BRPI0606662A2

BRPI0606662A2 - métodos para diagnosticar a disfunção miocárdica, a doença da artéria coronária, a disfunção ventricular causada pela doença da artéria coronária, anormalidades de perfusão, para diagnosticar a presença e avaliar a severidade da doença da artéria coronária e a severidade da disfunção ventricular e a disfunção miocárdica, e, kit

Info

Publication number: BRPI0606662A2
Application number: BRPI0606662-3A
Authority: BR
Inventors: Richard J Barrett
Original assignee: King Pharmaceuticals Res & Dev
Priority date: 2005-01-12
Filing date: 2006-01-12
Publication date: 2010-02-09
Also published as: JP2008527003A; IL184326A; EP1841355A4; EP1841355A1; KR20070095925A; US20060159621A1; WO2006076698A1; CN101102717A; MX2007008412A; IL184326A0; NZ556216A; CA2594328A1; AU2006204716A1; US20110002843A1

Abstract

MéTODOS PARA DIAGNOSTICAR A DISFUNçãO MIOCáRDICA, A DOENçA DA ARTéRIA CORONáRIA, A DISFUNçãO VENTRICULAR CAUSADA PELA DOENçA DA ARTéRIA CORONáRIA, ANORMALIDADES DE PERFUSãO, PARA DIAGNOSTICAR A PRESENçA E AVALIAR A SEVERIDADE DA DOENçA DA ARTéRIA CORONáRIA E A SEVERIDADE DA DISFUNçãO VENTRICULAR E A DISFUNçãO MIOCáRDICA, E, KIT. Esta invenção é direcionada à formação de imagem miocárdica de pacientes humanos tendo uma história de asma ou broncospasmo. Em particular, a presente invenção usa binodenoson como um pressionador farmacológico em combinação com qualquer um dentre os vários procedimentos diagnósticos não invasivos e invasivos disponíveis. Por exemplo, a administração intravenosa pode ser usada em combinação com um agente radiofármaco e formação de imagem de perfusão miocárdica para avaliar a severidade da isquemia rniocárdica.

Description

"MÉTODOS PARA DIAGNOSTICAR A DISFUNÇÃO MIOCÁRDICA, A DOENÇA DA ARTÉRIA CORONÁRIA, A DISFUNÇÃO VENTRICULAR CAUSADA PELA DOENÇA DA ARTÉRIA CORONÁRIA, ANORMALIDADES DE PERFUSÃO, PARA DIAGNOSTICAR A PRESENÇA E AVALIAR A SEVERIDADE DA DOENÇA DA ARTÉRIA CORONÁRIA E A SEVERIDADE DA DISFUNÇÃO VENTRICULAR E A DISFUNÇÃO MIOCÁRDICA, E, KIT"

Referência Cruzada A Pedidos Relacionados

Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório dos Estados Unidos n2 60/643.481, depositado em 21 de janeiro de 2005, cujo teor é aqui incorporado como referência em sua totalidade.

Campo Da Invenção

A invenção diz respeito a métodos de detectar e/ou diagnosticar a disfunção miocárdica em pacientes humanos que tenham uma história de asma ou broncospasmos. Em particular, a presente invenção usa binodenoson ou outros agonistas seletivos de adenosina A2a como pressionadores farmacológicos em combinação com qualquer dentre vários procedimentos diagnósticos não invasivos e invasivos disponíveis. Fundamentos Da Invenção

A adenosina é conhecida desde os idos de 1920 como tendo atividade vasodilatadora potente. Ela é um hormônio local liberado da maioria dos tecidos no corpo durante o estresse, especialmente o estresse hipóxico e isquêmico (ver Olsson et ai, Physiological Reviews, 70(3), 761-845, 1990). Como tal, a adenosina e os agentes de liberação da adenosina são agoracomumente usados para estimular a condição de estresse para fins de diagnóstico (ver A. N. Clark e G. A. Beller. The present role of nuclear cardiology in clinicai practice. Quarterly Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging 2005; 49: 43-58).

A formação de imagem da perfusão miocárdica écorrentemente a abordagem mais comum no uso de agentes estimuladores do estresse (pressionadores farmacológicos) como meio de formar imagens dos «* vasos coronarianos para se obter um diagnóstico da doença de artéria coronária. Isto é efetuado por injeção do pressionador farmacológico como a adenosina, em uma dose de cerca de 1 mg/kg de peso corporal, seguida por injeção de um agente de formação de imagem, por exemplo um radionuclídeo, e formação de imagem do coração para detectar a extensão de quaisquer distúrbios da circulação coronariana.

O mecanismo subjacente à formação de imagem da perfusão miocárdica é como segue: a adenosina, atuando sobre os receptores coronarianos da adenosina, causa o relaxamento das arteríolas coronarianas, desse modo aumentando o fluxo sangüíneo em todo o coração. Este efeito tem curta duração e, em uma dose de 1 mg/kg, a adenosina não dilata outros vasos sangüíneos periféricos para produzir substancial hipotensão sistêmica. Os vasos coronarianos adoentados ou de outra forma bloqueados não se dilatarão mais em resposta à adenosina, e o fluxo subseqüente de um agente de formação de imagem através do coração será menor nestas regiões de hipoperfusão em relação a outras áreas mais normais do coração. A imagem resultante possibilita que o diagnosticista quantifique a quantidade e a severidade da deficiência deperfusão coronariana. Esta análise é de importância suprema em selecionar qualquer outro processo de terapia e intervenção pelo médico (Ver, por exemplo, as Patentes dos Estados Unidos n~ 5.070.877 e 4.824.660).

O uso da adenosina e análogos de idêntica atuação é associado com certos efeitos colaterais. A adenosina atua sobre pelo menos três subclasses de receptores da adenosina: Ai, A2 e A3. O subtipo receptor A2 é encontrado nos vasos sangüíneos e é ainda dividido nos subtipos receptores A2a e A2b (ver Martin et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 265(1), 248-253, 1993). Embora não se esteja limitados por qualquer teoria específica, acredita-se que o receptor A2a seja responsável pormediar a vasodilatação coronariana, e prover a ação desejada da adenosina no procedimento diagnóstico. O subtipo receptor Ah quando ativado pela adenosina, entre outras ações, reduz a freqüência e a velocidade de condução da atividade elétrica que inicia o batimento cardíaco. Algumas vezes a adenosina, particularmente nas doses próximas a 1 mg/kg, ainda bloqueia (interrompe) o batimento cardíaco durante este procedimento diagnóstico, o que é uma ação altamente indesejável.

Outro efeito colateral associado com a administração da adenosina é a broncoconstrição em pacientes asmáticos. A broncoconstrição tem sido associada com a ativação dos receptores da adenosina A3 nos mastócitos. [Ver J. Linden. Trends. Pharmacol. Sei. 15: 298-306 (1994)]. Além disso, a adenosina foi descrita como um agente provocador da asma na Patente dos Estados Unidos n° 6.248.723. Assim, os efeitos colaterais da adenosina e dos agentes de liberação da adenosina resultam substancialmente do estímulo não seletivo dos vários subtipos do receptor da adenosina.

Por causa dos efeitos colaterais associados com a administração da adenosina, e, em particular, a broncoconstrição, os pacientes afligidos com uma história de asma ou broncospasmo têm sido excluídos da formação de imagem miocárdica com o uso da adenosina, do dipirimidamol e dos análogos da adenosina, como pressionadores farmacológicos. Incluídos na classe de pacientes excluídos acham-se os pacientes que têm sintomas como chiados ou uma história de broncospasmo severo. Estes sintomas são freqüentemente manifestados em pacientes que sofrem de asma ou de distúrbio pulmonar obstrutivo crônico (COPD).

A asma, em particular, é uma doença significativa dos pulmões que afeta quase 12 milhões de americanos. A asma é tipicamente caracterizada por limitação periódica do fluxo de ar e/ou por hiper-sensibilidade a vários estímulos, que resulta em estreitamento excessivo das vias aéreas. Outras características podem incluir a inflamação das vias aéreas,a eosinofilia e a fibrose das vias aéreas.

O predomínio da asma (isto é, tanto a incidência quanto a duração) vem aumentando. A prevalência atual aproxima-se dos 10% da população e aumentou 25% nos últimos 20 anos. De maior preocupação, entretanto, é o aumento no índice de mortes. Quando ligado ao crescimento de visitas e hospitalizações nas salas de emergência, dados recentes sugerem que a gravidade da asma está aumentando. Embora a maioria dos casos de asma seja facilmente controlada, para aqueles com a doença mais grave os custos, os efeitos colaterais e, muito freqüentemente, a ineficácia do tratamento, apresentam sérios problemas.

O COPD é caracterizado por inflamação crônica das vias aéreas menores (< 2 mm) que inevitavelmente resulta na reconstrução do tecido e no estreitamento irreparável (obstrução) desta porção das vias aéreas. Os pacientes que sofram dos COPD tipicamente apresentam fluxo expiratório máximo reduzido e esvaziamento forçado lento dos pulmões. Os COPD são associados com a bronquite crônica e com o enfisema.

Além da adenosina, outros pressionadores farmacológicos comuns para uso na formação de imagem miocárdica incluem o dipiridamol e a dobutamina. O dipiridamol inibe a absorção da adenosina nas células, o que intensifica os efeitos extracelulares da adenosina endógena. Semelhante à adenosina, o dipiridamol é excluído do uso como pressionador farmacológico em pacientes de asma e em pacientes com uma história de broncospasmo.

A dobutamina pode ser usada como os pressionadores farmacológicos na formação de imagem miocárdica de pacientes sofrendo de um distúrbio pulmonar com uma história de asma ou broncospasmo. Entretanto, a dobutamina tem certas desvantagens em comparação com a adenosina. Por exemplo, efeitos colaterais da dobutamina são com freqüência observados nos pacientes. Estes efeitos colaterais incluem arritmias ventriculares (ou ectopia), dor pulmonar, palpitações, cefaléias, rubores e dispnéia. Os efeitos colateraistambém podem incluir fibrilação atrial ou taquicardia supraventricular. Além disso, a angina com depressão do segmento ST é relatada ocorrer em vários pacientes com a doença da artéria coronária.

A Patente dos Estados Unidos n2 5.477.857 para McAfee et al. reivindica o uso de formação de imagem miocárdica de 2-cicloexilmetilidrazino-adenosina. Embora a patente 5.477.857 disponha que outros compostos de hidrazinoadenosina possam ser usados, apenas o método de uso de composto único é reivindicado. A patente 5.477.857 também reivindica o método de formação de imagem miocárdica nos mamíferos. Nenhuma utilização humana específica é exemplificada ou apresentada.

Martin et al. apresenta de uma forma geral as propriedades farmacológicas da 2-cicloexilmetilidenoidrazinoadenosina (binodenoson) em comparação com a adenosina. Ver Drug Development Research 40: 313-324, 1997. Entre outras coisas, Martin et al. comparou o efeito de certas doses de binodenoson sobre o fluxo do sangue coronariano com adenosina em cães anestesiados e conscientes. Com base nas doses que foram relatadas aumentarem a vasodilatação coronariana em cães, doses semelhantes foram administradas em um modelo de asma de carneiro alérgico para medir o efeito sobre a resistência pulmonar. Os seguintes resultados foram observados: o binodenoson, diferente da adenosina, não aumenta a resistência pulmonar no carneiro; entretanto, o carneiro que recebeu binodenoson experimentou um aumento significativo na freqüência respiratória. Assim, no modelo de carneiro, os autores não relataram uma dose de binodenoson que pudesse evitar efeitos adversos, tais como uma freqüência respiratória aumentada.

Em suma, permanece a necessidade de se administrar dosagens de binodenoson que, com segurança, obtenham a vasodilatação coronariana em pacientes humanos com uma história de asma ou broncospasmo sem a broncoconstrição, para possibilitar que uma população mais ampla de pacientes seja submetida a um método de formação de imagem miocárdica.Além disso, uma vez que as respostas hiperêmicas coronarianas ao binodenoson alteram o fluxo sangüíneo coronariano em uma população de pacientes vulneráveis, isto é, aqueles que possam sofrer de distúrbios do fluxo sangüíneo coronariano, os efeitos hiperêmicos obtidos por tais métodos para administração e dosagens do binodenoson, devem ser facilmente reversíveis.

Sumário Da Invenção

Em um aspecto, a invenção diz respeito a um método para diagnosticar a disfunção miocárdica em um paciente humano tendo uma história de asma ou broncospasmo. O método inclui as etapas de:

(a) administrar por uma via intravenosa, ao paciente humano, cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar a dilatação da artéria coronária; e

(b) detectar a disfunção miocárdica no paciente humano.

Em algumas modalidades do método, o binodenoson é administrado como uma dose bolo ao referido paciente humano. Por exemplo, em uma modalidade específica, cerca de 0,5 a cerca de 2,5 ug/kg do binodenoson são administrados ao referido paciente humano.

Em outras modalidades do método, o binodenoson é administrado por infusão ao referido paciente humano. Por exemplo, em uma modalidade específica, cerca de 0,3 a cerca de 2,0 u.g/kg/minuto do binodenoson são administrados ao referido paciente humano.

Nas modalidades específicas do método, a disfunção miocárdica é doença da artéria coronária, disfunção ventricular, diferenças no fluxo sangüíneo através dos vasos coronarianos livres da doença e vasos estenóticos, ou uma combinação destes.

Em algumas modalidades do método, a etapa (b) compreende um procedimento de formação de imagem miocárdica não invasivo. Por exemplo, em uma modalidade específica, o procedimento de formação de imagem não invasivo inclui a administração de um agente de formação de imagem.Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para detectar e/ou de diagnosticar a doença da artéria coronária em um paciente humano que tenha uma história de asma ou de broncospasmo. O método para detectar a doença da artéria coronária inclui as etapas de:

(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar a dilatação da artéria coronária;

(b) administrar um agente de formação de imagem ao paciente humano; e

(c) realizar a formação de imagem de perfusão miocárdica no paciente humano para detectar a doença da artéria coronária.

Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para detectar e/ou de diagnosticar a disfunção ventricular causada pela doença da artéria coronária em um paciente humano tendo uma história de asma ou de broncospasmo. O método para detectar a disfunção ventricular inclui as etapas de:

(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar a dilatação da artéria coronária; e

(b) realizar uma técnica de formação de imagem da função ventricular no paciente humano, para detectar a disfunção ventricular.

Em ainda outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para detectar e/ou diagnosticar anormalidades de perfusão em um paciente humano que tenha uma história de asma ou de broncospasmo. O método para detectar as anormalidades de perfusão inclui as etapas de:

(b) detectar as anormalidades da perfusão no paciente humano.

Em certas modalidades do método para detectar anormalidades8

de perfusão, a etapa (b) compreende medir a velocidade do fluxo sangüíneo coronariano no paciente humano, para avaliar a capacidade vasodilatadora dos vasos coronarianos doentes em comparação com os vasos coronarianos livres da doença. Em outras modalidades do método, a etapa (b) compreende avaliar a capacidade vasodilatadora (capacidade de reserva) dos vasos coronarianos doentes em comparação com os vasos coronarianos livres da doença.

Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para detectar a presença e avaliar a severidade da doença da artéria coronária em um paciente humano que tenha uma história de asma ou de broncospasmo. O método inclui as etapas de:

(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano, cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson, para proporcionar a dilatação da artéria coronária;

(b) administrar um agente radiofármaco ao paciente humano; e (c) realizar a cintigrafia no paciente humano para detectar a

doença da artéria coronária.

Em ainda outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para detectar a presença e avaliar a severidade da disfunção ventricular em um paciente humano que tenha uma história de asma ou broncospasmo. O método inclui as etapas de:

(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano, cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson, para proporcionar a dilatação da artéria coronária; e

(b) realizar a ecocardiografia no paciente humano para detectar a disfunção ventricular.

Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um kit que compreende um primeiro recipiente contendo uma dosagem unitária do binodenoson, e um segundo recipiente contendo um agente de formação de imagem, um antagonista de adenosina ou um agonista (3-2.Breve Descrição Dos Desenhos

A Figura 1 mostra o volume médio expiratório forçado em 1 segundo (FEVi) no decorrer do tempo em pacientes humanos tratados com placebo e binodenoson (1,5 ag/kg) com asma intermitente branda.

A Figura 2 é um gráfico mostrando as respostas hiperêmicas coronarianas máximas a infusões de 3 minutos de 0,9, 1,5 e 1,5 e 3 microgramas/kg; e a doses de bolo (durante 30 segundos) de 1,5 e 3 microgramas/kg de binodenoson em 25 a 28 pacientes humanos (não asmáticos). As respostas expressas como média ± percentual de desvio padrão da reserva de velocidade do fluxo sangüíneo coronariano (CBFVR).

A Figura 3 é um gráfico que apresenta o decurso de tempo das respostas médias da CBFV, expressa como percentual de CBFVR, de5 doses de binodenoson em pacientes humanos (não asmáticos).

A Figura 4 é um gráfico mostrando o efeito através do tempo do binodenoson, 1,5 (J.g/kg de bolo na velocidade do fluxo do sangue coronariano (CBFV), resistência vascular coronariana (CVR), pressão sistólica do sangue (SBP), pressão diastólica do sangue (DBP) e freqüência cardíaca (HR) em pacientes humanos (não asmáticos).

A Figura 5 é um gráfico mostrando as concentrações médias (± SD) do binodenoson após a administração de 3 ug/kg durante um período de 10 minutos em pacientes humanos não asmáticos.

A Figura 6 é um gráfico mostrando o relacionamento entre o binodenoson AUC0,4 e a dose total (em microgramas) em pacientes humanos não asmáticos.

A Figura 7 é um gráfico que mostra o relacionamento entre a depuração sistêmica do binodenoson e o peso corporal, em um paciente humano não asmático.

A Figura 8 é um histograma mostrando o número de efeitos adversos por paciente, associado com as doses de binodenoson, em pacienteshumanos não asmáticos.

A Figura 9A mostra as mudanças máximas médias (SD) na freqüência cardíaca, em diferentes doses de binodenoson em pacientes humanos não asmáticos. A Figura 9B mostra as mudanças máximas médias (SD) nas

pressões sistólica e diastólica em pacientes humanos não asmáticos.

A Figura 10 é um gráfico que apresenta as concentrações simuladas de binodenoson na circulação sistêmica após a administração de 1,5 p.g/kg, durante os períodos de 10 minutos, 3 minutos e 30 segundos.

Descrição Detalhada Da Invenção

São fornecidos métodos de detectar a disfunção miocárdica em pacientes humanos com distúrbios pulmonares, tendo um componente reativo das vias aéreas, por exemplo, tal como pacientes com asma ou COPD. Entre outras coisas, os métodos da invenção permitem que uma população mais ampla de pacientes se beneficiem dos procedimentos diagnósticos da disfunção miocárdica conhecidos, que contam com o fluxo de assopro coronariano crescente, mediante a administração dos pressionadores farmacológicos. Uma vez que os métodos da invenção usam os agonistas seletivos A2a, tais como o binodenoson, para prover dilatação coronariana, e dessa forma aumentar o fluxo sangüíneo coronariano, os métodos reduzem substancialmente, ou eliminam, os efeitos colaterais indesejáveis que acompanham o uso de outros pressionadores farmacológicos tais como a adenosina, o dipirimadol ou a dobutamina. Os melhoramentos são especialmente importantes em pacientes que sofram de um distúrbio pulmonar com um componentes reativo das vias aéreas, em que os menores pressionadores farmacológicos podem ser usados com segurança, em comparação com pacientes que estejam livres de distúrbios pulmonares.

Em uma modalidade, por exemplo, os métodos da invenção são úteis em detectar a disfunção miocárdica em pacientes que tenham umahistória de asma ou broncospasmo. Em algumas modalidades, tais pacientespodem ser identificados com referência à história médica do paciente, paradetectar uma história de um distúrbio pulmonar com um componente reativodas vias aéreas, por exemplo a asma ou o broncospasmo. Alternativamente, ospacientes que tenham asma branda podem ser identificados em uma entrevistaou consulta de triagem, mediante confirmação da reversão dabroncoconstrição em seguida à administração de albuterol. Em outramodalidade, os pacientes com asma podem ser identificados por uma provapositiva a um teste de prova da metacolina.

Pressionadores Farmacológicos

Compostos adequados para uso como pressionadoresfarmacológicos na presente invenção são os agonistas potentes e seletivos doreceptor da adenosina A2a. Em uma modalidade específica, os pressionadoresfarmacológicos atual como agonistas do receptor da adenosina A2a com umaEC50 da vasodilatação coronariana, de vasodilatação coronariana menor doque 2,5 nM e um quociente do índice de seletividade em comparação com oreceptor Ai da adenosina de pelo menos 10.000 e um quociente deseletividade em comparação com o receptor da adenosina A2b de pelo menos10.000. Nas modalidades preferidas, os compostos foram ainda testadosquanto aos efeitos colaterais deletérios aos pacientes humanos sofrendo de umdistúrbio com um componente reativo das vias aéreas, tal como pacientes quesofram de asma ou broncospasmo.

Os compostos seletivos como agonistas para os receptores A2ahumanos são apresentados na Patente dos Estados Unidos n2 5.278.150 paraOlsson et ai, a. qual é por este meio incorporada como referência em suatotalidade. Os compostos descritos na patente 5.278.150, em geral, sãohidrazino adenosinas 2-substituídas. A seletividade e a potência doscompostos na patente 5.278.150 variam muito. A patente apresenta apenas aseletividade e potência de Ai/A2a para tais compostos. O teste para uso com apresente invenção tipicamente requer, além disso, medir a seletividade deA2b/A2a e determinar se os compostos têm níveis aceitáveis de efeitoscolaterais para pacientes humanos tendo a história de asma ou broncospasmo.

Compostos de adenosina adicionais potentes quanto aosreceptores de A2a são apresentados na Patente dos Estados Unidos n26.326.359 para Monaghan et ai, a qual fica aqui incorporada como referênciaem sua totalidade. Embora se acredite que alguns dos compostos na patente6.326.359 possam ser adequados, os dados quanto a potência, seletividade deA1/A2a e A2b/A2a, não se acham presentemente disponíveis. O uso da presenteinvenção com os compostos apresentados na patente 6.326.359, portanto,necessita de tais testes, bem como dos testes quanto aos efeitos colaterais empacientes humanos tendo a história de asma ou broncospasmo.

Nas modalidades específicas, os pressionadoresfarmacológicos são selecionados de:

2- {2-[(cicloexil)metileno]hidrazino} adenosina (binodenoson),

2- {2-[(cicloex-3-enil)metileno]hidrazino} adenosina,

2-[2-(4-metilpentilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(3-etileptilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(hexilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(4-metoxibenzilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(4-propileptilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(3-propilbenzilidina)hidrazino]adenosina,

2-[2-(benzilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(4-fluorobenzilideno)hidrazino]adenosina,

2-[2-(4-metilbenzilidina)hidrazino]adenosina,

2-[2-(3-metilbenzilidina)hidrazino]adenosina, ou

2-[2-(4-clorobenzilideno)hidrazino]adenosina.

Os compostos podem ser avaliados quanto à sua adequabilidadecomo pressionadores farmacológicos mediante métodos conhecidos paradeterminar a potência e a seletividade dos compostos quanto ao receptor deadenosina A2A. Em uma modalidade, uma preparação de coração de porquinho-da-índia de Langendorff compassado em 260 batidas/minuto, através do átrioesquerdo, serviu para os ensaios de atividade do agonista do receptor da adenosinaA1 e do receptor da adenosina A2a. Ver J. Med. Chem. 1991, 34, 1349 e a Patentedos Estados Unidos n2 5.278.150. O tampão de perfusão consistiu em NaCl 120mM, NaHC03 27 mM, KC1 3,7 mM, KH2P04 1,3 mM, MgS04 0,64 mM, CaCl21,3 mM, piruvato 2 mM, e glicose 5 mM. O tampão foi saturado com 95% de02/5% de C02, equilibrado a 37°C em um trocador de calor e liberado em umapressão equivalente a 55 mm Hg. A drenagem contínua do ventrículo esquerdopor meio de um cateter introduzido através da válvula mitral garantiu que estacâmara cardíaca não procedia a nenhum trabalho externo. Um eletrodo noventrículo direito monitorou o eletrocardiograma. As coletas cronometradas doefluente cardíaco em um cilindro graduado durante a fase do estado estacionáriodas respostas de fluxo à administração do composto do fluxo coronariano totalmedido, que também foi monitorado por um fluxômetro eletromagnético em linhana cânula de perfusão aórtica. O quociente da relação de infusão do composto(mol/min.) dividida pelo índice de fluxo coronariano (litros/minuto) é igual àconcentração de agonista no perfundido. O índice de infusão do agonista foiaumentado em etapas nos intervalos de 3 a 4 minutos, até o aparecimento do blococardíaco de segundo grau (ponto de Wenckebach). A EC50 do prolongamento dointervalo de QRS do estímulo (EC50-SQPR), a concentração do compostonecessária para prolongar o intervalo em 50% da resposta máxima, reflete aatividade no receptor da adenosina Aj. A transformação logit dos dados do fluxocoronariano e a solução de regressão do logit (fluxo coronariano) sobre log[composto] para logit = 0 produziu uma estimativa de EC50 de vasodilataçãocoronariana (EC50-CF), um índice de atividade do receptor da adenosina A2. Oquociente da EC50 do prolongamento de QRS do estímulo dividido pela EC50 davasodilatação coronariana forneceu um índice de seletividade. Os valores doíndice > 1 indicam seletividade para o receptor da adenosina A2.

Certos agonistas potentes altamente seletivos do receptor daadenosina A2a foram apresentados, por exemplo, na Patente dos EstadosUnidos n- 5.278.150. A patente 5.278.150 descreve os dados de EC50-SQPR ede EC50-CF obtidos para os seguintes compostos na preparação do coração deporquinho-da-índia de Langendorff, como descrito acima, os quais sãodescritos abaixo na Tabela 1. A seletividade de A\/A2a na Tabela 1 foicalculada como o quociente da EC50 do prolongamento de QRS do estímulodividido pela EC50 da vasodilatação coronariana.

TABELA 1

LIGAÇÃO E SELETIVIDADE DO RECEPTOR DA ADENOSINA

<table>table see original document page 15</column></row><table>Como pode ser observado na Tabela 1, muitos compostos dehidrazino adenosina 2-substituída apresentam alta afinidade no receptor daadenosina A2 com muito boa seletividade em relação ao receptor Ai. Os maispreferidos são aqueles compostos que apresentam alta potência de A2 (EC50-CF < 2,5) e alta seletividade (seletividade > 10.000).

Tabela 2 Identificação Dos Compostos Da Tabela 1

Composto Nome

Binodenoson 2- {2-[(cicloexil)metileno]hidrazino} adenosina

B 2- {2- [(cicloex-3 -enil)metileno]hidrazino} adenosina

C 2-[2-(4-metilpentilideno)hidrazino]adenosina

D 2-[2-(3-etileptilideno)hidrazino]adenosina

E 2-[2-(hexilideno)hidrazino]adenosina

F 2-[2-(4-metoxibenzilideno)hidrazino]adenosina

G 2-[2-(4-propileptilideno)hidrazino]adenosina

H 2-[2-(3-propilbenzilidina)hidrazino]adenosina

I 2-[2-(benzilideno)hidrazino]adenosina

J 2-[2-(4-fluorobenzilideno)hidrazino]adenosina

K 2-[2-(4-metilbenzilidina)hidrazino]adenosina

L 2-[2-(3-metilbenzilidina)hidrazino]adenosina

M 2-[2-(4-clorobenzilideno)hidrazino]adenosina

Comparar A Adenosina

Comparar B 2-Amino-adenosina

Comparar C 2-Hidrazino-adenosina

É ainda preferível usar compostos que sejam seletivos quantoao receptor de A2a sobre o receptor de A2b. Métodos adicionais são conhecidosna técnica para realizar bioensaios e são úteis para identificar a seletividade aoreceptor de A2b, bem como confirmar a seletividade e a potência in vivo. Taisbioensaios são tipicamente realizados antes dos exames de animais e de sereshumanos. A Tabela 3 apresenta os resultados dos ensaios dos porquinhos-da-índia preparados quanto ao binodenoson, realizados antes das provashumanas.

Tabela 3 Testes De Bioensaios Quanto Ao Binodenoson

Ensaio_Receptor da Adenosina_EC50 (nM)_

Atrio Direito do Ai 21.000

Porquinho-da-índia(Inotropia Negativa)

Átrio Esquerdo do Ai 38.900

Porquinho-da-índia

(Inotropia Negativa)

Átrio Direito do A, 39.800

Porquinho-da-India(Cronotropia Negativa)

Coração de Langendorf A, 3.500

de Porquinho-da-índia(DromotropiaNegativa)

Coração de Langendorf A2a 0.26

de Porquinho-da-índia(DilataçãoCoronariana)

Anel Aórtico de A2b 44.700

Porquinho-da-índia

(Relaxamento)_

Como observado na Tabela 3, o binodenoson é um agonista deA2a potente e é confirmado ser muito seletivo em relação aos receptores daadenosina Ai e A2b- E razoável que os compostos adicionais identificados naTabela 1 tenham resultados correspondentes e sejam também adequados parauso na presente invenção.

Em uma modalidade específica da invenção, o agonista doreceptor da adenosina A2a é o binodenoson. Entre outras coisas, aadministração do agonista de A2a seletivo, o binodenoson, alcança um nívelútil de vasodilatação coronariana, sem a necessidade de se submeter opaciente humano a exercício físico. Esta propriedade do binodenoson permiteque os pacientes que sejam incapazes de exercícios sejam avaliados pelosmétodos de detecção descritos abaixo. Portanto, nas modalidades preferidasdos métodos da invenção, os pacientes necessitam apenas receber aadministração do binodenoson para induzir um nível de vasodilataçãocoronariana para facilitar os procedimentos de detecção.

Nas modalidades alternativas, os métodos da invenção podemser praticados, nos quais o paciente humano seja submetido a exercíciosfísicos em uma quantidade suficiente para contribuir para a dilatação daartéria coronária já induzida pelo binodenoson. Por exemplo o paciente podecaminhar ou correr sobre um tambor rotativo antes ou simultaneamente com atécnica usada para detectar a presença e avaliar a severidade da disfunçãomiocárdica. Nas modalidades que combinam exercício físico com aadministração do binodenoson, doses inferiores de binodenoson podem seradministradas.

Métodos De Detectar A Disfunção MiocárdicaEm certas modalidades, a invenção diz respeito a um métodopara diagnosticar a disfunção miocárdica em um paciente humano tendo umahistória de asma ou broncospasmo. Por meio da modalidade, a invenção édescrita com o uso do agonista do receptor da adenosina A2a, o binodenoson.Entretanto, o técnico habilitado reconhecerá que outros agonistas do receptorseletivo da adenosina A2a, tais como aqueles descritos acima, podem serutilizados no método da invenção após a avaliação da sua seletividade, como descrito na seção precedente e para segurança, como descrito nos Exemplos 1e3.

O método inclui as etapas de:

(a) administrar, por uma via intravenosa, ao paciente humano,0,1 alO ug/kg de binodenoson, para proporcionar a dilatação da artéria coronária; e

(b) detectar a disfunção miocárdica no paciente humano.Detectar a disfunção miocárdica pode incluir detectar a

presença da disfunção miocárdica no paciente humano, a localização dadisfunção miocárdica no coração do paciente, a avaliação da severidade dadisfunção miocárdica no paciente humano, ou uma combinação destas. Adisfunção miocárdica pode ser, sem limitar, a doença da artéria coronária (porexemplo, a estenose dos vasos coronarianos), as anormalidades da parede dascoronárias, a disfunção ventricular, a doença valvular ou congênita, e acardiomiopatia, a doença microvascular e a viabilidade miocárdica.

Os procedimentos de detecção que usam o binodenoson comoum pressionador farmacológico podem ser procedimentos de detecção ou nãoinvasivos ou invasivos. Os procedimentos de detecção não invasivos incluemaqueles que formam imagem do miocárdio ou os infartos miocárdicos(formação de imagem da perfusão miocárdica e formação de imagem doinfarto miocárdico). Além disso, os procedimentos de detecção não invasivaincluem aqueles que permitem uma avaliação da função ventricular emovimento da parede.

Os agentes de formação de imagem são freqüentementeadministrados em procedimentos de detecção não invasiva. Tipicamente, osagentes de formação de imagem são injetados no paciente após a injeção dopressionador farmacológico, e depois o clínico detecta, registra e analisa aimagem (com o uso, por exemplo, de um analisador de cintilação gamarotativo). Os agentes de formação de imagem incluem, porém sem limitar,radiofármacos (tal como os procedimentos de tomografia computadorizadapor emissão de fótons isolados), tomografia por emissão de pósitrons outomografia computadorizada), agentes de formação de imagem porressonância magnética, e microbolhas (tais como a ecocardiografiamiocárdica contrastada). Os radiofármacos podem ser usados nosprocedimentos de formação de imagem e incluem, porém sem limitar, tálio-201, rubídio-82, tecnécio-99m, derivados do tecnécio-99m, nitrogênio-13,rubídio-82, iodo 123 e oxigênio-15.

Em algumas modalidades da invenção, a disfunção miocárdicaé detectada pela formação de imagem da perfusão miocárdica. A formação deimagem pode ser realizado por cintigrafia, tomografia computadorizada poremissão de fótons isolados (SPECT), tomografia por emissão de pósitrons(PET), formação de imagem por ressonância magnética nuclear (RMN),ecocardiografia contrastada de perfusão, angiografia de subtração digital(DSA) e tomografia computadorizada por raio-X ultra-rápida (CINE CT), ecombinações destas técnicas.

Em uma modalidade específica da formação de imagem deperfusão miocárdica, a invenção diz respeito a um método para diagnosticar apresença e avaliar a severidade da doença de artéria coronária em um paciente humano tendo uma história de asma ou broncospasmo. O método inclui:

(a) administrar por uma via intravenosa, ao paciente humano,cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson, para prover a dilatação daartéria coronária;

(b) administrar um agente radiofarmacêutico ao paciente humano; e

(c) realizar a cintigrafia no paciente humano para detectar adoença da artéria coronária.

Por exemplo, em certas modalidades, o binodenoson éadministrado ao paciente humano mediante uma dose de bolo intravenosa de,por exemplo, 1,5 ug/kg, seguida por um curto período, por exemplo de cercade 3 minutos, para permitir a vasodilatação coronariana, a ser obtida. Depois,o agente radiofármaco é administrado ao paciente humano e a cintigrafia érealizada.

Em outras modalidades, a disfunção miocárdica é detectadapor formação de imagem da função ventricular. A formação de imagem podeser realizado por técnicas tais como a ecocardiografia, ventriculografiacontrastada e angiografia dr radionuclídeo. No caso dos estudos angiográficosde radionuclídeo, os estudos podem ser estudos de equilíbrio de passagem oufechado do ventrículo direito e/ou do esquerdo.Em uma modalidade específica da formação de imagem dafunção ventricular, a invenção diz respeito a um método para diagnosticar adisfunção ventricular em um paciente humano tendo uma história de asma oubroncospasmo mediante ecocardiografia. O método inclui:

(a) administrar por uma via intravenosa, ao paciente humano,cerca de 0,1 a 10 ug/kg de binodenoson de modo a proporcionar a dilataçãoda artéria coronária; e

(b) realizar a ecocardiografia no paciente humano para detectara disfunção ventricular.

A ecocardiografia pode ser usada, por exemplo, para avaliar apresença de anormalidades do movimento de parede regional e da perfusãomiocárdica.

Procedimentos invasivos que utilizam o binodenoson como umpressionador farmacológico incluem aqueles procedimentos em que umcateter intracardíaco é introduzido para avaliar a signiflcância funcional dasanormalidades da perfusão miocárdica. Por exemplo, os cateteres de ultra-som intravasculares podem ser introduzidos dentro de um vaso coronarianopara detectar as mudanças no fluxo sangüíneo dentro dos vasos coronarianos.

Em certas modalidades, a invenção diz respeito a métodos dediagnosticar anormalidades na perfusão miocárdica em um paciente humanotendo uma história de asma ou broncospasmo. O método inclui:

(a) administrar por uma via intravenosa, ao paciente humano,cerca de 0,1 a 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar a dilatação daartéria coronária; e

(b) detectar anormalidades da perfusão.

Em uma modalidade específica deste método, a detecção deanormalidades da perfusão é conduzida pela medição da velocidade do fluxosangüíneo coronariano no paciente humano, para avaliar a capacidadevasodilatadora dos vasos coronarianos doentes, em comparação com vasoscoronarianos livres da doença.

Em outra modalidade específica, a detecção das anormalidadesda perfusão é conduzida pela medição da velocidade do fluxo sangüíneocoronariano no paciente humano, de modo a avaliar a capacidadevasodilatadora dos vasos coronarianos doentes, em comparação com vasoscoronarianos doentes. Em uma modalidade particular deste método, avelocidade do fluxo sangüíneo coronariano pode ser avaliada mediante o usode um cateter de fluxo intravascular (por exemplo, um cateter de fluxoDoppler) a fim de avaliar a capacidade vasodilatadora (capacidade de reserva) dos vasos coronarianos.

Em modalidades específicas, os métodos de detecção dainvenção podem ainda incluir a etapa de administrar um antagonista daadenosina para reverter quaisquer efeitos colaterais desagradáveis quevenham a ser experimentados pelo paciente, ou para mais rapidamentereverter as respostas vasodilatadoras e hemodinâmicas ao binodenoson.Modos De Administração

Nos métodos da invenção, o binodenoson é administrado aospacientes humanos com uma história de asma ou broncospasmo, por injeçãointravenosa, em uma dose de cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg. Nasmodalidades específicas, a dose intravenosa é de 0,1 a 10 p.g/kg. Aadministração pode ser conduzida por uma injeção de bolo ou por infusão dobinodenoson no decorrer do tempo. Como aqui usado, incluindo nasreivindicações, "dosagem/administração/injeção de bolo" significa umainjeção de binodenoson no decurso de não mais do que cerca de 30 segundos,ao passo que ''dosagem/administração/injeção de infusão" significa aadministração de binodenoson no decurso de mais do que cerca de 30segundos.

Nas modalidades preferidas dos métodos da invenção, obinodenoson é administrado por injeção de bolo intravenosa de dosesvasodilatadoras de cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson. Entreoutras coisas, a injeção de bolo pode prevenir a necessidade do uso de umabomba de infusão. Preferivelmente, a dose de bolo do binodenosonadministrada é menor do que cerca de 2,5 ug/kg, por exemplo 0,5 a cerca de2,5 ug/kg, tal como cerca de 1 a cerca de 2 ug/kg. Em certas modalidadesespecíficas, a dose de bolo é menor do que 2,5 ug/kg, preferivelmente de 0,5a 2,5 ug/kg, mais preferível de 1 a 2 ug/kg.

Em outras modalidades dos métodos, o binodenoson éadministrado mediante dosagem de infusão. Tipicamente, a dosagem de infusão é de cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg/minuto, e é preferivelmente decerca de 0,3 a cerca de 2,0 ug/kg/minuto, tal como de cerca de 0,3 a cerca de0,5 ug/kg/minuto. Geralmente, a infusão do binodenoson no paciente humanoé completada dentro de um período de tempo que é menor do que 10 minutose,. em uma modalidade específica, é completada dentro de um período de tempo de menos do que 5 minutos.

Vários modos de administração alternativos dos agonistas daadenosina A2a são igualmente considerados. Estes modos incluem aadministração em uma forma de dosagem parenteral, uma forma de dosagemsublingual ou bucal, ou administração por um dispositivo transdérmico em um índice suficiente para provocar a vasodilatação.Kits De Administração

A invenção inclui kits que podem simplificar as etapasnecessárias ao clínico para efetuar a vasodilatação coronariana no pacientehumano e/ou para conduzir o método de detecção. Um kit típico da invenção compreende uma dosagem unitária

do agonista da adenosina A2, por exemplo o binodenoson. Em umamodalidade, a dosagem unitária se acha em um recipiente, o qual pode serestéril, contendo uma quantidade eficaz do agonista da adenosina A2a- Nestecaso, o kit pode ainda ter um segundo recipiente que contenha um agente deformação de imagem, um antagonista da adenosina (por exemplo, aaminofilina) ou um agonista (3-2 (por exemplo, albuterol). O agente deformação de imagem pode ser incluído nos métodos de detecção que utilizamos procedimentos de formação de imagem examinados acima. Os antagonistasda adenosina podem ser incluídos no kit como uma medida precautória parareverter rapidamente os efeitos hiperêmicos coronarianos aos agonistas daadenosina A2a. Os agonistas (3-2 podem ser incluídos no kit como uma medidaprecautória para reverter qualquer broncoconstrição que possa ser observadaem pacientes asmáticos durante ou subseqüente ao procedimento diagnóstico.

Em algumas modalidades, o kit pode compreender ainda umaparelho para administrar o agonista da adenosina A2a, por exemplo obinodenoson, mediante dosagem em bolo ou infusão. Tal aparelho podeincluir, por exemplo, uma seringa para injeção de bolo do agonista de A2a ouuma bomba de infusão adequada para a dosagem de infusão do agonista de A2a.

A invenção será ilustrada, porém não limitada, pelos seguintes exemplos:

Exemplos

Exemplo 1

Medição das respostas pulmonares ao binodenoson em pacientes humanos com asma intermitente branda

Metodologia

O estudo consistiu de 2 partes: uma Parte Simples Cega e umaParte Dupla Cega. A graduação da dose, de pacientes inscritos na ParteSimples Cega com asma intermitente branda, consistiu de 3 grupos dedosagem seqüencialmente inscritos com 8 pacientes por grupo, de tal modoque os Grupos de Dosagem 1, 2 e 3 recebessem doses alvo de binodenoson de0,5 ug/kg, 1,0 |ng/kg e 1,5 M-g/kg, respectivamente. Todos os 8 pacientes emum grupo de dosagem devem ter completado a dosagem na dose designada eum exame médico de cada grupo deve ter sido aceitável antes da inscrição nogrupo seguinte iniciado. A Parte Dupla Cega era iniciada apenas se o examemédico de todos os dados de segurança da Parte Simples Cega fosse aceitável.Na Parte Dupla Cega, os pacientes com asma intermitente branda foramaleatoriamente designados em uma relação de 2:1 para receber ou 1,5 )Lig/kgde binodenoson (planejado n=40) ou controle de placebo (planejado n=20).

Ambas as partes do estudo foram compreendidas de Visitas deTriagem, de Tratamento e de Acompanhamento. A Visita de Triagem ocorreude 7 a 14 dias antes da Visita de Tratamento e consistiu de um exame físico,de história médica, e de aplicação de critérios de inclusão e de exclusão. Ospacientes foram instruídos a medir o fluxo expiratório de pico (PEF) e ossintomas da asma durante um período de pelo menos 7 dias antes da Visita deTratamento. Os pacientes foram instados a continuar a atender todos oscritérios de eligibilidade da Triagem na Visita de Tratamento e o volumeexpiratório forçado em 1 segundo (FEVj) teve de permanecer dentro dos 80%do previsto para que os pacientes fossem qualificados para a dosagem. Todosos pacientes inscritos na Parte Simples Cega e os pacientes que foramrandomizados para receber o binodenoson na Parte Dupla Cega, receberam 3injeções intravenosas (IV) durante a Visita de Tratamento: (1) placebo; (2) uma dose baixa de binodenoson de prova para detectar reações potenciais dehipersensibilidade; e (3) uma dose de teste de binodenoson designada. Ospacientes randomizados para receber o placebo na Parte Dupla Cegareceberam 3 injeções de placebo. A Visita de Acompanhamento ocorreu 2 a 4dias em seguida à Visita de Tratamento.

Pacientes Selecionados Para O Estudo

Planejado: A inscrição planejada foi para até 84 pacientes: 24pacientes na Parte Simples Cega (grupos de escala de 3 doses com 8 pacientespor grupo) e 60 pacientes na Parte Dupla Cega (40 pacientes no grupo detratamento de binodenoson e 20 pacientes no grupo de tratamento deplacebo).

Analisado: 24 pacientes na Parte Simples Cega (grupos deescala de 3 doses com 8 pacientes por grupo) e 63 pacientes na Parte DuplaCega (41 pacientes no grupo de binodenoson e 22 pacientes no grupo deplacebo).

Os pacientes qualificados eram homens ou mulheres nãográvidas, não amamentando, de > 18 anos de idade pesando < 158 kg comuma história médica de asma intermitente branda [como definido nas"Diretrizes para o Diagnóstico e o Controle da Asma" preparadas pelos National Institutes of Health (NIH)] dentro dos 6 meses de Triagem.Alternativamente, a asma pode ter sido confirmada na Triagem através dareversibilidade da broncoconstrição (definida como > 12% de aumento noFEVi) em seguida a 2 jatos de albuterol inalado de um inalador de dosemedida (MDI) preparada (90 mg/jato) ou 2,5 mg de solução de albuterol liberada por nebulizador, ou através de um teste de prova de metacolina(MCT) positivo (concentração provocadora de metacolina, que causa umaqueda de 20% no FEVi [PC2o] < 8 mg/ml). Os pacientes deviam ser capazesde controlar sua asma com o uso dos agonistas p2 sozinhos; estar com saúdeestável boa em geral confirmada mediante exame físico e testes de laboratórioclínico; ter a capacidade de realizar testes reprodutíveis da função pulmonar(PFTs) como descrito pelos critérios da American Thoracic Society (ATS);não ter sido um fumante por pelo menos 1 ano antes do início do estudo comuma história de fumo de < 10 anos; e ter tido uma baixa ou muito baixaprobabilidade de doença da artéria coronária (CAD), como determinado pelas diretrizes do American College of Cardiology (ACC)/American HeartAssociation (AHA).

Os pacientes não eram classificados para o estudo se elestivessem pressão sangüínea sistólica (SBP) sentado em repouso < 100 ou >140 mmHg, pressão sangüínea diastólica (DBP) < 60 ou > 90 mmHg,freqüência de pulso > 95 batidas por minuto (bpm), ou um FEV! limiteinferior em repouso de< 80% do valor previsto na Triagem. Além disso, ospacientes não eram classificados na Visita de Tratamento se eles tivessem >20% de variabilidade nos valores de PEF em > 3 dos 7 dias antes da Visita deTratamento, se eles tivessem tido um resinado, gripe ou infecção das viasrespiratórias superiores dentro das 4 semanas antes da Visita de Tratamento,ou se eles tivessem tido uma história de reação alérgica à adenosina ou aodipiridamol.

Dose E Modo De Administração

Uma solução de 25(ig/ml de binodenoson foi administradacomo uma injeção de bolo durante 30 segundos [0,1 p.g/kg (0,084 ml/kg desolução diluída), 0,5 ug/kg (0,02 ml/kg de solução de estoque), 1,0 ug/kg(0,04 ml/kg de solução de estoque), 1,5 ug/kg (0,06 ml/kg de solução deestoque] durante 30 segundos.

Duração Do Tratamento

Cada paciente recebeu três injeções IV de bolo de 30 segundosseparadas por > 90 minutos em ambas as Partes Cega Única e Dupla Cega doestudo.

Terapia De Referência, Dose E Modo De Administração,Número De Bateladas

Placebo para combinar com a solução de binodenoson foiadministrado como uma injeção de bolo durante 30 segundos.

Critérios Para Avaliação

Segurança: O ponto final de segurança primária foi abroncoconstrição clinicamente significativa, definida como um decréscimo de> 20% no FEV] da linha de referência do pré-medicamento em seguida àadministração do binodenoson. Outras avaliações de segurança incluíram anecessidade da medicação de resgate, medições regulares da função pulmonar[FEV! (% previsto), capacidade vital forçada (FVC), e fluxo expiratórioforçado durante a metade média da FVC (FEF25%-75%)], sinais vitais, oximetriado pulso, descobertas do exame físico, resultados do eletrocardiograma(ECG), resultados clínicos de laboratório, e eventos adversos (AEs).Métodos Estatísticos

Segurança: Todos os dados coletados no estudo foramresumidos pelo tratamento (placebo; prova de 0,1 ug/kg de binodenoson; ou0,5, 1,0 ou 1,5 ug/kg de binodenoson) e Parte de estudo (Cega Única ouDupla Cega com resumos mono variados). Variáveis contínuas foramresumidas com estatísticas descritivas [n, média, mediana, desvio padrão (SD)e mínimo e máximo]. O percentual do coeficiente de variação também foitambém computado, quando apropriado. As variáveis categóricas foramresumidas pela apresentação do número e do percentual de pacientes em cadacategoria.

As análises de segurança focalizaram-se primeiramente sobre areação pulmonar ao binodenoson, medida pela mudança do FEVj dos valoresda linha de referência através do tempo. Os dados das medições pulmonaressecundárias (por exemplo, a mudança da FVC da linha de referência,necessária para a medicação de resgate) e das medições de segurança nãopulmonares (por exemplo, pressão sangüínea, a freqüência de pulso, aoximetria de pulso, mudanças do ECG, resultados clínicos de laboratório)foram resumidos. Os AEs emergentes do tratamento foram resumidos porgrupo de tratamento de acordo com as seguintes categorias: paciente, classede órgão do sistema, e AE individual, globais.

RESULTADOS

Parte Simples Cega do Estudo

A Tabela 4 apresenta o FEVj observado (como L e o%previsto) em seguida à primeira e à segunda injeções na Parte Simples Cegado estudo. A Tabela 5 apresenta a FEF25%.75o/o e FVC observadas em seguida àprimeira e à segunda injeções na Parte Simples Cega do estudo.<table>table see original document page 29</column></row><table><table>table see original document page 30</column></row><table><table>table see original document page 31</column></row><table><table>table see original document page 32</column></row><table>

1 A medição de 90 minutos quanto a 0,1 ug/kg de binodenoson serviu como a

medição da linha de referência.

Nenhuma mudança clinicamente significativa da linha dereferência em FEVi médio, FEVi médio (% previsto), FEF25o/0.75o/0 média ouFVC médio foi observada após as injeções de 0,1 ug/kgde placebo ou debinodenoson na Parte Simples Cega (Tabelas 4 e 5). Além disso, nenhumamudança clinicamente significativa da linha de referência no FEVi médio,FEVi médio (% previsto), FEF2s% 75%, ou FVC médio foi observada após asinjeções de binodenoson (terceira injeção) durante a Parte Simples Cega(Tabela 6).

Parte Dupla Cega do Estudo

Na Parte Dupla Cega do estudo, nenhuma mudança clínicasignificativa da linha de referência no FEVi médio, FEVi médio (% previsto),FEF25%.75o/o, ou FVC médio foi observada após a primeira ou a segunda injeções ouno grupo de 1,5 ug/kg de binodenoson ou no do placebo (Tabela 7).<table>table see original document page 33</column></row><table>Nenhuma mudança clinicamente significativa da linha dereferência no FEVj médio, FEVi médio (% previsto), FEF25o/0.75o/0, ou FVCmédio foi observada após a terceira injeção(placebo ou 1,5 ug/kg debinodenoson) na Parte Dupla Cega (Tabela 8). Além disso, nenhumadiferença de tratamento estatisticamente significativa foi observada. A Figura1 mostra um gráfico do FEV! médio (±SD) através do tempo para ospacientes tratados com placebo e com binodenoson na Parte Dupla Cega doestudo.

TABELA 8

<table>table see original document page 34</column></row><table>

1A medição de 90 minutos quanto à segunda injeção serviu como a medição da linha de referência.Sumário Dos Resultados De Ambas As Partes Do Estudo

Nenhum evento de broncoconstrição foi observado nem naParte Simples Cega nem na Dupla Cega do estudo. Nenhum pacientenecessitou de medicamento de resgate em qualquer das Partes Simples Cegaou Dupla Cega do estudo.

Nenhuma mudança da linha de referência clinicamentesignificativa no FEVj médio, FEV! médio (% previsto), FEF25o/0.75o/0 média ouFVC médio foi observada após qualquer injeção nas Partes Simples Cega ouDupla Cega do estudo. Nenhum paciente experimentou AEs emergentes de tratamento

após as injeções de placebo ou de 0,1 ug/kg de binodenoson na Parte SimplesCega. Metade dos pacientes experimentaram AEs emergentes de tratamentoapós a terceira injeção na Parte Simples Cega (0,5 ug/kg de binodenoson25%, 1,0 ug/kg de binodenoson 50% e 1,5 ug/kg de binodenoson 75%). Na Parte Dupla Cega, 19% dos pacientes de placebo e 69% doa pacientes de 1,5ug/kg de binodenoson experimentaram AEs, a maioria dos quais ocorreu apósa terceira injeção. A maioria dos AEs emergentes de tratamento comuns nogrupo de 1,5 ug/kg de binodenoson tiveram taquicardia (31%), vertigem(18%), rubor (15%), taquicardia sinusal e náuseas (8% cada), e cefaléia e desconforto abdominal (5% cada). Nenhum AE específico ocorreu em maisdo que 1 paciente no grupo de placebo.

Não houve mortes, AEs sérios, ou descontinuação prematuradevida aos AEs no transcorrer do estudo.

Nenhum resultado clinicamente significativo foi observado em relação às avaliações de laboratório, ECG ou oximetria de pulso. Aumentostransientes na SBP e na freqüência de pulso e decréscimos na DBP foramobservados em ambos os grupos de tratamento, na Parte Dupla Cega, com agrandeza de mudanças maiores no binodenoson em comparação com o grupode placebo.CONCLUSÕES

Os resultados deste estudo em pacientes com asmaintermitente branda demonstram que o binodenoson nas doses até 1,5 ug/kgnão induziu a broncoconstrição; e o binodenoson nas doses até 1,5 ug/kg foiseguro e bem tolerado; nenhum efeito clinicamente significativo sobre osparâmetros da função pulmonar, das avaliações de laboratório, dos sinaisvitais, do ECG ou da oximetria de pulso, foi observado.

EXEMPLO 2

REGIMES DE DOSAGEM DO BINODENOSON, QUEPRODUZEM VASODILATAÇÃO MICROCIRCULATÓRIA DASCORONÁRIAS COMPARÁVEL COM A ADENOSINA EM PACIENTESHUMANOS SEM HISTÓRIAS DE ASMA OU DE COPD

Este exemplo descreve estudos planejados para determinardoses e regimes de dosagem úteis quanto ao uso do binodenoson como um pressionador farmacológico. Especificamente, o estudo foi planejado paraestabelecer o regime de dosagem do binodenoson que produzisse um nível devasodilatação das coronárias comparável àquele produzido pela adenosinadurante um procedimento de estresse farmacológico, com menores e menosseveros efeitos colaterais. A reserva de velocidade do fluxo sangüíneo dascoronárias (CBFVR) foi estabelecido por injeções intracoronarianas (IC) dobolo de adenosina logo antes da administração do binodenoson para permitiruma comparação direta da grandeza das respostas.

Os pacientes que se apresentaram para a cateterização cardíacaforam examinados quanto à qualificação e forneceram permissão informadaantes da sedação. A qualificação final foi determinada pelo pesquisadordurante a cateterização diagnostica. Os pacientes qualificados incluíamhomens ou mulheres não grávidas de 18 anos de idade ou mais e pesandoentre 40 e 125 kg, que tivessem pelo menos 1 artéria coronária não obstruídaque fosse tecnicamente acessível e em que um fio guia Doppler (FloWire®,Volcano Corporation, Rancho Cordova, Califórnia) pudesse ser introduzido.Os pacientes eram excluídos caso eles tivessem ingerido cafeína,metilxantinas ou dipiridamol dentro de 12 horas ou tivessem uma história dehipersensibilidade à aminofilina ou à teofilina; tivessem recebido qualquermedicamento de pesquisa dentro dos 30 dias; tivessem sido arrolados em umestudo anterior de binodenoson; tivessem asma ativa ou doença pulmonarobstrutiva crônica; tivessem um infarto miocárdico agudo dentro dos 30 dias;tivessem hipertensão descontrolada, insuficiência cardíaca congestiva,hipertrofia ventricular esquerda, cardiomiopatia dilatada, arritmias ventriculares malignas, doença valvular clinicamente significativa, fração deejeção ventricular esquerda < 40%, um enxerto de desvio da patente ou stentno vaso de interesse, doença da artéria coronária principal esquerda (> 50%de estreitamento luminal por inspeção visual), doença severa de 3 vasos (>80% nos 3 vasos principais), aparência angiográfica sugestiva de trombo, ou tivesse sido submetido a uma intervenção percutânea durante a cateterização.

Os pacientes fizeram um eletrocardiograma (ECG) de 12derivações dentro de 7 dias e tiveram extração de sangue para testes clínicosde laboratório dentro de 24 horas, antes da entrada no estudo. Em seguida àconclusão do procedimento de cateterização diagnostica e confirmação detodos os critérios de qualificação, o fio guia de Doppler foi introduzido emuma artéria coronária acessível e manipulado até que um sinal estável fosseobtido.

ADMINISTRAÇÃO DO MEDICAMENTOTodas as medicações usuais do processo de cateterização,incluindo a nitroglicerina IC, a heparina, agentes ansiolíticos e agentesanalgésicos, foram permitidos. Dentro dos 15 minutos antes da administraçãode binodenoson, 2 a 3 doses de adenosina IC escalonadas foram injetadasrapidamente na artéria coronária alvo para definir a CBFVR. As doses debinodenoson foram então introduzidas em uma veia periférica através de umcateter de demora. Todos os 133 pacientes no estudo de seleção de dose foramaleatoriamente designados para receber 1 a 5 regimes de dosagem intravenosa(IV): binodenoson por infusão contínua durante 3 minutos nos índices de 0,3,0,5 ou 1 |a.g/kg/minuto (doses totais de 0,9, 1,5 e 3 ug/kg) ou doses debinodenoson de 1,5 ou 3 ug/kg por injeção IV de bolo durante 30 segundos.

MEDIÇÕES

A velocidade do fluxo sangüíneo coronariano (CBFV) foimedida como velocidade (cm/segundo) pulsátil contínua (sistólica ediastólica) com o fio guia Doppler introduzido através de um cateter guia. AHR foi originada do sinal do ECG. A SBP e a pressão sangüínea diastólica(DBP) foram registradas diretamente da bainha do cateter. Para cada injeçãode adenosina IC, a CBFVR foi calculada pela divisão do valor da CBFV depico após a injeção pelo valor da linha de referência respectiva. Cada CBFVRcalculada máxima do paciente foi usada como um ponto de referência para oque as respostas da CBFV ao binodenoson foram comparadas. Para cada dosede binodenoson, a CBFV da linha de referência (adenosina pós-IC), a CBFVde pico, o tempo em seguida ao tempo de início da dose para obter o CBFVde pico, e os percentuais de CBFVR (calculados como a relação da mudançada CBFV da linha de referência em seguida à administração do binodenosonversus CBFVR) em cada ponto foram calculados. O produto da pressão doíndice (RPP) e a resistência vascular coronariana (CVR) foram derivados emcada ponto do tempo (ver fórmulas na Tabela 10). Os pacientes no estudoforam monitorados continuamente até que a CBFV retornasse à linha dereferência, por 10 minutos após a CBFV tivesse retornado a dentro dos 25%da linha de referência pré-binodenoson, ou por um total de 45 minutos,qualquer que ocorresse primeiro. Os sinais vitais foram medidos novamenteaproximadamente 3 a 4 horas após a dosagem ou antes da alta hospitalar. Ospacientes retornaram para uma visita de acompanhamento 2 a 4 dias emseguida à cateterização, que incluía sinais vitais, um exame físico abreviado,um ECG de 12 derivações, avaliações da química sangüínea e dahematologia, e uma avaliação de quaisquer eventos adversos de formaçãotardia.

Os eventos adversos foram monitorados na totalidade doestudo. Uma abordagem conservadora foi tomada, conforme protocolo, paraidentificar os decréscimos na SBP e DBP no estudo de seleção de dose: Osdecréscimos na SBP > 20 mm Hg ou os decréscimos na DBP > 15 mm Hgtiveram de ser relatados como eventos adversos, não obstante a pressãosangüínea da linha de referência. A incidência de mudanças clinicamentesignificativas, definidas como decréscimos na SBP a < 80 mm Hg ou na DBPa < 45 mm Hg, também foram registrados. Os eventos adversos sérios foramdefinidos como aqueles que tenham resultado em morte; que tivessem riscode vida ou de incapacidade; ou que requeressem ou prolongassem ahospitalização. O dicionário Coding Symbols for Thesaurus of AdverseReaction Terms (COSTART) (versão 5.0, Food and Drug Administration,Rockville, Mariland) foi usado para codificar eventos adversos pelo sistemacorporal e o termo preferido.

ANÁLISES ESTATÍSTICAS

Todos os dados farmacodinâmicos e de segurança foramanalisados com o uso da população de intento-a-tratar (ITT), que incluía todos ospacientes que houvessem recebido qualquer quantidade do medicamento deestudo. O teste-t pareado foi usado para avaliar a significância das diferenças detratamento interno (pico versus linha de referência) na CBFV, sinais vitais, eCVR e RPP calculadas; as comparações repetidas foram corrigidas com o uso dométodo de Bonferroni-Holm. A significância estatística das diferenças entre osgrupos de tratamento foi avaliada com o uso de uma análise do modelo devariância (ANOVA) que incluía o tratamento e as interações do pesquisador.

O arrolamento de 120 pacientes no estudo de seleção de dose(24 pacientes por dose) forneceu 90% de força para se concluir que o limiarinferior do limite de confiança de 95% sobre o índice de sucesso da populaçãofoi de 65%. O sucesso foi definido como a hiperemia coronariana quepermanecesse > 85% da CBFVR por > 2 minutos. Para levar em conta osdesprendimentos, um arrolamento de 138 pacientes foi planejado.

RESULTADOS

Ao todo, 138 pacientes foram arrolados e 133 receberam umadose única do medicamento de estudo e foram incluídos nas análises de ITT.Cinco pacientes randomizados não receberam a medicação de estudo porcausa de eventos adversos do pré-tratamento, de dificuldades técnicas, ou deretratação da autorização. As características demográficas e os valores deCBFV da linha de referência (adenosina pré-IC) foram semelhantes atravésdos 5 grupos de dose. A adenosina IC produziu aumentos transientes nosvalores de CBFV, mas nenhum efeito consistente sobre SBP, DBPou HR; asrespostas dos pacientes à adenosina IC e as doses médias da adenosinaresultantes na CBFVR foram semelhantes através dos grupos de doses.

Os valores médios de CBFV, HR, SBP, DBP, CVR e RPP dalinha de referência antes da dosagem do binodenoson foram semelhantes atravésdos grupos de tratamento (Tabela 9). As respostas hiperêmicas das coronárias aobinodenoson foram evidentes dentro de segundos da administração domedicamento. A CBFV obteve níveis quase máximos dentro de 3 minutos, e aresposta de pico média ocorreu dentro dos primeiros 6 minutos em todos osgrupos de tratamento (p < 0,001, teste-t pareado, cada grupo). As respostas de picoforam semelhantes através dos grupos de tratamento (p = 0,757, ANOVA; Figura2). As respostas hiperêmicas dentro de cada grupo foram significativas em cadaponto do tempo após o início da dosagem de binodenoson (p < 0,001, medidasrepetidas ANOVA; Figura 3). As doses de 1,5 e de 3 ug/kg, quer infundidasdurante 3 minutos ou injetadas como bolos, produziram hiperemia coronarianamáxima equivalente à CBFVR, e a resposta hiperêmica à infusão 0,3fj,g/kg/minuto nos 3 minutos foi apenas levemente menos eficaz (Figura 2; Tabela9). A duração da hiperemia máxima média (o tempo da DBFV foi > 85% daCBFVR) foi relacionada à dose (p = 0,006, ANOVA; Tabela 9). A hiperemiamáxima persistiu por 7,4 ± 6,86 minutos em seguida à dose de bolo de 1,5 fig/kg.As respostas médias da CBFV para todas as 5 doses, expressas como percentuaisda CBFVR, são apresentadas na Figura 3.

Tabela 9 Cbfv E Percentual De Cbfvr Obtidos Em Seguida À Dosagem DeBinodenoson (População Itt)*

<table>table see original document page 41</column></row><table>

* p > 0,05 quanto ao efeito do tratamento global para cada variável doresultado (ANOVA).

f Pós-binodenoson. CBFV mais elevada após o binodenoson durante operíodo de observação na cateterização;

p < 0,001 para cada diferença dentro do tratamento entre o pico e a linha dereferência (teste-í pareado).* efeito do tratamento p = 0,006 (ANOVA).

ANOVA = análise de variação; CBFV = velocidade do fluxosangüíneo coronariano; CBFVR = reserva de velocidade do fluxo sangüíneocoronariano (CBFV de pico em seguida à CBFV da adenosina IC/linha dereferência); cm = centímetros; ITT = intento-a-tratar;min - minuto;SD = desvio padrão; seg - segundo.

As respostas hiperêmicas foram acompanhadas por aumentosrelacionados à dose em HR (p = 0,003, ANOVA) e RPP (p = 0,010, ANOVA); osaumentos em HR e RPP foram maiores nos pacientes tratados com as doses de 3ug/kg (Tabela 10. Os decréscimos modestos em SBP, DBP e CVR foramsemelhantes através das doses (p = 0,42, 0,45 e 0,42, respectivamente, ANOVA;A Tabela e as mudanças de pico nos sinais vitais foram semelhantes quandodoses comparáveis foram administradas por infusão ou injeção de bolo. Asmudanças induzidas pelo binodenoson em SBP, DBP, CVR, RPP e HR médiosretornaram aos níveis próximos à linha de referência dentro de aproximadamenteminutos. Não foi possível determinar precisamente o tempo necessário paraque a CBFV retornasse à linha de referência, tendo em vista que os catetereshaviam sido removidos da maioria dos pacientes aproximadamente 15 minutosapós a dosagem. Todos os pacientes estavam estáveis neste momento. Aextrapolação das respostas de declínio da CBFV sugere que a CBFV deva retomarcompletamente à linha de referência dentro dos 30 minutos. As respostas médiasde CBFV, CVR, SBP, DBP e HR a uma dose de bolo de 1,5 ug/kg são ilustradasna Figura 4.

Tabela 10 Sinais Vitais E Parâmatros Hemodinâmicos Em Seguida À

Dosagem De Binodenoson (População Itt)*<table>table see original document page 42</column></row><table>aumento máximo a partir da linha de referência durante o período deobservação na cateterização. Para cada variável, p < 0,001 para cada diferençadentro do tratamento entre o máximo e a linha de referência (teste-í pareado).f p > 0,05, * p = 0,003, § p = 0,010 para o efeito de tratamento global(ANOVA).Fórmulas:

• CVR (cm*mm Hg/min) = ([SBP - DBP]/3 + DBP)/CBFV}

• RPP (batidas*mm Hg/min) = SBP x HR

ANOVA = análise de variação; bpm = batidas por minuto;CBFV = velocidade do fluxo sangüíneo coronariano; CVR = resistênciavascular coronariana; DBP = pressão sangüínea diastólica; HR = freqüênciacardíaca; min = minuto; ITT = intento-a-tratar; RPP = produto da pressão dafreqüência; SBP = pressão sangüínea sistólica; seg = segundo.

Todas as doses de binodenoson foram bem toleradas. A maiorparte dos pacientes experimentou pelo menos um evento adverso (11). Nãohouve nenhuma diferença significativa na incidência global dos eventosadversos através dos grupos (p = 0,280, teste de qui-quadrado de Pearson),não obstante aqueles que receberam a dose menor (0,3 fig/kg/min. x 3 min.)tenham relatado os menores eventos adversos relacionados ao medicamento(Tabela 11). Os eventos mais adversos foram classificados como brandos(84%) ou moderados (15%) na intensidade. Tendo em vista serem os critériosdefinidos pelo protocolo, que decrescem na SBP > 20 mm Hg ou na DBP >15 mm Hg, serem relatados como eventos adversos, a hipotensão foi o eventoadversos mais comumente relatado; tais respostas foram relatadas por 50% a71% dos pacientes em cada grupo de dose e não foram relacionados à dose.Entretanto, apenas 2 a 4 pacientes por grupo (7% a 15%) experimentaramreduções na SBP < 80 mm Hg ou na DBP < 45 mm Hg. Não houve nenhumamudança ou tendências nos ECGs em qualquer dose, e não houve nenhumevento adverso relacionado ao ECG durante ou em seguida à administraçãodo binodenoson. Uma lista de eventos adversos relatados por > 5% dospacientes é fornecida na Tabela 11.

Tabela 11 Eventos Adversos Relatados Em > 5% Dos Pacientes Em QualquerGrupo De Tratamento, N (%) (População De Itt)_

<table>table see original document page 44</column></row><table>

* SBP reduzida em > 20 mm Hg ou DBP reduzida em > 15 mm Hg a partir dalinha de referência.

f Valores de SBP < 80 mm Hg ou valores de DBP < 45 mm Hg.

ALT = alanina aminotransferase; AST = aspartato aminotransferase; DBP =pressão sangüínea diastólica; ITT = intento-a-tratar; SBP = pressão sangüíneasistólica.

Duas séries de eventos adversos [fibrilação ventricular (n = 1),infarto miocárdico (n = 1)] ocorreram antes do tratamento. Sete eventosadversos sérios ocorreram em 6 pacientes durante o estudo: trombose (n = 1)e hemorragia (n = 2) foram considerados não relacionados ao medicamentodo estudo. Hipotensão (n = 2), bradicardia (n = 1) e taquicardia ventricular (n= 1) foram considerados relacionados ao medicamento do estudo. Afreqüência não foi relacionada à dose. Três pacientes descontinuaramprematuramente a infusão de 3 minutos de 1 fig/kg/minuto por causa dadispnéia (n = 1) ou da hipotensão (n = 2).SUMARIO

Como a adenosina, o começo da hiperemia induzida pelobinodenoson é imediato. As respostas vasodilatadoras coronarianas máximastenderam a ser relacionadas à dose, não obstante apenas a dose de infusão de0,9 ug/kg tenha produzido menos do que a hiperemia máxima. Por causa daduplicação da dose de infusões e de injeções de bolos de 1,5 para 3 ug/kg nãoter produzido hiperemia coronariana significativamente mais elevada, a dosede bolo de 1,5 ug/kg IV parece representar a assíntota da curva do efeito dedose hiperêmico. A hipiremia máxima persistiu mais em seguida ao bolo de 3ug/kg (12,3 ± 9,59 min) do que a dose de 1,5 ug/kg (7,4 ± 6,86 min) mas àscustas de HR e RPP mais elevadas e mais eventos adversos. A duração daresposta hiperêmica de 1,5 ug/kg é claramente suficiente para possibilitar aextração adequada dos radiofármacos rotulados 201 TI e 99mTc usados naformação de imagem da tomografia computadorizada por emissão de fótonsisolados (SPECT).

EXEMPLO 3

AVALIAÇÃO DOS FARMACOCINÉTICOS ESEGURANÇA DO BINODENOSON EM PACIENTES HUMANOS NÃOASMÁTICOS

Este exemplo descreve estudos planejados para avaliar afarmacocinética de dose única, a segurança e a tolerabilidade do binodenosonintravenoso. O binodenoson foi administrado a seres humanos para sedeterminar a segurança e a famacocinética de uma ampla faixa de doses.

MÉTODOS

Pacientes

Este estudo foi conduzido no New Orleans Center for ClinicaiResearch, New Orleans, LA, de acordo com as diretrizes da US Good ClinicaiPractice. Exigiu-se que os pacientes estivessem no estado de saúdegeralmente boa a ser determinado pelo exame físico e testes de laboratório,bem como pela avaliação dos sinais vitais. Os critérios de exclusão incluíramo teste positivo na triagem de drogas (vício de drogas); ingestão de cafeína,álcool ou medicação dentro das 24 da entrada do estudo; ou recebimento deum medicamento em pesquisa com 30 dias da entrada no estudo. Mulherescom possibilidade de parto e homens cujas companheiras não estivessemusando um método contraceptivo aceitável foram excluídos. Outros critériosde exclusão incluíram pacientes com hipotensão postural, pressão sangüíneasistólica supina de repouso de 90 mm Hg ou menor, pressão sangüíneadiastólica de 60 mm Hg ou menor, e freqüência cardíaca de 90 batidas/minutoou mais; história de infecção do vírus da imunodeficiência humana; resultadode teste positivo quanto ao antígeno superficial da hepatite B ou anticorpo dahepatite C; e qualquer condição clinicamente relevante que pudesse confundir a análise ou apresentar um risco de segurança.

Métodos de Estudo

O estudo foi programado como um estudo de centro isolado,de qualificação aberta, não randomizado, de desenvolvimento de doseintravenosa em 4 grupos (n = 6 cada) de voluntários saudáveis. O protocolo foi aprovado pela junta de revisão institucional; todos os pacientes deramconsentimento informado escrito. Os pacientes de cada grupo receberam 3doses crescentes de binodenoson administradas através da infusão intravenosadurante um período de 10 minutos, em um índice não excedente a 6 ug kg"1min"1. Não obstante as doses sucessivas de binodenoson tenham sidoadministradas no mesmo dia do estudo, o período de lavagem entre as dosesfoi de pelo menos 2 horas. Os pacientes no grupo 1 receberam dosesconsecutivas de binodenoson de 0,1, 0,2 e 0,4 |ag/kg; o grupo 2 recebeu 0,6, 1e 2 jLig/kg; o grupo 3 recebeu 2, 3 e 4 fig/kg; e o grupo 4 recebeu 4, 5 e 6A monitoração em série dos sinais vitais da freqüênciacardíaca, da pressão sangüínea sistólica supina, e da pressão sangüíneadiastólica, foi feita na triagem e durante cada fase de dosagem dentro dos 10minutos antes da infusão, em 2, 4, 6, 8 e 10 minutos durante a infusão, e em 2,5, 7,5, 10, 15, 20, 30, 45,60, 90 e 120 minutos após a infusão. Umeletrocardiograma (ECG) de 12 derivações foi obtido na triagem e no fim doestudo. O ECG foi monitorado através de telemetria durante a fase detratamento, incluindo durante as infusões. A monitoração foi iniciada dentrode 1 hora antes da dosagem e continuou até 24 horas após a conclusão da última dose.

Um total de 40 a 42 amostras de sangue foi colhido durante afase de tratamento para quantificação do binodenoson no plasma. Antes dadosagem, um cateter de polietileno foi introduzido em uma veia do antebraçocontralateral ao sítio de infusão. As amostras de sangue (5 ml) foram colhidas em tubos Vacutainer pré-esfriados (BD, Franklin Lakes, NJ) logo antes dainfusão (-1 minuto), no ponto médio (5 minutos) e no ponto mediano (5minutos) e no final (10 minutos) da infusão, e em 2, 5, 7,5, 10, 15, 20, 30, 45,60, 90 e 120 minutos após o término da infusão. O plasma foi separado domaterial celular mediante centrifugação sob refrigeração (4°C) em 4000 rpmpor 10 minutos, e depois foi armazenado em criotubos em -80°C até seranalisado. A quantidade total de sangue colhido durante o período deamostragem intensiva foi de aproximadamente 200 ml. As concentrações deplasma do binodenoson foram determinadas por ensaio validado decromatografia líquida de alto desempenho-espectrometria de massa(LC/MS/MS) na Phoenix International, Inc. (Montreal, Quebec, Canadá). Oensaio de LC/MS/MS teve um limite inferior de quantificação de 0,201 ng/ml.

Os parâmetros farmacocinéticos foram derivados para operfil de tempo de concentração do binodenoson do plasma de cadapaciente quanto a cada infusão de binodenoson mediante o uso de métodosnão compartimentais com o programa de software estatístico SAS (SASInstitute, Cary, NC). A concentração de pico (Cmáx) e o tempocorrespondente a (Cmáx) (W) foram originados por observação. A meia-vida terminal (i/2) foi calculada de (ln 2)IXZ, em que Xz, a constante do índice de eliminação, foi determinada por regressão log-linear da faseterminal do perfil de tempo de concentração do binodenoson. A área sob acurva (AUCo-t) foi calculada pela regra trapezoidal linear do tempo 0 até aúltima concentração quantificável (Cúitima)- A área até o infinito (AUCo-c»)foi estimada pela soma de AUCo-t + CúitimaA-z. A depuração (CL) sistêmica do binodenoson foi derivada da relação da dose de binodenoson comAUCo-oo, e o volume de distribuição (Vz) foi derivado da relação de CL comXz. O resumo das estatísticas quanto aos parâmetros farmacocinéticos foidisposto em tabela. A análise de regressão linear foi usada para avaliar orelacionamento entre a AUC e a dose.

A análise de segurança focalizada nos sinais vitais, nas

descobertas dos exames físicos, nos valores dos laboratórios clínicos, nosECGs, e nos eventos adversos (AEs). Os AEs e os AEs sérios foramdefinidos de acordo com os regulamentos da US Food and DrugAdministration. Os AEs registrados foram aqueles espontaneamente relatados pelos voluntários ou em resposta a questões não conducentes ouaqueles reconhecidos pelos pesquisadores. Os dados de segurança foramdispostos em tabela por grupo e/ou por dose. O efeito máximo da dose debinodenoson sobre os sinais vitais (pressão sangüínea sistólica, pressãosangüínea diastólica, freqüência cardíaca) foi analisado pela comparação do valor médio de pré-dose com o valor mudado ao máximo registradodurante cada período de infusão de 10 minutos ou durante o período depós-infusão de 120 minutos. Um teste-/ de Student pareado, 2-ajustado, foiusado para determinar se a mudança era significativamente diferente de 0(a = 0,05).Um total de 24 voluntários adultos saudáveis (17 homens e 7mulheres) participaram do estudo. Os valores médios quanto às idades e aopeso em todos os grupos variaram de 29 a 39 anos de idade e de 70,8 a 83,3kg, respectivamente. Quanto ao grupo de estudo como um todo, a idade médiafoi de 35 ± 9 anos, e o peso corporal médio foi de 75,6 ± 12,0 kg. Dentre ospacientes, 15 dos 24 (63%) eram brancos, 8 eram negros, e 1 era hispânico.Todos os pacientes arrolados atenderam aos critérios de inclusão e deexclusão no estudo, e nenhuma medicação concomitante foi usada durante oestudo.

Farmacocinética

A farmacocinética do binodenoson é apresentada na Tabela 12.As concentrações de pico (CmáX) foram geralmente obtidas pelo término do período de infusão da dosagem (Figuras 9A e 9B). Depois disso, asconcentrações de binodenoson declinaram de uma maneira bifásica. A áreasob a curva, calculada pela regra trapezoidal (AUC0.t) em geral representoumais do que 80% da AUC0.oo total. A AUC do binodenoson aumentouproporcionalmente com a dose(Figura 10). A Cmáx do binodenoson tambémaumentou com a dose, mas ficou sujeita a mudança resultante de levesvariações na duração da infusão. O volume aparente da distribuição indicaque o binodenoson distribui-se nos espaços dos fluidos extracelulares.

Os valores médios quanto à meia-vida de eliminação aparentedo binodenoson variou de 7,4 minutos (em 1 ug/kg) a 14,9 minutos (6 ug/kg), com uma leve tendência para valores mais elevados com a dose crescente.Entretanto, tendo em vista que as concentrações de plasma quanto ao nível dedose mais baixo (0,4 ug/kg) foram apenas marginalmente mais elevadas doque o limite inferior de quantificação do ensaio, as concentrações de plasmapuderam ser determinadas por um período de tempo mais longo nos níveis dedose mais elevados. Na média (média harmônica), a meia-vida terminal dobinodenoson através de todas as doses, foi de 10 ± 4 minutos.Tabela 12

<table>table see original document page 50</column></row><table>

Os dados são fornecidos como (SD) médio.

Não houve nenhuma diferença detectável (análise da variação)

entre os níveis de dose com respeito à depuração sistêmica do binodenoson. Adepuração sistêmica média do binodenoson em todos os níveis de dose foi de34,4 ± 7,5 ml min"1 kg"1. Entretanto, a depuração sistêmica correlacionou-secom o peso corporal do paciente, como mostrado na Figura 7. Um modelo deefeito misto linear (S-Plus, Insightful Corp., Seattle, Wash), com o pacienteusado como uma variável de efeitos aleatórios e o peso corporal como umtermo regressor, estabeleceu-se o seguinte relacionamento entre a depuração(CL) do binodenoson e o peso corporal (BW): CL = -0,19 + 0,039 BW (P =0,004).

SEGURANÇAAEs.

Em geral, o binodenoson foi bem tolerado. Não houve nenhumAE sério e nenhuma mudança do ECG clinicamente significativa. Aincidência dos AEs foi relacionada à dose, e 21 dos 24 voluntários (83%) relataram pelo menos 1 AE (Figura 8). Quase todos os AEs (99%) foramjulgados pelo pesquisador como sendo relacionados à administração dobinodenoson e foram de severidade branda (82%) ou moderada (17%).Amaior parte dos AEs (75%) começaram durante as infusões do medicamento eforam resolvidos espontaneamente dentro de 30 minutos do começo.Nenhuma intervenção clínica ou farmacológica foi necessária para reverter a ação do medicamento. Os AEs mais freqüentemente relatados foram acefaléia e a vasodilatação. Houve um aumento significativo na freqüência dosAEs relacionados ao binodenoson nas doses de 2 ug/kg ou maiores emcomparação com as doses de 1 ug/kg ou menores, em particular com respeitoà cefaléia (60% versus 7%), náusea/vômito (49% versus 0%), vasodilatação(54% versus 14%), vertigem (24% versus 0%), e parestesia (19% versus 3%).Sinais Vitais

Os efeitos máximos do binodenoson sobre a pressão sangüíneaforam variáveis nas doses de 1 ug/kg ou menos. A pressão sistólica médiaaumentou consistentemente nas doses de 1 ug/kg ou mais, e tanto a pressãosistólica média quanto a pressão diastólica média foram aumentadas nas dosesde 2 ug/kg ou mais. O aumento médio máximo na pressão sangüínea sistólicaem relação à linha de referência variou de 8,8 mm Hg na dose de 1 ug/kg a27,9 mm Hg na dose de 6 ug/kg. Os aumentos máximos médios na pressãosangüíneo sistólica e na diastólica foram estatisticamente significativos nos níveis de dose de 2 e 4 ug/kg, respectivamente (P < 0,05).

As doses de binodenoson de 0,1 ug/kg ou maiores foramassociadas com os aumentos na freqüência cardíaca (Figuras 9A e 9B). Osaumentos máximos na freqüência cardíaca variaram de 29 batidas/minuto nadose de 1 ug/kg a 66,3 batidas/minuto na dose de 6 ug/kg. As mudanças nas doses de 0,4 ug/kg e nas doses de 1 ug/kg ou maiores foram estatisticamentesignificativas (P < 0,001).

DISCUSSÃO

Os AEs mais prevalecentes - vasodilatação, cefaléia,vertigem, náusea, dor no peito, dor abdominal e parestesia - foramconsistentes com as propriedades farmacológicas do medicamento. Aincidência de AEs foi intensamente associada com a dose e a exposição, comum aumento marcante na incidência e na freqüência dos AEs maisdesagradáveis, tais como a dor no peito, a dor abdominal, a vertigem, anáusea e os vômitos nas doses de 4 |*ig/kg e maiores. Entretanto, não houvenenhum AE sério, e a maioria dos AEs iniciados durante o período de infusão,foi branda ou moderada na severidade, e resolvida dentro dos 30 minutos docomeço.

Nos animais, o binodenoson produziu hipotensão e taquicardia reflexa relacionadas à dose. Neste estudo, as respostas vasodilatadorasperiféricas foram sugeridas pela ocorrência de formigamento, rubor, cefaléia,plenitude e quentura. A despeito da vasodilatação periférica aparente, asmudanças na pressão sangüínea foram variáveis nas doses menores,resultando em valores médios imutáveis, e tanto a pressão sangüínea sistólica quanto a pressão sangüínea diastólica subiram levemente nas doses maioresdo que 1 ug/kg. Os acréscimos relacionados à dose na freqüência cardíaca nasdoses de 1 ug/kg ou maiores, sugerem que o binodenoson aumenta afreqüência cardíaca independentemente das mudanças na pressão sangüínea, eé incerto se as respostas cronotrópicas positivas podem ter hipotensãosistêmica induzida pelo medicamento obscurecida. O binodenoson é oprimeiro agonista seletivo do receptor da adenosina A2A a ser administradoaos seres humanos, e este aumento independente na freqüência cardíacarepresenta uma nova descoberta. O binodenoson não aumentou a freqüêncianas preparações atriais isoladas e desnervadas e não tem nenhuma afinidadequanto aos receptores p-adrenérgicos ou muscarínicos que pudesse explicaruma tal resposta. Existe evidência pré-clínica de que a ativação dos receptoresda adenosina A2A intensifica a liberação da norepinefrina dos terminais dosnervos eferentes simpáticos, mas um tal mecanismo não foi definido nos sereshumanos. A adenosina dos agentes de estresse farmacológicosvasodilatadores e o dipiridamol produzem elevações modestas na freqüênciacardíaca, e é provável que este efeito intensifique suas respostasvasodilatadoras diretas das coronárias mediante aumento da demandamiocárdica de oxigênio. O mesmo se espera seja verdade quanto aobinodenoson.

A farmacocinética do binodenoson foi caracterizada porlinearidade de dose com respeito à exposição dos parâmetros (Cmáx e AUC) erápido desaparecimento (tm = 10 minutos) da circulação sistêmica após acessação da infusão. A depuração sistêmica do binodenoson foi independenteda dose e indicativo da rápida remoção, da circulação sistêmica. Emboranenhum estudo do metabolismo tenha sido conduzido em seres humanos, osestudos in vitro com hepatócitos e microssomas sugerem baixa atividademetabólica e nenhuma inibição significativa das enzimas P450 do citocroma.

O relacionamento entre a depuração do binodenoson e o pesodo corpo fornece uma base racional para estabelecer a dose de binodenosoncom base no peso corporal para minimizar a variabilidade farmacocinética.Neste primeiro estudo em seres humanos, o binodenoson foi infundidodurante um período de 10 minutos. Os dados farmacocinéticos resultantessugeriram que as infusões mais curtas e as doses de bolo poderiam proverrespostas farmacodinâmicas consistentes com a formação de imagem deestresse farmacológico.

As concentrações simuladas do binodenoson após uma dose de1,5 |ug/kg administrada no decorrer de um período de 30 segundos, 3 minutose 10 minutos, são apresentadas na Figura 10.

CONCLUSÃO

O binodenoson intravenoso foi bem tolerado quandoadministrado em doses que variavam de 0,4 u.g/kg a 6 ug/kg, com efeitosfarmacológicos geralmente consistentes com as propriedades farmacológicasde ativação do receptor de A2A- As propriedadesfarmacocinéticas/farmacodinâmicas do binodenoson foram caracterizadas porlinearidade de dose, curta duração de ação e rápida remoção da circulaçãosistêmica, as quais são características desejáveis para esta classe demedicamentos.

Não obstante a presente invenção tenha sido descrita emtermos de modalidades específicas, várias substituições de métodos econdições de administração podem ser feitas, como será conhecido daqueleshabilitados na técnica. Por exemplo, o método e/ou veículo de administraçãopodem ser ajustados para acomodar a técnica de formação de imagemutilizada. Outras variações serão evidentes àqueles habilitados na técnica epretende-se sejam elas incluídas nesta invenção. O escopo da invenção deveapenas ser limitado pelas reivindicações que seguem.

Claims

1. Método para diagnosticar a disfunção miocárdica em umpaciente humano que tenha uma história de asma ou broncospasmo,caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humanocerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson, para proporcionar adilatação da artéria coronária; e(b) detectar a disfunção miocárdica no paciente humano.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o binodenoson é administrado como uma dose de bolo ao referidopaciente humano.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que cerca de 0,5 a cerca de 2,5 ug/kg do binodenoson sãoadministrados ao referido paciente humano.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o binodenoson é administrado por infusão ao referido pacientehumano.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelofato de que cerca de 0,3 a cerca de 2,0 ug/kg/minuto do binodenoson sãoadministrados ao referido paciente humano.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a disfunção miocárdica é doença da artéria coronária, disfunçãoventricular, diferenças no fluxo sangüíneo através dos vasos coronarianos evasos estenóticos livres de doença, ou combinações destes.

7. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a etapa (b) compreende um procedimento de formação de imagemmiocárdica não invasivo.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelofato de que o procedimento de formação de imagem não invasivo compreendea administração de um agente de formação de imagem.

9. Método para diagnosticar a doença da artéria coronária emum paciente humano que tenha uma história de asma ou broncospasmo,caracterizado pelo fato de compreender as etapas de:(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano,cerca de 0,1 a cerca de 10 fig/kg de binodenoson para proporcionar adilatação da artéria coronária;(b) administrar um agente de formação de imagem ao pacientehumano; e (c) realizar a formação de imagem da perfusão miocárdica nopaciente humano, para detectar a doença da artéria coronária.

10. Método para diagnosticar a disfunção ventricular causadapela doença da artéria coronária, em um paciente humano que tenha umahistória de asma ou broncospasmo, caracterizado pelo fato de quecompreende as etapas de:(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano,cerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar adilatação da artéria coronária; e(b) realizar uma técnica de formação de imagem da funçãoventricular no paciente humano para detectar a disfunção ventricular.

11. Método para diagnosticar anormalidades de perfusão emum paciente humano que tenha uma história de asma ou broncospasmo,caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humano cerca de 0,1 a cerca de 10 u.g/kg de binodenoson para proporcionar adilatação da artéria coronária; e(b) detectar anormalidades de perfusão no paciente humano.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que a etapa (b) compreende medir a velocidade do fluxosangüíneo coronariano no paciente humano, para avaliar a capacidadevasodilatadora dos vasos coronarianos doentes, em comparação com os vasoscoronarianos livres da doença.

13. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a etapa (b) compreende avaliar a capacidade vasodilatadora(capacidade de reserva) dos vasos coronarianos doentes em comparação comos vasos coronarianos livres da doença.

14. Método para diagnosticar a presença e avaliar a severidadeda doença da artéria coronária em um paciente humano que tenha uma história de asma ou broncospasmo, caracterizado pelo fato de quecompreende as etapas de:(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humanocerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar adilatação da artéria coronária; e(b) administrar um agente radiofarmacêutico ao pacientehumano; e(c) realizar a cintigrafia no paciente humano para detectar adoença da artéria coronária.

15. Método para diagnosticar a presença e avaliar a severidade da disfunção ventricular em um paciente humano que tenha uma história deasma ou broncospasmo, caracterizado pelo fato de que compreende as etapasde:(a) administrar por uma via intravenosa ao paciente humanocerca de 0,1 a cerca de 10 ug/kg de binodenoson para proporcionar a dilatação da artéria coronária; e(b) realizar a ecocardiografia no paciente humano para detectara disfunção ventricular.

16. Método para diagnosticar a disfunção miocárdica em umpaciente humano que tenha uma história de asma ou broncoespasmo,caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:(a) administrar cerca de 1,5 ug/kg de binodenoson pordosagem de bolo intravenosamente para proporcionar a dilatação da artériacoronária; e (b) detectar a disfunção miocárdica no paciente humano.

17. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende umprimeiro recipiente contendo uma dosagem unitária do binodenoson, e umsegundo recipiente contendo um agente de formação de imagem, umantagonista da adenosina ou um agonista (3-2.

18. Kit de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelofato de que o segundo recipiente contém o agente de formação de imagem.

19. Kit de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelofato de que o segundo recipiente contém um antagonista da adenosina.

20. Kit de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o segundo recipiente contém um agonista (3-2.