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TW202411247A - 針對流感神經胺酸酶的廣泛中和抗體 - Google Patents

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TW202411247A
TW202411247A TW112118976A TW112118976A TW202411247A TW 202411247 A TW202411247 A TW 202411247A TW 112118976 A TW112118976 A TW 112118976A TW 112118976 A TW112118976 A TW 112118976A TW 202411247 A TW202411247 A TW 202411247A
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acid sequence
antibody
antigen
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TW112118976A
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伊莉莎貝塔 卡麥隆尼
戴維德 寇提
凱文 Ｅ 豪瑟
柯里 摩蒙
馬泰奧 Ｓ 比薩托
喬爾吉 斯內爾
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瑞士商休曼生物醫藥股份公司
美商維爾生物科技股份有限公司
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Abstract

本揭露內容提供可結合至流感病毒神經胺酸酶(NA)，且可中和流感病毒感染之抗體及其抗原結合片段。亦提供編碼抗體之聚核苷酸、包含此類聚核苷酸之載體、可表現該等抗體之宿主細胞、相關組成物及使用本文所揭露之組成物以例如治療或預防流感感染之方法。

Description

針對流感神經胺酸酶的廣泛中和抗體
電子序列表之參考
電子序列表(930585_439TW_SEQUENCE_LISTING.xml；大小：136949位元組；及創建日期：2023年5月17日)之內容以全文引用之方式併入本文中。
本發明係有關於針對流感神經胺酸酶的廣泛中和抗體。
發明背景
流感為一種傳染病，每年在全世界範圍內爆發，導致每年約三百萬至約五百萬例嚴重疾病及約290,000至650,000例死於呼吸系統疾病(WHO，流感(季節性)情況說明，2018年11月6日)。最常見症狀包括：突然開始發燒、咳嗽(通常乾咳)、頭痛、肌肉及關節疼痛、嚴重不適(感覺不舒服)、喉嚨痛及流鼻涕。潛伏期在一至四天之間變化，但症狀通常在暴露於病毒之後約二天開始出現。流感之併發症可包括肺炎、鼻竇感染及先前健康問題(諸如哮喘或心臟衰竭)惡化、敗血症或慢性基礎疾病加重。
流感由流感病毒引起，該流感病毒為正黏液病毒科( Orthomyxoviridae)之一群抗原性及遺傳多樣性病毒，其含有反義、單股、分段RNA基因體。在四種類型之流感病毒(A、B、C及D)中，已知三種類型(A、B及C)影響人類。流感病毒可基於存在的主要表面蛋白質之不同亞型進行分類：血球凝集素(HA)及神經胺酸酶(NA)。存在至少18種由其血球凝集素(「HA」)蛋白質定義之A型流感亞型。HA可分類為二組。第1組包括H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16及H17亞型，且第2組包括H3、H4、H7、H10、H14及H15亞型。存在至少11種不同神經胺酸酶亞型(分別N1至N11 (cdc.gov/flu/about/viruses/types.htm))。神經胺酸酶在病毒遷移及傳播中起作用，藉由在自經感染之宿主細胞中釋放之前的病毒粒子上及在目標細胞表面醣蛋白上催化唾液酸殘基之水解來進行。已開發出經設計以抑制神經胺酸酶(NAI)之藥物(例如，奧司他韋(oseltamivir)、紮那米韋(zanamivir)、帕拉米韋(peramivir)、拉尼米韋(laninamivir))，但IAV亞型之天然獲得之突變降低了對當前NAI之敏感性(Hussain等人, Infection and Drug Resistance 10:121-134 (2017)。
需要用於治療流感病毒感染之新模式。
依據本發明之一實施例，係特地提出一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)，該VH包含一互補決定區(CDR)H1、一CDRH2及一CDRH3，以及(ii)及一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含一CDRL1、一CDRL2及一CDRL3，其中： (a)  該CDRH1包含SEQ ID NO.:55、SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:47或SEQ ID NO.:49中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (b)  該CDRH2包含SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:57或SEQ ID NO.:61中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (c)  該CDRH3包含SEQ ID NO.:5、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:51或SEQ ID NO.:53中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成， (d)  該CDRL1包含SEQ ID NO.:9或SEQ ID NO.:32中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (e)  該CDRL2包含SEQ ID NO.:10中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (f)  該CDRL3包含SEQ ID NO.:11、18、21、24、33或67中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成， 任擇地其限制條件為該CDRH1、該CDRH2、該CDRH3、該CDRL1、該CDRL2及該CDRL3不包含以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(i)分別3-5及9-11；(ii)分別3、4、15及9-11；(iii)分別3-5、9、10及18；(iv)分別3-5、9、10及21；(v)分別3-5、9-10及24；或(vi)分別3-5、32、96及33。
較佳實施例之詳細說明
本文提供可結合至各種流感病毒，諸如A型流感病毒(IAV)及B型流感病毒(IBV)且有力地中和該等流感病毒之感染的抗體及抗原結合片段。亦提供編碼抗體及抗原結合片段之聚核苷酸、載體、宿主細胞及相關組成物，以及使用該等抗體、核酸、載體、宿主細胞及相關組成物來治療(例如，降低、延遲、消除或預防)個體之流感病毒感染的方法及/或用於製造用以治療個體之流感感染的藥劑。
如本發明實例所教示，鑑別多種殖株相關之抗體，該等抗體結合至一連串IAV及IBV NA，且具有針對IAV及IBV病毒之中和/抑制性功能。某些抗體，包括「FNI9」，與抗體「1G01」(Stadlbauer等人( Science366(6464):499-504 (2019)所描述)相比具有改良之功能。所揭露之抗體及抗原結合片段包括自抗體FNI9工程化之變異體。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段與FNI9 (或其抗原結合片段)相比具有至少實質上等效、等效或改良之：結合廣度；活體外生產效價；神經胺酸酶抑制；及/或中和效力。在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段具有藉由UHPLC-SEC觀測不具有顯著聚集(＜3%高分子量物種)或碎裂(＜3%低分子物種)之尺寸排阻層析法(SEC)概況。與親代抗體FNI9相比，本文所揭露之某些變異抗體(例如「FNI9-v8.1」)具有一或多種改良之功能。
產生且表徵抗體之序列變異體。某些所揭露之實施例係關於此類抗體、其抗原結合片段及相關組成物及用途。
在更詳細地闡述本揭露內容之前，提供將在本文中使用之某些術語的定義可能有助於對本揭露內容之理解。其他定義闡述於整篇本揭露內容中。
在本說明書中，除非另外指明，否則任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍或整數範圍應理解為包括所述範圍內之任何整數值，且在適當時包括其分數(諸如整數之十分之一及百分之一)。此外，除非另外指明，否則本文所敍述之與諸如聚合物次單元、尺寸或厚度之任何物理特徵相關之任何數值範圍應理解為包括所敍述範圍內之任何整數。如本文所用，除非另外指明，否則術語「約」意謂指定範圍、值或結構之±20%。應理解，如本文所用，術語「一(a/an)」係指所列舉組分中之「一或多者」。使用選擇性連接詞(例如「或」)應理解為意謂替代方案中之一者、二者或其任何組合。如本文所用，術語「包括」、「具有」及「包含」同義地使用，該等術語及其變化形式意欲被理解為非限制性的。
「任擇的」或「任擇地」意謂隨後描述之要素、組分、事件或狀況可能發生或可能不發生，且該描述包括要素、組分、事件或狀況發生之情況及其不發生之情況。
另外，應理解，來源於本文所述之結構及次單元之各種組合的個別構築體或構築體之群體係由本申請案揭露，其程度如同各構築體或構築體之群體單獨地闡述一般。因此，特定結構或特定次單元之選擇在本揭露內容之範疇內。
術語「基本上由……組成」不等同於「包含」，且係指主張之指定材料或步驟，或實質上不影響所主張之主題之基本特徵的材料或步驟。舉例而言，當蛋白質區域、區、模組或蛋白質之胺基酸序列包括延伸、缺失、突變或其組合(例如，在胺基或羧基末端處或在區域之間的胺基酸)時，區域、區或模組(例如結合區域)或蛋白質「基本上由特定胺基酸序列組成」，其組合地佔區域、區、模組或蛋白質之長度的至多20% (例如，至多15%、10%、8%、6%、5%、4%、3%、2%或1%)且不實質上影響(亦即，活性降低不超過50%，諸如不超過40%、30%、25%、20%、15%、10%、5%或1%)區域、區、模組或蛋白質之活性(例如，結合蛋白質之目標結合親和力)。
如本文所用，「胺基酸」係指天然存在及合成之胺基酸，以及以類似於天然存在之胺基酸的方式起作用的胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然存在之胺基酸係由遺傳密碼編碼之胺基酸，以及隨後經修飾之胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸及O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物係指具有與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構(亦即與氫、羧基、胺基及R基團鍵結之α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此等類似物具有經修飾之R基團(例如正白胺酸)或經修飾之肽主鏈，但保留與天然存在之胺基酸相同之基本化學結構。胺基酸模擬物係指具有與胺基酸之一般化學結構不同之結構，然而以與天然存在之胺基酸類似之方式起作用的化合物。
如本文所用，「突變」係指核酸分子或多肽分子之序列分別與參考或野生型核酸分子或多肽分子相比的變化。突變可導致序列發生若干不同類型的變化，包括核苷酸或胺基酸之取代、插入或缺失。
「守恆取代」係指不顯著影響或改變特定蛋白質之結合特徵的胺基酸取代。一般而言，守恆取代為經取代之胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基置換的取代。守恆取代包括在以下組中之一者中發現之取代：第1組：丙胺酸(Ala或A)、甘胺酸(Gly或G)、絲胺酸(Ser或S)、蘇胺酸(Thr或T)；第2組：天冬胺酸(Asp或D)、麩胺酸(Glu或Z)；第3組：天冬醯胺(Asn或N)、麩醯胺酸(Gln或Q)；第4組：精胺酸(Arg或R)、離胺酸(Lys或K)、組胺酸(His或H)；第5組：異白胺酸(Ile或I)、白胺酸(Leu或L)、甲硫胺酸(Met或M)、纈胺酸(Val或V)；及第6組：苯丙胺酸(Phe或F)、酪胺酸(Tyr或Y)、色胺酸(Trp或W)。另外或替代地，胺基酸可根據類似功能、化學結構或組成(例如酸性、鹼性、脂族、芳族或含硫)分組至守恆取代組中。舉例而言，出於取代之目的，脂族分組可包括Gly、Ala、Val、Leu及Ile。其他守恆取代組包括：含硫：Met及半胱胺酸(Cys或C)；酸性：Asp、Glu、Asn及Gln；小脂族、非極性或略微極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro及Gly；極性、帶負電殘基及其醯胺：Asp、Asn、Glu及Gln；極性、帶正電殘基：His、Arg及Lys；大脂族、非極性殘基：Met、Leu、Ile、Val及Cys；及大芳族殘基：Phe、Tyr及Trp。額外資訊可見於Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company中。
如本文所用，「蛋白質」或「多肽」係指胺基酸殘基之聚合物。蛋白質適用於天然存在之胺基酸聚合物，以及適用於其中一或多個胺基酸殘基為相應天然存在之胺基酸的人工化學模擬物的胺基酸聚合物，及非天然存在之胺基酸聚合物。亦涵蓋本揭露內容之蛋白質、肽及多肽的變異體。在某些實施例中，變異蛋白、肽及多肽包含與本文所描述之經定義或參考胺基酸序列的胺基酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致的胺基酸序列或由其組成。
本揭露內容之任何多肽(例如VH、VL、抗體重鏈、抗體輕鏈)可在由聚核苷酸序列編碼時包含「訊息肽」(亦稱為前導序列、前導肽或運輸肽)。訊息肽使新合成的多肽靶向至其細胞內部或外部之適當位置。訊息肽可在定位或分泌期間或完成後完全或部分地自多肽移除。具有訊息肽之多肽可稱為「前蛋白」，而訊息肽移除之多肽可稱為「成熟」蛋白或多肽。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段為成熟蛋白或前蛋白。
「核酸分子」或「聚核苷酸」或「聚核酸」係指包括由天然次單元(例如，嘌呤或嘧啶鹼基)或非天然次單元(例如，𠰌啉環)構成之經共價連接的核苷酸的聚合化合物。嘌呤鹼基包括腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤及黃嘌呤，且嘧啶鹼基包括尿嘧啶、胸腺嘧啶及胞嘧啶。核酸分子包括聚核糖核酸(RNA)，其包括mRNA、微小RNA、siRNA、病毒基因體RNA及合成RNA；及聚去氧核糖核苷酸(DNA，亦稱為去氧核糖核酸)，其包括cDNA、基因體DNA及合成DNA；其中之任一者可為單股或雙股。若為單股，則核酸分子可為編碼股或非編碼(反義)股。編碼胺基酸序列之核酸分子包括所有編碼相同胺基酸序列之核苷酸序列。一些型式之核苷酸序列亦可包括內含子，以致經由共轉錄或轉錄後機制移除內含子。換言之，由於遺傳密碼之冗餘或簡併或藉由剪接，不同核苷酸序列可編碼相同胺基酸序列。
在一些實施例中，聚核苷酸包含經修飾之核苷、帽-1結構、帽-2結構或其任何組合。在某些實施例中，聚核苷酸包含假尿苷、N6-甲基腺苷、5-甲基胞苷、2-硫代尿苷或其任何組合。在一些實施例中，假尿苷包含N1-甲基假尿苷。此等特徵在此項技術中已知且論述於例如Zhang等人. Front. Immunol., DOI=10.3389/fimmu.2019.00594 (2019)；Eyler等人. PNAS116(46): 23068-23071; DOI: 10.1073/pnas.1821754116 (2019)；Nance及Meier, ACS Cent. Sci.2021, 7, 5, 748-756; doi.org/10.1021/acscentsci.1c00197 (2021)以及van Hoecke及Roose, J. Translational Med17:54 (2019); https://doi.org/10.1186/s12967-019-1804-8，其經修飾之核苷及mRNA特徵以引用之方式併入本文中。亦涵蓋本揭露內容之核酸分子的變異體。變異核酸分子與如本文所描述之確定或參考聚核苷酸之核酸分子至少70%、75%、80%、85%、90%，且較佳95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致(亦即，至少70%、至少75%、至少80%或至少90%，且較佳至少95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致)，或在0.015 M氯化鈉、0.0015 M檸檬酸鈉在約65-68℃下或0.015 M氯化鈉、0.0015 M檸檬酸鈉及50%甲醯胺在約42℃下之嚴格雜交條件下與聚核苷酸雜交。核酸分子變異體保留編碼具有本文所述之功能，諸如結合目標分子之其結合區域的能力。
「序列一致性百分比」係指藉由比較序列確定之在二個或更多個序列之間的關係。確定序列一致性之較佳方法經設計以在所比較之序列之間產生最佳匹配。舉例而言，出於最佳比較目的來比對序列(例如，可在第一及第二胺基酸或核酸序列中之一者或二者中引入空隙以用於最佳比對)。此外，出於比較目的可忽略非同源序列。除非另外指明，否則根據參考序列之長度計算本文所提及之序列一致性百分比。用以確定序列一致性及相似性之方法可見於公開可用的電腦程式中。序列比對及一致性百分比計算可使用BLAST程式(例如BLAST 2.0、BLASTP、BLASTN或BLASTX)來執行。用於BLAST程式中之數學演算法可見於Altschul等人, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997中。其他實例包括Clustal W、MAFFT、Clustal Omega、AlignMe、Praline、GAP、BESTFIT、Needle (EMBOSS)、Stretcher (EMBOSS)、GGEARCH2SEQ、Water (EMBOSS)、Matcher (EMBOSS)、LALIGN及SSEARCH2SEQ。全域比對演算法，諸如Needleman及Wunsch演算法，可用於將二個序列在其整個長度上比對，從而最大化匹配數目且最小化空隙數目。可使用預設值。
為了產生二個胺基酸序列之相似度分數，可使用評分矩陣，其為一些非一致胺基酸(例如，守恆胺基酸取代、具有類似生理化學特性之胺基酸及/或在異種同源物、同源物或同種同源物中展現頻繁取代之胺基酸)指派正分數。評分矩陣之非限制性實例包括PAM30、PAM70、PAM250、BLOSUM45、BLOSUM50、BLOUM62、BLOSUM80及BLOSUM90。
在本揭露內容之上下文內，將理解，當序列分析軟體用於分析時，分析結果係基於所參考之程式的「預設值」。「預設值」意謂最初在首次初始化時使用軟體加載之任何值或參數集。
術語「分離」意謂材料自其原始環境(例如若其為天然存在的，則為天然環境)中移除。舉例而言，存在於活動物中之天然存在之核酸或多肽為未經分離的，但與天然系統中之一些或所有共存材料分離的相同核酸或多肽為經分離的。此類核酸可為載體之一部分及/或此類核酸或多肽可為組成物(例如細胞溶解物)之一部分，且仍為經分離的，因為此類載體或組成物不為核酸或多肽之天然環境的一部分。在一些實施例中，「經分離」亦可描述抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或在人體外部之組成物。在某些實施例中，提供經分離之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
術語「基因」意謂涉及產生多肽鏈之DNA或RNA片段；在某些情況下，其包括在編碼區之前及之後的區(例如，5'非轉譯區(UTR)及3' UTR)，以及個別編碼片段(外顯子)之間的介入序列(內含子)。
「功能變異體」係指在結構上類似或在結構上實質上類似於本揭露內容之親代或參考化合物，但在組成(例如，一個鹼基、原子或官能基不同、經添加或移除)方面略微不同的多肽或聚核苷酸，使得該多肽或經編碼多肽能夠以至少50%效率，較佳地親代多肽之活性的至少55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或100%位準，進行親代多肽之至少一個功能。在一些實施例中，經編碼多肽或多肽能夠以親代多肽之活性的至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.9%或至少100%位準進行親代多肽之至少一個功能。換言之，當功能變異體與親代或參考多肽相比在所選分析中，諸如用於量測結合親和力之分析(例如，量測締合(Ka)或解離(K D)常數之Biacore®或四聚體染色)，展現出效能減小不超過50%時，本揭露內容之多肽或經編碼多肽的功能變異體具有「類似結合」、「類似親和力」或「類似活性」。
如本文所用，「功能部分」或「功能片段」係指包含僅親代或參考化合物之區域、部分或片段的多肽或聚核苷酸，且多肽或經編碼多肽保持與親代或參考化合物之區域、部分或片段相關之至少50%活性，較佳地為至少親代多肽之活性的55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或99.9%或100%位準，或提供生物效益(例如，效應功能)。在一些實施例中，多肽或經編碼多肽保持親代多肽之活性的至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或至少99.9%或至少100%位準。當功能部分或片段與親代或參考多肽相比，展現出效能減小不超過50%時(關於親和力，與親代或參考相比較佳不超過20%或10%，或不超過對數差異)，本揭露內容之多肽或經編碼多肽的「功能部分」或「功能片段」具有「類似結合」或「類似活性」。
如本文所用，術語「經工程化」、「重組」或「非天然」係指包括至少一個基因改變或藉由引入外源性或異源性核酸分子而經修飾之生物體、微生物、細胞、核酸分子或載體，其中此類改變或修飾藉由基因工程化(亦即，人工干預)來引入。基因改變包括例如引入編碼功能性RNA、蛋白質、融合蛋白質或酶類之可表現的核酸分子的修飾，或其他核酸分子添加、缺失、取代或細胞之基因物質的其他功能性破壞。額外修飾包括例如非編碼調節區，其中修飾改變聚核苷酸、基因或操縱子之表現。
如本文所用，「異源性」或「非內源性」或「外源性」係指並非宿主細胞或個體原生的任何基因、蛋白質、化合物、核酸分子或活性，或已被改變的宿主細胞或個體原生的任何基因、蛋白質、化合物、核酸分子或活性。異源性、非內源性或外源性包括已突變或以其他方式改變使得結構、活性或二者在原生與改變的基因、蛋白質、化合物或核酸分子之間不同的基因、蛋白質、化合物或核酸分子。在某些實施例中，異源性、非內源性或外源性基因、蛋白質或核酸分子(例如，受體、配位體等)可能不對宿主細胞或個體為內源性的，但實際上，編碼此類基因、蛋白質或核酸分子之核酸可藉由共軛、轉型、轉染、電穿孔或其類似方式添加至宿主細胞，其中經添加之核酸分子可整合至宿主細胞基因體中或可以染色體外基因物質之形式存在(例如，作為質體或其他自我複製載體)。術語「同源性」或「同源物」係指見於或衍生自宿主細胞、物種或菌株之基因、蛋白質、化合物、核酸分子或活性。舉例而言，異源性或外源性聚核苷酸或編碼多肽之基因可與原生聚核苷酸或基因同源，且對同源性多肽或活性編碼，但聚核苷酸或多肽可具有改變的結構、序列、表現量或其任何組合。非內源性聚核苷酸或基因以及經編碼多肽或活性可來自相同物種、不同物種或其組合。
在某些實施例中，若其已改變或突變，則宿主細胞原生之核酸分子或其部分將視為對宿主細胞為異源的，或若其已經異源表現控制序列改變或已經通常不與宿主細胞原生之核酸分子相關的內源性表現控制序列改變，則宿主細胞原生之核酸分子可視為異源的。另外，術語「異源性」可指與宿主細胞不同、改變或不為內源性的生物活性。如本文所述，超過一個異源核酸分子可作為單獨核酸分子、作為多個單獨受控基因、作為多順反子核酸分子、作為編碼融合蛋白之單個核酸分子或其任何組合引入宿主細胞中。
如本文所用，術語「內源性」或「原生」係指通常存在於宿主細胞或個體中之聚核苷酸、基因、蛋白質、化合物、分子或活性。
如本文所用，術語「表現」係指以核酸分子(諸如基因)之編碼序列為主，藉以產生多肽的過程。該過程可包括轉錄、轉錄後控制、轉錄後修飾、轉譯、轉譯後控制、轉譯後修飾或其任何組合。經表現之核酸分子通常可操作地連接於表現控制序列(例如啟動子)。
術語「可操作地連接」係指單一核酸片段上之二個或更多個核酸分子締合，使得一者之功能受另一者影響。舉例而言，當啟動子能夠影響編碼序列之表現(亦即編碼序列在啟動子之轉錄控制下)時，啟動子與編碼序列可操作地連接。「不連接」意謂締合的遺傳元件彼此不緊密締合，且一者之功能不影響另一者。
如本文所描述，超過一個異源核酸分子可作為獨立核酸分子、作為多個個別地受控基因、作為多順反子核酸分子、作為編碼蛋白質(例如抗體重鏈)之單核酸分子或其任何組合經引入宿主細胞中。當二個或更多個異源核酸分子引入宿主細胞中時，應理解，二個或更多個異源核酸分子可作為單個核酸分子(例如在單個載體上)、在各別載體上、在單個部位或多個部位整合至宿主染色體中或其任何組合引入。所提及之異源核酸分子或蛋白質活性之數目係指編碼核酸分子之數目或蛋白質活性之數目，而非引入宿主細胞中之各別核酸分子之數目。
術語「構築體」係指含有重組核酸分子(或當上下文清楚地指示時，本揭露內容之融合蛋白質)之任何聚核苷酸。(聚核苷酸)構築體可存在於載體(例如，細菌載體、病毒載體)中，或可整合至基因體中。「載體」為能夠輸送另一核酸分子之核酸分子。載體可為例如質體、黏質體、病毒、RNA載體或線性或環狀DNA或RNA分子，其可包括染色體、非染色體、半合成或合成核酸分子。本揭露內容之載體亦包括轉位子系統(例如Sleeping Beauty，參見例如Geurts等人, Mol. Ther. 8:108, 2003: Mátés等人, Nat. Genet. 41:753, 2009)。例示性載體為能夠自主複製(附加型載體)、能夠將聚核苷酸遞送至細胞基因體(例如，病毒載體)或能夠表現其所連接之核酸分子(表現載體)的載體。
如本文所用，「表現載體」或「載體」係指含有可操作地連接至適合之控制序列的核酸分子的DNA構築體，該控制序列能夠實現適合之宿主中核酸分子之表現。此類控制序列包括實現轉錄之啟動子、控制此類轉錄之任擇的操縱序列、編碼適合的mRNA核糖體結合位之序列及控制轉錄及轉譯終止之序列。載體可為質體、噬菌體粒子、病毒或僅潛在的基因體插入物。一旦轉型至適合之宿主中，載體可獨立於宿主基因體複製及起作用，或可在某些情況下整合至基因體自身中，或將載體中所含之聚核苷酸遞送至不具有載體序列之基因體中。在本發明書中，「質體」、「表現質體」、「病毒」及「載體」通常可互換地使用。
在將核酸分子插入至細胞中之上下文中，術語「引入」意謂「轉染」、「轉型」或「轉導」，且包括提及到將核酸分子併入至真核或原核細胞中，其中該核酸分子可併入至細胞之基因體(例如，染色體、質體、色素體或粒線體DNA)中，轉化成自主複製子或暫時表現(例如，經傳染mRNA)。
在某些實施例中，本揭露內容之聚核苷酸可操作地連接至載體之某些元件。舉例而言，實現所接合之編碼序列的表現及加工所需的聚核苷酸序列可以可操作方式連接。表現控制序列可包括適當轉錄起始、終止、啟動子及強化子序列；有效RNA加工訊息，諸如剪接及聚腺苷酸化訊息；使細胞質mRNA穩定之序列；增強轉譯效率之序列(亦即克紮克共同序列(Kozak consensus sequence))；增強蛋白質穩定性之序列；及增強蛋白質分泌之可能的序列。若表現控制序列與感興趣之基因及以反式或在一定距離起作用以控制感興趣之基因的表現控制序列鄰接，則可操作地連接表現控制序列。
在某些實施例中，載體包含質體載體或病毒載體(例如慢病毒載體或γ-逆轉錄病毒載體)。病毒載體包括逆轉錄病毒；腺病毒；微小病毒(例如腺相關病毒)；冠狀病毒；負股RNA病毒，諸如正黏病毒(例如流感病毒)、棒狀病毒(例如狂犬病及水泡性口炎病毒)、副黏病毒(例如麻疹及仙台)；正股RNA病毒，諸如小核糖核酸病毒及α病毒；及雙股DNA病毒，包括腺病毒、疱疹病毒(例如1型及2型單純疱疹病毒、艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、巨細胞病毒)及痘病毒(例如牛痘、禽痘及金絲雀痘)。其他病毒包括例如諾沃克病毒(Norwalk virus)、披衣病毒、黃病毒、呼腸孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒及肝炎病毒。逆轉錄病毒之實例包括：鳥類白血病性肉瘤性病毒、哺乳動物C型病毒、B型病毒、D型病毒、HTLV-BLV群、慢病毒、泡沫病毒(Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, Fundamental Virology, 第三版, B.N.Fields等人編, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996)。
「逆轉錄病毒」為具有RNA基因體之病毒，該RNA基因體使用逆轉錄酶逆轉錄至DNA中，隨後將逆轉錄DNA併入至宿主細胞基因體中。「γ逆轉錄病毒屬」係指逆轉錄病毒科之屬。γ逆轉錄病毒之實例包括小鼠幹細胞病毒、鼠類白血病病毒、貓科動物白血病病毒、貓科動物肉瘤病毒及禽類網狀內皮增殖病病毒。
「慢病毒載體」包括用於基因遞送之HIV類慢病毒載體，其可為整合或未整合的，具有相對較大封裝能力，且可轉導一系列不同細胞類型。慢病毒載體通常在將三個(封裝、包膜及轉移)或更多個質體暫時轉染至生產細胞中之後產生。與HIV一樣，慢病毒載體經由病毒表面醣蛋白與細胞表面上之受體的相互作用而進入目標細胞。進入後，病毒RNA經歷由病毒逆轉錄酶複合體介導的逆轉錄。逆轉錄產物為雙股線性病毒DNA，其為用於病毒整合至感染細胞之DNA中的受質。
在某些實施例中，病毒載體可為γ逆轉錄病毒屬，例如莫洛尼鼠類白血病病毒(Moloney murine leukemia virus，MLV)衍生之載體。在其他實施例中，病毒載體可為更複雜的逆轉錄病毒衍生之載體，例如慢病毒衍生之載體。HIV-1衍生之載體屬於此類別。其他實例包括衍生自HIV-2、FIV、馬傳染性貧血病毒、SIV及梅迪-維斯納病毒(Maedi-Visna virus) (綿羊慢病毒)之慢病毒載體。使用逆轉錄病毒及慢病毒病毒載體及封裝細胞以用含有轉殖基因之病毒粒子轉導哺乳動物宿主細胞的方法為此項技術中已知的且先前已描述於例如以下中：美國專利8,119,772；Walchli等人, PLoS One 6:327930, 2011；Zhao等人, J. Immunol. 174:4415, 2005；Engels等人, Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003；Frecha等人, Mol. Ther. 18:1748, 2010；及Verhoeyen等人, Methods Mol. Biol. 506:97, 2009。逆轉錄病毒及慢病毒載體構築體及表現系統亦可市購。其他病毒載體亦可用於包括DNA病毒載體之聚核苷酸遞送，該等DNA病毒載體包括例如以腺病毒為主之載體及以腺相關病毒(AAV)為主之載體；衍生自單純疱疹病毒(HSV)之載體，包括擴增子載體、複製缺陷型HSV及減毒性HSV (Krisky等人, Gene Ther. 5:1517, 1998)。
可用於本揭露內容之組成物及方法之其他載體包括衍生自桿狀病毒及α病毒之載體(Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. 第209-40頁, Friedmann T.編The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab)或質體載體(諸如睡美人或其他轉位子載體)。
當病毒載體基因體包含待作為各別轉錄本在宿主細胞中表現的多個聚核苷酸時，病毒載體亦可在二個(或更多個)轉錄本之間包含允許雙順反子或多順反子表現的其他序列。病毒載體中所用之此類序列的實例包括內部核糖體進入位(IRES)、弗林蛋白酶裂解位、病毒2A肽或其任何組合。
本文進一步描述用於直接投予至個體之質體載體，該等質體載體包括編碼以DNA為主之抗體或抗原結合片段的質體載體。
如本文所用，術語「宿主」係指靶向用異源核酸分子基因修飾以產生感興趣的多肽(例如，本揭露內容之抗體)的細胞或微生物。
宿主細胞可包括可接受載體或併入核酸或表現蛋白質之任何個別細胞或細胞培養物。該術語亦涵蓋宿主細胞之後代，無論基因上或表型上是否相同或不同。適合的宿主細胞可視載體而定且可包括哺乳動物細胞、動物細胞、人類細胞、猿猴細胞、昆蟲細胞、酵母細胞及細菌細胞。此等細胞可藉由使用病毒載體、經由磷酸鈣沈澱轉型、DEAE-聚葡萄糖、電穿孔、顯微注射或其他方法誘導併入載體或其他材料。參見例如Sambrook等人, Molecular Cloning:  A Laboratory Manual第2版(Cold Spring Harbor Laboratory, 1989)。
在流感感染之情形下，「宿主」係指經流感感染之細胞或個體。
如本文所用，「抗原」或「Ag」係指引起免疫反應之免疫原性分子。此免疫反應可涉及抗體產生、特異性免疫勝任細胞之活化、補體活化、抗體依賴性細胞毒性或其任何組合。抗原(免疫原性分子)可為例如肽、醣肽、多肽、醣多肽、聚核苷酸、多醣、脂質或其類似物。顯而易見的是，抗原可合成、重組產生或來源於生物樣品。可含有一或多個抗原之例示性生物樣品包括組織樣品、糞便樣品、細胞、生物流體或其組合。抗原可藉由已經修飾或基因工程化以表現抗原之細胞產生。抗原亦可存在於流感NA抗原中，諸如存在於病毒粒子中，或在由流感感染之細胞表面上表現或呈現。
術語「表位」或「抗原表位」包括由諸如免疫球蛋白之同源結合分子或其他結合分子、區域或蛋白質識別且特異性結合的任何分子、結構、胺基酸序列或蛋白質決定子。表位決定子一般含有化學活性表面類別的分子，諸如胺基酸或糖側鏈，且可具有特有的三維結構特徵以及荷質比特徵。當抗原為或包含肽或蛋白質時，表位可包括連續胺基酸(例如，線性表位)，或可包括來自蛋白質之不同部分或區的因蛋白質摺疊而接近之胺基酸(例如，非連續或構形表位)，或與蛋白質摺疊無關的緊密相鄰的非鄰接胺基酸。 抗體、抗原結合片段及組成物
在一個態樣中，本揭露內容提供經分離之抗流感神經胺酸酶(NA)抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至來自以下之一神經胺酸酶(NA)：(i)一A型流感病毒(IAV)，其中該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者；及(ii)一B型流感病毒(IBV)。
在某些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段與NA締合或聯合，但不與樣品中之任何其他分子或組分顯著締合或聯合。
在某些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段特異性結合至IAV NA。如本文所用，「特異性結合」係指抗體或抗原結合片段與抗原之締合或聯合的親和力或K a(亦即，特定結合相互作用之平衡結合常數，單位為1/M)等於或大於10 5M -1(其等於此締合反應之締合速率[K on]與解離速率[K off]的比率)，但不與樣品中之任何其他分子或組分顯著締合或聯合。可替代地，親和力可經定義為以M為單位之特定結合相互作用之平衡解離常數(K d) (例如10 -5M至10 -13M)。抗體可分類為「高親和力」抗體或「低親和力」抗體。「高親和力」抗體係指K a為至少10 7M -1、至少10 8M -1、至少10 9M -1、至少10 10M -1、至少10 11M -1、至少10 12M -1或至少10 13M -1的彼等抗體。「低親和力」抗體係指K a為至多10 7M -1、至多10 6M -1、至多10 5M -1的彼等抗體。可替代地，親和力可經定義為以M為單位之特定結合相互作用之平衡解離常數(K d) (例如10 -5M至10 -13M)。
已知用於鑑別結合特定目標之本揭露內容的抗體以及確定結合區域或結合蛋白質親和力的多種分析，諸如西方墨點、ELISA (例如，直接、間接或夾心)、分析型超速離心、光譜法及表面電漿子共振(Biacore®)分析(參見例如，Scatchard等人, Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949；Wilson, Science 295:2103, 2002；Wolff等人, Cancer Res. 53:2560, 1993；及美國專利第5,283,173號、第5,468,614號或等效物)。用於評定親和力或表觀親和力或相對親和力之分析為已知的。
在某些實例中，結合可藉由在宿主細胞中以重組方式表現流感NA抗原(例如，藉由轉染)及用抗體對(例如，固定的，或固定的及預滲透的)宿主細胞免疫染色，及藉由流動式細胞測量術(例如，使用ZE5細胞分析儀(BioRad®)及FlowJo軟體(TreeStar)分析結合來確定。在一些實施例中，陽性結合可由表現流感NA之細胞相對於對照(例如，模擬)細胞之抗體的不同染色來定義。
在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段結合至流感NA蛋白，如使用生物層干涉法或藉由表面電漿子共振所量測。
可使用IC50或EC50值描述本發明所揭露之抗體或抗原結合片段的某些特徵。在某些實施例中，IC50為引起所指示之生物或生物化學功能、活性或反應之半最大抑制的組成物(例如，抗體)之濃度。在某些實施例中，EC50為在分析中提供半最大反應之組成物的濃度。在一些實施例中，例如對於描述本發明所揭露之抗體或抗原結合片段中和流感感染之能力，IC50及EC50可互換地使用。
在某些實施例中，本揭露內容之抗體能夠中和藉由流感之感染。如本文所用，「中和抗體」為可中和，亦即防止、抑制、減少、阻礙或干擾病原體在宿主中引發及/或維持感染之能力的抗體。術語「中和抗體」及「中和之抗體(an antibody that neutralizes/antibodies that neutralize)」在本文中可互換地使用。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段可能能夠預防及/或中和活體外感染模型及/或活體內動物感染模型及/或人類中之流感感染。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段為人類、人源化或嵌合的。
在某些實施例中，(i)該第1組IAV NA包含N1、N4、N5及/或N8；及/或(ii)該第2組IAV NA包含N2、N3、N6、N7及/或N9。在一些實施例中：(i) N1為來自以下中之任何一或多者的N1：A/California/07/2009、A/California/07/2009 I223R/H275Y、A/California/07/2009 Q250S、A/Swine/Jiangsu/J004/2018、A/Swine/Hebei/2017、A/Stockholm/18/2007、A/Brisbane/02/2018、A/Michigan/45/2015、A/Mississippi/3/2001、A/Netherlands/603/2009、A/Netherlands/602/2009、A/Vietnam/1203/2004、A/Vietnam/1203/2004 S247R、A/Vietnam/1203/2004 I223R、A/Vietnam/1203/2004 R152I、A/Vietnam/1203/2004 D199N、A/G4/SW/Shangdong/1207/2016、A/G4/SW/Henan/SN13/2018、A/Mink/Spain/2022及A/New Jersey/8/1976；(ii) N4來自A/mallard duck/Netherlands/30/2011；(iii) N5來自A/aquatic bird/Korea/CN5/2009；(iv) N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011 A/chicken/Russia/3-29/2020；(v) N2為來自以下中之任何一或多者的N2：A/Washington/01/2007、A/HongKong/68、A/South Australia/34/2019、A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016、A/Switzerland/9715293/2013、A/Leningrad/134/17/57、A/Florida/4/2006、A/Netherlands/823/1992、A/Norway/466/2014、A/Switzerland/8060/2017、A/Texas/50/2012、A/Victoria/361/2011、A/HongKong/2671/2019、A/HongKong/2671/2019 K431E、A/SW/Mexico/SG1444/2011、A/Tanzania/205/2010、A/Aichi/2/1968、A/Bilthoven/21793/1972、A/Netherlands/233/1982、A/Shanghai/11/1987、A/Nanchang/933/1995、A/Fukui/45/2004、A/Brisbane/10/2007、A/Tasmania/503/2020、A/Cambodia/2020、A/Perth/16/2009、A/Kansas/14/2017、A/Swine/Kansas/2021、A/Canine/Korea/VC378/2012及A/Canine/Indiana/003018/2016；(vi) N3來自A/Canada/rv504/2004及A/chicken/Jalisco/PAVX17170/2017；(v) N6來自A/swine/Ontario/01911/1/99、A/Ck/Suzhou/j6/2019及A/Hangzhou/01/2021；(vi) N7來自A/Netherlands/078/03及A/Ck/621572/03；及/或(vii) N9為來自以下中之任何一或多者的N9：A/Anhui/2013及A/Hong Kong/56/2015。在某些實施例中，IBV NA為來自以下中之任何一或多者的NA：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)；B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)；B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)；B/Brisbane/33/2008；B/Colorado/06/2017；B/Hubei-wujiang/158/2009；B/Massachusetts/02/2012；B/Netherlands/234/2011；B/Perth/211/2001；B/Phuket/3073/2013；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/Perth/211/2011；B/HongKong/05/1972；B/Harbin/7/1994 (Victoria)；B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Victoria/504/2000 (Yamagata)；B/Victoria/2/87；B/Victoria/2/87譜系；B/Yamagata/16/88；及B/Yamagata/16/88譜系。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至以下中之各者：(i)第1組IAV NA；(ii)第2組IAV NA；及(iii) IBV NA，其中EC 50在約0.1 μg/mL至約50 μg/mL範圍內，或約0.1 μg/mL至約2 μg/mL範圍內，或0.1 μg/mL至約10 μg/mL範圍內，或2 μg/mL至約10 μg/mL範圍內，或約0.4 μg/mL至約50 μg/mL範圍內，或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL範圍內，或0.4 μg/mL至約10 μg/mL範圍內，或2 μg/mL至約10 μg/mL範圍內，或0.4 μg/mL至約1 μg/mL範圍內，或為0.4 μg/mL或更小。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至：(i)第1組IAV NA，其中EC 50在以下範圍內：約0.4 μg/mL至約50 μg/mL、約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、約2 μg/mL至約50 μg/mL、約2 μg/mL至約10 μg/mL或約10 μg/mL至約50 μg/mL；(ii)第2組IAV NA，其中EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、或約2 μg/mL至約50 μg/mL、或約2 μg/mL至約10 μg/mL、或約10 μg/mL至約50 μg/mL範圍內；及/或(iii) IBV NA，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL。在其他實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至：(i) N1，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL範圍內，或在以下範圍內：約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(ii) N4，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在以下範圍內：約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(iii) N5，其中EC 50在以下範圍內：約0.4 μg/mL至約2 μg/mL；(iv) N8，其中EC 50為約50 μg/mL；(v) N2，其中EC 50在以下範圍內：約0.4 μg/mL至約20 μg/mL，或約0.4 μg/mL至約10 μg/mL，或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL，約1 μg/mL至約10 μg/mL，或約1 μg/mL至約20 μg/mL，或約1 μg/mL至約5 μg/mL，或為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20 μg/mL；(vi) N3，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在以下範圍內：約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(vii) N6，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(viii) N7，其中EC 50在以下範圍內：約2 μg/mL至約50 μg/mL；(ix) N9，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在以下範圍內：約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；及/或(xi) IBV NA，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在以下範圍內：約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至：(i)以下中之一或多者：N1 A/California/07/2009、N1 A/California/07/2009 I223R/H275Y、N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2008、N1 A/Stockholm/18/2007、N4 A/mallard duck/Netherlands/30/2011、N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009、N2 A/Hong Kong/68、N2 A/Leningrad/134/17/57、N3 A/Canada/rv504/2004、N6 A/Swine/Ontario/01911/1/99、N9 A/Anhui/1/2013、B/Lee/10/1940 (祖性)、B/Brisbane/60/2008 (Victoria)、B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)、B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)、B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)及B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)，其中EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL，或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(ii) N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009，其中EC 50為約2 μg/mL，或在約2 μg/mL至約10 μg/mL範圍內；(iii) N8 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011，其中EC 50為約50 μg/mL；(iv) N2 A/Washington/01/2007，其中EC 50在約2 μg/mL至約10 μg/mL範圍內；(v) N7 A/Netherlands/078/03，其中EC 50在約2 μg/mL至約50 μg/mL範圍內；(vi) N2 A/South Australia/34/2019，其中EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL範圍內；(vii) N2 A/Switzerland/8060/2017，其中EC 50在約9.5 μg/mL至約3.8 μg/mL範圍內；(viii) N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016，其中EC 50在約18.4 μg/mL至約2.2 μg/mL範圍內；(iv) N2 A/Switzerland/9715293/2013，其中EC 50在約1.6 μg/mL至約1.2 μg/mL範圍內；及/或(v) N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2018，其中EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL範圍內，或為約0.4、約2、約10或約50 μg/mL。在某些實施例中，該NA表現於一宿主細胞(例如，一CHO細胞)之表面上且與NA之結合係根據流動式細胞測量術。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至NA，其中KD小於1.0E-12 M、小於1.0E-11 M、小於1.0 E-11 M，或為1.0E-12M或更小、1.0E-11M或更小或1.0E-10或更小，或KD在1.0E-10與1.0E-13之間，或KD在1.0E-11與1.0E-13之間，其中任擇地，該結合係藉由生物層干涉法(BLI)評定。
在某些實施例中，該NA為N1、N2及/或N9。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至：(1) NA表位，其包含以下胺基酸(N1 NA編號)中之任何一或多者：R368、R293、E228、E344、S247、D198、D151、R118；及/或(2) NA表位，其包含以下胺基酸(N2 NA編號)中之任何一或多者：R371、R292、E227、E344、S247、D198、D151、R118。應理解，抗體及抗原結合片段亦可結合至流感神經胺酸酶，該等流感神經胺酸酶可能不遵循N1或N2胺基酸編號慣例；此等表位之胺基酸可對應於本文指定之N1或N2胺基酸殘基，諸如藉由在NA中相同(例如，藉由比對、3-D結構、守恆或此等之組合)但編號不同之位置處的相同胺基酸殘基。因此，提及N1或N2編號將理解為對應於所計數之胺基酸的胺基酸。展示N1相對於N2位置編號(使用H1N1_California.07.2009及H3N2_NewYork.392.2004)之實例提供於表3中。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至：(1) NA表位，其包含胺基酸R368、R293、E228、D151及R118 (N1 NA編號)；及/或(2) NA表位，其包含胺基酸R371、R292、E227、D151及R118 (N2 NA編號)。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至包含於NA活性位(如本文所描述，該NA活性位包含形成催化核心且直接接觸唾液酸之功能性胺基酸，以及形成活性位骨架之結構胺基酸)中或包含NA活性位之表位，其中任擇地，該NA活性位包含以下胺基酸(N2編號)：R118、D151、R152、R224、E276、R292、R371、Y406、E119、R156、W178、S179、D/N198、I222、E227、H274、E277、D293、E425。在某些實施例中，R118、D151、R152、R224、E276、R292、R371及Y406形成催化核心且直接接觸唾液酸。在某些實施例中，E119、R156、W178、S179、D/N198、I222、E227、H274、E277、D293及E425形成活性位骨架。
在某些實施例中，表位包含或進一步包含以下NA胺基酸(N2編號)中之任何一或多者：E344、E227、S247及D198。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至包含S245N胺基酸突變及/或E221D胺基酸突變之NA (N2編號)。
在某些實施例中，NA包含IBV NA。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至包含以下胺基酸中之任何一或多者的IBV NA表位(IBV編號；例如對於FluB Victoria及FluB Yamagata)：R116、D149、E226、R292及R374。在一些實施例中，表位包含胺基酸R116、D149、E226、R292及R374。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠抑制一活體外感染模型、一活體內動物感染模型及/或一人類中之(i)一IAV NA，其中該IAV NA包含一第1組IAV NA、一第2組IAV NA或二者，及/或(ii)一IBV NA之一唾液酸酶活性。在其他實施例中：(i)該第1組IAV NA包含一H1N1及/或一H5N1；(ii)該第2組IAV NA包含一H3N2及/或一H7N9；及/或(iii)該IBV NA包含以下中之一或多者：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/HongKong/05/1972；B/Taiwan/2/1962 (祖性)；B/Brisbane/33/2008 (Victoria)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/New York/1056/2003 (Victoria)；B/Florida/4/2006(Yamagata)；B/Jiangsu/10/2003 (Yamagata)；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/Perth/211/2011；B/Harbin/7/1994 (Victoria)；B/Colorado/06/2017 (Victoria)；B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Perth/211/2001 (Yamagata)；B/Hubei-wujiagang/158/2009 (Yamagata)；B/Wisconsin/01/2010 (Yamagata)；B/Massachusetts/02/2012 (Yamagata)；B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)；及B/Victoria/504/2000 (Yamagata)。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠以在以下之一範圍內之一IC50抑制藉由一第1組IAV NA；一第2組IAV NA；及/或一IBV NA引起之一唾液酸酶活性：約0.0008 μg/mL至約4 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約3 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約2 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約1 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.9 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.8 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.7 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.6 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.5 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.4 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.3 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.2 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.1 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.09 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.08 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.07 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.06 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.05 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.04 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.03 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.02 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.01 μg/mL、0.002 μg/mL至約4 μg/mL、約0.001 μg/mL至50 μg/mL、約0.1 μg/mL至約30 μg/mL、約0.1 μg/mL至約20 μg/mL、約0.1 μg/mL至約10 μg/mL、約0.1 μg/mL至約9 μg/mL、約0.1 μg/mL至約8 μg/mL、約0.1 μg/mL至約7 μg/mL、約0.1 μg/mL至約6 μg/mL、約0.1 μg/mL至約5 μg/mL、約0.1 μg/mL至約4 μg/mL、約0.1 μg/mL至約3 μg/mL、約0.1 μg/mL至約2 μg/mL、約0.1 μg/mL至約1 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.9 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.8 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.7 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.6 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.5 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.4 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.3 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.2 μg/mL、約0.8 μg/mL至約30 μg/mL、約0.8 μg/mL至約20 μg/mL、約0.8 μg/mL至約10 μg/mL、約0.8 μg/mL至約9 μg/mL、約0.8 μg/mL至約8 μg/mL、約0.8 μg/mL至約7 μg/mL、約0.8 μg/mL至約6 μg/mL、約0.8 μg/mL至約5 μg/mL、約0.8 μg/mL至約4 μg/mL、約0.8 μg/mL至約3 μg/mL、約0.8 μg/mL至約2 μg/mL、約0.8 μg/mL至約1 μg/mL，或為約0.1 μg/mL、約0.2 μg/mL、約0.3 μg/mL、約0.4 μg/mL、約0.5 μg/mL、約0.6 μg/mL、約0.7 μg/mL、約0.8 μg/mL、約0.9 μg/mL、約1.0 μg/mL、約1.5 μg/mL、約2.0 μg/mL、約2.5 μg/mL、約3.0 μg/mL、約3.5 μg/mL、約4.0 μg/mL、約4.5 μg/mL、約5.0 μg/mL、約5.5 μg/mL、約6.0 μg/mL、約6.5 μg/mL、約7.0 μg/mL、約7.5 μg/mL、約8.0 μg/mL、約8.5 μg/mL、約9.0 μg/mL、約10 μg/mL、約11 μg/mL、約12 μg/mL、約13 μg/mL、約14 μg/mL、約15 μg/mL、約16 μg/mL、約17 μg/mL、約18 μg/mL、約19 μg/mL、約20 μg/mL、約25 μg/mL及/或約30 μg/mL。在其他實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠以在以下之一範圍內之一IC50抑制一或多個第1組及/或第2組IAV，及/或一或多個IBV之NA唾液酸酶活性：約.00001 µg/ml至約25 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約10 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約1 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約.001 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約.0001 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約25 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約10 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約1 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約.001 µg/ml至約25 µg/ml，或約.001 µg/ml至約10 µg/ml，或約.001 µg/ml至約1 µg/ml，或約.001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約.001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約.01 µg/ml至約25 µg/ml，或約.01 µg/ml至約10 µg/ml，或約.01 µg/ml至約1 µg/ml，或約.01 µg/ml至約0.1µg/ml，或約1 µg/ml至約25 µg/ml，或約1 µg/ml至約10 µg/ml，或為約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5或15 µg/ml。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠活化一人類FcγRIIIa。在其他實施例中，活化係在將該抗體或抗原結合片段與經一IAV感染之一目標細胞(例如，一A549細胞)一起培育(例如，23小時)之後使用一宿主細胞(任擇地，一Jurkat細胞)確定，該宿主細胞包含：(i)該人類FcγRIIIa (任擇地，一F158對偶基因)；及(ii)可操作地連接至編碼一報導子，諸如一螢光素酶報導子之一序列的一NFAT表現控制序列。在另外其他實施例中，活化係在將該抗體或抗原結合片段與經一H1N1 IAV感染之該目標細胞一起培育(任擇地，培育約23小時)之後確定，其中任擇地，該H1N1 IAV為A/PR8/34，及/或其中任擇地，該感染之一感染倍率(MOI)為6。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠中和藉由一IAV及/或一IBV引起之感染。在某些實施例中，該IAV及/或該IBV具有抗病毒劑抗性，其中任擇地，該抗病毒劑為奧司他韋。在某些實施例中，該IAV包含一N1 NA，其包含胺基酸突變：H275Y；E119D + H275Y；S247N + H275Y；I222V；及/或N294S，其中任擇地，該IAV包含CA09或A/Aichi。在某些實施例中，該IAV包含一N2 NA，其包含胺基酸突變E119V、Q136K及/或R292K。在某些實施例中，該IAV包含一N1 NA，其包含胺基酸突變：S247R、I223R、R152I、D199N及/或Q250S，其中任擇地，該IAV包含A/Vietnam/1203/2004或A/California/7/2009。在某些實施例中，該IAV包含一N2 NA，其包含胺基酸突變K431E，其中任擇地，該IAV包含A/Hong Kong/2671/2019。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠治療及/或預防一個體之(i)一IAV感染及/或(ii)一IBV感染。在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠治療及/或緩解由以下引起之一感染：(i)一H1N1病毒，其中任擇地，該H1N1病毒包含A/PR8/34；及/或(ii)一H3N2病毒，其中任擇地，該H3N2病毒任擇地包含A/Hong Kong/68。在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠在投予一有效量之該抗體或抗原結合片段之後預防受該IAV及/或該IBV感染之一個體之體重減輕，任擇地持續(i)至多15天，或(ii)超過15天。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠預防患有一IAV感染及/或一IBV感染之一個體的一體重減輕超過10%，此藉由參考恰好在該IAV及/或該IBV感染之前的該個體之體重來確定。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段能夠延長患有一IAV感染及/或一IBV感染之一個體的存活。
在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段在一小鼠(例如一tg32小鼠)中具有如下之一活體內半衰期：(i)在以下之一範圍內：約10天至約14天、約10.2天至約13.8天、約10.5天至約13.5天、約11天至約13天、約11.5天至約12.5天，在10天與14天之間、或在10.5天與13.5天之間、或在11天與13天之間，或為約10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12.0、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13.0、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9或14.0天；或(ii)在以下之一範圍內：約12天至約16天、約12.5天至15.5天、約13天至15天、約13.5天至約14.5天，或在12天與16天之間、或在13天與15天之間、或在13.5天與14.5天之間，或為約12.0、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13.0、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、1.36、13.7、13.8、13.9、14.0、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9、15.0 15.1、15.2、15.3、15.4、15.5、1.56、15.7、15.8、15.9或16.0天。
除非本文中明確地定義，否則熟習此項抗體技術者理解之術語各自賦予此項技術中獲得之含義。舉例而言，術語「抗體」係指包含藉由二硫鍵互連之至少二個重(H)鏈及二個輕(L)鏈的完整抗體，以及具有或保持結合至由完整抗體所識別之抗原目標分子之能力的完整抗體之任何抗原結合部分或片段，諸如scFv、Fab或Fab'2片段。因此，本文中術語「抗體」係在最廣泛的意義上使用且包括多株及單株抗體，包括完整抗體及其功能性(抗原結合)抗體片段，包括抗原結合片段(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重組IgG (rIgG)片段、單鏈抗體片段，包括單鏈可變片段(scFv)，及單區域抗體(例如sdAb、sdFv、奈米抗體)片段。該術語涵蓋免疫球蛋白之經基因工程化及/或以其他方式修飾之形式，諸如胞內抗體、肽體、嵌合抗體、完全人類抗體、人源化抗體，及異結合抗體、多特異性(例如雙特異性)抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、串聯二scFv及串聯三scFv。除非另有說明，否則術語「抗體」應理解為涵蓋其功能性抗體片段。該術語亦涵蓋完整或全長抗體，包括任何種類或亞類的抗體，包括IgG及其子類(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgE、IgA及IgD。
術語「V L」或「VL」及「V H」或「VH」係指分別來自抗體輕鏈及抗體重鏈之可變結合區。在某些實施例中，VL為卡帕(κ)類(本文中亦為「VK」)。在某些實施例中，VL為拉姆達(λ)類。可變結合區包含稱為「互補決定區」(CDR)及「骨架區」(FR)之分散的定義明確的子區。術語「互補決定區」及「CDR」與「高變區」或「HVR」同義，且係指抗體可變區內之胺基酸序列，其一般而言一同賦予抗原特異性及/或該抗體之結合親和力，其中連續CDR (亦即，CDR1及CDR2，CDR2及CDR3)在一級結構中藉由骨架區彼此分離。在各可變區中存在三個CDR (HCDR1、HCDR2、HCDR3；LCDR1、LCDR2、LCDR3；分別亦稱為CDRH及CDRL)。在某些實施例中，抗體VH包含如下四個FR及三個CDR：FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4；且抗體VL包含如下四個FR及三個CDR：FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4。一般而言，VH及VL經由其各別CDR共同形成抗原結合部位。在某些實施例中，一或多個CDR不接觸抗原及/或在能量上不促成抗原結合。
如本文所用，CDR之「變異體」係指具有至多1至3個胺基酸取代(例如，守恆或非守恆取代)、缺失或其組合之CDR序列的功能變異體。
CDR及骨架區之編號可根據任何已知方法或方案，諸如Kabat、Chothia、EU、IMGT、Contact、North、Martin及Aho編號方案(參見例如Kabat等人, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 第5版；Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))；Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003；Honegger及Plückthun, J. Mol. Bio. 309:657-670 (2001)；North等人 J Mol Biol. (2011) 406:228-56; doi:10.1016/j.jmb.2010.10.030；Abhinandan及Martin, Mol Immunol. (2008) 45:3832-9. 10.1016/j.molimm.2008.05.022)。此等參考文獻之抗體及CDR編號系統以引用之方式併入本文中。等效殘基位置可使用抗原受體編號及受體分類(ANARCI)軟體工具(2016，Bioinformatics 15:298-300)標註且比較不同分子。因此，根據一個編號方案鑑別如本文所提供之例示性可變區域(VH或VL)序列的CDR不包括包含使用不同編號方案確定的相同可變區域之CDR的抗體。為了根據IMGT分析序列，可使用imgt.org/IMGTindex/V-QUEST.php及imgt.org/IMGT_vquest/input。
在某些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中各CDR獨立地選自如表1及/或表2中所提供之NA特異性抗體的相應CDR。亦即，涵蓋來自表1及/或表2中所提供之NA特異性抗體的CDR之所有組合。
在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號方法。
術語「CL」係指「免疫球蛋白輕鏈恆定區」或「輕鏈恆定區」，亦即來自抗體輕鏈之恆定區。術語「CH」係指「免疫球蛋白重鏈恆定區」或「重鏈恆定區」，根據抗體同型可進一步分為CH1、CH2及CH3 (IgA、IgD、IgG)或CH1、CH2、CH3，及CH4區域(IgE，IgM)。抗體重鏈之Fc區進一步描述於本文中。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含CL、CH1、CH2及CH3中之任何一或多者。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段可包含CL、CH1、CH2及CH3中之任何一或多者。在某些實施例中，CL包含與SEQ ID NO.:35之胺基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性(或相似性)的胺基酸序列。在某些實施例中，CH1-CH2-CH3包含與SEQ ID NOs.:34、35、38、70及74-95中之任一者之胺基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性(或相似性)的胺基酸序列。應理解，例如在哺乳動物細胞株中產生可移除抗體重鏈之一或多個C端離胺酸(參見例如Liu等人. mAbs 6(5):1145-1154 (2014))。因此，本揭露內容之抗體或抗原結合片段可包含重鏈、CH1-CH3、CH3或Fc多肽，其中存在或不存在C端離胺酸殘基；換言之，涵蓋其中重鏈、CH1-CH3或Fc多肽之C端殘基不為離胺酸的實施例，及其中離胺酸為C端殘基的實施例。在某些實施例中，組成物包含本揭露內容之多個抗體及/或抗原結合片段，其中一或多個抗體或抗原結合片段不包含在重鏈、CH1-CH3或Fc多肽之C端處的離胺酸殘基，且其中一或多個抗體或抗原結合片段包含在重鏈、CH1-CH3或Fc多肽之C端處的離胺酸殘基。
在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段可包含重鏈、CH1-CH3、CH3或Fc多肽，其中存在或不存在C端甘胺酸-離胺酸序列(例如對應於SEQ ID NO.:95之最後二個胺基酸)。
「Fab」(抗原結合片段)為結合至抗原之抗體的一部分，且包括可變區及經由鏈間二硫鍵連接至輕鏈之重鏈的CH1。各Fab片段在抗原結合方面為單價的，亦即其具有單一抗原結合部位。用胃蛋白酶處理抗體產生單一大型F(ab')2片段，其大致對應於具有二價抗原結合活性且仍能夠交聯抗原之二個二硫鍵連接的Fab片段。Fab及F(ab')2二者為「抗原結合片段」的實例。Fab'片段與Fab片段的不同之處在於在包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸之CH1區域的羧基端處具有額外極少殘基。Fab'-SH為本文中恆定區域之半胱胺酸殘基具有游離硫醇基之Fab'的名稱。F(ab')2抗體片段最初以其間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab'片段對形式產生。抗體片段之其他化學偶合亦為已知的。
Fab片段可例如藉由肽連接子接合以形成單鏈Fab，在本文中亦稱為「scFab」。在此等實施例中，存在於原生Fab中之鏈間雙硫鍵可能不存在，且連接子完全或部分用以連接(link/connect)單一多肽鏈中之Fab片段。重鏈衍生之Fab片段(例如包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：VH + CH1或「Fd」)及輕鏈衍生之Fab片段(例如包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：VL + CL)可以任何排列形式連接以形成scFab。舉例而言，scFab可根據(重鏈Fab片段-連接子-輕鏈Fab片段)或(輕鏈Fab片段-連接子-重鏈Fab片段)自N端至C端方向排列。用於scFab中之肽連接子及例示性連接子序列在本文中進一步詳細地論述。
「Fv」為含有完整抗原識別及抗原結合部位之小抗體片段。此片段一般由具有緊密、非共價締合之一個重鏈可變區域及一個輕鏈可變區域之二聚體組成。然而，即使單一可變區域(或僅包含對抗原具有特異性之三個CDR之Fv的一半)亦能夠識別且結合抗原，但通常親和力比完整結合部位低。
「單鏈Fv」亦簡稱為「sFv」或「scFv」，其為包含連接至單一多肽鏈中之V H及V L抗體區域之抗體片段。在一些實施例中，scFv多肽包含安置於V H區域與V L區域之間且連接V H區域與V L區域之多肽連接子，從而使得scFv能夠保留或形成抗原結合所需之結構。可使用在此項技術中熟知之標準技術將此類肽連接子併入至融合多肽中。關於scFv之綜述，參見Pluckthun之The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, New York, 第269-315頁(1994)；Borrebaeck 1995，見下文。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含scFv，該scFv包含VH區域、VL區域及將VH區域連接至VL區域之肽連接子。在特定實施例中，scFv包含藉由肽連接子連接至VL區域之VH區域，其可呈VH-連接子-VL定向或呈VL-連接子-VH定向。本揭露內容之任何scFv可經工程化使得VL區域之C端藉由短肽序列連接至VH區域之N端，或反之亦然(亦即，(N)VL(C)-連接子-(N)VH(C)或(N)VH(C)-連接子-(N)VL(C)。可替代地，在一些實施例中，連接子可連接至VH區域、VL區域或二者之N端部分或N端。
肽連接子序列可例如基於以下進行選擇：(1)其能呈現可撓性延伸構形；(2)其不能或缺乏呈現可與第一及第二多肽上之及/或目標分子上之功能性表位相互作用的二級結構的能力；及/或(3)缺乏或相對缺乏可能與多肽及/或目標分子反應之疏水性或帶電殘基。關於連接子設計(例如長度)之其他考慮因素可包括其中VH及VL可形成功能性抗原結合部位之構形或構形範圍。在某些實施例中，肽連接子序列含有例如Gly、Asn及Ser殘基。其他接近中性之胺基酸，諸如Thr及Ala亦可包括於連接子序列中。可適用作連接子之其他胺基酸序列包括以下中所揭露之序列：Maratea等人, Gene 40:39 46 (1985)；Murphy等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8258 8262 (1986)；美國專利第4,935,233號及美國專利第4,751,180號。連接子之其他例示性及非限制性實例可包括例如Glu-Gly-Lys-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Glu-Ser-Lys-Val-Asp (Chaudhary等人,  Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1066-1070 (1990))及Lys-Glu-Ser-Gly-Ser-Val-Ser-Ser-Glu-Gln-Leu-Ala-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-Asp (Bird等人, Science 242:423-426 (1988))及五聚體Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，當存在於單一迭代中或重複1至5次或更多次時，或更高。可使用任何適合連接子，且一般可為約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、15 23、24、25、26、27、28、29、30、40、50、60、70、80、90、100個胺基酸長，或小於約200個胺基酸長，且將較佳包含可撓性結構(可為由連接子連接之二個區、區域、模體、片段或模組之間的構形移動提供可撓性及空間)，且將較佳具有生物惰性及/或具有人類中之低免疫原性風險。scFv可使用本文所揭露之VH及VL序列之任何組合或CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3序列之任何組合來構築。在一些實施例中，不需要連接子序列；例如當第一及第二多肽具有可用於分離功能區域且防止空間干擾之非必需N端胺基酸區時。
在抗體發展期間，生殖系可變(v)、連接(J)及多樣性(D)基因座中之DNA可重新佈置且編碼序列中之核苷酸插入及/或缺失可出現。體細胞突變可由所得序列編碼，且可參照相對應的已知生殖系序列來鑑別。在一些情況下，對於抗體之所需特性(例如，結合至流感NA抗原)而言並不重要，或對抗體賦予非所需特性(例如，投予抗體之個體的增加之免疫原性風險)或二者之體細胞突變可經相對應的經生殖系編碼之胺基酸或藉由不同胺基酸置換，使得改進或維持抗體之所需特性且降低或消除抗體之非所需特性。因此，在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含與親代抗體或抗原結合片段相比在可變區中之至少一個更多經生殖系編碼之胺基酸，其限制條件為親代抗體或抗原結合片段包含一或多個體細胞突變。本揭露內容之例示性抗NA抗體之可變區及CDR胺基酸序列提供於本文中之表1中。
此等及相關人類IG對偶基因之聚核苷酸序列及其他資訊可在例如IMGT.org獲得(參見例如)。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含胺基酸修飾(例如，取代突變)以消除氧化、去醯胺及/或異構化之不良風險。
本文亦提供與本發明所揭露之(「親代」)抗體相比包含在可變區(例如，VH、VL、骨架或CDR)中之一或多個胺基酸改變的變異抗體，其中該變異抗體能夠結合至NA抗原。
在某些實施例中，VH包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：表1及/或表2中所闡述之任何VH胺基酸序列，且VL包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：表1及/或表2中所闡述之任何VL胺基酸序列。
參考圖71，在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含圖71中所示之FNI9抗體之VH及圖71中所示之FNI9抗體之VL，其限制條件為該抗體或抗原結合片段不包含FNI9-VH-WT之VH及FNI9-VK-WT之VL。
參考圖71，在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含FNI9-VH-WT、FNI9-VH-FR124GL、FNI9-VH.4、FNI9-VH.5、FNI9-VH.6、FNI9-VH.7、FNI9-VH.8、FNI9-VH.9、FNI9-VH.10、FNI9-VH.11、FNI9-VH.12或FNI9-VH.13之VH胺基酸序列的VH，及(ii)包含FNI9-VK.7之VL胺基酸序列的VL。
參考圖71，在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含FNI9-VH-WT、FNI9-VH-FR124GL、FNI9-VH.4、FNI9-VH.5、FNI9-VH.6、FNI9-VH.7、FNI9-VH.8、FNI9-VH.9、FNI9-VH.10、FNI9-VH.11、FNI9-VH.12或FNI9-VH.13之VH胺基酸序列的VH，及(ii)包含FNI9-VK.8之VL胺基酸序列的VL。
參考圖71，在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含FNI9-VH-FR124GL、FNI9-VH.4、FNI9-VH.5、FNI9-VH.6、FNI9-VH.7、FNI9-VH.8、FNI9-VH.9、FNI9-VH.10、FNI9-VH.11、FNI9-VH.12或FNI9-VH.13之VH胺基酸序列的VH，及(ii)包含FNI9-VK-WT之VL胺基酸序列的VL。
參考圖72，在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含圖72中所示之FNI9變異抗體的VH及VL。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與抗體FNI9之不同之處在於VH中之S28T突變的抗體「FNI9-v8.1」之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3，且任擇地包含VH及VL。與FNI9相比，FNI9-v8.1在藉由暫時轉染之宿主細胞表現為重組IgG1時具有改良之生產效價。與FNI9相比，FNI9-v8.1在MUNANA分析中亦具有抑制某些N1及N2神經胺酸酶之唾液酸酶活性的較低IC50。與FNI9相比，FNI9-v8.1在ELLA分析中亦具有抑制假病毒衍生之神經胺酸酶之唾液酸酶活性的較低IC50。藉由流動式細胞測量術評定，與FNI9相比，FNI9-v8.1亦更強有力地結合至N9_A_Anhui_2013。藉由表面電漿子共振評定，與FNI9相比，FNI9-v8.1對某些IAV及IBV NA抗原(包括攜帶聚醣及不攜帶聚醣之抗原)具有較高親和力。與FNI9相比，FNI9-v8.1具有對某些IAV及IBV NA之唾液酸酶活性的改良活體外抑制(報告為以ng/ml為單位之EC50)。
FNI9-v8.1包含分別為SEQ ID NOs.:55 (GGTFNNQA)、4 (IFPISGTP)、5 (ARAGSDYFNRDLGWENYYFAS)、9 (RSVSSN)、10 (DAS)及11 (QQYNNWPPWT)之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，以及分別為SEQ ID NOs.:54及8之VH及VL胺基酸序列。應理解，「-v8.1」係指FNI9之變異體，其包含「v8」VH (SEQ ID NO.:54)及「v1」VL (SEQ ID NO.:8，與親代FNI9相同之VL)。
在一些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含SEQ ID NOs.:2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VH，及(ii)包含SEQ ID NO.:8之VL胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VL。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之VH；及(ii)包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之VL。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)基本上由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)組成之VH；及(ii)基本上由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)組成之VL。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)組成之VH；及(ii)由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)組成之VL。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之重鏈；及(ii)包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之輕鏈。在某些其他實施例中，抗體或抗原結合片段為(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變。在一些實施例中，輕鏈為IgG1 κ輕鏈。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)各自包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之二條重鏈；及(ii)各自包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之二條輕鏈。
在某些其他實施例中，抗體或抗原結合片段為(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變。在一些實施例中，輕鏈各自為IgG1 κ輕鏈。在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3的VH，其中任擇地，CDR根據IMGT定義；及(ii)包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3的VL，其中任擇地，CDR根據IMGT定義。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)在VH中包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3的重鏈，其中任擇地，CDR根據IMGT定義；及(ii)在VL中包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3的輕鏈，其中任擇地，CDR根據IMGT定義。在某些其他實施例中，抗體或抗原結合片段為(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變。在一些實施例中，輕鏈為IgG1 κ輕鏈。
在某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含：(i)各自在VH中包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3的二條重鏈，其中任擇地，CDR根據IMGT定義；及(ii)各自在VL中包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3的二條輕鏈，其中任擇地，CDR根據IMGT定義。在某些其他實施例中，抗體或抗原結合片段為(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變。在一些實施例中，輕鏈各自為IgG1 κ輕鏈。
在一些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含SEQ ID NOs.:2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VH，及(ii)包含SEQ ID NO.:37之VL胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VL。
在一些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含SEQ ID NOs.:2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VH，及(ii)包含SEQ ID NO.:66之VL胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VL。
在一些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段，其包含(i)包含SEQ ID NOs.:2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VH，及(ii)包含SEQ ID NO.:68之VL胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之VL。
表A提供本揭露內容之某些FNI9變異抗體之VH及VL胺基酸SEQ ID NOs。
變異抗體 VH胺基酸SEQ ID NO.: VL胺基酸SEQ ID NO.:
FNI9-v13.8 65 68
FNI9-v4.1 46 8
FNI9-v5.1 48 8
FNI9-v6.1 50 8
FNI9-v7.1 52 8
FNI9-v8.1 54 8
FNI9-v9.1 56 8
FNI9-v10.1 58 8
FNI9-v11.1 60 8
FNI9-v12.1 63 8
FNI9-v4.7 46 66
FNI9-v5.7 48 66
FNI9-v6.7 50 66
FNI9-v7.7 52 66
FNI9-v8.7 54 66
FNI9-v9.7 56 66
FNI9-v10.7 58 66
FNI9-v11.7 60 66
FNI9-v12.7 63 66
在一些實施例中，該流感包含一A型流感病毒、一B型流感病毒或二者。
在某些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段為單特異性(例如，結合至單一表位)或多特異性的(例如，結合至多個表位及/或目標分子)。抗體及抗原結合片段可以多種形式構築。例示性抗體形式揭露於Spiess等人, Mol. Immunol. 67(2):95 (2015)中，且揭露於Brinkmann及Kontermann, mAbs 9(2):182-212 (2017)中，其形式及其製備方法以引用的方式併入本文中且包括例如雙特異性T細胞銜接器(BiTE)、DART、杵-入-臼(KIH)組件、scFv-CH3-KIH組件、KIH共同輕鏈抗體、TandAb、三體(Triple Bodies)、TriBi迷你抗體、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFv2、四價Hcab、胞內抗體、CrossMab、雙功能Fab (DAF) (二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、電荷對、Fab臂交換、SEED體、Triomab、LUZ-Y組件、Fcab、κλ-體、正交Fab、DVD-Ig (例如，美國專利案第8,258,268號，其形式以全文引用之方式併入本文中)、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zy體及DVI-IgG (四合一)、以及所謂的FIT-Ig (例如，PCT公開案第WO 2015/103072號，其形式以全文引用之方式併入本文中)、所謂的Wuxi體形式(例如，PCT公開案第WO 2019/057122號，其形式以全文引用之方式併入本文中)及所謂的In-Elbow-Insert Ig形式(IEI-Ig，例如PCT公開案第WO 2019/024979及WO 2019/025391號，其形式以全文引用之方式併入本文中)。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含VH區域、二個或更多個VL區域或二者(亦即，二個或更多個VH區域及二個或更多個VL區域)中之二者或更多者。在特定實施例中，抗原結合片段包含形式(N端至C端方向) VH-連接子-VL-連接子-VH-連接子-VL，其中該等二個VH序列可能相同或不同，且二個VL序列可能相同或不同。此類連接之scFv可包括配置成結合至給定目標之VH及VL區域的任何組合，且呈包含二個或更多個VH及/或二個或更多個VL之形式，可結合一個、二個或更多個不同表位或抗原。應瞭解，併入多個抗原結合區域之形式可包括呈任何組合或定向之VH及/或VL序列。舉例而言，抗原結合片段可包含形式VL-連接子-VH-連接子-VL-連接子-VH、VH-連接子-VL-連接子-VL-連接子-VH或VL-連接子-VH-連接子-VH-連接子-VL。
本揭露內容之構築的單特異性或多特異性抗體或抗原結合片段包含本文中所揭露之VH及VL序列之任何組合及/或CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3序列之任何組合。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體或抗原結合片段可包含本揭露內容之一個、二個或更多個抗原結合區域(例如，VH及VL)。可能存在結合至相同或不同NA表位之二個或更多個結合區域，且在一些實施例中，如本文所提供之雙特異性或多特異性抗體或抗原結合片段可包含另一NA特異性結合區域，及/或可包含一起結合至不同抗原或病原體之結合區域。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段可為多特異性的；例如雙特異性、三特異性或其類似性質。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含Fc多肽或其片段。「Fc」片段或Fc多肽包含藉由二硫鍵固持在一起的二個抗體H鏈的羧基端部分(亦即，IgG之CH2及CH3區域)。Fc可包含包括二個Fc多肽(亦即，二個CH2-CH3多肽)之二聚體。抗體「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區(例如原生序列Fc區或胺基酸序列變異Fc區)的彼等生物活性，且隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。如本文所論述，可對Fc區域進行修飾(例如，胺基酸取代)，以便改變(例如，改善、減低或消除)含Fc之多肽(例如，本揭露內容之抗體)的一或多種功能性。此類功能包括例如Fc受體(FcR)結合、抗體半衰期調節(例如，藉由結合於FcRn)、ADCC功能、蛋白A結合、蛋白G結合及補體結合。改變(例如，改善、減低或消除) Fc功能性之胺基酸修飾包括例如T250Q/M428L、M252Y/S254T/T256E、H433K/N434F、M428L/N434S、M428L/434A、E233P/L234V/L235A/G236 + A327G/A330S/P331S、E333A、S239D/A330L/I332E、P257I/Q311、K326W/E333S、S239D/I332E/G236A、N297Q、K322A、S228P、L235E + E318A/K320A/K322A、L234A/L235A (在本文中亦稱為「LALA」)及L234A/L235A/P329G突變，該等突變中之某些概述且標註於由InvivoGen (2011)所公開且在invivogen.com/PDF/review/review-Engineered-Fc-Regions-invivogen.pdf?utm_source=review&utm_medium=pdf&utm_ campaign=review&utm_content=Engineered-Fc-Regions下線上可用之「工程化Fc區」，且以全文引用之方式併入本文中。
舉例而言，為了活化補體級聯，當一或多個免疫球蛋白分子連接至抗原目標時，C1q蛋白複合體可與至少二個IgG1分子或一個IgM分子結合(Ward, E. S.及Ghetie, V., Ther. Immunol.2 (1995) 77-94)。Burton, D. R.描述( Mol. Immunol.22 (1985) 161-206)包含胺基酸殘基318至337之重鏈區參與補體結合。Duncan, A. R.及Winter, G. ( Nature332 (1988) 738-740)使用定點突變誘發報導Glu318、Lys320及Lys322形成與C1q之結合部位。Glu318、Lys320及Lys 322殘基在C1q結合中之作用係藉由含有此等殘基之短合成肽抑制補體介導之溶解的能力來確認。
舉例而言，FcR結合可由(抗體之) Fc部分與Fc受體(FcR)之相互作用介導，該等FcR為包括造血細胞之細胞上之特殊化細胞表面受體。Fc受體屬於免疫球蛋白超家族，且顯示介導藉由免疫複合體之吞噬作用進行之經抗體塗佈之病原體的移除及塗佈有對應抗體之紅血球及各種其他細胞目標(例如腫瘤細胞)的溶解，以上係經由抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC；Van de Winkel, J. G.及Anderson, C. L., J. Leukoc. Biol.49 (1991) 511-524)進行。FcR係根據其對免疫球蛋白種類之特異性界定；針對IgG抗體之Fc受體稱為FcγR，針對IgE抗體之Fc受體稱為FcεR，針對IgA抗體之Fc受體稱為FcαR，諸如此類，且新生兒Fc受體稱為FcRn。Fc受體結合描述於例如Ravetch, J. V.及Kinet, J. P., Annu. Rev. Immunol.9 (1991) 457-492；Capel, P. J.等人, Immunomethods4 (1994) 25-34；de Haas, M.等人, J Lab. Clin. Med.126 (1995) 330-341；及Gessner, J. E.等人, Ann. Hematol.76 (1998) 231-248中。
受體對原生IgG抗體之Fc區域(FcγR)的交聯觸發多種效應功能，包括吞噬作用、抗體依賴性細胞毒性，及炎性介體釋放，以及免疫複合體清除及對抗體產生的調控。本文中涵蓋提供受體(例如，FcγR)之交聯的Fc部分。在人類中，迄今為止已表徵三類FcγR，其為：(i) FcγRI (CD64)，其以高親和力結合單體IgG且在巨噬細胞、單核球、嗜中性白血球及嗜酸性白血球上經表現；(ii) FcγRII (CD32)，其以中等至低親和力結合複合IgG，尤其在白血球上經廣泛表現，咸信其為抗體介導之免疫之中樞參與者，且其可分成FcγRIIA、FcγRIIB及FcγRIIC，其在免疫系統中執行不同功能，但以類似低親和力結合至IgG-Fc，且此等受體之胞外區域為高度同源的；及(iii) FcγRIII (CD16)，其以中等至低親和力結合IgG且已發現呈二種形式：FcγRIIIA，其已經發現於NK細胞、巨噬細胞、嗜酸性白血球及一些單核球及T細胞上且咸信其介導ADCC；及FcγRIIIB，其高度表現於嗜中性白血球上。
在許多涉及殺死作用之細胞(例如巨噬細胞、單核球、嗜中性白血球)上發現FcγRIIA，且其似乎能夠活化殺死過程。FcγRIIB似乎在抑制過程中起一定作用，且在B細胞、巨噬細胞上及肥大細胞及嗜酸性白血球上發現FcγRIIB。重要的是，已展示75%之所有FcγRIIb發現於肝臟中(Ganesan, L. P.等人, 2012: 「FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes」 Journal of Immunology 189: 4981-4988)。FcγRIIB在稱為LSEC之肝竇內皮上經充分表現，且在肝及LSEC中之庫弗細胞(Kupffer cell)中為小免疫複合體清除之主要部位(Ganesan, L. P.等人, 2012: FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes. Journal of Immunology 189: 4981-4988)。
在一些實施例中，本文中所揭露之抗體及其抗原結合片段包含用於結合至FcγRIIb，尤其Fc區之Fc多肽或其片段，諸如IgG型抗體。此外，有可能藉由引入突變S267E及L328F對Fc部分工程化以增強FcγRIIB結合，如Chu, S. Y.等人, 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcγRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933所描述。藉此，可增強免疫複合體之清除(Chu, S.等人, 2014: Accelerated Clearance of IgE In Chimpanzees Is Mediated By Xmab7195, An Fc-Engineered Antibody With Enhanced Affinity For Inhibitory Receptor FcγRIIb. Am J Respir Crit, American Thoracic Society International Conference Abstracts)。在一些實施例中，本揭露內容之抗體或其抗原結合片段包含具有突變S267E及L328F之經工程化Fc部分，尤其如Chu, S. Y.等人, 2008: Inhibition of b cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcγRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933所描述。
在B細胞上，FcγRIIb可用以抑制免疫球蛋白進一步產生及同型轉換為例如IgE類。在巨噬細胞上，認為FcγRIIb抑制如經由FcγRIIA介導之吞噬作用。在嗜酸性白血球及肥大細胞上，B形式可經由IgE結合至其單獨受體而有助於抑制此等細胞之活化。
關於FcγRI結合，E233-G236、P238、D265、N297、A327及P329中之至少一者的原生IgG中之修飾減少結合至FcγRI。經取代至對應位置IgG1及IgG4中之位置233-236處之IgG2殘基使IgG1及IgG4與FcγRI之結合減少10 3倍，且消除人類單核球對抗體致敏型紅血球之反應(Armour, K. L等人. Eur. J. Immunol.29 (1999) 2613-2624)。
關於FcγRII結合，發現針對FcγRIIA之結合降低，例如針對E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、R292及K414中之至少一者的IgG突變。
人類FcγRIIA之二個對偶基因形式為「H131」變異體，其以較高親和力結合至IgG1 Fc；及「R131」變異體，其以低親和力結合至IgG1 Fc。參見例如Bruhns等人, Blood 113:3716-3725 (2009)。
關於FcγRIII結合，發現與FcγRIIIA之結合降低，例如針對E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、S239、E269、E293、Y296、V303、A327、K338及D376中之至少一者的突變。在人類IgG1上映射Fc受體之結合部位、上述突變部位及用於量測FcγRI及FcγRIIA結合之方法描述於Shields, R. L.等人, J. Biol. Chem.276 (2001) 6591-6604中。
人類FcγRIIIA之二個對偶基因形式為「F158」變異體，其以較低親和力結合至IgG1 Fc；及「V158」變異體，其以較高親和力結合至IgG1 Fc。參見例如Bruhns等人, Blood 113:3716-3725 (2009)。
關於與FcγRII之結合，原生IgG Fc之二個區似乎參與FcγRII與IgG之間的相互作用，亦即(i) IgG Fc之下部鉸鏈部位，詳言之胺基酸殘基L、L、G、G (234-237，EU編號)，及(ii) IgG Fc之CH2區域之相鄰區，詳言之鄰近於下部鉸鏈區之上部CH2區域，例如P331區中之環及股(Wines, B.D.等人, J. Immunol. 2000；164: 5313-5318)。此外，FcγRI似乎結合至IgG Fc上之相同部位，而FcRn及蛋白A結合至IgG Fc上之不同部位，該不同部位似乎在CH2-CH3界面處(Wines, B.D.等人, J. Immunol. 2000；164: 5313-5318)。
亦涵蓋增加本揭露內容之Fc多肽或其片段與(亦即，一或多個) Fcγ受體之結合親和力的突變(例如，與參考Fc多肽或其片段或含有不包含一或多個突變之多肽或其片段相比)。參見例如Delillo及Ravetch, Cell 161(5):1035-1045 (2015)以及Ahmed等人, J. Struc. Biol. 194(1):78 (2016)，該等文獻之Fc突變及技術以引用之方式併入本文中。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段可包含Fc多肽或其片段，其包含選自G236A；S239D；A330L及I332E之突變；或包含該等突變中之任何二者或更多者的組合；例如S239D/I332E；S239D/A330L/I332E；G236A/S239D/I332E；G236A/A330L/I332E (在本文中亦稱為「GAALIE」)；或G236A/S239D/A330L/I332E。在一些實施例中，Fc多肽或其片段不包含S239D。在一些實施例中，Fc多肽或其片段包含位置239處之S (EU編號)。
在某些實施例中，Fc多肽或其片段可包含以下或由以下組成：參與FcRn結合之Fc多肽或其片段的至少一部分。在某些實施例中，Fc多肽或其片段包含改善針對(例如，促進結合至) FcRn之結合親和力(例如，在pH為約6.0下)，且在一些實施例中，藉此延長包含Fc多肽或其片段之分子之活體內半衰期(例如，與參考Fc多肽或其片段或在其他方面相同但不包含該(該等)修飾之抗體相比)的一或多個胺基酸修飾。在某些實施例中，Fc多肽或其片段包含或衍生自IgG Fc，且半衰期延長之突變包含以下中之任何一或多者：M428L；N434S；N434H；N434A；N434S；M252Y；S254T；T256E；T250Q；P257I；Q311I；D376V；T307A；E380A (EU編號)。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含M428L/N434S (在本文中亦稱為「MLNS」、「LS」、「_LS」及「-LS」)。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含M252Y/S254T/T256E。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含T250Q/M428L。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含P257I/Q311I。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含P257I/N434H。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含D376V/N434H。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含T307A/E380A/N434A。在某些實施例中，半衰期延長之突變包含M428L/N434A。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括包含取代突變M428L/N434S之Fc部分。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括包含取代突變M428L/N434A之Fc部分。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括包含取代突變G236A/A330L/I332E之Fc多肽或其片段。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包括(例如，IgG) Fc部分，其包含G236A突變、A330L突變及I332E突變(GAALIE)，且不包含S239D突變(例如，包含位置239處之原生S)。在特定實施例中，抗體或抗原結合片段包括Fc多肽或其片段，其包含取代突變：M428L/N434S及G236A/A330L/I332E，且任擇地不包含S239D (例如，包含239處之S)。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包括Fc多肽或其片段，其包含取代突變：M428L/N434S及G236A/S239D/A330L/I332E。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含改變醣基化之突變，其中改變醣基化之突變包含N297A、N297Q或N297G，及/或抗體或抗原結合片段經部分或完全去醣基化及/或部分或完全去岩藻醣基化。宿主細胞株及部分或完全去醣基化或部分或完全去岩藻醣基化抗體及抗原結合片段之製備方法為已知的(參見例如，PCT公開案第WO 2016/181357號；Suzuki等人. Clin. Cancer Res. 13(6):1875-82 (2007)；Huang等人. mAbs6:1-12 (2018))。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含在鉸鏈、CH2及/或CH3中(或在Fc中)包含一或多個突變的重鏈，其中該抗體或抗原結合片段具有優於例如包含參考野生型Fc多肽及/或包含已知變異Fc多肽之抗體或抗原結合片段的一或多種改良特徵。本發明所揭露之Fc變異體具有例如：與一或多種人類FcγRA (例如FcγRIIA及/或FcγRIIIA之結合增加；與人類FcγRIIB之結合減少/降低；相比於與人類FcγRIIB之結合，與一或多種人類FcγRA之結合增加；相比於已知Fc多肽，熱穩定性增加；與人類C1q之結合增加；在表現FcγRIIIA之宿主細胞中人類FcγRIIIA訊息傳導增加，在表現FcγRIIA之宿主細胞中人類FcγRIIIA訊息傳導增加，在表現FcγRIIB之宿主細胞中人類FcγRIIB訊息傳導減少，相比於FcγRIIB與FcγRA之結合的相對增加，相比於已知Fc多肽生產品質改良；及此類特徵之組合。
在某些實施例中，包含本揭露內容之變異Fc多肽的抗體提供出人意料的優點，諸如以下中之任何一或多者：與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體相比，對一或多種人類FcγRA之結合親和力增加(例如藉由表面電漿子共振，例如使用Biacore儀器確定及/或藉由電化學發光分析，諸如中尺度發現(MSD)分析確定)及/或誘導一或多種人類FcγRA之增加的訊息傳導(例如使用(1) Fc變異抗體(2)表現抗原之目標細胞及(3)表現一或多種人類FcγRA，任擇地驅動報導基因，諸如GFP或螢光素酶表現之報導細胞確定)；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體相比，對人類FcγRIIB之結合親和力減少及/或誘導人類FcγRIIB之減少的訊息傳導；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體相比，跨人類FcγRIIA-H、人類FcγRIIA-R、人類FcγRIIB、人類FcγRIIIA-F及人類FcγRIIIA-V之獨特且任擇地改良的結合概況，其中改良的結合包含相對於結合至及/或活化抑制性FcγR訊息傳導，結合至及/或活化FcγRA訊息傳導之整體增加；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體相比，對人類C1q之結合親和力增加；與不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之變異Fc多肽或其片段相比，對熱穩定性無不利影響或無實質性不利影響，對熱穩定性之負面影響降低(例如包含突變G236A、A330L及I332E之人類IgG1 Fc (例如與包含包括突變G236A、A330L及I332E之人類IgG1 Fc的抗體相比，對解鏈溫度具有較小降低作用，或不具有降低作用)，或與包含包括突變G236A、A330L及I332E之人類IgG1 Fc的抗體相比具有較高解鏈溫度))；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體(例如包含突變G236A、A330L及I332E之人類IgG1 Fc的抗體)相比，增加自然殺手細胞及/或PBMC (例如表現F158/V158或V158/V158 FcγRIIIA)針對表現抗原之目標細胞的特異性溶解(例如經由ADCC)；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體相比，增加單核球(例如CD14+單核球，任擇地表現F158/V158 FcγRIIA及R131/H131 FcγRIIA或F158/F158 FcγRIIA及R131/H131 FcγRIIA)針對表現抗原之目標細胞的ADCP；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體在與抗原組合提供時相比，在與抗原組合提供時增加樣品中CD83+細胞(例如moDC)之百分比及/或增加moDC之CD83表現；與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體在與抗原組合提供時相比，在與抗原組合提供時增加樣品中moDC之一或多種細胞介素(任擇地選自由IL-1β、IFN-γ、IL-6及TNF-α組成之群)的產生；及/或與包含不包含突變及/或岩藻醣基化狀態之參考Fc多肽的抗體在與抗原組合提供至moDC時相比，在與抗原組合提供至moDC時增加moDC刺激抗原特異性CD4+ T細胞之能力，其中任擇地，(1) moDC及CD4+ T細胞來自相同(任擇地經抗原接種)個體及/或(2)抗原特異性CD4+ T細胞之刺激係藉由抗原特異性CD4+ T細胞之CD25表現增加及/或增殖增加(例如藉由CFSE染色隨時間推移減少確定)及/或CD69表現增加及/或NFAT表現增加及/或CD44表現增加來確定。
在一些實施例中，與參考野生型Fc或Fc片段相比，本揭露內容之經工程化Fc或Fc片段(或包含其之多肽)包含二個或更多個取代突變，且二個或更多個取代之組合效應不同於且任擇地大於基於個別組分取代突變之效應及/或基於二個或更多個取代突變之子集之效應而預期的效應。換言之，在一些實施例中，組合突變包含關於個別組分突變及/或其子集之非累加或協同效應。
在一些實施例中，本發明所揭露之包含Fc變異體之抗體或抗原結合片段具有諸如效應功能、結合人類C1q之能力、誘導FcγRA介導之細胞訊息傳導之能力、結合至人類FcRn之能力、促進ADCP之能力、促進ADCC之能力、促進CD4+ T細胞活化之能力及其類似者等特徵。
本發明所揭露之多肽包括包含以下之變異體的多肽：IgG Fc多肽或其片段，其中與IgG Fc多肽或其片段相比，變異體包含一或多個修飾。應理解，除非另外說明，否則除所述一或多個差異以外，「參考」多肽或抗體(例如參考IgG Fc多肽或其片段、參考抗體、參考CH2多肽、參考IgG鉸鏈-CH2、參考IgG鉸鏈-Fc多肽、參考CH3多肽)較佳與所述分子(例如Fc多肽或其片段之變異體；包含此類變異體之多肽；包含Fc多肽之變異體的抗體)一致。
舉例而言，應理解，對於在EU位置236處包含丙胺酸(A)胺基酸之變異IgG1 Fc多肽，除在EU位置236處發現原生甘胺酸(G)胺基酸以外，參考Fc多肽包括在其他方面與變異體一致的IgG1 Fc多肽。作為另一實例，對於Fc多肽片段之變異體(例如含有CH2及CH3之一部分)，參考Fc多肽片段較佳與變異體具有一致的長度且較佳與變異體的不同之處僅在於所述特徵(例如存在於變異體中之一或多個胺基酸突變)。在一些實施例中，參考Fc多肽、Fc多肽片段或抗體包含野生型胺基酸序列(例如野生型人類IgG1)。除變異體中存在之所述差異以外，參考Fc多肽、Fc多肽片段或抗體將與變異體為相同的同型，且較佳地為相同的異型。在參考抗體之情況下，Fab或其他抗原結合區域將較佳與包含變異Fc多肽或其片段之指定抗體中存在的彼等一致。
在一些實施例中，與參考(例如野生型) IgG Fc多肽或其片段相比，IgG Fc多肽或其片段之變異體包括一或多個胺基酸取代。在本文中，變異IgG Fc多肽或片段中胺基酸之位置可藉由參考「EU位置」來描述；應理解，「EU位置」遵循如Kabat中所闡述之EU編號系統。藉助於說明，應理解，在下文提供之人類IgG1 CH1-CH3胺基酸序列之實例中，第一胺基酸(A)對應於EU位置118，且最後一個胺基酸(K)對應於EU位置447： ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
因此，應理解除非另外指示，否則所列舉之胺基酸之位置遵循人類IgG1之EU編號，即使完整抗體重鏈、完整CH1-CH3、完整CH2-CH3或其類似物不存在或未明確列舉。換言之，例如，若僅描述鉸鏈-CH2且可能不存在CH3及/或CH1，則除非另外說明，否則參考EU編號描述鉸鏈-CH2中胺基酸之位置。免疫球蛋白G重鏈恆定區域之EU編號、Kabat編號、IMGT外顯子編號及IMGT獨特編號之間的對應性為此項技術中已知的且展示於例如IMGT科學圖表(www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html；創建於2001年5月17日，存取於2021年5月23日，最後更新於2020年1月20日)。
本揭露內容之Fc變異體之某些實施例(岩藻醣基化，除非另外指示)及其非限制性特性概述於表B中。 表B.某些Fc變異體及其特性
變異體 ( 相對於野生型人類 IgG1 Fc 之取代突變 ) 與岩藻醣基化野生型人類 IgG1 相比 ， 指定變異體之某些特性
G236A_L328V_Q295E 與人類FcγRIIa (H131對偶基因及R131對偶基因)之結合增加；與人類FcγRIIb之結合相當或減少(例如藉由MSD分析及/或表面電漿子共振)；以下比率增加：與人類FcγRIIa (H131對偶基因或R131對偶基因)之結合相對於與人類FcγRIIb之結合；與人類FcRn之結合相當；生產效價相當；宿主細胞中經由FcγRIIa之訊息傳導增加及/或宿主細胞中經由FcγRIIb之訊息傳導減少；Tm在野生型之12℃或更小內；G236S_R292P_Y300L與C1q之結合改良
G236A_P230A_Q295E
G236A_R292P_I377N
G236A_K334A_Q295E
G236S_R292P_Y300L
G236A_Y300L 與人類FcγRIIa之結合增加(H131 (超過18倍)及R131 (超過4倍))；與人類FcγRIIb之結合類似或與人類FcγRIIb之結合減少(例如藉由表面電漿子共振所量測)；以下比率增加：與人類FcγRIIa (H131或R131)之結合相對於與人類FcγRIIb之結合；與人類FcRn之結合相當；生產效價相當；宿主細胞中經由FcγRIIa之訊息傳導增加及/或宿主細胞中經由FcγRIIb之訊息傳導減少；Tm在野生型之4.5℃內
G236A_R292P_Y300L 與人類FcγRIIa之結合增加(H131 (超過14倍)及R131 (超過2.7倍))；與人類FcγRIIb之結合類似；以下比率增加：與人類FcγRIIa (H131或R131)之結合相對於與人類FcγRIIb之結合；與人類FcγRIIIa (V158對偶基因及F158對偶基因)之結合增加；與人類FcRn之結合相當；生產效價相當；宿主細胞中經由FcγRIIa及/或FcγRIIIa之訊息傳導增加，及/或宿主細胞中經由FcγRIIb之訊息傳導減少；宿主細胞中經由FcγRIIa之訊息傳導增加及/或宿主細胞中經由FcγRIIb之訊息傳導減少；Tm在野生型之4℃內；與人類C1q之結合相當
G236S_G420V_G446E_L309T 與人類FcγRIIa之結合增加；與人類FcγRIIb之結合減少(小於0.5倍)；以下比率增加：與人類FcγRIIa (H131或R131)之結合相對於與人類FcγRIIb之結合；與人類FcRn之結合相當；生產效價相當；宿主細胞中經由FcγRIIa及/或FcγRIIIa之訊息傳導增加，及/或宿主細胞中經由FcγRIIb之訊息傳導減少；Tm在野生型之4℃或更小內
G236A_R292P
R292P_Y300L 與人類FcγRIIIa (V158及F158)之結合增加；與人類C1q之結合增加；Tm在野生型之4℃內
Y300L 與人類C1q之結合增加
E345K_G236S_L235Y_S267E
E272R_L309T_S219Y_S267E
G236Y
G236W
F243L_G446E_P396L_S267E
G236A (去岩藻醣基化) 與人類FcγRIIa (H131)及小鼠FcγRIIa (R131)之結合增加，與人類FcγRIIb之結合減少，與人類FcγRIIIa (V158)及小鼠FcγRIIIa (F158)之結合增加，與人類FcγRIIIb之結合增加，與人類FcRn之結合略微減少，Tm在野生型之0.15℃內或在野生型之0.9℃內或在野生型之0.8℃內或在野生型之0.7℃內
S239D_H268E_G236A 與所有測試人類FcγR之結合增加且經由所有測試人類FcγR之訊息傳導增加：FcγRIIA (H131)；FcγRIIA (R131)；FcγRIIB；FcγRIIIA (V158)；FcγRIIIA (F158)；FcγRIIIB；另外，當攜帶S239D_H268E_G236A_M428L_N434S之抗HBV抗體與hBsAg組合時，由此形成之免疫複合體與MoDC一起培育；與僅攜帶M428L_N434S之抗體相比，MoDC與供體CD4+ T細胞之後續培育引起NFAT+CD69+ CD3+CD4+ T細胞之百分比增加。
所揭露之含Fc變異體之抗體的額外特徵展示於本發明實例及圖式中，且在本文中描述。
應理解，變異體中存在之二個或更多個胺基酸取代可以多種方式表示，例如表示為G236A_Y300L或G236A/Y300L。此外，突變或組合突變可使用包括原始胺基酸及由取代產生之胺基酸的短形式提及。舉例而言，G236A可描述為「GA」或「236A」；G236A_Y300L可描述為「GAYL」；G236A_L328V_Q295E可描述為「GALVQE」；G236A_R292P_Y300L可描述為「GARPYL」，G236A_R292P_I377N可描述為「GARPIN」，或其類似者。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，Fc多肽或其片段之變異體可衍生自或包含人類Fc多肽或其片段，及/或可衍生自或包含人類IgG1、人類IgG2、人類IgG3或人類IgG4同型。在此情形下，表述「衍生自」意謂除指定修飾(例如胺基酸取代)之外，變異體與參考多肽或同型相同。藉助於實例，除胺基酸取代突變G236A_L328V_Q295E (及任擇地，其他胺基酸取代)之外包含野生型人類IgG1 Fc胺基酸序列之變異Fc多肽可稱為「衍生自」野生型人類IgG1 Fc。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，多肽、CH2、Fc、Fc片段或抗體可包含人類Ig序列，諸如人類IgG1序列。在一些實施例中，多肽、CH2、Fc、Fc片段或抗體可包含除所描述之突變之外的原生或野生型人類Ig序列，或可包含含有一或多種額外突變的人類Ig (例如IgG)序列。
抗體或抗原結合片段可為任何異型或異型之組合。「異型」係指在IgG亞類之中發現之對偶基因變體。舉例而言，異型可包含G1m1 (或G1m(a))、G1m2 (或G1m(x))、G1m3 (或G1m(f))、G1m17 (或Gm(z))m)、G1m27及/或G1m28 (G1m27及G1m28已描述為「他型異型(alloallotype)」)。
G1m3及G1m17異型位於CH1區域中之相同位置(根據EU編號之位置214)。G1m3包含R214 (EU)，而G1m17包含K214 (EU)。G1m1異型位於CH3區域中(在位置356及358 (EU)處)，且係指置換E356D及M358L。G1m2異型係指在位置431 (EU)中用甘胺酸置換丙胺酸。G1m異型、他型異型及其特徵為此項技術中已知的且描述於例如www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/allotypes/human/IGH/IGHC/G1m_allotypes.html以及Lefranc, M.-P.及Lefranc, G. Human Gm, Km and Am allotypes and their molecular characterization: a remarkable demonstration of polymorphism於：B. Tait, F. Christiansen (編), Immunogenetics, 第34章, Humana Press, Springer, New York, USA. Methods Mol. Biol. 2012; 882, 635-680. PMID: 22665258, LIGM: 406，其內容及異型以及異型資訊以引用之方式併入本文中。
G1m1異型可例如與G1m3、G1m17、G1m27、G1m2及/或G1m28異型組合。在一些實施例中，異型為無G1m1之G1m3 (G1m3,-1)。在一些實施例中，異型為G1m17,1異型。在一些實施例中，異型為G1m3,1。在一些實施例中，異型為無G1m1之G1m17 (G1m17,-1)。任擇地，此等異型可與G1m2、G1m27或G1m28異型組合(或不組合)。舉例而言，異型可為G1m17,1,2。
在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含G1m3異型或G1m3,1異型。在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含G1m3異型且包含M428L及N434S或M428L及N434A突變或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含G1m3,1異型且包含M428L及N434S或M428L及N434A突變或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含G1m17, 1異型。在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含G1m17, 1異型且包含M428L及N434S或M428L及N434A突變或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，如本文中進一步描述。
在某些實施例中，Fc多肽之變異體僅包含指定或所述胺基酸突變(例如取代)，且不包含任何其他胺基酸取代或突變；例如相對於參考多肽(例如野生型Fc多肽或其片段)。舉例而言，在一些實施例中，包含胺基酸取代G236A_Y300L之變異Fc多肽不包含任何其他胺基酸取代；亦即包含除G236A及Y300L以外野生型的胺基酸序列。
在一些實施例中，Fc多肽之變異體可包含一或多個額外胺基酸突變(例如取代)，其可經指定(例如M428L_N434S；M428L_N434A)。在一些實施例中，另外一或多個胺基酸突變在三級結構中實體上遠離所述胺基酸位置，及/或具有使得所述Fc變異體或其片段之一或多種功能不降低或降低以下的性質(例如為守恆取代)：不超過50%、不超過40%、不超過30%、不超過25%、不超過20%、不超過15%、不超過10%或不超過5%，或不超過10倍、不超過9倍、不超過8倍、不超過7倍、不超過6倍、不超過5倍、不超過4倍、不超過3倍、不超過2倍或不超過1.5倍。在一些實施例中，Fc多肽之變異體包含突變M428L及N434S或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，包括本文所描述之突變。
在一些實施例中，提供一種抗體或抗原結合片段(本文中進一步描述)，其在(例如人類) IgG1重鏈中包含(i)-(xviii)中之任一者中所闡述之胺基酸突變：(i) G236A、L328V及Q295E；(ii) G236A、P230A及Q295E；(iii) G236A、R292P及I377N；(iv) G236A、K334A及Q295E；(v) G236S、R292P及Y300L；(vi) G236A及Y300L；(vii) G236A、R292P及Y300L；(viii) G236S、G420V、G446E及L309T；(ix) G236A及R292P；(x) R292P及Y300L；(xi) G236A及R292P；(xii) Y300L；(xiii) E345K、G236S、L235Y及S267E；(xiv) E272R、L309T、S219Y及S267E；(xv) G236Y；(xvi) G236W；(xvii) F243L、G446E、P396L及S267E；(xviii) G236A、S239D及H268E，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU索引。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含一或多個增強與人類FcRn之結合的突變，諸如M428L及N434S突變或M428L及N434A突變(EU編號)或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，彼等本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。在一些實施例中，IgG1重鏈包含CH1-CH3或CH2-CH3或鉸鏈-CH2-CH3，其中CH1-CH3或CH2-CH3或鉸鏈-CH2-CH3分別與野生型人類IgG1 CH1-CH3或CH2-CH3或鉸鏈-CH2-CH3具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)。在某些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含Fc變異體，其包含與SEQ ID NOs.:69-95中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NOs.:69-95中之任一者中所闡述之胺基酸序列或其變異體，例如其進一步包含一或多個增強與人類FcRn之結合的突變，諸如M428L及N434S突變或M428L及N434A突變(EU編號)或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，包括本文所描述之突變。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NOs.:69-95中之任一者中所闡述之胺基酸序列的不同之處僅在於一或多個IgG1異型特異性突變及/或在於存在M428L及N434S突變或M428L及N434A突變或增強與人類FcRn之結合的其他突變的胺基酸序列。
本揭露內容之抗體或抗原結合片段可經岩藻醣基化(例如，包含一或多個岩藻醣基部分，且通常包含原生(野生型)岩藻醣基化模式或與原生相比包括一或多個額外或較少岩藻醣基部分的岩藻醣基化模式)，或可經去岩藻醣基化。特定言之，原生IgG1抗體在N297處攜帶聚醣部位，且此通常為在抗體中可發現核心岩藻醣部分之唯一部位，不過一些聚醣部位可在抗體發展期間經由突變(例如在可變區域中)產生。抗體或抗原結合片段之岩藻醣基化可藉由引入胺基酸突變以引入或破壞岩藻醣基化部位(例如N297處之突變，諸如N297Q或N297A，以破壞可包括核心岩藻醣部分之聚醣的形成)來影響，但通常較佳維持N297及其聚醣，諸如藉由在已經基因工程化以缺乏使抗體或抗原結合片段岩藻醣基化之能力(或具有受抑制或受損能力)的宿主細胞中表現抗體或抗原結合片段；藉由在宿主細胞使多肽岩藻醣基化之能力受損的條件下(例如在2-氟-L-岩藻醣(2FF)存在下)表現抗體或抗原結合片段，或其類似者。去岩藻醣基化抗體或抗原結合片段可不包含岩藻醣部分，或實質上不包含岩藻醣部分，及/或可由經基因工程化以缺乏使抗體或抗原結合片段岩藻醣基化之能力(或具有受抑制或受損能力)的宿主細胞表現及/或可在宿主細胞使抗體或抗原結合片段岩藻醣基化之能力受損的條件下(例如在2-氟-L-岩藻醣(2FF)存在下)表現。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段在Asn297處不包含核心岩藻醣部分。在一些實施例中，去岩藻醣基化抗體或抗原結合片段與FcγRIIIA之結合增加。在一些情況下，將2FF添加至包含表現抗體之宿主細胞的培養基中使得約85%或更多的抗體或抗原結合片段不攜帶岩藻醣部分。因此，當多個抗體或抗原結合片段在2FF或類似試劑存在下產生時，多個抗體或抗原結合片段可描述為「去岩藻醣基化」。在一些情況下，多個抗體或抗原結合片段可描述為例如去岩藻醣基化，意謂多個抗體或抗原結合片段之單一抗體或抗原結合片段分子的約85%或更多不包含岩藻醣部分。在某些較佳實施例中，去岩藻醣基化抗體或抗原結合片段或其群體或多者在EU位置297處包含天冬醯胺(N)。岩藻醣基化或其缺乏可使用例如質譜分析(例如電噴質譜分析(ESI-MS))來評定。在一些實施例中，提供包含多個本發明所揭露之抗體或抗原結合片段中之任何一或多者的組成物，其中該組成物包含去岩藻醣基化抗體或抗原結合片段。
在某些實施例中，本發明所揭露之IgG Fc多肽或其片段之變異體具有與包含以下一或多個突變之參考Fc多肽的對應功能不同(例如與其相比改良)的一或多種功能：G236A；G236S；G236A_A330L_I332E；G236A_A330L_I332E_M428L_N434S；A330L_I332E；或G236A_S239D_A330L_I332E。舉例而言，在某些實施例中，與包含以下一或多個突變：G236A；G236S；G236A_A330L_I332E；G236A_A330L_I332E_M428L_N434S；A330L_I332E；或G236A_S239D_A330L_I332E之參考Fc多肽相比，本發明所揭露之IgG Fc多肽或其片段之變異體具有以下特性中之一或多者：與人類FcγRIIa H131之結合(例如親和力)及/或經由其之訊息傳導增加；與人類FcγRIIa R131之結合(例如親和力)及/或經由其之訊息傳導增加；與人類FcγRIIb之結合(例如親和力)及/或經由其之訊息傳導減少；與人類FcγRIIa (H131、R131或二者)之結合(例如親和力)及/或經由其之訊息傳導的比率相對於與人類FcγRIIb之結合(例如親和力)或經由其之訊息傳導的比率(分別)增加；與人類FcγRIIIa (V158、F158或二者)之結合(例如親和力)及/或經由其之訊息傳導增加；與人類C1q之結合(例如親和力)增加；Tm較高；生產效價改良；宿主細胞中經由FcγRIIa (H131、R131或二者)之訊息傳導改良；在存在抗原呈現細胞時，對人類NK細胞及/或人類PBMC之ADCP及/或ADCC的促進增加；及在與抗原之免疫複合體中刺激moDC之能力改良。
在本揭露內容中，相比於比較物(例如，參考野生型IgG1 Fc，或除M428L及N434S突變以外或除M428L及N434A突變以外為野生型的參考IgG1 Fc，或包含G236A_A330L_I332E突變之變異IgG1 Fc)與同一結合搭配物之結合，變異Fc多肽或片段之結合可描述為增加(或「大於」或其類似者)或減少(或「降低」或「小於」或其類似者)。變異Fc多肽或片段(或包含其之抗體或多肽)與結合搭配物(例如人類FcγR、FcRn或C1q)之間的結合相互作用可較佳使用電化學發光分析，更佳使用中尺度發現(「MSD」；mesoscale.com)平台確定。MSD結合分析類似於ELISA，但MSD使用電化學發光而非比色作為偵測技術。用於量測結合相互作用之其他技術為已知的，且包括例如ELISA、表面電漿子共振(SPR)、生物層干涉法(BLI)及其類似技術。
在一些實施例中，結合包括親和力、親合力或二者。親和力係指結合分子與其結合搭配物之間的鍵之強度。在一些情況下，結合可包括親和力及/或親合力。除非另外指示，否則親合力係指分子與結合搭配物之總結合強度，且反映結合親和力、結合部位之價數(例如Fc多肽包含一個、二個還是更多個結合部位)，以及例如是否存在可影響結合之另一試劑(例如Fc多肽之非競爭性抑制劑)。
本揭露內容之變異分子與結合搭配物之間的結合相互作用可根據相對於參考分子與結合搭配物之間的結合相互作用的變化倍數來表示。舉例而言，包含變異Fc之本發明所揭露之抗體與人類FcγRIIa之結合可比包含野生型Fc之抗體與人類FcγRIIa之結合強，且變異體之相對增加的強度可根據相對於使用相同分析之參考分子結合的變化倍數(例如曲線下面積之線性尺度)來表示。舉例而言，變異Fc多肽或片段可以比參考Fc多肽或片段結合至FcγRIIa大2倍、3倍、4倍或5倍的結合強度結合至FcγRIIa。作為另一實例，與參考Fc或其片段相比，變異Fc多肽或其片段可較不強烈結合至FcγRIIb；例如與參考Fc多肽或其片段相比，可具有0.9倍結合、0.8倍結合、0.7倍結合、0.6倍結合或其類似者。應理解，例如表述「與參考之結合相比大2倍的結合」意謂與參考相比，結合增加2倍。
此外，本揭露內容之變異Fc分子與二種不同搭配物分子之結合可根據比率描述，且此比率可與使用參考分子用相同分析獲得的類似比率進行比較。舉例而言，變異Fc多肽可比其結合至人類FcγRIIb強五倍地結合至人類FcγRIIa H131，而參考野生型Fc多肽與其結合至人類FcγRIIb一樣強地結合至FcγRIIa H131。在此實例中，變異Fc多肽可稱為具有5:1 (結合FcγRIIIa H131:結合FcγRIIb)結合比率，其可與參考野生型Fc多肽之1:1 (結合FcγRIIIa H131:結合FcγRIIb)結合比率進行比較。
本揭露內容之變異Fc分子亦可根據在宿主細胞中誘導訊息傳導之能力描述，其中宿主細胞表現或過度表現一或多種FcγR (例如FcγRIIa H131、FcγRIIa R131、FcγRIIb、FcγRIIIa F158或FcγRIIIa V158)且訊息傳導由變異分子與FcγR結合誘導。適用於確定訊息傳導之報導細胞包括例如NFAT驅動螢光素酶報導子之表現的細胞(例如可購自Promega®)。
除非另外說明，否則如本文所描述之FcγR、FcRn及C1q為人類的。
在一些實施例中，包含變異Fc多肽或片段之抗體或抗原結合片段較佳能夠誘導以下中之一或多者：抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)；及補體依賴性細胞毒性。用於量測此等功能之分析為已知的。
在一些實施例中，分別與參考Fc多肽、片段、抗體或抗原結合片段相比，變異Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)較佳具有與人類FcRn之可比結合(例如在pH 6.0下)及/或哺乳動物中之可比活體內半衰期。
在一些實施例中，分別與參考Fc多肽、片段、抗體或抗原結合片段相比，變異Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)較佳具有增加的與人類FcRn之結合(例如在pH 6.0下)及/或延長的哺乳動物中之活體內半衰期。
在一些實施例中，變異Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)較佳具有比參考Fc多肽(或包含其之抗體或抗原結合片段)之解鏈溫度(Tm)低小於12℃、小於11℃、小於10℃、小於9℃、小於8℃、小於7℃、小於6℃、小於5℃、小於4℃、小於3℃、小於2℃或小於1℃的Tm，或具有比參考Fc多肽或片段(或包含其之多肽或抗體)之Tm高的Tm。在一些實施例中，參考多肽或片段為或包含野生型人類Fc多肽(或包含其之抗體)。
在一些實施例中，變異Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)之解鏈溫度高於包含突變G236A、A330L、I332E及任擇地M428L及N434S之參考Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)之解鏈溫度。
在一些實施例中，與參考Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)相比，變異Fc多肽或片段(或包含其之抗體或抗原結合片段)較佳能夠在宿主細胞株(例如CHO細胞株)中至少大約一樣有效地產生(例如產生至少大約相同效價及/或在低小於0.1倍、小於0.09倍、小於0.08倍、小於0.07倍、小於0.06倍、小於0.05倍、小於0.04倍、小於0.03倍、小於0.02倍或小於0.02倍內)。
在某些實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置328處之纈胺酸(V)及在EU位置295處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GALVQE」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG鉸鏈-CH2多肽；或(ii) IgG鉸鏈-Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置230處之丙胺酸(A)及在EU位置295處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GAPAQE」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置292處之脯胺酸(P)及在EU位置377處之天冬醯胺(N)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GARPIN」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置334處之丙胺酸(A)及在EU位置295處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GAKAQE」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之絲胺酸(S)、在EU位置292處之脯胺酸(P)及在EU位置300處之白胺酸(L)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GSRPYL」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置292處之脯胺酸(P)及在EU位置300處之白胺酸(L)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GARPYL」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)及在EU位置300處之白胺酸(L)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GAYL」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些其他實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽；或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置239處之天冬胺酸(D)及在EU位置268處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GASDHE」)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步包含突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在一些實施例中，相比於參考抗體或抗原結合片段分別與人類FcγRIIa或人類FcγRIIb之結合，該抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合增加及/或與人類FcγRIIb之結合減少，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。
在某些實施例中，與人類FcγRIIa之結合增加包含相比於參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIa之結合，與人類FcγRIIa之結合大超過1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。
在一些實施例中，人類FcγRIIa包含H131，且任擇地，與人類FcγRIIa H131之結合增加包含相比於參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIa H131之結合，與人類FcγRIIa H131之結合大至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。
在一些實施例中，人類FcγRIIa包含R131，且任擇地，與人類FcγRIIa R131之結合增加包含相比於參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIa R131之結合，與人類FcγRIIa R131之結合大超過1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。
在一些實施例中，與人類FcγRIIb之結合減少包含參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIb之結合的小於0.9倍、小於0.8倍、小於0.7倍、小於0.6倍或0.5倍與0.9倍之間。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，(1) (i)抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(ii)抗體或抗原結合片段分別與人類FcγRIIb之結合的比率大於(2) (iii)參考多肽與人類FcγRIIa之結合與(iv)參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIb之結合的比率，其中參考抗體或抗原結合片段任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。在一些實施例中，人類FcγRIIa包含H131、R131或二者。在一些實施例中，(1)中之比率比(2)中之比率大超過1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍或至少14倍。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)及在EU位置300處之白胺酸(L)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GAYL」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在一些實施例中，相比於參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合，該抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合增加，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。
在一些實施例中，與人類FcγRIIa之結合增加包含相比於參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIa之結合，與人類FcγRIIa之結合大至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍或至少18倍。
在一些實施例中，人類FcγRIIa包含H131，且任擇地，與人類FcγRIIa H131之結合增加包含相比於參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIa H131之結合，與人類FcγRIIa H131之結合大至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍或至少18倍。
在一些實施例中，人類FcγRIIa包含R131，且任擇地，與人類FcγRIIa R131之結合增加包含相比於參考抗體或抗原結合片段(任擇地包含野生型人類IgG (例如IgG1) Fc多肽或其片段)與人類FcγRIIa R131之結合，與人類FcγRIIa R131之結合大至少4倍。
在某些實施例中，(1) (i)抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(ii)抗體或抗原結合片段分別與人類FcγRIIb之結合的比率大於(2) (iii)參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(iv)參考多肽與人類FcγRIIb之結合的比率，其中參考抗體或抗原結合片段包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段。在某些實施例中，人類FcγRIIa包含H131、R131或二者。在其他實施例中，(1)中之比率比(2)中之比率大至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍或至少17倍。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置292處之脯胺酸(P)及在EU位置300處之白胺酸(L)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GARPYL」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些實施例中，相比於參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合，該抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合增加，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。
在一些實施例中，與人類FcγRIIa之結合增加包含相比於任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合，與人類FcγRIIa之結合大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍或至少14倍。
在一些實施例中，人類FcγRIIa包含H131，且任擇地，與人類FcγRIIa H131之結合增加包含相比於任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa H131之結合，與人類FcγRIIa H131之結合大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍或至少14倍。
在一些實施例中，人類FcγRIIa包含R131，且任擇地，與人類FcγRIIa R131之結合增加包含相比於任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa R131之結合，與人類FcγRIIa R131之結合大至少2倍。
在某些實施例中，(1) (i)抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(ii)抗體或抗原結合片段分別與人類FcγRIIb之結合的比率大於(2) (iii)參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(iv)參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIb之結合的比率，其中參考抗體或抗原結合片段任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。在一些實施例中，人類FcγRIIa包含H131、R131或二者。在一些實施例中，(1)中之比率比(2)中之比率大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍或至少15倍。
在某些實施例中，相比於參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合，該抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合增加，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。在一些實施例中，人類FcγRIII包含V158、F158或二者。在某些其他實施例中，與人類FcγRIIIa之結合增加包含相比於任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合，與人類FcγRIIIa之結合大超過2倍、至少2.1倍、至少2.2倍、至少2.3倍、至少2.4倍、至少2.5倍、至少2.6倍、至少2.7倍、至少2.8倍、至少2.9倍、至少3.0倍、至少3.1倍、至少3.2倍、至少3.3倍、至少3.4倍、至少3.5倍、至少3.6倍或至少3.7倍。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至人類補體組分1q (C1q)，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含IgG Fc多肽之變異體，其中該變異體包含在EU位置236處之絲胺酸(S)、在EU位置420處之纈胺酸(V)、在EU位置446處之麩胺酸(E)及在EU位置309處之蘇胺酸(T)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GSGVGELT」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)及在EU位置292處之脯胺酸(P)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GARP」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些實施例中，相比於參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIb之結合，該抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIb之結合減少，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。在一些實施例中，相比於任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIb之結合，與人類FcγRIIb之結合減少包含小於0.9倍、小於0.8倍、小於0.7倍、小於0.6倍、小於0.5倍或小於0.4倍。
在其他實施例中，相比於參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合，該抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合增加，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。
在一些實施例中，與人類FcγRIIa之結合增加包含相比於包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合，與人類FcγRIIa之結合大超過1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍。
在某些實施例中，人類FcγRIIa包含H131、R131或二者。
在一些實施例中，(1) (i)抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(ii)抗體或抗原結合片段分別與人類FcγRIIb之結合的比率大於(2) (iii)抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合與(iv)參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIb之結合的比率，其中參考抗體或抗原結合片段任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。在一些實施例中，人類FcγRIIa包含H131、R131或二者。在某些實施例中，(1)中之比率比(2)中之比率大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少10倍、至少11倍或至少12倍。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽，其中該變異體包含在EU位置292處之脯胺酸(P)及在EU位置300處之白胺酸(L)，且其中相比於參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合，任擇地，變異體，且進一步任擇地，抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIIa之結合增加，其中任擇地，結合使用電化學發光分析，進一步任擇地使用中尺度發現確定。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 CH2多肽或IgG Fc多肽(「RPYL」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
在某些實施例中，人類FcγRIIIa包含V158、F158或二者，且其中與人類FcγRIIIa之結合增加包含相比於任擇地包含野生型人類IgG Fc多肽或其片段之參考抗體或抗原結合片段與人類FcγRIIa之結合，結合大至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少5.1倍或至少5.2倍。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置300處之白胺酸(L)。在一些實施例中，IgG CH2多肽或IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GALVQE」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置345處之離胺酸(K)、在EU位置236處之絲胺酸(S)、在EU位置235處之酪胺酸(Y)及在EU位置267處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GSEKLYSE」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG鉸鏈-CH2多肽或(ii) IgG鉸鏈-Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置272處之精胺酸(R)、在EU位置309處之蘇胺酸(T)、在EU位置219處之酪胺酸(Y)及在EU位置267處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG鉸鏈-CH2多肽或IgG鉸鏈-Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1鉸鏈-CH2多肽或IgG鉸鏈-Fc多肽或其片段(「SYSEERLT」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之酪胺酸(Y)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GY」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之色胺酸(W)。在一些實施例中，IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 CH2多肽或Fc多肽或其片段(「GW」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)，其中該IgG Fc多肽或其片段，且任擇地該多肽經去岩藻醣基化，且其中進一步任擇地，該變異體包含在EU位置330處之白胺酸(L)及在EU位置332處之麩胺酸(E)，其中再進一步任擇地，該變異體不包含在EU位置239處之天冬胺酸(D)，且甚至進一步任擇地，包含在EU位置239處之絲胺酸(S)。在一些實施例中，IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 CH2多肽或Fc多肽或其片段(分別為「GA-afuc」或「GAALIE-afuc」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。
亦提供本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置243處之白胺酸(L)、在EU位置446處之麩胺酸(E)、在EU位置396處之白胺酸(L)及在EU位置267處之麩胺酸(E)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「FLSEPLGE」)。在某些其他實施例中，存在突變M428L及N434S，或突變M428L及N434A，或增強與人類FcRn之結合的任何其他突變，諸如本文所描述之突變。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。
亦提供一種抗NA抗體或抗原結合片段，其包含以下之變異體：(i) IgG CH2多肽或(ii) IgG Fc多肽或其片段，其中該變異體包含在EU位置236處之丙胺酸(A)、在EU位置239處之天冬胺酸(D)、麩胺酸(E)及EU位置332、在EU位置428處之白胺酸(L)及在EU位置434處之絲胺酸(S)或丙胺酸(A)。在一些實施例中，IgG Fc多肽或其片段包含(例如在其他方面為野生型的) IgG1 Fc多肽或其片段(「GASDIEMLNS」或「GASDIEMLNA」)。
在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含(例如IgG1) IgG Fc多肽之變異體，其中根據EU編號，該變異體包含以下突變：(i) M428L、N434S、G236A、L328V及Q295E；(ii) M428L、N434S、G236A、R292P及I377N；(iii) M428L、N434S、G236A及Y300L；(iv) M428L、N434S、G236A、R292P及Y300L；(v) M428L、N434S、G236A、L328V及Q295E，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化；(vi) M428L、N434S、G236A、R292P及I377N，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化；(vii) M428L、N434S、G236A及Y300L，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化；或(viii) M428L、N434S、G236A、R292P及Y300L，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。在一些實施例中，(例如IgG1) IgG Fc多肽之變異體包含基本上由以上(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)或(viii)中之取代突變組成的胺基酸取代。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含κ輕鏈。
在一些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段包含(例如IgG1) IgG Fc多肽之變異體，其中根據EU編號，該變異體包含以下突變：(i) M428L、N434A、G236A、L328V及Q295E；(ii) M428L、N434A、G236A、R292P及I377N；(iii) M428L、N434A、G236A及Y300L；(iv) M428L、N434A、G236A、R292P及Y300L；(v) M428L、N434A、G236A、L328V及Q295E，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化；(vi) M428L、N434A、G236A、R292P及I377N，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化；(vii) M428L、N434A、G236A及Y300L，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化；或(viii) M428L、N434A、G236A、R292P及Y300L，其中該抗體或抗原結合片段經去岩藻醣基化。在一些實施例中，IgG Fc多肽之變異體包含基本上由以上(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)或(viii)中之取代突變組成的胺基酸取代。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段即使當在個體中未發現可偵測位準之抗體或抗原結合片段時(亦即，當抗體或抗原結合片段在投予之後已自個體中清除時)，亦能夠在個體中引發活體內持續保護。此類保護在本文中稱為疫苗作用。在不希望受理論束縛的情況下，咸信樹突狀細胞可內化抗體與抗原之複合體，且其後誘導或促成針對抗原之內源性免疫反應。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含一或多個修飾，諸如Fc中之突變，包含G236A、A330L及I332E，該等修飾能夠活化可誘導例如對抗原之T細胞免疫性的樹突狀細胞。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段包含Fc多肽或其片段，其包括CH2 (或其片段)、CH3 (或其片段)或CH2及CH3，其中該CH2、CH3或二者可具有任何同型且可含有胺基酸取代或分別與對應野生型CH2或CH3相比之其他修飾。在某些實施例中，本揭露內容之Fc包含締合以形成二聚體之二個CH2-CH3多肽。
重鏈或Fc胺基序列(包括包含如本文所揭露之胺基酸取代突變之某些序列)之非限制性實例提供於SEQ ID NOs.:69-95中。在某些實施例中，本揭露內容之抗NA抗體或抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NOs.:69-95中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)之胺基酸序列或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成的重鏈。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段可為單株抗體或抗原結合片段。如本文所用，術語「單株抗體」係指獲自基本上同種之抗體群體(亦即構成該群體之個別抗體為相同的，除了在一些情況下少量存在的可能天然存在之突變外)的抗體。單株抗體針對單一抗原部位具有高度特異性。此外，與包括針對不同表位之不同抗體的多株抗體製劑相反，各單株抗體針對抗原之單一表位。除了其特異性之外，單株抗體之優勢在於其可不受其他抗體的污染而合成。術語「單株」不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生抗體。舉例而言，適用於本發明之單株抗體可藉由首先由Kohler等人, Nature 256:495 (1975)描述之融合瘤方法製備，或可在細菌、真核動物或植物細胞中使用重組DNA方法製得(參見例如美國專利案第4,816,567號)。亦可使用例如Clackson等人, Nature, 352:624-628 (1991)及Marks等人, J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)中描述之技術自噬菌體抗體庫中分離單株抗體。單株抗體亦可使用揭露於PCT公開案第WO 2004/076677A2號中之方法獲得。
本揭露內容之抗體及抗原結合片段包括「嵌合抗體」，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體中的對應序列相同或同源，而該(等)鏈之其餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或子類別之抗體，以及此類抗體之片段(只要其表現出所需生物活性)中的對應序列相同或同源(參見美國專利第4,816,567號；第5,530,101號及第7,498,415號；及Morrison等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。舉例而言，嵌合抗體可包含人類及非人類殘基。此外，嵌合抗體可包含在接受者抗體或供體抗體中未發現之殘基。進行此等修飾以進一步優化抗體效能。關於其他細節，參見Jones等人, Nature321:522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature332:323-329 (1988)；及Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。嵌合抗體亦包括靈長類化及人源化抗體。
「人源化抗體」通常被視為具有自非人類來源引入其中之一或多個胺基酸殘基的人類抗體。此等非人類胺基酸殘基通常獲自可變區域。人源化可遵循Winter及同事之方法(Jones等人, Nature, 321:522-525 (1986)；Reichmann等人, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等人, Science, 239:1534-1536 (1988))，藉由用非人類可變序列取代人類抗體之對應序列進行。相應地，此類「人源化」抗體為嵌合抗體(美國專利第4,816,567號；第5,530,101號及第7,498,415號)，其中實質上小於完整人類可變區域已經來自非人類物種的對應序列取代。在一些情況下，「人源化」抗體為一種藉由非人類細胞或動物產生且包含人類序列，例如H C區域之抗體。
「人類抗體」為一種僅含有存在於由人類產生之抗體中之序列(亦即，由編碼人類抗體之基因編碼的序列)的抗體。然而，如本文所用，人類抗體可包含未在天然存在之人類抗體(例如，自人類中分離之抗體)中發現的殘基或修飾，包括本文所述之彼等修飾及變異體序列。此等通常係為了進一步改善或增強抗體效能而達成。在一些情況下，人類抗體藉由轉殖基因動物產生。舉例而言，參見美國專利第5,770,429號；第6,596,541號及第7,049,426號。
在某些實施例中，本揭露內容之抗體或抗原結合片段為嵌合、人源化或人類抗體或抗原結合片段。
在一些實施例中，藥物動力學(「PK」)參數用於描述或表徵本文所提供之抗體或抗原結合片段。出於評估PK參數之目的，關於抗體血清濃度收集之細節結合本文中之實例描述。術語「t 1/2」或「半衰期」係指向個體投予之醫藥組成物中所包括之抗體或抗原結合片段的消除半衰期。術語「C 最後」通常係指最後可測量血漿濃度(亦即，該物質此後不以可量測之血漿濃度存在)。
在一些實施例中，藉由IMGT編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。在一些實施例中，CDRH3及CDRL3係根據IMGT定義。在一些實施例中，CDRH3及CDRL3係根據IMGT-接合定義。
在一些實施例中，藉由Kabat編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，藉由Chothia編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，藉由增強Chothia編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，藉由AHo編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，藉由North編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，藉由Contact編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，藉由Martin編號系統或方法確定，抗體或抗原結合片段之VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之VH及VL的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈可變區域(VH)，其包含互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3，以及(ii)及輕鏈可變區域(VL)，其包含CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中：(a) CDRH1包含SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:47、SEQ ID NO.:49或SEQ ID NO.:55中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(b) CDRH2包含SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:57或SEQ ID NO.:61中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(c) CDRH3包含SEQ ID NO.:5、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:51或SEQ ID NO.:53中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，(d) CDRL1包含SEQ ID NO.:9或SEQ ID NO.:32中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(e) CDRL2包含SEQ ID NO.:10中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(f) CDRL3包含SEQ ID NO.:11、18、21、24、33或67中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，任擇地其限制條件為CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3不包含以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(i)分別3-5及9-11；(ii)分別3、4、15及9-11；(iii)分別3-5、9、10及18；(iv)分別3-5、9、10及21；(v)分別3-5、9-11及24；或(vi)分別3-5、32、96及33。
在某些實施例中，CDRH3及CDRL3包含以下中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別5及11；(ii)分別5及18；(iii)分別5及21；(iv)分別5及24；(v)分別5及33；(vi)分別5及67；(vii)分別15及11；(viii)分別15及18；(ix)分別15及21；(x)分別15及24；(xi)分別15及33；(xii)分別15及67；(xiii)分別51及11；(xiv)分別51及18；(xv)分別51及21；(xvi)分別51及24；(xvii)分別51及33；(xviii)分別51及67；(xix)分別53及11；(xx)分別53及18；(xxi)分別53及21；(xxii)分別53及24；(xxiii)分別53及33；或(xxiv)分別53及67。
在某些其他實施例中，CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別3-5、9、10及67；(ii)分別47、4、5及9-11；(iii)分別47、4、5、9、10及67；(iv)分別49、4、5及9-11；(v)分別47、4、5、9、10及67；(vi)分別55、4、5及9-11；(vii)分別55、4、5、9、10及67；(viii)分別3、4、51及9-11；(ix)分別3、4、51、9、10及67；(x)分別55、4、5及9-11；(xi)分別55、4、5、9、10及67；(xii)分別3、61、5及9-11；(xiii)分別3、61、5、9、10及67；或(xiv)分別3-5及9-11。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈可變區域區域(VH)及(ii)輕鏈可變區域(VL)，其中：(i) VH包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列的互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(ii) VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(iii) VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(iv) VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(v) VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(vi) VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(vii) VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(viii) VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(ix) VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(x) VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xi) VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xii) VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xiii) VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xiv) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xv) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xvi) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xvii) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xviii) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xix) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xx) VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxi) VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxii) VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxiii) VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxiv) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxv) VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxvi) VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxvii) VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxviii) VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxix) VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxx) VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxi) VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxii) VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxiii) VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxiv) VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxv) VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxvi) VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxvii) VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxviii) VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxix) VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxx) VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxi) VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxii) VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxiii) VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；或(xxxxiv) VH包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3任擇地根據IMGT編號系統定義。
在某些實施例中，(i) VH包含與SEQ ID NOs.:2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成；及(ii) VL包含與SEQ ID NOs.:8、17、20、23、31、37、66及68中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成，任擇地其限制條件為該VH及該VL不包含以下中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(a)分別2及8；(b)分別14及8；(c)分別2及17；(d)分別2及20；(e)分別2及23；或(f)分別2及31。在一些實施例中，(i) VH包含與SEQ ID NO.:54中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成，及(ii) VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成。
在一些實施例中，VH及VL與以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別2及66；(ii)分別46及8；(iii)分別46及17；(iv)分別46及20；(v)分別46及23；(vi)分別46及31；(vii)分別46及66；(viii)分別48及8；(ix)分別48及17；(x)分別48及20；(xi)分別48及23；(xii)分別48及31；(xiii)分別48及66；(xiv)分別54及8；(xv)分別54及17；(xvi)分別54及20；(xvii)分別54及23；(xviii)54及31；(xix)分別54及66；(xx)分別56及8；(xxi)分別56及17；(xxii)分別56及20；(xxiii)分別56及23；(xxiv)分別54及31；(xxv)分別54及66；(xxvi)分別60及8；(xxvii)分別60及17；(xxviii)分別60及20；(xxix)分別60及23；(xxx)分別60及31；(xxxi)分別60及66；(xxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxiii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
抗體及抗原結合片段之可變區域可包含骨架區胺基酸序列。骨架區胺基酸序列可使用例如IMGT、Kabat、Chothia、增強Chothia、Contact、Martin或AHo編號系統或方法鑑別。在一些實施例中，VH包含本發明所揭露之VH胺基酸序列的骨架區(FR)1、FR2、FR3及/或FR4，或包含所揭露之FR1、FR2、FR3及/或FR4胺基酸序列之變異體，其中與所揭露之VH胺基酸序列相比，該變異體包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失。在一些實施例中，所揭露之FR1、FR2、FR3及/或FR4胺基酸序列之變異體分別與所揭露之FR1、FR2、FR3及/或FR4胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)。在一些實施例中，VL包含本發明所揭露之VL胺基酸序列的骨架區(FR)1、FR2、FR3及/或FR4，或包含所揭露之FR1、FR2、FR3及/或FR4胺基酸序列之變異體，其中與所揭露之VL胺基酸序列相比，該變異體包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失。在一些實施例中，所揭露之FR1、FR2、FR3及/或FR4胺基酸序列之變異體分別與所揭露之FR1、FR2、FR3及/或FR4胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含： (1) VH，其包含：(i) FR1，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR1胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，(ii) FR2，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR2胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，(iii) FR3，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR3胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，及/或(iv) FR4，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR4胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體；及/或 (2) VL，其包含(i) FR1，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR1胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，(ii) FR2，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR2胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，(iii) FR3，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR3胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體，及/或(iv) FR4，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：如圖71中所示，「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR4胺基酸序列，或其包含一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個胺基酸取代、插入及/或缺失之變異體。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據IMGT。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Kabat。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Chothia。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據增強Chothia。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Contact。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Martin。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據North。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據AHo。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含： (1) VH，其包含：(i) FR1，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FN9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的FR1胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列，(ii) FR2，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR2胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列，(iii) FR3，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR3胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列，及/或(iv) FR4，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VH-WT」、「FNI9-VH-FR124GL」、「FNI9-VH.4」、「FNI9-VH.5」、「FNI9-VH.6」、「FNI9-VH.7」、「FNI9-VH.8」、「FNI9-VH.9」、「FNI9-VH.10」、「FNI9-VH.11」、「FNI9-VH.12」及「FNI9-VH.13」中之任一者的VH FR4胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列；及/或 (2) VL，其包含(i) FR1，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR1胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列，(ii) FR2，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR2胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列，(iii) FR3，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR3胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列及/或(iv) FR4，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與如圖71中所示之「FNI9-VK-WT」、「FNI9-VK.7」及「FNI9-VK.8」中之任一者的VL FR4胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據IMGT。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Kabat。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Chothia。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據增強Chothia。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Contact。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據Martin。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據North。在一些實施例中，VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4係根據AHo。
在一些實施例中，VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在某些實施例中，VH及VL分別包含SEQ ID NOs.:54及8中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
在某些實施例中，提供一種包含重鏈及輕鏈之抗體，其中該重鏈及該輕鏈包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列：(i)分別45及37；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；或(xxxxiv)分別2及37。
在某些實施例中，重鏈及輕鏈分別包含SEQ ID NOs.:54及8中所闡述之胺基酸序列。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈可變區域(VH)，其包含互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3，以及(ii)及輕鏈可變區域(VL)，其包含CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中：(a) CDRH2如SEQ ID NO.:4中所闡述且包含於SEQ ID NO.:59中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述；(b) CDRH2如SEQ ID NO.:61中所闡述且包含於SEQ ID NO.:62中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述；或(c) CDRH2如SEQ ID NO.:61中所闡述且包含於SEQ ID NO.:64中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述。
在其他實施例中，CDRL1如SEQ ID NO.:9中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:10中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NOs.:11、18、21、24、33及67中之任一者中所闡述。在其他實施例中，CDRL1如SEQ ID NO.:32中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:10中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NOs.:11、18、21、24、33及67中之任一者中所闡述。在其他實施例中，CDRL1如SEQ ID NO.:32中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:96中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NO.:33中所闡述。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區域(VH)及輕鏈可變區域(VL)，其中VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別65及68；(ii)分別46及8；(iii)分別48及8；(iv)分別50及8；(v)分別52及8；(vi)分別54及8；(vii)分別56及8；(viii)分別58及8；(ix)分別60及8；(x)分別63及8；(xi)分別46及66；(xii)分別48及66；(xiii)分別50及66；(xiv)分別52及66；(xv)分別54及66；(xvi)分別56及66；(xvii)分別58及66；(xviii)分別60及66；(xix)分別63及66；或(xx)分別2及37。
在一些實施例中，該流感包含一A型流感病毒、一B型流感病毒或二者。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含人類抗體、單株抗體、經純化抗體、單鏈抗體、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段為多特異性抗體或抗原結合片段，其中任擇地，抗體或抗原結合片段為雙特異性抗體或抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含(例如IgG1) Fc多肽或其片段。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含IgG、IgA、IgM、IgE或IgD同型。在其他實施例中，抗體或抗原結合片段包含選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之IgG同型。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含IgG1同型。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含IgG1m3異型、IgG1m17異型、IgG1m1異型或其任何組合。
在一些實施例中，Fc多肽或其片段包含：(i)與不包含突變之參考Fc多肽相比，增加與人類FcRn之結合親和力的突變(例如使用表面電漿子共振(SPR)所量測(例如Biacore，例如T200儀器，使用製造商之方案))；及/或(ii)與不包含突變之參考Fc多肽相比，增加與人類FcγR之結合親和力的突變(例如使用表面電漿子共振(SPR)所量測(例如Biacore，例如T200儀器，使用製造商之方案，及/或使用中尺度發現(MSD)所量測))。
在一些實施例中，增加與人類FcRn之結合親和力的突變包含：M428L；N434S；N434H；N434A；N434S；M252Y；S254T；T256E；T250Q；P257I；Q311I；D376V；T307A；E380A；或其任何組合。在一些實施例中，增加與人類FcRn之結合親和力的突變包含：(i) M428L/N434S；(ii) M252Y/S254T/T256E；(iii) T250Q/M428L；(iv) P257I/Q311I；(v) P257I/N434H；(vi) D376V/N434H；(vii) T307A/E380A/N434A；(viii) M428L/N434A；或(ix) (i)-(viii)之任何組合。在一些實施例中，增加與人類FcRn之結合親和力的突變包含M428L/N434S或M428L/N434A。
在一些實施例中，增強與FcγR之結合的突變包含S239D；I332E；A330L；G236A；或其任何組合。在一些實施例中，增強與FcγR之結合的突變包含：(i) S239D/I332E；(ii) S239D/A330L/I332E；(iii) G236A/S239D/I332E；或(iv) G236A/A330L/I332E，其中Fc多肽或其片段任擇地包含位置239處之Ser。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含改變醣基化之突變，其中改變醣基化之突變包含N297A、N297Q或N297G；及/或其經去醣基化；及/或其經去岩藻醣基化。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)在重鏈中，(i)(a)可變區域(VH)，其包含分別在SEQ ID NOs.:3-5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434A；以及(ii)在輕鏈中，輕鏈可變區域(VL)，其包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)在重鏈中，(i)(a)可變區域(VH)，其包含分別在SEQ ID NOs.:3-5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，(i)(b)突變M428L及N434S；以及(ii)在輕鏈中，輕鏈可變區域(VL)，其包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列。
在某些實施例中，VH及VL分別與SEQ ID NOs.:2及8中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。在某些實施例中，VH及VL分別包含SEQ ID NOs.:2及8中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
在某些實施例中，VH及VL分別與SEQ ID NOs.:2及37中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。在某些實施例中，VH及VL分別包含SEQ ID NOs.:2及37中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含IgG1m3異型、IgG1m17異型、IgG1m1異型或其任何組合。
在某些實施例中，VH包含於進一步包含SEQ ID NO.:34、SEQ ID NO.:36或SEQ ID NO.:38中所闡述之CH1-CH3胺基酸序列的重鏈中。在某些實施例中，VL包含於進一步包含SEQ ID NO.:35中所闡述之CL胺基酸序列的輕鏈中。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈，其包含SEQ ID NO.:39中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:39或由該胺基酸序列組成；及(ii)輕鏈，其包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈，其包含SEQ ID NO.:40中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:40或由該胺基酸序列組成；及(ii)輕鏈，其包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈，其包含SEQ ID NO.:42中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:42或由該胺基酸序列組成；及(ii)輕鏈，其包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)重鏈，其包含SEQ ID NO.:43中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:43或由該胺基酸序列組成；及(ii)輕鏈，其包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:39中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:39或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:40中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:40或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:42中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:42或由其組成；及(ii)二條輕，各鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:43中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:43或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施例中，提供一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其抗原結合片段，其在其重鏈中包含(i)-(xviii)中之任一者中所闡述之胺基酸突變：(i) G236A、L328V及Q295E；(ii) G236A、P230A及Q295E；(iii) G236A、R292P及I377N；(iv) G236A、K334A及Q295E；(v) G236S、R292P及Y300L；(vi) G236A及Y300L；(vii) G236A、R292P及Y300L；(viii) G236S、G420V、G446E及L309T；(ix) G236A及R292P；(x) R292P及Y300L；(xi) G236A及R292P；(xii) Y300L；(xiii) E345K、G236S、L235Y及S267E；(xiv) E272R、L309T、S219Y及S267E；(xv) G236Y；(xvi) G236W；(xvii) F243L、G446E、P396L及S267E；(xviii) G236A、S239D及H268E。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段在其重鏈中包含胺基酸突變G236A。
在某些實施例中，本揭露內容提供一種抗體，其包含： (i)重鏈，其包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及 (ii)輕鏈，其包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)。
在某些實施例中，本揭露內容提供一種抗體，其包含： (i)重鏈，其由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107組成；及 (ii)輕鏈，其由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)組成。
在某些實施例中，本揭露內容提供一種抗體，其包含： (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及 (ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)。
在某些實施例中，本揭露內容提供一種抗體，其包含： (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107組成；及 (ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)組成。 聚核苷酸、載體及宿主細胞
在另一態樣中，本揭露內容提供經分離聚核苷酸，其編碼本發明所揭露之抗體或其抗原結合片段或其部分(例如，CDR、VH、VL、重鏈或輕鏈、或重鏈及輕鏈)中之任一者，或其編碼本發明所揭露之多肽。
在某些實施例中，該聚核苷酸包含去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，其中該RNA任擇地包含信使RNA (mRNA)。
在一些實施例中，聚核苷酸包含經修飾之核苷、帽-1結構、帽-2結構或其任何組合。在某些實施例中，聚核苷酸包含假尿苷、N6-甲基腺苷、5-甲基胞苷、2-硫代尿苷或其任何組合。在一些實施例中，假尿苷包含N1-甲基假尿苷。
在某些實施例中，該聚核苷酸經密碼子最佳化以表現於一宿主細胞(例如，人類細胞或CHO細胞)中。當已知或鑑別到編碼序列時，密碼子最佳化可使用已知技術及工具，例如使用GenScript® OptimiumGene TM工具，或其類似物進行)。密碼子最佳化序列包括經部分密碼子最佳化(亦即，一或多個密碼子經最佳化以在宿主細胞中表現)之序列及經完全密碼子最佳化之序列。
亦應瞭解，本揭露內容之編碼抗體及抗原結合片段的聚核苷酸可能具有不同核苷酸序列，但因例如遺傳密碼之簡併、剪接及其類似者仍編碼相同抗體或抗原結合片段。
在某些實施例中，聚核苷酸包含(i)與SEQ ID NO.:109中所闡述之核苷酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的核苷酸序列及(ii)與SEQ ID NO.:110中所闡述之核苷酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的核苷酸序列。在某些實施例中，聚核苷酸編碼：SEQ ID NO.:107及SEQ ID NO.:108。
在某些實施例中，第一聚核苷酸包含與SEQ ID NO.:109中所闡述之核苷酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的核苷酸序列，且第二聚核苷酸與SEQ ID NO.:110中所闡述之核苷酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的核苷酸序列。在某些實施例中，該第一聚核苷酸編碼SEQ ID NO.:107且該第二聚核苷酸編碼SEQ ID NO.:108。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，聚核苷酸可包含去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。在一些實施例中，RNA包含信使RNA (mRNA)。
亦提供載體，其中該載體包含或含有如本文中所揭露之聚核苷酸(例如，編碼結合至IAV NA、IBV NA或二者之抗體或抗原結合片段或多肽的聚核苷酸)。載體可包含本文中所揭露之載體中之任何一或多者。在特定實施例中，提供一種載體，其包含編碼抗體或抗原結合片段或其一部分之DNA質體構築體(例如，所謂的「DMAb」；參見例如Muthumani等人, J Infect Dis. 214(3):369-378 (2016)；Muthumani等人, Hum Vaccin Immunother 9:2253-2262 (2013))；Flingai等人, Sci Rep. 5:12616 (2015)；及Elliott等人, NPJ Vaccines18 (2017)，該等編碼抗體之DNA構築體及相關使用方法，包括投予其之方法以引用的方式併入本文中)。在某些實施例中，DNA質體構築體包含編碼抗體或抗原結合片段之重鏈及輕鏈(或VH及VL)的單一開放閱讀框架，其中編碼重鏈之序列及編碼輕鏈之序列任擇地藉由編碼蛋白酶裂解部位之聚核苷酸及/或藉由編碼自裂解肽之聚核苷酸分隔開。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段之取代性組分由包含於單一質體中之聚核苷酸編碼。在其他實施例中，抗體或抗原結合片段之取代性組分由包含於二個或更多個質體(例如，第一質體包含編碼重鏈、VH或VH+CH1之聚核苷酸，且第二質體包含編碼同源輕鏈、VL或VL+CL之聚核苷酸)中之聚核苷酸編碼。在某些實施例中，單一質體包含編碼來自本揭露內容之二個或更多個抗體或抗原結合片段之重鏈及/或輕鏈的聚核苷酸。例示性表現載體為pVax1，可購自Invitrogen®。本揭露內容之DNA質體可藉由例如電穿孔(例如，肌肉內電穿孔)或藉由適當的調配物(例如，玻尿酸酶)遞送至個體。
在一些實施例中，提供一種聚核苷酸(例如mRNA)，其包含(i)編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107的核苷酸序列，及(ii)編碼SEQ ID NO.:108之核苷酸序列。聚核苷酸可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在一些實施例中，提供第一質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107的聚核苷酸(例如mRNA)，且提供第二質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:108之聚核苷酸(例如mRNA)。第一質體或載體及/或第二質體或載體可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在某些實施例中，提供第一質體或載體，其包含有包含SEQ ID NO.:109或由其組成之聚核苷酸(例如mRNA)，且提供第二質體或載體，其包含有包含SEQ ID NO.:110或由其組成之聚核苷酸(例如mRNA)。第一質體或載體及/或第二質體或載體可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在一些實施例中，提供一種方法，其包含向個體投予編碼抗體重鏈、VH或Fd (VH + CH1)之第一聚核苷酸(例如mRNA)，及向個體投予編碼同源抗體輕鏈、VL或VL+CL之第二聚核苷酸(例如mRNA)。
在一些實施例中，提供一種方法，其包含向個體投予聚核苷酸(例如mRNA)，其包含(i)編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107的核苷酸序列，及(ii)編碼SEQ ID NO.:108之核苷酸序列。聚核苷酸可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在一些實施例中，提供一種方法，其包含向個體投予(i)第一質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107的聚核苷酸(例如mRNA)，及(ii)第二質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:108之聚核苷酸(例如mRNA)。第一質體或載體及/或第二質體或載體可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在某些實施例中，提供一種方法，其包含向個體投予第一質體或載體，該第一質體或載體包含有包含SEQ ID NO.:109或由其組成之聚核苷酸(例如mRNA)，且提供第二質體或載體，該第二質體或載體包含有包含SEQ ID NO.:110或由其組成之聚核苷酸(例如mRNA)。第一質體或載體及/或第二質體或載體可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。在一些實施例中，提供一種聚核苷酸(例如，mRNA)，其編碼抗體或其抗原結合片段之重鏈及輕鏈。在一些實施例中，提供一種聚核苷酸(例如，mRNA)，其編碼抗體或其抗原結合片段之二條重鏈及二條輕鏈。參見例如Li, JQ., Zhang, ZR., Zhang, HQ等人. Intranasal delivery of replicating mRNA encoding neutralizing antibody against SARS-CoV-2 infection in mice. Sig Transduct Target Ther 6,369 (2021).https://doi.org/10.1038/s41392-021-00783-1，編碼抗體之mRNA構築體、載體及其相關技術以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，聚核苷酸經由α病毒複製子粒子(VRP)遞送系統遞送至個體。在一些實施例中，複製子包含經修飾之VEEV複製子，該複製子包含二個次基因體啟動子。在一些實施例中，聚核苷酸或複製子可同時轉譯抗體或其抗原結合片段之重鏈(或VH或VH+1)及輕鏈(或VL或VL+CL)。在一些實施例中，提供一種方法，其包含向個體遞送此類聚核苷酸或複製子。
在另一態樣中，本揭露內容亦提供一種宿主細胞，其表現根據本揭露內容之抗體或抗原結合片段；或包含或含有根據本揭露內容之載體或聚核苷酸。
此類細胞之實例包括但不限於真核細胞，例如酵母細胞、動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞；及原核細胞，包括大腸桿菌( E. coli)。在一些實施例中，細胞為哺乳動物細胞，諸如人類B細胞。在某些此類實施例中，細胞為哺乳動物細胞株，諸如CHO細胞(例如，DHFR-CHO細胞(Urlaub等人, PNAS 77:4216 (1980))、人類胚胎腎細胞(例如，HEK293T細胞)、PER.C6細胞、Y0細胞、Sp2/0細胞、NS0細胞、例如Hepa RG細胞之人類肝細胞、骨髓瘤細胞或融合瘤細胞。哺乳動物宿主細胞株之其他實例包括小鼠塞特利氏細胞(例如TM4細胞)；由SV40轉型之猴腎CV1株(COS-7)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；猴腎細胞(CV1)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；犬腎細胞(MDCK；水牛鼠肝細胞(BRL 3A)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞； MRC5細胞；及FS4細胞。適用於抗體生產之哺乳動物宿主細胞株亦包括例如Yazaki及Wu, Methods in Molecular Biology, 第248卷(B. K. C. Lo編, Humana Press, Totowa, N.J.), 第255-268頁(2003)中所描述之哺乳動物宿主細胞株。
在某些實施例中，宿主細胞為原核細胞，諸如大腸桿菌。諸如大腸桿菌之原核細胞中之肽的表現係充分確立的(參見例如Pluckthun, A. Bio/Technology 9:545-551 (1991)。舉例而言，抗體可在細菌中產生，尤其在不需要醣基化及Fc效應功能時。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如美國專利第5,648,237號；第5,789,199號；及第5,840,523號。
在特定實施例中，細胞可經根據本說明書之載體，用表現載體轉染。術語「轉染」係指將核酸分子，諸如DNA或RNA (例如mRNA)分子引入細胞中，例如引入真核細胞中。在本說明書之情形下，術語「轉染」涵蓋技術人員已知用於將核酸分子引入細胞中，諸如引入真核細胞中，包括引入哺乳動物細胞中的任何方法。此類方法涵蓋例如電穿孔、例如基於陽離子脂質及/或脂質體之脂質體轉染、磷酸鈣沈澱、基於奈米粒子之轉染、基於病毒之轉染或基於陽離子聚合物(諸如DEAE-聚葡萄糖或聚伸乙亞胺等)之轉染。在某些實施例中，引入為非病毒。
此外，本揭露內容之宿主細胞可經根據本揭露內容之載體穩定地或暫時地轉染，例如用於表現根據本揭露內容之抗體或其抗原結合片段。在此類實施例中，細胞可經如本文所述之載體穩定地轉染。或者，細胞可經編碼如本文中所揭露之抗體或抗原結合片段之根據本揭露內容的載體暫時地轉染。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，聚核苷酸可對宿主細胞為異源的。
因此，本揭露內容亦提供異源性地表現本揭露內容之抗體或抗原結合片段的重組宿主細胞。舉例而言，細胞可屬於與完全或部分產生抗體之物種(例如表現人類抗體或經工程化之人類抗體之CHO細胞)不同的物種。在一些實施例中，宿主細胞之細胞類型在自然界中不表現抗體或抗原結合片段。此外，宿主細胞可在不存在於抗體或抗原結合片段之原生狀態中(或在抗體或抗原結合片段經工程化或自其衍生之親代抗體的原生狀態中)之抗體或抗原結合片段上賦予轉譯後修飾(PTM；例如醣基化或岩藻醣基化)或其缺乏。此類PTM或缺乏PTM可能引起功能差異(例如，降低之免疫原性)。因此，由本文所揭露之宿主細胞產生的本揭露內容之抗體或抗原結合片段可包括不同於在原生狀態下之該抗體(或親代抗體)的一或多個轉譯後修飾(例如，由宿主細胞產生之人類抗體可包含一或多個轉譯後修飾，或可包括較少轉譯後修飾，以使得當與人類分離及/或由原生人類B細胞或漿細胞產生時不同於該抗體)。
適用於表現本揭露內容之結合蛋白之昆蟲細胞為此項技術中已知的且包括例如草地貪夜蛾( Spodoptera frugipera) Sf9細胞、粉紋夜蛾(Trichoplusia ni) BTI-TN5B1-4細胞及草地貪夜蛾SfSWT01「Mimic TM」細胞。參見例如Palmberger等人, J. Biotechnol. 153(3-4):160-166 (2011)。已鑑別出可與昆蟲細胞結合使用，尤其用於轉染草地貪夜蛾細胞之許多桿狀病毒株。
諸如絲狀真菌或酵母菌之真核微生物亦為適用於選殖或表現編碼蛋白質之載體的宿主，且包括具有「人源化」醣基化路徑之真菌及酵母菌株，從而引起產生具有部分或完全人類醣基化模式之抗體。參見Gerngross, Nat. Biotech.22:1409-1414 (2004)；Li等人, Nat. Biotech.24:210-215 (2006)。
植物細胞亦可用作用於表現本揭露內容之抗體或抗原結合片段的宿主。舉例而言，PLANTIBODIES™技術(描述於例如美國專利第5,959,177號；第6,040,498號；第6,420,548號；第7,125,978號；及第6,417,429號中)採用轉殖基因植物以產生抗體。
在某些實施例中，宿主細胞包含哺乳動物細胞。在特定實施例中，宿主細胞為CHO細胞、HEK293細胞、PER.C6細胞、Y0細胞、Sp2/0細胞、NS0細胞、人類肝細胞、骨髓瘤細胞或融合瘤細胞。
在一相關態樣中，本揭露內容提供用於產生抗體或抗原結合片段之方法，其中該等方法包含在足以產生抗體或抗原結合片段之條件及時間下培養本揭露內容之宿主細胞。舉例而言，適用於分離及純化以重組方式產生之抗體的方法可包括獲得來自適合宿主細胞/載體系統(分泌重組抗體至培養基中)的上清液，且隨後使用可商購的過濾器濃縮培養基。在濃縮之後，可將濃縮物施加至單一適合之純化基質或施加至一系列適合之基質，諸如親和基質或離子交換樹脂。一或多個逆相HPLC步驟可用以進一步純化重組多肽。當自天然環境分離免疫原時，亦可採用此等純化方法。大規模製備本文所述之經分離/重組抗體中之一或多者的方法包括分批細胞培養，其經監測及控制以維持適當培養條件。可溶性抗體之純化可根據本文所述及此項技術中已知之方法進行，且與國內及國外管控機構之法律及指導原則一致。 組成物
本文亦提供包含單獨或以任何組合形式之本發明所揭露之抗體、抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、載體或宿主細胞，且可進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑的組成物。本文進一步詳細論述此類組成物，以及載劑、賦形劑及稀釋劑。
在某些實施例中，組成物包含第一載體及第二載體，該第一載體包含第一質體，且該第二載體包含第二質體，其中該第一質體包含編碼該抗體或其抗原結合片段之重鏈、VH或VH+CH1之聚核苷酸，且第二質體包含編碼同源輕鏈、VL或VL+CL的聚核苷酸。在某些實施例中，組成物包含偶合至適合遞送媒劑或載劑之聚核苷酸(例如mRNA)。在某些實施例中，組成物包含編碼抗體重鏈、VH或Fd (VH + CH1)之第一聚核苷酸(例如mRNA)及編碼同源抗體輕鏈或VL之第二聚核苷酸(例如mRNA)。在一個實例中，組成物可包含編碼包含SEQ ID NO.: 54中所闡述之VH之抗體重鏈的第一聚核苷酸(例如mRNA)及編碼包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL之抗體輕鏈的第二聚核苷酸(例如mRNA)。在另一實例中，組成物可包含編碼抗體重鏈之第一聚核苷酸(例如mRNA)，該抗體重鏈包含分別如SEQ ID NOs.: (i) 55、4及5中所闡述之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列；及編碼抗體輕鏈之第二聚核苷酸(例如mRNA)，該抗體輕鏈包含分別如SEQ ID Nos.: 9-11中所闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列。
用於向人類個體投予之例示性媒劑或載劑包括脂質或脂質衍生之遞送媒劑，諸如脂質體、固體脂質奈米粒子、油性懸浮液、次微米級脂質乳液、脂質微泡、逆脂質微胞、耳蝸脂質體、脂質微管、脂質微柱或脂質奈米粒子(LNP)或奈米尺度平台(參見例如Li等人. Wilery Interdiscip Rev. Nanomed Nanobiotechnol. 11(2):e1530 (2019))。用於設計適當mRNA及調配mRNA-LNP以及遞送其之原理、試劑及技術描述於例如Pardi等人( J Control Release 217345-351 (2015))；Thess等人( Mol Ther 23: 1456-1464 (2015))；Thran等人( EMBO Mol Med 9(10):1434-1448 (2017)；Kose等人( Sci. Immunol. 4eaaw6647 (2019)；及Sabnis等人( Mol. Ther. 26:1509-1519 (2018))中，該等技術包括加帽、密碼子最佳化、核苷修飾、mRNA純化、將mRNA併入至穩定脂質奈米粒子(例如可離子化陽離子脂質/磷脂醯膽鹼/膽固醇/PEG-脂質；可離子化脂質:二硬脂醯基PC:膽固醇:聚乙二醇脂質)中及其皮下、肌肉內、皮內、靜脈內、腹膜內及氣管內投予，係以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，提供一種聚核苷酸(例如mRNA)，其包含(i)編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107的核苷酸序列，及(ii)編碼SEQ ID NO.:108之核苷酸序列。聚核苷酸可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在一些實施例中，提供第一質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107的聚核苷酸(例如mRNA)，且提供第二質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:108之聚核苷酸(例如mRNA)。第一質體或載體及/或第二質體或載體可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在某些實施例中，提供第一質體或載體，其包含有包含SEQ ID NO.:109或由其組成之聚核苷酸(例如mRNA)，且提供第二質體或載體，其包含有包含SEQ ID NO.:110或由其組成之聚核苷酸(例如mRNA)。第一質體或載體及/或第二質體或載體可包含於進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組成物中。
在某些實施例中，組成物包含本揭露內容之第一抗體或抗原結合片段及本揭露內容之第二抗體或抗原結合片段，其中該第一抗體或抗原結合片段與該第二抗體或抗原結合片段不同。 方法及用途
本文亦提供使用本揭露內容之抗體或抗原結合片段、核酸、載體、細胞或組成物診斷流感感染(例如，在人類個體中，或在獲自人類個體之樣品中)的方法。
診斷方法(例如，活體外、離體)可包括使抗體、抗體片段(例如，抗原結合片段)與樣品接觸。此類樣品可自個體分離，例如，獲自例如鼻腔通道、鼻竇腔、唾液腺、肺、肝臟、胰臟、腎臟、耳、眼睛、胎盤、消化道、心臟、卵巢、垂體、腎上腺、甲狀腺、腦、皮膚或血液之經分離組織樣品。診斷方法亦可包括偵測抗原/抗體複合體，尤其在使抗體或抗體片段與樣品接觸之後。此類偵測步驟可在實驗台上進行，亦即不與人類或動物身體有任何接觸。偵測方法之實例為熟習此項技術者所熟知，且包括例如酶聯免疫吸附分析(ELISA)，包括直接、間接及夾心ELISA。
本文亦提供使用本揭露內容之抗體或抗原結合片段或包含該抗體或抗原結合片段之組成物治療個體之方法，其中該個體患有、被認為患有或處於患上流感感染的風險下。「治療(treat)」、「治療(treatment)」或「改善(ameliorate)」係指對個體(例如人類或非人類哺乳動物，諸如靈長類動物、馬、貓、犬、山羊、小鼠或大鼠)之疾病、病症或病狀的醫學管理。一般而言，包含本揭露內容之抗體或組成物的適當劑量或治療方案係以足以引發治療效益或預防效益的量投予。治療性或預防性(prophylactic)/預防性(preventive)益處包括改善臨床結果；減輕或緩解與疾病相關之症狀；減少症狀的發生；改善生活品質；延長無病狀態；疾病嚴重程度減輕；使疾病病況穩定；延緩或預防疾病進展；緩解；存活；延長存活期；或其任何組合。在某些實施例中，治療性或預防性/預防性效益包括減少或預防因治療流感感染而住院(亦即，以統計學上顯著之方式)。在某些實施例中，治療性或預防性/預防性益處包括減少因治療流感感染而住院的持續時間(亦即，以統計學上顯著之方式)。在某些實施例中，治療性或預防性/預防性效益包括減少或消除對呼吸干預，諸如插管及/或使用呼吸器裝置之需求。在某些實施例中，治療性或預防性/預防性效益包括逆轉晚期疾病病理學及/或降低死亡率。
在某些實施例中，對於單次劑量，例如每天、每週或每月劑量，根據本揭露內容之組成物或方法中抗體或抗原結合片段之量可不超過1 g或500 mg。在一些實施例中，對於單次劑量，根據本揭露內容之組成物或方法中抗體或抗原結合片段之量可不超過200 mg或100 mg。舉例而言，在一些實施例中，對於單次劑量，根據本揭露內容之組成物或方法中抗體或抗原結合片段之量可不超過50 mg。
本揭露內容之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物的「治療有效量」或「有效量」係指足以產生治療作用之該組成物或分子的量，該治療作用包括以統計學上顯著之方式改善之臨床結果；減輕或緩解與疾病相關之症狀；降低症狀的發生；改善之生活品質；更長的無疾病狀態；疾病嚴重程度減輕；疾病病況之穩定；延緩疾病進展；緩解；存活；或延長的存活期。當提及單獨投予之個別活性成分時，治療有效量係指該成分或單獨表現該成分之細胞的作用。當提及組合時，治療有效量係指不論連續、依序或同時投予，產生治療作用之活性成分或組合的輔助活性成分與表現活性成分之細胞的組合量。
因此，在某些實施例中，提供用於治療個體之流感感染的方法，其中該等方法包含向該個體投予如本文中所揭露之有效量的抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
一般而言，可藉由本揭露內容治療之個體為人類及其他靈長類動物個體，諸如用於獸醫學目的之猴及猿。諸如小鼠及大鼠之其他模式生物亦可根據本揭露內容治療。在任一前述實施例中，個體可為人類個體。個體可為雄性或雌性且可為任何適齡(包括嬰兒、幼年、青年、成年及老年)個體。
咸信多個準則引起與流感感染相關之重度症狀或死亡的高風險。此等包括但不限於年齡、職業、一般健康、預先存在之健康狀況、場所及生活方式習慣。在一些實施例中，根據本揭露內容治療之個體包含一或多種風險因子。
在某些實施例中，根據本揭露內容治療之人類個體為嬰兒、兒童、青年、中年或老年個體。在某些實施例中，根據本揭露內容治療之人類個體低於1歲、或為1至5歲、或在5與125歲之間(例如，5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或125歲，包括其中或其間之任何及所有年齡)。在某些實施例中，根據本揭露內容治療之人類個體為0-19歲、20-44歲、45-54歲、55-64歲、65-74歲、75-84歲或85歲，或更大年齡。咸信，中年個體，且尤其老年個體可能處於特定風險。在特定實施例中，人類個體為45-54歲、55-64歲、65-74歲、75-84歲或85歲，或更大年齡。在一些實施例中，人類個體為男性。在一些實施例中，人類個體為女性。
在某些實施例中，根據本揭露內容治療之個體已接受針對流感之疫苗，且該疫苗藉由臨床診斷或科學或法規共識，例如藉由該個體之疫苗後感染或症狀經確定為無效的。
預防流感病毒之感染尤其係指預防性環境，其中該個體未診斷感染有流感病毒(未進行診斷或診斷結果為陰性)，及/或該個體未展現出或經歷感染有流感病毒之症狀。預防流感病毒之感染尤其適用於感染時處於嚴重疾病或併發症之更大風險下的個體，諸如孕婦、兒童(諸如59個月以下的兒童)、老年人、患有慢性醫學病狀(諸如慢性心臟病、肺病、腎病、代謝疾病、神經發育病、肝病或血液疾病)之個體及患有免疫抑制病狀(諸如HIV/AIDS，接受化學療法或類固醇，或惡性病)之個體。另外，預防流感病毒之感染亦尤其適用於例如由於增加之暴露而處於獲得流感病毒感染之更大風險下的個體，例如在公共區域工作或停留之個體，尤其醫護人員。
在某些實施例中，治療係作為暴露期間或暴露前預防投予。在某些實施例中，治療係作為暴露後預防投予。
在一些實施例中，提供一種用於降低個體之流感感染風險的方法，其中該方法包含向個體投予有效量之本發明所揭露之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞、人類B細胞或組成物。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段或經編碼抗體或抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO.:54 (且任擇地，Fc中之M428L及N434S突變)之重鏈及包含SEQ ID NO.:8之輕鏈。在其他實施例中，重鏈包含SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，且輕鏈包含SEQ ID NO.:108。
在一些實施例中，提供一種用於針對個體之流感感染進行暴露前預防的方法，其中該方法包含向個體投予有效量之本發明所揭露之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞、人類B細胞或組成物。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段或經編碼抗體或抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO.:54 (且任擇地，Fc中之M428L及N434S突變)之重鏈及包含SEQ ID NO.:8之輕鏈。在其他實施例中，重鏈包含SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，且輕鏈包含SEQ ID NO.:108。
在一些實施例中，提供一種用於針對個體之流感感染進行暴露期間預防的方法，其中該方法包含向個體投予有效量之本發明所揭露之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞、人類B細胞或組成物。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段或經編碼抗體或抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO.:54 (且任擇地，Fc中之M428L及N434S突變)之重鏈及包含SEQ ID NO.:8之輕鏈。在其他實施例中，重鏈包含SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，且輕鏈包含SEQ ID NO.:108。
在一些實施例中，提供一種用於針對個體之流感感染進行暴露期間預防的方法，其中該方法包含向個體投予有效量之本發明所揭露之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞、人類B細胞或組成物。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段或經編碼抗體或抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO.:54 (且任擇地，Fc中之M428L及N434S突變)之重鏈及包含SEQ ID NO.:8之輕鏈。在其他實施例中，重鏈包含SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，且輕鏈包含SEQ ID NO.:108。
在治療性環境中，相比之下，個體通常感染有流感病毒、診斷患有流感病毒感染及/或展現出流感病毒感染之症狀。值得注意的是，流感病毒感染之術語「治療(treatment)」及「治療(therapy)」/「治療(therapeutic)」可指(完全)治癒流感病毒感染及/或相關症狀以及緩解/降低流感病毒感染及/或相關症狀(例如，緩解/降低感染及/或症狀之嚴重程度、症狀數目、感染及/或症狀之持續時間或其任何組合)。
應理解，在本文中提及症狀之數目及/或嚴重程度之降低，該降低係由投予本發明所揭露之醫藥組成物引起，描述與未接受所揭露之醫藥組成物的參考個體之比較。參考個體可為例如：(i)在早期時段(例如，A型流感病毒季節之前)之相同個體，(ii)以下相同或類似之個體：年齡或年齡組；性別；懷孕狀態；慢性醫學病狀(諸如慢性心臟病、肺病、腎病、代謝疾病、神經發育病、肝病或血液疾病)或不具有慢性醫學病狀；及/或免疫抑制病狀或不具有免疫抑制病狀；或(iii)在流感病毒季節期間之某一群體(例如，地方、區域或國家，包括相同或類似年齡或年齡範圍及/或一般健康狀況)內的典型個體。預防可例如藉由以下確定：在整個流感季節之一部分期間或歷經整個流感季節未患上經診斷之流感感染及/或不具有與流感感染相關之症狀。
在某些實施例中，本文所提供之方法包括向處於流感感染之直接風險下的個體投予治療有效量之根據本揭露內容的組成物。流感感染之直接風險通常在流感流行期間出現。已知流感病毒循環且導致疾病之季節性流行(WHO，流感(季節性)情況說明，2018年11月6日)。在溫帶氣候中，季節性流行主要在冬季出現，而在熱帶區域，流感可能在全年出現，從而導致更不規律地爆發。舉例而言，在北半球，流感流行之風險在11月、12月、1月、2月及3月期間較高，而在南半球，流感流行之風險在5月、6月、7月、8月及9月期間較高。
在一些實施例中，治療及/或預防包含暴露後預防。
在一些實施例中，該個體已接受、正接受或將接受抗病毒劑。在一些實施例中，該抗病毒劑包含神經胺酸酶抑制劑、流感聚合酶抑制劑或二者。在某些實施例中，該抗病毒劑包含奧司他韋、拉那米韋(lanamivir)、帕拉米韋、紮那米韋、巴洛沙韋(baloxavir)或其任何組合。
投予本發明所揭露之組成物之典型途徑包括但不限於經口、局部、經皮、吸入、非經腸、舌下、經頰、經直腸、經陰道及鼻內。如本文所用，術語「非經腸」包括皮下注射、靜脈內、肌肉內、胸骨內注射或輸注技術。在某些實施例中，投予包含藉由選自以下之途徑投予：經口、靜脈內、非經腸、胃內、胸膜內、肺內、直腸內、皮內、腹膜內、瘤內、皮下、局部、經皮、腦池內、鞘內、鼻內及肌肉內。在特定實施例中，方法包含向個體經口投予該抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
調配根據本發明之某些實施例之醫藥組成物以使得含於其中之活性成分在向患者投予該組成物後為生物可用的。將投予至個體或患者之組成物可呈一或多個劑量單位之形式，其中例如錠劑可為單一劑量單位，且本文所述之呈氣霧劑形式之抗體或抗原結合的容器可容納多個劑量單位。製備此類劑型之實際方法對熟習此項技術者為已知的或將顯而易見；例如參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版(Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000)。待投予之組成物將在任何情況下含有有效量之本揭露內容之抗體或抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，以根據本文中之教示治療感興趣的疾病或病狀。
組成物可呈固體或液體形式。在一些實施例中，載劑為微粒，使得組成物例如呈錠劑或散劑形式。載劑可為液體，同時組成物為例如口服油、可注射液體或適用於例如吸入投予之氣霧劑。當意欲經口投予時，醫藥組成物較佳呈固體或液體形式，其中半固體、半液體、懸浮液及凝膠形式包括在本文視為固體或液體之形式內。
作為用於經口投予之固體組成物，醫藥組成物可調配為散劑、顆粒劑、壓縮錠劑、丸劑、膠囊、口嚼錠、粉片或其類似物。此類固體組成物將通常含有一或多種惰性稀釋劑或可食載劑。另外，可存在以下中之一或多者：黏合劑，諸如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉、乳糖或糊精；崩解劑，諸如海藻酸、海藻酸鈉、澱粉羥基乙酸鈉(Primogel)、玉米澱粉及其類似物；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或氫化植物油(Sterotex)；助滑劑，諸如膠態二氧化矽；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；調味劑，諸如胡椒薄荷、水楊酸甲酯或柑橘調味劑；及著色劑。當組成物呈例如明膠膠囊之膠囊形式時，除以上類型之材料之外，其亦可含有諸如聚乙二醇或油之液體載劑。
組成物可呈液體形式，例如酏劑、糖漿、溶液、乳液或懸浮液。舉二例而言，液體可用於經口投予或用於藉由注射遞送。當意欲用於經口投予時，除本發明化合物之外，較佳組成物亦含有甜味劑、防腐劑、染料/著色劑及增香劑中之一或多者。在意欲藉由注射投予之組成物中，可包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等張劑中之一或多者。
液體醫藥組成物，無論其為溶液、懸浮液或其他類似形式，均可包括以下佐劑中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液(較佳生理鹽水)、林格氏溶液(Ringer's solution)、等張氯化鈉、非揮發性油，諸如可充當溶劑或懸浮介質之合成單甘油酯或二甘油酯；聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及張力調節劑，諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成的安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水為較佳佐劑。可注射的醫藥組成物較佳為無菌的。
意欲用於非經腸或經口投予之液體組成物應含有一定量之如本文所揭露之抗體或抗原結合片段以使得將獲得適合劑量。通常，此量為組成物中至少0.01%抗體或抗原結合片段。當意欲用於經口投予時，此量可變化為介於組成物重量的0.1%與約70%之間。某些經口醫藥組成物含有約4%與約75%之間的抗體或抗原結合片段。在某些實施例中，製備根據本發明之醫藥組成物及製劑，以使得非經腸劑量單位在稀釋之前含有0.01至10重量%之間的抗體或抗原結合片段。
組成物可意欲用於局部投予，在該情況下，載劑可適當地包含溶液、乳液、軟膏或凝膠基質。舉例而言，基質可包含以下中之一或多者：石蠟脂、羊毛蠟、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、諸如水及醇之稀釋劑及乳化劑以及穩定劑。增稠劑可存在於用於局部投予之組成物中。若意欲用於經皮投予，則組成物可包括經皮貼片或離子電滲裝置。醫藥組成物可意欲用於以例如栓劑形式經直腸投予，該栓劑將在直腸中熔融且釋放藥物。用於經直腸投予之組成物可含有油性基質作為適合之無刺激性賦形劑。此類基質包括但不限於羊毛蠟、可可脂及聚乙二醇。
組成物可包括改變固體或液體劑量單位之物理形式的各種材料。舉例而言，組成物可包括圍繞活性成分形成包覆殼層之材料。形成包覆殼層之材料通常為惰性的，且可選自例如糖、蟲膠及其他腸溶包覆劑。替代地，活性成分可裝入明膠膠囊中。呈固體或液體形式之組成物可包括結合至本揭露內容之抗體或抗原結合片段且藉此幫助遞送化合物之試劑。可起此能力作用之適合試劑包括單株或多株抗體、一或多種蛋白質或脂質體。組成物可基本上由可以氣霧劑形式投予之劑量單位組成。術語氣霧劑用於表示介於膠態性質之彼等系統至由加壓封裝組成之系統範圍內的多種系統。遞送可藉由液化或壓縮氣體或藉由分配活性成分的適合之泵系統來進行。氣霧劑可以單相、雙相或三相系統形式遞送以便遞送活性成分。氣霧劑之遞送包括必需容器、活化劑、閥門、次容器及其類似物，其在一起可形成套組。一般熟習此項技術者在不進行不當實驗之情況下可確定較佳氣霧劑。
應理解，本揭露內容之組成物亦涵蓋用於本文所述之聚核苷酸的載劑分子(例如，脂質奈米粒子、奈米尺度遞送平台及其類似物)。
醫藥組成物可藉由醫藥技術中熟知之方法製備。舉例而言，意欲藉由注射投予之組成物可藉由將包含如本文所述之抗體、其抗原結合片段或抗體結合物及任擇地，鹽、緩衝液及/或穩定劑中之一或多者的組成物與無菌蒸餾水組合以形成溶液來製備。可添加界面活性劑以促進形成均質溶液或懸浮液。界面活性劑為與肽組成物非共價相互作用以促進抗體或其抗原結合片段在水性遞送系統中溶解或均勻懸浮的化合物。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，組成物之抗體或抗原結合片段可包含如分別在SEQ ID NOs.:55、4、5、9、10及11中闡述之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列。在某些實施例中，組成物之抗體或抗原結合片段包含分別在SEQ ID NOs.:54及8中闡述之VH及VL胺基酸序列。在某些實施例中，組成物之抗體或抗原結合片段包含人類IgG1同型(例如包含異型，諸如IgG1m3或IgG1m17,1)且在Fc中包含M428L及N434S突變。在一些實施例中，組成物之抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO.:108中所闡述之輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，組成物之抗體或抗原結合片段包含二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:108中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施例中，提供一種組成物，其包含相對於需要該組成物之個體的體重(kg)呈3 mg/kg、0.9 mg/kg或0.3 mg/kg之濃度的抗體或抗原結合片段。在某些實施例中，包含抗體或抗原結合片段之組成物：具有280-315 mOsm/kg之滲透重量莫耳濃度；在靈敏度＜ 0.05 EU/mg之情況下不具有可偵測的內毒素；為無菌的；具有7.4之pH；且包含藉由親和層析純化之抗體或抗原結合片段。
一般而言，適當劑量及治療方案提供呈足以提供治療及/或預防效益(諸如本文所述，包括改善的臨床結果(例如，腹瀉或相關脫水或發炎之頻率、持續時間或嚴重程度降低，或更長的無病存活期及/或總存活期，或症狀嚴重程度減輕)之量的組成物。對於預防用途，劑量應足以預防與疾病或病症相關之疾病、延遲其發作或減輕其嚴重程度。根據本文所述之方法投予的組成物之預防益處可藉由進行臨床前(包括活體外及活體內動物研究)及臨床研究，且藉由適當的統計學、生物學及臨床方法及技術分析自其獲得之資料來確定，其皆可由熟習此項技術者容易地實踐。
組成物以有效量投予(例如以治療流感病毒感染)，該有效量將視包括以下之多種因素而變化：所採用之特定化合物之活性；化合物之代謝穩定性及作用時長；個體之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；投予模式及時間；排泄速率；藥物組合；特定病症或病狀之嚴重程度；及經受療法之個體。在某些實施例中，在根據本揭露內容之調配物及方法投予療法之後，與經安慰劑治療或其他適合之對照個體相比，測試個體將展現出與疾病或病症相關之一或多種症狀的約10%直至約99%減少。
一般而言，抗體或抗原結合片段之治療有效劑量為(對於70 kg哺乳動物)約0.001 mg/kg (亦即0.07 mg)至約100 mg/kg (亦即7.0 g)；較佳地，治療有效劑量為(對於70 kg哺乳動物)約0.01 mg/kg (亦即0.7 mg)至約50 mg/kg (亦即3.5 g)；更佳地，治療有效劑量為(對於70 kg哺乳動物)約1 mg/kg (亦即70 mg)至約25 mg/kg (亦即1.75 g)。對於本揭露內容之聚核苷酸、載體、宿主細胞及相關組成物，治療有效劑量可不同於抗體或抗原結合片段之治療有效劑量。
在一些實施例中，方法或用途包含向有需要之個體投予一劑量之抗體或抗原結合片段，其中該劑量包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：3 mg/kg、0.9 mg/kg或0.3 mg/kg之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，方法或用途包含向有需要之個體投予一劑量之包含抗體或抗原結合片段之組成物，其中該劑量包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：3 mg/kg、0.9 mg/kg或0.3 mg/kg之該組成物。在一些實施例中，提供一種組成物，其包含相對於需要該組成物之個體的體重(kg)呈3 mg/kg、0.9 mg/kg或0.3 mg/kg之濃度的抗體或抗原結合片段。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段可包含如分別在SEQ ID NOs.:55、4、5、9、10及11中闡述之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含分別在SEQ ID NOs.:54及8中闡述之VH及VL胺基酸序列。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段包含人類IgG1同型(例如包含異型，諸如IgG1m3或IgG1m17,1)且在Fc中包含M428L及N434S突變。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO.:108中所闡述之輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:108中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施例中，投予包含向個體靜脈內投予。在一些實施例中，組成物經調配用於向個體靜脈內投予。在一些實施例中，方法或用途包含單次投予抗體、抗原結合片段或組成物。在一些實施例中，方法或用途包含單次劑量之抗體、抗原結合片段或組成物。在某些實施例中，包含抗體或抗原結合片段之組成物：具有280-315 mOsm/kg之滲透重量莫耳濃度；在靈敏度＜ 0.05 EU/mg之情況下不具有可偵測的內毒素；為無菌的；具有7.4之pH；且包含藉由親和層析純化之抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，個體具有約70 kg之體重。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，個體患有H5N1流感感染，處於感染H5N1流感感染之風險下，或已暴露於H5N1流感。在本發明所揭露之實施例中之任一者中，個體患有H7N9流感感染，處於感染H7N9流感感染之風險下，或已暴露於H7N9流感。在一些實施例中，方法、用途、劑量或組成物係用於預防流感感染，諸如流感H5N1及/或流感H7N9感染。在一些實施例中，預防包含暴露後預防。
在某些實施例中，方法包含向個體投予該抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物2、3、4、5、6、7、8、9、10次或更多次。在某些實施例中，方法包含向個體投予該抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物至少2、3、4、5、6、7、8、9、10次或更多次。
在某些實施例中，方法包含向個體投予該抗體、抗原結合片段或組成物多次，其中第二次或連續投予係分別在第一次或先前投予之後約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約24、約48、約74、約96小時或更久時進行。
在某些實施例中，方法包含在個體感染流感之前至少一次投予抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
包含本揭露內容之抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物的組成物亦可與一或多種其他治療劑投予同時、在其之前或在其之後投予，該一或多種其他治療劑諸如神經胺酸酶抑制劑，例如奧司他韋、紮那米韋、帕拉米韋或拉尼米韋。該組合療法可包括投予含有本發明化合物及一或多種額外活性劑之單一醫藥劑量調配物，以及投予包含本揭露內容之抗體或抗原結合片段及呈自身獨立劑量調配物之各活性劑的組成物。舉例而言，如本文所描述之抗體或其抗原結合片段及其他活性劑可以諸如錠劑或膠囊之單一口服劑量組成物形式一同向患者投予，或各藥劑係以獨立口服劑量調配物形式投予。類似地，如本文所描述之抗體或抗原結合片段及其他活性劑可以諸如鹽水溶液或其他生理學上可接受之溶液之單一非經腸劑量組成物形式一同向個體投予，或各藥劑係以獨立非經腸劑量調配物形式投予。在使用獨立劑量調配物之情況下，包含抗體或抗原結合片段及一或多種額外活性劑之組成物可基本上同時，亦即並行地投予，或在單獨地交錯時間，亦即依序及按任何次序投予；組合療法應理解為包括所有此等方案。
在一些實施例中，向先前已接受一或多種抗炎劑及/或一或多種抗病毒劑之個體投予抗體(或一或多種核酸、宿主細胞、載體或組成物)。在一些實施例中，抗病毒劑為神經醯胺酶抑制劑(NAI)，諸如奧司他韋、紮那米韋、帕拉米韋或拉尼米韋。在一些實施例中，向先前已接受抗體(或一或多種核酸、宿主細胞、載體或組成物)之個體投予一或多種抗炎劑及/或一或多種抗病毒劑。在一些實施例中，抗病毒劑為神經醯胺酶抑制劑(NAI)，諸如奧司他韋、紮那米韋、帕拉米韋或拉尼米韋。
在一相關態樣中，提供本發明所揭露之抗體、抗原結合片段、載體、宿主細胞及組成物(例如，用於診斷、預防及/或治療流感感染，用於製造用以預防或治療流感感染之藥劑的)用途。
在某些實施例中，提供抗體、抗原結合片段、聚核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其用於治療或預防個體之流感感染的方法。
在某些實施例中，提供抗體、抗原結合片段或組成物，其用於製造或製備用於治療或預防個體之流感感染之藥劑的方法。
本揭露內容亦提供以下非限制性列舉實施例。
實施例1.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)，該VH包含一互補決定區(CDR)H1、一CDRH2及一CDRH3，以及(ii)及一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含一CDRL1、一CDRL2及一CDRL3，其中：(a)該CDRH1包含SEQ ID NO.:55、SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:47或SEQ ID NO.:49中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(b)該CDRH2包含SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:57或SEQ ID NO.:61中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(c)該CDRH3包含SEQ ID NO.:5、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:51或SEQ ID NO.:53中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，(d)該CDRL1包含SEQ ID NO.:9或SEQ ID NO.:32中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(e)該CDRL2包含SEQ ID NO.:10中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或(f)該CDRL3包含SEQ ID NO.:11、18、21、24、33或67中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，任擇地其限制條件為該CDRH1、該CDRH2、該CDRH3、該CDRL1、該CDRL2及該CDRL3不包含以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(i)分別3-5及9-11；(ii)分別3、4、15及9-11；(iii)分別3-5、9、10及18；(iv)分別3-5、9、10及21；(v)分別3-5、9-11及24；或(vi)分別3-5、32、96及33。
實施例2.  如實施例1之抗體或抗原結合片段，其中該CDRH3及該CDRL3包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別5及11；(ii)分別5及18；(iii)分別5及21；(iv)分別5及24；(v)分別5及33；(vi)分別5及67；(vii)分別15及11；(viii)分別15及18；(ix)分別15及21；(x)分別15及24；(xi)分別15及33；(xii)分別15及67；(xiii)分別51及11；(xiv)分別51及18；(xv)分別51及21；(xvi)分別51及24；(xvii)分別51及33；(xviii)分別51及67；(xix)分別53及11；(xx)分別53及18；(xxi)分別53及21；(xxii)分別53及24；(xxiii)分別53及33；或(xxiv)分別53及67。
實施例3.  如實施例1或2之抗體或抗原結合片段，其中該CDRH1、該CDRH2、該CDRH3、該CDRL1、該CDRL2及該CDRL3包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別55、4、5及9-11；(ii)分別47、4、5及9-11；(iii)分別47、4、5、9、10及67；(iv)分別49、4、5及9-11；(v)分別47、4、5、9、10及67；(vi)分別3-5、9、10及67；(vii)分別55、4、5、9、10及67；(viii)分別3、4、51及9-11；(ix)分別3、4、51、9、10及67；(x)分別55、4、5及9-11；(xi)分別55、4、5、9、10及67；(xii)分別3、61、5及9-11；(xiii)分別3、61、5、9、10及67；(xiv)分別3-5及9-11；或(xv)分別3、57、5及9-11。
實施例3a. 如實施例1或2之抗體或抗原結合片段，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列如以下SEQ ID NOs.中所闡述：(i)分別55、4、5及9-11；(ii)分別47、4、5及9-11；(iii)分別47、4、5、9、10及67；(iv)分別49、4、5及9-11；(v)分別47、4、5、9、10及67；(vi)分別3-5、9、10及67；(vii)分別55、4、5、9、10及67；(viii)分別3、4、51及9-11；(ix)分別3、4、51、9、10及67；(x)分別55、4、5及9-11；(xi)分別55、4、5、9、10及67；(xii)分別3、61、5及9-11；(xiii)分別3、61、5、9、10及67；(xiv)分別3-5及9-11；或(xv)分別3、57、5及9-11。
實施例4.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)及(ii)輕鏈可變區域(VL)，其中：(i)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(ii)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(iii)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(iv)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(v)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(vi)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(vii)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(viii)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(ix)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(x)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xi)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xii)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xiii)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xiv)該VH包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列的互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xv)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xvi)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xvii)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xviii)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xix)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xx)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxi)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxii)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxiii)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxiv)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxv)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxvi)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxvii)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxviii)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxix)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxx)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxi)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxii)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxiii)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxiv)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxv)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxvi)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxvii)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxviii)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxix)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxx)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxi)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxii)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxiii)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(xxxxiv)該VH包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3，或(xxxxv)該VH包含SEQ ID NO.:65中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:68中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3任擇地根據IMGT編號系統定義。
實施例5.  如實施例1至4中任一項之抗體或抗原結合片段，其中：(i)該VH包含與SEQ ID NOs.:54、2、14、45、46、48、50、52、56、58、60、63及65中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成；及(ii)該VL包含與SEQ ID NOs.:8、17、20、23、31、37、66及68中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成，任擇地其限制條件為該VH及該VL不包含以下中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(a)分別2及8；(b)分別14及8；(c)分別2及17；(d)分別2及20；(e)分別2及23；或(f)分別2及31。
實施例6.  如實施例1至5中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH及該VL與以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別46及8；(iii)分別46及17；(iv)分別46及20；(v)分別46及23；(vi)分別46及31；(vii)分別46及66；(viii)分別48及8；(ix)分別48及17；(x)分別48及20；(xi)分別48及23；(xii)分別48及31；(xiii)分別48及66；(xiv)分別2及66；(xv)分別54及17；(xvi)分別54及20；(xvii)分別54及23；(xviii) 54及31；(xix)分別54及66；(xx)分別56及8；(xxi)分別56及17；(xxii)分別56及20；(xxiii)分別56及23；(xxiv)分別54及31；(xxv)分別54及66；(xxvi)分別60及8；(xxvii)分別60及17；(xxviii)分別60及20；(xxix)分別60及23；(xxx)分別60及31；(xxxi)分別60及66；(xxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxiii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；(xxxxiv)分別2及37；或(xxxxv)分別65及68。
實施例7.  如實施例1至6中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH及該VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；(xxxxiv)分別2及37；(xxxxv)分別45及37；(xxxxvi)分別46及8；或(xxxxvii)分別56及8。
實施例7a.如實施例1至6中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH及該VL分別包含SEQ ID NOs.:(i) 54及8中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
實施例8.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)，該VH包含一互補決定區(CDR)H1、一CDRH2及一CDRH3，以及(ii)及一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含一CDRL1、一CDRL2及一CDRL3，其中：(a) CDRH2如SEQ ID NO.:4中所闡述且包含於SEQ ID NO.:59中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述；(b) CDRH2如SEQ ID NO.:61中所闡述且包含於SEQ ID NO.:62中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述；或(c) CDRH2如SEQ ID NO.:61中所闡述且包含於SEQ ID NO.:64中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述。
實施例9.  如實施例8之抗體或抗原結合片段，其中CDRL1如SEQ ID NO.:9中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:10中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NOs.:11、18、21、24、33及67中之任一者中所闡述。
實施例10.    如實施例8之抗體或抗原結合片段，其中CDRL1如SEQ ID NO.:32中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:10或96中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NOs.:11、18、21、24、33及67中之任一者中所闡述。
實施例11. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含一重鏈可變區域(VH)及一輕鏈可變區域(VL)，其中該VH及該VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別46及8；(iii)分別48及8；(iv)分別50及8；(v)分別52及8；(vi)分別65及68；(vii)分別56及8；(viii)分別58及8；(ix)分別60及8；(x)分別63及8；(xi)分別46及66；(xii)分別48及66；(xiii)分別50及66；(xiv)分別52及66；(xv)分別54及66；(xvi)分別56及66；(xvii)分別58及66；(xviii)分別60及66；(xix)分別63及66；或(xx)分別2及37。
實施例12.    如實施例1至11中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該流感包含一A型流感病毒、一B型流感病毒或二者。
實施例13.    如實施例1至12中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或該抗原結合片段包含一人類抗體、一單株抗體、一經純化抗體、一單鏈抗體、一Fab、一Fab'、一F(ab')2或Fv。
實施例14.    如實施例1至13中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段為一多特異性抗體或抗原結合片段，其中任擇地，該抗體或抗原結合片段為一雙特異性抗體或抗原結合片段。
實施例15.    如實施例1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含一(例如IgG1) Fc多肽或其一片段。
實施例16.    如實施例1至15中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG、IgA、IgM、IgE或IgD同型。
實施例17.    如實施例1至16中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之一IgG同型，任擇地其中一C端離胺酸經移除或一C端甘胺酸-離胺酸經移除。
實施例18.    如實施例1至17中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG1同型。
實施例19.    如實施例1至18中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG1m3異型、一IgG1m17異型、一IgG1m1異型或其任何組合。
實施例20.    如實施例15至19之抗體或抗原結合片段，其中該Fc多肽或其片段包含：(i)一突變，與不包含該突變之一參考Fc多肽相比，該突變增加與一人類FcRn之結合親和力(例如使用表面電漿子共振(SPR)所量測(例如Biacore，例如T200儀器，使用製造商之方案))；及/或(ii)一突變，與不包含該突變之一參考Fc多肽相比，該突變增加與一人類FcγR之結合親和力(例如使用表面電漿子共振(SPR)所量測(例如Biacore，例如T200儀器，使用製造商之方案，及/或使用中尺度發現(MSD)所量測))。
實施例21.    如實施例20之抗體或抗原結合片段，其中增加與一人類FcRn之結合親和力的該突變包含：M428L；N434S；N434H；N434A；N434S；M252Y；S254T；T256E；T250Q；P257I；Q311I；D376V；T307A；E380A；或其任何組合。
實施例22.    如實施例20或21之抗體或抗原結合片段，其中增加與一人類FcRn之結合親和力的該突變包含：(i) M428L/N434S；(ii) M252Y/S254T/T256E；(iii) T250Q/M428L；(iv) P257I/Q311I；(v) P257I/N434H；(vi) D376V/N434H；(vii) T307A/E380A/N434A；(viii) M428L/N434A；或(ix) (i)-(viii)之任何組合。
實施例23.    如實施例20至22中任一項之抗體或抗原結合片段，其中增加與一人類FcRn之結合親和力的該突變包含M428L/N434S或M428L/N434A。
實施例24.    如實施例20至23中任一項之抗體或抗原結合片段，其中增強與一FcγR之結合的該突變包含S239D；I332E；A330L；G236A；或其任何組合。
實施例25.    如實施例20至24中任一項之抗體或抗原結合片段，其中增強與一FcγR之結合的該突變包含：(i) S239D/I332E；(ii) S239D/A330L/I332E；(iii) G236A/S239D/I332E；或(iv) G236A/A330L/I332E，其中該Fc多肽或其片段任擇地包含位置239處之Ser。
實施例26.    如實施例1至25中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含改變醣基化之一突變，其中改變醣基化之該突變包含N297A、N297Q或N297G；及/或其經去醣基化；及/或其經去岩藻醣基化。
實施例27.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)在一重鏈中，(i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:3-5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434A；以及(ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列。
實施例28.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)在一重鏈中，(i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:3-5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434S；以及(ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列。
實施例29.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)在一重鏈中，(i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:55、4及5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:54中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434S；以及(ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例30.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)在一重鏈中，(i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:47、4及5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:46中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434S；以及(ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例31.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)在一重鏈中，(i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:3-5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:65中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434S；以及(ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:68中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例32.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)在一重鏈中，(i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:3、57及5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:56中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及(i)(b)突變M428L及N434S；以及(ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例33.    如實施例27至32中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL與以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別2及31；(iii)分別2及8；(iv)分別46及8；(v)分別65及68；或(vi)分別56及8。
實施例34.    如實施例27至33中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別2及31；(iii)分別2及8；(iv)分別46及8；(v)分別65及68；或(vi)分別56及8。
實施例35.    如實施例27至34中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL分別與SEQ ID NOs.:2及37中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性(或相似性)，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
實施例36.    如實施例27至33及31中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL分別包含SEQ ID NOs.:2及37中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
實施例37.    如實施例27至36中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG1m3異型、一IgG1m17異型、一IgG1m1異型或其任何組合。
實施例38.    如實施例1至37中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH包含於一重鏈中，該重鏈進一步包含SEQ ID NO.:34、SEQ ID NO.:36或SEQ ID NO.:38中所闡述之CH1-CH3胺基酸序列，或包含C端離胺酸經移除且任擇地C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:34、C端甘胺酸經移除之SEQ ID NO.:36或C端甘胺酸經移除之SEQ ID NO.:38。
實施例39.    如實施例1至38中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VL包含於進一步包含SEQ ID NO.:35中所闡述之CL胺基酸序列的一輕鏈中。
實施例40.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:39中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:39或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例41.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:40中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:40或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例42.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:42中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:42或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例43.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:43中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:43或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例44.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:39中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:39或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例45.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:40中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或C端甘胺酸-離胺酸經移除，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:40或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例46.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:42中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:42或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例47.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:43中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:43或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例48.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列及SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列。
實施例48a.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含(i)一VH，該VH包含SEQ ID NOs.:2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，及(ii)一VL，該VL包含SEQ ID NO.:8之VL胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例48b.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)一VH，該VH包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)；及(ii)一VL，該VL包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)。
實施例48c.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)一VH，該VH由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)組成；及(ii)一VL，該VL由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)組成。
實施例48d.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)一重鏈，該重鏈包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)，其中任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該輕鏈為一IgG1 κ輕鏈。
實施例48e.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)二條重鏈，各重鏈包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)，其中任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該等輕鏈各自為一IgG1 κ輕鏈。
實施例48f.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)一VH，該VH包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義；及(ii)一VL，該VL包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義。
實施例48g.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)一重鏈，該重鏈在一VH中包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義；及(ii)一輕鏈，該輕鏈在一VL中包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義，其中進一步任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該輕鏈為一IgG1 κ輕鏈。
實施例48h.  一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含：(i)二條重鏈，各重鏈在一VH中包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈在一VL中包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義，且其中進一步任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該等輕鏈各自為一IgG1 κ輕鏈。
實施例49.    一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含(i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列及(ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者包含SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列，其中任擇地，該抗體為一IgG1同型，且其中進一步任擇地，該抗體包含M428L及N434S突變(EU編號)。
實施例50.    如實施例1至49中任一項之抗體或抗原結合片段，其在其一重鏈中包含(i)-(xviii)中之任一者中所闡述之胺基酸突變：(i) G236A、L328V及Q295E；(ii) G236A、P230A及Q295E；(iii) G236A、R292P及I377N；(iv) G236A、K334A及Q295E；(v) G236S、R292P及Y300L；(vi) G236A及Y300L；(vii) G236A、R292P及Y300L；(viii) G236S、G420V、G446E及L309T；(ix) G236A及R292P；(x) R292P及Y300L；(xi) G236A及R292P；(xii) Y300L；(xiii) E345K、G236S、L235Y及S267E；(xiv) E272R、L309T、S219Y及S267E；(xv) G236Y；(xvi) G236W；(xvii) F243L、G446E、P396L及S267E；(xviii) G236A、S239D及H268E。
實施例51.    如實施例1至50中任一項之抗體或抗原結合片段，其在其一重鏈中包含胺基酸突變G236A。
實施例52.    如實施例1至51中任一項之抗體或抗原結合片段，其：經去岩藻醣基化；已在不能岩藻醣基化或使一多肽岩藻醣基化之能力受抑制的一宿主細胞中產生；已由一宿主細胞在抑制其岩藻醣基化之條件下產生；或其任何組合。
實施例53.    如實施例1至52中任一項之抗體或抗原結合片段，其為人類、人源化或嵌合的。
實施例54.    如實施例1至53中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至來自以下之一NA：(i)一A型流感病毒(IAV)，其中該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者；及(ii)一B型流感病毒(IBV)。
實施例55.    如實施例54之抗體或抗原結合片段，其中：(i)該第1組IAV NA包含一N1、一N4、一N5及/或一N8；及/或(ii)該第2組IAV NA包含一N2、一N3、一N6、一N7及/或一N9。
實施例56.    如實施例55之抗體或抗原結合片段，其中：(i)該N1為來自以下中之任何一或多者的一N1：A/California/07/2009、A/California/07/2009 I223R/H275Y、A/California/07/2009 Q250S、A/Swine/Jiangsu/J004/2018、A/Swine/Hebei/2017、A/Stockholm/18/2007、A/Brisbane/02/2018、A/Michigan/45/2015、A/Mississippi/3/2001、A/Netherlands/603/2009、A/Netherlands/602/2009、A/Vietnam/1203/2004、A/Vietnam/1203/2004 S247R、A/Vietnam/1203/2004 I223R、A/Vietnam/1203/2004 R152I、A/Vietnam/1203/2004 D199N、A/G4/SW/Shangdong/1207/2016、A/G4/SW/Henan/SN13/2018、A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018、A/Mink/Spain/2022及A/New Jersey/8/1976；(ii)該N4來自A/mallard duck/Netherlands/30/2011；(iii)該N5來自A/aquatic bird/Korea/CN5/2009；(iv)該N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011或A/chicken/Russia/3-29/2020；(v)該N2為來自以下中之任何一或多者的一N2：A/Washington/01/2007、A/Washington/01/2007 R292K、A/HongKong/68、A/South Australia/34/2019、A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016、A/Switzerland/9715293/2013、A/Leningrad/134/17/57、A/Florida/4/2006、A/Netherlands/823/1992、A/Norway/466/2014、A/Switzerland/8060/2017、A/Texas/50/2012、A/Victoria/361/2011、A/HongKong/2671/2019、A/HongKong/2671/2019 K431E、A/SW/Mexico/SG1444/2011、A/Tanzania/205/2010、A/Aichi/2/1968、A/Bilthoven/21793/1972、A/Netherlands/233/1982、A/Shanghai/11/1987、A/Nanchang/933/1995、A/Fukui/45/2004、A/Brisbane/10/2007、A/Tasmania/503/2020 A/Cambodia/2020、A/Perth/16/2009、A/Kansas/14/2017、A/Swine/Kansas/2021、A/Canine/Korea/VC378/2012及A/Canine/Indiana/003018/2016；(vi)該N3為來自A/Canada/rv504/2004及A/Ck/Ja/2017中之任何一或多者的一N3；(v)該N6為來自A/swine/Ontario/01911/1/99、A/Ck/Suzhou/2019及A/Hangzhou/2021中之任何一或多者的一N6；(vi)該N7為來自A/Netherlands/078/03、A/Ck/621572/03中之任何一或多者的一N7；(vii)該N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011及A/Ck/Russia/2020中之任何一或多者；及/或(viii)該N9為來自以下中之任何一或多者的一N9：A/Anhui/2013及A/Hong Kong/56/2015。
實施例57.    如實施例54至56中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該IBV NA為來自以下中之任何一或多者的一NA：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)；B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)；B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)；B/Brisbane/33/2008；B/Colorado/06/2017；B/Hubei-wujiang/158/2009；B/Massachusetts/02/2012；B/Netherlands/234/2011；B/Perth/211/2001；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/Perth/211/2011；B/HongKong/05/1972；B/Phuket/3073/2013、B/Harbin/7/1994 (Victoria)、B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Victoria/504/2000 (Yamagata)；B/Victoria/2/87；B/Victoria/2/87譜系；B/Yamagata/16/88；及B/Yamagata/16/88譜系。
實施例58.    如實施例1至57中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至以下中之各者：(i)一第1組IAV NA；(ii)一第2組IAV NA；及(iii)一IBV NA，其中一EC 50在約0.1 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或在約0.1 μg/mL至約2 μg/mL之一範圍內，或在0.1 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或在約0.4 μg/mL至約2 μg/mL之一範圍內，或在0.4 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在0.4 μg/mL至約1 μg/mL之一範圍內，或為0.4 μg/mL或更小。
實施例59.    如實施例58之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至：(i)該第1組IAV NA，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL、約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、約2 μg/mL至約50 μg/mL、約2 μg/mL至約10 μg/mL或約10 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內；(ii)該第2組IAV NA，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、或約2 μg/mL至約50 μg/mL、或約2 μg/mL至約10 μg/mL、或約10 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內；及/或(iii)該IBV NA，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL。
實施例60.    如實施例59之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至：(i)一N1，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(ii)一N4，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(iii)一N5，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約2 μg/mL之一範圍內；(iv)一N8，其中一EC 50為約50 μg/mL；(v)一N2，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約20 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、約1 μg/mL至約10 μg/mL、或約1 μg/mL至約20 μg/mL、或約1 μg/mL至約5 μg/mL之一範圍內，或為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20 μg/mL；(vi)一N3，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(vii)一N6，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(viii)一N7，其中一EC 50在約2 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內；(ix)一N9，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；及/或(xi)一IBV NA，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL。
實施例61.    如實施例59或60之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至：(i)以下中之一或多者：N1 A/California/07/2009、N1 A/California/07/2009 I223R/H275Y、N1 A/Stockholm/18/2007、N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2008、N4 A/mallard duck/Netherlands/30/2011、N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009、N2 A/Hong Kong/68、N2 A/Leningrad/134/17/57、N3 A/Canada/rv504/2004、N6 A/Swine/Ontario/01911/1/99、N9 A/Anhui/1/2013、B/Lee/10/1940 (祖性)、B/Brisbane/60/2008 (Victoria)、B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)、B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)、B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)及B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；(ii) N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009，其中一EC 50為約2 μg/mL，或在約2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內；(iii) N8 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011，其中一EC 50為約50 μg/mL；(iv) N2 A/Washington/01/2007，其中一EC 50在約2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內；(v) N7 A/Netherlands/078/03，其中一EC 50在約2 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內；(vi) N2 A/South Australia/34/2019，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內；(vii) N2 A/Switzerland/8060/2017，其中一EC 50在約9.5 μg/mL至約3.8 μg/mL之一範圍內；(viii) N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016，其中一EC 50在約18.4 μg/mL至約2.2 μg/mL之一範圍內；(iv) N2 A/Switzerland/9715293/2013，其中一EC 50在約1.6 μg/mL至約1.2 μg/mL之一範圍內；及/或(v) N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2018，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或為約0.4、約2、約10或約50 μg/mL。
實施例62.    如實施例1至61中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該NA表現於一宿主細胞(例如一CHO細胞)之表面上且結合至NA係根據流動式細胞測量術。
實施例63.    如實施例1至62中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至一NA，其中一KD小於1.0E-12 M、小於1.0E-11 M、小於1.0 E-11 M，或為1.0E-12M或更小、1.0E-11M或更小或1.0E-10或更小，或一KD在1.0E-10與1.0E-13之間，或一KD在1.0E-11與1.0E-13之間，其中任擇地，該結合係藉由生物層干涉法(BLI)評定。
實施例64.    如實施例63之抗體或抗原結合片段，其中該NA為一N1、一N2及/或一N9。
實施例65.    如實施例1至64中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至：(1) (i)一NA表位，其包含以下胺基酸(N1 NA編號)中之任何一或多者：R368、R293、E228、E344、S247、D198、D151、R118；及/或(ii)一NA表位，其包含以下胺基酸(N2 NA編號)中之任何一或多者：R371、R292、E227、E344、S247、D198、D151、R118；及/或(2) (i)一NA表位，其包含胺基酸R368、R293、E228、D151及R118 (N1 NA編號)；及/或(ii)一NA表位，其包含胺基酸R371、R292、E227、D151及R118 (N2 NA編號)；及/或(3)一表位，其包含於一NA活性位中或包含一NA活性位，其中任擇地，該NA活性位包含以下胺基酸(N2編號)：R118、D151、R152、R224、E276、R292、R371、Y406、E119、R156、W178、S179、D/N198、I222、E227、H274、E277、D293、E425；及/或(4)一IBV NA表位，其包含：(i)以下胺基酸中之任何一或多者：R116、D149、E226、R292及R374；或(ii)胺基酸R116、D149、E226、R292及R374。
實施例66.    如實施例65之抗體或抗原結合片段，其中：(1)該表位進一步包含以下NA胺基酸(N2編號)中之任何一或多者：E344、E227、S247及D198；及/或(2)該抗體或抗原結合片段能夠結合至包含一S245N胺基酸突變及/或一E221D胺基酸突變之一NA。
實施例67.    如實施例1至66中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至包含一S245N胺基酸突變及/或一E221D胺基酸突變之一NA。
實施例68.    如實施例1至67中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠抑制一活體外感染模型、一活體內動物感染模型及/或一人類中以下之一唾液酸酶活性：(i)一IAV NA，其中該IAV NA包含一第1組IAV NA、一第2組IAV NA或二者，及/或(ii)一IBV NA。
實施例69.    如實施例68之抗體或抗原結合片段，其中：(i)該第1組IAV NA包含一H1N1及/或一H5N1；(ii)該第2組IAV NA包含一H3N2及/或一H7N9；及/或(iii)該IBV NA包含以下中之一或多者：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/HongKong/05/1972；B/Taiwan/2/1962 (祖性)；B/Brisbane/33/2008 (Victoria)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/New York/1056/2003 (Victoria)；B/Florida/4/2006(Yamagata)；B/Jiangsu/10/2003 (Yamagata)；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/Perth/211/2011；B/Harbin/7/1994 (Victoria)；B/Colorado/06/2017 (Victoria)；B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Perth/211/2001 (Yamagata)；B/Hubei-wujiagang/158/2009 (Yamagata)；B/Wisconsin/01/2010 (Yamagata)；B/Massachusetts/02/2012 (Yamagata)；及B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)。
實施例70.    如實施例1至69中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠抑制以下之一唾液酸酶活性：一第1組IAV NA；一第2組IAV NA；及/或一IBV NA，其中一IC50在約0.0008 μg/mL至約4 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約3 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約2 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約1 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.9 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.8 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.7 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.6 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.5 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.4 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.3 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.2 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.1 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.09 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.08 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.07 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.06 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.05 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.04 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.03 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.02 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.01 μg/mL、0.002 μg/mL至約4 μg/mL、約0.001 μg/mL至50 μg/mL、約0.1 μg/mL至約30 μg/mL、約0.1 μg/mL至約20 μg/mL、約0.1 μg/mL至約10 μg/mL、約0.1 μg/mL至約9 μg/mL、約0.1 μg/mL至約8 μg/mL、約0.1 μg/mL至約7 μg/mL、約0.1 μg/mL至約6 μg/mL、約0.1 μg/mL至約5 μg/mL、約0.1 μg/mL至約4 μg/mL、約0.1 μg/mL至約3 μg/mL、約0.1 μg/mL至約2 μg/mL、約0.1 μg/mL至約1 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.9 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.8 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.7 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.6 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.5 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.4 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.3 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.2 μg/mL、約0.8 μg/mL至約30 μg/mL、約0.8 μg/mL至約20 μg/mL、約0.8 μg/mL至約10 μg/mL、約0.8 μg/mL至約9 μg/mL、約0.8 μg/mL至約8 μg/mL、約0.8 μg/mL至約7 μg/mL、約0.8 μg/mL至約6 μg/mL、約0.8 μg/mL至約5 μg/mL、約0.8 μg/mL至約4 μg/mL、約0.8 μg/mL至約3 μg/mL、約0.8 μg/mL至約2 μg/mL、約0.8 μg/mL至約1 μg/mL之一範圍內，或為約0.1 μg/mL、約0.2 μg/mL、約0.3 μg/mL、約0.4 μg/mL、約0.5 μg/mL、約0.6 μg/mL、約0.7 μg/mL、約0.8 μg/mL、約0.9 μg/mL、約1.0 μg/mL、約1.5 μg/mL、約2.0 μg/mL、約2.5 μg/mL、約3.0 μg/mL、約3.5 μg/mL、約4.0 μg/mL、約4.5 μg/mL、約5.0 μg/mL、約5.5 μg/mL、約6.0 μg/mL、約6.5 μg/mL、約7.0 μg/mL、約7.5 μg/mL、約8.0 μg/mL、約8.5 μg/mL、約9.0 μg/mL、約10 μg/mL、約11 μg/mL、約12 μg/mL、約13 μg/mL、約14 μg/mL、約15 μg/mL、約16 μg/mL、約17 μg/mL、約18 μg/mL、約19 μg/mL、約20 μg/mL、約25 μg/mL及/或約30 μg/mL。
實施例71.    如實施例70之抗體或抗原結合片段，其能夠抑制一或多種第1組及/或第2組IAV及/或一或多種IBV之NA唾液酸酶活性，其中一IC50在以下之一範圍內：約.00001 µg/ml至約25 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約10 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約1 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約.001 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約.0001 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約25 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約10 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約1 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約.001 µg/ml至約25 µg/ml，或約.001 µg/ml至約10 µg/ml，或約.001 µg/ml至約1 µg/ml，或約.001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約.001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約.01 µg/ml至約25 µg/ml，或約.01 µg/ml至約10 µg/ml，或約.01 µg/ml至約1 µg/ml，或約.01 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約1 µg/ml至約25 µg/ml，或約1 µg/ml至約10 µg/ml， 或為約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5或15 µg/ml。
實施例72.    如實施例1至71中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠活化一人類FcγRIIIa。
實施例73.    如實施例72之抗體或抗原結合片段，其中活化係在將該抗體或抗原結合片段與經一IAV感染之一目標細胞(例如一A549細胞)一起培育(例如23小時)之後使用一宿主細胞(任擇地，一Jurkat細胞)確定，該宿主細胞包含：(i)該人類FcγRIIIa (任擇地，一F158對偶基因)；及(ii)可操作地連接至編碼一報導子，諸如一螢光素酶報導子之一序列的一NFAT表現控制序列。
實施例74.    如實施例73之抗體或抗原結合片段，其中活化係在將該抗體或抗原結合片段與經一H1N1 IAV感染之該目標細胞一起培育(任擇地，培育約23小時)之後確定，其中任擇地，該H1N1 IAV為A/PR8/34，及/或其中任擇地，該感染之一感染倍率(MOI)為6。
實施例75.    如實施例1至74中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠中和藉由一IAV及/或一IBV引起之感染。
實施例76.    如實施例75之抗體或抗原結合片段，其中該IAV及/或該IBV具有抗病毒劑抗性，其中任擇地，該抗病毒劑為奧司他韋。
實施例77.    如實施例54至76中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該IAV包含一N1 NA，其包含胺基酸突變：H275Y；E119D + H275Y；S247N + H275Y；I222V；及/或N294S，其中任擇地，該IAV包含CA09或A/Aichi。
實施例78.    如實施例54至77中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該IAV包含一N2 NA，其包含胺基酸突變E119V、Q136K及/或R292K。
實施例79.    如實施例1至78中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠治療及/或預防一個體之(i)一IAV感染及/或(ii)一IBV感染。
實施例80.    如實施例1至79中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠治療及/或緩解由以下引起之一感染：(i)一H1N1病毒，其中任擇地，該H1N1病毒包含A/PR8/34；及/或(ii)一H3N2病毒，其中任擇地，該H3N2病毒任擇地包含A/Hong Kong/68。
實施例81.    如實施例1至80中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠在投予一有效量之該抗體或抗原結合片段之後預防受該IAV及/或該IBV感染之一個體之體重減輕，任擇地持續(i)至多15天，或(ii)超過15天。
實施例82.    如實施例1至81中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠預防患有一IAV感染及/或一IBV感染之一個體的一體重減輕超過10%，此藉由參考恰好在該IAV及/或該IBV感染之前的該個體之體重來確定。
實施例83.    如實施例1至82中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠延長患有一IAV感染及/或一IBV感染之一個體的存活。
實施例84.    如實施例1至83中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段在一小鼠(例如一tg32小鼠)中具有如下之一活體內半衰期：(i)在以下之一範圍內：約10天至約14天、約10.2天至約13.8天、約10.5天至約13.5天、約11天至約13天、約11.5天至約12.5天，在10天與14天之間、或在10.5天與13.5天之間、或在11天與13天之間，或為約10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12.0、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13.0、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9或14.0天；或(ii)在以下之一範圍內：約12天至約16天、約12.5天至15.5天、約13天至15天、約13.5天至約14.5天，或在12天與16天之間、或在13天與15天之間、或在13.5天與14.5天之間，或為約12.0、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13.0、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、1.36、13.7、13.8、13.9、14.0、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9、15.0 15.1、15.2、15.3、15.4、15.5、1.56、15.7、15.8、15.9或16.0天。
實施例85.    如實施例83或84之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至來自以下之一神經胺酸酶(NA)：(i)一A型流感病毒(IAV)，其中該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者；及/或(ii)一B型流感病毒(IBV)，且其中任擇地，該抗體或抗原結合片段能夠(1)抑制NA唾液酸酶活性及/或(2)中和藉由該IAV及/或該IBV引起之感染。
實施例85a.  一種抗體，其包含： (i)一重鏈，其包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及 (ii)一輕鏈，其包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)。
實施例85b.  一種抗體，其包含： (i)一重鏈，其由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107組成；及 (ii)一輕鏈，其由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)組成。
實施例85c.  一種抗體，其包含： (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及 (ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)。
實施例85d.  一種抗體，其包含： (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107組成；及 (ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)組成。
實施例86.    一種經分離聚核苷酸，其編碼如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段，或編碼該抗體或該抗原結合片段之一VH、一Fd、一重鏈、一VL及/或一輕鏈，其中任擇地：(1)該重鏈包含SEQ ID NO.:107或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或由其組成；(2)該輕鏈包含SEQ ID NO.:108或由其組成；(3)該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:109；及/或(4)該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:110。
實施例87.    如實施例86之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，其中該RNA任擇地包含信使RNA (mRNA)。
實施例88.    如實施例86至87中任一項之聚核苷酸，其包含一經修飾之核苷、一帽-1結構、一帽-2結構或其任何組合。
實施例89.    如實施例88之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含一假尿苷、一N6-甲基腺苷、一5-甲基胞苷、一2-硫代尿苷或其任何組合。
實施例90.    如實施例89之聚核苷酸，其中該假尿苷包含N1-甲基假尿苷。
實施例91.    如實施例86至90中任一項之聚核苷酸，其經密碼子最佳化以表現於一宿主細胞中。
實施例92.    如實施例91之聚核苷酸，其中該宿主細胞包含一人類細胞。
實施例93.    一種重組載體，其包含如實施例86至92中任一項之聚核苷酸，其中任擇地，該聚核苷酸編碼：(1)SEQ ID NO.:107，或C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及(2) SEQ ID NO.:108，其中進一步任擇地，該載體包含SEQ ID NO.:109及SEQ ID NO.:110。
實施例94.    一種宿主細胞，其包含如實施例86至92中任一項之聚核苷酸及/或如實施例93之載體，其中該聚核苷酸任擇地對於該宿主細胞為異源的及/或其中該宿主細胞能夠表現經編碼之抗體或抗原結合片段或多肽。
實施例95.    一種經分離之人類B細胞，其包含如實施例86至92中任一項之聚核苷酸及/或如實施例93之載體，其中聚核苷酸任擇地對於該人類B細胞為異源的及/或其中該人類B細胞經不朽化。
實施例96.    一種組成物，其包含：(i)如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段；(ii)如實施例86至92中任一項之聚核苷酸；(iii)如實施例93之重組載體；(iv)如實施例94之宿主細胞；及/或(v)如實施例95之人類B細胞， 及一醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。
實施例97.    如實施例96之組成物，其包含一第一抗體或抗原結合片段及一第二抗體或抗原結合片段，其中該第一抗體或抗原結合片段及該第二抗體或抗原結合片段中之各者係不同的且各自根據如實施例1至85d中任一項。
實施例97a.  如實施例96之組成物，其包含如實施例86至92中任一項之聚核苷酸，其中該聚核苷酸編碼(i) SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，及(ii) SEQ ID NO.:108，且該聚核苷酸任擇地包含SEQ ID NO.:109及SEQ ID NO.:110。
實施例97b.  如實施例96之組成物，其包含(i)一第一聚核苷酸，其編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，其中任擇地，該第一聚核苷酸包含SEQ ID NO.:109，及(ii)一第二聚核苷酸，其編碼SEQ ID NO.:108，其中任擇地，該第二聚核苷酸包含SEQ ID NO.:110。
實施例97c.  如實施例96之組成物，其包含(1)一第一質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107之一聚核苷酸，其中任擇地，該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:109，及(2)一第二質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:108之一聚核苷酸，其中任擇地，該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:110。
實施例98.    一種組成物，其包含囊封於一載劑分子中之如實施例86至92中任一項之聚核苷酸或如實施例93之載體，其中該載劑分子任擇地包含一脂質、一脂質衍生之遞送媒劑，諸如一脂質體、一固體脂質奈米粒子、一油性懸浮液、一次微米級脂質乳液、一脂質微泡、一逆脂質微胞、一耳蝸脂質體、一脂質微管、一脂質微柱、脂質奈米粒子(LNP)或一奈米尺度平台。
實施例99.    如實施例86至92中任一項之聚核苷酸、如實施例93之載體或如實施例96或98之組成物，其包含編碼包含SEQ ID NO.: 54中所闡述之VH之一抗體重鏈的一第一聚核苷酸(例如mRNA)及編碼包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL之一抗體輕鏈的一第二聚核苷酸(例如mRNA)。
實施例100.  如實施例86至92中任一項之聚核苷酸、如實施例93之載體或如實施例96或98之組成物，其包含編碼一抗體重鏈之一第一聚核苷酸(例如mRNA)，該抗體重鏈包含分別如SEQ ID NOs.: (i) 55、4及5中所闡述之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列；及編碼一抗體輕鏈之一第二聚核苷酸(例如mRNA)，該抗體輕鏈包含分別如SEQ ID Nos.: 9-11中所闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列。
實施例101.  一種製備如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段之方法，其包含在足以使如實施例94之宿主細胞或如實施例95之人類B細胞分別表現該抗體或抗原結合片段之一時間及條件下培養該宿主細胞或該人類B細胞。
實施例102.  如實施例101之方法，其進一步包含分離該抗體或抗原結合片段。
實施例103.  一種治療或預防一個體之一IAV感染及/或一IBV感染之方法，該方法包含向該個體投予一有效量之：(i)如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段；(ii)如實施例86至92、99及100中任一項之聚核苷酸；(iii)如實施例93、99或100之重組載體；(iv)如實施例94之宿主細胞；(v)如實施例95之人類B細胞；及/或(vi)如實施例96至100中任一項之組成物。
實施例104. 如實施例103之方法，其中該抗體或抗原結合片段係以約3 mg/kg之一劑量(諸如3 mg/kg之一劑量)、約0.9 mg/kg之一劑量(諸如0.9 mg/kg之一劑量)或約0.3 mg/kg之一劑量(諸如0.3 mg/kg之一劑量)向該個體投予。
實施例105.  如實施例103或實施例104之方法，其中該IAV感染為一H5N1及/或一H7N9感染。
實施例106.  一種治療或預防一人類個體之一流感感染之方法，該方法包含向該個體投予如實施例86至92、99及100中任一項之聚核苷酸、如實施例93、99或100之重組載體或如實施例96至100中任一項之組成物，其中該聚核苷酸包含mRNA。
實施例107.  如實施例106之方法，其中該流感感染包含一IAV感染及/或一IBV感染。
實施例108.  如實施例103至107中任一項之方法，其包含向該個體投予一單次劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物。
實施例109.  如實施例103至107中任一項之方法，其包含向該個體投予二個或更多個劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物。
實施例110.  如實施例103至109中任一項之方法，其包含任擇地在一流感季節之前或在一流感季節期間，每年一次向該個體投予一劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物。
實施例111.  如實施例103至109中任一項之方法，其包含每年二次或更多次向該個體投予一劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物；例如約每6個月一次。
實施例112.  如實施例103至111中任一項之方法，其包含肌肉內、皮下或靜脈內投予該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物。
實施例113.  如實施例103至112中任一項之方法，其中該治療及/或預防包含暴露後預防。
實施例114.  如實施例103至113中任一項之方法，其中該個體已接受、正在接受或將接受一抗病毒劑。
實施例115.  如實施例114之方法，其中該抗病毒劑包含一神經胺酸酶抑制劑、一流感聚合酶抑制劑或二者。
實施例116.  如實施例114或115之方法，其中該抗病毒劑包含奧司他韋、紮那米韋、巴洛沙韋、帕拉米韋、拉尼米韋或其任何組合。
實施例117.  如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段、如實施例86至92、99及100中任一項之聚核苷酸、如實施例93、99或100之重組載體、如實施例94之宿主細胞、如實施例95之人類B細胞及/或如實施例96至100中任一項之組成物，其用於治療或預防一個體之一IAV感染及/或一IBV感染的一方法。
實施例118.  如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段、如實施例86至92、99及100中任一項之聚核苷酸、如實施例93、99或100之重組載體、如實施例94之宿主細胞、如實施例95之人類B細胞及/或如實施例96至100中任一項之組成物，其用於製備用於治療或預防之一個體之一IAV感染及/或一IBV感染的一藥劑。
實施例119.  一種用於活體外診斷一IAV感染及/或一IBV感染之方法，該方法包含：(i)使來自一個體之一樣品與如實施例1至85d中任一項之抗體或抗原結合片段接觸；及(ii)偵測包含一抗原及該抗體，或包含一抗原及該抗原結合片段之一複合體。
實施例120.  如實施例103、104、106至116及119中任一項之方法或如實施例117及119中任一項所使用之抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞、人類B細胞及/或組成物，其中：(i)該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者，其中任擇地，該第1組IAV NA包含一N1、一N4、一N5及/或一N8；及/或該第2組IAV NA包含一N2、一N3、一N6、一N7及/或一N9，其中進一步任擇地，該N1來自A/California/07/2009、來自A/California/07/2009 I223R/H275Y、來自A/California/07/2009 Q250S、來自A/Swine/Jiangsu/J004/2018、來自A/Swine/Hebei/2017、來自A/Stockholm/18/2007、來自A/Brisbane/02/2018、來自A/Michigan/45/2015、來自A/Mississippi/3/2001、來自A/Netherlands/603/2009、來自A/Netherlands/602/2009、來自A/Vietnam/1203/2004、來自A/Vietnam/1203/2004 S247R、來自A/Vietnam/1203/2004 I223R、來自A/Vietnam/1203/2004 R152I、來自A/Vietnam/1203/2004 D199N、來自A/G4/SW/Shangdong/1207/2016、來自A/G4/SW/Henan/SN13/2018、來自A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018、來自A/Mink/Spain/2022及/或來自A/New Jersey/8/1976；該N4來自A/mallard duck/Netherlands/30/2011；該N5來自A/aquatic bird/Korea/CN5/2009；該N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011及/或來自A/chicken/Russia/3-29/2020；該N2來自A/Washington/01/2007、來自A/HongKong/68、來自A/HongKong/2671/2019、來自A/HongKong/2671/2019 K431E、來自A/South Australia/34/2019、來自A/Switzerland/8060/2017、來自A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016、來自A/Switzerland/9715293/2013、來自A/Leningrad/134/17/57、來自A/Florida/4/2006、來自A/Netherlands/823/1992、來自A/Norway/466/2014、來自來自A/Texas/50/2012、來自A/Victoria/361/2011、來自A/SW/Mexico/SG1444/2011、來自A/Aichi/2/1968、來自A/Bilthoven/21793/1972、來自A/Netherlands/233/1982、來自A/Shanghai/11/1987、來自A/Nanchang/933/1995、來自A/Fukui/45/2004、A/Brisbane/10/2007、來自A/Tanzania/205/2010、來自A/Cambodia/2020、來自A/Perth/16/2009、來自A/Kansas/14/2017、為A/Swine/Kansas/2021、來自A/Canine/Korea/VC378/2012及/或來自A/Canine/Indiana/003018/2016；該N3來自A/Canada/rv504/2004及/或來自A/chicken/Jalisco/PAVX17170/2017；該N6來自A/swine/Ontario/01911/1/99、來自A/Ck/Suzhou/j6/2019及/或來自A/Hangzhou/01/2021；該N7來自A/Netherlands/078/03及/或來自及A/Ck/621572/03；及/或該N9來自A/Anhui/2013、來自A/Hong Kong/56/2015；及/或(ii)該IBV NA來自：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)；B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)；B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)；B/Brisbane/33/2008 (Victoria)；B/Colorado/06/2017 (Victoria)；B/Hubei-wujiang/158/2009 (Yamagata)；B/Massachusetts/02/2012 (Yamagata)；B/Netherlands/234/2011；B/Perth/211/2001(Yamagata)；B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/HongKong/05/1972；B/Harbin/7/1994 (Victoria)；B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Perth/211/2011；B/Victoria/2/87；B/Victoria/2/87譜系；B/Yamagata/16/88；B/Yamagata/16/88譜系或其任何組合。
實施例121.  一種治療或預防一個體之一流感感染之方法，該方法包含以約3 mg/kg之一劑量(諸如3 mg/kg之一劑量)、約0.9 mg/kg之一劑量(諸如0.9 mg/kg之一劑量)或約0.3 mg/kg之一劑量(諸如0.3 mg/kg之一劑量)向該個體投予一抗體或抗原結合片段，或以約3 mg/kg之一劑量(諸如3 mg/kg之一劑量)、約0.9 mg/kg之一劑量(諸如0.9 mg/kg之一劑量)或約0.3 mg/kg之一劑量(諸如0.3 mg/kg之一劑量)向該個體投予包含該抗體或抗原結合片段之一組成物，其中：(i)該抗體或抗原結合片段之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列分別如SEQ ID NOs.: 55、4、5及9-11中所闡述；(ii)該抗體或抗原結合片段之一VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該抗體或抗原結合片段之一VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3；(iii)該抗體或抗原結合片段之一VH及一VL分別包含SEQ ID NOs.:54及8中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成；及/或(iv)該抗體或抗原結合片段之一重鏈及一輕鏈分別包含SEQ ID NOs.: 107 (或c端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或c端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)及108中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
實施例122.  如實施例121之方法，其中該流感感染包含一H5N1 IAV、一H7N9 IAV或二者。
實施例123.  如實施例121或122之方法，其中該方法包含向該個體投予一單次劑量之該抗體或抗原結合片段。
實施例124.  如實施例121至123中任一項之方法，其中該方法包含向該個體投予3 mg/kg之該抗體或抗原結合片段。
實施例125.  如實施例121至123中任一項之方法，其中該方法包含向該個體投予0.9 mg/kg之該抗體或抗原結合片段。
實施例126.  如實施例121至123中任一項之方法，其中該方法包含向該個體投予0.3 mg/kg之該抗體或抗原結合片段。
實施例127.  如實施例121至126中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含一人類IgG1同型(例如包含一異型，諸如IgG1m3或IgG1m17,1)且在Fc中包含M428L及N434S突變。
實施例128.  如實施例121至127中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:108中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例129.  如實施例121至128中任一項之方法，其包含藉由靜脈內投予向該個體投予該抗體、抗原結合片段或組成物。
實施例130.  如實施例121至129中任一項之方法，其中包含該抗體或抗原結合片段之該組成物：具有280-315 mOsm/kg之一滲透重量莫耳濃度；在一靈敏度＜ 0.05 EU/mg之情況下不具有可偵測的內毒素；為無菌的；具有7.4之一pH；且包含藉由親和層析純化之該抗體或抗原結合片段。
實施例131.  如實施例121至130中任一項之方法，其中該個體：患有一H5N1流感感染；處於感染一H5N1流感感染之風險下；已暴露於一H5N1流感；患有一H7N9流感感染；處於感染一H7N9流感感染之風險下；及/或已暴露於一H7N9流感。
實施例132.  如實施例121至131中任一項之方法，其中該治療或預防包含預防。
實施例133.  如實施例121至131中任一項之方法，其中該治療或預防包含暴露後預防。
實施例134.  一種組成物，其包含一抗NA抗體或抗原結合片段及一醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑，其中：(i)該抗體或抗原結合片段包含分別如SEQ ID NOs.:55、4、5、9、10及11中所闡述之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列；及/或(ii)該抗體或抗原結合片段包含分別在SEQ ID NOs.:54及8中闡述之VH及VL胺基酸序列。
實施例135.  如實施例134之組成物，其中該抗體或抗原結合片段包含一人類IgG1同型(例如包含一異型，諸如IgG1m3或IgG1m17,1)且在Fc中包含M428L及N434S突變。
實施例136.  如實施例134或135之組成物，其中該抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO.:108中所闡述之輕鏈胺基酸序列。
實施例137.  如實施例134至136中任一項之組成物，其中一組成物之抗體或抗原結合片段包含二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:108中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
實施例138.  如實施例134至137中任一項之組成物，其包含相對於需要該組成物之一個體的體重(kg)呈3 mg/kg、0.9 mg/kg或0.3 mg/kg之一濃度的該抗體或抗原結合片段。
實施例139.  如實施例134至138中任一項之組成物，其中該組成物：具有280-315 mOsm/kg之一滲透重量莫耳濃度；在一靈敏度＜ 0.05 EU/mg之情況下不具有可偵測的內毒素；為無菌的；具有7.4之一pH；且包含藉由親和層析純化之該抗體或抗原結合片段。 表1.某些序列及Seq ID編號之表
SEQ ID NO 序列 標識符
1 CAGGTCCACCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGGAGCCTGGGTCCTCGGTGACGGTCTCCTGCAAGGCATCT GGAGGCAGCTTCAACAACCAGGCTATTAGCTGGGTGCGACAGGCCCCAGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGAGGG ATCTTCCCTATCTCTGGCACACCGACCAGCGCACAGAGGTTCCAGGGCAGAGTCACATTTACCGCGGACGAGTCCACGACCACAGTCTACATGGATCTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTCTACTACTGT GCGAGAGCGGGTTCGGATTACTTTAATAGAGACCTCGGCTGGGAAAACTACTACTTTGCGTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG FNI9 VH (wt-nt)
2 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9 VH (aa)
3 GGSFNNQA FNI9 CDRH1 (aa)
4 IFPISGTP FNI9 CDRH2 (aa)
5 ARAGSDYFNRDLGWENYYFAS FNI9 CDRH3 (aa)
6 CAGGTGCACCTGGTGCAGAGCGGAGCTGAGGTGAAGGAGCCAGGATCCAGCGTGACAGTGTCTTGCAAGGCTTCCGGCGGCAGCTTCAACAATCAGGCTATCTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATGGGCGGCATCTTTCCCATCTCTGGCACACCTACCTCCGCCCAGAGGTTCCAGGGAAGGGTGACCTTCACCGCTGACGAGAGCACCACAACCGTGTACATGGATCTGTCTTCCCTGAGATCTGACGATACCGCCGTGTACTATTGTGCCAGAGCTGGCTCCGACTATTTCAACCGCGATCTGGGCTGGGAGAATTACTATTTTGCTTCCTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGAGCTCT FNI9 VH (co-nt)
7 GAAATCGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTCTATCTTCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGT CGGAGTGTTAGTAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATTTAT GATGCATCCACCAGGGCCACTGGTTTTTCAGCCAGGTTCGCTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTCTGCTATTTATTACTGT CAGCAGTATAATAACTGGCCTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAC FNI9 Vk (wt-nt)
8 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNNWPPWTFGQGTKVEIK FNI9 VK (aa)
9 RSVSSN FNI9 CDRL1(aa)
10 DAS FNI9 CDRL2(aa)
11 QQYNNWPPWT FNI9 CDRL3(aa)
12 GAGATCGTGATGACCCAGTCCCCAGCCACACTGAGCCTGTCCAGCGGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGGGCTTCCCGGAGCGTGTCTTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCTCCCAGACTGCTGATCTATGACGCCTCTACCAGAGCTACAGGCTTCTCCGCCAGGTTTGCTGGATCTGGATCCGGCACAGAGTTCACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGAGCGAGGATTCTGCTATCTACTATTGTCAGCAGTACAACAATTGGCCCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACAAAGGTGGAGATCAAG FNI9 Vk (co-nt)
13 CAGGTGCACCTGGTGCAGAGCGGAGCTGAGGTGAAGGAGCCAGGATCCAGCGTGACAGTGTCTTGCAAGGCTTCC GGCGGCAGCTTCAACAATCAGGCTATCTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATGGGCGGC ATCTTTCCCATCTCTGGCACACCTACCTCCGCCCAGAGGTTCCAGGGAAGGGTGACCTTCACCGCTGACGAGAGCACCACAACCGTGTACATGGATCTGTCTTCCCTGAGATCTGACGATACCGCCGTGTACTATTGT GCCAGAGCTGGCTCCGACTATTTCAACCGCGATCTGGGCTTCGAGAATTACTATTTTGCTTCCTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGAGCTCT FNI9-VH-W110F (nt)
14 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLG F ENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH-W110F (aa)
15 ARAGSDYFNRDLG F ENYYFAS FNI9-VH-W110F CDRH3 (aa)
16 GAGATCGTGATGACCCAGTCCCCAGCCACACTGAGCCTGTCCAGCGGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGGGCTTCC CGGAGCGTGTCTTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCTCCCAGACTGCTGATCTAT GACGCCTCTACCAGAGCTACAGGCTTCTCCGCCAGGTTTGCTGGATCTGGATCCGGCACAGAGTTCACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGAGCGAGGATTCTGCTATCTACTATTGT CAGCAGTACAACAATTTCCCCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACAAAGGTGGAGATCAAG FNI9-VK-W94F (nt)
17 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNN F PPWTFGQGTKVEIK FNI9-VK-W94F (aa)
18 QQYNN F PPWT FNI9-VK-W94F CDRL3 (aa)
19 GAGATCGTGATGACCCAGTCCCCAGCCACACTGAGCCTGTCCAGCGGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGGGCTTCC CGGAGCGTGTCTTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCTCCCAGACTGCTGATCTAT GACGCCTCTACCAGAGCTACAGGCTTCTCCGCCAGGTTTGCTGGATCTGGATCCGGCACAGAGTTCACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGAGCGAGGATTCTGCTATCTACTATTGT CAGCAGTACAACAATTGGCCCCCTTTCACCTTTGGCCAGGGCACAAAGGTGGAGATCAAG FNI9-VK-W97F (nt)
20 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNNWPP F TFGQGTKVEIK FNI9-VK-W97F (aa)
21 QQYNN W PP F T FNI9-VK-W97F CDRL3 (aa)
22 GAGATCGTGATGACCCAGTCCCCAGCCACACTGAGCCTGTCCAGCGGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGGGCTTCC CGGAGCGTGTCTTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCTCCCAGACTGCTGATCTAT GACGCCTCTACCAGAGCTACAGGCTTCTCCGCCAGGTTTGCTGGATCTGGATCCGGCACAGAGTTCACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGAGCGAGGATTCTGCTATCTACTATTGT CAGCAGTACAACAATTTTCCCCCTTTCACCTTTGGCCAGGGCACAAAGGTGGAGATCAAG FNI9-VK-W94F-W97F (nt)
23 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNN F PP F TFGQGTKVEIK FNI9-VK-W94F-W97F (aa)
24 QQYNN F PP F T FNI9-VK-W94F-W97F CDRL3 (aa)
25 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSYNAVWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSGWYNDYAESVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARSGHITVFGVNVDAFDMWGQGTMVTVSS FM08 VH
26 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLSSYTHWYQQKPGKAPKLLIYAASSRGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSRTFGQGTKVEIK FM08 VL
27 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK WT hIgG1 Fc
28 ESKYGPPCPPCPAPPVAGP 嵌合鉸鏈序列
29 CAGGTGCACCTGGTGCAGAGCGGAGCTGAGGTGAAGGAGCCAGGATCCAGCGTGACAGTGTCTTGCAAGGCTTCCGGCGGCAGCTTCAACAATCAGGCTATCTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATGGGCGGCATCTTTCCCATCTCTGGCACACCTACCTCCGCCCAGAGGTTCCAGGGAAGGGTGACCTTCACCGCTGACGAGAGCACCACAACCGTGTACATGGATCTGTCTTCCCTGAGATCTGACGATACCGCCGTGTACTATTGTGCCAGAGCTGGCTCCGACTATTTCAACCGCGATCTGGGCTGGGAGAATTACTATTTTGCTTCCTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGAGCTCT FNI9-v5-VH (co-nt)
30 GAGATTGTGATGACCCAGTCCCCTGCTACCCTGAGCGTGTCCCCCGGAGAGAGAGCTACCCTGAGTTGCCGCGCCAGCCGCAGTGTCTCTGACAACCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGGCTGCTGATCTATGGCGCCTCCACCAGGGCTACAGGCATCCCAGCTCGGTTCTCTGGATCCGGAAGCGGCACCGAGTTTACCCTGACAATCTCCAGCCTGCAGAGCGAGGATTTCGCCGTGTACTATTGCCAGCATTACAACATCTGGCCTCCTTGGACATTCGGTCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAG FNI9-v5-VK (co-nt)
31 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRAS RSVSDNLAWYQQKPGQAPRLLIY GASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC QHYNIWPPWTFGQGTKVEIK FNI9-v5-VK (aa)
32 RSVSDN FNI9-v5-VK CDRL1 (aa)
33 QHYNIWPPWT FNI9-v5-VK CDRL3 (aa)
34 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK IgHG1*01，G1m3 CH1-CH3，具有M428L及N434S突變及C端離胺酸
35 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC κ輕鏈CL
36 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPG IgHG1*01，G1m3 CH1-CH3，具有M428L及N434S突變，不具有C端離胺酸
37 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC QQYNNWPPWTFGQGTKVEIK FNI9-變異體VL
38 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHAHYTQKSLSLSPG IgHG1*01，G1m3 CH1-CH3，具有M428L及N434A突變，不具有C端離胺酸
39 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK FNI9_MLNS重鏈序列，具有C端離胺酸
40 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHAHYTQKSLSLSPGK FNI9_MLNA重鏈序列，具有C端離胺酸
41 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC FNI9輕鏈序列
42 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK FNI9-變異體_MLNS重鏈序列，具有C端離胺酸
43 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHAHYTQKSLSLSPGK FNI9-變異體_MLNA重鏈序列，具有C端離胺酸
44 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC QQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC FNI9-變異體輕鏈序列
45 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH-FR124GL
46 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFSNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.4
47 GGSFSNQA FNI9-VH.4 CDRH1
48 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNKQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.5
49 GGSFNKQA FNI9-VH.5 CDRH1
50 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSEYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.6
51 ARAGSEYFNRDLGWENYYFAS FNI9-VH.6 CDRH3
52 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWEQYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.7
53 ARAGSDYFNRDLGWEQYYFAS FNI9-VH.7 CDRH3
54 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.8
55 GGTFNNQA FNI9-VH.8 CDRH1
56 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTATSAQRFQGRVTITADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.9
57 IFPISGTA FNI9-VH.9 CDRH2
58 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTYAQRFQGRVTITADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.10
59 IFPISGTPTY FNI9-VH.10 CDRH2及二個C端側接胺基酸
60 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTATYAQRFQGRVTITADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.11
61 IFPISGTA FNI9-VH.11 CDRH2
62 IFPISGTATY FNI9-VH.11 CDRH2及二個C端側接胺基酸
63 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTANYAQRFQGRVTITADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFA SWGQGTLVTVSS FNI9-VH.12
64 IFPISGTANY FNI9-VH.12 CDRH2及二個C端側接胺基酸
65 QVQLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKAS GGSFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGG IFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYC ARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS FNI9-VH.13
66 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNIWPPWTFGQGTKVEIK FNI9-VK.7
67 QQYNIWPPWT FNI9-VK.7 CDRL3
68 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRAS RSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY DASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYC QQYNNWPPWTFGQGTKVEIK FNI9-VK.8
69 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPP CP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 野生型人類IgG1 CH1-CH3 (UniProtKB P01857)；鉸鏈加底線，CH2斜體
70 EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 野生型人類IgG1鉸鏈CH2-CH3；鉸鏈加底線， CH2 斜體
71 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK 野生型人類IgG1 CH2
72 GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 野生型人類IgG1 CH3
73 EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK 野生型人類IgG1鉸鏈-CH2；鉸鏈加底線，CH2斜體
74 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAVPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A、L328V及Q295E突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
75 EPKSCDKTHTCPPCAAPELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A、P230A及Q295E突變之人類IgG1鉸鏈-CH2-CH3胺基酸序列
76 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDNAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A、R292P及I377N突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
77 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEATISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A、K334A及Q295E突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
78 APELLSGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTLRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236S、R292P及Y300L突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
79 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTLRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A及Y300L突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
80 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTLRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A、R292P及Y300L突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
81 APELLSGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVTHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQVNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPEK 具有G236S、G420V、G446E及L309T突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
82 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A及R292P突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
83 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTLRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有R292P及Y300L突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
84 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A及R292P突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
85 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTLRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有Y300L突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
86 APELYSGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRKPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有E345K、G236S、L235Y及S267E突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
87 EPKYCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPRVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVTHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有E272R、L309T、S219Y及S267E突變之人類IgG1鉸鏈-CH2-CH3胺基酸序列
88 APELLYGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236Y突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
89 APELLWGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236W突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
90 APELLGGPSVFLLPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPLVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPEK 具有F243L、G446E、P396L及S267E突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
91 APELLAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
92 APELL AGP DVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS EEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有G236A、S239D及H268E突變之人類IgG1 CH2-CH3胺基酸序列
93 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IgG1m3 CH1-CH3
94 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IgG1m17,1 CH1-CH3
95 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IgG1m3,1 CH1-CH3
96 GAS FNI9-v5 CDRL2 (aa)
97 caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaggtgaagaagccaggctccagcgtgaaggtgagctgcaaggcttctggcggcaccttctcttcctacgctatctcctgggtgaggcaggctccaggacagggactggagtggatgggcggcatcatccctatcttcggcacagccaactacgctcagaagtttcagggcagagtgaccatcacagccgacgagtctacctccacagcttatatggagctgagctctctgcgctccgaggataccgccgtgtactattgtgccagggctggcagcgactacttcaaccgggatctgggctgggagaattactattttgactattggggccagggcaccctggtgacagtgtccagc FNI-UCA-IGH (wt-nt)
98 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFDYWGQGTLVTVSS FNI-UCA VH (aa)
99 gagatcgtgatgacccagtctcctgccacactgagcgtgtctccaggagagagggccaccctgtcctgcagggcttcccagagcgtgtccagcaacctggcctggtaccagcagaagccaggccaggctcccaggctgctgatctatggcgccagcaccagagctacaggcatcccagctcgcttctctggatccggaagcggcacagagtttaccctgacaatctcttccctgcagtctgaggacttcgccgtgtactattgtcagcagtacaacaattggcccccttggacctttggccagggcacaaaggtggagatcaag FNI-UCA-IGK (wt-nt)
100 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK FNI-UCA VK (aa)
101 GGTFSSYA FNI-UCA CDRH1
102 IIPIFGTA FNI-UCA CDRH2
103 ARAGSDYFNRDLGWENYYFDY FNI-UCA CDRH3
104 QSVSSN FNI-UCA CDRL1
105 GAS FNI-UCA CDRL2
106 QQYNNWPPWT FNI-UCA CDRL3
107 QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK FNI9-v8.1重鏈胺基酸(CH3中具有M428L及N434S突變之IgG1m3)
108 EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC FNI9-v8.1輕鏈胺基酸
109 CAGGTGCACCTGGTGCAGAGCGGAGCTGAGGTGAAGGAGCCAGGATCCAGCGTGACAGTGTCTTGCAAGGCTTCCGGCGGCACCTTCAACAATCAGGCTATCTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATGGGCGGCATCTTTCCCATCTCTGGCACACCTACCTCCGCCCAGAGGTTCCAGGGAAGGGTGACCTTCACCGCTGACGAGAGCACCACAACCGTGTACATGGATCTGTCTTCCCTGAGATCTGACGATACCGCCGTGTACTATTGTGCCAGAGCTGGCTCCGACTATTTCAACCGCGATCTGGGCTGGGAGAATTACTATTTTGCTTCCTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGAGCTCTGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCAAGTAGCAAGAGCACATCCGGTGGCACAGCCGCCCTGGGTTGTCTGGTGAAAGATTATTTCCCTGAGCCCGTGACAGTCTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGAGTGCACACATTCCCTGCTGTGCTGCAGTCCAGCGGCCTGTACTCCCTGTCTTCCGTGGTGACCGTGCCAAGCTCTTCCCTGGGCACCCAGACATATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCTTCCAATACAAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGCCAAAGAGCTGTGATAAGACCCATACATGCCCACCTTGTCCAGCTCCAGAGCTGCTGGGCGGCCCATCCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCTAGAACCCCAGAGGTGACATGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTGAAGTTTAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCTAAGACAAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTATCGGGTGGTGTCTGTGCTGACAGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCTGCTCCAATCGAGAAGACCATCTCTAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCTCAGGTGTACACACTGCCTCCAAGCCGCGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCTCTGACATGTCTGGTGAAGGGCTTCTATCCCTCTGACATCGCTGTGGAGTGGGAGTCCAATGGCCAGCCTGAGAACAATTACAAGACCACACCCCCTGTGCTGGACTCCGATGGCAGCTTCTTTCTGTATTCCAAGCTGACCGTGGATAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGTTCTGTGCTGCACGAAGCCCTGCACTCCCATTATACTCAGAAGTCCCTGTCCCTGTCCCCTGGAAAA FNI9-v8.1重鏈核苷酸(CH3中具有M428L及N434S突變之IgG1m3)
110 GAGATCGTGATGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCCCTGTCCAGCGGAGAGAGAGCCACACTGAGCTGCAGGGCTAGCAGGTCCGTGTCCTCCAACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCTGGCCAGGCTCCACGCCTGCTGATCTATGACGCCAGCACAAGAGCTACCGGCTTCTCTGCCAGGTTTGCTGGATCCGGAAGCGGAACCGAGTTCACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGAGCGAGGACTCTGCTATCTACTATTGCCAGCAGTACAACAATTGGCCCCCTTGGACATTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAATTGAAATCTGGAACTGCCTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAATTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCTCTGCAGAGCGGCAATTCTCAGGAGTCCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGATTCTACATATTCCCTGTCCAGCACCCTGACACTGAGCAAGGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCTTGTGAGGTGACCCATCAGGGCCTGTCTTCCCCTGTGACAAAGTCTTTCAACAGGGGAGAGTGT FNI9-v8.1輕鏈核苷酸
111 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSYNAVWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSGWYNDYAESVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARSGHITVFGVNVDAFDMWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK FM08_MLNS重鏈胺基酸
112 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLSSYTHWYQQKPGKAPKLLIYAASSRGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC FM08輕鏈胺基酸
113 AGCRAAAGCAGG 引子Uni12
114 caattggctctgtctctct 正向引子
115 atgaaattgatgttcgccc 反向引子
116 gaagagccgatactagaa 引子
117 ttctagtatcggctcttc 引子
118 ACGCGTGATCAGCAAAAGCAGG MBTuni-12引子
119 ACGCGTGATCAGTAGAAACAAGG MBTuni-13引子
120 ATTCTCCTTGGAATTTGCCCTT 正向引子
121 CATAGCGTAAAAGGAGCAACA 反向引子
表2. 某些FNI9 抗體之SEQ ID NOS. ( 胺基酸序列 )
CDRH1 CDRH2 CDRH2+ 側接 CDRH3 VH CDRL1 CDRL2 CDRL3 VL
FNI9 3 4 -- 5 2 9 10 11 8
FNI9-VH-W110F 3 4 -- 15 14
FNI9-VK-W94F -- 9 10 18 17
FNI9-VK-W97F -- 9 10 21 20
FNI9-VK-W94F-W97F -- 9 10 24 23
FNI9-v5-VK -- 32 96 33 31
FNI9-變異體VL 9 10 11 37
FNI9-VH-FR124GL 3 4 -- 5 45
FNI9-VH.4 47 4 -- 5 46
FNI9-VH.5 49 4 -- 5 48
FNI9-VH.6 3 4 -- 51 50
FNI9-VH.7 3 4 -- 53 52
FNI9-VH.8 55 4 -- 5 54
FNI9-VH.9 3 57 -- 5 56
FNI9-VH.10 3 4 59 5 58
FNI9-VH.11 3 61 62 5 60
FNI9-VH.12 3 61 64 5 63
FNI9-VH.13 3 4 5 65
FNI9-VK.7 9 10 67 66
FNI9-VK.8 9 10 11 68
FNI9-v13.8 3 4 5 65 9 10 11 68
FNI9-v4.1 47 4 -- 5 46 9 10 11 8
FNI9-v5.1 49 4 -- 5 48 9 10 11 8
FNI9-v6.1 3 4 -- 51 50 9 10 11 8
FNI9-v7.1 3 4 -- 53 52 9 10 11 8
FNI9-v8.1 55 4 -- 5 54 9 10 11 8
FNI9-v9.1 3 57 -- 5 56 9 10 11 8
FNI9-v10.1 3 4 59 5 58 9 10 11 8
FNI9-v11.1 3 61 62 5 60 9 10 11 8
FNI9-v12.1 3 61 64 5 63 9 10 11 8
FNI9-v4.7 47 4 -- 5 46 9 10 67 66
FNI9-v5.7 49 4 -- 5 48 9 10 67 66
FNI9-v6.7 3 4 -- 51 50 9 10 67 66
FNI9-v7.7 3 4 -- 53 52 9 10 67 66
FNI9-v8.7 55 4 -- 5 54 9 10 67 66
FNI9-v9.7 3 57 -- 5 56 9 10 67 66
FNI9-v10.7 3 4 59 5 58 9 10 67 66
FNI9-v11.7 3 61 62 5 60 9 10 67 66
FNI9-v12.7 3 61 64 5 63 9 10 67 66
FNI9-v1.1 3 4 -- 5 2 9 10 11 8
表3. 神經胺酸酶胺基酸位置比較(H1N1 California.07.2009 與H3N2 New York.392.2004)
殘基_N1 位置_N1 殘基_N2 位置_N2
M 1 M 1
N 2 N 2
P 3 P 3
N 4 N 4
Q 5 Q 5
K 6 K 6
I 7 I 7
I 8 I 8
T 9 T 9
I 10 I 10
G 11 G 11
S 12 S 12
V 13 V 13
C 14 S 14
M 15 L 15
T 16 T 16
I 17 I 17
G 18 S 18
M 19 T 19
A 20 I 20
N 21 C 21
L 22 F 22
I 23 F 23
L 24 M 24
Q 25 Q 25
I 26 I 26
G 27 A 27
N 28 I 28
I 29 L 29
I 30 I 30
S 31 T 31
I 32 T 32
W 33 V 33
I 34 T 34
S 35 L 35
H 36 H 36
S 37 F 37
I 38 K 38
Q 39 Q 39
L 40 Y 40
G 41 E 41
N 42 F 42
Q 43 N 43
N 44 S 44
Q 45 P 45
I 46 P 46
E 47 N 47
T 48 - NA
C 49 - NA
N 50 N 48
Q 51 Q 49
S 52 V 50
V 53 M 51
I 54 L 52
T 55 C 53
Y 56 E 54
E 57 P 55
N 58 T 56
N 59 I 57
T 60 I 58
W 61 E 59
V 62 R 60
N 63 N 61
Q 64 I 62
T 65 T 63
- NA E 64
Y 66 I 65
V 67 V 66
N 68 Y 67
I 69 L 68
S 70 T 69
N 71 N 70
T 72 T 71
N 73 T 72
F 74 I 73
A 75 E 74
A 76 K 75
G 77 E 76
Q 78 M 77
S 79 C 78
V 80 P 79
V 81 K 80
S 82 L 81
V 83 A 82
K 84 E 83
L 85 Y 84
A 86 R 85
G 87 N 86
N 88 W 87
S 89 S 88
S 90 K 89
- NA P 90
L 91 Q 91
C 92 C 92
P 93 D 93
V 94 I 94
S 95 T 95
G 96 G 96
W 97 F 97
A 98 A 98
I 99 P 99
Y 100 F 100
S 101 S 101
K 102 K 102
D 103 D 103
N 104 N 104
S 105 S 105
V 106 I 106
R 107 R 107
I 108 L 108
G 109 S 109
S 110 A 110
K 111 G 111
G 112 G 112
D 113 D 113
V 114 I 114
F 115 W 115
V 116 V 116
I 117 T 117
R 118 R 118
E 119 E 119
P 120 P 120
F 121 Y 121
I 122 V 122
S 123 S 123
C 124 C 124
S 125 D 125
P 126 P 126
L 127 D 127
E 128 K 128
C 129 C 129
R 130 Y 130
T 131 Q 131
F 132 F 132
F 133 A 133
L 134 L 134
T 135 G 135
Q 136 Q 136
G 137 G 137
A 138 T 138
L 139 T 139
L 140 L 140
N 141 N 141
D 142 N 142
K 143 V 143
H 144 H 144
S 145 S 145
N 146 N 146
G 147 D 147
T 148 T 148
I 149 V 149
K 150 H 150
D 151 D 151
R 152 R 152
S 153 T 153
P 154 P 154
Y 155 Y 155
R 156 R 156
T 157 T 157
L 158 L 158
M 159 L 159
S 160 M 160
C 161 N 161
P 162 E 162
I 163 L 163
G 164 G 164
E 165 - NA
V 166 V 165
P 167 P 166
S 168 F 167
P 169 H 168
Y 170 L 169
N 171 G 170
S 172 T 171
R 173 K 172
F 174 Q 173
E 175 V 174
S 176 C 175
V 177 I 176
A 178 A 177
W 179 W 178
S 180 S 179
A 181 S 180
S 182 S 181
A 183 S 182
C 184 C 183
H 185 H 184
D 186 D 185
G 187 G 186
I 188 K 187
N 189 A 188
W 190 W 189
L 191 L 190
T 192 H 191
I 193 V 192
G 194 C 193
I 195 V 194
S 196 T 195
G 197 G 196
P 198 D 197
D 199 D 198
N 200 K 199
G 201 N 200
A 202 A 201
V 203 T 202
A 204 A 203
V 205 S 204
L 206 F 205
K 207 I 206
Y 208 Y 207
N 209 N 208
G 210 G 209
I 211 R 210
I 212 L 211
T 213 V 212
D 214 D 213
T 215 S 214
I 216 I 215
K 217 V 216
S 218 S 217
W 219 W 218
R 220 S 219
N 221 K 220
N 222 K 221
I 223 I 222
L 224 L 223
R 225 R 224
T 226 T 225
Q 227 Q 226
E 228 E 227
S 229 S 228
E 230 E 229
C 231 C 230
A 232 V 231
C 233 C 232
V 234 I 233
N 235 N 234
G 236 G 235
S 237 T 236
C 238 C 237
F 239 T 238
T 240 V 239
V 241 V 240
M 242 M 241
T 243 T 242
D 244 D 243
G 245 G 244
P 246 S 245
S 247 A 246
N 248 S 247
G 249 G 248
Q 250 K 249
A 251 A 250
S 252 D 251
Y 253 T 252
K 254 K 253
I 255 I 254
F 256 L 255
R 257 F 256
I 258 I 257
E 259 E 258
K 260 E 259
G 261 G 260
K 262 K 261
I 263 I 262
V 264 I 263
K 265 H 264
S 266 T 265
V 267 S 266
E 268 T 267
M 269 L 268
N 270 S 269
A 271 G 270
P 272 S 271
N 273 A 272
Y 274 Q 273
H 275 H 274
Y 276 V 275
E 277 E 276
E 278 E 277
C 279 C 278
S 280 S 279
C 281 C 280
Y 282 Y 281
P 283 P 282
D 284 R 283
S 285 Y 284
S 286 P 285
E 287 G 286
I 288 V 287
T 289 R 288
C 290 C 289
V 291 V 290
C 292 C 291
R 293 R 292
D 294 D 293
N 295 N 294
W 296 W 295
H 297 K 296
G 298 G 297
S 299 S 298
N 300 N 299
R 301 R 300
P 302 P 301
W 303 I 302
V 304 V 303
S 305 D 304
F 306 I 305
N 307 N 306
- NA I 307
Q 308 K 308
N 309 D 309
L 310 Y 310
E 311 S 311
Y 312 I 312
Q 313 V 313
I 314 S 314
G 315 S 315
Y 316 Y 316
I 317 V 317
C 318 C 318
S 319 S 319
G 320 G 320
I 321 L 321
F 322 V 322
G 323 G 323
D 324 D 324
N 325 T 325
P 326 P 326
R 327 R 327
P 328 K 328
N 329 N 329
D 330 D 330
K 331 S 331
T 332 S 332
G 333 S 333
S 334 S 334
C 335 S 335
- NA H 336
- NA C 337
- NA L 338
G 336 D 339
P 337 P 340
V 338 N 341
S 339 N 342
S 340 E 343
N 341 E 344
G 342 G 345
A 343 G 346
N 344 H 347
G 345 G 348
V 346 V 349
K 347 K 350
G 348 G 351
F 349 W 352
S 350 A 353
F 351 F 354
K 352 D 355
Y 353 D 356
G 354 G 357
N 355 N 358
G 356 D 359
V 357 V 360
W 358 W 361
I 359 M 362
G 360 G 363
R 361 R 364
T 362 T 365
K 363 I 366
S 364 S 367
I 365 E 368
S 366 K 369
S 367 L 370
R 368 R 371
N 369 S 372
G 370 G 373
F 371 Y 374
E 372 E 375
M 373 T 376
I 374 F 377
W 375 K 378
D 376 V 379
P 377 I 380
N 378 E 381
G 379 G 382
W 380 W 383
T 381 S 384
G 382 K 385
T 383 P 386
D 384 N 387
N 385 S 388
N 386 K 389
F 387 L 390
S 388 Q 391
I 389 I 392
- NA N 393
K 390 R 394
Q 391 Q 395
D 392 V 396
I 393 I 397
V 394 V 398
G 395 D 399
I 396 R 400
N 397 G 401
E 398 N 402
W 399 R 403
S 400 S 404
G 401 G 405
Y 402 Y 406
S 403 S 407
G 404 G 408
S 405 I 409
F 406 F 410
V 407 - NA
Q 408 - NA
H 409 - NA
P 410 - NA
E 411 S 411
L 412 V 412
T 413 E 413
G 414 G 414
L 415 K 415
D 416 S 416
C 417 C 417
I 418 I 418
R 419 N 419
P 420 R 420
C 421 C 421
F 422 F 422
W 423 Y 423
V 424 V 424
E 425 E 425
L 426 L 426
I 427 I 427
R 428 R 428
G 429 G 429
R 430 R 430
P 431 K 431
K 432 E 432
E 433 E 433
N 434 T 434
T 435 E 435
I 436 V 436
- NA L 437
W 437 W 438
T 438 T 439
S 439 S 440
G 440 N 441
S 441 S 442
S 442 I 443
I 443 V 444
S 444 V 445
F 445 F 446
C 446 C 447
G 447 G 448
V 448 T 449
N 449 S 450
S 450 G 451
D 451 T 452
T 452 Y 453
V 453 G 454
G 454 T 455
W 455 G 456
S 456 S 457
W 457 W 458
P 458 P 459
D 459 D 460
G 460 G 461
A 461 A 462
E 462 D 463
L 463 I 464
P 464 N 465
F 465 L 466
T 466 - NA
I 467 M 467
D 468 P 468
K 469 I 469
實例 實例 1 抗 NA 單株抗體之鑑別及測試
基於相應血清針對N1及N4 (G1)；及N2、N3及N9 (G2)流感假病毒之結合選擇來自匿名人類供體之周邊血液單核細胞(PBMC)。藉由篩選來自扁桃體供體樣品(n=50)之血清針對神經胺酸酶亞型N1及N2抗原之反應性，及來自PBMC供體樣品(n=124)之血清針對神經胺酸酶亞型N4、N3及N9之反應性來選擇供體。用於篩選之神經胺酸酶抗原在哺乳動物細胞中表現且藉由流動式細胞測量術評估結合。
來自五個供體之B記憶細胞藉由流動式細胞測量術分選以便輸入至發現工作流程中(圖1)。將單個分選的B細胞(n=39,350)在50 µl培養物中與間葉基質細胞(MSC)共培養以刺激抗體分泌。藉由結合及NA抑制分析來評估所分泌之抗體。使用酶聯凝集素分析(ELLA)評估N1唾液酸酶活性之抑制，ELLA為一種以吸光度為主之分析，其利用大的醣蛋白受質胎球蛋白作為NA裂解唾液酸之受質(Lambre等人， J Immunol Methods.1990)。使用以螢光為主之分析來量測N1、N2及N9唾液酸酶活性之抑制，該分析量測NA酶對2'-(4-甲基傘形基)-α-D-N-乙醯神經胺酸(MUNANA)之裂解(Potier等人. Anal. Biochem. 1979.)。
藉由ELISA評估與來自第1組IAV N1 A/Vietnam/1203/2004及第2組IAV N2 A/Tanzania/205/2010及N9 A/Hong Kong/56/2015之NA的結合，以確定廣度。來自所選擇之B細胞的抗體序列經選殖為cDNA且定序。
十四個殖株相關的單株抗體係由發現工作流程(圖2A)產生。選擇FNI3及FNI9 (FNI9包含以下VH及VL胺基酸序列：VH：SEQ ID NO.:2；VL：SEQ ID NO.:8)用於進一步評估及測試。FNI3及FNI9 VH與未突變共同祖先「UCA」之VH的比對展示於圖2B中。UCA結合至廣泛的IAV及IBV NA (資料未展示)。評估FNI3及FNI9與NA亞型之結合。酶聯免疫吸附分析(ELISA)用於量測FNI3及FNI9與N1 (圖3A)、N2 (圖3B)及N9 (圖3C)之結合，且報告為相較於以ng/ml為單位之濃度的光學密度(OD)。生物層干涉法(BLI)用於量測FNI3及FNI9針對N1結合(圖4A)、N2 (圖4B)及N9 (圖4C)之KD、締合(kon)及解離(kdis)。藉由比較抗體1G01-LS (1G01藉由Stadlbauer等人( Science 366(6464):499-504 (2019)；參見圖1B；抗體1G01以及抗體1E01及1G04之VH及VL胺基酸序列以引用之方式併入本文中)描述，及在此等實驗中攜帶M428L及N434S Fc突變)之結合亦藉由ELISA及BLI分析來量測。陰性對照抗體K-用於ELISA分析。
FNI3及FNI9與來自第I組IAV、第II組IAV及IBV之NA的結合概述於圖5中(具有比較物1G01)。使用以FACS為主之分析定量結合，在該分析中NA表現於哺乳動物細胞之表面上。簡言之，Expi-CHO細胞經編碼不同IAV及IBV NA之質體暫時地轉染。轉染後48小時，將細胞與不同mAb之連續稀釋液一起培育。在60分鐘培育之後，洗滌細胞且隨後與抗人類IgG-AF647二級抗體一起培育。隨後洗滌細胞二次且在FACS下評估抗體結合。1G01用作比較物。
流感神經胺酸酶之醣基化對宿主群體中之免疫逃避及病毒適應有影響。醣基化部位可在位置245 (245Gly+)及247 (247Gly+)處出現(Wan等人. Nat Microbiology.2019)。A/South Australia/34/2019、A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016及A/Switzerland/9715293/2013中之例示性245Gly+及247+Gly修飾部位展示於圖6A中。圖6B展示針對A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016及A/Switzerland/9715293/2013活病毒儲備液之唾液酸酶活性的抑制(NAI)，報告為以µg/ml為單位之EC50。藉由流動式細胞測量術來量測經A/South Australia/34/2019 (245Gly+)感染之哺乳動物細胞中FNI3及FNI9與N2之結合(圖6C)。自豬中分離之歐亞類禽流感病毒株在遺傳上不同(Sun等人. Proc Natl Acad SciU S A. 2020)。藉由流動式細胞測量術來量測FNI3及FNI9與經H1N1豬歐亞類禽(EA)病毒株，A/Swine/Jiangsu/J004/2018感染之哺乳動物細胞中之NA的結合，如圖7中所示。
在人類上皮第2型(HEP-2)細胞中評估FNI3及FNI9之多反應性的潛能。比較抗HA抗體FI6v3用作陽性對照，且抗副黏液病毒抗體「MPE8」(Corti等人. Nature 501(7467):439-43 (2013))作為陰性對照包括在內。FNI3及FNI9在HEP-2細胞中展示缺乏多反應性(資料未展示)。
使用針對第I組IAV、第II組IAV及IBV之MUNANA分析來量測NA中之唾液酸酶活性的抑制，其結果概述於圖8中。針對多個第I組IAV、第II組IAV及IBV病毒株之抗體的唾液酸酶抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)概述於圖9中。圖10A及圖10B展示FNI3及FNI9針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。圖10A在同一圖內描繪第I組IAV、第II組IAV及IBV，且圖10B在獨立的圖中描繪各組。亦評估FNI3、FNI9、FNI14、FNI17及FNI19抑制來自一組IAV及IBV病毒株(圖11A)之NA之唾液酸酶活性的能力(圖11B)，該等病毒株中之一些在245位置處具有醣基化部位，如由星號指示。圖12A至圖12D展示FNI1、FNI3、FNI9、FNI14、FNI17及FNI19針對H1N1 A/California/07/2009 (圖12A)、H3N2 A/Hong Kong/8/68 (圖12B)、B/Malaysia/2506/2004 (圖12C)及B/Jiangsu/10/2003 (圖12D) NA之中和曲線(報告為IC50 (µg/ml)。
使用NFAT驅動之螢光素酶報導分析評估FNI3及FNI9對FcγRIIIa (圖13A)及FcγRIIa (圖13B)之活化。在與經H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/1934以6之感染倍率(MOI)感染之A549細胞一起培育23小時之後評定Jurkat-FcγRIIIa (F158對偶基因)及Jurkat-FcγRIIa (H131對偶基因)細胞株之活化。亦測試比較抗體FY1-GRLR及IgG1抗體FM08_LS，後者具有SEQ ID NO.:25之VH及SEQ ID NO.:26之VL且包含M428L及N434S (EU編號) Fc突變。 實例 2 抗 NA 抗體之結構及功能研究
引起流感對奧司他韋具有抗性之神經胺酸酶(NA)突變可能因NA亞型不同(參見例如，Hussain等人, Infection and Drug Resistance 10:121-134 (2017))。圖14A及圖14B按年份展示在(圖14A) N1 (H1N1、豬H1N1及禽類H5N1)及(圖14B) N2 (H3N2、H2N2)中之NA抗病毒劑抗性突變之頻率。反向遺傳學方法用於對H1N1 A/California/07/2009進行工程化以具備奧司他韋(OSE)抗性突變(H275Y、E119D及H275Y、S247N及H275Y)。量測FNI3 (圖15A)、FNI9 (圖15B)及奧司他韋(圖15C)對反向工程化之H1N1 A/California/07/2009病毒之中和以及比較抗體FM08 (圖15D)及1G01 (圖15E)抗體之中和，且報告為以nM為單位之抑制%。此等資料表明FNI3及FNI9對OSE抗性NA突變缺乏敏感性的結構基礎。接下來，包括第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV病毒之額外病毒經反向遺傳學工程化以攜帶OSE抗性突變(H275Y、E119D/H275Y、H275Y/S247N、I222V及N294S)。量測FNI3、FNI9及比較抗體1G01之中和活性且報告為以µg/ml為單位之IC50。圖16A描繪個別病毒株之中和，且圖16B描繪藉由中和抗NA抗體分組之病毒株的中和。
確定FNI3 (單獨或與NA之複合體)之晶體結構，以研究結合功能。與NA複合之FNI3抗原結合片段(Fab)區域之相對平坦銜接角展示於圖17中。針對未結合(圖18A)或N2 NA結合狀態(圖18B)進行FNI3重鏈之互補決定區3 (CDR3)的晶體結構分析。根據此等研究，未結合FNI3晶體結構(圖18A)展示β褶板構形及在殘基E111 (CO) - D102 (NH)、E111 (NH) - D102 (CO)、G109 (CO) - F104 (NH)、G109 (NH) - N105 (CO)及L108 (NH) - N105 (CO)之羧酸基(CO)與胺基(NH)之間的完整主鏈氫鍵；結合FNI3-N2晶體結構(圖18B)展示β褶板構形之破壞及在G109 (CO) - F104 (NH)之間的一個完整主鏈氫鍵。不受理論束縛，在FNI3-N2晶體結構中不存在β褶板結構可能藉由二種潛在情形解釋：(1)由於藉由結合至N2 NA的誘導配合，可能出現β褶板之破壞；(2)由於藉由單獨Fab區域之晶體接觸的誘導配合，可能發生β褶板形成。
將FNI3抗體之Fab區域與NA亞型複合之晶體結構及銜接角與其他抗NA抗體之類似特性相比較以進一步表徵FNI3之銜接特性。圖19A展示以下比較抗體：與N1 NA複合之1G01 (上圖)；及與N9 NA複合之1G04 (Stadlbauer等人，前述) (下圖)。圖19B展示與N2 NA複合之FNI3 (上圖)，其中該銜接角與圖17中所示之銜接角相同，但Fab區域係呈不同定向。圖19B亦展示與N2 NA複合之比較抗體1E01 (Stadlbauer等人, 前述) (下圖)。線指示銜接角，且展示比較抗體之蛋白質資料庫(PDB)識別代碼。根據此等研究，FNI3具有與1E01類似的銜接角，但具有不同的Fab定向。
FNI3互補決定區(CDR)相互作用示意性地展示於圖20中，來自使用MOE (Chemical Computing Group之分子操作環境；www.chemcomp.com)之「快速製備」蛋白質。自此分析，CDRH3以幾乎90°角彎曲以佔據NA結合袋，且CDRH2平放在NA表面上。自此分析，CDRH2似乎在能量上不促成結合且CDRL似乎不促成結合相互作用。自此研究，在CDRH3內，D107及R106似乎促成N2 NA結合(圖21)。負數為以kcal/mol為單位之相互作用能量。
FNI3之晶體結構覆蓋於奧司他韋結合之N2 NA結構上(圖22、圖23)，表明奧司他韋與R118、R292及R371相互作用。
使用來自在2000及2020年間分離之H3N2病毒(n=60,597)之N2 NA序列探究FNI3表位之守恆。表位區共同胺基酸序列展示於圖24A中，其中表展示在所分析之N2 NA序列組中之特定位置處之胺基酸頻率。圓圈值指示以最低三個頻率呈現之胺基酸Glu221 (E221，17.41%)、Ser245 (S245，33.69%)及Ser247 (S247，36.16%)。圖24B (底部)展示來自FNI3之Y60及Y94與N2 NA之殘基E221、S245及S247的相互作用。使用簡單模型化，S245N突變增加結合，S247T突變降低結合，且E221D突變為實際上中性(資料未展示)。
使用來自在2000及2020年間分離之H1N1病毒(n=57,597)之N1 NA序列探究FNI3表位之守恆。圖25展示N2 NA FNI3表位守恆分析(展示於圖24A及24B中)與來自H1N1之N1 NA序列中之FNI3表位守恆之分析的比較。鑑別共同殘基對，R118 (N2)及R118 (N1)、D151 (N2)及D151 (N1)、E227 (N2)及E228 (N1)、R292 (N2)及R293 (N1)以及R371 (N2)及R368 (N1)。N2 NA內重要的FNI3相互作用殘基及對應體FNI3 CDRH3殘基展示於下圖之表中。殘基R371、R292及R118與FNI3 CDRH3之D107相互作用，且殘基D151及E227與FNI3 CDRH3之R106相互作用。 實例 3 抗 NA 單株抗體之預防性活性
在IAV感染之鼠類BALB/c模型中評估FNI3及FNI9之預防性活性。簡言之，在以LD90 (90%之致命劑量)鼻內感染H1N1亞型A/Puerto Rico/8/34或H3N2亞型A/Hong Kong/1/68之前一天向7-8週齡之BALB/c小鼠投予(i.v.) FNI3 (圖26A中之「mAb-03」)、FNI9 (圖26A中之「mAb-09」)或媒劑對照(圖26A及圖26B)。以0.2、0.6、2或6 mg/kg投予(i.v.)抗體。在感染開始時收集基線血清，且在感染後第2至14天中之每一天評估體重及死亡率二者(圖26B)。十五天內某些測試條件之體重量測展示於圖27A至圖27D (A/Puerto Rico/8/34 FNI9測試組)及圖28A至圖28D (A/Hong Kong/1/68 FNI9測試組)中。在所有抗體劑量(0.2、0.6、2及6 mg/kg)下投予FNI3 (資料未展示)或FNI9減少體重減輕(與媒劑相比)。亦量測總體死亡率(圖29A，A/Puerto Rico/8/34感染之小鼠；圖29B，A/Hong Kong/1/68感染之小鼠)。圖30A及圖30B展示在經A/Puerto Rico/8/34 (圖30A)或A/Hong Kong/8/68 (圖30B)感染之小鼠中報告為曲線下面積之體重減輕。亦展示與來自經A/Puerto Rico/8/34 (圖31A)或A/Hong Kong/8/68 (圖31B)感染之BALB/c小鼠之體重減輕的曲線下面積分析之血清中IgG相比之負曲線下面積峰。FNI3 (「FNI3-LS」)、FNI9 (「FNI9-LS」)及比較抗體FM08_LS及1G01 (「1G01-LS」)在tg32小鼠中之藥物動力學展示於圖32中。 實例 4 藥物動力學研究
在tg32小鼠中評定FNI3 (「FNI3-LS」)、FNI9 (「FNI9-LS」)及比較抗體FM08_LS及1G01-LS之Fc變異體(M428L/N434S突變)的藥物動力學分析，且進行半衰期，其結果概述於圖32中。使用ELISA分析活體外確定抗體之血漿濃度。將山羊抗人類IgG抗體(Southern Biotechnology：2040-01)在PBS中稀釋至10 µg/ml，且將25 µl添加至96孔平底½面積ELISA盤之各孔中用於在4℃下塗佈隔夜。塗佈之後，使用自動ELISA洗滌器將盤用補充有0.05% Tween 20之0.5×PBS (洗滌溶液)洗滌二次。隨後，在室溫(RT)下將盤用補充有1% BSA之100 µl/孔之BSA (阻斷溶液)阻斷1小時，且隨後洗滌二次。隨後以1:2逐步地稀釋樣品，重複二次，總共8次稀釋。經由將抗體稀釋至0.5 µg/ml以類似方式製備待測試之各抗體之標準物。隨後在阻斷溶液中以1:3逐步地稀釋標準物，重複二次，總共8次稀釋。將二十五微升所製備之樣品或標準物添加至山羊抗人類IgG塗佈之孔中，且在RT下培育1小時。四次洗滌之後，每孔添加25 µl之1:500稀釋於阻斷溶液中之多株抗IgG-鹼性磷酸酶結合抗體(Southern Biotechnology：2040-04)用於偵測且在RT下培育1小時。在四次洗滌之後，藉由添加80 µl/孔之受質溶液(1錠劑之對硝苯基磷酸鹽(Sigma-Aldrich：N2765-100TAB)於20 ml碳酸氫鹽緩衝液中)來使盤顯影。在RT下培育30分鐘之後，使用分光光度計在405 nm下量測吸光度。
為了確定小鼠血漿中之抗體濃度，在Gen5軟體(BioTek)中對比濃度繪製來自ELISA資料之OD值。使用可變斜率模型、四個參數及以下等式應用非線性曲線擬合：Y=(A-D) / (1+ (X/C)^B) +D)。內插在標準曲線¾之可預測分析範圍內之樣品稀釋度之OD值(如在設定實驗中由品質控制樣品在曲線¾之上部、中部或下部範圍內確定)以定量樣品。隨後考慮樣品之最終稀釋度確定抗體之血漿濃度。若樣品稀釋度之超過一個值在標準曲線之線性範圍內，則使用此等值之平均值。藉由使用具有以下設定之WINNONLIN NONCOMPARTMENTAL ANALYSIS PROGRAM (8.1.0.3530核心版本，Phoenix software，Certara)分析藥物動力學(PK)資料：模型：血漿資料，i.v.彈丸注射投予；非遺漏觀測值之數目：8；穩態間隔Tau: 1.00；劑量時間：0.00；劑量：5.00 mg/kg；計算方法：使用線性內插之線性梯形；λ_z計算之加權：均勻加權；λ_z方法：找到λ_z之最佳擬合，對數回歸。繪圖及統計分析(線性回歸或離群值分析)使用Prism 7.0軟體(GraphPad, La Jolla, CA, USA)進行。 實例 5 產生 FNI3 及 FNI9 變異抗體
FNI3及FNI9之變異體係由使可變區中之胺基酸突變來產生。參見表1及2。 實例 6 額外研究
評估FNI抗體針對一組IAV NA及IBV NA之結合及NAI活性(圖33)。FNI17及FNI19以低於FNI3及FNI9之濃度結合來自人類IAV循環的病毒株(例如來自A/California/07/2009之N1或來自A/Washington/01/2007之N2)之NA (參見圖33中藉由矩形突出顯示之資料)。FNI3及FNI9展現出針對來自人畜共通病毒株之NA (例如來自A/Anhui/1/2013之N9，參見圖33中藉由矩形突出顯示之資料)之更高的交叉反應性。所有FNI抗體結合至來自A/Swine/Jiangsu/J004/2018 (參見圖33中藉由自頂部起第二個矩形突出顯示之資料)之N1，其已表徵為具有大流行性可能(Sun等人. Proc Natl Acad SciU S A. 2020)。分析FNI序列變異體之功能。在針對IAV及攜帶OSE抗性突變之病毒的進一步中和及NAI研究中測試FNI抗體。在與IAV及IBV NA一起培育之後測試FNI抗體之FcγR活化。進行表位守恆研究及活體外抗性選擇研究。分別在Balb/c及DBA/2小鼠中進行FNI3及FNI9針對IAV及針對B/Victoria/504/2000及B/Brisbane/60/2008之活體內預防研究。在SCID Tg32小鼠中測試攜帶MLNS Fc突變之FNI抗體的活體內藥物動力學。來自上述研究之資料展示於圖33至圖50B中。FNI9展示缺乏針對HEP-2細胞之多反應性(資料未展示)。
使用FNI9、FNI7及FNI19進行其他研究(cryo-EM，相對於H1N1 A/California/07/2009之抗性，NHP中之PK，功效)。 實例 7 FNI NA 表位內之守恆
藉由晶體結構研究及銜接分析評估抗NA抗體(FNI3、FNI17及FNI19)與NA之間的結合相互作用。在來自2009年至2019年之第I組IAV、第II組IAV及IBV中之FNI NA表位內之前五個相互作用殘基的守恆展示於圖51中。 實例8 活體外效力： FNI 抗體與 FM08 及奧司他韋之比較
評估與OSE及FM08之效力相比FNI抗體之活體外效力。藉由核蛋白(NP)染色所量測之FNI9、OSE及比較抗體「FM08」針對H3N2 A/Hong Kong/8/68病毒之活體外中和活性展示於圖52中。 實例 9 活體內效力： FNI 抗體與 FM08 及奧司他韋之比較
評估與OSE及FM08之效力相比FNI抗體之活體內效力。
測試「GAALIE」變異抗體(G236A/A330L/I332E變異體)對FcγRIIIa及FcγRIIa之抗體活化，如圖53中所示。使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測FcγRIIIa (F158對偶基因)及FcγRIIa (H131對偶基因)之活化。在與經H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34以6之感染倍率(MOI)感染之A549細胞一起培育之後評定活化。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及攜帶GAALIE突變(字尾「GAALIE」)之FNI3、FNI9、FNI17及FNI19抗體。亦測試比較抗體「FM08_LS」及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
活體內實驗間研究經設計以比較在經H1N1 IAV A/Puerto Rico/8/34或H3N2 IAV A/Hong Kong/8/68感染之BALB/c小鼠中之FM08_LS與FNI3及FNI9之預防性活性(圖54)。在感染LD90 (90%致命劑量)之A/Puerto Rico/8/34或H3N2 IAV A/Hong Kong/8/68之前一天，以6 mg/kg、2 mg/kg、0.6 mg/kg或0.2 mg/kg投予抗體。該研究之時刻表、資料收集及指標與圖26B中所示之彼等相同。在實驗A (「Exp-A」)中，在用FNI3 (資料未展示)或FNI9 (圖27A至圖27D)預處理之後使BALB/c小鼠感染A/Puerto Rico/8/34。在實驗A之另一臂中，在用FNI3 (資料未展示)或FNI9 (圖28A至圖28D)預處理之後使BALB/c小鼠感染A/Hong Kong/8/68。在實驗B (「Exp-B」)中，在用FM08_LS預處理之後使BALB/c小鼠感染A/Puerto Rico/8/34 (資料未展示)或A/Hong Kong/8/68 (資料未展示)。
十五天內FNI9測試組之體重量測展示於圖27A至圖27D (A/Puerto Rico/8/34 FNI9測試組)及圖28A至圖28D (A/Hong Kong/1/68 FNI9測試組)中。與來自在用FNI3或FNI9或FM08_LS處理後之經A/Puerto Rico/8/34 (H1N1)或A/Hong Kong/8/68 (H3N2)感染的BALB/c小鼠之體重減輕的曲線下面積分析之血清中IgG相比之負曲線下面積峰值展示於圖42中。
活體內研究經設計以評估經IAV A/Puerto Rico/8/34感染之雌性BALB/c小鼠中之奧司他韋(OSE)之生物效力(圖55)。在經10倍LD50 (50%致命劑量)之A/Puerto Rico/8/34感染前二小時開始，在第0天以10 mg/kg藉由經口胃管灌食投予OSE。在感染後6小時以相同劑量投予OSE，且隨後每日二次，直至感染後第6天。歷經十四天之體重量測展示於圖56中，且歷經十四天之存活率展示於圖57中。自在感染後二天及四天時獲得之樣品中量測來自OSE處理之小鼠之肺勻漿中之病毒效價(圖58)。 實例10 FNI3 、 FNI9 、 FNI17 及 FNI19 變異抗體之產生及表徵
自FNI3、FNI9、FNI17及FNI19中產生可變區域序列變異體且針對結合及中和進行表徵。產生總共三十二(32)個變異抗體，其中二十六(26)個變異體含有VH及/或VL骨架胺基酸向生殖系序列之逆轉，三(3)個FNI17變異體含有VH骨架區向生殖系序列之逆轉及VL中之W97A/L/Y突變，且三(3)個FNI17變異體含有野生型VH及VL中之W97A/L/Y突變。自FNI3中產生總計11個變異體，自FNI9中產生5個變異體，自FNI17中產生11個變異體且自FNI19中產生5個變異體。
量測藉由可發展性變異體針對IAV NA (來自H5N1 A/Vietnam/1203/2004之NA1；來自H3N2 A/Tanzania/205/2010之NA2；來自H7N9 A/Hong Kong/56/2015之NA9)及IBV NA (來自B/Malaysia/2506/2004之BNA7；來自B/Perth/211/2011之BNA2)之唾液酸酶活性的活體外抑制。FNI9及變異體「FNI9-變異體」至「FNI9-v9」之抑制活性展示於圖59A至圖59E中。在此等圖中，「FNI9-v6」、「FNI9-v7」、「FNI9-v8」及「FNI9-v9」如圖67中所示，且與如例如圖70至圖72中所示之FNI9變異序列「-VH.6」、「-VH.7」、「-VH.8」及「-VH.9」不相同。
藉由FACS評估所有三十二(32)個變異體與IAV NA及IBV NA之結合，以排除由於mAb骨架區逆轉為生殖系引起的潛在廣度損失。結果包括FNI9及所產生之FNI9變異體與以下之陽性結合：來自A/Stockholm/18/2007、A/California/07/2009及A/California/07/2009 I23R/H275Y之N1；來自A/South Australia/34/2019、A/Leningrad/134/17/57及A/Washington/01/2007之N2；來自A/Canada/rv504/2004之N3；來自A/swine/Ontario/01911/1/99之N6；來自A/Netherlands/078/03之N7；來自B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)、B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)及B/Lee/10/1940 (祖性)之IBV NA。
確定FNI3、FNI9、FNI17及FNI19之表面電荷及藥物動力學(pK)值。整體表面電荷圖使用PyMOL (The PyMOL Molecular Graphics System，1.2r3pre版，Schrödinger，LLC)產生，提供FNI9之資料(圖60)以及pK值及解析度(以Å為單位報告)。不受理論束縛，抗體表面上之總體正電荷降低可用以藉由細胞表面上之胞飲作用減少抗體之螯合。FNI9與FNI3、FNI17及FNI19相比呈現出更多負表面電荷及相應改善之pK值(資料未展示)。 實例 11 進一步研究
進行額外研究，如圖61至圖69D中所描述及展示。 實例12 FNI9-v5 之 測試
活體外評估FNI9變異抗體FNI9-v5之結合及中和。藉由MUNANA分析活體外量測FNI9及FNI9-v5針對NA之唾液酸酶活性抑制。對於MUNANA分析，將FNI9及FNI9-v5抗體連續稀釋且與固定量之純化神經胺酸酶在96孔盤中混合，且在短培育時間之後，添加受質(MUNANA；2'-(4-甲基傘形基)-α-D-N-乙醯神經胺酸)。將盤在37℃下培育2.5小時，其後，停止反應且藉由螢光量測NA活性。量測針對來自H5N1 A/Vietnam/1203/2004 (圖85A)之N1及來自H3N2 A/Tanzania/205/2010 (圖85B)之N2的唾液酸酶活性抑制。
在存在或不存在位置245處之醣基化部位之情況下FNI9及FNI9-v5 Fab片段與N2抗原之結合親和力藉由表面電漿子共振(SPR；圖86)量測。
FNI9及FNI9-v5對假型病毒粒子中N2唾液酸酶活性之抑制藉由酶聯凝集素分析(ELLA)量測。神經胺酸酶(NA)活性使用ELLA藉由量測當唾液酸由NA唾液酸酶活性裂解時暴露的半乳糖之量來定量。將FNI9及FNI9-v5抗體連續稀釋且與固定量之NA類病毒粒子(僅攜帶NA之假粒子)混合。在短培育時間之後，將混合物轉移至經胎球蛋白塗佈之盤中。在37℃下隔夜培育之後，添加與辣根過氧化酶(HRP)結合之花生凝集素(PNA)用於偵測。比色讀數與NA活性成比例。量測針對A/Switzerland/2017 (圖87A)及A/Kansas/14/2017 (圖87B)之唾液酸酶活性抑制。 實例13 FNI9 抗體中之額外工程化
觀測到FNI17-v19針對在NA位置245處攜帶聚醣之當代H3N2病毒株的活性降低。與FNI17-v19相比，FNI9-v5及FNI9-v13展現類似廣度及效力，但展現針對攜帶聚醣之NA的較高中和活性。歸因於針對N9醣蛋白之較高活性，選擇FNI9-v5而非FNI19-v13用於進一步研究。然而，與親代FNI9相比，FNI9-v5針對一些IAV及IBV病毒株展示較低中和活性。FNI9包含SEQ ID NO.:2之VH胺基酸序列及SEQ ID NO.:8之VL胺基酸序列。藉由在親代FNI9之VH及/或VL中引入一或多個胺基酸突變來產生額外FNI9變異抗體。參見圖70至圖72。圖72中概述之變異體為：
變異抗體 VH胺基酸SEQ ID NO.: VL胺基酸SEQ ID NO.:
FNI9-v13.8 65 68
FNI9-v4.1 46 8
FNI9-v5.1 48 8
FNI9-v6.1 50 8
FNI9-v7.1 52 8
FNI9-v8.1 54 8
FNI9-v9.1 56 8
FNI9-v10.1 58 8
FNI9-v11.1 60 8
FNI9-v12.1 63 8
FNI9-v4.7 46 66
FNI9-v5.7 48 66
FNI9-v6.7 50 66
FNI9-v7.7 52 66
FNI9-v8.7 54 66
FNI9-v9.7 56 66
FNI9-v10.7 58 66
FNI9-v11.7 60 66
FNI9-v12.7 63 66
亦產生包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列及SEQ ID NO.:37中所闡述之VL胺基酸序列的變異抗體。
亦產生包含SEQ ID NO.:45中所闡述之VH胺基酸序列及SEQ ID NO.:8.中所闡述之VL胺基酸序列的變異抗體。
FNI9-v8.1全長重鏈胺基酸序列之一實例提供於SEQ ID NO.:107中。編碼此全長重鏈之聚核苷酸之一實例提供於SEQ ID NO.:109中。FNI9-v8.1全長輕鏈胺基酸序列之一實例提供於SEQ ID NO.:108中。編碼此全長輕鏈之聚核苷酸之一實例提供於SEQ ID NO.:110中。 實例14 新穎 Fc 變異體之設計
人類IgG1 Fc區經工程化以改善功能，以便藉由活化某些FcγR (例如FcγRIIA、FcγRIIIA、FcγRIIB)潛在地促進預防、治療或疫苗效應。在早期感染中增強FcγRIIA之活化可促進抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)及病毒中和。在晚期或已建立之感染中增強FcγRIIA及/或FcγRIIIA之活化可促進ADCP及/或抗體依賴性細胞毒性(ADCC)，促進受病毒感染細胞之清除前阻斷病毒擴散。在感染期間任何時間增強FcγRIIA及/或FcγRIIIA之活化可藉由促進抗原呈現及適應性免疫來提供疫苗效應。
評定Fc變異體且使用迭代發現工作流程開發新變異體。產生大約2500個Fc點突變之初始集合，且收集並分析功能資料。功能資料包括結合相互作用(例如與FcγRI、FcγRIIA (R131)、FcγRIIB、FcγRIIC、FcγRIIIA (V158)、FcRn及C1q)、經由FcγR之訊息傳導、熱穩定性、表現能力、多反應性及半衰期可延長性。開發以機器學習及多因子預測為主之演算法以幫助設計其他變異體。Fc變異體在CHO細胞中表現為抗A型流感IgG1抗體(具有FY1 Fab；Kallewaard等人. Cell 166(3):596-608 (2016)，使用高效液相層析(HPLC)滴定，且使用蛋白A管柱純化。第一盤(2×96，具有或不具有2-去氧-2-氟-L-岩藻醣(2FF)，其抑制岩藻醣基化)含有用於量測已知突變(作為參考)之影響的孔及用於量測新穎突變(單一或組合)之影響的孔。
使用各種分析對Fc變異體進行分析以評估生物物理學、生物化學及生物特性。此等包括聚集(例如藉由尺寸排阻層析法)、熱穩定性、醣基化、結構、訊息傳導及結合(例如使用表面電漿子共振或以中尺度發現為主之分析)。亦測試效應功能，包括抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。評估單一Fc突變之結合特徵，鑑別至多三個突變之組合，其對IIA/IIB比率增加具有最高影響，且包括其他變異。分析所得其他變異體。感興趣的特徵包括對FcγRIIa之親和力增加且對FcγRIIb之親和力降低，或反過來。使用不偏叢集分析及具有手動分析之雷達繪圖，鑑別出九個Fc變異體叢集，其對各種FcγR及FcRn具有強烈增加、增加、相似或相同、降低或強烈降低之親和力。
某些Fc變異體之結合親和力(藉由MSD量測)、Tm及生產效價展示於圖73中。在最初預測提高FcγRIIA/FcγRIIB結合之比率的十個變異體，此等中之五個(IIA/IIB值在圖73中以粗體展示)提高比率，此藉由MSD量測。 實例15 Fc 變異體之進一步測試
基於自實例14中所描述之第一盤之變異體獲得的結果，產生第二盤(2×20，具有及不具有2FF)之變異體。表現且純化二十個Fc變異抗體以評估效價及產量。在不具有或具有2FF之情況下表現變異體以確定岩藻醣基化對效價及產量之影響(圖74A至圖74C)。圖4A展示使用蛋白A管柱確定之抗體效價。在無2FF之細胞中表現之變異體的平均效價較高。圖74B展示由二次重複純化(輸入體積為900 μL)產生的產量，每次純化二次溶離。圖74C概述理論最大產量、平均產量、平均回收率及第二次溶離之蛋白質濃度(以µg /ml為單位量測)。Fc變異體使用二次溶離進行純化且在確定產量之前合併。在無2FF之情況下表現之純化Fc變異體中，平均產量較高。
使用尺寸排阻層析法分析純化抗體(+2FF及無2FF)之二聚潛能，且評估Tm。對於C220P及R292P_Y300L變異體(僅+2FF樣品)觀測到低分子量物種。某些Fc變異體之Tm值在WT之4.2℃內；相比之下，GAALIE Fc變異體之Tm相對於WT低大約14℃(在二個盤上測試)。除組合突變體G236A_R292P_I377N之外，無法解析包括R292P之變異體的CH2去摺疊。
測試(無2FF) Fc變異體與FcγRIIA-H (高親和力)、FcγRIIA-R (低親和力)、FcγRIIB、FcγRIIIA-V (高親和力)、FcγRIIIA-F (低親和力)及FcRn (在pH 6下)之結合且將其表現為相對於野生型Fc之變化倍數(圖75A)。FcγRIIA-H/FcγRIIB結合之比率以及C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)資料亦展示於圖75B中。圖76中所示之變異體未經2FF處理。經由不同FcγR之抗體訊息傳導使用報導子分析(Promega TM螢光素酶報導細胞；3次實驗之平均值)來量測。測試岩藻醣基化Fc變異體經由所示所有四種FcγR受體之訊息傳導(圖77A)，同時測試去岩藻醣基化變異體經由FcγRIIIA-V及FcγRIIIA-F之訊息傳導(圖77B)。選擇許多變異Fc用於進一步表徵。
此等變異體(岩藻醣基化及去岩藻醣基化二者)以及包含已知突變(例如G236A_S239D_A330L_I332E (「GASDALIE」)；G236A_A330L_I332E (「GAALIE」)之比較變異Fc的特徵概述展示於圖78中。
進一步研究如圖82至84I中所示及描述進行。圖82至圖83B展示抗流感(HA)抗體「FY1」Fc變異體之FcγR活化及結合。圖84A至圖84I係關於抗HBsAg (HBC34-v40)Fc變異抗體且展示：使用抗體及HBsAg對人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)之活化及其細胞介素產生；人類HBsAg特異性CD4+記憶T細胞之活化；HBsAg特異性TCR轉殖基因Jurkat報導CD4+ T細胞之活化；抗體:HBsAg免疫複合體(IC)對來自經HBV疫苗接種之huFcγR小鼠之CD4+記憶T細胞的再刺激；及HBC34-v40 Fc變異體對人類FcγR之結合動力學(包括相對於對照Fc之變化倍數)。 實例16 額外 FNI9 變異抗體之測試
進一步表徵如實例13中所描述之FNI9變異抗體。本文中展示之「FNI9」及「FNI9-v1.1」抗體(FNI9-v1.1在例如圖89至圖93D、圖95A、圖95B、圖96A、圖97A、圖97B及其他圖中提及)具有相同VH及VK胺基酸序列。FNI9-v1.1與FNI9變異體同時產生以控制生產條件中之任何差異。
FNI9變異抗體之生產效價及尺寸排阻層析法(SEC)概況展示於圖90中。藉由MUNANA分析量測FNI9變異體針對N1、N2及N9 NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(圖91A至圖91B)。藉由ELLA量測FNI9變異體針對假病毒衍生之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(圖92A至圖92B)。
藉由流動式細胞測量術量測FNI9變異抗體與哺乳動物細胞中暫時表現之NA的結合(圖93A至圖93D)。圖93A展示與來自A/California/07/2009及A/California/07/2009 I223R/H275Y之N1以及A/Washington/01/2007及A/Washington/01/2007 R292K中之N2的結合。圖93B展示與來自A/Switzerland/8060/2017、A/Kansas/14/2017、A/Cambodia/2020及A/South Australia/34/2019之N2的結合。圖93C展示與來自B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)、B/Brisbane/2008 (Victoria)、B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)及B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)之IBV NA的結合。圖93D展示與來自A/Leningrad/134/17/57及A/Perth/16/2009之N2以及來自A/Anhui/1/2013之N9的結合。
某些FNI9變異抗體對IAV及IBV NA抗原之結合親和力使用Biacore儀器藉由SPR (圖94)量測。NA固定於抗Avi晶片上且將各FNI9變異Fab之連續稀釋液添加至固定的配位體上。即時量測締合及解離動力學，且使用1:1結合模型外推動力學參數且計算KD值。親和力評定為與親代抗體「FNI9-v1.1」相比之變化倍數。測試「FNI9-v4.1」、「FNI9-v8.1」、「FNI9-v9.1」及「FNI9-v13.8」(表現為IgG1)與IBV NA、N1、IAV N2 (在位置245處具有及不具有醣基化)及IAV N9之結合。
藉由SPR量測來自FNI9-v1.1、FNI9-v4.1、FNI9-v8.1及FNI9-v13.8之Fab片段對N2抗原的結合親和力(圖95A至圖95B)。測試與在位置245處具有醣基化(標記為「+gly245」)或不具有醣基化(標記為「-gly245」)之A/Tanzania/205/2010、A/South Australia/34/2019及A/HongKong/2671/2019的結合。圖95A展示報告為以nM為單位之平衡常數KD的結合親和力，而圖95B展示報告為與來自親代抗體FNI9-v1.1之Fab相比的變化倍數的結合親和力。
FNI9-v1.1 (圖96A)、FNI9-v8.1 (圖96B)及FNI9-v9.1 (圖96C)與N9 NA之結合動力學藉由生物層干涉法(BLI；圖96A至圖96C)量測。
FNI9-v1.1、FNI9-v8.1、FNI9-v4.1、FNI9-v9.1及FNI9-v13.8之活體外中和活性在針對一組季節性IAV (在位置245處具有及不具有醣基化)之微量中和分析中量測(報告為以µg/ml為單位之EC50)。病毒係獲自國際試劑資源(International Reagent Resource) (CDC, Atlanta, Georgia, USA)及生物參考材料中心(Centre for Biological Reference Materials) (NIBSC, Potters Bar, UK)。將抗體連續稀釋且添加至先前用確定的病毒輸入感染30分鐘之MDCK-LN細胞上。在24小時之後，細胞感染經由病毒核蛋白染色量測且經由細胞成像進行分析。繪製劑量反應曲線以內插抗體之IC50 (半最大抑制濃度)及IC90，其報告為二個獨立實驗之幾何平均值(圖97A至圖97B)。
藉由MUNANA分析量測某些FNI9變異體針對N1、N2及N9 NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(圖98A至圖98G)。測試FNI9-v4.1、FNI9-v4.7、FNI9-v5.1、FNI9-v5.7、FNI9-v6.1、FNI9-v6.7、FNI9-v7.1、FNI9-v7.7、FNI9-v8.7、FNI9-v8.1及FNI9-v13.8抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對A/Vietnam/1203/2004中之N1 (圖98A)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (圖98B)、A/Switzerland/8060/2017中之N2 (圖98C)、A/South Australia/34/2019中之N2 (圖98D)、A/HongKong/2671/2019中之N2 (圖98E)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (+Gly245) (圖98F)及A/Hong Kong/56/2015中之N9 (圖98G)的唾液酸酶活性抑制。
藉由MUNANA分析量測某些FNI9變異體針對N1、N2及N9 NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(圖99A至圖99G)。測試FNI9-v6.1、FNI9-v9.1、FNI9-v9.7、FNI9-v11.1、FNI9-v11.7、FNI9-v12.1及FNI9-v12.7抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對A/Vietnam/1203/2004中之N1 (圖99A)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (圖99B)、A/Switzerland/8060/2017中之N2 (圖99C)、A/South Australia/34/2019中之N2 (圖99D)、A/HongKong/2671/2019中之N2 (圖99E)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (+Gly245) (圖99F)及A/Hong Kong/56/2015中之N9 (圖99G)的唾液酸酶活性抑制。
藉由ELLA量測某些FNI9變異體針對假病毒衍生之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(圖100A至圖100F)。測試FNI9-v4.1、FNI9-v4.7、FNI9-v5.1、FNI9-v5.7、FNI9-v6.1、FNI9-v6.7、FNI9-v7.1、FNI9-v7.7、FNI9-v8.7、FNI9-v8.1及FNI9-v13.8抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對H7N3 A/Ck/Ja/2017 (圖100A)、H5N6 A/Ck/Suzhou/2019 (圖100B)、H5N6 A/Hangzhou/2021 (圖100C)、H7N7 A/Ck/621572/03 (圖100D)、H5N8 A/Ck/Russia/2020 (圖100E)及H7N9 A/Anhui/1/2013 (圖100F)之唾液酸酶活性抑制。
藉由ELLA量測某些FNI9變異體針對指定假病毒衍生之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。測試FNI9-v6.1、FNI9-v9.1、FNI9-v9.7、FNI9-v11.1、FNI9-v11.7、FNI9-v12.1及FNI9-v12.7抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對H7N3 A/Ck/Ja/2017 (圖101A)、H5N6 A/Ck/Suzhou/2019 (圖101B)、H5N6 A/Hangzhou/2021 (圖101C)、H7N7 A/Ck/621572/03 (圖101D)、H5N8 A/Ck/Russia/2020 (圖101E)及H7N9 A/Anhui/1/2013 (圖101F)之唾液酸酶活性抑制。 實例17 活體外效力 ：FNI9 、FNI19-v3 、FNI17-v19 及FNI17-v19-LS
藉由核蛋白(NP)染色量測FNI9、FNI19-v3、FNI17-v19及FNI17-v19-LS針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之活體外效力。結果展示於圖102A至圖102B中，且矩形指示在位置245處攜帶醣基化之第II組(H3N2) NA。亦量測比較抗體1G01之中和活性。 實例18 某些 FNI 抗體之活體外效力對比活體內預防性活性
測試FNI9之活體外效力。圖105展示FNI9針對H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016之活體外中和活性。亦量測抗HA比較抗體FM08-LS之中和活性。
在H3N2 IAV感染之鼠類BALB/c模型中評估FNI9、FNI9-v8.1及FNI17-v19之預防性活性。簡言之，BALB/c小鼠用FNI9-v8.1、FNI9或FNI17-v19以3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg、0.1 mg/kg或0.03 mg/kg處理，隨後感染H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016。感染後四天收集之來自組織之肺勻漿中的病毒效價展示於圖107中。亦在經OSE (10 mg/kg或20 mg/kg)或抗HA比較抗體M08_LS處理之小鼠中量測病毒效價。 實例 19 額外活體外效力對比活體內預防性活性研究
測試FNI9及FNI17-v19之活體外效力。圖106展示FNI9及FNI17-v19針對H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016之活體外中和活性的劑量反應曲線。
在H3N2 IAV感染之鼠類BALB/c模型中評估FNI9、FNI9-v8.1及FNI17-v19之預防性活性。簡言之，BALB/c小鼠用FNI9-v8.1、FNI9或FNI17-v19以3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg、0.1 mg/kg或0.03 mg/kg處理，隨後感染H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016。感染後四天收集之來自組織之肺勻漿中的病毒效價展示於圖107中。亦在經OSE (10 mg/kg或20 mg/kg)或抗HA比較抗體M08_LS處理之小鼠中量測病毒效價。 實例 20 預防性活性： FNI9-v8.1
在IAV及IBV感染之鼠類模型中量測FNI9-v8.1之預防性活性。簡言之，BALB/c小鼠用FNI9-v8.1以3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg處理，隨後感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34 (圖108A)、H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 (圖108B)、B/Victoria/504/2000 (Yamagata) (圖108C)或B/Brisbane/60/2008 (Victoria) (圖108D)。感染後四天收集之來自組織之肺勻漿中的病毒效價展示於圖108A至圖108D中。圖109A至圖109D展示報告為對數溶菌斑形成單位形成單位/公克組織(Log pfu/g)之效價資料。亦在經OSE (10 mg/kg或20 mg/kg)或抗HA比較抗體M08_LS處理之小鼠中量測病毒效價。 實例 21 活體外效力 ：FNI9-v8.1
測試FNI9-v8.1針對一組H1N1 IAV、H3N2 IAV (在位置245處具有或不具有醣基化部位)及IBV之活體外中和資料(圖110A及圖110B)。
FNI9-v8.1針對所有病毒株H1N1 IAV、H3N2 IAV、H3N2 IAV (在位置245處不具有醣基化部位)、H3N2 IAV (在位置245處具有醣基化部位)及IBV之活體外中和資料的概述展示於圖111中。 實例 22 活體外效力 ：FNI9-v8.1 、FNI17 及FNI19
藉由核蛋白(NP)染色量測FNI9-v8.1、FNI17及FNI19針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之活體外效力。結果展示於圖112A至圖112B中。亦量測比較抗體1G01之中和活性。 實例23 活體外效力 ：FNI9-v8.1 及FM08_LS 之組合活性
針對H1N1 A/Puerto Rico/8/34 (圖113A及圖113B)及H3N2 A/Tasmania/503/2020 (圖113C及圖113D)測試FNI9-v8.1 (抗NA)及FM08 (抗HA)之組合活體外中和活性。中和矩陣(以µg/ml為單位報告)展示於圖113A及圖113C中。協同圖展示於圖113B及圖113D中。 實例 24 抗體效應功能：FNI9-v8.1
評估抗體效應功能。量測在天竺鼠補體存在下由FNI9-v8.1-LS介導之對感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34之MDCK-LN細胞的補體依賴性細胞毒性(CDC) (圖114A至圖114B)。亦量測抗HA比較抗體FM08_LS及Fc緘默陰性對照FNI9-v8.1-GRLR之CDC。CDC在圖114A中報告為抗體依賴性殺死%且在圖114B中報告為抗體依賴性殺死之曲線下面積。
量測在人類自然殺手細胞存在下由FNI9-v8.1-LS介導之對感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34之A549細胞的抗體依賴性細胞毒性(ADCC) (圖115A至圖115B)。亦量測抗HA比較抗體FM08_LS及Fc緘默陰性對照FNI9-v8.1-GRLR之ADCC。ADCC在圖115A中報告為抗體依賴性殺死%且在圖115B中報告為曲線下面積。 實例 25 藥物動力學研究：FNI9-v5 及FNI9-v8.1
在SCID tg32小鼠中測試FNI9-v5及FNI9-v8.1之活體內藥物動力學。抗體表現為在Fc中具有M428L及N434S突變之重組IgG1m3。在投予後大約60天內，SCID tg32小鼠中FNI9-v5及FNI9-v8.1隨時間推移之抗體濃度(報告為µg/ml)分別展示於圖125A及圖125B中。圖126A至圖126E概述FNI9-v5-LS (「FNI9-v5-rIgG1-LS」)及FNI9-v8.1-LS (「FNI9-v8.1-rIgG1m3-LS」)在SCID tg32小鼠中之活體內藥物動力學資料(每種抗體n=五隻個別動物)。 實例26 組織交叉反應性(TCR) 評定 ：FNI9-V5 及FNI9-V8.1
使用免疫組織化學染色在一組人類組織中評定FNI9-v5及FNI9-v8.1抗體之組織交叉反應性(TCR)的潛能。
為了促進免疫組織化學偵測，FNI9-v5、FNI9-v8.1 (各自表現為在Fc中具有M428L及N434S突變之重組IgG1m3)及同型對照(「ctrl-IgG1」，靶向非流感抗原)使用商業Alexa Fluor™ 488蛋白質標記套組與Alexa Fluor 488結合。藉由量測280 nm下之吸光度確定結合蛋白質之存在。各別結合抗體蛋白質濃度為2.17 mg/mL (FNI9-v5)、1.49 mg/mL (FNI9-v8.1)及1.62 mg/mL (ctrl-IgG1)。各別標記程度為1.63 (FNI9-v5)、0.86 (FNI9-v8.1)及2.56 (ctrl-IgG1)。
製備來自流感陽性及流感陰性細胞之冷凍切片作為對照且製備一組用於檢查之人類組織。該組包括腎上腺、膀胱、血細胞、骨髓、乳房、腦-小腦、腦-皮質、內皮、眼、輸卵管、食道、胃竇、胃體、十二指腸、迴腸、大腸、心臟、腎臟、肝臟、肺、淋巴結、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經、垂體、胎盤、前列腺、皮膚、脊髓、脾臟、橫紋肌、睪丸、胸腺、甲狀腺、扁桃體、輸尿管、子宮-子宮頸及子宮-子宮內膜組織。為了評定組織生存力，該組人類組織經免疫組織化學染色以展現波形蛋白、細胞角蛋白及溫韋伯氏因子(von Willebrand factor)。組織生存力之評定指示該組人類組織係有活力的。
在對照樣品(流感陽性及陰性細胞)中滴定FNI9-v5-AF488。在整個流感陽性細胞(陽性對照)製備中觀測到個別細胞之陽性膜及細胞質濃度依賴性染色。在流感陰性細胞(陰性對照)中未觀測到FNI9-v5-AF488陽性染色。在具有ctrl-IgG1-AF488或抗體稀釋劑之對照樣品中未看到染色。
在陽性對照滴定之載玻片評估之後，選擇三種濃度用於在人類組織組中進行測試：1.25、0.16及0.020 µg/mL。為確認用於FNI9-v5-AF488之染色方法及濃度與FNI9-v8.1-AF488一起使用的適合性，完成方法轉移，其中對照樣品在三種先前使用之濃度下用FNI9-v8.1-AF488染色：1.25、0.16及0.020 µg/mL。在FNI9-v8.1-AF488之情況下在陽性對照樣品中觀測到的染色與先前在FNI9-v5-AF488之情況下觀測到的染色一致，且因此認為染色方法及濃度適用於使用FNI9-v8.1-AF488之組織滴定。
在該組人類組織中進行組織滴定。在陽性對照樣品中觀測到與對照滴定中觀測到之染色一致的在FNI9-v5-AF488之情況下的陽性染色，且在FNI9-v8.1-AF488之情況下觀測到可比染色。在陰性對照樣品中在FNI9-v5-AF488或FNI9-v8.1-AF488之情況下未觀測到陽性染色。在人類組織中之任一者中，在FNI9-v5-AF488 (資料未展示)或FNI9-v8.1-AF488 (圖127A至圖127C)之情況下未觀測到陽性染色。 實例27 針對低病原性 IAV 測試 FNI 抗體
使用活體外分析評估FNI抗體對低病原性IAV中之神經胺酸酶的抑制。
藉由ELLA評估抗NA mAb FNI9-v8.1、FNI17-v19及FNI19-v3針對以僅NA為主之假型的抑制活性，該等假型攜帶N3、N4或N5，代表地方性低病原性A型禽流感病毒(LPAIV) (圖128A至圖128C)。藉由MUNANA分析評估相同抗NA mAb針對以僅NA為主之假型的抑制活性，該等假型攜帶N1、N2、N6或N8，代表在豬、狗及海豹中循環之地方性低病原性哺乳動物IAV (圖129A至圖129F)。1G01亦在ELLA及MUNANA分析二者中作為對照抗體進行測試。 實例28 針對抗性IAV 突變體測試FNI 抗體 活體外抗性研究
藉由大批篩選病毒群體或藉由在遞增劑量之抗體存在下連續繼代病毒來分離抗體抗性突變體。對於前一方法，將MDCK細胞以30,000個細胞/孔塗鋪於96孔盤(Corning CON3596)中之100 μl培養基(MEM + GlutaMAX (ThermoFisher 41090-028) + 10% FBS Hyclone (VWR SH30070.03) + 50 U/ml青黴素/50 ng/ml鏈黴素(Bioconcept 4-01F00-H) + 100 μg/ml康黴素(Life Technologies 15160047) + 1% NEAA (Bioconcept 5-13K00-H) + 1%丙酮酸鈉(Life Technologies 11360039) + 0.05 mM β-巰基乙醇(Bioconcept 5-69F00-E))中，且在37℃ 5% CO2下培養隔夜。第二天，A/Hong Kong/1/1968病毒輸入與100 μg/ml之FNI19抗體一起在37℃下預培育30分鐘。隨後，在用200 μl/孔PBS (Sigma-Aldrich D8537-500ML)進行2次洗滌步驟之後，將病毒/抗體混合物在感染培養基(補充有1 μg/ml TCPK-胰蛋白酶(Bioconcept LS003750)及10 μg/ml康黴素之MEM)中進行限數稀釋，以在100 μl中以MOI=0.001感染MDCK細胞。三小時後，添加100 μL/孔含有100 μg/ml FNI19之感染培養基，且細胞再培育72小時。培育時間之後，在MUNANA緩衝液(MES 32.5 mM/CaCl2 4 mM，pH 6.5)中製備20 mM MUNANA受質(Sigma 69587-5MG)溶液，且將50 μl/孔分配至96孔盤中以與等量分析培養物上清液一起在37℃下培育1小時。添加一百微升/孔之停止溶液(0.2 M甘胺酸/50% Et-OH，pH 10.7)，且用Cytation 5 (Biotek-Agilent)量測445 nm下之螢光。螢光臨限值設定為5×未感染細胞之訊息，且處理高於該截止值之上清液以用於NA定序。根據製造商說明書，使用Qiagen QIAmp病毒RNA套組(Qiagen 52904)自140 μl培養物上清液提取病毒基因體RNA。使用SuperScript III RT套組(Life Technologies 18080044)用引子Uni12 (5'-AGC RAA AGC AGG-3' (SEQ ID NO.:113))合成cDNA。使用Q5 HotStart DNA聚合酶套組(Bioconcept M0493L)用特異性引子正向：5'-caattggctctgtctctct-3' (SEQ ID NO.:114)及反向：5'-atgaaattgatgttcgccc-3' (SEQ ID NO.:115)藉由PCR擴增神經胺酸酶基因。
將PCR產物自1.5%瓊脂糖凝膠純化且用3種不同引子定序：5'-caattggctctgtctctct-3' (SEQ ID NO.:114)、5'-gaagagccgatactagaa-3' (SEQ ID NO.:116)、5'-ttctagtatcggctcttc-3' (SEQ ID NO.:117)。用CLC Main Workbench 22軟體進行與A/Hong Kong/1/1968神經胺酸酶之序列比對。
對於連續繼代抗性實驗，將MDCK-LN細胞以120,000個細胞/孔接種於24孔盤中，且在生長培養基(DMEM，10% [FBS]、0.01 M HEPES、100 U/mL青黴素-100 μg/mL鏈黴素)中在37℃下培養隔夜。二十四小時後，將H1N1 A/California/07/2009或A/New Caledonia/20/99病毒儲備液及FNI9在含有0.5 μg/mL經TPCK處理之胰蛋白酶的感染培養基中1:1稀釋且混合，以得到最終濃度1000 PFU/孔病毒及0.5×IC50之FNI9 (47.35 ng/mL)。將病毒:抗體混合物置放於37℃下且預複合30分鐘。包括細胞及病毒對照孔用於CPE比較物。將細胞在DMEM中洗滌二次，且隨後將100 μL病毒:抗體複合混合物、病毒及細胞對照添加至孔中，在37℃下持續1小時。在病毒吸附之後，將細胞在DMEM中洗滌二次，隨後將500 μL稀釋抗體或含有0.5 μg/mL經TPCK處理之胰蛋白酶的感染培養基添加回其各別孔中。將盤在37℃下培育，且一旦病毒:抗體孔中存在超過50% CPE，則收集病毒。病毒上清液以120 μL等分試樣在-80℃下冷凍，一個等分試樣用於下一抗性繼代，一個等分試樣添加至360 μL DNA/RNA Shield用於RNA提取，且保存一個等分試樣用於額外繁殖。對於第2代，用原始0.5×及1×IC50濃度之FNI9重複該過程，其中選擇展示CPE之最高抗體濃度用於下一繼代。對於各額外繼代，重複選定孔之濃度以及2×濃度。對於CA09研究，病毒繼代8次且最終濃度為64×IC50之FNI9 (3200 ng/mL)。
為了鑑別基因體突變，根據製造商說明書使用Zymo QuickRNA病毒套組(R1034)提取病毒基因體RNA，且使用Qubit RNA BR分析套組(Invitrogen，Q10210)來量測RNA濃度。使用帶有Platinum Taq DNA聚合酶之SuperScript III一步RT-PCR系統(Invitrogen，12574018)用MBTuni-12 (5'-ACGCGTGATCAGCAAAAGCAGG-3' (SEQ ID NO.:118))及MBTuni-13 (5'-ACGCGTGATCAGTAGAAACAAGG-3' (SEQ ID NO.:119))引子合成cDNA，且使用AMPure XP磁性珠粒(Beckman Coulter，A63880)純化PCR片段。接下來，使用NEBNext Ultra II FS DNA Library Prep Kit for Illumina (NEB，E6177L)使擴增子片段化，隨後使用NEBNext Multiplex Oligos for Illumina (NEB，7335L)添加轉接子及索引。使用NEBNext樣品純化珠粒純化DNA樣品，且隨後使用Qubit DNA HS分析套組(Invitrogen，Q32854)定量，且使用D500 tape station (Agilent，G2964AA)驗證。最後，將樣品稀釋且合併，隨後使用帶有MiSeq試劑套組v3 (MS-102-3003)及PhiX Control v3 (FC- 110-3001)之MiSEQ分析儀定序。NA突變I223R及S247N分別首先出現在第6代及第7代中，且截至第8代各自達到總NGS讀段之約50%。
鑑別出一組具有突變之NA，該等突變經由活體外抗性研究鑑別為能夠降低但不消除FNI mAb之結合或活性。使用攜帶突變NA之假型藉由MUNANA分析量測針對該組之神經胺酸酶酶活性的抑制(圖130A至圖130G)。 深度突變掃描概況
深度突變掃描方法用於確定NA胺基酸突變如何影響mAb結合。產生基於N1 A/California/07/2009之細胞表面呈現庫，其中包括170個所選胺基酸之所有變異體。突變殘基包括與獲自以下之結合Fab在6.0 Å距離內之表位殘基：cryo-EM (與N2/A/Tanzania/205/2010複合之FNI17 Fab及FNI19 Fab，此研究)及晶體結構(具有N2/A/Tanzania/205/2010之NI3 Fab (未公開)、1E01 Fab (PDB 6Q20)、Mem5 Fab (PDB 2AEP)及B10 Fab (PDB 6N6B)。另外，包括具有GISAID中過去20年H1N1及H5N1之已知序列變異的殘基。
庫構築、慢病毒產生、次世代定序及資料解褶積藉由麻省理工學院與哈佛大學布洛德研究所(Broad Institute of MIT and Harvard)之基因擾動平台(Genetic Perturbation Platform，GPP)進行。對於庫合成，合成慢病毒載體pMT025，其編碼野生型N1 A/California/07/2009 ORF，經由2×G4S連接子添加C端最小HA標籤，且使用該慢病毒載體作為模板產生變異體庫池。具有分別含有NheI及MluI之5'及3'側接轉接子之全長變異體池在Twist Biosciences處合成。在限制消化選殖及pDNA擴增之後，使用Illumina Nextera XT平台藉由NGS評定pDNA庫之變異體組成。偵測到所有3472個經設計變異體，且變異體之分佈大致為對數常態的，跨變異體之讀段計數有1.3倍標準差。慢病毒粒子根據可經由GPP獲得之方案(http://www.broadinstitute.org/rnai/public/resources/protocols)產生。將庫以約0.3之感染倍率轉導至FreeStyle™ 293-F細胞(ThermoFisher Scientific)中，且維持在每個變異體2,000個細胞之平均表示下。
對於篩選，藉由流動式細胞測量術確定結合至細胞表面呈現之NA的mAb。mAb經由游離胺結合直接結合至Alexa Fluor 647 (ThermoFisher Scientific)，以使得能夠進行以螢光為主之偵測。在嘌呤黴素選擇之後5-7天收穫含有NA變異體庫之293-F細胞，將其在含有3%牛血清白蛋白之PBS中洗滌，隨後與Alexa Fluor 647結合之mAb一起在4℃下於暗處培育1小時。洗滌細胞，隨後用4%多聚甲醛固定，隨後在二個獨立分選儀(BD Aria Fusion或Sony MA900)上以技術雙重複進行分選。使用LIVE/DEAD™可固定藍色死細胞染色套組(ThermoFisher Scientific)將死細胞自分析排除。每個技術重複製備最少6000萬個細胞用於FACS。表現NA變異體庫之293-F細胞藉由FACS分選為陰性、低及高mAb結合分組，且各分組中之變異體分佈藉由NGS確定，如下文所描述。NA ORF包括最小c端HA標籤，其亦使用Alexa Fluor 488抗HA.11表位標籤抗體(BioLegend)進行篩選以確定170個所選擇殘基中之各者處的突變如何影響一般蛋白質表現。對於各篩選，收集最少500萬個未分選之庫細胞以充當未分選對照。
分別用QIAamp DNA FFPE組織套組(具有以下修改：0.3 M NaCl添加至溶解緩衝液中且在56℃下培育延長至4小時)及QIAamp DNA血液套組(Qiagen)自經分選樣品及未分選對照中分離gDNA。對gDNA進行準備以用於NGS，如先前所描述112。簡言之，ORF藉由PCR用以下引子(正向：5'-ATTCTCCTTGGAATTTGCCCTT-3' (SEQ ID NO.:120)，反向：5'-CATAGCGTAAAAGGAGCAACA-3' (SEQ ID NO.:121))自gDNA擴增且使用Illumina Nextera XT套組處理以用於NGS。使用Nextseq2000定序平台對樣品進行定序，以2×150個循環獲得雙端讀段。使用突變體偵測軟體ASMv1.0進行序列資料處理及變異體識別，如先前所描述112。各樣品之標準化讀段經log2轉換。計算比較各庫變異體之負分選分組與未分選池以及低及高結合FACS分選分組的Log2變化倍數值，且接著針對抗HA標籤及抗NA抗體二者求平均。潛在逃脫定義為具有接近緘默突變(與緘默突變之平均值相距最大二個標準差)之HA標籤訊息及具有接近終止密碼子突變(與終止密碼子突變之平均值相距最大三個標準差)之抗NA訊息的逃脫。
分析序列守恆。H3N2 (IAV)、H1N1 (IAV)、H5N1 (IAV)、H7N9 (IAV)、H5N8 (IAV)、H5N6 (IAV)、Victoria (IBV)及Yamagata (IBV) NA蛋白序列自GISAID (www.gisaid.org)擷取。蛋白質序列使用MAFFT [PMID: 23329690]與參考NA序列比對。所使用之序列在2022年10月擷取，且用於比對之各別參考為用於H1N1序列之A/California/07/2009 (NC_026434.1)、用於H3N2序列之A/NewYork/392/2004 (YP_308842.1)以及用於Victoria及Yamagata IBV序列之8B/Yamagata/16/1988 (AAN39803.1)。對於圖121A至圖121H，所使用之序列在2022年7月擷取，且用於比對之各別參考為用於H3N2、H1N1、H5N1、H7N9 H5N8、H5N6序列之A/NewYork/392/2004 (YP_308842.1)以及用於Victoria及Yamagata IBV序列之B/Yamagata/16/1988 (AAN39803.1)。用R (https://www.R-project.org/) v.4.0.4分析多序列比對。標識圖用R套件「ggseqlogo」v.0.1 [PMID: 29036507]產生。每個殘基之守恆用R套件「Biostrings」v.2.58.0 (bioconductor.org/packages/Biostrings)計算。
鑑別出一組具有突變之NA，該等突變經由深度突變掃描(DMS)鑑別為能夠降低但不消除FNI mAb之結合或活性。使用攜帶突變NA之假型藉由MUNANA分析量測針對該組之神經胺酸酶酶活性的抑制(圖131A至圖131B)。 實例29 抗HA 莖抗體之預防性活性可受益於與FNI9 NA 抑制抗體之聯合
為了評估FNI抗體與抗HA抗體之組合的預防性活性，設計活體內研究。向小鼠(BALB/c小鼠，7-8週齡)預防性投予無效劑量之抗HA莖抗體(0.25 mg/kg或0.125 mg/kg)與抗NA FNI抗體呈1:1之比的組合。向小鼠投予抗體，隨後感染H3N2 A/Hong Kong/1/68 (圖132A及圖132C)或H1N1 A/Puerto Rico/8/34 (圖132B)。抗體經鼠化(在圖132A中由「mu」字首指示)或為人類(圖132B及圖132C)。抗NA抗體包括FNI9-v8.1-LS、FNI17-LS及FNI19-v3-LS，且所使用之抗HA抗體為FM08。如所指示，抗體以0.25 mg/kg或0.125 mg/kg之劑量投予。亦量測經僅FNI抗體或媒劑對照預處理之小鼠的體重減輕。 實例30 FNI9-V8.1 及奧司他韋針對H5N1 及H7N9 高病原性流感病毒之預防性活性 目的
此研究之目標為評定第0天至第14天FNI9v8.1 (在本實例中亦稱為「mAb-9v8.1」)及奧司他韋對雌性小鼠(來自用於評估抗流感藥物且由用於流感病毒疾病模型之歷史資料支撐的小鼠模型)中對H5N1及H7N9高病原性禽流感病毒(HPAIV)之反應的預防功效。第14天之指標包括臨床觀測結果、體重減輕及存活率。 測試及對照材料
適當處理組中之小鼠在感染之前24小時，在第-1天經由靜脈內注射接受單次劑量之mAb-9v8.1或媒劑對照。奧司他韋處理組中之小鼠基於第-2天個別體重在第-1天至第5天每天一次經由經口胃管灌食接受奧司他韋(總計7次劑量)。所有研究動物均在第0天感染高病原性H5N1或H7N9病毒之致命攻擊。 表4.媒劑(無菌磷酸鹽緩衝鹽水(PBS))
鑑別 無菌PBS，pH 7，美國藥典(USP)級
描述 無菌PBS
製造商 --
批號 --
穩定性 --
再驗日期 --
純度 --
濃度 10 mM PO 4 3−、137 mM NaCl及2.7 mM KCl
製備及處理 投予之前在室溫(RT)下平衡
儲存 2-8℃
劑量 N/A
給藥途徑 靜脈內(IV)注射
劑量體積 基於第-2天個別體重，不超過250 µL
投予 基於第-2天個別體重，在第-1天(感染前24小時)單次投予
安全性 最低安全性要求包括在處理時始終戴護目鏡(或等效物)、手套且穿實驗服
劑量調整 N/A
表 5. 測試品 1 ： FNI9v8.1
描述 經工程化之人類單株抗體，重組，經純化
製造商 Vir Biotechnology
批號 -
再驗日期 N/A
化學級別 非醫藥級
穩定性 6個月
滲透重量莫耳濃度 280-315 mOsm/Kg
熱原性 在靈敏度＜0.05 EU/mg之情況下沒有可偵測的內毒素
無菌性 無菌
pH 7.4
純度 藉由親和層析純化
濃度 -
製備及處理 在無菌環境中處理
儲存 ≤-70℃直至使用，隨後4℃
劑量 3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg
給藥途徑 靜脈內(IV)注射
劑量體積 10 mL/kg
投予 基於第-2天個別體重，在第-1天(流感感染前24小時)單次投予
安全性 無危險，標準PPE足夠-不用於人類用途
劑量調整 基於先前活體內研究
此研究中使用之FNI9v8.1抗體包含：分別SEQ ID NOs: 55、4及5之CDRH1-3序列以及SEQ ID NOs: 9、10及11之LCDR1-3序列；SEQ ID NO: 54之VH序列及SEQ ID NO: 8VL序列；以及SEQ ID NO: 107之重鏈序列及SEQ ID NO: 108之輕鏈序列。 表6.測試品2：奧司他韋(亦稱為TAMIFLU TM)
描述 神經胺酸酶抑制劑(粉末)
製造商 MedChemExpress
批號 HY-17016-500MG
再驗日期 --
化學級別 醫藥級
穩定性 在4℃下至多7天(研究第-1天至第5天) (在注射用無菌水中復原之後)
滲透重量莫耳濃度 --
無菌性 無菌
pH --
濃度 1.0 mg/mL (在注射用無菌水中復原之後)
製備及處理 在無菌環境中處理
儲存 4℃ (一旦再懸浮)
劑量 10 mg/kg
給藥途徑 經口胃管灌食
劑量體積 基於第-2天個別體重，不超過20 µL/kg，根據關於小鼠之經口胃管灌食之可接受體積的BRT政策
投予 基於第-2天個別體重，在第-1天至第5天每天(總計7次劑量)。
安全性 安全-無危險
劑量調整 基於活體內研究
表7. 流感H5N1 病毒(HPAIV 病毒株)
鑑別 流感
供應商 --
目錄號 --
批號 --
效價 --
處理 在使用之前，將病毒等分試樣在室溫下解凍。凍融降低病毒效價，因此各等分試樣為一次性等分試樣。
儲存 ≤ -70℃
感染劑量 -
劑量體積 50 µL/小鼠
途徑 鼻內(i.n.)
投予 第0天單次投予
劑量調整 選擇此感染劑量以使用導致未處理動物中90%死亡率之感染水準評定測試品在A型流感模型中之預防作用。
表8. 流感H7N9 病毒(HPAIV 病毒株)
鑑別 流感
供應商 --
目錄號 --
批號 --
效價 --
處理 在使用之前，將病毒等分試樣在室溫下解凍。凍融降低病毒效價，因此各等分試樣為一次性等分試樣。
儲存 ≤ -70℃
感染劑量 -
劑量體積 50 µL/小鼠
途徑 鼻內(i.n.)
投予 第0天單次投予
劑量調整 選擇此感染劑量以使用導致未處理動物中90%死亡率之感染水準評定測試品在A型流感模型中之預防作用。
測試系統 動物
小鼠已用於評估抗流感藥物，且存在支撐其在流感病毒疾病模型中之使用的歷史資料。 方法 研究大綱
此研究檢查第0天至第14天mAb-9v8.1及奧司他韋對鼠類宿主模型中對高病原性禽流感H5N1及H7N9病毒感染之反應的預防功效。
主要研究設計使用60隻雌性小鼠(10個測試組，每組6隻小鼠)。額外小鼠可用作在實驗開始日期之前不健康或為體重離群值之小鼠的可能替代。
在第-1天，感染前24小時，經由靜脈內注射用媒劑或測試品(3、0.9或0.3 mg/kg劑量)處理小鼠。在第0天，所有主要研究動物(及充當替代之任何可適用的額外動物)經高病原性禽流感病毒H5N1或H7N9之致命攻擊(LD90)鼻內感染。記錄體重、臨床觀測結果及存活率直至第14天。 表9：實驗組，H5N1
組 小鼠數目 測試品 處理組 鼻內感染 指標
1 6 - 媒劑 流感H5N1 (LD90) 直至第14天之存活率、體重減輕、臨床觀測結果
3 6 mAb-9v8.1 3 mg/kg
4 6 mAb-9v8.1 0.9 mg/kg
5 6 mAb-9v8.1 0.3 mg/kg
6 6 奧司他韋 10 mg/kg
總計 30
表10：實驗組，H7N9
組 小鼠數目 測試品 處理組 鼻內感染 指標
1 6 - 媒劑 流感H7N9 (LD90) 直至第14天之存活率、體重減輕、臨床觀測結果
3 6 mAb-9v8.1 3 mg/kg
4 6 mAb-9v8.1 0.9 mg/kg
5 6 mAb-9v8.1 0.3 mg/kg
6 6 奧司他韋 10 mg/kg
總計 30
基於個別動物第-2天體重，在第-1天以單次IV注射形式投予mAb-9v8.1處理。基於第-2天個別體重，在第-1天至第5天每天一次經由經口胃管灌食投予奧司他韋處理(總計7次劑量)。 研究程序 給藥
在第-1天(感染前24小時)經由IV注射向動物給予測試品或媒劑(無菌PBS)。抗體測試品以3、0.9、0.3 mg/kg之劑量投予，不超過250 µL (小鼠可接受的IV注射體積)。
奧司他韋處理組中之動物經由經口胃管灌食投予奧司他韋，基於第-2天個別體重在第-1天至第5天每天一次以10 mg/kg之劑量經由經口胃管灌食投予(總計7次劑量)。 每日觀測
自第-2天至第14天每天一次監測所有小鼠。 體重量測
在第-2天且自第4天至第14天每天稱重小鼠。若小鼠達到30%體重減輕且觀測到以下變化中之任一者，則由獸醫評定病狀以確定是否有必要立即安樂死。 (a)駝背姿勢：(i)當觸摸或鼓勵移動時，動物不自駝背姿態移動。(ii)當觸摸或鼓勵移動時，動物移動，但停止且返回至駝背姿態。 (b)當觸摸或鼓勵移動時，動物跌倒且無法恢復平穩。 (c)當觸摸或鼓勵移動時，動物顯示呼吸困難。 (d)體重減輕在接下來48小時內不穩定或增加。 收集血清用於PK 分析( 第0 天)
在第0天(感染前)，經由隱靜脈收集血液(60 µL)，將其置放於不具有抗凝劑之血液收集管中，且對於除奧司他韋劑量組中之動物外的所有動物使其凝結30-60分鐘。隨後在設定為室溫之儀器中在2500×g下離心5分鐘之後將樣品加工成血清。在各收集日，將各血清樣品等分至新鮮的經標記收集管中且在收集之後立即用乾冰急凍。樣品管經標記且儲存在≤-70℃下。 最終程序
在第14天，動物經安樂死且記錄終末體重。
可組合上述各種實施例以提供其他實施例。本說明書中所提及及/或申請案資料表中所列之所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、外國專利、外國專利申請案及非專利公開案，包括以下美國臨時專利申請案：2022年5月23日申請之第63/345,016號；2022年11月23日申請之第63/427,799號；2022年12月5日申請之第63/430,319號；2023年1月27日申請之第63/481,977號；2023年3月3日申請之第63/488,433號；及2023年3月30日申請之U.S. 63/493,057，以全文引用之方式併入本文中。必要時，可修改實施例之態樣以採用各種專利、申請案及公開案之概念，從而提供又其他實施例。
可依據上文詳細描述，對實施例進行此等及其他改變。一般而言，在以下申請專利範圍中，所用術語不應解釋為將申請專利範圍限制於本說明書及申請專利範圍中所揭露之特定實施例，而應解釋為包括所有可能之實施例以及該申請專利範圍有權要求的等效物之全部範疇。因此，申請專利範圍不受本揭露內容限制。
無
圖 1展示用於抗「NA」(神經胺酸酶)單株抗體發現之工作流程。藉由篩選來自(人類)扁桃體供體樣品(n=50)之血清針對神經胺酸酶亞型N1及N2抗原之反應性，及來自周邊血液單核細胞(PBMC)供體樣品(n=124)之血清針對神經胺酸酶亞型N4、N3及N9之反應性來選擇供體。用於篩選之神經胺酸酶抗原在哺乳動物細胞中表現且藉由流動式細胞測量術評估結合。來自五個供體之B記憶細胞藉由流動式細胞測量術分選以便輸入至發現工作流程中。將單個分選的B細胞(n=39,350)在50 µl培養物中與間葉基質細胞(MSC)共培養以刺激抗體分泌。藉由結合及NA抑制分析來評估所分泌之抗體。使用酶聯凝集素分析(ELLA)評估N1唾液酸酶活性之抑制，且使用以螢光為主之分析來量測N1、N2及N9唾液酸酶活性之抑制，該分析量測2'-(4-甲基傘形基)-α-D-N-乙醯神經胺酸(MUNANA)之裂解。「NI活性」係指神經胺酸酶抑制活性。藉由ELISA評估與來自第1組IAV N1 A/Vietnam/1203/2004及第2組IAV N2 A/Tanzania/205/2010及N9 A/Hong Kong/56/2015之NA的結合，以確定廣度。來自所選擇之B細胞的抗體序列經選殖為cDNA且定序。
圖2A展示針對自人類供體PBMC中分離之A型流感病毒(「IAV」)之單株抗體(具有「FNI」字首)的VH區域序列比對。 圖2B展示「FNI3」及「FNI9」(FNI9包含以下VH及VL胺基酸序列：VH：SEQ ID NO.:2；VL：SEQ ID NO.: 8)與未突變共同祖先「UCA」(VH：SEQ ID NO.:98；VL：SEQ ID NO.:100)的VH區域序列比對。
圖3A 至圖3C展示藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)所量測之FNI3及FNI9與N1 (圖3A)、N2 (圖3B)及N9 (圖3C) NA之結合，報告為OD相對於濃度(以ng/ml為單位)。亦量測藉由比較抗體1G01-LS及陰性對照抗體針對無關抗原「K-」之結合。
圖4A 至圖4C展示藉由生物層干涉法(BLI)所量測之攜帶M428L/N434S Fc突變之FNI3 (圖中之「FNI3-LS」)及攜帶M428L/N434S Fc突變之FNI9 (圖中之「FNI9-LS」)與N1 (圖4A)、N2 (圖4B)及N9 (圖4C) NA之結合動力學。解離報告為kdis (1/s)，締合報告為kon (1/Ms)，且KD係根據kdis/kon之比率計算。亦量測藉由比較抗體(1G01-LS)之結合。
圖5概述來自測試FNI3及FNI9，以及比較抗體1G01針對一組第I組IAV、第II組IAV及B型流感病毒(IBV) NA之結合的流動式細胞測量術分析之結果。粗體字指示來自自人類中分離之流感病毒的NA。右側比例尺上之值展示所計算之EC50範圍。基於觀測到結合之最低濃度而選擇值。
圖6A 至圖6C係關於FNI3及FNI9針對攜帶醣基化部位之NA的活性。圖6A展示在A/South Australia/34/2019、A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016及A/Switzerland/9715293/2013中之位置245 (245Gly+)及247 (247Gly+)處之第2組IAV N2亞型NA的醣基化部位。圖6B概述在A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016及A/Switzerland/9715293/2013活病毒儲備液中之唾液酸酶活性的抑制(NAI)，報告為以µg/ml為單位之EC50。圖6C展示藉由流動式細胞測量術所量測之經A/South Australia/34/2019 (245Gly+)感染之哺乳動物細胞中之FNI3及FNI9與NA之結合。模擬物染色展示為陰性對照。
圖7展示藉由流動式細胞測量術所量測之FNI3及FNI9與表現於經H1N1豬歐亞類禽(EA)病毒株，A/Swine/Jiangsu/J004/2018感染之哺乳動物細胞上之NA的結合。模擬物染色展示為陰性對照。
另一實驗(資料未展示)展示FNI3及FNI9缺乏針對人類上皮第2型(HEP-2)細胞結合之多反應性。抗HA抗體FI6v3用作陽性對照，且抗副黏液病毒抗體MPE8作為陰性對照包括在內。
圖8概述藉由MUNANA分析所量測之FNI3及FNI9針對一組第I組IAV、第II組IAV及B型流感病毒(IBV) NA之唾液酸酶活性的抑制(「NAI」)。
圖9展示FNI3及FNI9針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。
圖10A 至圖10B展示針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之FNI3及FNI9對唾液酸酶活性之活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。圖10A在同一圖內描繪針對第I組IAV、第II組IAV及IBV之抑制活性，且圖10B在獨立的圖內描繪針對此等IAV的抑制活性。
圖11A展示在活體外抑制唾液酸酶活性分析中所測試之一組IAV及IBV病毒株。 圖11B展示來自FNI3、FNI9、FNI14、FNI17及FNI19之分析的結果(報告為以µg/ml為單位之IC50)。圖例中之星號指示醣基化部位存在於位置245中。
圖12A 至圖12D展示抗體FNI1、FNI3、FNI9、FNI14、FNI17及FNI19針對H1N1 A/California/07/2009 (圖12A)、H3N2 A/Hong Kong/8/68 (圖12B)、B/Malaysia/2506/2004 (圖12C)及B/Jiangsu/10/2003 (圖12D) NA之中和(報告為以µg/ml為單位之IC50)。
圖13A 及圖13B展示FcγRIIIa (圖13A；F158對偶基因)及FcγRIIa (圖13B；H131對偶基因)之抗體活化。使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化。測試FNI3及FNI9，以及比較抗體FM08 (圖中之「FM08_LS」；VH：SEQ ID NO.:25；VL：SEQ ID NO.:26)及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
圖14A 及圖14B按年份展示在(圖14A) N1 (H1N1、豬H1N1及禽類H5N1)及(圖14B) N2 (H3N2、H2N2)亞型中之NA抗病毒劑抗性突變之頻率。
圖15A 至圖15E展示藉由抗流感抗體或奧司他韋對經反向遺傳學工程化以具有奧司他韋(OSE)抗性突變(H275Y、E119D及H275Y，或S247N及H275Y)之H1N1 A/California/07/2009病毒的中和。量測FNI3 (圖15A)、FNI9 (圖15B)及奧司他韋(圖15C)以及比較抗體FM08 (圖15D)及1G01 (圖15E)之中和活性。
圖16A 及圖16B展示抗NA抗體對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV、IBV病毒及經反向遺傳學工程化以具有OSE抗性突變(H275Y、E119D/H275Y、H275Y/S247N、I222V或N294S)之IAV及IBV病毒的中和(報告為以µg/ml為單位之IC50)。圖16A中之星號(x軸)指示攜帶OSE抗性突變之病毒。量測FNI3、FNI9及比較抗體1G01之中和活性。圖16A描繪個別病毒株之中和，且圖16B描繪藉由中和抗NA抗體分組之病毒株的中和。
圖17展示來自晶體結構研究之資料，其展示FNI3抗體之抗原結合片段(Fab)區域與NA之銜接。
圖18A 及圖18B展示由當未結合(圖18A)或結合至N2 NA (圖18B)時FNI3重鏈之重鏈互補決定區3 (H-CDR3)之晶體結構研究構成的圖。未結合FNI3 H-CDR3晶體結構(圖18A)展示在殘基E111 (CO) - D102 (NH)、E111 (NH) - D102 (CO)、G109 (CO) - F104 (NH)、G109 (NH) - N105 (CO)及L108 (NH) - N105 (CO)之羧酸基(CO)與胺基(NH)之間的β褶板構形及完整主鏈氫鍵。FNI3-N2晶體結構(圖18B)展示H-CDR3 β褶板構形的破壞與在G109 (CO) - F104 (NH)之間的一個完整主鏈氫鍵。
圖19A 及圖19B展示自晶體結構研究產生之圖，該等研究顯示與NA亞型複合的FNI3之抗原結合片段(Fab)區域及比較抗體1G01、1G04及1E01之銜接角。線指示所有圖中之銜接角，且展示比較抗體1G01、1G04及1E01之蛋白質資料庫(PDB)識別代碼。圖19A展示與N1 NA複合之1G01 (上圖)及與N9 NA複合之1G04 (下圖)。圖19B展示與N2 NA複合之FNI3 (上圖)及與N2 NA複合之1E01 (下圖)。
圖20展示FNI3 CDR：H-CDR3、H-CDR2及L-CDR之構形及相互作用。為產生此等資料，蛋白質使用分子操作環境(Molecular Operating Environment，MOE)「快速製備」。
圖21展示與N2 NA，包括輕鏈CDR (L-1、L-2、L-3)及重鏈CDR (H-1、H-2、H-3)之殘基複合的FNI3之晶體結構。H-CDR3與N2 NA之相互作用在右圖中以增強之解析度展示。負數為以kcal/mol為單位之相互作用能量。蛋白質使用分子操作環境(MOE)軟體「快速製備」。
圖22展示與奧司他韋結合之N2 NA複合的FNI3之晶體結構表示。展示奧司他韋與N2 NA之R292、R371及R118相互作用。
圖23展示與奧司他韋結合之N2 NA複合的FNI3之晶體結構替代性視圖。
圖24A 及圖24B展示來自2000及2020年間分離之H3N2 (n=60, 597)之N2 NA序列中之FNI3表位守恆分析。圖24A中之表展示所分析之N2 NA序列中特定位置處之胺基酸的頻率。圓圈值指示以最低三個頻率呈現之胺基酸Glu221 (E221，17.41%)、Ser245 (S245，33.69%)及Ser247 (S247，36.16%)。酸性胺基酸包括：天冬胺酸、麩胺酸；鹼性胺基酸包括：精胺酸、組胺酸、離胺酸；疏水性胺基酸包括：異白胺酸、白胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、脯胺酸；中性胺基酸包括：天冬醯胺、麩醯胺酸；及極性胺基酸包括：絲胺酸、蘇胺酸、甘胺酸、酪胺酸。圖24B展示來自FNI3之VH Y60及Y94與N2 NA之E221、S245及S247的相互作用。
圖25展示來自2000及2020年間分離之H1N1 (n=57,597)之N1 NA序列中之N2 NA FNI3表位守恆(頂部；如圖24A及圖24B中所示)與FNI3表位守恆(底部)之比較。酸性胺基酸包括：天冬胺酸、麩胺酸；鹼性胺基酸包括：精胺酸、組胺酸、離胺酸；疏水性胺基酸包括：異白胺酸、白胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、脯胺酸；中性胺基酸包括：天冬醯胺、麩醯胺酸；及極性胺基酸包括：絲胺酸、蘇胺酸、甘胺酸、酪胺酸。
圖26A 及圖26B展示用於評估在經IAV A/Puerto Rico/8/34或A/Hong Kong/8/68感染之BALB/c小鼠中之FNI3 (圖26A中之「mAb-03」)及FNI9 (圖26A中之「mAb-09」)之預防性活性的活體內研究之設計。圖26A展示用於該研究之給藥及病毒株。圖26B展示該研究之時刻表及指標。
圖27A 至圖27D展示在用FNI9預處理之後經H1N1 A/Puerto Rico/8/34感染之BALB/c小鼠中歷經十五天之體重之量測。在感染LD90 (90%致命劑量)之A/Puerto Rico/8/34之前一天，以6 mg/kg (圖27A)、2 mg/kg (圖27B)、0.6 mg/kg (圖27C)或0.2 mg/kg (圖27D)投予抗體。亦量測投予媒劑對照之小鼠的體重(各圖中之左圖)。
圖28A 至圖28D展示在用FNI9預處理之後經H3N2 A/Hong Kong/8/68感染之BALB/c小鼠中歷經十五天之體重之量測。在感染LD90 (90%致命劑量)之A/Hong Kong/8/68之前一天，以6 mg/kg (圖28A)、2 mg/kg (圖28B)、0.6 mg/kg (圖28C)或0.2 mg/kg (圖28D)投予抗體。亦量測接受媒劑對照之小鼠的體重(各圖中之左圖)。
圖29A 及圖29B展示在用FNI3或FNI9處理之後經A/Puerto Rico/8/34 (圖29A)或A/Hong Kong/8/68 (圖29B)感染之BALB/c小鼠中歷經十五天之存活。亦量測經媒劑對照預處理之小鼠之存活。
圖30A 及圖30B展示在用FNI3或FNI9預處理之後經A/Puerto Rico/8/34 (圖30A)或A/Hong Kong/8/68 (圖30B)感染之BALB/c小鼠中之感染後第4天至第14天的體重減輕(報告為曲線下面積)。亦量測經媒劑對照預處理之小鼠之體重減輕。
圖31A 及圖31B展示與來自在用FNI3或FNI9處理後之經A/Puerto Rico/8/34 (圖31A)或A/Hong Kong/8/68 (圖31B)感染的BALB/c小鼠之體重減輕的曲線下面積分析之血清中IgG相比之負曲線下面積峰值。
圖32展示tg32小鼠中之FNI3 (「FNI3-LS」)、FNI9 (「FNI9-LS」)及比較抗體FM08及1G01 (「1G01-LS」)，均攜帶M428L/N434S突變，之活體內藥物動力學。經計算之半衰期藉由矩形突出顯示。
圖33概述來自測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19在指定濃度(μg/mL)下針對在哺乳動物細胞上暫時表現之一組第I組IAV、第II組IAV及B型流感病毒(IBV) NA之結合的流動式細胞測量術分析之結果。粗體字指示來自自人類中分離之流感病毒的NA。右側比例尺上之值展示所計算之EC50範圍。基於觀測到結合之最低濃度而選擇值。
圖34展示藉由FNI3、FNI9、FNI17及FNI19針對來自在人類中循環的IAV之第I組(H1N1)及第II組(H3N2) NA的唾液酸酶活性之活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。矩形指示在位置245處具有醣基化之第II組(H3N2) NA及相應唾液酸酶抑制值(報告為以µg/ml為單位之IC50)。
圖35展示藉由FNI3、FNI9、FNI17及FNI19針對一組人類祖性、Victoria譜系及Yamagata譜系IBV NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。
圖36展示藉由核蛋白(NP)染色所量測之FNI3、FNI9、FNI17及FNI19針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之活體外中和活性。亦量測比較抗HA抗體「FM08_LS」及「FHF11v9」之中和活性。
圖37展示藉由核蛋白(NP)染色所量測之FNI3、FNI9、FNI17、FNI19及奧司他韋(OSE)針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之活體外中和活性。1nM = 150μl。
圖38A 及圖38B展示藉由MUNANA分析所量測之FNI3及FNI9針對來自OSE抗性流感病毒之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。OSE抗性IAV經反向遺傳學工程化以具有奧司他韋(OSE)抗性突變。圖38A展示針對Cal/09 N1及Cal/09 N1 OSE抗性(H1N1)之唾液酸酶活性抑制。圖38B展示針對Aichi/68 N2及Aichi/68 N2 OSE抗性NA (H3N2)之唾液酸酶活性抑制。
圖39展示FcγRIIIa (F158對偶基因)及FcγRIIa (H131對偶基因)之抗體活化。使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化。在與經H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34以6之感染倍率(MOI)感染之A549細胞一起培育之後評定活化。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及攜帶M428L/N434S突變之比較抗體「FM08_MLNS」及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
圖40A 及圖40B展示在與IAV (圖40A)及IBV (圖40B) NA一起培育之後FcγRIIIa (V158對偶基因)之抗體活化。在與Expi-CHO細胞一起培育之後使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化，該等Expi-CHO細胞經編碼不同IAV及IBV NA之質體暫時地轉染。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
圖41A 及圖41B展示在與IAV (圖41A)及IBV (圖41B) NA一起培育之後FcγRIIa (H131對偶基因)之抗體活化。在與Expi-CHO細胞一起培育之後使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化，該等Expi-CHO細胞經編碼不同IAV及IBV NA之質體暫時地轉染。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
圖42展示與來自在用FNI3、FNI9或FM08_LS處理後之經A/Puerto Rico/8/34 (H1N1)或A/Hong Kong/8/68 (H3N2)感染的BALB/c小鼠之體重減輕的曲線下面積分析之血清中IgG相比之負曲線下面積峰值(報告為以µg/ml為單位之IC50)。出於擬合目的，已在10 -1μg/ml之IgG濃度下計算媒劑組之負峰面積。
圖43A 及圖43B展示用於評估在經IBV B/Victoria/504/2000 (Yamagata)或B/Brisbane/60/2008 (Victoria)感染之DBA/2J小鼠中之FNI3_MLNS (圖43A中之「mAb-03」)及FNI9_MLNS (圖43A中之「mAb-09」)之預防性活性的活體內研究之設計。圖43A展示用於該研究之給藥及病毒株。圖43B展示該研究之時刻表及指標。
圖44A 至圖44D展示在用FNI3或FNI9預處理之後經IBV B/Victoria/504/2000 (Yamagata)感染之DBA/2小鼠中歷經十五天之體重的量測。在感染LD90 (90%致命劑量)之IBV B/Victoria/504/2000 (Yamagata)之前一天，以6 mg/kg (圖44A)、2 mg/kg (圖44B)、0.6 mg/kg (圖44C)或0.2 mg/kg (圖44D)投予抗體。亦量測投予媒劑對照之小鼠的體重(各圖中之左圖)。
圖45A 至圖45D展示在用FNI3或FNI9預處理之後經IBV B/Brisbane/60/2008 (Victoria)感染之DBA/2小鼠中歷經十五天之體重的量測。在感染LD90 (90%致命劑量)之IBV B/Brisbane/60/2008 (Victoria)之前一天，以6 mg/kg (圖45A)、2 mg/kg (圖45B)、0.6 mg/kg (圖45C)或0.2 mg/kg (圖45D)投予抗體。亦量測投予媒劑對照之小鼠的體重(各圖中之左圖)。
圖46A 及圖46B展示在用FNI3或FNI9預處理之後經B/Victoria/504/2000 (Yamagata) (圖46A)或B/Brisbane/60/2008 (Victoria) (圖46B)感染之DBA/2小鼠中之感染後第4天至第14天的體重減輕(報告為體重曲線下面積之變化)。亦量測經媒劑對照預處理之小鼠之體重減輕。
圖47A 及圖47B展示在用FNI3或FNI9處理後，在經B/Victoria/504/2000 (Yamagata) (圖47A)或B/Brisbane/60/2008 (Victoria) (圖47B)感染之DBA/2小鼠中歷經十五天之存活。亦量測經媒劑對照預處理之小鼠之存活。
圖48A 及圖48B展示在IAV及IBV NA中之FNI3表位守恆。圖48A展示來自H1N2、H2N2、H3N2及H5N2 IAV (n= 65,5262) (頂部)之N2 NA序列相對於來自H1N1及H5N1 (N=58,954) (底部)之N1 NA序列的分析。所有序列在2000及2020年間分離。酸性胺基酸包括：天冬胺酸、麩胺酸；鹼性胺基酸包括：精胺酸、組胺酸、離胺酸；疏水性胺基酸包括：異白胺酸、白胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、脯胺酸；中性胺基酸包括：天冬醯胺、麩醯胺酸；及極性胺基酸包括：絲胺酸、蘇胺酸、甘胺酸、酪胺酸。圖48A中由方塊包圍之殘基指示圖48B之下圖中所描述之某些胺基酸。圖48B中之表展示N2 NA內之重要FNI3相互作用殘基及對應體FNI3 CDRH3殘基。
圖49展示在IBV NA中之FNI3表位守恆。分析來自B/Brisbane/60/2008 (圖中之「FluB Victoria」；N= 7,814；頂部)之IBV NA序列相對於來自B/Victoria/504/2000 (圖中之「FluB Yamagata」；N=13,243；底部)之IBV NA序列。酸性胺基酸包括：天冬胺酸、麩胺酸；鹼性胺基酸包括：精胺酸、組胺酸、離胺酸；疏水性胺基酸包括：異白胺酸、白胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、脯胺酸；中性胺基酸包括：天冬醯胺、麩醯胺酸；及極性胺基酸包括：絲胺酸、蘇胺酸、甘胺酸、酪胺酸。由方塊包圍之殘基指示與FNI3 HCDR3相互作用之主要NA殘基，其在IAV N1/N2及IBV中為100%守恆的。
圖50A 及圖50B展示在投予後30天裏在SCID tg32小鼠中之攜帶MLNS Fc突變(FNI3 (「FNI3-LS」)、FNI9 (「FNI9-LS」)、FNI17 (「FNI17-LS」)、FNI19 (「FNI19-LS」))之FNI抗體及比較抗體FM08_MLNS的活體內藥物動力學。圖50A中展示隨時間變化之濃度(報告為µg/ml)。圖50B中之表展示半衰期(以天為單位報告)、AUC (以天*µg/ml為單位報告)、清除(以µg/ml為單位報告)及體積(以ml為單位報告)。
圖51展示在來自2009年至2019年之第I組IAV、第II組IAV及IBV中之FNI NA表位內之前五個相互作用殘基的守恆。
圖52展示藉由核蛋白(NP)染色所量測之FNI9、奧司他韋(OSE)及比較抗體「FM08」針對H3N2 A/Hong Kong/8/68病毒之活體外中和活性。經計算之IC50 (以nM為單位)、IC80 (以nM為單位)及最大抑制(報告為百分比)在圖下方展示。
圖53展示藉由「GAALIE」Fc變異抗體(包含Fc中之G236A/A330L/I332E突變)之FcγRIIIa (F158對偶基因)及FcγRIIa (H131對偶基因)的抗體活化。使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化。在與經H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34以6之感染倍率(MOI)感染之A549細胞一起培育之後評定活化。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及攜帶GAALIE突變(字尾「GAALIE」)之FNI3、FNI9、FNI17及FNI19抗體。亦測試比較抗體「FM08_LS」及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
圖54展示用於比較經IAV A/Puerto Rico/8/34或A/Hong Kong/8/68感染之BALB/c小鼠中之FM08_LS與FNI3_LS及FNI9_LS之預防性活性的活體內實驗間研究之設計。該表展示用於該研究之給藥及病毒株。該研究之時刻表及指標與圖26B中所示之時刻表及指標相同。來自實驗A (「Exp-A」)之體重資料展示於圖27A至圖27D (FNI9-LS，A/Puerto Rico/8/34)及圖28A至圖28D (FNI9-LS，A/Hong Kong/8/68)中。
圖55展示用於評估經IAV A/Puerto Rico/8/34感染之雌性BALB/c小鼠中之奧司他韋(OSE)之生物效力的活體內研究之設計。時刻表展示感染時間、OSE給藥及研究指標。在經10倍LD50 (50%致命劑量)之A/Puerto Rico/8/34感染前二小時開始，在第0天以10 mg/kg藉由經口胃管灌食投予OSE。在感染後6小時以相同劑量投予OSE，且隨後每日二次，直至感染後第6天。
圖56展示在用奧司他韋(OSE)預處理之後經H1N1 A/Puerto Rico/8/34感染之BALB/c小鼠中歷經十四天之體重之量測。亦量測經媒劑對照(H2O)預處理之小鼠之體重減輕。
圖57展示在用奧司他韋(OSE)預處理之後經H1N1 A/Puerto Rico/8/34感染之BALB/c小鼠中歷經十四天之存活。亦量測經媒劑對照(H2O)預處理之小鼠之存活。
圖58展示來自經OSE處理且經H1N1 A/Puerto Rico/8/34感染之BALB/c小鼠之肺勻漿中之病毒效價。感染後二天及四天時收集肺組織。效價報告為50%組織培養物感染劑量/公克組織(TCID50/g)。
圖59A 至圖59E展示藉由FNI9及某些FNI9變異體針對IAV NA及IBV NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(報告為以µg/ml為單位之IC50)。展示用於來自H5N1 A/Vietnam/1203/2004 (圖59A)之第I組(H1N1) IAV NA1、來自H3N2 A/Tanzania/205/2010 (圖59B)之NA2及來自H7N9 A/Hong Kong/56/2015 (圖59C)之NA9的FNI9及FNI9變異體之中和活性。展示用於來自B/Malaysia/2506/2004 (圖59D)之BNA2及來自B/Perth/211/2011 (圖59E)之BNA7的FNI9及變異體之中和活性。在此等圖中，「FNI9-v6」、「FNI9-v7」、「FNI9-v8」及「FNI9-v9」如圖67中所示，且與如例如圖70至圖72中所示之FNI9變異序列「-VH.6」、「-VH.7」、「-VH.8」及「-VH.9」不相同。
圖60展示FNI9 VH之額外特徵。使用PyMOL產生FNI9之整體表面電荷圖以及PK值及解析度(以Å為單位報告)。
圖61展示在FNI抗體FNI3、FNI9、FNI17及FNI19之間的結合能，該等抗體在NA上具有與與唾液酸相互作用相關之高度守恆的殘基。
圖62展示藉由流動式細胞測量術所量測之FNI3、FNI9、FNI17及FNI19與表現於經H1N1豬歐亞類禽(EA)病毒株，A/Swine/Jiangsu/J004/2018感染之哺乳動物細胞上之NA的結合。模擬物抗體染色展示為陰性對照。
圖63展示FNI3、FNI9及FNI17與N9 NA之結合動力學，藉由生物層干涉法(BLI)所量測。KD係根據kdis/kon之比率計算，其中kdis為以(1/s)計算之解離，且kon為以(1/Ms)計算之締合。
圖64展示藉由FNI3、FNI9、FNI17、FNI17-v19、FNI19及FNI19-v3針對第II組H7N9 A/Anhui/1/2013 IAV NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(以ng/ml為單位報告)。
圖65展示在與第II組H7N9 A/Anhui/1/2013 IAV培育之後的FcγRIIIa (V158對偶基因)之抗體活化。在與Expi-CHO細胞一起培育之後使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化，該等Expi-CHO細胞經編碼來自A/Anhui/1/2013 IAV之N9的質體暫時地轉染。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。
圖66A 至圖66C展示藉由「GAALIE」Fc變異抗體(包含Fc中之G236A/A330L/I332E突變)之FcγRIIa (H131對偶基因)的抗體活化。在與Expi-CHO細胞一起培育之後使用經工程化之Jurkat細胞中之NFAT介導之螢光素酶報導子來量測活化，該等Expi-CHO細胞經編碼不同IAV (圖66A中之H1N1 A/California/07/2009；圖66B中之H3N2 A/Hong Kong/8/68)及IBV (圖66C中之B/Malaysia/2506/2004) NA的質體暫時地轉染。測試FNI3、FNI9、FNI17及FNI19，以及攜帶GAALIE突變(圖中之字尾「GAALIE」)之FNI3、FNI9、FNI17及FNI19抗體。亦測試比較抗體「FM08_LS」及陰性對照抗體(FY1-GRLR)。FM08_LS及FY1-GRLR在圖66A至圖66C中具有最低所量測值。
圖67展示某些FNI3、FNI9、FNI17或FNI19 mAb之抗體效價，包括與野生型相比之變異體的增加/缺失。
圖68展示對於FNI9及某些FNI9變異體(FNI9-變異體(VH SEQ ID NO.:2，VL SEQ ID NO.:37)至FNI9-v9)之藉由流動式細胞測量術所量測之與第I組IAV、第II組IAV及IBV NA之結合(報告為MFI)。將針對變異體之MFI值相對於針對野生型FNI9之MFI值標準化。圖68中所示之FNI9變異體與如例如圖70至圖72中所示FNI9變異序列「-VH.6」、「-VH.7」、「-VH.8」及「-VH.9」不相同。
圖69A 至圖69D展示藉由生物層干涉法(BLI)所量測之FNI3-LS、FNI9-LS、FNI17-LS及FNI19-LS，以及攜帶GAALIE突變(圖中之字尾「GAALIE」)之FNI3-LS、FNI9-LS、FNI17-LS及FNI19-LS抗體與不同FcγR之結合動力學。箭頭指示FNI17-LS及FNI17-LS-GAALIE之曲線。圖69A展示與FcγRIIA(H)之結合、圖69B展示與FcγRIIA(R)之結合、圖69C展示與FcγRIIIA(F)之結合且圖69D展示與FcγRIIIA(V)之結合。
圖70展示引入至野生型FNI9 VH或VL中以產生額外變異抗體之突變。
圖71展示FNI9野生型(「WT」)可變區域胺基酸序列及包含如圖70中所示之一或多個突變的FNI9抗體可變區域。
圖72概述包含如圖70中所示之一或多個突變的本揭露內容之某些FNI9變異抗體(FNI9-v13.8-FNI9-v12.7)。
圖73展示某些IgG1 Fc變異抗體之FcγR及C1q結合親和力(藉由以中尺度發現為主之分析(MSD；採用電化學發光)量測)以及其他特徵。第三列開始往下之Fc變異體(「G236A_E272Y_S298N」及以下)使用迭代發現工作流程鑑別。G236A_A330L_I332E變異體用作比較物。測試Fc變異抗體與FcγRIIA-H (高親和力H158對偶基因)、FcγRIIB、FcγRIIA-R (低親和力R131對偶基因)、FcγRIIIA-V (高親和力V158對偶基因)、FcγRIIIA-F (低親和力F158對偶基因)、FcγRIIIB及FcRn之結合。資料報告為與野生型IgG1相比之結合的變化倍數。亦展示FcγRIIA/FcγRIIB結合之比率以及相對於野生型IgG1之生產效價(mg/mL)及Tm (℃)。
圖74A 至圖74C展示岩藻醣基化對二十種Fc變異抗體之產生及純化的影響。變異體在2-去氧-2-氟-L-岩藻醣(2FF)不存在(「無2FF」)或存在(「+2FF」)之情況下表現；2FF減少岩藻醣基化。圖74A展示使用蛋白A管柱確定之抗體效價。圖74B展示由二次重複純化產生之產量。圖74C中之表概述理論最大產量及平均產量，均以µg為單位量測，以及所計算之第二溶離之平均回收率及蛋白質濃度(以µg /ml為單位量測)。Fc變異體使用二次溶離進行純化且在確定產量之前合併。
圖75A 至圖75B概述相對於野生型Fc，Fc變異體之FcγR結合及其他特徵。條形物及值指示與野生型Fc相比，結合之變化倍數。所示Fc變異體未用2FF處理。圖75A展示與FcγRIIA-H (高親和力)、FcγRIIA-R (低親和力)、FcγRIIB、FcγRIIIA-V (高親和力)、FcγRIIIA-F (低親和力)及FcRn (在pH 6下)之結合。圖75B進一步展示FcγRIIA-H/FcγRIIB結合之比率以及C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)，其中WT「基線」值由豎直紅色虛線指示。結合藉由以中尺度發現為主之分析(MSD；採用電化學發光)量測。
圖76展示某些Fc變異體與FcγRIIA-H (高親和力)及FcγRIIB之結合。由線連接之標繪表示同一變異體。所示變異體未用2FF處理。
圖77A 至圖77B展示使用報導細胞分析所量測之經由不同FcγR的FcγR訊息傳導(Promega；所測試之細胞表現一種類型/對偶基因FcγR，如所指示)。如圖中所指示，所示Fc變異體經岩藻醣基化(「fuc」；124A/124B)或去岩藻醣基化(「afuc」；124B)。值係由三次實驗之平均值計算，且指示與野生型Fc相比，曲線下面積(以對數繪製)之變化倍數(線性表示)。
圖78概述某些變異Fc之特徵。包含指定Fc之抗體表現為重組人類IgG1。結合藉由以中尺度發現為主之分析(MSD；採用電化學發光)量測。值表示與包含野生型岩藻醣基化人類IgG1 Fc之抗體相比的變化倍數。亦展示使用報導細胞分析所量測之FcγR訊息傳導的變化倍數。
圖79展示來自量測以下之實驗的結果：某些Fc變異抗體之FcγR結合；FcγRIIA對偶基因與FcγRIIB之結合的比率；C1q結合；解鏈溫度；及FcRn結合。抗A型流感抗體FY1 (Kallewaard等人, Cell. 2016年7月28日;166(3):596-608)表現為重組IgG1m3，其中CH3中具有M428L及N434S突變，且其中Fc中別處具有指定組合突變。結合(一項研究)藉由以中尺度發現為主之分析(MSD；採用電化學發光)量測。結合資料展示為相對於無其他Fc突變之FY1 rIgG1m3-MLNS的變化倍數。使用報導細胞分析(NFAT驅動螢光素酶) (Promega)藉由FcγR訊息傳導確認FcγR結合。
圖80展示來自如圖79中量測抗體特徵之額外實驗的結果。在此等實驗中，FY1表現為無M428L及N434S突變之重組IgG1m3 (亦即，具有野生型IgG1m3 CH1-CH3或具有表中指示之突變)。FY1-rIgG1m3及FY1-rIgG1m3-GAALIE抗體在第一盤中獨立地產生及量測二次；展示平均資料。FY1-rIgG1m3-GA抗體在第一及第二盤中獨立地產生2次。對於其他變異體，進行單一量測。結合藉由以中尺度發現為主之分析(MSD；採用電化學發光)量測。結合資料展示為相對於具有野生型Fc之FY1 rIgG1m3的變化倍數。FcγR結合/活化使用報導細胞分析(NFAT驅動螢光素酶) (Promega)。
圖81展示來自使用去岩藻醣基化Fc變異抗體，如圖80中量測特徵之其他實驗的結果。在2FF存在下產生抗體以獲得去岩藻醣基化聚醣。在此等實驗中，FY1表現為無M428L及N434S突變之重組IgG1m3 (亦即，具有野生型IgG1m3 CH1-CH3或具有表中指示之突變)。FY1-rIgG1m3及FY1-rIgG1m3-GAALIE抗體在第一盤中獨立地產生及量測二次；展示平均資料。FY1-rIgG1m3-GA抗體在第一及第二盤中獨立地產生2次。對於其他變異體，進行單一量測。結合藉由以中尺度發現為主之分析(MSD；採用電化學發光)量測。
圖82展示如圖例中所指示，具有變異Fc之抗流感FY1抗體的FcγRIIA活化/訊息傳導。目標細胞為表現FluA H1N1 HA之A549細胞，且報導細胞為表現FcγRIIA (H131對偶基因)及處於NFAT啟動子控制下之螢光素酶的Jurkat細胞。
圖83A 至圖83B展示如圖例中所指示，具有變異Fc之抗流感FY1抗體的FcγRIIIA活化/訊息傳導。目標細胞為表現FluA H1N1 HA之A549細胞，且報導細胞為表現FcγRIIIA (F158較低親和力對偶基因(A)或V158較高親和力對偶基因(B))及處於NFAT啟動子控制下之螢光素酶的Jurkat細胞。
圖84A 至圖84I係關於某些抗HBV (「HBC34-v40」；參見PCT公開案第WO 2021/262840號) Fc變異抗體。(A)流動式細胞測量術，其展示在指定HBC34-v40 Fc變異抗體(50 µg/mL)及30 IU/mL來自HBV+患者血清之HBsAg存在下單核球衍生之樹突狀細胞(moDC) (表現指定FcγR)上的CD83表現。(B)流動式細胞測量術，其展示在HBC34-v40 Fc變異抗體(50 µg/mL)及處於指定濃度之來自HBV+患者血清(BioIVT)之HBsAg存在下moDC上的CD83表現。左圖係來自吸液/產生抗體:HBsAg之免疫複合體之第一方法的實驗；右圖係來自使用吸液/產生抗體:HBsAg之免疫複合體之第二方法的實驗。(C)與來自相同供體之moDC一起培育5天的自體CD4+記憶T細胞(來自HBV接疫苗種者)上的CD25表現(活化標記)及CFSE (增殖)；moDC首先用100 IU/mL HBsAg(來自二種患者血清)及50 µg/mL HBC34-v40 Fc變異抗體活化隔夜。在一個實驗中比較LS-GAYL變異體。(D) CD14+單核球用IL-4及GM-CSF刺激6天。MoDC用抗原及HBC34-v40 Fc變異抗體(50 µg/mL)處理隔夜，接著與表現HBsAg特異性人類TCR之HLA匹配(HLA-DR限制性)轉殖基因Jurkat細胞共培養。讀數為Jurkat細胞之GFP-NFAT報導子。(E)三個獨立實驗重複在0.125 µg/mL抗體下之Jurkat TCR報導子分析的比較。(F)來自不同分析之資料的概述。(G)展示實驗配置之方案，其用於評定來自經HBsAg疫苗免疫接種及增強免疫之表現FcγR之小鼠的離體T細胞增殖；記憶CD44+ CD4+ T細胞經分選，用CFSE標記，與免疫複合體(抗體:HBsAg抗原)脈衝之BMDC共培養，且在第6天評定增殖。SEB=來自金黃色葡萄球菌(S. Aureus)之葡萄球菌腸毒素B。(H)如(G)中之(500,000個) CD4+記憶T細胞上之CD4表現及CFSE染色，其中BMDC (50,000個)使用包含指定HBC34-v40 Fc變異抗體(20 µg/mL)及HBsAg (1000 IU/mL)之免疫複合體刺激。SEB=1 µg/mL；曼-惠特尼檢定(Mann-Whitney test)。(I) (左)與用單獨的HBsAg、單獨的抗體或SEB預處理之moDC一起培育後CFSE低CD4+ CD44+ T細胞之頻率；(右)與用HBsAg及指定HBC34-v40 Fc變異抗體在指定濃度下預處理之moDC一起培育後CFSE低CD4+ CD44+ T細胞之頻率。moDC來自轉殖基因表現人類FcγR之小鼠，且T細胞來自HuFcγR小鼠(n=4個獨立實驗)或C57Bl/6 (n=1個實驗)。測試50,000個moDC+500,000個T細胞。SEB=1 µg/mL；曼-惠特尼檢定。
圖85A 至圖85B展示藉由MUNANA分析所量測之FNI9及FNI9-v5針對NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。圖85A展示針對來自H5N1 A/Vietnam/1203/2004之N1的唾液酸酶活性抑制。圖85B展示針對來自H3N2 A/Tanzania/205/2010之N2的唾液酸酶活性抑制。
圖86展示藉由表面電漿子共振(SPR)所量測，在存在或不存在位置245處之醣基化部位之情況下FNI9及FNI9-v5 Fab片段與N2抗原之結合親和力。結合親和力報告為平衡常數KD，以nM為單位。標記「+ glcy245」指示醣基化部位存在於位置245。星號指示產生Fab片段之方法，其中「r」指示藉由重組表現產生且「d」指示藉由消化產生。
圖87A 至圖87B展示藉由酶聯凝集素分析(ELLA)所量測，FNI9及FNI9-v5對假型病毒粒子中N2唾液酸酶活性之活體外抑制。圖87A展示針對A/Switzerland/2017假病毒粒子之唾液酸酶活性抑制。圖87B展示針對A/Kansas/14/2017假病毒粒子之唾液酸酶活性抑制。
圖88展示FNI9及FNI9-v5對流感之活體外中和(報告為以µg/ml為單位之EC50)。
圖89概述FNI9親代抗體之某些變異體之VH及VL (VK)區域中的突變。「FNI9」及「FNI9-v1.1」抗體具有胺基酸序列。FNI9-v1.1與變異體同時產生以控制生產條件中之任何差異。
圖90展示FNI9抗體之生產效價及尺寸排阻層析法(SEC)概況。「ok」之SEC概況指示藉由UHPLC-SEC未觀測到顯著聚集(＜3%高分子量物種)或碎裂(＜3%低分子物種)。「未評定」之SEC概況指示無法評定SEC概況，因為在暫時轉染中未以足夠效價產生抗體。對於生產力，「過低」指示暫時轉染之細胞的上清液中抗體效價低於定量方法(BLI上之蛋白A結合)之偵測極限。「FNI9-v1.1」具有與FNI9相同的序列。
圖91A 至圖91B展示藉由MUNANA分析所量測之FNI9變異體針對N1、N2及N9 NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。值指示引起唾液酸酶活性之50%抑制的抗體濃度(以µg/ml為單位)。分析中所用之神經胺酸酶抗原濃度指示於圖例中。「FNI9-v1.1」具有與FNI9相同的序列。
圖92A 至圖92B展示藉由ELLA所量測之FNI9變異體針對指定假病毒衍生之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。值指示引起唾液酸酶活性之50%抑制的抗體濃度(以µg/ml為單位)。分析中所用之神經胺酸酶抗原濃度指示於圖例中。「FNI9-v1.1」具有與FNI9相同的序列。
圖93A 至圖93D展示FNI9抗體與哺乳動物細胞中暫時表現之NA的結合，此藉由流動式細胞測量術量測且以MFI為單位報告。圖93A展示與來自A/California/07/2009及A/California/07/2009 I223R/H275Y之N1以及A/Washington/01/2007及A/Washington/01/2007 R292K中之N2的結合。圖93B展示與來自A/Switzerland/8060/2017、A/Kansas/14/2017、A/Cambodia/2020及A/South Australia/34/2019之N2的結合。圖93C展示與來自B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)、B/Brisbane/2008 (Victoria)、B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)及B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)之IBV NA的結合。圖93D展示與來自A/Leningrad/134/17/57及A/Perth/16/2009之N2以及來自A/Anhui/1/2013之N9的結合。在圖93A至圖93D中，對於各測試條件(例如，對於圖93A中之「N1_A_Calif_07_2009」)，各圖中之條自左至右對應於如各別圖例中自上至下及自左至右指示之抗體。舉例而言，圖93A中「N1_A_Calif_07_2009」上方左起前三個條對應於FNI9v-1.1、FNI9-v4.1及FNI9-v4.7。抗體FNI9-v1.1、FNI9-v4.1、FNI9-v8.1、FNI9-v13.8及FNI9-v9.1由條中之圖案或陰影指示。
圖94展示藉由SPR所量測，抗體「FNI9-v4.1」、「FNI9-v8.1」、「FNI9-v9.1」及「FNI9-v13.8」(表現為IgG1)對IAV及IBV NA抗原之親和力。指示NA抗原類別，其中「FluB」指示來自IBV之NA，「N1」指示N1 NA，「A/H3N2 -gly245」指示來自H3N2病毒株不具有位置245處之醣基化的N2 NA，「A/H3N2 +gly245」指示來自H3N2病毒株具有位置245處之醣基化的N2 NA，且「N9」指示N9 NA。值指示與親代抗體「FNI9-v1.1」(與FNI9相同之序列)相比親和力之變化倍數。
圖95A 至圖95B展示藉由SPR所量測，來自FNI9-v1.1 (與FNI9相同之序列)、FNI9-v4.1、FNI9-v8.1及FNI9-v13.8之Fab片段對N2抗原的親和力。量測與在位置245處具有醣基化(標記為「+gly245」)或不具有醣基化(標記為「-gly245」)之A/Tanzania/205/2010、A/South Australia/34/2019及A/HongKong/2671/2019的結合。圖95A展示報告為以nM為單位之平衡常數KD的結合親和力。圖95B展示報告為與來自親代抗體FNI9-v1.1之Fab相比之變化倍數的結合親和力。
圖96A 至圖96C展示藉由生物層干涉法(BLI)所量測之FNI9-v1.1 (與FNI9相同之序列) (圖96A)、FNI9-v8.1 (圖96B)及FNI9-v9.1 (圖96C)與N9 NA之結合動力學。解離報告為kdis (1/s)，締合報告為ka (1/Ms)，且KD (M)係根據kdis/ka之比率計算。
圖97A展示FNI9-v1.1 (與FNI9相同之序列)、FNI9-v8.1、FNI9-v4.1、FNI9-v9.1及FNI9-v13.8針對一組季節性IAV及IBV之活體外中和活性(報告為以µg/ml為單位之EC50)。在位置245處攜帶醣基化之病毒株如所指示。 圖 97B展示FNI9-v1.1及FNI9-v8.1針對一組季節性第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之唾液酸酶活性的活體外抑制(報告為以ng/ml為單位之EC50)。
圖98A 至圖98G展示藉由MUNANA分析所量測之某些FNI9變異體針對N1、N2及N9 NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。測試FNI9-v4.1、FNI9-v4.7、FNI9-v5.1、FNI9-v5.7、FNI9-v6.1、FNI9-v6.7、FNI9-v7.1、FNI9-v7.7、FNI9-v8.7、FNI9-v8.1及FNI9-v13.8抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對A/Vietnam/1203/2004中之N1 (圖98A)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (圖98B)、A/Switzerland/8060/2017中之N2 (圖98C)、A/South Australia/34/2019中之N2 (圖98D)、A/HongKong/2671/2019中之N2 (圖98E)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (+Gly245) (圖98F)及A/Hong Kong/56/2015中之N9 (圖98G)的唾液酸酶活性抑制。
圖99A 至圖99G展示藉由MUNANA分析所量測之某些FNI9變異體針對N1、N2及N9 NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。測試FNI9-v6.1、FNI9-v9.1、FNI9-v9.7、FNI9-v11.1、FNI9-v11.7、FNI9-v12.1及FNI9-v12.7抗體。FNI9、FNI9-v1.1 (與FNI9相同，與變異體一起產生以控制生產條件中之任何差異)及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對A/Vietnam/1203/2004中之N1 (圖99A)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (圖99B)、A/Switzerland/8060/2017中之N2 (圖99C)、A/South Australia/34/2019中之N2 (圖99D)、A/HongKong/2671/2019中之N2 (圖99E)、A/Tanzania/205/2010中之N2 (+Gly245) (圖99F)及A/Hong Kong/56/2015中之N9 (圖99G)的唾液酸酶活性抑制。
圖100A 至圖100F展示藉由ELLA所量測之某些FNI9變異體針對指定假病毒衍生之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。測試FNI9-v4.1、FNI9-v4.7、FNI9-v5.1、FNI9-v5.7、FNI9-v6.1、FNI9-v6.7、FNI9-v7.1、FNI9-v7.7、FNI9-v8.7、FNI9-v8.1及FNI9-v13.8抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對H7N3 A/Ck/Ja/2017 (圖100A)、H5N6 A/Ck/Suzhou/2019 (圖100B)、H5N6 A/Hangzhou/2021 (圖100C)、H7N7 A/Ck/621572/03 (圖100D)、H5N8 A/Ck/Russia/2020 (圖100E)及H7N9 A/Anhui/1/2013 (圖100F)之唾液酸酶活性抑制。
圖101A 至圖101F展示藉由ELLA所量測之某些FNI9變異體針對指定假病毒衍生之NA之唾液酸酶活性的活體外抑制。測試FNI9-v6.1、FNI9-v9.1、FNI9-v9.7、FNI9-v11.1、FNI9-v11.7、FNI9-v12.1及FNI9-v12.7抗體。FNI9、FNI9-v1.1及FNI9-v5作為比較抗體進行測試。展示針對H7N3 A/Ck/Ja/2017 (圖101A)、H5N6 A/Ck/Suzhou/2019 (圖101B)、H5N6 A/Hangzhou/2021 (圖101C)、H7N7 A/Ck/621572/03 (圖101D)、H5N8 A/Ck/Russia/2020 (圖101E)及H7N9 A/Anhui/1/2013 (圖101F)之唾液酸酶活性抑制。
圖102A 至圖102B展示藉由核蛋白(NP)染色所量測之FNI9、FNI19-v3、FNI17-v19及FNI17-v19-LS針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之活體外中和活性。矩形指示在位置245處具有醣基化之第II組(H3N2) NA。亦量測比較抗體1G01之中和活性。
圖103A 至圖103B展示FNI9-v1.1或FNI9-v8.1針對一組第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA藉由非線性回歸確定之中值EC90值的估計(以µg/ml為單位報告)。
圖104概述FNI9-v8.1針對一組第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV (具有或不具有聚醣-245)及IBV NA之中值EC90、在25%下之組織調整EC90及在5%下之組織調整EC90。
圖105展示FNI9針對H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016之活體外中和活性(以µg/ml為單位報告)。亦量測抗HA比較抗體FM08-LS之中和活性。
圖106展示FNI9及FNI17-v19針對H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016之活體外中和活性的劑量反應曲線。
圖107展示來自在感染H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016之前經FNI9-v1.1、FNI9-v8.1或FNI17-v19處理之BALB/c小鼠之肺勻漿中的病毒效價。抗體係以3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg、0.1 mg/kg或0.03 mg/kg投予。亦在經OSE (10 mg/kg或20 mg/kg)或抗HA比較抗體M08_LS處理之小鼠中量測病毒效價。感染後四天收集肺組織。效價報告為對數50%組織培養物感染劑量/公克組織(Log TCID50/g)。
圖108A 至圖108D展示來自在感染IAV或IBV之前經FNI9-v8.1處理之BALB/c小鼠之肺勻漿中的病毒效價。以3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg投予抗體，隨後感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34 (圖108A)、H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 (圖108B)、B/Victoria/504/2000 (Yamagata) (圖108C)或B/Brisbane/60/2008 (Victoria) (圖108D)。亦在經OSE (10 mg/kg或20 mg/kg)或抗HA比較抗體M08_LS處理之小鼠中量測病毒效價。感染後四天收集肺組織。效價報告為對數50%組織培養物感染劑量/公克組織(Log TCID50/g)。
圖109A 至圖109D展示來自在感染IAV或IBV之前經FNI9-v8.1處理之BALB/c小鼠之肺勻漿中的病毒效價。以3 mg/kg、0.9 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg投予抗體，隨後感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34 (圖109A)、H3N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 (圖109B)、B/Victoria/504/2000 (Yamagata) (圖109C)或B/Brisbane/60/2008 (Victoria) (圖109D)。效價報告為對數溶菌斑形成單位/公克組織(Log pfu/g)。
圖110A 及圖110B展示FNI9-v8.1針對一組H1N1 IAV、H3N2 IAV (在位置245處具有或不具有醣基化部位)及IBV之活體外中和資料。
圖111概述FNI9-v8.1針對所有病毒株H1N1 IAV、H3N2 IAV、H3N2 IAV (在位置245處不具有醣基化部位)、H3N2 IAV (在位置245處具有醣基化部位)及IBV之活體外中和資料。
圖112A 至圖112B展示藉由核蛋白(NP)染色所量測之活FNI9-v8.1、FNI17及FNI19針對第I組(H1N1) IAV、第II組(H3N2) IAV及IBV NA之體外中和活性。亦量測比較抗體1G01之中和活性。對於各病毒株，展示二個獨立實驗之資料。
圖113A 至圖113D展示活體外中和矩陣(圖113A及圖113C)及協同圖(圖113B及113D)，其報告FM08及FNI9-v8.1針對H1N1 A/Puerto Rico/34 (圖113A及圖113B)及H3N2 A/Tasmania/503/2020 (圖113C及圖113D)之組合活性。
圖114A 至圖114B展示在天竺鼠補體存在下由FNI9-v8.1-LS (在Fc中包含M428L及N434S突變)介導之對感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34之MDCK-LN細胞的補體依賴性細胞毒性(CDC)。亦量測抗HA比較抗體FM08_LS及Fc緘默陰性對照FNI9-v8.1-GRLR之CDC。CDC在圖114A中報告為抗體依賴性殺死%且在圖114B中報告為曲線下面積。
圖115A 至圖115B展示在人類自然殺手細胞存在下由FNI9-v8.1-LS介導之對感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34之A549細胞的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。亦量測抗HA比較抗體FM08_LS及Fc緘默陰性對照FNI9-v8.1-GRLR之ADCC。ADCC在圖115A中報告為抗體依賴性殺死%且在圖115B中報告為曲線下面積。
圖116A 至圖116B展示使用外周血液單核細胞(PBMC)作為單核球來源且使用PKH67標記之表現N2 NA之ExpiCHO細胞作為目標細胞，FNI9-v8.1-LS之連續稀釋液的抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。y軸指示對CD14及PKH67呈雙陽性之單核球百分比。對於所有分析，FNI9-v8.1-GRLR用作Fc緘默陰性對照，且結果展示為劑量反應曲線(a、b、c)及曲線下面積(AUC) (d、e、f)，代表n=1 (d、e)或n=2 (f)實驗重複(黑點)。
圖117A 至圖117D展示第0天抗體濃度與關於圖108A至圖108D之活體內病毒肺效價之間的相關性。感染後4天時肺中之感染性病毒效價繪製為隨感染H1N1 A/Puerto Rico/8/34、H3N2 A/Singapore/2016、B/Victoria/504/2000及B/Brisbane/60/2008前(第0天)之血清mAb濃度而變。
圖118A 至圖118F展示藉由ELLA所量測之抗NA mAb對在哺乳動物細胞中暫時表現之在位置245處不攜帶(-)或攜帶(+)聚醣之NA施加的酶活性抑制。
圖119A 至圖119D展示藉由ELLA所量測之抗NA mAb針對以僅NA為主之假型施加的酶活性抑制(IC50值)，該等假型攜帶N3、N6、N7、N8或N9，代表先前報導感染人類之高病原性A型禽流感病毒(HPAIV) (Ke等人, 2017；Li等人, 2022；WHO, 2021)。額外資料展示於圖133A至圖133C中。
圖120A 至圖120D展示藉由MUNANA分析所量測，抗NA抗體針對第1組(N1)及第2組(N2) IAV (A、B)以及Yamagata及Victoria譜系IBV (C、D) NA抗原之NA酶活性抑制。
圖121A 至圖121H展示FNI抗體關鍵接觸殘基之守恆分析。2000年至2022年關鍵NA接觸殘基(R118、D151、E227、R292及R371)每年之平均守恆百分比(紅色線)。指示每年所分析之序列的數目(黑色條)。H1N1、H3N2及IBV分離株為人類來源，而對於H5N1、H7N9、H5N8及H5N6，包括來自所有動物貯主之病毒。
圖122A 至圖122E-2展示對結合至NA之FNI抗體的詳細結構分析。所提供之資料：(A) FNI9:NA (Tanzania/2010)之靜態表位分析描繪為熱圖，其陰影比例尺為MOE kcal/mol能量，密度曲線藉由表位殘基及互補位殘基壓縮所有能量。總能量為-230 MOE kcal/mol。FNI17:NA (Tanzania/2010)之靜態表位分析描繪相同。總能量為-240 MOE kcal/mol。(B) FNI9:NA (Tanzania/2010)之動態表位-互補位分析，如(A)中所描述描繪，不同之處在於能量為使用如上文針對(A)所描述相同之MOE能量分析跨11.5 µs聚集完全原子MD模擬(每10 ns)之平均值。總能量為-370 MOE kcal/mol。(C)表位-互補位相互作用之佔有率百分比反映存在接觸之11.5 µs MD的分率(在5 Å內)。總佔有率為5600 (%)。FNI17:NA之表位-互補位相互作用的總佔有率為4700 (%)。輪廓框描繪FNI9動態互補位分析中存在，FNI17動態互補位分析中不存在的表位殘基-互補位殘基接觸。(D) FNI9與FNI17表位相互作用能量之比較，其中黑色星形描繪FNI9中存在而FNI17中不存在的接觸，白色星形描繪FNI17中存在而FNI9中不存在的觸點接觸。(E) FNI9與FNI17互補位相互作用能量之比較，其中黑色及白色星形如(D)中。
圖123展示流感病毒株及指定抗NA抗體之中和EC50之清單。
圖124展示具有或不具有聚醣245之季節性病毒的NA抗原以及藉由SPR量測之對某些FNI抗體Fab及1G01 Fab之對應親和力(KD)之清單。
圖125A 至圖125B展示FNI9-v5 (圖125A)及FNI9-v8.1 (圖125B)在投予後大約60天內在SCID tg32小鼠中作為隨時間推移之濃度(報告為µg/ml)的活體內藥物動力學。抗體表現為在Fc中具有M428L及N434S (「LS」，亦稱為「MLNS」)突變之重組IgG1m3。
圖126A 至圖126E概述FNI9-v5-LS (「FNI9-v5-rIgG1-LS」)及FNI9-v8.1-LS (「FNI9-v8.1-rIgG1m3-LS」)在SCID tg32小鼠中之活體內藥物動力學資料。展示五隻個別動物之資料。
圖127A 至圖127C概述使用免疫組織化學染色所量測，使用FNI9-v8.1 (結合至Alexa Fluor 488)針對一組人類組織進行組織交叉反應性(TCR)研究的結果。
圖128A 至圖128C展示藉由ELLA所量測之抗NA mAb FNI9-v8.1、FNI17-v19及FNI19-v3針對以僅NA為主之假型施加的神經胺酸酶酶活性抑制，該等假型攜帶N3、N4或N5，代表地方性低病原性A型禽流感病毒(LPAIV)。亦測試1G01作為對照抗體。
圖129A 至圖129F展示藉由MUNANA分析所量測之抗NA mAb FNI9-v8.1、FNI17-v19及FNI19-v3針對以僅NA為主之假型施加的神經胺酸酶酶活性抑制，該等假型攜帶N1、N2、N6或N8，代表豬、狗及海豹中之循環地方性低病原性哺乳動物IAV。亦測試1G01作為對照抗體。
圖130A 至圖130G展示藉由MUNANA分析所量測之針對一組假型的神經胺酸酶酶活性抑制，該等假型攜帶具有經由活體外抗性研究鑑別為能夠降低但不消除FNI mAb之結合或活性之突變的NA。
圖131A 至圖131B展示藉由MUNANA分析所量測之針對一組假型的神經胺酸酶酶活性抑制，該等假型攜帶具有經由深度突變掃描(DMS)鑑別為能夠降低但不消除FNI mAb之結合或活性之突變的NA。
圖132A 至圖132C展示在用抗NA抗體、抗HA抗體或呈1:1之比的抗NA與抗HA抗體之一預處理之後感染H3N2 A/Hong Kong/1/68 (圖132A及圖132C)或H1N1 A/Puerto Rico/8/34 (圖132B)之BALB/c小鼠(n=6)中感染後第0天至第14天之體重減輕(報告為曲線下面積)。抗體經鼠化(在圖132A中由「mu」字首指示)或為人類(圖132B及圖132C)。抗NA抗體包括FNI9-v8.1-LS、FNI17-LS及FNI19-v3-LS，且所使用之抗HA抗體為FM08。抗體以0.25 mg/kg或0.125 mg/kg之劑量投予。亦量測經媒劑對照預處理之小鼠之體重減輕。
圖133A 至圖133C展示額外資料。
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Claims (88)

  1. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)，該VH包含一互補決定區(CDR)H1、一CDRH2及一CDRH3，以及(ii)及一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含一CDRL1、一CDRL2及一CDRL3，其中： (a)  該CDRH1包含SEQ ID NO.:55、SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:47或SEQ ID NO.:49中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (b)  該CDRH2包含SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:57或SEQ ID NO.:61中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (c)  該CDRH3包含SEQ ID NO.:5、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:51或SEQ ID NO.:53中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成， (d)  該CDRL1包含SEQ ID NO.:9或SEQ ID NO.:32中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (e)  該CDRL2包含SEQ ID NO.:10中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；及/或 (f)  該CDRL3包含SEQ ID NO.:11、18、21、24、33或67中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成， 任擇地其限制條件為該CDRH1、該CDRH2、該CDRH3、該CDRL1、該CDRL2及該CDRL3不包含以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(i)分別3-5及9-11；(ii)分別3、4、15及9-11；(iii)分別3-5、9、10及18；(iv)分別3-5、9、10及21；(v)分別3-5、9-10及24；或(vi)分別3-5、32、96及33。
  2. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中該CDRH3及該CDRL3包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別5及11；(ii)分別5及18；(iii)分別5及21；(iv)分別5及24；(v)分別5及33；(vi)分別5及67；(vii)分別15及11；(viii)分別15及18；(ix)分別15及21；(x)分別15及24；(xi)分別15及33；(xii)分別15及67；(xiii)分別51及11；(xiv)分別51及18；(xv)分別51及21；(xvi)分別51及24；(xvii)分別51及33；(xviii)分別51及67；(xix)分別53及11；(xx)分別53及18；(xxi)分別53及21；(xxii)分別53及24；(xxiii)分別53及33；或(xxiv)分別53及67。
  3. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該CDRH1、該CDRH2、該CDRH3、該CDRL1、該CDRL2及該CDRL3包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別55、4、5及9-11；(ii)分別47、4、5及9-11；(iii)分別47、4、5、9、10及67；(iv)分別49、4、5及9-11；(v)分別47、4、5、9、10及67；(vi)分別3-5、9、10及67；(vii)分別55、4、5、9、10及67；(viii)分別3、4、51及9-11；(ix)分別3、4、51、9、10及67；(x)分別55、4、5及9-11；(xi)分別55、4、5、9、10及67；(xii)分別3、61、5及9-11；(xiii)分別3、61、5、9、10及67；(xiv)分別3-5及9-11；或(xv)分別3、57、5及9-10。
  4. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)及(ii)輕鏈可變區域(VL)，其中： (i)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (ii)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (iii)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (iv)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (v)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (vi)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (vii)該VH包含SEQ ID NO.:46中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (viii)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (ix)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (x)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xi)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xii)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xiii)該VH包含SEQ ID NO.:48中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xiv)該VH包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列的互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xv)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xvi)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xvii)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xviii)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xix)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xx)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxi)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxii)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxiii)該VH包含SEQ ID NO.:56中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxiv)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxv)該VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxvi)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxvii)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxviii)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxix)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxx)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxi)該VH包含SEQ ID NO.:60中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxii)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxiii)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxiv)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxv)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxvi)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxvii)該VH包含SEQ ID NO.:50中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxviii)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxix)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:17中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxx)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:20中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxxi)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:23中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxxii)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:31中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxxiii)該VH包含SEQ ID NO.:52中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:66中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (xxxxiv)該VH包含SEQ ID NO.:2中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3，或 (xxxxv)該VH包含SEQ ID NO.:65中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該VL包含SEQ ID NO.:68中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3， 其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3任擇地根據IMGT編號系統定義。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體或抗原結合片段，其中： (i)該VH包含與SEQ ID NOs.:54、2、14、45、46、48、50、52、56、58、60、63及65中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成；及 (ii)該VL包含與SEQ ID NOs.:8、17、20、23、31、37、66及68中之任一者中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含該所闡述之胺基酸序列或由該所闡述之胺基酸序列組成， 任擇地其限制條件為該VH及該VL不包含以下中所闡述之胺基酸序列或不由該等胺基酸序列組成：(a)分別2及8；(b)分別14及8；(c)分別2及17；(d)分別2及20；(e)分別2及23；或(f)分別2及31。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH及該VL與以下SEQ ID NOs中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別46及8；(iii)分別46及17；(iv)分別46及20；(v)分別46及23；(vi)分別46及31；(vii)分別46及66；(viii)分別48及8；(ix)分別48及17；(x)分別48及20；(xi)分別48及23；(xii)分別48及31；(xiii)分別48及66；(xiv)分別2及66；(xv)分別54及17；(xvi)分別54及20；(xvii)分別54及23；(xviii) 54及31；(xix)分別54及66；(xx)分別56及8；(xxi)分別56及17；(xxii)分別56及20；(xxiii)分別56及23；(xxiv)分別54及31；(xxv)分別54及66；(xxvi)分別60及8；(xxvii)分別60及17；(xxviii)分別60及20；(xxix)分別60及23；(xxx)分別60及31；(xxxi)分別60及66；(xxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxiii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；(xxxxiv)分別2及37；或(xxxxv)分別65及68。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH及該VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別46及37；(iii)分別48及37；(iv)分別50及37；(v)分別52及37；(vi)分別54及37；(vii)分別56及37；(viii)分別58及37；(ix)分別60及37；(x)分別63及37；(xi)分別65及37；(xii)分別45及66；(xiii)分別46及66；(xiv)分別48及66；(xv)分別50及66；(xvi)分別52及66；(xvii)分別54及66；(xviii)分別56及66；(xix)分別58及66；(xx)分別60及66；(xxi)分別63及66；(xxii)分別65及66；(xxiii)分別45及68；(xxiv)分別46及68；(xxv)分別48及68；(xxvi)分別50及68；(xxvii)分別52及68；(xxviii)分別54及68；(xxix)分別56及68；(xxx)分別58及68；(xxxi)分別60及68；(xxxii)分別63及68；(xxxiii)分別65及68；(xxxiv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及8；(xxxv)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及17；(xxxvi)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及20；(xxxvii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及23；(xxxviii)分別45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及31；(xxxix)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及37；(xxxx)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxi)分別2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及68；(xxxxii)分別2、14、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63或65及66；(xxxxiii)分別2及8；(xxxxiv)分別2及37；(xxxxv)分別45及37；(xxxxvi)分別46及8；或(xxxxvii)分別56及8。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH及該VL分別包含SEQ ID NOs.: 54及8中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
  9. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含(i)一重鏈可變區域(VH)，該VH包含一互補決定區(CDR)H1、一CDRH2及一CDRH3，以及(ii)及一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含一CDRL1、一CDRL2及一CDRL3，其中： (a) CDRH2如SEQ ID NO.:4中所闡述且包含於SEQ ID NO.:59中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述； (b) CDRH2如SEQ ID NO.:61中所闡述且包含於SEQ ID NO.:62中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述；或 (c) CDRH2如SEQ ID NO.:61中所闡述且包含於SEQ ID NO.:64中，CDRH1如SEQ ID NO.:3中所闡述，且CDRH3如SEQ ID NO.:5中所闡述。
  10. 如請求項9之抗體或抗原結合片段，其中CDRL1如SEQ ID NO.:9中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:10中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NOs.:11、18、21、24、33及67中之任一者中所闡述。
  11. 如請求項10之抗體或抗原結合片段，其中CDRL1如SEQ ID NO.:32中所闡述，CDRL2如SEQ ID NO.:10或96中所闡述，且CDRL3如SEQ ID NOs.:11、18、21、24、33及67中之任一者中所闡述。
  12. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含一重鏈可變區域(VH)及一輕鏈可變區域(VL)，其中該VH及該VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別46及8；(iii)分別48及8；(iv)分別50及8；(v)分別52及8；(vi)分別65及68；(vii)分別56及8；(viii)分別58及8；(ix)分別60及8；(x)分別63及8；(xi)分別46及66；(xii)分別48及66；(xiii)分別50及66；(xiv)分別52及66；(xv)分別54及66；(xvi)分別56及66；(xvii)分別58及66；(xviii)分別60及66；(xix)分別63及66；或(xx)分別2及37。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該流感包含一A型流感病毒、一B型流感病毒或二者。
  14. 如請求項1至13中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或該抗原結合片段包含一人類抗體、一單株抗體、一經純化抗體、一單鏈抗體、一Fab、一Fab'、一F(ab')2或Fv。
  15. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段為一多特異性抗體或抗原結合片段，其中任擇地，該抗體或抗原結合片段為一雙特異性抗體或抗原結合片段。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含一(例如IgG1) Fc多肽或其一片段。
  17. 如請求項1至16中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG、IgA、IgM、IgE或IgD同型。
  18. 如請求項1至17中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之一IgG同型，任擇地其中一C端離胺酸經移除或一C端甘胺酸-離胺酸經移除。
  19. 如請求項1至18中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG1同型。
  20. 如請求項1至19中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG1m3異型、一IgG1m17異型、一IgG1m1異型或其任何組合。
  21. 如請求項16至20之抗體或抗原結合片段，其中該Fc多肽或其片段包含： (i)一突變，與不包含該突變之一參考Fc多肽相比，該突變增加與一人類FcRn之結合親和力(例如使用表面電漿子共振(SPR)所量測(例如Biacore，例如T200儀器，使用製造商之方案))；及/或 (ii)一突變，與不包含該突變之一參考Fc多肽相比，該突變增加與一人類FcγR之結合親和力(例如使用表面電漿子共振(SPR)所量測(例如Biacore，例如T200儀器，使用製造商之方案，及/或使用中尺度發現(MSD)所量測))。
  22. 如請求項21之抗體或抗原結合片段，其中增加與一人類FcRn之結合親和力的該突變包含：M428L；N434S；N434H；N434A；N434S；M252Y；S254T；T256E；T250Q；P257I；Q311I；D376V；T307A；E380A；或其任何組合。
  23. 如請求項21或22之抗體或抗原結合片段，其中增加與一人類FcRn之結合親和力的該突變包含：(i) M428L/N434S；(ii) M252Y/S254T/T256E；(iii) T250Q/M428L；(iv) P257I/Q311I；(v) P257I/N434H；(vi) D376V/N434H；(vii) T307A/E380A/N434A；(viii) M428L/N434A；或(ix) (i)-(viii)之任何組合。
  24. 如請求項21至23中任一項之抗體或抗原結合片段，其中增加與一人類FcRn之結合親和力的該突變包含M428L/N434S或M428L/N434A。
  25. 如請求項21至24中任一項之抗體或抗原結合片段，其中增強與一FcγR之結合的該突變包含S239D；I332E；A330L；G236A；或其任何組合。
  26. 如請求項21至25中任一項之抗體或抗原結合片段，其中增強與一FcγR之結合的該突變包含：(i) S239D/I332E；(ii) S239D/A330L/I332E；(iii) G236A/S239D/I332E；或(iv) G236A/A330L/I332E，其中該Fc多肽或其片段任擇地包含位置239處之Ser。
  27. 如請求項1至26中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含改變醣基化之一突變，其中改變醣基化之該突變包含N297A、N297Q或N297G；及/或其經去醣基化；及/或其經去岩藻醣基化。
  28. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含 (i)在一重鏈中， (i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:55、4及5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:54中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及 (i)(b)突變M428L及N434S；以及 (ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
  29. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或其一抗原結合片段，其包含： (1) (i)在一重鏈中， (i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:47、4及5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:46中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及 (i)(b)突變M428L及N434S；以及 (ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列， (2) (i)在一重鏈中， (i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:3-5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:65中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及 (i)(b)突變M428L及N434S；以及 (ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-10中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:68中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列；或 (3) (i)在一重鏈中， (i)(a)一可變區域(VH)，該VH包含分別在SEQ ID NOs.:3、57及5中闡述之互補決定區(CDR)H1、CDRH2及CDRH3胺基酸序列，其中任擇地，該VH包含與SEQ ID NO.:56中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列，及 (i)(b)突變M428L及N434S；以及 (ii)在一輕鏈中，一輕鏈可變區域(VL)，該VL包含分別在SEQ ID NOs.:9-11中闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列，其中任擇地，該VL包含與SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
  30. 如請求項28至29中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL與以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別2及31；(iii)分別2及8；(iv)分別46及8；(v)分別65及68；或(vi)分別56及8。
  31. 如請求項28至30中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL包含以下SEQ ID NOs.中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成：(i)分別54及8；(ii)分別2及31；(iii)分別2及8；(iv)分別46及8；(v)分別65及68；或(vi)分別56及8。
  32. 如請求項28至30中任一項之抗體或抗原結合片段，其中VH及VL分別與SEQ ID NOs.:2及37中所闡述之胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性，或包含該等胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。
  33. 如請求項28至32中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含一IgG1m3異型、一IgG1m17異型、一IgG1m1異型或其任何組合。
  34. 如請求項1至33中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VH包含於一重鏈中，該重鏈進一步包含SEQ ID NO.:34、SEQ ID NO.:36或SEQ ID NO.:38中所闡述之CH1-CH3胺基酸序列，或包含C端離胺酸經移除且任擇地C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:34、C端甘胺酸經移除之SEQ ID NO.:36或C端甘胺酸經移除之SEQ ID NO.:38。
  35. 如請求項1至34中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VL包含於進一步包含SEQ ID NO.:35中所闡述之CL胺基酸序列的一輕鏈中。
  36. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體，其包含： (1) (i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:39中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:39或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成； (2) (i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:40中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:40或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成； (3) (i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:42中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:42或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成； (4) (i)一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO.:43中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:43或由其組成；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成； (5) (i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:39中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:39或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成； (6) (i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:40中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或C端甘胺酸-離胺酸經移除，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:40或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:41中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成； (7) (i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:42中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:42或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或 (8) (i)二條重鏈，各重鏈包含SEQ ID NO.:43中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，或包含C端離胺酸經移除或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:43或由其組成；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含SEQ ID NO.:44中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
  37. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列及SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列。
  38. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含(i)一VH，該VH包含SEQ ID NOs.:2、45、46、48、50、52、54、56、58、60、63及65中之任一者的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，及(ii)一VL，該VL包含SEQ ID NO.:8之VL胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
  39. 一種抗流感神經胺酸酶(抗NA)抗體或抗原結合片段，其包含： (1) (i)一VH，該VH包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)；及(ii)一VL，該VL包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)； (2) (i)一VH，該VH由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)組成；及(ii)一VL，該VL由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)組成； (3) (i)一重鏈，該重鏈包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)；及(ii)一輕鏈，該輕鏈包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)，其中任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該輕鏈為一IgG1 κ輕鏈； (4) (i)二條重鏈，各重鏈包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)，其中任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該等輕鏈各自為一IgG1 κ輕鏈； (5) (i)一VH，該VH包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義；及(ii)一VL，該VL包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義； (6) (i)一重鏈，該重鏈在一VH中包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義；及(ii)一輕鏈，該輕鏈在一VL中包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義，其中進一步任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該輕鏈為一IgG1 κ輕鏈； (7) (i)二條重鏈，各重鏈在一VH中包含VH胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.:54)之CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義；及(ii)二條輕鏈，各輕鏈在一VL中包含VL胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.:8)之CDRL1、CDRL2及CDRL3，其中任擇地，該等CDR係根據IMGT定義，且其中進一步任擇地，該抗體或抗原結合片段為一(例如人類) IgG1同型且任擇地包含M428L及N434S突變，及/或其中該等輕鏈各自為一IgG1 κ輕鏈；或 (8) (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列及(ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者包含SEQ ID NO.:8中所闡述之胺基酸序列，其中任擇地，該抗體為一IgG1同型，且其中進一步任擇地，該抗體包含M428L及N434S突變(EU編號)。
  40. 如請求項1至39中任一項之抗體或抗原結合片段，其在其一重鏈中包含(i)-(xviii)中之任一者中所闡述之胺基酸突變：(i) G236A、L328V及Q295E；(ii) G236A、P230A及Q295E；(iii) G236A、R292P及I377N；(iv) G236A、K334A及Q295E；(v) G236S、R292P及Y300L；(vi) G236A及Y300L；(vii) G236A、R292P及Y300L；(viii) G236S、G420V、G446E及L309T；(ix) G236A及R292P；(x) R292P及Y300L；(xi) G236A及R292P；(xii) Y300L；(xiii) E345K、G236S、L235Y及S267E；(xiv) E272R、L309T、S219Y及S267E；(xv) G236Y；(xvi) G236W；(xvii) F243L、G446E、P396L及S267E；(xviii) G236A、S239D及H268E。
  41. 如請求項1至40中任一項之抗體或抗原結合片段，其在其一重鏈中包含胺基酸突變G236A。
  42. 如請求項1至41中任一項之抗體或抗原結合片段，其：經去岩藻醣基化；已在不能岩藻醣基化或使一多肽岩藻醣基化之能力受抑制的一宿主細胞中產生；已由一宿主細胞在抑制其岩藻醣基化之條件下產生；或其任何組合。
  43. 如請求項1至42中任一項之抗體或抗原結合片段，其為人類、人源化或嵌合的。
  44. 如請求項1至43中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至來自以下之一NA： (i)一A型流感病毒(IAV)，其中該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者；及 (ii)一B型流感病毒(IBV)。
  45. 如請求項44之抗體或抗原結合片段，其中： (i)該第1組IAV NA包含一N1、一N4、一N5及/或一N8；及/或 (ii)該第2組IAV NA包含一N2、一N3、一N6、一N7及/或一N9。
  46. 如請求項45之抗體或抗原結合片段，其中： (i)該N1為來自以下中之任何一或多者的一N1：A/California/07/2009、A/California/07/2009 I223R/H275Y、A/California/07/2009 Q250S、A/Swine/Jiangsu/J004/2018、A/Swine/Hebei/2017、A/Stockholm/18/2007、A/Brisbane/02/2018、A/Michigan/45/2015、A/Mississippi/3/2001、A/Netherlands/603/2009、A/Netherlands/602/2009、A/Vietnam/1203/2004、A/Vietnam/1203/2004 S247R、A/Vietnam/1203/2004 I223R、A/Vietnam/1203/2004 R152I、A/Vietnam/1203/2004 D199N、A/G4/SW/Shangdong/1207/2016、A/G4/SW/Henan/SN13/2018、A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018、A/Mink/Spain/2022及A/New Jersey/8/1976； (ii)該N4來自A/mallard duck/Netherlands/30/2011； (iii)該N5來自A/aquatic bird/Korea/CN5/2009； (iv)該N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011或A/chicken/Russia/3-29/2020； (v)該N2為來自以下中之任何一或多者的一N2：A/Washington/01/2007、A/Washington/01/2007 R292K、A/HongKong/68、A/South Australia/34/2019、A/Switzerland/8060/2017、A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016、A/Switzerland/9715293/2013、A/Leningrad/134/17/57、A/Florida/4/2006、A/Netherlands/823/1992、A/Norway/466/2014、A/Switzerland/8060/2017、A/Texas/50/2012、A/Victoria/361/2011、A/HongKong/2671/2019、A/HongKong/2671/2019 K431E、A/SW/Mexico/SG1444/2011、A/Tanzania/205/2010、A/Aichi/2/1968、A/Bilthoven/21793/1972、A/Netherlands/233/1982、A/Shanghai/11/1987、A/Nanchang/933/1995、A/Fukui/45/2004、A/Brisbane/10/2007、A/Tasmania/503/2020 A/Cambodia/2020、A/Perth/16/2009、A/Kansas/14/2017、A/Swine/Kansas/2021、A/Canine/Korea/VC378/2012及A/Canine/Indiana/003018/2016； (vi)該N3為來自A/Canada/rv504/2004及A/Ck/Ja/2017中之任何一或多者的一N3； (v)該N6為來自A/swine/Ontario/01911/1/99、A/Ck/Suzhou/2019及A/Hangzhou/2021中之任何一或多者的一N6； (vi)該N7為來自A/Netherlands/078/03、A/Ck/621572/03中之任何一或多者的一N7； (vii)該N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011及A/Ck/Russia/2020中之任何一或多者；及/或 (viii)該N9為來自以下中之任何一或多者的一N9：A/Anhui/2013及A/Hong Kong/56/2015。
  47. 如請求項44至46中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該IBV NA為來自以下中之任何一或多者的一NA：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)；B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)；B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)；B/Brisbane/33/2008；B/Colorado/06/2017；B/Hubei-wujiang/158/2009；B/Massachusetts/02/2012；B/Netherlands/234/2011；B/Perth/211/2001；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/Perth/211/2011；B/HongKong/05/1972；B/Phuket/3073/2013、B/Harbin/7/1994 (Victoria)、B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Victoria/504/2000 (Yamagata)；B/Victoria/2/87；B/Victoria/2/87譜系；B/Yamagata/16/88；及B/Yamagata/16/88譜系。
  48. 如請求項1至47中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至以下中之各者： (i)一第1組IAV NA； (ii)一第2組IAV NA；及 (iii)一IBV NA 其中一EC 50在約0.1 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或在約0.1 μg/mL至約2 μg/mL之一範圍內，或在0.1 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或在約0.4 μg/mL至約2 μg/mL之一範圍內，或在0.4 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內，或在0.4 μg/mL至約1 μg/mL之一範圍內，或為0.4 μg/mL或更小，其中任擇地 該抗體或抗原結合片段能夠結合至： (i)該第1組IAV NA，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL、約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、約2 μg/mL至約50 μg/mL、約2 μg/mL至約10 μg/mL或約10 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內； (ii)該第2組IAV NA，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、或約2 μg/mL至約50 μg/mL、或約2 μg/mL至約10 μg/mL、或約10 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內；及/或 (iii)該IBV NA，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL，其中進一步任擇地 該抗體或抗原結合片段能夠結合至： (i)一N1，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL； (ii)一N4，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL； (iii)一N5，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約2 μg/mL之一範圍內； (iv)一N8，其中一EC 50為約50 μg/mL； (v)一N2，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約20 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約10 μg/mL、或約0.4 μg/mL至約2 μg/mL、約1 μg/mL至約10 μg/mL、或約1 μg/mL至約20 μg/mL、或約1 μg/mL至約5 μg/mL之一範圍內，或為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20 μg/mL； (vi)一N3，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL； (vii)一N6，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL； (viii)一N7，其中一EC 50在約2 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內； (ix)一N9，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL；及/或 (xi)一IBV NA，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL。
  49. 如請求項48之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至： (i)以下中之一或多者：N1 A/California/07/2009、N1 A/California/07/2009 I223R/H275Y、N1 A/Stockholm/18/2007、N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2008、N4 A/mallard duck/Netherlands/30/2011、N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009、N2 A/Hong Kong/68、N2 A/Leningrad/134/17/57、N3 A/Canada/rv504/2004、N6 A/Swine/Ontario/01911/1/99、N9 A/Anhui/1/2013、B/Lee/10/1940 (祖性)、B/Brisbane/60/2008 (Victoria)、B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)、B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)、B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)及B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)，其中一EC 50為約0.4 μg/mL，或在約0.1 μg/mL至約1.9 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.5 μg/mL、或約0.1 μg/mL至約1.0 μg/mL之一範圍內，或為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 μg/mL； (ii) N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009，其中一EC 50為約2 μg/mL，或在約2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內； (iii) N8 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011，其中一EC 50為約50 μg/mL； (iv) N2 A/Washington/01/2007，其中一EC 50在約2 μg/mL至約10 μg/mL之一範圍內； (v) N7 A/Netherlands/078/03，其中一EC 50在約2 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內； (vi) N2 A/South Australia/34/2019，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內； (vii) N2 A/Switzerland/8060/2017，其中一EC 50在約9.5 μg/mL至約3.8 μg/mL之一範圍內； (viii) N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016，其中一EC 50在約18.4 μg/mL至約2.2 μg/mL之一範圍內； (iv) N2 A/Switzerland/9715293/2013，其中一EC 50在約1.6 μg/mL至約1.2 μg/mL之一範圍內；及/或 (v) N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2018，其中一EC 50在約0.4 μg/mL至約50 μg/mL之一範圍內，或為約0.4、約2、約10或約50 μg/mL。
  50. 如請求項1至49中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該NA表現於一宿主細胞(例如一CHO細胞)之表面上且結合至NA係根據流動式細胞測量術，及/或其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至一NA，其中一KD小於1.0E-12 M、小於1.0E-11 M、小於1.0 E-11 M，或為1.0E-12M或更小、1.0E-11M或更小或1.0E-10或更小，或一KD在1.0E-10與1.0E-13之間，或一KD在1.0E-11與1.0E-13之間，其中任擇地，該結合係藉由生物層干涉法(BLI)評定。
  51. 如請求項50之抗體或抗原結合片段，其中該NA為一N1、一N2及/或一N9。
  52. 如請求項1至51中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至： (1) (i)一NA表位，其包含以下胺基酸(N1 NA編號)中之任何一或多者：R368、R293、E228、E344、S247、D198、D151、R118；及/或(ii)一NA表位，其包含以下胺基酸(N2 NA編號)中之任何一或多者：R371、R292、E227、E344、S247、D198、D151、R118； 及/或 (2) (i)一NA表位，其包含胺基酸R368、R293、E228、D151及R118 (N1 NA編號)；及/或(ii)一NA表位，其包含胺基酸R371、R292、E227、D151及R118 (N2 NA編號)； 及/或 (3)一表位，其包含於一NA活性位中或包含一NA活性位，其中任擇地，該NA活性位包含以下胺基酸(N2編號)：R118、D151、R152、R224、E276、R292、R371、Y406、E119、R156、W178、S179、D/N198、I222、E227、H274、E277、D293、E425； 及/或 (4)一IBV NA表位，其包含：(i)以下胺基酸中之任何一或多者：R116、D149、E226、R292及R374；或(ii)胺基酸R116、D149、E226、R292及R374， 其中任擇地 (a)該表位進一步包含以下NA胺基酸(N2編號)中之任何一或多者：E344、E227、S247及D198；及/或 (b)該抗體或抗原結合片段能夠結合至包含一S245N胺基酸突變及/或一E221D胺基酸突變之一NA。
  53. 如請求項1至52中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠結合至包含一S245N胺基酸突變及/或一E221D胺基酸突變之一NA。
  54. 如請求項1至53中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠抑制一活體外感染模型、一活體內動物感染模型及/或一人類中以下之一唾液酸酶活性：(i)一IAV NA，其中該IAV NA包含一第1組IAV NA、一第2組IAV NA或二者，及/或(ii)一IBV NA，其中任擇地： (1)該第1組IAV NA包含一H1N1及/或一H5N1； (2)該第2組IAV NA包含一H3N2及/或一H7N9；及/或 (3)該IBV NA包含以下中之一或多者：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/HongKong/05/1972；B/Taiwan/2/1962 (祖性)；B/Brisbane/33/2008 (Victoria)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/New York/1056/2003 (Victoria)；B/Florida/4/2006(Yamagata)；B/Jiangsu/10/2003 (Yamagata)；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/Perth/211/2011；B/Harbin/7/1994 (Victoria)；B/Colorado/06/2017 (Victoria)；B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Perth/211/2001 (Yamagata)；B/Hubei-wujiagang/158/2009 (Yamagata)；B/Wisconsin/01/2010 (Yamagata)；B/Massachusetts/02/2012 (Yamagata)；及B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)。
  55. 如請求項1至54中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠抑制以下之一唾液酸酶活性：一第1組IAV NA；一第2組IAV NA；及/或一IBV NA， 其中一IC50在以下之一範圍內： 約0.0008 μg/mL至約4 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約3 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約2 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約1 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.9 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.8 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.7 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.6 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.5 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.4 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.3 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.2 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.1 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.09 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.08 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.07 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.06 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.05 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.04 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.03 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.02 μg/mL、約0.0008 μg/mL至約0.01 μg/mL、0.002 μg/mL至約4 μg/mL、約0.001 μg/mL至50 μg/mL、約0.1 μg/mL至約30 μg/mL、約0.1 μg/mL至約20 μg/mL、約0.1 μg/mL至約10 μg/mL、約0.1 μg/mL至約9 μg/mL、約0.1 μg/mL至約8 μg/mL、約0.1 μg/mL至約7 μg/mL、約0.1 μg/mL至約6 μg/mL、約0.1 μg/mL至約5 μg/mL、約0.1 μg/mL至約4 μg/mL、約0.1 μg/mL至約3 μg/mL、約0.1 μg/mL至約2 μg/mL、約0.1 μg/mL至約1 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.9 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.8 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.7 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.6 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.5 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.4 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.3 μg/mL、約0.1 μg/mL至約0.2 μg/mL、約0.8 μg/mL至約30 μg/mL、約0.8 μg/mL至約20 μg/mL、約0.8 μg/mL至約10 μg/mL、約0.8 μg/mL至約9 μg/mL、約0.8 μg/mL至約8 μg/mL、約0.8 μg/mL至約7 μg/mL、約0.8 μg/mL至約6 μg/mL、約0.8 μg/mL至約5 μg/mL、約0.8 μg/mL至約4 μg/mL、約0.8 μg/mL至約3 μg/mL、約0.8 μg/mL至約2 μg/mL、約0.8 μg/mL至約1 μg/mL，或為約0.1 μg/mL、約0.2 μg/mL、約0.3 μg/mL、約0.4 μg/mL、約0.5 μg/mL、約0.6 μg/mL、約0.7 μg/mL、約0.8 μg/mL、約0.9 μg/mL、約1.0 μg/mL、約1.5 μg/mL、約2.0 μg/mL、約2.5 μg/mL、約3.0 μg/mL、約3.5 μg/mL、約4.0 μg/mL、約4.5 μg/mL、約5.0 μg/mL、約5.5 μg/mL、約6.0 μg/mL、約6.5 μg/mL、約7.0 μg/mL、約7.5 μg/mL、約8.0 μg/mL、約8.5 μg/mL、約9.0 μg/mL、約10 μg/mL、約11 μg/mL、約12 μg/mL、約13 μg/mL、約14 μg/mL、約15 μg/mL、約16 μg/mL、約17 μg/mL、約18 μg/mL、約19 μg/mL、約20 μg/mL、約25 μg/mL及/或約30 μg/mL，其中任擇地 該抗體或抗原結合片段能夠抑制一或多種第1組及/或第2組IAV及/或一或多種IBV之NA唾液酸酶活性，其中一IC50在以下之一範圍內：約.00001 µg/ml至約25 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約10 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約1 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約.001 µg/ml，或約0.0001 µg/ml至約.0001 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約25 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約10 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約1 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約.0001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約.001 µg/ml至約25 µg/ml，或約.001 µg/ml至約10 µg/ml，或約.001 µg/ml至約1 µg/ml，或約.001 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約.001 µg/ml至約0.01 µg/ml，或約.01 µg/ml至約25 µg/ml，或約.01 µg/ml至約10 µg/ml，或約.01 µg/ml至約1 µg/ml，或約.01 µg/ml至約0.1 µg/ml，或約1 µg/ml至約25 µg/ml，或約1 µg/ml至約10 µg/ml， 或為約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5或15 µg/ml。
  56. 如請求項1至55中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠活化一人類FcγRIIIa，其中任擇地 活化係在將該抗體或抗原結合片段與經一IAV感染之一目標細胞(例如一A549細胞)一起培育(例如23小時)之後使用一宿主細胞(任擇地，一Jurkat細胞)確定，該宿主細胞包含：(i)該人類FcγRIIIa (任擇地，一F158對偶基因)；及(ii)可操作地連接至編碼一報導子，諸如一螢光素酶報導子之一序列的一NFAT表現控制序列，其中進一步任擇地 活化係在將該抗體或抗原結合片段與經一H1N1 IAV感染之該目標細胞一起培育(任擇地，培育約23小時)之後確定，其中任擇地，該H1N1 IAV為A/PR8/34，及/或其中任擇地，該感染之一感染倍率(MOI)為6。
  57. 如請求項1至56中任一項之抗體或抗原結合片段，其能夠中和藉由一IAV及/或一IBV引起之感染，其中任擇地，該IAV及/或該IBV具有抗病毒劑抗性，其中任擇地，該抗病毒劑為奧司他韋(oseltamivir)。
  58. 如請求項44至57中任一項之抗體或抗原結合片段，其中：(1)該IAV包含一N1 NA，其包含胺基酸突變：H275Y；E119D + H275Y；S247N + H275Y；I222V；及/或N294S，其中任擇地，該IAV包含CA09或A/Aichi；及/或(2)該IAV包含一N2 NA，其包含胺基酸突變E119V、Q136K及/或R292K。
  59. 如請求項1至58中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠：(1)治療及/或預防一個體之(i)一IAV感染及/或(ii)一IBV感染；及/或(2)治療及/或緩解由以下引起之一感染：(i)一H1N1病毒，其中任擇地，該H1N1病毒包含A/PR8/34；及/或(ii)一H3N2病毒，其中任擇地，該H3N2病毒任擇地包含A/Hong Kong/68；及/或(3)在投予一有效量之該抗體或抗原結合片段之後預防受該IAV及/或該IBV感染之一個體之體重減輕，任擇地持續(i)至多15天，或(ii)超過15天；及/或(4)預防患有一IAV感染及/或一IBV感染之一個體的一體重減輕超過10%，此藉由參考恰好在該IAV及/或該IBV感染之前的該個體之體重來確定；及/或(5)延長患有一IAV感染及/或一IBV感染之一個體的存活。
  60. 如請求項1至59中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段在一小鼠(例如一tg32小鼠)中具有如下之一活體內半衰期： (i)在以下之一範圍內：約10天至約14天、約10.2天至約13.8天、約10.5天至約13.5天、約11天至約13天、約11.5天至約12.5天，在10天與14天之間、或在10.5天與13.5天之間、或在11天與13天之間，或為約10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12.0、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13.0、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9或14.0天；或 (ii)在以下之一範圍內：約12天至約16天、約12.5天至15.5天、約13天至15天、約13.5天至約14.5天，或在12天與16天之間、或在13天與15天之間、或在13.5天與14.5天之間，或為約12.0、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13.0、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、1.36、13.7、13.8、13.9、14.0、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9、15.0 15.1、15.2、15.3、15.4、15.5、1.56、15.7、15.8、15.9或16.0天。
  61. 如請求項59或60之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至來自以下之一神經胺酸酶(NA)：(i)一A型流感病毒(IAV)，其中該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者；及/或(ii)一B型流感病毒(IBV)，且其中任擇地，該抗體或抗原結合片段能夠(1)抑制NA唾液酸酶活性及/或(2)中和藉由該IAV及/或該IBV引起之感染。
  62. 一種抗體，其包含： (1) (i)一重鏈，其包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及 (ii)一輕鏈，其包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)； (2) (i)一重鏈，其由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107組成；及 (ii)一輕鏈，其由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)組成； (3) (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者包含胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及 (ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者包含胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)；或 (4) (i)二條重鏈，其中該二條重鏈中之各者由胺基酸序列QVHLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFNNQAISWVRQAPGQGLEWMGGIFPISGTPTSAQRFQGRVTFTADESTTTVYMDLSSLRSDDTAVYYCARAGSDYFNRDLGWENYYFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.:107)，或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107組成；及 (ii)二條輕鏈，其中該二條輕鏈中之各者由胺基酸序列EIVMTQSPATLSLSSGERATLSCRASRSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASTRATGFSARFAGSGSGTEFTLTISSLQSEDSAIYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.:108)組成。
  63. 一種經分離聚核苷酸，其編碼如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段，或編碼該抗體或該抗原結合片段之一VH、一Fd、一重鏈、一VL及/或一輕鏈，其中任擇地：(1)該重鏈包含SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸經移除之SEQ ID NO.:107或由其組成；(2)該輕鏈包含SEQ ID NO.:108或由其組成；(3)該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:109；(4)該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:110；(5)該聚核苷酸包含去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，其中該RNA任擇地包含信使RNA (mRNA)；及/或(6)該聚核苷酸包含一經修飾之核苷、一帽-1結構、一帽-2結構或其任何組合，其中進一步任擇地，該聚核苷酸包含一假尿苷、一N6-甲基腺苷、一5-甲基胞苷、一2-硫代尿苷或其任何組合，其中再進一步任擇地，該假尿苷包含N1-甲基假尿苷。
  64. 如請求項63之聚核苷酸，其經密碼子最佳化以表現於一宿主細胞中，其中任擇地，該宿主細胞包含一人類細胞。
  65. 一種重組載體，其包含如請求項63或64之聚核苷酸，其中任擇地，該聚核苷酸編碼：(1)SEQ ID NO.:107，或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107；及(2) SEQ ID NO.:108，其中進一步任擇地，該載體包含SEQ ID NO.:109及SEQ ID NO.:110。
  66. 一種宿主細胞，其包含如請求項63或64之聚核苷酸及/或如請求項65之載體，其中該聚核苷酸任擇地對於該宿主細胞為異源的及/或其中該宿主細胞能夠表現經編碼之抗體或抗原結合片段或多肽。
  67. 一種經分離之人類B細胞，其包含如請求項63或64之聚核苷酸及/或如請求項65之載體，其中聚核苷酸任擇地對於該人類B細胞為異源的及/或其中該人類B細胞經不朽化。
  68. 一種組成物，其包含： (i)如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段； (ii)如請求項63或64之聚核苷酸； (iii)如請求項65之重組載體； (iv)如請求項66之宿主細胞；及/或 (v)如請求項67之人類B細胞， 及一醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑， 其中任擇地： (1)該組成物包含一第一抗體或抗原結合片段及一第二抗體或抗原結合片段，其中該第一抗體或抗原結合片段及該第二抗體或抗原結合片段中之各者係不同的且各自根據如請求項1至62中任一項； (2)該聚核苷酸編碼(i) SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，及(ii) SEQ ID NO.:108，且該聚核苷酸進一步任擇地包含SEQ ID NO.:109及SEQ ID NO.:110； (3)該組成物包含(i)一第一聚核苷酸，其編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107，其中進一步任擇地，該第一聚核苷酸包含SEQ ID NO.:109，及(ii)一第二聚核苷酸，其編碼SEQ ID NO.:108，其中進一步任擇地，該第二聚核苷酸包含SEQ ID NO.:110；或 (4)該組成物包含(1)一第一質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:107或C端離胺酸或C端甘胺酸-離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107之一聚核苷酸，其中進一步任擇地，該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:109，及(2)一第二質體或載體，其包含編碼SEQ ID NO.:108之一聚核苷酸，其中進一步任擇地，該聚核苷酸包含SEQ ID NO.:110。
  69. 一種組成物，其包含囊封於一載劑分子中之請求項63或64之聚核苷酸或如請求項65之載體，其中該載劑分子任擇地包含一脂質、一脂質衍生之遞送媒劑，諸如一脂質體、一固體脂質奈米粒子、一油性懸浮液、一次微米級脂質乳液、一脂質微泡、一逆脂質微胞、一耳蝸脂質體、一脂質微管、一脂質微柱、脂質奈米粒子(LNP)或一奈米尺度平台。
  70. 如請求項63或64之聚核苷酸、如請求項65之載體或如請求項68或69之組成物，其包含： (1)一第一聚核苷酸(例如mRNA)，其編碼包含SEQ ID NO.: 54中所闡述之VH之一抗體重鏈；及一第二聚核苷酸(例如mRNA)，其編碼包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL之一抗體輕鏈；或 (2)一第一聚核苷酸(例如mRNA)，其編碼包含分別如SEQ ID NOs.: (i) 55、4及5中所闡述之CDRH1、CDRH2及CDRH3序列之一抗體重鏈；及一第二聚核苷酸(例如mRNA)，其編碼包含分別如SEQ ID Nos.: 9-11中所闡述之CDRL1、CDRL2及CDRL3序列之一抗體輕鏈。
  71. 一種製備如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段之方法，其包含在足以使如請求項65之宿主細胞或如請求項66之人類B細胞分別表現該抗體或抗原結合片段之一時間及條件下培養該宿主細胞或該人類B細胞，其中任擇地，該方法進一步包含分離該抗體或抗原結合片段。
  72. 一種治療或預防一個體之一IAV感染及/或一IBV感染之方法，該方法包含向該個體投予一有效量之： (i)如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段； (ii)如請求項63、64及70中任一項之聚核苷酸； (iii)如請求項65或70之重組載體； (iv)如請求項66之宿主細胞； (v)如請求項67之人類B細胞；及/或 (vi)如請求項68至70中任一項之組成物。
  73. 如請求項72之方法，其中：(1)該抗體或抗原結合片段係以約3 mg/kg、約0.9 mg/kg或約0.3 mg/kg之一劑量向該個體投予；及/或(2)該IAV感染為一H5N1及/或一H7N9感染。
  74. 一種治療或預防一人類個體之一流感感染之方法，該方法包含向該個體投予如請求項63、64或70之聚核苷酸、如請求項65或70之重組載體或如請求項68至70中任一項之組成物，其中該聚核苷酸包含mRNA，其中任擇地，該流感感染包含一IAV感染及/或一IBV感染。
  75. 如請求項72至74中任一項之方法，其包含：(1)向該個體投予一單次劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物；或(2)向該個體投予二個或更多個劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物。
  76. 如請求項72至75中任一項之方法，其包含：(1)任擇地在一流感季節之前或在一流感季節期間，每年一次向該個體投予一劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物；或(2)每年二次或更多次向該個體投予一劑量之該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物；例如約每6個月一次。
  77. 如請求項72至76中任一項之方法，其包含肌肉內、皮下或靜脈內投予該抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞或組成物。
  78. 如請求項72至77中任一項之方法，其中： (1)該治療及/或預防包含暴露後預防；及/或 (2)該個體已接受、正在接受或將接受一抗病毒劑，其中任擇地，該抗病毒劑包含一神經胺酸酶抑制劑、一流感聚合酶抑制劑或二者，其中進一步任擇地，該抗病毒劑包含奧司他韋、紮那米韋(zanamivir)、巴洛沙韋(baloxavir)、帕拉米韋(peramivir)、拉尼米韋(laninamivir)或其任何組合。
  79. 如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段、如請求項63、64及70中任一項之聚核苷酸、如請求項65或70之重組載體、如請求項66之宿主細胞、如請求項67之人類B細胞及/或如請求項68至70中任一項之組成物，其用於治療或預防一個體之一IAV感染及/或一IBV感染的一方法。
  80. 如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段、如請求項63、64及70中任一項之聚核苷酸、如請求項65或70之重組載體、如請求項66之宿主細胞、如請求項67之人類B細胞及/或如請求項68至70中任一項之組成物，其用於製備用於治療或預防之一個體之一IAV感染及/或一IBV感染的一藥劑。
  81. 一種用於活體外診斷一IAV感染及/或一IBV感染之方法，該方法包含： (i)使來自一個體之一樣品與如請求項1至62中任一項之抗體或抗原結合片段接觸；及 (ii)偵測包含一抗原及該抗體，或包含一抗原及該抗原結合片段之一複合體。
  82. 如請求項72至78及81中任一項之方法或如請求項79及80中任一項所使用之抗體或抗原結合片段、多肽、聚核苷酸、重組載體、宿主細胞、人類B細胞及/或組成物，其中： (i)該IAV包含一第1組IAV、一第2組IAV或二者，其中任擇地，該第1組IAV NA包含一N1、一N4、一N5及/或一N8；及/或該第2組IAV NA包含一N2、一N3、一N6、一N7及/或一N9，其中進一步任擇地，該N1來自A/California/07/2009、來自A/California/07/2009 I223R/H275Y、來自A/California/07/2009 Q250S、來自A/Swine/Jiangsu/J004/2018、來自A/Swine/Hebei/2017、來自A/Stockholm/18/2007、來自A/Brisbane/02/2018、來自A/Michigan/45/2015、來自A/Mississippi/3/2001、來自A/Netherlands/603/2009、來自A/Netherlands/602/2009、來自A/Vietnam/1203/2004、來自A/Vietnam/1203/2004 S247R、來自A/Vietnam/1203/2004 I223R、來自A/Vietnam/1203/2004 R152I、來自A/Vietnam/1203/2004 D199N、來自A/G4/SW/Shangdong/1207/2016、來自A/G4/SW/Henan/SN13/2018、來自A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018、來自A/Mink/Spain/2022及/或來自A/New Jersey/8/1976；該N4來自A/mallard duck/Netherlands/30/2011；該N5來自A/aquatic bird/Korea/CN5/2009；該N8來自A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011及/或來自A/chicken/Russia/3-29/2020；該N2來自A/Washington/01/2007、來自A/HongKong/68、來自A/HongKong/2671/2019、來自A/HongKong/2671/2019 K431E、來自A/South Australia/34/2019、來自A/Switzerland/8060/2017、來自A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016、來自A/Switzerland/9715293/2013、來自A/Leningrad/134/17/57、來自A/Florida/4/2006、來自A/Netherlands/823/1992、來自A/Norway/466/2014、來自來自A/Texas/50/2012、來自A/Victoria/361/2011、來自A/SW/Mexico/SG1444/2011、來自A/Aichi/2/1968、來自A/Bilthoven/21793/1972、來自A/Netherlands/233/1982、來自A/Shanghai/11/1987、來自A/Nanchang/933/1995、來自A/Fukui/45/2004、A/Brisbane/10/2007、來自A/Tanzania/205/2010、來自A/Cambodia/2020、來自A/Perth/16/2009、來自A/Kansas/14/2017、為A/Swine/Kansas/2021、來自A/Canine/Korea/VC378/2012及/或來自A/Canine/Indiana/003018/2016；該N3來自A/Canada/rv504/2004及/或來自A/chicken/Jalisco/PAVX17170/2017；該N6來自A/swine/Ontario/01911/1/99、來自A/Ck/Suzhou/j6/2019及/或來自A/Hangzhou/01/2021；該N7來自A/Netherlands/078/03及/或來自及A/Ck/621572/03；及/或該N9來自A/Anhui/2013、來自A/Hong Kong/56/2015；及/或 (ii)該IBV NA來自：B/Lee/10/1940 (祖性)；B/Brisbane/60/2008 (Victoria)；B/Malaysia/2506/2004 (Victoria)；B/Malaysia/3120318925/2013 (Yamagata)；B/Wisconsin/1/2010 (Yamagata)；B/Yamanashi/166/1998 (Yamagata)；B/Brisbane/33/2008 (Victoria)；B/Colorado/06/2017 (Victoria)；B/Hubei-wujiang/158/2009 (Yamagata)；B/Massachusetts/02/2012 (Yamagata)；B/Netherlands/234/2011；B/Perth/211/2001(Yamagata)；B/Phuket/3073/2013 (Yamagata)；B/Texas/06/2011 (Yamagata)；B/HongKong/05/1972；B/Harbin/7/1994 (Victoria)；B/Washington/02/2019 (Victoria)；B/Perth/211/2011；B/Victoria/2/87；B/Victoria/2/87譜系；B/Yamagata/16/88；B/Yamagata/16/88譜系或其任何組合。
  83. 一種治療或預防一個體之一流感感染之方法，該方法包含以約3 mg/kg、約0.9 mg/kg或約0.3 mg/kg之一劑量向該個體投予一抗體或抗原結合片段，或以約3 mg/kg、約0.9 mg/kg或約0.3 mg/kg之一劑量向該個體投予包含該抗體或抗原結合片段之一組成物，其中： (i)該抗體或抗原結合片段之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列分別如SEQ ID NOs.: 55、4、5及9-11中所闡述； (ii)該抗體或抗原結合片段之一VH包含SEQ ID NO.:54中所闡述之VH胺基酸序列的CDRH1、CDRH2及CDRH3，且該抗體或抗原結合片段之一VL包含SEQ ID NO.:8中所闡述之VL胺基酸序列的CDRL1、CDRL2及CDRL3； (iii)該抗體或抗原結合片段之一VH及一VL分別包含SEQ ID NOs.:54及8中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成；及/或 (iv)該抗體或抗原結合片段之一重鏈及一輕鏈分別包含SEQ ID NOs.: 107 (或c端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)及108中所闡述之胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成，其中任擇地 (1)該流感感染包含一H5N1 IAV、一H7N9 IAV或二者；及/或 (2)該方法包含向該個體投予一單次劑量之該抗體或抗原結合片段；及/或 (3)該方法包含向該個體投予3 mg/kg之該抗體或抗原結合片段，或該方法包含向該個體投予0.9 mg/kg之該抗體或抗原結合片段，或該方法包含向該個體投予0.3 mg/kg之該抗體或抗原結合片段。
  84. 如請求項83中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含一人類IgG1同型(例如包含一異型，諸如IgG1m3或IgG1m17,1)且在Fc中包含M428L及N434S突變，及/或其中該抗體或抗原結合片段包含各自包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的二條重鏈及各自包含SEQ ID NO.:108中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的二條輕鏈，及/或其中該方法包含藉由靜脈內投予向該個體投予該抗體、抗原結合片段或組成物，及/或包含該抗體或抗原結合片段之該組成物：具有280-315 mOsm/kg之一滲透重量莫耳濃度；在一靈敏度＜ 0.05 EU/mg之情況下不具有可偵測的內毒素；為無菌的；具有7.4之一pH；且包含藉由親和層析純化之該抗體或抗原結合片段，及/或該個體：患有一H5N1流感感染；處於感染一H5N1流感感染之風險下；已暴露於一H5N1流感；患有一H7N9流感感染；處於感染一H7N9流感感染之風險下；及/或已暴露於一H7N9流感。
  85. 如請求項83或84之方法，其中該治療或預防包含預防。
  86. 如請求項83或84之方法，其中該治療或預防包含暴露後預防。
  87. 一種組成物，其包含一抗NA抗體或抗原結合片段及一醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑，其中： (i)該抗體或抗原結合片段包含分別如SEQ ID NOs.:55、4、5、9、10及11中所闡述之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3胺基酸序列；及/或 (ii)該抗體或抗原結合片段包含分別在SEQ ID NOs.:54及8中闡述之VH及VL胺基酸序列，其中任擇地 該抗體或抗原結合片段包含一人類IgG1同型(例如包含一異型，諸如IgG1m3或IgG1m17,1)且在Fc中包含M428L及N434S突變，及/或 該抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO.:108中所闡述之輕鏈胺基酸序列，及/或 一組成物之抗體或抗原結合片段包含各自包含SEQ ID NO.:107 (或C端離胺酸經移除之SEQ ID NO.:107)中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的二條重鏈及各自包含SEQ ID NO.:108中所闡述之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的二條輕鏈，及/或 該組成物包含相對於需要該組成物之一個體的體重(kg)呈3 mg/kg、0.9 mg/kg或0.3 mg/kg之一濃度的該抗體或抗原結合片段。
  88. 如請求項87之組成物，其中該組成物：具有280-315 mOsm/kg之一滲透重量莫耳濃度；在一靈敏度＜ 0.05 EU/mg之情況下不具有可偵測的內毒素；為無菌的；具有7.4之一pH；且包含藉由親和層析純化之該抗體或抗原結合片段。
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