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TW202340177A - 作為 flt3抑制劑之吡嗪化合物 - Google Patents

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TW202340177A
TW202340177A TW111150672A TW111150672A TW202340177A TW 202340177 A TW202340177 A TW 202340177A TW 111150672 A TW111150672 A TW 111150672A TW 111150672 A TW111150672 A TW 111150672A TW 202340177 A TW202340177 A TW 202340177A
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曉東 王
南宏 林
索斯騰 Ａ 柯奇柏格
索羅曼 Ｂ 烏蓋許
尼爾霍華 斯奎爾斯
拉文卓 Ｂ 屋帕薩尼
湯瑪士 布特勒
圖 范
詹姆士 Ｔ 鮑莫爾
安娜 崔妮蒂 特如曼 亞當
蘇永利
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美商拜歐米富士恩股份有限公司
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Abstract

本發明揭露抑制FLT3活性的雜環化合物。還描述FLT3的特異性共價抑制劑。還揭露包含所述化合物的醫藥組合物。本發明揭露單獨或與其他治療劑聯合使用FLT3抑制劑治療增殖疾病或病症的方法，所述增殖疾病或病症包括血液惡性腫瘤和其他依賴FLT3活性的疾病或病症。

Description

作為FLT3抑制劑之吡嗪化合物
本文描述了化合物、製備此類化合物的方法、醫藥組合物和含有此類化合物的藥物、以及使用此類化合物和組合物抑制FLT3活性的方法。
類FMS酪氨酸激酶3（FLT3）是在正常造血幹細胞/先驅細胞上表達的受體酪氨酸激酶。在其被FLT3配體（FL）活化後，FLT3二聚化並誘導與造血細胞存活和增殖相關的許多訊息傳導途徑。
FLT3也經常在許多急性白血病細胞中過度表達，並且 FLT3基因的突變是急性骨髓性白血病中最常見的一般性改變。 FLT3基因的活化性突變佔新診斷的AML成人患者的約三分之一（Papaemmanuil等人, 2016, N Engl J Med. 374：2209），其中這些突變引起組成型FLT3訊息級聯（signaling cascade）。在其他骨髓惡性腫瘤中也發現了 FLT3的基因改變，例如骨髓發育不良症候群（MDS）和急性淋巴細胞白血病（ALL）。活化性 FLT3突變是內部串聯重複（ITD），或酪氨酸激酶結構域中的點突變，或有時兩者的組合。 FLT3-ITD突變存在於約20％的AML患者中，點突變存在於約5％-10％的AML患者中。兩種突變都可以通過不依賴於配體（ligand-independent）的自身磷酸化持續地（constitutively）活化FLT3，導致訊息傳導和細胞增殖增加，導致白血病細胞的存活（Kennedy等人, 2020, Front。Oncol.10：612880；Kiyoi 等人, 2020, Cancer Science 111:312）。 FLT3-ITD突變尤其與不良預後和高復發率相關，且ITD 突變可在疾病進展及/或復發期間獲得或喪失。為此，歐洲白血病網絡和癌症網絡指南都推薦在AML患者中測試 FLT3-ITD 。
早期研究的FLT3抑制劑，稱為第一代FLT3抑制劑，包括多激酶抑制劑索拉非尼（sorafenib）、米哚妥林（midostaurin）、來他替尼（lestaurtinib）、舒尼替尼（sunitinib）和坦度替尼（tandutinib）。這些第一代抑制劑缺乏作為單一療法的功效，最可能部分是由於它們的非特異性作用。儘管這些第一代抑制劑中的許多已經作為單一療法或與化學療法組合而被放棄作為AML的治療劑，但是米哚妥林（Rydapt）與化學療法組合在2017年對患有新診斷的 FTL3突變的AML的成人獲得FDA批准。
第二代FLT3抑制劑對FLT3具有更大的特異性並且更有效。第二代抑制劑包括吉非替尼（gilteritinib）、克諾拉尼（crenolanib）和喹雜替尼（quizartinib）。吉非替尼和克諾拉尼都是I型抑制劑，意味著它們可以結合FLT3的無活性和活性構象，而喹雜替尼是僅可以結合無活性構象的II型抑制劑。2018年，FDA批准吉特替尼用於 FLT3突變患者的復發性或難治性AML。在研究喹雜替尼與誘導或鞏固化療（QuANTUM-R）組合在患有復發性或難治性FLT3-ITD　AML的患者中的作用的III期試驗中，喹雜替尼表現出存活益處和可管理的安全性特徵（Cortes等人, 2019, Lancet Oncol, 20：984）。目前，正在III期臨床試驗中研究克諾拉尼用於治療具有 FLT3突變的患者中的復發性或難治性AML。
FLT3的另一種抑制劑包括共價結合的FLT3抑制劑FF-10101，其已證明對喹雜替尼-抗性（quizartinib-resistant）AML具有活性（Yamaura等人, 2018, Blood, 131：426），並且目前正在針對復發性或難治性血液惡性腫瘤（包括AML）的臨床試驗中進行研究。FF-10101和其他 N-苯基嘧啶-2-胺化合物在PCT申請WO 2013/157540和轉讓給Fujifilm公司的美國專利第9,145,415號中描述。PCT申請WO 2015/056683和2015/056683和美國專利第9,701,644號，也是轉讓給Fujifilm 公司，描述了FF-10101的結晶形式。轉讓給Fujifilm 公司的描述FF-10101和FF-10101用於某些類型癌症的用途的其他專利和專利申請包括PCT申請WO 2016/027904；WO 2020/075838；WO 2020/175629；和美國專利第9,987,278號。
Hanmi Pharmaceutical有限公司在PCT申請WO 2020/022600；WO 2020/171646；WO 2020/171649；和WO 2020/262974中描述了含嘧啶的化合物和這些化合物在FLT3-突變型癌症中的用途。含有嘧啶的FLT3抑制劑HM43239目前正在進行1/2期臨床試驗，用於患有復發性或難治性抗性AML的患者（Daver等人. 2019, Blood, 134: 1331）。
Genosco和Oscotec公司在PCT申請WO 2013/142382和美國專利第8,877,763號中描述了吡啶並嘧啶化合物及其在治療血液惡性腫瘤中的用途。在轉讓給Oscotec公司的WO 2020/040467中描述了特定FLT3抑制劑G-749的晶型，在也轉讓給Oscotec公司的WO 2020/159117中描述了G-749的口服醫藥組合物。
在生物化學上，據報導這些抑制劑阻斷FLT3在TYR-589/591處的自身磷酸化和下游訊息傳導介質訊息轉導子和轉錄活化子5（STAT5）和細胞外訊息相關激酶（ERK）（Wang等人, 2021, J. Med. Chem. 64（8）：4870-4890。對FLT3抑制劑的抗性已在臨床中通過 FLT3中的二級突變（包括先前僅ITD突變腫瘤中的酪氨酸激酶結構域中的突變）報導（Heidel等人, 2006, Blood 107（1）：293-300，Smith 等人, 2012, Nature 485（7397）：260-263）。
儘管在該領域進行了研究，仍然需要遞送有效的化合物來抑制FLT3。因此，本發明的目的是提供FLT3抑制劑，其醫藥組合物和抑制FLT3的方法。同樣重要的是開發將克服ITD共同突變的習知抗性機制的抑制劑，所述ITD共同突變再削弱FLT3的自身磷酸化能力。
在一態樣中，本文描述了FLT3的抑制劑。本文還描述了FLT3的特異性雜環抑制劑。在一些實施方案中，FLT3抑制劑是共價抑制劑。在一些實施方案中，FLT3抑制劑是非共價抑制劑。
在另一態樣中，本文描述了合成此類共價抑制劑的方法，使用此類共價抑制劑治療疾病（包括其中FLT3的抑制對患有該疾病的患者提供治療益處的疾病）的方法。還描述了包含FLT3抑制劑和一種或多種醫藥學上可接受的載體，賦形劑或稀釋劑的醫藥組合物。本文還描述了抑制FLT3的化合物及其使用方法。在某些實施方案中，本文所述的化合物和醫藥組合物用於治療血液惡性腫瘤，包括但不限於急性髓性白血病。
在一些實施方案中，本文提供具有以下結構的根據式（P6-I）的化合物： 或其立體異構物或其醫藥學上可接受的鹽， 其中：A 1、A 2、A 3和A 4各自獨立地為–C(R 7)=或-N=；條件是A 1、A 2、A 3和A 4中不超過兩個N； L 1和L 3各自獨立地是取代或未取代的C 1-C 4伸烷基； R 1是H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的環烷基、或取代或未取代的雜環烷基； R 2b獨立地是H或C 1-C 4烷基； R 4是i)-C(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)，ii)-S(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)，iii)-S(O) 2-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)，或 iv）取代或未取代的環氧化物； R 5是H、Cy、CN、鹵素、取代或未取代的C 1-6烷基，取代或未取代的鹵烷基，取代或未取代的C 1-6烷氧基，取代或未取代的鹵烷氧基，取代或未取代的烷胺基； Cy是取代或未取代的環烷基，或取代或未取代的雜環烷基； R 6a和R 6b各自獨立地為H、鹵素、CN或C 1-6烷基；或R 6a和R 6b連接在一起以形成鍵；R 6C為H、鹵基、CN或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基是未被取代的或被選自以下基團中的一個或多個取代：取代或未取代的胺基、取代或未取代的羥基或取代或未取代之具有1到2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的雜環烷基；以及 R 7各自獨立地是H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基，或取代或未取代的雜環烷基。
在一些實施方案中，本文提供了根據式（P6-IIa）或（P6-IIb）的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在一些實施方案中，本文提供了式（P6-IIIa）、（P6-IIIb）、（P6-IIIc）或（P6-IIId）的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在一些實施方案中，對於本文所述的任何式的化合物，R 5是H、Cy、CN、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或C 1-6烷胺基；Cy是環烷基或雜環烷基；Cy、烷基、烷氧基和烷胺基各自是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基或二烷胺基、取代或未取代的環烷基，取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個取代。
在一些實施方案中，對於本文所述的任何式的化合物，R 5是Me、Et、n-Pr、i-Pr、i-Bu、環丙基、N,N-二甲基、N-乙基-N-甲基、N-異丙基胺基、N-異丙基-N-甲基胺基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基。
在一些實施方案中，對於本文所述的任何式的化合物，R 4是-C(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c、-S(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c、 -S(O) 2-B-C(R 6a)=C(R 6b)‑C(O)-R 6c、-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c、-B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O)-R 6c、-B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O) 2-R 6c、-B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-R 6aR 6b；或-B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-OR 6aOR 6b；B是取代或未取代的C 1-4伸烷基、取代或未取代的環烷基，或取代或未取代的雜環烷基；且R 6c為取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的胺基、取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子。在一些實施方案中，R 4為-CH 2-CH=CH-C(O)-N(CH 3) 2。在一些實施方案中，R 4為‑CH 2-C≡CH-C(O)-N(CH 3) 2。
在某些實施方案中，所述化合物能夠共價鍵合FLT3。在某些實施方案中，所述化合物包含能夠共價鍵合FLT3的官能基，例如在R 4處。在某些實施例中，化合物包含促進共價鍵結FLT3的連接子（linker）。雖然不希望受任何操作理論的束縛，但據信結構P6-I的右側（L1右側）形成能夠結合FLT3的結合袋的官能基。本文提供的化合物的連接子提供足夠的長度和組成以提供R 4與FLT3上的位點（例如Cys12）的共價鍵合。在某些實施方案中，連接子包含L 1。在某些實施方案中，連接子包含L 3。在某些實施方案中，連接子包含L 1和L 3。在某些實施方案中，連接子是-L 1-N(H)-C(O)-L 3-。在某些實施例中，連接子促進共價結合，這將化合物與所屬技術領域的通常知識者習知的具有不足以促進FLT3的充分或任何共價結合的長度或組成或兩者的連接子的化合物區分開。
在某些實施方案中，化合物不是化合物Cpd 1-41中的任一種，或其任何鹽。
Cpd 結構
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
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15
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29
30
31  
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36
37
38
39
40
41
在某些實施方案中，所述化合物不是化合物14-P19中的任一種，或其任何鹽。
Cpd 結構
P-14
P-15
P-16
P-17
P-18
P-19
本文考慮上述各種變量的基團的任何組合。應當理解，所屬技術領域的通常知識者可以選擇本文提供的化合物上的取代基和取代模式，以提供化學穩定的化合物，並且可以透過本領域習知的技術以及本文所述的技術合成。
在一些實施方案中，本文提供醫藥組合物，其包含治療有效量的至少一種本文任何化合物或其醫藥學上可接受的鹽、醫藥學活性代謝物、醫藥學上可接受的前驅藥或醫藥學上可接受的溶劑化物。在某些實施方案中，本文提供的醫藥組合物還包含醫藥學上可接受的載體、賦形劑及/或稀釋劑。
提供了配製用於透過合適途徑和方式給藥的醫藥組合物，其含有有效濃度的一種或多種本文提供的化合物或其醫藥學上有效的衍生物，所述醫藥組合物遞送有效治療、預防或改善疾病、病症或狀況的一種或多種症狀的量，所述疾病、病症或狀況受FLT3活性調節或以其他方式影響，其中涉及FLT3活性，或特徵在於 FLT3基因中的突變。有效量和濃度對於改善本文公開的任何疾病、病症或狀況的任何症狀是有效的。
在某些實施方案中，本文提供了醫藥組合物，其包含：i)醫藥學上可接受的載體、稀釋劑及/或賦形劑；以及ii)一種或多種本文提供的化合物。
在一些實施方案中，本文提供了醫藥組合物，其包含治療有效量的選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物和醫藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。在一些實施方案中，將包含選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物的醫藥組合物配製成選自口服給藥、腸胃外給藥、口腔給藥、鼻腔給藥、局部給藥和直腸給藥的給藥途徑。
在一些實施方案中，本文提供了預防、治療或改善哺乳動物中與FLT3異常活性相關的疾病或病症的方法，其包括給予哺乳動物有效治療疾病或治療病症量的選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽。在其他實施方案中，本文提供了預防、治療或改善哺乳動物中與FLT3基因突變相關的疾病或病症的方法，其包括給予哺乳動物有效治療疾病或治療病症量的選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽。在某些實施方案中， FLT3突變是內部串聯突變( FLT3-ITD)。在某些實施方案中， FLT3突變是酪氨酸激酶結構域( FLT3-TKD)中的點突變。
在一些實施方案中，所述疾病或病症是血液惡性腫瘤，包括但不限於白血病、淋巴瘤或多發性骨髓瘤。在某些實施方案中，疾病或病症是白血病，包括但不限於急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、前淋巴細胞白血病(PLL)、大顆粒淋巴細胞(LGL)、多毛細胞白血病(HCL)、肥大細胞白血病(MCL)或骨髓發育不良症候群(MDS)。
在某些實施方案中，所述疾病或病症是急性骨髓性白血病(AML)。在某些實施方案中，AML是 FLT3突變陽性的。在某些實施方案中，AML是新診斷的。在某些實施方案中，AML是 FLT3突變陽性的且是新診斷的。在某些實施方案中，AML是復發性或難治性的。在某些實施方案中，AML是復發性或難治性AML，並且是 FLT3突變陽性的。在某些實施方案中，患者具有 NPM1突變。
在某些實施方案中，所述疾病或病症是淋巴瘤，包括但不限於非何杰金氏淋巴瘤或何杰金氏淋巴瘤。在某些實施方案中，所述疾病或病症是多發性骨髓瘤。
在一些實施方案中，本文提供了選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其用於治療。在一些實施方案中，本文提供了選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其用於治療與FLT3體內異常活性相關的疾病或病症。在一些實施方案中，本文提供了選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其用於治療。在一些實施方案中，本文提供了選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其用於體內治療與 FLT3基因中的突變相關的疾病或病症。在一些實施方案中，本文提供了選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其用於製備治療用藥物。在一些實施方案中，本文提供了選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其用於製備治療與FLT3的異常活性相關或與 FLT3基因突變相關的疾病或病症的藥物。有用的疾病和病症在本文中描述。
在一些實施方案中，本文提供了用於治療的醫藥組合物，其包含選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，本文提供了包含選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的醫藥組合物，其用於治療與FLT3的異常活性相關或與 FLT3基因突變相關的疾病或病症。在一些實施方案中，本文提供了用於製備治療用藥物的醫藥組合物，其包含選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，本文提供了包含選自式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的醫藥組合物，其用於製備治療體內與FLT3異常活性相關或與 FLT3基因突變相關的疾病或病症的藥物。有用的疾病和病症在本文中描述。
在上述實施方案的任一個中，一些實施方案中，施用是腸內、胃腸外或兩者，並且其中(a)將有效量的所提供的化合物全身施用至所述哺乳動物；(b)將有效量的所提供的化合物口服給予所述哺乳動物；(c)將有效量的所提供的化合物靜脈內施用於所述哺乳動物；(d)透過吸入給予有效量的所提供的化合物；(e) 透過鼻腔給予有效量的所提供的化合物；或(f)透過注射給予哺乳動物有效量的所提供的化合物；(g)將有效量的所提供的化合物局部（皮膚）施用給哺乳動物；(h)透過眼部給予有效量的所提供的化合物；或(i)將有效量的所提供的化合物經直腸施用於所述哺乳動物。
在任何上述實施方案中是包括單次施用有效量的所提供化合物的一些實施方案，包括其中(i)所提供化合物施用一次；(ii)在一天的時間間隔內將提供的化合物多次施用於所述哺乳動物；(iii)連續地；或(iv)持續地。
在任何上述實施方案中是包括多次施用有效量的所提供的化合物的一些實施方案，包括其中(i)以單劑量施用所提供的化合物的一些實施方案；(ii)多次給藥間隔為每6小時；(iii)每8小時向哺乳動物施用所提供的化合物。在一些實施方案中，所述方法包括停藥期，其中暫時中止所述化合物的施用或暫時減少所施用的化合物的劑量；在停藥期結束時，重新開始化合物的給藥。停藥期的長度可以從2天到1年變化。
在涉及治療增殖性疾病包括癌症例如血液癌症的上述實施方案的任一個中，一些實施方案包括施用至少一種選自阿崙單抗（alemtuzumab）、阿扎胞苷（azacitine）、硼替佐米（bortezomib）、地西他濱（decitabine）、依維莫司（everolimus）、馬拉米坦（malademetan）、帕博西尼（palbociclib）、泊那替尼（ponatinib）、維奈托克（venetoclax）和伏立諾他（vorinostat）的另外的藥劑。在其他實施方案中，包括癌症例如血液癌症的增殖性病症的治療包括施用至少一種另外的活性劑，其選自三氧化二砷、天冬醯胺酶(聚乙二醇化或非聚乙二醇化)、貝伐單抗（bevacizumab）、西妥昔單抗（cetuximab）、基於鉑的化合物，例如順鉑（cisplatin）、克拉屈濱（cladribine）、道諾黴素（daunorubicin）/多柔比星（doxorubicin）/伊達比星（idarubicin）、伊立替康（irinotecan）、氟達拉濱（fludarabine）、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil）、吉妥單抗（gemtuzumab）、甲氨蝶呤（methotrexate）、太平洋紫杉醇（Paclitaxel™）、紫杉醇（taxol）、替莫唑胺（temozolomide）、硫鳥嘌呤（thioguanine），或藥物類別包括激素(抗雌激素、抗雄激素或促性腺激素釋放激素類似物)、干擾素例如α干擾素、氮芥類例如硫酸布他卡因（busulfan）或美法崙（melphalan）或二氯甲基二乙胺（mechlorethamine）、類視黃醇例如維甲酸（tretinoin）、不可逆拓撲異構酶抑制劑例如伊立替康（irinotecan）或拓撲替康（topotecan）、酪氨酸激酶不可逆抑制劑例如吉非尼（gefinitinib）或伊馬替尼（imatinib），或治療由這樣的治療誘導的體徵或症狀的藥劑，包括別嘌呤醇（allopurinol）、非格司亭（filgrastim）、格拉司瓊（granisetron）/昂丹司瓊（ondansetron）/帕洛諾司瓊（palonosetron）、屈大麻酚（dronabinol）。
在某些實施方案中，本文提供的是製造的物品，其包括包裝材料、在包裝材料內的本文提供的化合物或其組合物，和指示施用化合物或組合物以治療疾病或病症的標籤。
在一些實施方案中，式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)的化合物是FLT3活性的共價抑制劑。在某些實施方案中，在酶試驗中，這樣的共價抑制劑具有低於10微莫耳（microM）的IC 50。在一些實施方案中，FLT3抑制劑具有小於1微莫耳的IC 50，在一些實施方案中，小於0.25微莫耳或甚至小於0.025微莫耳。
本文所述的方法和組合物的其他目的、特徵和優點將從以下詳細描述中變得顯而易見。然而，應當理解，詳細描述和具體示例雖然指示具體實施例，但僅以說明的方式給出，因為根據該詳細描述，在本公開的精神和範圍內的各種改變和修改對於所屬技術領域的通常知識者將變得顯而易見。本文所用的章節標題僅用於組織目的，而不應被解釋為限制所描述的主題。本申請中引用的所有文件或文件的部分，包括但不限於專利、專利申請、文章、書籍、手冊和論文，出於任何目的通過引用全部明確地併入本文。
1.特定術語
除非另外定義，否則本文所用的所有技術和科學術語具有與所要求保護的主題所屬技術領域的通常知識者通常理解的相同含義。在本文術語有多個定義的情況下，以本部分的定義為準。在參考URL或其他這樣的標識符或地址的情況下，應當理解，這樣的標識符可以改變，並且網際網路上的特定訊息可以來回變化，但是透過搜索網際網路可以找到等效的訊息。對其的引用證明了這種訊息的可用性和公共傳播。
應當理解，前面的一般描述和下面的詳細描述僅是示例性和說明性的，而不是對所要求保護的任何主題的限制。在本申請中，除非另外特別說明，單數的使用包括複數。必須注意，如在說明書和所附請求項中所使用的，單數形式「一」、「一個」和「該」包括複數指代物，除非上下文另外清楚地指明。術語「包括」以及其他形式，例如「包含（include）」、「包括（includes）」和「被包括（included）」的使用不是限制性的。標準化學術語的定義可以在參考著作中找到，包括Carey and Sundberg "ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 THED." Vols. A (2000) and B (2001), Plenum Press, New York。除非另有說明，使用所屬技術領域的通常知識者習知的質譜、NMR、HPLC、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術和藥理學的常規方法。除非提供具體的定義，本文所述的分析化學、合成有機化學和醫藥化學所採用的命名法以及實驗室程序和技術是本領域習知的。標準技術可用於化學合成、化學分析、藥物製備、配製和遞送以及患者的治療。標準技術可用於重組DNA、寡核苷酸合成以及組織培養和轉化（例如電穿孔、脂染）。反應和純化技術可以例如使用製造商說明書的試劑盒進行，或如本領域中通常完成的或如本文所述進行。前述技術和程序通常可以用本領域公知的常規方法進行，並且如在本說明書中引用和討論的各種一般和更具體的參考文獻中所述。
應理解，本文所述的方法和組合物不限於本文所述的特定方法、方案、細胞株、構建體和試劑，因此可以變化。還應理解，本文所用的術語僅用於描述特定實施方案的目的，而不是要限製本文所述的方法和組合物的範圍，其僅由所附請求項限制。
本文提及的所有出版物和專利為了描述和公開例如出版物中描述的構建體和方法學的目的通過引用整體併入本文，所述構建體和方法學可以與本文描述的方法、組合物和化合物結合使用。本文所討論的出版物僅提供其在本申請的申請日之前的公開內容。不得將本文任何內容解釋為承認本發明人無權憑藉先前發明或出於任何其他原因使本發明先於此公開。
「烷基」是指僅由碳和氫原子組成的直鏈或支鏈烴基，不含不飽和度，具有一至十五個碳原子(例如，C 1-C 15烷基)。在某些實施方案中，烷基包含一至十三個碳原子(例如，C 1-C 13烷基)。在某些實施方案中，烷基包含一至八個碳原子(例如C 1-C 8烷基)。在一些實施方案中，烷基包含五至十五個碳原子(例如，C 5-C 15烷基)。在某些實施方案中，烷基包含五至八個碳原子(例如C 5-C 8烷基)。烷基通過單鍵與分子的其餘部分連接，例如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)、1-甲基乙基(異丙基或i-Pr)、正丁基(n-Bu)、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基或t-Bu)、3-甲基己基、2-甲基己基等。除非在說明書中另有明確說明，否則烷基可按下文和本文所定義和描述任選地被取代。
「烷基」基團也可以是具有1至6個碳原子的「低級烷基」。
如本文所用，C 1-C x包括C 1-C 2、C 1-C 3...、C 1-C x。
「烯基」是指僅由碳和氫原子組成的直鏈或支鏈烴鏈基團，含有至少一個雙鍵且具有2至12個碳原子。在某些實施方案中，烯基包含2至8個碳原子。在一些實施方案中，烯基包含2至4個碳原子。烯基透過單鍵與分子的其餘部分連接，例如乙烯基（ethenyl）（即，乙烯基（vinyl））、丙烯基（prop‑1‑enyl）（即，烯丙基（allyl））、丁-1-烯基（but-1-enyl）、戊-1-烯基（pent-1-enyl）、戊-1,4-二烯基（penta-1,4-dienyl）等。除非在說明書中另有具體說明，否則烯基如下文和本文中所定義和描述的任選地被取代。
「炔基」是指僅由碳和氫原子組成，含有至少一個三鍵，具有2至12個碳原子的直鏈或支鏈烴鏈基團。在某些實施方案中，炔基包含2至8個碳原子。在一些實施方案中，炔基具有2至4個碳原子。炔基通過單鍵與分子的其餘部分連接，例如乙炔基（ethynyl）、丙炔基（propynyl）、丁炔基（butynyl）、戊炔基（pentynyl）、己炔基（hexynyl）等。除非在說明書中另有具體說明，否則炔基如以下和本文中所定義和描述的任選地被取代。
「伸烷基」或「伸烷基鏈」是指將分子的其餘部分連接至基團的直鏈或支鏈二價烴鏈，其僅由碳和氫組成，不含不飽和度且具有1至12個碳原子，例如亞甲基（methylene）、亞乙基（ethylene）、亞丙基（propylene）、亞正丁基（n-butylene）等。伸烷基鏈通過單鍵與分子的其餘部分連接並通過單鍵與基團連接。伸烷基鏈與分子的其餘部分和與基團的連接點可通過伸烷基鏈中的一個碳或通過鏈中的任何兩個碳。除非在說明書中另有具體說明，否則伸烷基鏈如下文和本文中所定義和描述的任選地被取代。
「亞烯基」或「亞烯基鏈」是指將分子的其餘部分連接至基團的直鏈或支鏈二價烴鏈，其僅由碳和氫組成，含有至少一個雙鍵且具有2至12個碳原子，例如亞乙烯基（ethenylene）、亞丙烯基（propenylene）、亞丁烯基（n-butenylene）等。亞烯基鏈通過雙鍵或單鍵與分子的其餘部分連接，並通過雙鍵或單鍵與基團連接。亞烯基鏈與分子的其餘部分和與基團的連接點可通過鏈中的一個碳或任何兩個碳。除非說明書中另有特定說明，否則亞烯基鏈如下文及本文中所定義及描述的任選地被取代。
「亞炔基」或「亞炔基鏈」是指將分子的其餘部分連接至基團的直鏈或支鏈二價烴鏈，其僅由碳和氫組成，含有至少一個三鍵且具有2至12個碳原子，例如乙炔（ethyne）、丙炔（propyne）、丁炔（butyne）等。亞烯基鏈通過三鍵或單鍵與分子的其餘部分連接，並通過三鍵或單鍵與基團連接。亞炔基鏈與分子的其餘部分和與基團的連接點可通過鏈中的一個碳或任何兩個碳。除非說明書中另有具體說明，否則亞炔基鏈如下文及本文中所定義及描述任選經取代。
「芳基」是指透過從環碳原子除去氫原子而衍生自芳族單環或多環烴環體系的基團。芳族單環或多環烴環體系僅含有氫和6-18個碳原子的碳，其中環體系中的至少一個環是完全不飽和的，即，根據休克爾理論（Hückel theory），其含有環狀的，離域的（4n＋2） -電子體系。芳基包括但不限於諸如苯基（Ph）、茀基（fluorenyl）和萘基（naphthyl）的基團。除非在說明書中另有具體說明，否則術語「芳基」或前綴「ar-」（如在「芳烷基」中）意在包括如下文和本文中所定義和描述的任選取代的芳基。
「芳烷基」是指式‑R c‑芳基的基團，其中R c為如上定義的伸烷基鏈，例如芐基（benzyl）、二苯甲基（diphenylmethyl）等。芳烷基的伸烷基鏈部分如上文對於伸烷基鏈所述任選地被取代。芳烷基的芳基部分如上文關於芳基所述任選地被取代。
「芳烯基」是指式–R d‑芳基的基團，其中R d為如上文所定義的亞烯基鏈。芳烯基的芳基部分如上文關於芳基所述任選地被取代。芳烯基基團的亞烯基鏈部分如上文關於亞烯基基團所定義的任選地被取代。
「芳炔基」是指式‑R e‑芳基的基團，其中R e為如上定義的亞炔基鏈。芳炔基的芳基部分如上文關於芳基所述任選地被取代。芳炔基的亞炔基鏈部分如上文對亞炔基鏈所定義的那樣任選地被取代。
「碳環基」或「環烷基」是指僅由碳和氫原子組成的穩定的非芳族單環或多環烴基，其包括具有三至十五個碳原子的稠合或橋接的環系統。在某些實施方案中，碳環基包含三至十個碳原子。在一些實施方案中，碳環基包含五至七個碳原子。碳環基透過單鍵與分子的其餘部分連接。碳環基任選是飽和的（即僅含有單個C-C鍵）或不飽和的（即含有一個或多個雙鍵或三鍵）。一個完全飽和的碳環基也被稱為「環烷基」。單環環烷基的實例包括，例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。不飽和碳環基也稱為「環烯基」。單環環烯基的實例包括，例如，環戊烯基、環己烯基、環庚烯基和環辛烯基。多環碳環基包括，例如，金剛烷基（adamantyl）、降冰片基（norbornyl）(即，雙環[2.2.1]庚基)、降冰片烯基（norbornenyl）、十氫化萘基（decalinyl）、7,7二甲基雙環[2.2.1]庚基等。除非在說明書中另有明確說明，術語「碳環基」意指包括如下文定義和描述的任選取代的碳環基。
「鹵代（Halo）」或「鹵素（halogen）」是指溴、氯、氟或碘取代基。
術語「鹵代烷基」、「鹵代烯基」、「鹵代炔基」和「鹵代烷氧基」包括其中至少一個氫被鹵素原子替代的烷基、烯基、炔基和烷氧基結構。在其中兩個或更多個氫原子被鹵素原子替代的某些實施方案中，鹵素原子全部彼此相同。在其中兩個或更多個氫原子被鹵素原子替代的一些實施方案中，鹵素原子彼此不是全部相同的。
「氟代烷基」是指被一個或多個如上定義的氟基取代之如上定義的烷基，例如三氟甲基（trifluoromethyl）、二氟甲基（difluoromethyl）、2,2,2三氟乙基（2,2,2 trifluoroethyl）、1-氟代甲基-2-氟代乙基（1‑fluoromethyl‑2‑fluoroethyl）等。氟代烷基的烷基部分如上文對烷基所定義的那樣任選被取代。
如本文所用，術語「非芳族雜環」、「雜環烷基」或「雜脂環族」是指非芳族環，其中形成環的一個或多個原子為雜原子。「非芳族雜環」或「雜環烷基」基團是指包括至少一個選自氮、氧和硫的雜原子的環烷基。這些基團可以與芳基或雜芳基稠合。雜環烷基環可以由三至14個環原子形成，例如三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或多於九個原子。雜環烷基環可以任選地被取代。在某些實施方案中，非芳族雜環含有一個或多個羰基或硫代羰基，例如含有氧代和硫代的基團。雜環烷基的實例包括但不限於：內醯胺、內酯、環醯亞胺、環硫醯亞胺、環胺基甲酸酯、四氫噻吩、四氫吡喃（4H-pyran）、四氫吡喃（tetrahydropyran）、吡啶、1,3-dioxin（1,3-二氧雜環戊烷）、1,3-二氧雜環已烷（1,3-dioxane）、1,4-二氧雜環己烷（1,4-dioxin）、1,4-二氧雜環庚烷（1,4-dioxane）、呱嗪、1,3-氧雜硫環戊烷（1,3-oxathiane）、1,4-氧雜噻環（1,4-oxathiin）、1,4-氧雜硫環己烷（1,4-oxathiane）、四氫-1,4-噻吩、2H-1,2-氧雜環戊烷（2H-1,2-oxazine）、馬來醯亞胺、琥珀醯亞胺、巴比妥酸、硫巴比妥酸、二氧代呱嗪、乙烯基脲、二氫尿嘧啶、嗎啉、三氧雜環己烷、六氫-1,3,5-三嗪（hexahydro-1,3,5-triazine）、四氫噻吩、四氫呋喃、吡咯啉、吡咯啶、吡咯啶酮、吡咯啶二酮、吡唑啉、吡唑啶、咪唑啉、咪唑啶、1,3-二氧雜環戊二烯、1,3-二氧雜環丁烷、1,3-二硫雜環戊二烯、1,3-二硫雜環丁烷、異惡唑啉、異噁唑啶、噁唑啉、噁唑啶、噁唑啶酮、噻唑啉、噻唑啶、1,3-氧噻唑啉。雜環烷基的說明性實例，也稱為非芳族雜環，包括： 等等。術語雜脂環族還包括碳水化合物的所有環狀形式，包括但不限於單醣、雙醣和寡醣。取決於結構，雜環烷基可以是單自由基或雙自由基（即，雜環伸烷基）。
「雜芳基」是指衍生自3-至18-員芳族環基團的基團，所述芳族環基團包含二至十七個碳原子和一至六個選自氮、氧和硫的雜原子。如本文所用，雜芳基為單環、雙環、三環或四環環系，其中環系中的至少一個環是完全不飽和的，即，根據休克爾理論，其含有環狀，離域的（4n＋2） -電子體系。雜芳基包括稠合或橋接的環系統。在一些實施方案中，雜芳基環具有五個、六個、七個、八個、九個或多於九個環原子。雜芳基中的雜原子任選被氧化。如果存在，一個或多個氮原子任選地被四級胺化（quaternized）。雜芳基通過環的任何原子與分子的其餘部分連接。雜芳基的實例包括但不限於：氮平基、吖啶基、苯並咪唑基、苯並吲哚基、1,3苯並二氧戊環基、苯並呋喃基、苯並惡唑基，苯並[d]噻唑基、苯並噻二唑基、苯並[b][1,4]二氧戊環基、苯並[b][1,4]惡嗪基、1,4苯並二氧戊環基、苯並萘呋喃基、苯並噁唑基、苯並二氧戊環基、苯並二氧芑基、苯並吡喃基、苯並呋喃基、苯並呋喃基、苯並噻吩基（benzothienyl/ benzothiophenyl）、苯並噻吩[3,2-d]嘧啶基、苯並三唑基、苯並[4,6]咪唑並[1,2-a]吡啶基、卡巴唑基、噌啉基、環五[d]嘧啶基、6,7-二氫-5H-環戊二烯並[4,5]噻吩並[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氫苯並[h]喹唑啉基、5,6-二氫苯並[h]噌啉基、6,7-二氫-5H-苯並[6,7]環庚三烯並[1,2-c]噠嗪基、二苯並呋喃基、二苯並噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、呋喃並[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛四烯並[d]嘧啶基，5,6,7,8,9,10-六氫環辛四烯並[d]噠嗪基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛並[d]吡啶基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、異吲哚基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、異喹啉基、吲哚嗪基、異惡唑基、5,8-亞甲基-5,6,7,8-四氫喹唑啉基、萘啶基、1,6-萘啶酮基、惡二唑基、2-氧代氮雜基、惡唑基、環氧乙烷基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氫苯並[h]喹唑啉基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩惡嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡唑並[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶並[3,2-d]嘧啶基、吡啶並[3,4-d]嘧啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、5,6,7,8-四氫喹唑啉基、5,6,7,8-四氫苯並[4,5]噻吩並[2,3d]嘧啶基、6,7,8,9-四氫-5H-環庚並[4,5]噻吩並[2,3d]嘧啶基、5,6,7,8-四氫吡啶並[4,5-c]噠嗪基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、噻吩並[2,3-d]嘧啶基、噻吩並[3,2-d]嘧啶基、噻吩並[2,3-c]吡啶基和噻吩基（即噻吩基）。除非在說明書中另有明確說明，術語「雜芳基」意指包括如上定義的雜芳基，其如下文和本文所定義和描述的任選地被取代。
「N-雜芳基」是指如上定義的含有至少一個氮的雜芳基，其中雜芳基與分子其餘部分的連接點是通過雜芳基中的氮原子。N-雜芳基如上所述任選地被雜芳基取代。
「C-雜芳基」是指如上定義的雜芳基，其中雜芳基與分子其餘部分的連接點通過雜芳基中的碳原子。C-雜芳基如上所述任選被雜芳基取代。
「環氧化物」是指三員環醚。環氧化物如下文和本文所定義和描述的任選地被取代。
「雜芳基烷基」指式-R c-雜芳基的基團，其中R c為如上定義的伸烷基鏈。如果雜芳基是含氮雜芳基，則雜芳基任選在氮原子處與烷基連接。雜芳基烷基的伸烷基鏈任選地如上文對伸烷基鏈所定義的被取代。雜芳基烷基的雜芳基部分任選如上文雜芳基中所定義被取代。
「氫硫基」指-S-基團。
「亞磺醯基」是指-S (= O)-基團。
「磺醯基」是指-S (= O) 2-基團。
「胺基」是指-NH 2基團。
「氰基」是指-CN基團。
「硝基」指-NO 2基團。
「氧雜」是指-O-基團。
「氧代」是指= O基團。
「亞胺基」是指= NH基。
「硫氧基」是指= S基團。
「烷氧基」基團是指(烷基)O-基團，其中烷基如本文所定義。
「芳氧基」是指(芳基)O-基團，其中芳基如本文所定義。
「碳環基烷基」是指如本文定義的烷基，其被碳環基取代。「環烷基烷基」是指如本文定義的烷基，其被環烷基取代。非限制性的環烷基烷基包括環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基等。
本文所用的術語「雜烷基」、「雜烯基」和「雜炔基」包括任選取代的烷基、烯基和炔基，其中一個或多個骨架鏈原子是雜原子，例如氧、氮、硫、矽、磷或其組合。雜原子可位於雜烷基的任何內部位置或位於雜烷基與分子的其餘部分連接的位置處。實例包括但不限於：-CH 2-O-CH 3, -CH 2-CH 2-O-CH 3, -CH 2-NH-CH 3, -CH 2-CH 2-NH-CH 3, -CH 2-N(CH 3)-CH 3, -CH 2-CH 2-NH-CH 3, -CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 3, -CH 2-S-CH 2-CH 3, -CH 2-CH 2,-S(O)-CH 3, -CH 2-CH 2-S(O) 2-CH 3, -CH=CH-O-CH 3, -Si(CH 3) 3, -CH 2-CH=N-OCH 3, 和–CH=CH-N(CH 3)-CH 3。此外，最多兩個雜原子可以是連續的，例如-CH 2-NH-OCH 3和–CH 2-O-Si(CH 3) 3。
術語「雜原子」是指除碳或氫以外的原子。雜原子通常獨立地選自氧、硫、氮、矽和磷，但不限於這些原子。在存在兩個或多個雜原子的實施方案中，所述兩個或多個雜原子可以全部彼此相同，或者所述兩個或多個雜原子中的一些或全部可以各自彼此不同。
術語「鍵」、「直接鍵結」或「單鍵」是指兩個原子之間的化學鍵，或當通過鍵連接的原子被認為是較大子結構的一部分時的兩個部分。
「異氰酸酯基」是指-NCO基團。
「異硫氰基」指-NCS基團。
術語「部分」是指分子的特定區段或官能基。化學部分通常被認為是嵌入或附加於分子的化學實體。
「硫代烷氧基」或「烷硫基」是指-S-烷基。
「烷基硫烷基」是指被-S-烷基取代的烷基。
如本文所用，術語「醯氧基」是指式RC（=O）O-的基團。
「羧基」是指-C（O）OH 基團。
如本文所用，術語「乙醯基」是指式-C（=O）CH 3的基團。
「醯基」是指基團-C（O）R 。
如本文所用，術語「三鹵甲烷磺醯基」是指式X 3CS(=O) 2-的基團，其中X為鹵素。
「氰基烷基」是指被至少一個氰基取代的如本文所定義的烷基。
如本文所用，術語「N-磺醯胺基」或「磺醯基胺基」是指式RS(=O) 2NH-的基團。
如本文所用，術語「O胺氨甲醯基」是指式-OC（=O）NR 2的基團。
如本文所用，術語「N-胺甲醯基」是指式ROC（=O）NH-的基團。
如本文所用，術語「O-硫代胺甲醯基」是指式-OC（=S）NR 2的基團。
如本文所用，術語「N-硫代胺甲醯基」是指式ROC（=S）NH-的基團。
如本文所用，術語「C-醯胺基」是指式-C（=O）NR 2的基團。
「胺基羰基」是指CONH 2基團。
如本文所用，術語「N-醯胺基」是指式RC（=O）NH-的基團。
「羥基烷基」是指被至少一個羥基取代的如本文所定義的烷基。羥基烷基的非限制性實例包括但不限於：羥基甲基、2-羥基乙基，2-羥基丙基、3-羥基丙基、1-（羥基甲基）-2-甲基丙基、2-羥基丁基、3-羥基丁基、4-羥基丁基，2,3-二羥基丙基、1-（羥基甲基）-2-羥基乙基、2,3-二羥基丁基、3,4-二羥基丁基和2-（羥基甲基）-3-羥基丙基。
「烷氧基烷基」是指被如本文所定義的烷氧基取代的如本文所定義的烷基。
「烯氧基」基團是指（烯基）O-基團，其中烯基如本文所定義。
術語「烷基胺」是指-N（烷基） xH y基團，其中x和y選自x =1、y=1和x=2、y =0。當x=2時，烷基與其所連接的N原子一起可任選地形成環狀環系統。
「烷胺基烷基」是指被如本文所定義的烷基胺取代的如本文所定義的烷基。
「醯胺」是具有式-C（O）NHR或-NHC（O）R的化學部分，其中R選自烷基、環烷基、芳基、雜芳基（經由環碳鍵結）和雜脂環（經由環碳鍵結）。醯胺部分可在胺基酸或肽分子與本文所述的化合物之間形成鍵，從而形成前驅藥。本文所述的化合物上的任何胺或羧基側鏈可以被醯胺化。製備此類醯胺的方法和具體基團是所屬技術領域之通常知識者習知的，並且可以容易地在參考文獻中找到，例如Greene及Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 第3版, John Wiley & Sons, New York, NY, 1999，其全部內容通過引用併入本文。
術語「酯」是指具有式-COOR的化學部分，其中R選自烷基、環烷基、芳基、雜芳基（經由環碳鍵結）和雜脂環基（經由環碳鍵結）。本文所述的化合物上的任何羥基或羧基側鏈可以被酯化。製備這種酯的方法和具體基團是所屬技術領域之通常知識者習知的，並且可以容易地在參考文獻中找到，例如Greene及Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 第3版, John Wiley & Sons, New York, NY, 1999，其全部內容通過引用併入本文中。
如本文所用，術語「環」是指任何共價閉合的結構。環包括例如碳環（例如芳基和環烷基）、雜環（例如雜芳基和非芳族雜環）、芳族環（例如芳基和雜芳基）和非芳族環（例如環烷基和非芳族雜環）。環可以任選地被取代。環可以是單環或多環的。
如本文所用，術語「環系統」是指一個或一個以上的環。
術語「員環」可以包括任何環狀結構。術語「員」意謂表示構成環的骨架原子的數目。因此，例如，環己基、吡啶、吡喃和噻喃是6員環，環戊基、吡咯、呋喃和噻吩是5員環。
術語「稠合」是指其中兩個或更多個環共享一個或多個鍵的結構。
如本文所述，本文提供的化合物可以是「任選取代的」。通常，術語「取代的」無論前面是否有術語「任選地」，都意謂著指定部分的一個或多個氫被合適的取代基替代。除非另外指明，否則「任選取代的」基團可在基團的每個可取代位置處具有合適的取代基，並且當任何給定結構中的多於一個位置可被多於一個選自指定基團的取代基取代時，每個位置處的取代基可以相同或不同。本文提供的取代基的組合較佳是導致形成穩定或化學上可行的化合物的那些。如本文所用，術語「穩定的」是指當經受允許其產生、檢測和在某些實施例中其回收、純化和用於本文所公開的一個或多個目的的條件時基本上不改變的化合物。
「任選取代的」基團的可取代的碳原子上的合適單價取代基獨立地為鹵素；–(CH 2) 0–4R ；-(CH 2) 0–4OR ；-O(CH 2) 0-4R ；-O-(CH 2) 0–4C(O)OR ；-(CH 2) 0–4CH(OR ) 2；-(CH 2) 0–4SR ；-(CH 2) 0–4Ph，其可以被R 取代；-(CH 2) 0–4O(CH 2) 0–1Ph 其可以被R 取代；-CH=CHPh，其可以被R 取代；-(CH 2) 0–4O(CH 2) 0–1-pyridyl其可以被R 取代；-NO 2；-CN；-N 3；-(CH 2) 0–4N(R ) 2；-(CH 2) 0–4N(R )C(O)R ；-N(R )C(S)R ；-(CH 2) 0–4N(R )C(O)NR 2；-N(R )C(S)NR 2；-(CH 2) 0–4N(R )C(O)OR ；-N(R )N(R )C(O)R ；-N(R )N(R )C(O)NR 2；-N(R )N(R )C(O)OR ；- (CH 2) 0–4C(O)R ；-C(S)R ；-(CH 2) 0–4C(O)OR ；-(CH 2) 0–4C(O)SR ；-(CH 2) 0–4C(O)OSiR 3；-(CH 2) 0–4OC(O)R ；-OC(O)(CH 2) 0–4SR-，-SC(S)SR ；-(CH 2) 0–4SC(O)R ；-(CH 2) 0–4C(O)NR 2；-C(S)NR 2；-C(S)SR ；-(CH 2) 0–4OC(O)NR 2；-C(O)N(OR )R ；-C(O)C(O)R ；-C(O)CH 2C(O)R ；-C(NOR )R ；-(CH 2) 0–4SSR ；-(CH 2) 0–4S(O) 2R ；-(CH 2) 0–4S(O) 2OR ；-(CH 2) 0–4OS(O) 2R ；-S(O) 2NR 2；-(CH 2) 0–4S(O)R ；-N(R )S(O) 2NR 2；-N(R )S(O) 2R ；-N(OR )R ；-C(NH)NR 2；-P(O) 2R ；-P(O)R 2；-OP(O)R 2；-OP(O)(OR ) 2；SiR 3；-(C 1–4直鏈或支鏈亞烷基)O–N(R ) 2；或-(C 1–4直鏈或支鏈亞烷基)C(O)O–N(R ) 2，其中每個R 可以如下文所定義被取代並且獨立地為氫、C 1-6脂族基、–CH 2Ph、–O(CH 2) 0–1Ph、-CH 2-(5-6員雜芳基環)或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環，或儘管上文定義，兩次獨立出現的R 與介於其間的原子一起形成具有具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的3-12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環，其可以如下文所定義被取代。
R （或由兩個獨立出現的R 與介於其間的原子一起形成的環）上合適的單價取代基獨立地為鹵素，–(CH 2) 0–2R ●，-(鹵代R ●)，-(CH 2) 0–2OH，-(CH 2) 0–2OR ●，-(CH 2) 0–2CH(OR ●) 2；-O(鹵代R ●)，-CN，-N 3，-(CH 2) 0–2C(O)R ●，-(CH 2) 0–2C(O)OH，-(CH 2) 0–2C(O)OR ●，-(CH 2) 0–2SR ●，-(CH 2) 0–2SH，-(CH 2) 0–2NH 2，-(CH 2) 0–2NHR ●，-(CH 2) 0–2NR ● 2，-NO 2，-SiR ● 3，-OSiR ● 3，-C(O)SR ●，-(C 1–4直鏈或支鏈亞烷基)C(O)OR ●，或–SSR ●，其中每個R ●是未取代的或在前面有「鹵代」的情況下僅被一個或多個鹵素取代，且獨立地選自C 1-4脂族基、-CH 2Ph，-O(CH 2) 0–1Ph或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。R 的飽和碳原子上的合適二價取代基包括=O和=S。
「任選取代的」基團的飽和碳原子上的合適二價取代基包括以下：=O，=S，=NNR * 2，=NNHC(O)R *，=NNHC(O)OR *，=NNHS(O) 2R *，=NR *，=NOR *，-O(C(R * 2)) 2–3O–，或-S(C(R * 2)) 2–3S–，其中，R*的每次獨立出現選自氫、可如以下所定義被取代的C 1-6脂族基團、或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的未取代的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。與「任選取代的」基團的鄰位可取代碳連接的合適二價取代基包括：–O(CR * 2) 2–3O–，其中，R*各自獨立地選自氫、C 1-6脂族基團，其可以如下文所定義被取代，或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的未取代的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
R*的脂族基團上的合適的取代基包括鹵素，–R ●，-(鹵代R ●)，-OH，-OR ●，-O(鹵代R ●)，-CN，-C(O)OH，-C(O)OR ●，-NH 2，-NHR ●，-NR ● 2，或-NO 2，其中每個R ●是未取代的或其中前面有「鹵代」的僅被一個或多個鹵素取代，並且獨立地是C 1-4脂族基團，–CH 2Ph, –O(CH 2) 0–1Ph，或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
「任選取代的」基團的可取代的氮上的合適的取代基包括：–R †，–NR † 2，–C(O)R †，–C(O)OR †，–C(O)C(O)R †，-C(O)CH 2C(O)R †，-S(O) 2R †，-S(O) 2NR † 2，-C(S)NR † 2，-C(NH)NR † 2，或-N(R †)S(O) 2R †；其中每個R†獨立地為氫，可如下文所定義經取代的C 1-6脂肪族基、未經取代的-OPh 或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的未經取代的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環，或儘管具有上文定義，但兩個獨立出現的R†與介於其間的原子一起形成具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的未經取代的3-12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環。
R †的脂族基團上的合適取代基獨立地為鹵素，–R ●，-(鹵代R ●)，-OH，-OR ●，-O(鹵代R ●)，-CN，-C(O)OH，-C(O)OR ●，-NH 2，-NHR ●，-NR ● 2，或-NO 2，其中各R ●未被取代或其中前面的「鹵代」僅被一個或多個鹵素取代，且獨立地為C 1-4脂族基團，–CH 2Ph，-O(CH 2) 0–1Ph或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
術語「親核試劑（nucleophile）」或「親核性（nucleophilic）」是指富電子化合物或其部分結構。
術語「親電子試劑（electrophile）」或「親電子性（electrophilic）」是指少電子或缺電子分子或其部分。親電子試劑的實例包括，但絕不限於，邁克爾受體部分。
如本文所用，關於製劑、組合物或成分的術語「可接受的」或「醫藥學上可接受的」意指對所治療的受試者的一般健康沒有持久的有害影響或不消除化合物的生物活性或性質，並且是相對無毒的。
如本文所用，藉由施用特定化合物或醫藥組合物來「改善」特定疾病、病症或病狀的症狀是指可歸因於施用化合物或組合物或與施用化合物或組合物相關的任何嚴重程度減輕、發作延遲、進展減緩或持續時間縮短，無論是永久的還是暫時的、持久的還是短暫的。
「生物利用度」是指本文公開的化合物，例如式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物的重量百分比，其被遞送到所研究的動物或人體的全身循環中。當靜脈內給藥時，藥物的總暴露（AUC（0-∞））通常定義為100％生物可利用的（F％）。「口服生物利用度」是指當與靜脈內注射相比口服施用醫藥組合物時，本文公開的化合物，例如式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一個的化合物被吸收到全身循環中的程度。
「血漿濃度」是指本文公開的化合物，例如式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一個的化合物在受試者的血液的血漿組分中的濃度。應理解，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一者的化合物的血漿濃度可因關於代謝及/或與其他治療劑的可能相互作用的可變性而在個體之間顯著變化。根據本文公開的一些實施方案，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一個的化合物的血漿濃度可隨受試者而變化。同樣，諸如最大血漿濃度（C max）或達到最大血漿濃度的時間（T max）或血漿濃度時間曲線下的總面積（AUC （ 0- ∞））的值可隨受試者而變化。由於這種可變性，構成式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物的「治療有效量」所需的量可隨受試者而變化。
如本文所用，術語「共同施用」等意在涵蓋向單個患者施用所選治療劑，並且意在包括其中藥劑藉由相同或不同施用途徑或在相同或不同時間施用的治療方案。
如本文所用，術語「有效量」或「治療有效量」是指將在一定程度上緩解所治療的疾病或病狀的一種或多種症狀的所施用的藥劑或化合物的足夠量。結果可以是疾病的病徵、症狀或病因的減少及/或減輕，或生物系統的任何其他期望的改變。例如，用於治療用途的「有效量」是提供疾病症狀的臨床顯著降低而沒有過度不良副作用所需的包含本文公開的化合物的組合物的量。在任何個體情況下的合適的「有效量」可以使用諸如劑量遞增研究的技術來確定。術語「治療有效量」包括例如預防有效量。本文公開的化合物的「有效量」是有效實現期望的藥理作用或治療改善而沒有過度不良副作用的量。應理解，「有效量」或「治療有效量」會因為式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）中任的任一種的化合物的代謝的變化、受試者的年齡、體重、整體狀況、所治療的病狀、所治療的病狀的嚴重程度和開處方的醫師的判斷而隨各個體而變化。僅作為實例，治療有效量可以通過常規實驗確定，包括但不限於劑量遞增臨床試驗。
術語「增強（enhance）」或「增強（enhancing）」是指增加或延長所需效果的效能或持續時間。舉例來說，「增強」治療劑的作用是指在治療疾病、病症或病狀期間在效能或持續時間方面增加或延長治療劑的作用的能力。如本文所用，「增強有效量」是指足以增強治療劑在治療疾病、病症或病狀中的作用的量。當用於患者時，用於該用途的有效量將取決於疾病，病症或病狀的嚴重程度和病程、先前療法、患者的健康狀況和對藥物的反應，以及治療醫師的判斷。
本文所用的術語「相同」是指相同的兩個或多個序列或子序列。此外，如本文所用，術語「基本上相同」是兩個或多個序列在比較窗口或指定區域上針對最大對應而比較及比對時，如使用比對演算法或藉由手動比對及目視檢查所量測，具有相同的序列單元百分比。僅作為實例，如果連續單元在指定區域上具有約60％相同性、約65％相同性、約70％相同性、約75％相同性、約80％相同性、約85％相同性、約90％相同性或約95％相同性，則兩個或更多個序列可為「基本上相同的」。這些百分數描述兩個或多個序列的「相同性百分比」。序列的相同性可以存在於長度為至少約75-100個連續單元的區域上，存在於長度為約50個連續單元的區域上或當未指定時，跨越整個序列存在。該定義也指測試序列的互補序列。僅作為實例，當胺基酸殘基相同時，兩個或更多個多肽序列是相同的，而如果在指定區域上胺基酸殘基是約60％相同、約65％相同、約70％相同、約75％相同、約80％相同、約85％相同，約90％相同或約95％相同，則兩個或更多個多肽序列是「基本上相同的」。相同性可存在於長度為至少約75-100個胺基酸的區域上，存在於長度為約50個胺基酸的區域上，或在未指定的情況下，存在於多肽序列的整個序列上。
本文所用的術語「分離」是指將感興趣的組分與非感興趣的組分分離和除去。分離的物質可以是乾燥或半乾燥狀態，或者是溶液，包括但不限於：水溶液。分離的組分可以是均相狀態或分離的組分可以是包含另外的醫藥學上可接受的載體及/或賦形劑的醫藥組合物的一部分。僅作為實例，當核酸或蛋白質不含其在天然狀態下與其結合的至少一些細胞組分，或核酸或蛋白質已被濃縮至大於其體內或體外生產濃度的水準時，核酸或蛋白質是「分離的」。此外，例如，當一個基因被與編碼感興趣基因以外蛋白質的開放閱讀框架分離時，該基因就是分離的。
本文公開的化合物的「代謝物」是當化合物被代謝時形成的該化合物的衍生物。術語「活性代謝物」是指當化合物代謝時形成的化合物的生物活性衍生物。本文所用的術語「代謝」是指生物體改變特定物質的過程的總和，包括但不限於水解反應和由酶催化的反應，例如氧化反應。因此，酶可以對化合物產生特定的結構改變。例如，細胞色素P450催化多種氧化和還原反應，而二磷酸尿苷葡糖醛酸轉移酶催化活化的葡糖醛酸分子向芳族醇、脂族醇、羧酸、胺和游離巰基的轉移。關於代謝的進一步訊息可以從The Pharmacological Basis of Therapeutics, 第9版, McGraw-Hill (1996)獲得。本文公開的化合物的代謝物可透過向宿主施用化合物並分析來自宿主的組織樣品，或透過將化合物與肝細胞在體外培育並分析所得化合物來鑒定。這兩種方法都是本領域公知的。在一些實施方案中，化合物的代謝物透過氧化過程形成並且對應於相應的含羥基化合物。在一些實施方案中，化合物被代謝為藥理學活性代謝物。
本文所用的術語「調節」意指直接或間接地與靶標相互作用以改變靶標的活性，包括（僅作為實例）增強靶標的活性、抑制靶標的活性、限制靶標的活性或延長靶標的活性。
如本文所用，術語「調節劑」是指改變分子活性的化合物。例如，與不存在調節劑時的活性大小相比，調節劑可引起分子的某些活性大小的增加或減少。在某些實施方案中，調節劑是降低分子的一種或多種活性的大小的抑制劑。在某些實施方案中，抑制劑完全阻止分子的一種或多種活性。在某些實施方案中，調節劑是活化劑，其增加分子的至少一種活性的量值。在某些實施方案中，調節劑的存在導致在不存在調節劑時不發生的活性。
如本文所用，術語「共價抑制劑」是指在與標靶蛋白（例如FLT3）接觸後引起與所述蛋白形成新共價鍵或在所述蛋白內形成新共價鍵的化合物，借此儘管隨後存在或不存在所述共價抑制劑，但一種或多種標靶蛋白的生物活性（例如磷酸轉移酶活性）減少或消失。相反，非共價抑制劑化合物在與標靶蛋白接觸時不引起與該蛋白形成新的共價鍵或在該蛋白內形成新的共價鍵，因此可與標靶蛋白締合和解離。在某些實施方案中，共價抑制劑是不可逆的。在某些實施方案中，非共價抑制劑是可逆的。
本文所用的術語「FLT3蛋白-蛋白相互作用的共價抑制劑」是指可與FLT3的胺基酸殘基形成共價鍵的FLT3抑制劑。在一個實施方案中，FLT3的共價抑制劑可與FLT3的Cys殘基形成共價鍵；在特定實施方案中，共價抑制劑可與FLT3的Cys12殘基（或其同源物）形成共價鍵。
如本文所用，術語「預防有效量」是指施用於患者的組合物的量，其將在一定程度上緩解所治療的疾病、病症或病狀的一種或多種症狀。在此類預防性應用中，此類量可取決於患者的健康狀態、體重等。通過常規實驗，包括但不限於劑量遞增臨床試驗，確定這樣的預防有效量被認為完全在本領域技術範圍內。
如本文所用，術語「選擇性結合化合物」是指選擇性結合一種或多種標靶蛋白的任何部分的化合物。
如本文所用，術語「選擇性結合」是指選擇性結合化合物以比其結合非標靶蛋白更大的親和力結合標靶蛋白（例如FLT3）的能力。在某些實施方案中，特異性結合是指以比對非靶標的親和力大至少10、50、100、250、500、1000或更多倍的親和力結合靶標。
如本文所用，術語「選擇性調節劑」是指相對於非標靶活性，選擇性調節標靶活性的化合物。在某些實施方案中，特異性調節劑是指調節靶標活性至少為非靶標活性的10、50、100、250、500、1000倍。
如本文所用，術語「基本上純化的」是指相關的組分可以實質上或基本上不含在純化之前通常伴隨相關組分或與其相互作用的其他組分。僅舉例來說，當目標組分的製劑含有少於約30％、少於約25％、少於約20％、少於約15％、少於約10％、少於約5％、少於約4％、少於約3％、少於約2％或少於約1％（以乾重計）的污染組分時，目標組分可為「實質上純化」。因此，感興趣的「實質上純化」的組分可以具有約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％或更高的純度水準。
本文所用的術語「受試者」或「患者」是指作為治療、觀察或實驗對象的動物。僅作為實例，受試者可以是但不限於：哺乳動物，包括但不限於人類。
如本文所用，術語「標靶活性」是指能夠被選擇性調節劑調節的生物活性。某些示例性標靶活性包括但不限於結合親和力、訊號轉導、酶活性、腫瘤生長、發炎或發炎相關過程，以及與疾病或病症相關的一種或多種症狀的改善。
如本文所用，術語「標靶蛋白」是指能夠被選擇性結合化合物結合的蛋白分子或一部分。在某些實施方案中，標靶蛋白是FLT3。
本文所用的術語「治療（treat）」、「治療（treating）」或「治療（treatment）」包括減輕、緩和或改善疾病或病症的症狀，預防其他症狀，改善或預防症狀的潛在代謝原因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的發展，緩解疾病或病症，引起疾病或病症的消退，緩解由疾病或病症引起的病症，或停止疾病或病症的症狀。術語語「治療（treat）」、「治療（treating）」或「治療（treatment）」包括但不限於預防性及/或治療性治療。
如本文所用，術語「 FLT3」或「FLT3」是指類fms酪氨酸激酶3，基因或蛋白質。同義詞包括CD135，CD135抗原，胎肝激酶2，FL 細胞因子受體，FLK -2，FLK2，FLT3_HUMAN，fms相關酪氨酸激酶3，生長因子受體酪氨酸激酶III型，受體型酪氨酸-蛋白激酶FLT3，幹細胞酪氨酸激酶1，STK-1和STK1。人序列包括NM_004119和NM_004119.2（mRNA）和NP_004110和NP_004110.2（蛋白質）。小鼠序列包括NM_010229和NM_010229.2（mRNA）和NP_034359和NP_034359.2（蛋白質）。
如本文所用，IC 50是指在測量此類反應的測定中實現最大反應的50％抑制（如FLT3的抑制）的特定測試化合物的劑量、濃度或量。
如本文所用，EC 50是指在由特定測試化合物誘導，引起或加強的特定反應的最大表達的50％處引起劑量依賴性反應的特定測試化合物的劑量、濃度或量。
本文所述的方法包括向有需要的受試者施用含有治療有效量的一種或多種本文所述的FLT3抑制劑化合物的組合物。
在一些實施方案中，本文所述的方法可用於治療癌症，例如B細胞增殖性病症，其包括但不限於：彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、慢性淋巴細胞性淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、B細胞幼淋巴細胞性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤/瓦氏巨球蛋白血症、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、縱隔（胸腺）大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病和淋巴瘤樣肉芽腫病。
上述每種病症的症狀，診斷測試和預後測試是本領域習知的，參見，例如，Harrison's Principles of Internal Medicine©,」 第16版, 2004, The McGraw-Hill Companies, Inc. Dey等人 (2006), Cytojournal 3(24), 及「Revised European American Lymphoma」 (REAL)分類系統（參見例如國家癌症學會(National Cancer Institute)維護的網站）。
許多動物模型可用於建立治療任何前述疾病的FLT3抑制劑化合物的治療有效劑量範圍。
治療血栓栓塞性疾病的動物模型也是習知的。
所提供的化合物針對前述疾病之一的治療功效可在治療過程期間優化。例如，所治療的受試者可進行診斷評估以將疾病症狀或病理的緩解與通過施用給定劑量的FLT3抑制劑實現的體內FLT3活性的抑制相關聯。 2.化合物
在以下對適用於本文所述方法的FLT3抑制劑化合物的描述中，可在參考著作（如果本文沒有另外定義）中找到所提及的標準化學術語的定義，包括Carey 和 Sundberg 的Advanced Organic Chemistry 4th Ed.” Vols. A (2000) 和B (2001), Plenum Press, New York。除非另有說明，使用所屬技術領域之通常知識者習知的質譜、NMR、HPLC、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術和藥理學的常規方法。除非提供具體定義，否則本文中所描述的聯合分析化學、合成有機化學以及藥物及醫藥化學所採用的命名法及其實驗室程序與技術為此項技術中已知的命名法及實驗室程序與技術。標準技術可用於化學合成、化學分析、藥物製備、調配和遞送以及患者的治療。
FLT3抑制劑化合物可用於製備治療任何前述病症（例如血液惡性腫瘤）的藥物。
在一些實施方式中，用於本文所述方法的FLT3抑制劑化合物抑制FLT3活性的體外IC 50小於約10μM （例如，小於約1μM、小於約0.5μM、小於約0.4μM、小於約0.3μM、小於約0.1μM、小於約0.08μM、小於約0.06μM、小於約0.05μM，小於約0.04μM、小於約0.03μM、小於約0.02μM、小於約0.01μM、小於約0.008μM、小於約0.006μM、小於約0.005μM、小於約0.004μM、小於約0.003μM、小於約0.002μM、小於約0.001μM、小於約0.00099μM、小於約0.00098μM、小於約0.00097μM、小於約0.00096μM、小於約0.00095μM、小於約0.00094μM、小於約0.00093μM、小於約0.00092μM 或小於約0.00090μM）。在一些實施例中，FLT3抑制劑對FLT3具有選擇性。在一些實施例中，FLT3抑制劑對FLT3的選擇性超過cKit 。
本文還描述了合成此類共價抑制劑的方法，使用此類共價抑制劑治療疾病（包括其中FLT3的抑制對患有該疾病的患者提供治療益處的疾病）的方法。還描述了包含FLT3抑制劑的醫藥組合物。
本文具體描述了與FLT3上的半胱氨酸殘基形成共價鍵的FLT3共價抑制劑。本文進一步描述了與FLT3上的Cys12殘基形成共價鍵的FLT3的共價抑制劑。本文所述的共價抑制劑化合物包括邁克爾受體部分。還描述了包含FLT3的共價抑制劑的藥物製劑。
通常，在體外試驗，例如無細胞生化試驗或細胞功能試驗中鑒定或表徵本文所述方法中使用的FLT3的非共價或共價抑制劑化合物。這些試驗可用於測定非共價或共價FLT3抑制劑化合物的體外IC 50。
此外，FLT3和候選共價FLT3抑制劑之間的共價複合物形成是FLT3的共價抑制的有用指示物，其可藉由本領域習知的許多方法(例如質譜法)容易地確定。例如，一些共價FLT3抑制劑化合物可與FLT3 GC12的Cys 12形成共價鍵（例如通過Michael反應）。參見S. Xu等人. Angewandte Chemie International Ed. 57(6), 1601-1605 (2017)（全文以引用方式併入）。
本文描述了式(P-I)、式(I)-式(LXIIIb)、式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)和式(P5-I’)-(P5-Vd)中任一種的化合物。本文還描述了這類化合物的醫藥學上可接受的鹽、醫藥學上可接受的溶劑化物、醫藥學活性代謝物和醫藥學上可接受的前驅藥。提供了醫藥組合物，其包括至少一種這樣的化合物或這樣的化合物的醫藥學上可接受的鹽、醫藥學上可接受的溶劑化物、醫藥學活性代謝物或醫藥學上可接受的前驅藥。在一些實施方案中，當本文公開的化合物含有可氧化的氮原子時，該氮原子可以通過本領域公知的方法轉化為N-氧化物。在某些實施方案中，還提供了具有式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)中任一個所示結構的化合物的異構物和化學保護形式。
在一些實施方案中，本文提供式(P6-I)化合物的FLT3共價抑制劑。在一些實施方案中，本文提供了具有以下結構的式(P6-I)的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽， 其中：每個A 1、A 2、A 3和A 4獨立地為-C(R 7) =或-N =；條件是A 1、A 2、A 3和A 4中不超過兩個N； L 1和L 3各自獨立地為取代或未取代的C 1-C 4伸烷基； R 1是H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的環烷基，或取代或未取代的雜環烷基； R 2b獨立地為H或C 1-C 4烷基； R 4為i)-C(O)-C(R 6a) = C(R 6b)(R 6C)，ii)-S (O)-C(R 6a) = C(R 6b)(R 6C)，iii)-S (O)2-C(R 6a) = C(R 6b)(R 6C)，或iv)取代或未取代的環氧化物； R 5為H、Cy、CN、鹵素、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的C 1-6烷氧基、取代或未取代的鹵代烷氧基、取代或未取代的烷胺基； Cy是取代或未取代的環烷基，或取代或未取代的雜環烷基； 每個R 6a和R 6b獨立地為H、鹵素、CN或C 1-6烷基；或R 6a和R 6b連接在一起以形成鍵；R 6C為H、鹵素、CN或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基為未被取代的或被選自以下基團中的一個或多個取代：取代或未取代的胺基、取代或未取代的羥基和取代或未取代之具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的雜環烷基；以及 每個R 7獨立地為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、或取代或未取代的雜環烷基。
在某些實施方案中，本文提供的化合物不包括化合物C-1、C-2或C-3中的任何化合物或其任何鹽。 C-1                                          C-2                                          C-3 在某些實施方案中，本文提供的一種或多種化合物與C-1、C-2和C-3中的一種或多種相比顯示優越的性質。在某些實施方案中，本文提供的一種或多種化合物與C-1、C-2及/或C-3相比在攜帶 FLT3-ITD突變的細胞例如MOLM-13細胞中顯示優越的IC 50值。在某些實施方案中，本文提供的一種或多種化合物在具有 FLT3-ITD突變的細胞，例如MV4-11細胞中顯示比C-1、C-2及/或C-3更高的IC 50值。在某些實施方案中，一種或多種本文提供的化合物與C-1、C-2及/或C-3相比顯示較少的脫靶效應，在某些實施方案中，一種或多種本文提供的化合物在不攜帶FLT-3突變的細胞例如K562細胞中顯示比化合物C-2更強的抑制作用。在某些實施方案中，化合物C-1在MOLM-13細胞中顯示IC 50＞100 nM和Ymax為0%，在MV4-11細胞中顯示IC 50＞100 nM和Ymax為9.7%，在K562細胞中顯示IC 50＞100 nM和Ymax為0%。在某些實施方案中，化合物C-2在MOLM-13細胞中顯示IC 50為19.2 nM且Ymax為98.6%，在MV4-11細胞中顯示IC 50為5 nM且Ymax為99.1%，在K562細胞中顯示IC 50為44 nM且Ymax為95.8%。化合物C-2的K562結果表明在無 FLT3突變的細胞中的作用。在某些實施方案中，化合物C-3在MOLM-13細胞中顯示IC 50＞100 nM和Ymax為0%，在MV4-11細胞中顯示IC 50＞100 nM和Ymax為6.8%，在K562細胞中顯示IC 50＞100 nM和Ymax為0%。這些結果與表2A中實施例的結果相當。
在某些實施方案中，R 5是Cy。在某些實施方式中，R 5是取代或未取代的C 1-6烷基。在某些實施方案中，R 5為C 1-6烷基，其未被取代或被鹵素、CN、OH、取代或未被取代的C 1-6烷氧基取代。在某些實施方式中，R 5是C 1-6烷基，被F、CN、OMe或OEt取代。在某些實施方案中，R 5為C 1-6烷氧基，其為未取代的或被鹵素、CN、OH、取代的或未取代的C 1-6烷氧基取代。在某些實施方式中，R 5是C 1-6烷氧基，被F、CN、OMe或OEt取代。在某些實施方案中，R 5為烷胺基，其為未取代的或被鹵素、CN、OH、取代的或未取代的C 1-6烷氧基取代。在某些實施方案中，R 5為烷胺基，其被F、CN、OMe或OEt取代。在某些實施方式中，R 5是N(H)(Me)、N(H)(Et)或N(H)(iPr)。在某些實施方式中，R 5是二烷胺基，未取代或被鹵素、CN、OH、取代或未取代的C 1-6烷氧基取代。在某些實施方式中，R 5是二烷胺基，被F、CN、OMe或OEt取代。
在某些實施方案中，R 5為N(Me) 2。
在某些實施方案中，R 5是Cy。在某些實施方案中，R 5是環丙基、環丁基或環戊基。
在某些實施方案中，R 1是Me。在具體的實施方案中，R 1是Et。在某些實施方案中，R 7是F、Cl、Me、Et或OMe。在具體的實施方案中，R 7是H。
在某些實施方案中，R 4是-C(O)-CH=CH 2。在具體的實施方案中，R 4是-C(O)-CH=CH-CH 2-NMe 2。
烷基是未被取代的或被選自取代的或未取代的胺基、取代的或未取代的羥基的基團中的一個或多個取代，並且在一些實施方案中，對於本文所述的任何式的化合物，R 4是-C(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -S(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -S(O) 2-B-C(R 6a)=C(R 6b)  -C(O)-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O)-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O) 2-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-R 6aR 6b; 或-B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-OR 6aOR 6b；B 是取代或未取代的C 1-4伸烷基、取代或未取代的環烷基、或取代或未取代的雜環烷基；且R 6C為取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的胺基、取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子。在一些實施方案中，R 4為-CH 2-CH=CH-C(O)-N(CH 3) 2。在一些實施方案中，R 4為‑CH 2-C≡CH-C(O)-N(CH 3) 2。
在某些實施方案中，A 1、A 2、A 3和A 4之一是N。在某些實施方案中，A 1、A 2、A 3和A 4中的兩個是N。
在某些實施方式中，A 1、A 2和A 3各自獨立地是-C（R 7）=；並且A 4是C （R 7）=或N。
在某些實施例中，A 4是-N=。在某些實施例中，A 4是-C（R 7）=；並且R 7是H、烷基或烷氧基。在某些實施例中，A 4是-C（R 7）=；且R 7為取代或未取代的雜環烷基。在某些實施例中，A 4是-C（R 7）=；且R 7為取代或未取代的吡咯烷基或哌啶基。在某些實施例中，A 4是-C（R 7）=；且R 7為哌啶基，其未被取代或被烷基或雜環烷基取代。在某些實施例中，A 3是-C（R 7）=；並且R 7是H、烷基或烷氧基。
在某些實施例中，Y是-C(R 2eR 2f)-。在某些實施方案中，Y是-CH 2-、-C（Me）H、CMe 2、CHF或CF 2。在某些實施方案中，Y是-O-。在某些實施方案中，Y是-NR 2g-。在某些實施例中，Y是-NMe-。在某些實施方案中，Y是-NH-。
在某些實施例中，每個R 2c和R 2d獨立地是H或烷基。在某些實施例中，每個R 2c和R 2d獨立地是H或Me。在某些實施例中，R 2c是H；且R 2d為Me。在某些實施方案中，R 2c和R 2d可以連接在一起形成4-6員雜環烷基。在某些實施例中，每個R 2c和R 2d是H。
在某些實施例中，L 1是取代的或未取代的C 2-C 4伸烷基。在某些實施方案中，L 1是C 2-C 4伸烷基，其是未取代的或被鹵素、羥基或烷基取代。
在某些實施方式中，L 1是未取代的C 2-C 4伸烷基。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-, -CH 2-CH 2-CH 2-, or -CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-。在某些實施方案中，L1為-CH 2-CH 2-CH 2-。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-。
在某些實施方案中，L 2為單鍵。在某些實施方案中，L 2為–C(O)-L 3-NR 2b-。在某些實施方案中，L 2為–C(O)-L 3-NH-。在某些實施方案中，L 2為–C(O)-L 3-N(CH 3)-。
在某些實施方案中，L 1為未取代的C 2-C 4伸烷基，L 2為–C(O)-L 3-NR 2b-。在某些實施方案中，L 1為未取代的C 2-C 4伸烷基，L 2為–C(O)-L 3-NR 2b-。在某些實施方案中，L 1是-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-或-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-，L 2是–C(O)-CH(CH 3)-NH-。
在某些實施方案中，所述化合物如式(P5-I’)所示： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，A 1、A 2和A 4各自為CH，且A 4為CR 7；並且所述化合物如式(P4-I)所示： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，所述化合物是根據式(P5-Ia)和(P5-Ib)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，L 1是取代或未取代的乙烯基。在某些實施例中，L 1是未取代的乙烯基。
在某些實施方案中，所述化合物是根據式（P4-II）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，所述化合物是根據式（P5-IIa）或（P5-IIb）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，L 1是被Me、Et、i-Pr、二甲基、OH或甲氧基取代的乙烯基。
在某些實施方案中，所述化合物根據（P4-IIIa）或（P4-IIIb）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，所述化合物根據（P5-IIIa），（P5-IIIb）、（P5-IIIc）或（P5-IIId）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，L 3是-CH 2-。
在某些實施方案中，所述化合物根據式（P4-IVa）或（P4-IVb）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，所述化合物是根據式（P5-IVa）、（P5-IVb）、（P5-IVc）或（P5-IVd）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，L 3是-CH(Me)-或C(Me) 2-。
在某些實施方案中，所述化合物根據式（P4-Va）或（P4-Vb）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，所述化合物是根據式（P5-Va）、（P5-Vb）、（P5-Vc）或（P5-Vd）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，R 2b是H或Me。
在某些實施例中，該化合物是根據化學式（P2-I）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，R 7是H、Me、Et、Cl、F 或OMe。在某些實施方案中，R 7是H。
在某些實施方案中，R 1是Me或Et。在某些實施方案中，R 5為環丙基、Me、Et、N(Me) 2或N(i-Pr)(Me)。在某些實施方案中，R 1為Me或Et和R 5為環丙基、Me、Et、N(Me) 2或N(i-Pr)(Me)。在某些實施方案中，R 1為Me或Et，R 5為環丙基、Me、Et、N(Me) 2或N(i-Pr)(Me)，R 7為H。
在某些實施方案中，所述化合物是根據式(XLIIIa)、(XLIIIb)、(XLIIIc)或(XLIIId)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，所述化合物是根據式(XLIVa)、(XLIVb)、(XLIVc)或(XLIVd)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，所述化合物是根據式(XLVIa)、(XLVIb)、(XLVIc)、(XLVId)、(XLVIe)或(XLVIf)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(XLVIm)、(XLVIn)、(XLVIo)、(XLVIp)、(XLVIq)或(XLVIr)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(XLVIIa)或(XLVIIb)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(XLVIIIa)、(XLVIIIb)、(XLVIIIc)或(XLVIIId)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(XLVIIIe)、(XLVIIIf)、(XLVIIIg)或(XLVIIIh)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，對於式 Va-LIIf，當存在Et基團時，用Me取代。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(LXa)、(LXb)、(LXc)、(LXd)、(LXe)或(LXf)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(LXIa)、(LXIb)、(LXIc)或(LXId)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(LXIIa)、(LXIIb)、(LXIIc)或(LXIId)的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(LXIIIa)或(LXIIIb)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，R 5如式P6-I所述，在某些實施方案中，R 5為環丙基、Me、Et、N(Me) 2或N(i-Pr)(Me)。在某些實施方案中，R 5為NHMe、NH(CH(CH 2CH 3) 2)或NH(環烷基)，其中該環烷基被1或2個氟基團取代。
在某些實施方案中，對於式(P-I)、(P2-I)、(I)-(LXIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)和(P5-I’)-(P5-Vd)而言，-CONH 2基團被-CON(H) Me所替代。
除非另有說明，本文所述的下列實施方案中的每一個可獨立地適用於上式(P-I)、(P2-I)、(I)-(LXIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)和(P5-I’)-(P5-Vd)中的每一個。
在某些實施方案中，X是O。在某些實施方案中，X是-NR 2a-。在某些實施方案中，X是-NR 2a-；和R 2a是H、Me、Et或i-Pr。在某些實施方案中，X是-NR 2a-；R 2a是H，在某些實施方案中，X是單鍵。
在某些實施方案中，L 1為取代或未取代的C 1-C 4伸烷基。在某些實施方案中，L 1為未取代的或被鹵素、羥基或烷基取代的C 2-C 4伸烷基。在某些實施方式中，L 1是未取代的C 1-C 4伸烷基。在某些實施方式中，L 1是未取代的C 2-C 4伸烷基。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-或-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-CH 2-。在某些實施方案中，L 1為-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-。
在某些實施方案中，L 2為單鍵。在某些實施方案中，L 2為-C(O)-L 3-NR 2b-。在某些實施方案中，L 2為-C(O) -L 3-NH-。在某些實施方案中，L 2為-C(O)-L 3-N (CH 3)-。
在某些實施方案中，L 3為取代或未取代的C 1-C 4伸烷基；並且每個伸烷基上的取代基獨立地選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。在某些實施方式中，L 3是未取代的C 1-C 4伸烷基。在某些實施方式中，L 3是未取代的C 2-C 4伸烷基。在某些實施方案中，L 3為未取代的C 1伸烷基。在某些實施方案中，L 3為未取代的C 2伸烷基。在某些實施方案中，L 3為未取代的C 3伸烷基。
在某些實施方式中，R 2b是C 1-C 4烷基。在某些實施方案中，R 2b為甲基。
在某些實施方式中，R 4為-C(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6C)。在某些實施方式中，R 4是-C(O)-CH= CH 2。在某些實施方式中，R 4為-S (O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6C)，或-S(O) 2-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6C)。在某些實施方式中，R 4是-S(O) 2-CH=CH 2。在某些實施方式中，R 4為-C(O)-C(R 6a) =C(R 6b)(R 6C)。
在某些實施方式中，R 4是-C(O)-CH=CH 2。在某些實施方式中，R 4為-S (O) 2-C(R 6a) = C(R 6b)(R 6C)。在某些實施方式中，R 4是-S (O) 2-CH=CH 2。
在某些實施方案中，R 7為氫。
在某些實施方式中，R 6a、R 6b和R 6C各自為H。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H或F；和R 6C是取代或未取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b之一是CN，另一個是H；和R 6C是H，或取代或未取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；和R 6C是未取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；和R 6C是Me或Et。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；和R 6C是被胺基、烷胺基或二烷胺基取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；和R 6C是被NH 2、NHCH 3或N (CH 3) 2取代的烷基，在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自是H；和R 6C是被二甲基胺基取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；R 6C為-CH 2NMe 2。在某些實施方案中，R 6a和R 6b形成鍵結（從而形成三鍵）；和R 6C是H或取代或未取代的烷基。在某些實施方案中，R 6a和R 6b形成鍵（從而形成三鍵）；和R 6C是Me。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；和R 6C為-(CH2) q-雜環烷基；和q是1、2、3或4。在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自是H；和R 6C為-(CH2) q-雜環烷基；q是1。在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自是H；和R 6C為-(CH2) q-雜環烷基；q是2。在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自是H；和R 6C為-(CH2) q-雜環烷基；和q是3。在某些實施方案中，雜環烷基是取代或未取代的氮雜環丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或氮雜基。在某些實施方案中，雜環烷基是氮雜環丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或氮雜卓-1-基。在某些實施方案中，雜環烷基是被1或2個氟基團取代的氮雜環丁烷-1-基。在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自為H或Me；和R 6C是-CH 2-氮雜環丁烷-1-基，CH 2-吡咯烷-1-基，或-CH 2-哌啶-1-基。在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自為H或Me；和R 6C為-CH 2-氮雜環丁烷-1-基，其中氮雜環丁烷-1-基被1或2個氟基取代。在某些實施方式中，R 6a和R 6b之一是F；和R 6C是H或未取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b之一是F；和R 6C是Me或Et。在某些實施方式中，R 6a和R 6b之一是F；和R 6C是被胺基、烷胺基或二烷胺基取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b之一是F；另一個是H；和R 6C是H。在某些實施方案中，R 6C為被取代胺基取代的烷基，其中在胺基上的取代選自烷基、環烷基或雜環烷基。在某些實施方案中，R 6C為被N-環烷基-N-烷基-胺基取代的烷基。在某些實施方案中，R 6C為被N-雜環烷基-N-烷基-胺基取代的烷基。在某些實施方案中，R 6C為被N-環丙基-N-烷基-胺基取代的烷基。在某些實施方案中，R 6C為被N-環丙基-N-甲基-胺基取代的烷基。在某些實施方案中，R 6C為被N-環丙基-N-乙基-胺基取代的烷基。在某些實施方案中，就R 6c而言，烷基是甲基或乙基。在某些實施方案中，R 6C為被N-環丙基-N-甲基-胺基取代的甲基。
在某些實施方式中，R 4是-C(O)-CH=CH 2、-C(O)-C(F)= CH 2，或-S (O) 2-CH= CH 2。
在某些實施方案中，R 1a為Me、Et或i-Pr。在某些實施方案中，R 1a為Me。
在某些實施方案中，R 4是未取代的環氧化物。在某些實施方式中，R 4是烷基取代的環氧化物。在某些實施方式中，R 4是被Me、Et、i-Pr或n-Pr取代的環氧化物。
在某些實施方式中，R 6a是H，在某些實施方式中，R 6a是F，在某些實施方式中，R 6a是CN。
在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是-C(O)-CRA=C(Rb) R 6C。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是C(O)-CH=C(H)R 6C。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4為-C(O)-CF = C(Rb) R 6C。在某些實施方式中，R 4是-C(O)-CF=CH 2。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是-C(O)-CH=CH 2。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是-C(O)-C≡CR 6C。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是-C(O)-C≡CH。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是-C(O)-C≡C-CH 3。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是C(O)-CH=CH-CH 2-NMe 2。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是C(O)-CH= CH-CH 2-NHMe。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是C(O)-CH=CH-CH 2-雜環烷基，其中所述雜環烷基具有1個氮原子並且任選被取代。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是C(O)-CH= CH-CH 2-雜環烷基，其中所述雜環烷基是N-連接的且任選被取代。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是C(O)-CH=CH-CH 2-具有1個氮的雜環烷基。在式(P-I)、(P2-I)、(LXia)-(LXIIIb)、(P4-I)-(P4-Vb)或(P5-I’)-(P5-Vd)的某些實施方案中，R 4是 。在式（P-I），（P2-I），（I'），（LXIa）-（LXIIIb），（P4-I）-（P4-Vb）或（P5-I’）-（P5-Vd）的某些實施方案中，R 4是 ，在某些實施方案中，R 4是 。
在某些實施例中，R 6C是H。在某些實施例中，R 6C是取代或未取代的烷基。在某些實施例中，R 6C是H，或取代或未取代的烷基。在某些實施例中，R 6C是未取代的烷基。在某些實施例中，R 6C是Me或Et 。
在某些實施方案中，R 6C是被胺基、烷胺基或二烷胺基取代的烷基。在某些實施方案中，R 6C是被二甲基胺基取代的烷基。在某些實施例中，R 6C是-CH 2NMe 2。在某些實施例中，R 6C是H或取代或未取代的烷基。在某些實施例中，R 6C是Me。在某些實施方案中，R 6C是-（CH 2）q -雜環烷基；並且q為1、2、3或4。在某些實施方案中，R 6C是-（CH 2）q-雜環烷基；且q為1。在某些實施方案中，R 6C是-（CH 2）q -雜環烷基；且q 為2。在某些實施方案中，R 6C是-（CH 2）q-雜環烷基；且q為3。
在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLIVa）或（XLIVc）。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLVIe）或（XLVIq）。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLVIIIa）或（XLVIIIc）。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLIIIa）或（XLIIIc）。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLIVa）或（XLIVc）；且R 4為-C（O）-CH=CH 2。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLIVa）或（XLIVc）；且R 4為-C（O）-CH=CHR 6C。在式（XLIVa）或（XLIVc）的特定實施方案中，R 4是C（O）-CH=CH-CH 2-NMe 2。
在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLVIe）或（XLVIq）；且R 4為-C（O）-CH=CH 2。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLVIe）或（XLVIq）；且R 4為-C（O）-CH=CHR 6C。在式（XLVIe）或（XLVIq）的特定實施方案中，R 4是-C（O）-CH=CH -CH 2-NMe 2。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLVIIIa）或（XLVIIIc）；且R 4為-C（O）-CH=CH 2。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLVIIIa）或（XLVIIIc）；且R 4為-C（O）-CH=CHR 6C。在式（XLVIIIa）或（XLVIIIc）的特定實施方案中，R 4是-C（O）-CH=CH -CH 2-NMe 2。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLIIIa）或（XLIIIc）；且R 4為-C （O）-CH=CH 2。在某些實施方案中，該化合物是根據式（XLIIIa）或（XLIIIc）；且R 4為-C（O）-CH=CHR 6C。在式（XLIIIa）或（XLIIIc）的特定實施方案中，R 4是-C（O）-CH=CH -CH 2-NMe 2。
在一些實施方案中，對於式（P-I）、（P4-I）、（P2-I），（XLIIIa）、（XLIIIb）、（XLIIIc）、（XLIIId）、（XLIVb）、（XLVIc），（XLVId）、式（XLVIa）、（XLVIb）、（XLVIc）、（XLVId）、（XLVIe）、（XLVIf）、（XLVIm）、（XLVIn）、（XLVIo），（XLVIp）、（XLVIq）、（XLVIr）、（XLVIIIa）、（XLVIIIc）、（XLVIIIe）、（XLVIIIg）、（LXa）、（LXb）、（LXc）、（LXd）、（LXe）、（LXf）、（LXIa）、（LXIb）、（LXIc）、（LXId）、（LXIIa）、（LXIIb）、（LXIIc）、 (LXIId） （LXIIIa）或（LXIIIb）的化合物，R 4為-C(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -S(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -S(O) 2-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O)-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O)2-R 6c, -B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-R 6aR 6b； 或 -B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-OR 6aOR 6b；B 是取代或未取代的C 1-4伸烷基，取代或未取代的環烷基，或取代或未取代的雜環烷基；且R 6C為取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的胺基，取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子。在某些實施方案中，R 4是-C(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c，-S(O)-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c或-S(O) 2-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c。在某些實施方案中，R 4是-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c，-B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O)-R 6c，-B-C(R 6a)=C(R 6b)-S(O) 2-R 6c。在某些實施方案中，R 4是-B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-R 6aR 6b；或-B-C(R 6a)=C(R 6b)-P(O)-OR 6aOR 6b。在具體的實施方案中，R 4是-B-C(R 6a)=C(R 6b)-C(O)-R 6c。在某些實施方案中，R 4是‑C(O)-CH=CH-CH 2-NMe 2。在某些實施方案中，R 4是‑C(O)-CH=CH-CH 2-NHMe。在某些實施例中，R 6C是取代的或未取代的烷氧基。在某些實施方式中，R 6C是取代或未取代的OMe、OEt、O-i-Pr 或O-t-Bu 。在某些實施方式中，R 6C是OMe、OEt、O-i-Pr 或O-t-Bu 。在某些實施方式中，R 6C是取代或未取代的雜環烷基。在某些實施例中，R 6C是取代的或未取代的氮雜環丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或氮雜基。在某些實施方案中，R 6C為氮雜環丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或氮雜-1-基。在某些實施例中，R 6C是哌啶-1-基。在某些實施例中，R 6C是取代的或未取代的胺基。在某些實施例中，R 6C是取代的胺基。在某些實施方案中，R 6C是二烷胺基。在某些實施方案中，R 6C是二甲基胺基，二乙基胺基，N-異丙基-N-甲基胺基或N-異丙基-N-乙基胺基。在某些實施方案中，R 6C是二甲基胺基。
在一些較佳實施方案中，本文提供了具有結構(P6-I)的式(P6-I)化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽， 其中：每個A 1、A 2、A 3和A 4獨立地為-C(R 7) =或-N =；條件是A 1、A 2、A 3和A 4中的N不超過兩個； L 1和L 3各自獨立地為取代或未取代的C 1-C 4伸烷基； R 1為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的環烷基、或取代或未取代的雜環烷基； R 2b獨立地為H或C 1-C 4烷基； R 4為i)-C(O)-C(R 6a) = C(R 6b)(R 6C)，ii)-S (O)-C(R 6a) = C(R 6b)(R6C)，iii)-S(O) 2-C(R 6a) = C(R 6b)(R 6C)，或iv)取代或未取代的環氧化物； R 5為H、Cy、CN、鹵素、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的C 1-6烷氧基、取代或未取代的鹵代烷氧基、取代或未取代的烷胺基； Cy是取代或未取代的環烷基，或取代或未取代的雜環烷基； R 6a和R 6b各自獨立地為H、鹵素、CN或C 1-6烷基；或R 6a和R 6b連接在一起以形成鍵；R 6C為H、鹵素、CN或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基為未被取代的或被選自以下基團中的一個或多個取代：取代或未取代的胺基、取代或未取代的羥基和取代或未取代之具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的雜環烷基；以及 每個R 7獨立地為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、或取代或未取代的雜環烷基。
在一些實施方案中，對於本文所述的任何式的化合物，R 5是H、Cy、CN、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或C 1-6烷胺基；Cy是環烷基或雜環烷基；Cy、烷基、烷氧基和烷胺基各自是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基或二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個取代。在某些實施方案中，每個環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
在某些實施方式中，R 5是取代的C 1-6烷基，取代的C 1-6烷氧基或取代的烷胺基；並且所述取代是取代或未取代的環烷基或取代或未取代的雜環烷基之外的。在某些實施例中，R 5是未取代的環烷基。在某些實施方案中，R 5是被羥基、烷氧基、鹵素或C 1-C 6烷基取代的環烷基。在某些實施例中，R 5是未取代的環烷基。在某些實施方案中，R 5是被羥基、烷氧基、鹵素或C 1-C 6烷基取代的雜環烷基。
在某些實施方案中，R 5是-NHC（O）R ；並且R是C 1-C 6烷基。
在某些實施例中，A 1，A 2和A 4各自是CH，並且A 3是CR 7。在某些實施方案中，A 1和A 2各自為CH ；A 3是CR 7，且A 4是N 。在某些實施例中，A 1，A 2和A 3各自是CH，並且A 4是CR 7。在某些實施方案中，A 4是CR 7；並且R 7是H、鹵素、烷基、鹵代烷基或烷氧基。在某些實施方案中，A 4是CR 7；並且R 7是H、F、Me、Et、Cl、CF 3或OMe。在某些實施方案中，A 3是CR 7；並且R 7是H、鹵素、烷基、鹵代烷基或烷氧基。在某些實施方案中，A 3是CR 7；並且R 7是H、F、Me、Et、Cl、CF 3或OMe。
在某些實施例中，該化合物是根據式（P6-IIa）或（P6-IIb）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施例中，L 1是取代的或未取代的C 1-C 4伸烷基。在某些實施方案中，每個伸烷基上的取代基獨立地選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。在某些實施例中，L 1是-CH 2-CH 2-，-C（Me）H-CH 2-或-CH 2-C（Me）H-。在某些實施例中，L 1是-CH 2-C（Me）H-。
在某些實施方式中，化合物是根據式（P6-IIIa），（P6-IIIb），（P6-IIIc）或（P6-IIId）： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，R 1為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的環烷基、或取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立選自氮、氧和硫的雜原子。在某些實施方案中，烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基和雜環烷基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。在某些實施方案中，R 1為H、Me或Et。
在某些實施方案中，該化合物是根據式(P6-IVa)、(P6-IVb)、(P6-IVc)或(P6-IVd)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，L 3為取代或未取代的C 1-C 4伸烷基。在某些實施方案中，每個伸烷基上的取代基獨立地選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。在某些實施方案中，L 3為-CH 2-或-C(Me) H-。在某些實施方案中，L 3為-C(Me) 2-、-CH 2-CH 2-、-C(Me) H-CH 2-、-CH 2-C(Me) H-，或 。
在某些實施方案中，R 2b為H或Me。
在某些實施方案中，每個R 7獨立地為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、或取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子。在某些實施方案中，在烷基、烷氧基和雜環烷基的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
在某些實施方式中，R 7是H、F、Me、Et、Cl、CF 3或OMe。
在某些實施方案中，R 5為H、Cy、CN、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或C 1-6烷胺基；Cy、烷基、烷氧基和烷胺基各自是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基、二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基中的一個或多個取代，所述雜環烷基具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子；取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基。在某些實施方案中，環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。在某些實施方案中，Cy是環烷基。在某些實施方案中，Cy是雜環烷基。
在某些實施方案中，R 5是Cy，其是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基、二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個取代。在某些實施方案中，環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個；Cy是環烷基或雜環烷基。
在某些實施方案中，R 5為未取代或取代的C 1-6烷基、未取代或取代的C 1-6烷氧基、或未取代或取代的烷胺基。在某些實施方案中，烷基、烷氧基和烷胺基各自是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基、二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個取代。在某些實施方案中，環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
在某些實施方案中，R 5為Cy、CN、鹵素、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的C 1-6烷氧基、取代或未取代的鹵代烷氧基、或取代或未取代的烷胺基。
在某些實施方案中，R 5為Me、Et、i-Pr、n-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、sec-Bu、取代或未取代的環丙基、取代或未取代的環丁基、取代或未取代的環戊基、取代或未取代的環己基、Cl、F、CN、CF 3、OMe、OEt、O-i-Pr、-OCF3、N,N-二甲基胺基、N,N-二乙基胺基、N,N-二異丙基胺基、N-乙基-N-甲基胺基、N-異丙基-N-乙基胺基、N-異丙基胺基、N-乙基胺基、N-甲基胺基、N-正丙基胺基、取代或未取代的1-氮雜環丁烷基、取代或未取代的1-吡咯烷基、取代或未取代的1-哌啶基、或取代或未取代的1-嗎啉基。在某些實施方案中，環丙基、環丁基、環戊基和環己基各自上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
在某些實施方案中，R 5是Me、Et、n–Pr、i–Pr、i-Bu、環丙基、N,N-二甲基、N-乙基-N-甲基、N-異丙基胺基、N-異丙基-N-甲基胺基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基。在某些實施方案中，R 5是環丙基。在某些實施方案中，R 5是Me。在某些實施方案中，R 5是N-異丙基-N-甲基胺基。
在某些實施例中，R 4是-C(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)。
在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自獨立地為H、鹵素、CN或C 1-6烷基；或R 6a和R 6b連接在一起形成鍵；R 6C是H、鹵素、CN或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基是未被取代的或被選自以下基團中的一個或多個取代：取代或未取代的胺基、羥基、取代或未取代的C 1-6烷氧基和取代或未取代之具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的雜環烷基。在某些實施方案中，每個胺基，烷氧基和雜環烷基上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
在某些實施例中，R 6a，R 6b和R 6c各自是H。
在某些實施方案中，R 6c是被胺基、烷胺基或二烷胺基取代的烷基。在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自是H ；並且R 6C是被胺基、烷胺基或二烷胺基取代的烷基。
在某些實施方案中，R 6a和R 6b形成鍵；並且R 6C是H或取代或未取代的烷基。在某些實施方案中，烷基上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、C 1-4烷氧基和雜環烷基中的一個或多個，該雜環烷基具有1-2個獨立選自氮、氧和硫的雜原子。在某些實施方案中，R 6a和R 6b形成鍵；並且R 6C是Me。
在某些實施方式中，R 6a和R 6b各自為H；並且R 6C為‑(CH 2) q-雜環烷基；q是1。
在某些實施方案中，雜環烷基是取代或未取代的氮雜環丁烷-1-基、取代或未取代的吡咯烷-1-基、取代或未取代的哌啶-1-基、取代或未取代的嗎啉-1-基或取代或未取代的氮雜卓-1-基。在某些實施方案中，氮雜環丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基和氮雜基各自上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
在某些實施方案中，R 6a和R 6b各自為H或Me；並且R 6C為-CH 2-氮雜環丁烷-1-基、-CH 2-吡咯烷-1-基或-CH 2-哌啶-1-基。
在某些實施方案中，R 4是-C(O)-CH= CH 2、-C(O)-CH= CH-CH 2-NHMe、-C(O)-CH=CH-CH 2-NMe 2、-C(O)-CH= CH-CH 2-氮雜環丁烷-1-基、-C(O)-CH= CH-CH 2-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)、-C(O)-CH= CH-CH 2-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)、-C(O)-C≡CH、-C(O)-C≡C-Me或-C(O)-C≡C-CH 2-NMe 2。
在某些實施方案中，化合物選自表2A中所列的化合物中的任一種，或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
在一些具體實施方案中，化合物為選自化合物#163、164、202、203、204、213、224、226、227、228、230、232、233, 241、247、252、308、310、315、501-506、507、508、509、511、512、513、516A、517、518、520和605的任何化合物或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些特定的實施方案中，化合物是選自化合物# 204、252、310、501-506、507、508、509、511、512、513、516A、517、518、520和605的任何化合物。
在某些實施方案中，化合物選自化合物ID 204、252、310、509、511和516A。
在某些實施方案中，化合物選自化合物ID308、315、506、507、508、513、512、513、517和520。
在某些實施方案中，化合物選自化合物ID515和516。
在一些特定實施方案中，化合物為選自化合物#156、158、159和160的任何化合物或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，化合物為選自化合物#142A、204、219、221、228、232和246的任何化合物或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。在一些具體實施方案中，化合物為選自化合物#142A、204、228和232的任何化合物或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體的實施方案中，所述化合物為化合物#142A或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。在一些具體的實施方案中，所述化合物為化合物228或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。在某些實施方案中，所述化合物為化合物204。在某些實施方案中，所述化合物為化合物506。在某些實施方案中，所述化合物為化合物516A。在某些實施方案中，所述化合物為化合物ID252。在某些實施方案中，所述化合物是化合物ID509。在某些實施方案中，所述化合物為化合物511。
在一些具體的實施方案中，所述化合物是選自表2A或表2B的任何化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物是下表1中列出的任何化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物： 表1
ID 名稱
137 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
138 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
142A 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
143 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-methoxy-anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-甲氧基-苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
144 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-methoxy-anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-甲氧基-苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
156 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-(dimethylamino)-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-（二甲基胺基）-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
158 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
159 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
160 3-[3-[2-[[(2S)-2-[but-2-ynoyl(methyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-(dimethylamino)-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[丁-2-炔醯基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-（二甲基胺基）-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
162 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[2-[[(Z)-4-(dimethylamino)-2-fluoro-but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoylamino]ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[2-[[（Z）-4-（二甲基胺基）-2-氟-丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
163 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
164 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-[bis(trideuteriomethyl)amino]but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
202 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
203 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[4-(dimethylamino)but-2-ynoyl-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[4-（二甲基胺基）丁-2-炔醯基-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
204 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]-amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]-胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
205 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-（異丙基胺基）吡嗪-2-甲醯胺；
207 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5,6-dimethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5,6-二甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
208 5-cyclopropyl-6-ethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-6-乙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
209 3-[3-[2-[[(2S)-2-[but-2-ynoyl(methyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-cyclopropyl-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[丁-2-炔醯基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-環丙基-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
211 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoylamino]ethyl]anilino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基胺基]乙基]苯胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
213 5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-6-乙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
214 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5,6-dimethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（氮雜環丁-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5,6-二甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
215 5-cyclopropyl-6-ethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[2-fluoroprop-2-enoyl(methyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-6-乙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[2-氟丙-2-烯醯基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
216 6-ethyl-5-methyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 6-乙基-5-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
217 3-[3-[2-[[(2S)-2-[but-2-ynoyl(methyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-(dimethylamino)-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[丁-2-炔醯基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-（二甲基胺基）-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
218 5-(dimethylamino)-6-methyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-6-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
219 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
220 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[1-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]cyclopropanecarbonyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[1-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基] 環丙烷羰基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
221 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
222 5-cyclopropyl-6-methyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-6-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
223 3-[3-[2-[[1-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]cyclopropanecarbonyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[1-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基] 環丙烷羰基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
224 5-cyclopropyl-6-ethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl-[(E)-4-(methylamino)but-2-enoyl]amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-6-乙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基-[（E）-4-（甲基胺基）丁-2-烯醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
225 5-[ethyl(methyl)amino]-6-methyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-[乙基（甲基）胺基]-6-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
226 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
227 6-ethyl-5-methyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl-[(E)-4-(methylamino)but-2-enoyl]amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 6-乙基-5-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基-[（E）-4-（甲基胺基）丁-2-烯醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
228 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
230 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-(dimethylamino)-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-（二甲基胺基）-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
231 5-[isopropyl(methyl)amino]-6-methyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-[異丙基（甲基）胺基]-6-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
232 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-[isopropyl(methyl)amino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-[異丙基（甲基）胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
233 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
234 3-[3-[2-[[(2R)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2R）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
236 5-cyclopropyl-6-ethyl-3-[3-[2-[[(2R)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-6-乙基-3-[3-[2-[[（2R）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
237 5-cyclopropyl-6-ethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[prop-2-enoyl(trideuteriomethyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-6-乙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[丙-2-烯醯基（三氘甲基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
238 5,6-dimethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide; 5,6-二甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
239 5-(dimethylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-（二甲基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
240 6-ethyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 6-乙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（3-氟氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
241 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 5-環丙基-3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
242 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-cyclopropyl-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-環丙基-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
243 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5,6-diethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5,6-二乙基-吡嗪-2-甲醯胺；
244 3-[3-[2-[[(2S)-2-[4-(dimethylamino)but-2-ynoyl-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[4-（二甲基胺基）丁-2-炔醯基-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
245 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-5,6-dimethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-5,6-二甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
246 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-[bis(trideuteriomethyl)amino]but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
247 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-[bis(trideuteriomethyl)amino]but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-[isopropyl(methyl)amino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-[異丙基（甲基）胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
248 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-[bis(trideuteriomethyl)amino]but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-cyclopropyl-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-環丙基-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
249 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-[bis(trideuteriomethyl)amino]but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
250 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-5-[isopropyl(methyl)amino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-[異丙基（甲基）胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
251 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-5,6-dimethyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-5,6-二甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
252 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺；
253 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-[ethyl(methyl)amino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-[乙基（甲基）胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
254 5-cyclopropyl-3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-5-fluoro-anilino]-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; or 5-環丙基-3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-5-氟-苯胺基]-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；或
255 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-ethyl-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide; 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-乙基-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺；
301 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-5,6-dimethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5,6-二甲基-吡嗪-2-甲醯胺
302 3-[3-[2-[[(2R)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[（2R）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
303 6-ethyl-5-(isopropylamino)-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl-[(E)-4-(methylamino)but-2-enoyl]amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-（異丙基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基-[（E）-4-（甲基胺基）丁-2-烯醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
304 5-cyclopropyl-3-[[4-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-2-pyridyl]amino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 5-環丙基-3-[[4-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-2-吡啶基]胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
305 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-isopropyl-6-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-異丙基-6-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
306 5-cyclopropyl-3-[[5-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-3-pyridyl]amino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 5-環丙基-3-[[5-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-3-吡啶基]胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
307 6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl-[(E)-4-(methylamino)but-2-enoyl]amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基-[（E）-4-（甲基胺基）丁-2-烯醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
308 6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]-3-[3-[2-[[2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]-3-[3-[2-[[2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
309 5-[isopropyl(methyl)amino]-6-methyl-3-[3-[2-[[2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 5-[異丙基（甲基）胺基]-6-甲基-3-[3-[2-[[2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
310 5-cyclopropyl-3-[[2-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-4-pyridyl]amino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 5-環丙基-3-[[2-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-4-吡啶基]胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
311 3-[3-[(2R)-2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]propyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（2R）-2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]丙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
312 3-[3-[(2S)-2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]propyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（2S）-2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]丙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
313 5-cyclopropyl-3-[[6-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-2-pyridyl]amino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 5-環丙基-3-[[6-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-2-吡啶基]胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
314 3-[3-[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]propyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（2R）-2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]丙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
315 6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]-3-[3-[2-[[(2S)-2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]-3-[3-[2-[[（2S）-2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
316 6-cyclopropyl-2-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-ethyl-pyridine-3-carboxamide 6-環丙基-2-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-乙基-吡啶-3-甲醯胺
317 3-[3-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]propyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（2S）-2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]丙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
318 3-[3-[2-[[(2S)-2-[4-(dimethylamino)butanoyl-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[（2S）-2-[4-（二甲基胺基）丁醯基-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
319 6-cyclopropyl-2-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-methyl-pyridine-3-carboxamide 6-環丙基-2-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-甲基-吡啶-3-甲醯胺
320 6-cyclopropyl-2-[[5-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-3-pyridyl]amino]-5-ethyl-pyridine-3-carboxamide 6-環丙基-2-[[5-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-3-吡啶基]胺基]-5-乙基-吡啶-3-甲醯胺
321 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
322 6-(dimethylamino)-2-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-5-ethyl-pyridine-3-carboxamide 6-（二甲基胺基）-2-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-乙基-吡啶-3-甲醯胺
323 6-cyclopropyl-2-[[5-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-3-pyridyl]amino]-5-methyl-pyridine-3-carboxamide 6-環丙基-2-[[5-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-3-吡啶基]胺基]-5-甲基-吡啶-3-甲醯胺
324 3-[3-[(1S)-2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1S）-2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
325 3-[3-[(1S)-2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1S）-2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
326 3-[3-[(1R)-2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲基-吡嗪-2-甲醯胺
327 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethynyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙炔基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
328 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-5-[isopropyl(methyl)amino]-6-vinyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-[異丙基（甲基）胺基]-6-乙烯基-吡嗪-2-甲醯胺
501 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-（異丙基胺基）吡嗪-2-甲醯胺
502 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
503 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-5,6-diethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-5,6-二乙基-吡嗪-2-甲醯胺
504 5-cyclopropyl-3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 5-環丙基-3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
505 3-[3-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-[bis(trideuteriomethyl)amino]but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-（異丙基胺基）吡嗪-2-甲醯胺
506 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-5-cyclopropyl-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-5-環丙基-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
507 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-propyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-丙基-吡嗪-2-甲醯胺
508 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-5,6-diethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-5,6-二乙基-吡嗪-2-甲醯胺
509 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-isopropyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-異丙基-吡嗪-2-甲醯胺
510 6-ethyl-5-isobutyl-3-[3-[2-[[2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-異丁基-3-[3-[2-[[2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
511 6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]-3-[3-[2-[[2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]-3-[3-[2-[[2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
512 6-ethyl-5-isobutyl-3-[3-[(1R)-1-methyl-2-[[2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-異丁基-3-[3-[（1R）-1-甲基-2-[[2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
513 6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]-3-[3-[(1R)-1-methyl-2-[[2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]pyrazine-2-carboxamide 6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]-3-[3-[（1R）-1-甲基-2-[[2-[甲基（丙-2-烯醯基）胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺
514 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-methoxy-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-甲氧基-吡嗪-2-甲醯胺
515 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-5-ethoxy-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-乙氧基-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
516 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-isopropoxy-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-異丙氧基-吡嗪-2-甲醯胺
516A 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
517 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-isobutyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-異丁基-吡嗪-2-甲醯胺
518 3-[3-[(1R)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1R）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
519 3-[3-[(1S)-2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]-1-methyl-ethyl]anilino]-5,6-diethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[（1S）-2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]-1-甲基-乙基]苯胺基]-5,6-二乙基-吡嗪-2-甲醯胺
520 3-[[2-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]-4-pyridyl]amino]-5-cyclopropyl-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[[2-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]-4-吡啶基]胺基]-5-環丙基-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
601 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-isobutyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-異丁基-吡嗪-2-甲醯胺
602 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-5-ethoxy-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-5-乙氧基-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
603 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]anilino]-6-ethyl-5-isopropoxy-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-異丙氧基-吡嗪-2-甲醯胺
604 3-[[2-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]-4-pyridyl]amino]-6-ethyl-5-isobutyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[[2-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]-4-吡啶基]胺基]-6-乙基-5-異丁基-吡嗪-2-甲醯胺
605 3-[[2-[2-[[(2S)-2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]propanoyl]amino]ethyl]-4-pyridyl]amino]-6-ethyl-5-[isopropyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[[2-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]-4-吡啶基]胺基]-6-乙基-5-[異丙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
606 3-[[2-[2-[[2-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]-4-pyridyl]amino]-6-ethyl-5-[ethyl(methyl)amino]pyrazine-2-carboxamide 3-[[2-[2-[[2-[[（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]-4-吡啶基]胺基]-6-乙基-5-[乙基（甲基）胺基]吡嗪-2-甲醯胺
607 3-[3-[2-[[2-[[(E)-4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl]-methyl-amino]acetyl]amino]ethyl]-4-fluoro-anilino]-5-cyclopropyl-6-ethyl-pyrazine-2-carboxamide 3-[3-[2-[[2-[[（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]乙醯基]胺基]乙基]-4-氟-苯胺基]-5-環丙基-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺
在一些具體的實施方案中，化合物為選自化合物#204的任何化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體的實施方案中，化合物為選自化合物#232的任何化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物是選自以下的任一種化合物： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，化合物是選自以下的任一種化合物： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
在一些具體實施方案中，所述化合物為： 或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構物。
式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的化合物的某些實施方案顯示出針對FLT3改善的有效性，其中IC 50值低至小於1nM或小於0.1nM，及/或當體內（例如在大鼠中）施用時，在低於5毫克/公斤的低劑量下（例如在3毫克/公斤或低於3毫克/公斤）對FLT3的活性部位有高佔有率（例如超過50％、70％或90％佔有率）。
在一些實施方案中，本文提供了包含選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的醫藥組合物。
在一些實施方案中，本文提供了包含治療有效量的式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）和式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物以及醫藥學上可接受的賦形劑的醫藥組合物。
在一些實施方案中，醫藥組合物被配製用於選自口服施用，腸胃外施用，經頰施用，經鼻施用，局部施用或直腸施用的施用途徑。
在一些實施方案中，本文提供了用於治療增殖性疾病或病症的方法，其包括向有需要的患者施用本文提供的醫藥組合物。
在某些實施例中，患者具有一或多個 FLT3突變。在某些實施方案中， FLT3突變選自N676K、F691L、D835H、D835V、D835Y、Y842C及其組合。在某些實施例中， FLT3突變是N676K。在某些實施例中， FLT3突變是F691L。在某些實施例中， FLT3突變是D835H。在某些實施例中， FLT3突變是D835V。在某些實施例中， FLT3突變是D835Y。在某些實施方案中， FLT3突變是Y842C。在某些實施方案中，患者具有 NPM1突變。
在一些實施方案中，所述自身免疫疾病選自血液惡性腫瘤。
在一些實施方案中，本文提供用於治療異種免疫疾病或病狀的方法，其包括向有需要的患者施用本文提供的醫藥組合物。
在一些實施方案中，本文提供用於治療癌症的方法，其包括向有需要的患者施用本文提供的醫藥組合物。
在某些實施方案中，癌症具有ALK（間變性淋巴瘤激酶）突變。在某些實施方案中，癌症對ALK融合呈陽性。在某些實施方案中，所述癌症對ALK抑制劑有抗性。在某些實施例中，癌症具有選自由以下組成的群組的ALK 突變：T1151K、I1171N、I1171S、I1171T、F1174I、F1174L、F1174V、V1180L、L1196M、L1196Q、L1198F、L1198H、C1156Y、C1159Y、G1202R、D1203N、F1245V、L1256F、G1269A和其組合。
在一些實施方案中，癌症是血液惡性腫瘤。
在一些實施方案中，所述疾病或病症是白血病、淋巴瘤或多發性骨髓瘤。在某些實施方案中，所述疾病或病症是急性淋巴細胞白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、慢性淋巴細胞白血病（CLL），慢性骨髓性白血病（CML）、前淋巴細胞白血病（PLL）、大顆粒淋巴細胞（LGL）、毛細胞白血病（HCL）、肥大細胞白血病（MCL）或骨髓發育不良症候群（MDS）。
在某些實施方案中，所述疾病或病症是急性骨髓性白血病（AML）。在某些實施方案中，AML是 FLT3突變陽性的。在某些實施方案中，所述AML是新診斷的。在某些實施方案中，AML是 FLT3突變陽性的並且是新診斷的。在某些實施方案中，AML是復發性或難治性的。在某些實施方案中，AML是復發性或難治性的並且是 FLT3突變陽性的。在某些實施例中， FLT3突變是 FLT3-ITD突變。在某些實施方案中， FLT3突變選自N676K、F691L、D835H、D835V、D835Y、Y842C及其組合。在某些實施例中， FLT3突變是N676K。在某些實施例中， FLT3突變是F691L。在某些實施例中， FLT3突變是D835H。在某些實施例中， FLT3突變是D835V。在某些實施例中， FLT3突變是D835Y。在某些實施方案中， FLT3突變是Y842C。在某些實施方案中，患者具有 NPM1突變。
在某些實施方案中，AML對化療有抗性。在某些實施方案中，AML對化療有抗性並且已經發展出 FLT3-IND突變，包括但不限於選自N676K、F691L、D835H、D835V、D835Y、Y842C及其組合的至少一種突變。
在某些實施方案中，AML對先前施用的FLT3抑制劑具有抗性。在某些實施方案中，AML對吉非替尼（gilteritinib）具有抗性。在某些實施方案中，AML對米哚妥林（midostaurin）具有抗性。
在一些實施方案中，本文提供用於治療肥大細胞增多症的方法，其包括向有需要的患者施用本文提供的醫藥組合物。
在一些實施方案中，本文提供用於治療骨質疏鬆症或骨吸收病症的方法，其包括向有需要的患者施用本文提供的醫藥組合物。
在一些實施方案中，本文提供了用於治療發炎性疾病或病症的方法，其包括向有需要的患者施用本文提供的醫藥組合物。
在一些實施方案中，本文提供了用於治療狼瘡的方法，其包括向有需要的受試者施用包含治療有效量的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的組合物，該化合物為選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的FLT3抑制劑。
在一些實施例中，本文提供用於治療異種免疫疾病或病狀的方法，其包含向有需要的個體投予含有治療有效量的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的組合物，該化合物為選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的FLT3抑制劑。
在一些實施例中，本文提供治療彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤或慢性淋巴細胞白血病的方法，其包含向有需要的個體投予含有治療有效量的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的組合物，所述化合物為選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的FLT3抑制劑。
在一些實施方案中，本文提供了用於治療肥大細胞增多症的方法，其包括向有需要的受試者施用包含治療有效量的作為FLT3抑制劑的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的組合物，所述FLT3抑制劑選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）。
在一些實施方案中，本文提供用於治療骨質疏鬆症或骨吸收病症的方法，其包括向有需要的受試者施用包含治療有效量的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的組合物，所述化合物為選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的FLT3抑制劑。
在一些實施方案中，本文提供了用於治療發炎性疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用包含治療有效量的化合物或其醫藥學上可接受的鹽的組合物，所述化合物為選自式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的FLT3抑制劑。
在一些實施方案中，本文提供了醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受的載體和藥學有效量的根據本文所述的式中的任一個的化合物。在一些實施方案中，該化合物是根據式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）和式（P5-I’）-（P5-Vd）中的任一種。
在一些實施方案中，醫藥組合物被配製用於選自口服施用、腸胃外施用、經頰施用、經鼻施用、局部施用或直腸施用的施用途徑。
在一些實施方案中，載體是腸胃外載體。在一些實施方案中，載體是口服載體。在一些實施方案中，載體是局部載體。
本文考慮上述各種變量的基團的任何組合。應當理解，所屬技術領域之通常知識者可以選擇本文提供的化合物上的取代基和取代模式，以提供化學穩定的並且可以透過本領域習知的技術以及本文所述的那些技術合成的化合物。
式（I）化合物的其他代表性實施方案包括表2A和表2B中所列的化合物或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物或立體異構物。
在整個說明書中，基團及其取代基可由所屬技術領域之通常知識者選擇以提供穩定的部分和化合物。
在一些實施方案中，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的化合物抑制FLT3。在一些實施方案中，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的化合物用於治療患有FLT3依賴性或FLT3介導的病症或疾病的患者，所述病症或疾病包括但不限於增殖性疾病如血液惡性腫瘤。
在一些實施方案中，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）的化合物用於治療患有FLT -依賴性或FLT3介導的病症或疾病的患者，所述病症或疾病包括但不限於癌症，例如血液惡性腫瘤。 3.化合物的製備
式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任何一個的化合物都可以使用所屬技術領域之通常知識者習知的標準合成反應或使用本領域習知的方法合成。這些反應可以按線性順序以提供化合物，或者它們可以用來合成片段，隨後用本領域習知的方法將其連接。本文的實施例中提供示例性方法。
本文描述了抑制FLT3活性的化合物及其製備方法。本文還描述了這類化合物的醫藥學上可接受的鹽、醫藥學上可接受的溶劑化物、醫藥學活性代謝物和醫藥學上可接受的前驅藥。提供了醫藥組合物，其包括至少一種這樣的化合物或這樣的化合物的醫藥學上可接受的鹽、醫藥學上可接受的溶劑化物、醫藥學活性代謝物或醫藥學上可接受的前驅藥。
用於合成本文所述的化合物的起始材料可以透過合成或從商業來源獲得，例如但不限於Aldrich Chemical Co.（威斯康星州密爾沃基），Bachem（加利福尼亞州托蘭斯）或Sigma Chemical Co.（密蘇裡州聖路易斯）。本文所述的化合物和具有不同取代基的其他相關化合物可以使用所屬技術領域之通常知識者中習知的技術和材料進行合成，如本文所述，例如，在March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4th Ed. (Wiley 1992)、Carey和Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4th Ed., Vol. A和B (Plenum 2000, 2001)、Green和Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS 3rd Ed. (Wiley 1999)、Fieser和Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991)、Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5和Supplementals (Elsevier Science Publishers, 1989)、Organic Reactions, Volumes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991)以及Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989)中所描述的方法（其全部通過引用整體併入本文）。用於合成本文所述的化合物的另外的方法可以在Arnold等人的國際專利公開第WO01/01982901號，Arnold等人的Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 10 (2000) 2167-2170和Burchat等人的Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12 (2002) 1687-1690中找到。本領域中已知的反應可用於推導本文中所述化合物的通用合成方法，該反應可以透過使用適當的試劑和條件進行修改，正如所屬技術領域之通常知識者所認識到的那樣，引入所提供的公式中的各種基團。
如果需要，可以使用常規技術分離和純化反應產物，所述常規技術包括但不限於過濾、蒸餾、結晶、色層分析法等。這些材料可以使用常規手段表徵，包括物理常數和光譜數據。
本文所述的化合物可製備為單一異構物或異構物的混合物。
在一些實施方案中，根據本文所述的合成方案製備式（P6-I）的代表性化合物。 4.化合物的其他形式
本文公開的化合物具有式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb），式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的結構。應理解，除非另外指明，否則當提及本文所述的化合物時，其意指包括式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一個的化合物以及落入這些通式範圍內的所有具體化合物。
本文所述的化合物可以具有一個或多個立構中心，並且每個中心可以以R或S構型存在。本文提供的化合物包括所有非對映異構物、對映異構物和差向異構物的形式以及其合適的混合物。如果需要，立體異構物可以透過本領域習知的方法獲得，例如透過手性色譜柱分離立體異構物。
非對映異構物混合物可基於其物理化學差異透過習知方法，例如透過色層分析法及/或部分結晶法，分離成其個別非對映異構物。在一些實施方案中，對映異構物可透過手性色譜柱分離。在一些實施方案中，對映異構物可以如下分離：透過與合適的光學活性化合物（例如醇）反應將對映異構物混合物轉化為非對映異構物混合物，分離非對映異構物並將單獨的非對映異構物轉化（例如水解）為相應的純對映異構物。所有這些異構物，包括非對映異構物，對映異構物及其混合物被認為是本文所述組合物的一部分。
本文所述的方法和製劑包括使用本文所述的化合物的N-氧化物、結晶形式（也稱為多晶型物）或醫藥學上可接受的鹽，以及具有相同類型活性的這些化合物的活性代謝物。在一些情況下，化合物可作為互變異構物存在。所有互變異構物都包括在本文提供的化合物的範圍內。此外，本文所述的化合物可以非溶劑化形式以及與醫藥學上可接受的溶劑如水、乙醇等的溶劑化形式存在。本文提供的化合物的溶劑化形式也被認為是本文公開的。
式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種未氧化形式的化合物可以由式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物的N-氧化物，透過用還原劑處理而製備，例如，但不限於：硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化物或類似物，在合適的惰性有機溶劑中，例如，但不限於：乙腈、乙醇、二惡烷水溶液或類似物，反應溫度在0至80°C之間。
在一些實施方案中，本文所述的化合物被製備為前驅藥。「前驅藥」是指在體內轉化為母藥（parent drug）的藥劑。前驅藥通常是有用的，因為在一些情況下，它們可能比母藥更容易施用。例如，它們可以透過口服給藥是生物可利用的，而母藥不是。與母藥相比，前驅藥在醫藥組合物中組合物中具有改善的溶解度。前驅藥的一個非限制性實例是本文所述的化合物，其作為酯（「前驅藥」）施用以促進穿過細胞膜的傳遞，其中水溶性對於移動是不利的，但一旦在細胞內，則其代謝水解為羧酸、活性物質，其中水溶性是有益的。前驅藥的另一個實例可以是與酸基團鍵合的短肽（聚胺基酸），其中肽被代謝以暴露活性部分。在某些實施方案中，在體內施用時，前驅藥化學轉化成化合物的生物學、藥學或治療活性形式。在某些實施方案中，前驅藥通過一個或多個步驟或過程酶促代謝為化合物的生物學、藥學或治療活性形式。為了產生前驅藥，對藥物活性化合物進行修飾，以便在體內給藥後重新生成活性化合物。可以設計前驅藥以改變藥物的代謝穩定性或轉運特性，掩蔽副作用或毒性，改善藥物的味道或改變藥物的其他特性或性質。根據體內藥效學過程和藥物代謝的知識，所屬技術領域之通常知識者一旦習知藥物活性化合物，就可以設計該化合物的前驅藥。（例如，參見，Nogrady（1985）medicinal chemistry A biochemical approach, Oxford University Press, New York, 頁數388-392；Silverman （1992）, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc., San Diego, 頁數352-401, Saulnier 等人,（1994）, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 第4卷, 頁數1985）。
本文所述化合物的前驅藥形式（其中前驅藥在體內代謝以產生如本文所述的衍生物）包括在請求項的範圍內。在一些情況下，一些本文描述的化合物可以是另一種衍生物或活性化合物的前驅藥。
前驅藥通常是有用的，因為在一些情況下，它們可能比母藥更容易施用。例如，它們透過口服給藥可具有生物可利用性，而母藥不是。與母藥相比，前驅藥還可以在醫藥組合物中具有改善的溶解度。前驅藥可以設計為可逆的藥物衍生物，用作調節劑以增強藥物向特定部位組織的運輸。在一些實施方案中，前驅藥的設計增加了有效的水溶性。參見，例如，Fedorak等人, Am. J. Physiol., 269:G210-218 (1995)；Mcleod 等人, Gastroenterol, 106:405-413 (1994)；Hochhaus等人, Biomed. Chrom., 6:283-286 (1992)；J. Larsen和H. Bundgaard, Int. J. Pharmaceutics, 37, 87 (1987)；J. Larsen等人, Int. J. Pharmaceutics, 47, 103 (1988)；Sinkula等人, J. Pharm. Sci., 64:181-210 (1975)；T. Higuchi和V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series；以及Edward B. Roche, Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987，全部以其全文併入本文。
式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一個的化合物的芳族環部分上的位點可易受各種代謝反應的影響，因此在芳族環結構上併入適當的取代基諸如（僅舉例來說）鹵素可減少，最小化或消除此代謝途徑。
本文所述的化合物包括同位素標記的化合物，其與本文呈現的各種式和結構中所述的那些相同，但一個或多個原子被具有與通常在自然界中發現的原子質量或質量數不同的原子質量或質量數的原子替代。可摻入本發明化合物的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，例如分別為 2H， 3H， 13C， 14C， 15N， 18O， 17O， 35S， 18F， 36Cl。本文所描述的某些同位素標記化合物（例如，那些含有放射性同位素如 3H和 14C的化合物）在藥物及/或底物組織分佈測定中非常有用。此外，用同位素如氘（即 2H）取代，可提供由更大的代謝穩定性產生的某些治療優勢，例如增加的體內半衰期或降低的劑量需求。
在另外的或一些實施方案中，本文所述的化合物在施用至需要的生物體後代謝以產生代謝物，所述代謝物然後用於產生期望的效果，包括期望的治療效果。
本文所述的化合物可形成為及/或用作醫藥學上可接受的鹽。醫藥學上可接受的鹽的類型包括但不限於：（1）酸加成鹽，其透過使所述化合物的游離鹼形式與醫藥學上可接受的無機酸，例如：鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；或與有機酸反應，例如：乙酸、丙酸、己酸、環戊基丙酸，乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、三氟乙酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-（4-羥基苯甲醯基）苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羥乙基磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、2-萘磺酸，4-甲基二環-[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4,4’-亞甲基雙-（3-羥基-2-烯-1-羧酸）、3-苯基丙酸、三甲基乙酸，叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸等；（2）當母體化合物中存在的酸性質子被金屬離子例如，鹼金屬離子（例如鋰、鈉、鉀），鹼土金屬離子（例如鎂或鈣）或鋁離子替代時形成的鹽；或與有機鹼配位。可接受的有機鹼包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三木甲胺、N-甲基葡糖胺等。可接受的無機鹼包括氫氧化鋁，氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉等。
醫藥學上可接受的鹽的對應相反離子可以用各種方法進行分析和鑑定，所述方法包括但不限於：離子交換色層分析法（ion exchange chromatography）、離子色層分析法（ion chromatography）、毛細管電泳（capillary electrophoresis）、電感耦合電漿（inductively coupled plasma）、原子吸收光譜法（atomic absorption spectroscopy）、質譜法（mass spectrometry）或其任何組合。
通過使用以下技術中的至少一種回收鹽：過濾、用非溶劑沉澱後過濾、溶劑蒸發、或者在水溶液的情況下凍乾。
應當理解，提及醫藥學上可接受的鹽包括其溶劑加成形式或結晶形式，特別是溶劑化物或多晶型物。溶劑化物含有化學計量或非化學計量的量的溶劑，並且可以在與醫藥學上可接受的溶劑如水、乙醇等結晶的過程中形成。當溶劑是水時形成水合物，或當溶劑是醇時形成醇化物。本文所述的化合物的溶劑化物可以在本文所述的方法中方便地製備或形成。此外，本文提供的化合物可以非溶劑化形式以及溶劑化形式存在。通常，就本文提供的化合物和方法的目的而言，溶劑化形式被認為等同於非溶劑化形式。
應當理解，提及鹽包括其溶劑加成形式或晶體形式，特別是溶劑化物或多晶型物。溶劑化物含有化學計量或非化學計量的量的溶劑，並且通常在與醫藥學上可接受的溶劑如水、乙醇等結晶的過程中形成。當溶劑是水時形成水合物，或當溶劑是醇時形成醇化物。多晶型物包括化合物的相同元素組成的不同晶體堆積排列。多晶型物通常具有不同的X射線衍射圖、紅外光譜、熔點、密度、硬度、晶體形狀、光學特性和電學特性、穩定性和溶解度。各種因素如重結晶溶劑、結晶速率和儲存溫度可導致單晶形式佔優勢。
本文所述的化合物可以是各種形式，包括但不限於無定形形式，研磨形式和奈米顆粒形式。此外，本文所述的化合物包括結晶形式，也稱為多晶型物。多晶型物包括化合物的相同元素組成的不同晶體堆積排列。多晶型物通常具有不同的X射線衍射圖，紅外光譜，熔點，密度，硬度，晶體形狀，光學和電學性質，穩定性和溶解度。各種因素如重結晶溶劑，結晶速率和儲存溫度可導致單晶形式佔優勢。
醫藥學上可接受的鹽、多晶型物及/或溶劑化物的篩選和表徵可使用多種技術實現，包括但不限於熱分析、X射線衍射、光譜學、蒸氣吸附和顯微法。熱分析方法解決熱化學降解或熱物理過程，包括但不限於多晶型轉變，並且此類方法用於分析多晶型形式之間的關係，確定重量損失，發現玻璃化轉變溫度或用於賦形劑相容性研究。此類方法包括但不限於差示掃描量熱法（DSC）、調製式差示掃描量熱法（MDCS）、熱重分析（TGA）以及熱重和紅外分析（TG/IR）。X射線衍射方法包括但不限於單晶和粉末衍射儀以及同步加速輻射源。所使用的各種光譜技術包括但不限於拉曼（Raman）、FTIR、UVIS和NMR（液態和固態）。各種顯微技術包括但不限於偏振光顯微法，具有能量色散X射線分析（EDX）的掃描電子顯微法（SEM），具有EDX 的環境掃描電子顯微法（在氣體或水蒸氣氛圍中）、IR 顯微法和拉曼顯微法。
在整個說明書中，基團及其取代基可由所屬技術領域之通常知識者選擇以提供穩定的部分和化合物。 5.醫藥組合物/製劑
醫藥組合物可以使用一種或多種生理學上可接受的載體（包括賦形劑和助劑）以常規方式配製，所述載體促進將活性化合物加工成可藥用的製劑。適當的製劑取決於所選擇的給藥途徑。任何熟知的技術、載體和賦形劑可以適當地使用並且如本領域所理解的。本文所述的醫藥組合物的概述可見於例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第19版（Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995）；Hoover, John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975；Liberman, H.A.及Lachman, L. 編輯, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems, 第7版（Lippincott Williams & Wilkins 1999），以全文引用的方式併入本文中。
本文所用的醫藥組合物是指本文所述的化合物（例如式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物）與其他化學組分（例如載體、穩定劑、稀釋劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑及/或賦形劑）的混合物。醫藥組合物有助於將化合物給予生物體。在實踐本文提供的治療方法或用途時，治療有效量的本文所述的化合物以醫藥組合物形式向患有待治療的疾病、病症或病狀的哺乳動物施用。較佳地，哺乳動物是人類。治療有效量可根據疾病的嚴重程度、受試者的年齡和相對健康狀況，所用化合物的效力和其他因素而廣泛變化。所述化合物可單獨使用或作為混合物的組分與一種或多種治療劑組合使用。
在某些實施方案中，組合物還可以包括一種或多種pH調節劑或緩衝劑，包括：酸，例如：乙酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和鹽酸；包括：鹼，例如：氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乳酸鈉和三羥甲基胺基甲烷；以及如檸檬酸鹽/葡萄糖、碳酸氫鈉和氯化銨等緩衝劑。這些酸、鹼和緩衝劑的含量應使組合物的pH值保持在可接受的範圍內。
在一些實施方案中，組合物還可以包括一種或多種鹽，其量足以使組合物的滲透壓濃度達到可接受範圍。這些鹽包括具有鈉、鉀或銨陽離子和氯離子、檸檬酸根、抗壞血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氫根、硫酸根、硫代硫酸根或亞硫酸氫根陰離子的鹽類；合適的鹽類包括氯化鈉、氯化鉀、硫代硫酸鈉，亞硫酸氫鈉和硫酸銨。
本文所用的術語「藥物組合」是指由多於一種活性成分的混合或組合產生的產品，並且包括活性成分的固定和非固定組合。術語「固定組合」是指活性成分（例如本文所述的化合物和共用藥物）以單一實體或劑量的形式同時施用於患者。術語「非固定組合」是指活性成分（例如本文所述的化合物和共用藥物）作為分開的實體同時，並行或無特定間隔時間限制地依序施用於患者，其中此類施用在患者體內提供兩種化合物的有效水平。後者也適用於雞尾酒療法，例如施用三種或更多種活性成分。
本文所述的醫藥組合物可以透過多種施用途徑施用至受試者，包括但不限於：口服、腸胃外（例如靜脈注射、皮下、肌內注射）、鼻內、口腔、局部、直腸或經皮施用途徑。本文所述的醫藥組合物包括但不限於：水性液體分散液、自乳化分散液、固體溶液、脂質體分散液、氣溶膠、固體劑型、粉末、立即釋放製劑、控制釋放製劑、快速溶融製劑、錠劑、膠囊、丸劑、延遲釋放製劑、延長釋放製劑、脈衝釋放製劑、多顆粒製劑和混合的立即釋放和控制釋放製劑。
包含本文所述的化合物的醫藥組合物可以以常規方式製備，例如，僅作為實例，通過常規的混合、溶解、制粒、制糖心錠、磨細、乳化、包封、包埋或壓縮方法製備。
醫藥組合物將包含至少一種本文所述的化合物，例如式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物作為游離酸或游離鹼形式或醫藥學上可接受的鹽形式的活性成分。此外，本文所述的方法和醫藥組合物包括使用具有相同類型活性的這些化合物的N-氧化物、結晶形式（也稱為多晶型物）以及活性代謝物。在一些情況下，化合物可作為互變異構物存在。所有互變異構物都包括在本文提供的化合物的範圍內。另外，本文所述的化合物可以非溶劑化形式以及與醫藥學上可接受的溶劑如水、乙醇等的溶劑化形式存在。本文提供的化合物的溶劑化形式也被認為是本文公開的。
「消泡劑」在處理過程中減少起泡，其可使水性分散液、成品薄膜中或通常於損害處理中的氣泡凝結。示例的消泡劑包括矽乳液或失水山梨醇倍半油酸酯（sorbitan sesquoleate）。
「抗氧化劑」包括例如丁基化羥基甲苯（BHT），抗壞血酸鈉、抗壞血酸、偏亞硫酸鈉和生育酚。在某些實施方案中，抗氧化劑在需要時增強化學穩定性。
在某些實施方案中，本文提供的組合物還可以包含一種或多種防腐劑以抑制微生物活性。合適的防腐劑包括含汞物質，如硼酸苯汞（merfen）和硫柳汞；穩定的二氧化氯；和四級銨化合物如苯紮氯銨、十六烷基三甲基溴化銨和氯化十六烷吡啶。
本文所述的製劑可受益於抗氧化劑、金屬螯合劑、含硫醇化合物和其他一般穩定劑。此類穩定劑的實例包括但不限於：（a）約0.5％至約2％w/v甘油；（b）約0.1％至約1％w/v 甲硫胺酸；（c）約0.1％至約2％w/v 單硫代甘油；（d）約1mM至約10mM EDTA；（e）約0.01％至約2％w/v 抗壞血酸；（f）0.003％至約0.02％w/v 聚山梨醇酯80；（g）0.001％至約0.05％w/v 聚山梨醇酯20；（h）精氨酸；（i）肝素；（j）硫酸聚葡萄糖；（k）環糊精；（l）多硫酸戊聚糖和其他類肝素；（m）二價陽離子，如鎂和鋅；或（n）其組合。
「黏合劑」賦予黏合性質，包括例如：海藻酸及其鹽類；纖維素衍生物，如羧甲基纖維素、甲基纖維素（例如Methocel ®）、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素（例如Klucel ®）、乙基纖維素（例如Ethocel ®）和微晶纖維素（例如Avicel ®）；微晶葡萄糖；直鏈澱粉；矽酸鋁鎂；多糖酸；膨潤土；明膠；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交聯聚維酮；聚維酮；澱粉；預糊化澱粉；黃蓍膠、糊精、糖，例如蔗糖（例如Dipac ®）、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、甘露醇、山梨醇、木糖醇（例如Xylitab ®：和乳糖；天然或合成樹膠如阿拉伯膠、黃蓍膠、甘地膠、依莎貝果殼黏液（mucilage of isapol husks）、聚乙烯吡咯烷酮（例如Polyvidone ®CL, Kollidon ®CL, Polyplasdone ®XL-10）、落葉松阿拉伯半乳聚糖、Veegum ®、聚乙二醇、蠟類、海藻酸鈉等。
「載體」或「載體材料」包括在藥劑學上的任何常用的賦形劑，並且應基於與本文公開的化合物，例如是式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)中的任何一種化合物的相容性以及所需劑型的釋放特性來選擇。示例性的載體材料包括例如黏合劑、懸浮劑、崩解劑、填充劑、界面活性劑、助溶劑、穩定劑、潤滑劑、濕潤劑、稀釋劑及類似物。「醫藥學上相容的載體材料」可以包括但不限於：阿拉伯膠、明膠、膠態二氧化矽、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、麥芽糊精、甘油、矽酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、膽固醇、膽固醇酯、酪蛋白酸鈉、大豆卵磷脂、牛磺膽酸、磷脂醯膽鹼、氯化鈉、磷酸三鈣、磷酸氫二鉀、纖維素和纖維素共軛物、糖類硬脂醯乳酸鈉、卡拉膠、甘油單酯、甘油二酯、預糊化澱粉及類似物。參見，例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed（Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995）; Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; 及 Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. （Lippincott Williams & Wilkins1999）。
「分散劑」及/或「黏度調節劑」包括控制藥物通過液體介質或制粒方法或混合方法的擴散和均勻性的材料。在一些實施方案中，這些試劑還促進包衣或溶蝕基質的有效性。示例性的擴散促進劑/分散劑包括例如：親水性聚合物、電解質、Tween ®60或80、PEG、聚乙烯吡咯烷酮（PVP；商業名為Plasdone ®）、和基於碳水化合物的分散劑，例如：羥丙基纖維素（例如HPC、HPC-SL和HPC-L）、羥丙基甲基纖維素（例如HPMC K100、HPMC K4M、HPMC K15M和HPMC K100M）、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯（HPMCAS）、非晶態纖維素、矽酸鎂鋁、三乙醇胺、聚乙烯醇（PVA）、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物（S630）、4-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯酚與環氧乙烷和甲醛的聚合物（也稱為泰洛沙泊（tyloxapol））、泊洛沙姆（poloxamer）（例如Pluronics F68 ®、F88 ®和F108 ®，其為環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物）；和泊洛沙胺（poloxamines）（例如tetronic 908 ®，也稱為poloxamine 908 ®，其是將環氧丙烷和環氧乙烷依序加入乙二胺中所衍生得到的四官能基嵌段共聚物(BASF Corporation,Parsippany,N.J.)）、聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25、或聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S-630) 、聚乙二醇，例如分子量可為約300至約6000、或約3350至約4000、或約7000至約5400的聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素，聚山梨醇酯-80，海藻酸鈉、樹膠，例如黃蓍膠和阿拉伯膠、瓜爾膠、黃原膠類，例如黃原膠、糖、纖維素塑料（cellulosics），例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚山梨醇酯-80、海藻酸鈉、聚乙氧基化脫水山梨醇單月桂酸酯、聚維酮、卡波姆、聚乙烯醇（PVA）、海藻酸鹽、幾丁聚醣及其組合。增塑劑如纖維素或三乙基纖維素也可用作分散劑。特別適用於脂質體分散液和自乳化分散液的分散液是二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼（dimyristoyl phosphatidyl choline）、來自蛋類的天然磷脂醯膽鹼、來自蛋類的天然磷脂醯甘油、膽固醇和肉豆蔻酸異丙酯。
本發明的組合物中也可使用一種或多種溶蝕促進劑與一種或多種擴散促進劑的組合。
術語「稀釋劑」是指用於在遞送之前稀釋感興趣化合物的化合物。稀釋劑也可用於穩定化合物，因為它們可提供更穩定的環境。溶解在緩衝溶液（其也可以提供pH控制或維持）中的鹽在本領域中用作稀釋劑，包括但不限於磷酸鹽緩衝鹽水溶液。在某些實施方案中，稀釋劑增加組合物的體積以便壓縮或產生足夠的體積來均勻共混物用於膠囊填充。這樣的化合物包括例如：乳糖、澱粉、甘露醇、山梨醇、右旋糖、微晶纖維素如Avicel ®；磷酸氫鈣、磷酸二鈣二水合；磷酸三鈣、磷酸鈣；無水乳糖、噴霧乾燥的乳糖；預糊化澱粉、可壓縮糖，如Di-Pac ®（Amstar）；甘露醇、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯、基於蔗糖的稀釋劑、粉糖；磷酸二氫鈣一水合物、硫酸鈣二水合物；乳酸鈣三水合物，葡萄糖結合劑；穀物水解固形物，直鏈澱粉；粉狀纖維素、碳酸鈣；甘氨酸、高嶺土；甘露醇、氯化鈉；肌醇、膨潤土等。
術語「崩解」包括當與胃腸液接觸時劑型的溶解和分散。「崩解劑或崩散劑」促進物質的分解或崩解。崩解劑的實例包括澱粉，例如天然澱粉如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉、預糊化澱粉如National 1551或Amijel ®、或甘醇酸澱粉鈉（sodium starch glycolate）如Promogel ®或Explotab ®、纖維素如木製品、甲基結晶織維素如Avicel ®、Avicel ®PH101、Avicel ®PH102、Avicel ®PH105、Elcema ®P100、Emcocel ®、Vivacel ®、Ming Tia ®及Solka-Floc ®，甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素、或交聯纖維素，如交聯羧甲基纖維素鈉（Ac-Di-Sol ®）、交聯羧甲基纖維素（cross-linked carboxymethylcellulose）或交聯羧甲基纖維素（cross-linked croscarmellose）、交聯澱粉如甘醇酸澱粉鈉、交聯聚合物如交聯聚維酮、交聯聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸鹽如海藻酸或海藻酸鹽如海藻酸鈉、黏土如Veegum ®HV （矽酸鎂鋁）、樹膠如瓊脂、瓜爾膠、刺槐豆膠、加拉亞膠、果膠或黃蓍膠、甘醇酸澱粉鈉、膨潤土、天然海綿、界面活性劑、樹脂如陽離子交換樹脂、柑橘果肉、月桂基硫酸鈉與組合澱粉中的月桂硫酸鈉等。
「藥物吸收」或「吸收」通常是指藥物從給藥位點穿過屏障進入血管或作用位點的移動過程，例如藥物從胃腸道進入門靜脈或淋巴系統。
「腸溶包衣」是在胃中基本上保持完整但在小腸或結腸中溶解並釋放藥物的物質。通常，腸溶包衣包含聚合物材料，該聚合物材料防止在胃的低pH環境中釋放，但在較高pH下會離子化，通常pH為6至7，並因此在小腸或結腸中充分溶解以釋放其中的活性劑。
「溶蝕促進劑」包括控制特定物質在胃腸液中溶蝕的物質。溶蝕促進劑通常是所屬技術領域之通常知識者習知的。示例性的溶蝕促進劑包括例如親水性聚合物、電解質、蛋白質、胜肽和胺基酸。
「填充劑」包括化合物如乳糖、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、纖維素粉末、右旋糖、葡萄糖結合劑、聚葡萄糖、澱粉、預糊化澱粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露醇、山梨醇、氯化鈉、聚乙二醇等。
可用於本文所述製劑中的「調味劑」及/或「甜味劑」包括例如：阿拉伯膠糖漿、乙醯磺胺酸K、阿力甜、茴香、蘋果、阿斯巴甜、香蕉、巴伐利亞奶油、漿果、黑醋栗、白脫糖、檸檬酸鈣、樟腦、焦糖、櫻桃、櫻桃奶油、巧克力、肉桂、泡泡糖、柑橘、柑橘風味香精、柑橘奶油、棉花糖、可可、可樂、清涼櫻桃、清涼柑橘、環己胺基磺酸鹽、磺醯胺酸、右旋糖、桉、丁香酚、果糖、雜果賓治（fruit punch）、薑、甘草酸鹽、甘草糖漿、葡萄、葡萄柚、蜂蜜、異麥芽酮糖醇（somalt）、檸檬、酸橙、檸檬奶油、甘草酸一銨（MagnaSweet ®）、麥芽醇、甘露醇、楓、藥蜀葵、薄荷醇、薄荷奶油、混合漿果、新橙皮苷二氫查耳酮（neohesperidine DC）、紐甜（neotame）、柳橙、梨、桃子、胡椒薄荷、胡椒薄荷奶油、Prosweet ®粉末、覆盆子、沙士、蘭姆酒、糖精、黃樟素、山梨醇、綠薄荷、綠薄荷奶油、草莓、草莓奶油，甜菊、蔗糖素、蔗糖、糖精鈉、糖精、阿斯巴甜、醋磺內酯鉀（acesulfame potassium）、甘露醇、塔林（talin）、木糖醇、蔗糖素、山梨糖醇、瑞士奶油、塔格糖、橘子、索馬甜、雜果糖（tutti fruitti）、香草、胡桃、西瓜、野櫻桃、冬青、木糖醇，或這些調味成分的任何組合，例如：茴香-薄荷醇、櫻桃-茴香、肉桂-柳橙、櫻桃-肉桂、巧克力-薄荷、蜂蜜-檸檬、檸檬-酸橙、檸檬-薄荷、薄荷醇-桉、橘子-奶油、香草-薄荷，以及其混合物。
「潤滑劑」和「助流劑」是預防、減少或抑制材料的黏附或摩擦的化合物。示例性潤滑劑包括例如硬脂酸、氫氧化鈣、滑石、硬脂醯富馬酸鈉，碳氫化合物，例如礦物油，或氫化植物如氫化大豆油（Sterotex ®），高級脂肪酸及其鹼金屬和鹼土金屬鹽，如鋁、鈣、鎂、鋅、硬脂酸、硬脂酸鈉、甘油、滑石、蠟，Stearowet ®、硼酸、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉、白胺酸、聚乙二醇（例如PEG-4000）或甲氧基聚乙二醇，如Carbowax TM、油酸鈉、苯甲酸鈉、甘油二十二酸酯（glyceryl behenate）、聚乙二醇、月桂基硫酸鎂或月桂基硫酸鈉、矽酸膠如Syloid TM，Cab-O-Sil ®、澱粉如玉米澱粉、聚矽氧油、界面活性劑等。
「可測量的血清濃度」或「可測量的血漿濃度」描述通常以毫克(mg)、微克(μg)或奈克(ng)治療劑/毫升(ml)、分升(dl)或升(l)血清為單位量測的投予後吸收至血流中的血清或血漿濃度。如本文所用，可量測血漿濃度通常以ng/ml或μg /ml為單位量測。
「藥效學」是指決定與作用部位處藥物濃度有關的觀察到的生物反應的因素。
「藥物動力學」是指決定在作用部位達到和維持適當藥物濃度的因素。
「增塑劑」是用於使微膠囊材料或膜衣軟化以使其脆性較低的化合物。合適的增塑劑包括例如：聚乙二醇如PEG300、PEG400、PEG600、PEG1450、PEG3350和PEG800、硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纖維素和三乙酸甘油酯。在一些實施方案中，增塑劑也可用作分散劑或濕潤劑。
「助溶劑」包括化合物如甘油三乙酸酯、檸檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、十二烷基硫酸鈉、多庫酯鈉、維生素E TPGS、二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羥乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素、羥丙基環糊精、乙醇、正丁醇、異丙醇、膽固醇、膽鹽、聚乙二醇200-600、四氫呋喃聚乙二醇醚（glycofurol）、還氧二元醇（transcutol）、丙二醇和二甲基異山梨醇等。
「穩定劑」包括諸如任何抗氧化劑、緩衝劑、酸、防腐劑等的化合物。
本文所用的「穩定狀態」是當在一個給藥間隔內施用的藥物量等於消除的藥物量時，產生一高原期（plateau）或恆定的血漿藥物暴露。
「懸浮劑」包括化合物諸如聚乙烯吡咯烷酮，例如聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物（S630）；聚乙二醇，例如分子量可為具有約300至約6000、或約3350至約4000、或約7000至約5400的聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥甲基纖維素醋酸酯硬脂酸酯，聚山梨醇酯-80，羥乙基纖維素、海藻酸鈉、樹膠，例如，黃蓍膠和阿拉伯膠、瓜爾膠、三仙膠（包括黃原膠）、糖，纖維素素料，例如，羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉，羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚山梨醇酯-80、海藻酸鈉、聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯、聚維酮等。
「界面活性劑」包括化合物如月桂基硫酸鈉，多庫酯鈉、Tween 60或80、甘油三乙酸酯、維生素E TPGS、脫水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆（polaxomer）、膽鹽、單硬脂酸甘油酯、環氧乙烷和環氧丙烷的共聚物，例如Pluronic ®（BASF）等。一些其他界面活性劑包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯（60）氫化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10、辛苯聚醇40。在一些實施方案中，可包括界面活性劑以增強物理穩定性或用於其他目的。
「黏度增強劑」包括例如甲基纖維素、黃原膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙酸酯硬脂酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸鹽、阿拉伯膠、幾丁聚醣及其組合。
「濕潤劑」包括諸如油酸、單硬脂酸甘油酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、油酸三乙醇胺、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、多庫酯鈉、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、多庫酯鈉、三乙酸甘油酯、Tween 80、維生素E TPGS、銨鹽等的化合物。 5.1劑型
本文所述的組合物可以配製用於通過任何常規手段施用給受試者，所述常規手段包括但不限於口服、腸胃外（例如靜脈注射、皮下或肌內注射）、口腔、鼻內、直腸或經皮施用途徑。本文所用的術語「受試者」是指動物，較佳哺乳動物，包括人類或非人類。術語患者和受試者可以互換使用。
此外，本文所述的醫藥組合物（其包括式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物）可以配製成任何合適的劑型，包括但不限於待治療的患者口服攝取的口服水性分散液、液體、凝膠、糖漿、酏劑、漿液、懸浮液等，固體口服劑型、氣霧劑、控制釋放製劑、快速溶融製劑、發泡製劑、凍乾製劑、錠劑、粉末、丸劑、糖心錠、膠囊、延遲釋放製劑、延長釋放製劑、脈衝釋放製劑、多顆粒製劑和混合的立即釋放和控制釋放製劑。
用於口服使用的藥物製劑可以透過以下方式獲得：將一種或多種固體賦形劑與一種或多種本文所述的化合物混合，任選地研磨所得混合物，並且如果需要，在添加合適的助劑，然後加工該顆粒混合物，以獲得錠劑或糖心錠芯。合適的賦形劑包括例如填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素製劑，例如玉米澱粉、小麥澱粉、稻米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉；或其他賦形劑，諸如：聚乙烯吡咯烷酮（PVP或聚維酮）或磷酸鈣。如果需要，可以加入崩解劑，例如交聯羧甲纖維素鈉（cross-linked croscarmellose sodium）、聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽類如海藻酸鈉。
糖心錠芯具有合適的包衣。為此，可以使用濃縮的糖溶液，其可以任選地含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羰乙烯凝膠（carbopol gel）、聚乙二醇及/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。可以向錠劑或糖心錠包衣中加入染料或色素，用於識別或表徵活性化合物劑量的不同組合。
可以口服使用的藥物製劑包括由明膠製成的推入配合（push-fit）膠囊，以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨醇製成的密封軟膠囊。推入配合膠囊可以含有與填充劑（例如乳糖）、黏合劑（例如澱粉）及/或潤滑劑（例如滑石或硬脂酸鎂）以及任選的穩定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮在合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，可以加入穩定劑。用於口服給藥的所有制劑應該是適於這種給藥的劑量。
在一些實施方案中，本文公開的固體劑型可以是錠劑（包括懸浮錠劑、速溶錠劑、咀嚼崩解錠劑、快速崩解錠劑、發泡錠劑或囊片）、丸劑、粉末（包括無菌包裝粉末、可分配粉末或發泡粉末）、膠囊（包括軟膠囊或硬膠囊，例如由動物來源的明膠或植物來源的HPMC製成的膠囊，或「分散型膠囊」），固體分散液、固溶體、生物溶蝕劑型、控制釋放製劑、脈衝釋放劑型、多顆粒劑型、小丸劑、顆粒劑或氣霧劑。在一些實施方案中，醫藥組合物為粉末形式。在一些實施方案中，醫藥組合物為錠劑形式，包括但不限於速溶錠劑。另外，本文所述的醫藥組合物可以作為單個膠囊或多個膠囊劑型施用。在一些實施方案中，醫藥組合物以兩個，或三個，或四個膠囊或錠劑施用。
在一些實施方案中，固體劑型，例如錠劑，發泡錠劑和膠囊劑通過將式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物的顆粒與一種或多種藥物賦形劑混合以形成散裝共混組合物來製備。當提及這些散裝共混組合物為均勻的時候，是指式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物的顆粒均勻地分散在整個組合物中，使得組合物可容易地再分成同等有效的單位劑型，諸如錠劑、丸劑和膠囊。單個單位劑量還可以包括薄膜包衣，其在口服攝取或與稀釋劑接觸時崩解。這些製劑可透過常規藥理學技術製備。
常規的藥理學技術包括，例如，以下方法中的一種或組合：(1)乾式混合、(2)直接壓制、(3)研磨、(4)乾法或無水制粒、(5)濕法制粒、或(6)融合。參見例如Lachman等人，The Theory and Practice of Industrial Pharmacy(1986).。其他方法包括例如噴霧乾燥、鍋包衣（pan coating）、熔融制粒、制粒、流體化床噴霧乾燥或包衣（例如沃斯特包衣（wurster coating））、切向包衣（tangential coating）、頂部噴霧、製錠、擠壓等。
本文所述的藥物固體劑型可包含本文所述的化合物和一種或多種醫藥學上可接受的添加劑，諸如相容的載體、黏合劑、填充劑、懸浮劑、調味劑、甜味劑、崩解劑、分散劑、界面活性劑、潤滑劑、著色劑、稀釋劑、助溶劑、濕潤劑、增塑劑、穩定劑、滲透增強劑、濕潤劑、消泡劑、抗氧化劑、防腐劑或其一種或多種組合。在一些實施方案中，使用標準包衣程序，諸如Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th Edition (2000)中所述的那些，在式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的製劑周圍提供膜包衣。在一些實施方案中，式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的顆粒中的一些或全部被塗覆。在一些實施方案中，式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的顆粒中的一些或全部被微膠囊化。在仍然一些實施方案中，式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的顆粒不是微膠囊化並且是未包衣。
用於本文所述固體劑型的合適載體包括但不限於：阿拉伯膠、明膠、膠態二氧化矽、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、麥芽糊精、甘油、矽酸鎂、酪蛋白酸鈉、大豆卵磷脂、氯化鈉、磷酸三鈣、磷酸氫二鉀、硬脂醯乳酸鈉、角叉菜膠、甘油單酯、甘油二酯、預糊化澱粉、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯、蔗糖、微晶纖維素、乳糖、甘露醇等。
適用於本文所述固體劑型的填充劑包括但不限於：乳糖、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、纖維素粉末、右旋糖，葡萄糖結合劑、聚葡萄糖、澱粉、預糊化澱粉、羥丙基甲基纖維素（HPMC）、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯（HPMCAS）、蔗糖、木糖醇，乳糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、氯化鈉、聚乙二醇等。
為了盡可能有效地從固體劑型基質中釋放式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，通常在製劑中使用崩解劑，特別是當劑型使用黏合劑壓制時。當水分被吸收到劑型中時，崩解劑透過溶脹或毛細管作用幫助劑型基質破裂。適用於本文所述的固體劑型中的崩解劑包括但不限於：天然澱粉，諸如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉、預糊化澱粉如National 1551或Amijel ®，或甘醇酸澱粉鈉（sodium starch glycolate)如Promogel ®或Explotab ®，纖維素如木材產品、甲基結晶纖維素，例如Avicel ®、Avicel ®PH101、Avicel ®PH102、Avicel ®PH105、Elcema ®P100、Emcocel ®、Vivacel ®、Ming Tia ®、及Solka-Floc ®，甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素（croscarmellose）、交聯羧甲基纖維素（cross-linked carboxymethylcellulose）、或交聯羧甲基纖維素（cross-linked croscarmellose）、交聯澱粉如甘醇酸澱粉鈉、交聯聚合物如交聯聚維酮、交聯聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸鹽如海藻酸或海藻酸的鹽（如海藻酸鈉）、黏土如Veegum® HV（矽酸鎂鋁）、樹膠（如洋菜、瓜爾膠、刺槐豆膠、加拉亞膠、果膠、或黃蓍膠）、甘醇酸澱粉鈉、膨潤土、天然海綿、界面活性劑、樹脂如陽離子交換樹脂、柑橘果肉、月桂硫酸鈉、組合澱粉中的月桂硫酸鈉等。
黏合劑賦予固體口服劑型製劑黏著性：對於粉末填充的膠囊製劑，它們有助於可填充到軟或硬殼膠囊中的栓塞形成，對於錠劑製劑，它們確保錠劑在壓縮後保持完整，並有助於確保在壓縮或填充步驟之前的共混均勻性。適用作本文所述固體劑型中的黏合劑的材料包括但不限於：羧甲基纖維素、甲基纖維素（例如，Methocel ®）、羥丙基甲基纖維素（例如，Hypromellose USP Pharmacoat-603、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯（Aqoate HS-LF和HS）、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素（例如，Klucel ®）、乙基纖維素（例如，Ethocel ®）和微晶纖維素（例如，Avicel ®）、微晶葡萄糖、直鏈澱粉、矽酸鎂鋁、多糖酸、膨潤土、明膠，聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物、交聯聚維酮、聚維酮、澱粉、預糊化澱粉、黃蓍膠、糊精、糖例如糖（例如，Dipac ®）、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、甘露醇、山梨醇、木糖醇（例如，Xylitab ®）、乳糖、天然或合成樹膠如阿拉伯膠、黃蓍膠、甘地膠，依莎貝果殼黏液（mucilage of isapol husks）、澱粉、聚乙烯吡咯烷酮（例如，Povidone ®CL、Kollidon ®CL、Polyplasdone ®XL-10、及Povidone ®K-12）、落葉松阿拉伯半乳聚糖、Veegum ®、聚乙二醇、蠟類、海藻酸鈉等。
通常，在粉末填充的明膠膠囊製劑中使用20-70％的黏合劑含量。錠劑製劑中黏合劑的用量隨直接壓縮、濕法制粒、碾壓或其他賦形劑如本身可用作中等黏合劑的填充劑的使用而變化。所屬技術領域之通常知識者可以確定製劑的黏合劑含量，但是錠劑製劑中至多70％的黏合劑使用含量是常見。
用於本文所述的固體劑型的合適的潤滑劑或助流劑包括但不限於：硬脂酸、氫氧化鈣、滑石、玉米澱粉、硬脂醯富馬酸鈉、鹼金屬和鹼土金屬鹽，如鋁、鈣、鎂、鋅、硬脂酸、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、蠟、Stearowet ®、硼酸、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉、白胺酸、聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇如Carbowax TM、PEG 4000、PEG 5000、PEG6000、丙二醇、油酸鈉、山崳酸甘油酯、棕櫚醯硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯、月桂基硫酸鎂或月桂基硫酸鈉等。
適用於本文所述的固體劑型的稀釋劑包括但不限於：糖（包括乳糖、蔗糖和右旋糖）、多糖（包括葡萄糖結合劑和麥芽糊精）、多元醇（包括甘露醇、木糖醇和山梨糖醇）、環糊精等。
術語「非水溶性稀釋劑」表示通常用於藥物製劑的化合物，例如磷酸鈣、硫酸鈣、澱粉、改性澱粉和微晶纖維素、以及微纖維素（例如具有約0.45g/cm 3的密度，例如艾維素（Avicel）、粉狀纖維素）和滑石。
用於本文所述的固體劑型的合適的濕潤劑包括例如：油酸、單硬脂酸甘油酯、脫水山梨醇單油酸酯、脫水山梨醇單月桂酸酯、油酸三乙醇胺、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯、四級銨化合物（例如，Polyquat 10 ®）、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、硬脂酸鎂、多庫酯鈉、甘油三乙酸酯、維生素E TPGS 等。
適用於本文所述固體劑型的界面活性劑包括例如：月桂基硫酸鈉、脫水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆、膽鹽、單硬脂酸甘油酯、環氧乙烷和環氧丙烷的共聚物，例如（Pluronic ®(BASF)）等。
用於本文所述的固體劑型的合適的懸浮劑包括但不限於聚乙烯吡咯烷酮，例如聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30；聚乙二醇，例如聚乙二醇可具有約300至約6000、或約3350至約4000、或約7000至約5400的分子量；乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物（S630）；羧甲基纖維素鈉；甲基纖維素；羥基丙基甲基纖維素；聚山梨醇酯-80；羥乙基纖維素；海藻酸鈉；樹膠，例如黃蓍膠和阿拉伯膠；瓜爾豆膠；三仙膠，包括黃原膠；糖；纖維素製品，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚山梨醇酯-80、海藻酸鈉、聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯、聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯、聚維酮等。
適用於本文所述固體劑型的抗氧化劑包括例如丁基化羥基甲苯（BHT）、抗壞血酸鈉和生育酚。
應當理解，在本文所述的固體劑型中使用的添加劑之間存在相當大的重疊。因此，以上列出的添加劑應被認為僅僅是示例性的，而不是對可包括在本文所述的固體劑型中的添加劑類型的限制。這些添加劑的量可由所屬技術領域之通常知識者根據所需的特定特性而容易地確定。
在一些實施方案中，醫藥組合物的一層或多層被增塑。說明性地，增塑劑通常是高沸點固體或液體。合適的增塑劑可以以塗料組合物的約0.01重量％至約50重量％（w/w）加入。增塑劑包括但不限於：鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸酯、聚乙二醇、甘油、乙醯化甘油酯、三乙酸甘油酯、聚丙二醇、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、硬脂酸、油脂劑（stearol）、硬脂酸酯和蓖麻油。
壓制錠劑是透過壓制上述製劑的散裝共混物製備的固體劑型。在各種實施方案中，設計成在口中溶解的壓制錠劑將包含一種或多種調味劑。在一些實施方案中，壓制錠劑將包括圍繞最終壓制錠劑的膜。在一些實施方案中，膜包衣可提供式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物從製劑的延遲釋放。在一些實施方案中，膜包衣有助於患者順應性（例如，Opadry ®包衣或糖包衣）。包含Opadry ®的薄膜包衣通常為錠劑重量的約1％至約3％。在一些實施方案中，壓制錠劑包含一種或多種賦形劑。
膠囊可例如透過將上述式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的製劑的散裝共混物置於膠囊內部來製備。在一些實施方案中，將製劑（非水性懸浮液和溶液）置於軟明膠膠囊中。在一些實施方案中，將製劑置於標準明膠膠囊或非明膠膠囊如包含HPMC的膠囊中。在一些實施方案中，將製劑置於分散型膠囊中，其中膠囊可被整個吞咽或膠囊可被打開且內容物在進食前噴灑在食物上。在一些實施方案中，治療劑量被分成多個（例如，兩個，三個或四個）膠囊。在一些實施方案中，製劑的整個劑量以膠囊形式遞送。
在各種實施方案中，將式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的顆粒與一種或多種賦形劑乾式混合並壓縮成具有足以提供在小於約30分鐘、小於約35分鐘、小於約40分鐘、小於約45分鐘、小於約50分鐘、小於約55分鐘內基本上崩解的醫藥組合物的硬度的物質，例如錠劑。或口服給藥後少於約60分鐘，由此將製劑釋放到胃腸液中。
在一些實施方案中，劑型可包括微膠囊化製劑。在一些實施方案中，一種或多種其他相容材料存在於微膠囊化材料中。示例性材料包括但不限於pH 調節劑、溶蝕促進劑、消泡劑、抗氧化劑、調味劑和載體材料如黏合劑、懸浮劑、崩解劑、填充劑、界面活性劑、助溶劑、穩定劑、潤滑劑、濕潤劑和稀釋劑。
可用於本文所述的微膠囊化的材料包括與式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物相容的材料，其將式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物與其他不相容的賦形劑充分分離。與式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物相容的材料是延遲式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物在體內釋放。
可用於延遲包含本文所述化合物的製劑的釋放的示例性微膠囊化材料包括但不限於：羥丙基纖維素醚（HPC）如Klucel ®或Nisso HPC；低取代的羥丙基纖維素醚（L-HPC）、羥丙基甲基纖維素醚（HPMC）如Seppifilm-LC、Pharmacoat ®、Metolose SR、Methocel ®-E、Opadry YS、Prima Flo、Benecel MP824和Benecel MP843；甲基纖維素聚合物如Methocel ®-A、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯Aqoat（HF-LS、HF-LG、HF-MS）和Metolose ®；乙基纖維素（EC）及其混合物如E461、Ethocel ®、Aqualon ®-EC、Surelease ®；聚乙烯醇（PVA）如Opadry AMB；羥乙基纖維素如Natrosol ®；羧甲基纖維素及羧甲基纖維素的鹽（CMC）如Aqualon ®-CMC、聚乙烯醇和聚乙二醇共聚物如KollicoatIR ®、甘油單酯（Myverol）、甘油三酯（KLX）、聚乙二醇、改性食物澱粉；丙烯酸聚合物和丙烯酸聚合物與纖維素醚的混合物如Eudragit ®EPO、Eudragit ®L30D-55、Eudragit ®FS30D、Eudragit ®L100-55、Eudragit ®L100、Eudragit ®RD100、Eudragit ®RD100、Eudragit ®E100、Eudragit ®L12.5、Eudragit ®S12.5、Eudragit ®NE30D和Eudragit ®NE40D、醋酸鄰苯二甲酸纖維素；sepifilms如HPMC和硬脂酸的混合物、環糊精，以及這些物質的混合物。
在一些實施方案中，將增塑劑如聚乙二醇，例如PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450、PEG 3350和PEG 800、硬脂酸、丙二醇、油酸和三乙酸甘油酯摻入微膠囊材料中。在一些實施方案中，可用於延遲醫藥組合物釋放的微膠囊化材料來自美國藥典USP或國家藥品處方集（NF）。在一些實施方案中，微膠囊化材料是Klucel。在一些實施方案中，微膠囊化材料是甲基纖維素。
式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的微膠囊化化合物可透過所屬技術領域之通常知識者習知的方法配製。這些習知的方法包括例如噴霧乾燥法、轉盤-溶劑法、熱熔法，噴淋冷凍法、流體化床、靜電沉積、離心擠壓、旋轉懸浮分離、液體-氣體或固體-氣體界面處聚合、壓力擠壓或噴淋溶劑萃取浴。除了這些之外，還可以使用幾種化學技術，例如，複合凝聚法、溶劑蒸發、聚合物-聚合物不相容性、液體介質中的界面聚合、原位聚合、液體中乾燥以及液體介質中的去溶劑化。此外，也可以使用其他方法，例如輥壓、擠壓/滾圓、凝聚或奈米顆粒塗覆。
在一些實施方案中，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物的顆粒在配製成上述形式中的一種之前被微膠囊化。在一些實施方案中，一些或大部分顆粒在進一步配製之前透過使用標準包衣程序進行包衣，例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 第20版(2000)中所述之程序。
在一些實施方案中，式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物的固體劑量製劑用一層或多層增塑（塗覆）。說明性地，增塑劑通常是高沸點固體或液體。合適的增塑劑可以以塗料組合物的約0.01重量％至約50重量％（w/w）加入。增塑劑包括但不限於：鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸酯、聚乙二醇、甘油、乙醯化甘油酯、三乙酸甘油酯、聚丙二醇、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、硬脂酸、油脂劑、硬脂酸酯和蓖麻油。
在一些實施方案中，可將包含具有本文所述的式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物的製劑的粉末配製成包含一種或多種藥物賦形劑和調味劑。這樣的粉末可以例如通過將製劑和任選的藥物賦形劑混合以形成散裝共混組合物來製備。另外的實施方案還包括懸浮劑及/或濕潤劑。將該散裝共混物均勻地細分成單位劑量包裝或多劑量包裝單位。
在其他一些實施方案中，發泡粉末也根據本公開製備。發泡鹽已經用於將藥物分散在水中以用於口服給藥。發泡鹽是在乾燥混合物中含有藥劑的顆粒或粗糙粉末，通常由碳酸氫鈉、檸檬酸及/或酒石酸組成。當將本文所述組合物的鹽加入水中時，酸和鹼反應釋放二氧化碳氣體，從而引起「發泡」。發泡鹽的實例包括例如以下成分：碳酸氫鈉或碳酸氫鈉和碳酸鈉的混合物、檸檬酸及/或酒石酸。可以使用引起二氧化碳釋放的任何酸鹼組合來代替碳酸氫鈉和檸檬酸和酒石酸的組合，只要這些成分適合於藥物用途並且導致約6.0或更高的pH即可。
在一些實施方案中，包括式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的本文所述製劑為固體分散液。製備此類固體分散液的方法是本領域習知的，並且包括但不限於：例如美國專利第4,343,789號、第5,340,591號、第5,456,923號、第5,700,485號、第5,723,269號和美國公開申請第2004/0013734號，其各自通過引用具體併入本文中。在一些實施方案中，本文所述的製劑是固溶體。固溶體將物質與活性劑和其他賦形劑結合在一起，使得加熱混合物導致藥物溶解，然後將所得組合物冷卻以提供固體共混物，其可以進一步配製或直接加入膠囊或壓縮成錠劑。製備這種固體溶液的方法是本領域習知的，包括但不限於例如美國專利第4,151,273號、第5,281,420號和第6,083,518號，其各自通過引用具體併入本文中。
包含本文所述的製劑的藥物固體口服劑型（其包括式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）和式（P5-I’）-（P5-Vd）中的任一種的化合物）可被進一步配製以提供式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的受控釋放。控制釋放是指式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物在延長的時間段內根據期望的特性從其中摻入它的劑型中釋放。控制釋放曲線包括例如持續釋放、延長釋放、脈衝釋放和延遲釋放曲線。與立即釋放組合物相反，控制釋放組合物允許根據預定曲線在延長的時間段內將藥劑遞送至受試者。與習知快速釋放劑型相比，此類釋放速率可在長時段內提供治療有效含量之藥劑且由此在使副作用最小的同時提供較長之藥物反應期。此類較長反應期提供許多固有益處，該等固有益處為相應短效作用之立即釋放製劑所無法獲得的。
在一些實施方案中，本文所述的固體劑型可配製為腸溶包衣延遲釋放口服劑型，即，本文所述的醫藥組合物的口服劑型，其利用腸溶包衣以影響在胃腸道的小腸中的釋放。腸溶包衣劑型可以是壓縮的或模製的或擠出的錠劑/模製片（包衣的或未包衣的），其含有活性成分及/或其他組合物組分的顆粒、粉末、丸粒、珠粒或粒子，它們本身是包衣的或未包衣的。腸溶包衣的口服劑型還可以是含有固體載體或組合物的丸粒、珠粒或顆粒的膠囊（包衣的或未包衣的），它們本身是包衣的或未包衣的。
如本文所用的術語「延遲釋放」是指這樣的遞送使得釋放可以在腸道中的一些通常可預測的位置實現，所述位置比如果沒有延遲釋放改變將實現的位置更遠。在一些實施方案中，延遲釋放的方法是包衣。應將任何包衣施加至足夠的厚度，使得整個包衣在pH低於約5時不溶解於胃腸液中，但在pH約5及以上時溶解。預期顯示pH依賴性溶解度分佈的任何陰離子聚合物可用作本文所述的方法和組合物中的腸溶包衣以實現遞送至下胃腸道。在一些實施方案中，本文所述的聚合物為陰離子羧基聚合物。在一些實施方案中，聚合物及其相容的混合物及其一些性質包括但不限於：
蟲膠，也稱為純化的蟲膠，是從昆蟲的樹脂分泌物獲得的精製產物。該包衣可溶於pH＞7的介質中；
丙烯酸類聚合物。丙烯酸類聚合物的效能（主要是它們在生物流體中的溶解度）可以基於取代程度和類型而變化。合適的丙烯酸類聚合物的實例包括：甲基丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸銨共聚物。Eudragit系列E、L、S、RL、RS和NE（Rohm Pharma）可以以溶解在有機溶劑、水分散液或乾粉中的形式獲得。Eudragit系列RL、NE和RS在胃腸道中是不溶的，但是是可滲透的，並且主要用於結腸靶向。Eudragit系列E可溶於胃中。Eudragit系列L、L-30D和S不溶於胃而溶於腸；
纖維素衍生物。合適的纖維素衍生物的實例是：乙基纖維素；纖維素之偏乙酸酯與鄰苯二甲酸酐的反應混合物。效能可以基於取代程度和類型而變化。鄰苯二甲酸乙酸纖維素（CAP）在pH＞6時溶解。Aquateric（FMC）是水基體系，是顆粒＜1μm的噴霧乾燥CAP假膠乳。Aquateric 中的其他組分可包括pluronics、Tween和乙醯化單酸甘油酯。其他合適的纖維素衍生物包括：乙酸纖維素偏苯三酸酯（Eastman）；甲基纖維素（Pharmacoat，甲基纖維素）；羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HPMCP）；羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯（HPMCS）；和羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯（例如AQOAT（Shin Etsu））。效能可以基於取代程度和類型而變化。例如，HPMCP如HP-50、HP-55、HP-55S、HP-55F級是合適的。效能可以基於取代的程度和類型而變化。例如，合適等級的羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯包括但不限於在pH5下溶解的AS-LG（LF），在pH5.5下溶解的AS-MG（MF）和在較高pH下溶解的AS-HG（HF）。這些聚合物作為顆粒或作為水分散液的細粉末提供。
聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯（PVAP）。PVAP在pH＞5時溶解，並且其對水蒸氣和胃液的滲透性小得多。
在一些實施方案中，包衣可以並且通常確實含有增塑劑和可能的其他包衣賦形劑，例如著色劑、滑石及/或硬脂酸鎂，它們是本領域公知的。合適的增塑劑包括檸檬酸三乙酯（Citroflex 2）、三乙酸甘油酯（三醋精）、乙醯檸檬酸三乙酯（Citroflec A2）、Carbowax 400（聚乙二醇400）、鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸三丁酯、乙醯化單酸甘油酯、甘油、脂肪酸酯、丙二醇和鄰苯二甲酸二丁酯。特別地，陰離子羧基丙烯酸聚合物通常含有10-25重量％的增塑劑，特別是鄰苯二甲酸二丁酯、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯和甘油三乙酸酯。使用常規包衣技術如噴霧或鍋包衣來施用包衣。包衣厚度必須足以確保口服劑型保持完整，直到到達腸道中的所需局部遞送部位。
除了增塑劑之外，可以將著色劑、防黏劑、界面活性劑、消泡劑、潤滑劑（例如，巴西棕櫚蠟或PEG）加入到包衣中以溶解或分散包衣材料，並改善包衣效能和包衣產品。
在一些實施方案中，包括式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的本文所述的製劑使用脈衝劑型遞送。脈衝劑型能夠在受控滯後時間後的預定時間點或在特定部位提供一個或多個立即釋放脈衝。包括本文所述的製劑的脈衝劑型，其包括式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一種的化合物，可以使用本領域習知的多種脈衝製劑施用。例如，這樣的製劑包括但不限於美國專利第5,011,692號、第5,017,381號、第5,229,135號和第5,840,329號中描述的那些，其各自通過引用具體併入本文中。適用於本發明製劑的其他脈衝釋放劑型包括但不限於：例如美國專利第4,871,549號、第5,260,068號、第5,260,069號、第5,508,040號、第5,567,441號和第5,837,284號，所有這些專利均通過引用明確併入本文。在一些實施方案中，控制釋放劑型是脈衝釋放固體口服劑型，其包括至少兩組顆粒（即多顆粒），每組含有本文所述的製劑。第一組顆粒在被哺乳動物攝取時提供基本上立即劑量的式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物。第一組顆粒可以是未包衣的或包括包衣及/或密封劑。第二組顆粒包括包衣顆粒，其包含與一種或多種黏合劑混合的所述製劑中的式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物的總劑量的約2重量％至約75重量％、約2.5重量％至約70重量％、或約40重量％至約70重量％。包衣包括醫藥學上可接受的成分，其量足以在第二劑量釋放之前提供攝入後約2小時至約7小時的延遲。合適的包衣包括一種或多種可差異降解的包衣，例如（僅作為實例）pH 敏感性包衣（腸溶包衣），例如：丙烯酸樹脂（例如Eudragit ®EPO、Eudragit ®L30D-55、Eudragi ®FS 30D、Eudragit ®L100-55、Eudragit ®L100、Eudragit ®S100、Eudragit ®RD100、Eudragit ®E100、Eudragit ®L12.5、Eudragit ®S12.5和Eudragit ®NE30D、Eudragit ®NE40D ®），其單獨或與纖維素衍生物（例如乙基纖維素）摻合，或具有可變厚度的非腸溶包衣，以提供包含式（P-1）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）和式（P5-I’）-（P5-Vd）中任一者的化合物的調配物的差異釋放。
所屬技術領域之通常知識者習知的許多其他類型的控制釋放系統適用於本文所述的製劑。此類遞送系統的實例包括例如基於聚合物的系統，如聚乳酸和聚乙醇酸、聚酸酐和聚己內酯；多孔基質，為脂質的非聚合物基體系，包括固醇，例如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸，或中性脂肪，例如甘油單酯，甘油二酯和甘油三酯；水凝膠釋放系統；矽橡膠體系；肽基系統；蠟包衣，生物溶蝕劑型，使用常規黏合劑的壓制錠劑等。參見例如Liberman等人，Pharmaceutical Dosage Forms，第2版，第1卷，第209-214頁(1990)；Singh等人，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第2版，第751-753頁(2002)；美國專利第4,327,725號、第4,624,848號、第4,968,509號、第5,461,140號、第5,456,923號、第5,516,527號、第5,622,721號、第5,686,105號、第5,700,410號、第5,977,175號、第6,465,014號和第6,932,983號，這些專利中的每一者均以引用的方式明確併入本文中。
在一些實施方案中，提供了醫藥組合物，其包含本文所述的式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物的顆粒和至少一種分散劑或懸浮劑，用於口服施用於受試者。製劑可以是用於懸浮的粉末及/或顆粒，並且當與水混合時，獲得基本上均勻的懸浮液。
用於口服給藥的液體製劑劑型可以是包括但不限於醫藥學上可接受的水性口服分散液、乳液、溶液、酏劑、凝膠和糖漿的組的水性懸浮液。參見例如Singh等人，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第2版，第754-757頁(2002)。除了式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物的顆粒之外，液體劑型可包括添加劑，諸如：（a）崩解劑；（b）分散劑；（c）濕潤劑；（d）至少一種防腐劑，（e）黏度增強劑，（f）至少一種甜味劑，和（g）至少一種調味劑。在一些實施方案中，水性分散液可進一步包含結晶抑制劑。
如The USP Pharmacists' Pharmacopeia（2005版，第905章）中所定義，本文所述的水性懸浮液和分散液可以保持在均質狀態至少4小時。均勻性應通過與確定整個組合物的均勻性一致的取樣方法來確定。在一些實施方案中，可以透過持續小於1分鐘的物理攪拌將水性懸浮液再懸浮成均勻懸浮液。在一些實施方案中，可以透過持續小於45秒的物理攪拌將水性懸浮液再懸浮成均勻懸浮液。在另一些實施方案中，可以通過持續小於30秒的物理攪拌將水性懸浮液再懸浮成均勻懸浮液。在另一些實施方案中，不需要攪拌來保持均勻的水分散液。
用於含水性懸浮液和分散液的崩解劑的實例包括但不限於：澱粉，例如天然澱粉如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；預糊化澱粉如National 1551或Amijel ®，或羥基乙酸澱粉鈉如Promogel ®或Explotab ®；纖維素如木製品；甲基結晶纖維素，例如Avicel ®、Avicel ®PH101、Avicel ®PH102、Avicel ®PH105、Elcema ®P100、Emcocel ®、Vivacel ®、Ming Tia ®和Solka-Floc ®；甲基纖維素；交聯羧甲纖維素；或交聯纖維素，例如交聯羧甲基纖維素鈉（Ac-Di -Sol ®）、交聯羧甲基纖維素或交聯之交聯羧甲纖維素；交聯澱粉，例如澱粉羥乙酸鈉；交聯聚合物，例如交聯聚維酮；交聯聚乙烯吡咯烷酮；海藻酸鹽如海藻酸或海藻酸鹽如海藻酸鈉；黏土，例如Veegum ®HV （矽酸鎂鋁）；樹膠，例如瓊脂、瓜爾豆膠、槐豆膠、加拉亞膠、果膠或黃蓍膠；羥乙酸澱粉鈉；膨潤土；天然海綿；界面活性劑；樹脂，例如陽離子交換樹脂；柑橘渣；月桂基硫酸鈉；月桂基硫酸鈉與澱粉之組合；及其類似物。
在一些實施方案中，適用於本文所述的含水性懸浮液和分散液的分散劑是本領域習知的，並且包括例如親水性聚合物，電解質、Tween ®60或80、PEG、聚乙烯吡咯烷酮（PVP；商業上稱為Plasdone ®），和基於碳水化合物的分散劑，例如羥丙基纖維素和羥丙基纖維素醚（例如HPC、HPC-SL和HPC-L）、羥丙基甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素醚（例如HPMC K100、HPMC K4M、HPMCK 15M和HPMC K100M）、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基-纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯、非結晶纖維素、矽酸鎂鋁、三乙醇胺、聚乙烯醇（PVA）、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物（Plasdone ®，例如S-630）、4-（1,1,3,3-四甲基丁基）苯酚與環氧乙烷和甲醛的聚合物（也稱為泰洛沙泊）、泊洛沙姆（例如Pluronics F68 ®、F88 ®和F108 ®，其為環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物）；和泊洛沙胺（例如，Tetronic 908 ®，也稱為Poloxamine 908 ®，其是衍生自依次將環氧丙烷和環氧乙烷加成到乙二胺的四官能嵌段共聚物（BASF Corporation,Parsippany,N.J.））。在一些實施方案中，分散劑選自不包括以下試劑之一的組：親水性聚合物；電解質；TWEEN ®60或80；栓釘；聚乙烯吡咯烷酮（pvp）；羥丙基纖維素和羥丙基纖維素醚（例如HPC、HPC-SL和HPC-L）；羥丙基甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素醚（例如HPMC K100、HPMC K4M、HPMC K15M、HPMC K100M和Pharmacoat ®USP 2910（Shin-Etsu））；羧甲基纖維素鈉；甲基纖維素；羥乙基纖維素；羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯；羥丙基甲基纖維素乙酸酯硬脂酸酯；非晶纖維素；矽酸鋁鎂；三乙醇胺；聚乙烯醇（PVA）；4-（1,1,3,3-四甲基丁基）-苯酚與環氧乙烷和甲醛的聚合物；泊洛沙姆（例如，PluronicsF68 ®、F88 ®和F108 ®，其是環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物）；或泊洛沙姆（例如，Tetronic908 ®，也稱為Poloxamine908 ®）。
適用於本文所述的含水性懸浮液和分散液的濕潤劑是本領域習知的，並且包括但不限於：鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯（例如市售可得的Tween ®，諸如Tween20®和Tween80®（ICI Specialty Chemicals））和聚乙二醇（例如Carbowax 3350 ®和1450 ®、和Carbopol 934 ®（Union Carbide））、油酸、單硬脂酸甘油酯、去水山梨糖醇單油酸酯、去水山梨糖醇單月桂酸酯、油酸三乙醇胺、聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯去水山梨糖醇單月桂酸酯、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、多庫酯鈉、甘油三乙酸酯、維生素E TPGS、牛磺膽酸鈉、二甲矽油、磷脂醯膽鹼及其類似物。
用於本文所述的水性懸浮液或分散液的合適的防腐劑包括例如山梨酸鉀、對羥基苯甲酸酯類（例如對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯）、苯甲酸及其鹽、對羥基苯甲酸的其他酯如對羥基苯甲酸丁酯、醇如乙醇或苯甲醇、酚類化合物如苯酚，或四級化合物如苯紮氯銨。本文所用的防腐劑以足以抑制微生物生長的濃度摻入劑型中。
用於本文所述的含水性懸浮液或分散液的合適的黏度增強劑包括但不限於：甲基纖維素、黃原膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素，Plasdon ®S-630、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸鹽、阿拉伯膠、幾丁聚醣及其組合。黏度增強劑的濃度將取決於所選擇的試劑和所需的黏度。
適用於本文所述的含水性懸浮液或分散液的甜味劑的實例包括，例如，阿拉伯膠漿、乙醯磺胺酸K、阿力甜、茴香、蘋果、阿斯巴甜，香蕉、巴伐利亞奶油、漿果、黑醋栗、奶油糖果、檸檬酸鈣、樟腦、焦糖、櫻桃、櫻桃奶油、巧克力、肉桂、泡泡糖、柑橘、柑橘賓治、柑橘奶油、棉花糖、可可、可樂、清涼櫻桃、清涼柑橘、賽克拉美、克拉美特、右旋糖、桉樹、丁香酚、果糖、水果賓治、薑、甘草次酸鹽、甘草糖漿、葡萄，葡萄柚，蜂蜜、異麥芽酮糖醇、檸檬、酸橙、檸檬奶油、甘草酸單銨（MagnaSweet ®）、麥芽酚、甘露醇、楓樹、棉花糖，薄荷醇、混合漿果、新橙皮苷DC、紐甜、橙、梨、桃、薄荷、薄荷奶油、Prosweet ®粉末、覆盆子、根汁汽水、朗姆酒、糖精、黃樟素、山梨醇、留蘭香、留蘭香奶油、草莓，草莓奶油、甜葉菊、蔗糖素、蔗糖、糖精鈉、糖精、阿斯巴甜、乙醯磺胺酸鉀、甘露醇、踝蛋白、蔗糖素、山梨糖醇、瑞士奶油、塔格糖、橘子、索馬甜、百果糖、香草、胡桃、西瓜、野生櫻桃、冬青、木糖醇、或這些調味成分的任何組合，例如茴香-薄荷醇、櫻桃-茴香、肉桂-橙子、櫻桃-肉桂、巧克力-薄荷、蜂蜜-檸檬、檸檬-酸橙、檸檬-薄荷、薄荷醇-桉、橙子-奶油、香草-薄荷及其混合物。在一些實施方案中，水性液體分散液可包含濃度為水性分散液體積的約0.001％至約1.0％的甜味劑或調味劑。在一些實施方案中，水性液體分散液可包含濃度為水性分散液體積的約0.005％至約0.5％的甜味劑或調味劑。在另一實施方案中，水性液體分散液可以包含濃度為水性分散液體積的約0.01％至約1.0％的甜味劑或調味劑。
除了上面列出的添加劑之外，液體製劑還可以包括本領域常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑、助溶劑和乳化劑。示例性的乳化劑是乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉，膽固醇、膽固醇酯、牛磺膽酸、磷脂醯膽鹼、油（如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇、脫水山梨醇的脂肪酸酯或這些物質的混合物，及其類似物等。
在一些實施方案中，本文所述的醫藥組合物可以是自乳化藥物遞送系統（SEDDS）。乳液為一種不可混溶相通常以液滴形式於另一相中之分散液。通常，透過劇烈的機械分散產生乳液。與乳液或微乳液相反，SEDDS在沒有任何外部機械分散或攪拌的情況下加入到過量水中時自發形成乳液。SEDDS的優點是僅需要溫和的混合以將液滴分散在整個溶液中。另外，水或水相可以剛好在給藥前加入，這確保不穩定或疏水活性成分的穩定性。因此，SEDDS為疏水性活性成分的口服和腸胃外遞送提供了有效的遞送系統。SEDDS可以改善疏水性活性成分的生物利用度。製備自乳化劑型的方法是本領域習知的，並且包括但不限於例如美國專利第5,858,401號、第6,667,048號和第6,960,563號，其各自通過引用具體併入本文中。
應當理解，在本文所述的水性分散液或懸浮液中使用的以上列出的添加劑之間存在重疊，因為給定的添加劑通常由本領域的不同從業者不同地分類，或通常用於若干不同功能中的任一種。因此，以上列出的添加劑應被認為僅僅是示例性的，而不是對可包括在本文所述製劑中的添加劑類型的限制。這些添加劑的量可由所屬技術領域之通常知識者根據所需的特定特性容易地確定。 5.2鼻內製劑
鼻內製劑是本領域習知的，並且描述於例如美國專利第4,476,116號、第5,116,817號和第6,391,452號中，其各自通過引用明確併入本文中。根據本領域熟知的這些和其他技術製備之包含式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物的製劑使用苯甲醇或其他合適的防腐劑、碳氟化合物及/或本領域習知的其他助溶劑或分散劑製備為生理食鹽水之中的溶液。參見例如Ansel,H.C.等人, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 第6版(1995)。較佳地，這些組合物和製劑用合適的無毒的醫藥學上可接受的成分製備。這些成分是製備鼻用劑型的技術人員習知的，這些成分為熟習經鼻劑型製備者已知且其中一些可見於此領域中之標準參考文獻REMINGTON：THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 第21版, 2005中。合適載體的選擇高度依賴於所需鼻劑型的確切性質，例如溶液、懸浮液、軟膏或凝膠。鼻用劑型除了活性成分外通常還含有大量的水。也可以存在少量的其他成分如pH 調節劑、乳化劑或分散劑、防腐劑、界面活性劑、膠凝劑或緩衝劑和其他穩定劑和助溶劑。鼻用劑型應該與鼻分泌物等張。
對於通過吸入施用，本文所述的式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物可以呈氣霧劑、薄霧或粉末的形式。本文所述的醫藥組合物宜以來自加壓包裝或噴霧器之氣霧劑噴霧表現形式的形式使用適合推進劑（例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合氣體）來傳遞。在加壓氣霧劑的情況下，劑量單位可藉由提供傳遞計量數量之閥門來確定。用於吸入器或吹入器的膠囊和藥筒（例如，僅作為實例）可以配製成含有本文所述的化合物和合適的粉末基質（例如乳糖或澱粉）的粉末混合物。 5.3口腔製劑
包含式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中之任一種的化合物的口腔製劑可以使用本領域習知的多種製劑來施用。例如，這樣的製劑包括但不限於美國專利第4,229,447號、第4,596,795號、第4,755,386號和第5,739,136號，它們中的每一個都通過引用明確地併入本文中。此外，本文所述的含服劑型還可包含生物可侵蝕（可水解）的聚合物載體，其用於將劑型黏附至口腔黏膜。口腔劑型被製造成在預定時間段內逐漸侵蝕，其中式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物的遞送基本上在整個過程中提供。如所屬領域的技術人員將瞭解，經頰藥物遞送避免口服藥物投藥所遇到的缺點，例如緩慢吸收、活性劑被胃腸道中存在的流體降解及/或肝臟中的首過失活。關於可生物侵蝕的（可水解的）聚合物載體，應當理解，實際上可以使用任何這樣的載體，只要不損害所需的藥物釋放曲線，並且該載體與式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一種的化合物以及可存在於含服劑量單位中的任何其他組分相容。通常，聚合物載體包含黏附於頰黏膜的濕表面的親水性（水溶性和水溶脹性）聚合物。可用於本文中適用之聚合物載體之實例包括丙烯酸聚合物及共聚物，例如稱為「卡波姆」（Carbopol ®，其可獲自B.F.Goodrich，為一種此類聚合物）者。也可將其他組分摻入本文所述的含服劑型中，包括但不限於：崩解劑、稀釋劑、黏合劑、潤滑劑、調味劑、著色劑、防腐劑等。對於口腔或舌下給藥，組合物可以採取以常規方式配製的錠劑、口含錠或凝膠的形式。 5.4經皮製劑
本文所述的經皮製劑可使用本領域中已描述的多種裝置施用。例如，這樣的裝置包括但不限於，美國美國專利第3,598,122號、第3,598,123號、第3,710,795號、第3,731,683號、第3,742,951號、第3,814,097號、第3,921,636號，第3,972,995號、第3,993,072號、第3,993,073號、第3,996,934號、第4,031,894號、第4,060,084號、第4,069,307號、第4,077,407號、第4,201,211號、第4,230,105、第4,292,299號，第4,292,303、第5,336,168號、第5,665,378號、第5,837,280號、第5,869,090號、第6,923,983號、第6,929,801號和第6,946,144號，其各自通過引用以其全文具體併入本文中。
本文所述的經皮劑型可摻入本領域常規的某些醫藥學上可接受的賦形劑。在一些實施方案中，本文所述的經皮製劑包含至少三種組分：（1）式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中任一項的化合物的製劑；（2）滲透增強劑；和（3）水性佐劑。此外，經皮製劑可以包括額外的組分，例如但不限於：膠凝劑、乳膏和軟膏基質及其類似物。在一些實施方案中，經皮製劑可進一步包括編織或非編織襯底材料以增強吸收並防止經皮製劑從皮膚移除。在一些實施方案中，本文所述的經皮製劑可維持飽和或過飽和狀態以促進擴散到皮膚中。
適用於經皮施用本文所述化合物的製劑可採用經皮遞送裝置和經皮遞送貼片，並且可以是溶解及/或分散在聚合物或黏合劑中的親脂性乳液或緩衝水溶液。這樣的貼片可以被構建用於持續、脈衝或按需遞送藥劑。此外，本文所述化合物的經皮遞送可透過離子導入貼片及其類似物等實現。另外，經皮貼片可提供式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）和式（P5-I’）-（P5-Vd）中任一種的化合物的受控遞送。藉由使用速率控制膜或將化合物捕捉於聚合物基質或凝膠內來減緩吸收速率。相反，可使用吸收增強劑來增加吸收。吸收增強劑或載體可包括醫藥學上可接受之可吸收溶劑以幫助通過皮膚。舉例而言，經皮裝置係呈繃帶之形式，其包含襯底部件、含有化合物及視情況存在之載體的儲集層、視情況存在之在長時段內以控制及預定速率將化合物傳遞至宿主皮膚之速率控制障壁、及使裝置固定於皮膚之構件。 5.5可注射製劑
適用於肌內、皮下或靜脈內注射之包含式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）、式（P5-I’）-（P5-Vd）和式（P6-I）-（P6-IIId）中的任一者的化合物的製劑可以包括生理學上可接受的無菌水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液、以及用於復原為無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。合適的水性和非水性載體、稀釋劑、溶劑或媒介物的實例包括水、乙醇、多元醇（丙二醇、聚乙二醇、甘油、克列莫佛(cremophor)及其類似物），其合適的混合物，植物油（如橄欖油）和可注射的有機酯如油酸乙酯。例如，通過使用包衣如卵磷脂，在分散液的情況下透過維持所需的粒度，以及透過使用界面活性劑，可以維持適當的流動性。適合於皮下注射的製劑還可以含有添加劑，例如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。可以通過各種抗細菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸及其類似物確保防止微生物生長。還可能需要包括等滲劑，例如糖、氯化鈉及其類似物。可注射藥物形式的延長吸收可透過使用延遲吸收的試劑如單硬脂酸鋁和明膠來實現。
對於靜脈內注射，本文所述的化合物可以在水溶液中配製，較佳在生理上相容的緩衝液如漢克氏溶液（Hank's solution）、林格氏溶液（Ringer's solution）或生理食鹽水緩衝液。對於經黏膜給藥，在製劑中使用適於待滲透屏障的滲透劑。這種滲透劑通常是本領域習知的。對於其他腸胃外注射，合適的製劑可以包括水溶液或非水溶液，較佳具有生理上相容的緩衝劑或賦形劑。這樣的賦形劑通常是本領域習知的。
腸胃外注射可以包括快速注射或持續輸注。用於注射的製劑可以以單位劑型存在，例如在安瓿或多劑量容器中，添加有防腐劑。本文所述的醫藥組合物可以呈適合於腸胃外注射的形式，如在油性或水性媒介物中的無菌懸浮液、溶液或乳液，並且可以含有配製劑，如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。用於腸胃外給藥的醫藥組合物包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的懸浮液可以製備成適當的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油，或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質體。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或聚葡萄糖。任選地，懸浮液還可以含有合適的穩定劑或增加化合物溶解度以允許製備高度濃縮溶液的試劑。或者，活性成分可以是粉末形式，用於在使用前與合適的媒介物（例如無菌無熱原質水）配製。 6.製劑
在某些實施方案中，可以使用醫藥化合物的遞送系統，例如脂質體和乳劑。在某些實施方案中，本文所提供的組合物還可以包含黏膜黏附聚合物，其選自例如羧甲基纖維素、卡波姆（丙烯酸聚合物），聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚丙烯醯胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、海藻酸鈉和聚葡萄糖。
在一些實施方案中，本文所述的化合物可以局部施用並可以配製成多種可局部施用的組合物，諸如溶液、懸浮液、洗劑、凝膠、糊劑、藥棒、香膏、乳膏或軟膏。這樣的醫藥化合物可以含有助溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑和防腐劑。
本文所述的化合物還可以配製成直腸組合物，例如灌腸劑、直腸凝膠劑、直腸泡沫劑、直腸氣霧劑、栓劑、膠凍栓劑或保留灌腸劑，其含有習知栓劑基質，例如可可脂或其他甘油酯，以及合成聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等。在組合物的栓劑形式中，首先熔化低熔點蠟，例如但不限於脂肪酸甘油酯的混合物，任選地與可可脂組合。 7. 給藥方法和治療方案的實例
本文所述化合物可以用於製備抑制FLT3或其同源物的藥物，或用於治療至少部分受益於抑制FLT3或其同源物的疾病或病症。此外，在需要這種治療的受試者中治療本文所述的任何疾病或病症的方法包括給予所述受試者治療有效量的醫藥組合物，所述醫藥組合物包含至少一種本文所述的式(P2-I)、式(P4-I)-(P4-Vb)、式(P5-I’)-(P5-Vd)和式(P6-I)-(P6-IIId)中任何一個的化合物或其醫藥學上可接受的鹽、醫藥學上可接受的N-氧化物、醫藥學活性代謝物、醫藥學上可接受的前驅藥或醫藥學上可接受的溶劑化物。
含有本文所述化合物的組合物可被施用用於預防性及/或治療性治療。在治療應用中，將組合物以足以治癒或至少部分阻止疾病或病症的症狀的量施用給已經患有疾病或病症的患者。對該用途有效的量將取決於疾病或病症的嚴重性和進程、先前的治療、患者的健康狀態、體重和對藥物的反應以及治療醫師的判斷。所屬技術領域之通常知識者完全認為透過常規實驗（包括但不限於劑量遞增臨床試驗）確定這樣的治療有效量。
在預防性應用中，將含有本文所述化合物的組合物給予對特定疾病、病症或病況敏感或處於特定疾病、病症或病況的風險中的患者。這樣的量被定義為「預防有效量或劑量」。在該用途中，精確的量還取決於患者的健康狀態、體重等。所屬技術領域之通常知識者完全認為透過常規實驗（例如，劑量遞增臨床試驗）確定這樣的預防有效量。當用於患者時，用於該用途的有效量將取決於疾病、病症或病況的嚴重性和進程、先前的治療、患者的健康狀態和對藥物的反應以及治療醫師的判斷。
在患者的狀況沒有改善的情況下，根據醫生的判斷，化合物的施用可以長期施用，即，持續延長的時間段，包括在患者生命的整個持續時間內，以便改善或以其他方式控制或限制患者的疾病或狀況的症狀。
在患者的狀態確實改善的情況下，根據醫生的判斷，可以連續給予化合物的給藥；或者，可以暫時減少或暫時中止所施用的藥物的劑量一段時間（即，「停藥期」）。停藥期的長度可以在2天和1年之間變化，僅作為實例，包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。停藥期期間的劑量減少可以是從10%-100%，僅作為示例，包括10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
一旦患者狀況發生改善，如果需要，施用維持劑量。隨後，根據症狀，可以將給藥劑量或頻率或兩者降低至維持改善的疾病、病症或病況的水準。然而，患者可能在症狀復發後需要長期的間歇性治療。
與該量相應的給定試劑的量將根據因素而變化，所述因素例如具體的化合物、疾病或病症及其嚴重性、需要治療的受試者或宿主的身份（例如體重），但是仍然可以根據病例周圍的具體情況以本領域習知的方式常規確定，所述具體情況包括例如施用的具體試劑、施用途徑、治療的病症和治療的受試者或宿主。然而，通常，用於成人治療的劑量通常為每天0.02-5000 毫克，或每天約1-1500 毫克。所需劑量可以方便地以單一劑量或作為同時（或在短時間段內）或以適當間隔施用的分劑量存在，例如作為每天兩次、三次、四次或更多次的子劑量。
本文所述的醫藥組合物可以是適於單次施用精確劑量的單位劑型。在單位劑型中，製劑被分成含有合適量的一種或多種化合物的單位劑量。單位劑量可以是含有離散量製劑的包裝形式。非限制性實例是包裝的錠劑或膠囊，以及小瓶或安瓿中的粉末。水性懸浮液組合物可以包裝在單劑量的不可重新關閉的容器中。或者，可以使用多劑量可重新關閉容器，在這種情況下，通常在組合物中包括防腐劑。僅作為實例，用於腸胃外注射的製劑可以以單位劑型存在，其包括但不限於安瓿，或在多劑量容器中，具有添加的防腐劑。
前述範圍僅僅是例示，因為關於個體治療方案的變數數目是大的，並且從這些推薦值的相當大的偏移並不少見。這樣的劑量可以根據許多變量而改變，所述變量不限於所使用的化合物的活性、待治療的疾病或病症、施用模式、個體受試者的要求、待治療的疾病或病症的嚴重程度和執業醫師的判斷。
此類治療方案的毒性和治療功效可透過細胞培養物或實驗動物中的標準藥學程序來測定，包括（但不限於）測定LD 50（50％群體致死劑量）和ED 50（50％群體中治療有效劑量）。毒性和治療效果之間的劑量比率為治療指數，並且其可以表示為LD 50和ED 50之間的比率。呈現高治療指數的化合物為較佳。從細胞培養測定和動物研究獲得的數據可用於配製用於人類的劑量範圍。這樣的化合物的劑量較佳在包括具有最小毒性的ED 50的循環濃度範圍內。劑量可以在該範圍內變化，這取決於所用的劑型和所用的給藥途徑。 8. 治療方法
在具體的實施方案中，本文提供了治療、改善或預防有需要的患者的疾病或病症的方法，其包括施用一定量的本文所述的化合物以治療、改善或預防所述疾病或病症。在具體的實施方案中，本文提供了治療、改善或預防有需要的患者的疾病或病症的方法，其包括施用一定量的本文所述的醫藥組合物以治療、改善或預防所述疾病或病症。在某些實施方案中，本文提供用於治療的本文所述的任何化合物。在某些實施方案中，本文提供用於治療的本文所述的任何醫藥組合物。在某些實施方案中，本文提供用於治療、改善或預防有需要的患者的疾病或病症的本文所述的任何化合物。在某些實施方案中，本文提供用於治療、改善或預防有需要的患者的疾病或病症的本文所述的任何醫藥組合物。在某些實施方案中，本文提供本文所述的任何化合物，其用於製造用於治療的藥物。在某些實施方案中，本文提供本文所述的用於治療的任何醫藥組合物。在某些實施例中，本文提供本文所述的任何化合物，其用於製造用於治療、改善或預防有需要的患者中的疾病或病狀的藥劑。在某些實施方案中，本文提供本文所述的任何醫藥組合物，其用於製造用於治療、改善或預防有需要的患者的疾病或病況的藥物。本文描述了有用的病症和疾病。
在某些實施方案中，所述疾病或病症與FLT3功能障礙相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症與不期望的FLT3表達相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症與FLT3的過度表達相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症與不期望的FLT3水平相關。在某些實施例中，所述疾病或病狀與過度FLT3水平相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症與不期望的FLT3活性相關。在某些實施例中，所述疾病或病狀與FLT3的過度活性相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症與不期望的FLT3-MLL相互作用相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症與過度的FLT3-MLL相互作用相關。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制FLT3表達來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制FLT3的過度表達來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制FLT3水平來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制過度FLT3水平來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制不期望的FLT3活性來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制FLT3的過度活性來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制FLT3-MLL相互作用來治療。在某些實施方案中，所述疾病或病症適於透過抑制過度的FLT3-MLL相互作用來治療。
在某些實施方案中，所述疾病或病症與 FLT3基因中的突變相關。在某些實施方案中， FLT3基因中的突變是內部串聯重複突變（ FLT3-IND）。在某些實施方案中， FLT3-IND突變是D835突變。在一個實施方案中， FLT3-IND突變是D835V。在某些實施方案中， FLT3-IND突變是D835Y。在某些實施方案中，突變是酪氨酸激酶結構域（ FLT3-TKD）中的點突變。在某些實施方案中， FLT3突變選自N676K、F691L、D835H、D835V、D835Y、Y842C及其組合。在某些實施例中， FLT3突變是N676K。在某些實施例中， FLT3突變是F691L。在某些實施例中， FLT3突變是D835H。在某些實施例中， FLT3突變是D835V。在某些實施例中， FLT3突變是D835Y。在某些實施方案中， FLT3突變是Y842C。在某些實施方案中，患者具有 NPM1突變。
在一些實施方案中，向人施用本文提供的化合物。
在一些實施方案中，口服施用本文提供的化合物。
在一些實施方案中，所述疾病或病症是血液惡性腫瘤，包括但不限於白血病、淋巴瘤或多發性骨髓瘤。在某些實施方案中，所述疾病或病症是白血病，包括但不限於急性淋巴細胞白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、慢性淋巴細胞白血病（CLL）、慢性骨髓性白血病（CML），前淋巴細胞白血病（PLL）、急性前淋巴細胞白血病（APL）、大顆粒淋巴細胞（LGL）、毛細胞白血病（HCL）、慢性嗜中性粒細胞白血病（CNL）、急性未分化白血病（AUL）、間變性大細胞淋巴瘤（ALCL）、前淋巴細胞白血病（PML）、幼年型粒單核細胞白血病（JMML）、成人T細胞（ALL）或骨髓增生性疾病（MPD）、肥大細胞淋巴瘤（MCC）或骨髓發育不良症候群（MDS）。在某些實施方案中，所述疾病或病症是急性骨髓性白血病（AML）。在某些實施方案中，所述疾病或病症是復發性或難治性AML。
在某些實施方案中，所述疾病或病症是淋巴瘤，包括但不限於非何杰金氏淋巴瘤或何杰金氏淋巴瘤。在某些實施方案中，所述疾病或病症是非何傑金氏淋巴瘤，包括但不限於B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、T細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤（FL）、套細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症（淋巴漿細胞性淋巴瘤）。在某些實施方案中，所述疾病或病症是何杰金氏淋巴瘤，包括但不限於淋巴細胞缺失的何杰金氏病、富含淋巴細胞的何杰金氏病、混合細胞性何杰金氏淋巴瘤、結節性淋巴細胞為主的何杰金氏病或結節性硬化何杰金氏淋巴瘤。
在某些實施方案中，所述疾病或病症是多發性骨髓瘤。在一個實施方案中，多發性骨髓瘤是超二倍體。在一個實施方案中，多發性骨髓瘤是亞二倍體。
在某些實施方案中，所述疾病或病症是復發性或難治性的。在一個實施方案中，所述疾病或病症是復發性或難治性急性骨髓性白血病（AML）。在某些實施方案中，所述疾病或病症是新診斷的。在一個實施方案中，所述疾病或病症是新診斷的AML。 9. 組合療法
本文所述的FLT3抑制劑組合物還可以與其他熟知的治療試劑組合使用，所述其他熟知的治療試劑根據其對於待治療的病症的治療價值來選擇。通常，本文所述的組合物以及在使用組合療法的實施方案中，其他藥劑不必在相同的醫藥組合物中施用，並且可能由於不同的物理和化學特性而必須通過不同的途徑施用。在可能的情況下，在同一醫藥組合物中，給藥方式和給藥可取性的確定完全在熟練臨床醫師的知識範圍內。初始給藥可以根據本領域習知的既定方案進行，然後，基於觀察到的效果、劑量、給藥方式和給藥時間可以由熟練的臨床醫師修改。
在某些情況下，可適當地將本文所述的至少一種FLT3抑制劑化合物與另一種治療劑組合給藥。僅作為實例，如果患者在接受本文所述的FLT3抑制劑化合物之一時經歷的副作用之一是噁心，則與初始治療劑組合施用抗噁心劑可能是合適的。或者，僅作為實例，本文所述的化合物之一的治療有效性可通過施用佐劑來增強（即，佐劑本身可具有最小的治療益處，但與另一種治療劑組合，對患者的總體治療益處增強）。或者，僅作為實例，患者經歷的益處可通過施用本文所述的化合物之一與也具有治療益處的另一種治療劑（其也包括治療方案）來增加。在任何情況下，無論所治療的疾病、病症或病狀如何，患者所經歷的總體益處可簡單地為兩種治療劑的累加或患者可經歷協同益處。
所用化合物的具體選擇將取決於主治醫師的診斷和他們對患者狀況的判斷以及適當的治療方案。取決於疾病、病症或病狀的性質，患者的病狀和所用化合物的實際選擇，化合物可同時（例如，同時、基本上同時或在同一治療方案內）或依序施用。在評價所治療的疾病和患者的狀況之後，在治療方案期間每種治療劑的給藥順序和重複給藥次數的確定完全在熟練醫師的知識範圍內。
所屬技術領域之通常知識者習知，當藥物用於治療組合時，治療有效劑量可以變化。文獻中描述了用於實驗確定用於組合治療方案的藥物和其他藥劑的治療有效劑量的方法。例如，在文獻中已經廣泛地描述了規律性給藥的使用，即提供更頻繁、更低劑量以使毒副作用最小化。組合治療還包括在不同時間開始和停止以幫助患者的臨床管理的週期性治療。
對於本文所述的組合療法，共同施用的化合物的劑量當然將取決於所用的共同藥物的類型，所用的具體藥物，所治療的疾病或病症等而變化。此外，當與一種或多種生物活性劑共同施用時，本文提供的化合物可與生物活性劑同時或依序施用。如果依序給藥，主治醫師將決定蛋白質與生物活性劑組合給藥的適當順序。
在任何情況下，多種治療劑（其中之一是本文所述的式（P-I）、式（I）-式（LXIIIb）、式（P2-I）、式（P4-I）-（P4-Vb）或式（P5-I’）-（P5-Vd）的化合物）可以任何順序或甚至同時施用。如果同時給藥，多種治療劑可以以單一、統一的形式或以多種形式（僅作為實例，作為單一丸劑或作為兩個分開的丸劑）提供。治療劑之一可以以多劑量給予，或兩者可以以多劑量給予。如果不同時給藥，多劑量之間的時間可在大於0周至小於4周之間變化。此外，組合方法、組合物和製劑不限於僅使用兩種試劑；還設想了多種治療組合的使用。
應當理解，治療、預防或改善尋求緩解的病症的給藥方案可以根據多種因素進行修改。這些因素包括受試者患有的病症，以及受試者的年齡、體重、性別、飲食和醫學狀況。因此，實際使用的劑量方案可廣泛變化，因此可偏離本文所述的劑量方案。
構成本文公開的組合療法的藥劑可以是組合劑型或旨在基本上同時施用的單獨劑型。組成組合療法的藥劑也可依序投予，其中任一治療化合物通過需要兩步投予的方案投予。兩步給藥方案可要求活性劑的順序給藥或分開的活性劑的間隔給藥。多個給藥步驟之間的時間段可以在幾分鐘至幾小時的範圍內，這取決於每種藥劑的性質，例如藥劑的效力、溶解度、生物利用度、血漿半衰期和動力學曲線。目標分子濃度的晝夜節律變化也可以決定最佳劑量間隔。
此外，本文所述的化合物還可以與可為患者提供額外或協同益處的程序組合使用。僅作為實例，預期患者在本文所述的方法中發現治療及/或預防益處，其中本文公開的化合物的醫藥組合物及/或與其他治療劑的組合與遺傳測試組合以確定個體是否是習知與某些疾病或病症相關的突變基因的攜帶者。
本文所述的化合物和組合療法可以在疾病或病狀發生之前、期間或之後施用，並且施用含有化合物的組合物的時機可以變化。因此，例如，所述化合物可以用作預防劑並可以連續施用於具有發展病症或疾病傾向的受試者以預防疾病或病症的發生。化合物和組合物可以在症狀發作期間或在症狀發作後儘快給予受試者。化合物的施用可以在症狀發作的前48小時內，在症狀發作的前6小時內或在症狀發作的3小時內開始。初始給藥可以藉由任何可行的途徑，例如靜脈內注射、快速注射、在5分鐘至約5小時內輸注、丸劑、膠囊、經皮貼片、口腔遞送等，或其組合。化合物應在檢測到或懷疑疾病或病症發作後盡可能快地給藥，並持續治療疾病所需的時間長度，例如約1個月至約3個月。治療的長度可以針對每個受試者而變化，並且該長度可以使用習知的標準來確定。例如，化合物或含有化合物的製劑可以施用至少2周、約1個月至約5年、或約1個月至約3年。 10. 與FLT3抑制劑化合物組合使用的示例性治療劑
可與FLT3抑制劑化合物組合使用的其他抗癌劑包括：阿黴素（adriamycin）、放線菌素D（Dactinomycin）、博來黴素（Bleomycin）、長春花鹼（Vinblastine）、順鉑（Cisplatin）、阿西維辛（acivicin）；阿柔比星（aclarubicin）；鹽酸諾考達唑（acodazole hydrochloride）；山油柑鹼（acronine）；阿多來新（adozelesin）；阿地白介素（ldesleukin）；六甲蜜胺（altretamine）；安波黴素（ambomycin）；乙酸阿美蒽醌（ametantrone acetate）；氨苯呱酮（aminoglutethimide）；安吖啶（amsacrine）；安耐柔（anastrozole）；胺茴黴素（anthramycin）；天冬胺酸酶；曲林菌素（asperlin）；氮雜西定（azacitidine)；阿紮替派（azetepa）；阿佐黴素（azotomycin）；巴馬司他（batimastat）；苯佐替派（benzodepa）；比卡魯胺（bicalutamide）；鹽酸比生群（bisantrene hydrochloride）；二甲磺酸雙奈法德（bisnafide dimesylate）；比折來新（bizelesin）；硫酸博來黴素（bleomycin sulfate）；布喹那鈉（brequinar sodium）；溴匹立明（bropirimine）；白消安（busulfan）；放線菌素C（cactinomycin）；二甲睾酮（calusterone）；卡醋胺（caracemide）；卡貝替姆（carbetimer）；卡鉑（carboplatin）；卡莫司汀（carmustine）；鹽酸卡柔比星（carubicin hydrochloride）；卡折來新（carzelesin）；西地芬戈（cedefingol）；苯丁酸氮芥（chlorambucil）；西洛黴素（cirolemycin）；克拉屈濱（cladribine）；甲磺酸克立那托（crisnatol mesylate）；環磷醯胺；阿糖胞苷（Cytarabine） ；達卡巴仁（dacarbazine）；鹽酸道諾黴素（daunorubicin hydrochloride）；地西他濱（decitabine）；右奧馬鉑（dexormaplatin）；地紮胍寧（dezaguanine）；甲磺酸地紮胍寧（dezaguanine mesylate）；地吖醌（diaziquone）；多柔比星（doxorubicin）；鹽酸多柔比星（doxorubicin hydrochloride）；屈洛昔芬（droloxifene）；檸檬酸屈洛昔芬（droloxifene citrate）；丙酸屈他雄酮（dromostanolone propionate）；重氮黴素（duazomycin）；依達曲沙（edatrexate）；鹽酸依氟鳥胺酸（eflornithine hydrochloride）；依沙蘆星（elsamitrucin）；恩洛鉑（enloplatin）；恩普氨酯（enpromate）；依匹哌啶（epipropidine）；鹽酸泛艾黴素（epirubicin hydrochloride）；厄布洛唑（erbulozole)；鹽酸依索比星（esorubicin hydrochloride）；雌氮芥（estramustine）；雌氮芥磷酸鈉鹽；依他硝唑（etanidazole）；依託泊苷（etoposide）；磷酸依託泊苷；氯苯乙嘧胺（etoprine）；鹽酸法羅唑啉（fadrozole hydrochloride）；法紮拉濱（fazarabine）；芬維A胺（fenretinide）；氟尿嘧啶脫氧核苷（floxuridine）；磷酸福達樂（fludarabine phosphate）；氟尿嘧啶（fluorouracil）；氟西他濱（flurocitabine）；氟喹酮（fosquidone）；福司曲星鈉（fostriecin sodium)；吉西他濱（gemcitabine）；鹽酸吉西他濱；羥基脲；鹽酸伊達比星（idarubicin hydrochloride）；異環磷醯胺（ifosfamide）；伊莫福新（iimofosine）；間白素II（包括重組間白素II、或rlL2）、干擾素α-2a；干擾素α-2b；干擾素α-n1；干擾素α-n3；干擾素β-1a；干擾素γ-1b；異丙鉑（iproplatin）；鹽酸伊立替康（irinotecan hydrochloride）；乙酸蘭瑞肽（lanreotide acetate）；來曲唑（letrozole)；乙酸柳菩林（leuprolide acetate）；鹽酸利阿唑（liarozole hydrochloride）；洛美曲索鈉（lometrexol sodium）；洛莫司汀（lomustine）；鹽酸洛索蒽醌（losoxantrone hydrochloride）；馬索羅酚（masoprocol）；美坦辛（maytansine）；二氯甲基二乙胺鹽酸鹽（mechlorethamine hydrochloride）；乙酸甲地孕酮（megestrol acetate）；乙酸美侖孕酮（melengestrol acetate）；馬法蘭（melphalan）；美諾立爾（menogaril）；氫硫基嘌呤；胺甲蝶呤（methotrexate）；胺甲蝶呤鈉（methotrexate sodium）；氯苯胺啶（metoprine）；美妥替哌（meturedepa）；米丁度胺（mitindomide）；米托卡星（mitocarcin）；絲裂紅素（mitocromin）；米托潔林（mitogillin）；米托馬星（mitomalcin）；絲裂黴素（mitomycin）；米托司培（mitosper）；米托坦（mitotane）；鹽酸米托蒽醌（mitoxantrone hydrochloride）；黴酚酸（mycophenolic acid）；諾考達唑（nocodazoie）；諾拉黴素（nogalamycin）；奧馬鉑（ormaplatin）；奧昔舒侖（oxisuran)；培門冬酶（pegaspargase)；培利黴素（peliomycin）；戊氮芥（pentamustine）；硫酸培洛黴素（peplomycin sulfate）；培磷醯胺（perfosfamide）；雙溴丙基哌嗪（pipobroman）；哌泊舒凡（piposulfan）；鹽酸吡羅蒽醌（piroxantrone hydrochloride)；普卡黴素（plicamycin）；普洛美坦（plomestane）；蔔吩姆鈉（porfimer sodium）；泊非黴素（porfiromycin）；潑尼莫司汀（prednimustine）；鹽酸丙卡巴肼（procarbazine hydrochloride）；嘌呤黴素（puromycin）；鹽酸嘌呤黴素（puromycin hydrochloride）；吡唑呋喃菌素（pyrazofurin）；利波腺苷（riboprine）；羅穀亞胺（rogletimide）；沙芬戈（safingol）；鹽酸沙芬戈；希莫司汀（semustine）；辛曲（simtrazene）；磷乙醯天冬胺酸鈉（sparfosate sodium）；稀疏黴素（sparsomycin)；鹽酸鍺螺胺（spirogermanium hydrochloride）；螺莫司汀（spiromustine）；螺鉑（spiroplatin）；鏈黑黴素（streptonigrin)；鏈脲佐菌素（streptozocin）；磺氯苯脲（sulofenur）；他利黴素（talisomycin）；替可加蘭鈉（tecogalan sodium）；替加氟（tegafur）；鹽酸替洛蒽醌（teloxantrone hydrochloride）；替莫泊芬（temoporfin）；替尼泊苷（teniposide）；替羅昔隆（teroxirone）；睾內酯（testolactone）；硫咪嘌呤（thiamiprine）；硫鳥嘌呤（thioguanine）；噻替哌（thiotepa）；噻唑羧胺核苷（tiazofurin）；替拉紮明（tirapazamine）；檸檬酸托瑞米芬（toremifene citrate）；乙酸曲托龍（trestolone acetate）；磷酸曲西立濱（triciribine phosphate）；三甲曲沙（trimetrexate）；葡糖醛酸三甲曲沙（trimetrexate glucoronate）；曲普瑞林（triptorelin）；鹽酸妥布氯唑（tubulozole hydrochloride）；尿嘧啶氮芥（uracil mustard）；烏瑞替派（uredepa)；伐普肽（vapreotide）；維替泊芬（verteporfin）；硫酸長春花鹼（vinblastine sulfate）；硫酸長春新鹼（vincristine sulfate）；長春地辛（vindesine）；硫酸長春地辛（vindesine sulfate）；硫酸長春匹定（vinepidine sulfate）；硫酸長春甘酯（vinglycinate sulfate）；硫酸長春羅辛（vinleurosine sulfate）；酒石酸長春瑞濱（vinorelbine tartrate）；硫酸長春羅定（vinrosidine sulfate）硫酸長春利定（vinzolidine sulfate）；伏氯唑（vorozole）；折尼鉑（zeniplatin）；淨司他丁（zinostatin）；鹽酸佐柔比星（zorubicin hydrochloride）。
可與FLT3抑制劑化合物組合使用的其他抗癌劑包括：20-表-1,25二羥基維生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龍（abiraterone）；阿柔比星（aclarubicin）；阿希夫吩（acylfulvene）；腺環戊醇（adecypenol）；阿多來新（adozelesin）；阿地白介素（aldesleukin）；ALL-TK拮抗劑；六甲蜜胺（altretamine）；胺莫司汀（ambamustine）；2,4二氯苯氧乙酸（amidox）；阿米福汀（amifostine）；胺基酮戊酸（aminolevulinic acid）；胺柔比星（amrubicin）；安吖啶（amsacrine）；阿那格雷（anagrelide）；安耐柔（anastrozole）；穿心蓮內酯（andrographolide）；血管新生抑制劑；拮抗劑D；拮抗劑G；安塔利斯（antarelix）；抗背部形態形成蛋白質-1；抗雄激素，攝護腺癌；抗雌激素；抗腫瘤物質（antineoplaston）；反義寡核苷酸；艾菲地可寧甘胺酸鹽（aphidicolin glycinate）；細胞凋亡基因調控劑；細胞凋亡調節劑；類嘌呤酸（apurinic acid）；ara-CDP-DL-PTBA；精胺酸脫胺酶；苯胺吖啶（asulacrine）；阿他美坦（atamestane）；阿莫司汀（atrimustine）；洋蟲膠抑制素1（axinastatin 1）；洋蟲膠抑制素2（axinastatin 2）；洋蟲膠抑制素3（axinastatin3）；阿紮司瓊（azasetron）；阿紮毒素（azatoxin）；氮雜酪胺酸；漿果赤黴素III（baccatin III）衍生物；博拉諾（balanol）；巴馬司他（batimastat）；BCR/ABL拮抗劑；苯并二氫氯吩（benzochlorins）；苯甲醯星狀孢子鹼（benzoylstaurosporine）；β-內醯胺衍生物；β-艾利辛（β-alethine）；β-克拉黴素B（betaclamycin B）；樺木酸；bFGF抑制劑；比卡魯胺（bicalutamide）；比生群（bisantrene）；雙乙烯亞胺基精胺（bisaziridinylspermine）；雙奈法德（bisnafide）；雙崔特A（bistratene A）；比折來新（bizelesin）；布來福林（breflate）；溴匹立明（bropirimine）；布度鈦（budotitane）；丁硫胺酸硫酸亞胺（buthionine sulfoximine）；卡泊三醇（calcipotriol）；鈣磷酸蛋白（calphostin C）；喜樹鹼衍生物；金絲雀痘IL-2（canarypox IL-2）；截瘤達（capecitabine）；羧醯胺-胺基-三唑；羧醯胺基三唑；CaRest M3；CARN700；軟骨衍生之抑制劑；卡折來新（carzelesin）；酪蛋白激酶抑制劑（ICOS）；粟精胺（castanospermine）；天蠶抗菌肽B（cecropin B）；西曲瑞克（cetrorelix）；二氫卟酚（chlorlns）；磺胺氯喹啉（chloroquinoxaline sulfonamide）；西卡前列素（cicaprost)；順卟啉（cis-porphyrin）；克拉屈濱（cladribine）；氯米芬類似物（clomifene analogues）；克黴唑（clotrimazole）；克裡斯黴素（collismycin）A；克裡斯黴素（collismycin）B；考布他汀A4（combretastatin A4）；考布他汀類似物；康奈精（conagenin）；五環胍類生物鹼（crambescidin 816）克立那托（crisnatol）；念珠藻環肽8（cryptophycin8）；念珠藻環肽A（cryptophycin A）衍生物；鞘絲藻素（curacin A）；環戍烯蒽醌（cyclopentanthraquinones）；環鉑（cycloplatam）；環青黴素（cypemycin）、阿糖胞苷十八烷基磷酸鹽（Cytarabine ocfosfate）；溶胞因子；磷酸己烷雌酚（cytostatin）；達昔單抗（dacliximab）；地西他濱（decitabine）；脫氫膜海鞘素B（dehydrodidemnin B）；地洛瑞林（deslorelin）；地塞美松（dexamethasone）；右異環磷醯胺（dexifosfamide）；右雷佐生（dexrazoxane）；右維拉帕米（dexverapamil）；地吖醌（diaziquone）；膜海鞘素B（didemnin B）；第達（didox）；二乙基去甲精胺（diethylnorspermine）；二氫-5-氮雜胞苷；9-二氧黃溶黴素（9-dioxamycin）；二苯基螺莫司汀（diphenylspiromustine）；二十二烷醇（docosanol）；朵拉司瓊（dolasetron）；去氧氟尿苷（doxifluridine）；屈洛昔芬（droloxifene）；四氫大麻酚（dronabinol）；倍癌黴素（duocannycin SA）；依布硒（ebselen）；依考莫司汀（ecomustine）；依地福新（edelfosine）；依決洛單抗（edrecolomab）；依氟鳥氨酸（eflornithine）；欖香烯（elemene）；乙嘧替氟（emitefur）；泛艾黴素（epirubicin）；愛普列特（epristeride）；雌氮芥類似物（estramustine analogue）；雌激素促效劑；雌激素拮抗劑；依他硝唑（etanidazole）；磷酸依託泊苷（etoposide phosphate）；依西美坦（exemestane）；法倔唑（fadrozole）；法紮拉濱（fazarabine）；芬維A胺（fenretinide）；非格司亭（filgrastim）；非那甾胺（finasteride）；夫拉平度（flavopiridol）；氟卓斯汀（flezelastine）；氟海星酮（fluasterone）；福達樂（fludarabine）；鹽酸氟代柔紅黴素（fluorodaunorunicin hydrochloride）；福酚美克（forfenimex）；福美坦（formestane）；福司曲星（fostriecin）；福莫司汀（fotemustine）；莫特沙芬釓（gadolinium texaphyrin）；硝酸鎵（gallium nitrate）；加洛他濱（galocitabine）；加尼瑞克（ganirelix）；明膠酶抑制劑；吉西他濱（gemcitabine）；穀胱甘肽抑制劑；赫素磺醯胺（hepsulfam）；赫林蛋白（heregulin）；六亞甲基雙乙醯胺；金絲桃素（hypericin）；伊班膦酸（ibandronic acid）；伊達比星（idarubicin）；艾多昔芬（idoxifene）；伊決孟酮（idramantone）；伊莫福新（ilmofosine）；伊洛馬司他（ilomastat）；咪唑吖啶酮（imidazoacridones）；咪喹莫特（imiquimod）；免疫刺激肽；胰島素樣生長因子-1受體抑制劑；干擾素促效劑；干擾素；間白素；碘節胍（iobenguane）；碘多柔比星（iododoxorubicin）；甘薯苦醇（ipomeanol,4-）；伊羅普拉（iroplact）；伊索拉定（irsogladine）；異苯唑（isobengazole）；同功軟海棉素（isohomohalicondrin）B；伊他司瓊（itasetron）；促微絲聚合劑（jasplakinolide）；環縮肽（kahalalide F）；三乙酸片螺素（lamellarin-N triacetate）；蘭瑞肽（lanreotide）；雷拉黴素（leinamycin）；來格司亭（lenograstim）；硫酸蘑菇多糖（lentinan sulfate）；來泊司汀（leptolstatin）；來曲唑（letrozole）；白血病抑制因子；白細胞α干擾素；柳菩林（leuprolide）+雌激素+黃體酮；亮丙瑞林（leuprorelin）；左旋咪唑（levamisole）；利阿唑（liarozole）；線性聚胺類似物；親脂性雙醣肽；親脂性鉑化合物；利絲醯胺（lissoclinamide）7；洛鉑（lobaplatin）；胍乙基磷酸絲胺酸（lombricine）；洛美曲索（lometrexol）；氯尼達明（lonidamine）；洛索蒽醌（losoxantrone）；洛伐他汀（lovastatin）；洛索立賓（loxoribine)；勒托替康（lurtotecan）；藍花贗靛素鎦（lutetium texaphyrin）；利索茶鹼（lysofylline）；溶解肽（lytic peptides）；美坦新（maitansine）；抑甘露糖苷酶素（mannostatin A）；馬立馬司他（marimastat）；馬索羅酚（masoprocol）；乳腺絲胺酸蛋白酶抑制劑（maspin）；基質溶解因子（matrilysin）抑制劑；基質金屬蛋白酶抑制劑；美諾立爾（menogaril）；美巴龍（merbarone）；美替瑞林（meterelin）；甲硫胺酸酶；甲氧氯普胺（metoclopramide）；MIF抑制劑；米非司酮（mifepristone）；米替福新（miltefosine）；米立司亭（mirimostim） ；錯配雙股RNA；米托胍腙（mitoguazone）；二溴衛矛醇（mitolactol）絲裂黴素（mitomycin）類似物；米托萘胺（mitonafide）；絲裂毒素（mitotoxin）纖維母細胞生長因子-皂草素；米托蒽醌（mitoxantrone）；莫法羅汀（mofarotene）；莫拉司亭（molgramostim）；單株抗體，人類絨毛膜促性腺激素；單磷醯基脂質A+分支桿菌（myobacterium）細胞壁sk；莫比達醇（mopidamol）；多種抗藥性基因抑制劑；基於多重腫瘤抑制基因-1之療法；氮芥抗癌劑；印度洋海綿B（mycaperoxide B）；分枝桿菌細胞壁抽出物（mycobacterial cell wall extract）；苔蘚蟲海綿（myriaporone）；N-乙醯基地那林（N-acetyldinaline）；N-經取代之苯甲醯胺；那法瑞林（nafarelin）；那哥斯普（nagrestip）；納洛酮（naloxone）+噴他佐辛（pentazocine）；納帕維（napavin）；萘萜二醇（naphterpin）；那托司亭（nartograstim）；奈達鉑（nedaplatin）；奈莫柔比星（nemorubicin）；奈立膦酸（neridronic acid）；中性肽內切肽酶；尼魯米特（nilutamide）；尼薩黴素（nisamycin）；一氧化氮調節劑；硝基氧抗氧化劑；尼楚林（nitrullyn）；O6-苯甲基鳥嘌呤；奧曲肽（octreotide）；奧克三諾（okicenone）；寡核苷酸；奧那司酮（onapristone）；昂丹司瓊（ondansetron）；昂丹司瓊（ondansetron）；奧瑞森（oracin）；口服細胞素誘導劑；奧馬鉑（ormaplatin）；奧沙特隆（osaterone）；奧沙利鉑（oxaliplatin）；奧諾黴素（oxaunomycin）；鈀銨（palauamine）；棕櫚醯根黴素（palmitoylrhizoxin）；帕米磷酸（pamidronic acid）；人參三醇（panaxytriol）；帕諾米芬（panomifene）；副菌鐵素（parabactin）；帕折普汀（pazelliptine）；培門冬酶（pegaspargase）；培得星（peldesine）；戊聚糖聚硫酸鈉（pentosan polysulfate sodium）；噴司他汀（pentostatin）；噴曲唑（pentrozole）；全氟溴烷（perflubron）；培磷醯胺（perfosfamide）；紫蘇子醇（perillyl alcohol）；吩嗪黴素（phenazinomycin）；乙酸苯酯；磷酸酶抑制劑；必醫你舒（picibanil）；毛果蕓香鹼鹽酸鹽（pilocarpine hydrochloride）；比柔比星（pirarubicin）；比曲克辛（piritrexim）；普拉汀（placetin）A；普拉汀（placetin）B；纖溶酶原活化因子抑制劑；鉑複合物；鉑化合物；鉑-三胺複合物；葉吩姆鈉（porfimer sodium）；泊非黴素（porfiromycin）；潑尼松（prednisone）；丙基雙吖啶酮（propyl bis-acridone）；前列腺素J2；蛋白酶體抑制劑；基於蛋白質A之免疫調控劑；蛋白質激酶C抑制劑；蛋白質激酶C抑制劑，微海藻類（microalgal）；蛋白質酪胺酸磷酸酶抑制劑；嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑；紅紫素（purpurins）；吡唑并吖啶（pyrazoloacridine）；吡哆醇酸化血紅蛋白聚氧乙烯接合物；raf拮抗劑；雷替曲塞（raltitrexed）；雷莫司瓊（ramosetron）；ras法尼基（ras farnesyl）蛋白質轉移酶抑制劑；ras抑制劑；ras-GAP抑制劑；脫甲基瑞替普汀（retelliptine demethylated）；錸Re86依替膦酸鹽（rhenium Re 186 etidronate）；根黴素（rhizoxin）；核酶；RII維甲醯酚胺（retinamide）；羅穀亞胺（rogletimide）；羅稀吐鹼（rohitukine）；羅莫肽（romurtide）；羅喹美克（roquinimex）；如彼給諾（rubiginone）B1；如波斯（ruboxyl）；沙芬戈（safingol）；沙托品（saintopin）；SarCNU；肌肉葉綠醇（sarcophytol）A；沙格司亭（sargramostim）；Sdi 1擬似物；希莫司汀（semustine）；衰老細胞衍生的抑制劑1；正義寡核苷酸；訊號轉導抑制劑；訊號轉導調控劑；單鏈抗原結合性蛋白質；西佐非蘭（sizofiran）；索布佐生（sobuzoxane）；硼卡鈉（sodium borocaptate）；苯乙酸鈉；索菲醇（solverol）；生長調節素結合性蛋白質；索納明（sonermin）；磷乙醯天冬胺酸（sparfosic acid）；穗黴素D（spicamycin D）；螺莫司汀（spiromustine）；脾五肽（splenopentin）；海綿他汀素1（spongistatin 1）；角鯊胺（squalamine）；幹細胞抑制劑；幹細胞分化抑制劑；密擠青黴醯胺（stipiamide）基質降解酶（stromelysin）抑制劑；硫福辛（sulfinosine）；強效血管活性腸肽拮抗劑；磺酸偏端黴素（suradista）；舒拉明（suramin）；苦馬豆素（swainsonine）；合成性葡糖胺基聚醣；他莫司汀（tallimustine）；它莫西芬甲碘化物（tamoxifen methiodide）；牛磺莫司汀（tauromustine）；他紮羅汀（tazarotene）；替可加蘭鈉（tecogalan sodium）；替加氟（tegafur）；締哌喃鐵（tellurapyrylium）；端粒末端轉移酶（telomerase）抑制劑；替莫泊芬（emoporfin）；替莫唑胺（temozolomide）；替尼泊苷（teniposide）；四氯十氧化物（tetrachlorodecaoxide）；四氫唑環（tetrazomine）；白蓬草硝酸鈉（thaliblastine）；噻可拉林（thiocoraline）；血小板生成素；血小板生成素擬似物；胸腺法新（thymalfasin）；胸腺生成素受體促效劑；胸腺曲南（thymotrinan）；甲狀腺刺激激素；本紫紅素乙酯錫（tin ethyl etiopurpurin）；替拉紮明（tirapazamine）；二氯環戊二烯鈦（titanocene bichloride）；淺水海綿素（topsentin）；托瑞米芬（toremifene）；全能幹細胞因子；轉譯抑制劑；維甲酸（tretinoin）；三乙醯尿苷（triacetyluridine）；曲西立濱（triciribine）；三甲曲沙（trimetrexate）；曲普瑞林（triptorelin）；托烷司瓊（tropisetron）；妥羅雄脲（turosteride）；酪胺酸激酶抑制劑；酪胺酸激酶阻斷劑（tyrphostins）；UBC抑制劑；烏苯美司（ubenimex）；泌尿生殖竇衍生之生長抑制因子；尿激酶受體拮抗劑；伐普肽（vapreotide）；瓦裡奧林B（variolin B）；載體系統，紅細胞基因療法；維拉雷瑣（velaresol）；藜蘆明（veramine）；維爾定（verdins）；維替泊芬（verteporfin）；長春瑞濱（vinorelbine）；維夏汀（vinxaltine）；維它新（vitaxin）；伏氯唑（vorozole）；紮諾特隆（zanoterone）；折尼鉑（zeniplatin）；亞苄維C（zilascorb）；淨司他丁斯酯（zinostatin stimalamer）。
可與FLT3抑制劑化合物組合使用的其他抗癌劑包括烷化劑、抗代謝物、天然產物或激素，例如氮芥（例如，氯乙胺、環磷醯胺、丁酸氮芥等）、烷基磺酸酯（例如，白消安）、亞硝基脲（例如，卡莫司汀，洛姆斯汀等）或三氮烯（decarbazine等）。抗代謝物的實例包括但不限於葉酸類似物（例如甲氨蝶呤）或嘧啶類似物（例如阿糖胞苷）、嘌呤類似物（例如巰嘌呤、硫鳥嘌呤、噴司他丁）。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的其他抗癌劑包括Menin抑制劑。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的抗癌劑包括WDR5抑制劑。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的抗癌劑包括KRAS抑制劑。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的其他抗癌劑包括MEK抑制劑。在一個實施方案中，MEK抑制劑是曲美替尼（trametinib）。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的其他抗癌劑包括BCL2抑制劑。在一個實施方案中，BCL2抑制劑是維奈克拉（Venetoclax）。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的天然產物的實例包括但不限於長春花生物鹼（例如長春花鹼、長春新鹼）、表鬼臼毒素（例如依託泊苷）、抗生素（例如柔紅黴素、多柔比星、博來黴素），酶（例如L-天冬醯胺酶）或生物反應調節劑（例如干擾素α）。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的烷化劑的實例包括但不限於氮芥（例如，氯乙胺、環磷醯胺、苯丁酸氮芥、美法侖等）、氮丙啶和甲基蜜胺（例如，六甲蜜胺、噻替派）、烷基磺酸酯（例如，白消安）、亞硝基脲（例如，卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、鏈佐星等）或三氮烯（decarbazine等）。抗代謝物的實例包括但不限於葉酸類似物（例如甲氨蝶呤）或嘧啶類似物（例如氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷），嘌呤類似物（例如巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、噴司他丁）。
可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的激素和拮抗劑的實例包括但不限於腎上腺皮質類固醇（例如潑尼松）、孕激素（例如己酸羥孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羥孕酮）、雌激素（例如二乙醇雌二醇、炔雌醇）、抗雌激素（例如他莫昔芬）、雄激素（例如丙酸睾酮、氟甲睾酮）、抗雄激素（例如氟他胺）、促性腺激素釋放激素類似物（例如亮丙瑞林）。可用於本文所述的方法和組合物中用於治療或預防癌症的其他藥劑包括鉑配位絡合物（例如順鉑、卡波西汀）、蒽二酮（例如米托蒽醌）、取代脲（例如羥基脲）、甲基肼衍生物（例如丙卡巴肼）、腎上腺皮質抑制劑（例如米托坦、氨魯米特）。
由於穩定的微管而使細胞停滯在G2-M期並可與本文所述的FLT3抑制劑化合物組合使用的抗癌劑的實例包括但不限於以下市售藥物和開發中的藥物：厄布洛唑（erbulozole）（也稱為R-55104）、海兔毒素10（Dolastatin 10）（也稱為DLS-10和NSC-376128）、米弗林羥乙磺酸鹽（Mivobulin isethionate）（也稱為CI-980）、長春新鹼（vincristine）、NSC-639829，圓皮海綿內酯（Discodermolide）（也稱為NVP-XX-A-296）、ABT-751（Abbott，也稱為E-7010）、奧圖來爾亭類（Altorhyrtins）（例如奧圖來爾亭A和奧圖來爾亭C）、海綿他汀素類（Spongistatins）（例如海綿他汀素1、海綿他汀素2、海綿他汀素3、海綿他汀素4、海綿他汀素5、海綿他汀素6、海綿他汀素7、海綿他汀素8和海綿他汀素9）、鹽酸西馬多亭（Cemadotin hydrochloride）（亦即LU-103793與NSC-D-669356）、埃坡黴素類（例如埃坡黴素A、埃坡黴素B、埃坡黴素C（也稱為脫氧埃坡黴素（desoxyepothilone）A或dEpoA）、埃坡黴素D（也稱為KOS-862、dEpoB和脫氧埃坡黴素B）、埃坡黴素E、埃坡黴素F、埃坡黴素B N-氧化物、埃坡黴素A N-氧化物、16-氮雜-埃坡黴素B、21-胺基埃坡黴素B （也稱為BMS -310705）、21-羥基埃坡黴素D（也稱為脫氧埃坡黴素F和dEpoF）、26-氟埃坡黴素、奧立司達汀（Auristatin）PE（也稱為NSC-654663）、索利多汀（Soblidotin）（也稱為TZT-1027）、LS-4559-P （Pharmacia，也稱為LS-4577）、LS-4578（Pharmacia, 也稱為 LS-477-P）、LS-4477 （Pharmacia）、LS-4559 （Pharmacia）、RPR-112378 （Aventis）、硫酸長春新鹼（Vincristine sulfate）、DZ-3358（Daiichi）、FR-182877 （Fujisawa, 也稱為WS-9885B）、GS-164 （Takeda）、GS-198 （Takeda）、 KAR-2 （Hungarian Academy of Sciences）、BSF-223651 （BASF, 也稱為ILX-651 and LU-223651）、SAH-49960 （Lilly/Novartis)、SDZ-268970 （Lilly/Novartis) 、AM-97（Armad/Kyowa Hakko)、AM-132 （Armad） 、AM-138 （Armad/Kyowa Hakko）、IDN-5005 （Indena）、克利特非辛52（也稱為LY-355703）、AC-7739（Ajinomoto，也稱為AVE-8063A和CS-39.HCI）、AC-7700（Ajinomoto, 也稱為AVE-8062、AVE-8062A、CS-39-L-Ser.HCI和RPR-258062A）、維替左醯胺（Vitilevuamide）、妥布賴森A （Tubulysin A）、卡納登索（Canadensol）、矢車菊黃素（Centaureidin）（也稱為NSC-106969）、T-138067（Tularik，也稱為T-67、TL-138067和TI-138067）、COBRA 1（Parker Hughes Institute，也稱為DDE-261和WHI-261）、H10（Kansas State University）、H16 （Kansas State University）、恩考司丁A1（Oncocidin A1）（也稱為 BTO-956和DIME）、DDE-313 （Parker Hughes Institute）、富吉耐德B （Fijianolide B）、勞力馬德（Laulimalide）、SPA-2（Parker Hughes Institute）、SPA-1（Parker Hughes Institute，也稱為SPIKET-P）、3-IAABU（Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine，也稱為MF-569)、那可丁Narcosine）（也稱為 NSC-5366）、那卡丁（Nascapine）、D-24851（Asta Medica）、A-105972 （Abbott）、哈米特林（Hemiasterlin）、3-BAABU（Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine，也稱為 MF-191) 、TMPN（Arizona State University）、乙醯丙酮二茂釩（Vanadocene acetylacetonate）、T-138026（Tularik）、曼薩曲爾（Monsatrol, lnanocine） （也稱為 NSC-698666）、3-lAABE（Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine）、A-204197（Abbott）、T-607 （Tuiarik，也稱為 T-900607）、RPR-115781（Aventis）、艾榴素類（Eleutherobins）（例如去甲基艾榴素（Desmethyleleutherobin）、去乙醯基艾榴素（Desaetyleleutherobin）、異艾榴素-A（ lsoeleutherobin A）和Z-艾榴素（Z-Eleutherobin））、卡利貝苷（Caribaeoside）、卡利貝林（ Caribaeolin）、海利軟骨膠（Halichondrin）B、D-64131（Asta Medica）、D-68144（Asta Medica）、重氮醯胺（Diazonamide）A、A-293620（Abbott）、NPI -2350（Nereus），他卡諾內酯（Taccalonolide）A、TUB -245（Aventis）、A-259754（Abbott）、二唑司汀（Diozostatin）、(-)-苯基阿西司汀（phenylahistin）（也稱為NSCL-96F037）、D-68838（Asta Medica）、D-68836（Asta Medica）、肌基質蛋白（Myoseverin）B、D-43411（Zentaris，也稱為D-81862）、A-289099（Abbott）、A-318315（Abbott）、HTI -286（又名SPA -110，三氟乙酸鹽）（Wyeth）、D -82317（Zentaris）、D -82318（Zentaris）、SC -12983）NCI）、瑞伐斯他汀磷酸鈉（Resverastatin phosphate sodium）、BPR-0Y-007（National Health Research Institutes）和SSR-250411（Sanofi）。
本文所述的FLT3抑制劑還可與其他FLT3抑制劑組合施用，包括但不限於索拉非尼、米哚妥林、來他替尼、舒尼替尼、坦度替尼、吉非替尼、克雷諾拉尼、奎紮替尼、FF-10101和HM43239。 11.試劑盒/製品
為了用於本文所述的治療性應用，本文還描述了試劑盒和製品。這樣的試劑盒可以包括載體、包裝或容器，其被分隔以容納一個或多個容器，例如小瓶、管等，每個容器包括在本文所述的方法中使用的單獨元件之一。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和試管。容器可以由各種材料例如玻璃或塑料形成。
本文提供的製品包含包裝材料。用於包裝藥物產品的包裝材料是所屬技術領域之通常知識者公知的。參見例如美國專利第5,323,907號、第5,052,558號和第5,033,252號。藥物包裝材料的實例包括但不限於：泡罩包裝、瓶、管、吸入器、幫浦、袋、小瓶、容器、注射器、瓶子和適合於所選製劑和預期施用和治療模式的任何包裝材料。本文提供的化合物和組合物的製劑的廣泛配方被認為各種用於將得益於抑制FLT3或其中FLT3是症狀或病因的媒介或促進因素的任何疾病、病症或病狀的多種治療。
例如，容器可以包含本文所述的一種或多種化合物，任選地在組合物中或與本文公開的另一種藥劑組合。容器任選地具有無菌入口（例如容器可以是靜脈內溶液袋或具有可被皮下注射針刺穿的塞子的小瓶）。此類試劑盒任選地包含具有與其在本文所述的方法中的使用相關的鑑別說明或標記或說明書的化合物。
試劑盒將通常地包括一個或多個另外的容器，每個容器具有從商業和使用者角度來看對於使用在此描述的化合物所期望的一種或多種不同材料（如試劑，任選地以濃縮形式，及/或裝置）。此類材料的非限制性實例包括但不限於緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針、注射器、列出內容物及/或使用說明書的載體、包裝、容器、小瓶及/或管標記，以及具有使用說明書的包裝插頁。通常還包括一套說明。
標記可以在容器上或與容器相關聯。當形成標記的字母、數字或其他字符被附著，模製或蝕刻到容器本身中時，標記可以在容器上；當標記存在於也容納容器的容器或載體內時，標記可與容器相關聯，例如作為包裝插頁。標記可用於指示內容物用於特定的治療應用。標記還可以指示內容物的使用說明，例如在本文所述的方法中。
在某些實施方案中，醫藥組合物可以存在於包裝或分配器裝置中，其可以含有一個或多個含有本文提供的化合物的單位劑型。包裝可例如包含金屬或塑料箔，例如泡罩包裝。包裝或分配裝置可附有給藥說明書。包裝或分配器還可附有與容器相關的由管理藥物的製造、使用或銷售的政府機構規定形式的注意事項，該注意事項反映該機構批准用於人類或獸醫給藥的藥物的形式。例如，該注意事項可以是美國食品和藥物管理局批准用於處方藥的標記，或批准的產品插頁。還可以製備在相容的藥物載體中配製的含有本文提供的化合物的組合物，將其置於合適的容器中，並標記用於治療指定的病症。 實施例
以下具體和非限制性實施例僅用於說明，而不以任何方式限制本發明。在沒有進一步詳細闡述的情況下，相信所屬技術領域之通常知識者可以基於本文的描述最大程度地利用本發明。本文引用的所有出版物均通過引用整體併入本文。當參考URL或其他這樣的標識符或地址時，應當理解，這樣的標識符可以改變，並且網際網路上的特定訊息可以往返，但是藉由搜索網際網路可以找到等效的訊息。對此的引用證明了這種訊息的可用性和公開傳播。
以下實施例以及整個申請中，以下縮寫具有以下含義。如果沒有定義，則這些術語具有它們通常接受的含義。
aq = 水性(aqueous)
Boc = 叔丁氧羰基(tert-butyloxycarbonyl)
t-BuOH = 叔丁醇(tertiary butanol)
DCE = 1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane)
DCM = 二氯甲烷(dichloromethane)
DIAD = 偶氮二甲酸二異丙酯(diisopropyl azodicarboxylate)
DIEA or DIPEA = N,N-二異丙基乙胺(N,N-diisopropylethylamine)
DMAP = 二甲基胺基吡啶(dimethylaminopyridine)
DMF = 二甲基甲醯胺(dimethylformamide)
DMSO = 二甲基亞碸(dimethylsulfoxide)
ESI = 電灑游離法(electron spray ionization)
EA = 乙酸乙酯(ethyl acetate)
g = 克 (gram)
HCl = 氯化氫 (hydrogen chloride)
HPLC = 高效能液相層析法 (high performance liquid chromatography)
hr = 小時 (Hour)
1H NMR = 質子核磁共振法 (proton nuclear magnetic resonance)
IPA = 異丙醇 (isopropyl alcohol)
KOAc = 乙酸鉀 (potassium acetate)
LC-MS = 液相層析質譜儀 (liquid chromatography mass spectroscopy)
M = 莫耳 (molar)
MeCN = 丙酮腈 (acetonitrile)
MeOH = 甲醇 (methanol)
mg = 毫克 (milligram)
min = 分鐘 (minute)
ml = 毫升 (milliliter)
mM = 毫莫耳 (millimolar)
mmol = 毫莫耳 (millimole)
m.p. = 熔點 (melting point)
MS = 質譜 (mass spectrometry)
m/ z = 質荷比 (mass-to-charge ratio)
N = 正常 (normal)
NIS = N-碘代丁二醯亞胺(N-iodosuccinimide)
nM = 奈米莫耳 (nanomolar)
nm = 奈米 (nanometer)
Pd(dppf)Cl 2 = [1,1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯鈀(II) [1,1’-Bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II)
PE = 石油醚 (petroleum ether)
PyBOP = 苯並三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate)
quant. = 定量 (quantitative)
RP = 反相 (reverse phase)
rt or r.t. = 室溫 (room temperature)
Sat. = 飽和 (saturated)
TEA = 三乙胺 (triethylamine)
TFA = 三氟乙酸 (trifluoroacetic acid)
L = 微升 (microliter)
M = 微莫耳 (Micromolar)
通用合成方案 I 其中L 3、R 1、R 4、R 5和R 7如本文所述。 中間體的合成 中間體 6 (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 甲氧基苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl(S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)-5- methoxyphenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate） 步驟 1 ： (3- 胺基 -5- 甲氧基苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯(tert-butyl (3-amino-5-methoxyphenethyl)carbamate)
在25℃下，向Ni (723.77 毫克，12.33毫莫耳，1當量)的THF (50毫升)溶液中加入2-(3-胺基-5-甲氧基苯基)乙腈(2克，12.33毫莫耳，1當量)(Boc)2O (2.69克，12.33 毫莫耳，2.83毫升，1當量) DIPEA (3.19克，24.66 毫莫耳，4.30毫升，2當量)。在25℃和50 psi的H 2下攪拌混合物2小時。TLC顯示檢測到了一個極性較大的主要新斑點。粗製混合物在減壓下濃縮。粗產物透過矽膠硫醇色層分析（chromatography on silica thiol gel）來純化(石油醚/EtOAc = 3/1)。得到 (3-胺基-5-甲氧基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.3克，4.88毫莫耳，收率：39.58%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 6.81 (br t, J= 5.4 Hz, 1H), 6.00 - 5.96 (m, 2H), 5.92 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.11 - 3.01 (m, 2H), 2.49 - 2.45 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)。 步驟 2 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 甲氧基苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl(3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)-5-methoxyphenethyl)carbamate）
向(3-胺基-5-甲氧基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.65克，7.51毫莫耳，1當量)、3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(2克，7.51 毫莫耳，1當量)的872-50-4 (5毫升)溶液中加入DIPEA (19.41克，150.19 毫莫耳，26.16 毫升，20當量)，將混合物在N 2下於140℃攪拌24小時。LCMS顯示反應完成。將反應物倒入水(30毫升)中，用EtOAc(20毫升*3)萃取。合併有機層後，用水(50毫升*2)和飽和鹽水(100毫升)清洗，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷=2/1/1)。得到(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-甲氧基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.93克，4.01毫莫耳，收率：53.40%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ = 11.27 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.92 (br t, J = 5.3 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.21 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.30 – 3.26 (m, 2H), 2.81-2.79 (m, 2H) 2.50-2.48(m, 2H),1.42 (s, 9H), 1.32 (t, J = 7.5 Hz, 4H)。LC-MS (ES+, m/z): 351.4[(M+H) +]; Rt=0.824 分鐘。 步驟 3 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 )-5- 甲氧基苯基 ) 胺基 )-5- 氯 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)-5-methoxyphenyl)amino)-5-chloro-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-甲氧基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.93克，3.43 毫莫耳，純度：80%，1當量)溶解於HCl/EtOAc(100毫升)中，將混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。透過過濾處理粗製混合物。將粗產物透過在25℃下用EtOAc(20 毫升)重結晶純化，得到3-((3-(2-胺基乙基)-5-甲氧基苯基)胺基)-5-氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.3克，3.30 毫莫耳，收率：96.11%，HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 350.1[(M+H) +]; Rt=0.698 分鐘。 注意：HCl/EtOAc(4M)：HCl在0℃下鼓泡導入到EtOAc溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/EtOAc(4M)。 步驟 4 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 甲氧基苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙烷 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl(S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)-5-methoxyphenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向3-((3-(2-胺基乙基)-5-甲氧基苯基)胺基)-5-氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.3克，3.65 毫莫耳，純度：98.2%，1當量)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(1.11克，5.47 毫莫耳，1.5當量)的DMF(10毫升)溶液中加入BOP (1.54克，5.47 毫莫耳，1.5當量)、DIPEA (3.00克，36.49 毫莫耳，2.91 毫升，10當量)，將混合物在N 2下於25℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 1/2)。得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-甲氧基苯乙基)胺基)-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(1.84g，2.48 毫莫耳，收率：67.85%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ = 11.22 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.81 (br s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 4.55-4.52 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.30 - 3.24 (m, 2H), 2.90 - 2.78 (m, 2H), 2.74 - 2.66 (m, 5H), 1.36 (br s, 9H), 1.28 - 1.11 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 435.2[(M+H) +]; Rt=0.884 分鐘; HRMS:435.1911。 中間體 7 (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙烷 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl(S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino) phenethyl)amino)-1-oxpropan-2-yl)(methyl)carbamate） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2- yl)amino) phenethyl)carbamate）
向(3-胺基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2.25克，9.52 毫莫耳，1當量) 3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(2.10克，9.52 毫莫耳，1當量)溶解於二惡烷(20毫升)中，在25℃下加入DIPEA (12.31克，95.21 毫莫耳，16.58 毫升，10當量)。將混合物在130℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(40毫升)中，用EtOAc(20毫升*2)萃取。有機層用水(40毫升*2)和飽和鹽水(80毫升*2)清洗，在無水Na 2SO 4乾燥、過濾、減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠色層分析 (石油醚/EtOAc = 1:1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(3克，4.79毫莫耳，收率：50.27%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 420.2 [(M+H) +]; Rt=0.939 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 氯 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-5-chloro-6-ethylpyrazine -2-carboxamide）
將混合物N-[2-[3-[(3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基-吡嗪-2-基)胺基]苯基]乙基]胺基甲酸叔丁酯(2克，4.76 毫莫耳，1當量)和HCl/EtOAc(4M，50毫升，41.99當量)在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc =1:1)，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.38克，4.32 毫莫耳，收率：90.60%)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 320.2[(M+H) +]; Rt=0.671 分鐘。 注意：HCl/EtOAc(4M)：HCl在0℃下鼓泡導入到EtOAc溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/EtOAc(4M)。 步驟 3 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (S)-(1-((3-((3- carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
在25℃，向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.38克，4.32毫莫耳，1當量)、TCFH(1.82克，6.47毫莫耳，1.5當量)、NMI (3.54克，43.15 毫莫耳，10當量)的DMF(15毫升)溶液中，加入N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(1.32克，6.47毫莫耳，1.5當量)。將混合物在25℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水中(30毫升)，用EtOAc(15毫升*2)萃取。有機層用水(30毫升*2)和飽和鹽水(30毫升*2)清洗，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾、減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 1:1)，得到N-[(1S)-2-[2-[3-[(3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基-吡嗪-2-基)胺基]苯基]乙基胺基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-胺基甲酸叔丁酯(2.55克，粗製)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 505.2[(M+H) +]; Rt=7.177 分鐘。 中間體 8 (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙烷 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯(tert-butyl (S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2- yl)amino)-5-fluorophenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate) 步驟 1 ： (3- 溴 -5- 氟苯基 ) 甲醇（3-bromo-5-fluorophenyl)methanol）
向3-溴-5-氟苯甲酸(50克，228.30 毫莫耳，1當量)在0℃下的THF (500 毫升)溶液中，加入BH 3.THF (1M，570.76毫升，2.5當量)。將混合物升溫至25℃持續4小時。LCMS顯示反應完成。在0℃下將反應混合物緩慢加入MeOH (300毫升)中。然後將合併的有機相在70℃攪拌1小時，過濾並在真空下濃縮。將殘餘物傾入EtOAc(500 毫升)和H 2O (1升)中。分離水相，用乙酸乙酯(600毫升*3)萃取。將合併的有機相用飽和鹽水(600毫升*3)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到(3-溴-5-氟苯基)甲醇(50克，粗製)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.49 - 7.36 (m, 2H), 7.17 (dd, J = 1.0, 9.7 Hz, 1H), 5.45 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 5.8 Hz, 2H)。LC-MS (ES +, m/z): 202.9[(M-H) -]; Rt=1.493 分鐘。 步驟 2 ： 1- 溴 -3-( 溴甲基 )-5- 氟苯 （1-bromo-3-(bromomethyl)-5-fluorobenzene）
向(3-溴-5-氟-苯基)甲醇(50g，243.87 毫莫耳，1當量)的DCM (500毫升)溶液中加入PBr 3(132.03g，487.75 毫莫耳，2 當量)，將混合物在25℃和N 2氣氛下攪拌2小時。TLC顯示反應完成。濃縮混合物。將殘餘物用飽和NaHCO 3(800 毫升)稀釋，用EtOAc(800毫升*2)萃取，合併有機層，用水(800毫升*2)、飽和鹽水(800毫升)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到1-溴-3-(溴甲基)-5-氟苯(60克，粗製)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.47 (s, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 4.62 (s, 2H)。 步驟 3 ： 2-(3- 溴 -5- 氟苯基 ) 乙腈（2-(3-bromo-5-fluorophenyl)acetonitrile)）
在25℃下，向1-溴-3-(溴甲基)-5-氟苯(50克，186.62 毫莫耳，1當量)和TMSCN (24.07克，242.61 毫莫耳，30.35毫升，1.3當量)在CH 3CN (600毫升)中的溶液中加入TBAF的THF溶液(1M，242.61毫升，1.3當量)。將混合物在25℃攪拌5小時。TLC顯示反應完成。濃縮混合物。殘餘物用H 2O (1000毫升)稀釋，用EtOAc(800毫升*2)萃取，合併有機層，用水(800毫升*2)、飽和鹽水(800 毫升)清洗，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 20/1)，得到2-(3-溴-5-氟苯基)乙腈(29.1克，135.96 毫莫耳，收率：72.85%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.54 (td, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.28 (br d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H)。 步驟 4 ： (3-( 氰基甲基 )-5- 氟苯基 ) 胺基甲酸叔丁酯(tert-butyl (3-(cyanomethyl)-5-fluorophenyl)carbamate)
將2-(3-溴-5-氟苯基)乙腈(10克，46.72毫莫耳，1當量)、胺基甲酸叔丁酯(8.21克，70.08毫莫耳，1.5當量)、t-Bu Xphos (991.99 毫克，2.34 毫莫耳，0.05當量)、tBuXPhos Pd G3 (1.86克，2.34 毫莫耳，0.05 當量)和Cs 2CO 3(30.45克，93.44 毫莫耳，2 當量)在甲苯(100毫升)中的混合物脫氣，用氮氣吹掃3次，然後將混合物在100℃和N 2氣氛下攪拌10小時。LC-MS顯示反應完成。過濾反應混合物並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯= 10/1到1/1)純化，得到(3-(氰基甲基)-5-氟苯基)胺基甲酸叔丁酯(9克，35.96 毫莫耳，收率：76.97%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.70 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.25 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 6.77 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 1.48 (s, 9H)。LC-MS (ES +, m/z): 251.2 [(M+H) +]; Rt=0.795 分鐘。 步驟 5 ： 2-(3- 胺基 -5- 氟苯基 ) 乙腈（2-(3-amino-5-fluorophenyl)acetonitrile）
將N-[3-(氰基甲基)-5-氟-苯基]胺基甲酸叔丁酯(9克，35.96 毫莫耳，1當量)在HCl/EtOAc(4M，99.96毫升，11.12當量)中的混合物在25℃攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。將反應液注入飽和Na 2CO 3(50毫升)中，用EA 150毫升 (50毫升*3)萃取。將合併的有機層用飽和鹽水60毫升 (20毫升*3)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並減壓濃縮，得到2-(3-胺基-5-氟苯基)乙腈(4.3克，粗製)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 151.2[(M+H) +]; Rt=0.120 分鐘。 注意：HCl/EtOAc(4M)：HCl在0℃下鼓泡到EtOAc溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/EtOAc(4M)。 步驟 6 ： 3-(2- 胺基乙基 )-5- 氟苯胺（3-(2-aminoethyl)-5-fluoroaniline）
在N 2氣氛下，向2-（3-胺基-5-氟-苯基）乙腈（4.3克，28.64毫莫耳，1當量）和NH 3.H 2O（4.55克，45.44毫莫耳，5.00毫升，純度：35％，1.59當量）在THF（100毫升）中的溶液中加入雷氏鎳(Raney-Ni)（15.00克，175.08毫莫耳，6.11當量）。將懸浮液脫氣並用H 2吹掃3次。將混合物在50Psi的氫氣（57.85毫克，28.64毫莫耳，1當量）下在25°C攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到3-（2-胺基乙基）-5-氟苯胺（4.3克，粗製），其為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z):155.1[(M+H) +]; Rt=0.146 分鐘。 步驟 7 ：（ 3- 胺基 -5- 氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-amino-5-fluorophenethyl)carbamate）
將3-（2-胺基乙基）-5-氟苯胺（4.3克，27.89毫莫耳，1當量），（Boc） 2O（6.09克，27.89毫莫耳，6.41毫升，1當量），DIPEA （7.21克，55.78毫莫耳，9.72mL，2當量）於DCM（50毫升）中的混合物脫氣並用N 2吹掃3次，然後將混合物在25°C下在N 2氣氛下攪拌10小時。LC-MS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮以除去DCM。將殘餘物用H 2O 10毫升稀釋並用EA（30毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（100毫升*1）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至1/1）純化，得到N-[2-（3-胺基-5-氟-苯基）乙基]胺基甲酸叔丁酯（3.4克，13.37毫莫耳，收率：47.94%），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.91 - 6.76 (m, 1H), 6.24 - 6.03 (m, 3H), 5.37 - 5.25 (m, 2H), 3.19 - 3.15 (d, 1H), 3.11 - 3.03 (m, 2H), 2.57 - 2.52 (m, 1H), 1.42 - 1.34 (m, 9H)。LC-MS (ES +, m/z): 155.2[(M+H-100) +], 199.2[(M+H-56) +]; Rt=0.666 分鐘。 步驟 8 ：（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基） -5- 氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯(tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)- 5-fluorophenethyl)carbamate)
向（3-胺基-5-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（2克，7.86毫莫耳，1當量）和3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（1.73克，7.86毫莫耳，1當量）在NMP（4毫升）的溶液中加入DIPEA（40.66克，314.59毫莫耳，54.80毫升，40當量）。將混合物在140°C攪拌36小時。LC-MS顯示反應完成。將反應混合物倒入H 2O（15毫升）中，過濾得到殘餘物。將殘餘物用EA 15毫升稀釋並倒入H 2O 15毫升中，然後用EA（15毫升*3）萃取。分離有機相，用飽和鹽水（10毫升*3）洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥、過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/1）純化，得到（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（1.78克，3.13毫莫耳，收率：39.86%，純度：77.12％），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.36 (s, 1H), 8.30 (br s, 1H), 8.09 (br s, 1H), 7.65 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.87 (br t, J = 5.0 Hz, 1H), 6.71 (br d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.19 - 3.13 (m, 2H), 2.83 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.69 (br t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.26 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。LC-MS (ES +, m/z): 438.2[(M+H) +]; Rt=0.914 分鐘; 純度：77.12%。 步驟 9 ： 3- （（ 3- （ 2- 胺基乙基） -5- 氟苯基）胺基） -5- 氯 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)-5-fluorophenyl)amino)-5-chloro-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
將（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（1.3克，2.97毫莫耳，1當量）在HCl/MeOH （4M，50毫升，67.37當量）中的溶液於25°C攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到殘餘物，得到3-（（3-（2-胺基乙基）-5-氟苯基）胺基）-5-氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（1克，粗製，HCl），為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 338.2 [(M+H) +]; Rt=0.710 分鐘。 注意：HCl/甲醇（4M）：在0°C下將HCl 鼓泡導入到溶液中0.5小時。 步驟 10 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙烷 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸酯的叔丁酯（tert-butyl (S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)- 5-fluorophenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向3-（（3-（2-胺基乙基）-5-氟苯基）胺基）-5-氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（1克，2.96毫莫耳，1當量）和N-（叔丁氧基羰基）-N-甲基-L -丙氨酸（902.52毫克，4.44毫莫耳，1.5當量）在DMF（15毫升）中的溶液中加入1-甲基-1H-咪唑（2.43克，29.61毫莫耳，2.36毫升，10當量）和氯- N,N,N’,N’-四甲基甲醯胺六氟磷酸鹽（1.25克，4.44毫莫耳，1.5當量）。將混合物在25°C下攪拌10小時。LC-MS顯示反應完成。將反應混合物倒入H 2O（15毫升）中並用EA （10毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（10毫升*3）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/5）純化，得到（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-氟苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（1.5克，2.87毫莫耳，收率：96.88%），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.42 - 11.35 (m, 1H), 8.38 - 8.05 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.82 (br t, J = 5.1 Hz, 1H), 7.70 - 7.61 (m, 1H), 7.08 - 7.00 (m, 1H), 6.76 - 6.70 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 2.89 (s, 2H), 2.87 (s, 2H), 2.73 (s, 2H), 1.35 (br s, 9H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.22 - 1.16 (m, 3H)。LC-MS (ES +, m/z): 415.1 [(M+H) +]; Rt=1.901 分鐘, 純度：99.09%;HRMS:415.2488。 中間體 9 3,5- 二氯 -6- 乙基 -N- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺 步驟 1 ： 3,5- 二氯 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲酸甲酯( methyl3,5-dichloro-6-ethylpyrazine-2-carboxylate)
將3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-甲醯胺（15克，68.16毫莫耳，1.0當量），HCl/MeOH （4M，350.03毫升，20.54當量）的混合物在90°C攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物濃縮。將殘餘物用飽和NaHCO 3（500毫升）稀釋並用EtOAc（400毫升*2）萃取。合併有機層，用水（300毫升*2）、飽和鹽水（300毫升）洗滌，用無水Na 2CO 3乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚/乙酸乙酯=100/1）TLC （板1）Rf =0.67）得到3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-甲酸甲酯（13g，55.30毫莫耳，收率：81.13%），其為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 235.1 [(M+H) +]; Rt=0.830 分鐘。 注意：HCl/甲醇（4M）：在0°C下將HCl 鼓泡到溶液中持續0.5小時。 步骤 2 ： 3,5- 二氯 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲酸（3,5-dichloro-6-ethylpyrazine-2-carboxylic acid）
3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-甲酸甲酯(4.8克，20.42 毫莫耳，1.0 當量)在HCl (12M，671.40毫升，131.52當量)中的混合物。LCMS顯示反應完成。將反應物傾入H 2O (100毫升)中。水相用乙酸乙酯(50毫升*3)萃取。用飽和鹽水(100毫升*1)洗滌合併的有機相，用無水Na 2SO 4乾燥。過濾並真空濃縮，得到3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-甲酸(3克，13.57 毫莫耳，收率：66.47%)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 221.1 [(M+H) +]; Rt=0.688 分鐘。 步驟 3 ： 3,5- 二氯 -6- 乙基吡嗪 -2- 碳醯氯（3,5-dichloro-6-ethylpyrazine-2-carbonyl chloride）
向3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-羧酸(1克，4.52 毫莫耳，1.0 當量)的DCM(10毫升)混合物中加入DMF(16.53毫克，226.20微莫耳，0.05 當量)，最後一次性加入(COCl) 2(1.15克，9.05 毫莫耳，2.0 當量)，在0℃和N 2下反應1小時。TLC顯示反應完成。將殘餘物真空濃縮，得到3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-甲醯氯(0.8克，3.34 毫莫耳，收率：73.84%)，為黃色固體。 步驟 4 ： 3,5- 二氯 -6- 乙基 -N- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3,5-dichloro-6-ethyl- N-methylpyrazine-2-carboxamide）
將3,5-二氯-6-乙基-吡嗪-2-碳醯氯(0.8克，3.34毫莫耳，1.0當量)、甲胺；鹽酸鹽(451.08 毫克，6.68 毫莫耳，2.0 當量)和DIPEA (2.16g，16.70 毫莫耳，5.0當量)溶解於DCM (10毫升)溶液。將混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應物傾入H 2O (50毫升)中。水相用乙酸乙酯(10毫升*3)萃取。用飽和鹽水(50毫升*1)洗滌合併的有機相，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並真空濃縮。殘餘物透過矽膠色層分析法純化(柱高：250 mm，直徑：100 mm，100-200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=1/1、10/1)，得到3,5-二氯-6-乙基-N-甲基-吡嗪-2-甲醯胺(500 毫克，2.14 毫莫耳，收率：63.94%)，為棕色固體。LC-MS (ES +, m/z): 234.1 [(M+H) +]; Rt=0.705 分鐘。 中間體 10 (E)-N-(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸（(E)-N-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)-N-methyl-L-alanine） 步驟 1 ： N-(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸叔丁酯（tert-butyl (E)-N-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)-N-methyl-L-alaninate）
在25℃下，向甲基-L-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽(3克，15.33 毫莫耳，1當量)、( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(2.79克，16.86 毫莫耳，1.1當量)、EDCI (4.41克，23.00 毫莫耳，1.5 當量)、HOBt (2.07克，15.33 毫莫耳，1當量)的DMF (30毫升)溶液中加入DIPEA (19.81克，153.31 毫莫耳，26.70 毫升，10 當量)。將混合物在25℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(100毫升)中，用EtOAc(60毫升*2)萃取。有機層用水(60毫升*2)、飽和鹽水(60毫升*2)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾、減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(二氯甲烷：甲醇= 10:1)，得到(E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(2.75克，9.56 毫莫耳，收率：62.37%，純度：94%)，為黑褐色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 217.3[(M+H) +]; Rt=0.556 分鐘。 步驟 2 ： (E)-N-(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸（ (E)-N-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)-N-methyl-L-alanine）
在25℃下，向(E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(1克，3.70 毫莫耳，1當量) TFA (7.70克，67.53 毫莫耳，5毫升，18.26 當量)的DCM (10毫升)溶液中攪拌混合物2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到(E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸(760毫克，粗製)，為黑褐色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 215.2[(M+H) +]; Rt=0.339 分鐘。 中間體 11 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺 . 鹽酸（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-5-(dimethylamino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide.HCl） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6-( 二甲基胺基 )-5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-(dimethylamino)-5-ethylpyrazin-2- yl) amino)phenethyl)carbamate）
在25℃下，將(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(3克，7.14 毫莫耳，1當量)、DIEA (9.23克，71.44 毫莫耳，12.44毫升，10當量)、N-甲基甲胺(3.22克，39.50 毫莫耳，3.62毫升，5.53當量，HCl)溶解於DMA(20毫升)的溶液中，將混合物在100℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應液倒入水(50毫升)中，用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 1/1)，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.34克，3.13 毫莫耳，收率：43.77%)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 429.3[(M+H) +]; Rt=0.929 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-5-(dimethylamino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
將(3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.3克，3.03 毫莫耳，1當量)、HCl/EtOAc(4M，30毫升，39.56 當量)的混合物在25℃攪拌3小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(二甲基胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(900毫克，粗製，HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 329.4[(M+H) +]; Rt=0.641 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl氣體在0℃下鼓泡進入MeOH溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 中間體 12 (S)-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2- yl)amino)phenethyl)carbamate）
在25℃下，向(3-胺基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2克，8.46毫莫耳，1當量)、3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.86克，8.46毫莫耳，1當量)在NMP(5毫升)的溶液的混合物中加入DIPEA (21.88g，169.27 毫莫耳，29.48 毫升，20當量)，將混合物在140℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應物倒入H 2O (50毫升)中。水相用乙酸乙酯(20毫升*3)萃取。合併的有機相用飽和鹽水(50毫升*1)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。將殘餘物透過矽膠色譜(柱高：250 mm，直徑：100 mm，100-200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=1/1、10/1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(3.5克，6.67 毫莫耳，收率：78.79%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.19 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.59 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 2H), 6.93 - 6.83 (m, 2H), 3.16 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.82 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.28 - 1.24 (m, 3H) LC-MS (ES+, m/z): 420.3[(M+H) +]; Rt=0.941 分鐘。 步驟 2 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl(methyl)amino)pyrazin- 2-yl)amino)phenethyl)carbamate）
在20℃下，向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(400毫克，952.60微莫耳，1當量)和N-甲基丙烷-2-胺(696.70毫克，9.53毫莫耳，992.44微升，10 當量)在DMA (10毫升)中的溶液中加入DIPEA (123.12毫克，952.60 微莫耳，165.93微升，1當量)，將混合物在密封管中在100℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應液倒入水(30毫升)中，用EtOAc(30毫升*2)萃取。合併有機層，用水(15毫升*2)、飽和鹽水(10毫升)洗滌，乾燥(Na 2SO 4)，過濾並濃縮，得到粗產物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 1/2)，得到(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(350 毫克，766.57微莫耳，收率：80.47%)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 457.5[(M+H) +]; Rt=0.992 分鐘。 步驟 3 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(350毫克，766.57微莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，10.94毫升，57.07當量)的溶液在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(260 毫克，粗製)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 357.3 [(M+H) +]; Rt=0.716 分鐘。 注意：在0℃下將HCl/MeOH (4M)：HCl氣體鼓泡到MeOH溶液中0.5小時，然後稱重該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 步驟 4 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl(methyl)-amino)- pyrazin-2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(260 毫克，729.39微莫耳，1當量)、NMI (598.85 毫克，7.29 毫莫耳，581.41微升，10 當量)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(222.36 毫克，1.09 毫莫耳，1.5 當量)的DMF (3毫升)溶液中加入TCFH (306.98 毫克，1.09 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應液倒入水(15毫升)中，用EtOAc(10毫升*2)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(5毫升)洗滌，乾燥(Na 2SO 4)，過濾並濃縮，得到粗產物。粗產物透過矽膠色譜(石油醚/EtOAc = 1/1) TLC(板1 Rf = 0.75)純化，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(350 毫克，646.13微莫耳，收率：88.59%)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 542.4 [(M+H) +]; Rt=0.945 分鐘。 步驟 5 ： (S)-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 )- 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl)-amino)pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(350毫克，646.13微莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，10毫升，61.91當量)的混合物在15℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到(S)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(270毫克，粗製)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 442.3 [(M+H) +]; Rt=0.726 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl氣體在0℃下鼓泡進入MeOH溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 中間體 13 (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-methylpyrazin-2-yl)amino)- phenethyl)carbamate） 步驟 1 ： 3,5- 二氯 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺 （3,5-dichloro-6-methylpyrazine-2-carboxamide）
在25℃下，向3,5-二氯-2-甲基吡嗪(8克，49.08毫莫耳，1當量)的甲醯胺(53.05克，1.18莫耳，46.95毫升，24 當量)溶液中，在90℃下分批加入Na 2S 2O 8(18.70克，78.53毫莫耳，17.00毫升，1.6 當量)，在90℃下攪拌混合物1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(150毫升)中，用DCM (100毫升*2)提取。有機層用水(100毫升*2)、飽和鹽水(100毫升*2)洗滌，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 3:1)，得到3,5-二氯-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(3克，14.56毫莫耳，收率：29.67%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.27 - 8.13 (m, 1H), 8.02 (br s, 1H), 2.67 (s, 3H); LC-MS (ES+, m/z): 206.2 [(M+H) +]。Rt=0.627 分鐘。 步骤 2 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-methylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
在16℃下，向3,5-二氯-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(5.3克，25.72毫莫耳，1當量)、(3-胺基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(6.08克，25.72 毫莫耳，1當量)在NMP (50毫升)溶液中加入DIPEA (66.49克，514.49 毫莫耳，89.61毫升，20當量)。將混合物在140℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(150毫升)中，用EtOAc(100毫升*2)萃取。有機層用水(100毫升*2)、飽和鹽水(100毫升*2)洗滌，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠色譜(石油醚/EtOAc =1:1) TLC(板1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(6克，14.78 毫莫耳，收率：57.47%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 406.2 [(M+H) +]。RT=0.880 分鐘。 中間體 14 (S)-5- 環丙基 -6- 甲基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-cyclopropyl-6-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-methylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
在16℃下，向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(3.47克，8.55毫莫耳，1當量)、環丙基硼酸(7.34克，85.49毫莫耳，10當量)、K 2CO 3(3.54克，25.65毫莫耳，3當量)在DMA(24毫升)和H 2O(12毫升)中的溶液中，加入Pd(dppf)Cl 2(625.57毫克，854.94微莫耳，0.1當量)。在N 2氣氛下，在100℃攪拌混合物15小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物溶於DCM(40 毫升)中，加入清除劑(Pd)，然後在25℃攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水(120毫升)中，用EtOAc(80 毫升*2)萃取。有機層用水(80 毫升*2)、飽和鹽水(80 毫升*2)洗滌，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc =1:1)，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.9克，4.62毫莫耳，收率：54.01%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 412.2 [(M+H) +]。RT=0.893 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl) amino)-5-cyclopropyl-6-methylpyrazine- 2-carboxamide）
將(3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.9克，4.62毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，50毫升，43.32當量)的混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-環丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(1.8克，粗製)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 312.2 [(M+H) +]; RT=0.643 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：在0℃下將HCl鼓泡到MeOH溶液中0.5小時。 步驟 3 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-methylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(1.16克，5.69毫莫耳，1.1當量)的DMF (15毫升)溶液中加入DIPEA (6.69克，51.75毫莫耳，10當量)、3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-環丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(1.8克，5.17毫莫耳，1當量，HCl)，然後在0℃下加入BOP (3.43克，7.76毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(80毫升)中，用EtOAc(50毫升*2)萃取。有機層用水(50毫升*2)和飽和鹽水(50毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚：乙酸乙酯=2:1)，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(2.42克，4.87 毫莫耳，收率：94.17%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 497.3 [(M+H) +]; RT=0.860 分鐘。 步驟 4 ： ( S )-5- 環丙基 -6- 甲基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-cyclopropyl-6-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(1.5克，3.02毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，50毫升，66.21當量)的混合物在16℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到(S)-5-環丙基-6-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(1.23克，粗製)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 397.3 [(M+H) +]; RT=0.680 分鐘。 中間體 15 (S)-5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-6- 甲基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： 3,5- 二氯 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3,5-dichloro-6-methylpyrazine-2-carboxamide）
在25℃下，向3,5-二氯-2-甲基吡嗪(8克，49.08 毫莫耳，1當量)的甲醯胺(53.05克，1.18莫耳，46.95毫升，24 當量)溶液中，在90℃下分批加入Na 2S 2O 8(18.70克，78.53毫莫耳，17.00毫升，1.6當量)，在90℃下攪拌混合物1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(150毫升)中，用DCM (100毫升*2)萃取。有機層用水(100毫升*2)、飽和鹽水(100毫升*2)洗滌，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 3:1)，得到3,5-二氯-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(3克，14.56 毫莫耳，收率：29.67%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 8.27-8.13 (m, 1H), 8.02 (br s, 1H), 2.67 (s, 3H)；LC-MS (ES+, m/z): 206.2 [(M+H) +]。Rt=0.627 分鐘。 步驟 2 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-methylpyrazin-2-yl)amino)- phenethyl)carbamate（
在25℃下，向3,5-二氯-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(1.7克，8.25 毫莫耳，1當量)(3-胺基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.95克，8.25 毫莫耳，1當量)在NMP(30毫升)中的溶液中加入DIPEA(31.99克，247.54 毫莫耳，43.12毫升，30當量)。將混合物在140℃攪拌15小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(100毫升)中，用EtOAc(60毫升*2)萃取。有機層用水(60毫升*2)、飽和鹽水(60毫升*2)洗滌，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠色譜(石油醚/EtOAc = 1:1) TLC純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2.52克，6.21毫莫耳，收率：75.25%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 406.3 [(M+H) +]。 Rt=0.893 分鐘。 步驟 3 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-(isopropyl (methyl) amino)-5-methylpyrazin- 2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
在100毫升高壓釜中，將(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2.5克，6.16 毫莫耳，1當量)在具有N-甲基丙烷-2-胺(2.25克，30.80毫莫耳，3.21毫升，5當量)、DIEA (7.96克，61.59毫莫耳，10.73毫升，10當量)飽和的DMA(30毫升)溶液中在100℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。透過添加水(400毫升)使反應液驟冷，然後用EtOAc(300毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(350毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至1/1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-(異丙基(甲基)胺基)-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯，為黃色固體(9克，18.30毫莫耳，收率：74.29%，純度：90%)， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.10 (s, 1H), 7.77 (br d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.61 - 7.53 (m, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 2H), 7.23 - 7.15 (m, 1H), 6.95 - 6.82 (m, 1H), 6.81 - 6.75 (m, 1H), 4.40 - 4.30 (m, 1H), 3.16 - 3.09 (m, 2H), 2.94 - 2.85 (m, 3H), 2.69 - 2.63 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.39 - 1.32 (m, 9H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 6H) LC-MS (ES +, m/z): 443.3 [(M+H) +]; Rt =0.947 分鐘。 步驟 4 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl) amino)-5-(isopropyl (methyl) amino)-6- methylpyrazine-2-carboxamide）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-(異丙基(甲基)胺基)-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(9克，20.34毫莫耳，1當量)的混合物中加入HCl/MeOH (4M，100毫升)，在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物用EtOAc在25℃研磨10分鐘，然後過濾，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(異丙基(甲基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(7.7克，18.29毫莫耳，收率：89.94%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.13 (s, 1H), 8.12 - 8.00 (m, 3H), 7.93 - 7.67 (m, 1H), 7.60 - 7.36 (m, 3H), 7.28 - 7.23 (m, 1H), 6.88 - 6.83 (m, 1H), 4.36 - 4.28 (m, 1H), 3.07 - 2.99 (m, 2H), 2.91 - 2.85 (m, 5H), 2.44 (s, 3H), 1.23 - 1.19 (m, 6H)(HCl 鹽)。LC-MS (ES +, m/z): 343.2 [(M+H) +]; Rt =0.691 分鐘。 注意：HCl/EtOAc(4M)：HCl在0℃下鼓泡到EtOAc溶液中0.5小時，然後稱重溶液，得到HCl/EtOAc(4M)。 步骤 5 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6-( 异丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-(isopropyl (methyl) amino)-5- methylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(2.49克，12.27 毫莫耳，1.2當量)、1-甲基咪唑(8.39克，102.21毫莫耳，8.15毫升，10當量)的DMF(35毫升)溶液中加入3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(異丙基(甲基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(3.5克，10.22 毫莫耳，1當量)，然後加入TCFH(3.44克，12.27毫莫耳，1.2當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。通過加入水(120毫升)淬熄反應混合物，然後用EtOAc(100毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(150毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1)純化，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-(異丙基(甲基)胺基)-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(4.1克，7.38 毫莫耳，收率：72.22%，純度：95%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.11 (s, 1H), 7.84 - 7.73 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.24 - 7.14 (m, 1H), 6.83 - 6.75 (m, 1H), 4.41 - 4.31 (m, 1H), 4.04 - 4.01 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 2H), 2.93 - 2.86 (m, 3H), 2.72 - 2.65 (m, 5H), 2.46 - 2.41 (m, 3H), 1.42 - 1.32 (m, 9H), 1.17 (s, 9H)。LC-MS (ES +, m/z): 528.4 [(M+H) +]; Rt =0.902 分鐘。 步驟 6 ： (S)-5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-6- 甲基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-(isopropyl (methyl) amino)-6-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-(異丙基(甲基)胺基)-5-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(4.1克，7.77 毫莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，21.67毫升，11.15 當量)的混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。濃縮粗產物，得到(S)-5-(異丙基(甲基)胺基)-6-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(4.1克，粗製，HCl) 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.14 - 11.05 (m, 1H), 9.49 - 9.38 (m, 1H), 8.90 - 8.78 (m, 1H), 8.76 - 8.70 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 7.23 - 7.18 (m, 1H), 6.82 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.71 - 6.64 (m, 2H), 4.30 (s, 1H), 3.73 - 3.65 (m, 1H), 3.45 - 3.33 (m, 2H), 3.16 - 3.16 (m, 3H), 2.91 - 2.88 (m, 3H), 2.77 - 2.71 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.33 - 1.29 (m, 3H), 1.22 - 1.18 (m, 6H)。LC-MS (ES +, m/z): 428.3 [(M+H) +]; Rt =0.693 分鐘; 純度：95.9%。 注意：在0℃下將HCl/EtOAc(4M)：HCl鼓泡導入到EtOAc溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/EtOAc(4M)。 實施例 1 （化合物 137 ）（ S, E)-5- （二甲基氨基） -3-((3-(2-(2-(4- （二甲基氨基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）氨基） -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1:(S)-(1-((3-((3- 氨基甲醯基 -6- （二甲基氨基） -5- 乙基吡嗪 -2- 基）氨基）苯乙基）氨基） -1- 氧代丙 -2- 基）（甲基）氨基甲酸叔丁酯（tert-butyl(S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-(dimethylamino)-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
在25℃下，向(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(600 毫克，1.19 毫莫耳，1當量)、Me 2NH (968.83 毫克，11.88 毫莫耳，10 當量，HCl)在DMA (6毫升)中的溶液中加入DIPEA (1.54克，11.88 毫莫耳，10 當量)。將混合物在100℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(20毫升)中，用EtOAc(15毫升*2)萃取。有機層用水(15毫升*2)、飽和鹽水(15毫升*2)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物通過製備HPLC柱純化：C18-1150 *30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-80%，8分鐘，得到N-[(1S)-2-[2-[3-[ [3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基-吡嗪-2-基]胺基]苯基]乙基胺基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-胺基甲酸叔丁酯(251 毫克，449.58毫莫耳，收率：37.84%)，為棕色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 10.67 (s, 1H), 7.65 - 7.39 (m, 4H), 7.17 - 7.12 (m, 2H), 6.74 - 6.71 (m, 1H), 4.17 - 3.94 (m, 1H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.72 - 2.68 (m, 4H), 2.60 (s, 3H), 1.34 (s, 9H), 1.24 (br d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.21 - 1.19 (m, 3H); LC-MS (ES +, m/z): 514.3[(M+H) +]; Rt=0.872 分鐘。 步驟 2 ： (S)-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(251毫克，488.68毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，50毫升，409.27當量)的混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到(S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(230 毫克，粗製)，為棕色固體。LC-MS (ES +, m/z): 414.3[(M+H) +]; Rt=0.684 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl氣體在0℃下鼓泡進入MeOH溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 步驟 3 ： (S, E)-5-( 二甲胺基 )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
在25℃下，向( S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(230毫克，556.21毫莫耳，1當量)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(138.18毫克，834.31毫莫耳，1.5當量)、BOP (369.00毫克，834.31毫莫耳，1.5當量)的DMF (4毫升)溶液中加入DIPEA (718.86 毫克，5.56 毫莫耳，10 當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物透過製備HPLC柱純化：C18-1150 *30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5% -50%，8分鐘，得到(S, E)-5-(二甲胺基)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(155.89 毫克，293.50毫莫耳，收率：52.77%，純度：98.78%)，為棕色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6,TFA) δ = 11.15 - 11.07 (m, 1H), 9.76 - 9.63 (m, 1H), 8.10 - 7.85 (m, 1H), 7.76 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.40 (m, 3H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 6.86 - 6.76 (m, 2H), 6.64 - 6.46 (m, 1H), 5.01 - 4.51 (m, 1H), 3.95 - 3.78 (m, 2H), 3.32 - 3.26 (m, 2H), 3.07 (s, 6H), 2.90 (s, 2H), 2.80 - 2.67 (m, 11H), 1.30 - 1.21 (m, 6H); LC-MS (ES +, m/z): 525.3[(M+H) +]; Rt=2.099 分鐘; 純度：98.777%; HRMS (EI): m/z [M+H]+ 實測值: 525.3279。 實施例 2 ( 化合物 138) (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： ( S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) -amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
在25℃下，向( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(600 毫克，1.19 毫莫耳，1當量)、環丙基硼酸(1.02克，11.88毫莫耳，10當量)、K 2CO 3(492.61毫克，3.56 毫莫耳，3當量)在DMA (4毫升)和H 2O (2毫升)中的溶液中加入Pd (dppf) Cl 2(86.93毫克，118.81毫莫耳，0.1當量)。將混合物在100℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入飽和EDTA (10毫升)、EA (5毫升)中，用EtOAc(5毫升*2)萃取。有機層用水(10毫升*2)和飽和鹽水(10毫升*2)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥後，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過製備HPLC柱純化：C18-1150 *30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35% -80%，8分鐘，得到( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(338毫克，661.93毫莫耳，收率：55.71%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 10.61 - 10.54 (m, 1H), 7.86 - 7.75 (m, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 2H), 7.19 - 7.13 (m, 1H), 6.76 - 6.73 (m, 1H), 6.18 - 5.88 (m, 1H), 5.58 - 5.41 (m, 1H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.58 - 3.41 (m, 2H), 2.84 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.77 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.57 (m, 3H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.36 - 1.32 (m, 9H), 1.25 - 1.17 (m, 6H), 1.17 - 1.11 (m, 2H), 1.06 - 1.00 (m, 2H); LC-MS (ES +, m/z): 511.3[(M+H) +]; Rt=0.924 分鐘。 步驟 2 ： ( S)-5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(338毫克，661.93毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，50毫升，302.15當量)的混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到(S)-5-環丙基-6-乙基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(300毫克，粗製)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z): 411.3[(M+H) +]; Rt=0.707 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl氣體在0℃下鼓泡進入MeOH溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 步驟 3 ： (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
在25℃下，向(S)-5-環丙基-6-乙基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(300毫克，730.80毫莫耳，1當量)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(181.55 毫克，1.10 毫莫耳，1.5當量)、BOP (484.83毫克，1.10毫莫耳，1.5當量)在DMF (4毫升)中的溶液中加入DIPEA (944.50毫克，7.31毫莫耳，10當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物透過製備HPLC柱純化：C18-1150 *30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5%-50%，8分鐘，得到(S, E)-5-環丙基-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(207.25 毫克，395.71毫莫耳，收率：54.15%，純度：99.60%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, D2O) δ = 7.39 - 7.30 (m, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 6.78 - 6.72 (m, 1H), 6.66 - 6.56 (m, 1H), 6.51 - 6.40 (m, 1H), 4.86 - 4.75 (m, 1H), 3.74 - 3.62 (m, 2H), 3.49 - 3.29 (m, 2H), 2.79 - 2.60 (m, 13H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.28 - 1.13 (m, 6H), 1.03 - 0.97 (m, 2H), 0.90 (br s, 2H); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 - 11.00 (m, 1H), 9.74 - 9.59 (m, 1H), 8.21 - 8.12 (m, 1H), 8.07 (br s, 1H), 7.87 - 7.79 (m, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 2H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 6.88 - 6.77 (m, 2H), 6.65 - 6.45 (m, 1H), 5.01 - 4.53 (m, 1H), 3.92 - 3.81 (m, 2H), 3.32 - 3.27 (m, 2H), 2.95 - 2.87 (m, 5H), 2.80 - 2.76 (m, 6H), 2.70 (br s, 2H), 2.35 - 2.31 (m, 1H), 1.31 - 1.20 (m, 6H), 1.14 - 1.05 (m, 4H); LC-MS (ES +, m/z): 522.3[(M+H) +]; Rt=2.171 分鐘; HRMS (EI): m/z [M+H]+實測值: 522.3166。 實施例 3 ( 化合物 142A) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)phenethyl) carbamate）
在25℃下，向(3-胺基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2克，8.46毫莫耳，1當量)、3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.86克，8.46毫莫耳，1當量)在NMP (5毫升)的溶液中的混合物，加入DIPEA (21.88克，169.27 毫莫耳，29.48毫升，20當量)，將混合物在140℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應物傾入H 2O (50毫升)中。水相用乙酸乙酯(20毫升*3)萃取。用飽和鹽水(50毫升*1)洗滌合併的有機相，用無水Na 2SO 4乾燥。過濾並真空濃縮。將殘餘物通過矽膠色譜(柱高：250 mm，直徑：100 mm，100-200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=1/1,10/1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(3.5克，6.67 毫莫耳，收率：78.79%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.19 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.59 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 2H), 6.93 - 6.83 (m, 2H), 3.16 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.82 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.28 - 1.24 (m, 3H) LC-MS (ES+, m/z): 420.3[(M+H) +]; Rt=0.941 分鐘。 步驟 2 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-methylpyrazin-2-yl)amino)phenethyl) carbamate）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1克，2.38 毫莫耳，1當量)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧三硼雜(1.49克，11.91毫莫耳，5當量)在DMA (12毫升)和H 2O (3毫升)中的溶液中加入K 2CO 3(987.41毫克，7.14毫莫耳，3當量)和Pd (dppf) Cl 2(174.26 毫克，238.15毫莫耳，0.1當量)，將混合物在100℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物傾入飽和EDTA (100毫升)和EtOAc(30毫升)中，攪拌60分鐘。濃縮混合物。殘留物用NaHCO 3(50毫升)稀釋，用EtOAc(50毫升*4)萃取。合併有機層，用水(50毫升*2，N-二甲基乙醯胺)、飽和鹽水(50毫升)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。殘餘物用矽膠色層分析法純化(柱高：250 mm，直徑：100 mm，100-200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=1/1,10/1)。得到(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(650毫克，1.63毫莫耳，收率：68.32%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.05 (s, 1H), 8.14 (br d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.86 (br d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.65 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 - 7.42 (m, 1H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.88 - 6.80 (m, 2H),  3.18 - 3.13 (m, 2H), 2.78 - 2.72 (m, 2H), 2.71 - 2.67 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.26 - 1.22 (m, 3H), 1.20 - 1.10 (m, 3H). LC-MS (ES+, m/z): 400.3[(M+H) +]; Rt=0.912 分鐘。 步驟 3 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2- carboxamide）
向(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(650 毫克，1.63 毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (4M，20毫升，49.17 當量)中的混合物中在14℃下反應1小時。LCMS顯示反應完成。過濾並真空濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(450 毫克，1.50 毫莫耳，收率：92.38%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.08 (s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 7.87 (br s, 1H), 7.71 (dd, J = 1.3, 8.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.31 - 7.19 (m, 2H), 7.18 - 7.12 (m, 1H), 6.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.07 - 3.01 (m, 2H), 2.91 - 2.86 (m, 2H), 2.74 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 5H), 1.10 - 0.76 (m, 1H) LC-MS (ES+, m/z): 300.3[(M+H) +]; Rt=0.647 分鐘。 HCl/MeOH (4 M)：在0℃下，HCl鼓泡到MeOH溶液中0.5小時。 步驟 4 ( S )-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-methylpyrazin-2-yl)amino) phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(450毫克，1.50毫莫耳，1當量)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(366.59毫克，1.80毫莫耳，1.2當量)的DMF (8 毫升)溶液中加入TCFH (632.63毫克，2.25毫莫耳，1.5當量)和1-甲基咪唑(1.23克，15.03毫莫耳，1.20毫升，10當量)，將混合物在14℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應物傾入H 2O (30毫升)中。水相用乙酸乙酯(10毫升*6)萃取。用飽和鹽水(30毫升*1)洗滌合併的有機相，用無水Na 2SO 4乾燥。過濾並真空濃縮。將殘餘物透過矽膠硫醇色層分析來純化(柱高：250 mm，直徑：100 mm，100-200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=1/1,10/1)，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(1克，1.28 毫莫耳，收率：85.12%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.06 (s, 1H), 8.14 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.85 (br d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.83 - 7.76 (m, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 7.45 (br s, 1H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.61 - 4.16 (d, 1H), 3.30 (br d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.94 - 2.89 (m, 2H), 2.78 - 2.73 (m, 2H), 2.69 (br d, J = 8.3 Hz, 3H),  1.36 (br s, 9H), 1.25 - 1.21 (m, 3H), 1.19 - 1.15 (m, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 485.4[(M+H) +]; Rt=0.877 分鐘。 步驟 5 ： ( S )-6- 乙基 -5- 甲基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-6-ethyl-5-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl) amino)pyrazine-2-carboxamide）
向(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(1克，1.28 毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (4M，20毫升，62.53當量)中的混合物中，在14℃下反應1小時。LCMS顯示反應完成。過濾並真空濃縮，得到(S)-6-乙基-5-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(430毫克，1.12毫莫耳，收率：87.41%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 385.3[(M+H) +]; Rt=0.671 分鐘。 注意：0℃下，將HCl鼓泡到MeOH溶液中0.5小時。 步驟 6 ： ( S, E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide）
在14°C下，向（ S）-6-乙基-5-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（400毫克，1.04毫莫耳，1當量）、（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（161.25毫克，1.25毫莫耳，1.2當量）於DMF（5毫升）中的溶液中加入BOP （690.21毫克，1.56毫莫耳，1.5當量）和DIPEA（1.34克，10.40毫莫耳，1.81毫升，10當量），將混合物在14°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物透過製備型HPLC（柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10μm ；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20% -50%，10分鐘)，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(100.3 毫克，202.37毫莫耳，收率：19.45%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.09 - 11.03 (m, 1H), 9.75 (s, 1H) 8.16 (br s, 1H), 7.92 (br t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.66 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.28 - 7.17 (m, 1H), 6.88 - 6.73 (m, 2H), 6.66 - 6.44 (m, 1H), 5.03 - 4.51 (m, 1H), 3.94 - 3.78 (m, 2H), 3.34 - 3.26 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.78 -2.70 (m, 11H), 2.50 (m, 3H), 1.29 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.27 - 1.19 (m, 5H)。LC-MS (ES +, m/z): 496.4[(M+H) +]; Rt=0.682 分鐘; HRMS:496.3003。 實施例 4 （化合物 143 ） （ S, E ） -5- （二甲基胺基） -6- 乙基 -3- （（ 3- 甲氧基 -5- （ 2- （ 2- （ N- 甲基 -4- （甲基胺基）丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-methoxy-5-(2-(2-(N-methyl-4-(methylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2- carboxamide） 步驟 5 ： ( S)- （ 1- （（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基） -5- 甲氧基苯乙基）胺基） -1- 氧代丙 -2- 基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl)amino)-5- methoxyphenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate ）
向（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-甲氧基苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（500毫克，934.52毫莫耳，1當量）、N-甲基甲胺；鹽酸鹽（762.05毫克，9.35毫莫耳，10當量）在DMA（5毫升）中加入DIEA （1.21克，9.35毫莫耳，1.63毫升，10當量）。將混合物在N 2下在100°C攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應物倒入水（10毫升）中並用EtOAc （5毫升*2）萃取。合併有機層，用水（20毫升*2），飽和鹽水（20毫升）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。透過矽膠硫醇凝膠色層分析法（石油醚/EtOAc =1/2）純化粗產物。得到（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（二甲基胺基）-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-甲氧基苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，551.82毫莫耳），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl3- d) δ = 10.73 (s, 1H), 7.51 (br s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 4.70 - 4.42 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.52 - 3.41 (m, 3H), 3.04 (s, 6H), 2.72 - 2.66 (m, 4H), 2.62 (s, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.27 - 1.19 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 544.4[(M+H) +]; Rt=0.870 分鐘。 步驟 1 ：（ S ） -5- （二甲基胺基） -6- 乙基 -3- （（ 3- 甲氧基 -5- （ 2- （ 2- （甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-methoxy-5-(2-(2-(methylamino) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
向（ S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（二甲基胺基）-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-甲氧基苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，551.82毫莫耳，1當量）於HCl/MeOH （50毫升）中的溶液中在25°C下攪拌混合物1小時。LCMS顯示反應完成。在減壓下濃縮粗製混合物。得到（S）-5-（二甲基胺基）-6-乙基-3-（（3-甲氧基-5-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺的粗製混合物（230毫克，518.55毫莫耳，收率：93.97%），為呈黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 444.3[(M+H) +]; Rt=0.734 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl在0℃下鼓泡到MeOH溶液中0.5小時，然後稱重該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 步驟 2 ： ( S, E)-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基 -3-((3- 甲氧基 -5-(2-(2-(N- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-methoxy-5-(2-(2-(N-methyl-4- (methylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine- 2-carboxamide）
向( S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-甲氧基-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(230 毫克，518.55毫莫耳，1當量)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(171.76 毫克，1.04 毫莫耳，2當量，HCl)的DMF (4毫升)溶液中加入DIEA (670.19 毫克，5.19 毫莫耳，903.23微升，10當量)、BOP (344.02 毫克，777.83毫莫耳，1.5當量)。在N 2氣氛下於25℃攪拌混合物2小時。LCMS顯示反應完成。混合物透過製備HPLC柱純化：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20% -50%，8分鐘。得到黃色固體狀的(S, E)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-甲氧基-5-(2-(2-(N-甲基-4-(甲基胺基)丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(60 毫克，108.17毫莫耳，收率：20.86%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, TFA) δ = 11.24 - 11.00 (m, 1H), 9.74 (br d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.12 - 7.86 (m, 1H), 7.77 (br s, 1H), 7.47 (br s, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.85 - 6.77 (m, 1H), 6.64 - 6.48 (m, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.05 - 4.53 (m, 1H), 3.90 - 3.80 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.34 - 3.24 (m, 2H), 3.08 (s, 6H), 2.91 (s, 2H), 2.81 - 2.63 (m, 11H), 1.32 - 1.20 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 555.3[(M+H) +]; Rt=2.117 分鐘; HRMS:555.3435。 實施例 5 ( 化合物 144) (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 甲氧基苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)-5-methoxyphenyl)amino)-6- ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 甲氧基苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-5-methoxyphenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-甲氧基苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，934.52毫莫耳，1當量)、環丙基硼酸(802.73 毫克，9.35 毫莫耳，10 當量)在DMA (4毫升)、H 2O (2毫升)中的溶液中在N 2氣氛及100℃下攪拌混合物10小時。LCMS顯示反應完成。將反應物倒入飽和EDTA (10毫升)、EtOAc(5毫升)中，攪拌60分鐘，用EtOAc(5毫升*3)萃取。合併有機層，用水(20毫升*2)沖洗，放置。鹽水(20毫升)，用無水Na 2SO 3乾燥、過濾並濃縮，得到粗產物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 1/1)，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-甲氧基苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(330 毫克，610.37毫莫耳，收率：65.31%)，為白色固體。LC-MS (ES+, m/z): 541.3[(M+H) +]; Rt=0.890 分鐘。 步驟 2 ： (S)-5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((3- 甲氧基 -5-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((3-methoxy-5-(2-(2-(methylamino) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
向(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-甲氧基苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(330毫克，610.37毫莫耳，1當量)的DCM (40毫升)溶液中加入TFA (20毫升)。將混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。在減壓下濃縮粗製混合物。然後，將混合物直接投入下一步驟，得到 (S)-5-環丙基-6-乙基-3-((3-甲氧基-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺的粗製混合物(250 毫克，567.49毫莫耳，收率：92.97%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 441.3[(M+H) +]; Rt=0.753 分鐘。 步驟 3 ： (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 甲氧基苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)-5-methoxyphenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide）
向(S)-5-環丙基-6-乙基-3-((3-甲氧基-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(250毫克，567.49毫莫耳，1當量)，(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(187.97 毫克，1.13 毫莫耳，2當量，HCl)的DMF (4毫升)溶液中加入BOP (376.48毫克，851.23毫莫耳，1.5當量)、DIEA (733.44毫克，5.67毫莫耳，988.46微升，10當量)。在N 2氣氛下於25℃攪拌混合物2小時。LCMS顯示反應完成。粗製混合物透過製備HPLC柱純化：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20% -50%，8分鐘，得到 (S, E)-5-環丙基-3-((3-(2-(2-(4-(二甲胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)-5-甲氧基苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(70毫克，126.89毫莫耳，收率：22.36%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, TFA) δ = 11.18 - 11.02 (m, 1H), 9.75 (br s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.92 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.84 (br s, 1H), 7.38 (br d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.86 - 6.78 (m, 1H), 6.78 - 6.75 (m, 1H), 6.65 - 6.48 (m, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.02 - 4.54 (m, 1H), 3.92 - 3.81 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.35 - 3.25 (m, 2H), 2.96 - 2.87 (m, 4H), 2.82 - 2.64 (m, 9H), 2.39 - 2.27 (m, 1H), 1.32 - 1.19 (m, 6H), 1.15 - 1.07 (m, 4H). LC-MS (ES+, m/z): 552.3 [(M+H) +]; Rt=2.188 分鐘; HRMS:552.3289。 實施例 6 ( 化合物 156) 步驟 1 ： (E)-N-(4- 溴丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-bromobut-2-enoyl)- N-methyl- L-alaninate）
向甲基-L-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽(9g，45.99 毫莫耳，1當量)和(E)-4-溴丁-2-烯酸(8.35克，50.59 毫莫耳，1.1當量)在DMF (90毫升)中的混合物中，在20℃和N 2下一次性加入2-溴-1-乙基-吡啶-1-鎓；四氟硼酸鹽(18.89克，68.99 毫莫耳，1.5 當量)和DIEA (59.44克，459.92 毫莫耳，80.11 毫升，10當量)。將混合物在20℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物倒入水(200毫升)中。水相用乙酸乙酯(100毫升*3)萃取。合併的有機相用飽和鹽水(400毫升*1)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物通過柱色層分析法(SiO 2，石油醚：乙酸乙酯= 30/1至1/1)純化。得到目標化合物(E)-N-(4-溴丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(8克，26.13 毫莫耳，收率：28.40%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +，m/z)：206.3 [(M+H) +]。Rt =1.837分鐘。 步驟 2 ： N-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl)- N-methyl- L-alaninate）
在25℃和N 2下，向( E)- N-(4-溴丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(8克，26.13毫莫耳，1當量)和氮雜環丁烷鹽酸鹽(2.44克，26.13毫莫耳，1當量)在DMF (80毫升)中的混合物中一次性加入DIPEA (10.13克，78.38毫莫耳，3當量)。將混合物在25℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓過濾，得到殘餘物。殘餘物通過柱色層分析法(SiO 2，石油醚：乙酸乙酯= 1/1至1/1)純化。得到目標化合物(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(550毫克，1.95毫莫耳，收率：2.48%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：283.4 [(M+H) +]。Rt =0.546分鐘。 步驟 3 ： ( E)-N-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸（( E)- N-(4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl)- N-methyl- L-alanine ）
在20℃和N 2下，向(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(500毫克，1.77毫莫耳，1當量)的DCM (1.5毫升)混合物中一次性加入TFA (77.00克，675.30 毫莫耳，50.00毫升，381.38 當量)。將混合物在20℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。得到目標化合物(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸(480毫克，粗製)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：227.3 [(M+H) +]。Rt =0.177 分鐘。 步驟 4 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-5-(dimethylamino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide ）
向( E)- N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸丙酸(109.44 毫克，483.66毫莫耳，2 當量)和3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(二甲基胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，241.83毫莫耳，1當量)在DMF (2毫升)中的混合物中，在25℃和N 2下一次性加入BOP (160.43毫克，362.74毫莫耳，1.5當量)和DIPEA (312.55 毫克，2.42 毫莫耳，421.22微升，10當量)。將混合物在25℃攪拌4小時，LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過製備型HPLC(TFA條件)柱純化：C18-1150為30 mm的5μm的星號；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10% -55%，8分鐘。得到目標化合物(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-(二甲基胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(25.1 毫克，45.85毫莫耳，收率：18.96%)，為棕色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6, TFA) δ = 11.22 - 11.07 (m, 1H), 10.02 - 9.71 (m, 1H), 8.11 - 7.86 (m, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 1H), 7.56 - 7.42 (m, 3H), 7.26 - 7.15 (m, 1H), 6.82 - 6.67 (m, 2H), 6.52 - 6.19 (m, 1H), 4.97 - 4.56 (m, 1H), 4.14 (br d, J = 6.2 Hz, 2H), 4.00 -3.98 (m, 4H), 3.35 - 3.24 (m, 2H), 3.09 - 3.04 (m, 6H), 2.92 - 2.86 (m, 2H), 2.80 - 2.67 (m, 6H), 2.44 - 2.35 (m, 2H), 1.28 - 1.19 (m, 6H). 1H NMR (400 MHz, D2O) δ = 7.55 - 7.39 (m, 1H), 7.26 - 7.05 (m, 2H), 6.80 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.58 - 6.40 (m, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.85 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.86 (m, 2H), 3.84 - 3.59 (m, 2H), 3.53 - 3.27 (m, 2H), 3.05 - 2.93 (m, 6H), 2.79 - 2.62 (m, 7H), 2.58 - 2.29 (m, 2H), 1.32 - 1.12 (m, 6H) LC-MS (ES+, m/z): 537.3 [(M+H) +]. Rt=2.117 分鐘。HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 537.3306。 實施例 7 ( 化合物 158) (S, E)-5-( 二甲基胺基 )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)-5-fluorophenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6-( 二甲基胺基 )-5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-(dimethylamino)-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-5-fluorophenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，956.03毫莫耳，1當量)的DMA (5毫升)溶液中加入DIPEA (1.24克，9.56毫莫耳，1.67毫升，10 當量)和二甲胺(779.58毫克，9.56 毫莫耳，875.94微升，10 當量，HCl)將混合物在100℃下在密封管中攪拌10小時。LC-MS顯示反應完成。將反應液注入H 2O (5毫升)中，用EA (10毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(10毫升*3)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/5)純化，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(300毫克，564.31毫莫耳，收率：59.03%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.38-11.23 (m, 1H), 7.87-7.73 (m, 2H), 7.72-7.60 (m, 1H), 7.58-7.47 (m, 1H), 7.17-7.05 (m, 1H), 6.68-6.55 (m, 1H), 4.57-4.22 (m, 1H), 3.17 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.07 (s, 5H), 2.79-2.74 (m, 4H), 2.71-2.68 (m, 4H), 1.40-1.20 (m, 15H)。LC-MS (ES +, m/z)：532.3 [(M+H) +]；Rt =0.886分鐘。 步驟 2 ： ( S)-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基 -3-((3- 氟 -5-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-fluoro-5-(2-(2-(methylamino) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(300毫克，564.31毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (4M，48.70毫升，345.21當量)中的混合於25℃攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。過濾反應混合物並減壓濃縮，得到(S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-氟-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)-胺基)-吡嗪-2-甲醯胺(287.4毫克，粗製，HCl)，為黃色油狀物(150毫克，粗製)。LC-MS (ES +, m/z)：432.2[(M+H) +]；Rt =0.755分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl在0℃下鼓泡進入MeOH溶液中0.5小時。 步驟 3 ： ( S, E)-5-( 二甲基胺基 )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)-5-fluorophenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide）
向( S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-氟-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(287 毫克，665.11毫莫耳，1當量)的DMF (4毫升)溶液中加入BOP (441.25 毫克，997.67毫莫耳，1.5 當量)、DIPEA (1.60克，12.40 毫莫耳，2.16 毫升，18.64 當量)和(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(352.36 毫克，2.73 毫莫耳，4.10 當量)。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備型HPLC純化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20% -50%，8分鐘)，得到(S, E)-5-(二甲基胺基)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)-5-氟苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(246 毫克，449.25毫莫耳，收率：67.55%，純度：99.10%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6,TFA) δ = 11.37 - 11.24 (m, 1H), 9.65 (br s, 1H), 8.14 - 7.86 (m, 1H), 7.79 (br s, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.52 (br s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 1H), 6.65 - 6.46 (m, 2H), 4.96 - 4.55 (m, 1H), 3.91 - 3.86 (m, 2H), 3.33 - 3.24 (m, 2H), 3.10 - 3.06 (m, 6H), 2.89 (s, 2H), 2.77 (br d, J = 7.3 Hz, 7H), 2.73 - 2.66 (m, 4H), 1.28 - 1.19 (m, 6H)。LC-MS (ES +, m/z): 543.3[(M+H) +]; Rt=2.200 分鐘; 純度：99.10%; HRMS:543.3200。 實施例 8 ( 化合物 159) (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido) propanamido)ethyl)-5-fluorophenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-5-fluorophenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，956.03毫莫耳，1當量)在DMA (4毫升)和H 2O (2毫升)中的溶液中加入Pd (dppf) Cl 2(69.95 毫克，95.60毫莫耳，0.1當量)、環丙基硼酸(821.20 毫克，9.56 毫莫耳，10 當量)和K 2CO 3(396.39毫克，2.87毫莫耳，3當量)，在25℃下將混合物在100℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應液注入到飽和EDTA (10毫升)、EA (5毫升)中，攪拌60分鐘後，用EA (5毫升*3)萃取。將合併的有機層用飽和鹽水(10毫升*3)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/1)純化，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(70 毫克，132.42毫莫耳，收率：13.85%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：529.3[(M+H) +]；Rt =0.904分鐘。 步驟 2 ： (S)-5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((3- 氟 -5-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((3-fluoro-5-(2-(2-(methylamino)propanamido) ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(310毫克，586.44毫莫耳，1當量)和TFA (2.45克，21.47 毫莫耳，1.59毫升，36.61當量)在DCM (5毫升)中的混合物於25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物並減壓濃縮，得到(S)-5-環丙基-6-乙基-3-((3-氟-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(440毫克，粗製TFA)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.28 - 11.19 (m, 1H), 8.79 - 8.67 (m, 2H), 8.54 - 8.47 (m, 1H), 8.18 (br s, 1H), 7.93 - 7.84 (m, 1H), 7.63 (br d, J = 11.9 Hz, 1H), 7.07 - 7.00 (m, 1H), 6.68 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.70 - 3.64 (m, 1H), 3.51 - 3.35 (m, 2H), 2.93 - 2.90 (m, 1H), 2.79 - 2.72 (m, 2H), 2.70 - 2.67 (m, 1H), 2.45 - 2.43 (m, 3H), 1.30 - 1.26 (m, 6H), 1.13 (br s, 2H), 1.09 - 1.05 (m, 2H)。LC-MS (ES +, m/z): 429.3[(M+H) +]; Rt=0.744 分鐘; 純度：91.31%。 步驟 3 ： ( S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)-5-fluorophenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide）
向(S)-5-環丙基-6-乙基-3-((3-氟-5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(220毫克，405.51毫莫耳，1當量，TFA)和(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸在DMF (2毫升)中的溶液中加入BOP (269.02 毫克，608.27毫莫耳，1.5當量)、DIPEA (524.10毫克，4.06毫莫耳，706.33微升，10當量)將混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，過濾反應混合物得到殘餘物。殘餘物通過製備型HPLC純化(柱：Phenomenex Luna 80*30 mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-50%，8分鐘)，得到(S, E)-5-環丙基-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)-5-氟苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(60.81 毫克，106.44毫莫耳，收率：26.25%，純度：94.46%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.23 (br s, 1H), 9.79 - 9.57 (m, 1H), 8.50-8.18 (m, 1H), 8.06 -7.93 (m, 2H), 7.91 - 7.88 (m, 1H), 7.01-7.09 (m, 1H), 6.83-6.79 (m, 1H), 6.65-6.60 (m, 2H), 5.08 - 4.49 (m, 1H), 3.97 - 3.78 (m, 2H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 2.94 - 2.88 (m, 4H), 2.79 - 2.68 (m, 9H), 2.36 - 2.29 (m, 1H), 1.38 - 1.23 (m, 6H), 1.15 - 1.05 (m, 4H)。LC-MS (ES +, m/z): 540.2[(M+H) +]; Rt=2.261 分鐘; 純度: 94.46; HRMS:540.3116。 實施例 9 ( 化合物 162) (S, Z)-5-( 二甲胺基 )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-2- 氟 -N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,Z)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-2-fluoro- N- methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide） 步驟 1 ： (Z)-4-( 二甲基胺基 )-2- 氟丁 -2- 烯酸乙酯（ethyl ( Z)-4-(dimethylamino)-2-fluorobut-2-enoate）
在0℃下，在加入後，向2-二乙氧基磷醯基-2-氟-乙酸乙酯(10克，41.29毫莫耳，8.40毫升，1當量)的DCM (100毫升)溶液中加入DBU (31.43克，206.46 毫莫耳，31.12毫升，5 當量)，在該溫度下攪拌混合物30分鐘，然後在0℃下加入2-(二甲基胺基)乙醛(10.48克，61.94 毫莫耳，1.5當量，H 2SO 3)。將所得混合物在25℃攪拌10小時。HPLC顯示反應完成。通過加入飽和氯化銨水溶液淬滅反應混合物。0℃下NH 4Cl (200毫升)，然後用DCM (100毫升*3)提取。用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌合併的有機層。鹽水(50毫升*2)，無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到(Z)-4-(二甲基胺基)-2-氟-丁-2-烯酸乙酯(4克，粗製)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：176.4 [(M+H) +]。Rt =0.247分鐘。 步驟 2 ： (Z)-4-( 二甲基胺基 )-2- 氟丁 -2- 烯酸（( Z)-4-(dimethylamino)-2-fluorobut-2-enoic acid）
向(Z)-4-(二甲基胺基)-2-氟-丁-2-烯酸乙酯(1克，5.71 毫莫耳，1當量)的THF (10毫升)和H 2O (1毫升)溶液中在0℃加入LiOH.H 2O (718.55毫克，17.12毫莫耳，3當量)。加入後，將混合物在25℃攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。用1M HCl中和反應混合物，減壓濃縮得到殘餘物。殘餘物通過製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100*30mm*5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：95% -70%，10分鐘)純化，得到化合物(Z)-4-(二甲基胺基)-2-氟丁-2-烯酸(620 毫克，4.21 毫莫耳，收率：73.82%)，為白色固體。.LC-MS (ES +, m/z)：148.3[(M+H) +]。Rt =0.183分鐘。 步驟 3 ： (S, Z)-5-( 二甲胺基 )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-2- 氟 -N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,Z)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-2-fluoro- N- methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide）
向(S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺 (S, Z)-5-(二甲基胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)-丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，241.83毫莫耳，1.0 當量)、(Z)-4-(二甲基胺基)-2-氟丁-2-烯酸(284.68 毫克，1.93 毫莫耳，8.0 當量)在DMF (3毫升) 的溶液中中加入BOP (160.43 毫克，362.74毫莫耳，1.5 當量)和DIPEA (312.54 毫克，2.42 毫莫耳，10 當量)，將混合物在10℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。殘餘物經製備型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30 mm*3um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35% -65%，8分鐘)純化，得到(S, Z)-5-(二甲基胺基)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-2-氟-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(13.41 毫克，24.61毫莫耳，收率：10.17%)，為棕色固體。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ= 11.12 - 11.09 (m, 1H), 7.98 (br d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.74 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 2H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.76 - 5.45 (m, 1H), 4.82 - 4.25 (m, 1H), 3.31 - 3.24 (m, 2H), 3.06 (s, 6H), 3.05 - 3.02 (m, 2H), 2.92 - 2.82 (m, 2H), 2.79 - 2.80 (m, 3H), 2.70 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.16 - 2.13 (f, 6H), 1.22 - 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 543.4 [(M+H) +]; Rt=2.894 分鐘; HRMS:543.3257。 實施例 10 ( 化合物 202) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺 -（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-car boxamide- ） 步驟 1 ： (E)-N-(4- 溴丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-bromobut-2-enoyl)- N-methyl- L-alaninate）
在20℃和N 2下，向甲基-L-丙氨酸叔丁基酯鹽酸鹽(9克，45.99毫莫耳，純度N/A，1當量)和(E)-4-溴丁-2-烯酸(8.35克，50.59毫莫耳，1.1當量)在DMF (90毫升)中的混合物中一次性加入BEP (18.89克，68.99 毫莫耳，1.5 當量)和DIEA (59.44克，459.92 毫莫耳，80.11毫升，10 當量)。將混合物在20℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物傾入冰水(w/w = 1/1)(120毫升)中。水相用乙酸乙酯(20毫升*3)萃取。合併的有機相用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。將殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚：乙酸乙酯=30/1至1/1)純化，得到(E)-N-(4-溴丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(8克，26.13 毫莫耳，收率：28.40%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：206.3 [(M + H-100) + ]。Rt =1.837分鐘。 步驟 2 ： N-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl)- N-methyl- L-alaninate）
在25℃下，向(E)-N-(4-溴丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(8克，26.13毫莫耳，1當量)和鹽酸氮雜環丁烷(2.44克，26.13 毫莫耳，1當量)在DMF (80毫升)中的混合物中一次性加入DIPEA (10.13克，78.38 毫莫耳，13.65毫升，3當量)，將混合物在25℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓過濾，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚：乙酸乙酯= 1/1至1/1)純化。得到目標化合物(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(550 毫克，1.95 毫莫耳，收率：2.48%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：283.4 [(M + H) + ]。Rt =0.546分鐘。 步驟 3 ： (E)-N-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 烯醯基 )-N- 甲基 -L- 丙氨酸（( E)- N-(4-(azetidin-1-yl)but-2-enoyl)- N-methyl- L-alanine ）
在20℃下，向(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸叔丁酯(500 毫克，1.77 毫莫耳，1當量)在DCM (1.5毫升)的溶液的混合物中一次性加入TFA (77.00克，675.30 毫莫耳，381.38 當量)，將混合物在20℃下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。反應在減壓下濃縮，得到殘餘物。得到目標化合物(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸(480 毫克，粗製)，為黃色油狀物。 LC-MS (ES +, m/z): 227.3 [(M+H) +]。 Rt=0.177分鐘。 步驟 4 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide）
向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(250 毫克，835.09毫莫耳，1當量)和(E)-N-(4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯醯基)-N-甲基-L-丙氨酸(188.96 毫克，835.09毫莫耳，1當量)在DMF (2.5毫升)溶液的混合物中，在0℃下，一次性加入BOP (554.01毫克，1.25毫莫耳，1.5當量)和DIPEA (1.08克，8.35毫莫耳，1.45毫升，10當量)，在0℃下將混合物攪拌4小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓過濾，得到殘餘物。殘餘物透過製備型HPLC(TFA條件)柱純化：C18-1 150*30 mm*5 µm；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5% -50%，8分鐘。得到目標化合物(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(60.43毫克，117.29毫莫耳，收率：14.05%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.12 - 10.98 (m, 1H), 10.10 - 9.95 (m, 1H), 8.16 (br s, 1H), 8.07 - 7.74 (m, 2H), 7.66 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.89 - 6.62 (m, 2H), 6.55 - 6.31 (m, 1H), 5.00 - 4.52 (m, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 2H), 4.06 - 3.89 (m, 4H), 3.36 - 3.25 (m, 2H), 2.94 - 2.86 (m, 2H), 2.80 - 2.71 (m, 3H), 2.71 - 2.65 (m, 2H), 2.52 - 2.50 (m, 3H), 2.43 - 2.19 (m, 2H), 1.30 - 1.20 (m, 6H)(TFA, 鹽)。 1H NMR (400 MHz, D 2O) δ = 7.27 - 7.22 (m, 1H), 7.19 - 7.12 (m, 1H), 7.08 - 7.01 (m, 1H), 6.77 - 6.70 (m, 1H), 6.53 (br d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.47 - 6.29 (m, 1H), 4.85 - 4.80 (m, 1H), 4.53 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.28 - 4.17 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 2H), 3.91 - 3.80 (m, 2H), 3.44 - 3.29 (m, 2H), 2.83 (s, 2H), 2.70 - 2.65 (m, 2H), 2.57 - 2.43 (m, 3H), 2.19 - 2.18 (m, 1H), 2.19 - 2.13 (m, 3H), 1.33 - 1.25 (m, 1H), 1.24 - 1.19 (m, 2H), 1.08 - 1.03 (m, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 508.3[(M+H)+]; Rt=2.076 分鐘。 HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 508.3055。 實施例 11 ( 化合物 203) (S)-5-( 二甲胺基 )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 炔醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- ynamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
向 N-(4-(二甲基胺基)丁-2-炔基)- N-甲基- L-丙氨酸(198.69毫克，608.99毫莫耳，2 當量，TFA)、BOP (202.01毫克，456.74毫莫耳，1.5 當量)、DIEA (393.54毫克，3.04 毫莫耳，530.38微升，10 當量)在DMF (2.5毫升)溶液中加入3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(二甲基胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，304.50毫莫耳，1當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。濃縮反應物。粗產物通過製備型HPLC純化(柱：C18-1150 *30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10% -55%，8分鐘)，然後通過製備型HPLC柱進一步純化：Phenomenex Luna C18 100*30mm*5um；流動相：[水(TFA)-MeOH ]；B%：45% -75%，10分鐘，得到(S)-5-(二甲胺基)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲胺基)-N-甲基丁-2-炔醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(6.67 毫克，12.76毫莫耳，收率：4.19%)，為黃色固體。1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.11 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 10.85 - 10.60 (m, 1H), 8.23 - 7.97 (m, 1H), 7.74 (br s, 1H), 7.55 (br d, J = 6.1 Hz, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 7.21 (dt, J = 3.5, 7.8 Hz, 1H), 6.79 (td, J = 1.4, 7.6 Hz, 1H), 4.93 - 4.79 (m, 1H), 4.24 (br d, J = 16.0 Hz, 2H), 3.34 - 3.27 (m, 2H), 3.26 - 3.03 (m, 8H), 2.79 - 2.66 (m, 11H),1.34 - 1.21 (m, 6H)(TFA 鹽)。LC-MS (ES+, m/z): 523.3 [(M+H)+]; Rt=2.813 分鐘; HRMS (EI): m/z [M] +實測值:523.3130;SFC:95.58%。 實施例 12 ( 化合物 204) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)pyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： ( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) （ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)pyrazine-2- carboxamide）
向(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(118.46毫克，917.19毫莫耳，1.5 當量)的DMF (2.5毫升)溶液中加入DIEA (790.27 毫克，6.11 毫莫耳，1.07 毫升，10 當量)和(S)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(270 毫克，611.46毫莫耳，1當量)，然後加入BOP (405.65 毫克，917.19毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。濃縮反應物。將粗產物透過製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15% -45%，8分鐘)純化，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(64.81 毫克，116.25毫莫耳，收率：19.01%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.15 - 11.06 (m, 1H), 9.67 (br s, 1H), 8.11 - 7.88 (m, 1H), 7.76 (br d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 2H), 6.65 - 6.46 (m, 1H), 4.99 - 4.54 (m, 1H), 4.25 (td, J = 6.6, 13.2 Hz, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 2H), 3.33 - 3.23 (m, 2H), 2.91 - 2.84 (m, 5H), 2.80 - 2.67 (m, 11H), 1.30 - 1.19 (m, 12H)。LC-MS (ES+, m/z): 553.4 [(M+H) +]; Rt=2.247 分鐘; HRMS (EI): m/z [M] +實測值:553.3696;SFC:99.14%。 實施例 13 ( 化合物 205) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropylamino) pyrazin-2-yl) amino)phenethyl)carbamate）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(200毫克，476.30毫莫耳，1當量)的DMA (2毫升)溶液中加入丙-2-胺(140.77毫克，2.38毫莫耳，5當量)和DIPEA (615.58 毫克，4.76 毫莫耳，829.63微升，10 當量)，將混合物在100℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。在25℃下，藉由加入水(50毫升)淬熄（quench）反應混合物，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至1/1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(180毫克，389.97毫莫耳，收率：81.88%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.22 (s, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.57 - 7.53 (m, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 6.92 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 6.78 - 6.74 (m, 2H), 4.31 - 3.98 (m, 1H), 3.15 - 3.10 (m, 2H), 2.67 - 2.63 (m, 2H), 2.61 - 2.55 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.21 - 1.17 (m, 3H)。LC-MS (ES +, m/z): 443.3 [(M+H) +]; Rt =0.887 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine- 2-carboxamide）
向(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(180毫克，406.73毫莫耳，1當量)加入HCl/MeOH (4M，101.68微升)，將混合物在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。得到殘餘物。將粗產物用EtOAc在25℃研磨10分鐘，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(130 毫克，367.71毫莫耳，收率：90.41%)，為黃色固體。1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.25 (br s, 1H), 8.08 (br s, 3H), 7.57 (s, 1H), 7.53 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.86 - 6.82 (m, 1H), 6.82 - 6.74 (m, 1H), 4.29 - 4.18 (m, 1H), 3.05 - 2.96 (m, 2H), 2.90 - 2.83 (m, 2H), 2.61 - 2.55 (m, 2H), 1.28 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 1.19 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ; LC-MS (ES +, m/z): 343.2[(M+H)+]; Rt=0.684 分鐘。 步驟 3 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropylamino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
在0℃下向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(130 毫克，379.63毫莫耳，1當量)、1-甲基咪唑(311.68 毫克，3.80 毫莫耳，302.60微升，10 當量)、 N-(叔丁氧基羰基)- N-甲基-L-丙氨酸(115.73 毫克，569.45毫莫耳，1.5 當量)、1-甲基咪唑(311.68 毫克，3.80 毫莫耳，302.60微升，10 當量)的DMF (1.5毫升)溶液中加入TCFH (159.78 毫克，569.45毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃下攪拌4小時。LCMS顯示反應完成。在25℃下，藉由加入水(50毫升)淬熄反應混合物，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1)純化，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(130 毫克，204.32毫莫耳，收率：53.82%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.21 (s, 1H), 7.84 - 7.77 (m, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.35 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.24 (br d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.76 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 3.32 - 3.26 (m, 3H), 2.69 (s, 5H), 2.58 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.37 (br s, 9H), 1.28 - 1.17 (m, 12H), LC-MS (ES +, m/z): 528.4 [(M+H) +]; Rt=0.929 分鐘。 步驟 4 ： ( S)-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 )-3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-6-ethyl-5-(isopropylamino)-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將( S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(130 毫克，246.37毫莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，61.59微升，1當量)的混合物在16℃下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物用EtOAc在25℃研磨10分鐘，得到黃色固體的(S)-6-乙基-5-(異丙基胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，215.39毫莫耳，收率：87.43%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.21 (br s, 1H), 9.24 - 9.15 (m, 1H), 8.85 - 8.76 (m, 1H), 8.64 (br t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.45 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.80 (br d, J = 7.4 Hz, 2H), 4.27 (br s, 1H), 3.74 - 3.64 (m, 1H), 3.43 - 3.37 (m, 1H), 2.85 - 2.67 (m, 4H), 2.59 (q, J = 7.4 Hz, 3H), 2.42 - 2.40 (m, 2H), 1.32 - 1.17 (m, 12H); LC-MS (ES +, m/z): 428.3[(M+H) +]; Rt=0.731分鐘; LC-MS (ES +, m/z): 428.3[(M+H) +]; Rt=0.731 分鐘。 注意：HCl/EtOAc(4M)：HCl在0℃下鼓泡到EtOAc溶液中0.5小時，然後稱取該溶液，得到HCl/EtOAc(4M)。 步驟 5 ： ( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )- N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine-2- carboxamide）
向( S)-6-乙基-5-(異丙基胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，233.90毫莫耳，1當量)的DMF (3毫升)溶液中加入BOP (124.14 毫克，280.67毫莫耳，1.2 當量)和DIPEA (302.29 毫克，2.34 毫莫耳，407.40微升，10 當量)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(36.25 毫克，280.67毫莫耳，1.2 當量)將混合物在0℃攪拌4小時。LC-MS顯示混合物是完全的。在25℃下，藉由加入水(50毫升)淬熄反應混合物，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15% -45%，8分鐘)純化，得到所需化合物，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(13.13 毫克，23.96毫莫耳，收率：10.24%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.25 - 11.18 (m, 1H), 9.90 (br s, 1H), 7.92 (br t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.64 - 7.52 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.25 (br s, 1H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 6.85 - 6.73 (m, 3H), 6.66 - 6.47 (m, 1H), 4.57 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.26 (qd, J = 6.7, 13.6 Hz, 1H), 3.93 - 3.81 (m, 2H), 3.34 - 3.23 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.80 - 2.74 (m, 6H), 2.73 - 2.66 (m, 3H), 2.62 - 2.56 (m, 2H), 1.29 - 1.16 (m, 12H)(TFA, 鹽) ; LC-MS (ES +, m/z): 539.3[(M+H) +]; Rt=2.117 分鐘; 純度：98.31%; HRMS:539.3476。 實施例 14 ( 化合物 213) (S)-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基 -3-((3-(2-(N- 甲基丙烯醯胺 ) 丙醯胺 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 二甲基胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-5-(dimethylamino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(400 毫克，933.43毫莫耳，1當量)的MeOH (7毫升)混合物中加入MeOH/HCl (933.43毫莫耳，30毫升，1當量)。將混合物在16℃攪拌2小時。將粗產物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(二甲基胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z)：329.3 [(M+H) +]；Rt =0.646分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl在0℃下鼓泡到MeOH溶液中0.5小時，然後稱重該溶液，得到HCl/MeOH (4M)。 步驟 2 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6-( 二甲基胺基 )-5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-(dimethylamino)-5- ethylpyrazin -2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
在0°C，向N-（叔丁氧基羰基）-N-甲基-L -丙氨酸（631.22毫克，3.11毫莫耳，1.2當量）、1-甲基咪唑（2.12g，25.88毫莫耳，2.06毫升，10當量）、3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-5-（二甲基胺基）-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（850毫克，2.59毫莫耳，1當量）在DMF （6毫升）溶液中的混合物中加入TCFH （1.09克，3.88毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物倒入冰水（w/w =1/1）（200毫升）中。將水相用乙酸乙酯（100毫升*3）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（100毫升*2）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。將殘餘物通過柱色層分析法（SiO 2，石油醚：乙酸乙酯=1/1)反應，得到目標化合物(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-(二甲基胺基)-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基) (甲基)胺基甲酸叔丁酯(1克，1.95毫莫耳，收率：91.34%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：514.4 [(M+H) +]；Rt =0.892分鐘。 步驟 3 ：（ S ） -5- （二甲基胺基） -6- 乙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
向(S)-(1- ((3- ((3-胺基甲醯基-6- (二甲基胺基) -5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基) -1-氧代丙-2-基) (甲基)胺基甲酸叔丁酯(700毫克，1.36毫莫耳，1當量)的HCl/MeOH (60毫升)溶液中加入。將混合物在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將粗產物減壓濃縮，得到(S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3- ((3- (2- (2- (甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(700毫克，粗製)，為黃色固體。LC-MS (ES +, m/z)：414.3 [(M+H) +]；Rt =0.690分鐘。 注意：HCl/甲醇（4M）：在0°C下將HCl 鼓泡到溶液中0.5小時。然後，稱取該溶液以獲得HCl/MeOH （4M）。 步驟 4 ：（ S ） -5- （二甲基胺基） -6- 乙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-5-(dimethylamino)-6-ethyl-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將（S）-5-（二甲基胺基）-6-乙基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（700毫克，1.69毫莫耳，1當量）在DMF（2毫升）的冰浴溶液中。將所得混合物在0°C下攪拌，加入DIEA （1.09克，8.46毫莫耳，1.47毫升，5當量），然後加入丙烯醯氯（183.86毫克，2.03毫莫耳，165.64微升，1.2當量）。將混合物在0°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。透過製備型HPLC(prep-HPLC)柱純化粗製混合物：Waters xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-60%，8分鐘，得到(S)-5-(二甲基胺基)-6-乙基-3-((3-(2-(N-甲基丙烯醯胺)丙醯胺)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(150毫克, 320.81 微莫耳, 收率：18.95%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.11 (s, 1H), 8.10 - 7.82 (m, 1H), 7.75 (br d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46 (br s, 2H), 7.20 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.71 (dd, J= 10.3, 16.5 Hz, 1H), 6.15 - 6.01 (m, 1H), 5.70 - 5.58 (m, 1H), 4.56 (br s, 1H), 3.30 - 3.22 (m, 2H), 3.07 (s, 6H), 2.86 (s, 2H), 2.79 - 2.67 (m, 5H), 1.27 - 1.15 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 468.3 [(M+H) +]; Rt=2.535 分鐘; HRMS:468.2704。 實施例 15 ( 化合物 219) (E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步骤 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl(3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1克，2.38 毫莫耳，1當量)在DMA (10毫升)溶液中加入K 2CO 3(1.15克，8.34 毫莫耳，3.5 當量)、Pd (dppf) Cl 2(1.74克，2.38 毫莫耳，1當量)、環丙基硼酸(245.48 毫克，2.86 毫莫耳，1.2 當量)。在N 2氣氛下，在100℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。在25℃下，通過加入水(50毫升)淬熄反應混合物，將反應混合物倒入飽和EDTA (50毫升)中並攪拌60分鐘，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯，為黃色固體(1克，2.04 毫莫耳，收率：85.85%，純度：87%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.06 - 11.00 (m, 1H), 8.13 - 8.09 (m, 1H), 7.81 (br d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.81 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.19 - 3.12 (m, 2H), 2.92 - 2.85 (m, 2H), 2.67 (br t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.31 - 2.23 (m, 1H), 1.35 - 1.15 (m, 12H), 1.13 - 1.06 (m, 4H)。LC-MS (ES +, m/z): 426.2 [(M+H) +]; Rt =0.928 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺鹽酸鹽（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2- carboxamide hydrochloride）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1克，2.35 毫莫耳，1當量)中加入HCl/MeOH (4M，25.00毫升，42.55 當量)。將混合物在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，將反應混合物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺鹽酸鹽，為黃色固體(0.9克，粗製，HCl)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.07 (s, 1H), 8.13 (br s, 4H), 7.88 - 7.78 (m, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.33 - 7.22 (m, 1H), 6.95 - 6.81 (m, 1H), 3.10 - 2.99 (m, 2H), 2.96 - 2.83 (m, 4H), 2.37 - 2.21 (m, 1H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.14 - 1.03 (m, 4H)(HCl 鹽); LC-MS (ES +, m/z): 362.2 [(M+H) +]。 Rt=0.711 分鐘。 注意：HCl/MeOH (4M)：HCl氣體在0℃下鼓泡進入MeOH溶液中0.5小時。 步驟 3 ： ( E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(80毫克，245.85毫莫耳，1當量)在DMF(0.5毫升)溶液中加入DIEA (317.73毫克，2.46毫莫耳，428.21微升，10 當量)、(E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基甘氨酸(172.29毫克，344.18毫莫耳，純度：40%，1.4當量)，然後加入BOP (152.23毫克，344.18毫莫耳，1.4當量)。將混合物在0℃攪拌4小時。LCMS顯示反應完成。通過添加水(50毫升)使反應液驟冷，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15% -35%，8分鐘)純化，得到所需化合物(E)-5-環丙基-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(10.37 毫克，20.43毫莫耳，收率：8.31%，純度：100%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.05 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 9.69 (br d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.23 - 7.99 (m, 2H), 7.84 - 7.78 (m, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 2H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 6.91 - 6.67 (m, 2H), 6.63 - 6.49 (m, 1H), 4.04 - 3.94 (m, 2H), 3.92 - 3.79 (m, 2H), 3.31 - 3.27 (m, 2H), 3.06 - 3.02 (m, 2H), 2.94 - 2.87 (m, 2H), 2.80 - 2.66 (m, 9H), 2.32 - 2.24 (m, 1H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.13 - 1.04 (m, 4H), LC-MS (ES +, m/z): 508.3 [(M+H) +]。Rt =2.182 分鐘。HRMS (EI): m/z [M] +實測值:508.3000。 實施例 16 ( 化合物 221) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl(methyl)amino)pyrazin-2-yl) amino)phenethyl)carbamate）
在20℃下，向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯在DMA(10毫升)中的溶液中加入DIPEA (1.54克，11.91 毫莫耳，2.07毫升，10 當量)和N-甲基乙胺(703.85毫克，11.91 毫莫耳，1.02毫升，10 當量)，將混合物在100℃下在密封管中攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將反應液倒入水(15毫升)中，用EtOAc(20毫升*3)萃取。合併有機層，用水(10毫升*3)、飽和鹽水(10毫升*3)洗滌，乾燥(Na 2SO 4)，過濾並濃縮，得到粗產物。將殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/1)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(430毫克，971.63毫莫耳，收率：81.60%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.12 - 11.06 (m, 1H), 7.81 - 7.65 (m, 1H), 7.61 - 7.52 (m, 1H), 7.49 - 7.36 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 1H), 6.92 - 6.83 (m, 1H), 6.78 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 3.52 - 3.40 (m, 2H), 3.17 - 3.14 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.76 - 2.64 (m, 4H), 1.38 - 1.33 (m, 9H), 1.24 - 1.18 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 443.3[(M+H) +]; Rt=0.908 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(400 毫克，903.85毫莫耳，1當量)的HCl/MeOH (40毫升)混合物在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(410毫克，粗製)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.14 (s, 1H), 7.75 (br s, 4H), 7.61 - 7.55 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.50 - 7.41 (m, 1H), 7.26 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.89 - 6.83 (m, 1H), 4.11 (br s, 2H), 3.46 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.88 - 2.81 (m, 2H), 2.74 (q, J= 7.4 Hz, 2H), 1.25 - 1.18 (m, 6H).  LC-MS (ES+, m/z): 343.1[(M+H) +]; Rt=0.703 分鐘。在0℃下將HCl/MeOH (4M)：HCl鼓泡到MeOH溶液中0.5小時。 步驟 3 (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl(methyl)amino)pyrazin- 2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl) carbamate）
在0℃下，向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(390毫克，1.14毫莫耳，1當量)和N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(347.19毫克，1.71毫莫耳，1.5當量)在DMF (4毫升)溶液中加入1-甲基咪唑(935.07毫克，11.39 毫莫耳，907.84微升，10當量)，然後加入TCFH (479.32 毫克，1.71 毫莫耳，1.5當量)，將混合物在0℃下攪拌3小時。LCMS顯示反應完成。將反應液倒入水(10毫升)中，用EtOAc(15毫升*3)萃取。合併有機層，用水(10毫升*3)、飽和鹽水(10毫升*3)洗滌，乾燥(Na 2SO 4)，過濾並濃縮，得到粗產物。將殘餘物通過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/1）純化得到呈黃色固體狀的（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（乙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（506毫克，958.96毫莫耳，收率：84.20%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 10.95 - 10.87 (m, 1H), 7.68 - 7.50 (m, 2H), 7.42 - 7.34 (m, 1H), 7.31 - 7.19 (m, 2H), 7.05 - 6.97 (m, 1H), 6.60 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.43 - 3.99 (m, 1H), 3.27 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.12 - 3.05 (m, 2H), 2.88 - 2.82 (m, 3H), 2.57 - 2.53 (m, 2H), 2.32 - 2.31 (m, 5H), 1.21 - 1.13 (m, 9H), 1.06 - 0.98 (m, 9H)。LC-MS (ES+, m/z): 528.2[(M+H) +]; Rt=0.890 分鐘。 步驟 4 ： (S)-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(300毫克，568.55毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (30毫升)中的混合物在16℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物並減壓濃縮，得到(S)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(298 毫克，粗製)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z)：428.2[(M+H) +]；Rt =0.721分鐘。 注意：0℃下將HCl鼓泡到MeOH溶液中0.5小時。 步驟 5 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(131.41 毫克，1.02 毫莫耳，1.5 當量)在DMF (2.5毫升)溶液中加入DIPEA (876.63 毫克，6.78 毫莫耳，1.18毫升，10 當量)、(S)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(290毫克，678.30毫莫耳，1當量)和BOP (450.00 毫克，1.02 毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物通過製備HPLC柱純化：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20% -50%，7分鐘。得到黃色固體的(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(89.46 毫克，165.14毫莫耳，收率：24.35%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.16 - 11.05 (m, 1H), 10.10 - 9.61 (m, 1H), 8.15 - 7.85 (m, 1H), 7.74 (br d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.59 - 7.50 (m, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 1H), 6.87 - 6.75 (m, 2H), 6.65 - 6.46 (m, 1H), 5.00 - 4.54 (m, 1H), 3.91 - 3.82 (m, 2H), 3.50 - 3.41 (m, 2H), 3.35 - 3.24 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.89 (s, 2H), 2.80 - 2.66 (m, 11H), 1.30 - 1.17 (m, 9H)(TFA 鹽)。LC-MS (ES+, m/z): 539.3[(M+H) +]; Rt=2.205 分鐘; HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 539.3488。 實施例 17 ( 化合物 224) ( S, E)-5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((3-(2-(2-(N- 甲基 -4-( 甲胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((3-(2-(2-( N-methyl-4-(methylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向1-甲基咪唑(1.51克，18.44毫莫耳，1.47毫升，10當量)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(449.68毫克，2.21毫莫耳，1.20當量)、3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺鹽酸鹽(600 毫克，1.84 毫莫耳，1當量)在DMF (5毫升)溶液中加入TCFH (620.81 毫克，2.21 毫莫耳，1.2當量)，將混合物在0℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。在25℃下，透過加入水(50毫升)淬熄反應混合物，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(20毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1)純化，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯，為黃色固體(400 毫克，721.86毫莫耳，收率：39.15%，純度：92.15%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.14 - 8.09 (m, 1H), 7.98 - 7.93 (m, 1H), 7.82 - 7.80 (m, 1H), 7.42 (br s, 2H), 7.21 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.27 (br s, 1H), 4.02 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.93 - 2.88 (m, 4H), 2.71 (br s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 1.36 - 1.16 (m, 15H), 1.10 - 1.05 (m, 4H); LC-MS (ES +, m/z): 511.4 [(M+H) +]; Rt=0.889 分鐘。 步驟 2 ： ( S, E)-(4-((1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氧代丁 -2- 烯 -1- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S,E)-(4-((1-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5- ethylpyrazin-2-yl)amino) phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl) amino)-4-oxobut-2-en-1-yl)(methyl)carbamate）
在0°C下，向（S）-5-環丙基-6-乙基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺鹽酸鹽（300毫克，671.18毫莫耳，1當量，HCl）和（E）-4-（（叔丁氧基羰基）（甲基）胺基）丁-2-烯酸（175.36毫克，814.70毫莫耳，1.21當量）於DMF （3毫升）中的溶液中添加DIEA（433.73毫克，3.36毫莫耳，584.54微升，5當量），然後添加BOP （296.85毫克，671.18毫莫耳，1當量）。將混合物在0°C下攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。通過加入水（100毫升）淬滅反應混合物，然後用EtOAc （50毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（30毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物通過製備型TLC （SiO 2，PE ：Etoac =0：1）純化，得到（ S, E）-（4-（（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基）-4-氧代丁-2-烯-1-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯，為黃色膠狀物（200毫克，329.09毫莫耳，收率：49.03%）。LC-MS （ES＋, m/z）：608.5[(M+H) +]。Rt =0.894分鐘。 步驟 2 ：（ S, E ） -5- 環丙基 -6- 乙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基 -4- （甲基胺基）丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((3-(2-(2-( N-methyl-4-(methylamino)but-2- enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
向（ S, E）-（4-（（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基）-4-氧代丁-2-烯-1-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（200毫克，329.09毫莫耳，1當量）的溶液中加入HCl/MeOH （4M，82.27微升，1當量）。將混合物在16°C下攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過製備型HPLC （柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：15％-45％，8分鐘），得到化合物（S, E）-5-環丙基-6-乙基-3-（（3-（2-（2-（N-甲基-4-（甲基胺基）丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（60.74毫克，97.33毫莫耳，收率：29.57%，純度：99.61％，TFA），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.04 (s, 1H), 8.81 (br s, 2H), 8.22 - 7.87 (m, 2H), 7.86 - 7.77 (m, 1H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 7.21 (br t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.85 - 6.70 (m, 2H), 6.64 - 6.46 (m, 1H), 5.01 - 4.55 (m, 1H), 3.80 - 3.66 (m, 2H), 3.37 (br s, 2H), 2.96 - 2.84 (m, 4H), 2.77 - 2.65 (m, 3H), 2.63 - 2.53 (m, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 1.31 - 1.19 (m, 6H), 1.14 - 1.03 (m, 4H)(TFA 鹽)。LC-MS (ES+, m/z): 508.3 [(M+H) +]。Rt=2.202 分鐘。 注意：HCl/甲醇（4M）：在0°C下將HCl 氣體鼓泡到溶液中0.5小時。 實施例 18 （化合物 226 ） （ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) ethyl) phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (E)-N- （ 4- （二甲基胺基）丁 -2- 烯醯基） -N- 甲基甘氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)- N-methylglycinate）
向(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(1.52克，9.17毫莫耳，2當量，HCl)在DMF (5毫升)溶液中加入DIPEA (5.93克，45.85 毫莫耳，7.99毫升，10 當量)、甲基甘氨酸叔丁酯(1.00克，4.58 毫莫耳，1當量，HCl)、HOBt (619.49 毫克，4.58 毫莫耳，1當量)和EDCI (1.32克，6.88 毫莫耳，1.5當量)。將混合物在25℃攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過製備HPLC柱純化：C18 (250*50mm *10 um)；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：15% -40%，10分鐘，得到 (E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯(540毫克，2.1 毫莫耳，收率：45.95%)，為棕色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 6.68-6.34 (m, 2H), 4.23-3.95 (m, 2H), 3.11-2.84 (m, 5H), 2.18-2.07 (m, 6H), 1.45-1.37 (m, 9H) LC-MS (ES +, m/z)：257.1[(M + H) +]；Rt =1.329分鐘。 步驟 2 ： ( E )- N -(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯醯基 )- N - 甲基甘氨酸（ (E)-N-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl) -N-methylglycine）
向( E)- N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)- N-甲基甘氨酸叔丁酯(270 毫克，1.05 毫莫耳，1當量)在DCM (2毫升)溶液中加入TFA (3.08克，27.01 毫莫耳，2毫升，25.65當量)。將混合物在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到(E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基甘氨酸(466 毫克，粗製)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO -d 6 ) δ = 9.97 (br d, J = 17.4 Hz, 1H), 6.97 - 6.48 (m, 2H), 4.28 - 4.02 (m, 2H), 3.95 - 3.82 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.76 (br d, J = 13.4 Hz, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 201.1[(M+H) +]; Rt=0.089 分鐘。 步驟 3 ： ( E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide）
向( E)- N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)- N-甲基甘氨酸(200.66 毫克，400.84毫莫耳，純度：40%，1.5 當量)在DMF (1 毫升)溶液中加入DIPEA (345.37毫克，2.67毫莫耳，465.46微升，10當量)、3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(80毫克，267.23毫莫耳，1當量)，然後加入BOP (177.28毫克，400.84毫莫耳，1.5當量)。將混合物在16℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備HPLC柱純化：C18-1150*30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5% -50%，8分鐘，得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(84.28 毫克，174.48毫莫耳，收率：65.29%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.09 - 11.04 (m, 1H), 9.84 - 9.67 (m, 1H), 8.21 (br s, 2H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 1H), 6.91 - 6.68 (m, 2H), 6.63 - 6.48 (m, 1H), 4.03 - 3.95 (m, 2H), 3.91 - 3.81 (m, 2H), 3.36 - 3.29 (m, 2H), 3.04 (s, 2H), 2.80 - 2.70 (m, 11H), 2.50 - 2.47 (m, 3H), 1.26 - 1.21 (m, 3H)(TFA 鹽)。  LC-MS (ES+, m/z): 482.3[(M+H) +]; Rt=2.056 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H]+: 482.2882。 實施例 19 ( 化合物 227) ( S, E )-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl) phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 (S, E)-(4-((1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氧代丁 -2- 烯 -1- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S,E)-(4-((1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-methylpyrazin-2-yl)amino) phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)amino)-4-oxobut-2-en-1-yl) (methyl)carbamate）
在0℃下，向(E)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基)胺基)丁-2-烯酸(279.92 毫克，1.30 毫莫耳，2 當量)在DMF(3毫升)中的溶液中加入DIPEA (840.39毫克，6.50毫莫耳，1.13毫升，10當量)、(S)-6-乙基-5-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(250毫克，650.24毫莫耳，1當量)，然後加入BOP (431.38 毫克，975.36毫莫耳，1.5當量)，將混合物在0℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應液倒入水(5毫升)中，用EtOAc(10毫升*3)萃取。合併有機層，用水(10毫升*3)、飽和鹽水(10毫升*3)洗滌，乾燥(Na 2SO 4)，過濾並濃縮，得到粗產物。將殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/1)純化，得到(S, E)-(4-((1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基)-4-氧代丁-2-烯-1-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(300 毫克，515.73毫莫耳，收率：79.31%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 582.3[(M+H) +]; Rt=0.782 分鐘。 步驟 2 ： ( S, E )-6- 乙基 -5- 甲基 -3-((3-(2-(2-(N- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-6-ethyl-5-methyl-3-((3-(2-(2-( N-methyl-4-(methylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將( S, E)-(4-((1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-甲基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基)-4-氧代丁-2-烯-1-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(280毫克，481.34毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (30毫升)中的混合物在0℃攪拌4小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物通過製備HPLC柱純化：Phenomenex Luna C18 75 *30mm *3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15% -45%，7分鐘，得到( S, E)-6-乙基-5-甲基-3-((3-(2-(2-(N-甲基-4-(甲基胺基)丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(96.08 毫克，196.89毫莫耳，收率：40.90%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 - 11.04 (m, 1H), 8.73 - 8.52 (m, 2H), 8.19 - 8.12 (m, 1H), 8.10 - 7.90 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.85 - 6.79 (m, 1H), 6.79 - 6.69 (m, 1H), 6.63 - 6.45 (m, 1H), 5.01 - 4.53 (m, 1H), 3.77 - 3.67 (m, 2H), 3.32 - 3.26 (m, 2H), 2.93 - 2.87 (m, 2H), 2.77 - 2.67 (m, 5H), 2.59 - 2.54 (m, 3H), 2.49 - 2.47 (m, 3H), 1.30 - 1.18 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 482.3[(M+H) +]; Rt=2.084 min; HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 482.2899。注意：0℃下將HCl鼓泡到MeOH溶液中0.5小時。 實施例 20 （化合物 228 ） （ S, E ） -5- 環丙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-methylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -5- 環丙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-methylpyrazine-2- carboxamide）
在0°C，向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（573.80毫克，3.46毫莫耳，1.5當量，HCl）在DMF（8毫升）中溶液的混合物，加入DIPEA （2.99克，23.10毫莫耳，10當量）、（S）-5-環丙基-6-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（1克，2.31毫莫耳，1當量，HCl），然後加入BOP （1.53克，3.46毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物濃縮至乾燥。將混合物透過製備型HPLC （柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10μm ；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：20%-50%，10分鐘），得到（S, E）-5-環丙基-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（320毫克，622.44毫莫耳，收率：26.95%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.05 (s, 1H), 9.70 (br s, 1H), 8.20 (br s, 1H), 8.11 - 7.88 (m, 1H), 7.80 (br s, 1H), 7.54 - 7.36 (m, 2H), 7.22 (br t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.81 (q, J= 8.0 Hz, 2H), 6.66 - 6.45 (m, 1H), 5.05 - 4.51 (m, 1H), 3.98 - 3.80 (m, 2H), 3.45 - 3.28 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.81 - 2.66 (m, 9H), 2.56 (s, 3H), 2.30 - 2.20 (m, 1H), 1.33 - 1.18 (m, 3H), 1.14 - 1.01 (m, 4H)(TFA, 鹽); LCMS (ES+, m/z): 508.2 [(M+H) +]; Rt= 2.117 分鐘; HRMS (EI): m/z [M] +實測值:508.3014。 實施例 21 （化合物 230 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （二甲基胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-(dimethylamino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- 溴 -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （二甲基胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-bromo- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl) phenyl)amino)-5-(dimethylamino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide）
向（ E）-4-溴丁-2-烯酸（45.43毫克，275.35毫莫耳，1.1當量）在DMF （1毫升）溶液中的混合物中加入DIPEA （323.52毫克，2.50毫莫耳，10當量）和（ S）-5-（二甲基胺基）-6-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（100毫克，250.32毫莫耳，1當量），最後在0°C在N 2下一次性加入BOP （166.07毫克，375.48毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物倒入水（20毫升）中。將水相用乙酸乙酯（20毫升*3）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（20毫升）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。將殘餘物通過柱色層分析法（SiO 2，石油醚：乙酸乙酯=0：1）。得到呈黃色固體的化合物（ S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-溴-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（二甲胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（100毫克，183.00毫莫耳，收率：73.11%）。LC-MS (ES+, m/z): 546.3[(M+H) +]。 Rt =0.804 分鐘。 步驟 2 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） - N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （二甲基胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（（ S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（azetidin-1-yl）- N-methylbut-2-enamido）propanamido）ethyl）phenyl）amino-5-（dimethylamino）-6- methylpyrazine-2-carboxamide）
向氮雜環丁烷鹽酸鹽（18.83毫克，201.30毫莫耳，1.1當量）在DMA（2毫升）中的混合物中加入NaI（82.29毫克，548.99毫莫耳，3當量）和DIPEA（236.51毫克，1.83毫莫耳，10當量），最後在25°C在N 2下一次性加入（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-溴-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（二甲基胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（100毫克，183.00毫莫耳，1當量）。將混合物在25°C下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物透過製備型HPLC （柱：Phenomenex C18 80*30mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：15％-45％，7分鐘）。得到化合物（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（二甲基胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（10.27毫克，19.65毫莫耳，收率：10.74%），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.15-11.09（m, 1H）, 10.03-9.91（m, 1H）, 8.11-7.90（m, 1H）, 7.83-7.77（m,1H）, 7.54（s, 1H）, 7.51-7.41（m, 2H）, 7.24-7.17（m, 1H）, 6.81-6.76（m, 1H）, 6.51-6.33（m, 1H）, 4.95-4.57（m, 1H）, 4.18-4.10（m, 2H）, 4.03-3.89（m, 4H）, 3.28（td, J =6.6, 13.3Hz, 2H）, 3.10（s, 6H）, 2.89（s, 2H）, 2.74-2.64（3H）, 2.47（s, 3H）, 2.42-2.30（m,2H）, 1.29-1.19（m, 3H）（TFA鹽）LC-MS （ES ＋, m/z）：523.3[(M+H)+]。Rt =2.046分鐘；hrms （ei）：m/z [M]＋實測值：523.3141。 實施例 22 （化合物 232 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-5-(isopropyl (methyl) amino)- 6- methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-5-(isopropyl (methyl) amino)-6- methylpyrazine- 2-carboxamide
向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（1.49克，11.51毫莫耳，1.2當量）在DMF（40毫升）中的溶液中加入DIEA（12.39克，95.90毫莫耳，16.70毫升，10當量）、（ S）-5-（異丙基（甲基）胺基）-6-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（4.1克，9.59毫莫耳，1當量），然後加入BOP（5.09克，11.51毫莫耳，1.2當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。通過加入水（120毫升）淬滅反應混合物，然後用EtOAc（90毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（100毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，DCM/MeOH =30/1至5/1）純化，得到（ S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（異丙基（甲基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（96.13毫克，198.40毫莫耳，收率：32.58%），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.11（s, 1H）, 8.07（brs, 1H）, 7.81-7.77（m, 1H）, 7.55-7.51（m, 1H）, 7.46-7.41（m, 2H）, 7.22-7.16（m, 1H）, 6.80-6.75（m, 1H）, 6.62-6.49（m, 2H）, 5.02-4.94（m, 1H）, 4.34（quin, J =6.6Hz, 1H）, 3.32-3.24（m,  2H）, 3.16-3.08（m, 2H）, 2.91-2.88（m, 3H）, 2.86-2.83（m, 2H）, 2.67（brs, 3H）, 2.44（s, 3H1.24-1.16（m, 9H）。LC-MS （ES ＋, m/z）：539.4[(M+H) +]；Rt =2.178分鐘；HRMS（EI）：m/z [M] ＋實測值：539.3435。 實施例 23 （化合物 233 ） （ S, E ） -5- （二甲基胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） - N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-5-(dimethylamino)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ E ） -1- （ 4- （二甲基胺基） - N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）環丁烷 -1- 羧酸（( E)-1-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)cyclobutane-1-carboxylic acid）
在0℃、N 2下，向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（41.46毫克，250.32毫莫耳，1當量）在DMF（1毫升）溶液中的混合物中加入DIPEA（323.51毫克，2.50毫莫耳，10當量）和（ S）-5-（二甲基胺基）-6-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（100毫克，250.32毫莫耳，1當量），最後一次性加入BOP（166.07毫克，375.48毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物透過製備型HPLC （柱：Phenomenex C1880*30mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：10％-40％，7分鐘），得到化合物（S, E）-5-（二甲基胺基）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）- N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（10.43毫克，20.43毫莫耳，收率：8.16%），為白色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.15-11.10（m, 1H）, 9.81-9.69（m, 1H）, 8.12-7.90（m, 1H）, 7.83-7.79（m, 1H）, 7.55-7.53（m, 1H）, 7.51-7.41（m, 2H）, 7.20（brt, J =7.7Hz, 1H）, 6.86-6.75（m, 2H）, 6.63-6.45（m, 1H）, 5.02-4.50（m, 1H）, 3.91-3.80（m, 2H）, 3.35-3.24（m, 2H）, 3.12-3.09（m, 6H）, 2.89（s, 2H）, 2.80-2.75（m, 6H）, 2.72-2.65（2.47（s, 3H）, 1.31-1.18（m, 3H）（TFA鹽）。LC-MS （ES ＋, m/z）：511.3[(M+H) +]。Rt =2.031分鐘；hrms （ei）：m/z [M]＋實測值：511.3134。 實施例 24 （化合物 241 ） （ E ） -5- 環丙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) acetamido)ethyl)phenyl)amino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ E ） -5- 環丙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) acetamido)ethyl)phenyl)amino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide）
在16°C下，向（ E）-N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸（500.00毫克，636.42毫莫耳，純度：40％，9.91e-1當量，TFA）在DMF（3毫升）的溶液中，加入DIPEA（830.13毫克，6.42毫莫耳，1.12毫升，10當量），3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，642.30毫莫耳，1當量）和BOP（426.12毫克，963.45毫莫耳，1.5當量）。將混合物在16°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物通過製備型HPLC （柱：Phenomenex C1880*30mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：得到（E）-5-環丙基-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）- N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（121.59毫克，185.02毫莫耳，收率：28.81%），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.13-10.99（m, 1H）, 9.80-9.61（m, 1H）, 8.03（brt, J =5.6Hz, 2H）, 7.83-7.76（m, 1H）, 7.49-7.39（m, 2H）, 7.27-7.18（m，1H）, 6.91-6.68（m, 2H）, 6.63-6.49（m, 1H）, 4.03-3.81（m, 4H）, 3.37-3.33（m, 2H）, 3.05-3.03（m, 1.5H）, 2.81-2.70（m, 9.5H）, 2.57-2.55（m, 3H）, 2.28-2.21（m, 1H）, 1.13-1.05（m, 4H）（TFA鹽）LC-MS （ES ＋, m/z）：494.3[(M+H) +]；Rt =2.088分鐘；HRMS（EI）：m/z [M] ＋實測值：494.2855。 實施例 25 （化合物 242 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-methylpyrazine-2-carboxamide）
在20°C下，向氮雜環丁烷鹽酸鹽（28.40毫克，303.61毫莫耳，1.1當量）、NaI（124.12毫克，828.04毫莫耳，3當量）、DIPEA（356.73毫克，2.76毫莫耳，480.76微升，10當量）於DMA（1毫升）的溶液中，加入（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-溴-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（150毫克，276.01毫莫耳，1當量）。將混合物在20°C攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物通過製備型HPLC柱純化：Waters xbridge BEH C18100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%)，得到（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（5.85毫克，11.26毫莫耳，收率：4.08%），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.13-10.98（m, 1H）, 8.24-8.12（m, 1H）, 8.10-7.72（m, 2H）, 7.49-7.35（m, 2H）, 7.26-7.17（m, 1H）, 6.84-6.78（m, 1H）, 6.60-6.28（m, 2H）, 5.02-4.46（m, 1H）, 3.32-3.03（m, 8H）, 2.85-2.64（m, 5H）, 2.56（s, 3H）, 2.28-2.21（m, 1H）, 2.05-1.77（m, 2H）, 1.17（brd, J =7.2Hz, 3H）, 1.14-1.04（m, 4H）；LC-MS （ES ＋, m/z）：520.3[(M+H) +]。Rt =2.132分鐘；HRMS（EI）：m/z [M] ＋實測值：520.3032。 實施例 26 （化合物 243 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5,6-diethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5,6-diethylpyrazine-2-carboxamide）
在0°C、N 2下，向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（91.43毫克，552.07毫莫耳，1.1當量，HCl）在DMF（0.5毫升）中的混合物中，加入DIEA（648.65毫克，5.02毫莫耳，874.19微升，10當量）和（ S）-5,6-二乙基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基苯基胺基）吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，501.88毫莫耳，1當量），然後一次性地加入BOP （332.96毫克，752.82毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物倒入水（10毫升）中，然後用乙酸乙酯（20毫升*3）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（20毫升*2）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物通過製備型HPLC（TFA條件）純化（柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：20%-50%, 8分鐘)，得到目標化合物（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（26.08毫克，51.02毫莫耳，收率：10.16%），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.22-10.90（m, 1H）, 9.76-9.52（m, 1H）, 8.22-8.10（m, 1H）, 7.92（brt, J =5.6Hz, 1H）, 7.90-7.80（m, 1H）, 7.66-7.59（m, 1H）, 7.52（s, 1H）, 7.28-7.18（m, 1H），6.90-6.73（m, 2H）, 6.66-6.42（m, 1H）, 5.07-4.44（m, 1H）, 3.93-3.77（m, 2H）, 3.32-3.27（m, 2H）, 2.90（s, 2H）, 2.88-2.82（m, 2H）, 2.81-2.691.33-1.21（m, 9H）（TFA鹽）。1HNMR（400MHz, D2O）δ=7.56-7.44（m, 1H）, 7.32-7.24（m, 1H）, 7.24-7.08（m, 1H）, 6.86（brd, J =7.2Hz, 1H）, 6.80-6.55（m, 1H）, 6.54（brs, 1H）, 4.84（brd, J =7.3Hz, 1H）, 3.86-3.67（m, 2H）, 3.54-3.33（m, 2H）, 2.84-2.63（m, 15H）, 1.35-1.16（m, 9H）。LC-MS （ES＋, m/z）：510.4[(M+H)+]；Rt =2.199分鐘。HRMS（EI）：m/z [M]＋實測值：510.3169。 實施例 271 （化合物 244 ） （ S ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 炔醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-ynamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 炔醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-ynamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide）
在0°C，向4-（二甲基胺基）丁-2-炔酸（148.81毫克，1.17毫莫耳，3當量）（150毫克，390.14毫莫耳，1當量）在DMF（3毫升）的溶液中，加入DIEA（504.23毫克，3.90毫莫耳，679.56微升，10當量）、（S）-6-乙基-5-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺，然後在0°C加入BOP（517.66毫克，1.17毫莫耳，3當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。透過加入水（50毫升）淬滅反應混合物，然後用EtOAc（30毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（20毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物通過製備型HPLC（柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：15%-45%，8分鐘)，得到（S）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-炔醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺，為黃色固體（96.13毫克，198.40毫莫耳，收率：32.58%，純度：98.36％）。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.11-11.01（m, 1H）, 8.05（brt, J =5.6Hz, 2H）, 7.90-7.81（m, 1H）, 7.71-7.63（m, 1H）, 7.47-7.41（m, 1H）, 7.26-7.19（m, 1H）, 6.85-6.80（m, 1H）, 4.89-4.78（m, 1H10H）, 2.77-2.66（m, 1H）, 2.50（brs, 3H）, 1.36-1.20（m, 6H）LC-MS （ES＋, m/z）：494.3[(M+H) +]；Rt =2.122分鐘；HRMS（EI）：m/z [M ＋H] ＋：494.2875。 實施例 28 （化合物 246 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （雙（甲基 -d3 ）胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （乙基（甲基）胺基） 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl- d3)amino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （雙（甲基 -d3 ）胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （乙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl- d3)amino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide）
在0°C，將苯並三唑-1-基氧基三（二甲基胺基）-鏻六氟磷酸鹽（429毫克，0.970毫莫耳，3當量）於N,N-二甲基甲醯胺（1毫升）的溶液，加入到（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯酸鹽酸鹽（290毫克，0.970毫莫耳，3當量）與作為雜質的氯化鋰、（S）-6-乙基-5-（乙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺鹽酸鹽（150毫克，0.323毫莫耳，1當量）和 N,N-二異丙基乙胺（0.45毫升，2.59毫莫耳，8當量）於 N,N-二甲基甲醯胺（0.5毫升）中的混合物中。1小時後，將反應物用乙酸乙酯（20毫升）稀釋，並在0°C用飽和碳酸氫鈉（10毫升）淬滅。有機相用5％氯化鋰（3*10毫升）和鹽水（10毫升）洗滌。有機相用硫酸鈉乾燥，減壓除去溶劑。將殘餘物進行快速色譜（0-40％甲醇/二氯甲烷）。合併含有產物的乾淨級分，減壓除去溶劑。將殘餘物與乙腈（10毫升）共蒸發。將殘餘物吸收在乙腈（10毫升）和水（10毫升）中，並進行凍乾，提供（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（雙（甲基-d3）胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙基-5-（乙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（61毫克，0.112毫莫耳，收率：34.53%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ11.12 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.51 – 7.42 (m, 2H), 7.21 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.65 – 6.57 (m, 1H), 6.56 – 6.41 (m, 1H), 4.99 (m, 1H), 3.47 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.33 – 3.20 (m, 2H), 3.05 (s, 3H), 3.03 – 2.93 (m, 2H), 2.85 (s, 2H), 2.80 – 2.65 (m, 5H), 1.31 – 1.14 (m, 9H)。 LC-MS (ES+, m/z): 545.3 [(M+H) +]; Rt = 3.818 分鐘。 實施例 29 （化合物 247 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （雙（甲基 -d3 ）胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6- methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （雙（甲基 -d3 ）胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6-methylpyrazine-2- carboxamide）
向5-[異丙基（甲基）胺基]-6-甲基-3-[3-[2-[[（2S）-2-（甲基胺基）丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；甲烷；鹽酸鹽（120毫克，0.25毫莫耳，1當量）和（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯酸（135毫克，1.002，4.0當量）在DMF （0.25毫升）的溶液中，加入在0°C下攪拌的DIPEA （194毫克，1.5毫莫耳，0.26毫升，5當量），隨後添加HOBt（444毫克，1.002毫莫耳，4.0當量）。懸浮液澄清，然後變為深棕色。將反應物在相同溫度下攪拌3小時。LCMS顯示反應未完成。在0°C下添加乙酸乙酯（10毫升）。將合併的有機層用碳酸氫鈉（飽和）洗滌2次，然後用鹽水洗滌2次。合併的有機層經硫酸鈉乾燥。濃縮溶劑，得到黃色固體（170毫克）。將混合物使用24克矽膠正相柱（silica gel normal phase column）純化，在30分鐘內使用從dcm調整至含10％甲醇的dcm進行洗脫 。收集產物且濃縮並凍乾，得到（S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（雙（甲基-d3）胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（異丙基（甲基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（29毫克，0.0532毫莫耳，收率：21.2%），為灰白色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO）δ11.12（s, 1H）, 7.92（s, 1H）, 7.81（s, 1H）, 7.61-7.35（m, 3H）, 7.22（t, J =7.7Hz，1H）, 6.88-6.70（m, 2H）, 6.70-6.40（m, 1H）, 4.99（d, J =7.5Hz, 1H）, 4.48-4.23（m, 1H）, 3.66（s, 1H）, 2.90（d, J =6.1Hz, 6H）, 2.71（s, 4H, 2.45（d, J =2.2Hz, 4H）, 1.43-0.99（m, 11H）。LC-MS （ES ＋, m/z）：545.3[(M+H) +]；Rt =3.906分鐘。 實施例 30 ( 化合物 248) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二 ( 甲基 -d3) 胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-methylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二 ( 甲基 -d3) 胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-methylpyrazine-2- carboxamide）
向(E)-4-[雙(三氘化甲基)胺基]丁-2-烯酸的漿料；氯鋰；鹽酸鹽(248.49 毫克，831.5毫莫耳，3.0 當量)在DMF(0.7毫升)的漿液中，加入DIEA(358.21毫克，2.77 毫莫耳，0.48 毫升，10 當量)和(S)-5-環丙基-6-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(120毫克，277.17毫莫耳，1當量)，然後在0.8毫升的DMF中加入BOP (367.76 毫克，831.5毫莫耳，3當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物濃縮並透過矽膠柱純化，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(雙(甲基-d3)胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-環丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(35 毫克，66.8毫莫耳，收率：24.09%)，為黃色固體。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.71 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.20 (m, 1H), 6.87 - 6.80 (m, 2H), 6.41 m, 2H), 5.94 (s, 1H), 5.18(m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.20 – 3.09 (m, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.79 (m, 2H), 2.56 (m, 3H), 2.11 (m, 1H), 1.35 -01.32 (m, 3H), 1.20 (m, 2H), 1.11 (m, 2H)。LC-MS (ES+, m/z): 514.3 [(M+H) +]; Rt=3.790 分鐘。 實施例 31 ( 化合物 249) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二 ( 甲基 -d3) 胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二 ( 甲基 -d3) 胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
向(E)-4-[雙(三氘化甲基)胺基]丁-2-烯酸(1.50當量，164 毫克，0.631毫莫耳)和N,N-二異丙基乙胺(10.0當量，0.73毫升，4.20 毫莫耳)在DMF(0.75毫升)溶液的混合物中加入6-乙基-5-[異丙基(甲基)胺基]-3-[3-[2-[ [(2S)-2-(甲基胺基)丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺；鹽酸鹽(1.00當量，201毫克，0.420毫莫耳)。在N 2下將混合物冷卻至0℃，滴加BOP (1.50當量，279 毫克，0.631毫莫耳)在DMF (0.75毫升)溶液。在0℃下攪拌反應2小時。用EtOAc(30毫升)和NaHCO3(aq)(10毫升)稀釋反應混合物，用NaHCO 3(aq)(1x)、水(2x)和鹽水(1x)洗滌。分離有機層，用Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮。將粗產物在矽膠柱上純化，用0-10% MeOH/DCM洗脫，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(雙(甲基-d3)胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(61 毫克，0.109 毫莫耳，收率：25.96%)，為灰白色固體。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 10.66 (s, 1H), 7.49 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.70 – 6.52 (m, 1H), 6.40 (dd, J = 25.3, 15.1 Hz, 1H), 4.96 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.24 (p, J = 6.8 Hz, 1H), 3.35 (ddd, J = 42.2, 13.3, 6.3 Hz, 2H), 3.08 – 2.95 (m, 2H), 2.88 – 2.76 (m, 5H), 2.68 (dt, J = 14.8, 6.4 Hz, 5H), 1.39 – 1.07 (m, 12H)。 LC-MS (ES +, m/z): 559.4 [(M+H) +]; Rt=3.992 分鐘。 實施例 32 ( 化合物 250) (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)acetamido)ethyl) phenyl)amino)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： ( E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido)acetamido) ethyl)phenyl)amino)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6-methylpyrazine-2- carboxamide）
向( E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基甘氨酸(248.82 毫克，395.88毫莫耳，1.5 當量，TFA)、BOP (175.09 毫克，395.88毫莫耳，1.5 當量)在DMF (0.5毫升)溶液中，然後加入3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-5-(異丙基(甲基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，263.92毫莫耳，1當量，HCl)在DMF (0.5毫升)溶液，加入DIPEA (341.09 毫克，2.64 毫莫耳，10 當量)，將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。殘餘物通過製備型HPLC純化(柱：Phenomenex Luna C18 150 *30mm *5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10%-40%，8分鐘)，得到( E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-(異丙基(甲基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(10.95 毫克，20.87毫莫耳，收率：7.91%，純度：100%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ= 11.11 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.24 - 7.99 (m, 1H), 7.79 (br s, 1H), 7.56 - 7.37 (m, 3H), 7.21 (dt, J = 3.2, 7.7 Hz, 1H), 6.92 - 6.67 (m, 2H), 6.64 - 6.48 (m, 1H), 4.34 (td, J = 6.6, 13.2 Hz, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 2H), 3.93 - 3.82 (m, 2H), 3.37 - 3.25 (m, 2H), 3.04 (s, 1.5H), 2.89 (s, 3H), 2.82 - 2.77 (m, 4.5H), 2.76 - 2.66 (m, 5H), 2.44 (s, 3H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 525.3[(M+H) +]; Rt=2.170 分鐘。HRMS:525.3257。 SFC: 100%。 中間體 4D （ S ） -5- （乙基（甲基）胺基） -6- 甲基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-(ethyl(methyl)amino)-6-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- （乙基（甲基）胺基） -5- 甲基吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl(3-((3-carbamoyl-6-(ethyl(methyl)amino)-5- methylpyrazin -2-yl)amino) phenethyl)carbamate）
在20°C下，向（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯，N-甲基乙胺（1.17克，19.71毫莫耳，1.69毫升，8當量）在DMA（10毫升）中的溶液中，加入DIPEA（3.18克，24.64毫莫耳，4.29毫升，10當量）。將混合物在100°C下攪拌10小時。LC-MS顯示檢測到所需化合物。將反應混合物倒入水（50毫升）中，然後用EtOAc （30毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（30毫升*1）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/1至0/1）純化，得到呈黃色固體的目標化合物（3-（（3-胺基甲醯基-6-（乙基（甲基）胺基）-5-甲基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（900毫克，2.10毫莫耳，收率：85.24%）。LC-MS（ES ＋，m/z）：429.3[(M+H) +]；Rt =0.906分鐘。 步驟 2 ： 3- （（ 3- （ 2- 胺基乙基）苯基）胺基） -5- （乙基（甲基）胺基） -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)phenyl)amino)-5-(ethyl(methyl)amino)-6- methylpyrazine-2-carboxamide）
向（3-（（3-胺基甲醯基-6-（乙基（甲基）胺基）-5-甲基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（900毫克，1.94毫莫耳，1當量，HCl）在HCl/MeOH （4M，4.8毫升，10當量）的溶液中在14°C下攪拌混合物2小時。TLC顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。得到目標化合物3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-5-（乙基（甲基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（750毫克，2.06毫莫耳，粗製），為黃色固體。 步驟 3 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙烷 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl(S)-(1-((3-((3-carbamoyl-6-(ethyl(methyl)amino)-5- methylpyrazin -2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-5-（乙基（甲基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（750毫克，2.06毫莫耳，1當量，HCl）、N-（叔丁氧基羰基）-N-甲基-L -丙氨酸（459.53毫克，2.26毫莫耳，1.1當量）在DMF（3毫升）中的溶液中加入BOP（1.36克，3.08毫莫耳，1.5當量）和DIPEA（2.66克，20.56毫莫耳，3.58毫升，10當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。LC-MS顯示檢測到所需化合物。將反應混合物倒入水（30毫升）中，然後用EA（3*30毫升）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（1*30毫升）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/1至0/1）純化。得到少量化合物（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（乙基（甲基）胺基）-5-甲基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（800毫克，1.56毫莫耳，收率：75.77%），其為黃色固體。LC-MS （ES ＋, m/z）：514.3[(M+H) +]；Rt =0.881分鐘。 步驟 4 ：（ S ） -5- （乙基（甲基）胺基） -6- 甲基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-(ethyl(methyl)amino)-6-methyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
向（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（乙基（甲基）胺基）-5-甲基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（800毫克，1.56毫莫耳，1當量）的溶液中加入HCl/MeOH （4M，389.38微升，1當量）。將混合物在14°C攪拌1小時。TLC 顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。得到目標化合物（S）-5-（乙基（甲基）胺基）-6-甲基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（700毫克，粗製），為黃色固體。 實施例 33 （化合物 252 ） （ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （乙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl (methyl) amino) pyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ：（ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （乙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl (methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在16℃下，向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(100 毫克，292.02毫莫耳，1當量)、(E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基甘氨酸(175.42 毫克，438.04毫莫耳，純度：50%，1.5 當量)、BOP (193.74 毫克，438.04毫莫耳，1.5 當量)在DMF(1毫升)的溶液中加入DIPEA (377.42毫克，2.92毫莫耳，508.65微升，10 當量)。將混合物在16℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物通過製備HPLC柱純化：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15% -45%，8分鐘)得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(11.6 毫克，22.10毫莫耳，收率：7.57%，純度：99.94%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.17 - 11.06 (m, 1H), 9.90 - 9.63 (m, 1H), 8.23 - 8.00 (m, 1H), 7.75 (br s, 1H), 7.59 - 7.42 (m, 3H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 6.92 - 6.68 (m, 2H), 6.65 - 6.49 (m, 1H), 4.04 - 3.95 (m, 2H), 3.93 - 3.81 (m, 2H), 3.46 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 - 3.26 (m, 2H), 3.04 (s, 4H), 2.82 - 2.67 (m, 12H), 1.26 - 1.17 (m, 6H); LC-MS (ES+, m/z): 525.3 [(M+H) +]。 RT=2.177 分鐘; HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 525.3267。 實施例 34 ( 化合物 253) (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-(ethyl(methyl)amino)-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： ( S, E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-(乙基(甲基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺 （( S,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-(ethyl(methyl)amino)-6- methylpyrazine-2-carboxamide）
向( S)-5-(乙基(甲基)胺基)-6-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(130毫克，314.38毫莫耳，1當量)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(57.27 毫克，345.82毫莫耳，1.1當量，HCl)在DMF (1毫升)溶液中，加入BOP (208.56 毫克，471.57毫莫耳，1.5當量)和DIEA (406.30 毫克，3.14 毫莫耳，547.58微升，10當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LC-MS，HPLC顯示檢測到所需化合物，將反應混合物倒入水(30毫升)中，然後用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(30毫升*1)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過製備型HPLC(TFA條件；柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10% -40%，8分鐘)純化，得到目標化合物(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-(乙基(甲基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(10.3 毫克，19.59毫莫耳，收率：6.23%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.13-11.09 (m, 1H), 8.11-7.89 (m, 1H), 7.79 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.52 (br s, 1H), 7.49-7.43 (m, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.23-7.17 (m, 1H), 6.85-6.76 (m, 2H), 6.64-6.47 (m, 1H), 4.59 (br s, 1H), 5.00-4.52 (m, 1H), 3.92-3.80 (m, 2H), 3.50 (q, J = 7.0 Hz, 2H)，3.36-3.24 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.89 (s, 2H), 2.74-2.74 (m, 6H), 2.73-2.47 (m, 1H), 2.31,1H), 1.29H, 1.31 (1H), 1.31,1H)。LC-MS (ES +, m/z)：525.33 [(M + H) +]；Rt =2.131分鐘。HRMS (EI)：M/z [ M + H ] +實測值：525.3257。SFC：97.58%。 實施例 35 ( 化合物 254) (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)-5-fluorophenyl)amino)-6-methylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-5- 環丙基 -3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-5-cyclopropyl-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)-5-fluorophenyl)amino)-6-methylpyrazine-2- carboxamide）
在0°C及N 2下，向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（35.16毫克，212.32毫莫耳，1.1當量，HCl）於DMF（1毫升）溶液中的混合物中，一次性加入DIPEA（249.46毫克，1.93毫莫耳，336.20微升，10當量）和（S）-5-環丙基-3-（（3-氟-5-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺（80毫克，193.02毫莫耳，1當量）和BOP（128.05毫克，289.52毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物倒入水（20毫升）中，水相用乙酸乙酯（100毫升*3）萃取，合併的有機相用鹽水（10毫升*3）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物透過製備型HPLC （TFA條件）柱純化：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30% -50%，8分鐘，得到目標化合物(S, E)-5-環丙基-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)-5-氟苯基)胺基)-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(11.17 毫克，21.09毫莫耳，收率：10.93%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.27-11.19 (m, 1H), 9.73-9.64 (m, 1H), 8.26-8.21 (m, 1H), 8.09-7.89 (m, 1H), 7.84 (br s, 1H), 7.63-7.55 (m, 1H), 7.01-6.97 (m, 1H), 6.84-6.76 (m, 1H), 6.64-6.47 (m, 2H), 5.01-4.52 (m, 1H), 3.95-3.81 (m, 2H), 3.32-3.26 (m, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.78-2.74 (m, 6H), 2.72-2.66 (m, 3H), 2.56 (s, 3H), 2.30-2.24 (m, 1H), 1.28-1.28 (m, 1H), 15.03, 1H), 2.07 (m, 1H)。1H NMR (400 MHz, D2O)δ= 7.00 (br D, J = 11.9 Hz, 1H), 6.79-6.60 (m, 2H), 6.59-6.44 (m, 1H), 6.35 (br D, J = 8.9 Hz, 1H), 4.90-4.54 (m, 1H), 3.86-3.73 (m, 2H), 3.46-3.28 (m, 2H), 2.85-2.79 (m, 8H), 2.72-2.53 (m, 3H), 2.29 (br s, 3H), 2.00-1.87 (m, 1H), 1.34-1.20 (m, 3H), 0.97 (br s, 2H), 0.79 (br s, 2H)。LC-MS (ES +, m/z)：526.3[(M + H) +]；Rt =2.202分鐘。HRMS (EI)：M/z [ M ] +實測值：526.2921。 實施例 36 ( 化合物 302) ( R, E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( R,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropyl (methyl) amino) pyrazine-2- carboxamide） 步驟 3 ： ( R ， E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( R,E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino) -N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide ）
向( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(260.85毫克，1.58 毫莫耳，1.5 當量，HCl)、DIPEA(1.36克，10.50毫莫耳，1.83毫升，10 當量)的DMF(3毫升)溶液中，然後在0℃下加入( R)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(500.00 毫克，1.05 毫莫耳，1當量，HCl)的DMF(3毫升)溶液，然後在0℃下加入BOP (696.59毫克，1.58毫莫耳，1.5當量)，將混合物在0℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。殘餘物透過製備型HPLC純化(柱：Phenomenex Luna C18 250 *50mm *10μm；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25% -55%，10分鐘)，得到(R, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(109.07 毫克，193.18毫莫耳，收率：18.75%，純度：99.75%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.10 (s, 1H), 8.12-7.88 (m, 1H), 7.76 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.56-7.42 (m, 3H), 7.21 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.87-6.74 (m, 2H), 6.67-6.45 (m, 1H), 5.02-4.53 (m, 1H), 4.25 (quind, J = 6.7, 13.2 Hz, 1H), 3.94-3.81 (m, 2H), 3.36-3.23 (m, 2H), 2.94-2.84 (m, 5H), 2.82-2.65 (m, 11H), 1.31-1.14 (m, 12H)。LC-MS (ES +, m/z)：553.3[(M + H) +]；Rt =2.293分鐘；HRMS：553.3621。SFC：100%。 實施例 37 ( 化合物 303) (S, E)-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 )-3-((3-(2-(2-(N- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-6-ethyl-5-(isopropylamino)-3-((3-(2-(2-(N-methyl-4-(methylamino) but-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-(4-((1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氧代丁 -2- 烯 -1- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (S, E)-(4-((1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropylamino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) (methyl) amino)-4-oxobut-2-en-1-yl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向(E)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基)胺基)丁-2-烯酸(194.83 毫克，905.17毫莫耳，1.2 當量)在DMF(3毫升)中的溶液中，加入DIPEA(974.89 毫克，7.54 毫莫耳，10 當量)和(S)-6-乙基-5-(異丙基胺基)-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(350 毫克，754.31毫莫耳，1當量，HCl)，然後加入BOP(500.42 毫克，1.13 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1.5小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(20毫升)中，用EtOAc(10毫升*2)萃取。有機層用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升*2)洗滌，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠色層分析法純化(DCM/MeOH =10:1)，得到(S, E)-(4-((1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基)-4-氧代丁-2-烯-1-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(437.5 毫克，700.26毫莫耳，收率：92.83%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.30-11.25 (m, 1H), 8.16-7.88 (m, 1H), 7.73 (br s, 1H), 7.65-7.56 (m, 1H), 7.47-7.40 (m, 1H), 7.35-7.19 (m, 2H), 6.87-6.76 (m, 2H), 6.65-6.36 (m, 2H), 5.09-4.54 (m, 1H), 4.37-4.26 (m, 1H), 4.03-3.88 (m, 2H), 3.32 (br d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.91-2.79 (m, 5H), 2.76 (s, 3H), 2.65 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.48-1.42 (m, 9H), 1.35-1.24 (m, 12H)；LC-MS (ES +, m/z)：625.5 [(M + H) +]。RT =0.855 分鐘。 步驟 2 ： (S, E)-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 )-3-((3-(2-(2-(N- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-6-ethyl-5-(isopropylamino)-3-((3-(2-(2-(N-methyl-4-(methylamino) but-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2- carboxamide）
將（S, E）-（4-（（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基）-4-氧代丁-2-烯-1-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（500毫克，800.29毫莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，30毫升，149.95當量）的混合物在16°C下攪拌1.5小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到殘餘物。將所得產物溶解於DMF 中並過濾，得到粗產物。粗產物通過製備型HPLC 柱純化：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3μm ；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5%-50%，8分鐘)，得到(S, E)-6-乙基-5-(異丙基胺基)-3-((3-(2-(2-(N-甲基-4-(甲基胺基)丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(90.4 毫克，167.67毫莫耳，收率：20.95%，純度：97.31%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.25-11.19 (m, 1H), 8.79-8.51 (m, 2H), 8.10-7.88 (m, 1H), 7.64-7.54 (m, 2H), 7.46-7.37 (m, 1H), 7.28-7.15 (m, 2H), 6.81-6.69 (m, 3H), 6.63-6.44 (m, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.33-4.19 (m, 1H), 3.79-3.67 (m, 2H), 3.31-3.24 (m, 2H), 2.93-2.88 (m, 2H), 2.73 (br s, 3H), 2.58 (br t, J = 7.3 Hz, 5H), 1.29-1.17 (m, 12H)； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 8.08-7.86 (m, 1H), 7.66-7.57 (m, 1H), 7.44-7.36 (m, 1H), 7.19 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82-6.66 (m, 2H), 6.60-6.43 (m, 1H), 4.98-4.51 (m, 1H), 4.28-4.20 (m, 1H), 3.72 (br d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.36-3.23 (m, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.72-2.64 (m, 3H), 2.58-2.53 (m, 5H), 1.27-1.15 (m, 12H)；LC-MS (ES +, m/z)：525.3 [(M + H) + ]。RT =2.143分鐘；HRMS (EI)：M/z [ M + H ] +實測值：525.3275。 實施例 38 （化合物 305 ） （ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- 異丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido) ethyl)phenyl)amino)-5-isopropyl-6-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- 異丙基 -6- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-isopropyl-6-methylpyrazine-2- carboxamide）
向( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(68.54 毫克，413.83毫莫耳，1.5 當量，HCl)的DMF (1毫升)溶液中，加入DIPEA(356.56 毫克，2.76 毫莫耳，480.54微升，10 當量)、(S)-5-異丙基-6-甲基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(120 毫克，275.89毫莫耳，1當量，HCl)和BOP (183.03 毫克，413.83毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備HPLC柱純化：Phenomenex Luna 80 *30mm *3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10% -50%，8分鐘，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)- N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-異丙基-6-甲基吡嗪-2-甲醯胺(27 毫克，52.95毫莫耳，收率：19.19%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ= 11.12-11.01 (m, 1H), 9.82-9.58 (m, 1H), 8.32-8.14 (m, 1H), 8.12-7.87 (m, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.67-7.56 (m, 1H), 7.56-7.49 (m, 1H), 7.28-7.19 (m, 1H), 6.87-6.75 (m, 2H), 6.65-6.45 (m, 1H), 5.04-4.51 (m, 1H), 3.94-3.79 (m, 2H), 3.34-3.23 (m, 3H), 2.92-2.87 (m, 2H), 2.80-2.68 (m, 9H), 2.49-2.47 (m, 3H), 1.30-1.21 (m, 9H)。(TFA鹽) LC-MS (ES +, m/z)：510.3[(M + H) +]；Rt =2.162分鐘；HRMS (EI)：M/z [ M + H ] +實測值：510.3194。 實施例 39 ( 化合物 306) (S, E)-5- 環丙基 -3-((5-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-5-cyclopropyl-3-((5-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut- 2-enamido) propanamido) ethyl) pyridin-3-yl) amino)-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide、 步驟 1 ： (S, E)-5- 環丙基 -3-((5-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-5-cyclopropyl-3-((5-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut- 2-enamido) propanamido) ethyl) pyridin-3-yl) amino)-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide）
在0℃下，向( S)-5-環丙基-6-乙基-3-((5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-3-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺鹽酸鹽(50 毫克，111.62毫莫耳，1當量HCl)的DMF (1毫升)溶液中，加入(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(17.30 毫克，104.45毫莫耳，9.36e-1當量，HCl)、BOP (59.24 毫克，133.94毫莫耳，1.2當量)和DIEA(72.13 毫克，558.08毫莫耳，97.21微升，5當量)，將混合物在0℃下攪拌2小時。LC-MS顯示反應完全消耗。在15℃下透過加入水(50毫升)淬熄反應混合物，然後用EtOAc(20毫升*3)萃取。用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌合併的有機層。鹽水(20毫升*2)，Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5% -35%，8分鐘)純化，得到(S, E)-5-環丙基-3-((5-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-3-基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺，為淡黃色固體(44.03 毫克，84.40毫莫耳，收率：75.62%，純度：100%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.19 (s, 1H), 10.70-10.05 (m, 1H), 8.78 (br s, 1H), 8.19 (br s, 1H), 8.17-7.94 (m, 3H), 7.91 (br s, 1H), 6.86-6.76 (m, 1H), 6.66-6.46 (m, 1H), 4.97-4.52 (m, 1H), 3.92-3.84 (m, 2H), 3.36 (br d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.95-2.89 (m, 2H), 2.87 (s, 2H), 2.77 (br s, 8H), 2.66 (s, 1H), 2.34-2.26 (m, 1H), 1.30-1.18 (m, 6H), 1.14-1.04 (m, 4H)。LC-MS (ES +, m/z)：523.3[(M + H) +]；Rt =1.753分鐘。HRMS (EI)：M/z [ M ] +實測值：523.3149。 實施例 40 ( 化合物 307) ( S, E )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-(N- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-( N-methyl-4- (methylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine- 2-carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-(4-((1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氧代丁 -2- 烯 -1- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S,E)-(4-((1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl(methyl) amino)pyrazin-2-yl)amino)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl) amino)-4-oxobut-2-en-1-yl)(methyl)carbamate）
向€ -4-（（叔丁氧基羰基）（甲基）胺基）丁-2-烯酸（189.12毫克，878.61毫莫耳，1.2當量）和DIEA（946.26毫克，7.32毫莫耳，1.28毫升，10當量）在DMF（2毫升）中的溶液中加入（S）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（350毫克，732.17毫莫耳，1當量，HCl），然後加入BOP （485.74毫克，1.10毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應物倒入水（15毫升）中並用EtOAc （10毫升*2）萃取。合併有機層，用水（10毫升*2），飽和鹽水（10毫升）洗滌，乾燥（Na 2SO 4），過濾並濃縮，得到粗產物。透過矽膠硫醇凝膠色層分析法（石油醚/EtOAc =1/1）TLC （板1 Rf=0.69）純化粗產物，得到呈黃色固體狀的（S, E）-（4-（（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基）-4-氧代丁-2-烯-1-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，626.18毫莫耳，收率：85.52%）。LC-MS （ES＋, m/z）：639.5[(M+H) +]；Rt =0.827分鐘。 步驟 2 ：（ S, E ） -6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基 -4- （甲基胺基）丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-( N-methyl-4-(methylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將（ S, E）-（4-（（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基）-4-氧代丁-2-烯-1-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，626.18毫莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，15毫升，95.82當量）的混合物在16°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾得到濾液。粗產物透過製備型HPLC 柱純化：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：10%-40%，8分鐘，得到（S, E）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（N-甲基-4-（甲基胺基）丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（101.00毫克，175.61毫莫耳，收率：28.04%，HCl），其為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.14-11.07（m, 1H）, 8.74-8.46（m, 2H）, 8.13-7.83（m, 1H）, 7.76（brs, 1H）, 7.56-7.50（m, 1H）, 7.50-7.39（m, 2H）, 7.25-7.14（m, 1H）, 6.79（d, J =7.3Hz, 1H）, 6.77-6.66（m, 1H）, 6.63-6.43（m, 1H）, 5.02-4.51（m, 1H）, 4.25（quin, J =6.6Hz, 1H）, 3.90-3.55（m, 2H）, 3.30-3.24（m, 2H）, 2.93-2.84（m, 5H）, 2.78-2.63（m, 6H）, 2.57（brs, 2H）, 1.29-1.19（m, 12H）（TFA, 鹽）。 1HNMR（400MHz, D2O）δ=8.09-7.63（m, 1H）, 7.54-7.49（m, 1H）, 7.46-7.40（m, 1H）, 7.20（brt, J =7.7Hz, 1H）, 6.82-6.65（m, 2H）, 6.63-6.38（m, 1H）, 5.00-4.50（m, 1H）, 4.24（quin, J =6.6Hz, 1H）, 3.82-3.59（m, 2H）, 3.33-3.20（m, 2H）, 2.93-2.84（m, 5H）, 2.76-2.64（m, 6H）, 2.56（s, 2H）, 1.22-1.16（m, 12H）（TFA, 鹽）。LC-MS （ES＋, m/z）：539.3[(M+H)+]；Rt =2.276分鐘。HRMS（EI）：m/z [M]＋實測值：539.3473。SFCC ：95.15％。 實施例 41 （化合物 308 ） 6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-( N-methylacrylamido) acetamido) ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 3 ： 6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-( N-methylacrylamido) acetamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide ）
在0°C、N 2下，向6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（160毫克，280.67毫莫耳，1當量）在DMF（3毫升）溶液的混合物中，加入DIEA（362.75毫克，2.81毫莫耳，10當量），然後一次性加入丙烯醯氯（25.40毫克，280.67毫莫耳，1當量）。將混合物攪拌3小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備型HPLC柱純化：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：35%-65%，8分鐘，得到6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（N-甲基丙烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（10.22毫克，21.06毫莫耳，收率：7.50%），其為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.10（d, J =1.5Hz, 1H）, 8.13-7.96（m, 1H）, 7.75（brs, 1H）, 7.56（brd，J =6.5Hz, 1H）, 7.47-7.42（m, 2H）, 7.21（t, J =7.8Hz, 1H）, 6.81-6.78（m, 1H）, 6.78-6.47（m, 1H）, 6.13-6.02（m, 1H）, 5.70-5.56（m, 1H）, 4.28-4.21（m, 1H）, 3.96（d, J =18.4Hz, 2H）, 3.31（brdd, J =7.5, 14.1Hz, 2H）, 3.02（s, 2H），2.863H）, 2.81（s, 1H）, 2.73-2.68（m, 4H）, 1.22-1.19（m, 9H）。LC-MS （ES＋, m/z）：482.3[(M+H) +]；Rt =2.637分鐘；HRMI（EI）：m/z [M ＋H] ＋：482.2864。 實施例 42 （化合物 310 ） （ S, E ） -5- 環丙基 -3- （（ 2- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）吡啶 -4- 基）胺基） -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-5-cyclopropyl-3-((2-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)pyridin-4-yl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： ( S)- （ 1- （（ 2- （ 4- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基）吡啶 -2- 基）乙基）胺基） -1- 氧代丙 -2- 基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((2-(4-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)pyridin-2-yl)ethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)(methyl)carbamate）
向 N-（叔丁氧基羰基）- N-甲基-L -丙氨酸（74.72毫克，367.65毫莫耳，1.5當量），NMI（201.23毫克，2.45毫莫耳，195.37微升，10.0當量）在DMF（2毫升）溶液的混合物中，加入3-（（2-（2-胺基乙基）吡啶-4-基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（80毫克，245.10毫莫耳，1當量，HCl），然後在0°C加入TCFH（82.52毫克，294.12毫莫耳，1.2當量），並將反應混合物在0°C攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。透過添加H 2O（50毫升）淬滅反應混合物，然後用DCM（20毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（30毫升）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過製備型TLC （SiO 2，DCM ：CH 2Cl 2）純化，得到（S）-（1-（（2-（4-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（85毫克，166.14毫莫耳，收率：67.78%），為黃色固體。LC-MS （ES ＋, m/z）：512.3[(M+H) +]。Rt =0.720分鐘。 步驟 2 ：（ S ） -5- 環丙基 -6- 乙基 -3- （（ 2- （ 2- （ 2- （甲基胺基）丙醯胺基）乙基）吡啶 -4- 基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((2-(2-(2-(methylamino)propanamido)ethyl) pyridin-4-yl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將（ S）-（1-（（2-（4-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（85毫克，166.14毫莫耳，1.0當量）在HCl/MeOH（4M，3毫升，72.23當量）中的溶液在25°C攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。在減壓下濃縮反應混合物，得到（S）-5-環丙基-6-乙基-3-（（2-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）吡啶-4-基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（90毫克，粗製，HCl），為黃色固體。LC-MS （ES＋, m/z）：412.3[(M+H)+]。Rt =0.568分鐘。 步驟 3 ： ( S, E)-5- 環丙基 -3-((2-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺。（( S, E)-5-cyclopropyl-3-((2-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)propanamido)ethyl)pyridin-4-yl)amino)-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向( S)-5-環丙基-6-乙基-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(70毫克，156.26毫莫耳，1.0當量HCl)和(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(38.82毫克，234.40毫莫耳，1.5當量HCl)、DIEA (201.96 毫克，1.56 毫莫耳，272.18微升，10當量)在DMF (2毫升)溶液中，加入BOP(103.67 毫克，234.40毫莫耳，1.5當量)，然後將反應混合物在0℃下攪拌2小時。LC-MS顯示反應完成。通過添加H 2O(20毫升)淬熄反應混合物，用DCM(10毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(10毫升)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC(鹼性條件柱：Phenomenex C18 75*30mm*3um；流動相：[水(NH 3H 2O + NH 4HCO 3)-ACN]；B%：10%-50%，8分鐘)純化，得到(S, E)-5-環丙基-3-((2-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(13.3 毫克，25.45毫莫耳，收率：16.29%，純度：100%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.43-11.34 (m, 1H), 8.32-8.17 (m, 2H), 8.12-7.75 (m, 2H), 7.49-7.32 (m, 2H), 6.69-6.29 (m, 2H), 5.06-4.44 (m, 1H), 3.52-3.25 (m, 2H), 3.01-2.89 (m, 4H), 2.87-2.68 (m, 4H), 2.75-2.64 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.16-2.03 (m, 6H), 1.33-1.23 (m, 4H), 1.21-1.09 (m, 6H)。LC-MS (ES +, m/z)：523.2[(M + H) +]。Rt =1.773分鐘。HRMS (EI)：M/z [ M + H ] +實測值：523.3130。 實施例 43 （化合物 315 ） （ S ） -6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ S ） -6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
在0°C，向（ S）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，418.38毫莫耳，1當量，HCl）和DIEA （270.36毫克，2.09毫莫耳，364.37微升，5當量）在DMF（3毫升）中的溶液中，加入丙-2-烯醯氯（45.44毫克，502.06毫莫耳，40.94微升，1.2當量），然後將混合物在0°C攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物真空濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過製備型HPLC（柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 µm；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：25%-55%，10分鐘），得到（S）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（N-甲基丙烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（10.92毫克，22.03毫莫耳，收率：5.27％，純度：100％），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.10（brs, 1H）, 8.10-7.84（m, 1H）, 7.77-7.51（m, 2H）, 7.50-7.39（m, 2H）, 7.20（t, J =7.8Hz, 1H）, 6.79（d, J =7.6Hz, 1H）, 6.71（brdd, J =10.4, 16.8Hz, 1H）, 6.15-6.01（m, 1H）, 5.70-5.57（m, 1H）, 4.99（brd, J =7.2Hz, 1H）, 4.25（quin, J =6.6Hz, 1H）, 3.35-3.19（m, 2H）, 2.92-2.80（m, 5H）, 2.77-2.65（m, 5H）, 1.28-1.14（m, 12H）。LC-MS （ES ＋, m/z）：496.3[(M+H)+]；Rt =2.752分鐘；HRMI（EI）：m/z [M] ＋實測值：496.3052。 實施例 44 （化合物 321 ） ( R,E)-3-((3-(1-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 4 ： (R, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺 ) 乙醯胺基 ) 丙烷 -2- 基 ) 苯胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide）
向( E)-N-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-N-甲基甘氨酸(162.37 毫克，343.00毫莫耳，純度：50%，1.5 當量，HCl)的DMF(0.5毫升)溶液中加入DIPEA(329.92 毫克，2.55 毫莫耳，444.63微升，10 當量)，(R)-3-((3-(1-胺基丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(80 毫克，228.66毫莫耳，1當量，HCl)和BOP (151.70 毫克，343.00毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備HPLC柱純化：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm *10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-70%，8分鐘，得到(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺)乙醯胺基)丙烷-2-基 苯胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺（11.16毫克，22.33毫莫耳，收率：9.77％），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.11-10.98（m, 1H）, 8.20-8.09（m, 1H）, 8.09-7.81（m, 2H）, 7.64-7.56（m, 1H）, 7.54-7.48（m, 1H）, 7.28-7.20（m, 1H）, 6.89-6.81（m, 1H）, 6.64-6.24（m, 2H）, 3.99-3.88（m, 2H）, 3.28-3.18（m, 2H）, 3.04-3.00（m, 1H）, 2.99-2.96（m, 1H）, 2.94-2.84（m, 2H）, 2.81-2.70（m, 4H）, 2.53-2.51（m, 3H）, 2.17-2.06（m, 6H）, 1.26-1.17（m, 6H）。LC-MS （ES ＋, m/z）：496.3[(M+H) +]；Rt =0.967分鐘；HRMS（EI）：m/z [M]＋實測值：496.2995。 實施例 45 ( 化合物 322) (S, E)-6-( 二甲基胺基 )-2-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 乙基煙醯胺（(S,E)-6-(dimethylamino)-2-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-ethylnicotinamide） 步驟 1 ： ( S, E )-6-( 二甲基胺基 )-2-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 乙基煙醯胺（( S,E)-6-(dimethylamino)-2-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)phenyl)amino)-5-ethylnicotinamide）
向( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(110.66毫克，668.17毫莫耳，1.5 當量，HCl)在DMF(4毫升)溶液的混合物中，一次性加入DIPEA(4.45毫莫耳，775.87微升，10 當量)和(S)-6-(二甲基胺基)-5-乙基-2-((3-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)煙醯胺(200 毫克，445.45毫莫耳，1當量，HCl)，最後在0℃下一次性加入BOP (295.52 毫克，668.17毫莫耳，純度：N/A，1.5 當量)，將混合物在N 2下在0℃下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備HPLC(TFA)純化：柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：5% -40%，8分鐘，得到( S, E)-6-(二甲基胺基)-2-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-5-乙基煙醯胺(13.15 毫克，25.07毫莫耳，收率：5.63%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ=11.40 (br s, 1H), 9.86 (br dd, J = 1.4, 3.4 Hz, 1H), 8.14-7.80 (m, 3H), 7.59 (s, 1H), 7.52-7.46 (m, 1H), 7.30-7.13 (m, 2H), 6.86-6.77 (m, 1H), 6.73 (d, J = 7.5 Hz,1H), 6.63-6.46 (m, 1H), 5.03-4.51 (m, 1H), 3.91-3.79 (m, 2H), 3.33-3.24 (m, 2H), 2.96-2.94 (m, 6H), 2.91-2.88 (m, 2H), 2.79-2.66 (m, 9H), 2.58-2.54 (m, 2H), 1.30-1.17 (m, 6H)(鹽)。LC-MS (ES +, m/z)：524.3[(M + H) +]；Rt =1.951分鐘；HRMS (EI)：M/z [ M + H ] +實測值：524.3328。 實施例 46 ( 化合物 323) (S,E)-6- 環丙基 -2-((5-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 )-5- 甲基煙醯胺（( S,E)-6-cyclopropyl-2-((5-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2 enamido) propanamido)ethyl)pyridin-3-yl)amino)-5-methylnicotinamide） 步驟 1 ： (S, E)-6- 環丙基 -2-((5-(2-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 )-5- 甲基煙醯胺（( S,E)-6-cyclopropyl-2-((5-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido)propanamido)ethyl)pyridin-3-yl)amino)-5-methylnicotinamide）
向( S)-6-環丙基-5-甲基-2-((5-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-3-基)胺基)煙醯胺(122 毫克，281.79毫莫耳，1當量)、( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(70.00 毫克，422.69毫莫耳，1.5 當量，HCl)在DMF(2毫升)溶液中，加入DIPEA(364.19 毫克，2.82 毫莫耳，10 當量)，然後在0℃下加入BOP(186.95 毫克，422.69毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃下攪拌1小時。LC-MS顯示檢測到所需化合物。反應混合物用(H 2O) 10毫升淬熄，然後用EtOAc(10毫升*3)萃取。合併的有機層用飽和鹽水(10毫升*3)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用製備型HPLC(中性條件；柱：Waters Xbridge BEH C18 100 *30mm *10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：20% -50%，8分鐘)，得到少量化合物( S, E)-6-環丙基-2-((5-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-3-基)胺基)-5-甲基煙醯胺(11.08 毫克，21.83毫莫耳，收率：7.75%)，為黑褐色固體。 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4)δ= 8.81-8.75 (m, 1H), 8.04-7.94 (m, 2H)，7.87-7.84 (m, 1H), 6.81-6.67 (m, 1H)，6.56-6.43 (m, 1H), 5.09-5.01 (m, 1H), 3.58-3.45 (m, 2H), 3.32 (s, 2H), 3.14-3.06 (m, 2H), 2.90-2.80 (m, 3H), 2.39 (s, 3H)，2.27-2.21 (m, 7H), 1.40-1.29 (m, 3H), 1.17-1.13 (m, 2H), 1.10-1.05 (m, 2H)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.14 (s, 1H), 8.62 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.15-7.88 (m, 5H), 7.90-7.86 (m, 1H), 6.65-6.37 (m, 2H), 5.01-4.93 (m, 1H), 3.40-3.32 (m, 2H), 3.32 (s, 2H), 3.04-2.92 (m, 2H), 2.76-2.63 (m, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.19 (br s, 7H), 1.24 (br d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.08-0.98 (m, 4H)。LC-MS (ES +, m/z)：508.3[(M + H) +]；Rt =1.750分鐘。HRMS (EI)：M/z [ M ] +實測值：508.3040。 實施例 47 ( 化合物 324) ( S, E )-3-((3-(1-(2-(4-( 二甲胺基 )- N - 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido)propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S,E)-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2-carboxamide ）
向（ E）-N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸（51.51毫克，257.25毫莫耳，1.5當量）在DMF（1毫升）溶液的混合物中，加入DIPEA（221.64毫克，1.71毫莫耳，298.71微升，10當量）和（S）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺（60毫克，171.50毫莫耳，1當量，HCl），最後在16°C下一次性加入BOP（113.78毫克，257.25毫莫耳，1.5當量）。將混合物在16°C在N 2下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物濃縮。將殘餘物透過製備型HPLC （柱：Waters xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：25％-55％，8分鐘），得到( S, E)-3-((3-(1-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺(10.42 毫克，20.91毫莫耳，收率：12.19%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ= 11.05 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.15 (br d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.09-7.82 (m, 2H), 7.60 (br t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.55-7.51 (m, 1H), 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.62-6.24 (m, 2H), 3.94 (d, J = 17.9 Hz, 2H), 3.28-3.18 (m, 2H), 3.02 (s, 1H), 2.99-2.95 (m, 1.5H), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.81-2.70 (m, 3.5H), 2.51 (br, 3H), 2.15-2.04 (m, 2.12, 2.11H), 2.11-2.6 (1H), 2.27.1H)。 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4)δ= 7.64-7.56 (m, 2H), 7.28-7.19 (m, 1H), 6.88 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.80-6.64 (m, 1H), 6.61-6.26 (m, 1H), 4.09-3.95 (m, 2H), 3.48-3.33 (m, 2H), 3.14-2.94 (m, 5H), 2.88 (s, 1H), 2.79 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.28-2.18 (m, 6H), 1.32-1.26 (m, 6H)。LC-MS (ES +, m/z)：496.1[(M + H) +]；Rt =2.710分鐘；HRMS (EI)：M/z [ M + H ] +實測值：496.3041。 實施例 48 （化合物 326 ） 3- （（ 3- （（ R ） -1- （（ S ） -2- （（ E ） -4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(( R)-1-((S)-2-(( E)-4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： 3- （（ 3- （（ R ） -1- （（ S ） -2- （（ E ） -4- （二甲基胺基） - N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(( R)-1-(( S)-2-(( E)-4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) propanamido)propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-methylpyrazine-2- carboxamide）
在0°C，向（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（57.11毫克，344.86毫莫耳，1.5當量，HCl）在DMF（1毫升）中的溶液中，加入DIPEA（297.14毫克，2.30毫莫耳，400.45微升，10當量），6-乙基-5-甲基-3-（（3-（（ R）-1-（（ S）-2-（甲基胺基）丙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（100毫克，229.91毫莫耳，1當量，HCl），然後加入BOP （152.52毫克，344.86毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物透過製備型HPLC柱純化：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3μm ；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：5%-50%，8分鐘，得到3-（（3-（（ R）-1-（（ S）-2-（（ E）-4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-甲基吡嗪-2-甲醯胺（11.02毫克，21.62毫莫耳，收率：9.41%），為黃色固體。 1HNMR（400MHz, DMSO -d6）δ=11.11-10.95（m, 1H）, 9.83-9.59（m, 1H）, 8.24-8.07（m, 1H）, 8.02-7.81（m, 2H）, 7.65-7.56（m, 1H）, 7.51（s, 1H）, 7.27-7.18（m, 1H）, 6.85-6.74（m, 2H）, 6.62-6.43（m, 1H）, 5.00-4.50（m, 1H）, 3.91-3.77（m, 2H）, 3.28-3.15（m, 2H）, 2.98-2.86（m, 3H）, 2.66-2.61（m, 1H）, 2.53-2.51（m, 3H）, 1.26-1.17（m, 9H）。（TFA鹽）LC-MS （ES ＋, m/z）：510.3[(M+H) +]；Rt =2.168分鐘；HRMS（EI）：m/z [M] ＋實測值：510.3176。 實施例 49 （化合物 327 ） （ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙炔基 -5- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethynyl-5-(isopropyl (methyl) amino) pyrazine- 2-carboxamide） 步驟 1 ：（ 2- （（ 3- （（ 5- 溴 -3- 胺基甲醯基 -6- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基） -2- 氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-((3-((5-bromo-3-carbamoyl-6-(isopropyl (methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
向3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-6-溴-5-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（1.1克，2.70毫莫耳，1當量）、N-（叔丁氧基羰基）-N-甲基甘氨酸（1.02g，5.40毫莫耳，2當量）、BOP （1.79克，4.05毫莫耳，1.5當量）在DMF（10毫升）中的溶液中，加入DIPEA（5.24克，40.51毫莫耳，7.06毫升，15當量）。將混合物在16°C攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水（30毫升）中並用EtOAc（30毫升*2）萃取。有機層用水（60毫升*2），飽和鹽水（60毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯=1:1），得到（2-（（3-（（5-溴-3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（370毫克，639.58毫莫耳，收率：65.13%），為黃色油狀物。LC-MS（ES＋, m/z）：578.4[(M+H) +]；Rt =0.813分鐘。 步驟 2 ：（ 2- （（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- （異丙基（甲基）胺基） -5- （（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基） -2- 氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-6-(isopropyl (methyl) amino)-5- ((triisopropylsilyl) ethynyl) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl)amino)- 2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在20°C下，向（2-（（3-（（5-溴-3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，518.58毫莫耳，1當量）和乙炔基三異丙基矽烷（283.73毫克，1.56毫莫耳，349.04微升，3當量）在THF（3毫升）的溶液中，加入TEA（262.38毫克，2.59毫莫耳，360.90微升，5當量）、Pd （PPh 3） 2Cl 2（36.40毫克，51.86毫莫耳，0.1當量）和CuI（9.88毫克，51.86毫莫耳，0.1當量）。將混合物在N 2下在20°C攪拌3小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物溶於DCM（10毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在20°C攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水（10毫升）中並用DCM（10毫升*2）萃取。有機層用水（20毫升*2），飽和鹽水（20毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯=1：3），得到（2-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）-5-（（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（206毫克，302.96毫莫耳，收率：58.42%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.45 - 11.40 (m, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.62 - 7.53 (m, 3H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 1H), 6.92 - 6.86 (m, 1H), 5.28 - 5.15 (m, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 2H), 3.31 - 3.26 (m, 2H), 3.13 - 3.08 (m, 3H), 2.79 - 2.69 (m, 5H), 1.41 - 1.31 (m, 9H), 1.22 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.15 - 1.09 (m, 21H); LC-MS (ES+, m/z): 680.4 [(M+H) +]; Rt =1.250 分鐘。 步驟 3 ： 5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- （（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪 -2- 甲醯胺（ 5-(isopropyl (methyl) amino)-3-((3-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-((triisopropylsilyl) ethynyl) pyrazine-2-carboxamide）
向（2-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）-5-（（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（200毫克，294.13毫莫耳，1當量）在DCM（2毫升）溶液中，加入TFA（1.54克，13.51毫莫耳，1毫升，45.92當量），將混合物在20°C下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-（（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，粗製），其為黑褐色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 580.6 [(M+H) +]; RT=0.913 分鐘。 步驟 4 ：（ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- （（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-5-(isopropyl (methyl) amino)-6-((triisopropylsilyl) ethynyl) pyrazine-2-carboxamide）
向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（85.93毫克，518.83毫莫耳，1.5當量，HCl）在DMF（3毫升）溶液中，加入DIPEA（670.55毫克，5.19毫莫耳，903.70微升，15當量）和5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-（（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪-2-甲醯胺（240毫克，345.88毫莫耳，1當量，TFA），然後加入BOP（229.47毫克，518.83毫莫耳，1.5當量）。將混合物在20°C下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水（10毫升）中並用EtOAc （10毫升*2）萃取。有機層用水（20毫升*2），飽和鹽水（20毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。透過矽膠色譜（DCM：H 2O）純化粗產物。MeOH =10：1）純化，得到（ E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（異丙基（甲基）胺基）-6-（（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪-2-甲醯胺（76毫克，109.99毫莫耳，收率：31.80%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.46 - 11.40 (m, 1H), 8.17 - 7.89 (m, 1H), 7.73 - 7.53 (m, 3H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 6.94 - 6.84 (m, 1H), 6.67 - 6.47 (m, 2H), 5.29 - 5.14 (m, 1H), 4.02 - 3.90 (m, 2H), 3.12 - 3.00 (m, 6H), 2.86 - 2.69 (m, 6H), 2.24 - 2.10 (m, 6H), 1.25 - 1.08 (m, 27H); LC-MS (ES+, m/z): 691.4 [(M+H) +]; RT=0.947 分鐘。 步驟 5 ：（ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙炔基 -5- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethynyl-5-(isopropyl (methyl) amino) pyrazine-2- carboxamide）
在16°C下，向（E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（異丙基（甲基）胺基）-6-（（三異丙基甲矽烷基）乙炔基）吡嗪-2-甲醯胺（76毫克，109.99毫莫耳，1當量）在DMF（1.5毫升）溶液中，加入CsF（66.83毫克，439.95毫莫耳，16.22微升，4當量），將混合物在16°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物通過製備型HPLC 柱純化：Waters xbridge prep OBD C18 150*40mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-70%，8分鐘，得到（E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙炔基-5-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（10.36毫克，19.18毫莫耳，收率：17.44％，純度：98.97％），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.50 - 11.42 (m, 1H), 8.16 - 7.89 (m, 1H), 7.79 - 7.68 (m, 1H), 7.64 - 7.38 (m, 3H), 7.25 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.93 - 6.83 (m, 1H), 6.67 - 6.48 (m, 2H), 5.08 - 4.94 (m, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.01 - 3.91 (m, 2H), 3.31 - 3.26 (m, 2H), 3.09 - 2.93 (m, 7H), 2.81 (s, 1H), 2.75 - 2.68 (m, 2H), 2.18 - 2.07 (m, 6H), 1.23 (d, J= 6.6 Hz, 6H); 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.42 - 11.31 (m, 1H), 8.18 - 7.90 (m, 1H), 7.62 - 7.53 (m, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.29 - 7.20 (m, 1H), 6.93 - 6.83 (m, 1H), 6.68 - 6.44 (m, 2H), 5.08 - 4.90 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.00 - 3.90 (m, 2H), 3.36 - 3.24 (m, 2H), 3.08 - 2.90 (m, 7H), 2.76 (br s, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 2H), 2.17 - 2.03 (m, 6H), 1.21 (d, J= 6.6 Hz, 6H); LCMS (ES+, m/z): 535.3 [(M+H)+]; Rt= 2.167 分鐘; HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:535.3162。 實施例 50 （化合物 328 ） （ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- 乙烯基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) ethyl)phenyl)amino)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6-vinylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 2 ：（ 2- （（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- （異丙基（甲基）胺基） -5- 乙烯基吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基） -2- 氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-6-(isopropyl(methyl)amino)-5-vinylpyrazin- 2-yl)amino)phenethyl)amino)-2-oxoethyl)(methyl)carbamate）
向（2-（（3-（（5-溴-3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，518.58毫莫耳，1當量）和TEA（157.43毫克，1.56毫莫耳，216.54微升，3當量）在DMF（5毫升）的溶液中，加入4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3，2-二氧雜硼雜環戊烷（239.61毫克，1.56毫莫耳，263.88微升，3當量），然後加入Pd（dppf）Cl 2（37.95毫克，51.86毫莫耳，0.1當量）。將混合物脫氣並用N 2吹掃3次，然後在N 2氣氛下在80°C攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物溶於EtOAc（10毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在20°C攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水（30毫升）中並用EtOAc （20毫升*2）萃取。合併有機層，用水（10毫升*2），飽和鹽水（10毫升）洗滌，乾燥（Na 2SO 4），過濾並濃縮，得到粗產物。將粗產物透過製備型TLC（PE/EA =1/2）純化，得到（2-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）-5-乙烯基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（150毫克，285.37毫莫耳，收率：55.03%），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 526.5 [(M+H) +]; Rt =0.821 分鐘。 步驟 3 ： 5- （異丙基（甲基）胺基） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙烯基吡嗪 -2- 甲醯胺（5-(isopropyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(methylamino)acetamido)ethyl)phenyl)amino)-6-vinylpyrazine-2-carboxamide）
在0°C下，向（2-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-（異丙基（甲基）胺基）-5-乙烯基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（70毫克，133.17毫莫耳，1當量）和2，6-二甲基吡啶（230.00毫克，2.15毫莫耳，250.00微升，16.12當量）在DCM （1毫升）溶液中，逐滴加入TMSI（257.25毫克，1.29毫莫耳，175.00微升，9.65當量）。添加後，將所得混合物在16°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓濃縮，得到5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙烯基吡嗪-2-甲醯胺（80毫克，粗製），為黃色固體。LC-MS （ES ＋, m/z）：426.5[(M+H)+]；Rt =0.605分鐘。 步驟 4 ：（ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- （異丙基（甲基）胺基） -6- 乙烯基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido)acetamido)ethyl)phenyl)amino)-5-(isopropyl(methyl)amino)-6-vinylpyrazine-2-carboxamide）
向（ E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（46.70毫克，282.00毫莫耳，1.5當量，HCl）在DMF（1毫升）中的溶液中加入DIEA（242.98毫克，1.88毫莫耳，327.47微升，10當量）和5-（異丙基（甲基）胺基）-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙烯基吡嗪-2-甲醯胺（80毫克，188.00毫莫耳，1當量），然後加入BOP（124.72毫克，282.00毫莫耳，1.5當量）。將混合物在16°C下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。過濾後，透過製備型HPLC （柱：Waters xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相： [水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30％-60％，8分鐘），並透過SFC分離（柱：Chiralpak IH，250*30mm，10um；流動相：[甲醇（0.1％IPAm）]；B％：18%-18%，12分鐘，得到（ E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-（異丙基（甲基）胺基）-6-乙烯基吡嗪-2-甲醯胺（6.37毫克，11.77毫莫耳，收率：6.26%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.34 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.18 - 7.89 (m, 2H), 7.57 (br d, J = 15.8 Hz, 2H), 7.51 - 7.43 (m, 1H), 7.23 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.68 (dd, J = 10.8, 17.1 Hz, 1H), 6.61 - 6.55 (m, 1H), 6.55 - 6.29 (m, 1H), 6.23 (dd, J = 2.1, 17.1 Hz, 1H), 5.32 - 5.25 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 3.95 (d, J = 19.4 Hz, 2H), 3.37 - 3.31 (m, 2H), 3.07 (br d, J = 3.8 Hz, 1H), 3.03 - 2.96 (m, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.81 (s, 2H), 2.76 - 2.68 (m, 2H), 2.21 - 2.11 (m, 6H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 6H); 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6+ D 2O) δ = 11.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 1H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 10.8, 17.1 Hz, 1H), 6.59 - 6.22 (m, 2H), 6.13 (dd, J = 1.6, 17.1 Hz, 1H), 5.32 - 5.26 (m, 1H), 4.28 - 4.20 (m, 1H), 3.96 - 3.90 (m, 2H), 3.32 - 3.25 (m, 2H), 3.07 (br d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.98 - 2.94 (m, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.78 (s, 1H), 2.72 - 2.67 (m, 2H), 2.17 - 2.06 (m, 6H), 1.16 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ES+, m/z): 537.3 [(M+H) +]; Rt= 2.259 分鐘; HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:537.3313。 實施例 51 化合物 501 (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino) but-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (S)-(1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropylamino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) carbamate）
在0℃下，向(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸(397.82 毫克，2.10 毫莫耳，1.2 當量)、3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(600 毫克，1.75 毫莫耳，1當量)和NMI (1.44克，17.52 毫莫耳，1.40毫升，10 當量)在DMF (6毫升)溶液中，加入TCFH(737.42 毫克，2.63 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。將混合物倒入水(5毫升)中，用EtOAc(5毫升*2)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠色層分析法純化(石油醚：乙酸乙酯=1:1)，得到(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺基甲酸叔丁酯(710 毫克，1.38 毫莫耳，收率：78.89%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.27 - 11.15 (m, 1H), 7.88 - 7.76 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.55 (br d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.35 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.28 - 7.14 (m, 2H), 6.89 - 6.65 (m, 3H), 4.35 - 4.20 (m, 1H), 4.06 - 3.89 (m, 1H), 3.31 (br s, 2H), 2.69 - 2.64 (m, 2H), 2.63 - 2.55 (m, 2H), 1.44 - 1.07 (m, 21H). LCMS (ES+, m/z): 514.3 [(M+H) +]; Rt=0.762 分鐘。 步驟 2 ：（ S ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- 胺基丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （異丙基胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-3-((3-(2-(2-aminopropanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5- (isopropylamino) pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺基甲酸叔丁酯(710 毫克，1.38 毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，40毫升，115.75 當量)的混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到(S)-3-((3-(2-(2-胺基丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(650毫克，粗製)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.31 - 11.12 (m, 1H), 8.55 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.18 (br d, J = 3.9 Hz, 3H), 7.62 - 7.58 (m, 1H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.29 - 7.12 (m, 2H), 6.88 - 6.73 (m, 2H), 4.33 - 4.21 (m, 1H), 3.45 (dt, J = 7.0, 13.4 Hz, 2H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 2.80 - 2.70 (m, 2H), 2.59 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.35 - 1.14 (m, 12H)。LCMS (ES +, m/z): 414.3[(M+H) +]; Rt=0.565 分鐘。 步驟 3 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino) but-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino) pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(520.66 毫克，3.14 毫莫耳，2 當量，HCl)、(S)-3-((3-(2-(2-胺基丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(650 毫克，1.57 毫莫耳，1當量)和DIPEA (2.03克，15.72 毫莫耳，2.74毫升，10 當量)的DMF (4毫升)溶液中，加入BOP (1.04克，2.36 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物用製備型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25% -65%，8分鐘)，得到(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基胺基)吡嗪-2-甲醯胺(165.87 毫克，308.53微莫耳，收率：19.63%，純度：97.59%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.15 - 11.00 (m, 1H), 8.00 - 7.91 (m, 1H), 7.71 - 7.51 (m, 2H), 7.40 - 7.29 (m, 1H), 7.24 - 7.07 (m, 2H), 6.83 - 6.70 (m, 2H), 6.61 (br d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 4.32 - 4.17 (m, 2H), 3.34 - 3.18 (m, 2H), 2.98 - 2.93 (m, 2H), 2.69 - 2.63 (m, 2H), 2.59 - 2.53 (m, 2H), 2.16 - 2.06 (m, 6H), 1.26 - 1.15 (m, 12H). LC-MS (ES+, m/z): 525.3[(M+H) +]; Rt=2.068 分鐘。HRMS (EI): m/z (M+H) +實測值: 525.3270。 實施例 52 化合物 502 ( S, E )-3-((3-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)but-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(1-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(1-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl(methyl)amino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) carbamate）
在0°C下，向（叔丁氧基羰基）-L -丙氨酸（361.15毫克，1.91毫莫耳，1.5當量）在DMF（5毫升）溶液中，加入NMI（1.04克，12.73毫莫耳，1.01毫升，10當量），3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（500毫克，1.27毫莫耳，1當量，HCl），然後在0°C加入TCFH（535.56毫克，1.91毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。將反應物倒入H 2O（10毫升）中。將水相用乙酸乙酯（15毫升*3）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（10毫升*3）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物透過製備型HPLC （柱：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：40%-75%，8分鐘，得到（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，663.31微莫耳，收率：52.13%），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.16 - 11.04 (m, 1H), 7.92 - 7.68 (m, 2H), 7.63 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 7.34 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 1H), 6.88 - 6.72 (m, 2H), 4.32 - 4.17 (m, 1H), 3.97 - 3.74 (m, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 1H), 3.28 - 3.17 (m, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 3H), 2.75 - 2.63 (m, 4H), 1.37 (s, 9H), 1.25 - 1.19 (m, 9H), 1.12 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 528.4[(M+H)+]; Rt=0.989 分鐘。 步驟 2 ：（ S ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- 胺基丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-3-((3-(2-(2-aminopropanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide）
將（S）-（1-（（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-1-氧代丙-2-基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，663.31莫耳，1當量）在HCl/MeOH （20毫升）中的混合物在16°C攪拌2小時。在減壓下濃縮反應混合物，得到（S）-3-（（3-（2-（2-胺基丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（307毫克，粗製），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.19 - 10.99 (m, 1H), 8.60 - 8.38 (m, 1H), 8.15 (br d, J = 3.4 Hz, 3H), 7.88 - 7.60 (m, 1H), 7.58 - 7.38 (m, 3H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 6.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.28 - 4.19 (m, 1H), 3.75 - 3.71 (m, 1H), 3.48 - 3.41 (m, 1H), 3.32 - 3.24 (m, 1H), 2.89 - 2.83 (m, 3H), 2.76 - 2.67 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.24 - 1.19 (m, 9H) (HCl 鹽)。LC-MS (ES+, m/z): 428.3[(M+H) +]; Rt=0.815分鐘。 步驟 3 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基）丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(dimethylamino)but-2-enamido)propanamido)ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropyl(methyl)amino) pyrazine-2- carboxamide）
在0℃下，向( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(123.14毫克，743.53微莫耳，1.5當量，HCl)的DMF(3毫升)溶液中加入DIPEA (640.64 毫克，4.96 毫莫耳，863.40 微升，10當量)、(S)-3-((3-(2-(2-胺基丙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(230 毫克，495.69 微莫耳，1當量，HCl)和然後BOP(328.85 毫克，743.53 微莫耳，1.5當量)，將混合物在0℃下攪拌2小時。將反應物倒入H 2O（5毫升）中。將水相用乙酸乙酯（10毫升*3）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（10毫升*3）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物通過製備型HPLC（柱：Waters xbridge prep OBD C18 150*40mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：35%-75%，8分鐘，得到（ S, E）-3-（（3-（2-（2-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（55.27毫克，102.05微莫耳，收率：20.59%），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.17 - 11.03 (m, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 8.01 - 7.90 (m, 1H), 7.78 - 7.69 (m, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 2H), 7.24 - 7.14 (m, 1H), 6.82 - 6.76 (m, 1H), 6.59 - 6.48 (m, 1H), 6.14 - 6.07 (m, 1H), 4.32 (s, 2H), 3.31 - 3.20 (m, 2H), 2.98 - 2.92 (m, 2H), 2.88 - 2.82 (m, 3H), 2.73 - 2.65 (m, 4H), 2.14 - 2.11 (m, 6H), 1.23 - 1.14 (m, 12H)。LC-MS (ES+, m/z): 539.3[(M+H) +]; Rt=2.309 分鐘。HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 539.3442。 中間體 1 (R)-(2-(3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate） 步驟 1 ： 2-(3- 溴苯基 ) 丙腈（2-(3-bromophenyl) propanenitrile）
向1-(3-溴苯基)乙烷-1-酮(10克，50.24 毫莫耳，6.62毫升，1當量)和1-((異氰酸甲基)磺醯基)-4-甲基苯(11.77克，60.29 毫莫耳，1.2 當量)在1,2-DME (100毫升)中的溶液中加入KOtBu(1M的THF溶液，100.70毫升，2.00當量)和t-BuOH (50毫升)。在0℃下攪拌混合物，然後升溫至25℃持續2小時。將反應液注入到水(150毫升)中，用乙酸乙酯(200毫升*3)萃取。合併有機層，用水(100毫升*2)、飽和鹽水(100毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。殘餘物透過柱色層分析法純化(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯= 30/1至3/1)。殘餘物經製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 250 mm *100mm *10um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-65%，20分鐘)純化，得到2-(3-溴苯基)丙腈(4.7克，22.37 毫莫耳，收率：44.53%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 1H), 7.46 - 7.42 (m, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 1.55 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。 步驟 2 ： 2-(3- 溴苯基 ) 丙 -1- 胺（2-(3-bromophenyl) propan-1-amine）
向2-(3-溴苯基)丙腈(11.3克，53.79毫莫耳，1當量)的THF(30毫升)溶液中加入BH 3。THF (1M，268.96毫升，5 當量)在16℃下反應0.5小時。將混合物加熱至80℃10小時。將混合物緩慢滴加到MeOH中，然後加熱至80℃1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到2-(3-溴苯基)丙-1-胺(13.11克，粗製)，為白色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 214.1[(M+H) +]; Rt=0.508分鐘。 步驟 3 ： (2-(3- 溴苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-(3-bromophenyl) propyl) carbamate）
向2-(3-溴苯基)丙-1-胺(25.6克，119.57 毫莫耳，1當量)的DCM (256 毫升)溶液中加入Boc 2O (52.19克，239.14 毫莫耳，54.94毫升，2當量)和DIPEA (46.36克，358.71毫莫耳，62.48毫升，3當量)。將混合物在20℃攪拌10小時。將反應液倒入水(300毫升)中，用DCM(300毫升*3)萃取。合併有機層，用水(200毫升*2)、飽和鹽水(200毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。殘餘物通過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯= 20/1-3/1)純化，得到(2-(3-溴苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(28克，89.11毫莫耳，收率：74.53%)，為無色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.44 - 7.34 (m, 2H), 7.30 - 7.18 (m, 2H), 6.90 - 6.81 (m, 1H), 3.15 - 2.98 (m, 2H), 2.94 - 2.81 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.15 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 258.0[(M-56) +]; Rt=1.005 分鐘。 步驟 4 ： (2-(3-(( 二苯基亞甲基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-(3-((diphenylmethylene) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向(2-(3-溴苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(6.00克，19.10毫莫耳，1當量)和二苯基甲烷亞胺(6.92克，38.19毫莫耳，6.41毫升，2當量)的t-AmylOH(60毫升)溶液中加入Cs 2CO 3(18.66克，57.29毫莫耳，3當量)、BrettPhos (1.02克，1.91 毫莫耳，0.1當量)和BrettPhos Pd G3 (1.73克，1.91 毫莫耳，0.1當量)。將混合物脫氣，用N 2吹掃3次，然後在N 2氣氛下在100℃攪拌10小時。將反應液注入到水(40毫升)中，用乙酸乙酯(60毫升*3)萃取。合併有機層，用水(50毫升*2)、飽和鹽水(50毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將殘餘物溶於DCM (50毫升)中，加入清除劑(Pd)，然後在25℃攪拌1小時，然後過濾。殘餘物通過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯= 100/1至1/1)純化，得到(2-(3-((二苯基亞甲基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(7.40克，粗製)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +，m/z)：415.3[(M + H) + ]；Rt =1.086分鐘。 步驟 5 ： (2-(3- 胺基苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-(3-aminophenyl) propyl) carbamate）
向(2-(3-((二苯基亞甲基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(11.00克，26.54毫莫耳，1當量)的MeOH (110毫升)溶液中加入NH 2OH.HCl (3.32克，47.76毫莫耳，1.8 當量)和NaOAC(5.22克，63.69 毫莫耳，2.4 當量)。將混合物在25℃攪拌4小時。將反應混合物減壓濃縮除去MeOH。殘留物用H 2O (100毫升)稀釋，用乙酸乙酯300毫升(100毫升*3)萃取。合併的有機層用水(100毫升*2)、飽和鹽水(100毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 (250*70mm，15 um)；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10% -40%，20分鐘)純化，得到(2-(3-胺基苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(5.40g，21.57 毫莫耳，收率：81.29%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 6.95 - 6.87 (m, 1H), 6.81 - 6.70 (m, 1H), 6.44 - 6.29 (m, 3H), 3.07 - 2.88 (m, 2H), 2.72 - 2.59 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.9 Hz, 3H) (未檢測到活性N-H)。LC-MS (ES+, m/z): 251.3[(M+H) +]; Rt=0.695 分鐘。 步驟 6 ： (R)-(2-(3- 胺基苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-aminophenyl) propyl) carbamate）
透過SFC分離（2-（3-胺基苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（10.80克，43.14毫莫耳，1當量）（柱：DAICEL CHIRALCEL OJ （250mm*50mm，10um）；流動相：[0.1％NH 3H 2O IPA]；B％：20%-20%，4.4分鐘，得到（R）-（2-（3-胺基苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（5克，19.97毫莫耳，收率：46.30%）和（S）-（2-（3-胺基苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（4.90克，19.57毫莫耳，收率：45.37%），為無色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 6.91 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.82 - 6.68 (m, 1H), 6.49 - 6.27 (m, 3H), 3.10 - 2.82 (m, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.14 - 1.02 (m, 3H) (未檢測到活性的N-H)。LC-MS (ES+, m/z): 251.2[(M+H) +]; Rt=0.695 分鐘。 步驟 7 ： ( R )-(2-(3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
在16°C下，向（ R）-（2-（3-胺基苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（2.50克，9.99毫莫耳，1當量）和3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（2.20克，9.99毫莫耳，1當量）在NMP （25毫升）溶液中，加入DIPEA（12.91克，99.87毫莫耳，17.39毫升，10當量）。將混合物在N 2氣氛下加熱至140°C持續10小時。將反應物倒入水（100毫升）中並用乙酸乙酯（200毫升*3）萃取。合併有機層，用水（150毫升*2）、飽和鹽水（150毫升*2）洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將殘餘物通過製備型TLC （柱：Welch xtimate C18 250*70mm#10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：60%-95%，60分鐘，得到（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（2.05克，4.60毫莫耳，收率：46.04%），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.23 - 11.11 (m, 1H), 8.35 - 8.18 (m, 1H), 8.11 - 7.96 (m, 1H), 7.60 - 7.46 (m, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.31 - 7.23 (m, 1H), 6.91 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.87 - 6.78 (m, 1H), 3.15 - 2.98 (m, 2H), 2.89 - 2.76 (m, 3H), 1.36 - 1.32 (m, 9H), 1.26 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。 LC-MS (ES+, m/z): 378.1[(M+H-56) +]; Rt=3.120 分鐘。HRMS (EI): m/z 實測值: 434.1916。 中間體 2 步驟 1 ： ( E)-N- （ 4- （二甲基胺基）丁 -2- 烯醯基） -N- 甲基甘氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-(dimethylamino) but-2-enoyl)- N-methylglycinate）
向（E）-4-（二甲基胺基）丁-2-烯酸（1.52克，9.17毫莫耳，2當量，HCl）在DMF（5毫升）中的溶液中，加入DIPEA（5.93克，45.85毫莫耳，7.99毫升，10當量）、2-（亞胺基（甲基）-λ5-氯烷基）乙酸叔丁酯（1.00克，4.58毫莫耳，1當量，HCl）、HOBt （619.49毫克，4.58毫莫耳，1當量）和EDCI（1.32克，6.88毫莫耳，1.5當量）。將混合物在25°C下攪拌10小時。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過製備型HPLC （柱：C18（250*50mm*10um）；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：15%-40%，10分鐘，得到（ E）- N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）-N-甲基甘氨酸叔丁酯（540毫克，2.11毫莫耳，收率：45.95%），其為棕色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 6.68 - 6.34 (m, 2H), 4.23 - 3.95 (m, 2H), 3.11 - 2.84 (m, 5H), 2.18 - 2.07 (m, 6H), 1.45 - 1.37 (m, 9H) LC-MS (ES+, m/z): 257.1[(M+H) +]; Rt=1.329 分鐘。 步驟 2 ：（ E ） - N - （ 4- （二甲胺基）丁 -2- 烯醯基） -N- 甲基甘氨酸（ (E)-N-(4-(dimethylamino) but-2-enoyl) -N-methylglycine）
向（E）-N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）-N-甲基甘氨酸叔丁酯（270毫克，1.05毫莫耳，1當量）在DCM（2毫升）溶液中，加入TFA（3.08克，27.01毫莫耳，2毫升，25.65當量）。將混合物在16°C下攪拌2小時。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到（E）-N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）-N-甲基甘氨酸（466毫克，粗製），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO -d 6 ) δ = 9.97 (br d, J = 17.4 Hz, 1H), 6.97 - 6.48 (m, 2H), 4.28 - 4.02 (m, 2H), 3.95 - 3.82 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.76 (br d, J = 13.4 Hz, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 201.1[(M+H) +]; Rt=0.089 分鐘。 實施例 53 化合物 503 （ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-5, 6-diethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5, 6-diethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，921.81微莫耳，1當量），三乙基硼烷（903.31毫克，9.22毫莫耳，1.33毫升，10當量），Cs 2CO 3（901.03毫克，2.77毫莫耳，3當量）在DMF（5毫升）和H 2O（2毫升）溶液中添加P（tBu） 3Pd G 2（47.23毫克，92.18 微莫耳，0.1當量）。將混合物在80°C在N 2下攪拌5小時。將殘餘物溶於DCM（10毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在25°C攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水（10毫升）中並用DCM （10毫升*2）萃取。合併有機層，用水（20毫升*2），飽和鹽水（20毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：以得到（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，818.64 微莫耳，收率：88.81%），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 (s, 1H), 8.20 - 8.10 (m, 1H), 7.86 (br d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.66 - 7.48 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.89 - 6.78 (m, 2H), 3.15 - 2.99 (m, 2H), 2.92 - 2.80 (m, 3H), 2.80 - 2.71 (m, 2H), 1.36 - 1.16 (m, 18H)。LCMS (ES+, m/z): 428.2 [(M+H) +]; Rt=0.947 分鐘。 步驟 2 ：（ R ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-5, 6-diethylpyrazine-2- carboxamide）
將（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（440毫克，1.03毫莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，40毫升，155.47當量）的混合物在25°C下攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（350毫克，粗製，HCl），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.12 (s, 1H), 8.22 - 8.12 (m, 1H), 7.90 (br d, J = 13.0 Hz, 4H), 7.74 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.57 (m, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 1H), 6.96 - 6.89 (m, 1H), 3.07 - 2.97 (m, 3H), 2.85 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.76 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.33 - 1.22 (m, 9H)(HCl 鹽)。LCMS (ES +, m/z): 328.2[(M+H) +]; Rt=0.568 分鐘。 步驟 3 ：（ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-5, 6-diethylpyrazine-2-carboxamide）
在0°C，向（E）-N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）-N-甲基甘氨酸（82.54毫克，262.65 微莫耳，1.91當量，TFA），DIPEA （266.38毫克，2.06毫莫耳，359.01微升，15當量）、（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（50毫克，137.41微莫耳，1當量，HCl）在DMF（0.5毫升）溶液中，加入BOP（91.16毫克，206.11微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC （柱：Waters xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：15%-55%，8分鐘），得到（R, E）-3-（（3-（1-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（20.15毫克，38.51微莫耳，收率：28.02％，純度：97.39％），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.13 - 11.07 (m, 1H), 8.19 - 8.12 (m, 1H), 8.10 - 7.83 (m, 2H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.28 (d, J= 15.0 Hz, 2H), 3.94 (d, J= 17.3 Hz, 2H), 3.29 - 3.21 (m, 2H), 3.03 - 2.73 (m, 10H), 2.19 - 2.05 (m, 6H), 1.34 - 1.18 (m, 9H). LC-MS (ES+, m/z): 510.3[(M+H) +]; Rt=2.149 分鐘。HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 510.3174。 實施例 54 化合物 504 （ R, E ） -5- 環丙基 -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-5-cyclopropyl-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido)acetamido)propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethylpyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： ( R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，921.81微莫耳，1當量），環丙基硼酸（791.81毫克，9.22毫莫耳，10當量）和K 2CO 3（382.20毫克，2.77毫莫耳，3當量）在DMA （10毫升）和H 2O（5毫升）中的溶液中加入Pd（dppf）Cl 2（67.45毫克，92.18 微莫耳，0.1當量）。將混合物在100°C在N 2下攪拌10小時。將殘餘物溶於EtOAc（40毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在20°C攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水（30毫升）中並用EtOAc （20毫升*2）萃取。合併有機層，用水（10毫升*2），飽和鹽水（10毫升）洗滌，乾燥（Na 2SO 4），過濾並濃縮。透過矽膠層析法（石油醚/EtOAc =1/1）純化粗產物，得到（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（320毫克，728.02 微莫耳，收率：78.98%），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 440.3[(M+H) +]; Rt=1.047 分鐘。 步驟 2 ：（ R ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-5-cyclopropyl-6- ethylpyrazine-2-carboxamide）
將（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，910.02微莫耳，1當量）和HCl/MeOH （10毫升）的混合物在25°C攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮以得到（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（270毫克，粗製，HCl），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 340.3[(M+H) +]; Rt=0.543 分鐘。 步驟 3 ： ( R, E)-5- 環丙基 -3-((3-(1-(2-(4-( 二甲胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R,E)-5-cyclopropyl-3-((3-(1-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2- enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl)amino)-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide）
向（ E）- N-（4-（二甲基胺基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸（125.40毫克，399.05微莫耳，3當量，TFA）在DMF（1毫升）的溶液中添加DIEA（171.91毫克，1.33毫莫耳，231.69微升，10當量）和（ R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（50毫克，133.02微莫耳，1當量，HCl），然後加入BOP（88.25毫克，199.52微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。過濾以得到濾液。將粗產物透過製備型HPLC（柱：Waters xbridge prep OBD C18 150*40mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-70%，8分鐘），得到（R，E）-5-環丙基-3-（（3-（1-（2-（4-（二甲基胺基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（20.08毫克，37.71微莫耳，收率：28.35%），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 8.12 (br d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.08 - 7.84 (m, 1H), 7.82 (br d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.54 (br s, 1H), 7.34 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.22 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.63 - 6.23 (m, 2H), 3.93 (d, J= 16.4 Hz, 2H), 3.28 - 3.21 (m, 2H), 3.01 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 2.98 - 2.86 (m, 6H), 2.77 (s, 1H), 2.29 (br t, J= 6.2 Hz, 1H), 2.16 - 2.06 (m, 6H), 1.29 - 1.08 (m, 10H)。LC-MS (ES+, m/z): 522.4[(M+H) +]; Rt=2.170 分鐘。HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 522.3186。 實施例 55 化合物 505 (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 雙 ( 甲基 -d3) 胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido)ethyl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino)pyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (S, E)-3-((3-(2-(2-(4-( 雙 ( 甲基 -d3) 胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((3-(2-(2-(4-(bis(methyl-d3)amino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(isopropylamino) pyrazine-2-carboxamide）
向（E）-4-[雙（三氘代甲基）胺基]丁-2-烯酸（155.8毫克，0.5994毫莫耳，1.5當量）和N,N-二異丙基乙胺（0.6961毫升，3.996毫莫耳，10當量）在DMF（1毫升）溶液的混合物中，加入6-乙基-5-（異丙基胺基）-3-[3-[2-[[（2S）-2-（甲基胺基）丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺二鹽酸鹽（200.0毫克，0.3996毫莫耳，1當量）。將混合物在氮氣下冷卻至0°C。滴加苯並三唑-1-基氧基三（二甲基胺基）-磷鎓六氟磷酸鹽（265.1毫克，0.5994毫莫耳，1.5當量）在DMF（1毫升）中的溶液。將反應在0°C下攪拌2小時。將反應混合物用EtOAc（30毫升）和NaHCO 3（aq）（10毫升）稀釋，用NaHCO 3（aq）（1x），水（2x）和鹽水（1x）洗滌。經Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮。在矽膠柱上（0-30％甲醇/乙醇）純化粗物質，得到149毫克呈膠狀的所需產物。將化合物溶解於ACN （2毫升）中，過濾，用ACN （2*1毫升）沖洗，添加水（6毫升），凍乾以提供3-[3-[2-[[（2S）-2-[[（E）-4-[雙（三氘甲基）胺基]丁-2-烯醯基]-甲基-胺基]丙醯基]胺基]乙基]苯胺基]-6-乙基-5-（異丙基胺基）吡嗪-2-甲醯胺（134.0毫克，0.2460毫莫耳，收率：61.56%），為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.14 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.57 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.22 – 7.06 (m, 2H), 6.76 – 6.62 (m, 2H), 6.59 – 6.34 (m, 2H), 4.92 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.20 (dq, J = 13.4, 6.6 Hz, 1H), 3.15 - 3.35 (m, 2H), 2.97 – 2.85 (m, 2H), 2.77 (s, 2H), 2.70 – 2.57 (m, 3H), 2.52 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.30 – 1.00 (m, 12H)。 LC-MS (ES+, m/z): 545.4[(M+H) +]。 中間體 3 （ E ） -N- （ 4- （氮雜環丁 -1- 基）丁 -2- 烯醯基） -N- 甲基甘氨酸（(E)-N-(4-(azetidin-1-yl) but-2-enoyl)-N-methylglycine） 步驟 1 ： -4- （氮雜環丁烷 -1- 基）丁 -2- 烯酸乙酯（ethyl ( E)-4-(azetidin-1-yl) but-2-enoate）
向（ E）-4-溴丁-2-烯酸乙酯（5.00克，25.90毫莫耳，3.57毫升，1當量）和DIEA（10.04克，77.70毫莫耳，13.53毫升，3當量）在DMF（100毫升）溶液中，加入氮雜環丁烷鹽酸鹽（2.42克，25.90毫莫耳，1當量）。將混合物在60°C下攪拌1小時。在減壓下濃縮5個平行反應物。將粗產物通過製備型HPLC（柱：Waters xbridge BEH C18 250*70mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：0％-35％，20分鐘）。將混合物用TFA 調節至pH=2並濃縮，得到（ E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸乙酯（16.00克，56.49毫莫耳，收率：43.62%，TFA），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 6.71 (td, J= 5.2, 15.7 Hz, 1H), 5.89 (td, J= 1.9, 15.8 Hz, 1H), 4.13 - 4.07 (m, 2H), 3.14 - 3.07 (m, 6H), 2.02 - 1.93 (m, 2H), 1.20 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 170.1[(M+H) +]; Rt=1.879 分鐘。 步驟 2 ：（ E ） -4- （氮雜環丁 -1- 基）丁 -2- 烯酸（( E)-4-(azetidin-1-yl) but-2-enoic acid）
向（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸乙酯（12.00克，46.08毫莫耳，1當量，0.8TFA）在THF（40毫升）和H 2O（20毫升）中的溶液中加入，LiOH. H 2O（3.87克，92.15毫莫耳，2當量）。將混合物在25°C下攪拌10小時。將混合物減壓濃縮，得到（ E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸（5.50克，粗製），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 6.20 (br d, J= 15.5 Hz, 1H), 5.73 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 3.04 (d, J= 7.0 Hz, 4H), 2.96 (dd, J= 1.1, 5.9 Hz, 2H), 1.93 (br d, J= 6.9 Hz, 2H) （未檢測到活性的COO-H）。LC-MS (ES+, m/z): 142.1[(M+H) +]; Rt=0.210分鐘。 步驟 3 ： ( E)- N- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基）丁 -2- 烯醯基） - N- 甲基甘氨酸叔丁酯（ tert-butyl ( E)- N-(4-(azetidin-1-yl) but-2-enoyl)- N-methylglycinate）
向（ E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸（5.50克，38.96毫莫耳，2當量）和DIEA（25.18克，194.80毫莫耳，33.93毫升，10當量）在DMF（85毫升）溶液中，加入甲基甘氨酸叔丁酯鹽酸鹽（3.54克，19.48毫莫耳，1當量），然後加入BOP（12.92克，29.22毫莫耳，1.5當量）。將混合物在25°C下攪拌10小時。將混合物減壓濃縮。將粗產物通過製備型HPLC（柱：Phenomenex Luna C18 250mm*100mm*10um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：10％-40％，20分鐘），然後用飽和NaHCO 3（20毫升）調節至pH =7，用EtOAc （200毫升*2）萃取。合併有機層，用水（200毫升*2），飽和鹽水（150毫升*1）洗滌，用Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮，得到（ E）- N-（4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸叔丁酯（1.00克，3.73毫莫耳，收率：19.13％），為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 269.2[(M+H) +]; Rt=3.385 分鐘。 步驟 4 ：（ E ） -N- （ 4- （氮雜環丁 -1- 基）丁 -2- 烯醯基） -N- 甲基甘氨酸（( E)- N-(4-(azetidin-1-yl) but-2-enoyl)- N-methylglycine）
將（ E）- N-（4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸叔丁酯（800毫克，2.98毫莫耳，1當量），TFA（12.32克，108.05毫莫耳，8.00毫升，36.24當量）和DCM（16毫升）的混合物在25°C下攪拌2小時。將混合物減壓濃縮，得到（ E）- N-（4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸（800毫克，粗製，TFA），為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 213.2[(M+H) +]; Rt=0.122 分鐘。 實施例 56 化合物 506 （ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R,E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido)acetamido)propan-2-yl)phenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： ( R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，921.81微莫耳，1當量），環丙基硼酸（791.81毫克，9.22毫莫耳，10當量）和K 2CO 3（382.20毫克，2.77毫莫耳，3當量）在DMA（10毫升）和H 2O（5毫升）溶液中，加入Pd （dppf）Cl 2（67.45毫克，92.18微莫耳，0.1當量）。將混合物在100°C在N 2下攪拌10小時。將殘餘物溶於EtOAc（40毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在25°C攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水（30毫升）中並用EtOAc（20毫升*2）萃取。合併有機層，用水（10毫升*2）、飽和鹽水（10毫升*1）洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。通過矽膠層析法（石油醚/EtOAc =1/1）純化粗產物，得到（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（320毫克，728.02微莫耳，收率：78.98％），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 440.3[(M+H) +]; Rt=1.047 分鐘。 步驟 2 ：（ R ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-5-cyclopropyl-6- ethylpyrazine-2-carboxamide）
將（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，910.02毫莫耳，1當量）和HCl/MeOH（10毫升，4M）的混合物在25°C攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮以得到（ R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（270毫克，粗製，HCl），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 340.3[(M+H) +]; Rt=0.543 分鐘。 步驟 3 ：（ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R,E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
向（ E）- N-（4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸（347.19毫克，1.06毫莫耳，2當量，TFA）在DMF（1毫升）溶液中，加入DIEA （687.66毫克，5.32毫莫耳，926.76微升，10當量）和（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，532.06微莫耳，1當量，HCl），然後加入BOP（352.98毫克，798.10微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。過濾得到濾液。將粗產物透過製備型HPLC （柱：Phenomenex C18 75*30mm*3um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％，25%-75%，8分鐘），得到（R, E）-3-（（3-（1-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（89.9毫克，160.04微莫耳，收率：30.08％），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 8.12 (br s, 1H), 8.08 - 7.79 (m, 2H), 7.54 (br d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.35 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.23 (dt, J= 4.3, 7.8 Hz, 1H), 6.83 (br dd, J= 3.7, 7.3 Hz, 1H), 6.50 - 6.14 (m, 2H), 3.92 (d, J= 16.4 Hz, 2H), 3.28 - 3.20 (m, 2H), 3.14 - 3.08 (m, 3H), 3.07 - 3.00 (m, 3H), 2.96 - 2.77 (m, 6H), 2.33 - 2.26 (m, 1H), 1.95 (td, J= 7.0, 19.8 Hz, 2H), 1.27 (t, J= 7.5 Hz, 3H), 1.21 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 1.13 - 1.08 (m, 4H). LC-MS (ES+, m/z): 534.3[(M+H) +]; Rt=2.265 分鐘。 HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 534.3185。 實施例 57 化合物 507 （ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 丙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-propylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R)- （ 2- （ 3- （（ 6- 烯丙基 -3- 胺基甲醯基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-(3-((6-allyl-3-carbamoyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
將（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，921.81微莫耳，1當量），2-烯丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷（1.55克，9.22毫莫耳，10當量），Pd （dppf）Cl 2（67.45毫克，92.18微莫耳，0.1當量），Cs 2CO 3（901.03毫克，2.77毫莫耳，3當量）在二惡烷（20毫升）和H 2O（5毫升）中的混合物在90°C在N 2下攪拌16小時。將殘餘物倒入飽和EDTA（20毫升）中並攪拌60分鐘。將水相用乙酸乙酯（20毫升*3）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（20毫升）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並真空濃縮。透過在矽膠硫醇凝膠上層析（石油醚/EtOAc =20/1至2/1）純化粗產物，得到（R）-（2-（3-（（6-烯丙基-3-胺基甲醯基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，682.52微莫耳，收率：74.04％），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 440.2[(M+H) +]; Rt=0.865 分鐘。 步驟 2 ： (R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 丙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-propylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
在25°C，向Pd/C（10.0毫克，682.52微莫耳，純度：50％，1當量）在EtOAc 80毫升）的懸浮液中，加入（R）-（2-（3-（（6-烯丙基-3-胺基甲醯基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，682.52微莫耳，1當量）並在25°C在15psi 的H2氣氛下攪拌1小時。將混合物過濾並濃縮至乾燥，得到（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-丙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（150毫克，粗製），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 10.69 (s, 1H), 7.87 (br d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.66 - 7.52 (m, 2H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.84 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.48 - 5.37 (m, 1H), 4.50 - 4.36 (m, 1H), 3.53 - 3.40 (m, 1H), 3.22 - 3.10 (m, 1H), 2.95 - 2.84(m, 1H), 2.79 - 2.71 (m, 4H), 1.90 - 1.81 (m, 2H), 1.47 - 1.33 (m, 9H), 1.31 - 1.19 (m, 6H), 1.03 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 442.2[(M+H) +]; Rt=2.406 分鐘。 步驟 3 ：（ R ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 丙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-propylpyrazine-2-carboxamide）
將（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-丙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（150毫克，339.70微莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，20毫升，235.50當量）的混合物在25°C攪拌1小時。將混合物濃縮至乾燥，得到（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-丙基吡嗪-2-甲醯胺（140毫克，粗製，HCl），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 342.2[(M+H) +]; Rt=0.585 分鐘。 步驟 4 ：（ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 丙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-propylpyrazine-2-carboxamide）
在0°C下，向（E）-N-（4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基）-N-甲基甘氨酸（193.39毫克，592.73微莫耳，1.6當量，TFA）在DMF（1.5毫升）溶液中，加入DIPEA（478.79毫克，3.70毫莫耳，645.27微升，10當量）和（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-丙基吡嗪-2-甲醯胺（140毫克，370.46微莫耳，1當量，HCl）。然後在0°C加入BOP （245.77毫克，555.69微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌1小時。過濾混合物。將殘餘物通過製備型HPLC（柱：Waters xbridge BEH C18100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-60%，8分鐘），得到（R，E）-3-（（3-（1-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-丙基吡嗪-2-甲醯胺（70.0毫克，127.03微莫耳，收率：34.29％，純度：97.21％），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.16 - 11.02 (m, 1H), 8.22 - 8.13 (m, 1H), 8.11 - 7.82 (m, 2H), 7.64 (br d, J = 7.4 Hz, 1H),7.52 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30 - 7.19 (m, 1H), 6.88 - 6.80 (m, 1H), 6.51 - 6.21 (m, 2H), 3.93 (d, J = 17.3 Hz, 2H), 3.26 - 3.19 (m, 2H), 3.16 - 3.08 (m, 3H), 3.07 - 2.96 (m, 4H), 2.94 - 2.87 (m, 1H), 2.83 - 2.69 (m, 6H), 2.04 - 1.88 (m, 2H), 1.82 (sxt, J = 7.4 Hz, 2H), 1.27 - 1.17 (m, 6H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H). LC-MS (ES+, m/z): 536.3[(M+H) +]; Rt=2.328 分鐘。HRMS (EI): m/z [M] +實測值: 536.3325。 實施例 58 化合物 508 （ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-5, 6-diethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5, 6-diethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
在25°C下，向（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400毫克，921.81微莫耳，1當量）、三乙基硼烷（903.31毫克，9.22毫莫耳，1.33毫升，10當量），Cs 2CO 3（901.03毫克，2.77毫莫耳，3當量）在DMF （5毫升）和H 2O（2毫升）溶液中，加入P（tBu） 3Pd G2（47.23毫克，92.18微莫耳，0.1當量）。將混合物在80°C在N 2下攪拌5小時。將殘餘物溶於DCM（10毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在25°C攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水（10毫升）中並用DCM（10毫升*2）萃取。合併有機層，用水（20毫升*2），飽和鹽水（20毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯=3:1），以得到（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，818.64 微莫耳，收率：88.81％），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 (s, 1H), 8.20 - 8.10 (m, 1H), 7.86 (br d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.66 - 7.48 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.89 - 6.78 (m, 2H), 3.15 - 2.99 (m, 2H), 2.92 - 2.80 (m, 3H), 2.80 - 2.71 (m, 2H), 1.36 - 1.16 (m, 18H)。LCMS (ES+, m/z): 428.2 [(M+H) +]; Rt=0.947 分鐘。 步驟 2 ：（ R ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-5, 6-diethylpyrazine-2- carboxamide）
將（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（440毫克，1.03毫莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，40毫升，155.47當量）的混合物在25°C下攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（350毫克，粗製，HCl），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.12 (s, 1H), 8.22 - 8.12 (m, 1H), 7.90 (br d, J = 13.0 Hz, 4H), 7.74 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.57 (m, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 1H), 6.96 - 6.89 (m, 1H), 3.07 - 2.97 (m, 3H), 2.85 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.76 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.33 - 1.22 (m, 9H)(HCl 鹽)。LCMS (ES+, m/z): 328.2[(M+H) +]; Rt=0.568 分鐘。 步驟 3 ： (R)- （ 2- （（ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基） -2- 氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-((2-(3-((3-carbamoyl-5, 6-diethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在0°C下，向（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（230毫克，632.07微莫耳，1當量，HCl），N-（叔丁氧基羰基）-N-甲基甘氨酸（179.39毫克，948.10微莫耳，1.5當量），DIPEA（816.91毫克，6.32毫莫耳，1.10毫升，10當量）在DMF（3毫升）溶液中，加入BOP（419.33毫克，948.10微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。將混合物倒入水（5毫升）中並用EtOAc（5毫升*2）萃取。合併有機層，用水（10毫升*2）、飽和鹽水（10毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯= 1:3），得到（R）-（2-（（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（240毫克，481.33微莫耳，收率：76.15％），其為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.13 - 11.06 (m, 1H), 8.22 - 8.11 (m, 1H), 7.93 - 7.77 (m, 2H), 7.69 - 7.60 (m, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 1H), 7.29 - 7.20 (m, 1H), 6.89 - 6.80 (m, 1H), 3.78 - 3.62 (m, 2H), 3.29 - 3.19 (m, 2H), 2.95 - 2.66 (m, 8H), 1.41 - 1.18 (m, 18H)。LCMS (ES+, m/z): 499.4 [(M+H) +]; Rt=0.836 分鐘。 步驟 4 ：（ R ） -5,6- 二乙基 -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （甲基胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-5, 6-diethyl-3-((3-(1-(2-(methylamino) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將（R）-（2-（（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（240毫克，481.33微莫耳，1當量）和HCl/MeOH（4M，27.69毫升，230.13當量）的混合物在25°C攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到（R）-5,6-二乙基-3-（（3-（1-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（230毫克，粗製），為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 399.4[(M+H) +]; Rt=0.579分鐘。 步驟 5 ：（ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-5, 6-diethylpyrazine-2-carboxamide）
在0°C下，向（R）-5,6-二乙基-3-（（3-（1-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，459.81微莫耳，1當量，HCl）、（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸（293.35毫克，1.15毫莫耳，2.5當量，TFA），DIPEA（594.27毫克，4.60毫莫耳，800.91微升，10當量）在DMF（2毫升）溶液中，加入BOP（305.05毫克，689.72微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌1小時。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC （柱：Waters xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-65%，8分鐘），得到（R, E）-3-（（3-（1-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（30.10毫克，24.75微莫耳，收率：12.28％，純度：97.89％），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.11 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 8.20 - 8.04 (m, 1H), 7.93 - 7.81 (m, 2H), 7.68 - 7.52 (m, 2H), 7.32 - 7.18 (m, 1H), 6.92 - 6.80 (m, 1H), 6.61 - 6.37 (m, 2H), 6.29 - 6.14 (m, 1H), 3.99 - 3.90 (m, 2H), 3.29 - 3.22 (m, 2H), 3.17 - 3.02 (m, 6H), 2.98 (s, 2H), 2.92 - 2.82 (m, 3H), 2.81 - 2.73 (m, 3H), 2.06 - 1.87 (m, 2H), 1.35 - 1.19 (m, 9H)(TFA 鹽)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 +D 2O) δ = 11.01 - 10.92 (m, 1H), 7.68 - 7.60 (m, 1H), 7.51 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30 - 7.20 (m, 1H), 6.90 - 6.80 (m, 1H), 6.58 - 6.36 (m, 2H), 3.92 (br d, J = 19.6 Hz, 2H), 3.29 - 3.19 (m, 2H), 3.16 - 3.09 (m, 3H), 3.08 - 2.98 (m, 3H), 2.95 (s, 2H), 2.90 - 2.80 (m, 3H), 2.78 - 2.71 (m, 3H), 2.02 - 1.87 (m, 2H), 1.32 - 1.16 (m, 9H)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ,T=273+80 K) δ = 11.02 - 10.90 (m, 1H), 8.06 - 7.90 (m, 1H), 7.74 - 7.41 (m, 4H), 7.30 - 7.20 (m, 1H), 6.91 - 6.81 (m, 1H), 6.66 - 6.10 (m, 2H), 3.97 - 3.89 (m, 2H), 3.29 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.20 - 3.10 (m, 5H), 3.00 - 2.71 (m, 9H), 2.06 - 1.91 (m, 2H), 1.35 - 1.22 (m, 9H). LC-MS (ES+, m/z): 522.2[(M+H) +]; Rt=2.267 分鐘。HRMS (EI): m/z (M+H) +實測值: 522.3195。 實施例 59 化合物 509 （ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 異丙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-isopropylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R) - （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- （丙 -1- 烯 -2- 基）吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(prop-1-en-2-yl) pyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（400.00毫克，921.81微莫耳，1當量）和4,4,5,5-四甲基-2-（丙-1-烯-2-基）-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷（774.50毫克，4.61毫莫耳，5當量）在DMF（4毫升）中的溶液中加入Pd （dppf）Cl 2（67.45毫克，92.18微莫耳，0.1當量）和Cs 2CO 3（901.03毫克，2.77毫莫耳，3當量）。將混合物在100°C在N 2氣氛下攪拌10小時。將反應物倒入水（10毫升）中並用EtOAc（20毫升*3）萃取。合併有機層，用水（15毫升*2），飽和鹽水（15毫升*2）洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將殘餘物溶解於DCM（20毫升）中。加入清除劑（Pd），然後在25°C下攪拌1小時，然後過濾。將殘餘物通過柱層析（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/1）純化，得到（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（丙-1-烯-2-基）吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，682.52微莫耳，收率：74.04%），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 440.3[(M+H) +]; Rt=1.053 分鐘。 步骤 2 ： (R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 异丙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isopropylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
在H 2氣氛下，向(R)-(2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(190 毫克，432.26微莫耳，1當量)在MeOH (30毫升)溶液中，加入Pd/C(200 毫克，432.26微莫耳，純度：50%，1當量)。將懸浮液脫氣並用H 2吹掃3次。在15 Psi的H 2下，在20℃下攪拌混合物1小時。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到(R)-(2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丙基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(160 毫克，362.35微莫耳，收率：83.83%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES +, m/z): 442.3[(M+H) +]; Rt=1.067 分鐘。 步驟 3 ： (R)-3-((3-(1- 胺基丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5- isopropylpyrazine-2-carboxamide）
將（ R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（100毫克，226.47微莫耳，1當量）在HCl/MeOH（30毫升）溶液的混合物中，於25°C攪拌1小時。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到（ R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-異丙基吡嗪-2-甲醯胺（100毫克，粗製），為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 342.3[(M+H) +]; Rt=0.134 分鐘。 步驟 4 ：（ R, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 異丙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isopropylpyrazine-2-carboxamide）
向（ E）- N-（4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯醯基）- N-甲基甘氨酸（64.75毫克，198.46微莫耳，1.5當量，TFA）在DMF（0.5毫升）溶液中，加入DIPEA（171.00毫克，1.32毫莫耳，230.45微升，10當量）、（R）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-異丙基吡嗪-2-甲醯胺（50毫克，132.31微莫耳，1當量，HCl）和BOP（87.77毫克，198.46微莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌1小時。將反應混合物過濾並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過製備型HPLC（柱：Waters xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-60%，8分鐘），得到（R, E）-3-（（3-（1-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）丙-2-基）苯基）胺基）-6-乙基-5-異丙基吡嗪-2-甲醯胺（14.02毫克，25.67微莫耳，收率：19.40%），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.14 - 11.02 (m, 1H), 8.22 - 8.11 (m, 1H), 8.10 - 7.83 (m, 2H), 7.71 - 7.63 (m, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 1H), 7.30 - 7.18 (m, 1H), 6.89 - 6.77 (m, 1H), 6.53 - 6.13 (m, 2H), 3.96 - 3.89 (m, 2H), 3.28 - 3.20 (m, 3H), 3.14 - 3.08 (m, 3H), 3.07 - 3.00 (m, 3H), 2.97 - 2.84 (m, 3H), 2.81 - 2.77 (m, 3H), 2.01 (s, 2H), 1.27 - 1.18 (m, 12H)。LC-MS (ES+, m/z): 536.3[(M+H) +]; Rt=2.323 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:536.3359。 實施例 60 化合物 510 6- 乙基 -5- 異丁基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-isobutyl-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： 6- 乙基 -5- 異丁基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-isobutyl-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
向6-乙基-5-異丁基-3-[3-[2-[ [2-(甲基胺基)乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺鹽酸鹽(97.60 毫克，0.2174 毫莫耳，1當量)在DMF (1毫升)中的懸浮液中，加入N,N-二異丙基乙胺(0.3786毫升，2.174 毫莫耳，10 當量)。將混合物冷卻至0℃。滴加丙烯醯氯(0.02650毫升，0.3261 毫莫耳，1.5 當量)的DMF(0.1毫升)溶液。將反應物從0℃繼續攪拌至室溫2小時。用EtOAc(20毫升)稀釋混合物，用NaHCO 3(水溶液)(1x)、水(2x)、鹽水(1x)洗滌。用MgSO 4乾燥、過濾並濃縮。將粗產物溶解在MeOH/DCM (1:1)中，裝載在矽膠上，通過12克矽膠柱(0-5% MeOH/EtOAc)純化，得到6-乙基-5-異丁基-3-[3-[2-[ [2-[甲基(丙-2-烯醯基)胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺(76.00 毫克，0.1621 毫莫耳，收率：74.56%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.99 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.98 (dt, J = 56.4, 5.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 7.16 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.80 – 6.73 (m, 1H), 6.73 – 6.39 (m, 1H), 6.01 (ddd, J = 26.5, 16.7, 2.5 Hz, 1H), 5.56 (ddd, J = 47.1, 10.4, 2.5 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 19.0 Hz, 2H), 3.31 – 3.19 (m, 2H), 2.85 (d, J = 83.1 Hz, 3H), 2.73 – 2.54 (m, 6H), 2.18 (hept, J = 6.8 Hz, 1H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 467.400 [(M+H) +]。 實施例 61 化合物 511 6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl(methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
向N-[2-[3-[(3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基-吡嗪-2-基)胺基]苯基]乙基]胺基甲酸叔丁酯(3.465克，8.25 毫莫耳，1當量)在1,4-二氧六環(10毫升)溶液中，加入N-乙基甲胺(7.173毫升，82.52毫莫耳，10 當量)，隨後加入N,N-二異丙基乙胺(1.437毫升，8.252毫莫耳，1當量)。將反應混合物加熱回流70小時。將反應混合物在旋轉蒸發儀上濃縮。將殘餘物在EtOAc(100毫升)和NaHCO 3(50毫升) /水(50毫升)之間分配，然後分離各層。用EtOAc(50毫升)萃取水相。合併的有機物用水(2x)洗滌並鹽水洗滌(1x)。用MgSO 4乾燥、過濾並濃縮。將粗產物在80克矽膠柱(0-40% EtOAc /己烷)上純化，得到N-[2-[3-[[3-胺基甲醯基-5-乙基-6-[乙基(甲基)胺基]吡嗪-2-基]胺基]苯基]乙基]胺基甲酸叔丁酯(2.650克，5.988 毫莫耳，收率：72.57%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H), 7.74 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.46 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.44 – 7.38 (m, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.83 – 6.73 (m, 1H), 3.47 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.14 (dt, J = 8.2, 6.1 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.74 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.67 (dd, J = 8.5, 6.4 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.22 (dt, J = 12.2, 7.2 Hz, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 443.304 [(M+H) +]。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在環境溫度下，向N-[2-[3-[ [3-胺基甲醯基-5-乙基-6-[乙基(甲基)胺基]吡嗪-2-基]胺基]苯基]乙基]胺基甲酸叔丁酯(2.650克，5.988毫莫耳，1當量)在1,4-二惡烷(15毫升)溶液中，加入4N HCl的二惡烷(15毫升，10 當量)溶液。將反應混合物攪拌5小時。將反應混合物用EtOAc(30毫升)稀釋，過濾，用EtOAc(3x)沖洗，真空乾燥，得到3-[3-(2-胺基乙基)苯胺基]-6-乙基-5-[乙基(甲基)胺基]吡嗪-2-甲醯胺二鹽酸鹽(2.440克，5.874 毫莫耳，收率：98.10%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.13 (s, 1H), 8.07 (s, 3H), 7.74 (s, 1H), 7.63 – 7.38 (m, 3H), 7.30 – 7.21 (m, 1H), 6.90 – 6.83 (m, 1H), 3.45 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.11 – 2.95 (m, 5H), 2.87 (dd, J = 9.7, 6.2 Hz, 2H), 2.73 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.21 (dt, J = 11.9, 7.2 Hz, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 343.230 [(M+H) +]。 步驟 3 ： (2-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl(methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向2-[叔-丁氧基羰基(甲基)胺基]乙酸(273.3 毫克，1.445毫莫耳，1.2當量)和3-[3-(2-胺基乙基)苯胺基]-6-乙基-5-[乙基(甲基)胺基]吡嗪-2-甲醯胺二鹽酸鹽(500.0毫克，1.204毫莫耳，10當量)在DMF (1毫升)溶液中，滴加N,N-二異丙基乙胺(2.097毫升，12.04毫莫耳，10當量)，隨後滴加苯並三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)-鏻六氟磷酸鹽(638.9 毫克，1.445 毫莫耳，1.2 當量)的DMF(2毫升)溶液。將反應物從0℃至室溫攪拌1小時。用EtOAc(60毫升)稀釋反應混合物，用NaHCO 3(水溶液)(1x)、水(2x)、鹽水(1x)洗滌。用MgSO 4乾燥，過濾並濃縮。將粗產物在40克矽膠柱(0-100% EtOAc /己烷)上純化，得到N-[2-[2-[3-[ [3-胺基甲醯基-5-乙基-6-[乙基(甲基)胺基]吡嗪-2-基]胺基]苯基]乙基胺基]-2-氧代-乙基]-N-甲基胺基甲酸叔丁酯(537.0 毫克，1.046 毫莫耳，收率：86.85%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.11 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.73 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (dd, J = 11.2, 5.6 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.72 (d, J = 14.5 Hz, 2H), 3.46 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.32 (s, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.73 (dd, J = 12.6, 5.2 Hz, 4H), 1.37 (d, J = 27.3 Hz, 9H), 1.22 (dt, J = 12.7, 7.2 Hz, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 514.400 [(M+H) +]。 步驟 4 ： 6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在室溫下，向N-[2-[2-[3-[ [3-胺基甲醯基-5-乙基-6-[乙基(甲基)胺基]吡嗪-2-基]胺基]苯基]乙基胺基]-2-氧代-乙基]-N-甲基-胺基甲酸叔丁酯(520.0 毫克，1.012 毫莫耳，1當量)的二惡烷(3毫升)溶液中，滴加4N HCl的二惡烷(3.0 毫升，12 當量)溶液。攪拌反應物2小時。去除溶劑。將殘餘物用MTBE/EtOAc/MeOH (1:2:2)研磨，過濾，用EtOAc(5x)沖洗，真空乾燥，得到6-乙基-5-[乙基(甲基)胺基]-3-[3-[2-[ [2-(甲基胺基)乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺二鹽酸鹽(442.0毫克，0.9086毫莫耳，收率：89.75%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.04 (s, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.55 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.51 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz, 2H), 7.16 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.57 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.31 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.10 (s, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.66 (dd, J = 8.6, 6.6 Hz, 4H), 1.14 (dt, J = 11.4, 7.2 Hz, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 414.300 [(M+H) +]。 步驟 5 ： 6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(2-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((3-(2-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向6-乙基-5-[乙基(甲基)胺基]-3-[3-[2-[ [2-(甲基胺基)乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺二鹽酸鹽(100.0 毫克，0.2056 毫莫耳，1當量)的DMF懸浮液中，加入N,N-二異丙基乙胺(0.3581毫升，2.056 毫莫耳，10 當量)，然後加入丙烯醯氯(0.01840毫升，0.2261 毫莫耳，1.1當量)。將反應混合物在0℃下攪拌45分鐘。再加入丙烯醯氯(10.0微升，繼續30分鐘。用EtOAc(20毫升)稀釋反應混合物，用NaHCO 3(水溶液)(1x)、水(2x)、鹽水(1x)洗滌。用MgSO 4乾燥、過濾並濃縮。將粗產物溶解在MeOH/DCM (1:1)中，裝載在矽膠上，透過12克矽膠柱(0-5% MeOH/EtOAc)純化，得到6-乙基-5-[乙基(甲基)胺基]-3-[3-[2-[ [2-[甲基(丙-2-烯醯基)胺基]乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺(69.00 毫克，0.1468 毫莫耳，收率：71.43%)，為灰白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.98 (dt, J = 55.5, 5.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.50 (dt, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.43 – 7.31 (m, 2H), 7.14 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.76 – 6.71 (m, 1H), 6.71 – 6.39 (m, 1H), 6.01 (ddd, J = 26.2, 16.7, 2.5 Hz, 1H), 5.57 (ddd, J = 46.5, 10.4, 2.5 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 18.7 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.22 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.85 (d, J = 83.8 Hz, 3H), 2.70 – 2.57 (m, 4H), 1.14 (dt, J = 12.9, 7.2 Hz, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 468.300 [(M+H) +]。 實施例 62 化合物 512 （ R ） -6- 乙基 -5- 異丁基 -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ N- 甲基丙烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-6-ethyl-5-isobutyl-3-((3-(1-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R)- （ 2- （ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（250毫克，576.13微莫耳，1當量）、異丁基硼酸（587.30毫克，5.76毫莫耳，10當量）和Cs 2CO 3（563.14毫克，1.73毫莫耳，3當量）在二惡烷（2.5毫升）和H 2O（0.5毫升）溶液中，加入Pd （dppf）Cl 2（42.16毫克，57.61微莫耳，0.1當量）。將混合物在100°C在N 2下攪拌10小時。將混合物倒入水（5毫升）中並用EtOAc （5毫升*2）萃取。合併有機層，用水（10毫升*2）、飽和鹽水（10毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯 =2:1），得到（R）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（160毫克，351.19微莫耳，收率：60.96%），為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 - 11.02 (m, 1H), 8.16 (br s, 1H), 7.92 - 7.82 (m, 1H), 7.70 - 7.62 (m, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.83 (br d, J= 7.0 Hz, 2H), 3.16 - 2.99 (m, 2H), 2.91 - 2.81 (m, 1H), 2.76 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 2.68 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 2.32 - 2.21 (m, 1H), 1.39 - 1.31 (m, 9H), 1.24 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.18 (br d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.03 - 0.94 (m, 6H)。LCMS (ES+, m/z): 456.2 [(M+H) +]; Rt=1.002 分鐘。 步驟 2 ：（ R ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine- 2-carboxamide）
將(R)-(2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(180 毫克，395.09毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，25毫升，253.11當量)的混合物在25℃攪拌4小時。將反應混合物減壓濃縮，得到(R)-3-((3-(1-胺基丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(160毫克，粗製)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 356.3[(M+H) +]; Rt=0.635 分鐘。 步驟 3 ： (R)-(2-((2-(3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-((2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向(R)-3-((3-(1-胺基丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(270毫克，688.89毫莫耳，1當量，HCl)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(260.69毫克，1.38毫莫耳，2 當量)的DMF(2.5毫升)溶液中，加入NMI (565.60毫克，6.89毫莫耳，549.13微升，10 當量)，然後加入TCFH (289.93 毫克，1.03 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。將混合物倒入水(5毫升)中，用EtOAc(5毫升*2)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。粗產物透過矽膠色層分析法純化(石油醚：乙酸乙酯=1:1)，得到(R)-(2-((2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(300 毫克，569.62微莫耳，收率：82.69%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.15 - 11.09 (m, 1H), 8.28 - 8.16 (m, 1H), 7.98 - 7.82 (m, 2H), 7.73 (br s, 1H), 7.57 - 7.47 (m, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 1H), 6.94 - 6.87 (m, 1H), 3.83 - 3.69 (m, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.01 - 2.89 (m, 1H), 2.86 - 2.78 (m, 5H), 2.75 - 2.71 (m, 2H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 1.46 - 1.24 (m, 15H), 1.08 - 0.99 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 527.3[(M+H) +]; Rt=0.916 分鐘。 步驟 4 ： (R)-6- 乙基 -5- 異丁基 -3-((3-(1-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-6-ethyl-5-isobutyl-3-((3-(1-(2-(methylamino) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(R)-(2-((2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(180毫克，341.77微莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，25毫升，292.59當量)的混合物在25℃攪拌4小時。將反應混合物減壓濃縮，得到 (R)-6-乙基-5-異丁基-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(185 毫克，粗製)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 427.3[(M+H) +]; Rt=0.709 分鐘。 步驟 5 ： (R)-6- 乙基 -5- 異丁基 -3-((3-(1-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-6-ethyl-5-isobutyl-3-((3-(1-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(R)-6-乙基-5-異丁基-3-((3-(1-(2-(甲胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(370 毫克，799.11微莫耳，1當量，HCl)和DIPEA(619.68 毫克，4.79 毫莫耳，835.14微升，6當量)的DMF (4毫升)溶液中，加入丙烯醯氯(86.79毫克，958.93微莫耳，78.19微升，1.2當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到(R)-6-乙基-5-異丁基-3-((3-(1-(2-(N-甲基丙烯醯胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(72.26 毫克，149.53微莫耳，收率：18.71%，純度：99.45%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.11 - 11.03 (m, 1H), 8.23 - 8.12 (m, 1H), 8.10 - 7.81 (m, 2H), 7.71 - 7.59 (m, 1H), 7.55 - 7.43 (m, 1H), 7.29 - 7.19 (m, 1H), 6.89 - 6.40 (m, 2H), 6.16 - 5.97 (m, 1H), 5.74 - 5.51 (m, 1H), 4.01 - 3.90 (m, 2H), 3.29 - 3.20 (m, 2H), 3.04 - 2.96 (m, 1H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.82 (br s, 4H), 2.70 - 2.64 (m, 2H), 2.32 - 2.20 (m, 1H), 1.29 - 1.16 (m, 6H), 1.02 - 0.93 (m, 6H). LC-MS (ES+, m/z): 481.3[(M+H) +]; Rt=2.757 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 481.2929。 實施例 63 化合物 513 (R)-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(1-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-6-ethyl-5-(ethyl (methyl) amino)-3-((3-(1-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R)-(2-(3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl (methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
將(R)-(2-(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，1.15毫莫耳，1當量)、DIPEA(743.15 毫克，5.75 毫莫耳，1.00毫升，5 當量)、N-甲基乙胺(1.36克，23.00 毫莫耳，1.98毫升，20當量)和DMA(5毫升)的混合物在密封試管中於100℃攪拌16小時。將反應液倒入水(50毫升)中，用EtOAc(30毫升*2)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將粗產物通過矽膠色譜(石油醚/EtOAc = 3/1)純化，得到(R)-(2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(450 毫克，969.82微莫耳，收率：84.33%，純度：98.4%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.11 (s, 1H), 7.74 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.46 (br d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.39 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.87 - 6.76 (m, 2H), 3.46 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.14 - 2.94 (m, 5H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.73 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.39 - 1.29 (m, 9H), 1.27 - 1.14 (m, 10H)。LCMS (ES+, m/z): 457.2 [(M+H) +]; Rt=0.944 分鐘。 步驟 2 ： (R)-3-((3-(1- 胺基丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-3-((3-(1-aminopropan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl (methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(R)-(2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(450毫克，985.59毫莫耳，1當量) HCl/MeOH (4M，30毫升，121.75 當量)的混合物在25℃攪拌2小時。濃縮混合物，得到3(R)-3-((3-(1-胺基丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(400 毫克，粗製，HCl)，為黃色固體。LCMS (ES +, m/z): 357.1[(M+H) +]; Rt=0.598 分鐘。 步驟 3 ： (R)-(2-((2-(3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (R)-(2-((2-(3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl (methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(288.92 毫克，1.53 毫莫耳，1.5 當量)、NMI (835.82 毫克，10.18 毫莫耳，811.48微升，10 當量)的DMF (10毫升)溶液中加入(R)-3-((3-(1-胺基丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(400 毫克，1.02 毫莫耳，1當量，HCl)，然後加入TCFH (428.45 毫克，1.53 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。將反應液倒入水(30毫升)中，用EtOAc(25毫升*2)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚/EtOAc = 2/1)，得到(R)-(2-((2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(450 毫克，782.21微莫耳，收率：76.84%，純度：91.72%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 528.4[(M+H) +]; Rt=0.852 分鐘。 步驟 4 ： (R)-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(1-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-6-ethyl-5-(ethyl (methyl) amino)-3-((3-(1-(2-(methylamino) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(R)-(2-((2-(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(450 毫克，852.83微莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，27.00毫升，126.64當量)的混合物在25℃攪拌2小時。濃縮混合物，得到(R)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(400 毫克，粗製，HCl)，為黃色油狀物。LCMS (ES+, m/z): 428.4[(M+H) +]; Rt=0.582 分鐘。 步驟 5 ： (R)-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((3-(1-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(R)-6-ethyl-5-(ethyl (methyl) amino)-3-((3-(1-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(R)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(350 毫克，754.31微莫耳，1當量，HCl)、DIPEA (487.44 毫克，3.77 毫莫耳，656.93微升，5 當量)在DMF (3毫升)溶液中，加入丙烯醯氯(75.10毫克，829.74微莫耳，67.66微升，1.1當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。過濾混合物，得到殘餘物。粗產物透過製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm *3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30% -60%，8分鐘)純化，得到(R)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((3-(1-(2-(N-甲基丙烯醯胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(76.04毫克，157.89微莫耳，收率：20.93%，純度：100%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.13 (s, 1H), 8.09 - 7.85 (m, 1H), 7.74 (br s, 1H), 7.58 (br d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.51 - 7.37 (m, 2H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.88 - 6.80 (m, 1H), 6.79 - 6.39 (m, 1H), 6.16 - 5.97 (m, 1H), 5.73 - 5.48 (m, 1H), 3.95 (d, J = 14.6 Hz, 2H), 3.31 (br s, 2H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 3.09 - 2.97 (m, 5H), 2.89 (td, J = 7.6, 15.5 Hz, 1H), 2.81 - 2.70 (m, 3H), 1.25 - 1.16 (m, 9H); HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 482.2856。LC-MS (ES+, m/z): 482.3[(M+H) +]; Rt=2.605 分鐘。 實施例 64 化合物 515 6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((2-(2-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((2-(2-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (2-(4-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl(methyl)amino) pyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) carbamate）
將(2-(4-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，1.19毫莫耳，1當量)、N-甲基乙胺(1.40克，23.76 毫莫耳，2.04毫升，20 當量)、DIPEA (767.65 毫克，5.94 毫莫耳，1.03毫升，5 當量)在DMA (3毫升)溶液的混合物中，加熱至100℃達10小時。將混合物倒入水(60毫升)中，用EtOAc(60毫升*2)萃取。將有機層用水(40 毫升*2)，飽和鹽水(40毫升*2)，Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮洗滌，將粗產物透過矽膠色譜(石油醚：乙酸乙酯=1:1)純化，得到(2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(400 毫克，901.83毫莫耳，收率：75.91%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 11.06 (br s, 1H), 8.25 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.62 - 7.49 (m, 2H), 7.39 (br d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.29 - 5.24 (m, 1H), 5.20 - 5.12 (m, 1H), 3.46 (q, J = 7.0 Hz, 4H), 3.05 (s, 3H), 2.86 (br t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.70 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.22 (dt, J = 4.3, 7.2 Hz, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 444.4[(M+H) +]; Rt=0.390 分鐘。 步驟 2 ： 3-((2-(2- 胺基乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((2-(2-aminoethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(400 毫克，901.83毫莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，26.67毫升，118.28 當量)的混合物在25℃攪拌1小時。將混合物濃縮至乾燥，得到3-((2-(2-胺基乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2甲醯胺(400 毫克，粗製，HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 344.3[(M+H) +]; Rt=0.320 分鐘。 步驟 3 ： (2-((2-(4-((3- 氨甲醯基 -5- 乙基 -6-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-((2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(ethyl(methyl)amino) pyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl)carbamate）
在0℃下，向N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(398.45 毫克，2.11 毫莫耳，2 當量)、NMI (864.51 毫克，10.53 毫莫耳，839.33微升，10 當量)的DMF (5毫升)溶液中，加入3-((2-(2-胺基乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(400毫克，1.05毫莫耳，1當量，HCl)，然後在0℃下加入TCFH (443.15毫克，1.58毫莫耳，1.5當量)，將混合物在0℃下攪拌1小時。將混合物倒入水(60毫升)中，用EtOAc(60毫升*2)萃取。合併有機層，用水(40毫升*2)、飽和鹽水(40毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。粗產物透過矽膠色層分析法純化(石油醚：乙酸乙酯=1:1)，得到(2-((2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(400 毫克，777.27毫莫耳，收率：73.82%)，為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 515.3[(M+H) +]; Rt=0.399 分鐘。 步驟 4 ： 6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((2-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((2-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(2-((2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(400 毫克，777.27毫莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，30.00毫升，154.39當量)的混合物在25℃攪拌1小時。將混合物濃縮至乾燥，得到6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(400 毫克，粗製，HCl)，為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z): 415.3[(M+H) +]; Rt=0.319 分鐘。 步驟 5 ： 6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((2-(2-(2-(N- 甲基丙烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)-3-((2-(2-(2-(N-methylacrylamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(200毫克，410.32毫莫耳，1當量，2HCl)、DIPEA(549.20毫克，4.25毫莫耳，740.16微升，10.36 當量)的DCM (10毫升)溶液中，加入丙烯醯氯(37.14 毫克，410.32毫莫耳，33.34微升，1當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。過濾混合物，然後透過製備型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150 *40mM *10um；流動相：[ A：水 (10 毫莫耳 NH 4HCO 3)；B：ACN]；B%：5.00% -35.00%，8.00分鐘)純化，得到6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((2-(2-(2-(N-甲基丙烯醯胺基)乙基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(37.25 毫克，79.50毫莫耳，收率：19.38%，純度：100%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.42 (s, 1H), 8.24 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.17 - 7.88 (m, 1H), 7.80 (br d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.63 - 7.48 (m, 2H), 7.47 - 7.34 (m, 1H), 6.81- 6.42 (m, 1H), 6.14 - 5.95 (m, 1H), 5.71 - 5.48 (m, 1H), 3.92 (d, J = 19.1 Hz, 2H), 3.51 - 3.35 (m, 4H), 3.05 (s, 3H), 2.99 (s, 1.5H), 2.80 - 2.69 (m, 5.5H), 1.23 - 1.16 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 469.2[(M+H) +]; Rt=2.006分鐘。HRMS (EI): m/z (M+H) +實測值: 469.2668。 實施例 65 化合物 516 (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl)-5-fluorophenyl) amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-5-fluorophenethyl) carbamate）
向(3-胺基-5-氟苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2.00g，7.86 毫莫耳，1當量)和3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.73克，7.86 毫莫耳，1當量)的NMP (20毫升)溶液中，加入DIPEA (40.66克，314.59 毫莫耳，54.80毫升，40當量)。在N 2氣氛下，將混合物在140℃攪拌72小時。將反應混合物倒入H 2O (100毫升)中，用EtOAc(150毫升*3)萃取。分離有機相，用水(200毫升*2)、飽和鹽水(100毫升*3)洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物通過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/5）純化，得到（3-（（3-氨甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-5-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（1.40克，3.20毫莫耳，收率：40.65%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.42 - 11.30 (m, 1H), 8.37 - 8.26 (m, 1H), 8.18 -8.04 (m, 1H), 7.71 - 7.60 (m, 1H), 7.04 - 6.95 (m, 1H), 6.93- 6.85 (m, 1H), 6.75 - 6.69 (m, 1H), 3.18 - 3.14 (m, 2H), 2.86 - 2.80 (m, 2H), 2.72 – 2.67 (m, 2H), 1.36  - 1.33 (m, 9H), 1.26 (t, J - 7,6 Hz, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 382.2[(M+H)-56 +]; Rt=0.897分鐘。 步驟 2 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-5-fluorophenethyl) carbamate）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(500.00 毫克，1.14 毫莫耳，1當量)和環丙基硼酸(490.40 毫克，5.71 毫莫耳，5 當量)的二噁烷(10毫升)溶液中，加入CsF (607.07 毫克，4.00 毫莫耳，147.53微升，3.5 當量)和Pd (dppf) Cl 2.CH 2Cl 2(93.25 毫克，114.18毫莫耳，0.1當量)。在N 2氣氛下，將混合物在95℃攪拌10小時。將反應液倒入水(50毫升)中，用EtOAc(80毫升*3)萃取。合併有機層，用水(80毫升*2)、飽和鹽水(60毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將殘餘物溶於DCM (30毫升)中。加入清除劑(Pd)，然後在25℃攪拌1小時，然後過濾。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/5)純化，得到(3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(310 毫克，698.96毫莫耳，收率：61.21%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.28 - 11.18 (m, 1H), 8.27 - 8.09 (m, 1H), 7.97 - 7.83 (m, 1H), 7.65 - 7.52 (m, 1H), 7.07 - 6.95 (m, 1H), 6.94 - 6.82 (m, 1H), 6.69 - 6.58 (m, 1H), 3.20 - 3.10 (m, 2H), 2.97 - 2.86 (m, 2H), 2.70 - 2.65 (m, 2H), 2.34 - 2.28 (m, 1H), 1.37 - 1.31 (m, 9H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.16 - 1.10 (m, 2H), 1.09 - 1.02 (m, 2H)。LC-MS (ES+, m/z): 444.3[(M+H) +]; Rt=0.623 分鐘。 步驟 3 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)-5-fluorophenyl) amino)-5-cyclopropyl-6- ethylpyrazine-2-carboxamide）
將(3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(300.00 毫克，676.42毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (40毫升)中的混合物脫氣，並用N 2吹掃3次，然後將混合物在25℃下在N 2氣氛下攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)-5-氟苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(249毫克，粗製，HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 344.2[(M+H-56) +]; Rt=0.407 分鐘。 步驟 4 ： (2-((3-((3- 氨甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-5- 氟苯乙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-5-fluorophenethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl)carbamate）
向 N-(叔丁氧基羰基)- N-甲基甘氨酸(248.05毫克，1.31毫莫耳，2 當量)的DMF(3毫升)溶液中加入DIPEA(847.20 毫克，6.56 毫莫耳，1.14毫升，10 當量)、3-((3-(2-胺基乙基)-5-氟苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(249毫克，655.51毫莫耳，1當量，HCl)和BOP(434.88 毫克，983.26毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應物傾入H 2O(20毫升)中，用EtOAc(30毫升*3)萃取。合併有機層，用水(35毫升*2)、飽和鹽水(30毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/1)純化，得到(2-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(320 毫克，621.85毫莫耳，收率：94.87%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.26 - 11.20 (m, 1H), 8.21 - 8.12 (m, 1H), 7.95 - 7.85 (m, 2H), 7.64 - 7.53 (m, 1H), 7.07 - 6.98 (m, 1H), 6.71 - 6.59 (m, 1H), 3.74 - 3.65 (m, 2H), 2.96 - 2.85 (m, 3H), 2.78 - 2.66 (m, 6H), 2.34 - 2.29 (m, 1H), 1.38 (s, 3H), 1.33 - 1.23 (m, 9H), 1.15 - 1.10 (m, 2H), 1.09 - 1.03 (m, 2H)。LC-MS (ES+, m/z): 515.3[(M+H) +]; Rt=0.571 分鐘。 步驟 5 ： 5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((3- 氟 -5-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((3-fluoro-5-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(2-((3-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-5-氟苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(320毫克，621.85毫莫耳，1當量)在HCl/MeOH (40毫升，4M)中的混合物在25℃下攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到5-環丙基-6-乙基-3-((3-氟-5-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(300毫克，粗製，HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 415.3[(M+H)+]; Rt=0.408 分鐘。 步驟 6 ： (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 )-5- 氟苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) -5-fluorophenyl) amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
向( E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(254.66毫克，997.92毫莫耳，3當量，TFA)的DMF (1.5毫升)溶液中，加入DIPEA (429.92毫克，3.33毫莫耳，579.40微升，10當量)、5-環丙基-6-乙基-3-((3-氟-5-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(150 毫克，332.64毫莫耳，1當量，HCl)和BOP (220.68 毫克，498.96毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC純化(柱：2_ Phenomenex Gemini C18 75*40 mm*3um；流動相：[水(0.05% NH 3H 2O +10毫莫耳 NH 4HCO 3)-ACN]；梯度：經8.0分鐘從30%到55% B)，得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)-5-氟苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(37.32 毫克，69.42毫莫耳，收率：20.87%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.25 - 11.18 (m, 1H), 8.17 - 8.12 (m, 1H), 8.11 - 7.88 (m, 1H), 7.87 - 7.84 (m, 1H), 7.65 - 7.51 (m, 1H), 7.03 - 6.95 (m, 1H), 6.68 - 6.57 (m, 1H), 6.48 - 6.13 (m, 2H), 3.95 - 3.83 (m, 2H), 3.36 - 3.30 (m, 2H), 3.11 - 3.05 (m, 3H), 3.03 - 2.94 (m, 5H), 2.92 - 2.84 (m, 2H), 2.80 - 2.74 (m, 1H), 2.72 - 2.63 (m, 2H), 2.32 - 2.24 (m, 1H), 1.98 - 1.83 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.13 - 1.00 (m, 4H). LC-MS (ES+, m/z): 538.3[(M+H) +]; Rt=2.892 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:548.2975。 實施例 66 化合物 516A (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將苯並三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)-磷鎓六氟磷酸鹽(181.84毫克，0.4112毫莫耳，2 當量)加入到(E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸的溶液中；在0℃下，在DMF(0.60毫升)中的2,2,2-三氟乙酸(104.92毫克，0.4112毫莫耳，2當量)、6-乙基-5-[乙基(甲基)胺基]-3-[3-[2-[ [2-(甲基胺基)乙醯基]胺基]乙基]苯胺基]吡嗪-2-甲醯胺二鹽酸鹽(100.0 毫克，0.2056 毫莫耳，1當量)和N,N-二異丙基乙胺(318.82毫克，2.4669 毫莫耳，0.4297毫升、12當量)。將反應攪拌1小時。用EtOAc(20毫升)稀釋反應物，用飽和NaHCO3(水溶液)(1x)、水(2x)、鹽水洗滌。用MgSO 4乾燥、過濾並濃縮。透過製備HPLC(Gilson)在Gemini 10 uM NX-C18 110A 150*30mm上純化，用(B/A) = 5-95% ACN與0.1% TFA /水與0.1% TFA洗脫。合併純餾分(pure fraction)，用NaHCO 3(aq)調節pH = 10，用EtOAc萃取(3x)，經MgSO4乾燥、過濾並濃縮。溶解於1:1 ACN /水(1毫升)中，凍乾，得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(30.0 毫克，0.05230 毫莫耳，收率：25.43%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 11.12 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.13 (t, J = 5.5 Hz, 0.5H), 7.94 (t, J = 5.7 Hz, 0.5H), 7.73 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 – 7.39 (m, 2H), 7.21 (td, J = 7.9, 4.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.50 – 6.19 (m, 2H), 3.94 (d, J = 19.1 Hz, 2H), 3.45 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.17 – 3.09 (m, 3H), 3.09 – 2.97 (m, 7H), 2.84 – 2.64 (m, 6H), 1.95 (dp, J = 21.0, 7.0 Hz, 2H), 1.21 (dt, J = 12.5, 7.2 Hz, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 537.400[(M+H) +]。 實施例 67 化合物 517 (R, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (R, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯 胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(R)-6-乙基-5-異丁基-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(230毫克，496.74微莫耳，1當量，HCl)、(E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(316.91毫克，1.24毫莫耳，2.5當量，TFA)、DIPEA(642.01毫克，4.97毫莫耳，865.24微升，10 當量)的DMF (2.5毫升)溶液中，加入BOP (329.55毫克，745.12微莫耳，1.5當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 75 *30mm*3um；流動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20% -50%，8分鐘)純化，得到(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(66.07 毫克，114.96微莫耳，收率：23.14%，純度：95.65%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.08 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 9.99 - 9.78 (m, 1H), 8.19 (br s, 1H), 8.17 - 7.95 (m, 1H), 7.93 - 7.84 (m, 1H), 7.69 - 7.60 (m, 1H), 7.57 - 7.44 (m, 1H), 7.30 - 7.19 (m, 1H), 6.91 - 6.74 (m, 1H), 6.69 - 6.57 (m, 1H), 6.52 - 6.35 (m, 1H), 4.22 - 3.86 (m, 8H), 3.28 - 3.21 (m, 2H), 3.04 - 3.00 (m, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.81 - 2.72 (m, 4H), 2.69 - 2.66 (m, 2H), 2.38 - 2.21 (m, 3H), 1.27 - 1.19 (m, 6H), 0.98 (d, J = 6.5 Hz, 6H)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.67 (br d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.89 - 6.71 (m, 2H), 6.47 - 6.31 (m, 1H), 4.16 - 4.02 (m, 2H), 3.94 - 3.82 (m, 6H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 3.00 - 2.95 (m, 2H), 2.91 - 2.81 (m, 1H), 2.76 - 2.69 (m, 3H), 2.64 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.31 (br s, 2H), 2.22 (td, J = 6.7, 13.5 Hz, 1H), 1.23 - 1.14 (m, 6H), 0.97 - 0.90 (m, 6H)(TFA 鹽)。LC-MS (ES+, m/z): 550.3[(M+H) +]; Rt=1.979 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 550.3502。 實施例 68 化合物 518 (R, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)pyrazine-2- carboxamide） 步驟 1 ： (R, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)pyrazine-2- carboxamide ）
在0℃下，向( E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(481.23 毫克，1.89毫莫耳，2.5當量，TFA)的DMF(3毫升)溶液中，加入DIPEA (974.89 毫克，7.54毫莫耳，1.3毫升，10 當量)、(R)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(350 毫克，754.31微莫耳，1當量，HCl)和BOP (500.42 毫克，1.13 毫莫耳，1.5 當量)，在0℃攪拌混合物1小時。過濾反應混合物並減壓濃縮。殘餘物經製備型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 15 *40m *10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30% -60%，8分鐘)純化，得到(R, E)-3-((3-(1-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(140 毫克，244.56微莫耳，收率：32.42%，純度：96.2%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.21 - 11.05 (m, 1H), 8.12 - 7.80 (m, 1H), 7.79 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.52 (m, 1H), 7.51 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 1H), 6.86 - 6.77 (m, 1H), 6.58 - 6.14 (m, 2H), 3.99 - 3.86 (m, 2H), 3.49 - 3.40 (m, 2H), 3.27 - 3.19 (m, 2H), 3.15 - 3.08 (m, 3H), 3.07-2.97 (m, 6H), 2.96 (s, 1.5H), 2.88 (dt, J = 4.0, 7.1 Hz, 1H), 2.79 - 2.69 (m, 3.5H), 2.02 - 1.89 (m, 2H), 1.24 - 1.16 (m, 9H)。LC-MS (ES+, m/z): 551.3[(M+H) +]; Rt=2.274 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:551.3468。 實施例 69 化合物 519 (S, E)-3-((3-(1-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(S,E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-5,6-diethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (S)-(2-(3-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(2-(3-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向( S)-(2-(3-胺基苯基)丙基)胺基甲酸叔丁酯(2.00克，7.99毫莫耳，1當量)和3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(1.76克，7.99毫莫耳，1當量)在NMP(20毫升)溶液中，加入DIPEA(10.33克，79.89毫莫耳，13.92毫升，10當量)。將混合物加熱至140℃並在N 2氣氛下攪拌36小時。將反應液注入到水(40毫升)中，用乙酸乙酯(60毫升*3)萃取。合併有機層，用水(80毫升*2)、飽和鹽水(80毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/1）純化，得到（S）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（2.3克，5.30毫莫耳，收率：66.34%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.21 - 11.11 (m, 1H), 8.32 - 8.19 (m, 1H), 8.09 - 7.98 (m, 1H), 7.59 - 7.47 (m, 1H), 7.41 - 7.22 (m, 2H), 6.95 - 6.78 (m, 2H), 3.15 - 2.99 (m, 2H), 2.89 - 2.78 (m, 3H), 1.34 (s, 9H), 1.26 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。LC-MS (ES+, m/z): 378.2[(M+H-56) +]; Rt=0.909 分鐘。 步驟 2 ： ( S )-(2-(3-((3- 胺基甲醯基 -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl ( S)-(2-(3-((3-carbamoyl-5,6-diethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl) carbamate）
向3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(500毫克，1.06毫莫耳，1當量，HCl)和三乙基硼烷(1M，10.63毫升，10 當量)的DMF(5毫升)和H 2O (2毫升)溶液中，加入P(tBu) 3Pd G 2(54.47 毫克，106.29微莫耳，0.1當量)和Cs 2CO 3(1.04克，3.19 毫莫耳，3當量)。在N 2氣氛下，將混合物加熱至80℃10小時。將反應液倒入水(10毫升)中，用EtOAc(20毫升*3)萃取。合併有機層，用水(15毫升*2)、飽和鹽水(15毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。將殘餘物溶於DCM (20毫升)中，加入清除劑(Pd)，然後在25℃攪拌1小時，然後過濾。將殘餘物透’過柱層析（SiO 2，石油醚/醋酸乙酯=20/1至1/1）純化，得到（S）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，818.64微莫耳，收率：77.02%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.15 - 11.00 (m, 1H), 8.21 - 8.05 (m, 1H), 7.90 - 7.51 (m, 4H), 7.32 - 7.19 (m, 1H), 6.82 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 2H), 2.88 - 2.71 (m, 5H), 1.39 - 1.07 (m, 18H)。LC-MS (ES+, m/z): 428.4[(M+H) +]; Rt=0.919 分鐘。 步驟 3: （ S ） -3- （（ 3- （ 1- 胺基丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-3-((3-(1- aminopropan-2-yl) phenyl)amino)-5,6-diethylpyrazine-2- carboxxamide）
在25°C、N 2氣氛下，將（S）-（2-（3-（（3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基）胺基）苯基）丙基）胺基甲酸叔丁酯（330毫克，771.86微莫耳，1當量）在HCl/MeOH（20毫升，4M）中的混合物攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到（S）-3-（（3-（1-胺基丙-2-基）苯基）胺基）-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺（320毫克，粗製），其為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.22 - 11.00 (m, 1H), 8.21 - 8.11 (m, 1H), 7.97 (br s, 2H), 7.87 (br s, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.29 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.92 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.08 - 2.95 (m, 3H), 2.84 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.75 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.34 - 1.20 (m, 9H)。LC-MS (ES+, m/z): 328.3[(M+H) +]; Rt=0.598 分鐘。 步驟 4: (S)-(2-((2-(3-((3- 氨甲醯基 -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 丙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯 （ tert-butyl ( S)-(2-((2-3-((3-carbamoyl-5,6-diethylpyrazin-2-yl) amino) phenyl) propyl)amino)-2-oxoethyl(methyl) carbamate）
在0℃下，向 N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(243.35毫克，1.29毫莫耳，1.5當量)的DMF(3毫升)溶液中，加入DIPEA(1.11克，8.57 毫莫耳，1.49毫升，10 當量)、(S)-3-((3-(1-胺基丙-2-基)苯基)胺基)-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺(312毫克，857.42微莫耳，1當量，HCl)，然後在0℃加入BOP (568.83毫克，1.29毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃攪拌1小時。將反應液倒入水(5毫升)中，用EtOAc(10毫升*3)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，得到粗產物。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/1)純化，得到(S)-(2-((2-(3-((3-氨甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(320 毫克，641.78 微莫耳，收率：74.85%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 499.4[(M+H) +]; Rt=0.827 分鐘。 步驟 5 ： (S)-5,6- 二乙基 -3-((3-(1-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 丙 -2- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( S)-5,6-diethyl-3-((3-(1-(2-(methylamino) acetamido) propan-2-yl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(2-((2-(3-((3-胺基甲醯基-5,6-二乙基吡嗪-2-基)胺基)苯基)丙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(310毫克，621.72微莫耳，1當量)在HCl/MeOH (20毫升，4M)溶液的混合物中，在25℃下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮，得到(S)-5,6-二乙基-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(320毫克，粗製)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.13 - 11.04 (m, 1H), 8.89 - 8.72 (m, 2H), 8.54 - 8.45 (m, 1H), 8.21 - 8.11 (m, 1H), 7.92 - 7.82 (m, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.19 - 7.13 (m, 1H), 6.90 - 6.83 (m, 1H), 3.67 - 3.55 (m, 1H), 3.43 - 3.22 (m, 3H), 2.91 - 2.80 (m, 3H), 2.78 - 2.71 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.27 - 1.21 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 399.3[(M+H) +]; Rt=0.572 分鐘。 步驟 6 ：（ S, E ） -3- （（ 3- （ 1- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）丙 -2- 基）苯基）胺基） -5,6- 二乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( S, E)-3-((3-(1-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido)acetamido) propan-2-yl)phenyl)amino)-5,6-diethylpyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向( E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(396.02毫克，1.55毫莫耳，2.5當量，TFA)的DMF (3毫升)溶液中，加入DIPEA(802.27 毫克，6.21 毫莫耳，1.08毫升，10 當量)、(S)-5,6-二乙基-3-((3-(1-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(270毫克，620.74微莫耳，1當量，HCl)，並在0℃加入BOP (411.82 毫克，931.12微莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃攪拌1小時。過濾反應混合物並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm *10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30% -70%，8分鐘)純化，得到( S, E)-3-((3-(1-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)丙-2-基)苯基)胺基)-5,6-二乙基吡嗪-2-甲醯胺(159.54 毫克，302.10微莫耳，收率：48.67%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.14 - 11.05 (m, 1H), 8.21 - 8.10 (m, 1H), 8.09 - 7.81 (m, 2H), 7.67 - 7.59 (m, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 1H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.88 - 6.80 (m, 1H), 6.52 - 6.15 (m, 2H), 4.00 - 3.85 (m, 2H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 3.15 - 3.08 (m, 3H), 3.07 - 2.98 (m, 3H), 2.96 (s, 1.5H), 2.92 - 2.81 (m, 3H), 2.79 - 2.71 (m, 3.5H), 2.01 - 1.88 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.26 - 1.17 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 522.3[(M+H) +]; Rt=2.248 分鐘。 HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:522.3185。 實施例 70 化合物 520 ( E)-3-((2-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((2-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (2-((2-(4-((3- 氨甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-((2-(4-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl)carbamate）
在25℃下，向 N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(521.72毫克，2.76毫莫耳，1.5當量)的DMF(12毫升)溶液中，加入DIPEA(2.38克，18.38 毫莫耳，3.20毫升，10當量)、(2-((2-(4-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(600毫克，1.84 毫莫耳，1當量)和BOP(1.22克，2.76 毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在25℃下攪拌2小時。藉由添加H 2O (20毫升)淬熄反應混合物，然後用DCM (20毫升*3)萃取。合併的有機層，用飽和鹽水(20毫升)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮。將殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，DCM：MeOH = 20:1)純化，得到(2-((2-(4-((3-氨甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(722 毫克，1.45 毫莫耳，收率：78.93%)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 498.3[(M+H) +]. Rt=0.627 分鐘。 步驟 2 ： 5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((2-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((2-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在25°C下，將（2-（（2-（4-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（722毫克，1.45毫莫耳，1.0當量）在HCl/MeOH （4M，20毫升，722.3當量）中的溶液攪拌1小時。在減壓下濃縮反應混合物，得到5-環丙基-6-乙基-3-（（2-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）吡啶-4-基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（600毫克，粗製，HCl），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 398.2[(M+H) +]. Rt=0.953 分鐘。 步驟 3 ： (E)-3-((2-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((2-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(882.13毫克，3.46毫莫耳，2.5當量，TFA)的DMF(8 毫升)溶液中，加入DIPEA (1.79克，13.83毫莫耳，2.41毫升，10 當量)和5-環丙基-6-乙基-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(600 毫克，1.38 毫莫耳，1當量，HCl)，然後在0℃加入BOP (917.31 毫克，2.07 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0°C攪拌2小時。將混合物透過製備型HPLC （柱：Waters xbridge BEH C18 250*70mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：25%-55%，20分鐘），得到（E）-3-（（2-（2-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）吡啶-4-基）胺基）-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（44.11毫克，84.72微莫耳，收率：6.13％，純度：98.94％），為黃色固體， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.39 (br d, J=6.88 Hz, 1 H), 8.33 - 8.19 (m, 2 H), 8.17 – 7.92 (m, 2 H), 7.45 (br dd, J=10.57, 6.07 Hz, 2 H), 6.59 - 6.17 (m, 2 H), 4.01 – 3.83 (m, 2 H), 3.51 – 3.41 (m, 2 H), 3.15 – 2.99 (m, 7 H), 2.98 - 2.78 (m, 6 H), 2.38 - 2.30 (m, 1 H), 2.02 – 1.86 (m, 2 H), 1.29 (t, J=7.50 Hz, 3 H), 1.20 - 1.08 (m, 4 H)。LC-MS (ES+, m/z): 521.3[(M+H) +]。Rt=2.471 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 521.3025。 實施例 71 化合物 601 (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
向（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（500毫克，1.19毫莫耳，1當量）、異丁基硼酸（1.21克，11.91毫莫耳，10當量）、Cs 2CO 3（1.16克，3.57毫莫耳，3當量）在二噁烷（5毫升）和H 2O（1毫升）溶液中，加入Pd（dppf）Cl 2（87.13毫克，119.07微莫耳，0.1當量）。在N 2、100℃下，將混合物攪拌10小時。將殘餘物溶於DCM(20毫升)中，加入清除劑(Pd)，然後在25℃下攪拌1小時，然後過濾。將混合物倒入水(60毫升)中並用DCM(60毫升*2)萃取。合併有機層，用水(40毫升*2)、飽和鹽水(40毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚：乙酸乙酯=1:1)，得到(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(300 毫克，679.40微莫耳，收率：57.06%)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 442.3[(M+H) +]; Rt=0.949 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine- 2-carboxamide）
將(3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(300 毫克，679.40微莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，16.9毫升，100當量)的混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(170毫克，粗製)，為黃色油狀物。LCMS (ES+, m/z): 342.3[(M+H) +]; Rt=0.618 分鐘。 步驟 3 ： (2-((3-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在25℃下，向3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(170毫克，449.84微莫耳，1當量，HCl)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(170.23毫克，899.68微莫耳，2 當量)、DIPEA (581.39毫克，4.50毫莫耳，783.54微升，10 當量)在DMF(2毫升)溶液中，加入BOP(298.43 毫克，674.76微莫耳，1.5 當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。將混合物倒入水(20毫升)中，用EtOAc(30毫升*2)萃取。合併有機層，用水(10毫升*2)、飽和鹽水(10毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(乙酸乙酯：石油醚=3:1)，得到(2-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(200毫克，390.14微莫耳，收率：86.73%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.14 - 10.99 (m, 1H), 8.23 - 8.12 (m, 1H), 8.00 - 7.84 (m, 2H), 7.66 - 7.45 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 6.89 - 6.78 (m, 1H), 3.80 - 3.64 (m, 2H), 3.22 - 3.12 (m, 1H), 2.83 - 2.64 (m, 10H), 2.30 - 2.20 (m, 1H), 1.24 (br t, J = 7.5 Hz, 12H), 1.06 - 0.92 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 513.5[(M+H) +]; Rt=0.870 分鐘。 步驟 4 ： 6- 乙基 -5- 異丁基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-isobutyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(2-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(200毫克，390.14微莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，20毫升，205.06當量)的混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到6-乙基-5-異丁基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(180 毫克，粗製)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 413.3[(M+H) +]; Rt=0.654 分鐘。 步驟 5 ： (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine-2-carboxamide）
在25℃下，向6-乙基-5-異丁基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(110毫克，245.00微莫耳，1當量，HCl)、(E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(218.82 毫克，857.48微莫耳，3.5 當量，TFA)、DIPEA (316.64毫克，2.45毫莫耳，426.74微升，10 當量)的DMF(1毫升)溶液中，加入BOP(162.54毫克，367.49微莫耳，1.5 當量)。將混合物在25℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm *10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35% -65%，8分鐘)純化，得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(60.70 毫克，111.12微莫耳，收率：45.35%，純度：98.06%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.07 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.23 - 7.82 (m, 3H), 7.57 (br d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.24 (dt, J = 4.2, 7.9 Hz, 1H), 6.84 (br d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.61 - 6.12 (m, 2H), 3.95 (d, J = 18.8 Hz, 2H), 3.32 - 3.26 (m, 2H), 3.17 - 3.02 (m, 6H), 3.02 - 2.98 (m, 2H), 2.85 - 2.80 (m, 1H), 2.78 - 2.66 (m, 6H), 2.25 (td, J = 6.9, 13.7 Hz, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.6 Hz, 6H); 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 10.86 - 10.78 (m, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 1H), 7.48 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.22 (dt, J = 3.3, 7.8 Hz, 1H), 6.83 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.13 (br d, J = 15.3 Hz, 2H), 3.96 - 3.88 (m, 2H), 3.31 (td, J = 7.4, 17.8 Hz, 2H), 3.16 - 2.98 (m, 6H), 2.98 - 2.94 (m, 2H), 2.80 (br s, 1H), 2.74 - 2.62 (m, 6H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.02 - 1.85 (m, 2H), 1.19 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.95 - 0.91 (m, 6H)。LC-MS (ES+, m/z): 536.4[(M+H) +]; Rt=2.336 分鐘。HRMS (EI): m/z (M+H) +實測值: 536.3323。 實施例 72 化合物 602 (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 乙氧基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-5-ethoxy-6-ethylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (3-((3- 胺基甲醯基 -6- 乙氧基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (3-((3-carbamoyl-6-ethoxy-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
向(3-((3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(600毫克，1.43毫莫耳，1當量)的EtOH(6毫升)溶液中，加入EtONa(486.18毫克，7.14毫莫耳，5當量)。將混合物在70℃攪拌2小時。將混合物倒入水(60毫升)中，用EtOAc(60毫升*2)萃取。合併有機層，用水(40毫升*2)、飽和鹽水(40毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯=1：1）純化，得到（3-（（3-胺基甲醯基-6-乙氧基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（440毫克，1.02毫莫耳，收率：71.69%），為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.27 (s, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.68 - 7.56 (m, 2H), 7.43 - 7.33 (m, 1H), 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.93 - 6.80 (m, 2H), 4.46 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.20 - 3.10 (m, 2H), 2.74 - 2.62 (m, 4H), 1.45 - 1.36 (m, 12H), 1.22 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。LCMS (ES+, m/z): 430.3[(M+H) +]; Rt=0.911 分鐘。 步驟 2 ： 3-((3-(2- 胺基乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-5- 乙氧基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl) amino)-5-ethoxy-6-ethylpyrazine-2- carboxamide）
將（3-（（3-胺基甲醯基-6-乙氧基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（340毫克，791.60微莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，20毫升，101.06當量）的混合物在25°C攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-5-乙氧基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（310毫克，粗製），為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 330.2[(M+H) +]; Rt=0.598 分鐘。 步驟 3 ：（ 2- （（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 乙氧基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基） -2- 氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-6-ethoxy-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl) carbamate）
在25°C下，向3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-5-乙氧基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（350毫克，956.66微莫耳，1當量，HCl）、N-（叔丁氧基羰基）-N-甲基甘氨酸（362.02毫克，1.91毫莫耳，2當量）、DIPEA （1.24克，9.57毫莫耳，1.67毫升，10當量）在DMF（4毫升）溶液中，加入BOP（634.67毫克，1.43毫莫耳，1.5當量）。將混合物在25°C下攪拌1小時。將混合物倒入水（50毫升）中並用EtOAc（50毫升*2）萃取。合併有機層，用水（50毫升*2）、飽和鹽水（50毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（乙酸乙酯：石油醚=2:1），得到（2-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-乙氧基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，699.18毫莫耳，收率：73.09%），為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 501.4[(M+H) +]; Rt=0.819 分鐘; 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.38 - 11.28 (m, 1H), 8.04 - 7.89 (m, 2H), 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.95 - 6.86 (m, 1H), 4.56 - 4.46 (m, 2H), 3.82 - 3.72 (m, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 2H), 2.85 - 2.68 (m, 7H), 1.50 - 1.34 (m, 12H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。 步驟 4 ： 5- 乙氧基 -6- 乙基 -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（5-ethoxy-6-ethyl-3-((3-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將（2-（（3-（（3-胺基甲醯基-6-乙氧基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基）-2-氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（350毫克，699.18微莫耳，1當量）和HCl/MeOH （4M，20毫升，114.42當量）的混合物在25°C攪拌4小時。將反應混合物減壓濃縮，得到5-乙氧基-6-乙基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（280毫克，粗製），為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 401.3[(M+H) +]; Rt=0.609 分鐘。 步驟 5 ：（ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -5- 乙氧基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-5-ethoxy-6-ethylpyrazine-2-carboxamide）
在25°C下，向5-乙氧基-6-乙基-3-（（3-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（280毫克，640.83微莫耳，1當量，HCl）、（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸（490.60毫克，1.92毫莫耳，3當量，TFA）、DIPEA（1.24克，9.61毫莫耳，1.67毫升，15當量）在DMF（2.5毫升）溶液中，加入BOP（566.85毫克，1.28毫莫耳，2當量）。將混合物在25°C下攪拌1小時。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC （柱：Waters xbridge prep OBD C18 150*40mm*10um；流動相：[水（NH 4HCO 3）-ACN]；B％：30%-60%，8分鐘），得到（E）-3-（（3-（2-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基）-5-乙氧基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（69.94毫克，131.75微莫耳，收率：20.56％，純度：98.64％），為白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.32 - 11.25 (m, 1H), 8.21 - 7.83 (m, 2H), 7.69 - 7.54 (m, 2H), 7.50 - 7.37 (m, 1H), 7.31 - 7.19 (m, 1H), 6.91 - 6.81 (m, 1H), 6.23 (br d, J = 15.1 Hz, 2H), 4.51 - 4.41 (m, 2H), 3.95 (d, J = 19.6 Hz, 2H), 3.32 - 3.25 (m, 2H), 3.17 - 3.03 (m, 6H), 3.02 - 2.99 (m, 2H), 2.84 - 2.78 (m, 1H), 2.74 - 2.64 (m, 4H), 2.04 - 1.87 (m, 2H), 1.45 - 1.37 (m, 3H), 1.26 - 1.18 (m, 3H); 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.15 - 10.98 (m, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.44 - 7.35 (m, 1H), 7.29 - 7.19 (m, 1H), 6.90 - 6.80 (m, 1H), 6.55 - 6.08 (m, 2H), 4.42 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.98 - 3.91 (m, 2H), 3.36 - 3.23 (m, 2H), 3.18 - 2.99 (m, 6H), 2.99 - 2.94 (m, 2H), 2.82 - 2.75 (m, 1H), 2.73 - 2.61 (m, 4H), 2.03 - 1.86 (m, 2H), 1.40 - 1.32 (m, 3H), 1.17 (t, J = 7.5 Hz, 3H). LC-MS (ES+, m/z): 524.3[(M+H) +]; Rt=2.226 分鐘。HRMS (EI): m/z (M+H) +實測值: 524.2995。 實施例 73 化合物 603 （ E ） -3- （（ 3- （ 2- （ 2- （ 4- （氮雜環丁烷 -1- 基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 異丙氧基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isopropoxypyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丙氧基吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isopropoxypyrazin-2-yl) amino) phenethyl) carbamate）
向2-甲基丙-1-醇（8.02克，108.20毫莫耳，10毫升，45.46當量）的溶液中，加入NaH（2克，50.00毫莫耳，純度：60％，21當量）。將混合物在0°C攪拌0.5小時。在0°C加入在2-甲基丙-1-醇（50毫升）中的（3-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（1克，2.38毫莫耳，1當量）。將混合物在65°C下攪拌12小時。將殘餘物用H 2O（20毫升）稀釋。將反應混合物減壓濃縮以除去2-甲基丙-1-醇（50毫升）。將殘餘物用20毫升的EtOAc稀釋，並用30毫升的EtOAc（10毫升*3）萃取。將合併的有機層用飽和鹽水（15毫升）洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，並減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=4/1）純化，得到（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丙氧基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（0.53克，1.19毫莫耳，收率：50.18%），為淺黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.31 - 11.26 (m, 1 H), 7.91 - 7.86 (m, 1 H), 7.66 - 7.61 (m, 2 H), 7.33 - 7.20 (m, 2 H), 6.96 - 6.90 (m, 1 H), 6.86 - 6.81 (m, 1 H), 5.33 - 5.24 (m, 1 H), 3.17 - 3.09 (m, 2 H), 2.70 - 2.60 (m, 4 H), 1.40 (d, J=6.14 Hz, 6 H), 1.36 (s, 9 H), 1.20 (t, J=7.45 Hz, 3 H)。LC-MS (ES+, m/z): 466.2[(M+Na) +]; Rt=2.273 分鐘。 步驟 2 ： 3- （（ 3- （ 2- 胺基乙基）苯基）胺基） -6- 乙基 -5- 異丙氧基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isopropoxypyrazine- 2-carboxamide）
向（3-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丙氧基吡嗪-2-基）胺基）苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（430毫克，969.48毫莫耳，1當量）的溶液中，加入HCl/MeOH（4M，40毫升，165.04當量）。將混合物在25°C下攪拌2小時。將反應混合物減壓濃縮以除去溶劑，得到3-（（3-（2-胺基乙基）苯基）胺基）-6-乙基-5-異丙氧基吡嗪-2-甲醯胺（410毫克，粗製），為淺黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 344.2[(M+H) +]; Rt=1.560 分鐘。 步驟 3 ：（ 2- （（ 3- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丙氧基吡嗪 -2- 基）胺基）苯乙基）胺基） -2- 氧代乙基）（甲基）胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-((3-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isopropoxypyrazin-2-yl) amino) phenethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl)carbamate）
向 N-(叔丁氧基羰基)- N-甲基甘氨酸(272.72 毫克，1.44 毫莫耳，1.5 當量)的DMF(6毫升)溶液中，加入DIPEA(1.24克，9.61 毫莫耳，1.67 毫升，10當量)和3-((3-(2-胺基乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丙氧基吡嗪-2-甲醯胺(330毫克，960.92毫莫耳，1當量)和BOP (637.49 毫克，1.44 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。將反應混合物用EtOAc(50毫升)和水(50毫升)稀釋，用EtOAc(50毫升*3)萃取。合併的有機層，用30毫升的飽和鹽水洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，DCM：MeOH = 15:1)純化，得到(2-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丙氧基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(500 毫克，粗製)，為淡黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.31 - 11.25 (m, 1 H), 7.96 - 7.93 (m, 1 H), 7.90 - 7.85 (m, 1 H), 7.66 - 7.59 (m, 2 H), 7.38 - 7.20 (m, 2 H), 6.88 - 6.82 (m, 1 H), 5.34 - 5.23 (m, 1 H), 2.89 (s, 3 H), 2.78 - 2.72 (m, 6 H), 2.68 - 2.61 (m, 2 H), 1.39 (d, J=6.14 Hz, 9 H), 1.32 (s, 4 H), 1.22 - 1.15 (m, 5 H)。LC-MS (ES+, m/z): 515.3[(M+H) +]; Rt=2.225 分鐘。 步驟 4 ： 6- 乙基 -5- 異丙氧基 -3-((3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-isopropoxy-3-((3-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
向(2-((3-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丙氧基吡嗪-2-基)胺基)苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，621.84毫莫耳，1當量)的溶液中加入HCl/MeOH (4M，40毫升，115.32 當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮以除去溶劑，得到6-乙基-5-異丙氧基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(500 毫克，粗製)，為淺黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 415.3[(M+H) +]; Rt=0.688 分鐘。 步驟 5 ： (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丙氧基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) phenyl) amino)-6-ethyl-5-isopropoxypyrazine-2-carboxamide）
向(E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(636.62毫克，2.49毫莫耳，2.5 當量，TFA)的DMF(4毫升)溶液中，加入DIPEA(1.29克，9.98毫莫耳，1.74毫升，10當量)、6-乙基-5-異丙氧基-3-((3-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(450毫克，997.87毫莫耳，1當量，HCl)和BOP (662.01毫克，1.50 毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌2小時。將殘餘物透過製備型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm *10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-70%，8分鐘)純化，得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)-6-乙基-5-異丙氧基吡嗪-2-甲醯胺(61.55 毫克，114.48毫莫耳，收率：11.47%，純度：100%)，為白色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 10.97 - 10.87 (m, 1 H), 7.70 - 7.60 (m, 1 H), 7.58 - 7.47 (m, 2 H), 7.26 - 7.21 (m, 1 H), 6.89 - 6.75 (m, 2 H), 6.42 - 6.34 (m, 1 H), 5.39 - 5.26 (m, 2 H), 4.04 – 3.94 (m, 2 H), 3.62 - 3.49 (m, 2 H), 3.28 - 3.15 (m, 5 H), 3.11 (s, 2 H), 3.03 – 2.92 (m, 1 H), 2.85 - 2.77 (m, 2 H), 2.72 (q, J=7.42 Hz, 2 H), 2.17 - 2.06 (m, 2 H), 1.60 (br s, 2 H), 1.45 (d, J=6.25 Hz, 6 H), 1.25 (t, J=7.44 Hz, 3 H). LC-MS (ES+, m/z): 538.3[(M+H) +]; Rt=2.956 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 538.3119。 實施例 74 化合物 604 (E)-3-((2-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((2-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ： (2-(4-((3- 氰基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（t ert-butyl (2-(4-((3-cyano-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl)ethyl)carbamate）
將(2-(4-((6-氯-3-氰基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.00克，1.74 毫莫耳，1當量)、異丁基硼酸(885.60毫克，8.69 毫莫耳，5 當量)、CsF (923.74 毫克，6.08 毫莫耳，224.48微升，3.5 當量)、Pd (dppf) Cl 2(141.89 毫克，173.75毫莫耳，0.1當量)在二惡烷(18毫升)溶液的混合物中脫氣，用N 2吹掃3次，然後將混合物在N 2氣氛下在95℃攪拌6小時。將殘餘物溶於DCM (20毫升)中，加入清除劑(Pd)，然後在25℃攪拌1小時，然後過濾。將殘餘物在EtOAc(80毫升)和水(40毫升)之間分配，然後分離。用EtOAc(40毫升*3)萃取水相。合併的有機物，用飽和鹽水(40毫升)洗滌，用MgSO 4乾燥、過濾並濃縮。殘餘物透過柱色層分析法(SiO 2，乙酸乙酯)純化，得到(2-(4-((3-氰基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，1.18毫莫耳，收率：67.78%)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 425.2[(M+H) +]; Rt=1.443 分鐘。 步驟 2 ： (2-(4-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) carbamate）
在0℃下，向(2-(4-((3-氰基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，1.18毫莫耳，1當量)的MeOH(4毫升)和DMSO(0.4毫升)溶液中，加入Cs 2CO 3(767.47毫克，2.36毫莫耳，2 當量)和H 2O 2(620毫克，5.47毫莫耳，525.42微升，純度：30%，4.64當量)，將混合物在25℃攪拌2小時。透過加入H 2O (15毫升)淬熄反應混合物，並用乙酸乙酯(15毫升*3)萃取。合併的有機層，用飽和Na 2S 2O 3(15毫升)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到(2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，粗製)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 443.3[(M+H) +]; Rt=0.709 分鐘。 步驟 3 ： 3-((2-(2- 胺基乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((2-(2-aminoethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine- 2-carboxamide）
向(2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯(500毫克，1.13毫莫耳，1當量)的溶液中，加入HCl/MeOH (4M，40毫升，141.62 當量)。將混合物在25℃攪拌2小時。將反應混合物減壓濃縮除去溶劑，得到3-((2-(2-胺基乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(400 毫克，粗製，HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 343.2[(M+H) +]; Rt=0.554 分鐘。 步驟 4 ： (2-((2-(4-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- 異丁基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基 )-2- 氧代乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（ tert-butyl (2-((2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-isobutylpyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) amino)-2-oxoethyl) (methyl)carbamate）
在0℃下，向 N-(叔丁氧基羰基)- N-甲基甘氨酸(331.52毫克，1.75毫莫耳，1.5當量)的DMF (3毫升)溶液中，加入DIPEA(1.51克，11.68 毫莫耳，2.03毫升，10 當量)、3-((2-(2-胺基乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺(400毫克，1.17 毫莫耳，1當量，HCl)和BOP (774.94 毫克，1.75 毫莫耳，1.5 當量)，將混合物在0℃攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物用EtOAc(50毫升)和水(50毫升)稀釋，用EtOAc(50毫升*3)萃取。合併的有機層，用飽和鹽水(50毫升)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，並減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物透過製備TLC純化(SiO 2，DCM：MeOH = 10:1，0.5% Et 3N)，得到(2-((2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(450 毫克，876.12毫莫耳，收率：75.00%)，為淺黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 514.3[(M+H) +]; Rt=0.686 分鐘。 步驟 5 ： 6- 乙基 -5- 異丁基 -3-((2-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（6-ethyl-5-isobutyl-3-((2-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
向(2-((2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-異丁基吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(450毫克，876.12毫莫耳，1當量)的溶液中，加入HCl/MeOH (4M，40毫升，182.62當量)。將混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物減壓濃縮除去溶劑，得到6-乙基-5-異丁基-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(400 毫克，粗HCl)，為黃色固體。LC-MS (ES+, m/z): 414.3[(M+H) +]; Rt=0.549 分鐘。 步驟 6 ： (E)-3-((2-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5- 異丁基吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((2-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-isobutylpyrazine-2-carboxamide）
向（E）-4-（氮雜環丁烷-1-基）丁-2-烯酸（567.12毫克，2.22毫莫耳，2.5當量，TFA）的DMF（5毫升）中的溶液中，加入DIEA（1.15克，8.89毫莫耳，1.55毫升，10當量）和6-乙基-5-異丁基-3-（（2-（2-（2-（甲基胺基）乙醯胺基）乙基）吡啶-4-基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（400毫克，888.94毫莫耳，1當量，HCl）和BOP（589.74毫克，1.33毫莫耳，1.5當量）。將混合物在0°C下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將殘餘物透過製備型HPLC（柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流動相：[水（TFA）-ACN]；B％：5％-35％，8分鐘）。將殘餘物用15毫升的DCM和15毫升的飽和Na 2CO 3水溶液稀釋，並用30毫升的DCM（10毫升*3）萃取。將合併的有機層，用飽和鹽水（15毫升）洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到（E）-3-（（2-（2-（2-（4-（氮雜環丁烷-1-基）-N-甲基丁-2-烯醯胺基）乙醯胺基）乙基）吡啶-4-基）胺基）-6-乙基-5-異丁基吡嗪-2-甲醯胺（103.16毫克，190.19毫莫耳，收率：21.39％，純度：98.94％），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 11.05 (br s, 1 H), 8.33 - 8.26 (m, 1 H), 7.96 - 7.89 (m, 1 H), 7.67 - 7.49 (m, 2 H), 7.41 - 7.34 (m, 1 H), 6.87 - 6.72 (m, 1 H), 6.47 - 6.16 (m, 1 H), 5.71 (s, 1 H), 4.11 - 4.00 (m, 2 H), 3.74 - 3.62 (m, 2 H), 3.29 - 3.23 (m, 2 H), 3.23 - 3.16 (m, 2 H), 3.16 - 3.11 (m, 3 H), 3.11 - 2.97 (m, 2 H), 2.94 - 2.88 (m, 2 H), 2.80 (q, J=7.42 Hz, 2 H), 2.73 (d, J=7.00 Hz, 2 H), 2.36 - 2.26 (m, 1 H), 2.14 - 2.01 (m, 2 H), 1.29 (d, J=7.44 Hz, 3 H), 1.05 (d, J=6.63 Hz, 6 H); HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 537.3302。LCMS (ES+, m/z): 537.3[(M+H) +]; Rt=1.894 分鐘。 實施例 75 化合物 605 （ S, E ） -3- （（ 2- （ 2- （ 2- （ 4- （二甲基胺基） -N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基）丙醯胺基）乙基）吡啶 -4- 基）胺基） -6- 乙基 -5- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((2-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-(isopropyl (methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide） 步驟 1 ：（ 2- （ 4- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基）吡啶 -2- 基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-(4-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) carbamate）
在0°C下，向（2-（4-（（6-氯-3-氰基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（1.8克，4.47毫莫耳，1當量）在DMSO（5毫升）和i-PrOH （20毫升）的溶液中，加入Cs 2CO 3（5.82克，17.87毫莫耳，4當量）和H 2O 2（8.11克，71.49毫莫耳，6.87毫升，純度：30％，16當量），使混合物升溫至25°C並攪拌17小時。將反應混合物透過加入H 2O（100毫升）淬滅並用乙酸乙酯（100毫升*2）萃取。將合併的有機層，用飽和Na 2S 2O 3（100毫升）洗滌，用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（乙酸乙酯：石油醚=5：1）純化，得到（2-（4-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（750毫克，1.78毫莫耳，收率：19.94%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.56 - 11.46 (m, 1H), 8.42 - 8.31 (m, 2H), 8.20 - 8.13 (m, 1H), 7.66 - 7.58 (m, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 1H), 6.93 - 6.80 (m, 1H), 3.31 - 3.25 (m, 2H), 2.90 - 2.79 (m, 4H), 1.38 - 1.35 (m, 9H), 1.31 - 1.25 (m, 3H)。LCMS (ES+, m/z): 421.3[(M+H) +]; Rt=0.543 分鐘。 步驟 2 ：（ 2- （ 4- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 基）胺基）吡啶 -2- 基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl (methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) carbamate）
向（2-（4-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（300毫克，712.77毫莫耳，1當量）、N-甲基丙-2-胺（521.30毫克，7.13毫莫耳，742.59微升，10當量）在DMA（3毫升）的溶液中，加入DIPEA（1.84克，14.26毫莫耳，2.48毫升，20當量）。將混合物在100°C下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水（50毫升）中，並用EtOAc（530毫升*2）萃取。合併有機層，用水（50毫升*2）、飽和鹽水（50毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（乙酸乙酯：石油醚= 5:1，得到（2-（4-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（210毫克，458.95毫莫耳，收率：64.39%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.52 - 11.47 (m, 1H), 8.37 - 8.28 (m, 1H), 7.94 - 7.85 (m, 1H), 7.70 - 7.56 (m, 2H), 7.51 - 7.41 (m, 1H), 6.96 - 6.85 (m, 1H), 4.41 - 4.29 (m, 1H), 3.34 - 3.28 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.86 - 2.77 (m, 4H), 1.41 (s, 9H), 1.34 - 1.25 (m, 9H)。LCMS (ES+, m/z): 458.3[(M+H) +]; Rt=0.635 分鐘。 步驟 3 ：（ 2- （ 4- （（ 3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6- （異丙基（甲基）胺基）吡嗪 -2- 基）胺基）吡啶 -2- 基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl (methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) carbamate）
將（2-（4-（（3-胺基甲醯基-5-乙基-6-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-基）胺基）吡啶-2-基）乙基）胺基甲酸叔丁酯（210毫克，458.95毫莫耳，1當量）和HCl/MeOH（4M，25毫升，217.89當量）的混合物在16°C下攪拌5小時。將反應混合物減壓濃縮，得到3-（（2-（2-胺基乙基）吡啶-4-基）胺基）-6-乙基-5-（異丙基（甲基）胺基）吡嗪-2-甲醯胺（200毫克，粗製），為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 358.3[(M+H) +]; Rt=0.331 分鐘。 步驟 4 ： (S)-(1-((2-(4-((3- 胺基甲醯基 -5- 乙基 -6-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ) 胺基 )-1- 氧代丙 -2- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (S)-(1-((2-(4-((3-carbamoyl-5-ethyl-6-(isopropyl (methyl) amino) pyrazin-2-yl) amino) pyridin-2-yl) ethyl) amino)-1-oxopropan-2-yl) (methyl) carbamate）
在0℃下，向3-((2-(2-胺基乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(200毫克，559.52毫莫耳，1當量)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(170.57毫克，839.27毫莫耳，1.5 當量)、NMI (459.38毫克，5.60毫莫耳，446.00微升，10 當量)的DMF (2毫升)溶液中，加入TCFH (235.48毫克，839.27毫莫耳，1.5當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(40毫升)中，用EtOAc(50毫升*2)萃取。合併有機層，用水(40毫升*2)、飽和鹽水(40毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘餘物。粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(二氯甲烷：甲醇=10:1)，得到(S)-(1-((2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(200 毫克，368.55毫莫耳，收率：65.87%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.60 - 11.44 (m, 1H), 8.37 - 8.30 (m, 1H), 7.92 (br d, J= 2.1 Hz, 2H), 7.69 (br d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 1H), 4.37 - 4.31 (m, 1H), 3.44 (br s, 2H), 2.96 - 2.94 (m, 2H), 2.90 - 2.74 (m, 9H), 1.41 (br s, 9H), 1.34 - 1.20 (m, 12H)。LC-MS (ES+, m/z): 543.3[(M+H) +]; Rt=0.422 分鐘。 步驟 5 ： (S)-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 )-3-((2-(2-(2-( 甲基胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S)-6-ethyl-5-(isopropyl (methyl) amino)-3-((2-(2-(2-(methylamino) propanamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
將(S)-(1-((2-(4-((3-胺基甲醯基-5-乙基-6-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-基)胺基)吡啶-2-基)乙基)胺基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(200毫克，368.55毫莫耳，1當量)和HCl/MeOH (4M，20毫升，217.07當量)的混合物在16℃下攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，得到(S)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(210 毫克，粗製)，為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 443.4[(M+H) +]; Rt=0.331 分鐘。 步驟 6 ： (S, E)-3-((2-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 丙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 異丙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(S, E)-3-((2-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) propanamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-(isopropyl (methyl) amino) pyrazine-2-carboxamide）
在0℃下，向(S)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)-3-((2-(2-(2-(甲基胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(210毫克，438.40毫莫耳，1當量，HCl)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(108.91 毫克，657.60毫莫耳，1.5 當量，HCl)、DIPEA (566.60毫克，4.38 毫莫耳，763.61微升，10 當量)的DMF (2毫升)溶液中，加入BOP(290.84毫克，657.60毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。過濾混合物，得到殘餘物。將粗產物透過製備型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25% -55%，8分鐘)純化，得到(S, E)-3-((2-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯胺基)丙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-(異丙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(51.85 毫克，87.50毫莫耳，收率：19.96%，純度：93.44%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.50 - 11.42 (m, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.85 (br d, J= 2.1 Hz, 2H), 7.66 - 7.58 (m, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 6.67 - 6.35 (m, 2H), 5.06 - 4.49 (m, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 1H), 3.53 - 3.36 (m, 2H), 3.06 - 2.69 (m, 12H), 2.23 - 1.99 (m, 6H), 1.30 - 1.15 (m, 12H); HRMS (EI): m/z (M+H) +實測值: 554.3552。LC-MS (ES+, m/z): 554.3[(M+H) +]; Rt=1.919 分鐘。 實施例 76 化合物 606 (E)-3-((2-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((2-(2-(2-(4-(dimethylamino)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)pyrazine- 2-carboxamide） 步驟 1 ： (E)-3-((2-(2-(2-(4-( 二甲基胺基 )-N- 甲基丁 -2- 烯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -4- 基 ) 胺基 )-6- 乙基 -5-( 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（( E)-3-((2-(2-(2-(4-(dimethylamino)- N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl) pyridin-4-yl) amino)-6-ethyl-5-(ethyl(methyl)amino)pyrazine- 2-carboxamide）
在0℃下，向( E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(101.93毫克，615.48毫莫耳，1.5 當量，HCl)的DMF (2毫升)溶液中，加入DIPEA (530.31 毫克，4.10 毫莫耳，10 當量)、6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)-3-((2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(200 毫克，410.32毫莫耳，1當量，2HCl)，然後加入BOP(272.21 毫克，615.48毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。過濾反應混合物，得到殘餘物。殘餘物經製備型HPLC純化(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；流動相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B%：25% -55%，8分鐘)，得到(E)-3-((2-(2-(2-(4-(二甲基胺基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)吡啶-4-基)胺基)-6-乙基-5-(乙基(甲基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(40.68 毫克，76.74毫莫耳，收率：18.7%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.47 - 11.41 (m, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 1H), 7.95 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.85 - 7.79 (m, 1H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 6.62 - 6.25 (m, 2H), 3.98 - 3.90 (m, 2H), 3.51 - 3.38 (m, 4H), 3.09 - 3.05 (m, 3H), 3.03 - 3.00 (m, 3H), 2.92 - 2.88 (m, 1H), 2.82 - 2.73 (m, 5H), 2.14 - 2.05 (m, 6H), 1.22 (dt, J = 4.6, 7.1 Hz, 6H). LC-MS (ES+, m/z): 526.3[(M+H) +]; Rt=1.795 分鐘。HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值:526.3239。 實施例 77 化合物 607 (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 )-4- 氟苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl)-4-fluorophenyl) amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine- 2-carboxamide） 步骤 1 ： 2-(2- 氟 -5- 硝基苯基 ) 乙腈（2-(2-fluoro-5-nitrophenyl) acetonitrile）
在25℃下，向NaCN (2.450克，49.99毫莫耳，1.95當量)在H 2O (20毫升)的溶液中，滴加2-(溴甲基)-1-氟-4-硝基苯(6克，25.64 毫莫耳，1當量)在EtOH(90毫升)中的混合物。將混合物在25℃攪拌4小時。LCMS顯示反應完成。用2N的NaOH(40毫升)淬熄混合物。用H 2O (300毫升)稀釋混合物，用EtOAc(150毫升*3)萃取。合併的有機層，用飽和鹽水(130毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥、過濾並濃縮。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚：乙酸乙酯=5:1)，得到2-(2-氟-5-硝基苯基)乙腈(3g，16.65 毫莫耳，收率：64.96%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.44 (dd, J = 2.9, 6.4 Hz, 1H), 8.34 (td, J = 3.7, 8.9 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 9.1Hz, 1H), 4.26 (s, 2H)。LCMS (ES+, m/z): 214.2[(M+H) +]; Rt=2.095 分鐘。 步驟 2 ： 2-(2- 氟 -5- 硝基苯基 ) 乙 -1- 胺（2-(2-fluoro-5-nitrophenyl) ethan-1-amine）
向2-(2-氟-5-硝基-苯基)乙腈(3克，16.65 毫莫耳，1當量)的THF(50毫升)的溶液中，滴加BH 3.THF (1M，69.00毫升，4.14當量)。將混合物在70℃再添加2小時。TLC顯示反應完成。將該混合物滴加到MeOH (100毫升)中，然後在70℃回流1小時，然後濃縮至乾燥，得到2-(2-氟-5-硝基苯基)乙-1-胺(3克，粗製)，為黃色油狀物。 步驟 3 ： (2- 氟 -5- 硝基苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (2-fluoro-5-nitrophenethyl) carbamate）
將2-(2-氟-5-硝基苯基)乙-1-胺(3克，16.29 毫莫耳，1當量)、Boc 2O (7.11克，32.58 毫莫耳，7.48毫升，2 當量)、DIPEA (10.53克，81.45 毫莫耳，14.19毫升，5 當量)和DCM(60毫升)的混合物在25℃下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物濃縮至乾燥，然後透過矽膠硫醇色層分析來純化(石油醚：乙酸乙酯=5:1)，得到(2-氟-5-硝基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2克，7.04毫莫耳，收率：43.19%)，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 8.15 - 8.00 (m, 2H), 7.11 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 4.54 (br s, 1H), 3.34 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 2.87 (br t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.34 (s, 9H)。LC-MS (ES+, m/z): 485.2[(M+H-100) +]; Rt=0.527 分鐘。 步驟 4 ： (5- 胺基 -2- 氟苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (5-amino-2-fluorophenethyl) carbamate）
在25℃下，在50 psi的H 2下，向(2-氟-5-硝基苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(2克，7.04 毫莫耳，1當量)、Pd/C(200毫克，7.04毫莫耳，純度：50%，1當量)的MeOH (100毫升)溶液中攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物過濾並濃縮至乾燥，得到(5-胺基-2-氟苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(1.5克，粗製)，為黃色油狀物。LCMS (ES+, m/z): 155.3[(M+H-100) +]; Rt=0.319 分鐘。 步驟 5 ： (5-((3- 胺基甲醯基 -6- 氯 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (5-((3-carbamoyl-6-chloro-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) -2-fluorophenethyl)carbamate）
將（5-胺基-2-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（500毫克，1.97毫莫耳，1當量）、3,5-二氯-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺（519.20毫克，2.36毫莫耳，1.2當量）、DIPEA（7.42克，57.41毫莫耳，10.00毫升，29.20當量）和NMP（40毫升）的混合物在140°C下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水（150毫升）中，並用EtOAc（150毫升*2）萃取。合併有機層並用水（80毫升*2）、飽和鹽水（80毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。將粗產物透過矽膠硫醇色層分析來純化（石油醚：乙酸乙酯 = 5:1），得到（5-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-2-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（500毫克，1.14毫莫耳，收率：58.07%），為黃色固體。LCMS (ES+, m/z): 460.2[(M+Na) +]; Rt=0.619 分鐘。 步驟 6 ：（ 5- （（ 3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基）胺基） -2- 氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (5-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino) -2-fluorophenethyl) carbamate）
將（5-（（3-胺基甲醯基-6-氯-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-2-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（500毫克，1.14毫莫耳，1當量）、環丙基硼酸（980.80毫克，11.42毫莫耳，10當量）、Pd （dppf）Cl 2（83.55毫克，114.18毫莫耳，0.1當量）、CsF（867.24毫克，5.71毫莫耳，210.75微升，5當量）、DMA（2毫升）的混合物在100°C在N 2下攪拌10小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水（40毫升）中，並用EtOAc（40毫升*2）萃取。將有機層用水（80毫升*2）、飽和鹽水（80毫升*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮。將殘餘物溶於DCM（30毫升）中，加入清除劑（Pd），然後在25°C攪拌1小時，然後過濾並濃縮。將粗產物透過製備型HPLC（柱：Phenomenexluna C18 75*30mm*3um；流動相：[水（0.1％TFA）-ACN]；梯度：經8分鐘從60％到97％ B）純化，得到（5-（（3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基）胺基）-2-氟苯乙基）胺基甲酸叔丁酯（58毫克，130.77毫莫耳，收率：11.45%），為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 10.48 (br s, 1H), 7.79 (br s, 1H), 7.44 - 7.31 (m, 2H), 6.90 (br t, J = 9.3 Hz, 1H), 5.42 (br dd, J = 1.8, 2.9 Hz, 1H), 4.61 - 4.43 (m, 1H), 3.34 (br d, J = 4.1 Hz, 2H), 2.96 - 2.65 (m, 4H), 2.12 - 2.02 (m, 1H), 1.34 (br s, 9H), 1.24 (br t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.84 - 0.75 (m, 4H)。LC-MS (ES+, m/z): 444.3[(M+H) +]; Rt=2.216 分鐘。 步驟 7 ： 3- （（ 3- （ 2- 胺基乙基） -4- 氟苯基）胺基） -5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（3-((3-(2-aminoethyl)-4-fluorophenyl) amino)-5-cyclopropyl-6- ethylpyrazine-2-carboxamide）
將(5-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-2-氟苯乙基)胺基甲酸叔丁酯(95毫克，214.20毫莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，47.50毫升，887.03當量)的混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。濃縮該混合物，得到3-((3-(2-胺基乙基)-4-氟苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(85毫克，粗製，HCl)，為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z):344.3[(M+H) +]; Rt=0.400 分鐘。 步驟 8 ： (5-((3- 胺基甲醯基 -6- 環丙基 -5- 乙基吡嗪 -2- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯乙基 ) 胺基甲酸叔丁酯（tert-butyl (5-((3-carbamoyl-6-cyclopropyl-5-ethylpyrazin-2-yl) amino)-2-fluorophenethyl) carbamate）
在0℃下，向3-((3-(2-胺基乙基)-4-氟苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(85毫克，223.77毫莫耳，1當量，HCl)、N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基甘氨酸(63.51毫克，335.65毫莫耳，1.5 當量)、DIPEA (289.20 毫克，2.24 毫莫耳，389.76微升，10 當量)在DMF(2毫升)溶液的混合物中，加入BOP(148.45 毫克，335.65毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將混合物倒入水(40毫升)中，用EtOAc(40毫升*2)萃取。合併有機層，用水(40毫升*2)、飽和鹽水(40毫升*2)洗滌，用Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮。粗產物透過製備TLC純化(石油醚：乙酸乙酯=1:2)，得到(2-((5-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-2-氟苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(85 毫克，165.18毫莫耳，收率：73.82%))，為黃色油狀物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 10.54 (s, 1H), 7.76 (br d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.43 (m, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 1H), 6.90 (br t, J = 9.1 Hz, 1H), 6.21 - 5.85 (m, 1H), 5.32 (br s, 1H), 3.76 (s, 2H), 3.50 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.91 - 2.73 (m, 7H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.24 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.09 (br dd, J = 2.6, 4.5 Hz, 2H), 1.05 - 0.99 (m, 2H); LC-MS (ES+, m/z):515.2 [(M+H) +]; Rt=0.584 分鐘。 步驟 9 ： 5- 環丙基 -6- 乙基 -3-((4- 氟 -3-(2-(2-( 甲基胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 ) 苯基 ) 胺基 ) 吡嗪 -2- 甲醯胺（5-cyclopropyl-6-ethyl-3-((4-fluoro-3-(2-(2-(methylamino) acetamido) ethyl) phenyl)amino)pyrazine-2-carboxamide）
將(2-((5-((3-胺基甲醯基-6-環丙基-5-乙基吡嗪-2-基)胺基)-2-氟苯乙基)胺基)-2-氧代乙基)(甲基)胺基甲酸叔丁酯(85毫克，165.18毫莫耳，1當量)、HCl/MeOH (4M，28.33毫升，686.12 當量)的混合物在25℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。濃縮混合物，得到5-環丙基-6-乙基-3-((4-氟-3-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(80毫克，粗製，HCl)，為黃色油狀物。LC-MS (ES+, m/z):415.2[(M+H) +]; Rt=0.422 分鐘。 步驟 10 ： (E)-3-((3-(2-(2-(4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-N- 甲基丁 -2- 烯醯胺基 ) 乙醯胺基 ) 乙基 )-4- 氟苯基 ) 胺基 )-5- 環丙基 -6- 乙基吡嗪 -2- 甲醯胺（(E)-3-((3-(2-(2-(4-(azetidin-1-yl)-N-methylbut-2-enamido) acetamido) ethyl)-4-fluorophenyl)amino)-5-cyclopropyl-6-ethylpyrazine-2- carboxamide）
在0℃下，加入5-環丙基-6-乙基-3-((4-氟-3-(2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)乙基)苯基)胺基)吡嗪-2-甲醯胺(80毫克，177.41毫莫耳，1當量，HCl)、(E)-4-(氮雜環丁烷-1-基)丁-2-烯酸(362.18 毫克，1.42 毫莫耳，8 當量，TFA)、DIPEA (356.16 毫克，2.76 毫莫耳，480.00微升，15.53當量)的DMF (0.8毫升)溶液中，加入BOP(117.70毫克，266.11毫莫耳，1.5 當量)。將混合物在0℃攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。過濾混合物。粗產物透過製備型HPLC純化(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mM*10um；流動相：[水(10毫莫耳 NH 4HCO 3)-ACN]；梯度：經8.0分鐘從20%到50% B)，得到(E)-3-((3-(2-(2-(4-(氮雜環丁烷-1-基)-N-甲基丁-2-烯醯胺基)乙醯胺基)乙基)-4-氟苯基)胺基)-5-環丙基-6-乙基吡嗪-2-甲醯胺(26.84 毫克，49.92毫莫耳，28.14%)，為黃色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 11.03 - 10.92 (m, 1H), 8.22 - 7.92 (m, 2H), 7.87 - 7.77 (m, 1H), 7.54 - 7.36 (m, 2H), 7.17 - 7.04 (m, 1H), 6.52 (s, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 2H), 3.28 (br s, 2H), 3.17 - 2.94 (m, 7H), 2.90 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.81 - 2.68 (m, 4H), 2.31 - 2.23 (m, 1H), 2.01 - 1.87 (m, 2H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.12 - 1.01 (m, 4H)。LC-MS (ES+, m/z): 538.2 [(M+H) +]; Rt= 2.284 分鐘, HRMS (EI): m/z [M+H] +實測值: 538.2981。 其他示例性化合物
比較化合物C-1、C-2和C-3是或可以使用與公開文獻（例如AR 110273、WO2012/053606、WO2010/128659、US8,969,336和US9,487,491）中描述的一般方法和程序一致的方法和程序製備，其各自的內容通過引用併入本文中。
表2A和2B中描述了使用本文所述的一般方法和步驟由容易獲得的起始原料製備或可製備的代表性化合物。 實施例 B1 FLT3 體外抑制活性
在人類AML細胞株MOLM-13（AddexBio:C0003003）和MV-4-11（ATCC: CRL-9591）以及CML細胞株K-652（ATCC: CRL-3343）中研究了其增殖抑制作用。Molm-13對於 FLT3-ITD 突變是雜合體，而MV4-11對於 FLT3-ITD是同合體(Quentmeier H等人., Leukemia. 17(1):120-4)。K562不具有任何 FLT3突變。將細胞維持在補充有10％熱滅活FBS （ThermoFisher catalog no. A31605）和1％青黴素-鏈黴素（ThermoFisher catalog no. 10378016）的RPMI -1640培養基（ThermoFisher catalog no. 61870036）中，並在37°C下在具有5％CO 2的加濕培養箱中培養。細胞株通過黏附於培養瓶而生長，細胞維持在70％-80％匯合範圍內。
ATP存在於所有代謝活性細胞中並被認為是細胞存活和增殖的標記。根據廠商的實驗建議，使用CellTiter-Glo試劑盒（Promega catalog no. G7572）測定代謝細胞活性，這是一種基於ATP與添加的UltraGlo®重組熒光素酶反應產生發光的ATP監測系統（Kawano等人, 2016, PLOS One, 8；11(7):e0158888）。該實驗基於96孔板形式。
將測試化合物以10mM溶於DMSO (Sigma catalog no. D8418；純度≥99.9%)中並在-20℃下儲存。在單次測試中，在所選的細胞株中同時評估測試化合物的八個濃度，每個濃度各測試兩次。使用Giltratinib和FF-10101作為參考化合物並在八個濃度下進行兩次測試。100％的增殖由未處理的細胞（0.2％DMSO）表示。
在實驗當天，用細胞存活分析儀NucleoCounter (Chemometec NC-200)定量細胞，並用新鮮培養基稀釋以獲得每200微升培養基約10,000個細胞的細胞密度。將200微升細胞懸浮液加入96孔板的孔中。
接種細胞2小時後，使用D300e化合物分配器（Life Sciences Tecan D300）加入所需濃度的化合物，在各分配的化合物之間搖動。在37℃下，在5% CO 2的加濕培養箱中培養測定板。
在第4天（加入化合物後約96小時），將測定板在室溫下平衡約15分鐘，然後加入40微升/孔的Promega CellTiterGlo試劑。在軌道震盪器上混合5分鐘以促進細胞裂解，然後在室溫下、黑暗中再培養10分鐘以穩定發光訊息。藉由使用GloMax GM300板閱讀器（Promega），並使用96孔板標準方案來讀取發光值。
數據表示為與0.2%DMSO（載劑(vehicle)（陰性對照相比的抑制百分比，計算方式如下：%抑制=100-[(RLU樣品)×100/(RLU平均對照*) ]，其中，*表示0.2% DMSO的平均值。
結果使用GraphPad（Prism）進行分析，IC 50值通過使用四參數邏輯方程的非線性回歸計算。表2A中報告了T4天（4天）測量的IC 50值： ＜1 nM, **** 1-10 nM, *** 10-100 nM, ** 100-500 nM, * ＞500 nM。
圖1、圖2a、圖2b、圖3a、圖3b、圖4a、圖4b、圖5a和圖5b描述了代表性化合物在各種細胞株中的細胞活性。
本發明的化合物提供以下IC 50(4天)值。 表2A：代表性化合物及其IC 50值
化合物 ID 結構 分子量 (MW) MOLM-13 MV-4:11 K-562
137 524.66 ***** ***** *
138 521.65 **** ***** *
142A 495.63 **** **** *
143 554.68 ***** ***** *
144 551.68 ***** ***** *
156 536.67 ***** ***** *
158 542.65 ***** ***** *
159 539.64 **** ***** *
160 479.57 *** **** *
162 542.65 ** *** *
163 513.61 **** **** *
164 501.65 *** **** *
202 507.63 **** **** *
203 522.64 **** ***** *
204 552.71 ***** ***** *
205 538.68 ***** ***** *
207 481.59 *** *** *
208 464.56 *** **** *
209 476.57 *** **** *
211 507.63 *** **** *
213 467.56 **** ***** *
214 493.6 *** *** *
215 482.55 * * *
216 438.52 *** *** *
217 465.55 *** *** *
218 453.54 *** **** *
219 507.63 ***** ***** *
220 533.67 *** **** *
221 538.68 ***** ***** *
222 450.53 *** *** *
223 507.63 *** **** *
224 507.63 **** ***** *
225 467.56 *** **** *
226 481.59 **** ***** *
227 481.59 **** **** *
228 507.63 **** **** *
230 522.64 **** ***** *
231 481.59 *** **** *
232 538.68 **** ***** *
233 510.63 **** ***** *
234 495.62 * *** *
236 464.56 *** *** *
237 467.58 *** **** *
238 424.5 * * *
239 528.62 *** **** *
240 525.62 * *** *
241 493.6 **** **** *
242 519.64 **** **** *
243 509.64 **** ***** *
244 493.6 **** ***** *
245 499.58 *** **** *
246 544.72 ***** ***** *
247 544.72 **** ***** *
248 513.66 **** **** *
249 558.75 ***** ***** *
250 524.66 **** ***** *
251 485.55 *** **** *
252 524.66 ***** ***** *
253 524.66 **** ***** *
254 525.62 **** ***** *
255 495.62 *** **** *
301 467.56 *** *** *
302 552.71 **** ***** *
303 524.66 ***** ***** *
304 522.64 ** ** *
305 509.64 **** **** *
306 522.64 **** **** *
307 538.68 ***** ***** *
308 481.59 **** **** *
309 467.56 ** **** *
310 522.64 **** ***** *
311 495.62 ** *** *
312 495.62 ** *** *
313 522.64 ** *** *
314 509.64 ** *** *
315 495.62 **** **** *
316 520.67 ** *** *
317 509.64 *** **** *
318 554.73 *** **** *
319 506.64 *** *** *
320 521.65 ** *** *
321 495.62 **** **** *
322 523.67 ** *** *
323 507.63 ** *** *
324 495.62 ** *** *
325 509.64 ** ** *
326 509.64 * * *
327 534.65 **** *** *
328 536.67 *** ***** *
501 524.66 ***** ***** *
502 538.68 ***** ***** *
503 509.64 ***** ***** *
504 521.65 ***** ***** *
505 544.72 *
506 533.67 ***** **** *
507 535.68 ***** **** *
508 521.65 * * *
509 535.68 ***** **** *
510 466.58 *** *** *
511 467.56 ***** **** *
512 480.6 * *** *
513 481.59 **** *** *
515 468.56 **** ***** *
516 537.64 **** **** *
516A 536.67 ***** ***** *
517 549.71 **** **** *
518 550.7 ***** ***** *
519 521.65 *** **** *
520 520.63 **** **** *
601 535.68 **** ***** *
602 523.63 **** ***** *
603 537.65 **** ***** *
604 536.67 **** ***** *
605 553.7 ***** ***** *
606 525.65 **** ***** *
607 537.63 **** **** *
C-1 539.63 * * *
C-2 591.75 *** **** ***
C-3 452.55 * * *
吉列替尼 552.71 **** **** **
實施例 B2 WT FLT3 和 FLT3-ITD 生化試驗
針對WT FLT3和FLT3-ITD 酶，建立高通量384孔Lance Ultra TR-FRET激酶分析，並使用U Light標記的肽（供體）和標有Eu-結合抗體的FLT3蛋白（受體）(WuXi Aptec)。TR-FRET 的原理是基於供體與受體熒光團之間的能量轉移，所述能量轉移是當熒光團彼此緊密接近（約100 Å）時產生的。重組WT FLT3（# PR4666C, M.W. 48.6 kDa）購自Invitrogen 和FLT3-ITD （FLT3-ITD-W51, # F-12-12CG-10, M.W. 76 kDa）購自Signalchem 。WT FLT3酶測定的最佳測定條件如下：0.5nM FLT3蛋白、50nM ULight-JAK -1（Tyr1023）底物肽（PerkinElmer # TRF0121）、100μM ATP、60分鐘反應時間。FLT3-ITD 酶測定的最佳測定條件如下：0.0625nM FLT3-ITD 蛋白、50nM ULight-JAK -1（Tyr1023）底物肽、50μM ATP、90分鐘反應時間。簡言之，製備測試化合物的11個劑量的3x序列稀釋液，將參考化合物和100納升(nanoliters)轉移至384孔測定板的適當孔中。將5微升2x酶/肽加入測定孔中，將測定板在1000 rpm下離心約30秒，用密封膜密封並在23℃下培養30分鐘。測定緩衝液包含50mM HEPES（pH7.5），1mM EDTA，0.01％Brij-35，10mM MgCl 2和2mM DTT。接下來，將5微升的2x ATP混合物加入到測定孔中，並將板以1000 rpm離心約30秒，用密封膜密封，並在23℃培養適當的持續時間。在測定培養（對於WT FLT3為30分鐘，對於FLT3-ITD為60分鐘）後，將10μl 2x檢測混合物（Eu-W1024抗磷酸酪氨酸（PT66）2nM和EDTA 10mM）加入到測定孔中，測定板以1000 rpm離心約1分鐘，用密封膜密封並在23℃培養60分鐘。在Perkin Elmer Envision讀數器上在兩個波長（665/615）下讀取測定板並且計算615 nm與665 nm的比率。
數據表示為相對於媒介物對照的抑制率，並且計算如下：（100％抑制-孔數據）/（100％抑制-0％抑制）*100。
結果通過XLFIT5分析為％抑制與對數(log)[化合物濃度]，IC 50值由非線性回歸使用四參數-邏輯方程計算。Fit = (A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))。Res = (y-fit)。測量的相對IC 50值報告在下表2B中：***** ＜0.1 nM, **** 0.101-0.200 nM, *** 0.201-0.500 nM, ** 0.501-1.000 nM, * ＞1 nM。
圖2c、圖2d、圖3c、圖3d、圖4c、圖4d、圖5c和圖5d描繪代表性化合物在FLT3-WT 和FLT3-ITD 酶中的生物化學活性。
本發明的化合物提供以下IC 50值。 表2B：代表性化合物及其IC 50值
化合物 ID FLT3 WT IC 50 FLT3 ITD IC 50
137 ** ***
138 *** ***
143 **** ****
144 *** ***
156 *** ***
158 **** ****
159 ** ***
203 ** ***
204 **** ****
205 **** ****
213 ** ****
221 ** ****
232 ** **
239 ** ****
241 * ***
250 *** ***
252 *** ****
253 ** ***
254 ** **
302 * *
303 *** ***
305 * *
306 ** *
307 *** ***
308 *** ****
310 ** **
315 * **
321 ** *
327 ** ***
328 *** ***
501 ** **
502 **** ***
503 *** **
506 **** ***
507 *** ***
508 ** **
509 *** **
510 * *
511 *** *****
513 ** ***
515 ** ****
516 *** ****
516A ** ****
517 ** **
518 *** ****
519 * *
520 * **
601 * **
602 *** ***
603 *** ***
605 *** ***
606 ** ***
C-1 * *
C-2 ** **
C-3 * *
吉列替尼 * **
實施例 B3 FLT3 突變體測定
目前臨床上已批准或開發了多種FLT3激酶抑制劑，包括：米哚妥林、索拉非尼、喹紮替尼(AC220)和吉特替尼。儘管它們具有良好的效力與存活效益，但這些標靶FLT3抑制劑的單一療法因治療引起的耐藥性而受到限制，進而導致復發和整體存活率不佳（Smith CC等人. Nature. 2012;485(7397):260-U153, Smith等人. Blood. 2017;130(1):48–58）。TKD中的獲得性突變和F691L「看守」（gatekeeper）突變賦予對大多數目前可用的FLT3抑制劑的抗藥性(Eguchi等人. Biomedicines. 2020;8(8):245; Smith CC等人. Cancer Discov. 2015;5(6):668–79)。因此，能夠克服這些抗藥性突變的藥物賦予選擇性的優點，並且是高度期望的。
使用穩定表達人FLT3-ITD、FLT3-ITD-D835Y或FLT3-ITD -F691L的Ba/F3細胞株（小鼠pro-B細胞株）評估化合物對FLT3活化突變的活性。簡言之，將人FLT3-ITD/FLT3-ITD-D835Y/FLT3-ITD-D691L表達質體與慢病毒包裝質體一起轉染到293FT細胞中以產生慢病毒。使用PEG8000濃縮收集的上清液，並用於在含有聚凝胺的無血清培養基中以1-5MOI感染Ba/F3細胞。感染的Ba/F3細胞在有嘌呤黴素的情況下進行篩選，並通過測序及/或蛋白質檢測試驗驗證存活的細胞。活化激酶的組成型表達將Ba/F3細胞轉化為IL-3-非依賴性生長，使其在無IL-3存在下培養，將由此產生的轉化的細胞株維持在培養基（90％RPMI1640＋10％熱滅活FBS ＋1x青黴素－鏈黴素/抗生素－抗真菌劑）中，在不存在IL －3的情況下，在37o C 下，在空氣中5％CO 2的氣氛中，並且常規地進行傳代培養。為了用於化合物測試，收穫指數生長期的細胞，計數，並以所需細胞密度重新懸浮細胞。細胞存活測定在96孔測定板中進行，每孔接種90微升細胞懸浮液。測試化合物和測定對照的序列稀釋液是新鮮製備的用於測定。在100% DMSO （400x stock）中製備九點3x序列稀釋液，隨後在細胞培養基中稀釋以獲得10x stocks。將10微升10x stocks序列稀釋液加入測定板中的適當孔中（每種條件有三份孔）。測定中的最終DMSO濃度為0.25％。將測定板在37°C下在具有5％CO 2的加濕培養箱中培養3天。在3天結束時，使用Promega CellTiter-Glo 發光細胞存活測定試劑盒（Promega-G7573）按照廠商的方案評價細胞存活，並且使用2104 Envision讀板器（PerkinElmer）測量活細胞中由ATP 分子產生的發光訊號。
測試化合物的抑制率(IR)通過以下公式確定：IR (%) = (1-(RLU化合物-RLU空白)/(RLU對照-RLU空白))×100%。在Excel文件中計算不同劑量化合物的抑制作用，並使用GraphPad Prism分析劑量反應以評估相關參數，例如底部、頂部和IC 50。對於藉由GraphPad Prism進行的IC 50分析，使用以下方程來擬合曲線：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^ ((LogIC 50-X)*HillSlope))。本文提供的代表性化合物在對穩定表達人類FLT3-ITD突變的工程Ba/F3細胞株進行測試時顯示出強大的抗白血病活性（IC 50＜10 nM），其中頂級化合物顯示出比吉非替尼更高的效力（表2C）。還對穩定表達TKD突變FLT3-ITD-D835Y或看守突變FLT3-ITD-F691L的Ba/F3細胞株進行了化合物測試。與已發表的數據一致，FLT3-ITD-D835Y和FLT3-ITD-F691L突變體與FLT3-ITD相比，對quizartinib的敏感性降低（IC 50增加50至100倍）。Gilteritinib（吉列替尼）對FLT3-ITD和FLT3-ITD-D835Y突變體保持高活性，但對FLT3看守突變體FLT3-ITD-F691L的活性較低（相對於FLT3-ITD，IC 50增加約15倍）。相比之下，本文提供的幾個代表性化合物的概況很突出，它們對兩種突變體都保持了良好的活性（IC 50的轉變＜10倍）。特別值得注意的是FLT3-ITD-F691L對本發明的大多數化合物高度敏感。總之，鑒於本發明的代表性化合物能夠同時抑制TKD突變D835Y和看守突變F691L，顯示出卓越的特徵。
在第3天(3天)測量的IC 50值報告在下表2C中：***** ＜1 nM, **** 1-10 nM, *** 10-100 nM, ** 100-500 nM, * ＞500 nM。
本發明的化合物提供以下IC 50(3天)值。 表2C：代表性化合物和它們的相對IC 50值
化合物 ID Ba/F3-FLT3-ITD Ba/F3-FLT3-ITD-D835Y Ba/F3-FLT3-ITD-F691L
吉列替尼 **** *** ***
AC220 (quizartinib) **** ** **
204 **** **** ****
205 ***** **** ****
219 **** *** ****
232 **** *** ****
250 **** *** ****
252 ***** **** ****
307 **** *** ***
310 **** *** ***
504 **** *** ****
506 **** *** ****
507 **** *** ****
508 **** *** ****
516 **** *** ***
516A **** *** ****
518 **** *** ****
602 **** *** ****
603 **** *** ***
605 **** *** ***
吉列替尼-一種習知的FLT3抑制劑，其被批准用於治療具有 FLT3突變的復發性或難治性急性骨髓性白血病（AML）。
Quizartinib -一種目前正在開發中的習知FLT3抑制劑，用於治療急性骨髓性白血病。 實施例 B4 ：醫藥組合物
為了說明的目的，以下描述的組合物以具有式(I)的化合物呈現。 實施例 B2a ：腸胃外組合物
為了製備適於注射給藥的胃腸外醫藥組合物，將100毫克式(I)化合物的水溶性鹽溶解於DMSO中，然後與10毫升0.9%無菌鹽水混合。將混合物摻入到適於注射給藥的劑量單位形式中。 實例 B2b ：口服組合物
為了製備用於口服遞送的醫藥組合物，將100毫克式（I）化合物與750毫克澱粉混合。將該混合物摻入適於口服給藥的口服劑量單位，如硬明膠膠囊中。 實施例 B2c ：舌下 ( 硬錠劑 ) 組合物
為了製備用於口腔給藥的醫藥組合物，例如硬錠劑，將100毫克式(I)化合物與420 毫克混合的糖粉、1.6毫升輕玉米糖漿、2.4毫升蒸餾水和0.42毫升薄荷提取物混合。將混合物輕輕地混合併倒入模具中以形成適於含服給藥的錠劑。 實施例 B2d ：吸入組合物
為了製備用於吸入遞送的醫藥組合物，將20 毫克式(I)化合物與50毫克無水檸檬酸和100毫升0.9%氯化鈉溶液混合。將混合物併入吸入遞送單元，如適於吸入施用的噴霧器。 實施例 B2e ：直腸凝膠組合物
為了製備直腸給藥的藥物組合物，將100毫克式(I)化合物與2.5克甲基纖維素(1500 mPa)、100毫克甲基萘、5克甘油和100毫升純水混合。然後將所得凝膠混合物摻入直腸遞送單元，例如注射器，其適於直腸施用。 實施例 B2f ：局部用凝膠組合物
為了製備藥物局部凝膠組合物，將100毫克的式(I)化合物與1.75克羥丙基纖維素、10毫升丙二醇、10毫升肉荳蔻酸異丙酯和100毫升純化醇USP混合。然後將所得凝膠混合物加入到適於局部給藥的容器，如管中。 實施例 B2g ：眼用溶液組合物
為了製備眼用藥物溶液組合物，將100毫克的式(I)化合物與0.9克NaCl在100毫升純水中混合，並使用0.2微米過濾器過濾。然後將所得等滲溶液併入眼用遞送單元，例如適於眼用給藥的滴眼劑容器。
應當理解，本文所述的實施例和實施方案僅用於說明性目的，並且所屬技術領域之通常知識者將根據其提出各種修改或變化，而且這些修改或變化將包含在本申請的精神和範圍以及所附請求項的範圍內。本文引用的所有出版物、專利和專利申請在此通過引用整體併入用於所有目的。
本申請中給出和闡述的本文提供的化合物的至少一些化學名稱可以是藉由使用可商購的化學命名軟體程式在自動化基礎上產生的，並且沒有獨立地驗證。在所示化學名稱和所示結構不同的情況下，以所示結構為準。在其中掌性中心存在於結構中但對於掌性中心未顯示特定立體化學的化學結構中，與掌性結構相關的兩種對映異構物都被該結構涵蓋。
本申請主張於2021年12月30日提交的美國臨時申請第63/295,494號、於2022年3月4日提交的美國臨時申請第63/316,939號、於2022年5月17日提交的美國臨時申請第63/364,860號、於2022年12月9日提交的美國臨時申請第63/386,772號、以及於2022年8月19日提交的國際申請第PCT/US2022/40953號的權益，其內容通過引用整體併入本文中。
無
圖1說明化合物506、C-1、C-2和C-3在MV-4:11細胞株中基於細胞的活性。 圖2a至圖2d描述化合物506、C-1、C-2和C-3在圖2a MOLM-13和圖2b K-562細胞株、以及圖2c FLT3-WT和圖2d FLT3-ITD酶中基於細胞及生物化學的活性。 圖3a至圖3d描述化合物204、205、307和232在圖3a MOLM-13和圖3b K-562細胞株、以及圖3c FLT3-WT和圖3d FLT3-ITD酶中基於細胞及生物化學的活性。 圖4a至圖4d描述化合物250、252、507和516在圖4a MOLM-13和圖4b K-562細胞株、以及圖4c FLT3-WT和圖4d FLT3-ITD酶中基於細胞及生物化學的活性。 圖5a至圖5d描述化合物516A、602、603和605在圖5a MOLM-13和圖5b K-562細胞株、以及圖5c FLT3-WT和圖5d FLT3-ITD酶中基於細胞及生物化學的活性。

Claims (50)

  1. 一種根據式(P6-I)的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽， 其中：A 1、A 2、A 3和A 4各自獨立地為–C(R 7)=或-N=；條件是A 1、A 2、A 3和A 4中不超過兩個N； L 1和L 3各自獨立地為取代或未取代的C 1-C 4伸烷基；並且每個伸烷基上的取代基獨立地選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個； R 1為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的環烷基、或取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子；並且烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基和雜環烷基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個； R 2b獨立地為H或C 1-C 4烷基； R 4為i)-C(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)，ii)-S(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)，或iii)-S(O) 2-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)； R 5為H、Cy、CN、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或C 1-6烷胺基； Cy、烷基、烷氧基和烷胺基各自是未被取代的或被以下取代： 鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基、二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個，該取代或未取代的雜環烷基具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子； 並且在環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個； Cy是環烷基或雜環烷基； R 6a和R 6b各自獨立地為H、鹵素、CN或C 1-6烷基；或R 6a和R 6b連接在一起以形成一鍵；R 6C為H、鹵素、CN或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基為未被取代的或被選自以下基團中的一個或多個取代：取代或未取代的胺基、羥基、取代或未取代的C 1-6烷氧基、和取代或未取代之具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的雜環烷基；並且胺基、烷氧基和雜環烷基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個； R 7各自獨立地為H、鹵素、CN、取代或未取代的C 1-6烷基、取代或未取代的烷氧基、或取代或未取代的雜環烷基，其具有1-2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子；並且在烷基、烷氧基和雜環烷基的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
  2. 如請求項1所述的化合物，其中，A 1、A 2和A 4各自為CH，且A 3為CR 7。
  3. 如請求項1所述的化合物，其中，A 1和A 2中的每一個為CH；A 3為CR 7，且A 4為N。
  4. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物是根據式(P6-IIa)或(P6-IIb)： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的化合物，其中，L 1為-CH 2-CH 2-、 -C(Me)H-CH 2-、或-CH 2-C(Me)H-。
  6. 如請求項1至4中任一項所述的化合物，其中，L 1為-CH 2-C(Me)H-。
  7. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物是根據式(P6-IIIa)、(P6-IIIb)、(P6-IIIc)或(P6-IIId)的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的化合物，其中R 1為H、Me、或Et。
  9. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物是根據式(P6-IVa)、(P6-IVb)、(P6-IVc) 或(P6-IVd)的化合物： 或其立體異構物，或其醫藥學上可接受的鹽。
  10. 如請求項1至9中任一項所述的化合物，其中L 3為-CH 2-、或 -C(Me)H-。
  11. 如請求項1至9中任一項所述的化合物，其中，L 3為-C(Me) 2-、-CH 2-CH 2-、-C(Me)H-CH 2-、-CH 2-C(Me)H-、或 。
  12. 如請求項1至11中任一項所述的化合物，其中R 2b是H、或Me。
  13. 如請求項1至12中任一項所述的化合物，其中，R 7為H、F、Me、Et、Cl、CF 3、或OMe。
  14. 如請求項1至13中任一項所述的化合物，其中，R 5是Cy，其是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基、二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個取代；並且在環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個；以及Cy是環烷基或雜環烷基。
  15. 如請求項1至13中任一項所述的化合物，其中，R 5為未取代或取代的C 1-6烷基、未取代或取代的C 1-6烷氧基、或未取代或取代的烷胺基；烷基、烷氧基和烷胺基各自是未被取代的或被鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、胺基、烷胺基、二烷胺基、取代或未取代的環烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或C 1-4烷氧基中的一個或多個取代；並且在環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
  16. 如請求項1至13中任一項所述的化合物，其中，R 5為Me、Et、i-Pr、n-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、sec-Bu、取代或未取代的環丙基、取代或未取代的環丁基、取代或未取代的環戊基、取代或未取代的環己基、Cl、F、CN、CF 3、OMe、OEt、O-i-Pr、-OCF3、N,N-二甲基胺基、N,N-二乙基胺基、N,N-二異丙基胺基、N-乙基-N-甲基胺基、N-異丙基-N-乙基胺基、N-異丙基胺基、N-乙基胺基、N-甲基胺基、N-正丙基胺基、取代或未取代的1-氮雜環丁烷基、取代或未取代的1-吡咯烷基、取代或未取代的1-哌啶基、或取代或未取代的1-嗎啉基；以及在環丙基、環丁基、環戊基和環己基中每個取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
  17. 如請求項1至13中任一項所述的化合物，其中，R 5是Me、Et、n-Pr、i-Pr、i-Bu、環丙基、N,N-二甲基、N-乙基-N-甲基、N-異丙胺基、N-異丙基-N-甲基胺基、甲氧基、乙氧基或i-丙氧基。
  18. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 4為-C(O)-C(R 6a)=C(R 6b)(R 6c)。
  19. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 6a、R 6b和R 6c中每一個為H。
  20. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 6a和R 6b中每一個為H；以及R 6c是被胺基、烷胺基或二烷胺基取代的烷基。
  21. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 6a和R 6b形成一鍵；且R 6c是H或取代或未取代的烷基；並且烷基上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基、C 1-4烷氧基和雜環烷基中的一個或多個，該雜環烷基具有1-2個獨立選自氮、氧和硫的雜原子。
  22. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 6a和R 6b形成鍵；以及R 6c是Me。
  23. 如請求項1-17中任一項所述的化合物，其中，R 6a和R 6b中每一個為H；以及R 6c為‑(CH 2) q-雜環烷基；且q是1。
  24. 如請求項23所述的化合物，其中，雜環烷基是取代或未取代的氮雜環丁烷-1-基、取代或未取代的吡咯烷-1-基、取代或未取代的哌啶-1-基、取代或未取代的嗎啉-1-基或取代或未取代的氮雜卓-1-基；以及氮雜環丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基和氮雜基各自上的取代基選自鹵素、CN、C 1-4烷基、羥基和C 1-4烷氧基中的一個或多個。
  25. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 6a和R 6b中每一個為H或Me；以及R 6c為-CH 2-氮雜環丁烷-1-基、-CH 2-吡咯烷-1-基 或-CH 2-哌啶-1-基。
  26. 如請求項1至17中任一項所述的化合物，其中，R 4是-C(O)-CH=CH 2, -C(O)-CH=CH-CH 2-NHMe、 -C(O)-CH=CH-CH 2-NMe 2、 -C(O)-CH=CH-CH 2-氮雜環丁烷-1-基、-C(O)-CH=CH-CH 2-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)、 -C(O)-CH=CH-CH 2-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)、-C(O)-C≡CH, -C(O)-C≡C-Me、或 -C(O)-C≡C-CH 2-NMe 2。
  27. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物選自表2A中列出的化合物中的任一種，或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物；條件是該化合物不是C-1、C-2、C-3和吉列替尼。
  28. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物選自化合物ID 204、252、310、509、511和516A；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  29. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物選自化合物ID 308、315、506、507、508、512、513、517和520；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  30. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物選自化合物ID 506和516；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  31. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物為化合物ID 204；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  32. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物為化合物ID 516A；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  33. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物為化合物ID 252；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  34. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物為化合物ID 506；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  35. 如請求項1所述的化合物，其中，該化合物為化合物ID 511；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或溶劑化物。
  36. 一種醫藥組合物，包括一治療有效量之請求項1至35中任一項所述的化合物；或其醫藥學上可接受的立體異構物、鹽、溶劑化物或前驅藥；和醫藥學上可接受的賦形劑。
  37. 如請求項36所述的醫藥組合物，其中，被配製用於選自口服施用、腸胃外施用、口腔施用、鼻腔施用、局部施用或直腸施用的施用途徑。
  38. 一種治療增殖性疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用一治療有效量之請求項36或37所述的醫藥組合物。
  39. 一種治療增殖性疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用請求項36或37所述的醫藥組合物。
  40. 一種治療癌症的方法，包括向有需要的患者施用一治療有效量之請求項36或37所述的醫藥組合物。
  41. 如請求項40所述的方法，其中，該癌症是血液惡性腫瘤。
  42. 如請求項40所述的方法，其中，該血液惡性腫瘤是急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、前淋巴細胞白血病(PLL)、大顆粒淋巴細胞白血病(LGL)、毛細胞白血病(HCL)、肥大細胞白血病(MCL)或骨髓發育不良症候群(MDS)。
  43. 如請求項40所述的方法，其中，該患者具有選自N676K、F691L、D835H、D835V、D835Y、Y842C及其組合的 FLT3突變。
  44. 一種如請求項1至35中任一項所述的化合物或其代謝物、溶劑化物、醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或前驅藥，或如請求項36或37所述的醫藥組合物在製備藥物中的用途。
  45. 一種如請求項1至35中任一項所述的化合物或其代謝物、溶劑化物、醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或前驅藥，或如請求項36或37所述的醫藥組合物作為藥物的用途。
  46. 一種如請求項1至35中任一項所述的化合物或其代謝物、溶劑化物、醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或前驅藥，或如請求項36或37所述的醫藥組合物用於治療、防止或預防增殖性疾病的用途。
  47. 一種如請求項1至35中任一項所述的化合物或其代謝物、溶劑化物、醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或前驅藥，或如請求項36或37所述的醫藥組合物用於治療、防止或預防血液惡性腫瘤的用途。
  48. 一種如請求項1至35中任一項所述的化合物或其代謝物、溶劑化物、醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或前驅藥在製備用於治療、防止或預防增殖性疾病的藥物中的用途。
  49. 一種如請求項1至35中任一項所述的化合物或其代謝物、溶劑化物、醫藥學上可接受的立體異構物、鹽或前驅藥在製備用於治療、防止或預防血液惡性腫瘤的藥物中的用途。
  50. 如請求項1至35中任一項所述的化合物、如請求項36或37所述的醫藥組合物、如請求項40至48中任一項所述的方法，或如請求項49或50所述的用途，其中，該化合物為FLT3抑制劑。
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