UA126590C2

UA126590C2 - Похідні глюконової кислоти для застосування в лікуванні та/або попередженні інфекцій, спричинених мікроорганізмами

Info

Publication number: UA126590C2
Application number: UAA202002422A
Authority: UA
Inventors: Улф Еллервік; Улф Еллервик; Олов СТЕРНЕР; Хелена Стрівенс; Хелена Стревенс; Софі Маннер; Софи Маннер
Original assignee: Гедеа Біотеч Аб; Гедеа Биотеч Аб
Priority date: 2017-10-06
Filing date: 2018-10-05
Publication date: 2022-11-02
Also published as: PH12020550222A1; IL273297B1; KR102650182B1; CN111182895A; CL2020000859A1; US20200253925A1; IL273297A; WO2019068862A1; EP3691625B1; AU2018346361A1; MX2020003660A; US11612584B2; EA202090750A1; IL273297B2; EP3691625A1; JP7424636B2; CN111182895B; ZA202001605B; SG11202002494WA; KR20200060413A

Abstract

Винахід стосується застосування сполуки Формули ХХ або її лактону, такого як сполука Формули XIX або XXI: , IX , XXI в лікуванні та/або попередженні бактеріальної інфекції, вибраної з групи, що складається з інфекції, спричиненої Gardnerella vaginalis, Mobiluncus spp., Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Prevotella spp., Enterococci, Bacteroides spp., Peptostreptococcus spp., Porphyromonas gingivalis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acetinobacter baumanii, Streptococcus pyogenes, бета-гемолітичними стрептококами групи C, бета-гемолітичними стрептококами групи G та/або Streptococcus agalactiae.

Description

он

Он о о

НО,, он лох он т о

ОН їх ; ХХІ в лікуванні та/або попередженні бактеріальної інфекції, вибраної з групи, що складається з інфекції, спричиненої СагапегеїЇа мадіпаїїз, Мобіїнпсив 5рр., Огеаріазта игеамісит, Мусоріазта

Ппотіпів, РгемоїеПа 5рр., Епіегососсі, Васієгоїде5 5рр., Реріозігеріососсив 5рр., Рогрпуготопав діпдімай|іє, Ев5сНегісніа соїї, Рвепдотопавз аєгидіпоза, Асеїїпорасієї Брайтапії, Зпнеріососсив5 руодепез, бета-гемолітичними стрептококами групи С, бета-гемолітичними стрептококами групи

С та/або б5ігеріососсив адаїасііає.

Галузь техніки

Цей винахід відноситься до сполуки Формули І для застосування в лікуванні та/або попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами. Крім того, цей винахід відноситься до способу попередження та/або зниження утворення біоплівки.

Попередній рівень техніки

Антимікробні засоби використовували протягом останніх 70 років для лікування пацієнтів, які мають інфекційні захворювання. З 1940-х років зазначені лікарські засоби призвели до значного зниження захворюваності та смертності від інфекційних захворювань. У той же час, зазначені лікарські засоби використовували настільки широко і настільки довго, що збудники інфекції, по відношенню до яких були розроблені антимікробні засоби з мстою їх знищення, пристосувалися до них. В результаті цього лікарські препарати стають неефективними і інфекції зберігаються в організмі, підвищуючи ризик поширення іншим індивідуумам.

Резистентність до антимікробних засобів ставить під загрозу ефективне попередження та лікування все зростаючого діапазону інфекцій, спричинених бактеріями, паразитами, вірусами та грибами.

Таким чином, резистентність до антимікробних засобів являє собою все більш серйозну загрозу для здоров'я населення в світі, що вимагає дій у всіх державних секторах та суспільстві.

У всіх класів мікроорганізмів розвивається резистентність: у грибів розвивається резистентність до протигрибкових засобів, у вірусів розвивається резистентність до противірусних засобів, у найпростіших розвивається резистентність до антипротозойних засобів і у бактерій розвивається резистентність до антибіотиків.

Ця проблема резистентності до антибіотиків являє собою поширене явище. Грибкові інфекції, що є резистентними до лікування, являють собою все більшу проблему для здоров'я населення. В цілому, резистентність до протигрибкових засобів с порівняно рідкісною, в той же час зазначена проблема, ймовірно, буде отримувати розвиток до того часу, поки не буде зроблено більше для попередження подальшої резистентності в результаті поширення та попередження поширення зазначених інфекцій. Незважаючи на те, що велика частина резистентності до протигрибкових засобів виникає у видів Сапаїда, резистентність у інших типів грибів, таких як Азрегдіїїн5, також являє собою все більшу проблему.

Зо Оскільки гриби являють собою еукаріоти, також як і господарі-люди, яких вони інфікують, мають місце лише невелика кількість мішеней, що відрізняються, які можуть бути використані для розробки протигрибкових засобів. Таким чином, протигрибкові засоби головним чином обмежені лікарськими засобами, що цілеспрямовано виливають на невелику кількість метаболічних шляхів.

Однією з мішеней для протигрибкових засобів є біоплівка, яка являє собою продукт, що утворюється в результаті процесу розвитку мікроорганізмів. Біоплівки утворюються клітинами мікроорганізмів, що склеюються одна з однією та оточуються позаклітинним полімерним матриксом, що самопродукується. Утворення біоплівки являє собою стратегію виживання для бактерій та грибів з метою адаптації до свого живого оточення, особливо в агресивному середовищі. Коли клітина переключається на біоплівковий режим росту, вона зазнає фенотипового зрушення в поведінці, при якому значні набори генів диференційно регулюються.

Біоплівки можуть містити різні типи мікроорганізмів, наприклад, бактерій, архей, найпростіших, грибів та водоростей.

За оцінками, біоплівки асоційовані з 80 95 інфекцій, спричинених мікроорганізмами, а ріст мікроорганізмів в біоплівках може посилювати їх резистентність до антимікробних засобів. Крім того, бактерії біоплівок до 1000 разів більш толерантні та/або резистентні до антибіотиків, ніж планктонні клітини.

У більшості грибів гіфи являють собою основний спосіб вегетативного росту, а в сукупності вони називаються міцелій. Наприклад, вірулентність Сапаіїда аїЇрбісапе опосередкована переходом від планктонних клітин до гіфів. Гіральна форма, тобто, филаментозні клітини, мають здатність інвазувати тканину та індукувати запалення, опосередковане кандидалізіном, цитотоксичним пептидним токсином, що руйнує епітеліальні клітини (Моуєз еї. АЇ., Маїиге, 2016, 532, 64).

Резистентність до антимікробних засобів не тільки являє собою проблему при первинних інфекціях, але також і при вторинних інфекціях. Без ефективних антимікробних засобів для попередження та лікування інфекцій медичні процедури, такі як трансплантація органів, хіміотерапія раку, лікування цукрового діабету та значне хірургічне втручання починають являти дуже високий ризик. Крім цього, грибкові інфекції стали однією з основних причин захворюваності та смертності у пацієнтів з ослабленою імунною системою, таких як пацієнти з бо ВІЛ/СНІД, туберкульозом або такі, які проходять хіміотерапію. Незважаючи на підвищену обізнаність та вдосконалені стратегії лікування, частий розвиток резистентності до протигрибкових засобів, що використовуються в клінічній практиці, сприяє підвищенню втрат від мікозів.

Таким чином, має місце зростаюча потреба в нових антимікробних засобах.

Коротка сутність винаходу

Автори цього винаходу розробили спосіб попередження та/або зниження утворення біоплівки. Якщо утворення біоплівки знижується або попереджається, то окремі клітини мікроорганізмів більше не можуть прикріплятися до поверхні. Таким чином, подальша інфекція попереджається та клітини мікроорганізмів, які більше не утворюють біоплівки, видаляються.

Автори цього винаходу показали, що лікування сполукою Формули І еЕ о

Соя е еЕ

Ї або її лактоном, де

Е вибирають з групи, що складається з -Н, -алкілу, -С(О)алкілу та фенілу;

Е незалежно вибирають з групи, що складається з -ОВ, -Н та галогену; і п являє собою ціле число, що становить 1, 2 або 3; призводить до зниження присутності біоплівки, що складається з видів грибів, та надає цитотоксичний ефект на декілька видів грибів. Крім цього, автори цього винаходу показали, що сполука Формули І є придатною як антибактеріальний засіб.

Таким чином, відповідно до одного аспекту, цей винахід відноситься до сполуки Формули І або фармацевтичної композиції, що містить сполуку Формули І, для застосування в лікуванні та/"або попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що якщо інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою грибкову інфекцію, то сполука Формули І, не являє собою сполуку Формули (ХІМ) он он о тику он он он

ХМ або її лактон.

Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до глюконо-б-лактона для застосування в лікуванні бактеріальної інфекції або змішаної грибкової та бактеріальної інфекції.

Відповідно до іншого аспекту цей винахід відноситься до способу попередження та/або зниження утворення біоплівки, при цьому вказаний спосіб включає введення сполуки Формули І.

Відповідно до додаткового аспекту цей винахід відноситься до сполуки Формули | для застосування в попередженні передчасних пологів.

Опис графічних матеріалів

Фіг. 1. Нормалізоване утворення біоплівки Сапаїйада аїбісап5, обробленої різними кислотами.

СІУА - гліцеринова кислота (рН - 7), ХА - ксилонова кислота (рН - 7), СА - лимонна кислота (рН - 4,6), СА - глюконова кислота (рн - 6,5), ГА - молочна кислота (рН - 4,9). Біоплівку вимірювали через 24 год.

Фіг. 2. Зміни оптичного обертання при гідролізі глюконо-б-лактона (БА) в дистильованій воді (незаштриховані кола), буфер з рН 4 (заштриховані кола), буфер з рН 5 (незаштриховані прямокутники) і буфер з рН 7 (незаштриховані кола).

Фіг. 3. Нормалізоване утворення біоплівки Сападїіда аібісап5 в мінімальному середовищі при рН 2.6-6,6 з фосфатним буфером (незаштриховані кола, пунктирна лінія) або глюконо-б-лактоні (заштриховані прямокутники, суцільна лінія). Біоплівку вимірювали через 24 год., а забарвлення здійснювали за допомогою кристалічного фіолетового.

Фі. 4. (А) Нормалізоване утворення біоплівки Сапаіїда аїбісап5, обробленої лактонізованою/олігомерізованою СА. Осад лактонізованої/олігомерізованої глюконової кислоти додавали до буферного розчину з рН 3,71 (10 мл) при 37 "С. Зразки (4 мл) виділяли через кожну годину (з різним часовим інтервалом) та додавали новий буферний розчин (4 мл). Зразки розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем та ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год. (В) Нормалізоване утворення біоплівки Сапаїда діаргага, обробленої лактонізованою/олігомерізованою А. Осад лактонізованої/олігомерізованої глюконової кислоти додавали до буферного розчину з рН 3,71 (10 мл) при 37 "С. Зразки (4 мл) виділяли через кожну годину (з різним часовим інтервалом) та додавали новий буферний розчин (4 мл). Зразки розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем та ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год.

Фіг. 5. (А) Нормалізоване утворення біоплівки Сапаїда аїЇрісап5, обробленої і люконо-б- лактоном (СА). Осад СОБА додавали до буферного розчину з рН 3,71 (10 мл) при 37 "С. Зразки (4 мл) виділяли через 1, 2, 3, 4, 5, 6 та 24 год. та додавали новий буферний розчин (4 мл).

Зразки розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем та ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год. (В) Нормалізоване утворення біоплівки Сапаїда діабгага, обробленої

СрА. Осад СА додавали до буферного розчину з рН 3,71 (10 мл) при 37 "С. Зразки (4 мл) виділяли через 1, 2, 3, 4. 5, 6 та 24 год. та додавали новий буферний розчин (4 мл). Зразки розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем та ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год.

Фіг. 6. (А) Життєздатність біоплівок С. аірбісап5 та С діабгайа після обробки глюконо-б- лактоном (С0А) в різних концентраціях протягом 24 год. Забарвлення біоплівки здійснювали за допомогою ХТТ. Оптична щільність, вимірювана при 485 нм. Діагональні смужки вказують на дані для С. аіІрісап5. Заштриховані стовпці чорного кольору вказують на дані для С. діабгаца. (В)

Життєздатність біоплівок С. аЇБбісап5 та С. діабгайа після обробки СБА в різних концентраціях протягом 48 год. Забарвлення біоплівки здійснювали за допомогою ХТТ. Оптична щільність, вимірювана при 485 нм. Діагональні смужки вказують на дані для С. аїЇрісап5. Заштриховані стовпці чорного кольору вказують на дані для С. діаргаїа.

Фіг. 7. Вплив глюконо-б-лактона (СА) на зрілу біоплівку С. аІБісап5 та С. діабгайа. Зрілу біоплівку (ріст протягом 48 год.) інкубували з СОБА протягом 5 год. при 37 "С і потім клітини при послідовному розведенні висіювали на планшет УРО для оцінки виживання клітин.

Фіг. 8. (А) Дослідження мікрофлюїдики утворення біоплівки необробленої С. аїрісап5 в мінімальному середовищі з рН 7,0. Необроблені клітини головним чином утворюють гіфи. (В)

Дослідження мікрофлюїдики утворення біоплівки С. аїЇрісап5, обробленої в мінімальному

Зо середовищі гідролізатом глюконо-б-лактона (ЗОБА) в х50 кінцевій концентрації з рн 3.8.

Додавання СОА призводило до росту С. аІрісап5 головним чином у вигляді дріжджової форми, але не у вигляді гіфів.

Фіг. 9. Утворення біоплівки Е5сПегісніа соїї К12, обробленої фосфатним буфером (заштриховані прямокутники), лимонною кислотою (незаштриховані прямокутники), молочною кислотою (заштриховані трикутники), глюконовою кислотою (заштриховані кола) або глюконо-б- лактоном (незаштриховані кола), з отриманням середовищ з різним значенням рн (2,6-6,6).

Біоплівку забарвлювали кристалічним фіолетовим.

Детальний опис сутності винаходу

Сполуки

Відповідно до одного аспекту цей винахід відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить сполуку Формули 1. еЕ о

Соя е еЕ

Ї або її лактон, де

Е незалежно вибирають з групи, що складається з -ОВ, -Н та галогену; і п являє собою ціле число, що становить 1, 2 або 3, для застосування в лікуванні та/або попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що якщо інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою грибкову інфекцію, то сполука Формули І, не являє собою сполуку Формули (ХІМ)

он он о но он он он

ХМ або її лактон.

Відповідно до одного варіанту здійснення алкіл являє собою аліфатичний ланцюг С1-Сго.

Термін "аліфатичний ланцюг, що використовується в цьому документі, відноситься до неароматичних вуглеводнів. Зазначені аліфатичні ланцюги можуть бути лінійними, розгалуженими та/або циклічними. Зазначені аліфатичні ланцюги можуть бути насиченими або ненасиченими. У зазначених аліфатичних ланцюгах один або декілька атомів водню можуть бути насичені ароматичним фрагментом, що містить один або декілька бензольних фрагментів.

Відповідно до одного варіанту здійснення алкіл являє собою аліфатичний ланцюг Сі-Стго, при цьому один або декілька атомів водню необов'язково заміщені -ОН, 0 або фенілом, і при цьому одна або декілька СНе-груп аліфатичного ланцюга необов'язково заміщені О, 5 або МН.

Необмежуючі приклади алкілів, в яких одна або декілька СНе-груп аліфатичного ланцюга необов'язково заміщені О, 5 або МН, являють собою ефіри, тіоефіри та третинні аміни.

Відповідно до одного варіанту здійснення алкіл являє собою аліфатичний ланцюг С1-Сго, такий як аліфатичний ланцюг С1-С:15, аліфатичний ланцюг С1-С:о, аліфатичний ланцюг С:-Сх, такий як аліфатичний ланцюг С5-Сго, такий як аліфатичний ланцюг С5-С:5, такий як аліфатичний ланцюг

С5-С:о, такий як аліфатичний ланцюг Стіо-Сго, такий як аліфатичний ланцюг Сто-С15. Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення алкіл вибирають з групи, що складається з метилу, етилу та пропилу.

Відповідно до одного варіанту здійснення щонайменше одна з К являє собою -ОВ.

Відповідно до одного варіанту здійснення щонайменше дві, наприклад, щонайменше три, наприклад, щонайменше чотири, наприклад, щонайменше п'ять, наприклад, щонайменше шість

Е являють собою ОК. Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення К" являє собою -ОНВ.

Відповідно до одного варіанту здійснення щонайменше одна з КК являє собою -ОН.

Відповідно до іншого варіанту здійснення не більше однієї з К' являє собою -Н, наприклад, не більше двох з К' являють собою -Н. Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення К" являє собою -Н.

Відповідно до одного варіанту здійснення -ОК являє собою ацетат або лактат.

У водному розчині сполуки відповідно до Формули | можуть перебувати в рівновазі з відповідними лактонами, наприклад, б-лактоном та у-лактоном. Відповідно до одного варіанту

Зо здійснення сполука Формули | являє собою її лактон. Зазначений лактон переважно може являти собою б-лактон або у-лактон.

Відповідно до одного варіанту здійснення сполуку Формули І вибирають з групи, що складається з

Е!

Е" о о в) о о о

Е! еЕ еЕ е е е еЕ

Е в е

І! ПІ ІМ

Е" в в В" ' Е" в. в в Е"! о в о о в о о о

М М апа МІ

Відповідно до іншого варіанту здійснення сполуку Формули І вибирають з групи, що складається з

Ок

Ок о о о о о о ко ко Ок ко ок ко ок ок ок ок

МИ! ІХ хХ ок ов ов ов ко ко ов ов ко о ок о Ок о ок о о о

Хх! ХІЇ апа ХПІ

Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення п становить 2.

Відповідно до одного варіанту здійснення сполука Формули І являє собою он он о но он он он

ХІМ

Відповідно до одного варіанту здійснення сполука Формули І являє собою сполуку Формули

ХУ, он о о но он он

ХУ .

Відповідно до одного варіанту здійснення сполуку Формули І вибирають з групи, що складається з ок о о ок ов ово во

І т ок е .,, во ; во бов т Е он - Е ОВ.

Ов. ок ок о о

ХМ ХМІ апа ХМ!

Відповідно до одного варіанту здійснення сполуку Формули І вибирають з групи, що складається з он он о о он он о НО, он 7 п ню. Ж А Ж

Ін Ф) он ї ї он о Он

Е Е о он оно он

ХІХ хх ХХІ ,

Відповідно до одного варіанту здійснення сполуки ХІХ, ХХ та ХХІ знаходяться в рівновазі з водним розчином.

Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення сполука Формули І являє собою глюконо- б-лактон (СБА, Формула ХІХ). он о о но" "он он

ХІХ ,

Відповідно до іншого варіанту здійснення сполука не являє собою глюконо-б-лактон (Формула ХІХ). Таким чином, відповідно до одного аспекту, цей винахід відноситься до сполуки

Формули ! для застосування в лікуванні та/"або попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що сполука Формули І не являє собою глюконо-б-лактон (Формула

ХІХ).

Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до сполуки Формули І для застосування в лікуванні талабо попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що якщо сполука Формули І являє собою сполуку Формули ХІХ, то інфекція, спричинена мікроорганізмами, не являє собою грибкову інфекцію.

Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до сполуки Формули І для застосування в лікуванні талабо попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що якщо сполука Формули І являє собою сполуку Формули ХІХ, то інфекція, спричинена мікроорганізмами, не являє собою урогенітальну грибкову інфекцію.

Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до сполуки Формули І для застосування в лікуванні талабо попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що якщо сполука Формули І являє собою сполуку Формули ХІХ, то інфекція, спричинена мікроорганізмами, не являє собою вульвовагінальний кандидоз.

Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до сполуки Формули І для застосування в лікуванні талабо попередження інфекцій, спричинених мікроорганізмами, за умови, що якщо інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою урогенітальну грибкову інфекцію, то сполука Формули І, не являє собою сполуку Формули ХІМ.

Відповідно до одного варіанту здійснення сполука являє собою ацеталь Формули |.

Відповідно до одного варіанту здійснення оксогрупа сполуки являє собою відповідний ацеталь, тобто, сполуку Формули І вибирають з групи, що складається з

Ок

Ок о ов ов ок ОоКво ов во ок ко ко ок ок ов ок ов ко о ов ко

ХХІ ХХ! апа ХХІМ

Ок о Ок ок ок ок А во ов во . ,, юю М АЖ Ов во" тов т Її ов

Ов ов ов о ок ко ов

ХМ ХХМ апа ХХМІ

Полімер/олігомер

Відповідно до одного варіанту здійснення сполука Формули І олігомерізують з утворенням олігомеру. Відповідно до іншого варіанту здійснення сполуку Формули | полімерізують з утворенням полімеру.

Відповідно до одного варіанту здійснення олігомер або полімер містить одну сполуку

Формули І, тобто, являє собою гомоолігомер/полімер, при цьому одна сполука Формули І являє собою мономер. Відповідно до іншого варіанту здійснення олігомер або полімер являє собою змішаний олігомер/полімер, тобто, гетероолігомер/ полімер. Відповідно до одного варіанту здійснення олігомер містить щонайменше дві різні сполуки Формули І.

Відповідно до одного варіанту здійснення олігомер або полімер додатково містить молочну кислоту, тобто, являє, собою олігомер/полімер молочної кислоти.

Відповідно до одного варіанту здійснення дві сполуки Формули І пов'язують з метою утворення димеру. Відповідно до одного варіанту здійснення димер містить дві сполуки

Формули ХІМ. Відповідно до одного варіанту здійснення димер містить дві різні сполуки

Формули І.

Інфекції

Відповідно до одного аспекту цей винахід відноситься до сполуки Формули | або фармацевтичної композиції, що містить сполуку Формули І для застосування в лікуванні та/або попередженні інфекцій, спричинених мікроорганізмами. Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до глюконо-б-лактона для застосування в лікуванні бактеріальної інфекції або змішаної грибкової та бактеріальної інфекції.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою урогенітальну інфекцію. Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою вагінальну інфекцію.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою інфекцію у ссавця, тобто,

Зо суб'єкт, який потребує зазначеного лікування, являє собою ссавця. Переважно, ссавець являє собою людину. Відповідно до одного варіанту здійснення людина являє собою жінку. Зазначена жінка може являти собою жінку, яка є вагітною.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою дерматит та/або екзему.

Зазначений дерматит та/або екзема являє собою себорейний дерматит. Інфекція може також являти собою вторинну інфекцію зазначеного дерматиту або екземи.

Термін "вторинна інфекція" що використовується в цьому документі, відноситься до наслідків або ускладнення основної причини. Зазначена основна причина може являти собою первинну інфекцію.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою акне всіх ступенів тяжкості, або акнеформні стани, такі як розацеа, периоральний або периорбітальний дерматит.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою фурункульоз, карбункулез або фолікуліт.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою хейліт. Зазначений хейліт може являти собою ангулярний хейліт.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція може являти собою інфекцію обличчя, шкіри голови, тулуба та/або пахової області. Інфекція може являти собою інфекцію інфікованих шкірних ран в зазначених областях. Інфекція також може бути локалізована в шкірних складках тіла.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою імпетиго або бешихове запалення.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою інфекцію стоп. Зазначена інфекція стопи може бути асоційована з діабетичними ранами стоп. Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція стоп може бути вторинною по відношенню до врослих нігтів пальців стопи або мозолів стоп.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція може являти собою вторинну інфекцію, що виникає після укусу тварини. Зазначене тварина може являти собою комаху. Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою вторинну інфекцію, що виникає після укусів комах, укусів комарів, укусів кліщів, мігруючої еритеми або доброякісного шкірного лімфаденоза.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою вторинну інфекцію простого герпесу, шкірну, ротової порожнини або генітальну, або вторинну інфекцію герпес-зостер або варіцелла-зостер.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою вторинну інфекцію внаслідок пошкодження шкіри, таку як опіки або порізі.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою грибковий, бактеріальний або змішаний блефарит.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою кон'юнктивіт.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою вагініт або цервіцит.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція спричинена ТГгіспотопав5 мадіпаїв.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою трихомоніаз.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекцію, спричинену мікроорганізмами, вибирають з групи, що складається з грибкових інфекцій, бактеріальних інфекцій та змішаних грибкових і бактеріальних інфекцій.

Бактеріальні інфекції

Відповідно до деяких варіантів здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою бактеріальну інфекцію. Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою змішану грибкову і бактеріальну інфекцію.

Відповідно до одного варіанту здійснення бактеріальна інфекція являє собою періодонтит.

Відповідно до одного варіанту здійснення бактеріальна інфекція являє собою бактеріальний вагіноз.

Зо Відповідно до одного варіанту здійснення бактеріальну інфекцію вибирають з групи, що складається з інфекції, спричиненої СагОпегеЇПа мадіпаїї5х, Сніатуадіа і Маспотаїів, Меїі5зеїпа допотпоєає, Ттеропета раїїйдит (з5урпіїїв), Агоробішт мадіпає, РгемоїеМНа 5рр, Мобріїшпсив 5рр,

Реріозігеріососсив5 5рр, Рогурпуготопах 5рр, Мусоріазта Потіпі5, Васієгоїде5 5рр, Огеаріазта игеаїуїйсит, Зігеріососси5 5рр, Епієгорасієйасєеає, Епіегососсі, Зарнпуососсив /5рр,

Ргоріопірасієтішт, ЕзсеНегісніа соїї, Кіерзівеа, гарнуіососсив ерідеттіаі5, тарпуіососсив ацйгеив,

Реєндотопаз аєгидіпоза, Асеїїпобрасієї Байтапії, Зпмеріососсиз руодепе5, Мнеріососсив адаїасііає, бета-гемолітичними стрептококами групи С і С та/або Рогрпуготопаз діпдімаїїв.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція є вторинною по відношенню до колонізації оральної, назальної або аногенітальної області стрептококами групи А або групи В або полірезистентними бактеріями.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція являє собою перианальний стрептококовий дерматит.

Змішані грибкові та бактеріальні інфекції

Відповідно до одного варіанту здійснення зазначена інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою змішану грибкову і бактеріальну інфекцію. Бактеріальний компонент зазначеної змішаної грибкової та бактеріальної інфекції може являти собою ту ж саму бактеріальну інфекцію, як визначено в цьому документі. Грибковий компонент зазначеної змішаної грибкової та бактеріальної інфекції може являти собою ту ж саму грибкову інфекцію, як визначено в цьому документі. Відповідно до одного варіанту здійснення вказаний грибковий компонент змішаної грибкової та бактеріальної інфекції являє собою кандидоз.

Зазначена змітана грибкова та бактеріальна інфекція може являти собою інтертригінозний дерматит або пароніхію.

Грибкові інфекції

Відповідно до деяких варіантів здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою грибкову інфекцію. Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою змішану бактеріальну і грибкову інфекцію. Відповідно до одного варіанту здійснення зазначена грибкова інфекція являє собою мікоз. Зазначений мікоз може бути вибраний з групи, що складається з дерматофітозу, кандидозу, кокцидіоїдомікозу, гістоплазмозу. бластомікозу, паракокцидіоїдомікозу, споротрихозу, хромомікозу та феомікозного бо абсцесу, аспергільозу, криптококкозу, зігомікозу та міцетоми.

Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення мікоз являє собою кандидоз. Зазначений кандидоз може бути вибраний з групи, що складається з кандидозу вульви і піхви; кандидозу шкіри і нігтів: кандидозу урогенітальних і шлунково-кишкових областей; кандидозного стоматиту; кандидозу молочної залози і сосків; легеневого кандидозу; кандидозного менінгіту; кандидозного ендокардиту; і кандидозного сепсису.

Відповідно до одного варіанту здійснення мікоз являє собою дерматофітоз. Зазначений дерматофітоз може бути вибраний з групи, що складається з дерматофітного оніхомікозу; оніхомікозу пальця стопи; оніхомікозу пахової області; дерматофіти стоп; дерматофітозу долонь і кистей рук; дерматофітозу волосся обличчя та голови, асбестовидного лишаю; дерматофітозу шкіри голови; дерматофітії тулуба; черепицеподібного мікозу; і пахового дерматомікозу.

Відповідно до одного варіанту здійснення грибкову інфекцію вибирають з групи, що складається з інфекцій, спричинених видами Сапаїда, такими як Сапаїйда аїбісап5, Сапаїда

Кгизеї, Сапайда діаргага, інфекцій, спричинених Сапдіаа ігорісаїїє; інфекцій, спричинених видами

Тпіспорпуїоп, такими як Тгіспорпуїоп меггисозит, Тгіспорпуїп гибгит, Тгіспорпуїп міоїассит,

Тиіспорпуїоп їопзигап5; та інфекцій, спричинених видами Місгозрогит, таких як інфекції, спричинені Місгозрогит сапів; інфекцій, спричинених Азрегоійи5, та інфекцій, спричинених

Маїаззеліа.

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція спричинена Засспаготусез сегемівіає.

Відповідно до одного варіанту здійснення мікоз являє собою різнокольоровий лишай.

Відповідно до одного варіанту здійснення сполука Формули | не являє собою сполуку

Формули ХІХ і грибкова інфекція не являє собою урогенітальну грибкову інфекцію.

Відповідно до іншого варіанту здійснення сполука Формули І не являє собою сполуку

Формули ХІХ і грибкова інфекція не являє собою вульвовагінальний кандидоз.

Відповідно до ще одного варіанту здійснення грибкова інфекція не являє собою урогенітальну грибкову інфекцію і сполука Формули І не являє собою он он о он он он

ХІМ

Вірусні інфекції

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою вірусну інфекцію. Відповідно до одного варіанту здійснення вірусна інфекція являє собою

ВІЛ.

Склади

Відповідно до деяких варіантів здійснення цей винахід відноситься до фармацевтичної композиції, що містить сполуку Формули | для застосування в лікуванні інфекції, спричиненої мікроорганізмами. Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтичну композицію складають у вигляді таблетки, таблетки, що розпадається в порожнині рота (або таблетки, що розчиняється в порожнині рота (О0Т)), пастилки, камеді, жувальної гумки, крему, лосьйону, гелю, емульсії, розчину, піни, мазі, спрею, суспензії, рідини для полоскання рота, ополіскувача для порожнини рота, ополіскувача для ротової порожнини, апарату для промивання порожнини рота, лаку для нігтів, дермального пластиру або шампуню. Відповідно до одного варіанту здійснення зазначений розчин пристосований для застосування в бандажі, пов'язці та/або компресі.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція містить щонайменше 5 мас. 956, наприклад, щонайменше 10 мас. 956, наприклад, щонайменше 15 мас. 95, наприклад, щонайменше 20 мас. 9о, наприклад, щонайменше 25 мас. 90, наприклад, щонайменше 30 мас. 96, наприклад, щонайменше 40 мас. 956, наприклад, щонайменше 50 мас. 95, наприклад, щонайменше 60 мас. 95 сполуки Формули (1).

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція для застосування відповідно до будь-яким з попередніх пунктів, де фармацевтична композиція містить не більше 99 мас. 95, наприклад, не більше 95 мас. 95, наприклад, не більше 90 мас. 95, наприклад, не

БО більше 85 мас. 95, наприклад, не більше 80 мас. 95, наприклад, не більше 75 мас. 95 сполуки

Формули (І).

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція містить від 5 до 99 мас. 95, наприклад, від 10 до 95 мас. 95, наприклад, від 15 до 95 мас. 95, наприклад, від 20 до 90 мас. 95, наприклад, від 40 до 95 мас. 95, наприклад, від 40 до 95 мас. 95, наприклад, від 50 до 95 мас. 956 сполуки Формули (І).

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція містить не більше 10 мас. 95 води, наприклад, не більше 5 мас. 95 води.

Термін "антимікробний засіб", що використовується в цьому документі, відноситься до засобу, що може призводити до зниження або усунення або пригнічення росту мікроорганізмів таким чином, як цей термін відомий в цій галузі техніки (ілюстративні мікроорганізми включають до себе мікроорганізми, такі як бактерії, гриби. віруси і інші патогени). Аналогічним чином, термін "протигрибковий засіб" відноситься до засобу, який може призводити до зниження або усунення або пригнічення росту грибів, а термін "антибактеріальний засіб" відноситься до засобу, який може призводити до зниження або усунення або пригнічення росту бактерій.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція додатково містить один або декілька протигрибкових засобів. Відповідно до одного варіанту здійснення цей винахід відноситься до способу лікування однієї або декількох інфекцій, спричинених мікроорганізмами, що включає спільне введення сполуки Формули І! та антимікробного засобу індивідууму, який цього потребує. Відповідно до одного варіанту здійснення зазначений антимікробний засіб являє собою протигрибковий засіб або антибактеріальний засіб. Зазначене протигрибковий засіб може бути вибрано з групи, що складається з міконазола, терконазола, ізоконазола, фентиконазола, флуконазола, ністатина, кетоконазола, клотримазола, бутоконазола. еконазола. тіоконазола, іграконазола, 5-фторурацила та метронідазола.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція додатково містить один або декілька антибактеріальних засобів. Антибіотики являють собою тип антимікробних засобів, що використовуються в лікуванні та попередженні бактеріальних інфекцій. Зазначений антибактеріальний засіб може бути вибрано з групи, що складається з клиндаміцина, тетрацикліна, амоксициліна, ампіциліна, еритроміцина, доксицикліна, ломефлоксацина, норфлоксацина, афлоксама, ципрофлаксина, азитроміцина та цефлотоксіна.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція додатково містить стероїд. Зазначений стероїд може являти собою кортизон.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтичну композицію складають у вигляді тампона, песарія, вагінального аерозолю, вагінальної чаші, вагінального гелю, вагінальної вкладки, вагінального пластиру, вагінального кільця, вагінальної губки, вагінального супозиторія, вагінального крему, вагінальної емульсії, вагінальної піни, вагінального лосьйону, вагінальної мазі, вагінального порошку, вагінального шампуню, вагінального розчину, вагінального спрею, вагінальної суспензії, вагінальної таблетки, вагінальної палички, вагінального диска, вагінального засобу та будь-якої їх комбінації, або при цьому фармацевтична композиція присутня на засобі гігієни, такому як тампон, гігієнічна прокладка, урологічна прокладка або памперс, або щоденна прокладка.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція пристосована для введення щонайменше один раз в день, наприклад, щонайменше два рази на день, наприклад, щонайменше три рази на день.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція пристосована для введення не частіше ніж один раз на два дні, наприклад, не частіше ніж один раз на три дні. наприклад, не частіше ніж один раз на тиждень.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція пристосована для введення не частіше ніж один раз на шість днів.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція пристосована для введення протягом щонайменше одного тижня, наприклад, протягом щонайменше двох тижнів, наприклад, протягом щонайменше трьох тижнів, наприклад, протягом щонайменше чотирьох тижнів.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтична композиція пристосована для введення протягом щонайменше один раз в день протягом щонайменше одного тижня.

Відповідно до одного варіанту здійснення фармацевтичну композицію складають з метою вивільнення сполуки відповідно до Формули І протягом тривалого періоду часу, такого як протягом щонайменше 4 годин, такого як протягом щонайменше 6 годин, такого як щонайменше в протягом 24 годин після введення.

Спосіб попередження та/або зниження утворення біоплівки

Відповідно до одного аспекту цей винахід відноситься до способу попередження та/або зниження утворення біоплівки, при цьому спосіб включає введення сполуки Формули І. Термін "біоплівка", що використовується в цьому документі, відноситься до агрегату з мікроорганізмів, в бо якому клітини мікроорганізмів прикріплюються одна до одної та/або до поверхні. Зазначені клітини, що прикріплюються, часто вкриті матриксом з позаклітинної полімерної речовини, наприклад, що такої, що містить позаклітинну ДНК, білки та полісахариди, що продукуються клітинами. Клітини мікроорганізмів, що ростуть в біоплівкці часто фізіологічно відрізняються від планктонних клітин того ж самого організму.

Такі біоплівки можуть утворюватися на будь-яких живих або неживих поверхнях. Відповідно до одного варіанту здійснення біоплівка являє собою біоплівку в організмі ссавця або на ньому.

Відповідно до одного варіанту здійснення біоплівка являє собою біоплівку імплантата або протеза. Термін "імплантат або протез", що використовується в цьому документі, відноситься до штучних замісників частин тіла, а також матеріалів, що вводять в тканину для функціональних, косметичних або терапевтичних цілей. Імплантати або протези можуть бути функціональними, як у випадку штучних верхніх кінцівок і нижніх кінцівок, або косметичними, як у випадку штучного ока. Імплантати, всі з яких вводяться або імплантуються в організм, мають тенденцію до терапевтичного застосування.

Зазначений імплантат або протез може бути вибраний з групи, що складається з катетера, периферичного венозного катетера, центрального венозного катетера, серцевих клапанів, шлуночкових допоміжних пристроїв, коронарних стентів, нейрохірургічних вентрикулярних шунтів, нейрологічних стимуляторів, що імплантуються, артропротезів, пристроїв для фіксації переломів, надувних імплантатів статевого члена, імплантатів молочної залози, кохлеарних імплантатів, інтраокулярних лінз, дентальних імплантатів, імплантата для ларингектомії, імплантата для трахеостомії, голосових протезів, імплантата для рухливості щелепи, імплантата для тимпаностоміїта зубних імплантатів.

Спосіб для застосування в попередженні передчасних пологів

Відповідно до одного варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою бактеріальний вульвовагініт. При дозріванні шийки матки або недостатності шийки матки зазначена інфекція може мігрувати в матку та викликати хоріоамніоніт та потім передчасні пологи. Мають місце факти, які підтверджують, що надмірне запалення, таке як вагініт або цервіцит, за допомогою продукування простагландинів, може призводити до передчасного скорочення та передчасних пологів навіть за відсутності проявлення хоріоамніоніта.

Недоношений новонароджений може потім зазнавати інвазивної бактеріальної інфекції;

Зо пневмонії, менінгіту або сепсису в результаті імунодефіциту у недоношеної дитини. Особливо стрептококи групи А і В та полірезистентні бактерії можуть призводити до серйозної перинатальної інфекції у дитини і післяпологового ендометриту у породіллі, а також являти собою причину як неонатальної, так і материнської значної захворюваності та смертності.

Відповідно до іншого варіанту здійснення інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою кандидоз. Недоношений новонароджений може зазнавати інвазивної інфекції, спричиненої Сапаїда, однієї з найбільш серйозних нозокоміальних інфекцій, що викликають більш високу захворюваність і смертність, ніж бактеріальна інфекція, зокрема, в неонатальних відділеннях інтенсивної терапії.

Таким чином, відповідно до одного аспекту цей винахід відноситься до сполуки Формули для застосування в попередженні передчасних пологів. Відповідно до прийнятнішого варіанту здійснення зазначену сполуку вводять вагінально. Сполука може бути складена у вигляді тампона, песарія, вагінального аерозолю, вагінальної чаші, вагінального гелю, вагінальної вкладки, вагінального пластиру, вагінального кільця, вагінальної губки, вагінального супозиторія, вагінального крему, вагінальної емульсії, вагінальної піни, вагінального лосьйону, вагінальної мазі, вагінального порошку, вагінального шампуню, вагінального розчину, вагінального спрею, вагінальної суспензії, вагінальної таблетки, вагінальної палички, вагінального диска, вагінального засобу та будь-якої їх комбінації, або при цьому сполука присутня на засобі гігієни, такому як тампон, гігієнічна прокладка, урологічна прокладка або памперс, або щоденна прокладка.

Приклади

Приклад 1: Ефекти різних гідроксильованих кислот

Аналіз утворення біоплівки

Штами дріжджових грибів (Табл. 1) вирощували при 37 "С в повному середовищі УРО (0,5 95 дріжджовий екстракт, 1 95 пептон, 2 95 глюкоза) або мінімальному середовищі, що складається з

УМВ (основи азотного агару для дріжджів без амінокислот і сульфату амонію, РОКЕМЕОІШМ М,

СУМО505) з додаванням 0,595 сульфату амонію, 0,295 глюкози і 100 мМ Г-проліну. При необхідності 295 агар використовували для затвердіння середовища. Рідке мінімальне середовище (УМВ (основу азотного агару для дріжджів без амінокислот і сульфату амонію,

ЕОВМНОІЮМ'М, СУМО505) з додаванням 0,5 95 сульфату амонію, 0,2 956 глюкози і 100 мМ І- бо проліну) використовували для аналізу біоплівки (біоплівкове середовище).

В експериментах по впливу рН на біоплівку значення рН (від 2,6 до 6,6) отримували з використанням або різних калієво-фосфатних буферів в кінцевій концентрації 0,25 М, або з додаванням лимонної кислоти, молочної кислоти і глюконової кислоти до біоплівкового середовища.

Таблиця 1

Дріжджові гриби, що використовуються в цьому дослідженні позначення штаму . , Дикий тип, вірулентний в ІА. М. СШит, еї аї. Мої. інфекції, секвенований штам |/179-182 . Дикий тип, типовий штам, . секвенований штам

Біоплівку вимірювали в рідкий культурі, як описано ІК. Зспег еї а!., 3 (Веїпезаа), 2014, 4. 1671-1680. І. беітапо-Еціане еї аі. Віотей Кез Іпі. 2015; 2015:783639|, з деякими модифікаціями.

Перед виконанням аналізу біоплівки дріжджові культури вирощували в рідкому середовищі ХРО протягом 24 годин до стаціонарної фази (ОЮвоо 11-17)", потім клітини осаджували центрифугуванням (1699 494), промивали стерильною водою і клітини потім вводили в досліджуване біоплівкове середовище (МВ (основу азотного агару для дріжджів без амінокислот і сульфату амонію) з додаванням 0,5 95 сульфату амонію, 0,2 95 глюкози і 100 мМ 1 - проліну, рН 7,0) в кінцевій концентрації 0,2 ООвоо/мл і інкубували в 96-лункових плоскодонних полістіренових мікротитровальних планшетах (бідта АїЇдгісп, Согіпуд? Сов5іаї?? планшети для культивування, СІ 53596-50ЕА) протягом 72 годин при 37 "С в термостаті. У певні часові точки кристалічний фіолетовий (НТО0О1-86О07; Зідта АїЇдгісй) додавали до середовища в кінцевій концентрації 0,05 95, крім того, вимірювали загальну біомасу. Через 24 години після забарвлення клітин лунки планшетів промивали чотири рази 200 мкл води з видаленням планктонних клітин, потім біоплівки висушували і розчиняли в 200 мкл 9695 етанолу.

Вимірювання загальної біомаси і забарвлення біоплівки кристалічним фіолетовим здійснювали при ОЮО5во за допомогою планшет-рідера РІ ОО5іаг ОРТІМА, ВМО ГАВТЕСН. Вимірювання біоплівки з кристалічним фіолетовим нормалізували по відношенню до загальної біомасі (ОЮ5во біоплівки/ОЮ5во загальної біомаси).

Ефекти різних гідроксильованих кислот

Для порівняння ефектів різних гідроксильованих карбонових кислот в низьких концентраціях утворення біоплівки вимірювали через 24 годин після додавання 0,06 мас. 95 гліцеринової кислоти, ксилонОової кислоти, лимонної кислоти, глюконової кислоти і молочної кислоти в незабуферених умовах. Дані показано в Табл. 2 та на Фіг. 1.

Зо

Таблиця 2

Вплив низьких концентрацій (0,06 95) гідроксильованих карбонових кислот на утворення біоплівки Сапаіда аіБбісап5. Віоплівку вимірювали через 24 год. я пенннтвя І значення рн (95 контроля)

Глюконовакислота(ЗА)Ї | (65 | 6

Як видно з Табл. 2, глюконова кислота являє собою найбільш ефективну сполуку, за нею йдуть молочна кислота і лимонна кислота. Заміна молочної кислоти глюконовою кислотою призводило до »50 95 меншому утворенню біоплівки (6 95 порівняно з 13 95 контролю). За умови, що утворення біоплівки є дуже чутливим до низького значення рН, і що глюконова кислота призводить лише до помірного зниження значення рН порівняно з молочною кислотою і лимонною кислотою, цей результат є несподіваним.

Приклад 2: Утворення біоплівки Сапаїаа аібісап5 прирізних значеннях рн

З метою подальшої оцінки впливу глюконової кислоти в попередженні утворення біоплівки визначали утворення біоплівки при різному значенні рН (як описано в Прикладі 1) для глюконОовоОї кислоти, молочної кислоти та лимонної кислоти.

Як видно з Табл. 3, глюконова кислота характеризувалася вираженими ефектами відносно утворення біоплівки Сапаїда аІрісапе, в той час як ефекти молочної кислоти та лимонної кислоти були набагато менш вираженими. Крім цього, глюконова кислота характеризувалася вираженим ефектом також при значеннях рН до близько 6, в той час як зазначений ефект, що спостерігається у відношенні молочної кислоти та лимонної кислоти, характеризувався початком зниження вже при значенні рН 5. Крім того, глюконова кислота призводила до повної втрати утворення біоплівки при рн 2,6. Дані представлені в Табл. 3.

Таблиця З

Утворення біоплівки Сапаїйда аїбісап5 в результаті додавання глюконової кислоти, молочної кислоти або лимонної кислоти (24 год. обробки) 00000001 ота Молочекюлота| Лимоннаннюлога | Буфер

Молочна кислота | Лимонна кислота Буфер кислота

Нормалізована біоплівка (ОЮ5во) 0,17 з 4,6 3,2 при рН 6,1

Нормалізована біоплівка (ОЮг5во) 1,6 0,34 0,25 при рН 2,6

Приклад 3: Утворення біоплівки Сапаїада діангаїа при різних значеннях рн

Сапаїда діабгага є набагато більш складною для лікування порівняно з Сапаїйда аїрісапв. В той же час, виразний ефект отримували при більш тривалій обробці, тобто, 72 год. обробці глюконовою кислотою (Табл. 4).

Таблиця 4

Утворення біоплівки Сапаїйда діабгага в результаті додавання глюконової кислоти, молочної кислоти або лимонної кислоти (72 год., обробки) зни ЦО ння, вен

Нормалізована біоплівка (ОЮг5во) 1,6 2,8 2,9 4,7 при рН 6,1

Нормалізована біоплівка (ОЮг5во) 0,07 1,0 4,8 при рН 2,6

На підставі зазначених результатів був зроблений висновок про те, що глюконова кислота надавала більш виражений ефект в цілеспрямованому впливі на утворення біоплівки Сапаїда порівняно з молочною кислотою і лимонною кислотою. На відміну від ефекту, що спостерігається в разі молочної кислоти та лимонної кислоти, ефект, що спостерігається в разі глюконової кислоти, являв собою не просто рН-залежний ефект. Зазначений ефект був присутній навіть при значенні рН 6.

Таким чином, був зроблений висновок, що глюконова кислота була придатною як протигрибкова сполука, як свідчило зниження утворення біоплівки. Сполука було фізіологічно і

Зо фармацевтично прийнятною. Таким чином, глюконова кислота була придатною для отримання фармацевтичних складів для застосування в лікуванні кандидозу.

Приклад 4: Отримання похідних глюконової кислоти

Лактонізація/олігомеризація глюконової кислоти

Глюконову кислоту (БА) (50 мас. 95 в Н2О, 4 г) наливали у відкритий флакон та нагрівали до 120 "С. Через 24 год. суміш охолоджували до кімнатної температури, при цьому вона тверділа.

З метою аналізу складу водного розчину глюконової кислоти ((ЗА) ЗА (50 мас. 95 в Него) розчиняли в ОМ5О-05 та аналізували за допомогою 'Н- та /ЗС-ММВ.

Лактонізовану/олігомерізовану глюконову кислоту (див. вище) розчиняли в ОМ5О-49 та аналізували за допомогою "Н- та "ЗС-ММЕ, див. Табл. 5.

Таблиця 5

Порівняння СА, лактонізованоїта олігомерізованої СА, що аналізували за допомогою "Н- та "30-ММА

СА (526-95-4) тетненютненнтннннох 00

Лактонізована та олігомерізирована СА

Був зроблений висновок, що СА призводила до утворення складної суміші різних лактонів, а також олігомерізованного матеріалу при тривалому зневодненні.

Приклад 5: Гідроліз глюконо-б-лактона (ОА)

У водному розчині глюконо-б-лактон (ЗОБА) знаходиться в рівновазі з (ЗА, САБ5 526-95-4).

СрА (200 мг) додавали до дистильованої НгО (20 мл), буферу з рН 4, буферу з рН 5 або буферу з рН 7 при 37 "С. Оптичне обертання і значення рН вимірювали в динаміці. Оптичне обертання вимірювали при 37 "С. Ю-лінії натрію, С - 10 мг/мл, товщині шару - 10 см. Оптичне обертання ОА становило приблизно 66". Оптичне обертання глюконової кислоти становить приблизно 5" |(Ю. Т. Зам/уег. У. В. Ваддег, у. Ат. Спет. бос, 1959, 81, 5302-5306).

Цей експеримент показав, що СОВА повільно гідролізувався до суміші С0А та СА (Фіг. 2).

Рівновага була рН-залежною і відповідні концентрації СОА присутні при всіх забуферених умовах.

Приклад 6: Утворення біоплівки в моделі станів іп мімо з використанням глюконової кислоти (СА)

Осад лактонізованої/олігомерізованої глюконової кислоти (1,3 г, зразки в двох повторах) додавали до буферного розчину з рН 3,71 (0,5 М КНгРОз/ортофосфорної кислоти, 10 мл) при 37 "С. Зразки (4 мл) видаляли щогодини (1, 2, 3, 4, 5, 6 і 24 год.) і додавали новий буферний розчин (4 мл). Зразки розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем (див. вище) і ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год., як описано вище. Як видно з Фіг. 4А, ЗА, що

Зо вивільняється, призводила до значного зниження ступеня утворення біоплівки у Сапаїда аірісапв5. Крім цього, гідроліз осаду, ймовірно, був досить повільним для того, щоб забезпечити превентивний ефект протягом до щонайменше 6 годин, і по всій видимості, набагато довше.

Зазначений ефект був менш вираженим в разі Сапаїда діабгава (Фіг. 48). Дані представлені в

Табл. 6.

Таблиця 6

Утворення біоплівки Сапаїйда аїБбісапз і Сапаїда діабгага, оброблених лактонізованою/олігомерізованою СА в моделі умов іп мімо. Зразки видаляли через 1 год., розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем і ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год.

Приклад 7: Утворення біоплівки в моделі станів іп мімо з використанням глюконо-б-лактона

Осади глкюжоно-б-лактона (ОА) (2,5 г, зразки в двох повторах) додавали до буферного розчину з рН 3,71 (0,5 М КНгРОз/ортофосфорної кислоти, 10 мл) при 37 "С. Зразки (4 мл) видаляли в фіксовані часові точки (1, 2, 3, 4, 5, 6 і 24 год.) і додавали новий буферний розчин (4 мл). Зразки розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем (див. вище) і ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год., як описано вище. Як видно з фіг. 5А, ЗОБА, що вивільняється, призводив до значного зниження ступеня утворення біоплівки у С. аїБісапв. Крім цього, гідроліз осаду, ймовірно, був досить повільним для того, щоб забезпечити превентивний ефект протягом до щонайменше 24 годин, і по всій видимості, набагато довше. Зазначений ефект був менш вираженим в разі С. діабгаїа (Фіг. 58).

Таблиця 7

Утворення біоплівки С. аіІрісап5 та С. діабгага, оброблених СОВА в моделі умов іп мімо. Зразки видаляли через 1 год., розбавляли 50 разів біоплівковим середовищем для аналізу і ступінь утворення біоплівки вимірювали через 24 год.

Результати показали, що утворення біоплівки як С. аіІБісап5, так ії С діабгайа знижувалося в присутності ЗОБА. Крім зниженого утворення біоплівки, З0ОА може призводити до порушення життєздатності зрілої біоплівки С. аїБбісапз5 і С. діабгаца.

Приклад 8: Життєздатність зрілих біоплівок С. аІБісап5 і С. діабгага, оброблених глюконо-б- лактоном

Життєздатність біоплівок С. аіІрісапз і С. діабгайа після обробки глюконо-б-лактоном (О0А) в різній концентрації і різні часові періоди оцінювали за допомогою забарвлення клітин за допомогою ХТТ. ХХТ являє собою колориметричний аналіз для кількісної оцінки життєздатності клітин, а також цитотоксичності. Аналіз заснований на розщепленні солі тетразолія ХІТ, перетворення, яке відбувається тільки в життєздатних клітинах. Зрілу біоплівку піддавали дії

СОА протягом 24 год. Потім клітини промивали 2 рази РВ5, після чого додавали реакційну суміш з ХТТ. Через 30 хв. вимірювали оптичну щільність при 485 нм.

Аналіз ХТТ показав значне зниження життєздатності С. діабгага вже через 24 год. після інкубації (Фіг. БА). Ефект був менш вираженим в разі С. аІрісапв, однак чітко помітним через 48 год. (Фіг. 68).

Крім цього, зрілу біоплівку (вирощену протягом 48 год. в ММВ, 0,2 95 глюкози, 100 мМ проліну) С. аїБісапз5 і С. діабгаїа інкубували з ОБА різних концентрацій (0,05-0,5 г/мл) при 37 "С.

Зо Для цієї мети біоплівкове середовище (МВ, 0,2 95 глюкози, 100 мМ проліну) видаляли і додавали С0А, який розчиняли в концентрації 0,05, 0,1, 0,2 ії 0,5 г/мл. Після інкубації з ОА протягом 5 год. або 73 год. 5 мкл клітин висівали при послідовному розведенні (від 1:10 до 1:1000) на агаровому середовищі УРО для оцінки виживання клітин. Висіяні клітини інкубували протягом 24 год. при 37 "С і візуально аналізували. Клітини зі зрілої біоплівки, оброблені водою, використовували в якості контролю. Було виявлено, що СМБА призводить до зниження життєздатності клітин С. аїрісапе і С. діабгаїа, зокрема, в високих концентраціях. У концентраціях 0,2 і 0,5 г/мл через 5 год. інкубації життєздатність клітин знижувалася в приблизно 100 раз як в разі С. аїрісапв, так і в разі С. аІабгаїа. Через 73 год. інкубації з 0,5 г/мл

СрА життєздатність клітин С. аіІрісап5 знижувалася в приблизно 1000 разів (дані не показані). С. діабгайа виявилася більш чутливою до ОСОБА (Фіг. 7).

Приклад 9: Дослідження мікрофлюїдики утворення біоплівки

Для контролю клітинної морфології С. аірісап5 також вивчали утворення біоплівки за допомогою мікроскопії та мікрофлюїдики. Після інокуляції дріжджових клітин гіфи починали утворюватися протягом першої години інкубації в біоплівковому середовищі (УМВ з додаванням 100 мМ проліну ії 0,2 95 глюкози, рН 7,0). На Фіг. ВА показані необроблені клітини через 5 год.

Осад глюконо-б-лактона (2,5 г) додавали до буферного розчину з рН 3,71 (0,65 М

КНегРОз/ортофосфорної кислоти, 10 мл) при 37 "С. Зразок видаляли через 1 год. і розводили в разів біоплівковим середовищем і додавали до С. АїІрісап5. Через 5 год. найбільш оброблені клітини були планктонними (Фіг. 88). 50

Приклад 10: Життєздатність різних видів Сапаїда в присутності глюконо-б-лактона

Інші досліджувані Сапаіда 5р. також були чутливими (тобто, відповідно до показника життєздатності клітин з використанням аналізу ХТТ, пор. Приклад 8) до глюконо-б-лактону (СПА). У той же час, вони демонстрували різні рівні чутливості. Сапаїда аібісапе 505314 демонструвала найбільш низьку чутливість, а силіконовий ізолят Сапаїда Кгивєї А4-1 демонстрував найбільш високу чутливість. Токсичність ОА опосередкована в результаті руйнування клітинної стінки, оскільки клітини, схильні до дії ОБА, характеризувалися найменшою життєздатністю на середовищі з калькофлуором білим порівняно з середовищем з додаванням осмотичного стабілізатора (0,5 М сахарози) і порівняно з необробленими клітинами на цих середовищах, В Табл. З представлені якісні ефекти, показані з використанням СБА.

Таблиця 8

Чутливість різних видів Сапаїда до ОСА

Таким чином, (ї) ОСА може призводити до руйнування зрілої біоплівки, утвореної С. аІБбісап5 і С. діаьгаца, (її) при впливі СБА б. аІрісапе перетворюється в дріжджову форму, в той час як життєздатність С. діабгага знижується, (ії) зазначений ефект є виразним навіть відносно інших штамів, тобто, С. ігорісаїїв і С. Кгизеї.

Приклад 11: Співолігомерізація глюконової кислоти (ЗА) з молочною кислотою (І А)

І А: БА (мольне співвідношення 4:1)

ПІ -Молочну кислоту (563 мг, 6,26 ммоль) і О-глюконову кислоту (50 95 у воді, 0,50 мл, 1,57 ммоль) змішували в пробірці і нагрівали до 130 "С. Через 4 год. температуру підвищували до 140 "С. В цілому через 27 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш тверділа при охолодженні.

І А: БА (мольне співвідношення 8:1)

ПІ -Молочну кислоту (569 мг, 6,32 ммоль) і О-глюконову кислоту (50 95 у воді, 0,25 мл, 0,78 ммоль) змішували в пробірці і нагрівали до 130 "С. Через 4 год. температуру підвищували до 140 "С. В цілому через 27 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш тверділа при охолодженні.

ГА: БА (мольне співвідношення 16:1)

ПІ -Молочну кислоту (565 мг, 6,28 ммоль) і О-глюконову кислоту (50 95 у воді, 0,35 мл, 0,39

Зо ммоль) змішували в пробірці і нагрівали до 130 "С. Через 4 год. температуру підвищували до 140 "С. В цілому через 27 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш тверділа при охолодженні.

І А: СА (мольне співвідношення 10:1, пряме змішування)

ОІ-Молочну кислоту (1 г, 11 ммоль) і О-глюконову кислоту (50 95 у воді, 0,35 мл, 0,78 ммоль) змішували в пробірці і нагрівали до 130 "С під вакуумом. В цілому через 22 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш ставала майже повністю твердою при охолодженні.

ГА: БА (мольне співвідношення 10:1, попередне нагрівання протягом 5 год.)

ПІ -Молочну кислоту (1 г, 11 ммоль) попередньо нагрівали при 130 "С під вакуумом. Через 5 год. додавали Ю-глюконову кислоту (50 95 у воді, 0,35 мл, 1,1 ммоль). Ще через 16 год. під вакуумом при 130 "С реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш тверділа при охолодженні. 1 мас. 95 СА в ЧА

Ю-глюконову кислоту (50 9о у воді, 4 г) і моногідрат лимонної кислоти (20 мг. 1 мас. Ов) змішували в пробірці і нагрівали до 120 "С. В цілому через 15 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш не тверділа при охолодженні. 5 мас. 95 СА в СА

Ю-глюконову кислоту (50 9о у воді, 4 г) і моногідрат лимонної кислоти (105 мг, 5 мас. о) змішували в пробірці і нагрівали до 120 "С. В цілому через 15 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш не тверділа при охолодженні. 10 мас. 95 СА в СА

ЮО-глюконову кислоту (50 9о у воді, 4 г) Її моногідрат лимонної кислоти (222 мг, 10 мас. Ов) змішували в пробірці і нагрівали до 120 "С. В цілому через 15 год. реакційну суміш доводили до кімнатної температури. Реакційна суміш не тверділа при охолодженні.

На підставі цих результатів було показано, що глюконова кислота може бути олігомерізована з молочною кислотою з утворенням твердої речовини, на відміну від чистої глюконової кислоти або молочної кислоти, обидві з яких являють собою рідини.

Приклад 12: Вплив глюконо-б-лактона та цукрових кислот на Е. соїї

Умови росту

Бактеріальний штам ЕзсНегіспіа сої К12 використовували для дослідження біоплівки.

Зазначений штам підтримували на середовищі І.В при 37 "С. Біоплівку вивчали в синтетичному середовищі МОУ (х 1 МУ мінімальних солей (Зідта Мб60О30), 2 мМ Мо505», 0,1 мм Сасіг і 0,2 95 глюкози), що містило фосфатний буфер, лимонну кислоту, молочну кислоту, глюконову кислоту або глюконо-б-лактон, з отриманням середовищ з різними значеннями рН (2,6-6,6).

Біоплівка

Культуру БЕ. соїї К12 (ОЮвоо «- 5,0), отриману протягом ночі, промивали стерильною водою і інокулювали до кінцевої концентрації 0,2 ОО/мл середовища МО з різним значенням рН різних сполук. Утворення біоплівки вивчали в 9б-лункових плоскодонних полістіренових мікротитровальних планшетах (Зідта Аїагісн, Согпіпає, Совіа!?, планшети для культивування,

СІ 53596-50ЕА). Біоплівку забарвлювали кристалічним фіолетовим.

Під час експерименту з біоплівкою (24-48 годин) бактеріальний штам характеризувався підвищенням своєї біомаси (2-3-кратним) тільки в середовищі МО з додаванням фосфатного буфера при рН 6,1 і рН 6,6 (Фіг. 9). Біомаса була нижчою на інших середовищах і спостерігали зниження бактеріальної біомаси при зниженні значення рН середовища. Кислоти (лимонна кислота, молочна кислота, глюконова кислота) і глюконо-б-лактон надавали інгібуючий ефект на ріст. Крім інгібування росту, зниження рН середовища призводило до зниження утворення біоплівки. Найбільш низький вміст біоплівки спостерігали в середовищі з додаванням глюконової кислоти. Другою найбільш ефективною в інгібуванні біоплівки була молочна кислота, за якою слідував глюконо-б-лактон. Порівняно з фосфатним середовищем, біоплівка на середовищі з глюконовою кислотою була в 38 разів менше при значенні рН 2,6 їі в 15 разів менше при значенні рН 3,0). При значенні рН 6,6 глюконова кислота і молочна кислота призводили до зниження біоплівки в «- 2 рази. Глюконо-б-лактон при значенні рН 2,6 призводив до зниження утворення біоплівки в 14,2 разів через 24 год. і в 30 разів через 48 год. відповідно.

Зниження значення рН середовища надавало виразний ефект на утворення біоплівки Е. соїї, що, ймовірно, асоційоване з бактерицидним ефектом (більш низьке утворення біоплівки супроводжувалося більш низькою біомасою).

Приклад 13: Дослідення МІС глюконо-б-лактона на СагапегеїЇІа мадіпаїї5, Іасюбасійв5 ствірайи5 та І асіобасіїи5 іпег5

Штами

СагапегеїІа мадіпаййв ССС 3717

І асюбрасійв5 стізраие ССС 44128

І асюбрасійшв іпетв ССС 44025

Приготування інокулятів

Сагапегеїйа мадіпаїї5, І асіобасіїйше іпег5 та Іасіорасійй5 сгізраїш5 отримували з ССО (Колекція культур Університету Гетеборга). Планшети для субкультур організовували для С. мадіпаїїє на основі планшетів з шоколадом-Ої, а для І асіобасійи5 5рр. на основі планшетів з агаром М.К.5. при 5 95 СО», 36 "С. Інокуляти отримували з планшетів для субкультур. Колонії інокулювали в пробірки для культивування з 5 мл досліджуваного середовища і перемішували на вортексі 2 хв. з використанням приблизно 10 скляних гранул по З мм в діаметрі. Колонії видаляли до тих пір, поки мутність розчину не склала ОЮ475 0,4-0,5. Бактеріальні розчини перевіряли з використанням світлової мікроскопії при х40 з фазовим контрастом з тим, щоб переконатися, що клітини були дисперговані. Кожну бактеріальну суспензію розбавляли в своєму досліджуваному середовищі, 1:100, до складання 1-3 х 105 КУО/мл. Розчини мікроорганізмів зберігали при 20 "С під час приготування інокулятів.

Приготування мікророзведень і дослідження МІС

Розчин досліджуваної речовини отримували в асептичних умовах в концентрації 1 г/мл в бо стерильній НгО. Перший ряд лунок заповнювали 100 мкл речовини і потім виконували 2-кратні розведення вертикально за 8 кроків. Контролі включали: ї) контролі росту для кожного штаму (не) - відповідний мікроорганізм в досліджуваному середовищі без антимікробного засобу (АМ), ії) відсутність контролю росту (-сігї) - середовище, що досліджується і речовина в максимальній досліджуваній концентрації, це необхідно для того, щоб переконатися, що речовина окремо не може призводити до зміни кольору досліджуваних середови ц, їїї) контроль гентаміцином для кожного штаму.

Потім додавали 100 мкл мікроорганізмів та планшети обережно струшували при 500 об./хв. протягом 30 секунд перед інкубацією при 35"С і 9095 відн. вол. в інкубаторі СО», встановленому при 595 СО». Через 48 і 72 години інкубації вимірювали ОО і проводили візуальні оцінки. Значення рН також вимірювали для всіх розведень, п-1, рН - 6,8-7,1.

Аналізи мікророзведень для визначення МІС проводили в трьох повторах для оцінки значень МІС в разі СБА відносно С, мадіпаїї5 (САМНВ) і Г. стіврайи5 (Із05-МЕ5) через 48 годин інкубації при 5 95 СО? і І... іпег5, культивованих в анаеробних умовах через 120 годин (Табл. 7).

Таблиця 9

Мінімальні інгібуючі концентрації (МІС) у випадку СОВА відносно 0. мадіпаїї5 (САМНВ),

Г стіврайцив (Із05-М.Е.5.) та Ї.. іпег5 (САМНВ)

Значення мінімальної концентрації (МІС) СОВА відносно СагапегеїІа мадіпаїї5 було набагато меншим, ніж значення МІС СБА відносно Іасіобасіїйшв5 іпег5 і Іасіобасійй5 сгізрайш5. Таким чином, БА є більш ефективним відносно (СзагапегеПйа мадіпаї5, ніж відносно помірних

Гасюбасійиз іпегз і асюбасійив5 сгізрацив5.

Приклад 14: Дослідження МІС ЗА відносно Ез5сПегіспіа соїї, арпуіососсиз ерідегтіаїв, еарпуососсивз айгеи5, Рвепдотопаз аегидіпоза, Асеїїпорасієї Баштапії, еігеріососсив5 руодепез, Зігеріососсив адаїіасііає, бета-гемолітичних стрептококів груп С і б та Рогрпуготопавз діпдімаї в.

Штами

Аероби:

Езспепісніа сої ССС 3274/АТСС 10536 еіарнуіососсив ерідептідіє ССС 23118 еарпуіососсив апгеи5 ССС 15915/АТОО 29213

Рзеидотопазх аєгидіпоза (РАОТ) ССС 56489/АТОСО 15692

Асеїїпобасієгї баштапії ССС 57035

Аероби зі складними поживними потребами: зігеріососсив руосдепе5 ССС 47803/АТОО 700294 зігеріососсив адаіасіає ССС 29376

Бета-гемолітичні стрептококи групи С 5ігеріососсив дуздаїасіїіає 55 едцівітіїв ССО 4211

Бета-гемолітичні стрептококи групи 5 5ігеріососсив дуздаїасііає 55 едиївітіїв ССС 7975

Анаероб:

Рогрпуготопаз діпдімаййв ССС 25893 / АТОС 33277

Приготування інокулятів

Всі штами отримували з мікробіологічних банків і організовували планшети для ліній і субкультур. Аероби культивували на планшетах з Т5А, аероби зі складними поживними потребами культивували на планшетах з кров'ю коня і анаероб культивували на планшетах з

ЕАА. Протягом всього дослідження аероби культивували в аеробних умовах, мікроорганізми зі складними поживними потребами при 5 95 СО?» і аероб в жорстких анаеробних умовах при 37 "С.

Під час дослідження петлі для посівів з колоніями, відібраними з планшетів з агаром після 18-24 год. культивування в разі аеробів і аеробів зі складними поживними потребами, суспендували в 5 мл фізіологічного розчину в 10 мл пробірках, що містять 10 скляних гранул по З мм в діаметрі.

Анаероби суспендували в Сопсері 400, а розбавлювачем виступав бульйон ВгисейПа з додаванням геміну (5 мкг/мл), вітаміну К1 (1 мкг/мл) і лізованої крові коня (5 95). Потім клітинні суспензії ретельно перемішували на вортексі протягом 1 хвилини з отриманням мутної суспензії. Кожну суспензію аеробів і аеробів зі складними поживними потребами доводили до

ОО, що дорівнює 0,28 при 475 нм з використанням спектрофотометра, що корелювало приблизно з 1-3 х 108 КУО/мл в разі більшості видів. У разі анаероба вимір ОЮ виявився складним у зв'язку із застосуванням крові в середовищі для культивування. У зв'язку з цим його суспендували до стандарту МакФарланда, рівного 0,5, а щільність клітин інокулята перевіряли за допомогою визначення кількості мікроорганізмів чашковим методом. Аероби і аероби зі складними поживними потребами додатково розводили в фізіологічному розчині в 10 разів таким чином, щоб концентрація інокулята дорівнювала 1,5-3,0 х 107 КУО/мл. Анаероб не розводили, а використовували безпосередньо. Суспензії різних аеробів і аеробів зі складними поживними потребами переносили до відповідних лунок 96-лункового планшета. А. рашитапгпії,

Е. соїї та Р. аегидіпоза поміщали в один ряд, Єїарпуіососсі 5рр. поміщали в другий ряд, а аероби зі складними поживними потребами поміщали в третій ряд планшета. Анаероб переносили з резервуара багатоканальної піпетки об'ємом 25 мл.

Приготування мікророзведень і дослідження МІС здійснювали, як в Прикладі 13. Аналізи мікророзведень для визначення МІС використовували втрьох повторах для оцінки значень МІС в разі глюконо-б-лактона (БА) (Табл. 10).

Таблиця 10

Мінімальні інгібуючі концентрації (МІС) БА відносно Езспегіспіа соїї, арпуіососсих ерідегтіаів, еіарпуіососсив ашгеи5, Рзейдотопавзх аєгидіпоза, Асеїїпобрасієгї баштагпії, Бігеріососсив руодепев, зігеріососсизх адаїасіає, бета-гемолітичних стрептококів груп С і З та Рогрпуготопаєх діпдімаїї5

Ідентификація відповідно до

Штам ссус МІС (г/мл) ссца 57035 0,0031 ссца 3274 0,0063 ссцуа 56489 0.0031

ССЦ 15915 0,0063 ссца 23118 0,0031 соц 29376 0,0031

Бета-гемолітичні стрептококи групи С ССуваг 0,0016

Бета-гемолітичні стрептококи групи Ссустзив 0,0031 ссуа 47803 0,0031 ссуа 25893 0.0031

Значення мінімальної інгібуючої концентрації (МІС) СОА відносно ЕвзсНегісніа «соїїЇ, еарпуіососсив ерідетптідіє, Зіарпуіососсив ашцгеив, Реєпдотопаз аєгидіпоза, Асеїіпорасіє! рашйтагпії, Зігеріососси5 руодепе5, Зігеріососси5 адаіасііае, бета-гемолітичних стрептококів груп

Сб ої б та Рогрпуготопав5 діпдімай5, як правило, нижче, ніж значення МІС СБбБА відносно

І асюбрасійишзв іпегв і І асіорасійи5 сгізра(и5 (Приклад 13). Таким чином, БА є більш ефективним відносно зазначених патогенів, ніж відносно помірних І асіобасійизв іпегзв і І асіобасіїсв5 стізрайи5.

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Застосування сполуки Формули ХХ он он о пре 7 т он оно он хх або її лактону, такого як сполука Формули ХІХ або ХХІ:

он о о Он НО,,, он У" а, но он б ОН он о ; ХІХ ; ХХІ в лікуванні та/або попередженні бактеріальної інфекції, вибраної з групи, що складається з інфекції, спричиненої Сагопеге/а уадіпа!їв, Мобйипсив 5рр., Огтеаріазта игеа|уйсит, Мусоріазта Потіпів, Ргемоїейа 5рр., Епіегососсі, Васіегоїде5 5рр., Реріозгеріососсив 5рр., Рогрпуготопав діпдімайї5, ЕвсРегіспіа соїї, Рзеййотопавз аегидіпоза, Асеїйпобрасієї Баймтапії, бГгеріососсив руодепез, бета-гемолітичними стрептококами групи С, бета-гемолітичними стрептококами групи С та/"або бгеріососсив ада!асіїає.

2. Застосування за п. 1, де сполука належить до Формули ХХ або Формули ХІХ.

3. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів, де інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою урогенітальну інфекцію.

4. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів, де інфекція, спричинена мікроорганізмами, являє собою вагінальну інфекцію.

5. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів, де бактеріальна інфекція являє собою бактеріальний вагіноз.

6. Застосування за будь-яким з пп. 1-4, де інфекція вибрана з групи, що складається 3: а) дерматиту та/або екземи, такого як себорейний дерматит; р) вторинної інфекції дерматиту або екземи; с) акне або акнеформних станів, таких як розацеа, періоральний або періорбітальний дерматит; а) фурункульозу; е) карбункульозу; І) фолікуліту; 9) імпетиго; І) бешихового запалення; ї) періодонтиту; |) вторинної інфекції відносно колонізації стрептококів групи А або В та полірезистентних бактерій, зокрема, де колонізація є оральною, назальною або аногенітальною; К) періанального стрептококового дерматиту; І) інтертригінозного дерматиту; т) пароніхії; Зо п) інфекції інфікованих шкірних ран; о) вторинної інфекції відносно врослих нігтів пальців стопи або мозолів стоп, де інфекція асоційована з ранами діабетичної стопи; р) вторинної інфекції, що виникає після укусу тварини; а) вторинної інфекції, що виникає після укусів комах, укусів комарів, укусів кліщів, мігруючої еритеми або доброякісного шкірного лімфаденозу; г) вторинної інфекції простого герпесу, такого як оральний або генітальний простий герпес; вторинної інфекції герпес-зостер або варіцелла-зостер; 5) блефариту; У кон'юнктивіту; и) вагініту та м) цервітиту.

7. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів, де інфекція являє собою інфекцію у ссавця, переважно людини, зокрема жінки, наприклад вагітної жінки.

8. Застосування сполуки Формули ХХ он он о ю. М А ЖД т т он он он хх або її лактону, такого як сполука Формули ХІХ або ХХІ:

он о о он НО, он но "он о он он о ; ХІХ ; ХХІ в лікуванні бактеріального вагінозу, спричиненого бактеріальною інфекцією, вибраною з групи, що складається з інфекції, спричиненої СагОпегеЛа мадіпайв, МобПйипсив 5рр., Шгеаріазта шигеауйсит, Мусоріаєта Потіпіх, Ргтемоїела 5рр. Епіегососсі, Васієгоіїде5 5рр., Реріозігеріососсив 5рр., Рогрпуготопав діпдіма!йє, ЕвсНегісніа соїї, Рзейдйотопав аеєгидіпоза, Асейпобасіег райтапії, 5геріососсиз руодепевз, бета-гемолітичними стрептококами групи С, бета-гемолітичними стрептококами групи С та/або сгеріососсиз адаіасіає.

9. Застосування за будь-яким з пп. 1-8, де сполука являє собою глюконо-б-лактон (Формула ХІХ): он а У з, но он он ХІХ ,

10. Застосування сполуки Формули ХХ або її лактону, такого як сполука Формули ХІХ або ХХІ, в лікуванні та/або попередженні бактеріальної інфекції, вибраної з групи, що складається з інфекції, спричиненої Сагопеге/а уадіпа!їв, Мобйипсив 5рр., Огеаріазта игеауїйсит, Мусоріазта Потіпів, Ргемоїейа 5рр., Епіегососсі, Васіегоїде5 5рр., Реріозгеріососсив 5рр., Рогрпуготопав діпдіма!й5, ЕзсНегісніа сої Рвеидотопа5 аегидіпоза, Асейпобасієї райтапії бГгеріососсив руодепез, бета-гемолітичними стрептококами групи С, бета-гемолітичними стрептококами групи С та/або б Беріососсиз оадааснає за п. 1, де сполуку Формули ХХ, ХІХ або ХХІ олігомерізують/полімеризують з утворенням олігомеру/полімеру.

11. Застосування за п. 10, де олігомер або полімер додатково містить молочну кислоту.

12. Застосування за будь-яким з пп. 1-9, де сполука знаходиться в фармацевтичній композиції, де фармацевтична композиція містить від 5 до 99 мас. 956, наприклад від 10 до 95 мас. об, наприклад від 15 до 95 мас. 95, наприклад від 20 до 90 мас. 95, наприклад від 40 до 95 мас. 95, наприклад від 40 до 95 мас. 95, наприклад від 50 до 95 мас. 96, сполуки Формули ХХ або її лактону; та/або де фармацевтична композиція містить не більше 10 мас. 95 води, наприклад не більше 5 мас. 95 води.

13. Застосування за п. 12, де фармацевтичну композицію складають у вигляді тампона, песарію, вагінального аерозолю, вагінальної чаші, вагінального гелю, вагінальної вкладки, вагінального пластиру, вагінального кільця, вагінальної губки, вагінального супозиторія, вагінального крему, вагінальної емульсії, вагінальної піни, вагінального лосьйону, вагінальної Зо мазі, вагінального порошку, вагінального шампуню, вагінального розчину, вагінального спрею, вагінальної суспензії, вагінальної таблетки, вагінальної палички, вагінального диска, вагінального засобу та будь-якої їх комбінації, або при цьому композиція присутня на засобі гігієни, такому як тампон, гігієнічна прокладка, урологічна прокладка або памперс, або щоденна прокладка.

14. Застосування сполуки Формули ХХ або її лактону в попередженні передчасних пологів, спричинених бактеріальною інфекцією, вибраною з групи, що складається з інфекції, спричиненої Сагапеге/а уадіпа!їв, МобПипсиз 5рр., Огеаріазта игеауійсит, Мусоріахта Нотіпів, РгекмоїепІа 5рр., Епіегососсі, Васіегоіде5 5рр., Реріозгеріососсив 5рр., Рогрпуготопазх діпдімаїїв, ЕзсепПегісніа соїї, Рееидотопаз аєегидіпоза, Асейпобасієг Байтапії, бгеріососсив руодепевз, бета- гемолітичними стрептококами групи С, бета-гемолітичними стрептококами групи с та/або огеріососсив адаасіає.

15. Застосування за п. 14, де сполуку вводять вагінально.

Неормалізована біоплівка ЮО ща 4 З 9 з ш щі м т п Ед т Кх з х Я 5 5 о 8 - - тріг. 1 Оптичне ит обертання (1 ТО жк 4 т ! А і щу Я АХ : | У. х Е : у щу : Ж у і м еВ Хор Ї за , о оф Бу і КВ ! шо Вк -в і : ІБ сросоо Боовстнн в. жо й щі ща 50 КО Час (хв.

Фіг. 2

Нормалізована дж з «вм льлаз бісплівка В хв ч : Я : Е Ех ! я, Ох - 1 й : : ї : і Я Й и ! і х то : до оееееесесйесесесесесесйесососокококо осоксксксксесі есксксесесесідесесесессссс й З а Но і т 8 вн

Фіг. З

А Пи пахи НО ой м па і 1 2:53 4 5 85 24 Без зброя те Норканзовна епоха ме Ж що

Я я.

в. о. НИ 1 5 3 8.5 в ж Ще сарай ас од

Фіг. 4

А Мормалюмавекни бБіжннаха ща 2 т в

7.2 3 «а я в - Б ка зак слой В Верде влвня Ксчміснка С й, 5 як ово 4

В Я.Я А.К. З ШК. і 1 2 З а З а м Бех сорока щас гак

Фіг. 5 і і і жд н і а т В: : і І т і ; і М і м і Му лко ке М КК Ме Мох ї і З» -х ОМ Я ща ОО мух 5 ї. ' тео ВЕ хх У т КОХ МОШЩЕ О ООО а і КО МУ Б КОМ ча і Б М мох її Ж КІ па М ОБ Мона і хх ЗИ.

З ск КЕ БВ БИ х ос МИС Зх хх ААУ « Е щі ХЕ - е - - я ж Е Ж КУ пт зх Ге; м ін - щк щі З ще «5 хе г Кк, я - «с «3 щ їж, ; з і 11 ; ! ' У ї за Е і ОК ніч З 1 кА ' Мк МЕ їв З З вх Мі 4 «В КЕ і ШЕ Сай ск М ях Кх ря я п М І СЕ ! НО Ме Я шк 1 УМ М Б ШЕ ОО КУ ї БКХ ох У І Ви ЩО на й БУ М ї і ОК, Мі ви Ба р з БК т Ки ЯТЬ М Н М Ка ня З Ме ! ІМ - М її М і а ШЕ 5 г ке і пЕ п ще КЗ Ге.

МЕ З ЗБЕ СЕ Ск СЕ С 155 це С С Ж.

ІК Мо ща М СО а да БЕ ЕСЕ НИ Я - й - г - З Ф - 2 й КУ це Е - Х М х цк хх Кк м Е- т п с - с Ся в ок «а її Б оч у В ою Б Б Б 5 З я ЕЕ о ЕЕ 85 8 ок ж Ме ща Кк а щ щЩ 3 М ОО В іч 3 шк КО нн НН 1 ОКХ ОО я с й ОО

Фіг. 7

А пи ПО ЕЕ З КОВО , С я Воосвен Я до Ден В ВВЕ я Вон я с НВ Кен Певно Де КН т повнова оон панни в ВН я нення п ВоОВаВе нн перев З тин Ве Конення Пен нон Де ОО ее Е п п ПЕВНА ни НЕ ни м ее З о о с : ПО я Анни он оон пн я М В нення не КН КН вия СК ПВнння КВК КН СО Вон порно КО нвкених воно они зей КВН и НЯ ЕК м ПО я ООН Коенренн НЯ ЕХО Я По ВВ ПЕ ООН повен ПЕКИ НЕК рн Ворон» ВОЗ е они ПЕ ОО о с. ВИН я В с ооо М ВВ еннеи Ден ОНИ Он Бо ВО ОБ о п. о. о г ОЇ ни оон крони ВН и КВН онов ОК ОК Воно т М Я В я Сн ня сх о Б со пе Нв ПЕКИ с повен удо оКни пом омосвоя Пон іо зок онко ення оо ДО я о о о пон Вени ПК Я пон нон еокнене, Ве Кеоненен в Ве з шо с Ол Дно и КЕ ОО ОО ВО В я ПОШТИ ее оо Воно Ве Яни Вони вен ех 0. с ВОК ОН ення М я ун я с с о. ПО ОО Ден ня вон п вно двроовов МОЯ повно нор поем Деко інн Кок росоовннено ух ен ВЕК, Дон ее с по По я ПО ООН У ОННя п. пон МИЛИ Врнонних СКК пововноо пеня ОКО УНН СВО нан КН ВО ТЕ що . 1 се У енер я ПОН о ООН КОХ нки певне екон ПН Ко 5 ННЯ Є СОЯ ВО п нин перев Ве ПТ пе они М я МЕНЯ НЕ ВЕ ОВ оно я оо Нав ЕН пооНя ше В В Ве о с о. ПЕ и НЯ ех я с с с Вони нене В я КД нВннннненя ня В УОнН ни ОВВКн ЗОН ВОВК п п З ня КО пеоевен Вон ПО о ше в Я с: о я пн ВО ОН Он рин вне ВУ МЕ Вк п я Ве ОБО я 0, конроно Кене о п ОВ рон ОКУ ВЕС Я о ОМ Б окон нн зни а КК вон ПЛИНИ КК Ме ОО У З с о с ен М ОО я еВ о З у ке с зн ПЕ я с 0 ОО ОУН ОО Де ии ох ОВ ее о рони екон ох ЗО рення ПП ОВК 5 МОН ен пов мовне оо поко оно ПИУЕМНН во М СО п о о дон ПН попе ав пн ен Коня я с о. с ИН ОО ДЕК ПК с с 5 п В ор ов ня Пенн око о. Ор у о днави пнях Вон ун оіно Во с ПК ОН ПОН о. ПО ОК МОХ ПК ОО ВЕК ОО МОЯ кя реко ПО ВОД о 0. с о. ння ее Ден с у с о КОХ В ПЕ 5 о. п с о Я ях МоВ Кн пр онинн ве рн он ЕК ОХ Х ОО В З о с с с с с є с с шо щу ОК ве В М КК ОО . поши ОО я ен с 0. ОВ КО КОН воо ОО вон Ин НК ОО о. . . с о я Кон ек у ВНУ ЗУ ХО М ння о НЕ в ен ОХ хе що и . с с В Ох с ОО - 6 о п КО Я во ООН о ОК ОО Ж о Ох ММ КО ее ХО КО ВМО. М У ОКХ МУКА о з В ПЕ що х ОО ОК ОК ОО Моя ОО ПК унн ЕЕ ДИ ооо ОХ СК МК ОО Св ВО Ов ння ун еннн нн ВО ОХ ММА ХМ ОО зх В ов КО По ПО о В ОК ХО КУ п я КОМ НОВ вро о Я ПК В КК Б : с с ВЕ ПИШУ. оон Я СОНЯ ен ОО ХО М Ся ОО ОО Вон ЕН МОЯ В ПНО ОО с о о о 0. По В п ОКОМ МОЯ он КН с х с о У Я нен с с ння 5 с с о СО БОЖКО ОО їх с 5. с В В щу Ед Ве о я ее нн Ну с о М кни ПК с п о КОКАА ООН нерв ОНИ ЕК х с Вени ОД р с с

6. п КО з я ОО ВН ПЕН КЕ дення Я у с по о Во ВН онко ВК ДО с с КК ВИДНО ох ння ДооонкннЯ Ден ОО ЗО о. с Соня ПОЛ ПИ с КО М М Ведення ЕК СПОН ОО З пн ВАНН

ВОВК ВВ В о ОО оо во вав ВВЕ сова вв оо ово пвоо о воо во ав ВН ПО НН ОО ОО М Кв а а В В ОО дання В я ОО ви ОО КК ШЕПЕШ НЕ КО п В КО ее в А А о ПН М вн М ММ М В ВН В В М М и З ПО В ОО в я ОН НН в и ДЕ о В В о о ОО Око в нн вве вав п в М В и а ПО ОО кн нн в но ие ОО В ОК В В о В В ОК в нн ПК Кн ння СО Б ОО ОЇ Он ОО о КО НО и СК КОВО ОК Пен в ОО ОО а Он М я по НН оре ОВ ОКО СО п ОО У Кен и В ОН У о ооо опор ПО ОО оо ВВ ПИШИ ПКП КК КПП НЕК он ие он В С НЕ КК КК ОО В о сон М шо п В и По НО В У ПО В ПН Х ПО М я По В В я ООН В Х ОО ОО В ПОКИ око оо ов оо о ОО о ВОМ ВО Х М М М НН НЯ М С М ПО КВ В КК С М ПК. ОО ОО В 5, ПО М В о и ОВ МО М ВВ В У о ввв. У ОМА ОВ У и ни ОО КО ХХ ОВ ОК Оу они М НВ ОО ОО Ка нин ВЕУ В Вих п ПИШНЕ НИКИ ПЕВ СОН В о в» Конех С ОО ВО о В З и М КИ М и М М о о и ОО ня мах Пе ОО ОО ооо о в М я 4 ПН ОН о в 4 ПОВ В нн ша ІІ ЦІВ МОВО ко ОО я. В В и В Ва Ов о о М КОВО о о ок ОО. . . и :

Фіг. 8 (продовження) з кт Еноплівка ее - Ой -

о в. БИ Мі ї Е ї Ех Я Во х Є ї 4 А і За о я ї 1 Е я г: ї у а і де зві я У ї р й І ї АГ я я й З й ше же Е Кк я ї кити я Ех од я, Е 7 с яв ї ЙО нний ї п иа не ї ча и ї . ке ти ї Е пев й о Й Е БИ Бе ї 2 : ї

"х. Б г ме й Я а 5 В 7 вн