CN104990879A - 血清糖化白蛋白含量测定方法及测定试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了血清糖化白蛋白含量的测定方法，在亲水性纳米聚苯乙烯胶体试剂中加入血清样本，样本中的白蛋白和糖化白蛋白被无差别吸附在亲水性纳米聚苯乙烯胶体颗粒表面；然后加入特异的鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，形成纳米颗粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白鼠单克隆抗体复合体；该复合体在羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体的作用下产生凝聚反应，凝聚量与吸附在亲水性纳米聚苯乙烯胶体颗粒表面的糖化白蛋白的量成正比；根据测定吸光度的变化量可以检测样本中糖化白蛋白所占比率。本发明能够利用现有自动生化分析仪，简化检测步骤，一步法直接准确地测得血清糖化白蛋白的百分比例。

Description

血清糖化白蛋白含量测定方法及测定试剂盒

技术领域

本发明涉及医疗检测领域，特别涉及一种血清糖化白蛋白含量测定方法及测定试剂盒。

背景技术

血清糖化白蛋白在临床上主要用于反映近期(过去2周至1个月)的血糖控制情况。目前血清糖化白蛋白的测定主要采用酶法测定原理，分三步过程：1、先测定血清中的白蛋白含量；2、再测定血清中的糖化白蛋白含量；3、最后通过计算，用步骤2的结果除以步骤1的结果求得糖化白蛋白的百分比例。该检测方法步骤复杂，需要专用的测量仪器，检测时间长，同时由于检测的步骤多而导致检测结果准确性低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种血清糖化白蛋白含量测定方法及测定试剂盒。本发明要解决的技术问题是：利用现有自动生化分析仪，简化检测步骤，一步法直接准确地测得血清糖化白蛋白的百分比例。

为实现上述技术目的，本发明中采取的技术方案为：血清糖化白蛋白含量的测定方法，包括以下步骤：

A.将待测血清样本加入亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液中，血清样本中的白蛋白和糖化白蛋白被无差别吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面；

B.在步骤A所得的混合液中加入鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，形成纳米颗粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体复合体；

C.向步骤B所得的混合体系中加入羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体，步骤B所得复合体中的鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体与羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体产生凝聚反应，凝聚量与吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面的糖化白蛋白的量成正比；

D.测定步骤C所得混合体系的吸光度的变化量，与吸光度变化校准曲线相对照，即可测得样本中糖化白蛋白的含量占比。

上述方案中，所述亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液的摩尔浓度为50mM。

上述方案中，所述步骤D中，在570-650nm波长下检测吸光度的变化。

本发明还公开了一种血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品，所述试剂R1包括亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液和鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，所述试剂R2包括羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体，所述校准品为糖化白蛋白校准液。

上述方案中，所述亲水性纳米聚苯乙烯颗粒的粒径为50-200纳米。

上述方案中，所述亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液的摩尔浓度为50mM。

上述方案中，所述鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体的重量占比为1～1.5％。

上述方案中，所述羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体的重量占比为2.0～2.6％。

上述方案中，所述试剂盒还包括质控品，所述质控品为糖化白蛋白质控液。

本发明的优点和有益效果在于：本发明提供一种血清糖化白蛋白含量测定方法及测定试剂盒，能够利用现有自动生化分析仪，简化检测步骤，一步法直接准确地测得血清糖化白蛋白的百分比例。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明在OLYMPUS AU400/640/2700/5400全自动生化分析仪的参数设定表

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

本发明是一种血清糖化白蛋白含量的测定方法，包括以下步骤：

A.将待测血清样本加入亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液中，血清样本中的白蛋白和糖化白蛋白被无差别吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面；

B.在步骤A所得的混合液中加入鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，形成纳米颗粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体复合体；

C.向步骤B所得的混合体系中加入羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体，步骤B所得复合体中的鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体与羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体产生凝聚反应，凝聚量与吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面的糖化白蛋白的量成正比；

D.测定步骤C所得混合体系的吸光度的变化量，与吸光度变化校准曲线相对照，即可测得样本中糖化白蛋白的含量占比。

本方法的原理是：在亲水性纳米聚苯乙烯试剂中加入血清样本，样本中的白蛋白和糖化白蛋白被无差别吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面。吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面的糖化白蛋白的量与样本中的糖化白蛋白所占比率成正比。加入特异的鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，形成纳米颗粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白鼠单克隆抗体复合体。这个复合体在羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体的作用下产生凝聚反应。凝聚量与吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面的糖化白蛋白的量成正比。

样本中的糖化白蛋白所占比率通过凝聚量的变化来表示，所以根据测定吸光度的变化量可以检测糖化白蛋白所占比率。

本发明还公开了一种血清糖化白蛋白测试试剂盒，包括试剂R1、试剂R2校准品和质控品，试剂R1包括摩尔浓度为50mM的亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液和质量百分比浓度为1.3％的鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，试剂R2包括质量百分比浓度为2.4％的羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体，校准品为糖化白蛋白校准液，质控品为糖化白蛋白质控液。试剂盒内的包装规格为R140ml*1；R210ml*1，2-10℃避光密封保存。

测试时，按照图1所示参数表设定奥林巴斯2700全自动生化分析仪，校准品浓度和位置根据实际情况输入。

采取测试样本待用，按照下表进行测试：

1、主/负波长：340/410nm反应方法：终点法反应方向:正

然后通过合适的数学模型(非线性)如Logit-log(4p)或SPLINE拟合多点定标的校准曲线。样品浓度值通过校准曲线得出。

本发明除了适用于奥林帕斯系列全自动生化分析仪，还可适用于日立7180、7600；贝克曼LX20；东芝40；杜邦RXL；雅培C8000全自动生化分析仪。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.血清糖化白蛋白含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.将待测血清样本加入亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液中，血清样本中的白蛋白和糖化白蛋白被无差别吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面；

B.在步骤A所得的混合液中加入鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，形成纳米颗粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体复合体；

C.向步骤B所得的混合体系中加入羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体，步骤B所得复合体中的鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体与羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体产生凝聚反应，凝聚量与吸附在亲水性纳米聚苯乙烯颗粒表面的糖化白蛋白的量成正比；

D.测定步骤C所得混合体系的吸光度的变化量，与吸光度变化校准曲线相对照，即可测得样本中糖化白蛋白的含量占比。

2.根据权利要求1所述的血清糖化白蛋白含量的测定方法，其特征在于，所述亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液的摩尔浓度为50mM。

3.根据权利要求1所述的血清糖化白蛋白含量的测定方法，其特征在于，所述步骤D中，在570-650nm波长下检测吸光度的变化。

4.血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和校准品，所述试剂R1包括亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液和鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体，所述试剂R2包括羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体，所述校准品为糖化白蛋白校准液。

5.根据权利要求4所述的血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，其特征在于，所述亲水性纳米聚苯乙烯颗粒的粒径为50-200纳米。

6.根据权利要求4所述的血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，其特征在于，所述亲水性纳米聚苯乙烯颗粒缓冲液的摩尔浓度为50mM。

7.根据权利要求4所述的血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，其特征在于，所述鼠抗人糖化白蛋白单克隆抗体的重量占比为1～1.5％。

8.根据权利要求4所述的血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，其特征在于，所述羊抗鼠糖化白蛋白抗抗体的重量占比为2.0～2.6％。

9.根据权利要求4～8任一所述的血清糖化白蛋白含量测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括质控品，所述质控品为糖化白蛋白质控液。