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TW202003471A - Shp2磷酸酶抑制劑及其使用方法 - Google Patents

Shp2磷酸酶抑制劑及其使用方法 Download PDF

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TW202003471A
TW202003471A TW108109755A TW108109755A TW202003471A TW 202003471 A TW202003471 A TW 202003471A TW 108109755 A TW108109755 A TW 108109755A TW 108109755 A TW108109755 A TW 108109755A TW 202003471 A TW202003471 A TW 202003471A
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TW
Taiwan
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pharmaceutically acceptable
mmol
acceptable salt
nitrogen
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TW108109755A
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English (en)
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亞歷山大 Ｍ 泰勒
安德烈 蘭斯卡比
伊莉莎白 Ｈ 凱利
凱利 Ｃ 秀特李維斯
Ｗ 派翠克 華特斯
馬克 Ａ 穆爾克
湯瑪士 Ｈ 麥林
哈坎 谷奈丁
法比奇 佐丹尼多
艾瑞克 特里恩
Original Assignee
美商傳達治療有限公司
美商Ｄ Ｅ 蕭爾研究有限公司
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Abstract

本發明係關於新穎化合物及其醫藥組合物，以及用本發明之化合物及組合物抑制SHP2磷酸酶之活性的方法。本發明進一步係關於(但不限於)用本發明之化合物及組合物治療與SHP2失調有關之病症的方法。

Description

SHP2磷酸酶抑制劑及其使用方法
含有Src同源區2 (SH2)之蛋白酪胺酸磷酸酶2 (SHP2)為由PTPN11 基因編碼之蛋白酪胺酸磷酸酶。SHP2含有兩個Src同源區2 (SH2) NH2 端結構域及一個C端蛋白酪胺酸磷酸酶結構域。其遍在表現於各種組織及細胞類型中。SHP2在調控細胞生物過程之各種信號傳導路徑中起著重要作用，且涉及各種生長因子及細胞介素之信號傳導路徑。在單個信號傳導路徑內，SHP2可同時在細胞內信號傳導過程中起積極(信號增強)作用及消極(信號衰減)作用。咸信SHP2藉由使其相關信號傳導分子去磷酸化，從而使局部信號傳導流衰減而起作用。然而，SHP2活動在大部分信號傳導路徑(例如，生長因子、細胞介素及細胞外基質受體)中之主要作用為增強信號轉導。舉例而言，SHP2為ERK/MAPK信號傳導路徑之正調控劑，其在調控細胞增殖及存活方面起關鍵作用。(SHP2磷酸酶之概述參見(例如) K. S. Grossman等人,Adv. Cancer Res. 2010,106 , 53-89；及其中所引用之參考文獻)。
在基礎狀態下，SHP2通常由於其N端SH2 (N-SH2)結構域與其催化(PTP)結構域之間的分子內相互作用而自動抑制，從而阻斷對催化位點之接近。活化與SH2結構域相互作用之蛋白質誘導使此抑制逆轉且允許受質接近催化位點之構形改變。PTPN11 基因中影響SHP2之基礎抑制所涉及之N-SH2或PTP結構域殘基的突變產生SHP2蛋白之更易活化形式，其會引起不受調控或增加的SHP2活性。SHP2之此類活化突變體與諸如努南症候群(Noonan syndrome)之發育障礙有關，其中幾乎SHP2之所有突變形式顯示增加的PTP活性。因此，需要SHP2磷酸酶抑制劑化合物以及用此等化合物治療癌症及其他病症之方法。
在一些實施例中，本發明提供由下式表示之式Ia或式Ib化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體：
Figure 02_image003
其中 D選自由以下組成之群：苯基；具有一個或兩個各自獨立地選自由S、O或N組成之群之雜原子的5員或6員雜芳基；及C3-6 環烷基，其中D在可用碳上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD1 之取代基取代，且在氮(若存在)上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD2 之取代基取代； U為C、CR4 或N； V為C、CR4 或N；其中U或V中之至少一者必須為C、CR4 或N； B與D稠合，使得D及B共用的兩個原子均為碳或一個原子為碳且一個原子為氮； R4 獨立地選自由以下組成之群：氫、-C(O)N(R6 )2 、-N(R6 )2 及-C1-3 烷基-N(R6 )2 ； R6 在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：H、-(C1 -C6 )烷基、-C(O)OC1-4 烷基及苯基； RD1 選自由以下組成之群：羥基、氰基、鹵素及-N(R6 )2 ； RD2 選自-(C1 -C6 )烷基及苯基； X選自由以下組成之群：鍵、-O-、-NRX1 -及-S(O)w - (其中w為0、1或2)； R1 為選自由以下組成之群之環部分：8員至12員雙環雜芳基、苯基、5員至7員單環雜芳基及4員至7員雜環基，其中該環部分可視情況經一個、兩個或更多個各自獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：R10 、-OR10 、-S(O)w R10 (其中w為0、1或2)、-C1-6 烷基-S(O)w -C1-3 烷基、-N(R10 )2 、-N(CO)R10 、-N-S(O)w -R10 (其中w為0、1或2)、-OS(O)w -R10 (其中w為0、1或2)、-S(O)w -N(R10 )2 (其中w為0、1或2)、-S(O)(NH)R10 、-N(H)-SO2 -C1-3 烷基、-N(SO2 -C1-3 烷基)2 、P(O)(R10 )2 、-C(O)R10 、-C(O)OR10 、-C(O)N(R10 )2 、側氧基、鹵素、羥基、氰基、硝基、-C(=N-ORa )-C1-3 烷基、-C(=N-ORa )-H、-S(O)(NRa )-C1-3 烷基、苯基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、-O-苯基、C1-3 烷基或C1-3 鹵烷基取代)、C1-3 烷基、C2-6 炔基、C1-3 鹵烷基、C3-6 環烷基、雜環基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、側氧基、C1-3 烷基或C1-3 鹵烷基取代)及雜芳基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、-C(O)N(R10 )2 、C1-3 烷基、C1-3 烷基-O-C1-3 烷基、C1-3 烷基-OH或C1-3 鹵烷基取代)； R10 獨立地選自由以下組成之群：氫、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-6 環烷基、C5-6 環烯基、C2-6 雜烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基；其中C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-6 環烷基、C5-6 環烯基、C2-6 雜烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基可視情況經一個、兩個、三個或更多個各自獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：鹵素、羥基、-NRa C(O)-R20 、-C(O)-R20 、-C(NRa )-Rb 、-NRa Rb 、C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基及C1-6 烷氧基； R20 選自由以下組成之群：氫、羥基、鹵素、-NRa Rb 、C1-6 烷基及C1-6 烷氧基； RX1 選自由以下組成之群：氫、-(C1 -C6 )烷基及苯基；且 Ra 及Rb 各自獨立地選自由氫及C1-3 烷基組成之群。
本發明亦提供例如含有本文所述化合物之醫藥組合物。此外，本發明提供一種藉由向有需要之個體(例如人類)投與治療有效量的本文所述化合物或組合物而抑制個體之SHP2磷酸酶活性的方法。
本發明進一步提供例如一種藉由向有需要之個體投與治療有效量的本文所述化合物或組合物而治療個體之病症的方法。病症之實例包括努南症候群、嗜中性白血球減少症、糖尿病、神經母細胞瘤、黑素瘤、急性骨髓白血病、青少年白血病、青少年骨髓單核細胞性白血病、乳癌、肺癌及結腸直腸癌。除本文所述之化合物或組合物以外，此方法可包括投與治療有效量的抗體、抗體-藥物結合物、免疫調節劑或組蛋白脫乙醯基酶抑制劑。
本發明部分地基於在本申請案之實例部分中更充分描述的某些發現。舉例而言，本發明部分地基於本文所揭示化合物之發現以及此類化合物展現之SHP2磷酸酶抑制。
本發明之此等及其他實施例進一步描述於本申請案之以下部分中，包括實施方式、實例及申請專利範圍。熟習此項技術者將自本文中之揭示內容而顯而易知本發明之另外其他目標及優勢，該等目標及優勢僅為說明性的且不具有限定性。因此，一般熟習此項技術者將認識到其他實施例而不脫離本發明之精神及範疇。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2018年3月21日申請之美國臨時申請案第62/646,099號、2018年3月29日申請之美國臨時申請案第62/649,834號、2018年3月21日申請之美國臨時申請案第62/646,083號、2018年4月24日申請之美國臨時申請案第62/661,902號及2018年9月27日申請之美國臨時申請案第62/737,819號之權益及優先權，該等申請案中每一者之內容在此以全文引用之方式併入本文中。
已在以下疾病中偵測到活化的SHP2突變：青少年骨髓單核細胞性白血病(例如，Q506P)、慢性骨髓單核細胞性白血病(例如，Y63C)、神經母細胞瘤(例如，T507K)、黑素瘤(例如，R138Q)、急性骨髓白血病(例如，G503V)、乳癌、肺癌(例如，E76V)、結腸直腸癌(例如，E76G)。(M. Bentires-Alj等人,Cancer Res. 2004,64 , 8816-8820；及其中所引用之參考文獻)。
SHP2磷酸酶抑制劑揭示於例如WO 2015/107493；WO 2015/107494；WO 2015/107495；及J.G. Fortanet等人,J. Med. Chem. 2016, DOI: 10.1021/acs.jmedchem.6b00680；及其中所引用之參考文獻中。SHP2磷酸酶抑制之作用描述於例如Y.-N. P. Chen等人,Nature , 2016, doi:10.1038/nature18621；J. Wang等人,J. Clin. Invest. 2016,126 , 2077-2092；及其中所引用之參考文獻中。
本發明之化合物及/或組合物單獨或與其他治療組合可有效治療、減輕及/或抑制與SHP2磷酸酶活性有關的病症，諸如努南症候群、豹皮症候群(Leopard Syndrome)、糖尿病、神經母細胞瘤、黑素瘤、青少年白血病、青少年骨髓單核細胞性白血病(JMML)、慢性骨髓單核細胞性白血病、急性骨髓白血病、HER2陽性乳癌、三陰性乳癌、乳腺管癌、侵襲性乳腺管癌、非小細胞肺癌(包括肺腺癌)、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、嗜中性白血球減少症(柯士文症候群(Kostmann's syndrome))及全身性紅斑性狼瘡症。參見例如N. Aceto等人Nature Medicine , 2012, 28,529-538；C.M. Furcht等人Oncogene , 2013, 32, 2346-2355；V. E. Schneeberger等人Oncotarget , 2015, 6, 6191-6202；P. Cai等人,Biomedicine & Pharmacotherapy 2014, 68, 285-290；及其中所引用之參考文獻。
本文所描述之方法亦可包括另外投與治療有效量的抗體、抗體-藥物結合物、免疫調節劑或組蛋白脫乙醯基酶抑制劑。縮寫及定義
如本文所描述，本發明化合物可含有「視情況經取代」部分。一般而言，術語「經取代」無論前面是否有術語「視情況」均意謂指定部分之一或多個氫經適合的取代基替換。除非另有指示，否則「視情況經取代」之基團可在基團之各可取代位置處具有適合的取代基，且當任何既定結構中之多於一個位置可經多於一個選自指定基團之取代基取代時，在每一位置處之取代基可相同或不同。由本發明預想之取代基之組合較佳為使得形成穩定或化學上可行之化合物的彼等取代基。如本文中所用，術語「穩定」係指化合物在經受允許其產生、偵測及(在某些實施例中)其回收、純化及用於本文所揭示之一或多種目的之條件時不發生實質上改變。
「視情況經取代」之基團之可取代碳原子上之適合的單價取代基獨立地為鹵素；-(CH2 )0-4 R°；-(CH2 )0-4 OR°；-O(CH2 )0-4 Ro ；-O-(CH2 )0-4 C(O)OR°；-(CH2 )0-4 CH(OR°)2 ；-(CH2 )0-4 SR°；-(CH2 )0-4 Ph，其可經R°取代；-(CH2 )0-4 O(CH2 )0-1 Ph，其可經R°取代；-CH=CHPh，其可經R°取代；-(CH2 )0-4 O(CH2 )0-1 -吡啶基，其可經R°取代；-NO2 ；-CN；-N3 ；-(CH2 )0-4 N(R°)2 ；-(CH2 )0-4 N(R°)C(O)R°；-N(R°)C(S)R°；-(CH2 )0-4 N(R°)C(O)NR°2 ；-N(R°)C(S)NR°2 ；-(CH2 )0-4 N(R°)C(O)OR°；-N(R°)N(R°)C(O)R°；-N(R°)N(R°)C(O)NR°2 ；-N(R°)N(R°)C(O)OR°；-(CH2 )0-4 C(O)R°；-C(S)R°；-(CH2 )0-4 C(O)OR°；-(CH2 )0-4 C(O)SR°；-(CH2 )0-4 C(O)OSiR°3 ；-(CH2 )0-4 OC(O)R°；-OC(O)(CH2 )0-4 SR°；-SC(S)SR°；-(CH2 )0-4 SC(O)R°；-(CH2 )0-4 C(O)NR°2 ；-C(S)NR°2 ；-C(S)SR°；-SC(S)SR°；-(CH2 )0-4 OC(O)NR°2 ；-C(O)N(OR°)R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2 C(O)R°；-C(NOR°)R°；-(CH2 )0-4 SSR°；-(CH2 )0-4 S(O)2 R°；-(CH2 )0-4 S(O)2 OR°；-(CH2 )0-4 OS(O)2 R°；-S(O)2 NR°2 ；-(CH2 )0-4 S(O)R°；-N(R°)S(O)2 NR°2 ；-N(R°)S(O)2 R°；-N(OR°)R°；-C(NH)NR°2 ；-P(O)(OR°)R°；-P(O)R°2 ；-OP(O)R°2 ；-OP(O)(OR°)2 ；-SiR°3 ；-(C1-4 直鏈或分支鏈伸烷基)O-N(R°)2 ；或-(C1-4 直鏈或分支鏈伸烷基)C(O)O-N(R°)2 ，其中各R°可如下文所定義經取代且獨立地為氫、C1-6 脂族基、-CH2 Ph、-O(CH2 )0-1 Ph、-CH2 -(5員至6員雜芳基環)或者具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環，或不管上述定義，兩個獨立出現的R°與其插入原子一起形成具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3員至12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環，其可如下文所定義經取代。
R°(或由兩個獨立出現的R°與其插入原子一起形成之環)上之適合的單價取代基獨立地為鹵素、-(CH2 )0-2 Rl 、-(鹵基Rl )、-(CH2 )0-2 OH、-(CH2 )0-2 ORl 、-(CH2 )0-2 CH(ORl )2 、-O(鹵基Rl )、-CN、-N3 、-(CH2 )0-2 C(O)Rl 、-(CH2 )0-2 C(O)OH、-(CH2 )0-2 C(O)ORl 、-(CH2 )0-2 SRl 、-(CH2 )0-2 SH、-(CH2 )0-2 NH2 、-(CH2 )0-2 NHRl 、-(CH2 )0-2 NRl 2 、-NO2 、-SiRl 3 、-OSiRl 3 、-C(O)SRl 、-(C1-4 直鏈或分支鏈伸烷基)C(O)ORl 或-SSRl ，其中各Rl 未經取代或在前面有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地選自C1-4 脂族基、-CH2 Ph、-O(CH2 )0-1 Ph或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環。R°之飽和碳原子上之適合的二價取代基包括=O及=S。
「視情況經取代」之基團之飽和碳原子上之適合的二價取代基包括以下：=O、=S、=NNR* 2 、=NNHC(O)R* 、=NNHC(O)OR* 、=NNHS(O)2 R* 、=NR* 、=NOR* 、-O(C(R* 2 ))2-3 O-或-S(C(R* 2 ))2-3 S-，其中各獨立出現之R* 係選自氫；C1-6 脂族基，其可如下文所定義經取代；或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環。結合至「視情況經取代」之基團之鄰接可取代碳之適合的二價取代基包括：-O(CR* 2 )2-3 O-，其中各獨立出現之R* 係選自氫；C1-6 脂族基，其可如下文所定義經取代；或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環。
R* 之脂族基上之適合的取代基包括鹵素、-Rl 、-(鹵基Rl )、-OH、-ORl 、-O(鹵基Rl )、-CN、-C(O)OH、-C(O)ORl 、-NH2 、-NHRl 、-NRl 2 或-NO2 ，其中各Rl 未經取代或在前面有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地為C1-4 脂族基、-CH2 Ph、-O(CH2 )0-1 Ph或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環。
「視情況經取代」之基團之可取代氮上之適合的取代基包括-R† 、-NR† 2 、-C(O)R† 、-C(O)OR† 、-C(O)C(O)R† 、-C(O)CH2 C(O)R† 、-S(O)2 R† 、-S(O)2 NR† 2 、-C(S)NR† 2 、-C(NH)NR† 2 或-N(R† )S(O)2 R† ；其中各R† 獨立地為氫；C1-6 脂族基，其可如下文所定義經取代；未經取代之-OPh；或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環；或不管上述定義，兩個獨立出現之R† 與其插入原子一起形成具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之3員至12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環。
R† 之脂族基上之適合的取代基獨立地為鹵素、-Rl 、-(鹵基Rl )、-OH、-ORl 、-O(鹵基Rl )、-CN、-C(O)OH、-C(O)ORl 、-NH2 、-NHRl 、-NRl 2 或-NO2 ，其中各Rl 未經取代或在前面有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地為C1-4 脂族基、-CH2 Ph、-O(CH2 )0-1 Ph或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5員至6員飽和、部分不飽和或芳基環。
如本文所用，術語「異構體」係指具有相同化學式但結構或光學組態不同的化合物。如本文所用，術語「立體異構體」係指且包括具有相同分子式但原子及/或官能基之空間定位不同的異構分子。本發明化合物之所有立體異構體(例如，由於各個取代基上之不對稱碳原子而可能存在的彼等立體異構體)，包括對映異構形式及非對映異構形式，涵蓋在本發明之範疇內。
如本文所用，術語「互變異構體」為平衡存在且容易自一種異構形式轉化成另一種異構形式的兩種或更多種結構異構體中之一者。應理解，互變異構體涵蓋價互變異構體及質子互變異構體(亦稱為互變異構體)。價互變異構體包括藉由一些鍵結電子之重組相互轉化。質子互變異構體包括經由質子之遷移相互轉化，諸如酮-烯醇異構化及亞胺-烯胺異構化。
如本文所用，術語「同位素取代」係指用原子之同位素取代該原子。如本文所用，術語「同位素」係指與自然界中主要存在的原子具有相同原子數但質量數(中子數)與該等自然界中主要存在的原子之質量數不同的原子。應理解，具有同位素取代的化合物係指其中所含有的至少一個原子經其同位素取代的化合物。可經其同位素取代之原子包括(但不限於)氫、碳及氧。氫原子之同位素之實例包括2 H (亦表示為D)及3 H。碳原子之同位素之實例包括13 C及14 C。氧原子之同位素之實例包括18 O。
除非另外指明，否則如本文所用，術語「烷基」係指具有直鏈、分支鏈、單環部分或多環部分或其組合之單價脂族烴基，其中該基團視情況在直鏈、分支鏈、單環部分或多環部分或其組合之一或多個碳原子處經各碳處之一或多個取代基取代，其中該一或多個取代基獨立地為C1 -C10 烷基。「烷基」之實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、庚基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、降𦯉基及其類似基團。
如本文所用，術語「雜芳基」或「雜芳族基團」係指含有一或多個諸如氮、氧及硫之雜原子(例如一至三個雜原子)的單環芳族5員至6員環系統，或含有一或多個諸如氮、氧及硫之雜原子(例如一至三個雜原子)的8員至10員雙環不飽和或部分不飽和環系統。可能時，該雜芳基環可經由碳或氮連接至相鄰基團。雜芳基環之實例包括(但不限於)呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、噁唑、異噻唑、異噁唑、咪唑、吡唑、三唑、吡啶或嘧啶、四氫喹啉等。
術語「雜環基(heterocyclyl)」或「雜環基團(heterocyclic group)」係此項技術中公認的且係指飽和的4員至10員單環及雙環結構，包括橋連環或稠合環，且其環結構包括一至三個諸如氮、氧及硫之雜原子。可能時，雜環基環可經由碳或氮連接至相鄰基團。
術語「醫藥學上可接受之鹽」意欲包括衍生自無機酸或有機酸之鹽，該等酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、過氯酸、磷酸、甲酸、乙酸、乳酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、丁二酸、酒石酸、乙醇酸、水楊酸、檸檬酸、甲磺酸、苯磺酸、苯甲酸、丙二酸、三氟乙酸、三氯乙酸、萘-2磺酸及其他酸；以及衍生自無機鹼或有機鹼之鹽，該等鹼包括例如鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、氨、離胺酸、精胺酸、組胺酸、多羥基胺或四氟硼酸鹽。例示性醫藥學上可接受之鹽見於例如Berge, 等人 (J. Pharm. Sci. 1977, 66(1), 1；及Gould, P.L.,Int. J. Pharmaceutics 1986, 33, 201-217中(每一者在此以全文引用之方式併入)。醫藥學上可接受之鹽亦意欲涵蓋半鹽，其中化合物:酸之比率分別為2:1。例示性半鹽為衍生自包含兩個羧酸基之酸的彼等鹽，該等酸諸如蘋果酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、丁二酸、酒石酸、戊二酸、草酸、己二酸及檸檬酸。其他例示性半鹽為衍生自二質子礦物酸之彼等鹽，該等酸諸如硫酸。較佳例示性半鹽包括(但不限於)半順丁烯二酸鹽、半反丁烯二酸鹽及半丁二酸鹽。
如本文所用，術語「約」在本文中用於指大約、大致、在…左右或在…附近。當術語「約」與數值範圍結合使用時，其藉由向上及向下擴展所闡述數值之邊界來調整其範圍。一般而言，術語「約」在本文中用於藉由向上或向下(較高或較低)之20%變化來調整數值以高於及低於所述值。
如本文所用，「有效量」、「足夠量」或「治療有效量」係足以實現有益或所需結果(包括臨床結果)的化合物的量。因此，有效量可足以例如減輕或改善與SHP2磷酸酶有關的病痛之嚴重程度及/或持續時間或其一或多個症狀；預防與SHP2磷酸酶有關的病痛相關病狀或症狀之進展；或者增強或以其他方式改良另一療法之預防效果或治療效果。有效量亦包括避免或實質上減弱非所需副作用的化合物的量。
如本文所用以及此項技術中所理解，「治療」為獲得有益或所需結果(包括臨床結果)之方法。有益或所需臨床結果包括(但不限於)一或多個症狀或病狀之緩解或改善、疾病或病痛之程度減輕、疾病或病痛之狀態穩定(亦即不惡化)、疾病或病痛之擴散之預防、疾病或病痛進展之延遲或減緩、疾病或病痛狀態之改善或緩和，以及緩解(無論部分或全部)，無論可偵測或不可偵測。「治療」亦可意謂存活期與未接受治療之預期存活期相比延長。
片語「有需要」係指需要與SHP2磷酸酶活性有關的病狀之症狀或無症狀減輕或另外可藉由本發明之化合物及/或組合物緩解。
在一些實施例中，本發明提供由下式表示之式Ia或式Ib化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體：
Figure 02_image005
其中 D (在本文式X及式XI中亦描述為CyC )選自由以下組成之群：苯基；具有一個或兩個各自獨立地選自由S、O或N組成之群之雜原子的5員或6員雜芳基；及C3-6 環烷基，其中D在可用碳上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD1 之取代基取代，且在氮(若存在)上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD2 之取代基取代； U為C、CR4 或N； V為C、CR4 或N； 其中U或V中之至少一者必須為C或CR4 ； B與D稠合，使得D及B共用的兩個原子均為碳或一個原子為碳且一個原子為氮； R4 獨立地選自由以下組成之群：氫、-C(O)N(R6 )2 、-N(R6 )2 及-C1-3 烷基-N(R6 )2 ； R6 在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：H、-(C1 -C6 )烷基、-C(O)OC1-4 烷基及苯基； RD1 選自由以下組成之群：羥基、氰基、鹵素及-N(R6 )2 ； RD2 選自-(C1 -C6 )烷基及苯基； X (在本文式X及式XI中亦描述為L2 )選自由以下組成之群：鍵、-O-、-NRX1 -及-S(O)w - (其中w為0、1或2)； R1 (在本文式X及式XI中亦描述為R2 )為選自由以下組成之群之環部分：8員至12員雙環雜芳基、苯基、5員至7員單環雜芳基及4員至7員雜環基，其中該環部分可視情況經一個、兩個或更多個各自獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：R10 、-OR10 、-S(O)w R10 (其中w為0、1或2)、-C1-6 烷基-S(O)w -C1-3 烷基、-N(R10 )2 、-N(CO)R10 、-N-S(O)w -R10 (其中w為0、1或2)、-OS(O)w -R10 (其中w為0、1或2)、-S(O)w -N(R10 )2 (其中w為0、1或2)、-S(O)(NH)R10 、-N(H)-SO2 -C1-3 烷基、-N(SO2 -C1-3 烷基)2 、P(O)(R10 )2 、-C(O)R10 、-C(O)OR10 、-C(O)N(R10 )2 、側氧基、鹵素、羥基、氰基、硝基、-C(=N-ORa )-C1-3 烷基、-C(=N-ORa )-H、-S(O)(NRa )-C1-3 烷基、苯基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、-O-苯基、C1-3 烷基或C1-3 鹵烷基取代)、C1-3 烷基、C2-6 炔基、C1-3 鹵烷基、C3-6 環烷基、雜環基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、側氧基、C1-3 烷基或C1-3 鹵烷基取代)及雜芳基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、-C(O)N(R10 )2 、C1-3 烷基、C1-3 烷基-O-C1-3 烷基、C1-3 烷基-OH或C1-3 鹵烷基取代)； R10 獨立地選自由以下組成之群：氫、C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-6 環烷基、C5-6 環烯基、C2-6 雜烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基；其中C1-6 烷基、C2-6 烯基、C2-6 炔基、C3-6 環烷基、C5-6 環烯基、C2-6 雜烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基可視情況經一個、兩個、三個或更多個各自獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：鹵素、羥基、-NRa C(O)-R20 、-C(O)-R20 、-C(NRa )-Rb 、-NRa Rb 、C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基及C1-6 烷氧基； R20 選自由以下組成之群：氫、羥基、鹵素、-NRa Rb 、C1-6 烷基及C1-6 烷氧基； RX1 選自由以下組成之群：氫、-(C1 -C6 )烷基及苯基；且 Ra 及Rb 各自獨立地選自由氫及C1-3 烷基組成之群。
在一些實施例中，D選自由以下組成之群：
Figure 02_image007
Figure 02_image009
； 其中*及+表示與環B之連接稠合點。
在一些實施例中，X為鍵，R1 為含氮環部分且R1 經由氮鍵結。
在一些實施例中，R1 選自由以下組成之群：1,2,3,4-四氫喹啉-1-基、1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基、1,2,3,4-四氫喹啉-1-基、1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基、1,2,3,4-四氫吡啶并[2,3-b ]吡嗪-1-基、1H -苯并[d ]咪唑-1-基、吲哚啉-1-基、2,3-二氫-1H-吡咯并[3,2-b ]吡啶-1-基、2,3-二氫-1H -吡咯并[3,2-c ]吡啶-1-基、異吲哚啉-2-基、2,3,4,5-四氫苯并[f ][1,4]噁氮呯-4-基、2-(3,4-二氫異喹啉-1(2H )-酮)、2-(3,4-二氫異喹啉-1(2H )-酮)、2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-基、哌啶-1-基、1-(1,2,3,4-四氫-6H -吡啶并[1,2-a ]嘧啶-6-酮)、1,2,3,4-四氫-1,8-㖠啶-1-基、1-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-2(1H )-酮)、2,3,4,5-四氫-1H -苯并[b ]氮呯-1-基、1-(2,3-二氫喹啉-4(1H )-酮)、2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-基、1,2,3,4-四氫-1,6-㖠啶-1-基、5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ][1,3]二氮呯-4-基、3,4-二氫喹喏啉-1-基-2(1H )-酮、2,3,4,6-四氫-1,6-㖠啶-1-基-5(1H )-酮、1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基、1,2,3,4-四氫-2,7-㖠啶-2-基、1,2,3,4-四氫-2,6-㖠啶-2-基、3,4-二氫-2H -苯并[b ][1,4]噻嗪-4-基1 1-二氧化物、1,2,3,4-四氫吡嗪并[2,3-d ]噠嗪-1-基、1,4-二氫吡啶并[3,4-b]吡嗪-1-基-3(2H )-酮、5,6,7,8-四氫-1,6-㖠啶-6-基、5,6,7,8-四氫-1,7-㖠啶-7-基、1,2,3,4-四氫吡啶并[3,4-b ]吡嗪-1-基、5,8-二氫喋啶-5-基-7(6H )-酮、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-b ]吡啶-4-基或5,6,7,8-四氫吡嗪并[2,3-c ]噠嗪-5-基，其中氮環部分可視情況經一個或兩個各自獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：Cl、F、-CN、C1-4 烷基、-OC1-4 烷基、C2-6 烯基、C2-4 炔基、C3-6 環烷基、C5-6 環烯基、-C(H)=N-OCH3 、-C(H)=N-OH、-C(CH3 )=N-OH、-(CH2 )0-1 C(O)NH2 、-(CH2 )0-1 C(O)NHC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)N(C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-1 C(O)OC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)OH、-S(O)2 C1-4 烷基、-(CH2 )0-1 NH2 、-(CH2 )0-1 NHC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 (C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-1 NH(CO)C1-4 烷基、苯基、視情況經取代之雜芳基及視情況經取代之雜環基，其中C1-4 烷基或C3-6 環烷基可視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代。
在一些實施例中，雜芳基選自由以下組成之群：2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、1,2,4-三唑-3-基、噻唑-2-基、吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、咪唑-2-基、噁唑-2-基、噁唑-5-基、異噁唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、1,3,4-噻二唑-2-基及1,2,4-噁二唑-3-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-三唑-2-基、1,3,4-三唑-2-基；其中雜芳基可視情況經C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個2羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)取代。
在一些實施例中，雜環基選自由以下組成之群：四氫呋喃-3-基、吡咯啶-1-基、哌嗪-1-基、哌啶-4-基、哌啶-1-基、1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、2,5-二氫呋喃-3-基、哌嗪-1-基-3-酮、N-嗎啉基、四氫哌喃-2-基或1,2,4-噁二唑-3-基-5-酮，其中雜環基可視情況經羥基或C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個2羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)取代。
在一些實施例中，R1 為1,2,3,4-四氫喹啉部分(其視情況經一個、兩個或三個鹵基、C1-3 烷基或C1-3 鹵烷基取代)、C1-3 烷基、C1-3 鹵烷基及雜芳基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、C1-3 烷基、C1-3 烷基-O-C1-3 烷基、C1-3 烷基-OH或C1-3 鹵烷基取代)。
在一些實施例中，R1 為1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶部分(其視情況經一個、兩個或三個鹵基取代)、C1-3 烷基、C1-3 鹵烷基及雜芳基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、-C(O)N(R10 )2 、C1-3 烷基、C1-3 烷基-O-C1-3 烷基、C1-3 烷基-OH或C1-3 鹵烷基取代)。
在一些實施例中，R1 為1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶部分(其視情況經一個、兩個或三個鹵基取代)、C1-3 烷基、C1-3 鹵烷基及雜芳基(其視情況經一個、兩個或三個鹵素、-C(O)N(R10 )2 、C1-3 烷基、C1-3 烷基-O-C1-3 烷基、C1-3 烷基-OH或C1-3 鹵烷基取代)。
在一些實施例中，R1 為苯基；其中苯基可視情況經一個、兩個或三個各自獨立地選自由-OR10 、鹵素及氰基組成之群之取代基取代。
在一些實施例中，R1 為吡啶基；其中吡啶基可視情況經一個、兩個或三個各自獨立地選自由-OR10 、鹵素及氰基組成之群之取代基取代。
在一些實施例中，R1 為吲哚基或吲哚啉基，其中吲哚基或吲哚啉基可視情況經一個、兩個或三個各自獨立地選自由-OR10 、鹵素及氰基組成之群之取代基取代；且其中吲哚基或吲哚啉基經由碳鍵結。
本文亦揭示例如式II化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中式II由下式表示：
Figure 02_image011
； 其中： D選自由以下組成之群：苯基；具有一個或兩個獨立地選自由S、O或N組成之群之雜原子的5員或6員雜芳基；及C3-6 環烷基，其中D在碳上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD1 之取代基取代，且在氮(若存在)上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD2 之取代基取代； B與D稠合，使得D及B共用的兩個原子均為碳； Z2 選自由CR22 及N組成之群； Z1 選自由以下組成之群：NR61 、C(R23 )2 、C(O)及O； R21 選自由以下組成之群：氫、鹵素、氰基、羥基、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C3 -C6 環烷基、C1 -C6 烷氧基、-C(O)N(R6 )2 、雜環烷基、苯基及雜芳基，其中C1 -C6 烷基、C3 -C6 環烷基、C1 -C6 烷氧基、雜環烷基、苯基及雜芳基可各自經一個、兩個或三個或更多個各自選自由以下組成之群之取代基取代：鹵基、-C(O)-OR26 、-C(O)R26 、-C(O)N(R6 )2 、-N(R6 )2 、C1-3 烷基(其視情況經羥基或甲氧基取代)、C1 -C3 烷氧基及C1-3 鹵烷基； R29 選自由以下組成之群：氫、鹵素、氰基、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C3 -C6 環烷基、C1 -C6 烷氧基、-C(O)N(R6 )2 、雜環烷基、苯基及雜芳基，其中C1 -C6 烷基、C3 -C6 環烷基、C1 -C6 烷氧基、雜環烷基、苯基及雜芳基可各自經一個、兩個或三個或更多個各自選自由以下組成之群之取代基取代：鹵基、-C(O)R26 、C(O)-OR26 、-C(O)N(R6 )2 、N(R6 )2 、C1-3 烷基(其視情況經羥基或甲氧基取代)及C1-3 鹵烷基； R22 在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、氰基、羥基、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C3 -C6 環烷基、C1 -C6 烷氧基、-C(O)N(R6 )2 、雜環烷基、苯基及雜芳基，其中C1 -C6 烷基、C3 -C6 環烷基、C1 -C6 烷氧基、雜環烷基、苯基及雜芳基可各自經一個、兩個或三個或更多個各自選自由以下組成之群之取代基取代：鹵基、-C(O)-OR26 、C(O)R26 、-C(O)N(R6 )2 、N(R6 )2 、C1-3 烷基(其視情況經羥基或甲氧基取代)、C1 -C2 烷氧基及C1-2 鹵烷基； R23 在每次出現時獨立地選自由H、鹵素及C1 -C6 烷基組成之群； R24 選自由H、鹵素及C1 -C6 烷基組成之群； R26 選自由氫及C1-3 烷基組成之群； R4 獨立地選自由以下組成之群：氫、-C(O)N(R6 )2 及-N(R6 )2 ； R6 在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、-(C1 -C6 )烷基及苯基； R61 選自由以下組成之群：氫、-(C1 -C6 )烷基、-C(O)-(C1 -C6 )烷基、C3-6 環烷基(其視情況經一個或兩個羥基、C1-2 烷基及C1-2 烷氧基取代)及苯基； RD1 選自由以下組成之群：羥基、氰基、鹵素及-N(R6 )2 ；且 RD2 選自-(C1 -C6 )烷基及苯基。
在一些實施例中，D選自由以下組成之群：
Figure 02_image013
Figure 02_image015
； 其中*及+表示與環B之連接稠合點。
在一些實施例中，Z2 為N。在一些實施例中，Z2 為CH。在一些實施例中，Z1 為C(R23 )2 。
在一些實施例中，R23 在每次出現時為氫。在一些實施例中，R23 在每次出現時為甲基。
在一些實施例中，R22 及R24 在每次出現時為氫。
在一些實施例中，R21 選自由以下組成之群：氫、鹵素、CF3 、N(R6 )2 、C(O)N(R6 )2 、雜芳基及苯基。在一些實施例中，R21 為C(O)NHCH3 。
在一些實施例中，R21 為雜芳基。在一些實施例中，R21 選自由以下組成之群：
Figure 02_image017
Figure 02_image019
。
在一些實施例中，R21 為氫。
本文亦揭示例如由下式表示之式III化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體：
Figure 02_image021
； 其中： A (本文針對式X及式XI亦描述為R2 ，其中式X及式XI之L2 為共價鍵)選自由以下組成之群：
Figure 02_image023
； 其中： R17 選自由以下組成之群：H、Cl、F、CHF2 、CF3 、-CN、C1-4 烷基、C3-6 環烷基、C5-6 環烯基、-OC1-4 烷基、-O-雜芳基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、-C=N-OC1-4 烷基、-C=N-OH、-C(C1-4 烷基)=N-OH、-(CH2 )0-1 C(O)NH2 、-(CH2 )0-1 C(O)NHC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)NHC1-4 烷基-雜芳基、-(CH2 )0-1 C(O)N(C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-1 C(O)OC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)OH、-(CH2 )0-1 S(O)2 C1-4 烷基、-(CH2 )0-1 NH2 、-(CH2 )0-1 NHC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 (C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-1 NH(CO)C1-4 烷基、苯基、雜芳基及雜環基， 其中雜芳基及O-雜芳基可視情況經一或多個C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)取代；且 其中雜環基可視情況經一或多個羥基或C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)取代； R18 選自由以下組成之群：H、Cl、F、-CN、NO2 、C1-4 烷基、C3-4 環烷基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、-OC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)NH2 、-(CH2 )0-1 C(O)NHC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)N(C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-1 C(O)OC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 C(O)OH、NH2 、-NHC(O)C1-4 烷基、-NHS(O)2 C1-4 烷基、-N(S(O)2 C1-4 烷基)2 、-N(C1-4 烷基)S(O)2 C1-4 烷基、-N=S(O)(C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-1 SC1-4 烷基、-(CH2 )0-1 S(O)C1-4 烷基、-(CH2 )0-1 S(O)2 C1-4 烷基、-S(O)2 C3-4 環烷基、-S(O)2 雜芳基、-S(O)(=NH)C1-4 烷基、-S(O)(=NC1-4 烷基)C1-4 烷基、苯基、雜芳基及雜環基； 其中苯基、雜芳基及雜環基可視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群之基團取代：F、C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)、環丙基、-C(O)NH2 、-C(O)NHC1-4 烷基、-C(O)N(C1-4 烷基)2 、-C(O)OC1-4 烷基及-C(O)OH； R19 及R20 中之每一者獨立地選自由H及-C1-4 烷基組成之群；或 R19 及R20 與其所連接之碳原子一起形成可視情況經一個或兩個氟原子取代的C2-4 烯基部分； R21 選自由以下組成之群：H、C1-4 烷基、-C3-4 環烷基、-(CH2 )0-4 C(O)C1-4 烷基、-(CH2 )0-4 C(O)OC1-4 烷基、-(CH2 )0-4 C(O)NH2 、-(CH2 )0-4 C(O)NHC1-4 烷基、-(CH2 )0-4 C(O)N(C1-4 烷基)2 、-(CH2 )0-4 S(O)2 C1-4 烷基及雜環基； 其中R17 、R18 、R19 、R20 或R21 之各C1-4 烷基、C2-4 烯基、C2-4 炔基、C3-4 環烷基、C3-6 環烷基或C5-6 環烯基可視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代； R6 在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：H、-(C1 -C6 )烷基、-C(O)OC1-4 烷基及苯基； R4 獨立地選自由以下組成之群：氫、-C(O)N(R6 )2 及-N(R6 )2 ； D選自由以下組成之群：苯基；具有一個或兩個獨立地選自由S、O或N組成之群之雜原子的5員或6員雜芳基；及C3-6 環烷基，其中D在碳上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD1 之取代基取代，且在氮(若存在)上視情況經一個或兩個各自獨立地選自RD2 之取代基取代； B與D稠合，使得D及B共用的兩個原子均為碳； RD1 選自由以下組成之群：羥基、氰基、鹵素及-N(R6 )2 ；且 RD2 選自-(C1 -C6 )烷基及苯基。
在一些實施例中，R17 選自由以下組成之群：2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、1,2,4-三唑-3-基、噻唑-2-基、吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、咪唑-2-基、噁唑-2-基、噁唑-5-基、異噁唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、1,3,4-噻二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-三唑-2-基及1,3,4-三唑-2-基；其中R17 可視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代。
在一些實施例中，R17 選自由以下組成之群：四氫呋喃-3-基、吡咯啶-1-基、哌嗪-1-基、哌啶-4-基、哌啶-1-基、1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、2,5-二氫呋喃-3-基、哌嗪-1-基-3-酮、N-嗎啉基、四氫哌喃-2-基及1,2,4-噁二唑-3-基-5-酮；其中R17 可視情況經一或多個羥基或C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)取代。
在一些實施例中，R18 選自由以下組成之群：苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、噻唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基及1,3,4-噁二唑-2-基；其中R18 可視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群之基團取代：F、C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)、環丙基、-C(O)NH2 、-C(O)NHC1-4 烷基、-C(O)N(C1-4 烷基)2 、-C(O)OC1-4 烷基及-C(O)OH。
在一些實施例中，R18 選自由以下組成之群：-(CH2 )0-1 -(N-嗎啉基)、四氫哌喃基、四氫呋喃基、環氧乙烷基、異噻唑啶-2-基-1,1-二氧化物及-(CH2 )0-1 -噁唑啶-3-基-2-酮；其中R18 可視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群之基團取代：F、C1-2 烷基(其視情況經一個、兩個或三個氟原子、一個或兩個羥基或者一個或兩個-OC1-2 烷基取代)、環丙基、-C(O)NH2 、-C(O)NHC1-4 烷基、-C(O)N(C1-4 烷基)2 、-C(O)OC1-4 烷基及-C(O)OH。
在一些實施例中，R19 為-CH3 或-CHF2 ，R20 為H，且R19 及R20 所連接之碳具有(R )組態。在一些實施例中，R19 為H，R20 為-CH3 或-CHF2 ，且R19 及R20 所連接之碳具有(S )組態。
在一些實施例中，D選自由以下組成之群：
Figure 02_image025
Figure 02_image027
； 其中*及+表示與環B之連接稠合點。
在一些實施例中，本發明提供一種式X化合物；
Figure 02_image029
或其醫藥學上可接受之鹽，其中； X為-CH2 -、-CH(RX )-、-C(RX )2 -、-C(O)-、-NH-、-N(RX )-或-O-； Y為C、CH、C(RY )或N； 當Y為CH、C(RY )或N時，
Figure 02_image031
為單鍵；或當Y為C時，
Figure 02_image033
為雙鍵； R1 為L1 -CyB -L2 -R2 ； CyB 為苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的單環5員至6員雜芳基；或具有1至5個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的雙環8員至10員雜芳基；其中CyB 經m個R3 之例項取代； CyC 為苯并；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基并；3員至7員飽和或部分不飽和稠合環脂族基；或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；其中在CyC 為雜環或雜芳基并時，該等雜原子可出現在CyC 內的任何位置處；且其中在每一情況下CyC 經n個R4 之例項取代； L1 為共價鍵或-C(O)-； L2 為共價鍵或C1-4 二價飽和或不飽和的直鏈或分支鏈烴鏈，其中該鏈之一個或兩個亞甲基單元視情況且獨立地經以下替換：-CH(RL )-、-C(RL )2 -、C3-5 伸環烷基、-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2 -、-S(O)2 N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2 -； R2 為氫、RA 或RB ，且在R2 為RB 時，R2 經q個RC 之例項取代； R3 、R4 、RX 、RY 及RL 之各例項獨立地為RA 或RB 且經r個RC 之例項取代； R5 之各例項獨立地為RA 或RB 且經r個RC 之例項取代；或兩個R5 之例項與其插入原子一起形成3員至6員碳環稠環或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至6員雜環稠環； RA 之各例項獨立地為側氧基、鹵素、-CN、-NO2 、-OR、-SR、-NR2 、-S(O)2 R、-S(O)2 NR2 、-S(O)R、-S(O)NR2 、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2 、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2 、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2 、-N(R)C(NR)NR2 、-N(R)S(O)2 NR2 或-N(R)S(O)2 R； RB 之各例項獨立地為C1-6 脂族基；苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；3員至7員飽和或部分不飽和碳環；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環；或具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環； RC 之各例項獨立地為側氧基、鹵素、-CN、-NO2 、-OR、-SR、-NR2 、-S(O)2 R、-S(O)2 NR2 、-S(O)R、-S(O)NR2 、-OS(O)2 F、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2 、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2 、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2 、-N(R)C(NR)NR2 、-N(R)S(O)2 NR2 、-N(R)S(O)2 R或視情況經取代的選自以下之基團：C1-6 脂族基；苯基；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；及具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基環； 各R獨立地為氫或視情況經取代的選自以下之基團：C1-6 脂族基；苯基；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；及具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基環，或： 同一氮上之兩個R基團與其插入原子一起形成除該氮以外，具有0至3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的4員至7員飽和、部分不飽和或雜芳基環； b及c中之每一者獨立地為0或1；且 a、m、n、q及r中之每一者獨立地為0、1、2、3或4； 其中該化合物不為
Figure 02_image035
Figure 02_image037
。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image039
Figure 02_image041
， 其中X、Y、R1 、R4 、R5 、a、b、c及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，CyB 選自由以下組成之群：
Figure 02_image043
Figure 02_image045
， 其中CyB 經m個R3 之例項取代。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image047
Figure 02_image049
， 其中CyC 、X、Y、L2 、R2 、R3 、R5 、a、b及c中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image051
， 其中CyC 、Y、R1 、R5 、a、b及c中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image053
， 其中CyC 、X、Y、R1 、R5 、a、b及c中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image055
， 其中CyC 、Y、R1 、R5 及a中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image057
， 其中CyC 、Y及R1 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image059
， 其中CyC 及R1 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，變數a為2。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，兩個R5 之例項與其插入原子一起形成3員至6員碳環稠環或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至6員雜環稠環。
在一些實施例中，本發明提供一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
Figure 02_image061
， 其中CyC 及R1 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
Figure 02_image063
， 其中CyC 及R1 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image065
， 其中CyC 、X、L2 及R2 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image067
Figure 02_image069
其中X、L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image071
Figure 02_image073
其中X、L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image075
Figure 02_image077
其中X、L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image079
其中L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image081
其中L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image083
其中L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image085
Figure 02_image087
其中L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image089
Figure 02_image091
其中L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，一種本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
Figure 02_image093
Figure 02_image095
其中L2 、R2 、R3 、R4 及n中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，R3 之至少一個例項為-CH3 、-CHF2 、-CH2 OH、-CH(CH3 )OH或環丙基。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，X為-CH2 -。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，X為-O-。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，CyC 為苯并。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，CyC 為具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基并。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，Y為-N-。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，Y為-CH2 -。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L1 為共價鍵。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L1 為-C(O)-。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L2 為共價鍵。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L2 為-S-。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L2 為-O-。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L2 為-C(O)-。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，L2 為C1-3 脂族基。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，n為1、2、3或4。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，n為0。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R4 之至少一個例項為氟。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為C1-6 脂族基；苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；3員至7員飽和或部分不飽和碳環；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環；或具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環；其中R2 經q個RC 之例項取代。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為經q個RC 之例項取代的C1-6 脂族基。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為經q個RC 之例項取代的苯基。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為經q個RC 之例項取代的具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為經q個RC 之例項取代的3員至7員飽和或部分不飽和碳環。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為經q個RC 之例項取代的具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為經q個RC 之例項取代的具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為：
Figure 02_image097
Figure 02_image099
、異丙基、乙基或甲基，其各自經q個RC 之例項取代。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為：
Figure 02_image101
，其各自經q個RC 之例項取代。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為：
Figure 02_image103
，其各自經q個RC 之例項取代。
在一些實施例或其醫藥學上可接受之鹽中，R2 為：
Figure 02_image105
。
在一些實施例中，本發明提供一種式XI化合物：
Figure 02_image107
或其醫藥學上可接受之鹽，其中； X為-CH2 -、-CH(RX )-、-C(RX )2 -、-C(O)-、-NH-、-N(RX )-或-O-； Y為CH、C(RY )或N； Z為-CH2 -、-CH(RZ )-、-C(RZ )2 -、-NH-、-N(RZ )-或-O-； CyB 為苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的單環5員至6員雜芳基；或具有1至5個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的雙環8員至10員雜芳基；其中CyB 經m個R3 之例項取代； CyC 為苯并；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基并；3員至7員飽和或部分不飽和稠合環脂族基；或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；其中在CyC 為雜環或雜芳基并時，該等雜原子可出現在CyC 內的任何位置處；且其中在每一情況下CyC 經n個R4 之例項取代； L2 為共價鍵或C1-4 二價飽和或不飽和的直鏈或分支鏈烴鏈，其中該鏈之一個或兩個亞甲基單元視情況且獨立地經以下替換：-CH(RL )-、-C(RL )2 -、C3-5 伸環烷基、-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2 -、-S(O)2 N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2 -； R2 為氫、RA 或RB ，且在R2 為RB 時，R2 經q個RC 之例項取代； R3 、R4 、RX 、RY 、RZ 及RL 之各例項獨立地為RA 或RB 且經r個RC 之例項取代； R5 之各例項獨立地為RA 或RB 且經r個RC 之例項取代；或兩個R5 之例項與其插入原子一起形成3員至6員碳環稠環或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至6員雜環稠環； RA 之各例項獨立地為側氧基、鹵素、-CN、-NO2 、-OR、-SR、-NR2 、-S(O)2 R、-S(O)2 NR2 、-S(O)R、-S(O)NR2 、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2 、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2 、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2 、-N(R)C(NR)NR2 、-N(R)S(O)2 NR2 或-N(R)S(O)2 R； RB 之各例項獨立地為C1-6 脂族基；苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；3員至7員飽和或部分不飽和碳環；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環；或具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環； RC 之各例項獨立地為側氧基、鹵素、-CN、-NO2 、-OR、-SR、-NR2 、-S(O)2 R、-S(O)2 NR2 、-S(O)R、-S(O)NR2 、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2 、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2 、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2 、-N(R)C(NR)NR2 、-N(R)S(O)2 NR2 、-N(R)S(O)2 R或視情況經取代的選自以下之基團：C1-6 脂族基；苯基；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；及具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基環； 各R獨立地為氫或視情況經取代的選自以下之基團：C1-6 脂族基；苯基；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；及具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基環，或： 同一氮上之兩個R基團與其插入原子一起形成除該氮以外，具有0至3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的4員至7員飽和、部分不飽和或雜芳基環； b及c中之每一者獨立地為0或1；且 a、m、n、q及r中之每一者獨立地為0、1、2、3或4
在一些實施例中，本發明提供一種式XI化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
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其中CyC 、CyB 、X、Y、Z、R3 、L2 及R2 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種式XI化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
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， 其中CyC 、R3 、L2 及R2 中之每一者如本文中之實施例及類別以及子類別中所定義。 本發明之化合物之實例包括本文中之表及範例中所列的彼等化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或立體異構體混合物。在一些實施例中，本發明包含選自表1中所描繪之彼等化合物的化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或立體異構體混合物：表 1 . 本發明之代表性化合物.
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本發明之化合物或組合物可適用於得益於SHP2磷酸酶之抑制的應用。舉例而言，SHP2磷酸酶之抑制可提供用於治療癌症之治療方法。(參見例如Y.-N. P. Chen等人,Nature , 2016, doi:10.1038/nature18621；及其中所引用之參考文獻；其中之每一者在此以全文引用之方式併入)。亦已發現SHP2磷酸酶之抑制改善全身性紅斑性狼瘡症之病原性。(參見例如J. Wang等人,J. Clin. Invest. 2016,126 , 2077-2092；及其中所引用之參考文獻；其中之每一者在此以全文引用之方式併入)。
在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可適用於抑制腫瘤細胞生長。在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可適用於改善全身性紅斑性狼瘡症之病原性。在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可適用於治療各種其他病症，包括神經纖維瘤(例如，1型神經纖維瘤(NF1)、努南症候群(NS))、糖尿病、神經母細胞瘤、黑素瘤(參見Hill等人, Mol. Cancer Res. 2019,17 , 583-593)、青少年白血病、青少年骨髓單核細胞性白血病(JMML，參見Yu等人, Mol. Cancer Ther. 2013,12 , 1738-1748)、慢性骨髓單核細胞性白血病、急性骨髓白血病、HER2陽性乳癌(參見Hu等人, Oncol Rep. 2014; 32(1):205-12；及Zhao等人, Oncogene, doi: 10.1038/s41388-018-0574-8)、三陰性乳癌(參見Sausgruber等人, Oncogene, 2015,34 , 2272-2278)、乳腺管癌、侵襲性乳腺管癌、非小細胞肺癌(包括肺腺癌，參見Nichols等人, 2018, Nat. Cell Biol.20 , 1064-1073；及Mainardi等人, 2018, Nat Med. 24(4): 512-517)、結腸直腸癌、食道癌(Qi等人, 2017, Int. J. Mol. Sci.18 , 134)、胃癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、嗜中性白血球減少症(柯士文症候群)、卵巢癌(參見Sun等人, 2019, Am J Cancer Res.;9(1):145-159)、FGFR1擴增型/突變型癌症(例如，FGFR1擴增型或突變型乳癌、肺癌或前列腺癌)、FGFR2擴增型癌症(例如，FGFR2擴增型胃癌)、FGFR2融合型/突變型癌症(例如，FGFR2融合型/突變型膽管癌)或FGFR3融合型/突變型癌症(例如，FGFR3融合型或突變型膀胱癌)。在一些實施例中，所治療之病症為增生性病症。在一些實施例中，所治療之病症為實體腫瘤。在一些實施例中，所治療之病症為神經纖維瘤(例如，1型神經纖維瘤(NF1)、努南症候群(NS))。在一些實施例中，所治療之病症為糖尿病。在一些實施例中，所治療之病症為神經母細胞瘤。在一些實施例中，所治療之病症為黑素瘤。在一些實施例中，所治療之病症為血液癌症。在一些實施例中，所治療之病症為青少年白血病。在一些實施例中，所治療之病症為青少年骨髓單核細胞性白血病(JMML)。在一些實施例中，所治療之病症為慢性骨髓單核細胞性白血病。在一些實施例中，所治療之病症為急性骨髓白血病。在一些實施例中，所治療之病症為乳癌。在一些實施例中，所治療之病症為HER2陽性乳癌。在一些實施例中，所治療之病症為三陰性乳癌。在一些實施例中，所治療之病症為乳腺管癌。在一些實施例中，所治療之病症為侵襲性乳腺管癌。在一些實施例中，所治療之病症為非小細胞肺癌(包括肺腺癌)。在一些實施例中，所治療之病症為結腸直腸癌。在一些實施例中，所治療之病症為食道癌。在一些實施例中，所治療之病症為胃癌。在一些實施例中，所治療之病症為頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)。在一些實施例中，所治療之病症為嗜中性白血球減少症(例如，柯士文症候群)。在一些實施例中，所治療之病症為卵巢癌。在一些實施例中，所治療之病症為FGFR1擴增型/突變型癌症(例如，FGFR1擴增型或突變型乳癌、肺癌或前列腺癌)。在一些實施例中，所治療之病症為FGFR2擴增型癌症(例如，FGFR2擴增型胃癌)。在一些實施例中，所治療之病症為FGFR2融合型/突變型癌症(例如，FGFR2融合型/突變型膽管癌)。在一些實施例中，所治療之病症為FGFR3融合型/突變型癌症(例如，FGFR3融合型或突變型膀胱癌)。
在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可與其他治療及/或癌症療法組合使用。舉例而言，本發明之化合物或組合物可與以下(但不限於以下)組合使用：抗體、抗體-藥物結合物、激酶抑制劑、免疫調節劑及組蛋白脫乙醯基酶抑制劑。本發明之化合物或組合物亦可與如以下文獻中所揭示之其他治療及/或癌症療法組合使用：WO 2015/107495；及其中所引用之參考文獻；其中之每一者在此以全文引用之方式併入。
舉例而言，本文所揭示之化合物(或含有該等化合物之醫藥組合物)可單獨或與另一治療劑組合用於治療本文所提及疾病中之一或多者。舉例而言，在一些實施例中，所提供之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與以下藥劑中之一或多者組合使用：BCR-ABL抑制劑：例如伊馬替尼(imatinib)、伊尼羅替尼(inilotinib)、尼羅替尼(nilotinib)、達沙替尼(dasatinib)、伯舒替尼(bosutinib)、普納替尼(ponatinib)、巴氟替尼(bafetinib)、達魯舍替(danusertib)、塞卡替尼(saracatinib)、PF03814735；ALK抑制劑(參見Dardaei等人, 2018, Nat Med.; 24(4):512-517)：例如克唑替尼、NVP-TAE684、色瑞替尼(ceritinib)、艾樂替尼(alectinib)、布加替尼(brigatinib)、恩曲替尼(entrecinib)、勞拉替尼(lorlatinib)；BRAF抑制劑(參見Prahallad等人, 2015, Cell Rep. 12, 1978-1985)：例如維羅非尼(vemurafenib)、達拉非尼(dabrafenib)；FGFR抑制劑：例如英非替尼(infigratinib)、多韋替尼(dovitinib)、厄達替尼(erdafitinib)、BLU-554、AZD4547；FLT3抑制劑：例如舒尼替尼(sunitinib)、米哚妥林(midostaurin)、坦度替尼(tanutinib)、索拉非尼(sorafenib)、來他替尼(lestaurtinib)、喹雜替尼(quizartinib)及克諾拉尼(crenolanib)；MEK抑制劑(參見Fedele等人, 2018, BioRxiv 307876；Torres-Ayuso等人, 2018, Cancer Discov. 8, 1210-1212；及Wong等人, 2016, Oncotarget. 2016年10月4日; 7(40): 65676-65695)：例如曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib)、畢尼替尼(binimetinib)、司美替尼；ERK抑制劑：例如優立替尼(ulixertinib)、MK-8353、LY-3214996；VEGF受體抑制劑：例如貝伐單抗(bevacizumab)、阿西替尼(axitinib)、阿柏西普(aflibercept)、布立尼布(brivanib)、莫替沙尼(motesanib)、帕瑞肽(pasireotide)、索拉非尼；酪胺酸激酶抑制劑：例如埃羅替尼、立尼法尼(linifanib)、舒尼替尼、帕唑帕尼(pazopanib)；表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑：吉非替尼(gefitnib)、奧希替尼(osimertinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)；HER2受體抑制劑：例如曲妥珠單抗(trastuzumab)、來那替尼(neratinib)、拉帕替尼(lapatinib)；MET抑制劑：例如克唑替尼、卡博替尼(cabozantinib)；CD20抗體：例如利妥昔單抗(rituximab)、托西莫單抗(tositumomab)、奧法木單抗(ofatumumab)；DNA合成抑制劑：例如卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱(gemcitabine)、奈拉濱(nelarabine)、羥基脲；抗贅生性藥劑：例如奧沙利鉑(oxaliplatin)、順鉑(cisplatin)；HER二聚化抑制劑：例如帕妥珠單抗(pertuzumab)；人類顆粒球群落刺激因子(G-CSF)調節劑：例如非格司亭(filgrastim)；免疫調節劑：例如阿托珠單抗(afutuzumab)、來那度胺(lenalidomide)、沙立度胺(thalidomide)、泊利度胺(pomalidomide)；CD40抑制劑：例如達西珠單抗(dacetuzumab)；促凋亡受體促效劑(PARA)：例如杜拉樂明(dulanermin)；熱休克蛋白(HSP)抑制劑：例如坦螺旋黴素(tanespimycin) (17-烯丙基胺基-17-去甲氧基格爾德黴素(17-allylamino-17-desmethoxygeldanamycin))；刺蝟蛋白(Hedgehog)拮抗劑：例如維莫德吉(vismodegib)；蛋白酶體抑制劑：例如硼替佐米(bortezomib)；PI3K抑制劑：例如皮克昔布(pictilisib)、達妥昔布(dactolisib)、布帕昔布(buparlisib)、泰尼昔布(taselisib)、艾德昔布(idelalisib)、杜維昔布(duvelisib)、溫布昔布(umbralisib)；磷脂酶A2抑制劑：例如阿那格雷(anagrelide)；BCL-2抑制劑：例如維奈托克(venetoclax)；芳香酶抑制劑：依西美坦(exemestane)、來曲唑(letrozole)、阿那曲唑(anastrozole)、芙仕得(faslodex)、他莫昔芬(tamoxifen)；拓樸異構酶I抑制劑：例如伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(topotecan)；拓樸異構酶II抑制劑：例如依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)；mTOR抑制劑：例如替西羅莫司(temsirolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、依維莫司(everolimus)、西羅莫司(sirolimus)；破骨細胞性骨骼再吸收抑制劑：例如唑來膦酸(zoledronic acid)；CD33抗體藥物結合物：例如吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin)；CD22抗體藥物結合物：例如奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)；CD20抗體藥物結合物：例如替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)；生長抑素類似物：例如奧曲肽(octreotide)；介白素-11 (IL-11)：例如奧普瑞介白素(oprelvekin)；合成性紅血球生成素：例如阿法達貝泊汀(darbepoetin alfa)；核因子κ B受體活化因子(RANK)抑制劑：例如地諾單抗(denosumab)；血小板生成素模擬肽：例如羅米司亭(romiplostim)；細胞生長刺激劑：例如帕利夫明(palifermin)；抗類胰島素生長因子-1受體(IGF-1R)抗體：例如非吉單抗(figitumumab)；抗CSl抗體：例如埃羅妥珠單抗(elotuzumab)；CD52抗體：例如阿侖單抗(alemtuzumab)；CTLA-4抑制劑：例如曲美木單抗(tremelimumab)、伊匹單抗(ipilimumab)；PD1抑制劑：例如納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)；免疫黏附素：例如皮立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224；PDL1抑制劑：例如MSB0010718C；YW243.55.S70、MPDL3280A；MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105；LAG-3抑制劑：例如BMS-986016；GITR促效劑；GITR融合蛋白及抗GITR抗體；組蛋白脫乙醯基酶抑制劑(HDI)：例如伏立諾他(voninostat)；抗CTLA4抗體：例如曲美木單抗、伊匹單抗；烷基化劑：例如替莫唑胺(temozolomide)、放線菌素d (dactinomycin)、美法侖(melphalan)、六甲蜜胺(altretamine)、卡莫司汀(carmustine)、苯達莫司汀(bendamustine)、白消安(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、洛莫司汀(lomustine)、順鉑、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、環磷醯胺、達卡巴嗪(dacarbazine)、六甲蜜胺、異環磷醯胺、丙卡巴肼(procarbazine)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、氮芥(mustine)及二氯甲基二乙胺、鏈脲菌素(streptozocin)、噻替派(thiotepa)；生物反應調節劑：例如卡介苗(bacillus calmette-guerin)、地尼白介素(denileukin diftitox)；抗腫瘤抗生素：例如阿黴素(doxorubicin)、博萊黴素(bleomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、道諾黴素脂質體、米托蒽醌(mitoxantrone)、表柔比星(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)、絲裂黴素C；抗微管劑：例如雌氮芥(estramustine)；組織蛋白酶K抑制劑：例如奧當卡替(odanacatib)；埃博黴素(Epothilone)類似物：例如伊沙匹隆(ixabepilone)；TpoR促效劑：例如艾曲波帕(eltrombopag)；抗有絲分裂劑：例如多烯紫杉醇(docetaxel)；腎上腺類固醇抑制劑：例如胺魯米特(aminoglutethimide)；抗雄激素：例如尼魯米特(nilutamide)；雄激素受體抑制劑：例如恩雜魯胺(enzalutamide)、乙酸阿比特龍(abiraterone acetate)、奧特羅那(orteronel)、加利特龍(galeterone)及西維諾尼(seviteronel)、比卡魯胺(bicalutamide)、氟他胺(flutamide)；雄激素：例如氟甲睾酮(fluoxymesterone)；CDK1抑制劑：例如阿昔迪布(alvocidib)、帕博西尼(palbociclib)、瑞博西尼(ribociclib)、曲拉西尼(trilaciclib)、阿貝西尼(abemaciclib)；促性腺激素釋放激素(GnRH)受體促效劑：例如亮丙立德(leuprolide)或乙酸亮丙立德；紫杉烷(Taxane)抗贅生劑：例如卡巴他賽(cabazitaxel)、拉洛他賽(larotaxel)；5-HTla受體促效劑：例如紮利羅登(xaliproden)；HPV疫苗：例如GlaxoSmithKline出售之Cervarix®、Merck出售之Gardasil®；鐵螯合劑：例如地拉羅司(deferasirox)；抗代謝物：例如克拉瑞濱(claribine)、5-氟尿嘧啶、6-硫代鳥嘌呤、培美曲塞(pemetrexed)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷脂質體、地西他濱(decitabine)、羥基脲、氟達拉濱(fludarabine)、氟尿苷(floxuridine)、克拉屈濱(cladribine)、甲胺喋呤(methotrexate)、噴司他汀(pentostatin)；雙膦酸鹽：例如帕米膦酸鹽(pamidronate)；去甲基劑：例如5-阿紮胞苷(5-azacitidine)、地西他濱；抗腫瘤植物鹼：例如太平洋紫杉醇結合蛋白(paclitaxel protein-bound)；長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春瑞賓(vinorelbine)、太平洋紫杉醇；類視黃素：例如亞利崔托寧(alitretinoin)、維甲酸(tretinoin)、異維甲酸、貝瑟羅汀(bexarotene)；糖皮質類固醇：例如氫化可的松(hydrocortisone)、地塞米松(dexamethasone)、潑尼龍(prednisolone)、強體松(prednisone)、甲基潑尼龍；細胞介素：例如介白素-2、介白素-11 (oprevelkin)、α干擾素阿爾法(IFN-α)；雌激素受體下調劑：氟維司群(fulvestrant)；抗雌激素：例如他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene)；選擇性雌激素受體調節劑(SERM)：例如雷洛昔芬(raloxifene)；促黃體素釋放激素(LHRH)促效劑：例如戈舍瑞林(goserelin)；孕酮：例如甲地孕酮(megestrol)；細胞毒性劑：三氧化二砷、天冬醯胺酶(亦稱為L-天冬醯胺酶、歐文菌屬L-天冬醯胺酶；抗噁心藥物：例如NK-1受體拮抗劑(例如，卡索匹坦(casopitant))；細胞保護劑：例如阿米福汀(amifostine)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)；及免疫檢查點抑制劑。術語「免疫檢查點」係指CD4及CD8 T細胞之細胞表面上之一組分子。免疫檢查點分子包括(但不限於)計畫性死亡1 (PD-1)、細胞毒性T淋巴細胞抗原4 (CTLA-4)、B7H1、B7H4、OX-40、CD 137、CD40及LAG3。可充當適用於本發明方法之免疫檢查點抑制劑之免疫治療劑包括(但不限於) PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD 160、2B4及/或TGFR β之抑制劑。
本文所述化合物可充當異位抑制劑，且藉由靶向SHP2之自動抑制構形而阻斷SHP2之活化。
本文所述化合物亦可經由併入催化SHP2之破壞的藥劑中而抑制SHP2功能。舉例而言，該等化合物可併入蛋白水解靶向嵌合體(PROTAC)中。PROTAC為雙功能分子，其中一個部分能夠接合E3泛蛋白連接酶且另一部分能夠結合意欲藉由細胞蛋白品質控制機制進行降解的標靶蛋白。標靶蛋白至特定E3接合酶之募集產生其破壞標記(亦即，泛素化)且隨後藉由蛋白酶體降解。可使用任何E3接合酶。PROTAC中與E3接合酶接合的部分經由連接子連接至PROTAC中與標靶蛋白接合的部分，該連接子由可變原子鏈組成。因此，SHP2至E3接合酶之募集將引起SHP2蛋白之破壞。該可變原子鏈可包括例如環、雜原子及/或重複聚合單元。該可變原子鏈可為堅硬或可撓性的。該可變原子鏈可使用標準技術連接至上文所描述的兩個部分。
本文所述化合物可連接至可變鏈的一端，而可變鏈的另一端可結合至E3接合酶。因此，SHP2至接合酶之募集將引起SHP2蛋白之破壞。
在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可與抗體組合使用。在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可與抗體-藥物結合物組合使用。在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可與激酶抑制劑組合使用。在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可與免疫調節劑組合使用。在一些實施例中，本發明之化合物或組合物可與組蛋白脫乙醯基酶抑制劑組合使用。
在一些實施例中，本發明提供一種治療SHP2介導之病症的方法，其包含向有需要之個體投與本文所描述之化合物，其中該病症係選自WO2019051084A1中所描述之彼等病症，該文獻在此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，本發明提供一種治療SHP2介導之病症的方法，其包含向有需要之個體投與本文所描述之化合物以及另一治療劑，其中該另一治療劑不為SHP2抑制劑且選自WO2019051084A1中所描述之彼等治療劑，該文獻在此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，所揭示化合物可以介於以下範圍內之劑量投與給需要治療之個體：每天每公斤待治療個體體重約0.0001 mg至約100 mg，諸如每公斤約1.0 mg至10 mg。然而，其他變量在本發明之範疇內。
所揭示化合物可單獨或與醫藥學上可接受之載劑組合投與，該等載劑諸如稀釋劑、填充劑、水溶液及甚至有機溶劑。本發明之化合物及/或組合物可以錠劑、散劑、口含錠、糖漿、可注射溶液及其類似者之形式投與。諸如調味劑、黏合劑、賦形劑及其類似者之其他成分在本發明之範疇內。
在一些實施例中，醫藥學上可接受之組合物可含有介於以下範圍內之濃度的所揭示化合物及/或其醫藥學上可接受之鹽：約0.01至約90 wt%、約0.01至約80 wt%、約0.01至約70 wt%、約0.01至約60 wt%、約0.01至約50 wt%、約0.01至約40 wt%、約0.01至約30 wt%、約0.01至約20 wt%、約0.01至約2.0 wt%、約0.01至約1 wt%、約0.05至約0.5 wt%、約1至約30 wt%或約1至約20 wt%。組合物可以溶液、懸浮液、軟膏或膠囊及其類似者之形式調配。醫藥組合物可以水溶液之形式製備，且可含有其他組分，諸如防腐劑、緩衝劑、張力劑、抗氧化劑、穩定劑、黏度調節成分及其類似者。
在一些實施例中，本發明提供包含所揭示化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物及/或藥劑的用途，其用於治療由SHP2磷酸酶引起或與SHP2磷酸酶有關的疾病病況及/或病狀的方法中。舉例而言，本文提供用有效量的所揭示化合物且視情況有效量的諸如本文所揭示之另一化合物(例如，治療劑)來治療有需要之個體(例如，患有癌症(例如白血病、乳癌、肺癌及/或結腸直腸癌)之個體)的方法。
在一些實施例中，治療方法包含以下步驟：i)確定需要此類治療之個體；(ii)提供所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)或其醫藥學上可接受之鹽；及(iii)以治療有效量投與該所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)以治療、抑制及/或預防需要此類治療之個體的疾病病況或病狀。
在一些實施例中，治療方法包含以下步驟：i)確定需要此類治療之個體；(ii)提供包含所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)或其醫藥學上可接受之鹽的組合物；及(iii)以治療有效量投與該組合物以治療、抑制及/或預防需要此類治療之個體的疾病病況或病狀。
在一些實施例中，個體為動物。動物包括動物界之所有成員，但不限於人類、小鼠、大鼠、貓、猴、狗、馬及豬。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體為小鼠、大鼠、貓、猴、狗、馬或豬。
在一些實施例中，本發明之化合物或組合物經口、靜脈內、吸入、鼻內、眼內、體表、皮下、直腸、陰道內或鞘內投與。在一些實施例中，化合物或組合物經口投與。在一些實施例中，化合物或組合物經靜脈內投與。
在一些實施例中，該等方法包含向個體投與有效量的所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)或其醫藥學上可接受之鹽；或包含所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的組合物。
醫藥學上可接受之載劑為熟習此項技術者所熟知，且包括例如佐劑、稀釋劑、賦形劑、填充劑、潤滑劑及媒劑。在一些實施例中，載劑為稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。在一些實施例中，載劑為稀釋劑、佐劑或賦形劑。在一些實施例中，載劑為稀釋劑或佐劑。在一些實施例中，載劑為賦形劑。通常，醫藥學上可接受之載劑針對活性化合物係化學惰性的，且在使用條件下係無毒的。醫藥學上可接受之載劑之實例可包括例如水或鹽水溶液、聚合物(諸如聚乙二醇)、碳水化合物及其衍生物、油、脂肪酸或醇類。作為醫藥載劑之油的非限制性實例包括石油、動物油、植物油或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似者。醫藥載劑亦可為鹽水、阿拉伯膠(gum acacia)、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠態二氧化矽、脲及其類似者。此外，亦可使用助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。適合的醫藥載劑之其他實例描述於例如以下文獻中：Remington's: The Science and Practice of Pharmacy, 第22版 (Allen, Loyd V., Jr 編, Pharmaceutical Press (2012))；Modern Pharmaceutics, 第5版 (Alexander T. Florence, Juergen Siepmann, CRC Press (2009))；Handbook of Pharmaceutical Excipients, 第7版 (Rowe, Raymond C.; Sheskey, Paul J.；Cook, Walter G.；Fenton, Marian E. 編, Pharmaceutical Press (2012)) (其中之每一者在此以全文引用之方式併入)。
在一些實施例中，治療、預防及/或抑制與SHP2磷酸酶有關之病狀的方法包含以下步驟：i)確定需要此類治療之個體；(ii)提供所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)或其醫藥學上可接受之鹽；或包含所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的組合物；及(iii)以治療有效量投與該化合物或組合物以治療、預防及/或抑制需要此類治療之個體之與SHP2磷酸酶有關的疾病病況或病狀。
在一些實施例中，本發明化合物調配成醫藥組合物，以供以適合於活體內投與之生物相容形式投與給個體。根據另一態樣，本發明提供一種醫藥組合物，其包含所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)與醫藥學上可接受之稀釋劑及/或載劑的混合物。醫藥學上可接受之載劑在與組合物之其他成分相容且不對其接受者有害之意義上為「可接受的」。本文中所使用的醫藥學上可接受之載劑可選自各種有機或無機物質，該等物質用作醫藥調配物之物質且經併入作為鎮痛劑、緩衝劑、黏合劑、崩解劑、稀釋劑、乳化劑、賦形劑、增量劑、滑動劑、增溶劑、穩定劑、懸浮劑、張力劑、媒劑及黏度增加劑。亦可添加醫藥添加劑，諸如抗氧化劑、芳香劑、著色劑、風味改善劑、防腐劑及甜味劑。可接受的醫藥載劑之實例包括羧甲基纖維素、結晶纖維素、甘油、阿拉伯膠、乳糖、硬脂酸鎂、甲基纖維素、粉末、鹽水、海藻酸鈉、蔗糖、澱粉、滑石及水以及其他。在一些實施例中，術語「醫藥學上可接受」意謂經聯邦政府或洲政府之監管機構批准或在美國藥典或其他公認之藥典中列出適用於動物，且更特定言之適用於人類。
諸如清潔劑之界面活性劑亦適用於調配物中。界面活性劑之特定實例包括聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇、乙酸乙烯酯及乙烯吡咯啶酮之共聚物、聚乙二醇、苯甲醇、甘露糖醇、甘油、山梨糖醇或脫水山梨糖醇之聚氧乙烯化酯；卵磷脂或羧甲基纖維素鈉；或丙烯酸衍生物，諸如甲基丙烯酸酯及其他；陰離子界面活性劑，諸如鹼性硬脂酸鹽，特定言之硬脂酸鈉、硬脂酸鉀或硬脂酸銨；硬脂酸鈣或硬脂酸三乙醇胺；烷基硫酸鹽，特定言之月桂基硫酸鈉及鯨蠟基硫酸鈉；十二烷基苯磺酸鈉或二辛基磺基丁二酸鈉；或脂肪酸，特定言之衍生自椰子油之彼等脂肪酸；陽離子界面活性劑，諸如具有式N+ R'R''R'''R''''Y- 之水溶性四級銨鹽，其中R基團相同或不同，視情況為羥化烴基，且Y- 為強酸之陰離子，諸如鹵素、硫酸根及磺酸根陰離子；溴化鯨蠟基三甲銨為可使用的陽離子界面活性劑中之一者，其為具有式N+ R'R''R'''之胺鹽，其中R基團相同或不同，視情況為羥化烴基；鹽酸十八烷基胺為可使用的陽離子界面活性劑中之一者；非離子界面活性劑，諸如脫水山梨糖醇之視情況聚氧乙烯化酯，特定言之聚山梨醇酯80或聚氧乙烯化烷基醚；硬脂酸聚乙二醇、蓖麻油之聚氧乙烯化衍生物、聚甘油酯、聚氧乙烯化脂肪醇、聚氧乙烯化脂肪酸或環氧乙烷及環氧丙烷之共聚物；兩性界面活性劑，諸如甜菜鹼之經取代月桂基化合物。
在向個體投與時，所揭示化合物(例如式Ia、式Ib、式II、式III、式X或式XI化合物)及醫藥學上可接受之載劑可為無菌的。適合的醫藥載劑亦可包括賦形劑，諸如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、聚乙二醇300、水、乙醇、聚山梨醇酯20及其類似者。必要時，本發明之組合物亦可含有少量潤濕劑或乳化劑，或pH緩衝劑。
本發明之醫藥調配物係藉由醫藥技術中熟知之方法製備。視情況，亦添加一或多種輔助成分(例如，緩衝劑、調味劑、表面活性劑及其類似者)。載劑之選擇係藉由化合物之溶解度及化學性質、所選投藥途徑及標準醫藥實踐決定。
另外，本發明之化合物及/或組合物係藉由包括經口投與、舌下或頰內投與之已知程序投與給人類或動物個體。在一些實施例中，化合物及/或組合物經口投與。
對於經口投與，本發明化合物之調配物可以諸如膠囊、錠劑、散劑、顆粒之劑型或以懸浮液或溶液之形式提供。膠囊調配物可為明膠、軟膠囊或固體。錠劑及膠囊調配物可進一步含有一或多種佐劑、黏合劑、稀釋劑、崩解劑、賦形劑、填充劑或潤滑劑，其中之每一者為此項技術中已知。此類實例包括碳水化合物(諸如乳糖或蔗糖)、無水磷酸氫鈣、玉米澱粉、甘露糖醇、木糖醇、纖維素或其衍生物、微晶纖維素、明膠、硬脂酸鹽、二氧化矽、滑石、乙醇酸澱粉鈉、阿拉伯膠、調味劑、防腐劑、緩衝劑、崩解劑及著色劑。經口投與之組合物可含有一或多種視情況選用之藥劑，例如甜味劑，諸如果糖、阿斯巴甜糖(aspartame)或糖精；調味劑，諸如胡椒薄荷、冬青油或櫻桃；著色劑；及防腐劑，以提供醫藥學上可口的製劑。
在一些實施例中，組合物呈諸如錠劑、膠囊或單次劑量小瓶之單位劑型。適合的單位劑量(亦即治療有效量)可在針對指定所選化合物之投與的每一條件以適當方式設計的臨床試驗期間判定，且當然將視所需臨床指標而變化。
根據本發明之方法，本發明化合物以治療有效量向個體投與，例如以減輕或改善個體之與SHP2磷酸酶活性有關之症狀。此量容易藉由熟習此項技術者基於已知程序判定，該等程序包括對在活體內確定的滴定曲線之分析以及本文所揭示之方法及分析。
在一些實施例中，該等方法包含投與治療有效劑量的本發明化合物。在一些實施例中，治療有效劑量為每公斤體重至少約0.0001 mg、每公斤體重至少約0.001 mg、每公斤體重至少約0.01 mg、每公斤體重至少約0.05 mg、每公斤體重至少約0.1 mg、每公斤體重至少約0.25 mg、每公斤體重至少約0.3 mg、每公斤體重至少約0.5 mg、每公斤體重至少約0.75 mg、每公斤體重至少約1 mg、每公斤體重至少約2 mg、每公斤體重至少約3 mg、每公斤體重至少約4 mg、每公斤體重至少約5 mg、每公斤體重至少約6 mg、每公斤體重至少約7 mg、每公斤體重至少約8 mg、每公斤體重至少約9 mg、每公斤體重至少約10 mg、每公斤體重至少約15 mg、每公斤體重至少約20 mg、每公斤體重至少約25 mg、每公斤體重至少約30 mg、每公斤體重至少約40 mg、每公斤體重至少約50 mg、每公斤體重至少約75 mg、每公斤體重至少約100 mg、每公斤體重至少約200 mg、每公斤體重至少約250 mg、每公斤體重至少約300 mg、每公斤體重至少約350 mg、每公斤體重至少約400 mg、每公斤體重至少約450 mg、每公斤體重至少約500 mg、每公斤體重至少約550 mg、每公斤體重至少約600 mg、每公斤體重至少約650 mg、每公斤體重至少約700 mg、每公斤體重至少約750 mg、每公斤體重至少約800 mg、每公斤體重至少約900 mg或每公斤體重至少約1000 mg。應認識到，本文所列劑量中之任一者可構成上限或下限劑量範圍，且可與任何其他劑量組合以構成包含上限值及下限值之劑量範圍。
在一些實施例中，治療有效劑量介於每公斤體重約0.1 mg至約10 mg、每公斤體重約0.1 mg至約6 mg、每公斤體重約0.1 mg至約4 mg或每公斤體重約0.1 mg至約2 mg之範圍內。
在一些實施例中，治療有效劑量介於約1至500 mg、約2至150 mg、約2至120 mg、約2至80 mg、約2至40 mg、約5至150 mg、約5至120 mg、約5至80 mg、約10至150 mg、約10至120 mg、約10至80 mg、約10至40 mg、約20至150 mg、約20至120 mg、約20至80 mg、約20至40 mg、約40至150 mg、約40至120 mg或約40至80 mg之範圍內。
在一些實施例中，該等方法包含單次給藥或投與(例如，以單次注射或沈積之形式)。替代地，該等方法包含在約2至約28天或約7至約10天或約7至約15天或更長時間內，向有需要之個體每日投與一次、每日投與兩次、每日投與三次或每日投與四次。在一些實施例中，該等方法包含長期投與。在其他實施例中，該等方法包含在數週、數月、數年或數十年之療程內投與。在其他實施例中，該等方法包含在數週之療程內投與。在其他實施例中，該等方法包含在數月之療程內投與。在其他實施例中，該等方法包含在數年之療程內投與。在其他實施例中，該等方法包含在數十年之療程內投與。
所投與劑量可視已知因數而變化，該等因數諸如活性成分之藥力學特徵以及其投藥模式及途徑；活性成分之投與時間；接受者之年齡、性別、健康狀況及體重；症狀之性質及程度；並行治療之種類、治療頻率及所需效果；以及分泌速率。所有此等因數皆容易判定，且熟習此項技術者可使用此等因數來調整或滴定劑量及/或給藥方案。
組合物中所採用之精確劑量亦將視投藥途徑而定，且應根據醫師判斷及各個體之情況決定。在本發明之特定實施例中，經口投與本發明化合物之適合劑量範圍通常為每天約1 mg至每天約1000 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約1 mg至每天約800 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約1 mg至每天約500 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約1 mg至每天約250 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約1 mg至每天約100 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約5 mg至每天約50 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約5 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約10 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約20 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約30 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約40 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約50 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約60 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約70 mg。在一些實施例中，口服劑量為每天約100 mg。應認識到，本文所列劑量中之任一者可構成上限或下限劑量範圍，且可與任何其他劑量組合以構成包含上限值及下限值之劑量範圍。
本發明之化合物及/或組合物中之任一者可提供於包含該等化合物及/或組合物之套組中。因此，在一些實施例中，本發明之化合物及/或組合物提供於套組中。
熟習此項技術者將認識到，或能夠僅使用習知實驗來確定本文中所描述之本發明之特定實施例的許多等效物。此等等效物意欲在本發明之範疇內。
藉由以下非限制性實例進一步描述本發明。實例
本文所述之化合物可基於本文所含之教示及此項技術中已知之合成程序以多種方式來製備。在下文所描述合成方法之描述中，應理解，除非另外指示，否則所有提出之反應條件(包括溶劑選擇、反應氛圍、反應溫度、實驗持續時間及處理程序)均可經選擇作為該反應之標準條件。熟習有機合成之技術者應理解，分子各個部分上所存在之官能基必須與所提出之試劑及反應物相容。不與反應條件相容之取代基將對於熟習此項技術者顯而易見，且因此指示替代方法。用於實例之起始物質為市售的或容易藉由標準方法由已知物質來製備。
本文中鑑別為「中間物」之化合物中之至少一些經涵蓋作為本發明化合物。
本文提供實例以有助於對本發明之更透徹理解。以下實例用於說明製備及實踐本發明之主題的例示性模式。然而，本發明之範疇不應理解為限於此等實例中所揭示之特定實施例，該等實例僅為說明性的。舉例而言，式(I)化合物一般可根據例示性流程1製備：
Figure 02_image263
流程1 其中X、R1 、R6 、R4 、U、B及D如本文中其他處所定義，Q獨立地為鹵素(諸如Cl、Br、I及其類似者)或任何其他脫離基(諸如OSO2 Me、OMs、OTs、OTf及其類似者)。LG為脫離基，諸如Cl、Br、I、OTs、OTf及其類似者，且P為保護基，諸如4-甲氧基苯甲基及其類似者。可使用的替代保護基描述於例如Greene等人, Protective Groups in Organic Synthesis (第4版 2006)中。
如流程1中所展示，芳基化合物(諸如式1001 化合物)與金屬化部分或其他活化部分進行交叉偶合反應，得到式1002 化合物。式1002 化合物隨後與胺(諸如化合物1005 )進行取代反應，接著去除保護基，得到式(I)化合物。在一些實施例中，LG為I。在一些實施例中，LG為Cl。在一些實施例中，LG為OTf或OTs。替代地，受保護的雜芳基醚(諸如式1003 化合物)進行交叉偶合反應，得到式1004 化合物。隨後去除醚保護基且活化所得羥基以形成Q基團(諸如OSO2 Me、OMs、OTs、OTf及其類似者)，形成式1002 化合物，其隨後可向前用於製備具有式(I)之化合物。
替代地，本發明化合物一般可根據例示性流程2製備：
Figure 02_image265
流程2 其中X、R1 、R6 、R4 、U、B及D如本文中其他處所定義，Q獨立地為鹵素(諸如Cl、Br、I及其類似者)或任何其他脫離基(諸如OSO2 Me、OMs、OTs、OTf及其類似者)。LG為脫離基，諸如Cl、Br、I、OTs、OTf及其類似者，且P為保護基，諸如4-甲氧基苯甲基及其類似者。可使用的替代保護基描述於例如Greene等人, Protective Groups in Organic Synthesis (第4版 2006)中。
如流程2中所展示，芳基化合物(諸如式1001 化合物)與胺(諸如1005 )進行取代反應，得到式1006 化合物。式1006 化合物隨後與金屬化部分或其他活化部分進行交叉偶合反應，得到式1007 化合物。在一些實施例中，可去除式1007 化合物之保護基，產生式(I)化合物。在其他實施例中，式1007 化合物可保持受保護，且R1 部分上之官能基藉由一般熟習此項技術者已知的方法再官能化。
在一些實施例中，交叉偶合反應為布赫瓦爾德-哈特維希反應(Buchwald-Hartwig reaction)。在一些實施例中，交叉偶合反應為Chan-Lam偶合反應。在一些實施例中，交叉偶合反應為烏爾曼反應(Ullmann reaction)。在一些實施例中，交叉偶合反應為鈴木反應(Suzuki reaction)。在一些實施例中，交叉偶合反應為Stille反應。在一些實施例中，交叉偶合反應為根岸反應(Negishi reaction)。在一些實施例中，交叉偶合反應為檜山反應(Hiyama reaction)。如一般技術者將顯而易見，可使用其他交叉偶合反應。
在一些實施例中，在酸性條件(諸如含HBr之AcOH)下去除保護基。去除保護基之條件將視保護基之性質而定。去除各種保護基之條件可見於例如Greene等人, Protective Groups in Organic Synthesis (第4版 2006)中。
監測反應，且使用以下方法中之一者來表徵最終產物。LCMS標準條件為：Waters HPLC系統，其裝備有Alliance 2695主模組、Waters 996二極體陣列偵測器及ZQ micromass ESI-MS偵測器。移動相A：H2 O (10.0 mM NH4 HCO2 )，移動相B：CH3 CN。HPLC條件為：XBridge C18管柱，4.6 × 30 mm，3.5 μm，0.0至0.2分鐘等度(5% B)，0.2至2.0分鐘梯度(5-100% B)，3.0至3.0分鐘等度(100% B)；流動速率：3.0 mL/min；UV通道：254 nm。
使用半製備型HPLC A、半製備型HPLC B或半製備型SFC來進行一些外消旋產物之純化。半製備型HPLC A：Gilson 215系統，其裝備有Waters 996二極體陣列偵測器及Waters 2525泵。半製備型HPLC B：Waters 2767系統，其裝備有Waters 996二極體陣列偵測器、2 × Waters 515泵、Waters 2525泵及ZQ micromass ESI-MS偵測器。半製備型SFC：Mettler Toledo Minigram SFC，其裝備有Knauer K-2501 UV偵測器及Alcott型號1719自動取樣器。
使用分析型HPLC A進行產物均質性及對映異構體過量判定：Agilent 1100 HPLC系統，其裝備有Agilent G1315A二極體陣列偵測器。縮寫 ： Ac：乙醯基 AcOH或HOAc：乙酸 ACN或MeCN：乙腈 Anhyd：無水 Aq：水溶液 BINAP：2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘基 Bn：苯甲基 Boc：第三丁氧基羰基 Boc2 O：二碳酸二第三丁酯 BPO：過氧化苯甲醯 BOP：苯并三唑-1-基氧基參(二甲基胺基)鏻六氟磷酸鹽 CSA：樟腦磺酸 d：天 DAST：三氟化二乙基胺基硫 dba：二苯亞甲基丙酮 DBU：1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯 DCE：1,2-二氯乙烷 DCM：二氯甲烷 DEA：二乙胺 DHP：二氫哌喃 DIBAL-H：氫化二異丁基鋁 DIPEA：N,N-二異丙基乙胺 DMA：N,N-二甲基乙醯胺 DME：1,2-二甲氧基乙烷 DMAP：4-二甲基胺基吡啶 DMF：N,N-二甲基甲醯胺 DMSO：二甲亞碸 dppf：1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵 EDC或EDCI：1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽 ee：對映異構體過量 ESI：電噴霧電離 EA：乙酸乙酯 EtOAc：乙酸乙酯 EtOH：乙醇 FA：甲酸 h或hrs：小時 HATU：N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)
Figure 108109755-A0304-12-01
六氟磷酸鹽 HCl：鹽酸 HPLC：高效液相層析 IPA：異丙醇 K2 CO3 ：碳酸鉀 LAH：氫化鋰鋁 LDA：二異丙胺基鋰 M：莫耳 MeOH：甲醇 Me2 S：二甲硫 MeONa：甲醇鈉 MeI：碘甲烷 min：分鐘 mL：毫升 mM：毫莫耳 mmol：毫莫耳 MTBE：甲基第三丁基醚 nBuLi：正丁基鋰 NaOH：氫氧化鈉 Na2 SO4 ：硫酸鈉 NBS：N-溴丁二醯亞胺 NCS：N-氯丁二醯亞胺 NMP：N-甲基吡咯啶 NMR：核磁共振 ℃：攝氏度 PE：石油醚 POCl3 ：氧氯化磷 PPh3 ：三苯膦 Rel：相對 R.T.或rt：室溫 RuPhos：2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基聯苯 sat：飽和 SFC：超臨界流體層析 SOCl2 ：二氯化硫 TBAB：溴化四丁基銨 TEA：三乙胺 Tf：三氟甲烷磺酸酯 TfAA、TFMSA或Tf2 O：三氟甲烷磺酸酐 TFA：三氟乙酸 TIPS：三異丙基矽烷基 THF：四氫呋喃 THP：四氫哌喃 TLC：薄層層析 wt：重量 Xantphos：4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃中間物之合成 ： 6- 氯 -3- 碘 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 ， 中間物 A
Figure 02_image267
步驟 a ：在100 mL圓底燒瓶中，將3,5-二氯吡嗪-2-甲酸(3.65 g，18.9 mmol)及NaHCO3 (4.70 g，22.7 mmol)溶解於二甲基甲醯胺(38 mL)中。逐滴添加碘甲烷(7.14 mL，113 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物隔夜。混合物用水(50 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 × 15 mL)萃取。經合併之有機物用鹽水(4 × 10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。在高真空乾燥2至3小時之後，獲得呈微黃色固體狀之3,5-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(3.77 g，96%)。1 H-NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.57 (s, 1H), 4.03 (s, 3H)。
步驟 b ：將3,5-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(5.0 g，24.2 mmol)溶解於無水四氫呋喃(242 mL)與甲醇(27 mL)之9:1混合物中。用冰/水浴將混合物冷卻至1.5至2℃，且在此溫度下攪拌10分鐘。隨後謹慎添加硼氫化鋰於THF (13.3 mL，26.6 mmol)中之2 M溶液，保持溫度低於4至5℃。添加後，在0至4℃下再攪拌反應混合物10至15分鐘。向燒瓶中添加甲醇(120 mL)，且在室溫下攪拌混合物15分鐘。將反應物緩慢傾入1 M HCl溶液(100 mL)與乙酸乙酯(200 mL)之混合物中。在室溫下攪拌所得混合物15分鐘。水層用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取，且經合併之有機物用鹽水(2 × 100 mL)洗滌，經無水MgSO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。在高真空乾燥2小時之後，獲得呈黃色油狀物之(3,5-二氯吡嗪-2-基)甲醇(4.3 g，99%產率)。1 H-NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.52 (s, 1H), 4.85 (s, 2H)。
步驟 c ：將(3,5-二氯吡嗪-2-基)甲醇(4.3 g，24 mmol)溶解於二氯甲烷(100 mL)中，且隨後一次添加全量MnO2 (20.2 g，240 mmol)。在室溫下攪拌所得深色不勻相混合物16小時。此後，將反應混合物用音波處理5分鐘，且向反應混合物中添加另外的MnO2 (4 g)。在室溫下攪拌所得懸浮液2小時。隨後經由矽藻土墊過濾混合物，且用二氯甲烷洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，在高真空乾燥30分鐘之後，得到呈淺黃色油狀物之3,5-二氯吡嗪-2-甲醛(2.36 g，56%產率)。1 H-NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 10.29 (s, 1H), 8.71 (s, 1H)。
步驟 d ：將3,5-二氯吡嗪-2-甲醛(2.9 g，16.4 mmol)溶解於N -甲基-2-吡咯啶酮(16 mL)中，隨後逐滴添加水合肼(0.78 mL，49.2 mmol)。在65℃下攪拌所得棕色懸浮液40分鐘。此後，添加另外的水合肼(0.4 mL)，且在65℃下攪拌混合物2小時。將混合物冷卻至室溫，傾入1 M HCl溶液(100 mL)中，且添加乙酸乙酯(400 mL)。水層用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取，且經合併之有機物用鹽水(300 mL)洗滌，經無水MgSO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由逆相層析(0至50%梯度之乙腈/10 mM甲酸銨水溶液)純化黃色粗殘餘物，凍乾後得到呈淡棕色固體狀之6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(800 mg，32%產率)。1 H-NMR (500 MHz, CD3 OD) δ 8.58 (s, 1H), 8.34 (s, 1H)。
步驟 e ：將6-氯-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪溶解於乙腈(24 mL)中。依次添加N -碘丁二醯亞胺(3.43 g，14.5 mmol)及四氟硼酸溶液(2.8 mL，21.7 mmol，48%於水中)。隨後在回流下攪拌所得棕色/橙色混合物2小時。形成米色/棕色沈澱且將混合物冷卻至室溫，隨後將混合物置放於冰/水浴中5分鐘。藉由過濾收集所得固體且用冷的乙腈洗滌，在高真空乾燥之後得到呈黃色固體狀之6-氯-3-碘-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(1.81 g，89%產率)。LCMS [M+H]+ = 280.9；1 H-NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.59 (s, 1H)。
步驟 f ：將6-氯-3-碘-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(850 mg，3 mmol)溶解於二氯甲烷(15 mL)中。向燒瓶中依次添加3,4-二氫-2H-哌喃(0.85 mL，9.1 mmol)及單水合對甲苯磺酸(176 mg，0.91 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物10分鐘。混合物隨時間變得勻相且變成淺黑色。此後，向燒瓶中添加飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)，且攪拌該兩相混合物10分鐘。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由急驟層析(0至50%梯度之乙酸乙酯/己烷)純化粗殘餘物，在高真空乾燥隔夜之後，得到呈灰白色固體狀之6-氯-3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(1.02 g，93%產率)。LCMS [M+H]+ = 364.9，[M-THP+H]+ =281.0；1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.56 (s, 1H), 5.96 (dd,J = 10.4, 2.6 Hz, 1H), 4.16 - 4.06 (m, 1H), 3.82 - 3.74 (m, 1H), 2.72 - 2.58 (m, 1H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 2.01 - 1.94 (m, 1H), 1.89 - 1.70 (m, 2H), 1.69 - 1.59 (m, 1H)。
6- 氯 -3- 碘 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -1- 甲酸 甲 酯， 中間物 B
Figure 02_image269
步驟 a ：將氫化鈉(213 mg，5.34 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液冷卻至0℃，隨後添加6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(1 g，3.56 mmol，經由中間物A之步驟a至e合成)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌反應物2.25小時。隨後使反應混合物冷卻至0至10℃且添加氯甲酸甲酯(817 µL，10.6 mmol)，並且攪拌反應混合物20分鐘。完成後，添加水(20 mL)，隨後將混合物傾入水(60 mL)中。過濾反應混合物，且用水洗滌固體，得到呈白色固體狀之6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(1.71 g，粗產物)。LCMS m/z [M+H]+ = 338.9。
乙酸 [6- 氯 -3- 碘 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ] 甲酯 ， 中間物 C
Figure 02_image271
步驟 a ：向圓底燒瓶中裝入6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(525 mg，1.55 mmol，中間物B)、2-(乙醯氧基)乙酸(1.46 g，12.4 mmol)、硝酸銀(52.6 mg，0.31 mmol)以及乙腈(15 mL)及水(9 mL)。向混合物中添加過硫酸銨(2.82 g，12.4 mmol)，且將反應物加熱至85℃。2小時後，將反應物冷卻至室溫且傾入乙酸乙酯及鹽水中。將有機層預吸收至矽膠上且藉由管柱層析純化(用乙酸乙酯及庚烷溶離)，得到呈白色固體狀之5-[(乙醯氧基)甲基]-6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(225 mg，35%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 410.9。
步驟 b ：在室溫下向含有含5-[(乙醯氧基)甲基]-6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(220 mg，0.5358 mmol)之二氯甲烷(4 mL)的反應管中裝入哌啶(52.9 µL，0.5358 mmol)。15分鐘後，添加另外的哌啶(0.2當量)。15分鐘後，添加3,4-二氫-2H-哌喃(145 µL，1.60 mmol)及4-甲基苯-1-磺酸(92.2 mg，0.5358 mmol)。30分鐘後，將反應混合物預吸收至矽膠上且藉由管柱層析純化(用乙酸乙酯及庚烷溶離)，得到呈白色固體狀之乙酸[6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基]甲酯。LCMS m/z [M+H]+ = 437.0。
3- 側氧基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 ， 中間物 D
Figure 02_image273
向NaH (486 mg，60%)於DMF (20 mL)中之溶液中添加含2,3-二氫-1H-茚-1-酮(541 mg，4.10 mmol)之DMF (10 mL)。在10℃下攪拌反應物30分鐘。隨後添加含N-(2-氯乙基)-N-(2-碘乙基)胺基甲酸第三丁酯(1.37 g，4.10 mmol)之DMF (10 mL)，並且攪拌反應物且將其加熱至50℃後保持12小時。反應混合物用水(100.0 mL)稀釋且用乙酸乙酯(100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用水(100.0 mL)及鹽水(100.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈棕色油狀物之3-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(220 mg，18%產率)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 202.1。
1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺， 中間物 E
Figure 02_image275
在微波小瓶中添加5-氯-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(500 mg，1.65 mmol，中間物D)及MeOH (2.5 mL)。隨後向反應混合物中添加乙酸胺(1.90 g，24.7 mmol)及亞胺基甲烷化三硼烷-1-基鎓三氫化鈉(175 mg，1.98 mmol)，在微波下在110℃下加熱該反應混合物1小時。隨後，添加另外15當量的乙酸銨及1.2當量的氰基硼氫化鈉，且在110℃下在微波下加熱反應混合物1.5小時。隨後濃縮反應混合物，且隨後添加2 N NaOH (5 mL)。隨後用EtOAc (2×5 mL)萃取混合物，且有機層經Na2 SO4 乾燥。過濾並濃縮混合物，得到呈無色油狀物之粗產物。藉由管柱層析(0至10% MeOH/DCM + 1% NH4 OH)純化油狀物，得到1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(185 mg，0.612 mmol)。隨後將此中間物溶解於DCM (4 mL)中且添加TFA (1 mL)，並且在室溫下攪拌反應混合物16小時。真空濃縮反應混合物，且使殘餘物與甲苯共沸3次。分離呈泡沫固體狀之1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(307 mg，43%產率，2 TFA鹽)。LCMS m/z [M+H]+ = 203.1。
(1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 F
Figure 02_image277
步驟 a ：將1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(800.0 mg，2.9 mmol，中間物E)、6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(1.05 g，2.9 mmol，中間物A)及Et3 N (2.0 mL，14.4 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物在60℃下攪拌1小時。向反應混合物中添加Boc2 O (757.0 mg，3.5 mmol)，且在60℃下再攪拌反應物2小時。反應混合物用EtOAc (150 mL)稀釋且用水(100 mL × 3)洗滌。濃縮有機層且藉由矽膠管柱(EtOAc/石油醚= 0至20%)純化，得到呈白色固體狀之N -{1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(1.50 g，82%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 653.1。
乙酸 (6-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 甲酯 ， 中間物 G
Figure 02_image279
步驟 a ：向具有含乙酸[6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基]甲酯(76 mg，0.1740 mmol，中間物C)之DMF (0.13 mL，1 mL)的小瓶中添加含1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二三氟乙酸鹽(89.4 mg，0.2088 mmol，中間物E)之1 mL DMF及乙基雙(丙-2-基)胺(121 µL，0.696 mmol，許尼希氏鹼)。密封小瓶且將混合物加熱至75℃。1小時後，添加更多的二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二三氟乙酸鹽以及許尼希氏鹼(240 μL)。在形成乙酸(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲酯之後，添加二碳酸第三丁酯(56.9 mg，0.261 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物48小時。為了完成轉化，添加另外35 mg Boc2 O，且將反應混合物加熱至75℃後保持20分鐘。將反應混合物冷卻至室溫，隨後添加5% w/w LiCl溶液且用EtOAc萃取混合物。真空濃縮有機層且藉由管柱層析(10 g管柱，10至50% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到乙酸(6-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲酯(85 mg，71%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 703.3。
(S)-1-(((R)- 第三丁基亞磺醯基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 ， 中間物 H
Figure 02_image281
步驟 a ：將3-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1 g，3.31 mmol，中間物D)溶解於2-Me-THF (20 mL)中。隨後添加四鈦-1-基鎓四乙醇化物(4.50 mL，13.2 mmol)，接著添加(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(721 mg，5.95 mmol)，且在90℃下攪拌反應混合物16小時。隨後將反應混合物冷卻至0℃且逐份添加硼氫化鋰(1+) (79.2 mg，3.64 mmol)，並且攪拌混合物0.5小時。反應物隨後用甲醇淬滅且真空濃縮。添加EtOAc及水且用EtOAc萃取混合物，且有機層經Na2 SO4 乾燥、過濾並濃縮。藉由管柱層析(24 g管柱，0至100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3S)-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(500 mg，21%產率)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 307.0。
(S)-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 I
Figure 02_image283
步驟 a ： 將(3S)-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(500 mg，1.22 mmol，中間物H)溶解於MeOH (15 mL)中且添加鹽酸(3.05 mL，12.2 mmol)，並且在室溫下攪拌反應混合物16小時。隨後添加另外1 mL 4 N HCl且在室溫下攪拌反應混合物1小時，隨後將反應混合物加熱至60℃後保持2小時。隨後濃縮反應混合物。向殘餘物中添加MBTE，隨後過濾殘餘物，得到呈白色固體狀之(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(335 mg，99%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 203.1。
((1S)-1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 J
Figure 02_image285
步驟 a ： 將(3S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.37 g，5.01 mmol，中間物I)溶解於DMF (15 mL)中，隨後添加6-氯-3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(2 g，7.13 mmol，中間物A)，接著添加乙基雙(丙-2-基)胺(4.97 mL，28.5 mmol)。在75℃下攪拌反應物3小時，形成(1S)-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。將反應混合物冷卻至室溫，隨後分成兩份。向約10 mL反應混合物中添加二碳酸二第三丁酯(1.79 mL，7.84 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物16小時。向反應混合物中添加EtOAc及水，且用EtOAc萃取反應物3次。經合併之有機層經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至矽膠上。藉由管柱層析(0至45% EtOAc/庚烷)純化混合物，得到((1S)-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(955 mg，1.51 mmol)。LCMS m/z [M+H]+ = 631.1。
乙酸 (6-((S)-1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 甲酯 ， 中間物 K
Figure 02_image287
步驟 a ： 將乙酸[6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基]甲酯(528 mg，1.21 mmol，中間物C)溶解於DMF (10 mL)中。隨後向反應物中添加(3S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(335 mg，1.21 mmol，中間物I)，接著添加乙基雙(丙-2-基)胺(844 µL，4.84 mmol)，且在75℃下攪拌混合物16小時。隨後將反應混合物冷卻至室溫並添加二碳酸二第三丁酯(305 µL，1.33 mmol)，且在室溫下攪拌反應物3小時。反應物隨後用EtOAc及水稀釋。分離各層，隨後有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且直接濃縮至SiO2 上。藉由管柱層析(0至50% EtOAc/庚烷)純化混合物，得到呈灰白色固體狀之乙酸(6-((S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲酯(500 mg，54%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 703.3。
1-(1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -1- 基 ) 乙 -1- 酮，中間物 L
Figure 02_image289
步驟 a ： 向1,2,3,4-四氫喹喏啉(500.0 mg，3.7 mmol，CAS編號3476-89-9)及Et3 N (770.0 μL，5.6 mmol)於DCM (20 mL)中之0℃溶液中添加含AcCl (289.0 μL，4.1 mmol)之DCM (5 mL)，且在0℃下攪拌反應物0.5小時。濃縮反應物且藉由矽膠管柱(EtOAc/石油醚= 50%)純化，得到呈黃色固體狀之1-(1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基)乙-1-酮(530.0 mg，80.9%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 177.1。
4- 甲基苯 -1- 磺酸 1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 酯 ， 中間物 M
Figure 02_image291
Figure 02_image293
步驟 a ： 將BnOH (30.8 g，0.285 mol，29.6 mL，1.1當量)於THF (450 mL)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向混合物中緩慢添加NaH (12.4 g，0.311 mol，60%油分散液，1.2當量)。添加之後，在25℃下攪拌混合物1小時。在-78℃下向所得溶液中添加3,5-二氯吡嗪-2-甲腈(45.0 g，258.64 mmol，1.0當量)於THF (450 mL)中之溶液，且在-78℃下攪拌混合物0.5小時。隨後將反應物傾入水(1.00 L)中且用EtOAc (1.00 L×3)萃取。經合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。在25℃下將殘餘物在10:1之石油醚/EtOAc (1.50 L)中漿化0.5小時。過濾混合物且用石油醚(200 mL)洗滌濾餅。減壓乾燥濾餅，得到呈白色固體狀之5-(苯甲氧基)-3-氯吡嗪-2-甲腈(79.3 g，300 mmol，58%產率，93%純度)。LCMS m/z [M+H]+ = 245.9。1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 8.23 (s, 1H), 7.51 - 7.39 (m, 5H), 5.48 (s, 2H)。步驟 b ： 在N2 、-78℃下向5-(苯甲氧基)-3-氯吡嗪-2-甲腈(20.0 g，75.6 mmol，1.0當量)於THF (200 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (1.0 M，227 mL，3.0當量)。在-78℃下攪拌混合物1小時。在-78℃下藉由10% HOAc水溶液(2.00 L)淬滅反應物且用EtOAc (1.50 L×3)萃取。用飽和NaHCO3 水溶液將經合併之有機層之pH調整至8至9並且分離該有機層。有機層用鹽水(1.00 L)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物在EtOAc (300 mL)與石油醚(6.00 L)之混合溶液中漿化。藉由過濾收集沈澱，得到呈棕色油狀物之5-(苯甲氧基)-3-氯吡嗪-2-甲醛(11.3 g)。LCMS m/z [2M+H]+ = 497.9；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 10.27 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 5H), 5.51 (s, 2H)。步驟 c ： 在25℃下攪拌5-(苯甲氧基)-3-氯吡嗪-2-甲醛(11.3 g，45.4 mmol，1.0當量)及NH2 NH2 .H2 O (6.96 g，137 mmol，6.76 mL，3.0當量)於EtOH (113 mL)中之混合物。隨後在25℃下向混合物中添加Et3 N (23.0 g，228 mmol，31.6 mL，5.00當量)。將混合物加熱至80℃且在80℃下攪拌16小時。隨後濃縮反應物，得到殘餘物。殘餘物用EtOAc (500 mL)溶解且用飽和NH4 Cl水溶液(500 mL)洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈棕色固體狀之6-(苯甲氧基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(9.5 g，84%純度，步驟b至c之產率47%)。LCMS m/z [M+H]+ = 227.0；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 11.07 (br s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.50 - 7.47 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 3H), 5.46 (s, 2H)。步驟 d ： 在25℃下向6-(苯甲氧基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(9.50 g，35.4 mmol，1.0當量)於DMF (190 mL)中之溶液中添加NIS (10.4 g，46.0 mmol，1.3當量)。隨後將混合物加熱至80℃且攪拌1小時。隨後將反應物冷卻至25℃且隨後傾入冰水(2.00 L)中。用EtOAc (2.00 L)萃取混合物。有機層用10% Na2 SO3 水溶液(500 mL×2)及鹽水(500 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之6-(苯甲氧基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(24.7 g，97%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 352.8；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 10.73 (br s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.50 - 7.47 (m, 2H), 7.44 - 7.38 (m, 3H), 5.46 (s, 2H)。步驟 e ： 向6-(苯甲氧基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(12.1 g，34.3 mmol，1.0當量)於DCM (20.0 mL)中之溶液中添加DHP (8.65 g，103 mmol，9.40 mL，3.0當量)及TsOH.H2 O (1.96 g，10.3 mmol，0.3當量)。在25℃下攪拌混合物0.5小時。合併三個並行的批料以用於處理。將混合物傾入飽和NaHCO3 溶液(250 mL)中且隨後用EtOAc (250 mL×2)萃取。有機層經合併且用鹽水(500 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且隨後真空濃縮。藉由矽膠層析(石油醚:EtOAc = 30:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6-(苯甲氧基)-3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(34.0 g，72%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 436.8；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 8.24 (s, 1H), 7.51 (br d,J =6.8 Hz, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 3H), 5.87 (dd,J =2.6, 10.2 Hz, 1H), 5.50 (d,J =1.6 Hz, 2H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 3.84 - 3.75 (m, 1H), 2.74 - 2.61 (m, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 1.99 (br dd,J =2.4, 12.8 Hz, 1H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.69 - 1.63 (m, 1H)。步驟 f ： 在N2 、25℃下向6-(苯甲氧基)-3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(12.9 g，27.9 mmol，1.00當量)及1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(3.74 g，27.9 mmol，1.00當量)於甲苯(130 mL)中之混合物中添加RuPhos (2.60 g，5.57 mmol，0.2當量)、Pd2 (dba)3 (766 mg，836 μmol，0.03當量)及Cs2 CO3 (27.3 g，83.6 mmol，3.0當量)。將混合物加熱至100℃且在100℃下攪拌20小時。過濾混合物，且向濾液中添加水(500 mL)並用EtOAc (500 mL)萃取。經合併之有機層用0.5 M HCl水溶液(200 mL)洗滌。用DCM (200 mL×2)進一步萃取水層。經合併之有機層(EtOAc及DCM)用飽和NaHCO3 (200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(330 g矽石管柱，溶離劑為10至30%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-(6-(苯甲氧基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(17.6 g，64%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 443.1；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 8.12 (s, 1H), 8.05 (dd,J =1.2, 4.6 Hz, 1H), 7.70 (dd,J =1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.52 (br d,J =6.8 Hz, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 3H), 6.97 (dd,J =4.6, 8.4 Hz, 1H), 5.86 (dd,J =2.4, 10.2 Hz, 1H), 5.50 (d,J =2.2 Hz, 2H), 4.19 - 4.12 (m, 2H), 3.86 - 3.76 (m, 1H), 3.07 (t,J =6.6 Hz, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.25 - 2.13 (m, 3H), 1.98 (br d,J =12.8 Hz, 1H), 1.80 (br t,J =9.7 Hz, 2H), 1.74 - 1.63 (m, 2H)。步驟 g ： 在N2 下向1-(6-(苯甲氧基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(9.00 g，20.4 mmol，1.00當量)於MeOH (950 mL)中之溶液中添加Pd(OH)2 /C (1.14 g，4.07 mmol，50%純度，0.20當量)。將懸浮液真空脫氣且用H2 淨化若干次。將混合物在25℃下在H2 (50 psi)下攪拌30小時。合併2個並行的批料以用於處理。過濾混合物且減壓乾燥濾餅，得到呈淺黑色固體狀的含有Pd(OH)2 /C之3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-醇(13.7 g)。1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 12.60 (br s, 1H), 8.05 - 7.91 (m, 2H), 7.64 (br d,J =8.4 Hz, 1H), 7.02 (dd,J =4.4, 8.2 Hz, 1H), 5.68 (br d,J =8.7 Hz, 1H), 4.02 (br s, 2H), 3.94 (br d,J =11.2 Hz, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 1H), 2.94 (br t,J =6.4 Hz, 2H), 2.40 - 2.30 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 3H), 1.89 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 1.71 (br s, 1H), 1.55 (br s, 2H)。步驟 h ： 在25℃下向3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-醇(7.00 g，19.9 mmol，1.0當量)於DCM (70.0 mL)中之混合物中添加DIPEA (2.82 g，21.9 mmol，3.81 mL，1.1當量)。隨後將混合物冷卻至0℃，且在0℃下添加p-TsCl (4.54 g，23.9 mmol，1.20當量)於DCM (70.0 mL)中之溶液。在0至10℃下攪拌混合物1小時。合併2個並行的批料以用於處理。將反應物傾入冰水(250 mL)中且用EtOAc (250 mL×3)萃取。經合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠層析(石油醚:EtOAc = 5:1至1:1)純化殘餘物，得到呈紅色泡沫狀之4-甲基苯磺酸3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基酯(16.4 g，76%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 507.1；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) δ 8.23 (s, 1H), 8.10 (dd,J =1.4, 4.6 Hz, 1H), 8.00 (d,J =8.4 Hz, 2H), 7.76 (dd,J =1.4, 8.4 Hz, 1H), 7.41 (d,J =8.2 Hz, 2H), 7.00 (dd,J =4.6, 8.4 Hz, 1H), 5.68 (dd,J =2.4, 10.5 Hz, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 2H), 4.10 (br s, 1H), 3.72 (dt,J =2.4, 11.2 Hz, 1H), 3.06 (t,J =6.6 Hz, 2H), 2.59 - 2.51 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.22 - 2.11 (m, 3H), 1.91 (br dd,J =2.2, 12.9 Hz, 1H), 1.79 - 1.71 (m, 2H), 1.64 (br d, J=6.8 Hz, 1H)。
2,3- 二氫螺 [ 茚 -1,4'- 哌啶 ]-2- 胺，中間物 N
Figure 02_image295
步驟 a ： 將2-側氧基-2,3-二氫螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(500 mg，1.65 mmol，CAS編號241819-85-2)及1-苯基甲胺(264 mg，2.47 mmol)溶解於DCE (10 mL)中。隨後添加乙酸(9.42 µL，0.165 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物1小時。接著，添加氰基硼酸鈉(155 mg，2.47 mmol)且在室溫下攪拌反應物48小時。隨後將反應物加熱至50℃後保持2.5小時，隨後添加AcOH (90 μL)，且在50℃下再攪拌反應物48小時。反應物隨後用飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取。經合併之有機相用鹽水洗滌且濃縮。藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之2-(苯甲基胺基)-2,3-二氫螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(242 mg，37%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 393.5。步驟 b ： 將2-(苯甲基胺基)-2,3-二氫螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(242 mg，0.616 mmol)及三氟乙酸(70.2 mg，0.616 mmol)溶解於MeOH (5 mL)中。隨後在室溫下使反應混合物循環通過3巴氫氣下具有10% Pd/C濾筒之H-Cube 2小時。隨後濃縮反應混合物且藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷，接著0至10% MeOH/DCM + 1% NH4 OH)純化，得到2-胺基-2,3-二氫螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(68 mg，37%產率)。步驟 c ： 將2-胺基-2,3-二氫螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(68 mg，0.23 mmol)溶解於MeOH (2 mL)中，隨後添加TFA (1 mL)且在室溫下攪拌反應混合物1小時。濃縮反應混合物，用甲苯沖洗且高真空乾燥1小時，得到2,3-二氫螺[茚-1,4'-哌啶]-2-胺(40.0 mg，41%產率，2 TFA)。LCMS m/z [M+H]+ = 203.3。
4-[ 順 -3-[( 第三丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ] 環丁基 ] -1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -6- 甲腈，中間物 O
Figure 02_image297
步驟 a ： 在40℃下向順-3-胺基環丁-1-醇鹽酸鹽(3.04 g，24.6 mmol)及Et3 N (10.3 mL，73.8 mmol)於EtOH (100.0 mL)中之溶液中添加3-氟-4-硝基苯甲腈(4.10 g，24.6 mmol)。在40℃下攪拌混合物0.5小時。隨後真空濃縮混合物，得到粗產物。用1:4之EtOAc:石油醚濕磨固體並攪拌20分鐘。過濾混合物且真空乾燥濾餅，得到呈橙色固體狀之3-[(3-羥基環丁基)胺基]-4-硝基苯甲腈(5.60 g，98%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 234.0。步驟 b ： 將3-[(3-羥基環丁基)胺基]-4-硝基苯甲腈(5.60 g，24.0 mmol)及Pd/C (1.00 g，10%)於MeOH (100.0 mL)中之溶液在10℃下在H2 (15 psi)下攪拌12小時。隨後過濾反應混合物且真空濃縮濾液，得到呈黃色膠狀物之4-胺基-3-[(3-羥基環丁基)胺基]苯甲腈(5.00 g，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 203.9。步驟 c ： 將4-胺基-3-[(3-羥基環丁基)胺基]苯甲腈(5.00 g，24.6 mmol)、1,2-二溴乙烷(18.40 g，98.4 mmol)、TBAB (31.70 g，98.4 mmol)及TEA (13.7 mL，98.4 mmol)之溶液在60℃下攪拌12小時。將溶液添加至H2 O (500.0 mL)中且隨後用EtOAc (500.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(500.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈橙色膠狀物之粗產物。藉由急驟矽膠層析(80 g管柱，0%至65%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈橙色油狀物之4-[順-3-羥基環丁基]-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈(3.50 g，62%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 230.1步驟 d ： 將4-[順-3-羥基環丁基]-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈(3.50 g，15.2 mmol)、TBSCl (2.96 g，19.7 mmol)及咪唑(2.06 g，30.4 mmol)於CH2 Cl2 (30.0 mL)中之溶液在40℃下攪拌0.5小時。真空濃縮混合物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至15%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈橙色油狀物之4-[順-3-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]環丁基]-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈(2.50 g，48%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 343.9。HPLC：在254 nm下93.5%純度。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：6.83-6.86 (m, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.30-6.33 (m, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.01-4.05 (m, 1H), 3.45-3.49 (m, 2H), 3.17-3.23 (m, 1H), 3.01-3.06 (m, 2H), 2.65-2.70 (m, 2H), 1.89-1.95 (m, 2H), 0.82 (s, 9H), 0.00 (s, 6H)。
4-( 反 -3-(( 第三丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ) 環丁基 )-1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -6- 甲腈 ， 中間物 P
Figure 02_image299
如針對中間物O所描述，在步驟a中偶合反-3-胺基環丁-1-醇鹽酸鹽來合成4-(反-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環丁基)-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈。最終中間物之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 344.2。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：6.81-6.88 (m, 1H), 6.50-6.51 (m, 1H),6.31-6.34 (m, 1H), 4.29-4.36 (m, 1H), 3.90-3.97 (m, 1H), 3.49-3.50 (m, 2H), 3.01-3.04 (m, 2H), 2.24-2.34 (m, 4H), 0.85 (s, 9H), 0.01 (s, 6H)。
4-( 反 -3- 甲氧基環丁基 )-1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -6- 甲腈，中間物 Q
Figure 02_image301
如中間物O之步驟a至c中所描述，在步驟a中偶合反-3-甲氧基環丁-1-胺鹽酸鹽來合成4-(反-3-甲氧基環丁基)-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈。最終中間物之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 243.9；1 H NMR (400MHz, CDCl3 )：δ = 7.02-6.95 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.42 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.09-3.98 (m, 2H), 3.59 (t,J = 5.0 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.12 (t,J = 5.0 Hz, 2H), 2.46-2.32 (m, 4H)。
4-( 順 -3- 甲氧基環丁基 )-1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -6- 甲腈，中間物 R
Figure 02_image303
如中間物O之步驟a至c中所描述，在步驟a中偶合順-3-甲氧基環丁-1-胺鹽酸鹽來合成4-(順-3-甲氧基環丁基)-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈。最終中間物之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 244.1；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：6.94 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 6.41 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.37 (br, 1H), 3.70-3.78 (m, 1H), 3.56 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.38-3.48 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.13 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 2.73-2.83 (m, 2H), 1.93-2.03 (m, 2H)。
6- 氯 - 3-(2,3- 二氯苯基 ) 吡嗪 -2- 胺， 中間物 S
Figure 02_image305
步驟 a ：將3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(600 mg，2.87 mmol，1.0當量，CAS編號212779-21-0)、(2,3-二氯苯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(547 mg，2.87 mmol，1.0當量)、Pd(dppf)Cl2 (210 mg，287 µmol，0.1當量)及K3 PO4 (1.82 g，8.61 mmol，3.0當量)於二噁烷(15 mL)及H2 O (3 mL)中之混合物抽成真空且用N2 氣體再填充3次，隨後在70℃下攪拌12小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至10:1)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之6-氯-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺(630 mg，80%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 273.9/275.9。
(S)-4- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 二鹽酸鹽 ， 中間物 T
Figure 02_image307
步驟 a ： 向圓底燒瓶中裝入4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(533 mg，2.53 mmol)及THF (10 mL)，之後冷卻至-78℃以供添加鋰雙(丙-2-基)胺(2.90 mL，2.90 mmol)。45分鐘後，添加2-(溴甲基)-1-氟-3-碘苯(954 mg，3.03 mmol)於THF (2 mL)中之溶液，且使反應物升溫至室溫。45分鐘後，用水及乙酸乙酯稀釋反應物。將有機層預吸收在矽膠(4 g)上且藉由管柱層析純化(用乙酸乙酯/庚烷溶離)，得到呈無色油狀物之4-氰基-4-[(2-氟-6-碘苯基)甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(860 mg，76%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 445.1。步驟 b ： 向圓底燒瓶中裝入4-氰基-4-[(2-氟-6-碘苯基)甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(860 mg，1.93 mmol)、Pd/P(tBu)3 G2 (98.8 mg，0.1930 mmol)、DMF (15 mL)、水(1.5 mL)及三乙胺(320 µL，2.31 mmol)。將氮氣鼓泡通過混合物5分鐘，之後將小瓶密封且加熱至130℃。3小時後，添加另外的Pd/P(tBu)3 G2 (98.8 mg，0.1930 mmol)及三乙胺(233 mg，2.31 mmol)，且在130℃下攪拌混合物隔夜。將反應物冷卻至室溫且分配於乙酸乙酯、水與鹽水之間。將有機層預吸收在矽膠(4 g)上且藉由管柱層析純化(用乙酸乙酯及庚烷溶離)，得到4-氟-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(280 mg，0.8767 mmol)。LCMS m/z [M+H]+ = 320.7。步驟 c ： 向反應管中裝入4-氟-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(280 mg，0.8767 mmol)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(158 mg，1.31 mmol)、2-MeTHF及四鈦-1-基鎓四乙醇化物(1.19 mL，3.50 mmol)。將小瓶密封且加熱至80℃後保持隔夜。將混合物冷卻至室溫，且向其中裝入鋰酸硼鎓(28.5 mg，1.31 mmol)。2小時後，反應物用甲醇淬滅且真空濃縮。將殘餘物溶解於乙酸乙酯及水中。向水層中裝入矽藻土，過濾且用乙酸乙酯反萃取。將經合併之有機溶離份預吸收在矽膠(4 g)上且藉由管柱層析純化(用乙酸乙酯及庚烷溶離)，得到呈無色油狀物之(3S)-7-氟-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(175 mg，0.412 mmol)。LCMS m/z [M+H]+ = 425.2。步驟 d ： 向反應管中裝入(3S)-7-氟-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(170 mg，0.40 mmol)及甲醇(3 mL)，接著裝入鹽酸(1 mL，4.00 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16小時。隨後真空移除溶劑，且用甲基第三丁基醚濕磨殘餘物。過濾且風乾至恆重之後，分離呈白色固體狀之(S)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(150 mg)。LCMS m/z [M+H]+ = 221.1。
((1S)-4- 氟 -1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 U
Figure 02_image309
步驟 a ： 將(3S)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.38 g，4.70 mmol，中間物T)溶解於DMF (12 mL)中。隨後添加6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(1.71 g，4.70 mmol，中間物A)，接著添加乙基雙(丙-2-基)胺(3.27 mL，18.8 mmol)，且在75℃下攪拌反應混合物2小時。隨後將反應混合物冷卻至室溫並添加二碳酸二第三丁酯(1.17 mL，5.17 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物隨後用EtOAc及水稀釋。分離各層，隨後有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮至SiO2 上。經由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化混合物，得到N-[(3S)-7-氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(392 mg，13%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 649.5。
(R)-4- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 二鹽酸鹽 ， 中間物 V
Figure 02_image311
Figure 02_image313
如針對中間物T所描述，在步驟c中使用(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺形成(3R)-7-氟-3-{[(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯，來合成(R)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽。分離呈白色固體狀之(R)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽。LCMS m/z [M+H]+ = 221.2。
6-[1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H- 吡唑 -5- 基 ]-1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶，中間物 W
Figure 02_image315
步驟 a ： 向6-溴-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(4.0 g，18.7 mmol)於二噁烷(50 mL)及H2 O (5 mL)中之溶液中添加Cs2 CO3 (12.1 g，37.4 mmol)、1-(氧雜環己烷-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1H -吡唑(7.8 g，28.0 mmol，CAS編號903550-26-5)及Pd(dppf)Cl2 (684 mg，935 mmol)。在N2 氛圍下在100℃下攪拌混合物12小時。隨後真空濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱(溶離：石油醚:乙酸乙酯= 1:0至1:3)純化，得到呈黃色固體狀之6-[1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑-5-基]-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(3.7 g，70%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 284.9。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 7.55~7.54 (m, 1H), 7.25 (d ,J = 6.4 Hz, 1H), 6.92 (d ,J = 6.4 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.94~5.90 (m, 1H), 4.04~4.00 (m, 1H), 3.61~3.60 (m, 1H), 3.34~3.32 (m, 2H), 2.94~2.92 (m, 2H), 2.48~2.41 (m, 1H), 2.12~2.08 (m, 3H), 1.92~1.90 (m, 1H), 1.78~1.48 (m, 3H)。
6-(1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 )-1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶，中間物 X
Figure 02_image317
步驟 a ： 在N2 下向6-氯-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(2 g，11.8 mmol)及1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1H -吡唑(2.93 g，14.1 mmol)於二噁烷(35.0 mL)及H2 O (5.0 mL)中之混合物中添加Pd(dppf)Cl2 (1.29 g，1.77 mmol)及K3 PO4 (5.49 g，25.9 mmol)。在N2 下在100℃下攪拌混合物3小時。隨後真空濃縮混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至0/1)純化，得到呈棕色固體狀之產物6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(1.30 g，52%產率)。LCMS m/z [M]+ = 214.9。
(S)-6- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 二鹽酸鹽 ， 中間物 Y
Figure 02_image319
如上文針對中間物T所描述，在步驟a中使用1-(溴甲基)-4-氟-2-碘苯進行偶合來合成(S)-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.80-9.04 (m, 2H), 8.65 (br s, 3H), 7.42 (dd, J=2.44, 9.03 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=5.37, 8.30 Hz, 1H), 7.19 (dt, J=2.44, 8.79 Hz, 1H), 4.41 (br d, J=4.64 Hz, 1H), 3.69-3.74 (m, 1H), 3.31 (br d, J=13.18 Hz, 1H), 2.89-3.20 (m, 5H), 1.94-2.10 (m, 1H), 1.68-1.84 (m, 2H), 1.47-1.61 (m, 1H), 0.99-1.18 (m, 4H)。
((3S)-5- 氟 -1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 Z
Figure 02_image321
步驟 a ： 向含6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(150 mg，0.4114 mmol，中間物A)之DMF (4 mL)中裝入乙基雙(丙-2-基)胺(355 µL，2.05 mmol)及(S)-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(120 mg，0.411 mmol，中間物Y)，且將溶液加熱至75℃後保持4小時。隨後添加另外0.2當量的6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(中間物A)，且在75℃下攪拌反應物2小時。隨後將反應物冷卻至室溫並添加二碳酸二第三丁酯(107 mg，0.4936 mmol)，且在室溫下攪拌反應物16小時。隨後將混合物分配於鹽水與EA之間。將有機層預吸收在SiO2 (2 g)上且藉由管柱層析(12 g管柱，20至70% EA/庚烷)純化，得到呈白色固體狀之((3S)-5-氟-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(175 mg，66%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 649.2。1-(6- 氯 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 ， 中間物 AA
Figure 02_image323
步驟 a ： 向小瓶中裝入含6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(2 g，5.48 mmol，中間物A)、XantPhos-Pd-G4 (263 mg，0.274 mmol)、1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(720 mg，5.37 mmol)及Cs2 CO3 (3.54 g，10.9 mmol)之PhMe (20 mL)。將混合物用氮氣鼓泡10分鐘，隨後將小瓶密封且加熱至60℃後保持48小時。冷卻反應混合物，添加水及EA。有機層用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。藉由管柱層析(Si-40 g管柱，50至90% EA/庚烷)純化殘餘物，得到呈橙色固體狀之1-(6-氯-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(1.48 g，73%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 371.3。
6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基 - 3-( 甲苯磺醯基氧基 ) 吡嗪 -2- 甲酸乙酯，中間物 AB
Figure 02_image325
步驟 a ： 在0℃下向丙烷-1,2-二胺(5.00 g，67.4 mmol，5.76 mL，1.00當量)於EtOH (25.0 mL)中之經攪拌混合物中逐滴添加2-側氧基丙二酸二乙酯(11.7 g，67.4 mmol，10.4 mL，1.00當量)。使混合物升溫至25℃。在25℃下攪拌反應物2小時，隨後在95℃下攪拌反應物18小時。濃縮反應混合物，隨後藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 20:1至0:1，隨後石油醚/乙酸乙酯/EtOH=8:3:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-羥基-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(2.24 g，18%產率)。1 H NMR (400MHz DMSO-d 6 ) 12.8 (br s, 1 H), 7.35 (br s, 1 H), 4.25 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 2.24 (s, 3 H), 1.26 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。步驟 b ： 在N2 、0℃下向3-羥基-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(2.24 g，12.3 mmol，1.00當量)於DMF (11.2 mL)中之經攪拌溶液中一次添加全量NBS (2.30 g，12.9 mmol，1.05當量)，隨後在20℃下攪拌混合物2小時。將反應混合物傾入H2 O (60.0 mL)中，其中形成固體沈澱。過濾懸浮液且減壓乾燥固體濾過物，得到呈淡黃色固體狀之6-溴-3-羥基-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(1.90 g，59%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 262.9；1 H NMR (400MHz DMSO-d 6 ) 12.8 (br s, 1 H), 4.30 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 2.45 (s, 3 H), 1.29 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。步驟 c ： 在20℃、N2 下向6-溴-3-羥基-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(1.90 g，7.28 mmol，1.00當量)及K2 CO3 (4.02 g，29.1 mmol，4當量)於ACN (9.50 mL)及H2 O (1.90 mL)中之經攪拌混合物中添加(2,3-二氯苯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(1.39 g，7.28 mmol，1.00當量)及Pd(dppf)Cl2 ·CH2 Cl2 (594 mg，728 μmol，0.10當量)。在90℃下攪拌混合物1小時。隨後向混合物中添加H2 O (20.0 mL)且用0.5 N HCl酸化至pH = 7。隨後用乙酸乙酯(40.0 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯=50/1至1/1，Rf = 0.6)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6-(2,3-二氯苯基)-3-羥基-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(700 mg，29%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 327.1；1 H NMR (400MHz CDCl3 ) 11.47 (br s, 1 H), 7.57 (d,J = 7.6 Hz, 1 H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1 H), 7.27 - 7.25 (m, 1 H), 4.56 (q,J = 6.8 Hz, 2 H), 2.42 (s, 3 H), 1.45 (td,J = 7.2 Hz, 0.8 Hz, 3 H)。步驟 d ： 將乙基 -6-(2,3- 二氯苯基 )-3- 羥基 -5- 甲基吡嗪 -2- 甲酸酯 (150.0 mg ，458.0 µmol )、TsCl (130.0 mg，686.0 μmol)及DIPEA (241.0 μL，1.37 mmol)於CH2 Cl2 (3.0 mL)中之溶液在20℃下攪拌1小時。將溶液傾入H2 O (10.0 mL)中且用CH2 Cl2 (10.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈橙色油狀物之6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基 - 3-[(4- 甲基苯磺醯基 ) 氧基 ] 吡嗪 -2- 甲酸乙酯 (240.0 mg，定量粗產率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS m/z [M+H]+ = 481.0/483.0。
2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 硫醇鈉，中間物 AC
Figure 02_image327
步驟 a ： 向250 mL圓底燒瓶中裝入3-氯-4-碘吡啶-2-胺(1 g，3.92 mmol)、9-{[5-(二苯基磷烷基)-9,9-二甲基-9H-二苯并哌喃-4-基]二苯基-4-磷烷基}-O-甲烷磺醯基-8-甲基-8-4-氮雜-9-鈀三環[8.4.0.02 ,7]十四-1(14),2,4,6,10,12-六烯-9,9-雙(基鎓)-10-酸-9-醇鹽(188 mg，0.196 mmol)、二噁烷(30 mL)、3-硫基丙酸甲酯(476 µL，4.31 mmol)及乙基雙(丙-2-基)胺(1.36 mL，7.84 mmol)。將混合物用氮氣鼓泡5分鐘，隨後在100℃下攪拌混合物1小時。反應混合物用EA稀釋，經由矽藻土過濾且用EA洗滌。將濾液預吸收在SiO2 (8 g)上且藉由管柱層析(40 g管柱，0至50% EA/己烷)純化，得到3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(890 mg，92%產率)。LCMS m/z [M]+ = 246.9。步驟 b ： 將3-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基]丙酸甲酯(890 mg，3.60 mmol)及乙氧基鈉(1.40 mL，3.78 mmol)溶解於THF (10 mL)中。在25℃下攪拌混合物10分鐘。用DCM (10至15 mL)稀釋混合物並攪拌直至長晶；5分鐘後，懸浮液中形成大量固體。添加另外的DCM (86 mL)，過濾反應物，且濾餅用DCM洗滌並風乾。分離呈紅色/棕色固體狀之2-胺基-3-氯吡啶-4-硫醇鈉(473 mg，71%產率)，其在使用前儲存於冷凍機中。LCMS m/z [M+H-Na]+ = 160.9。(S)-5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 AD
Figure 02_image329
如上文針對中間物T所描述，在步驟a中使用2-(溴甲基)-4-氟-1-碘苯進行偶合且在步驟c中使用(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺來合成(S)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm 8.94 (br s, 2 H) 8.58 (br s, 3 H) 7.61 (br dd, J=7.81, 5.86 Hz, 1 H) 7.07 - 7.18 (m, 2 H) 4.37 (br d, J=4.39 Hz, 1 H) 3.71 (s, 1 H) 3.31 (br d, J=13.43 Hz, 1 H) 3.13 - 3.22 (m, 2 H) 2.87 - 3.10 (m, 3 H) 1.95 - 2.11 (m, 1 H) 1.64 - 1.85 (m, 2 H) 1.50 (br d, J=14.40 Hz, 1 H) 1.09 (s, 4 H)。
6-(1,3- 噁唑 -2- 基 )-1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 ， 中間物 AE
Figure 02_image331
步驟 a ： 將6-溴-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(1 g，4.69 mmol，CAS編號1219022-46-4)、2-(三丁基錫烷基)-1,3-噁唑(2.51 g，7.03 mmol)、Pd2 (dba)3 (429 mg，469 µmol)及XPhos (447 mg，938 µmol)於二噁烷(30 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。冷卻至室溫後，添加KF (2 g)，且在20℃下攪拌反應混合物0.5小時。反應混合物用乙酸乙酯(60 mL)稀釋且用H2 O (30 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯作為溶離劑)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之6-(1,3-噁唑-2-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(260 mg，28%產率)。LCMS m/z [M]+ = 201.9。
4-(1- 氰基環丙基 )-1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -6- 甲腈，中間物 AF
Figure 02_image333
步驟 a ： 向1-胺基環丙烷-1-甲腈鹽酸鹽(4.0 g，33.7 mmol)及TEA (13.9 mL，101 mmol)於EtOH (60.0 mL)中之混合物中添加3-氟-4-硝基苯甲腈(5.6 g，33.7 mmol)。在90℃下攪拌混合物12小時。真空濃縮混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至3/1)純化，得到呈黃色固體狀之產物3-[(1-氰基環丙基)胺基]-4-硝基苯甲腈(2.8 g，36%產率)。1 HNMR (400MHz, CDCl3 ) δ 8.34-8.24 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.20-7.18 (m, 1H), 1.82-1.79 (m, 2H), 1.45-1.42 (m, 2H)。步驟 b ： 向3-[(1-氰基環丙基)胺基]-4-硝基苯甲腈(2.5 g，10.9 mmol)於MeOH (40.0 mL)中之混合物中添加10%濕Pd/C (300.0 mg)。在15℃、H2 (15 psi)下攪拌混合物2小時。過濾混合物且真空濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至1/1)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之產物4-胺基-3-[(1-氰基環丙基)胺基]苯甲腈(1.1 g，51%產率)。1 HNMR (400MHz, CDCl3 ) δ 7.22-7.20 (m, 1H), 7.11-7.05 (m, 1H), 6.68 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.70 (s, 2H), 1.58-1.51 (m, 2H), 1.23-1.19 (m, 2H)。步驟 c ： 將4-胺基-3-[(1-氰基環丙基)胺基]苯甲腈(500.0 mg，2.5 mmol)、TBAB (3.2 g，10.0 mmol)、TEA (1.1 mL，8.6 mmol)及1,2-二溴乙烷(1.5 mL，17.4 mmol)之混合物在60℃下攪拌24小時。將混合物傾入水(50 mL)中且用DCM (50 mL × 3)萃取。有機層用鹽水洗滌且經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至1/1)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之產物4-(1-氰基環丙基)-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈(175.0 mg，經合併產物)。LCMS m/z [M+H]+ = 224.9；1 H NMR (400MHz, CDCl3 )：δ = 7.10 (s, 1H), 6.96 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.38 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.46 (t,J = 4.6 Hz, 2H), 3.46 (t,J = 4.6 Hz, 2H), 1.55 (s, 2H), 1.21 (s, 2H)。
3-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 ， 中間物 AG
Figure 02_image335
步驟 a ： 將1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(100 mg，494 µmol，中間物E)、Boc2 O (322 mg，1.48 mmol)及TEA (149 mg，1.48 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物在30℃下攪拌2小時。隨後減壓濃縮混合物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=1:0至10:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(30 mg，62%純度，15%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 425.1。
6- 溴 -1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 ， 中間物 AH
Figure 02_image337
Figure 02_image339
步驟 a ： 將6-溴-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.5 g，3.94 mmol，經由中間物AL之步驟a至c合成)、AcONH4 (3.03 g，39.4 mmol)及NaBH3 CN (297 mg，4.72 mmol)於EtOH (30 mL)中之溶液在80℃下攪拌1小時。隨後每小時向混合物中添加3次另外的AcONH4 (3.03 g，39.4 mmol)及NaBH3 CN (297 mg，4.72 mmol)且在80℃下攪拌混合物，隨後在80℃下攪拌混合物9小時。將溶液添加至10% NaOH (150 mL)中且隨後用EtOAc (200 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色膠狀物之1-胺基-6-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.5 g，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 381.0/383.0。步驟 b ： 將1-胺基-6-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.5 g，3.93 mmol)、Boc2 O (1.02 g，4.71 mmol)及Et3 N (1.61 mL，11.7 mmol)於DCM (30 mL)中之溶液在20℃下攪拌1小時。將溶液添加至H2 O (100 mL)中且隨後用CH2 Cl2 (50 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色膠狀物之粗產物。藉由急驟矽膠層析(40 g，0%至10%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色膠狀物之6-溴-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.4 g，74%)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 381.0/383.0。
1- 胺基 -N,N- 二甲基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-6- 甲醯胺 ， 中間物 AI
Figure 02_image341
Figure 02_image343
步驟 a ： 將6-溴-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(300.0 mg，623.0 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (45.6 mg，62.3 μmol)及TEA (256.0 μL，1.86 mmol)於MeOH (20.0 mL)中之溶液在CO (50 psi)下在80℃下攪拌12小時。濃縮混合物，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(12 g，0%至15%之乙酸乙酯/石油醚)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1',5-二甲酸1'-第三丁酯5-甲酯(200.0 mg，70%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 461.2。步驟 b ： 將(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1',5-二甲酸1'-第三丁酯5-甲酯(200.0 mg，434.0 µmol)及LiOH·H2 O (91.1 mg，2.17 mmol)於MeOH/H2 O (3.0 mL/3.0 mL)中之溶液在50℃下攪拌0.5小時。將反應混合物用2 N HCl調整至pH = 4且用CH2 Cl2 (10.0 mL × 2)萃取。減壓濃縮經合併之有機層，得到呈黃色油狀物之產物1'-[(第三丁氧基)羰基]-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-5-甲酸(150.0 mg，78%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 447.2。步驟 c ： 將1'-[(第三丁氧基)羰基]-1-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-6-甲酸(200.0 mg，447.0 µmol)、二甲胺鹽酸鹽(109.0 mg，1.34 mmol)、HATU (254.0 mg，670.0 μmol)及TEA (245.0 μL，1.78 mmol)於DMF (5.0 mL)中之溶液在50℃下攪拌0.5小時。將反應混合物傾入H2 O (20.0 mL)中且用EtOAc (20.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈黃色油狀物之產物1-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-6-(二甲基胺甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(200.0 mg，95%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 474.2。步驟 d ： 將1-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-6-(二甲基胺甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(200.0 mg，422.0 µmol)於HCl/MeOH (5.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀物之產物1-胺基-N ,N -二甲基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-6-甲醯胺二鹽酸鹽(150.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 274.1。
2- 氯 -3- 氟吡啶 -4- 硫醇鈉，中間物 AJ
Figure 02_image345
步驟 a ： 向2-氯-3-氟-4-碘吡啶(900 mg，3.5 mmol)及3-硫基丙酸2-乙基己酯(912 mg，4.2 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物中添加Pd2 (dba)3 (319 mg，0.3 mmol)、XantPhos (403 mg，0.7 mmol)及DIPEA (1.8 mL，10.4 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:10)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之3-[(2-氯-3-氟吡啶-4-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(410 mg，34%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 348.1。步驟 b ： 將3-[(2-氯-3-氟吡啶-4-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(200 mg，0.6 mmol)及MeONa (37.1 mg，0.7 mmol)於THF (1.0 mL)中之混合物在20℃下攪拌1小時。將混合物用DCM (0.5 mL)稀釋且在0℃下攪拌30分鐘。過濾反應混合物且濾餅用DCM洗滌並風乾，得到呈淡黃色固體狀之2-氯-3-氟吡啶-4-硫醇鈉(80 mg，75%產率)。LCMS m/z [M+H]+ =164.0。
3- 氯 - 5- 甲基吡嗪 -2- 甲酸甲酯，中間物 AK
Figure 02_image347
步驟 a ： 將3,5-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(2.0 g，9.7 mmol，經由中間物A之步驟a合成)、三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧硼𠮿(2.4 g，19.3 mmol)、Pd(PPh3 )4 (558 mg，483 µmol)及Cs2 CO3 (6.3 g，19.3 mmol)於二噁烷(70 mL)中之混合物在N2 氛圍下在110℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至50%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之3-氯-5-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯(250 mg，14%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 187.0。
(1S )-6- 溴 -1-{[(R )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯基 ] 胺基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 ， 中間物 AL
Figure 02_image349
Figure 02_image351
步驟 a ： 在N2 、-78℃下向哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(10.00 g，41.10 mmol)於THF (150.0 mL)中之溶液中添加LDA (24.6 mL，49.3 mmol，2 M)。在-78℃下攪拌混合物1小時。在-78℃下向混合物中添加含1-溴-4-(溴甲基)苯(10.70 g，43.10 mmol)之THF (50.0 mL)。隨後在N2 下在20℃下攪拌混合物11小時。反應混合物用H2 O (400.0 mL)淬滅且用EtOAc (400.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(300.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(120 g管柱，0%至5%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-[(4-溴苯基)甲基]哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(11.40 g，67%產率)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 312.0/314.0。步驟 b ： 將4-[(4-溴苯基)甲基]哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(11.40 g，27.6 mmol)及KOH (7.74 g，138.0 mmol)於MeOH/H2 O (50.0 mL/50.0 mL)中之溶液在60℃下攪拌16小時。將混合物用2 N HCl調整至pH = 5且用CH2 Cl2 (150.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之4-[(4-溴苯基)甲基]-1-[(第三丁氧基)羰基]哌啶-4-甲酸(10.8 g，99%產率)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 298.0/300.0。步驟 c ： 在N2 、20℃下向4-[(4-溴苯基)甲基]-1-[(第三丁氧基)羰基]哌啶-4-甲酸(10.00 g，25.1 mmol)於DCM (150.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (3.64 mL，50.2 mmol)。在20℃下攪拌混合物1小時，此時觀察到白色懸浮液。在0℃下向混合物中逐份添加AlCl3 (5.01 g，37.6 mmol)。在N2 下在20℃下攪拌混合物2小時。反應混合物隨後藉由2 N NaOH淬滅且調整至pH = 10。接著，在20℃下向混合物中添加Boc2 O (10.90 g，50.2 mmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。過濾反應混合物，且用CH2 Cl2 (100.0 mL × 2)萃取濾液。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(80 g管柱，0%至10%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈橙色固體狀之6-溴-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(6.00 g，63%產率)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 280.0/282.0。步驟 d ： 向6-溴-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.00 g，2.62 mmol)及Ti(OEt)4 (2.17 mL，10.4 mmol)於2-Me-THF (20.0 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(635.0 mg，5.24 mmol)。在N2 下在90℃下攪拌反應混合物12小時。含(1E )-6-溴-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.30 g，粗產物)之2-Me-THF (20.0 mL)不經進一步純化即直接用於下一步驟中。步驟 e ： 在0℃下向(1E )-6-溴-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.30 g，2.68 mmol)於2-Me-THF (20.0 mL)中之溶液中添加LiBH4 (2.68 mL，5.36 mmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。反應混合物用MeOH淬滅，隨後用H2 O (200.0 mL)濕磨且用EtOAc (200.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到橙色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至30%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1S )-6-溴-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(550.0 mg，42%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 485.1/487.1。
(S )-1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-6- 甲腈，中間物 AM
Figure 02_image353
步驟 a ： 將(1S )-6-溴-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(550.0 mg，1.13 mmol，中間物AL)、Zn(CN)2 (265.0 mg，2.26 mmol)及XantPhos-Pd-G4 (108.0 mg，113.0 μmol)於DMF (20.0 mL)中之溶液在N2 下在100℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到橙色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至50%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1S )-6-氰基-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(490.0 mg，100%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 432.2。步驟 b ： 將(1S )-6-氰基-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(450.0 mg，1.04 mmol)於HCl/MeOH (15.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌0.5小時。濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之產物(S )-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-6-甲腈二鹽酸鹽(450.0 mg，70%純度，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 228.1。
7- 溴 -1- 甲基 -1,2,3,4- 四氫喹喏啉，中間物 AN
Figure 02_image355
步驟 a ： 向4-溴-2-氟-1-硝基苯(25.0 g，113.0 mmol)於MeOH (100.0 mL)及THF (50.0 mL)中之混合物中逐滴添加MeNH2 (67.5 mL，135.0 mmol，2 M於THF中)。在10℃下攪拌混合物12小時。隨後向混合物中添加更多的MeNH2 (60.0 mL，2 M於THF中)，且在45℃下攪拌混合物12小時。真空濃縮混合物，得到殘餘物。將水(200.0 mL)添加至混合物中，且用EtOAc (200.0 mL × 2)萃取混合物。有機層用鹽水洗滌且經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之5-溴-N -甲基-2-硝基苯胺(25.5 g，98%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 ) 7.95 (d,J = 9.2 Hz, 2H), 6.93 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.71-6.68 (m, 1H), 7.48 (s, 1H), 2.94 (d,J = 5.2 Hz, 3H)。步驟 b ： 向5-溴-N -甲基-2-硝基苯胺(10.0 g，43.2 mmol)於MeOH (150.0 mL)中之混合物中逐滴添加含連二亞硫酸鈉(67.5 g，388.0 mmol)之H2 O (60.0 mL)。在60℃下攪拌混合物12小時。隨後過濾混合物且真空濃縮濾液。殘餘物用EtOAc (200.0 mL × 3)萃取，有機層用H2 O (100.0 mL)及鹽水(100.0 mL)洗滌，隨後經無水Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且真空濃縮濾液，得到呈棕色油狀物之產物5-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8.60 g，粗產物)。步驟 c ： 將5-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(1.0 g，4.97 mmol)、1,2-二溴乙烷(2.13 mL，24.8 mmol)及TBAB (4.80 g，14.9 mmol)之混合物在60℃下攪拌12小時。真空濃縮混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至2/1)純化，得到呈棕色固體狀之7-溴-1-甲基-1,2,3,4-四氫喹喏啉(233.0 mg，21%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 226.9/228.9。
4- 甲基 - 1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -6- 甲腈，中間物 AO
Figure 02_image357
步驟 a ： 在N2 下向7-溴-1-甲基-1,2,3,4-四氫喹喏啉(500.0 mg，2.20 mmol)及Zn(CN)2 (516.0 mg，4.40 mmol)於DMF (10.0 mL)中之混合物中添加[(t -Bu)3 P]2 Pd (224.0 mg，440.0 µmol)。在N2 、120℃下攪拌混合物12小時。TLC (石油醚/EtOAc = 2/1)顯示形成新斑點且無起始物質剩餘。將經合併之混合物傾入水(50.0 mL)中且用EtOAc (50.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到棕色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至2/1)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之產物4-甲基-1,2,3,4-四氫喹喏啉-6-甲腈(370.0 mg，95.0%純度)。LCMS m/z [M]+ = 173.8。
3H - 螺 [ 1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 酮， 中間物 AP
Figure 02_image359
Figure 02_image361
步驟 a ： 向2-氟苯甲醛(4 g，32.2 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加丙烷-1,3-二硫醇(3.5 mg，32.2 mmol)及I2 (244 mg，966 μmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。將反應混合物傾入Na2 S2 O3 溶液(0.4 M，180 mL)中，且添加150 mL NaOH溶液。分離有機相，且水相用CH2 Cl2 (200 mL)萃取。經合併之有機溶離份用水(150 mL)、鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發，得到黃色固體。自CH2 Cl2 :石油醚(1:1)再結晶，得到呈白色固體狀之2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷(5.00 g，72%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 215.0。步驟 b ： 在-78℃下向2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷(4 g，18.6 mmol)於THF (50 mL)中之混合物中緩慢添加LDA (18.6 mL，37.2 mmol)。在-20℃下攪拌所得混合物0.5小時，隨後在-78℃下添加4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(3.7 g，18.6 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物2小時。隨後將反應混合物傾入飽和NH4 Cl (50 mL)中且用EtOAc (80 mL × 3)萃取。經合併之有機溶離份用水(100 mL)、鹽水(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發，得到黃色油狀物。藉由矽膠管柱(溶離：石油醚:乙酸乙酯= 5:1至2:1)純化該油狀物，得到呈白色固體狀之產物4-[2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基]-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(3.20 g，42%產率)。LCMS m/z [M-100]+ = 313.9。步驟 c ： 向4-[2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基]-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2 g，4.83 mmol)於DCM (20 mL)及H2 O (5 mL)中之混合物中添加吡啶(2 mL)、吡啶·HBr3 (1.82 g，5.79 mmol)及TBAB (158 mg，483 μmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。將溶液傾入水(30 mL)中且用DCM (50 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發。藉由矽膠管柱(溶離：石油醚:乙酸乙酯= 5:1至1:1)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之4-(2-氟苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.20 g，77%產率)。LCMS m/z [M-100]+ = 223.9。步驟 d ： 向4-(2-氟苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(600 mg，1.85 mmol)於二噁烷(5 mL)中之溶液中添加t -BuOK (207 mg，1.85 mmol)。在70℃下攪拌混合物2小時。減壓濃縮混合物且用水(20 mL)稀釋，藉由EtOAc (30 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-側氧基-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(210 mg，75%產率)。LCMS m/z [M-100]+ = 203.9。步驟 e ： 向3-側氧基-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(300 mg，988 µmol)於二噁烷(2 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(2.46 mL，4 M)。在20℃下攪拌混合物12小時。將反應混合物濃縮至乾燥，添加MeOH (2 mL)及K2 CO3 (100 mg)。過濾混合物且將濾液濃縮至乾燥，得到呈白色固體狀之3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-酮(150 mg，75%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 204.9。
6- 甲基 -2,3,4,6- 四氫 -1,6- 㖠啶 -5(1H)- 酮， 中間物 AQ
Figure 02_image363
步驟 a ： 將6-甲基-1,6-㖠啶-6-鎓碘化物(1.56 g，5.73 mmol，CAS編號37960-58-0)懸浮於水(10 mL)中且冷卻至0℃。向反應物中裝入含氫氧化鈉(1.25 g，31.5 mmol)之水(10 mL)及含三鉀六(亞胺基甲烷化)鐵(4.04 g，12.3 mmol)之水(10 mL)。將溶液在0℃下攪拌1小時，隨後在室溫下攪拌16小時。混合物用CHCl3 萃取，乾燥且預吸收在SiO2 (3 g)上。藉由管柱層析(Si-40 g管柱，0至10% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之6-甲基-1,6-㖠啶-5(6H)-酮(540 mg，59%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 161.1；1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.90 (dd, J=1.89, 4.67 Hz, 1H), 8.71 (dd, J=1.26, 8.08 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=4.55, 8.08 Hz, 1H), 7.32 (d, J=7.58 Hz, 1H), 6.79 (d, J=7.58 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H)。步驟 b ： 將6-甲基-5,6-二氫-1,6-㖠啶-5-酮(109 mg，0.6805 mmol)溶解於MeOH (10 mL)中。使溶液循環通過H-Cube，1 mL/min，10% Pd/C，70巴，70℃。1小時後，移除溶劑且用DCM沖洗殘餘物，得到呈白色固體狀之6-甲基-2,3,4,6-四氫-1,6-㖠啶-5(1H)-酮(105 mg，94%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 165.0。
(R)-7- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 AR ； 及 (S)-7- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 AS
Figure 02_image365
如上文針對中間物T所描述，在步驟a中使用2-溴-1-(溴甲基)-3-氟苯作為偶合搭配物來合成(R)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺及(S)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。在步驟c中使用(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，且在還原期間形成非對映異構體混合物，可藉由製備型HPLC分離該混合物，得到(R)-1-(((S)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(較早溶離的異構體，1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.26 (dt, J=5.25, 7.75 Hz, 1H), 7.04 (d, J=7.57 Hz, 1H), 6.95 (t, J=8.79 Hz, 1H), 5.68 (d, J=9.77 Hz, 1H), 4.44 (d, J=10.01 Hz, 1H), 3.78 (br d, J=11.96 Hz, 1H), 3.59-3.72 (m, 1H), 3.00 (br d, J=16.11 Hz, 3H), 2.77 (br d, J=16.11 Hz, 1H), 1.71 (br t, J=10.25 Hz, 1H), 1.34-1.56 (m, 11H), 1.21-1.31 (m, 1H), 1.10 (s, 9H))及(S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(較晚溶離的異構體，1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.27 (dt, J=5.25, 7.75 Hz, 1H), 7.05 (d, J=7.32 Hz, 1H), 6.95 (t, J=8.67 Hz, 1H), 5.51 (d, J=7.57 Hz, 1H), 4.38 (d, J=7.57 Hz, 1H), 3.52-3.72 (m, 2H), 2.95-3.19 (m, 3H), 2.80 (br d, J=15.87 Hz, 1H), 1.59-1.74 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.18-1.33 (m, 2H), 1.08 (s, 9H))。(R)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺及(S)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：兩種對映異構體之LCMS m/z [M+H]+ = 221.1。
5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [b] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-7- 胺，中間物 AT
Figure 02_image367
步驟 a ： 將含4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.65 g，7.84 mmol)之THF (10 mL)冷卻至-78℃且向其中裝入鋰雙(丙-2-基)胺(9.01 mL，9.01 mmol) (添加時最大溫度為-65℃)，並且在-78℃下攪拌反應物1.5小時。隨後添加含幾滴DMF的2-溴-3-(溴甲基)吡啶(1.93 g，7.72 mmol) (注意，物質極具刺激性)於THF (2 mL)中之溶液，且在-78℃下攪拌反應物2小時。隨後使反應物升溫至0℃，接著使其升溫至室溫，且攪拌反應物16小時。用水及EA稀釋反應物。將有機層預吸收在SiO2 (7 g)上且藉由管柱層析(Si-80 g管柱，25至50% EA/庚烷)純化，得到呈無色油狀物之4-((2-溴吡啶-3-基)甲基)-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(910 mg，31%產率)，其在靜置後固化成蠟質固體。LCMS m/z [M-tBu]+ = 324.0/326.0。步驟 b ： 將含4-[(2-溴吡啶-3-基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(910 mg，2.39 mmol)之2-MeTHF (15 mL)冷卻至0℃，且向其中裝入氯(丙-2-基)鎂(氯鋰) (3.67 mL，4.78 mmol)，且在0℃下攪拌反應物30分鐘。接著，將反應物冷卻至-78℃且向其中裝入丁基鋰(1.04 mL，2.62 mmol)，並且在-78℃下攪拌反應物1小時。隨後添加另外0.25當量的nBuLi，且再攪拌反應物45分鐘。反應混合物隨後用水淬滅且用EA (2×)萃取。乾燥並濃縮有機層，得到7-亞胺基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(700 mg，97%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 246.0/302.0。步驟 c ： 將7-亞胺基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(720 mg，2.38 mmol)溶解於EA (15 mL)中，且在H-Cube中運轉90分鐘(5巴，40℃)。隨後藉由旋轉蒸發移除溶劑，且藉由製備型HPLC (5至40% ACN/水/FA)純化粗殘餘物。7-胺基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(208 mg，29%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32-8.43 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.56-7.69 (m, 1H), 7.13-7.27 (m, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.74 (br d, J=12.94 Hz, 2H), 2.99 (br d, J=16.11 Hz, 3H), 2.62 (br d, J=16.11 Hz, 1H), 2.45-2.51 (m, 3H), 1.49-1.71 (m, 2H), 1.31-1.48 (m, 8H), 1.04 (br d, J=13.43 Hz, 1H)。亦分離副產物7-側氧基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(100 mg)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (d, J=3.66 Hz, 1H), 8.07 (d, J=7.81 Hz, 1H), 7.62 (dd, J=4.64, 7.81 Hz, 1H), 3.93 (br d, J=12.94 Hz, 2H), 3.11 (s, 2H), 2.99 (br s, 2H), 1.59 (dt, J=4.27, 12.63 Hz, 2H), 1.30-1.52 (m, 10H)。步驟 d ： 向含7-胺基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(208 mg，0.6855 mmol)之MeOH (5 mL)中裝入鹽酸(1.71 mL，6.85 mmol)，且在室溫下攪拌反應物2.5小時。隨後將反應物加熱至50℃後保持5小時。將反應物冷卻至室溫且攪拌16小時。隨後藉由旋轉蒸發移除溶劑且用MTBE沖洗，得到呈白色固體狀之5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-7-胺二鹽酸鹽(188 mg，99%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 204.0。
(1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [b] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-7- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 AU
Figure 02_image369
步驟 a ： 向含6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(244 mg，0.6697 mmol，中間物A)之DMF (4 mL)中裝入乙基雙(丙-2-基)胺(580 µL，3.34 mmol)及5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-7-胺二鹽酸鹽(185 mg，0.6697 mmol，中間物AT)，且將溶液加熱至80℃後保持4小時。隨後將反應物冷卻至室溫並添加二碳酸二第三丁酯(175 mg，0.8036 mmol)，且在室溫下攪拌反應物16小時。隨後添加另外0.25當量的二碳酸二第三丁酯，且在室溫下再攪拌反應物2.5小時。隨後將反應混合物分配於鹽水與EA之間。將有機層預吸收在SiO2 (2 g)上且藉由管柱層析(Si 12 g管柱，70至100% EA/庚烷)純化混合物，得到呈黃色固體狀之(1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-7-基)胺基甲酸第三丁酯(260 mg，73%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 632.1。2,3- 二氯吡啶 -4- 硫醇鈉，中間物 AV
Figure 02_image371
步驟 a ： 向2,3-二氯-4-碘吡啶(2 g，7.30 mmol)及3-硫基丙酸2-乙基己酯(1.75 g，8.01 mmol)於二噁烷(20 mL)中之溶液中添加XantPhos (844 mg，1.46 mmol)、Pd2 dba3 (668 mg，0.7300 mmol)及DIPEA (3.81 mL，21.9 mmol)。隨後在N2 下在100℃下攪拌混合物12小時。隨後向反應混合物中添加鹽水及EtOAc，接著用EtOAc (3×)萃取該反應混合物。經合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且與SiO2 一起蒸發。藉由管柱層析(6至50% EtOAc/己烷)純化混合物，得到3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(1.6 g，60%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 363.9/365.9。步驟 b ： 將3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(307 mg，0.8426 mmol)溶解於THF (0.3 M，2.8 mL)中並添加乙氧基鈉(329 µL，0.8847 mmol，21%於EtOH中)，且在室溫下攪拌反應物10分鐘。用DCM (10至15 mL)稀釋混合物並攪拌直至長晶；5分鐘後懸浮液中形成大量固體。過濾混合物，得到(2,3-二氯吡啶-4-基)硫化物(sulfanide)(79 mg，46%產率)。LCMS m/z [M+H-Na]+ = 179.9/181.9。
3- 氯 - 2- 甲基吡啶 -4- 硫醇鈉，中間物 AW
Figure 02_image373
步驟 a ： 向3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(800 mg，2.19 mmol，經由中間物AV之步驟a合成)及三甲基硼氧雜環己烷(411 mg，3.28 mmol)於二噁烷(0.3 M，7 mL)及水(4 M，0.5 mL)中之溶液中添加XphosG4 (376 mg，0.438 mmol)及Pd2 dba3 (376 mg，0.438 mmol)。將混合物脫氣3分鐘，隨後加熱至110℃後保持2小時。隨後將混合物冷卻至室溫，且添加EtOAc及鹽水。混合物用EtOAc萃取，且有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。經由管柱層析(40 g管柱，0至60% EtOAc)純化殘餘物，得到3-((3-氯-2-甲基吡啶-4-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(317 mg，42%產率)。LCMS m/z [M]+ = 343.9。步驟 b ： 將3-[(3-氯-2-甲基吡啶-4-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(317 mg，0.922 mmol)溶解於THF (0.3 M，3 mL)中並添加乙氧基鈉(360 µL，0.968 mmol) [21%於EtOH中]，且在室溫下攪拌混合物10分鐘。用DCM (10至15 mL)稀釋混合物並攪拌直至長晶。5分鐘後，懸浮液中形成大量固體。過濾混合物，得到(3-氯-2-甲基吡啶-4-基)硫化物(146 mg，全產率)。LCMS m/z [M+H-Na]+ = 159.9/161.9。
((3S)-4- 氟 -1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 AX
Figure 02_image375
步驟 a ： 向含6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(91.9 mg，0.252 mmol，中間物A)之DMF (4 mL)中裝入乙基雙(丙-2-基)胺(218 µL，1.26 mmol)及(S)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(74 mg，0.252 mmol，中間物AS)，且將溶液加熱至80℃後保持3小時。將反應物冷卻至室溫並添加二碳酸二第三丁酯(66.0 mg，0.303 mmol)，且在室溫下攪拌反應物16小時。隨後添加另外0.25當量的二碳酸二第三丁酯，且再攪拌反應物2.5小時。隨後將反應物分配於鹽水與EA之間。將有機層預吸收在SiO2 (2 g)上且藉由管柱層析(Si-12 g管柱，20至70% EA/庚烷)純化，得到呈白色固體狀之((3S)-4-氟-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(90 mg，55%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 671.1。
(S)-5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [b] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-5- 胺 ， 中間物 AY
Figure 02_image377
Figure 02_image379
如針對中間物T所描述，在步驟a中使用3-溴-2-(溴甲基)吡啶作為偶合搭配物來合成(S)-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺。LCMS m/z [M+H]+ = 204.1。
N-[(5S)-1'-[3- 碘 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [b] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-5- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 AZ
Figure 02_image381
步驟 a ： 將6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(223 mg，0.6118 mmol，中間物A)溶解於DMF (5 mL)中。接下來，添加(5S)-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺二鹽酸鹽(169 mg，0.6118 mmol，中間物AY)，接著添加乙基雙(丙-2-基)胺(425 µL，2.44 mmol)，且在75℃下攪拌反應物2小時。接下來，添加二碳酸二第三丁酯(153 µL，0.6729 mmol)，且在室溫下攪拌反應物1.5小時。反應混合物隨後用EtOAc稀釋且用水萃取。分離各層，且有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮至SiO2 上。藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化混合物，得到N-[(5S)-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基]胺基甲酸第三丁酯(167 mg，43%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 632.1。
螺 [ 雙環 [3.1.0] 己烷 -3,4'- 哌啶 ]-2- 胺，中間物 AB
Figure 02_image383
步驟 a ： 向50 mL燒瓶中添加無水DMSO (5 mL)，隨後用N2 氣體鼓泡且裝備熱電偶。分小份向溶液中添加氫化鈉(173 mg，4.36 mmol，60%於油中)，同時監測溫度以免超出35℃。隨後分小份添加三甲基(側氧基)-λ6 -硫基鎓碘化物(959 mg，4.36 mmol)，同時監測溫度。隨後在室溫下攪拌懸浮液45分鐘。同時，將1-側氧基-8-氮雜螺[4.5]癸-2-烯-8-甲酸第三丁酯(1 g，3.97 mmol，如PCT國際申請案2016203406中所描述合成)溶解於2.5 mL無水DMSO中。隨後將此溶液逐滴添加至反應混合物中，同時劇烈攪拌並監測溫度以免超出27℃。隨後在室溫下攪拌反應混合物16小時。隨後逐滴添加10 mL水，且用二乙醚(2×30 mL)萃取溶液。經合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之4-側氧基螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(422 mg，40%產率)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 166.0。步驟 b ： 將鹽酸(288 mg，7.91 mmol)溶解於EtOH (15 mL)中，隨後添加4-側氧基螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(210 mg，0.791 mmol)，接著添加乙酸胺(909 mg，11.8 mmol)及NaCNBH3 (54.6 mg，0.870 mmol)。隨後在微波中在130℃下加熱反應混合物1小時。添加另外的NaCNBH3 (54.6 mg，0.870 mmol)，且在微波中在130℃下再攪拌混合物1小時。隨後真空濃縮反應混合物，且用NaOH (2 N，15 mL)處理殘餘物。用EtOAc (2×5 mL)萃取混合物，且經合併之有機層經Na2 SO4 乾燥。真空濃縮溶液且藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷，接著0至10% MeOH/DCM + 0.1% NH4 OH，其中產物在約7% MeOH下溶離)純化，得到4-胺基螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(70.0 mg，33%產率)。LCMS m/z [M+H-56]+ = 211.1。步驟 c ： 將4-胺基螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(70.0 mg，0.26 mmol)溶解於3 mL MeOH中。隨後添加HCl (4 N於二噁烷中，1 mL)，且在室溫下攪拌反應混合物16小時。隨後真空濃縮反應混合物且用MeOH沖洗，得到螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-4-胺二鹽酸鹽(76.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 167.0。
(1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) 螺 [ 雙環 [3.1.0] 己烷 -3,4'- 哌啶 ]-2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 BB
Figure 02_image385
步驟 a ： 將螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-4-胺二鹽酸鹽(120 mg，0.502 mmol，中間物BA)及6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(182 mg，0.502 mmol，中間物A)放入圓底燒瓶中且溶解於DMF (2 mL)中。隨後添加乙基雙(丙-2-基)胺(435 µL，2.50 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物2小時。接下來，添加二碳酸二第三丁酯(114 µL，0.502 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物2.5小時。隨後真空濃縮反應混合物且藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到(1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(185 mg，62%產率)。LCMS m/z [M]+ = 594.3。
(S)-5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [c] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-7- 胺 ， 中間物 BC
Figure 02_image387
如針對中間物T及中間物AY所描述，在步驟a中偶合甲烷磺酸(3-溴吡啶-4-基)甲酯來合成(S)-5,7-二氫螺[環戊并[c]吡啶-6,4'-哌啶]-7-胺。LCMS m/z [M+H]+ = 204.1。
N-[(7R)-1'-[3- 碘 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [c] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-7- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 BD
Figure 02_image389
如針對中間物AZ所描述，在步驟a中偶合6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(中間物A)及(S)-5,7-二氫螺[環戊并[c]吡啶-6,4'-哌啶]-7-胺二鹽酸鹽(中間物BC)來合成N-[(7R)-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-5,7-二氫螺[環戊并[c]吡啶-6,4'-哌啶]-7-基]胺基甲酸第三丁酯。LCMS m/z [M+H]+ = 632.1。
N-[(3S)-1'-{3- 羥基 -1-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 BE
Figure 02_image391
步驟 a ： 將3,5-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(1.0 g，4.83 mmol，CAS編號330786-09-9)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.65 g，4.83 mmol，中間物I)及CsF (3.66 g，24.1 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物在70℃下攪拌2小時。隨後將Boc2 O (1.57 g，7.24 mmol)及TEA (1 mL)添加至混合物中，且在20℃下攪拌混合物1小時。混合物用H2 O (50 mL)稀釋且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至5:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(1.58 g，69%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 473.1。步驟 b ： 將5-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(1.5 g，3.17 mmol)、PMBNHNH2 ·2HCl (927 mg，4.12 mmol)及TEA (2.01 mL，15.8 mmol)於EtOH (20 mL)中之混合物在80℃下攪拌10小時。減壓濃縮混合物且藉由管柱層析(DCM/MeOH = 1:0至10:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{3-羥基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(2.6 g，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 557.2。
(S)-(6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 溴吡嗪 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯及 (S)-(6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 溴吡嗪 -2- 基 )( 第三丁氧基羰基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ( 混合物 ) ， 中間物 BF
Figure 02_image393
步驟 a ： 將3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(300 mg，1.4 mmol，CAS編號212779-21-0)、DMAP (87 mg，0.7 mmol)及(Boc)2 O (936 mg，4.3 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物在25℃下攪拌16小時。隨後用H2 O (15 mL × 2)及鹽水(15 mL)洗滌反應混合物。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -(3-溴-6-氯吡嗪-2-基)-N -[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯(580 mg，99%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 429.8/431.8。步驟 b ： 將N -(3-溴-6-氯吡嗪-2-基)-N -[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯(270 mg，0.7 mmol)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(200 mg，1.0 mmol，中間物I)及DIPEA (0.3 mL，2.0 mmol)添加至DMF (2 mL)中。在85℃下攪拌混合物12小時。反應混合物隨後用EtOAc (50 mL)稀釋。混合物用H2 O (15 mL × 3)及鹽水(15 mL × 3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(DCM:MeOH = 100:5)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物的(S)-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-溴吡嗪-2-基)胺基甲酸第三丁酯與(S)-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-溴吡嗪-2-基)(第三丁氧基羰基)胺基甲酸第三丁酯之混合物(200 mg)。LCMS m/z [M+H]+ = 474.4/476.1；574.1/576.1。
2- 甲基 -6,7,8,9- 四氫 -1H- 吡咯并 [3,4-f] 喹啉 -3- 酮， 中間物 BG
Figure 02_image395
步驟 a ： 將5-溴喹啉(2.0 g，9.61 mmol，1.0當量)、Zn(CN)2 (2.26 g，19.23 mmol，2.0當量)及XantPhos-Pd-G4 (924.8 mg，961.3 μmol，0.1當量)於二噁烷(20.0 mL)及H2 O (2.0 mL)中之混合物在N2 下在80℃下攪拌16小時。減壓濃縮反應混合物。藉由矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之喹啉-5-甲腈(1.28 g，84.6%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 155.1。步驟 b ： 向喹啉-5-甲腈(780.0 mg，5.06 mmol，1.0當量)於MeOH (10.0 mL)中之溶液中添加Raney-Ni (300.0 mg，5.11 mmol，1.0當量)及NH3 ·H2 O (1.91 g，2.10 mL，28%溶液)。將反應混合物脫氣且用H2 再填充三次。在H2 (15 psi)下在15℃下攪拌反應混合物16小時。反應混合物經由矽藻土墊過濾且用MeOH (5.0 mL × 4)洗滌。減壓濃縮濾液，得到綠色殘餘物。藉由矽膠管柱層析(DCM:MeOH = 10:1)純化殘餘物，得到呈綠色油狀物之5-喹啉基甲胺(550.0 mg，69%產率)。LCMS m/z [M]+ = 158.1。步驟 c ： 向5-喹啉基甲胺(550.0 mg，3.48 mmol，1.0當量)於DCM (7.0 mL)中之溶液中添加氯甲酸異丙酯(852.1 mg，6.95 mmol，965.0 μL，2.0當量)及TEA (1.06 g，10.43 mmol，1.45 mL，3.0當量)。在N2 下在15℃下攪拌反應混合物16小時。減壓濃縮反應混合物，得到黃色殘餘物。藉由矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 0:1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -(5-喹啉基甲基)胺基甲酸異丙酯(670.0 mg，79%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 245.1。步驟 d ： 向異丙基-N -(5-喹啉基甲基)胺基甲酸酯(830.0 mg，3.40 mmol，1.0當量)及Cs2 CO3 (3.32 g，10.19 mmol，3.0當量)於DMF (10.0 mL)中之溶液中添加MeI (578.7 mg，4.08 mmol，253.8 μL，1.2當量)於DMF (2.0 mL)中之溶液。在N2 下在15℃下攪拌反應混合物16小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用水(70.0 mL)洗滌且用EtOAc (50.0 mL × 3)萃取。減壓濃縮經合併之有機層，得到紅色殘餘物。藉由矽膠管柱層析(DCM:MeOH = 10:1)純化殘餘物，得到呈紅色油狀物之異丙基-N -甲基-N -(5-喹啉基甲基)胺基甲酸酯(610.0 mg)。藉由矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 0:1)再次純化粗產物，得到呈黃色油狀物之異丙基-N -甲基-N -(5-喹啉基甲基)胺基甲酸酯(210.0 mg，24%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 259.1。步驟 e ： 向異丙基-N -甲基-N -(5-喹啉基甲基)胺基甲酸酯(130.0 mg，503.3 μmol，1.0當量)於MeOH (3.0 mL)中之溶液中添加PtO2 (20.0 mg，88.08 μmol，1.75當量)。將反應混合物脫氣且用H2 再填充三次。在H2 (15 psi)下在30℃下攪拌反應混合物16小時。反應混合物經由矽藻土墊過濾且用MeOH (5.0 mL × 3)洗滌。減壓濃縮濾液，得到呈綠色油狀物之產物N -甲基-N -(1,2,3,4-四氫喹啉-5-基甲基)胺基甲酸異丙酯(115.0 mg，87%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 262.9；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 6.95-6.91 (m, 1H), 6.51 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.43 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.98-4.92 (m, 1H), 4.43 (s, 2H), 3.26-3.23 (m, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.68-2.65 (m, 2H), 2.00-1.94 (m, 2H), 1.31-1.29 (m, 6H)。步驟 f ： 向N -甲基-N -(1,2,3,4-四氫喹啉-5-基甲基)胺基甲酸異丙酯(60.0 mg，228.7 μmol，1.0當量)於DCM (3.8 mL)中之溶液中添加P2 O5 (324.6 mg，2.29 mmol，10.0當量)。在N2 下在40℃下攪拌反應混合物16小時。反應混合物藉由添加飽和NaHCO3 水溶液而調整至pH = 8且用DCM (30.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮，得到黃色殘餘物。藉由製備型HPLC (NH4 HCO3 ) (管柱：Waters Xbridge 150 × 25 5 u；移動相：[水(10 mM NH4 HCO3 )-ACN]；B%：15%至45%，7 min)純化粗產物，得到呈白色固體狀之2-甲基-6,7,8,9-四氫-1H -吡咯并[3,4-f ]喹啉-3-酮(20.0 mg，43%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 202.9。
(R )-N -[(1S )-7- 氰基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 BH
Figure 02_image397
步驟 a ： 將2-溴-3-甲基苯甲酸(10.0 g，46.5 mmol，CAS編號53663-39-1)、DIPEA (38.2 mL，232.0 mmol)、HATU (22.9 g，60.4 mmol)及DMF (80.0 mL)之混合物在25℃下攪拌1小時。隨後添加NH4 Cl (7.4 g，139.0 mmol)，且在25℃下攪拌所得混合物12小時。濃縮反應混合物以移除DMF。隨後向殘餘物中添加水(200.0 mL)。過濾混合物且用水(100.0 mL × 2)洗滌濾餅，得到呈棕色固體狀之2-溴-3-甲基苯甲醯胺(8.7 g，87%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 214.0/216.0。步驟 b ： 在0℃下向2-溴-3-甲基苯甲醯胺(8.5 g，39.7 mmol)及TEA (8.2 mL，59.5 mmol)於DCM (100.0 mL)中之反應混合物中緩慢添加TFAA (8.3 mL，59.5 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物15分鐘。反應混合物隨後用H2 O (20.0 mL)淬滅且用DCM (50.0 mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至30%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之2-溴-3-甲基苯甲腈(8.3 g，全產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 197.9/199.9。步驟 c ： 將2-溴-3-甲基苯甲腈(4.0 g，20.4 mmol)、NBS (4.3 g，24.4 mmol)及BPO (491.0 mg，2.0 mmol)於CCl4 (30.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在85℃下攪拌12小時。過濾且濃縮反應混合物。藉由管柱層析(石油醚/EtOAc = 1:0至3:1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-溴-3-(溴甲基)苯甲腈(2.3 g，42%產率)。步驟 d ： 向4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.9 g，9.2 mmol)於THF (20.0 mL)中之-78℃溶液中逐滴添加LDA (6.9 mL，13.8 mmol，2 M於THF中)，且在-78℃下攪拌1小時。隨後向反應物中添加2-溴-3-(溴甲基)苯甲腈(2.1 g，7.7 mmol)，且在-78℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後使反應混合物升溫至20℃。反應混合物用飽和NH4 Cl溶液(30.0 mL)淬滅且用EtOAc (50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至25%之石油醚/EtOAc)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-[(2-溴-3-氰基苯基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.8 g，57%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 304.0/306.0。步驟 e ： 將4-[(2-溴-3-氰基苯基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.3 g，3.3 mmol)、P(t-Bu)3 -Pd-G4 (387.0 mg，0.7 mmol)及TEA (915.0 µL，6.6 mmol)於DMF (13.5 mL)及H2 O (1.5 mL)中之混合物在N2 氛圍下在130℃下攪拌12小時。反應混合物用水(80.0 mL)淬滅且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至25%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之7-氰基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(400.0 mg，1.2 mmol，37%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 349.1。步驟 f ： 將7-氰基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(400.0 mg，1.2 mmol)、(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(591.0 mg，4.9 mmol)、Ti(OEt)4 (1.7 g，7.3 mmol)及2-Me-THF (10.0 mL)之反應混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。在24小時內，重複2次在90℃下添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(591.0 mg，4.9 mmol)及Ti(OEt)4 (1.7 g，7.3 mmol)。粗產物溶液直接用於下一步驟中。步驟 g ： 在0℃下向(1Z )-7-氰基-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(524.0 mg，1.2 mmol)於2-Me-THF (10.0 mL)中之粗產物溶液中添加NaBH4 (13.7 mg，0.4 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後再次添加NaBH4 (13.7 mg，0.4 mmol)，且在0℃下攪拌所得混合物0.5小時。反應混合物用MeOH (1.0 mL)、EtOAc (80.0 mL)及H2 O (50.0 mL)淬滅。過濾反應混合物，且用EtOAc (80.0 mL × 2)洗滌濾餅。用EtOAc (80.0 mL × 2)萃取濾液。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至50%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1S )-7-氰基-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(250.0 mg，48%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 454.2。步驟 h ： 向(1S )-7-氰基-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(200.0 mg，0.5 mmol)於DCM (8.0 mL)中之反應混合物中添加TFA (0.8 mL)。在25℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後用TEA將反應混合物調整至pH = 7至8。濃縮混合物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(1S )-7-氰基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(153.0 mg，92%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 332.1。
乙酸 1,2,3,4- 四氫喹啉 -6- 基 酯，中間物 BI
Figure 02_image399
步驟 a ： 在0℃下向喹啉-6-醇(1.00 g，6.88 mmol)及TEA (2.84 mL，20.6 mmol)於DCM (50.0 mL)中之溶液中逐滴添加乙醯氯(1.07 g，13.7 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時。將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用DCM (50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到橙色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至30%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之產物乙酸喹啉-6-基酯(1.20 g，94%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 188.0。步驟 b ： 將乙酸喹啉-6-基酯(1.20 g，6.41 mmol)及PtO2 (218.0 mg，961.0 μmol)於THF (50.0 mL)中之溶液在H2 (15 psi)下在20℃下攪拌12小時。過濾反應混合物且減壓濃縮濾液，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至20%之乙酸乙酯/石油醚)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之乙酸1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯(1.00 g，82%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 192.1。
[(4- 乙醯胺基苯基 )( 氟磺醯基 ) 胺基 ] 磺醯氟 ， 中間物 BJ
Figure 02_image401
步驟 a ： 在20℃、N2 下向LiN(SO2 F)2 (2.74 g，14.7 mmol)及PhI(OAc)2 (3.54 g，11.0 mmol)於DCE (30.0 mL)中之溶液中逐滴添加含N -苯基乙醯胺(1.00 g，7.39 mmol)之DCE (20.0 mL)。在90℃下攪拌反應混合物20分鐘。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至35%之乙酸乙酯/石油醚)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之[(4-乙醯胺基苯基)(氟磺醯基)胺基]磺醯氟(1.35 g，58%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 314.9。
2- 溴 -3-( 溴甲基 )-6- 甲氧基吡啶，中間物 BK
Figure 02_image403
步驟 a ： 在25℃下向2-溴-6-甲氧基吡啶-3-甲醛(3.75 g，17.3 mmol，CAS編號1060810-41-4)於MeOH (120 mL)中之混合物中逐份添加NaBH4 (327.0 mg，8.6 mmol)。在25℃下攪拌混合物5分鐘。用H2 O (150 mL)淬滅反應物。減壓移除MeOH。用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取經合併之混合物。經合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(2-溴-6-甲氧基吡啶-3-基)甲醇(4.7 g，經合併產物)。LCMS m/z [M+H]+ = 218.0/220.0。步驟 b ： 在DCM (200 mL)中添加化合物(2-溴-6-甲氧基吡啶-3-基)甲醇(4.50 g，20.6 mmol)及CBr4 (8.19 g，24.7 mmol)。隨後在0℃下逐滴添加含PPh3 (6.47 g，24.7 mmol)之DCM (50 mL)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。隨後用鹽水(100 mL)淬滅反應物且分離經分配之層。用DCM (100 mL × 2)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:10)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-溴-3-(溴甲基)-6-甲氧基吡啶(5.7 g，99%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 281.8。
(R )-N -[(7S )-2- 甲氧基 -5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [b ] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-7- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 BL
Figure 02_image405
步驟 a ： 將化合物4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.43 g，11.6 mmol)放入THF (100 mL)中。在0℃下向混合物中逐滴添加LDA (10.6 mL，21.2 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。在0℃下向混合物中逐滴添加含2-溴-3-(溴甲基)-6-甲氧基吡啶(3.0 g，10.6 mmol，中間物BK)之THF (50 mL)。使混合物升溫至25℃且攪拌2小時。藉由添加飽和NH4 Cl (100 mL)來淬滅反應物。用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-[(2-溴-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.7 g，62%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 410.0/412.0。步驟 b ： 在2-Me-THF (20 mL)及PhMe (20 mL)中添加化合物4-[(2-溴-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.7 g，4.1 mmol)。在-78℃下添加i -PrMgCl·LiCl (6.4 mL，8.3 mmol，1.3 M於THF中)及n-BuLi (1.7 mL，4.1 mmol，2.5 M於己烷中)。在-78℃下攪拌反應混合物1小時。使混合物緩慢升溫至25℃且攪拌15小時。反應物用飽和NH4 Cl (20 mL)淬滅。用HCl (2 N)將混合物調整至pH = 5至6。用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機相用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-甲氧基-7-側氧基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(160 mg，12%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 333.1步驟 c ： 向2-甲氧基-7-側氧基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(160 mg，0.5 mmol)及Ti(OEt)4 (0.5 mL，2.4 mmol)於2-Me-THF (10 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(116 mg，1.0 mmol)。在N2 下在90℃下攪拌反應混合物12小時。添加另外的(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(116 mg，1.0 mmol)及Ti(OEt)4 (0.5 mL，2.4 mmol)。在N2 下在90℃下再攪拌反應混合物12小時。用EtOAc (20 mL)稀釋反應物並添加H2 O (10 mL)，其中形成大量白色固體。過濾混合物且用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取濾液。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (乙酸乙酯/石油醚= 1/1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(7Z )-2-甲氧基-7-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(70.0 mg，33%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 436.1。步驟 d ： 在0℃下向含化合物(7Z )-2-甲氧基-7-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(70 mg，160 µmol)之THF (2 mL)中添加NaBH4 (18 mg，480 µmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用MeOH淬滅反應混合物。將溶液添加至H2 O (10 mL)及EtOAc (10 mL)中。過濾混合物且用EtOAc (10 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (乙酸乙酯:石油醚= 1:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之(7S )-2-甲氧基-7-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-5,7-二氫螺[環戊并[b ]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(70 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 438.1。步驟 e ： 在TFA (0.2 mL)及DCM (2 mL)之溶液中添加(7S )-2-甲氧基-7-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-5,7-二氫螺[環戊并[b ]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(70 mg，0.2 mmol)。在25℃下攪拌混合物0.5小時。用TEA將混合物調整至pH = 8至9。濃縮混合物，得到呈無色油狀物之(R )-N -[(7S )-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-7-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(60 mg，粗產物)。LCMS m/z [M+H]+ = 338.1。
3- 溴 -2-( 溴甲基 )-6- 甲氧基吡啶，中間物 BM
Figure 02_image407
步驟 a ： 將3-溴-6-氯吡啶-2-甲酸(10.0 g，42.2 mmol，CAS編號929000-66-8)於MeOH (100.0 mL)/SOCl2 (10.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌3小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之3-溴-6-氯吡啶-2-甲酸甲酯(10.4 g，99%產率)。步驟 b ： 在N2 氛圍、0℃下，經20分鐘向3-溴-6-氯吡啶-2-甲酸甲酯(5.0 g，19.9 mmol)及MeOH (1.0 mL，25.8 mmol)於THF (15.0 mL，經NaH新鮮乾燥)中之溶液中緩慢添加t -BuOK (29.8 mL，29.8 mmol，1 M於THF中)。在0℃下攪拌反應混合物5分鐘。反應混合物用冰冷的飽和NH4 Cl溶液(30.0 mL)淬滅且用EtOAc (50.0 mL × 2)快速萃取。經合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥、過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至10%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之甲基-3-溴-6-甲氧基吡啶-2-甲酸酯(4.5 g，92.0%產率)。步驟 c ： 向甲基-3-溴-6-甲氧基吡啶-2-甲酸酯(9.0 g，36.5 mmol)於MeOH (30 mL)中之混合物中添加NaBH4 (1.38 g，36.5 mmol)。在25℃下攪拌混合物0.5小時。每0.5小時重複2次在25℃下添加NaBH4 (1.38 g，36.5 mmol)。濃縮反應混合物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之(3-溴-6-甲氧基吡啶-2-基)甲醇(6.40 g，81%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 217.7/219.7。步驟 d ： 向DCM (30 mL)中添加(3-溴-6-甲氧基吡啶-2-基)甲醇(2.5 g，11.4 mmol)及CBr4 (4.5 g，13.6 mmol)。在0℃下向反應混合物中逐滴添加含PPh3 (3.6 g，13.6 mmol)之DCM (10 mL)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。濃縮反應物，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至10%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之3-溴-2-(溴甲基)-6-甲氧基吡啶(2.69 g，84%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 281.8。
(R )-N -[(5S)-2- 甲氧基 -5,7- 二氫螺 [ 環戊并 [b ] 吡啶 -6,4'- 哌啶 ]-5- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 BN
Figure 02_image409
如針對中間物BL所描述，在步驟a中偶合4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯與3-溴-2-(溴甲基)-6-甲氧基吡啶(中間物BM)來合成(R )-N -[(5S)-2-甲氧基-5,7-二氫螺[環戊并[b ]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺。在步驟b中，以下條件用於環化：含P(t -Bu)3 -Pd-G4及TEA之DMF及H2 O，130℃，12小時。最終中間物BN之LCMS：LCMS m/z [M+H]+ = 338.1。
3-( 溴甲基 )-4- 碘苯甲腈，中間物 BO
Figure 02_image411
步驟 a ： 在DCE (30.0 mL)中添加4-碘-3-甲基苯甲腈(2.00 g，8.20 mmol)、BPO (199.0 mg，822.0 µmol)及NBS (2.20 g，12.30 mmol)，並且將反應混合物抽成真空並用N2 再填充3次，且在80℃下攪拌2小時。添加另一批NBS (1.50 g，8.44 mmol)，且在80℃下再攪拌混合物12小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:EtOAc = 100:0至100:5)純化，得到呈白色固體狀之3-(溴甲基)-4-碘苯甲腈(1.60 g，61%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 ) 8.03-8.00 (m, 1H), 7.77-7.72 (m, 1H), 7.28-7.24 (m, 1H), 4.58 (s, 2H)。
(R )-N -[(1S )-5- 氰基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 BP
Figure 02_image413
Figure 02_image415
如經由中間物BH之步驟d至h所描述，在步驟a中以4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯及3-(溴甲基)-4-碘苯甲腈(中間物BO)為起始物質來合成(R )-N -[(1S )-5-氰基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺。最終產物之表徵：LCMS m/z [M]+ = 331.9。
(4,5,6- 三氯吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯，中間物 BQ
Figure 02_image417
步驟 a ： 將6-氯吡啶-2-胺(2.5 g，19.4 mmol)及NCS (2.8 g，21.3 mmol)於MeCN (40 mL)中之混合物在80℃下攪拌18小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至30%)對其進行純化，得到呈白色固體狀之5,6-二氯吡啶-2-胺(2.1 g，66%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 162.8。步驟 b ： 在0℃下向5,6-二氯吡啶-2-胺(2.1 g，12.8 mmol)於無水THF (20 mL)中之溶液中添加NaHMDS (25.6 mL，25.6 mmol)。在此溫度下攪拌反應混合物30分鐘，隨後添加(Boc)2 O (2.9 g，13.4 mmol)於無水THF (10 mL)中之溶液。在0℃下攪拌所得混合物1.5小時。混合物用飽和NH4 Cl淬滅且用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取。有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至10%)對其進行純化，得到呈無色油狀物之(5,6-二氯吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(2.5 g，74%產率)。步驟 c ： 在N2 氛圍下向(5,6-二氯吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.2 g，4.6 mmol)於無水THF (15 mL)中之-70℃混合物中添加LDA (5.7 mL，11.4 mmol)。在此溫度下攪拌2小時後，添加含NCS (1.1 g，8.2 mmol)之THF (5 mL)。將所得混合物在-70℃下攪拌2小時且在20℃下攪拌10小時。反應混合物用H2 O (40 mL)稀釋且用乙酸乙酯(45 mL × 2)萃取。經合併之有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至5%)對其進行純化，得到呈無色油狀物之(4,5,6-三氯吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.3 g，純度：30%)。
(R )-2- 甲基 -N -[(3S )-1'-[5-( 鈉硫基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 BR
Figure 02_image419
步驟 a ： 將(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(450 mg，1.5 mmol，經由實例120之步驟a合成)、2,5-二溴吡嗪(416 mg，1.8 mmol)及TEA (1.0 mL，7.3 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在80℃下攪拌2小時。反應混合物隨後用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且用H2 O (20 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至70%)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之(R )-N -[(3S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(580 mg，86%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 463.0/465.0。步驟 b ： 將(R )-N -[(3S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(550 mg，1.2 mmol)、3-巰基丙酸2-乙基己酯(307 mg，1.4 mmol)、Pd2 (dba)3 (108 mg，118 µmol)、XantPhos (136 mg，236 µmol)及TEA (0.5 mL，3.5 mmol)於甲苯(30 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至55%)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之3-((5-((S)-1-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(650 mg，92%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 601.6。步驟 c ： 向3-((5-((S)-1-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(650 mg，1.1 mmol)於無水THF (3.0 mL)中之混合物中添加MeONa (116 mg，2.2 mmol)，在N2 氛圍下在20℃下攪拌所得混合物12小時。隨後真空濃縮反應混合物，得到粗產物，用石油醚:乙酸乙酯= 10:1 (15 mL)對其進行濕磨並過濾。收集固體且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之(R )-2-甲基-N -[(3S )-1'-[5-(鈉硫基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]丙烷-2-亞磺醯胺(650 mg，純度：70%)。LCMS m/z [M+H - Na]+ = 417.0。
2- 溴 -5-((2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ) 吡嗪，中間物 BS
Figure 02_image421
步驟 a ： 將2,5-二溴吡嗪(287 mg，1.2 mmol)、2,3-二氯吡啶-4-醇(300 mg，1.8 mmol)及Cs2 CO3 (593 mg，1.8 mmol)於DMF (5.0 mL)中之混合物在85℃下攪拌24小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用水(30.0 mL)稀釋且用乙酸乙酯(50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用H2 O (30.0 mL)及鹽水(30.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:15)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀物之2-溴-5-((2,3-二氯吡啶-4-基)氧基)吡嗪(530 mg)。LCMS m/z [M+H]+ = 321.8。
7- 溴 -3- 側氧基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 ， 中間物 BT
Figure 02_image423
步驟 a ： 在N2 、-78℃下向哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(10.0 g，41.1 mmol)於THF (150.0 mL)中之溶液中添加LDA (24.6 mL，49.3 mmol，2 M)。在-78℃下攪拌混合物1小時。隨後在-78℃下添加1-溴-2-(溴甲基)苯(12.3 g，49.3 mmol)於THF (50.0 mL)中之溶液。在N2 下在20℃下攪拌混合物11小時。將混合物傾入H2 O (300.0 mL)中且用EtOAc (300.0 mL × 2)萃取。經合併之有機相用鹽水(300.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色油狀物之4-(2-溴苯甲基)哌啶-1,4-二甲酸1-(第三丁酯)4-甲酯(20 g，50%純度)。步驟 b ： 將4-[(2-溴苯基)甲基]哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(20.0 g，50%純度)及KOH (13.5 g，242.0 mmol)於MeOH/H2 O (50.0 mL/50.0 mL)中之溶液在60℃下攪拌12小時。將混合物減壓濃縮至約50.0 mL。殘餘物用H2 O (300.0 mL)稀釋，用EtOAc/石油醚(1/10，220.0 mL)萃取。丟棄有機相。水相用6 N HCl酸化至pH = 5至6，隨後用EtOAc (250.0 mL × 2)萃取。經合併之有機相藉由鹽水(100.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之4-[(2-溴苯基)甲基]-1-[(第三丁氧基)羰基]哌啶-4-甲酸(5.98 g，15.0 mmol)。LCMS m/z [M+H]+ = 298.0。步驟 c ： 在N2 、20℃下向4-[(2-溴苯基)甲基]-1-[(第三丁氧基)羰基]哌啶-4-甲酸(6.2 g，14.7 mmol)於DCM (100.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (2.1 mL，29.4 mmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。觀察到白色懸浮液，隨後在0℃下逐份添加AlCl3 (2.9 g，22.0 mmol)。在N2 下在20℃下攪拌混合物2小時。用2 N NaOH將混合物調整至pH = 9。向混合物中添加(Boc)2 O (7.6 mL，33.5 mmol)且在20℃下攪拌12小時。用DCM (100.0 mL × 2)萃取混合物。經合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至10%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之7-溴-3-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.6 g，4.2 mmol)。步驟 d ： 向7-溴-3-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.1 g，2.9 mmol)於EtOH (20.0 mL)中之溶液中逐份(4次)添加NH4 OAc (8.9 g，115.0 mmol)及NaBH3 CN (907.0 mg，14.4 mmol)。在80℃下攪拌混合物12小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物。殘餘物用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取，且經合併之有機相用2 N NaOH水溶液(50.0 mL × 2)洗滌。經分離之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到1-胺基-4-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.1 g，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 381.0/383.0。
1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-4- 甲腈，中間物 BU
Figure 02_image425
步驟 a ： 向3-胺基-7-溴-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.1 g，中間物BT)於DCM (10.0 mL)中之溶液中添加(Boc)2 O (1.3 g，5.8 mmol)及Et3 N (1.2 mL，8.6 mmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至10%)純化，得到呈白色固體狀之7-溴-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(840.0 mg，1.7 mmol)。LCMS m/z [M+H]+ = 481.1/483.1。步驟 b ： 向7-溴-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(600.0 mg，1.2 mmol)於DMF (20.0 mL)中之溶液中添加Zn(CN)2 (1.2 g，9.9 mmol)及XantPhos-Pd-G4 (119.0 mg，124.0 µmol)。在N2 下在100℃下攪拌混合物12小時。過濾經合併之混合物，用EtOAc (50.0 mL × 3)萃取且用鹽水(50.0 mL)洗滌。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至15%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-7-氰基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(500.0 mg，67%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 450.1。步驟 c ： 向3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-7-氰基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(250.0 mg，584.0 µmol)於MeOH (5.0 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH (5.0 mL，4 M)，且在20℃下攪拌混合物12小時。減壓濃縮混合物，得到呈白色固體狀之1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈二鹽酸鹽(150 mg，86%粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 228.1。
N -[( 第三丁氧基 ) 羰基 ]-N -(1'-{3- 羥基 -1-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 BV
Figure 02_image427
如針對上文中間物BE所描述，在步驟a中偶合3,5-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯及1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(中間物E)來合成6-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-醇。隨後根據以下條件在步驟c中對6-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-醇(300 mg，657 µmol)進行保護：在20℃下攪拌含Boc2 O (285 mg，1.31 mmol)及TEA (250 µL，1.97 mmol)之DCM (5 mL) 5小時。減壓濃縮混合物，得到呈黃色油狀物之N -[(第三丁氧基)羰基]-N -(1'-{3-羥基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(500 mg，80%純度，93%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 657.2。
6- 甲基 -1,2,3,4,5,6- 六氫 -1,6- 㖠啶 -5- 酮 ， 中間物 BW
Figure 02_image429
步驟 a ： 將1,6-㖠啶(0.965 g，7.41 mmol)溶解於MeOH (8.5 mL)中且向其中裝入碘甲烷(921 µL，14.8 mmol)。將小瓶密封且加熱至65℃，並且攪拌16小時。移除溶劑，將殘餘物溶解於少量MeOH (1至2 mL)中且向其中裝入乙酸乙酯。過濾混合物，用EA洗滌且風乾至恆重，得到6-甲基-1,6-㖠啶-6-鎓碘化物(1.56 g)。步驟 b ： 將6-甲基-1,6-㖠啶-6-鎓碘化物(1.56 g，5.73 mmol)懸浮於水(10 mL)中且冷卻至0℃。向反應物中裝入含NaOH (1.25 g，31.5 mmol)之水(10 mL)及含三鉀六(亞胺基甲烷化)鐵(4.04 g，12.3 mmol)之水(10 mL)。將溶液在0℃下攪拌1小時，隨後在室溫下攪拌隔夜。混合物用CHCl3 萃取，乾燥並濃縮。藉由急驟矽膠層析(用MeOH:DCM = 0:100至10:90溶離)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之6-甲基-5,6-二氫-1,6-㖠啶-5-酮(540 mg)。LCMS：[M+H]+ = 161。步驟 c ： 將6-甲基-5,6-二氫-1,6-㖠啶-5-酮(109 mg，0.6805 mmol)溶解於MeOH (10 mL)中。在70℃、70巴H2 下，以1 mL/min泵送溶液通過10% Pd/C濾筒，持續90分鐘。移除溶劑，得到呈白色固體狀之6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮(90 mg)。LCMS m/z [M+H]+ = 165。
(S)-5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 BX
Figure 02_image431
Figure 02_image433
如針對中間物T所描述，在步驟a中使用2-(溴甲基)-4-氟-1-碘苯進行偶合來合成(S)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。最終中間物之表徵：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm 8.94 (br s, 2 H) 8.58 (br s, 3 H) 7.61 (br dd, J=7.81, 5.86 Hz, 1 H) 7.07 - 7.18 (m, 2 H) 4.37 (br d, J=4.39 Hz, 1 H) 3.71 (s, 1 H) 3.31 (br d, J=13.43 Hz, 1 H) 3.13 - 3.22 (m, 2 H) 2.87 - 3.10 (m, 3 H) 1.95 - 2.11 (m, 1 H) 1.64 - 1.85 (m, 2 H) 1.50 (br d, J=14.40 Hz, 1 H) 1.09 (s, 4 H)。
((1S)-5- 氟 -1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 BY
Figure 02_image435
如針對中間物J所描述，偶合6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(中間物A)與(S)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(中間物BX)來合成((1S)-5-氟-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯。最終中間物BY之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 649.2。
(R)-7- 氟 -3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺， 中間物 BZ
Figure 02_image437
步驟 a ： 向2,3-二氟苯甲醛(10 g，70.3 mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(103 mg，0.8436 mmol)於ACN (100 mL)中之混合物中添加三甲基矽烷甲腈(7.87 g，79.4 mmol)，其中使用冷浴來抵消添加期間的少量發熱。在室溫下攪拌反應物5小時。濃縮反應物，得到呈黃色油狀物之2-(2,3-二氟苯基)-2-((三甲基矽烷基)氧基)乙腈。步驟 b ： 將含2-(2,3-二氟苯基)-2-[(三甲基矽烷基)氧基]乙腈(8.45 g，35.0 mmol)之THF (65 mL)冷卻至-78℃且向其中裝入1M LHMDS (38.5 mL，38.5 mmol)，在添加期間不允許溫度上升超過-65℃。在-78℃下攪拌反應混合物1.5小時，隨後添加含4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(7.67 g，38.5 mmol)之THF (10 mL)，在添加期間同樣不允許溫度上升超過-65℃，且在-78℃下攪拌反應物3小時。隨後向反應混合物中添加鹽酸(84.0 mL，84.0 mmol)，且使溶液升溫至室溫並攪拌16小時。分離有機層且用EA反萃取水層。有機層經乾燥，濃縮且藉由管柱層析(330 g管柱，0至40% EA/庚烷)純化，得到呈無色油狀物之4-(氰基(2,3-二氟苯基)(羥基)甲基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(4.5 g)以及呈白色固體狀之4-(2,3-二氟苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(4.3 g)。LCMS m/z [M+H-100]+ = 241.9。步驟 c ： 將4-(2,3-二氟苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.25 g，6.59 mmol)及(第三丁氧基)鉀(7.24 mL，7.24 mmol)溶解於THF (3 mL)中，且將其在70℃下在微波中加熱1小時。隨後添加水且用EA萃取混合物。乾燥並濃縮經合併之有機層，得到呈淡黃色油狀物之7-氟-3-側氧基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯。LCMS m/z [M+H-100]+ = 222.2。步驟 d ： 向7-氟-3-側氧基-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(4.2 g，13.0 mmol)及(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2.36 g，19.5 mmol)於2-MeTHF (5 mL)中之混合物中添加四鈦-1-基鎓四乙醇化物(17.7 mL，52.0 mmol)。隨後將小瓶密封且加熱至95℃後保持16小時。隨後將反應混合物冷卻且用2-MeTHF (20 mL)稀釋，並且進一步冷卻至-10℃。隨後向溶液中添加鋰酸硼鎓(283 mg，13.0 mmol)，且攪拌反應混合物20分鐘。隨後向反應混合物中添加乙酸乙酯並攪拌10分鐘。隨後向劇烈攪拌之鹽水溶液中逐滴添加反應混合物。攪拌所得懸浮液15分鐘，向其中裝入矽藻土，隨後過濾。分離各層，且將有機層預吸收在SiO2 (8 g)上。藉由管柱層析(25 g管柱，25至75 EA/庚烷)純化混合物，得到呈白色泡沫狀之(R)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-7-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.6 g，29%產率)。1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 ) δ 7.44 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.13-7.08 (m, 1H), 4.92 (s, 1H), 3.67-3.62 (m, 1H), 3.50-3.36 (m, 3H), 2.59-2.47 (m, 1H), 2.31-2.10 (m, 3H)。步驟 e ： 向含(3R)-7-氟-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.54 g，3.61 mmol)之MeOH (25 mL)中裝入鹽酸(9.02 mL，36.1 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物5小時。隨後移除溶劑且用MTBE沖洗，得到呈白色固體狀之(R)-7-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽。LCMS m/z [M+H]+ = 649.2。
((3R)-7- 氟 -1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CA
Figure 02_image439
如針對中間物J所描述，偶合6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(中間物A)與(3R)-7-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(中間物BZ)來合成((3R)-7-氟-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯。LCMS m/z [M+H]+ = 651.2。
(R)-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺， 中間物 CB
Figure 02_image441
步驟 a ： 將3-側氧基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(200 mg，659 µmol，經由中間物AP之步驟a至d合成)、Ti(OEt)4 (599 mg，2.63 mmol)及(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(119 mg，988 μmol)於2-Me-THF (10 mL)中之混合物在N2 氛圍下在80℃下攪拌12小時。隨後濃縮反應混合物，得到(R,Z)-3-((第三丁基亞磺醯基)亞胺基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(600 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 429.0。步驟 b ： 在0℃下向(3Z)-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(5.5 g，粗產物)於THF (50 mL)中之混合物中添加氫化鋰硼烷(331 mg，15.1 mmol)，隨後在25℃下攪拌所得混合物2小時。反應混合物用飽和NH4 Cl淬滅，用H2 O (200 mL)稀釋，隨後用乙酸乙酯(200 mL × 2)萃取。有機相用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠管柱(溶離：石油醚:乙酸乙酯= 1:0至1:3)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3R)-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(4.1 g，74%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 431.0。步驟 c ： 將(3R)-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.15 g，2.81 mmol)溶解於20 mL MeOH中，隨後添加鹽酸(7.00 mL，28.0 mmol)。在60℃下攪拌反應混合物30分鐘。隨後將反應混合物濃縮至油狀物。添加MTBE且產物沈澱。過濾混合物，且用MTBE洗滌固體並乾燥，得到(3R)-3H-螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(750 mg，96%產率)。
((3R)-1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CC
Figure 02_image443
如針對中間物J所描述，偶合6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(中間物A)與(R)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(中間物CB)來合成((3R)-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯。LCMS m/z [M+H-100]+ = 533.3。
(R )-N -[(1S )-4,6- 二氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 CD
Figure 02_image445
如針對中間物AL所描述，在步驟a中偶合哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯及1-(溴甲基)-2,4-二氟苯來合成(R )-N -[(1S )-4,6-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺。隨後如下去除(1S )-4,6-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯之保護基：將(1S )-4,6-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(190 mg，429 µmol)於DCM (5 mL)及TFA (1 mL)中之混合物在20℃下攪拌2小時。減壓濃縮混合物且用MeOH稀釋殘餘物。用Na2 CO3 將混合物調整至pH = 8。過濾混合物且減壓濃縮濾液，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(1S )-4,6-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(140 mg，96%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 343.0。
(5- 氯吡嗪 -2- 基 )(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 ) 甲酮，中間物 CE
Figure 02_image447
步驟 a ： 向可重複密封之反應小瓶中裝入5-氯吡嗪-2-甲酸(500 mg，3.15 mmol)及二氯化硫(5.73 mL，78.7 mmol)。向混合物中裝入DMF (3滴)，且將其加熱至80℃後保持3.5小時。真空移除溶劑且用甲苯沖洗，得到黃色結晶固體。將固體懸浮於DCM (4 mL)中，冷卻至0至5℃，且向其中裝入三乙胺(1.74 mL，12.6 mmol)及1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(422 mg，3.15 mmol)，並且攪拌反應混合物1小時。隨後向反應混合物中裝入碳酸氫鹽且用DCM萃取。有機層經乾燥，濃縮且藉由管柱層析(Si-25 g管柱，70至100% EA/庚烷)純化，得到(5-氯吡嗪-2-基)(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)甲酮(748 mg，86%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 275.1。
(S)-(1'-(5- 胺基 -1,3,4- 噻二唑 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CF
Figure 02_image449
步驟 a ： 向一次性試管中裝入(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(203 mg，0.738 mmol，中間物I)、三乙胺(148 mg，1.47 mmol)、5-氯-1,3,4-噻二唑-2-胺(100 mg，0.738 mmol，CAS編號37566-40-8)及攪拌棒。添加DMF (2 mL)且在80℃下攪拌溶液2小時，此時形成中間物(S)-5-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺。隨後將反應混合物分配於EtOAc與水之間。分離各層，且濃縮水層並高真空乾燥。隨後將殘餘物再懸浮於DCM (2 mL)中，且添加三乙胺(200 μL)及二碳酸二第三丁酯(186 µL，0.8113 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。真空濃縮混合物，隨後藉由管柱層析(0至10% MeOH/DCM + 1% NH4 OH)純化，得到N-[(3S)-1'-(5-胺基-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(101 mg，34%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 402.6。
N-[(3S)-1'-(5- 溴 -1,3- 噻唑 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CG
Figure 02_image451
步驟 a ： 將2,5-二溴-1,3-噻唑(106 mg，0.436 mmol)、(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(120 mg，0.436 mmol，中間物I)及三乙胺(121 μL，0.873 mmol)於2 mL DMF中之混合物在100℃下加熱20小時。將反應混合物冷卻至室溫並添加二碳酸二第三丁酯(109 µL，0.480 mmol)，且在室溫下攪拌混合物48小時。隨後將反應混合物分配於EtOAc與水之間。用EtOAc萃取水層3×。經合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由管柱層析(0至100%乙酸乙酯/庚烷)純化殘餘物，得到N-[(3S)-1'-(5-溴-1,3-噻唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(47.0 mg，23%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 464.5/466.5。
(S)-1'-(5- 氯吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 CH
Figure 02_image453
步驟 a ： 將2,5-二氯吡嗪(50 mg，0.336 mmol)、碳酸二銫(1+) (436 mg，1.34 mmol)及(3S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(92.3 mg，0.336 mmol，中間物I)溶解於DMF (2 mL)中。在80℃下攪拌反應混合物3小時。隨後將反應混合物分配於EtOAc與水之間，且用EtOAc萃取水層3次。有機層經合併，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由管柱層析(0至10% MeOH/DCM + 1% NH4 OH)純化殘餘物，得到(3S)-1'-(5-氯吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(52.0 mg，49%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 315.4。
(S)-1'-(5- 溴吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 CI
Figure 02_image455
步驟 a ： 在DMF (20 mL)中添加2,5-二溴吡嗪(1.23 g，5.19 mmol)、(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(1.3 g，4.72 mmol，中間物I)及TEA (3.26 mL，23.6 mmol)。在85℃下攪拌反應混合物12小時。混合物隨後用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，有機層經分離且用H2 O (20 mL × 3)、鹽水(30 mL × 3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(DCM:MeOH = 100:0至100:5)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(S)-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(1.2 g，71%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 360.0/362.0。
N -{4-[(5- 溴嘧啶 -2- 基 ) 硫基 ]-3- 氯吡啶 -2- 基 }-N -[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CJ
Figure 02_image457
步驟 a ： 將5-溴-2-氯嘧啶(550 mg，2.84 mmol)、3-氯-4-(鈉硫基)吡啶-2-胺(491 mg，2.69 mmol，中間物AC)及Cs2 CO3 (1.85 g，5.68 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物在80℃下攪拌1小時。混合物用H2 O (20 mL)稀釋，隨後用EtOAc (20 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-[(5-溴嘧啶-2-基)硫基]-3-氯吡啶-2-胺(530 mg，59%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 318.8。步驟 b ： 將4-[(5-溴嘧啶-2-基)硫基]-3-氯吡啶-2-胺(200 mg，629 µmol)、Boc2 O (164 mg，754 µmol)及DMAP (115 mg，943 µmol)於DCM (10 mL)中之混合物在25℃下攪拌12小時。減壓濃縮混合物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至10:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -{4-[(5-溴嘧啶-2-基)硫基]-3-氯吡啶-2-基}-N -[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯(300 mg，92%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 518.9；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.87 (s, 2H), 8.51-8.49 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.94-7.92 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 1.36 (s, 18H)。
(R )-N -[(3S )-1'-(5- 溴嘧啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 CK
Figure 02_image459
步驟 a ： 將(R )-N -((S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(200 mg，652 µmol，經由實例120之步驟a合成)、5-溴-2-氯嘧啶(126 mg，652 µmol)、XantPhos-Pd-G4 (62.7 mg，65.2 µmol)及Cs2 CO3 (423 mg，1.30 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在N2 氛圍下在80℃下攪拌10小時。混合物用H2 O (20 mL)稀釋，隨後用EtOAc (20 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R )-N -[(3S )-1'-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(140 mg，46%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 465.0。
N -[(3R )-1'-(5- 溴吡嗪 -2- 基 )-3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CL
Figure 02_image461
步驟 a ： 將(3R )-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(100 mg，0.4 mmol，中間物CB)、2,5-二溴吡嗪(108 mg，0.5 mmol)及TEA (230 µL，1.7 mmol)於DMF (2.0 mL)中之混合物在85℃下攪拌12小時。此反應混合物直接用於下一步驟。LCMS m/z [M+H]+ = 361.9。步驟 b ： 向反應混合物中添加(Boc)2 O (134 mg，0.6 mmol)。在70℃下攪拌反應混合物2小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:100，乙酸乙酯:甲醇= 100:0至100:10)對其進行純化，得到呈白色固體狀之N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(110 mg，58%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 460.9。
2- 氯 -N - 甲基吡啶 -4- 胺 ( 中間物 CM)
Figure 02_image463
步驟 a ： 將2,4-二氯吡啶(1.00 g，6.75 mmol)及MeNH2 水溶液(30.0 mL)於MeOH (10.0 mL)中之混合物在密封試管中在85℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g，0%至30%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-氯-N -甲基吡啶-4-胺(600.0 mg，62%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 143.0；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：7.78-7.80 (m, 1H), 6.47-6.52 (m, 2H), 2.80-2.83 (m, 3H)。
(1'S)-1',3'- 二氫螺 [ 氮雜環丁烷 -3,2'- 茚 ]-1' 胺 ， 中間物 CN ； 及 (1'R )-1',3'- 二氫螺 [ 氮雜環丁烷 -3,2'- 茚 ]-1' 胺 ， 中間物 CO
Figure 02_image465
步驟 a ： 在N2 、-78℃下向3-氰基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(3.60 g，19.70 mmol，CAS編號142253-54-1)於THF (40 mL)中之溶液中逐滴添加LDA (11.8 mL，23.60 mmol，2.0 M)。在0℃下攪拌混合物15分鐘。隨後在-78℃下向混合物中添加含1-溴-2-(溴甲基)苯(5.40 g，21.60 mmol)之THF (20 mL)。在N2 下在0至25℃下攪拌混合物12小時。反應混合物隨後藉由H2 O (150 mL)淬滅且用EtOAc (150 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至10%)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀物之3-[(2-溴苯基)甲基]-3-氰基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(1.00 g，14%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.10-7.57 (m, 4H), 4.20 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.03 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.34 (s, 2H), 1.37 (s, 9H)。步驟 b ： 將3-[(2-溴苯基)甲基]-3-氰基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(800.0 mg，2.27 mmol)、PdCl2 (Amphos) (160.0 mg，227.0 µmol，CAS編號887919-35-9)及TEA (918.0 mg，9.08 mmol)於DMA/H2 O (10 mL，10/1)中之混合物在N2 、120℃下攪拌12小時。隨後將反應混合物傾入EtOAc (50 mL)中且用水(30 mL × 3)洗滌。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至20%)純化，得到呈黃色固體狀之1'-側氧基-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯(520.0 mg，84%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.40-7.83 (m, 4H), 4.26 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.90 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.49 (s, 2H), 1.49 (s, 9H)。步驟 c ： 將1'-側氧基-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯(520.0 mg，1.90 mmol)、(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(460.0 mg，3.80 mmol，CAS編號196929-78-9)及Ti(OEt)4 (3.50 g，15.20 mmol)於2-Me-THF (10 mL)中之混合物在100℃下攪拌12小時。反應混合物直接用於下一步驟中。步驟 d ： 在-78℃下向1'-((第三丁基亞磺醯基)亞胺基)-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸(R )-第三丁酯(1.90 mmol，來自步驟c)於2-Me-THF (10 mL)中之混合物中緩慢添加L -selectride (2.85 mmol，2.85 mL，1.0 M於THF中，CAS編號38721-52-7)。添加後，在0℃下攪拌混合物1小時。反應混合物隨後用MeOH (10 mL)淬滅，將其傾入EtOAc (500 mL)及H2 O (5 mL)中，且攪拌0.5小時。經由矽藻土過濾混合物且用EtOAc (300 mL × 2)洗滌。濃縮濾液且藉由矽膠管柱(EtOAc/石油醚= 30至50%)純化，得到呈淡黃色固體狀之(1'S )-1'-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯(300.0 mg，42%產率，較快溶離之異構體)以及呈淡黃色固體狀之(1'R )-1'-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯(280.0 mg，39%產率，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對組態。(1'S )-1'-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯之表徵：1 HNMR (400 MHz, DMSO_d 6 )：δ 7.21-7.45 (m, 4H), 5.91 (br, 1H), 4.63 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.15 (br, 1H), 3.84 (br, 2H), 3.50 (br, 1H), 3.21 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.06 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.18 (s, 9H)。LCMS m/z [M+H]+ = 323.1。(1'R )-1'-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯之表徵：1 H NMR (400 MHz, DMSO_d 6 )：δ 7.19-7.30 (m, 4H), 5.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.23 (br, 1H), 3.84-4.10 (m, 2H), 3.66 (br, 1H), 3.27 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.07 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.19 (s, 9H)。LCMS m/z [M+H]+ = 323.1。步驟 e ： 將(1'S )-1'-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯(300.0 mg，792.0 µmol)於2 M HCl/MeOH (20 mL)中之溶液在25℃下攪拌1小時。濃縮反應混合物，得到呈淡黃色固體狀之(1'S )-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1'-胺二鹽酸鹽(240.0 mg，123%粗產率)。步驟 f ： 將(1'R )-1'-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1-甲酸第三丁酯(280.0 mg，739.0 µmol)於2 M HCl/MeOH (20 mL)中之溶液在25℃下攪拌1小時。濃縮反應混合物，得到呈淡黃色固體狀之(1'R )-1',3'-二氫螺[氮雜環丁烷-3,2'-茚]-1'-胺二鹽酸鹽(220.0 mg，120%粗產率)。
(R )-2- 甲基 -N -[(4S )-1- 甲基 -4,6- 二氫 -1H - 螺 [ 環戊并 [c] 吡唑 -5,4'- 哌啶 ]-4- 基 ] 丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 CP
Figure 02_image467
步驟 a ： 向4-溴-1-甲基-1H -吡唑-5-甲酸(4.80 g，23.4 mmol，CAS編號84547-84-2)於THF (40.00 mL)中之混合物中添加BH3 /THF (93.60 mL，1 M)。在N2 氛圍下在80℃下攪拌混合物12小時。向混合物中添加EtOAc (200 mL)。用飽和NaHCO3 (200 mL × 3)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(4-溴-1-甲基-1H -吡唑-5-基)甲醇(4.10 g，92%產率)。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 7.26 (s, 1H), 4.62 (s, 2H), 3.86 (s, 3H)。步驟 b ： 在DCM (100 mL)中添加化合物(4-溴-1-甲基-1H -吡唑-5-基)甲醇(3.00 g，15.7 mmol)及CBr4 (6.23 g，18.8 mmol)。隨後在0℃下逐滴添加含PPh3 (4.93 g，18.8 mmol)之DCM (50 mL)，且在0℃下攪拌混合物0.5小時。用鹽水(100 mL)淬滅反應物且分離經分配之層。用DCM (100 mL × 2)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之4-溴-5-(溴甲基)-1-甲基-1H -吡唑(3.20 g，81%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 252.8, 254.8, 256.8。步驟 c ： 將化合物4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.96 g，14.1 mmol)放入THF (100 mL)中。在0℃下向混合物中逐滴添加LDA (8.85 mL，17.7 mmol，2 M於THF中)，且在0℃下攪拌混合物0.5小時。隨後使混合物冷卻至-78℃。隨後在-78℃下向混合物中逐滴添加含4-溴-5-(溴甲基)-1-甲基-1H-吡唑(3 g，11.8 mmol)之THF (50 mL)，且在-78℃下攪拌混合物1小時。藉由添加飽和NH4 Cl (100 mL)而淬滅反應物，且用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:50)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之4-[(4-溴-1-甲基-1H -吡唑-5-基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(3.30 g，73%產率)。LCMS m/z [M-56+MeCN+H]+ = 368.0, 370.0。步驟 d ： 將化合物4-[(4-溴-1-甲基-1H -吡唑-5-基)甲基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.00 g，2.6 mmol)、PdCl2 (AmPhos) (92.0 mg，130 µmol)及TEA (1.43 mL，10.4 mmol)放入DMA (50.00 mL)及H2 O (1.00 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在120℃下攪拌反應混合物12小時。混合物用乙酸乙酯(150 mL)稀釋，用H2 O (50 mL × 5)、鹽水(100 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:50)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-甲基-4-側氧基-4,6-二氫-1H -螺[環戊并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(560 mg，71%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 306.0。步驟 e ： 向1-甲基-4-側氧基-4,6-二氫-1H -螺[環戊并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(200.0 mg，654 µmol)及Ti(OEt)4 (1.34 mL，6.54 mmol)於2-Me-THF (5.00 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(316 mg，2.61 mmol)。在N2 下在90℃下攪拌反應混合物12小時。在N2 下在100℃下再攪拌反應混合物24小時。混合物直接用於下一步驟中。LCMS m/z [M+H]+ = 409.1。步驟 f ： 在0℃下，在(4Z )-1-甲基-4-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-4,6-二氫-1H -螺[環戊并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(260.0 mg，636 µmol)於2-Me-THF (5.00 ml)中之混合物中添加NaBH4 (48.0 mg，1.27 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用乙酸乙酯(50 mL)稀釋混合物。在攪拌下添加H2 O (20 mL)，形成大量白色固體。過濾混合物。分離濾液，且用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取水相。經合併之有機相用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:20至100:80)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(4S )-1-甲基-4-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-4,6-二氫-1H -螺[環戊并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(150.0 mg，57%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 411.1。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 7.53 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.90~4.00 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.00~3.30 (m, 2H), 2.86 (s, 2H), 1.60~2.10 (m, 4H), 1.27 (s, 9H), 1.22 (s, 9H)。步驟 g ： 向TFA (1.00 mL)及DCM (10.00 mL)之溶液中添加化合物(4S )-1-甲基-4-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-4,6-二氫-1H -螺[環戊并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(150.0 mg，365 µmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。隨後用TEA將混合物調整至pH = 8至9。濃縮混合物，得到(R )-2-甲基-N -[(4S )-1-甲基-4,6-二氫-1H -螺[環戊并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-4-基]丙烷-2-亞磺醯胺(200.0 mg，177%粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 311.1。
(1R)-4,7- 二氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 CQ ； 及 (1S )-4,7- 二氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺， 中間物 CR
Figure 02_image469
Figure 02_image471
步驟 a ： 將哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(25.70 g，106.0 mmol，CAS編號124443-68-1)溶解於THF (200 mL)中，且將反應混合物冷卻至-78℃。隨後添加LDA (57.5 mL，115.0 mmol)，且在-78℃下攪拌反應混合物2小時。隨後添加2-(溴甲基)-1,4-二氟苯(20.00 g，96.6 mmol，CAS編號85117-99-3)於THF (100 mL)中之溶液，且使反應混合物升溫至20℃並攪拌2小時。反應混合物用鹽水(300 mL)淬滅、用EtOAc (300 mL × 2)萃取，有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-[(2,5-二氟苯基)甲基]哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(25.00 g，70%產率)。LCMS m/z [M+H-Boc]+ = 269.9。步驟 b ： 在MeOH (150 mL)及H2 O (150 mL)之混合物中添加4-[(2,5-二氟苯基)甲基]哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁酯4-甲酯(25.00 g，67.6 mmol)及KOH (30.20 g，540 mmol)，在60℃下攪拌反應混合物12小時。將反應混合物減壓濃縮至約200 mL，隨後用石油醚(200 mL × 3)萃取。藉由添加6 N HCl將水相調整至pH = 4，隨後用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取。經合併之有機相用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈白色固體狀之1-[(第三丁氧基)羰基]-4-[(2,5-二氟苯基)甲基]哌啶-4-甲酸(20.00 g，83%產率)。LCMS m/z [M+H-Boc]+ = 256.0。步驟 c ： 將1-[(第三丁氧基)羰基]-4-[(2,5-二氟苯基)甲基]哌啶-4-甲酸(10.00 g，28.1 mmol)溶解於1,2-二氯乙烷(200 mL)中，且將反應混合物冷卻至0℃。隨後添加SOCl2 (4.1 mL，56.2 mmol)，且使反應混合物升溫至20℃並攪拌4小時。隨後添加AlCl3 (5.60 g，42.1 mmol)，且在75℃下攪拌反應混合物12小時。藉由添加2 N NaOH將反應混合物調整至pH = 12，隨後添加(Boc)2 O (9.8 mL，42.1 mmol)，且在25℃下攪拌反應混合物2小時。反應混合物經減壓濃縮，用EtOAc (500 mL)稀釋，用H2 O (300 mL × 3)、鹽水(300 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之4,7-二氟-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(6.50 g，69%產率)。LCMS m/z [M+H-Boc]+ =237.8。步驟 d ： 在2-Me-THF (40 mL)中添加4,7-二氟-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(2.50 g，7.4 mmol)、(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(3.58 g，29.6 mmol)、Ti(OEt)4 (9.3 mL，44.4 mmol)，且在90℃下攪拌反應混合物48小時。反應混合物不經進一步純化即用於下一步驟(3.26 g粗產物，經計算為理論產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 441.0。步驟 e ： 將含(1Z )-4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(3.26 g，粗產物)之2-Me-THF (40 mL)冷卻至0℃，隨後添加NaBH4 (136.0 mg，3.7 mmol)。使反應混合物升溫至20℃並攪拌2小時。反應混合物隨後用H2 O (50 mL)及EtOAc (100 mL)淬滅，過濾且用EtOAc (50 mL × 2)洗滌濾餅。濾過物用H2 O (100 mL × 2)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，並且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:50)純化，得到呈黃色固體狀之4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(2.70 g，83%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 443.0。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 6.89-6.74 (m, 2H), 4.57-4.51 (m, 1H), 3.79-3.72 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 3.10-3.01 (m, 4H), 1.86-1.69 (m, 2H), 1.55-1.45 (m, 1H), 1.40-1.38 (m, 9H), 1.20-1.16 (m, 1H), 1.13-1.12 (m, 9H)。SFC：e.e. = 51.36%，水相法設置：AD-3-EtOH-DEA-5-40-25 mL，小瓶：1:E,5，通道名稱：PDA Ch1 220nm@4.8nm。步驟 f ： 藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(2.50 g，5.6 mmol)，得到呈黃色固體狀之產物(1R )-4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(900.0 mg，36%產率) (LCMS m/z [M+H]+ = 443.1；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 )：δ 7.14-7.04 (m, 2H), 5.63-5.60 (m, 1H), 4.44-4.41 (m, 1H), 3.65-3.56 (m, 2H), 3.18-2.85 (m, 3H), 1.71-1.69 (m, 2H), 1.41-1.38 (m, 9H), 1.32-1.26 (m, 2H), 1.13-1.12 (m, 9H))及呈黃色固體狀之(1S )-4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(900.0 mg，36%產率) (LCMS m/z [M+H]+ = 443.1；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 )：δ 7.14-7.04 (m, 2H), 5.79-5.76 (m, 1H), 4.55-4.43 (m, 1H), 3.80-3.67(m, 2H), 3.08-2.82 (m, 4H), 1.76-1.71 (m, 1H), 1.56-1.30 (m, 11H), 1.11 (s, 9H))。步驟 g ： 在4 N HCl/MeOH (20 mL)中添加(1R )-4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(900.0 mg，2.0 mmol)，在25℃下攪拌反應混合物2小時。藉由過濾收集白色沈澱並乾燥，得到呈白色固體狀之(1R )-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(500.0 mg，79%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 239.0；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 )：δ 9.33-9.23 (m, 2H), 8.87 (s, 3H), 7.30-7.18 (m, 2H), 4.60 (s, 1H), 3.42-3.33 (m, 2H), 3.12-2.97 (m, 4H), 2.24-2.04(m, 2H), 1.71-1.49 (m, 2H)。步驟 h ： 在4 N HCl/MeOH (6 mL)中添加(1S )-4,7-二氟-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(300.0 mg，677.0 µmol)，在25℃下攪拌反應混合物1小時。藉由過濾收集沈澱並乾燥，得到呈白色固體狀之(1S )-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(150.0 mg，71%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 239.0；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 9.21-9.15 (m, 2H), 8.81 (s, 3H), 7.31-7.19 (m, 2H), 4.62 (s, 1H), 3.38-3.33 (m, 2H), 3.17-2.98 (m, 4H), 2.22-2.01 (m, 2H), 1.72-1.50 (m, 2H)。
N -[(3R )-4,7- 二氟 -1'-[3- 碘 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CS
Figure 02_image473
步驟 a ： 在DMF (6 mL)中添加6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(150.0 mg，411.0 µmol，中間物A)、(1R )-4,7-二氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(127.0 mg，411.0 µmol，中間物CQ)、TEA (283.0 µL，2.1 mmol)，且在80℃下攪拌反應混合物12小時。添加(Boc)2 O (94.3 µL，411.0 µmol)，且在25℃下攪拌反應混合物2小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-4,7-二氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，73%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 667.1。
2- 氯吡啶 -3- 硫醇鈉，中間物 CT
Figure 02_image475
步驟 a ： 向2-氯-3-碘吡啶(1.00 g，4.17 mmol，CAS編號78607-36-0)及3-巰基丙酸2-乙基己酯(1.13 g，5.21 mmol，CAS編號50448-95-8)於二噁烷(30 mL)中之混合物中添加Pd2 (dba)3 (317 mg，347 µmol)、XantPhos (401.0 mg，695 µmol)及DIPEA (1.80 mL，10.4 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 保護下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之3-[(2-氯吡啶-3-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(1.00 g，88%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 330.1。步驟 b ： 將3-[(2-氯吡啶-3-基)硫基]丙酸2-乙基己酯(500.0 mg，1.51 mmol)及MeONa (122.0 mg，2.26 mmol)於THF (5 mL)中之混合物在0℃下攪拌1小時。隨後在20℃下攪拌混合物溶液1小時。將混合物用DCM (5 mL)稀釋並攪拌0.5小時，此時大量固體沈澱。添加另外的DCM且藉由過濾收集固體，得到呈黃色固體狀之2-氯吡啶-3-硫醇鈉(111.0 mg，44%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 218.0。
(R )-N -[(3S )-1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 CU
Figure 02_image477
步驟 a ： 在N2 下向(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(50.0 mg，163.0 µmol，經由實例120之步驟a合成)及2-溴-5-碘吡啶(46.2 mg，163 µmol，CAS編號73290-22-9)於甲苯(3.0 mL)中之混合物中添加XantPhos-Pd-G4 (15.6 mg，16.3 µmol)及Cs2 CO3 (116.0 mg，358.0 µmol)。在N2 、80℃下攪拌混合物12小時。隨後減壓濃縮混合物且藉由急驟矽膠層析(DCM/MeOH = 1/0至10/1)純化殘餘物，得到呈棕色油狀物之(R )-N -[(3S )-1'-(6-溴吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(60.0 mg，80%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 462.0。
(R )-2- 甲基 -N -((R )-1- 甲基螺 [ 吲哚啉 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 CV
Figure 02_image479
Figure 02_image481
步驟 a ： 在N2 氛圍、25℃下向2-溴苯胺(10.00 g，58.1 mmol，CAS編號615-36-1)及4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(11.50 g，58.1 mmol，CAS編號79099-07-3)於HOAc (80 mL)中之反應混合物中添加Me3 SiCN (7.98 mL，63.9 mmol，CAS編號7677-24-9)。在25℃下攪拌反應混合物12小時。將經合併之反應混合物傾入冰冷的NH4 OH溶液(500 mL，28%溶液)中，隨後用EtOAc (300 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用石油醚(100 mL)濕磨，隨後過濾，得到呈白色固體狀之4-[(2-溴苯基)胺基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(19.00 g，86%產率)。1 HNMR (400MHz, CDCl3 ) δ 7.52 - 7.50 (m, 1H), 7.27 - 7.24 (m, 1H), 7.20 - 7.18 (m, 1H), 6.80 - 6.77 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.90 (br s, 2H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 2.37 (br d,J = 13.6 Hz, 2H), 1.93 - 1.86 (m, 2H), 1.47 (s, 9H)。步驟 b ： 將4-[(2-溴苯基)胺基]-4-氰基哌啶-1-甲酸第三丁酯(6.00 g，15.7 mmol)、PdCl2 (Amphos)2 (1.11 g，1.57 mmol，CAS編號887919-35-9)及TEA (8.67 mL，62.7 mmol)於DMA (120 mL)及H2 O (2.4 mL)中之混合物在N2 氛圍下在120℃下攪拌12小時。反應混合物用水(120 mL)稀釋，隨後用EtOAc (100 mL × 3)萃取。有機層用水(80 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(220 g，0%至20%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-側氧基螺[吲哚啉-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.95 g，41%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 324.9。步驟 c ： 在N2 氛圍下向3-側氧基螺[吲哚啉-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(450.0 mg，1.5 mmol)於THF (9 mL)中之反應混合物中添加NaHMDS (2.21 mL，2.2 mmol，1 M於THF中)。在0℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後添加(MeO)2 SO2 (1.86 g，14.8 mmol)且在0℃下攪拌所得混合物0.5小時。將經合併之反應混合物傾入飽和NaHCO3 (40 mL)中，且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之產物(1.4 g)。隨後向殘餘物中添加NaOH溶液(20 mL，4 M於水中)，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後用EtOAc (50 mL × 2)萃取混合物。經合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈綠色油狀物之1-甲基-3-側氧基螺[吲哚啉-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(500.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 338.9；1 HNMR (400MHz, CDCl3 ) δ 7.57 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.45 (m, 1H), 6.74 - 6.66 (m, 2H), 4.14 - 3.97 (m, 2H), 3.67 - 3.65 (m, 2H), 2.89 (s, 3H), 1.88 (br s, 2H), 1.53 - 1.38 (m, 12H)。步驟 d ： 將1-甲基-3-側氧基-1,3-二氫螺[吲哚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(600.0 mg，1.9 mmol)、(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(916.0 mg，7.6 mmol)及Ti(OEt)4 (6 mL)之反應混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。重複一次在100℃下添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(916.0 mg，7.6 mmol)。在100℃下攪拌所得混合物20小時。經合併之反應混合物用EtOAc (50 mL)及H2 O (50 mL)淬滅。過濾反應混合物，且用EtOAc (50 mL × 2)洗滌濾餅。分離濾液且用EtOAc (50 mL × 2)萃取水溶液。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g，0%至33%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3E )-1-甲基-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-1,3-二氫螺[吲哚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(190.0 mg，20%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 420.1。步驟 e ： 在25℃下向(3E )-1-甲基-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]亞胺基}-1,3-二氫螺[吲哚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(190.0 mg，0.4 mmol)於2-Me-THF (4 mL)中之混合物中添加NaBH4 (170.0 mg，4.5 mmol)及MeOH (1 mL)。在40℃下攪拌混合物0.5小時。用MeOH (1 mL)淬滅反應混合物，且將其傾入H2 O (50 mL)與EtOAc (60 mL)之混合物中。分離混合物且用EtOAc (60 mL × 2)萃取水溶液。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (石油醚/EtOAc = 1/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3R )-1-甲基-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[吲哚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(157.0 mg，83%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 444.1；1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.22 - 7.17 (m, 2H), 6.71 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.46 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.61 (d,J =9.2 Hz, 1H), 4.36 - 4.20 (m, 2H), 3.61 (br d,J = 9.2 Hz, 1H), 3.18 - 2.92 (m, 2H), 2.01 - 1.88 (m, 1H), 1.47 - 1.46 (m, 11H), 1.28 - 1.23 (m, 1H), 1.17 (s, 9H)。步驟 f ： 向(3R )-1-甲基-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[吲哚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(157.0 mg，0.4 mmol)於DCM (4 mL)中之反應混合物中添加TFA (0.4 mL)。將反應混合物在25℃下攪拌0.5小時，且隨後在40℃下攪拌0.5小時。用TEA將反應混合物調整至pH = 7至8。隨後濃縮混合物，得到呈黃色油狀物之(R )-2-甲基-N -((R )-1-甲基螺[吲哚啉-2,4'-哌啶]-3-基)丙烷-2-亞磺醯胺(119.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 321.9。
(S)-(1'-(7- 溴噻吩并 [3,2-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CW
Figure 02_image483
步驟 a ： 在MeCN (20 mL)中添加化合物4-氯噻吩并[3,2-d ]嘧啶(800 mg，4.68 mmol，CAS編號16269-66-2)、NBS (1.05 g，4.68 mmol)及HOAc (0.2 mL)。在85℃下攪拌混合物18小時。隨後用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(20 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至15/100)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之7-溴-4-氯噻吩并[3,2-d ]嘧啶(229 mg，20%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 250.8；1 HNMR 2 (400MHz, CDCl3 ) δ 9.14 (s, 1H), 8.09 (s, 1H)。步驟 b ： 將化合物7-溴-4-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶(210 mg，841 µmol)、(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(254 mg，925 µmol，中間物I)及TEA (582 µL，4.20 mmol)放入DMF (10 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在85℃下攪拌反應混合物12小時。濃縮反應混合物並添加H2 O (30 mL)，且用乙酸乙酯(100 mL)萃取混合物。經合併之有機層用H2 O (20 mL × 5)及鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之殘餘物(330 mg，94%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 415.0。步驟 c ： 將化合物(3S )-1(S )-1'-(7-溴噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(330 mg，794 µmol)、TEA (400 mg，4.0 mmol)及(Boc)2 O (519 mg，2.4 mmol)放入DMF (10 mL)中。在25℃下攪拌反應混合物2小時。濃縮反應混合物並添加H2 O (20 mL)，隨後用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:40)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(S)-(1'-(7-溴噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(240.0 mg，59%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 517.0。
乙酸 (6-((R )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3H - 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 碘 -1-( 四氫 -2H - 哌喃 -2- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 甲酯 ， 中間物
Figure 02_image485
步驟 a ： 向(R )-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(230 mg，0.8 mmol，中間物CB)及乙酸[6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基]甲酯(361 mg，0.8 mmol，中間物C)於DMF (5.0 mL)中之溶液中添加TEA (573 µL，4.1 mmol)。在70℃下攪拌反應物12小時。隨後向溶液中添加(Boc)2 O (379 μL，1.7 mmol)，且在70℃下再攪拌反應物2小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)對其進行純化。得到呈白色固體狀之乙酸(6-((R )-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲酯(550 mg，94%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 705.0。
(R)-N-((1S)-1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 CY
Figure 02_image487
步驟 a ： 將6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(12 g，32.9 mmol，中間物A)、(R )-N -((S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(10.0 g，32.9 mmol，經由實例120之步驟a合成)及CsF (14.9 g，98.6 mmol)於DMSO (150 mL)中之溶液在60℃下攪拌2小時。將反應混合物傾入H2 O (700 mL)中且用EtOAc (700 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(800 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到橙色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(220 g，0%至50%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-N-((1S)-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(12.5 g，60%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 635.0；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.31 (s, 1H), 7.33-7.36 (m, 1H), 7.22-7.27 (m, 3H), 5.78-5.83 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.46-4.55 (m, 3H), 4.03-4.06 (m, 1H), 3.72-3.77 (m, 1H), 3.34-3.37 (m, 1H), 3.23-3.27 (m, 1H), 2.82-2.87 (m, 1H), 2.54-2.58 (m, 1H), 2.10-2.19 (m, 2H), 1.90-1.93 (m, 2H), 1.68-1.80 (m, 4H), 1.52-1.64 (m, 1H), 1.31 (s, 9H)。
N -[(3S )-1'-(5- 溴吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 CZ
Figure 02_image489
步驟 a ： 向(3S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(1.30 g，3.6 mmol，中間物CI)於DMF (15 mL)中之溶液中添加Boc2 O (1.65 mL，7.22 mmol)。在25℃下攪拌所得混合物12小時。反應混合物用水(30 mL)稀釋，隨後用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(815 mg，50%產率)。LC-MS (M +H)+ m/z = 459.0。
1- 苯甲基 -6- 氯 -3-[(2,3- 二氯苯基 ) 硫基 ]-5- 甲基 -1H ,4H ,5H - 吡唑并 [3,4-d ] 嘧啶 -4- 酮， 中間物 DA
Figure 02_image491
步驟 a ： 向1-苯甲基-3-碘-7-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-1H ,4H ,5H ,6H ,7H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6-二酮(2.00 g，4.0 mmol，CAS號2055938-41-3)及2,3-二氯苯-1-硫醇(1.06 g，6.0 mmol)於二噁烷(20 mL)中之混合物中添加Pd2 (dba)3 (291 mg，0.4 mmol)、XantPhos (370.0 mg，0.8 mmol)及DIPEA (1.4 mL，8.0 mmol)。將混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在120℃下攪拌10小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化，得到呈淡紅色固體狀之1-苯甲基-3-[(2,3-二氯苯基)硫基]-7-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-1H ,4H ,5H ,6H ,7H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6-二酮(1.00 g，45%產率)。LC-MS (M +H)+ m/z = 552.9。步驟 b ： 將1-苯甲基-3-[(2,3-二氯苯基)硫基]-7-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-1H ,4H ,5H ,6H ,7H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6-二酮(950.0 mg，1.7 mmol)於TfOH (0.2 mL)及TFA (20 mL)中之溶液在70℃下攪拌1小時。反應混合物用DCM (30 mL)稀釋，經減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用H2 O (10 mL)稀釋，藉由添加NaOH水溶液(1 N)調整至pH = 9至10，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。用石油醚及乙酸乙酯(10:1)濕磨殘餘物，此時形成大量沈澱。藉由過濾收集固體，且用石油醚:乙酸乙酯= (10:1，20 mL)洗滌濾餅，隨後乾燥，得到呈淡棕色固體狀之1-苯甲基-3-[(2,3-二氯苯基)硫基]-5-甲基-1H ,4H ,5H ,6H ,7H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6-二酮(740.0 mg，100%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：8.75 (s, 1H), 7.11-7.18 (m, 5H), 6.87-6.92 (m, 1H), 6.62-6.65 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 3.25 (s, 3H)。步驟 c ： 向1-苯甲基-3-[(2,3-二氯苯基)硫基]-5-甲基-1H ,4H ,5H ,6H ,7H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6-二酮(300.0 mg，0.7 mmol)及DIPEA (1.2 mL，6.9 mmol)之混合物中添加POCl3 (1.7 mL，18.5 mmol)。在120℃下攪拌反應混合物12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋該殘餘物。將混合物緩慢添加至冰冷的飽和NaHCO3 (30 mL)中，且分離經分配之層。用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:50)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-苯甲基-6-氯-3-[(2,3-二氯苯基)硫基]-5-甲基-1H ,4H ,5H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-酮(220.0 mg，71%產率)。LC-MS (M +H)+ m/z = 450.9。
(3S )-1'-{3- 碘 -5- 甲基 -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺， 中間物 DB
Figure 02_image493
Figure 02_image495
步驟 a ： 將((1S )-1'-(3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(500.0 mg，792.0 µmol，中間物J)、10% Pd/C (100.0 mg)及TEA (220.0 µL，1.58 mmol)於THF (15.0 ml)中之溶液在H2 (15 psi)下在20℃下攪拌12小時。過濾反應混合物且濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(380.0 mg，95%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：505.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 向N -[(3S )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(380.0 mg，753.0 µmol)於AcOH/ACN (10.0 mL/10.0 mL)中之溶液中添加NBS (134.0 mg，753.0 µmol)。在20℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後減壓濃縮反應混合物。殘餘物用H2 O (100.0 mL)濕磨且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用飽和NaHCO3 (100.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至20%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(330.0 mg，75%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：583.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(330.0 mg，565.0 µmol)、三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧硼𠮿(141.0 mg，1.13 mmol，CAS編號823-96-1)、Pd(dppf)Cl2 (82.7 mg，113.0 μmol，CAS編號72287-26-4)及K2 CO3 (233.0 mg，1.69 mmol)於二噁烷/H2 O (10.0 mL/2.0 mL)中之溶液在N2 下在90℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至30%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，85%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：519.2 (M+H)+ 。步驟 d ： 將N -[(3S )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，482.0 µmol)於HCl/MeOH (15.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌1小時。隨後濃縮反應混合物，用EtOAc濕磨且攪拌20分鐘。過濾混合物且濃縮濾餅，得到呈黃色固體狀之(S )-1'-(5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(180.0 mg，101%粗產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：335.1 (M+H)+ 。步驟 e ： 將化合物(3S )-1'-{5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(100.0 mg，269.0 µmol)及TEA (111 µL，807.0 µmol)溶解於DCM (10 mL)中。隨後添加含(Boc)2 O (73.8 µL，322.0 µmol)之DCM (0.13 mL)。在25℃下攪拌混合物2小時。混合物用H2 O (10 mL × 2)、鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-{5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(70.0 mg，60%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：435.1 (M+H)+ 。步驟 f ： 在DMF (2 mL)中添加N -[(3S )-1'-{5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(70.0 mg，161.0 µmol)及NIS (54.2 mg，241.0 µmol)。在110℃下攪拌反應混合物16小時。用飽和Na2 SO3 (10 mL)與飽和NaHCO3 (10 mL)之混合物淬滅混合物並攪拌10分鐘，此時形成大量沈澱。隨後添加H2 O (10 mL)且攪拌混合物1分鐘，隨後用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈棕色固體狀之(3S )-1'-{3-碘-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(60.0 mg，81%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：461.0 (M+H)+ 。
4- 氯 -1- 甲基 -1H - 吡唑并 [3,4-d ] 嘧啶 ， 中間物 DC ； 及 4- 氯 -2- 甲基 -2H - 吡唑并 [3,4-d ] 嘧啶 ， 中間物 DD
Figure 02_image497
步驟 a ： 將4- 氯 -2H - 吡唑并 [3,4-d ] 嘧啶 (1.00 g ，6.5 mmol ，CAS編號5399-92-8)溶解於THF (33.0 mL)中。隨後在0℃下添加NaHMDS (10 mL，1.0 M於THF中)，且攪拌混合物5分鐘。在N2 氣體保護下，在0℃下經5分鐘緩慢添加MeI (1.03 mL，16.7 mmol)。使反應混合物升溫至25℃且攪拌1小時。用H2 O (200 mL)及CH2 Cl2 (200 mL)稀釋混合物，隨後分離經分配之層。用CH2 Cl2 (50 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯:石油醚= 0:100至100:100)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4- 氯 -1- 甲基 -1H - 吡唑并 [ 3,4-d ] 嘧啶 (98.3 mg ，9.1%產率) (LCMS (ESI+)m/z ：169 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.87 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 4.09 (s, 3H))以及呈黃色固體狀之4- 氯 -2- 甲基 -2H - 吡唑并 [ 3,4-d ] 嘧啶 (242 mg ，22% 產率) (LCMS (ESI+)m/z ：169 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.91 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 4.25 (s, 3H))。
(S )-5-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ) 吡嗪 -2- 硫醇鈉 ， 中間物 DE
Figure 02_image499
步驟 a ： 將(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(590.0 mg，1.3 mmol，中間物CZ)、3-巰基丙酸2-乙基己酯(334.0 mg，1.5 mmol，CAS編號50448-95-8)、Pd2 (dba)3 (117.0 mg，0.13 mmol)、XantPhos (148.0 mg，0.26 mmol，CAS編號161265-03-8)及TEA (522 µL，3.8 mmol)於甲苯(15 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至15%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之3-((5-((S )-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(690 mg，90%產率)。LCMS (ESI+)m/z ：597.2 (M +H)+ 。步驟 b ： 向3-((5-((S )-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(690.0 mg，1.2 mmol)於無水THF (10 mL)中之混合物中添加MeONa (124.0 mg，2.3 mmol)。在N2 氛圍下在20℃下攪拌所得混合物3小時。隨後濃縮反應混合物，得到粗產物，用石油醚:乙酸乙酯= 10:1 (50 mL)濕磨該粗產物。收集固體且真空乾燥，得到呈紅色固體狀之(S )-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(500.0 mg，100%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：413.1 (M-Na+H)+ 。
4-[1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3- 烯 -3'- 酮 ， 中間物 DF
Figure 02_image501
步驟 a ： 將化合物1-[6-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基]-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(4.00 g，10.7 mmol，中間物AA)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(2.72 g，11.7 mmol，CAS編號1310384-20-3)、Pd(dppf)Cl2 (782.0 mg，1.1 mmol)及Cs2 CO3 (6.97 g，21.4 mmol)放入溶劑二噁烷(250 mL)及H2 O (25 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次；隨後在90℃下攪拌反應混合物12小時。隨後濃縮反應混合物且添加H2 O (200 mL)，隨後用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:50至100:90)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]環己-3-烯-1-甲腈(4.70 g，99.5%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：442.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]環己-3-烯-1-甲腈(2.70 g，6.1 mmol)及1-溴-2-(溴甲基)苯(1.67 g，6.7 mmol)溶解於THF (150 mL)中。隨後在-10℃下向混合物中逐滴添加LDA (3.66 mL，7.3 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使其升溫至25℃後保持1小時。接下來，在0℃下向混合物中逐滴添加另外的LDA (3.66 mL，7.3 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使其升溫至25℃後保持1小時。藉由添加飽和NH4 Cl (200 mL)來淬滅反應混合物，隨後用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(300 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:20至100:80)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-[(2-溴苯基)甲基]-4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]環己-3-烯-1-甲腈(1.70 g，26%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：610.0, 612.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 將1-[(2-溴苯基)甲基]-4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]環己-3-烯-1-甲腈(700.0 mg，1.1 mmol)、PdCl2 (AmPhos)2 (23.1 mg，32.6 µmol)及TEA (631 µL，4.6 mmol)放入DMA (25 mL)及H2 O (0.5 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在120℃下攪拌反應混合物12小時。隨後用乙酸乙酯(100 mL)稀釋混合物。混合物用H2 O (30 mL × 5)、鹽水(50 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:50至100:80)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(520 mg，86%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：533.1 (M+H)+ 。
4- 氯 -1- 甲基 -1H - 咪唑并 [4,5-c ] 吡啶 ， 中間物 DG ； 及 4- 氯 -3- 甲基 -3H - 咪唑并 [4,5-c ] 吡啶 ， 中間物 DH
Figure 02_image503
步驟 a ： 在N2 、20℃下向4-氯-3H -咪唑并[4,5-c ]吡啶(1 g，6.51 mmol，CAS編號81053-66-9)於DMSO/THF (2.5 mL/25 mL)中之溶液中添加NaHMDS (9.76 mL，9.76 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時。隨後，在20℃下向反應混合物中添加MeI (1.21 mL，19.5 mmol)。隨後在20℃下攪拌反應混合物11小時。過濾反應混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之4-氯-1-甲基-1H -咪唑并[4,5-c ]吡啶(中間物DG) (257.2 mg ，24%產率)，LCMS (ESI+) m/z：167.8 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.16~8.14 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.27~7.25 (m, 1H), 3.71 (s, 3H)；以及呈白色固體狀之4-氯-3-甲基-3H -咪唑并[4,5-c ]吡啶(中間物DH) (201.8 mg ，19% 產率)，LC-MS (ESI+) m/z：167.8 (M+H)+ , 1 HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.34~8.13 (m, 1H), 7.98 (m, 1H), 7.79~7.54 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 4.34~4.09 (m, 3H)。
2- 氯 -5- 環丙基 -1H - 吡咯并 [2,3-b ] 吡啶，中間物 DI
Figure 02_image505
步驟 a ： 將5-溴-1H -吡咯并[2,3-b ]吡啶(8.00 g，40.6 mmol，CAS號183208-35-7)、環丙基
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(8.01 g，93.3 mmol)及K2 CO3 (16.60 g，121.0 mmol)於甲苯(100.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在25℃下攪拌0.5小時。隨後，添加Pd2 (dba)3 (1.85 g，2.0 mmol)及SPhos (1.66 g，4.1 mmol)，且在N2 氛圍下在100℃下攪拌所得混合物11.5小時。隨後真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，隨後將殘餘物溶解於乙酸乙酯(200.0 mL)中且用H2 O (150.0 mL × 3)洗滌。有機相用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至35%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-環丙基-1H -吡咯并[2,3-b ]吡啶(2.70 g，42%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 159.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 向5-環丙基-1H -吡咯并[2,3-b ]吡啶(2.10 g，13.2 mmol)於t -BuOH (120.0 mL)中之攪拌溶液中逐份添加三溴化吡啶鎓(12.50 g，39.5 mmol)，隨後在25℃下攪拌所得混合物12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，隨後將殘餘物溶解於乙酸乙酯(200.0 mL)中且用H2 O (150.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色固體狀之3,3-二溴-5-環丙基-1H ,2H ,3H -吡咯并[2,3-b ]吡啶-2-酮(4.3 g，粗產物)。LC-MS (ESI+ ) m/z 330.9 (M+H)+ 。步驟 c ： 向3,3-二溴-5-環丙基-1H ,2H ,3H -吡咯并[2,3-b ]吡啶-2-酮(4.30 g，12.9 mmol)於AcOH (20.0 mL)及MeOH (20.0 mL)中之混合物中添加Zn (4.21 g，64.5 mmol)，且在25℃下攪拌所得混合物2小時。隨後過濾反應混合物且真空濃縮，得到殘餘物，隨後將殘餘物溶解於乙酸乙酯(100.0 mL)中且用H2 O (80.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(25.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，用EtOH (20 mL)濕磨殘餘物，得到呈棕色固體狀之5-環丙基-1H ,2H ,3H -吡咯并[2,3-b ]吡啶-2-酮(1.50 g，67%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 174.9 (M+H)+ 。步驟 d ： 將5-環丙基-1H ,2H ,3H -吡咯并[2,3-b ]吡啶-2-酮(700.0 mg，4.0 mmol)於POCl3 (6.50 mL，69.9 mmol)中之混合物在110℃下攪拌4小時。隨後真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將殘餘物溶解於DCM (20.0 mL)中且用飽和Na2 CO3 調整至pH = 8，隨後用DCM (25.0 mL × 3)萃取。有機相用鹽水(25.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至35%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-氯-5-環丙基-1H -吡咯并[2,3-b ]吡啶(410.0 mg，34%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 193.0 (M+H)+ 。
N -[(3S )-1'-(5- 硫基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 DJ
Figure 02_image507
Figure 02_image509
步驟 a ： 將2,5-二溴吡嗪(4.00 g，16.8 mmol，CAS編號23229-26-7)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(5.06 g，18.4 mmol，中間物I)及TEA (11.6 mL，84.0 mmol)於DMF (50 mL)中之混合物在80℃下攪拌3小時。隨後將粗產物溶液冷卻至室溫且直接用於下一步驟。LC-MS (ESI+ )m/z ：341.9, 343.9 (M-NH2 )+ 。步驟 b ： 向(S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(6.03 g，16.7 mmol)於DMF (50 mL)中之粗產物溶液中添加(Boc)2 O (5.73 mL，25.0 mmol)。在25℃下攪拌所得混合物12小時。混合物隨後用EtOAc (500 mL)稀釋。接下來，混合物用H2 O (100 mL × 5)、鹽水(500 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至15%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(7.60 g，99%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：459.2, 461.2 (M+H)+ 。步驟 c ： 向二噁烷(60 mL)中添加(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(3.00 g，6.53 mmol)、3-硫基丙酸2-乙基己酯(1.56 g，7.18 mmol，CAS編號50448-95-8)、XantPhos (752 g，1.30 mmol)、Pd2 (dba)3 (597.0 mg，0.65 mmol)及DIPEA (3.40 mL，19.5 mmol)。將反應混合物抽成真空且用N2 再填充3次。在100℃下攪拌溶液12小時。隨後減壓移除溶劑。用DCM (100 mL)及H2 O (100 mL)濕磨殘餘物，且濾出黃色固體。分離有機層且用DCM (100 mL × 2)萃取水層。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到棕色殘餘物。藉由急驟管柱層析(石油醚/EtOAc = 100:0至100:15)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之3-({5-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}硫基)2-乙基己基丙酸甲酯(3.0 g，77%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：597.2 (M+H)+ 。步驟 d ： 將化合物3-({5-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(200.0 mg，335 µmol)溶解於THF (1.00 mL)中。將反應混合物冷卻至-78℃，且在N2 下經10分鐘逐滴添加t -BuOK (1.00 mL，1 M於THF中)。在-78℃下攪拌反應混合物20分鐘。在-78℃下，將反應混合物用DCM (30 mL)稀釋且用HCl/MeOH (2 N)酸化至pH = 6。用H2 O (20 mL)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-(5-硫基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(138.0 mg，100%產率，粗產物)。
5-((S)-1-(((R)- 第三丁基亞磺醯基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 硫醇鈉 ， 中間物 DK ； 及 5-((S)-1-(((R)- 第三丁基亞磺醯基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 甲基吡嗪 -2- 硫醇鈉 ， 中間物 DL
Figure 02_image511
Figure 02_image513
步驟 a ： 將(R)-N-((S)-1'-(5-溴-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(320.0 mg，670.0 µmol，經由實例83及84之步驟a合成)、3-硫基丙酸2-乙基己酯(292.0 mg，1.3 mmol，CAS編號50448-95-8)、XantPhos (77.5 mg，134.0 µmol)、DIPEA (344.0 μL，2.0 mmol)及Pd2 (dba)3 (61.3 mg，67.0 µmol)於1,4-二噁烷(15.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在110℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至55%)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之3-((5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-甲基吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯及3-((5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(400.0 mg)。LC-MS (ESI+ ) m/z 615.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 向3-((5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-甲基吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯及3-((5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(390.0 mg，634.0 μmol)於無水THF (10.0 mL)中之混合物中添加MeONa (68.0 mg，1.3 mmol)，且在N2 氛圍下在20℃下攪拌所得混合物1小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，用石油醚:乙酸乙酯= 10:1 (20 mL)對其進行濕磨並過濾。合併固體且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-甲基吡嗪-2-硫醇鈉及5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基吡嗪-2-硫醇鈉(260 mg，91%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 431.1 (M+H-Na)+ 。
2- 氯 -1- 環戊基乙 -1- 酮， 中間物 DM
Figure 02_image515
步驟 a ： 向環戊烷甲酸(3.00 g，26.2 mmol)於SOCl2 (10.0 mL)中之混合物中添加DMF (2滴)，且在N2 氛圍下在50℃下攪拌所得混合物3小時。真空濃縮混合物，得到殘餘物，將殘餘物溶解於DCM (30.0 mL)中且隨後再次真空濃縮，得到呈無色油狀物之環戊烷碳醯氯(3.40 g，98%粗產率)。步驟 b ： 向環戊烷碳醯氯(3.40 g，25.6 mmol)於無水THF (60.0 mL)中之0℃混合物中緩慢添加TMSCHN2 (38.4 mL，76.8 mmol)，隨後在此溫度下攪拌混合物0.5小時。隨後將所得混合物升溫至20℃且攪拌11.5小時。真空濃縮混合物，得到殘餘物，隨後將殘餘物溶解於THF (60.0 mL)中，且在0℃下緩慢添加HCl/1,4-二噁烷(4 M，19.2 mL)。將所得混合物升溫至20℃且攪拌2小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，將殘餘物溶解於乙酸乙酯(50.0 mL)中且用飽和NaHCO3 (30.0 mL)洗滌。有機相用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至5%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之2-氯-1-環戊基乙-1-酮(2.50 g，67%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 4.16 (s, 2H), 3.14-3.06 (m, 1H), 1.87-1.59 (m, 8H)。
6- 溴 -3-[(3S )-3-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 } -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ] 吡嗪 -2- 甲酸甲酯 ， 中間物 DN
Figure 02_image517
步驟 a ： 將6-溴-3-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(3 g，11.9 mmol，CAS編號1256921-67-1)、TEA (8.26 mL，59.5 mmol)及(S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(3.27 g，11.9 mmol，中間物I)放入DMF (80 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。隨後在50℃下攪拌反應混合物2小時。混合物不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (ESI+ ) m/z：440.8 (M+Na)+ 。步驟 b ： 將3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-溴吡嗪-2-甲酸甲酯(4.96 g，11.8 mmol)、TEA (8.20 mL，59.0 mmol)及(Boc)2 O (7.72 g，35.4 mmol)放入DMF (80 mL)中。在25℃下攪拌反應混合物2小時。隨後經合併之混合物用EtOAc (1 L)稀釋，用H2 O (300 mL × 5)、鹽水(800 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至20/100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(7.67 g，經合併產物)。LC-MS (ESI+ )m/z ：425.2 (M -NHBoc+Na)+ 。
N -[(3S )-1'-(5- 溴 -3- 氰基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 DO
Figure 02_image519
步驟 a ： 將6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(500.0 mg，966 µmol，中間物DN)及NaOH (386 mg，9.66 mmol)放入MeOH/H2 O = 5 mL/5 mL中。在25℃下攪拌反應混合物12小時。濃縮反應混合物且用乙酸乙酯(40 mL × 2)萃取，並且分離經分配之層。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸(600 mg，1.19 mmol，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：503.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸(600.0 mg，1.19 mmol)、DIPEA (1.83 g，14.2 mmol)、HATU (676 mg，1.78 mmol)及DMF (10 mL)之混合物在25℃下攪拌1小時。隨後添加NH4 Cl (631 mg，11.8 mmol)，且在25℃下攪拌所得混合物12小時。混合物隨後用EtOAc (200 mL)稀釋。混合物用H2 O (60 mL × 5)、鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-(5-溴-3-胺甲醯基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(480 mg，80%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：504.0 (M +H)+ 。步驟 c ： 在0℃下向N -[(3S )-1'-(5-溴-3-胺甲醯基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(480 mg，955 µmol)及TEA (197 µL，1.43 mmol)於DCM (10.0 mL)中之反應混合物中緩慢添加TFFA (201 µL，1.43 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物15分鐘。隨後反應混合物用H2 O (20.0 mL)淬滅且用DCM (50.0 mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至10%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀物之N -[(3S )-1'-(5-溴-3-氰基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(361 mg，78%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：506.0 (M+Na)+ 。
2- 氯 -5- 碘 -3- 甲基 -3,4- 二氫嘧啶 -4- 酮， 中間物 DP
Figure 02_image521
步驟 a ： 向2,4-二氯-5-碘嘧啶(3.5 g，12.7 mmol，CAS編號13544-44-0)於THF (60 ml)中之溶液中添加氫氧化鈉(1 N，45 mL)。在15℃下攪拌反應混合物12小時。隨後用乙酸乙酯(50 mL × 1)萃取混合物。水層用HCl水溶液(2 N)調整至pH = 5至6且用乙酸乙酯(50 mL × 4)萃取。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:20至100:60)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-氯-5-碘-3,4-二氫嘧啶-4-酮(620 mg，19%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：256.8 (M+H)+ 。步驟 b ： 在0℃下向2-氯-5-碘-3,4-二氫嘧啶-4-酮(400 mg，1.55 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中逐滴添加LDA (1.55 mL，2.0 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物5分鐘，隨後添加MeI (212.0 μL，3.41 mmol)。使混合物升溫至15℃，且在此溫度下攪拌18小時。混合物隨後用H2 O (20 mL)稀釋且用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。經合併之有機層用飽和NH4 Cl (60 mL × 2)、鹽水(100 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至30/100)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-氯-5-碘-3-甲基-3,4-二氫嘧啶-4-酮(234.0 mg，56%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：270.7 (M+H)+ 。
(1'-(5- 碘 -1- 甲基 -6- 側氧基 -1,6- 二氫嘧啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸 (S )- 第三丁酯 ， 中間物 DQ
Figure 02_image523
步驟 a ： 將2-氯-5-碘-3-甲基-3,4-二氫嘧啶-4-酮(234.0 mg，865 µmol，中間物DP)、DIPEA (766 µL，4.32 mmol)及(S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(283 mg，1.03 mmol，中間物I)放入DMF (10 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在100℃下攪拌反應混合物2小時。將混合物冷卻至室溫，且其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：458.9 (M +H)+ 。步驟 b ： 將2-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-碘-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮(377.0 mg，864 µmol)、TEA (362 µL，2.59 mmol)及(Boc)2 O (295 µL，1.29 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在15℃下攪拌2小時。隨後濃縮混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:EtOAc = 100:0至100:60)純化，得到呈無色油狀物之(1'-(5-碘-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(150.0 mg，32%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：537.1 (M +Na)+ 。
1- 苯甲基 -6- 氯 -3- 碘 -5- 甲基 -1H,4H,5H- 吡唑并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 酮， 中間物 DR
Figure 02_image525
步驟 a ： 將1-苯甲基-3-碘-7-(4-甲氧基苯甲基)-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6(5H ,7H )-二酮(1.0 g，2.0 mmol，CAS編號2055938-41-3，如PCT國際申請案2016203404中所描述合成)於TFA (10 mL)及TfOH (0.1 mL)中之混合物在70℃下攪拌15小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物，用飽和NH4 Cl水溶液(100 mL)濕磨該殘餘物，隨後用EtOAc (100 mL × 2)萃取。濃縮經合併之有機層，得到殘餘物，用EtOAc (3 mL)濕磨該殘餘物，此時形成沈澱。藉由過濾收集固體，得到呈綠色固體狀之1-苯甲基-3-碘-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4,6(5H ,7H )-二酮(600 mg，79%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：383.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 在POCl3 (5 mL)中添加1-苯甲基-3-碘-5-甲基-1H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二酮(500 mg，1.30 mmol)及DIPEA (681 µL，3.90 mmol)。在120℃下攪拌混合物12小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物，用EtOAc (20 mL)稀釋該殘餘物。將混合物緩慢添加至冰冷且飽和的NaHCO3 水溶液(30 mL)中。分離經分配之層，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至30/100)純化殘餘物，得到呈灰色固體狀之1-苯甲基-6-氯-3-碘-5-甲基-1H,4H,5H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮(400 mg，998 µmol)。LC-MS (ESI+ )m/z ：401.2 (M+H)+ 。
(1'-(1- 苯甲基 -3- 碘 -5- 甲基 -4- 側氧基 -4,5- 二氫 -1H - 吡唑并 [3,4-d ] 嘧啶 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸 (S )- 第三丁酯 ， 中間物 DS
Figure 02_image527
步驟 a ： 在DMSO (2.00 mL)中添加1-苯甲基-6-氯-3-碘-5-甲基-1H ,4H ,5H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-酮(210.0 mg，524 µmol，中間物DR)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(172.0 mg，628 µmol，中間物I)及DIPEA (455 µL，2.61 mmol)。在120℃下攪拌反應混合物12小時。將反應混合物冷卻至室溫，且粗產物溶液不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：550.0 (M-NH2 )+ 。步驟 b ： 將(Boc)2 O (178 µL，783 µmol)添加至(S )-6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1-苯甲基-3-碘-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4(5H )-酮(296.0 mg，522 µmol)於DMSO (3 mL)中之混合物中。在30℃下攪拌混合物2小時。隨後混合物用EtOAc (30 mL)稀釋。混合物用H2 O (20 mL × 3)、鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至50/100)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1'-(1-苯甲基-3-碘-5-甲基-4-側氧基-4,5-二氫-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(200.0 mg，58%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：667.1 (M+H)+ 。
(R)-N-((S)-1'-(5- 溴 -3,6- 二甲基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 DT
Figure 02_image529
步驟 a ： 向(R)-N-((S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.00 g，3.76 mmol，經由實例 120 之步驟 a 合成 )於DMF (10.0 mL)中之溶液中添加2,5-二溴-3,6-二甲基吡嗪(1.33 g，3.76 mmol，CAS編號121594-49-8)及TEA (1.90 g，18.8 mmol，2.62 mL)，且在80℃下攪拌所得混合物12小時。混合物隨後用H2 O (50 mL)稀釋且用90 mL乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(50 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=10/1至1/1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R)-N-((S)-1'-(5-溴-3,6-二甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.12 g，2.07 mmol，55%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：493.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3)：δ 7.33 (d,J = 6.8 Hz 1H), 7.25 - 7.20 (m,3H), 4.58 (d,J = 10 Hz, 1H), 3.66 (d,J = 10 Hz 1H), 3.46 - 3.40 (m,2H), 3.15 (d,J = 16 Hz 1H), 3.07 - 3.01 (m,1H), 2.96 - 2.91 (m, 1H), 2.75 (d,J = 16 Hz 1H), 2.50 (d,J = 12.4 Hz 6H), 2.41 - 2.34 (m,1 H), 2.00 - 1.94 (m, 1H), 1.67 (d,J = 13.6 1H), 1.40 - 1.37 (m, 1H), 1.30 (s, 9H)。
(R)-N-((S)-1'-(6- 溴 -5- 甲基吡啶 -3- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 DU
Figure 02_image531
步驟 a ： 向2-溴-5-碘-3-甲基吡啶(500 mg，167.8 μmol，CAS號65550-78-9)於甲苯(1.00 mL)中之溶液中添加(R)-N-((S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(594.8 mg，1.68 mmol，經由實例120之步驟a合成)、Cs2 CO3 (1.64 g，5.03 mmol，3.00當量)及Xantphos-Pd-G4 (161.5 mg，167.8 μmol，0.10當量)，且在80℃下攪拌所得混合物12小時。隨後用H2 O (20 mL)稀釋混合物，且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取混合物。合併有機萃取物且用鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：55%至85%，10分鐘)純化黃色殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-N-((S)-1'-(6-溴-5-甲基吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(330 mg，678 μmol，40%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：478.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.87 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.32 (m, 1H), 7.26 - 7.21 (m, 3H), 7.09 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 4.59 (d,J = 10 Hz, 2H), 3.62 - 3.50 (m, 3H), 3.1 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.98 - 2.87 (m, 2H), 2.75 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.43 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.01 - 1.94 (m, 1H), 1.72 - 1.71 (m, 1H), 1.44 - 1.40 (m, 1H), 1.31 (s, 9H)。
(R)-N-((S)-1'-(5- 溴 -6- 甲基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 DV ； 及 (R)-N-((S)-1'-(5- 氯 -3- 甲基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 DW
Figure 02_image533
步驟 a ： 向2-溴-5-氯-3-甲基吡嗪(400 mg，1.93 mmol，CAS編號1260664-82-1)於DMF (2.00 mL)中之溶液中添加(R)-N-((S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(683.36 mg，1.93 mmol，經由實例120之步驟a合成)及TEA (975.53 mg，9.64 mmol，1.34 mL)，且在80℃下攪拌混合物3小時。隨後用FA將混合物調整至pH 6至7。隨後藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 150×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：48%至78%，10分鐘)純化混合物，得到呈白色固體狀之(R)-N-((S)-1'-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(290 mg，607.38 μmol，32%產率) (LC-MS (ESI+ )m/z ：479.2 (M+H)+ )以及呈白色固體狀之(R)-N-((S)-1'-(5-氯-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(135 mg，312 μmol，16%產率) (LC-MS (ESI+ )m/z ：433.2 (M+H)+ )。
(S)-(5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 DX
Figure 02_image535
步驟 a ： 向(S)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(3.00 g，10.2 mmol，中間物BX)於DMF (30.0 mL)中之溶液中添加NaOH (2.29 g，57.3 mmol)。在25℃下攪拌混合物5分鐘，隨後向混合物中添加Boc2 O (6.70 g，30.7 mmol)。在25℃下攪拌混合物5小時。隨後將混合物傾入水(50.0 mL)中且用乙酸乙酯(40.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(40.0 mL × 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-ACN]；B%：65%至90%，28分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(3.21 g，7.59 mmol，74%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：421.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(3.21 g，7.59 mmol)於DCM (30.0 mL)中之溶液中添加ZnBr2 (3.42 g，15.2 mmol，759 μL)，且在25℃下攪拌混合物12小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：10%至25%，13分鐘)純化混合物，得到呈白色油狀物之(S)-(5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.5 g，4.68 mmol，62%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：321.2 (M+H)+ 。
(S)-(1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 DY
Figure 02_image537
步驟 a ： 向2-溴-5-碘吡啶(1.33 g，4.68 mmol)、(S)-(5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.50 g，4.68 mmol，中間物DX)及Cs2 CO3 (4.58 g，14.04 mmol)於甲苯(15.0 mL)中之溶液中添加XantPhos-Pd-G4 (451 mg，468 μmol)，且在80℃下攪拌混合物12小時。隨後過濾混合物且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-ACN]；B%：58%至83%，28分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(S)-(1'-(6-溴吡啶-3-基)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(645 mg，1.34 mmol，29%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：478.3 (M+H)+ 。
(S)-(5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 DZ
Figure 02_image539
步驟 a ： 向(S)-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(2.00 g，6.82 mmol，中間物Y)於DMF (20.0 mL)中之溶液中添加Boc2 O (4.47 g，20.5 mmol，4.70 mL)及NaOH (1.53 g，38.2 mmol)，且在25℃下攪拌混合物5小時。將混合物傾入水(40.0 mL)中且用乙酸乙酯(30.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL × 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-ACN]；B%：64%至89%，28分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.78 g，4.23 mmol，62%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：421.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.78 g，4.23 mmol)於DCM (20.0 mL)中之溶液中添加ZnBr2 (1.91 g，8.47 mmol，424 μL)，且在25℃下攪拌混合物12小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：10%至25%，13分鐘)純化混合物，得到呈白色油狀物之(S)-(5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(1.1 g，3.43 mmol，81%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：321.1 (M+H)+ 。
(S)-(1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EA
Figure 02_image541
步驟 a ： 向2-溴-5-碘吡啶(975 mg，3.43 mmol)、(S)-(5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(1.10 g，3.43 mmol，中間物DZ)及Cs2 CO3 (3.36 g，10.3 mmol)於甲苯(15.0 mL)中之溶液中添加XantPhos-Pd-G4 (330 mg，343 μmol)。在80℃下攪拌混合物12小時。隨後用矽藻土過濾混合物且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-ACN]；B%：57%至82%，35分鐘)純化混合物，得到呈白色固體狀之(S)-(1'-(6-溴吡啶-3-基)-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(596 mg，1.25 mmol，36%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：500.1 (M+23)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3)：δ 8.04 (d,J = 3.20 Hz, 1H), 7.31-7.14 (m, 1H), 7.14-7.10 (m, 1H ), 7.56-7.53 (m, 2H), 6.98-6.93 (m, 2H), 5.02 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.68 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 3.57-3.50 (m, 2H), 3.02-2.92 (m, 3H), 2.72 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.04-2.01 (m, 1H), 1.84-1.78 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.44-1.40 (m, 1H)。
(R)-(3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EB
Figure 02_image543
步驟 a ： 如中間物DZ之步驟b中所描述，使用ZnBr2 對(R)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(經由中間物CB (R)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺之Boc保護合成(與Boc2 O在標準條件下合成))進行單去保護，得到(R)-(3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯。
(R)-N-((R)-1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 EC
Figure 02_image545
步驟 a ： 向2-溴-5-碘吡啶(1.00 g，3.52 mmol)、(R)-(3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(1.09 g，3.52 mmol，中間物EB)及Cs2 CO3 (3.44 g，10.6 mmol)於甲苯(10.0 mL)中之溶液中添加XantPhos-Pd-G4 (339 mg，352 μmol)。在80℃下攪拌混合物12小時。隨後過濾混合物且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 250×50×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-ACN]；B%：46%至71%，36分鐘，80%分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-N-((R)-1'-(6-溴吡啶-3-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(570 mg，1.23 mmol，35%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：466.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.04 (d,J = 3.20 Hz, 1H), 7.31-7.29 (m, 3H), 7.14-7.11 (m, 1H ), 7.56-7.53 (m, 2H), 6.96-6.95 (m, 1H), 6.85 (d,J = 8.00 Hz, 1H), 4.73 (d,J = 10.8 Hz, 1H), 3.72 (d,J = 10.8 Hz, 1H), 3.66-3.53 (m, 2H), 3.26-3.22 (m, 2H), 2.28-2.16 (m, 1H), 2.16-2.13 (m, 1H), 1.96-1.83 (m, 2H), 1.28 (s, 9H)。
(S)-3-((5-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 硫基 ) 丙酸乙酯 ， 中間物 ED
Figure 02_image547
步驟 a ： 在N2 下向2-溴-5-氯吡嗪(46.0 g，237 mmol)及3-巰基丙酸乙酯(31.9 g，237 mmol)於二噁烷(460 mL)中之混合物中一次添加全量的DIPEA (61.4 g，475 mmol，82.8 mL)、Xantphos (13.7 g，23.8 mmol)及Pd2 (dba)3 (10.8 g，11.8 mmol)。在N2 下在80℃下攪拌混合物2小時。隨後過濾混合物且真空濃縮濾液。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 1:0至5:1，石油醚:乙酸乙酯= 10:1)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀物之3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(52.0 g，192 mmol，81%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：247.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.37 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 4.18 - 4.13 (m, 2H), 3.40 (t,J = 7.0 Hz, 2H), 2.73 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.25 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。步驟 b ： 在25℃下向3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(18.0 g，72.9 mmol)及(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(20.1 g，72.9 mmol，中間物I，2 HCl)於NMP (180 mL)中之溶液中添加Na2 CO3 (30.9 g，291 mmol)。隨後將混合物加熱至130℃且攪拌1小時。隨後使混合物冷卻至25℃。接下來，向反應混合物中添加(Boc)2 O (7.00 g，32.1 mmol，7.37 mL)及DIPEA (4.15 g，32.1 mmol，5.59 mL)，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後在25℃下向混合物中添加另外的(Boc)2 O (10.5 g，48.2 mmol，11.1 mL)及DIPEA (5.28 g，40.9 mmol，7.12 mL)，且再攪拌混合物1小時。隨後將反應混合物傾入水(600 mL)中，其中形成沈澱，且用EtOAc (200 mL × 2)萃取混合物。經合併之有機層用0.500 N HCl (250 mL × 2)、鹽水(200 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物(用石油醚:乙酸乙酯= 1:0至3:1溶離)，得到呈黃色油狀物之(S)-3-((5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(7.50 g，14.3 mmol，20%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：513.3 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.071 (d,J = 2.80 Hz, 2H), 7.29 - 7.27 (m, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 3H), 5.01 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.18 - 4.11 (m, 4H), 3.29 - 3.26 (m, 2H), 3.19 - 3.16 (m, 2H), 3.05 (d,J = 16.0 Hz 1H), 2.79 (d,J = 15.6 Hz 1H), 2.69 - 2.65 (m, 2H), 1.94 - 1.93 (m, 1H), 1.74 - 1.71 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.28 - 1.24 (m, 3H)。
8-(((5- 溴吡嗪 -2- 基 ) 氧基 ) 甲基 ) 喹啉，中間物 EE
Figure 02_image549
步驟 a ： 在0℃下向喹啉-8-基甲醇(1.70 g，10.7 mmol)於DMF (65.0 mL)中之溶液中添加NaH (428 mg，10.7 mmol，於礦物油中之60%分散液)。隨後在0℃下攪拌混合物1小時。接下來，向混合物中添加2,5-二溴吡嗪(2.12 g，8.91 mmol)。隨後在0至25℃下攪拌反應混合物6小時。隨後將混合物傾入水(200 mL)中且用乙酸乙酯(150 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(100 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 1/0至10/1，Rf = 0.40)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之8-(((5-溴吡嗪-2-基)氧基)甲基)喹啉(1.80 g，5.68 mmol，64%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：318.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.98 - 8.97 (m, 1H), 8.24 - 8.14 (m, 3H), 7.87 - 7.82 (m, 2H), 7.57 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.48 - 7.45 (m, 1H), 6.13 (s, 2H)。
(S)-(1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EF
Figure 02_image551
步驟 a ： 向(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(3.00 g，10.9 mmol，中間物I，2 HCl)於DMF (30.0 mL)中之溶液中添加NaOH (2.44 g，61.0 mmol)。在25℃下攪拌混合物5分鐘，隨後向混合物中添加Boc2 O (7.14 g，32.7 mmol，7.51 mL)。在25℃下再攪拌混合物16小時。隨後將混合物傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(50.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用飽和NH4 Cl溶液(50.0 mL × 2)、鹽水(50.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈白色固體狀之(S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(5.07 g，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：495.4 (M-172)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.25 - 7.19 (m, 4H), 4.96 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.63 (br d,J = 9.2 Hz, 1H), 3.93 (br d,J = 12.4 Hz, 2H), 3.05 - 2.96 (m, 3H), 2.73 (br d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.83 - 1.76 (m, 1H), 1.63 - 1.59 (m, 3H), 1.49 - 1.47 (m, 18H)。步驟 b ： 向(S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(4.00 g，9.94 mmol)於DCM (40.0 mL)中之溶液中添加ZnBr2 (4.48 g，19.9 mmol，995 μL)，且在25℃下攪拌混合物12小時。隨後，向混合物中添加另外的ZnBr2 (2.24 g，9.94 mmol，497 μL)，且在25℃下再攪拌混合物4小時。隨後減壓濃縮混合物以移除DCM。用MeOH (50.0 mL)溶解殘餘物，且用氫氧化銨(25.0 mL，約28%溶液)調整至pH 8至9。隨後過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由逆相HPLC (FA條件)純化殘餘物，得到呈紅色固體狀之(S)-(1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.50 g，50%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：303.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.24 - 7.19 (m, 4H), 4.95 (br d,J = 9.6 Hz, 1H), 4.71 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.33 (br s, 2H), 3.14 - 2.87 (m, 5H), 2.73 (br d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.91 - 1.84 (m, 1H), 1.69 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.35 (br d,J = 14.0 Hz, 1H)。
(3R)-3H-8'- 氮雜螺 [ 苯并呋喃 -2,3'- 雙環 [3.2.1] 辛烷 ]-3- 胺， 中間物 EG
Figure 02_image553
步驟 a ： 在0℃下向2-氟苯甲醛(200 g，168 mL，1.61 mol)及丙烷-1,3-二硫醇(176 g，163 mL，1.63 mol)於DCM (1.00 L)中之溶液中逐滴添加三氟化硼-Et2 O (103 mL，402 mmol，48%溶液)。隨後在25℃下攪拌反應物1小時。隨後將反應混合物傾入水(200 mL)中並分離有機相，且用二氯甲烷(200 mL ×2)萃取水相。經合併之有機溶離份用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發。在25℃下用石油醚(1.00 L)濕磨粗產物1小時，且隨後過濾。真空乾燥殘餘物，得到呈白色固體狀之2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷(302 g，1.40 mol，87%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.64 - 7.62 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.18 - 7.16 (m, 1H), 7.08 - 7.06 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 3.15 - 3.09 (m, 2H), 2.94 - 2.90 (m, 2H), 2.20 - 2.16 (m, 1H), 1.97 - 1.93 (m, 2H)。步驟 b ： 在N2 氛圍下，在攪拌下將2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷(100 g，464 mmol)於THF (500 mL)中之混合物冷卻至-50至-40℃後保持30分鐘。在-50至-40℃下向混合物中逐滴添加LDA (2.00 M，278 mL)，持續30分鐘。隨後使混合物升溫至-30至-20℃後保持1小時。接下來，再次將混合物冷卻至-50至-40℃，且向混合物中逐滴添加(1R,5S)-3-側氧基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(109 g，487 mmol，CAS編號185099-67-6)於THF (200 mL)中之溶液，持續1小時。添加後，在-50至-40℃下再攪拌混合物1小時。使混合物升溫至0℃，且將其在25℃下用飽和NH4 Cl (500 mL)淬滅且在25℃下用乙酸乙酯(500 mL × 2)萃取。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液，得到粗產物。在25℃下用石油醚(500 mL)濕磨粗產物1小時，且隨後過濾。真空乾燥殘餘物，得到呈白色固體狀之(1R,3r,5S)-3-(2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基)-3-羥基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(182 g，414 mmol，89%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：340.1 (M-99)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.03 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.31 (m, 1H), 7.18 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.10 - 7.05 (m, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.13 (s, 1H), 2.82 - 2.76 (m, 2H), 2.62 - 2.55 (m, 4H), 2.42 (s, 1H), 2.06 - 2.01 (m, 2H), 1.84 -1.81 (m, 4H), 1.89 -1.55 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。步驟 c ： 在0℃下向(1R,3r,5S)-3-(2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基)-3-羥基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(180 g，409 mmol)、吡啶(66.1 mL，818. mmol)、Py·HBr3 (26.4 g，81.8 mmol)於水(90.0 mL)及DCM (900 mL)中之混合物中添加TBAB (261 g，818 mmol)。在25℃下攪拌混合物2小時。隨後將反應混合物傾入水(2.00 L)中且用DCM (1.00 L × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(1.00 L)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發，得到殘餘物。得到呈黃色膠狀物之(1R,3r,5S)-3-(2-氟苯甲醯基)-3-羥基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(140 g，98%粗產率)，且其不經進一步純化即用於下一步驟中。步驟 d ： 在20℃下向(1R,3r,5S)-3-(2-氟苯甲醯基)-3-羥基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(140 g，400 mmol)於二噁烷(700 mL)中之混合物中添加t-BuOK (67.4 g，601 mmol)。隨後在70℃下攪拌混合物2小時。將反應混合物傾入水(1.50 L)中且用乙酸乙酯(1.00 L × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(1.00 L)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=50/1至20/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1'R,2r,5'S)-3-側氧基-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-甲酸第三丁酯(45.0 g，135 mmol，34%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：352.1 (M+Na)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.63 (t,J = 8 Hz, 2H), 7.12 - 7.00 (m, 2H), 4.40 - 4.29 (m, 2H), 2.33 - 2.23 (m, 4H), 2.04 (d,J = 4.8 Hz, 2H), 1.55 (d,J = 13.6 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H)。步驟 e ： 在25℃下向(1'R,2r,5'S)-3-側氧基-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-甲酸第三丁酯(45.0 g，135 mmol)於2-Me-THF (90.0 mL)中之溶液中添加Ti(OEt)4 (92.7 g，406 mmol，84.3 mL)及(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(32.8 g，271 mmol)。隨後在90℃下攪拌混合物96小時。隨後將反應混合物冷卻至-5至0℃，且經1小時謹慎地逐份添加LiBH4 (3.25 g，149 mmol，1.10當量) (保持溫度在-5至0℃下)，隨後在-5至0℃下攪拌混合物2小時。藉由在0至10℃下添加甲醇(2.00 mL)來淬滅溶液並添加2-[2-[雙(2-羥乙基)胺基]乙基-(2-羥乙基)胺基]乙醇(50.0 g)，且在20℃下攪拌混合物1小時。隨後，向混合物中添加0.5 N HCl以將pH調整至1.00，且用乙酸乙酯(2.00 L × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(1.00 L)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後使用石油醚/乙酸乙酯=1:1 (2 L × 3)經由SiO2 過濾，且減壓蒸發。隨後，向粗殘餘物中添加甲基第三丁基醚(100 mL)且在20℃下攪拌混合物2小時，隨後過濾並乾燥濾餅，得到呈白色固體狀之(1'R,2r,3R,5'S)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-甲酸第三丁酯(28.0 g，64.1 mmol，47%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：335.0 (M-99)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 7.27 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 6.91 - 6.87 (m, 1H), 6.80 (d,J = 8 Hz, 1H), 6.03 (d,J = 10 Hz, 1H), 4.47 (d,J = 10 Hz, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.14 (s, 1H), 2.33 - 2.31 (m, 1H), 2.16 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 1.97 - 1.76 (m, 5H), 1.43 (s, 9H), 1.15 (s, 9H)。步驟 f ： 向(1'R,2r,3R,5'S)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-甲酸第三丁酯(10.0 g，22.9 mmol)於MeOH (20.0 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH (4.00 M，50.0 mL)。在20℃下攪拌混合物2小時。減壓濃縮反應混合物以移除甲醇，得到殘餘物。在20℃下用乙酸乙酯(50.0 mL)濕磨殘餘物30分鐘。隨後過濾混合物且減壓濃縮濾餅，得到呈白色固體狀之(1'R,2r,3R,5'S)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-3-胺(6.5 g，21.4 mmol，94%產率，2 HCl)。LC-MS (ESI+ )m/z ：231.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 9.74 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 8.98 (s, 3H), 7.71(d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 - 7.33 (m, 1H), 7.02 - 6.95 (m, 2H), 4.53 (s, 1H), 4.19 (s, 1H), 4.00 (s, 1H), 3.16 (s, 2H), 2.82 - 2.77 (m, 1H), 2.41 - 2.40 (m, 1H), 2.27 - 2.23 (m, 2H), 2.14 -2.02 (m, 3H), 1.87 (d,J = 15.2 Hz, 1H)。
3- 氯 - 4-((5- 氯吡嗪 -2- 基 ) 硫基 ) 吡啶 -2- 胺，中間物 EH
Figure 02_image555
步驟 a ： 在25℃下向2-溴-5-氯吡嗪(20.0 g，103 mmol)及2-胺基-3-氯吡啶-4-硫醇鈉(18.9 g，103 mmol，中間物AC)於二噁烷(80.0 mL)中之溶液中添加Pd2 (dba)3 (3.79 g，4.14 mmol)、Xantphos (2.99 g，5.17 mmol)及DIPEA (26.7 g，207 mmol，36.0 mL)。隨後將混合物加熱至80℃且在80℃下攪拌3小時。隨後將混合物冷卻至25℃並過濾。用乙酸乙酯(50.0 mL × 3)洗滌濾餅。濃縮經合併之有機層，得到殘餘物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 20:1至3:1，TLC：石油醚:乙酸乙酯= 3:1，Rf = 0.25)純化殘餘物兩次，得到呈黃色固體狀之3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-胺(3.00 g，10.4 mmol，10%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：273.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.50 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 8.34 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.87 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.55 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.52 (s, 2H)。
3- 氯 - 6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 甲酸乙酯，中間物 EI
Figure 02_image557
步驟 a ： 在25℃下向6-溴-3-氯-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(1.00 g，3.58 mmol，CAS編號2091009-80-0)及K2 CO3 (494 mg，3.58 mmol)於ACN (10.0 mL)及H2 O (2.00 mL)中之溶液中添加(2,3-二氯苯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(887 mg，4.65 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (262 mg，358 μmol)。將溶液加熱至80℃且攪拌2小時。反應混合物隨後藉由添加水(20.0 mL)而淬滅且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用飽和NaCl (20.0 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到紅色油狀物。藉由矽膠層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=100/1至0/1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-氯-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(683 mg，1.98 mmol，55%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：345.0/347.0 (M+H)+ 。
2- 氯 -N,6- 二甲基異煙鹼醯胺 ， 中間物 EJ
Figure 02_image559
步驟 a ： 向2-氯-6-甲基異煙鹼酸(500 mg，2.91 mmol，CAS編號25462-85-5)、甲胺鹽酸鹽(984 mg，14.6 mmol)及TEA (2.03 mL，14.6 mmol)於DMF (20.0 mL)中之經攪拌溶液中添加HATU (2.22 g，5.83 mmol)。在15℃下攪拌反應混合物2小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (50.0 mL)中且用乙酸乙酯(30.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL × 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 50/1至2/1，Rf = 0.35)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之2-氯-N,6-二甲基異煙鹼醯胺(900 mg，粗產物)。LC-MS (ESI+ )m/z ：185.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.44 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.37 (br s, 1H), 3.02 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.59 (s, 3H)。
(S)-(1'-(4- 碘 -3- 甲基吡啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EK
Figure 02_image561
步驟 a ： 在20℃下向2-氟-4-碘-3-甲基吡啶(1.00 g，4.22 mmol，CAS編號153034-80-1)及DIPEA (2.94 mL，16.9 mmol)於NMP (5.00 mL)中之經攪拌溶液中添加(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(1.39 g，5.06 mmol，2 HCl，中間物I)。在120℃下攪拌混合物14小時。隨後添加更多DIPEA (2.00 mL)，且在130℃下攪拌反應混合物14小時。接下來，在15℃下添加Boc2 O (1.38 g，6.33 mmol，1.45 mL)，且在15℃下攪拌反應混合物4小時。反應混合物隨後用H2 O (20.0 mL)稀釋且用乙酸乙酯(30.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1/0至5/1，Rf = 0.50)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀物之粗產物(600 mg)。藉由逆MPLC (FA條件)純化油狀物，得到呈黃色膠狀物之(S)-(1'-(4-碘-3-甲基吡啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(110 mg，212 μmol，5%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：520.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.73 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.39 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.31 - 7.29 (m, 1H), 7.24 - 7.20 (m, 3H), 5.01 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.68 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 3.31 (d,J = 10.8 Hz, 2H), 3.07 - 2.90 (m, 4H), 2.80 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.12 - 2.07 (m, 1H), 1.86 - 1.80 (m, 1H), 1.73 - 1.67 (m, 1H), 1.51 (s, 9H)。
(S)-(1'-(4- 碘 -6- 甲基吡啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EL
Figure 02_image563
步驟 a ： 在25℃下向2-氟-4-碘-6-甲基吡啶(800 mg，3.38 mmol，CAS編號884494-45-5)及(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(1.11 g，4.05 mmol，中間物I，2 HCl)於NMP (10.0 mL)中之溶液中添加DIPEA (2.35 mL，13.50 mmol)，隨後在120℃下攪拌混合物24小時。隨後，在120℃下，在攪拌下經3小時添加另外的(S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(464 mg，1.69 mmol，中間物I，2 HCl)及DIPEA (1.18 mL，6.75 mmol)。接下來，在攪拌下向混合物中添加(Boc)2 O (1.10 g，5.06 mmol，1.16 mL)，隨後在25℃下攪拌反應物12小時。將反應混合物傾入水(100 mL)中，且隨後用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取水相。經合併之有機相用鹽水(100 mL × 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由管柱層析(100至200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=100/1至20/1，產物Rf = 0.48)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(S)-(1'-(4-碘-6-甲基吡啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(860 mg，49%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：520.1 (M+H)+ 。
(S)-(1'-(3- 溴 -5- 甲基苯基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EM
Figure 02_image565
步驟 a ： 在N2 下向1,3-二溴-5-甲基苯(450 mg，1.80 mmol，CAS編號1611-92-3)、(S)-(1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(327 mg，1.08 mmol，中間物EF)及Cs2 CO3 (1.76 g，5.40 mmol)於二噁烷(2 mL)中之溶液中添加Xantphos (208 mg，360 μmol)及Pd2 (dba)3 (165 mg，180 μmol)，隨後在100℃下攪拌混合物4小時。將反應混合物傾入水(100 mL)中，隨後用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取水相。經合併之有機相用鹽水(100 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到粗產物，藉由矽膠層析(100至200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=100/1至5/1，Rf = 0.45)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之(S)-(1'-(3-溴-5-甲基苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(180 mg，35%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：471.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.63 - 7.65 (m, 2H), 7.53 - 7.58 (m, 2H), 7.12 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.86 - 6.88 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.51 - 3.54 (m, 1H), 3.02 (s, 3H), 2.88 - 2.90 (m, 2H), 2.72 - 2.74 (m, 2H), 2.27 - 2.30 (m, 4H), 1.27 - 1.55 (m, 9H)。
6- 氯 - 8-( 三氟甲基 )-[1,2,4] 三唑并 [4,3-b] 噠嗪，中間物 EN
Figure 02_image567
步驟 a ： 向3,6-二氯-4-(三氟甲基)噠嗪(4.50 g，20.7 mmol，CAS編號1057672-68-0)於EtOH (45.0 mL)中之混合物中添加TEA (3.18 mL，22.8 mmol)及NH2 NH2 .H2 O (4.86 g，97.1 mmol，4.72 mL)，且在85℃下攪拌混合物3小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (FA條件)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之6-氯-3-肼基-4-(三氟甲基)噠嗪(1.10 g，5.18 mmol，25%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：213.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 7.75 (s, 1H)。步驟 b ： 向6-氯-3-肼基-4-(三氟甲基)噠嗪(1.10 g，5.18 mmol，FA)添加HCOOH (11.0 mL)，且在100℃下攪拌混合物3小時。減壓濃縮混合物以移除HCOOH，隨後將殘餘物傾入NaHCO3 水溶液(30.0 mL)中且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL)洗滌且減壓濃縮，得到呈棕色固體狀之6-氯-8-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]噠嗪(950 mg，4.27 mmol，83%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：223.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 9.59 (s, 1H), 7.94 (s, 1H)。
6- 溴 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 基 ) 咪唑并 [1,2-a] 吡啶 ， 中間物 EO
Figure 02_image569
步驟 a ： 向5-溴-3-碘吡啶-2-胺(10.0 g，33.5 mmol，CAS編號381233-96-1)及2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(7.91 g，40.1 mmol，6.04 mL)於EtOH (100 mL)中之混合物中添加HCl (10.0 M，20.0 mL)，且在75℃下攪拌反應混合物16小時。減壓濃縮反應混合物以移除EtOH，用H2 O (200 mL)稀釋殘餘物，且用NaHCO3 水溶液將混合物調整至pH = 9。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 10/1至1/1，Rf = 0.21)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6-溴-8-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(3.40 g，10.5 mmol，32%產率)。 LC-MS (ESI+ )m/z ：322.9 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 8.72 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.98 - 7.97 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.61 (d,J = 1.2 Hz, 1H)。步驟 b ： 將6-溴-8-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(1.20 g，3.72 mmol)、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1H-吡唑(773 mg，3.72 mmol，CAS編號847818-74-0)、K2 CO3 (770 mg，5.57 mmol)、Pd(dppf)Cl2 .CH2 Cl2 (607 mg，743 μmol)於H2 O (1.20 mL)及1,4-二噁烷(12.0 mL)中之混合物脫氣，且隨後將其在N2 下加熱至60℃後保持16小時。混合物用H2 O (100 mL)稀釋且用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取，經合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 10/1至1/1，Rf = 0.30)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6-溴-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(0.70 g，2.53 mmol，68%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：277.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 8.86 - 8.85 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.63 (d,J = 1.2 Hz 1H), 7.60- 7.59 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.48 (d,J = 2.0 Hz 1H), 6.57 (d,J = 2.0 Hz 1H), 3.82 (s, 3H)。
6- 溴 -8-( 二氟甲氧基 ) 咪唑并 [1,2-a] 吡啶，中間物 EP
Figure 02_image571
步驟a：在10至20℃下向2-胺基-5-溴吡啶-3-醇(5.00 g，23.5 mmol，CAS編號39903-01-0)於DME (50.0 mL)中之混合物中逐滴添加含NaOH (3.00 g，75.0 mmol)之H2 O (30.0 mL)。將反應混合物真空脫氣，且在10至20℃下使氯(二氟)甲烷(15.0 psi)傳遞通過反應混合物，並且攪拌混合物16小時。將反應混合物傾入H2 O (100 mL)中，隨後用乙酸乙酯(50.0 mL × 4)萃取。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 1/0至0/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-溴-3-(二氟甲氧基)吡啶-2-胺(1.70 g，6.20 mmol，26%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：238.7 (M+H)+ 。步驟 b ： 向5-溴-3-(二氟甲氧基)吡啶-2-胺(1.00 g，4.18 mmol)於EtOH (10.0 mL)中之混合物中添加2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(1.07 g，5.44 mmol，818 μL)及HBr (7.45 g，30.4 mmol，5.00 mL，33%於HOAc中)，且在90℃下攪拌混合物16小時。減壓濃縮混合物以移除EtOH，且將殘餘物溶解於乙酸乙酯(50.0 mL)中且用NaHCO3 (50 mL)及鹽水(50.0 mL)洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥，隨後減壓濃縮，得到呈棕色固體狀之6-溴-8-(二氟甲氧基)咪唑并[1,2-a]吡啶(900 mg，3.42 mmol，82%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：265.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 8.67 (s, 1 H), 7.98 (d, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 7.46 - 7.10 (m, 1 H)。
(S)-(1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 EQ
Figure 02_image573
步驟 a ： 將(S)-(1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.00 g，3.31 mmol，中間物EF)、2-溴-5-碘吡啶(1.03 g，3.64 mmol)、Cs2 CO3 (3.23 g，9.92 mmol)、Pd2 (dba)3 (303 mg，331 μmol)及RuPhos (308 mg，661 μmol)於DMSO (20.0 mL)中之混合物脫氣並用N2 淨化三次，且隨後在N2 氛圍下在100℃下攪拌混合物3.5小時。將反應物傾入H2 O中，隨後過濾且收集濾餅。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 1:0至0:1，Rf = 0.45)純化殘餘物，得到呈橙色固體狀之(S)-(1'-(6-溴吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(740 mg，49%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：458.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.04 (d,J = 3.2 Hz, 2H), 7.33 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.19 (m, 3H), 7.12 - 7.09 (m, 1H), 5.02 (d,J = 10 Hz, 1H), 4.66 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 3.58 - 3.50 (m, 2H), 3.04 - 2.93 (m, 3H), 2.76 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.08 - 2.01 (m, 1H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.49 (s, 9H)。
(S)-5-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ) 吡啶 -2- 硫醇鈉 ， 中間物 ER
Figure 02_image575
步驟 a ： 將(S)-(1'-(6-溴吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(900 mg，1.96 mmol，中間物EQ)、3-巰基丙酸乙酯(316 mg，2.36 mmol)、Pd2 (dba)3 (89.9 mg，98.1 μmol)、Xantphos (113 mg，196 μmol)、DIPEA (761 mg，5.89 mmol，1.03 mL)及二噁烷(10.0 mL)之混合物在N2 下在80℃下攪拌2小時。隨後過濾混合物且真空濃縮溶液。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 10:1至3:1，Rf = 0.3)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(S)-3-((5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡啶-2-基)硫基)丙酸乙酯(1.10 g，1.83 mmol，93%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：512.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.19 (s, 1H), 7.29 - 7.23 (m, 4H), 7.21 - 7.11 (m, 2H), 5.02 (d,J = 10 Hz, 1H), 4.66 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 2H), 3.74 - 3.54 (m, 2H), 3.39 - 3.60 (m, 2H), 3.00 - 2.77 (m, 3H), 2.75 - 2.71 (m, 3H), 2.05 (s, 1H), 1.87 - 1.84 (m, 2H), 1.57 (s, 9H), 1.49 - 1.24 (m, 3H)。步驟 b ： 在0℃下向(S)-3-((5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡啶-2-基)硫基)丙酸酯(0.50 g，977 μmol)於THF (5.00 mL)中之溶液中添加EtONa (99.7 mg，1.47 mmol)於EtOH (1.00 mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使其升溫至25℃且在25℃下攪拌2小時。隨後真空濃縮混合物，得到呈紅色固體狀之(S)-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡啶-2-硫醇鈉(423 mg，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：412.2 (M-23+2H)+ 。
(R)-5-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ) 吡嗪 -2- 硫醇鈉 ， 中間物 ES
Figure 02_image577
步驟 a ： 在25℃下向3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(2.00 g，8.11 mmol，經由中間物ED之步驟a合成)及(R)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(2.25 g，8.11 mmol，中間物CB)於NMP (20.0 mL)中之溶液中添加Na2 CO3 (3.44 g，32.4 mmol)。隨後將混合物加熱至130℃且在130℃下攪拌1小時。接下來，將混合物冷卻至25℃並添加Boc2 O (1.95 g，8.92 mmol，2.05 mL)及DIPEA (1.15 g，8.92 mmol，1.55 mL)，且在25℃下攪拌混合物12小時。隨後將混合物傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取。經合併之有機層用0.5 N HCl溶液(50.0 mL)、飽和NaHCO3 溶液(50.0 mL)、鹽水(50.0 mL)洗滌，隨後經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 1/0至3/1，產物Rf = 0.40)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R)-3-((5-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(600 mg，1.15 mmol，14%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：515.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.09 (d,J = 10.8 Hz, 2H), 7.32 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.24 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 6.83 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.02 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 4.71 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.16 (m, 1H), 4.13 -4.08 (m, 2H), 3.47 - 3.42 (m, 2H), 3.28 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.69 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.97 - 1.92 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.40 (s, 1H), 1.27 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。步驟 b ： 在0℃下向(R)-3-((5-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(350 mg，680 μmol)於THF (5.00 mL)中之溶液中添加EtONa (69.4 mg，1.02 mmol，8.52 μL)於EtOH (1.00 mL)中之溶液。隨後在0℃下攪拌混合物0.5小時，且使其升溫至25℃並攪拌1.5小時。真空濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之(R)-5-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(290 mg，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：415.2 (M-23+2H)+ 。
((1'R,2r,3R,5'S)-8'-(5- 溴吡嗪 -2- 基 )-3H-8'- 氮雜螺 [ 苯并呋喃 -2,3'- 雙環 [3.2.1] 辛烷 ]-3- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 ET
Figure 02_image579
步驟 a ： 在25℃下向2,5-二溴吡嗪(1.00 g，4.20 mmol)及(1'R,2r,3R,5'S)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-3-胺(1.53 g，5.04 mmol，中間物EG，2 HCl)於DMSO (10.0 mL)中之溶液中添加二異丙胺(3.40 g，33.6 mmol，4.75 mL)。隨後將混合物加熱至100至110℃，且在100至110℃下攪拌混合物3小時。將混合物冷卻至25℃且向混合物中添加(Boc)2 O (1.65 g，7.57 mmol，1.74 mL)，並且在25℃下攪拌混合物6小時。混合物用H2 O (40.0 mL)稀釋且用乙酸乙酯( 40.0 mL × 3) 萃取。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯=20:1至16:1，Rf = 0.50)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之((1'R,2r,3R,5'S)-8'-(5-溴吡嗪-2-基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(1.60 g，3.14 mmol，75%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：487.2 (M+H)+ 。
5-((1'R,2r,3R,5'S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3H-8'- 氮雜螺 [ 苯并呋喃 -2,3'- 雙環 [3.2.1] 辛烷 ]-8'- 基 ) 吡嗪 -2- 硫醇鈉 ， 中間物 EU
Figure 02_image581
步驟 a ： 將((1'R,2r,3R,5'S)-8'-(5-溴吡嗪-2-基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(1.50 g，2.92 mmol，中間物ET)、3-巰基丙酸乙酯(392 mg，2.92 mmol)、Pd2 (dba)3 (134 mg，146 μmol)、XantPhos (169 mg，292 μmol)及DIPEA (756 mg，5.85 mmol，1.02 mL)於二噁烷(15.0 mL)中之混合物脫氣並用N2 淨化三次，且在N2 氛圍下在80℃下攪拌混合物2小時。隨後經由矽藻土過濾混合物，且減壓濃縮反應混合物以移除二噁烷。藉由製備型HPLC (NH3 •H2 O條件)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-((5-((1'R,2r,3R,5'S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(1.40 g，2.59 mmol，78%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：541.6 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.06 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.23 - 7.20 (m, 2H), 6.91 - 6.87 (m, 1H), 6.80 - 6.78 (m, 1H), 4.84 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.64 - 4.54 (m, 3H), 4.19 - 4.12 (m, 2H), 3.29 - 3.25 (m, 2H), 2.72 - 2.68 (m, 2H), 2.43 - 2.42 (m, 2H), 2.21 - 2.20 (m, 2H), 2.18 - 2.17 (m, 2H), 2.07 - 2.06 (m, 1H), 2.06 - 2.05 (m, 1H), 1.49 - 1.45 (m, 3H), 1.34 (s, 6H), 1.27 (s, 3H)。步驟 b ： 在0℃下向3-((5-((1'R,2r,3R,5'S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(500 mg，924 μmol)於THF (1.00 mL)中之溶液中添加EtONa (100 mg，1.48 mmol)於EtOH (1.00 mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物0.5小時。隨後使混合物升溫至25℃且在25℃下攪拌1小時。接下來，在25℃下向混合物中添加另外的EtONa (31.4 mg，462 μmol)於EtOH (1.00 mL)中之溶液，且在25℃下攪拌混合物1小時。在25℃下真空濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之5-((1'R,2r,3R,5'S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(400 mg，98%粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：441.2 (M-Na+2H)+ 。
5-(5- 氯 -6- 甲基 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -1- 基 )-2- 甲基異喹啉 -1(2H)- 酮， 中間物 EV
Figure 02_image583
步驟 a ： 在25℃下向4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼㖦) (478 mg，1.88 mmol)、5-溴-2-甲基異喹啉-1(2H)-酮(320 mg，1.34 mmol，CAS編號1367905-79-0)於二噁烷(6.00 mL)中之溶液中添加KOAc (396 mg，4.03 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (49.2 mg，67.2 μmol)。將溶液真空脫氣且用N2 淨化若干次。隨後將混合物加熱至100℃且在100℃下攪拌4小時。將混合物冷卻至25℃且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用水(10.0 mL)及乙酸乙酯(10.0 mL)稀釋，隨後用乙酸乙酯(10.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(10.0 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 4/1至3/1，Rf = 0.40)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)異喹啉-1(2H)-酮(302 mg，900 μmol，67%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：286.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 在25℃下向2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)異喹啉-1(2H)-酮(350 mg，1.04 mmol)、5-氯-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(172 mg，1.02 mmol，中間物EY)於DMF (5.00 mL)中之溶液中添加Cu(OAc)2 (189 mg，1.04 mmol)及吡啶(324 mg，4.09 mmol，330 μL)。隨後將混合物加熱至100至110℃且攪拌6小時。將混合物冷卻至25℃且將其傾入H2 O (5.00 mL)中。隨後用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(5 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 × 25 × 10 μm；移動相：[水(0.2% FA)-ACN]；B%：33%至63%，11分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-(5-氯-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-基)-2-甲基異喹啉-1(2H)-酮(20.0 mg，61.4 μmol，6%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：326.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.64 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.84 - 7.82 (m, 1H), 7.66 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.06 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.27 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.76 (s, 3H)。
(R)-2- 甲基 -N-((R)-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ) 丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 EW
Figure 02_image585
步驟 a ： 將(3R)-3-{[(R)-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯基 ] 胺基 }-3H- 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 甲酸第三丁酯 (500 mg ，1.22 mmol ，經由中間物CB之步驟a至b合成)於TFA (2 mL)及DCM (10 mL)中之溶液在30℃下攪拌2小時。隨後減壓濃縮反應混合物。殘餘物用DCM (10 mL)及MeOH (1 mL)稀釋，且用K2 CO3 固體調整至pH=8。過濾溶液且減壓濃縮濾液，得到呈淡黃色固體狀之(R)-2-甲基-N-((R)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)丙烷-2-亞磺醯胺(370 mg ，1.19 mmol )。LC-MS (ESI+ )m/z ：309.1 (M+H)+ 。
(1'S)-1',3'- 二氫 -8- 氮雜螺 [ 雙環 [3.2.1] 辛烷 -3,2'- 茚 ]-1'- 胺， 中間物 EX (RTX-1136712)
Figure 02_image587
步驟 a ： 在N2 氛圍下在0℃下將第三丁醇鉀(373 g，3.33 mol)懸浮於DME (900 mL)中。隨後經30分鐘逐滴添加溶解於DME (900 mL)中之甲苯磺醯基甲基胩(390 g，2.00 mol)，保持溫度低於5℃，且隨後在0℃下再攪拌1小時。接下來，在0℃下逐滴添加異丙醇(160 g，2.66 mol，204 mL)，且再攪拌反應混合物30分鐘。隨後經30分鐘逐滴添加溶解於DME (900 mL)中之(1R,5S)-3-側氧基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(300 g，1.33 mol)，維持反應溫度低於5℃。添加後，在0℃下攪拌反應混合物1小時，隨後使其升溫至20℃並攪拌12小時。隨後經由矽藻土過濾反應混合物且用乙酸乙酯(300 mL × 2)洗滌殘餘物。合併有機層且蒸發，得到粗產物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=50:1至30:1)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(1R,5S)-3-氰基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(210 g，888 mmol，67%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 4.22 (m, 2H), 2.99 - 2.90 (m, 1H), 2.00 (t,J = 2.6 Hz , 4H), 1.85 - 1.81 (m, 2H), 1.59 (d,J = 8 Hz , 4H), 1.45 (s, 9H)。步驟 b ： 在-70℃下向(1R,5S)-3-氰基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(100 g，423 mmol)於THF (700 mL)中之溶液中添加LDA (2.00 M，253 mL)，且在-70℃下攪拌混合物1小時。隨後向混合物中添加含1-溴-2-(溴甲基)苯(111 g，444 mmol)之THF (300 mL)，且在-70℃下攪拌混合物2小時。隨後將反應混合物傾入冰冷的飽和NH4 Cl溶液(1.00 L)中且用乙酸乙酯(1.00 L × 2)萃取。有機層用鹽水(1.00 L × 1)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。用石油醚/乙酸乙酯(20/1，500 mL)濕磨殘餘物，得到呈白色固體狀之(1R,3s,5S)-3-(2-溴苯甲基)-3-氰基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(145 g，353 mmol，84%產率)。任意指定立體化學。LC-MS (ESI+ )m/z ：351.1 (M-55)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.59 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.30 - 7.28 (m, 1H), 7.14 - 7.16 (m, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.19 (s, 1H), 3.08 (s, 2H), 2.23 (t,J = 4.8 Hz, 2H), 2.05 - 1.93 (m, 6H), 1.44 (s, 9H)。步驟 c ： 在氮氣氛圍、20℃下向(1R,3s,5S)-3-(2-溴苯甲基)-3-氰基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(145 g，353 mmol)於DMA (1.00 L)及H2 O (100 mL)中之溶液中添加TEA (214 g，2.12 mol，295 mL)及PdCl2 (Amphos)2 (5.01 g，7.08 mmol，5.01 mL)。隨後將混合物加熱至100℃且在100℃下攪拌18小時。隨後將反應混合物進一步加熱至130℃且在130℃下攪拌24小時。隨後將反應混合物傾入飽和NH4 Cl溶液(1.00 L)中且用乙酸乙酯(1.00 L × 2)萃取。經合併之有機層用0.50 N HCl (1.00 L)、飽和NaHCO3 溶液(1.00 L)及鹽水(800 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。用石油醚/乙酸乙酯(200/1，500 mL)濕磨殘餘物並過濾，得到呈黃色固體狀之(1R,3s,5S)-1'-側氧基-1',3'-二氫-8-氮雜螺[雙環[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-甲酸第三丁酯(108 g，321 mmol，91%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：272.1 (M-55)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.71 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.35 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 4.37 (s, 1H), 4.28 (s, 1H), 3.13 -2.99 (m, 2H), 2.09 - 1.92 (m, 6H), 1.82 - 1.55 ( m, 2H), 1.51 (s, 9H)。步驟 d ： 在25℃下向(1R,3s,5S)-1'-側氧基-1',3'-二氫-8-氮雜螺[雙環[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-甲酸第三丁酯(100 g，297 mmol)於Ti(OEt)4 (330 g，1.45 mol，300 mL)中之溶液中添加(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(108 g，893 mmol)。隨後將反應混合物加熱至90℃並攪拌5天。隨後將反應混合物冷卻至-5至0℃且添加2-Me-THF (200 mL)，接著經2小時謹慎地逐份添加LiBH4 (7.13 g，327 mmol)，保持溫度在-5至0℃，在-5至0℃下再攪拌混合物2小時。藉由在0至10℃下添加甲醇(4.00 mL)而淬滅溶液且添加2-[2-[雙(2-羥乙基)胺基]乙基-(2-羥乙基)胺基]乙醇(500 g)，並且在20℃下攪拌混合物1小時。隨後向混合物中添加1.00 N HCl以將pH調整為1.00，且用乙酸乙酯(3.00 L× 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(2.00 L × 1)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後用石油醚:乙酸乙酯=1:1 (3.00 L ×3)經由SiO2 過濾，且減壓蒸發。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 8/1至3/1，石油醚/乙酸乙酯=3/1，Rf =0.20)純化粗產物，得到呈棕色膠狀物之(1R,1'S,3s,5S)-1'-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1',3'-二氫-8-氮雜螺[雙環[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-甲酸第三丁酯(52.5 g，120 mmol，41%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：433.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 7.30 - 7.28 (m, 1H), 7.18 - 7.14 (m, 3H), 5.50 (d,J = 4 Hz, 1H), 4.50 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.06-4.00 (m, 2H), 3.09 (d,J = 15.2 Hz, 1H), 2.29 -2.19 (m, 2H), 2.15 -2.06 (m, 1H), 1.83 (s, 3H), 1.69 ( s, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.10 (s, 9H)。步驟 e ： 向(1R,1'S,3s,5S)-1'-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1',3'-二氫-8-氮雜螺[雙環[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-甲酸第三丁酯(10.0 g，22.9 mmol)於MeOH (25.0 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH (4.00 M，49.7 mL)，且在20℃下攪拌混合物2小時。隨後減壓濃縮反應混合物以移除MeOH，得到殘餘物。在20℃下用二氯甲烷/甲醇= 1/1 (50.0 mL)濕磨殘餘物30分鐘。隨後過濾混合物且減壓濃縮濾餅，得到呈白色固體狀之(1R,1'S,3s,5S)-1',3'-二氫-8-氮雜螺[雙環[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-1'-胺(6.50 g，21.5 mmol，94%產率，2 HCl)。1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 9.61 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.64 (s, 3H), 7.60 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 3H), 4.57 (s, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.45 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.59 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.11 -2.03 (m, 2H), 2.04 - 1.98 (m, 4H), 1.47 (d,J = 10.8 Hz, 1H)。
5- 氯 -6- 甲基 - 1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪，中間物 EY
Figure 02_image589
步驟 a ： 在75℃下向1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-4,5-二胺(159 g，485 mmol)於EtOH (1.60 L)中之經攪拌溶液中逐滴添加2-側氧基丙酸(42.7 g，485 mmol，34.2 mL)於EtOH (600 mL)中之溶液，且在75℃下攪拌反應混合物1小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=5/1至0/1，Rf = 0.20)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之粗產物(45.0 g)。藉由逆相HPLC (0.1% FA條件)進一步純化粗產物，得到呈黃色固體狀之1-(4-甲氧基苯甲基)-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-醇(12.0 g，40.9 mmol，8%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：271.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 12.14 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.18 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 6.86 (d,J = 8.8 Hz 2H), 5.42 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 2.39 (s, 3H)。步驟 b ： 在0℃下向1-(4-甲氧基苯甲基)-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-醇(12.0 g，44.4 mmol)於1,4-二噁烷(220 mL)中之溶液中逐滴添加POCl3 (37.7 g，246 mmol，22.9 mL)。隨後在80℃下攪拌混合物12小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯=20/0至5/1，Rf =0.50)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(6.00 g，20.7 mmol，47%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：289.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.12 (s, 1H), 7.32 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 6.85 (d,J = 6.8 Hz, 2H), 5.59 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.81 (s, 3H)。步驟 c ： 將5-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪於CF3 COOH (47.4 g，416 mmol，30.8 mL)中之溶液在70℃下攪拌5小時。隨後真空濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於水(200 mL)中。用飽和NaHCO3 (200 mL)將pH調整至8，且用乙酸乙酯(500 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(200 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之粗產物。藉由逆相HPLC (0.1% HCl條件)純化粗產物，得到呈淡黃色固體狀之5-氯-6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(1.40 g，8.24 mmol，40%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：169.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 14.10 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 2.69 (s, 1H)。
4-(5- 巰基吡嗪 -2- 基 ) 螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-1'(3'H )- 酮， 中間物 EZ
Figure 02_image591
步驟 a ： 將2-溴-5-甲氧基吡嗪(5.08 g，26.9 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(6.00 g，25.7 mmol，CAS編號1310384-20-3)、K2 CO3 (10.6 g，77.1 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (1.88 g，2.57 mmol，CAS編號72287-26-4)於二噁烷(150.00 mL)及H2 O (15.00 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後濃縮反應混合物且添加H2 O (200 mL)。混合物用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取，且經合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(4.80 g，87%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：216.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(1.90 g，8.82 mmol)及1-溴-2-(溴甲基)苯(2.42 g，9.70 mmol，CAS編號3433-80-5)溶解於THF (200 mL)中。隨後，在-10℃下向混合物中逐滴添加LDA (4.85 mL，9.70 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使混合物升溫至25℃後保持1小時。在-10℃下向混合物中逐滴添加另一批LDA (4.41 mL，8.82 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使混合物升溫至25℃後保持1小時。藉由添加飽和NH4 Cl (200 mL)來淬滅經合併之反應混合物。混合物用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取，且經合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-[(2-溴苯基)甲基]-4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(3.00 g，89%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：383.7, 385.7 (M+H)+ 。步驟 c ： 將1-[(2-溴苯基)甲基]-4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(3.00 g，7.80 mmol)、PdCl2 (AmPhos)2 (276 mg，390 µmol，CAS編號887919-35-9)及TEA (4.31 mL，31.2 mmol)放入DMA (50.00 mL)及H2 O (1.00 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充三次。在120℃下攪拌反應混合物12小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(2.20 g，92%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：307.0 (M+H)+ 。步驟 d ： 將4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(1.60 g，5.22 mmol)溶解於MeOH (90.0 mL)及THF (10.0 mL)中，隨後添加10% Pd/C (160.0 mg，濕)。將反應混合物抽成真空且使用H2 再填充三次。隨後在H2 (15 psi)下在25℃下攪拌反應混合物12小時。隨後過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:20)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(1.20 g，75%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：308.9 (M+H)+ 。步驟 e ： 將4-(5-甲氧基吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(900.0 mg，2.91 mmol)放入HBr/AcOH (33%，15.0 mL)中，且在100℃下攪拌反應混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。濃縮反應混合物並添加H2 O (10.0 mL)，隨後用DCM (20.0 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用鹽水(30.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(DCM:MeOH = 100:0至100:5)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-(5-羥基吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(80.0 mg，58%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：295.1 (M+H)+ 。步驟 f ： 將4-(5-羥基吡嗪-2-基)螺[環己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-酮(500 mg，1.69 mmol)溶解於DMF (10 mL)中。添加BOP (2.23 g，5.06 mmol)且在20℃下攪拌反應混合物5分鐘。接下來，添加3-硫基丙酸2-乙基己酯(575 µL，2.53 mmol)及DBU (1.50 mL，10.1 mmol)，且在20℃下攪拌反應混合物1小時。添加另外的3-硫基丙酸2-乙基己酯(1.91 mL，8.45 mmol)，且在20℃下攪拌混合物12小時。隨後用EtOAc (30 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物，且分離經分配之層。水相用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取，且經合併之有機層用鹽水(30 mL × 3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯= 100:0至100:15)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之3-((5-(1'-側氧基-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-4-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(410 mg，49%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：495.2 (M+H)+ 。步驟 g ： 將3-((5-(1'-側氧基-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-4-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(220.0 mg，444 µmol)溶解於THF (1.00 mL)中。將反應混合物冷卻至-78℃，且在N2 下經10分鐘逐滴添加t -BuOK (1.33 mL，1.33 mmol，1 M於THF中)。隨後在-78℃下攪拌反應混合物20分鐘。隨後在-78℃下，反應混合物用DCM (30 mL)稀釋且用HCl/MeOH (2 N)酸化至pH = 6。用H2 O (20 mL)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之4-(5-巰基吡嗪-2-基)螺[環己烷-1,2'-茚]-1'(3'H )-酮(137.0 mg，441 µmol，100%粗產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：311.0 (M+H)+ 。
N -[(3S )-1'-(1- 甲基 -6- 側氧基 -5- 硫基 -1,6- 二氫嘧啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FA
Figure 02_image593
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(5-碘-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(400.0 mg，745 µmol，中間物DQ)、Pd2 (dba)3 (68.2 mg，74 µmol)、XantPhos (86.2 mg，149 µmol)、丁酸2-乙基己酯(162.0 mg，745 μmol)及DIPEA (367 µL，2.2 mmol)於二噁烷(10.00 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。濃縮混合物且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至60%)純化，得到呈黃色油狀物之3-({2-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-5-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(236.0 mg，51%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：627.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 在-78℃下經10分鐘向3-({2-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-5-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(236.0 mg，376 µmol)於無水THF (1.50 mL)中之混合物中添加t -BuOK (1.12 mL，1.1 mmol，1 M於THF中)。在N2 氛圍下在-78℃下攪拌混合物0.5小時。隨後在-78℃下，反應混合物用DCM (30 mL)稀釋且用HCl/EtOAc (2 N，1.00 mL)酸化至pH = 6。混合物用鹽水(20 mL)洗滌，且有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈紅色油狀物之N -[(3S )-1'-(1-甲基-6-側氧基-5-硫基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，72%粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：443.1 (M +H)+ 。
3-[(3S )-3-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6- 硫基吡嗪 -2- 甲酸甲酯 ， 中間物 FB
Figure 02_image595
步驟 a ： 將6-溴-3-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(500 mg，966 µmol，中間物DN)、3-硫基丙酸2-乙基己酯(231 mg，1.06 mmol)、Pd2 (dba)3 (88.4 mg，96.6 μmol)、Xantphos (111 mg，193 μmol)及DIPEA (249 mg，1.93 mmol)放入二噁烷(20 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，且隨後在100℃下攪拌10小時。隨後濃縮反應混合物，添加H2 O (20 mL)，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:40)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之3-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-({3-[(2-乙基己基)氧基]-3-側氧基丙基}硫基)吡嗪-2-甲酸甲酯(450 mg，71%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：655.3 (M +H)+ 。步驟 b ： 將化合物3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-({3-[(2-乙基己基)氧基]-3-側氧基丙基}硫基)吡嗪-2-甲酸甲酯(250.0 mg，381.0 µmol)溶解於THF (1.5 mL)中。將反應混合物冷卻至-78℃，且在N2 下經10分鐘逐滴添加t -BuOK (1.14 mL，1.1 mmol，1 M於THF中)。在-78℃下攪拌反應混合物0.5小時。在-78℃下，將反應混合物用DCM (20 mL)稀釋且用HCl/MeOH (4 N)酸化至pH = 5至6。用H2 O (20 mL)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-硫基吡嗪-2-甲酸酯(179.0 mg，100%粗產率)。
N -[(3S )-1'-(1- 苯甲基 -5- 碘 -6- 側氧基 -1,6- 二氫嘧啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FC
Figure 02_image597
步驟 a ： 在DMF (40 mL)中添加2-氯-5-碘-3,4-二氫嘧啶-4-酮(1.5 g，5.8 mmol，經由中間物DP之步驟a合成)、K2 CO3 (2.4 g，17.5 mmol)及苯甲基溴(2.0 g，11.6 mmol)。在50℃下攪拌反應混合物2小時。混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，用H2 O (40 mL × 2)、鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之3-苯甲基-2-氯-5-碘-3,4-二氫嘧啶-4-酮(750.0 mg，2.2 mmol，37%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：346.8 (M+H)+ 。步驟 b ： 將3-苯甲基-2-氯-5-碘-3,4-二氫嘧啶-4-酮(750.0 mg，2.2 mmol)、N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(783.0 mg，2.6 mmol，中間物EF)及TEA (1.5 mL，10.8 mmol)放入DMF (15 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充三次，隨後在70℃下攪拌反應混合物2小時。反應混合物隨後用水(40 mL)稀釋，且用EtOAc (80 mL × 2)萃取。有機層用H2 O (40 mL)及鹽水(40 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至30%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3S )-1'-(1-苯甲基-5-碘-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(730.0 mg，1.2 mmol，55%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：613.1 (M+H)+ 。
(R)-5- 氟 -3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺， 中間物 FD
Figure 02_image599
步驟 a ： 在0℃下向丙烷-1,3-二硫醇(119 g，1.11 mol，111 mL)及2,5-二氟苯甲醛(150 g，1.06 mol，114 mL)於DCM (750 mL)中之溶液中逐滴添加BF3 .Et2 O (78.0 g，263 mmol，67.8 mL，48%溶液)。隨後在25℃下攪拌反應物1小時。反應混合物隨後用水(500 mL)稀釋且用CH2 Cl2 (500 mL × 3)萃取，且真空濃縮有機層。將殘餘物在石油醚(400 mL)中漿化且藉由過濾收集，得到呈白色固體狀之2-(2,5-二氟苯基)-1,3-二噻烷(180 g，774 mmol，73%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.36 (dd,Jab = 2.8 Hz,Jac = 8.4 Hz, H), 7.02 - 6.97 (m, 2H), 5.50 (s, 1H), 3.15 - 3.08 (m, 2H), 2.95 - 2.91 (m, 2H), 2.21 - 2.17 (m, H), 1.97 - 1.93 (m, H)。步驟 b ： 將2-(2,5-二氟苯基)-1,3-二噻烷(100 g，430 mmol)於THF (400 mL)中之溶液冷卻至-50至-40℃。隨後在-50至-40℃下向混合物中添加LDA (2 M，258 mL)，且使混合物升溫至-30至-20℃後保持1小時。隨後將混合物冷卻至-50至-40℃，且向混合物中逐滴添加4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(90.0 g，451 mmol)於THF (200 mL)中之溶液。添加後，在-50至-40℃下再攪拌混合物1小時。隨後在25℃下，混合物用飽和NH4 Cl (600 mL)淬滅且用乙酸乙酯(400 mL × 2)萃取。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液，得到粗產物。在25℃下用石油醚(400 mL)濕磨粗產物1小時，且隨後過濾。真空乾燥殘餘物，得到呈白色固體狀之4-(2-(2,5-二氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(132 g，286 mmol，67%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：332.1 (M-100)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 7.85 - 7.80 (m, H), 7.05 - 7.00 (m, 2H), 3.91 (s, 2H), 2.97 (s, 2H), 2.86 - 2.81 (m, 2H), 2.66 - 2.61 (m, 2H), 2.55 (s, H), 1.90 - 1.87 (m, 2H), 1.79 (t,J = 16.4 Hz, 3H), 1.41 (s, 9H)。步驟 c ： 在0℃下向4-(2-(2,5-二氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(147 g，318 mmol)、吡啶(50.4 g，637 mmol，51.4 mL)、TBAB (20.56 g，63.77 mmol)於H2 O (73.5 mL)及CH2 Cl2 (735 mL)中之溶液中添加吡啶-HBr3 (203 g，637 mmol)。隨後在25℃下攪拌混合物2小時。隨後將溶液傾入水(750 mL)中且用CH2 Cl2 (500 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，隨後過濾。真空濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之4-(2,5-二氟苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(109 g，定量粗產率)。步驟 d ： 在25℃下向4-(2,5-二氟苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(109 g，319 mmol)於二噁烷(440 mL)中之混合物中添加t-BuOK (53.7 g，478 mmol)。隨後在70℃下攪拌混合物2小時。隨後將溶液傾入水(1.00 L)中且用乙酸乙酯(500 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 1:0至8:1，Rf = 0.30，石油醚:乙酸乙酯= 3:1)純化粗產物。用石油醚(50.0 mL)進一步濕磨混合物，得到呈淡黃色固體狀之5-氟-3-側氧基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(32.0 g，93.1 mmol，29%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：265.8 (M-55)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.38 - 7.32 (m, H), 7.32 - 7.27 (m, H), 7.12 (dd,Jab = 4.0 Hz,Jac = 9.2 Hz, H), 4.15 (s, 2H), 3.22 (s, 2H), 1.98 - 1.90 (m, 2H), 1.61 (d,J = 13.6 Hz, 2H), 1.50 (s, 9H)。步驟 e ： 在25℃下向5-氟-3-側氧基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(31.0 g，90.2 mmol)於2-甲基四氫呋喃(217 mL)中之溶液中添加Ti(OEt)4 (61.8 g，271 mmol，56.1 mL)及(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(21.9 g，180 mmol)。隨後在90℃下攪拌混合物18小時。隨後將反應混合物冷卻至0℃，且在0至10℃下添加LiBH4 (2.94 g，134.9 mmol)，並且在0至10℃下攪拌混合物2小時。藉由在0至10℃下添加甲醇(15.0 mL)而淬滅混合物並添加2-[2-[雙(2-羥乙基)胺基]乙基-(2-羥乙基)胺基]乙醇(50.0 g)，且在25℃下攪拌混合物30分鐘。向混合物中添加10%檸檬酸溶液(800 mL)，且用乙酸乙酯(400 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用鹽水(80.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，隨後經由SiO2 過濾且減壓蒸發，得到黃色油狀物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 10:1至2:1，Rf = 0.30、0.35)純化黃色油狀物，得到黃色固體。將黃色固體在甲基第三丁基醚(120 mL)中漿化並過濾，得到白色固體。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 10:1至2:1，Rf = 0.30)純化白色固體，得到呈白色固體狀之(R)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-5-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(15.0 g，34.4 mmol，38%產率)。1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 7.06 - 7.01 (m, H), 6.82 (dd,J = 4.00 Hz,J = 8.40 Hz, H), 6.13 (d,J = 10.80 Hz, H), 4.65 (d,J = 10.40 Hz, H), 4.01 - 3.88 (m, H), 3.04 (s, H), 1.85 - 1.69 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.19 (s, 9H)。步驟 f ： 在25℃下向(R)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-5-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(16.0 g，37.5 mmol)於甲醇(32.0 mL)中之混合物中添加HCl/MeOH (4.00 M，80.0 mL)，且在25℃下攪拌混合物2小時。隨後真空濃縮反應混合物，得到白色固體。將白色固體在乙酸乙酯(50.0 mL)中漿化，過濾，且真空乾燥濾餅，得到呈白色固體狀之(R)-5-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(10.0 g，33.3 mmol，89%產率，2 HCl)。1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 9.71 (d, J = 8.00 Hz, H), 9.39 (d, J = 9.20 Hz, H), 9.18 (s, H), 9.39 (dd, J = 2.40 Hz, J = 8.00 Hz, H), 7.20 - 7.15(m, H), 9.39 (d, J = 9.20 Hz, H), 9.39 (dd, J = 4.00 Hz, J = 8.80 Hz, H), 4.75 (s, H), 4.75 (s, H), 3.42 (d, J = 12.80 Hz, H), 3.21 (d, J = 12.00 Hz, H), 3.03 (s, 2H), 2.43 - 2.37 (m, H), 2.17 (d, J = 13.20 Hz, H), 1.99 (d, J = 12.40 Hz, H), 1.87 (d, J = 12.40 Hz, H)。
N -[(3R )-1'-(5- 溴吡嗪 -2- 基 )-5- 氟 -3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FE
Figure 02_image601
步驟 a ： 將2,5-二溴吡嗪(200.0 mg，0.8 mmol，CAS編號23229-25-6)、(3R )-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(272.0 mg，0.9 mmol，中間物FD)及TEA (580 µL，4.2 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在80℃下攪拌2.5小時。粗產物溶液直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：361.6 (M-NH2 )+ 。步驟 b ： 在15℃下向(R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氟-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(318.0 mg，0.8 mmol)於DMF (10 mL)中之粗產物溶液中添加Boc2 O (383 µL，1.7 mmol)。在15℃下攪拌反應混合物12小時。反應混合物隨後用水(30 mL)稀釋，且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用H2 O (40 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至10%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(270.0 mg，0.6 mmol，兩個步驟之產率67%)。LC-MS (ESI+ )m/z ：479.0 (M +H)+ 。
N -[(3R )-5- 氟 -1'-(5- 硫基吡嗪 -2- 基 )-3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FF
Figure 02_image603
步驟 a ： 將N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(270.0 mg，0.6 mmol，中間物FE)、3-硫基丙酸2-乙基己酯(135.0 mg，0.6 mmol，CAS編號50448-95-8)、Pd2 (dba)3 (51.5 mg，0.06 mmol)、XantPhos (65.1 mg，0.1 mmol)及DIPEA (276 µL，1.7 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (20 mL)中且用EtOAc (40 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至15%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-({5-[(3R )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(220.0 mg，0.4 mmol，63%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：617.2 (M +H)+ 。步驟 b ： 在-78℃下經10分鐘向3-({5-[(3R )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(220.0 mg，0.4 mmol)於無水THF (1.5 mL)中之混合物中添加t -BuOK (1.1 mL，1.1 mmol，1 M於THF中)，且在N2 氛圍下在-78℃下攪拌所得混合物0.5小時。隨後在-78℃下，反應混合物用DCM (30 mL)稀釋且用HCl/EtOAc (2 N，1 mL)酸化至pH = 6。用H2 O (20 mL)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈紅色油狀物之N -[(3R )-5-氟-1'-(5-硫基吡嗪-2-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(154.0 mg，100%粗產率)。
6- 氯 - 1- 甲基 -3-(1,2,3,4- 四氫喹啉 -1- 基 )-1,2- 二氫吡啶 -2- 酮， 中間物 FG
Figure 02_image605
步驟 a ： 將3-溴-6-氯-2-甲氧基吡啶(1.0 g，4.5 mmol，CAS編號1211526-62-3)、1,2,3,4-四氫喹啉(656.0 mg，4.9 mmol，CAS編號25448-04-8)、Pd2 (dba)3 (616.0 mg，0.7 mmol)、t -BuONa (646.0 mg，6.7 mmol)及XantPhos (1.6 g，2.7 mmol)之混合物添加至甲苯(30 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充三次，並且在100℃下攪拌反應混合物12小時。隨後過濾反應混合物且用EtOAc (80 mL × 2)洗滌。用H2 O (30 mL × 2)洗滌濾過物，且有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至5%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之1-(6-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1,2,3,4-四氫喹啉(1.3 g，4.5 mmol，101%粗產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：274.9 (M+H)+ 。步驟 b ： 將1-(6-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1,2,3,4-四氫喹啉(1.3 g，4.5 mmol)及TMSI (6.5 mL，45.3 mmol)於DCM (20 mL)中之混合物在50℃下攪拌12小時。隨後添加另外的TMSI (6.5 mL，45.3 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物50小時。反應混合物隨後用DCM (60 mL)及H2 O (40 mL)稀釋，且用DCM (50 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至10%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6-氯-3-(1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)吡啶-2-醇(550.0 mg，2.1 mmol，47%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：260.9 (M+H)+ 。步驟 c ： 在N2 氛圍、0℃下向NaH (166.0 mg，4.2 mmol，於礦物油中之60%分散液)於DMF (10 mL)中之溶液中添加6-氯-3-(1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)吡啶-2-醇(550.0 mg，2.1 mmol)。在0℃下攪拌混合物20分鐘，隨後添加碘甲烷(326 µL，5.3 mmol)，且使混合物升溫至15℃並在N2 氛圍下在此溫度下攪拌1小時。混合物隨後用MeOH (1 mL)淬滅，用H2 O (40 mL)稀釋，且水相用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。經合併之有機層用水(30 mL × 2)洗滌，接著用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，乙酸乙酯/石油醚= 0/100至30/100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之6-氯-1-甲基-3-(1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)-1,2-二氫吡啶-2-酮(400.0 mg，1.5 mmol，69%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：275.0 (M +H)+ 。
(S)-(1'-(6- 碘 -5- 甲基咪唑并 [2,1-b][1,3,4] 噻二唑 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FH
Figure 02_image607
步驟 a ： 將2-溴咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑(3.0 g，14.7 mmol，CAS編號1137142-58-5)、(1S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(4.04 g，14.7 mmol，中間物I)及DIPEA (12.8 mL，73.5 mmol)於DMF (50.0 mL)中之混合物在100℃下攪拌3小時。反應混合物直接用於下一步驟。LC-MS (ESI+) m/z：326.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(1S)-1'-{咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(4.7 g，14.4 mmol)於DMF (50.0 mL)中之混合物中添加(Boc)2 O (4.94 mL，21.6 mmol)，且在20℃下攪拌所得混合物1小時。混合物隨後用乙酸乙酯(150.0 mL)稀釋且用H2 O (80.0 mL × 3)洗滌。有機相用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至75%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N-[(1S)-1'-{咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(4.10 g，9.63 mmol，2個步驟之產率67%)。LC-MS (ESI+) m/z：426.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 向N-[(1S)-1'-{咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(2.0 g，4.69 mmol)於DMF (30.0 mL)中之0℃混合物中添加NIS (1.15 g，5.15 mmol)，且在0℃下攪拌所得混合物3.5小時。混合物隨後用乙酸乙酯(80.0 mL)稀釋且用H2 O (50.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(30.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至45%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N-[(1S)-1'-{5-碘咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(1.75 g，3.17 mmol，68%產率)。少量雙碘化產物亦在反應期間形成，且在純化期間移除。LC-MS (ESI+) m/z：551.9 (M+H)+ 。步驟 d ： 將N-[(1S)-1'-{5-碘咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(1.7 g，3.08 mmol)、甲基
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(921 mg，15.4 mmol)、Cs2 CO3 (2.00 g，6.16 mmol)及Pd(PPh3 )4 (355 mg，308 µmol)於1,4-二噁烷(20.0 mL)中之混合物在N2 氛圍、135℃下在微波照射下攪拌1小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，將其溶解於乙酸乙酯(30.0 mL)中，用H2 O (20.0 mL × 2)及鹽水(15.0 mL)洗滌。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至95%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N-[(1S)-1'-{5-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(780 mg，1.77 mmol，57%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：440.2 (M+H)+ 。步驟 e ： 將N-[(1S)-1'-{5-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(1.3 g，1.77 mmol，純度：60%)及NIS (595 mg，2.65 mmol)於DMF (15.0 mL)中之混合物在15℃下攪拌1.5小時。混合物隨後用乙酸乙酯(50.0 mL)稀釋且用H2 O (25.0 mL × 3)洗滌。有機相用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至40%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N-[(1S)-1'-{6-碘-5-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(460 mg，813 µmol，46%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：566.0 (M+H)+ 。
(R)-6- 氟 -3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺， 中間物 FI
Figure 02_image609
步驟 a ： 在0℃下向2,4-二氟苯甲醛(150 g，1.06 mol，114 mL)及丙烷-1,3-二硫醇(119 g，1.11 mol，111 mL)於CH2 Cl2 (750 mL)中之溶液中逐滴添加BF3 .Et2 O (78.0 g，263 mmol，67.8 mL，48%溶液)。隨後在25℃下攪拌反應物1小時。反應混合物隨後用水(500 mL)淬滅且用CH2 Cl2 (300 mL × 2)萃取。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液。將殘餘物在石油醚(50.0 mL)中漿化且藉由過濾收集，得到呈白色固體狀之2-(2,4-二氟苯基)-1,3-二噻烷(192 g，826 mmol，78%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：233.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.61 - 7.55 (m, H), 6.88 - 6.81 (m, H), 6.80 - 6.77 (m, H), 5.47 (s, 1H), 3.12 - 3.05 (m, 2H), 2.91 - 2.88 (m, 2H), 2.18 - 2.13 (m, H), 1.92 - 1.89 (m, H)。步驟 b ： 將2-(2,4-二氟苯基)-1,3-二噻烷(123 g，529 mmol)於THF (615 mL)中之溶液冷卻至-50至-40℃。在-50至-40℃下向混合物中添加LDA (2 M，317 mL)。隨後使混合物升溫至-30至-20℃後保持1小時。接下來，將混合物冷卻至-50至-40℃，並且向混合物中逐滴添加TMSCl (60.4 g，555 mmol，70.5 mL)。添加後，在-50至-40℃下再攪拌混合物1小時。在-50至-40℃下向混合物中添加另外的LDA (2 M，397 mL)。隨後使混合物升溫至-30至-20℃後保持1小時。隨後將混合物冷卻至-50至-40℃，且在-50至-40℃下向混合物中添加4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(110 g，555 mmol)於THF (246 mL)中之溶液。在-50至-40℃下攪拌混合物1小時。隨後在25℃下，混合物用NH4 Cl水溶液(1.50 L)淬滅且用乙酸乙酯(1.00 L × 2)萃取。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液，得到粗產物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 1:0至10:1，石油醚:乙酸乙酯= 3:1，Rf = 0.45)純化混合物，得到呈黃色油狀物之4-(2-(2,4-二氟-3-(三甲基矽烷基)苯基)-1,3-二噻烷-2-基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(234 g，459 mmol，87%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：504.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.98 - 7.92 (m, H), 6.77 (t,J = 8.0 Hz, H), 3.81 (s, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.74 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.52 - 2.45 (m, 2H), 1.78 - 1.75 (m, 2H), 1.64 - 1.60 (t,J = 7.2 Hz, 4H), 1.31 (s, 9H), 0.26 (s, 9H)。步驟 c ： 在0℃下向4-(2-(2,4-二氟-3-(三甲基矽烷基)苯基)-1,3-二噻烷-2-基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(210 g，412 mmol)、吡啶(65.2 g，824 mmol，66.5 mL)及TBAB (26.5 g，82.4 mmol)於CH2 Cl2 (1.05 L)及H2 O (105 mL)中之溶液中添加吡啶-HBr3 (263 g，824 mmol)。隨後在25℃下攪拌混合物2小時。將溶液傾入水(1.50 L)中且用CH2 Cl2 (800 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(1.50 L)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且真空濃縮濾液，得到呈棕色油狀物之4-(2,4-二氟-3-(三甲基矽烷基)苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(171 g，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：313.9 (M-100)+ 。步驟 d ： 在25℃下向4-(2,4-二氟-3-(三甲基矽烷基)苯甲醯基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(171 g，413 mmol)於二噁烷(650 mL)中之溶液中添加t-BuOK (69.6 g，620 mmol)。隨後在70℃下攪拌混合物2小時。將溶液傾入水(1.00 L)中且用乙酸乙酯(800 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(1.00 L)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，隨後過濾且減壓蒸發。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 100:1至25:1，Rf = 0.30，石油醚:乙酸乙酯= 3:1)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之6-氟-3-側氧基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(52.0 g，160 mmol，39%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：222.1 (M-100)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 7.78 (dd,Jab = 2.0 Hz,Jac = 8.4 Hz, H), 7.27 (dd,Jab = 2.0 Hz,Jac = 9.6 Hz, H), 7.07 - 7.04 (m, H), 4.00 (d,J = 13.6 Hz, 2H), 3.14 (s, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.74 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.74 - 1.64 (m, 4H), 1.43 (s, 9H)。步驟 e ： 在15℃下向6-氟-3-側氧基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(40.0 g，123 mmol)於2-Me-THF (80.0 mL)中之溶液中添加Ti(OEt)4 (84.5 g，370 mmol，76.9 mL)及(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(29.9 g，247 mmol)。隨後在90℃下攪拌混合物18小時。接下來，在0℃下向混合物中添加LiBH4 (2.96 g，135 mmol)，且在15℃下攪拌混合物2小時。藉由0℃之MeOH (20.0 mL)淬滅溶液並添加2-[2-[雙(2-羥乙基)胺基]乙基-(2-羥乙基)胺基]乙醇(40.0 g)，且在15℃下攪拌混合物1小時。混合物用0.5 N HCl調整至pH = 1且用乙酸乙酯(600 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(800 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，隨後經由SiO2 過濾且真空濃縮濾液。隨後用MTBE (100 mL)濕磨混合物，得到呈白色固體狀之(R)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-6-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(27.0 g，62.1 mmol，50%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：371.1 (M-55)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 7.26 (t,J = 6.4 Hz, H), 6.75 (dd,Jab = 2.4 Hz,Jac = 9.6 Hz, 2H), 6.09 (d,J = 10.4 Hz, H), 4.61 (d,J = 10.4 Hz, H), 3.96 (t,J = 16.8 Hz, 2H), 3.04 (s, 2H), 1.89 - 1.82 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.17 (s, 9H)。步驟 f ： 在15℃下向(R)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-6-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(15.0 g，34.5 mmol)於MeOH (30.0 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH (4 M，75.0 mL)，且在15℃下攪拌混合物1小時。真空濃縮混合物。在15℃下用石油醚:乙酸乙酯= 3:1 (40.0 mL)濕磨粗產物1小時，得到呈白色固體狀之(R)-6-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(10.08 g，34.1 mmol，99%產率，2 HCl)。LC-MS (ESI+ )m/z ：347.8 (M-16)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 9.58 (s, H), 9.36 (s, H), 9.03 (s, 3H), 7.79 (dd,Jab = 5.6 Hz,Jac = 8.0 Hz, H), 6.90 - 6.83 (m, 2H), 4.72 (s, H), 3.43 (s, H), 3.24 (d,J = 12.8 Hz, H), 3.06 (s, H), 2.50 - 2.41 (m, H), 2.19 (d,J = 12.4 Hz, H), 2.02 - 2.00 (m, H), 1.91 (d,J = 1.6 Hz, H)。
N -[(3R )-6- 氟 -1'-[3- 碘 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FJ
Figure 02_image611
步驟 a ： 將(3R )-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(800.0 mg，2.7 mmol，中間物FI)、6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(1.03 g，2.8 mmol，中間物A)及TEA (1.86 mL，13.5 mmol)於DMF (25.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌3小時。將反應混合物冷卻至室溫，且其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：551.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(3R )-6-氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(1.45 g，2.6 mmol)於DMF (25.0 mL)中之混合物中添加(Boc)2 O (1.20 mL，5.3 mmol)，且在15℃下攪拌混合物2小時。混合物隨後用乙酸乙酯(70.0 mL)稀釋且用H2 O (30.0 mL × 3)洗滌。有機相用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚，0%至40%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3R )-6-氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.30 g，76%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：651.1 (M+H)+ 。
6- 氯 -3- 碘 -5- 甲基 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 ， 中間物 FK
Figure 02_image613
步驟 a ： 在70℃下向6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(10.0 g，29.5 mmol，中間物B)及過硫酸銨(20.2 g，88.6 mmol，19.3 mL)於CH3 CN (100 mL)及H2 O (50.0 mL)中之混合物中逐滴添加乙酸(8.87 g，148 mmol，8.45 mL)及AgNO3 (50.2 g，295 mmol)於CH3 CN (40.0 mL)及H2 O (20.0 mL)中之溶液，隨後在70至90℃下攪拌混合物10分鐘。隨後將混合物冷卻至室溫，且用飽和NaHCO3 溶液調整至pH = 8。隨後過濾混合物，且用DCM (200 mL × 3)萃取濾液。經合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈黃色固體狀之6-氯-3-碘-5-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(33.0 g，65.5 mmol，55.5%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：352.9 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 4.07 (s, 3H), 2.75 (s, 3H)。步驟 b ： 在25℃下向6-氯-3-碘-5-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-1-甲酸甲酯(28.0 g，55.6 mmol)於DCM (300 mL)中之溶液中添加哌啶(5.21 g，61.2 mmol，6.04 mL)，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後在25℃下向混合物中添加TsOH. H2 O (13.8 g，72.3 mmol)及DHP (4.68 g，55.6 mmol，5.08 mL)，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後用飽和NaHCO3 溶液(10.0 mL × 2)及鹽水(100 mL)洗滌混合物。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚:乙酸乙酯= 20:1至10:1，Rf = 0.80)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之6-氯-3-碘-5-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(11.0 g，27.2 mmol，48%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：379.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 5.94 (dd,J1 = 2.4 Hz,J2 = 10 Hz, 1H), 4.14 - 4.10 (m, 1H), 3.83 - 3.76 (m, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 2.17 - 2.13 (m, 1H), 1.99 - 1.96 (m, 1H), 1.83 - 1.74 (m, 2H), 1.65 - 1.63 (m, 1H)。
N -[(3R )-5- 氟 -1'-[3- 碘 -5- 甲基 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FL
Figure 02_image615
步驟 a ： 將(R )-5-氟-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(350.0 mg，1.2 mmol，中間物FD)、6-氯-3-碘-5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪(446.0 mg，1.2 mmol，中間物FK)及TEA (815.0 μL，5.9 mmol)於DMF (10.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌4小時。隨後將反應混合物冷卻至室溫，且其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ ) m/z 565.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(3R )-5-氟-1'-[3-碘-5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(650.0 mg，1.2 mmol)於DMF (10.0 mL)中之混合物中添加(Boc)2 O (527.0 μL，2.3 mmol)，且在15℃下攪拌混合物1小時。混合物隨後用乙酸乙酯(40.0 mL)稀釋且用H2 O (25.0 mL × 3)洗滌。有機相用鹽水(15.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至25%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-5-氟-1'-[3-碘-5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(520.0 mg，68%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：665.0 (M+H)+ 。
6- 氯 -3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡啶 ， 中間物 FM
Figure 02_image617
步驟 a ： 向6-氯-1H -吡唑并[3,4-b ]吡啶(350.0 mg，2.3 mmol，CAS編號63725-51-9)於DMF (15.0 mL)中之混合物中添加NIS (764.0 mg，3.4 mmol)，且在110℃下攪拌所得混合物12小時。隨後用飽和Na2 SO3 (15.0 mL)及飽和NaHCO3 (15.0 mL)淬滅反應混合物，攪拌10分鐘，隨後添加H2 O (15.0 mL)，且攪拌混合物5分鐘。隨後藉由過濾收集固體，用H2 O (50.0 mL)洗滌且減壓乾燥，得到呈黃色固體狀之6-氯-3-碘-1H -吡唑并[3,4-b ]吡啶(580.0 mg，91%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 279.8 (M+H)+ 。步驟 b ： 將6-氯-3-碘-1H -吡唑并[3,4-b ]吡啶(580.0 mg，2.1 mmol)、DHP (520.0 mg，6.2 mmol)及CSA (48.0 mg，207.0 µmol)於DCM (15.0 mL)中之混合物在45℃下攪拌2小時。隨後將混合物傾入飽和NaHCO3 (40.0 mL)中且用DCM (25.0 mL × 3)萃取。有機相用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚，0%至13%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡啶(640.0 mg，85%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 363.8 (M+H)+ 。
((1S)-1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡啶 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FN
Figure 02_image619
步驟 a ： 將N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(520.0 mg，1.7 mmol，中間物EF)、6-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡啶(621.0 mg，1.7 mmol，中間物FM)及TEA (709.0 μL，5.1 mmol)於DMF (15.0 mL)中之混合物在90℃下攪拌18小時。混合物隨後用乙酸乙酯(40.0 mL)稀釋且用H2 O (20.0 mL × 3)洗滌。有機相用鹽水(10.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至23%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡啶-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(290.0 mg，27%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 630.1 (M+H)+ 。
N -[(3R )-1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-6- 氟 -3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ]-1,1- 二苯基甲亞胺 ， 中間物 FO
Figure 02_image621
步驟 a ： 將(R )-6-氟-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(600.0 mg，2.0 mmol，中間物FI)、二苯基甲亞胺(329.0 mg，1.8 mmol)及TEA (841.0 μL，6.1 mmol)於MeCN (30.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌12小時。隨後減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(二氯甲烷:甲醇= 0%至7%)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(R )-N -(二苯基亞甲基)-6-氟-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(750.0 mg，96%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：387.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將(R )-N -(二苯基亞甲基)-6-氟-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(750.0 mg，1.9 mmol)、3-溴吡啶(458.0 mg，2.9 mmol)、Cs2 CO3 (1.58 g，4.9 mmol)及XantPhos-Pd-G4 (186.0 mg，194.0 µmol)於甲苯(35.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至65%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-6-氟-1'-(吡啶-3-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(230.0 mg，26%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：464.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 向N -[(3R )-6-氟-1'-(吡啶-3-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(230.0 mg，496.0 µmol)於MeCN (10.0 mL)及DCM (5.0 mL)中之0℃混合物中添加NBS (87.7 mg，496.0 µmol)，且在0℃下攪拌所得混合物0.5小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至20%)對其進行純化，得到呈白色固體狀之N -[(3R )-1'-(6-溴吡啶-3-基)-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(230.0 mg，85.5%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：544.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d4 )：δ 7.96 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 7.57-7.55 (m, 2H), 7.47-7.39 (m, 3H), 7.35-7.30 (m, 1H), 7.27-7.21 (m, 3H), 7.16-7.12 (m, 2H), 7.04-7.01 (m, 1H), 6.92-6.86 (m, 1H), 6.53-6.46 (m, 2H), 4.67 (s, 1H), 3.46-3.41 (m, 1H), 3.29-3.12 (m, 3H), 2.32-2.28 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.74-1.69 (m, 1H), 1.59-1.54 (m, 1H)。
N -[(3R )-1'-(6- 溴吡啶 -3- 基 )-6- 氟 -3H - 螺 [ 1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ]-1,1- 二苯基甲亞胺 ， 中間物 FP
Figure 02_image623
步驟 a ： 向(3R )-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(500.0 mg，2.2 mmol，中間物FD)於MeCN (5.00 mL)中之溶液中添加TEA (678.0 mg，6.7 mmol)，且在95℃下攪拌反應混合物1小時。接下來向反應混合物中添加二苯基甲亞胺(405.0 mg，2.24 mmol)，且在95℃下攪拌反應物10小時。隨後濃縮反應混合物且藉由矽膠層析(DCM/MeOH = 30/1至8/1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R )-N -(二苯基亞甲基)-5-氟-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(600 mg，69%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：387.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3R )-5-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(600.0 mg，1.5 mmol)、Pd2 (dba)3 (141.0 mg，0.15 mmol)、t -BuONa (446.0 mg，4.65 mmol)、3-溴吡啶(489.0 mg，3.1 mmol)及BINAP (193.0 mg，0.3 mmol)於甲苯(5.00 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至70%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-5-氟-1'-(吡啶-3-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(700.0 mg，97%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：464.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 在0℃下向N -[(3R )-6-氟-1'-(吡啶-3-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(300.0 mg，0.6 mmol)於MeCN (5.00 mL)及DCM (2.50 mL)中之混合物中添加NBS (114.0 mg，0.6 mmol)，且在0℃下攪拌所得混合物0.5小時。隨後濃縮反應混合物且藉由矽膠層析(石油醚/EtOAc = 30/1至1/1)純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-(6-溴吡啶-3-基)-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-1,1-二苯基甲亞胺(330.0 mg，94%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：544.1 (M+H)+ 。
N -[(3R )-1'-(5- 溴吡嗪 -2- 基 )-6- 氟 -3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FQ
Figure 02_image625
步驟 a ： 將2,5-二溴吡嗪(200.0 mg，0.8 mmol，CAS編號23229-25-6)、(3R )-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(272.0 mg，0.9 mmol，中間物FI)及TEA (580 µL，4.2 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在80℃下攪拌2小時。將溶液冷卻至室溫，且其直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：361.8 (M-NH2 )+ 。步驟 b ： 在15℃下向(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(318.0 mg，0.8 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(383 µL，1.7 mmol)，且在15℃下攪拌反應混合物12小時。反應混合物隨後用水(30 mL)稀釋，且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用H2 O (40 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至10%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(260.0 mg，0.5 mmol，兩個步驟之產率65%)。LC-MS (ESI+ )m/z ：478.9 (M+H)+ 。
N -[(3R )-6- 氟 -1'-(5- 硫基吡嗪 -2- 基 )-3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FR
Figure 02_image627
步驟 a ： 將(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氟-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸(R )-第三丁酯(260.0 mg，0.5 mmol，中間物FQ)、3-硫基丙酸2-乙基己酯(130.0 mg，0.6 mmol，CAS編號50448-95-8)、Pd2 (dba)3 (49.6 mg，0.05 mmol)、XantPhos (62.7 mg，0.11 mmol)及DIPEA (265 µL，1.6 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (20 mL)中且用EtOAc (40 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至15%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-({5-[(3R )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}硫基)2-乙基己基丙酸甲酯(190.0 mg，0.3 mmol，57%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：617.2 (M +H)+ 。步驟 b ： 在-78℃下經10分鐘向3-({5-[(3R )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(188.0 mg，0.3 mmol)於無水THF (1.5 mL)中之混合物中添加t -BuOK (0.9 mL，0.9 mmol，1 M於THF中)，且在N2 氛圍下在-78℃下攪拌所得混合物0.5小時。在-78℃下，反應混合物用DCM (30 mL)稀釋且用HCl/EtOAc (2 N，1 mL)酸化至pH = 6。隨後用H2 O (20 mL)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈紅色油狀物之N -[(3R )-6-氟-1'-(5-硫基吡嗪-2-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(131.0 mg，100%粗產率)。
(1s ,4s )-4-(6- 硫基吡啶 -3- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 酮 ， 中間物 FS
Figure 02_image629
Figure 02_image631
步驟 a ： 將4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)環己-3-烯-1-甲腈(4.5 g，19.3 mmol，CAS編號1310384-20-3)、5-溴-2-甲氧基吡啶(4.0 g，21.2 mmol，CAS編號13472-85-0)、K2 CO3 (5.3 g，38.6 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (1.4 g，1.9 mmol)放入二噁烷(300 mL)及H2 O (30 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在100℃下攪拌反應混合物12小時。隨後濃縮反應混合物並添加H2 O (100 mL)，且用EtOAc (150 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之4-(6-甲氧基吡啶-3-基)環己-3-烯-1-甲腈(3.8 g，17.7 mmol，92%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：215.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將4-(6-甲氧基吡啶-3-基)環己-3-烯-1-甲腈(1.9 g，8.9 mmol)及1-溴-2-(溴甲基)苯(2.4 g，9.7 mmol，CAS編號3433-80-5)溶解於THF (200 mL)中。隨後在-10℃下向混合物中逐滴添加LDA (4.9 mL，9.7 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使混合物升溫至25℃後保持1小時。在-10℃下向混合物中逐滴添加另外的LDA (4.4 mL，8.9 mmol，2 M於THF中)。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後使混合物升溫至25℃後保持1小時。藉由添加飽和NH4 Cl (100 mL)來淬滅經合併之反應混合物。隨後用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之1-[(2-溴苯基)甲基]-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)環己-3-烯-1-甲腈(3.3 g，經合併之產物)。步驟 c ： 將1-[(2-溴苯基)甲基]-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)環己-3-烯-1-甲腈(3.3 g，8.6 mmol)、PdCl2 (AmPhos)2 (304.0 mg，0.4 mmol，CAS編號887919-35-9)及TEA (4.8 mL，34.4 mmol)放入DMA (60 mL)及H2 O (1.2 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在120℃下攪拌反應混合物12小時。濃縮混合物，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(2.3 g，88%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：306.2 (M+H)+ 。步驟 d ： 將4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(2.3 g，7.5 mmol)溶解於MeOH (100 mL)及THF (6 mL)中。隨後添加10% Pd/C (300.0 mg，濕)，且將反應混合物抽成真空並使用H2 再填充3次。隨後在H2 (50 psi)下在25℃下攪拌反應混合物12小時。隨後過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(80 g，乙酸乙酯/石油醚= 0/100至18/100)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1s ,4s )-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(1.02 g，3.3 mmol，44%產率) (LC-MS (ESI+)m/z ：307.9 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.08 (s, 1H), 7.73 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 - 7.56 (m, 2H), 7.42 - 7.37 (m, 2H), 6.73 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.99 (s, 2H), 2.61 - 2.59 (m, 1H), 2.40 - 2.30 (m, 2H), 1.97 (br d,J = 12.4 Hz, 2H), 1.73 - 1.68 (m, 4H)以及呈黃色固體狀之(1r ,4r )-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(0.7 g，2.3 mmol，30%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：307.9 (M+H)+ 。步驟 e ： 向(1s ,4s )-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(1.02 g，3.3 mmol)於DCM (70 mL)中之混合物中添加TMSI (7.1 mL，49.6 mmol)。在50℃下攪拌混合物12小時。隨後用DCM (80 mL)稀釋混合物並添加H2 O (30 mL)。分離經分配之層，且用DCM (40 mL × 2)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。用EtOAc (5 mL)濕磨殘餘物，此時形成沈澱，且藉由過濾收集固體。用EtOAc (1 mL)洗滌濾餅並乾燥，得到呈黃色固體狀之(1s,4s)-4-(6-羥基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(900.0 mg，3.1 mmol，93%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：293.9 (M+H)+ 。步驟 f ： 將(1s ,4s )-4-(6-羥基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(800.0 mg，2.7 mmol)及TEA (5.6 mL，40.8 mmol)溶解於DCM (35 mL)中並添加Tf2 O (3.2 mL，19.0 mmol)。在20℃下攪拌混合物2小時。隨後混合物用DCM (60 mL)稀釋，用H2 O (40 mL)及鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至20/100)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之三氟甲烷磺酸5-[(1s,4s)-3'-側氧基-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-4-基]吡啶-2-基酯(1.02 g，2.4 mmol，89%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：426.0 (M+H)+ 。步驟 g ： 將三氟甲烷磺酸5-[(1s,4s)-3'-側氧基-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-4-基]吡啶-2-基酯(900.0 mg，2.1 mmol)、3-硫基丙酸2-乙基己酯(506.0 mg，2.3 mmol)、XantPhos (244.0 mg，0.4 mmol)、Pd2 (dba)3 (193.0 mg，0.2 mmol)及DIPEA (1.1 mL，6.3 mol)添加至二噁烷(30 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在100℃下攪拌溶液12小時。反應混合物隨後用DCM (50 mL)稀釋，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟管柱層析(40 g管柱，石油醚/EtOAc = 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之3-((5-((1s,4s)-1'-側氧基-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-4-基)吡啶-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(1.45 g，2.9 mmol，經合併之產物)。LC-MS (ESI+)m/z ：494.2 (M+H)+ 。步驟 h ： 將3-((5-((1s,4s)-1'-側氧基-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-4-基)吡啶-2-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(500.0 mg，1.0 mmol)溶解於THF (6 mL)中。將反應混合物冷卻至-78℃，且在N2 下經10分鐘逐滴添加t -BuOK (3.0 mL，1 M於THF中)。在-78℃下攪拌反應混合物30分鐘。隨後在-78℃下，反應混合物用DCM (50 mL)稀釋且用HCl/MeOH (2 N)酸化至pH = 5至6。用H2 O (30 mL × 3)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之(1s ,4s )-4-(6-硫基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(312.0 mg，100%粗產率)。
N -[(3S )-1'-(1- 苯甲基 -6- 側氧基 -5- 硫基 -1,6- 二氫嘧啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯 ， 中間物 FT
Figure 02_image633
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(1-苯甲基-5-碘-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(400.0 mg，0.6 mmol，中間物FC)、Pd2 (dba)3 (59.7 mg，0.06 mmol)、DIPEA (247.0 mg，1.9 mmol)、XantPhos (75.5 mg，0.1 mmol)及3-巰基丙酸2-乙基己酯(283.0 mg，1.3 mmol)於1,4-二噁烷(10.00 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至85%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之3-({1-苯甲基-2-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-5-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(400.0 mg，83%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：703.4 (M+H)+ 。步驟 b ： 將3-({1-苯甲基-2-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-5-基}磺醯基)丙酸2-乙基己酯(400.0 mg，0.5 mmol)溶解於THF (6.00 mL)中。將反應混合物冷卻至-78℃，且在N2 下逐滴添加t -BuOK (3.03 mL，1 M於THF中)。在-78℃下攪拌反應混合物60分鐘。隨後在-78℃下，反應混合物用DCM (50 mL)稀釋且用HCl/MeOH (2 N)酸化至pH = 5至6。用H2 O (30 mL × 3)及鹽水(20 ml)洗滌混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-(1-苯甲基-6-側氧基-5-硫基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(280.0 mg，95%粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：519.1 (M+H)+ 。
(10R )-5- 溴 -8- 氧雜 -1,3,6- 三氮雜三環 [8.4.0.0 2,7 ] 十四 -2(7 ),3,5- 三烯 -12- 酮 ， 中間物 FU
Figure 02_image635
Figure 02_image637
步驟 a ： 向(R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-側氧基哌啶-2-甲酸(90.0 g，370 mmol)於DMF (450 mL)中之經攪拌溶液中添加Cs2 CO3 (133 g，407 mmol)，且在20℃下攪拌混合物10分鐘。隨後向混合物中逐滴添加CH3 I (78.2 g，551 mmol，34.3 mL)，且在20℃下攪拌反應混合物2小時。過濾反應混合物且用乙酸乙酯(500 mL)洗滌濾餅。將濾液傾入H2 O (2.00 L)中且用乙酸乙酯(500 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(500 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之(R)-4-側氧基哌啶-1,2-二甲酸1-(第三丁酯)2-甲酯(92.0 g，88%粗產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 5.13 - 4.85 (m, 1H), 4.11 - 4.04 (m, 1H), 3.75 - 3.56 (m, 4H), 2.78 (s, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.47 (s, 9H)。步驟 b ： 在20℃下向(R)-4-側氧基哌啶-1,2-二甲酸1-(第三丁酯)2-甲酯(92.0 g，358 mmol)於DCM (230 mL)中之經攪拌溶液中添加TFA (354 g，3.11 mol，230 mL)，且在20℃下攪拌混合物2小時。隨後濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀物之(R)-4-側氧基哌啶-2-甲酸甲酯(97.0 g，定量粗產率，TFA)。1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 4.21 - 4.12 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.46 - 3.39 (m, 1H), 3.21 - 3.08 (m, 1H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.15 - 2 .01 (m, 1H), 1.95 - 1.76 (m, 2H)。步驟 c ： 在0℃下向(R)-4-側氧基哌啶-2-甲酸甲酯(80.0 g，295 mmol，TFA)及TEA (149 g，1.47 mol，205 mL)於DCM (400 mL)中之經攪拌溶液中添加CbzCl (75.5 g，442 mmol，62.9 mL)。隨後在15℃下攪拌反應物12小時。接下來，在0℃下添加CbzCl (30.0 mL)且在15℃下攪拌反應混合物2小時。隨後向反應混合物中添加H2 O (1.00 L)，且用DCM (500 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(500 mL × 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1/0至2/1) (石油醚/乙酸乙酯= 2/1，Rf = 0.60)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R)-4-側氧基哌啶-1,2-二甲酸1-苯甲酯2-甲酯(46.0 g，153 mmol，3個步驟之產率50%)。LC-MS (ESI+ )m/z ：291.9 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.38 - 7.36 (m, 5H), 5.24 - 5.02 (m, 3H), 4.17 - 4.13 (m, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 4H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.55 - 2 .51 (m, 2H)步驟 d ： 將(R)-4-側氧基哌啶-1,2-二甲酸1-苯甲酯2-甲酯(41.0 g，141 mmol)、乙烷-1,2-二醇(34.9 g，563 mmol，31.5 mL)及4-甲基苯磺酸(水合物) (2.68 g，14.1 mmol)於甲苯(205 mL)中之溶液加熱至110℃，且在110℃下攪拌2小時，用迪安-斯塔克分水器(Dean-Stark trap)移除水。將反應混合物傾入飽和NaHCO3 水溶液(500 mL)中且用乙酸乙酯(300 mL × 2)萃取。經合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之(R)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-7,8-二甲酸8-苯甲酯7-甲酯(47.2 g，定量粗產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.38 - 7.28 (m, 5H), 5.18 - 5.11 (m, 2H), 5.06 - 4.92 (m, 1H), 4.25 - 4.12 (m, 1H), 4.02 - 3.87 (m, 4H), 3.75 - 3.70 (m, 3H), 3.46 - 3.32 (m, 1H), 2.45 - 2 .36 (m, 2H), 1.89 - 1.64 (m, 2H)。步驟 e ： 在N2 、0℃下向(R)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-7,8-二甲酸8-苯甲酯7-甲酯(48.0 g，143 mmol)於THF (480 mL)中之經攪拌溶液中逐份添加LAH (10.9 g，286 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物2小時。隨後在10℃下用H2 O (10.9 mL)淬滅反應混合物，隨後添加15% NaOH水溶液(10.9 mL)及Na2 SO4 固體(50.0 g)。在20℃下攪拌所得混合物0.5小時。隨後過濾混合物且用乙酸乙酯(500 mL × 2)洗滌濾餅，並濃縮濾液，得到呈淡黃色油狀物之(R)-7-(羥甲基)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸苯甲酯(38.2 g，87%粗產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.38 - 7.29 (m, 5H), 4.70 (s, 2H), 3.99 - 3.94 (m, 4H), 3.85 (dd,J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 3.38 (dd,J = 11.2, 2.0 Hz, 1H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.50 - 2.43 (m, 1H), 2.31 - 2 .27 (m, 1H), 1.95 - 1.88 (m, 1H), 1.80 (td,J = 12.8, 4.4 Hz, 1H), 1.69 - 1.63 (m, 2H)。步驟 f ： 在N2 下向(R)-7-(羥甲基)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸苯甲酯(41.0 g，133 mmol)於MeOH (410 mL)中之經攪拌溶液中添加Pd/C (4.10 g，10 wt%)。將懸浮液真空脫氣且用H2 淨化若干次。在15℃下在H2 (50 psi)下攪拌混合物14小時。隨後過濾反應混合物，且在N2 下向濾液中添加Pd/C (5.00 g，10 wt)。將懸浮液真空脫氣且用H2 淨化若干次。在40℃下在H2 (50 psi)下再次攪拌混合物4小時。過濾反應混合物且濃縮濾液。將殘餘物溶解於MeOH (400 mL)中且在N2 下添加Pd/C (5.00 g，10 wt%)。將懸浮液真空脫氣且用H2 淨化若干次。在50℃下在H2 (50 psi)下攪拌混合物20小時。最後，在N2 下添加Pd(OH)2 (5.00 g，20 wt%)。將懸浮液真空脫氣且用H2 淨化若干次。在50℃下在H2 (50 psi)下攪拌混合物20小時。過濾反應混合物且濃縮濾液，得到呈黃色油狀物之(R)-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-7-基)甲醇(25.0 g，定量粗產率)。1 HNMR (400 MHz, MeOD)：δ 3.96 - 3.93 (m, 4H), 3.61 - 3.59 (m, 2H), 2.89 - 2.85 (m, 1H), 2.53 - 2.47 (m, 1H), 2.37 - 2.32 (m, 1H), 1.81 - 1.76 (m, 2H), 1.71 - 1.67 (m, 2H)。步驟 g ： 向(R)-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-7-基)甲醇(16.5 g，95.3 mmol)及CsF (43.4 g，286 mmol，10.5 mL)於DMSO (120 mL)中之溶液中添加2,3-二溴吡嗪(22.7 g，95.3 mmol)。在130℃下攪拌混合物2.5小時。反應混合物隨後用H2 O (500 mL)稀釋且用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(200 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯= 50/1至1/2，Rf = 0.20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R)-6a,7,9,10-四氫-6H-螺[吡嗪并[2,3-b]吡啶并[1,2-d][1,4]噁嗪-8,2'-[1,3]二氧雜環戊烷] (7.90 g，29.5 mmol，4個步驟之產率26%)。LC-MS (ESI+ )m/z ：250.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.71 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 7.45 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 4.64 - 4.60 (m, 1H), 4.39 (dd,J = 11.2, 2.8 Hz, 1H), 4.14 - 4.10 (m, 1H), 4.01 (s, 4H), 3.62 - 3.56 (m, 1H), 3.00 - 2.93 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 3H), 1.61 - 1.58 (m, 1H)。步驟 h ： 向(R)-6a,7,9,10-四氫-6H-螺[吡嗪并[2,3-b]吡啶并[1,2-d][1,4]噁嗪-8,2'-[1,3]二氧雜環戊烷] (7.90 g，29.5 mmol)於DCM (79.0 mL)中之經攪拌溶液中添加NBS (5.25 g，29.5 mmol)。在15℃下攪拌混合物0.5小時。隨後用鹽水(50.0 mL × 2)洗滌反應混合物。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。在15℃下用100 mL石油醚/乙酸乙酯(20/1)濕磨殘餘物15分鐘。過濾懸浮液，減壓乾燥濾餅，得到呈黃色固體狀之(R)-3-溴-6a,7,9,10-四氫-6H-螺[吡嗪并[2,3-b]吡啶并[1,2-d][1,4]噁嗪-8,2'-[1,3]二氧雜環戊烷] (9.40 g，28.6 mmol，97%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：328.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.80 (s, 1H), 4.55 - 4.38 (m, 1H), 4.40 (dd,J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 4.12 (dd,J = 11.2, 7.6 Hz, 1H), 4.02 - 3.99 (m, 4H), 3.60 - 3.57 (m, 1H), 3.00 - 2.92 (m, 1H), 1.84 - 1.75 (m, 3H), 1.60 - 1.53 (m, 1H)。步驟 i ： 在15℃下向(R)-3-溴-6a,7,9,10-四氫-6H-螺[吡嗪并[2,3-b]吡啶并[1,2-d][1,4]噁嗪-8,2'-[1,3]二氧雜環戊烷] (8.80 g，26.8 mmol)之經攪拌溶液中添加HCOOH (1.29 g，26.8 mmol，44.0 mL)。隨後在40℃下攪拌溶液4小時。隨後濃縮反應混合物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯= 6/1至2/1，Rf = 0.30)純化殘餘物，得到呈黃色膠狀物之(R)-3-溴-6a,7,9,10-四氫吡嗪并[2,3-b]吡啶并[1,2-d][1,4]噁嗪-8(6H)-酮(7.07 g，24.0 mmol，90%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：284.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.87 (s, 1H), 4.87 - 4.82 (m, 1H), 4.53 (dd,J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 4.22 (dd,J = 11.6, 6.0 Hz, 1H), 3.81 - 3.75 (m, 1H), 3.21 - 3.18 (m, 1H), 2.60 - 2.46 (m, 4H)。
N -[(3R ,7'R )-12'- 溴 -3H -9'- 氧雜 -2',11',14'- 三氮雜螺 [1- 苯并呋喃 -2,5'- 三環 [8.4.0.0²,7 ] 十四烷 ]-1'(10'),11',13'- 三烯 -3- 基 ]-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 FV
Figure 02_image639
步驟 a ： 在N2 、-78℃下向2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷(900.0 mg，4.19 mmol，經由中間物AP之步驟a合成)於THF (20.0 mL)中之溶液中添加LDA (2.19 mL，4.39 mmol，2 M)。在-78℃下攪拌反應混合物0.5小時，隨後在-78℃下添加含(10R )-5-溴-8-氧雜-1,3,6-三氮雜三環[8.4.0.02,7 ]十四-2(7 ),3,5-三烯-12-酮(600.0 mg，2.11 mmol，中間物FU)之THF (10.0 mL)。隨後在N2 下在10℃下攪拌反應混合物11.5小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。濃縮經合併之層且用EtOAc:石油醚= 1:1濕磨殘餘物，得到呈黃色固體狀之(10R )-5-溴-12-[2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基]-8-氧雜-1,3,6-三氮雜三環[8.4.0.02,7 ]十四-2(7),3,5-三烯-12-醇(700.0 mg，67.3%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：497.9及499.9 (M+H)+ 。步驟 b ： 在25℃下向(10R )-5-溴-12-[2-(2-氟苯基)-1,3-二噻烷-2-基]-8-氧雜-1,3,6-三氮雜三環[8.4.0.02,7 ]十四-2(7),3,5-三烯-12-醇(700.0 mg，1.40 mmol)於DCM/H2 O (30.0 mL/3.0 mL)中之溶液中添加吡啶(0.5 mL)、Pyr·HBr3 (668.0 mg，2.09 mmol)及TBAB (90.2 mg，280.0 μmol)。在25℃下攪拌反應混合物12小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用DCM (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至35%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(10R )-5-溴-12-(2-氟苯甲醯基)-8-氧雜-1,3,6-三氮雜三環[8.4.0.02,7 ]十四-2(7),3,5-三烯-12-醇(530.0 mg，93%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：407.9及409.9 (M+H)+ 。步驟 c ： 將(10R )-5-溴-12-(2-氟苯甲醯基)-8-氧雜-1,3,6-三氮雜三環[8.4.0.02,7 ]十四-2(7),3,5-三烯-12-醇(500.0 mg，1.22 mmol)及t -BuOK (341.0 mg，3.05 mmol)於二噁烷(15.0 mL)中之溶液在70℃下攪拌2小時。將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至25%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(7'R )-12'-溴-3H -9'-氧雜-2',11',14'-三氮雜螺[1-苯并呋喃-2,5'-三環[8.4.0.02,7 ]十四烷]-1'(10'),11',13'-三烯-3-酮(210.0 mg，44%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：387.9及389.9 (M+H)+ 。步驟 d ： 向(7'R )-12'-溴-3H -9'-氧雜-2',11',14'-三氮雜螺[1-苯并呋喃-2,5'-三環[8.4.0.02,7 ]十四烷]-1'(10'),11',13'-三烯-3-酮(210.0 mg，0.54 mmol)及Ti(OEt)4 (492.0 mg，2.16 mmol)於2-Me-THF (15.0 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(130.0 mg，1.08 mmol)。在N2 下在90℃下攪拌反應混合物12小時。將反應混合物冷卻至室溫，且其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：491.0及493.0 (M+H)+ 。步驟 e ： 在-78℃下向N -[(7'R )-12'-溴-3H -9'-氧雜-2',11',14'-三氮雜螺[1-苯并呋喃-2,5'-三環[8.4.0.02,7 ]十四烷]-1'(10'),11',13'-三烯-3-亞基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(270.0 mg，0.55 mmol)於2-Me-THF (15.0 mL)中之溶液中添加LiBH4 (23.7 mg，1.09 mmol)，且在-78℃下攪拌反應混合物2小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (100.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(4 g，0%至50%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3R ,7'R )-12'-溴-3H -9'-氧雜-2',11',14'-三氮雜螺[1-苯并呋喃-2,5'-三環[8.4.0.02,7 ]十四烷]-1'(10'),11',13'-三烯-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(250.0 mg，92%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：493.0及495.0 (M+H)+ 。
(S )-N -((S )-1'-(2- 溴噻唑 -4- 羰基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺 ， 中間物 FW
Figure 02_image641
步驟 a ： 將2-溴-1,3-噻唑-4-甲酸(200.0 mg，961 µmol)、TEA (671 µL，4.80 mmol)、HATU (547.0 mg，1.44 mmol)及(R)-N-((S)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(352.0 mg，1.15 μmol，經由實例120之步驟a合成)放入DMF (15 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在25℃下攪拌反應混合物1小時。混合物隨後用EtOAc (100 mL)稀釋，且混合物用H2 O (30 mL × 5)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至80%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(S )-N -((S )-1'-(2-溴噻唑-4-羰基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(458 mg，96%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：498.0 (M+H)+ 。
1-(3- 甲氧基苯基 )-1H - 吡唑 -3- 甲酸， 中間物 FX ； 1-(3- 甲氧基苯基 )-1H - 吡唑 -5- 甲酸， 中間物 FY
Figure 02_image643
步驟 a ： 將1H -吡唑-3-甲酸甲酯(500.0 mg，3.96 mmol)、3-甲氧基苯基
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(901.0 mg，5.9 mmol)、Cu(OAc)2 (1.43 g，7.9 mmol)及TEA (2.7 mL，19.7 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物在O2 氛圍下在40℃下攪拌12小時。隨後過濾反應混合物。濃縮濾液，且藉由急驟矽膠層析(80 g管柱，0%至30%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-甲酸甲酯(190 mg，21%產率，較高極性) (LC-MS (ESI+ ) m/z：232.9 (M+H)+ )以及呈黃色固體狀之1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-甲酸甲酯(30.0 mg，3%產率) (LC-MS (ESI+ ) m/z：232.9 (M+H)+ )。步驟 b ： 向1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-甲酸甲酯(190.0 mg，0.82 mmol)於MeOH (3.00 mL)中之混合物中添加含NaOH (327 mg，8.18 mmol)之H2 O (2 mL)。隨後在60℃下攪拌反應混合物1小時。隨後濃縮反應混合物且用水(10 mL)淬滅。用稀HCl (1.2 M)將混合物調整至pH = 5至6，此時形成沈澱。藉由過濾收集固體並真空乾燥，得到呈灰白色固體狀之1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-甲酸(95.0 mg，53%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：218.9 (M +H)+ 。步驟 c ： 向1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-甲酸甲酯(30 mg，0.13 mmol)於MeOH (1.00 mL)中之反應混合物中添加含NaOH (51.5 mg，1.29 mmol)之H2 O (1 mL)。在60℃下攪拌反應混合物1小時。隨後濃縮反應混合物且用水(10 mL)淬滅。用稀HCl溶液(1.2 M)將混合物調整至pH = 5至6，此時形成沈澱。用EtOAc (20 mL × 2)萃取反應混合物。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-甲酸(28.1 mg，0.13 mmol，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：218.9 (M +H)+ 。
1-(2,4- 二氟苯基 )-5- 甲基 - 1H - 吡唑 -3- 甲酸， 中間物 FZ
Figure 02_image645
步驟 a ： 向2,4-二側氧基戊酸乙酯(1.00 g，6.3 mmol)於EtOH (25.0 mL)中之混合物中添加(2,4-二氟苯基)肼鹽酸鹽(1.25 g，7.0 mmol)及AcOH (2.52 mL，44.2 mmol)，且在60℃下攪拌所得混合物12小時。真空濃縮混合物，得到殘餘物，將殘餘物溶解於乙酸乙酯(30.0 mL)中且用飽和NaHCO3 (20.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至25%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-甲酸乙酯(1.00 g，60%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 266.9 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CDCl3)：δ 7.51-7.47 (m, 1H), 7.05-7.00 (m, 2H), 6.76 (s, 1H), 4.46-4.40 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.41 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。步驟 b ： 將1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-甲酸乙酯(400.0 mg，1.5 mmol)及LiOH·H2 O (315.0 mg，7.5 mmol)於MeOH (20.0 mL)及H2 O (8.0 mL)中之混合物在20℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其溶解於H2 O (25.0 mL)中且用2 M HCl調整至pH = 4。隨後用乙酸乙酯(30.0 mL × 2)萃取混合物，且有機相用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色固體狀之1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-甲酸(310 mg，86.8%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 239.0 (M+H)+ 。
2'- 氯 - 3',6'- 二甲基 -3,4'- 聯吡啶，中間物 GA
Figure 02_image647
步驟 a ： 在二噁烷(6 mL)及H2 O (2 mL)中添加2,4-二氯-3,6-二甲基吡啶(300.0 mg，1.7 mmol，CAS編號83791-90-6)、(吡啶-3-基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(271.0 mg，2.2 mmol，CAS編號1692-25-7)、Pd(dppf)Cl2 (124.0 mg，0.2 mmol)、K2 CO3 (715.0 mg，5.1 mmol)之混合物。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在100℃下攪拌反應混合物12小時。將反應混合物傾入H2 O (20 mL)中且用EtOAc (40 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至50%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之2'-氯-3',6'-二甲基-3,4'-聯吡啶(270.0 mg，1.2 mmol，73%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：218.9 (M +H)+ 。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.36 (s, 1H), 9.18 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 8.98 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.40 - 8.37 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 2.83 (s, 3H), 2.46 (s, 3H)。實例：
方法 1 ， 實例 1 及 2 ： 1-(4-{6-[(3R )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 }-1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -1- 基 ) 乙 -1- 酮 (RTX-1084025) 及 (1-(4-{6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 }-1,2,3,4- 四氫喹喏啉 -1- 基 ) 乙 -1- 酮之合成
Figure 02_image649
步驟 a ： 將N -{1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(150.0 mg，237.0 µmol，中間物F)、1-(1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基)乙-1-酮(50.0 mg，284.0 µmol，中間物L)、XantPhos-Pd-G4 (22.7 mg，23.7 µmol)及Cs2 CO3 (155.0 mg，474.0 µmol)於PhMe (10 mL)中之混合物在N2 下在100℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物。藉由矽膠管柱(EtOAc/石油醚= 30至60%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -{1'-[3-(4-乙醯基-1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(130.0 mg，81.2%產率)。步驟 b ： 將N -{1'-[3-(4-乙醯基-1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，176.0 µmol)於TFA (1 mL)及DCM (5 mL)中之溶液在N2 下在20℃下攪拌12小時。隨後將反應混合物傾入飽和NaHCO3 (50 mL)中，且用DCM (30 mL × 2)萃取。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱(MeOH/DCM = 0至10%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-[4-(6-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基]乙-1-酮(85.0 mg，91%純度，89%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 495.2。步驟 c ： 藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H (250 mm×30 mm，5 μm)，移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.1% NH3 ·H2 O)，梯度：保持50% B，流動速率：50 mL/min，管柱溫度：35℃)分離1-[4-(6-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基]乙-1-酮(85.0 mg，171.0 µmol)，得到呈黃色固體狀之1-(4-{6-[(3R )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基)乙-1-酮(32.0 mg，較快溶離之異構體，38%產率) (LCMS m/z [M+H]+ = 495.0，1 HNMR (400 MHz, CDCl3)：δ 8.06 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.22-7.30 (m, 1H), 7.12-7.18 (m, 3H), 6.92-7.08 (m, 2H), 6.73-6.83 (m, 1H), 4.18-4.28 (m, 2H), 4.10-4.17 (m, 2H), 3.90-4.07 (m, 3H), 3.15-3.35 (m, 2H), 3.05 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.69 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.70-1.90 (m, 2H), 1.53-1.60 (m, 1H), 1.30-1.40 (m, 1H)，SFC ee：100%)以及呈黃色固體狀之1-(4-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-1,2,3,4-四氫喹喏啉-1-基)乙-1-酮(35.0 mg，較慢溶離之異構體，41%產率) (LCMS m/z [M+H]+ = 495.0，1 HNMR (400 MHz, CDCl3)：δ 8.06 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.22-7.30 (m, 1H), 7.12-7.18 (m, 3H), 6.92-7.08 (m, 2H), 6.73-6.83 (m, 1H), 4.18-4.28 (m, 2H), 4.10-4.17 (m, 2H), 3.90-4.07 (m, 3H), 3.15-3.35 (m, 2H), 3.05 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.69 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.70-1.90 (m, 2H), 1.53-1.60 (m, 1H), 1.30-1.40 (m, 1H)；SFC ee：98.5%)。
方法 1 表：藉由使 步驟 a 中之各種胺與碘化物交叉偶合 ， 經由方法 1 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0001
 a 步驟a在任何時候皆在80至100℃下進行2至12小時。NaOtBu亦可用作鹼。步驟b進行2至12小時；HCl/MeOH亦可用於去除保護基。以與方法 1 類似之方式合成的化合物 ：
實例 8 、 9 、 10 及 11 ： (1S,2S,5S)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3 ,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) 螺 [ 雙環 [3.1.0] 己烷 -3,4'- 哌啶 ]-2- 胺 ； (1S,2R,5S)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) 螺 [ 雙環 [3.1.0] 己烷 -3,4'- 哌啶 ]-2- 胺 ； (1R,2R,5R)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) 螺 [ 雙環 [3.1.0] 己烷 -3,4'- 哌啶 ]-2- 胺 ； 以及 ((1R,2S,5R)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) 螺 [ 雙環 [3.1.0] 己烷 -3,4'- 哌啶 ]-2- 胺之合成
Figure 02_image651
步驟 a ： 藉由製備型SFC分離1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(40.0 mg，96.0 µmol)。管柱：DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250 mm × 30 mm，5 μm)。條件：0.1% NH3 ·H2 O EtOH。開始B 30%，結束B 30%。流動速率：50 mL/min。獲得呈黃色固體狀之(1S,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(16.0 mg，96 μmol，40%產率)，且獲得呈黃色固體狀之(1R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(16.0 mg，96 μmol，40%產率)。任意指定非對映異構體之絕對立體化學。步驟 b ： 將(1S,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(16.0 mg，38.4 µmol)、(Boc)2 O (8.4 mg，38.4 µmol)及TEA (10.6 µL，76.8 µmol)於DCM (1.0 mL)中之溶液在15℃下攪拌15分鐘。減壓濃縮反應混合物。藉由TLC (乙酸乙酯，1% NH3 ·H2 O)純化殘餘物。獲得呈黃色固體狀之((1S,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(18.0 mg，34.8 µmol，91%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 517.2。步驟 c ： 藉由製備型SFC分離((1S,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(18 mg，34.8 µmol)。管柱：DAICEL CHIRALPAK AD-H (250 mm × 30 mm，5 μm)。條件：0.1% NH3 ·H2 O EtOH。開始B 40%，結束B 40%。流動速率：70 mL/min。獲得呈黃色固體狀之((1S,2S,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(5.00 mg，9.67 µmol，100% ee，R t = 2.584 min)，且獲得呈黃色固體狀之((1S,2R,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(10.0 mg，19.3 µmol，100% ee，R t = 3.266 min)。管柱：Chiralpak AD-3 100 × 4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：A：CO2 ，B：40%乙醇(0.05% DEA)，流動速率：2.8 mL/min，管柱溫度：40℃。步驟 d ： 將((1S,2S,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸酯(5.0 mg，9.7 µmol)於HCl/MeOH (2.0 mL，4 N)中之溶液在15℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之產物(1S ,4S ,5S )-1'-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-4-胺鹽酸鹽(4.3 mg，9.5 µmol，95%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 417.2。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.31 (s, 1H), 8.03-8.06 (m, 2H), 7.55-7.58 (m, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 4.36-4.40 (m, 1H), 4.07-4.10 (m, 2H), 3.26-3.30 (m, 3H), 3.15-3.24 (m, 2H), 2.26-2.34 (m, 2H), 2.17-2.22 (m, 1H), 1.94-1.97 (m, 1H), 1.62-1.80 (m, 5H), 1.47-1.52 (m, 1H), 0.88-0.94 (m, 1H), 0.59-0.63 (m, 1H)。步驟 e ： 將((1S,2R,5S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(10.0 mg，19.3 µmol)於HCl/MeOH (2 mL，4 N)中之溶液在15℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之產物(1S ,4R ,5S )-1'-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-4-胺(7.2 mg，17.2 µmol，76.2%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 417.2。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.32 (s, 1H), 8.03-8.06 (m, 2H), 7.55-7.59 (m, 1H), 4.45-4.53 (m, 2H), 4.07-4.10 (m, 2H), 3.65-6.67 (m, 1H), 3.27-3.30 (m, 2H), 3.14-3.21 (m, 2H), 2.28-2.34 (m, 2H), 2.16-2.22 (m, 1H), 2.01-2.05 (m, 1H), 1.79-1.88 (m, 2H), 1.69-1.73 (m, 2H), 1.54-1.64 (m, 2H), 0.80-0.85 (m, 1H), 0.68-0.73 (m, 1H)。步驟 f ： 將(1R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(16.0 mg，38.4 µmol)、(Boc)2 O (8.8 µL，38.4 µmol)及TEA (10.6 μL，76.8 µmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液在10℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物。藉由TLC (乙酸乙酯，1% NH3 . H2 O)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(18.0 mg，34.8 µmol，90.9%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 517.3。步驟 g ： 藉由製備型SFC分離((1R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(18.0 mg，34.8 µmol)。管柱：Phenomenex-Cellulose-2 (250 mm × 30 mm，5 μm)。條件：0.1% NH3 ·H2 O EtOH。開始B 40%，結束B 40%。流動速率：60 mL/min。獲得呈黃色固體狀之((1R,2R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(6.0 mg，11.6 µmol，34%產率，SFC e.e. = 100.0%，R t = 3.660 min)，且獲得呈黃色固體狀之((1R,2S,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(11.0 mg，21.2 µmol，61%產率，SFC e.e. = 97.3%，R t = 4.290 min)。管柱：Lux Cellulose-2 150 × 4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：A：CO2 ，B：40%乙醇(0.05% DEA)，流動速率：2.8 mL/min，管柱溫度：40℃。步驟 h ： 將((1R,2R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(6.0 mg，11.6 µmol)於HCl/MeOH (2.0 mL，4 N)中之溶液在10℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物，得到產物(1R,2R,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(5.0 mg，10.2 μmol，88%產率，2 HCl鹽)。LCMS m/z [M+H]+ = 417.1；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.32 (s, 1H), 8.04-8.07 (m, 2H), 7.56-7.59 (m, 1H), 4.52-4.55 (m, 1H), 4.37-4.40 (m, 1H), 4.07-4.10 (m, 2H), 3.26-3.30 (m, 3H), 3.18-3.24 (m, 2H), 2.29-2.34 (m, 2H), 2.18-2.21 (m, 1H), 1.94-1.97 (m, 1H), 1.62-1.80 (m, 5H), 1.48-1.52 (m, 1H), 0.89-0.94 (m, 1H), 0.60-0.63 (m, 1H)。步驟 i ： 將((1R,2S,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-基)胺基甲酸第三丁酯(11.0 mg，21.2 µmol)於HCl/MeOH (2.0 mL，4 N)中之溶液在10℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物，得到產物(1R,2S,5R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)螺[雙環[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺(9.3 mg，19.0 μmol，90%產率，2 HCl鹽)。LCMS m/z [M+H]+ = 417.1；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 8.33 (s, 1H), 8.04-8.07 (m, 2H), 7.56-7.59 (m, 1H), 4.45-4.53 (m, 2H), 4.07-4.10 (m, 2H), 3.66-6.67 (m, 1H), 3.28-3.30 (m, 2H), 3.14-3.21 (m, 2H), 2.28-2.34 (m, 2H), 2.16-2.22 (m, 1H), 2.01-2.05 (m, 1H), 1.80-1.89 (m, 2H), 1.69-1.73 (m, 2H), 1.55-1.66 (m, 2H), 0.81-0.86 (m, 1H), 0.70-0.73 (m, 1H)。
方法 2 ， 實例 12 ： 1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H )- 基 ) -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ) -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image653
步驟 a ： 將4-甲基苯-1-磺酸1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基酯(531 mg，1.05 mmol，中間物M)及1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(214 mg，1.05 mmol，中間物E)溶解於DMF (25 mL)中。添加二異丙基乙胺(916 µL，5.25 mmol)，且在110℃下加熱反應混合物16小時。冷卻後，藉由逆相HPLC (0至30%乙腈/HCl水溶液)純化混合物，凍乾後得到1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(12.0 mg，21%產率)。LCMS m/z [M]+ = 537.6。步驟 b ： 將1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺溶解於4 M HCl/二噁烷(200 µL)中，且在60℃下加熱2小時。冷卻後，藉由逆相HPLC (5至10%乙腈/HCl水溶液)純化混合物，得到1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1i -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(6.0 mg，60%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 453.2；1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.57 (br s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.89 (dd, J=1.22, 4.64 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=1.22, 8.30 Hz, 1H), 7.27-7.35 (m, 1H), 7.15-7.21 (m, 1H), 6.95 (dd, J=4.52, 8.42 Hz, 1H), 4.31 (br dd, J=7.20, 12.08 Hz, 2H), 3.93-3.99 (m, 2H), 3.90 (s, 1H), 3.17-3.31 (m, 4H), 3.10 (br d, J=15.87 Hz, 1H), 2.93 (br t, J=6.47 Hz, 2H), 2.69 (br d, J=15.87 Hz, 1H), 2.06 (td, J=6.20, 11.78 Hz, 2H), 1.65-1.85 (m, 2H), 1.53 (br d, J=12.94 Hz, 1H), 1.17 (br d, J=13.43 Hz, 1H)。
方法 2 表：藉由使 步驟 a 中之各種胺與甲苯磺酸酯交叉偶合 ， 經由方法 1 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0002
 a 步驟a在任何時候皆在100至110℃下進行3至16小時。步驟b在任何時候皆在60至80℃下進行1至3小時。b 步驟b後經由SFC分離化合物。條件：管柱：DAICEL CHIRALPAK IC (250 mm×30 mm，10 μm)；移動相：0.1% NH3 ·H2 O，EtOH。開始B：55%，結束B：55%。流動速率：70 mL/min。任意指定對映異構體之絕對立體化學。以與方法 2 類似之方式合成的化合物 ：
實例 19 及 20 ： (R)-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 甲醇及 (S)-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image655
步驟 a ： 將6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基-3-[(4-甲基苯磺醯基)氧基]吡嗪-2-甲酸乙酯(240.0 mg，498.0 µmol，中間物AB)及1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二鹽酸鹽(164.0 mg，597.0 µmol，中間物E)於DIPEA及NMP (4.0 mL/2.0 mL)中之溶液在90℃下攪拌12小時。將溶液傾入H2 O (20.0 mL)中且用EtOAc (20.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g，0%至75%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈橙色油狀物之3-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(350.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 511.1/513.1。步驟 b ： 在N2 、0℃下向3-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(300.0 mg，586.0 µmol)於CH2 Cl2 (5.0 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (878.0 μL，878.0 μmol，1 M)。在20℃下攪拌混合物1小時。在0℃下向混合物中添加10% AcOH (30.0 mL)。隨後用CH2 Cl2 (20.0 mL × 2)萃取混合物，且經合併之有機層用飽和NaHCO3 (30.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (HCl)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇鹽酸鹽(40.0 mg，14%產率)。步驟 c ： 藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H (250 mm × 30 mm，5 μm)，移動相：0.1% NH3 ·H2 O MeOH (開始B：40%，結束B：40%)，流動速率：55 mL/min)分離(3-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇鹽酸鹽(40.0 mg，79.0 mmol)，得到呈白色固體狀之產物(R)-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(7.70 mg，20.8%產率，R t = 3.18分鐘，較快溶離之異構體)以及呈白色固體狀之(S)-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(8.50 mg，22.9%產率，R t = 3.41分鐘，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。(R)-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 469.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：7.52-7.55 (m, 1H), 7.24-7.32 (m, 3H), 7.09-7.13 (m, 3H), 4.59 (s, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.57-3.61 (m, 2H), 3.01-3.14 (m, 3H), 2.68-2.73 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.83-1.94 (m, 2H), 1.51-1.55 (m, 1H), 1.37-1.41 (m, 1H)。SFC：e.e. = 96.2%。(S)-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 469.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：7.64-7.66 (m, 1H), 7.38-7.44 (m, 3H), 7.22-7.25 (m, 3H), 4.71 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.69-3.73 (m, 2H), 3.13-3.26 (m, 3H), 2.80-2.85 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.93-2.07 (m, 2H), 1.63-1.67 (m, 1H), 1.49-1.53 (m, 1H)。SFC：e.e. = 97.3%，管柱：Chiralpak AS-3 100 × 4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：A：CO2 ，B：甲醇(0.1%乙醇胺)，梯度：在4.5分鐘內5%至40% B，且在40%下保持2.5分鐘，隨後5% B持續1分鐘，流動速率：2.8 mL/min，管柱溫度：40℃。
方法 3 ， 實例 21 及 22 ： (3R )-1'-[6- 胺基 -5-(2,3- 二氯苯基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺 及 (3S )-1'-[6- 胺基 -5-(2,3- 二氯苯基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image657
步驟 a ： 將6-氯-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺(150 mg，546 µmol，1.0當量，中間物S)、1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(165 mg，600 µmol，1.1當量，中間物E)及Cs2 CO3 (886 mg，2.72 mmol，5.0當量)於NMP (1 mL)中之混合物在N2 氛圍下在140℃下攪拌2小時。混合物用飽和NaHCO3 (20 mL)稀釋，隨後用EtOAc (20 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(DCM/MeOH = 1:0至20:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之1'-[6-胺基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(150 mg，63%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 440.1。步驟 b ： 藉由SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm × 30 mm，10 μm)；條件：0.1% NH3 ·H2 O EtOH；開始B：50%；結束B：50%；流動速率：70 mL/min)分離殘餘物1'-[6-胺基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(150 mg，340 µmol，1.0當量)，得到呈黃色固體狀之(3R )-1'-[6-胺基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(31.7 mg，21%產率，較快溶離之異構體)，且獲得呈黃色固體狀之(3S )-1'-[6-胺基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(42.6 mg，29%產率，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。(3R )-1'-[6-胺基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵資料：LCMS m/z (M+H)+ = 439.9；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.63-7.59 (m, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.41-7.33 (m, 3H), 7.25-7.21 (m, 3H), 4.26-4.22 (m, 2H), 3.99 (s, 1H), 3.25-3.15 (m, 3H), 2.86-2.81 (m, 1H), 1.92-1.76 (m, 2H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.48-1.43 (m, 1H)。SFC：e.e. = 90.6%，Rt = 5.279分鐘。管柱：Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：40%乙醇(0.1%乙醇胺)/CO2 。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：40℃。(3S )-1'-[6-胺基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵資料：LCMS m/z (M+H)+ = 439.9；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.63-7.60 (m, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.43-7.33 (m, 3H), 7.26-7.21 (m, 3H), 4.26-4.22 (m, 2H), 3.99 (s, 1H), 3.25-3.15 (m, 3H), 2.86-2.81 (m, 1H), 1.92-1.76 (m, 2H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.48-1.43 (m, 1H)。SFC：e.e. = 84.2%，Rt = 7.362分鐘。管柱：Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：40%乙醇(0.1%乙醇胺)/CO2 。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：40℃。
方法 3 表：藉由使 步驟 a 中之各種胺與氯化物偶合 ， 經由方法 3 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0003
 a 許尼希氏鹼用作胺，且在100℃下加熱反應物5小時。由於胺係對掌性的，因此不進行步驟b SFC。b 在步驟a中，TEA用作鹼，且在85℃下加熱混合物12小時。在對掌性分離之前，在室溫下使用HCl/MeOH對THP中間物進行去保護，持續0.5小時。c 在純化前用BOC基團對步驟A後之中間物進行保護，隨後在對掌性分離前用HCl/MeOH進行去保護。d CsF用作步驟a中之鹼，且反應在70℃下進行0.5小時。在處理前用BOC基團對步驟a之中間物進行保護，隨後在最終純化前用HCl/MeOH進行去保護。由於胺係對掌性的，因此沒有步驟b。e 任意指定對映異構體之絕對立體化學。
方法 4 ， 實例 30 ： (S)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-4- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image659
步驟 a ： 向圓底燒瓶中裝入((1S)-4-氟-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.3 g，2.00 mmol，中間物U)、1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(295 mg，2.20 mmol)、甲烷磺酸9-{[5-(二苯基磷烷基)-9,9-二甲基-9H-二苯并哌喃-4-基]二苯基-λ5 -磷烷基}-8-甲基-8-氮雜-9-鈀三環[8.4.0.02,7 ]十四-1(14),2(7),3,5,10,12-六烯-9-基酯(192 mg，0.2 mmol)及(第三丁氧基)鈉(288 mg，3.00 mmol)。將燒瓶抽成真空且用N2 回填三次。隨後添加甲苯(30 mL)且在80℃下攪拌反應物2小時。隨後將反應物冷卻至室溫，並且用EtOAc稀釋且預吸收至矽膠(5 g)上。藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化混合物，得到((1S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.09 g，83%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 655.7。步驟 b ： 將((1S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.09 g，1.66 mmol)溶解於MeOH (15 mL)中並添加鹽酸(4.15 mL，16.6 mmol)，且在60℃下攪拌2小時。濃縮反應物，隨後藉由製備型HPLC (5至30% B，FA)純化，得到(S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(465 mg，60%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 471.46；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 位移 12.59 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.89 (dd, J=1.52, 4.55 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=1.39, 8.46 Hz, 1H), 7.22-7.35 (m, 2H), 7.09 (t, J=8.21 Hz, 1H), 6.96 (dd, J=4.55, 8.34 Hz, 1H), 4.33 (dt, J=4.29, 9.09 Hz, 2H), 4.14 (s, 1H), 3.90-4.00 (m, 2H), 3.17 (br d, J=16.17 Hz, 1H), 2.93 (t, J=6.44 Hz, 2H), 2.85 (br d, J=15.92 Hz, 1H), 2.53 (s, 1H), 2.00-2.13 (m, 2H), 1.66-1.86 (m, 2H), 1.56 (br d, J=13.14 Hz, 1H), 1.34 (br d, J=13.64 Hz, 1H)。
方法 4 表：藉由使 步驟 a 中之各種胺與碘化物交叉偶合 ， 經由方法 4 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0004
 a RuPhos及RuPhos-Pd-G2或RuPhos與Pd2 (dba)3 與Cs2 CO3 或NaOtBu作為鹼，或XantPhos-Pd-G4與Pd2 (dba)3 及Cs2 CO3 亦可用作用於步驟a中之偶合的催化劑系統。步驟a在80至110℃下進行2至16小時。步驟2在MeOH或EtOAc中在25至60℃下進行2至6小時。b 化合物係外消旋的。c 化合物為非對映異構體之混合物。d 在步驟a中使用溴化物而非碘化物。e 在步驟a中使用氯化物而非碘化物。f 在步驟b中使用TFA來進行去保護。g 步驟a使用含Cs2 CO3 及XantPhos-Pd-G4之甲苯，在100℃下持續12小時。對於步驟b，在100℃下使用TFA及TfOH (10:1)持續16小時，來實現去保護。h 步驟a與含BrettPhos-Pd-G3及NaOtBu之甲苯在100℃下進行16小時。i Sphos-G4與含Cs2 CO3 之二噁烷用於步驟a，其在90℃下進行12小時。j 不需要去保護步驟b。k 在步驟a中使用含RuPhos-Pd-G4、RuPhos、Cs2 CO3 及NaI之甲苯，在120℃下持續12小時。l CPhos-Pd-G3用作催化劑，在步驟a中使用含tBuON之甲苯，在90℃下持續12小時。m 在步驟a中，在tBuOH中使用tBuXPhos-Pd-G3與含tBuXPhos及tBuONa之tBuOH，在70℃下持續12小時。n 在步驟b中，在100℃下使用TFA及TfOH來進行去保護。以與方法 4 類似之方式合成的化合物 ：
實例 65 ： 氟硫酸 1-{6-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 }-1,2,3,4- 四氫喹啉 -6- 基酯之 合成
Figure 02_image661
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(400.0 mg，634.0 µmol，中間物J)、乙酸1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯(240.0 mg，1.26 mmol，中間物BI)、XantPhos-Pd-G4 (60.9 mg，63.4 μmol)及Cs2 CO3 (206.0 mg，634.0 μmol)於甲苯(15.0 mL)中之溶液在N2 下在85℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物。混合物用H2 O (80.0 mL)濕磨且用EtOAc (80.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈棕色固體狀之產物乙酸1-{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯(450.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 694.3。步驟 b ： 將乙酸1-{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯(450.0 mg，648.0 µmol)於2 N NaOH/MeOH (10.0 mL/20.0 mL)中之溶液在20℃下攪拌0.5小時。隨後用2 N HCl將反應混合物調整至pH = 5。將反應混合物傾入H2 O (80.0 mL)中且用EtOAc (80.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(60.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到橙色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(24 g管柱，0%至30%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[3-(6-羥基-1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(400.0 mg，95%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 652.2。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[3-(6-羥基-1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(350.0 mg，536.0 µmol)、[(4-乙醯胺基苯基)(氟磺醯基)胺基]磺醯氟(252.0 mg，804.0 µmol，中間物BJ)及DBU (173.0 μL，1.17 mmol)於THF (9.0 mL)中之溶液在20℃下攪拌12小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (50.0 mL)中且用EtOAc (50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至20%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之氟硫酸1-(6-((S )-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯(250.0 mg，64%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 734.2。步驟 d ： 將氟硫酸1-(6-((S )-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基)-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯(230.0 mg，313.0 µmol)於HCl/MeOH (20.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其用MeOH (5.0 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (HCl)純化，得到呈橙色固體狀之氟硫酸1-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基酯鹽酸鹽(115.2 mg，623%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 550.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.30 (s, 1H), 7.52-7.55 (m, 1H), 7.41-7.44 (m, 2H), 7.36-7.39 (m, 1H), 7.17-7.19 (m, 1H), 6.95-7.00 (m, 2H), 4.52-4.56 (m, 1H), 4.40-4.44 (m, 2H), 3.94-3.98 (m, 2H), 3.39-3.52 (m, 2H), 3.19-3.24 (m, 2H), 2.94-2.98 (m, 2H), 2.12-2.16 (m, 2H), 1.81-1.94 (m, 3H), 1.66-1.70 (m, 1H)。
實例 211 ： {3-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image663
步驟 c ： 將3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(100 mg，212 µmol，經由方法4合成，在步驟a中之偶合中使用6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(中間物DN)及1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶，其中Xantphos-Pd-G4及Cs2 CO3 作為反應物；且在室溫下進行步驟b去保護2小時)及LiBH4 (12.0 mg，318 µmol)放入THF (6 mL)及MeOH (4 mL)中。在20℃下攪拌反應混合物12小時。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (HCOOH)純化，得到呈黃色固體狀之{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)吡嗪-2-基}甲醇(4.00 mg，4%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：443.1 (M +H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ 8.68 - 8.44 (m, 1H), 8.68 - 8.42 (m, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.00 (m, 1H), 7.65 (m, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 3H), 7.19 - 7.07 (m, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.28 (s, 1H), 3.89 (m, 2H), 3.52 - 3.36 (m, 2H), 3.22 - 3.08 (m, 4H), 3.05 - 2.96 (m, 3H), 2.20 - 2.10 (m, 2H), 2.07 - 1.92 (m, 2H), 1.74 - 1.59 (m, 2H)。
實例 212 ： {3-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6-(1,2,3,4- 四氫喹啉 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image665
步驟 c ： 將甲基-3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)吡嗪-2-甲酸酯(30 mg，63.8 µmol，經由方法4合成，在步驟a中之偶合中使用甲基-6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸酯(中間物DN)及1,2,3,4-四氫喹啉，其中Xantphos-Pd-G4及Cs2 CO3 作為反應物；且在室溫下進行步驟b去保護0.5小時)及LiBH4 (2.79 mg，127 µmol)放入THF (5 mL)中。在30℃下攪拌反應混合物2小時。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (HCOOH)純化，得到呈黃色固體狀之{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)吡嗪-2-基}甲醇(5.30 mg，HCOOH鹽，17%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：442.1 (M +H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ = 8.56 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 3H), 7.24 - 7.13 (m, 2H), 7.12 - 7.04 (m, 1H), 6.99 - 6.89 (m, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.23 (s, 1H), 3.96 - 3.86 (m, 2H), 3.30 - 3.20 (m, 2H), 3.20 - 3.05 (m, 3H), 3.04 - 2.91 (m, 1H), 2.83 (m, 2H), 2.08 - 1.91 (m, 4H), 1.64 (m, 2H)。
實例 213 ： (S )-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-( 吲哚啉 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image667
步驟 b ： 在N2 、0℃下向3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(2,3-二氫-1H -吲哚-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(178 mg，320 µmol，經由方法4合成，在步驟a中偶合6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(中間物DN)與吲哚啉，在100℃下使用含XantPhos-Pd-G4及Cs2 CO3 之PhMe，持續12小時)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (480 µL，480 µmol，1 M於甲苯中)。在相同溫度下再攪拌溶液2小時。隨後向反應混合物中緩慢添加EtOAc (20 mL)及10% AcOH (50 mL)，隨後用EtOAc (50 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用NaHCO3 水溶液洗滌，接著用鹽水(50 mL × 3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至30/100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-(2,3-二氫-1H -吲哚-1-基)-3-(羥甲基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(64.0 mg，38%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：528.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[5-(2,3-二氫-1H -吲哚-1-基)-3-(羥甲基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，94.7 µmol)溶解於EtOAc (1.00 mL)中。隨後添加HCl/EtOAc (1.00 mL，4 N)，且在10℃下攪拌混合物2小時。減壓濃縮反應混合物。將殘餘物用MeOH (5.0 mL)溶解，且用固體Na2 CO3 調整至pH = 7至8並且藉由製備型HPLC (HCOOH)純化。獲得呈黃色固體狀之(S )-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(吲哚啉-1-基)吡嗪-2-基)甲醇甲酸鹽(31.4 mg，70%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：428.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ 8.55 (s, 1H), 8.26 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.52 (m, 1H), 7.43 - 7.28 (m, 3H), 7.25 - 7.05 (m, 2H), 6.95 - 6.82 (m, 1H), 4.85 - 4.73 (m, 2H), 4.39 (s, 1H), 4.10 (m, 2H), 3.31 - 3.19 (m, 4H), 3.18 - 3.06 (m, 4H), 2.12 - 1.81 (m, 2H), 1.80 - 1.53 (m, 2H)。
實例 214 ： (S)-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-(2,3,4,5- 四氫 -1H- 苯并 [b] 氮呯 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image669
步驟 a ： 將6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(800.0 mg，1.5 mmol)、Xantphos-Pd-G4 (147.0 mg，154 µmol，中間物DN)、Cs2 CO3 (1.00 g，3.08 mmol)及2,3,4,5-四氫-1H -苯并[b ]氮呯(226.0 mg，1.5 mmol，CAS編號1701-57-1)於甲苯(25.00 mL)中之溶液在N2 下在100℃下攪拌12小時。濃縮混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:EtOAc = 100:0至100:20)純化，得到呈綠色油狀物之3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(2,3,4,5-四氫-1H -1-苯并氮呯-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(267.0 mg，30%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：584.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 在N2 、0℃下向3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-(2,3,4,5-四氫-1H -1-苯并氮呯-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(265.0 mg，453 µmol)於THF (10.00 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (679 μL，679 μmol，1 M於甲苯中)。在相同溫度下再攪拌溶液2小時。向反應混合物中緩慢添加EtOAc (20 mL)及10% AcOH (50 mL)，隨後用EtOAc (50 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用NaHCO3 水溶液(50 mL)洗滌，接著用鹽水(50 mL × 3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至20/100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[3-(羥甲基)-5-(2,3,4,5-四氫-1H -1-苯并氮呯-1-基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(166.0 mg，66%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：556.2 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[3-(羥甲基)-5-(2,3,4,5-四氫-1H -1-苯并氮呯-1-基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(90.0 mg，161 µmol)添加至HCl/EtOAc (8.00 mL，4 M)中。在10℃下攪拌混合物2小時。隨後將殘餘物用MeOH (5.00 mL)溶解，且用固體Na2 CO3 調整至pH = 7至8並且藉由製備型HPLC (HCOOH)純化。獲得呈黃色固體狀之(S)-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮呯-1-基)吡嗪-2-基)甲醇甲酸鹽(15.4 mg，19%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：456.1 (M +H)+ ；1 H NMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ = 8.56 (s, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 7.37 - 7.22 (m, 7H), 4.73 (s, 2H), 4.26 (s, 1H), 4.10 - 3.67 (m, 2H), 3.18 - 2.93 (m, 6H), 2.78 - 2.64 (m, 2H), 2.03 - 1.82 (m, 4H), 1.81 - 1.56 (m, 4H)。
方法 5 ， 實例 66 及 67 ： (3R )-1'-[3-(2- 氯 -3- 氟吡啶 -4- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺 及 (3S )-1'-[3-(2- 氯 -3- 氟吡啶 -4- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image671
Figure 02_image673
步驟 a ： 向(2-氯-3-氟吡啶-4-基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(99.9 mg，570.0 µmol)、N -{1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(300.0 mg，475.0 µmol，中間物F)於二噁烷(10.0 mL)及H2 O (1.0 mL)中之溶液中添加Pd(dppf)Cl2 (34.7 mg，47.5 µmol)及Cs2 CO3 (462.0 mg，1.4 mmol)，且在N2 下在100℃下攪拌所得混合物12小時。隨後濃縮反應混合物，用EtOAc (100.0 mL)稀釋，且用H2 O (50.0 mL × 2)及鹽水(50.0 mL)洗滌。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至30%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(1'-(3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(135.0 mg，45%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 634.2。步驟 b ： 將N -{1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(100.0 mg，0.158 mmol)溶解於HCl/MeOH (5.0 mL，4 N)中，且在20℃下攪拌12小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，將其用MeOH (10.0 mL)稀釋且用固體K2 CO3 調整至pH = 8至9。過濾混合物且減壓濃縮，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(MeOH/DCM = 0至8%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(40.0 mg，56%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 430.0。步驟 c ： 藉由製備型對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK IC (250 mm × 30 mm，5 μm)；條件：0.1% NH3 ·H2 O EtOH；開始：50%，結束：50%；流動速率：50 mL/min)分離1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(40.0 mg，88.9 µmol)，得到呈白色固體狀之(3R )-1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(5.70 mg，12.6 µmol，較快溶離之異構體，R t = 4.410分鐘，14%產率，e.e. = 100.0%)以及呈白色固體狀之(3S )-1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(5.20 mg，11.5 µmol，較慢溶離之異構體，R t = 4.957分鐘，13%產率，e.e. = 96.7%)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。(3R )-1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵資料：LCMS m/z (M+H)+ = 450.1；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：8.52-8.60 (m, 1H), 8.32-8.43 (m, 2H), 7.27-7.33 (m, 1H), 7.10-7.23 (m, 1H), 4.28-4.44 (m, 1H), 3.85 (s, 1H), 3.21-3.27 (m, 2H), 3.10 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.65 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.77-1.87 (m, 1H), 1.64-1.76 (m, 1H), 1.50-1.61 (m, 1H), 1.09-1.19 (m, 1H)。SFC：e.e. = 100%，(3S )-1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵資料：LCMS m/z (M+H)+ = 450.1；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：8.55-8.59 (m, 1H), 8.34-8.42 (m, 2H), 7.25-7.33 (m, 1H), 7.12-7.24 (m, 1H), 4.28-4.45 (m, 1H), 3.85 (s, 1H), 3.20-3.28 (m, 2H), 3.10 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.65 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.77-1.89 (m, 1H), 1.65-1.76 (m, 1H), 1.50-1.61 (m, 1H), 1.09-1.19 (m, 1H)。SFC：e.e. = 96.7%。
方法 5 表： 藉由使步驟 a 中之 (1'-(3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 ( 中間物 F) 與 各種
Figure 108109755-A0304-12-02
 酸交叉偶合 ， 經由方法 5 合成之化合物 a 可使用其他鈴木偶合條件，諸如Pd2 (dba)3 、XPhos (30.2 mg，63.4 µmol)及K3 PO4 。步驟b在任何時候皆在室溫下進行1至12小時。任意指定對映異構體之絕對立體化學。b 使用(S)-(1'-(7-溴噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(中間物CW)代替中間物F來進行交叉偶合。化合物係對掌性的，不需要步驟c。以與方法 5 類似之方式合成的化合物 ：
實例 77 及 78 ： (R )-1'-(3-(2- 胺基 -3- 氟吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺、 (S )-1'-(3-(2- 胺基 -3- 氟吡啶 -4- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image675
步驟 a ： 將N -{1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，317.0 µmol，中間物F)、(3-氯-2-氟苯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(82.8 mg，475.0 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (34.7 mg，47.5 µmol)及Na2 CO3 (67.2 mg，634.0 µmol)於二噁烷(10.0 mL)及H2 O (2.0 mL)中之混合物在100℃下攪拌12小時。濃縮混合物，用EtOAc (50.0 mL × 3)萃取且用鹽水(50.0 mL)洗滌。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至15%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -{1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(70.0 mg，35%產率)。LCMS m/z (M+Na)+ = 656.2。步驟 b ： 將N -{1'-[3-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(130.0 mg，204.0 µmol)、Pd2 (dba)3 (18.6 mg，20.4 µmol)、二苯基甲亞胺(55.4 mg，306.0 µmol)、Cs2 CO3 (199.0 mg，612.0 µmol)及BINAP (25.4 mg，40.8 µmol)於甲苯(5.0 mL)中之混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，在100℃下攪拌反應混合物12小時。濃縮經合併之混合物，用EtOAc (50.0 mL × 2)萃取且用鹽水(50.0 mL)洗滌。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物，藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至35%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[1'-(3-{2-[(二苯基亞甲基)胺基]-3-氟吡啶-4-基}-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，62%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 779.4。步驟 c ： 向(1'-(3-(2-((二苯基亞甲基)胺基)-3-氟吡啶-4-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，154.0 µmol)於MeOH (2.0 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH (2.0 mL，4 N)，且在20℃下攪拌混合物12小時。濃縮混合物，得到殘餘物，將其用DCM/石油醚(1/2，5.0 mL × 3)洗滌。真空乾燥固體，得到呈黃色固體狀之1'-(3-(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(70.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 431.1。步驟 d ： 藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H (250 mm×30 mm，5 μm)，移動相：0.1% NH3 ·H2 O EtOH (開始B：55%，結束B：55%)，流動速率：50 mL/min)分離1'-[3-(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(70.0 mg，162.0 µmol)，得到呈白色固體狀之(R )-1'-(3-(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(16.6 mg，R t = 4.631分鐘，較快溶離之異構體)以及呈白色固體狀之(S )-1'-(3-(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(13.8 mg，R t = 5.070分鐘，較慢溶離之異構體)。(R )-1'-(3-(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 431.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.38 (s, 1H), 7.81 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.33-7.41 (m, 2H), 7.16-7.26 (m, 3H), 4.34-4.49 (m, 2H), 3.95 (s, 1H), 3.33-3.45 (m, 2H), 3.17 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.81 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.74-1.96 (m, 2H), 1.57-1.70 (m, 1H), 1.41-1.51 (m, 1H)。SFC：e.e. = 98.7%。(S )-1'-(3-(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 431.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.52 (s, 1H), 7.96 (t,J = 6.2 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H),7.38-7.45 (m, 2H), 7.31-7.38 (m, 1H), 4.52-4.62 (m, 1H), 4.39-4.50 (m, 2H), 3.37-3.55 (m, 2H), 3.23 (s, 2H), 1.90-2.01 (m, 1H), 1.76-1.89 (m, 2H), 1.63-1.74 (m, 1H)。SFC：e.e. = 97.2%，管柱：Chiralpak AS-H 150×4.6 mm I.D.，5 μm，移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5%保持0.5分鐘，隨後5%至40% B持續3.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B持續1.5分鐘，流動速率：3 mL/min，管柱溫度：40℃。
實例 79 ： (3S)-1'-[3-(2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image677
如上文針對實例77所描述，在步驟a中偶合N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(中間物J)與(2,3-二氯吡啶-4-基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸來合成(3S )-1'-[3-(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽。由於胺係對掌性的，因此不需要對掌性分離。分離呈黃色固體狀之(3S )-1'-[3-(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(29.3 mg，54%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 447.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.50 (s, 1H), 7.99 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.46-7.34 (m, 3H), 4.60-4.44 (m, 3H), 3.54-3.41 ( m, 2H), 3.24 (s, 2H), 2.04-1.68 (m, 4H)。SFC：e.e. = 94.0%，R t = 5.008分鐘，管柱：Chiralpak AS-H 150 × 4.6 mm I.D.，5 μm，移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.1%乙醇胺)，梯度：在5%保持0.5分鐘，隨後5%至40% B持續3.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B持續1.5分鐘，流動速率：3 mL/min，管柱溫度：40℃。
方法 6 ， 實例 80 及 81 ： (R)-1'-(5-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 及 (S)-1'-(5-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image679
步驟 a ： 在DMF (20 mL)中添加化合物2,5-二溴吡嗪(500 mg，2.1 mmol)、1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(815 mg，2.5 mmol，中間物E)及TEA (1.5 mL，10.5 mmol)，且在85℃下攪拌混合物12小時。隨後用乙酸乙酯(100 mL)稀釋混合物。混合物用H2 O (20 mL × 3)及鹽水(30 mL × 3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(DCM:MeOH = 100:0至100:5)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(740 mg，98%產率)。步驟 b ： 在二噁烷(10 mL)中添加化合物1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(200 mg，0.5 mmol)、2-胺基-3-氯吡啶-4-硫醇鈉(131 mg，0.7 mmol，中間物AC)、Pd2 (dba)3 (51 mg，0.05 mmol)、XantPhos (64 mg，0.1 mmol)、DIPEA (0.5 mL，2.8 mmol)。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在110℃下攪拌反應混合物12小時。過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:20至100:100，隨後EtOAc:MeOH = 100:5)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1'-{5-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(150 mg，61%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 439.1。步驟 c ： 藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALCEL OD (250 mm×30 mm，10 μm)；移動相：55% MeOH (0.1% NH3 ·H2 O)/CO2 ；流動速率：70 mL/min)分離化合物外消旋-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(150 mg，341 µmol)，得到呈灰白色固體狀之(R )-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(43.5 mg，29%產率，R t = 1.546分鐘，較快溶離之異構體)以及呈灰白色固體狀之(S )-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(46.5 mg，31%產率，R t = 1.982分鐘，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。(R )-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 439.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.23 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.49~7.52 (m, 1H), 7.26~7.28 (m, 1H), 7.09~7.13 (m, 3H), 5.83~5.85 (m, 1H), 4.23~4.27 (m, 2H), 3.88 (s, 1H), 3.24-3.29 (m, 2H), 3.05~3.10 (m, 1H), 2.72~2.77(m, 1H), 1.65~1.81 (m, 2H), 1.51~1.55 (m, 1H), 1.35~1.39 (m, 1H)；SFC：e.e. = 93.6%，R t = 1.546分鐘。(S )-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 439.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.35 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.61~7.64 (m, 1H), 7.38~7.40 (m, 1H), 7.21~7.26 (m, 3H), 5.95~5.97 (m, 1H), 4.35~4.38 (m, 2H), 3.98 (s, 1H), 3.37-3.40 (m, 2H), 3.17~3.22 (m, 1H), 2.82~2.87(m, 1H), 1.77~1.94 (m, 2H), 1.63~1.67 (m, 1H), 1.46~1.50 (m, 1H)。SFC：e.e. = 98.37%，R t = 1.982分鐘。管柱：Chiralcel OD-3 50×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：40%甲醇(0.05% DEA)/CO2 。流動速率：4 mL/min。管柱溫度：40℃。
實例 82 ： (3R)-1'-{5-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 }-7- 氟 -3H- 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image681
步驟 a ： 將(R )-N -[(3R )-7-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(150.0 mg，459 µmol，中間物CA)、2,5-二溴吡嗪(130.0 mg，550 µmol，CAS編號23229-25-6)及TEA (316 μL，2.3 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在80℃下攪拌12小時。混合物用H2 O (25 mL)稀釋，隨後用乙酸乙酯(30 mL × 2)萃取。有機相用鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至60%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-7-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(180.0 mg，81%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 482.9、484.9。步驟 b ： 將(R )-N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-7-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(180.0 mg，372 µmol)、2,3-二氯-4-(鈉硫烷基)吡啶(90.1 mg，446 µmol，中間物AV)、Pd2 (dba)3 (34.0 mg，37.2 µmol)、XantPhos (43.0 mg，74.4 µmol)及DIPEA (182 μL，1.1 mmol)於1,4-二噁烷(10.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在110℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至80%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(3R )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-7-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(150 mg，69%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 582.0。步驟 c ： 將(R )-N -[(3R )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-7-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(140.0 mg，240 µmol)於HCl/MeOH (4 M，10 mL)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3R )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-7-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(84.1 mg，68%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 477.8；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.50 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 8.39 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 8.04 (d,J = 5.6 Hz, 1H),), 7.41 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.30-7.25 (m, 1H), 7.11-7.06 (m, 1H), 6.76 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.79-4.71 (m, 2H), 4.53-4.49 (m, 1H), 3.61-3.48 (m, 2H), 2.26-2.16 (m, 2H), 2.06-1.91 (m, 2H)。以與方法 6 類似之方式合成的化合物 ：
實例 83 及 84 ： (S)-1'-(5-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 及 (S)-1'-(5-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 )-3- 甲基吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image683
Figure 02_image685
Figure 02_image687
步驟 a ： 將(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(600 mg，2.0 mmol，經由實例120之步驟a合成)、2,5-二溴-3-甲基吡嗪(586 mg，2.3 mmol，CAS編號1260672-37-4)及TEA (1.3 mL，9.8 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物在80℃下攪拌2小時。反應混合物用乙酸乙酯(40 mL)稀釋且用H2 O (30 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至70%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-N-((S)-1'-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-溴-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(380 mg，3:1比率之(R)-N-((S)-1'-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺與(R)-N-((S)-1'-(5-溴-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺)。LCMS m/z (M+H)+ = 477.0/479.0。步驟 b ： 將(R)-N-((S)-1'-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-溴-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(350 mg，733 µmol)、3-氯-4-(鈉硫烷基)吡啶-2-胺(160 mg，879 µmol，中間物AC)、Pd2 (dba)3 (67.1 mg，73.3 µmol)、XantPhos (84.4 mg，146 µmol)及DIPEA (391 μmL，2.2 mmol)於二噁烷(15 mL)中之混合物在N2 氛圍下在110℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷= 0%至10%)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之(R)-N-((S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(420 mg)。LCMS m/z (M+H)+ = 557.0。步驟 c ： 將(R)-N-((S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(350 mg，628 µmol)於HCl/MeOH (4 M，5 mL)中之混合物在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺及(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(160 mg，混合物)。步驟 d ： 藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250 mm × 30 mm，5 μm)，移動相：0.1% NH3 ·H2 O MeOH (開始B：40%，結束B：40%)，流動速率：60 mL/min)分離混合物(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺及(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(160 mg)，得到產物呈白色固體狀之(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(99 mg，35%產率，R t = 5.58分鐘，較慢溶離之異構體)以及呈白色固體狀之(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(32.9 mg，12%產率，R t = 4.65分鐘，較快溶離之異構體)。(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 453.0；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.03 (s, 1H), 7.49 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 7.28-7.26 (m, 1H), 7.14-7.09 (m, 3H), 5.71 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.71-4.39 (m, 2H), 4.28-4.23 (m, 2H), 3.86 (s, 1H), 3.07 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.71 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.80-1.64 (m, 2H), 1.54-1.49 (m, 1H), 1.37-1.32 (m, 1H)；SFC：e.e.= 100%。(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 453.0；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.15 (s, 1H), 7.51 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 7.29-7.27 (m, 1H), 7.11-7.09 (m, 3H), 5.88 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.63-3.59 (m, 2H), 3.12-3.01 (m, 3H), 2.69 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.94-1.78 (m, 2H), 1.55-1.52 (m, 1H), 1.39-1.36 (m, 1H)。SFC：e.e.= 95.5%；Chiralcel OJ-3 100 × 4.6 mm I.D.，3 μm；移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)；梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘；流動速率：2.8 mL/min；溫度：35℃。
方法 7 ， 實例 85 及 86 ： (R )-1'-(3-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 及 (S )-1'-(3-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image689
步驟 a ： 向(1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(200 mg，317 µmol，中間物F)及2-胺基-3-氯吡啶-4-硫醇鈉(86.7 mg，475 µmol，中間物AC)於二噁烷(5.0 mL)中之溶液中添加Pd2 (dba)3 (29 mg，31.7 µmol)、XantPhos (36.6 mg，63.4 µmol)及Cs2 CO3 (206.0 mg，634.0 µmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在100℃下攪拌反應物12小時。減壓濃縮反應混合物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:70)且隨後藉由製備型TLC (DCM:MeOH = 10:1)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之產物(1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(120 mg，57%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 663.1。步驟 b ： 將(1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(120 mg，180 µmol)於HCl/MeOH (5.0 mL，4 M)中之溶液在15℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物，得到產物1'-{3-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫烷基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(85 mg，92%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 479.1。步驟 c ： 藉由SFC分離化合物1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(75 mg，156 µmol)，得到各對映異構體粗產物。分離條件：管柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H (250 mm × 30 mm，5 μm)。條件：0.1% NH3 ·H2 O EtOH。開始B 50%，結束B 50%。流動速率：50 mL/min。隨後藉由製備型TLC (二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化各對映異構體。獲得呈白色固體狀之(R )-1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(30.0 mg，40%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 479.1；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 +CD3 OD)：δ 8.20 (s, 1H), 7.45-7.47 (m, 1H), 7.24-7.27 (m, 1H), 7.14-7.21 (m, 3H), 5.86-5.87 (m, 1H), 4.26-4.29 (m, 2H), 3.92 (s, 1H), 3.23-3.28 (m, 2H), 3.02-3.06 (m, 1H), 2.72-2.75 (m, 1H), 1.68-1.82 (m, 2H), 1.58-1.61 (m, 1H), 1.40-1.43 (m, 1H)。SFC：e.e. = 96.2%，R t = 5.272分鐘。獲得呈白色固體狀之(S )-1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(27.0 mg，36%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 479.1；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 +CD3 OD)：δ 8.20 (s, 1H), 7.48-7.50 (m, 1H), 7.27-7.28 (m, 1H), 7.17-7.20 (m, 3H), 5.88-5.89 (m, 1H), 4.25-4.28 (m, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.22-3.28 (m, 2H), 3.03-3.07 (m, 1H), 2.71-2.75 (m, 1H), 1.69-1.84 (m, 2H), 1.58-1.62 (m, 1H), 1.39-1.43 (m, 1H)。SFC：e.e. = 97.8%，R t = 5.808分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1分鐘。流動速率：2.8 mL/min，管柱溫度：40℃。
方法 7 表： 藉由使步驟 a 中之硫鹽與各種溴化物或碘化物交叉偶合 ， 經由方法 7 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0005
 a 步驟a在任何時候皆在100至120℃下進行12小時。步驟b在任何時候皆進行1至12小時。b 由於偶合中使用的溴化物或碘化物係對掌性的，因此不需要SFC步驟c。c 對於經由SFC分離之化合物，任意指定對映異構體之絕對立體化學。d DIPEA用作步驟a中之鹼。e HCl/EtOAc (4 M)用於步驟b中之去保護。f 步驟b在90℃下進行1小時。不需要SFC步驟c；藉由製備型HPLC (HCl)分離非對映異構體，且任意指定絕對立體化學。
方法 8 ， 實例 98 ： (S)-(6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3-(5-( 甲磺醯基 )-3,4- 二氫喹啉 -1(2H)- 基 ) -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image691
步驟 a ： 向可重複密封之反應小瓶中裝入乙酸{6-[(1S)-1-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(100 mg，0.1423 mmol，中間物K)、5-甲烷磺醯基-1,2,3,4-四氫喹啉(33.0 mg，0.1565 mmol)、甲烷磺酸9-{[5-(二苯基磷烷基)-9,9-二甲基-9H-二苯并哌喃-4-基]二苯基-?5-磷烷基}-8-甲基-8-氮雜-9-鈀三環[8.4.0.0²,7]十四-1(14),2(7),3,5,10,12-六烯-9-基酯(13.6 mg，0.01423 mmol)及碳酸二銫(1+) (92.7 mg，0.2846 mmol)。將小瓶抽成真空且用N2 氣體回填3次，隨後添加甲苯(5 mL)且在95℃下攪拌反應物72小時。隨後將反應混合物預吸收至矽膠上且藉由管柱層析(10 g管柱，使用0至100% EA/庚烷)純化，得到乙酸{6-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-(5-甲烷磺醯基-1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(59.0 mg，53%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 786.4。步驟 b ： 將乙酸{6-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-(5-甲烷磺醯基-1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(92 mg，0.117 mmol)溶解於DCM (3 mL)中並添加TFA (1 mL)，且在室溫下攪拌16小時。隨後添加甲苯且濃縮反應混合物。隨後將殘餘物溶解於THF (5 mL)中並添加氫氧化鋰(1+) (1.17 mL，1.17 mmol) (1 N)，且在室溫下攪拌反應混合物2小時。隨後濃縮反應混合物，且將殘餘物溶解於含另外甲酸(65.9 µL，1.75 mmol)之DMSO中。藉由逆相製備型HPLC (使用10至40% B (FA))純化溶液，得到{6-[(3S)-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-(5-甲烷磺醯基-1,2,3,4-四氫喹啉-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲醇(18.0 mg，產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 560.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.86-13.16 (m, 1H), 7.33-7.39 (m, 2H), 7.11-7.24 (m, 5H), 4.54 (s, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.88-3.93 (m, 2H), 3.73-3.81 (m, 2H), 3.21-3.26 (m, 5H), 3.04-3.17 (m, 3H), 2.71 (br d, J=15.87 Hz, 1H), 2.04 (quin, J=6.04 Hz, 2H), 1.81-1.99 (m, 2H), 1.56 (br d, J=12.70 Hz, 1H), 1.27 (br d, J=12.94 Hz, 1H)。
方法 8 表： 藉由使乙酸 (6-((S)-1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3- 碘 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 甲酯 ( 中間物 K) 與 步驟 a 中之各種胺交叉偶合 ， 經由方法 8 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0006
 a 步驟a在95至110℃下進行12至72小時。亦可使用HCl/乙腈或其他溶劑來實現步驟b去保護。b 在步驟a中，在16小時後添加另外的催化劑/鹼，且反應在100℃下再進行16小時。化合物係外消旋的。以與方法 8 類似之方式合成的化合物 ：
實例 104 ： (S)-(6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image693
步驟 a ： 將乙酸{6-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(98.0 mg，0.17 mmol，中間物K)溶解於DCM (2 mL)中並添加TFA (0.5 mL)，且在室溫下攪拌反應混合物16小時，形成中間物乙酸(S)-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲酯。隨後添加甲苯且真空濃縮反應物，隨後添加THF且再次濃縮混合物以移除TFA。接下來，將殘餘物再溶解於2 mL THF及0.5 mL水中，隨後添加LiOH且在室溫下攪拌反應混合物3小時。隨後真空濃縮反應物，且將殘餘物再溶解於含甲酸之DMSO中。藉由製備型HPLC (5至30% ACN/水/FA)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(S)-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲醇。LCMS m/z [M+H]+ = 351.1；1H NMR (500 MHz, DMSO-d6 ) ppm：8.28 - 8.33 (m, 1 H), 8.13 - 8.19 (m, 1 H), 7.37 - 7.43 (m, 1 H), 7.18 - 7.28 (m, 4 H), 4.59 - 4.63 (m, 2 H), 4.06 - 4.12 (m, 1 H), 3.63 - 3.74 (m, 2 H), 3.06 - 3.14 (m, 2 H), 2.75 - 2.82 (m, 1 H), 1.83 - 1.97 (m, 2 H), 1.51 - 1.60 (m, 2 H), 1.33 - 1.41 (m, 2 H)。
方法 9 ， 實例 105 ： (3S )-3- 胺基 -1'-[3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-4- 甲腈之合成
Figure 02_image695
Figure 02_image697
步驟 a ： 將(R )-N -[(1S )-7-氰基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(153.0 mg，0.5 mmol，中間物BH)、1-[6-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基]-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(188.0 mg，0.5 mmol，中間物AA)、TEA (640.0 µL，4.6 mmol)及DMF (4.0 mL)之混合物在85℃下攪拌12小時。濃縮反應混合物且用H2 O (30.0 mL)淬滅。用EtOAc (40.0 mL × 3)萃取反應混合物。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (DCM/CH3 OH = 10/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-3-胺基-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈(217.0 mg，71%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 666.2。步驟 b ： 將(R )-N -[(3S )-4-氰基-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(167.0 mg，0.3 mmol)添加至HCl/MeOH (20.0 mL，4 M)中。在50℃下攪拌反應混合物0.5小時。濃縮經合併之反應混合物，且藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化殘餘物。獲得呈黃色固體狀之(3S )-3-胺基-1'-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈(88.8 mg，61%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 478.0；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.60 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.91 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.64 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 6.97 (t,J = 4.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.09 (m, 3H), 3.97 - 3.94 (m, 2H), 3.44 - 3.41 (m, 2H), 3.10 (d,J = 12.8 Hz, 1H), 2.94 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 2.86 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 2.10 - 2.05 (m, 2H), 1.84 - 1.43 (m, 4H)。
方法 9 表： 藉由使 1-(6- 氯 -1-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 ( 中間物 AA) 與 步驟 a 中之各種胺交叉偶合 ， 經由方法 9 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0007
 a 步驟a在任何時候皆在70至100℃下進行2至12小時。許尼希氏鹼亦可用於步驟a中，且CsF亦可用作添加劑。步驟b在任何時候皆在25至50℃下進行。b 代替中間物AA，(中間物CE)用作步驟a中之偶合搭配物。不需要去保護步驟b。c 在步驟a之後，在純化前用Boc2 O保護中間物；任意指定對映異構體之絕對組態。
方法 9 表 2 ： 藉由使 (S)-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 ( 中間物 I) 與步驟 a 中之 各種氯化物交叉偶合 ， 經由方法 9 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0008
 a 步驟a在任何時候皆在70至100℃下進行2至12小時。許尼希氏鹼亦可用於步驟a中，且CsF亦可用作添加劑。步驟b在任何時候皆在25至50℃下進行。b 在步驟a中，DIPEA用作鹼，且將其在120℃下加熱12小時。在步驟b中，TfOH/TFA用於去保護，其在100℃下進行16小時。c 步驟1於DMF中在80℃下進行12小時，其中Cs2 CO3 作為鹼。d 不需要步驟2去保護。e 用碳酸氫鈉使中間物I游離鹼化，隨後添加2滴NMP且將混合物加熱至140℃後保持4小時。不需要去保護步驟。f DIPEA用作步驟a中之鹼，其在180℃下進行1小時。g 使用含K2 CO3 之IPrOh，在微波、120℃下進行7小時來實現步驟a中之偶合。不需要步驟b，且使用矽膠層析(0至8%之MeOH/DCM)隨後使用製備型HPLC (HCl)純化產物，得到最終產物。h 步驟a在含DIPEA之NMP中在180℃下進行2小時，i 中間物EX而非中間物I用作步驟a中之胺。j 中間物EG而非中間物I用作步驟a中之胺，使用DIPEA作為鹼，於NMP中在130℃下進行1小時而實現。以與方法 9 類似之方式合成的化合物 ：
實例 116 及 117 ： (R)-1- 胺基 -1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 ) -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-4- 甲腈及 (S)-1- 胺基 -1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 ) -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ) -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-4- 甲腈之合成
Figure 02_image699
如上文實例105、方法9中所描述，在步驟a中偶合1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈(中間物BU)與1-[6-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基]-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(中間物AA)來合成(R)-1-胺基-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈及(S)-1-胺基-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈。藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm × 30 mm，10 μm)，移動相：0.1% NH3 ·H2 O IPA (開始B：55%，結束B：55%)，流動速率：70 mL/min)分離3-胺基-1'-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-7-甲腈(100.0 mg)，得到產物呈黃色固體狀之(R)-1-胺基-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈(43.7 mg，R t = 5.24分鐘，較快溶離之異構體)以及呈黃色固體狀之(S)-1-胺基-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈(31.0 mg，R t = 8.44分鐘，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。(R)-1-胺基-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈：LCMS m/z (M+H)+ = 478.2；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.23 (s, 1H), 7.83-7.89 (m, 1H), 7.68 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.29-7.34 (m, 1H), 6.96-7.02 (m, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.34-4.48 (m, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.90-3.97 (m, 2H), 3.34-3.44 (m, 2H), 2.92-3.07 (m, 3H), 2.13-2.25 (m, 2H), 1.78-1.99 (m, 2H), 1.60-1.72 (m, 1H), 1.37-1.49 (m, 1H)。SFC：e.e. = 90.0%。(S)-1-胺基-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲腈：LCMS m/z (M+H)+ = 478.2；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.23 (s, 1H), 7.82-7.90 (m, 1H), 7.68 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.28-7.34 (m, 1H), 6.96-7.04 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.35-4.47 (m, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.89-3.97 (m, 2H), 3.34-3.45 (m, 2H), 2.94-3.08 (m, 3H), 2.13-2.25 (m, 2H), 1.78-1.99 (m, 2H), 1.61-1.71 (m, 1H), 1.38-1.48 (m, 1H)。SFC：e.e. = 99.5%。管柱：Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：40%異丙醇(0.1%乙醇胺)/CO2 ，流動速率：2.8 mL/min，管柱溫度：40℃。
實例 118 及 119 ： (S)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺 及 (R)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image701
Figure 02_image703
步驟 a ： 將3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-酮(100 mg，492 µmol，中間物AP)、1-[6-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基]-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(200 mg，541 µmol，中間物AA)及TEA (148 mg，1.47 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物在80℃下攪拌12小時。反應混合物用乙酸乙酯(50 mL)稀釋且用H2 O (30 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(溶離劑：石油醚:乙酸乙酯= 1:1)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-酮(250 mg，95%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 538.1。步驟 b ： 將1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-酮(230 mg，427 µmol)、AcONH4 (640 mg，8.5 mmol)及NaBH3 CN (26.8 mg，0.42 mmol)於EtOH (15 mL)中之溶液在60℃下攪拌1小時。在20℃下重複2次添加AcONH4 (640 mg，8.5 mmol)及NaBH3 CN (26.8 mg，0.42 mmol)。在60℃下再攪拌反應混合物11小時。將反應混合物傾入H2 O (40 mL)中且隨後用EtOAc (40 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈黃色固體狀之粗產物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(87.0 mg，38%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 539.1。步驟 c ： 向1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(87 mg，161 μmol)於MeOH (5 mL)中之混合物中添加HCl/MeOH (400 μL，4 M)。在20℃下攪拌混合物2小時。真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之1'-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(78.0 mg，99%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 455.0。步驟 d ： 藉由SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AY 250 mm × 30 mm，10 μm；條件：0.1% NH3 ·H2 O ETOH；開始B：45%；結束B：45%；流動速率(ml/min)：70)分離產物外消旋-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-3H -螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(78 mg，158 µmol)，得到呈黃色固體狀之(S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(30.7 mg，43%產率，較快溶離之異構體)，且獲得呈黃色固體狀之(R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(39.2 mg，55%產率，較慢溶離之異構體)。(S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 455.0；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.30 (s, 1H), 7.89-7.88 (m, 1H), 7.42-7.40 (m, 1H), 7.34-7.33 (m, 1H), 7.23-7.22 (m, 1H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.93-6.92 (m, 1H), 6.84-6.82 (m, 1H), 4.51-4.49 (m, 2H), 4.20 (s, 1H), 3.97-3.96 (m, 2H), 3.58-3.48 (m, 2H), 3.08-3.01 (m, 2H), 2.23-2.20 (m, 2H), 2.02-2.00 (m, 2H), 1.88-1.86 (m, 2H)。SFC：e.e.= 96.4%，Rt = 4.82分鐘。(R)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵：LCMS m/z (M+H)+ = 455.0；1 HNMR (400 MHz, MeOD-d 4 )：δ 8.22 (s, 1H), 7.82-7.81 (m, 1H), 7.45-7.39 (m, 2H), 7.38-7.31(m, 1H), 7.03-6.99 (m, 1H), 6.96-6.93 (m, 1H), 6.92-6.89 (m, 1H), 4.85 -4.82 (m, 1H), 4.74-4.66 (m, 2H), 3.90-3.87 (m, 2H), 3.48-3.42 (m, 2H), 3.01-2.98 (m, 2H), 2.14-2.12 (m, 2H), 1.96-1.92 (m, 2H), 1.87-1.82 (m, 2H)。SFC：e.e.= 94.5%，Rt = 7.86分鐘，管柱：Chiralpak IC-3 150×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：40%乙醇(0.05% DEA)/CO2 ；流動速率：2.5 mL/min。管柱溫度：35℃。
方法 10 ， 實例 233 ： (3S )-1'-[5-( 環己基硫烷基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image705
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(5-硫烷基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(65.0 mg，157 µmol，中間物DJ)、碘環己烷(42.8 mg，204 µmol)及K2 CO3 (65.0 mg，471 µmol)於DMF (2.00 mL)中之混合物在N2 下在70℃下攪拌12小時。經合併之反應混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，用H2 O (20 mL × 3)及鹽水(40 mL × 2)洗滌，隨後經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(環己基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(81.0 mg，經合併之產物)。LC-MS (ESI+ )m/z ：517.1 (M+Na)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(環己基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(80.0 mg，161 µmol)於HCl/MeOH (5.00 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (5.00 mL)中，且用固體Na2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8至9。隨後過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[5-(環己基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(23.6 mg，37%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：395.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.17 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 8.09 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 7.42 - 7.34 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 4.21 (td,J = 3.5, 13.5 Hz, 2H), 3.96 (s, 1H), 3.31 - 3.19 (m, 3H), 3.16 (d,J = 15.8 Hz, 1H), 2.80 (d,J = 15.8 Hz, 1H), 2.02 - 1.73 (m, 6H), 1.70 - 1.56 (m, 2H), 1.46 - 1.29 (m, 6H)。
方法 10 表： 藉由使步驟 a 中之各種硫醇與各種碘化物或溴化物交叉偶合 ， 經由方法 10 合成之化合物
Figure 108109755-A0304-0009
 a 藉由對掌性SFC (DAICEL CHIRALCEL OD-H (250 mm×30 mm，5 μm)；移動相：30% EtOH (0.1% NH3 ·H2 O)/CO2 ；流動速率：70 mL/min)分離步驟b之外消旋化合物。任意指定絕對組態。b 步驟a在80℃下進行12小時。c 在步驟a中使用TEA/DMF，在室溫下進行1小時。步驟b使用TFA/TfOH進行去保護，在100℃下進行1小時。d TEA用作步驟a中之鹼。EtAOc用作步驟b中之溶劑。以與方法 10 類似之方式合成的化合物 ：
實例 241 ： (S )-1'-(5-( 環丙基硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image707
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(5-硫烷基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(130.0 mg，315 µmol，中間物DJ)、環丙基
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(134.0 mg，1.57 mmol)、Cu(OAc)2 (114.0 mg，630 µmol)及TEA (261 µL，1.88 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物在O2 下在40℃下攪拌12小時。隨後過濾反應混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(4 g管柱，0%至20%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(環丙基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(42.0 mg，30%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：453.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(環丙基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(40.0 mg，88.3 µmol)於HCl/MeOH (5.00 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。濃縮混合物，得到殘餘物，且將殘餘物溶解於MeOH (3 mL)中。用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 9至10。隨後過濾混合物且藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化濾過物，得到呈黃色固體狀之(S )-1'-(5-(環丙基硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(13.1 mg，42%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：352.9 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.20 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 8.13 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 4.19 (m, 2H), 3.97 (s, 1H), 3.30 - 3.12 (m, 3H), 2.82 (d,J = 15.8 Hz, 1H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 1.97 - 1.72 (m, 2H), 1.61 (m, 1H), 1.45 (m, 1H), 1.09 - 1.00 (m, 2H), 0.72 - 0.63 (m, 2H)。
實例 242 ： (S )-2-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-5-((2,3- 二氯苯基 ) 硫基 )-3- 甲基嘧啶 -4(3H )- 酮之 合成
Figure 02_image709
步驟 a ： 將(1'-(5-碘-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(S )-第三丁酯(75.0 mg，139 µmol，中間物DQ)、XantPhos (16.0 mg，27.8 µmol)、DIPEA (46.1 µL，278 µmol)、Pd2 (dba)3 (12.7 mg，13.9 μmol)及2,3-二氯苯硫酚(29.7 mg，166 µmol，CAS編號17231-95-7)放入二噁烷(4.0 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在100℃下攪拌反應混合物12小時。隨後濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:60)純化，得到呈棕色油狀物之(1'-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(90.0 mg，110%粗產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：587.1 (M +H)+ 。步驟 b ： 將(1'-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(88 mg，149 µmol)於HCl/EtOAc (6.00 mL，4 M)中之混合物在15℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物。將殘餘物用MeOH (5.00 mL)溶解且用固體Na2 CO3 調整至pH = 7至8。隨後過濾混合物且藉由製備型HPLC (HCOOH)純化濾過物，得到呈白色固體狀之(S )-2-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H )-酮(34.0 mg，43%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：487.0 (M +H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d4 ) δ = 8.53 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.52 (m, 1H), 7.45 - 7.29 (m, 4H), 7.15 (m, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.90 - 3.62 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 3.32 - 3.27 (m, 1H), 3.24 - 3.06 (m, 2H), 2.15 - 1.86 (m, 2H), 1.85 - 1.56 (m, 2H)。
實例 243 ： {3-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image711
步驟 a ： 向6-溴-3-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-甲酸(S )-甲酯(3 g，5.79 mmol，中間物DN)及2,3-二氯吡啶-4-硫醇(1.14 g，6.36 mmol，CAS編號1803809-56-4)於二噁烷(30 mL)中之溶液中添加Pd2 (dba)3 (529 mg，579 μmol)、XantPhos (665 mg，1.15 mmol)及DIPEA (3 mL，17.3 mmol)。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在120℃下攪拌反應混合物12小時。隨後減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之3-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-甲酸甲酯(S )-甲酯(1.70 g，48%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：616.1(M + H)+ 。步驟 b ： 在N2 、-78℃下向3-[(3S)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-甲酸甲酯(500 mg，810 µmol)於THF (15 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (806 µL，1.21 mmol，1.5 M於甲苯中)。在相同溫度下再攪拌溶液2小時。隨後在-78℃下藉由10% AcOH水溶液(50 mL)淬滅反應物，且用EtOAc (50 mL × 3)萃取。用飽和NaHCO3 水溶液將經合併之有機層之pH調整至8至9並且分離該等有機層。有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S)-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-甲醯基吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(260 mg，55%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：588.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-(羥甲基)吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120 mg，203 µmol)添加至HCl/MeOH (10 mL，2 M)中。在25℃下攪拌混合物2小時。隨後用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 7至8。過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (4 mL)中。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (FA)純化，得到呈白色固體狀之{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}甲醇甲酸鹽(19.2 mg，18%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z 488.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 ) δ 8.43 (s, 1H), 8.50 - 8.37 (m, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.91 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 7.38 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.31 - 7.16 (m, 3H), 6.73 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.64 - 4.58 (m, 2H), 4.56 - 4.45 (m, 2H), 4.23 (s, 1H), 3.99 - 3.71 (m, 2H), 3.30 - 3.22 (m, 2H), 3.15 - 2.88 (m, 2H), 2.01 - 1.75 (m, 2H), 1.70 - 1.44 (m, 2H)。
實例 244 ： (S )-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-(( 環丙基甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image713
步驟 a ： 將3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-硫烷基吡嗪-2-甲酸甲酯(179.0 mg，380.0 µmol，中間物FB)、(溴甲基)環丙烷(153.0 mg，1.1 mmol)及TEA (260 µL，1.9 mmol)於DMF (5.0 mL)中之混合物在N2 下在70℃下攪拌12小時。經合併之反應混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，用H2 O (20 mL × 3)、鹽水(40 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-甲酸甲酯(230.0 mg，經合併之產物)。LC-MS (ESI+ )m/z ：525.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 在N2 、-78℃下向3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-甲酸甲酯(230.0 mg，438.0 µmol)於THF (15.0 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (873.0 µL，1.3 mmol，1.5 M於甲苯中)。使溶液升溫至20℃並攪拌4小時。在-78℃下用10% AcOH水溶液(20 mL)淬滅反應物，且用EtOAc (30 mL × 3)萃取。用飽和NaHCO3 水溶液將經合併之有機層之pH調整至8至9並且分離該有機層。有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]-3-(羥甲基)吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，23%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：519.1 (M+Na)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]-3-(羥甲基)吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(49.0 mg，98.6 µmol)之混合物溶解於EtOAc (0.5 mL)中。隨後添加HCl/EtOAc (0.5 mL，4 M)且在25℃下攪拌反應物1小時。反應混合物隨後用MeCN (5 mL)稀釋且用固體Na2 CO3 調整至pH = 7至8。添加MeOH (2.00 mL)且過濾混合物，並且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (HCOOH)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(S )-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇甲酸鹽(2.1 mg，5%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：397.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.57 (br d,J = 2.3 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.47 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.37 - 7.24 (m, 3H), 4.70 (s, 2H), 4.25 (s, 1H), 3.56 - 3.40 (m, 2H), 3.20 - 3.09 (m, 5H), 3.04 - 2.94 (m, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.18 - 1.06 (m, 1H), 0.64 - 0.51 (m, 2H), 0.35 - 0.25 (m, 2H)。經由其他方法合成之化合物：
實例 120 ： {3-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ] 吡嗪 -2- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image715
Figure 02_image717
步驟 a ： 將(1S )-1-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.30 g，3.19 mmol，中間物H)於TFA/DCM (3.0 mL/15.0 mL)中之溶液在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用MeOH (20.0 mL)稀釋，用固體Na2 CO3 調整至pH = 9，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2.00 g，粗產物，50%純度)。LCMS m/z [M+H]+ = 307.1。步驟 b ： 將3-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(200.0 mg，1.15 mmol，CAS編號27825-21-4)、(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(772.0 mg，1.26 mmol，50%純度)及CsF (522.0 mg，3.44 mmol)於DMSO (15.0 mL)中之溶液在60℃下攪拌1小時。將反應混合物傾入H2 O (60.0 mL)中且用EtOAc (60.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(40.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到橙色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至65%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之3-[(3S )-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(450.0 mg，89%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 443.1。步驟 c ： 將3-[(3S )-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(450.0 mg，1.01 mmol)於HCl/MeOH (20.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物，得到呈橙色固體狀之產物3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯鹽酸鹽(400.0 mg，定量粗產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 339.1。步驟 d ： 在N2 、0℃下向3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯鹽酸鹽(350.0 mg，933.0 µmol)於DCM (20.0 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (3.73 mL，3.73 mmol，1 M於甲苯中)。在0℃下攪拌反應混合物1小時。用10% AcOH淬滅反應混合物。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈白色固體狀之{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}甲醇(58.2 mg，20%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 311.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.12-8.18 (m, 2H), 7.39-7.42 (m, 1H), 7.21-7.24 (m, 3H), 4.72 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.53-3.57 (m, 2H), 3.11-3.19 (m, 3H), 2.79-2.84 (m, 1H), 1.91-2.05 (m, 2H), 1.61-1.66 (m, 1H), 1.48-1.52 (m, 1H)。
實例 121 及 122 ： (R )-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 甲醇及 (S )-(3-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image719
Figure 02_image721
步驟 a ： 將3-氯-5-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯(250 mg，1.3 mmol，中間物AK)、1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(473 mg，1.7 mmol，中間物E)及CsF (1.0 g，6.6 mmol)於DMSO (15 mL)中之混合物在80℃下攪拌12小時。反應混合物不經進一步純化即直接用於下一步驟。LCMS m/z (M+H)+ = 352.9。步驟 b ： 將3-{3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基}-5-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯(450 mg，1.3 mmol，於步驟a之DMSO中)及(Boc)2 O (548 mg，2.5 mmol)於NaOH水溶液(2 N，30 mL)中之混合物在20℃下攪拌12小時。用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取反應混合物。有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至50%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-(3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯(490 mg，85%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 453.2。步驟 c ： 向LiAlH4 (100 mg，2.6 mmol)於無水THF (10 mL)中之0℃混合物中添加3-(3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯(400 mg，883 µmol)於THF (10 mL)中之溶液，且在此溫度下攪拌所得混合物2小時。用15% NaOH (0.1 mL)淬滅反應混合物並過濾。真空濃縮濾液，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之N -{1'-[3-(羥甲基)-6-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(80 mg，21%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 425.1。步驟 d ： 藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AY-H (250 mm × 30 mm，5 μm)，移動相：0.1% NH3 ·H2 O EtOH (開始B：45%，結束B：45%)，流動速率：70 mL/min)分離化合物N- {1'-[3-(羥甲基)-6-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(80 mg，188 µmol)，得到產物呈白色固體狀之(R)-(1'-(3-(羥甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(35 mg，44%產率，R t = 1.79分鐘，較快溶離之異構體)以及呈白色固體狀之(S)-(1'-(3-(羥甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(37 mg，46%產率，R t = 4.81分鐘，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。兩種對映異構體之LCMS m/z (M+H)+ = 425.1，兩種對映異構體之SFC：e.e.= 100%，Chiralpak AY 150 × 4.6 mm I.D.，3 μm；移動相：40%乙醇(0.05% DEA)/CO2 ；流動速率：2.5 mL/min；溫度：35℃。步驟 e ： 將N -[(3R )-1'-[3-(羥甲基)-6-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(33 mg，77.7 µmol)於HCl/MeOH (4 M，2 mL)中之混合物在15℃下攪拌2小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之產物(R )-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇鹽酸鹽(23.3 mg，90%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 325.0；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.99 (s, 1H), 7.55 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45-7.34 ( m, 3H), 4.93 (s, 2H), 4.47 (s, 1H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.88-3.84 (m, 1H), 3.49-3.38 (m, 2H), 3.21 (d,J = 4.8 Hz, 2H), 2.63 (s, 3H), 2.10-2.03 (m, 1H), 1.97-1.90 (m, 1H), 1.83-1.80 (m, 1H), 1.69-1.65 (m, 1H)。步驟 f ： 將N -[(3S )-1'-[3-(羥甲基)-6-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(37 mg，87.1 µmol)於HCl/MeOH (4 M，2 mL)中之混合物在15℃下攪拌2小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之產物(S )-(3-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇鹽酸鹽(28.7 mg，91%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 324.9；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.00 (s, 1H), 7.55 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.45-7.34 ( m, 3H), 4.92 (s, 2H), 4.46 (s, 1H), 4.01-3.97 (m, 1H), 3.86-3.83 (m, 1H), 3.48-3.37 (m, 2H), 3.21 (s, 2H), 2.62 (s, 3H), 2.09-2.02 (m, 1H), 1.96-1.89 (m, 1H), 1.83-1.80 (m, 1H), 1.69-1.65 (m, 1H)。
實例 123 ： {5- 胺基 -3-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ] 吡嗪 -2- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image723
步驟 a ： 將3,5-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(1.0 g，4.83 mmol)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.65 g，4.83 mmol，中間物I)及CsF (3.66 g，24.1 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物在70℃下攪拌2小時。將Boc2 O (1.57 g，7.24 mmol)及TEA (1 mL)添加至混合物中，且在20℃下攪拌混合物1小時。混合物用H2 O (50 mL)稀釋，用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(50 mL)洗滌,經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，並且藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至5:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(1.58 g，69%產率)以及呈黃色固體狀之3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(320 mg，14%產率)。兩種異構體之LCMS m/z (M+H)+ = 473.1。步驟 b ： 將3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(280 mg，592 µmol)、二苯基甲亞胺(128 mg，710 µmol)、Cs2 CO3 (577 mg，1.77 mmol)、Pd2 (dba)3 (27.1 mg，29.6 µmol)及BINAP (36.8 mg，59.2 µmol)於PhMe (10 mL)中之混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在100℃下攪拌混合物12小時。減壓濃縮反應物。殘餘物用H2 O (20 mL)稀釋且用EtOAc (20 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化殘餘物，得到混合物3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-[(二苯基亞甲基)胺基]吡嗪-2-甲酸甲酯(LCMS m/z (M+H)+ = 618.2)及5-胺基-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(LCMS m/z (M+H)+ = 454.2) (260 mg，兩種異構體之混合物之純度73%)。步驟 c ： 將3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-[(二苯基亞甲基)胺基]吡嗪-2-甲酸甲酯及5-胺基-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(240 mg，73%純度)於HCl/MeOH (4 M，10 mL)中之混合物在25℃下攪拌2小時。減壓濃縮混合物且用MeOH稀釋殘餘物。用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 8。過濾混合物且減壓濃縮濾液。藉由管柱層析(DCM/MeOH = 1:0至10:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之5-胺基-3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(70 mg)。LCMS m/z (M+H)+ = 354.1步驟 d ： 向5-胺基-3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(130 mg，367 µmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加LiAlH4 (139 mg，3.66 mmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。隨後混合物用THF (30 mL)稀釋。添加15% NaOH (0.14 mL)並過濾混合物。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之{5-胺基-3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}甲醇(20.2 mg，17%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 326.2；1 HNMR (400 MHz, 甲醇_d 4 )：δ 7.47 (s, 1H), 7.41-7.38 (m, 1H), 7.23-7.20 (m, 3H), 4.57 (s, 2H), 3.99 (s, 1H), 3.57-3.53 (m, 2H), 3.14-3.08 (m, 3H), 2.81-2.76 (m, 1H), 1.97-1.89 (m, 2H), 1.60-1.56 (m, 1H), 1.47-1.43 (m, 1H)。
實例 124 ： (S)-1'-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
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步驟 a ： 向N-[(3S)-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(500 mg，0.8 mmol，中間物J)及1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(136 mg，1.0 mmol)於甲苯(5.0 mL)中之混合物中添加XantPhos-Pd-G4 (60.4 mg，79.2 µmol)及Cs2 CO3 (514 mg，1.6 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:80)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之產物N-[(3S)-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(460 mg，91%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 637.3。步驟 b ： 向N-[(3S)-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(430 mg，0.7 mmol)於MeCN (2.5 mL)及AcOH (2.5 mL)中之溶液中添加NBS (132 mg，0.7 mmol)。在25℃下攪拌反應物12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:70)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之產物N-[(3S)-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(400 mg，83%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 715.1/717.1。步驟 c ： 向((1S)-1'-(5-溴-3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(400 mg，0.6 mmol)及三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧硼𠮿(76.9 mg，0.6 mmol)於二噁烷(5.0 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物中添加Pd(dppf)Cl2 (40.8 mg，55.8 µmol)及K2 CO3 (153 mg，1.1 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:70)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之產物((1S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-5-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(240 mg，66%產率)。1 HNMR (400 MHz, CDCl3)：8.06-8.07 (m, 1H), 7.82-7.84 (m, 1H), 7.31-7.37 (m, 1H), 7.27-7.26 (m, 3H), 6.99-7.03 (m, 1H), 5.78-5.81 (m, 1H), 5.06-5.10 (m, 1H), 4.70-4.73 (m, 1H), 4.11-4.18 (m, 3H), 3.84-4.00 (m, 2H), 3.74-3.79 (m, 1H), 3.22-3.29 (m, 1H), 3.05-3.11 (m, 3H), 2.81-2.85 (m, 1H), 2.61-2.64 (m, 1H), 2.14-2.25 (m, 4H), 1.90-1.97 (m, 2H), 1.70-1.85 (m, 4H), 1.52 (s, 9H)。步驟 d ： 將N-[(3S)-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(230 mg，0.4 mmol)於HCl/MeOH (10.0 mL，4 M)中之溶液在25℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於MeOH (8.0 mL)中，且藉由逆相製備型HPLC (HCl)純化溶液。獲得呈黃色固體狀之產物(S)-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-5-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(145 mg，82%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 467.2；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d4 )：8.04-8.06 (d, J = 5.6, 1H), 7.93-7.96 (d, J = 8.4, 1H), 7.54-7.58 (m, 2H), 7.40-7.46 (m, 2H), 7.34-7.38 (m, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.08-4.11 (m, 2H), 3.77-3.81 (m, 1H), 3.67-3.71 (m, 1H), 3.24-3.30 (m, 4H), 3.21 (s, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.30-2.37 (m, 2H), 2.07-2.14 (m, 1H), 1.95-2.02 (m, 1H), 1.84-1.87 (m, 1H), 1.70-1.73 (m, 1H)。SFC：e.e. = 98.4%。
實例 125 ： 6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-N,5- 二甲基 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 甲醯胺之合成
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步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250 mg，396 µmol，中間物J)、甲胺鹽酸鹽(534 mg，7.9 mmol)、Pd2 (dppf)Cl2 (28.9 mg，39.6 µmol)及TEA (1.1 mL，7.9 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物在CO氛圍(50 psi)下在80℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其溶解於乙酸乙酯(50 mL)中，隨後用H2 O (25 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至95%)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之N -[(3S )-1'-[3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(210 mg，95%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 562.1。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(210 mg，373 µmol)、NBS (132 mg，746 µmol)於MeCN (10 mL)及AcOH (1 mL)中之混合物在25℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，隨後用飽和NaHCO3 (15 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(5 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至80%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-溴-3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，42%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 640.1。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[5-溴-3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，156 µmol)、三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧硼𠮿(194 mg，1.6 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (11.4 mg，15.6 µmol)及K2 CO3 (43.0 mg，312 µmol)於1,4-二噁烷(10 mL)/H2 O (1 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯作為溶離劑)對其進行純化，得到呈棕色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-甲基-3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，56%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 576.2。步驟 d ： 將N -[(3S )-1'-[5-甲基-3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50 mg，86.8 µmol)於HCl/MeOH (4 M，2 mL)中之混合物在25℃下攪拌1小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-N,5-二甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-甲醯胺鹽酸鹽(15.5 mg，42%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 392.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.55 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45-7.34 (m, 3H), 4.49 (s, 1H), 3.80-3.68 (m, 2H), 3.31-3.21 (m, 4H), 3.07 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.14-1.96 (m, 2H), 1.86-1.83 (m, 1H), 1.73-1.70 (m, 1H)。
實例 126 ： (3S )-1'-{3-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
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步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-{3-羥基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(2.6 g，67%純度，3.12 mmol，中間物BE)、2,3,4-三氯吡啶(682 mg，3.74 mmol)及Cs2 CO3 (3.05 g，9.36 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物在70℃下攪拌12小時。隨後混合物用H2 O (50 mL)稀釋，且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.58 g，72%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 702.1。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，142 µmol)於TFA (5 mL)及TfOH (0.5 mL)中之混合物在20℃下攪拌10小時。減壓濃縮經合併之混合物且用MeOH稀釋殘餘物。用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 8。過濾混合物且藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化濾過物，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(30 mg，44%產率)。LCMS m/z [M+Na]+ = 504.0。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 +甲醇_d 4 )：δ 8.37 (s, 1H), 8.22-8.20 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 7.41-7.39 (m, 1H), 7.28-7.22 (m, 3H), 7.13-7.11 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 4.44-4.43 (m, 2H), 3.99 (s, 1H), 3.42-3.32 (m, 2H), 3.23-3.19 (m, 1H), 2.87-2.82 (m, 1H), 1.93-1.83 (m, 2H), 1.68-1.64 (m, 1H), 1.49-1.45 (m, 1H)。
實例 127 ： (3S)-1'-{3-[(3- 氯 -2- 甲基吡啶 -4- 基 ) 氧基 ]-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
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Figure 02_image737
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，142 µmol，經由實例126之步驟a合成)、三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧硼𠮿(35.6 mg，284 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (10.3 mg，14.2 µmol)及K3 PO4 ·3H2 O (113 mg，425 µmol)於H2 O (0.5 ml)及二噁烷(5 mL)中之混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在100℃下攪拌混合物12小時。隨後減壓濃縮反應混合物且藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至2:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-甲基吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(170 mg，與另一相同反應物之經合併產物)。LCMS m/z [M+H]+ = 682.2。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-甲基吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(150 mg，219 µmol)於TFA (5 mL)及TfOH (0.5 mL)中之混合物在90℃下攪拌0.5小時。隨後減壓濃縮混合物且用MeOH稀釋殘餘物。用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 8。過濾混合物且藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化濾過物，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-甲基吡啶-4-基)氧基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(23.7 mg，23%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 462.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇_d 4 )：δ 8.29 (s, 1H), 8.21-8.19 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 7.39-7.36 (m, 1H), 7.26-7.20 (m, 3H), 6.96-6.94 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.44-4.39 (m, 2H), 3.97 (s, 1H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.21-3.16 (m, 1H), 2.85-2.80 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 1.91-1.80 (m, 2H), 1.65-1.61 (m, 1H), 1.48-1.44 (m, 1H)。
實例 128 ： (S )-4-((6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 ) 氧基 )-3- 氯 -1- 甲基吡啶 -2(1H )- 酮之 合成
Figure 02_image739
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(450 mg，499 µmol，經由實例126之步驟a合成)、Pd2 (dba)3 (46 mg，50 µmol)、t -BuXPhos (43 mg，100 µmol)及KOH (83 mg，1.49 mmol)於二噁烷(5 mL)及H2 O (5 mL)中之混合物在N2 下在100℃下攪拌10小時。隨後用EtOAc (10 mL × 2)萃取反應混合物。經合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至1:2)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(150 mg，44%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 684.1。步驟 b ： 向N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(140 mg，204 µmol)及Cs2 CO3 (199 mg，612 µmol)於DMF (5 mL)中之混合物中添加MeI (70.1 µL，1.12 mmol)。在25℃下攪拌混合物0.5小時。經合併之混合物用H2 O (20 mL)稀釋且用EtOAc (20 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至1:2)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(140 mg)。LCMS m/z [M+H]+ = 698.2。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(130 mg，186 μmol)於TFA (3 mL)及TfOH (0.3 mL)中之混合物在90℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物且用MeOH稀釋殘餘物，隨後用Na2 CO3 調整至pH = 8。藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化混合物，得到呈白色固體狀之(S )-4-((6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基)氧基)-3-氯-1-甲基吡啶-2(1H )-酮(24.2 mg，27%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 477.9；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 +甲醇_d 4 )：δ 8.38 (s, 1H), 7.66-7.63 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.23 (m, 4H), 6.21-6.18 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.48-4.43 (m, 2H), 3.98 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.37-333 (m, 2H), 3.25-3.20 (m, 1H), 2.87-2.82 (m, 1H), 1.90-1.33 (m, 4H)。
實例 129 ： (S )-1'-(5-((6- 胺基 -2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image741
Figure 02_image743
步驟 a ： 將(R )-2-甲基-N -[(3S )-1'-[5-(鈉硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]丙烷-2-亞磺醯胺(550 mg，877 µmol，中間物BR)、N -(4,5,6-三氯吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(866 mg，877 µmol，中間物BQ)及Cs2 CO3 (570 mg，1.8 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物在70℃下攪拌12小時。反應混合物用乙酸乙酯(60 mL)稀釋，用H2 O (40 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至70%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之產物N -[5,6-二氯-4-({5-[(3S )-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}硫烷基)吡啶-2-基]胺基甲酸第三丁酯(330 mg，56%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 677.1。步驟 b ： 將N -[5,6-二氯-4-({5-[(3S )-3-{[(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}硫烷基)吡啶-2-基]胺基甲酸第三丁酯(300 mg，442 µmol)於HCl/MeOH (4 M，10 mL)中之混合物在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物，得到粗產物，用MeOH (3 mL)濕磨該粗產物並過濾，得到呈黃色固體狀之(S )-1'-(5-((6-胺基-2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(167.5 mg，74%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 472.9；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.43 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 8.34 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.44-7.35 (m, 3H), 5.93 (s, 1H), 4.52-4.34 (m, 3H), 3.48-3.36 (m, 2H), 3.24 (s, 2H), 1.97-1.67 (m, 4H)。
實例 130 ： (3S )-1'-{5-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 } -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image745
步驟 a ： 將(R )-2-甲基-N -[(3S )-1'-[5-(鈉硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]丙烷-2-亞磺醯胺(1.2 g，純度：70%，中間物BR)、2,3,4-三氯吡啶(547 mg，2.1 mmol)及Cs2 CO3 (1.2 g，3.8 mmol)於DMF (50 mL)中之混合物在70℃下攪拌2小時。混合物用乙酸乙酯(110 mL)稀釋且用H2 O (100 mL × 2)洗滌。經合併之有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至80%)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(R )-N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(900 mg，84%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 562.0/564.0。步驟 b ： 將(R )-N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(80 mg，142 µmol)於HCl/MeOH (4 M，2 mL)中之混合物在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物，得到粗產物。將殘餘物用MeOH (2 mL)濕磨，過濾且真空濃縮，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(32.1 mg，46%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 457.9；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.44 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.03 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.46-7.35 (m, 3H), 6.73 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.53-4.36 (m, 3H), 3.49-3.37 (m, 2H), 3.24 (s, 2H), 1.96-1.67 (m, 4H)。
實例 131 ： 4-({5-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ] 吡嗪 -2- 基 } 硫烷基 )-3- 氯 -1,2- 二氫吡啶 -2- 酮之 合成
Figure 02_image747
步驟 a ： 將(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(700 mg，1.4 mmol，實例130)、(Boc)2 O (609 mg，2.8 mmol)及TEA (1.0 mL，7.1 mmol)於DCM (20 mL)中之混合物在20℃下攪拌3小時。混合物用H2 O (30 mL)稀釋且用二氯甲烷(30 mL × 3)萃取。經合併之有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至50%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(720 mg，91%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 558.0/560.0。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(700 mg，1.3 mmol)、KOH (210 mg，3.8 mmol)、t -Bu-XPhos (106 mg，250 µmol)及Pd2 (dba)3 (114 mg，125 µmol)於二噁烷(10 mL)及H2 O (10 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。反應混合物用H2 O (40 mL)稀釋且用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。有機相用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯作為溶離劑)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(420 mg，62%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 540.1。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-{5-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(110 mg，203 µmol)於HCl/MeOH (4 M，2 mL)中之混合物在20℃下攪拌1小時。減壓濃縮混合物並凍乾，得到呈黃色固體狀之4-({5-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-3-氯-1,2-二氫吡啶-2-酮鹽酸鹽(87.4 mg，90%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 439.9；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.58 (s, 3H), 8.53 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.60 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.38-7.24 (m, 5H), 5.52 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 4.42-4.29 (m, 3H), 3.30-3.22 (m, 3H), 3.01 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.87-1.75 (m, 2H), 1.60-1.54 (m, 2H)。
實例 132 ： 4-({5-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ] 吡嗪 -2- 基 } 硫烷基 )-3- 氯 -1- 甲基 -1,2- 二氫吡啶 -2- 酮之 合成
Figure 02_image749
步驟 a ： 向N -[(3S )-1'-{5-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250 mg，462 µmol，經由實例131之步驟a至b合成)及Cs2 CO3 (449 mg，1.4 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物中添加MeI (745 μL，11.9 mmol)，在20℃下攪拌所得混合物0.5小時。反應混合物用乙酸乙酯(50 mL)稀釋且用H2 O (40 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯作為溶離劑)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-[(3-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250 mg，98%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 554.0。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{5-[(3-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(240 mg，433 µmol)於HCl/MeOH (4 M，10 mL)中之混合物在20℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，將該殘餘物凍乾，得到呈黃色固體狀之4-({5-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-3-氯-1-甲基-1,2-二氫吡啶-2-酮鹽酸鹽(161 mg，76%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 453.9；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.62 (s, 3H), 8.53 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.61 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.55 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.38-7.28 (m, 3H), 5.59 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.42-4.29 (m, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.30-3.22 (m, 3H), 3.01 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.88-1.77 (m, 2H), 1.61-1.54 (m, 2H)。
實例 133 ： (3S)-1'-{5-[(2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image751
步驟 a ： 向2-溴-5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪(500 mg，1.6 mmol，中間物BS)及(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(570 mg，1.9 mmol，經由實例120之步驟a合成)於甲苯(5.0 mL)中之混合物中添加RuPhos-Pd-G4 (131 mg，0.2 mmol)、RuPhos (144 mg，0.3 mmol)及Cs2 CO3 (1.0 g，3.1 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用水(100.0 mL)稀釋且用乙酸乙酯(200.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用H2 O (100.0 mL)及鹽水(100.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:60)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(R )-N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(220 mg，26%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 546.0。步驟 b ： 向(R )-N -((S )-1'-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(220 mg，0.4 mmol)及二苯基甲亞胺(134 µL，0.8 mmol)於甲苯(5.0 mL)中之混合物中添加Pd2 (dba)3 (36.7 mg，40.2 µmol)、BINAP (50.0 mg，80.4 µmol)及Cs2 CO3 (261 mg，0.8 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:70)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R )-N -((S )-1'-(5-((3-氯-2-((二苯基亞甲基)胺基)吡啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(170 mg，61%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 691.1。步驟 c ： 將(R )-N -[(3S )-1'-[5-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}氧基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(150 mg，0.2 mmol)於HCl/MeOH (5.0 mL，0.5 M)中之溶液在25℃下攪拌1小時。藉由製備型HPLC (HCl)純化反應混合物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-{5-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(85.0 mg，86%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 423.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.16-8.17 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.86-7.88 (d,J = 7.2, 1H), 7.53-7.55 (d, J = 7.6, 1H), 7.40-7.45 (m, 2H), 7.34-7.38 (m, 1H), 7.65-7.67 (d, J = 7.2, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.35-4.39 (m, 1H), 4.21-4.25 (m, 1H), 3.37-3.41 (m, 1H), 3.30-3.32 (m, 1H), 3.17-3.26 (m, 2H), 1.77-1.99 (m, 3H), 1.64-1.67 (m, 1H)。
實例 134 ： (3S )-1'-{5-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ] 吡嗪 -2- 基 } -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image753
步驟 a ： 將(R )-N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(90 mg，0.2 mmol，經由實例133之步驟a合成)於HCl/MeOH (5.0 mL，0.5 M)中之溶液在25℃下攪拌0.5小時。完成後，用固體K2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8。過濾反應物且藉由製備型HPLC (NH3 .H2 O)純化濾過物，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(30 mg，41%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 442.0；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：8.08-8.10 (d,J = 5.6, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.25-7.27 (m, 1H), 7.14-7.17 (m, 3H), 6.77-6.79 (d,J = 5.6, 1H), 4.01-4.09 (m, 2H), 3.93 (s, 1H), 3.09-3.19 (m, 2H), 3.00-3.04 (m, 1H), 2.65-2.69 (m, 1H), 1.79-1.86 (m, 1H), 1.69-1.76 (m, 1H), 1.55-1.59 (m, 1H), 1.31-1.35 (m, 1H)。
實例 135 ： 4-({6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 } 氧基 )-3- 氯 -1,2- 二氫吡啶 -2- 酮之 合成
Figure 02_image755
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250 mg，355 µmol，經由實例126之步驟a合成)、Pd2 (dba)3 (33 mg，36 µmol)、t -BuXPhos (30 mg，71 µmol)及KOH (59 mg，1.1 mmol)於二噁烷(5 mL)及H2 O (5 mL)中之混合物在N2 下在100℃下攪拌10小時。隨後用EtOAc (10 mL × 2)萃取反應混合物。有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至1:2)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(180 mg，74%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 684.1。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(3-氯-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(160 mg，233 µmol)於TFA (3 mL)及TfOH (0.5 mL)中之混合物在90℃下攪拌0.5小時。減壓濃縮混合物且用MeOH稀釋殘餘物，用Na2 CO3 調整至pH = 8。藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化混合物，得到呈白色固體狀之4-({6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}氧基)-3-氯-1,2-二氫吡啶-2-酮(24.2 mg，22%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 464.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.43 (s, 1H), 7.37-7.29 (m, 2H), 7.19-7.16 (m, 3H), 5.98-5.96 (m, 1H), 4.38-4.30 (m, 2H), 3.84 (s, 1H), 3.18-3.08 (m, 3H), 2.67-2.62 (m, 1H), 1.83-1.53 (m, 3H), 1.15-1.11 (m, 1H)。
實例 136 及 137 ： rel-(R )-1'-(3-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ) -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ) -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 及 rel-(S )-1'-(3-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ) -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ) -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image757
步驟 a ： 將N -[(第三丁氧基)羰基]-N -(1'-{3-羥基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(500 mg，80%純度，609 µmol，中間物BV)、2,3,4-三氯吡啶(133 mg，730 µmol)及Cs2 CO3 (593 mg，1.82 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物在100℃下攪拌24小時。混合物用H2 O (20 mL)稀釋且用EtOAc (20 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -(1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(160 mg，37%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 702.2。步驟 b ： 將N -(1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)胺基甲酸第三丁酯(140 mg，199 µmol)、Pd2 (dba)3 (18.2 mg，19.9 µmol)、二苯基亞胺(43.1 mg，238 µmol)、Cs2 CO3 (194 mg，597 µmol)及BINAP (24.7 mg，39.8 µmol)於PhMe (10 mL)中之混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。隨後在100℃下攪拌反應混合物12小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之N -{1'-[3-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}氧基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(120 mg，71%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 847.2。步驟 c ： 將N -{1'-[3-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}氧基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基}胺基甲酸第三丁酯(110 mg，129 µmol)於TFA (3 mL)及TfOH (0.3 mL)中之混合物在20℃下攪拌5小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(DCM/MeOH = 1:0至10:1)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之1'-{3-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(35.0 mg，59%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 463.1。步驟 d ： 藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250 mm × 30 mm，5 μm)；條件：0.1% NH3 ·H2 O MeOH；開始B 40%；結束B 40%；流動速率：50 mL/min)分離1'-{3-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(30 mg，64.8 µmol)。獲得呈白色固體狀之產物rel-(R )-1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(10 mg，33%產率，較快溶離之異構體)，且獲得呈白色固體狀之產物rel-(S )-1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(10 mg，33%產率，較慢溶離之異構體)。任意指定對映異構體之絕對立體化學。rel-(R )-1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 463.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇_d 4 )：δ 8.32 (s, 1H), 7.73-7.75 (d,J = 6 Hz, 1H), 7.40-7.42 (m, 1H), 7.21-7.29 (m, 3H), 6.27-6.29 (d,J = 6 Hz, 1H), 4.42-4.47 (m, 2H), 4.06 (s, 1H), 3.36-3.44 (m, 2H), 3.19-3.23 (m, 1H), 2.90-2.94 (m, 1H), 1.80-1.93 (m, 2H), 1.64-1.67 (m, 1H), 1.52-1.55 (m, 1H)。SFC：e.e. = 99.5%，R t = 4.992分鐘。rel-(S )-1'-(3-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 463.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇_d 4 )：δ 8.32 (s, 1H), 7.73-7.75 (d,J = 6 Hz, 1H), 7.38-7.40 (m, 1H), 7.21-7.28 (m, 3H), 6.27-6.29 (d,J = 6 Hz, 1H), 4.42-4.47 (m, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.36-3.44 (m, 2H), 3.18-3.22 (m, 1H), 2.84-2.88 (m, 1H), 1.79-1.94 (m, 2H), 1.63-1.67 (m, 1H), 1.47-1.51 (m, 1H)。SFC：e.e. = 96.6%，R t = 5.265分鐘。管柱：Chiralcel OJ-H 150 × 4.6 mm I.D.，5 μm。移動相：A：CO2 ，B：甲醇(0.05% DEA)。梯度：在5%保持0.5分鐘，隨後5%至40% B持續3.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：3 mL/min。管柱溫度：40℃。
實例 138 ： (S)-N4-(6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 )-3- 氯吡啶 -2,4- 二胺之合成
Figure 02_image759
步驟 a ： 將((1S)-1'-(3-碘-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(350.0 mg，555.0 µmol，來自中間物J)、2,3-二氯吡啶-4-胺(135.0 mg，832.0 µmol，CAS編號184416-83-9)、XantPhos-Pd-G4 (47.6 mg，55.4 µmol)及Cs2 CO3 (270.0 mg，832.0 µmol)於PhMe (10 mL)中之混合物在100℃下攪拌12小時。濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱(EtOAc/石油醚= 0至30%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N-[(3S)-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)胺基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，54%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 665.1。步驟 b ： 將N-[(3S)-1'-{3-[(2,3-二氯吡啶-4-基)胺基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(180.0 mg，270.0 µmol)、Ph2 C=NH (73.4 mg，405.0 µmol)、Cs2 CO3 (177.0 mg，540.0 µmol)、Pd2 (dba)3 (24.7 mg，27.0 µmol)及BINAP (33.6 mg，54.0 µmol)於PhMe (10 mL)中之混合物在N2 下在100℃下攪拌12小時。濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱(EtOAc/石油醚= 0至30%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N-[(3S)-1'-[3-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}胺基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，55%產率)。LCMS m/z (M+H- Ph2 C)+ = 646.2。步驟 c ： 將N-[(3S)-1'-[3-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}胺基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，148.0 µmol)於4 M HCl/MeOH (10.0 mL)中之溶液在25℃下攪拌1小時。濃縮反應混合物且將其溶解於MeOH (5 mL)中，並且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(S)-N4-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-3-氯吡啶-2,4-二胺(23.0 mg)。藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H 250 mm×30 mm，5 μm；移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.1% NH3 ·H2 O)；梯度：保持50% B；流動速率：50 mL/min；管柱溫度：35℃)分離(S)-N4-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-3-氯吡啶-2,4-二胺(e.e. = 70%)。由於引入了一些雜質，因此藉由製備型HPLC (HCl)再次純化產物，得到呈黃色固體狀之(S)-N4-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-3-氯吡啶-2,4-二胺二鹽酸鹽(8.0 mg)。LCMS m/z [M+H]+ = 462.1。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.40 (s, 1H), 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35-7.45 (m, 3H), 7.17 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.40-4.60 (m, 3H), 3.40-3.55 (m, 2H), 3.24 (s, 2H), 1.65-2.00 (m, 4H)；SFC：e.e. = 98.8%，Rt = 3.501分鐘。管柱：AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm；移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)；等度：40% B；流動速率：2.8 mL/min；管柱溫度：35℃。
實例 139 ： (S)-1'-(5-((2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-4- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image761
步驟 a ： 在DMF (0.23 M，17 mL)中添加2,5-二溴吡嗪(1.02 g，4.31 mmol)、(3S)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.15 g，3.92 mmol，中間物T)及TEA (2.69 mL，19.5 mmol)。在85℃下攪拌混合物12小時。向反應混合物中添加EtOAc及鹽水，且用EtOAc萃取溶液(3×)。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。藉由管柱層析(0至20% MeOH/DCM + 0.1% NH4 OH)純化殘餘物，得到(S)-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(1.36 g，84%產率)。LCMS m/z [M]+ = 377.3。步驟 b ： 將(3S)-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-7-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(1.36 g，3.60 mmol)、3-氯-4-(鈉硫烷基)吡啶-2-胺(657 mg，3.60 mmol，中間物AC)及Pd-Xantphos-G4 (346 mg，0.3600 mmol)放入微波小瓶中，且將其抽成真空並用氮氣回填。添加DIPEA (3.13 mL，18.0 mmol)及二噁烷(15 mL)，且將反應物在微波中加熱至110℃後保持16小時。反應物經由矽藻土過濾，且用EtOAc沖洗並濃縮。藉由管柱層析(100 g管柱，0至20% MeOH/DCM + 0.1% NH4 OH)純化殘餘物。藉由逆相HPLC (5至40% ACN/水+ 0.1%甲酸)再純化物質，得到(S)-1'-(5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(173 mg，10%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 457.3；1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.46 (d, J=0.78 Hz, 1 H), 8.27 - 8.30 (m, 1 H), 8.23 - 8.27 (m, 1 H), 7.65 (d, J=5.19 Hz, 1 H), 7.24 - 7.30 (m, 1 H), 7.19 - 7.24 (m, 1 H), 7.00 - 7.07 (m, 1 H), 5.75 - 5.89 (m, 1 H), 4.22 - 4.35 (m, 2 H), 4.03 (s, 1 H), 3.21 - 3.31 (m, 2 H), 3.14 (d, J=16.08 Hz, 1 H), 2.77 (d, J=15.82 Hz, 1 H), 1.74 - 1.81 (m, 1 H), 1.65 - 1.73 (m, 1 H), 1.52 - 1.59 (m, 1 H), 1.26 - 1.32 (m, 1 H)。
實例 140 ： (S )-1'-(5-( 二氟甲基 )-3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H )- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image763
Figure 02_image765
步驟 a ： 將((1S )-1'-(3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.50 g，2.37 mmol，中間物J)、1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(381.0 mg，2.84 mmol)、XantPhos-Pd-G4 (227.0 mg，237.0 μmol)及Cs2 CO3 (1.54 g，4.74 mmol)於PhMe (50.0 mL)中之溶液在N2 下在100℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (200.0 mL)中且用EtOAc (200.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到棕色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至65%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之((1S )-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.20 g，80%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 637.2。步驟 b ： 在20℃下向((1S )-1'-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(1.20 g，1.88 mmol)於MeCN/AcOH (30.0 mL/30.0 mL)中之溶液中逐份添加NBS (334.0 mg，1.88 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用飽和NaHCO3 (150.0 mL)濕磨且用EtOAc (150.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至60%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.25 g，93%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 715.1/717.1。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.25 g，1.74 mmol)、乙烯基三氟硼酸鉀(466.0 mg，3.48 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (254.0 mg，348.0 μmol)及K3 PO4 ·3H2 O (2.60 g，5.22 mmol)於i-PrOH/H2 O (20.0 mL/2.0 mL)中之溶液在N2 下在100℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (200.0 mL)中且用EtOAc (200.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(150.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到棕色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至75%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-乙烯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.00 g，87%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 663.2。步驟 d ： 在20℃下向N -[(3S )-1'-[5-乙烯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.00 g，1.50 mmol)於丙酮/H2 O (21.0 mL/7.0 mL)中之溶液中添加K2 OsO4 ·2H2 O (55.2 mg，150.0 μmol)及NaIO4 (963.0 mg，4.50 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時。過濾反應混合物且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至70%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-甲醯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(520.0 mg，52%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 665.2。步驟 e ： 在N2 、0℃下向N -[(3S )-1'-[5-甲醯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，376.0 µmol)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加DAST (303.0 mg，1.88 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物1小時。反應混合物用H2 O (30.0 mL)淬滅且用DCM (20.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到棕色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至70%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈橙色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-(二氟甲基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，19%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 687.2。步驟 f ： 將N -[(3S )-1'-[5-(二氟甲基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，72.8 µmol)於HCl/MeOH (3.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌2小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用MeOH (3.0 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (HCl)純化。獲得呈黃色固體狀之產物(S )-1'-(5-(二氟甲基)-3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(4.30 mg，11%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 503.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.31-8.34 (m, 1H), 8.10-8.12 (m, 1H), 7.61-7.64 (m, 1H), 7.54-7.57 (m, 1H), 7.36-7.44 (m, 3H), 6.86-7.12 (m, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.21-4.25 (m, 2H), 3.71-3.86 (m, 2H), 3.36-3.43 (m, 2H), 3.29-3.31 (m, 2H), 3.21 (s, 2H), 2.31-2.37 (m, 2H), 2.11-2.13 (m, 1H), 2.01-2.10 (m, 1H), 1.83-1.87 (m, 1H), 1.69-1.73 (m, 1H)。
實例 141 及實例 142 ： (R)-1-(6-((S)-1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 乙 -1- 醇及 (S)-1-(6-((S)-1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -5- 基 ) 乙 -1- 醇之合成
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Figure 02_image769
步驟 a ： 在N2 、20℃下向N -[(3S )-1'-[5-甲醯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(260.0 mg，391.0 µmol，經由實例140之步驟a至d合成)於THF (10.0 mL)中之溶液中添加MeMgBr (390.0 μL，1.17 mmol，3 M於THF中)。在20℃下攪拌反應混合物3小時。反應混合物用H2 O (30.0 mL)淬滅且用EtOAc (50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到棕色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至85%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(1-羥乙基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，75%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 681.2。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(1-羥乙基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，293.0 µmol)於TFA/DCM (5.0 mL/5.0 mL)中之溶液在30℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物。殘餘物用MeOH (5.0 mL)稀釋，用固體Na2 CO3 調整至pH = 9，且藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之1-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}乙-1-醇(40.0 mg，28%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 497.1。步驟 c ： 藉由製備型SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm × 30 mm，10 μm)，移動相：0.1% NH3 ·H2 O ETOH (開始B：40%，結束B：40%)，流動速率：70 ML/MIN)分離1-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}乙-1-醇(40.0 mg，80.5 µmol)，得到呈黃色固體狀之(R)-1-(6-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)乙-1-醇(9.6 mg，24%產率，R t = 3.92分鐘，較快溶離之異構體)以及呈黃色固體狀之(S)-1-(6-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)乙-1-醇(10.5 mg，26%產率，R t = 4.74分鐘，較慢溶離之異構體)。任意指定非對映異構體之絕對立體化學。(R)-1-(6-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)乙-1-醇之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 497.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：7.78-7.80 (m, 1H), 7.40-7.43 (m, 1H), 7.28-7.31 (m, 1H), 7.09-7.13 (m, 3H), 6.92-6.95 (m, 1H), 5.05-5.13 (m, 1H), 3.91-3.99 (s, 3H), 3.65-3.80 (m, 1H), 3.40-3.50 (m, 1H), 3.15-3.20 (m, 1H), 3.00-3.08 (m, 2H), 2.88-2.98 (m, 2H), 2.70-2.75 (m, 1H), 2.08-2.12 (m, 2H), 1.89-2.05 (m, 2H), 1.55-1.60 (m, 1H), 1.38-1.42 (m, 4H)；SFC：e.e. = 97.6%。(S)-1-(6-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)乙-1-醇之表徵：LCMS m/z [M+H]+ = 497.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：7.78-7.80 (m, 1H), 7.40-7.43 (m, 1H), 7.28-7.31 (m, 1H), 7.09-7.13 (m, 3H), 6.92-6.95 (m, 1H), 5.05-5.13 (m, 1H), 3.91-3.99 (s, 3H), 3.65-3.80 (m, 1H), 3.40-3.50 (m, 1H), 3.15-3.20 (m, 1H), 3.00-3.08 (m, 2H), 2.88-2.98 (m, 2H), 2.70-2.75 (m, 1H), 2.08-2.12 (m, 2H), 1.89-2.05 (m, 2H), 1.55-1.60 (m, 1H), 1.38-1.42 (m, 4H)。SFC：e.e. = 96.4%。
實例 143 ： (S)-1'-(3-( 苯基乙炔基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
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Figure 02_image773
步驟 a ： 於密封試管中，將(R)-N-[(3S)-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(250 mg，0.394 mmol，中間物CY)、乙炔苯(47.5 µL，0.4332 mmol)、乙基雙(丙-2-基)胺(69.4 µL，0.3978 mmol)、碘化亞銅(3.74 mg，0.0197 mmol)及XPhos-Pd-G4 (33.9 mg，0.0394 mmol)添加至MeCN (5 mL)中。將混合物用N2 鼓泡5分鐘，且在80℃下攪拌反應物20小時。真空移除溶劑且藉由管柱層析(Si-12 g管柱，25至100% EA/庚烷)純化粗產物，得到(R)-2-甲基-N-((1S)-1'-(3-(苯基乙炔基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)丙烷-2-亞磺醯胺。LCMS m/z [M+H]+ = 609.4。步驟 b ： 向含(R)-2-甲基-N-[(3S)-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(2-苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]丙烷-2-亞磺醯胺(120 mg，0.197 mmol)之MeOH (2 mL)中裝入鹽酸(492 µL，1.97 mmol)，且將其加熱至60℃後保持2小時。真空移除溶劑且藉由製備型HPLC (10至40% ACN/水/FA)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(S)-1'-(3-(苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(50 mg，60%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 421.6；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 位移 13.35-13.65 (m, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.58-7.65 (m, 2H), 7.44-7.49 (m, 3H), 7.31-7.36 (m, 1H), 7.16-7.23 (m, 3H), 4.28-4.39 (m, 2H), 3.93 (s, 1H), 3.30 (br s, 2H), 3.11 (d, J=15.92 Hz, 1H), 2.71 (d, J=15.66 Hz, 1H), 1.76-1.86 (m, 1H), 1.70 (dt, J=3.79, 12.51 Hz, 1H), 1.55 (br d, J=12.63 Hz, 1H), 1.21 (br d, J=12.63 Hz, 1H)。
實例 144 ： (S)-1'-(6-(2- 氯苯基 )-5- 甲基咪唑并 [2,1-b][1,3,4] 噻二唑 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image775
步驟 a ： 將N-[(3S)-1'-(5-胺基-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(101 mg，0.252 mmol，中間物CF)溶解於10 mL丙酮中，隨後添加2-溴-1-(2-氯苯基)丙-1-酮(80.8 µL，0.503 mmol，CAS編號75815-22-4)，且在回流下加熱反應物16小時。隨後移除溶劑且將殘餘物溶解於6 N HCl (12 mL)中，並且在100℃下攪拌反應物1.5小時。隨後添加另外當量的2-溴-1-(2-氯苯基)丙-1-酮(124 mg，0.503 mmol)，且將反應物在100℃下攪拌45分鐘，隨後在室溫下攪拌48小時。真空濃縮反應混合物且藉由製備型HPLC (5至30% B，FA)對其進行純化。得到(3S)-1'-[6-(2-氯苯基)-5-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(8.20 mg，0.0182 mmol)。LCMS m/z [M+H]+ = 450.5；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 位移 7.50-7.54 (m, 1H), 7.44-7.48 (m, 1H), 7.35-7.41 (m, 2H), 7.29-7.34 (m, 1H), 7.14-7.21 (m, 3H), 3.90 (s, 1H), 3.69-3.79 (m, 2H), 3.41 (br d, J=3.03 Hz, 2H), 3.07 (d, J=15.66 Hz, 1H), 2.61-2.69 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.83-1.92 (m, 1H), 1.77 (dt, J=4.29, 12.63 Hz, 1H), 1.53-1.60 (m, 1H), 1.19 (br d, J=15.41 Hz, 1H)。
實例 145 ： (S)-1'-(5-(2- 氯苯基 ) 噻唑 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image777
步驟 a ： 將N-[(3S)-1'-(5-溴-1,3-噻唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(48 mg，0.103 mmol，中間物CG)、(2-氯苯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(17.7 mg，0.114 mmol)、甲烷過氧化鉀氫化鉀(28.9 mg，0.207 mmol)及鈀肆(11.9 mg，0.0103 mmol)溶解於DMF/水(10:1)中。在微波中在100℃下加熱反應混合物30分鐘。將反應物分配於水與EtOAc之間，且用EtOAc萃取混合物(2×)。經合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由管柱層析(0至100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物，得到N-[(3S)-1'-[5-(2-氯苯基)-1,3-噻唑-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(29.0 mg，57%產率)。隨後將此中間物溶解於DCM (750 μL)中，隨後添加TFA (200 μL)，且在室溫下攪拌反應混合物15分鐘。濃縮反應混合物，隨後藉由HPLC (10至40% B (FA))對其進行純化，得到(3S)-1'-[5-(2-氯苯基)-1,3-噻唑-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(14.9 mg，37%產率)。LCMS m/z [M+H]+ = 396.5；1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 位移 7.58 (dd, J=1.53, 7.93 Hz, 1H), 7.50-7.55 (m, 2H), 7.33-7.39 (m, 2H), 7.27-7.31 (m, 1H), 7.19-7.24 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.84 (br d, J=13.12 Hz, 2H), 3.24-3.28 (m, 3H), 3.08 (d, J=15.86 Hz, 1H), 2.74 (d, J=15.86 Hz, 1H), 1.80-1.87 (m, 1H), 1.70-1.79 (m, 1H), 1.54 (br dd, J=1.37, 13.27 Hz, 1H), 1.28 (br d, J=12.81 Hz, 1H)。
實例 146 ： (3S)-1'-[5-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image779
步驟 a ： 在小瓶中，稱取(3S)-1'-(5-氯吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(52 mg，0.165 mmol，中間物CH)、1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(24.3 mg，0.182 mmol)、甲烷磺酸9-{[5-(二苯基磷烷基)-9,9-二甲基-9H-二苯并哌喃-4-基]二苯基-λ5 -磷烷基}-8-甲基-8-氮雜-9-鈀三環[8.4.0.02,7 ]十四-1(14),2(7),3,5,10,12-六烯-9-基酯(15.8 mg，0.0165 mmol)及(第三丁氧基)鈉(23.7 mg，0.248 mmol)。將反應混合物抽成真空且用N2 回填，隨後添加甲苯(2 mL)且在80℃下攪拌反應物20分鐘。隨後濃縮反應混合物，且將殘餘物再溶解於DMSO中，並且藉由逆相HPLC (5至30% B (FA))對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3S)-1'-[5-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(12.0 mg，18%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 413.6；1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 位移 8.24 (s, 2H), 8.14 (d, J=1.22 Hz, 1H), 8.07 (d, J=1.22 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=1.22, 4.58 Hz, 1H), 7.36-7.41 (m, 1H), 7.17-7.27 (m, 3H), 7.09 (dd, J=1.22, 8.24 Hz, 1H), 6.93 (dd, J=4.58, 8.24 Hz, 1H), 4.12 (dt, J=3.97, 8.39 Hz, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.61-3.65 (m, 2H), 3.06-3.14 (m, 3H), 2.89 (t, J=6.41 Hz, 2H), 2.76 (d, J=15.86 Hz, 1H), 1.98-2.04 (m, 2H), 1.79 (dt, J=4.27, 12.51 Hz, 1H), 1.70 (dt, J=4.12, 12.43 Hz, 1H), 1.50 (br d, J=11.90 Hz, 1H), 1.27 (br d, J=12.81 Hz, 1H)。
實例 147 ： (S)-1'-(5-((2,3- 二氯苯基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image781
步驟 a ： 在二噁烷(10 mL)中添加化合物(S)-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(200.0 mg，556 µmol，中間物CI)、2,3-二氯苯-1-硫醇(129.0 mg，722 µmol，CAS編號17231-95-7)、Pd2 (dba)3 (50.9 mg，55.6 µmol)、XantPhos (64.2 mg，111 µmol)及DIPEA (485 µL，2.78 mmol)。將反應混合物抽成真空且用N2 再填充3次。在110℃下攪拌反應混合物12小時。隨後添加H2 O (20 mL)，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取反應混合物。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到(S)-1'-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(300 mg，定量粗產率)。LCMS m/z (M+53)+ = 509。步驟 b ： 將(S )-1'-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(254.0 mg，555 µmol)、二碳酸二第三丁酯(328 µL，1.10 mmol)及TEA (228 µL，1.66 mmol)溶解於DCM (10 mL)中，且在室溫下攪拌混合物13小時。反應混合物用H2 O (10 mL × 2)、鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (石油醚:乙酸乙酯= 3:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯苯基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(95.0 mg，30.7%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 456.9。步驟 c ： 在HCl/MeOH (5.0 mL，4 M)中添加化合物N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯苯基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100.0 mg，179 µmol)，且在25℃下攪拌混合物0.5小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯苯基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(35.5 mg，85%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 457.0；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.53 (s, 3H) , 8.49 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.57~7.60 (m, 1H), 7.46~7.49 (m, 1H), 7.23~7.38 (m, 4H), 6.84~6.87 (m, 1H), 4.35~4.39 (m, 2H), 4.25~4.30 (m,1H), 3.19~3.28 (m, 3H), 2.98~3.03 (m, 1H), 1.73~1.85 (m, 2H), 1.51~1.59 (m, 2H)。
實例 148 ： (S)-N4-(6-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 )-N4- 甲基吡啶 -2,4- 二胺之合成
Figure 02_image783
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(300.0 mg，475.0 µmol，中間物J)、2-氯-N -甲基吡啶-4-胺(87.9 mg，617.0 µmol，中間物CM)、XantPhos-Pd-G4 (45.6 mg，47.5 μmol)及Cs2 CO3 (308.0 mg，950.0 μmol)於PhMe (10.0 mL)中之溶液在N2 下在90℃下攪拌12小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (30.0 mL)中且用EtOAc (50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到棕色殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至35%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{3-[(2-氯吡啶-4-基)(甲基)胺基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(230.0 mg，75%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 645.1。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{3-[(2-氯吡啶-4-基)(甲基)胺基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(150.0 mg，232.0 µmol)、二苯基甲亞胺(63.0 mg，348.0 µmol)、Pd2 (dba)3 (21.2 mg，23.2 μmol)、XPhos (44.2 mg，92.8 μmol)及t -BuONa (66.8 mg，696.0 μmol)於PhMe (5.0 mL)中之溶液在N2 下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物。將殘餘物用EtOAc (10.0 mL)濕磨，過濾且濃縮濾液，得到呈橙色固體狀之N -[(3S )-1'-[3-({2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}(甲基)胺基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，137%粗產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 790.2。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[3-({2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}(甲基)胺基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，316.0 µmol)於HCl/MeOH (6.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌2小時。將反應混合物傾入H2 O (20.0 mL)中且用EtOAc (30.0 mL × 2)萃取。減壓濃縮水相。將殘餘物用MeOH (5.0 mL)稀釋，藉由製備型HPLC (HCl)及製備型SFC純化。獲得呈黃色固體狀之(S)-N4-(6-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-N4-甲基吡啶-2,4-二胺(9.7 mg，35%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 442.1；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.34 (s, 1H), 7.54-7.56 (m, 1H), 7.41-7.43 (m, 1H), 7.26-7.30 (m, 3H), 6.31-6.34 (m, 1H), 6.13-6.14 (m, 1H), 4.41-4.48 (m, 2H), 4.10-4.14 (m, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.38-3.45 (m, 2H), 3.19-3.24 (m, 1H), 2.93-2.98 (m, 1H), 1.82-1.92 (m, 2H), 1.55-1.69 (m, 2H)。SFC：e.e. = 96.9%，R t = 2.23分鐘。管柱：ChiralCel OD-3 150×4.6 mm I.D.，3 μm，移動相：40%甲醇(0.1%乙醇胺)，流動速率：2.5 mL/min，管柱溫度：40℃。
實例 149 ： (3S )-1'-{5- 甲基 -3-[6-(1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 )-1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image785
Figure 02_image787
步驟 a ： 在PhMe (16 mL)中添加N-[(3S)-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(300.0 mg，475.0 µmol，中間物J)、6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(122.0 mg，570.0 µmol，中間物X)、Xantphos-Pd-G4 (45.6 mg，47.5 µmol，CAS編號1599466-81-5)及Cs2 CO3 (462.0 mg，1.42 mmol)。將反應混合物抽成真空且用N2 再填充3次，且在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:90)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N-[(3S)-1'-{3-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(320.0 mg，94%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 717.3。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{3-[6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(320.0 mg，446.0 µmol)溶解於ACN (10 mL)與AcOH (10 mL)之混合物中，添加NBS (79.3 mg，446.0 µmol)，且在25℃下攪拌反應混合物2小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:30至0:100)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-溴-3-[6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(320.0 mg，90%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 797.2。步驟 c ： 在二噁烷(16 mL)與H2 O (4 mL)之混合物中添加N -[(3S )-1'-{5-溴-3-[6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(220.0 mg，276.0 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (20.2 mg，27.6 µmol)、Cs2 CO3 (179.0 mg，552.0 µmol)及MeB(OH)2 (81.4 mg，1.38 mmol)。將反應混合物抽成真空且用N2 再填充3次，且在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:50至100:100)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-甲基-3-[6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(180.0 mg，90%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 731.3。步驟 d ： 在4 N HCl/MeOH (6 mL)中添加N -[(3S )-1'-{5-甲基-3-[6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(180.0 mg，246.0 µmol)，在25℃下攪拌反應混合物2小時。減壓濃縮反應混合物且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-{5-甲基-3-[6-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(45.4 mg，34%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 547.1。1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.50 (s, 1H), 7.99 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.46-7.34 (m, 3H), 4.60-4.44 (m, 3H), 3.54-3.41 ( m, 2H), 3.24 (s, 2H), 2.04-1.68 (m, 4H)。
實例 150 ： (S )-2-((6 -((S )-1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙腈之合成
Figure 02_image789
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(500.0 mg，792.0 µmol，中間物J)、(2S )-2-(甲基胺基)丙酸(244.0 mg，2.4 mmol，CAS編號29475-64-7)、K2 CO3 (327.0 mg，2.40 mmol)及奈米銅粉末(100.0 mg，1.60 mmol)於NMP (10.0 mL)中之混合物在130℃下在微波照射下攪拌1.5小時。反應混合物隨後用H2 O (100.0 mL)稀釋，用HCl (2 N)調整至pH = 5至6且用DCM (100.0 mL × 3)萃取。經合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈黃色油狀物之N-(6-((S)-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-N-甲基-L-丙胺酸(1.00 g，104%粗產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 606.3。步驟 b ： 將(2S )-2-({6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}(甲基)胺基)丙酸(1.00 g，粗產物)、1H -1,2,3-苯并三唑-1-醇銨(375.0 mg，2.5 mmol，CAS編號63307-62-0)及EDCI (473.0 mg，2.5 mmol)於DMF (10.0 mL)中之混合物在N2 下在20℃下攪拌12小時。反應物用H2 O (200.0 mL)稀釋且用EtOAc (150.0 mL × 3)萃取。經合併之有機相用鹽水(300.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至90%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之((1S )-1'-(3-(((S )-1-胺基-1-側氧基丙-2-基)(甲基)胺基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(700.0 mg)。LCMS m/z (M+H)+ = 605.3。步驟 c ： 在0℃下向((1S )-1'-(3-(((S )-1-胺基-1-側氧基丙-2-基)(甲基)胺基)-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(350.0 mg，578.0 µmol)及Et3 N (158.0 µL，1.2 mmol)於DCM (10.0 mL)中之溶液中逐滴添加TFAA (161.0 µL，1.2 mmol)，且在25℃下攪拌混合物12小時。反應混合物用H2 O (50.0 mL)淬滅且用DCM (50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0至30%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-(3-{[(1S )-1-氰基乙基](甲基)胺基}-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100.0 mg，28%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 609.1。步驟 d ： 將N -[(3S )-1'-(3-{[(1S )-1-氰基乙基](甲基)胺基}-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，204.0 µmol)溶解於CH3 CN (2.0 mL)及HCl (2.0 mL，2 N)中，且在25℃下攪拌12小時。混合物藉由NaHCO3 (水溶液)調整至pH = 8至9且用EtOAc (50.0 mL × 3)萃取。經合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(S )-2-((6 -((S )-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基)(甲基)胺基)丙腈(23.4 mg，28%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 403.0；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 9.85 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.31-7.38 (m, 1H), 7.19-7.26 (m, 3H), 5.90 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 4.20-4.33 (m, 2H), 4.01 (s, 1H), 3.24-3.38 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 3.05-3.16 (m, 1H), 2.69-2.81 (m, 1H), 1.75-1.96 (m, 3H), 1.66 (d,J = 7.2Hz, 3H), 1.37-1.46 (m, 1H)。
實例 151 ： (2S )-2-({6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 }( 甲基 ) 胺基 ) 丙醯胺之合成
Figure 02_image791
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(3-{[(1S )-1-胺甲醯基乙基](甲基)胺基}-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，330.0 µmol，經由實例150之步驟a至b合成)溶解於EtOAc (5.0 mL)及HCl/EtOAc (3.0 mL，4 N)中，且在25℃下攪拌12小時。混合物用H2 O (10.0 mL)稀釋，藉由無水Na2 CO3 調整至pH = 8至9且用EtOAc (50.0 mL × 3)萃取。經合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (FA)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(2S )-2-({6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}(甲基)胺基)丙醯胺甲酸鹽(12.3 mg，26.3 µmol，8%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 421.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO_d 6 )：δ 11.82 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.31-7.42 (m, 1H), 7.17-7.27 (m, 3H), 7.02 (s, 1H), 5.23 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.2-4.42 (m, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.08-3.20 (m, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.75 (m, 1H), 1.62-1.84 (m, 2H), 1.46-1.56 (m, 1H), 1.18-1.31 (m, 4H)。
實例 152 ： (3S)-1'-[5- 甲基 -3-( 哌啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image793
步驟 a ： 向((1S )-1'-(3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(500.0 mg，0.8 mmol，中間物J)及哌啶(80.8 mg，1.0 mmol)於甲苯(10.0 mL)中之混合物中添加XantPhos-Pd-G4 (76.1 mg，79.2 µmol，CAS編號1621274-19-8)及Cs2 CO3 (513.0 mg，1.6 mmol)。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在100℃下攪拌反應混合物12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，54%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 588.3。步驟 b ： 向N -[(3S )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，0.4 mmol)於MeCN (5.0 mL)及AcOH (3.0 mL)中之溶液中添加NBS (90.6 mg，0.5 mmol)。在25℃下攪拌反應混合物12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之產物N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(130.0 mg，46%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 666.1。步驟 c ： 向N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(130.0 mg，0.2 mmol)及三甲基硼氧雜環己烷(48.9 mg，0.4 mmol)於二噁烷(5.0 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物中添加Pd(dppf)Cl2 (14.2 mg，19.5 µmol)及K2 CO3 (53.7 mg，0.4 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 下在100℃下攪拌12小時。隨後減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之產物N -[(3S )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(80.0 mg，68%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 602.3。步驟 d ： 將N -[(3S )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(75.0 mg，0.1 mmol)於HCl/MeOH (5.0 mL，4 M)中之溶液在30℃下攪拌2小時。減壓濃縮反應混合物。用MeOH (5.0 mL)溶解殘餘物，且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[5-甲基-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(40.0 mg，71%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 418.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：7.54-7.56 (m, 1H), 7.35-7.45 (m, 3H), 7.47 (m, 1H), 3.99-4.03 (m, 1H), 3.85-3.97 (m, 5H), 3.36-3.40 (m, 1H), 3.25-3.32 (m, 1H), 3.21 (s, 2H), 2.66 (s, 3H), 2.03-2.11 (m, 1H), 1.91-1.98 (m, 1H), 1.75-1.87 (m, 7H), 1.68-1.72 (m, 1H)。
實例 153 ： 2-{6-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5-( 羥甲基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 } 乙腈之合成
Figure 02_image795
步驟 a ： 在N2 下向乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯(300.0 mg，426.0 µmol，中間物K)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1,2-噁唑(83.0 mg，426.0 µmol，CAS編號928664-98-6)於二噁烷(8 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物中添加Pd(dppf)Cl2 (31.1 mg，42.6 µmol)及K2 CO3 (146.0 mg，1.0 mmol)。在N2 、100℃下攪拌混合物12小時。減壓濃縮混合物，得到黃色固體。藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至1/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[3-(氰基甲基)-5-(羥甲基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(90.0 mg，37%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 574.1。步驟 b ： 向N -[(3S )-1'-[3-(氰基甲基)-5-(羥甲基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(60.0 mg，104.0 µmol)於DCM (1 mL)中之混合物中添加TFA (1 mL)。在30℃下攪拌混合物2小時。將混合物用固體Na2 CO3 調整至pH = 8，且藉由製備型HPLC (HCOOH)對其進行純化，得到呈白色固體狀之2-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-(羥甲基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}乙腈甲酸鹽(15.0 mg，33%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 390.2；1 H NMR (400MHz, CD3 OD-d 4 )：8.54 (s, 1H), 7.53-7.51 (m, 1H), 7.42-7.34 (m, 3H), 4.83 (s, 2H), 4.41 (s, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.85-3.73(m, 2H), 3.31-3.11 (m, 4H), 2.10-1.97 (m, 2H), 1.79-1.68 (m, 2H)。
實例 154 ： 6-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5-( 羥甲基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 甲腈之合成
Figure 02_image797
步驟 a ： 在N2 下向乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑並[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(300.0 mg，426.0 µmol，中間物K)及Zn(CN)2 (100.0 mg，852.0 µmol)於DMF (10 mL)中之混合物中添加[(t -Bu)3 P]2 Pd (43.5 mg，85.2 µmol，CAS編號53199-31-8)。在N2 、110℃下攪拌混合物12小時。隨後將混合物傾入水(50 mL)中且用EtOAc (50 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(60 mL × 3)洗滌且經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到黃色固體。藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至3/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氰基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯(250.0 mg，98%產率)。LCMS m/z (M+Na)+ = 624.1。步驟 b ： 將乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氰基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯(150.0 mg，249.0 µmol)於HCl/EtOAc (2 mL，4 M)中之混合物在30℃下攪拌12小時。減壓濃縮混合物，得到呈棕色固體狀之乙酸{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氰基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯鹽酸鹽(113.0 mg，100%產率)。LCMS m/z (M+Na)+ = 440.0。步驟 c ： 向乙酸{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-氰基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯鹽酸鹽(113.0 mg，248.0 µmol)於THF (3 mL)及H2 O (1 mL)中之混合物中添加LiOH·H2 O (31.2 mg，744.0 µmol)。在30℃下攪拌混合物12小時。隨後減壓濃縮混合物，得到黃色油狀物。藉由製備型HPLC (HCOOH)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-(羥甲基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-甲腈甲酸鹽(35.0 mg，34%產率)。LCMS m/z (M+Na)+ = 398.0；1 H NMR (400MHz, CD3 OD-d 4 )：8.54 (s, 1H), 7.52-7.50 (m, 1H), 7.40-7.34 (m, 3H), 4.83 (s, 2H), 4.40 (s, 1H), 3.92-3.80 (m, 2H), 3.33-3.11 (m, 4H), 2.10-1.96 (m, 2H), 1.79-1.68 (m, 2H)。
實例 155 ： 6-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5-( 羥甲基 )-N- 甲基 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 甲醯胺之合成
Figure 02_image799
步驟 a ： 將乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯(500.0 mg，711.0 µmol，中間物K)、MeNH2 ·HCl (475.0 mg，7.1 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (52.0 mg，71.1 µmol)及TEA (2 mL)於MeOH (20 mL)中之混合物抽成真空且使用CO再填充3次，隨後在CO (50 psi)下在80℃下攪拌12小時。減壓濃縮混合物，且藉由管柱層析(DCM/MeOH = 1:0至10:1)純化殘餘物，得到170.0 mg呈棕色固體狀之((1S)-1'-(5-(羥甲基)-3-(甲基胺甲醯基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(170.0 mg，66%純度，27%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 592.2。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(羥甲基)-3-(甲基胺甲醯基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(170.0 mg，66%純度，189.0 µmol)於HCl/EtOAc (4 M，3 mL)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓濃縮混合物。將殘餘物用EtOAc (10 mL)稀釋且用K2 CO3 調整至pH = 8。過濾混合物且減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC (FA)純化混合物，得到呈黃色固體狀之6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-(羥甲基)-N -甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-甲醯胺(甲酸) (17.3 mg，20%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 408.1；1 HNMR (400 MHz, CDCl3 + MeOD-d 4 )：δ 8.27 (br, 1H), 7.36-7.32 (m, 1H), 7.24-7.20 (m, 3H), 4.76-4.74 (m, 2H), 4.09 (m, 1H), 3.31-3.30 (m, 2H), 3.16-2.83 (m, 7H), 1.62-1.59 (m, 2H), 1.54-1.50 (m, 2H)。
實例 156 ： {6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-3- 甲基 -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -5- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image801
步驟 a ： 將乙酸(6-((S )-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)甲酯(150 mg，213 µmol，中間物K)、K3 PO4 ·3H2 O (529 mg，1.06 mmol)、三甲基硼氧雜環己烷(267 mg，2.13 mmol，CAS編號823-96-1)及Pd(PPh3 )4 (24.6 mg，21.3 µmol)溶解於PhMe/H2 O (10 mL/1 mL)中。將經合併之反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在100℃下攪拌反應混合物12小時。用乙酸乙酯(30 mL)及H2 O (20 mL)稀釋反應混合物。分離經分配之層，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:40)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之乙酸(6-((S )-1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基)甲酯(130 mg，112%粗產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 591.2。步驟 b ： 將乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(120 mg，203 µmol)添加至HCl水溶液(14 mL，4 N)中，且在25℃下攪拌反應混合物6小時。用飽和Na2 CO3 溶液將反應混合物調整至pH = 7至8。藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化混合物，得到{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲醇(1.40 mg，2%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 365.1；1 H NMR (400MHz, CD3 OD) δ 7.34 - 7.37 (m, 1H), 7.18 - 7.20 (m, 3H), 4.76 (s, 3H), 3.65 - 3.66 (m, 1H), 3.32 - 3.37 (m, 2H), 3.13 - 3.26 (m, 3H), 3.04 - 3.07 (m, H), 2.77 (s, 3H), 1.96 - 1.97 (m, 2H), 1.48 - 1.61 (m, 1H), 1.47 - 1.48 (m, 1H)。
實例 157 ： (3S )-1'-{5-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 甲基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image803
步驟 a ： 向(R )-N -((S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基 )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基 )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(400.0 mg，0.9 mmol，經由中間物BR之步驟a合成)於THF (10 mL)中之反應混合物中添加CuCl (341.0 mg，3.5 mmol)，且在25℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後在N2 氛圍、-78℃下向反應混合物中添加n -BuLi (1.38 mL，3.5 mmol，2.5 M於THF中)。在-78℃下攪拌所得混合物1小時。接下來，添加2,3-二氯吡啶-4-甲醛(758.0 mg，4.3 mmol，CAS編號884495-41-4)，且在-78℃下攪拌所得混合物1小時。反應混合物用飽和NH4 Cl (20 mL)淬滅且用EtOAc (40 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至100%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -((1S )-1'-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)(羥基)甲基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(155.0 mg，32%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 560.0。步驟 b ： 在25℃下向(R )-N -[(3S)-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基 )(羥基)甲基]吡嗪-2-基 }-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(155.0 mg，0.3 mmol)於THF (1 mL)中之反應混合物中添加PBr3 (74.8 mg，0.3 mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌0.5小時，且隨後在80℃下攪拌2小時。經合併之反應混合物藉由0℃之H2 O (15 mL)淬滅且用固體Na2 CO3 調整至pH = 10至11。用EtOAc (30 mL × 3)萃取反應混合物。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)甲基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(3.7 mg，3%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 440.0；1 H NMR (400MHz, CDCl3 ) δ 8.20 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.34 - 7.33(m, 1H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 7.14 - 7.10 (m, 1H), 4.21 - 4.11 (m, 4H), 3.99 (s, 1H), 3.24 - 3.15 (m, 2H), 3.09 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.74 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 3H), 1.41 - 1.34 (m, 1H)。
實例 158 ： {6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-3- 甲氧基 -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -5- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image805
步驟 a ： 向K2 CO3 (146.0 mg，1.1 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物中添加乙酸{6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲酯(250.0 mg，355.0 µmol，中間物K)。在20℃下攪拌混合物12小時。隨後減壓濃縮混合物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-(羥甲基)-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(210.0 mg，90%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 661.1。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(羥甲基)-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(190.0 mg，287.0 µmol)及TBSCl (64.5 mg，430.0 µmol)於TEA (1 mL)及DCE (5 mL)中之混合物在70℃下攪拌2小時。混合物用H2 O (20 mL)稀釋，隨後用EtOAc (20 mL × 2)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 10:0至10:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-(5-{[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]甲基}-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，90%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 775.1。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-(5-{[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]甲基}-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(140.0 mg，180.0 µmol)、Cs2 CO3 (117.0 mg，360.0 µmol)、CuI (3.4 mg，18.0 µmol)及3,4,7,8-四甲基-1,10-啡啉(8.5 mg，36.0 µmol)於MeOH (5 mL)中之混合物在100℃下在微波照射下攪拌2小時。移除TBS基團，且羥基在反應過程中氧化成醛。減壓濃縮混合物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 1:0至5:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-甲醯基-3-甲氧基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(40.0 mg，40%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 563.2。步驟 d ： 在N2 氛圍、0℃下向N -[(3S )-1'-[5-甲醯基-3-甲氧基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(40.0 mg，71.0 µmol)於MeOH (5 mL)中之混合物中添加NaBH4 (5.4 mg，142.0 µmol)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。混合物隨後用飽和NH4 Cl (20 mL)淬滅且用EtOAc (20 mL)萃取。有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(羥甲基)-3-甲氧基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(35.0 mg，88%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 565.2。步驟 e ： 將N -[(3S )-1'-[5-(羥甲基)-3-甲氧基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(35.0 mg，61.9 µmol)於DCM (3 mL)及TFA (0.3 mL)中之混合物在30℃下攪拌12小時。隨後減壓濃縮混合物。將殘餘物用EtOAc (10 mL)稀釋且藉由K2 CO3 調整至pH = 7。過濾混合物且減壓濃縮濾液。隨後藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化混合物，得到呈白色固體狀之{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-甲氧基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-5-基}甲醇(6.7 mg，29%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 381.0；1 HNMR (400 MHz, MeOD-d 4 )：δ 7.42-7.39 (m, 1H), 7.26-7.20 (m, 3H), 4.77 (s, 2H), 4.12 (s, 3H), 4.02 (s, 1H), 3.75-3.72 (m, 2H), 3.24-2.79 (m, 4H), 2.05-1.96 (m, 2H), 1.67-1.32 (m, 2H)。
實例 159 ： {6-[(3R )-3- 胺基 -3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -5- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image807
步驟 a ： 向乙酸{6-[(3R )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基]-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲酯(200 mg，0.3 mmol，中間物CX)於二噁烷(5.0 mL)中之混合物中添加Cs2 CO3 (183 mg，0.6 mmol)、XantPhos-Pd-G4 (21.5 mg，28.3 µmol)及Et3 SiH (223 µL，1.4 mmol)。將反應混合物用N2 淨化3分鐘，且在N2 下在100℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:50)對其進行純化。獲得呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-[5-(羥甲基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，66%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 537.2。步驟 b ： 將N -[(3R )-1'-[5-(羥甲基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，186 µmol)於THF (3.0 mL)及HCl/H2 O (3 mL，2 M)中之溶液在30℃下攪拌12小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物用H2 O (5.0 mL)溶解且用固體K2 CO3 調整至pH = 8，隨後藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化。獲得呈白色固體狀之{6-[(3R )-3-胺基-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基]-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基}甲醇(10.0 mg，15%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 353.1；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.13 (s, 1H), 7.40-7.42 (m, 1H), 7.18-7.22 (m, 1H), 6.90-6.94 (m, 1H), 6.80-6.82 (m, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.80-3.84 (m, 1H), 3.70-3.74 (m, 1H), 3.42-3.49 (m, 2H), 2.15-2.23 (m, 1H), 2.00-2.08 (m, 2H), 1.80-1.90 (m, 1H)。
實例 160 ： (3S)-1'-[5- 甲基 -3-( 嗎啉 -4- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image809
Figure 02_image811
步驟 a ： 在N2 下向N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(300.0 mg，475.0 µmol，中間物J)及嗎啉(82.7 mg，950.0 µmol)於甲苯(10.0 mL)中之混合物中添加Cs2 CO3 (338.0 mg，1.0 mmol)、RuPhos (33.2 mg，71.2 µmol，CAS編號787618-22-8)及RuPhos-Pd-G4 (40.3 mg，47.5 µmol，CAS號1599466-85-9)。在N2 、100℃下攪拌混合物12小時。隨後減壓濃縮混合物，且藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至1/1)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之N -[(3S )-1'-[3-(嗎啉-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(250.0 mg，89%產率)。LCMS m/z (ESI+ ) (M+Na)+ = 612.2。步驟 b ： 在N2 、-20℃下向N -[(3S )-1'-[3-(嗎啉-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(230.0 mg，390.0 µmol)於ACN (4.0 mL)及AcOH (4.0 mL)中之混合物中添加NBS (72.8 mg，409.0 µmol)。在N2 、-20℃下攪拌混合物1小時。減壓濃縮混合物，得到棕色油狀物。用飽和NaHCO3 將油狀物調整至pH = 8，且用EtOAc (40.0 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌且經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到棕色油狀物。藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至3/1)純化殘餘物，得到呈棕色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-溴-3-(嗎啉-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(140.0 mg)。LCMS m/z (M+H)+ = 668.1、670.1。步驟 c ： 在N2 下向N -[(3S )-1'-[5-溴-3-(嗎啉-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，179.0 µmol)及K2 CO3 (61.6 mg，447.0 µmol)於二噁烷(5 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物中添加Pd(dppf)Cl2 (13.0 mg，17.9 µmol，CAS編號72287-26-4)及三甲基硼氧雜環己烷(49.7 µL，358.0 µmol，CAS編號823-96-1)。在N2 、90℃下攪拌混合物12小時。減壓濃縮混合物，且藉由急驟矽膠層析(石油醚/EtOAc = 1/0至3/1)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-甲基-3-(嗎啉-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(80.0 mg，74%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 604.2。步驟 d ： 將N -[(3S )-1'-[5-甲基-3-(嗎啉-4-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(80.0 mg，132.0 µmol)於HCl/EtOAc (4 mL，4 M)中之混合物在30℃下攪拌12小時。減壓濃縮混合物，得到棕色固體。將含固體之EtOAc (10.0 mL)在20℃下攪拌10分鐘。過濾混合物且凍乾濾餅，得到呈棕色固體狀之(3S )-1'-[5-甲基-3-(嗎啉-4-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(48.0 mg，80%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 420.0。1 H NMR (400MHz, CD3 OD-d 4 )：7.54 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 3H), 4.47 (s, 1H), 3.91-3.87 (m, 5H), 3.82-3.80 (m, 5H), 3.28-7.25 (m, 2H), 3.20 (s, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.09-2.03 (m, 2H), 1.96-1.68(m, 2H)。
實例 161 ： (3R)-1'-[5- 甲基 -3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-3H- 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image813
步驟 a ： 將(3R )-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.10 g，3.96 mmol，中間物CB)、1-[6-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基]-1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶(1.46 g，3.96 mmol，中間物AA)及TEA (3.31 mL，23.7 mmol)於DMSO (25.0 mL)中之溶液在80℃下攪拌4小時。向混合物中添加Boc2 O (1.69 g，7.78 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物0.5小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (250.0 mL)中且用EtOAc (100.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g，0%至65%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.40 g，56%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 639.1。步驟 b ： 向N -[(3R )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.40 g，2.19 mmol)於MeCN/AcOH (25.0 mL/25.0 mL)中之溶液中添加NBS (389.0 mg，2.19 mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時。隨後用H2 O淬滅反應混合物且減壓濃縮。殘餘物用H2 O (200.0 mL)濕磨且用EtOAc (150.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g，0%至35%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.25 g，80%產率)。LCMS m/z (M+H)+ = 717.0。步驟 c ： 將N -[(3R )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.25 g，1.74 mmol)、三甲基硼氧雜環己烷(436.0 mg，3.48 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (254.0 mg，348.0 μmol)及K2 CO3 (720.0 mg，5.22 mmol)於二噁烷/H2 O (50.0 mL/5.0 mL)中之溶液在N2 下在90℃下攪拌12小時。將反應混合物傾入H2 O (150.0 mL)中且用EtOAc (200.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(200.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(40 g，0%至50%之乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(860.0 mg，76%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：653.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 將N -[(3R )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(860.0 mg，1.31 mmol)於HCl/MeOH (30.0 mL，4 M)中之溶液在20℃下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物，得到固體。將固體用EtOAc濕磨且攪拌0.5小時。隨後過濾混合物且凍乾濾餅。獲得呈橙色固體狀之(3R )-1'-[5-甲基-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(589.3 mg，89%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：469.1 (M+H)+ 。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：8.05-8.07 (m, 1H), 7.94-7.97 (m, 1H), 7.57-7.62 (m, 2H), 7.41-7.44 (m, 1H), 7.06-7.11 (m, 1H), 7.00-7.03 (m, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.08-4.12 (m, 2H), 3.92-3.94 (m, 1H), 3.74-3.78 (m, 1H), 3.41-3.53 (m, 2H), 3.29-3.32 (m, 2H), 2.67 (s, 3H), 2.33-2.41 (m, 3H), 2.10-2.18 (m, 2H), 1.98-2.06 (m, 1H)。
實例 162 ： (3R)-1'-[5- 甲基 -3-( 哌啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-3H- 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image815
步驟 a ： 將N -[(3R )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(702.0 mg，1.1 mmol，中間物CC)、哌啶(121.0 mg，1.4 mmol，CAS編號110-89-4)、XantPhos-Pd-G4 (105.0 mg，0.1 mmol，CAS編號1621274-19-8)及Cs2 CO3 (716.0 mg，2.2 mmol)於PhMe (15 mL)中之溶液在N2 下在110℃下攪拌12小時。反應混合物用H2 O (80 mL)稀釋且用EtOAc (80 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(20 g，0%至35%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3R )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(160.0 mg，0.3 mmol，24.6%產率)。LCMS (ESI+ ) m/z：590.2 (M+H)+ 。 隨後經由如實例161中所描述之步驟b至d合成(3R )-1'-[5-甲基-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽，其中步驟b在0℃而非25℃下進行1小時。分離呈棕色固體狀之(3R )-1'-[5-甲基-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(69.0 mg，步驟d中產率90%)。LC-MS (ESI+ )m/z ：420.1 (M+H)+ 。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.56 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.06 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.99 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.08 (d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.92 - 3.87 (m, 5H), 3.53 - 3.40 (m, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.34 - 2.28 (m, 1H), 2.14 - 1.93 (m, 3H), 1.77 (s, 6H)。
實例 163 ： 6-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5- 甲基 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 甲腈之合成
Figure 02_image817
Figure 02_image819
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(600.0 mg，951 µmol，中間物J)、Zn(CN)2 (272.0 mg，1.9 mmol)及[(t -Bu3 P)2 ]Pd (48.5 mg，95.1 µmol)於DMF (30 mL)中之混合物在N2 氛圍下在130℃下攪拌12小時。反應混合物用乙酸乙酯(45 mL)稀釋，用H2 O (35 mL × 2)及鹽水(20 mL)洗滌，隨後經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至40%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[3-氰基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(360.0 mg，72%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：552.1 (M+Na)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[3-氰基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(360 mg，679 µmol)於MeOH (8.0 mL)及NaOH水溶液(10%，8.0 mL)中之混合物在90℃下攪拌1小時。真空濃縮混合物，得到殘餘物，將殘餘物用H2 O (20 mL)稀釋且用2 N NaOH調整至pH = 4，隨後用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。經合併之有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色固體狀之6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-甲酸(360.0 mg，97%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：549.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將6-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-甲酸(360.0 mg，656 µmol)、1H -1,2,3-苯并三唑-1-醇銨(149.0 mg，984 µmol)及EDCI (188 mg，984 µmol)於DMF (15.0 mL)中之混合物在25℃下攪拌1小時。反應混合物用乙酸乙酯(40 mL)稀釋，隨後用H2 O (30 mL × 3)洗滌。經合併之有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(甲醇/石油醚= 0%至10%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[3-胺甲醯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(220.0 mg，61%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：548.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 向N -[(3S )-1'-[3-胺甲醯基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(220.0 mg，401 µmol)於MeCN (10.0 mL)及AcOH (1.0 mL)中之混合物中添加NBS (106.0 mg，601 µmol)，且在25℃下攪拌所得混合物12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其溶解於乙酸乙酯(25 mL)中，隨後用飽和NaHCO3 (15 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷= 0%至10%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-溴-3-胺甲醯基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(210 mg，97%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：543.0及544.0 (M+H)+ 。步驟 e ： 將N -[(3S )-1'-{5-溴-3-胺甲醯基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(210.0 mg，387 µmol)、TFAA (108.0 μL，774 µmol)及TEA (160.0 μL，1.2 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物在N2 氛圍下在25℃下攪拌12小時。反應混合物用飽和NaHCO3 (25 mL)稀釋，隨後用DCM (30 mL × 3)萃取。經合併之有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至35%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-溴-3-氰基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，50%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：546.0 (M+Na)+ 。步驟 f ： 將N -[(3S )-1'-{5-溴-3-氰基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100.0 mg，190 µmol)、三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧硼𠮿(71.5 mg，570 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (13.9 mg，19.0 µmol)及K2 CO3 (52.4 mg，380 µmol)於1,4-二噁烷(10.0 mL)及H2 O (1.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至30%)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-{3-氰基-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(35.0 mg，40%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：404.0 (M+H-Boc)+ 。步驟 g ： 將N -[(3S )-1'-[3-氰基-5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(35.0 mg，64.3 µmol)於TFA (1.0 mL)中之混合物在25℃下攪拌2小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其溶解於MeOH (5 mL)中且用固體Na2 CO3 調整至pH = 8。過濾混合物且真空濃縮，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之6 -[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-甲腈(2.8 mg，12%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：343.1 (M+H-NH2 )+ 。1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：7.45-7.43 (m, 1H), 7.32-7.24 (m, 3H), 4.15 (s, 1H), 3.74-3.69 (m, 2H), 3.26-3.15 (m, 3H), 2.92 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.07-1.96 (m, 2H), 1.70-1.59 (m, 2H)。
實例 164 ： (3S )-1'-{5-[(2S )-2- 苯基吡咯啶 -1- 基 ] 吡嗪 -2- 基 } -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image821
Figure 02_image823
步驟 a ： 將(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(150.0 mg，326 µmol，中間物CZ)、(2R )-2-苯基吡咯啶(47.9 mg，326 µmol，CAS編號56523-47-8)、Cs2 CO3 (318.0 mg，978 µmol)、RuPhos-Pd-G4 (27.7 mg，32.6 µmol)及RuPhos (30.4 mg，65.2 µmol)於甲苯(6.00 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後添加H2 O (10 mL)，且用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至25/100)純化殘餘物，得到呈綠色油狀物之N -[(3S )-1'-{5-[(2R )-2-苯基吡咯啶-1-基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(79.0 mg，46%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：526.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 將化合物N -[(3S )-1'-{5-[(2R )-2-苯基吡咯啶-1-基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(79.0 mg，150 µmol)添加至HCl/二噁烷(6.00 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物0.5小時。用H2 O (20 mL)及EtOAc (20 mL)稀釋混合物，隨後分離經分配之層。用EtOAc (20 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(30 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-{5-[(2S )-2-苯基吡咯啶-1-基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(21.0 mg，33%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：426.1 (M+H)+ 。1 HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 7.80 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 3H), 7.21 - 7.14 (m, 6H), 4.94 - 4.92 (m, 1H), 3.54 - 3.47 (m, 3H), 3.46 - 3.43 (m, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.91 - 2.78 (m, 2H), 2.56 (m, 1H), 2.44 - 2.31 (m, 1H), 2.00 - 1.88 (m, 2H), 1.82 - 1.60 (m, 3H), 1.45 (m, 1H), 1.07 (m, 1H)。
實例 165 ： (3S)-1'-{5-[(2S)-2- 苯基吡咯啶 -1- 基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image825
在步驟1中之偶合中使用(2S )-2-苯基吡咯啶(CAS編號59347-91-0)，如實例164中所描述來合成(3S )-1'-{5-[(2S )-2-苯基吡咯啶-1-基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺。(3S )-1'-{5-[(2S )-2-苯基吡咯啶-1-基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵資料：LCMS (ESI+ )m/z ：426.3 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, CD3 CN) δ = 7.68 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 3H), 7.25 - 7.14 (m, 6H), 4.93 (m, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.85 - 3.69 (m, 3H), 3.59 - 3.48 (m, 1H), 3.01 (m, 1H), 2.98 - 2.84 (m, 2H), 2.41 - 2.40 (m, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 1H), 2.04 - 1.96 (m, 2H), 1.88 - 1.76 (m, 2H), 1.68 (m, 1H), 1.49 (m, 1H), 1.21 - 1.11 (m, 1H)。
實例 166 ： (S )-1'-(5-((R )-2- 苯基哌啶 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image827
Figure 02_image829
在步驟1中之偶合中使用(2R )-2-苯基哌啶(CAS編號58613-54-0)，如實例164中所描述來合成(S )-1'-(5-((R )-2-苯基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。(S )-1'-(5-((R )-2-苯基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵資料：LCMS (ESI+ )m/z ：440.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, CD3 CN) δ = 7.79 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 5H), 7.19 (s, 4H), 5.10 - 4.98 (m, 1H), 3.94 - 3.79 (m, 3H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.09 - 2.93 (m, 3H), 2.65 (m, 1H), 2.07 - 2.01 (m, 2H), 1.85 - 1.69 (m, 4H), 1.62 - 1.50 (m, 3H), 1.21 (m, 1H)。
實例 167 ： (3S )-1'-[3-(3,6- 二氫 -2H - 哌喃 -4- 基 )-5- 甲基 -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺 之合成
Figure 02_image831
步驟 a ： 將(3S )-1'-{3-碘-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(60.0 mg，130 µmol，中間物DB)、2-(3,6-二氫-2H -哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦(32.5 mg，155.0 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (9.5 mg，13.0 µmol)及Cs2 CO3 (84.7 mg，260.0 µmol)放入溶劑二噁烷(15 mL)及H2 O (1.5 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在90℃下攪拌反應混合物12小時。濃縮反應混合物且添加H2 O (20 mL)，隨後用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (HCl)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[3-(3,6-二氫-2H -哌喃-4-基)-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(5.0 mg，9.2%產率，HCl鹽)。LCMS (ESI+ )m/z ：417.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 7.53~7.56 (m, 1H), 7.30~7.44 (m, 4H), 4.47 (s, 1H), 4.40~4.42 (m, 2H), 3.97~4.00 (m, 2H), 3.63~3.76 (m, 2H), 2.69~2.73 (m, 2H), 2.68 (s, 3H), 1.95-2.63 (m, 2H), 1.81~1.86 (m, 1H), 1.69~1.73(m, 1H)。
實例 168 ： (3S)-1'-[5-( 環戊基硫烷基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image833
步驟 a ： 向溴環戊烷(163.0 mg，1.1 mmol，CAS編號137-43-9)及TEA (228 µL，1.7 mmol)於DMF (2 mL)中之反應混合物中添加N -[(3S )-1'-[5-(鈉硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，0.3 mmol，中間物DE)。在25℃下攪拌反應混合物1小時。經合併之反應混合物用水(20 mL)淬滅，隨後用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用水(50 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型TLC (石油醚/EtOAc = 4/1)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(55.0 mg，33%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：481.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，0.1 mmol)於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。濃縮經合併之反應混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (HCl條件)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(28.6 mg，75%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：381.0 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.26 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.51 (d,J =7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.33 (m, 3H), 4.40 (s, 1H), 4.33 (d,J =14 Hz, 1H), 4.19 (d,J =14.4 Hz, 1H), 3.76 - 3.73 (m, 1H), 3.38 - 3.33 (m, 2H), 3.19 (s, 2H), 2.05 - 1.62 (m, 12H)。
實例 169 ： (3S )-1'-{ 咪唑并 [1,2-a ] 吡嗪 -6- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image835
步驟 a ： 將(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(240.0 mg，872 µmol，中間物I)溶解於MeOH (2.00 mL)中。隨後用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 9至10，隨後過濾混合物。接下來，向濾液中添加6-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪(121.0 mg，792 µmol，CAS編號76537-23-0)。濃縮混合物，得到殘餘物。向殘餘物中添加NMP (2滴)，隨後在150℃下攪拌混合物2小時。完成後，將混合物冷卻至室溫且藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)純化，得到呈灰色固體狀之(3S )-1'-{咪唑并[1,2-a ]吡嗪-6-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(27.2 mg，11%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：320.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ = 8.77 (m, 1H), 7.94 - 7.84 (m, 2H), 7.69 (m, 1H), 7.47 - 7.36 (m, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 3H), 3.99 (s, 1H), 3.93 - 3.83 (m, 2H), 3.15 - 3.11 (m, 4H), 2.79 (m, 1H), 2.10 - 1.83 (m, 2H), 1.65 (m, 1H), 1.56 - 1.46 (m, 1H)。
實例 170 ： (3S )-1'-[5-( 乙基硫烷基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image837
步驟 a ： 向碘乙烷(179.0 mg，1.2 mmol)及TEA (190 µL，1.4 mmol)於DMF (2 mL)中之反應混合物中添加N -[(3S )-1'-[5-(鈉硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(100.0 mg，0.2 mmol，中間物DE)。在25℃下攪拌反應混合物0.5小時。經合併之反應混合物用水(20 mL)淬滅，隨後用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用水(50 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型TLC (石油醚/EtOAc = 4/1)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(乙基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(76.0 mg)。LCMS (ESI+ )m/z ：441.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(乙基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(76.0 mg，0.172 mmol)於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (中性條件)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(3S )-1'-[5-(乙基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(16.0 mg，27%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：340.9 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.15 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.38 - 7.35 (m, 1H), 7.21 - 7.18 (m, 3H), 4.19 - 4.13 (m, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.23 - 3.11 (m, 3H), 2.98 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.78 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.85 - 1.76 (m, 2H), 1.60 - 1.44 (m, 2H), 1.26 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。
實例 171 ： (3S )-1'-[5-( 環丙基甲氧基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image839
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，0.4 mmol，中間物CZ)、Cs2 CO3 (285.0 mg，0.9 mmol)、CuI (8.3 mg，0.04 mmol)及Me4 -啡啉(20.5 mg，0.09 mmol，CAS編號1660-93-1)於環丙基甲醇(3 mL)中之混合物用N2 鼓泡5分鐘；隨後在100℃下在微波照射下攪拌8小時。反應混合物隨後用H2 O (20 mL)稀釋且用EtOAc (30 mL × 2)萃取。有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-(環丙基甲氧基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(148.0 mg，75%產率)。步驟 b ： 向N -[(3S )-1'-[5-(環丙基甲氧基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(90.0 mg，0.2 mmol)於DCM (4 mL)中之反應混合物中添加TFA (0.4 mL)。在25℃下攪拌反應混合物1小時。隨後用固體Na2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8至9，並過濾。濃縮濾液，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (鹼性條件)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之(3S )-1'-[5-(環丙基甲氧基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(17.8 mg，25%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：351.1 (M +H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.34 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 3H), 4.06 (d,J = 6.8 Hz, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.94 - 3.89 (m, 2H), 3.12 - 3.03 (m, 3H), 2.71 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.61- 1.60 (m, 1H), 1.41 - 1.26 (m, 2H), 0.64 - 0.60 (m, 2H), 0.37 - 0.34 (m, 2H)。
實例 172 、 173 、 174 、 175 ： (1S,1'R)-4-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H)- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己 [3] 烯 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 (172) 、 (1R ,1'S )-4-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H )- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己 [3] 烯 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 (173) 、 (1R ,1'R )-4-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H )- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己 [3] 烯 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 (174) 及 (1S ,1'S )-4-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H )- 基 )-1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己 [3] 烯 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 (175) 之 合成
Figure 02_image841
Figure 02_image843
步驟 a ： 將4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(580.0 mg，1.1 mmol，中間物DF)添加至HCl/MeOH (15.00 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。用EtOAC:MeOH = 10:1濕磨殘餘物，此時形成黃色固體，藉由過濾收集固體。隨後將固體溶解於MeOH (25 mL)中，且用TEA將混合物調整至pH = 9至10。濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(450.0 mg，93%粗產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：449.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 向4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(250.0 mg，557 µmol)及Ti(OEt)4 (1.14 mL，5.6 mmol)於2-Me-THF (3.00 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(269.0 mg，2.2 mmol)。在N2 下在95℃下攪拌反應混合物72小時。隨後用EtOAc (100 mL)稀釋混合物並添加H2 O (20 mL)，其中形成白色固體。過濾混合物，且分離濾液中經分配之層。用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取水相。經合併之有機層用H2 O (100 mL)、鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之(R )-2-甲基-N -{4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-亞基}丙烷-2-亞磺醯胺(300.0 mg，98%粗產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：552.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將(R )-2-甲基-N -{4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-亞基}丙烷-2-亞磺醯胺(300.0 mg，543 µmol)溶解於2-Me-THF (10.00 mL)中。隨後在-20℃下添加NaBH4 (40.8 mg，1.1 mmol)，且使混合物升溫至25℃並攪拌2小時。用H2 O (5 mL)淬滅反應物，隨後用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之(R )-N -(4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(300 mg，100%產率，粗產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：554.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 將(R )-N -(4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(300.0 mg，541 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物0.5小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物，接下來將殘餘物溶解於MeOH (5 mL)中。用TEA將混合物調整至pH = 9至10。隨後濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-胺(243 mg，100%產率，粗產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：450.0 (M+H)+ 。步驟 e ： 將4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-胺(243.0 mg，540 µmol)及TEA (149 µL，1.08 mmol)溶解於DCM (13 ml)中。隨後添加含(Boc)2 O (135 µL，594 µmol)之DCM (2 mL)，且在25℃下攪拌混合物2小時。混合物隨後用H2 O (10 mL × 2)、鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (石油醚:乙酸乙酯= 1:2)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(105 mg，35%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：550.1 (M+H)+ 。步驟 f ： 藉由對掌性SFC (DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm × 30 mm，10 μm)，移動相：40% IPA (0.1% NH3 ·H2 O)/CO2 ；流動速率：80 mL/min)分離(4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(105.0 mg，191 µmol)，得到((1R ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯及((1S ,1'S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯，以及((1R,1'S)-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-1'-基)胺基甲酸第三丁酯與((1S,1'R)-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-1'-基)胺基甲酸第三丁酯之混合物。隨機指定所有四種異構體之絕對立體化學組態。 藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm × 30 mm，10 μm)；移動相：40% IPA (0.1% NH3· H2 O)/CO2 ；流動速率：70 mL/min)進一步純化((1R ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(12 mg)，得到呈黃色固體狀之產物((1R ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(10.0 mg，84%產率)。LCMS (ESI+) m/z：550.1 (M+H)+ 。 獲得呈黃色固體狀之產物((1S ,1'S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(32.0 mg，31%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：550.1 (M+H)+ 。 藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK IG (250 mm × 30 mm，10 μm)，移動相：55% EtOH (0.1% NH3· H2 O)/CO2 ；流動速率：80 mL/min)分離((1R,1'S)-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-1'-基)胺基甲酸第三丁酯與((1S,1'R)-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-1'-基)胺基甲酸第三丁酯之混合物(50 mg)，得到呈黃色固體狀之((1R,1'S)-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(42.0 mg，60%產率；LCMS (ESI+ )m/z ：550.1 (M+H)+ )及((1S,1'R)-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H)-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(8.0 mg，20%產率，LC-MS (ESI+ )m/z ：550.1 (M+H)+ )。步驟 g ： 將((1S ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(10.0 mg，18.1 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈棕色固體狀之(1S ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(7.60 mg，HCl鹽，86%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：450.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.80 (s, 1H), 7.97~8.06 (m, 2H), 7.42~7.51 (m, 2H), 7.24~7.31 (m, 3H), 6.94 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.06~4.10 (m, 2H),3.14~3.20 (m, 2H), 2.90~3.04 (m, 2H), 2.67~2.86 m, 2H), 2.49-2.60 (m, 1H), 2.32~2.39 (m, 1H),2.20 ~2.27 (m, 2H), 1.77~1.92 (m, 2H)。SFC：e.e. = 99.6%，R t = 4.217分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ；B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。隨機指定絕對立體化學。步驟 h ： 將((1R ,1'S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(42 mg，76.4 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈棕色固體狀之(1R ,1'S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(36.4 mg，HCl鹽，98%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：450.1 (M+H)+ ； 1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.89 (s, 1H), 8.09~8.17 (m, 2H), 7.55~7.60 (m, 2H), 7.35~7.41 (m, 3H), 6.96 (s, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.18~4.22 (m, 2H), 3.27~3.32 (m, 2H), 3.20 ~3.25 (m, 1H), 3.09~3.16 (m, 1H), 2.91~2.96 m, 1H), 2.71-2.81 (m, 1H), 2.51~2.57 (m, 1H), 2.31 ~2.38 (m, 3H), 1.94~2.05 (m, 2H)。SFC：e.e. = 99.1%，R t = 4.552分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ；B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。隨機指定絕對立體化學。步驟 i ： 將((1S ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(8 mg，14.5 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈棕色固體狀之(1R ,1'R )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(6.90 mg，HCl鹽，98%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：450.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.89 (s, 1H), 8.08~8.17 (m, 2H), 7.55~7.60 (m, 2H), 7.35~7.42 (m, 3H), 6.96 (s, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.17~4.21 (m, 2H), 3.26~3.32 (m, 2H), 3.19 ~3.24 (m, 1H), 3.08~3.15 (m, 1H), 2.90~2.95 m, 1H), 2.74-2.81 (m, 1H), 2.51~2.56 (m, 1H), 2.31 ~2.36 (m, 3H), 1.95~2.06 (m, 2H)。SFC：e.e. = 100.0%，R t = 4.552分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ；B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。隨機指定絕對立體化學。步驟 j ： 將((1S ,1'S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(32.0 mg，58.2 µmol)添加至HCl/MeOH (5.00 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈棕色固體狀之(1S ,1'S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己[3]烯-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(26.9 mg，HCl鹽，95%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：450.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.79 (s, 1H), 7.97~8.05 (m, 2H), 7.42~7.51 (m, 2H), 7.24~7.31 (m, 3H), 6.94 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.06~4.10 (m, 2H), 3.16~3.20 (m, 2H), 2.90~3.04 (m, 2H), 2.67~2.86 m, 2H), 2.49-2.55 (m, 1H), 2.32~2.39 (m, 1H), 2.20 ~2.27 (m, 2H), 1.77~1.92 (m, 2H)。SFC：e.e. = 98.6%，R t = 4.217分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ；B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。隨機指定絕對立體化學。
實例 185 ： (S )-1'-(5-(( 四氫 -2H - 哌喃 -4- 基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
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步驟 a ： 向4-溴噁烷(227.0 mg，1.4 mmol，CAS編號25637-16-5)及TEA (287 µL，2.1 mmol)於DMF (2.00 mL)中之反應混合物中添加(S )-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(150.0 mg，0.3 mmol，中間物DE)，且在25℃下攪拌反應混合物1小時。經合併之反應混合物隨後用水(20 mL)淬滅，且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用水(50 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型TLC (石油醚/EtOAc = 4/1)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(1'-(5-((四氫-2H -哌喃-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(28.0 mg，20%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：497.1 (M +H)+ 。步驟 b ： 將(1'-(5-((四氫-2H -哌喃-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(16 mg，0.03 mmol)於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。隨後濃縮反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (5 mL)中，且用固體Na2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8至9。過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (中性條件)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(S )-1'-(5-((四氫-2H -哌喃-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(13.2 mg，0.03 mmol，經合併之產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：397.1 (M +H)+ ；1 H NMR (400MHz, CD3 OD) δ 8.18 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.37 - 7.35 (m, 1H), 7.23 - 7.18 (m, 3H), 4.22 - 4.18 (m, 1H), 3.94 - 3.91 (m, 3H), 3.49 - 3.42 (m, 3H), 3.22 - 3.12 (m, 3H), 2.78 (d,J =16.0 Hz, 1H), 1.92 - 1.44 (m, 8H)。
實例 186 ： (3S)-1'-[3-(4,4- 二氟哌啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
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Figure 02_image849
在步驟a中偶合((1S )-1'-(3-碘-1-(四氫-2H -哌喃-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(中間物J)與4,4-二氟哌啶(CAS編號21987-29-1)，如針對實例152所描述合成(3S)-1'-[3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺。最終化合物之表徵：LCMS (ESI+ )m/z ：454.1 (M +H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ 7.53 (m, 1H), 7.44 - 7.30 (m, 3H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.01 - 3.93 (m, 4H), 3.93 - 3.75 (m, 2H), 3.30 - 3.21 (m, 2H), 3.19 (s, 2H), 2.68 - 2.59 (m, 3H), 2.25 - 1.60 (m, 8H)。
實例 187 ： (3R )-1'-{5-[(2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 氧基 ] 吡嗪 -2- 基 }-3H - 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
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Figure 02_image853
步驟 a ： 將N -[(3R )-1'-(5-溴吡嗪-2-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(680.0 mg，1.5 mmol，中間物CL)、KOH (247.0 mg，4.4 mmol)、t -BuXPhos (124.0 mg，294 µmol)及Pd2 (dba)3 (134.0 mg，147 µmol)於1,4-二噁烷(8.0 mL)及H2 O (8.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌3小時。將反應混合物冷卻至0℃，隨後用1 N HCl酸化至pH = 5，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。有機相用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯= 0%至90%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-(5-羥基吡嗪-2-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(210.0 mg，36%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：399.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3R )-1'-(5-羥基吡嗪-2-基)-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，501 µmol)、2,3,4-三氯吡啶(109.0 mg，601 µmol，CAS編號55934-02-6)及Cs2 CO3 (326.0 mg，1.0 mmol)於DMF (15.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌2.5小時。反應混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，隨後用H2 O (20 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至40%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3R )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(150.0 mg，55%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：544.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3R )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(150.0 mg，275 µmol)、二苯基甲亞胺(99.6 mg，550 µmol)、BINAP (34.2 mg，55.0 µmol)、Cs2 CO3 (179.0 mg，550 µmol)及Pd2 (dba)3 (25.1 mg，27.5 µmol)於甲苯(15.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至40%)對其進行純化，得到呈黃色油狀物之N -[(3R )-1'-[5-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}氧基)吡嗪-2-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，63%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：689.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 將N -[(3R )-1'-[5-({3-氯-2-[(二苯基亞甲基)胺基]吡啶-4-基}氧基)吡嗪-2-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，174 µmol)於HCl/MeOH (2 M，5.0 mL)中之混合物在25℃下攪拌3小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，將其溶解於MeOH (5 mL)中且用固體Na2 CO3 調整至pH = 8。過濾混合物且真空濃縮，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(3R )-1'-{5-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)氧基]吡嗪-2-基}-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(39.3 mg，53%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：425.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：8.05 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.77 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.20 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.22 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.36-4.28 (m, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.49-3.39 (m, 2H), 2.03-1.81 (m, 4H)。
實例 188 及 189 ： (1s ,1'R ,4S )-4-(3-(3,4- 二氫 -1,5- 㖠啶 -1(2H )- 基 ) -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -6- 基 ) -1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 及 (1s,3'S,4R)-4-[3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺之合成
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Figure 02_image857
步驟 a ： 將4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3-烯-3'-酮(500.0 mg，938 µmol，中間物DF)溶解於MeOH (50 mL)中。隨後添加10% Pd/C (50 mg，濕)，且將反應混合物抽成真空並使用H2 氣體再填充3次。在H2 (15 psi)下在25℃下攪拌反應混合物72小時。反應混合物隨後經由矽藻土墊過濾且用MeOH (20 mL)洗滌。濃縮濾液，得到呈黃色油狀物之4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(501 mg，100%產率，粗產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：535.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將4-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(501.0 mg，937 µmol)添加至HCl/MeOH (4 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(HCl鹽)及(1r ,4r )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(HCl鹽)。凍乾後，將(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(HCl鹽)溶解於MeOH (5 mL)中。將混合物用TEA調整至pH = 9至10並濃縮，得到呈黃色固體狀之(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(游離鹼) (50 mg，12%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：451.0 (M+H)+ 。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 10.57 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.01~8.03 (m, 1H), 7.66~7.68 (m, 1H), 7.58~7.62 (m, 1H), 7.50~7.55 (m, 1H), 7.28~7.37 (m, 2H), 6.90~6.93 (m, 1H), 4.08~4.12 (m, 2H), 2.97~3.07 (m, 5H), 2.47~2.57 (m, 2H), 2.12~2.19 (m, 2H), 1.99~2.03 (m, 2H), 1.84~1.89 (m, 2H), 1.60~1.68 (m, 2H), 1.50~1.54 (m, 2H)。亦將(1r ,4r )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(HCl鹽)溶解於MeOH (5 mL)中。將混合物用TEA調整至pH = 9至10並濃縮，得到(1r ,4r )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(80 mg，19%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：451.0 (M+H)+ 。1 HNMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 10.27 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.02~8.04 (m, 1H), 7.72~7.75 (m, 1H), 7.61~7.64 (m, 1H), 7.53~7.58 (m, 1H), 7.38~7.41 (m, 1H), 7.31~7.35 (m, 1H), 6.90~6.94 (m, 1H), 4.10~4.13 (m, 2H), 2.98~3.10 (m, 5H), 2.12~2.18 (m, 2H), 2.02~2.07 (m, 2H), 1.82~1.98 (m, 4H), 1.55~1.7(m, 2H)。步驟 c ： 向(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(80 mg，177 µmol)及Ti(OEt)4 (362 µL，1.76 mmol，CAS編號3087-36-3)於2-Me-THF (1 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(85.8 mg，708 µmol，CAS編號196929-78-9)。在N2 下在95℃下攪拌反應混合物72小時。隨後用EtOAc (30 mL)稀釋混合物且添加H2 O (20 mL)，其中形成大量白色固體。過濾混合物且用乙酸乙酯(10 mL × 2)萃取濾液。經合併之有機層用H2 O (30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之(R )-2-甲基-N -[(1S ,4S )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-亞基]丙烷-2-亞磺醯胺(90.0 mg，92%產率，粗產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：554.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 將(R )-2-甲基-N -[(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-亞基]丙烷-2-亞磺醯胺(90.0 mg，162 µmol)溶解於2-MeTHF (10 mL)中。隨後在-20℃下添加NaBH4 (12.2 mg，324 µmol)。隨後使混合物升溫至25℃並攪拌2小時。用H2 O (10 mL)淬滅反應物，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取混合物。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀物之(R )-N -((1s ,4s )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(90.0 mg，100%產率，粗產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：578.1 (M+Na)+ 。步驟 e ： 將(R )-N -((1s ,4s )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(90 mg，161 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物0.5小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物，將殘餘物溶解於MeOH (5 mL)中。用TEA將混合物調整至pH = 9至10。隨後濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之(1s ,4s )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-胺(72.0 mg，99%產率，粗產物)。LCMS (ESI+ )m/z ：452.0 (M+H)+ 。步驟 f ： 將(1s ,4s )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-胺(72 mg，159 µmol)及TEA (43.9 µL，318 µmol)溶解於DCM (8 ml)中。隨後添加含(Boc)2 O (39.8 µL，174 µmol)之DCM (2 mL)。在25℃下攪拌混合物2小時。混合物隨後用H2 O (10 mL × 2)、鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (石油醚:乙酸乙酯= 1:3)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(30.0 mg，34%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：552.1 (M+H)+ 。步驟 g ： 藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm×30 mm，10 μm)；移動相：45% EtOH (0.1% NH3· H2 O)/CO2 ；流動速率：70 mL/min)分離N -[(1s ,4s )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(30.0 mg，54.3 µmol)，得到呈灰白色固體狀之N -[(1S ,3'R,4S)-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(5.00 mg，17%產率，R t = 2.772分鐘，單峰)及呈灰白色固體狀之N -[(1s ,3'S ,4R )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(8.00 mg，27%產率，R t = 2.928分鐘，單峰)。LC-MS (ESI+ )m/z ：552.1 (M+H)+ 。任意指定非對映異構體之絕對組態。步驟 h ： 將((1s ,1'R ,4S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)胺基甲酸第三丁酯(5.0 mg，9.06 µmol)添加至HCl/MeOH (5.00 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1s ,1'R ,4S )-4-(3-(3,4-二氫-1,5-㖠啶-1(2H )-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(4.0 mg，HCl鹽，90%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：452.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.62 (s, 1H), 8.09~8.15 (m, 2H), 7.56~7.59 (m, 2H), 7.27~7.43 (m, 3H), 4.72 (s, 1H), 4.17~4.21 (m, 2H), 3.08~3.27 (m, 4H), 2.71~ 2.90 (m, 1H), 2.33~2.38 (m, 2H), 1.96-2.11 (m, 6H), 1.75~1.90 (m, 1H), 1.60~1.69 (m, 1H)；SFC：e.e. = 100%，R t = 4.576分鐘。管柱：Chiralcel OD-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：甲醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：40℃。步驟 i ： 將N -[(1s ,3'S ,4R )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(8.0 mg，14.5 µmol)添加至HCl/MeOH (5.00 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1s ,3'S ,4R )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(6.50 mg，HCl鹽，92%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：452.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.62 (s, 1H), 8.09~8.15 (m, 2H), 7.56~7.59 (m, 2H), 7.34~7.43 (m, 3H), 4.72 (s, 1H), 4.17~4.20(m, 2H), 3.18~3.30 (m, 4H), 2.71~ 2.83 (m, 1H), 2.31~2.38 (m, 2H), 1.96-2.12 (m, 6H), 1.76~1.80 (m, 1H), 1.62~1.69 (m, 1H)；SFC：e.e. = 100%，R t = 4.375分鐘。管柱：Chiralcel OD-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：甲醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：40℃。
實例 190 及 191 ： (1r, 3'R, 4R)-4-[3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺及 (1r, 3'S, 4S)-4-[3-(1,2,3,4- 四氫 -1,5- 㖠啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺之合成
Figure 02_image859
Figure 02_image861
經由步驟a至d，用(1r,4r)-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(90 mg，199 µmol，經由實例188至189之步驟a及b合成)形成中間物N -[(1r ,4r )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯，該等步驟以與上文針對實例188至189之步驟c至f所描述類似的方式進行。步驟 e ： 藉由對掌性SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK AS (250 mm×50 mm，10 μm)；移動相：30% EtOH (0.1% NH3 ·H2 O)/CO2 ；流動速率：65 mL/min)分離N -[(1r ,4r )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，90.6 µmol)，得到呈黃色固體狀之N -[(1r ,3'R ,4R )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(5.00 mg，10%產率，R t = 3.268分鐘) (LCMS (ESI+ )m/z ：552.1 (M+H)+ )以及呈黃色固體狀之N -[(1r ,3'S ,4S )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(13.0 mg，26%產率，R t = 3.400分鐘) (LCMS (ESI+ )m/z ：552.1 (M+H)+ )。任意指定非對映異構體之絕對組態。步驟 f ： 將N -[(1r , 3'R , 4R )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(5.0 mg，9.06 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1r , 3'R , 4R )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(3.7 mg，HCl鹽，84%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：452.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.58 (s, 1H), 8.09~8.15 (m, 2H), 7.58~7.60 (m, 1H), 7.51~7.54 (m, 1H), 7.35~7.42 (m, 3H), 4.38 (s, 1H), 4.17~4.20 (m, 2H), 3.05~3.32 (m, 4H), 2.31~ 2.38 (m, 2H), 2.09~2.15 ( m, 1H), 1.96~2.06 (m, 4H), 1.77~1.86 (m, 4H)；SFC：e.e. = 99.1%，R t = 5.401分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 150×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持2.5分鐘。流動速率：2.5 mL/min。管柱溫度：35℃。步驟 g ： 將N -[(1r , 3'S , 4S )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]胺基甲酸第三丁酯(13.0 mg，23.5 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。凍乾殘餘物，得到呈棕色固體狀之(1r , 3'S , 4S )-4-[3-(1,2,3,4-四氫-1,5-㖠啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(11.0 mg，HCl鹽，96%產率)。LCMS (ESI+ )m/z ：452.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.58 (s, 1H), 8.09~8.15 (m, 2H), 7.57~7.61 (m, 1H), 7.51~7.54 (m, 1H), 7.35~7.42 (m, 3H), 4.38 (s, 1H), 4.17~4.21 (m, 2H), 3.29~3.33 (m, 4H), 2.31~ 2.38 (m, 2H), 2.11~2.18 (m, 1H), 1.96~2.06 (m, 4H), 1.78~1.86 (m, 4H)；SFC：e.e. = 98.7%，R t = 5.817分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 150×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持2.5分鐘。流動速率：2.5 mL/min。管柱溫度：35℃。
實例 192 ： (3S )-1'-[5-( 喹啉 -5- 基 )-5H - 吡咯并 [2,3-b] 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image863
步驟 a ： 將2-氯-5H -吡咯并[2,3-b ]吡嗪(200.0 mg，1.3 mmol，CAS編號889447-19-2)、(喹啉-5-基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(674.0 mg，3.9 mmol，CAS編號355386-94-6)、Cu(OAc)2 (472.0 mg，2.6 mmol)及TEA (722 µL，5.2 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物在O2 氛圍下在40℃下攪拌12小時。過濾且濃縮反應混合物。藉由矽膠管柱(溶離：石油醚:乙酸乙酯= 100:0至2:1)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之5-{2-氯-5H -吡咯并[2,3-b]吡嗪-5-基}喹啉(265.0 mg，0.9 mmol，73%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：280.9 (M +H)+ 。步驟 b ： 向5-{2-氯-5H -吡咯并[2,3-b]吡嗪-5-基}喹啉(160.0 mg，0.6 mmol)及(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(310.0 mg，1.1 mmol，中間物I，藉由固體Na2 CO3 鹼化)之混合物中添加NMP (4滴)。在140℃下攪拌混合物7小時。藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化反應混合物，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-[5-(喹啉-5-基)-5H -吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(32.2 mg，0.07 mmol)。LC-MS (ESI+ )m/z ：447.1 (M +H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.93 (s, 1H), 8.21 - 8.19 (m, 1H), 7.93 - 7.88 (m, 3H), 7.75 - 7.70 (m, 2H), 7.37 - 7.36 (m, 1H), 7.21 - 7.18 (m, 3H), 6.69 (d,J =3.6 Hz, 1H), 4.13 (d,J =12.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 1H), 3.28 - 3.12 (m, 3H), 2.79 (d,J =15.6 Hz, 1H), 1.94 - 1.81 (m, 2H), 1.62 - 1.45 (m, 2H)。
實例 193 ： (3S )-1'-[5-(3,6- 二氫 -2H- 哌喃 -4- 基 )-3- 甲基 -5H- 吡咯并 [2,3-b ] 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image865
在與上文步驟1相同的條件下，使2-溴-3-甲基-5H -吡咯并[2,3-b ]吡嗪(CAS編號1260812-97-2)與2-(3,6-二氫-2H -哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦(CAS編號287944-16-5)偶合36小時，如上文針對實例192所描述來合成(3S )-1'-[5-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-3-甲基-5H-吡咯并[2,3-b ]吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺。最終產物之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：416.1 (M +H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.64 (s, 1H), 7.40 - 7.38 (m, 1H), 7.23 - 7.19 (m, 3H), 6.53 (d,J =4.0 Hz, 1H), 6.41 - 6.40 (m, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.02 - 4.00 (m, 3H), 3.15 - 3.08 (m, 3H), 2.84 - 2.78 (m, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.04 - 1.97 (m, 2H), 1.67 - 1.49 (m, 2H)。
實例 194 ： (3S)-1'-[3- 甲基 -5-( 喹啉 -5- 基 )-5H- 吡咯并 [2,3-b] 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image867
Figure 02_image869
在與上文步驟1相同的條件下，使2-溴-3-甲基-5H -吡咯并[2,3-b]吡嗪(CAS編號1260812-97-2)與(喹啉-5-基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(CAS編號355386-94-6)偶合36小時，如上文針對實例192所描述合成(3S)-1'-[3-甲基-5-(喹啉-5-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺。最終產物之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：461.1 (M +H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.37 (d,J = 3.6 Hz, 1H), 8.86 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.50 - 8.37 (m, 2H), 8.16 - 8.14 (m, 3H), 7.58 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 3.79 - 3.60 (m, 4H), 3.27 - 3.23 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.33 - 2.19 (m, 2H), 2.02 - 1.81 (m, 2H)。
實例 195 ： (3S )-1'-{1- 苯基 -1H 吡唑并 [3,4-d ] 嘧啶 -4- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image871
步驟 a ： 在DMF (6 mL)中添加(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(200.0 mg，726.0 µmol，中間物I)、4-氯-2H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶(112.0 mg，726.0 µmol)及DIPEA (632.0 µL，3.6 mmol)，在80℃下攪拌反應混合物2小時。添加(Boc)2 O (201.0 µL，871.0 µmol)，且在80℃下攪拌反應混合物1小時。減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:70)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{2H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，66%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：421.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 在THF (10 mL)中添加N -[(3S )-1'-{2H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，475.0 µmol)、PhB(OH)2 (115.0 mg，950.0 µmol)、Cu(OAc)2 (189.0 mg，950.0 µmol)及DMAP (173.0 mg，1.4 mmol)，且將反應混合物抽成真空並用O2 再填充3次，並且在氧氣(氣球)下在80℃下攪拌72小時。隨後減壓濃縮反應混合物且藉由急驟矽膠層析(石油醚:EtOAc = 100:0至100:80)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{1-苯基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，21%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：497.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.60 (br, 1H), 8.38 (br, 1H), 8.18 (d,J = 8 Hz, 2H), 7.59-7.54 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 1H), 7.26-7.19 (m, 4H), 4.85 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 4.42 (br, 2H), 3.64 (br, 2H),3.15 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.81 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.72-1.65 (m, 4H), 1.36 (s, 9H)。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-{1-苯基-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，100.0 µmol)添加至4 M HCl/MeOH (4 mL)中，且在25℃下攪拌反應混合物2小時。隨後減壓濃縮反應混合物，用EtOAc (10 mL)稀釋並過濾，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-{1-苯基-1H 吡唑并[3,4-d ]嘧啶-4-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(35.0 mg，81.0%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：397.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.72 (br, 1H), 8.54 (br, 3H), 8.49 (s, 1H), 8.24 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 7.67-7.62 (m, 3H), 7.48-7.39 (s, 4H), 4.75 (s, 2H), 7.48 (s, 1H), 4.52-4.50 (m, 2H), 3.38-3.35 (m, 1H), 3.15 (d,J = 16 Hz, 1H), 1.95-1.65 (m, 4H)。
實例 245 ： 1-{6-[(3S)-3- 胺基 -6- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5- 甲基 - 1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 }-6- 甲基 - 1,2,3,4,5,6- 六氫 -1,6- 㖠啶 -5- 酮之合成
Figure 02_image873
步驟 a ： 將N -[(3S )-6-氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(500.0 mg，770 µmol，中間物BY)溶解於MeCN/AcOH (10 mL/10 mL)中。隨後添加NCS (123.0 mg，924 µmol)，且在70℃下攪拌混合物2小時。混合物隨後用EtOAc (100 mL)稀釋。混合物隨後用飽和NaHCO3 (50 mL)、H2 O (30 mL × 3)及鹽水(60 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(363 mg，69%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：683.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-氯-3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(363.0 mg，531 µmol)、6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮(87.1 mg，531 µmol，中間物BW)、Xantphos-Pd-G4 (50.9 mg，53.1 µmol)及Cs2 CO3 (518.0 mg，1.59 mmol)於甲苯(10.0 mL)中之溶液在N2 下在70℃下攪拌12小時。反應混合物用H2 O (40 mL)稀釋且用EtOAc (40 mL × 3)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(EtOAc:MeOH = 100:0至100:5)純化殘餘物，得到呈黃色液體狀之N -[(3S )-1'-[5-氯-3-(6-甲基-5-側氧基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(73.0 mg，19%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：719.2 (M +H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-[5-氯-3-(6-甲基-5-側氧基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(73.0 mg，101 µmol)、三甲基硼氧雜環己烷(86.5 μL，3.5 M於THF中)、Pd(dppf)Cl2 (7.39 mg，10.1 µmol)及K2 CO3 (27.9 mg，202 µmol)放入溶劑二噁烷(5.00 mL)及H2 O (1.00 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。在90℃下攪拌反應混合物12小時。濃縮反應混合物並添加H2 O (20 mL)，隨後用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(EtOAc:MeOH = 100:0至100:10)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-6-氟-1'-[5-甲基-3-(6-甲基-5-側氧基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(61.0 mg，87%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：699.2 (M +H)+ 。步驟 d ： 將N -[(3S )-6-氟-1'-[5-甲基-3-(6-甲基-5-側氧基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-1-基)-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(61.0 mg，87.2 µmol)添加至HCl/MeOH (5 mL，4 M)中。在25℃下攪拌反應混合物0.5小時。減壓濃縮反應混合物且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之1-{6-[(3S )-3-胺基-6-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮鹽酸鹽(23.3 mg，52%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：515.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ = 7.54-7.57 (m, 1H), 7.37-7.39 (m, 1H), 7.08-7.18 (m, 2H), 6.13-6.15 (m, 1H), 4.46 (s, 1H), 3.88-3.91 (m, 2H), 3.66-3.79 (m, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.16-3.26 (m, 4H), 2.75-2.78 (m, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.05-2.20 (m, 3H), 1.94-1.99 (m, 1H), 1.85-1.88 (m, 1H), 1.69-1.73 (m, 1H)。
實例 246 ： 1-{6-[(3S)-3- 胺基 -5- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5- 甲基 - 1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -3- 基 }-6- 甲基 - 1,2,3,4,5,6- 六氫 -1,6- 㖠啶 -5- 酮之合成
Figure 02_image875
Figure 02_image877
在步驟a中以N -[(3S )-5-氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(中間物Z)為起始物質，如針對實例245所描述合成1-{6-[(3S )-3-胺基-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮鹽酸鹽，步驟a在70℃下進行12小時而非2小時。最終產物1-{6-[(3S )-3-胺基-5-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮鹽酸鹽(59.7 mg，45%產率，黃色固體)之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：515.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 13.22 (br, 1H), 8.70 (s, 3H), 7.47~7.49 (m, 1H), 7.34~7.38 (m, 1H), 7.17~7.27 (m, 2H), 5.81~5.83 (m, 1H), 4.43~4.45 (m, 1H), 3.71~3.85 (m, 2H), 3.63~3.66 (m, 2H), 3.41~3.52 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.90~3.19 (m, 4H), 2.56 (s, 3H), 1.91~2.08 (m, 4H), 1.59~1.67 (m, 2H)。
實例 247 ： 1-{6-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5- 甲基 -1H - 吡唑并 [3,4-b ] 吡嗪 -3- 基 }-6- 甲基 -1,2,3,4,5,6- 六氫 -1,6- 㖠啶 -5- 酮之合成
Figure 02_image879
Figure 02_image881
在步驟a中以N -[(3S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(中間物J)為起始物質，如針對實例245所描述合成1-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮。最終產物1-{6-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-甲基-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-3-基}-6-甲基-1,2,3,4,5,6-六氫-1,6-㖠啶-5-酮(35.0 mg，69%產率，黃色固體)之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：497.2 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) 7.53-7.55 (m, 1H), 7.31-7.46 (m, 4H), 6.06-6.08 (m, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.87-3.90 (m, 2H), 3.67-3.80 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.20-3.27 (m, 4H), 2.73-2.77 (m, 2H), 2.65 (s, 3H),2.05-2.19 (m, 3H), 1.96-2.01 (m, 1H), 1.83-1.86 (m, 1H), 1.70-1.73 (m, 1H)。
實例 248 ： (3S )-1'-[5-( 丙 -2- 基硫烷基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image883
步驟 a ： 向2-碘丙烷(469.0 mg，2.8 mmol)及TEA (574 µL，4.1 mmol)於DMF (8 mL)中之反應混合物中添加N -[(3S )-1'-[5-(鈉硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(300.0 mg，0.7 mmol，中間物DE)。在25℃下攪拌反應混合物1小時。反應混合物隨後用水(20 mL)淬滅，且用EtOAc (50 mL × 2)萃取。有機層用水(50 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(40 g管柱，0%至25%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-[5-(丙-2-基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(20.0 mg，0.04 mmol)。LC-MS (ESI+ )m/z ：455.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(丙-2-基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(20.0 mg，0.04 mmol)於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。濃縮經合併之反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (5 mL)中，且用固體Na2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8至9。過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[5-(丙-2-基硫烷基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(17.9 mg，0.05 mmol，經合併之產物)。LC-MS (ESI+ )m/z ：354.9 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.17 (d,J =1.6 Hz, 1H), 8.08 (d,J =1.6 Hz, 1H), 7.37 - 7.35 (m, 1H), 7.23 - 7.18 (m, 3H), 4.22 - 4.17 (m, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.49 - 3.46 (m, 1H), 3.24 - 3.12 (m, 3H), 2.79 (d,J =15.6 Hz, 1H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.60 - 1.40 (m, 2H), 1.27 (d,J =6.8 Hz, 6H)。
實例 249 及 250 ： (3S )-1'-[5-( 環戊基硫烷基 )-3- 甲基吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺 及 (3S )-1'-[5-( 環戊基硫烷基 )-6- 甲基吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image885
步驟 a ： 將5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-甲基吡嗪-2-硫醇鈉(中間物DK)及5-((S)-1-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基吡嗪-2-硫醇鈉(中間物DL) (250.0 mg，552.0 μmol)、溴環戊烷(163.0 mg，1.1 mmol)及Cs2 CO3 (451.0 mg，1.4 mmol)於DMF (15.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在70℃下攪拌3小時。混合物用乙酸乙酯(40.0 mL)稀釋，隨後用H2 O (25.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(15.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至50%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R)-N-((S)-1'-(5-(環戊基硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-(環戊基硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(230 mg，84%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 499.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將(R)-N-((S)-1'-(5-(環戊基硫基)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R)-N-((S)-1'-(5-(環戊基硫基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(220.0 mg，441.0 µmol)於HCl/MeOH (4 M，10 mL)中之混合物在20℃下攪拌1小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，將其溶解於MeOH (5.0 mL)中且用固體Na2 CO3 調整至pH = 8至9。過濾混合物且真空濃縮，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)-3-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(14.4 mg，8%產率)以及呈白色固體狀之(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)-6-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(39.2 mg，23%產率)。(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)-3-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵：LC-MS (ESI+ ) m/z 395.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.00 (s, 1H), 7.38 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 7.25-7.17 (m, 3H), 3.98 (s, 1H), 3.92-3.85 (s, 1H), 3.41 (d,J = 12.4 Hz, 2H), 3.13-3.01 (m, 3H), 2.76 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.15-2.09 (m, 2H), 2.03-1.1.79 (m, 4H), 1.71-1.58 (m, 5H), 1.46 (d,J = 13.2 Hz, 1H)。SFC：e.e.= 98.6%，Rt = 3.007分鐘，Chiralpak AS-3 100 × 4.6 mm I.D.，3 μm；移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)；梯度：5%至40% B持續4.5分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1分鐘；流動速率：2.8 mL/min；溫度：40℃。(3S )-1'-[5-(環戊基硫烷基)-6-甲基吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵：LC-MS (ESI+ ) m/z 395.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.97 (s, 1H), 7.37 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.25-7.16 (m, 3H), 4.16 (d,J = 13.2 Hz, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.88-3.82 (s, 1H), 3.21-3.12 (m, 3H), 2.78 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.12-2.02 (m, 2H), 1.91-1.73 (m, 4H), 1.70-1.56 (m, 5H), 1.42 (d,J = 13.6 Hz, 1H)。SFC：e.e.= 97.8%，Rt = 3.377分鐘，與其他區位異構物之管柱條件相同。
實例 251 ： (3S )-1'-[5-( 環戊氧基 ) 吡嗪 -2- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image887
Figure 02_image889
步驟 a ： 將(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(100.0 mg，217 µmol，中間物CZ)、Cs2 CO3 (141.0 mg，434 µmol)、3,4,7,8-四甲基-1,10-啡啉(10.2 mg，43.4 µmol)及CuI (4.1 mg，21.7 µmol)於環戊醇(2 mL)中之混合物用N2 鼓泡5分鐘，隨後在130℃下在微波照射下攪拌2小時。過濾反應混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1'-(5-(環戊氧基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(20.0 mg，20%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：465.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-(環戊氧基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(20.0 mg，43.0 µmol)於TFA (0.1 mL)及DCM (1.0 mL)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (3 mL)中，且用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 9至10。隨後過濾混合物且藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化濾過物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[5-(環戊氧基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(5.30 mg，34%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：365.0 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 7.66 (s, 2H), 7.32 - 7.23 (m, 1H), 7.17 - 7.00 (m, 3H), 5.12 (br t,J = 5.3 Hz, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 3H), 3.07 - 2.93 (m, 3H), 2.67 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 1.90 - 1.63 (m, 8H), 1.57 - 1.29 (m, 4H)。
實例 252 ： (1S)-1'-{6- 環戊基咪唑并 [2,1-b][1,3,4] 噻二唑 -2- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image891
步驟 a ： 將5-溴-2,3-二氫-1,3,4-噻二唑-2-亞胺(300.0 mg，1.7 mmol，CAS編號37566-39-5)、(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(781.0 mg，1.7 mmol，經由實例120之步驟a合成，65%純度)及TEA (686.0 μL，5.0 mmol)於EtOH (25.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌4小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(二氯甲烷:甲醇= 0%至8%)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之(R )-N -[(3S )-1'-(5-亞胺基-4,5-二氫-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.1 g，98%產率，60%純度)。LC-MS (ESI+ ) m/z 406.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將(R )-N -[(3S )-1'-(5-亞胺基-4,5-二氫-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(300.0 mg，443.0 µmol)及2-氯-1-環戊基乙-1-酮(97.3 mg，664.0 µmol，中間物DM)於EtOH (10.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(二氯甲烷:甲醇= 0%至13%)對其進行純化，得到呈白色固體狀之粗產物。隨後藉由製備型HPLC (HCl)再純化固體，得到呈白色固體狀之(1S )-1'-{6-環戊基咪唑并[2,1-b ][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(81.0 mg，43%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 394.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.86 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.56 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 3H), 4.49 (s, 1H), 4.02-3.96 (m, 1H), 3.89-3.82 (m, 1H), 3.62-3.52 (m, 2H), 3.29-3.25 (m, 1H), 3.24-3.19 (m, 2H), 2.24-2.16 (m, 2H), 2.08-1.69 (m, 10H)。
實例 253 ： (1S)-1'-{6- 環丙基咪唑并 [2,1-b][1,3,4] 噻二唑 -2- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image893
步驟 a ： 將(R )-N -[(3S )-1'-(5-亞胺基-4,5-二氫-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(200.0 mg，493.0 µmol，經由實例252之步驟a合成)及2-溴-1-環丙基乙-1-酮(120.0 mg，739.0 µmol，CAS編號69267-75-0)於EtOH (15.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌18小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(二氯甲烷:甲醇= 0%至13%)對其進行純化，得到呈白色固體狀之粗產物。隨後藉由製備型HPLC (HCl)純化固體，得到呈白色固體狀之(1S )-1'-{6-環丙基咪唑并[2,1-b ][1,3,4]噻二唑-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(30.1 mg，15%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 366.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.77 (s, 1H), 7.55 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45-7.34 (m, 3H), 4.49 (s, 1H), 4.01-3.94 (m, 1H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.62-3.51 (m, 2H), 3.26-3.16 (m, 2H), 2.11-1.91 (m, 3H), 1.87-1.81 (m, 1H), 1.74-1.67 (m, 1H), 1.15-1.10 (m, 2H), 0.90-0.86 (m, 2H)。
實例 254 ： (1S)-1'-[5- 甲基 - 3-( 吡咯啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image895
Figure 02_image897
步驟 a ： 將N -[(1S )-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(350.0 mg，555.0 µmol，中間物J)、吡咯啶(197.0 mg，2.8 mmol)、XantPhos-Pd-G4 (53.3 mg，55.4 µmol，CAS編號1621274-19-8)及Cs2 CO3 (358.0 mg，1.1 mmol)於甲苯(20.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至45%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(1S )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(180.0 mg，57%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 574.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 向N -[(1S )-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(180.0 mg，313.0 µmol)於MeCN (5.0 mL)及AcOH (5.0 mL)中之混合物中添加NBS (60.8 mg，344.0 µmol)，且在20℃下攪拌混合物1小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，將其溶解於乙酸乙酯(30.0 mL)中，隨後用飽和NaHCO3 (20.0 mL)及鹽水(10.0 mL)洗滌。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至35%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(1S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(130 mg，64%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 654.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(1S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(130.0 mg，199.0 µmol)、三甲基硼氧雜環己烷(74.9 mg，597.0 µmol，CAS編號823-96-1)、K2 CO3 (54.9 mg，398.0 µmol)及Pd(dppf)Cl2 (14.5 mg，19.9 µmol)於1,4-二噁烷(10.0 mL)及H2 O (3.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。隨後真空濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至40%)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(1S )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(80.0 mg，69%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 588.3 (M+H)+ 。步驟 d ： 將N -[(1S )-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(80.0 mg，136.0 µmol)於HCl/MeOH (2 M，3 mL)中之混合物在20℃下攪拌2小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈紅色固體狀之(1S )-1'-[5-甲基-3-(吡咯啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(36.5 mg，61%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 404.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.56 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 3H), 4.48 (s, 1H), 4.09-3.84 (m, 6H), 3.42-3.33 (m, 2H), 3.22 (s, 2H), 2.66 (s, 3H), 2.16-1.68 (m, 8H)。
實例 255 ： (3S)-1'-[5- 環丙基 -3-( 哌啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image899
Figure 02_image901
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(170.0 mg，255.0 µmol，經由實例152之步驟a至b合成)、環丙基
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(54.7 mg，637.0 µmol)、K2 CO3 (105.0 mg，764.0 µmol)、SPhos (20.8 mg，50.9 µmol)及Pd2 (dba)3 (23.2 mg，25.4 µmol)於甲苯(20.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，將其溶解於乙酸乙酯(30.0 mL)中且用H2 O (20.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(10.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至25%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S )-1'-[5-環丙基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(110.0 mg，69%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 628.4 (M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-[5-環丙基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(110.0 mg，175.0 µmol)於HCl/MeOH (2 M，5 mL)中之混合物在20℃下攪拌2小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-[5-環丙基-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(73.2 mg，87%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 444.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.56 (d,J = 7.2 Hz, 1H),, 7.45-7.35 (m, 3H), 4.49 (s, 1H), 4.26-4.14 (m, 2H), 3.93 (s, 4H), 3.46-3.37 (m, 2H), 3.22 (s, 2H), 2.30-2.22 (m, 1H), 2.14-2.07 (m, 1H), 2.02-1.96 (m, 1H), 1.88-1.80 (m, 7H), 1.73-1.70 (m, 1H), 1.21-1.15 (m, 4H)。
實例 256 ： (S )-(5-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ) 吡嗪 -2- 基 )( 苯基 ) 甲酮之合成
Figure 02_image903
步驟 a ： 將(1'-(5-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(100 mg，217 µmol，中間物CZ)、(1-苯基乙烯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(38.4 mg，260 µmol)、Pd(dppf)Cl2 (15.8 mg，21.7 µmol)及Cs2 CO3 (141 mg，434 µmol)放入二噁烷(10 mL)及H2 O (1 mL)之溶液中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。隨後在100℃下攪拌反應混合物12小時。隨後濃縮反應混合物並添加H2 O (30 mL)，且用EtOAc (50 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(1'-(5-(1-苯基乙烯基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S)- 第三丁酯(90.0 mg，87%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：483.1(M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S)-1'-[5-(1-苯基乙烯基)吡嗪-2-基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(90.0 mg，186 µmol)、K2 OsO4 ·2H2 O (92.7 mg，279 µmol)及NaIO4 (59.6 mg，279 µmol)於丙酮(10.00 mL)及H2 O (5.00 mL)中之混合物在25℃下攪拌2小時。隨後用乙基醚(30 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物。過濾混合物且分離經分配之層。用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至40/100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之N -[(3S)-1'-(5-苯甲醯基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(60.0 mg，67%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：507.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將(1'-(5-苯甲醯基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S)- 第三丁酯(40 mg，82.5 µmol)於TFA (0.1 mL)及DCM (1 mL)中之溶液在25℃下攪拌1小時。隨後用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 9至10。過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeCN (3 mL)中且藉由製備型HPLC (鹼性條件)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(S )-(5-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)(苯基)甲酮(6.50 mg，16.9 µmol，21%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z 385.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ = 8.74 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.97 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.42 - 7.37 (m, 1H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 4.48 (d , J = 13.8 Hz, 2H), 4.01 (s, 1H), 3.48 - 3.39 (m, 2H), 3.21 (d,J = 15.8 Hz, 1H), 2.87 (d,J = 15.9 Hz, 1H), 1.97 - 1.76 (m, 2H), 1.72 - 1.61 (m, 1H), 1.51 (d,J = 13.9 Hz, 1H)。
實例 257 ： (3S)-1'-{5-[( 羥亞胺基 )( 苯基 ) 甲基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image905
步驟 a ： 將N -[(3S )-1'-(5-苯甲醯基吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50 mg，0.1 mmol，經由實例256之步驟a及b合成)、NH2 OH·HCl (70.8 mg，1.0 mmol)、TEA (713 μl，5.2 mmol)及NH2 OH·HCl (286 mg，4.1 mmol)於MeOH (5.0 mL)中之混合物在25℃下攪拌2小時。用乙基醚(30 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物。隨後過濾混合物且分離經分配之層。用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取水相。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0/100至80/100)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(1'-(5-((羥亞胺基)(苯基)甲基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S,E)- 第三丁酯(80 mg，53%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：500.2(M+H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S)-1'-{5-[(E)-(羥亞胺基)(苯基)甲基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(80 mg，160 µmol)於HCl/MeOH (10 ml)中之溶液在25℃下攪拌1小時。隨後用固體Na2 CO3 將混合物調整至pH = 9至10。過濾混合物且濃縮濾液，得到殘餘物。將殘餘物溶解於HCl/MeOH (10 mL)中。藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化混合物，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-{5-[(羥亞胺基)(苯基)甲基]吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(甲酸) (9.30 mg，13%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：385.1. (M+H)+ ；1 HNMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ = 8.61 - 8.43 (m, 2H), 8.35 - 8.26 (m, 1H), 7.57 - 7.27 (m, 10H), 7.61 - 7.24 (m, 1H), 4.46 - 4.26 (m, 3H), 3.44 - 3.35 (m, 2H), 3.26 - 3.11 (m, 2H), 1.95 - 1.78 (m, 2H), 1.76 - 1.59 (m, 2H), 10.35 -1.23 (m, 1H)。
實例 258 ： {3-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6-[(2- 胺基 -3- 氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡啶 -2- 基 } 甲醇之合成
Figure 02_image907
Figure 02_image909
步驟 a ： 將6-溴-3-氟吡啶-2-甲酸甲酯(500.0 mg，2.1 mmol，CAS編號1214332-47-4)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(586.0 mg，2.1 mmol，中間物I)及TEA (1.46 mL，10.6 mmol)於DMF (50.0 mL)中之混合物在80℃下攪拌3小時。反應混合物不經進一步處理即直接使用。LC-MS (ESI+ ) m/z 417.9 (M+H)+ 。步驟 b ： 向3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-溴吡啶-2-甲酸甲酯(886.0 mg，2.1 mmol)於DMF (50.0 mL)中之混合物中添加(Boc)2 O (722 μL，3.2 mmol)，在20℃下攪拌混合物2小時。混合物隨後用乙酸乙酯(120.0 mL)稀釋且用H2 O (80.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(50.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至35%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡啶-2-甲酸甲酯(700 mg，64%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 538.0 (M+Na)+ 。步驟 c ： 將6-溴-3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]吡啶-2-甲酸甲酯(320.0 mg，619.0 µmol)、3-氯-4-(鈉硫烷基)吡啶-2-胺(146.0 mg，804.0 µmol，中間物AC)、XantPhos (71.1 mg，123.0 µmol)、DIPEA (352.0 μL，1.9 mmol)及Pd2 (dba)3 (56.6 mg，61.9 µmol)於1,4-二噁烷(15.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至85%)對其進行純化，得到呈棕色固體狀之6-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡啶甲酸(S )-甲酯(290.0 mg，79%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 596.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 在0℃下向6-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡啶甲酸(S )-甲酯(290.0 mg，486.0 µmol)於無水THF (10.0 mL)中之混合物中緩慢添加DIBAL-H (2.42 mL，2.42 mmol)，隨後使所得混合物升溫至15℃且在N2 氛圍下攪拌5小時。混合物用10% AcOH (20.0 mL)淬滅，隨後用乙酸乙酯(20.0 mL × 2)萃取。用飽和NaHCO3 (20.0 mL)及鹽水(10.0 mL)洗滌有機相。有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷= 0%至8%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{6-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫烷基]-2-(羥甲基)吡啶-3-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，18%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 568.1 (M+H)+ 。步驟 e ： 將N -[(3S )-1'-{6-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫烷基]-2-(羥甲基)吡啶-3-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，88.0 µmol)於HCl/EtOAc (4 M，2.0 mL)及EtOAc (2.0 mL)中之混合物在15℃下攪拌1小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物，將其溶解於MeOH (5.0 mL)中且用固體Na2 CO3 調整至pH = 8.0。過濾混合物且真空濃縮，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈白色固體狀之{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-2-基}甲醇(4.2 mg，10%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 490.0 (M+Na)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.66-7.64 (m, 2H), 7.55 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.43-7.40 (m, 1H), 7.27-7.22 (m, 3H), 6.17 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.05 (s, 1H), 3.21-3.12 (m, 3H), 3.06-2.99 (m, 2H), 2.82 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.08-1.96 (m, 2H), 1.69-1.64 (m, 1H), 1.55-1.51 (m, 1H)。
實例 259 及 260 ： (1R)-1-{3-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 } 乙 -1- 醇及 (1S)-1-{3-[(3S)-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-6-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 } 乙 -1- 醇之合成
Figure 02_image911
步驟 a ： 在N2 、-78℃下向3-[(3S )-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-甲酸甲酯(500.0 mg，810 µmol，經由實例243之步驟a合成)於THF (15.00 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (806 µL，1.21 mmol，1.5 M於甲苯中)。在相同溫度下攪拌溶液2小時。在-78℃下藉由10% AcOH水溶液(50 mL)淬滅反應物，且用EtOAc (50 mL × 3)萃取。用飽和NaHCO3 水溶液將經合併之有機層之pH調整至8至9並且分離該有機層。有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物。獲得呈黃色固體狀之產物N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-甲醯基吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(260.0 mg，55%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：586.0 (M+H)+ 。亦獲得呈黃色油狀物之副產物N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-(羥甲基)吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120 mg，25%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：588.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 在-78℃下向N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-甲醯基吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，340 µmol)於THF (3.00 mL)中之混合物中緩慢添加MeMgBr (153 µL，462 µmol，3 M於二乙基醚中)。使混合物升溫至0℃後保持1小時。在0℃下添加另外的MeMgBr (153 µL，462 µmol，3 M於二乙基醚中)。在0℃下攪拌混合物1小時。隨後用H2 O (10 mL)淬滅反應物。過濾混合物，且用EtOAc (20 mL × 3)萃取濾液。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(石油醚/乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-(1-羥乙基)吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(202 mg，335 µmol，99%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：602.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S )-1'-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]-3-(1-羥乙基)吡嗪-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，331 µmol)溶解於EtOAc (2.00 mL)中。隨後添加HCl/EtOAc (2.00 mL，4 M)，且在25℃下攪拌混合物1小時。藉由過濾收集所沈澱之黃色固體。將固體溶解於MeOH (5.00 mL)中。用固體NaHCO3 將混合物調整至pH = 8至9。過濾混合物且藉由製備型HPLC (HCOOH)純化濾過物，得到呈黃色固體狀之1-{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}乙-1-醇(甲酸) (100.0 mg，HCOOH鹽，55%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：502.0 (M+H)+ 。步驟 d ： 將1-{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}乙-1-醇(100.0 mg，199 µmol，HCOOH鹽)用固體NaHCO3 鹼化且藉由對掌性SFC (DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm×30 mm，10 μm；移動相：50% EtOH (0.1% NH3 ·H2 O)/CO2 ；流動速率：70 mL/min)分離，得到兩種非對映異構體，藉由第二製備型HPLC (HCOOH條件)進一步純化該等非對映異構體。任意指定非對映異構體之絕對組態。獲得呈白色固體狀之(1R )-1-{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}乙-1-醇(甲酸) (26.2 mg，24%產率)：LC-MS (ESI+ )m/z ：502.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.53 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.05 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.45 - 7.30 (m, 3H), 6.90 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 5.10 (q,J = 6.4 Hz, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.01 - 3.88 (m, 1H), 3.86 - 3.77 (m, 1H), 3.42 - 3.36 (m, 1H), 3.32 - 3.26 (m, 1H), 3.23 - 3.10 (m, 2H), 2.09 - 1.90 (m, 2H), 1.79 (m, 1H), 1.67 (m, 1H), 1.54 (d,J = 6.4 Hz, 3H)；SFC：e.e. = 100%，R t = 1.561分鐘。管柱：Chiralpak AD-3 50×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：40%乙醇(0.05% DEA)/CO2 。流動速率：4 mL/min。管柱溫度：35℃。獲得呈白色固體狀之(1S )-1-{3-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}乙-1-醇(甲酸) (19.8 mg，18%產率)：LC-MS (ESI+ )m/z ：502.0 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 8.55 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.05 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 7.51 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.42 - 7.29 (m, 3H), 6.90 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 5.09 (q,J = 6.3 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.09 - 3.97 (m, 1H), 3.80 - 3.69 (m, 1H), 3.45 - 3.34 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 3.21 - 3.09 (m, 2H), 2.08 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.78 - 1.64 (m, 2H), 1.53 (d,J = 6.4 Hz, 3H。SFC：e.e. = 100%，R t = 2.320分鐘，與針對其他非對映異構體所陳述之條件相同。
實例 261 ： 2-[(3S )-3- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ]-5-[(2,3- 二氯苯基 ) 硫烷基 ]-3,4- 二氫嘧啶 -4- 酮之 合成
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Figure 02_image915
步驟 a ： 將5-溴-2-氯-4-甲氧基嘧啶(1.00 g，4.5 mmol，CAS編號57054-92-9)、(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺二鹽酸鹽(1.40 g，4.9 mmol，中間物I)及TEA (3.10 mL，22.3 mmol)於DMF (20.00 mL)中之混合物在50℃下攪拌1小時。混合物直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：388.9、390.9 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(3S )-1'-(5-溴-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺(1.70 g，4.5 mmol)於DMF (20.00 mL)中之混合物中添加(Boc)2 O (1.50 mL，6.7 mmol)。在25℃下攪拌混合物3小時。混合物隨後用EtOAc (100 mL)稀釋，用H2 O (30 mL × 3)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:20)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N -[(3S)-1'-(5-溴-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(2.20 g，100%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：489.0、491.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3S)-1'-(5-溴-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(300.0 mg，612 µmol)及2,3-二氯苯-1-硫醇(120.0 mg，673 µmol)溶解於二噁烷(20.0 mL)中。隨後依次添加XantPhos (70.5 mg，122 µmol)、Pd2 (dba)3 (55.9 mg，61.2 µmol)及DIPEA (318 µL，1.8 mmol)。將混合物抽成真空且使用N2 再填充3次。隨後在120℃下攪拌反應混合物10小時。隨後減壓移除溶劑，得到黑色殘餘物，藉由管柱層析(石油醚/EtOAc = 100:0至100:60)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3S)-1'-{5-[(2,3-二氯苯基)硫烷基]-4-甲氧基嘧啶-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(260.0 mg，72%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：609.1 (M+Na)+ 。步驟 d ： 將N -[(3S)-1'-{5-[(2,3-二氯苯基)硫烷基]-4-甲氧基嘧啶-2-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(50.0 mg，85.0 µmol)放入HBr水溶液(48%，20 mL)中。在100℃下攪拌反應混合物6小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (2.00 mL)中且用固體Na2 CO3 調整至pH = 7至8，隨後藉由製備型HPLC (FA)對其進行純化，得到呈白色固體狀之2-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-5-[(2,3-二氯苯基)硫烷基]-3,4-二氫嘧啶-4-酮(6.80 mg，17%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：472.9 (M+H)+ ；1 H NMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ 8.02 (s, 1H), 7.42 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.34 - 7.17 (m, 4H), 7.05 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.80 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 4.43 - 4.28 (m, 2H), 4.16 ( d,J = 13.9 Hz, 1H), 3.45 - 3.28 (m, 2H), 3.17 - 3.03 (m, 2H), 2.12 - 1.46 (m, 4H)。
實例 262 ： (S )-1'-(5-((2,3- 二氯苯基 ) 硫基 )-4- 甲氧基嘧啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image917
步驟 a ： 將(1'-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(50.0 mg，85.0 µmol，經由實例261之步驟a至c合成)放入HCl/EtOAc (10 mL，4 M)中。隨後在25℃下攪拌混合物2小時。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (FA)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(S )-1'-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺甲酸鹽(19.4 mg，HCOOH鹽，43%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：487.0 (M+H)+ ；1 H NMR (400MHz, 甲醇-d 4 )δ 8.55 ( s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.49 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.41 - 7.26 (m, 4H), 7.12 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 4.78 - 4.65 (m, 2H), 4.31 (s, 1H), 3.97 - 3.89 (m, 3H), 3.47 - 3.36 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 1H), 1.81 (d,J = 4.2, 12.4 Hz, 2H), 1.72 - 1.57 (m, 2H)。
實例 263 ： (S)-1'-(5-(((6- 氯吡啶 -2- 基 ) 甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image919
步驟 a ： 在0℃下向(S)-3-((5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(190 mg，371 μmol，中間物ED)及2-(溴甲基)-6-氯吡啶(191 mg，927 μmol，CAS編號63763-79-1)於THF (8.00 mL)中之溶液中添加EtONa (101 mg，1.48 mmol)於EtOH (1.60 mL)中之溶液。隨後在0至25℃下攪拌混合物16小時。隨後將混合物傾入水(50.0 mL)中且用乙酸乙酯(50.0 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(50.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈淡黃色油狀物之(S)-(1'-(5-(((6-氯吡啶-2-基)甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(335 mg，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：538.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 在25℃下向(S)-(1'-(5-(((6-氯吡啶-2-基)甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(320 mg，595 μmol)於DCM (12.8 mL)中之溶液中添加TFA (1.97 g，17.3 mmol，1.28 mL)。在25℃下攪拌混合物12小時。混合物隨後用飽和NaHCO3 溶液調整至pH 7至8且用DCM (20.0 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(20.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max - RP 150 × 50 mm × 10 μm；移動相：[水(0.225% FA) - ACN]；B%：16%至46%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(S)-1'-(5-(((6-氯吡啶-2-基)甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(79.2 mg，158 μmol，27%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：438.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d6 )：δ 8.30 - 8.26 (m, 2H), 8.03 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.78 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 3H), 7.22 - 7.17 (m, 3H), 4.31 (s, 2H), 4.16 - 4.12 (m, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 3H), 2.70 - 2.66 (m, 1H), 1.78 - 1.62 (m, 2H), 1.49 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 1.16 (br d,J = 12.8 Hz, 1H)。
實例 264 ： (S)-1'-(5-(( 環戊基甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image921
在步驟a中偶合(S)-3-((5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)丙酸乙酯(中間物ED)與(溴甲基)環戊烷，如上文針對實例263所描述合成(S)-1'-(5-((環戊基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。(S)-1'-(5-((環戊基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：395.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d6 )：δ 8.34 - 8.27 (m, 1H), 8.06 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.33 - 7.31 (m, 1H), 7.21 - 7.14 (m, 3H), 4.14 - 4.09 (m, 2H), 3.88 (s, 1H), 3.18 - 2.99 (m, 5H), 2.65 (br d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.09 - 1.98 (m, 1H), 1.80 - 1.44 (m, 10H), 1.27 - 1.19 (m, 2H), 1.13 (br d,J = 12.4 Hz, 1H)。
實例 265 ： (S)-1'-(5-( 苯乙基硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image923
步驟 a ： 在25℃下向(2-溴乙基)苯(696 mg，3.76 mmol，508 μL)及TEA (571 mg，5.64 mmol，785 μL)於DMF (15.0 mL)中之溶液中添加(S )-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(350 mg，805 μmol，中間物DE)，且在25℃下攪拌混合物1小時。將反應混合物傾入水(50.0 mL)中且用乙酸乙酯(50.0 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(50.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 × 25 × 10 μm；移動相：[水(0.225% FA) - ACN]；B%：70%至100%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(S)-(1'-(5-(苯乙基硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(130 mg，30%產率)LC-MS (ESI+ )m/z ：517.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 在25℃下向(S)-(1'-(5-(苯乙基硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(150 mg，290 μmol)於MeOH (5.00 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH (4 M，2.00 mL)，且在25℃下攪拌混合物12小時。隨後真空濃縮混合物。用MeOH (4.00 mL)溶解殘餘物，且用氫氧化銨(25至28%)將混合物之pH調整至8至9。藉由製備型HPLC (管柱：Xtimate C18 150 × 25 mm × 5 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v) - ACN]；B%：56%至86%，10分鐘)純化混合物，得到殘餘物。用CH3 CN (3.00 mL)溶解殘餘物，且向混合物中添加HCOOH (78.7 mg，1.64 mmol)於H2 O (30.0 mL)中之溶液。凍乾混合物，得到呈淡黃色固體狀之(S)-1'-(5-(苯乙基硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(57.3 mg，120 μmol，85%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：417.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d6 )：δ 8.31 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.07 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.35 - 7.18 (m, 9H), 4.14 (br d,J = 13.2 Hz, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.27 - 3.24 (m, 2H), 3.17 - 3.06 (m, 4H), 2.87 (t,J = 7.6 Hz, 2H), 2.69 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.08 - 1.73 (m, 1H), 1.71 - 1.63 (m, 1H), 1.50 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 1.18 (br d,J = 14.4 Hz, 1H)。
實例 266 ： (S)-1'-(5-(( 環丙基甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image925
在步驟a中，在TEA作為鹼的情況下偶合(S )-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(中間物DE)與(溴甲基)環丙烷，如針對實例265所描述合成(S)-1'-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺。(S)-1'-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：350.2 (M-17)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d6 )：δ 8.28 - 8.25 (m, 2H), 8.07 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.34 - 7.33 (m, 1H), 7.22 - 7.17 (m, 3H), 4.15 - 4.10 (m, 2H), 3.92 (s, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 4H), 2.95 (d,J = 6.8 Hz, 2H), 2.69 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 1.80 - 1.62 (m, 2H), 1.49 (br d,J = 3.2 Hz, 1H), 1.17 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 1.04 - 0.97 (m, 1H), 0.51 - 0.47 (m, 2H), 0.22 - 0.19 (m, 2H)。
實例 267 ： (S)-2-((5-(1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 ) 吡嗪 -2- 基 ) 硫基 )-1-( 對甲苯基 ) 乙 -1- 酮之合成
Figure 02_image927
在步驟a中使用TEA作為鹼，偶合(S )-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(中間物DE)與2-溴-1-(對甲苯基)乙-1-酮(CAS編號619-41-0)，如針對實例265所描述合成(S)-2-((5-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-1-(對甲苯基)乙-1-酮，步驟a在室溫下進行12小時。在步驟b中，使用含TFA之DCM代替含HCl之MeOH來進行去保護。(S)-2-((5-(1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-1-(對甲苯基)乙-1-酮之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：445.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d6 )：δ 8.25 - 8.22 (m, 2H), 8.06 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.89 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (br d,J = 7.6 Hz, 3H), 7.20 - 7.18 (m, 3H), 4.57 (s, 2H), 4.13 (br d,J = 13.6 Hz, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.15 - 3.05 (m, 4H), 2.69 (br d,J = 15.6 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.78 - 1.62 (m, 2H), 1.48 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 1.17 (br d,J = 13.6 Hz, 1H)。
實例 268 ： (R)-(3-(3- 胺基 -3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image929
步驟 a ： 在20℃下向3-氯-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(382 mg，1.10 mmol，中間物EI)及DIPEA (428 mg，3.31 mmol，577 μL)於DMF (5.00 mL)中之溶液中添加(R)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(337 mg，1.21 mmol，中間物CB，2 HCl)。將溶液加熱至100℃且攪拌15小時。用H2 O (20.0 mL)稀釋反應混合物，隨後過濾且減壓乾燥濾餅，得到呈黃色固體狀之(R)-3-(3-胺基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(498 mg，88%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：513.4 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz MeOD)：δ 7.64 - 7.62 (m, 1H), 7.43 - 7.39 (m, 2H), 7.37 - 7.35 (m, 1H), 7.20 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 6.94 - 6.70 (m, 1H), 6.82 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.12 - 4.36 (m, 2H), 4.18 (s, 1H), 4.10 - 4.93 (m, 2H), 3.55 - 3.47 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.98 - 1.97 (m, 1H), 1.83 - 1.82 (m, 3 H), 1.39 - 1.28 (m, 3 H)。步驟 b ： 在N2 、-78℃下向(R)-3-(3-胺基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(498 mg，970 μmol)於DCM (10.0 mL)中之溶液中添加DIBAL-H (1 M，3.88 mL)。在-78℃下攪拌溶液2小時。在-20℃下藉由添加鹽水(30.0 mL)來淬滅反應混合物，且隨後過濾並用DCM (20.0 mL × 3)萃取濾液。經合併之有機層用鹽水(10.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥且減壓濃縮，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150×25×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：30%至60%，9分鐘)對其進行純化，得到呈灰白色固體狀之(R)-(3-(3-胺基-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(30.0 mg，57.2 μmol，5%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：471.3 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz MeOD)：δ 8.51 (s, 1H), 7.65 - 7.63 (m, 1H), 7.47 - 7.45 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.41 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.37 - 7.35 (m, 1H), 7.29 (t,J = 5.6 Hz, 1H), 6.97 (t,J = 14.4 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.39 (s,1H), 3.90 (d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.75 (d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.47 - 3.41 (m, 2H), 2.28 (s,3H), 2.21 (s, 1H), 2.05 - 2.01 (m, 2H), 1.89 - 1.86 (m, 1H)。
實例 269 ： (S)-(3-(1- 胺基 -4- 氟 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-6-(2,3- 二氯苯基 )-5- 甲基吡嗪 -2- 基 ) 甲醇之合成
Figure 02_image931
在步驟a中偶合3-氯-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-甲酸乙酯(中間物EI)與(S)-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(中間物T)，如上文實例268中所描述合成(S)-(3-(1-胺基-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇；且使步驟b達到室溫，攪拌12小時。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150×25×10 μm；移動相：[水(0.1% TFA)-ACN]；B%：30%至60%，13分鐘)純化(S)-(3-(1-胺基-4-氟-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇，得到化合物(39.8 mg，65.5 μmol，7%產率，TFA)：LC-MS (ESI+ )m/z ：487.1 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz MeOD)：δ 7.64 (dd,J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 7.36 (dd,J = 1.6 Hz, 7.6 Hz, 2H), 7.16 (t,J = 16.4 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.51 (s, 1H), 3.85 - 3.81 (m, 1H), 3.75 - 3.72 (m, 1H), 3.26 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 3.24 - 3.22 (m, 1H), 3.16 (s, 1H), 3.13 - 3.12 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.08 - 1.91 (m, 2H), 1.81 - 1.78 (m, 1H), 1.70 - 1.67 (m , 1H)。
實例 270 ： (S)-1'-(6- 甲基 -4-( 噻唑 -2- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image933
步驟 a ： 在N2 下向(S)-(1'-(4-碘-6-甲基吡啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(860 mg，1.66 mmol，中間物EL)、CsF (755 mg，4.97 mmol，183 μL)及Pd(PPh3 )2 Cl2 (116 mg，166 μmol)於二噁烷(20.0 mL)中之溶液中添加2-(三丁基錫烷基)噻唑(929 mg，2.48 mmol，CAS編號121359-48-6)，隨後在100℃下攪拌混合物3小時。將反應混合物傾入水(50.0 mL)中，隨後用乙酸乙酯(50.0 mL × 2)萃取水相。經合併之有機相用鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠層析(100至200目矽膠，石油醚/乙酸乙酯=100/1至8/1，產物Rf = 0.20)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(S)-(1'-(6-甲基-4-(噻唑-2-基)吡啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(580 mg，1.16 mmol，70%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：477.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(S)-(1'-(6-甲基-4-(噻唑-2-基)吡啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(580 mg，1.22 mmol)於EtOAc (10.0 mL)中之溶液中添加HCl/EtOAc (4 M，304 μL)，隨後在25℃下攪拌混合物1小時。真空濃縮反應混合物，得到粗產物，將其用水(20.0 mL)稀釋。用乙酸乙酯(20.0 mL)萃取水相，隨後凍乾水相，得到呈黃色固體狀之(S)-1'-(6-甲基-4-(噻唑-2-基)吡啶-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(101.63 mg，232 μmol，19%產率，HCl)。LC-MS (ESI+ )m/z ：377.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO)：δ 8.74 (s, 2H), 8.13 - 8.15 (m, 2H), 7.64 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.28 - 7.36 (m, 4H), 4.31 - 4.46 (m, 3H), 3.43 - 3.49 (m, 2H), 3.25 - 3.29 (m, 1H), 2.99 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 2.63 (s, 3H), 1.89 - 1.99 (m, 2H), 1.59 - 1.70 (m, 2H)。
實例 271 ： (S)-1'-(3- 甲基 -5-( 甲磺醯基 ) 苯基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image935
步驟 a ： 將(S)-(1'-(3-溴-5-甲基苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(130 mg，276 μmol，中間物EM)、MeSO2 Na (28.2 mg，276 μmol)、L-脯胺酸(6.35 mg，55.2 μmol)、K2 CO3 (7.62 mg，55.2 μmol)及CuI (5.25 mg，27.6 μmol)於DMSO (4 mL)中之混合物在微波下在140℃下照射2小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (40.0 mL)中，且用乙酸乙酯(40.0 mL × 2)萃取水相。經合併之有機相用鹽水(40 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈棕色油狀物之(S)-(1'-(3-甲基-5-(甲磺醯基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(60 mg，46%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：471.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 在25℃下經1小時向(S)-(1'-(3-甲基-5-(甲磺醯基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(60 mg，127 μmol)於EtOAc (2 mL)中之溶液中添加HCl/EtOAc (4 M，319 μL)。真空濃縮反應混合物，得到殘餘物，且隨後用水(20.0 mL)稀釋殘餘物。用乙酸乙酯(20.0 mL × 2)萃取水相，隨後真空濃縮水相。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150×25×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：6%至36%，10分鐘)純化粗產物，且真空濃縮溶離劑以移除ACN。凍乾剩餘的水溶液，得到呈黃色固體狀之(S)-1'-(3-甲基-5-(甲磺醯基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(7.40 mg，17.4 μmol，14%產率，FA)。LC-MS (ESI+ )m/z ：317.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz MeOD-d 4 )：δ 7.48 - 7.50 (m, 1H), 7.29 - 7.37 (m, 4H), 7.19 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 4.35 - 4.37 (m, 1H), 3.65 - 3.77 (m, 2H), 3.05 - 3.16 (m, 7H), 2.40 (s, 3H), 1.84 - 1.98 (m, 2H), 1.62 - 1.74 (m, 2H)。
實例 272 ： (S)-1'-(6-(( 環丙基甲基 ) 硫基 ) 吡啶 -3- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺 甲酸鹽之合成
Figure 02_image937
步驟 a ： 在25℃下向(S)-5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡啶-2-硫醇鈉(423 mg，977 μmol，中間物ER)於DMF (10.0 mL)中之溶液中添加TEA (692 mg，6.84 mmol，952 μL)及(溴甲基)環丙烷(613 mg，4.54 mmol，435 μL)，且在25℃下攪拌混合物2小時。隨後將反應混合物傾入水(50.0 mL)中且用乙酸乙酯(50.0 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(50.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之(S)-(1'-(6-((環丙基甲基)硫基)吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(500 mg，定量粗產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：466.3 (M+H)+ 。步驟 b ： 在25℃下向(S)-(1'-(6-((環丙基甲基)硫基)吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸第三丁酯(500 mg，1.07 mmol)於DCM (10.0 mL)中之溶液中添加TFA (1.50 mL，20.2 mmol)，且在25℃下攪拌混合物16小時。混合物隨後用飽和NaHCO3 溶液調整至pH 7至8且用DCM (20.0 mL × 3)萃取。有機層用鹽水(20.0 mL × 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150×25×10 μm；移動相：[水(0.2% FA)-ACN]；B%：10%至40%，11分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(S)-1'-(6-((環丙基甲基)硫基)吡啶-3-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺甲酸鹽(60.7 mg，141 μmol，13%產率，FA)。LC-MS (ESI+ )m/z ：366.3 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d 6 )：δ 8.26 (s, 1H), 8.19 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 7.38 (t,J = 3.6 Hz, 1H), 7.30 (dd,J = 3.0, 8.8 Hz, 1H), 7.23 - 7.19 (m, 3H), 7.13 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 4.01 (s, 1H), 3.56 (br d,J = 12.6 Hz, 2H), 3.06 - 2.99 (m, 3H), 2.94 - 2.83 (m, 2H), 2.69 (d,J = 16.2 Hz, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 2H), 1.50 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 1.27 (br d,J = 11.4 Hz, 1H), 1.11 - 0.99 (m, 1H), 0.53 - 0.46 (m, 2H), 0.28 - 0.20 (m, 2H)。
實例 273 ： (R)-1'-(5-(( 環丙基甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-3H- 螺 [ 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image939
在步驟a中偶合(R)-5-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(中間物ES)與(溴甲基)環丙烷，如上文針對實例272所描述合成(R)-1'-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺。(R)-1'-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：369.2 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz MeOD-d4 )：δ 8.45 (s, 1H), 8.21 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 8.12 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.47 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 - 7.31 (m, 1H), 7.02 - 6.98 (m, 1H), 6.92 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.43 - 4.40 (m, 2H), 4.23 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.45 - 3.39 (m, 2H), 2.95 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 2.05 - 2.01 (m, 2H), 1.85 - 1.81 (m, 2H), 1.05 - 1.02 (m, 1H), 0.54 - 0.51 (m, 2H), 0.21 - 0.20 (m, 2H)。
實例 274 ： (1'R,2r,3R,5'S)-8'-(5-(( 環丙基甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-3H-8'- 氮雜螺 [ 苯并呋喃 -2,3'- 雙環 [3.2.1] 辛烷 ]-3- 胺之 合成
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Figure 02_image943
在步驟a中偶合5-((1'R,2r,3R,5'S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-8'-基)吡嗪-2-硫醇鈉(中間物EU)與(溴甲基)環丙烷，如上文針對實例272所描述合成(1'R,2r,3R,5'S)-8'-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-3-胺。(1'R,2r,3R,5'S)-8'-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-3H-8'-氮雜螺[苯并呋喃-2,3'-雙環[3.2.1]辛烷]-3-胺之表徵：LC-MS (ESI+ )m/z ：378.1 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400 MHz DMSO-d6 )：δ 8.20 - 8.19 (m, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.24 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.14 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.84 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 6.77 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 3.85 (s, 1H), 2.96 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 2.30 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 2.26 - 2.22 (m, 1H), 1.97 - 1.92 (m, 3H), 1.74 (d,J = 14.8 Hz, 1H), 1.62 (d, 15.2 Hz, 1H), 1.04 - 1.01 (m, 1H), 0.50 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 0.21 (d,J = 4.8 Hz, 2H)。
實例 275 、 276 及 277 ： (1s , 3'S , 4R )-4-{5-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺、 (1s , 3'R , 4S )-4-{5-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺及 (1r , 4r )-4-(5-((2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺之 合成
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Figure 02_image947
步驟 a ： 將4-(5-硫烷基吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(137.0 mg，441 µmol，中間物EZ)、2,3,4-三氯吡啶(120.0 mg，661 µmol)及TEA (304 µL，2.20 mmol)於DMF (5.00 mL)中之混合物在N2 下在70℃下攪拌12小時。反應混合物隨後用EtOAc (100 mL)稀釋，用H2 O (20 mL × 3)、鹽水(40 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至20%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(200.0 mg，99%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：456.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 向4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(200 mg，438 µmol)及Ti(OEt)4 (899 µL，4.37 mmol)於2-Me-THF (1.00 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(212.0 mg，1.75 mmol)。在N2 下在95℃下攪拌反應混合物48小時。隨後將混合物冷卻至室溫，且其直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：559.1、561.0 (M+H)+ 。步驟 c ： 在20℃下向(R )-N -(4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(240 mg，428 µmol)於2-Me-THF (5.00 mL)中之混合物中添加NaBH4 (32.3 mg，856 µmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。隨後用MeOH (1 mL)淬滅反應物。用EtOAc (50 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物，且在25℃下攪拌混合物5分鐘，其中形成白色固體。過濾混合物且分離濾液中經分配之層。用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取水層。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:60)及製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯= 1:1)純化殘餘物，得到兩種產物(R )-N -((1s ,4S )-4-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺及(R )-N -((1r ,4R )-4-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺。獲得呈無色油狀物之主要產物(R )-N -((1s ,4S )-4-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(40.0 mg，71.2 µmol)，LC-MS (ESI+ )m/z ：561.1 (M+H)+ 。獲得呈無色油狀物之產物(R )-N -((1r ,4R )-4-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(40.0 mg，16%產率)，LC-MS (ESI+ )m/z ：560.9 (M+H)+ 。任意指定非對映異構體之絕對組態。步驟 d ： 將(R )-2-甲基-N -[(1s , 4s )-4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(40.0 mg，71.2 µmol)溶解於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到兩種非對映異構體。任意指定非對映異構體之絕對組態。獲得呈白色固體狀之產物(1s , 3'S , 4R )-4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(11.2 mg，22.6 µmol，HCl鹽，32%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：439.9 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.79 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 8.68 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 8.14 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.29 (m, 3H), 7.13 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.16 (d,J = 6.3 Hz, 2H), 3.05 - 2.91 (m, 1H), 2.07 (br d,J = 3.1 Hz, 1H), 2.02 - 1.70 (m, 7H)。呈白色固體狀之產物(1s , 3'R , 4S )-4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(1.0 mg，HCl鹽，3%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：439.9 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.83 - 8.77 (m, 1H), 8.71 - 8.59 (m, 1H), 8.18 - 8.11 (m, 1H), 7.51 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.45 - 7.31 (m, 3H), 7.13 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.25 - 3.09 (m, 2H), 3.03 - 2.88 (m, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.00 - 1.72 (m, 7H)。SFC：e.e. = 100%，管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。步驟 e ： 將(R )-2-甲基-N-[(1r ,4r )-4-{5-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(20.0 mg，35.6 µmol)溶解於HCl/MeOH (2.00 mL，4 M)中。在25℃下攪拌混合物1小時。濃縮反應混合物且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(1r , 4r )-4-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(4.0 mg，23%產率)。任意指定絕對組態。LC-MS (ESI+) m/z：440.0 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.72 - 8.64 (m, 1H), 8.20 - 8.09 (m, 1H), 7.60 - 7.48 (m, 1H), 7.46 - 7.29 (m, 3H), 7.19 - 7.08 (m, 1H), 4.69 (s, 0.60H), 4.36 (s, 0.36H), 3.28 - 3.12 (m, 1H), 3.11 - 2.92 (m, 1H), 2.79 (d,J =16.3 Hz, 1H), 2.16 - 1.54 (m, 8H)。SFC：管柱：Chiralcel OJ-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。
實例 278 ： (3R)-6- 氟 -1'-[5- 甲基 -3-( 哌啶 -1- 基 )-1H- 吡唑并 [3,4-b] 吡嗪 -6- 基 ]-3H- 螺 [1- 苯并呋喃 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
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步驟 a ： 將N -[(3R )-6-氟-1'-[3-碘-1-(氧雜環己烷-2-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(1.3.0 g，2.0 mmol，中間物FJ)、哌啶(546.0 μL，6.0 mmol)、Cs2 CO3 (1.95 g，6.0 mmol)及XantPhos-Pd-G4 (191.0 mg，199.0 µmol)於甲苯(30.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌12小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至35%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-6-氟-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(510.0 mg，43%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：608.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 向N -[(3R )-6-氟-1'-[1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(510.0 mg，839.0 µmol)於MeCN (10.0 mL)及AcOH (10.0 mL)中之混合物中添加NBS (221.0 mg，1.3 mmol)，且在15℃下攪拌所得混合物1小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至25%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(330.0 mg，57%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：686.1 (M+H)+ 。步驟 c ： 將N -[(3R )-1'-[5-溴-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-6-氟-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(330.0 mg，480.0 µmol)、甲基
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(143.0 mg，2.4 mmol)、K2 CO3 (165.0 mg，1.2 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (35.1 mg，48.0 µmol)於1,4-二噁烷(15.0 mL)及H2 O (5.0 mL)中之混合物在N2 氛圍下在90℃下攪拌12小時。隨後真空濃縮混合物，得到殘餘物，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至25%)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之N -[(3R )-6-氟-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，67%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 622.2 (M+H)+ 。步驟 d ： 將N -[(3R )-6-氟-1'-[5-甲基-1-(氧雜環己烷-2-基)-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(200.0 mg，321.0 µmol)於HCl/MeOH (4 M，10.0 mL)中之混合物在15℃下攪拌1小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(3R )-6-氟-1'-[5-甲基-3-(哌啶-1-基)-1H -吡唑并[3,4-b ]吡嗪-6-基]-3H -螺[1-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(102.1 mg，67%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：438.1 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.61-7.58 (m, 1H), 6.86-6.79 (m, 2H), 4.73 (s, 1H), 4.24-4.15 (m, 1H), 4.08-3.90 (m, 5H), 3.56-3.43 (m, 2H), 2.68 (s, 3H), 2.40-2.32 (m, 1H), 2.19-1.96 (m, 3H), 1.87-1.74 (m, 6H)。
實例 279 及 280 ： (1s,3'S,4R)-4-{6-[(2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫烷基 ] 吡啶 -3- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺及 (1s ,1'R ,4S )-4-(6-((2,3- 二氯吡啶 -4- 基 ) 硫基 ) 吡啶 -3- 基 ) -1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 之合成
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步驟 a ： 將(1s ,4s )-4-(6-硫烷基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(312.0 mg，1.0 mmol，中間物FS)、2,3,4-三氯吡啶(273.0 mg，1.5 mmol，CAS編號55934-02-6)及TEA (693 µL，5.0 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在N2 下在70℃下攪拌14小時。反應混合物隨後用EtOAc (80 mL)稀釋，用H2 O (50 mL × 3)及鹽水(40 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(20 g管柱，0%至30%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(1s ,4s )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(215.0 mg，0.5 mmol，47%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：454.9 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(1s ,4s )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(210.0 mg，0.5 mmol)及Ti(OEt)4 (945 µL，4.6 mmol)於2-Me-THF (1 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(558.0 mg，4.6 mmol)。在N2 下在95℃下攪拌反應混合物64小時。隨後將混合物冷卻至室溫，且其直接用於下一步驟中。步驟 c ： 在20℃下向(R )-2-甲基-N -[(1s,4s)-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-亞基]丙烷-2-亞磺醯胺(257.0 mg，0.5 mmol)於2-Me-THF (5 mL)中之混合物中添加NaBH4 (34.7 mg，0.9 mmol)，且在20℃下攪拌混合物1小時。隨後用MeOH (1 mL)淬滅反應物，且用EtOAc (50 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物。在25℃下攪拌混合物5分鐘，其中形成沈澱。過濾混合物，且分離濾液中經分配之層。用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取水層。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:50)純化殘餘物，得到(R )-2-甲基-N -[(1s ,4s )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(110.0 mg，0.2 mmol，43%產率)。LC-MS (ESI+)m/z ：560.0 (M+H)+ 。步驟 d ： 藉由SFC (管柱：Chiralpak AD-3 50×4.6 mm I.D.，3 μm；移動相：A：CO2 ；B：乙醇(0.05% DEA)；等度：40% B；流動速率：4 mL/min；管柱溫度：35℃；ABPR：1500 psi)分離(R )-2-甲基-N -[(1s ,4s )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(110.0 mg，0.2 mmol)，得到呈黃色固體狀之(R )-2-甲基-N -[(1s,3'S ,4R )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(65.0 mg，0.1 mmol)以及呈黃色固體狀之(R )-2-甲基-N -[(1s,3'R ,4S )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(10.0 mg，0.02 mmol)。步驟 e ： 將(R )-2-甲基-N -[(1s,3'S ,4R )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(65.0 mg，0.1 mmol)於HCl/MeOH (5 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌15分鐘。隨後濃縮反應混合物，且藉由製備型HPLC (HCl)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1s ,3'S ,4R )-4-{6-[(2,3-二氯吡啶-4-基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(25.5 mg，45%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：439.0 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.94 (br s, 1H), 8.49 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.21 (br d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.04 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.42 - 7.30 (m, 3H), 7.13 (br d,J = 4.8 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 3.24 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 3.00 (br s, 1H), 2.73 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.10 - 1.90 (m, 6H), 1.71 - 1.61 (m, 2H)。SFC：e.e. = 99%，R t = 2.169分鐘。管柱：Chiralpak AD-3 50×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。等度：60% B。流動速率：3 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。步驟 f ： 將(R )-N -((1s ,1'R ,4S )-4-(6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(10.0 mg，0.02 mmol)於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中之混合物在15℃下攪拌15分鐘。隨後濃縮反應混合物。藉由製備型HPLC (HCl)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1s ,1'R ,4S )-4-(6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(1.9 mg，0.004 mmol，22%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：439.0 (M-NH2 )+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.67 (s, 1H), 8.09 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.73 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 3H), 6.95 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.24 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 2.876 (br s, 1H), 2.75 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 2.08 - 1.82 (m, 7H), 1.67 - 1.65 (m, 1H)。SFC：e.e. = 94%，R t = 0.937分鐘。管柱：Chiralpak AD-3 50×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ；B：乙醇(0.05% DEA)。等度：60% B。流動速率：3 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。
實例 281 及 282 ： (1s , 3'S , 4R )-4-{6-[( 環丙基甲基 ) 硫烷基 ] 吡啶 -3- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺及 (1s , 3'R , 4S )-4-{6-[( 環丙基甲基 ) 硫烷基 ] 吡啶 -3- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺之合成
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步驟 a ： 將(1s ,4s )-4-(6-硫烷基吡啶-3-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(110.0 mg，355 µmol，中間物FS)、(溴甲基)環丙烷(143.0 mg，1.1 mmol)及TEA (179.0 mg，1.7 mmol)於DMF (2.00 mL)中之混合物在N2 下在70℃下攪拌12小時。反應混合物隨後用EtOAc (100 mL)稀釋，用H2 O (20 mL × 3)、鹽水(40 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟矽膠層析(12 g管柱，0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(1s ,4s )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(120.0 mg，93%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：364.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 向(1s ,4s )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(120.0 mg，330 µmol)及Ti(OEt)4 (679 µL，3.30 mmol)於2-Me-THF (3.00 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(159.0 mg，1.3 mmol)。隨後在N2 下在95℃下攪拌反應混合物96小時。將混合物冷卻至室溫，且其直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：467.2 (M+H)+ 。步驟 c ： 在20℃下向(R )-2-甲基-N -[(1s ,4s )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-亞基]丙烷-2-亞磺醯胺(150.0 mg，321 µmol)於2-Me-THF (5.00 mL)中之混合物中添加NaBH4 (24.2 mg，642 µmol)，且攪拌反應物2小時。隨後用MeOH (1.00 mL)淬滅反應物，且用EtOAc (50 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物。在25℃下攪拌混合物5分鐘，此時形成沈澱，並且過濾混合物。分離濾液中經分配之層，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取水層。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R )-2-甲基-N -[(1s , 4s )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(40.0 mg，27%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：469.1 (M+H)+ 。步驟 d ： 將(R )-2-甲基-N -[(1s,4s)-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(40.0 mg，85.3 µmol)溶解於EtOAc (0.5 mL)中。隨後添加HCl/EtOAc (0.5 mL，4 M)且在20℃下攪拌混合物1小時，其中形成黃色固體。藉由過濾收集黃色固體，得到呈黃色固體狀之(1s , 4s )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(20.0 mg，HCl鹽，58%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：365.0 (M+H)+ 。步驟 e ： 藉由對掌性SFC (DAICEL CHIRALPAK AS (250 mm×30 mm，10 μm)；移動相：35% EtOH (0.1% NH3 ·H2 O)/CO2 ，流動速率：80 mL/min)分離(1s , 4s )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺(20.0 mg，54.8 µmol，HCl鹽)，得到呈黃色固體狀之(1s , 3'S , 4R )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺(3.10 mg，16%產率) (LC-MS (ESI+)m/z ：365.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.37 - 8.25 (m, 1H), 7.69 - 7.53 (m, 1H), 7.41 (br d,J = 6.0 Hz, 1H), 7.34 - 7.09 (m, 4H), 4.25 (s, 1H), 3.28 - 3.01 (m, 3H), 2.69 - 2.43 (m, 2H), 2.23 - 2.04 (m, 1H), 1.94 - 1.58 (m, 6H), 1.53 - 1.34 (m, 2H), 1.12 (m, 7.7, 12.0 Hz, 1H), 0.65 - 0.53 (m, 2H), 0.34 - 0.25 (m, 2H)；SFC：e.e. = 100%，R t = 2.169分鐘；管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm；移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)；梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘；流動速率：2.8 mL/min；管柱溫度：35℃；ABPR：1500 psi)以及呈白色固體狀之(1s , 3'R , 4S )-4-{6-[(環丙基甲基)硫烷基]吡啶-3-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺(3.1 mg，16%產率) (LC-MS (ESI+ )m/z ：365.1 (M+H)+ ；1 HNMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 8.34 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.64 (dd,J = 2.3, 8.3 Hz, 1H), 7.57 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.45 - 7.25 (m, 4H), 4.78 (s, 1H), 3.28 - 3.04 (m, 3H), 2.79 - 2.62 (m, 2H), 2.10 - 1.90 (m, 2H), 1.84 - 1.54 (m, 4H), 1.52 - 1.35 (m, 1H), 1.18 - 1.06 (m, 1H), 0.96 - 0.86 (m, 1H), 0.64 - 0.54 (m, 2H), 0.38 - 0.26 (m, 2H))。任意指定非對映異構體之絕對組態。
實例 283 、 284 及 285 ： (1s, 3'S, 4R)-4-{5-[( 環丙基甲基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺、 (1s , 1'R , 4S )-4-(5-(( 環丙基甲基 ) 硫基 ) 吡嗪 -2- 基 )-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-1'- 胺 及 (1r, 4r)-4-{5-[( 環丙基甲基 ) 硫烷基 ] 吡嗪 -2- 基 }-1',3'- 二氫螺 [ 環己烷 -1,2'- 茚 ]-3'- 胺之合成
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Figure 02_image959
Figure 02_image961
步驟 a ： 將4-(5-硫烷基吡嗪-2-基)-14-(5-巰基吡嗪-2-基)螺[環己烷-1,2'-茚]-1'(3'H )-酮(137.0 mg，441 µmol，中間物EZ)、(溴甲基)環丙烷(178.0 mg，1.32 mmol)及TEA (304 µL，2.20 mmol)於DMF (2.00 mL)中之混合物在N2 下在70℃下攪拌12小時。反應混合物用EtOAc (50 mL)稀釋，用H2 O (20 mL × 3)、鹽水(20 mL × 2)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(0%至15%之EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之4-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)螺[環己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-酮(160.0 mg，438 µmol，100%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：364.9 (M+H)+ 。步驟 b ： 向4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-酮(160.0 mg，438 µmol)及Ti(OEt)4 (899 µL，4.37 mmol)於2-Me-THF (1.00 mL)中之溶液中添加(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(212.0 mg，1.75 mmol)。在N2 下在95℃下攪拌反應混合物48小時。隨後將混合物冷卻至室溫，且其直接用於下一步驟中。LC-MS (ESI+ )m/z ：468.2 (M+H)+ 。步驟 c ： 在20℃下向(R )-N -(4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-亞基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(200.0 mg，427 µmol)於2-Me-THF (5 mL)中之混合物中添加NaBH4 (32.2 mg，854 µmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。隨後用MeOH (1 mL)淬滅反應物，且用EtOAc (50 mL)及H2 O (20 mL)稀釋混合物。在25℃下攪拌混合物5分鐘，此時形成沈澱，且過濾混合物。分離濾液中經分配之層，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取水層。經合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:0至100:30)純化殘餘物，得到呈無色油狀物之主要產物(R )-N -((1S , 4S )-4-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(60.0 mg，30%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：470.1 (M+H)+ 。藉由製備型HPLC (HCOOH)進一步純化另一產物(30.0 mg)，得到呈白色固體狀(5.0 mg，2.5%產率)之(R )-N -((1r , 4R )-4-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(5.0 mg，3%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：470.1 (M+H)+ 。任意指定非對映異構體之絕對組態。步驟 d ： 藉由對掌性SFC (DAICEL CHIRALCEL OD (250 mm×30 mm，10 μm)；移動相：35% EtOH (0.1% NH3 H2 O)/CO2 ；流動速率：70 mL/min)分離(R )-2-甲基-N-[(1s , 4s )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(60.0 mg，127 µmol)，得到呈白色固體狀之(R )-2-甲基-N -[(1s , 3'S , 4R )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(16.0 mg，27%產率) (LC-MS (ESI+ )m/z ：470.1 (M+H)+ )以及呈白色固體狀之(R )-2-甲基-N -[(1s , 3'R , 4S )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(9.0 mg，15%產率) (LC-MS (ESI+ )m/z ：470.1 (M+H)+ )。步驟 e ： 將(R )-2-甲基-N -[(1s , 3'S , 4R )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(16.0 mg，34.0 µmol)溶解於EtOAc (0.25 mL)中，隨後添加HCl/EtOAc (0.25 mL，4 M)。在20℃下攪拌混合物0.5小時，此時形成沈澱。藉由過濾收集固體且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈黃色固體狀之(1s , 3'S , 4R )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(8.4 mg，HCl鹽，62%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：349.1 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.53 - 8.41 (m, 2H), 7.51 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.44 - 7.28 (m, 3H), 4.35 (s, 1H), 3.23 - 3.09 (m, 4H), 2.91 - 2.76 (m, 1H), 2.08 - 1.98 (m, 1H), 1.97 - 1.69 (m, 7H), 1.16 (dt,J = 4.7, 7.8 Hz, 1H), 0.69 - 0.54 (m, 2H), 0.38 - 0.29 (m, 2H)。SFC：e.e. = 100%，R t = 2.922分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。任意指定非對映異構體之絕對組態。步驟 f ： 將(R )-N -((1s , 1'R , 4S )-4-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(9.0 mg，19.1 µmol)溶解於EtOAc (0.25 mL)中，隨後添加HCl/EtOAc (0.25 mL，4 M)且在20℃下攪拌混合物0.5小時，此時形成固體沈澱。藉由過濾收集黃色固體，得到呈黃色固體狀之(1s , 1'R , 4S )-4-(5-((環丙基甲基)硫基)吡嗪-2-基)-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-1'-胺鹽酸鹽(6.9 mg，HCl鹽，90%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：349.0 (M-NH2 )+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.56 - 8.38 (m, 2H), 7.54 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.43 - 7.28 (m, 3H), 4.69 (s, 1H), 3.26 - 3.10 (m, 3H), 2.97 - 2.84 (m, 1H), 2.74 (d,J = 16.3 Hz, 1H), 2.09 - 1.78 (m, 6H), 1.75 - 1.51 (m, 2H), 1.20 - 1.07 (m, 1H), 0.64 - 0.52 (m, 2H), 0.36 - 0.25 (m, 2H)。SFC：e.e. = 100%，R t = 2.827分鐘。管柱：Chiralpak AS-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。任意指定非對映異構體之絕對組態。步驟 g ： 將(R )-2-甲基-N -[(1r , 4r )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-基]丙烷-2-亞磺醯胺(5.0 mg，10.6 µmol)添加至HCl/MeOH (1 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌混合物1小時。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈非對映異構體混合物形式的白色固體狀之(1r , 4r )-4-{5-[(環丙基甲基)硫烷基]吡嗪-2-基}-1',3'-二氫螺[環己烷-1,2'-茚]-3'-胺鹽酸鹽(2.2 mg，HCl鹽，52%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：348.9 (M-NH2 )+ ；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.56 - 8.38 (m, 2H), 7.54 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.43 - 7.28 (m, 3H), 4.69 (s, 1H), 3.26 - 3.10 (m, 3H), 2.97 - 2.84 (m, 1H), 2.74 (d,J = 16.3 Hz, 1H), 2.09 - 1.78 (m, 6H), 1.75 - 1.51 (m, 2H), 1.20 - 1.07 (m, 1H), 0.64 - 0.52 (m, 2H), 0.36 - 0.25 (m, 2H)。SFC：R t = 3.453分鐘及R t = 2.443分鐘。管柱：Chiralcel OJ-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：乙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。ABPR：1500 psi。任意指定非對映異構體之絕對組態。
實例 286 ： (1S )-1'-[2-(2,6- 二氯苯基 )-1,3- 噻唑 -4- 羰基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image963
步驟 a ： 將(R )-N -((S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(352.0 mg，1.15 mmol，經由實例120之步驟a合成)、2-溴-1,3-噻唑-4-甲酸(200 mg，961 µmol)、HATU (547 mg，1.44 mmol)及TEA (671 µL，4.80 mmol)放入DMF (10 mL)中。在25℃下攪拌反應混合物12小時。混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，且混合物用H2 O (30 mL × 5)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至80%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -((S )-1'-(2-溴噻唑-4-羰基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(400 mg，84%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：498.0 (M+H)+ 。步驟 b ： 將(S )-N -[(1S )-1'-(2-溴-1,3-噻唑-4-羰基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(200.0 mg，402 µmol)、雙(三-第三丁基膦)鈀(20.5 mg，40.2 µmol)、DIPEA (114.0 mg，884 µmol)及(2,6-二氯苯基)
Figure 108109755-A0304-12-02
酸(92.0 mg，482 µmol)放入二噁烷/H2 O (10/0.6 mL)中。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在120℃下攪拌反應混合物3小時。隨後濃縮反應混合物並添加H2 O (30 mL)，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取溶液。經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:50至100:100，隨後EtOAc:MeOH = 100:10)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(S )-N -[(1S )-1'-[2-(2,6-二氯苯基)-1,3-噻唑-4-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(27.0 mg，12%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：584.0 (M +Na)+ 。步驟 c ： 將(S )-N -[(1S )-1'-[2-(2,6-二氯苯基)-1,3-噻唑-4-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(27.0 mg，47.9 µmol)於HCl/MeOH (4 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。濃縮經合併之反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (5 mL)中，且用固體Na2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8至9。過濾混合物，且藉由製備型HPLC (鹼性條件)純化濾過物，得到呈白色固體狀之(1S )-1'-[2-(2,6-二氯苯基)-1,3-噻唑-4-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(4.10 mg，19%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：458.0 (M +H)+ 。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.27 (s, 1H), 7.64 - 7.49 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 4.49 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.55 - 3.34 (m, 2H), 3.16 (s, 1H), 2.82 (s, 1H), 2.12 - 1.77 (m, 2H), 1.76 - 1.22 (m, 3H)。
實例 287 ： (1S)-1'-[1-(3- 甲氧基苯基 )-1H- 吡唑 -3- 羰基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image965
步驟 a ： 將1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-甲酸(95.0 mg，0.44 mmol，中間物FX)、TEA (303 µL，2.17 mmol)及HATU (248.0 mg，0.65 mmol)放入DMF (5 mL)中，且在25℃下攪拌反應混合物1小時。隨後添加(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(173 mg，0.57 mmol，經由實例120之步驟a合成)，且在25℃下攪拌所得混合物12小時。用EtOAc (50 mL)稀釋混合物。混合物用H2 O (30 mL × 2)、鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至100%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(3S )-1'-[1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(126.0 mg，57%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：507.1 (M +H)+ 。步驟 b ： 將(R )-N -[(3S )-1'-[1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(126 mg，0.2486 mmol)溶解於HCl/MeOH (2 mL，4 M)中，且在25℃下攪拌1小時。隨後濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(1S )-1'-[1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-3-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(43.2 mg，34%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：403.1 (M +H)+ ；1 HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.48~8.51 (m, 4H), 7.62~7.64 (m, 1H), 7.40~7.44 (m, 3H), 7.27~7.38 (m, 3H), 6.92~6.98 (m, 1H), 6.79~6.80 (m, 1H), 4.30~4.60 (m, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.22~3.40 (m, 1H), 2.99~3.04 (m, 3H), 1.78~1.89 (m, 2H), 1.54~1.65 (m, 2H)。
實例 288 ： (1S )-1'-[1-(3- 甲氧基苯基 )-1H - 吡唑 -5- 羰基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image967
步驟 a ： 將化合物1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-甲酸(28.1 mg，0.13 mmol，中間物FY)、TEA (90.1 µL，0.64 mmol)及HATU (73.3 mg，0.19 mmol)放入DMF (2 mL)中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。隨後添加(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(51.2 mg，0.1673 mmol，經由實例120之步驟a合成)，且在25℃下攪拌所得混合物12小時。隨後用EtOAc (50 mL)稀釋混合物。混合物用H2 O (30 mL × 2)、鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由製備型TLC (乙酸乙酯:石油醚= 1:0)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(3S )-1'-[1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(37.0 mg，57%產率)。LC-MS (ESI+) m/z：507.1 (M +H)+ 。步驟 b ： 將N -[(1S )-1'-[1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]胺基甲酸第三丁酯(37.0 mg，73.6 µmol)於HCl/MeOH (5 mL，4 M)中之溶液在25℃下攪拌1小時。隨後減壓濃縮反應混合物且藉由製備型HPLC (NH3 ·H2 O)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(1S )-1'-[1-(3-甲氧基苯基)-1H -吡唑-5-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(14.7 mg，50%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：403.2 (M +H)+ ；1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 7.76~7.78 (m, 1H), 7.41~7.46 (m, 1H), 7.26~7.29 (m, 1H), 7.14~7.18 (m, 3H), 6.99~7.07 (m, 3H), 6.64~6.67 (m, 1H), 4.17~4.24 (m, 1H), 3.72~3.80 (m, 4H), 2.99~3.17 (m, 3H), 2.89~2.96 (m, 1H), 2.52~2.56 (m, 1H),1.44~1.63 (m, 2H), 1.19~1.32 (m, 1H), 0.82~1.10 (m, 1H)。
實例 289 ： (1S)-1'-[1-(2,4- 二氟苯基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 羰基 ]-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image969
步驟 a ： 將1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-甲酸(140.0 mg，587.0 µmol，中間物FZ)、(R )-N -[(1S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(307.0 mg，704.0 µmol，經由實例120之步驟a合成)、HATU (334.0 mg，880.0 µmol)及TEA (242.0 μL，1.8 mmol)於DMF (10.0 mL)中之混合物在20℃下攪拌12小時。混合物用乙酸乙酯(50.0 mL)稀釋且用H2 O (30.0 mL × 2)洗滌。有機相用鹽水(15.0 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷= 0%至10%)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R )-N -[(1S )-1'-[1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(250 mg，81%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z 527.2 (M+H)+ 。步驟 b ： 將(R )-N -[(1S )-1'-[1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(240.0 mg，455.0 µmol)於HCl/MeOH (4 M，5.0 mL)中之混合物在20℃下攪拌0.5小時。隨後減壓濃縮混合物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC (HCl)對其進行純化，得到呈白色固體狀之(1S )-1'-[1-(2,4-二氟苯基)-5-甲基-1H -吡唑-3-羰基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(151 mg，73%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：406.0 (M-NH2 )+ ；1 H NMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ 7.64-7.17 (m, 7H), 6.60 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 4.64-4.37 (m, 3H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.28-3.15 (m, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.91-1.57 (m, 4H)。
實例 290 及 291 ： (S)-1-((S)-1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-2-(4- 氟苯基 ) 丙 -1- 酮 及 (R)-1-((S)-1- 胺基 -1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1'- 基 )-2-(4- 氟苯基 ) 丙 -1- 酮 之合成
Figure 02_image971
步驟 a ： 將(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(652.0 mg，2.13 mmol，經由實例120之步驟a合成)、2-(4-氟苯基)丙酸(300.0 mg，1.78 mmol)、HATU (1.01 g，2.67 mmol)及TEA (1.24 mL，8.90 mmol)放入DMF (10 mL)中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，且混合物用H2 O (30 mL × 5)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至75%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-N -[(3S )-1'-[2-(4-氟苯基)丙醯基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(370 mg，46%產率)。LC-MS (ESI+ ) m/z：457.1 (M+H)+ 。步驟 b ： 將(R )-N -[(3S )-1'-[2-(4-氟苯基)丙醯基]-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(180.0 mg，394 µmol)於HCl/MeOH (5 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。隨後濃縮經合併之反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物溶解於MeOH (5.00 mL)中，且用固體Na2 CO3 將反應混合物調整至pH = 8至9。過濾混合物且濃縮濾液，得到呈白色固體狀之1-[(3S )-3-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基]-2-(4-氟苯基)丙-1-酮(110 mg，80%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：336.0 (M-NH2 )+ 。步驟 c ： 藉由對掌性SFC (DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm×30 mm，10 μm)；移動相：45% NH3· H2 O/IPA/CO2 ；流動速率：80 mL/min)分離1-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-(4-氟苯基)丙-1-酮(110 mg，312 µmol)，得到呈白色固體狀之(S)-1-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-(4-氟苯基)丙-1-酮(37.8 mg，107 µmol，35%產率，R t = 4.004分鐘) (LC-MS (ESI+ )m/z ：336.0 (M -NH2 )+ ；1 H NMR (400MHz, 甲醇-d 4 ) δ 7.39 - 7.27 (m, 3H), 7.18 (m , 3H), 7.12 - 7.03 (m, 2H), 4.44 - 4.24 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 3.98 - 3.68 (m, 2H), 3.44 - 3.34 (m, 1H), 3.16 - 2.94 (m, 2H), 2.81 - 2.60 (m, 1H), 1.78 - 1.63 (m, 1H), 1.51 (s, 1H), 1.40 (m, 5H)；SFC：e.e. = 100%，R t = 3.988分鐘)以及呈白色固體狀之(R)-1-((S)-1-胺基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-(4-氟苯基)丙-1-酮(40.9 mg，116 µmol，38%產率，R t = 4.926分鐘) (LC-MS (ESI+ )m/z ：336.0 (M -NH2 )+ ；7.40 - 7.24 (m, 3H), 7.17 (s, 3H), 7.12 - 7.01 (m, 2H), 4.45 - 4.25 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 3.95 - 3.78 (m, 2H), 3.39 - 3.33 (m, 1H), 3.11 - 2.97 (m, 2H), 2.79 - 2.54 (m, 1H), 1.84 - 1.20 (m, 7H)；SFC：e.e. = 99.5%，R t = 4.898分鐘)。管柱：Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D.，3 μm。移動相：A：CO2 ，B：異丙醇(0.05% DEA)。梯度：5%至40% B持續4分鐘，且在40%保持2.5分鐘，隨後5% B保持1.5分鐘。流動速率：2.8 mL/min。管柱溫度：35℃。任意指定非對映異構體之絕對組態。
實例 292 ： (3S)-1'-(2- 苯氧基苯甲醯基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image973
步驟 a ： 將(R )-N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(171.0 mg，559 µmol，經由實例120之步驟a合成)、2-苯氧基苯甲酸(100.0 mg，466 µmol，CAS編號2243-42-7)、HATU (265.0 mg，699 µmol)及TEA (325 µL，2.3 mmol)放入DMF (10.00 mL)中。在25℃下攪拌反應混合物12小時。混合物用EtOAc (100 mL)稀釋，且用H2 O (30 mL × 5)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚= 0%至75%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(R )-2-甲基-N -[(3S )-1'-(2-苯氧基苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]丙烷-2-亞磺醯胺(190.0 mg，81%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：525.1 (M+Na)+ 。步驟 b ： 將(R )-2-甲基-N -[(3S )-1'-(2-苯氧基苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]丙烷-2-亞磺醯胺(188.0 mg，374 µmol)於HCl/MeOH (5.00 mL，4 M)中之混合物在25℃下攪拌0.5小時。濃縮反應混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (HCl)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3S )-1'-(2-苯氧基苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(63.2 mg，39%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：399.1 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )：δ 8.71 - 8.38 (m, 3H), 7.64 - 7.56 (m, 1H), 7.48 - 7.15 (m, 9H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 6.90 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.47 - 4.02 (m, 2H), 3.54 - 3.45 (m, 1H), 3.33 - 3.09 (m, 3H), 3.05 - 2.83 (m, 1H), 1.94 - 1.60 (m, 2H), 1.57 - 1.26 (m, 2H)。
實例 293 ： (S )-1'-(5- 甲基咪唑并 [2,1-b ][1,3,4] 噻二唑 -2- 基 )-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-1- 胺之 合成
Figure 02_image975
步驟 a ： 將(1'-(5-甲基咪唑并[2,1-b ][1,3,4]噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)胺基甲酸(S )-第三丁酯(100.0 mg，181.0 µmol，經由中間物FH之步驟a至b合成)於HCl/MeOH (4 M，10.0 mL)中之混合物在20℃下攪拌1小時。減壓濃縮混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (HCl)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(S )-1'-(5-甲基咪唑并[2,1-b ][1,3,4]噻二唑-2-基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺鹽酸鹽(20.6 mg，30%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：339.0 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, 甲醇-d 4 )：δ 7.55 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.44-7.35 (m, 4H), 4.49 (s, 1H), 4.05-4.00 (m, 1H), 3.91-3.86 (m, 1H), 3.64-3.54 (m, 2H), 3.27-3.18 (m, 2H), 2.49 (d,J = 1.2 Hz, 3H), 2.08-1.84 (m, 3H), 1.75-1.69 (m, 1H)。
實例 294 ： (3S)-1'-{3',6'- 二甲基 -[3,4'- 聯 吡啶 ]-2'- 基 }-1,3- 二氫螺 [ 茚 -2,4'- 哌啶 ]-3- 胺之 合成
Figure 02_image977
Figure 02_image979
步驟 a ： 在甲苯(6 mL)中添加2'-氯-3',6'-二甲基-3,4'-聯吡啶(190.0 mg，0.9 mmol，中間物GA)、N -[(3S )-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(338.0 mg，1.1 mmol，中間物EF)、RuPhos-Pd-G4 (73.8 mg，0.08 mmol，CAS編號1599466-85-9)、RuPhos (81.0 mg，0.2 mmol，CAS編號787618-22-8)、Cs2 CO3 (852.0 mg，2.6 mmol)及NaI (194.0 mg，1.3 mmol)之混合物。將反應混合物抽成真空且使用N2 再填充3次，並且在120℃下攪拌反應混合物12小時。隨後將反應混合物傾入H2 O (40 mL)中且用EtOAc (80 mL × 2)萃取。經合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由急驟矽膠層析(10 g，0%至10%之MeOH/DCM)純化殘餘物，得到呈棕色油狀物之N -[(3S )-1'-{3',6'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-2'-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(134.0 mg，0.3 mmol，32%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：485.1 (M +H)+ 。步驟 b ： 將N -[(3S )-1'-{3',6'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-2'-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基]胺基甲酸第三丁酯(120.0 mg，0.2 mmol)於HCl/MeOH (5 mL，4 M)中之混合物在15℃下攪拌1小時。隨後濃縮混合物且藉由製備型HPLC (HCl條件)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S )-1'-{3',6'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-2'-基}-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-3-胺鹽酸鹽(44.9 mg，0.11 mmol，43%產率)。LC-MS (ESI+ )m/z ：385.1 (M+H)+ ；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD)：δ 9.38 (m, 1H), 9.14 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 8.98 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.35 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 7.59 - 7.54 (m, 1H), 7.42 - 7.28 (m, 4H), 4.56 (s, 1H), 4.00 - 3.82(m, 2H), 3.57 - 3.47 (m, 2H), 3.25 - 3.19 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.14 - 1.72 (m, 4H)。SHP2 異位抑制分析 .
SHP2經由將雙酪胺醯基磷酸化肽結合至其Src同源2 (SH2)域而異位活化。後一活化步驟引起SHP2之自身抑制界面釋放，其又使得SHP2蛋白酪胺酸磷酸酶(PTP)具有活性且可用於基質識別及反應催化。使用瞬時螢光分析格式之代替基質DiFMUP監控SHP2之催化活性。
更特定言之，使用50 μl之最終反應體積及以下分析緩衝液條件，在平底、低凸緣、非結合表面之96孔黑色聚苯乙烯培養盤(Corning，目錄號3575)中，在室溫下再進行磷酸酶反應：60 mM HEPES，pH 7.2，75 mM NaCl，75 mM KCl，1 mM EDTA，0.005% Brij-35，5 mM DTT。
使用如下分析監測本發明化合物(濃度自0.003 µM變化至100 µM)對SHP2之抑制，其中將0.25 nM SHP2與0.5 µM肽IRSl_pY1172(dPEG8)pY1222 (序列：H2N- LN(pY)IDLDLV (dPEG8)LST(pY)ASINFQK-醯胺)一起培育。在25℃下培育30至60分鐘之後，向反應物中添加代替基質DiFMUP (Invitrogen，目錄號D6567，100 μM最終)，且使用微板讀取器(PolarStar，BMG)，在355 nm激發及460 nm放射下持續監測10分鐘內DiFMUP至6,8-二氟-7-羥基-4-甲基香豆素(DiFMU)之轉化。使用與基於對照之標準化擬合之標準化IC50 回歸曲線來分析抑制劑量反應曲線。 SHP2異位抑制分析之結果描繪於下表中。表示為「A」之化合物具有小於或等於50 nM之IC50 值；表示為「B」之化合物具有大於50 nM但小於或等於1 μM之IC50 值；表示為「C」之化合物具有大於1 μM但小於或等於10 μM之IC50 值；且表示為「D」之化合物具有大於10 μM之IC50 值。表 2 . SHP2異位抑制分析之結果.
Figure 108109755-A0304-0010
 以引用之方式併入
出於所有目的，本文中提及之所有公開案及專利均以全文引用之方式併入本文中，如同各個別公開案或專利特定地且獨立地以引用之方式併入。在有衝突的情況下，以本申請案(包括本文中之任何定義)為准。等效物
儘管已論述本發明之特定實施例，但以上說明為說明性而非限制性的。熟習此項技術者在審閱本說明書時將顯而易知本發明之許多變化形式。本發明之完整範疇以及其等效物之完整範疇，及說明書，以及此類變化形式，應參照申請專利範圍確定。
除非另外指示，否則本說明書及申請專利範圍中所使用之表達成分數量、反應條件等之所有數字應理解為在所有情況下皆由術語「約」修飾。因此，除非有相反指示，否則本說明書及所附申請專利範圍中所闡述之數值參數為近似值，其可視本發明設法獲得之所需特性而變化。
圖 1A. 說明使用埃羅替尼(erlotinib) (EGFR抑制劑)及本發明之SHP2抑制劑對KYSE520 (頭頸部細胞之鱗狀細胞癌)之協同生長抑制的等效線圖。圖 1B. 說明使用克唑替尼(crizotinib) (ALK抑制劑)及本發明之SHP2抑制劑對NCI-H3122 (非小細胞肺癌細胞)之協同生長抑制的等效線圖。圖 2A. 說明使用司美替尼(selumetinib) (MEK抑制劑)及本發明之SHP2抑制劑對NCI-N87 (胃癌細胞)之協同生長抑制的等效線圖。圖 2B. 說明使用ARS-1620 (KRAS G12C抑制劑)及本發明之SHP2抑制劑對NCI-H23 (KRAS G12C突變型非小細胞肺癌細胞)之協同生長抑制的等效線圖。圖 3. 說明使用AZD-4547 (FGFR抑制劑)及本發明之SHP2抑制劑對HuH-7 (肝細胞癌細胞)之協同生長抑制的等效線圖。
Figure 108109755-A0101-11-0002-1

Claims (65)

  1. 一種式X化合物；
    Figure 03_image001
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中； X為-CH2 -、-CH(RX )-、-C(RX )2 -、-C(O)-、-NH-、-N(RX )-或-O-； Y為C、CH、C(RY )或N； 當Y為CH、C(RY )或N時，
    Figure 03_image982
    為單鍵；或當Y為C時，
    Figure 03_image984
    為雙鍵； R1 為L1 -CyB -L2 -R2 ； CyB 為苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的單環5員至6員雜芳基；或具有1至5個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的雙環8員至10員雜芳基；其中CyB 經m個R3 之例項取代； CyC 為苯并；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基并；3員至7員飽和或部分不飽和稠合環脂族基；或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；其中在CyC 為雜環或雜芳基并時，該等雜原子可出現在CyC 內的任何位置處；且其中在每一情況下CyC 經n個R4 之例項取代； L1 為共價鍵或-C(O)-； L2 為共價鍵或C1-4 二價飽和或不飽和的直鏈或分支鏈烴鏈，其中該鏈之一個或兩個亞甲基單元視情況且獨立地經以下替換：-CH(RL )-、-C(RL )2 -、C3-5 伸環烷基、-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2 -、-S(O)2 N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2 -； R2 為氫、RA 或RB ，且在R2 為RB 時，R2 經q個RC 之例項取代； R3 、R4 、RX 、RY 及RL 之各例項獨立地為RA 或RB 且經r個RC 之例項取代； R5 之各例項獨立地為RA 或RB 且經r個RC 之例項取代；或兩個R5 之例項與其插入原子一起形成3員至6員碳環稠環或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至6員雜環稠環； RA 之各例項獨立地為側氧基、鹵素、-CN、-NO2 、-OR、-SR、-NR2 、-S(O)2 R、-S(O)2 NR2 、-S(O)R、-S(O)NR2 、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2 、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2 、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2 、-N(R)C(NR)NR2 、-N(R)S(O)2 NR2 或-N(R)S(O)2 R； RB 之各例項獨立地為C1-6 脂族基；苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；3員至7員飽和或部分不飽和碳環；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環；或具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環； RC 之各例項獨立地為側氧基、鹵素、-CN、-NO2 、-OR、-SR、-NR2 、-S(O)2 R、-S(O)2 NR2 、-S(O)R、-S(O)NR2 、-OS(O)2 F、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2 、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2 、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2 、-N(R)C(NR)NR2 、-N(R)S(O)2 NR2 、-N(R)S(O)2 R或視情況經取代的選自以下之基團：C1-6 脂族基；苯基；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；及具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基環； 各R獨立地為氫或視情況經取代的選自以下之基團：C1-6 脂族基；苯基；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和雜環；及具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基環，或： 同一氮上之兩個R基團與其插入原子一起形成除該氮以外，具有0至3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的4員至7員飽和、部分不飽和或雜芳基環； b及c中之每一者獨立地為0或1；且 a、m、n、q及r中之每一者獨立地為0、1、2、3或4； 其中該化合物不為
    Figure 03_image986
    Figure 03_image988
    。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image990
    Figure 03_image992
    。
  3. 如請求項1之化合物，其中CyB 選自由以下組成之群：
    Figure 03_image994
    Figure 03_image996
    ， 其中CyB 經m個R3 之例項取代。
  4. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image998
    。
  5. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image1000
    。
  6. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image1002
    。
  7. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image1004
    。
  8. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image1006
    。
  9. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image1008
    。
  10. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中變數a為2。
  11. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中兩個R5 之例項與其插入原子一起形成3員至6員碳環稠環或具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至6員雜環稠環。
  12. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式中之一者：
    Figure 03_image1010
    。
  13. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1012
    Figure 03_image1014
    。
  14. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1016
    。
  15. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1018
    。
  16. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1020
    。
  17. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1022
    Figure 03_image1024
    。
  18. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1026
    Figure 03_image1028
    。
  19. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1030
    Figure 03_image1032
    。
  20. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1034
    。
  21. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有下式：
    Figure 03_image1036
    。
  22. 如請求項1至21中任一項之化合物，其中R3 之至少一個例項為-CH3 、-CHF2 、-CH2 OH、-CH(CH3 )OH或環丙基。
  23. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X為-CH2 -。
  24. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X為-O-。
  25. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中CyC 為苯并。
  26. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中CyC 為具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員雜芳基并。
  27. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-N-。
  28. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-CH2 -。
  29. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L1 為共價鍵。
  30. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L1 為-C(O)-。
  31. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L2 為共價鍵。
  32. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L2 為-S-。
  33. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L2 為-O-。
  34. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L2 為-C(O)-。
  35. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L2 為C1-3 脂族基。
  36. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為1、2、3或4。
  37. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為0。
  38. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 之至少一個例項為氟。
  39. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為C1-6 脂族基；苯基；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；3員至7員飽和或部分不飽和碳環；具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環；或具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環；其中R2 經q個RC 之例項取代。
  40. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為經q個RC 之例項取代的C1-6 脂族基。
  41. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為經q個RC 之例項取代的苯基。
  42. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為經q個RC 之例項取代的具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的8員至10員雙環雜芳基環；具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5員至6員單環雜芳基環。
  43. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為經q個RC 之例項取代的3員至7員飽和或部分不飽和碳環。
  44. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為經q個RC 之例項取代的具有1至2個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3員至7員飽和或部分不飽和單環雜環。
  45. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為經q個RC 之例項取代的具有1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的7員至12員飽和或部分不飽和雙環雜環。
  46. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為：
    Figure 03_image1038
    Figure 03_image1040
    、異丙基、乙基或甲基，其各自經q個RC 之例項取代。
  47. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為：
    Figure 03_image1042
    。
  48. 一種選自由表1中所描繪之化合物組成之群中之化合物、及其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或立體異構體混合物。
  49. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至48中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑。
  50. 一種如請求項1至48中任一項之化合物或如請求項49之組合物的用途，其係用於製造供抑制有需要之個體之SHP2磷酸酶活性的藥劑。
  51. 如請求項50之用途，其中該藥劑進一步包含以下或與以下一起投與：抗體、抗體-藥物結合物、免疫調節劑或組蛋白脫乙醯基酶抑制劑。
  52. 如請求項50或51之用途，其中該個體為人類。
  53. 一種如請求項1至48中任一項之化合物或如請求項49之組合物的用途，其係用於製造供治療有需要之個體之病症的藥劑。
  54. 如請求項53之用途，其中該藥劑進一步包含以下或與以下一起投與：抗體、抗體-藥物結合物、免疫調節劑或組蛋白脫乙醯基酶抑制劑。
  55. 如請求項53或54之用途，其中該病症為努南症候群(Noonan syndrome)。
  56. 如請求項53或54之用途，其中該病症為嗜中性白血球減少症。
  57. 如請求項53或54之用途，其中該病症為糖尿病。
  58. 如請求項53或54之用途，其中該病症為神經母細胞瘤。
  59. 如請求項53或54之用途，其中該病症為黑素瘤。
  60. 如請求項53或54之用途，其中該病症為急性骨髓白血病。
  61. 如請求項53或54之用途，其中該病症為青少年白血病。
  62. 如請求項53或54之用途，其中該病症為青少年骨髓單核細胞性白血病。
  63. 如請求項53或54之用途，其中該病症為乳癌。
  64. 如請求項53或54之用途，其中該病症為肺癌。
  65. 如請求項53或54之用途，其中該病症為結腸直腸癌。
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