CN102083849A

CN102083849A - 新的胆甾-4-烯-3-酮肟的衍生物、包含其的药物组合物以及制备方法

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Publication number: CN102083849A
Application number: CN2009801263552A
Authority: CN
Inventors: R·普鲁斯; A·纳奇; C·谢姆鲍尔特; C·德鲁奥
Original assignee: Trophos SA
Current assignee: Trophos SA
Priority date: 2008-07-30
Filing date: 2009-07-29
Publication date: 2011-06-01
Anticipated expiration: 2029-07-29
Also published as: JP2011529478A; CA2725791C; FR2934596B1; IL210951A0; BRPI0915120A2; AU2009275790B2; IL210951B; EP2307438B1; RU2496784C2; US9447140B2; EP2307438A2; CA2725791A1; JP5872897B2; JP2015205899A; US20110224180A1; FR2934596A1; WO2010012904A2; CN102083849B; AU2009275790A1; HK1154868A1

Abstract

本发明涉及新的化学化合物，特别是胆甾-4-烯-3-酮肟的衍生物，以及其作为药物，尤其是作为细胞保护性药物，特别是作为神经保护性、心脏保护性和/或肝脏保护性药物的应用。

Description

新的胆甾-4-烯-3-酮肟的衍生物、包含其的药物组合物以及制备方法

所述药物特别适合于与细胞的变性或死亡，特别是运动神经元和/或心肌细胞和/或肝细胞的变性或死亡有关的病理学状态和创伤。

本发明还涉及包含所述化合物的药物组合物，以及其制备方法。

细胞变性过程的特征在于通常引起不希望的细胞活性和细胞死亡的细胞功能障碍。

细胞已发展出对应激作出应答的适应机制，这延长了它们的寿命或者延迟或阻止细胞死亡(细胞保护机制)。

然而，这些细胞保护机制有时是不足的、不适当的或太迟被诱导而无效，并且细胞死亡。因此，提供有助于细胞保护的新型细胞保护性药物显得是有益的。

在细胞死亡的主要机制中，主要区分出坏死、凋亡和坏死状凋亡(nécroptose)。

坏死是在组织损伤期间发生的所谓的“偶发性”细胞死亡。细胞的质膜是最受影响的，从而引起细胞的稳态的改变。细胞将吸收水，直至这将引起其质膜裂解的程度。这种细胞裂解导致细胞质内容物释放到周围环境中。坏死是炎症性过程的起始。

坏死可以影响一组细胞或组织，而其他邻近部分仍是存活的。所产生的转变是细胞或组织的坏疽。

换言之，坏死通过在细胞由于事件而达到其生命的终点时发生的形态学改变来定义，所述事件例如为重大创伤例如器官范围内血液循环的停止或减少、高热(温度的显著上升)、化学产品中毒、物理休克等。

最为人所知的坏死之一是在由于冠状动脉闭塞(梗阻)而引起的梗死(在心肌范围内的血流供应的停止)时心肌的坏死。

凋亡是生物的正常生理学的整体部分之一。它是高度受调节的细胞死亡的生理学形式，并且它是多细胞生物存活所必需的。凋亡是在胚胎发育期间起极其重要作用的过程。

凋亡中的细胞或凋亡的细胞将使其自身与其他细胞相隔离。凋亡通常涉及组织中的单个细胞并且不引起炎症。凋亡的特征性形态学要点之一是细胞核和细胞质的显著固缩(condensation)，这引起细胞体积的显著减少。核随后片段化，每个片段由双重被膜包围。随后，凋亡小体(细胞质和细胞核元件)被释放，并且将通过吞噬作用被邻近细胞吸收。

凋亡可以以不同方式被诱导。例如，辐射、化学化合物或激素的存在是能够引起细胞中的凋亡事件级联的刺激。细胞内信号例如不完全的有丝分裂或DNA损伤也可以诱导凋亡。

凋亡还在遗传毒性试剂作用后或在疾病期间发生。某些病理学状态的特征在于异常凋亡，其引起某些细胞群体的丧失，例如肝细胞毒性、视网膜病、心脏毒性。

因此，区分出生理性凋亡和病理性凋亡。本发明基本上集中于病理性凋亡。

存在细胞死亡的其他机制，例如坏死状凋亡，其具有坏死和凋亡的特征。由于坏死状凋亡而死亡的细胞具有与由于坏死而死亡的细胞相似的特征，但这种机制的生物化学步骤更类似于凋亡。这种细胞死亡的机制例如在缺血时发生。

因此，本发明的目的之一还是提供新型药物，其可以允许预防和/或治疗坏死和/或病理性凋亡和/或坏死状凋亡(抗坏死和/或抗凋亡和/或抗坏死状凋亡的药物)。

细胞变性过程可能尤其是由于被分组在变性疾病或疾患这一术语之下的病理学情况、创伤或暴露于各种因素。

这些创伤和因素可以例如包括暴露于辐射(UV、γ)、低氧或缺乏氧、缺乏营养素、缺乏生长因子、毒物、细胞毒素、废物、环境毒素、自由基、活性氧。还可以提及在医学治疗背景下用作治疗剂的化学或生物试剂，例如细胞生长抑制剂或抗炎剂。

在以变性过程为特征的最重要的病理学情况中，发现下述病况：

■骨、关节、结缔组织和软骨疾病，例如骨质疏松症，骨髓炎，关节炎(包括例如骨关节炎、类风湿性关节炎和银屑病关节炎)，无血管性坏死，进行性骨化性纤维发育不良，佝偻病，库欣综合征；

■肌疾病，例如肌营养不良，例如迪谢纳肌营养不良，强直性肌营养不良，肌病和肌无力；

■皮肤疾病，例如皮炎，湿疹，银屑病，衰老或者瘢痕形成的改变；

■心血管疾病，例如心脏和/或血管缺血，心肌梗塞，缺血性心脏病，慢性或急性心功能不全，心脏节律障碍，心房纤维性颤动，心室纤维性颤动，阵发性心动过速，心功能不全，缺氧，低氧，由于用抗癌剂进行治疗而引起的副作用；

■循环系统疾病，例如动脉粥样硬化，动脉硬化，外周血管疾病，脑血管意外，动脉瘤；

■血液学和血管疾病，例如贫血，血管淀粉样变性，出血，镰状细胞病，红细胞破裂综合征(red cell fragmentation syndrome)，嗜中性白细胞减少症，白细胞减少症，髓发育不全，全血细胞减少症，血小板减少症，血友病；

■肺疾病，包括肺炎，哮喘；慢性阻塞性肺疾病，例如慢性支气管炎和肺气肿；

■胃肠道疾病，例如溃疡；

■肝脏疾病，包括病毒性肝炎和肝硬化，由于毒素或药物而引起的肝脏疾病，可向肝硬化发展的疾患例如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，威尔逊病，原发性硬化性胆管炎，或原发性胆汁性肝硬化；

■胰腺疾病，例如急性或慢性胰腺炎；

■代谢疾病，例如糖尿病和尿崩症，甲状腺炎；

■肾疾病，例如急性肾病症或肾小球肾炎；

■病毒和细菌感染，例如败血病；

■由化学试剂、毒素或药物引起的严重中毒；

■与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关的变性疾患；

■与衰老相关的病症，例如加速衰老综合征；

■炎性疾病，例如克罗恩病，类风湿性多关节炎；

■自身免疫疾病，例如红斑狼疮；

■牙疾病，例如导致组织降解的那些牙疾病，例如牙周炎；

■眼疾病或病症，包括糖尿病性视网膜病，青光眼，黄斑变性，视网膜变性，色素性视网膜炎，视网膜裂孔或撕裂，视网膜脱离，视网膜缺血，与创伤相关的急性视网膜病，炎症性变性，外科手术后的并发症，由药物引起的视网膜病，白内障；

■听觉通道(voie auditive)病症，例如耳硬化和由抗生素诱导的耳聋；

■与线粒体相关的疾病(线粒体病理学状态)，例如弗里德赖希共济失调，伴随有结构性线粒体异常的先天性肌营养不良，某些肌病(MELAS综合征、MERFF综合征、皮尔森综合征)，MIDD综合征(线粒体性糖尿病和耳聋)，沃尔弗拉姆综合征，张力障碍。

此外，神经变性过程的特征是神经元的功能障碍和死亡，导致由脑(中枢神经系统，CNS)、脊髓和外周神经系统(PNS)介导的神经功能的丧失。它们尤其可以由归于神经变性疾病或疾患这一术语的病理学情况，由损伤，或由暴露于毒素而引起。

以神经变性过程为特征的最重要的病理学状态为：

-慢性神经变性疾病，尤其是遗传性或散发性的慢性脱髓鞘性疾病，有利地是阿尔茨海默病，亨廷顿舞蹈病，帕金森病，肌萎缩性侧索硬化，脊髓性肌萎缩，特别是婴儿脊髓性肌萎缩，克-雅病，多发性硬化，肌萎缩性侧索硬化，脑白质营养不良(包括肾上腺脑白质营养不良)，癫痫，痴呆，精神分裂症，和与AIDS相关的神经学综合征；

-与衰老有关的神经元损伤；

-遗传性或损伤性的外周神经病，例如法伯病、沙-马-图病、克拉伯病、脑白质营养不良、糖尿病性神经病和由抗癌治疗引起的神经病；

-脑、外周神经或脊髓的创伤；

-由于脑血管意外而导致的或由缺乏血液灌流而引起的脑或脊髓局部缺血；

-遗传性的、损伤性的或与视觉感觉神经元衰老有关的变性，例如黄斑变性，色素性视网膜炎，或由青光眼诱导的视神经变性；

-遗传性的、创伤性的或与听觉感觉神经元衰老有关的变性，其导致听力减退或丧失。

在这些病理学状态中受影响的一部分信号传导途径是大量神经变性疾病所共有的。阿尔茨海默病是最常见的痴呆。它导致出现脑萎缩、海马(corne d’Ammon)中神经元的大量丧失，并且它还涉及胆碱能神经元。其他病理学状态，例如脑叶萎缩(皮克病、克-雅病)、Lewy体痴呆、血管性痴呆(démences vasculaires)、帕金森病，与这些痴呆的症状开始时明显的神经元死亡有关。

用于保护神经元免于死亡的一种治疗方法是提供神经营养蛋白质。

这些蛋白质，例如BDNF(脑衍生神经营养因子)、CNTF(睫状神经营养因子)、NGF(神经生长因子)、GDNF(神经胶质衍生神经营养因子)在胚胎发育过程中或在成人中于损伤后合成。这些生长因子促进神经元细胞的存活、成熟和分化。此外，它们抑制凋亡机制、激活多条存活途径和保护大量的神经元群。在大多数神经元变性中建议使用它们。

能激活神经营养因子的表达或能模仿这些因子的作用的化合物具有用于治疗神经变性综合征的治疗潜力。

特别地，提供用于治疗神经元变性的神经营养分子旨在三个目标：

-补偿神经营养因子的潜在缺乏，其与由神经元的外周或中枢靶标所供应的这些因子不足和/或这些因子的逆向运输紊乱相关；

-以非特异性方式干涉在变性级联反应中所涉及的生物化学途径；

-促进树突生长和神经末梢分支的天然补偿现象。

因此，这些化合物在大量病理学状态中，特别是在涉及外周和中枢神经系统的病理学状态中具有有益的效用。

此外，在上述范围内，运动神经元是尤其存在于脊髓和脑干中的神经元。它们的变性或它们的死亡可以导致四肢肌肉逐渐变弱，随后导致萎缩，并可能导致肌肉的痉挛状态(即持久收缩)。

由脊髓和/或延髓运动神经元的变性和死亡引起的最重要的病学理状态是肌萎缩性侧索硬化，也称为沙尔科病或Lou Gehrig病，以及脊髓性肌萎缩，特别是婴儿脊髓性肌萎缩，也称为韦-霍病或库-韦病。

此外，在伴随脊髓或外周运动神经被压碎和/或切断的创伤情况下观察到运动神经元的变性。

更一般地，对于其中牵涉脊髓运动神经元的变性或死亡的疾病，使用脊髓性肌萎缩这一术语。

肌萎缩性侧索硬化(ALS)是与不同类型的内含物例如Lewis小体相关的神经变性疾病，其特征在于脊髓和皮质运动神经元的变性，由此造成的必然后果有时与额痴呆(démence frontale)相关联。在ALS发展过程中，变性现象不仅发生在脑中，还发生在脊髓中，并通过缺少神经支配而由此发生在肌肉中。

在化学结构方面，文献资料提供了3-羟亚氨基-胆甾-4-烯的衍生物的几个实例。专利申请WO2004/082581和WO2007/118967尤其是这样，它们各自就其神经保护和细胞保护特性描述了3-羟亚氨基-胆甾-4-烯及其衍生物。

文献Liebigs Annalen der Chemie[(1991)，(1)，第89-91页]描述了化合物3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯和3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯以及其手性旋光(chiroptique)性质。但是，对于这两种化合物，该文献没有描述任何细胞保护、神经保护和/或心脏保护活性。

文献Chemical & Pharmaceutical Bulletin[(1972)，20(7)，第1567-9页]描述了3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯的反式异构体，然而对于该化合物，没有描述或提及可能的细胞保护、神经保护和/或心脏保护活性。

然而，并不是贬低目前已知的治疗方法，但迄今还没有对于制止细胞变性，特别是神经元变性来说有效的治疗方法。

因此，依然存在有对于使得能够有效地保护细胞对抗变性现象的新产品的实际需求。

本发明的化合物，除了它们是新的外，还具有非常有利的药理学特性。

有利地，它们表现出是细胞保护性的，特别是神经保护性的和/或心脏保护性的和/或肝脏保护性的。

除了其生物学活性外，这些新型化合物中的某些还可以具有与其药理学活性有关的有利特性，例如其药物动力学、其生物利用率、其溶解性、其稳定性、其毒性、其吸收和/或其代谢。这使得它们对于制备药物，特别是对于制备细胞保护性药物，非常特别地神经保护性和/或心脏保护性和/或肝脏保护性药物来说是非常有用的。

更具体地，本发明的目标在于符合式(I)的新型化合物：

其中，

-R₁可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、芳基、杂环基团，或卤素原子，或-CN、-CF₃、-NO₂、-OR^a、-SR^a、-SO₂R^a、-NR^aR^b、-OC(O)R^a、-OC(O)NR^aR^b、-C(O)OR^a、-CONR^aR^b基团，其中

(i)R^a和R^b同时或相互独立地可以选自氢原子，或C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、芳基、杂芳基基团，或者

(ii)R^a和R^b一起可以形成具有2至6个碳原子的、线性或支化的烃链，其任选地包含一个或多个双键和/或任选地被一个或多个氧原子、硫原子或氮原子间断；

-R₂可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、芳基基团，或卤素原子；

-R₃可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基基团，或卤素原子，或-CN、-OR^a、-SR^a、-SeR^a、-COOR^a、-NR^aR^b、-OCONR^aR^b基团，其中-R^a和-R^b如前所定义；或者

-R₃和R₂与它们所与之相附着的碳一起可以形成(C₃-C₆)-环烷基基团；

-R₄可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基基团；或者

-R₄和R₂一起可以在R₂和R₄所与之相附着的碳原子之间形成额外的碳-碳键(C-C键)，或C₃-C₆环烷基基团；

-R₅可以表示氢原子，或-OR^a、-SR^a、-CN、-NR^aR^b基团，其中-R^a和-R^b如前所定义；

-R₆可以表示氢原子，或-CH₃、-CH₂-CN、-CH₂-SR^a、-CH₂-SeR^a基团，或符合下述式(A)或(B)的基团：

-CH₂-Q-R^c (A) 或-C(O)-Q-R^c (B)

其中，

+Q可以表示氧原子，或-NR^a基团，其中R^a如前所定义，或间隔臂，其由线性或支化的、任选地经取代的、包含2至20个碳原子的、和此外还包含至少一个杂原子的烃链构成，

+R^c可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基、芳基、杂芳基、杂环、C₁-C₆烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、杂芳基-C(O)-、杂环-C(O)-基团，特别是由下述式(C)或(D)之一所表示的基团

-R₇可以表示氢原子，或卤素原子，或羟基基团，优选地氢原子；

-R₈可以表示氢原子，或-OR^a基团，其中R^a如前所定义，优选地为氢原子；

-R₉可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、芳基基团，或卤素原子，优选地氢原子；

-R₁₀可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基基团，卤素原子，或-CN、-CF₃、-NO₂、-OR^a、-SR^a、-SO₂R^a、-NR^aR^b、-OC(O)R^a、-OC(O)NR^aR^b、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b基团，其中R^a和R^b如前所定义，优选地为氢原子；

-R₁₀与R₉一起可以表示氧代、＝CH-C₁-C₆烷基、＝CH-芳基、＝CH-C₃-C₆环烷基基团；

-R₁₁可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基或芳基基团，优选地氢原子；或者

-R₁₁和R₉一起可以在它们所与之相附着的碳原子之间形成额外的C-C键，或一起可以形成C₃-C₆环烷基基团；

-R₁₂可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基基团，或-OR^a、-SR^a基团，其中-R^a如前所定义，优选地为氢原子；

-R₁₃可以表示

(i)C₄-C₁₂烷基基团，或C₄-C₁₂链烯基基团，特别地，选自下列的基团：

(ii)符合下述式(E)的基团：

R¹⁴-X-R¹⁵ (E)

其中：

-R¹⁴可以表示C₄-C₁₂烷基基团，或C₄-C₁₂链烯基基团，尤其是C₅-C₁₀烷基基团，优选地下述G₇基团

-X可以表示氧原子，或-NR^a基团，其中R^a如前所描述，和

-R¹⁵可以表示C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、芳基、杂芳基、杂环、

-C(O)-C₁-C₆烷基、-C(O)-C₃-C₆环烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、-C(O)-杂环基团，特别是由如前所描述的式(C)或(D)所表示的基团；

以及：

-其顺式、反式异构体，当它们存在时，

-其旋光异构体(对映异构体，非对映异构体)，当它们存在时，

-其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，

-其水合物和其溶剂化物，

-其前体药物，

除了下列化合物：

3-羟亚氨基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2，2-二甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-7，7-二甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2-(3-羟亚氨基-丁基)-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-胆甾-1，4-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4，6-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4，24-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4-烯-6-酮；

3-羟亚氨基-24-甲基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-24-甲基-胆甾-4，22-二烯-6-酮；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4-烯-6-酮；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4，22-二烯-6-酮；

3-羟亚氨基-胆甾-4，22-二烯-6-酮；

3-羟亚氨基-胆甾-4，24-二烯-6-酮；

3，6-二羟亚氨基-胆甾-4-烯；

3，6-二羟亚氨基-胆甾-4，22-二烯；

3，6-二羟亚氨基-胆甾-4，24-二烯；

3，6-二羟亚氨基-24-甲基-胆甾-4，22-二烯；

3，6-二羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4-烯；

3，6-二羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-1，4，6-三烯。

应当理解，根据本文，

◆术语“C₁-C₆烷基”是指包含1至6个碳原子的、线性或支化的烃基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基、正己基。C₁-C₄烷基基团是优选的。烷基基团可以任选地被下面所定义的芳基基团取代，在该情况下，使用芳基烷基基团这个词。芳基烷基基团的例子尤其为苄基和苯乙基。可选地，烷基基团可以被独立地选自下列的取代基之一取代一次或多次：卤素原子，或-CN、-CF₃、-COOR^a、-CONR^aR^b、-O-CONR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-SR^b基团，其中R^a和R^b基团如前所描述。除非特别说明，烃基可以包含4至12个碳原子。术语“C₂-C₆链烯基”是指具有2至6个碳原子的、包含一个或多个双键的、线性或支化或环状的烃基。可以提及例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-3-丁烯基、1-己烯基。可选地，链烯基基团可以被独立地选自下列的取代基之一取代一次或多次：卤素原子，或-CN、-CF₃、-COOR^a、-C(O)NR^aR^b、-O-C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-SR^b基团，其中R^a、R^b基团如前所描述。

◆术语“C₃-C₆环烷基”是指具有3至6个碳原子的、饱和或部分不饱和的环状烃基。环烷基基团尤其包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基这些取代基。可选地，环烷基基团可以被独立地选自下列的取代基之一取代一次或多次：卤素原子，或-CN、-CF₃、-COOR^a、-C(O)NR^aR^b、-O-C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-SR^a基团，其中R^a、R^b基团如前所描述。

◆术语“C₂-C₆炔基”是指具有2至6个碳原子的、包含至少一个三键的、线性或支化的烃基。炔基基团尤其包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基或2-戊炔基这些取代基。可选地，炔基基团可以被独立地选自下列的取代基之一取代一次或多次：卤素原子，或-CN、-CF₃、-COOR^a、-C(O)NR^aR^b、-O-C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-SR^a基团，其中R^a、R^b基团如前所描述。

◆术语“C₆-C₁₀芳基”是指具有6至10个碳原子，更优选地6个碳原子的芳香烃基。芳基基团尤其包括苯基、萘基和联苯基。可选地，芳基基团可以被独立地选自下列的取代基之一取代一次或多次：卤素原子，或烷基、-CN、-CF₃、-N₃、-NO₂、-COOR^a、-C(O)NR^aR^b、-O-C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-SR^a基团，其中R^a、R^b基团如前所描述。

◆术语“C₃-C₉杂环基”是指包含3至9个碳原子并包含一个或多个杂原子的，任选地经取代的，饱和、不饱和或芳香族的单环或多环基团。优选地，杂原子选自氧、硫和氮。杂环的例子为呋喃基、噻吩基、吡咯、咪唑、异噻唑、噻唑、异

唑、

唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲哚、异吲哚、吲唑、喹啉、异喹啉、酞嗪、喹唑啉、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、噻唑烷或苯邻二甲酰亚胺、苯并咪唑基团。可选地，杂环基团可以被独立地选自下列的取代基之一取代一次或多次：卤素原子，或烷基、-CN、-CF₃、-N₃、-NO₂、-COOR^a、-C(O)NR^aR^b、-O-C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-SR^a基团，其中R^a、R^b基团如前所描述。

◆术语“卤素”是指氯原子、溴原子、氟原子和碘原子，优选地氟原子。

◆表述“间隔臂”是具指包含2至20个碳原子的、饱和或不饱和的、任选地经取代的、并包含至少一个杂原子的烃链。特别地，所述间隔臂选自下列K1、K2、K3或K4基团，其中R^a如前所描述：

◆术语“治疗”意指预防性的、治愈性的、治标性的处理，以及救助患者(减轻痛苦、改善生存期、减慢疾病进展)等。此外，所述治疗可以与其他成分或疗法(例如尤其是用于治疗本申请中所列举的病理学状态或创伤的其他活性化合物)相组合来进行。

◆术语“细胞保护性”是指试剂(例如天然或非天然的化学化合物)发挥下列作用的能力：维持细胞彼此之间或与其他组织的相互作用；保护细胞对抗变性现象(其导致细胞功能的丧失或不希望的细胞活性，其中有或没有细胞死亡)，和/或对抗细胞功能障碍和/或对抗导致这些细胞功能障碍的变性疾病或疾患(其中所述功能障碍或所述疾病或疾患导致或不导致细胞死亡)。

◆术语“神经保护性”或“心脏保护性”或“肝脏保护性”是指所述试剂的相同特性，但特定地对于神经系统的细胞(“神经保护性”)，或特定地对于心脏系统的细胞(“心脏保护性”)，或特定地对于肝脏系统的细胞(“肝脏保护性”)。因此，可以理解，细胞保护性或者神经保护性或心脏保护性或肝脏保护性化合物为具有前面所描述的特性的化合物。

特别优选的式(I)的化合物为这些，其中：

-取代基R₁可以选自氢原子，氟原子，C₁-C₆烷基基团，可选地C₁-C₄烷基基团，和苯基基团，其任选地经取代；

-取代基R₆可以选自-CH₃基团和-CH₂-OH基团，更优选地，取代基R₆可以表示-CH₃基团。

根据本发明的另一个方面，优选的取代基R₆可以表示符合下述式(A)的基团：

-CH₂-Q-R^c (A)

其中Q可以表示氧原子，并且R^c可以表示符合下述式(C)的基团：

其他根据本发明的优选化合物为这些，其中，取代基R₆可以表示符合下述式(A)的基团：

-CH₂-Q-R^c (A)

其中Q可以表示NR^a基团，其中R^a如前所描述；并且R^c可以表示选自芳基、杂芳基、杂环的基团，特别是符合下述式(D)的基团：

其中R₄与R₂一起在R₂和R₄所与之相附着的碳原子之间形成额外的C-C键的化合物也是优选的。

同样地，相应于其中R₁₁和R₉一起在它们所与之相附着的碳原子之间形成额外的C-C键的式(I)的化合物也是优选的化合物。

根据本发明特别优选的取代基R₁₃选自下列G₁和G₂基团：

其他根据本发明的优选化合物为这样的化合物，其中，R₁₃可以表示符合下述式(E)的基团，

R₁₄-X-R₁₅ (E)

其中：

-R₁₄可以表示下述G₇基团：

-X可以表示-NH或-NCH₃，和

(i)R₁₅可以表示选自芳基、杂芳基、杂环基团的基团，特别是符合下述式(D)的基团：

(ii)R₁₅可以表示选自-C(O)-C₁-C₆烷基、-C(O)-C₃-C₆环烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、-C(O)-杂环基团的基团，特别是符合下述式(C)的基团：

特别有利地，根据本发明的优选化合物为：

-3-羟亚氨基-4-氟-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-6β-氟-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-2，2-二氟-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-2，6-二氟-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-2α-氟-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4-基)氨基]-27-降胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-19-羟基-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-19-生物素基氧基-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-2-甲基-胆甾-4-烯；

-3-羟亚氨基-4-甲氧基-胆甾-4-烯；

以及：

-其顺式、反式异构体，当它们存在时，

-其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，

-其水合物和其溶剂化物，

-其前体药物。

与药学上可接受的酸的加成盐例如可以是与下列酸形成的盐：盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、甲酸、丙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、草酸、乙醛酸、天冬氨酸、链烷磺酸例如甲磺酸或乙磺酸、芳基磺酸例如苯磺酸或对甲苯磺酸、或者羧酸。

某些本发明的优选化合物具有一个或多个氟原子。作为例子，在4位处具有氟原子的3-羟亚氨基-4-氟-胆甾-4-烯(式I-1)是特别优选的。

式I-1。

令人惊讶地，在该化合物中引入这样的氟原子使得能够改变其药理学特性。当通过口服途径施用时，以单一的反式异构体形式获得的该氟化的化合物(式I-1)呈现出经改善的暴露。

根据本发明，3-羟亚氨基-6-氟-胆甾-4-烯(式I-2)和3-羟亚氨基-2，2-二氟-胆甾-4-烯(式I-3)属于优选的化合物。

应当注意，在本文中，可以由概括性术语“卤素”表示的原子也可以是天然或合成的放射性同位素，例如对于氟来说，可以是氟-18(¹⁸F)。经放射性标记的式(I)的化合物，特别是用同位素¹⁸F标记的那些，对于医学成像是非常有用的，特别是对于正电子发射断层成像术(PET)，其是为了诊断疾病(例如在肿瘤学、神经病学和心脏病学领域中)而开发的体内成像技术。按相同的思路，对于溴和碘可提及，它们分别可以表示经放射性标记的同位素溴-75(⁷⁵Br)和碘-124(¹²⁴I)。

根据本文，概括性术语“卤素”还可以涵盖天然或合成的非放射性同位素，例如非放射性同位素氟-19(¹⁹F)，其对于生物医学研究，尤其是在认知神经科学中，和特别地对于磁共振成像(MRI)技术是有用的。

本发明的目标化合物具有非常有利的药理学特性。它们尤其具有出众的细胞保护特性，特别是神经保护特性，非常特别是针对运动神经元的神经保护特性，和心脏保护特性，和肝脏保护特性。

这些特性在后面在实验部分中进行举例说明。它们证明将上面所描述的化合物以及其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐用作细胞保护性药物，特别是神经保护性和/或心脏保护性和/肝脏保护性药物是正确的。

非常特别地，根据本发明的化合物具有出众的针对运动神经元、中枢神经系统的神经元、运动神经和外周神经的活性。

因此，本发明的目标还在于，式(I)的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)以及其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐，作为药物的用途。

因此，本发明的目标还在于式(I)的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)或者其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐在制备细胞保护性药物中的用途。

由于其细胞保护特性，根据本发明的化合物可以用于制备药物，所述药物用于治疗或预防坏死和/或病理性凋亡和/或坏死状凋亡(抗坏死和/或抗凋亡和/或抗坏死状凋亡的药物)，或者用于治疗或预防如下疾患：

■血液学和血管疾病，例如贫血，血管淀粉样变性，出血，镰状细胞病，红细胞破裂综合征，嗜中性白细胞减少症，白细胞减少症，髓发育不全，全血细胞减少症，血小板减少症，血友病；

■胃肠道疾病，例如溃疡；

■胰腺疾病，例如急性或慢性胰腺炎；

■代谢疾病，例如糖尿病和尿崩症，甲状腺炎；

■肾疾病，例如急性肾病症或肾小球肾炎；

■病毒和细菌感染，例如败血病；

■由化学试剂、毒素或药物引起的严重中毒；

■与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关的变性疾患；

■与衰老相关的病症，例如加速衰老综合征；

■炎性疾病，例如克罗恩病，类风湿性多关节炎；

■自身免疫疾病，例如红斑狼疮；

■牙疾病，例如导致组织降解的那些牙疾病，例如牙周炎；

■听觉通道病症，例如耳硬化和由抗生素诱导的耳聋；

非常特别地，由于其神经保护特性，根据本发明的药物可用于治疗或预防神经变性疾患，例如亨廷顿舞蹈病，慢性神经变性疾病，有利地，遗传性或散发性的慢性脱髓鞘性神经变性疾病，与衰老有关的神经元损伤，遗传性或损伤性的外周神经病，糖尿病性神经病或由抗癌治疗引起的神经病，脑、外周神经或脊髓的创伤，脑或脊髓的局部缺血，癫痫，遗传性的、损伤性的或与视觉感觉神经元衰老有关的变性或视神经的变性，遗传性的、创伤性的或与听觉感觉神经元衰老有关的变性，脑叶萎缩和血管性痴呆，和尤其是脊髓性肌萎缩，肌萎缩性侧索硬化，和由于脊髓或外周运动神经的创伤而引起的病理学状态。

尤其是由于其针对运动神经元的神经保护特性，它们特别地可用于治疗脊髓性肌萎缩，尤其是肌萎缩性侧索硬化或婴儿脊髓性肌萎缩，以及可用于治疗如上所提及的脊髓或外周运动神经的创伤。

一般地，化合物的日剂量将是获得治疗效果的最小剂量。该剂量将取决于先前提及的各种不同因素。对于人类来说，上面所描述的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)的剂量一般可以为0.001至100mg/千克/天。

需要时，日剂量可以以每天2、3、4、5、6或更多次服用来进行施用，或者通过在一天中采用适当的间隔施用的多个亚剂量来进行施用。

所选择的量将取决于多重因素，特别是取决于施用途径，施用持续时间，施用时刻，该化合物的清除速率，与该化合物联合使用的不同产品，患者的年龄、体重和身体健康状况，以及他/她的医疗史，和医学中已知的任何其他信息。

主治医师的处方可以从比通常使用的剂量低的剂量开始，随后这些剂量将逐渐增加，以便更好地控制可能的副作用的发生。

本发明的目标还在于药物组合物，其包含作为有效成分的至少一种式(I)的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)或者其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐。

在这些组合物中，所述有效成分有利地以生理学上有效的剂量存在；前述的组合物尤其包含有效的神经保护剂量的至少一种上述有效成分。

作为药物，可以将符合式(I)的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)以及其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐，掺入到用于经消化或肠胃外途径进行施用的药物组合物中。

此外，根据本发明的药物组合物还可以包含至少一种具有治疗活性的其他成分，其用于同时、分开或错时使用，尤其是当治疗患有如上面所定义的与细胞(特别是心脏细胞和/或运动神经元)的变性或死亡有关的病理学状态或创伤的受试者时。

根据本发明的药物组合物或药物有利地包含一种或多种惰性赋形剂或载体，即药学上无活性的且无毒的赋形剂或载体。例如，可以提及与制药用途相容的且本领域技术人员已知的盐水溶液、生理溶液、等渗溶液、缓冲溶液等。所述组合物可以包含选自分散剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂等的一种或多种试剂或载体。可在制剂(液体的和/或可注射的和/或固体的制剂)中使用的试剂或载体尤其是甲基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、环糊精、聚山梨醇酯80、甘露醇、明胶、乳糖、植物油或动物油、阿拉伯胶等。所述组合物可以配制为可注射的悬浮液、凝胶剂、油、片剂、栓剂、粉剂、明胶胶囊(gélule)、胶囊等，任选地采用确保延长和/或延缓释放的盖仑氏制剂形式或装置进行配制。对于这种类型的制剂，有利地使用诸如纤维素、碳酸盐或淀粉的试剂。

施用可以通过本领域技术人员已知的任何方法来进行，优选地经由口服途径或者通过注射，通常经由腹膜内、大脑内、鞘内、静脉内、动脉内或肌内途径。经由口服途径的施用是优选的。关于长期治疗，优选的施用途径将是舌下的、口服的或经皮的。

对于注射，所述化合物一般包装为液体悬浮液形式，其例如可以通过注射器或通过灌注来注射。应当理解，流量和/或注射剂量，或者一般地，待施用的剂量，可以由本领域技术人员根据患者、病理学状态、施用方式等进行调整。应当理解，可以进行重复施用，任选地与其他活性成分或任何药学上可接受的载体(缓冲液，盐水溶液，等渗的，在稳定剂存在下等)相组合。

本发明可用于哺乳动物中，特别是用于人类中。

本发明的目标还在于用于制备上面所描述的组合物的方法，其特征在于，根据本身已知的方法将有效成分与可接受的赋形剂，特别是药学上可接受的赋形剂相混合。

特别地，本发明的目标在于上面式(I)的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)在制备用于治疗或预防与细胞，特别是心脏细胞和/或神经元的变性或死亡有关的病理学状态或创伤的药物中的用途，不论所述变性或死亡是自然的还是偶发的。

更特别地，本发明的目标还在于上面式(I)的化合物(3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)在制备用于治疗或预防坏死和/或病理性凋亡和/或坏死状凋亡的药物(抗坏死和/或抗凋亡和/或抗坏死状凋亡的药物)或者用于治疗或预防如下疾患的药物中的用途：

■循环系统疾病，例如动脉粥样硬化，动脉硬化，和外周血管疾病，脑血管意外，动脉瘤；

■胃肠道疾病，例如溃疡；

■胰腺疾病，例如急性或慢性胰腺炎；

■代谢疾病，例如糖尿病和尿崩症，甲状腺炎；

■肾疾病，例如急性肾病症或肾小球肾炎；

■病毒和细菌感染，例如败血病；

■由化学试剂、毒素或药物引起的严重中毒；

■与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关的变性疾患；

■与衰老相关的病症，例如加速衰老综合征；

■炎性疾病，例如克罗恩病，类风湿性多关节炎；

■自身免疫疾病，例如红斑狼疮；

■牙疾病，例如导致组织降解的那些牙疾病，例如牙周炎；

■听觉通道病症，例如耳硬化和由抗生素诱导的耳聋；

■与线粒体相关的疾病(线粒体病理学状态)，例如弗里德赖希共济失调，伴随有结构性线粒体异常的先天性肌营养不良，某些肌病(MELAS综合征、MERFF综合征、皮尔森综合征)，MIDD综合征(线粒体性糖尿病和耳聋)，沃尔弗拉姆综合征，张力障碍；和特别地

■神经变性疾病，例如亨廷顿舞蹈病，慢性神经变性疾病，有利地，遗传性或散发性的慢性脱髓鞘性和神经变性疾病，尤其是多发性硬化和脑白质营养不良，与衰老有关的神经元损伤，遗传性或损伤性的外周神经病，沙-马-图病，糖尿病性神经病或由抗癌治疗引起的神经病，癫痫，脑、外周神经或脊髓的创伤，脑或脊髓的局部缺血，遗传性的、损伤性的或与视觉感觉神经元衰老有关的变性或视神经的变性，遗传性的、创伤性的或与听觉感觉神经元衰老有关的变性，脑叶萎缩和血管性痴呆，与运动神经元的变性有关的疾病和创伤，和更特别地，脊髓性肌萎缩，特别是婴儿脊髓性肌萎缩，肌萎缩性侧索硬化，多发性硬化，以及脊髓或外周运动神经的创伤。

十分特别地，本发明的目标在于式(I)的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)在制备用于治疗脊髓性肌萎缩(特别是婴儿脊髓性肌萎缩)和肌萎缩性侧索硬化的药物中的用途。

这些药物的应用通常包括给患者，特别是哺乳动物，十分特别是人类，施用治疗有效量的式I的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)，特别用于增加细胞(特别是心脏细胞和/或神经元)的存活或促进轴突的生长。

本发明的目标同样还在于用于治疗上述疾病(尤其是神经变性疾病)的方法，和尤其是用于在患有此类病理学状态或创伤的哺乳动物(一般为患者)中治疗与神经元的变性或死亡有关的病理学状态或创伤的方法，所述方法包括给这些哺乳动物施用治疗有效量的式I的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)，特别用于增加神经元的存活或促进轴突的生长。

此外，本发明的目标还在于用于治疗上面所描述的疾患，和尤其是在患有此类病理学状态或创伤的哺乳动物(一般为患者)中治疗与运动神经元的变性或死亡有关的病理学状态或创伤的方法，所述方法包括给这些哺乳动物施用治疗有效量的式I的化合物(其中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯)，特别用于增加神经元的存活。更特别地，所述与运动神经元的变性或死亡有关的病理学状态为肌萎缩性侧索硬化或婴儿脊髓性肌萎缩。根据另一个变化形式，本发明还涉及包含通过本领域技术人员已知的检测和/或可视化技术直接地或间接地可检测和/或可显现的标记基团的化合物，所述检测和/或可视化技术例如为荧光显微镜检术技术，或者利用抗生物素蛋白(链霉抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白(neutravidin))对于生物素的非常强的亲和力(Ka～10⁷M)的技术。

在该术语的一般意义上，“标记”是指诸如放射性同位素的实体，或者同位素实体，例如荧光团试剂、着色剂、半抗原、生物素等。

术语“荧光团”一般涉及这样的物质的特征，其是发荧光的，即当它被能量源激发时吸收光能(激发光)并且快速地将该能量以荧光形式释放出来(发射光)。为荧光团的该特征使得能够设想在生物系统(膜、细胞、神经元、线粒体等)中使用这样的物质作为荧光标记物，以例如实现所研究的细胞的成像。

生物素是由植物、细菌和某些真菌合成的一种辅酶，其也称为维生素H。借助于对于生物素具有非常强的亲和力(Ka～10⁷M)的抗生物素蛋白(链霉抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白)来检测生物素。生物素的结构如下：

生物素。

在现有技术中已知，向具有生物学活性的物质中掺入生物素基团使得能够通过使用利用抗生物素蛋白对于生物素的非常强的亲和力的方法，来分离和/或鉴定能够与所述活性物质相互作用的蛋白质靶标或其他非蛋白质的化合物。如此分离出的蛋白质靶标或其他非蛋白质的化合物例如通过质谱法来表征。在本领域技术人员已知的应用中，可以提及例如：使用生物素化的化合物的诊断测试；采用生物素化的抗体的ELISA测试(酶联免疫吸附测定法)；基于使用固定化抗生物素蛋白柱(在其上负载有生物素化的化合物)的亲和层析；蛋白质组学分析技术(2D电泳和质谱法)，等等。

根据本发明的标记基团可以选自：生物素或荧光团基团，例如7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑-4-基(式D)；

荧光团；蒽；和荧光素。优选地，根据本发明的标记基团选自：生物素和荧光团基团7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑-4-基(式D)。

用生物素或用荧光团基团标记的根据本发明的化合物是对于下列情形来说非常有用的探针：

-可视化和/或检测与经标记的化合物相接触的细胞，

-研究它们在活的生物(人或动物)中的分布，和它们在细胞区室(膜、细胞、神经元、线粒体、核、内质网、高尔基体、溶酶体、内体和其他细胞器等)中的定位，

-实施检测能够与所述经标记的化合物相互作用的蛋白质或其他非蛋白质的化合物的方法，

-鉴定它们的分子靶标，

-从分子角度研究分子-蛋白质相互作用，

-检测胆甾-4-烯-3-酮肟及其衍生物的特异性单克隆抗体，

-开发和施行结合测定法，其尤其使得能够进行关于所考虑的靶标的更精化的配体的优化，

-开发含量测定方法，

-开发筛选配体的新工具。

这样的标记基团的掺入不引起根据本发明的经标记的化合物的生物学活性的丧失，并且使得能够使用这些经标记的化合物作为探针，特别是作为示踪剂或标记试剂。

因此，根据本发明的另一个目标是，提供包含选自NBD基团和生物素的标记基团的式(I)的化合物。

此外，本发明的目标还在于，式I的化合物作为探针，特别是作为示踪剂或标记试剂的用途，其中：

-R₆可以表示符合下述式(A)的基团：

-CH₂-Q-R^c (A)

其中，

-Q可以表示氧原子，或NR^a基团，其中R^a如前所描述，和

-R^c可以表示符合式(C)或(D)的基团

-R₁₃可以表示符合下述式(E)的基团：

R₁₄-X-R₁₅ (E)

其中

-R₁₄可以表示下述G₇基团

-X可以表示氧原子，或NR^a，其中R^a如前所描述，特别地表示NH或NCH₃，和

-R₁₅可以表示符合下述式(C)或(D)的基团：

根据本发明的作为示踪剂或标记试剂的特别优选的化合物由下述式(III)、(IV)或(V)来表示：

其中，取代基R₁可以如前所描述。优选地，取代基R₁为氢原子。

根据本发明的式(I)的化合物可以通过各种合成方法来获得，所述合成方法尤其利用本领域技术人员熟知的酮的肟化反应。下面的流程阐明了用于制备式(I)的化合物的方法：

作为例子，特别合适的用于获得式(I)的化合物的方法在于，使：

(i)式(II)的化合物，其中基团R₁至R₁₃如前所定义，与

(ii)羟胺的卤化物，例如盐酸羟胺

进行反应。

有利地，该方法可以在适合的溶剂例如吡啶中进行。

可以通过本领域技术人员熟知的各种方法从反应介质中分离出式(I)的化合物。可选地，可以将式(I)的化合物转变为其药学上可接受的盐。式(II)的化合物(其用作用于获得式(I)的化合物的起始产物)是商购可得的，或者通过本领域技术人员已知的方法来制备。

下面的实施例举例说明本发明，而不是限制本发明。在实施例中和在制备中所描述的化合物的结构根据常用技术(核磁共振，质谱学等)来确定。

缩写：

PE：石油醚

EA：乙酸乙酯

s：单峰

d：双重峰

t：三重峰

sept：七重峰

实施例1-式(II)的化合物的制备

实施例1a-4-氟-胆甾-4-烯-3-酮的合成

4-氟-胆甾-4-烯-3-酮根据在下述文章中所描述的方法来制备：Toyota，A.等人，Chemical & Pharmaceutical Bulletin(1994)，42(3)，459-61；和Nakanishi，S.等人：Chemistry & Industry(London，UnitedKingdom)(1960)，1136-7。

实施例1b-6β-氟-胆甾-4-烯-3-酮的合成

6β-氟-胆甾-4-烯-3-酮根据在下述文章中所描述的方法之一来制备：Thomas，M.G.等人，Journal of the Chemical Society，PerkinTransactions 1：Organic and Bio-Organic Chemistry(1999)，(21)，3191-3198；Poss，A.J.等人，Tetrahedron Letters(1995)，36(27)，4721-4；Edmunds，J.J.等人，Journal of the Chemical Society，Chemical Communications(1989)，(13)，881-3；Salmond，W.G.等人，Ger.Offen.(1983)，DE 3225747；Nakanishi，S.等人，Journal of theAmerican Chemical Society(1959)，815259-60。

实施例1c-2，2-二氟-胆甾-4-烯-3-酮和2，6-二氟-胆甾-4-烯-3-酮的合成

在圆底烧瓶中，添加悬浮在260mL甲醇中的10g(26mmol)胆甾-4-烯-3-酮，随后添加17.4g(27.2mmol)1-氟-4-羟基-1，4-二氮

双环[2，2，2]辛烷双(四氟硼酸盐)，其以50质量％在氧化铝上。将该介质回流搅拌16小时，并再添加7.7g氟化试剂；在回流下继续搅拌5小时，和在环境温度下继续搅拌4天。然后，将该反应介质在真空下浓缩，并将残留物接纳在二氯甲烷中。在过滤后，将获得的溶液在真空下浓缩，并将残留物接纳在500mL的在乙腈中的10％盐酸中。将悬浮液在环境温度下搅拌2小时，并过滤。沉淀物用乙酸乙酯进行洗涤，和滤液用乙酸乙酯进行萃取，并将有机相在真空下浓缩。

通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱剂：PE/EA，100％PE至80/20PE/EA的梯度)和随后通过半制备型HPLC对沉淀物进行纯化，这使得能够分离出17.5mg 2，6-二氟-胆甾-4-烯-3-酮和23.1mg 2，2-二氟-4-胆甾烯-3-酮。

将从滤液获得的残留物通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱剂：PE/EA，100％PE至80/20PE/EA的梯度)和随后通过半制备型HPLC来进行纯化，这使得能够分离出另外82mg的2，2-二氟-胆甾-4-烯-3-酮。

●2，6-二氟-胆甾-4-烯-3-酮

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.11(d，1H，4-CH)，5.21(dddd，1H，2-CH)，4.86(ddd，1H，6-CH)，0.71(s，3H，18-CH₃)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝5.82分钟，m/z＝421[M+H]⁺

●2，2-二氟-胆甾-4-烯-3-酮

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.26(d，1H，4-CH)，0.73(s，3H，18-CH₃)

¹⁹F-NMR(CDCl₃)：δ(ppm，未校准)-86.33(ddd，2-CF_a)，-101.04(d，2-CF_b)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝6.48分钟，m/z＝421[M+H]⁺

实施例1d-2α-氟-胆甾-4-烯-3-酮的合成

在圆底烧瓶中，添加悬浮在130mL甲醇中的5g(13mmol)胆甾-4-烯-3-酮，随后添加8.7g(13.6mmol)1-氟-4-羟基-1，4-二氮

双环[2，2，2]辛烷双(四氟硼酸盐)，其以50质量％在氧化铝上。将该介质回流搅拌3小时，并添加4.3g氟化试剂；在回流下继续搅拌3小时，和在环境温度下继续搅拌过夜。然后，将该反应介质在真空下浓缩，并将残留物接纳在二氯甲烷中。在过滤后，将获得的溶液在真空下浓缩，并将残留物接纳在250mL的在乙腈中的10％盐酸中。将悬浮液在环境温度下搅拌1小时，并过滤。沉淀物用乙酸乙酯进行洗涤，和滤液用乙酸乙酯进行萃取，并将有机相在真空下浓缩。

将所获得的残留物通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱剂：PE/EA，100％PE至95/5PE/EA的梯度)和随后通过半制备型HPLC来进行纯化，这使得能够分离出30mg 2α-氟-胆甾-4-烯-3-酮。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝6.27分钟(顺式/反式)，m/z＝403[M+H]⁺

实施例1e-25-氟-胆甾-4-烯-3-酮的合成

在0℃下，在圆底烧瓶中引入100mg(247mmol)25-氟-5-胆甾烯-3β-醇和15mL丙酮，随后添加160μL琼斯试剂。将该介质在0℃下搅拌9分钟，随后通过添加乙醇来终止反应。在低于30℃的温度下在真空下进行浓缩后，将残留物接纳在10mL乙醇中，并添加100μL1N盐酸溶液。将该介质在50-60℃下搅拌15分钟，随后在真空下浓缩。将所获得的残留物接纳在水中，并用乙酸乙酯进行萃取；将有机相分开，用水进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。在通过在硅胶上的快速色谱法(石油醚，随后为石油醚/乙酸乙酯95/5)进行纯化后，获得69mg的该烯酮，产率为69％。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝5.41分钟，m/z＝403[M+H]⁺

实施例1f-25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4-基)氨基]-27-降胆甾-5-烯-3-酮和25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯 -3-酮的合成

步骤1：叔丁基二甲基甲硅烷基-25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾醇的合成

在圆底烧瓶中，引入在40mL甲醇中的2.83g(5.65mmol)叔丁基二甲基甲硅烷基-25-酮基-27-降胆甾醇⁽¹⁾、3.62g(53.67mmol)N-甲基胺盐酸盐和355mg(5.65mmol)氰基氢硼化钠。将溶液在环境温度下搅拌过夜，随后将该介质在真空下浓缩。将残留物接纳在2M碳酸钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取3次。合并有机相，用饱和氯化钠溶液进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，过滤，并在真空下浓缩。就这样使用所获得的产物而无需纯化。

LC/DEDL/MS：T_R＝10.42分钟，m/z＝516[M+H]⁺

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)5.29-5.33(密集的，1H，6-CH)，3.47(m，1H，3-CH)，2.10-2.55(密集的，4H，25-CH和NCH₃)，0.67(s，3H，18-CH₃)，0.05(s，6H，Si(CH₃)₂)

(1)Ferraboschi，P.等人，Tetrahedron Asymmetry(1999)，10(13)，2497-2500；Ferraboschi，P.等人，Tetrahedron：Asymmetry(1998)，9(13)，2193-2196；Okamoto，M.等人，Jpn.Kokai Tokkyo Koho(1997)，15pp.CODEN：JKXXAF JP 09249691 A 19970922；Satsangi，R.K.等人，Analyst(Cambridge，United Kingdom)(1992)，117(6)，953-7。

步骤2：25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾醇的合成

在圆底烧瓶中，引入在12mL二氯甲烷中的2g(3.87mmol)在步骤1中获得的叔丁基二甲基甲硅烷基-25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾醇。逐滴添加4mL的在二

烷中的4N氯化氢溶液。将该反应介质在环境温度下搅拌1小时，随后在玻璃料上进行过滤。通过添加氢氧化钠溶液来使滤液碱化，并用二氯甲烷萃取3次。合并有机相，通过无水硫酸镁进行干燥，过滤，并在真空下浓缩。就这样使用所获得的产物而无需纯化。

LC/DEDL/MS：T_R＝1.85和2.08分钟，m/z＝402[M+H]⁺

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)5.29-5.40(密集的，1H，6-CH)，3.50(m，1H，3-CH)，2.10-2.65(密集的，4H，25-CH和NCH₃)，0.67(s，3H，18-CH₃)

步骤3：25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾-4-烯-3-酮的合成

在0℃下，在圆底烧瓶中引入870mg(2.16mmol)在步骤1中获得的25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾醇、15mL丙酮和6mL二氯甲烷，随后添加1.1mL琼斯试剂。将该介质在0℃下搅拌20分钟，随后通过添加2mL乙醇来终止反应。在低于30℃的温度下在真空下进行浓缩后，将残留物接纳在15mL乙醇中，并添加725μL 1N盐酸溶液。将该介质在50℃下搅拌20分钟，随后在真空下浓缩。将所获得的残留物接纳在水中，并用二氯甲烷萃取3次；合并有机相，用饱和氯化钠溶液进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。在通过在硅胶上的快速色谱法(二氯甲烷/甲醇，95/5至8/2的梯度)进行纯化后，获得106mg的该烯酮，产率为12％。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝7.35分钟，m/z＝400[M+H]⁺

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)5.72(s，1H，4-CH)，2.86(m，1H，25-CH)，2.10-2.60(密集的，3H，NCH₃)，0.70(s，3H，18-CH₃)

步骤4：25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4-基)氨基]-27-降胆甾-5-烯-3-酮的合成

在圆底烧瓶中，引入在8mL二氯甲烷中的106mg(0.265mmol)在步骤3中获得的25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾-4-烯-3-酮、58.3mg(0.292mmol)4-氯-7-硝基苯并呋咱和74μL三乙胺。将溶液在环境温度下避光搅拌过夜，随后将该反应介质在二氯甲烷中进行稀释。将所获得的溶液用1N盐酸溶液进行洗涤(3次)，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。将所获得的残留物通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/乙酸乙酯95/5)和随后通过反相快速色谱法(洗脱剂：乙腈)进行纯化。以栗色固体的形式获得27mg所期望的产物(产率为18％)。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝4.75分钟，m/z＝563[M+H]⁺

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)8.44(d，1H，NBD-CH)，6.16(d，1H，NBD-CH)，5.71(s，1H，4-CH)，2.93-3.25(密集的，4H，25-CH和NCH₃)，0.66(d，3H，18-CH₃)

步骤4’：25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯-3-酮的合成

在圆底烧瓶中，引入在2mL N，N-二甲基甲酰胺和1mL二氯甲烷中的82mg(0.205mmol)在步骤3中获得的25-(N-甲基氨基)-27-降胆甾-4-烯-3-酮、43mg(0.226mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、33mg(0.267mmol)N，N-二甲基氨基吡啶和55mg(0.226mmol)D(+)-生物素。将该反应介质在环境温度下搅拌过夜，随后将其搀大量水冲稀，并用二氯甲烷萃取3次。合并有机相，用饱和氯化钠溶液进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。在通过在硅胶上的快速色谱法(100％二氯甲烷至95/5二氯甲烷/甲醇的梯度)进行纯化后，获得90mg的该酰胺，产率为70％。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝9.14分钟，m/z＝626[M+H]⁺

实施例1g-19-生物素基氧基-胆甾-4-烯-3-酮的合成

在圆底烧瓶中，引入在3.5mL N，N-二甲基甲酰胺和2mL二氯甲烷中的112mg(0.582mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、84mg(0.688mmol)N，N-二甲基氨基吡啶和142mg(0.582mmol)D(+)-生物素。将该介质在环境温度下搅拌45分钟，随后逐滴添加溶解在2mL N，N-二甲基甲酰胺中的212mg(0.529mmol)19-羟基-胆甾-4-烯-3-酮＊。将该介质在环境温度下搅拌48小时，随后将其在真空下浓缩。将残留物接纳在水中，并用乙酸乙酯萃取3次。合并有机相，用饱和氯化钠溶液进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。在通过在硅胶上的快速色谱法(100％二氯甲烷至95/5二氯甲烷/甲醇的梯度)进行纯化后，获得180mg 19-生物素基氧基-胆甾-4-烯-3-酮这一酯，产率为54％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)5.91(s，1H)，4.72(d，1H)，4.52(m，1H)4.32(m，1H)，4.12(d，1H)，3.13(m，1H)，2.93(dd，1H)，0.70(s，3H)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝4.85分钟，m/z＝627[M+H]⁺

＊化合物19-羟基-胆甾-4-烯-3-酮是商购可得的。

实施例1h-2-甲基-胆甾-4-烯-3-酮的合成

2-甲基-胆甾-4-烯-3-酮根据在下述文章中所描述的方法来制备：Julia，S.等人，Journal of Chemical society(1964)，Aug，2633-9。

实施例1i-4-甲氧基-胆甾-4-烯-3-酮的合成

4-甲氧基-胆甾-4-烯-3-酮根据在下述文章中所描述的方法来制备：Patel，K.M.等人，Journal of Organic Chemistry(1975)，40(10)，1504-5；和Engelfried，O.等人，专利DE 1117112(1961)。

实施例2-式(I)的化合物的合成

实施例2a-一般方法A：

在圆底烧瓶中，引入在吡啶(大约10至20mL/mmol)中的1个当量的酮和6个当量的盐酸羟胺。将溶液在环境温度下搅拌过夜，随后将该反应介质在真空下浓缩。将所获得的残留物接纳在水中，并用二氯甲烷或用乙酸乙酯进行萃取；将有机相分开，用水进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。如果需要，将该产物通过在硅胶上的快速色谱法进行纯化。

实施例2b-3-羟亚氨基-4-氟-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1a中制备的4-氟-胆甾-4-烯-3-酮开始，获得3-羟亚氨基-4-氟-胆甾-4-烯，具有定量产率。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)3.02(dd，2H，2-CH₂)，2.23(td，1H，6-CH_a)，0.69(3H，18-CH₃)

¹⁹F-NMR(CDCl₃)：δ(ppm，未校准)-137.35(s，4-CF)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝6.42分钟，m/z＝418[M+H]⁺

实施例2c-3-羟亚氨基-6β-氟-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1b中制备的6β-氟-胆甾-4-烯-3-酮开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-6β-氟-胆甾-4-烯，产率为93％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.75(d，0.3H，4-CH[顺式])，6.07(d，0.7H，4-CH[反式])，5.01(dt，0.3H，6-CH [顺式])，4.97(dt，0.7H，6-CH[反式])，3.07(d，0.7H，2-CH_a[反式])，0.72(s，3H，18-CH₃)

¹⁹F-NMR(CDCl₃)：δ(ppm，未校准)-159.23(td，6-CF[反式])，-162.05(td，6-CF[顺式])

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝5.88和5.96分钟(顺式/反式)，m/z＝418[M+H]⁺

实施例2d-3-羟亚氨基-2，2-二氟-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1c中制备的2，2-二氟-4-胆甾烯-3-酮开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-2，2-二氟-胆甾-4-烯，产率为89％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)7.18(d，0.3H，4-CH[顺式])，6.49(d，0.7H，4-CH[反式])，3.09(宽d，0.7H)，0.71(s，3H，18-CH₃)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝6.06分钟，m/z＝436[M+H]⁺

实施例2e-3-羟亚氨基-2，6-二氟-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1c中制备的2，6-二氟-胆甾-4-烯-3-酮开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-2，6-二氟-胆甾-4-烯，产率为97％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.84(s，0.35H，4-CH[顺式])，6.25(s，0.65H，4-CH[反式])，5.94(宽d，1H，2-CH)，5.13(宽d，1H，6-CH)，0.70(s，3H，18-CH₃)

¹⁹F-NMR(CDCl₃)：δ(ppm，未校准)-171.52(td，2-CF[顺式])，-180.75(td，2-CF[反式])，-183.56(d，6-CF[顺式])，-184.02(d，6-CF[反式])

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝5.68分钟，m/z＝436[M+H]⁺

实施例2f-3-羟亚氨基-2α-氟-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1d中制备的2α-氟-胆甾-4-烯-3-酮开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-2α-氟-胆甾-4-烯，产率为97％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.87(s，0.3H，4-CH[顺式])，6.21(s，0.7H，4-CH[反式])，5.08(ddd，1H，2-CH)，3.08(宽d，0.7H)，0.69(s，3H，18-CH₃)

¹⁹F-NMR(CDCl₃)：δ(ppm，未校准)-183.12(ddd，2-CF [顺式])，-183.66(ddd，2-CF[反式])

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝5.78和5.99分钟(顺式/反式)，m/z＝418[M+H]⁺

实施例2g-3-羟亚氨基-25-氟-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1e中制备的25-氟-胆甾-4-烯-3-酮开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-25-氟-胆甾-4-烯，产率为83％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.46(s，0.4H，4-CH[顺式])，5.77(s，0.6H，4-CH[反式])，3.04(d，0.6H，2-CH_a [反式])，0.70(s，3H，18-CH₃)

¹⁹F-NMR(CDCl₃)：δ(ppm，未校准)-137.01(sept，25-CF)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝4.44和4.84分钟(顺式/反式)，m/z＝418[M+H]⁺

实施例2h-3-羟亚氨基-25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4- 基)氨基]-27-降胆甾-4-烯的合成

在圆底烧瓶中，引入在2mL吡啶中的25mg(0.044mmol)在实施例1f-步骤4中制备的25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4-基)氨基]-27-降胆甾-4-烯-3-酮和25mg(0.36mmol)盐酸羟胺。将溶液在环境温度下搅拌过夜，随后将该反应介质在二氯甲烷中进行稀释。将所获得的溶液用水进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。如此以橙色固体的形式获得26mg 3-羟亚氨基-25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4-基)氨基]-27-降胆甾-4-烯(产率为89％)。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝3.34，3.64和3.95分钟，m/z＝578[M+H]⁺

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)8.45(d，1H，NBD-CH)，6.45(s，0.34H，4-CH[顺式])，6.16(d，1H，NBD-CH)，5.80(s，0.66H，4-CH[反式])，2.94-3.30(密集的，4H，25-CH和NCH₃)，0.64(d，3H，18-CH₃)

实施例2i-3-羟亚氨基-25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯的合成

在圆底烧瓶中，引入在2mL吡啶中的65mg(0.104mmol)在实施例1f-步骤4’中制备的25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯-3-酮和65mg(0.935mmol)盐酸羟胺。将溶液在环境温度下搅拌过夜，随后将该吡啶在真空下浓缩。将残留物接纳在水中，并用乙酸乙酯萃取4次。合并有机相，用饱和氯化钠溶液进行洗涤，通过无水硫酸镁进行干燥，并在真空下浓缩。如此以米色固体的形式获得66mg 3-羟亚氨基-25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯(产率为98％)。

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝8.56和8.81分钟，m/z＝641[M+H]⁺

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.46(s，0.3H，4-CH[顺式])，5.77(s，0.7H，4-CH[反式])，2.68-2.81(密集的，4H)，2.85-3.23(密集的，3H)，3.82(m，0.5H)，4.33(m，1H)，4.51(m，1H)，4.73(m，0.5H)，4.90-5.01(密集的，1H)，5.35-5.49(密集的，1H)，0.68(宽s，3H，18-CH₃)

实施例2j-3-羟亚氨基-7α-羟基-胆甾-4-烯

根据方法A，从7α-羟基-胆甾-4-烯-3-酮＊开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-7α-羟基-胆甾-4-烯，具有定量产率。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.56(s，0.3H)，5.87(s，0.7H)，3.85-3.94(密集的，1H)，3.92-4.08(密集的，1H)，3.05(dt，0.7H)，2.56(宽d，1H)，1.07(s，3H)，0.90(d，3H)，0.86(dd，6H)，0.69(s，3H)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝3.19和3.56分钟(顺式/反式)，m/z＝416[M+H]⁺

＊7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮是商购可得的。

实施例2k-3-羟亚氨基-19-羟基-胆甾-4-烯

根据方法A，从19-羟基-胆甾-4-烯-3-酮＊开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-19-羟基-胆甾-4-烯，产率为96％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.75(s，0.25H)，6.07(s，0.75H)，3.69-3.81(密集的，1H)，3.92-4.08(密集的，1H)，2.96(宽d，1H)，0.68(s，3H)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝3.81和4.27分钟(顺式/反式)，m/z＝416[M+H]⁺

＊19-羟基-4-胆甾烯-3-酮是商购可得的。

实施例2l-3-羟亚氨基-19-生物素基氧基-胆甾-4-烯

根据方法A，从在实施例1g中制备的19-生物素基氧基-胆甾-4-烯-3-酮这一酯开始，以顺式/反式混合物的形式获得3-羟亚氨基-19-生物素基氧基-胆甾-4-烯，产率为92％。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.76(s，0.3H)，6.62(宽s，1H)，5.93(s，0.7H)，4.89(d，0.7H)，4.73(d，0.3H)，4.50(m，1H)，4.34(m，1H)，4.03(d，0.3H)，3.85(d，0.7H)，2.15-3.20(密集的，8H)，0.69(s，3H)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝4.41和4.55分钟(顺式/反式)，m/z＝642[M+H]⁺

实施例2m-3-羟亚氨基-2-甲基-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1h中制备的2-甲基-胆甾-4-烯-3-酮开始，获得3-羟亚氨基-2-甲基-胆甾-4-烯，具有定量产率。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)6.44(s，0.7H)，5.78(s，0.20H)，0.70(s，3H)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝6.42和6.74分钟(顺式/反式)，m/z＝414[M+H]⁺

实施例2n-3-羟亚氨基-4-甲氧基-胆甾-4-烯的合成

根据方法A，从在实施例1i中制备的4-甲氧基-胆甾-4-烯-3-酮开始，获得3-羟亚氨基-4-甲氧基-胆甾-4-烯，具有定量产率。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ(ppm)3.57(s，3H)，3.03(dd，2H)，0.69(s，3H)

LC/UV/MS(254nm)：T_R＝6.36分钟，m/z＝430[M+H]⁺

药理学研究

根据下述实验步案来测试这些化合物：

式(I)的化合物对于运动神经元的存活的影响

为了证明式(I)的化合物的神经保护作用，申请人研究了它们对于大鼠运动神经元营养剥夺的体外模型的活性。可以有用地参考关于培养脊髓运动神经元的本申请人的专利申请WO0142784。

解剖大鼠E14胚胎的脊髓，并在胰蛋白酶消化后通过研磨分离出腹侧部分。

通过已知的方法(Camu等人，1993，Purification of spinalmotoneurons from chicken and rat embryos by immunopanning.In“Immunoselection Strategies for Neural cell culture”，Neuroprotocols：A companion to Methods in Neurosciences 2，191-199；Henderson等人，1993，Neutrophins promote motor neuron survival and are presentin embryonic limb bud.Nature 363(6426)：266-70)将运动神经元与其他脊髓细胞相分开。

将细胞在密度梯度上进行离心。运动神经元富集在大细胞的级分(密度最低)中。将该级分的细胞与抗-p75(其为存在于运动神经元上的表面抗原)抗体一起进行孵育。

添加与磁珠相偶联的二抗，并使细胞混合物通过在磁铁中的柱(Arce等人，1999 Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promotesurvival of m ouse motoneurons purified by a novel technique.J.Neurosci Res 55(1)：119-26)。仅运动神经元被保留：其纯度为90％左右。

根据Raoul等人，1999，Programmed cell death of embryonicmotoneurons triggered through the Fas death receptor.J Cell Biol147(5)：1049-62，在聚鸟氨酸-层粘连蛋白的基质上的培养孔中，将运动神经元以低密度接种在经补充的Neurobasal培养基(GIBCO)中。

在每个系列中包括阴性对照(不存在营养因子)和阳性对照(在1ng/ml BDNF(脑衍生神经营养因子)、1ng/ml GDNF(神经胶质衍生神经营养因子)和10ng/ml CNTF(睫状神经营养因子)存在下，其由美国公司PEPROTECH，Inc.和Sigma-Aldrich公司销售)。

在接种后60分钟，添加待测试的化合物，并将培养物于37℃在5％CO₂下维持3天。

运动神经元具有在不存在神经营养因子的情况下死亡的自发倾向(Pettmann和Henderson，1998，Neuronal cell death.Neuron 20(4)：633-47)。在3天后，在钙荧光素(其在活细胞中变得发荧光)存在下温育细胞后，通过测量荧光来评价存活。

于37℃在5％CO₂和饱和湿度下培养3天后，在补充有神经营养因子的培养基中高达50％的最初接种的运动神经元存活，而在未添加神经营养因子的培养基中少于15％的运动神经元存活。

通过与在添加有神经营养因子的培养基中运动神经元的存活相比较而言，当将它们添加至Neurobasal培养基(GIBCO)时它们阻止运动神经元死亡的能力，来评价待测试的化合物的神经保护活性。

在能够允许在Neurobasal培养基中获得更好的运动神经元存活率的浓度下，根据本发明的式I的化合物显示出神经保护活性。

该存活率表示为，相对于由神经营养因子所导致的存活而言，在用待测试的化合物进行处理后活细胞的数目。因此，该比例可以表示，相对于由神经营养因子所导致的存活而言，由于受试化合物而引起的存活百分数。如果该比例大于0，那么所述化合物对于运动神经元的存活的影响是正向的。

所获得的结果如下：

下列实施例的化合物	浓度(μM)	比例
			2b	3	0.73
2c	3	0.50
			2d	3	0.50
2e	3	0.37
			2f	3	0.27
2h	1	0.66
			2i	3	0.42
2k	3	0.49
			2l	1	0.32
2m	1	0.42
			2n	1	0.34

由于其对于脊髓运动神经元的营养效用，因此根据本发明的式(I)的化合物显得可能可用作药物，尤其是在治疗肌萎缩中，特别是在治疗肌萎缩性侧索硬化或婴儿脊髓性肌萎缩中，和在治疗脊髓的创伤中。

Claims

1.符合式I的化合物，

其中，

-R₄可以表示氢原子，或C₁-C₆烷基基团；或者

-R₄和R₂一起可以在R₂和R₄所与之相附着的碳原子之间形成额外的碳-碳键，或C₃-C₆环烷基基团；

-CH₂-Q-R^c (A) 或-C(O)-Q-R^c (B)

其中，

-R₁₀与R₉一起可以表示氧代、＝CH-C₁-C₆烷基、＝CH-芳基、＝CH-(C₃-C₆)-环烷基基团；

-R₁₃可以表示

(ii)符合下述式(E)的基团：

R¹⁴-X-R¹⁵ (E)

其中：

-X可以表示氧原子，或-NR^a基团，其中R^a如前所描述，和

以及：

-其顺式、反式异构体，当它们存在时，

-其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，

-其水合物和其溶剂化物，

-其前体药物，

除了下列化合物：

3-羟亚氨基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2，2-二甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-7，7-二甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2-(3-羟亚氨基-丁基)-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-胆甾-1，4-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4，6-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4，24-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-4-烯-6-酮；

3-羟亚氨基-24-甲基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-24-甲基-胆甾-4，22-二烯-6-酮；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4-烯-6-酮；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4，22-二烯-6-酮；

3-羟亚氨基-胆甾-4，22-二烯-6-酮；

3-羟亚氨基-胆甾-4，24-二烯-6-酮；

3，6-二羟亚氨基-胆甾-4-烯；

3，6-二羟亚氨基-胆甾-4，22-二烯；

3，6-二羟亚氨基-胆甾-4，24-二烯；

3，6-二羟亚氨基-24-甲基-胆甾-4，22-二烯；

3，6-二羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4-烯；

3，6-二羟亚氨基-24-乙基-胆甾-4，22-二烯；

3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯；

3-羟亚氨基-胆甾-1，4，6-三烯。

2.根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₁可以表示氢原子。

3.根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₁可以表示C₁-C₆烷基基团，可选地C₁-C₄烷基基团。

4.根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₁可以表示氟原子。

5.根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₁可以表示苯基，其任选地经取代。

6.根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₆选自CH₃基团和CH₂-OH基团。

7.根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₆可以表示符合下述式(A)的基团：

-CH₂-Q-R^c (A)

8.根据权利要求1的化合物，其特征在于，所述化合物相应于式(I)，其中R₄与R₂一起在R₂和R₄所与之相附着的碳原子之间形成额外的C-C键。

9.根据权利要求1的化合物，其特征在于，所述化合物相应于式(I)，其中R₁₁与R₉一起在R₁₁和R₉所与之相附着的碳原子之间形成额外的C-C键。

10.根据权利要求1至9中任一项的化合物，其特征在于，R₇和R₈是氢原子。

11.根据权利要求1至10中任一项的化合物，其特征在于，R₉、R₁₀、R₁₁和R₁₂是氢原子。

12.根据权利要求1至11中任一项的化合物，其特征在于，R₆是甲基。

13.根据权利要求1至12中任一项的化合物，其特征在于，R₁₃可以表示选自下列的基团：

14.根据权利要求13的化合物，其特征在于，R₁₃＝G₁

15.根据权利要求13的化合物，其特征在于，R₁₃＝G₂

16.根据权利要求1至12中任一项的化合物，其特征在于，R₁₃可以表示符合下述式(E)的基团：

R₁₄-X-R₁₅ (E)

其中：

-R₁₄可以表示下述G₇基团

-X可以表示NH或NCH₃，和

-R₁₅可以表示选自芳基、杂芳基、杂环的基团。

17.根据权利要求16的化合物，其特征在于，R₁₅可以表示由下述式(D)所表示的基团：

18.根据权利要求1至12中任一项的化合物，其特征在于，R₁₃可以表示符合下述式(E)的基团：

R₁₄-X-R₁₅ (E)

其中：

-R₁₄可以表示下述G₇基团

-X可以表示NH或NCH₃，和

-R₁₅可以表示符合下述式(C)的基团

19.根据前述权利要求中任一项的化合物，其特征在于，所述化合物为：

3-羟亚氨基-4-氟-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-6β-氟-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2，2-二氟-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2，6-二氟-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2α-氟-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-25-[甲基(7-硝基-2，1，3-苯并

二唑-4-基)氨基]-27-降胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-25-((N-(+)-生物素酰基-N-甲基)氨基)-27-降胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-19-羟基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-19-生物素基氧基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-2-甲基-胆甾-4-烯；

3-羟亚氨基-4-甲氧基-胆甾-4-烯。

20.权利要求1至19中任一项之中所描述的式I的化合物在制备药物中的用途，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯。

21.权利要求1至19中任一项之中所描述的化合物在制备细胞保护性药物，优选地心脏保护性和/或神经保护性和/或肝脏保护性药物中的用途，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯。

22.根据权利要求1至19之一的化合物在制备用于治疗或预防坏死和/或病理性凋亡和/或坏死状凋亡的药物(抗坏死和/或抗凋亡和/或抗坏死状凋亡的药物)中的用途，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯。

23.根据权利要求1至19之一的化合物在制备用于治疗与细胞，特别是心脏细胞和/或神经元的变性或死亡有关的病理学状态或创伤的药物中的用途，不论所述变性或死亡是自然的还是偶发的，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯。

24.根据权利要求1至19之一的化合物或者其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐在制备用于治疗如下疾患的药物中的用途，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯：

■骨、关节、结缔组织和软骨疾病；

■肌疾病，例如肌营养不良；

■皮肤疾病；

■心血管疾病；

■循环系统疾病；

■血液学和血管疾病；

■肺疾病，其中包括慢性阻塞性肺疾病；

■胃肠道疾病；

■肝脏疾病；

■胰腺疾病；

■代谢疾病；

■肾疾病；

■病毒和细菌感染；

■严重中毒；

■与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关的变性疾患；

■与衰老相关的病症；

■炎性疾病；

■自身免疫疾病；

■牙病症；

■眼疾病或病症；

■听觉通道病症；

■与线粒体相关的疾病(线粒体病理学状态)；

■神经学疾病和神经变性疾病。

25.根据权利要求1至19之一的化合物或者其酯和/或其与药学上可接受的酸的加成盐在制备用于治疗神经变性疾病的药物中的用途，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯。

26.根据权利要求24或25的用途，其特征在于，所述神经保护性药物用于治疗选自下列的神经变性疾病：亨廷顿舞蹈病，遗传性或散发性的慢性神经变性疾病，与衰老有关的神经元损伤，遗传性或损伤性的外周神经病，沙-马-图病，糖尿病性神经病或由抗癌治疗引起的神经病，癫痫，慢性脱髓鞘性和神经变性疾病，尤其是多发性硬化和脑白质营养不良，脑、外周神经或脊髓的创伤，脑或脊髓的局部缺血，遗传性的、损伤性的或与视觉感觉神经元衰老有关的变性或视神经的变性，遗传性的、创伤性的或与听觉感觉神经元衰老有关的变性，脑叶萎缩和血管性痴呆，与运动神经元的变性有关的疾病和创伤，脊髓性肌萎缩，特别是婴儿脊髓性肌萎缩，多发性硬化，肌萎缩性侧索硬化，以及脊髓或外周运动神经的创伤。

27.根据权利要求24至26中任一项的用途，其特征在于，所述神经保护性药物用于治疗脊髓性肌萎缩，特别是婴儿脊髓性肌萎缩，或肌萎缩性侧索硬化。

28.根据权利要求7、17或18的化合物作为示踪剂或标记试剂的用途。

29.药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含作为有效成分的至少一种在权利要求1至19中任一项之中所描述的化合物，以及药学上可接受的赋形剂，在所述化合物中包括3-羟亚氨基-4-氯-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-4-溴-胆甾-4-烯、3-羟亚氨基-6-乙氧基-胆甾-4，6-二烯和3-羟亚氨基-4-甲基-胆甾-4-烯。