PRACTICA 4
PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA
Bravo Alejandra, Delgado Pablo, Pinto Faviola
RESUMEN
En esta prctica se muestra una metodologa en la que se describe como diferentes
solventes con diversas concentraciones influyen en las membranas biolgicas en este
caso en la membrana de la beterraga, se logr identificar qu factores afectan la
integridad de la membrana, los cuales pueden producir distintos efectos dainos en la
membrana. Esto se hizo a partir de una prueba con el espectrofotmetro.
INTRODUCCION
La viabilidad y la funcin celulares dependen de un conjunto de funciones de
mantenimiento fundamentales (por ejemplo, integridad de membrana, adquisicin de
nutrientes, comunicacin, movimiento, renovacin de molculas senescentes,
catabolismos molecular y produccin de energa) (Mitchell, 2017). A menudo, las
actividades especficas se compartimentalizan en orgnulos intracelulares rodeados por
membrana (Mitchell, 2017).
La membrana plasmtica y las de los orgnulos son bicapas fluidas de fosfolpidos
anfipticos con cabezas hidrfilas asociadas con el medio acuoso y colas lipdicas
hidrfobas que interactan para formar una barrera frente a la difusin pasiva. Los
componentes de la membrana se distribuyen de forma de heterognea y asimtrica
(Mitchell, 2017). Aunque lateralmente las membranas son fluidas, las protenas de su
interior quedan confinadas en dominios aislados. En consecuencia, las protenas
insertadas presentan diferentes solubilidades intrnsecas en varios dominios lipdicos
acumulndose en diversas reas. No obstante, tambin es posible hallar distribuciones
protenicas aleatorias, mediante interacciones protena-protena intercelulares que
establecen lmites definidos. Esta estrategia se emplea para mantener la polaridad
celular (Mitchell, 2017).
Los dominios de membrana aislados tambin se forman por interaccin de protenas con
molculas citoesquelticas o matriz extracelular (MEC). La distribucin no aleatoria de
los lpidos y protenas de membrana resultante es importante para las interacciones
intercelulares y clula-matriz, as como para las vas secretoras y endoctica (Mitchell,
2017). Constituyendo as un glucocliz que tiene funcin de barrera qumica y
mecnica (Mitchell, 2017).
Las membranas permiten la difusin pasiva de molculas pequeas no polares e
hidrfobas a favor de sus gradientes de concentracin. Las molculas pequeas polares
tambin atraviesan las membranas con relativa facilidad, aunque el transporte de
grandes volmenes de agua requiere protenas acuaporinas (Mitchell, 2017).
Dado entonces que las membranas son plenamente permeables a las molculas polares
pequeas, el agua la atraviesa siguiendo las correspondientes concentraciones de solutos
(Mitchell, 2017).
Por otro lado, y asimismo la membrana plasmtica puede sufrir daos mecnicos por
efecto de ciertas sustancias. Por ejemplo, los efectos que produce el alcohol sobre el
organismo son numerosos y variados (Estruch, 2005) entre esos efectos est el prejuicio
a la fluidez de la membranas (Elvir, 2009). Se estima que las membranas biolgicas
poseen una alta permeabilidad hacia el alcohol (Elvir, 2009). Todos los efectos de este
sobre las clulas, son debidos a una interaccin inespecfica del alcohol con la
membrana que se traduce como un aumento en la fluidez de la misma (Elvir, 2009). Es
importante que estas se mantengan en ptimas condiciones puesto que la fluidez es
necesaria para que numerosas protenas puedan funcionar de forma ptima. Tambin
provocando un efecto deshidratante, ya que el mecanismo de accin del etanol no es
debido nicamente a su grado de hidrofobicidad sino que la porcin hidrfila de este
tambin juega un papel importante (Elvir, 2009).
Las membranas celulares responden a los cambios ambientales modificando su
composicin, para evitar el dao que dichos cambios podran ejercer. Una de las
modificaciones ms importantes es la variacin de la composicin de sus cidos grasos,
que le permite mantener la homeoviscosidad ante situaciones de estrs (Pucci, 2004).
La deshidratacin de membranas a temperatura constante causa una transicin de fase
gel a fase cristalina-lquida, la deshidratacin produce un aumento en la temperatura de
transicin (Pucci, 2004). Una deshidratacin extensa puede causar una transicin de las
membranas de bicapa laminar a una fase II hexagonal invertida en la que los
fosfolpidos forman una micela la cual se intercala entre la bicapa (Pucci, 2004).
Objetivos:
Identificar los factores que afectan la integridad de las membranas.
Mencionar factores que afectan la velocidad de difusin.
Explicar la importancia de la difusin.
MTODOS Y MATERIALES
Se cortaron pequeos discos de beterraga y se pesaron en una balanza digital para que
estos estn en un intervalo de 0.4 a 0.6 g.
Se realizaron diluciones de acuerdo a la siguiente tabla
Concentracin Alcohol
Sustancia H2O [ml]
[%] [ml]
Alcohol 1 0,2 19,8
25 5 15
50 10 10
Acetona 1 0,2 19,8
25 5 15
50 10 10
Se etiquetaron seis tubos de ensayo con la dilucin correspondiente y el nmero 1
haciendo alusin al nmero de grupo. Se agreg 5ml de cada dilucin a cada tubo
agregando el disco de beterraga. Se dej reposar por 30 min.
Concentracin
Sustancia N de tubo
[%]
Alcohol 1 1
25 2
50 3
Acetona 1 4
25 5
50 6
Se cortaron 5 discos de beterraga de un peso aproximado de 0.5 a 0.6 de peso. Se
etiquet con un marcador indeleble informacin de la temperatura a la cual se someter
cada tubo de ensayo. Se atemper el agua para someter cada tubo a las siguientes
temperaturas por 5 min.
Temperatura [C] N de tubo
0 1
20 2
37 3
55 4
70 5
RESULTADOS
Curva de Calibracin
1.5
1 f(x) = 32.03x + 0.51
Absorbancia
Absorbancia
0.5 Linear (Absorbancia)
0
0 0.01 0.02 0.03
Concentracin/M
Fig.1 Grfica de la Absorbancia en funcin a la concentracin [M] de etanol.
Curva de Calibracin
2
1.5 f(x) = 67.09x + 0.63
1 Absorbancia
Absorbancia
Linear (Absorbancia)
0.5
0
0 0.01 0.01 0.02 0.02
Concentracin/M
Fig.2 Grfica de la Absorbancia en funcin a la concentracin [M] de acetona
Curva de Calibracin
2
f(x) = 0.03x - 0.17
1.5
1 Absorbancia
Absorbancia Linear (Absorbancia)
0.5
0
0 1020304050607080
Temperatura C
Fig.3 Grafica de la Absorbancia en funcin a la temperatura
DISCUSION
La absorbancia en todos los modelos de experimentacin resulto presentar una relacin
directa, tanto con las concentraciones de etanol y acetona, como con el incremento de
temperatura, esa relacin se presenta en funcin de las propiedades fsico-qumicas,
tanto de la molcula cianina, como de las diferentes sustancias empleadas en el
experimento. La cianina es una sustancia hidrosoluble que se presenta
en las vacuolas de distintos taxones vegetales, siendo la misma
soluble en sustancias polares, como el etanol, o la acetona, y en
ambos casos presentndose una mayor concentracin de un
determinado soluto en el medio, las vacuolas que retienen en parte
cianina adems de agua, se ven obligadas a expulsar parte de su
agua al medio, junto con las molculas de cianina para igualar las
concentraciones tanto dentro, como fuera de la clula, con el objetivo
de reducir la presin osmtica e igualarla en ambos lados de la membrana, A su
vez, el etanol es capaz de incorporarse a las colas hidrofobicas de la membrana, gracias
al grupo hidroxilo, facilitando la difusin, y evitando que las colas se unan entre si
anlogamente a cuando la membrana est muy saturada, logrando un incremento de la
fluidez en la membrana. Esto explica, por qu se tuvo una mayor absorbancia
(Moleculas de cianina) a mayor concentracin de un determinado
soluto en el medio. Para el caso de la temperatura, se observ que
una mayor temperatura, dio como resultado una mayor absorbancia
(Moleculas de cianina) a temperaturas ms elevadas, esto se debe a
que una mayor temperatura incrementa la presin osmtica, esto
debido a que la temperatura es una medida de la velocidad promedio
a la que los tomos y molculas de una determinada substancia se
mueven, entonces una temperatura mayor, supone un mayor
movimiento de las molculas, y esto a su vez, facilita el movimiento
Browniano que es la principal fuerza involucrada en la difusin de las
molculas, una mayor presin osmtica en el medio facilitara la
difusin de agua y cianina desde las vacuolas celulares hacia el
medio para reducir la presin osmtica, y llegar a un punto de
equilibrio.
CONCLUSIONES
Con los resultados obtenidos, se puede concluir, que los factores que afectan la
integridad de las membranas, principalmente son la temperatura, la concentracin de
solutos en ambos lados de la membrana, y la naturaleza de los solutos utilizados y
presentes tanto dentro, como fuera de la clula, a su vez los factores que afectan la
velocidad de la difusin se ve afectada por los mismos factores. Esto demuestra que la
difusin es muy importante al momento de mantener una clula en condiciones ptimas,
debido a que la difusin, no requiere un gasto energtico en la clula, lo cual la favorece
al enfrentar estreses ambientales.
ANEXOS
Formulas:
m= l
=coeficiente de extincion M 1 cm1
l=solucion por la cual atraviesa la luz 1cm
m=32.026
m=67.087
A= l c
A= Absorbancia de cada muestra para cada solvente
c=concentracin de la disolucion en cada cubeta
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6
Absorbanci 0.615 1.239 0.649 0.466 1.646 1.430
a
A 0.019 0.039 0.020 0.0069 0.024 0.021
c=
l
BIBLIOGRAFIA
1. Estruch, R.2005.Efectos del alcohol en la fisiologa humana.Barcelona.19pp.
2. Elvir, J.2009. Efecto del etanol sobre las Membranas Biolgicas. Venezuela. 5pp
3. Mitchell, R. N., Kumar, V., Abbas, A. K., & Aster, J. C. (Eds.).
(2017). Compendio de Robbins y Cotran. Patologa estructural y funcional
StudentConsult. Elsevier Health Sciences.
4. Pucci, G. N., Hrtig, C., & Pucci, O. H. (2004). Influencia de la concentracin
salina y la temperatura en la composicin de cidos grasos de membrana de
Pseudomonas fluorescens GNP-OHP-3. Revista argentina de
microbiologa, 36(1), 6-15.
