TW403754B

TW403754B - Protein kinase c inhibitor

Info

Publication number: TW403754B
Application number: TW085114103A
Authority: TW
Inventors: Gary Lowell Engel; Nagy Alphonse Farid; Margaret Mary Faul; Michael Robert Jirousek; Lori Ann Richardson
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1995-11-20
Filing date: 1996-11-18
Publication date: 2000-09-01
Also published as: EP0776895A1; ATE172199T1; CA2237221A1; PE22798A1; DK0776895T3; TR199800759T2; WO1997018809A1; AR004336A1; MX9803792A; US6117861A; PL184715B1; AU1054897A; HU226821B1; US5710145A; JPH11500149A; CA2237221C; KR100304210B1; NO982182L; CY2103B1; NO982182D0

Description

__4MT54_— ;__ 五、發明説明（！）蛋白激酶C (PKC)是一群功能與絲氨酸/蘇氨酸激酶相關之酵素。在細胞訊息傳遞、基因表現及細胞分化及生長的控制等方面，蛋白激酶C均扮演著重要的角色。目前得知至少已知10種蛋白激酶C的同功酶（isozyme)在其組織分佈，酵素專一性及調控方面是不同的（尼許朱卡γ.生化年報’: 31-44 (1989);尼許朱卡 γ.科學 258 ： 607-614 (1992)) 〇蛋白激酶c同功酶是爲單鏈的多胜肽，其長度範圍從592 個至737個胺基酸不等，同功酶含有一個調控區域及一個催化區域，經由一個連結胜肽將此兩區接合在一起，又該賙控區域及催化區域可進一步細分爲不變及可變區域。蛋白激酶C的催化區域和其它的蛋白激酶者是非常相似的，然而調控區域對PKC同功酶而言卻是唯一的。在PKC同功酶群中顯示其胺基酸的相似度介於40-80%之間，然而不同生物種間的單一酵素的相似度通常是高於97〇/〇。經濟部中央標準局員工消費合作社印製蛋白激酶C是一種膜相關的酵素，且受一些因素的異位型性調控（allosterically regulated)，這些因素包括膜鱗脂質，鈣及某些受磷脂肪酶反應後所釋放出的膜脂肪；例如二醯基甘油。（貝爾，；R.M.及布斯，D.J.，生物化學雜誌。 : 4661-4664 (1901);尼許朱卡 γ.科學 258 ： 607-614 (1992))。蛋白激酶C同功酶α，β-1，β_2及γ需要膜嶙脂貝、雀弓及一酷基甘油/大戟一1帖酉旨（phorbolesters)才有完全的活化，而δ，e，η及Θ等型式的pKc則爲鈣無關式的活化模式，又ζ (zeta)及λ型的PKC則與鈣及二醯基甘油 _ -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐）~~~： ' ――

40抓4 五、發明説明（均無關，一般認爲其活化只需要膜磷脂質即可。八有—種或兩種的蛋白激酶c同功酶與特定的疾病有關例如，糖尿病患者血糖指數的升高會導致血管組織中 β-2同功酶此專—性同功酶的上升。(依諾古許等人；腿^

$姐：11〇59_11065 (1992))。人體血小板中因糖尿導^ 土同力酶的升南與其對促效劑（ag〇ni叫反應的改變有相關 !生（貝斯特III，E. j及盧，j·痠差^ :(追加· ；ι) 97A (W3))。人體維生素D受體受蛋白激酶c。β型同功酶作用後可被選擇性的磷酸化。此磷酸化作用和該受體功能的改欠有關連（徐等人；MAS, USA肢：9315_9319 (l"i);徐等人，學雜誌_ Mi: 15118-15126 (1993)。除此之外，目則的研％顯示β-2同功酶負責紅白血病之細胞分化，而以同功酶則與這些相同細胞中的巨核細胞分化有關（孟瑞等人，學雜誌遞：15847-15853 (1993))。由於蛋白激酶C同功酶的普遍存在之特性及其在生理上所扣凟的重要角色，故而推論有高度專一性pkc抑制物的存在。有些事實證明某些同功酶和疾病狀態是呈相關的，因而合理推.論對與其它PKC同功酶及其它蛋白激酶相關的某一種或兩種之蛋白激酶C同功酶有選擇性之抑制化合物是爲良好的治療劑’。由於其專一性，此種化合物證明有較大的功效且具低毒性。 Ν，；ΝΓ-橋架-雙吲哚基順丁烯二醯亞胺一族的化合物已由赫斯等人揭示在 ΕΡ 0 657 458 中（U.S.S.N 08/413,735)，並以 Ερ 〇 657 458文號於1995年6月14日發表。此ν，Ν，-橋架系列化合 Μ氏琅尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） I I-- (請先Μ讀背面之注意事項,寫本f )

.IT —線 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403754 A7 B7 五、發明説明（物中較佳的化合物包括式I的化合物

N(CH3)2 本發明提供一種新穎的、或I化合物的^效鹽類。最意想不到的是所申請專利的鹽類型式有較佳的溶解度，且對病人有極爲良好的生物效益。除此之外，該種鹽類容易以結晶型式配製及純化之。因此’該申請專利鹽類是較優良的醫藥物且爲良好的治療劑。該申請專利鹽類可用於治療與糖尿病以及其併發症，局部缺血，發炎，中樞神經系統疾病’心血管疾病，皮膚病及癌症等相關疾病。本發明提供式I化合物的甲磺酸鹽類。因此，本發明提供式la化合物' (I) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

N(CK3)2 . CH3SO3H (ia) 以及其溶劑化物。本發明的另一個訴求是一種抑制蛋白激括以醫藥學上有效本音其包動物。除此之夕卜L Μ此㈣的哺乳除此々外’本發明提供在生理上因蛋白激酶起的疾病治療方法，如局部缺血，發炎，中樞神㈣2 =，心血管疾病、皮膚病及癌症，其方法包择以醫藥學上有效含量之1a化合物施與需此療法的哺乳動物。，本發明特料科藥學上的，且特別相於治療微血总糖尿病併發症’特別是糖尿病視網膜病。 s 病。因此，本發明另提供— / 4變性法的哺乳動物。…量一合物施與需此療 =明的最後一個訴求是含有式M合物與醫樂學上可接受之賦形劑、載.體或種藥調配物。从昆合-起的醫針對本文中本發明所揭示者及申請專利者目的而今列名詞及縮寫定義如下：。下經濟郜中央檩準局員工消費合作社印製私：又中所用#樂學上有效含量"一詞意指能夠抑動物體"KC活性的化合物含量。當‘然，根據本用的特別化合物劑童將由實例的狀況而定，包括施用的化合物’施藥的途徑’治療的特杨件及相似的考量。可“ 由不同的途徑來施用這些化合物，如口服、肛塞、妹皮稭皮下注射、局部性，靜脈注射、肌肉注射或鼻料較佳的施藥途徑是口服。針對所有的適應症而言，血刑本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格公瘦）五、發明説明（日劑量含有約從0.01毫克/公斤至約20毫克/公斤本發明所指的活性化合物，較佳的日劑量約爲〇〇1至約1〇毫克/公斤，τ交佳疋低於1笔克/公斤，而最佳則爲約〇至約〇 5毫克/公斤。本文所用"治療"一詞意指管理及照顧病人以對抗所罹患之病病、病況或'不適，其包括施用本發明所指的化合物以預防病徵或併發症的開始，或是減輕症狀或併發症，或是治療該疾病’病況或不適。本文所用"總相關物質"一詞意指終產物中有關不純度的含量》不純度包括終產物中（但局限於）之上游反應中間產物或不符的反應終產物。總相關物質是純度的計量。 .如前述，本發明提供能選擇性抑制蛋白激酶c之式1&化合物及其溶劑化物。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 η Κ

(la) •N(ch3)2 . CH3SO3K 式la化合物可與諸如水，甲醇，乙醇，二.甲基甲酿胺，乙故乙S曰及其類似物等溶劑化物型式存在.，亦可配製水合 /昆合物及;谷劑化物。此種水合物及/或溶劑化物的來源可來自結晶作用的溶劑，來自製備或結晶作用的溶劑，或是 s- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) ( 210X297公釐） A7 B7 經中央操準局員 X .消費合作衽印製 r-403754 五、發明説明（附加至該溶劑上'這些水合物及溶劑化物均是本發明的範圍。較佳的情形是式ia化合物以單水合物或三水合物製備之已知式la化合物存有各種的立體異構物，本發明較佳的化合物是爲式lb及式Ic : Η

n(CH3)2 . CH3SO3H (Ib) 、 CK3SO3H (Ic) 然而，消旋物或個別的鏡面異構物及其混合“爲本發明的部分。製備式I自由基質已由赫斯等人揭示在EP 〇 657々Μ中，並以EP 0 657 458文號於1995年6月14曰發表，並併入本文參考。化合物較佳的製法如下：一 . 釐）本紙張準（CNS) A4 規格（ 403754 at B7 五、發明説明（7 )

Η ----------t.-- {請先聞讀背面之*注意事項1¾¾¾本頁) 訂

I是氧甲磺醯基或溴，Pi是羥基保護基，較佳的是爲三級丁基二苯基單矽烷基氧（TBDPS)，三級丁基二甲基單矽烷基氧（TBDMS)，三苯基甲基（三苯甲基），單或二曱氧三苯曱基，或烷酯或芳香酯。L爲良好的殘餘基，如氯、溴、石典、甲績酿基、甲苯續醯基（tosyl)及其類似物。L較佳的是氧甲續醯基或溴。._ _ -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）線經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 403754 五、發明説明（8 形成化合物IV的反應可藉由任何製備队取代性4哚的已知方法來完成《該反應通常涉及大約相等莫耳含量的反應劑II及m，雖然其它的比例亦可行（特別是其中的烷基化試劑過:r時）。反應最好是在引用鹼金屬鹽類或其它技藝所偏好之燒基化條件下之極性非質子溶劑中完成，反應條件包括如下：二曱基曱醯胺或四氫呋喃中的六甲基二矽疊氮化鉀（potassium hexamethyldisilazide)或是二甲基曱醯胺中的氫化鈉。反應較佳是緩慢逆添加存於乙腈或二甲基磺醯胺 I碳酸鉋，反應溫度最好是從約室溫至約反應混合物的逆流溫度。藉由技藝中偏好的技術以去除羥基保護可將化合物〗乂轉換化合物v，化合物v與甲燒績酸酐及溶於TIiF的嘧啶或在氮氣存在下之二氯甲烷反應後可輕易的轉換成化合物 VI ’或是將孩醇類與溶於二氯甲烷，THF或乙腈或其它適 σ之溶劑的二苯基膦或三苯基亞鱗酸及喊咬條件下的溴反應亦可完成。將化合物VI與溶於極性溶劑（如DMF，THF/ 水，二甲基乙醯胺或其它技藝中所偏好的條件）之二甲基胺反應後可轉換成化合物I。將式I化合物與溶於非反應性有機溶劑（較佳的是有機溶劑/水的混合物，而·最佳的是水_丙酮的混合物）中之甲烷石Λυ故反應後可製備成本發明申請專利的.甲續酸鹽類，其它諸如甲醇，丙酮、乙酸乙酯及其混合物等亦可用以反應。落劑和水的混合比例並不要求，通常是以反應劑的溶解度而定。溶劑對水的較佳混合比例通常從約0.1 : 1至1〇〇 : Μ氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) /\4^格（2丨0Χ：297公釐 ----------裝— (請先閱讀背面之ίι意事項再...為本頁) 訂 —線 ΓΥ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 11- 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 403754五、發明説明（體積化，較佳的比例是i : i至2〇 :〗，最佳的比例是5 :工至 10 : 1。最佳比例是依所選的溶劑而定，較佳選擇是丙酮，其與水的比例是9:卜反應通常涉及兩種大約相等莫耳含量的反應劑，雖然其它的比例亦可行（特別是其中的甲烷硫酸過量時）。甲烷硫酸添加至反應中的速度並不重要，可快速加入（<5分鐘）或緩慢的加入（超過6時或更長的時間）。反應是在〇°C至逆流溫度的溫度下完成。反應持續攪拌直到鹽類完全的形成（以x•光能繞射測定之），其所需時間爲5分鐘至12小時 '本發明中的鹽類較佳且較易以結晶悲製備之。以乾燥法或於20-60%相對濕度下可將本發明中鹽類的二水合悲輕易轉換成單水合態。該鹽類實質上是種有明確熔點，雙折射及x_光繞射圖式的結晶體，通常而 s此晶體之非晶形固體少於10%，較佳的是少於5%，最佳的則是低於1 %。以過遽法或其它技藝中所偏好的分離技術直接從反應混合物中分離甲確酸鹽類，產量範圍從5〇 %至1〇〇0/〇。若有需要可以再結晶法或其它技藝中所偏好的純化技術將該鹽類進一步的純化之β 下列的範例及製備法只是提供本發明更詳進的説明，本發明的範圍不只是以下列的範例説明而已。在下列的範例及製備法中，熔點，核磁共振譜，質譜，矽膠片上的高壓液體層析’ Ν，Ν-二甲基甲酿胺，活性炭上麵，四氫咬喃及乙酸乙酯分別縮寫成M.Pt.，NMR，MS，HPLC，DMF， Pd/C，THF及EtOAc。"NMR”及”MS，，一詞意指該圖譜與所需 -12- 木纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------裝-- (請先聞T讀背面之一注意事項4"^冩本頁) 訂一

.rrii.E_.rM 線經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403754 五、發明説明（10 ) 的結構相符。製備1 liL2-『（甲某碏醯基）氧基1乙氣某）_4·(三笨基甲氧基）-1_丁醇甲烷磺酸鹽在Ns存在下，將三苯曱基氯（〗75.2克，0.616莫耳）溶於 500毫升的CH2C12，加入三乙基胺（71.9克，100毫升，0.710 莫耳），再加入R,S-縮水甘油（50.0克，0.648莫耳），並將反應溶液加至溫和迴流溫度（42°C ) 4小時，將反應冷卻至室溫，並以250毫升氯化銨飽和水溶液萃取2次，而後以250 毫升鹽水萃取。水層以1〇〇毫升的CH2C12反萃取，而有機層乾燥之（MgS04)，並於眞空下蒸散之而得油狀三苯曱基-縮水甘油，以乙醇再結晶後可得104.4克固態的三苯甲基縮水甘油（54%)。，内含溪化乙晞鎂（vinylmagnesium bromide).( 50毫升，50毫莫耳，2.0當量）的1MTHF於N2存在下冷卻至-20°C，加入催化量的碘化銅（0.24克，1.26毫莫耳，0.05當量）。所得的反應混合物於-20°C下擾拌5分鐘，而後在-20°C下將溶於40毫升之無水THF的三苯甲基縮水甘油（7.91克，25.0毫莫耳）一滴滴加入上述反應混合物中（添加時間超過15分鐘）。將反應混合物在-20°C下攪拌3小時，而後回溫至室溫，並攪拌15 分鐘。將反應混合物冷卻至-30°C以終止反應，而後缓慢 .添加125毫升氯化銨飽和水溶液。所得的反應混合物以200 毫升的乙酸乙酯萃取之。有機層再以内含0.93克（2.50毫莫 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I. I-----參--- (請先閣讀背面之注意事項VE..,.寫本莨)」訂線 403754 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（U ) 耳，0.1當量）EDTA的125毫升去離子水溶液萃取以去除任何的金屬。以5 0毫升的乙酸乙醋反萃取水層，與有機層結合後以100毫升的鹽水清洗，乾燥（MgS04)，於眞空下蒸發可得油狀物，油狀物以1.2升的己烷/乙酸乙酯（3/1)經過矽膠（76克）過濾之，濾液在眞空下蒸發後可得9.07克淡黃色油狀物（100%)之1-氧-(三苯基甲基）-2-羥基戊醇。懸浮於礦物油之60%氫化鈉懸浮液（6.13克，0.153莫耳， 1.5當量）在室溫下加入175毫升之無水THF中，所得的反應混合物在室溫下攪拌1.5小時，而後以注射筒加入17_7毫升剛蒸餾過的溴丙缔（0.204毫莫耳，2.0當量），反應加熱至45 °C 1小時，以TLC或HPLC監控該反應的進行。將反應混合物冷卻至0 °C，緩慢添加400毫升的氯化銨飽和水溶液以終止過多的鹼。以800毫升的乙酸乙酯萃取所得的反應混合物，而以500毫升的水清洗有機層，以1〇〇毫升的乙酸乙酯反萃取水層，與有機層結合後以2〇〇毫升的鹽水清洗，乾燥（MgS〇4)，於眞空下蒸發可得41·5克（>ι〇〇%)黃色的油狀物，1，Γ，1·'-[[[2-(2-丙晞基氧基）-4-戊埽基]氧基]次甲基] 叁[苯]。 1，1'，1"-[[[2-(2-丙烯基氧基）-4·戊婦基]氧基]次甲基]畚 [苯](39.3克，0.102毫莫耳）溶於390毫升無水甲醇及60毫升 CH2C12之溶液中，並冷卻至_5〇。匚至-40°C，以打n2氣泡通過黏稠的反應落液。在_5〇9C至-40°C溫度下打〇3氣泡通過反應混合物達80分鐘’直到反應顏色變成淡藍色。所得反應混合物在N2存在下回溫至室溫，並將反應溫度保持在低於 -14- 本紙張尺詹用中國國宏後准/ _____ W. s- r i t 公 (請先閣讀背面之注意事項寫本頁) -裝. <11 §.lllEir.- 線經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403754 A7 B7 五、發明説明（12 ) 10°C下緩慢添加内含硼氫化鈉（23.15克，0.612莫耳，6當量）之85毫升乙醇/ 85毫升水的溶液以終止該反應。反應於冰浴下攪拌30分鐘，並回溫至室溫，隔夜攪拌，溫度上升至31 °C。以400毫升的氯化銨飽和水溶液稀釋反應混合物，以800毫升的乙酸乙酯萃取之。以400毫升的水清洗有機層，並以150毫升的乙酸乙酯反萃取水層。與有機層結合後以200毫升的鹽水清洗’乾燥（MgS04)，於眞空下蒸發可得雲霧油狀物。油狀物以3批的己烷/乙酸乙酯（2/1)再結晶可得28.9克之3-(2-羥基乙氧基）-4-(三苯基甲氧基）-1-丁醇（72%)。 3-(2-羥基乙氧基）-4-(三苯基曱氧基）-1_丁醇（14.〇克， 35.7毫莫耳）溶於140毫升的CH2C12中，並於N2存在下冷卻至0C ’並加入三乙基胺（10.8克，.14.9毫升，0.107莫耳， 3.0當量）。而後在低於5 eC下，一滴一滴的加入氣化甲烷颯（11.0克，7.46毫升，96.4毫莫耳，2.7當量）。以額外的的 CH^Cl2 ( 300毫升）稀釋所得的反應混合物，再以2〇〇毫升的水及200毫升之氯化兹飽和水溶液清洗之。以5〇毫升的 (3¾¾反萃取水層，與有機層結合後以1〇〇毫升的鹽水清洗，乾燥（MgS〇4)，於眞空下蒸發可得白色固態18 4克（94%) 的3-(2-[(甲基續醯基）氧基]乙氧基]_4_(三苯基甲氧基）_i-丁醇甲燒續酸鹽。 -15- 本，·.氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規每（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項\ 本頁) •裝. 訂 403754 at 一 ___B7 五、發明説明（13 ) ~~〜一製備2 (S)-三苯甲基-缩水甘油將三苯甲基氯（2866克，10.3莫耳）在A的存在下溶於7升的CH2C12中，加入三乙基胺（1189克，1638毫升，118莫耳），而後加入（R)-(+)-縮水甘油（795.0克10.6莫耳）並以i升的CH^Cl·2清洗之。將反應洛液加熱至溫和迴流溫度（42«c ) 3-4小時後冷卻至室溫，再加入3升的鹽水。乾燥有機層 (600克NaJO4) ’並在具空下蒸發可得油狀物的.三苯曱基. 縮水甘油化合物’自乙醇中再結晶後可得2354克（70%)固賤的三苯甲基-縮水甘油化合物。製備3 (g)-3-『2-T (甲基績醯基）氧基1乙氧基1 ·4-(三苯基甲氧基）丁醇甲烷磺酸鹽經濟部中央標準局員工消費合作·杜印製内含溴化乙烯鎂（5.76升，5.76莫耳，1_96當量）之11^1'1^ 溶液於Ν2存在下冷卻至-20°C，加入催化量的碘化銅（28.2 克，0.148莫耳’，〇.〇5當量）。所得的反應混合物於-2(TC下攪拌5分鐘，而後在-20°(：下將溶於3.2升之無水11^的（8)-三苯甲基縮水甘油（929.0克，2.94莫）一滴滴加入上述反應混合物中（添加時間砝過1.5小時）。將反應混合物在-20°C下揽摔1小時，將反應混合物冷卻至-3 0°C以終止反應，而後缓慢添加5升氣化銨飽和水溶液。有機層用1升的10%重量體積比的EDTA溶液萃取2次以去除任何的金屬。有機層以 2升的鹽水清洗2次，乾燥（MgS04)，並於眞空下蒸發可得 __ - 16- 本紙張尺度適用中国國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 __403754 ；；_ 五、發明説明（14 ) 1061克（96%)的油狀（S)-l-0-三苯基甲基_4-幾基戊醇。懸浮於磺物油之60%氫化鈉懸浮液（268·9克，6 72莫耳， 1.5當量）在&的存在下加入2.8升之無水THF中，而後在室溫下加入内含（Shl-O-三苯基曱基_4_羥基戊醇（1543克，448 莫耳）之5.6升無水THF。所得的反應混合物在室溫下攪拌 1.5小時，而後加入770毫升剛蒸餾過的溴丙烯（8 89莫耳， 2.0當量）（添加時間超過20分鐘）。反應加熱至45°C 1-2小時後冷卻至15-20 C ’缓f更添加2升氣化録飽和水溶液以終止過多的鹼。用1升的乙酸乙酯及1升的水稀釋反應所得的屍合物’並分離有機層。以5〇〇毫升的乙酸乙酸反萃取水層，與有機層結合後乾燥之（MgS04)，並於眞空下蒸發，可得1867克（98%)黃色油狀物（s)-l，l，,i'，-[ [ [2-( 2-丙烯基氧基）-4-戊烯基]氧基]次甲基]叁[苯]。 (S)-l，r，l"-[ [ [2-(2-丙烯基氧基）-4-戊烯基]氧基]次甲基] 參[苯](1281克，3.33莫耳）溶於4升的無水甲醇及3.6升的 CI^Cl2之溶液中，並冷卻至_5〇1至_4〇。(：，以打N2氣泡通過黏稠的反應溶液。在反應中加式蘇丹III指示劑。在-5(TC至 -35°C溫度下打〇3氣泡通過反應混合物達13小時，直到反應自桃色變成淡黃綠色。所得反應混合物在N2存在下回溫至室溫’並將反應溫度保持在低於30。(：下缓慢添加内含硼氫化鈉（754克，19.9莫耳，6當量）之2.5升乙醇/2.5升水的溶液’此反應於室溫下隔夜攪拌，並以HPLC監控反應的進行。將反應混合物冷卻至l〇_15°C，並於<20°C的條件下緩慢添加4升氯化銨飽和水溶液。終止後的反應混合物過濾 _______ " 17 本紙ft尺度適用中國國( CNS ) A4規格（210X297公釐） — (請先閱讀背面之注意事項，，'w寫本頁) •裝. ,ιτ 線 A7 B7 403754 --------- 五、發明説明（15 之，並以3升CHs.Cl2清洗固體。分離有機層，以3升的氯化按飽和水溶液清洗之，而以1升的CHzCl2反萃取水層。與有機層結合後乾燥之（MgS〇4)，並於眞空下蒸發可得1361克 (>100%)油狀的（S)-3-( 2-羥基乙氧基）三苯基甲氧基）小丁醇。 (S)-3-( 2-羥基乙氧基）-4-(三苯基曱氧基）-1 丁醇（500克， 1.27莫耳）溶於4.8升的CKbCl2中，並於A存在下冷卻至〇 C ’而後加入二乙基胺（386.4克’ 532毫升，30當量）。而後在<5eC .的條件下一滴一滴的加入甲燒續g盛氯（396 3克.， 268毫升，3.46毫莫耳，3.0當量（添加時間超過3〇分鐘）。所得的反應混合物在0 °C至5 °C下攪拌1-2小時，並以HPLC 監控之。以額外的CHsCl2稀釋反應混合物，再以2升的水及2升的氯化録飽和水溶.液清洗2次。以1升的ch2C12反萃取水層，與有機層結合後乾燥之（MgSCU)，並於眞空下蒸發可得粗固體，以三批的乙酸庚醋/乙脂（1 : i)再結晶後可得615克固態之（S)-3-[ 3-[(曱基續g蠢基）氧基]乙氧U丨丨丨丨丨丨p 苯基曱氧基）小丁醇甲烷績酸鹽。NMR. MS. 鲅備4 3-[ 2-碘乙氧基1 -4-(三苯基甲氧基）-1-碘丁烷溶於500毫升試藥級丙酮中的3-(2-[(甲基磺醯基）氧基]乙氧基]-4-(三苯基甲氧基）_1_ 丁醇甲烷績酸鹽（5.〇克，9.10毫莫耳）與碳酸氫鈉（0.0770克，0.910毫莫耳，0.1當量）及碘化鋼（34.2克’ 0.228莫耳，25當量）反應之。所得之反應混合 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項耳：寫本頁) -燊· 言 Π 經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403V54 b7 .五、發明説明（：16 ) - 物在N2的存在下於50°C溫度下攪拌大約16小時。，、，τ 以HPLC監控反應的進行。在眞空狀態下去除反應混合物由^ 丁的两嗣，以300毫升乙酸乙酯與200毫升水所混合之溶液％ &_ 所得的固態物。再以.200多毫升之水清洗有機層，以1〇〇真升額外的乙酸乙酯反萃取所總共結合的有機展 s 叫嘈。再以200 毫升10%亞磷酸鈉水溶液清洗有機層（去除黃顏色 >，再& 100毫升鹽水清洗，乾燥（MgS〇4)，於眞空下蒸發可得5 45 克（98%)透明油狀之3-[ 2-碘乙氧基]-4-(三苯基甲氧基）破丁烷。MS. NMR. 製備5 (S)-10，ll，14,15-四氫-13-「甲烷磺醯基氣某(^甲基” _4 Q : ?· ' .、 — 1 7 16,21-二亞甲基-1氫，氫-二笨并fEJCl吡咯#『3 4-滸]，『3,4,13〗氧重氮環十六竣炔-1,3-二嗣 3,4-(雙）-(1氫-吲哚-3-基）-N-甲基順丁晞二醯亞胺 ( 1 0 . 0 4克，29_4毫莫耳）及（S)-3-( 2-碘乙氧基）-4-(三級_ 丁基二本基單梦燒基氧基）破丁燒（17.9克，29.4毫莫耳）— 起溶於無水的DMF ( 80毫升）中。將此溶液以注射針筒％添加至50°C内含碳酸铯（38.3克，11S毫莫耳）之無水DMF (1.7 升）懸浮液中’其條件是在N2存在下，且所添加的時間需超過72小時。於眞空下去除DMF，以CHCls/lN HC1分餾殘餘物，以氯仿及乙酸乙酯反萃取酸層，結合有機層後以1N HC1，水，鹽水分別清洗1次，2次，2次，以Na2S〇4乾澡之，潭原產生紫紅色的固體，所用的粗反應混合物無需進 -------- 19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（ 210X297公釐） ^： I. |---裝-- (請先閲1背面之注意事項14.寫本頁) 訂 I線〇 403^54 _Η；五、發明説明(：17 ) ―步的純化。粗反應混合物懸浮於乙醇（700毫升）中，並與5N KOH (800毫升）反應之。將反應溫度升至8(TC，2小時後於眞空狀態下去除乙醇，並將水懸浮液冷卻至0 °C，添加5N HC1 酸化之。收集紫色沈澱物，並以乙酸乙酯做洗出劑通過矽塞。濃縮洗出物可產得8.7克部分梦化的紫紅色固態順丁埽二醯亞胺，此產物直接用於下一步的反應無需進一步的純化。在N2的存在下，室溫下，將i，i，i，3,3,3，-六曱基（41.6毫升，19.7毫莫耳）及甲醇（4毫升，98.5毫莫耳）加入上述無水的DMF溶液中，（8.7克，19.7毫莫耳）。40小時之後，在眞空狀態下濃縮反應，並加入體積比爲2 : 1之MeCN/lN HC1溶液（100毫升）。將殘餾物攪拌丨小時，去除有機層，以乙酸乙酯萃取水層，去除溶劑後可產得8.9克的順丁烯二醯亞胺，此產物不需進一步的純化。經濟部中央標準局員工消費合作社印製於N2的存在下，室溫下，於内含順丁烯二醯亞胺（8.9 克，2〇毫莫耳），之CH2C12 ( 8〇〇毫升）懸浮液中加入吡啶（4.85 毫升，60毫莫耳）及稍過量之甲烷磺酸酐（4.21克，24毫莫耳）。16小時之後，以〇. in HC1及鹽水清洗反應混合物，並濃縮有機層。以低梯度〇_1〇% MeCN含量的CH2C12將殘餘物通過的塞洗出來。含有所需甲磺酸鹽類之洗出液濃縮後可產得2.8克紫紅色固體狀如標題所示的化合物。自二硤化合物所得總產量爲18%。MS. 本紙崁尺度適用中國國家標^ ( CNS ) A4規格^ 21〇><297公釐^: 403754 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（18 ) 製備6 (SV134(二曱基胺基）甲基 1-1〇,11,14,15·四氫-4,9 : 16-?」-二亞甲基-1氮，13氨-二各并『Ε,ΚΙρ比哈幷『3.4- ft. 1，丨1,4,131氣重氮環十六碳炔：-1，3(2氫）-二銅 2,3-雙-(1氫-<15丨11朵-3-基）-]^-甲基順丁烯二驢亞胺（114.7 克，0.336莫耳）及（S)-3-[2-(甲基磺醯基）氧基]乙氧基]_4_ (三苯基甲氧基）-1-丁醇甲烷磺酸鹽（220.0克，0.401莫耳， 1.2當量）溶於4.3升的DMF中。而後將此溶液缓慢地加入5〇 °C内含碳酸铯（437.8克，1.34莫耳，4.0當量）之7升DMF的泥狀溶液中，其添加速度爲1毫升/分鐘，而添加時間超過 70小時^ 70-72小時之後，冷卻反應並過濾之，於眞空下去除DMF可得殘餘物，將殘餘物溶於4,6升的CH2C12。以1.15 升的IN HC1水溶液萃取有機層，再以4.6升的鹽水萃取之。結合水層後再以1_.1升的CI^Cl2反萃取，結合有機層乾燥之 (NajO4)並過遽之。大部分的溶劑會於眞空狀態下去除，而所得的溶液利用4-5加侖的額外CH^Cl2通過2公斤的碎膠以去除基質。在眞空下去除溶劑，而所得的紫色固體磨碎後溶於7倍體積之乙腈中（根據粗（s)-l〇，u，i4，15-四氫-2-甲基-13-[(三苯基曱氧基）曱基]_4,9 : 16,21-二亞甲基_1氫，13氣 -二苯并田，幻吡咯#[3,4-氫][1,4，13]氧重氮環十六碳块· 1，3(2氫）-二酮的重量乾燥後可得ΐ50·2克（57%)之⑻-10，11，14，15-四氫-2-甲基-13-[(三苯基曱氧基）曱基卜4,9 : 16,21-二亞甲基-1氫，13氫-二苯弁[Ε，Κ]吡咯幷[3,4_ • 星][丨，4，13]氧重氮環十六碳炔-1，3(2星）-二酮，（以HPLC對 -----21- (請先閲讀背面之注意事項v.'k寫本頁)， .裝· 訂線

_- 五、發明説明乂 19 A7 B7 標準可得89%純度)。 (8)-10，11,14，15-四氫-2-甲基-13-[(三苯基甲氧基）甲基]_ 4,9 : 16,21-二亞甲基-1氫，13氫-二苯并[E，K]吡咯并[3,4-氫]U，4，13]氧重氮環十六碳块-1,3(2氫）-二酮（32.7克，46.9 毫莫耳）懸浮於L6升乙醇及1.6升ION KOH的水溶液中。所得混合物加溫至溫和逆流（78°C )達19小時，大部分的固體會在逆流溫時溶解，將反應溶液冷卻至l〇°C至15°C，並於 <15°C的條件下緩慢加入ION HC1 (1.2升）以調整酸度至 pH=l，再酸化的過程會產生紅色混合液，以500毫升的 CH2C12稀釋反應混合物，並攪拌20分鐘，而後過濾以去除大部分的鹽類。以額外的CH2C12 ( 1.5升）清洗鹽類，用1升的水萃取過濾液兩次，所結合的水層以1升的CH2C12反萃取，乾燥有機層（MgS04) β在眞空下去除溶劑可產得36.0 (>100%)紫色固體的（3)-10，11，14，15-四氳-13-[(三苯基曱氧 [3,4-氫][1，4，13]氧重氮環十六碳炔-1，3-二酮，（以HPLC面積測得80%純度）七經濟部中央標準局員工消費合作社印製在N2存在下，將（S)-10，ll，14，15-四氫-13-[(三苯基甲氧基）甲基]-4,9 : 16,21-二亞曱基-13氫-二苯幷[E，K]呋喃并[3,4-氫][1，4，13]氧重氮環十六碳炔-1，3-二酮，（36.0克，定爲46.9 毫莫耳）溶於320毫升的無水DMF中，並與事先已混合好的 1，1，1，3,3,3-六甲基二矽胺烷（99毫升，75.7克，0.469莫耳， 1.0當量）與曱醇（9_5毫升，7.51克，0.235莫耳，5當量）之混合液反應之。所得反應混合物在45°C下加熱7小時，以 -22· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇xy7公釐） A7 B7 五、發明説明（20 ) HPLC監控反應的進行，於眞空狀態下去除大部分的dmF，再以200毫升的乙酸乙酯萃取所剩之殘餘物，並再分別以 200毫升的水清洗1次，以1〇〇毫升的5% LiCl溶液清洗2次。以100毫升乙酸乙酯反萃取水層，結合有機層以200毫升的氯化銨飽和水溶液清洗之，乾燥之（MgS04)，眞空下蒸發後可產得35.9克（>100%)紫色固體之粗 13-[(三苯基甲氧基）曱基]-4,9 : 16,21-二亞曱基-1氫；13氫-二笨并[E，K]吡咯幷[3,4-氫][1，4,13]氧重氮環十六碳炔_〗，3(2 氫）-二酮。經濟部中央標準局員工消費合作社印製將（S)-10，ll，14，15-四氫-13-[(三苯基甲氧基）甲基]_4,9 : 16,21-二亞甲基-1氫；13氫-二苯并[e，K]吡咯幷[3,4_ 氫][M,13]氧重氮環十六碳块-1，3(2氫）-二酮（34.0克，定爲 46.8毫莫耳）溶於350毫升的CH2C12，並於N2存在下冷卻至-25°C *在<0°C條件下，將無水HC1打氣包通過反應溶液中大約1-2分鐘’將混合液回溫至室溫並攪拌1小時。以HPLC 監控反應的進行。過濾反應混合物，以200毫升的CH2C12清洗固體後，將固體置於50°C烘箱中乾燥可得1.86克（90%)紫色固體的（3)-10，11，14，15-四氫-13-(羥基甲基）-4,9:16,21-二亞甲基-1氫，Π氫-二苯并[Ε·,Κ]吡咯弁[3,4-氫][1，4，13]氧重氮環十六碳炔-1，3( 2氫_)-二酮（以HPLC面積測得93%純度）。溶於900毫升THF之0)-1〇，11，14，15-四氫-13-(羥基曱基）-4,9 · 16,21-—亞甲基-1氩，13氫-二苯并[Ε，Κ]ρ比洛并[3，4~ 氫][1,4,13]氧重氮環十六碳炔4,3(2氫）_二酮（18.2克，41.2 毫莫耳）的懸浮液與吡啶（9·78克，10.0毫升，0.124毫莫耳， 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格(.训心7公羞）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 403V54 _!Z_____ 五、發明説明（21 ) 3當量）及甲坑靖酸酐（14·3克’ 80.4毫莫耳’ 2當量）反應之，並於N2存在下加溫至逆流（67°C )達16小時。以HPLC監控反應的進行。冷卻反應’並以600毫升的乙酸乙酯稀釋之，以300毫升的1N HC1萃取2次’以600毫升的水萃取1 次。以300毫升的乙酸乙酯反萃取水層，將有機層乾燥之 (MgS04)。在眞空下去除溶劑後可產得19_〇克的⑻-10,11，14，15-四氫-13-[(甲基磺醯基）氧]曱基]-4,9:16,21-二亞甲基-1氫，13氫-二苯幷[[Ε,Κ]吡咯并[3,4-氫][Μ,Ι3]氧重氮環十六碳炔-1，3( 2氫）-二酮。將所得的化合物磨碎後溶於190毫升的熱CH2C12 (40°C )中，趁熱過濾，並以1〇〇毫升的室溫CH2C12清洗之，可得17.3克紫色固體（81%)之0)-10,11，14，15-四氫-13-[[甲基磺酿基）氧]曱基]_4,9:16,21-二亞甲基-1氫，13氫-二苯并[[E，K]吡咯并[3,4-氫][1，4，13]氧重氮環十六碳炔-1,3( 2氫）-二酮，（以HPLC面積測得96%純度）。將（S)-10，ll，14，15-四氫_13-[[(曱基磺醯基）氧]甲基]_4,9 : 16,21-二亞曱基-1氫，13氫-二苯幷[[Ε，κ]吡咯并[3,4_ 氫][1，4，13]氧重氮環十六碳_炔_1，3(2氫）_二酮（9.50克，18.3 耄莫耳）溶於475毫升的THF中，加入172毫升40%二甲基胺的水溶液（0.173莫耳，75當量），在閉封的反應器中將所得的落液加熱至65°C (8-10 psi)達19小時。冷卻反應’以900毫升的乙酸乙醋稀釋之，用450毫升的水萃取有機層2次，以鹽水萃取1次。用額外的25〇毫升乙酸乙酯反萃取水層，乾燥有機層（MgSCU)。於眞空下去除溶劑後可產得7 82克（s)_ ------- —__. - 24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210.X297公釐） I-1 111111 枯衣— 111 ~~ 訂 ~~ 11 線 (請先閲-讀背面之注意事項V /寫本頁)， - 一，….V一 403754 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（22) 13-[(二曱基胺基）曱基]-10，11，14，15-四氫-4,9:16,21_二亞曱基-1氫，13氫-二苯幷[E，K]吡咯并[3,4-氫][I，4，13]氧重氮環十六碳炔-1，3(2氫）-二酮（91%)。範例1 甲磺酸鹽類 _ (S)-13-[(二曱基胺基）甲基]-10，11，14，15-四氫-4,9:16,21-二亞甲基-1氫，13氫-二苯并[Ε,Κ]吡咯并[3,4-氫][M，13]氧重氮環十六碳炔-1,3(2氫）-二酮（3.0克，6.4毫莫耳）懸浮於90毫升試藥級之丙酮中。甲烷磺酸（0.62克，1當量）溶於10毫升去離子水中，並加入基質/丙酮混合液中，攪拌所得的紅橘色混合液，並過濾之，以25毫升的丙酮清洗之，乾燥後可得2.92克（81%)的甲磺酸鹽類。所有的步驟，包括清洗步驟，均是在室溫下進行。 .. ' 範例2 ^ 單./鹽酸鹽'- 將（S)-i3-[(二甲基胺基）曱基]-1〇，11，14，15_四氫_4 9:16 21_ 一亞曱基-1鼠，I3風-二苯并[Ε，Κ]ρ比嘻弁[3,4_氯][1 * η]氧重氮環十六碳炔-1，3 (·2氫）-二鲷（3.0克，6.4毫莫耳）基質懸浮於120毫升的甲醇（1當量）中可製備單鹽酸鹽類。其後加入 1NHC1所得混合液攪拌大約16小時，過濾後以以毫升的甲醇做爲清洗液。'所得的鹽類於5(TC眞空下隔夜乾燥後可得 2.6S克（82%)之HC1鹽類。所有的步驟，包括清洗步驟，: ___ -25- 本紙&尺度適用中國國家標準（CNW A4規格（210X297公釐) ^ —--- (請先讀背面之注意事項Κ—」寫本頁) .裝. ,ίτ 線 ,一 ri—r ^03754 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（23 ) - 於室溫下進行。 I 範例3-8 ^ ~ ---、酒石酸鹽、號後|鹽、乙酸鹽及鱗酸鹽藉由技藝中所偏好的技術利用甲醇/水溶劑混合物可製備氣酸、硫酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸及磷酸鹽類。各種的鹽4疋將故的水溶液加入内含(二甲基胺基）甲基]-l〇，ll，14，15-四氫-4,9 : 16,21-二亞甲基心氫，13氫-二苯弁 [E，K]?比洛幷[3,4-氫][1,4,13]氧重氮環十六碳炔_ι，3( 2氫）-二酮之甲醇懸浮液中後製備而成的。最不可思議的是本專利申請鹽類具改良的溶解度，且最重要的是其對病人具良好的生物療效。此鹽類易以單結晶型式製備之，且大大地減少了不純度。下面的範例提供了相較的分析以説明本專利申請鹽類不可思議及優良的特性。 , .範例9 產量、總相關物質及殘存溶劑的比趫總相關物質意指終產物中不純度的相關含量，因此是_ 純度的測量方式。’鹽類製備中發現硫酸鹽的產，量& γ (82%)，而產量最低是爲琥珀酸鹽（52%)(表1)。雖然於各種鹽類的製備中總相關物質（TRS)已減少’最大的減少量 (5.26%)是在製備甲磺酸鹽中發現。在眞空50aC烘箱乾燥太約16小時後只有、鹽酸鹽存有殘餘甲醇（0.62重量百分比）。 ' _ - 26 - _ 本紙浪又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） (請先閣讀背面之注意事項厂i.<寫本頁) -裝訂線 403754 A7 B7 五、發明説明（24 ) 而於琥珀酸鹽類及乙酸鹽與磷酸鹽類中以GC分析檢測發現内含0.18至1.32%的THF，這可能是在最後二個於液態 THF合成步驟中所遺留於鹽類中的。

表I :不同鹽類產量，％TRS& %殘餘溶劑鹽類產量 (%) TRS (%, HPLC)a 殘餘’ 溶劑，（％)b 鹽酸鹽 69 9.12 0.62 MeOH 硫酸鹽 82 7.28 none 酒石酸鹽 77 8.95 none 曱磺酸鹽 63 4.72 none 琥珀酸鹽 52 7:86 1.32 THF 乙酸鹽e 68 8.05 1.12 THF 磷酸鹽d 79 6.28 0.18 THF 請闓讀背之注項感、裝訂 a用於製備這些鹽類的自由基質具有9.98%總相關物質。 b偵測極限爲σ. 1% (1000 ppm)，所有的鹽類均於甲醇/水中製備，並於檢測之前在50°C眞空烘箱中乾燥大約16小時。 °以X光繞射分析#現於製備條件下琥珀酸及乙酸鹽未完全的滴定。 d以X光繞射分析發現磷酸鹽是部分滴定。 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）線經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^03754

經濟部中央標準局員工消費合作社印製範例1 0 X光繞射比φ# ，鹽類亦藉由偏光顯微鏡的比較以測定結晶性（雙折射性）。粉狀X光繞射顯示只有鹽酸鹽、甲磺酸鹽、琥拍酸鹽 ^乙酸鹽是結晶性的，而且產生獨―的父光圖譜。又琥轴 ^和乙酸鹽的x光圖瑨彼此之間是非常相以的，而顯示、自由鹼基型式的相關性。硫酸鹽 '酒石酸鹽及磷酸鹽則爲較差而具有重要.非形態特性的結晶性，由於易於純化且其往後的操作，所以結晶性鹽類是較佳的選擇。範例11 溶解度的比鲂_ 每種鹽類的液態溶解度以uv分析測定之（表π)並加以比車又&。出人意表的是曱續酸鹽類的液態溶解度最大，i 76 寬克/鼋升。甲磺酸鹽類的溶解皮明顯地高於其它的鹽類。表II的資料顯示出本專利申請鹽類溶於水中的溶解度比最常用的醫.藥學上可接受鹽類，鹽酸鹽，之溶解度 (0.268¾克/毫升）高出6倍，其後的研究也一致性的證明在办解度上有2至6倍的增加。琥珀酸鹽及乙酸鹽類中發現的高pH値顯示存有未滴定完的自由鹼基。甲磺酸鹽類的液fe落解度隨pH而異，最佳溶解度的pH値落在pH 4 〇至 5.0,最佳的是pH 4.5 (.2.25毫克/毫升）。不論是較高或較低的ρ Η値均會使其溶解度明顯地下降。除了値會影響溶解度之外，甲磺酸鹽的液態溶解度會因爲添加氯化鈉型式 ______ -28- 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS ) A4規格（21〇χ 297公爱) ' -- ----------裝-- (請先閣讀背面之注意事項广；.<寫本頁) 〇訂線 403754 A7 B7 五、發明説明（26 ) 的氯離子而使其明顯下降，這是因爲形成了鹽酸鹽類所導致的。. ，表II :液態溶解度鹽類溶解度 (微克鹽/毫升水）溶解度 c微嫌/毫升水） PH (飽和水溶液）鹽酸鹽 268 249 4.98 硫酸鹽 14 12 2.57 , 曱磺酸鹽 1760 1460 4.69 琥珀酸鹽 0.5 0.4 7.72 酒石酸鹽 71 54 3.77 乙酸鹽 1 0.9 7.80 磷酸鹽 736 ' 609 3.78 (請先閡讀背面之注意事項，.ν,-寫本頁) -裝- *va 範例12 每種鹽類以TGA，DSC及馬特勒熱台顯微術分析比較之 (表III)。當溫度自20°C加溫至100°C後發現鹽類的重量損失爲0.73至5.50%。硫*酸鹽、酒石酸鹽及磷酸鹽的重量損失最大，分別爲5.50%。當溫度自100°C加溫至200°C時，只有鹽酸鹽、琥拍.酸鹽^及乙酸鹽有進一步的重量損失。DSC分析顯示曱磺酸鹽類在261.6°C時有一明確的吸熱熔點峰，而硫酸鹽則在267.4°C時顯出較廣的吸熱現象。DSC分析顯示鹽酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、乙酸及磷酸鹽則不具熔點吸熱的現象。琥珀酸、乙酸及磷酸在大約245°C時有DSC放熱 _-29-__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）線經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403754 A7 __B7 五、發明説明（27 ) 反應。亦利用馬特勒熱台顯微術觀測樣品，而鹽酸鹽在達 30CTC的高溫下並沒有顯示出任何的熔解現象，而其它的鹽類則在215°C至270°C的溫度下顯示出成液狀的現象。表III : TGA，DSC及熱板顯微術結果鹽類 TGA TGA DSC 熱柢顯微術 (失重％) (失重％) 最高吸熱溫度 20-100°C 100-200°C (°C) rc) 鹽酸鹽 1.42 0.9 no MP no MP 硫酸鹽 5.50 - 267.4 260-270 甲磺酸鹽 3.97 - 261.6 230-264 琥珀酸鹽 0.73 1.90 no MP 230-270 酒石酸鹽 5.50 - no MP 215-255 乙酸鹽 0.77 1.44 no MP 245-265 磷酸鹽 5.50 - no MP 230-250 r 範例13 吸濕性比較分別在27%，35%，65%及80%的相對濕度下（RH)測定各種鹽類的吸濕性，結果列於表IV中。首先必須將樣品置於眞空下以建立RH資料的參考値。每種鹽類之内含水量亦以庫爾-費思電·量分析測定之。置於眞空下及置於80% RH下其鹽類所得的重量是從1.2至 8.4%的重量比。碡酸鹽類是最爲吸濕的一種，其次依序是 __；_-30-__ 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------—择衣------ΐτ------# / ). (請先閲讀背面之注意事項dw寫本頁)1 -,--丨) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403754 a? B7 五、發明説明（28) 酒石酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、鹽酸鹽及琥珀酸鹽。而庫爾-費思電量分析資料與内含高量水分之酒石酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽及_甲續_酸鹽的吸濕性資料相當的吻合0 表IV:吸濕性及庫耳費思（K.F.)結果鹽類吸濕性眞空下RH RH RH RH K. F. (原始重量 27% 35% 65% (%) 鹽酸鹽 100 98.7 98.2 99.3 100.4 100.6 1.3 硫酸鹽 100 98.9 98.4 99.8 100.9 101.9 4.9 甲磺酸鹽 100 99.0 98.5 99.4 100.7 104.4 3.6 琥珀酸鹽 100 99.3 98.5 99.1 100.0 100.5 0.2 酒石酸鹽 100 97.9 98.2 101.3 103.8 105.4 5.1 乙酸鹽 100 99.4 98.6 99.2 100.2 100.6 0.3 磷酸鹽 100 98.2 98.6 102.6 105.5 106.6 4.6 範例14 甲續酸鹽在甲醇/水.，100%丙酮，9 : i之丙酮/水，3 : i 之丙酮/水及1:1之·丙酮/水中製備，用以製備這些鹽類的驗基含有9.98%的總相關物質。而每種鹽類的產量以及總相關物負的結果列於表v中，用以比較結果HC1鹽類包括其中。表V中Ν_Α·註記表杀不存在。本紙張尺度適用中-國家標準（CNS ) Λ4規格-- I - -. mu 1 -1 - 1. _ i n^— n I ·I I- I - I -1 i ml 一eJ (請先閣讀背面之注意事項^_\寫本頁). - 線 403754_B7 五、發明説明（29 ) 表V : HC1及曱磺酸鹽類的產量及TRS 鹽類溶劑產量％ TRS (%, HPLC)3 殘餘溶劑(％)c 鹽酸鹽 30:1甲醇/水 69 9.123 0.62甲醇鹽酸鹽 9:1丙酮/水 83 4.73a N. A. 鹽酸鹽 20:1甲醇/水 82 2.23b 0.05甲醇曱磺酸鹽 7:1甲醇/水 63 4_72a none 曱磺酸鹽丙酮 85 9.80a N. A. 甲磺酸鹽_ 9:1丙酮/水 73 2.00a N. A. 甲磺酸鹽 5:1丙酮/水 39 0.69a N. A. 曱磺酸鹽 1:1丙酮/水 29 4_12a N. A. 曱磺酸鹽 9:1丙酮/水 81 0.91b 0.69丙酮 (請先閲，讀背面之注意事項vrfv寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 a用以製備這些鹽類的鹼基含有9.98%的總相關物質。 b用以製備這些鹽類的鹼基含有7.03%的總相關物質。 e偵測分析極限爲0.1% (1000 ppm)。於5:1丙酮/水中所製備的曱磺酸鹽具有0.7%總相關物質，降低了未反應鹼基之TRS的9.3%，然而其產量卻低至39%。假若所用的是9 : 1丙酮/水，則其產量上升至73%，TRS至 2.0%。鹽酸鹽的TRS亦降至4.7%，減少了 5.3%，但仍然存有2.4%未知的總相關物質。製備本專利申請鹽類的能力明顯地減少了不純度（TRS)，且其製備過程更爲有效率，並避免造成日後純化的成本。 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7

403ϊ54 由於鹽酸鹽是最常使用的醫藥學鹽類，且特別地揭示於赫斯等人所著，〇8/413,735,並以ΕΡ 0 657 458文號在1995年 6月Η日發表（範例5)，其中完成了甲磺酸鹽及鹽酸鹽的生物性比較。出:人意表的是本專利申請鹽類比HC1鹽類具更明顯的生物療效。這些鹽類的生物療效測定是在四隻雄性撒犬中以口服方式施用單劑量2〇毫克/公斤的丑^鹽類以及綠浮於10%樹膠中的本專利由請鹽類。每劑之間允許有— 週的緩衝期’劑量的施與是採交又方式設計（2隻狗/鹽/研先狗）。血漿中的活性化合物及活性代謝物濃度須監測。每隻狗在口服施以本專利申請之甲磺酸鹽後其血漿中所含之（S)-13-[(二甲基胺基）曱基經濟.部中央橾準局員工消費合作社印製一亞甲基-1氫，13氫-二苯并[E，K]吡咯并[3,4-氫][1，4，13]氧重氮環十六碳炔-1,3(2氫）-二酮及代謝物比施以同劑量之HC1 鹽類高。施用HC1鹽所測得的平均最大血漿濃度（c&^a± 疾差）爲400± 142奈克/毫升（化合物）及862土 255奈克/毫升 (代謝物），而施用本專利申請曱磺酸鹽所測得的則爲 896±243奈克/毫升（化合物）及2455±93〇奈克/毫升（代謝物）。這表示血聚中化合物及代謝物大約增加了 260%。在研究期間血漿中化合物和代謝物亦對時間做圖，在濃度曲線的面積（AUC')比例表示是施以病人化合物的生物療效，HC1鹽及本專利申請曱確酸鹽所測得的比例列於表VI中。表VI ·以單劑20耄克/公斤之鹽酸鹽及甲磺酸鹽口服施藥 ______-33 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐）

31 ^03754 五、發明説明（後所得的AUC比例狗# 代謝物甲績酸鹽：鹽酸鹽化合物甲旛酸鹽：鹽酸鹽 1 2.77 3.89 2 2.97 1.62 3 ,2.02 2.14 4 2.74 2.56 平均 2.62 2.55 標準偏差 0.21 0.49 經濟部中央標準局員工消費合作社印製出人意表的是表VI中所列的資料顯示甲磺酸鹽的生物療效疋HC1鹽的2.58倍。此生物療效的明顯增加致使爲達相同的醫藥學功效可減低病人施用的劑量β因此，病人的施用量減低了，除此之外，降低劑量使用可減少化合物的成本並減少製造化合物的總量。因此，本發明所用甲磺酸鹽劑量是從0.5毫克/公斤/劑至0 25毫克/公斤/劑，較佳的是〇1至 0.5毫克/公斤/劑。在產生相同血中濃度上而言，此劑量實質上所需者是比HC1劑量低。這七種鹽類物理資料摘要顯示甲磺酸鹽之物質理特性明顯地比所研究的鹽類好，並揭示於赫斯等人所發表之Ερ 〇 657 458文號之。最重要的是本專利申請鹽類的生物療效與 HC1鹽（生物療效比較後發現本專利申請鹽類是良好的治療劑。因此，本專利申請鹽的優點包括有： (1)高的液態溶解度； _— -34- Μ氏張尺度適用中國國家標準（CNS )八4^格（210Χ297公慶）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 403754 at __B7_ 五、發明説明（32 ) (2) 大量地減少了 HPLC測得之總相關物質； (3) GC分析發現沒有殘餘溶劑； (4) 以X光繞射及偏光顯微術發現是爲結晶性的； (5) DSC測得有明確的熔點；以及 (6) 比HC1鹽的生物療效高出2.5倍。，如前所述，本發明之化合物具有選擇性蛋白激酶C抑制物的活性，該化合物的活性揭示於赫斯等人所著專利文號 EP 0 657 458，並於1995年6月14日發表。該化合物活性是以#5離子#5調物依賴性蛋白激酶分析（Calcium Calmodulin Dependent Protein Kinase Assay)，路'蛋白蛋白激酶 II 分析 (Casein Protein Kinase II assay)，cAMP-依賴性蛋白激酶催化次單元分析及蛋白-穌·氣酸激酶分析等測定之。甲績酸鹽發現是具有活性的，且選擇性同功酶在這些分析中的IC50 値少於10 μΜ。具此醫藥學上活性之化合物可用於治療病理上與蛋白激酶C有關之疾病。文獻所報告的疾病包括有：糖尿病及其併發症（包括視網膜症，神經變性病及腎病），局部缺友，發炎，中框神經系統疾病，心臟血管疾病，，阿茲海默症，皮膚病及癌症。本專利申請化合物在施用之前最好先調製之，是故，本發明的另一個具體實例是内含式la化合物及一種或多種醫藥學上接受的載體，稀釋劑或賦形劑的醫藥學調配物。本發明醫藥學調配物是利用已熟知的步驟及具功效成分來製備的，在製備本發明調配物時，活性成分通常和載體混合在一起，或是以載體稀釋之，或是包埋於載體中而以 _；_- 35 -_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公楚)

----------批衣------、玎------# (請先閲讀背面之注意事項，，：¾馬本頁). · C 403754 A7 -----------B7 五、發明説明（33 ) ' ----- 膠囊藥囊、紙膜或其它容器的型式存在。當載體是做爲稀釋劑時，其可以是固體、半固體或液體以做爲活性成分的賦形劑、輔劑或基質。因此，該調配物可以錠劑、藥片卷末錠片、藥囊、扁囊劑、懸浮液、乳化液、溶液、糖漿、霧劑（固體或是在液態基質中）、軟動物膠囊、硬動物膠囊、栓劑、無菌注射劑及無菌包裝粉末等型式存在。 ’ 、經濟部中央標準局員工消費合作杜印製一些合適的載體、賦形劑及稀釋劑包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖、甘露醇、澱粉、樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、西 f蓍膠、動物膠、矽酸鈣、微細結晶纖維質’聚乙烯吡咯燒酮、纖維素、水糖衆、甲基纖維素、甲基及丙基經基苯甲酸/目石粉、硬脂酸鎂及礦物油。調配物中可額外添加潤巧d、保濕劑、乳化劑及懸浮劑、防腐劑、甜度劑或香料。本發明组成調配物最好是爲單位劑量型式丨每一劑量含有從約1至約20毫克的活性成分，更常的劑量是約2至10 笔克°然而，必須了解的是所施用的治療劑量必須是依醫生根據相關的狀況而定的，這些相關狀況包括有欲治療的疾病，施用化合物的選擇及施用藥劑的途徑，因此，上述的劑量範圍不是意圖限制本發明在任何方面的限制。"單位劑量型式"一詞意指生理上合適的區分單位以做爲人體或其它哺乳動物的單位劑量，每一單位含有事先測定含= 的活性物質及合適的醫藥載體以產生所需要的治療效果。下列的調配物範例只是用以説明並不是要限制本發明任何方面的範圍。

"適财 _ 家髀（CNSTMiiTT^7^T 4〇3?δ4 Α7 Β7 五、發明説明（34 調配物1 硬動物膠囊是利用下列成分所製備的：含量（毫克/ 5 85 10 · 活性成分乾燥澱粉硬脂酸鎂羅囊）總量 100毫克將上述的成分混合在一起，填充在硬動物辱囊中膠囊内的含量重100毫克。每個經濟部中央橾準局員工消費合作社印製調配物2 錠片是利用下列成分所製備的：活性成分微細結晶纖維素煙薰二氧化矽硬脂酸總量含量（毫克/錠片） 7 78 10 5 100毫克將所有的成分混合在一起並壓製成每個重量爲i 〇〇毫克的錠片。 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210x297公麓） 403754 at B7 五、發明説明（35 ) 調配物3 内含10毫克活性成分之鍵片妁製程如下：活性成分含賓'(笔克/鍵片） 10 澱粉 45 微細結晶纖維素 35 ' 聚乙烯吡洛虎酮 4 (溶於水的1 0 %水溶液）羧基甲基鈉澱粉 4.5 硬脂酸鎂 0.5 滑石粉 1

I 背忠注意事項 if!* I裝訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製總量· 1〇〇毫克將活性成分，澱粉及纖維素通過45號篩子，並完全混合之。將所得的混合粉末與聚乙烯吡咯烷酮溶液混人之，而後通過14號篩子。如此產生的顆粒於5〇°C下乾燥之，並通過18號篩子。將事先已用60號篩子過篩的幾基甲基鋼殿粉、硬脂酸鎂及滑石粉加入至顆粒物中，混合之後於壓鍵機上壓製每個重量爲1〇〇毫克的錠片。 -38 I403754五、發明説明（36 A7 B7 調配物4 内含8毫克活性成分之膠囊的製程如下·· 含量（毫克/膠囊）活性成分 8 澱粉 95 微細結晶纖維素 95 硬脂酸鎂 2 總量 200毫克將活性成分，纖維素、澱粉及硬脂酸鎂混合在一起，通過45號的篩子而後填充至硬動物膠囊中，每個膠囊内的含量爲200毫克。本發明的原理，較佳具體實例及操作模式已於前文説明敘述，本發明意旨是保護本文内容而不是被解釋爲限制某特定揭示型式，因爲所述是爲説明而爲限制。以丈中技藝所做的改良及改變均不失本發明的内涵。注意事 U!,I裝頁訂〇經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims

第85114103號專利申請案 A8 « f專利範圍修正本(89年4月）^403754 °» 六、申請專利範圍

及其水合物。 2·根據申*青專利範圍第1項之如下式之趟. Η

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· -----訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ’N(CK3)2 · CH3S〇3H 及其水合物。 3.根據申請專利範圍第1項或第2項的鹽，其實質上為結曰曰 4.根據申請專利範圍第3項的鹽，其為二基）甲基]-1〇，11，14，15-四氫-4,9:16,21-二亞甲基胺甲基-1氫，13 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）第85114103號專利申請案 A8 « f專利範圍修正本(89年4月）^403754 °» 六、申請專利範圍

及其水合物。 2·根據申*青專利範圍第1項之如下式之趟. Η

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· -----訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ’N(CK3)2 · CH3S〇3H 及其水合物。 3.根據申請專利範圍第1項或第2項的鹽，其實質上為結曰曰 4.根據申請專利範圍第3項的鹽，其為二基）甲基]-1〇，11，14，15-四氫-4,9:16,21-二亞甲基胺甲基-1氫，13 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A8 B8 Γ»

、申請專利範圍 403754 氫-二苯并[Ε，Κ]吡咯并[3,4-氫][1，4，13]-氧重氮環十六碳块-1，3(2氫）-二酮甲磺酸鹽單水合物。根據申凊專利範圍第丨項中的鹽，该鹽類的總相關物質含量低於5%。 6. —種用於抑制蛋白激酶c之醫藥組合物，其包含根據申請專利範園第1項的鹽與一種或多種醫藥上可接受的稀释劑，賦形劑或載體。 7. 根據申請專利範圍第6項中的醫藥組合物，其中該組合物含有約1至約20毫克該鹽。 8·根據中請專利範圍第丨項❹類，係用於治療微血管糖尿病併發症。 9·—種製備根據申請專利範圍第丨項的鹽類之方法，其包括由如下式化合物，

其中甲磺酸是在非反應性的有機溶劑中。 1〇.根據申請專利範圍第9項的方法，其中水〇 U.根據申請專利範圍第10項的方法，其中其' 中溶劑為丙酮/ 其中溶劑為體積比

403754_§__ 穴、申請專利乾圍約5 : 1至約10 : 1之丙酮：水。 12.根據申請專利範圍第11項的方法，其中溶劑為體積比 9 水酮丙之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 3 本紙張尺度適用中哥國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）