TW576747B

TW576747B - Medicaments comprising parathyroid hormones for reducing risk of both vertebral and non-vertebral bone fracture in postmenopausal women at risk or having osteoporosis

Info

Publication number: TW576747B
Application number: TW088114185A
Authority: TW
Inventors: Janet M Hock
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1998-08-19
Filing date: 1999-10-26
Publication date: 2004-02-21
Also published as: KR100454207B1; HK1212602A1; DE15152726T1; NO20072983L; CZ20004134A3; CA2325371C; HK1030545A1; PE20001089A1; KR20010072763A; EP1059933B1; AU746277B2; CO5130020A1; PT2266598T; EA200001015A1; EA003362B1; BR9909445A; DK2907522T1; WO2000010596A1; HUP0101594A3; TR200003455T2

Description

576747 _案號88114185 年C月以曰修正_ 五、發明說明（1) 發明領域本發明係關於藉投藥副甲狀腺激素，增加骨絡换度及/ 或硬度之方法。較特別地，本發明係關於在可能或實際外傷位置（如人之腰骨或脊椎處於骨質疏鬆症之風險或罹患骨質疏鬆症）增加骨骼翁度或硬度之方法。發明背景如雌激素，雙膦酸鹽，氟化物或降鈣素等既存作用物可預防骨質流失且誘使骨質實3 - 5 %增加，其係再充填重塑之空間，但淨骨質形成並未被顯著的刺激。經由抑制轉換率之抑制保留骨質，對於已有大量骨質流失之病人而言，並不足以保護彼等免於骨折之危險性。對已有骨質疏鬆症之病人而言，經由骨質形成增加骨強度之促蛋白合成劑，可對骨折提供較佳的保護作用。副甲狀腺激素（PTH)是一種由哺乳動物副甲狀腺所分泌的8 4個胺基酸之產物，其經由在各種組織上的作用，包括在骨絡，可控制血清中之i弓水平。牛及人類PTH的N -末端 34胺基酸（PTH (1-34))與全長激素確實在生物上是相當的。PTH的其他胺基末端片段（如包括卜31及卜38)或PTHrP (PTH-相關之肽/蛋白質）或任一者或二者之類似物，可活化PTH/PTHrP受體（PTH1受體），在骨質量上具類似的生物作用，然此作用的幅度可有異。以各種型式的PTH在人類中研究，已證明其在骨骼上有合成蛋白的作用，且在其治療骨質疏鬆症及相關的骨質失調症之用法上有立即重大的興趣。PTH在骨骼上的重大合成蛋白作用，包括刺激骨質形成造成骨實質及/或強度上

O:\60\60045-910417.ptc 第4頁 576747 _案號88114185 <?ί年孕月Λ)日修正_ 五、發明說明（2) 的淨獲重，已在許多動物模式及人體中有所證明。一般相信，對人類及動物模式中投予ΡΤΗ，對於皮質骨骼有負面作用。事實上在副甲狀腺機能亢進中發生的内源 Ρ 丁 Η自然生成地增加情形，可造成皮質骨絡的薄化，並伴隨結構性及小梁骨骼質量的增加。過去的研究建議，當 Haversian皮質骨骼（見於人類及較高等哺乳動物）在ΡΤΗ影響下重塑，此中骨質將有再分佈情況，如此皮質骨骼質量及強度減弱，而小梁骨骼在質量及強度上均有所增加。例如，在投予PTH之已發表的臨床研究中，以外源PTH治療後皮質骨骼質量會減少，而這些發現生成一些相關問題，如 ΡΤΓΗ之治療造成皮質骨骼質及強度之減少。由此研究生成的一個問題有，由於皮質骨骼之流失此中總骨架骨質將有所流失。在骨質疏鬆症中，此點具高度臨床相關性，因為與皮質骨骼比較下，小梁骨骼有較多的流失，表示機械上之填加大多是由其餘的皮質骨骼質所帶來的。皮質骨骼質的不斷流失可增加骨折的危險性。因此，骨質疏鬆症治療劑可維持或增加個體殘留的皮質骨骼質是很重要的。在非人類動物中，如狗，鼬鼠，山羊及猴子，利用 Haversian重塑研究PTH對皮質骨骼之作用；但常因樣品規模以致無可信賴的統計分析結果。由P T Η治療對此動物皮質骨骼機械特性所誘生之改變所造成之衝擊仍是未知的。在齧齒類已發表之研究中已顯示，在ΡΤΗ之投予中皮質骨骼質量有所增加，但取消Ρ Τ Η後此優勢會喪失。然而，齧齒類皮質骨骼與Haversian皮質骨骼有顯著不同的結構，且重塑是經由表面同位格之形成及再吸收，而非經由骨單

O:\60\60045-9104i7.ptc 第5頁 576747 _案號88114185 今/年么月/7曰修正_ 五、發明說明（3) 位之皮質内重塑。再者，在相當短的齧齒類骨骼上進行生物機械測試之技術性限制，於如PT Η —類之作用物因改變骨骼之幾何學使其增厚時，會得到測量上之加工結果。此加工結果使得對這些人類或其他動物之皮質骨骼反應插補，而使骨單位重塑不被信賴。因此，對於動物，如人類，關於進行H a ν e r s i a η重塑之既存數據顯示，Ρ Τ Η對於皮質骨骼有負面的衝擊，造成骨質經由皮質骨骼之耗盡而有淨的流失。因此關於Ρ Τ Η作用有一個較受歡迎的想法，即病人需同時或接續以抗再吸收劑之治療，以將Ρ Τ Η誘生之骨質流失減至最低程度。事實上，此模式是婦女許多臨床研究之基礎所在。例如，有三種臨床研究是在停經婦女中使用 Ρ 丁 Η，並伴隨降血鈣素或雌激素之同時治療，或在缺乏 G n R Η激動劑-S y n a r e 1之停經前婦女中用於子宮内膜異位症。雌激素及PTH對皮質骨骼轉換率之相反作用，使其在有此二作用之組合治療中難以遵行Ρ Τ Η之作用。在呈現Haversian重塑之人類及其他動物中，對於應用 PTH以增加骨骼強度及硬度仍有需要。再者，也需有可增加皮質骨骼品質及含量之方法。發明要點本發明是有關投予副甲狀腺激素以增加骨骼，較好是皮質骨骼知度及/或硬度之方法。較特別地，本發明是有關增加潛在的或確實創傷位置骨骼桊度或硬度之方法。骨骼度及/或硬度之增加可由精藝者已知之許多方式予以顯明，如增加之骨礦物質密度，增加之骨礦物質含量，對失

O:\60\60045-9l0417.ptc 第6頁 576747 案號 88114185 五、發明說明（4) 敗之防禦增加等。此方法可在潛在創傷位置處增加勒性或硬度，而骨質疏鬆症個體之腰骨或脊柱，或有不正常低之骨質量或不佳的骨結構之另外部位。此方法也可增加確實創傷位置處之篆性或硬度，如骨折，如在腰骨或脊椎。用於本發明之較佳個體為有骨質疏鬆症或具高危險群之婦女或男性，較好是停經後之婦女，且和同時使用之激素補充療法（HRT )，雌激素或相當的療法’或抗再吸收療法是無關的。副曱狀腺激素，如重組體人類副甲狀腺激素N -末端胺基酸1-34，可週期地或間歇地投藥。再者，依據本發明方法，骨絡象度及/或硬度之增加可持續數個重塑週期，或達數年，即於最後一次投予副甲狀腺激素後算起。附圖說明圖1A及顯示在大腿骨中板（皮質骨骼）（A)及近端股骨 (鬆質骨+皮質骨骼）（B)中之BMD(骨礦物質密度）及BMC(骨礦物質含量），在以p τ H處理動物中此二含量均較對照組顯著為南° 圖2A至2D顯示在大腿骨中板皮質骨骼中，PTH對於機械強度及慣性之橫切面力矩（cross sectional moment of inertia)(CSMI)之作用。圖3說明對照組及處理組中骨礦物質含量DXA偵測之變化百分率。圖4A-C說明針對骨面積（A)，骨礦物質含量（B)及骨礦物質密度（C )’腰椎2 - 4中對照組及處理組脊椎D X A偵測之變化百分率。

Q:\60\60045-910417.ptc 第7頁 576747 _案號88114185 9/年t月0日修正_ 五、發明說明（5) 圖5 A及5 B說明以副甲狀腺激素處理之靈長類腰椎中骨質量（A )及骨強度（B )之增加。圖6 A及6 B說明以副曱狀腺激素處理之靈長類中，股骨頸強度（A)及肱骨中骨幹（B)之固定強度之增加。圖7說明中板肱骨骨内膜及骨周膜表面骨形成率之活化。圖8說明與對照組比較下，由於P T Η處理在腰椎骨骨骼聲波密度移動之柱形圖分析。可注意到在取消ΡΤΗ處理後，皮質骨骼區間之密度會增加。詳細說明本發明是有關投予副甲狀腺激素至個體，以增加骨骼韵性及/或硬度之方法。此方法可用於在潛在創傷或確實創傷部位以增加勒性及/或硬度。創傷通常包括骨折，外科創傷，關節替補，矯形步驟等。增加的骨择性及/或硬度通常包括皮質骨骼增加的礦物質密度，增加的骨強度，增加的負載抗性等。如此中所用的，最終力量係指骨路檢品对受的最大力量；硬度指負載-變形曲線線性部份之斜率；且對失敗之防禦力（w 〇 r k t 〇 f a i 1 u r e )係指負載-變形曲線下在失敗前的區域。此中各自均可以骨骼研究技藝中之標準方法偵測及估計。這些變數是依據内在物質特性及幾何學之結構特性，且可如上述地予以決定：Turner CH， Burr DB 1993 M Basic biomechanical measurements of bone: a tutorial. M Bone 14:595-608，此已列為本案參考，最終力量，硬度及對失敗之防禦力均可常規化之，以得到内在

Q:\60\60045-910417.ptc 第8頁 576747 修正案號 88Π4185 五、發明說明（6) 的物質特性，如最終壓力，彈性模數，及乘性，其和大小及形狀無關。如此中所用的，最後壓力指檢品可耐受的最大壓力；彈性模數指物質内在的硬度；且敕性指每單位體積對骨折的抗性。這些可以技藝中已知的方法決定。。如此中所指之股骨強度可在股骨頸或中板上偵測，利用在後一位置上之三點或四點變曲法進行。骨創傷本發明方法對於可能罹患或已罹患一種以上骨骼創傷者有益。此方法有益於哺乳動物個體，特別是人類。人類由於意外，醫學介入，疾病或失調症等可遭受各樣骨絡創傷中任一者。在年輕人中，骨骼創傷大多可歸因於骨折，修補骨折時之醫學介入，或如經甲運動對受損關節或結締組織之修復。其他型式之骨骼創傷型式，如由於骨質疏鬆症，髖部替補，或與其他全身性狀況之治療有關之二次狀況（糖皮質激素骨質疏鬆症，灼傷或器官移植）所致者最常見於老年人。個體則包括人類，較好是婦女，且有骨質疏鬆症之危險性或已罹患此疾者。骨質疏鬆症之危險因子是技藝中已知的，包括男性及女性之生殖腺官能不足狀況，無關於年齡，可誘生生殖腺官能不足之狀況，疾病或藥物，與骨質疏鬆症有關之營養因素（常見的是低鈣或維生素D )，抽煙，酒精，與骨質流失有關之藥物（如糖皮質激素，曱狀腺素，肝素，經，抗驚厥劑等），視力喪失以致易跌倒，太空旅行，固定不動，長期住院或臥床及其他與骨質疏鬆症危險性增加有關聯的全身性疾病。骨質疏鬆存在之徵候

O:\60\60045-910417.ptc 第9頁 576747 _案號88114185 7/年么月/7}曰修正_ 五、發明說明（7) 為技藝中已知的，且包括脊椎壓縮骨折，低骨質（通常低於平均年輕正常值至少一個標準偏差）及/或無外傷的骨折至少一者之放射學證據。骨質疏鬆症，可導致如髖部骨折，一個以上椎骨骨折，前臂遠端骨折，肱骨近端骨折，或綜合性骨折。本發明方法可用來減少此類骨折之危險性或可用於治療此骨折。經由增加骨骼強度及/或硬度，如髖部、椎骨或二者，有助減低骨折的危險性且有助骨折的癒合。骨質疏鬆症高危險群的典型婦女是停經後的婦女，生殖腺官能不足之停經前婦女。較佳的個體是停經後婦女，且和同時的激素替補治療（H R T )，雌激素或相當之治療，或抗再吸收療法無關。本發明方法可使骨質疏鬆症任何階段下之個體均受惠，但尤指早期及末期階段者。本發明提出對正罹患骨質疏鬆症或有此疾之高危險群之個體，可有效預防或減低骨折發生率之方法。例如，本發明可減少有多發性骨幹骨折病人骨折的數目；可治療低骨質之病人或先前骨折而有進一步多發性骨幹骨折危險性之病人，如椎骨骨質疏鬆之病人可快速進展以減低此骨折之發生率；減低骨幹骨折高危險群病人骨折的嚴重性；減少有骨幹骨折高危險群病人之非脊椎骨折；及/或改善骨骼之品質。其他個體也可能是骨創傷高危險群或正罹患此疾，且可由本發明方法中受惠。例如，具上述一種以上骨折高危險群之各種個體，可預期手術造成骨骼創傷，或可進行矯正手術此中處理有不正常低骨質或不佳骨結構部位之骨骼。

O:\60\60045-9l0417.ptc 第10頁 576747 案號 88Π4185 曰修正五、發明說明（8) 例如，手術後功能之恢復，如關支持可因本發明方法而改善。本步驟中恢復，其係在不正常骨質此步驟包括骨絡之手術分離包括骨結構之流失需以體白骨生成及構築。可實行本發明的其他適合能低下或駝背之苦者，正遭受和進行所改之或所相關之創傷者。骨骼性及硬度本發明方法可減低創傷之危險性，硬度或二者以助自創傷中恢性或硬度得自皮質，小梁及鬆質明方法可提出骨骼势性，硬度，正常族群之範圍内或之上。較好平較由於創傷或有創傷危險性所之對照族群比較下，增加之療？性折之危險性或可能性。骨絡的某些特性當增加時，可或硬度。此種特性包括骨礦物質量（BMC)，活化頻率或骨形成率小梁及其他結締性，周膜及内膜橫切面骨面積及骨質量，對負載禦力。這些特性一者以上之增加某些骨骼特性，如骨髓質空間節替補（如膝或髖）或脊之發明方法也有助於自矯正或不佳骨骼結構處操作，骨切開術，關節替補其中避免彌補物偏差而予以再的個體包括受副曱狀腺機副甲狀腺機能低下或駝背性，或經由增加骨骼枭復。一般而言，骨骼之勒骨骼之質量及強度。本發質量及/或強度之水平在本發明所提供之增加之水致之水平還高。此未處理、硬度或二者較可降低骨提供增加之骨骼歆性及/ 密度（BMD)，骨礦物質含小梁數目，小梁厚度，骨之形成，皮質孔隙度，之抗性及/或對失敗之防是本發明方法較佳之結及彈性模數，當減低時可

O:\60\60045-910417.ptc 第11頁 576747 _案號88114185 弓/年在月Θ曰修正_ 五、發明說明（9) 增加骨骼之染性及/或硬度。這些特性一者以上之減少可為本發明方法較佳之結果。本發明方法可有效地用於增加許多骨骼中任一者之势性及/或硬度。例如，本發明可增加骨骼勒性及/或硬度者包括髖骨，如腸骨，腳骨如股骨，脊柱之骨如椎管，或手臂之骨如遠端前臂骨或近端肱骨。嚷性及/或硬度上此種增加可在骨骼全部中得知，或局限在骨骼某些部位上。例如，經由增加股骨頸或股骨粗隆之象性及/或硬度，可增加股骨之兔性及/或硬度。髖部之翁性及/或硬度則可由增加髂或髂脊而增加。椎管翁性及/或硬度可由增加莖，板或體之勒性及/或硬度而增加。有益的，在脊柱某些部位，作用是在椎管上，如頸椎，腰椎，，氐椎及/或尾椎上。較好，作用是在一個以上之中胸椎及/或上腰椎中。歡性及/或硬度之增加，可見於各型骨骼，或主要在某一型骨骼上。骨骼型式包括海綿（鬆質，小梁，或成層）骨及緊密的（皮質或稠密）骨及骨折骨痂。本發明方法經由在鬆質及皮質骨骼，或在單獨的皮質骨骼上之作用，而可差別地增加f?性及/或硬度。小梁骨，是結締組織所黏附之骨骼，也可以本發明方法予以動性化及/或硬化。例如，可在叙帶、腱之黏附位置處，及/或在肌肉黏附處提供額外的择I性。副甲狀腺激素在充作活性組份方面，本發明組合物或溶液可納入全長的，84個胺基酸的副甲狀腺激素，特別是人類型式，hPTH (1-84)，或可得自重組體，肽合成或自人類流體中萃取。

O:\60\60045-910417.ptc 第12頁 576747 案號 88114185 年ά月ΐΊ曰修正五、發明說明（10) 如見於美國專利案No. 5,208,041 ，已列中此中參考。 hPTH (1-84)之胺基酸序列述於 Kimura et al.於 Biochem Biophys· Res. Comm., 114(2):493 o 組合物或溶液中充作活性組份者也可納入人類PTH之片段或片段變型，或具有人類PT Η活性但源自大鼠、豬或牛 Ρ Τ Η，其活性可在K i m m e 1 e t a 1所報告之骨質疏鬆症切除卵巢之大鼠模式中決定，Endocrinology, 1 9 9 3， 32(4): 1 5 7 7。所納入之副曱狀腺激素片段至少要有N -末端殘基的前2 8 個，如PM(1-28)，PTH(：l - 31)，PTHU-34)，PTH(卜 37)， PTH(1 - 38)及PTH(1-41)。另外在PTH變型中可納入1至5個胺基酸置換，以改進PTH穩定性及半衰期，如以白胺酸或其他可改善PTH穩定性抗氧化之疏水性胺基酸替補8及/或 1 8位置處之曱硫胺酸，及以對胰蛋白酶不敏感之胺基酸，如組胺酸或其他可改善PTH穩定性抗蛋白酶之胺基酸替補 25-27區域之胺基酸。PTH其他適合的型式包括PTHrP， PTHrP(l-34)，PTHrP(l-36)及 PTH 類似物或可活化ΡΤΗ1 受體之PTHrP。這些PTH型式包括在"副甲狀腺激素"一詞中，如此中所用的。激素可以已知之重組體或合成方法獲得，如述於U.S· Pat. 4,086,196及5，556,940，已列為此中參考。較佳的激素是人類ΡΤΗ(1-34)，也知為teriparatide。可用於本發明之人類PTHU-34)穩定溶液，述於U.S. Pat. Application Serial No. 60/069,075 ，已列為此中參考。可用於本發明中之人類PTH(1-34)結晶型，述於U.S.

0:\60\60045-9l0417.ptc 第13頁 576747 _案號88114185 q丨年么月Π曰修正_ 五、發明說明（11)

Pat. Application Serial No. 60/069，875 ，已列為此中參考。投予副曱狀腺激素副甲狀腺激素通常以腸外方式投予，較好經由皮下注射，利用技藝中熟知之方法及調和物。可有益地應用於本發明中之人類ΡΊΓΗ( 1 - 34)穩定調和物，述於U. S.專利案系列Ν 〇. 6 0 / 0 6 9，0 7 5，已列為本案參考。本專利案也描述可用於副甲狀腺激素貯存及投予用的其他許多調和物。副甲狀腺激素的穩定化溶液可包括穩定劑，緩衝劑，保藏劑等。可納入溶液或組合物中之穩定化作用物包括多元醇，其包括糖類，較好是單醣或雙醣，如葡萄糖，海藻糖，糖或蔗糖；糖醇如甘油或丙二醇或其混合物。較佳之多元醇是甘露醇或丙二醇。多元醇濃度範圍由約1至約20 wt-%，較好是總溶液的約3至1 0 w t - %。可應用於本發明溶液或組合物中之緩衝劑可為任何的酸或鹽組合，係藥學上可接受的，且可維持水溶液之pH值在 3 - 7範圍，較好3 - 6。有用的緩衝溶液系統包括如：乙酸鹽，酒石酸鹽或檸檬酸鹽來源。較佳的緩衝溶液系統為醋酸鹽或酒石酸鹽來源，最佳的是醋酸鹽來源。緩衝溶液之濃度可在約2 mM至約5 0 0 mM範圍，較好約2 ιηΜ至100 mM。本發明穩定化溶液或組合物可包括腸外可接受之保藏劑。此保藏劑包括如··甲盼，〒醇，盼，氣〒烧銨，氣T 乙氧銨，氣丁醇，苯基乙醇，對位羥胺基苯曱酸曱酯，對羥胺基苯曱酸丙酯，硫柳汞及苯基汞硝酸鹽及醋酸鹽。較

O:\60\60045-9104l7.ptc 第14頁 576747 案號 88114185_今7年4 月/Q曰_修正_ 五、發明説明（12) 佳的保滅劑疋間位—甲紛或卞醇·，最好是間位-甲盼。所應用之保藏劑含量在由0 _ 1至約2 w t - %，較好約〇 . 3至約1 . 0 w t - %之總溶液。因此，經穩定化之ter i para t i de溶液可包括甘露醇，乙酸鹽及間位-甲酚，在5 °C下之貯架期約1 5個月以上。副甲狀腺激素組合物若欲求時，可呈粉末型式，含有2 % 以下按重計之水，其由無菌，水性激素溶液冷凍乾燥而成，且此溶液由所選定之副甲狀腺激素，緩衝劑及穩定劑混合而製成。當製備冷；東乾综粉末時，可充作緩衝劑之尤其有用者疋酒石酸鹽來源。特別有用的穩定劑包括甘胺酸，蔗糖，海藻糖及甜菜糖。此外，副及賦形劑調中確認之藥 Pharmaceut Publishing 肺，口，鼻副甲狀腺種以上個體提供在皮質劑量通常大可大至約1 0 性或硬度，個體需額外之替補治療甲狀腺激素和，以穩定用載劑及其 i ca1 Sc i en Co . , East ，或採柱劑激素調和或骨骼之度骨骼結構，於約5微克/ 至約4 0微克尤其指皮質或極高劑量。副甲狀腺可與技藝中所應用之典型緩衝溶液及溶解供腸外投藥之蛋白質。技藝調和物述於Mar tin, "Remington, s ces，” 15th Ed. ; Mack 〇n U 9 7 5 )。副甲狀腺也可經由或經口調和物遞送。可供投予之劑量係足以有效增加一 ί〆旦或/更度。較好，此有效劑量可 % I 或強度上有所改善。有效公、天，然而特別在人類，劑量 /叹而2 ’或大至可有效地增加ft 月月/ 1 。有副甲狀腺機能低下之二甲=腺激此個體也需激素月匕_於替補療法中所需之劑量

576747 _案號88114185 彳/年彳月广？曰修正_ 五、發明說明（13) 是技藝中已知的。激素的投予可以是有規律的（如每天或每週一次以上），間歇地（如在一天或一週内不規律投予），或循環的（如一天或週之期間規律給藥，繼以一段不投藥期）。較好PT Η每天投予一次歷1 - 7天，在骨質疏鬆症中範圍可由3個月多達至3年。典型而言，副甲狀腺激素投藥之益處可持續至投藥期後。數月份投藥之益處可持續多至一年或二年以上，但未有額外的投藥。副甲狀腺激素調和物之用法本發明也包括一種套組，其中含有本發明之醫藥組合物及本發明方法之使用方法。套組中可含有小瓶，其中是本發明之調和物及適合的載劑，或乾燥的或呈液體型式。套組進一步包括在小瓶上標幟型式之指示說明及/或包含在盒子内呈插入物型式之說明書，其中小瓶是包裝的，可供使用及投予本化合物。指示說明也可以印在包裝小瓶之盒子上。指示說明含有如有效劑量及投藥資料等資訊，可供此領域工作者投予藥物之用。預期此領域中之工作者包括任何醫師，護士或可能投予藥物之技術人員。本發明也是有關一種醫藥組合物，其中包括有一種以上副曱狀腺激素之調和物，如人類ΡΤΗ( 1-84)或人類ΡΤΗ (1 - 3 4 )，而且其係適於腸外投藥。依據本發明，一種以上副甲狀腺激素之調和物，如人類ΡΤΗ( 1 -84)或人類ΡΤΗ (1 - 34)可用於製成組合物或藥物適於腸外投藥。本發明也是有關製造組合物之方法，包括一種以上副甲狀腺激素之調和物，如人類PTH(：l-84)或人類ΡΤΗ(1-34)，呈適於腸外

Q:\60\60045-910417.ptc 第16頁 576747 __案號88114185 兮丨年必月/7曰修正__ 五、發明說明（14) 投藥之型式。例如，可以數種方式製造液體或固體調和物，利用傳統的技術進行。液體調和物之製備可將一種以上副甲狀腺激素，如人類PTHU-84)或人類PTH(1-34)溶於適合的溶劑中，如水，於適合的p Η下，且包括緩衝溶液或其他賦形劑，如此形成上述穩定化溶液之一。以下實例可說明本發明，且不欲予以限制。實例實例1一投予rhPTH (卜34)至兔子後骨強度及密度之增強實驗步驟雌性完壁的New Zealand白色兔子（HRP Inc· Denver, Pa·)，是經由皮質内重塑可形成骨質之最小型動物之一，約9個月大且重3 · 2 5 - 3 · 7 5公斤，以平均體重分成3組各6隻動物。二個實驗組接受1 〇或4 0微克/毫升/公斤/天劑量之生合成的PT Η (1 - 3 4 )。對照組給予1 . 0毫升/公斤/天之含有 2°/〇熱去活兔子血清之酸化的〇. 9Μ食鹽水。ΡΤΗ(1-34)或溶媒以每天一次皮下注射，一週5天共打1 4 0天。兔子給予含有0.5°/。Ca及0.41 % Ρ之兔子用實驗室口糧，並自由給水。劑量的選擇基礎在於一系列的初步研究，結果顯示（1) 經過1 00微克/公斤PTH( 1-34)單一劑注射，血鈣增加，而 2 4小時後再落回至基線，而在5 0微克/公斤單一劑量後，血鈣在24小時内回至基線，（2) 20微克/公斤PTH(卜34)之重覆注射可暫時提升血鈣，而在6 - 2 4小時内恢復至基線值，及（3) S 5微克/公斤之PTH (卜34)不會改變骨表面之組織形態計量。一組雙重茜素標幟（Sigma, St· Louis)以20毫克/公斤

O:\60\60045-9l04l7.ptc 第17頁 576747 修正_ 案號 88114185 組雙重^弓黃、綠素標幟毫克/公斤，s · c ·給五、發明說明（15) 之量，在55及63天時i.m.給予，而〆 (Sigma, St· Louis)在15及7天時以加旦/么 u 予，之後再犧牲0兔子以C02及任思么序 ^ A , p ^ . , 氣1 ϋ..注入戍巴比女注射後約3 - 6小時，經心臟穿刺採血冉1 · ρ 1 ΠΛ ^ ^ -售股骨，腰椎鈉（100毫克/公斤）殺死之。右肱骨’一 (L3-L5)及右脛骨取出。血液化學 · 以電腦化多槽式血清分析偵測血清中之約’碟酸鹽’驗性磷酸酶，肌酸酐及尿氮含量。組織形態計量在脛骨中板之皮質骨骼及L 3之鬆質骨上進行組織形態計量。犧牲動物之後，自各動物中取出這些骨胳.，並在10% 中性緩衝之福馬林中固定2 4小時。組織在乙醇之階式糸列中脫水（7 0 - 1 0 0 %，每級換2次，各4小時，並於真空下）。檢品再置二甲苯中，並在真空下以甲基異丁烯酸酯浸潤，於2小時/步驟，且在Shandon Hypercenter自動處理器 (Shandon Lipshaw, Pittsburgh, PA)中經歷24 小時浸潤。檢品包埋在有0 . 2 %啟動劑之2 % D D K -塑形内（D e 1 a w a r e Diamond Knives, Wilmington, DE)。脛骨之橫切面利用鑽石線鑛切成80 微米（Delaware Diamond Knives, Inc. DE)再以Goldner’s三色素染色。處理約80微米厚之未染色橫切面，進行螢光色標幟之動力學組織形態學計量。L 3之箭頭形切面在Reichert - Jung 2050切片機（Magee Scientific Inc·, Dexter, MI)上切成5 微米，並以 McNeal’ s四色素染色，或保留不染色以行動力學組織形態

Q:\60\60045-910417.ptc 第18頁 576747 _案號88114185 fl年ά月ίΊβ 修正_ 五、發明說明（16) 學計量之用。組織形態計量係以Nikon螢光顯微鏡（Opt i phot, Nikon, Tokyo, Japan)及半自動化數據系統（BioQuant IV，R&M Biometrics, Nashville, TN)在150x 放大倍率下進行。在脛骨之半骨幹整個橫切面上偵測於周膜，内膜及皮質内封皮上骨之形成及再吸收。鬆質骨之偵測則在腰椎中央6毫米2區域内，及周圍皮質殼邊緣0.5毫米處進行。命名依 ASBMR組織形態計量命名協會為準（Parfitt AM, Drezner MK, Florieux FH, Kanis JA, Malluche H, Meunier PJ, Ott SM, Recker RR 1987 MBone histomorphoraetry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Hi stomorphometry Nomenclature Committee", J· Bone Miner. Res. 2: 5 9 5 -6 1 0 )動力學變數依據鈣黃綠素標幟偵測。骨質量之偵測股骨之中板及第四腰椎於5 0 %乙醇/食鹽水中，其橫切面以定量電腦斷層攝影（QCT或pQCT)掃描，應用9 6 0A pQCT，且以 Dichte 軟體 5.1 版本分析（Norland/Stratec, Ft. A t k i n s ο η，W I )。偵測完全組織變數，包括容積的骨骼礦物質密度（vBMD，毫克/公分3)，橫切面積（X 一面積，毫米2) 及骨礦物質含量（BMC，毫克），利用148 x148 x1200微米之聲響尺寸。容積之估計可由X-面積乘以1·2毫米之切片厚度。切下之股骨整個股骨頸浸於5 0 %乙醇/食鹽水中，並以周邊二元能量吸收計量法掃描（p D Ε X A，

Norland/Stratec)。特定之，利用〇·5χΐ·〇毫米之掃描步

O:\60\60045-910417.ptc 第19頁 576747 _案號 8811418j_年 > 月，9 曰__ 五、發明說明（17) 驟及0· 04閥值’偵測表觀的骨礦物質密度（aBMD，克/公分2)，投影面積（公分2)及骨礦物質含量（BMC，克）。 4物機械測試在右股骨中板及L 5體上偵測骨骼機械特性。骨骼再切片，清除結缔組織，包覆在浸於等滲食鹽水之紗布内，並貯於-2 0 °C下直到進行測試為止。在測試前，檢品在室溫下解凍達卜2小時。所有檢品在3 7 °C循環水浴中利用MTS 8 1 0 伺服液壓測試機器（Μ T S C 〇 r p ·，M i η n e a ρ ο 1 i s，Μ N )測試至失敗為止。利用HP 70 9 0A偵測劃圖系統（Hewl ett Packard, Carnas， WA)記錄負載一變形曲線。最終力量 (檢品可持續之最大力量），硬度（負荷一變形曲線線性部份之斜率）及對失敗之防禦力（在失敗前於負載一變形曲線下之面積）利用數據機系統（Jandel Scientific, Corte Madera， CA)。這些變數為結構特性，其和内在的物質特性及幾何學有關。Turner CH, Burr DB 1993 "Basic biomechanical measurements of bone : a tutorial." Bone ii: 5 9 5 - 6 0 8。將數據常規化以得内在物質特性，如最終壓力（檢品持續之最大壓力），彈性模數（物質内在硬度）及勒性（每單位體積對骨折之抗性），其均和大小及外形無關° I d ° 利用三點彎曲法在中板處偵測股骨強度。股骨固定在固定板上，其中前側面向裝填者。負載物應用在二個支持物間之中點上’其間距離5 4宅米退。負載的細胞以1宅米/秒之速率置換直到發生失敗為止。由負載-變形曲線中獲得的數據予以常規化，可由最終力量中估算出彎曲最終壓力

0:\60\60045-9104i7.ptc 第20頁 576747 __案號88114185 9/丰Θ月/9日修正_ 五、發明說明（18) σ r = F uLr/8I (1) 其中（Jr是彎曲骨折壓力，Fu是最終力量，L是支持物間之長度，r是前後方向之半徑，且I是慣性力矩。U。慣性力矩值之估算是假設股骨橫切面是呈橢圓。自厚度中計算出乎均皮質的厚度，厚度的偵測是以一對彎腳規測量股骨橫切面的各四象而得，正確度至0 · 0 1毫米且有±0· 005毫米之精確度（Mitutoyo, Japan)。利用以下方程式估計股骨的彈性模數（Ef):

Ef=(硬度）*(L3/48I ) (2) 股骨的黎性（薪性f)也可由下式中估計：性广3*(對失敗的防禦力（work to failure))*r2/LI (3) 關於第五腰椎（L 5 )的機械測試’利用B u c h 1 e r I s o m e t慢速鑛子（Buehler LTD，， Evanston， IL)平行切下椎管體二末端之平板。後部突出物再切片後，可比較地偵測L 5之機械強度。在中風對照組中應用壓縮負載物，以1毫米/秒之十字頭速率經由樞軸壓板來校正椎管面不平行的排列。為使負載一變形曲線之數據常規化’以及評估和骨絡幾何學無關之内在物質特性，將最終力量除以總體的橫切面積可估算出最終壓力。橫切面積（CSA)由下式估算 CSA= 7Γ ab/4 ( 4) 其中a及b分別是前一後及中一側方向之寬度）。椎管之彈性模數（Ev)由下式估算 Εν=(硬度）/(CSA/h) (5) 其中h是椎管體之頭蓋-尾椎高度。

O:\60\60045-9l0417.ptc 第 21 頁 576747 __88114185 切年么月Λ)曰修正 _ 五、發明說明（19) 由下式估算出椎管體之枭性（翁性ν) 捧H4V=(對失敗之防禦力）/(CSA*h) (6) 整波顯微照傻利用鑽石線鋸自右肱骨之中骨幹切下5 〇〇微米厚之橫切面。利用解析度1微米之測微計（M i t u t 〇 y 〇 , J a p a η ) <貞測各檢品之精確厚度。聲波速率偵測則利用掃描式聲波顯微鏡 (UH3, Olympus, Japan)進行，採用先前Hasegawa Κ, Turner CH, Recker RR, Wu E, Burr DB 1995 "Elastic properties of osteoporotic bone measured by scanning acoustic microscopy1 丨· Bone 16 : 8 5 - 9 0 所述之方法。利用此技術，可偵測出在所選定之焦點下詳細的内在機械特性。50 MHz 變換器（V-390, Panametrics, Waltham, ΜΑ)可用來產生脈衝-反射模式之聲波，而50 Μ Η ζ透鏡可產生聲波束，直徑約6 0微米。檢品固定在小室底部，其中並充滿水且在固定溫度下（2 2 °C )。在聲波間之延長時間由檢品頂部反映出來，而由檢品底部反映出來的則利用數據化示波鏡（TDS 620, Tekronix， Beaverton, OR)在不同位置處偵測延長時間，如此在肱骨之前皮質中各位置互相距3 0 0微米以上。聲波速率由檢品厚度之兩倍除以平均延長時間而得。利用天平求出濕重（W w)及浸水重量（Ws)於100% 乙醇中（AJ100， Mettler Instrument Corp. , Hei ghtstown, NJ) 〇濕密度（p)自Archimedes’s 原則中估算出來： p ={Ww/(Ww-Ws)}* P ETOH (7) 其中pETOH是醇之密度（0.789克/公分3)。假設此聲波在骨

O:\60\60045-910417.ptc 第22頁 576747 ___案U厕-日修正_ 五、發明說明（20) 中之路徑是均質的’代表檢品之内在硬度之彈性係數（c) 可以下式估算： Ο (8) 其中p是濕密度且v是聲波速率。統計分以Bart lett分析用來檢查變數的均質性。當變數是均質的，可應用針對post - hoc比較之單向aN〇VUi7 Fisher，s PLSD試驗。當變數非均質的，可應用變數的Kruskal-Wallis乃非…憂數分析’加上利用Mann Whitney，s U-試驗之post-hoc分析。在Ρ<〇· 05時具統計意義。結果以平均值土 SEM表示。結果艚會及生化學兔子以10毫克/公斤/天之溶媒ΡΤΗ(1-34)處理，體重可呈現少量增加歷140天。給予ΡΤΗ( 1 - 3 4 ) 4 0微克/公斤/天之兔子，體重上可呈現5 1克少幅增加，代表實驗中體重 1 . 4 土 1 . 6 %之減少（表1)。血清偵測是在兔子的正常生理反應之内，雖然可觀察到血鈣及尿氮少量之增加。在較高的 PTH U - 3 4 )劑量下，血清鹼性磷酸酶有2倍的增加（表2 )。

Q:\60\60045-910417.ptc 第23頁 576747 _案號88114185_31年έ月/勹日修正五、發明說明（21) _鶴^+:MHil+SEM>邻-命_6 _泠+。*ρ<0·05 聆牮萊贫民谗^蚪药(毫克/公合）磷酸鹽(毫克/公合）鹼性磷酸（國際單位/升）肌酸酐(毫克/公合）尿氮(毫克/公合） i δ u W 1" .丑鵰 '令 F3P CJ 30¾ 20¾ 、r iifflK iirfii n^T » s w >> >> 對照組 12·1±0·3 4·7±0·2 24.7±4.1 1.9±0.1 18·3±0·3 3.43 ±0.08 3.70±0.05 0.26±0·09 對照組 ΡΤΗ(1-34) 10微克/公斤/天 12·6±0.2 4·7±0·2 41.0±8·1 1·6±0·1 18.1±0.8 。*P<0.05與對照組比較而言。 3·42±0·08 3.51±0.05 0.90±0.05 ΡΤΗ(1-34) 10微克/公斤/天 ΡΤΗ(1-34) 40微克/公斤/天 13·5±0·3* 5.5 土 0·3 49·8 士 7·1* 1·8±7·1* 23.9±1.9 3·42±0·08 3.37±0.10 -0·05±0·05* ΡΤΗ(1-34) 40微克/公斤/天 > l!PTH(r34)fHt14^^s

Q:\60\60045-910417.ptc 第24頁 576747 案號 88114185 年篆月〈公s 修正五、發明說明（22) 組織形態測定在PTHU - 34)處理組中，脛骨中板之周膜（ps.MS/BS)及内皮質（Ec.MS/BS)表面骨形成會增加。pSeMS/BS在較高劑量組顯著高於另二組（Ρ<〇· 〇〇1 )，而Ec· MS/BS在較高劑量組也顯著大於對照組（P < 〇 · 〇 5 )。和血清鹼性磷酸酶增加— 致地，在各表面上骨質之形成速率（Ps.BFR/BS及 Ec· BFR/BS)在較高劑量組顯著大於另二組（ρ<0· 05)。在周膜或内皮質封皮上，礦物質並列速率（MAR)於二者上均無變化。在皮質内，給予40微克/公斤/天之PTHC1-34)兔子，其再吸收位置數目（Rs.N/Ct.Ar)較另二組顯著大7倍 (ρ<0·05)(表4)。給予PTHC 1 -34 ) 4 0微克/公斤/天之兔子，其未經標記之骨數（L.On.N/Ct.Ar)也顯著多於另二組 (p < 0 . 0 1相對於對照組，P< 0 · 0 5相對於1 0微克/公斤/天組）。M A R則是二個處理組均顯著高於對照組（p < 0 · 0 1)，但在PTH-處理組之間並無顯著差異。在二劑量下，骨形成率 (BFR/BV)及活化頻率（Ac· F)均增加（分別是ρ<0· 05及 ρ < 0 · 0 1 ) 0 雖然二種劑量下骨面積（Β. Ar)均有所增加，但顯著差異僅見於較高劑量及對照組之間（Ρ < 0 · 0 1 )。處理後骨髓面積 (M a. Ar)減少，但三組間無顯著差異。然而，皮質面積 (C t · A r )在較高劑量組是顯著大於另二組（ρ < 0 · 〇〇〇 1相對於對照組，ρ〈0· 05相對於低劑量組）。Ct. Ar在較低劑量組也顯著高於對照組（P<〇. 05)。類似結果也見於％(：1:· Ar。皮質孔隙度（Ct. Po)在給予ΡΤΗ(1-34) 10微克/公斤/天

O:\60\60045-910417.ptc 第25頁 576747 _案號88114185_斤1年孓月Π曰修正_ / 五、發明說明（23) 一組中為對照組的二倍（ρ<0· 05)，而在給予ΡΤ Η (1-34) 40 微克/公斤/天一組中，C t. Ρ 〇為對照組的6倍高（ρ < 0 · 0 1 )。然而孔隙於皮質内室，且在該位置之内，似乎不和ΡΤ Η — 般可成為生化強度之因素，也會增加皮質骨骼面積，此點和慣性橫切面力矩增加符合。

O:\60\60045-910417.ptc 第26頁 576747 案號 88114185 年 β 曰正修 4 2 /IV 明說明發 Λ五 »鵪2^N^il+SEM>邻-♦弦 6 鵰冷屮。*p<0b5 旖準眾痒^胬^蚪 -ΡΛ0.05 转 PTHO-34) 10犛^./>>斗/^沒谗^蚪。

迹¾¾赛鴻 ii^it^ 迹豨淼爹塒二b^SH

5 EC.OS/BS(％) EC0.Th(_米) PS.MARG5/S EC.MAR(#^/^) PS.MS/BS(％) EC.MS/BS(％) Ps.BFR/BS EC.BFR/BS 犛漭聆 oobol+6.0 7.41+24 S3I+P17 1.331+0.22 3.81+1.9 26.41+6.6oo2±oo2 0.40I+P10 PTH(li)s 13.71+10.5 3.71+2.3 S8I+0.08 0.791:0.16 00.21+2.1 32.61+8.2 0.031+0.01 slzto.lo PTH(S4) 40 _^/>>>/> 20.2I+5.OO OO.1I+0.9 0.66±0.M 1.321+0.15 22·3ι+2·7ι 57.7I+1P4* 261+0.0¾ 0.7S0.12*-

1

Q:\60\00045-910417.ptc 第27頁 576747 案號 88114185 年 ql 日正修五、發明說明（25) »鶴2+:MHil+SEM^7fr -#贫 6鵰挣屮。*ρ<0·05 靼淖 H?JiLrrs:i -ΡΛ005 # PTHO-34) s^JL/>>;t/^tb^^H。 RS.N/ct>r(#/^^J ron.N/ctAr (#/州^J O.Th(i) MARS_/S BFR/BV(％/i APF(#/»^ B.Ar($^J Ma_Ar($ilo Ct.Ar(州米 J %a.Ar(％) 0.0141+0013 0011 ±0.006 4.92±0.59 1.191+0.20 P5I+0.3 1.81+1.0 29.1I+L3 12.7I+P7 16.41+0.9 56.41+1.5 PTHO-34) 10_^/>>斗/> oo13±oo04 S27±0.006 5.42±S0 1.56±0.13* 00.5I+2.9* 15.1I+5.0* 33.31+1.9 11.91+1.0 2L3l+r2* 64.2I+1.6* PTHO-34) έ 0.0971+0.036?; 0.2151+0.094*++ 5·16±ρ27 1.60±0.12* !^.4±3·8* 43.8Ι+10.5Ϊ, 37.8I+2.7* 10.71+1.0 27.11+2.¾ 71·6ι+1.5*·μ·

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0:\60\60045-9l0417.ptc 第28頁 576747 _案號88114185 年屮月/Ί曰修正五、發明說明（26) 婵^^」f^iil+SEM>邻-伞贫 6 鵰誇屮。*?<0.05^犛眾弦^谗 -ΡΛ005 # PTHO-34) 10_^/>>;t/^tb^3iH。 m鎿 + 瀨4!®^ ';€^S^SH 餐碲r^’SH^>^s>s ^^>r^,si 淼爹塒^^卧 BV/TV(％) 27.5I+L4 TbHhsi124.81+73 ES/BS(％) 0.5I+P3 ols(％)P4I+0.2 os/BS(％) 5.2I+L3 ob.s/BS(％) 1.4I+P6 O.Thsi 5.21+0.5 OV/TV90) o.lo±oo2MARS_/^) 1.3I+P2MS/BS(％) 4·4 ±1.4 BFR/BS (蘀米 V 象米 v^) 19.71+5.3 PTH(1 丨 34) 30.51+3^ 147.41+12.7 1.41+0.3 0.9I+P3 7.21+1.2 L3I+0.6 53I+P5 S3I+003 L5I+P1 7.41+1.9 38.51+8.9 PTHO-34) 40 _^/>>斗/沙 27.91+3.2 126.41+13.7 2.6I+0.7* L3±& 27.7ι+3·8*-μ· 15.31+5¾ ^.41+0.2 0.46±0.07t L7I+P1 2払.2|+1.5*-»-+ 153.0Ι+15.6Ϊ, ^5IPTH(r34)摩铖 W 瑀漭# 時陪^its O:\60\60045-9l0417.ptc 第29頁 576747 _案號88114185_γ /年《月/η日佟不 _ 五、發明說明（27) 在鬆質骨中，以ΡΤΗ(1 -34)處理時，形成變數（qs/BS， Ob.S/BS，OV/TV，及MS/BS)尤多增加（表5)。給予 P 丁 Η ( 1 - 3 4 ) 4 0微克/公斤/天之兔子組，均較另二組顯著增加（ρ < 0 · 0 1相對於對照組，及1 0微克/公斤/天組，於各變數中）。骨形成速率（BFR/BS)在給予40微克/公斤/天 ΡΤΗ(1-34)兔子組中，也較另二組顯著增加（ρ<〇·〇〇〇ι相對於對照組及1 0微克/公斤/天組）。雖然再吸收作用（E S / B S 及Oc.S/BS)在ΡΤΗ(卜34)二個處理組中均是增加的，但僅有較高劑量組中之經浸#表面（E S / B S )顯著高於對照組 (ρ<0·001)。此三組中之骨樣厚度（O.Th)並無差異。估不論對加速之骨轉換有證據，經Ρ T Η ( 1 - 3 4 )處理後，相對的骨骼體積（BV/TV)並未改變。在任一組中均未觀察到隧道式再吸收及小梁周之纖維生成。骨質量之偵測股骨中板之vBMD及BMC在40微克/公斤/天組別中以pQCT 評估，其顯著高於另二組（ρ<0·001於vBMD及ρ<〇·〇〇〇ι於 BMC，相對於對照組，ρ<0· 05於vBMD及ρ<0· 〇1於BMC相對於較低劑量組）（圖1A)。vBMD及BMC在10微克/公斤/天組中，顯著高於對照組（ρ<0· 05於vBMD及BMC)。雖然股骨中板之骨面積依劑量再增加，但僅在4 0微克/公斤/天組有顯著的增加（ρ<0·05)。在近端股骨中之a B M D及B M C，以雙重X射線吸收測定法 (D X Α或p D X A )偵測，均是與劑量有關地增加。對照組及1 〇微克/公斤/天組間（P < 0 · 〇 5 )以及對照組與4 〇微克/公斤/天組間（p< 0 · 0 0 1 )，aBMD及BMC均存在有顯著的差異（圖1 b )。

O:\60\60045-9i0417.ptc 第30頁 576747 __-案號88114185 9年《月曰修正五、發明說明（28) 此三組在骨面積上均未見顯著差異。整體而言，圖1示出在股骨中板（皮質骨骼）（A)及在近端股骨（鬆質骨+皮質骨骼）（B)中之BMD(骨礦物質密度）及 BMC (骨礦物質含量），在ρτΗ _處理組動物均較對照組顯著地高（二種劑量下）。以較高劑量處理之兔子，其股骨中板之皮質骨骼面積顯著高於對照組。近端股骨之骨面積，在各組間無顯著差異。數據以平均值土SEM表示，*ρ<0·05與對照組比較，十ρ< 〇 · 〇 5與ρτ Η 1 0微克/公斤/天組比較。在二組間以pQCT評估，在vbmd，BMC或腰椎（L4)骨面積上並然顯著差異。生物機械學測Μ 股骨中板之結構牿把，^ 禦力均在劑量有下，如裒終力量，硬度及對失敗之防板皮質骨骼之機械強^加（圖2)。圖2示出ΡΤΗ對於股骨中在較高劑量組，結構二及橫切面慣性力矩之作用（CSM I )。加，而在低劑量，硬，特性（空心線）及CSMI會顯著地增質特性（實心線），鱼對$也有顯著的增加。至於内在之物量組有顯著的增加;;彈=^比較下，僅彈性模數在較低劑比較下會顯著地減少。於抵數在較高劑量組與較低劑量組示，*表示Ρ<0· 05與對照^圖2中：數據以平均值土SEM表、克/公斤/天組比較下。、匕車父下’且午表示Ρ<0·05與1〇微在此研究及圖2所示沾 ΡΤΗ(1_34) 40微克/公 ^果中，所有的變數在兔子給予 (Ρ < 0 · 0 1對最終力量及天中均較對照組顯著地高度而言）。硬度在較低南，敗之防禦力而言，ρ < 〇 · 〇 5對硬 -”夏級也顯著高於對照組

第31頁 576747 _案號88114185 q丨年φ月/9日修正_ 一_- 五、發明說明（29) (ρ < 0 · 0 5 )。至於内在的物質特性，彈性模數在4 0微克/公斤/天組則顯著少於1 〇微克/公斤/天組（ρ < 〇 . 〇 1 )。在腰椎管體中，三組間之機械特性均未見顯著差異。聲波顯微術三組間在聲波速度或彈性係數上均無顯著差異。討論在完整成熟的雌性兔子長骨上，皮質骨骼對生合成的 hPTH( 1-34)之骨骼反應涉及物質特性之直接調控及生物機械特性之補償性調控。PTH ( 1 - 3 4 )可增加骨骼之轉換及皮質孔隙度，且在4 0微克/公斤劑量下，可減少皮質骨骼之物質彈性模數。然而，增加之彈性模數更甚於在周膜及内皮質表面所增加之骨並列補償作用，因而造成兔子皮質骨骼結構強度，硬度及對失敗之防禦力上顯著的改進。在此利用完整兔子的研究中，以ρ T Η ( 1 - 3 4 )治療後估不論有證據顯示骨轉換之增加，腰椎之鬆質骨體積並無改變。先前充作骨細胞不良模式，皮質内重塑之存在，以及短的重塑期-加上兔子快速的生長及早期的骨骼成熟作用 (達6-9月）’構成選擇兔子為模式之基礎，其中可用來測定間歇投予之ΡΤΗ(1_34)之作用。兔子在血I弓水平上可呈現極大的變化（10-16毫克/公合），但這些水平並不為食用鈣之量所直接影響，此為模式的另一優點。兔子以40微克/公斤ptjj(1-34)處理，雖可記錄到約1毫克/毫升之暫時的顯著增加，但確實的數值始終在已知生理範圍之内。

O:\60\60045-910417.ptc 第32頁 576747 修正案號 88114185 五、發明說明（30) 在目前的研究中，以生成合成的hPTH(l - 34)處理140 天，可在皮質内以及周膜及内皮質表面增加骨質之形成率。皮質内之A c. F在較低劑量組可增加8 X，在較高劑量組為2 0 X。此在脛骨皮質孔隙度方面，在較低劑量組可增加 2 X，在較高劑量組為6 X。來自聲波顯微術之數據顯示，在肱骨本身之骨質彈性特性上並不受影響，顯示内在之皮質骨骼品質是正常的。因此，增加之孔隙度應歸因於彈性模數之略為減低，其為包括皮質空間在内之物質特性之測度。然而，在較高劑量組中脛骨中板周膜及内皮質表面上，所增加之皮質孔隙度更甚於顯著增加之MS/BS及BFR/BS所補償的，因而造成骨面積顯著的增加。此可增加橫切面之慣性力矩，其與骨骼之彎曲剛性成比例，如同在股骨中板一般（圖2 )。當與對照組比較下，這些在外形及物質特性上改變之因果關係是用以改進股骨骨幹之機械強度及硬度，因此相抵消皮質孔隙度增加可能的有害機械作用。結論總而言之，在投予PT Η (1 - 34 )後骨轉換及皮質孔隙度會增加，並伴隨在周膜及内皮質表面上骨質同時增加。這些現象綜合造成股骨動性最終壓力，硬度及對失敗之防禦力上之加強。實例2--rhPT Η ( 1-34)投予至猴子後骨強度及密度之增加實驗步驟總則此研究之活期是使用野生的，成年（關閉之生長板）的

O:\60\60045-910417.ptc 第33頁 576747 _案號88114185 %年4·月Π日修正_— 一五、發明說明（31) cynomolgus 靈長類（Macaca fascicularis)，重2. 77 士 0· 03公斤（平均值土平均值之標準偏差[SEM])。猴子保持隔離3個月，其以含有〇· 3%鈣，〇· 3%磷酸鹽，及2 5 0 IU維生素D3/100克飲食之食物開始，並自由取用加氟的水（1 ppm氟化物）。鈣含量相當於1734毫克鈣/20 0 0卡。此飲食下1個月後，動物分成2 1或2 2隻一組，虛偽操作或切除卵巢者。在彡卩巢切除後2 4小時開始每天一次之皮下注射溶媒 (虛偽的及切除卵巢之對照組）或rhPTH (卜34)，劑量為1微克/公斤（PTH1)或5微克/公斤（PTH5)。動物可處理達月（PTH1及PTH5)或歷12個月再取消處理（p 丁 JJ卜w及 PTH5-W)。研究組如表6所示地區分。表6—靈長類研究之分組組別縮寫開始之猴子 (π=128) 最後分析之猴子 (rj=： 121^ 虚偽切除卵巢者，18個月之溶媒 Sham 21 '~'— yil x ^ L· j 21 "" ^ ^ 切除卵巢者，18個月溶媒 OVX 22^ ^--—- 切除卵巢者，18個月1微克 rhPTH(l-34V 公斤 / 天 PTH1 19 ^ 切除卵巢者，12個月1微克 rhPTH(l-34)/公斤/天，6個月的溶媒 PTH1-W —--- 21 — 20 切除卵巢者，18個月5微克 rhPTH(l_34)/公斤 / 天 PTH5 22^~^~ S^— 切除卵巢者，12個月5微克 rhPTH(l-34)/公斤/天，6個月的溶媒 PTH5-W 2]~ ~~ -—-- 在給予溶媒或rhPTHU-34)注射後，3個月為間隔採取^

576747 -_」8114哗_n Q 修正 - 五、發明說明（32) 小時之血清及尿液樣品。在各r h ρτ H (卜3 4 )處理組中，以5 隻猴子分別的取樣設計用於藥物動力學研究，在基線’ 7 ’ 1 1及1 7個月時取樣（各次占據〇至2 4 〇分鐘。在0時及6個月間隔時，以雙重能量X射線吸收測定法（D χ A)評估總骨骼及脊柱（L-2至L-4)骨質；以周邊定量電腦斷層分析（pQCT) 評估在中板及遠方放線，及近端脛骨中之骨質量。在6及 1 5個月時採取骼骨活組織檢以行組織外形測定法。所有動物在1 8個月後予以安樂死。在腰栓L-3至L-4，股骨頸，肱骨中板，及自股骨骨幹切下之皮質骨骼檢品上進行生物機械測試（偵測定義於表 7)。在肱骨中板，腰椎L-2，股骨頸，股骨中板，橈骨中板及遠端放線上進行傳統的靜態及動態平衡組織外形學偵測（如表1 1所述測定）。數據適於額外的探究分析以檢查劑量依賴性，撒回之影響，結果之間之交互作用及時間上的改變，利用精藝者熟知之方法進行。所有的分析由技藝中已知之方法進行及決定。關於某些實驗個體，以組織形態偵測及極化的F〇ur i er 轉形紅外顯微術檢查肱骨之皮質骨骼。F o u r i e r轉形紅外顯八’ 微術之進行係由此顯微術已知方法經改編而成。 3 D有限元素塑剞研究這些研究可在投予PTH 18個月之猴子椎骨上決定3])有限元素塑型數據。來自已切除子宮（n = 7)及PTH (n = 7)組之切下的L-5椎管，於5 0%乙醇/食鹽水中，以定量電腦斷層分析（QCT, Norland， Ft· Atkinson， WI)利用 70 x70 微米圖

O:\60\60045-9i0417.ptc 第 35 頁 576747 _案號 88114185_气Ί 年 4 月 /7]曰__ 五、發明說明（33) 素，在5 0 0微米小距離下連續掃描。5 0 0微米橫切面各自進行下列分析：容量骨礦物質密度（BMD，毫克/cc)，骨礦物質含量（BMC，毫克），橫切面面積（X-面積），鬆質骨容積 (BV/TV)，小梁厚度（Tb· Th)，及結締性（結節密度，骨架分析）。在各連續掃描之圖素可平均生成490x490x500微米vox e 1 s。連續掃描片再行堆積，且針對各骨骼產生一個三角形表面網，並利用"進行式立方體"演算法進行（如見 Lorensen and Cline 1987 "Marching cubes, a high resolution 3D surface construction algorithm.M Computer Graphics ϋ:1 6 3 - 1 6 9 )。再以各表面網之平滑版來產生3 D有限元素模塑之四面體網。各四面體元素之年輕模數，由原先之voxel密度及物質特性所衍生，後者則來自猴子股骨骨幹磨粉之皮質骨骼。將四面體網旋轉，使各椎管之底部表面可與平面成一線。再於L - 5各模式中進行線性彈性壓力分析，其中在椎體頂表面施加10 0N之分布的負載，其與底部平面垂直而底部平面則固定在負載之方向。評估所造成之問軸性變形的輪廓，以及BMD之分佈，並在pth及已切除印巢者間作比較。在此解析下’各voxel之密度與各voxel是充滿骨質或軟組織之程度有關。結果本案内容中所報告之差異是有統計意義的，p<0. 05。所有動物在研究期間最初體體均有4% — 9%之增加，不論是何種處理狀況下。 A清及尿液俏測

Q:\60\60045-910417.ptc 第36頁 576747 修正案號 88114185 五、發明說明（34) 在所有接受卵巢切除猴子中，於第3及1 8個月時血中雖激素均低於5微微克/毫升。當偵測鈣時，將體内穩衡與# 偽之對照組比較，在最後一次注射後2 4小時偵測知切除f 巢者有較低之血鈣及磷酸鹽及1 , 2 5 -二羥基維生素D水平P 但在内源的PTH，尿環狀腺苔單鱗酸鹽（cAMP)，尿旬，尿肌酸酐，或血尿氮上並無差異。以rhPTH(l-34)處理之動物與切除卵巢者比較下，有較低之血中磷酸鹽，較低的内源性PTH，但較高的1 , 25 -二羥基維生素D及尿cAMP。血清骨形成標幟分析則顯示’切除卵巢猴子有較虛偽組較低< 血中總鹼性磷酸酶（ALP)及骨鈣質，而rhPTH(卜34)恢復水平回至虛偽組數值。尿中C -端肽（CrossLaps)排泄可作為骨質再吸收之生化標幟，r h PT Η (1 - 3 4 )組與切除卵巢之對照組比較下，並不因處理而有所改變。骨質量

整體的骨骼骨質量，以總體BMC表示，因ΡΤΗ (1-34)有顯著的增加（圖3)。卵巢切除對照組1 8個月仍可保持脊柱骨礦物質密度（BM D)穩定，而虛偽組可較基線增多約5 % (圖 4A-4C及5A)。和基線比較下，rhPTH(l-34)可增加脊柱BMD 達7%-14%，而整體骨礦物質含量（BMC，圖3)高至6% (圖 4A-4C及5A)。也可增加脊椎骨礦物質含量（圖5A)。在 rhPTH(l_34)處理過之靈長類中，其增加幅度顯著高於卵巢切除之對照組，且相似（PTH1 )或高於（PTH5)虛偽組。 rhPTHU-34)無法改變中板或遠端橈骨之BMD。在PTH5組中，中板之橫切面積增加達7%。於近端脛骨，橫切面積並未增加，但r h P T Η ( 1 - 3 4 )與彡卩巢切除組比較下，會增加B M C

III圓

Q:\60\60045-910417.ptc 第37頁 576747 __案號 88114185 β丨年么月日__ 五、發明說明（35) 及BMD。處理6個月後取消者，在脊柱及股骨頸中之BMD及 BMC仍保持較卵巢切除者為高，但肱骨皮質中板中則無改變〇骨質強唐 rhPTH(l - 34)可增加椎管中之強度（^)達43%(表7及8，圖 5B)。rhPTH(卜34)改進股骨頸（fu)之強度可高達12%(表7及 9，圖6A)。此卵巢切除組比較下，rhPTH(l-34)不會改變在肢骨中板皮質骨骼幹中之測度（表7及1〇)，或來自股骨骨幹切下之檢品之物質特性（表7及9，圖6 B )。動物以 rhPTH( 1 - 34 )處理1 2個月再撤消處理達6個月組中，骨強度之測度仍顯著高於卵巢切除之對照組（表7 _ 1 〇，圖5 B及 6 A ) 〇表7第3及4腰椎（L-3及L-4)，肱骨中板，近端股骨頸，及股骨檢品中之變數報告變數單位說明腰椎，L-3及L-4 A 毫米2 橫切面積 Fv N 在0.2%抵消下之力量之屈服力 S N/亳米壓力-置換曲線直線部份之斜率(硬度） ο γ 百萬帕屈服壓力 Ε Mpa 年輕模數肱骨中板 Τ 亳米平均皮質厚度 Fu N 取終力置是檢品可耐登之最大力量 S N/毫米壓力-置換曲線直線部份之钭皋唐） mJ/U η-亳米壓力-置換曲線下之面積 (U=對失敗之防禦力）近端股骨頸

576747

——^室麓 88114185 ζΉ 年 έ 月 Π 日五、發明說明（36) _Fu N *纥力量是棒品女力 _股骨骨榦檢品 MPa 最終壓力 '^' -〜一 E Gpa 年輕模數 U J/米3 靭性〜- Yu 最終拉力 ' '〜一 ---— 表8 卵巢切除靈長類18個月時在脊柱（腰椎，l-3及合下）中強度之生物機械測度、’、τ、鸞敦位虚僞级 ονχ釙照烺 PTH! PTH 卜 W PTR5 PTWS-W Α(ί 米 90.5 ±2.Γ gS.7^2.3 38J ^ 2.0 <M.9*2.3 37.3 j. 2.7 ~ 42.5 ±2.1 Fr(K) 173“ 52 14991941 1915± 10SQ 1899^73° 2113 ±77^· 1792 i 59° SCN/秃来） 7312*319 580Si474* 7701 7401 ±452" 8012 * 367e 7074 ±314" 9« (M〇sm> 19·“0·彡 17.3 ± 1.0 21.9* UQ 2U±0.Se 24.“ U1·。— 21.9*0.9* H(Mpu) 650 ± 32 54^ ±49 717±4S# 659 i： 42 759士36g 69&±41* 縮寫：OVX=卵巢切除組；PTHl=rhPTH(卜34)，1微克/公斤，達18個月；ΡΤΙΠ -W = rhPTHU-34)，1微克/公斤處理12 個月後再撤消6個月組；PTH5 = rhPTHU -34)，5微克/公斤達18個月；PTH5 - W = rhPTH(l - 34)，5微克/公斤達12個月後再撤消6個月。見表4 · 1中對變數之說明數據以每組之平均值土標準偏差（SEM)表示。統計上有意義係與OVX對照組比較而言（Ρ<〇· 〇5)。統計上有意義係與虛偽對照組比較而言（ρ< 〇 · 〇 5 ) ° 表9 來自股骨骨幹同樣大小檢品之物質特性生物機械測

Q:\60\60045-910417.ptc 第39頁 576747 案號88114185 <?丨年月〇曰五、發明說明（37) 定，及切除卵巢靈長類1 8個月時，股骨頸強度之生物機械測定縮寫：OVX=卵巢切除組；PTHl=rhPTH(l-34)，1微克/公斤，達18個月；PTHl-W = rhPTH(l-34)，1 微克/ 公斤，12 個月後撤消，P T Η 5 - W = r h P T Η ( 1 - 3 4 )，5微克/公斤歷1 8個月； ΡΤΗ5-W=以 rhPTH(卜 34) 5 微克 / 公斤，12 明說之數變對^ 1每4以表據見數 > - - r 示表 Μ Ε s 差偏準標土值均平之 Ζ對Y虛與與係係義義意意有有上上 ^-0 計統統較比言言而較比 ο < < Ρ Ρ ( 表物生之骼骨質皮板中骨肱時月個 8 IX 類長靈除切巢卵

Jl偽級 ΟνΧ^ΛΛ PTH】 PTHl-W PTH5 PTH5-W 222±5· 216^5 222*4 214 db 6 206 ±6 208 ±6 17^^0.6 1<S.4±0.4 17.1 i0.4 16.^ ±0.6 15.4 ±0.6* 15.3^0.6* 5.9 ±QJ S.Sii〇.A 6“*0.4 5 J ± 0.4 5.4 ^ 0.4 6.1 ±0.4 r 0.035*0.001 Q.035 ± 0.002 0.036^0.002 0.034 ±0.002 0.034 ± 0.002 0.038 * 0.002 遶蝙觥骨頦 Ρη -1 1288*41 U05*33f 1235 ± 45^ 1258 ± 52° 1362 ±30" 12!3i42 機械測定 «教 (氧位)· A偽A OVX 針 PTJ4t ΡΤΙΠ-W PTH5 PTH5-W 4来） 1.74 ±0.04' 1.63 ▲0.0]* 1.68 戈 003 1.66 士 0.04 1.80 土 0.04* 1X2 4 0.05 FJN) 725 ±2^ 636±26 654 士 23 6S9*23 6g〇i 15* 707 ± 24 S(N/毫米） <501 ±23 520Ji 26 544 士 23 573 ±20 54S± 573 ±24 U(mJ) 1797^85 1542 ±92 _ ίβ41*137 1751 ±84 lg〇4^99 1775^» U3 縮寫：OVX=卵巢切除者；PTHl=rhPTH(l-34)，1微克/公斤歷18個月；ΡΤΙΠ - W = rhPTH(l-34)，1微克/公斤，12個月後

第40頁 O:\60\60045-910417.ptc 576747 案號88114185 91年Φ月/Q曰絛正 _/ 五、發明說明（38) 撤消之，？1^5 =汁？丁盯1-34)，5微克/公斤歷18個月， PTH5-W = rhPTH(l - 34)，5微克/公斤，12個月後撤消之。 a 見表4 · 1對變數之說明 b數據以平均值土標準偏差（SEM )表示。。統計上有意義係與OVX對照組比較而言（ρ<〇· 05)。 s統計上有意義係與虛偽對照組比較而言（ρ< 0 · 0 5 )。骨骼組織形態測定在卵巢切除組中，其轉換率雖然大於虛偽對照組，但對腸骨之骨容積並無顯著的流失。由於6個月時投予之四環素標幟在許多動物中未被測及，在此時間點時僅可測及靜態變數。靜態及動力學組織形態測定數據在1 5個月時顯示，以rhPTH( 1 - 34)處理可增加較卵巢切除組更多之鬆質骨面積，且增加骨之形成但不會增加再吸收之測度超出卵巢切除對照組之上。以較高劑量之r h P T Η ( 1 - 3 4 )可逐漸增加骨形成率。在以rhPTH( 1-34)處理12個月後再撤消之，雖然鬆質骨之增加仍高於卵巢切除對照組，但骨形成及再吸收恢復至在卵巢切除對照組中所見之水平，而骨轉換仍較虛偽對照組為高。rhPTH( 1-34)不影響礦質化，活化頻率，或重塑期。在吸收及形成間，個別骨質多細胞單位 (BMU) -為基礎之骨平衡並無差異。總而言之， rhPTH( 1 -34)經由骨形成之選擇生刺激可增加鬆質骨。在肱骨之皮質骨骼中，其中rhPTHd - 34)不會顯著地改變BMD或骨強度測度，rhPTH(l-34)可刺激周膜，内膜及皮質内腔室中之變化（表1 1及1 2)。雖然各組間在總面積或髓質面積方面無差異，rhPTH (1-34)可增加皮質面積，且

Q:\60\60045-9l0417.ptc 第41頁 576747 _案號88114185 Ή年7月，7曰修正_ / 五、發明說明（39) ΡΤΗ5及PTH5-W組有顯著較多的皮質骨骼，可推知橫切面慣性力矩有所增加，此為強度的測度之一。面積的增加可歸因於骨周膜及内膜表面形成增加之故（圖7)。 ' 虛偽對照組及ΡΤ Η 5-W組與切除卵巢對照組及其他的 rhPTH( 1_34)-處理組比較下，有減少的周膜礦質代表面。内皮礦質化表面在卵巢切除對照組中顯著多於虛偽組，且 r h P T Η ( 1 _ 3 4 )所增加的不會超過印巢切除對照組之數據以上。在皮質内重塑中，在卵巢切除動物中有較多的再吸收空間，而且活化頻率在卵巢切除的，ΡΤΗ1及ΡΤΗ5組中均高於虛偽對照組或任一撤消組。卵巢切除組與虛偽對照組比較下，前者每單位面積有顯著較多的經標記骨細胞，且 rhPTH( 1 _34)不會增加這些數值至卵巢切除對照組之上〇卵巢切除組與虛偽組比較下，皮質内孔隙度前者大些，但卵巢切除組及PTH1間幾無差異。PTH5及PTH5-W增加之孔隙度在卵巢切除對照組之上。由兔子研究之數據可推知，孔隙度增加，伴隨著皮質骨骼之增加，可能是維持 rhPTH( 1-34) -處理過之骨骼之生物機械特性之結構反應。 1 8個月時在形成期，骨樣寬度，壁寬度，或骨樣成熟方面，已切除卵巢者及其他各組間並無差異。總而言之，在卵巢切除對照組及任一劑量之 rhPTH( 1-34)組間，轉換率並無差別。虛偽對照組有較卵巢切除或rhPTH(l-34)處理動物任一者較低之轉換率。當 rhPTH( 1-34)撤消達6個月時，轉換率顯著下降，但BMD及生物機械強度仍較卵巢切除對照組高許多。各組中之骨樣寬度及皮質内成熟時間均為正常值，顯示處理並不會造成

O:\60\60045-910417.ptc 第42頁 _案號88114185 q丨年…月/^日修正_ 五、發明說明（40) 礦質化過程正常時效上的任何缺失。壁寬度之正常數值顯示，處理並不會改變再吸收及個別B M U水平下形成間之正常平衡。表1 1 肱骨皮質骨骼測度之組織形態測定變數數據單位說明 Ac.F 週期/年活化頻率 BPR/BS.Ec 微米/天骨形成率，内皮質表面指示物 BFR/BS.Ps 微米/天骨形成率，周膜表面指示物 BFR/BV %年骨形成率，骨容積指示物 FP 天數形成期 L.On.N/Ct.A #/毫米2 氟色素標記之骨細胞數/每單位皮質面積 MAR 微米/天礦物質並列率，皮質内 MAR.Ec 微米/天礦物質並列率，内皮質表面 MAR.Ps 微米/天礦物質並列率，周膜表面 MS/BS.Ec % 礦質化内皮質表面常規化至總内皮質表面 MS/BS.Ps % 礦質化周膜表面常規化至總周膜表面 O.Wi 微米骨樣的寬度 Rs.N/Ct.A #毫米/3 每單位皮質面積下之再吸收空間數目 W.Wi 微米骨的壁寬度 omt 天骨樣成熟時間 Po % 孔隙度，為空間所占據之骨面積百分率 B.Ar 毫米2 骨面積，在周膜表面内之總面積 Ct.Ar 毫米2 皮質面積，周膜表面内之骨面積(包括孔隙度） Mc.Ar 毫米2 髓質腔面積 * 命名為 Journal of Bone and Mineral Research 1987 中所建議的。

0:\60\60045-9l0417.ptc 第43頁 576747 _案號 88114185 91 年 ^ 月，？日_ 五、發明說明（41) 諮鰣：ονχ=^¥τ;^%; PTHTrhpTHr34Yl_^/>>;t-lM£;PTHrwnYxrhpTHr34) 1_^/>>坏黔隖12 窗 ; PTH5"rhpTHr34)二 _^/>>斗黟鴻18 窗 PTS-WHrhpTHr34) - 5#^/>>邙鰣闼12 窗 5s!t^。斜棘鉍涂聆 ovx fm^Trb^cp<oo5) ->>4.2摩飧婵。婵 ά^“Ήϋι+^^^^(οοΕΜ)>斗。 1 Mc.Ar Ct.Ar f B Ar S3 omt W.Wi Rs.N/a.A O.Wi i MS/BS.Ps MS/BS.Ec 1 MAR.Ps lMAR.Ec、 1 MAR L.On.N/Ct.A 5 BFR/8V 1 BFR/BS.Ps 1 BFR/BS.Ec AaF 變數b ί 15.72 i 4.07 37.40 i 3.75 53.12 i 5,50 | 1.32 士 0.60a 4,58 ± 1.261 63.23 ±13.61 0.12 土 0.171 3.77 士 0·92 ! L8U3.59a | 3.09 ± 6.498 1 0.62 db 0.24 0.48 士 0.19a |〇.91db〇.33a 0.28 ± 0.273 1 82,73 士 41.06 2.13 db 2.06* 3,79 士 3.07 7.08 i 3.80 1.85il.87^c 虚偽组 1 1 17.47 i 4.22 135J5±5.04 | 52.82 ±7.09 2,61 ± 1.40 | 13.87 土丨,04 1 68.63 i 15.09 0.21 ±0.13 4.04 db 0.91 10.03 ± 10.49 20.99 ±18.04 | 0.69 i 0.23 0,75ir〇.25 i.07£0.19 1.03土0.52 65.94 i 1979 19.16^5.37 I 9.12 ±7.58 1 1 20.93 dt 19.23 6.06 ±3.31 ovx 1 16.61 i 3.77 37.61 i 3.86 502 ±5.97 4.65 £4.78 3,76 ±0.70 61.36 ±7.79 0.28 ±0.18 | 3.66 i 0.67 8,59 ±5.73 1 25.19^17.14 1 0.89 土 0·95 0.66 ±0.15 | |0.98±0.12Λ， 1 1.26 ±0J1 63.44 ±10.02 9.23 ± 5.93 | 8.53^10.54 | 18.14 dh 13.95 7,69 ±4.96 PTH1 ( 16.84 ±3.74 138.10 士 4.83 154.94 ±6.55 )2.23 ±1.60 | 3.86 £0.74 63.12117,35 0.12^0.074 3.96 ±0.83 3.86 ±4.83* | 11.74±14.4lJ ! 1 034 i 0.151 | 0.66 士 0.16 1 1.06 士 0.27 0.50±0.36B 64.94 dhlL99 4.39 £3.488 3.60 4=3.84" 14.89^ 10.32 ί H- N PTH 卜 W ] 14.85 ±4.72* 140.96 ±4.30* 55,81 i 6.24 \6.n±uy 6Λ5 士 13.85 65.28 i 9.43 O S \l· O io 3·94士 U3 11.00 i 9.63 40.47-124.68'； 0.66 i 0.17 ! 〇·75 土 0·14 [1.03 士 0·23 | 1·45 士 0·473 181.97 ±95.63 ，12.93 i5.94a」 8.99 i 5.81 1 34.04 i 19.01 I 8.70 ±3.97 I PTH5 17.34 ±6.05 40.83 i 5.801 1 |58·16 士 8.79* . 6.40i4,22a ； 5.07 ±2.65 1 63.82=8.31 1 0,19db〇.I8 1 3.76 ±0·83 1 2.30t3.76B 8.93 ± 15.398 0.82 ±0.15 0.63 i 0.17 1 0·85 土 0.283 ί 0.38 ± 0.261 i 88.63 i 52.90 | 221 士 1.73 恿 5.79 ±4.05 1 12.73 i!6.33a | 2,05^1.461 PTH5-W | 诹12 S ^ ^ ^ ^ ^^ε§ .αΜ ^ O:\60\60045-910417.ptc 第44頁 576747 ____銮號.88114185_9ί 年4月/9曰_修正 _ 五、發明說明（42) 由組織形態測定及極化的F 〇 u r i e r轉形紅外顯微術進行之研究顯示，投予P T Η可改進骨之品質，因為係以年輕的骨（一定大小結晶範圍，頃向較小尺寸）置換老骨（大的結晶）。再者，一旦自給予低劑量之猴子中撤消ΡΤΗ，會有額外的益處，即基質會有最佳之礦質化，且結晶可成熟。由組織形態測定及F 〇 u r i e r轉形紅外顯微術衍生之數據顯示，因為在礦物質相成熟中發生最佳之礦質化作用，因此對皮質骨骼之骨品質有預料之外之益處。 3 D有限元素模塑研究 L - 5中段500微米切片之檢查顯示PTH組在BMD上有21%增加，而卵巢切除組B M C自2 7 %增加，而橫切面積並無變化。由ΡΤΗ中分析中心部份顯示，在BV/TV有73%的增加乃Tb. Th 增加3 0 %之故，且與卵巢切除組比較有3 7 %較高之T b · N值。此區域之結締性分析顯示，對P T Η椎管，有i 4 0 %較高之結節密度（結節/組織體積）及2 8 6 %較高之結節-對-結節支撐。組織描記圖分佈分析骨voxe 1密度，對ΡΤΗ而言顯示在低密度比例上有減少（0-355毫克/ cc)，在中密度有增加 (356-880 毫克/cc)，在較高密度 voxels (887-1200 毫克 / c c )時少有作用，此乃與卵巢切除組比較而言（圖8 )。最醒目的是在撤消處理達6個月後，在皮質骨絡腔室中位移至較高骨質voxel密度（圖8)。可估算出落在BMD值某一範圍内之椎管骨元素之比例 (voxels)。所選擇之BMD範圍如下：低BMD，0-300毫克 /cc ;中BMD，3 0 0 - 7 0 0 毫克/cc ;高BMD ，7 0 0 - 1 0 0 0 毫克

O:\60\60045-9104l7.ptc 第45頁 576747 _案號88114185 ?/年《月〇曰絛不 τ 71 Γ Γ — ' ' ........ ..... — _ 五、發明說明（43) /cc ;及皮質BMD ’>1000毫克/ cc(表13)。與印巢切除之對照組比較下，PTH處理可顯著地減低低BMD骨之體積，及增加中BMD骨之體積。在撤消PTH之後，中BMD骨有所減少而高B M D骨增加，顯示中B M D骨變得較稠密。表1 3 以BMD值分組之L5椎管體積百分率 (平均值土SEM) 處理低 BMD (%) 中 BMD (%) 高 BMD (%) 皮質BMD (%) 卵巢切除組 30.4±2.2 48.7±1.6 19·9±1·2 〇·9±〇·3 PTH 17·2±1·6* 58·9±1.9* 22.8 士 2.7 0·6±〇·3 PTH-W 22·4±1.3* 49.7 ±1.2 27.0±1.6* 〇.8±0.2 表14 L5椎管中水平之BMC及椎管有效應變處理 BMC(毫克）有效應變(ustrain) 卵巢切除組 37.2±1·6 Ί 701 ±64 PTH 1 47·4±1.5* 447 ±36* PTH-W i 44.2±1.2* 539±34* *統計上的差異(p<0.05，Fisher’s PLSD試驗) 綜合於圖8之數據顯示，猴子的L-5椎管經PTH處理18個月，可反應出在骨質量，小梁厚度及小梁結締力上均顯著增加，在椎管外側尺寸上（X -面積）只有些許作用。L- 5中骨元素分佈分析則顯示，重度礦質化骨骼區域一點也不改變，且無骨質硬化之跡象。反應，多孔之小梁骨對PTΗ最有反應。BMD之改變造成軸向應變上實質的減少，顯示有機械上之改進。如ΡΤΗ及印巢切除組BMD組織描記圖中清楚顯示的，ΡΤΗ可將低密度骨質voxels轉化成中密度vox els ，但對高密度voxels無顯著作用。

O:\60\60045-9104l7.ptc 第46頁 576747 _案號 88114185 9丨年4月，9曰__ 五、發明說明（44) 綜合表2之數據顯示，經PTH處理，穿越椎管中之BMC會顯著增加，而在撤消6個月後仍可保有P T Η之益處。在椎管之平均機械應變因ΡΤΗ處理可減少36%，而撤消ΡΤΗ後仍保持低於OVX 23%。此研究顯示撤消ΡΤΗ處理達6個月並不會造成新形成骨質之再吸收，但反應中密度骨可有益地再分佈成較低及較高密度骨質。此再分佈可在椎管造成連續的應變減少，因此改善機械功能。討論此露長類研究顯示，ΡΤΗ在無其他藥物下給予將可影響骨骼，有益於皮質及小梁骨以增加整體之骨骼骨質量。再者，撤消ΡΤΗ並不會造成與ΡΤΗ處理有關之益處重大的喪失，歷2個重塑週期。在其他試驗中使用替代的標幟來顯示骨中活性，且假設其在數據上之改變可反映出骨質量之變化。雖然在人類及靈長類中已有數據發表，即在早期停經或在活性疾病期間，形成及再吸收標幟均會增加（此符合骨轉換之活化），但高轉換仍被視為是骨流失之表徵。在青年期，對於人類骨骼成熟中之高轉換鮮有研究，但伴隨在骨質量上合成代謝之增加。依據目前技藝知，此現象在骨質疏鬆症之藥物治療上是完全非預期的。因此，骨轉換標幟之增加，與 ΡΤΗ增加骨質量及強度之已知的合成代謝作用並不符合，如本研究數據中所顯示的。由此在猴子身上18個月之研究數據中可支持以下意外的發現： •總骨骼質量有整體顯著的增加

O:\60\60045-910417.ptc 第47頁 576747 修正案號 88114185 五、發明說明（45) •在股骨頸骨質量及強度上有顯著的增加 •並無自皮質骨骼”偷取’’以增加小梁骨之跡象。在富含皮質骨骼（股骨頸）或小梁骨（腰椎）之所在，胃質量及強度是有統計意義之增加。在純皮質骨骼部位（股骨中-骨幹），與卵巢切除之對照組比較下，ρ Τ Η傾向於可穩定或略增加骨質量及強度。 •在卵巢切除猴子（及人類）中骨標幟之改變，無法反映出ΡΤΗ在骨骼上之有益且合成代謝之作用。使用本研究中取自靈長類之體液，可發展出新的且可更被信賴之替代標幟。 •撤消治療後，骨質量及強度獲得之保持可達至少2個重塑週期。此ΡΤΗ靈長類研究異於在恒河猴及cynomolgus狼子上已發表之研究，因為其中使用較大之檢品體積以提供適度的統計力來偵測差異性，此點在先前較小的研究·上可能是不明顯的；對照組包括卵巢切除之靈長類（用於已發表研究中）及虛偽操作但是完整之靈長類。後一對照組在此型式的研究中先前並未有所報告，如此PTH的某些益處，以及某些測度恢復至虛偽對照組水平，與卵巢切除動物之數值比較，均係第一次的評估。結論此在成熟，野生的，卵巢切除的（OVX) cynomolgus狼子，Macaca fascicularis的18個月研究，可確保在以 rhPTH( 1-34)處理後骨之效力及安全性，不論是處理12個月後撤消處理6個月，或處理長達18個月。rhPTH(l-34)可

O:\60\60045-910417.ptc 第48頁 576747 _案號88114185 引年Φ月/勹曰修正_ 五、發明說明（46) 顯著地增加脊柱及股骨頸之骨質量及強度在卵巢切除對照組之上，到達相當於或大於虛偽對照組之值。在以 r h P T Η ( 1 - 3 4 )處理之切除卵巢猴子中，鈣血中平衡之測度 (血鈣，磷酸鹽，及1 , 2 5 -二羥基維生素D )可恢復對虛偽對照組之值。用來評估骨轉換之血液，尿液及組織形態測定，顯示rhPTH( 1 - 34)可保持形成率相當於或於卵巢切除之對照組，而骨質再吸收之生化標幟仍保持與虛偽對照組相當。在所有以rhPTH(l - 34)處理高達18個月的動物中，藥物動力學測度並未因時間而改變，且此中並無 rhPTH(l-34)之累積。在經過18個月之處理後，此中也無持續高血鈣或腎病變之證據。在礦質化或重塑期中也無變化。於rhPTH(l-34)中所觀察到的骨胳骨礦物質含量之淨獲重可由骨形成率及骨形成表面之增加，而骨質再吸收少或無作用予以解釋。在臨界相關位置上，如脊柱，股骨頸及近端脛骨，在骨礦物質含量，骨礦物質密度及強度之生物機械測度，包括銳性及硬度，均有顯著的增加。 rhPTH(l-34)可增加肱骨及橈骨中板皮質骨骼之轉換率，但不會顯著地改變骨質量或強度之生物機械測度，此與卵巢切除的或虛偽對照組比較而言。然而，皮質寬度及 /或或皮質骨骼面積之增加與橫切面慣性力矩之增加（強度及硬度之測度）是一致的。rhPTH( 1-34)對於皮質骨骼之内在物質特性並無顯著作用。皮質内骨質之形成被刺激，因而增加皮質之寬度及皮質内之孔隙度。這些在孔隙度上之改變似乎和維持骨質之彈性有關。在猴子中，以r h P T Η ( 1 - 34 )處理1 2個月再撤消6個月，與

Q:\60\60045-9l0417.ptc 第49頁 576747 _案號88114185 π丨年夺月6日修正_ 五、發明說明（47) 脊柱及股骨頸骨質量及強度之獲重（較少但仍是顯著的）有關。在撤消後，在肱骨及橈骨皮質骨骼中板上並未有顯著的作用。骨標幟及組織形態測定顯示，傾向於恢復至在虛偽對照組中所測知之低轉換值。在齧齒類中進行的活體内機械學研究顯示，與 rhPTH( 1—34)合成代謝結果有關之基因在1至6個小時内是向上調控的，且在第一劑後2 4小時内，於再吸收作用上無可測及之作用下，可偵測到骨形成表面之增加。 r h P T Η ( 1 - 3 4 )似乎在S ~期時會補充至骨組細胞，並刺激彼等分化成成骨細胞，由是快速增加骨形成表面之百分率。 rhPTH(l—34)之單一或多重劑量注射可在1小時内給予以誘導骨中之合成代謝作用。然而，當相當劑量以多重注射在 6小時或8小時内投予年輕大鼠内，合成代謝作用可消除，由此推知，為誘生合成代謝作用，則短暫且有限的與 rhPTH(l-34)曝露是必要的。總而言之，；rhPTH(l-34)對猴子及兔子之骨質具合成代謝作用，在臨床相關位置上測定可增加骨質量及生物機械強度，如腰脊柱及股骨頸，此因骨形成之選擇性刺激所致。在皮質位置處以組織形態測定所知之骨轉換，内皮質表面形成，及孔隙度之增加，並不會改變骨質量或骨強度之生物機械測度，但確會因增加皮質骨骼面積及/或寬度而增加橫切面之慣性力矩。這些研究證明，投予副曱狀腺激素受體活化劑，如重組體人類PTH( 1 - 34)，可在處理中及之後改善骨之品質。事實上，對卵巢切除猴子給予1微克或5微克/公斤/天之

O:\60\60045-9l0417.ptc 第50頁 576747 案號88114185 9丨年7月/0曰〜修正__ 五、發明說明（48) rhPTH(l - 34)(LY333334)，一天一次歷丄8個月，或相同劑量歷1 2個月繼以6個月之撤消期的研究數據中顯示，以組織形態測定及極化Four i er轉形紅外顯微術分析肱骨之皮質骨骼品質可有顯著的改進。此分析顯示，投予P T Η因以年輕骨質（一定結晶大小範圍，傾向於較小尺寸）置換老骨 (大結晶）可改善骨的品質。再者，在給予低劑量猴子組中一旦撤消Ρ Τ Η，則此中仍有額外的益處因基質變得適度礦質化，且結晶成熟。此一結果是空前的且意料之外的，顯示經由ΡΤΗ加強及使堅取骨質之新方法，且可因而避免骨折。此新方法包括加強及調控礦值化作用，以提供更堅數，更硬，更耐受骨折之骨骼。此有益作用所需要的不只是新基質之形成。這些發現顯示，ΡΤΗ對於有不動骨或骨骼或骨骼中有礦物質缺失之病人是有益的，限制條件是此中仍需有適量的鈣及維生素D補充。如此顯示Ρ Τ Η可減少非椎管之骨折。在皮質骨骼上之猴子數據說明了 ΡΤΗ對於皮質骨骼品質有益之理由，經由在礦質化作用上之改進，加速老骨為新骨之置換及礦質化作用。此外，由撤消數據顯示，低劑量 ΡΤΗ因可加強礦質化作用故在處理被撤消期間，仍可有額外的益處。目前對骨品質之定義並不包括礦質化作用之改進。 ΡΤΗ投予至靈長類所得之不斷的益處，與投予至齧齒類之結果顯著地相反。對大鼠之研究則已一律顯示，撤消處理後骨質會很快速的流失（Gunness_Hey et al·， 1989; Shen et al·， 1992; Shen et al·， 1993; Mosekilde et

0:\60\60045-910417.ptc 第51頁 576747 __案號88114185 — 彳I年孓月日鉻t_ 五、發明說明（49) al· ， 1997)。這些數據顯示，以PT Η處理之有限療程益處，繼以一段撤消期，可達到最大的益處。在ΡΤ Η處理期繼以無處理期之早先研究中，處理期少於1個月。先前並未發展出18 - 24 個月之延長但有限處理期繼以至少2個重塑週期之模式。使用此一療程，以及皮質骨骼礦物質品質最大益處時對低劑量之要求，均是不可預料且意外的。實例3 - - r h Ρ Τ Η ( 1 - 3 4 )投予至人類時，增加之骨強度及密度，及減少骨折臨床策略檢視者：此多個中心的研究包括9 9個主要的檢視者。研究日期：1996年7月（開始）- 1998年12月（停止）臨床期：第3期主題：為了證明以20及40毫克/天rhPTH(l-34)加上i弓及維生素D，與單獨的鈣及維生素D比較，經3年處理後，新椎管骨折患者比例有減少方法：雙盲式，鈣-及維生素D -受控的，任意研究個體數目：rhPTH(l-34):有1093人登記，研究者：1998 年1 2月：848 空白組：有544人登記，研究者：1998年12 月：447 診斷及包括之準則：婦女3 0 - 8 5歲，停經最少5年，最少有 1人中度或2人緩和的非外傷性椎管骨折劑量及投藥：受試產物（盲目下） rhPTH(l- 3 4 ) :2 0微克/天，皮下給予

O:\60\60045-9l0417.ptc 第52頁 576747 _案號 88Π4185_巧|年β月fO曰__ 五、發明說明（50) rhPTH(l- 3 4 ) :4 0微克/天，皮下給予參考治療（盲目的）空白研究注射用藥對所有病人之添力η物鈣（開放-標幟）：1 0 0 0毫克/天，一天一次維生素D(開放-標幟）：4 0 0 - 1 2 0 0 IU/天，每天一次：處理期：rhPTH(l- 3 4 ) : 1 7 - 2 3個月（排除6個月的追加期）空白組：1 7 - 2 3個月（排除6個月的追加期）評估準則：效力-脊柱X射線：血清生物標幟（鈣，骨特異鹼性磷酸酶，溶膠原蛋白I羧基末端肽原）；尿液標幟（鈣， N -末端肽，自由態去氧吡哆啉）；1，2 5 -二羥基維生素D ; 骨礦物質密度：脊柱，髖部，腕，及總體；長高；族群藥物動力學；骨活組織檢（選定的研究位置）安全性-物理檢查；血液學，臨床化學，及尿液分析；高峰血鈣及白蛋白；2 4小時尿鈣，肌酸酐，及磷；25 -羥基維生素D ;禁食之三甘油醋；rhPTH(l-34)抗體。結果此臨床試驗包括有共1 6 3 7位婦女，以重組體人類副甲狀腺激素（1_34)，rhPTH(l-34)，0，20或40毫克/公斤/天處理，並添加維生素D及鈣，歷1 8 - 2 4個月，此中之數據顯示以下史無前例及意外的發現： 1 . 先前有椎管骨折的病人，有7 8 %以上新的多發生骨折會減少。 2.非椎管骨折均顯著減少（包括髖骨，橈骨，腕，骨

0:\60\60045-9104l7.ptc 第53頁 576747 _案號88114185 9 I年4月/Ί β 絛正五、發明說明（51) 盤，足，肱骨，肋骨或腳踝），ρ< 0.007。 3 . 先前有椎骨骨折的病人，有6 6 %以上新的骨折會減少 0 4. 先前有椎骨骨折的病人，有7 8 %以上新的中度（2 5 %以上失去椎管高度或相當的測度）至嚴重（4 0 %以上失去椎管高度或相當的測度）骨折會減少。骨折如G e n a n t e t a 1 . (1 9 9 3 )於Vertebra 1 fracture assessment using a semiquantitative technique; J. Bone & Min Res 81137-1148中所定義。 5 . 先前有骨折的病人，髖骨，脊柱及總體之骨礦物質含量有顯著的增加，顯示在這些部位骨折的減少可早在治療1 2個月後即發生。這些在骨折上的數據是PTH減少骨折在人類的第一次數據。這些發現證明，在骨品質及骨強度上之改進，就如@ 上述報告之臨證前數據一般。這些結果也顯示出在非椎管位置處對骨品質及強度之益處。骨折數減少可在治療的S 1 8 - 2 3個月期間持續的發現，是臨床上或臨證前研究所無先例的。討論單獨的PTΗ是否可增加骨質之勘性及強度以改進對骨的抗性的問題，先前並未在人體中測試。已發表之致地建議，PTH之給予一定要配合抗再吸收劑或雌激素 — 先前已發表之臨床試驗包括大小型之病人族群，^ °、決定骨折是否顯著的減低。在一個研究中PTH單彳蜀日彳處無法評估，因為其中缺少空白對照組。在第二個ϋ盈

576747 修正案號 88114185 五、發明說明（52) 中，應用一般被接受之骨折定義，未觀察到骨折有否減少〇骨折數減少，在1 8 - 2 3個月的處理期間均持續的這個發現是無先例的且意外的。這些結果全然地超越減少尋常的個別骨折。這些結果證明，ΡΤΗ對於先前有椎管骨折，而有脊柱系重隨之而來之骨折高危險群之病人是有益的。本數據顯示，在個別病人中可減少2處以上骨折的益處是空前且意外的發現。 ΡΤΗ對骨質疏鬆症及類似疾病嚴重型式之應用，此發現先前未曾被檢視。本結果全然超越增加的骨質量。這些結果證明，ΡΤ Η對於先前骨折或是骨質量很低之病人，經由顯著地減少新的中度-嚴重骨折數目，而可預防中度-嚴重疾病之加速進行。在綜合的非椎管位置（髖部，腕，肱骨，足，肋骨，腳踝，橈骨及骨盤）減少骨折的發現是意外的。基於ΡΤΗ對此部位有負面作用的一般想法而言，此點特別令人感到意外。本數據資料證明了一個新發現，即ΡΤΗ投予至有接受維生素D及飼添加物之病人，可有效地預防椎管及非椎管骨折。和一般想法相反的，ΡΤ Η可加強非椎管部位之骨骼，以避免新的骨折或減輕骨折之嚴重性。對停經後婦女之第3期試驗顯示，以低劑量（2 0微克）治療之病人對骨骼有意料之外之益處，因為不良作用減少，但仍可保有骨折避免及骨折減輕，和在高劑量（4 0微克）下所見的類似。F I - I R猴子數據提供了機械學上的解釋，因為其中示出低劑量ΡΤΗ在皮質骨骼上可增加晶體之形成且

Q:\60\60045-910417.ptc 第55頁 576747 _案號88114185 QI年缸月ίΊ日_修正 _ 五、發明說明（53) 加速礦質化作用。此外，低劑量猴子顯示在撤消處理後的額外益處，因為Ρ Τ Η可加強骨之礦物質含量。本數據證明了一個新穎的發現，即低劑量Ρ Τ Η給予至已接受維生素D及鈣添加物之病人，可有效地用於避免椎管及非椎管骨折。和一般的想法相反，ΡΤΗ可加強非椎管部位之骨骼以避免新的骨折，或減輕骨折之嚴重度，很明顯的是經由改進骨骼之礦質化作用及礦物質含量。一般的理念以為，ΡΤΗ可增加皮質孔隙度且因此減弱了骨骼，尤其在治療早期。進一步此理念硬指，皮質骨骼部位是骨折高危險所在，且Ρ Τ Η對非椎管部位之骨折減輕上無法提供益處。此理念也以為，單獨的Ρ Τ Η似乎是無效的，且需同時伴有抗再吸收治療，以阻斷皮質骨骼上負面的作用。本數據則證明，Ρ Τ Η投予至已接受維生素D及鈣添加物病人時之空前的益處。十分意外的，ΡΤΗ對於脊柱多發性骨折危險群，額外的非椎管骨折危險群，脊柱中度至嚴重的額外骨折之危險群，均可加強骨骼而減少新骨折之次數。結論本臨床研究證明可應用副曱狀腺激素之投予： 1 .以減低多發性骨路骨折危險群病人之骨折數； 2. 可治療骨質量低或先前骨折而為進一步多發性骨骼骨折危險群之病人，如其脊柱骨質疏鬆症會快速發展之病人； 3. 可減輕骨骼骨折危險群病人骨折之嚴重度； 4. 可減少骨骼骨折危險群病人之非-椎管骨折；

O:\60\60045-9l0417.ptc 第56頁 576747 _案號88114185 Q丨年4月/0曰修正_ 五、發明說明（54) 5 · 可改善骨之品質。本發明參考許多特殊且較佳之具體實例及教示已加以描述。然而，應了解可在同時保有本發明精神及範圍之内進行許多變化及修飾。在本說明書中的所有刊物及專利應用均為本發明所參與之技藝中，一般技術水平之指示。

O:\60\60045-910417.ptc 第57頁 576747 _案號88114185 c?l年伞月ή Q 修正圖式簡單說明

0:\60\60045-9104l7.ptc 第58頁

Claims

576747 案號88114185 ?厶年1乙月么日修正六、申請專利範圍 1 . 一種共同使處於骨質疏鬆症風險或具有骨質疏鬆症之停經後婦女的脊椎管或非脊椎管之骨折風險降低之藥物，其包括由人類副甲狀腺激素之胺基酸序列1至3 4所組成之副曱狀腺激素以及一或多種醫藥上可接受之載體或賦型劑，其中該藥物係以每曰劑量2 0微克至4 0微克施用於該婦女達至少約1 2個月至3年，並共同施用維他命D及鈣，但不共同施用抗再吸收劑。 2 .根據申請專利範圍第1項之藥物，其中該每曰劑量為 2 0微克。 3 .根據申請專利範圍第1項之藥物，其中該每曰劑量係施用達至少約2 4個月。 4. 一種使處於骨質疏鬆症風險或具有骨質疏鬆症之人體的非脊椎管之骨折風險降低之藥物，其包括一種副甲狀腺激素以及一或多種醫藥上可接受之載體或賦型劑，其中該藥物係以每日劑量2 0微克至4 0微克施用於該人體，並共同施用維他命D及鈣，但不共同施用抗再吸收劑。 5 . —種使處於骨質疏鬆症風險或具有骨質疏鬆症之人體的皮質骨骼強度增加之藥物，其包括一種副曱狀腺激素以及一或多種醫藥上可接受之載體或賦型劑，其中該藥物係以每日劑量2 0微克至4 0微克施用於該人體，並共同施用維他命D及鈣，但不共同施用抗再吸收劑。 6 .根據申請專利範圍第4或5項之樂物’其中該人體係處於骨質疏鬆症風險或具有骨質疏鬆症，該骨質疏鬆症係起因於年齡相關之性機能衰退症狀。

O:\60\60045-921204.ptc 第59頁 576747 _案號88114185 ^年（乙月日修正_ 六、申請專利範圍 7.根據申請專利範圍第6之藥物，其中該人類為停經後婦女。 8 .根據申請專利範圍第4或5項之藥物，其中該人體具有骨質疏鬆症。 9 .根據申請專利範圍第4或5項之藥物，其中該藥物係施用至少12個月至3年。 1 0 .根據申請專利範圍第4或5項之藥物，其中該每曰劑量為20微克。 1 1 .根據申請專利範圍第4或5項之藥物，其中該每曰劑量係施用至少約2 4個月。 1 2 .根據申請專利範圍第4或5項之藥物，其中該副曱狀腺激素係選自 PTH(1-31)、PTHU-34)、ΡΤΗ(1-37)、 PTH(1-38)及PTH(1-41) 〇 1 3 .根據申請專利範圍第1 2項之藥物，其中該副甲狀腺激素係人類P T Η ( 1 - 3 4 )。 1 4.根據申請專利範圍第1 2項之藥物，其中該副甲狀腺激素係人類ΡΤΗ( 1-84)。

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