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TW202444754A - 抗體 - Google Patents

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TW202444754A
TW202444754A TW113103286A TW113103286A TW202444754A TW 202444754 A TW202444754 A TW 202444754A TW 113103286 A TW113103286 A TW 113103286A TW 113103286 A TW113103286 A TW 113103286A TW 202444754 A TW202444754 A TW 202444754A
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amino acid
acid sequence
antibody
cxcr4
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瑪格 比勞德
羅伯特 羅蘭斯
約翰 麥考特
馬修 魏克
摩根妮 勒框特
馬修 巴尼斯
凱薩琳 哈欽斯
克斯堤 班奈特
麗莎 史托特
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英商凱麥博有限公司
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Abstract

本發明是有關特異性地結合至CXCR4的抗體或其抗原結合片段。本發明也有關該等抗體用於治療、用於治療癌症，以及用於治療實體腫瘤。本發明也關於包含該等抗體的醫藥組成物、編碼該等抗體的核酸、包含該等核酸的載體，以及包含該等核酸或載體的宿主細胞。

Description

抗體
本發明描述特異性地結合CXCR4 (C-X-C模體趨化因子受體4)的抗體或抗原結合片段，及其在治療各種疾病或病況中的用途。
CXCR4 (也稱為C-X-C模體趨化因子受體4、CD184、FB22、Fusin、HM89、LCR1、白血球衍生性七跨膜結構域受體(LESTR)、脂多醣相關蛋白3 (LAP-3)和基質細胞衍生性因子1 (SDF-1)受體) (Uniprot ID：P61073)是一種A型G蛋白偶聯受體(GPCR)，並且是趨化因子受體家族的一部分。CXCR4與GPCR共有常見的桶狀結構，並包含7個跨膜α螺旋、3個胞外環、3個胞內環、胞外N端和胞內C端(Wu et al.,(2010). Structures of the CXCR4 chemokine GPCR with small-molecule and cyclic peptide antagonists. Science.330(6007):1066-1071、Zhu et al.,(2013). Structure-based studies of chemokine receptors. Curr Opin Struct Biol.23(4):539-546)。
GPCR在人類和許多其他物種中是最大的膜受體家族。此外，GPCR被認為是經核准藥物的最大目標家族(Allen and Roth, (2011). Strategies to discover unexpected targets for drugs active at G protein-coupled receptors. Annu Rev Pharmacol Toxicol.51:117-144；Rask-Andersen et al.,(2014). The druggable genome: Evaluation of drug targets in clinical trials suggests major shifts in molecular class and indication. Annu Rev Pharmacol Toxicol.54:9-26；Santos et al.,(2017) and Oprea et al,(2018). Unexplored therapeutic opportunities in the human genome. Nat Rev Drug Discov. 17:317-332) A comprehensive map of molecular drug targets. Nat Rev Drug Discov.16(1): 19-34)。許多因素促成了靶向GPCR藥物的廣泛應用，包括其成藥性(druggability)、與多種類型趨化因子和其他配體的交互作用，以及在質膜中的表現，允許用分子(諸如抗體)進行胞外靶向。這使得超過35%的經核准藥物以GPCR和相關上游或下游配體或傳訊途徑為目標。約12%直接靶向GPCR (Hopkins and Groom, (2002). The druggable genome. Nat Rev Drug Discov. 1(9):727-730；Sriram and Insel, (2018). GPCRs as targets for approved drugs: How many targets and how many drugs?. Mol Pharmacol. 93(4):251-258)。然而，GPCR是動態的跨膜蛋白，使得結構研究具有挑戰性。CXCR4晶體結構於2010年被解析出來，並且是肽GPCR的第一個晶體結構(Wu et al.,(2010)、Zhu et al.,(2013)，均同上)。
CXCR4的內源性配體是CXCL12，也稱為SDF-1 (Uniprot ID：P48061)。CXCL12是一個高度保守的趨化因子，在人類CXCL12和小鼠CXCL12之間有99%同源性(Schabath et al., (1999). The murine chemokine receptor CXCR4 is tightly regulated during T cell development and activation. Journal of Leukocyte Biology.66(6):996-1004)。存在有許多人類CXCL12同功型，例如α、β、γ、δ、ε、θ和同型7。也已經發現CXCR4的額外配體，其包括巨噬細胞遷移抑制因子(IMF) (Bernhagen et al.,(2007). MIF is a noncognate ligand of CXC chemokine receptors in inflammatory and atherogenic cell recruitment. Nat Med.13(5):587-596)與泛素(Saini et al.,(2010). CXC chemokine receptor 4 is a cell surface receptor for extracellular ubiquitin. J Biol Chem.14;285(20):15566-15576)。
CXCL12結合會促進三維CXCR4構形，有利於G αi蛋白解離為α和βγ次單位。CXCL12結合賦予不同的細胞活性，諸如經由抑制腺苷酸環化酶活性來抑制cAMP形成、活化磷脂酶C (PLC)-β、生成二醯基甘油和肌醇1,4,5三磷酸(IP3)，其控制胞內Ca 2+的釋放。在抑制腺苷酸環化酶的同時，受體活化NF-kβ、JAK-STAT和PI3K-AKT途徑以及mTOR和JNK/p38 MAPK，其調節細胞存活、增生和趨化性(Scala (2015). Molecular Pathways: Targeting the CXCR4-CXCL12 Axis--Untapped Potential in the Tumor Microenvironment. Clin Cancer Res.21(19):4278-4285)。徵集β抑制蛋白在CXCL12結合後透過內化使得受體減敏(Teicher & Fricker (2010). CXCL12 (SDF-1)/CXCR4 pathway in cancer. Clin Cancer Res.16(11):2927-2931；Cheng et al.,(2000). β-Arrestin Differentially Regulates the Chemokine Receptor CXCR4-mediated Signalling and Receptor Internalization, and This Implicates Multiple Interaction Sites between β-Arrestin and CXCR4. J Biol Chem.275(4): 2479-2485)。
CXCR4表現於身體的許多器官中，並且在免疫系統的細胞上表現最高，因此也發現在這些成熟免疫細胞起源的骨髓棲位(niche)中高度表現(例如骨髓生成細胞、紅血球生成細胞、淋巴細胞、單核球和母細胞) (數據來自The Human Protein Atlas version 18.1，更新於15/11/2018 https://www.proteinatlas.org/)。CXCR4也被發現在內分泌來源的組織(例如腎上腺組織和甲狀腺組織)中增加。CXCR4表現已在多種癌細胞上被發現，例如乳癌、腎癌、胰臟癌、卵巢癌、子宮內膜癌、頭頸癌、結腸直腸癌、胃癌和肺癌細胞(數據來自The Human Protein Atlas version 18.1，更新於15/11/2018 https://www.proteinatlas.org/)。CXCR4也參與癌細胞的後期增生和轉移(Guo et al., (2014). CXCL12-CXCR4 Axis Promotes Proliferation, Migration, Invasion, and Metastasis of Ovarian Cancer. Oncol Res.22(5-6):247-258；Wei et al., (2018). Targeting CXC motif chemokine receptor 4 inhibits the proliferation, migration and angiogenesis of lung cancer cells. Oncol Lett.16(3):3976-3982)。
除了CXCR4在癌症中的作用外，CXCR4中的突變(主要在C端發現到)與WHIM症候群(疣、低伽瑪球蛋白血症、感染和嗜中性白血球骨髓保留症(warts, hypogammaglobulinemia, infections, and myelokathexis , myelokathexis))相關((McDermott & Murphy (2019). WHIM syndrome: Immunopathogenesis, treatment and cure strategies. Immunol Rev.287(1):91-102)。再者，CXCR4是HIV-1的輔助受體，已被研究作為HIV治療的治療目標(Chen (2019). Molecular Mechanism of HIV-1 Entry. Trends Microbiol.doi: 10.1016/j.tim.2019.06.002. [印刷前的電子公開版本])。
抗體或抗原結合片段
本文揭示特異性地結合至CXCR4 (例如人類CXCR4)的抗體及其抗原結合片段。在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性地結合至表面表現的CXCR4。在另一個實施例中，抗體或其抗原結合片段抑制CXCL12結合至CXCR4。在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段抑制CXCL12結合至人類CXCR4。
在一個態樣中，本發明提供一種特異性地結合至CXCR4的抗體或其抗原結合片段，其中抗體或其抗原結合片段包含VH結構域，其中VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：10或13，或其中的每一者包含3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：11或14，或其中的每一者包含3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：12或15，或其中的每一者包含3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；且其中抗體或其抗原結合片段包含VL結構域，其中VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：20或23，或其中的每一者包含3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：21或24，或其中的每一者包含3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：22或25，或其中的每一者包含3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3中的每一者包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列，其中選自CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3的至多一個CDR包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：24的CDRL2胺基酸序列；與(iii)SEQ ID NO：25的CDRL3胺基酸序列，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3中的每一者包含0至3個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：25的CDRL3胺基酸序列，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3中的每一者包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：25的CDRL3胺基酸序列，其中選自CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3的至多一個CDR包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，VH結構域包含：(i) SEQ ID NO：13的CDRH1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：14的CDRH2胺基酸序列；(iii) SEQ ID NO：15的CDRH3胺基酸序列；而VL結構域包含：(i) SEQ ID NO：23的CDRL1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO：24的CDRL2胺基酸序列；與(iii) SEQ ID NO：25的CDRL3胺基酸序列。
在一個實施例中，VH結構域包含與SEQ ID NO：16至少90%相同的胺基酸序列；及/或VL結構域包含與SEQ ID NO：26至少90%相同的胺基酸序列。
在又一個實施例中，VH結構域包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；而VL結構域包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列。
在一個實施例中，抗體或片段是人類的、人源化的或嵌合的。
在一個實施例中，CXCR4是人類的(視情況地選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3)。在一個實施例中，CXCR4是恆河猴的及/或食蟹獼猴的(視情況地選自SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9)。
在一個實施例中，抗體或片段特異性地結合至人類、恆河猴、食蟹獼猴及/或囓齒動物CXCR4，視情況地人類和食蟹獼猴CXCR4，視情況地其中結合是藉由表面電漿共振(surface plasmon resonance，SPR)、流式細胞分析術、活細胞成像、ELISA或放射性配體結合來測定。
在一個實施例中，抗體或片段包含恆定區(CH及/或CL)。在又一個實施例中，CH是(i) IgG4恆定區，諸如IgG4-PE恆定區(例如SEQ ID NO：267或SEQ ID NO：305)或(ii) IgGl恆定區，諸如IgG1恆定區，其包含與野生型(例如SEQ ID NO：249或307)相比與Fc-γ受體及/或C1q的結合降低的突變。在又一個實施例中，CL是κ輕鏈恆定區。
在一個實施例中，抗體或片段包含重鏈及輕鏈，且重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：18至少90%相同的胺基酸序列，及/或輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：28至少90%相同的胺基酸序列。在又一個實施例中，重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列。
在一個實施例中，抗體或片段抑制CXCL12結合至CXCR4。
在一個實施例中，抗體或片段以1至100 nM (例如1至30 nM)的IC50抑制經CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP，視情況地其中使用受毛喉素（forskolin）刺激的cAMP傳訊分析來測定CXCR4依賴性經CXCL12媒介抑制cAMP的抑制作用。
在一個實施例中，抗體或片段以0.01至15 nM (例如0.01至0.2 nM)的IC50抑制β-抑制蛋白徵集至CXCR4，視情況地其中使用基於功能性細胞的報導基因分析來測定β-抑制蛋白徵集。
在一個實施例中，抗體或片段以0.2至4 nM (例如0.2至1 nM)的IC50抑制CXCL12結合至CXCR4，視情況地其中使用HTRF分析來測定CXCL12抑制。
在一個實施例中，抗體或片段不會在T細胞(視情況地CD8+ T細胞)中誘導細胞凋亡，視情況地其中使用流式細胞分析術測定細胞凋亡。
在一個實施例中，抗體或片段以0.5至10 nM (例如0.5至5 nM)的EC50結合至食蟹獼猴CXCR4，視情況地其中使用流式細胞分析術測定食蟹獼猴CXCR4結合。
在一個實施例中，抗體或片段以0.2至2 nM (例如0.4至0.8 nM)的KD結合至人類CXCR4，視情況地其中使用表面電漿共振(SPR)來測定結合親和力。
在一個實施例中，抗體或片段不結合至CXCR7 (視情況地，其中CXCR7是人類的且進一步視情況地選自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6)，視情況地其中使用流式細胞分析術、放射性配體結合、表面電漿共振(SPR)、活細胞成像或ELISA來測定CXCR7結合。
在一個實施例中，抗體或片段以0.5至20 nM (例如0.5至5 nM)的IC50抑制CXCL12媒介的T細胞反應，其中在活體外使用無標記動態質量再分佈分析來測定抑制作用。
在一個實施例中，抗體或片段以0.01至5 nM (例如0.01至1 nM)的IC50抑制CXCR4+ T細胞往CXCL12的趨化性，其中使用活細胞成像或流式細胞分析術來測定抑制作用。
在一個實施例中，與PBS相比，抗體或片段增加平均CD45+細胞動員（mobilisation），視情況地其中使用流式細胞分析術來測定動員。
在一個實施例中，抗體或片段結合至CXCR4同二聚體。
在一個實施例中，抗體或片段使得CD8+ T細胞能夠浸潤腫瘤。
本發明的一個態樣提供如本文所述用於療法的抗體或抗原結合片段。
本發明的又一個態樣提供如本文所述用於治療癌症的抗體或片段，視情況地其中癌症是胰臟癌或胰管癌。
本發明的又一個態樣提供如本文所述用於治療實體腫瘤的抗體或片段。
在一個實施例中，治療進一步包含投予又一種療法，視情況地其中又一種療法包含獨立地選自由抗PD-1抗體或其抗原結合片段和抗PD-L1抗體或其抗原結合片段組成之群組一或多個又一種治療劑；及/或視情況地，其中又一種療法是選自化療、放療及/或手術切除腫瘤。
在一個實施例中，治療進一步包含投予又一種治療劑，其為PD-1/PD-L1傳訊抑制劑(例如PD-1抗體或其抗原結合片段，或PD-L1抗體或其抗原結合片段)。
本發明的又一個態樣提供一種醫藥組成物，其包含如本文所述的抗體或片段及醫藥上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑，且視情況地進一步包含一或多個又一種治療劑。
本發明的又一個態樣提供一種編碼(a)如本文所述抗體或片段的VH結構域及/或VL結構域，或(b)如本文所述抗體或片段的重鏈及/或輕鏈的核酸。
本發明的又一個態樣提供一種包含如本文所述核酸的載體，視情況地其中載體是CHO載體或HEK293載體。
本發明的又一個態樣提供一種包含如本文所述核酸或如本文所述載體的宿主細胞。
1. 定義
除非本文另有定義，否則科學術語和技術術語應具有那些本領域具有通常知識者通常理解的含義。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
單數術語「一(a、an)」和「該」包括複數指示物，除非上下文另有明確指示。類似地，用詞「或」意欲包括「及」，除非上下文另有明確說明。儘管與本文所述的那些方法和材料類似或等效的方法和材料可以用於實施或測試本發明，但下面說明適當的方法和材料。縮寫「e.g.」源自拉丁語 exempli gratia，並且在本文中用於指示非限制性實例。因此，縮寫「e.g.」與術語「例如」同義。
在說明書和申請專利範圍中，術語「約」用於修飾例如組成物中成分的量、濃度、體積、處理溫度、處理時間、產率、流速、壓力以及類似值，及其範圍，它們被用來說明本發明的實施例。術語「約」是指例如因為用於製造化合物、組成物、濃縮物或使用調配物的典型測量和處理程序；因為這些程序中的無意錯誤；因為用於實施方法的起始材料或成分的製造、來源或純度的差異，以及類似的近似考慮因素所可能發生的數值變化。術語「約」還涵括因為具有特定初始濃度或混合物的調配物的老化而有不同的量，以及由於混合或處理具有特定初始濃度或混合物的調配物而有不同的量。當用術語「約」修飾時，隨附申請專利範圍包括這些量的等效物。
如本文所用，「投予(administer或administration)」是指將存在於體外的物質(例如，本文提供的抗CXCR4抗體或抗原結合片段)注射或以其他方式物理性遞送給患者的行為，諸如藉由黏膜、皮內、靜脈內、肌肉內遞送及/或本文所描述的或本領域已知的任何其他物理遞送方法。當要治療疾病(或病況)或其症狀時，投予物質通常發生在疾病(或病況)或其症狀發作之後。當要預防疾病(或病況)或其症狀時，投予物質通常發生在疾病(或病況)或其症狀發作之前。
如本文所用，術語「親和力」、「結合親和力」或類似者是指兩個分子彼此結合的程度或傾向。在一個實施例中，親和力或結合親和力被指定為K D或EC 50，具有通常知識者將能夠從在適當分析中生成的數據計算這些值，分析為例如表面電漿共振(SPR) (使用Biacore TM或使用ProteOn XPR36 TM(Bio-Rad TM))、KinExA TM(Sapidyne Instruments, Inc)、ForteBio Octet (Pall ForteBio Corp.)、流式細胞分析術(例如Mirrorball TM螢光細胞測量儀)、活細胞成像、酶聯免疫吸附分析(ELISA)或放射性配體結合(較佳SPR、流式細胞分析術、活細胞成像、ELISA或放射性配體結合)；視情況地與諸如GraphPad Prism的程式組合使用。在一個實施例中，「親和力」或「結合親和力」是抗體或抗原結合片段與抗原(例如目標受體(例如CXCR4))結合有多強的一種度量。在一個實施例中，「親和力」或「結合親和力」是抗體或抗原結合片段上的單獨互補位(抗原結合位點)與(抗原，例如受體的)表位結合的強度，或者是受體(例如CXCR4)和配體(例如CXCL12)交互作用的強度。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段對受體的親和力或結合親和力在奈莫耳(nM)範圍內或在皮莫耳(pM)範圍內。如本文所用，術語「K D」意欲指特定抗體-抗原交互作用的平衡解離常數。「K a」是締合速率常數(也稱為K on)，而「K d」是解離速率常數(也稱為K off)。
如本文所用，術語「拮抗劑」、「拮抗」或類似者是指抗體或其抗原結合片段結合至目標抗原並抑制其一或多個結合配偶體與目標抗原交互作用的能力。在CXCR4的情況下，拮抗劑(例如抗體或其抗原結合片段)能夠拮抗配體(例如CXCL12)的結合，並防止配體對受體的生物效用(例如配體的傳訊、受體的構形變化、受體的活化或受體與其他細胞分子的交互作用)。CXCR4的已知配體包括CXCL12 (也稱為SDF-1)、泛素和MIF。其他CXCR4配體可能尚未確定。CXCR4的功能活性可在cAMP分析、β-抑制蛋白分析、CXCL12抑制分析、內化分析、細胞凋亡分析、DMR分析、趨化性分析、T細胞浸潤分析、遷移分析或癌症的疾病相關模型中進行測量，其為那些具有通常知識者所熟知。其他分析是本領域具有通常知識者已知的。在一個較佳實施例中，抗體或其抗原結合片段是拮抗劑，例如完全拮抗劑。在另一個實施例中，抗體或其抗原結合片段是部分拮抗劑。部分抑制劑部分地抑制(即不完全抑制)一或多個結合配偶體與目標抗原的交互作用。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可以交替使用，並且表示透過免疫球蛋白分子可變區中的至少一個抗原辨識位點來辨識並特異性地結合至目標抗原的免疫球蛋白分子，目標抗原為諸如蛋白質、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂質或前述的組合。術語「抗體」也指分子量為大約150 kDa的Y形醣蛋白，其由四條多肽鏈組成：兩條輕(L)鏈和兩條重(H)鏈。以下進一步說明五種類型的哺乳動物Ig重鏈恆定區。哺乳動物中有兩種類型的免疫球蛋白輕鏈：λ和κ。抗體或抗原結合片段的「可變區」或「可變結構域」是指抗體或抗原結合片段的重鏈或輕鏈的胺基端結構域。重鏈和輕鏈的可變結構域可能分別稱為「V H」和「V L」。這些結構域通常是抗體中變化最大的部分(相對於同類的其他抗體)，並且含有抗原結合位點。V H和V L分別連接至重鏈(C H)恆定區和輕鏈(C L)恆定區。
本文所述的抗體或抗原結合片段可能是寡株的、多株的、單株的(包括全長單株抗體)、駱駝化的、嵌合的(例如小鼠可變區和人類恆定區，或人類可變區和小鼠恆定區)、CDR移植的、多特異性、雙特異性、催化性、人源化的、人類、完全人類、抗特應型（anti-idiotypic），包括可以按可溶性或結合形式標記的抗體及其片段、變異體、融合物或衍生物，以及任何其他經修飾的免疫球蛋白(包含抗原結合位點)，只要抗體或抗原結合片段單獨或與已知技術提供的其他胺基酸序列組合展現出所需的生物活性即可。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段是人類的、完全人類的、人源化的或嵌合的。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段是人類抗體或抗原結合片段，視情況地具有非人類轉譯後修飾(例如醣基化)。抗體或抗原結合片段可能來自任何物種。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段是哺乳動物或囓齒動物抗體或抗原結合片段。本文所述的抗體或抗原結合片段可以是裸露的或結合至其他分子(諸如毒素、放射性同位素等)。
術語「抗原結合結構域」、「抗原結合區」、「抗原結合片段」和類似術語是指抗體的一部分，其包含與抗原交互作用並賦予結合劑其對抗原的特異性及親和力的胺基酸殘基(例如互補決定區(CDR))。抗原結合區可以衍生自任何動物物種，諸如囓齒動物(例如小鼠、兔、大鼠或倉鼠)、雞和人類。較佳地，抗原結合區是人類來源的。在本說明書通篇中，抗體上下文中的用語「片段」被認為是此一抗體的抗原結合片段。
術語「抗原結合片段」可以包括單鏈Fv (scFv)、單鏈抗體、單結構域抗體、結構域抗體、Fv片段、Fab片段、F(ab')片段、F(ab') 2片段、展現出所需生物活性的抗體片段、經雙硫鍵穩定的可變區(dsFv)、二聚體可變區(雙抗體)、抗特應型(抗Id)抗體(包括，例如針對抗體的抗Id抗體)、胞內抗體、線性抗體、單鏈抗體分子和上述任一者之抗體片段和表位結合片段形成的多特異性抗體。具體而言，本文所述的抗體和抗體片段可以包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有抗原結合位點的分子。用酶(木瓜酶)消化抗體會產生兩個相同的抗原結合片段(也稱為「Fab」片段)，以及一個不具有抗原結合活性但具有結晶能力的「Fc」片段。當本文使用時，「Fab」是指抗體的一個片段，其包括重鏈和輕鏈中的各者的一個恆定結構域和一個可變結構域。本文的術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈的C端區，包括天然序列Fc區和變異體Fc區。「Fc片段」是指透過雙硫鍵連接在一起的兩條H鏈的羧基端部分。抗體的效應功能是由Fc區中的序列所決定，這個Fc區也被某些類型細胞上發現的Fc受體(FcR)識別。用酶(胃蛋白酶)消化抗體會產生F(ab') 2片段，其中抗體分子的兩個臂保持著連接並包含兩個抗原結合位點。F(ab') 2片段具有交聯抗原的能力。
如本文所用，「授權號」或「行銷授權號」是指監管機構在決定特定醫療產品及/或組成物可在該機構的管轄區域內行銷及/或提供銷售時所頒發的號碼。如本文所用，「監管機構」是指負責評估例如醫療產品及/或組成物的安全性和療效以及控制此類產品及/或組成物在給定區域中的銷售/行銷的機構之一。美國食品藥物管理局(FDA)和歐洲藥品管理局(EPA)只是這類監管機構的兩個實例。其他非限制性實例可包括SDA、MPA、MHPRA、IMA、ANMAT、香港衛生署藥物辦公室、CDSCO、Medsafe和KFDA。
術語「雙特異性抗體」表示對兩個目標分子包含特異性的抗體。術語「雙特異性抗體」包括諸如以下形式：雙互補位抗體、DVD-Ig (參見DiGiammarino et al., “Design and generation of DVD-Ig™ molecules for dual-specific targeting”, Meth. Mo. Biol., 2012, 889, 145-156)、mAb 2(參見WO2008/003103)、FIT-Ig (參見WO2015/103072)、mAb-dAb、對接與鎖定(dock and lock)、Fab臂交換、SEEDbody、Triomab、LUZ-Y、Fcab、κλ-體、正交Fab、scDiabody-Fc、雙抗體-Fc、串聯scFv-Fc、Fab-scFv-Fc、Fab-scFv、胞內抗體、BiTE、雙抗體、DART、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、雙抗體-CH3、Triple體、微型抗體(Miniantibody)、微體(minibody)、TriBi微體、scFv-CH3 KIH、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFv、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四價HCab、ImmTAC、孔內旋鈕、具有共同輕鏈的孔內旋鈕、具有共同輕鏈和電荷對的孔內旋鈕、電荷對、具有共同輕鏈的電荷對、DT-IgG、DutaMab、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig和zybody。有關雙特異性形式的綜述，參見Spiess, C., et al., Mol. Immunol. (2015)。
如本文所用，術語「載劑」是指與治療劑一起投予的稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑)、賦形劑或媒劑。這樣的醫藥載劑可以是無菌液體，諸如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油與類似者。當靜脈內投予醫藥組成物時，水是較佳的載劑。食鹽水溶液以及葡萄糖水溶液和甘油溶液也可用作為液體載劑，特別是用於注射溶液。較佳的載劑是基於脂質A的載劑和Gerbu佐劑。
術語「CDR區」或「CDR」是指抗體或抗原結合片段可變結構域的區域，其在序列上高度可變及/或形成在結構上界定的環。一般來說，抗體的抗原結合位點包括六個CDR區：三個位於V H(CDRH1、CDRH2、CDRH3)中，而三個位於V L(CDRL1、CDRL2、CDRL3)中。抗體重鏈和輕鏈的這些區域賦予抗體抗原結合特異性。CDR可能根據Kabat系統或IMGT系統來定義。其他系統可用來定義CDR，其為Chothia等人設計的系統(參見Chothia, C. & Lesk, A. M., 1987, “Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins”, J. Mol. Biol., 196, 901-917)。用於確定CDR的其他系統包括Martin (Enhanced Chothia) (Abhinandan and Martin (2008). Analysis and improvements to Kabat and structurally correct numbering of antibody variable domains. Mol Immunol.45(14):3832-3839、AHo (Honegger and Plückthun (2001). Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modelling and analysis tool. J Mol Biol.309(3):657-670)，以及paratome (Kunik et al.,(2012). Paratome: an online tool for systematic identification of antigen-binding regions in antibodies based on sequence or structure. Nucelic Acids Res.40 (web server issue): W521-W524)編號方案。此處使用術語CDR來指示這些區域中的一或多者。具有通常知識者能夠輕鬆比較不同的命名系統並確定一個特定序列是否可能被定義為CDR。
術語「化療劑」或「化療」是指其主要目的是通常透過干擾腫瘤細胞生長或倍增的能力來破壞癌細胞的治療劑。化療劑有多種類型，已核准的化療藥物超過50種。化療藥物可以基於其如何作用來分類。烷化藥物透過直接攻擊DNA (基因的遺傳物質)來殺死癌細胞。環磷醯胺是一種烷化藥物。抗代謝物會干擾DNA的產生並阻止細胞生長與倍增。抗代謝藥物的一個實例是5-氟尿嘧啶(5-FU)。抗腫瘤抗生素是由土壤中的天然物質(諸如真菌)製成的。它們干擾重要的細胞功能，包括DNA和細胞蛋白質的產生。多柔比星（Doxorubicin）和博萊黴素（bleomycin）屬於此類化療藥物。植物生物鹼會阻止細胞正常分裂。長春花鹼和長春新鹼是從長春花植物中獲得的植物生物鹼。類固醇激素減緩一些仰賴激素的癌症生長。舉例而言，他莫昔芬（tamoxifen）被用來治療仰賴激素雌激素生長的乳癌。DNA損傷反應(DDR)抑制劑(諸如PARP抑制劑)在單股或雙股斷裂後阻斷DNA修復機制。在另一個實施例中，化療劑是誘導免疫原性細胞死亡的藥劑，例如鉑療法(諸如奧沙利鉑（oxaliplatin）)。在一個實施例中，化療是針對所治療的癌症的標準照護細胞毒性化療。
化療劑的實例包括阿黴素（Adriamycin）、多柔比星、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytosine arabinoside，Ara-C)、環磷醯胺、噻替派（Thiotepa）、泰索帝(Taxotere) (多西紫杉醇（docetaxel）)、白消安（Busulfan）、細胞毒素、吉西他濱（Gemcitabine）、紫杉醇（Paclitaxel）、多柔比星、紫杉醇（Taxol）、甲胺蝶呤、順鉑、美法崙（Melphalan）、長春鹼、博萊黴素、依托泊苷（Etoposide）、異環磷醯胺、絲裂黴素C、米托蒽醌（Mitoxantrone）、長春新鹼、長春瑞濱（Vinorelbine）、卡鉑、替尼泊苷（Teniposide）、道諾黴素（Daunomycin）、胭脂紅黴素（Carminomycin）、胺基蝶呤（Aminopterin）、放線菌素D、絲裂黴素、埃斯波黴素（Esperamicins）(參見美國專利第4,675,187號)、美法崙，及其他相關氮芥（nitrogen mustard）。適當的毒素和化療劑描述於Remington's Pharmaceutical Sciences, 19 thEd. (Mack Publishing Co., 1995)，以及Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7 thEd. (MacMillan Publishing Co., 1985)中。化療劑的其他實例包括伊立替康(脂質體)，它是一種拓樸異構酶I抑制劑。其他適當的毒素及/或化療劑是具有通常知識者所熟知的。菊白葉酸（Leucovorin）(醛葉酸（folinic acid）)與化療藥物組合使用以增強該藥物的有效性或充當化學保護劑，例如菊白葉酸與5-氟尿嘧啶或甲胺蝶呤組合使用。
如本文所用，術語「組成物」意欲含括視情況地含有指定量的指定成分(例如，本發明的抗體或抗原結合片段)的產品，以及直接或間接由視情況地含有指定量的指定成分組合產生的任何產品。
如本文所用，術語「包含(comprising或comprises)」用於指抗體、抗原結合片段、用途、組成物、方法及其各自的組分，其對於方法或組成物是必需的，但對納入非指定元件(不論必要與否)是開放的。
術語「由…組成」是指如本文所述的抗體、抗原結合片段、用途、組成物、方法及其各自的組分，排除在實施例的說明中未列舉的任何元件。
術語「交叉反應」、「交叉反應性」或類似術語是指抗體或抗原結合片段(例如抗hCXCR4抗體)與相似目標(例如另一個物種的CXCR4)或不相干目標(例如CXCR7、CXCR3、CCR5或本文他處所述的其他目標及/或配體)之間的特異性結合，不相干目標不是目標抗原(例如人類CXCR4)。在一個實施例中，如果如例如藉由SPR所測量結合低於抗體或抗原結合與期望目標抗原(例如hCXCR4)結合的約10% (例如7%、5%、3%或1%)，則抗體或抗原結合片段不與不相干目標交叉反應。在另一個實施例中，如果如例如藉由SPR所測量結合大於抗體或抗原結合與期望目標抗原(例如hCXCR4)結合的約80% (例如85%、90%、95%)或結合相同，則抗體或抗原結合片段與類似目標交叉反應。
在多肽的上下文中，如本文所用，術語「衍生物」是指包含CXCR4多肽的胺基酸序列的多肽，或特異性地結合至CXCR4多肽的抗體或抗原結合片段，其已因為引入胺基酸殘基取代、缺失或添加而被改變。如本文所用，術語「衍生物」也指CXCR4多肽或特異性地結合至CXCR4多肽的抗體或抗原結合片段，其已被化學修飾，例如透過將任何類型的分子共價附接至多肽。例如但不限於CXCR4多肽、CXCR4多肽的片段或CXCR4抗體可能被化學修飾，例如透過醣基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知的保護/阻斷基團衍生化、蛋白水解切割、鍵聯至細胞配體或其他蛋白等。衍生物以不同於天然存在或起始肽或多肽的方式進行修飾，無論是在所附接分子的類型或位置上。衍生物進一步包括刪除肽或多肽上天然存在的一或多個化學基團。CXCR4多肽或CXCR4抗體或抗原結合片段的衍生物可使用具有通常知識者已知的技術透過化學修飾進行化學修飾，該等技術包括但不限於特定的化學切割、乙醯化、調配、衣黴素（tunicamycin）代謝合成等。再者，CXCR4多肽或抗CXCR4抗體或抗原結合片段的衍生物可能含有一或多個非經典胺基酸。多肽衍生物具有與本文所述的CXCR4多肽或抗CXCR4抗體或抗原結合片段相似或相同的功能。
「有效量」是指在必要的劑量和時段內有效達到期望效用(包括治療或預防結果)的量。「治療有效量」是指影響特定病症的可測量的改善或預防作用所需的最小濃度。本文的治療有效量可根據多種因素(諸如患者的疾病狀態、年齡、性別和體重，以及抗體或抗原結合片段在個體中引發期望反應的能力)而變化。治療有效量也是其中抗體或抗原結合片段的毒性或有害效用被治療有益效用所抵消之量。「防治有效量」是指在必要的劑量和時段內有效達到期望防治結果的量。在一些實施例中，本發明的抗體或抗原結合片段的有效量為約0.1 mg/kg (每kg個體體重的mg抗體或抗原結合片段)至約100 mg/kg。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段的有效量為約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg或約100 mg/kg (或其中的範圍)。在一些實施例中，如本文所用，「有效量」也指達到特定結果(例如抑制CXCR4生物活性)的本發明抗體或抗原結合片段的量。
如本文所用，術語「表位」是指抗原(諸如CXCR4多肽)表面上的局部區域，其能夠與抗體或抗原結合片段的一或多個抗原結合區結合，並且在動物(較佳哺乳動物，最佳在人類中)中具有抗原性或免疫原性活性，能夠引發免疫反應。具有免疫原性活性的表位是在動物中引發抗體反應的多肽的一部分。具有抗原性活性的表位是抗體或抗原結合片段特異性地結合的多肽的一部分，如藉由本領域熟知的任何方法所測定的(例如藉由免疫分析)，其中一些在本文中有所描述。抗原性表位不一定具有免疫原性。表位通常由分子的化學活性表面基團(諸如胺基酸或糖側鏈)組成，並具有特定的三維結構特徵以及特定的電荷特徵。貢獻表位的多肽區域可能是多肽的連續胺基酸，或者表位可能來自多肽的兩個或更多個非連續區域。表位可能是也可能不是抗原的三維表面特徵。在某些實施例中，CXCR4表位是CXCR4多肽的三維表面特徵，其可能是單體、二聚體(例如同二聚體或異二聚體)、三聚體、四聚體或多聚體。在一個較佳實施例中，CXCR4表位是單體或同二聚體CXCR4多肽的三維表面特徵。在另一個實施例中，CXCR4表位是異二聚體CXCR4多肽的三維表面特徵，如本文進一步所述的。在其他實施例中，CXCR4抗原決定位是單體或同二聚體CXCR4多肽的線性特徵。
如本文所用，術語「賦形劑」是指通常用作為藥物的稀釋劑、媒劑、防腐劑、黏合劑或穩定劑的惰性物質，並且包括但不限於蛋白質(例如血清白蛋白等)、胺基酸(如天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸等)、脂肪酸和磷脂質(如磺酸烷基酯、辛酸酯等)、界面活性劑(例如SDS、聚山梨醇酯、非離子界面活性劑等)、醣類(例如蔗糖、麥芽糖、海藻糖等)和多元醇(例如甘露醇、山梨醇等)。亦參見Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa.，其全部內容以引用的方式併入本文。
如本文所用，術語「融合蛋白」是指包含抗體或抗原結合片段的胺基酸序列和異源多肽或蛋白質的胺基酸序列(即通常不是抗體或抗原結合片段的一部份的多肽或蛋白質(例如非抗CXCR4抗體或抗原結合片段))的多肽。當就CXCR4或抗CXCR4抗體使用時，術語「融合」是指肽或多肽、或其片段、變異體及/或衍生物與異源肽或多肽的連接。較佳地，融合蛋白保有CXCR4或抗CXCR4抗體的生物活性。在某些實施例中，融合蛋白包含CXCR4抗體V H結構域、V L結構域、V HCDR (一個、兩個或三個V HCDR)及/或V LCDR (一個、兩個或三個V LCDR)，其中融合蛋白特異性地結合至CXCR4表位。
當參照抗體使用時，術語「重鏈」是指五種不同的類型，基於重鏈恆定結構域胺基酸序列被稱為阿爾發(α)、德爾塔(δ)、艾普西隆(ε)、伽瑪(γ)和姆(μ)。這些不同類型的重鏈是眾所周知的，並分別產生五類抗體IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括IgG的4個亞類(即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)，以及IgA的兩個亞類(即IgA1和IgA2)。一個較佳的實施例是IgG同型。在一個實施例中，重鏈是囓齒動物重鏈。在一個較佳實施例中，重鏈是人類重鏈。重鏈包含可變區(V H)和重鏈恆定區。本說明書中用於重鏈恆定區的胺基酸位置的編號是根據EU索引(Kabat, E.A. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest: Tabulation and Analysis of Amino Acid and Nucleic Acid Sequences of Precursors, V-Regions, C-Regions, J-Chain, T-Cell Receptors for Antigen T-Cell Surface Antigens, [Beta]2- Microglobulins, Major Histocompatibility Antigens, Thy-1, Complement, C-Reactive Protein, Thymopoietin, Integrins, PostGamma Globulin, [Alpha]2-Macroglobulins, and Other Related Proteins, 5th ed, National Institutes of Health)。
如本文所用，術語「宿主細胞」或類似術語是指經核酸分子轉染的特定目標細胞以及此一細胞的後代或潛在後代。由於後續世代中可能發生的突變或環境影響或核酸分子併入到宿主細胞基因體中，此一細胞的後代可能與經核酸分子轉染的親代細胞不相同。在一個實施例中，「宿主細胞」是非人類的。在一個實施例中，「宿主細胞」不是人類全能細胞。
「人類抗體」是具有與人類產生的抗體及/或已經使用製造人類抗體的任何技術製造的抗體的胺基酸序列相對應的胺基酸序列的抗體，並且明確排除包含非人類抗原結合殘基的人源化抗體。
術語「人源化抗體」是指嵌合抗體的一個子集，其中非人類免疫球蛋白(供體抗體)的「CDR區」置換人類免疫球蛋白(受體抗體)中CDR區的殘基。一般而言，人源化抗體將包括至少一個且通常兩個可變結構域的基本上全部，其中所有或基本上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白序列的CDR區，且所有或基本上所有框架區是人類免疫球蛋白序列的框架區，儘管框架區可能包括一或多個增進抗體性能(諸如結合親和力、異構化、免疫原性等)的取代。
術語「IMGT編號」和類似術語是本領域公認的，並且指為了比較免疫球蛋白和T細胞受體的可變區序列而對胺基酸殘基進行編號的系統(Lefranc, M. P., 1997, “Unique database numbering system for immunogenetic analysis”, Immunol. Today, 18, 50)。IMGT編號系統仰賴可變區結構的高度保守性。IMGT編號系統考慮並結合了框架區(FR)和互補決定區(CDR)的定義。
如本文所用，術語「抑制(inhibits、inhibition、inhibiting)」以及類似術語是指抗體或抗原結合片段結合至表位的能力，這部分地、基本上或完全地防止配體(例如CXCL12)結合至受體(例如CXCR4)。如果抗體或抗原結合片段所結合的表位完全阻斷了配體的結合位點，則配體結合被完全阻止(這可能是物理阻斷(在相同或重疊表位的情況下)或空間阻斷(其中抗體或抗原結合片段很大，從而阻止配體結合至其獨特表位))，且配體不會從循環中被移除。因此，循環配體的濃度可能看起來會增加。如果抗體或抗原結合片段所結合的表位部分阻斷了配體的結合位點，則配體可能能夠結合，但只能較弱(在部分抑制的情況下)，或呈與天然交互作用不同的方向。在這種情況下，一些配體可能會從循環中被移除，但不會像配體結合位點完全空出(free)並可供結合那麼多。因此，抑制是指配體和受體的物理交互作用。IC 50是抑制劑(例如本文所揭示的抗體或抗原結合片段)的半數最大抑制濃度。抑制作用可以藉由HTRF來測量，HTRF詳細描述於本文他處和Mathis (1995) Clinical Chemistry 41(9), 1391-1397中。也可以藉由時間分辨螢光能量轉移(TR-FRET)基於細胞的配體抑制分析來測量抑制作用(Zwier et al,(2010). A fluorescent ligand-binding alternative using Tag-lite Technology. J Biomol Screen.15(10):1248-1259)。本說明書通篇中，術語「抑制」可與術語「中和」互換。在本文的任一實施例中，「抑制」表示在給定濃度下的特異性結合%或所達到的最大特異性結合%與當分析中沒有提供配體(例如CXCL12)所達到者不相上下(或相同[標準誤差內])。因此，在一個實施例中，抑制提供了配體(例如CXCL12)的特異性結合% (在50 nM、30 nM、10 nM、1 nM或0.1 nM [抗體或抗原結合片段]下)與同型對照相比在50至100%、60至100%、70至100%、80%至100%，例如85%至100%，或90%至100%範圍內的降低。在另一個實施例中，抑制提供配體(例如CXCL12)的特異性結合% (在50 nM、30 nM、10 nM、1 nM或0.1 nM [抗體或抗原結合片段]下)與同型對照相比在95%至100%範圍內的降低。在另一個實施例中，抑制是與同型對照相比配體(例如CXCL12)的特異性結合%降低100%。在另一個實施例中，抑制提供配體(例如CXCL12)的最大特異性結合%與同型對照相比在80%至100%，例如85%至100%、或90%至100%範圍內的降低。在另一個實施例中，抑制提供配體(例如CXCL12)的最大特異性結合%與同型對照相比在95%至100%範圍內的降低。在另一個實施例中，完全中和是配體(例如CXCL12)的最大特異性結合%與同型對照相比降低100%。在一個實施例中，抑制CXCL12與CXCR4結合的抗體或抗原結合片段是拮抗劑(例如完全拮抗劑或部分拮抗劑等)或反向促效劑。反向促效劑是一種抗體或抗原結合片段，其結合至與促效劑配體(例如CXCR4)相同的目標受體，但誘導與促效劑所誘導的反應相反的藥理學反應(例如，如果促效劑降低cAMP含量，則反向促效劑可能會增加cAMP含量)。當受體具有組成性活性時(在促效劑不存在的情況下產生藥理學反應)，可能會展現出反向促效作用。反向促效劑可以在促效劑不存在的情況下降低受體的藥理學反應，使其低於基礎活性水平。在一個實施例中，抗CXCR4抗體(例如CXCR4反向促效劑)可能經由一種途徑減少受體的藥理學反應，並且可能不影響受體發出訊號的其他途徑。在另一個實施例中，與受體的基礎傳訊相比，抗CXCR4抗體(例如CXCR4反向促效劑)可能會增加cAMP含量並且還影響其他CXCR4傳訊途徑。
如本文所用，「注射裝置」是指被設計用於執行注射的裝置，注射包括將注射裝置暫時流體連接至人類的組織(通常為皮下組織)的步驟。注射還包括將某量的液體藥物投予至組織中以及將注射裝置與組織分離或移除。在一些實施例中，注射裝置可以是靜脈內裝置或IV裝置，其是當目標組織是循環系統內的血液(例如靜脈內的血液)時使用的一種注射裝置類型。注射裝置的常見但非限制性實例是針頭和注射器。
如本文所用，「說明書」是指在物品的直接容器上顯示的書面、印刷或圖形內容，例如在含有醫藥活性劑的小瓶上顯示的書面材料，或關於容納在含有感興趣組成物的套組中的感興趣產品的組成和用途的詳細資訊。說明書闡述了預期投予或執行的治療方法。
「經分離的」或「經純化的」抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸是已經從其生產環境(例如天然的或重組的)的組分中鑑定、分離及/或回收的抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸。例如，抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸基本上不含來自抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸衍生而來的細胞或組織來源的細胞物質或其他汙染性蛋白質，或化學合成時基本上不含化學前驅物或其他化學品。措詞「基本上不含細胞材料」包括抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸的製劑，其中所需產物與從中分離或重組產生該產物的細胞的細胞組分分離。因此，基本上不含細胞材料的抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸包括具有少於約30%、20%、10%或5% (以乾重計)的異源蛋白質(在本文也稱為「汙染蛋白質」)的所需材料的製劑。當重組產生抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸時，其較佳也基本上不含培養基，即培養基佔蛋白質製劑體積的小於約20%、10%或5%。當抗體、抗原結合片段、蛋白質或核酸藉由化學合成產生時，其較佳基本上不含化學前驅物或其他化學品，即其與涉及蛋白質合成的化學前驅物或其他化學品分離。因此，此類製劑除了所需材料以外具有小於約30%、20%、10%、5% (以乾重計)的化學前驅物或化合物。在一個較佳實施例中，分離及/或純化本發明的抗體或抗原結合片段。
如本文所用，術語「同型對照」或類似術語是通常為相同物種(或在嵌合體的情況下為物種混合物)的抗體或抗原結合片段，且較佳地具有與測試抗體或抗原結合片段相同的恆定區，但其中V H結構域和V L結構域對感興趣的目標抗原(即CXCR4)不具特異性，或對與感興趣的目標抗原(即CXCR4)無關的抗原具有特異性，或者是V H和V L對任何其他人類目標的非結合組合。當測試人類可變-小鼠恆定嵌合體時，同型對照可能是市售的小鼠IgG1同型對照(例如可從Sigma Aldrich，目錄號M9269獲得)。當測試完全人類IgG4-PE形式抗體時，同位素對照較佳是具有人類可變區和人類IgG4-PE恆定區的抗體。具有通常知識者將能夠鑑定出合適的抗體作為同型對照。
術語「Kabat編號」和類似術語是本領域公認的並且是指將比抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區中的其他胺基酸殘基更為多變(即高變)的胺基酸殘基進行編號的系統(Kabat et al.,(1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391以及Kabat et al.,(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)。關於重鏈可變區，高變區的範圍通常為CDR1的胺基酸位置31至35、CDR2的胺基酸位置50至65，以及CDR3的胺基酸位置95至102。
如本文所用，術語「單株抗體」是指從基本上均質的抗體群獲得的抗體，即除了包含可能少量存在的天然存在的可能突變及/或轉譯後修飾(例如異構化、醯胺化)以外均相同之群的個別抗體。單株抗體具有高度特異性並針對單一抗原決定位或表位。相反，多株抗體製劑通常包括針對不同抗原決定位(或表位)的不同抗體。如本文所用，術語「單株抗體」含括完整與全長單株抗體(例如全長、四鏈單株抗體)以及如本文他處的抗原結合片段。此外，「單株抗體」是指以多種方式製造的此等抗體，包括但不限於融合瘤、噬菌體選擇、重組表現和轉殖基因動物。本文的單株抗體可以包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的其餘部分與衍生自另一個物種或屬於另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及展現出期望生物活性的此類抗體的片段。
術語「天然存在的」或「天然的」當與諸如核酸分子、多肽、宿主細胞與類似者的生物材料結合使用時，是指在自然界中發現的並且未經人類操作的那些(也稱為野生型)。天然CXCR4配體包括CXCL12 (SDF-1)、MIF和泛素。
如本文所用，「包裝」是指如何將組分組織及/或限制於適合分配及/或使用的單元內。包裝可包括例如盒子、袋子、注射器、安瓿、小瓶、管、蛤殼式包裝、用於維持無菌的屏障及/或容器、標籤等。
在比對序列並且在有需要時引入空位以達到最佳比對，且不考慮任何保守取代作為序列同一性的部分時，關於肽、多肽、抗體或抗原結合片段(或核苷酸)序列的術語「同一性百分比(%)」、「胺基酸序列同一性百分比(%)」(或「核苷酸序列同一性百分比(%)」)、「與…相同的百分比(%)」、「同一性」和類似者被定義為，候選序列中與特定肽或多肽序列中的胺基酸殘基(或核苷酸鹼基)相同的胺基酸殘基(或核苷酸鹼基)的百分比。出於確定胺基酸序列同一性百分比之目的而進行比對可以按照本領域技術範圍內的各種方式來實現，例如，使用公開可用的電腦軟體，諸如Needleman-Wunsch (Emboss的NEEDLE程式)、Basic Local Alignment Search Tool (BLAST TM)、BLAST-2、ALIGN或MEG ALIGN™ (DNASTAR)軟體。在一個實施例中，同一性%是相同胺基酸殘基的數目除以比對長度(X+Y)，其中比對長度是最長序列(例如X)的長度加上那個序列中空位殘基的數目(Y)。在一個較佳實施例中，可以使用Needleman-Wunsch (Emboss的NEEDLE程式)來實現比對，例如使用BLOSUM60矩陣，空位開放為10，空位延伸為0.5。
如本文所用，術語「醫藥上可接受的」是指經聯邦或州政府監管機構批准，或列於美國藥典、歐洲藥典或其他普遍認可的藥典中用於動物，更特別是用於人類。
如本文所用，術語「多核苷酸」、「核苷酸」、「核酸」、「核酸分子」和其他類似術語可交替使用並且包括DNA、RNA、mRNA與類似者。
如本文所用，術語「預防(prevent、preventing、prevention)與「防治(prophylaxis)」是指因為投予本文提供的療法或療法組合(例如防治劑或治療劑的組合，諸如本發明的抗體或抗原結合片段)而完全或部分抑制CXCR4媒介的疾病(或病況)及/或與其相關的症狀生成、復發、發病或擴散。
術語「放療」是指使用輻射(例如電離輻射)來殺死癌細胞及/或減少腫瘤塊的治療。放療可以與其他治療劑組合使用。放療可以與化療組合使用。放療可能用作為手術切除惡性腫瘤後的治療。放療可以透過植入物(也稱為近接治療)或透過注射、膠囊、飲料或植入物投予的放射性同位素從外部施加於生物體(例如人類、狗、貓、小鼠等)。放療是本領域已知的術語，並且包括三維適形放療(3D-CRT)、影像導引放療(IGRT)、強度調節放療(IMRT)、螺旋斷層放療、光子束放療、質子束放療、術中放療(IORT)、立體定位放射治療和立體定位身體放療(SBRT)。放療可以透過直線加速器(LINAC) (也稱為直線粒子加速器)由外部施用。
術語「囓齒動物」是指囓齒目的哺乳動物。在一個實施例中，囓齒動物是在上顎和下顎中的每一者中具有一對持續生長的門牙的哺乳動物。在一個實施例中，術語「囓齒動物」是指選自小鼠、大鼠、松鼠、土撥鼠、花栗鼠、絨鼠、豪豬、海狸、水豚、沙鼠、倉鼠和天竺鼠的一或多種囓齒動物。在一個實施例中，囓齒動物是鼠科。在一個實施例中，囓齒動物是鼠類。在一個較佳實施例中，囓齒動物是小鼠或大鼠。
術語「特異性地結合」以及類似者在本文是指抗體或抗原結合片段以特異性的方式結合至感興趣的蛋白質(例如CXCR4)，而不是透過極性交互作用或其他非特異性(但可觀察到的)結合的黏附。例如，抗CXCR4抗體或抗原結合片段憑藉其CDR區與CXCR4上的其抗原決定位(表位)交互作用而特異性地結合至CXCR4。可以例如藉由免疫分析(例如酶聯免疫吸附分析(ELISA))、基於盤的多陣列(例如Meso Scale Discovery TM平台)、SPR (例如Biacore TM)、流式細胞分析術(例如Mirrorball TM螢光細胞測量儀)、活細胞影像、放射免疫分析(RIA)、放射性配體結合或本領域具有通常知識者已知的其他技術來鑑定特異性地結合至感興趣蛋白質(例如CXCR4抗原)的抗體或其抗原結合片段。在一個特定實施例中，使用流式細胞分析術、放射性配體結合、SPR、活細胞成像或ELISA來測定結合。通常，特異性反應將是背景訊號或雜訊的至少兩倍，更通常是背景的超過10倍(例如超過15倍、超過20倍、超過50倍或超過100倍)。關於抗體特異性的討論，參見例如Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336。
術語「個體」或「患者」指任何動物，包括但不限於哺乳動物，例如非人類哺乳動物。如本文所用，術語「哺乳動物」是指哺乳其幼體並生下活體幼體(真獸類或胎盤哺乳動物)或產卵(後獸亞綱或非胎盤哺乳動物)的任何脊椎動物。哺乳動物物種的實例包括但不限於人類和其他靈長類動物，包括非人類靈長類動物，諸如黑猩猩和其他猿類以及猴類物種；農場動物，諸如牛、綿羊、豬、山羊和馬；家養哺乳動物，諸如狗和貓；實驗動物，諸如小鼠、大鼠(包括棉鼠)、倉鼠和天竺鼠；鳥類，包括家養鳥類、野生鳥類和競賽鳥類，諸如雞、火雞和其他雞類鳥類、鴨、鵝與類似者。在一個特定實施例中，個體是人類患者。
如本文所用，「基本上」、「基本上全部」或「基本上術語」是指至少約60%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或約100%。
如本文所用，術語「治療劑」是指可用於治療、控制或改善CXCR4媒介的疾病(或病況)及/或與其相關的症狀的任何藥劑，該等疾病(或病況)是本文他處描述。在某些實施例中，術語「治療劑」是指本發明的抗體或抗原結合片段。在某些其他實施例中，術語「治療劑」是指本發明抗體或抗原結合片段以外的藥劑。較佳地，治療劑是已知可用於，或已經或目前用於治療、控制或改善CXCR4媒介的疾病(或病況)或與其相關的一或多種症狀的藥劑，例如健康照護專業人員認為是標準護理的治療劑。
如本文所用，術語「療法」是指任何可用於預防、控制、治療及/或改善CXCR4媒介的疾病或病況(例如癌症或本文所述的任何其他疾病或病況)的方案、方法及/或藥劑。在某些實施例中，術語「療法(therapies和therapy)」是指生物療法、支持性療法及/或可用於預防、控制、治療及/或改善具有通常知識者(諸如醫療專業人員)已知的CXCR4媒介的疾病或病況的其他療法。
術語「治療(treat、treatment和treating)」是指因為投予一或多種療法(包括但不限於投予一或多種治療劑，諸如本發明的抗體或抗原結合片段或其抗原結合片段)而減少或改善CXCR4媒介的疾病或病況(本文他處描述)的進展、嚴重性及/或持續時間。在特定實施例中，此類術語是指減少或抑制CXCR4配體(例如CXCL12)與CXCR4的結合，及/或改善、減少或抑制與CXCR4媒介的疾病或病況相關的一或多種症狀(如本文他處描述，例如癌症)。
術語「可變區」或「可變結構域」是指輕鏈和重鏈的一部分，通常是重鏈中胺基端的約120至130個胺基酸和輕鏈中胺基端的約100至110個胺基酸，其抗體之間的序列差異很大，並且用於每個特定抗體對其特定抗原(例如CXCR4)的結合和特異性。序列的可變性集中在CDR區，而可變結構域中更為高度保守的區域稱為框架區(FR)。在較佳實施例中，可變區是人類可變區。
細胞生物學和分子生物學中常用術語的定義可以在“The Merck Manual of Diagnosis and Therapy”, 19th Edition, published by Merck Research Laboratories, 2006 (ISBN 0-911910-19-0)；Robert S. Porter et al.,(eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9)；Benjamin Lewin, Genes X, published by Jones & Bartlett Publishing, 2009 (ISBN-10: 0763766321)；Kendrew et al.,(Eds.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8)以及Current Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan et al., eds.中找到。
除非另有說明，否則本發明使用如例如Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4 ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2012)；Molecular Biology 3 rdEdition, David Clark et al., Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (2018)；Molecular Biology of the Cell, 6 thEdition, Alberts et al., Garland Science, New York, USA (2014)；Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications, R. Ian Freshney, John Wiley & Sons, New Jesrsey USA (2011)；Rang & Dale’s Pharmacology 8 thEdition, Rang et al.,Elsevier Churchill Livingstone., England (2016)；Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995)；Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coligan, et al., ed., John Wiley and Sons, Inc.)；Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et al.,ed., John Wiley and Sons, Inc.)；Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, Publisher: Wiley-Liss; 5th edition (2005)；以及Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol. 57, Jennie P. Mather and David Barnes editors, Academic Press, 1st edition, 1998)中所述的標準程序進行，其以全文引用的方式併入本文。
其他術語定義於本發明各種實施例的說明中。 2.    CXCR4 抗體
本發明提供一種特異性地結合至CXCR4 (例如人類CXCR4 [hCXCR4])的抗體或其抗原結合片段。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段是特異性地結合CXCR4 (例如hCXCR4)的單株抗體或其抗原結合片段(諸如完全人類單株抗體)。在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段是全長抗體。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段是包含2條重鏈和2條輕鏈的4鏈抗體。
發明人已經鑑定出對CXCR4具有特異性的抗體，其比現有的抗CXCR4抗體具有許多潛在的用途和益處。例如，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段可能具有以下經增進的或有益性質中的一或多者： a.   僅抑制CXCR4的配體中之一者的選擇性(例如抑制CXCL12/CXCR4交互作用，但不是CXCR4與其他配體(例如MIF或泛素)的交互作用) b.  對CXCR4具有特異性，抑制多個配體的結合(例如CXCL12、MIF和泛素；CXCL12和泛素；或CXCL12和MIF) c.   誘導T細胞往腫瘤(例如實體腫瘤)的浸潤程度增加，從而縮小腫瘤體積 d.  誘導低量的T細胞凋亡 e.   改善或降低免疫原性/無副作用 f.   改善溶解度 g.  改善穩定性 h.  易於調配 i.   給藥頻率及/或投藥途徑 j.   可製造性(例如表現、容易純化、同功型、純化期間管柱的親和力(例如蛋白質A或鎳)、重鏈和輕鏈無解離、重鏈解離、增進產率、減少蛋白質切割/剪切) k.  增進療效及/或作為組合療法的一部分增進療效
本發明的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(包括CL-82574、CL-82458、CL-82558、CL-82658、CL-83083、CL-83083-2、CL-82583、CL-82580、CL-82577、CL-82571、CL-82562、CL-82556、CL-82551、CL-82541、CL-82523、CL-82517、CL-82495、CL-82473、CL-82455、CL-83158、CL-148712與CL-148729，其將在下面詳細說明)是就本文所述實施例和配置來描述的。除非另有說明，否則所有實施例和配置應被解讀為能夠與任何其他實施例或配置組合，除非這樣的組合沒有技術意義或以其他方式明確說明。具體而言，特定實施例的引用包括引用任何子實施例(例如，在後續實施例中引用實施例3具體包括對實施例3a、實施例3b等的引用)，除非從上下文中顯而易見。
在這說明書通篇中，在一個實施例中提到CXCR4是哺乳動物CXCR4。哺乳動物物種的實例包括但不限於人類和其他靈長類動物，包括非人類靈長類動物，諸如黑猩猩和其他猿類以及猴類物種；農場動物，諸如牛、綿羊、豬、山羊和馬；家養哺乳動物，諸如狗和貓；實驗動物，包括囓齒動物，諸如小鼠、大鼠(包括棉鼠)、倉鼠、沙鼠和天竺鼠。在一個實施例中，CXCR4是囓齒動物CXCR4 (例如小鼠或大鼠CXCR4)。在另一個實施例中，CXCR4是恆河猴及/或食蟹獼猴CXCR4 (視情況地選自SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9)。在一個較佳實施例中，CXCR4是人類CXCR4 (視情況地，其中人類CXCR4是選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3)。在另一個實施例中，CXCR4是細胞表面表現的CXCR4。
CXCR4是一種GPCR，與大多數GPCR一樣存在有多種同功型。在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段能夠與hCXCR4的所有同功型交互作用。人類CXCR4 (hCXCR4)的胺基酸序列可在Uniprot ID：P61073 (SEQ ID NO：2)中發現到。迄今，Uniprot資料庫中鑑定出兩種hCXCR4同功型：同功型1的長度為352個胺基酸，而同功型2的長度為356個胺基酸(Duquenne et al.,(2014). The Two Human CXCR4 Isoforms Display Different HIV Receptor Activities: Consequences for the Emergence of X4 Strains. J Immunol.193(8):4188-4194)。同功型1中的胺基酸1-5 MEGIS (在受體的N端)在同功型2中被MSIPLPLLQ置換。在一個較佳實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性地結合至同功型(SEQ ID NO：2)或同功型2。在一個較佳實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性地結合至同功型1與2兩者。將理解尚未鑑定出所有同功型。
在另一個實施例中，CXCR4蛋白已經經歷轉譯後修飾(例如醣基化、磷酸化、泛素化或硫酸化)。在一個實施例中，CXCR4已經在胺基酸N11、S18及/或N176 (參考序列：同功型1)上經歷了醣基化(N-連接及/或O-連接)。
在本文的實施例通篇中，CXCR4可能是野生型人類CXCR4。另外或或者，人類CXCR4可能是變異型CXCR4，例如SNP、多型性變異體、截短變異體、突變變異體或具有框移突變的變異體。在一個實施例中，變異型CXCR4由包含一或多個單核苷酸多型性(SNP) (例如選自由CXCR4-I261I、CXCR4-K68K和CXCR4-F93S組成之群組)的胺基酸序列編碼(Petersen et al., (2005). Risk for HIV-1 Infection Associated with a Common CXCL12 (SDF1) Polymorphism and CXCR4 Variation in an African Population, J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 40(5): 521-526))。CXCR4胞內C端區域的單點突變可導致變異體產生，這些變異體常見於疣、低伽瑪球蛋白血症、感染和嗜中性白血球骨髓保留症( Warts, Hypogammaglobulinemia, Infections, and Myelokathexis，WHIM)或相關疾病(例如華氏巨球蛋白血症，Waldenström macroglobulinaemia)。另外或或者，變異體CXCR4可能由包含一或多個突變的胺基酸序列編碼，該等突變為例如無義突變(導致胺基酸序列截短，例如E343K、E343X、S338X、G336X和R334X (其中X終止序列)) (Liu et al.,(2012) WHIM syndrome caused by a single amino acid substitution in the carboxy-tail of chemokine receptor CXCR4. Blood.120(1):181-189)。框移突變是因為插入或刪除一或多個核苷酸，在轉譯遺傳密碼時導致從突變起的位置(例如到讀框的結尾或到終止子核酸序列)非自然讀框所致。在另一個實施例中，變異體CXCR4由包含框移突變(例如S341框移、S339框移、H315框移、T318框移、R322框移、L326框移、K327框移和I328框移)的胺基酸序列編碼((Liu et al.,(2012) 上文，以及Poulain et al.,(2016). Genomic Landscape of CXCR4 Mutations in Waldenström Macroglobulinemia. Clin. Cancer Res.22(6):1480-1488))。在另一個實施例中，變異體CXCR4由包含胺基酸334-352、338-352或343-352之間的缺失的胺基酸序列編碼(參考序列：同功型1) (Hernandez et al.,(2003). Mutations in the chemokine receptor gene CXCR4 are associated with WHIM syndrome, a combined immunodeficiency disease. Nat Genet.34:70-74；Treon et al.,(2014). Somatic mutations in MYD88 and CXCR4 are determinants of clinical presentation and overall survival in Waldenstrom macroglobulinemia. Blood.123:2791-2796)。一些患者可能會表現這些變異體CXCR4蛋白中的任一者，因此能夠抑制這些變異體CXCR4的抗體或抗原結合片段可用於治療或預防不同或範圍更廣泛的患者(例如，如果抗體或抗原結合片段在野生型CXCR4和變異體CXCR4之間具有交叉反應性，則範圍更廣泛的患者)。因此，在一個實施例中，當抗CXCR4抗體或抗原結合片段結合至以下時，某些CXCR4媒介的疾病或病況可能受到治療或預防：變異體CXCR4，具有獨立選自胺基酸334-352、338-352或343-352 (參考序列：同功型1)之缺失的突變；或變異體CXCR4，由包含一或多個選自由CXCR4-I261I、CXCR4-K68K和CXCR4-F93S組成之群組的SNP的胺基酸序列編碼；或變異體CXCR4，由包含一或多個選自由E343K、E343X、S338X、G336X或R334X組成之群組的無義突變的胺基酸序列編碼；或變異體CXCR4，由包含一個或多個選自由S341框移、S339框移、H315框移、T318框移、R322框移、L326框移、K327框移和I328框移組成之群組的框移突變的胺基酸序列編碼。
在一個實例中，抗體或抗原結合片段的結合位點選自複數個(例如庫)結合位點。例如，多個結合位點包含複數個4鏈抗體或其片段(例如Fab或scFv)，或由複數個4鏈抗體或其片段(例如Fab或scFv)組成。用於產生複數個供篩選的結合位點的合適方法包括噬菌體展示(產生抗體結合位點的噬菌體展示庫)、核醣體展示(產生抗體結合位點的核醣體展示庫)、酵母菌展示(產生抗體結合位點的酵母菌展示庫)、哺乳動物展示、共價展示(如順式展示)，或非人類脊椎動物(如囓齒動物，如小鼠或大鼠，如Velocimouse TM、Intelliselect TM轉殖基因小鼠、Xenomouse TM、Aliva Mouse TM、HuMab Mouse TM、Omnimouse TM、Omnirat TMMeMo Mouse TM)、OmniFlic TM、OmniChicken TM和OmniClic™)用hCXCR4蛋白或hCXCR4表位進行免疫，然後分離出一系列抗體生產細胞(例如B細胞、漿細胞或漿母細胞庫)及/或經分離的抗體或抗原結合片段的庫。
發明人提供了以下抗CXCR4抗體，其中的每一者特異性地結合至CXCR4：
CL-82574具有SEQ ID NO：16的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：10 (IMGT)或SEQ ID NO：13 (Kabat)的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：11 (IMGT)或SEQ ID NO：14 (Kabat)的CDRH2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：12 (IMGT)或SEQ ID NO：15 (Kabat)的CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：17。CL-82574具有SEQ ID NO：26的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含SEQ NO: 20 (IMGT)或SEQ ID NO：23 (Kabat)的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：21 (IMGT)或SEQ ID NO：24 (Kabat)的CDRL2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：22 (IMGT)或SEQ ID NO：25(Kabat)的CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：27。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：18 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：19)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：28 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：29)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-33*01 (SEQ ID NO：311)、IGHD1-20*01(SEQ ID NO：316)和IGHJ3*02 (SEQ ID NO：319)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ3*01 (SEQ ID NO：323)基因區段的重組而做出。
CL-82458具有SEQ ID NO：36的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：30 (IMGT)或SEQ ID NO：33 (Kabat)的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：31 (IMGT)或SEQ ID NO：34 (Kabat)的CDRH2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：32 (IMGT)或SEQ ID NO：35 (Kabat)的CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：37。CL-82458具有SEQ ID NO：46的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含SEQ ID NO: 40 (IMGT)或SEQ ID NO：43 (Kabat)的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：41 (IMGT)或SEQ ID NO：44 (Kabat)的CDRL2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：42 (IMGT)或SEQ ID NO：45 (Kabat)的CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：47。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：38 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：39)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：48 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：49)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-23*04 (SEQ ID NO：312)、IGHD1-1*01 (SEQ ID NO：317)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ4*01 (SEQ ID NO：326)基因區段的重組而做出。
CL-82558具有SEQ ID NO：56的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：50 (IMGT)或SEQ ID NO：53 (Kabat)的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：51 (IMGT)或SEQ ID NO：54 (Kabat)的CDRH2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：52 (IMGT)或SEQ ID NO：55 (Kabat)的CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：57。CL-82558具有SEQ ID NO：66的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含SEQ ID NO: 60 (IMGT)或SEQ ID NO：63 (Kabat)的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：61 (IMGT)或SEQ ID NO：64 (Kabat)的CDRL2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：62 (IMGT)或SEQ ID NO：65 (Kabat)的CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：67。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：58 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：59)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：68 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：69)。重鏈可變區是透過人類IGHV4-31*03 (SEQ ID NO：310)、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV2-28*01 (SEQ ID NO：322)和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82658具有SEQ ID NO：76的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：70 (IMGT)或SEQ ID NO：73 (Kabat)的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：71(IMGT)或SEQ ID NO：74 (Kabat)的CDRH2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：72 (IMGT)或SEQ ID NO：75 (Kabat)的CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：77。CL-82658具有SEQ ID NO：86的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：80 (IMGT)或SEQ ID NO：83 (Kabat)的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：81 (IMGT)或SEQ ID NO：84 (Kabat)的CDRL2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：82 (IMGT)或SEQ ID NO：85 (Kabat)的CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：87。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：78 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：79)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：88 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：89)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-30*18 (SEQ ID NO：308)、IGHD3-16*02 (SEQ ID NO：313)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ3*01 (SEQ ID NO：323)基因區段的重組而做出。
CL-83083具有SEQ ID NO：96的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：90 (IMGT)或SEQ ID NO：93 (Kabat)的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：91 (IMGT)或SEQ ID NO：94 (Kabat)的CDRH2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：92 (IMGT)或SEQ ID NO：95 (Kabat)的CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：97。CL-83083具有SEQ ID NO：106的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含SEQ ID NO: 100 (IMGT)或SEQ ID NO：103 (Kabat)的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：101 (IMGT)或SEQ ID NO：104 (Kabat)的CDRL2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：102 (IMGT)或SEQ ID NO：105 (Kabat)的CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：107。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：98 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：99)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：108 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：109)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-73*02 (SEQ ID NO：309)、IGHD3-9*01 (SEQ ID NO：314)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGLV10-54*02 (SEQ ID NO：321)和IGLJ3*02 (SEQ ID NO：324)基因區段的重組而做出。
CL-83083-2具有SEQ ID NO：96的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：90 (IMGT)或SEQ ID NO：93 (Kabat)的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：91 (IMGT)或SEQ ID NO：94 (Kabat)的CDRH2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：92 (IMGT)或SEQ ID NO：95 (Kabat)的CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：97。CL-83083-2具有SEQ ID NO：106的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含SEQ ID NO：100 (IMGT)或SEQ ID NO：103 (Kabat)的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：101 (IMGT)或SEQ ID NO：104 (Kabat)的CDRL2胺基酸序列，以及SEQ ID NO：102 (IMGT)或SEQ ID NO：105 (Kabat)的CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：107。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：98 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：99)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：110 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：111)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-73*02 (SEQ ID NO：309)、IGHD3-9*01 (SEQ ID NO：314)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGLV10-54*02 (SEQ ID NO：321)和IGLJ3*02 (SEQ ID NO：324)基因區段的重組而做出。
CL-82583具有SEQ ID NO：112的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：112定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：113。CL-82583具有SEQ ID NO：116的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：116定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：117。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：114 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：115)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：118 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：119)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-33*01 (SEQ ID NO：311)、IGHD1-1*01 (SEQ ID NO：317)和IGHJ3*02 (SEQ ID NO：319)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ3*01 (SEQ ID NO：323)基因區段的重組而做出。
CL-82580具有SEQ ID NO：120的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：120定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：121。CL-82580具有SEQ ID NO：124的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：124定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：125。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：122 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：123)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：126 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：127)。重鏈可變區是透過人類IGHV1-8*01、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-5*03和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82577具有SEQ ID NO：128的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：128定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：129。CL-82577具有SEQ ID NO：132的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：132定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：133。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：130 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：131)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：134 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：135)。重鏈可變區是透過人類IGHV4-31*03 (SEQ ID NO：310)、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV2-28*01 (SEQ ID NO：322)和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82571具有SEQ ID NO：136的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：136定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：137。CL-82571具有SEQ ID NO：140的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：140定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：141。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：138 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：139)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：142 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：143)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-21*03、IGHD5-18*01和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1D-13*d01和IGKJ4*01 (SEQ ID NO：326)基因區段的重組而做出。
CL-82562具有SEQ ID NO：144的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：144定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：145。CL-82562具有SEQ ID NO：148的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：148定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：149。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：146 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：147)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：150 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：151)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-30*18 (SEQ ID NO：308)、IGHD1-20*01 (SEQ ID NO：316)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82556具有SEQ ID NO：152的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：152定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：153。CL-82556具有SEQ ID NO：156的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：156定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：157。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：154 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：155)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：158 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：159)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-33*01 (SEQ ID NO：311)、IGHD1-20*01 (SEQ ID NO：316)和IGHJ3*02 (SEQ ID NO：319)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ3*01 (SEQ ID NO：323)基因區段的重組而做出。
CL-82551具有SEQ ID NO：160的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：160定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：161。CL-82551具有SEQ ID NO：164的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：164定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：165。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：162 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：163)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：166 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：167)。重鏈可變區是透過人類IGHV1-8*01、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-5*03和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82541具有SEQ ID NO：168的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：168定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：169。CL-82541具有SEQ ID NO：172的輕鏈可變區(VL)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：172定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：173。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：170 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：171)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：174 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：175)。重鏈可變區是透過人類IGHV4-31*03 (SEQ ID NO：310)、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV2-28*01 (SEQ ID NO：322)和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82523具有SEQ ID NO：176的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：176定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：177。CL-82523具有SEQ ID NO：180的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：180定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：181。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：178 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：179)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：182 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：183)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-23*04 (SEQ ID NO：312)、IGHD1-20*01 (SEQ ID NO：316)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ4*01 (SEQ ID NO：326)基因區段的重組而做出。
CL-82517具有SEQ ID NO：184的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：184定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：185。CL-82517具有SEQ ID NO：188的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：188定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：189。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：186 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：187)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：190 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：191)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-73*02 (SEQ ID NO：309)、IGHD3-9*01 (SEQ ID NO：314)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-5*03和IGKJ1*01(SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82495具有SEQ ID NO：192的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：192定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：193。CL-82495具有SEQ ID NO：196的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：196定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：197。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：194 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：195)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：198 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：199)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-33*01 (SEQ ID NO：311)、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-82473具有SEQ ID NO：200的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：200定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：201。CL-82473具有SEQ ID NO：204的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：204定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：205。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：202 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：203)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：206 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：207)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-33*01 (SEQ ID NO：311)、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ4*02基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV2-30*01和IGKJ3*01 (SEQ ID NO：323)基因區段的重組而做出。
CL-82455具有SEQ ID NO：208的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：208定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：209。CL-82455具有SEQ ID NO：212的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：212定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：213。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：210 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：211)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：214 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：215)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-33*01 (SEQ ID NO：311)、IGHD3-10 *01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV3-15*01和IGKJ1*01 (SEQ ID NO：325)基因區段的重組而做出。
CL-83158具有SEQ ID NO：216的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：216定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：217。CL-83158具有SEQ ID NO：220的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：220定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：221。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：218 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：219)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：222 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：223)。重鏈可變區是透過人類IGHV4-34*01、IGHD3-10*01 (SEQ ID NO：315)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGLV3-19*01和IGLJ3*02 (SEQ ID NO：324)基因區段的重組而做出。
CL-148712具有SEQ ID NO：224的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：224定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：225。CL-148712具有SEQ ID NO：228的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：228定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：229。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：226 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：227)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：230 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：231)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-23*04 (SEQ ID NO：312)、IGHD1-1*01 (SEQ ID NO：317)和IGHJ6*02 (SEQ ID NO：318)基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGKV1-17*01 (SEQ ID NO：320)和IGKJ4*01 (SEQ ID NO：326)基因區段的重組而做出。
CL-148729具有SEQ ID NO：232的重鏈可變區(V H)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V H胺基酸序列SEQ ID NO：232定義的CDRH1、CDRH2和CDRH3胺基酸序列。V H結構域的重鏈核酸序列為SEQ ID NO：233。CL-148729具有SEQ ID NO：236的輕鏈可變區(V L)胺基酸序列，包含如藉由IMGT或Kabat從V L胺基酸序列SEQ ID NO：236定義的CDRL1、CDRL2和CDRL3胺基酸序列。V L結構域的輕鏈核酸序列為SEQ ID NO：237。V H結構域可能與本文所述重鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：305或SEQ ID NO：307。V L結構域可能與本文所述輕鏈恆定區序列中的任一者組合，例如SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：301或SEQ ID NO：303。全長重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：234 (重鏈核酸序列SEQ ID NO：235)。全長輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO：238 (輕鏈核酸序列SEQ ID NO：239)。重鏈可變區是透過人類IGHV3-73*02 (SEQ ID NO：309)、IGHD6-25*01和IGHJ4*02基因區段的重組而做出。輕鏈可變區是透過人類IGLV1-51*01和IGLJ3*02 (SEQ ID NO：324)基因區段的重組而做出。
(如本文所述)本發明的抗體或抗原結合片段特異性地結合至CXCR4；對CXCR4的特異性結合及/或對CXCR4的結合親和力可以藉由SPR或本領域已知的其他技術來測定。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段特異性地結合至人類CXCR4。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段特異性地結合至人類CXCR4和食蟹獼猴CXCR4。
在一個實施例中，使用奈米盤、細胞或病毒樣顆粒(VLP)進行SPR以呈現全部或部分受體(例如CXCR4)。在另一個實施例中，奈米盤、細胞或VLP用於呈現突變型(例如經熱穩定的)或變異型受體(例如CXCR4)。在一個實施例中，使用構形經熱穩定的受體進行SPR，構形經熱穩定的受體是例如CXCR4 StaR ®，其為突變型(經熱穩定) CXCR4受體，已根據WO2009/081136中所述的方法生成和選擇(亦參見：Magnani et al(2008). Co-evolving stability and conformational homogeneity of the human adenosine A 2areceptor. Proc Natl Acad Sci USA.105(31):10744-10749；Serrano-Vega et al(2008). Conformational thermostabilization of the beta1-adrenergic receptor in a detergent-resistant form. Proc Natl Acad Sci USA.105(3):877-882；及Shibata et al(2009). Thermostabilization of the neurotensin receptor NTS1. J Mol Biol.390(2):262-277)，其視情況地使用奈米盤、細胞或VLP來呈現。
在一個實施例中，在25℃或37℃下進行SPR。在一個實施例中，在生理pH下(諸如約pH 7或在pH 7.6下)進行SPR (例如使用pH 7.6的Hepes緩衝鹽水(也稱為HBS-EP，可獲自Teknova Inc (California；目錄號H8022)))。在一個實施例中，在生理鹽含量(例如150 mM NaCl)下進行SPR。在一個實施例中，在按體積計不超過0.05%的清潔劑含量下，例如在0.05% P20 (聚山梨醇酯20；例如Tween-20TM)與3 mM EDTA存在下進行SPR。
在一個實例中，在25℃下並使用10 nM Hepes、150 mM NaCl、0.1% w/v BSA作為運行緩衝液在pH 7.3下進行SPR。在一個實例中，在25℃或37℃下、於pH 7.6、150 mM NaCl、0.05%清潔劑(例如P20)和3 mM EDTA的緩衝液中進行SPR。緩衝液可含10 mM Hepes。在一個實例中，在25℃或37℃下於HBS-EP中進行SPR。在一個實例中，使用SPR藉由以下方式測定抗體或抗原結合片段的親和力： 1.  將抗人類(或物種相匹配的其他相關人類、大鼠或非人類脊椎動物抗體恆定區) IgG (例如Biacore TMBR-1008-38)偶聯至生物感測器晶片(例如GLM晶片)，諸如藉由一級胺偶聯； 2.  將抗人類IgG (或其他物種相匹配的抗體)暴露於測試IgG抗體(例如抗CXCR4抗體或抗原結合片段)將測試抗體捕獲至晶片上； 3.  將測試抗原以1024 nM、256 nM、64 nM、16 nM、4 nM和0 nM (即單獨緩衝液)透過晶片的捕獲表面；和 4.  並使用表面電漿共振，例如在上文討論的SPR條件下(例如在25℃下，在生理緩衝液中)，測定測試抗體與測試抗原結合的親和力。SPR可以使用任何標準SPR裝置進行，諸如藉由Biacore TM或使用ProteOn XPR36 TM(Bio-Rad TM)。
在另一個實施例中，可以將抗原呈現在生物感測器晶片上(而不是步驟1和2)，然後使該抗原暴露於抗體或抗原結合片段(而不是晶片3)。在另一個實施例中，在SA晶片的主動流動通道上捕獲經生物素化的CXCR4病毒樣顆粒，然後使用經純化的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(例如Fab片段)作為分析物並以1.23 nM、3.7 nM、11.11 nM、33.33 nM及100 nM流過捕獲的CXCR4 VLP。
在另一個實施例中，使用細胞進行的SPR可以使用測量表面締合蛋白的重複差示測量的技術(例如LigandTracer TM技術(Ridgeview))進行分析。
捕獲表面的再生可以使用10 mM甘胺酸在pH 1.7下進行。這會移除被捕獲的抗體或抗原結合片段，並允許表面用於其他交互作用。可以使用標準技術將結合數據擬合至固有的1：1模型，例如使用ProteOn XPR36 TM分析軟體固有的模型。
特異性地結合至CXCR4抗原的抗體或其抗原結合片段可能與相關抗原，特別是不同物種(例如恆河猴、食蟹獼猴、囓齒動物及/或人類)的CXCR4交叉反應。因此，在一個實施例中，抗體或抗原結合片段特異性地結合至人類、恆河猴、食蟹獼猴及/或囓齒動物(例如小鼠或大鼠) CXCR4。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段特異性地結合至人類及/或食蟹獼猴CXCR4。
在一個較佳實施例中，特異性地結合至人類CXCR4抗原的抗體或其抗原結合片段不會與其他抗原交叉反應，其他抗原是例如選自CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR5、CXCR6、CXCR7、CXCR8、CXCR9、CXCR10、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CB2，或其任何組合的抗原。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段不結合至CXCR7或不與CXCR7交叉反應，例如未可偵測到地結合至CXCR7 (視情況地其中CXCR7是人類的並且進一步視情況地選自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6)。在一個較佳實施例中，當與陽性對照(例如抗CXCR7抗體)相比時，抗體或抗原結合片段不結合至CXCR7 (視情況地其中CXCR7是人類的並且進一步視情況地選自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6)。在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段不結合至CCR5結合或並不與CCR5交叉反應，例如未可偵測到地結合至CCR5。在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段不結合至CXCR3或不與CXCR3交叉反應，例如未可偵測到地結合至CXCR3。在一個實施例中，基本上如本文實例12中所述來測定交叉反應性。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段特異性地結合至CXCR4 (例如人類CXCR4)。在一個實施例中，特異性結合可以藉由結合親和力來測量，其可以表示為EC 50或K D。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段以0.2至2 nM、0.2至1 nM、0.2至0.8 nM，或較佳0.4至0.8 nM的K D特異性地結合至人類CXCR4。在一個實施例中，藉由SPR來測定結合親和力，例如如本文他處所述或基本上如本文實例11中所述進行。
在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段以0.5至10 nM、0.5至8 nM，或較佳地0.5至5 nM的EC 50特異性地結合至食蟹獼猴CXCR4。在一個實施例中，藉由流式細胞分析術來測定結合親和力，例如如本文他處所述或基本上如本文實例10中所述進行。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段(基本上)抑制配體(例如如上所述的天然配體)結合至CXCR4。在一個較佳實施例中，配體是CXCL12 (例如人類CXCL12，特別是人類αCXCL12 (SEQ ID NO：327))。在一個實施例中，CXCL12具有被切割的訊號肽(視情況地長度為21個胺基酸)。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段(基本上)抑制CXCL12結合至CXCR4。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段完全抑制CXCL12結合至CXCR4 (例如人類CXCL12結合至人類CXCR4及/或食蟹獼猴CXCL12結合至食蟹獼猴CXCR4)。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段部分抑制CXCL12結合至CXCR4。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段部分或完全抑制CXCL12結合至CXCR4，但並未顯示任何可偵測到抑制CXCR4配體(例如MIF或泛素)結合至CXCR4。
在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段以0.2至4 nM、0.2至3 nM、0.2nM至2 nM，或較佳地0.2至1 nM的IC 50抑制CXCL12 (例如人類或食蟹獼猴CXCL12)結合至CXCR4 (例如人類或食蟹獼猴CXCR4)。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段以0.4至4 nM的IC 50抑制人類CXCL12結合至人類CXCR4 (視情況地選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3)。在一個較佳實施例中，使用如本文他處所述的HTRF分析或基本上如本文實例7中所述進行的HTRF分析來測定CXCL12抑制。
在一個實施例中，在室溫(例如22或25℃)下進行HTRF分析。在另一個實施例中，在暗處進行分析，特別是在培育期期間。在任何HTRF分析中，使用適當的供體-受體螢光對。供體分子與感興趣的受體(即CXCR4)或感興趣的配體(例如CXCL12)結合。受體分子結合至供體分子所結合的受體/配體的結合配偶體。供體分子或受體分子可能連接至例如抗小鼠Fc抗體、抗人類Fc抗體、抗Flag抗體、抗His抗體、直接連接至鏈黴親和素[各中之每一者結合至感興趣的配體或受體(例如CXCL12或CXCR4)]，或直接連接至感興趣的配體或受體(例如CXCL12或CXCR4)。在一個實例中，供體分子是穴狀化合物(cryptate) (620 nm發射)，而受體分子是選自D2 (647 nm發射)和Alexaflour647 (665 nm發射)。在一個實施例中，以滴定的方式測定抗體或其抗原結合片段的濃度以提供特異性結合%曲線(參見實例7，公式6)。在一個實施例中，抗原或抗原結合片段的濃度範圍為大約1 mM至1 pM (例如500 nM至15 pM或50 nM至5 pM)。在另一個實施例中，取得複數個數據點，例如6、7、8、9、10、11、12或13個數據點，特別是10或11個數據點。在一個實施例中，在HTRF緩衝液(例如PBS (Sigma) + 0.53 M KF (Sigma) + 0.1%w/v BSA (Sigma))中進行HTRF分析。
在一個實例中，使用HTRF藉由以下方式來測定配體(例如CXCL12)的特異性結合%： 1.  將重組配體(例如CXCL12 (標記有AlexaFlour647))與抗體或抗原結合片段在盤中組合； 2.  將表現受體(例如CXCR4 (經銪穴狀化合物標記的SNAP))的細胞添加至盤； 3.  添加測試抗體或抗原結合片段並放置一段足夠的時間以達到平衡(例如在室溫下大約1或2小時)； 4.  使用能夠激發供體分子(例如在335 nm下)並能夠測量供體和受體螢光分子的發射波長(例如在620 nm和665 nm下)的讀盤儀讀取盤(讀盤儀的實例包括EnVision TM(Perkin Elmer)、PHERAstar TMFS、PHERAstar TMFSX、CLARIOstar TM和FLUOstar TM，以及POLARstar TMOmega)；和 5.  例如使用公式6確定測試分子(例如CXCL12)的特異性結合%；及/或 6.  例如使用公式5確定配體(例如CXCL12)的IC 50。在一個實施例中，可以使用標準分析技術(例如使用GraphPad/PRISM分析軟體)擬合(例如抑制)數據(例如特異性結合%)。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段在T細胞(視情況地CD8 +T細胞)中不誘導細胞凋亡(例如CXCR4媒介的細胞凋亡)，視情況地其中使用流式細胞分析術來測定細胞凋亡。在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段不誘導CXCR4媒介的細胞凋亡(不論是藉由直接作用於CXCR4或透過抑制其天然配體中的一或多者作用)，例如活體外在表現CXCR4的細胞中，視情況地使用流式細胞分析術來測定。在一個實施例中，使用Jurkat T細胞或初代初始T細胞(例如哺乳動物或人類)測定細胞凋亡。在一個實施例中，T細胞是表現CXCR4的T細胞。T細胞可能是CD8 +T細胞、CD4 +T細胞或調節性T細胞(Treg)，較佳地CD8 +T細胞。在一個實施例中，在測定細胞凋亡的分析中使用合適的同型對照(例如IgG4-PE)和陽性對照(例如抗Fas抗體或星形孢菌素)。在一個實施例中，如果抗體或抗原結合片段具有小於50%、小於40%、小於30%或小於20%的最大特異性誘導的細胞凋亡百分比(視情況地表示為抗Fas反應或星形孢菌素誘導的細胞凋亡百分比)，則抗體或片段在T細胞中不誘導細胞凋亡。在另一個實施例中，最大特異性誘導的細胞凋亡百分比(視情況地表示為抗Fas反應或星形孢菌素誘導的細胞凋亡百分比)小於10%、小於8%、小於5%或小於4%，特別是小於5%。在另一個實施例中，最大特異性誘導的細胞凋亡百分比(視情況地表示為抗Fas反應或星形孢菌素誘導的細胞凋亡百分比)小於3%、小於2%、小於1%或小於0.8%。在另一個實施例中，最大特異性誘導的細胞凋亡百分比(視情況地表現為抗Fas反應或星形孢菌素誘導的細胞凋亡百分比)小於0.5%、小於0.3%、小於0.2%或小於0.1%。在一個較佳實施例中，使用例如如本文所述或基本上如本文實例9A或9B中所述進行的流式細胞分析術來測定最大特異性誘導的細胞凋亡百分比。在另一個實施例中，抗體(例如具有效應功能降低或無效應功能的抗體)或抗原結合片段不誘導CXCR4媒介的B細胞凋亡。
細胞凋亡是細胞死亡的一種計劃性形式，涉及細胞組分被一群稱為凋亡蛋白酶的半胱胺酸蛋白酶所降解。凋亡蛋白酶可透過內在(粒線體媒介)或外在(例如死亡受體和效應細胞媒介)凋亡途徑被活化。外在活化的實例可以是透過Fas活化或效應細胞釋放顆粒酶和穿孔素。在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段不誘導外在(例如死亡受體和效應細胞媒介的)及/或內在(粒線體媒介的)細胞凋亡。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(基本上)經由CXCR4 (例如人類或食蟹獼猴CXCR4)抑制CXCL12 (例如人類或食蟹獼猴CXCL12)傳訊，例如抑制CXCL12媒介的CXCR4經由cAMP傳訊。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段(基本上)抑制經CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP，例如使用受毛喉素刺激的cAMP傳訊分析(例如AlphaScreen TMcAMP分析)。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段完全或基本上抑制CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP。在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段部分抑制CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段以1至100 nM、1至90 nM、1至80 nM、1至70 nM、1至60 nM、1至50 nM、1至40 nM，或較佳地1至30 nM的IC 50抑制CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP。在一個實施例中，使用受毛喉素刺激的cAMP傳訊分析來測定cAMP，其基本上如本文實例6 (人類CXCR4)和實例10B (食蟹獼猴CXCR4)中所述進行。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(基本上)抑制β-抑制蛋白徵集到CXCR4 (例如hCXCR4或食蟹獼猴CXCR4)，視情況地其中該β-抑制蛋白徵集是由CXCL12 (例如hCXCL12或食蟹獼猴CXCL12)所誘導。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段以0.01至15 nM、0.01至10 nM、0.01至5 nM、0.01至4 nM、0.01至3 nM、0.01至2 nM、0.01至1.5 nM、0.01至1 nM、0.01至0.5 nM，或較佳地0.01至0.2 nM的IC 50抑制β-抑制蛋白徵集到CXCR4。在一個實施例中，在基於功能性細胞的報導基因分析(例如使用Tango CXCR4-bla U2OS細胞)中進行β-抑制蛋白徵集到CXCR4的抑制。在一個實施例中，使用30 nM的CXCL12誘導β-抑制蛋白來測量β-抑制蛋白徵集的抑制作用。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段的濃度為100 nM至0.1 pM (例如50 nM至0.5 pM或40 nM至0.5 pM)。在一個實施例中，基於功能性細胞的報導基因分析基本上如本文實例6C中所述進行。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段在結合至細胞表面後(例如在結合至細胞表面上的CXCR4後)，(顯著地)被內化到細胞中，並且視情況地其中使用螢光顯微鏡術來測定內化。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段在結合至細胞表面上的CXCR4後被內化到細胞中，總重疊目標區域的最大訊號比同型對照大1.2倍至10倍、1.2倍至5倍、1.2倍至4倍、1.2倍至3倍，或1.2倍至2倍。在一個實施例中，總重疊目標區域的最大訊號比同型對照大2倍至10倍、2倍至5倍、2倍至4倍、2倍至3倍、3倍至4倍，或3倍至5倍，特別是2倍至4倍。在一個實施例中，同型對照是IgG4-PE。在一個實施例中，使用螢光成像技術(例如IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System (Essen BioScience))或ELISA，特別是螢光成像技術來測定內化。在一個實施例中，基本上如本文實例8中所述來測定抗CXCR4抗體或抗原結合片段的內化。
在一個實施例中，螢光成像技術包含活細胞分析，其測量活細胞成像的即時定量並分析。這個技術能夠隨著時間對細胞行為進行視覺化和量化，並視情況地在實驗室培養箱中自動收集和分析影像。活細胞分析系統的一個實例是IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System (Essen BioScience)，它用於測量受體或抗體(或抗原結合片段)內化、趨化性、細胞凋亡或細胞浸潤到3D細胞環境(例如腫瘤球體)中。內化會產生二級抗體的陽性讀數(紅色螢光)。
在不受理論囿限的情況下，本發明的抗體或抗原結合片段可能被內化並與受體(例如CXCR4)一起再循環回到細胞表面。或者，它們可能在細胞內仍然與受體(例如CXCR4)結合，這防止它們被慣常細胞機制降解。或者，與受體結合的抗體或抗原結合片段被內化，且受體在沒有抗體或抗原結合片段的情況下再循環回到細胞表面。因為本發明的抗體或抗原結合片段不像基準抗體那樣快地被內化，發明人推測它們與細胞表面上的受體結合的時間更久，抑制配體(例如CXCL12)更久，因此本發明的抗體或抗原結合片段可能具有更高的解離速率常數(Kd)值，即使整體親和力看起來相似。另一種理論是本發明的抗體或抗原結合片段結合至單體CXCR4，且由於空間位阻，單個抗體或抗原結合片段不結合至超過一個CXCR4蛋白(單體)。因此，本發明的抗體或抗原結合片段可能不會交聯兩個受體，因而抗體或抗原結合片段：受體複合物的內化較慢。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(基本上)抑制配體媒介的(例如CXCL12、MIF及/或泛素，特別是CXCL12) T細胞反應，例如如透過細胞形狀的變化來測量。在這樣一個的分析中，觀察到的細胞形狀變化是由細胞物質的重新分佈或細胞膜的變化，或細胞內組分的位置改變所引起的。在一個實施例中，使用電傳導來測定或使用無標記動態質量再分佈(DMR)分析來測定配體媒介的T細胞反應。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段以0.5至20 nM、0.5至15 nM、0.5至13 nM、0.15至10 nM、0.5至8 nM，或較佳地0.5至5 nM的IC 50抑制CXCL12媒介的T細胞反應。在一個實施例中，基本上如本文實例13中所述進行DMR分析。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(基本上)抑制CXCR4 +T細胞(例如人類T細胞，諸如從人類血液中提取的初代人類T細胞)往CXCR4配體(諸如CXCL12)的趨化性。在一個實施例中，使用活細胞成像(例如IncuCyte TMS3趨化性分析系統)或流式細胞分析術(例如基於跨孔的流式細胞分析術方法)，視情況地使用Jurkat T細胞來測定趨化性。在一個實施例中，30 nM或6.25 nM的CXCL12用於在分析中誘導趨化性(作為趨化劑)。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段以0.01至5 nM、0.01至3 nM、0.01至2 nM，或較佳地0.01至1 nM的IC 50抑制CXCR4 +T細胞往CXCL12的趨化性。在一個實施例中，基本上如本文實例14中所述進行趨化性分析。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(基本上或顯著地)使T細胞(例如CD8 +T細胞)能夠浸潤(移入)腫瘤(例如實體腫瘤)，視情況地如在腫瘤球體分析中測量。可以藉由使用FACS或免疫組織化學(IHC) (取得多個經治療與未經治療腫瘤的切片，施加鑑定T細胞的試劑並比較兩者)評估T細胞浸潤到小鼠腫瘤中(藉由比較來自未經治療的小鼠和經本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段治療的小鼠的樣品)在活體內測量腫瘤浸潤。腫瘤(例如中央腫瘤塊)被腫瘤基質所包圍(參見圖9和10)。在一個較佳實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(基本上或顯著地)使得T細胞(例如CD8 +T細胞)能夠從腫瘤基質浸潤腫瘤。一旦T細胞進入腫瘤(例如中央腫瘤塊)，它們就能夠實現細胞殺傷並能夠破壞惡性細胞。圖10中顯示了其潛在機制。在不受理論囿限的情況下，於本文所述抗CXCR4抗體不存在的情況下，出現在基質中的癌症相關纖維母細胞(CAF)分泌CXCL12並遠離T細胞偏好往其遷移的腫瘤細胞建立一個更強梯度。圖9示意性地說明這一點。
可以使用球體分析在活體外測量腫瘤浸潤。球體是3D細胞培養模型，可用於模擬實體腫瘤的一些特徵。與2D細胞培養相比，3D細胞培養具有許多優勢，例如改善細胞-細胞接觸，更能代表腫瘤並創造腫瘤環境條件(例如缺氧和壞死)。腫瘤球體可用作為篩選治療劑的活體外模型(Costa et al.,(2016). 3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis. Biotechnol Adv.34(8):1427-1441)。球體含有腫瘤細胞(例如HT-29細胞)，當用干擾素γ (IFNγ)刺激時，腫瘤細胞會分泌CXCR3配體(CXCL9、CXCL10和CXCL11)。將重組CXCL12添加到培養基中以代表腫瘤基質內發現的CXCL12。添加的濃度大到足以超過腫瘤分泌的CXCL9、CXCL10和CXCL11促浸潤趨化因子梯度，因此更為準確地反映了活體內條件。這個分析使用表現CXCR4的CCRF-HSB-2細胞(T細胞淋巴母細胞)並模擬腫瘤環境中的T細胞。咸信透過抗CXCR4抗體抑制CXCL12傳訊會導致T細胞淋巴母細胞往球體釋放的CXCL9、CXCL10及/或CXCL11的CXCR3趨化性恢復，並導致T細胞浸潤程度增加，使得腫瘤體積降低。因此，在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(顯著地)誘導T細胞淋巴母細胞浸潤到腫瘤球體中的增加。在一個實施例中，腫瘤球體包含選自HT-29細胞、HS-5細胞、MS-5細胞和MEF細胞中的一或多者的細胞，例如HT-29細胞。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段誘導T細胞淋巴母細胞(例如CCRF-HSB-2細胞)浸潤至腫瘤球體中的最大浸潤百分比為40%至100%、50%至100%、60%至100%、70%至100%、80%至100%、90%至100%、95%至100%，或97%至100%。在一個實施例中，最大浸潤百分比為10至100%、20至90%、30至90%、40至90%、50至90%、60至90%、70至90%、80%至90%、90至90%、95至90%或97%至90%，特別是50%至100%。在一個實施例中，使用活細胞分析(例如IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System，如本文他處所述)測量T細胞淋巴母細胞浸潤到球體中。在一個實施例中，T細胞浸潤至癌症球體的調控基本上如本文實例15中所述進行。
在一個實施例中，與緩衝液(例如磷酸鹽緩衝鹽水(PBS))對照相比，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(顯著地)增加細胞動員，諸如CD45 +細胞(白血球)動員。在一個實施例中，藉由細胞計數器或流式細胞分析術，特別是流式細胞分析術來測量細胞動員。在一個實施例中，細胞動員增加被測量為與對照(例如媒劑對照(諸如PBS)，或同型對照)相比，CD45 +細胞的平均增加，視情況地其中抗體或抗原結合片段顯著地增加平均增加CD45 +細胞動員。在一個實施例中，CD45 +細胞動員基本上如本文實例16至18中所述進行。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含恆定區(例如C H及 /或C L)，例如如本文他處所述。在一個實施例中，恆定區是哺乳動物(例如人類、食蟹獼猴、恆河猴、馬、狗、貓、小鼠、大鼠等)恆定區(例如C H及 /或C L)，特別是囓齒動物恆定區，例如鼠類恆定區，諸如小鼠或大鼠恆定區。在一個較佳實施例中，抗體或抗原結合片段包含人類恆定區(例如C H及 /或C L)。
在一個實施例中，重鏈恆定區可以被改變(例如被突變)以修飾抗體的性質，例如增加或減少以下中之一或多者：Fc受體結合、抗體醣基化、效應細胞功能及/或補體功能。參見例如EP2654790、美國公開第2012/0251531號；美國專利第9,133,274號，與第10,239,944號；以及PCT公開第WO2014/065945號、第WO2015/150447號，與第WO2021/016571號，其各以全文引用的方式併入本文。
在一些實施例中，重鏈恆定區缺乏Fc效應功能，即無效應恆定區。在一個實施例中，重鏈恆定區包含與野生型相比對Fc-γ受體及/或C1q的結合減少的突變。在一個實施例中，重鏈恆定區可能缺乏可測量到的與人類FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa和FcγRIIIb受體的結合，但維持與人類FcγRIIb受體的結合且視情況地維持與人類FcRn受體的結合。FcγRI、FcγRIla、FcγRIIIa和FcγRIIIb是活化受體的實例。FcγRIIb是抑制性受體的一個實例。FcRn是再循環受體的一個實例。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含人類IgG4恆定區，例如包含SEQ ID NO：258至263的胺基酸序列。在一個實施例中，IgG4重鏈恆定區包含與野生型相比對Fc-γ受體及/或C1q的結合減少的突變。例如，恆定區可能包含Leu235Glu (使用EU索引)突變。IgG4重鏈恆定區的另一個選擇性突變是Ser228Pro (使用EU索引)突變，其可提高穩定性。在一個實施例中，人類IgG4恆定區可能包含Leu235Glu和Ser228Pro (使用EU索引)突變。這個「IgG4-PE」重鏈恆定區是無效應。在一個較佳實施例中，恆定區是IgG4-PE恆定區(視情況地選自SEQ ID NO：267或305)。在一個較佳實施例中，IgG4-PE恆定區是由SEQ ID NO：264至266或304中的任一核酸序列編碼。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含人類IgG1恆定區，其包含降低效應功能的突變(即失效的IgG1恆定區)。在一個實施例中，IgGl恆定區包含與野生型相比對Fc-γ受體及/或C1q的結合減少的突變，諸如在選自由Leu234、Leu235、Gly237、Asp265、Asp270、Asn297、Ala327、Pro329和Pro331 (使用EU索引)組成之群組的胺基酸中的一或多者的取代。在一個實施例中，IgG1恆定區包含Leu235Ala及/或Gly237Ala (使用EU索引)突變(例如胺基酸序列SEQ ID NO：249，視情況地由核苷酸序列SEQ ID NO：248編碼)。在另一個實施例中，IgGl恆定區包含Leu234Phe、Leu235Glu和Pro331Ser (使用EU索引)突變(例如胺基酸序列SEQ ID NO：307，視情況地由核苷酸序列SEQ ID NO：306編碼)。
本發明抗體或抗原結合片段中的任一者可能包含恆定區，諸如囓齒動物恆定區或人類恆定區(例如IgG4恆定區或IgGl恆定區)，例如無效應人類恆定區(例如IgG4)，視情況地其中恆定區是IgG4-PE (SEQ ID NO：267或SEQ ID NO：305)或失能的IgG1 (例如SEQ ID NO：249或SEQ ID NO：307)。
恆定區(諸如如本文他處所述的IgG4或IgG1恆定區)通常以C端離胺酸為終，其有時例如在蛋白質生產或下游加工期間被剪切。本文所述包含C端離胺酸的任何抗體序列也希望含括這樣的離胺酸在轉譯後刪除(即剪切)的實施例。因此，在一個實施例中，恆定區是IgG4 (例如完全人類IgG4或突變型IgG4)，且IgG4恆定區包含C端離胺酸或不包含C端離胺酸(離胺酸剪切的)。在一個較佳實施例中，恆定區是IgG4-PE且包含C端離胺酸(例如SEQ ID NO：267)或不包含C端離胺酸(離胺酸剪切的) (例如SEQ ID NO：305)。
在另一個實施例中，恆定區是野生型人類IgG1 (視情況地選自SEQ ID NO：241、243、245和247)。例如，恆定區是配有效應(effector-enabled)的IgGl恆定區，視情況地具有ADCC及/或CDC活性。在一個實施例中，恆定區針對增強ADCC及/或CDC及/或ADCP經工程改造。在Gül et al., “Antibody-Dependent Phagocytosis of Tumour Cells by Macrophages: A Potent Effector Mechanism of Monoclonal Antibody Therapy of Cancer”, Cancer Res., 75(23), December 1, 2015中討論了抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)機制。
在不受理論囿限的情況下，本發明的抗體或抗原結合片段(其包含有包含Leu235Glu及/或Ser228Pro (使用EU索引)突變的重鏈恆定區(例如IgG4-PE恆定區，視情況地SEQ ID NO：267或305))可能在生產期間提供抗體或抗原結合片段的產率提高，或者可能增強抗體或抗原結合片段的生物學性質，例如在本文所述的任何分析中。例如，與包含不同重鏈恆定區的相同抗體或抗原結合片段可變區相比(例如IgG1、失能的IgG1、IgG1突變體或IgG4)，這些突變可能會降低由抗體或抗原結合片段所誘導的細胞凋亡程度(例如藉由直接作用於CXCR4或透過抑制其天然配體中的一或多者作用)。恆定區序列可能有助於抗體或抗原結合片段的內化概況，或者可能導致抗體或抗原結合片段具有比包含不同可變區(例如IgG1、IgG4、失能的IgG1或IgG1突變體)的相同抗體或抗原結合片段可變區更短的半衰期。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈，諸如κ輕鏈。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈恆定區，諸如κ輕鏈恆定區。κ輕鏈恆定區胺基酸序列和核苷酸序列如SEQ ID NO：271至279中所述。在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含λ輕鏈，及/或λ輕鏈恆定區。λ輕鏈恆定區胺基酸序列和核苷酸序列如SEQ ID NO：280至303中所述。
在一個實施例中，抗體包含兩條全長重鏈和兩條全長輕鏈(各包含V H和C H以及V L和C L)。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段是多特異性(例如雙特異性)抗體或融合蛋白，例如如上所述的雙特異性抗體。
在一個實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含CDRH3的V H結構域，其中 a)          CDRH3胺基酸序列選自SEQ ID NO：12、15、32、35、52、55、72、75、92和95，其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代； b)          CDRH3胺基酸序列與選自SEQ ID NO：12、15、32、35、52、55、72、75、92和95的序列相同； c)          CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat所定義且來自選自SEQ ID NO：112、120、128、136、144、152、160、168、176、184、192、200、208、216、224和232的V H結構域，其中CDRH3序列各自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；或 d)          CDRH3胺基酸序列與如藉由IMGT或Kabat定義的CDRH3胺基酸序列相同且為來自選自SEQ ID NO：112、120、128、136、144、152、160、168、176、184、192、200、208、216、224和232的V H結構域。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含V H結構域，其中 a.  V H結構域包含： i.        SEQ ID NO：12或15，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：10或13，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：11或14，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列， b.  V H結構域包含： i.        SEQ ID NO：32或35，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：32或35的CDRH3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：30或33，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：30或33的CDRH1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：31或34，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：31或34的CDRH2胺基酸序列， c.  V H結構域包含： i.        SEQ ID NO：52或55，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：52或55的CDRH3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：50或53，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：50或53的CDRH1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：51或54，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：51或54的CDRH2胺基酸序列， d.  V H結構域包含： i.        SEQ ID NO：72或75，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：72或75的CDRH3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：70或73，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：70或73的CDRH1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：71或74，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：71或74的CDRH2胺基酸序列， e.  V H結構域包含： i.        SEQ ID NO：92或95，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：92或95的CDRH3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：90或93，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：90或93的CDRH1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：91或94，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：91或94的CDRH2胺基酸序列， f.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：112的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：112的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：112的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：112的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：112的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：112的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， g.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：120的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：120的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：120的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：120的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：120的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：120的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， h.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：128的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：128的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：128的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：128的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：128的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：128的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， i.   V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：136的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：136的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：136的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：136的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：136的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：136的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， j.   V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：144的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：144的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：144的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：144的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：144的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：144的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， k.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：152的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：152的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：152的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：152的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：152的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自SEQ ID NO：152的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， l.   V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：160的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：160的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：160的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：160的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：160的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：160的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， m. V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：168的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：168的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：168的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：168的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：168的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選SEQ ID NO：168的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， n.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：176的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：176的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：176的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：176的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：176的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：176的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， o.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：184的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：184的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：184的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：184的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：184的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：184的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， p.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：192的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：192的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：192的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：192的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：192的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：192的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， q.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：200的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：200的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：200的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：200的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：200的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自SEQ ID NO：200的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， r.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：208的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：208的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：208的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：208的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：208的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：208的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， s.  V H結構域包含： i         CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：216的V H結構域，或其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：216的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii        CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：216的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：216的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：216的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：216的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代， t.   V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：224的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：224的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii        CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：224的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：224的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：224的V H結構域，其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：224的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代，或 u.  V H結構域包含： i.        CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：232的V H結構域，或者其中CDRH3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：232的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 ii.       CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：232的V H結構域，或其中CDRH1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：232的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；及/或 iii.      CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：232的V H結構域，或其中CDRH2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：232的V H結構域並包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含有或進一步包含有包含CDRL3的V L結構域，其中 a.          CDRL3胺基酸序列選自SEQ ID NO：22、25、42、45、62、65、82、85、102和105，其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代； b.          CDRL3胺基酸序列與選自SEQ ID NO：22、25、42、45、62、65、82、85、102和105的序列相同； c.          CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat所定義且來自選自SEQ ID 116、124、132、140、148、156、164、172、180、188、196、204、212、220、228和236的V L結構域，其中CDRH3序列各自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代；或 d.          CDRL3胺基酸序列與如藉由IMGT或Kabat定義的CDRL3胺基酸序列相同且為來自選自SEQ ID NO：116、124、132、140、148、156、164、172、180、188、196、204、212、220、228和236的V L結構域。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含或進一步包含V L結構域，其中 a.  V L結構域包含： i.        SEQ ID NO：22或25，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：20或23，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：21或24，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列， b.  V L結構域包含： i.        SEQ ID NO：42或45，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：42或45的CDRL3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：40或43，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：40或43的CDRL1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：41或44，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：41或44的CDRL2胺基酸序列， c.  V L結構域包含： i.        SEQ ID NO：62或65，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：62或65的CDRL3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：60或63，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：60或63的CDRL1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：61或64，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：61或64的CDRL2胺基酸序列， d.  V L結構域包含： i.        SEQ ID NO：82或85，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：82或85的CDRL3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：80或83，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：80或83的CDRL1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：81或84，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：81或84的CDRL2胺基酸序列， e.  V L結構域包含： i.        SEQ ID NO：102或105，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：102或105的CDRL3胺基酸序列；及/或 ii.       SEQ ID NO：100或103，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：100或103的CDRL1胺基酸序列；及/或 iii.      SEQ ID NO：101或104，或其中的每一者包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的SEQ ID NO：101或104的CDRL2胺基酸序列， f.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：116的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：116的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：116的V L結構域，或其中CDRL1基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：116的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：116的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：116的V L結構域， g.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：124的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：1294的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：124的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：124的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：124的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：124的V L結構域， h.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：132的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：132的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：132的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：132的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：132的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：132的V L結構域， i.   V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：140的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：140的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：140的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：140的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：140的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：140的V L結構域， j.   V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：148的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：148的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：148的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：148的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：148的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：148的V L結構域， k.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：156的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：156的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：156的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：156的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：156的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：156的V L結構域， l.   V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：164的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：164的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：164的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：164的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：164的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：164的V L結構域， m. V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：172的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：172的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：172的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：172的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：172的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：172的V L結構域， n.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：180的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：180的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：180的V L結構域，或者其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：180的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：180的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：180的V L結構域， o.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：188的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：188的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：188的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：188的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：188的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：188的V L結構域， p.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：196的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：196的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：196的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代選自SEQ ID NO：196的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：196的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：196的V L結構域， q.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：204的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：204的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：204的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：204的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：204的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：204的V L結構域， r.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：212的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：212的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：212的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：212的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：212的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：212的V L結構域， s.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：220的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：220的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：220的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：220的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：220的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：220的V L結構域， t.   V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：228的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：228的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：228的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：228的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：228的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：228的V L結構域， u.  V L結構域包含： i.        CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：236的V L結構域，或其中CDRL3胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：236的V L結構域；及/或 ii.       CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：236的V L結構域，或其中CDRL1胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：236的V L結構域；及/或 iii.      CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自選自SEQ ID NO：236的V L結構域，或其中CDRL2胺基酸序列如藉由IMGT或Kabat定義且來自包含10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代的選自SEQ ID NO：236的V L結構域。
根據本文的實施例，指定的CDR (例如CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及/或CDRL3)如藉由Kabat或IMGT所定義。在一個實施例中，指定的CDR包含一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。在一個實施例中，指定的CDR包含一個或兩個(例如兩個)胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。在一個實施例中，指定的CDR包含一個、兩個或三個(例如三個、或兩個或三個)胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。在一個實施例中，指定的CDR包含一個、兩個、三個或四個(例如四個、三個或四個、一個或四個，或兩個或四個)胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。在一個實施例中，指定的CDR包含一個、兩個、三個、四個或五個(例如五個、四個或五個、三個或五個、兩個或五個，或一個或五個)胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。在一個實施例中，指定的CDR包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個(例如六個、五個或六個、四個或六個、三個或六個、兩個或六個，或一個或六個)胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。胺基酸取代包括其中胺基酸被不同的天然存在的胺基酸殘基置換的改變。此類取代可能被分類為「保守的」，在這種情況下，多肽中所含的胺基酸殘基被在極性、側鏈功能性或大小方面具有相似特徵的另一個天然存在的胺基酸置換。此類保守取代是本領域周知的。在一個實施例中，胺基酸取代是保守胺基酸取代，視情況地其中保守取代是來自群(1)至(8)的胺基酸被同一群中的胺基酸置換： 1) 甘胺酸(G)、丙胺酸(A)； 2) 絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、半胱胺酸(C)、甲硫胺酸(M)； 3) 天冬胺酸(D)、麩胺酸(E)； 4) 天冬醯胺酸(N)、麩醯胺酸(Q)； 5) 天冬胺酸(D)、麩胺酸(E)、天冬醯胺酸(N)、麩醯胺酸(Q)； 6) 精胺酸(R)、離胺酸(K)、組胺酸(H)； 7) 甘胺酸(G)、丙胺酸(A)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)； 8) 異白胺酸(I)、白胺酸(L)、甲硫胺酸(M)、纈胺酸(V)、脯胺酸(P)；和 9) 苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含VH結構域，其中VH結構域包含SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列，與SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；且其中抗體或抗原結合片段包含VL結構域，其中VL結構域包含SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列，與SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列，其中一或多個CDR (例如CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及/或CDRL3)包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含VH結構域，其中VH結構域包含SEQ ID NO：13的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：14的CDRH2胺基酸序列，與SEQ ID NO：15的CDRH3胺基酸序列；且其中抗體或抗原結合片段包含VL結構域，其中VL結構域包含SEQ ID NO：23的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：24的CDRL2胺基酸序列，與SEQ ID NO：25的CDRL3胺基酸序列，其中一或多個CDR (例如CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及/或CDRL3)包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含VH結構域，其中VH結構域包含SEQ ID NO：13的CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO：14的CDRH2胺基酸序列，與SEQ ID NO：15的CDRH3胺基酸序列；且其中抗體或抗原結合片段包含VL結構域，其中VL結構域包含SEQ ID NO：23的CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO：24的CDRL2胺基酸序列，與SEQ ID NO：25的CDRL3胺基酸序列，其中一個CDR (例如CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及/或CDRL3)包含至多一個胺基酸取代，視情況地保守胺基酸取代。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含V H結構域，其中 a. V H結構域包含與SEQ ID NO：16相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； b. V H結構域包含與SEQ ID NO：36相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； c. V H結構域包含與SEQ ID NO：56相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； d. V H結構域包含與SEQ ID NO：76相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； e. V H結構域包含與SEQ ID NO：96相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； f. V H結構域包含與SEQ ID NO：112相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； g. V H結構域包含與SEQ ID NO：120相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； h. V H結構域包含與SEQ ID NO：128相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； i. V H結構域包含與SEQ ID NO：136相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； j. V H結構域包含與SEQ ID NO：144相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； k. V H結構域包含與SEQ ID NO：152相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； l. V H結構域包含與SEQ ID NO：160相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； m. V H結構域包含與SEQ ID NO：168相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； n. V H結構域包含與SEQ ID NO：176相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； o. V H結構域包含與SEQ ID NO：184相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； p. V H結構域包含與SEQ ID NO：192相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； q. V H結構域包含與SEQ ID NO：200相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； r. V H結構域包含與SEQ ID NO：208相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； s. V H結構域包含與SEQ ID NO：216相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； t. V H結構域包含與SEQ ID NO：224相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；或 u. V H結構域包含與SEQ ID NO：232相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含或進一步包含V L結構域，其中 a. V L結構域包含與SEQ ID NO：26相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； b. V L結構域包含與SEQ ID NO：46相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； c. V L結構域包含與SEQ ID NO：66相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； d. V L結構域包含與SEQ ID NO：86相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； e. V L結構域包含與SEQ ID NO：106相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； f. V L結構域包含與SEQ ID NO：116相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； g. V L結構域包含與SEQ ID NO：124相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； h. V L結構域包含與SEQ ID NO：132相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； i. V L結構域包含與SEQ ID NO：140相同或至少9080%、95%或98%相同的胺基酸序列； j. V L結構域包含與SEQ ID NO：148相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； k. V L結構域包含與SEQ ID NO：156相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； l. V L結構域包含與SEQ ID NO：164相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； m. V L結構域包含與SEQ ID NO：172相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； n. V L結構域包含與SEQ ID NO：180相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； o. V L結構域包含與SEQ ID NO：188相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； p. V L結構域包含與SEQ ID NO：196相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； q. V L結構域包含與SEQ ID NO：204相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； r. V L結構域包含與SEQ ID NO：212相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； s. V L結構域包含與SEQ ID NO：220相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； t. V L結構域包含與SEQ ID NO：228相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；或 u. V L結構域包含與SEQ ID NO：236相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列。
為免疑慮，如這些實施例通篇中所用，術語「至少X%相同」旨在指如本文所定義的「同一性%」。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含V H結構域和V L結構域，其中 a. V H結構域包含與SEQ ID NO：16相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：26相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； b. V H結構域包含與SEQ ID NO：36相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：46相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； c. V H結構域包含與SEQ ID NO：56相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：66相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； d. V H結構域包含與SEQ ID NO：76相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：86相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； e. V H結構域包含與SEQ ID NO：96相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：106相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； f. V H結構域包含與SEQ ID NO：112相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：116相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； g. V H結構域包含與SEQ ID NO：120相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：124相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； h. V H結構域包含與SEQ ID NO：128相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：132相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； i. V H結構域包含與SEQ ID NO：136相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：140相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； j. V H結構域包含與SEQ ID NO：144相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：148相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； k. V H結構域包含與SEQ ID NO：152相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：156相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； l. V H結構域包含與SEQ ID NO：160相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：164相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； m. V H結構域包含與SEQ ID NO：168相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：172相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； n. V H結構域包含與SEQ ID NO：176相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：180相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； o. V H結構域包含與SEQ ID NO：184相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：188相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； p. V H結構域包含與SEQ ID NO：192相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：196相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； q. V H結構域包含與SEQ ID NO：200相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：204相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； r. V H結構域包含與SEQ ID NO：208相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：212相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； s. V H結構域包含與SEQ ID NO：216相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：220相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； t. V H結構域包含與SEQ ID NO：224相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：228相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；或 u. V H結構域包含與SEQ ID NO：232相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列；且V L結構域包含與SEQ ID NO：236相同或至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段包含重鏈和輕鏈，其中 a. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列； b. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：18至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：28至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； c. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列； d. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：38至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：48至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； e. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列； f. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：58至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：68至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； g. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列； h. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：78至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：88至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； i. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：98的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列； j. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：98至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：108至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； k. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：98的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列； l. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：98至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：110至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； m. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列； n. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：114至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：118至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； o. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：126的胺基酸序列； p. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：122至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：126至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； q. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：130的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列； r. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：130至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：134至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； s. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列； t. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：138至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：142至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； u. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列； v. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：146至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：150至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； w. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列； x. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：154至少90%、95%或98%同一性的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：158至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； y. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：166的胺基酸序列； z. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：162至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：166至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； aa. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：170的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列； bb. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：170至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：174至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； cc. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：178的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：182的胺基酸序列； dd. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：178至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：182至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； ee. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：186的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：190的胺基酸序列； ff. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：186至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：190至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； gg. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：198的胺基酸序列； hh. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：194至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：198至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； ii. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：202的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：206的胺基酸序列； jj. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：202至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：206至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； kk. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：210的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：214的胺基酸序列； ll. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：210至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：214至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； mm. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：218的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：222的胺基酸序列； nn. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：218至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：222至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； oo. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：226的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：230的胺基酸序列； pp. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：226至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：230至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列； qq. 重鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：234的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含SEQ ID NO：238的胺基酸序列；或 rr. 重鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：234至少90%、9585%或98%同一性的胺基酸序列，而輕鏈胺基酸序列包含與SEQ ID NO：238至少90%、95%或98%相同的胺基酸序列。
在本文所述實施例的任一者中，同一性%可能取代為選自以下的任一同一性%：70%相同、75%相同、80%相同、85%相同或90%相同。在本文實施例的任一者中，同一性%可能取代為選自以下的任一同一性%：91%相同、92%相同、93%相同、94%相同或95%相同，特別是95%相同。在本文實施例的任一者中，同一性%可能取代為選自以下的任一同一性%：96%相同、97%相同、98%相同、99%相同或100%相同，特別是98%相同。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含V H結構域，V H結構域包含長度為5至27個胺基酸、5至25個胺基酸、5至24個胺基酸、5至23個胺基酸、5至21個胺基酸、10至25個胺基酸、10至24個胺基酸、10至23個胺基酸、10至21個胺基酸、12至25個胺基酸、12至23個胺基酸、12至21個胺基酸、14至25個胺基酸、14至23個胺基酸或14至21個胺基酸的CDRH3。在另一個實施例中，CDRH3的長度是6、14、15、17、19、21或23個胺基酸。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含衍生自人類V H基因區段、人類D基因區段和人類J H基因區段重組的V H結構域，其中人類V H基因區段是IGHV3-33 (例如IGHV3-33*01)，及/或人類D基因區段是IGHD1-20 (例如IGHD1-20*01)，及/或人類J H基因區段是IGHJ3 (例如IGHJ3*02)，視情況地其中抗體或抗原結合片段包含有包含長度為12至23個胺基酸的CDRH3的V H結構域。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含衍生自人類V H基因區段、人類D基因區段和人類J H基因區段重組的V H結構域，其中人類V H基因區段是IGHV3-30 (例如IGHV3-30*18)，及/或人類D基因區段是IGHD3-16 (例如IGHD3-16*02)，及/或人類J H基因區段是IGHJ6 (例如IGHJ6*02)，視情況地其中抗體或抗原結合片段包含有包含長度為12至23個胺基酸的CDRH3的V H結構域。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含衍生自人類V H基因區段、人類D基因區段和人類J H基因區段重組的V H結構域，其中人類V H基因區段是IGHV3-73 (例如IGHV3-73*02)，及/或人類D基因區段是IGHD3-9 (例如IGHD3-9*01)，及/或人類J H基因區段是IGHJ6 (例如IGHJ6*02)，視情況地其中抗體或抗原結合片段包含有包含長度為12至23個胺基酸的CDRH3的V H結構域。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含衍生自人類V H基因區段、人類D基因區段和人類J H基因區段重組的V H結構域，其中人類V H基因區段是IGHV4-31 (例如IGHV4-31*03)，及/或人類D基因區段是IGHD3-10 (例如IGHD3-10*01)，及/或人類J H基因區段是IGHJ6 (例如IGHJ6*02)，視情況地其中抗體或抗原結合片段包含有包含長度為12至23個胺基酸的CDRH3的V H結構域。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含衍生自人類V H基因區段、人類D基因區段和人類J H基因區段重組的V H結構域，其中人類V H基因區段是IGHV3-23 (例如IGHV3-23*04)，及/或人類D基因區段是IGHD1-1 (例如IGHD1-1*01)，及/或人類J H基因區段是IGHJ6 (例如IGHJ6*02)，視情況地其中抗體或抗原結合片段包含有包含長度為12至23個胺基酸的CDRH3的V H結構域。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含有包含CDRH3的V H結構域，其中CDRH3包含胺基酸模體AX 1GQLERR或X 2YGX 3DV，其中X 1、X 2和X 3獨立地為任何胺基酸且視情況地其中CDRH3的長度為12至23個胺基酸。在一個實施例中，X 1是選自組胺酸、離胺酸和精胺酸(較佳地選自離胺酸和精胺酸)的胺基酸。在一個實施例中，X 2是選自絲胺酸、蘇胺酸和半胱胺酸的胺基酸；或選自苯丙胺酸、酪胺酸和色胺酸(較佳地選自絲胺酸和酪胺酸)的胺基酸。在一個實施例中，X 3是選自纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸或脯胺酸(較佳地選自甲硫胺酸或白胺酸)的胺基酸。在一個實施例中，胺基酸取代是保守取代(如本文他處所述)。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含有包含CDRL3的V L結構域，CDRL3包含模體LQX 1NX 2YPX 3T，其中X 1、X 2和X 3獨立地為任何胺基酸。在一個實施例中，X 1是選自丙胺酸或甘胺酸的胺基酸，或選自絲胺酸、蘇胺酸或半胱胺酸的胺基酸。在一個實施例中，X 2是選自天冬醯胺酸或麩醯胺酸的胺基酸，或選自組胺酸、離胺酸或精胺酸的胺基酸。在一個實施例中，X 3是選自酪胺酸、色胺酸或苯丙胺酸的胺基酸，或選自纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸或脯胺酸的胺基酸。在一個實施例中，胺基酸取代是保守取代(如本文他處所述)。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段與選自以下的抗體或抗原結合片段競爭結合至CXCR4：CL-82574、CL-82458、CL-82558、CL-82658、CL-83083、CL-83083-2、CL-82583、CL-82580、CL-82577、CL-82571、CL-82562、CL-82556、CL-82551、CL-82541、CL-82523、CL-82517、CL-82495、CL-82473、CL-82455、CL-83158，CL-148712及CL-148729 (尤其是CL-82574或CL-83083-2)。抗體CL-82574、CL-82458、CL-82558、CL-82658、CL-83083、CL-83083-2、CL-82583、CL-82580、CL-82577、CL-82571、CL-82562、CL-82556、CL-82551、CL-82541、CL-82523、CL-82517、CL-82495、CL-82473、CL-82455、CL-83158，CL-148712及CL-148729如上文所述，具有如所述CDR、可變區及/或全長重鏈和輕鏈的序列中的任一者。在一個實施例中，競爭是藉由如本文他處所述的SPR測定。這樣的競爭可能是由於例如結合至CXCR4的相同或重疊表位的抗體或抗原結合片段造成。在另一個實施例中，藉由ELISA、HTRF、螢光活化細胞分選(FACS)或具有通常知識者顯而易見的且在本文他處描述的技術來測定。在一個實施例中，藉由生物層干涉術(BLI)來測定競爭，這種技術對於具有通常知識者來說是顯而易見的。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段與CXCL12 (或其融合蛋白)競爭(例如以劑量依賴性方式)結合至細胞表面表現的CXCR4。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段結合至選自以下的抗體或抗原結合片段所特異性地結合的表位(即結合至相同表位)：CL-82574、CL-82458、CL-82558、CL-82658、CL-83083、CL-83083-2、CL-82583、CL-82580、CL-82577、CL-82571、CL-82562、CL-82556、CL-82551、CL-82541、CL-82523、CL-82517、CL-82495、CL-82473、CL-82455、CL-83158，CL-148712及CL-148729 (尤其是CL-82574或CL-83083-2)。在一個實施例中，藉由定點突變(例如丙胺酸掃描)、重疊肽掃描(例如pepscan)或透過X射線晶體學來鑑定表位。在一個實施例中，提供一種特異性地結合至表位的抗體或抗原結合片段，該表位與抗體CL-82574、CL-82458、CL-82558、CL-82658、CL-83083、CL-83083-2、CL-82583、CL-82580、CL-82577、CL-82571、CL-82562、CL-82556、CL-82551、CL-82541、CL-82523、CL-82517、CL-82495、CL-82473、CL-82455、CL-83158，CL-148712及CL-148729中的任一者所特異性地結合的表位(基本上)相似(或相同)。參與抗體或抗原結合片段與抗原交互作用的接觸胺基酸殘基可能藉由本領域具有通常知識者已知的各種方法來測定。在一個實施例中，用丙胺酸(又稱丙胺酸掃描)或另一個不相干的胺基酸連續置換抗原序列的胺基酸(使用標準分子生物學技術使抗原編碼序列的DNA突變)，在這種情況下為CXCR4，可能提供其突變會降低或消除抗體或抗原結合片段辨識所討論抗原的能力的殘基。在一個實施例中，使用標準技術評估結合，諸如但不限於SPR、HTRF、ELISA (其在本文他處描述)。可以進行其他取代以提高結合的破壞，諸如改變抗原序列胺基酸側鏈上的電荷(例如離胺酸變為麩胺酸)、轉換極性和非極性殘基(例如絲胺酸變為白胺酸)。丙胺酸掃描或其他胺基酸取代方法可能使用突變形式的瞬時或穩定表現直接在細胞上進行。當使用ELISA或HTRF進行丙胺酸掃描或其他胺基酸取代方法時，如果訊號減少至少25%或30%，則將胺基酸殘基鑑定為對表位有貢獻。在一個實施例中，訊號降低至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%或至少60%。在一個實施例中，訊號降低至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。當以SPR進行丙胺酸掃描或其他胺基酸取代方法時，如果有至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍或至少100倍，則將胺基酸殘基鑑定為對表位有貢獻。在一個實施例中，X射線晶體學被用來確定抗體或抗原結合片段與抗原之間的接觸殘基(即確定抗體或抗原結合片段所結合的表位)，晶體學允許直接可視化涉入抗體-抗原交互作用的接觸殘基；視情況地，其中X射線晶體學使用經熱穩定受體。在一個實施例中，如果抗體或抗原結合片段辨識線性表位，則可以基於抗原序列產生短肽，並且可以使用標準技術(例如SPR、HTRF或ELISA)評估抗體或抗原結合片段與這些肽的結合。藉由對任何顯示結合的肽進行丙胺酸掃描，可以對表位進行進一步檢視。作為線性肽的替代方案，可以使用Pepscan技術(http://www.pepscan.com/)，利用肽化學鍵聯至支架上進行構形掃描(包括重疊肽掃描)，該技術已用於確定CD20靶向抗體上的不連續表位(Niederfellner, Gerhard, et al.,"Epitope characterization and crystal structure of GA101 provide insights into the molecular basis for type I/II distinction of CD20 antibodies.", Blood, 118.2, (2011), 358-367.)。
在一個實施例中，多肽(例如CXCR4)是單體。在另一個實施例中，多肽(例如CXCR4)與另一個相同的多肽形成同二聚體。在另一個實施例中，多肽(例如CXCR4)與不同的多肽(例如CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR5、CXCR6、CXCR7、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CB2、ADCYAP1R1、ADORA2B、ADORA3、ADRB2、APLNR、C5AR1、CALCR、CHRM1、GALR1、EDNRB、HRH1、MLNR、NTSR1、PTGER2、PTGER3、SSTR2，或TACR3)形成異二聚體。在一個實施例中，多肽(例如CXCR4)與CXCR7或CXCR3形成異二聚體。在另一個實施例中，多肽(例如CXCR4)與CCR5或CB2形成異二聚體。在另一個實施例中，多肽(例如CXCR4)形成三聚體或四聚體。在另一個實施例中，多肽(例如CXCR4)形成多聚體，其為超過兩個多肽的締合物。多聚體由多個相同多肽或不同多肽的組合或兩者組成(例如多個CXCR4蛋白；或兩個或更多個CXCR4蛋白和一或多個CXCR7蛋白)。二聚化或寡聚化可能會影響受體結構或功能(例如訊號傳導、傳訊譜)。在一個實施例中，二聚化可透過基於鄰近分析來確定，該分析選自由雙分子螢光互補(BiFC)、鄰近連接分析(PLA)、螢光共振能量轉移(FRET)、生物發光共振能量轉移(BRET)、半胱胺酸交聯和免疫共沉澱組成之群組。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(特異性地或額外地)結合至CXCR4同二聚體。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段(特異性地或額外地)結合至CXCR4單體。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段(特異性地或額外地)結合至CXCR4多聚體。在一個實施例中，抗體或抗原結合片段(特異性地或額外地)結合至CXCR4異二聚體。在一個實施例中，異二聚體是CXCR4和CXCR7異二聚體。在另一個實施例中，異二聚體包含CXCR4和CXCR3，或CXCR4和CXCR2。在另一個實施例中，異二聚體包含CXCR4和選自下列的另一個GPCR：CXCR1、CXCR2、CXCR5或CXCR6。在另一個實施例中，異二聚體包含CXCR4和CCR5。在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段(特異性地或額外地)結合至與β-抑制蛋白複合的CXCR4。
在一個實施例中，提供一種編碼如本文所述的抗CXCR4抗體或其抗原結合片段的CDRH3的核酸。
在一個實施例中，提供一種編碼如本文所述的抗CXCR4抗體或其抗原結合片段的V H結構域及/或V L結構域的核酸。序列表中提供了本發明的V H和V L結構域核酸序列。
在一個實施例中，提供一種核酸，其包含與以下序列至少80%、85%或90%相同的核苷酸序列： a. SEQ ID NO：19及/或SEQ ID NO：29； b. SEQ ID NO：39及/或SEQ ID NO：49； c. SEQ ID NO：59及/或SEQ ID NO：69； d. SEQ ID NO：79及/或SEQ ID NO：89； e. SEQ ID NO：99及/或SEQ ID NO：109； f. SEQ ID NO：99及/或SEQ ID NO：111； g. SEQ ID NO：115及/或SEQ ID NO：119； h. SEQ ID NO：123及/或SEQ ID NO：127； i. SEQ ID NO：131及/或SEQ ID NO：135； j. SEQ ID NO：139及/或SEQ ID NO：143； k. SEQ ID NO：147及/或SEQ ID NO：151； l. SEQ ID NO：155及/或SEQ ID NO：159； m. SEQ ID NO：163及/或SEQ ID NO：167； n. SEQ ID NO：171及/或SEQ ID NO：175； o. SEQ ID NO：179及/或SEQ ID NO：183； p. SEQ ID NO：187及/或SEQ ID NO：191； q. SEQ ID NO：195及/或SEQ ID NO：199； r. SEQ ID NO：203及/或SEQ ID NO：207； s. SEQ ID NO：211及/或SEQ ID NO：215； t. SEQ ID NO：219及/或SEQ ID NO：223； u. SEQ ID NO：227及/或SEQ ID NO：231；或 v. SEQ ID NO：235及/或SEQ ID NO：239。
在一個實施例中，提供編碼如本文所述的抗CXCR4抗體或其抗原結合片段的重鏈及/或輕鏈的核酸。
在本文實施例的任一者中，核酸序列與指定序列(例如由SEQ ID NO定義的)為至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、93%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%相同。在本文實施例的任一者中，核酸是經分離和經純化的核酸。
在一個實施例中，提供一種包含如本文所述核酸的載體；視情況地其中載體是CHO載體或HEK293載體。
在一個實施例中，提供一種包含如本文所述的核酸或如本文所述的載體的宿主細胞。在一個實施例中，宿主細胞是哺乳動物。在一個實施例中，宿主細胞是CHO (中國倉鼠卵巢)細胞(例如CHO-S細胞)或HEK (人類胚腎)細胞(例如HEK293或HEK293T細胞)。 3. 抗體的用途治療劑
如本文所述抗CXCR4抗體或抗原結合片段中的任一者可用於CXCL12/CXCR4途徑的治療性調節，並因此可用於治療或預防CXCR4媒介的疾病或病況。
因此，在一個實施例中，提供一種如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段用於療法。在一個實施例中，提供一種本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段在製造用於療法的藥劑中的用途。在另一個實施例中，提供一種如本文所述抗CXCR4抗體或抗原結合片段，其用於治療或預防如下所述的CXCR4媒介的疾病或病況。
在另一個實施例中，提供一種如本文所述抗CXCR4抗體或抗原結合片段在製備供治療或預防下文所述CXCR4媒介的疾病或病況的藥劑中的用途。
在另一個實施例中，提供一種在患者中治療或預防如下文所述CXCR4媒介的疾病或病況的方法，包含向該患者投予治療或防治有效量的如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段，其中CXCR4媒介的疾病或病況由此得到治療或預防。
在另一個實施例中，提供一種包含如本文所述抗CXCR4抗體或抗原結合片段的醫藥組成物，其用於療法，或用於治療或預防如下文所述的CXCR4媒介的疾病或病況。
在本說明書通篇中，CXCR4媒介的疾病或病況是涉及CXCR4途徑的異常調節(例如CXCR4傳訊、CXCR4的下游效應及/或CXCR4的過度表現)的任何疾病或病況。
在一個較佳實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是癌症，特別是實體腫瘤。在又一個實施例中，癌症的特徵在於CD8 +T細胞的存在，例如無法浸潤腫瘤(例如中央腫瘤塊)的T細胞。
在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是獨立地選自以下的一或多種疾病或病況：小細胞肺癌、非小細胞肺癌(例如腺癌、鱗狀細胞癌和大細胞肺癌)、乳癌、卵巢癌(例如轉移性卵巢癌)、腎癌、胃癌、胰臟癌、胰管癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肝癌、頭頸癌、腦癌、食道癌、肝癌、肺癌、攝護腺癌、子宮癌、腦癌、膀胱癌、肉瘤、腺癌、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、神經膠質瘤、星細胞瘤(I級-毛狀星細胞瘤、II級-低惡性度星細胞瘤、III級-退行性星細胞瘤，或IV級-膠質母細胞瘤(GBM))、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、寡樹突細胞瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、骨肉瘤、腦膜瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、腦幹神經膠質瘤、混合神經膠質瘤、視神經神經膠質瘤、室管膜下瘤、腦膜瘤、轉移性腦瘤、寡樹突細胞瘤、腦下垂體腫瘤、原始神經外胚層(PNET)腫瘤、幼年毛狀星細胞瘤(JPA)、松果體腫瘤、橫紋肌瘤和人類乳突病毒(HPV)相關癌症(其中HPV陽性腫瘤及/或病變為子宮頸上皮內腫瘤1、子宮頸上皮內腫瘤2、子宮頸上皮內腫瘤3、子宮頸癌(原位及/或侵襲性)、頭頸癌、HPV乳頭狀瘤病、肛門乳頭狀瘤病、肛門癌、陰道癌、外陰癌及/或陰莖癌)。
在另一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是選自癌瘤、肉瘤、骨髓瘤、白血病及/或淋巴瘤的癌症。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是癌瘤，例如腺癌及/或鱗狀細胞癌。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是腺癌(其在器官或腺體中發展)，例如選自結腸癌、乳癌、肺癌、攝護腺癌、食道癌、胃癌和胰臟癌的一或多種腺癌。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是鱗狀細胞癌，例如選自黑色素瘤、子宮頸癌、頭頸癌、陰道癌、甲狀腺癌、食道癌、肺癌、陰莖癌、膀胱癌、肝癌和肛門癌的一或多腫癌瘤。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是肉瘤，例如選自膀胱癌、橫紋肌肉瘤、神經膠質瘤和星細胞瘤(I級-毛狀星細胞瘤、II級-低惡性度星細胞瘤、III級-退行性星細胞瘤，或IV級-膠質母細胞瘤(GBM))的一或多種肉瘤。在另一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是骨髓瘤，例如多發性骨髓瘤。在另一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤及/或非霍奇金淋巴瘤。在另一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是白血病，例如選自骨髓性白血病、顆粒球性白血病、淋巴性白血病、淋巴球性白血病、淋巴母細胞性白血病、真性紅血球增多症和紅血球過多症的一或多種淋巴瘤。在另一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是混合型癌症(例如，其中癌症包含兩種或更多種不同的癌症)，例如選自腺鱗癌、漏診中胚層腫瘤、癌肉瘤和畸形癌的一或多種混合型癌症。
在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是獨立選自以下的一或多種疾病或病況：卵巢癌(例如轉移性卵巢癌)、胰臟癌、膠質母細胞瘤(GBM)和原始神經外胚層(PNET)腫瘤。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是獨立選自以下的一或多種疾病或病況：卵巢癌(例如轉移性卵巢癌)、胰臟癌、膠質母細胞瘤(GBM)、原始神經外胚層(PNET)腫瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、腎癌、胰管癌和結腸直腸癌。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是獨立選自胰臟癌、胰管癌、攝護腺癌和小細胞肺癌的一或多種疾病或病況。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是獨立地選自以下的一或多種疾病或病況：胰臟癌、胰管癌、攝護腺癌、小細胞肺癌、神經膠質瘤、黑色素瘤、頭頸癌、非小細胞肺癌、大腸直腸癌和食道癌。
在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是獨立選自以下的一或多種疾病或病況：疣、低伽瑪球蛋白血症、感染和嗜中性白血球骨髓保留症(WHIM) (也稱為WHIM症候群)、華氏巨球蛋白血症、人類免疫不全病毒(HIV)、血小板減少症、缺血性心臟衰竭、心肌梗塞後恢復、清髓後同種異體移植、閉塞性細支氣管炎、嗜中性球減少症、瘧疾、鴉片類藥物引起的痛覺過敏、類風濕性關節炎、血液遺傳疾病(諸如鐮狀細胞貧血、A型血友病、B型血友病、α-地中海型貧血、β-地中海型貧血、δ-地中海型貧血、類血友病（von Willebrand Disease）、惡性貧血、範可尼貧血（Fanconi anemia）、血小板減少性紫癜、血栓好發症及所有原發性免疫不全疾病中的任一者)。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況包括血液遺傳疾病，諸如鐮狀細胞貧血、A型血友病、B型血友病、α-地中海型貧血、β-地中海型貧血、δ-地中海型貧血、類血友病、惡性貧血、範可尼貧血、血小板減少性紫癜、特發性肺纖維化與血栓好發症中的任一者。在一個較佳實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是WHIM或HIV。
在另一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段用於幹細胞動員(有或沒有顆粒球群落刺激因子的情況下)以供治療嚴重缺血性疾病，包括心肌梗塞、肢體缺血、缺血性中風、和急性腎損傷。在一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況是清髓後同種異體移植。
在另一個實施例中，本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段用於腔內放療的方法中。在另一個實施例中，本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段用於傷口癒合的方法中。
在另一個實施例中，CXCR4媒介的疾病或病況包括CXCL12媒介的疾病或病況。CXCL12媒介的疾病或病況包括涉及CXCL12途徑的異常調節(例如CXCL12傳訊、CXCL12的下游效應及/或CXCL12的過度表現)的任何疾病或病況。CXCL12媒介的疾病或病況包括但不限於選自以下的一或多者：生殖細胞腫瘤和轉移(例如睪丸生殖細胞腫瘤)、妊娠相關疾病(例如子癎前症)和成人發病型史迪爾病（斯蒂爾）。
在另一個實施例中，本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段與放療組合使用以減少或治療殘餘腫瘤，例如在放療之後(例如放療後12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週或2週)投予抗體或抗原結合片段。在一個實施例中，本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段與放療組合使用以減少或預防血管生成及/或腫瘤復發。這可能透過減少或防止CXCR4 +細胞(例如CXCR4 +免疫細胞；例如巨噬細胞或T細胞)浸潤到經照射(經由放療)的腫瘤中來達到。在一個實施例中，殘餘腫瘤是剩餘的腫瘤塊。在一個實施例中，腫瘤是「3.抗體的用途」章節中列出的任何腫瘤。在一個較佳實施例中，腫瘤是膠質母細胞瘤及/或子宮頸癌。Thomas et al(2019). Macrophage Exclusion after Radiation Therapy (MERT): A First in Human Phase I/II Trial using a CXCR4 Inhibitor in Glioblastoma. Clin Cancer Res.25(23):6948-6957中進一步描述了膠質母細胞瘤放療後的巨噬細胞排除(Macrophage Exclusion after Radiation Therapy in Glioblastoma，MERT)。
在一個實施例中，提供一種在患者中或活體外抑制CXCR4活性的方法，包含投予有效量的如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段。
在一個實施例中，提供一種在患者中減少(惡性)腫瘤的尺寸或體積的方法，包含向該患者投予有效量的本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段。
在一個實施例中，提供一種如上所述的方法或用途，其進一步包含(向患者)投予另一種療法，視情況地其中該另一種療法包含一或多種(例如超過一種，諸如兩種或三種)獨立地選自由以下組成之群組的另一種治療劑： a) 免疫檢查點抑制劑(諸如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM-3抗體、抗CTLA-4抗體、抗TIGIT抗體、抗BTLA抗體、抗VISTA抗體和抗LAG-3抗體)； b) 免疫刺激劑(諸如抗OX40抗體、抗HVEM抗體、抗CD27抗體、抗CD28抗體、抗CD137L抗體、抗OX40L抗體、抗GITRL抗體、抗ICOSL抗體、抗PD-L2抗體、抗GITR抗體、抗CD137抗體、抗ICOS抗體和抗CD40抗體)； c) 抗CSF1R抗體、抗CCR4抗體、抗CD39抗體、抗CD73抗體、抗CD96抗體、抗CXCR2抗體、抗CD200抗體、抗GARP抗體、抗SIRPα抗體、抗CXCL9抗體、抗CXCL10抗體、抗CXCL11抗體及抗CD155抗體； d) 趨化因子受體拮抗劑(諸如CCR4和CXCR2趨化因子受體)； e) 體抑素受體(somatosin receptor)、EP2/EP4、A2AR、CD39、CD73受體拮抗劑 f) 標靶激酶抑制劑(諸如CSF-1R、EGFR或VEGFR抑制劑)； g) 血管新生抑制劑(諸如抗VEGF-A或Delta樣配體-4)； h) 免疫刺激肽或趨化因子(諸如CXCL9或CXCL10)； i) 細胞激素(諸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL_14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20和IL-21，特別是IL-2、IL-12、IL-15、IL-21)和干擾素(諸如IFN-α、IFN-β和IFN- γ，特別是IFN-γ)； j) 雙特異性T細胞接合劑(BiTE)，具有至少一種針對CD3的特異性(例如CD3/CD19 BiTE)和NK細胞接合劑(例如CD16)； k) 其他雙特異性分子(例如靶向腫瘤相關抗原的含有IL-2或含有IL-15的分子，腫瘤相關抗原為例如表皮生長因子受體，諸如EGFR、Her-2、紐約食道癌-1 (NY-ESO-1)、GD2、EpCAM或黑色素瘤相關抗原3 (MAGE-A3))； l) 溶瘤病毒(諸如HSV病毒(視情況地其分泌GMCSF)、新城雞瘟病毒、牛痘病毒、腺病毒、NCD病毒(副黏液病毒)、辛得比斯病毒、呼吸道融合病毒、麻疹病毒、柯薩奇病毒、水泡性口炎病毒、門戈病毒（Mengo virus）、里奧病毒（reovirus）、細小病毒、馬拉巴病毒(彈狀病毒)和伊科病毒(Echnvirus))； m) 接種腫瘤相關抗原(諸如紐約食道癌-1 [NY-ESO-1]、黑色素瘤相關抗原-3 [MAGE-3]、BCMA)； n) 基於細胞的療法(諸如例如表現抗CD19的嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)、嵌合抗原受體自然殺手細胞(CAR-NK)、抗EpCam、抗VEGF/VEGFR或抗間皮素)； o) 腫瘤特異性T細胞(例如自體腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL))或LAK細胞的授受性轉移；和 p) 腫瘤相關抗原抗體(諸如抗-CEA、抗-GD2、抗-磷脂醯肌醇蛋白聚醣-3、抗-磷脂醯肌醇蛋白聚醣-2、抗連接蛋白-4和抗-間皮素)； 及/或視情況地，其中又一種療法是選自化療、放療及/或手術切除腫瘤。
在一個實施例中，趨化因子受體拮抗劑是腺苷途徑的拮抗劑(例如，靶向腺苷途徑的抗體)。在另一個實施例中，又一種治療劑是選自抗CD47、抗SIRPα、抗KIR、抗CD70和抗GARP抗體。在另一個實施例中，又一種治療劑是選自抗HER2、抗CD20、抗NKG2A、抗TRAIL和抗Notch抗體。在另一個實施例中，又一種治療劑是選自抗PVRIG、抗ILDR2和抗CD55抗體。在一個實施例中，又一種治療劑是與選自放療、化療及/或抗體藥物結合物(ADC)的又一種療法組合。在另一個實施例中，又一種治療劑是選自IDO抑制劑、PARP抑制劑、BTK抑制劑、MAPK抑制劑、STING激動劑、TLR促效劑(例如TLR7/9、TLR8)、A2aR拮抗劑、CXCR2拮抗劑、STAT3轉錄因子抑制劑、EGFR抑制劑、BRAF抑制劑、Wee1酪胺酸激酶抑制劑、FGFR-1/3，及/或PDGFR抑制劑的小分子。在一個實施例中，又一種治療劑是選自ImmTac、反義/siRNA/shRNA、ProTAC和前驅藥結合物。
在一個實施例中，提供一種如本文所述的方法或用途，除了化療或放療外，其包含向患者(例如人類)投予如所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段。在一個實施例中，提供一種如本文所述的方法或用途，其包含在投予化療及/或放療之前或之後向患者投予如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段，其中抗體或抗原結合片段(如與不投予抗體或抗原結合片段時相比)增加化療及/或放療的療效。在投予化療及/或放療之後投予如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段可能是有益的，因為癌細胞可能對治療更為敏感。
在一個較佳實施例中，又一種治療劑是PD-1/PD-L1傳訊抑制劑(例如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體)。在一個實施例中，又一種療法是檢查點抑制劑(如上所述)和化療的組合。在一個實施例中，又一種治療劑是兩種檢查點抑制劑(如上所述)的組合。
在一個實施例中，提供又一種治療劑，其包含抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含如下文詳述特異性地結合抗原的抗原結合位點。
在一個實施例中，又一種治療劑是特異性地結合PD-L1 (例如hPD-L1)的抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，抗PD-L1抗體或其抗原結合片段包含選自以下抗PD-L1抗體中的任一者：阿特利珠單抗(atezolizumab)/MPDL3280A (Roche)、阿維魯單抗(avelumab)/MSB0010718C (Merck)、BMS-936559/MDX-1105 (BMS)、德瓦魯單抗(durvalumab)/Medi4736 (Medimmune)、KN-035、CA-170、FAZ-053 M7824、ABBV-368、LY-3300054、GNS-1480、YW243.55.S70、REGN3504，以及WO2019/129136、WO2019/129211、WO2019/132533、WO2019/072869、WO2019/075097、WO2019/085238、WO2019/040780、WO2019/005634、WO2019/005635、WO2019/005636、WO2019/005637、WO2019/005638、WO2019/005639、WO2019/005642、WO2019/005641、WO2019/005640、WO2018/222949、WO2018/194496、WO2018/195226、WO2018/162430、WO2018/162446、WO2018/162749、WO2018/181064、WO2018/153320、WO2018/133873、WO2018/136553、WO2018/119475、WO2018/080812、WO2018/054940、WO2018/034225、WO2018/009894、WO2018/024237、WO2018/026249、WO2018/005682、WO2017/072280、WO2017/215590、WO2017/072273、WO2017/218435、WO2017/196867、WO2017/197667、WO2017/148424、WO2017/118321、WO2017/132562、WO2017/097407、WO2017/084495、WO2017/087547、WO2017/091429、WO2017/034916、WO2017/020291、WO2017/020858、WO2017/020802、WO2017/020801、WO2016/111645、WO2016/050721、WO2016/197367、WO2016/061142、WO2016/149201、WO2016/000619、WO2016/160792、WO2016/022630、WO2016/007235、WO2015/036499、WO2015/179654、WO2015/173267、WO2015/181342、WO2015/109124、WO2015/195163、WO2015/112805、WO2015/061668、WO2014/159562、WO2014/165082、WO2014/100079、WO2014/055897、WO2013/181634、WO2013/173223、WO2013/079174、WO2012/145493、WO2011/066389、WO2010/077634、WO2010/036959，WO2010/089411或WO2007/005874中所述的PD-L1抗體中的任一者，這些抗體以引用的方式併入本文。
在一個實施例中，又一種治療劑是特異性地結合PD-1 (例如hPD-1)的抗PD-1抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含選自以下的抗PD-1抗體中的任一者：帕博利珠單抗(pembrolilzumab) (Keytruda TM/MK-3475)、納武單抗(Opdivo TM/BMS-936558/MDX-1106)、MEDI-0680/AMP514、PDR001、蘭博利珠單抗(Lambrolizumab)、BMS-936558、REGN2810、BGB-A317、BGB-108、PDR-001、SHR-1210、JS-001、JNJ-63723283、AGEN-2034、PF-06801591、杰諾單抗(genolimzumab)、MGA-012、IBI-308、BCD-100、TSR-042 ANA011、AUNP-12、KD033、MCLA-134、mDX400、muDX400、STI-A1110、AB011、244C8、388D4、XCE853，或匹迪利珠單抗(pidilizumab)/CT-011，或以下中所述的抗PD-1抗體中的任一者：WO2015/112800 & US2015/0203579 (包括表1至3中的抗體)、US9,394,365、US5,897,862與US7,488,802、WO2017/087599 (包括抗體SSI-361和SHB-617)、WO2017/079112、WO2017/071625 (包括寄存物C2015132，融合瘤LT004，以及抗體6F5/6 F5 (Re)、6F5H1 L1和6F5 H2L2)、WO2017/058859 (包括PD1AB-1至PD1AB-6)、WO2017/058115 (包括67D9、c67D9，和hu67D9)、WO2017/055547 (包括12819.15384、12748.15381、12748.16124、12865.15377、12892.15378、12796.15376、12777.15382、12760.15375和13112.15380)、WO2017/040790 (包括AGEN2033w、AGEN2034w、AGEN2046w、AGEN2047w、AGEN2001w和AGEN2002w)、WO2017/025051 & WO2017/024515 (包括1.7.3 hAb、1.49.9 hAb、1.103.11 hAb、1.103.11-v2 hAb、1.139.15 hAb和1.153.7 hAb)、WO2017/025016 & WO2017/024465 (包括抗體A至抗體I)、WO2017/020858 & WO2017/020291 (包括1.4.1、1.14.4、1.20.15和1.46.11)、WO2017/019896 & WO2015/112900 & US2015/0210769 (包括BAP049-hum01至BAP049-hum16和BAP049-Clone-A至BAP049-Clone-E)、WO2017/019846 (包括PD-1 mAb 1至PD-1 mAb 15)、WO2017/016497 (包括MHC723、MHC724、MHC725、MHC728、MHC729、m136-M13、m136-M19、m245-M3、m245-M5和m136-M14)、WO2016/201051 (包括抗體EH12.2H7、抗體hPD-1 mAb2、抗體hPD-1 mAb7、抗體hPD-1 mAb9、抗體hPD-1 mAb15，或選自表1的抗PD-1抗體)、WO2016/197497 (包括DFPD1-1至DFPD1-13)、WO2016/197367 (包括2.74.15和2.74.15.hAb4至2.74.15.hAb8)、WO2016/196173 (包括表5，與圖1至5中的抗體)、WO2016/127179 (包括R3A1、R3A2、R4B3和R3D6)、WO2016/077397 (包括實例9表1中所述的抗體)、WO2016/106159 (包括實例2表3的鼠類抗體以及實例3表7、8與9中的人源化抗體)、WO2016/092419 (包括C1、C2、C3、EH12.1、mAb7-G4、mAb15-G4、mAb-AAA、mAb15-AAA)、WO2016/068801 (包括殖株A3及其變異體，以及圖1至4中所述的其他抗體)、WO2016/014688 (包括10D1、4C10、7D3、13F1、15H5、14A6、22A5、6E1、5A8、7A4與7A4D，以及實例9-10的人源化抗體)、WO2016/015685 (包括10F8、BA08-1、BA-08-2和15H6)、WO2015/091911 & WO2015/091910 (包括實例2、3與4中的抗犬PD-1抗體)、WO2015/091914 (包括表3中的抗犬PD-1抗體)、WO2015/085847 (包括mAb005、H005-1至H005-4)、WO2015/058573 (包括cAB7)、WO2015/036394 (包括LOPD180)、WO2015/035606 (包括實例2表1，實例7表14、15與16，以及實例11表20、21與22中的抗體)、WO2014/194302 (包括GA2、RG1B3、RG1H10、RG2A7、RG2H10、SH-A4、RG4A6、GA1、GB1、GB6、GH1、A2、C7、H7、SH-A4、SH-A9、RG1H11，和RG6B)、WO2014/179664 (包括9A2、10B11、6E9、APE1922、APE1923、APE1924、APE1950、APE1963和APE2058)、WO2014/206107 (包括純系1、10、11、55、64、38、39、41和48)、WO2012/135408 (包括h409A11、h409A16，和h409A17)、WO2012/145493 (包括抗體1E3、1E8、1H3與h1H3 Var 1至h1H3 Var 14)、WO2011/110621 (包括圖1至11中揭示的抗體949與經修飾形式)、WO2011/110604 (包括圖3至11中揭示的抗體948與經修飾形式)、WO2010/089411 (包括CNCM寄存號1-4122、1-4080或1-4081)、WO2010/036959 (包括實例1表1中的抗體)、WO2010/029435 & WO2010/029434 (包括殖株2、10與19)、WO2008/156712 (包括hPD-1.08A、hPD-1.09A、h409A11、h409A16和h409A17以及實例2、表H、實例4及表IV中所述的抗體)、WO2006/121168 (包括殖株17D8、4H1、5C4、4A11、7D3、5F4和2D3)、WO2004/004771或WO2004/056875 (包括PD1-17、PD1-28、PD1-33、PD1-35、PD1-F2和表1中所述的Ab)；抗PD-1抗體的序列和特徵以引用的方式併入本文。
在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段與PD-1或PD-L1傳訊抑制劑(諸如抗PD-1抗體或抗原結合片段，或抗PD-L1抗體或抗原結合片段)組合使用，供用於治療或預防CXCR4媒介的疾病或病況(如本文所述)，其中a至i中的一者、多者或全部適用： a. 癌細胞對宿主免疫反應的敏感性增加； b. 腫瘤中的免疫抑制作用降低； c. T細胞導致腫瘤的細胞凋亡 d. 腫瘤內的癌細胞辨識能力增強； e. 癌細胞生長受到抑制； f. 癌細胞被消滅； g. 腫瘤塊減少； h. 腫瘤包含FAP+基質細胞；或 i. 腫瘤對免疫療法有抗性。
又再一個實施例包括藉由向動物投予治療有效劑量的如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段在哺乳動物中治療增生或侵襲相關疾病的方法。在不受理論囿限的情況下，這可透過抑制CXCL12驅動從腫瘤及/或基質中排除T細胞或透過抑制來自腫瘤及/或基質的腫瘤抑制細胞(例如髓鞘衍生的抑制細胞或T-reg)來實現。因此，在一個實施例中，本文所述抗CXCR4抗體或抗原結合片段中的任一者減少轉移性侵犯和黏附。在另一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段減少腫瘤血管生成。在另一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段減少腫瘤細胞增生和化療抗性。 偵測
在另一個實施例中，抗體或抗原結合片段可用於在樣品中偵測CXCR4表現的存在、不存在及/或含量。CXCR4表現可以在活體內及/或活體外偵測，並且可用於幫助診斷涉及CXCR4表現及/或過度表現的疾病或病況。在另一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段用於偵測疾病或病況，例如成像(即PET)。 指導患者挑選
在一個實施例中，使用本文所述抗CXCR4抗體或抗原結合片段中的任一者偵測CXCR4表現可用於指導患者挑選。在一個實施例中，本文所述的抗CXCR4抗體或其抗原結合片段可用於輔助挑選以抗CXCR4抗體或抗原結合片段進行治療性抗體治療的患者。在一些情況下，含量較高的CXCR4可能表示治療成功，而含量較低可能表示成功的可能性降低。剪接變異體及/或蛋白質加工的偏好表現可產生獨特的蛋白質混合物譜，其可能會影響患者對治療的反應或可能在治療後改變。這些概況可能有助於識別患者並定義出應該接受治療、繼續接受治療或應該接受替代治療的患者子集。在另一個實施例中，抗體或其抗原結合片段可用於偵測CXCR4同功型。患者樣品可包括例如血液、血漿、血清、痰、唾液、尿液、CSF、淚液、呼出的外源性顆粒樣品、細胞上清液、細胞或組織溶解產物或組織樣品。 4. 醫藥組成物
在一個實施例中，提供一種醫藥組成物，其包含有效量的如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段以及醫藥上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑。所採用的抗CXCR4抗體或抗原結合片段的治療有效量將取決於例如治療對象、投藥途徑和患者的病況。在一個實施例中，組成物包含其他賦形劑或穩定劑。
醫藥上可接受的載劑是已知的，並且包括在所採用的劑量和濃度下對暴露於其的細胞或哺乳動物無毒的載劑。通常生理上可接受的載劑是pH經緩衝的水溶液。生理上可接受的載劑的實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸(EDTA)；糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)和PLURONICS™。
如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段或如本文所述的醫藥組成物可例如作為液體或粉末氣霧劑(經凍乾的)靜脈內或透過鼻、肺投藥。抗體、抗原結合片段或組成物也可以非經腸或皮下投予。當全身投予時，組成物應是無菌的，無熱原的並且於經適當考慮pH、等滲性和穩定性處於生理上可接受的溶液中。這些條件是那些具有通常知識者所熟知的。
投予防治劑或治療劑(例如如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段)或醫藥組成物的方法包括但不限於非經腸投藥(例如皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內和皮下)、硬膜外和黏膜(例如鼻內和口腔途徑)。在一個特定實施例中，鼻內、肌肉內、靜脈內或皮下(特別是靜脈內)投予防治劑或治療劑(例如如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段)或醫藥組成物。防治劑或治療劑或組成物可能藉由任何便利的途徑投予，例如藉由輸注或推注、藉由穿過上皮或黏膜皮膚內層(例如口腔黏膜、鼻內黏膜、直腸黏膜和腸黏膜等)吸收，並且可能與其他治療劑或生物活性劑一起投予。投藥可以是全身的或局部的。每個劑量可能或可能不藉由相同的投藥途徑投予。在一個實施例中，如本文所述的抗CXCR4抗體或其抗原結合片段可經由多種投藥途徑與如所述的相同或不同抗CXCR4抗體或其抗原結合片段的其他劑量同時或隨後一起投予。
多種遞送系統是已知的並且可用於投予防治劑或治療劑(例如如本文所述的抗CXCR4抗體或其抗原結合片段)，包括但不限於包囊在脂質體、微粒、微膠囊、能夠表現抗體或抗原結合片段的重組細胞、受體媒介的內吞作用(參見例如Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987))、構建作為逆轉錄病毒載體或其他載體的一部分的核酸。此外，還可以採用肺投藥，例如藉由使用吸入器或噴霧器，以及具有氣化劑的調配物。參見，例如美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號與第4,880,078號；以及PCT公開號WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346與WO99/66903，其各自以全文引用的方式併入本文。
在一個特定實施例中，可能需要將如本文所述的防治劑或治療劑或醫藥組成物局部投予至需要治療的區域。這可能藉由例如局部輸注、藉由局部投藥(例如藉由鼻內噴霧)、藉由注射或藉由植入物來實例，該植入物是多孔、非多孔或凝膠狀材料，包括膜(諸如矽質膜或纖維)。當投予防治劑或治療劑(例如如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段)時，必須注意使用抗體或抗原結合片段不吸收的材料。
在一個實施例中，提供一種醫藥組成物，其包含如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段和醫藥上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑，且進一步包含一或多種(例如超過一種，或例如兩種)又一種獨立地選自由以下組成之群組的治療劑： a) 免疫檢查點抑制劑(諸如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM-3抗體、抗CTLA-4抗體、抗TIGIT抗體、抗BTLA抗體、抗VISTA抗體和抗LAG-3抗體)； b) 免疫刺激劑(如抗OX40抗體、抗HVEM抗體、抗CD27抗體、抗CD28抗體、抗CD137L抗體、抗OX40L抗體、抗GITRL抗體、抗ICOSL抗體、抗PD-L2抗體、抗GITR抗體、抗CD137抗體、抗ICOS抗體和抗CD40抗體)； c) 抗CSF1R抗體、抗CCR4抗體、抗CD39抗體、抗CD73抗體、抗CD96抗體、抗CXCR2抗體、抗CD200抗體、抗GARP抗體、抗SIRPα抗體、抗CXCL9抗體、抗CXCL10抗體、抗CXCL11抗體及抗CD155抗體； d) 趨化因子受體拮抗劑(諸如CCR4和CXCR2趨化因子受體)； e) 體抑素受體、EP2/EP4、A2AR、CD39、CD73拮抗劑； f) 標靶激酶抑制劑(諸如CSF-1R、EGFR或VEGFR抑制劑)； g) 血管新生抑制劑(諸如抗VEGF-A或Delta樣配體-4)； h) 免疫刺激肽或趨化因子(諸如CXCL9或CXCL10)； i) 細胞激素(諸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL_14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20和IL-21，特別是IL-2、IL-12、IL-15、IL-21)和干擾素(諸如IFN-α、IFN-β和IFN- γ，特別是IFN-γ)； j) 雙特異性T細胞接合劑(BiTE)，具有至少一種針對CD3的特異性(例如CD3/CD19 BiTE)和NK細胞接合劑(例如CD16)； k) 其他雙特異性分子(例如靶向腫瘤相關抗原的含有IL-2或含有IL-15的分子，腫瘤相關抗原為例如表皮生長因子受體，諸如EGFR、Her-2、紐約食道癌-1 (NY-ESO-1)、GD2、EpCAM或黑色素瘤相關抗原3 (MAGE-A3))； l) 溶瘤病毒(諸如HSV病毒(視情況地其分泌GMCSF)、新城雞瘟病毒、牛痘病毒、腺病毒、NCD病毒(副黏液病毒)、辛得比斯病毒、呼吸道融合病毒、麻疹病毒、柯薩奇病毒、水泡性口炎病毒、門戈病毒、里奧病毒、細小病毒、馬拉巴病毒(彈狀病毒)和伊科病毒(Echnvirus))； m) 接種腫瘤相關抗原(諸如紐約食道癌-1 [NY-ESO-1]、黑色素瘤相關抗原-3 [MAGE-3]、BCMA)； n) 基於細胞的療法(諸如例如表現抗CD19的嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)、嵌合抗原受體自然殺手細胞(CAR-NK)、抗EpCam、抗VEGF/VEGFR或抗間皮素)； o) 腫瘤特異性T細胞或LAK細胞的授受性轉移； p) 腫瘤相關抗原抗體(諸如抗-CEA、抗-GD2、抗-磷脂醯肌醇蛋白聚醣-3、抗-磷脂醯肌醇蛋白聚醣-2、抗連接蛋白-4和抗-間皮素)；和 q) 化療。
在一個實施例中，提供一種如本文所述的醫藥組成物，或包含如本文所述的醫藥組成物的套組，其中組成物用於療法；或用於治療及/或預防如上所述的CXCR4媒介的疾病或病況。
在一個實施例中，提供一種如本文所述的醫藥組成物(其與標籤或說明書組合)或包含標籤或說明書的套組，用於在患者中治療及/或預防如本文所述的該CXCR4媒介的疾病或病況；視情況地，其中標籤或說明書包括行銷授權號(例如FDA或EMA授權號)。視情況地，標籤或說明書可以是呈監管藥品或生物製品的製造、使用或銷售的政府機構所規定形式的通知，該通知反映了供人類投藥的製造、使用或銷售的機構的批准(例如授權號)。在一個實施例中，套組包括本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段以及向需要治療的患者投予抗體或抗原結合片段的說明書。在一個實施例中，套組包含IV或注射裝置，其包含如本文所述的該抗CXCR4抗體或抗原結合片段。在一個實施例中，靜脈內投予抗體或抗原結合片段。在一個實施例中，皮下投予抗體或抗原結合片段。在一個實例中，如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段包含在醫用容器中，例如小瓶、注射器、IV容器或注射裝置(諸如眼內或玻璃體內注射裝置)。在一個實例中，抗CXCR4抗體或抗原結合片段在活體外，例如在無菌容器中。在一個實施例中，該組成物根據常規程序調配為適合於靜脈內投予給人類的醫藥組成物。通常，靜脈內投藥的組成物是無菌等滲水性緩衝液中的溶液。必要時，組成物還可能包括增溶劑和局部麻醉劑(諸如利多卡因)以減輕注射部位的疼痛。然而，這樣的組成物可能藉由靜脈內以外的途徑投藥。一般而言，組成物的組分呈單位劑量形式單獨提供或混合在一起，例如呈乾燥的凍乾粉末或無水濃縮物，在不透氣密封容器(諸如標明活性劑數量的安瓿或小袋)中。當組成物藉由輸注投藥時，可以用含有無菌醫藥級水或鹽水的輸注瓶來分配。當組成物藉由注射投藥時，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，以便可以在投藥之前混合組分。本發明的又一種治療劑可能藉由任何方法遞送，該等方法是本領域具有通常知識者眾所周知的。例如，又一種治療劑可能經口、全身或局部遞送(至腫瘤環境)。在一個實施例中，又一種治療劑是經口遞送。在一個實施例中，又一種治療劑是被全身遞送(例如靜脈內)。在一個實施例中，又一種治療劑局部遞送至腫瘤環境。在另一個實施例中，抗CXCR4抗體及/或其他治療劑在手術切除腫瘤的全部或(基本上)一部分後被局部遞送至部位。 5. 套組和製品
在另一個實施例中，提供一種製品，其包括其中含有本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段的組成物的容器以及指示組成物可用於治療特徵在於CXCR4表現或過度表現的疾病或病況的藥品說明書或標籤。在一個實施例中，提供一種用於治療及/或預防CXCR4媒介的疾病或病況的套組，該套組包含如本文任何實施例或實施例組合中所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段(和視情況地如本文他處所述的又一種治療劑)，視情況地與用於治療及/或預防人類的該等疾病或病況的標籤或說明書組合；視情況地，其中標籤或說明書包含行銷授權號(例如FDA或EMA授權號)；視情況地，其中套組包含IV或注射裝置，其包含抗體或抗原結合片段。在另一個實施例中，套組包含有包含在容器或IV袋內的抗體或抗原結合片段。在另一個實施例中，容器或IV袋是無菌容器或無菌IV袋。在另一個實施例中，將抗體或抗原結合片段調配成包含在(無菌)容器內或包含在(無菌)IV袋內的醫藥組成物。在又一個實施例中，套組進一步包含使用說明書。 6. 額外實施例
在一個實施例中，提供一種特異性地結合至CXCR4的抗體或其抗原結合片段，其中抗體或抗原結合片段使得CD8 +T細胞能夠浸潤腫瘤。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含有包含CDRH3的V H結構域，其中CDRH3序列與如本文所述抗體或抗原結合片段的CDRH3序列相同，或包含3、2或1個胺基酸取代。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含有包含CDRH1、CDRH2和CDRH3的V H結構域，其中CDRH1-3序列與如本文所述抗體或抗原結合片段的CDRH1-3序列相同，或包含3、2或1個胺基酸取代。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含V H結構域，其中V H結構域包含與如本文所述抗體或抗原結合片段的V H胺基酸序列相同或至少90%相同的胺基酸序列。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含有包含CDRL3的V L結構域，其中CDRL3序列與如本文所述抗體或抗原結合片段的CDRL3序列相同，或包含3、2或1個胺基酸取代。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含有包含CDRL1、CDRL2和CDRL3的V L結構域，其中CDRL1-3序列與如本文所述抗體或抗原結合片段的CDRL1-3序列相同，或包含3、2或1個胺基酸取代。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含V L結構域，其中V L結構域包含與如本文所述抗體或抗原結合片段的V L胺基酸序列相同或至少90%相同的胺基酸序列。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含V H結構域和V L結構域，其中V H結構域包含與如本文所述抗體或抗原結合片段的V H胺基酸序列相同或至少90%相同的胺基酸序列；而V L結構域包含與如本文所述抗體或抗原結合片段的V L胺基酸序列相同或至少90%相同的胺基酸序列。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並且包含重鏈和輕鏈，其中重鏈胺基酸序列與如本文所述抗體或抗原結合片段的重鏈胺基酸序列相同或至少90%相同；而輕鏈胺基酸序列與如本文所述抗體或抗原結合片段的輕鏈胺基酸序列相同或至少90%相同。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，並與如本文所述抗體或抗原結合片段競爭結合至CXCR4。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，其中抗體或抗原結合片段結合至與如本文所述抗體或抗原結合片段特異性地結合的表位相同的表位。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，其中抗體或片段在T細胞(視情況地CD8 +T細胞)中不誘導細胞凋亡。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，其中抗體或片段以0.2至4 nM或更小的EC 50結合至食蟹獼猴CXCR4。
在一個實施例中，提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性地結合至CXCR4，其中抗體或抗原結合片段不結合至CXCR7。
在一個實施例中，提供一種如本文所述的抗體或其抗原結合片段，其用於治療如本文所述的CXCR4媒介的疾病或病況。
在一個實施例中，提供一種如本文所述的抗體或抗原結合片段在製造用於治療如本文所述的CXCR4媒介的疾病或病況的藥劑中的用途。
在一個實施例中，提供一種在患者中治療如本文所述的CXCR4媒介的疾病或病況的方法，包含向該患者(例如人類)投予治療有效量的如本文所述的抗體或抗原結合片段，其中CXCR4媒介的疾病或病況由此得到治療。
在一個實施例中，提供一種包含醫藥組成物的套組，該醫藥組成物包含如本文所述的抗CXCR4抗體或抗原結合片段，其中組成物用於治療如本文所述的CXCR4媒介的疾病或病況。
在一個實施例中，提供一種編碼本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段或其任何部分的核酸。
在一個實施例中，提供一種載體，其包含編碼本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段或其任何部分的核酸。
在一個實施例中，提供一種宿主細胞，其包含編碼本文所揭示的抗CXCR4抗體或抗原結合片段或其任何部分的核酸，或如本文中所述的載體。 7. 非正式序列表
SEQ ID NO: 名稱 說明 序列
1 人類CXCR4 人類CXCR4用於細胞株生成的胺基酸序列 MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSMKEPCFREENANFNKIFLPTIYSIIFLTGIVGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAVANWYFGNFLCKAVHVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQRPRKLLAEKVVYVGVWIPALLLTIPDFIFANVSEADDRYICDRFYPNDLWVVVFQFQHIMVGLILPGIVILSCYCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYIGISIDSFILLEIIKQGCEFENTVHKWISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHALTSVSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTESESSSFHSSGGGGSGGGGSHHHHHH
2 人類CXCR4 人類CXCR4的胺基酸序列。Uniprot ID: P61073 MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSMKEPCFREENANFNKIFLPTIYSIIFLTGIVGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAVANWYFGNFLCKAVHVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQRPRKLLAEKVVYVGVWIPALLLTIPDFIFANVSEADDRYICDRFYPNDLWVVVFQFQHIMVGLILPGIVILSCYCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYIGISIDSFILLEIIKQGCEFENTVHKWISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHALTSVSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTESESSSFHSS
3 人類CXCR4 人類CXCR4的密碼子經優化核酸序列 atggaaggcatcagcatctacaccagcgacaactacaccgaggaaatgggcagcggcgactacgacagcatgaaggaaccctgcttccgggaagagaacgccaacttcaacaagatcttcctgcccacaatctacagcatcatctttctgaccggcatcgtgggcaacggactcgtgatcctcgtgatgggctaccagaaaaagctgcggagcatgaccgacaagtaccggctgcacctgagcgtggccgacctgctgttcgtgatcaccctgcctttctgggccgtggacgccgtggccaattggtacttcggcaacttcctgtgcaaggccgtgcacgtgatctacaccgtgaacctgtacagcagcgtgctgatcctggccttcatcagcctggacagatacctggccatcgtgcacgccaccaacagccagcggcctagaaagctgctggccgagaaggtggtgtacgtgggcgtgtggattcccgccctgctgctgaccatccccgacttcatcttcgccaacgtgtccgaggccgacgaccggtacatctgcgaccggttctaccccaacgacctgtgggtggtggtgttccagttccagcacatcatggtgggactgatcctgcctggcatcgtgattctgagctgctactgcatcatcatcagcaagctgagccacagcaagggccaccagaagcggaaggccctgaaaaccaccgtgatcctgattctggctttcttcgcctgctggctgccctactacatcggcatctccatcgacagcttcatcctgctggaaatcatcaagcagggctgcgagttcgagaacaccgtgcacaagtggatcagcattaccgaggccctggcctttttccactgctgcctgaaccctatcctgtacgccttcctgggcgccaagttcaagacctctgcccagcacgccctgaccagcgtgtccagaggaagcagcctgaagatcctgagcaagggcaagagaggcggccacagctccgtgtctacagagagcgagagcagcagcttccacagctctggcggcggaggatctgggggaggcggatctcaccaccatcaccatcac
4 人類CXCR7 人類CXCR7用於細胞株生成的胺基酸序列 MDLHLFDYSEPGNFSDISWPCNSSDCIVVDTVMCPNMPNKSVLLYTLSFIYIFIFVIGMIANSVVVWVNIQAKTTGYDTHCYILNLAIADLWVVLTIPVWVVSLVQHNQWPMGELTCKVTHLIFSINLFGSIFFLTCMSVDRYLSITYFTNTPSSRKKMVRRVVCILVWLLAFCVSLPDTYYLKTVTSASNNETYCRSFYPEHSIKEWLIGMELVSVVLGFAVPFSIIAVFYFLLARAISASSDQEKHSSRKIIFSYVVVFLVCWLPYHVAVLLDIFSILHYIPFTCRLEHALFTALHVTQCLSLVHCCVNPVLYSFINRNYRYELMKAFIFKYSAKTGLTKLIDASRVSETEYSALEQSTK
5 人類CXCR7 人類CXCR7的胺基酸序列。 Uniprot ID: P25106 MDLHLFDYSEPGNFSDISWPCNSSDCIVVDTVMCPNMPNKSVLLYTLSFIYIFIFVIGMIANSVVVWVNIQAKTTGYDTHCYILNLAIADLWVVLTIPVWVVSLVQHNQWPMGELTCKVTHLIFSINLFGSIFFLTCMSVDRYLSITYFTNTPSSRKKMVRRVVCILVWLLAFCVSLPDTYYLKTVTSASNNETYCRSFYPEHSIKEWLIGMELVSVVLGFAVPFSIIAVFYFLLARAISASSDQEKHSSRKIIFSYVVVFLVCWLPYHVAVLLDIFSILHYIPFTCRLEHALFTALHVTQCLSLVHCCVNPVLYSFINRNYRYELMKAFIFKYSAKTGLTKLIDASRVSETEYSALEQSTK
6 人類CXCR7 人類CXCR7的核酸序列 atggacctgcacctgttcgactattccgagcctggcaacttctccgacatctcctggccttgcaactccagcgactgcatcgtggtggacaccgtgatgtgccccaacatgcccaacaagtccgtgctgctgtacaccctgtccttcatctacatcttcatcttcgtgatcggcatgatcgccaactccgtggtcgtgtgggtcaacatccaggctaagaccaccggctacgacacccactgctacatcctgaacctggctatcgccgacctgtgggtcgtgctgacaatccctgtgtgggttgtgtccctggtgcagcacaaccagtggcctatgggagagctgacctgcaaagtgacccacctgatcttctccatcaacctgttcggctctatcttcttcctgacctgtatgtccgtggaccgctacctgtccatcacctacttcaccaacacaccctccagccggaagaaaatggtccgacgggtcgtgtgcatcctcgtgtggctgctggccttctgtgtgtctctgcccgacacctactacctgaaaaccgtgacctccgcctccaacaacgagacatactgccggtctttctaccccgagcactccatcaaagaatggctgatcggaatggaactggtgtccgtggtgctgggcttcgccgtgcctttctctattatcgccgtgttctacttcctgctggccagagccatctccgcctcttccgatcaagagaagcactcctctcggaagatcatcttctcctacgtggtggtgtttctcgtgtgctggctgccttaccatgtggctgtgctgctggacatcttcagcatcctgcactacatccctttcacctgtcggctggaacacgccctgtttaccgctctgcatgtgacccagtgcctgagcctggtgcactgctgtgtgaaccctgtgctgtactccttcatcaaccggaactaccgctacgagctgatgaaggcctttatcttcaagtactccgccaagaccggcctgaccaagctgatcgacgcctccagagtgtccgagacagagtacagcgccctggaacagtccaccaag
7 食蟹獼猴CXCR4 食蟹獼猴CXCR4用於細胞株生成的胺基酸序列 MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSIKEPCFREENAHFNRIFLPTIYSIIFLTGIVGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAVANWYFGNFLCKAVHVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQKPRKLLAEKVVYVGVWIPALLLTIPDFIFASVSEADDRYICDRFYPNDLWVVVFQFQHIMVGLILPGIVILSCYCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYIGISIDSFILLEIIKQGCEFENTVHKWISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHALTSVSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTESESSSFHSS
8 食蟹獼猴CXCR4 食蟹獼猴CXCR4的胺基酸序列。 Uniprot ID: Q28474 MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSIKEPCFREENAHFNRIFLPTIYSIIFLTGIVGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAVANWYFGNFLCKAVHVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQKPRKLLAEKVVYVGVWIPALLLTIPDFIFASVSEADDRYICDRFYPNDLWVVVFQFQHIMVGLILPGIVILSCYCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYIGISIDSFILLEIIKQGCEFENTVHKWISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHALTSVSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTESESSSFHSS
9 食蟹獼猴CXCR4 食蟹獼猴CXCR4的核酸序列 atggaaggcatctccatctacacctccgacaactacaccgaggaaatgggctccggcgactacgactccatcaaagagccttgcttccgggaagagaacgcccacttcaaccggatctttctgcccacaatctactctatcatcttcctgaccggcatcgtcggcaacggcctggtcattctggtcatgggctaccagaaaaagctgcggtccatgaccgacaagtaccggctgcatctgtctgtggccgacctgctgttcgtgatcaccctgcctttttgggccgtcgatgccgtggccaactggtacttcggcaacttcctgtgcaaggccgtgcacgtgatctacaccgtgaacctgtactcctccgtgctgatcctggccttcatctccctggacagatacctggccatcgtgcacgccaccaactctcagaagcccagaaagctgctggccgagaaggtggtgtatgtcggcgtgtggattcccgctctgctgctgacaatccccgacttcatcttcgcctccgtgtccgaggccgacgaccggtacatctgcgacagattctaccccaacgacctgtgggtcgtcgtgttccagttccagcacatcatggtcggactgatcctgcctggcatcgtgatcctgtcctgctactgcatcatcatctccaagctgtcccactccaagggccaccagaagcggaaggctctgaaaaccacagtgatcctgattctggctttcttcgcctgctggctgccctactacatcggcatcagcatcgacagcttcatcctgctggaaatcatcaagcagggctgcgagttcgagaacaccgtgcacaagtggatctccattaccgaggctctggccttcttccactgttgtctgaaccctatcctgtacgccttcctgggcgccaagttcaagacctctgctcagcacgctctgacctctgtgtccagaggctccagcctgaagatcctgagcaagggcaagagaggcggccactcttctgtgtctaccgagtccgagtcctccagcttccactcctct
10 CL-82574 CDRH1 (IMGT) CL-82574的CDRH1使用IMGT的胺基酸序列 GFTFYSYG                   
11 CL-82574 CDRH2 (IMGT) CL-82574的CDRH2使用IMGT的胺基酸序列 IWYGGTNK
12 CL-82574 CDRH3 (IMGT) CL-82574的CDRH3使用IMGT的胺基酸序列 ARGQLERRRGGLNI
13 CL-82574 CDRH1 (KABAT) CL-82574的CDRH1使用Kabat的胺基酸序列 SYGMH
14 CL-82574 CDRH2 (KABAT) CL-82574的CDRH2使用Kabat的胺基酸序列 VIWYGGTNKYYADSVKG
15 CL-82574 CDRH3 (KABAT) CL-82574的CDRH3使用Kabat的胺基酸序列 GQLERRRGGLNI
16 CL-82574 重鏈可變區 CL-82574的V H的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFYSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYGGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGQLERRRGGLNIWGQGTVVTVSS
17 CL-82574 重鏈可變區 CL-82574的V H的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttctatagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaagggactggagtgggtggcagttatatggtatggtggaactaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgacagccgaagacacggctgtgtattactgtgcgagagggcagctggaacgccgacggggcggtttgaatatctggggccaagggacagtggtcaccgtctcttcag
18 CL-82574 完全重鏈序列 CL-82574重鏈的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFYSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYGGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGQLERRRGGLNIWGQGTVVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
19 CL-82574 完全重鏈序列 CL-82574重鏈的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttctatagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaagggactggagtgggtggcagttatatggtatggtggaactaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgacagccgaagacacggctgtgtattactgtgcgagagggcagctggaacgccgacggggcggtttgaatatctggggccaagggacagtggtcaccgtctcttcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
20 CL-82574 CDRL1 (IMGT) CL-82574的CDRL1使用IMGT的胺基酸序列 QGVRDD
21 CL-82574 CDRL2 (IMGT) CL-82574的CDRL2使用IMGT的胺基酸序列 AAS
22 CL-82574 CDRL3 (IMGT) CL-82574的CDRL3使用IMGT的胺基酸序列 LQHNSYPFT
23 CL-82574 CDRL1 (KABAT) CL-82574的CDRL1使用KABAT的胺基酸序列 RASQGVRDDLG
24 CL-82574 CDRL2 (KABAT) CL-82574的CDRL2使用KABAT的胺基酸序列 AASSLQS
25 CL-82574 CDRL3 (KABAT) CL-82574的CDRL3使用KABAT的胺基酸序列 LQHNSYPFT
26 CL-82574 輕鏈可變區 CL-82574的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVRDDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPFTFGPGTKVDIK
27 CL-82574 輕鏈可變區 CL-82574的V L的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcgttagagatgatttaggttggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttatccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaac
28 CL-82574 完全輕鏈序列 CL-82574輕鏈的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVRDDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
29 CL-82574 完全輕鏈序列 CL-82574輕鏈的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcgttagagatgatttaggttggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttatccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
30 CL-82458 CDRH1 (IMGT) CL-82458的CDRH1使用IMGT的胺基酸序列 GFTFYSYA
31 CL-82458 CDRH2 (IMGT) CL-82458的CDRH2使用IMGT的胺基酸序列 ISGSGDIT
32 CL-82458 CDRH3 (IMGT) CL-82458的CDRH3使用IMGT的胺基酸序列 AKGQLERRYYKYYGMDV
33 CL-82458 CDRH1 (KABAT) CL-82458的CDRH1使用Kabat的胺基酸序列 SYAMN
34 CL-82458 CDRH2 (KABAT) CL-82458的CDRH2使用Kabat的胺基酸序列 GISGSGDITYYADSVKG
35 CL-82458 CDRH3 (KABAT) CL-82458的CDRH3使用Kabat的胺基酸序列 GQLERRYYKYYGMDV
36 CL-82458 重鏈可變區 CL-82458的V H的胺基酸序列 EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFYSYAMNWVRQAPGKGLKWVSGISGSGDITYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMHSLRPEDTAIYYCAKGQLERRYYKYYGMDVWGQGTTVTVSS
37 CL-82458 重鏈可變區 CL-82458的V H的核酸序列 gaggtgcagctggtagagtctgggggagacttagtacagcctggggggtccctgagactctcttgtgcagcctctggattcaccttttacagctatgccatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctaaaatgggtctcaggtattagtggtagtggtgatatcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgcacagcctgagacccgaagacacggccatatattactgtgcgaaaggccaactggaacgacggtactacaagtactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
38 CL-82458 完全重鏈序列 CL-82458重鏈的胺基酸序列 EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFYSYAMNWVRQAPGKGLKWVSGISGSGDITYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMHSLRPEDTAIYYCAKGQLERRYYKYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
39 CL-82458 完全重鏈序列 CL-82458重鏈的核酸序列 gaggtgcagctggtagagtctgggggagacttagtacagcctggggggtccctgagactctcttgtgcagcctctggattcaccttttacagctatgccatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctaaaatgggtctcaggtattagtggtagtggtgatatcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgcacagcctgagacccgaagacacggccatatattactgtgcgaaaggccaactggaacgacggtactacaagtactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
40 CL-82458 CDRL1 (IMGT) CL-82458的CDRL1使用IMGT的胺基酸序列 QGIRND
41 CL-82458 CDRL2 (IMGT) CL-82458的CDRL2使用IMGT的胺基酸序列 GAS
42 CL-82458 CDRL3 (IMGT) CL-82458的CDRL3使用IMGT的胺基酸序列 LQQNSYPLT
43 CL-82458 CDRL1 (KABAT) CL-82458的CDRL1使用KABAT的胺基酸序列 RANQGIRNDLG
44 CL-82458 CDRL2 (KABAT) CL-82458的CDRL2使用KABAT的胺基酸序列 GASSLKS
45 CL-82458 CDRL3 (KABAT) CL-82458的CDRL3使用KABAT的胺基酸序列 LQQNSYPLT
46 CL-82458 輕鏈可變區 CL-82458的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRANQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASSLKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQQNSYPLTFGGGTKVEIK
47 CL-82458 輕鏈可變區 CL-82458的V L的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaaatcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatggtgcatccagtttgaaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacctactattgtctacagcagaatagttacccgctcactttcggcggagggaccaaagtggagatcaaac
48 CL-82458 完全輕鏈序列 CL-82458輕鏈的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRANQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASSLKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQQNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
49 CL-82458 完全輕鏈序列 CL-82458輕鏈的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaaatcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatggtgcatccagtttgaaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacctactattgtctacagcagaatagttacccgctcactttcggcggagggaccaaagtggagatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
50 CL-82558 CDRH1 (IMGT) CL-82558的CDRH1使用IMGT的胺基酸序列 GGSISSGGYY
51 CL-82558 CDRH2 (IMGT) CL-82558的CDRH2使用IMGT的胺基酸序列 ISYSGNT
52 CL-82558 CDRH3 (IMGT) CL-82558的CDRH3使用IMGT的胺基酸序列 ARDRRIPMLRGVKGYYYGLDV
53 CL-82558 CDRH1 (KABAT) CL-82558的CDRH1使用Kabat的胺基酸序列 SGGYYWS
54 CL-82558 CDRH2 (KABAT) CL-82558的CDRH2使用Kabat的胺基酸序列 YISYSGNTFYSPSLKS
55 CL-82558 CDRH3 (KABAT) CL-82558的CDRH3使用Kabat的胺基酸序列 DRRIPMLRGVKGYYYGLDV
56 CL-82558 重鏈可變區 CL-82558的V H的胺基酸序列 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQVPGKGLEWIGYISYSGNTFYSPSLKSRVTISVDTSENKFSLRLTSVTAADTAVYFCARDRRIPMLRGVKGYYYGLDVWGQGTTVTVSS
57 CL-82558 重鏈可變區 CL-82558的V H的核酸序列 caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcagtggtgggtactactggagctggatccgccaggtcccagggaagggcctggagtggattggatacatctcatacagtgggaacaccttctacagcccgtccctcaagagtcgagttaccatatcagtagacacgtctgagaacaagttctccctgaggctgacctctgtgactgccgcggacacggccgtgtatttctgtgcgagagatcgacgtattcctatgcttcggggagttaaaggctactactacggtttggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
58 CL-82558 完全重鏈序列 CL-82558重鏈的胺基酸序列 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQVPGKGLEWIGYISYSGNTFYSPSLKSRVTISVDTSENKFSLRLTSVTAADTAVYFCARDRRIPMLRGVKGYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
59 CL-82558 完全重鏈序列 CL-82558重鏈的核酸序列 caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcagtggtgggtactactggagctggatccgccaggtcccagggaagggcctggagtggattggatacatctcatacagtgggaacaccttctacagcccgtccctcaagagtcgagttaccatatcagtagacacgtctgagaacaagttctccctgaggctgacctctgtgactgccgcggacacggccgtgtatttctgtgcgagagatcgacgtattcctatgcttcggggagttaaaggctactactacggtttggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
60 CL-82558 CDRL1 (IMGT) CL-82558的CDRL1使用IMGT的胺基酸序列 QSLLHRNGYKY
61 CL-82558 CDRL2 (IMGT) CL-82558的CDRL2使用IMGT的胺基酸序列 LGS
62 CL-82558 CDRL3 (IMGT) CL-82558的CDRL3使用IMGT的胺基酸序列 MQALQTPWT
63 CL-82558 CDRL1 (KABAT) CL-82558的CDRL1使用KABAT的胺基酸序列 RSSQSLLHRNGYKYLD
64 CL-82558 CDRL2 (KABAT) CL-82558的CDRL2使用KABAT的胺基酸序列 LGSNRAS
65 CL-82558 CDRL3 (KABAT) CL-82558的CDRL3使用KABAT的胺基酸序列 MQALQTPWT
66 CL-82558 輕鏈可變區 CL-82558的V L的胺基酸序列 DIVMTQSPLSLPVIPGEPASISCRSSQSLLHRNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPARFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIK
67 CL-82558 輕鏈可變區 CL-82558的V L的核酸序列 gatattgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcatccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcctgcatagaaatggatacaagtatttggattggtacctgcagaagccggggcagtctccacagctcctgatctatttgggttctaatcgggcctccggggtccctgccaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgtatgcaagctctacaaactccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
68 CL-82558 完全輕鏈序列 CL-82558輕鏈的胺基酸序列 DIVMTQSPLSLPVIPGEPASISCRSSQSLLHRNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPARFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
69 CL-82558 完全輕鏈序列 CL-82558輕鏈的核酸序列 gatattgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcatccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcctgcatagaaatggatacaagtatttggattggtacctgcagaagccggggcagtctccacagctcctgatctatttgggttctaatcgggcctccggggtccctgccaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgtatgcaagctctacaaactccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
70 CL-82658 CDRH1 (IMGT) CL-82658的CDRH1使用IMGT的胺基酸序列 GFSFSSYG
71 CL-82658 CDRH2 (IMGT) CL-82658的CDRH2使用IMGT的胺基酸序列 ISYDGSNK
72 CL-82658 CDRH3 (IMGT) CL-82658的CDRH3使用IMGT的胺基酸序列 SKGSLTPRRGYYYSYGMDV
73 CL-82658 CDRH1 (KABAT) CL-82658的CDRH1使用Kabat的胺基酸序列 SYGMH
74 CL-82658 CDRH2 (KABAT) CL-82658的CDRH2使用Kabat的胺基酸序列 VISYDGSNKYYADSVKG
75 CL-82658 CDRH3 (KABAT) CL-82658的CDRH3使用Kabat的胺基酸序列 GSLTPRRGYYYSYGMDV
76 CL-82658 重鏈可變區 CL-82658的V H的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGEDTAVYYCSKGSLTPRRGYYYSYGMDVWGQGTTVTVSS
77 CL-82658 重鏈可變區 CL-82658的V H的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattctccttcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatcatatgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagaggtgaggacacggctgtgtattactgttcgaaagggagtttaacacctcgccggggttactactactcctacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
78 CL-82658 完全重鏈序列 CL-82658重鏈的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGEDTAVYYCSKGSLTPRRGYYYSYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
79 CL-82658 完全重鏈序列 CL-82658重鏈的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattctccttcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatcatatgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagaggtgaggacacggctgtgtattactgttcgaaagggagtttaacacctcgccggggttactactactcctacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
80 CL-82658 CDRL1 (IMGT) CL-82658的CDRL1使用IMGT的胺基酸序列 QGIRND
81 CL-82658 CDRL2 (IMGT) CL-82658的CDRL2使用IMGT的胺基酸序列 AAS
82 CL-82658 CDRL3 (IMGT) CL-82658的CDRL3使用IMGT的胺基酸序列 LQHNGYPFT
83 CL-82658 CDRL1 (KABAT) CL-82658的CDRL1使用KABAT的胺基酸序列 RASQGIRNDLS
84 CL-82658 CDRL2 (KABAT) CL-82658的CDRL2使用KABAT的胺基酸序列 AASSLQS
85 CL-82658 CDRL3 (KABAT) CL-82658的CDRL3使用KABAT的胺基酸序列 LQHNGYPFT
86 CL-82658 輕鏈可變區 CL-82658的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLSWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNGYPFTFGPGTKVDIK
87 CL-82658 輕鏈可變區 CL-82658的V L的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagaaatgatttaagctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatggttacccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaac
88 CL-82658 完全輕鏈序列 CL-82658輕鏈的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLSWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNGYPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
89 CL-82658 完全輕鏈序列 CL-82658輕鏈的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagaaatgatttaagctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatggttacccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
90 CL-83083 & CL-83083-2 CDRH1 (IMGT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRH1使用IMGT的胺基酸序列 GFTFSGSA
91 CL-83083 & CL-83083-2 CDRH2 (IMGT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRH2使用IMGT的胺基酸序列 IRSKANKYAT
92 CL-83083 & CL-83083-2 CDRH3 (IMGT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRH3使用IMGT的胺基酸序列 TWELSNYDILTGFYYGMDV
93 CL-83083 & CL-83083-2 CDRH1 (KABAT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRH1使用Kabat的胺基酸序列 GSAMH
94 CL-83083 & CL-83083-2 CDRH2 (KABAT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRH2使用Kabat的胺基酸序列 RIRSKANKYATAYAASVKG
95 CL-83083 & CL-83083-2 CDRH3 (KABAT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRH3使用Kabat的胺基酸序列 ELSNYDILTGFYYGMDV
96 CL-83083 & CL-83083-2 重鏈可變區 CL-83083 & CL-83083-2的V H的胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSGSAMHWVRQASGKGLEWVGRIRSKANKYATAYAASVKGRFTISRDDSKNTAYVQMKSLKTEDTAVYYCTWELSNYDILTGFYYGMDVWGQGTTVTVSS
97 CL-83083 & CL-83083-2 重鏈可變區 f CL-83083 & CL-83083-2的V H的核酸序列 gaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttggtccagccgggggggtccctgaaactctcctgtgcagcctctgggttcaccttcagtggatctgctatgcactgggtccgccaggcttccgggaaagggctggagtgggttggccgtattagaagtaaagctaacaaatatgcgacagcatatgctgcgtcggtgaaaggcaggttcaccatctccagagatgattcaaagaatacggcgtatgtgcaaatgaagagcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattactgtacttgggaattgtcgaattacgatattttgactggtttctactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
98 CL-83083 & CL-83083-2 完全重鏈序列 CL-83083 & CL-83083-2重鏈的胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSGSAMHWVRQASGKGLEWVGRIRSKANKYATAYAASVKGRFTISRDDSKNTAYVQMKSLKTEDTAVYYCTWELSNYDILTGFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
99 CL-83083 & CL-83083-2 完全重鏈序列 CL-83083 & CL-83083-2重鏈的核酸序列 gaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttggtccagccgggggggtccctgaaactctcctgtgcagcctctgggttcaccttcagtggatctgctatgcactgggtccgccaggcttccgggaaagggctggagtgggttggccgtattagaagtaaagctaacaaatatgcgacagcatatgctgcgtcggtgaaaggcaggttcaccatctccagagatgattcaaagaatacggcgtatgtgcaaatgaagagcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattactgtacttgggaattgtcgaattacgatattttgactggtttctactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
100 CL-83083 & CL-83083-2 CDRL1 (IMGT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRL1使用IMGT的胺基酸序列 SNNVGNLG
101 CL-83083 & CL-83083-2 CDRL2 (IMGT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRL2使用IMGT的胺基酸序列 RNN
102 CL-83083 & CL-83083-2 CDRL3 (IMGT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRL3使用IMGT的胺基酸序列 SAWDSSLSAWV
103 CL-83083 & CL-83083-2 CDRL1 (KABAT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRL1使用KABAT的胺基酸序列 TGNSNNVGNLGAA
104 CL-83083 & CL-83083-2 CDRL2 (KABAT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRL2使用KABAT的胺基酸序列 RNNNRPS
105 CL-83083 & CL-83083-2 CDRL3 (KABAT) CL-83083 & CL-83083-2的CDRL3使用KABAT的胺基酸序列 SAWDSSLSAWV
106 CL-83083 & CL-83083-2 輕鏈可變區 CL-83083 & CL-83083-2的V L的胺基酸序列 QAGLTQPPSVSKGLRQTATLTCTGNSNNVGNLGAAWLQQHQGHPPKLLSYRNNNRPSGISERFFASRSGNTASLTITGLQPEDEADYYCSAWDSSLSAWVFGGGTKLTVL
107 CL-83083 & CL-83083-2 輕鏈可變區 CL-83083 & CL-83083-2的V L的核酸序列 caggcagggctgactcagccaccctcggtgtccaagggcttgagacagaccgccacactcacctgcactgggaacagcaacaatgttggcaacctaggagcagcttggctgcagcagcaccagggccaccctcccaaactcctatcctacaggaataataaccggccctcagggatctcagagagattctttgcatccaggtcaggaaacacagcctccctgaccattactggactccagcctgaggacgaggctgactattactgctcagcatgggacagcagcctcagtgcttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
108 CL-83083 完全輕鏈序列 CL-83083輕鏈的胺基酸序列 QAGLTQPPSVSKGLRQTATLTCTGNSNNVGNLGAAWLQQHQGHPPKLLSYRNNNRPSGISERFFASRSGNTASLTITGLQPEDEADYYCSAWDSSLSAWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFSPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVKKTVAPTECS
109 CL-83083 完全輕鏈序列 CL-83083輕鏈的核酸序列 caggcagggctgactcagccaccctcggtgtccaagggcttgagacagaccgccacactcacctgcactgggaacagcaacaatgttggcaacctaggagcagcttggctgcagcagcaccagggccaccctcccaaactcctatcctacaggaataataaccggccctcagggatctcagagagattctttgcatccaggtcaggaaacacagcctccctgaccattactggactccagcctgaggacgaggctgactattactgctcagcatgggacagcagcctcagtgcttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctccccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacaaaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtgaagaagacagtggcccctacagaatgttca
110 CL-83083-2 完全輕鏈序列 CL-83083-2輕鏈的胺基酸序列 QAGLTQPPSVSKGLRQTATLTCTGNSNNVGNLGAAWLQQHQGHPPKLLSYRNNNRPSGISERFFASRSGNTASLTITGLQPEDEADYYCSAWDSSLSAWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
111 CL-83083-2 完全輕鏈序列 CL-83083-2輕鏈的核酸序列 caagctggattgacacagcctcctagcgtgtccaagggcctgagacagaccgctacactgacctgcaccggcaactctaacaacgtgggcaatctgggcgctgcctggttgcagcagcatcagggacatcctccaaagctgctgtcctaccggaacaacaaccggccttccggcatctccgagcggttcttcgcttctagatccggcaataccgccagcctgaccatcactggactgcagcctgaggacgaggccgactactactgttctgcctgggactcctctctgtccgcctgggttttcggcggaggcacaaaactgacagtgctgggccagcctaaggccgctccttccgttacactgttccctccatcctccgaggaactgcaggccaacaaggctaccctcgtgtgcctgatctccgacttttaccctggcgctgtgaccgtggcctggaaggctgatagttctcctgtgaaggccggcgtggaaaccaccacaccttccaagcagtccaacaacaaatacgccgcctcctcctacctgtctctgacccctgaacagtggaagtcccacaagtcctacagctgccaagtgacccacgagggctccaccgtggaaaagacagtggctcctaccgagtgctcc
112 CL-82583 重鏈可變區 CL-82583的V H的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFYSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYGGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGQLERRRGGLNIWGQGTMVTVSS
113 CL-82583 重鏈可變區 CL-82583的V H的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttctatagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatggtggaactaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgacagccgaagacacggctgtgtattactgtgcgagagggcaactggaacgccgacggggcggtttgaatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcag
114 CL-82583 完全重鏈序列 CL-82583重鏈的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFYSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYGGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGQLERRRGGLNIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
115 CL-82583 完全重鏈序列 CL-82583重鏈的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttctatagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatggtggaactaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgacagccgaagacacggctgtgtattactgtgcgagagggcaactggaacgccgacggggcggtttgaatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
116 CL-82583 輕鏈可變區 CL-82583的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVRDDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPFTFGPGTKVDIK
117 CL-82583 輕鏈可變區 CL-82583的V L的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcgttagagatgatttaggttggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttatccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaac
118 CL-82583 完全輕鏈序列 CL-82583輕鏈的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVRDDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
119 CL-82583 完全輕鏈序列 CL-82583輕鏈的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcgttagagatgatttaggttggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttatccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
120 CL-82580 重鏈可變區 CL-82580的V H的胺基酸序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISAAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGYYGSGSRYRGYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
121 CL-82580 重鏈可變區 CL-82580的V H的核酸序列 caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcagggcttctggatacaccttcaccaattatgatatcaactgggtgcgacaggccactggacaagggcttgagtggatgggatggatgaaccctaacagtggtaacacaggctatgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccaggaacacctccataagcgcagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaagacacggccgtgtattactgtgcgagaggccgggggtactatggttcggggagccgttataggggctactactactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
122 CL-82580 完全重鏈序列 CL-82580重鏈的胺基酸序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISAAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGYYGSGSRYRGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
123 CL-82580 完全重鏈序列 CL-82580重鏈的核酸序列 caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcagggcttctggatacaccttcaccaattatgatatcaactgggtgcgacaggccactggacaagggcttgagtggatgggatggatgaaccctaacagtggtaacacaggctatgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccaggaacacctccataagcgcagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaagacacggccgtgtattactgtgcgagaggccgggggtactatggttcggggagccgttataggggctactactactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
124 CL-82580 輕鏈可變區 CL-82580的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKVLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSWTFGQGTKVEIK
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187 CL-82517 完全重鏈序列 CL-82517重鏈的核酸序列 gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtagtagacgttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtattactgtgcgagagcctatgggcaggtcgccccctactactactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
188 CL-82517 輕鏈可變區 CL-82517的V L的胺基酸序列 AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIK
189 CL-82517 輕鏈可變區 CL-82517的V L的核酸序列 gccatccagttgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagcagtgctttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagctcctaaactcctgatctatgatgcctccagtttggaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtcaacagtttaatagttacccgctcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaac
190 CL-82517 完全輕鏈序列 CL-82517輕鏈的胺基酸序列 AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
191 CL-82517 完全輕鏈序列 CL-82517輕鏈的核酸序列 gccatccagttgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagcagtgctttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagctcctaaactcctgatctatgatgcctccagtttggaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtcaacagtttaatagttacccgctcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
192 CL-82495 重鏈可變區 CL-82495的V H的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTLSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYSADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNRLRAEDTAVYYCARGGGYYGSGSHYRGYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
193 CL-82495 重鏈可變區 CL-82495的V H的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgaagcgtctggattcaccctcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggaatgatggaagtaataaatattctgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagactgagagccgaggacacggctgtgtattattgtgcgagagggggtggttactatggttcggggagtcattatagaggatactattactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
194 CL-82495 完全重鏈序列 CL-82495重鏈的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTLSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYSADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNRLRAEDTAVYYCARGGGYYGSGSHYRGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
195 CL-82495 完全重鏈序列 CL-82495重鏈的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgaagcgtctggattcaccctcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggaatgatggaagtaataaatattctgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagactgagagccgaggacacggctgtgtattattgtgcgagagggggtggttactatggttcggggagtcattatagaggatactattactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
196 CL-82495 輕鏈可變區 CL-82495的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKVEIK
197 CL-82495 輕鏈可變區 CL-82495的V L的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttacccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
198 CL-82495 完全輕鏈序列 CL-82495輕鏈的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
199 CL-82495 完全輕鏈序列 CL-82495輕鏈的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttacccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
200 CL-82473 重鏈可變區 CL-82473的V H的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVTVILYGGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGMLTYYYSSGFDYWGQGTLVTVSS
201 CL-82473 重鏈可變區 CL-82473的V H的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtaacagttatattgtatggtggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgtttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctcagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagggatgttaacgtattactatagttcggggtttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag
202 CL-82473 完全重鏈序列 CL-82473重鏈的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVTVILYGGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGMLTYYYSSGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
203 CL-82473 完全重鏈序列 CL-82473重鏈的核酸序列 caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtaacagttatattgtatggtggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgtttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctcagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagggatgttaacgtattactatagttcggggtttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
204 CL-82473 輕鏈可變區 CL-82473的V L的胺基酸序列 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPFTFGPGTKVDIK
205 CL-82473 輕鏈可變區 CL-82473的V L的核酸序列 gatgttgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccttggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaaagcctcgtatacagtgatggaaacacctacttgaattggtttcagcagaggccaggccaatctccaaggcgcctaatttataaggtttctaaccgggactctggggtcccagacagattcagcggcagtgggtcaggcactgatttcacactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaaggtacacactggccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaac
206 CL-82473 完全輕鏈序列 CL-82473輕鏈的胺基酸序列 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
207 CL-82473 完全輕鏈序列 CL-82473輕鏈的核酸序列 gatgttgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccttggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaaagcctcgtatacagtgatggaaacacctacttgaattggtttcagcagaggccaggccaatctccaaggcgcctaatttataaggtttctaaccgggactctggggtcccagacagattcagcggcagtgggtcaggcactgatttcacactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaaggtacacactggccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
208 CL-82455 重鏈可變區 CL-82455的V H的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGYYGSGKHYRGYYYNGMGVWGQGTPVTVSS
209 CL-82455 重鏈可變區 CL-82455的V H的核酸序列 caggtgcagttggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcaataactatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggaatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagggggtggttactatggttcggggaaacattatagaggctattactataacggtatgggcgtctggggccaagggaccccggtcaccgtctcctcag
210 CL-82455 完全重鏈序列 CL-82455重鏈的胺基酸序列 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGYYGSGKHYRGYYYNGMGVWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
211 CL-82455 完全重鏈序列 CL-82455重鏈的核酸序列 caggtgcagttggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcaataactatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggaatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagggggtggttactatggttcggggaaacattatagaggctattactataacggtatgggcgtctggggccaagggaccccggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
212 CL-82455 輕鏈可變區 CL-82455的V L的胺基酸序列 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEVTLTISSLQSEDFTIYYCQQYNNWPWTFGQGTKVDIK
213 CL-82455 輕鏈可變區 CL-82455的V L的核酸序列 gaaatagtgatgacgcagtctccagccaccctgtctgtgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcaacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatggtgcatccaccagggccactggtatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagaggtcactctcaccatcagcagcctgcagtctgaagattttacaatttattactgtcagcagtataataactggccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggatatcaaac
214 CL-82455 完全輕鏈序列 CL- CL-82455輕鏈的胺基酸序列 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEVTLTISSLQSEDFTIYYCQQYNNWPWTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
215 CL-82455 完全輕鏈序列 CL- CL-82455輕鏈的核酸序列 gaaatagtgatgacgcagtctccagccaccctgtctgtgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcaacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatggtgcatccaccagggccactggtatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagaggtcactctcaccatcagcagcctgcagtctgaagattttacaatttattactgtcagcagtataataactggccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggatatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
216 CL-83158 重鏈可變區 CL-83158的V H的胺基酸序列 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGKINHSGSTNYKPSLKSRVNISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCAREASMLRGVKGYRFYLYAMDVWGQGTSVTVSS
217 CL-83158 重鏈可變區 CL-83158的V H的核酸序列 caggtgcagctacaacagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtggttactactggagttggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattgggaaaatcaatcatagtggaagcaccaactacaaaccgtccctcaagagtcgagtcaacatatcagtagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgacctctgtgaccgccgcggacacggctgtgtattactgtgcgagagaggcctctatgcttcggggagttaaggggtatcgcttctacttatacgcaatggacgtctggggccaagggacctcggtcaccgtctcctcag
218 CL-83158 完全重鏈序列 CL- CL-83158重鏈的胺基酸序列 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGKINHSGSTNYKPSLKSRVNISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCAREASMLRGVKGYRFYLYAMDVWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGYYGSGKYYRGYYYNGMDVWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
219 CL-83158 完全重鏈序列 CL- CL-83158重鏈的核酸序列 caggtgcagctacaacagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtggttactactggagttggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattgggaaaatcaatcatagtggaagcaccaactacaaaccgtccctcaagagtcgagtcaacatatcagtagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgacctctgtgaccgccgcggacacggctgtgtattactgtgcgagagaggcctctatgcttcggggagttaaggggtatcgcttctacttatacgcaatggacgtctggggccaagggacctcggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
220 CL-83158 輕鏈可變區 CL-83158的V L的胺基酸序列 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQTPLLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVL
221 CL-83158 輕鏈可變區 CL-83158的V L的核酸序列 tcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacagacccctttacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaaccatgtggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
222 CL-83158 完全輕鏈序列 CL-83158輕鏈的胺基酸序列 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQTPLLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
223 CL-83158 完全輕鏈序列 CL-83158輕鏈的核酸序列 tcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacagacccctttacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaaccatgtggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
224 CL-148712 重鏈可變區 CL-148712的V H的胺基酸序列 EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFYSYAMNWVRQAPGKGLKWVSGISGSGDITYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMHSLRAEDTAVYYCAKGQLERRYYKYYGMDVWGQGTTVTVSS
225 CL-148712 重鏈可變區 CL-148712的V H的核酸序列 gaggtgcagctggtggagtctgggggagacttagtacagcctggggggtccctgagactctcttgtgcagcctctggattcaccttttacagctatgccatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctaaaatgggtctcaggtattagtggtagtggtgatatcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgcacagcctgagagccgaagacacggccgtatattactgtgcgaaaggccaactggaacgacggtactacaagtactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcag
226 CL-148712 完全重鏈序列 CL-148712重鏈的胺基酸序列 EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFYSYAMNWVRQAPGKGLKWVSGISGSGDITYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMHSLRAEDTAVYYCAKGQLERRYYKYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
227 CL-148712 完全重鏈序列 CL-148712重鏈的核酸序列 gaggtgcagctggtggagtctgggggagacttagtacagcctggggggtccctgagactctcttgtgcagcctctggattcaccttttacagctatgccatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctaaaatgggtctcaggtattagtggtagtggtgatatcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgcacagcctgagagccgaagacacggccgtatattactgtgcgaaaggccaactggaacgacggtactacaagtactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
228 CL-148712 輕鏈可變區 CL-148712的V L的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRANQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASSLKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQQNSYPLTFGGGTKVEIK
229 CL-148712 輕鏈可變區 CL-148712的V L的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaaatcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatggtgcatccagtttgaaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacctactattgtctacagcagaatagttacccgctcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaac
230 CL-148712 完全輕鏈序列 CL-148712輕鏈的胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRANQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASSLKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQQNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
231 CL-148712 完全輕鏈序列 CL-148712輕鏈的核酸序列 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaaatcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatggtgcatccagtttgaaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacctactattgtctacagcagaatagttacccgctcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
232 CL-148729 重鏈可變區 CL-148729的V H的胺基酸序列 AVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSGSTMHWVRQASGRGLEWVGRIRSKADSYATAYSASVKGRFTISRDDSKKMAYLQMNSLKTEDMAVYYCTRSGDYWGQGTLVTVSS
233 CL-148729 重鏈可變區 CL-148729的V H的核酸序列 gcggtgcagctggtggagtccgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctctactatgcactggtccgccaggcttccgggagagggctggagtgggttggccgtattagaagcaaagctgacagttacgcgacagcatatagtgcgtcggtgaaaggcaggttcaccatctccagagatgattcaaagaaaatggcgtatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacatggccgtgtattattgtactagaagcggggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag
234 CL-148729 完全重鏈序列 CL-148729重鏈的胺基酸序列 AVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSGSTMHWVRQASGRGLEWVGRIRSKADSYATAYSASVKGRFTISRDDSKKMAYLQMNSLKTEDMAVYYCTRSGDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
235 CL-148729 完全重鏈序列 CL-148729重鏈的核酸序列 gcggtgcagctggtggagtccgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctctactatgcactggtccgccaggcttccgggagagggctggagtgggttggccgtattagaagcaaagctgacagttacgcgacagcatatagtgcgtcggtgaaaggcaggttcaccatctccagagatgattcaaagaaaatggcgtatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacatggccgtgtattattgtactagaagcggggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
236 CL-148729 輕鏈可變區 CL-148729的V L的胺基酸序列 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGKNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDTNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLDITGLQTGDEADYYCGTWDISLSVGWLFGGGTKVTVL
237 CL-148729 輕鏈可變區 CL-148729的V L的核酸序列 cagtctgtgttgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatctcctgttctggaagcagctccaacattggaaaaaattatgtagcctggtaccagcaactcccaggaacagcccccaaactcctcatttatgacactaataagcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctggacatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatatcagcctgagtgttggttggctgttcggcggagggaccaaggtgaccgtcctag
238 CL-148729 完全輕鏈序列 CL-148729輕鏈的胺基酸序列 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGKNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDTNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLDITGLQTGDEADYYCGTWDISLSVGWLFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
239 CL-148729 完全輕鏈序列 CL-148729輕鏈的核酸序列 cagtctgtgttgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatctcctgttctggaagcagctccaacattggaaaaaattatgtagcctggtaccagcaactcccaggaacagcccccaaactcctcatttatgacactaataagcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctggacatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatatcagcctgagtgttggttggctgttcggcggagggaccaaggtgaccgtcctaggccagcctaaggccgctccttccgttacactgttccctccatcctccgaggaactgcaggccaacaaggctaccctcgtgtgcctgatctccgacttttaccctggcgctgtgaccgtggcctggaaggctgatagttctcctgtgaaggccggcgtggaaaccaccacaccttccaagcagtccaacaacaaatacgccgcctcctcctacctgtctctgacccctgaacagtggaagtcccacaagtcctacagctgccaagtgacccacgagggctccaccgtggaaaagacagtggctcctaccgagtgctcca
240 人類IgG1恆定區 IGHG1*01 人類重鏈恆定區(IGHG1*01)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgggtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
241 人類重鏈恆定區(IGHG1*01)蛋白質序列(P01857) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
242 人類IgG1恆定區 IGHG1*02或IGHG1*05 人類重鏈恆定區(IGHG1*02或IGHG1*05)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
243 人類重鏈恆定區(IGHG1*02)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
244 人類IgG1恆定區 IGHG1*03 人類重鏈恆定區(IGHG1*03)核苷酸序列(Y14737) gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
245 人類重鏈恆定區(IGHG1*03)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
246 人類IgG1恆定區 IGHG1*04 人類重鏈恆定區(IGHG1*04)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacatcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
247 人類重鏈恆定區(IGHG1*04)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
248 失能人類IgG1重鏈恆定區 失能人類IGHG1*01 失能人類IGHG1*01重鏈恆定區核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagtggagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcgcgggggcaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
249 失能人類IGHG1*01重鏈恆定區胺基酸序列。不同於野生型序列的兩個殘基經辨識呈粗體。 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL AG APSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
250 人類IgG2恆定區 IGHG2*01或IGHG2*04或IGHG2*05 人類重鏈恆定區(IGHG2*01或IGHG2*03或IGHG2*05)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
251 人類重鏈恆定區(IGHG2*01)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
252 人類IgG2恆定區 IGHG2*02 人類重鏈恆定區(IGHG2*02)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgacctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcatggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
253 人類重鏈恆定區(IGHG2*02)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
254 人類IgG2恆定區 IGHG2*04 人類重鏈恆定區(IGHG2*04)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
255 人類重鏈恆定區(IGHG2*04)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
256 人類IgG2恆定區 IGHG2*06 人類重鏈恆定區(IGHG2*06)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatctccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
257 人類重鏈恆定區(IGHG2*06)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
258 人類IgG4恆定區 IGHG4*01或IGHG4*04 人類重鏈恆定區(IGHG4*01或IGHG4*04)核苷酸序列 gcttccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggtaaa
259 人類重鏈恆定區(IGHG4*01)蛋白質序列(P01861) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
260 人類IgG4恆定區 IGHG4*02 人類重鏈恆定區(IGHG4*02)核苷酸序列 gcttccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccgtgcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctctgggtaaa
261 人類重鏈恆定區(IGHG4*02)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
262 人類IgG4恆定區 IGHG4*03 人類重鏈恆定區(IGHG4*03)核苷酸序列 gcttccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctctgggtaaa
263 人類重鏈恆定區(IGHG4*03)蛋白質序列 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
264 人類IgG4-PE恆定區 IGHG4- PE 人類重鏈恆定區(IGHG4-PE)核苷酸序列形式A gcctccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacggccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccagtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccatgcccagcgcctgaatttgaggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcatcgatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggatccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggtaaa
265 人類重鏈恆定區(IGHG4-PE)核苷酸序列形式B gcctccaccaagggacctagcgtgttccctctcgccccctgttccaggtccacaagcgagtccaccgctgccctcggctgtctggtgaaagactactttcccgagcccgtgaccgtctcctggaatagcggagccctgacctccggcgtgcacacatttcccgccgtgctgcagagcagcggactgtatagcctgagcagcgtggtgaccgtgcccagctccagcctcggcaccaaaacctacacctgcaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcgggtggagagcaagtacggccccccttgccctccttgtcctgcccctgagttcgagggaggaccctccgtgttcctgtttccccccaaacccaaggacaccctgatgatctcccggacacccgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtcagccaggaggaccccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaggtgcacaatgccaaaaccaagcccagggaggagcagttcaattccacctacagggtggtgagcgtgctgaccgtcctgcatcaggattggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggactgcccagctccatcgagaagaccatcagcaaggctaagggccagccgagggagccccaggtgtataccctgcctcctagccaggaagagatgaccaagaaccaagtgtccctgacctgcctggtgaagggattctacccctccgacatcgccgtggagtgggagagcaatggccagcccgagaacaactacaaaacaacccctcccgtgctcgatagcgacggcagcttctttctctacagccggctgacagtggacaagagcaggtggcaggagggcaacgtgttctcctgttccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagagcctctccctgtccctgggcaag
266 人類重鏈恆定區(IGHG4-PE)核苷酸序列形式C gccagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccttgcagcaggagcacctccgaatccacagctgccctgggctgtctggtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcgctctgacatccggcgtccacacctttcctgccgtcctgcagtcctccggcctctactccctgtcctccgtggtgaccgtgcctagctcctccctcggcaccaagacctacacctgtaacgtggaccacaaaccctccaacaccaaggtggacaaacgggtcgagagcaagtacggccctccctgccctccttgtcctgcccccgagttcgaaggcggacccagcgtgttcctgttccctcctaagcccaaggacaccctcatgatcagccggacacccgaggtgacctgcgtggtggtggatgtgagccaggaggaccctgaggtccagttcaactggtatgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagacaaagccccgggaagagcagttcaactccacctacagggtggtcagcgtgctgaccgtgctgcatcaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtcagcaataagggactgcccagcagcatcgagaagaccatctccaaggctaaaggccagccccgggaacctcaggtgtacaccctgcctcccagccaggaggagatgaccaagaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaagggattctacccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcccgagaacaattataagaccacccctcccgtcctcgacagcgacggatccttctttctgtactccaggctgaccgtggataagtccaggtggcaggaaggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgagcctgtccctgggaaag
267 人類重鏈恆定區(IGHG4-PE)蛋白質序列(胺基酸取代以粗體顯示) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP PCPAPEF EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
268 不活化人類IgG4恆定區 不活化IGHG4 不活化人類重鏈恆定區(IGHG4)核苷酸序列 gcctccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacggccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccagtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccatgcccagcgcctccagttgcggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcatcgatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggatccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggtaaa
269 不活化人類重鏈恆定區(IGHG4)蛋白質序列(相對於人類IgG4的不活化突變以粗體顯示) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP PCPAP PVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
270 人類Cκ恆定區 IGKC*01 人類 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*01)核苷酸序列 cgtacggtggccgctccctccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggaatccgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
271 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*01)胺基酸序列 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
272 人類Cκ恆定區 IGKC*02 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*02)核苷酸序列 cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggagagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgccggcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
273 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*02)胺基酸序列 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQESKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAGEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
274 人類Cκ恆定區 IGKC*03 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*03)核苷酸序列 cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagcggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggagagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
275 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*03)胺基酸序列 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQRKVDNALQSGNSQESVTEQESKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
276 人類Cκ恆定區 IGKC*04 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*04)核苷酸序列 cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaactctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
277 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*04)胺基酸序列 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKLYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
278 人類Cκ恆定區 IGKC*05 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*05)核苷酸序列 cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcaacaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc
279 Cκ輕鏈恆定區(IGKC*05)胺基酸序列 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSNTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
280 人類Cλ恆定區 IGLC1*01 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*01)核苷酸序列(ENST00000390321.2) cccaaggccaaccccacggtcactctgttcccgccctcctctgaggagctccaagccaacaaggccacactagtgtgtctgatcagtgacttctacccgggagctgtgacagtggcttggaaggcagatggcagccccgtcaaggcgggagtggagacgaccaaaccctccaaacagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcccgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
281 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*01)胺基酸序列(A0A075B6K8) PKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
282 人類Cλ恆定區 IGLC1*02 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*02)核苷酸序列形式A ggtcagcccaaggccaaccccactgtcactctgttcccgccctcctctgaggagctccaagccaacaaggccacactagtgtgtctgatcagtgacttctacccgggagctgtgacagtggcctggaaggcagatggcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccaaaccctccaaacagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcccgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
283 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*02)核苷酸序列形式B ggtcagcccaaggccaaccccactgtcactctgttcccgccctcctctgaggagctccaagccaacaaggccacactagtgtgtctgatcagtgacttctacccgggagctgtgacagtggcctggaaggcagatggcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccaaaccctccaaacagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcccgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
284 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*02)胺基酸序列 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
285 人類Cλ恆定區 IGLC2*01 Cλ輕鏈恆定區(IGLC2*01)核苷酸序列形式A ggccagcctaaggccgctccttctgtgaccctgttccccccatcctccgaggaactgcaggctaacaaggccaccctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgccgtgaccgtggcctggaaggctgatagctctcctgtgaaggccggcgtggaaaccaccaccccttccaagcagtccaacaacaaatacgccgcctcctcctacctgtccctgacccctgagcagtggaagtcccaccggtcctacagctgccaagtgacccacgagggctccaccgtggaaaagaccgtggctcctaccgagtgctcc
286 Cλ輕鏈恆定區(IGLC2*01)核苷酸序列形式B ggccagcctaaagctgcccccagcgtcaccctgtttcctccctccagcgaggagctccaggccaacaaggccaccctcgtgtgcctgatctccgacttctatcccggcgctgtgaccgtggcttggaaagccgactccagccctgtcaaagccggcgtggagaccaccacaccctccaagcagtccaacaacaagtacgccgcctccagctatctctccctgacccctgagcagtggaagtcccaccggtcctactcctgtcaggtgacccacgagggctccaccgtggaaaagaccgtcgcccccaccgagtgctcc
287 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*02)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
288 人類Cλ恆定區 IGLC2*02或IGLC2*03 Cλ輕鏈恆定區(IGLC2*02或IGLC2*03)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
289 Cλ輕鏈恆定區(IGLC2*02)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
290 人類Cλ恆定區 IGLC3*01 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*01)核苷酸序列 cccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagttgcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggggtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacaaaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagttgcccctacggaatgttca
291 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*01)胺基酸序列 PKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
292 人類Cλ恆定區 IGLC3*02 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*02)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccggggccagtgacagttgcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggggtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacaaaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacggaatgttca
293 Cλ輕鏈恆定區(IGLC1*02)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGPVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
294 人類Cλ恆定區 IGLC3*03 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*03)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacaaaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
295 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*03)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
296 人類Cλ恆定區 IGLC3*04 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*04)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca
297 Cλ輕鏈恆定區(IGLC3*04)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
298 人類Cλ恆定區 IGLC6*01 Cλ輕鏈恆定區(IGLC6*01)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccatcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgcctgatcagtgacttctacccgggagctgtgaaagtggcctggaaggcagatggcagccccgtcaacacgggagtggagaccaccacaccctccaaacagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctgcagaatgttca
299 Cλ輕鏈恆定區(IGLC6*01)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVKVAWKADGSPVNTGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
300 人類Cλ恆定區 IGLC7*01或IGLC7*02 Cλ輕鏈恆定區(IGLC7*01或IGLC7*02)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccatcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcgtaagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatggcagccccgtcaaggtgggagtggagaccaccaaaccctccaaacaaagcaacaacaagtatgcggccagcagctacctgagcctgacgcccgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccgggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctgcagaatgctct
301 Cλ輕鏈恆定區(IGLC7*01)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFYPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAECS
302 人類Cλ恆定區 IGLC7*03 Cλ輕鏈恆定區(IGLC7*03)核苷酸序列 ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcgtaagtgacttcaacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatggcagccccgtcaaggtgggagtggagaccaccaaaccctccaaacaaagcaacaacaagtatgcggccagcagctacctgagcctgacgcccgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccgggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctgcagaatgctct
303 Cλ輕鏈恆定區(IGLC7*03)胺基酸序列 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFNPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAECS
304 人類IgG4-PE恆定區 IGHG4-PE 人類重鏈恆定區(IGHG4-PE)核苷酸序列 (離胺酸剪切) gcttctaccaagggacccagcgtgttccctctggctccttgctccagatccacctccgagtctacagctgctctgggctgcctggtcaaggactactttcctgagcctgtgaccgtgtcttggaactctggcgctctgacatctggcgtgcacacattccctgctgtgctgcagtcctccggcctgtactctctgtcctctgtcgtgaccgtgccttcctctagcctgggcaccaagacctacacctgtaatgtggaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagcgcgtggaatctaagtacggccctccttgtcctccatgtcctgctccagagtttgaaggcggcccttccgtgtttctgttccctccaaagcctaaggacaccctgatgatctctcggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttcaactccacctacagagtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggccaagggccagcctcgagaaccccaggtttacaccctgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctcgtgaagggattctacccctccgatatcgccgtggaatgggagtctaatggccagccagagaacaactacaagacaacccctcctgtgctggactccgacggctccttctttctgtattcccgcctgaccgtggacaagtccagatggcaagagggcaacgtgttctcctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaatcactacacccagaagtccctgtctctgtccctgggc
305 人類IgG4-PE恆定區 IGHG4-PE 人類重鏈恆定區(IGHG4-PE)胺基酸序列(離胺酸剪切) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
306 人類IgG1恆定區(FES突變體) IGHG1 (FES突變體) 人類重鏈恆定區(IGHG1 (FES突變體))核苷酸序列 gcttctaccaagggacccagcgttttccctctggctccatcctccaagtctacctctggcggaacagctgctctgggctgcctggtcaaggactactttcctgagccagtgaccgtgtcttggaactctggcgctctgacatctggcgtgcacacctttccagctgtgctgcagtcctccggcctgtactctctgtcctctgtcgtgaccgtgccttccagctctctgggaacccagacctacatctgcaatgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaggtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccatgtcctgctccagagtttgaaggcggcccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatctctcggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtctcacgaggatcccgaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctacagagtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcctccatcgaaaagaccatctccaaggccaagggccagcctagggaaccccaggtttacaccttgccaccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgtctggttaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagtctaatggccagcctgagaacaactacaagacaacccctcctgtgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtccagatggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaagtccctgtctctgagccccggcaag
307 人類IgG1恆定區(FES突變體) IGHG1 (FES突變體) 人類重鏈恆定區(IGHG1 (FES突變體)) (胺基酸變化以 粗體顯示)胺基酸序列 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE FEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
308 IGHV3-30*18 IGHV3-30*18基因區段核苷酸序列 atggagtttgggctgagctgggttttcctcgttgctcttttaagaggtgtccagtgtcaggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatcatatgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgcgaaaga
309 IGHV3-73*02 IGHV3-73*02基因區段核苷酸序列 atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattttaaaaggtgtccagtgtgaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgaaactctcctgtgcagcctctgggttcaccttcagtggctctgctatgcactgggtccgccaggcttccgggaaagggctggagtgggttggccgtattagaagcaaagctaacagttacgcgacagcatatgctgcgtcggtgaaaggcaggttcaccatctccagagatgattcaaagaacacggcgtatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattactgtactagaca
310 IGHV4-31*03 IGHV4-31*03基因區段核苷酸序列 atgaaacacctgtggttcttcctcctgctggtggcagctcccagatgggtcctgtcccaggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagcagtggtggttactactggagctggatccgccagcacccagggaagggcctggagtggattgggtacatctattacagtgggagcacctactacaacccgtccctcaagagtcgagttaccatatcagtagacacgtctaagaaccagttctccctgaagctgagctctgtgactgccgcggacacggccgtgtattactgtgcgagaga
311 IGHV3-33*01 IGHV3-33*01基因區段核苷酸序列 atggagtttgggctgagctgggttttcctcgttgctcttttaagaggtgtccagtgtcaggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagtagctatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagaga
312 IGHV3-23*04 IGHV3-23*04基因區段核苷酸序列 atggagtttgggctgagctggctttttcttgtggctattttaaaaggtgtccagtgtgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcagctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtagcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgaaaga
313 IGHD3-16*02 IGHD3-16*02基因區段核苷酸序列 gtattatgattacgtttgggggagttatcgttatacc
314 IGHD3-9*01 IGHD3-9*01基因區段核苷酸序列 gtattacgatattttgactggttattataac
315 IGHD3-10*01 IGHD3-10*01基因區段核苷酸序列 gtattactatggttcggggagttattataac
316 IGHD1-20*01 IGHD1-20*01基因區段核苷酸序列 ggtataactggaacgac
317 IGHD1-1*01 IGHD1-1*01基因區段核苷酸序列 ggtacaactggaacgac
318 IGHJ6*02 IGHJ6*02基因區段核苷酸序列 attactactactactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcaggt
319 IGHJ3*02 IGHJ3*02基因區段核苷酸序列 tgatgcttttgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcaggt
320 IGKV1-17*01 IGKV1-17*01基因區段核苷酸序列 atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctgctctggttcccaggtgccaggtgtgacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcataatagttaccct
321 IGLV10-54*02 IGLV10-54*02基因區段核苷酸序列 atgccctgggctctgctcctcctgaccctcctcactcactctgcagtgtcagtggtccaggcagggctgactcagccaccctcggtgtccaagggcttgagacagaccgccacactcacctgcactgggaacagcaacattgttggcaaccaaggagcagcttggctgcagcagcaccagggccaccctcccaaactcctatcctacaggaataacaaccggccctcagggatctcagagagattctctgcatccaggtcaggaaacacagcctccctgaccattactggactccagcctgaggacgaggctgactattactgctcagcattggacagcagcctcagtgctca
322 IGKV2-28*01 IGKV2-28*01基因區段核苷酸序列 atgaggctccctgctcagctcctggggctgctaatgctctgggtctctggatccagtggggatattgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcctgcatagtaatggatacaactatttggattggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctatttgggttctaatcgggcctccggggtccctgacaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaagctctacaaactcctcc
323 IGKJ3*01 IGKJ3*01基因區段核苷酸序列 attcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaac
324 IGLJ3*02 IGLJ3*02基因區段核苷酸序列 ttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
325 IGKJ1*01 IGKJ1*01基因區段核苷酸序列 gtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
326 IGKJ4*01 IGKJ4*01基因區段核苷酸序列 gctcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaac
327 人類CXCL12阿爾發 CXCL12-阿爾發的胺基酸序列(Uniprot ID: P48061-2) MNAKVVVVLVLVLTALCLSDGKPVSLSYRCPCRFFESHVARANVKHLKILNTPNCALQIVARLKNNNRQVCIDPKLKWIQEYLEKALNK
8. 實例
以下實例說明抗CXCR4抗體的生長、特徵鑑定和性能。使用Kymouse TM(又名IntelliSelect TMTransgenic Mouse)生成抗體，這是一種能夠生成具有人類可變結構域(由人類V (D)和J基因區段以及小鼠恆定結構域生成)的抗體的轉殖基因小鼠平台。Kymouse TM(又名IntelliSelect TMTransgenic Mouse)系統描述於Lee et al.,2014, Complete humanization of the mouse immunoglobulin loci enables efficient therapeutic antibody discovery, Nature Biotechnology, 32(4):356-363、WO2011/004192、WO2011/158009與WO2013/061098中。這個計畫採用了Kymouse TM(又名IntelliSelect TMTransgenic Mouse) HK和HL品系。在HK品系中，免疫球蛋白重鏈基因座和輕鏈κ基因座是人源化的，而在HL品系中，免疫球蛋白重鏈基因座和輕鏈λ基因座是人源化的。
Kymouse TM(又名IntelliSelect TMTransgenic Mouse)使用傳統的12週細胞表現抗原免疫計畫表，以過度表現CXCR4的各種類型細胞株進行免疫，該計畫表包括每次免疫中的多次加打(表1)，以及鑑定出結合至人類CXCR4的抗體。抗體進行初次和二次篩選，如下文進一步詳述，以確定主要小組(lead panel)。
除非另有說明，否則所有蛋白質或肽(例如CXCR4、CXCR7和CXCL12)均為人類的。 實例1
(A)製備表現CXCR4或StaR ®CXCR4或CXCR7的MEF、DC2.4、CHO-S和HEK-293細胞用於免疫接種和篩選
生成穩定轉染的細胞株。訂購編碼密碼子經優化(針對哺乳動物表現) CXCR4 (SEQ ID NO：1) (組胺酸標記的人類CXCR4)、食蟹獼猴(cyno) CXCR4 (SEQ ID NO：7)、CXCR7 (SEQ ID NO：4)和StaR ®CXCR4的全長DNA序列作為合成DNA寡核苷酸，並被選殖到表現載體中受CMV或EF1α啟動子控制，側接3'和5' PiggyBac特定末端重複序列，這有助於穩定併入到細胞基因體中(參見：“A hyperactive piggyBactransposase for mammalian applications”; Yusa K., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 108(4): 1531-6, 2011 Jan 25)。關於生成表現CXCR4的細胞株，使用FreeStyle Max轉染試劑(Invitrogen)根據製造商說明書轉染人類胚腎-293 (HEK-293)細胞、中國倉鼠卵巢-S (CHO-S)細胞、小鼠樹突狀細胞(DC2.4)和小鼠胚胎纖維母細胞(MEF)細胞。為了生成食蟹獼猴CXCR4、CXCR7和StaR ®CXCR4細胞株，將CMV啟動子驅動的食蟹獼猴CXCR4、CXCR7和StaR ®CXCR4表現載體與piggyBac轉位酶共轉染至CHO-S細胞中，以生成僅只分別表現cyno CXCR4、CXCR7和StaR ®CXCR4抗原的細胞。使用抗CXCR4-藻紅蛋白(PE)偶聯抗體(FAB173P, R&D Systems)藉由流式細胞分析術評估CXCR4或StaR ®蛋白的表現。藉由流式細胞分析術使用抗CXCR4-PE偶聯抗體12G5 (R&D Systems)評估cyno CXCR4的表現。藉由流式細胞分析術使用抗CXCR7-PE螢光團偶聯抗體8F11-M16 (Biolegend)評估CXCR7的表現。評估抗原表現後，將穩定表現CXCR4的HEK-293和CHO-S細胞以及CXCR4 StaR ®CHO-S細胞針對CXCR4高度表現進行FACS分選。使用連續稀釋方法將穩定表現CXCR4的MEF細胞製成株系細胞株，並以高CXCR4表現按規模放大單一殖株。 實例2-免疫接種
Kymouse TM(又名IntelliSelect TMTransgenic Mouse) HK和HL品系是依照表1中所示方案，用表現CXCR4的細胞(HEK-293、DC2.4或CHO)或StaR ®DNA或StaR ®蛋白(單獨使用或組合使用進行免疫接種)進行免疫接種。表1詳列出在各個免疫接種階段(初打和加打)使用的Kymouse™品系和免疫原。 表 1 ：使用 Kymouse TM( 又名 IntelliSelect TMTransgenic Mouse) HK 和 HL 品系進行的免疫接種總結。
方案 小鼠 初打 加打 1 加打 2 加打 3 最後加打
KM157-B1 HK、HL hCXCR4 HEK-293細胞 hCXCR4 HEK-293細胞 hCXCR4 HEK-293細胞 hCXCR4 HEK-293細胞 hCXCR4 HEK-293細胞
KM161-B1 HK hCXCR4 DC2.4細胞 hCXCR4 DC2.4細胞 hCXCR4 DC2.4細胞 - hCXCR4 DC2.4細胞
KM173-B1 HL hCXCR4 StaR ®DNA hCXCR4 StaR ®蛋白 hCXCR4 StaR ®蛋白 - hCXCR4 StaR ®蛋白
使用尾靜脈流體動力注射，用CXCR4 StaR ®DNA對KM173-B1進行初打。Sigma佐劑系統用於所有KM157-B1和KM173-B1 StaR ®蛋白加打。Sigma佐劑僅用於KM161-B1初打。免疫接種和休息間隔通常為2至3週之間。藉由流式細胞分析術分析連續血液樣品的血清是否存在特異性抗體，並使用滴定數據(如果可能)來挑選用於B細胞分選的小鼠。 實例3-生成B細胞分選抗原以及抗體擷取和表現 (A)用於B細胞分選的CXCR4 StaR ®生成、純化和奈米盤(Nanodisc)併入
CXCR4經穩定受體蛋白(StaR ®)的生成、表現、純化和奈米盤併入、融合至綠色螢光蛋白(GFP)以生成螢光分選試劑用於標記和分離表現CXCR4反應性B細胞受體的B細胞。藉由定點突變產生經熱穩定的CXCR4變異體(基本上如WO2009/081136中所述)，然後選殖到昆蟲細胞表現載體中以生成融合至綠色螢光蛋白的重組蛋白(GFP；StaR ®)。接著使用桿狀病毒表現系統在昆蟲細胞中表現螢光StaR ®蛋白，並使用親和層析和粒徑排阻層析在清潔劑中進行純化。然後將經清潔劑純化的受體併入脂質-蛋白奈米盤中(參見“Preparation Of Nanodisc Reconstitution Mixtures”;www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/materialsscience/nanomaterials/ nanodisc-protocols.html)，並移除清潔劑，生成與活細胞一起使用會相容的受體試劑。 (B)分選表現抗CXCR4抗體的B細胞
使用基本上如WO2015/040401的實例1中所述的技術，從經免疫的小鼠回收表現抗CXCR4抗體的B細胞。根據對CXCR4的滴定反應從每次免疫活動中挑選經免疫的小鼠。簡言之，在免疫方案中從小鼠分離而來的脾臟和淋巴結細胞用螢光團偶聯的抗體和標記(CD19-PB、IgM-APC-Cy7、IgD-APC-Cy7、7-AAD)的混合物與經螢光標記的StaR ®CXCR4奈米盤-GFP進行染色，以螢光活化細胞分選(FACS)鑑別出感興趣的細胞。基於前向和側向散射性質挑選單一細胞，並排除7-AAD+死細胞。透過選擇IgM -IgD -細胞，針對類別轉換來富集CD19 +B細胞，並針對與StaR ®CXCR4-奈米盤-GFP的結合進一步挑選。IgM -IgD -CXCR4 +細胞被單細胞分選到溶解緩衝液中並在乾冰上速凍以保留RNA內容物。
使用RT-PCR和又兩輪PCR回收經單細胞分選的B細胞的V區序列，然後橋接到小鼠IgG1恆定區並在HEK-293細胞中表現。篩選HEK-293細胞上清液中是否存在CXCR4結合抗體，並生成感興趣的殖株清單。同時，也透NGS回收V區序列。這些被選殖到人類IgG4-PE恆定區載體中，而這些載體的DNA被用來瞬時轉染HEK-293細胞。然後篩選這些細胞的上清液中是否有功能性抗CXCR4抗體。 實例4-使用Mirrorball篩選技術初步篩選結合至細胞表現的CXCR4的B細胞表現的上清液
篩選從實例3的HEK-293轉染所收集的上清液與CHO-S細胞表面表現的CXCR4或StaR ®CXCR4的結合。將上清液以每孔10 µL (/孔)舖盤到經過非結合黑壁透明底部的經組織培養物處理的384孔盤(Corning)中。將陽性(R&D Systems, MAB170-SP)和陰性對照抗體(小鼠IgG2a，內部)以10 µL/孔的體積添加到含有PBS (Gibco)、1% BSA (Sigma)和0.1%疊氮化鈉(Severn Biotech)的所需孔中。以1.5 ×10 -7M的濃度加入陽性和陰性對照抗體，得到最終濃度為3.0 ×10 -8M。先前經染色並用Cell Trace Red (Life Technologies)的細胞(CXCR4或StaR ®CXCR4)以2 × 10 3/孔添加於體積為30 µL的PBS (Gibco)、1% BSA (Sigma)和0.1%疊氮化鈉(Severn Biotech)中。最後，以4 µg/mL的濃度加入10 µL Alexa Fluor 488標記的山羊抗小鼠抗體(Jackson Immuno Research)，得到最終濃度為0.8 µg/mL。將盤在4℃下培育過夜並在Mirroball (TTP Labtech)上讀取。
首先透過定義細胞大小的周長(例如20-200 µm)識別細胞群(CXCR4或StaR ®CXCR4)來鑑別抗體，這樣可以排除細胞碎片和細胞團塊等。進一步圈選出這個群以鑑別真實染色細胞群，供進一步分析AlexaFluor 488中值平均強度訊號，以便對孔值進行排序，從而與陽性和陰性對照抗體進行比較來識別抗體，從而給出結合值百分比(公式1)。抗體的挑選是基於使用Genedata Biologics (Genedata)生成的直方圖，這個直方圖表示從所有孔獲得的AlexaFluor 488通道的中值平均強度的整體分佈。當抗體頻率降低時，在直方圖尾部直觀地應用截止值(平均中值強度FLU) (表2)。進入二次篩選階段的抗體是從比較CXCR4和StaR ®CXCR4結合抗體來進行挑選，以鑑定每個細胞株的共有和獨特抗體。挑出所有共有抗體和CXCR4抗體以及StaR ®CXCR4細胞株獨有的抗體(表2)。
公式1：針對初步篩選計算結合%
非特異性結合(NSB)是指具有陰性對照抗體的孔的AlexaFluor 488中值平均強度的平均值。總結合(TB)是指具有陽性對照抗體的孔的AlexaFluor 488中值平均強度的平均值。 表 2 ：初步篩選結果總結
篩選的上清液 陽性結果 總選定的主要結果 中值平均截止值 (FLU)
CXCR4 StaR ® 細胞 CXCR4 細胞 CXCR4 StaR ® 細胞 CXCR4 細胞
502 27 42 44 ≧100 ≧250
259 39 78 83 ≧85 ≧160
216 14 8 17 ≧70 ≧50
由免疫接種篩選而來的上清液數量，以及針對結合至CXCR4或StaR ®CXCR4，符合初步篩選挑選標準的上清液數量的總結。表格詳列所篩選的上清液數量、陽性結果的數量和相關截止值。 實例5-結合至細胞表現之CXCR4的二次FACS篩選
測試來自實例3的上清液結合至表現CXCR4的CHO-S細胞的能力。將表現CXCR4的CHO-S細胞(參見實例1)或野生型對照細胞稀釋於FACS緩衝液(DPBS (Sigma) 1% BSA (Sigma) 0.1%疊氮化鈉(Severn Biotech))中，並以1 × 10 5個細胞/孔的密度分配至96孔V底盤(Greiner)中。將盤在4℃下以300 g離心3分鐘。關於上清液篩選，抽吸上清液並將25 µL未經稀釋的上清液或25 µL陽性對照抗體或陰性對照抗體添加到已洗滌的細胞。每個盤含有1 ×10 -8M的陽性或陰性對照抗體的特定孔。也使用陽性與陰性對照抗體從3 ×10 -8M來產生對照滴定曲線。將細胞在4℃下培育60分鐘。將盤在4℃下以300 g離心3分鐘，並添加100 µL FACS緩衝液來洗滌細胞。重複洗滌步驟又再兩次。為了偵測抗體結合，將在FACS緩衝液中稀釋至2 µg/mL的50 µL山羊抗小鼠AlexaFluor 647 (Jackson Immuno Research)加入細胞中。將細胞在4℃下培育60分鐘。將盤在4℃下以300 g離心3分鐘，並添加100 µL FACS緩衝液來洗滌細胞。重複洗滌步驟又再兩次。透過在4℃下添加25 µL 4%多聚甲醛歷時20分鐘來固定細胞。將盤在4℃下以300 g離心3分鐘，並添加100 µL FACS緩衝液來洗滌細胞。重複這些洗滌步驟又再兩次。如上所述將細胞洗滌一次並重新懸浮於100 µL FACS緩衝液中進行分析。藉由流式細胞分析術使用CytoFLEX (Beckman Coulter)測量AlexaFluor 647訊號強度(幾何平均值)。
使用Flow Jo分析軟體(Flow Jo LLC)，使用前向和側向散射功能圈選CHO-S細胞群。計算每孔被圈選出的CHO-S細胞獲得在647 nm處的幾何平均值(Alexa Fluor 647 Comp-FL4-A)，然後匯出到Excel表格(Microsoft)。計算陽性對照孔和陰性對照孔的幾何平均值的平均值。使用Genedata Biologics (Genedata)藉由計算各個抗體的結合百分比(公式2)與對照孔進行比較，評估每種抗體的結合。含有上清液的孔根據GeoMean，並與野生型對照細胞相比所應用的截止值(0%或5%)進行排名(表3)。
公式2：計算二次篩選的結合%：
非特異性結合(NSB)是指具有陰性對照抗體的孔的精平均幾何平均值。總結合(TB)是指具有陽性對照抗體的孔的幾何平均值的平均值。 表 3 ：二次篩選結果總結
篩選的上清液 針對功能特徵所挑出的二次結果
154 122
由初步篩選結果篩選出的上清液數量，以及針對結合至CXCR4滿足二次篩選挑選標準的上清液數量的總結。 實例6-傳訊抑制(cAMP及β抑制蛋白)
從二次篩選(表3，實例5)鑑定出的抗體以IgG4-PE形式小規模(0.1-3 mg)表現，並在BacMam CXCR4 HEK-293細胞中評估抑制CXCL12媒介抑制受毛喉素誘導的cAMP的能力。也透過β-抑制蛋白傳訊的抑制分析(Thermo Fisher)篩選選定的抗體。
(A) CXCR4對CXCL12抑制受毛喉素刺激的cAMP的抑制作用-兩個濃度篩選
HEK-293細胞在0.5 mM丁酸鈉存在下以1% v/v CXCR4 BacMam病毒(Genscript)感染24小時，並以25,000個細胞/孔接種在經膠原蛋白包覆的半區白色96孔盤(Corning)上。實驗當天，將抗體在含有0.1%牛血清白蛋白(BSA, Sigma)的Hanks緩衝鹽水溶液(HBSS, Sigma)中稀釋20倍。這些被進一步稀釋10倍。除非抗體儲液濃度低於10 μM，否則以500 nM和50 nM來篩選抗體。在向每孔添加50 μL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS, Sigma)之前，從表現CXCR4的HEK-293細胞中移除培養基，然後移除PBS並以二重複替換為20 μL抗體稀釋液。抗體在37℃下培育30分鐘。將毛喉素(Sigma)在含有2.5 mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX, Sigma)的HBSS + 0.1% BSA中稀釋至50 μM。然後使用這個溶液將CXCL12 (Genscript)稀釋至5 × EC 80(EC 80= 5.5 nM)最終分析濃度(FAC)。將5 μL 5 × EC 80CXCL12加入至細胞，並在37℃下培育又再20分鐘。然後使用HiRange cAMP套組(Cisbio)偵測cAMP。將提供的乾燥物重新懸浮於5 mL H 2O中，生成20 × cAMP-d2和抗cAMP-c穴狀化合物抗體儲液。然後這些儲液在套組溶解緩衝液中稀釋20倍並向各孔加入12.4 μL各個偵測試劑。將細胞在室溫(RT)下置於平盤搖床上1小時，然後使用標準HTRF方案在PHERAstar FS微量讀盤儀(BMG Labtech)上讀取盤，激發為335 nm並在620 nm和665 nm下讀取發射。如公式3中計算HTRF比，按公式4計算抑制%。兩次濃度篩選的技術結果是基於對應於展現出HTRF值低於平均EC 80訊號之值(該盤扣除EC 80對照孔的3×標準差)的任何孔的結果。
基於在500 nM下展現出＞80%抑制作用來挑選要進行的結果。對於那些在低於此濃度下測試表現較差的抗體，也進行那些基於理論30 nM濃度反應曲線預測展現良好效力的抗體。在篩選的122個二次結果中，有22個進行了進一步特徵鑑定。
公式3：計算HTRF比
公式4：計算cAMP反應的抑制%
(B) CRXR4對CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP的抑制作用-全抑制曲線分析
HEK-293細胞(Thermo Fisher)在0.5 mM丁酸鈉(Sigma)存在下以1% v/v CXCR4 BacMam病毒感染24小時，並以25,000個細胞/孔接種在經膠原蛋白包覆的半區白色96孔盤(Corning)上。次日，將抗體連續稀釋在Hanks緩衝鹽水溶液(HBSS)中以生成10點1/2 log連續稀釋(最終分析濃度範圍500 nM至15 pM)。在向每孔添加50 μL PBS之前，從表現CXCR4的HEK-293細胞中移除培養基。然後移除PBS，並以二重複替換為20 μL抗體稀釋液。抗體在37℃下培育30分鐘。將毛喉素在含有2.5 mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)的HBSS + 0.1% BSA中稀釋至50 μM。然後使用這個溶液將CXCL12稀釋至5 × EC 80(EC 80= 5.5 nM)最終分析濃度(FAC)。將5 μL的5 ×EC 80CXCL12加入至細胞，並在37℃下培育又再20分鐘。然後使用HiRange cAMP套組(Cisbio)偵測cAMP。藉由將提供的乾燥物重新懸浮於5 mL H 2O中，生成20 × cAMP-d2和抗cAMP-穴狀化合物抗體儲液。然後這些儲液在套組溶解緩衝液中稀釋20倍並向各孔加入12.4 μL各個偵測試劑。將細胞在室溫(RT)下置於平盤搖床上1小時，然後使用標準HTRF方案在PHERAstar FS微量讀盤儀(BMG Labtech)上讀取盤，激發為335 nm並在620 nm和665 nm下讀取發射。
HTRF比如公式3中進行計算。按照公式4將數據標準化。在GraphPad Prism version 7 (GraphPad Prism Software, Inc., San Diego, CA)中將數據擬合至4參數S形劑量反應曲線(公式5)。
公式5：4參數S形劑量反應擬合
其中log IC 50是抑制CXCL12反應達50%的log濃度(以M為單位)，而最大抑制%是CXCL12的最大抑制(取自曲線的最小漸近線，即「底部」)。Log IC 50可用公式6轉換為IC 50。
公式6-由log IC 50計算IC 50
與人類IgG4-PE同型對照相比，活性為5.5 nM (EC 80)的CXCL12對受毛喉素誘導的cAMP活性受到呈IgG4-PE形式的22種抗體以奈莫耳到低於奈莫耳的效力抑制(表4)。 表 4. CXCR4 對 CXCL12 媒介抑制受毛喉素刺激的 cAMP 的抑制作用進行全抑制曲線分析的純化上清液數量的總結。
抗體 IC 50(nM) ± SD 最大抑制 % ± SD 重複 #
CL-82551 39 ± 14 92 ± 7 3
CL-82658 23 ± 9 98 ± 6 3
CL-82583 28 ± 10 91 ± 8 3
CL-82580 46 ± 9 90 ± 4 3
CL-82495 27 ± 9 96 ± 5 3
CL-82455 91 ± 37 103 ± 12 3
CL-82458 40 ± 12 88 ± 9 3
CL-82558 29 ± 27 94 ± 26 3
CL-82577 29 ± 10 92 ± 7 3
CL-82523 24 ± 7 87 ± 5 3
CL-82562 99 ± 51 92 ± 7 3
CL-83083 36 ± 14 80 ± 4 3
CL-83083-2 44 ± 14 93 ±4 3
CL-82571 44 ± 19 88 ± 15 3
CL-83158 68 ± 28 91 ± 17 3
CL-82517 34 ± 9 79 ± 16 3
CL-82556 17 ± 5 94 ± 8 3
CL-82574 21 ± 4 96 ± 8 3
CL-82541 74 ± 37 87 ± 18 3
CL-82473 ＞1000 - 3
CL-148729 6 ± 4 114 ± 10 3
CL-148712 19 ± 4 105 ± 19 3
基準 1 IgG4-PE 31 ± 14 87 ± 9 -
同型對照 IgG4-PE 無抑制 - 3
IC 50；產生50%活性抑制所需的抗體平均濃度(nM；奈莫耳)。 SD；標準差。
(C)抑制β抑制蛋白傳訊
在基於功能性細胞的報導基因分析(Invitrogen)中篩選抗CXCR4抗體，並依據其抑制CXCL12誘導的β-抑制蛋白徵集的能力來評估其效力。將Tango CXCR4-bla U2OS細胞(Invitrogen)以10,000個細胞/孔、20 µL/孔接種到經組織培養物處理的384孔透明平底黑色盤(Corning)中，並在37℃，5% CO 2下於包含補充有1%透析FBS (Gibco)、0.1 mM NEAA (Gibco)、25 mM HEPES (Gibco)和100 U/mL 青黴素/鏈黴素(Invitrogen)的DMEM的分析培養基中血清飢餓24小時。將以4×稀釋於分析培養基中(8點，範圍從160 nM 到2 pM，二重複，稀釋倍數為4)的10 µL/孔抗體或分析培養基添加至細胞並在37℃、5% CO 2下培育30分鐘。在分析培養基中以2×製備的CXCL12 (Genscript)連續稀釋液(8個稀釋液，範圍從1 µM到61 pM，稀釋倍數為4，二重複)，並將20 µL/孔添加到未用抗體處理的細胞。然後將在分析培養基中以4×稀釋=120 nM的10 µL/孔CXCL12 (EC 80=30 nM)或分析培養基添加到有抗體的細胞。各盤含有無細胞對照孔、含有未經處理細胞的陰性對照孔，以及含有用CXCL12 EC 80處理的細胞的陽性對照孔以及CXCL12滴定以確認各盤中的EC 80值。在37℃，5% CO 2下培育5小時後，將盤在室溫下平衡10分鐘，然後根據製造商的建議(Invitrogen)添加8 µL/孔以6×製備的LiveBLAzer™-FRET Substrate Mixture。將盤在室溫下在暗處中培育60分鐘，之後使用Envision讀盤儀(Perkin Elmer)在409/20 nm下激發並在460/40 nm和530/30 nm下偵測來測量底部螢光。
使用Excel和GraphPad Prism (version 7)分析螢光計數。計算無細胞對照孔在460 nm(平均藍色背景)和530 nm(平均綠色背景)下的平均螢光。然後從460 nm處藍色螢光的所有原始值中扣除平均藍色背景；從530 nm處綠色螢光的所有原始值中扣除平均綠色背景。以這種方式獲得的值被稱為淨藍色螢光和淨綠色螢光。然後透過將淨藍色螢光值除以淨綠色螢光值來計算藍色/綠色螢光比。平均陰性比對應於陰性對照孔獲得的藍色/綠色螢光比值的平均值，其含有未經處理的細胞。最後，將藍色/綠色螢光比值除以平均陰性比來計算所有孔的反應比。然後在GraphPad Prism中針對抗體濃度繪製各個抗體所獲得的反應比。使用非線性回歸，繪製具有可變斜率的抑制劑量反應曲線，並計算各個抗體的IC 50值(公式5)。因此，按效力對抗體進行排序。
與人類IgG4-PE同型對照相比，30 nM CXCL12所誘導的β-抑制蛋白徵集受到22種抗體以奈莫耳到低於奈莫耳的效力抑制(表5)。 表 5. 人類 CXCR4 抑制 β- 抑制蛋白徵集的全抑制曲線分析進行的純化上清液數量的總結。
抗體 IC 50(nM) ± SD 最大抑制 % ± SD 重複 #
CL-82551 1.56 ± 0.26 98.15 ± 3.03 3
CL-82658 0.35 ± 0.10 100.0 ± 3.94 3
CL-82583 0.17 ± 0.09 94.03 ± 13.1 3
CL-82580 1.15 ± 0.31 100.1 ± 1.40 3
CL-82495 2.08 ± 0.93 98.90 ± 4.10 3
CL-82455 9.12 ± 7.95 86.81 ± 15.8 3
CL-82458 0.31 ± 0.07 101.8 ± 3.05 3
CL-82558 0.07 ± 0.03 99.46 ± 2.16 4
CL-82577 0.24 ± 0.05 101.5 ± 2.93 3
CL-82523 0.08 ± 0.04 100.7 ± 1.69 4
CL-82562 0.52 ± 0.19 100.9 ± 3.59 3
CL-83083 0.43 ± 0.06 98.91 ± 1.40 2
CL-83083-2 0.79 ± 0.41 96.86 ± 8.15 3
CL-82571 1.00 ± 0.23 85.61 ± 33.8 3
CL-83158 1.43 ± 1.30 99.25 ± 2.38 3
CL-82517 0.84 ± 0.45 89.56 ± 20.7 3
CL-82556 0.14 ± 0.11 100.6 ± 2.63 4
CL-82574 0.14 ± 0.11 99.46 ± 1.41 4
CL-82541 0.38 ± 0.14 97.15 ± 0.78 3
CL-82473 ＞120 85.01 ± 7.56 3
CL-148729 0.11 ± 0.00 99.60 ± 2.66 2
CL-148712 0.19 ± 0.03 98.42 ± 5.97 2
基準 1 (IgG4-PE) 0.25 ± 0.13 100.9 ± 1.13 4
同型對照 IgG4-PE ＞120 10.06 ± 8.53 4
IC 50；產生50%活性抑制所需的抗體平均濃度(nM；奈莫耳)。 SD；標準差。 實例7-抑制CXCL12結合
被鑑定為對透過cAMP和β-抑制蛋白傳訊抑制CXCR4傳訊具有效用的抗體進一步使用TR-FRET基於細胞的配體抑制分析(Cisbio)針對CXCL12抑制進行特徵鑑定。關於這些實驗，抗CXCR4抗體和基準抗體被格式化為IgG4-PE抗體。準備就緒的铽標記SNAP-CXCR4 HEK-293細胞購自Cisbio (C1TT1CXCR4)。在1 × Tag-Lite緩衝液(TLB, Cisbio)中以4 ×最終分析濃度製備10點1/2 log抗體稀釋液，並將5 μL加入白色384孔proxiplate (PerkinElmer)中。在低光條件下，將AlexaFluor 647-CXCL12 (Almac)在TLB中稀釋至160 nM，並在各孔中加入5 μL。總結合和非特異性結合(NSB)分別由AlexaFluor 647-CXCL12單獨和在50 μM AMD-3100存在下測定。將準備就緒分析的細胞解凍至5 mL TLB中，並在335 ×g下離心5分鐘以沉澱細胞。移除上清液，並將細胞沉澱物重新懸浮於TLB中至0.6 × 10 6個細胞/ml。在低光條件下向每孔添加10 μL細胞，然後在室溫下培育2 h。使用標準HTRF方案在PHERAstar FS上讀取盤(在335 nm下激發，並在620 nm和665 nm下讀取發射)。
HTRF比如公式3中所述計算，特異性結合如公式7中計算。
公式7：計算特異性結合 發現所有測試的抗體均抑制CXCL12結合至表現CXCR4的細胞。最大抑制範圍為96 ± 1至101 ± 11%，抗體IC 50值範圍為3.92 ± 1.95至0.55 ± 0.04 nM (表6)。 表6. CXCL12結合至人類CXCR4的抑制作用的全抑制曲線分析的純化上清液數量的總結。
抗體 IC 50(nM) ± SD 最大抑制 % ± SD 重複數
CL-82523 0.55 ± 0.04 101 ± 0 3
CL-82556 0.70 ± 0.15 99 ± 0 3
CL-82583 0.72 ± 0.08 98 ± 1 3
CL-82577 0.92 ± 0.15 98 ± 0 3
CL-82541 1.16 ± 0.09 97 ± 0 3
CL-82562 0.86 ± 0.07 100 ± 1 3
CL-82455 3.68 ± 1.37 98 ± 2 3
CL-82473 1.20 ± 0.06 98 ± 7 3
CL-82458 0.79 ± 0.03 99 ± 0 3
CL-82658 1.04 ± 0.25 100 ± 2 3
CL-82558 0.57 ± 0.01 101 ± 2 3
CL-83158 3.36 ± 1.35 101 ± 11 3
CL-82574 0.63 ± 0.18 98 ± 0 3
CL-83083 1.74 ± 0.60 96 ± 1 3
CL-83083-2 3.92 ± 1.95 97 ± 1 4
CL-82517 1.06 ± 0.42 96 ± 2 3
CL-82571 1.47 ± 0.15 96 ± 1 3
CL-82580 1.41 ± 0.16 97 ± 1 3
CL-82551 1.21 ± 0.23 98 ± 1 3
CL-82495 1.71 ± 0.23 100 ± 1 3
基準 1 IgG4-PE 1.34 ± 0.27 97 ± 2 -
同型對照 IgG4-PE 無結合 無結合 3
IC 50；產生50%活性抑制所需的抗體平均濃度(nM；奈莫耳)。 SD；標準差。 實例8-在Ramos細胞上抗CXCR4抗體的內化
測試呈IgG4-PE形式的選定CXCR4特異性mAb和同型對照(IgG4-PE)內化到表現CXCR4的細胞(Ramos；B 細胞淋巴瘤細胞株，ATCC)中的能力。首先用IncuCyte TMCytoLight Rapid Green Reagent (Essen BioScience)對Ramos細胞進行非特異性標記，用FBS洗去多餘標記，然後將細胞以大約150,00個細胞/孔(15 µL/孔)接種到384孔組織培養盤中。在RPMI + 10% FBS中製備抗體稀釋液。抗體的最終分析濃度為100 nM、31.6 nM、10 nM、3.17 nM、1 nM和0.32 nM。如果被內化，分子會穿梭至溶小體，其中pH約為4.5至5.0。pHrodo染料在中性pH下幾乎為無螢光的，但在酸性環境中會發出明亮螢光。山羊抗人類IgG、Fcγ片段特異性(Jackson ImmunoResearch)-pHrodo Red標記的二級抗體(內部)相對於起始抗體濃度按照3：1的莫耳比使用(即最終分析濃度：300 nM、94.95 nM、30 nM、9.51 nM、3 nM和0.96 nM)。將15 µL/孔的抗體試劑稀釋液加入細胞，並將盤在IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System (Essen BioScience)中於37℃下培育，並使用20×物鏡連續成像至多50小時，按規律(約2小時)間隔收集相位、紅色和綠色螢光影像。
培育後，使用IncuCyte TMS3 2018A軟體包(Essen BioScience)進行影像分析。分別針對匯合、綠色和紅色物體定義處理定義，然後使用綠色和紅色螢光總重疊目標區域(每個影像µm 2)來量化內化。在GraphPad Prism中繪製總重疊訊號的時間依賴性，並確定每種抗體隨時間的最大訊號(總重疊目標區域)。
觀察到抗體內化，且這個效用是抗體特異性的和濃度依賴性的。所有抗體的內化峰值均在細胞加載的前960 min (16小時)內觀察到。基於最大訊號值的抗體排序為：CL-82558 (SEQ ID NO：60和70)、基準1 (IgG4-PE)、CL-82458 (SEQ ID NO：39和49)、CL-82658 (SEQ ID NO：81和91)、CL-82574 (SEQ ID NO：18和28)、人類抗CD20抗體、CL-83083 (SEQ ID NO：102和112)和人類同型對照(IgG4-PE) (圖1，表7)。所測試的抗體被認為呈內化陽性。 表 7. 基於最大訊號值的抗體排序
抗體 最大訊號 ( 總重疊目標區域 )
CL-82558 23911.3
基準 1 (IgG4-PE) 21241.4
CL-82458 20801.6
CL-82658 18925.2
CL-82574 18105.8
陽性對照 ( 人類抗 -CD20 抗體 ) 13916.2
CL-83083 9668.6
同型對照 (IgG4-PE) 6788.6
訊號顯示抗體達到的最大內化。 實例9-抗CXCR4抗體對Jurkat和初代T細胞的細胞凋亡
(A)使用抗CXCR4抗體與Jurkat細胞評估細胞凋亡
使用Jurkat細胞(永生化T細胞株)，將五種呈IgG4-PE形式的抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574、CL-83083)與適當的人類同型對照抗體(IgG4-PE)和基準抗CXCR4抗體、基準1 (IgG4-PE形式)一起在初代初始T細胞凋亡分析中進行測試。
將抗體稀釋於含有10% v/v胎牛血清(FBS)的RPMI培養基(Gibco) (完整RPMI)中，以生成2 ×最終分析濃度的10點1/2 log連續稀釋液。將抗Fas抗體殖株CH11 (Millipore)稀釋至200 nM並作為細胞凋亡的陽性對照，而IgM和IgG4-PE同型對照作為陰性對照。將100 μL抗體稀釋液加入96孔全面積平底盤(Corning)。Jurkat細胞在完全RPMI中稀釋至1 × 10 6個細胞/mL，並向每個孔加入100 μL細胞。然後將盤在37℃、5% CO 2下培育24小時。
次日，藉由將5×膜聯蛋白緩衝液(Thermo Fisher)在水中稀釋5倍來製備膜聯蛋白緩衝液。藉由將1 mg/mL儲液(Thermo Fisher)在膜聯蛋白緩衝液中稀釋100倍，製備10 μg/mL碘化丙啶(PI)工作溶液。將細胞重新懸浮並轉移至V底96孔儲存盤(Corning)。將盤以300 × g離心5分鐘以沉澱細胞。小心移除上清液，並將細胞重新懸浮於100 μL冷PBS中。然後將盤再次離心(300 ×g，5 min)。小心移除上清液，並將細胞重新懸浮於85 μL膜聯蛋白緩衝液中。將5 μL AF647-膜聯蛋白V (Thermo Fisher)和10 μL 10 μg/mL PI溶液添加到每個孔中，但用於在流式細胞分析儀和圈圍的設置補償控制的單染色對照孔除外。細胞在室溫、暗處中染色15分鐘。
染色後，使用FACS Canto II (BD BioSciences)藉由流式細胞分析術分析細胞的細胞凋亡。凋亡早期的細胞顯示AF647-膜聯蛋白V染色陽性，而凋亡晚期的細胞呈現PI和AF647-膜聯蛋白V染色均陽性。
細胞凋亡誘導的測量結果表示為SIA的平均值± S.D. (公式8)，表示為抗Fas誘導的細胞凋亡% (視為100%)，並且是基於以二重複進行的3個獨立實驗的膜聯蛋白V+染色結果。
抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574、CL-83083)和同型對照(IgG4-PE)未顯示出濃度依賴性的細胞凋亡增加；特異性誘導的細胞凋亡(SIA；表示為抗Fas反應%)的最大%為-4.9至1.4%。相較之下，基準1 (IgG4-PE)顯示細胞凋亡的濃度依賴性增加，最大SIA反應%為34%。數據總結於表8中。 表 8. 由 可溶性抗 CXCR4 抗體和對照誘導的 Jurkat T 細胞凋亡。
抗體 % SIA S.D n
無抗體 -Jurkat 細胞 0 0.0 3
抗 Fas 陽性對照 100 0 3
同型對照 (IgG4-PE) 0 0
基準 1 (IgG4-PE) 33.9 2.4 3
CL-82558 -1.9 3.4 2
CL-82458 -4.9 5.6 3
CL-82574 1.4 3.5 3
CL-82658 -4.1 5.8 3
CL-83083 -1.7 3.1 3
SIA；特異性誘導細胞凋亡。S.D.；標準差。N；分析重複數。
(B)使用抗CXCR4抗體與初代初始T細胞評估細胞凋亡
在初代初始T細胞凋亡分析中將五種呈IgG4-PE形式的抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574、CL-83083)與適當的同型對照抗體IgG4-PE和基準抗CXCR4抗體基準1 (IgG4-PE形式)進行測試。透過膜聯蛋白V結合和依據流式細胞分析術的細胞對活/死染料的通透性來評估抗體誘導的初始人類T細胞凋亡。
(i)分離初代初始T細胞
周邊血液單核細胞(PBMC)是從由健康人類捐贈者血液製備的白血球錐中分離出來的，並得到研究倫理委員會的批准。根據製造商的說明書，使用泛T細胞分離套組(Stemcell Technologies)藉由陰性選擇從PBMC分離出初代人類T細胞。
(ii)使用可溶性抗體進行初代初始T細胞凋亡分析
將初始T細胞以5 × 10 5個細胞/孔接種到96孔平底板(Corning Inc.)的100 µL RPMI + 1% FCS (完全培養基)中。將五種抗CXCR4抗體或適當的同型對照(IgG4-PE)抗體和X-連接子Affinipure (Fab') 2片段山羊抗人類IgG Fc片段特異性抗體(Jackson ImmunoResearch) (加入此分析中以促進抗體交聯)以1：1莫耳比稀釋在完全培養基中，並使用連續3倍稀釋液進行滴定，得到最終濃度範圍為4.44至120 nM。將抗體以2 ×濃度加入100 µL/孔完全培養基中來複製T細胞孔，並將細胞在37℃、5% CO 2下培育過夜(~18小時)。作為細胞凋亡誘導的陽性對照，星形孢菌素(Abcam)以1 µM的最終濃度按二重複添加到對照孔中。次日，從分析盤中回收細胞懸浮液，並轉移至深孔V底96孔板(Thermo Fisher)，以供膜聯蛋白V和活/死可固定黃色死細胞染劑(皆為Thermo Fisher)染色。以4℃下以350 × g離心10分鐘沉澱細胞，然後以200 µL/孔的1 ×膜聯蛋白V結合緩衝液(由5 ×濃縮物製備；Thermo Fisher)洗滌一次。然後將細胞重新懸浮於100 µL 1 ×膜聯蛋白V結合緩衝液中，該緩衝液含有5 µL膜聯蛋白V Alexa Fluor 488結合物和1 µL 1：10稀釋的活/死可固定黃色死細胞染劑，並在室溫下避光培育15分鐘。T細胞也以膜聯蛋白V Alexa Fluor 488結合物或單獨的活/死可固定黃色死細胞染劑進行二重複染色，以製備用於補償的單染色對照。培育結束時，向每個孔添加200 µL的1 ×膜聯蛋白V結合緩衝液，並將盤在4℃下以350 × g離心10分鐘。藉由重新懸浮於100 µL/孔的4%多聚甲醛(PFA)/PBS (Affymetrix)中並在室溫下培育15-20分鐘來固定細胞。以4℃下以400 × g離心10分鐘沉澱細胞，然後重新懸浮於300 µL/孔的1 ×膜聯蛋白V結合緩衝液中，以便在Attune NxT流式細胞分析儀上進行分析。
細胞凋亡誘導的測量結果表示為特異性誘導的細胞凋亡(SIA)的平均值+/- S.D. (公式8)，表示為星形孢菌素誘導的細胞凋亡的百分比(視為100%)，並且基於二重複樣品的膜聯蛋白V+染色結果。
公式8：計算特異性誘導細胞凋亡(SIA) SIA = 特異性誘導細胞凋亡 化合物誘導的=由抗CXCR4抗體、人類IgG4-PE同型對照或星形孢菌素誘導的細胞凋亡 自發的 = 僅接受培養基的孔中T細胞的背景細胞凋亡
(iii)使用盤結合抗體的初代初始T細胞凋亡分析
抗CXCR4抗體或適當的同型對照抗體人類IgG4-PE在PBS中以1：3連續稀釋，得到最終濃度範圍為4.44至120 nM抗體。將100 µL等分樣品加入到96孔EIA/RIA平底高結合微孔盤(Corning Inc.)的二重複孔中，並在室溫下培育至少1小時。然後從孔中吸出抗體，並將新鮮分離的T細胞以5 × 10 5個細胞/孔在200 µL分析培養基中接種到經抗體預包覆的盤上。將細胞與盤結合抗體在37℃、5% CO 2下培育過夜(~18小時)。次日，透過劇烈上下移液從分析盤回收細胞，並轉移至深孔V底96孔盤，以膜聯蛋白V和活/死可固定黃色死細胞染劑染色並分析細胞凋亡，如前所述(章節b)。
當以可溶形式與交聯劑一起使用時，五種抗CXCR4抗體或基準抗體基準1中的任何一者都沒有觀察到明顯的細胞凋亡誘導。所有抗CXCR4使用盤結合抗體誘導的細胞凋亡均低於基準1 (IgG4-PE)觀察到的，基準1 (IgG4-PE)誘導7-21%的T細胞凋亡。總結不同T細胞捐贈者的可溶性+交聯劑(表9)和盤結合(表10)抗體在最高測試抗體濃度(120 nM)下的SIA% (表示為星形孢菌素誘導的細胞凋亡%)。 表 9. 可溶性抗 CXCR4 抗體與交聯劑誘導的細胞凋亡。
治療 誘導的細胞凋亡 %
T 細胞捐贈者 D0441 D0448 D0455 D0464
僅 T 細胞 0.5 0.0 -0.1 0.3
星形孢菌素 100 100 100 100
同型對照 (IgG4-PE) -0.5 -1.5 -0.8 0.0
基準 1 IgG4-PE 3.2 -1.7 0.5 2.1
CL-82558 N.d. N.d. 0.5 1.5
CL-82458 N.d. N.d. -0.3 0.1
CL-82574 N.d. N.d. 0.4 0.7
CL-82658 N.d. N.d. 0.9 0.1
CL-83083 N.d. N.d. -1.1 0.9
N.d.；未測定 表 10. 由板結合抗 CXCR4 抗體誘導的細胞凋亡。
治療 誘導的細胞凋亡 %
T 細胞捐贈者 D0441 D0448 D0455 D0464
僅 T 細胞 -1.1 -1.0 0.3 0.3
星形孢菌素 100 100 100 100
同型對照 (IgG4-PE) -0.1 -0.6 1.4 -0.1
基準 1 (IgG4-PE) 7.9 6.8 20.6 15.4
CL-82558 N.d. N.d. 7.0 3.6
CL-82458 N.d. N.d. 2.4 3.6
CL-82574 N.d. N.d. 8.6 5.4
CL-82658 N.d. N.d. 6.4 7.7
CL-83083 N.d. N.d. 3.8 7.4
N.d.；未測定 實例10-食蟹獼猴交叉反應性
(A)抗CXCR4抗體與食蟹獼猴表現細胞的結合
呈IgG4-PE形式的抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574、CL-83083和CL-148729)與適當的同型對照抗體(IgG4-PE)和呈IgG4-PE形式的基準抗CXCR4基準一起測試與表現食蟹獼猴CXCR4的細胞的結合(圖2)。將表現食蟹獼猴CXCR4的CHO-S細胞以100 µL/孔細胞、100萬個細胞/mL (10萬個細胞/孔)鋪盤到96孔V底盤(Greiner)中。將盤在4℃下以300 × g離心3分鐘，並丟棄上清液。在各別的96孔V底盤中製備抗體，以提供8個稀釋點，稀釋倍數為5。各抗體的最高濃度為120 × 10 nM並稀釋於FACS緩衝液PBS (Gibco)、1% BSA (Sigma)與0.1%疊氮化鈉(Severn Biotech)中。將一級抗體稀釋液加入細胞(50 µL/孔)，並透過移液重新懸浮細胞沉澱物。將盤在4℃下培育1小時。加入100 µL/孔PBS，並將盤在4℃下以300 × g離心3分鐘，且丟棄上清液。這個步驟重複兩次。加入2 µg/mL抗人類Alexa Fluor 647二級偵測抗體(Jackson Immuno Research)，其以50 µL/孔稀釋在FACS緩衝液中。透過移液將細胞重新懸浮。將盤在4℃下培育1小時。加入100 µL/孔PBS，並將盤在4℃下以300 × g離心3分鐘，且丟棄上清液。這個步驟重複兩次。最後，將細胞重新懸浮於100 µL/孔的PBS中，並在CytoFLEX (Beckman Coulter)上進行分析。
使用前向和側向散射(Flow Jo, Flow Jo LLC)藉由圈選主要細胞群來分析抗體與CHO-S細胞上表現的食蟹獼猴CXCR4的結合，以允許雙峰區分。將每個孔獲得的Comp-FL4-A Geomean (Alexa 647)值匯出至Excel (Microsoft)作為表格，並使用GraphPad Prism繪製值以產生滴定曲線。透過轉換數據並將4參數邏輯回歸曲線擬合到每個抗體滴定來計算EC 50值。
五種抗體以奈莫耳親和力(1.11 nM至11 nM)結合至表現食蟹獼猴CXCR4的細胞(表11)。CL-148729不結合至食蟹獼猴CXCR4 (圖2)。基準1 IgG4-PE結合至表現食蟹獼猴CXCR4的細胞。 表 11. 如藉由 流式細胞分析術測量的與 CHO 細胞表現的食蟹獼猴 CXCR4 結合的抗體的 EC 50 值。
抗體 EC 50(nM) SD (nM) 重複數
CL-82558 1.1 0.36 3
CL-82458 2.2 0.79 3
CL-82574 3.5 1.3 3
CL-82658 4.2 2.7 3
CL-83083 11.0 3.1 2
CL-148729 無結合 無結合 3
基準 1 IgG4-PE 12.2 8.9 3
同型對照 IgG4-PE - - 3
數值顯示為三次獨立實驗的平均EC 50。SD；標準差。NB；無結合。
(B)食蟹獼猴CXCR4對CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP的抑制作用
在食蟹獼猴CXCR4 cAMP傳訊分析中測試呈IgG4-PE形式的抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574和CL-83083)與人類同型對照抗體(IgG4-PE)和呈IgG4-PE形式的基準抗CXCR4抗體基準1。
在120 mm 2組織培養皿中存在0.5 mM丁酸鈉的情況下，以5% v/v cyno CXCR4 BacMam病毒感染HEK-293細胞歷時24小時。實驗當天，將抗體在HBSS + 0.1% BSA中稀釋至4 ×起始濃度，並產生10點1/2 log濃度反應曲線。將2 μL抗體加入384孔proxiplate (PerkinElmer)中。在添加細胞解離溶液(Gibco)之前用PBS洗滌細胞。然後將細胞收集到PBS中，藉由離心(335 ×g，5 min)沉澱並移除上清液。然後將細胞重新懸浮於HBSS + 0.1% BSA中，達到0.33 ×10 6個細胞/mL，並在每個孔中加入6 μL。將盤在37℃下培育45分鐘。
將毛喉素於含有2.5 mM IBMX的HBSS + 0.1% BSA中稀釋至5 μM。然後將其用於將CXCL12稀釋至5 ×EC 80FAC (EC 80= 0.74 nM)。然後將2 μL CXCL12加入拮抗劑培育後的盤中，並在37℃下培育又再20分鐘。使用HiRang cAMP套組(Cisbio)偵測cAMP含量。將提供的乾燥物重新懸浮於5 mL H 2O中，生成20 × cAMP-d2和抗cAMP-c穴狀化合物抗體儲液。然後這些儲液稀釋20倍至套組溶解緩衝液中並向各孔加入12.4 μL各個偵測試劑。將細胞在室溫(RT)下置於平盤搖床上1小時，然後使用標準HTRF方案在PHERAstar FS微量讀盤儀(BMG Labtech)上讀取盤，激發為335 nm並在620 nm和665 nm下讀取發射。如公式4中計算HTRF比，並按公式4與5計算抑制%與IC 50值。
所有測試的五個抗體均抑制食蟹獼猴CXCL12媒介抑制受毛喉素刺激的cAMP。最大抑制百分比從78±10%變化至90±11%，IC 50值在1.0±0.8至11.8±7.8 nM範圍內(表12)。 表 12. 對食蟹獼猴 CXCL12 媒介抑制受毛喉素刺激的 cAMP 的抑制作用。
抗體 IC 50(nM) ± SD 最大抑制 % ± SD 重複數
CL-83083 11.8 ± 7.8 84 ± 19 4
CL-82574 1.2 ± 0.6 90 ± 11 4
CL-82558 1.3 ± 0.7 83 ± 5 4
CL-82458 2.0 ± 0.7 78 ± 10 4
CL-82658 1.0 ± 0.8 80 ± 16 4
基準 1 IgG4-PE 12.4 ± 5.4 92 ± 23 4
同型對照 IgG4-PE 無抑制 - 3
IC 50；產生50%活性抑制所需的抗體平均濃度(nM；奈莫耳)。 SD；標準差。 實例11-藉由表面電漿共振(SPR)測定親和力
(A) Fab片段抗體與病毒樣顆粒上表現的CXCR4的結合
使用Biacore 8K (GE)藉由SPR生成CXCR4的Fab表觀親和力(表13)。在SA晶片(GE #BR100531)的活動流道上捕獲生物素化的CXCR4病毒樣顆粒(VLP, Lot# INT-1793B, Integral Molecular)。將五個經純化的抗CXCR4 Fab片段CL-82558、CL-82458、CL-82574、CL-82658和CL-83083用作為分析物，並以1.23 nM、3.7 nM、11.11 nM、33.33 nM和100 nM流過捕獲的CXCR4 VLP。使用緩衝液注射(即0 nM)對結合感測圖進行雙重參考，並將數據擬合至Biacore 8K評估軟體固有的1：1模型。這個分析是在25℃下，並使用10 mM Hepes (Sigma H0887)、150 mM NaCl (Sigma S5150)、0.1% w/v BSA (Sigma A4503)、7.4 pH作為運行緩衝液運行。Fab中沒有一者結合VLP-Null (缺乏hCXCR4)。 表 13. 抗 CXCR4 fab 與 VLP 顆粒上表現的 CXCR4 結合的親和力測量結果 (K D) 。
Fab 配體 ka (M -1s -1) kd (1/s) K D (nM)
CL-82558 hCXCR4 VLP 2.32E+06 1.55E-03 0.67
CL-82458 hCXCR4 VLP 8.87E+05 1.11E-03 1.26
CL-82574 hCXCR4 VLP 9.27E+05 4.81E-04 0.52
CL-82658 hCXCR4 VLP 6.16E+05 4.23E-04 0.69
CL-83083 hCXCR4 VLP 5.46E+05 1.02E-03 1.86
K D以奈莫耳(nM)濃度單位計算。
(B)抗CXCR4抗體與表現StaR ®CXCR4的奈米盤的結合
使用Biacore T200儀器(GE Healthcare)藉由SPR估算對CXCR4的抗體親和力(表14)。藉由胺偶聯將抗IgG抗體固定在晶片CM5 (GE Healthcare)上。在活性通道中捕獲呈IgG4-PE形式的抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574、CL-83083)。無捕獲抗CXCR4抗體的通道用作為參考品。然後以0 (空白)和250 nM的濃度注入CXCR4 StaR ®奈米盤。使用Biacore T200評估軟體將扣除空白的感測圖擬合到1：1交互作用模型。這個分析是在25℃下，使用0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl作為運行緩衝液來運行。 表 14. 與奈米圓盤上表現的 StaR ®CXCR4 結合的抗 CXCR4 抗體的親和力測量結果 (K D) 。
樣品 Ab k a(M -1s -1) k d(1/s) K D (nM)
N=1 N=2 N=1 N=2 N=1 N=2
CL-82558 1.2E+05 7.7E+04 4.7E-04 1.3E-04 3.9 1.7
CL-82458 6.1E+04 - 4. -04 - 7.5 -
CL-82574 1.1E+05 - 8.8E-04 - 8.0 -
CL-82658 5.2E+04 - 5.0E-04 - 9.6 -
CL-83083 1.4E+05 - 9.7E-04 - 7.1 -
實例12-CXCR7交叉反應性
將表現CXCR7的CHO-S細胞以100 µL/孔細胞、100萬個細胞/mL (10萬個細胞/孔)鋪盤到96孔V底盤(Greiner)中。將盤在4℃下以300 × g離心3分鐘，並丟棄上清液。在各別的96孔V底盤中製備抗體(包括呈IgG4-PE形式的CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574和CL-83083以及對照)，以提供8個稀釋點，稀釋倍數為5。各抗體的最高濃度為120 nM並稀釋於FACS緩衝液PBS (Gibco)、1% BSA (Sigma)和0.1%疊氮化鈉(Severn Biotech)中。將一級抗體稀釋液加入細胞(100 µL/孔)，並透過移液重新懸浮細胞沉澱物。將盤在4℃下培育1小時。加入100 µL/孔PBS，並將盤在4℃下以300 × g離心3分鐘，且丟棄上清液。這個步驟重複兩次。加入2 µg/mL的抗人類或抗小鼠Alexa Fluor 647二級偵測抗體(Jackson Immuno Research)，其以50 µL/孔稀釋在FACS緩衝液中。透過移液將細胞重新懸浮。將盤在4℃下培育1小時。加入100 µL/孔PBS，並將盤在4℃下以300 × g離心3分鐘，且丟棄上清液。這個步驟重複兩次。最後，將細胞重新懸浮於100 µL/孔的PBS中，並在CytoFLEX (Beckman Coulter)上進行分析。
使用前向和側向散射(Flow Jo, Flow Jo LLC)藉由圈選主要細胞群來分析抗體與CHO-S細胞上表現的CXCR7的結合，以允許雙峰區分。將每個孔獲得的Comp-FL4-A Geomean (Alexa 647)值匯出至Excel (Microsoft)作為表格，並使用GraphPad Prism繪製值以產生滴定曲線。
除了陽性對照(mAb #11G8 R&D Systems)外，沒有抗體顯示與表現CXCR7的CHO-S細胞結合(圖3)。 實例13-使用無標記動態質量再分佈(DMR)分析之CXCL12刺激經分離人類T細胞反應的抑制作用
Corning TMEpic TM技術是一種無標記光學生物感測器系統，用於在細胞內偵測配體誘導的變化(動態質量再分佈，DMR)。簡言之，偏振光穿過含有細胞樣品的生物感測器微量滴定盤底部，反射光波長的變化表示受體活化後所觸發的細胞組分重新分佈。波長偏移可能在幅度、方向(正或負)上以及隨著時間的推移而改變，這取決於不同的活化傳訊途徑如何導致各種細胞內分子重新定位。
讓細胞沉降到配備有光學生物感測器的孔的底部。入射寬頻光被引導沿著底部行進。電磁場延伸到細胞層約150 nm的深度，並根據相鄰細胞區域的光密度損失能量，且測量出射波長。GPCR媒介的傳訊會在細胞內引起影響光密度的變化，從而相對於刺激前條件改變出射波長(以皮米為單位測量)，並在分析的運行時間內被記錄下來。這種波長偏移的幅度與重新定位的細胞內物質的量成比例：質量增加對整體反應有正面的貢獻，而質量減少則有負面的貢獻。
(A)從人類全血分離初代T細胞
新鮮的人類血液由Cambridge Bioscience提供。使用150-200 mL含有抗凝劑(CPD，檸檬酸鹽磷酸鹽葡萄糖)的血液。一開始以冷的Dulbeccos PBS (Sigma)按1：2的比率稀釋血液。將30 mL經稀釋血液小心地分層放入含有15 mL Lymphopure (Biolegend)的50 mL Falcon管中。所有試管在室溫下以800 × g離心30分鐘，無需煞車。從膚色血球層離心細胞後，使用Pasteur移液管收集位於Lympopure上方和血漿界面下方的層。將收集的細胞懸浮液以Dulbeccos PBS稀釋一半並在室溫下以335 × g離心10分鐘。將所有細胞沉澱物一起放入一個50 mL Falcon管中，並在Dulbeccos PBS中稀釋，然後計數且再次以335 × g離心10分鐘。這個步驟後，使用泛T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)將所得的PBMC (周邊血液單核細胞)用於分離T細胞。將細胞沉澱物重新懸浮於有0.5% BSA (Sigma)和2 mM EDTA (Sigma)的緩衝液(不含鈣或鎂的Dulbeccos PBS (Sigma))體積中，計算為每1×10 7個細胞40 µL。然後，每1×10 7個細胞加入10 µL泛T細胞生物素抗體混合物，充分混合並在冰上培育5分鐘。細胞懸浮液進一步以緩衝液稀釋(30 µL/1×10 7個細胞)，然後每1×10 7個細胞加入20 µL泛T細胞微珠混合物，充分混合並在冰上培育10分鐘。接下來將LS管柱(Mitenyi Biotec)插入QurdoMacs分離裝置(Mitenyi Biotec)的磁場中，並以3 mL緩衝液沖洗。將細胞懸浮液施加到管柱上並收集含有富集T細胞的流出物。用3 mL緩衝液沖洗管柱超過兩次，將流出物收集到同一管內。將此經富集的T細胞餾分重新懸浮，並計數細胞數量。取出一小部分細胞，以抗CD3 PE螢光團偶聯抗體(Becton Dickinson)藉由對細胞染色並藉由流式細胞分析術使用FACS Canto II (BD BioSciences)進行分析來確認T細胞的純度。通常，T細胞的純度大於96%。將剩餘的細胞懸浮液以335 × g離心5分鐘並將細胞重新懸浮於無血清培養基(Gibco)中。
(B)使用EPIC BT系統分析儀進行DMR分析
將重新懸浮於無血清培養基中的經分離T細胞以150,000個細胞/孔(每45µL)鋪盤至384孔玻璃底EPIC盤(Corning)中。將細胞置於37℃培養箱中2小時靜置。然後，將盤放入EPIC BT系統分析儀(Corning)中以獲得2分鐘的背景讀數。在37℃下進行分析。在無血清培養基中製備測試抗體稀釋液，以在10 ×最終分析濃度下達到10點半log稀釋液，通常範圍為0.2 µM至6.7 pM最終分析濃度。暫停盤讀數，並將5 µL抗體稀釋液或5 µL對照加入細胞中，每30秒收集動態質量再分佈(DMR)讀數的變化歷時30分鐘。隨後，開始第二次讀數。重新編碼基線讀數後，暫停分析，並將5 µL 10 × EC 80濃度CXCL12添加到對照孔(其中添加5 µL無血清培養基)以外的所有孔中。再次收集盤讀數又再60分鐘。
在添加化合物後5至50分鐘之間，使用EPIC分析儀軟體藉由對最小反應峰值進行量化來分析DMR隨著分析運行時間的軌跡。透過扣除相應的緩衝液對照來校正數據並匯出以供進一步分析。這個數據是針對分析對照進行標準化，以使用公式9計算出抑制%，其中CXCL12 EC 80對照用於定義0%抑制，並將無血清培養基中未經刺激的細胞定義為100%抑制。
公式9：計算抑制%
IC 50值是使用GraphPad Prism 7藉由將數據擬合到4參數邏輯函數得出的。
所有抗CXCR4抗體(CL-82458、CL-82558、CL-82658、CL-83083、CL-83083-2和CL-82574)均能夠在初代初始T細胞中引起CXCL12反應的濃度依賴性降低，效力在1.54至12.09 nM之間。所有測試的抗CXCR4抗體將CXCL12傳訊降低至CXCL12反應的0-5.1%之間(表15)。 表 15. 抗 CXCR4 抗體在初代初始 T 細胞中對 CXCL12 反應的抑制作用的 IC 50 總結。
抗體 IC 50(nM) ± SD 效用 % ± SD 重複數
CL-82458 12.08 ± 3.36 2.0 ± 6.7 4
CL-82558 1.72 ± 0.99 4.3 ± 1 4
CL-82658 1.54 ± 0.32 -0.6 ±6.4 4
CL-83083 3.58 ± 1.86 5.1 ± 6.2 4
CL-83083-2 3.98 ± 1.35 4.4 ± 3.9 3
CL-82574 2.09 ± 1.19 0.68 ± 6.3 4
基準 1 IgG4-PE 9.61 ± 1.68 11.4 ± 4.7 6
IgG4-PE 同型對照 無抑制 - 8
IC 50；產生50%活性抑制所需的抗體平均濃度(nM；奈莫耳)。 SD；標準差。 實例14- Jurkat T細胞或初代人類T細胞往CXCL12的趨化性的抑制作用
(A) Jurkat T細胞往CXCL12的趨化性的抑制作用
在趨化性分析中，使用內源性地表現CXCR4的人類T細胞(Jurkat細胞) (Jurkat細胞)藉由使用IncuCyte TMS3趨化性分析系統評估呈IgG4-PE形式的五種抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574和CL-83083)、基準抗體基準1 (呈IgG4-PE形式)和IgG4-PE同型對照抑制Jurkat細胞往30 nM CXCL12 (估算EC 80)遷移的能力，來進一步檢驗這些抗體的拮抗效用。
趨化盤膜(Essen BioScience)的頂側和底側分別用20和150 µL/孔以50 µg/mL稀釋於RPMI 10% FBS (Invitrogen)中的Matrigel生長因子還原型(Corning)包覆。在96孔PS V底盤(Greiner)的分析培養基RPMI + 0.5% FBS (Invitrogen)中，以2 ×製備抗體的連續稀釋液(8個稀釋液，範圍從200 nM到1.52 pM，稀釋倍數為4，三重複)。Jurkat細胞在分析培養基中稀釋為166萬個細胞/mL。在新的96孔PS V底盤(Greiner)中，透過上下移液將呈2 ×的40 µL/孔的抗體與呈166萬個細胞/mL的40 µL/孔的Jurkat細胞混合。在37°C下30分鐘後，接著在室溫下30分鐘，從趨化盤膜兩側除去基質膠，將200 µL/孔的DPBS (Invitrogen)加入趨化盤(也稱為儲盤)的底側，同時將60 µL/孔的Jurkat細胞與抗體轉移到趨化盤的頂側。於96深孔PP V底盤(Corning)內在分析培養基中以1 ×製備CXCL12連續稀釋液(8個稀釋液，範圍從1.6 µM到0.73 nM，稀釋倍數為3，三重複)，以及CXCL12的溶液(呈其估算EC 80(30 nM))。每個趨化盤含有陰性對照孔(其中未經處理的細胞往分析培養基遷移)、陽性對照孔(其中未經處理的細胞往30 nM CXCL12遷移)，並滴定CXCL12以確認其EC 80值。在室溫下培育45至60分鐘後，將含有細胞和抗體的趨化盤的頂側轉移到含有200 µL/孔CXCL12或分析培養基的新儲庫趨化盤的頂部。接著將趨化盤在IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System (Essen BioScience)中於37℃、5%CO 2下培育。平衡20分鐘後，在相位通道中使用10 ×物鏡和Chemotaxis Top/Bot掃描模式，每3小時掃描盤，持續48小時。
使用IncuCyte TM上的Chemotaxis Migration (Top Only)分析定義來分析所有孔的每個時間點的掃描。細胞遮罩是以0.2分割調整(segmentation adjustment)、8像素孔徑、應用150 µm²的最小面積過濾器和50像素的全孔處理禁止來定義。使用IncuCyte TM軟體上的Graph Metrics，將總相位物件區域相對於初始頂部值[頂部]進行標準化，代表趨化盤頂部隔室中的細胞匯合度相對於當遷移分析開始時於T=0小時之時的初始細胞匯合度(頂部)標準化，在30小時的掃描時間內擷取所有孔，並匯出以供使用Excel (Microsoft)和GraphPad Prism (version 7)進一步分析。使用陽性對照孔和陰性對照孔中在30小時之時獲得的平均匯合度對匯出的數據進行標準化；將這個標準化產生的遷移抑制百分比與抗體濃度作圖，以評估抗體對CXCL12誘導的Jurkat細胞遷移的抑制效用(圖4)。
與人類IgG4-PE同型對照相比，Jurkat細胞往30 nM CXCL12遷移會受到所有五種抗CXCR4抗體以奈莫耳至低於奈莫耳的效力抑制(表16，圖4)。 表 16. 抑制 Jurkat 細胞往 30 nM CXCL12 遷移的抗體的 IC 50 值 ( 莫耳濃度 ) 。
抗體 IC 50(nM) IC 50(nM) IC 50(nM) 平均 IC 50(nM) SD IC 50(nM)
n=1 n=2 n=3
CL-82558 0.72 0.94 0.71 0.79 0.13
CL-82574 0.32 0.62 0.63 0.52 0.18
CL-82458 2.18 3.43 1.66 2.42 0.91
CL-82658 0.22 0.31 0.21 0.25 0.05
CL-83083 0.47 0.43 0.34 0.41 0.07
同型對照 (IgG4-PE) - - - -
基線1 IgG4-PE ＞100 ＞100 ＞100 ＞100
數值顯示為獨立實驗(n)、平均IC 50值和平均IC 50的標準差(SD)。
(B)初代人類T細胞往CXCL12的趨化性的抑制作用
在使用重組CXCL12作為趨化劑的初代初始T細胞遷移分析中，測試五種抗CXCR4抗體(CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574和CL-83083) (呈IgG4-PE形式)與基準抗CXCR4抗體基準1 (呈IgG4-PE形式)和同型對照抗體人類IgG4-PE。使用跨孔分析並藉由流式細胞分析術細胞計數評估抗體誘導抑制初始人類T細胞應對CXCL12之遷移。
(C)初代初始T細胞遷移分析
將如前(實例9)所述分離的初始人類T細胞於RPMI + 1%人類AB 血清(Sigma)的RPMI (分析培養基)中重新懸浮達到10 ×10 6個細胞/mL，並將50 µL細胞懸浮液按1：1與2 ×抗CXCR4抗體濃縮物(呈IgG4-PE形式)、基準抗體基準1 (呈IgG4-PE形式)或人類同型對照IgG4-PE於96孔U底盤(Corning Inc.)中混合。使用4倍連續稀釋在分析培養基中稀釋抗體，得到最終分析濃度範圍為0.029至120 nM，並藉由在37℃、5% CO 2下培育30分鐘用抗體對T細胞進行預處理。將最終濃度為6.25 nM的CXCL12以29 µL/孔添加至ChemoTx盤(Neuroprobe Inc.)的底室。這是使用本文所述分析條件在0.781至50 nM的CXCL12滴定曲線中估計會誘導峰值T細胞遷移的CXCL12趨化劑濃度。將帶框過濾器放置在趨化劑的頂部，並將50 μL T細胞/抗體混合物添加到每個帶框過濾器的頂部，以得到最終接種濃度為2.5 × 10 5個細胞/孔。然後將ChemoTx盤在37C℃、5% CO 2下培育4小時。透過用25 µL分析培養基沖洗一次從底室回收遷移的T細胞。然後將細胞懸浮液匯集在深孔V底96孔盤(Thermo Fisher)中，並以分析培養基將每個孔的體積調整至200 µL。接下來，將盤在4℃下以350 × g離心10分鐘以沉澱細胞，然後藉由在150 µL/孔的4% PFA/PBS中在室溫下重新懸浮15分鐘而被固定。接著將盤在4℃下以400 × g重新離心10分鐘，並將每個細胞沉澱物重新懸浮於200 µL PBS + 2 mM EDTA (Sigma-Aldrich)中，以供使用Attune NxT流式細胞分析儀分析固定體積樣品中的遷移細胞計數。數據表示為三重複樣品的最大遷移平均值%+-/ S.D.。透過將遷移% (公式10)表示為對估計會誘導峰值T細胞遷移(公式11)的CXCL12濃度(6.25 nM)的遷移反應的分數來確定值。
公式10：計算T細胞遷移% 已遷移細胞計數=使用6.25 nM CXCL12作為趨化劑從ChemoTx盤底室回收的T細胞的細胞計數(+/-經抗體或人類同型對照IgG4-PE預處理) 基線遷移計數=僅使用分析培養基作為趨化劑從ChemoTx盤底室回收的T細胞的細胞計數 輸入T細胞=添加到帶框過濾器頂部的T細胞懸浮液的細胞計數
公式11：計算最大遷移% 往6.25 nM CXCL12的遷移%=使用6.25 nM CXCL12作為趨化劑從ChemoTx盤底室回收的未經處理細胞的細胞計數。
當與同型對照人類IgG4-PE相比時，在6.25 nM CXCL12下運行的初代初始T細胞趨化性受到所有五種抗CXCR4抗體以濃度依賴性方式抑制(圖5和6)。所有抗CXCR4抗體都達到低於奈莫耳至奈莫耳圍內的趨化性抑制(表17，圖5)。由於生成的曲線不完整，無法準確確定CL-82558、CL-82458、基準1 IgG4-PE的IC 50值。基準1 IgG4-PE、CL-82458和CL-83083顯示趨化性最大抑制作用較差(圖5和6，表17)。 表 17. 抗 CXCR4 抗體媒介抑制初始 T 細胞往 6.25nM CXCL12 遷移。
抗 CXCR4 抗體 IC 50(nM) 在 120 nM Ab 下的最大遷移 % 最大遷移的 S.D. 捐贈者數目
CL-82558 N.d. -曲線不完整 6.34 3.65 3
CL-82458 N.d. -曲線不完整 17.65 6.23 4
CL-82574 0.95 5.44 14.64 5
CL-82658 0.99 -2.08 8.84 3
CL-83083 1.55 25.73 15.10 4
基準 1 IgG4-PE N.d. -曲線不完整 34.17 7.99 3
IgG4-PE 同型對照 N.d. 121.70 28.47 6
(D)在經分離的人類T細胞中CXCL12誘導的趨化性的抑制作用
(i)從人類血液分離泛T細胞
新鮮的人類血液由Cambridge Bioscience提供。使用150-200 mL含有抗凝劑(CPD，檸檬酸鹽磷酸鹽葡萄糖)的血液。一開始以不含鈣或鎂的冷Dulbeccos PBS (Sigma)按1：2的比率稀釋血液。將30 mL經稀釋血液小心地分層放入的50 mL Falcon管的15 mL Lymphopure (Biolegend)中。試管在室溫下以800 × g離心30分鐘，無需煞車。從膚色血球層離心細胞後，使用Pasteur移液管收集位於Lympopure上方和血漿界面下方的層並置放到一個新鮮的試管中。將收集的細胞懸浮液以PBS按1：2稀釋並在室溫下以340 × g離心10分鐘。將細胞沉澱物重新懸浮於PBS中、匯集至一個50 mL Falcon管中，並用Dulbecco’s PBS稀釋直到50 mL。計數細胞並以340 × g離心10分鐘。所得沉澱物含有PBMC (周邊血液單核細胞)並使用泛T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)分離T細胞。將細胞沉澱物重新懸浮於緩衝液(不含鈣或鎂的PBS + 0.5% BSA (Sigma)和2 mM EDTA (Sigma))的體積中，計算為40 µL/1×10 7個細胞。然後，每1×10 7個細胞加入10 µL泛T細胞生物素抗體混合物，充分混合並在冰上培育5分鐘。之後，細胞懸浮液進一步以緩衝液稀釋(30 µL/1×10 7個細胞)，然後每1×10 7個細胞加入20 µL泛T細胞微珠混合物。充分混合溶液並在冰上培育10分鐘。在培育期間，將LS管柱(Mitenyi Biotec)插入QurdoMacs分離裝置(Mitenyi Biotec)的磁場中，並以3 mL緩衝液沖洗。培育10分鐘後，將細胞懸浮液施加到管柱上並收集含有富集T細胞的流出物。用2 × 3 mL緩衝液沖洗管柱，將流出物收集到同一管內。將此經富集的T胞餾分重新懸浮，並計數細胞數量。取出一小部分細胞，以抗CD3 PE偶聯螢光團抗體(Becton Dickinson)藉由對細胞染色並使用FACS Canto II (BD BioSciences)藉由流式細胞分析術進行分析來確認T細胞的純度。通常T細胞的純度大於96%。將剩餘的細胞懸浮液以340 × g離心5分鐘並將細胞重新懸浮於趨化緩衝液HBSS (Gibco) + 0.1% BSA (Sigma)中。
(ii)使用跨孔系統的趨化性
將經分離T細胞重新懸浮於趨化緩衝液中達到濃度為約3 mL中約40 × 10 6個細胞/mL。將鈣黃綠素(Calcein)-AM (Invitrogen 11564257)以30 µL DMSO稀釋1 × 50 µg小瓶中，並進一步稀釋至3 mL趨化分析緩衝液中。將這3 mL加入細胞溶液中，並將細胞在37℃下培育30分鐘。之後，以340 × g沉澱細胞歷時5分鐘，並以4 × 10 6個細胞/mL重新懸浮供立即使用。在趨化緩衝液中以10 ×最終分析濃度製備測試抗體稀釋液，包括抗體CL-82558、CL-82458、CL-82658、CL-82574和CL-83083 (呈IgG4-PE形式)、基準抗體基準1 (呈IgG4-PE形式)和人類IgG4-PE同型對照。將5 µL趨化緩衝液中的抗體稀釋液或5 µL對照加入趨化盤(HTS跨孔96孔趨化盤5 µm Corning (經由VWR) 734-4081)的頂室，然後加入45 µL細胞。接著將頂室放入備用的96孔盤中，並在37℃下培育30分鐘。這期間，在趨化緩衝液中的150 µLCXCL12 (呈各種濃度)置於趨化盤的底室。拮抗劑培育完成後，將頂室小心下放至底室中，並將盤在37℃下培育60分鐘。培育後，移除頂室並丟棄。將100 µL底室放入黑色96孔盤中，並使用PHERAstar讀盤儀上的螢光強度(FI 485 610 520)模組測量螢光。
分析是以Schild形式進行，使用單一濃度的測試抗體與對CXCL12的全劑量反應曲線。使用公式12對數據進行標準化以計算最大CXCL12反應%，其中最大CXCL12反應用於定義100%，趨化緩衝液定義為0%。
公式12：計算最大CXCL12反應% 表 18. 抗 CXCR4 抗體媒介抑制 T 細胞遷移至 CXCL12 。
抗體 在 30 nM CXCL12 存在下的抗體 IC 50n=1-5 最大測試 Ab 濃度 (nM) 在最大抗體濃度存在下，往 100 nM CXCL12 的最大遷移 % 在最大抗體濃度存在下，往 100 nM CXCL12 的最大遷移的 SD
CL-82558 0.14 30 16.9 9.6
CL-82458 0.26 300 12.9 6.5
CL-82574 0.21 30 12.0 6.3
CL-82658 0.18 30 0.2 3.5
CL-83083 0.35 100 11.7 7.7
基準 1 IgG4-PE 1.2 100 21.9 13.6
人類 IgG4-PE 同型對照 ＞300 300 122.6 14.2
實例15-使用抗CXCR4抗體調節T細胞浸潤到HT-29結腸癌球體中
3D球體培養模型模擬實體腫瘤的多種活體內特徵和結構性質，諸如細胞-細胞交互作用、細胞-細胞外基質交互作用和缺氧條件。因此，它們是在活體外評估T細胞浸潤的一種有用工具。預期透過中和CXCL12配體來抑制CXCR4傳訊會增加能夠浸潤腫瘤球體的T細胞數量。使用由人類結腸癌細胞株(HT-29)組成的球體作為模型來評估抗CXCR4抗體增加T細胞浸潤到腫瘤球體內的能力。CCRF-HSB-2 T細胞株(同時表現CXCR4和CXCR3受體)被用作為初代T細胞模型。當用干擾素γ (IFNγ)刺激時，HT-29細胞經證明會分泌CXCR3配體(CXCL9、CXCL10和CXCL11)。在培養的3天內形成球體，然後將重組CXCL12配體添加到分析培養基中，以在個別球體周圍形成高濃度的CXCL12。因此，T細胞往CXCR3配體的趨化性受到破壞，導致T細胞發生化學激動作用(chemokinesis)，其中失去了往梯度的定向運動。抗CXCR4抗體抑制CXCL12傳訊會導致T細胞往球體釋放的CXCL9、CXCL10及/或CXCL11的CXCR3趨化性恢復，並使得浸潤程度增加。這個浸潤模型也可以使用從人類血液分離的初代T細胞(例如PBMC的一部分或進一步分離為泛CD3 +或CD4 +/CD8 +)來建立，該模型有可能評估T細胞浸潤和T細胞媒介的應對抗CXCR4抗體殺傷腫瘤細胞，不論是作為單一療法及/或與檢查點抑制劑(諸如抗PD1/PD-L1或抗CTLA-4)組合。
將HT-29 (ATCC HTB-38)腫瘤細胞重新懸浮於McCoy5a (Gibco) + 10% FBS(分析培養基)中達到5.0 × 10 4個細胞/mL，並將100 µL/孔的細胞懸浮液添加到U底超低附接分析盤。將重組人類IFNγ (R&D)在分析培養基中稀釋至15 ng/mL，並將50 µL/孔加入分析盤中，得到最終濃度為5 ng/mL。將分析盤在120 × g下離心10分鐘並在37℃、5%CO 2下培育3天以允許每孔形成單一球體。在第3天，使用4倍連續稀釋將抗體在分析培養基中以16 ×稀釋，濃度範圍為1600 nM至97.6 pM (最終分析濃度範圍為100 nM至6.1 pM)，並將100 µL抗體滴定液與100 µL在分析培養基中稀釋至80 nM的CXCL12 (最終分析濃度5 nM)混合。使用本文所述的分析條件依據從20 nM至1.2 pM製備的CXCL12滴定曲線，這個CXCL12濃度估算會誘導CCRF-HSB-2浸潤的最大抑制作用。CCRF-HSB-2 (ATCC CCL120.1)細胞以PBS洗滌兩次，在補充1 µM CellTrace™遠紅標記染料(Thermo Fisher)的PBS中重新懸浮至1.0 × 10 6個細胞/mL，並在37℃、5% CO 2下培育20分鐘。然後將分析培養基加入細胞中(初始標記體積的至少0.6倍)，並將細胞懸浮液在37℃、5% CO 2下培育5分鐘以去除任何剩餘的游離染料。將細胞在300 × g下離心5分鐘並在分析培養基中重新懸浮至2.0 ×10 6個細胞/mL。將25 µL/孔的抗體/CXCL12混合物和25 µL/孔的經標記CCRF-HSB-2細胞加入分析盤中，然後在37℃、5% CO 2下培育分析盤過夜。每個分析盤包括CCRF HSB-2浸潤的陽性對照孔(無CXCL12，無抗體)和陰性對照孔(5 nM CXCL12，無抗體)。在第4天，從培養箱中取出分析盤，並藉由上下移液3次用150 µL/孔的分析培養基洗滌球體。將150 µL/孔的PBS加入球體，如前所述對球體進行第二次清洗，以去除未能浸潤HT-29腫瘤球體的CCRF-HSB-2細胞。將150 µL/孔的PBS加入已洗滌的球體，並立即在IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System中使用球體掃描模式和10×物鏡在亮視野和紅色螢光通道中捕捉影像來掃描分析盤。
使用IncuCyte TMS3軟體上的球體分析模組分析由IncuCyte TMS3 Live Cell Analysis System所取得的影像。使用亮視野影像，選擇參數以準確定義球體物體(分割靈敏度為60，而最小面積濾波器為1 ×10 4µm²)。使用背景扣除演算法分析在紅色螢光通道中取得的影像，該演算法使用半徑為700 µm的圓盤估算影像上的螢光背景。然後從原始螢光值中扣除估算的背景，得到背景校正影像。使用IncuCyte TMS3軟體上的Graph Metrics，計算每個孔的最大亮視野物體邊界(即球體)內的平均紅色螢光強度，並將值匯出以使用Excel和GraphPad Prism軟體進一步分析。關於每個分析盤，計算陽性對照孔(最大浸潤)和陰性對照孔(最小浸潤)的平均值，並計算應對抗CXCR4抗體處理的浸潤%，如公式13中所述。關於每個測試抗體，在GraphPad Prism中繪製5個獨立實驗的平均浸潤百分比與以莫耳濃度表示的濃度對數的關係圖(圖7)。在測試的最高抗體濃度(100 nM)下觀察到的最大浸潤百分比總結於表19中。
公式13：計算浸潤百分比(%)
CCRF-HSB-2細胞浸潤到經IFNγ處理的HT-29腫瘤球體中會因為5 nM CXCL12的存在而受到抑制，而用CL-82574和CL-83083-2抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)處理使得與人類IgG4-PE同型對照相比，CCRF-HSB-2浸潤呈濃度依賴性增加。觀察到兩種抗體的浸潤增加在奈莫耳範圍內，在最高抗體測試濃度(100 nM)下的最大浸潤百分比就CL-82574來說達到88.58%，就CL-83083-2來說達到71.54% (表19，圖7)。 表 19. 在 5 nM CXCL12 存在下 ， 抗 CXCR4 抗體媒介 CCRF-HSB-2 細胞浸潤至經 IFN γ 處理的 HT-29 腫瘤球體中的最大百分比。
抗體 在 100 nM 下的最大浸潤 % 最大浸潤的平均 % 最大浸潤的 SD%
n=1 n=2 n=3 n=4 n=5
CL-82574 75.43 88.06 100.78 86.31 92.32 88.58 9.24
CL-83083-2 61.03 77.02 85.38 51.9 82.35 71.54 14.44
同型對照 (IgG4-PE) 15.56 -3.09 9.03 4.67 -2.78 4.68 7.96
值顯示為數個獨立實驗(n)、最大浸潤的平均%和最大浸潤百分比的標準差(SD)。 實例16-來自人源化CD34+ NSG小鼠骨髓的CD45 +細胞的動員
從美國的Jackson Laboratories進口二十隻雌性hNSG-CD34動物。抵達後，它們以每籠5隻為一組被安置在有金屬漏斗的透明塑膠IVC籠(Green line GM500 Sealsafe Plus, Tecniplast UK)內。在第-1天，對動物進行秤重以獲得研究前體重，研究僅在動物體重超過18 g時開始。動物被植入識別微晶片。
研究當天，動物腹膜內(I.P.)注射100 µL PBS或100 µL抗CXCR4抗體CL-82574或CL-83083-2 (呈IgG4-PE形式) (2 mg/mL於生理鹽水中)，20 g小鼠相當於10 mg/kg。處理後1小時，在異氟烷麻醉下透過末梢採血採集血液，並將血液儲存在冰上的經EDTA塗覆管中直至分析。如表20中所示給予動物100 μL PBS或抗體。 表 20. 研究的分組，顯示每組使用的小鼠數目和接受的治療。
組別 動物數目 治療
1 5 PBS
2 5 CL-82574 (10 mg/kg)
3 5 CL-83083-2 (10 mg/kg)
(A)流式細胞分析術的血液處理
為了準備染色，將500 µL血液加入到15 mL falcon管中的4.5 mL紅血球溶解緩衝液(Sigma, # R7757)中，並在室溫下培育10分鐘。培育後，將試管在室溫下以300 × g離心5分鐘。將沉澱物重新懸浮於5 mL FACS緩衝液(PBS + 1% BSA (Sigma #A7906) + 0.1% 疊氮化鈉(Severn Biotec # 40-2010-10) + 2 mM EDTA (Sigma # 03690))中，並在室溫下以300 × g再次離心5分鐘。然後將細胞沉澱物重新懸浮於200 µL的FACS緩衝液中並保存在冰上。
關於流式細胞分析術分析，將每個血液樣品的全部200 µL轉移至96孔聚丙烯深孔盤(Corning # 3957)。將盤在4℃下以300 × g離心5分鐘，然後將細胞重新懸浮於50 µL Fc阻斷混合液(1 µL小鼠Trustain + 2.5 µL人類Trustain：50 µL FACS緩衝液，Biolegend #101320和# 22302)並在4℃下培育10分鐘。最後，將細胞與50 µL流式細胞分析術抗體一起培育30分鐘，如混合液組中所示(表21)。染色後，將細胞在FACS緩衝液中洗滌兩次以去除任何未結合的抗體。使用4%多聚甲醛在室溫下固定細胞20分鐘，然後用PBS清洗，再將所有樣品重新懸浮於200 µL PBS中直到資料擷取。使用Attune NxT流式細胞分析儀擷取數據。 表 21. 用於經動員細胞的 CD45 染色的流式細胞分析術標記組。
標記 供應商 Cat. # 螢光團
CD45 E-bioscience 48-0459-42 eFluor 450
CD34 Biolegend 343506 PE
小鼠 Fc/ 阻斷 Biolegend 101320 ------------------
人類 Fc/ 阻斷 Biolegend 422302 ------------------
圖8顯示了如藉由流式細胞分析儀記錄，每個血液樣品孔中偵測到的人類CD45+細胞總數。與對照相比，所有治療組的平均白血球計數顯著增加，尤其是CL-82574組。 實例17-在食蟹獼猴中骨髓白血球的動員
為了確定對骨髓白血球動員的影響，有必要利用CXCR4抗體使用食蟹獼猴進行動員研究。動員研究將如Peng et al., Distinct mobilization of leukocytes and hematopoietic stem cells by CXCR4 peptide antagonist LY2510924 and monoclonal antibody LY2624587 (2017) Oncotarget. 8(55):94619-94634所述的類似方法進行。簡言之，對2至4歲、體重2.5至4 kg的雄性和雌性食蟹獼猴皮下投予選定的CXCR4抗體(單次注射10-30 mg/kg)。將在給藥前由每隻動物收集全血樣品做為基線計數，並在給藥後至多到給藥後24小時(第1天)與第4天的多個時間點收集全血樣品供進行細胞計數。WBC和嗜中性球將在臨床病理實驗室中經由常規血液分析進行分析。周邊血液中CD34 +細胞的計數將使用流式細胞分析術計算，使用類似於已公開方案的方法(例如Peng et al., 2017)。例如，為了要計算全血樣品中的CD34 +細胞數量；將20 μL染色儲液(1/3抗CD45-perCP、1/3抗CD34-PE和1/3活/死染劑)加入有校正珠粒的試管中用於細胞定量。將含有染色儲液的試管以25 μL全血加25 μL RPMI 1640 + 0.1% BSA稀釋，在室溫下暗處培育15分鐘，然後加入溶解溶液來溶解紅血球，培育30分鐘，接著以適當的流式細胞分析儀進行流式細胞分析術分析。圈選/區域策略將透過側向散射(SS)與核染料(淋巴細胞)以及SS與CD45 (CD45陰性/暗淡細胞)來定義，且合併區域將在CD34與核染料的點圖中查看(同時計數最終圖中的CD34陰性/暗淡和CD34 +細胞)。將在SS與每個CP圖中定義珠粒，以對CD34 +細胞/μL全血進行計數(公式14)。因為抗體治療抑制CXCR4預期會導致所述細胞類型隨著時間而增加2-6倍。(CD34+細胞數)/(珠粒數) X (每次測試的珠粒)/(測試體積) X 稀釋倍數
公式14：計算每µL血液中的CD34+細胞 CD34 +細胞/μL=(CD34 +細胞數)/(珠粒數) X (每次測試的珠粒)/(測試體積) X 稀釋倍數 實例18-使用人類CXCR4嵌入小鼠的腫瘤療效及CD45+細胞動員研究
將使用被植入人類CXCR4嵌入C57BL/6小鼠的MC38、LLC或B16-F10腫瘤模型進行療效研究。植入當天，以1 ×10 5個腫瘤細胞/動物將腫瘤皮下注射到小鼠右後側。治療組將接受其第一劑抗體(表22)或對照抗體(以10 mg/kg腹膜內給藥的抗體)。腫瘤細胞植入後六天，小鼠將一週給予抗體三次，總共兩週。將使用數位卡尺在二維上一週三次測量以監測腫瘤發展，直至研究結束。將使用公式15估算腫瘤體積(mm 3)。
公式15：計算腫瘤體積 其中L是腫瘤的較大直徑，而W是腫瘤的較小直徑。
小鼠持續進行研究，直到它們的腫瘤發展到平均直徑為12 mm或它們達到研究方案中所概述的人道終點。人道終點存活統計數據將使用Kaplan-Meier方法和Prism (GraphPad)進行計算。 表 22. 人類 CXCR4 嵌入小鼠的治療組。
組別 動物數 治療
1 5 10mg/kg 同型對照人類 IgG4-PE
2 5 10mg/kg CL-82574
3 5 10mg/kg 抗 PD-L1 抗體
4 5 10mg/kg CL-82574 + 10mg/kg 抗 PD-L1 抗體
(B)使用人類CXCR4嵌入小鼠的CD45+細胞動員研究
此方案將如實例16中所述進行。簡言之，在研究當天，人類CXCR4嵌入小鼠將腹膜內注射100 μg PBS或100 μL抗CXCR4抗體(2 mg/mL於鹽水中)，對20 g小鼠相當於10 mg/kg。處理後1小時，在異氟烷麻醉下透過末梢採血採集血液，並將血液儲存在冰上的經EDTA包覆管中直至分析。將使用與實例16中所述類似的方法進行分析。 表 23. 抗體基因區段表
抗體 ID IGH V 基因 IGH D 基因 IGH J 基因 CDRH3 長度 非生殖系 CDRH3 胺基酸 CDRH3 外部的突變 IGL V 基因 IGL J 基因 CDRL3 長度 非生殖系 CDRL3 胺基酸 CDRL3 外部的突變
核酸 胺基酸 核酸 胺基酸
CL-82658 IGHV3-30*18 IGHD3-16*02 IGHJ6*02 19 8 2 2 IGKV1-17*01 IGKJ3*01 9 1 1 1
CL-83083 IGHV3-73*02 IGHD3-9*01 IGHJ6*02 19 6 9 3 IGLV10-54*02 IGLJ3*02 11 1 4 3
CL-83158 IGHV4-34*01 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 22 11 7 5 IGLV3-19*01 IGLJ3*02 11 1 2 2
CL-83083-2 IGHV3-73*02 IGHD3-9*01 IGHJ6*02 19 6 9 3 IGLV10-54*02 IGLJ3*02 11 - - -
CL-82523 IGHV3-23*04 IGHD1-20*01 IGHJ6*02 17 4 10 9 IGKV1-17*01 IGKJ4*01 9 0 0 0
CL-82558 IGHV4-31*03 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 21 8 14 10 IGKV2-28*01 IGKJ1*01 9 0 6 4
CL-82574 IGHV3-33*01 IGHD1-20*01 IGHJ3*02 14 8 8 5 IGKV1-17*01 IGKJ3*01 9 0 3 2
CL-82556 IGHV3-33*01 IGHD1-20*01 IGHJ3*02 14 8 8 4 IGKV1-17*01 IGKJ3*01 9 0 5 4
CL-82583 IGHV3-33*01 IGHD1-1*01 IGHJ3*02 14 7 6 4 IGKV1-17*01 IGKJ3*01 9 0 3 2
CL-82458 IGHV3-23*04 IGHD1-1*01 IGHJ6*02 17 3 18 10 IGKV1-17*01 IGKJ4*01 9 1 7 3
CL-82562 IGHV3-30*18 IGHD1-20*01 IGHJ6*02 17 6 5 4 IGKV1-17*01 IGKJ1*01 9 1 3 1
CL-82577 IGHV4-31*03 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 21 8 18 14 IGKV2-28*01 IGKJ1*01 9 0 3 3
CL-82517 IGHV3-21*03 IGHD5-18*01 IGHJ6*02 17 5 2 2 IGKV1D-13*d01 IGKJ4*01 9 0 1 0
CL-82541 IGHV4-31*03 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 21 7 11 8 IGKV2-28*01 IGKJ1*01 9 0 2 2
CL-82473 IGHV3-33*01 IGHD3-10*01 IGHJ4*02 15 5 6 3 IGKV2-30*01 IGKJ3*01 9 0 0 0
CL-82551 IGHV1-8*01 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 23 7 0 0 IGKV1-5*03 IGKJ1*01 9 0 3 3
CL-82580 IGHV1-8*01 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 23 6 4 3 IGKV1-5*03 IGKJ1*01 9 0 1 1
CL-82571 IGHV3-73*02 IGHD3-9*01 IGHJ6*02 19 6 9 3 IGKV1-5*03 IGKJ1*01 9 1 3 2
CL-82495 IGHV3-33*01 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 23 6 8 5 IGKV1-17*01 IGKJ1*01 9 0 0 0
CL-82455 IGHV3-33*01 IGHD3-10*01 IGHJ6*02 23 9 6 5 IGKV3-15*01 IGKJ1*01 9 0 4 4
CL-148712 IGHV3-23*04 IGHD1-1*01 IGHJ6*02 17 3 14 8 IGKV1-17*01 IGKJ4*01 9 1 6 3
CL-148729 IGHV3-73*02 IGHD6-25*01 IGHJ4*02 6 0 11 8 IGLV1-51*01 IGLJ3*02 12 4 8 5
實例19：抗CXCR4抗體的活體內抗腫瘤療效
為了檢驗CL-82574的活體內抗腫瘤療效，使用同基因腫瘤模型Pan02 (Crown Bioscience Ltd, UK)進行了一項研究。在這項活體內工作中，C57BL/6小鼠經過基因修飾，將小鼠CXCR4基因替換為其人類對應基因，並將CL-82574重新格式化為小鼠IgG1。此抗體可作為單一療法或與抗PD-1 (BioXcell, RMP1-14)組合投予，
小鼠飼養在Babraham Institute (Cambridge, UK)的Biological Support Unit，並在8-11週齡時供應給Crown Bioscience Ltd。在研究開始前，將小鼠隨機分配至治療組(每組12隻小鼠，3隻雄性和9隻雌性)，參見表24。使用補充有10%胎牛血清與2 mM L-麩醯胺酸的RMPI在活體外將Pan02細胞繼代。確認腫瘤細胞注射時細胞生存力高於90%。將Pan02細胞重新懸浮於PBS中並皮下注射至小鼠的左側腹(3x10 6個細胞/小鼠)。作為單一療法或與10mg/kg抗PD-1組合(Q3D，從第15天開始)，小鼠腹膜內(i.p.)投予45 mg/kg mIgG1 CL-82574 (Q3D，從第8天開始)持續三週。對照組的小鼠則以磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)作為媒劑對照處理。
組別 小鼠 N 處理 劑量 (mg/kg) 劑量體積 (ml/kg) 方案 起始日 途徑
媒劑 12 PBS 0 10 Q3D持續3週 8 i.p.
媒劑 + 抗 PD1 12 PBS 0 10 Q3D持續3週 8 i.p
大鼠IgG2a-抗PD-1 10 10 Q3D持續2週 15 i.p.
CL-82574 + 抗 PD1 12 CL-82574 45 10 Q3D持續3週 8 i.p.
大鼠IgG2a抗PD-1 10 10 Q3D持續2週 15 i.p.
CL-82574 12 CL-82574 45 10 Q3D持續3週 8 i.p
表24：Pan02模型的活體內抗腫瘤療效研究的處理組
腫瘤細胞注射之日起一週測量腫瘤大小和小鼠體重3次。小鼠持續進行研究，直到它們的腫瘤平均直徑達到15 mm，或當出現腫瘤潰瘍(福利終點)。研究止於第60天。使用經修飾的橢球公式計算腫瘤體積：0.5 × (長度×寬度 2)。對第25天至第44天的腫瘤體積進行統計分析，由於缺失值(達到終點)比例較高，因此較晚的日期不考慮進行分析。
使用CL-82574或抗PD-1的單一療法在這個模型中並未顯示出抗腫瘤效用。相較之下，與媒劑對照以及抗PD-1單一療法相比時，接受CL-82574和抗PD-1組合處裡的小鼠展現出腫瘤生長延遲。使用雙向變異數分析對觀察到的差異進行分析，對相對於基線(設在第7天，給藥開始前)的腫瘤體積變化進行分析。所得的腫瘤生長數據總結於圖11。經調整的p值顯示於表25中。
這些數據暗示CL-82574和抗PD-1療法之間具有組合抗腫瘤效用。 表 25- 腫瘤植入後第 25 天和第 44 天之間，各個處理組與媒劑組的比較結果以及 CL-82574 + aPD1 與媒劑 + 抗 PD1 的比較結果
經調整的 P 值
第 1 組 第 2 組 第 25 天 第 28 天 第 30 天 第 32 天 第 35 天
媒劑 媒劑 +抗PD-1 1.0000 1.0000 0.4061 0.9052 0.1949
媒劑 CL-82574 +抗PD-1 0.0836 0.0364 0.0002 0.0163 0.0005
媒劑 CL-82574 1.0000 1.0000 0.4735 0.9052 0.7793
媒劑 +抗PD-1 CL-82574 +抗PD-1 0.2921 0.0725 0.0170 0.0018 0.0748
經調整的 P 值
第 1 組 第 2 組 第 37 天 第 39 天 第 42 天 第 44 天
媒劑 媒劑 +抗PD-1 0.0860 0.5666 0.8308 1.0000
媒劑 CL-82574 +抗PD-1 ＜.0001 0.0011 0.0099 0.0180
媒劑 CL-82574 0.9090 0.5666 0.8308 1.0000
媒劑 +抗PD-1 CL-82574 +抗PD-1 0.0398 0.0243 0.0013 0.0193
在全局雙向變異數分析類型之後使用Bonferroni-Holm校正獲得的按天數的經調整p值，包括所有具有重複和天(重複)因素的組別及其交互作用，然後每天進行對比分析。
無
圖 1. 抗CXCR4抗體的時間依賴性內化率(A. CL-82458、B. CL-82558、C. CL-82574、D. CL-82658、E. CL-83083、F. 基準1c、G .陰性(IgG4-PE同型)和H. 相關陽性(人類抗CD20抗體)對照。圖式顯示在抗體濃度增加下的內化率。mAb conc；分析中所使用的抗體濃度，奈莫耳濃度。 圖 2. 抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)、基準抗體(呈IgG4-PE形式)和IgG4-PE同型對照抗體與食蟹獼猴CXCR4的結合。如藉由流式細胞分析術評估抗CXCR4抗體結合至CHO細胞上所表現的食蟹獼猴CXCR4的代表性數據。數據代表四個獨立實驗。結合表示為幾何(Geo)平均值。 圖 3. 抗CXCR4(呈IgG4-PE形式)、基準(呈IgG4-PE形式)、IgG4-PE同型對照、抗CXCR7 mAb #11G8和小鼠IgG1同型對照抗體不結合至CXCR7。如藉由流式細胞分析術評估抗CXCR4抗體不結合至CHO細胞上所表現的CXCR7的代表性數據。數據代表兩個獨立實驗。結合表示為幾何(Geo)平均值。 圖 4. 與受到刺激往30 nM CXCL12遷移的Jurkat T細胞一起培育之抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)、基準抗體(呈IgG4-PE形式)和IgG4-PE同型對照抗體所獲得的平均抑制百分比(± SD)。數據代表三個獨立實驗。 圖 5. 抗CXCR4媒介抑制初代初始T細胞遷移的總結。此圖表示在3至5名獨立捐贈者中以不同濃度的抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)和IgG4-PE同型對照預處理時，初始初代T細胞往6.25 nM CXCL12的最大遷移百分比的平均值(± S.D.)。 圖 6. 基準抗CXCR4抗體對初代初始T細胞的抑制。此圖表示三名獨立捐贈者以不同濃度的基準抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)和IgG4-PE同型對照預處理的初始T細胞往6.25 nM CXCL12的最大遷移百分比的平均值(± S.D.)。 圖 7.以抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)或IgG4-PE同型對照處理後，CCRF-HSB-2浸潤到經IFNγ處理的HT-29腫瘤球體中的百分比。數據代表五個獨立實驗(平均值± SD)。 圖 8. 以抗CXCR4抗體(呈IgG4-PE形式)處理時，NSG小鼠的人類CD45 +細胞的動員。如藉由流式細胞分析儀記錄，在每個血液樣品的孔中所偵測到的人類CD45 +細胞總數。 圖 9. 從腫瘤排除T細胞的建議作用機制示意圖。位於基質中的癌症相關纖維母細胞(CAF)應對局部促腫瘤條件分泌高含量的CXCL12。CXCR4 +T細胞對升高的CXCL12梯度做出反應，並被防止跟從其他不太確定的梯度(例如CXCL9、CXCL10及/或CXCL11)，這導致T細胞留在基質中。據信CXCL9、CXCL10及/或CXCL11梯度鼓勵T細胞進入腫瘤並殺傷惡性腫瘤細胞。 圖 10. 抗CXCR4抗體抑制T細胞上的CXCR4會防止細胞在基質內對CXCL12做出反應。T細胞能夠跟從其他T細胞相關趨化因子梯度(例如CXCL9、CXCL10及/或CXCL11)，這可以允許T細胞成功浸潤到腫瘤中並隨後殺死腫瘤細胞。 圖 11. 與媒劑對照相比，使用抗CXCR4抗體和PD-1抑制劑的組合治療會延遲腫瘤生長。
無
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Claims (24)

  1. 一種特異性地結合至CXCR4的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含V H結構域，其中該V H結構域包含： i. SEQ ID NO：10或13的CDRH1胺基酸序列； ii. SEQ ID NO：11或14的CDRH2胺基酸序列； iii. SEQ ID NO：12或15的CDRH3胺基酸序列；且 其中該抗體或其抗原結合片段包含V L結構域，其中該V L結構域包含： i. SEQ ID NO：20或23的CDRL1胺基酸序列； ii. SEQ ID NO：21或24的CDRL2胺基酸序列；與 iii. SEQ ID NO：22或25的CDRL3胺基酸序列。
  2. 如請求項1之抗體或片段，其中 該V H結構域包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；且 該V L結構域包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列。
  3. 如前述請求項中任一項之抗體或片段，其中： a) CXCR4是人類的(視情況地選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3)； b) CXCR4是恆河猴的及/或食蟹獼猴的(視情況地選自SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9)；或 c) 抗體或片段特異性地結合至人類、恆河猴、食蟹獼猴及/或囓齒動物CXCR4，視情況地人類和食蟹獼猴CXCR4； 視情況地其中結合是藉由表面電漿共振(surface plasmon resonance，SPR)、流式細胞分析術、活細胞成像、ELISA或放射性配體結合來測定。
  4. 如前述請求項中任一項之抗體或片段，其中該抗體或片段包含恆定區(C H及/或C L)，視情況地其中： a) C H是(i) IgG4恆定區，諸如IgG4-PE恆定區(例如SEQ ID NO：267或SEQ ID NO：305)或(ii) IgGl恆定區，諸如IgG1恆定區，其包含與野生型(例如SEQ ID NO：249或307)相比與Fc-γ受體及/或C1q的結合降低的突變；及/或 b) CL是κ輕鏈恆定區。
  5. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段包含重鏈及輕鏈，且重鏈包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列，而輕鏈包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列。
  6. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段抑制CXCL12結合至CXCR4。
  7. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段不會在T細胞(視情況地CD8 +T細胞)中誘導細胞凋亡，視情況地其中使用流式細胞分析術測定細胞凋亡。
  8. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段以0.5至10 nM (例如0.5至5 nM)的EC 50結合至食蟹獼猴CXCR4，視情況地其中使用流式細胞分析術測定食蟹獼猴CXCR4結合。
  9. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段以0.2至2 nM (例如0.4至0.8 nM)的K D結合至人類CXCR4，視情況地其中使用表面電漿共振(SPR)來測定結合親和力。
  10. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段不結合至CXCR7 (視情況地，其中CXCR7是人類的且進一步視情況地選自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6)，視情況地其中使用流式細胞分析術、放射性配體結合、表面電漿共振(SPR)、活細胞成像或ELISA來測定CXCR7結合。
  11. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段以0.5至20 nM (例如0.5至5 nM)的IC 50抑制CXCL12媒介的T細胞反應，其中在活體外使用無標記動態質量再分佈分析來測定抑制作用。
  12. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段以0.01至5 nM (例如0.01至1 nM)的IC 50抑制CXCR4 +T細胞往CXCL12的趨化性，其中使用活細胞成像或流式細胞分析術來測定抑制作用。
  13. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中與PBS相比，該抗體或片段增加平均CD45 +細胞動員（cell mobilisation），視情況地其中使用流式細胞分析術來測定動員。
  14. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段結合至CXCR4同二聚體。
  15. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其中該抗體或片段使得CD8 +T細胞能夠浸潤腫瘤。
  16. 如前述請求項中任一項所定義之抗體或片段，其係用於療法中。
  17. 如請求項1至15中任一項所定義之抗體或片段，其係用於治療癌症，視情況地其中該癌症是胰臟癌或胰管癌。
  18. 如請求項1至15中任一項所定義之抗體或片段，其係用於治療實體腫瘤。
  19. 如請求項16至18中任一項使用之抗體或片段，其中該治療進一步包含投予又一種療法，視情況地其中該又一種療法包含獨立地選自由抗PD-1抗體或其抗原結合片段和抗PD-L1抗體或其抗原結合片段組成之群組一或多個又一種治療劑； 及/或視情況地其中又一種療法是選自化療、放療及/或手術切除腫瘤。
  20. 如請求項16至19中任一項使用的抗體或片段，其進一步包含投予又一種治療劑，其為PD-1/PD-L1傳訊抑制劑(例如PD-1抗體或其抗原結合片段，或PD-L1抗體或其抗原結合片段)。
  21. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至15中任一項所定義之抗體或片段及醫藥上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑，且視情況地進一步包含一或多個又一種治療劑。
  22. 一種核酸，其編碼(a)如請求項1至15中任一項所定義之抗體或片段的V H結構域及/或V L結構域，或(b)如請求項1至15中任一項之抗體或片段的重鏈及/或輕鏈。
  23. 一種載體，其包含如請求項22所定義之核酸；視情況地其中該載體是CHO載體或HEK293載體。
  24. 一種宿主細胞，其包含如請求項22之核酸或如請求項23所定義之載體。
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