CN101606902A

CN101606902A - 具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂

Info

Publication number: CN101606902A
Application number: CNA2008100535627A
Authority: CN
Inventors: 沈丽琳; 候庆昌; 邵长风; 陈坚; 张颖; 刘苗苗; 张繁; 王江; 贺其刚; 李伟
Original assignee: BIRTH CONTROL INSTITUTE TIANJING CITY
Current assignee: BIRTH CONTROL INSTITUTE TIANJING CITY
Priority date: 2008-06-19
Filing date: 2008-06-19
Publication date: 2009-12-23

Abstract

本发明涉及一种具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂，属于避孕用具。本发明的凝胶剂是由杀精子剂、杀菌剂、基质、保湿剂、防腐剂及水组成，并通过以下步骤制得凝胶剂：将基质加入保湿剂中，边加入边搅拌使之分散均匀，再加入杀精子剂，搅拌均匀；取杀菌剂、防腐剂加入制备量的纯化水中搅拌成均匀溶液，以上两种溶液混合在一起，充分搅拌均匀后脱泡即制得。本发明为复方制剂，除有避孕作用外，还有广谱抗微生物作用，选用羟丙基甲基纤维素做凝胶剂，使药物与阴道粘膜有良好的生物相容性，具有粘附力强和粘附时间长，不易流失，保持有效时间长，毒性低、刺激性小等优点。

Description

具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂

技术领域

本发明涉及避孕用具及制备方法，具体是一种具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂。

背景技术

艾滋病在我国的流行已进入快速增长期，根据我国卫生部2002年报告全国艾滋病病毒感染者近100万，我国艾滋病、性病的感染人数正以每年30％的速度增长。在艾滋病病毒感染的女性中，绝大多数都是育龄妇女，通过性行为感染，她们被感染后还可引起母婴传播。为了减少非意愿妊娠和预防艾滋病等性传播疾病的传播，作为一种预防艾滋病的策略，世界卫生组织和联合国艾滋病规划署等国际组织已将由妇女主动使用的杀微生物避孕制剂作为优先发展项目。为了维护妇女的生殖健康，保护妇女的合法权益，研究一种由妇女主动使用和控制的，即能预防艾滋病、性病传播又能减少非意愿妊娠的外用杀微生物避孕制剂是非常必要的，这对减少非意愿妊娠和预防艾滋病、性病的传播具有双重意义。

现在此领域的研究非常活跃，国内长江生物药业有限公司研制的杀微生物避孕药-康乐宝杀菌膏是一种复方凝胶剂，获得卫生部的消字号产品。也有人将其称“液体避孕套”。

美国拉什-长老会-圣路加医学中心在中国申请的专利号为01809090.7的“捕获和灭活病原性微生物和精子的组合物和方法”的专利，提供了抗微生物和避孕组合物的方法，能防止和/或减少通过性活动传播的性传播疾病。和防止和/或减少怀孕危险，组合物含有①基质形成剂，②生物粘合剂，③缓冲剂，④可任选的湿润剂，⑤可任选的防腐剂，和⑥水；其中组合物适于涂在阴道内，在与精液接触后，形成半固体基质(从而捕获射精释放的微生物和精子)；其中组合物导致宫颈粘液硬化(从而降低精子进入的可能性)，并在阴道表面形成生物粘合层(从而防止或减少导致性传播疾病的微生物与阴道表面接触的危险)；组合物在男性射精释放的精液存在下，维持阴道酸性小于pH5；且其中组合物不会明显损伤阴道内的正常微生物平衡。抗微生物和避孕组合物还可以含有其它抗微生物剂和/或避孕药(如壬苯醇醚、辛苯聚醇、苯扎氯铵、磷酸化的橙皮甙、磺酸化的橙皮甙、聚苯乙烯磺酸酯、取代的苯磺酸甲醛共聚物、H₂SO₄改性的扁桃酸、聚维酮碘、伊曲康唑、酮康唑、甲硝唑、克霉唑、氟康唑、特拉康唑、咪康唑、替硝唑、伊康唑、氯霉素、制霉菌素、环吡司胺等)。该专利虽然可组合成众多配方，但并不是每个配方都能制备出可以应用的组合物。

发明内容

本发明为了解决现有技术中药物对阴道刺激大，配方原料多，制备方法复杂的问题而提供一种由女性自主使用既能减少非意愿妊娠又可降低HIV和其他性传播疾病发病率，避孕有效率高，预防生殖道感染效果好，工艺简单，使用方便，对阴道刺激性小的具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂。

本发明所涉及的具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂，其组分包括杀精子剂、杀菌剂、基质、保湿剂、防腐剂及水，并通过以下步骤制得凝胶剂：将基质加入保湿剂中，边加入边搅拌使之分散均匀，再加入杀精子剂，搅拌均匀；取杀菌剂、防腐剂加入制备量的纯化水中搅拌成均匀溶液，以上两种溶液混合在一起，充分搅拌均匀后脱泡即制得凝胶。

该凝胶剂原料重量百分比的配比如下：杀精子剂0.1～5、杀菌剂0.1～3、基质1～10、保湿剂1～50、防腐剂0.01～0.5，余量为纯化水。

该凝胶剂原料重量百分比的配比如下：杀精子剂2、杀菌剂1.8、基质5、保湿剂20、防腐剂0.15，余量为纯化水。

上述的杀精子剂选自壬苯醇醚-9和辛苯聚醇中的一种，杀菌剂选自聚甲酚磺醛、酮康唑、甲硝唑和替硝唑中任意一种或两种。基质选自羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚壳糖、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素中任意一种或两种，保湿剂选自丙二醇、甘油和聚乙二醇中任一种或两种。防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠和对羟基苯甲酸酯类中的一种或两种。

本发明的凝胶剂主要包括基质、杀菌剂、杀精子剂、保湿剂和防腐剂。

杀精子剂辛苯聚醇与常用的外用杀精子剂壬苯醇醚具有同样的杀精子效果，但是对阴道的刺激小，让使用者更容易接受，因此本发明杀菌剂采用辛苯聚醇。

聚甲酚磺醛是一种强酸，表面带有负电荷，它最大的优点是选择性作用于病变组织的同时，仍维持正常的阴道酸性环境，不利于各种病原微生物生长繁殖，而有利于乳酸杆菌的滋生繁殖，并保护正常的阴道鳞状上皮。聚甲酚磺醛具有广谱抗菌作用，包括革兰氏阳性菌、格兰氏阴性菌、真菌和某些病毒，其中，阴道加特纳均、厌氧菌滴虫和念珠菌对之尤为敏感。但阴道乳酸菌菌丛却基本不受影响，因此能保持阴道正常微生物的平衡。

能够用作凝胶基质的材料比较多，如卡波姆、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、聚壳糖、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等为几种常用作凝胶基质的高分子材料，但并不是每种材料都适合做本发明的凝胶基质，适合用于本发明的基质应该能在较低的pH值范围内保持性能的稳定，使药物与阴道粘膜有良好的生物相容性，同时还应具有黏附时间长，粘着力强，不易流失，保持有效时间长，毒性低，刺激性小的特点。本发明选择卡波姆、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素三种材料通过以下实验进行筛选，最终选择羟丙基甲基纤维素(HPMC)作为凝胶基质。

1.卡波姆基质凝胶剂

配方聚甲酚磺醛 1.8g

辛苯聚醇 2.0g

卡波姆934P 2.0g

甘油 10g

丙二醇 10g

三乙醇胺适量

纯化水适量

总重量 100g

制备步骤：以下各原料按配方量称取。

a.称取甘油、丙二醇倒入烧杯，加入卡波姆搅拌均匀；加纯化水60ml，再加入辛苯聚醇，继续搅拌均匀，滴加三乙醇胺使pH≈4.5，呈透明，无色凝胶。

b.在上述凝胶中加入聚甲酚磺醛，边加边搅拌，凝胶变的稀薄，呈红棕色液体，无法成形。用pH试纸测得pH值约为2。

结论：卡波姆不适合做含有上述主药成分的凝胶剂基质。

2.羧甲基纤维素钠(CMC-Na)基质凝胶剂

配方聚甲酚磺醛 1.8g

辛苯聚醇 2.0g

甘油 10g

丙二醇 10g

CMC-Na 2.5g

纯化水适量

总重量 100g

制备步骤：以下各原料按配方量称取。

a.称取甘油、丙二醇倒入烧杯，加入CMC-Na搅拌均匀，加入辛苯聚醇，继续搅拌均匀，制得混合物1。

b.称聚甲酚磺醛于烧杯中，加入制备量的纯化水，搅拌均匀，溶液为红棕色，制得溶液2。

c.将溶液2倒入混合物1中，边加入边搅拌，溶液逐渐变得粘稠，直至呈均匀状态。

3.不含药物的CMC-Na基质空白凝胶剂

配方甘油 10g

丙二醇 10g

CMC-Na 2.5g

纯化水适量

总重量 100g

制备步骤：以下各原料按配方量称取。

称取甘油、丙二醇倒入烧杯，加入CMC-Na搅拌均匀，加纯化水至总重量为100g，边加入边搅拌，直至液体呈半固体凝胶状态，无色不透明。

黏度测定

取样品100ml，放入烧杯中，以NDJ-85型数字粘度计进行测定，空白样品平均粘度为30.0Pa.S。

两种CMC-Na基质凝胶剂黏度比较

结论：加入药物后可使以CMC-Na为基质的凝胶剂粘度下降。

4.羟丙基甲基纤维素(HPMC)基质凝胶剂

配方聚甲酚磺醛 1.8g

辛苯聚醇 2.0g

甘油 10g

丙二醇 10g

HPMC 3.0g

纯化水适量

总重量 100g

制备步骤：以下各原料按配方量称取。

a.称取甘油、丙二醇倒入烧杯，加入HPMC搅拌均匀，加入辛苯聚醇，继续搅拌均匀，制得混合物1。

b.称取聚甲酚磺醛于烧杯，加入制备量的纯化水，搅拌均匀，溶液呈红棕色，制得溶液2。

c.将溶液2倒入混合物1中，边倒入边搅拌，溶液逐渐变粘稠，直至呈半固态状态，透明红棕色。

5.不含药物的HPMC基质空白凝胶剂

配方甘油 10g

丙二醇 10g

HPMC 3.0g

纯化水加至总重量 100g

制备步骤：同前不含药物的CMC-Na基质空白凝胶剂的制备方法。

黏度测定：方法同上。

粘度比较

结论：HPMC适于作上述主要成分的凝胶基质。

试验中对黏度和外观进行比较：

1.2、3号配方中以2.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)作凝胶基质制成的不含主药的凝胶剂与含主药成分的凝胶剂相比，动力黏度下降，由30～40Pa.S降至15～20Pa.S。制成的凝胶剂棕红色，不透明。

2.1号配方中以2％卡波姆934P作凝胶基质制成的凝胶剂，加入主药后，动力黏度急剧下降，溶液变稀薄。因为主药是酸性物质，卡波姆做凝胶基质受酸碱度影响很大，pH值过高或过低均影响剂型的形成。卡波姆形成的凝胶在pH 5～11范围内十分稳定，在pH 6～12时最为粘稠，当pH＜3或＞12时，粘度为1000mPa.S，pH为8时粘度增到50Pa.S。在可制成凝胶的pH范围内主药的棕红色变淡，影响含量。

3.羟丙基甲基纤维素对酸碱比较稳定，但如超出pH 2～11范围并同时受较高温度或存放较长时间，则会使黏度下降。以2.5％至3.2％羟丙基甲基纤维素(HPMC)为凝胶基质制成的凝胶剂黏度适中，动力黏度25-30Pa.S适宜阴道应用。制成的凝胶剂棕红色，透明。

本发明选用高分子材料羟丙基甲基纤维素做凝胶剂基质，其在水中溶解不受pH值影响，具有增稠能力，排盐性、pH稳定性、保水性、尺寸稳定性、及广泛的耐酶性、分散性和粘结性，使药物与阴道粘膜有良好的生物相容性，具有粘附力强和粘附时间长，不易流失，保持有效时间长，毒性低、刺激性小等优点，是一个有效的新的阴道用凝胶剂基质，具有良好的临床应用前景。

适合用于本发明的保湿剂有甘油、丙二醇、聚乙二醇等多元醇，毒性小，无刺激性，一定比例的丙二醇和水的混合溶剂能延缓许多药物的水解，增加稳定性。对药物在皮肤和粘膜的吸收有促进作用，本发明采用甘油、丙二醇作为保湿剂既可保湿又可增加凝胶的透明度。

本发明的制作方法简单，由于聚甲酚磺醛本身是酸性，所以没有必要再加酸性缓冲剂，再用碱调ph值，因此降低了成本，减少了工序。

本发明具有的优点和积极效果是

本发明为复方制剂，除有避孕作用外，还有广谱抗微生物作用，包括：病毒、细菌、霉菌和原虫。该凝胶剂可由妇女自主使用和控制，既有杀精避孕的作用又可降低HIV和其他性传播疾病发病率，从而在减少妇女非意愿妊娠和降低妇女HIV感染率两方面保护了妇女的生殖健康权利。与现有技术相比，本发明具有制剂工艺简单，使用更加方便，对阴道的刺激性小，舒适感强的优点。

具体实施方式

实施例1本发明凝胶剂的制备方法

原料：

羟丙基甲基纤维素、丙二醇、甘油、山梨酸钾均市售。聚甲酚磺醛：济南齐河合成精细化工有限公司提供，批号：050802；辛苯聚醇：西格玛奥德里奇(上海)贸易公司(ICEPL CA 630)，批号：075K0071；纯化水：自制。

配方

羟丙基甲基纤维素 3.0g

丙二醇 10g

甘油 10g

聚甲酚磺醛 1.8g

辛苯聚醇 2.0g

山梨酸钾 0.15g

纯化水适量

总量 100g

制备方法：

按配方量称取丙二醇、甘油，混合均匀后，边搅拌边加入羟丙基甲基纤维素使混合液分散均匀，再加入辛苯聚醇，搅拌均匀。分别将山梨酸钾和聚甲酚磺醛加入制备量的纯化水中搅拌成均匀溶液，将溶液倒入上述混合液中，充分搅拌均匀后脱泡即可。制备的凝胶剂为棕红色半透明的半固体。

下面通过毒理学、药理学的各项试验，进一步说明本发明凝胶剂的积极效果。

一.急性毒性试验(LD₅₀)

1.材料

1.1药物

本发明的凝胶剂，按实施例1制备；由天津市计划生育研究所提供。

1.2动物

昆明种健康小鼠，雌雄各半，体重在18g-22g之间，由天津市药物研究院提供，实验动物合格证为大小鼠实验动物、生产设施符合屏障级标准，准第012号。

2.方法

采用Bliss法测定能灭活微生物的避孕阴道凝胶剂的LD₅₀。动物购入后适应环境一周，先以少量小鼠做预试验，测其全死和全不死剂量。小鼠按体重随机分成5组，每组10只，雌雄各半。各剂量组间距为0.8，各组给药剂量分别为66mg/kg、82mg/kg、102mg/kg、128mg/kg和160mg/kg。按0.1ml/10g进行一次腹腔注射。给药后立即观察小鼠的反应，连续观察一周，每日记录动物体重变化、毒性反应情况和死亡动物分布。死亡动物及时进行尸检，记录病变情况，用计算机算出LD₅₀值。具体数据见表1。

表1能灭活微生物的避孕凝胶剂的LD₅₀实验数据

通过以上数据可得结论：本发明凝胶剂腹腔给药的LD₅₀为95.88mg/kg，可信范围为83.78-109.71mg/kg。小鼠腹腔注射给药量为人公斤体重的16.7倍时，仍可耐受。

二.对乳酸杆菌影响的试验

乳酸杆菌是女性阴道内正常菌丛中的优势菌，对维持阴道内菌群平衡起着重要作用。本发明的凝胶剂作为有杀微生物和避孕作用的阴道制剂，观察其对阴道乳酸杆菌的影响非常有意义。因此以嗜酸性乳酸杆菌为试验菌株，观察凝胶剂对培养的乳酸杆菌的影响，为进一步评价该凝胶制剂的安全性提供科学依据，

材料与方法

1.材料

实验菌种：嗜酸性乳酸杆菌(ATCC4356)：购于中国科学院微生物研究所菌种中心；

样品：凝胶剂：按实施例1制备；天津市计划生育研究所提供

阴性对照物：生理盐水；

阳性对照物：度米芬(溴化N，N-二甲基-N-(2-苯氧乙基)-1-十二烷铵一水合物)青阳药业有限公司；批号：031003；

乳酸细菌培养液(MRS)：按配方配制；

配方：

酪蛋白胨 10.0克牛肉浸取物 10.0克

酵母提取液 5.0克葡萄糖 20.0克

乙酸钠 5.0克柠檬酸三胺 2.0克

吐温80 1.0克磷酸氢二钾 2.0克

七水硫酸镁 0.2克四水硫酸锰 0.05克

蒸馏水 1000ml

配制方法：将上述配方量物质于三角烧瓶中，搅拌均匀后，用高压锅在121℃灭菌15min，pH 6.2～6.4，备用。

2.设备

厌养培养罐：bo3-A型2.4升北京东方白信生物技术有限公司；麦氏比浊管

3.方法

3.1.样品的配制：精密称取适量凝胶剂样品，用生理盐水稀释凝胶剂使其含聚甲酚磺醛分别为4.5，9，18，36(mg/ml)的溶液为样品，备用。精密称取适量度米芬，用生理盐水配制成浓度分别为4.5，9，18，36(mg/ml)的溶液为阳性对照备用。生理盐水为阴性对照。

3.2.菌液的培养：将MRS培养液121℃，15mi n灭菌。将乳酸杆菌接种于MRS培养液中，37℃厌氧培养48h，应用麦氏比浊管作标准，确定培养的乳酸杆菌浓度为1.5-3.0×10⁸时备用

3.3.实验方法：采用滤纸片琼脂扩散法进行试验。将MRS培养液与3％琼脂液按1∶1比例混合后，121℃20min灭菌。在超净工作台中完成下列操作：每个培养皿中加入20ml混合液为底层培养基，待凝固后，精取0.3ml新鲜增殖的乳酸杆菌，注满已铺好底层的培养皿中。取无菌并干燥的圆形滤纸片(直径为6mm)，每片上滴加一种浓度的溶液10u l，然后用镊子将滤纸片轻轻放入培养皿中，对照品的操作类同于样品，每个培养皿放3个样品滤纸片，1个阳性对照片和1个阴性对照片，共5片。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平皿表面，盖好平皿。然后将培养皿放入产生厌养混合气体的厌养罐中，置于37℃培养箱中厌养培养48小时后取出观察结果，用卡尺测量抑菌圈的直径。试验重复3次。结果见表2

表2样品对乳酸杆菌产生的抑菌圈直径(mm)(n＝3)

4.结果与讨论

本发明研制的凝胶剂为复方制剂，曾进行的家兔抗生育试验结果表明，当凝胶剂达到100％避孕效果时，凝胶剂中的辛苯聚醇浓度为14.4mg/ml，甲酚磺醛的浓度为13mg/ml。本试验结果为聚甲酚磺醛浓度在4.5～18mg/ml范围内对乳酸杆菌不产生抑菌圈。结论：本发明的阴道凝胶剂在抗生育剂量下对阴道乳酸杆菌的生长、繁殖为无抑制作用。

三.对阴道刺激的试验

1.材料

1.1药物

①本发明凝胶剂，按实施例1配方制备；天津市计划生育研究所提供。

②空白赋性剂为天津市计划生育研究所提供。

③乐乐迷凝胶(壬苯醇醚凝胶)购于中国医科大学制药有限公司。批号：050502。。

1.2动物

雌性大耳家白兔16只，体重2.5-3.0kg，购自天津市春乐养殖场，合格证号00666。

2.方法

将兔子随机分为四组，1.机械刺激组；2.空白赋形剂组；3.阳性药(乐乐醚凝胶)对照组；4.试验药组。每天定时用特制的消毒的玻璃套管将凝胶剂缓缓推入阴道深处，机械刺激组只用玻璃套管不加药，给药后家兔在特制的铁丝笼内呈仰卧位10分钟后放回，连续给药7天。在末次试验后24h内将家兔处死解剖，肉眼观察并记录阴道充血和炎症情况。将兔子阴道壁组织以10％甲醛液固定24小时后，将阴道壁分上中下三部分取材，经石蜡包埋切片，HE染色(用苏木精和伊红两种染料染色)，荧光显微镜下观察。

结果：阴道粘膜病理形态改变有四种表现：①血管充血②水肿③白细胞浸润④上皮溃疡，每个部分病变程度按4级评分。每项刺激程度按四级评分(从无病变至最重)。结果见表3。

表3阴道刺激试验各组评分表

评价：由本实验结果评分可见，本发明的凝胶剂对阴道刺激四个部分病变总分为4，根据标准0-8分为可接受范围，故本发明凝胶剂的阴道刺激试验为可接受范围。

四.抗生育和避孕作用试验

1.材料

1.1药物

①本发明的凝胶剂，按实施例1制备；由天津市计划生育研究所提供。

②乐乐迷凝胶(壬苯醇醚凝胶)购于中国医科大学制药有限公司，批号：050502。

1.2动物

大耳白家兔两性，购自天津市春乐养殖场，体重2.5-3.0kg。合格证号00666。

2.方法

大耳白家兔购入后适应环境1周，按体重随机分为5组，每组5只即空白对照组、阳性对照组、本发明凝胶剂高中低3个剂量组。空白对照组给予等量无药的凝胶，阳性对照组给于乐乐醚凝胶剂48mg/kg，本发明的凝胶剂高、中、低剂量组分别为本发明凝胶剂48mg/kg、24mg/kg、12mg/kg 3种剂量。为催家兔发情，每只雌兔发情交配前24小时肌注苯甲酸雌二醇0.1mg/只。给药时用自制的玻璃乳胶注射器套管将凝胶药液缓慢推入阴道深处，各组均在给药后10分钟按1∶2比例与有生育能力的雄兔进行交配，交配21天后解剖，记录卵巢排卵点，子宫着床点，活胎数，死胎数和未孕动物数并计算避孕率，试验结果用ins tat软件进行统计学处理。

结果与结论

1.本发明凝胶剂对家兔的抗生育作用

本发明的凝胶剂高、中、低3个剂量组卵巢排卵点分别为10.2±1.3，10.2±1.6和10.4±1.5。阳性对照组为10.4±1.1。空白对照组为10.4±2.1。统计结果表明各组家兔卵巢排卵功能正常且无组间差异，见表4。

表4能灭活微生物的避孕凝胶剂对家兔的抗生育的作用。

**与空白对照组相比P＜0.01；*与空白对照组相比P＜0.05

本发明的凝胶剂高剂量组和阳性对照组一样子宫着床点均为零，中、低剂量组分别为2.2±4.9和6.0±3.7，空白对照组为8.2±1.9。高剂量组与空白对照组相比有非常显著的差异(P＜0.01)，中剂量组与空白对照组相比只有显著的差异(P＜0.05)，低剂量组与空白对照组相比无显著的差异(P＞0.05)，见表2

本发明的凝胶剂高剂量组和阳性对照组一样均无死胎，中剂量组只有一只动物有活胎，活胎数为2.2±4.9，而低剂量组动物活胎数为6.0±3.7，空白对照组的活胎数为8.2±1.9。本发明的凝胶剂高、中、低3个剂量组与空白对照组相比统计学上分别为有非常显著的差异(P＜0.01)，有显著的差异(P＜0.05)和无显著的差异(P＞0.05)。实验各个组均未见死胎，见表2。

2.本发明凝胶剂对家兔的避孕作用

本发明的凝胶剂高、中、低3个剂量组家兔未孕数分别为5只、4只和1只。避孕率分别为100％、80％和20％。与空白对照组相比在统计学上分别为有非常显著的差异(P＜0.01)，有显著的差异(P＜0.05)和无显著的差异(P＞0.05)。见表5。

表5本发明凝胶剂对家兔的避孕作用。

**与空白对照组相比P＜0.01；*与空白对照组相比P＜0.05

结论：在试验剂量下(24-48mg/kg)本发明凝胶剂对家兔有明显的抗生育作用和避孕作用。与市售的乐乐醚胶避孕效果相同。

五.体外杀精的试验

为了观察能灭活微生物的避孕凝胶剂的杀精效果，我们做了体外杀精试验。

1.药品与仪器

1.1药品

本发明凝胶剂，按实施例1制备；由天津市计划生育研究所提供。

辛苯聚醇凝胶剂(实施例1配方中不加聚甲酚磺醛)为天津市计划生育研究所提供。

乐乐迷(壬苯醇醚凝胶剂)购于中国药科大学制药有限公司，批号：050502。。

精液：取自禁欲一周健康有生育能力的志愿者。

1.2仪器：OLYMPUS CH2显微镜、恒温箱、秒表等。

2.方法

采集禁欲一周的新鲜人精液，待其液化后按WHO指定的标准方法进行精子总数和活动度的测定，凡总数高于20×10⁶/ml，活动率大于80％者用于本试验。本试验采用改良Sander-Cramer法，将待测药物与精液按体积比5∶1混合，充分混匀5秒后，迅速取一滴混合液于载玻片上，在室温(25℃)用显微镜连续观察10个高倍视野，记录20秒内有无活动精子。有活动精子的为(+)，无活动精子的为(-)，计算最低杀精浓度。每次试验采用3个不同志愿者的精液标本，每个试验重复3次。以乐乐醚做阳性对照药。

3.结果与讨论

20秒内本发明凝胶剂最低杀精浓度均为0.5mg/ml，与阳性对照药乐乐醚相同，具体数据见表6

表6凝胶剂体外杀精的作用。

注：“-”为20秒内无活动精子。“+”为20秒内有活动精子

试验结果表明，辛苯聚醇凝胶剂与乐乐迷最低杀精浓度均为0.5mg/ml与本发明凝胶剂的杀精效果类同。聚甲酚磺醛不影响辛苯聚醇杀精作用。

六.杀菌作用试验

1、样品

名称：本发明凝胶剂按实施例1制备天津市计划生育研究所提供。

2、培养基及菌种

培养基：营养肉汤培养基(批号：060323)

营养琼脂培养基(批号：060908)

真菌培养基(批号：071017)

琼脂粉(批号：060903)均为北京三药科技开发公司生产

菌种：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

大肠埃希菌[CMCC(B)44103]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

均购自中国药品生物制品检定所

3、试验方法

3.1培养基的配制：取上述营养肉汤培养基4g加水至100ml为双料培养基，取上述营养肉汤培养基2g加水至100ml为单料培养基；取上述真菌培养基5.7g，加水至100ml为双料培养基，取上述真菌培养基2.85g，加水至100ml为单料培养基，121℃高压灭菌15分钟；取上述营养琼脂培养基6.8g加水至200ml，取上述真菌培养基5.7g及上述琼脂粉3.8g加水至200ml，121℃高压灭菌15分钟，以上各培养基放置约50℃时注入平皿，每个平皿约20ml，凝固后备用。

3.2菌悬液的制备：取上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的营养琼脂培养物1白金耳分别接种于15ml灭菌营养肉汤培养基中35℃培养24小时；取上述白色念珠菌的真菌琼脂培养基培养物1白金耳接种于15ml灭菌真菌培养基中25℃培养48小时作为原菌液，取各原菌液1ml分别至盛有9ml灭菌0.9％氯化钠溶液试管中作为10^-1菌液，等倍稀释至10^-6，含菌量为50～100cfu/ml，备用。

3.3样品处理：取凝胶剂2ml各3份，2份分别加至含有双料营养肉汤培养基2ml的灭菌管中，1份加至含有双料真菌培养基2ml的灭菌管中，混匀，为第一管，浓度为0.9％；取相应第一管溶液2ml分别至含有单料营养肉汤培养基2ml的灭菌管中及含有单料真菌培养基2ml的灭菌管中，混匀，为第二管，浓度为0.45％；同法依次倍比稀释至第11管，第3管至第11管的浓度分别为0.225％、0.1125％、0.05625％、0.02812％、0.01406％、0.00703％、0.00352％、0.00176％和0.00088％。营养肉汤培养基倍比系列管中的一组每管分别加入含菌量为10^-6稀释级金黄色葡萄球菌菌液0.1ml，另一组每管分别加入含菌量为10^-6稀释级大肠埃希菌菌液0.1ml，35℃培养24小时；真菌培养基倍比系列管中每管分别加入稀释至10^-6的白色念珠菌菌液0.1ml，25℃培养48小时。同时做阳性对照(第12管，培养基2ml中分别加入对照菌0.1ml)、阴性对照(第13管，培养基2ml)及空白凝胶对照(第14管，1ml空白凝胶和1ml双料培养基中加入对照菌0.1ml)。

4、试验结果

灭菌实验数据见表7

表7凝胶剂杀菌效果数据

注：-表示无菌生长；+表示有菌生长；*表示最低杀菌浓度；#表示最低抑菌浓度

将未见细菌生长的金黄色葡萄球菌管前5管，大肠埃希菌管前4管培养物各0.1ml分别加入营养琼脂平皿中，用灭菌棒涂抹均匀，35℃培养24小时；将未见细菌生长的白色念珠菌前3管培养物0.1ml分别加入真菌琼脂平皿中，用灭菌棒涂抹均匀，25℃培养48小时。平皿上的菌落数小于5个的最小稀释度的药物浓度为最低杀菌浓度(分别为金黄色葡萄球菌第5管，大肠埃希菌第3管和白色念珠菌第2管)，见表8

5、结论

本试验重复2次，结果相同。

表8最低杀菌浓度和最低抑菌浓度

空白凝胶对照对本试验无干扰。

七、杀微生物避孕凝胶剂体外杀滴虫试验(可简化)

1材料

虫株：阴道毛滴虫采集于天津市南开医院妇科

培养基：天津医科大学寄生虫学教研室配制

样品：①杀微生物避孕凝胶剂按实施例1制备

②溶液(不含凝胶基质)

③替硝唑注射液批号070731

2试验方法

2.1制备毛滴虫液：培养活跃的800～1000个虫体/0.1ml。

2.2试验药物配制：将试验药物分别按1∶1，1∶2，1∶4，1∶8稀释。

2.3按表格所列时间段分别取样，低倍镜下观察虫体活动情况，高倍镜下观察虫体形态变化。

3杀虫效果判定标准

①虫体活跃、形态良好(-)；②虫体微动、形态正常(±)；③虫体不活动、形态变圆(+)；④虫体完整、颗粒化(++)；⑤虫体裂解(+++)

4试验结果

4.1凝胶剂最小抑虫度1∶1 10分钟，

最小杀虫度1∶1 30分钟

4.2溶液最小抑虫度1∶8 10分钟

最小杀虫度1∶8 30分钟

试验结果表明，凝胶剂在设计给药剂量下，给药10min时能够满足杀灭滴虫的。

八、凝胶剂体外直接杀病毒作用

将不同稀释度的药物100μl与100μl HIV上清在EP管中混合，同时设置阳性药物次氯酸钠、阴性对照及阳性对照孔，室温下孵育0min、5min、10min、30min取出，吸1μl上述混合液到已加好4×104/孔的C8166细胞的96孔板中，37℃，5％CO2培养箱中培养三天倒置显微镜下(100×)计数合胞体个数，计算抑制率(％)。试验结果表明：凝胶剂在1％浓度时，10min和30min抑制率90％左右，表现出较强的直接杀病毒的作用。

九、体外抗淋病抗奈瑟氏菌和抗解脲支原体试验

试验结果表明，凝胶剂在设计给药剂量下，还有明显的抗淋病抗奈瑟氏菌和抗解脲支原体活性作用。

实施例2

原料

羧甲基纤维素、丙二醇、甘油、山梨酸钾均市售；聚甲酚磺醛：济南齐河合成精细化工有限公司提供，批号：050802；辛苯聚醇：西格玛奥德里奇：(上海)贸易公司(ICEPL CA 630)提供，批号：075K0071。纯化水：自制。

配方

羧甲基纤维素 3.0g

丙二醇 1.0g

甘油 1.0g

聚甲酚磺醛 1.8g

辛苯聚醇 2.0g

苯甲酸钠 0.15g

纯化水适量

总量 100g

制备方法同实施例1

Claims

1.一种具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂，其特征在于该凝胶剂的组分包括杀精子剂、杀菌剂、基质、保湿剂、防腐剂及水，并通过以下步骤制得凝胶剂：将基质加入保湿剂中，边加入边搅拌使之分散均匀，再加入杀精子剂，搅拌均匀；取杀菌剂、防腐剂加入制备量的纯化水中搅拌成均匀溶液，以上两种溶液混合在一起，充分搅拌均匀后脱泡即制得凝胶。

2.根据权利要求1所述的具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂，其特征在于该凝胶剂原料重量百分比的配比如下：杀精子剂0.1～5、杀菌剂0.1～3、基质1～10、保湿剂1～50、防腐剂0.01～0.5，余量为纯化水。

3.根据权利要求1所述的具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂，其特征在于该凝胶剂原料重量百分比的配比如下：杀精子剂2、杀菌剂1.8、基质5、保湿剂20、防腐剂0.15，余量为纯化水。

4.根据权利要求1所述的具有杀微生物作用的避孕阴道凝胶剂，其特征在于杀精子剂选自壬苯醇醚和辛苯聚醇中的一种，杀菌剂选自聚甲酚磺醛、酮康唑、甲硝唑和替硝唑中任意一种或两种。基质选自羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚壳糖、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素中任意一种或两种，保湿剂选自丙二醇、甘油和聚乙二醇中任一种或两种。防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠和对羟基苯甲酸酯类中任意一种或两种。