BR0011856B1

BR0011856B1 - Agonistas de receptor a2a de n-pirazol

Info

Publication number: BR0011856B1
Application number: BRPI0011856-7B1A
Authority: BR
Inventors: Jeffrey A Zablocki; Elfatih O Elzein; Venkata P Palle
Original assignee: Cv Therapeutics Inc
Priority date: 1999-06-22
Filing date: 2000-06-21
Publication date: 2014-06-17
Also published as: US20140073596A1; IL147198A; ZA200200301B; US7655637B2; US20060052332A1; HK1044952B; TWI230161B; NO20016350D0; AR024441A1; DK1189916T3; US8569260B2; BRPI0011856B8; US6642210B1; MXPA01013325A; KR20020028910A; CN1167709C; ATE256141T1; CA2377746A1; JP2003506461A; US20130058866A1

Description

AGONISTAS DE RECEPTOR A2A DE N-PIRAZOL

Antecedentes da Invenção Campo da Invenção Esta invenção inclui compostos de 2-adenosina substituídos com N-pirazol, que são úteis como agonistas de receptor de A2a. Os compostos desta invenção são agentes de vasodilatação, que são úteis como auxílios de formação de imagem do coração, que ajudam na identificação de mamíferos e, especialmente, de seres humanos que estejam sofrendo de distúrbios coronarianos, tais como perfusão coronariana ruim, o que é indicativo de distúrbio arterial coronariano (CAD). Os compostos desta invenção também podem ser usados como uma terapêutica para um distúrbio arterial coronariano, bem como para quaisquer outros distúrbios mediados pelo receptor A2A.

Descrição da Técnica Um stress farmacológico, freqüentemente, é induzido com adenosina ou dipiridamol em pacientes com suspeita de CAD, antes da formação de imagem com cintigrafia TI ou ecocardiografia. Ambas as drogas afetam a dilatação dos vasos de resistência coronariana, pela ativação de receptores A2 de superfície de célula. Embora o stress farmacológico fosse originalmente introduzido como um meio de provocar dilatação coronária em pacientes incapazes de se exercitar, vários estudos mostraram que o valor de prognóstico de formação de imagem 201T1 ou ecocardiográfico em pacientes submetidos a stress farmacológico com adenosina ou dipiridamol foi equivalente para pacientes submetidos a testes de stress de exercícios tradicionais.

Entretanto, há uma alta incidência de efeitos colaterais adversos relacionados à droga, durante uma formação de imagem de stress farmacológico, com essas drogas, tais como dor de cabeça e náusea, que poderíam ser melhorados com novos agentes terapêuticos.

Os receptores A2B e A3 de adenosina estão envolvidos na desgranulação de mastócito e, portanto, a asmáticos não são dados agonistas de adenosina não específicos, para a indução de um teste de stress farmacológico.

Adicionalmente, uma estimulação de adenosina do receptor Αχ no átrio e no nó A-V diminuirá o intercalo S-H, o qual pode induzir um bloqueio AV (N.C. Gipto et al . ; J. Am Coll.

Cardiol; (1992) 19: 248-257). Também, uma estimulação do receptor de adenosina Αχ por adenosina pode ser responsável pela náusea, uma vez que o receptor Αχ é encontrado no trato intestinal (J. Nicholls et al.; Eur. J. Pharm. (1997) 338 (2) 143-150) .

Dados de animais sugerem que receptores do subtipo A2a de adenosina específicos em vasos de resistência coronariana mediam as respostas de dilatação coronariana para adenosina, ao passo que a estimulação do receptor de subtipo A2b relaxa os valos periféricos (nota: este último diminui a pressão sanguínea sistêmica). Como resultado, há uma necessidade de composições farmacêuticas que sejam agonistas de receptor A2a, que não tenham um efeito farmacológico como resultado da estimulação do receptor Αχ in vivo. Mais ainda, há uma necessidade de agonistas de receptor A2a que tenham uma meia-vida curta e que sejam bem tolerados por pacientes passando por avaliações de stress coronariano farmacológico.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em um aspecto, esta invenção inclui compostos de N- p’irazol de 2-adenosina, que são agonistas úteis de receptor •&2A .

Em um outro aspecto, esta invenção inclui compostos farmacêuticos, incluindo N-pirazol de 2-adenosina, que são bem tolerados com poucos efeitos colaterais.

Ainda um outro aspecto desta invenção são os compostos de N-pirazol, que podem ser facilmente usados em conjunto com agentes de formação de imagem radioativos, para facilitar a formação de imagem coronariana.

Em uma montagem, esta invenção inclui compostos de N- pirazol de 2-adenosina, que têm a fórmula a seguir: Em uma outra montagem, esta invenção inclui métodos para uso dos compostos desta invenção para estimularem uma vasodilatação coronariana em mamíferos, especialmente em seres humanos, para uma situação de stress de seqüestro induzido no coração, para fins de formação de imagem do coração.

Ainda em uma outra montagem, esta invenção é uma composição farmacêutica, que compreende um ou mais compostos desta invenção e um ou mais excipientes farmacêuticos.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura IA é um registro analógico do aumento na tíondutância coronariana causada pelo Composto 16 desta invenção, antes e após infusões de CPX e ZM241385; a Figura 1B é um resumo dos dados mostrados na Figura IA, mostrando que o CPX não atenuou, mas ο ZM241385 realmente atenuou o aumento de condutância coronariana causado pelo Composto 16 desta invenção. Na Figura 1B, as barras representam a média + SEM de medida única de 6 corações com perfusão isolada de ratos; a Figura 2 é uma curva de resposta de concentração para os efeitos dromotrópicos negativos mediados por receptor de adenosina Ai (AdoR) (tempo de condução de AV) e vasodilatador mediado por AdoR A2a (aumento de condutância coronariana) do Composto 16 em corações com perfusão de ratos isolados. Os símbolos e as barras de erro indicam médias + SEM de determinação única a partir de cada um de quatro corações. 0 valor EC50 (potência) é a concentração do Composto 16 que causa 50% de resposta máxima; a Figura 3 é uma curva de resposta de concentração para os efeitos dromotrópicos negativos mediados por receptor de adenosina Αχ (AdoR) (tempo de condução de AV) e vasodilatador mediado por AdoR A2A (aumento de condutância coronariana) do Composto 16 em corações com perfusão isolados de porquinhos da índia. Os símbolos e as barras de erro indicam médias + SEM de determinação única a partir de cada um de quatro corações. O valor EC50 (potência) é a concentração do Composto 16 que causa 50% de resposta máxima; e a Figura 4 é um gráfico do efeito de CVT510, um agonista de receptor de adenosina Αχ e o Composto 16 desta invenção, um agonista de receptor de adenosina A2A no tempo de condução atrioventricular (AV) nos corações com perfusão de ratos isolados.

DESCRIÇÃO DA MONTAGEM ATUAL

Esta invenção inclui uma classe de N-pirazol de 2- adenosina tendo a fórmula: onde R1 = CH2OH, -CONR5R6; R3 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em alquila Ci-Ci5< halogênio, N02, CF3, CN, OR20, SR20, N(R20)2, S(0)R22, S02R22, SO2N(R20)2, SO2NR20COR22, SO2NR20CO2R22, SO2NR20CON(R20) 2, N(R20) 2NR20COR22, nr20co2r22, nr20con (R20) 2, nr20c (nr20)nhr23, cor20, co2r20, CON(R20)2í conr20so2r22, nr20so2r22, so2nr20co2r22, oconr20so2r22, oc(o)r20, C (0) OCH2OC (O) R20, e OCON(R20)2í -CONR7R8, alquenila C2-C15, alquinila C2-Ci5, heterociclila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, alquenila, alquinila, arila, heterociclila e heteroarila são opcionalmente substituídos por de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila, N02, heterociclila, arila, heteroarila, CF3, CN, OR20, SR20, N(R20)2, S(0)R22, S02R22, SO2N(R20)2í SO2NR20COR22, SO2NR20CO2R22, SO2NR20CON(R20) 2, N (R20) 2NR20COR22 , NR20CO2R22, NR20CON (R20) 2 , NR20C (NR20) NHR22, COR20, C02R2°, CON(R20)2, CONR20SO2R22, NR20SO2R22, SO2NR20CO2R22, OCONR20SO2R22 , OC (O) R20, C(0)0CH20C(0)R20, e OCON(R20)2, onde os substituintes opcionais heteroarila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídos com halogênio, N02, alquila, CF3, amino, mono- ou dialquilamino, alquil- ou aril- ou heteroarilamida, NCOR22, NR20SO2R22, COR20, C02R2°, CON(R20)2, NR20CON(R20) 2, OC (O) R20, OC(O)N(R20)2, SR20, S(0)R22, S02R22, SO2N(R20)2, CN ou OR20; R5 e R6 são, cada um, individualmente selecionados a partir de H e alquila C1-C15 opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, N02, heterociclila, arila, heteroarila, CF3, CN, OR20, SR20, N(R20)2, S(0)R22, so2r22, so2n(r20)2, so2nr20cor22, SO2NR20CO2R22, so2nr20con(r20)2, n(r20)2, nr20cor22, nr20co2r22, nr20con (R20) 2, nr20c (nr20)nhr22, cor20, co2r20, con(r20)2, conr20so2r22, nr20so2r22, so2nr20co2r22 , oconr20so2r22, oc(o)r20, C (0) OCH2OC (0) R20, e OCON(R20)2, onde cada um dos substituintes opcionais heteroarila, arila e heterociclila é opcionalmente substituído com halogênio, N02, alquila, CF3, amino, monoalquilamino, dialquilamino, alquilamida, arilamida, heteroarilamida, NCOR22, NR20SO2R22, COR20, C02R2°, CON(R20)2, NR20CON(R20) 2, OC (O) R20, OC(O)N(R20)2, SR20, S(0)R22, S02R22, SO2N(R20)2, CN e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila C1-C15, alquenila C2-C15, alquinila C2- Ci5, heterociclila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, alquenila, alquinila, arila, heterociclila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, N02/ heterociclila, arila, heteroarila, CF3, CN, OR20, SR20, N(R20)2í S(0)R22, so2r22, SO2N(R20)2í SO2NR20COR22, SO2NR20CO2R22, SO2NR20CON(R20) 2( n(r20)2/ nr20cor22, nr20co2r22, nr20con(r20) 2( NR20C(NR20)NHR22, cor20, co2r20, CON(R20)2í conr20so2r22, nr20so2r22, so2nr20co2r22, oconr20so2r22, oc(o)r20, C (O) OCH2OC (O) R20, e OCON(R20)2, e onde cada um dos substituintes opcionais heteroarila, arila e heterociclila é opcionalmente substituído com halogênio, N02, alquila, CF3, amino, monoalquilamino, dialquilamino, alquilamida, arilamida, heteroarilamida, NCOR22, NR20SO2R22, COR20, C02R2°, CON(R20)2, NR20CON(R20)2, 0C(0)R2°, OC (O)N(R20) 2, SR20, S (0) R22, S02R22, SO2N(R20)2, CN e OR20; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-C15 alquila, C2-Ci5 alquenila, C2-C15 alquinila, heterociclila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, alquenila, alquinila, arila, heterociclila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, N02, heterociclila, arila, heteroarila, CF3, CN, OR20, SR20, N(R20)2, S(0)R22, so2r22, SO2N(R20)2, so2nr20cor22, SO2NR20CO2R22, SO2NR20CON(R20) 2, N(R20)2, NR20COR22, NR20CO2R22, NR20CON(R20) 2, NR20C(NR20)NHR23, cor20, co2r20, con(r20)2, conr20so2r22, nr20so2r22, so2nr20co2r22, oconr20so2r22, oc(o)r20, C (O) 0CH20C (O) R20, e OCON(R20)2, e onde cada substituinte opcional heteroarila, arila e heterociclila é opcionalmente substituído com halogênio, N02, alquila, CF3, amino, mono- ou dialquilamino, alquil- ou aril- ou heteroarilamida, NCOR22, nr20so2r22, cor20, co2r20, con(r20)2, nr20con (R20) 2, OC (O) R20, OC (O)N(R20) 2, SR20, S(0)R22, S02R22, SO2N(R20)2, CN e OR20; R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em H, C1-C15 alquila, C2-C15 alquenila, C2-Ci5 alquinila, heterociclila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, alquenila, alquinila, heterociclila, arila, e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila, mono- ou dialquilamino, alquil- ou aril- ou heteroarilamida, CN, 0- Cx-C6 alquila, CF3, arila e heteroarila; R22 é selecionado a partir do grupo que consiste em Ci- C15 alquila, C2-Ci5 alquenila, C2-Ci5 alquinila, heterociclila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, alquenila, alquinila, heterociclila, arila, e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila, mono- ou dialquilamino, alquil- ou aril- ou heteroarilamida, CN, 0- Ci-C6 alquila, CF3, arila e heteroarila; e onde R2 e R4 são selecionados a partir do grupo que consiste em H, Ci-C6 alquila, e arila, onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com halogênio, CN, CF3, OR20 e N(R20)2, desde que quando R2 não for hidrogênio, então, R4 seja hidrogênio, e quando R4 não for hidrogênio, então, R2 seja hidrogênio.

Nos compostos preferidos desta invenção, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-C15 alquila, halogênio, CF3( CN, OR20, SR20, S(0)R22, S02R22, SO2N(R20)2, COR20, C02R2°, -CONR7R8, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, heteroarila, CF3, CN, OR20, SR20, S (0) R22, S02R22, SO2N(R20)2, COR20, C02R2°, e CON(R20)2, onde cada substituinte opcional heteroarila e arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R5 e R6 são independentemente selecionados a partir do grupo de H e C1-C15 alquila, incluindo um substituinte arila opcional, e cada substituinte arila opcional é opcionalmente substituído com halogênio, CF3; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-C15 alquila, C2-Ci5 alquenila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, alquinila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, heteroarila, CF3, CN, OR , e cada substituinte opcional heteroarila e arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C15 alquila; R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em H, C3-C4 alquila e arila, onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com um substituinte alquila; e R22 é selecionado a partir do grupo que consiste em Ci-C4 alquila e arila, os quais são, cada um, opcionalmente substituídos com de 1 a 3 grupos alquila.

Em uma outra montagem do composto desta invenção, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-C15 alquila, halogênio, CF3, CN, OR20, C02R2°, -CONR7R8, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila, arila, CF3, CN, OR20, C02R2°, ou CON(R20)2, e onde cada substituinte opcional heteroarila e arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R5 e R6 são, cada um, individualmente selecionados a partir de hidrogênio e Ci-Cs alquila; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em Ci-Cio alquila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, heteroarila, CF3, CN, e OR20, e onde cada substituinte opcional heteroarila e arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C15 alquila; e R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e Ci-C4 alquila.

Ainda em uma outra montagem do composto desta invenção, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-C10 alquila, halogênio, CF3, CN, C02R2°, -CONR7R8, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, CF3, CN, OR20, e CON (R20) 2; R5 e R6 são, cada um, individualmente selecionados a partir de hidrogênio e Ci-C6 alquila; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-C10 alquila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, heteroarila, CF3, CN, e OR20, e onde cada substituinte opcional heteroarila e arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C!-C15 alquila; e R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C4 alquila.

Ainda em uma outra montagem do composto desta invenção, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em Ci-C10 alquila, halogênio, CF3, CN, OR20, C02R2°, -CONR7R8, e arila; onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila, CF3, CN, OR20, e CON(R20)2; R5 e R6 são, cada um, individualmente selecionados a partir de hidrogênio e Ci~C6 alquila; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em Ci-Ci0 alquila, arila e heteroarila, onde os substituintes alquila, arila e heteroarila são opcionalmente substituídos com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, heteroarila, CF3, CN, OR20, e onde cada substituinte opcional heteroarila e arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C15 alquila; e R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e Ci-C4 alquila.

Em uma montagem do composto desta invenção, R1 = CH2OH. Quando R1 = CH2OH, então, é preferido que R3 seja selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, CONR7R8 e arila; onde o substituinte arila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci-C6 alquila, CF3, CN, OR20 e CON(R20)2; e R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-Ci0 alquila e arila, onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, CF3, CN, OR20, e onde cada substituinte opcional arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C15 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C4 alquila. Mais preferencialmente, quando R1 = CH2OH, então, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R , CONR7R8 e arila, onde o substituinte arila é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Cx-Cs alquila, CF3, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e Ci-C8 alquila, onde o substituinte alquila é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de arila, CF3, CN, e OR20, e onde cada substituinte opcional arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN ou OR20; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C8 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C4 alquila. Mesmo mais preferencialmente, quando R1 = CH20H, então, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste era C02R2°, CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, C1-C3 alquila, CF3, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C5 alquila, onde o substituinte alquila é opcionalmente substituído com arila, e onde cada substituinte arila opcional é opcionalmente substituído com halogênio, arila, CF3; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C3 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C4 alquila. Ainda mais preferencialmente, quando R1 = CH2OH, então, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, -CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, Cx-C3 alquila, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C5 alquila, onde o substituinte alquila é opcionalmente substituído com arila, e onde cada substituinte arila opcional é opcionalmente substituído com halogênio; R8 é hidrogênio; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C4 alquila. Ainda mais preferencialmente, quando R1 = CH2OH, então, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, -CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de halogênio, Cx-C3 alquila, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C5 alquila, onde o substituinte alquila é opcionalmente substituído com arila, e onde cada substituinte arila opcional é opcionalmente substituído com halogênio; R8 é hidrogênio; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Cx- C4 alquila. Quando R1 = CH2OH, então, é mais preferido que R7 seja metila e R3. seja -C02Et.

Em uma outra montagem, R1 = -CONHEt. Quando R1 = - CONHEt, então, é preferido que R3 seja selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, -CONR7R8 e arila; que é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci-Cs alquila, CF3, CN, OR20 e CON(R20) 2; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-C10 alquila e arila, onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, CF3, CN, e OR20, e onde cada substituinte opcional arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR ; R e selecionado a partir de hidrogênio e C1-C15 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C4 alquila. Mais preferencialmente, quando R1 = -CONHEt, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, -CONR7R8, arila, que é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci-C6 alquila, CF3, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-C8 alquila e arila, onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, CF3, CN, OR20, e cada substituinte opcional arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C8 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C4 alquila. Ainda mais preferencialmente, quando R1 = -CONHEt, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, - CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Cx-C3 alquila, CF3, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C5 alquila, onde o substituinte alquila é opcionalmente substituído com arila, e onde cada substituinte arila opcional é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C3 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C4 alquila. Ainda mais preferencialmente, quando R1 = -CONHEt, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, -CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de halogênio, Ci-C3 alquila, e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C5 alquila, onde o substituinte alquila é opcionalmente substituído com arila, e onde cada substituinte arila opcional é opcionalmente substituído com halogênio; R8 é hidrogênio; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C4 alquila. Mesmo mais preferencialmente, quando R1 = -CONHEt, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R20, CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de halogênio, Ci-C3 alquila, e OR20; R7 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C3 alquila; R8 é hidrogênio; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C4 alquila.

Nos compostos mais preferidos, R1 é CH2OH; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, CONR7R8 e arila, onde o substituinte arila é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci-C6 alquila, CF3, ou OR20; e R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-C8 alquila e arila, onde os substituintes alquila e arila são opcionalmente substituídos com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, arila, CF3, CN, OR20, e onde cada substituinte opcional arila é opcionalmente substituído com halogênio, alquila, CF3, CN e OR20; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e Ci-C8 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C4 alquila.

Ainda em uma montagem mais preferida, R1 = CH2OH; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, CONR7R8 e arila, que é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci-C3 alquila e OR20; R7 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-C3 alquila; R8 é selecionado a partir de hidrogênio; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e Ci- C4 alquila. Nesta montagem preferida, R3 é, mais preferencialmente, selecionado a partir de -C02Et e CONHEt.

Em uma outra montagem ainda mais preferida, R1 = - CONHEt, R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em C02R2°, - CONR7R8 e arila, onde o substituinte arila é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, Ci-C3 alquila, CF3, ou OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e Ci-C8 alquila, que é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, CF3, CN, ou OR20; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C3 alquila; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e C1-C4 alquila. Nesta montagem mais preferida, R8 é, preferencialmente, hidrogênio, R7 é, preferencialmente, selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C3, e R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C4 alquila.

Em uma montagem mais preferida, o composto desta invenção é selecionado a partir de etil l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-amino purin-2-il}pirazol-4-carboxilato, (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6- amino-2-[4-(4-clorofenil)-pirazolila] purin-9-il}-5-(hidroxi metil)oxolano-3,4-diol, (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4 - (4-metoxifenil)-pirazolil]purin-9-il}-5-(hidroximetil) oxolano-3,4-diol, (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4 -(4- metilfenil)-pirazolil]purin-9-il}-5-(hidroximetil) oxolano- 3.4- diol, (1-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroxi metil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4 -il)-N-metil carboxamida, ácido l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4- carboxílico, l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)- Ν,Ν-dimetilcarboxamida, l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4- dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il)-N-etilcarboxamida, l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)- 3.4- dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il] - 6-aminopurin-2- il}pirazol-4-carboxamida, l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4- dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il)-N-(ciclopentilmetil)carboxamida, 1-{9 -[(4S, 2R, 3R, 5R)- 3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]- 6 - aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-[(4-clorofenil)metil] carboxamida, etil 2- [ (1-{9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi- 5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4- il)carbonilamino]acetato, e misturas dos mesmos.

As definições a seguir se aplicam aos termos usados aqui. "Halo" ou "halogênio" - sozinho ou em combinação significa todos os halogênios, isto é, cloro (Cl), flúor (F), bromo (Br), iodo (I). "Hidroxila" se refere ao grupo -OH. "Tiol" ou "mercapto" se refere ao grupo -SH. "Alquila" - sozinho ou em combinação significa um radical derivado de alcano contendo de 1 a 20, preferencialmente, de 1 a 15 átomos de carbono (a menos que especificamente definido). Ele é um alquila de cadeia reta, alquila ramificado ou ciclo-alquila. Preferencialmente, grupos alquila retos ou ramificados contendo de 1 a 15, mais preferencialmente, de 1 a 8, mesmo mais preferencialmente de 1 a 6, ainda mais preferencialmente de 1 a 4 e, mais preferencialmente de 1 a 2 átomos de carbono, tais como metila, etila, propila, isopropila, butila, t- butila e similares. O termo "alquila inferior" é usado aqui para a descrição dos grupos alquila de cadeia reta descritos imediatamente acima. Preferencialmente, os grupos ciclo-alquila são sistemas de anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico de 3 a 8, mais preferencialmente de 3 a 6 elementos de anel por anel, tais como ciclo-propila, ciclo- pentila, ciclo-hexila, adamantila e similares. Alquila também inclui um grupo alquila de cadeia reta ou ramificado que contém ou é interrompido por uma porção ciclo-alquila. 0 grupo alquila de cadeia reta ou ramificado é afixado em qualquer ponto disponível, para a produção de um composto estável. Os exemplos disso incluem, mas não estão limitados a 4-(isopropil)-ciclo-hexiletil ou 2-metil-ciclo- propilpentil. Um alquila substituído é um alquila de cadeia reta, um alquila ramificado ou um grupo ciclo-alquila definido previamente, independentemente substituído com de 1 a 3 grupos ou substituintes de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquiltio, alquilsulfinila, alquilsulfonila, acilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, amino opcionalmente mono- ou di-substituído com grupos alquila, arila ou heteroarila, amidino, uréia opcionalmente substituída com grupos alquila, arila, heteroarila ou heterociclila, aminossulfonila opcionalmente N-mono- ou N,N-di-substituído com grupos alquila, arila, ou heteroarila, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heteroarilsulfonil amino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino, ou similares. "Alquenila" - sozinho ou em combinação significa um hidrocarboneto reto, ramificado ou cíclico contendo de 2 a 20, preferencialmente de 2 a 17, mais preferencialmente de 2 a 10, mesmo mais preferencialmente de 2 a 8, mais preferencialmente de 2 a 4 átomos de carbono e pelo menos uma, preferencialmente de 1 a 3, mais preferencialmente de 1 a 2, mais preferencialmente uma ligação dupla de carbono para carbono. No caso de um grupo ciclo-alquila, uma conjugação de mais de uma ligação dupla de carbono para carbono não é de modo a conferir aromaticidade ao anel. As ligações duplas de carbono para carbono podem estar contidas em uma porção ciclo-alquila, exceto por ciclo- propila, ou em uma porção de cadeia reta ou ramificada. Os exemplos de grupos alquenila incluem etenila, propenila, isopropenila, butenila, ciclo-hexenila e similares. Um alquenila substituído é o grupo alquenila de cadeia reta, alquenila ramificado ou ciclo-alquenila definido previamente, independentemente substituído com de 1 a 3 grupos ou substituintes de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquiltio, alquilsulfinila, alquilsulfonila, acilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, amino opcionalmente mono- ou di- substituído com grupos alquila, arila, heteroarila, ou heterociclila, aminossulfonila opcionalmente N-mono- ou N,N-di-substituído com grupos alquila, arila, ou heteroarila, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heteroarilsulfonilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonil amino, heteroarilcarbonilamino, carbóxi, alcoxicarbonila, ariloxicarbonila, heteroariloxicarbonila ou similares afixados em qualquer ponto disponível, para a produção de um composto estável. "Alquinila" - sozinho ou em combinação significa um hidrocarboneto reto ou ramificado, contendo de 2 a 20, preferencialmente de 2 a 17, mais preferencialmente de 2 a 10, mesmo mais preferencialmente de 2 a 8, mais preferencialmente de 2 a 4 átomos de carbono e pelo menos uma, preferencialmente uma ligação tripla de carbono para carbono. Os exemplos de grupos alquinila incluem etinila, propinila, butinila, e similares. Um alquinila substituído é o grupo alquinila de cadeia reta ou alquenila ramificado definido previamente, independentemente substituído com de 1 a 3 grupos ou substituintes de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquiltio, alquilsulfinila, alquilsulfonila, acilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, amino opcionalmente mono- ou di-substituído com grupos alquila, arila ou heteroarila, amidino, uréia opcionalmente substituída com grupos alquila, arila, heteroarila ou heterociclila, aminossulfonila opcionalmente N-mono- ou N,N-di-substituído com grupos alquila, arila, ou heteroarila, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heteroarilsulfonil amino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, heteroaril carbonilamino, ou similares afixados em qualquer ponto disponível, para a produção de um composto estável. "Alquil alquenila" se refere a um grupo -R- CR'=CR"'R"" , onde R é alquila inferior ou alquila inferior substituído, R', R" ', R"" podem ser, independentemente, hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, acila, arila, arila substituído, hetarila, ou hetarila substituído, como definido abaixo.

"Alquila alquinila" se refere a grupos -RC^CR', onde R é alquila inferior ou alquila inferior substituído, R' é hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, acila, arila, arila substituído, hetarila, ou hetarila substituído, como definido abaixo. "Alcóxi" denota o grupo -0R, onde R é alquila inferior, alquila inferior substituído, acila, arila, arila substituído, aralquila, aralquila substituído, heteroalquila, heteroarilalquila, ciclo-alquila, ciclo- alquila substituído, ciclo-heteroalquila, ou ciclo- heteroalquila substituído, como definido. "Alquiltio" denota o grupo -SR, -S (0) n=i-2-R, onde R é alquila inferior, alquila inferior substituído, arila, arila substituído, aralquila ou aralquila substituído, como definido aqui. "Acila" denota grupos -C(0)R, onde R é hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, arila, arila substituído, e similares, como definido aqui. "Arilóxi" denota grupos -OAr, onde Ar é um grupo arila, arila substituído, heteroarila ou heteroarila substituído, como definido aqui. "Amino" denota o grupo NRR' , onde Re R' podem ser, independentemente, hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, arila, arila substituído, hetarila ou hetarila substituído, como definido aqui, ou acila. "Amido" denota o grupo -C(0)NRR', onde R e R' podem ser, independentemente, hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, arila, arila substituído, hetarila, hetarila substituído, como definido aqui. "Carboxila" denota o grupo -C(0)0R, onde R é hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, arila, arila substituído, hetarila e hetarila substituído, como definido aqui. "Arila" - sozinho ou em combinação significa fenila ou naftila opcionalmente carbocíclico fundido com um cicloalquila preferencialmente de 5 a 7, mais preferencialmente de 5 a 6 elementos de anel e/ou opcionalmente substituído com de 1 a 3 grupos ou substituintes de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquiltio, alquilsulfinila, alquilsulfonila, acilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, amino opcionalmente mono- ou di- substituído com grupos alquila, arila ou heteroarila, amidino, uréia opcionalmente substituída com grupos alquila, arila, heteroarila ou heterociclila, aminossulfonila opcionalmente N-mono- ou N,N-di-substituído com grupos alquila, arila, ou heteroarila, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heteroarilsulfonilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonil amino, heteroarilcarbonilamino, ou similares. "Arila substituído" se refere a um arila opcionalmente substituído com um ou mais grupos funcionais, por exemplo, halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Heterociclo" se refere a um grupo carbocíclico saturado, insaturado ou aromático tendo um anel único (por exemplo, morfolino, piridila ou furila) ou anéis múltiplos condensados (por exemplo, naftpiridila, quinoxalila, quinolinila, indolizinila ou benzo[b]tienila) e tendo pelo menos um heteroátomo, tal como N, O ou S, no anel, o qual pode ser opcionalmente não-substituído ou substituído, por exemplo, com halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Heteroarila" - sozinho ou em combinação significa uma estrutura de anel aromático monocíclica contendo 5 ou 6 átomos de carbono, ou um grupo aromático bicíclico tendo de 8 a 10 átomos, contendo um ou mais, preferencialmente de 1 a 4, mais preferencialmente de 1 a 3, mesmo mais preferencialmente de 1 a 2 heteroátomos independentemente selecionados a partir do grupo 0, S e N, e opcionalmente substituídos com de 1 a 3 grupos ou substituintes de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquiltio, alquilsulfinila, alquilsulfonila, acilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, amino opcionalmente mono- ou di- substituído com grupos alquila, arila ou heteroarila, amidino, uréia opcionalmente substituída com grupos alquila, arila, heteroarila ou heterociclila, aminossulfonila opcionalmente N-mono- ou N,N-di-substituído com grupos alquila, arila, ou heteroarila, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heteroarilsulfonilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonil amino, heteroarilcarbonilamino, ou similares. Heteroarila também tem por finalidade incluir S ou N oxidizado, tal como sulfinila, sulfonila, N-óxido de um nitrogênio de anel terciário. Um átomo de carbono ou de nitrogênio é o ponto de afixação da estrutura de anel de heteroarila, de modo que um anel aromático estável seja retido. Os exemplos de grupos heteroarila são piridinila, piridazinila, pirazinila, quinazolinila, purinila, indolila, quinolinila, pirimidinila, pirrolila, oxazolila, tiazolila, tienila, isoxazolila, oxatiadiazolila, isotiazolila, tetrazolila, imidazolila, triazinila, furanila, benzofurila, indolila e similares. Um heteroarila substituído contém um substituinte afixado em um carbono ou nitrogênio disponível, para a produção de um composto estável. "Heterociclila" - sozinho ou em combinação significa um grupo cicloalquila não-aromático, que tem de 5 a 10 átomos, nos quais de 1 a 3 átomos de carbono no anel são substituídos por heteroátomos de 0, S ou N, e são opcionalmente benzo-fundidos ou heteroarila fundido de 5 a 6 elementos de anel e/ou são opcionalmente substituídos como no caso de cicloalquila. Heterociclila também tem por finalidade incluir S ou N oxidizado, tal como sulfinila, sulfonila, N-óxido de um nitrogênio de anel terciário. 0 ponto de afixação é em um átomo de carbono ou de nitrogênio. Os exemplos de grupos heterociclila são tetra- hidrofuranila, di-hidropiridinila, piperidinila, pirrolidinila, piperazinila, di-hidrobenzofurila, di- hidroindolila e similares. Um heterociclila substituído contém um nitrogênio substituinte afixado em um carbono ou nitrogênio disponível, para a produção de um composto estável. "Heteroarila substituído" se refere a um heterociclo opcionalmente mono- ou poli-substituído com um ou mais grupos funcionais, por exemplo, halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Aralquila" se refere ao grupo -R-Ar, onde Ar é um grupo arila e R é um grupo alquila inferior ou alquila inferior substituído. Os grupos arila, opcionalmente, podem ser não-substituídos ou substituídos, por exemplo, com halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Heteroalquila" se refere ao grupo -R-Het, onde Het é um grupo heterociclo e R é um grupo alquila inferior. Os grupos heteroalquila, opcionalmente, podem ser não- substituídos ou substituídos, por exemplo, com halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, arila, arilóxi, heterociclo, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Heteroarilalquila" se refere ao grupo -R-HetAr, onde HetAr é um grupo heteroarila e R alquila inferior ou alquila inferior substituído. Os grupos heteroarilalquila, opcionalmente, podem ser não-substituídos ou substituídos, por exemplo, com halogênio, alquila inferior, alcóxi, alquiltio, acetileno, arila, arilóxi, heterociclo, heterociclo substituído, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Cicloalquila" se refere a um grupo alquila cíclico ou policíclico divalente contendo de 3 a 15 átomos de carbono. "Cicloalquila substituído" se refere a um grupo cicloalquila compreendendo um ou mais substituintes, por exemplo, halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituído, alcóxi, alquiltio, acetileno, arila, arilóxi, heterociclo, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Ciclo-heteroalquila" se refere a um grupo cicloalquila, onde um ou mais dos átomos de carbono de anel são substituídos com um heteroátomo (por exemplo, N, O, S ou P) . "Ciclo-heteroalquila substituído" se refere a um grupo ciclo-heteroalquila, como definido aqui, o qual contém um ou mais substituintes, tal como halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, heterociclo substituído, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Alquil cicloalquila" denota o grupo -R-cicloalquila, onde cicloalquila é um grupo cicloalquila e R é um alquila inferior ou um alquila inferior substituído. Os grupos cicloalquila, opcionalmente, podem ser não-substituídos ou substituídos, por exemplo, com halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, acetileno, amino, amido, carboxila, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, heterociclo substituído, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares. "Alquil ciclo-heteroalquila" denota o grupo -R-ciclo- heteroalquila, onde R é um alquila inferior ou um alquila inferior substituído. Os grupos ciclo-heteroalquila, opcionalmente, podem ser não-substituídos ou substituídos, por exemplo, com halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio, amino, amido, carboxila, acetileno, hidroxila, arila, arilóxi, heterociclo, heterociclo substituído, hetarila, hetarila substituído, nitro, ciano, tiol, sulfamido e similares.

Os compostos desta invenção podem ser preparados como destacado nos Esquemas 1 a 4. Os compostos tendo a fórmula geral IV podem ser preparados como mostrado no Esquema 1.

Esquema 1 O Composto I pode ser preparado pela reação do composto 1 com 1,3-dicarbonila apropriadamente substituído, em uma mistura de AcOH e MeOH a 80 °C (Holzer et al. , J.

Heterocycl . Chem. (1993) 30, 865). O Composto II, o qual pode ser obtido pela reação do composto I com 2,2- dimetoxipropano, na presença de um ácido, pode ser oxidado para o ácido carboxilico III, com base em compostos estruturalmente similares, usando-se permanganato de potássio ou clorocromato de piridínio (M. Hudlicky, (1990) Oxidations in Organic Chemistry, ACS Monographs, American Chemical Society, Washington D.C.). A reação de uma amina primária ou secundária tendo a fórmula HNR6R7 e de um composto III, usando-se condições de acoplamento de DCC (M.

Fujino et al. , Chem. Pharm. Bull. (1974), 22, 1857), PyBOP (J. Martinez et al. , J. Med. Chem. (1988) 28, 1874) ou PyBrop (J. Caste et al. Tetrahedron, (1991), 32, 1967) podem levar ao composto IV.

Esquema 2 0 composto V pode ser preparado como mostrado no Esquema 2. 0 derivado 4 de Tri TBDMS pode ser obtido pelo tratamento do composto 2 com TBDMSC1 e imidazol em DMF, seguido pela hidrólise do éster de etila, usando-se NaOH. A reação de uma amina primária ou secundária com a fórmula HNR6R7 e de um composto 4, usando-se condições de acoplamento de DCC (M. Fujino et al. , Chem. Pharm. Bull. (1974), 22, 1857), PyBOP (J. Martinez et al. , J. Med. Chem. (1988) 28, 1874) ou PyBrop (J. Caste et al. Tetrahedron, (1991), 32, 1967) podem levar ao composto V.

Uma síntese específica de Composto 11 é ilustrada no Esquema 3 . Guanosina 5 comercialmente disponível foi convertida em triacetato 6, como descrito previamente (M. J. Robins e B. Uznanski, Can. J. Chem. (1981), 59, 2601- 2607). O composto 7, preparado pelo procedimento da literatura a seguir de Cerster et al. (J. F. Cerster, A. F.

Lewis, e R. K. Robins, Org. Synthesis, 242-243), foi convertido no composto 9 em duas etapas, como descrito previamente (V. Nair et al. , J. Org. Chem. , (1988), 53, 3051-3057) . O composto 1 foi preparado pela reação de hidrato de hidrazina com o composto 9 em etanol, a 80 °C. A condensação do composto 1 com etoxicarbonilmalondialdeído em uma mistura de AcOH e MeOH, a 80 °C, produziu o composto 10. O aquecimento do composto 10 em metilamina em excesso levou ao composto 11.

Esquema 4 A síntese de 1,3-dialdeído VII é descrita no Esquema 4. A reação de 3,3-dietoxiproprionato ou 3,3- dietoxipropionitrila ou 1,l-dietóxi-2-nitroetano VI (R3 = C02R, CN ou N02) com formato de etila ou metila, na presença de NaH, pode levar ao dialdeído VII (Y. Yamamoto et al., J. Org. Chem. (1989) 54, 4734).

Os compostos desta invenção são úteis em conjunto com agentes de formação de imagem radioativa para formar uma imagem da atividade coronariana. Os compostos desta invenção são agonistas de A2a, que se acredita que provejam uma ativação específica de receptores de adenosina A2A nos vasos coronarianos, em oposição aos receptores de adenosina Al no átrio e receptores de AV-nó e/ou A2B em vasos periféricos, desse modo evitando efeitos colaterais indesejáveis. Quando da administração em uma quantidade terapêutica, os compostos desta invenção fazem com que os vasos sanguíneos coronarianos se vasodilatem, para a indução de um seqüestro coronariano, onde os vasos coronarianos saudáveis sequestram sangue dos vasos não- saudáveis, resultando em falta de fluxo sanguíneo para os tecidos do coração. Doses menores de agonistas de A2A podem prover uma vasodilatação coronariana benéfica (menos severa) no tratamento de CAD crônico.

Como agonistas de A2A, os compostos desta invenção também são úteis na terapia adjuntiva com angioplastia, para a indução de dilatação, inibir a agregação de plaqueta e como um agente antiinflamatório geral. Os agonistas de A2Af tais como os compostos desta invenção, podem prover os benefícios terapêuticos descritos acima, evitando uma ativação de neutrófilo (Purinergic Approaches in Experimental Therapeutics K. A. Jacobson e M. F. Jarvis 1997 Wiley, Nova York). Os compostos desta invenção também são efetivos contra uma condição denominada nenhum refluxo, na qual as plaquetas e os neutrófilos se agregam e bloqueiam um vaso. Como os agonistas de A2A, os compostos desta invenção são efetivos contra nenhum refluxo, prevenindo uma ativação de neutrófilo e plaqueta (por exemplo, acredita-se que eles previnam a liberação de superóxido dos neutrófilos) . Como os agonistas de A2A, os compostos desta invenção são úteis, também, como agentes de cardioproteção, através de sua ação antiinflamatória sobre os neutrófilos. Assim, em situações nas quais o coração passará por um estado isquêmico, tal como um transplante, eles serão úteis.

Esta invenção também inclui promedicamentos dos agonistas de A2A identificados acima. Um promedicamento é uma droga a qual pode ser quimicamente modificada e pode ser biologicamente inativa em seu local de ação, mas a qual será degradada ou modificada por um ou mais processos enzimáticos ou in vivo para a forma bioativa. Os promedicamentos desta invenção devem ter um perfil farmacocinético diferente para a origem, permitindo uma absorção melhorada através do epitélio da mucosa, melhor formulação de sal e/ou solubilidade e estabilidade sistêmica melhorada. Os compostos identificados acima podem ser modificados, preferencialmente, em um ou mais dos grupos hidroxila. As modificações podem ser: (1) derivados de éster ou carbamato, os quais podem ser clivados por esterases ou lipases, por exemplo; (2) peptídios, os quais podem ser reconhecidos por proteinase específica ou não- específica; ou (3) derivados, que se acumulam em um local de ação através da seleção de membrana ou uma forma de promedicamento ou uma forma de promedicamento modificado, ou qualquer combinação de (1) a (3) acima.

Os compostos podem ser administrados de forma oral, intravenosa, através da epiderme ou por qualquer outro meio conhecido na técnica para a administração de um agente terapêutico. 0 método de tratamento compreende a administração de uma quantidade efetiva do composto escolhido, preferencialmente disperso em um portador farmacêutico. As unidades de dosagem do ingrediente ativo são selecionadas, geralmente, a partir da faixa de 0,01 a 100 mg/kg, mas será prontamente determinada por alguém versado na técnica, dependendo da rota de administração, da idade e da condição do paciente. Esta dose é administrada, tipicamente, em uma solução cerca de 5 minutos a cerca de uma hora ou mais antes da formação de imagem coronariana.

Nenhum efeito toxicológico inaceitável é esperado, quando os compostos da invenção são administrados de acordo com a presente invenção.

Se o composto final desta invenção contiver um grupo básico, um sal de adição de ácido pode ser preparado. Os sais de adição de ácido dos compostos são preparados de uma maneira padrão em um solvente adequado a partir da composição de origem e um excesso de ácido, tal como clorídrico, hidrobrômico, sulfúrico, fosfórico, acético, maléico, succínico ou metanossulfônico. A forma de sal clorídrico é especialmente útil. Se o composto final contiver um grupo acídico, sais catiônicos podem ser preparados. Tipicamente, o composto de origem é tratado com um excesso de um reagente alcalino, tal como hidróxido, carbonato ou alcóxido, contendo o cátion apropriado. Os cátions, tais como Na+, K+, Ca+2 e NH4+ são exemplos de cátions presentes em sais aceitáveis em termos farmacêuticos. Alguns dos compostos formam sais internos ou zwitteríons, os quais também podem ser aceitáveis.

As composições farmacêuticas, incluindo os compostos desta invenção, e/ou derivados das mesmas podem ser formuladas como soluções ou pós liofilizados para administração parenteral. Os pós podem ser reconstituídos pela adição de um diluente adequado ou de um outro portador aceitável em termos farmacêuticos, antes do uso. Se usadas na forma líquida, as composições desta invenção são incorporadas, preferencialmente, em uma solução aquosa isotônica de tampão. Os exemplos de diluentes adequados são uma solução salina isotônica normal, dextrose a 5% padrão em água e sódio de tampão ou uma solução de acetato de amônio. Essas formulações líquidas são adequadas para administração parenteral, mas, também, podem ser usadas para uma administração oral. Pode ser desejável adicionar excipientes, tais como polivinilpirrolidinona, gelatina, hidroxicelulose, acácia, polietileno glicol, manitol, cloreto de sódio, citrato de sódio ou qualquer outro excipiente conhecido por alguém de habilidade na técnica para composições farmacêuticas incluindo os compostos desta invenção. Alternativamente, os compostos farmacêuticos podem ser encapsulados, postos em tabletes ou preparados em uma emulsão ou xarope para administração oral. Os portadores sólidos ou líquidos aceitáveis em termos farmacêuticos podem ser adicionados, para se melhorar ou estabilizar a composição, ou para facilitar a preparação da composição. Os portadores líquidos incluem xarope, óleo de amendoim, azeite, glicerina, salina, álcoois e água. Os portadores sólidos incluem amido, lactose, sulfato de cálcio, dihidrato, teffa alba, estearato de magnésio ou ácido esteárico, talco, pectina, acácia, agar ou gelatina. 0 portador também pode incluir um material de liberação sustentada, tal como monoestearato de glicerol ou diestearato de glicerol, sozinho ou com uma cera. A quantidade de portador sólido varia, mas, preferencialmente, estará entre cerca de 20 mg e cerca de 1 grama por unidade de dosagem. As dosagens farmacêuticas são feitas usando-se técnicas convencionais, tais como moagem, mistura, granulação e compressão, quando necessário, para formas de tablete; ou moagem, mistura e preenchimento para formas de cápsula de gelatina rígida. Quando um portador líquido é usado, a preparação será na forma de um xarope, elixir, emulsão ou uma suspensão aquosa ou não-aquosa. Uma formulação líquida como essa pode ser administrada diretamente ou preenchida em uma cápsula de gelatina macia. É preferido que as composições desta invenção sejam administradas como uma solução, de forma oral ou intravenosa, por infusão contínua ou bolo.

Os Exemplos que se seguem servem para ilustrar esta invenção. Os Exemplos não têm por finalidade limitar, de forma alguma, o escopo desta invenção, mas são providos para mostrar como se fazer e usar os compostos desta invenção. Nos Exemplos, todas as temperaturas são em graus centígrados.

Exemplo 1 etil l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4- carboxilato (12) A uma suspensão de 2-hidrazinoadenosina (0,025 g, 0,08 mmol) em uma mistura de 1:1 de MeOH/AcOH foi adicionado (etoxicarbonil)malondialdeído (0,019 g, 0,12 mmol), e a mistura foi aquecida a 80 °C, por 3 h. O precipitado formado foi coletado por filtração e lavado com EtOH e éter, para levar a 12. ^NMR (DMSO-d6) δ 1,25 (t,3H), 3,5 (m, 1H) , 3,6 (m, 1H) , 3,8 (d, 1H) , 4,15 (d, 1H) , 4,55 (m, 1H) , 5,0 (t, 1H) , 5,2 (d, 1H) , 5,5 (d, 1H) , 5,9 (d, 1H) , 7,15-7,3 (m, 5H), 7,8 (br s, 2H), 8,1 (s, 1H), 8,4 (s, 1H), 8,9 (s, 1H).

Exemplo 2 (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4-(4-clorofenil)- pirazolil]purin-9-il}-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol (13) A uma suspensão de 2-hidrazinoadenosina (0,025 g, 0,08 mmol) em uma mistura de 1:1 de MeOH/AcOH foi adicionado 2- (4-cloro)fenilmalondialdeído (0,022 g, 0,12 mmol), e a mistura foi aquecida a 80 °C, por 3 h. O precipitado formado foi coletado por filtração e lavado com EtOH e éter, para levar a 13. 1HNMR (DMS0-d6) δ 3,5 (m, 1H) , 3,6 (m, 1H) , 3,8 (d, 1H) , 4,15 (d, 1H) , 4,2 (q, 2H) , 4,55 (m, 1H), 5,9 (d, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,25 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,9 (s, 1H).

Exemplo 3 (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4-(4-metoxifenil)- pirazolil]purin-9-il·}-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol (14) A uma suspensão de 2-hidrazinoadenosina (0,025 g, 0,08 mmol) em uma mistura de 1:1 de MeOH/AcOH foi adicionado 2- (4-metóxi)fenilmalondialdeído (0,022 g, 0,12 mmol), e a mistura foi aquecida a 80 “C, por 3 h. O precipitado formado foi coletado por filtração e lavado com EtOH e éter, para levar a 14. 1HNMR (DMSO-d6) δ 3,55 (m, 1H) , 3,65 (m, 1H) , 3,75 (s, 3H) , 3,9 (d, 1H) , 4,15 (d, 1H) , 4,6 (m, 1H) , 5,9 (d, 1H) , 6,75 (d, 2H) , 7,6 (d, 2H) , 8,15 (s, 1H) , 8,35 (s, 1H), 8,8 (s, 1H).

Exemplo 4 (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4-(4-metilfenil)- pirazolil]purin-9-il}-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol (15) A uma suspensão de 2-hidrazinoadenosina (0,025 g, 0,08 mmol) em uma mistura de 1:1 de MeOH/AcOH foi adicionado 2- (4-metil)fenilmalondialdeido (0,019 g, 0,12 mmol), e a mistura foi aquecida a 80 °C, por 3 h. 0 precipitado formado foi coletado por filtração e lavado com EtOH e éter, para levar a 15. 1HNMR(DMS0-d6) δ 3,55(m, 1H\), 3,65 (m, 1H) , 3,75 (s, 3H) , 3,9 (d, 1H) , 4,6 (m, 1H) , 5,9 (d, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,8 (s, 1H).

Exemplo 5 l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N- metilcarboxamida (16) 0 composto 12 (0,05 mg, 0,12 mmol) foi adicionado a 4 mL de metilamina (40% de sol. em água). A mistura foi aquecida a 65 °C, por 24 h. Após uma concentração em vácuo, o resíduo foi purificado, usando-se prep. TLC (10% MeoH:DCM). 1HNMR (CD3OD) δ 2,90 (s, 3H), 3,78 (m, 1H), 3,91 (m, 1H), 4,13 (d, 1H), 4,34 (d, 1H), 4,64 (m, 1H), 6,06 (d, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 9,05 (s, 1H).

Exemplo 6 ácido l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il)pirazol-4- carboxílico (17) O composto 12 (0,05 mg, 0,12 mmol) foi dissolvido em um equivalente de IN NaOH. A solução foi deixada agitar à temperatura ambiente, por 2 h, então, acidificada para um pH 4. 0 precipitado resultante foi filtrado e lavado com água e éter. ^NMR (CD30D) Δ 3,75 (m, 1H) , 3,90 (m, 1H) , 4,13 (d, 1H) , 4,43 (d, 1H) , 4,64 (m, 1H) , 6,05 (d, 1H) , 8,10 (s, 1H), 9,05 (s, 1H).

Exemplo 7 (l-{9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5 - (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)- N,N-dimetilcarboxamida (18) 0 composto 18 foi preparado de uma maneira similar àquela do composto 16, usando-se dimetilamina ao invés de metilamina, MS 405,12 (M + 1) .

Exemplo 8 (l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)- N-etilcarboxamida (19) O composto 19 foi preparado de uma maneira similar àquela do composto 16, usando-se etilamina ao invés de metilamina, MS 405,35 (M + 1) .

Exemplo 9 l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5 - (hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4- carboxamida (20) 0 composto 20 foi preparado de uma maneira similar àquela do composto 16, usando-se amônia ao invés de metilamina, MS 377,25 (M + 1).

Exemplo 10 1-{9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)- N-(ciclopentilmetil)carboxamida (21) 0 composto 12 (0,5 g, 1,2 mmol) foi dissolvido em DMF seco, TBDMSC1 (1,5 g, 10 mmol) e imidazol (0,68 g, 10 mmol) foram adicionados, e a mistura foi aquecida a 80 °C, por 24 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por coluna rápida, para a obtenção da forma protegida de trissilila do composto 12. O derivado de trissilila (0,8 g) , então, foi colocado em suspensão em 1 mL de água e tratado com 2 mL de IN KOH/MeOH. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi colocado em suspensão em 5 mL de água e acidif içado para um pH 5,5 com IN HCl. 0 precipitado resultante foi filtrado e lavado com água e éter de etila, para levar à forma de trissilila do ácido 20 . O ácido de derivado de trissilila 20 (0,14 g, 0,2 mmol), então, foi dissolvido em 5 mL de diclorometano. À solução foi adicionado HBTU (0,19 g, 0,4 mmol), HOBt (0,076 g, 4 mmol), N-metilmorf olina (0,04 g, 0,4 mmol) e cat. DMAP. A mistura foi deixada agitar à temperatura ambiente, por 24 h. A mistura, então, foi lavada com ácido cítrico a 10%, NaHC03 saturado, salmoura e seco por MgS04. 0 solvente foi removido e o resíduo foi tratado com 5 mL de 0,5N

NH4F/MeOH. A solução foi aquecida em refluxo, por 24 h. O

solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por TLC preparatória, para levar ao composto 21, MS 445,26 (M + 1).

Exemplo 11 (l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)- N-[(4-clorofenil)metil]carboxamida (22) O composto 22 foi preparado de uma maneira similar àquela do composto 21, usando-se 4-clorobenzilamina ao invés de ciclopentilamina, MS 501,19 (M + 1).

Exemplo 12 etil 2-[ (l-{9-[ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-dihidroxi-5 - (hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4- il)carbonilamino]acetato (23) O composto 23 foi preparado de uma maneira similar àquela do composto 21, usando-se metil éster de glicina ao invés de ciclopentilamina, MS 445,26 (M + 1).

Exemplo 13 Os compostos desta invenção foram ensaiados, para se determinar sua afinidade para o receptor e A2a em uma prep. de membrana de estriado de porco. Brevemente, 0,2 mg de membranas de corpo estriado de porco foram tratadas com deaminase de adenosina (2 U/mL) e 50 mM de Tris tampão (pH = 7,4) seguido por mistura. Às membranas de porco foram adicionados 2 μ1> de solução de origem de DMSO diluído serialmente dos compostos desta invenção, em concentrações variando de 10 nM a 100 microM, ou o controle recebeu 2 microL de DMSO sozinho, então, o antagonista ZM 241385 em Tris tampão (50 mM, pH de 7,4) foi adicionado, para a obtenção de uma concentração final de 2 nM. Após a incubação a 2 3 °C, por 2 h, então, as soluções foram filtradas, usando-se um coletor de membrana, usando-se múltiplas lavagens das membranas (2 x). Os discos de filtro foram contados em um coquetel de cintilação, para se determinar a quantidade de deslocamento de ZM titulado deslocado pelos compostos desta invenção. Mais de uma curva de 5 pontos foi usado para a geração de Ki,'s. e o número de experimentos é indicado na coluna marcada na Tabela 1 abaixo.

Tabela 1 +++ = 10-1.000 nM

++ = 1.000-10.000 nM

+ = mais de 10.000 nM

- = ma is de 100.000 nM

Exemplo 14 0 objetivo deste experimento foi determinar as afinidades e a seletividade de ligação de receptor de um composto desta invenção para receptores de adenosina AXí A2a/ A2b e A3. A clonagem molecular identificou e confirmou a existência de quatro subtipos de receptores de adenosina (AdoRs) , designados Αχ, A2A, A2B e A3AdoRs (Linden, 1994) .

Esses subtipos de AdoR têm distribuições anatômicas, propriedades farmacológicas e funções fisiológicas distintas (Shryock e Belardinelli, 1997) . Αχ e A3AdoRs se acoplam às proteínas G de inibição (Gi/0) e diminuem a atividade de ciclase de adenilila, ao passo que os A2a e A2BAdoRs aumentam o conteúdo de cAMP intracelular, através do acoplamento de proteínas G de estimulação (Gs).

Os ligantes com alta potência e seletividade de tecido / órgão para subtipos distintos de receptor de adenosina têm potenciais terapêuticos e de diagnóstico para uma variedade de doenças (tais como arritmia, doenças cardíacas isquêmicas, asma e mal de Parkinson) e são o foco de consideráveis esforços de pesquisa por academias e indústrias. Aqui, nós reportamos a caracterização farmacológica e funcional de uma série de novos análogos de adenosina desta invenção, usando linhas de célula de mamífero expressando AdoRs endógenos ou AdoRs humanos recombinantes.

Materiais A deaminase de adenosina foi adquirida pela Boehringer Mannheim Biochemicals Indianapolis, IN, U.S.A. [3H]ZM241385 (Lote N° 1) foi comprado da Rocris Cookson Ltd (Langford, Bristol, UK) . [3H]CPX (Lote N° 2229207) foi a partir da New England Nuclear (Boston, MA, USA). CGS21680 (Lote N° SW-3R- 84 e 8 9H4 60 7) , NECA (Lote N° OXV-295E), R-PIA (Lote N° WY- V-23), membranas Rolipram e HEK-hA2AAR foram obtidas a partir da Sigma-RBI (Natick, MA) . WRC-0470 foi preparado, como descrito na literatura (K. Niiya et al., J. Med. Chem. 35; 4557-4561 (1992)); o Composto 16 desta invenção foi sintetizado, como descrito acima, e preparado como uma solução de origem (10 mmol/L) em DMSO.

Cultura de célula e preparação de membrana - Células PC12 foram obtidas a partir da American Type Culture Collection e crescidas em DMEM com soro bovino fetal a 5%, soro de cavalo a 10%, 0,5 mmol/L de L-glutamina, 100 U/mL de penicilina, 0,1 mg/mL de estreptomicina, e 2,5 μg/mL de anfotericina. Células HEK-293 expressando, de forma estável, A2BAdoRs humano recombinante (HEK-hA2BAdoR) foram crescidas em DMEM suplementadas com soro bovino fetal a 10% e 0,5 mg/mL de G-418. Células CHOK1 expressando, de forma estável, AiAdoR (CHO-hAiAdoR) e A3AdoR (CHO-hA3AdoR) humano recombinante foram crescidas como monocamadas em pratos de cultura de plástico de 150 mm no meio F-12 de Ham suplementado com soro bovino fetal a 10%, na presença de 0,5 mg/mL de G-418. As células foram cultivadas em uma atmosfera de 5% de C02 / 95% de ar, mantido a 37 °C.

Para a confecção de membranas, as células foram destacadas das placas de cultura em 50 mmol/L de tampão gelado de Tris-HCl (pH 7,4). As suspensões de célula foram homogeneizadas com Polytron na regulagem 4, por 30 segundos, e giradas a 48.000 g, por 15 minutos. As pelotas foram lavadas três vezes por re-suspensão em tampão de Tris-HCl gelado e centrifugação. A pelota final foi recolocada em suspensão em um volume pequeno de Tris-HCl, teve a alíquota calculada e congelada a -80 °C, até ser usada para ensaios de ligação de receptor. A concentração de proteína de suspensões de membrana foi determinada usando-se o método de Bradford (Bio-Rad) com soro bovino como padrões.

Ensaios de Ligação de Competição - Os ensaios de competição foram realizados, para se determinar as afinidades (Κχ) dos compostos não rotulados a seguir (agentes de competição): Compostos WRC-0470; Composto 16 desta invenção, NECA, CGS 21680 e R-PIA para AxAdoRs (locais de ligação [3H]DPCPX em membranas de célula CHO- hAiAdoR) , A2AAdoRs (locais de ligação [3H] ZM241385 em PC12 e membranas de célula HEK-hA2AAR) , A2BAdoR (locais de ligação [3H] DPCPX em membranas de célula HEK-hA2BAdoR) , e A3AdoR (locais de ligação [125I] ABMECA em membranas de célula CHO- hA3AdoR).

As suspensões de membrana foram incubadas, por 2 horas, à temperatura ambiente, em 50 mmol/L de tampão de Tris-HCl (pH 7,4), contendo ADA (1 U/mL), Gpp(NH)p (100 μΜ) , radioligante {seja [3H]ZM241385 (-1,5 a 5 nmol/L) , [3H] DPCPX (~2,5 a 3,0 nmol/L para Ai e 39 nM para A2B) ou [125I] ABMECA (1 nM) } e concentrações progressivamente mais altas dos agentes de competição. Ao final da incubação, radioligantes ligados e livres foram separados por filtração através de filtros de fibra de vidro Whatman GF/C, usando-se um coletor de tecido de Brandel (Gaithersburg, MD) . Determinações em triplicata foram realizadas para cada concentração do agente de competição.

Projeto de Estudo (Protocolos) A afinidade (Κχ) de vários CVT para os receptores de adenosina Ai e A2A foi determinada por sua potência, para competirem para locais de ligação [3H] CPX (Ai) ou [3H]ZM241385 (A2a) em membranas derivadas de células CHO- hAxAdoR, PC12 ou HEK-HA2AAdoR. R-PIA e CGS21680, agonistas que são seletivos para Αχ e A2a, respectivamente, e NECA, um agonista de AdoR não-seletivo foram usados como controles.

Para facilitar uma comparação e evitar a complicação de múltiplos estados de afinidade, devido a um acoplamento de receptor a G-proteínas, os estudos de ligação de competição foram realizados na presença de Gpp (NH) p (100 μΜ) , para desacoplar receptores de G-proteínas. A afinidade de compostos selecionados para receptores A2B e A3 foi avaliada por sua potência para competir para locais de ligação [3H] CPX (A2B) e [125I]ABMECA (A3) em membranas derivadas de células HEK-hA2BAdoR e CHO-hA3AdoR, respectivamente.

Resultados A afinidade (Ki) de WRC-0470 e do Composto 16 para Ai de seres humanos, A2AAdoRs de ratos e seres humanos, como determinado por estudos de ligação de competição é resumida na Tabela 2, abaixo. Todos os compostos mostram seletividade moderada para receptor de A2a versus Ai de seres humanos. Mais ainda, a uma concentração de 10 μΜ, diminuiu a ligação específica de [3H] CPX (HEK-hA2BAdoR) ou [1251 ] ABMECA (CHO-hA3 AdoR) em 20% e 22%, respectivamente.

Tabela 2. Afinidades de Ligação de Agonistas de Receptor de Adenosina para A2AAdoRs e AjAdoRs Ki /nmol/L (pKi + SEM) Os resultados deste Experimento mostram que o Composto 16 é um agonista de A2A de baixa afinidade.

Exemplo 15 O objetivo deste Exemplo foi caracterizar em termos farmacológicos os efeitos do Composto 16 desta invenção sobre a condutância arterial coronariana. Especificamente, os experimentos foram projetados para se determinar: 1) a potência do Composto 16 e comparar sua potência com aquela de adenosina e outros agonistas selecionados de A2AAdoR, e 2) qual receptor de adenosina, o subtipo Ai ou A2A AdoR media a vasodilatação coronariana causada pelo Composto 16 desta invenção.

No coração, o receptor de adenosina A2A media a vasodilatação coronariana causada por adenosina, ao passo que o receptor Ai media as ações depressivas cardíacas de adenosina, tal como os efeitos negativos cronotrópicos e dromotrópicos (bloqueio de AV). Vários ligantes potentes e seletivos, agonistas e antagonistas, para Αχ e A2A AdoRs foram sintetizados. No coração, agonistas de Αχ AdoRs foram propostos como sendo úteis como agentes antiarrítmicos, ao passo que os agonistas de A2A AdoRs estão sendo desenvolvidos para uma vasodilatação coronariana seletiva.

Uma série de derivados de adenosina direcionados para ativação seletiva do receptor de adenosina A2a (A2a AdoR) foi sintetizada para fins de desenvolvimento de vasodilatadores coronarianos. Mais especificamente, neste estudo, nós reportamos o efeito de uma série de novos agonistas de A2a AdoR sobre a condutância arterial coronariana (vasodilatação) em corações com perfusão isolados de ratos e porquinhos da índia.

Materiais Os ratos (Sprague Dawley) e porquinhos da índia (Hartley) foram comprados da Simonsen e da Charles Rivers, respectivamente. 0 WRC-0470 foi preparado como descrito na literatura (K. Niiya et al. , J. Med. Chem. 35; 4557-4561 (1992)). 0 Composto 16 desta invenção foi preparado como descrito acima. CGS 21680 e adenosina foram comprados da Sigma. Uma solução de Krebs-Henseleit foi preparada, de acordo com os Métodos Padrão, e salina a 0,9% foi comprada da McGraw, Inc.. Métodos Ratos adultos Sprague Dawley e porquinhos da índia Hartley de ambos os sexos pesando de 23 0 a 260 gramas e de 300 a 350 gramas, respectivamente, foram usados neste estudo. Os animais foram anestesiados por injeção peritonial de um coquetel, contendo cetamina e xilazina (cetamina 100 mg, xilazina 20 mg/ml). O peito foi aberto e o coração rapidamente removido. 0 coração foi brevemente enxaguado em uma solução gelada de Krebs-Henseleit (veja abaixo), e a aorta canulada. O coração, então, foi posto em perfusão a uma vazão de 10 ml/min com uma solução modificada de Krebs-Henseleit (K-H) contendo NaCl 117,9, KC1 4,5, CaCl2 2,5 MgS04 1,18, KH2P04 1-18, piruvato 2,0 mmol/L. A solução de K-H (pH 7,4) foi gaseificada continuamente com 95% de 02 e 5% de C02 e aquecida até 35 + 0,50 °C. O coração foi eletricamente pacificado a um comprimento de ciclo fixo de 340 ms (250 batimentos/min) , usando-se um eletrodo bipolar colocado no átrio esquerdo.

Os estímulos elétricos foram gerados por um estimulador de Grass (Modelo S48, W. Warwick, RI) e enviado através de uma Unidade de Isolamento de Estímulo (Modelo SIU5, Astro-Med, Inc., NY) como pulsos de onda quadrada de 3 ms de duração e amplitude de pelo menos duas vezes a intensidade limite. A pressão de perfusão coronariana (CPP) foi medida, usando-se um transdutor de pressão, conectado à cânula aórtica através de um conector T posicionado aproximadamente 3 cm acima do coração. A pressão de perfusão coronariana foi monitorada por todo o experimento e gravada em um gravador de gráfico (Gould Recorder 2200S) ou em um sistema de gravação computadorizado (PowerLab/4S, ADinstruments PTy Ltd, Austrália) . Apenas corações com CPP variando de 8 a 11,33 kPa (na ausência de drogas) foram usados no estudo. A condutância coronariana (em ml/min/kPa) foi calculada como a relação entre a taxa de perfusão coronariana (10 ml/min) e a pressão de perfusão coronariana.

Em experimentos nos quais o efeito dromotrópico negativo mediado por um receptor de adenosina Αχ foi medido, os eletrogramas de superfície atrial e ventricular foram registrados, durante uma pacificação atrial constante. 0 efeito de vários agonistas de receptor de adenosina no tempo de condução atrioventricular foi determinado, como descrito previamente por Jenkins e Belardinelli Circ. Res. 63: 97-116 (1998).

As soluções de origem do Composto 16 desta invenção (5 mM) e CGS 21680 (5 mM) foram reparadas em sulfóxido de dimetila (DMSO); compradas a partir da Aldrich, PS 04253MS.

Uma solução de origem de adenosina (1 mg/ml) foi preparada em salina. Uma concentração foi feita a partir da solução de origem, por uma diluição em salina, para levar à solução de 2 x 10"4 ou 2 x 10~5 M. Essas soluções foram injetadas na linha de perfusão do aparelho como bolos de 20 μΐ. Em alguns experimentos, as soluções foram colocadas em uma seringa de 3 0 ml e as drogas foram infundidas nas taxas necessárias para a obtenção das concentrações de perfusado desejadas (por exemplo, 10, 100 nM, etc.).

Vasodilatação coronariana de agonistas de receptor de adenosina A2a As relações de resposta de concentração para o efeito do Composto 16 desta invenção (de 0,1 a 400 nM) e CGS21680 (0,1 a 10 nM) para aumentar a condutância coronariana foram obtidas. Após medições de controle da pressão de perfusão coronariana terem sido registradas, concentrações progressivamente mais altas dos agonistas de receptor de adenosina foram administradas, até que uma máxima dilatação coronariana fosse observada. As respostas de regime permanente para cada concentração de agonistas de receptor de adenosina foram registradas. Em cada coração desta série (4 a 6 corações para cada agonista), apenas um agonista e uma relação de resposta de concentração foi obtido.

Efeito vasodilatador coronariano de Composto 16 na ausência e na presença de antagonistas de receptor de adenosina.

Para se determinar qual subtipo de receptor de adenosina (Ai ou A2a) media a vasodilatação coronariana causada pelo Composto 12, os antagonistas de receptor de adenosina Ai e A2a CPX e ZM2413 85, respectivamente, foram usados. Os corações (n = 6) foram expostos ao composto sendo testado (10 nM) , e após o efeito deste agonista ter atingido o regime permanente, primeiramente CPX (60 nM), e, então, ZM241385 foram adicionados ao perfusado e as mudanças na CPP foram registradas.

Em corações com perfusão isolados (n = 36 ratos e 18 porquinhos da índia) pacificados a um comprimento de ciclo atrial constante de 340 ms, adenosina, CGS21680, WRC0470 e o Composto 16 causaram um aumento dependente da concentração em condutância coronariana. CGS21680 e WRC0470 foram os agonistas mais potentes testados. 0 Composto 16 foi aproximadamente 10 vezes mais potente do que a adenosina, para aumentar a condutância coronariana. É valioso notar que todos os agonistas foram vasodilatadores coronarianos várias vezes mais potentes em corações de ratos do que de porquinhos da índia (Tabela 3).

Tabela 3 - Potência de Agonistas de Receptor de Adenosina e Adenosina A2a para Aumentar a Condutância Coronariana em Corações com Perfusão Isolados de Ratos e Porquinhos da índia Para se determinar o subtipo de AdoR (Ax versus A2A) que é responsável pela vasodilatação coronariana observada na presença do Composto 16, o efeito deste agonista (10 nM) na condutância coronariana foi estudado, na ausência e na presença de CPX, um antagonista de Ai AdoR (Belardinelli et al, 1998) e ZM241385, um antagonista seletivo de A2a AdoR (Poucher et al, 1995), à concentração de 60 nM. Como mostrado na Figura 1, o Composto 16 significativamente aumentou a condutância coronariana para 1,65 + 0,075 ml/kPa^min'1 de um valor de linha de base de 1,20 +0,15 ml kPa^min"1. Este aumento da condutância coronariana causado pelo Composto 16 não foi afetado por CPX, mas foi completamente revertido por ZM241385 (1,275 + 0,15 ml kPa “■''min’1) .

Exemplo 16 0 objetivo deste Exemplo foi determinar a seletividade funcional do Composto 16, para causar uma vasodilatação coronariana. Especificamente, a potência de Composto 16 para causar uma vasodilatação coronariana (resposta de A2a AdoR) e um prolongamento do tempo de condução nodal de A-V (resposta de Ai AdoR) foi determinada em corações de ratos e porquinhos da índia.

Materiais Ratos de Sprague Dawley foram comprados da Simonsen.

Porquinhos da índia de Hartley foram comprados da Charles River. O Composto 16 foi preparado como descrito acima. CVT-510 - 2-{6- [((3R)oxolan-3-il)amino]purin-9-il} (4S, 3R, 5R)- 5 -(hidroximetil)oxolano-3,4-diol - foi preparado de acordo com o método de síntese mostrado na Patente U.S. N° 5.789.416, cujo relatório descritivo é incorporado aqui como referência. Cetamina foi compara a partir da Fort Dodge Animal Health (Lote N° 440444) e xilazina da Bayer (Lote N° 26051 A). A solução de Krebs-Henseleit foi preparada de acordo com os métodos padrão, e cloreto de sódio a 0,9% foi comprado a partir da McGraw Inc. (Lote N° J8B246).

Preparação de coração com perfusão Isolado: Ratos e porquinhos da índia de ambos os sexos pesando de 230 a 260 gramas e de 300 a 350 gramas, respectivamente, foram usados neste estudo. Os animais foram anestesiados por injeção peritonial de um coquetel, contendo cetamina e xilazina (cetamina 100 mg, xilazina 20 mg/ml) . O peito foi aberto e o coração rapidamente removido. O coração foi brevemente enxaguado em uma solução gelada de Krebs- Henseleit (veja abaixo), e a aorta canulada. O coração, então, foi posto em perfusão a uma vazão de 10 ml/min com uma solução modificada de Krebs-Henseleit (K-H) contendo NaCl 117,9, KC1 4,5, CaCl2 2,5 MgS04 1,18, KH2P04 1,18, piruvato 2,0 mmol/L. A solução de K-H (pH 7,4) foi gaseificada continuamente com 95% de 02 e 5% de C02 e aquecida até 35 + 0,50 °C. 0 coração foi eletricamente pacificado a um comprimento de ciclo fixo de 340 ms (250 batimentos/min), usando-se um eletrodo bipolar colocado no átrio esquerdo. Os estímulos elétricos foram gerados por um estimulador de Grass (Modelo S48, W. Warwick, RI) e enviado através de uma Unidade de Isolamento de Estímulo (Modelo SIU5, Astro-Med, Inc., NY) como pulsos de onda quadrada de 3 ms de duração e amplitude de pelo menos duas vezes a intensidade limite. A pressão de perfusão coronariana (CPP) foi medida, usando-se um transdutor de pressão, conectado à cânula aórtica através de um conector T posicionado aproximadamente 3 cm acima do coração. A pressão de perfusão coronariana foi monitorada por todo o experimento e gravada em um gravador de gráfico (Gould Recorder 2200S) ou em um sistema de gravação computadorizado (PowerLab/4S, ADInstruments PTy Ltd, Austrália). Apenas corações com CPP variando de 8 a 11,33 kPa (na ausência de drogas) foram usados no estudo. A condutância coronariana (em ml/min/kPa) foi calculada como a relação entre a taxa de perfusão coronariana (10 ml/min) e a pressão de perfusão coronariana. A depressão mediada por receptor de adenosina Αχ de tempo de condução nodal de A-D (efeito dromotrópico negativo) foi medida. Os eletrogramas de superfície atrial e ventricular em ratos e eletrogramas de feixe de His em porquinhos da india foram gravados, durante a pacificação atrial constante. Os efeitos do Composto 16 no tempo de condução atrioventricular e estímulo para feixe de His (intervalos S-H) foram determinados como descrito previamente por Jenkins e Belardinelli (1988).

Os efeitos do Composto 16 sobre a condutância coronariana (efeito de A2a) e o tempo de condução atrioventricular ou intervalo de feixe de estímulo para His (S-H) (efeito de Αχ) foram, então, determinados. Os corações foram instrumentados para uma gravação contínua de pressão de perfusão coronariana (resposta de A2A) e tempo de condução atrioventricular (A-V) ou intervalo de S-H (resposta de Αχ) . Em cada experimento, a relação de resposta de concentração do Composto 16 (n = 6 ratos, 4 porquinhos da índia) para aumentar a condutância coronariana e para prolongar o tempo de condução de A-V ou o intervalo de S-H foi determinado. Após medições de controle de CPP e do tempo de condução de A-V ou intervalo de S-H terem sido feitas, concentrações progressivamente mais altas do Composto 16 foram administradas, até uma vasodilatação coronária máxima e o tempo de condução nodal de A-V ou prolongamento do intervalo de S-H foram obtidos.

Em corações de ratos separados (n = 4), o efeito de várias concentrações (100 - 400 nM) de CVT510, um agonista de adenosina de Αχ (Snowdy et al, 1999), sobre o tempo de condução nodal de A-V foi determinado e comparado com aquele do composto 16 (0,1 a 30 μΜ).

As curvas de resposta de concentração para o Composto 16, para aumentar a condutância arterial coronariana e para prolongar o tempo de condução nodal de A-V ou o intervalo de S-H são mostradas nas Figuras 2 e 3. Em ambos os ratos e os porquinhos da índia, o Composto 16 aumentou a condutância coronariana de uma maneira dependente de concentração. As potências (valores EC50) para o Composto 16, para aumentar a condutância coronariana em corações de ratos foi de 6,4 + 0,6 nM e em porquinhos da índia foi de 18,6 + 6,0 nM. Em contraste, o efeito deste agonista no intervalo de S-H foi um pouco variável entre os corações de ratos e de porquinhos da índia. Em corações de rato, o Composto 16 não prolongou o tempo de condução nodal de A-V

(Figura 2 e 3) , ao passo que o CVT510 de agonista Αχ AdoR significativamente prolongou o tempo de condução nodal de A-V (Figura 4). Diferentemente de em ratos, nos corações de porquinhos da índia, o Composto 16 causou um prolongamento dependente de concentração do intervalo de S-H (resposta de Αχ) com um valor de EC50 (potência) de 4,0 + 2,3 μΜ (Figura 4). Este último valor é aproximadamente 215 vezes maior (isto é, menos potente) do que o valor de EC50 de 18,6 ± 6,0 nM, para causar uma vasodilatação coronariana (resposta de A2A - Figura 3) .

Os resultados indicam que o Composto 16 é um vasodilatador coronariano (efeito mediado por A2A AdoR) sem o efeito dromotrópico negativo (efeito mediado por Αχ AdoR) em corações de rato. Em corações de porquinho da índia, o Composto 16 causou um certo efeito dromotrópico negativo.

Ainda assim, o Composto 16 foi pelo menos 215 vezes mais seletivo para causar uma vasodilatação coronariana do que o efeito dromotrópico negativo. A(s) razão(ões) para a diferença de espécie na resposta mediada por Αχ AdoR eliciada pelo Composto 16 é desconhecida. Independentemente disso, em ambas as espécies (ratos e porquinhos da índia), o Composto 16 causou uma vasodilatação coronariana máxima em concentrações que não causaram um prolongamento do tempo de condução nodal de A-V, isto é, sem um efeito dromotrópico negativo. Também foi observado que o Composto 16 tem uma maior afinidade (isto é, >2- / >-13 vezes) para A2a do que para Αχ AdoR, e que há uma reserva de receptor notadamente maior para uma vasodilatação coronariana mediada por A2A AdoR do que para o efeito dromotrópico negativo mediado por Αχ AdoR.

Exemplo 17 O presente estudo foi designado para testar a hipótese de que há uma relação inversa entre a afinidade (Κχ ou ρΚχ) e a duração de ação de receptores de adenosina (AdoRs) de A2A. Especificamente, os objetivos do estudo foram determinar a relação entre a duração da vasodilatação causada por uma série selecionada de agonistas A2AAdoR de afinidade alta e baixa em corações isolados de ratos e porcos anestesiados; e a afinidade desses agonistas para A2AAdoRs em um estriado de porco.

Materiais: ratos (Sprague Dawley) foram comprados da Simonen. Porcos de fazenda foram obtidos a partir da Division of Laboratory Animal Resources, Universidade do Kentucky. 0 Composto 12, o Composto 13 e o Composto 16 desta invenção foram preparados como descrito nos métodos acima. YT-0146 foi preparado como descrito na Patente U.S. N° 4.956.345, cujo relatório descritivo é incorporado aqui como referência. WRC-0470 foi preparado como descrito na literatura (K. Niiya et al. , J. Med. Chem. 35; 4557-4561 (1992)). CGS21680 foi comprado a partir da Research Biochemicals, Inc. e Sigma e R-PIA (Lote N° WY-V-23) foi comprado a partir da Research Biochemicals, Inc. HENECA foi um presente da Professora Gloria Cristalli da Universidade de Camerino, Itália.

Os agentes anestésicos: cetamina foi comprada a partir de Fort Dodge Animal Health. Xilazina foi comprada a partir da Bayer. Pentobarbital de sódio foi comprado a partir de The Butler Co. Fenilefrina foi comprada a partir da Sigma. DMSO foi comprado a partir da Sigma e da American Tissue Type Collections. Uma solução de Krebs-Henseleit foi preparada, de acordo com métodos padrão, e salina a 0,9% foi comprada da McGraw, Inc..

Neste estudo, as preparações de laboratório a seguir foram usadas. 1) Corações com perfusão isolados de ratos; 2) Porcos de peito aberto anestesiados.

Preparação de coração com perfusão isolado de rato Ratos adultos Sprague Dawley de ambos os sexos pesando de 230 a 260 gramas e de 300 a 350 gramas, respectivamente, foram usados neste estudo. Os animais foram anestesiados por injeção peritonial de um coquetel, contendo cetamina e xilazina (cetamina 100 mg, xilazina 20 mg/ml). 0 peito foi aberto e o coração rapidamente removido. O coração foi brevemente enxaguado em uma solução gelada de Krebs- Henseleit (veja abaixo), e a aorta canulada. O coração, então, foi posto em perfusão a uma vazão de 10 ml/min com uma solução modificada de Krebs-Henseleit (K-H) contendo NaCl 117,9, KCl 4,5, CaCl2 2,5 MgS04 1,18, KH2P04 1,18, piruvato 2,0 mmol/L. A solução de K-H (pH 7,4) foi gaseificada continuamente com 95% de 02 e 5% de C02 e aquecida até 35 + 0,50 °C. 0 coração foi eletricamente pacificado a um comprimento de ciclo fixo de 340 ms (250 batimentos/min) , usando-se um eletrodo bipolar colocado no átrio esquerdo. Os estímulos elétricos foram gerados por um estimulador de Grass (Modelo S48, W. Warwick, RI) e enviado através de uma Unidade de Isolamento de Estímulo (Modelo SIU5, Astro-Med, Inc., NY) como pulsos de onda quadrada de 3 ms de duração e amplitude de pelo menos duas vezes a intensidade limite. A pressão de perfusão coronariana (CPP) foi medida, usando-se um transdutor de pressão, conectado à cânula aórtica através de um conector T posicionado aproximadamente 3 cm acima do coração. A pressão de perfusão coronariana foi monitorada por todo o experimento e gravada em um gravador de gráfico (Gould Recorder 2200S) ou em um sistema de gravação computadorizado (PowerLab/4S, ADInstruments PTy Ltd, Austrália). Apenas corações com CPP variando de 8 a 11,33 kPa (na ausência de drogas) foram usados no estudo. A condutância coronariana (em ml/min/kPa) foi calculada como a relação entre a taxa de perfusão coronariana (10 ml/min) e a pressão de perfusão coronariana.

Preparação de porcos de peito aberto anestesiados Porcos de fazenda pesando de 22 a 27 kg foram usados neste estudo. Todos os animais receberam cuidados humanos, de acordo com as recomendações estabelecidas em "The Principies of Laboratory Animal Care", formuladas pela Sociedade Nacional para Pesquisa Médica e no "Guide for the Care and Use of Laboratory Animais", preparado pelo Institute of Laboratory Animal Resources, e publicado pelo National Institutes of Health (NIH Publication N° 86-23, revisado em 1996). Além disso, animais foram usados de acordo com as recomendações do University of Kentucky Institutional Animal Care and Use Protocol. A anestesia foi utilizada cetamina (20 mg/kg, intramuscular) e pentobarbital de sódio (15 a 18 mg/kg, intravenosa) . A anestesia foi mantida com pentobarbital de sódio adicional (1,5 a 2 mg/kg, intravenosa), a cada 15 a 20 minutos. A ventilação foi mantida através de uma traqueotomia, usando-se uma mistura de ar ambiente e 100% de 02. Volume tidal, taxa respiratória e fração de 02 em ar inspirado foram ajustados, para se manter o gás sanguíneo arterial normal (ABG) e valores de pH. A temperatura corpórea de núcleo foi monitorada com um sensor de temperatura no esôfago e mantido com uma almofada de aquecimento entre 37,0 e 37,5 °C. Uma solução de Ringer de lactato foi administrada, através de uma veia da orelha ou femural, a de 5 a 7 ml/kg/min, após um bolo inicial de 300 a 400 ml. Um cateter foi inserido na artéria femural, para monitoração da pressão sanguínea arterial e para a obtenção de amostras de ABG. 0 coração foi exposto através de uma estemotomia e colocado em suspensão em um berço de pericãrdio. A pressão ventricular esquerda (LVP) foi medida com um transdutor de ponta sensível de pressão de alta fidelidade 5F (Millar Instruments, Houston, TX) colocado na cavidade ventricular esquerda através do ápice e preso com uma sutura em bolsa de tabaco. Um segmento da artéria coronariana descendente anterior esquerda (LAD), próximo à origem da primeira ramificação diagonal, foi dissecada sem tecido circundante.

Um sensor de fluxo perivascular de tempo de trânsito (Transonic Systems Inc., Ithaca, NY) foi colocado em torno deste segmento, para medir o fluxo sanguíneo coronariano (CBF) . Próximo ao sensor de fluxo, um angiocatéter modificado de 24g foi inserido para infusões intracoronarianas. Todos os dados hemodínicos foram continuamente exibidos em um monitor de computador e alimentados através de um conversor de analógico para digital de 32 bits em um computador de aquisição de dados on-line com um software personalizado (Augury, Coyote Bay Instruments, Manchester, NH) . Agonistas de A2a AdoR foram dissolvidos em DMSO, para a produção de concentrações de origem de 1 a 5 mM, as quais foram diluídas em salina a 0,9% e infundidas em taxas de 1 a 1,5 ml/min. Os agonistas de A2A AdoR foram administrados de forma intracoronariana.

Para a manutenção da pressão sanguínea constante, fenilefrina foi administrada de forma intravenosa. A solução de origem de fenilefrina (30 mM) foi preparada em água destilada.

Corações com perfusão isolados Para se determinar a duração da vasodilatação coronariana mediada por receptor de adenosina A2a causada por agonistas de adenosina e de receptor de adenosina, os agonistas foram administrados de forma intravenosa, por injeção de bolo (protocolo A) ou por infusão contínua (protocolo B).

Protocolo A: iniecões de bolo. Em cada coração desta série (3 a 11 corações para cada agonista) , bolos de adenosina (20 μΐ, 2 x 10~4 M), Compostos desta invenção (20 a 40 μΐ, 2 x 10'5 M) , e outros agonistas de receptor de adenosina foram injetados na linha de perfusão. Os tempos para 50% (t 0,5) e 90% (t 0,9) de reversão da diminuição na CPP foram medidos. Cada coração foi exposto a um máximo de três vasodilatadores.

Protocolo B: infusão contínua. Em uma série separada de experimentos (n = 4), o Composto 16 e a adenosina foram infundidos na linha de perfusão a uma taxa constante por um período de seis minutos. As concentrações de perfusado do Composto 16 e da adenosina foram de 20 nM e 200 nM, respectivamente, as quais foram aproximadamente 4 x suas respectivas concentrações previamente estabelecidas, para causar 50% de aumento máximo na condutância coronariana (EC50) em corações com perfusão isolados de ratos. Os tempos para 50% (t 0,5) e 90% (t 0,9) de reversão da diminuição na CPP foram medidos a partir do tempo no qual a infusão dos agonistas foi parada.

Duração dependente de dose de vasodilatação máxima causada por injeções de bolo do Composto 16. Para determinar a dependência da duração da máxima dilatação coronariana da dose do Composto 16, bolos (100 a 300 μΐ) de uma solução de origem de 2 x 10'5 M do Composto 16 foram injetados na linha de perfusão. Além disso, a duração da injeção foi variada, de acordo com o volume dos bolos, tal como 10, 20 e 30 segundos para bolos de 100, 200 e 300 μΐ, respectivamente. A duração de efeito máximo foi medida a partir do ponto no qual a diminuição na CPP atingiu o nadir para o ponto de início de reversão de CPP.

Relação entre afinidade de vários agonistas para o receptor de adenosina A2a e o tempo de reversão de seu efeito para aumentar a condutância coronariana: esses experimentos foram realizados para a construção da relação entre as afinidades dos vários agonistas pelo receptor de adenosina A2A e a duração de seu respectivo efeito sobre a condutância coronariana. Bolos de vários agonistas foram injetados na linha de perfusão de corações com perfusão isolados de ratos (n = 4 a 6 para cada agonista) e o tempo para 90% (t 0,9) de reversão da diminuição na CPP medida.

As afinidades dos vários agonistas para o receptor de adenosina A2A foram determinadas em membranas de estriado de porco, usando-se um ensaio de ligação de radioligante, como descrito acima. 0 tempo de reversão (t 0,9) da diminuição na CPP foi plotado contra suas afinidades (pKi) para o receptor de adenosina A2A.

Porco de peito aberto Antes do início do experimento, um período de estabilização de 30 minutos seguiu-se ao término de toda a instrumentação. Após a obtenção dos dados hemodinâmicos de linha de base, a primeira infusão intracoronariana de um agonista de A2A ADOR foi iniciada. As infusões foram mantidas por de 4 a 5 minutos, para permitir que LAD CBF atingisse um regime permanente, após o que a infusão foi terminada. 0 tempo para recuperação de 50% (t 0,5) e 90% (t 0,9) de CBF de linha de base foi registrado. Dez a 15 minutos após o CBF ter retornado para valores pré-droga, uma segunda infusão com um agonista diferente foi iniciada.

Em estudos preliminares, foi descoberto que a infusão intracoronariana de agonistas de adenosina produziu graus variáveis de hipotensão sistêmica e, assim, em todos os experimentos subseqüentes, a fenilefrina foi administrada de forma intravenosa. As medições hemodinâmicas foram feitas antes e seguindo-se ao início da infusão de fenilefrina a uma dose de - 1 μg/kg/min. A taxa de infusão de fenilefrina foi ajustada durante e seguindo-se às infusões dos agonistas de adenosina, para manter a pressão sanguínea arterial em valores de pré-infusão de 0,667 kPa. 0 efeito de um máximo de três agonistas diferentes foi determinado em cada experimento.

Resultados Adenosina, os compostos desta invenção e outros derivados de adenosina foram dados como bolos na linha de perfusão, em concentrações que causassem aumentos iguais ou quase iguais na condutância coronariana. Embora adenosina e os agonistas causassem aumentos máximos iguais na condutância coronariana, a duração de seu efeito foi notadamente diferente. A duração do efeito de adenosina foi a mais curta, seguida pelo Composto 16, ao passo que as de CGS12680 e WRC0470 foram as mais longas. As durações da vasodilatação coronariana causada por adenosina, os compostos desta invenção e outros agonistas, medidas como o tempo para 50% (t 0,5) e 90% (t 0,9) de reversão dos aumentos na condutância coronariana são resumidas na Tabela 4 .

Tabela 4 - Tempo de Reversão de Vasodilatação Coronariana por Adenosina e agonistas de receptor de adenosina em Corações com Perfusão Isolados de Ratos Tempo (em minutos) para 50% e 90% (t 0,5 e t 0,9, respectivamente) de reversão dos aumentos na condutância coronariana causados por adenosina e agonistas de receptor de adenosina. Os valores são em médias + SEM de determinações únicas em cada uma das preparações (n). O tempo de reversão de vasodilatação coronariana foi dependente da afinidade dos derivados de adenosina para receptores de A2A do estriado do cérebro. (Fig. 2A) Houve uma relação inversa significativa (P < 0,05) (r = 0,87) entre a afinidade (PKi) dos agonistas para o A2a AdoR e o tempo de reversão (t 0,9) da vasodilatação coronariana causada pelos mesmos agonistas.

Independentemente de o Composto 16 ter sido dado como um bolo ou como infusão contínua, a reversão da vasodilatação coronária foi relativamente rápida. De fato, uma comparação entre uma infusão de seis minutos de adenosina e o Composto 16 em doses em que eles causariam diminuições iguais na pressão de perfusão coronariana (CPP) revelou que a adenosina e o Composto 16 têm um curso de tempo similar para vasodilatação e tempo de reversão. Ambos os t 0,5 e t 0,9 foram quase idênticos. A duração da vasodilatação coronariana pelo Composto 16 foi dependente da dose. Um aumento no volume de um bolo do Composto 16 (solução de origem de 2 x 1CT5 M) causou diminuições de durações progressivamente mais longas na CPP. A duração máxima da vasodilatação coronariana (tempo em que a CPP permaneceu em seu valor mais baixo) aumentou conforme o volume dos bolos aumentou de 100 μΐ para 200 e 300 μΐ, sem afetar as diminuições máximas na CPP.

Vasodilatação coronariana em uma preparação de porco de peito aberto.

Em corações in si tu de uma preparação de porco anestesiado de peito aberto, o Composto 16 desta invenção, bem como o CGS21680 e outros agonistas de A2AAdoR (isto é, WRC-0470 e YT-146) causaram aumentos significativos no fluxo sanguíneo coronariano (CBF). Doses selecionadas desses compostos dados como infusões intracoronarianas contínuas (de 4 a 5 min) causaram aumentos de 3,1 a 3,8 vezes no CBF, como estabelecido na Tabela 3 abaixo. Uma vez estabelecido que todos os agonistas causaram quase a mesma magnitude de aumentos no CBF (isto é, "número de aumento") e causam mudanças similares na taxa de batimento e na pressão sanguínea arterial média, o tempo de reversão de seus respectivos efeitos de vasodilatação coronariana foi determinado.

Tabela 5. Magnitude de Aumento no Fluxo Sanguíneo Coronariano Causado por Vários Agonistas de Receptor de Adenosina em Porcos Anestesiados de Peito Aberto "Número de aumento" máximo em fluxo sanguíneo coronariano (CBF) acima da linha de base causado por vários agonistas de receptor de adenosina. Dados representam média + SEM de uma ou duas medições em cada porco (n).

Como resumido na Tabela 6, o t0(5 e o t0,9 de vasodilatação coronariana causado por vários agonistas de A2A AdoR e "compostos de CVT" foi variável. O tempo de reversão do aumento no CBF causado pelo Composto 16 desta invenção foi mais curto do que aquele de CGS21680, WRC-0470 ou YT-146. De forma mais importante, como em corações com perfusão isolados de ratos, houve uma relação inversa significativa (P < 0,05) (r = 0,93) entre a afinidade (PKi) dos agonistas A2AAdoR para receptores A2A de estriado de cérebro de porco e o tempo de reversão (t 0,9) de vasodilatação coronariana. Houve uma concordância excelente entre o tempo de reversão da vasodilatação coronariana causada por um número selecionado de agonistas em corações com perfusão isolados de ratos e em preparações de porco de peito aberto anestesiados.

Tabela 6 - Tempo de Reversão de Vasodilatação Coronariana causada por Vários Agonistas de Receptor de Adenosina em Porcos Anestesiados de Peito Aberto Tempo (em minutos) para 50% e 90% (t0,5 e t0,9, respectivamente) de reversão dos aumentos de fluxo sanguíneo coronariano causados por adenosina e agonistas de receptor de adenosina. Os valores são as médias + SEM de uma ou duas determinações em cada animal (n). 0 Composto 16 tem uma baixa afinidade para agonistas A2AAdoR e é menos potente (- 10 vezes) do que o agonista CGS21680 prototípico. Ainda assim, o Composto 16 é um pleno agonista para causar vasodilatação coronariana. Mas, como mostrado neste estudo, a duração de seu efeito é varias vezes mais curta do que aquela dos agonistas de alta afinidade CGS21680 e WRC-0470. Assim, o Composto 16 é um vasodilatador coronariano de agonistas de A2A AdoR de atuação curta. Por causa de sua duração curta de ação, em comparação com os agonistas de A2AAdoR de alta afinidade (por exemplo, WRC-0470 e CGS21680 ) , este vasodilatador coronariano de agonista de baixa afinidade, mas ainda pleno, pode prover ser um "agente de stress" farmacológico ideal, durante a formação de imagem de radionuclídeo do miocárdio.

Claims

1. Composto caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula: em que Ri é - CH2OH ; r3 é selecionado a partir do grupo que consiste em - CO2R20, -CONR7R8 e fenila, em que o substituinte fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci-6, CF3 e OR20; R7 é hidrogênio ou alquila Ci-6; em que 0 alquila Ci-6 é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, fenila, CF3, CO2R20í e em que o substituinte opcional fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci-6, e CF3; R8 é hidrogênio ou alquila Ci-6, em que 0 alquila Ci_6 é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, fenila, CF3 e CO2R20/ e em que o substituinte opcional fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci_6, e CF3; R20 é hidrogênio ou alquila Ci-6; e R2 e R4 são hidrogênio.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila Ci-6; e R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila Ci-4.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que; R7 é alquila Ci-6, em que o alquila Ci-6 é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, fenila e CF3, e em que o substituinte fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci-6 e CF3; e R20 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila Ci-4.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -C02R2o, -CONR7R8 e fenila, em que o substituinte fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em CF3 e OR20; R7 é alquila Ci_6, em que o alquila Ci_6 é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, fenila, CF3 e C02R20, e em que o substituinte fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci-s, e CF3; e R2o é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-4 alquila.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R20 é selecionado de hidrogênio e alquila Ci-4.

6. missing in original document.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila Ci-5, em que o substituinte alquila Ci_5 é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de fenila e CF3, e em que cada substituinte opcional fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 3 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci-S e CF3; R8 é selecionado a partir de hidrogênio e alquila Ci_3; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e alquila Ci- 4 ·

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em - CO2R20, -CONR7R8, e fenila, em que o substituinte fenila é opcionalmente substituído com de 1 a 2 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci-3, CF3 e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila Ci_6, em que o alquila Ci-6 é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de halogênio e CF3; Rs é selecionado a partir de hidrogênio e alquila Ci-3; e R2o é selecionado a partir de hidrogênio e alquila Ci-4

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em - CO2R20; -CONR7R8 e fenila, em que o substituinte fenila é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila Ci_3 e OR20; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila Ci-5/ em que 0 substituinte alquila C1-5 é opcionalmente substituído com fenila, e em que cada substituinte opcional fenila é opcionalmente substituído com halogênio; R8 é hidrogênio; e R20 é selecionado a partir de hidrogênio e alquila Ci_ 4 ·

10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de R7 ser metila.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de R3 ser -C02etila.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado a partir de etil 1-{9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-ila] -6-aminopurin-2-ila}pirazol-4- carboxilato, (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4-(4- clorofenil)-pirazolil]purin-9-ila}-5-(hidroximetil)oxolano- 3,4-diol, (4S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4-(4-metoxifenil)- pirazolil]purin-9-ila}-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol, (4 S, 2R, 3R, 5R)-2-{6-amino-2-[4-(4-metilfenil)-pirazolil] purin-9-ila}-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol, (l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-ila]-6- aminopurin-2-ila}pirazol-4-ila)-N-metilcarboxamida, ácido 1- {9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan- 2- ila]-6-aminopurin-2-ila}pirazol-4-carboxílico, 1-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-ila]-6- aminopurin-2-ila}pirazol-4-ila)-Ν,Ν-dimetilcarboxamida, 1- {9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2- ila]-6-aminopurin-2-ila}pirazol-4-ila)-N-etilcarboxamida, 1- {9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan- 2- ila]-6-aminopurin-2-ila}pirazol-4-ila)-4-metil carboxamida, 1-{9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroxi metil)oxolan-2-ila]-6-aminopurin-2-ila}pirazol-4-ila)-N- (ciclopentilmetil)carboxamida, l-{9-[(4S, 2R, 3R, 5R)-3,4- diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-ila]-6-aminopurin-2- ila}pirazol-4-ila)-N-[(4-clorofenil)metil] carboxamida e etil 2-[ (1-{9- [ (4S, 2R, 3R, 5R)-3,4-diidroxi-5- (hidroximetil) oxolan-2-ila]-6-aminopurin-2-ila}pirazol-4- ila) carbonilamino]acetato.

13. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 e um ou mais excipientes farmacêuticos.

14. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica está na forma de uma solução.

15. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 13 ou 14, caracterizada pelo fato de que a composição é útil como um anti-inflamatório, em uma terapia associada a angioplastia, como um inibidor de agregação plaquetária e como um inibidor de ativação de plaqueta e neutrófilo.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é (1 - {9 - [(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-ila]- 6-aminopurin-2-ila}pirazol-4-ila)-N-metilcarboxamida.