利用微生物合成δ‑生育三烯酚的方法的操作简便，同时能得到产量高的δ‑生育三烯酚。

Description

合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法及用途

技术领域

本发明涉及生物合成技术领域，更具体的说是涉及一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法。

背景技术

维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。早在20世纪20年代就被人们发现，Evans和他的同事在研究生殖过程中发现，酸败的猪油可以引起大鼠的不孕症。在1936年分离出结晶体，1938年被瑞士化学家人工合成。维生素E包含一组八个结构相关的生育酚(tocopherols)和生育三烯酚(tocotrienols)，早期，因为生育三烯酚相比生育酚来说有很低的生物活性，对其研究较少。近来研究表明，生育三烯酚具有生育酚所没有的功能，如神经元保护作用以及降低胆固醇等作用。且生育三烯酚具有较强的抗肿瘤活性,可以在体外及体内抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期和抑制血管生成。具有很好的临床应用前景。δ-生育三烯酚是维生素E的一种异构体，由于其潜在的多样化生物医学应用，例如抗癌活性，预防骨质疏松症和降低胆固醇，最近受到了广泛关注。

到目前为止，根据关于维生素E市场前景的报告，市场上维生素E约80％来自化学合成，20％来自植物或种子的提取。然而，化学合成维生素E的过程中使用了有毒的催化剂，使得该过程对环境不友好，不可持续。然而，δ-生育三烯酚主要是从油棕和大米中提取的，很少有人对其微生物的生物合成进行研究。工程酿酒酵母可以作为生产δ-生育三烯酚的替代和有前途的方式，代替植物中的提取方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株。

本发明的第二个目的是提供一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株的构建方法。

本发明的第三个目的是重组酿酒酵母菌株生产δ-生育三烯酚的用途。

本发明的技术方案概述如下：

合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株的构建方法，包括如下步骤：将外源基因hpd,hpt和vte1整合到酿酒酵母BY4742菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株VE01；在重组菌株VE01基因组δ位点整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重组菌株VE02,所述hpd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；hpt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；vte1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；thmg1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；ggppssa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

上述方法构建的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株。

合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株生产δ-生育三烯酚的用途，包括如下步骤：将权利要求2的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE02在发酵培养基中培养发酵，获得δ-生育三烯酚，所述发酵培养基的配方为35.66g/L葡萄糖、24.46g/L蛋白胨、14.01g/L酵母浸粉，余量为水。

本发明的优点：

本发明构建的一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株，能够以葡萄糖为碳源重头合成δ-生育三烯酚，代替植物提取的方法。这种利用微生物合成δ-生育三烯酚的方法的操作简便，同时能得到产量高的δ-生育三烯酚。

附图说明

图1为酿酒酵母中的δ-生育三烯酚合成路径。

图2为合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE01产量图。

图3为合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE02产量图。

图4为发酵条件优化后重组酿酒酵母菌株VE02合成δ-生育三烯酚产量图。

具体实施方式

原始菌株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae BY4742，于2016年9月在ATCC官网购买(https://www.atcc.org/products/all/201389.aspx)。

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株的构建方法,包括如下步骤：利用rDNA位点特异性同源重组的方法将外源基因hpd,hpt和vte1三个基因的表达盒整合到酵母(Saccharomyces cerevisiae BY4742)基因组rDNA位点，得到重组菌株VE01。

在重组菌株VE01基因组δ位点整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重组菌株VE02。

hpd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；hpt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；vte1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；thmg1基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.10所示；ggppssa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

具体步骤为：

(1)合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE01的构建方法，包括如下步骤：

从NCBI数据库获得Pseudomonas putida KT2440来源的基因hpd，Synechocystissp.PCC6803来源的基因hpt和Arabidopsis thaliana(拟南芥)来源的基因vte1的氨基酸序列，通过密码子优化人工合成这三个基因的序列，同时构建三个基因的表达盒，

hpd基因表达盒使用Ppgk1启动子和Tpgk1终止子(SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4)，

hpt基因表达盒使用Ptef1启动子和Ttpi1终止子(SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5)，

vte1基因表达盒使用Ppgk1启动子和Tcyc1终止子(SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.6)，

通过同源重组的方法，向酿酒酵母rDNA位点导入，hpd基因表达盒,hpt基因表达盒和vte1基因表达盒，得到合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE01。

(2)合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE02的构建方法，包括如下步骤：

从NCBI数据库获得Saccharomyces cerevisiae BY4742来源的基因thmg1基因，通过人工合成得到该核苷酸序列(SEQ ID NO.10)，

从NCBI数据库获得来自Sulfolobus acidocaldarius基因ggppssa的氨基酸序列，通过密码子优化人工合成这个基因的核苷酸序列(SEQ ID NO.11)，

构建这两个基因的表达盒，

thmg1基因表达盒使用Ppgk1启动子和Tpgk1终止子(SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.4)，

ggppssa基因表达盒使用Ptdh1启动子和Ttef1终止子(SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.12)，通过同源重组的方法，向酿酒酵母δ位点导入thmg1基因表达盒和ggppssa基因表达盒，得到合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE02(见图1)。

1、模块的构建

同源臂rDNA-up和rDNA-down均来自酿酒酵母BY4742基因组；筛选标记基因URA3来自质粒pRS426(购自Addgene,Inc.WWW.addgene.org)。

以酿酒酵母BY4742基因组为模板，以rDNAup-F(SEQ ID NO.13)，rDNAup-R-Tcyc1(SEQ ID NO.14)以及Ttpi1-rDNAdown-F(SEQ ID NO.15)，rDNAdown-R(SEQ ID NO.16)为引物，分别扩增同源臂rDNA-up(SEQ ID NO.17)和rDNA-down(SEQ ID NO.18)；

以vte1-Tcyc1-F(SEQ ID NO.19)，Tcyc1-R-rDNAup(SEQ ID NO.20)以及URA3-Ppgk1-F(SEQ IDNO.21)，Ppgk1-R-vte1(SEQ ID NO.22)为引物，分别扩增启动子Ppgk1(SEQID NO.1)和终止子Tcyc1(SEQ ID NO.6)；

以Tpgk1-Ptef1-F(SEQ ID NO.23)，Ptef1-R-hpt(SEQ ID NO.24)以及hpt-Ttpi1-F(SEQ ID NO.25)，Ttpi1-R-rDNAdown(SEQ ID NO.26)为引物，分别扩增启动子Ptef1(SEQID NO.2)和终止子Ttpi1(SEQ ID NO.5)；

以质粒PRS426为模板，Ppgk1-URA3-F(SEQ IDNO.27)和URA3-R-Ppgk1(SEQ IDNO.28)为引物，扩增标记基因URA3(SEQ ID NO.29)，所用序列见序列表。

本发明所用PCR酶为全式金生物科技有限公司的Fast Pfu聚合酶。50μL的PCR扩增体系如下：DNA模板，1μL；前引(10μM)和后引(10μM)各2.5μL；dNTP(10mM)，5μL；5×PfuBuffer，10μL；Fast Pfu聚合酶，1μL；最后用双蒸水补齐至50μL。在PCR仪上设置扩增程序。扩增条件为95℃预变性2min(1个循环)；95℃变性20sec、退火55℃20sec、72℃延伸30s(35个循环)；72℃延伸5min(1个循环)。

将上述扩增得到的7个片段与人工合成的基因片段hpd(SEQ ID NO.7),hpt基因(SEQ ID NO.8),vte1基因的核苷酸序(SEQ ID NO.9),Ppgk1启动子(SEQ ID NO.1)和Tpgk1终止子(SEQ ID NO.4)这5个片段混合，通过BM无缝连接试剂盒(博迈德生物科技有限公司)拼接成一个大片段。每个片段的摩尔比为1:1，片段总量达到1μg，连接体积如下，DNA片段10μL,2×Seamless Cloning Mix 10μL。在PCR仪上设置连接程序。连接条件为50℃50min，16℃10min。

通过PCR得到的片段，调整浓度在500ng，使用LiAc/鲑鱼精子DNA/PEG方法将其转化为感受态酵母。在不添加尿嘧啶的情况下，单个菌落在SC-drop琼脂平板上生长(20g/L葡萄糖，2g/L氨基酸混合物，6.7g/L不含氨基酸的酵母氮碱基，20g/L琼脂用于固体平板)。在30oC下孵育36h后，将菌落在30oC，200rpm的酵母蛋白ept葡萄糖(YPD)培养基(20g/L葡萄糖，20g/L蛋白胨，10g/L酵母提取物，20g/L琼脂固体培养基)中培养过夜。构建得到重组菌株VE01。

以酿酒酵母BY4742基因组为模板，以deltaup-F(SEQ ID NO.30)，deltaup-R-LEU(SEQ ID NO.31)以及Ttef1-deltadown-F(SEQ ID NO.32)，deltadown-R(SEQ ID NO.33)为引物，分别扩增同源臂delta-up(SEQ ID NO.34)和delta-down(SEQ ID NO.35)；

以LEU-Ppgk1-F(SEQ ID NO.36)，Ppgk1-R-thmgr(SEQ ID NO.37)以及thmg1-Tpgk1-F(SEQ ID NO.38)，Tpgk1-R(SEQ ID NO.39)为引物，分别扩增启动子Ppgk1(SEQ IDNO.1)和终止子Tpgk1(SEQ ID NO.4)；

以Tpgk1-Ptdh1-F(SEQ ID NO.40)，Ptdh1-R-ggppssa(SEQ ID NO.41)以及ggppssa-Ttef1-F(SEQ ID NO.42)，Ttef1-R-deltadown(SEQ ID NO.43)为引物，分别扩增启动子Ptdh1(SEQ ID NO.3)和终止子Ttef1(SEQ ID NO.12)；

以质粒PRS425为模板，deltaup-LEU-F(SEQ IDNO.44)和LEU-R-Ppgk1(SEQ IDNO.45)为引物，扩增标记基因LEU(SEQ ID NO.46)，所用序列见序列表。

将上述7个PCR扩增得到的片段和人工合成的thmg1基因，ggppssa基因片段通过BM无缝连接试剂盒(博迈德生物科技有限公司)拼接成一个大片段。每个片段的摩尔比为1:1，片段总量达到1μg，连接体积如下，DNA片段10μL,2×Seamless Cloning Mix 10μL。在PCR仪上设置连接程序。连接条件为50℃50min，16℃10min。

通过PCR得到的片段，调整浓度在500ng，使用LiAc/鲑鱼精子DNA/PEG方法将其转化为感受态酵母。在不添加尿嘧啶的情况下，单个菌落在SC-drop琼脂平板上生长(20g/L葡萄糖，2g/L氨基酸混合物，6.7g/L不含氨基酸的酵母氮碱基，20g/L琼脂用于固体平板)。在30oC下孵育36h后，将菌落在30oC，200rpm的酵母蛋白ept葡萄糖(YPD)培养基(20g/L葡萄糖，20g/L蛋白胨，10g/L酵母提取物，20g/L琼脂固体培养基)中培养过夜。构建得到重组菌株VE02.

2、发酵方法

种子培养基：20g/L葡萄糖、20g/L蛋白胨、10g/L酵母浸粉，余量为水；

发酵培养基：35.66g/L葡萄糖、24.46g/L蛋白胨、14.01g/L酵母浸粉，余量为水。

对照组：将重组菌株VE02接入5mL种子培养基30oC,200转/分，培养20h，再将这5mL培养基转接到30mL新鲜的种子培养基中，调整菌密度，使最终菌密度在OD600nm下为0.1，30oC,200转/分，培养72h，取培养液用于产物分析。

实验组：将重组菌株VE02接入5mL种子培养基30oC,200转/分，培养20h，再将这5mL培养基转接到30mL新鲜的发酵培养基中，调整菌密度，使最终菌密度在OD600nm下为0.1，30oC,200转/分，培养72h，取培养液用于产物分析。

3、产物分析

δ-生育三烯酚的提取和分析：分别将对照组和实验组30mL培养液在4oC 8000rpm/min下离心10分钟以得到细胞沉淀，并用双蒸馏水(ddH2O)洗涤两次以除去残留的培养基。然后，加入7ml双蒸馏水悬浮细胞，再加入7ml酸洗玻璃珠(0.4-0.6mm)和15ml分析级丙酮。在室温，5000rpm的涡旋下摇动30分钟，然后在4oC，8000rpm的条件下离心10分钟,得到上清液。将上清液在真空旋转蒸发仪中蒸发，并将残余物溶于乙腈(1mL)。使用具有UV检测器的Waters 2695HPLC仪器，通过高效液相色谱法(HPLC)进行分析。将溶液过滤并注入RP18Lichrospher100分析柱(5μm，150x4.6 mm，Merck，Germany)中，以δ-生育三烯酚(纯度≥98％，加拿大多伦多研究化学公司)作为标注品。流动相为乙腈，其中包含0.1％v/v三氟乙酸(TFA)，总流速为0.6mL/min，色谱图在292nm下检测，柱温为30oC，见图2、图3和图4。

前体尿黑酸和香叶基香叶基焦磷酸酯分析：分别取对照组和实验组各1ml培养液，并以12000rpm离心10分钟以得到上清液。用ddH2O稀释10倍，并使用0.2μm无机滤膜过滤。最后，与δ-生育三烯酚相同的HPLC分析方法，以尿黑酸(HGA)(纯度≥98％，Sigma-Aldrich，中国)作为标注品。香叶基香叶基焦磷酸酯分析是通过检测香叶基香叶基焦磷醇进行的。我们将1ml己烷分别添加到1ml对照组和实验组的培养液中，并使用涡旋在5000rpm下混合10分钟。在12000rpm离心10分钟后，对己烷层进行采样，并通过FULI自动进样器将1μl注入配备有熔融石英毛细管柱(30m×0.25mm内径，0.25mm DB-5MS，J&W Scientific，Folsom，CA)的FULI9790 GC。以标准GGOH(纯度≥95％；中国上海阿拉丁)为对照。

4、结果

在这项研究中，我们首先将三个必需基因(hpd，hpt和vte1)整合到起始菌株酿酒酵母BY4742基因组的rDNA位点中，得到了菌株VE01。但是，未检测到δ-生育三烯酚，并且对前体的检测显示香叶基香叶基焦磷酸酯(GGPP)也没检测到，仅检测到尿黑酸(HGA)。为了提高香叶基香叶基焦磷酸酯的产量，我们通过delta位点整合将thmg1和ggppssa基因整合到酵母菌株VE01基因组中，获得了重组菌株VE02，重组菌株VE02在种子培养基中培养，得到1.39mg/L的δ-生育三烯酚，为了进一步提高δ-生育三烯酚的产量，我们通过优化调整后的发酵培养基，最终获得了δ-生育三烯酚的产量提高(3.56mg/L)，比以前的培养基高约2.6倍。总之，最终获得了3.56mg/L的δ-生育三烯酚。

序列表

<110> 天津大学

<120> 合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法及用途

<160> 46

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 713

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 1

taacatctgc ataataggca tttgcaagaa ttactcgtga gtaaggaaag agtgaggaac 60

tatcgcatac ctgcatttaa agatgccgat ttgggcgcga atcctttatt ttggcttcac 120

cctcatacta ttatcagggc cagaaaaagg aagtgtttcc ctccttcttg aattgatgtt 180

accctcataa agcacgtggc ctcttatcga gaaagaaatt accgtcgctc gtgatttgtt 240

tgcaaaaaga acaaaactga aaaaacccag acacgctcga cttcctgtct tcctattgat 300

tgcagcttcc aatttcgtca cacaacaagg tcctagcgac ggctcacagg ttttgtaaca 360

agcaatcgaa ggttctggaa tggcgggaaa gggtttagta ccacatgcta tgatgcccac 420

tgtgatctcc agagcaaagt tcgttcgatc gtactgttac tctctctctt tcaaacagaa 480

ttgtccgaat cgtgtgacaa caacagcctg ttctcacaca ctcttttctt ctaaccaagg 540

gggtggttta gtttagtaga acctcgtgaa acttacattt acatatatat aaacttgcat 600

aaattggtca atgcaagaaa tacatatttg gtcttttcta attcgtagtt tttcaagttc 660

ttagatgctt tctttttctc ttttttacag atcatcaagg aagtaattat cta 713

<210> 2

<211> 422

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 2

cccacacacc atagcttcaa aatgtttcta ctcctttttt actcttccag attttctcgg 60

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ttttttactt cttgctcatt agaaagaaag catagcaatc taatctaagt tttaattaca 420

aa 422

<210> 3

<211> 688

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

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ccatatggag gataagttgg gctgagcttc tgatccaatt tattctatcc attagttgct 60

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agtagggttg ttgagcttag taaaaatgtg cgcaccacaa gcctacatga ctccacgtca 180

catgaaacca caccgtgggg ccttgttgcg ctaggaatag gatatgcgac gaagacgctt 240

ctgcttagta accacaccac attttcaggg ggtcgatctg cttgcttcct ttactgtcac 300

gagcggccca taatcgcgct ttttttttaa aaggcgcgag acagcaaaca ggaagctcgg 360

gtttcaacct tcggagtggt cgcagatctg gagactggat ctttacaata cagtaaggca 420

agccaccatc tgcttcttag gtgcatgcga cggtatccac gtgcagaaca acatagtctg 480

aagaaggggg ggaggagcat gttcattctc tgtagcagta agagcttggt gataatgacc 540

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gtacagttct attctctctc ttgcataaat aagaaattca tcaagaactt ggtttgatat 660

ttcaccaaca cacacaaaaa acagtact 688

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<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

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ttttgaatat tttttattta tatacgtata tatagactat tatttatctt ttaatgatta 120

ttaagatttt tattaaaaaa aaattcgctc ctcttttaat gcctttatgc agtttttttt 180

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<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

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attaatataa ttatataaaa atattatctt cttttcttta tatctagtgt tatgtaaaat 60

aaattgatga ctacggaaag cttttttata ttgtttcttt ttcattctga gccacttaaa 120

tttcgtgaat gttcttgtaa gggacggtag atttacaagt gatacaacaa aaagcaaggc 180

gctttttcta ataaaaagaa gaaaagcatt taacaattga acacctctat atcaacgaag 240

aatattactt tgtctctaaa tccttgtaaa atgtgtacga tctctatatg ggttactcat 300

aagtgtaccg aagactgcat tgaaagttta tgttttttca ctggaggcgt cattttcgcg 360

ttgagaagat gttcttatcc aaatttcaac tgttatata 399

<210> 6

<211> 221

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 6

aaaaagcctt cgagcgtccc aaaaccttct caagcaaggt tttcagtata atgttacatg 60

cgtacacgcg tctgtacaga aaaaaaagaa aaatttgaaa tataaataac gttcttaata 120

ctaacataac tataaaaaaa taaataggga cctagacttc aggttgtcta actccttcct 180

tttcggttag agcggatgtg gggggagggc gtgaatgtaa g 221

<210> 7

<211> 2021

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

taacatctgc ataataggca tttgcaagaa ttactcgtga gtaaggaaag agtgaggaac 60

tatcgcatac ctgcatttaa agatgccgat ttgggcgcga atcctttatt ttggcttcac 120

cctcatacta ttatcagggc cagaaaaagg aagtgtttcc ctccttcttg aattgatgtt 180

accctcataa agcacgtggc ctcttatcga gaaagaaatt accgtcgctc gtgatttgtt 240

tgcaaaaaga acaaaactga aaaaacccag acacgctcga cttcctgtct tcctattgat 300

tgcagcttcc aatttcgtca cacaacaagg tcctagcgac ggctcacagg ttttgtaaca 360

agcaatcgaa ggttctggaa tggcgggaaa gggtttagta ccacatgcta tgatgcccac 420

tgtgatctcc agagcaaagt tcgttcgatc gtactgttac tctctctctt tcaaacagaa 480

ttgtccgaat cgtgtgacaa caacagcctg ttctcacaca ctcttttctt ctaaccaagg 540

gggtggttta gtttagtaga acctcgtgaa acttacattt acatatatat aaacttgcat 600

aaattggtca atgcaagaaa tacatatttg gtcttttcta attcgtagtt tttcaagttc 660

ttagatgctt tctttttctc ttttttacag atcatcaagg aagtaattat ctacttttta 720

caacaaatat aaaacaatgg ctgacatctt cgaaaaccca atgggtttga tgggtttcga 780

atttatcgaa ttggcttctc caactccagg tgttttggaa ccagtttttc aaatattggg 840

cttcactaag gttgcgactc acagatctaa ggacgttcac ttgtaccgtc aaggtggtat 900

caacttgatc ttgaacaacg aaccaaagtc tatcgcttct tacttcgctg ctgaacacgg 960

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agctatcaag ggtatcggtg gtgctccatt gtacttgatc gacagattcg aagaaggttc 1140

ttctatctac gacatcgact tcaacttcat cgaaggtgtt gacagaaacc cagttggcgc 1200

gggtctcaag atcatcgacc acttgactca caacgtttac agaggtagaa tggcttactg 1260

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tatagactat tatttatctt ttaatgatta ttaagatttt tattaaaaaa aaattcgctc 1920

ctcttttaat gcctttatgc agtttttttt tcccattcga tatttctatg ttcgggttca 1980

gcgtatttta agtttaataa ctcgaaaatt ctgcgttcgt t 2021

<210> 8

<211> 540

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

atggatcgtt ggtttgtgtg gtgttgcttc tttggctatc gcttggggtt tgggtttgtg 60

gttgggtttg actgttggta tctctttgat catcggtact gcttactctg ttccaccagt 120

tagattgaag agattctctt tgttggctgc tttgtgtatc ttgactgtta gaggtatcgt 180

tgttaacttg ggtttgttct tgttcttcag aatcggtttg ggttacccac caactttgat 240

cactccaatc tgggttttga ctttgttcat cttggttttc actgttgcta tcgctatctt 300

caaggacgtt ccagacatgg aaggtgacag acaattcaag atccaaactt tgactttgca 360

aatcggtaag caaaacgttt tcagaggtac tttgatcttg ttgactggtt gttacttggc 420

tatggctatc tggggtttgt gggctgctat gccattgaac actgctttct tgatcgtttc 480

tcacttgtgt ttgttggctt tgttgtggtg gagatctcgt gacgttcact tggaatctaa 540

<210> 9

<211> 1473

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atgtacatgg aaatccgttc gttgatcgta agcatgaacc caaacttgtc ttctttcgaa 60

ttgtctcgtc cagtttctcc attgactaga tctttggttc cattcagatc tactaagttg 120

gttccaagat ctatctctcg tgtttctgct tctatctcta ctccaaactc tgaaactgac 180

aagatctctg ttaagccagt ttacgttcca acttctccaa acagagaatt gagaactcca 240

cactctggtt accacttcga cggtactcca agaaagttct tcgaaggttg gtacttcaga 300

gtttctatcc cagaaaagcg tgagtctttc tgcttcatgt actcggttga aaacccagct 360

ttcagacaat ctttgtctcc attggaagtt gctttgtacg gtccaagatt cactggtgtt 420

ggtgctcaaa tcttgggtgc taacgacaag tacttgtgtc aatacgaaca agactctcac 480

aacttctggg gtgacagaca cgaattggtt ttgggtaaca ctttctctgc tgttccaggt 540

gctaaggctc caaacaagga agttccacca gaagaattta acagaagagt ttcggaaggc 600

ttccaagcta ctccattctg gcaccaaggt cacatctgtg acgacggtag aactgactac 660

gctgaaactg ttaagtctgc tagatgggaa tactctacta gaccagttta cggttggggt 720

gacgttggtg ctaagcaaaa gtctactgcg ggttggccag cggcgttccc agttttcgag 780

ccacactggc aaatctgtat ggcgggcggc ttgtctactg gttggatcga atggggtggt 840

gaaagattcg aatttagaga cgctccatct tactctgaaa agaactgggg tggtggtttc 900

ccaagaaagt ggttctgggt tcaatgtaac gttttcgaag gtgctactgg tgaagttgct 960

ttgactgctg gtggtggttt gagacaattg ccaggtttga ctgaaactta cgaaaacgct 1020

gctttggttt gtgttcacta cgacggtaag atgtacgaat ttgttccatg gaacggtgtt 1080

gttagatggg aaatgtctcc atggggttac tggtacatca ctgctgaaaa cgaaaaccac 1140

gttgttgaat tggaagctag aactaacgaa gctggtactc cattgagagc gccaactact 1200

gaggtaggtc tcgctactgc ttgcagagac tcttgttacg gtgaattgaa gttgcaaatc 1260

tgggaaagat tgtacgacgg ttctaagggt aaggttatct tggaaactaa gtcttctatg 1320

gctgctgttg aaatcggtgg tggtccatgg ttcggtactt ggaagggtga cacttctaac 1380

actccagaat tgttgaagca agctctccaa gttccattgg acttggagtc ggctctcggt 1440

ttggttccat tcttcaagcc accaggtttg taa 1473

<210> 10

<211> 1578

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

atggaccaat tggttaagac tgaagttact aagaagtctt tcactgctcc agttcaaaag 60

gcttctactc cagttttgac taacaagact gttatctctg gttctaaggt taagtctttg 120

tcttctgctc aatcttcttc ttctggtcca tcttcttctt ctgaagaaga cgactctcgt 180

gacatcgaat ctttggacaa gaagatcaga ccattggaag aattggaagc tctcttgtct 240

tctggtaaca ctaagcaatt gaagaacaag gaagttgctg ctttggttat ccacggtaag 300

ttgccattgt acgctttgga aaagaagttg ggtgacacta ctagagctgt tgctgttaga 360

agaaaggctt tgtctatctt ggctgaagct ccagttttgg cttctgacag attgccatac 420

aagaactacg actacgacag agttttcggt gcttgttgtg aaaacgttat cggttacatg 480

ccattgccag ttggtgttat cggtccattg gttatcgacg gtacttctta ccacatccca 540

atggctacta ctgaaggttg tttggttgct tctgctatga gaggttgtaa ggctatcaac 600

gctggtggtg gcgctactac tgtgctcact aaggacggta tgactagagg tccagttgtt 660

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caaaacgcta tcaagaaggc tttcaactct acttctcgtt tcgctagatt gcaacacatc 780

caaacttgtt tggctggtga cttgttgttc atgagattca gaactactac tggtgacgct 840

atgggtatga acatgatctc taagggtgtt gagtacagct tgaagcaaat ggttgaagaa 900

tacggttggg aagacatgga agttgtttct gtttctggta actactgtac tgacaagaag 960

ccagctgcta tcaactggat cgaaggtaga ggtaagtctg ttgttgctga agctactatc 1020

ccaggtgacg ttgttagaaa ggttttgaag tctgacgttt ctgctttggt tgaattgaac 1080

atcgctaaga acttggttgg ttctgctatg gctggttctg ttggtggttt caacgctcac 1140

gctgctaact tggttactgc tgttttcttg gctttgggtc aagacccagc tcaaaacgtt 1200

gaatcttcta actgtatcac tttgatgaag gaagttgacg gtgacttgag aatctctgtt 1260

tctatgccat ctatcgaagt tggtactatc ggtggtggca ctgtcctcga accacaaggt 1320

gctatgttgg acttgttggg tgttagaggt ccacacgcta ctgctccagg tactaacgct 1380

agacaattgg ctagaatcgt tgcttgtgct gttttggctg gtgaattgtc tttgtgtgct 1440

gctttggctg ctggtcactt ggttcaatct cacatgactc acaacagaaa gccagctgaa 1500

ccaactaagc caaacaactt ggacgctact gacatcaaca gattgaagga cggttctgtt 1560

acttgtatca agtcttaa 1578

<210> 11

<211> 993

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

atgtcttact tcgacaacta cttcaacgaa atcgttaact ctgttaacga catcatcaag 60

tcttacatct ctggtgacgt tccaaagttg tacgaagcta gttaccactt gttcacttct 120

ggtggtaaga gattgagacc attgatcttg actatctctt ctgacttgtt cggtggtcaa 180

agagaaagag cttactacgc tggtgctgct atcgaagttt tgcacacttt cactttggtt 240

cacgacgaca tcatggacca agacaacatc agaagaggtt tgccaactgt tcacgttaag 300

tacggtttgc cattggctat cttggctggt gacttgttgc acgctaaggc tttccaattg 360

ttgactcaag ctctccgtgg tctcccatct gaaactatca tcaaggcttt cgacatcttc 420

actagatcta tcatcatcat ctctgaaggt caagctgttg acatggaatt tgaagacaga 480

atcgacatca aggaacaaga atacttggac atgatctctc gtaagactgc tgctttgttc 540

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atgtctgact tcggtactaa cttgggtatc gctttccaaa tcgttgacga catcttgggt 660

ttgactgctg acgaaaagga attgggtaag ccagttttct ctgacatcag agaaggtaag 720

aagactatcc tcgttatcaa gactctcgaa ttgtgtaagg aagacgaaaa gaagatcgtt 780

ttgaaggctt tgggtaacaa gtctgcttct aaggaagaat tgatgtcttc tgctgacatc 840

atcaagaagt actctttgga ctacgcttac aacttggctg aaaagtacta caagaacgct 900

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ttggctgaat ttactatcag aagaagaaag taa 993

<210> 12

<211> 471

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

atcttttata tttaaatctt atctattagt taattttttg taatttatcc ttatatatag 60

tctggttatt ctaaaatatc atttcagtat ctaaaaattc ccctcttttt tcagttatat 120

cttaacaggc gacagtccaa atgttgattt atcccagtcc gattcatcag ggttgtgaag 180

cattttgtca atggtcgaaa tcacatcagt aatagtgcct cttacttgcc tcatagaatt 240

tctttctctt aacgtcaccg tttggtcttt tatagtttcg aaatctatgg tgataccaaa 300

tggtgttccc aattcatcgt tacgggcgta ttttttacca attgaagtat tggaatcgtc 360

aattttaaag tatatctctc ttttacgtaa agcctgcgag atcctcttaa gtatagcggg 420

gaagccatcg ttattcgata ttgtcgtaac aaatactttg atcggcgcta t 471

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

tcgctttacc tcataaaact g 21

<210> 14

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

aaaagccttc gagcgtccca aacttgaaat tgctggcctt 40

<210> 15

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

ccaaatttca actgttatat aactccaaag agtatcactc acta 44

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

agaccttaac ctactaaata gt 22

<210> 17

<211> 1188

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 17

tcgctttacc tcataaaact gatacgagct tctgctatcc tgagggaaac ttcggcagga 60

accagctact agatggttcg attagtcttt cgcccctata cccaaattcg acgatcgatt 120

tgcacgtcag aaccgctacg agcctccacc agagtttcct ctggcttcac cctattcagg 180

catagttcac catctttcgg gtcccaacag ctatgctctt actcaaatcc atccgaagac 240

atcaggatcg gtcgattgtg cacctcttgc gaggccccaa cctacgttca ctttcattac 300

gcgtatgggt tttacaccca aacactcgca tagacgttag actccttggt ccgtgtttca 360

agacgggcgg catataacca ttatgccagc atccttgact tacgtcgcag tcctcagtcc 420

cagctggcag tattcccaca ggctataata cttaccgagg caagctacat tcctatggat 480

ttatcctgcc accaaaactg atgctggccc agtgaaatgc gagattcccc tacccacaag 540

gagcagaggg cacaaaacac catgtctgat caaatgccct tccctttcaa caatttcacg 600

tactttttca ctctcttttc aaagttcttt tcatctttcc atcactgtac ttgttcgcta 660

tcggtctctc gccaatattt agctttagat ggaatttacc acccacttag agctgcattc 720

ccaaacaact cgactcttcg aaggcacttt acaaagaacc gcactcctcg ccacacggga 780

ttctcaccct ctatgacgtc ctgttccaag gaacatagac aaggaacggc cccaaagttg 840

ccctctccaa attacaactc gggcaccgaa ggtaccagat ttcaaatttg agcttttgcc 900

gcttcactcg ccgttactaa ggcaatcccg gttggtttct tttcctccgc ttattgatat 960

gcttaagttc agcgggtact cctacctgat ttgaggtcaa actttaagaa cattgttcgc 1020

ctagacgctc tcttcttatc gataacgttc caatacgctc agtataaaaa aagattagcc 1080

gcagttggta aaacctaaaa cgaccgtact tgcattatac ctcaagcacg cagagaaacc 1140

tctctttgga aaaaaaacat ccaatgaaaa ggccagcaat ttcaagtt 1188

<210> 18

<211> 1036

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 18

actccaaaga gtatcactca ctaccaaaca gaatgtttga gaaggaaatg acgctcaaac 60

aggcatgccc cctggaatac caaggggcgc aatgtgcgtt caaagattcg atgattcacg 120

gaattctgca attcacatta cgtatcgcat ttcgctgcgt tcttcatcga tgcgagaacc 180

aagagatccg ttgttgaaag tttttaatat tttaaaattt ccagttacga aaattcttgt 240

ttttgacaaa aatttaatga atagataaaa ttgtttgtgt ttgttacctc tgggccccga 300

ttgctcgaat gcccaaagaa aaagttgcaa agatatgaaa actccacagt gtgttgtatt 360

gaaacggttt taattgtcct ataacaaaag cacagaaatc tctcaccgtt tggaatagca 420

agaaagaaac ttacaagcct agcaagaccg cgcacttaag cgcaggcccg gctggactct 480

ccatctcttg tcttcttgcc cagtaaaagc tctcatgctc ttgccaaaac aaaaaaatcc 540

attttcaaaa ttattaaatt tctttaatga tccttccgca ggttcaccta cggaaacctt 600

gttacgactt ttagttcctc taaatgacca agtttgtcca aattctccgc tctgagatgg 660

agttgccccc ttctctaagc agatcctgag gcctcactaa gccattcaat cggtactagc 720

gacgggcggt gtgtacaaag ggcagggacg taatcaacgc aagctgatga cttgcgctta 780

ctaggaattc ctcgttgaag agcaataatt acaatgctct atccccagca cgacggagtt 840

tcacaagatt accaagacct ctcggccaag gttagactcg ctggctccgt cagtgtagcg 900

cgcgtgcggc ccagaacgtc taagggcatc acagacctgt tattgcctca aacttccatc 960

ggcttgaaac cgatagtccc tctaagaagt ggataaccag caaatgctag caccactatt 1020

tagtaggtta aggtct 1036

<210> 19

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

cttcaagcca ccaggtttgt aaaaaaagcc ttcgagcgtc c 41

<210> 20

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

actatttagt aggttaaggt ctacatgtaa ttagttatgt cac 43

<210> 21

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

tatcagggcg atggcccact actaacatct gcataatagg catt 44

<210> 22

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

cgaacggatt tccatgtaca tgtgttttat atttgttgta a 41

<210> 23

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

gtattttaag tttaataact cccacacacc atagcttcaa aatg 44

<210> 24

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

gaacgcttgg atagtagcca ttttgtaatt aaaacttaga ttag 44

<210> 25

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

cttctctaac actatcttct aatttttcta ataaaaagaa gaa 43

<210> 26

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

gtgagtgata ctctttggag ttatataaca gttgaaattt g 41

<210> 27

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

ttacaacaaa tataaaacac ttcaattcat catttttttt ttattc 46

<210> 28

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

gcctattatg cagatgttag tagtgggcca tcgccctgat aga 43

<210> 29

<211> 1375

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

ttcaattcat catttttttt ttattctttt ttttgatttc ggtttctttg aaattttttt 60

gattcggtaa tctccgaaca gaaggaagaa cgaaggaagg agcacagact tagattggta 120

tatatacgca tatgtagtgt tgaagaaaca tgaaattgcc cagtattctt aacccaactg 180

cacagaacaa aaacctgcag gaaacgaaga taaatcatgt cgaaagctac atataaggaa 240

cgtgctgcta ctcatcctag tcctgttgct gccaagctat ttaatatcat gcacgaaaag 300

caaacaaact tgtgtgcttc attggatgtt cgtaccacca aggaattact ggagttagtt 360

gaagcattag gtcccaaaat ttgtttacta aaaacacatg tggatatctt gactgatttt 420

tccatggagg gcacagttaa gccgctaaag gcattatccg ccaagtacaa ttttttactc 480

ttcgaagaca gaaaatttgc tgacattggt aatacagtca aattgcagta ctctgcgggt 540

gtatacagaa tagcagaatg ggcagacatt acgaatgcac acggtgtggt gggcccaggt 600

attgttagcg gtttgaagca ggcggcagaa gaagtaacaa aggaacctag aggccttttg 660

atgttagcag aattgtcatg caagggctcc ctatctactg gagaatatac taagggtact 720

gttgacattg cgaagagcga caaagatttt gttatcggct ttattgctca aagagacatg 780

ggtggaagag atgaaggtta cgattggttg attatgacac ccggtgtggg tttagatgac 840

aagggagacg cattgggtca acagtataga accgtggatg atgtggtctc tacaggatct 900

gacattatta ttgttggaag aggactattt gcaaagggaa gggatgctaa ggtagagggt 960

gaacgttaca gaaaagcagg ctgggaagca tatttgagaa gatgcggcca gcaaaactaa 1020

aaaactgtat tataagtaaa tgcatgtata ctaaactcac aaattagagc ttcaatttaa 1080

ttatatcagt tattacccta tgcggtgtga aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata 1140

ccgcatcagg aaattgtaaa cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa 1200

atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa 1260

tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac 1320

gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actac 1375

<210> 30

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

tgttggaata gaaatcaact atc 23

<210> 31

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

gtattcccac agttaagctt atgtttatat tcattgatcc tat 43

<210> 32

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 32

ccccacacac catagcttca aataaaatga tgataataat attta 45

<210> 33

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 33

ccatgagaaa tgggtgaatg ttgag 25

<210> 34

<211> 167

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 34

tgttggaata gaaatcaact atcatctact aactagtatt tacattacta gtatattatc 60

atatacggtg ttagaagatg acgcaaatga tgagaaatag tcatctaaat tagtggaagc 120

tgaaacgcaa ggattgataa tgtaatagga tcaatgaata taaacat 167

<210> 35

<211> 170

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 35

ataaaatgat gataataata tttatagaat tgtgtagaat tgcagattcc cttttatgga 60

ttcctaaatc cttgaggaga acttctagta tattctgtat acctaatatt atagccttta 120

tcaacaatgg aatcccaaca attatctcaa cattcaccca tttctcatgg 170

<210> 36

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 36

gtgaatgctg gtcgctatac tgtaacatct gcataatagg c 41

<210> 37

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 37

gtcttaacca attggtccat gtgttttata tttgttgta 39

<210> 38

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 38

gttacttgta tcaagtctta atttttttct tttctctttc cccattat 48

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 39

aaacaacgaa cgcagaattt 20

<210> 40

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 40

aaattctgcg ttcgttgttt tgtatatgct catttacact c 41

<210> 41

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 41

gtagttgtcg aagtaagaca tttttgtgtg taaatttagt gaag 44

<210> 42

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 42

ctatcagaag aagaaagtaa ggagattgat aagacttttc ta 42

<210> 43

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 43

aaatattatt atcatcattt tatatagcgc cgatcaaagt atttg 45

<210> 44

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 44

taggatcaat gaatataaac ataagcttaa ctgtgggaat ac 42

<210> 45

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 45

gcctattatg cagatgttac agtatagcga ccagcattca cata 44

<210> 46

<211> 1724

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 46

aagcttaact gtgggaatac tcaggtatcg taagatgcaa gagttcgaat ctcttagcaa 60

ccattatttt tttcctcaac ataacgagaa cacacagggg cgctatcgca cagaatcaaa 120

ttcgatgact ggaaattttt tgttaatttc agaggtcgcc tgacgcatat acctttttca 180

actgaaaaat tgggagaaaa aggaaaggtg agaggccgga accggctttt catatagaat 240

agagaagcgt tcatgactaa atgcttgcat cacaatactt gaagttgaca atattattta 300

aggacctatt gttttttcca ataggtggtt agcaatcgtc ttactttcta acttttctta 360

ccttttacat ttcagcaata tatatatata tttcaaggat ataccattct aatgtctgcc 420

cctatgtctg cccctaagaa gatcgtcgtt ttgccaggtg accacgttgg tcaagaaatc 480

acagccgaag ccattaaggt tcttaaagct atttctgatg ttcgttccaa tgtcaagttc 540

gatttcgaaa atcatttaat tggtggtgct gctatcgatg ctacaggtgt cccacttcca 600

gatgaggcgc tggaagcctc caagaaggtt gatgccgttt tgttaggtgc tgtgggtggt 660

cctaaatggg gtaccggtag tgttagacct gaacaaggtt tactaaaaat ccgtaaagaa 720

cttcaattgt acgccaactt aagaccatgt aactttgcat ccgactctct tttagactta 780

tctccaatca agccacaatt tgctaaaggt actgacttcg ttgttgtcag agaattagtg 840

ggaggtattt actttggtaa gagaaaggaa gacgatggtg atggtgtcgc ttgggatagt 900

gaacaataca ccgttccaga agtgcaaaga atcacaagaa tggccgcttt catggcccta 960

caacatgagc caccattgcc tatttggtcc ttggataaag ctaatgtttt ggcctcttca 1020

agattatgga gaaaaactgt ggaggaaacc atcaagaacg aattccctac attgaaggtt 1080

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tgtcatttgt atagtttttt tatattgtag ttgttctatt ttaatcaaat gttagcgtga 1620

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taatatcatg cgtcaatcgt atgtgaatgc tggtcgctat actg 1724

Claims

1.合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株的构建方法，其特征是包括如下步骤：将外源基因hpd、hpt和vte1整合到酿酒酵母BY4742菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株VE01；在重组菌株VE01基因组δ位点整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重组菌株VE02；所述hpd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述hpt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述vte1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述thmg1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述ggppssa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.权利要求1的方法构建的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株。

3.权利要求2的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株生产δ-生育三烯酚的用途，其特征是包括如下步骤：将权利要求2的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE02在发酵培养基中培养发酵，获得δ-生育三烯酚，所述发酵培养基的配方为35.66g/L葡萄糖、24.46g/L蛋白胨、14.01g/L酵母浸粉，余量为水。