CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

DE LA HOJA DE COCA EN SOLVESNTES ETER Y

ACETONA
Objetivos de la !"#ti#a$

Aprendizaje de la tcnica de cromatografa en capa fina
Conocimiento de conceptos cromatogrficos: polaridad, fase mvil, fase
estacionaria, factor de retencin, etc.
Determinacin de los componentes orgnicos presentes en una muestra usando
sustancias patrn.
A%te#ede%tes$
La cromatografia es una tcnica de anlisis umico utilizada para separar sustancias
puras de mezclas complejas. !sta tcnica depende del principio de adsorcin selectiva "no
confundir con a#sorcin$. La cromatografa fue descu#ierta por el #otnico ruso, de
origen italiano, %i&'ail (s)ett en *+,-, pero su uso no se generaliz 'asta la dcada de
*+.,. (s)ett separ los pigmentos de las plantas "clorofila$ vertiendo e/tracto de 'ojas
verdes en ter de petrleo so#re una columna de car#onato de calcio en polvo en el
interior de una pro#eta. A medida ue la solucin va filtrndose por la columna, cada
componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, uedando la columna marcada
por #andas 'orizontales de colores, denominadas cromatogramas. Cada #anda
corresponde a un pigmento diferente.
La cromatografa es pro#a#lemente la ms verstil de las tcnicas de separacin: es
aplica#le a cualuier mezcla solu#le o voltil. De 'ec'o las tcnicas de separacin suelen
dividirse en dos grandes grupos: cromatogrficas 0 no cromatogrficas. La eleccin de
una tcnica cromatogrfica concreta depender de la naturaleza 0 cantidad de la muestra,
del o#jetivo de la separacin 0 de las limitaciones del tiempo 0 euipo aseui#le.
1odemos distinguir . tipos de cromatografa dependiendo si la fase estacionaria2fase
mvil es slido2luido, luido2luido o luido2gas:
Si es s&lido'l()*ido+ #abe disti%,*i! e%t!e$
C!o-ato,!a.(a de adso!#i&%$ !l slido adsor#e al componente ue
inicialmente esta#a en fase mvil "liuida o gaseosa$ "3uerzas de 4an der
5aals$.
Cromatografia de cambio inico: el slido es un cam#iador de iones
"fuerzas electrostticas$.
Informe De Anlisis Instrumental II
Elaborado por: Est. Jorge Luis Chambi Laura Pgina 1
Cromatografia de exclusin (o de geles): el slido es un gel formado por
polmeros no inicos porosos ue retienen a las molculas de soluto seg6n
su tama7o.
Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de
adsorcin, utilizada especialmente en #ioumica, en la ue un slido tiene
enlazado un llamado ligando de afinidad ue puede ser por ejemplo, un
indicador enzimtico o un anticuerpo.
Si es l()*ido'l()*ido+ #abe disti%,*i!$
Cromatografa de particin: el soluto se reparte entra la fase mvil "liuido
o gas$ 0 la fase estacionaria.
Si es l()*ido',as+ #abe disti%,*i! e%t!e$
Cromatografa gas-liquido (CGL)+ ue es una cromatografa de particin.
Cromatografa gas-slido (CGS)+ ue es una cromatografa de adsorcin.
8i es un fluido supercrtico, "fluido calentado a una temperatura superior a la
temperatura crtica, pero simultneamente comprimido a una presin ma0or ue su
presin critica$, se trata de la cromatografa de fluidos supercrticos "C38$, ue puede ser
de particin o de adsorcin.
Las tcnicas cromatogrficas, seg6n el dispositivo utilizado para conseguir la
separacin entre la fase mvil 0 la estacionaria, pueden ser: en columna 0 plana.
Cromatografa en columna: 8e utiliza un tu#o cilndrico, en cu0o interior se
coloca la fase estacionaria 0 a su travs se 'ace pasar la fase mvil. !l flujo de la
fase mvil "luido o gas$ a travs de la estacionaria se consigue:
*$ por presin,
9$ por capilaridad,
.$ por gravedad.
Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana
ue en realidad es tridimensional, aunue una de sus dimensiones es mu0
reducida, por lo ue puede considerarse #idimensional. 8e divide en dos tipos
generales:
*. :Cromatografa en papel: en la ue el papel a#sor#ente act6a como
soporte de la fase estacionaria "cromatografia de particin$. ;na muestra
luida flu0e por una tira vertical de papel a#sor#ente, so#re la cual se van
depositando los componentes en lugares especficos.
2. -Cromatografa en capa fina: en la ue un slido act6a como fase
estacionaria "cromatografia de particin$, se e/tiende en una capa delgada
so#re una placa, generalmente de vidrio.
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!l uso de la cromatografa est ampliamente e/tendido en el anlisis de alimentos,
medicinas, sangre, productos petrolferos 0 de fisin radiactiva.
Mate!iales / Rea#tivos$
%ateriales:
< placas de cromatografa
9 vasos de precipitado de *,,ml
9 1laca 1etri
* pro#eta de *, ml
4arillas de vidrio
=eactivos:
Acetona de lavar
Acetato de etilo
>e/ano
1atrn *: %entol
1atrn 9: Acetoacetato de etilo
1atrn .: 1irogalol
1atrn <: 3loroglucina
1atrn ?: @enzofenona
%uestra pro#lema 1
*
%uestra pro#lema 1
9
=evelador anisalde'do "99? ml etanol A *9 ml anisalde'do A *. ml >
9
8B
<
$
Obte%#i&% de #aila!es a a!ti! de ietas Paste*!$
1ara la realizacin de la prctica se de#en de o#tener capilares para la siem#ra de una
muestra, a partir de una pipeta 1asteur, calentando esta 0 jalarlo 'asta un dimetro de
capilar menos a *mm, uno para cada muestra. 8e podra 'acer solo un capilar para las
muestras, pero ello conllevara ue fuese limpiado el capilar cada vez ue lo usemos con
una muestra distinta a la anterior, con lo ue se iran arrastrando errores.
P!o#edi-ie%to e0e!i-e%tal$
!n este apartado se realizaran 9 placas de cromatografa . / *, cm, las cuales solo se
podrn coger por los #ordes 0 nunca tocar la parte de la tiza "la #lanca$, porue ello
acarreara errores en la medicin.
;na vez o#tenidas las placas, marcamos a lpiz una lnea a * cm de la #ase. 8o#re
esa lnea marcamos C puntos, donde se depositaran con los capilares peue7as cantidades
de las muestras.
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!n los frascos, ue act6an como tanue de elucin, se pondrn las disoluciones.
;tilizaremos 9 disoluciones de acetona 0 ter etlico.
3inalmente se revelarn las placas usando dos agentes reveladores:
Reelador fsico, usaremos una lmpara de ra0os ;4, donde pondremos con unas
pinzas las placas cromatogrficas. Las marcas ue aparezcan se se7alarn con
lpiz.
Reelador qumico! una vez pasada la placa por los ra0os ;4A, se introducir con
una pinza en un revelador anisalde'do 0 posteriormente ser colocada en una placa
calefactora a *,,D C. 3inalmente anotamos los colores o#tenidos.
C"l#*los$
1ara el clculo del factor de retencin, =
f
, se usar la siguiente e/presin:
=
f
E distancia recorrida por el compuesto
Distancia recorrida por el disolvente
8e tomar como distancia del compuesto la distancia comprendida entre la lnea
trazada donde se 'a depositado el compuesto 0 el centro de la manc'a.
PLACA 1
Siste-a el*/e%te$ ter
Dista%#ia !e#o!!ida o! el disolve%te$ ..? cm
Re#o!!ido
2#-3
R
.
4V Colo!
9.< ,.-F? 8G verde
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PLACA 5
Siste-a el*/e%te$ Acetona
Dista%#ia !e#o!!ida o! el disolve%te$ ..- cm
Re#o!!ido
2#-3
R
.
4V Colo!
... ,.+*-C Ho verde
Dis#*si&% de !es*ltados$
!n algunas placas no se ve el mentol, esto es de#ido a ue es posi#le 'a0an 'a#ido
otras reacciones las cuales impiden poder valorarlas.
!n el factor de retencin, las distancias 'an sido medidas con una regla a simple vista,
por lo ue los valores de polaridad no son e/actos sino una simple apro/imacin.
Co%#l*sio%es$
La tcnica de cromatografa en capa fina "CC3$ tiene numerosas ventajas, aparte de ser
rpida, sencilla, #arata... tiene tam#in la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra.
A partir del factor de retencin sa#remos ue sustancia es ms polar, siendo el mas
polar auel ue tenga un =
f
menor.
acetona I eter
6 Pola! 7 Pola!
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