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TW201925782A - 靶向bcma之嵌合抗原受體及其用途 - Google Patents

靶向bcma之嵌合抗原受體及其用途 Download PDF

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TW201925782A
TW201925782A TW107143164A TW107143164A TW201925782A TW 201925782 A TW201925782 A TW 201925782A TW 107143164 A TW107143164 A TW 107143164A TW 107143164 A TW107143164 A TW 107143164A TW 201925782 A TW201925782 A TW 201925782A
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TW
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individual
cells
car
cell therapy
bcma car
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TW107143164A
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English (en)
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瑪里尼西 尤利安 普提努
凱斯 曼斯費爾德
柏瑞斯 安格斯
詹 J 馬蘭霍斯特
亞當 大衛 柯恩
艾德華 Ａ 史黛德摩爾
艾爾弗雷德 卡福爾
麥克 Ｃ 米隆
約瑟夫 Ａ 芙瑞塔
Original Assignee
瑞士商諾華公司
賓夕法尼亞大學董事會
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Filing date
Publication date
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Abstract

本發明提供用於治療與BCMA表現有關之疾病的組合物及方法。本發明亦關於一種投與靶向BCMA之嵌合抗原受體(CAR)療法及另一種治療劑的方法。

Description

靶向BCMA之嵌合抗原受體及其用途
本發明大體上係關於經工程改造以表現靶向B細胞成熟抗原蛋白(BCMA)之嵌合抗原受體之細胞、視情況與另一種治療劑組合以治療與BCMA表現有關之疾病的用途。本發明進一步描述BCMA靶向療法用的預後生物標記物。
BCMA為B細胞譜系之細胞上所表現的腫瘤壞死家族受體(TNFR)成員。BCMA表現在呈現長壽命漿細胞命運的終末分化B細胞(包括漿細胞、漿母細胞，及活化B細胞及記憶B細胞之亞群)上最高。BCMA涉及介導漿細胞之存活以維持長期體液免疫。BCMA之表現近來已與許多癌症、自體免疫病症及感染疾病相關。BCMA表現增強的癌症包括一些血液癌症，諸如多發性骨髓瘤(MM)、霍奇金氏(Hodgkin's)及非霍奇金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、各種白血病(例如慢性淋巴球性白血病(CLL))，及神經膠母細胞瘤。
鑒於不斷地需求經改良之靶向諸如癌症之疾病的策略，因此用於改良靶向BCMA之治療劑的新組合物及方法(例如抗BCMA嵌合抗原受體(CAR)療法)高度符合需要。
本發明之特徵至少部分地為一種治療與B細胞成熟抗原(BCMA，亦稱為TNFRSF17、BCM或CD269)表現有關之疾病或病症的方法。在某些實施例中，該病症為癌症，例如血液癌症。在一些實施例中，本發明之特徵在於BCMA CAR表現細胞療法，例如作為單一療法或與另一種治療劑之組合療法。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞療法為表現結合BCMA之CAR分子的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，相較於任一單獨療法，組合療法維持或具有更佳的臨床有效性。在一個實施例中，BCMA CAR表現細胞療法及另一種治療劑係以單一劑型或兩種或超過兩種劑型存在。在一個實施例中，本文提供一種包含BCMA CAR表現細胞療法及另一種治療劑的組合物用作藥劑。在一個實施例中，本文提供一種包含BCMA CAR表現細胞療法及另一種治療劑的組合物，其用於治療與BCMA表現有關的疾病。在一個態樣中，本文提供一種包含BCMA CAR表現細胞療法及另一種治療劑的套組。在一些實施例中，本發明的另一特徵為評估或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法之反應的方法，或評估或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中之效力的方法。在一些實施例中，靶向BCMA的CAR療法係基於患者樣品中之生物標記物含量的獲取來製造或投與。
在一個態樣中，本發明之特徵為預測個體中之BCMA CAR T細胞之活體內擴增的方法。在另一態樣中，本文之特徵為預測個體對BCMA CAR T細胞之反應的方法。在一些實施例中，自個體分離出之白血球清除產物中的較高CD4+:CD8+ T細胞比率可以用於預測個體中之BCMA CAR T細胞存在較大的活體內擴增及/或個體對BCMA CAR T細胞存在較大的臨床反應。在一些實施例中，自個體分離出之白血球清除產物中的較低CD4+:CD8+ T細胞比率可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較弱的活體內擴增及/或個體對BCMA CAR T細胞的臨床反應較弱。在一些實施例中，製造BCMA CAR T細胞開始時之種細胞培養物中的較高CD4+:CD8+ T細胞比率(例如移除單核球之後的白血球清除產物中)可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較大的活體內擴增及/或個體對BCMA CAR T細胞的臨床反應較大。在一些實施例中，製造BCMA CAR T細胞開始時之種細胞培養物中的較低CD4+:CD8+ T細胞比率(例如移除單核球之後的白血球清除產物中)可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較弱的活體內擴增及/或個體對BCMA CAR T細胞的臨床反應較弱。在一些實施例中，BCMA CAR T細胞投與之前，個體周邊血液及/或骨髓中的較高CD4+:CD8+ T細胞比率可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較大的活體內擴增。在一些實施例中，投與BCMA CAR T細胞之前，個體周邊血液及/或骨髓中的較低CD4+:CD8+ T細胞比率可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較弱的活體內擴增。
在一些實施例中，自個體分離出之白血球清除產物中具有「早期記憶」表型之CD8+ T細胞頻率較高(例如CD45RO-CD27+CD8+ T細胞頻率較高)可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較大的活體內擴增及/或個體對BCMA CAR T細胞的臨床反應較大。在一些實施例中，自個體分離出之白血球清除產物中具有「早期記憶」表型的CD8+ T細胞頻率較低(例如CD45RO-CD27+CD8+ T細胞頻率較低)可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較弱的活體內擴增及/或個體對BCMA CAR T細胞的臨床反應較弱。
在一些實施例中，來自個體之種細胞在製造BCMA CAR T細胞期間存在較大的活體外擴增可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較大的活體內擴增。在一些實施例中，來自個體的種細胞在製造BCMA CAR T細胞期間存在較弱的活體外擴增可以用於預測個體中的BCMA CAR T細胞存在較弱的活體內擴增。
在一個態樣中，本文提供一種評估或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法之反應的方法，其中該個體患有與BCMA表現有關之疾病，該方法包含：
獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值：
(i)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)，或BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中)的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性，
(ii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性，
(iii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性，
(iv)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(v)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(vi)來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中：
(a)相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；或
(b)相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值降低指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少，
藉此評估或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應。
在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓)中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值，例如截至第9天的群體倍增數(PDL9)。
在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值增加指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加。在一些實施例中，相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值降低指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少。
在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值增加指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者；
(c)個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加。在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者。在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測個體適於BCMA CAR表現細胞療法。在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值增加指示或預測以下中之一者、兩者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或
(c) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法之反應減少。在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者。在一些實施例中，相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值包含CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。在一些實施例中，
在一些實施例中，該比率：
(1)大於或等於1 (例如在1與5之間，例如在1與3.5之間)；或
(2)大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)，
指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者；
(c)個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，該比率小於1 (例如在0.001與1之間)指示或預測以下中之一者、兩者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或
(c) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值包含CD8+ T細胞中之CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中之HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比大於或等於25% (例如在30%與90%之間，例如在35%與85%之間，例如在40%與80%之間，例如在45%與75%之間，例如在50%與75%之間)指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者；
(c)個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比小於25% (例如在0.1%與25%之間，例如在0.1%與22%之間，例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間))指示或預測以下中之一者、兩者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或
(c) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於20% (例如在20%與90%之間，例如在20%與80%之間，例如在20%與70%之間，例如在20%與60%之間)指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者；
(c)個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於20% (例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間)指示或預測以下中之一者、兩者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或
(c) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於15% (例如在15%與90%之間，例如在15%與80%之間，例如在15%與70%之間，例如在15%與60%之間，例如在15%與50%之間)指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者；
(c)個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於15% (例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間，例如在0.1%與8%之間)指示或預測以下中之一者、兩者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或
(c) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，來自個體之種細胞在BCMA CAR表現細胞療法製造期間增殖的值包含來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的擴增倍數(例如製造結束時的總細胞計數相對於製造開始時的總細胞計數)，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如藉由細胞計數所量測。
在一些實施例中，方法進一步包含：
使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或
在以下情況時向個體投與(例如起始投與或繼續投與) BCMA CAR表現細胞療法：
(a)指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；
(b)指示或預測個體為BCMA CAR表現細胞療法的有反應者；
(c)指示或預測個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d)指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增已增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，該方法進一步包含實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者：
向個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)；
向個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)；
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法；
中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向個體投與第二療法；
修改BCMA CAR表現細胞療法的製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，且將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；或
將預療法投與個體，其中該預療法使個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓)中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法；及在以下情況時將該BCMA CAR表現細胞療法投與個體：
(a)指示或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應減少；
(b)指示或預測個體為BCMA CAR表現細胞療法的無反應者；或
(c)指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增已減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含：
相較於參考值(例如無反應者參考值)，回應於以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加：
(i)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中)的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性，
(ii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性，
(iii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性，
(iv)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(v)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(vi)來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，
實施：
使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或
向個體投與(例如起始投與或繼續投與) BCMA CAR表現細胞療法，
藉此治療患有與BCMA表現有關之疾病的個體。
在一些實施例中，方法包含：回應於(i)-(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加，鑑別或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應已增強；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之有反應者；
(c)個體適於BCMA CAR表現細胞療法；或
(d) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增已增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含：
相較於參考值(例如有反應者參考值)，回應於以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低：
(i)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中)的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性，
(ii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性，
(iii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性，
(iv)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(v)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(vi)來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，
實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者：
向個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)；
向個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)；
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法；
中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向個體投與第二療法；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；或
將預療法投與個體，其中該預療法使個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與個體，
藉此治療患有與BCMA表現有關之疾病的個體。
在一些實施例中，方法包含：回應於(i)-(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低，鑑別或預測以下中之一者、兩者或所有者：
(a)個體對BCMA CAR表現細胞療法的反應已減少；
(b)個體為BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或
(c) BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增已減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值包含CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，方法包含：
回應於比率：
(1)大於或等於1 (例如在1與5之間，例如在1與3.5之間)；或
(2)大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)，實施：
使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或
向個體投與(例如起始投與或繼續投與) BCMA CAR表現細胞療法。
在一些實施例中，方法包含：
回應於比率小於1 (例如在0.001與1之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者：
向個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)；
向個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)；
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法；
中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向個體投與第二療法；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；或
將預療法投與個體，其中該預療法使個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與個體。
在一些實施例中，CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值包含CD8+ T細胞中之CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，方法包含：
回應於CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比大於或等於25% (例如在30%與90%之間，例如在35%與85%之間，例如在40%與80%之間，例如在45%與75%之間，例如在50%與75%之間)，實施：
使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或
向個體投與(例如起始投與或繼續投與) BCMA CAR表現細胞療法。
在一些實施例中，方法包含：
回應於CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比小於25% (例如在0.1%與25%之間，例如在0.1%與22%之間，例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者：
向個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)；
向個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)；
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法；
中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向個體投與第二療法；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；或
將預療法投與個體，其中該預療法使個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與個體。
在一些實施例中，CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，方法包含：
回應於CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於20% (例如在20%與90%之間，例如在20%與80%之間，例如在20%與70%之間，例如在20%與60%之間)，實施：
使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或
向個體投與(例如起始投與或繼續投與) BCMA CAR表現細胞療法。
在一些實施例中，方法包含：
回應於CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於20% (例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者：
向個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)；
向個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)；
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法；
中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向個體投與第二療法；
修改BCMA CAR表現細胞療法的製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；或
將預療法投與個體，其中該預療法使個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與個體。
在一些實施例中，CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，方法包含：
回應於CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於15% (例如在15%與90%之間，例如在15%與80%之間，例如在15%與70%之間，例如在15%與60%之間，例如在15%與50%之間)，實施：
使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或
向個體投與(例如起始投與或繼續投與) BCMA CAR表現細胞療法。
在一些實施例中，方法包含：
回應於CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於15% (例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間，例如在0.1%與8%之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者：
向個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)；
向個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)；
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法；
中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向個體投與第二療法；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加，及將藉由經修改之製造方法所產生的BCMA CAR表現細胞療法投與個體；或
將預療法投與個體，其中該預療法使個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與個體。
在一些實施例中，來自個體之種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值包含來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的擴增倍數(例如製造結束時的總細胞計數相對於製造開始時的總細胞計數)，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如藉由細胞計數所量測。
在一個態樣中，本文提供一種評估或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中之效力的方法，其中該個體患有與BCMA表現有關的疾病且其中該BCMA CAR表現細胞療法係使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製成，該方法包含：
獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值：
(i)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中)的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性，
(ii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性，
(iii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性，
(iv)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(v)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(vi)來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中：
(a)相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的效力增強；或
(b)相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的效力減小，
藉此評估或預測BCMA CAR表現細胞療法的效力。
在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造BCMA CAR表現細胞療法開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值，例如截至第9天的群體倍增數(PDL9)。
在一些實施例中，相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一些實施例中，相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
在一個態樣中，本文揭示一種製造BCMA CAR表現細胞療法的方法，其中該BCMA CAR表現細胞療法係使用來自個體的細胞(例如T細胞)製成，該方法包含：
獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值：
(i)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中)的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性，
(ii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性，
(iii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性，
(iv)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(v)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或
(vi)來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中：
相較於參考值(例如無反應者參考值)，回應於(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加，使用來自個體的細胞製造BCMA CAR表現細胞療法。
在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD8+Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值，例如截至第9天的群體倍增數(PDL9)。
在一個態樣中，本文提供一種製造BCMA CAR表現細胞療法的方法，其中該BCMA CAR表現細胞療法係使用來自個體的細胞(例如T細胞)製成，該方法包含：
獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值：
(i)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中)的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性，
(ii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性，
(iii)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性，
(iv)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，
(v)個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或
(vi)來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中：
相較於參考值(例如有反應者參考值)，回應於(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低，實施以下中之一者、兩者、三者或所有者：
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸；
修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如在製造BCMA CAR表現細胞療法期間使來自個體之種細胞的增殖增加；或
向個體投與預療法，其中該預療法使個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；及使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法。
在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與BCMA CAR表現細胞療法之前的個體周邊血液及/或骨髓中)之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取個體中(例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中)之CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值。在一些實施例中，方法包含獲取來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值，例如截至第9天的群體倍增數(PDL9)。
在一些實施例中，CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值包含CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值包含CD8+ T細胞中之CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
在一些實施例中，來自個體之種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值包含來自個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的擴增倍數(例如製造結束時的總細胞計數相對於製造開始時的總細胞計數)，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如藉由細胞計數所量測。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與以下中之一者、兩者或所有者組合投與個體：
(1)使包含CAR核酸或CAR多肽之細胞之功效增強的藥劑；
(2)改善與投與包含CAR核酸或CAR多肽之細胞有關之一或多種副作用的藥劑；
(3)治療與BCMA表現有關之疾病的藥劑。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與式(I)化合物(COF1)組合投與個體，其中COF1為：

或其醫藥學上可接受之鹽、酯、水合物、溶劑合物或互變異構體，其中：
X為O或S；
R1 為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其各自視情況經一或多個R4 取代；
R2a 及R2b 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基；或R2a 及R2b 與其所連接之碳原子一起形成羰基或硫羰基；
R3 各獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )或-N(RC )S(O)x RE ，其中各烷基、烯基、炔基及雜烷基獨立地且視情況經一或多個R6 取代；
各R4 獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、側氧基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )、-N(RC )S(O)x RE 、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其中各烷基、烯基、炔基、雜烷基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地且視情況經一或多個R7 取代；
RA 、RB 、RC 、RD 及RE 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基；
各R6 獨立地為C1 -C6 烷基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、芳基或雜芳基，其中各芳基及雜芳基獨立地且視情況經一或多個R8 取代；
各R7 獨立地為鹵基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ；
各R8 獨立地為C1 -C6 烷基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ；
n為0、1、2、3或4；及
x為0、1或2，視情況其中：
(1) COF1為免疫調節醯亞胺藥物(IMiD)，或其醫藥學上可接受之鹽；
(2) COF1選自由以下組成之群：來那度胺(lenalidomide)、泊利度胺(pomalidomide)、沙立度胺(thalidomide)及2-(4-(第三丁基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基異吲哚啉-5-基)甲基)乙醯胺，或其醫藥學上可接受之鹽；
(3) COF1選自由以下組成之群：
，或其醫藥學上可接受之鹽；或
(4) COF1為來那度胺，或其醫藥學上可接受之鹽。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與激酶抑制劑(例如BTK抑制劑，例如依魯替尼(ibrutinib))組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與第二CAR表現細胞療法組合投與個體。
在一些實施例中，第二CAR表現細胞療法為CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019。在一些實施例中，CD19 CAR表現細胞療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD19表現增加之後。在一些實施例中，CD19 CAR表現細胞療法包含表現CD19 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD19 CAR包含表8、9或10中所揭示之胺基酸序列(例如表8、9或10中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二CAR表現細胞療法為CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法。在一些實施例中，CD20 CAR表現細胞療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD20表現增加之後。在一些實施例中，CD20 CAR表現細胞療法包含表現CD20 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD20 CAR包含表11、12或13中所揭示之胺基酸序列(例如表11、12或13中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二CAR表現細胞療法為CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法。在一些實施例中，CD22 CAR表現細胞療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD22表現增加之後。在一些實施例中，CD22 CAR表現細胞療法包含表現CD22 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD22 CAR包含表14或15中所揭示之胺基酸序列(例如表14或15中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二CAR表現細胞療法為包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)。在一些實施例中，第二CAR選自由以下組成之群：CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)、CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)，及CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)。在一些實施例中，第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)。在一些實施例中，CD19 CAR表現細胞療法包含表現CD19 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD19 CAR包含表8、9或10中所揭示之胺基酸序列(例如表8、9或10中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。在一些實施例中，第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)。在一些實施例中，CD20 CAR包含表11、12或13中所揭示之胺基酸序列(例如表11、12或13中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。在一些實施例中，第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)。在一些實施例中，CD22 CAR包含表14或15中所揭示之胺基酸序列(例如表14或15中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二CAR表現細胞療法為包含表現多特異性CAR (例如雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，該CAR結合至第一抗原及第二抗原，其中第一抗原為BCMA。在一些實施例中，第二抗原選自由CD19、CD20及CD22組成之群。在一些實施例中，第二抗原為CD19。在一些實施例中，第二抗原為CD20。在一些實施例中，第二抗原為CD22。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與CD19抑制劑(例如本文所揭示之CD19抑制劑)組合投與個體。在一些實施例中，CD19抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD19表現增加之後。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與CD20抑制劑(例如本文所揭示之CD20抑制劑)組合投與個體。在一些實施例中，CD20抑制劑為結合至CD20及CD3的多特異性抗體分子，例如雙特異性抗體分子，例如THG338。在一些實施例中，CD20抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD20表現增加之後。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與CD22抑制劑(例如本文所揭示之CD22抑制劑)組合投與個體。在一些實施例中，CD22抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD22表現增加之後。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與結合至Fc受體樣2 (FCRL2)或Fc受體樣5 (FCRL5)的分子組合投與個體。在一些實施例中，分子為包含表現CAR之細胞的CAR表現細胞療法，該CAR結合至FCRL2或FCRL5。在一些實施例中，分子為結合至第一抗原及第二抗原的多特異性抗體分子，例如雙特異性抗體分子，其中第一抗原為FCRL2或FCRL5，視情況其中第二抗原為CD3。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與介白素-15 (IL-15)多肽、介白素-15受體α (IL-15Ra)多肽或IL-15多肽與IL-15Ra多肽組合(例如hetIL-15)組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與TGF β抑制劑組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與EGFR抑制劑(例如EGFRmut -酪胺酸激酶抑制劑(TKI))組合投與個體。在一些實施例中，EGFR抑制劑為EGF816。在一些實施例中，EGFR抑制劑為(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺。在一些實施例中，EGFR抑制劑為表27中所揭示之化合物A40。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與腺苷A2AR拮抗劑組合投與個體。在一些實施例中，腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：PBF509、CPI444、AZD4635、韋帕迪蘭(Vipadenant)、GBV-2034及AB928。在一些實施例中，腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與抗CD73抗體分子(例如本文所揭示之抗CD73抗體分子)組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與檢查點抑制劑組合投與個體。在一些實施例中，檢查點抑制劑為PD-1抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑選自由以下組成之群：PDR001、納武單抗(Nivolumab)、派立珠單抗(Pembrolizumab)、皮立珠單抗(Pidilizumab)、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591及AMP-224。在一些實施例中，PD-1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在個體中歷時例如至少1、2、3、4或5週的擴增增加例如至少1、2、3、4、5、10、15、20、25或30倍。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞在PD-1抑制劑投與之前投與個體。在一些實施例中，投與PD-1抑制劑時，BCMA CAR表現細胞在個體中不擴增或擴增極少(例如不超過1、2、3、4、5或10倍擴增)。在一些實施例中，檢查點抑制劑為PD-L1抑制劑。在一些實施例中，PD-L1抑制劑選自由以下組成之群：FAZ053、阿特唑單抗(Atezolizumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)及BMS-936559。在一些實施例中，PD-L1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在個體中歷時例如至少1、2、3、4或5週的擴增增加例如至少1、2、3、4、5、10、15、20、25或30倍。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞在PD-L1抑制劑投與之前投與個體。在一些實施例中，投與PD-L1抑制劑時，BCMA CAR表現細胞在個體中不擴增或擴增極少(例如不超過1、2、3、4、5或10倍擴增)。在一些實施例中，檢查點抑制劑為LAG-3抑制劑。在一些實施例中，LAG-3抑制劑選自由LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280及REGN3767組成之群。在一些實施例中，檢查點抑制劑為TIM-3抑制劑。在一些實施例中，TIM-3抑制劑選自由MGB453、TSR-022及LY3321367組成之群。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與結合至CD32B的抗體分子組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與結合至IL-17的抗體分子(例如結合至IL-17的拮抗性抗體分子，例如CJM112)組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與結合至IL-1β的抗體分子組合投與個體。
在前述態樣之某些實施例中，方法包含將BCMA CAR表現細胞療法與吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)及/或色胺酸2,3-二加氧酶(TDO)抑制劑(例如IDO1抑制劑)組合投與個體。在一些實施例中，IDO及/或TDO抑制劑為INCB24360、因多莫得(indoximod)、NLG919、艾帕斯塔(epacadostat)、NLG919或F001287。在一些實施例中，IDO及/或TDO抑制劑為(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法。在一些實施例中，第二療法為CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019。在一些實施例中，CD19 CAR表現細胞療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD19表現增加之後。在一些實施例中，CD19 CAR表現細胞療法包含表現CD19 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD19 CAR包含表8、9或10中所揭示之胺基酸序列(例如表8、9或10中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二療法為CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法。在一些實施例中，CD20 CAR表現細胞療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD20表現增加之後。在一些實施例中，CD20 CAR表現細胞療法包含表現CD20 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD20 CAR包含表11、12或13中所揭示之胺基酸序列(例如表11、12或13中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二療法為CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法。在一些實施例中，CD22 CAR表現細胞療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD22表現增加之後。在一些實施例中，CD22 CAR表現細胞療法包含表現CD22 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD22 CAR包含表14或15中所揭示之胺基酸序列(例如表14或15中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二療法為包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)。在一些實施例中，第二CAR選自由以下組成之群：CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)、CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)，及CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)。在一些實施例中，第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)。在一些實施例中，CD19 CAR表現細胞療法包含表現CD19 CAR的細胞(例如細胞群)。在一些實施例中，CD19 CAR包含表8、9或10中所揭示之胺基酸序列(例如表8、9或10中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。在一些實施例中，第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)。在一些實施例中，CD20 CAR包含表11、12或13中所揭示之胺基酸序列(例如表11、12或13中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。在一些實施例中，第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)。在一些實施例中，CD22 CAR包含表14或15中所揭示之胺基酸序列(例如表14或15中所揭示之CDR、scFv或全長胺基酸序列)，或與其至少約85%、90%、95%、99%或超過99%一致且/或具有一個、兩個、三個或超過三個取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列。
在一些實施例中，第二療法為包含表現多特異性CAR (例如結合至第一抗原及第二抗原的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一抗原為BCMA。在一些實施例中，第二抗原選自由CD19、CD20及CD22組成之群。在一些實施例中，第二抗原為CD19。在一些實施例中，第二抗原為CD20。在一些實施例中，第二抗原為CD22。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法。在一些實施例中，第二療法為CD19抑制劑，例如本文所揭示之CD19抑制劑。在一些實施例中，CD19抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD19表現增加之後。
在一些實施例中，第二療法為CD20抑制劑，例如本文所揭示之CD20抑制劑。在一些實施例中，CD20抑制劑為結合至CD20及CD3的多特異性抗體分子，例如雙特異性抗體分子，例如THG338。在一些實施例中，CD20抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD20表現增加之後。
在一些實施例中，第二療法為CD22抑制劑，例如本文所揭示之CD22抑制劑。在一些實施例中，CD22抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的CD22表現增加之後。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為結合至Fc受體樣2 (FCRL2)或Fc受體樣5 (FCRL5)的分子。在一些實施例中，分子為包含表現CAR之細胞的CAR表現細胞療法，該CAR結合至FCRL2或FCRL5。在一些實施例中，分子為結合至第一抗原及第二抗原的多特異性抗體分子，例如雙特異性抗體分子，其中第一抗原為FCRL2或FCRL5，視情況其中第二抗原為CD3。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為TGF β抑制劑。
在一個態樣中，本文揭示一種治療與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為EGFR抑制劑，例如EGFRmut -酪胺酸激酶抑制劑(TKI)。在一些實施例中，EGFR抑制劑為EGF816。在一些實施例中，EGFR抑制劑為(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺。在一些實施例中，EGFR抑制劑為表27中所揭示之化合物A40。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為腺苷A2AR拮抗劑。在一些實施例中，腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：PBF509、CPI444、AZD4635、韋帕迪蘭、GBV-2034及AB928。在一些實施例中，腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為抗CD73抗體分子，例如本文所揭示之抗CD73抗體分子。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為檢查點抑制劑。在一些實施例中，檢查點抑制劑為PD-1抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑選自由以下組成之群：PDR001、納武單抗(Nivolumab)、派立珠單抗(Pembrolizumab)、皮立珠單抗(Pidilizumab)、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591及AMP-224。在一些實施例中，PD-1抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的PD-1或PD-L1表現增加之後。在一些實施例中，PD-1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在個體中歷時例如至少1、2、3、4或5週的擴增增加例如至少1、2、3、4、5、10、15、20、25或30倍。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞在PD-1抑制劑投與之前投與個體。在一些實施例中，投與PD-1抑制劑時，BCMA CAR表現細胞在個體中不擴增或擴增極少(例如不超過1、2、3、4、5或10倍擴增)。在一些實施例中，檢查點抑制劑為PD-L1抑制劑。在一些實施例中，PD-L1抑制劑選自由以下組成之群：FAZ053、阿特唑單抗(Atezolizumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)及BMS-936559。在一些實施例中，PD-L1抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的PD-1或PD-L1表現增加之後。在一些實施例中，PD-L1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在個體中歷時例如至少1、2、3、4或5週的擴增增加例如至少1、2、3、4、5、10、15、20、25或30倍。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞在PD-L1抑制劑投與之前投與個體。在一些實施例中，投與PD-L1抑制劑時，BCMA CAR表現細胞在個體中不擴增或擴增極少(例如不超過1、2、3、4、5或10倍擴增)。在一些實施例中，檢查點抑制劑為LAG-3抑制劑。在一些實施例中，LAG-3抑制劑選自由LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280及REGN3767組成之群。在一些實施例中，LAG-3抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的LAG-3表現增加之後。在一些實施例中，檢查點抑制劑為TIM-3抑制劑。在一些實施例中，TIM-3抑制劑選自由MGB453、TSR-022及LY3321367組成之群。在一些實施例中，TIM-3抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的TIM-3表現增加之後。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為結合至CD32B的抗體分子。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為結合至IL-17的抗體分子，例如結合至IL-17的拮抗性抗體分子，例如CJM112。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為結合至IL-1β的抗體分子。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與個體，其中第二療法為吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)及/或色胺酸2,3-二加氧酶(TDO)抑制劑，例如IDO1抑制劑。在一些實施例中，IDO及/或TDO抑制劑為INCB24360、因多莫得(indoximod)、NLG919、艾帕斯塔(epacadostat)、NLG919或F001287。在一些實施例中，IDO及/或TDO抑制劑為(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體。在一些實施例中，IDO及/或TDO抑制劑係在BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與BCMA CAR表現細胞療法後，使個體中的IDO及/或TDO表現增加之後。
在前述態樣之某些實施例中，第二療法係在BCMA CAR表現細胞療法投與之前、同時或之後投與。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，其中該個體已接受或正接受BCMA CAR表現細胞療法，該方法包含：
相對於參考值，個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點，回應於個體中(例如來自個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)之抗原含量或活性在的值增加，其中該參考值為：
(i)在該至少一個時間點之前，個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)的抗原含量或活性(例如個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之前，個體中的抗原含量或活性，或個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，個體中的抗原含量或活性)；
(ii)患有與BCMA表現有關疾病之不同個體中的抗原含量或活性；或
(iii)患有與BCMA表現有關疾病之個體群體中的平均抗原含量或活性，
向個體投與抗原抑制劑，其中：
(1)抗原為CD19且抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中CD19抑制劑為：
(a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019；
(b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或
(c)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(2)抗原為CD20且抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中CD20抑制劑為：
(d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法；
(e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)；
(f)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法；或
(g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338，
(3)抗原為CD22且抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中CD22抑制劑為：
(h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法；
(i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或
(j)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(4)抗原為PD1或PD-L1且抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中抗原抑制劑為：
(k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或
(l) FAZ053、阿特珠單抗(Atezolizumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)或BMS-936559，
(5)抗原為IDO或TDO且抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中IDO及/或TDO抑制劑為：
(m) INCB24360、因多莫得(indoximod)、NLG919、艾帕斯塔(epacadostat)、NLG919或F001287；或
(n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或
(6)抗原為TGF-β且抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，其中該個體已接受或正接受BCMA CAR表現細胞療法，該方法包含：
個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點，獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品中)之抗原含量或活性的值，
相對於參考值，回應於該值增加，其中該參考值為：
(i)該至少一個時間點之前，個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)的抗原含量或活性(例如個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之前，個體中的抗原含量或活性，或個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，個體中的抗原含量或活性)；
(ii)患有與BCMA表現有關之疾病之不同個體中的抗原含量或活性；或
(iii)患有與BCMA表現有關之疾病之個體群體中的平均抗原含量或活性，
向個體投與抗原抑制劑，其中：
(1)抗原為CD19且抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中CD19抑制劑為：
(a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019；
(b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或
(c)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(2)抗原為CD20且抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中CD20抑制劑為：
(d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法；
(e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)；
(f)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法；或
(g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338，
(3)抗原為CD22且抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中CD22抑制劑為：
(h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法；
(i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或
(j)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(4)抗原為PD1或PD-L1且抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中抗原抑制劑為：
(k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或
(l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559，
(5)抗原為IDO或TDO且抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中IDO及/或TDO抑制劑為：
(m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或
(n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或
(6)抗原為TGF-β且抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含：
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法，
相對於參考值，個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點，回應於個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)之抗原含量或活性值增加，其中該參考值為：
(i)該至少一個時間點之前，個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)的抗原含量或活性(例如個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之前，個體中的抗原含量或活性，或個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，個體中的抗原含量或活性)；
(ii)患有與BCMA表現有關之疾病之不同個體中的抗原含量或活性；或
(iii)患有與BCMA表現有關之疾病之個體群體中的平均抗原含量或活性，
向個體投與抗原抑制劑，其中：
(1)抗原為CD19且抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中CD19抑制劑為：
(a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019；
(b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或
(c)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(2)抗原為CD20且抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中CD20抑制劑為：
(d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法；
(e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)；
(f)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法；或
(g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338，
(3)抗原為CD22且抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中CD22抑制劑為：
(h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法；
(i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或
(j)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(4)抗原為PD1或PD-L1且抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中抗原抑制劑為：
(k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或
(l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559，
(5)抗原為IDO或TDO且抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中IDO及/或TDO抑制劑為：
(m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或
(n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或
(6)抗原為TGF-β且抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
在一個態樣中，本文揭示一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含：
向個體投與BCMA CAR表現細胞療法，
獲取個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品中)之抗原含量或活性在個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點的值，
相對於參考值，回應於該值增加，其中該參考值為：
(i)該至少一個時間點之前，個體中(例如來自個體的樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)的抗原含量或活性(例如個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之前，個體中的抗原含量或活性，或個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，個體中的抗原含量或活性)；
(ii)患有與BCMA表現有關之疾病之不同個體中的抗原含量或活性；或
(iii)患有與BCMA表現有關之疾病之個體群體中的平均抗原含量或活性，
向個體投與抗原抑制劑，其中：
(1)抗原為CD19且抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中CD19抑制劑為：
(a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019；
(b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或
(c)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(2)抗原為CD20且抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中CD20抑制劑為：
(d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法；
(e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)；
(f)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法；或
(g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338，
(3)抗原為CD22且抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中CD22抑制劑為：
(h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法；
(i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或
(j)包含表現多特異性CAR (例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR)之細胞的CAR表現細胞療法，
(4)抗原為PD1或PD-L1且抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中抗原抑制劑為：
(k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或
(l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559，
(5)抗原為IDO或TDO且抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中IDO及/或TDO抑制劑為：
(m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或
(n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或
(6)抗原為TGF-β且抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
在前述態樣之某些實施例中，抗原含量或活性的值包含個體中(例如來自個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中)的抗原表現量，如本文所述之分析(例如免疫組織化學)所量測。
在一些實施例中，至少一個時間點為個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後的第5、10、15、20、25、28、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80或90天。
在一些實施例中，個體開始接受BCMA CAR表現細胞療法之後，個體經歷BCMA表現的減少。
在前述態樣的某些實施例中，BCMA CAR表現細胞療法包含表現BCAM CAR的細胞。在一些實施例中，BCMA CAR包含表3或5中所列之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2及HCDR3中之一或多者(例如所有三者)及/或表4或5中所列之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2及LCDR3中之一或多者(例如所有三者)，或與其具有95-99%一致性的序列。在一些實施例中，BCMA CAR包含表2或5中所列之重鏈可變區(VH)及/或表2或5中所列之輕鏈可變區(VL)，或與其具有95-99%一致性的序列。在一個實施例中，BCMA CAR包含表2或5中所列的BCMA scFv域胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 145、 SEQ ID NO: 146、 SEQ ID NO: 147、 SEQ ID NO: 148及SEQ ID NO: 149)，或與其具有95-99%一致性的序列。在一些實施例中，BCMA CAR包含表2或5中所列的全長BCMA CAR胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 109之殘基22-483、SEQ ID NO: 99之殘基22-490、SEQ ID NO: 100之殘基22-488、SEQ ID NO: 101之殘基22-487、SEQ ID NO: 102之殘基22-493、SEQ ID NO: 103之殘基22-490、SEQ ID NO: 104之殘基22-491、SEQ ID NO: 105之殘基22-482、SEQ ID NO: 106之殘基22-483、SEQ ID NO: 107之殘基22-485、SEQ ID NO: 108之殘基22-483、SEQ ID NO: 110之殘基22-490、SEQ ID NO: 111之殘基22-483、SEQ ID NO: 112之殘基22-484、SEQ ID NO: 113之殘基22-485、SEQ ID NO: 213之殘基22-487、SEQ ID NO: 214之殘基23-489、SEQ ID NO: 215之殘基22-490、SEQ ID NO: 216之殘基22-484、SEQ ID NO: 217之殘基22-485、SEQ ID NO: 218之殘基22-489、SEQ ID NO: 219之殘基22-497、SEQ ID NO: 220之殘基22-492、SEQ ID NO: 221之殘基22-490、SEQ ID NO: 222之殘基22-485、SEQ ID NO: 223之殘基22-492、SEQ ID NO: 224之殘基22-492、SEQ ID NO: 225之殘基22-483、SEQ ID NO: 226之殘基22-490、SEQ ID NO: 227之殘基22-485、SEQ ID NO: 228之殘基22-486、SEQ ID NO: 229之殘基22-492、SEQ ID NO: 230之殘基22-488、SEQ ID NO: 231之殘基22-488、SEQ ID NO: 232之殘基22-495、SEQ ID NO: 233之殘基22-490)，或與其具有95-99%一致性的序列。在一些實施例中，BCMA CAR係由表2或5中所列的核酸序列(例如SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170)或與其具有95-99%一致性的序列編碼。
在前述態樣之某些實施例中，與BCMA表現有關的疾病為癌症，視情況其中該癌症為血液癌症。在一些實施例中，與BCMA表現有關的疾病為選自以下中之一或多者的急性白血病：B細胞急性淋巴白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴白血病(「TALL」)、急性淋巴白血病(ALL)；慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)；B細胞前淋巴球性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅生物、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴增生病狀、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良及骨髓發育不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅生物、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)；前列腺癌(例如抗去勢或抗治療前列腺癌，或轉移性前列腺癌)、胰臟癌、肺癌；或漿細胞增殖病症(例如無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或頑固性骨髓瘤)、意義待定的單株γ球蛋白血症(MGUS)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、漿細胞瘤(例如漿細胞惡病質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤，及多發性漿細胞瘤)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性，及POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群(Crow-Fukase syndrome)、高槻疾病(Takatsuki disease)，及PEP症候群))，或其組合。在一些實施例中，與BCMA表現有關的疾病為ALL、CLL、DLBCL或多發性骨髓瘤。在一些實施例中，個體為人類患者。
材料、方法及實例僅具說明性且不希望具限制性。
標題、子標題或編號或標上字母之要素，例如(a)、(b)、(i)等，僅為易於閱讀而呈現。此文獻中標題或編號或標上字母之要素的使用不需要步驟或要素以字母次序來執行，或步驟或要素彼此需為離散的。
所有公開案、專利申請案、專利及本文所提及之其他參考文獻均以全文引用的方式併入本文中。
本發明之其他特徵、目標及優點自實施方式及圖式，及自申請專利範圍將顯而易知。
相關申請案
本案主張2017年11月30日申請之美國第62/593,043號及2018年10月29日申請之美國第62/752,010號的優先權，其每一者的內容以全文引用之方式併入本文中。
序列表 本案含有序列表，該序列表已以ASCII格式、以電子方式提交且以全文引用的方式併入本文中。該ASCII複本於2018年11月28日創建，命名為N2067-7137WO_SL.txt且大小為1,411,518個位元組。
定義
除非另外定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解相同的含義。
如本文所用，術語「BCMA」係指B細胞成熟抗原。BCMA (亦稱為TNFRSF17、BCM或CD269)為腫瘤壞死受體(TNFR)家族成員且主要表現於末端分化B細胞(例如記憶B細胞)及漿細胞上。其配位體稱為TNF家族之B細胞活化因子(BAFF)及增殖誘導配位體(APRIL)。BCMA涉及介導漿細胞之存活以維持長期體液免疫。BCMA之基因在染色體16上編碼，從而產生994個核苷酸長度之初始mRNA轉錄物(NCBI寄存號NM_001192.2)，該轉錄物編碼184個胺基酸之蛋白質(NP_001183.2)。已描述來源於BCMA基因座之第二反義轉錄物，其可在調節BCMA表現中起作用。(Laabi Y.等人, Nucleic Acids Res., 1994, 22:1147-1154)。意義未知的其他轉錄物變異體已有描述(Smirnova AS等人, Mol Immunol., 2008, 45(4):1179-1183)。已鑑別出第二種同功異型物，亦稱為TV4(Uniprot標識符Q02223-2)。如本文所用，「BCMA」包括包含全長野生型BCMA之突變(例如點突變、片段、插入、缺失及剪接變異體)的蛋白質。
如本文所用，術語「CD19」係指分化簇19蛋白質，其為白血病前驅細胞上可偵測之抗原決定子。人類及鼠類胺基酸及核酸序列可見於諸如GenBank、UniProt及Swiss-Prot之公共資料庫中。舉例而言，人類CD19之胺基酸序列可見於UniProt/Swiss-Prot寄存編號P15391且編碼人類CD19之核苷酸序列可見於寄存編號NM_001178098。如本文所用，「CD19」包括包含全長野生型CD19之突變(例如點突變、片段、插入、缺失及剪接變異體)的蛋白質。CD19表現於大部分B譜系癌症上，包括例如急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴球白血病及非霍奇金氏淋巴瘤。表現CD19之其他細胞提供於下文「與CD19表現相關之疾病」之定義中。其亦為B細胞祖細胞之早期標記物。參見例如Nicholson等人, Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997)。在一個態樣中，CART之抗原結合部分識別且結合CD19蛋白質之細胞外域內之抗原。在一個態樣中，CD19蛋白質表現於癌細胞上。
術語「一(a及an)」係指冠詞之一個或超過一個(亦即，至少一個)文法對象。舉例而言，「一個元件」意謂一個元件或超過一個元件。
術語「約」當提及可測值(諸如量、暫態持續時間及其類似值)時，意欲涵蓋指定值±20%，或在一些情況下±10%，或在一些情況下±5%，或在一些情況下±1%，或在一些情況下±0.1%之變化，因為此類變化適於實施所揭示之方法。
術語「嵌合抗原受體」或者「CAR」係指包含至少一個細胞外抗原結合域、跨膜域及包含來源於如下所定義之刺激分子之功能信號傳導域之細胞質信號傳導域(在本文中亦稱作「胞內信號傳導域」)的重組多肽構築體。在一些實施例中，CAR多肽構築體中的區域處於同一多肽鏈中，例如構成嵌合融合蛋白。在一些實施例中，CAR多肽構築體中之區域彼此不鄰接，例如處於不同多肽鏈中，例如如在本文所述之RCAR中所提供。
在一個態樣中，CAR之刺激分子為與T細胞受體複合物締合之ξ鏈。在一個態樣中，細胞質信號傳導域包含初始信號傳導域(例如，CD3-ξ之初始信號傳導域)。在一個態樣中，細胞質信號傳導域進一步包含一或多個來源於至少一個如下所定義之共刺激分子的功能信號傳導域。在一個態樣中，共刺激分子係選自4 1BB (亦即，CD137)、CD27、ICOS及/或CD28。在一個態樣中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含細胞外抗原識別域、跨膜域及含有來源於刺激分子之功能信號傳導域的胞內信號傳導域。在一個態樣中，CAR包含嵌合融合蛋白質，該嵌合融合蛋白包含細胞外抗原識別域、跨膜域及胞內信號傳導域，該胞內信號傳導域包含來源於共刺激分子之功能信號傳導域及來源於刺激分子的功能信號傳導域。在一個態樣中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含細胞外抗原識別域、跨膜域及胞內信號傳導域，該胞內信號傳導域包含來源於一或多個共刺激分子的兩個功能信號傳導域及來源於刺激分子的功能信號傳導域。在一個態樣中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含細胞外抗原識別域、跨膜域及胞內信號傳導域，該胞內信號傳導域包含來源於一或多個共刺激分子的至少兩個功能信號傳導域及來源於刺激分子的功能信號傳導域。在一個態樣中，CAR在CAR融合蛋白之胺基端(N端)包含視情況存在之前導序列。在一個態樣中，CAR進一步包含位於細胞外抗原識別域之N端的前導序列，其中該前導序列視情況在細胞加工期間自抗原結合域(例如scFv)裂解且使CAR局域化至細胞膜。
包含靶向特定腫瘤標記物X之抗原結合域(例如scFv、單域抗體或TCR (例如TCR α結合域或TCR β結合域))的CAR亦稱為XCAR，其中X可為如本文所述之腫瘤標記物。舉例而言，包含靶向BCMA之抗原結合域的CAR稱為BCMACAR。CAR可以表現於任何細胞中，例如如本文所述之免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)。
術語「信號傳導域」係指蛋白質之功能部分，其作用為經由限定的信號傳導路徑在胞內遞送調控細胞活性的資訊，此係藉由產生第二信使或藉由回應於此類信使而充當效應子。
如本文所用，術語「抗體」係指來源於特異性結合抗原之免疫球蛋白分子的蛋白質或多肽序列。抗體可為多株或單株、多鏈或單鏈或完整的免疫球蛋白且可來源於天然來源或重組來源。抗體可為免疫球蛋白分子之四聚物。
術語「抗體片段」係指完整抗體的至少一部分，或其重組變異體，且係指抗原結合域，例如完整抗體的抗原性決定可變區，其足以賦予抗體片段識別及特異性結合至標靶，諸如抗原。抗體片段之實例包括(但不限於) Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段、scFv抗體片段、線性抗體、單域抗體(諸如sdAb (VL或VH))、駱駝科VHH域，及由抗體片段形成的多特異性分子，諸如二價片段，其包含兩個或超過兩個(例如兩個)在鉸鏈區藉由二硫橋連接的Fab片段，或所連抗體之兩個或超過兩個(例如兩個)分離的CDR或其他抗原決定基結合片段。抗原片段亦可併入單域抗體、最大抗體、微型抗體、奈米抗體、胞內抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、v-NAR及雙-scFv中(參見例如Hollinger及Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005)。抗體片段亦可移植至基於多肽之支架，諸如III型纖維結合蛋白(Fn3)(參見美國專利第6,703,199號，其描述纖維結合蛋白多肽微型抗體)。
術語「scFv」係指一種融合蛋白，其包含至少一個包含輕鏈可變區的抗體片段及至少一個包含重鏈可變區的抗體片段，其中輕鏈與重鏈可變區鄰接地經由短柔性多肽連接子連接且能夠以單鏈多肽形式表現，且其中scFv保留其所來源之完整抗體的特異性。除非指明，否則如本文所用，scFv中之VL及VH可變區可以具有任何次序(例如就多肽之N端及C端而言)，scFv可以包含VL-連接子-VH或可以包含VH-連接子-VL。
如本文所用，術語「互補決定區」或「CDR」係指抗體可變區內之胺基酸序列，其賦予抗原特異性及結合親和力。舉例而言，通常，各重鏈可變區中存在三個CDR (例如HCDR1、HCDR2及HCDR3)且各輕鏈可變區中存在三個CDR (LCDR1、LCDR2及LCDR3)。所指定CDR之確切胺基酸序列邊界可使用多種熟知方案中之任一者確定，包括由Kabat等人 (1991),「Sequences of Proteins of Immunological Interest」第5版, 公眾健康服務署(Public Health Service), 國家衛生研究院(National Institutes of Health), Bethesda, MD (「Kabat」編號方案)；Al-Lazikani等人, (1997) JMB 273,927-948 (「Chothia」編號方案)所述之方案或其組合。根據Kabat編號方案，在一些實施例中，重鏈可變域(VH)中之CDR胺基酸殘基編號為31-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且輕鏈可變域(VL)中之CDR胺基酸殘基編號為24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。根據Chothia編號方案，在一些實施例中，VH中之CDR胺基酸編號為26-32 (HCDR1)、52-56 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且VL中之CDR胺基酸殘基編號為26-32 (LCDR1)、50-52 (LCDR2)及91-96 (LCDR3)。在組合之Kabat及Chothia編號方案中，在一些實施例中，CDR對應於作為Kabat CDR、Chothia CDR或兩者之一部分的胺基酸殘基。舉例而言，在一些實施例中，CDR對應於VH (例如哺乳動物VH，例如人類VH)中之胺基酸殘基26-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；及VL (例如哺乳動物VL，例如人類VL)中之胺基酸殘基24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。
包含抗體或其抗體片段之本發明CAR組合物的一部分可以多種形式存在，例如其中抗原結合域作為多肽鏈之一部分(包括例如單域抗體片段(sdAb))、單鏈抗體(scFv)或例如人類化抗體表現(Harlow等人, 1999, 於: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow等人, 1989, 於: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston等人, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；Bird等人, 1988, Science 242:423-426)。在一個態樣中，本發明之CAR組合物之抗原結合域包含抗體片段。在另一態樣中，CAR包含含有scFv的抗體片段。
如本文所用，術語「結合域」或「抗體分子」(在本文中亦稱為「抗標靶(例如BCMA)結合域」)係指包含至少一個免疫球蛋白可變域序列的蛋白質，例如免疫球蛋白鏈或其片段。術語「結合域」或「抗體分子」涵蓋抗體及抗體片段。在一個實施例中，抗體分子為多特異性抗體分子，例如其包含複數個免疫球蛋白可變域序列，其中該複數個序列中之第一免疫球蛋白可變域序列對第一抗原決定基具有結合特異性且該複數個序列中之第二免疫球蛋白可變域序列對第二抗原決定基具有結合特異性。在一個實施例中，多特異性抗體分子為雙特異性抗體分子。雙特異性抗體對不超過兩種抗原具有特異性。雙特異性抗體分子之特徵為第一免疫球蛋白可變域序列對第一抗原決定基具有結合特異性且第二免疫球蛋白可變域序列對第二抗原決定基具有結合特異性。術語「抗體重鏈」係指以天然存在之構形存在於抗體分子中且通常決定抗體所屬類別的兩種類型之多肽鏈中之較大者。
術語「抗體輕鏈」係指以天然存在之構形存在於抗體分子中之兩種類型多肽鏈中之較小者。Kappa (κ)及lambda (λ)輕鏈係指兩種主要的抗體輕鏈同型。
術語「重組抗體」係指使用重組DNA技術產生之抗體，諸如由噬菌體或酵母菌表現系統所表現之抗體。該術語亦應理解為意謂已藉由合成編碼抗體之DNA分子(且該DNA分子表現抗體蛋白)或指定抗體之胺基酸序列產生之抗體，其中該DNA或胺基酸序列已使用此項技術中可獲得且熟知的重組DNA或胺基酸序列技術獲得。
術語「抗原」或「Ag」係指引起免疫反應之分子。此免疫反應可能涉及抗體產生或特異免疫勝任細胞之活化或兩者。熟習此項技術者應瞭解包括幾乎所有蛋白質或肽之任何大分子均可充當抗原。此外，抗原可來源於重組或基因組DNA。熟習此項技術者應理解，當在本文中使用彼術語時，包含編碼引發免疫反應之蛋白質的核苷酸序列或部分核苷酸序列之任何DNA因此編碼「抗原」。此外，熟習此項技術者應瞭解抗原不必僅藉由基因之全長核苷酸序列編碼。顯而易見，本發明包括(但不限於)超過一種基因之部分核苷酸序列之用途且此等核苷酸序列以各種組合排列以編碼引發所需免疫反應之多肽。此外，熟習此項技術者應瞭解抗原根本不必藉由「基因」編碼。顯而易見，抗原可合成產生或可來源於生物樣品或可為除多肽之外的大分子。此類生物樣品可包括(但不限於)組織樣品、腫瘤樣品、細胞或具有其他生物組分之流體。
術語「抗腫瘤效應」係指一種生物效應，其可以藉由各種方式體現，包括(但不限於)例如腫瘤體積的減小、腫瘤細胞數目的減少、轉移數目的減少、壽命預期的增加、腫瘤細胞增殖的減少、腫瘤細胞存活率的降低，或與癌症病狀有關之各種生理學症狀的減輕。「抗腫瘤效應」亦可藉由本發明之肽、聚核苷酸、細胞及抗體預防腫瘤在第一處出現之能力來體現。
術語「抗癌效應」係指一種生物效應，其可以藉由各種方式來體現，包括(但不限於)例如腫瘤體積的減小、癌細胞數目的減少、轉移數目的減少、壽命預期的增加、癌細胞增殖的減少、癌細胞存活率的降低，或與癌症病狀有關之各種生理學症狀的減輕。「抗癌效應」亦可藉由肽、聚核苷酸、細胞及抗體預防癌症在第一處出現之能力體現。術語「抗腫瘤效應」係指一種生物效應，其可以藉由各種方式體現，包括(但不限於)例如腫瘤體積的減小、腫瘤細胞數目的減少、腫瘤細胞增殖的減少，或腫瘤細胞存活率的降低。術語「自體」係指來源於與隨後再引入個體中相同的個體之任何材料。
術語「同種異體」係指來源於與引入材料之個體相同物種之不同動物的任何材料。當一或多個基因座處之基因不相同時，兩個或超過兩個個體被稱為彼此同種異體。在一些態樣中，來自相同物種之個體的同種異體材料在基因學上可足夠不同，從而以抗原方式相互作用。
術語「異種」係指來源於不同物種之動物的移植物。
如本文所用，術語「清除術」係指此項技術公認之體外方法，藉此自供者或患者移出供者或患者之血液且通過將所選特定成分分離出之設備且使剩餘部分返回至供者或患者之循環，例如藉由回輸法。因此，在「清除樣品」之情況下係指使用清除術獲得之樣品。
術語「組合」係指呈一種單位劑型之固定組合，或組合投藥，其中本發明化合物與組合搭配物(例如如下文所解釋之另一藥物，亦稱為「治療劑」或「助劑」)可同時獨立投與或在時間間隔內分開投與，尤其其中此等時間間隔允許組合搭配物顯示協作效應，例如協同效應。單一組分可封裝在套組中或分開封裝。投藥之前，組分中之一或兩者(例如粉末或液體)可復原或稀釋至所需劑量。如本文所用，術語「共投藥」或「組合投藥」或其類似術語意欲涵蓋向有需要之單個個體(例如患者)投與所選組合搭配物，且意欲包括其中藥劑不一定藉由相同投藥途徑投與或同時投與之治療方案。如本文所用，術語「醫藥組合」意謂藉由混合或合併超過一種活性成分而得到的產物且包括活性成分之固定與非固定組合。術語「固定組合」意謂活性成分(例如本發明化合物)與組合搭配物均以單一實體或劑型同時投與患者。術語「非固定組合」意謂活性成分(例如本發明化合物)與組合搭配物均作為分開的實體同時、並行或依序(無特定時間限制)投與患者，其中此類投藥在患者體內提供治療有效含量的兩種化合物。後者亦適用於混合療法，例如投與三種或超過三種活性成分。
術語「癌症」係指以異常細胞之生長快速且不受控制為特徵的疾病。癌細胞可局部擴散或經由血流及淋巴系統擴散至身體其他部分。本文描述各種癌症之實例且其包括(但不限於)乳癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、皮膚癌、胰臟癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、腦癌、淋巴瘤、白血病、肺癌及其類似癌症。藉由本文所述之方法治療之較佳癌症包括多發性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。
術語「腫瘤」與「癌症」在本文中可互換使用，例如兩個術語均涵蓋實體及液體(例如瀰漫性或循環)腫瘤。如本文所使用，術語「癌症」或「腫瘤」包括惡化前以及惡性癌症及腫瘤。
「來源於」，當該術語在本文中使用時，表示第一分子與第二分子之間的關係。其一般指第一分子與第二分子之間的結構相似性，且不涵蓋或包括對來源於第二分子之第一分子的過程或來源限制。舉例而言，在胞內信號傳導域來源於CD3ζ分子之情況下，胞內信號傳導域保留足夠的CD3ζ結構，使得具有所需功能，亦即在適當條件下產生信號之能力。其不涵蓋或包括對產生胞內信號傳導域之特定方法之限制，例如其不意謂為了提供胞內信號傳導域，吾人必須以CD3ζ序列開始且缺失不必要序列，或施加突變以獲得胞內信號傳導域。
片語「與BCMA表現有關的疾病」包括(但不限於)與表現BCMA (例如野生型或突變型BCMA)之細胞有關的疾病或與表現BCMA (例如野生型或突變型BCMA)之細胞有關的病狀，包括例如增殖疾病，諸如癌症或惡性疾病或癌變前病狀，諸如骨髓發育不良、骨髓發育不良症候群或白血病前驅症；或與表現BCMA (例如野生型或突變型BCMA)之細胞有關的非癌症相關適應症。為避免疑問，與BCMA表現有關之疾病可以包括細胞當前不表現BCMA (例如由於BCMA表現已下調，例如由於靶向BCMA之分子(例如本文所述之BCMA抑制劑)治療)、但是曾經表現BCMA的病狀。在一個態樣中，與BCMA (例如野生型或突變型BCMA)表現相關之癌症為血液癌症。在一個態樣中，血液癌為白血病或淋巴瘤。在一個態樣中，與BCMA (例如野生型或突變型BCMA)表現有關的癌症為分化型血漿B細胞之惡性疾病。在一個態樣中，與BCMA (例如野生型或突變型BCMA)表現有關的癌症包括癌症及惡性疾病，包括(但不限於)例如一或多種急性白血病，包括(但不限於)例如B細胞急性淋巴白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴白血病(「TALL」)、急性淋巴白血病(ALL)；一或多種慢性白血病，包括(但不限於)例如慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴白血病(CLL)。與BMCA (例如野生型或突變型BCMA)表現有關的其他癌症或血液學病狀包含(但不限於)例如B細胞前淋巴球性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅生物、伯基特氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴增生病狀、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良及骨髓發育不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅生物、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症，及「白血病前驅症」，其為以骨髓血細胞之低效產生(或發育不良)為一體的不同血液學病狀集合，及其類似病狀。在一些實施例中，癌症為多發性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤或神經膠母細胞瘤。在實施例中，與BCMA表現相關之疾病包括漿細胞增生性病症，例如無征狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或頑固性骨髓瘤)、意義待定的單株γ球蛋白血症(MGUS)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、漿細胞瘤(例如漿細胞惡病質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤及多發性漿細胞瘤)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性及POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群、高槻病及PEP症候群)。與BCMA (例如野生型或突變型BCMA)表現相關之其他疾病包括(但不限於)例如與BCMA (例如野生型或突變型BCMA)表現相關之非典型及/或非典型癌症、惡性疾病、癌變前病狀或增殖疾病，例如本文所述之癌症，例如前列腺癌(例如抗去勢或抗治療前列腺癌，或轉移性前列腺癌)、胰臟癌或肺癌。
與BCMA (例如野生型或突變型BCMA)相關之非癌症相關病狀包括病毒感染；例如HIV、真菌感染(例如新型隱球菌(C. neoformans))；自體免疫疾病，例如類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、尋常天疱瘡及休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)；發炎性腸病、潰瘍性結腸炎；與黏膜免疫相關的移植相關同種特異性免疫病症；以及其中體液免疫性具有重要意義之針對生物製劑(例如因子VIII)之不必要免疫反應。在實施例中，與BCMA表現有關之非癌症相關適應症包括(但不限於)例如自體免疫疾病(例如狼瘡)、炎性病症(過敏症及哮喘)及移植。在一些實施例中，表現腫瘤抗原之細胞表現或在任何時間表現編碼腫瘤抗原之mRNA。在一個實施例中，表現腫瘤抗原之細胞產生腫瘤抗原蛋白質(例如野生型或突變型)，且腫瘤抗原蛋白質可以正常含量或降低的含量存在。在一個實施例中，表現腫瘤抗原之細胞在一個時間點產生可偵測含量之腫瘤抗原蛋白質，且隨後產生實質上不可偵測之腫瘤抗原蛋白質。
術語「保守序列修飾」係指不顯著影響或改變含有該胺基酸序列之抗體或抗體片段之結合特徵的胺基酸修飾。此類保守修飾包括胺基酸取代、添加及缺失。修飾可藉由此項技術中已知之標準技術(諸如定點突變誘發及PCR介導之突變誘發)引入本發明之抗體或抗體片段中。保守取代為胺基酸殘基置換為具有類似側鏈之胺基酸殘基的取代。具有類似側鏈之胺基酸殘基家族在此項技術中已定義。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β分支側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。因此，本發明CAR內之一或多個胺基酸殘基可用來自相同側鏈家族之其他胺基酸殘基置換，且可使用本文所述之功能分析來測試改變之CAR。
術語「刺激」係指刺激分子(例如TCR/CD3複合物)與其同源配位體結合而誘導的初始反應，藉此介導信號轉導事件，諸如(但不限於)經由TCR/CD3複合物進行信號轉導。刺激可介導某些分子之表現改變，諸如TGF-β下調，及/或細胞骨架結構重組，及其類似者。
術語「刺激分子」係指提供初始細胞質信號傳導序列之T細胞所表現的分子，對於T細胞信號傳導路徑之至少一些方面而言，該(等)初始細胞質信號傳導序列以刺激性方式調控TCR複合物之初始活化。在一些實施例中，CAR內的含ITAM域使初始TCR的信號傳導獨立於內源TCR複合物再現。在一個態樣中，初始信號係藉由例如TCR/CD3複合物與負載有肽之MHC分子的結合來起始，且此引起T細胞反應的介導，包括(但不限於)增殖、活化、分化及其類似者。以刺激方式起作用之初始細胞質信號傳導序列(亦稱為「初始信號傳導域」)可以含有信號傳導基元，其稱為基於免疫受體酪胺酸之活化基元或ITAM。特別適用於本發明之含有ITAM之初始細胞質信號傳導序列之實例包括(但不限於)來源於以下各者之彼等序列：TCR ξ、FcR γ、FcR β、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD278 (亦稱為「ICOS」)、FcεRI、CD66d、DAP10及DAP12。在本發明的特定CAR中，本發明之任一或多種CAR中的胞內信號傳導域包含胞內信號傳導序列，例如CD3-ξ之初始信號傳導序列。術語「抗原呈遞細胞」或「APC」係指在表面上呈現與主要組織相容複合物(MHC)複合之外來抗原的免疫系統細胞，諸如輔助細胞(例如B細胞、樹突狀細胞及其類似物)。T細胞可使用其T細胞受體(TCR)識別此等複合物。APC處理抗原且將其呈遞給T細胞。
「胞內信號傳導域」當該術語在本文中使用時，係指分子之胞內部分。在實施例中，胞內信號域轉導效應功能信號且導引細胞執行專門化功能。儘管可採用整個胞內信號傳導域，但在多數情況下，不必需使用整條鏈。就使用胞內信號傳導域之截斷部分而言，此類截斷部分只要其轉導效應功能信號，即可用於替代完整鏈。術語胞內信號傳導域因此意欲包括足以轉導效應功能信號之胞內信號傳導域的任何截斷部分。
胞內信號傳導域產生的信號促進含CAR細胞(例如CART細胞)的免疫效應功能。免疫效應功能之實例(例如在CART細胞中)包括溶胞活性及輔助活性，包括細胞介素分泌。
在一個實施例中，胞內信號傳導域可包含初始胞內信號傳導域。例示性初始胞內信號傳導域包括來源於負責初始刺激或抗原依賴性模擬之分子的彼等域。在一個實施例中，胞內信號傳導域可包含胞內共刺激域。例示性共刺激胞內信號傳導域包括來源於負責共刺激信號或抗原獨立刺激之分子的彼等域。舉例而言，在CART情況中，初始胞內信號傳導域可包含T細胞受體之細胞質序列，且共刺激胞內信號傳導域可包含來自共受體或共刺激分子之細胞質序列。
初始胞內信號傳導域可包含稱為基於免疫受體酪胺酸之活化基元或ITAM的信號傳導基元。含有ITAM之初始細胞質信號傳導序列之實例包括(但不限於)來源於以下之彼等序列：CD3 ξ、FcR γ、FcR β、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD278 (亦稱為「ICOS」)、FcεRI、CD66d、DAP10及DAP12。
術語「ξ」或者「ξ鏈」、「CD3-ξ」或「TCR-ξ」係指CD247。Swiss-Prot寄存編號P20963提供例示性人類CD3 ξ胺基酸序列。「ξ刺激域」或者「CD3ξ刺激域」或「TCR-ξ刺激域」係指CD3-ξ之刺激域或其變異體(例如具有突變(例如點突變、片段、插入或缺失)的分子)。在一個實施例中，ξ細胞質域包含基因庫寄存編號BAG36664.1之殘基52至164或其變異體(例如具有突變(例如點突變、片段、插入或缺失)的分子)。在一個實施例中，「ξ刺激域」或「CD3-ξ刺激域」為作為SEQ ID NO: 1027或1030提供的序列或其變異體(例如具有突變(例如點突變、片段、插入或缺失)的分子)。
術語「共刺激分子」係指T細胞上之同源結合搭配物，其特異性結合共刺激配位體，藉此介導T細胞產生共刺激反應，諸如(但不限於)增殖。共刺激分子為除抗原受體或其配位體以外的細胞表面分子，其為有效免疫反應所需。共刺激分子包括(但不限於) MHC I類分子、TNF受體蛋白、免疫球蛋白樣蛋白、細胞介素受體、整合素、信號傳導淋巴球性活化分子(SLAM蛋白質)、活化NK細胞受體、BTLA、Toll配位體受體、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、4-1BB (CD137)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS (CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM (LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a及特異性結合CD83之配位體。
共刺激胞內信號傳導域係指共刺激分子之胞內部分。
胞內信號傳導域可包含其所來源之分子的整個胞內部分或整個原生胞內信號傳導域，或其功能片段。
術語「4-1BB」係指CD137或腫瘤壞死因子受體超家族成員9。Swiss-Prot寄存編號P20963提供例示性人類4-1BB胺基酸序列。「4-1BB共刺激域」係指4-1BB之共刺激域，或其變異體(例如具有突變(例如點突變、片段、插入或缺失)之分子)。在一個實施例中，「4-1BB共刺激域」為作為SEQ ID NO:1022提供的序列或其變異體(例如具有突變(例如點突變、片段、插入或缺失)的分子)。
「免疫效應細胞」當該術語在本文中使用時，係指涉及免疫反應(例如促進免疫效應反應)的細胞。免疫效應細胞之實例包括T細胞，例如α/β T細胞及γ/δ T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T (NKT)細胞、肥大細胞及骨髓源吞噬細胞。
「免疫效應功能或免疫效應反應」當該術語在本文中使用時，係指例如免疫效應細胞之增強或促進免疫攻擊靶細胞的功能或反應。舉例而言，免疫效應功能或反應係指T或NK細胞促進殺死靶細胞或抑制靶細胞生長或增殖的特性。在T細胞之情況下，初始刺激及共刺激為免疫效應功能或反應之實例。
術語「效應功能」係指細胞之專門功能。T細胞之效應功能例如可為細胞溶解活性或輔助活性，包括分泌細胞介素。
術語「編碼」係指諸如基因、cDNA或mRNA之聚核苷酸中之特定核苷酸序列在生物過程中充當合成其他聚合物及大分子之模板的固有特性，該等聚合物及大分子具有已確定之核苷酸序列(例如rRNA、tRNA及mRNA)或已確定之胺基酸序列及來源於其之生物特性。因此，若與該基因對應之mRNA的轉錄及轉譯在細胞或其他生物系統中產生蛋白質，則基因、cDNA或RNA編碼該蛋白質。核苷酸序列與mRNA序列一致且通常提供於序列表中的編碼股與用作基因或cDNA轉錄之模板的非編碼股均可稱為編碼該基因或cDNA之蛋白質或其他產物。
除非另外指定，否則「編碼胺基酸序列之核苷酸序列」包括為彼此之簡併型式且編碼相同胺基酸序列之所有核苷酸序列。片語編碼蛋白質或RNA之核苷酸序列亦可包括內含子，以使得編碼蛋白質之核苷酸序列可在一些型式中含有內含子。
術語「有效量」或「治療有效量」在本文中可互換使用，且指如本文所述有效實現特定生物結果之化合物、調配物、物質或組合物之量。
術語「內源性」係指來自或在生物體、細胞、組織或系統內部產生之任何物質。
術語「外源性」係指自生物體、細胞、組織或系統外部引入或產生之任何物質。
術語「表現」係指啟動子驅動之特定核苷酸序列之轉錄及/或轉譯。
術語「轉移載體」係指包含經分離核酸且可用於將經分離核酸遞送至細胞內部的組合物。此項技術中已知多種載體，包括(但不限於)線性聚核苷酸、與離子或兩親媒性化合物相關之聚核苷酸、質體及病毒。因此，術語「轉移載體」包括自主複製質體或病毒。該術語亦應解釋為進一步包括促進核酸轉移至細胞中之非質體及非病毒化合物，諸如聚離胺酸化合物、脂質體及其類似物。病毒轉移載體之實例包括(但不限於)腺病毒載體、腺相關病毒載體、逆轉錄病毒載體、慢病毒載體及其類似物。
術語「表現載體」係指包含重組性聚核苷酸之載體，該重組性聚核苷酸包含可操作地連接至待表現之核苷酸序列的表現控制序列。表現載體包含足夠的順式作用元件用於表現；用於表現之其他元件可由宿主細胞供應或在活體外表現系統中。表現載體包括此項技術中已知之所有表現載體，包括併入重組性聚核苷酸之黏質體、質體(例如裸露或含於脂質體中)及病毒(例如慢病毒、逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
術語「慢病毒」係指逆轉錄病毒科之屬。慢病毒在逆轉錄病毒中獨特之處在於能夠感染未分裂細胞；其可將足量之遺傳資訊遞送至宿主細胞之DNA中，因此其為基因遞送載體之最有效方法之一。HIV、SIV及FIV均為慢病毒之實例。
術語「慢病毒載體」係指來源於慢病毒基因組之至少一部分的載體，尤其包括如Milone等人, Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009)中所提供之自不活化慢病毒載體。臨床中可使用之慢病毒載體之其他實例包括(但不限於)例如來自Oxford BioMedica之LENTIVECTOR®基因遞送技術、來自Lentigen之LENTIMAX™載體系統及其類似物。非臨床類型之慢病毒載體亦可獲得且為熟習此項技術者所知。
術語「同源」或「一致」係指兩種聚合物分子之間的次單元序列一致，例如兩種核酸分子之間，諸如兩種DNA分子或兩種RNA分子之間，或兩種多肽分子之間。當兩種分子的次單元位置均被同一單體次單元佔據時，例如若兩種DNA分子中之每一者中的位置被腺嘌呤佔據，則其在該位置處同源或一致。兩個序列之間的同源性為匹配或同源位置數目之直接函數；例如若兩個序列中之位置有一半(例如長度為十個次單元之聚合物中之五個位置)同源，則該兩個序列為50%同源；若90%之位置(例如10個中之9個)匹配或同源，則該兩個序列為90%同源。
非人類(例如鼠類)抗體之「人類化」形式為含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體之其他抗原結合子序列)。大多數情況下，人類化抗體及其抗體片段為人類免疫球蛋白(接受者抗體或抗體片段)，其中來自接受者之互補決定區(CDR)之殘基經來自諸如具有所需特異性、親和性及能力之小鼠、大鼠或兔子之非人類物種(供者抗體)之CDR的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv構架區(FR)殘基經相應非人類殘基置換。此外，人類化抗體/抗體片段可包含既不存在於接受者抗體中、亦不存在於所引入之CDR或構架序列中之殘基。此等修飾可進一步改進及最佳化抗體或抗體片段效能。一般而言，人類化抗體或其抗體片段將包含至少一個且典型兩個可變域的基本上全部，其中所有或實質上所有CDR區域對應於非人類免疫球蛋白之彼等區域且所有或大部分FR區域為人類免疫球蛋白序列之彼等區域。人類化抗體或抗體片段亦可包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，典型地為人類免疫球蛋白恆定區。關於其他詳情，參見Jones等人, Nature, 321: 522-525, 1986；Reichmann等人, Nature, 332: 323-329, 1988；Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596, 1992。
術語「完全人類」係指諸如抗體或抗體片段之免疫球蛋白，其中整個分子具有人類來源或由與抗體或免疫球蛋白之人類形式一致的胺基酸序列組成。
術語「分離」意謂改變或脫離自然狀態。舉例而言，天然存在於活動物中之核酸或肽未「經分離」，但部分或完全地與其天然狀態之共存材料分離的相同核酸或肽「經分離」。經分離的核酸或蛋白質可以實質上純化形式存在，或可存在於諸如宿主細胞之非原生環境中。
在本發明之上下文中，通常存在的核酸鹼基使用以下縮寫。「A」係指腺苷，「C」係指胞嘧啶，「G」係指鳥苷，「T」係指胸苷且「U」係指尿苷。
術語「可操作地連接」或「轉錄控制」係指調控序列與異源核酸序列之間的功能關聯，其引起異源核酸序列表現。舉例而言，當第一核酸序列與第二核酸序列以功能關係置放時，第一核酸序列與第二核酸序列可操作地連接。舉例而言，若啟動子影響編碼序列之轉錄或表現，則啟動子可操作地連接至該編碼序列。可操作地連接之DNA序列可彼此相鄰，且例如若為連接兩個蛋白編碼區所必需，則處於同一閱讀框中。
術語免疫原性組合物之「非經腸」投與包括例如皮下(s.c.)、靜脈內(i.v.)、肌肉內(i.m.)或胸骨內注射、瘤內或輸注技術。
術語「核酸」或「聚核苷酸」係指去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其單股或雙股形式之聚合物。除非特別限制，否則該術語涵蓋含有天然核苷酸之已知類似物的核酸，其具有與參考核酸類似的結合特性且以與天然存在之核苷酸類似的方式代謝。除非另外指明，否則特定核酸序列亦隱含地涵蓋其保守修飾的變異體(例如簡併密碼子取代，例如保守取代)、對偶基因、直系同源物、SNP及互補序列以及明確指定的序列。特定言之，簡併密碼子取代(例如保守取代)可藉由產生其中一或多個所選(或所有)密碼子之第三位置經混合鹼基及/或去氧肌苷殘基取代的序列來達成(Batzer等人, Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991)；Ohtsuka等人, J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985)；及Rossolini等人, Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994))。
術語「肽」、「多肽」及「蛋白質」可互換使用，且係指包含藉由肽鍵共價連接之胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽必須含有至少兩個胺基酸，且對可以構成蛋白質或肽序列之胺基酸的最大數目無限制。多肽包括包含藉由肽鍵彼此連接之兩個或超過兩個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文所用，該術語係指短鏈(在此項技術中通常亦稱為例如肽、寡肽及寡聚物)及長鏈(在此項技術中一般稱為蛋白質，其存在多種類型)。「多肽」包括例如生物活性片段、實質上同源的多肽、寡肽、同二聚體、雜二聚體、多肽變異體、經修飾的多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重組肽或其組合。
術語「啟動子」係指由細胞合成機制或引入之合成機制識別，起始聚核苷酸序列之特異性轉錄所需之DNA序列。
術語「啟動子/調節序列」係指表現可操作地連接至啟動子/調節序列之基因產物所必需的核酸序列。在一些情況下，此序列可為核心啟動子序列，且在其他情況下，此序列亦可包括增強子序列及表現基因產物所必需的其他調控元件。啟動子/調控序列可為例如以組織特異性方式表現基因產物之啟動子/調控序列。
術語「組成型」啟動子係指一種核苷酸序列，其當與編碼或指定基因產物之聚核苷酸可操作地連接時，在細胞之大多數或全部生理學條件下引起細胞產生基因產物。
術語「誘導型」啟動子係指一種核苷酸序列，其當與編碼或指定基因產物之聚核苷酸可操作地連接時，僅當細胞中存在對應於啟動子之誘導子時才引起細胞實質性產生基因產物。
術語「組織特異性」啟動子係指一種核苷酸序列，其當與編碼基因或由基因指定之聚核苷酸可操作地連接時，僅當細胞為對應於啟動子之組織類型的細胞時才引起細胞實質性產生基因產物。
術語「癌症相關抗原」或「腫瘤抗原」可互換地指完整地或以片段形式(例如MHC/肽)在癌細胞表面上表現之分子(典型地為蛋白質、碳水化合物或脂質)，且其適用於使藥理學藥劑優先靶向癌細胞。在一些實施例中，腫瘤抗原為正常細胞與癌細胞所表現之標記物，例如譜系標記物，例如B細胞上之CD19。在一些實施例中，腫瘤抗原為在癌細胞中相較於在正常細胞中過度表現之細胞表面分子，例如相較於正常細胞1倍過度表現、2倍過度表現、3倍或超過3倍過度表現。在一些實施例中，腫瘤抗原為癌細胞中不適當合成之細胞表面分子，例如相較於正常細胞上表現之分子含有缺失、添加或突變之分子。在一些實施例中，腫瘤抗原完整或以片段形式(例如MHC/肽)僅表現於癌細胞之細胞表面上，且在正常細胞表面上不合成或表現。在一些實施例中，本發明之CAR包括包含結合至MHC呈遞肽之抗原結合域(例如抗體或抗體片段)的CAR。通常，來源於內源性蛋白質之肽填充主要組織相容複合物(MHC) I類分子之凹穴，且由CD8 + T淋巴細胞上之T細胞受體(TCR)識別。MHC I級複合物由所有成核細胞組成性表現。在癌症中，病毒特異性及/或腫瘤特異性肽/MHC複合物代表免疫療法之一類獨特細胞表面標靶。在人類白血球抗原(HLA)-A1或HLA-A2的情形中靶向病毒或腫瘤抗原衍生肽的TCR樣抗體已有描述(參見例如Sastry等人, J Virol. 2011 85(5):1935-1942；Sergeeva等人, Blood, 2011 117(16):4262-4272；Verma等人, J Immunol 2010 184(4):2156-2165；Willemsen等人, Gene Ther 2001 8(21):1601-1608；Dao等人, Sci Transl Med 2013 5(176):176ra33；Tassev等人, Cancer Gene Ther 2012 19(2):84-100)。舉例而言，TCR樣抗體可經由篩選文庫(諸如人類scFv噬菌體呈現文庫)鑑別。
術語「腫瘤支持抗原」或「癌症支持抗原」可互換地指一種分子(典型地為蛋白質、碳水化合物或脂質)，其表現於本身未癌變、但支持癌細胞的細胞表面上，例如藉由促進其生長或存活，例如針對免疫細胞的抗性。此類型之例示性細胞包括基質細胞及骨髓源抑制細胞(MDSC)。腫瘤支持抗原本身無需在支持腫瘤細胞方面起作用，只要抗原存在於支持癌細胞的細胞上。
如在scFv之上下文中所用，術語「柔性多肽連接子」或「連接子」係指由單獨或組合使用之胺基酸(諸如甘胺酸及/或絲胺酸殘基)組成之肽連接子，其將可變重鏈區域與可變輕鏈區域連接在一起。在一個實施例中，柔性多肽連接子為Gly/Ser連接子且包含胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 1038)，其中n為等於或大於1的正整數。舉例而言，n=1，n=2，n=3，n=4，n=5及n=6，n=7，n=8，n=9及n=10。在一個實施例中，柔性多肽連接子包括(但不限於) (Gly4 Ser)4 (SEQ ID NO: 1039)或(Gly4 Ser)3 (SEQ ID NO: 1040)。在另一實施例中，連接子包括多個重複(Gly2Ser)、(GlySer)或(Gly3Ser)(SEQ ID NO: 1041)。本發明之範疇內亦包括以引用的方式併入本文中之WO2012/138475中所述之連接子。
如本文所用，5'帽(亦稱為RNA帽、RNA 7-甲基鳥苷帽或RNA m7G帽)為經修飾的鳥嘌呤核苷酸，其在轉錄開始後不久即添加至真核信使RNA的「前端」或5'端。5'帽由連接至第一個轉錄之核苷酸的端基組成。其存在對於核糖體識別及防止核糖核酸酶而言至關重要。帽添加與轉錄偶聯，且以共轉錄方式發生，以致每一者影響另一者。轉錄開始後不久，所合成之mRNA的5'端被與RNA聚合酶有關之帽合成複合物結合。此酶複合物催化mRNA封端所需之化學反應。合成以多步驟生物化學反應形式進行。封端部分可經修飾以調節mRNA之功能性，諸如其轉譯穩定性或效率。
如本文所用，「活體外轉錄RNA」係指活體外已合成之RNA，較佳為mRNA。一般而言，活體外轉錄之RNA自活體外轉錄載體產生。活體外轉錄載體包含用於產生活體外轉錄之RNA的模板。
如本文所用，「聚(A)」為藉由聚腺苷酸化連接至mRNA的一連串腺苷。在用於短暫表現之構築體的較佳實施例中，聚A在50與5000之間(SEQ ID NO: 1043)，較佳大於64，更佳大於100，最佳大於300或400 (SEQ ID NO: 2024)。聚(A)序列可經化學修飾或酶修飾以調節mRNA功能，諸如轉譯之位置、穩定性或效率。
如本文所用，「聚腺苷酸化」係指聚腺苷部分或其經修飾之變異體與信使RNA分子共價連接。在真核生物體中，大多數信使RNA (mRNA)分子在3'端發生聚腺苷酸化。3'聚(A)尾為經由酶(聚腺苷酸化聚合酶)之作用添加至前mRNA的腺嘌呤核苷酸(通常幾百個)之長序列。在高等真核生物中，聚(A)尾添加至含有特定序列(聚腺苷酸化信號)之轉錄物上。聚(A)尾及結合至其的蛋白質有助於保護mRNA不被核酸外切酶降解。聚腺苷酸化對於轉錄終止、mRNA自細胞核輸出及轉譯亦為重要的。聚腺苷酸化在DNA轉錄成RNA之後立即在細胞核中發生，而且另外可稍後在細胞質中發生。轉錄終止後，mRNA鏈經由與RNA聚合酶有關之核酸內切酶複合物的作用裂解。裂解位點之特徵通常為在裂解位點附近存在鹼基序列AAUAAA。mRNA已裂解後，腺苷殘基添加至裂解位點之自由3'端。
如本文所用，「短暫」係指非整合轉殖基因表現時段為數小時、數日或數週，其中若整合至基因組中或含於宿主細胞中之穩定質體複製子內時，則表現時間段小於基因表現時間段。
如本文所用，術語「治療」係指藉由投與一或多種療法(例如一或多種治療劑，諸如本發明之CAR)減少或減輕增殖病症之進展、嚴重程度及/或持續時間，或減輕增殖病症之一或多種症狀(較佳為一或多種可辨別的症狀)。在特定實施例中，術語「治療」係指減輕增殖病症之至少一個可量測身體參數，諸如腫瘤生長，而患者不一定可辨別。在其他實施例中，術語「治療」係指增殖病症的進展被抑制，此在身體上根據例如可辨別症狀的穩定、在生理學上根據例如身體參數的穩定，或兩者。在其他實施例中，術語「治療」係指腫瘤尺寸或癌細胞計數的減小或穩定。
術語「信號轉導路徑」係指在將信號自細胞之一部分傳輸至細胞之另一部分中起作用的多種信號轉導分子之間的生物化學關係。片語「細胞表面受體」包括能夠跨越細胞膜接收信號及傳輸信號之分子及分子複合物。
術語「個體」意欲包括可以誘發免疫反應之活生物體(例如哺乳動物、人類)。
術語「實質上純化」的細胞係指基本上不含其他細胞類型之細胞。實質上純化的細胞亦指已與在其天然存在之狀態下通常與其相關之其他細胞類型分離之細胞。在一些情況下，實質上純化的細胞群係指同源細胞群。在其他情況下，此術語僅指已與在其天然狀態下與其天然相關之細胞分離的細胞。在一些態樣中，細胞在活體外培養。在其他態樣中，細胞不在活體外培養。
如本文所用之術語「療法」意謂治療。藉由減輕、抑制、緩解或根除疾病狀態來獲得治療作用。
如本文所用，術語「預防」意謂疾病或疾病狀態之預防或保護性治療。
在本發明之上下文中，「腫瘤抗原」或「過度增殖病症抗原」或「與過度增殖病症相關之抗原」係指特定過度增殖病症所共有的抗原。在某些態樣中，本發明之過度增殖病症抗原來源於癌症，包括(但不限於)原發性或轉移性黑色素瘤、胸腺瘤、淋巴瘤、肉瘤、肺癌、肝癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌及腺癌，諸如乳癌、前列腺癌(例如抗去勢或抗治療前列腺癌，或轉移性前列腺癌)、卵巢癌、胰臟癌及其類似病症，或漿細胞增殖病症，例如無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或頑固性骨髓瘤)、意義待定的單株γ球蛋白血症(MGUS)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、漿細胞瘤(例如漿細胞惡病質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤及多發性漿細胞瘤)、全身性澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性及POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群、高槻病及PEP症候群)。
術語「轉染」或「轉化」或「轉導」係指外源核酸藉以轉移或引入宿主細胞中的過程。「轉染」或「轉化」或「轉導」的細胞為已經外源核酸轉染、轉化或轉導之細胞。該細胞包括初始個體細胞及其後代。
術語「特異性結合」係指一種抗體或配位體，其識別且結合存在於樣品中的同源結合搭配物(例如存在於T細胞上的刺激分子及/或共刺激分子)蛋白質，但該抗體或配位體基本上不識別或結合樣品中的其他分子。
如本文所用，「可調節嵌合抗原受體(RCAR)」係指一組多肽，在最簡單實施例中典型地為兩種多肽，其在免疫效應細胞中時，向細胞提供針對靶細胞(典型地為癌細胞)之特異性，及胞內信號產生。在一些實施例中，RCAR包含至少一個胞外抗原結合域、跨膜域及細胞質信號傳導域(在本文中亦稱作「胞內信號傳導域」)，在CAR分子之情況下細胞質信號傳導域包含來源於如本文所定義之刺激分子及/或共刺激分子的功能信號傳導域。在一些實施例中，RCAR中的多肽組彼此不鄰接，例如處於不同多肽鏈中。在一些實施例中，RCAR包括二聚合開關，其在二聚合分子存在時可以使多肽彼此偶合，例如可以使抗原結合域與胞內信號傳導域偶合。在一些實施例中，RCAR在如本文所述之細胞(例如免疫效應細胞)中表現，例如表現RCAR之細胞(在本文中亦稱為「RCARX細胞」)。在實施例中，RCARX細胞為T細胞，且稱為RCART細胞。在一實施例中，RCARX細胞為NK細胞，且稱為RCARN細胞。RCAR可為表現RCAR之細胞提供針對靶細胞(典型地為癌細胞)之特異性，及可調節之胞內信號產生或增殖，從而可使表現RCAR之細胞之免疫效應特性最佳化。在實施例中，RCAR細胞至少部分依賴於抗原結合域以提供對包含抗原結合域所結合之抗原的靶細胞之特異性。
「膜錨」或「膜繫栓域」當該術語在本文中使用時係指足以將胞外或胞內域錨定於質膜之多肽或部分(例如肉豆蔻醯基)。
「交換域」當該術語在本文中使用時，例如當提及RCAR時，係指在二聚合分子存在下與另一交換域締合之實體，典型地為基於多肽之實體。該締合引起連接至(例如融合至)第一交換域之第一實體與連接至(例如融合至)第二交換域之第二實體的功能偶聯。第一及第二交換域統稱為二聚合交換。在實施例中，第一與第二交換域彼此相同，例如其為具有相同初始胺基酸序列之多肽且統稱為均二聚交換。在實施例中，第一與第二交換域彼此不同，例如其為具有不同初始胺基酸序列的多肽且統稱為雜二聚交換。在實施例中，交換為胞內交換。在實施例中，交換為胞外交換。在實施例中，交換域為基於多肽(例如基於FKBP或FRB)之實體，且二聚合分子為小分子，例如雷帕黴素類似物(rapalogue)。在實施例中，交換域為基於多肽之實體，例如結合myc肽之scFv，且二聚合分子為多肽、其片段或多肽之多聚體，例如myc配位體或與一或多個myc scFv結合之myc配位體多聚體。在實施例中，交換域為基於多肽之實體，例如myc受體，且二聚合分子為抗體或其片段，例如myc抗體。
「二聚合分子」當該術語在本文中使用時，例如當提及RCAR時，係指促進第一交換域與第二交換域締合之分子。在實施例中，二聚合分子並非天然存在於個體中，或不以導致顯著二聚合之濃度存在。在實施例中，二聚合分子為小分子，例如雷帕黴素(rapamycin)或雷帕黴素類似物，例如RAD001。
術語「生物等效」係指除參考化合物(例如RAD001)之外之藥劑的量，此量為產生與參考劑量或參考量之參考化合物(例如RAD001)所產生之效應等效之效應所必需的。在實施例中，該效應為mTOR抑制程度，例如如根據P70 S6激酶抑制所量測，例如如在活體內或活體外分析中所評估，例如如藉由本文所述之分析(例如Boulay分析，或藉由西方墨點法量測磷酸化S6含量)所量測。在實施例中，該效應為PD-1陽性/PD-1陰性T細胞之比率改變，如藉由細胞分選所量測。在一個實施例中，mTOR抑制劑之生物等效量或劑量為達到與參考化合物之參考劑量或參考量相同之P70 S6激酶抑制程度的量或劑量。在一個實施例中，mTOR抑制劑之生物等效量或劑量為實現與參考化合物之參考劑量或參考量相同之PD-1陽性/PD-1陰性T細胞比率改變程度的量或劑量。
當與mTOR抑制劑(例如立體異位mTOR抑制劑，例如RAD001或雷帕黴素，或催化mTOR抑制劑)一起使用時，術語「免疫增強之低劑量」係指部分(而非完全)抑制mTOR活性之mTOR抑制劑的劑量，例如如根據P70 S6激酶活性抑制所量測。用於評估mTOR活性的方法(例如根據P70 S6激酶抑制)論述於本文中。該劑量不足以引起完全免疫抑制，但足以增強免疫反應。在一個實施例中，免疫增強之低劑量的mTOR抑制劑引起PD-1陽性免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)數目減少，及/或PD-1陰性免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)增加，或PD-1陰性免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)/PD-1陽性免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)比率增加。
在一個實施例中，免疫增強之低劑量之mTOR抑制劑引起原生T細胞之數目增加。在一個實施例中，免疫增強之低劑量之mTOR抑制劑引起以下中之一或多者：
以下標記物中之一或多者在例如記憶T細胞(例如記憶T細胞前驅物)上的表現增加：CD62L高、CD127高、CD27+及BCL2；
KLRG1在例如記憶T細胞(例如記憶T細胞前驅物)上的表現減少；及
記憶T細胞前驅物數目增加，例如具有以下特徵中之任一者或組合的細胞：增加的CD62L高、增加的CD127高、增加的CD27+、減少的KLRG1，及增加的BCL2；
其中發生任一種上述變化，例如至少短暫地發生，例如相較於未治療之個體。
如本文中所用，「難治性」係指對治療無反應之疾病，例如癌症。在實施例中，難治性癌症在治療前或開始時可對治療具有抗性。在其他實施例中，難治性癌症可在治療期間變得具有抗性。難治性癌症亦稱為抗性癌症。
如本文中所用，「已復發(Relapsed)」或「復發(relapse)」係指在一段時間改善或反應之後，例如在療法(例如癌症療法)預先治療之後，疾病(例如癌症)或疾病(例如癌症)病徵及症狀的再現。舉例而言，反應時段可以涉及癌細胞含量降至某一臨限值以下，例如低於20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%。再現可涉及癌細胞含量上升至某一臨限值以上，例如高於20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%。
在一個態樣中，療法之「有反應者」可為接受療法之後具有完全反應、極佳部分反應或部分反應的個體。在一個態樣中，療法之「無反應者」可為接受療法之後具有輕微反應、穩定疾病或漸進性疾病的個體。在一些實施例中，個體患有多發性骨髓瘤且個體對多發性骨髓瘤療法的反應係基於IMWG 2016準則確定，例如如Kumar等人, Lancet Oncol. 17, e328-346 (2016)所揭示，該文獻以全文引用之方式併入本文中，例如如表7中所述。
範圍：在通篇本發明中，本發明之各種態樣可以範圍格式呈現。應理解，範圍格式之描述僅為了方便及簡潔起見且不應解釋為對本發明範疇的固定限制。因此，範圍之描述應視為已特定揭示所有可能的子範圍以及彼範圍內之個別數值。舉例而言，諸如1至6之範圍描述應視為已特定揭示子範圍，諸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及彼範圍內之個別數值，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3及6。作為另一實例，諸如95-99%一致性之範圍包括具有95%、96%、97%、98%或99%一致性之某範圍，且包括諸如96-99%、96-98%、96-97%、97-99%、97-98%及98-99%一致性之子範圍。不管範圍之寬度如何，此均適用。
「基因編輯系統」當該術語在本文中使用時，係指一種系統，例如一或多種分子，該導引且實現該系統所靶向之基因組DNA位點處或附近之一或多種核酸的改變，例如缺失。基因編輯系統在此項技術中已知，且在下文更充分地描述。
下文更詳細地描述特定官能基及化學術語之定義。化學元素係根據元件週期表(Periodic Table of the Elements), CAS版本,Handbook of Chemistry and Physics , 第75版, 內封面來鑑別，且特定官能基一般如其中所述來定義。另外，有機化學之一般原理以及特定官能部分及反應性描述於Thomas Sorrell,Organic Chemistry , University Science Books, Sausalito, 1999；Smith及March,March's Advanced Organic Chemistry , 第5版, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001；Larock,Comprehensive Organic Transformations , VCH Publishers, Inc., New York, 1989；及Carruthers,Some Modern Methods of Organic Synthesis, 第3版, Cambridge University Press, Cambridge, 1987。
如本文所用，術語「烷基」係指單價飽和直鏈或分支鏈烴，諸如具有1至12、1至10或1至6個碳原子之直鏈或分支鏈基團，在本文中分別稱為C1 -C12 烷基、C1 -C10 烷基及C1 -C6 烷基。烷基實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第二戊基、異戊基、第三丁基、正戊基、新戊基、正己基、第二己基及其類似基團。
如本文所用，術語「烯基」及「炔基」分別指長度類似且可以取代上述烷基、但含有至少一個雙鍵或參鍵的不飽和脂族基。例示性烯基包括(但不限於) -CH=CH2 及-CH2 CH=CH2 。
如本文所用，術語「芳基」係指單環、雙環或多環烴環系統，其中至少一個環為芳族。代表性芳基包括完全芳族環系統，諸如苯基(例如(C6 )芳基)、萘基(例如(C10 )芳基)及蒽基(例如(C14 )芳基)；及其中芳族碳環與一或多個非芳族碳環稠合之環系統，諸如二氫茚基、鄰苯二甲醯亞胺基、萘醯亞胺基或四氫萘基，及其類似基團。
如本文所用，術語「碳環基」係指含有3至18個碳原子的單環或稠合、螺接稠合及/或橋接雙環或多環烴環系統，其中各環完全飽和或含有一或多個不飽和單元，但其中無芳族環。代表性碳環基包括環烷基(例如環戊基、環丁基、環戊基、環己基及其類似基團)及環烯基(例如環戊烯基、環己烯基、環戊二烯基及其類似基團)。
如本文所用，術語「羰基」係指-C=O。
如本文所用，術語「氰基」係指-CN。
如本文所用，術語「鹵基」或「鹵素」係指氟(氟基、-F)、氯(氯基、-Cl)、溴(溴基、-Br)或碘(碘基、-I)。
如本文所用，術語「雜烷基」係指其中鏈中之至少一個碳原子經諸如O、S或N之雜原子置換的單價飽和直鏈或分支鏈烷基鏈，其限制條件為在取代後，該鏈包含至少一個碳原子。在一些實施例中，雜烷基可以包含例如1至12、1至10或1至6個碳原子，在本文中稱為C1 -C12 雜烷基、C1 -C10 雜烷基及C1 -C6 雜烷基。在某些情況下，雜烷基包含1、2、3或4個獨立選擇之雜原子代替烷基鏈中之1、2、3或4個個別碳原子。代表性雜烷基包括-CH2 NHC(O)CH3 、-CH2 CH2 OCH3 、-CH2 CH2 NHCH3 、-CH2 CH2 N(CH3 )CH3 及其類似基團。
如本文所用，術語「雜芳基」係指其中至少一個環為芳族且包含雜原子且其中其他環不為雜環基的單環、雙環或多環環系統(如下所定義)。代表性雜芳基包括如下環系統：(i)各環包含雜原子且為芳族，例如咪唑基、噁唑基、噻唑基三唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基及喋啶基；(ii)各環為芳族或碳環基，至少一個芳族環包含雜原子且至少一個其他環為烴環或例如吲哚基、異吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、㖕啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、吡啶并[2,3-b ]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮、噻唑并[4,5-c ]-吡啶基、4,5,6,7-四氫噻吩并[2,3-c ]吡啶基、5,6-二氫-4H-噻吩并[2,3-c ]吡咯基、4,5,6,7,8-四氫喹啉基及5,6,7,8-四氫異喹啉基；及(iii)各環為芳族或碳環基，且至少一個芳族環與另一芳族環(例如4H-喹嗪基)共用橋頭雜原子。在某些實施例中，雜芳基為單環或雙環，其中該等環中之每一者含有5或6個環原子，其中該等環原子中之1、2、3或4個環原子為獨立地選自N、O及S之雜原子。
如本文所用，術語「雜環基」係指其中至少一個環為飽和或部分不飽和的(但不為芳族)且包含雜原子的單環或稠合、螺接稠合及/或橋接雙環及多環環系統。雜環基可在任何促成穩定結構之雜原子或碳原子處連接至其側基，且環原子中之任一者可視情況經取代。代表性雜環基包括如下環系統，其中(i)各環為非芳族的且至少一個環包含雜原子，例如四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯啶基、吡咯啶酮基、哌啶基、吡咯啉基、十氫喹啉基、噁唑啶基、哌嗪基、二噁烷基、二氧雜環戊烷基、二氮呯基、噁氮呯基、噻氮呯基、嗎啉基及奎寧環基；(ii)至少一個環為非芳族且包含雜原子，且至少一個其他環為芳族碳環，例如1,2,3,4-四氫喹啉基；以及(iii)至少一個環為非芳族且包含雜原子，且至少一個其他環為芳族且包含雜原子，例如3,4-二氫-1H-哌喃并[4,3-c]吡啶基及1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶基。在某些實施例中，雜環基為單環或雙環，其中該等環中之每一者含有3至7個環原子，其中該等環原子中之1、2、3或4個環原子為獨立地選自N、O及S之雜原子。
如本文所述，本發明化合物可含有「視情況經取代」的部分。通常，術語「取代」無論前面是否有術語「視情況」均意謂指定部分之一或多個氫經適合的取代基置換。除非另外指明，否則「視情況經取代之」基團在該基團之各可取代位置處均可能具有適合之取代基，且當任何指定結構中之超過一個位置可經超過一個選自指定基團之取代基取代時，該取代基在各位置處可為相同或不同的。根據本發明所設想之取代基組合較佳為促使穩定或化學可行之化合物形成的彼等組合。如本文所用，術語「穩定」係指化合物在經受允許其產生、偵測及(在某些實施例中)其回收、純化及用於本文所揭示之一或多種目的之條件時不發生實質性改變。
如本文所用，術語「側氧基」係指=O。
如本文所用，術語「硫羰基」係指C=S。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指在合理醫學判斷範疇內適用於與人類及低等動物之組織接觸而無異常毒性、刺激、過敏反應及其類似者且與合理益處/風險比相稱的彼等鹽。醫藥學上可接受的鹽在此項技術中已熟知。舉例而言，Berge等人在J . Pharmaceutical Sciences , 1977, 66, 1-19中詳細描述醫藥學上可接受之鹽，該文獻以引用的方式併入本文中。本發明化合物之醫藥學上可接受之鹽包括衍生自適合的無機及有機酸及鹼之彼等鹽。醫藥學上可接受之無毒性酸加成鹽之實例為胺基與無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸)或與有機酸(諸如乙酸、草酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、丁二酸或丙二酸)形成之鹽，或藉由使用此項技術中已知之其他方法(諸如離子交換)形成之鹽。其他醫藥學上可接受之鹽包括己二酸鹽、褐藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘化物、2-羥基-乙烷磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似鹽。衍生自適當鹼的鹽包括鹼金屬、鹼土金屬、銨及N+ (C1 - 4 烷基)4 - 鹽。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其類似鹽。適當時，其他醫藥學上可接受之鹽包括使用諸如鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低碳烷基磺酸鹽及芳基磺酸鹽之相對離子形成之無毒銨、四級銨及胺陽離子。
術語「溶劑合物」係指化合物與溶劑締合(通常藉由溶劑分解反應)的形式。此物理性締合可以包括氫鍵。習知溶劑包括水、甲醇、乙醇、乙酸、DMSO、THF、乙醚及其類似物。式(I)、式(I-a)及/或式(II)化合物可以例如結晶形式製備，且可溶劑化。適合溶劑合物包括醫藥學上可接受之溶劑合物且進一步包括化學計量溶劑合物與非化學計量溶劑合物。在某些情況下，溶劑合物能夠分離，例如當一或多個溶劑分子併入結晶固體之晶格中時。「溶劑合物」涵蓋溶液相與可分離溶劑合物。代表性溶劑合物包括水合物、乙醇合物及甲醇合物。
術語「水合物」係指與水締合之化合物。典型地，化合物之水合物中所含的水分子數目現對於水合物中之化合物分子數目呈確定的比率。因此，化合物之水合物可用例如通式R·x H2 O表示，其中R為化合物且其中x為大於0之數值。所指定化合物可形成超過一種類型的水合物，包括例如單水合物(x為1)、低水合物(x為大於0且小於1之數值，例如半水合物(R·0.5 H2 O))及多水合物(x為大於1之數值，例如二水合物(R·2 H2 O)及六水合物(R·6 H2 O))。
應理解，具有相同分子式、但其原子之鍵結性質或順序或其原子之空間排列不同的化合物稱為「異構體」。原子空間排列不同之異構體稱為「立體異構體」。
彼此不為鏡像之立體異構體稱為「非對映異構體」且彼此為不可重疊之鏡像的異構體稱為「對映異構體」。當化合物具有不對稱中心時，例如，其與四個不同基團鍵結時，可能存在一對對映異構體。對映異構體可以藉由其不對稱中心之絕對組態表徵且依據Cahn及Prelog之R-定序規則及S-定序規則描述，或藉由分子繞偏振光平面旋轉之方式描述且指定為右旋或左旋(亦即，分別為(+)或(-)-異構體)。對掌性化合物可以個別對映異構體形式或以其混合物形式存在。含有相等比例之對映異構體之混合物稱為「外消旋異構體」。
術語「互變異構體」係指作為特定化合物結構之可互換形式且在氫原子及電子之位移方面存在變化的化合物。因此，兩種結構可藉由π電子及原子(通常H)之移動保持平衡。舉例而言，烯醇與酮為互變異構體，因為其可藉由用酸或鹼處理而快速互相轉化。互變異構之另一實例為同樣藉由酸或鹼處理形成之苯基硝基甲烷之酸化及硝基形式。
互變異構形式可能與所關注化合物之最佳化學反應性及生物活性的達成有關。
除非另有說明，否則本文中所描繪的結構亦意欲包括該結構的所有異構體(例如對映異構體、非對映異構體及幾何(或構形)異構體)形式；舉例而言，各不對稱中心的R及S組態、Z及E雙鍵異構體，及Z及E構形異構體。因此，本發明化合物之單一立體化學異構體以及對映異構體、非對映異構體及幾何異構體(或構形異構體)混合物屬於本發明之範疇內。除非另有說明，否則本發明化合物之所有互變異構形式均在本發明之範疇內。另外，除非另外陳述，否則本文中所描繪之結構亦意欲包括僅在一或多個同位素增濃原子存在下不同之化合物。舉例而言，具有本發明結構的化合物(包括氫被氘或氚置換，或碳被13 C或14 C增濃碳置換)均屬於本發明之範疇內。此類化合物適用作例如分析工具、生物分析中之探針或根據本發明之治療劑。
在其中特定對映異構體較佳的情況下，在一些實施例中，其可以提供實質上不含相應對映異構體之特定對映異構體，且亦可稱為「光學增濃」。如本文所用，「光學增濃」意謂該化合物由顯著較大比例的一種對映異構體組成。在某些實施例中，化合物由至少約90重量%之較佳對映異構體組成。在其他實施例中，化合物由至少約95重量%、98重量%或99重量%之較佳對映異構體組成。較佳對映異構體可藉由熟習此項技術者已知之任何方法(包括對掌性高壓液相層析(HPLC)及對掌性鹽之形成及結晶)而自外消旋混合物分離，或藉由不對稱合成來製備。參見例如Jacques等人,Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen等人,Tetrahedron 33:2725 (1977)；Eliel, E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962)；Wilen, S.H.Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions 第268頁(E.L. Eliel, 編, Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)。
下文更詳細地描述本文組合物及方法之多個態樣。其他定義陳述於通篇說明書中。
詳細說明
本發明至少部分地提供一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含向該個體投與有效量的表現結合BCMA之CAR分子之細胞(例如細胞群)(「BCMA CAR表現細胞」)。在一些實施例中，與BCMA表現有關的疾病為血液癌，例如ALL、CLL、DLBCL或多發性骨髓瘤。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞療法係基於患者樣品中之生物標記物含量的獲取來投與。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞療法與第二療法組合投與個體。在一些實施例中，BCMA CAR表現細胞療法與第二療法同時或依序投與。
嵌合抗原受體 (CAR)
在一個態樣中，本文揭示使用表現CAR分子之細胞(例如細胞群)的方法。在一個態樣中，例示性CAR構築體包含視情況存在之前導序列(例如本文所述之前導序列)、抗原結合域(例如本文所述之抗原結合域)、鉸鏈(例如本文所述之鉸鏈區)、跨膜域(例如本文所述之跨膜域)及胞內刺激域(例如本文所述之胞內刺激域)。在一個態樣中，例示性CAR構築體包含視情況存在之前導序列(例如本文所述之前導序列)、胞外抗原結合域(例如本文所述之抗原結合域)、鉸鏈(例如本文所述之鉸鏈區)、跨膜域(例如本文所述之跨膜域)、胞內共刺激信號傳導域(例如本文所述之共刺激信號傳導域)及/或胞內主要信號傳導域(例如本文所述之初始信號傳導域)。
可為本文所述CAR分子之一部分之各種組分之非限制性實例的序列列舉於表 1 中，其中「aa」表示胺基酸，且「na」表示編碼相應肽的核酸。
表 1 . CAR之各種組分的序列(aa - 胺基酸序列，na - 核酸序列)。
CAR 抗原結合域
在一個態樣中，包含抗原結合域之CAR的一部分包含靶向腫瘤抗原(例如本文所述之腫瘤抗原)的抗原結合域。在一些實施例中，抗原結合域結合至：CD19；CD123；CD22；CD30；CD171；CS-1；C型凝集素樣分子-1、CD33；表皮生長因子受體變異體III (EGFRvIII)；神經節苷脂G2 (GD2)；神經節苷脂GD3；TNF受體家族成員；B細胞成熟抗原(BCMA)；Tn抗原((Tn Ag)或(GalNAcα-Ser/Thr))；前列腺特異性膜抗原(PSMA)；受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)；fms樣酪胺酸激酶3 (FLT3)；腫瘤相關醣蛋白72 (TAG72)；CD38；CD44v6；癌胚抗原(CEA)；上皮細胞黏附分子(EPCAM)；B7H3 (CD276)；KIT (CD117)；介白素-13受體次單元α-2；間皮素；介白素11受體α (IL-11Ra)；前列腺幹細胞抗原(PSCA)；蛋白酶絲胺酸21；血管內皮生長因子受體2 (VEGFR2)；路易斯(Y)抗原；CD24；血小板源生長因子受體β (PDGFR-β)；階段特異性胚抗原-4 (SSEA-4)；CD20；葉酸受體α；受體酪胺酸蛋白激酶ERBB2 (Her2/neu)；細胞表面相關黏蛋白1 (MUC1)；表皮生長因子受體(EGFR)；神經細胞黏附分子(NCAM)；前列腺酶；前列腺酸磷酸酶(PAP)；突變的延長因子2(ELF2M)；蝶素B2；纖維母細胞活化蛋白α (FAP)；胰島素樣生長因子1受體(IGF-I受體)、碳酸酐酶IX (CAIX)；β型蛋白酶體(前體(Prosome)，巨蛋白因子(Macropain))次單元9 (LMP2)；醣蛋白100 (gp100)；由斷裂點叢集區(BCR)及Abelson鼠類白血病病毒致癌基因同源物1 (Abl)組成的致癌基因融合蛋白(bcr-abl)；酪胺酸酶；A型蝶素受體2 (EphA2)；岩藻糖基GM1；唾液酸基路易斯黏附分子(sLe)；神經節苷脂GM3；轉麩胺醯胺酶5 (TGS5)；黑色素瘤相關高分子量抗原(HMWMAA)；鄰乙醯基-GD2神經節苷脂(OAcGD2)；葉酸受體β；腫瘤內皮標記物1 (TEM1/CD248)；相關的腫瘤內皮標記物7 (TEM7R)；密連蛋白6 (CLDN6)；促甲狀腺激素受體(TSHR)；G蛋白偶合受體C類第5組成員D (GPRC5D)；X染色體開放閱讀框架61 (CXORF61)；CD97；CD179a；退行性淋巴瘤激酶(ALK)；聚唾液酸；胎盤特異性1 (PLAC1)；globoH糖基神經醯胺(GloboH)之六醣部分；乳腺腺體分化抗原(NY-BR-1)；尿溶蛋白2 (UPK2)；A型肝炎病毒細胞受體1 (HAVCR1)；腎上腺素受體β3 (ADRB3)；泛連接蛋白3 (PANX3)；G蛋白偶合受體20 (GPR20)；淋巴球抗原6複合物，基因座K 9 (LY6K)；嗅覺受體51E2 (OR51E2)；TCR γ替代閱讀框架蛋白(TARP)；威爾姆斯腫瘤(Wilms tumor)蛋白質(WT1)；癌症/睪丸抗原1 (NY-ESO-1)；癌症/睪丸抗原2 (LAGE-1a)；黑色素瘤相關抗原1 (MAGE-A1)；位於染色體12p上的ETS易位變異基因6 (ETV6-AML)；精子蛋白質17 (SPA17)；X抗原家族成員1A (XAGE1)；血管生成素結合細胞表面受體2 (Tie 2)；黑色素瘤癌症睪丸抗原-1 (MAD-CT-1)；黑色素瘤癌症睪丸抗原-2 (MAD-CT-2)；Fos相關抗原1；腫瘤蛋白質p53 (p53)；p53突變體；前列腺蛋白；存活素；端粒酶；前列腺癌腫瘤抗原-1，由T細胞識別的黑色素瘤抗原1；大鼠肉瘤(Ras)突變體；人類端粒酶逆轉錄酶(hTERT)；肉瘤易位斷裂點；黑色素瘤細胞凋亡抑制因子(ML-IAP)；ERG (跨膜蛋白酶，絲胺酸2 (TMPRSS2) ETS融合基因)；N-乙醯基葡糖胺基轉移酶V (NA17)；成對的box蛋白Pax-3 (PAX3)；雄激素受體；週期素B1；v-myc禽類髓細胞組織增生病毒致癌基因神經母細胞瘤源同源物(MYCN)；Ras同源物家族成員C (RhoC)；酪胺酸酶相關蛋白質2 (TRP-2)；細胞色素P450 1B1 (CYP1B1)；被T細胞3識別的CCCTC結合因子(鋅指蛋白)樣鱗狀細胞癌抗原(SART3)；成對的box蛋白Pax-5 (PAX5)；前頂體素結合蛋白sp32 (OY-TES1)；淋巴球特異性蛋白質酪胺酸激酶(LCK)；A激酶錨定蛋白4 (AKAP-4)；滑膜肉瘤，X斷裂點2 (SSX2)；晚期糖基化最終產物的受體(RAGE-1)；腎泛素1 (RU1)；腎泛素2 (RU2)；豆莢蛋白；人類乳頭狀瘤病毒E6 (HPV E6)；人類乳頭狀瘤病毒E7 (HPV E7)；腸羧基酯酶；突變的熱休克蛋白70-2 (mut hsp70-2)；CD79a；CD79b；CD72；白血球相關免疫球蛋白樣受體1 (LAIR1)；IgA受體(FCAR或CD89)之Fc片段；白血球免疫球蛋白樣受體亞家族A成員2 (LILRA2)；CD300分子樣家族成員f (CD300LF)；C型凝集素域家族12成員A (CLEC12A)；骨髓基質細胞抗原2 (BST2)；含EGF樣模組的黏蛋白樣激素受體樣2 (EMR2)；淋巴球抗原75 (LY75)；磷脂肌醇蛋白聚醣-3 (GPC3)；Fc受體樣5 (FCRL5)；或免疫球蛋白λ樣多肽1 (IGLL1)。
抗原結合域可為結合至抗原的任何域，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、重組抗體、人類抗體、人類化抗體及其功能片段，包括(但不限於)單域抗體，諸如重鏈可變域(VH)、輕鏈可變域(VL)及駱駝科源奈米抗體的可變域(VHH)，以及此項技術中已知充當抗原結合域的替代支架，諸如重組纖維結合蛋白域、T細胞受體(TCR)，或其片段，例如單鏈TCR，及其類似物。在一些情況下，抗原結合域來源於將最終使用CAR之相同物種為有益的。舉例而言，用於人類時，CAR之抗原結合域包含抗體或抗體片段之抗原結合域的人類或人類化殘基可為有益的。
CAR 跨膜域
在各種實施例中，就跨膜域而言，CAR可經設計以包含連接至CAR胞外域之跨膜域。跨膜域可以包括一或多個鄰近於跨膜區的額外胺基酸，例如一或多個與跨膜蛋白所來源之蛋白質之胞外區(例如胞外區之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10直至15個胺基酸)締合的胺基酸及/或一或多個與跨膜蛋白所來源之蛋白質之胞內區(例如胞內區的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10直至15個胺基酸)締合的額外胺基酸。在一個態樣中，跨膜域為與CAR之其他域之一締合的跨膜域。在一些情況下，可以藉由胺基酸取代來選擇或修飾跨膜域，以避免此類域結合至相同或不同表面膜蛋白之跨膜域，例如以最小化與受體複合物之其他元件的相互作用。在一個態樣中，跨膜域能夠與CAR表現細胞之細胞表面上的另一CAR均二聚。在不同態樣中，跨膜域之胺基酸序列可經修飾或取代以使與同一CART中存在之原生結合搭配物之結合域的相互作用降至最低。
跨膜域可來源於天然或重組來源。在來源為天然時，該區域可來源於任何膜結合蛋白或跨膜蛋白。在一個態樣中，每當CAR已結合至標靶時，跨膜域能夠向胞內域傳導信號。特別適用於本發明中之跨膜域可以至少包括例如T細胞受體、CD28、CD27、CD3 ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154之α、β或ξ鏈的跨膜區。在一些實施例中，跨膜域可以至少包括例如以下之跨膜區：KIR2DS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1 (CD11a、CD18)、ICOS (CD278)、4-1BB (CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、IL2R β、IL2R γ、IL7R α、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKG2D、NKG2C。
在一些情況下，跨膜域可以經由鉸鏈(例如來自人類蛋白質的鉸鏈)連接至CAR之胞外區，例如CAR之抗原結合域。舉例而言，在一個實施例中，鉸鏈可為人類Ig (免疫球蛋白)鉸鏈，例如IgG4鉸鏈，或CD8a鉸鏈。在一個實施例中，鉸鏈或間隔子包含(例如組成為) SEQ ID NO: 1011之胺基酸序列。在一個態樣中，跨膜域包含(例如組成為) SEQ ID NO: 1019之跨膜域。
在一個態樣中，鉸鏈或間隔子包含IgG4鉸鏈。舉例而言，在一個實施例中，鉸鏈或間隔子包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1013之鉸鏈。在一些實施例中，鉸鏈或間隔子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 1014編碼的鉸鏈。
在一個態樣中，鉸鏈或間隔子包含IgD鉸鏈。舉例而言，在一個實施例中，鉸鏈或間隔子包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1015之鉸鏈。在一些實施例中，鉸鏈或間隔子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 1016編碼的鉸鏈。
在一個態樣中，跨膜域可為重組跨膜域，在此情況下，其將主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸。在一個態樣中，重組跨膜域之每一端可發現苯丙胺酸、色胺酸及纈胺酸之三聯體。
視情況，長度為2至10個胺基酸之短寡肽或多肽連接子可在CAR之跨膜域與細胞質區之間形成連接。甘胺酸-絲胺酸二聯體提供尤其適合之連接子。舉例而言，在一個態樣中，連接子包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1017。在一些實施例中，連接子係由核苷酸序列SEQ ID NO: 1018編碼。
在一個態樣中，鉸鏈或間隔子包含KIR2DS2鉸鏈。
細胞質域
CAR之細胞質域或區包括胞內信號傳導域。胞內信號傳導域一般負責已引入CAR之免疫細胞之至少一種正常效應功能的活化。
用於本文所述CAR中的胞內信號傳導域之實例包括T細胞受體(TCR)及共受體之細胞質序列，該T細胞受體與共受體協同作用以在抗原受體接合之後起始信號轉導；以及此等序列的任何衍生物或變異體及具有相同功能能力的任何重組序列。
已知單獨TCR產生之信號不足以完全活化T細胞且亦需要二級及/或共刺激信號。因此，可以稱T細胞活化藉由兩種不同類別的細胞質信號傳導序列介導：經由TCR (初始細胞內信號傳導域)起始抗原依賴性初始活化的彼等序列，及以抗原非依賴性方式起作用的彼等序列，以得到第二或共刺激信號(第二細胞質域，例如共刺激域)。
初始信號傳導域以刺激方式或抑制方式調控TCR複合物之主要活化。以刺激方式起作用之初始胞內信號傳導域可以含有已知為基於免疫受體酪胺酸之活化基元或ITAM的信號傳導基元。
含有特別適用於本發明之初始胞內信號傳導域的ITAM實例包括TCR ξ、FcR γ、FcR β、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD278 (亦稱為「ICOS」)、FcεRI、DAP10、DAP12及CD66d之ITAM。在一個實施例中，本發明的CAR包含細胞內信號傳導域，例如CD3-ξ (例如本文所述之CD3-ξ序列)的初始信號傳導域。
在一個實施例中，初始信號傳導域包含經修飾的ITAM域，例如相較於原生ITAM域具有改變(例如增加或降低)之活性的突變ITAM域。在一個實施例中，初始信號傳導域包含含有經修飾之ITAM之初始胞內信號傳導域，例如含有最佳化及/或截斷之ITAM的初始胞內信號傳導域。在一個實施例中，初始信號傳導域包含一個、兩個、三個、四個或超過四個ITAM基元。
共刺激信號傳導域
CAR之胞內信號傳導域本身可包含CD3-ξ信號傳導域或其可與適用於本發明之CAR之情形下之任何其他所需胞內信號傳導域組合。舉例而言，CAR之胞內信號傳導域可包含CD3 ξ鏈部分及共刺激信號傳導域。共刺激信號傳導域係指包含共刺激分子之胞內域的CAR之一部分。在一個實施例中，胞內域經設計以包含CD3-ξ之信號傳導域及CD28之信號傳導域。在一個態樣中，胞內域經設計以包含CD3-ξ之信號傳導域及ICOS之信號傳導域。
共刺激分子為淋巴球對抗原有效反應所必需之除抗原受體或其配位體之外的細胞表面分子。此類分子之實例包括CD27、CD28、4-1BB (CD137)、OX40、CD30、CD40、PD1、ICOS、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3及與CD83特異性結合之配位體，及其類似者。舉例而言，CD27共刺激已證明可增強活體外人類CART細胞擴增、效應功能及存活且增強人類T細胞活體內存留及抗腫瘤活性(Song等人, Blood. 2012; 119(3):696-706)。此類共刺激分子之其他實例包括CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp30、NKp44、NKp46、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2R β、IL2R γ、IL7R α、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、NKG2D、NKG2C及PAG/Cbp。
CAR之細胞質部分內之胞內信號傳導序列彼此可以隨機或指定次序連接。視情況，長度在例如2至10個胺基酸之間(例如2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)的短寡肽或多肽連接子可以使胞內信號傳導序列之間形成連接。在一個實施例中，甘胺酸-絲胺酸二聯體可用作適合連接子。在一個實施例中，單一胺基酸(例如丙胺酸、甘胺酸)可以用作適合連接子。
在一個態樣中，胞內信號傳導域經設計以包含兩個或超過兩個(例如2、3、4、5或超過5個)共刺激信號傳導域。在一個實施例中，兩個或超過兩個(例如2、3、4、5或超過5個)共刺激信號傳導域藉由連接分子(例如本文所述之連接分子)分隔。在一個實施例中，胞內信號傳導域包含兩個共刺激信號傳導域。在一些實施例中，連接子分子為甘胺酸殘基。在一些實施例中，連接子為丙胺酸殘基。
在一個態樣中，胞內信號傳導域經設計以包含CD3-ξ之信號傳導域及CD28之信號傳導域。在一個態樣中，胞內信號傳導域經設計以包含CD3-ξ之信號傳導域及4-1BB之信號傳導域。在一個態樣中，4-1BB之信號傳導域為SEQ ID NO: 1022之信號傳導域。在一個態樣中，CD3-ξ之信號傳導域為SEQ ID NO: 1027之信號傳導域。
在一個態樣中，細胞內信號傳導域經設計以包含CD3-ξ之信號傳導域及CD27之信號傳導域。在一個態樣中，CD27之信號傳導域包含SEQ ID NO: 1025之胺基酸序列。在一個態樣中，CD27之信號傳導域係由SEQ ID NO: 1026之核酸序列編碼。
在一個態樣中，本文所述之CAR表現細胞可以進一步包含第二CAR，例如包括不同抗原結合域的第二CAR，例如針對相同標靶或不同標靶(例如除本文所述之癌症相關抗原或本文所述之不同癌症相關抗原之外的標靶，例如CD19、CD33、CLL-1、CD34、FLT3或葉酸受體β)。在一個實施例中，第二CAR包括針對標靶的抗原結合域，表現該標靶的癌細胞類型與癌症相關抗原相同。在一個實施例中，表現CAR之細胞包含靶向第一抗原且包括具有共刺激信號傳導域而非初始信號傳導域之胞內信號傳導域的第一CAR，及靶向第二不同抗原且包括具有初始信號傳導域而非共刺激信號傳導域之胞內信號傳導域的第二CAR。雖然不希望被理論束縛，但將共刺激信號傳導域(例如4-1BB、CD28、ICOS、CD27或OX-40)置放於第一CAR上及將初始信號傳導域(例如CD3 ξ)置放於第二CAR上可以使CAR活性限於表現兩種標靶的細胞。在一個實施例中，表現CAR的細胞包含：第一癌症相關抗原CAR，該第一CAR包括結合本文所述之靶抗原的抗原結合域、跨膜域及共刺激域；第二CAR，該第二CAR靶向不同靶抗原(例如，在類型與第一靶抗原相同之癌細胞上所表現的抗原)且包括抗原結合域、跨膜域及初始信號傳導域。在另一實施例中，表現CAR之細胞包含：第一CAR，其包括結合本文所述之靶抗原的抗原結合域、跨膜域及初始信號傳導域；及第二CAR，其靶向除第一靶抗原之外的抗原(例如，在類型與第一靶抗原相同之癌細胞上表現的抗原)且包括針對抗原之抗原結合域、跨膜域及共刺激信號傳導域。
在另一態樣中，本發明之特徵在於表現CAR之細胞(例如CART細胞)群。在一些實施例中，表現CAR之細胞群包含表現不同CAR之細胞的混合物。舉例而言，在一個實施例中，CART細胞群可以包括：表現CAR的第一細胞，該CAR具有針對本文所述癌症相關抗原之抗原結合域；及表現CAR的第二細胞，該CAR具有不同抗原結合域，例如針對本文所述之不同癌症相關抗原之抗原結合域，例如針對本文所述之癌症相關抗原的抗原結合域，該癌症相關抗原不同於第一細胞所表現之CAR之抗原結合域所結合的癌症相關抗原。作為另一實例，表現CAR之細胞群可以包括：表現CAR的第一細胞，該CAR包括針對本文所述之癌症相關抗原的抗原結合域；及表現CAR的第二細胞，該CAR包括針對除如本文所述之癌症相關抗原之外之標靶的抗原結合域。在一個實施例中，表現CAR之細胞群包括例如表現包括初始細胞內信號傳導域之CAR的第一細胞及表現包括第二信號傳導域之CAR的第二細胞。
在另一態樣中，本發明之特徵為一種細胞群，其中該群中的至少一個細胞表現具有針對本文所述之癌症相關抗原之抗原結合域的CAR，且第二細胞表現另一種藥劑，例如增強表現CAR之細胞之活性的藥劑。舉例而言，在一個實施例中，藥劑可為抑制抑制分子之藥劑。在一些實施例中，抑制分子(例如PD-1)可降低表現CAR之細胞建立免疫效應反應之能力。抑制分子之實例包括PD-1、PD-L1、CTLA4、TIM3、CEACAM (CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I類、MHC II類、GAL9、腺苷及TGF (例如TGFβ)。在一個實施例中，抑制抑制分子的藥劑包含第一多肽，例如抑制分子；以及向細胞提供正信號的第二多肽，例如本文所述之胞內信號傳導域。在一個實施例中，藥劑包含第一多肽，例如抑制分子，諸如PD-1、PD-L1、CTLA4、TIM3、CEACAM (CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4及TGFβ，或其中任一者之片段；及第二多肽，其為本文所述之胞內信號傳導域(例如包含共刺激域(例如41BB、CD27、OX40或CD28，例如如本文所述)及/或初始信號傳導域(例如本文所述之CD3 ξ信號傳導域)。在一個實施例中，藥劑包含PD-1之第一多肽或其片段，及本文所述之胞內信號傳導域的第二多肽(例如本文所述之CD28信號傳導域及/或本文所述之CD3 ξ信號傳導域)。
BCMA CAR
在一個態樣中，本文所揭示之CAR結合至BCMA。例示性BCMA CAR可以包括WO2016/014565之表1或16中所揭示的序列，該文獻以引用之方式併入本文中。BCMA CAR構築體可以包括視情況存在之前導序列；視情況存在之鉸鏈域，例如CD8鉸鏈域；跨膜域，例如CD8跨膜域；胞內域，例如4-1BB胞內域；及功能信號傳導域，例如CD3 ξ域。在某些實施例中，該等區域鄰接且處於同一閱讀框中以形成單一融合蛋白。在其他實施例中，區域處於單獨多肽中，例如如本文所述之RCAR分子中。
例示性BCMA CAR分子序列或其片段揭示於表2-5中。在某些實施例中，全長BCMA CAR分子包括一或多個CDR、VH、VL、scFv，或以下之全長序列：BCMA-1、BCMA-2、BCMA-3、BCMA-4、BCMA-5、BCMA-6、BCMA-7、BCMA-8、BCMA-9、BCMA-10、BCMA-11、BCMA-12、BCMA-13、BCMA-14、BCMA-15、149362、149363、149364、149365、149366、149367、149368、149369、BCMA_EBB-C1978-A4、BCMA_EBB-C1978-G1、BCMA_EBB-C1979-C1、BCMA_EBB-C1978-C7、BCMA_EBB-C1978-D10、BCMA_EBB-C1979-C12、BCMA_EBB-C1980-G4、BCMA_EBB-C1980-D2、BCMA_EBB-C1978-A10、BCMA_EBB-C1978-D4、BCMA_EBB-C1980-A2、BCMA_EBB-C1981-C3、BCMA_EBB-C1978-G4、A7D12.2、C11D5.3、C12A3.2或C13F12.1，如表2-5所揭示，或與其基本上(例如95-99%)一致的序列。
可以用於抗BCMA CAR構築體中之其他例示性BCMA靶向序列揭示於WO 2017/021450、WO 2017/011804、WO 2017/025038、WO 2016/090327、WO 2016/130598、WO 2016/210293、WO 2016/090320、WO 2016/014789、WO 2016/094304、WO 2016/154055、WO 2015/166073、WO 2015/188119、WO 2015/158671、US 9,243,058、US 8,920,776、US 9,273,141、US 7,083,785、US 9,034,324、US 2007/0049735、US 2015/0284467、US 2015/0051266、US 2015/0344844、US 2016/0131655、US 2016/0297884、US 2016/0297885、US 2017/0051308、US 2017/0051252、US 2017/0051252、WO 2016/020332、WO 2016/087531、WO 2016/079177、WO 2015/172800、WO 2017/008169、US 9,340,621、US 2013/0273055、US 2016/0176973、US 2015/0368351、US 2017/0051068、US 2016/0368988及US 2015/0232557，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，其他例示性BCMA CAR構築體係使用VH及VL序列、根據PCT公開案WO2012/0163805產生(其內容以全文引用的方式併入本文)。
表 2. 例示性抗BCMA scFv域及BCMA CAR分子之胺基酸及核酸序列 亦提供各scFv的胺基酸序列可變重鏈及可變輕鏈序列。
表 3. 根據Kabat編號方案之重鏈可變域CDR (Kabat等人(1991), 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」第5版, 公眾健康服務署, 國家衛生研究院, Bethesda, MD)
表 4. 根據Kabat編號方案之輕鏈可變域CDR (Kabat等人(1991), 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」第5版, 公眾健康服務署, 國家衛生研究院, Bethesda, MD)
表 5 . 其他例示性BCMA CAR序列
RNA 轉染
本文揭示製備活體外轉錄之RNA CAR的方法。本發明亦包括可直接轉染至細胞中之CAR編碼RNA構築體。產生用於轉染之mRNA的方法可以包括用專門設計之引子活體外轉錄(IVT)模板，隨後添加聚A，以產生含有3'及5'未轉譯序列(「UTR」)、5'帽及/或內部核糖體進入位點(IRES)、待表現之核酸及長度典型地為50-2000個鹼基(SEQ ID NO: 2025)之聚A尾的構築體。如此產生之RNA可以有效轉染不同種類之細胞。在一個態樣中，模板包括CAR之序列。
在一個態樣中，抗BCMA CAR由信使RNA (mRNA)編碼。在一個態樣中，將編碼抗BCMA CAR之mRNA引入免疫效應細胞中，例如T細胞或NK細胞中，用於產生表現CAR之細胞(例如CART細胞或表現CAR之NK細胞)。
在一個實施例中，活體外轉錄之RNA CAR可以短暫轉染形式引入細胞中。使用聚合酶鏈反應(PCR)產生之模板、藉由活體外轉錄產生RNA。來自任何來源之所關注DNA可藉由PCR、使用適當引子及RNA聚合酶直接轉化成用於活體外mRNA合成之模板。DNA來源可為例如基因組DNA、質體DNA、噬菌體DNA、cDNA、合成DNA序列或任何其他適當DNA來源。用於活體外轉錄之所要模板為本發明之CAR。舉例而言，RNA CAR用的模板包含含有抗腫瘤抗體之單鏈可變域的胞外區；鉸鏈區、跨膜域(例如CD8a之跨膜域)；及細胞質區，該細胞質區包括細胞內信號傳導域，例如包含CD3-ξ信號傳導域及4-1BB信號傳導域。
在一個實施例中，待用於PCR之DNA含有開放閱讀框架。DNA可來自生物體基因組之天然存在之DNA序列。在一個實施例中，核酸可以包括5'及/或3'未轉譯區(UTR)中的一些或全部。核酸可包括外顯子及內含子。在一個實施例中，待用於PCR之DNA為人類核酸序列。在另一實施例中，待用於PCR之DNA為包括5'及3' UTR之人類核酸序列。DNA可替代地為通常不表現於天然存在之生物體中的人工DNA序列。例示性人工DNA序列為含有基因部分之序列，該等基因部分連接在一起形成編碼融合蛋白之開放閱讀框架。連接在一起之DNA部分可來自單個生物體或超過一種生物體。
使用PCR產生用於活體外轉錄mRNA之模板，以用於轉染。此項技術中熟知進行PCR之方法。用於PCR之引子經設計具有與待用作PCR模板之DNA區域實質上互補的區域。如本文所用，「實質上互補」係指引子序列中之大部分或全部鹼基互補，或一或多個鹼基不互補或不匹配之核苷酸序列。實質上互補序列能夠與預期DNA標靶在用於PCR之黏接條件下黏接或雜交。引子可經設計以與DNA模板之任何部分實質上互補。舉例而言，引子可以經設計以擴增在細胞中正常轉錄之核酸的一部分(開放閱讀框架)，包括5'及3' UTR。引子亦可經設計以擴增編碼所關注之特定區域的核酸部分。在一個實施例中，引子經設計以擴增人類cDNA之編碼區，包括5'及3' UTR的全部或一部分。適用於PCR之引子可藉由此項技術中熟知之合成方法產生。「正向引子」為含有核苷酸區域的引子，該等核苷酸區域與DNA模板上之位於待擴增DNA序列之上游的核苷酸實質上互補。「上游」在本文中用於指待擴增之DNA序列相對於編碼股之5端位置。「反向引子」為含有核苷酸區域的引子，該等核苷酸區域與位於待擴增DNA序列之下游的雙股DNA模板實質上互補。「下游」在本文中用於指待擴增之DNA序列相對於編碼股之3’端位置。
適用於PCR之任何DNA聚合酶可用於本文所揭示之方法中。試劑及聚合酶可購自多個來源。
亦可使用能夠促進穩定性及/或轉譯效率之化學結構。RNA較佳具有5'及3' UTR。在一個實施例中，5' UTR之長度為1至3000個核苷酸。待添加至編碼區之5'及3' UTR序列之長度可藉由不同方法改變，包括(但不限於)設計黏接至UTR之不同區域的PCR引子。使用此方法，一般技術者可以修改5'及3' UTR長度，此為所轉錄之RNA轉染後達成最佳轉譯效率所必需的。
5'及3' UTR可為所關注之核酸的天然存在之內源5'及3' UTR。或者，可藉由將UTR序列併入正向及反向引子中或藉由模板之任何其他修飾來添加相關核酸之非內源UTR序列。所關注核酸之非內源性UTR序列之用途可適用於改變RNA之穩定性及/或轉譯效率。舉例而言，已知3' UTR序列中之富AU元件可以降低mRNA之穩定性。因此，可以基於此項技術中熟知之UTR特性選擇及設計3' UTR以提高經轉錄之RNA的穩定性。
在一個實施例中，5' UTR可以含有內源核酸之Kozak序列。或者，當藉由如上文所述之PCR添加所關注核酸之非內源性5' UTR時，可以藉由添加5' UTR序列重新設計共同Kozak序列。Kozak序列可以提高一些RNA轉錄物的轉譯效率，但似乎並非所有RNA實現有效轉譯所必需的。此項技術中已知許多mRNA需要Kozak序列。在其他實施例中，5' UTR可為其RNA基因組在細胞中穩定的RNA病毒之5' UTR。在其他實施例中，多種核苷酸類似物可以用於3'或5' UTR以阻礙核酸外切酶使mRNA降解。
為了能夠在不需要基因選殖之情況下自DNA模板合成RNA，轉錄啟動子應連接至待轉錄序列上游之DNA模板。當充當RNA聚合酶啟動子的序列添加至正向引子之5'端時，RNA聚合酶啟動子併入待轉錄之開放閱讀框架上游的PCR產物中。在一個較佳實施例中，啟動子為如本文別處所述之T7聚合酶啟動子。其他適用啟動子包括(但不限於) T3及SP6 RNA聚合酶啟動子。此項技術中已知T7、T3及SP6啟動子的共同核苷酸序列。
在一個較佳實施例中，mRNA在5'端與3'聚(A)尾均具有帽，其決定細胞中之核糖體結合、轉譯起始及mRNA穩定性。在圓形DNA模板上，例如質體DNA，RNA聚合酶產生不適於在真核細胞中表現的長連體產物。在3' UTR之末端經線性化之質體DNA的轉錄產生正常大小之mRNA，其即使在轉錄後經聚腺苷酸化仍不能有效地發生真核轉染。
在線性DNA模板上，噬菌體T7 RNA聚合酶可以使轉錄物的3'端延伸越過模板的最後一個鹼基(Schenborn及Mierendorf, Nuc Acids Res., 13:6223-36 (1985)；Nacheva及Berzal-Herranz, Eur. J. Biochem., 270:1485-65 (2003)。
將聚A/T片段整合至DNA模板中的習知方法為分子選殖。然而，整合至質體DNA中之聚A/T序列可使質體不穩定，此為獲自細菌細胞之質體DNA模板通常高度混雜有缺失及其他畸變之原因。此使選殖程序不僅費力且費時，而且通常不可靠。此為能夠用聚A/T 3'片段構築DNA模板而無需選殖的方法高度符合需要的原因。
可以在PCR期間藉由使用含有聚T尾(諸如100T尾(SEQ ID NO: 2026))之反向引子(大小可為50-5000 T (SEQ ID NO: 2027))或在PCR之後藉由包括(但不限於)DNA連接或活體外重組之任何其他方法產生轉錄DNA模板之聚A/T區段。聚(A)尾亦向RNA提供穩定性且減少其降解。一般而言，聚(A)尾之長度與經轉錄之RNA的穩定性正相關。在一個實施例中，聚(A)尾在100與5000個腺苷之間(SEQ ID NO: 2028)。
RNA之聚(A)尾可以在活體外轉錄之後使用聚(A)聚合酶(諸如大腸桿菌聚A聚合酶(E-PAP))進一步延長。在一個實施例中，將聚(A)尾的長度自100個核苷酸增加至300與400個核苷酸之間(SEQ ID NO: 2024)使得RNA轉譯效率提高約兩倍。另外，不同化學基團連接至3'端可以提高mRNA穩定性。此類連接可含有經修飾/人工核苷酸、適體及其他化合物。舉例而言，ATP類似物可以使用聚(A)聚合酶併入聚(A)尾中。ATP類似物可進一步提高RNA穩定性。
5'蓋子亦向RNA分子提供穩定性。在一個較佳實施例中，藉由本文揭示之方法產生的RNA包括5'帽。使用此項技術中已知及本文所述之技術提供5'帽(Cougot等人, Trends in Biochem. Sci., 29:436-444 (2001)；Stepinski等人, RNA, 7:1468-95 (2001)；Elango等人, Biochim. Biophys. Res. Commun., 330:958-966 (2005))。
藉由本文所揭示之方法產生之RNA亦可含有內部核糖體進入位點(IRES)序列。IRES序列可為起始帽非依賴性核糖體結合至mRNA且促進轉譯起始的任何病毒、染色體或人工設計序列。可以包括適於細胞電穿孔之任何溶質，其可以含有促進細胞通透性及存活力之因子，諸如糖、肽、脂質、蛋白質、抗氧化劑及界面活性劑。
RNA可以使用多種不同方法中之任一者引入靶細胞中，例如包括(但不限於)以下之市售方法：電穿孔(Amaxa核轉染因子-II (Amaxa Biosystems, Cologne, Germany))、(ECM 830 (BTX) (Harvard Instruments, Boston, Mass.)或基因脈衝發生器II (Gene Pulser II)(BioRad, Denver, Colo.)、多功能細胞電穿孔儀(Multiporator)(Eppendort, Hamburg Germany)、使用脂質體轉染之陽離子型脂質體介導轉染、聚合物囊封、肽介導之轉染，或生物彈道顆粒遞送系統(諸如「基因槍」)(參見例如Nishikawa等人, Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001)。
非病毒遞送方法
在一些態樣中，非病毒方法可用於遞送編碼本文所述之CAR的核酸至細胞或組織或個體中。
在一些實施例中，非病毒方法包括使用轉座子(亦稱為可轉座元件)。在一些實施例中，轉座子為自身可插入基因組中之位置的DNA片，例如能夠自我複製且將其複本插入基因組中之DNA片，或可自較長核酸剪接且插入基因組中之另一位置的DNA片。舉例而言，轉座子包含由用於轉位之倒置重複側接基因組成之DNA序列。
使用轉座子遞送核酸的例示性方法包括睡美人(Sleeping Beauty)轉座子系統(SBTS)及piggyBac (PB)轉座子系統。參見例如Aronovich等人, Hum. Mol. Genet. 20.R1(2011):R14-20；Singh等人, Cancer Res. 15(2008):2961-2971；Huang等人, Mol. Ther. 16(2008):580-589；Grabundzija等人, Mol. Ther. 18(2010):1200-1209；Kebriaei等人, Blood. 122.21(2013):166；Williams. Molecular Therapy 16.9(2008): 1515-16；Bell等人, Nat. Protoc. 2.12(2007):3153-65；及Ding等人, Cell. 122.3(2005):473-83，，該等所有文獻均以引用的方式併入本文中。
SBTS包括兩種組分：1)含有轉殖基因之轉座子及2)轉座酶來源。轉座酶可將來自載體質體(或其他供者DNA)之轉座子轉座至標靶DNA，諸如宿主細胞染色體/基因組。舉例而言，轉座酶結合至攜帶者質體/供者DNA，自質體切下轉座子(包括轉殖基因)，且將其插入宿主細胞之基因組中。參見例如Aronovich等人，同上。
例示性轉座子包括基於pT2之轉座子。參見例如Grabundzija等人, Nucleic Acids Res. 41.3(2013):1829-47；及Singh等人, Cancer Res. 68.8(2008): 2961-2971，，該等所有文獻均以引用的方式併入本文中。例示性轉座酶包括Tc1/水手型轉座酶，例如SB10轉座酶或SB11轉座酶(高活性轉座酶，其可自例如巨細胞病毒啟動子表現)。參見例如Aronovich等人；Kebriaei等人；及Grabundzija等人，該等所有文獻均以引用的方式併入本文中。
SBTS之使用允許轉殖基因(例如編碼本文所述之CAR之核酸)實現有效整合及表現。本文提供產生穩定表現本文所述CAR之細胞(例如T細胞或NK細胞)的方法，例如使用諸如SBTS之轉座子系統。
根據本文所述之方法，在一些實施例中，將含有SBTS組分之一或多個核酸(例如質體)遞送至細胞(例如T或NK細胞)。舉例而言，藉由核酸(例如質體DNA)遞送標準方法(例如本文所述之方法，例如電穿孔、轉染或脂質體轉染)遞送核酸。在一些實施例中，核酸含有包含轉殖基因(例如編碼本文所述CAR的核酸)的轉座子。在一些實施例中，核酸含有包含轉殖基因(例如編碼本文所述CAR的核酸)的轉座子以及編碼轉座酶的核酸序列。在其他實施例中，提供具有兩種核酸之系統，例如雙質體系統，例如其中第一質體含有包含轉殖基因之轉座子且第二質體含有編碼轉座酶之核酸序列。舉例而言，第一及第二核酸共遞送至宿主細胞。
在一些實施例中，藉由將使用SBTS的基因插入術與使用核酸酶(例如鋅指核酸酶(ZFN)、轉錄活化因子樣效應子核酸酶(TALEN)、CRISPR/Cas系統，或工程化兆核酸酶再工程化歸巢核酸內切酶)的基因編輯術組合使用來產生表現本文所述之CAR的細胞，例如T或NK細胞。
在一些實施例中，使用非病毒遞送方法允許細胞(例如T或NK細胞)再程式化及將該等細胞直接輸注至個體中。非病毒載體之優點包括(但不限於)容易及相對低成本地產生滿足患者群體所需的足夠量、儲存期間之穩定性及缺乏免疫原性。
編碼 CAR 之核酸構築體
本發明亦提供編碼一或多個本文所述之CAR構築體的核酸分子。在一個態樣中，核酸分子作為信使RNA轉錄物提供。在一個態樣中，核酸分子作為DNA構築體提供。
因此，在一個態樣中，本發明係關於一種編碼嵌合抗原受體(CAR)之經分離之核酸分子，其中CAR包含抗原結合域、跨膜域及細胞內信號傳導域，該細胞內信號傳導域包含刺激域，例如共刺激信號傳導域及/或初始信號傳導域，例如ξ鏈。
編碼所要分子之核酸序列可使用此項技術中已知之重組方法獲得，諸如藉由使用標準技術篩選表現基因之細胞庫、自已知包括基因之載體獲得基因或自含有基因之細胞及組織直接分離。或者，所關注基因可以合成方式產生而非選殖。
本發明亦提供其中插有本發明之DNA的載體。來源於逆轉錄病毒(諸如慢病毒)之載體為適於達成長期基因轉移之工具，因為其允許轉殖基因長期穩定的整合及其在子細胞中之傳播。慢病毒載體優於來源於致癌逆轉錄病毒(諸如鼠類白血病病毒)之載體的額外優勢在於其可轉導非增殖細胞，諸如肝細胞。其亦具有低免疫原性之額外優勢。逆轉錄病毒載體亦可為例如γ逆轉錄病毒載體。γ逆轉錄病毒載體可以包括例如啟動子、封裝信號(ψ)、引子結合位點(PBS)、一或多個(例如兩個)長末端重複(LTR)，及所關注之轉殖基因，例如編碼CAR的基因。γ逆轉錄病毒載體可以缺乏病毒結構基因，諸如gag、pol及env。例示性γ逆轉錄病毒載體包括鼠類白血病病毒(MLV)、脾病灶形成病毒(SFFV)及骨髓增殖肉瘤病毒(MPSV)及由其衍生之載體。其他γ逆轉錄病毒載體描述於例如Tobias Maetzig等人,「Gammaretroviral Vectors: Biology, Technology and Application」Viruses. 2011年6月; 3(6): 677-713中。
在另一實施例中，包含編碼本發明之所要CAR之核酸的載體為腺病毒載體(A5/35)。在另一實施例中，編碼CAR之核酸的表現可使用轉座子(諸如睡美人(sleeping beauty)、CRISPR、CAS9及鋅指核酸酶)實現。下文參見June等人, 2009Nature Reviews Immunology 9.10: 704-716，該文獻以引用的方式併入本文。
簡言之，編碼CAR之天然或合成核酸之表現典型地藉由將編碼CAR多肽或其一部分之核酸可操作地連接至啟動子且將構築體併入表現載體中來達成。載體可適於複製及整合真核生物。典型的選殖載體含有轉錄及轉譯終止子、起始序列及適用於調控所要核酸序列表現的啟動子。
本發明之表現構築體亦可用於核酸免疫接種及基因療法(使用標準基因遞送方案)。基因遞送方法為此項技術中已知。參見例如美國專利第5,399,346號、第5,580,859號、第5,589,466號，該等專利以全文引用的方式併入本文中。在另一實施例中，本發明提供基因療法載體。
核酸可選殖至多種類型之載體中。舉例而言，核酸可選殖至載體中，包括(但不限於)質體、噬菌體、噬菌體衍生物、動物病毒及黏質體。備受關注之載體包括表現載體、複製載體、探針產生載體及定序載體。
此外，表現載體可以病毒載體形式提供給細胞。病毒載體技術為此項技術中熟知且描述於例如Sambrook等人, 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 第1-4卷, Cold Spring Harbor Press, NY)及其他病毒學與分子生物學手冊中。適用作載體之病毒包括(但不限於)逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、疱疹病毒及慢病毒。一般而言，適合載體含有在至少一種生物體中起作用的複製起點、啟動子序列、適宜的限制性核酸內切酶位點，及一或多種可選標記物(例如WO 01/96584；WO 01/29058；及美國專利第6,326,193號)。
已開發出用於將基因轉移至哺乳動物細胞中的多種基於病毒之系統。舉例而言，逆轉錄病毒為基因遞送系統提供適宜平台。所選基因可插入載體中且使用此項技術中已知之技術封裝於逆轉錄病毒顆粒中。接著可分離重組病毒且活體內或離體遞送至個體之細胞中。此項技術中已知許多逆轉錄病毒系統。在一些實施例中，使用腺病毒載體。多種腺病毒載體為此項技術中已知。在一個實施例中，使用慢病毒載體。
額外的啟動子元件(例如增強子)調控轉錄起始頻率。典型地，此等元件定位於起點上游30-110 bp區域中，但許多啟動子已顯示亦含有起始位點下游之功能元件。啟動子元件之間的間距通常為靈活的，因此當元件相對彼此倒置或移動時保留啟動子功能。在胸苷激酶(tk)啟動子中，啟動子元件之間的間距在活性開始減退之前可增加至相隔50 bp。視啟動子而定，個別元件可以協同地或獨立地發揮作用以活化轉錄。
能夠表現哺乳動物T細胞中之CAR轉殖基因的啟動子之一實例為EF1a啟動子。原生EF1a啟動子驅使延長因子-1複合物之α次單元表現，該複合物負責將胺基醯基tRNA酶促遞送至核糖體。EF1a啟動子已廣泛用於哺乳動物表現質體且已顯示有效地自選殖至慢病毒載體中的轉殖基因驅動CAR表現。參見例如Milone等人, Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009)。
啟動子之另一實例為即刻早期巨細胞病毒(CMV)啟動子序列。此啟動子序列為強組成型啟動子序列，其能夠驅使可操作地連接至其之任何聚核苷酸序列高量表現。然而，亦可使用其他組成型啟動子序列，包括(但不限於)猴病毒40 (SV40)早期啟動子、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)長末端重複(LTR)啟動子、MoMuLV啟動子、禽類白血病病毒啟動子、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)即刻早期啟動子、勞斯肉瘤病毒啟動子(Rous sarcoma virus promoter)，以及人類基因啟動子，諸如(但不限於)肌動蛋白啟動子、肌凝蛋白啟動子、延長因子-1α啟動子、血紅素啟動子及肌酸激酶啟動子。此外，本發明應不限於組成型啟動子之使用。亦涵蓋誘導型啟動子作為本發明之一部分。誘導型啟動子之使用提供分子開關，該分子開關能夠在需要此類表現時打開其可操作地連接之聚核苷酸序列之表現或在不需要表現時關閉表現。誘導型啟動子之實例包括(但不限於)金屬硫蛋白啟動子、糖皮質激素啟動子、孕酮啟動子及四環素啟動子。
啟動子之另一實例為磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子。在實施例中，可能需要截斷的PGK啟動子(例如相較於野生型PGK啟動子序列，具有一或多個(例如1、2、5、10、100、200、300或400個)核苷酸缺失的PGK啟動子)。以下提供例示性PGK啟動子之核苷酸序列。
WT PGK 啟動子

例示性截斷 PGK 啟動子：
PGK100:

PGK200:

PGK300:

PGK400:
載體亦可包括例如促進分泌之信號序列、聚腺苷酸化信號及轉錄終止子(例如來自牛生長激素(BGH)基因)、允許游離型複製及在原核生物中複製之元件(例如SV40起點及ColE1或此項技術中已知之其他元件)及/或允許選擇之元件(例如安比西林(ampicillin)抗性基因及/或吉歐黴素(zeocin)標記物)。
為評估CAR多肽或其一部分之表現，待引入細胞中之表現載體亦可含有可選標記基因或報導基因或兩者以促進自設法經由病毒載體轉染或感染之細胞群中鑑別及選擇表現細胞。在其他態樣中，可選標記物可攜載於單獨的DNA段上且用於共轉染程序。可選標記物與報導基因均可側接適當的調控序列以能夠在宿主細胞中達成表現。有用的可選標記物包括例如耐抗生素基因，諸如neo及其類似物。
報導基因用於鑑別潛在經轉染的細胞及評估調控序列功能。一般而言，報導基因為接受者生物體或組織中不存在或表現且編碼表現藉由一些可易於偵測之特性(例如酶促活性)體現之多肽的基因。在DNA已引入接受者細胞中之後的適合時間分析報導基因之表現。適合的報導基因可以包括編碼螢光素酶、β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯基轉移酶、分泌鹼性磷酸酶之基因，或綠色螢光蛋白基因(例如Ui-Tei等人, 2000 FEBS Letters 479: 79-82)。適合的表現系統為熟知的且可使用已知技術製備或市購。一般而言，顯示報導基因表現量最高的具有最小5'側接區域之構築體鑑別為啟動子。此類啟動子區域可連接至報導基因且用於評估能夠調節啟動子驅動轉錄的藥劑。
在一個實施例中，載體可進一步包含編碼第二CAR之核酸。在一個實施例中，第二CAR包括抗原結合域，該抗原結合域針對急性骨髓性白血病細胞上所表現的標靶，諸如CD123、CD34、CLL-1、葉酸受體β或FLT3；或B細胞上所表現的標靶，例如CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、FLT-3、ROR1、CD79b、CD179b或CD79a。在一個實施例中，載體包含編碼第一CAR之核酸序列，該第一CAR特異性結合第一抗原且包括具有共刺激信號傳導域、但不具有初始信號傳導域之胞內信號傳導域；及編碼第二CAR之核酸，該第二CAR特異性結合不同的第二抗原且包括具有初始信號傳導域、但不具有共刺激信號傳導域之胞內信號傳導域。在一個實施例中，載體包含編碼第一BCMA CAR的核酸，該CAR包括BCMA結合域、跨膜域及共刺激域；編碼第二CAR的核酸，該CAR靶向除BCMA之外的抗原(例如AML細胞上所表現的抗原，例如CD123、CD34、CLL-1、葉酸受體β或FLT3；或B細胞上所表現的抗原，例如CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、FLT-3、ROR1、CD79b、CD179b或CD79a)且包括抗原結合域、跨膜域及初始信號傳導域。在另一個實施例中，載體包含編碼第一BCMA CAR的核酸，該CAR包括BCMA結合域、跨膜域及初始信號傳導域；及編碼第二CAR的核酸，該CAR特異性結合除BCMA之外的抗原(例如AML細胞上所表現的抗原，例如CD123、CD34、CLL-1、葉酸受體β或FLT3；或B細胞上所表現的抗原，例如CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、FLT-3、ROR1、CD79b、CD179b或CD79a)且包括針對抗原的抗原結合域、跨膜域及共刺激信號傳導域。
在一個實施例中，載體包含編碼本文所述之BCMA CAR的核酸及編碼抑制CAR之核酸。在一個實施例中，抑制性CAR包含抗原結合域，該抗原結合域結合正常細胞(例如亦表現BCMA的正常細胞)上、而非癌細胞上所發現的抗原。在一個實施例中，抑制性CAR包含抑制性分子之抗原結合域、跨膜域及胞內域。舉例而言，抑制性CAR之胞內域可為PD1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、CEACAM (例如CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I類、MHC II類、GAL9、腺苷及TGFR (例如TGFR β)之胞內域。
在實施例中，載體可以包含兩個或超過兩個核酸序列，其編碼CAR，例如本文所述之BCMA CAR，及第二CAR，例如抑制性CAR或特異性結合至除BCMA外之抗原(例如在AML細胞上表現之抗原，例如CD123、CLL-1、CD34、FLT3或葉酸受體β；或在B細胞上表現之抗原，例如CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、FLT-3、ROR1、CD79b、CD179b或CD79a)的CAR。在此類實施例中，兩個或超過兩個編碼CAR之核酸序列藉由同框且呈單一多肽鏈形式之單一核分子編碼。在此態樣中，兩個或超過兩個CAR可以例如藉由一或多個肽裂解位點分隔。(例如，胞內蛋白酶之自裂解位點或受質)。肽裂解位點之實例包括以下，其中GSG殘基為視情況存在的：
T2A: (GSG) E G R G S L L T C G D V E E N P G P (SEQ ID NO: 1296)
P2A: (GSG) A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P (SEQ ID NO: 1297)
E2A: (GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P (SEQ ID NO: 1298)
F2A: (GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P (SEQ ID NO: 1299)
向細胞中引入及表現基因之方法為此項技術中已知。在表現載體之情形中，可以藉由此項技術中的任何方法容易地將載體引入宿主細胞中，例如哺乳動物、細菌、酵母或昆蟲細胞。舉例而言，表現載體可藉由物理、化學或生物方式轉移至宿主細胞中。
用於將聚核苷酸引入宿主細胞中之物理方法包括磷酸鈣沈澱、脂質體轉染、粒子轟擊、顯微注射、電穿孔及其類似方法。用於製造包含載體及/或外源性核酸之細胞的方法為此項技術中熟知的。參看例如Sambrook等人, 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 第1卷-第4卷, Cold Spring Harbor Press, NY)。將聚核苷酸引入宿主細胞中之一較佳方法為磷酸鈣轉染。
將所關注的聚核苷酸引入宿主細胞中之生物方法包括使用DNA及RNA載體。病毒載體及尤其逆轉錄病毒載體已成為將基因插入哺乳動物(例如人類)細胞中之最廣泛使用方法。其他病毒載體可來源於慢病毒、痘病毒、I型單純疱疹病毒、腺病毒及腺相關聯病毒及其類似病毒。參見例如美國專利第5,350,674號及第5,585,362號。
將聚核苷酸引入宿主細胞中之化學方式包括膠態分散系統，諸如大分子複合物、奈米膠囊、微球體、珠粒及基於脂質之系統，包括水包油乳液、微胞、混合微胞及脂質體。用作活體外及活體內遞送媒劑之例示性膠態系統為脂質體(例如人工膜囊泡)。可以利用當前技術中靶向遞送核酸之其他方法，諸如用靶向奈米顆粒或其他適合的亞微米尺寸化遞送系統遞送聚核苷酸。
在利用非病毒遞送系統之情況下，例示性遞送媒劑為脂質體。涵蓋使用脂質調配物將核酸引入宿主細胞(活體外、離體或活體內)。在另一態樣中，核酸可與脂質締合。與脂質締合的核酸可囊封於脂質體之水性內部中，散置於脂質體之脂質雙層內，經由與脂質體及寡核苷酸締合之連接分子連接至脂質體，包覆於脂質體中，與脂質體複合，分散於含有脂質之溶液中，與脂質混合，與脂質合併，以懸浮液形式含於脂質中，含有微胞或與微胞複合，或以其他方式與脂質締合。與組合物締合之脂質、脂質/DNA或脂質/表現載體不限於溶液中之任何特定結構。舉例而言，其可以雙層結構、微胞形式存在或具有「塌陷」結構。其亦可簡單地散置於溶液中，從而可形成尺寸或形狀上不均一的聚集物。脂質為可以天然存在的脂肪物質或合成脂質。舉例而言，脂質包括細胞質中天然存在之脂肪滴以及含有長鏈脂族烴之化合物類別及其衍生物，諸如脂肪酸、醇、胺、胺基醇及醛。
適合使用之脂質可獲自商業來源。舉例而言，二肉豆蔻基磷脂醯膽鹼(「DMPC」)可以獲自Sigma, St. Louis, MO；二鯨蠟基磷酸酯(「DCP」)可以獲自K&K Laboratories (Plainview, NY)；膽固醇(「Choi」)可以獲自Calbiochem-Behring；二肉豆蔻基磷脂醯甘油(「DMPG」)及其他脂質可以獲自Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL.)。脂質於氯仿或氯仿/甲醇中的儲備溶液可以在約-20℃儲存。氯仿用作唯一溶劑，因為其比甲醇更容易蒸發。「脂質體」為通用術語，其涵蓋藉由產生經圍封之脂質雙層或聚集物而形成的多種單層及多層脂質媒劑。脂質體之特徵可為具有囊泡結構，其具有磷脂雙層膜及內部水性介質。多層脂質體具有藉由水性介質分隔之多個脂質層。其在磷脂懸浮於過量水溶液中時自發地形成。脂質組分在形成封閉結構之前進行自身重排且在脂質雙層之間捕獲水及溶解之溶解物(Ghosh等人, 1991 Glycobiology 5: 505-10)。然而，亦涵蓋在溶液中具有與正常囊泡結構不同之結構的組合物。舉例而言，脂質可採用微胞結構或僅以脂質分子之非均一聚集物形式存在。亦涵蓋脂染胺-核酸複合物。
不管用於將外源性核酸引入宿主細胞或以其他方式使細胞暴露於本發明之抑制劑的方法，為了確認宿主細胞中重組DNA序列之存在，可進行多種分析。此類分析包括例如熟習此項技術者熟知之「分子生物」分析，諸如南方及北方墨點法、RT-PCR及PCR；「生物化學」分析，諸如偵測特定肽之存在或不存在，例如藉由免疫學方式(ELISA及西方墨點法)或藉由本文所述之分析來鑑別屬於本發明之範疇內的藥劑。
本發明進一步提供包含編碼CAR之核酸分子的載體。在一個態樣中，CAR載體可直接轉導至細胞中，例如T細胞或NK細胞。在一個態樣中，載體為選殖或表現載體，例如包括(但不限於)以下之載體：一或多種質體(例如表現質體、選殖載體、微環、微載體、雙微染色體)、逆轉錄病毒及慢病毒載體構築體。在一個態樣中，載體能夠在哺乳動物T細胞或NK細胞中表現CAR構築體在一個態樣中，哺乳動物T細胞為人類T細胞。在一個態樣中，哺乳動物NK細胞為人類NK細胞。
細胞源
在擴增及基因修飾之前，自個體獲得細胞源，例如免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)。術語「個體」意欲包括可以誘發免疫反應之活生物體(例如哺乳動物)。個體之實例包括人類、狗、貓、小鼠、大鼠及其轉殖基因物種。T細胞可獲自許多來源，包括周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染位點之組織、腹水、肋膜積液、脾組織及腫瘤。
在本發明之某些態樣中，可以使用此項技術中可獲得的任何數目個免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)株。在本發明之某些態樣中，T細胞可獲自使用熟習此項技術者已知之多種技術(諸如Ficoll™分離)自個體收集之血液單元。在一個較佳態樣中，藉由清除術獲得來自個體循環血液的細胞。清除產物典型地含有淋巴球，包括T細胞、單核球、顆粒球、B細胞、其他成核白血球、紅血球及血小板。在一個態樣中，藉由清除術收集之細胞可經洗滌以移除血漿部分且將細胞置於適當緩衝液或培養基中以用於後續處理步驟。在本發明之一個態樣中，用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌細胞。在一個替代態樣中，洗滌溶液缺乏鈣且可以缺乏鎂或可以缺乏多種(若並非全部)二價陽離子。
缺乏鈣的初始活化步驟能引起活化擴增。如一般技術者容易瞭解，洗滌步驟可藉由熟習此項技術者已知之方法實現，諸如根據製造商說明書使用半自動化「順流」離心機(例如Cobe 2991細胞處理器、Baxter CytoMate或Haemonetics細胞保存器5)。洗滌後，可將細胞再懸浮於多種生物相容性緩衝液中，諸如不含Ca不含Mg之PBS、PlasmaLyte A或其他具有或不具有緩衝液之鹽水溶液。或者，可移除清除樣品之非所要組分且將細胞直接再懸浮於培養基中。
認識到本申請案之方法可利用包含5%或小於5% (例如2%)人類AB血清之培養基條件，且採用已知培養基條件及組合物，例如Smith等人,「Ex vivo expansion of human T cells for adoptive immunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacement」Clinical & Translational Immunology (2015) 4, e31; doi:10.1038/cti.2014.31中所述之培養基條件及組合物。
在一個態樣中，藉由溶解紅血球及耗竭單核球而使T細胞與周邊血液淋巴球分離，例如藉由PERCOLLTM梯度進行離心或藉由逆流離心淘析。特定的T細胞亞群(諸如CD3+、CD4+、CD8+、CD45RA+及/或CD45RO+ T細胞)可以藉由正向或負向選擇技術進一步分離。舉例而言，在一個態樣中，T細胞係藉由與抗CD3/抗CD28 (例如3x28)結合之珠粒(諸如DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T)一起培育足以正向選擇所需T細胞的時間段來分離。在一個態樣中，該時間段為約30分鐘。在另一態樣中，該時間段在30分鐘至36小時或更長及其間所有整數值範圍內。在另一態樣中，該時間段為至少1、2、3、4、5或6小時。在另一較佳態樣中，該時間段為10至24小時。在一個態樣中，培育時間段為24小時。在相較於其他細胞類型存在極少T細胞的任何情況下可使用較長培育時間分離T細胞，諸如自腫瘤組織或免疫功能不全個體分離腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)。此外，使用較長培育時間可提高捕捉CD8+ T細胞之效率。因此，僅僅縮短或延長時間便使T細胞結合至CD3/CD28珠粒，且/或藉由增加或降低珠粒與T細胞比率(如本文進一步描述)，可以在培養起始時或在該方法期間之其他時間點據此優先選擇T細胞亞群。另外，藉由增加或降低珠粒或其他表面上之抗CD3及/或抗CD28抗體比率，可以在培養起始時或在其他所要時間點據此優先選擇T細胞亞群。熟習此項技術者將認識到本發明之上下文中亦可使用多輪選擇。在某些態樣中，可能需要執行選擇程序且在活化及擴增過程中使用「未選擇之」細胞。「未選擇之」細胞亦可經受其他多輪選擇。
T細胞群藉由負向選擇來增濃可以使用針對負向選擇之細胞所獨有之表面標記物之抗體組合來實現。一種方法為經由負向磁力免疫黏附或流式細胞術進行的細胞分選及/或選擇，其使用針對負向選擇之細胞上所存在之細胞表面標記物的單株抗體混合物。舉例而言，為了藉由負向選擇增濃CD4+細胞，單株抗體混合物典型地包括針對CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR及CD8之抗體。在一些實施例中，可能需要增濃或正向選擇典型地表現CD4+、CD25+、CD62Lhi、GITR+及FoxP3+之調控T細胞。在某些態樣中，可能需要增濃CD127低的細胞。或者，在某些態樣中，藉由抗C25結合之珠粒或其他類似選擇方法耗盡T調控細胞。
本文所述之方法可以包括例如使用例如負向選擇技術(例如本文所述)選擇特定的免疫效應細胞亞群，例如，作為T調控細胞耗乏群體之T細胞、CD25+耗乏細胞。較佳地，T調控細胞耗乏的群體含有少於30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%之CD25+細胞。
在一個實施例中，使用抗CD25抗體或其片段或結合CD25的配位體IL-2，自群體中移除T調控細胞，例如CD25+ T細胞。在一個實施例中，抗CD25抗體或其片段，或結合CD25的配位體與受質(例如珠粒)結合，或以其他方式塗佈於受質(例如珠粒)上。在一個實施例中，抗CD25抗體或其片段結合至如本文所述之受質。
在一個實施例中，使用來自MiltenyiTM 之CD25耗盡試劑自群體中移除T調控細胞，例如CD25+ T細胞。在一個實施例中，細胞與CD25耗盡藥劑比率為1e7個細胞與20 μL，或1e7個細胞與15 μL，或1e7個細胞與10 μL，或1e7個細胞與5 μL，或1e7個細胞與2.5 μL，或1e7個細胞與1.25 μL。在一個實施例中，例如對於T調控細胞(例如CD25+耗乏)而言，使用超過5億個細胞/毫升。在另一態樣中，使用6、7、8或9億個細胞/毫升之細胞濃度。
在一個實施例中，待耗乏之免疫效應細胞群包括約6×109 個CD25+ T細胞。在其他態樣中，待耗乏之免疫效應細胞群包括約1×109 至1×1010 個CD25+ T細胞及其間任何整數值。在一個實施例中，所得T調控細胞耗乏群體具有2×109 個T調控細胞，例如CD25+細胞，或小於(例如1×109 、5×108 、1×108 、5×107 、1×107 或小於1×107 個CD25+細胞)。
在一個實施例中，使用具有耗乏管組(諸如管162-01)之CliniMAC系統自群體中移除T調控細胞，例如CD25+細胞。在一個實施例中，CliniMAC系統在諸如DEPLETION2.1之耗乏裝置上運行。
不希望被特定理論束縛，在血球分離術之前或在製造表現CAR之細胞產物期間，使個體中免疫細胞之負調控劑含量降低(例如降低非所需免疫細胞(例如TREG 細胞)的數目)可以減少個體復發風險。舉例而言，耗乏TREG 細胞之方法為此項技術中已知。減少TREG 細胞之方法包括(但不限於)環磷醯胺、抗GITR抗體(本文所述之抗GITR抗體)、CD25-耗乏及其組合。
在一些實施例中，製造方法包含在製造表現CAR之細胞之前，減少TREG 細胞數目(例如耗乏)。舉例而言，製造方法包含使樣品(例如血球分離樣品)與抗GITR抗體及/或抗CD25抗體(或其片段，或CD25結合配位體)接觸，以便例如在製造表現CAR之細胞(例如T細胞、NK細胞)產物之前耗乏TREG 細胞。
在實施例中，個體用一或多種減少TREG 細胞之療法預治療，隨後收集細胞用於製造表現CAR之細胞產物，藉此降低表現CAR之細胞療法使個體復發的風險。在一個實施例中，減少TREG 細胞之方法包括(但不限於)向個體投與環磷醯胺、抗GITR抗體、CD25耗乏或其組合中之一或多者。投與環磷醯胺、抗GITR抗體、CD25耗乏或其組合中之一或多者可在表現CAR之細胞產物輸注之前、期間或之後進行。
在一個實施例中，個體用環磷醯胺預治療，隨後收集細胞用於製造表現CAR之細胞產物，藉此降低表現CAR之細胞療法使個體復發的風險。在一個實施例中，個體用抗GITR抗體預治療，隨後收集細胞用於製造表現CAR之細胞產物，藉此降低表現CAR之細胞療法使個體復發的風險。
在一個實施例中，待移除之細胞群既非調控性T細胞或腫瘤細胞，亦非以其他方式負面影響CART細胞擴增及/或功能的細胞，例如表現CD14、CD11b、CD33、CD15或由潛在免疫抑制細胞所表現之其他標記物的細胞。在一個實施例中，設想此類細胞與調控性T細胞及/或腫瘤細胞同時移除，或在該耗乏後移除，或以另一順序移除。
本文所述之方法可包括超過一個選擇步驟，例如超過一個耗乏步驟。藉由負向選擇增濃T細胞群可以例如使用針對負向選擇之細胞所獨有之表面標記物的抗體組合來實現。一種方法為經由負向磁力免疫黏附或流式細胞術進行的細胞分選及/或選擇，其使用針對負向選擇之細胞上所存在之細胞表面標記物的單株抗體混合物。舉例而言，為了藉由負向選擇增濃CD4+細胞，單株抗體混合物可包括針對CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR及CD8之抗體。
本文所述之方法可進一步包括自表現腫瘤抗原(例如不包含CD25之腫瘤抗原(例如CD19、CD30、CD38、CD123、CD20、CD14或CD11b)之群體)移除細胞，藉此提供適於表現CAR (例如本文所述之CAR)的T調控耗乏(例如CD25+耗乏)及腫瘤抗原耗乏之細胞群。在一個實施例中，表現腫瘤抗原之細胞與T調控(例如CD25+)細胞同時移除。舉例而言，抗CD25抗體或其片段及抗腫瘤抗原抗體或其片段可以連接至可用於移除細胞之相同受質(例如珠粒)，或抗CD25抗體或其片段或抗腫瘤抗原抗體或其片段可以連接至單獨珠粒，一種可以用於移除細胞的混合物。在其他實施例中，T調控細胞(例如CD25+細胞)的移除及腫瘤抗原表現細胞的移除依序進行，且可例如以任一次序發生。
亦提供如下方法，其包括自群體中移除表現檢查點抑制劑(例如本文所述之檢查點抑制劑)的細胞，例如PD1+細胞、LAG3+細胞及TIM3+細胞中之一或多者，藉此提供T調控耗乏(例如CD25+耗乏)細胞及檢查點抑制劑耗乏細胞(例如PD1+、LAG3+及/或TIM3+耗乏細胞)群體。例示性檢查點抑制劑包括PD1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、CEACAM (例如CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I類、MHC II類、GAL9、腺苷及TGFR β。在實施例中，檢查點抑制劑為PD1或PD-L1。在一個實施例中，表現檢查點抑制劑之細胞與T調控(例如CD25+)細胞同時移除。舉例而言，抗CD25抗體或其片段及抗檢查點抑制劑抗體或其片段可以連接至可用於移除細胞之相同珠粒，或抗CD25抗體或其片段及抗檢查點抑制劑抗體或其片段可以連接至單獨珠粒，一種可用於移除細胞之混合物。在其他實施例中，T調控細胞(例如CD25+細胞)之移除及表現檢查點抑制劑之細胞的移除依序進行，且可例如以任一次序進行。
在一個實施例中，可以選擇表現IFN-γ、TNFα、IL-17A、IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、IL-10、IL-13、顆粒酶B及穿孔蛋白或其他適當分子(例如其他細胞介素)中之一或多者的T細胞群。可以確定篩選細胞表現用的方法，例如PCT公開案第WO 2013/126712號所述的方法。
為了藉由正向或負向選擇分離出所要細胞群，可以改變細胞濃度及表面(例如顆粒，諸如珠粒)。在某些態樣中，可能需要顯著減小珠粒與細胞混合在一起的體積(例如增加細胞濃度)以確保細胞與珠粒最大接觸。舉例而言，在一個態樣中，使用約20億個細胞/毫升之濃度。在一個態樣中，使用10億個細胞/毫升之濃度。在另一態樣中，使用大於1億個細胞/毫升。在另一態樣中，使用10、15、20、25、30、35、40、45或50百萬個細胞/毫升之細胞濃度。在又一個態樣中，使用75、80、85、90、95或100百萬個細胞/毫升之細胞濃度。在其他態樣中，可以使用125或150百萬個細胞/毫升之濃度。使用高濃度可以引起細胞產量、細胞活化及細胞擴增增加。另外，使用高細胞濃度能夠更高效地捕捉可能弱表現所關注靶抗原的細胞，諸如CD28陰性T細胞，或自存在許多腫瘤細胞的樣品(例如白血病血液、腫瘤組織等)中捕捉。此類細胞群可以具有治療價值且需要獲得。舉例而言，使用高細胞濃度允許更有效選擇通常具有較弱CD28表現之CD8+ T細胞。
在一個相關態樣中，可能需要使用較低濃度之細胞。藉由顯著稀釋T細胞與表面(例如顆粒，諸如珠粒)之混合物，使顆粒與細胞之間的相互作用降至最低。由此選擇出高量表現結合至顆粒之所需抗原的細胞。舉例而言，相較於稀釋濃度下的CD8+ T細胞，CD4+ T細胞表現CD28的量高且更有效地被捕捉。在一個態樣中，所用細胞濃度為5×10e6/ml。在其他態樣中，所用濃度可為約1×105 /ml至1×106 /ml，及其間任何整數值。
在其他態樣中，細胞可在2-10℃或室溫下在旋轉器上以不同速度培育不同時間長度。
用於刺激之細胞亦可在洗滌步驟後冷凍。不希望受理論束縛，冷凍及隨後解凍步驟係藉由移除細胞群中的顆粒球及一定程度上移除單核球來提供更均勻產物。在移除血漿及血小板之洗滌步驟後，可將細胞懸浮於冷凍溶液中。儘管許多冷凍溶液及參數為此項技術中已知且適用於本文，但一種方法涉及使用含有20% DMSO及8%人類血清白蛋白之PBS，或培養基，該培養基含有10%聚葡萄糖40及5%右旋糖、20%人類血清白蛋白及7.5% DMSO，或31.25% Plasmalyte-A、31.25%右旋糖5%、0.45% NaCl、10%聚葡萄糖40及5%右旋糖、20%人類血清白蛋白及7.5% DMSO，或含有例如Hespan及PlasmaLyte A之其他適合細胞冷凍培養基，接著使細胞以每分鐘1°之速率冷凍至-80℃且以氣相儲存於液氮儲槽中。可以使用可控冷凍以及在-20℃下或在液氮中不可控立即冷凍之其他方法。
在某些態樣中，如本文所述將冷凍保存之細胞解凍及洗滌，且在室溫下靜置一小時，隨後使用本發明之方法活化。
本發明之上下文中亦涵蓋在可能需要如本文所述之經擴增細胞之前的一段時間自個體收集血液樣品或清除產物。因而，可以在需要的任何時間點收集待擴增的細胞源，且將所需細胞(諸如免疫效應細胞，例如T細胞或NK細胞)分離及冷凍以便隨後用於細胞療法，例如T細胞療法，用於任何數目種受益於細胞療法(例如T細胞療法，諸如本文所述之彼等)疾病或病狀。在一個態樣中，血液樣品或清除術取自一般健康個體。在某些態樣中，血液樣品或清除物取自處於產生疾病之風險中、但尚未產生疾病的一般健康個體，且將所關注的細胞分離及冷凍以供日後使用。在某些態樣中，免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)可以在日後的時間擴增、冷凍及使用。在某些態樣中，在診斷出如本文所述之特定疾病後不久、但在任何治療之前自患者收集樣品。在另一態樣中，自個體的血液樣品或清除物中分離細胞，隨後進行多種相關治療模式，包括(但不限於)用以下藥劑治療：諸如那他珠單抗(natalizumab)、艾法珠單抗(efalizumab)、抗病毒劑、化學療法、輻射、免疫抑制劑(諸如環孢素(cyclosporin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、甲胺喋呤(methotrexate)、黴酚酸酯(mycophenolate)及FK506)、抗體或其他免疫去除劑(諸如CAMPATH、抗CD3抗體、賽特杉(cytoxan)、氟達拉濱(fludarabine)、環孢素(cyclosporin)、FK506、雷帕黴素(rapamycin)、黴酚酸(mycophenolic acid)、類固醇、FR901228)及照射。
在本發明之另一態樣中，在給個體保留功能T細胞之治療後，直接自患者獲得T細胞。就此而言，已觀測到在某些癌症治療之後，特定言之，使用破壞免疫系統之藥物治療之後，在患者自治療正常恢復的時段期間，在治療之後不久，所得T細胞的品質可為最佳的或其離體擴增之能力得到改良。同樣，在使用本文所述之方法離體操縱之後，此等細胞可處於較佳狀態，從而增強移植及活體內擴增。因此，本發明之上下文內涵蓋在此恢復階段期間收集血細胞(包括T細胞)、樹突狀細胞或造血譜系之其他細胞。此外，在某些態樣中，移動(例如用GM-CSF移動)及調理方案可用於建立個體內之條件，其中特定細胞類型之再增殖、再循環、再生及/或擴增為有利的，尤其在治療之後的限定時間窗期間。說明性細胞類型包括T細胞、B細胞、樹突狀細胞及免疫系統之其他細胞。
在一個實施例中，表現CAR分子(例如本文所述之CAR分子)的免疫效應細胞獲自已接受mTOR抑制劑之免疫增強之低劑量的個體。在一個實施例中，足夠的時間之後，或mTOR抑制劑之免疫增強之低劑量足夠給與之後，收集經工程改造以表現CAR的免疫效應細胞(例如T細胞)群，使得個體中或自個體收集之PD1陰性免疫效應細胞(例如T細胞)含量，或PD1陰性免疫效應細胞(例如T細胞)/PD1陽性免疫效應細胞(例如T細胞)比率已至少短暫地增加。
在其他實施例中，已工程改造或將經工程改造以表現CAR之免疫效應細胞(例如T細胞)群可以藉由與一定量之增加PD1陰性免疫效應細胞(例如T細胞)數目或增加PD1陰性免疫效應細胞(例如T細胞)/PD1陽性免疫效應細胞(例如T細胞)比率的mTOR抑制劑接觸而加以離體處理。
在一個實施例中，T細胞群缺乏甘油二酯激酶(DGK)。缺乏DGK的細胞包括不表現DGK RNA或蛋白質或DGK活性降低或抑制之細胞。缺乏DGK的細胞可以藉由基因方法產生，例如投與RNA干擾劑(例如siRNA、shRNA、miRNA)以減少或防止DGK表現。或者，缺乏DGK的細胞可藉由用本文所述之DGK抑制劑處理來產生。
在一個實施例中，T細胞群缺乏Ikaros。缺乏Ikaros的細胞包括不表現Ikaros RNA或蛋白質或Ikaros活性降低或抑制之細胞，缺乏Ikaros的細胞可藉由基因方法產生，例如投與RNA干擾劑(例如siRNA、shRNA、miRNA)以減少或防止Ikaros表現。或者，缺乏Ikaros的細胞可藉由用Ikaros抑制劑(例如來那度胺(lenalidomide))處理產生。
在實施例中，T細胞群缺乏DGK且缺乏Ikaros，例如不表現DGK及Ikaros，或DGK及Ikaros活性降低或抑制。此類缺乏DGK及Ikaros的細胞可藉由本文所述之任何方法產生。
在實施例中，NK細胞獲自個體。在另一實施例中，NK細胞為NK細胞株，例如NK-92細胞株(Conkwest)。
CAR 細胞 ( 包括同種異體 CAR 細胞 ) 的修飾
在本文所述之實施例中，免疫效應細胞可為同種異體免疫效應細胞，例如T細胞或NK細胞。舉例而言，該細胞可為同種異體T細胞，例如缺乏功能T細胞受體(TCR)及/或人類白血球抗原(HLA)(例如HLA I類及/或HLA II類，及/或β-2微球蛋白(β2 m))表現的同種異體T細胞。同種異體CAR組合物及其方法已描述於例如WO 2016/014565第227-237頁中，該文獻以引用之方式全文併入本文中。
在一些實施例中，使用例如本文所述之方法(例如siRNA、shRNA、叢集之規則間隔短回文重複(CRISPR)轉錄活化因子樣效應子核酸酶(TALEN)，或鋅指核酸內切酶(ZFN))修飾細胞(例如T細胞或NK細胞)，以減少TCR及/或HLA及/或β2 m及/或本文所述之抑制分子(例如PD1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、CEACAM (例如CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I類、MHC II類、GAL9、腺苷及TGFR β)表現。
在一些實施例中，細胞(例如T細胞或NK細胞)經工程改造以表現端粒酶次單元，例如端粒酶催化次單元，例如TERT，例如hTERT。在一個實施例中，此類修飾使細胞在患者中的持久性改良。
T 細胞 之活化及擴增
T細胞通常可以如以下文獻中所述之方法活化及擴增：例如美國專利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；及美國專利申請公開案第20060121005號。
一般而言，本發明之T細胞可以藉由與表面接觸來擴增，該表面連接有刺激CD3/TCR複合物相關信號的藥劑及刺激T細胞表面上之共刺激分子的配位體。特定言之，T細胞群可以如本文所述加以刺激：諸如藉由與抗CD3抗體或其抗原結合片段或固著於表面上之抗CD2抗體接觸，或藉由與結合鈣離子載體之蛋白激酶C活化劑(例如苔蘚蟲素)接觸。為了共刺激T細胞表面上之輔助分子，使用結合輔助分子之配位體。舉例而言，T細胞群可與抗CD3抗體及抗CD28抗體在適於刺激T細胞增殖之條件下接觸。為了刺激CD4+ T細胞或CD8+ T細胞增殖，可使用抗CD3抗體及抗CD28抗體。可以使用之抗CD28抗體之實例包括9.3、B-T3、XR-CD28 (Diaclone, Besançon, France)，且可以使用此項技術中通常已知的其他方法(Berg等人, Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen等人, J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland等人, J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999)。
在某些態樣中，T細胞之初始刺激信號及共刺激信號可藉由不同方案提供。舉例而言，提供各信號之藥劑可存在於溶液中或偶聯至表面。當偶聯至表面時，可以使藥劑偶聯至相同表面(亦即，呈「順式」形式)或單獨表面(亦即，呈「反式」形式)。或者，一種藥劑可偶聯至表面且溶液中的另一藥劑。在一個態樣中，提供共刺激信號之藥劑結合至細胞表面且提供初始活化信號之藥劑存在於溶液中或偶聯至表面。在某些態樣中，兩種藥劑均可存在於溶液中。在一個態樣中，該等藥劑可以呈可溶形式，且隨後與表面(諸如表現Fc受體之細胞)或抗體或將與該等藥劑結合之其他結合劑交聯。就此而言，關於人工抗原呈遞細胞(aAPC)，參見例如美國專利申請公開案第20040101519號及第20060034810號，涵蓋該等細胞在本發明中用於活化及擴增T細胞。
在一個態樣中，兩種藥劑固著於珠粒上，於相同珠粒上，亦即「順式」；或在單獨珠粒上，亦即「反式」。舉例而言，提供初始活化信號之藥劑為抗CD3抗體或其抗原結合片段且提供共刺激信號之藥劑為抗CD28抗體或其抗原結合片段；且兩種藥劑均以等效分子量共固著於同一珠粒上。在一個態樣中，結合至珠粒之各種抗體依1:1比率用於CD4+ T細胞擴增及T細胞生長。在本發明之某些態樣中，使用一定比率之結合至珠粒之抗CD3:CD28抗體，以便觀測到T細胞擴增相較於使用1:1比率所觀測到的擴增增加。在一個特定態樣中，觀測到相較於使用1:1比率所觀測之擴增，觀測到約1至約3倍增加。在一個態樣中，結合至珠粒之CD3:CD28抗體的比率在100:1到1:100及其間的所有整數值範圍內。在本發明之一個態樣中，結合至顆粒的抗CD28抗體比抗CD3抗體多，亦即，CD3:CD28比率小於一。在本發明之某些態樣中，結合至珠粒之抗CD28抗體與抗CD3抗體之比率大於2:1。在一個特定態樣中，使用1:100之結合至珠粒的抗體CD3:CD28比率。在一個態樣中，使用1:75之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。在另一態樣中，使用1:50之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。在一個態樣中，使用1:30之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。在一個較佳態樣中，使用1:10之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。在一態樣中，使用1:3之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。在又一個態樣中，使用3:1之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。
可使用1:500至500:1及其間之任何整數值的顆粒與細胞比率刺激T細胞或其他靶細胞。如一般技術者可容易瞭解，顆粒與細胞比率可視相對於靶細胞之粒度而定。舉例而言，小尺寸珠粒僅可結合少數細胞，而較大珠粒可結合許多細胞。在某些態樣中，細胞與顆粒比率在1:100至100:1及其間之任何整數值範圍內且在其他態樣中，包含1:9至9:1及其間之任何整數值的比率亦可用於刺激T細胞。能夠刺激T細胞之抗CD3及抗CD28偶聯顆粒與T細胞比率可以如上所指出加以改變，然而，某些較佳值包括1:100、1:50、1:40、1:30、1:20、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1及15:1，一種較佳比率為每個T細胞至少1:1顆粒。在一個態樣中，使用1:1或小於1:1的顆粒與細胞比率。在一個特定態樣中，較佳的顆粒:細胞比率為1:5。在其他態樣中，顆粒與細胞比率可視刺激天數而變化。舉例而言，在一個態樣中，顆粒與細胞比率在第一天為1:1至10:1，且其後每天或每隔一天向細胞中添加額外顆粒長達10天，最終比率為1:1至1:10 (基於添加當天之細胞計數)。在一個特定態樣中，刺激第一天時的顆粒與細胞比率為1:1且在刺激第三天及第五天調整至1:5。在一個態樣中，每天或每隔一天添加顆粒直至第一天的最終比率為1:5，且在刺激第三天及第五天時為1:10。在一個態樣中，顆粒與細胞比率在刺激第一天時為2:1且在刺激第三天及第五天時調整至1:10。在一個態樣中，每天或每隔一天添加顆粒直至第一天的最終比率為1:1，且刺激第三天及第五天時為1:10。熟習此項技術者將瞭解多種其他比率可適用於本發明。詳言之，比率將視粒度以及細胞尺寸及類型而變化。在一態樣中，第一天使用之最典型比率為約1:1、2:1及3:1。
在本發明之其他態樣中，細胞(諸如T細胞)與藥劑塗佈之珠粒組合，隨後分離珠粒與細胞，接著培養細胞。在替代態樣中，在培養之前，藥劑塗佈之珠粒與細胞不分離，而是一起培養。在另一態樣中，珠粒及細胞首先藉由施加力(諸如磁力)集中，從而使細胞表面標記物之連接增加，藉此誘導細胞刺激。
舉例而言，細胞表面蛋白可藉由使連接有抗CD3及抗CD28之順磁性珠粒(3×28個珠粒)與T細胞接觸而連接。在一個態樣中，在例如PBS之緩衝劑(不具有二價陽離子，諸如鈣及鎂)中合併細胞(例如104 至109 個T細胞)與珠粒(例如1:1比率之DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T順磁性珠粒)。此外，一般技術者可容易瞭解可使用任何細胞濃度。舉例而言，樣品中的靶細胞可能極少且僅占樣品之0.01%，或整個樣品(亦即，100%)可以包含所關注的靶細胞。因此，任何細胞數目均在本發明之上下文中。在某些態樣中，可能需要顯著減小顆粒與細胞混合在一起的體積(亦即，增加細胞濃度)，確保細胞與顆粒的最大接觸。舉例而言，在一個態樣中，使用約100億個細胞/毫升、90億個細胞/毫升、80億個細胞/毫升、70億個細胞/毫升、60億個細胞/毫升、50億個細胞/毫升或20億個細胞/毫升之濃度。在一個態樣中，使用大於1億個細胞/毫升。在另一態樣中，使用10、15、20、25、30、35、40、45或50百萬個細胞/毫升之細胞濃度。在又一個態樣中，使用75、80、85、90、95或100百萬個細胞/毫升之細胞濃度。在其他態樣中，可以使用125或150百萬個細胞/毫升之濃度。使用高濃度可以引起細胞產量、細胞活化及細胞擴增增加。此外，使用高細胞濃度允許更有效捕捉可能微弱表現所關注之靶抗原的細胞，諸如CD28陰性T細胞。此類細胞群可具有治療價值且在某些態樣中需要獲得。舉例而言，使用高細胞濃度允許更有效選擇通常具有較弱CD28表現之CD8+ T細胞。
在一個實施例中，經編碼CAR (例如本文所述之CAR)之核酸轉導的細胞藉由例如本文所述之方法擴增。在一個實施例中，細胞在數小時(例如約2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、18、21小時)至約14天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天)時段的培養中擴增。在一個實施例中，細胞擴增4至9天之時段。在一個實施例中，細胞擴增8天或小於8天之時段，例如7、6或5天。在一個實施例中，細胞(例如本文所述之BCMA CAR細胞)在5天培養中擴增，且所得細胞的強力比在相同培養條件下培養9天而擴增的相同細胞更大。效力可藉由例如各種T細胞功能(例如增殖、靶細胞殺死、細胞介素產生、活化、遷移或其組合)來定義。在一個實施例中，擴增5天的細胞(例如BCMA CAR細胞)在抗原刺激後的細胞倍增數為在相同培養條件下培養9天而擴增之相同細胞增加至少一倍、兩倍、三倍或四倍。在一個實施例中，細胞(例如表現本文所述之BCMA CAR的細胞)在培養5天中擴增，且所得細胞展現的促炎性細胞介素產生(例如IFN-γ及/或GM-CSF含量)高於在相同培養條件下培養9天而擴增的相同細胞。在一個實施例中，擴增5天的細胞(例如本文所述之BCMA CAR細胞)顯示的促炎性細胞介素產生(例如IFN-γ及/或GM-CSF含量)(pg/ml)相較於在相同培養條件下培養9天而擴增之相同細胞增加至少一倍、兩倍、三倍、四倍、五倍、十倍或超過十倍。
在本發明之一個態樣中，混合物可培養若干小時(約3小時)至約14天或其間的任何小時整數值。在一個態樣中，混合物可培養21天。在本發明之一個態樣中，珠粒與T細胞一起培養約八天。在一個態樣中，珠粒與T細胞一起培養2-3天。亦可能需要若干輪刺激，以使得T細胞培養時間可為60天或超過60天。適於培養T細胞的條件包括適當培養基(例如最低必需培養基或RPMI培養基1640或X-Vivo 15 (Lonza))，該培養基可以含有增殖及存活力所需的因子，包括血清(例如胎牛血清或人類血清)、介白素-2 (IL-2)、胰島素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ及TNF-α，或熟習此項技術者已知之用於細胞生長的任何其他添加劑。細胞生長用之其他添加劑包括(但不限於)界面活性劑、人血漿蛋白粉(plasmanate)，及還原劑，諸如N-乙醯基-半胱胺酸及2-巰基乙醇。培養基可以包括RPMI 1640、AIM-V、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-Vivo 15及X-Vivo 20、Optimizer，其中添加有胺基酸、丙酮酸鈉及維生素，無血清或補充有適量血清(或血漿)或一組限定的激素，及/或足以供T細胞生長及擴增之量的細胞介素。抗生素(例如青黴素及鏈黴素)僅包括於實驗培養物中，而不存在於待輸注至個體之細胞培養物中。靶細胞在支持生長所需的條件下維持，例如適當溫度(例如37℃)及氛圍(例如空氣加上5% CO2 )。
在一個實施例中，細胞係在包括一或多種介白素的適當培養基(例如本文所述之培養基)中擴增，在14天擴增時段期間，使細胞增加至少200倍(例如200倍、250倍、300倍、350倍)，例如如藉由本文所述之方法(諸如流式細胞術)所量測。在一個實施例中，細胞在IL-15及/或IL-7 (例如IL-15及IL-7)存在下擴增。
在實施例中，本文所述之方法(例如表現CAR之細胞製造方法)包含自細胞群中移除T調控細胞(例如CD25+ T細胞)，例如使用抗CD25抗體或其片段，或CD25結合配位體IL-2。本文描述自細胞群移除T調控細胞(例如CD25+ T細胞)的方法。在實施例中，方法(例如製造方法)進一步包含使細胞群(例如其中T調控細胞(諸如CD25+ T細胞)已耗乏的細胞群；或先前已接觸抗CD25抗體、其片段或CD25結合配位體的細胞群)與IL-15及/或IL-7接觸。舉例而言，細胞群(例如先前已接觸抗CD25抗體、其片段，或CD25結合配位體)在IL-15及/或IL-7存在下擴增。
在一些實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含介白素-15 (IL-15)多肽、介白素-15受體α (IL-15Ra)多肽或IL-15多肽與IL-15Ra多肽(例如hetIL-15)組合的組合物在製造表現CAR之細胞期間接觸，例如離體接觸。在實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含IL-15多肽之組合物在製造表現CAR之細胞期間接觸，例如離體接觸。在實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含IL-15多肽與IL-15 Ra多肽組合的組合物在製造表現CAR之細胞期間接觸，例如離體接觸。在實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含hetIL-15之組合物在製造表現CAR之細胞期間接觸，例如離體接觸。
在一個實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含hetIL-15之組合物在離體擴增期間接觸。在實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含IL-15多肽之組合物在離體擴增期間接觸。在實施例中，使本文所述之表現CAR之細胞與包含IL-15多肽及IL-15Ra多肽之組合物在離體擴增期間接觸。在一個實施例中，接觸引起淋巴球亞群(例如CD8+ T細胞)存活及增殖。
已暴露於不同刺激時間之T細胞可以展現不同特徵。舉例而言，典型血液或經清除之外周血單核細胞產物中的輔助T細胞群(TH，CD4+)大於細胞毒性或抑制T細胞群。藉由刺激CD3及CD28受體而離體擴增T細胞產生的T細胞群在約第8天至第9天之前主要由TH細胞組成，而在約第8天至第9天之後，T細胞群包含愈來愈大之TC細胞群。因此，視治療目的而定，向個體輸注主要包含TH細胞之T細胞群可能有利。類似地，若已分離TC細胞之抗原特異性亞群，則更大程度地擴增此亞群可為有益的。
此外，除CD4及CD8標記物之外，其他表型標記物顯著變化，但大部分在細胞擴增過程期間可再現。因此，此類再現性能夠根據特定目的定製活化T細胞產物。
一旦構築BCMA CAR，則可利用各種分析來評估分子在適當活體外及動物模型中的活性，諸如(但不限於)抗原刺激之後擴增T細胞、在缺乏再刺激的情況下維持T細胞擴增的能力，及抗癌活性。評估BCMA CAR作用的分析在下文進一步詳細描述。
對初始T細胞中之CAR表現進行的西方墨點分析可以用於偵測單體及二聚體之存在。參見例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。簡言之，表現CAR之T細胞(CD4+與CD8+ T細胞之1:1混合物)在活體外擴增超過10天，隨後在還原條件下進行溶胞及SDS-PAGE。藉由西方墨點法，使用針對TCR-ζ鏈之抗體偵測含有全長TCR-ζ細胞質域及內源TCR-ζ鏈之CAR。在非還原條件下使用相同T細胞亞群進行SDS-PAGE分析以允許評估共價二聚體形成。
可藉由流式細胞測量術量測CAR+ T細胞在抗原刺激後之活體外擴增。舉例而言，CD4+ 與CD8+ T細胞之混合物用αCD3/αCD28 aAPC刺激，隨後在待分析之啟動子控制下用表現GFP之慢病毒載體轉導。例示性啟動子包括CMV IE基因、EF-1α、泛素C或磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子。在培養第6天藉由流式細胞術評估CD4+ 及/或CD8+ T細胞亞群之GFP螢光。參見例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。或者，在第0天，用αCD3/αCD28塗佈之磁性珠粒刺激CD4+ 與CD8+ T細胞之混合物，且在第1天使用表現CAR之雙順反子慢病毒載體連同使用2A核糖體跳躍序列的eGFP一起經CAR轉導。培養物在洗滌之後，用表現BCMA的細胞(諸如多發性骨髓瘤細胞株或K562-BCMA)再刺激。每隔一天向培養物中添加100 IU/ml外源IL-2。藉由流式細胞測量術，使用基於珠粒之計數對GFP+ T細胞計數。參見例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。
亦可量測在缺乏再刺激情況下的持續CAR+ T細胞擴增。參見例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。簡言之，在第0天用經αCD3/αCD28塗佈之磁性珠粒刺激且在第1天經指定CAR轉導之後，在培養第8天使用Coulter Multisizer III顆粒計數器、Nexcelom Cellometer Vision或Millipore Scepter量測平均T細胞體積(fl)。
動物模型亦可用於量測CART活性。舉例而言，可使用利用人類BCMA特異性CAR+ T細胞治療免疫缺乏小鼠之原發性人類多發性骨髓瘤的異種移植模型。參見例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。簡言之，在建立MM之後，將小鼠隨機分配至處理組。可將不同數目個BCMA CART細胞注射至負載MM之免疫缺乏小鼠。以每週一次之時間間隔，評估動物之疾病進展及腫瘤負荷。使用對數秩檢驗(log-rank test)比較各組之存活率曲線。此外，亦可分析免疫缺乏小鼠在T細胞注射後4週的絕對外周血液CD4+ 及CD8+ T細胞數。向小鼠注射多發性骨髓瘤細胞且3週後注射T細胞，該等T細胞經工程改造以表現BCMA CAR，例如編碼連接至eGFP之CAR的雙順反子慢病毒載體。注射之前，藉由與經模擬物轉導的細胞混合，將T細胞相對於45-50%輸入GFP+ T細胞歸一化，且藉由流式細胞術證實。每隔一週評估動物之白血病。利用對數秩檢驗比較CAR+ T細胞組之存活率曲線。
細胞增殖及細胞介素產生之評估先前已描述於例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。簡言之，評估CAR介導之增殖係在微量滴定盤中藉由將經洗滌的T細胞與表現BCMA之K562細胞或表現BCMA之其他骨髓瘤細胞混合來進行，該等細胞在使用之前用γ輻射照射。將抗CD3 (純系OKT3)及抗CD28 (純系9.3)單株抗體添加至含KT32-BBL細胞之培養物中充當陽性對照用於刺激T細胞增殖，因為此等信號支持長期CD8+ T細胞離體擴增。使用CountBright™螢光珠粒(Invitrogen, Carlsbad, CA)及流式細胞術，如製造商所述對在培養物中的T細胞計數。使用經工程改造而具有eGFP-2A連接之CAR表現慢病毒載體的T細胞，根據GFP表現來鑑別CAR+ T細胞。對於不表現GFP之CAR+ T細胞，使用生物素標記之重組BCMA蛋白質及二級抗生素蛋白-PE結合物偵測CAR+ T細胞。T細胞上之CD4+及CD8+表現亦同時使用特異性單株抗體(BD Biosciences)偵測。使用人類TH1/TH2細胞介素細胞學珠粒陣列套組(BD Biosciences, San Diego, CA)，根據製造商說明書，對再刺激24小時後收集的上清液進行細胞介素量測。使用FACScalibur流式細胞儀評估螢光，且根據製造商說明書分析資料。
可藉由標準51Cr釋放分析來評估細胞毒性。參見例如Milone等人, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)。簡言之，靶細胞(例如表現BCMA的K562株系及初始多發性骨髓瘤細胞)在37℃、在頻繁攪拌下用51Cr (NaCrO4，New England Nuclear, Boston, MA)負載2小時，用完全RPMI洗滌兩次且接種於微量滴定盤中。效應T細胞與靶細胞以不同的效應細胞:靶細胞比率(E:T)、在完全RPMI中、在孔中混合。亦製備僅含有培養基(自發釋放，SR)或1% triton-X 100清潔劑溶液(總釋放，TR)之額外孔。在37℃下培育4小時後，自各孔收集上清液。隨後使用γ粒子計數器(Packard Instrument Co., Waltham, MA)量測釋放之51Cr。各條件至少三重複進行，且使用下式計算溶解百分比：溶解% = (ER−SR)/(TR-SR)，其中ER表示各實驗條件下釋放之平均51Cr。或者，亦可使用Bright-Glo™螢光素酶分析來評估細胞毒性。
成像技術可用於評估攜有腫瘤之動物模型中之CAR之特定輸送及增殖。此類分析已描述於例如Barrett等人, Human Gene Therapy 22:1575-1586 (2011)中。簡言之，向NOD/SCID/γc-/- (NSG)小鼠或其他免疫缺乏小鼠靜脈內注射多發性骨髓瘤細胞，接著7天後，在用CAR構築體電穿孔之後4小時注射BCMA CART細胞。T細胞用慢病毒構築體穩定轉染以表現螢火蟲螢光素酶且對小鼠中的生物發光進行成像。或者，多發性骨髓瘤異種移植模型中單次注射CAR+ T細胞之治療功效及特異性可如下量測：向NSG小鼠注射經轉導以穩定表現螢火蟲螢光素酶之多發性骨髓瘤細胞，接著數天後單次尾靜脈注射經BCMA CAR構築體電穿孔之T細胞。在注射後的各時間點使動物成像。舉例而言，可產生代表性小鼠中之螢火蟲螢光素酶陽性腫瘤在第5天(治療前2天)及第8天(CAR+ PBL後24小時)的光子密度熱圖。
或者，或與本文所揭示之方法組合，揭示用於以下中之一或多者的方法及組合物：偵測及/或定量表現CAR之細胞(例如活體外或活體內(例如臨床監測))；免疫細胞擴增及/或活化；及/或CAR特異性選擇，包括使用CAR配位體。在一個例示性實施例中，CAR配位體為一種抗體，其結合至CAR分子，例如結合至CAR之胞外抗原結合域(例如抗體結合至抗原結合域，例如抗個體基因型抗體；或抗體結合至胞外結合域之恆定區)。在其他實施例中，CAR配位體為CAR抗原分子(例如如本文所述之CAR抗原分子)。
在一個態樣中，揭示一種用於偵測及/或定量表現CAR之細胞的方法。舉例而言，CAR配位體可以用於活體外或活體內偵測及/或定量表現CAR之細胞(例如臨床監測患者中的表現CAR之細胞，或給與患者)。該方法包括：
提供CAR配位體(視情況經標記之CAR配位體，例如包括標籤、珠粒、放射性或螢光標記之CAR配位體)；
獲取CAR表現細胞(例如獲取含有CAR表現細胞之樣品，諸如製造樣品或臨床樣品)；
使表現CAR之細胞與CAR配位體在發生結合的條件下接觸，藉此偵測所存在之表現CAR之細胞的含量(例如數量)。可使用諸如FACS、ELISA及其類似者之標準技術，偵測CAR表現細胞與CAR配位體之結合。
在另一態樣中，揭示一種擴增及/或活化細胞(例如免疫效應細胞)的方法。該方法包括：
提供表現CAR之細胞(例如，表現第一CAR之細胞或短暫表現CAR之細胞)；
使該表現CAR之細胞與CAR配位體(例如，如本文所述之CAR配位體)在發生免疫細胞擴增及/或增殖之條件下接觸，藉此產生經活化及/或擴增之細胞群。
在某些實施例中，CAR配位體存在(例如固著或連接至受質上，例如非天然存在之受質)。在一些實施例中，受質為非細胞受質。非細胞受質可為選自例如盤(例如微量滴定盤)、膜(例如硝化纖維素膜)、基質、晶片或珠粒的固體載體。在實施例中，CAR配位體存在於受質中(例如受質表面上)。CAR配位體可以固著、連接或共價或非共價締合(例如交聯)至受質。在一個實施例中，CAR配位體連接(例如共價連接)至珠粒。在前述實施例中，免疫細胞群可在活體外或離體擴增。該方法可以進一步包括在CAR分子配位體存在下培養免疫細胞群，例如使用本文所述之任一方法培養。
在其他實施例中，擴增及/或活化細胞的方法進一步包含添加第二刺激分子，例如CD28。舉例而言，CAR配位體及第二刺激分子可以固著至受質，例如一或多個珠粒，藉此使得細胞擴增及/或活化增加。
在又一態樣中，提供一種選擇或增濃表現CAR之細胞的方法。該方法包括使CAR表現細胞與如本文所述之CAR配位體接觸；以及基於CAR配位體之結合選擇細胞。
在又其他實施例中，提供一種耗乏、減少及/或殺死表現CAR之細胞之方法。該方法包括使CAR表現細胞與如本文所述之CAR配位體接觸；以及基於CAR配位體之結合靶向細胞，藉此減少CAR表現細胞之數目及/或殺死CAR表現細胞。在一個實施例中，CAR配位體偶聯至毒性劑(例如毒素或細胞去除藥物)。在另一個實施例中，抗個體基因型抗體可引起效應細胞活性，例如ADCC或ADC活性。
可用於本文所揭示之方法之例示性抗CAR抗體描述於例如WO 2014/190273及Jena等人,「Chimeric Antigen Receptor (CAR)-Specific Monoclonal Antibody to Detect CD19-Specific T cells in Clinical Trials」, PLOS 2013年3月 8:3 e57838中，其內容以引用的方式併入。在一個實施例中，抗個體基因型抗體分子識別抗CD19抗體分子，例如抗CD19 scFv。舉例而言，抗個體基因型抗體分子可以與Jena等人, PLOS 2013年3月 8:3 e57838中所述的CD19特異性CAR mAb純系編號136.20.1競爭結合；可以具有相同CDR (例如VH CDR1、VH CDR2、CH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3中之一或多者，例如全部，使用Kabat定義、Chothia定義或Kabat定義與Chothia定義之組合)作為CD19特異性CAR mAb純系編號136.20.1；可以具有一或多個(例如2個)可變區作為CD19特異性CAR mAb純系編號136.20.1，或可以包含CD19特異性CAR mAb純系編號136.20.1。在一些實施例中，根據Jena等人中所述之方法製得抗個體基因型抗體。在另一個實施例中，抗個體基因型抗體分子為WO 2014/190273中所述之抗個體基因型抗體分子。在一些實施例中，抗個體基因型抗體分子具有相同CDR (例如VH CDR1、VH CDR2、CH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3中之一或多者，例如全部)作為WO 2014/190273之抗體分子，諸如136.20.1；可以具有WO 2014/190273之抗體分子的一或多個(例如2個)可變區，或可以包含WO 2014/190273之抗體分子，諸如136.20.1。在其他實施例中，抗CAR抗體結合至CAR分子之胞外結合域的恆定區，例如如WO 2014/190273中所述。在一些實施例中，抗CAR抗體結合至CAR分子之胞外結合域的恆定區，例如重鏈恆定區(例如CH2-CH3鉸鏈區)或輕鏈恆定區。舉例而言，在一些實施例中，抗CAR抗體與WO 2014/190273中所述的2D3單株抗體競爭結合，具有相同CDR (例如VH CDR1、VH CDR2、CH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3中之一或多者，例如全部)作為2D3，或具有2D3之一或多個(例如2個)可變區，或包含如WO 2014/190273中所述的2D3。
在一些態樣及實施例中，本文中的組合物及方法針對T細胞的特定亞群最佳化，例如如2014年7月31日申請的美國第62/031,699號中所述，其內容以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，T細胞的最佳化亞群相較於對照T細胞(例如表現相同構築體之不同類型的T細胞(例如CD8+ 或CD4+ ))呈現增強的持久性。
在一些實施例中，CD4+ T細胞包含本文所述之CAR，該CAR包含適於(例如最佳化，例如引起持久性增強) CD4+ T細胞的細胞內信號傳導域，例如ICOS域。在一些實施例中，CD8+ T細胞包含本文所述之CAR，其CAR包含適於(例如最佳化，例如引起持久性增強) CD8+ T細胞的細胞內信號傳導域，例如4-1BB域、CD28域，或除ICOS域之外的另一共刺激域。在一些實施例中，本文所述之CAR包含本文所述之抗原結合域，例如CAR包含靶向BCMA之抗原結合域)。
在一個態樣中，本文描述一種治療個體(例如患有癌症之個體)的方法。該方法包括向該個體投與有效量之以下各者：
1) 包含CAR (CARCD4+ )之CD4+ T細胞：
該CAR包含：
抗原結合域，例如本文所述之抗原結合域，例如靶向BCMA的抗原結合域；
跨膜域；及
細胞內信號傳導域，例如第一共刺激域，例如ICOS域；及
2)包含CAR (CARCD8 + )之CD8+ T細胞，該CAR包含：
抗原結合域，例如本文所述之抗原結合域，例如靶向BCMA的抗原結合域；
跨膜域；及
細胞內信號傳導域，例如第二共刺激域，例如4-1BB域、CD28域，或除ICOS域之外的另一共刺激域；
其中CARCD4 + 與CARCD8 + 彼此不同。
視情況，該方法進一步包括投與：
3)包含CAR (第二CARCD8 + )的第二CD8+ T細胞，該CAR包含：
抗原結合域，例如本文所述之抗原結合域，例如特異性結合BCMA的抗原結合域；
跨膜域；及
胞內信號傳導域，其中第二CARCD8 + 包含不存在於CARCD8 + 上之胞內信號傳導域，例如共刺激信號傳導域，且視情況不包含ICOS信號傳導域。
其他分析，包括此項技術中已知的分析，亦可用於評估本發明的BCMA CAR構築體。
治療應用
BCMA 相關之疾病及 / 或病症
在一個態樣中，本發明提供用於治療與BCMA表現相關之疾病的方法。在一個態樣中，本發明提供用於治療疾病的方法，其中腫瘤的一部分呈BCMA陰性且腫瘤的一部分呈BCMA陽性。舉例而言，本發明之CAR可用於針對與BCMA表現升高相關之疾病已經歷治療的個體，其中針對BCMA含量升高已經歷治療之個體展現與BCMA含量升高相關之疾病。在實施例中，本發明之CAR可用於治療針對與BCMA表現相關之疾病已經歷治療的個體，其中已經歷與BCMA表現相關之治療的個體展現與BCMA表現相關之疾病。
在一個實施例中，本發明提供用於治療疾病的方法，其中BCMA在正常細胞與癌細胞上均表現，但在正常細胞上的表現量較低。在一個實施例中，方法進一步包含選擇以親和力結合的本發明CAR，該親和力允許BCMA CAR結合且殺死表現BCMA的癌細胞，但表現BCMA之正常細胞小於30%、25%、20%、15%、10%、5%或小於5%被殺死，例如如藉由本文所述之分析所測定。舉例而言，可使用基於Cr51 CTL之殺死分析，諸如流式細胞術。在一個實施例中，BCMA CAR的抗原結合域對靶抗原具有10- 4 M至10- 8 M的結合親和KD，例如10- 5 M至10- 7 M，例如10- 6 M或10- 7 M。在一個實施例中，BCMA抗原結合域的結合親和力比參考抗體(例如本文所述之抗體)小至少五倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍或1,000倍。
在一個態樣中，本發明係關於包含可操作地連接至啟動子之BCMA CAR的載體，用於在哺乳動物免疫效應細胞中表現，例如T細胞或NK細胞。在一個態樣中，本發明提供一種重組免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)，其表現用於治療BCMA表現腫瘤之BCMA CAR，其中表現BCMA CAR之重組免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)稱為BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)。在一個態樣中，本發明之BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)能夠使腫瘤細胞與其表面上所表現之至少一種本發明BCMA CAR接觸，使得BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)靶向腫瘤細胞且抑制腫瘤生長。
在一個態樣中，本發明係關於一種抑制BCMA表現腫瘤細胞之生長的方法，其包含使腫瘤細胞與本發明之BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)接觸，使得BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)回應於抗原而活化且靶向癌細胞，其中腫瘤生長得到抑制。
在一個態樣中，本發明係關於一種治療個體之癌症的方法。該方法包含向個體投與本發明之BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)，以便治療個體之癌症。可藉由本發明之BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART或BCMA CAR表現NK細胞)治療之癌症的一個實例為與BCMA表現相關之癌症。
本發明包括一種類型的細胞療法，其中免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)經基因修飾以表現嵌合抗原受體(CAR)且將BCMA CAR表現細胞(例如BCMA車或BCMA CAR表現NK細胞)輸注至有需要的接受者。輸注之細胞能夠殺死接受者中之腫瘤細胞。不同於抗體療法，CAR經修飾的細胞(例如T細胞或NK細胞)能夠在活體內複製，引起能夠維持腫瘤控制之長期持久性。在各種態樣中，向患者投與細胞(例如T細胞或NK細胞)或其後代，該細胞(例如T細胞或NK細胞)投與患者之後，在患者體內存留至少四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月、十三個月、十四個月、十五個月、十六個月、十七個月、十八個月、十九個月、二十個月、二十一個月、二十二個月、二十三個月、兩年、三年、四年或五年。
本發明亦包括一種類型的細胞療法，其中免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)藉由例如活體外轉錄的RNA修飾以短暫表現嵌合抗原受體(CAR)且將免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)輸注至有需要的接受者。輸注之細胞能夠殺死接受者中之腫瘤細胞。因此，在各個態樣中，免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)投與患者之後，投與患者的免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)存在小於一個月，例如三週、兩週、一週。
不希望被任何特定理論束縛，由經CAR修飾之細胞(例如T細胞或NK細胞)誘發之抗腫瘤免疫反應可為主動或被動免疫反應，或者可歸因於直接與間接免疫反應。在一個態樣中，經CAR轉導的免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)回應於表現BCMA的人類癌細胞展現特異性促炎性細胞介素分泌及強溶胞活性，抵抗可溶性BCMA抑制，介導旁觀細胞殺死且介導已建立之人類腫瘤消退。舉例而言，BCMA表現腫瘤之異質場內的無抗原腫瘤細胞容易被再定向BCMA的免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)間接摧毀，該等免疫效應細胞先前已針對相鄰的抗原陽性癌細胞反應。
在一個態樣中，本發明的經完全人類CAR修飾之免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)可為疫苗的一種類型，用於哺乳動物的離體免疫接種及/或活體內療法。在一個態樣中，哺乳動物為人類。
關於離體免疫接種，在細胞投與哺乳動物之前，活體外進行以下中之至少一者：i)擴增細胞，ii)向細胞中引入編碼CAR之核酸或iii)低溫保存細胞。
離體程序為此項技術中熟知且在下文中更完全論述。簡言之，自哺乳動物(例如人類)分離出細胞且用表現本文所揭示之CAR的載體進行基因修飾(亦即，活體外轉導或轉染)。經CAR修飾之細胞可以投與哺乳動物接受者以提供治療益處。哺乳動物接受者可為人類，且經CAR修飾之細胞相對於接受者可為自體的。或者，細胞相對於接受者而言可為同種異體的、同基因型的或異種的。
用於造血幹細胞及祖細胞離體擴增的程序描述於美國專利第5,199,942號中，該專利以引用之方式併入本文中，該程序可應用於本發明之細胞。其他適合方法為此項技術中已知的，因此本發明不限於任何特定離體擴增細胞之方法。簡言之，T細胞之離體培養及擴增包含：(1)藉由周邊血液採集或骨髓外植體自哺乳動物收集CD34+造血幹細胞及祖細胞；及(2)離體擴增此類細胞。除了美國專利第5,199,942號中所述之細胞生長因子之外，諸如flt3-L、IL-1、IL-3及c-kit配位體之其他因子可以用於培養及擴增該等細胞。
除了在離體免疫接種方面使用基於細胞之疫苗之外，本發明亦提供用於活體內免疫接種以針對患者中之抗原引發免疫反應之組合物及方法。
一般而言，如本文所述活化及擴增之細胞可用於治療及預防免疫功能不全之個體中產生的疾病。特定言之，本發明之經CAR修飾的免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)係用於治療與BCMA表現有關的疾病、病症及病狀。在某些態樣中，本發明之細胞用於治療處於產生與BCMA表現有關之疾病、病症及病狀風險中的患者。因此，本發明提供治療或預防與BCMA表現有關之疾病、病症及病狀的方法，包含向有需要之個體投與治療有效量之本發明的經CAR修飾之免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)。
在一個態樣中，本發明之表現CAR之細胞(例如CART細胞或表現CAR之NK細胞)可用於治療增殖疾病，諸如癌症或惡性疾病，或癌變前病狀，諸如骨髓發育不良、骨髓發育不良症候群或白血病前驅症。在一個態樣中，癌症為血液癌。血液癌症病狀為影響血液、骨髓及淋巴系統的癌症類型，諸如白血病及惡性淋巴增生病狀。在一個態樣中，血液癌為白血病或血液病。與BCMA有關之疾病或病症的實例為多發性骨髓瘤(亦稱為MM)(參見Claudio等人,Blood . 2002, 100(6):2175-86；及Novak等人,Blood . 2004, 103(2):689-94)。多發性骨髓瘤亦稱為漿細胞骨髓瘤或卡勒氏病(Kahler's disease)，為一種以異常或惡性血漿B細胞在骨髓中積聚為特徵的癌症。癌細胞時常侵入相鄰骨骼，毀壞骨胳結構且導致骨痛及骨折。大部分骨髓瘤個案亦以副蛋白(亦稱為M蛋白質或骨髓瘤蛋白質)產生為特徵，副蛋白為一種藉由惡性漿細胞之純系增殖而過量產生之異常免疫球蛋白。根據國際骨髓瘤工作組(International Myeloma Working Group，IMWG)的診斷準則，血清副蛋白含量超過30 g/L為多發性骨髓瘤的診斷準則(參見Kyle等人(2009), Leukemia. 23:3-9)。多發性骨髓瘤之其他症狀或病徵包括腎功能減弱或腎衰竭、骨骼病變、貧血、高鈣血症及神經症狀。
用於區分多發性骨髓瘤與其他漿細胞增殖病症的準則已藉由國際骨髓瘤工作組確立(參見Kyle等人(2009), Leukemia. 23:3-9)。必須滿足以下所有三個標準：
- 純系骨髓漿細胞≥10%
- 存在血清及/或泌尿單株蛋白質(除了患有真實非分泌性多發性骨髓瘤之患者中)
- 可歸因於潛在漿細胞增殖病症之末端器官損傷之證據，具體言之：
o 高鈣血症：血清鈣≥11.5 mg/100 ml
o 腎功能不全：血清肌酐＞1.73 mmol/l
o 貧血：血色正常，紅血球正常，血紅素值＞2 g/100 ml，低於正常下限，或血紅素值＜10 g/100 ml
o 骨骼病變：溶骨性病變、嚴重骨質減少或病理性骨折。
可藉由本文所述之組合物及方法治療的其他漿細胞增殖病症包括(但不限於)無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或頑固性骨髓瘤)、意義待定的單株γ球蛋白血症(MGUS)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、漿細胞瘤(例如漿細胞惡病質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤及多發性漿細胞瘤)、全身性澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性及POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群、高槻病及PEP症候群)。
多發性骨髓瘤的分期使用兩種分期系統：國際分期系統(ISS)(參見Greipp等人(2005), J. Clin. Oncol. 23 (15):3412-3420，該文獻以全文引用之方式併入本文中)及杜利-薩爾蒙分期系統(Durie-Salmon Staging system，DSS)(參見Durie等人(1975), Cancer 36 (3): 842-854，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。下表中概述該兩種分期系統：
表 6. 多發性骨髓瘤分期用的分期系統
*杜利-薩爾蒙分期系統亦包括指明腎功能狀態之子分類。在分期數之後添加名稱「A」或「B」，其中「A」指示相對正常之腎功能(血清肌酐值＜2.0 mg/dL)，且B指示異常腎功能(血清肌酐值＞2.0 mg/dL)。
用於多發性骨髓瘤的第三分期系統稱為修訂的國際分期系統(R-ISS)(參見Palumbo A, Avet-Loiseau H, Oliva S等人, Journal of clinical oncology: 美國臨床腫瘤學學會的官方雜誌2015;33:2863-9，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。R-ISS I期包括ISS I期(血清β2-微球蛋白含量＜3.5 mg/L及血清白蛋白含量≥3.5 g/dL)，CA風險不高[del(17p)及/或t(4;14)及/或t(14;16)]，及正常LDH含量(小於正常範圍的上限)。R-ISS III期包括ISS III期(血清β2-微球蛋白含量＞5.5 mg/L)及CA風險高或LDH含量高。R-ISS II期包括所有其他可能組合。
患者反應可以基於IMWG 2016準則來測定，如Kumar S, Paiva B, Anderson KC等人, International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma. The Lancet Oncology;17(8):e328-e346 (2016)所揭示，該文獻以全文引用之方式併入本文中。表7提供反應評估用的IMWG 2016準則。
表 7. 反應評估用的IMWG準則包括微小殘留疾病(MRD)準則
多發性骨髓瘤及相關疾病之標準療法包括化學療法、幹細胞移植(自體或同種異體)、放射療法及其他藥物療法。常用抗骨髓瘤藥物包括烷基化劑(例如苯達莫司汀(bendamustine)、環磷醯胺及美法侖(melphalan))、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(bortezomib))、皮質類固醇(例如地塞米松(dexamethasone)及潑尼松(prednisone))及免疫調節劑(例如沙立度胺(thalidomide)及來那度胺(lenalidomide)或Revlimid®)，或其任何組合。雙膦酸鹽藥物亦時常與預防骨質流失之標準抗MM療法組合投與。超過65-70歲之患者不大可能為幹細胞移植之人選。在一些情況下，雙重自體幹細胞移植為小於60歲患者的選項，其對第一次移植的反應次最佳。本發明之組合物及方法可以與多發性骨髓瘤的任一種當前處方療法組合投與。
多發性骨髓瘤的第一階段療法為誘導療法。誘導療法的目標為減少骨髓中的漿細胞數目及該等漿細胞所產生的分子(例如蛋白質)。誘導療法通常包含2或3種以下藥物類型的組合：靶向療法、化學療法或皮質類固醇。
可以接受幹細胞移植之患者的誘導療法
幹細胞移植患者通常為70歲或更年輕者且健康狀況通常良好。患者可以接受誘導療法，隨後接受高劑量化學療法及幹細胞移植。誘導療法通常給與若干循環且可包括以下藥物中之一或多者：CyBorD方案 - 環磷醯胺(Cytoxan，Procytox)、硼替佐米(Velcade)及地塞米松(Decadron，Dexasone)；VRD方案 - 硼替佐米、來那度胺(Revlimid)及地塞米松；沙立度胺(Thalomid)及地塞米松；來那度胺及低劑量地塞米松；硼替佐米及地塞米松；VTD方案 - 硼替佐米、沙立度胺及地塞米松；硼替佐米、環磷醯胺及潑尼松；硼替佐米、小紅莓(doxorubicin)(阿黴素(Adriamycin))及地塞米松；地塞米松；或脂質體小紅莓(Caelyx，Doxil)、長春新鹼(Oncovin)及地塞米松。
不能接受幹細胞移植之患者的誘導療法
不能接受幹細胞移植的患者可以接受使用以下藥物中之一或多者的誘導療法：CyBorD方案 - 環磷醯胺、硼替佐米及地塞米松；來那度胺(Revlimid)及低劑量地塞米松；MPT方案 - 美法侖、潑尼松及沙立度胺；VMP方案 - 硼替佐米、美法侖及潑尼松；MPL方案 - 美法侖、潑尼松及來那度胺；美法侖及潑尼松；硼替佐米及地塞米松；地塞米松；脂質體小紅莓、長春新鹼及地塞米松；沙立度胺及地塞米松；VAD方案 - 長春新鹼、小紅莓及地塞米松；或VRD方案 - 硼替佐米、來那度胺及地塞米松。
與BCMA相關之疾病或病症之另一實例為霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤(參見Chiu等人,Blood . 2007, 109(2):729-39；He等人,J Immunol. 2004, 172(5):3268-79)。
霍奇金氏淋巴瘤(HL)亦稱為霍奇金氏病，為一種起源於白血球或淋巴球之淋巴系統癌症。構成淋巴瘤之異常細胞稱為里德-斯德伯格氏細胞(Reed-Sternberg cell)。在霍奇金氏淋巴瘤中，癌症自一個淋巴結組擴散至另一淋巴結組。霍奇金氏淋巴瘤可基於里德-斯德伯格氏細胞形態及里德-斯德伯格氏細胞周圍之細胞組成(如經由淋巴結活組織檢查測定)細分為四種病理學亞型：結節狀硬化HL、混合細胞性亞型、富含淋巴球或淋巴球為主型、淋巴球耗乏型。一些霍奇金氏淋巴瘤亦可為結節狀淋巴球為主型霍奇金氏淋巴瘤，或可未指定。霍奇金氏淋巴瘤之症狀及病徵包括頸、腋窩或腹股溝中淋巴結之無痛腫脹、發熱、盜汗、體重減輕、疲乏、瘙癢或腹痛。
非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)包含不同類的血液癌症，包括除霍奇金氏淋巴瘤之外的任何種類之淋巴瘤。非霍奇金氏淋巴瘤亞型主要根據細胞形態、染色體畸變及表面標記物分類。NHL亞型(或NHL相關癌症)包括B細胞淋巴瘤，諸如(但不限於)伯基特氏淋巴瘤、B細胞慢性淋巴球性白血病(B-CLL)、B細胞前淋巴球性白血病(B-PLL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)(例如血管內大B細胞淋巴瘤及原發縱隔B細胞淋巴瘤)、濾泡性淋巴瘤(例如濾泡中心淋巴瘤、濾泡性小裂解細胞)、毛髮細胞白血病、高分級B細胞淋巴瘤(類似伯基特氏)、淋巴漿細胞淋巴瘤(瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症)、套細胞淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤(例如結外邊緣區B細胞淋巴瘤或黏膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤，及脾邊緣區B細胞淋巴瘤)、漿細胞瘤/骨髓瘤、前體B淋巴母細胞性白血病/淋巴瘤(PB-LBL/L)、原發中樞神經系統(CNS)淋巴瘤、原發眼內淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；及T細胞淋巴瘤，諸如(但不限於)多形性大細胞淋巴瘤(ALCL)、成人T細胞淋巴瘤/白血病(例如鬱積型、慢性、急性及淋巴瘤性)、血管中心性淋巴瘤、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤(例如蕈樣黴菌病、塞紮萊症候群等)、結外自然殺手/T細胞淋巴瘤(鼻型)、腸病變型腸T細胞淋巴瘤、大顆粒狀淋巴球白血病、前體T淋巴母細胞性淋巴瘤/白血病(T-LBL/L)、T細胞慢性淋巴球性白血病/前淋巴球性白血病(T-CLL/PLL)，及未指明的外周T細胞淋巴瘤。霍奇金氏淋巴瘤的症狀及病徵包括頸、腋窩或腹股溝中的淋巴結無痛腫脹、發熱、盜汗、體重減輕、疲乏、瘙癢、腹痛、咳嗽或胸痛。
霍奇金氏與非霍奇金氏淋巴瘤之分期相同且係指體內癌細胞之擴散程度。在I期，淋巴瘤細胞在一個淋巴結組中。在II期，淋巴瘤細胞存在於至少兩個淋巴結組中，但兩組位於隔膜之同一側，或組織或器官一部分中，且接近該器官的淋巴結位於隔膜之同一側。在III期中，淋巴瘤細胞存在於隔膜兩側之淋巴結中，或存在於接近此等淋巴結組之組織或器官的一部分中，或存在於脾中。在IV期中，淋巴瘤細胞發現於至少一個器官或組織之若干部分中，或淋巴瘤細胞存在於器官中及隔膜另一側之淋巴結中。除羅馬數字表示分期之外，分期亦可藉由字母A、B、E及S描述，其中A係指不具有症狀之患者，B係指具有症狀之患者，E係指其中淋巴瘤發現於淋巴系統外之組織中之患者，且S係指其中淋巴瘤發現於脾中之患者。
霍奇金氏淋巴瘤通常用輻射療法、化學療法或造血幹細胞移植治療。非霍奇金氏淋巴瘤之最常見療法為R-CHOP，其由四種不同化學療法(環磷醯胺、小紅莓、長春新鹼及潑尼龍)及利妥昔單抗(Rituxan®)組成。常用於治療NHL之其他療法包括其他化學治療劑、放射療法、幹細胞移植(自體或同種異體骨髓移植)或生物療法，諸如免疫療法。生物學治療劑之其他實例包括(但不限於)利妥昔單抗(rituximab)(Rituxan®)、托西莫單抗(tositumomab)(Bexxar®)、依帕珠單抗(epratuzumab)(LymphoCide®)，及阿侖單抗(alemtuzumab)(MabCampath®)。本發明之組合物及方法可以與霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤的任一種當前處方療法組合投與。
BCMA表現亦與亦稱為淋巴漿細胞淋巴瘤(LPL)之瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(WM)相關。(參見Elsawa等人,Blood . 2006, 107(7):2882-8)。先前認為瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症與多發性骨髓瘤相關，但最近已歸類為非霍奇金氏淋巴瘤之亞型。WM之特徵為不可控之B細胞淋巴細胞增殖，引起貧血且產生過量副蛋白質或免疫球蛋白M(IgM)，使得血液變稠且引起黏性過大症候群。WM之其他症狀或病徵包括發熱、盜汗、疲乏、貧血、體重減輕、淋巴結病或脾腫大、視覺模糊、眩暈、鼻出血、牙齦出血、異常瘀青、腎損傷或衰竭、澱粉樣變性或周圍神經病變。
WM標準療法係由化學療法組成，具體言之，使用利妥昔單抗(Rituxan®)。其他化學治療藥物可以組合使用，諸如苯丁酸氮芥(Leukeran®)、環磷醯胺(Neosar®)、氟達拉賓(Fludara®)、克拉屈濱(Leustatin®)、長春新鹼及/或沙立度胺。諸如潑尼松之皮質類固醇亦可與化學療法組合投與。在患者治療中通常使用血漿去除法或血漿交換以藉由自血液移除副蛋白質來緩解一些症狀。在一些情況下，幹細胞移植為一些患者之選項。
與BCMA有關之疾病或病症的另一實例為腦癌。特定言之，BCMA表現已與星形細胞瘤或神經膠母細胞瘤相關(參見Deshayes等人,Oncogene . 2004, 23(17):3005-12；Pelekanou等人,PLoS One . 2013, 8(12):e83250)。星形細胞瘤為由星形膠質細胞產生之腫瘤，星形膠質細胞為大腦中之一種類型神經膠質細胞。神經膠母細胞瘤(亦稱為多形性膠質母細胞瘤或GBM)為星形細胞瘤之最惡性形式，且視為腦癌之最晚期(IV期)。神經膠母細胞瘤存在兩種變異體：巨細胞神經膠母細胞瘤及神經膠質肉瘤。其他星形細胞瘤包括幼年型毛細胞性星形細胞瘤(JPA)、肌原纖維性星形細胞瘤、多形性黃色星形細胞瘤(PXA)、胚胎發育不良性神經上皮瘤(DNET)及多形性星形細胞瘤(AA)。
與神經膠母細胞瘤或星形細胞瘤相關之症狀或病徵包括大腦中壓力增加、頭痛、癲癇、記憶喪失、行為變化、身體單側動作或感覺喪失、語言功能障礙、認知受損、視覺受損、噁心、嘔吐，及臂或腿無力。
腫瘤之手術移除(或割除)為標準療法以儘可能多地移除神經膠瘤而不損害或最小化對正常周圍大腦的損傷。放射療法及/或化學療法通常在術後用於抑制及減緩任何殘餘癌細胞或衛星病變的疾病復發。放射療法包括全大腦放射線療法(習知外部射束放射線)、靶向三維適形放射線療法及靶向放射性核素。常用來治療神經膠母細胞瘤之化學治療劑包括替莫唑胺(temozolomide)、吉非替尼(gefitinib)或埃羅替尼(erlotinib)及順鉑(cisplatin)。諸如貝伐單抗(Bevacizumab)(Avastin®)之血管生成抑制劑亦常與化學療法及/或放射線療法組合使用。
支持療法亦時常用於減輕神經症狀且改善神經功能，且與本文所述之任一癌症療法組合投與。主要支持藥劑包括抗驚厥劑及皮質類固醇。因此，本發明之組合物及方法可與治療神經膠母細胞瘤或星形細胞瘤之任一標準或支持療法組合使用。
與BCMA表現相關之非癌症相關疾病及病症亦可藉由本文所揭示之組合物及方法治療。與BCMA表現有關之非癌症相關疾病及病症之實例包括(但不限於)：病毒感染，例如HIV；真菌感染，例如新型隱球菌(C . neoformans )；腸激躁疾病；潰瘍性結腸炎，及與黏膜免疫有關的病症。
本發明之經CAR修飾的免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)可以單獨或與稀釋劑及/或其他組分(諸如IL-2或其他細胞介素或細胞群)組合作為醫藥組合物形式投與。
本發明提供用於治療癌症之組合物及方法。在一個態樣中，癌症為血液癌，包括(但不限於)血液癌為白血病或淋巴瘤。在一個態樣中，本發明之表現CAR之細胞(例如CART細胞或表現CAR之NK細胞)可用於治療癌症及惡性疾病，諸如(但不限於)急性白血病，包括(但不限於)例如B細胞急性淋巴性白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴性白血病(「TALL」)、急性淋巴性白血病(ALL)；一或多種慢性白血病，包括(但不限於)例如慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)；其他血液癌或血液學病狀，包括(但不限於) 例如B細胞前淋巴球性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴組織增生病狀、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良及骨髓發育不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症，及「白血病前驅症」，其為以骨髓血細胞之低效產生(或發育不良)為一體的不同血液學病狀集合；及其類似病症。此外，與BCMA表現相關之疾病包括(但不限於)例如表現BCMA之非典型性及/或非經典癌症、惡性疾病、癌變前病狀或增殖疾病。
在實施例中，本文所述的組合物可以用於治療疾病，包括(但不限於)漿細胞增殖病症，例如無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或頑固性骨髓瘤)、意義待定的單株γ球蛋白血症(MGUS)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、漿細胞瘤(例如漿細胞惡病質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤及多發性漿細胞瘤)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性及POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群、高槻病及PEP症候群)。
在實施例中，本文所述之組合物可用於治療疾病，包括(但不限於)癌症，例如本文所述之癌症，例如前列腺癌(例如抗去勢或抗治療前列腺癌，或轉移性前列腺癌)、胰臟癌或肺癌。
本發明亦提供用於抑制表現BCMA之細胞群增殖或減少表現BCMA之細胞群的方法，方法包含使包含BMCA表現細胞的細胞群與結合至BCMA表現細胞之本發明抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)接觸。在一個特定態樣中，本發明提供用於抑制表現BCMA之癌細胞群增殖或減少表現BCMA之癌細胞群的方法，方法包含使表現BCMA的癌細胞群與結合至BCMA表現細胞之本發明抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)接觸。在一個態樣中，本發明提供用於抑制表現BCMA之癌細胞群增殖或減少表現BCMA之癌細胞群的方法，方法包含使表現BMCA的癌細胞群與結合至BCMA表現細胞之本發明抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)接觸。在某些態樣中，在患有骨髓性白血病或與BCMA表現細胞有關之另一癌症的個體或動物模型中，本發明的抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA車細胞或BCMA CAR表現NK細胞)使細胞及/或癌細胞之數量、數目、量或百分比相對於陰性對照組減少至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少65%、至少75%、至少85%、至少95%、或至少99%。在一個態樣中，個體為人類。
本發明亦提供用於預防、治療及/或管理與表現BCMA之細胞相關之疾病(例如表現BCMA之血液癌或非典型癌症)的方法，方法包含向有需要之個體投與結合至BCMA表現細胞之本發明抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)。在一個態樣中，個體為人類。與表現BCMA之細胞相關的病症之非限制性實例包括病毒或真菌感染及與黏膜免疫相關之病症。
本發明亦提供用於預防、治療及/或管理與BCMA表現細胞有關之疾病的方法，方法包含向有需要的個體投與結合至BCMA表現細胞的本發明抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)。在一個態樣中，個體為人類。
本發明提供用於預防與BCMA表現細胞有關之癌症復發的方法，方法包含向有需要之個體投與結合至BCMA表現細胞的本發明抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)。在一個態樣中，方法包含將有效量的結合至BCMA表現細胞之本文所述抗BCMA CAR表現細胞(例如BCMA CART細胞或BCMA CAR表現NK細胞)與有效量的另一療法組合投與有需要之個體。
使用生物標記以評估 CAR 有效性、個體適合性或樣品適合性之方法
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種評估或監測表現CAR之細胞療法(例如，BCMA CAR療法)在個體(例如，患有癌症(例如，血液癌症)之個體)內之有效性，或樣品(例如，血球分離樣品)對CAR療法(例如BCMA CAR療法)之適用性的方法。該方法包括獲取CAR療法有效性、個體適合性或樣品適合性之值，其中該值指示表現CAR之細胞療法的有效性或適合性。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，表現CAR細胞之療法包含複數種(例如，一群)表現CAR之免疫效應細胞，例如複數種(例如，一群) T細胞或NK細胞或其組合。在一個實施例中，表現CAR之細胞療法為BCMACAR療法。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，在接受表現CAR之細胞療法之前、期間或之後評估個體。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，反應者(例如，完全反應者)具有或鑑別為具有與無反應者相比，更大的GZMK、PPF1BP2或原始T細胞中一者、兩者或兩者以上(全部)之含量或活性。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，無反應者具有或鑑別為具有與反應者相比，更大的IL22、IL-2RA、IL-21、IRF8、IL8、CCL17、CCL22、效應T細胞或調節性T細胞中一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或七者以上(例如，全部)之含量或活性。
在一個實施例中，復發者為具有或鑑別為具有與非復發者相比，增加的以下基因中之一或多者(例如2、3、4者或全部)之表現量：MIR199A1、MIR1203、uc021ovp、ITM2C及HLA-DQB1，與非復發者相比，減少的以下基因中之一或多者(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11者或全部)之表現量的患者：PPIAL4D、TTTY10、TXLNG2P、MIR4650-1、KDM5D、USP9Y、PRKY、RPS4Y2、RPS4Y1、NCRNA00185、SULT1E1及EIF1AY。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，無反應者具有或鑑別為具有更大百分比之免疫細胞耗竭標記，例如，一種、兩種或更多種免疫檢查點抑制劑(例如，PD-1、PD-L1、TIM-3及/或LAG-3)。在一個實施例中，無反應者具有或鑑別為具有與來自反應者之表現PD-1或LAG-3之免疫效應細胞之百分比相比，更大百分比之表現PD-1、PD-L1或LAG-3之免疫效應細胞(例如，CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞) (例如，表現CAR之CD4+細胞及/或CD8+ T細胞)。
在一個實施例中，無反應者具有或鑑別為具有更大百分比之具有耗竭表型之免疫細胞，例如共表現至少兩種耗竭標記，例如共表現PD-1、PD-L1及/或TIM-3之免疫細胞。在其他實施例中，無反應者具有或鑑別為具有更大百分比之具有耗竭表型之免疫細胞，例如共表現至少兩種耗竭標記，例如共表現PD-1及LAG-3之免疫細胞。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，無反應者具有或鑑別為具有與表現CAR之細胞療法的反應者(例如，完全反應者)相比，表現CAR之細胞群體(例如，BCMACAR+細胞群體)中更大百分比之PD-1/PD-L1+/LAG-3+細胞。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，部分反應者具有或鑑別為具有與反應者相比，表現CAR之細胞群體(例如，BCMACAR+細胞群體)中更高百分比之PD-1/PD-L1+/LAG-3+細胞。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，無反應者具有或鑑別為具有在表現CAR之細胞群體(例如BCMACAR+細胞群體)中PD1/PD-L1+CAR+之耗竭表型及LAG3之共表現。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，無反應者具有或鑑別為具有與反應者(例如完全反應者)相比，表現CAR之細胞群體(例如BCMACAR+細胞群體)中更大百分比之PD-1/PD-L1+/TIM-3+細胞。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，部分反應者具有或鑑別為具有與反應者相比，表現CAR之細胞群體(例如BCMACAR+細胞群體)中更高百分比之PD-1/PD-L1+/TIM-3+細胞。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，血球分離樣品中CD8+ CD27+ CD45RO- T細胞之存在係個體對表現CAR之細胞療法(例如，BCMACAR療法)之陽性預測子。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，血球分離樣品中高百分比之PD1+ CAR+ T細胞及LAG3+ or TIM3+ T細胞係個體對表現CAR之細胞療法(例如，BCMACAR療法)之反應的不良預後預測子。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，反應者(例如，完全或部分反應者)具有以下概況中之一者、兩者、三者或三者以上(或全部)：
(i) 具有與參考值，例如CD27+免疫效應細胞之無反應者數目相比，更大數目之CD27+免疫效應細胞；
(ii) (i)具有與參考值，例如CD8+ T細胞之無反應者數目相比，更大數目之CD8+ T細胞；
(iii) 具有與參考值，例如表現一或多種檢查點抑制劑之細胞之無反應者數目相比，較低數目之表現一或多種檢查點抑制劑，例如選自PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或KLRG-1或組合之檢查點抑制劑之免疫細胞；或
(iv) 具有與參考值，例如靜止TEFF 細胞、靜止TREG 細胞、原始CD4細胞、非刺激性記憶細胞或早期記憶T細胞之無反應者數目相比，更大數目之靜止TEFF 細胞、靜止TREG 細胞、原始CD4細胞、非刺激性記憶細胞或早期記憶T細胞或其組合中一者、兩者、三者、四者或四者以上(全部)。
在本文所揭示之任一方法之一些實施例中，(vi)之細胞介素含量或活性係選自細胞介素CCL20/MIP3a、IL17A、IL6、GM-CSF、IFN-γ、IL10、IL13、IL2、IL21、IL4、IL5、IL9或TNFα中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者、八者或更多者(或全部)或其組合。細胞介素可選自IL-17A、CCL20、IL2、IL6或TNFa中之一者、兩者、三者、四者或四者以上(全部)。在一個實施例中，選自IL-17A及CCL20中之一或兩者的細胞介素之含量或活性增加指示反應增加或復發減少。
在實施例中，藉由本文之方法鑑別之反應者、無反應者、復發者或非復發者可根據臨床標準進一步評估。舉例而言，完全反應者患有或鑑別為患有疾病，例如癌症之個體，該個體展現對治療之完全反應，例如完全緩解。如本文所述，可例如使用NCCN Guidelines® 或Cheson等人, J Clin Oncol 17:1244 (1999)及Cheson等人, 「Revised Response Criteria for Malignant Lymphoma」, J Clin Oncol 25:579-586 (2007) (均以全文引用之方式併入本文中)鑑別完全反應。部分反應者患有或鑑別為患有疾病，例如癌症之個體，該個體展現對治療之部分反應，例如部分緩解。可例如使用如本文所述之NCCN Guidelines® 或Cheson標準來鑑別部分反應。無反應者患有或鑑別為患有疾病，例如癌症之個體，該個體不展現對治療之反應，例如患者患有穩定疾病或進行性疾病。可例如使用如本文所述之NCCN Guidelines® 或Cheson標準來鑑別無反應者。
或者，或與本文所揭示之方法組合，回應於該值，進行以下中之一者、兩者、三者、四者或四者以上：
例如向反應者或非復發者投與表現CAR之細胞療法；
投與改變劑量之表現CAR之細胞療法；
改變表現CAR之細胞療法之進度或時程；
例如向無反應者或部分反應者投與與表現CAR之細胞療法組合的額外試劑，例如檢查點抑制劑，例如本文所述之檢查點抑制劑；
在用表現CAR之細胞療法治療之前向無反應者或部分反應者投與增加個體中較年輕T細胞之數目的療法；
修改表現CAR之細胞療法之製造方法，例如在引入編碼CAR之核酸之前增濃較年輕T細胞，或例如針對鑑別為無反應者或部分反應者之個體提高轉導效率；
例如針對無反應者或部分反應者或復發者，投與替代性療法；或
若個體為或鑑別為無反應者或復發者，則例如藉由CD25耗盡、投與環磷醯胺、抗GITR抗體或其組合中之一或多者，減少TREG 細胞群體及/或TREG 基因簽名。
在某些實施例中，個體經抗GITR抗體預處理。在某一實施例中，個體在輸注或再輸注之前經抗GITR抗體處理。
組合療法
本文所述之表現CAR之細胞可與其他已知試劑及療法組合使用。如本文中所使用，「組合」投與意謂在個體受病症折磨之病程期間向個體遞送兩種(或兩種以上)不同治療，例如，在個體已被確診患有病症之後及在病症治癒或消除或出於其他原因治療停止之前，供應兩種或兩種以上治療。在一些實施例中，當開始遞送第二治療時，第一治療之遞送仍存在以使得就投與而言存在重疊。此在本文中有時稱為「同時」或「並行遞送」。在其他實施例中，一種治療之遞送在另一治療之遞送開始之前結束。在任一情況之一些實施例中，治療由於組合投與而更有效。舉例而言，第二治療更有效，例如在較少第二治療之情況下發現等效效果，或與若在不存在第一治療之情況下投與第二治療將發現的相比，第二治療在更大程度上減輕症狀，或在第一治療之情況下發現類似情況。在一些實施例中，遞送使得症狀減輕，或與病症相關之其他參數大於在無另一治療存在下遞送一種治療所將觀測到的參數。兩種治療之作用可部分相加，完全相加或大於相加。遞送可使得所遞送之第一療法之作用在遞送第二療法時仍可偵測到。
本文所述之表現CAR之細胞及至少一種額外治療劑可在相同或獨立組合物中同時投與或依序投與。對於依序投與，本文所述之表現CAR之細胞可首先投與，且其次可投與額外試劑，或投與次序可顛倒。
CAR療法及/或其他治療劑、程序或模態在病症活躍期期間或在疾病緩解或不太活躍期期間投與。CAR療法可在其他治療之前、與治療並行、治療後或在病症緩解期間投與。
當組合投與時，CAR療法及額外試劑(例如，第二或第三試劑)或所有可以比各試劑例如以單一療法形式單獨使用之量或劑量高、低或相同的量或劑量投與。在某些實施例中，CAR療法、額外試劑(例如，第二或第三試劑)或所有之投與量或劑量比各試劑例如以單一療法形式單獨使用之量或劑量低(例如，至少20%、至少30%、至少40%或至少50%)。在其他實施例中，引起所要效果(例如，癌症之治療)之CAR療法、額外試劑(例如，第二或第三試劑)或所有之量或劑量比為達成相同治療效果所需之各試劑例如以單一療法形式單獨使用之量或劑量低(例如，至少20%、至少30%、至少40%或至少50%)。
沙立度胺類化合物
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與沙立度胺類化合物之成員組合投與。在一些實施例中，沙立度胺類化合物之成員包括(但不限於)來那度胺(CC-5013)、泊利度胺(CC-4047或ACTIMID)、沙立度胺或其鹽或衍生物。在一些實施例中，化合物可為沙立度胺類化合物之一個、兩個、三個或超過三個成員之混合物。沙立度胺類似物及沙立度胺類似物之免疫調節特性描述於Bodera及Stankiewicz, Recent Pat Endocr Metab Immune Drug Discov. 2011年9月;5(3):192-6中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。沙立度胺類似物及E3泛素之結構複合物描述於Gandhi等人,Br J Haematol. 2014年3月;164(6):811-21中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。藉由沙立度胺類似物調節E3泛素接合酶描述於Fischer等人,Nature. 2014年8月7日;512(7512):49-53中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，化合物包含式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽、酯、水合物、溶劑合物或互變異構體，其中：
X為O或S；
R1 為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其各自視情況經一或多個R4 取代；
R2a 及R2b 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基；或R2a 及R2b 與其所連接之碳原子一起形成羰基或硫羰基；
R3 各獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )或-N(RC )S(O)x RE ，其中各烷基、烯基、炔基及雜烷基獨立地且視情況經一或多個R6 取代；
R4 各獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、側氧基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )、-N (RC )S(O)x RE 、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其中各烷基、烯基、炔基、雜烷基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地且視情況經一或多個R7 取代；
RA 、RB 、RC 、RD 及RE 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基；
R6 各獨立地為C1 -C6 烷基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、芳基或雜芳基，其中各芳基及雜芳基獨立地且視情況經一或多個R8 取代；
R7 各獨立地為鹵基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ；
R8 各獨立地為C1 -C6 烷基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ；
n為0、1、2、3或4；且
x為0、1或2。
在一些實施例中，X為O。
在一些實施例中，R1 為雜環基。在一些實施例中，R1 為6員雜環基或5員雜環基。在一些實施例中，R1 為含氮雜環基。在一些實施例中，R1 為哌啶基(例如，哌啶-2,6-二酮基)。
在一些實施例中，R2a 及R2b 各獨立地為氫。在一些實施例中，R2a 及R2b 連同其所連接之碳一起形成羰基。
在一些實施例中，R3 為C1 -C6 雜烷基、-N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA 。在一些實施例中，R3 為C1 -C6 雜烷基(例如，CH2 NHC(O)CH2 -苯基-第三丁基)、-N(RC )(RD ) (例如，NH2 )或-N(RC )C(O)RA (例如，NHC(O)CH3 )。
在一實施例中，X為O。在一實施例中，R1 為雜環基(例如，哌啶-2,6-二酮基)。在一實施例中，R2a 及R2b 各獨立地為氫。在一實施例中，n為1。在一實施例中，R3 為-N(RC )(RD ) (例如，-NH2 )。在一實施例中，化合物包含來那度胺，例如3-(4-胺基-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮，或其醫藥學上可接受之鹽。在一實施例中，化合物為來那度胺，例如如下式：
。
在一實施例中，X為O。在一實施例中，R1 為雜環基(例如，哌啶基-2,6-二酮基)。在一些實施例中，R2a 及R2b 連同其所連接之碳一起形成羰基。在一實施例中，n為1。在一實施例中，R3 為-N(RC )(RD ) (例如，-NH2 )。在一實施例中，化合物包含泊利度胺，例如4-胺基-2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮，或其醫藥學上可接受之鹽。在一實施例中，化合物為泊利度胺，例如如下式：
。
在一實施例中，X為O。在一實施例中，R1 為雜環基(例如，哌啶基-2,6-二酮基)。在一實施例中，R2a 及R2b 連同其所連接之碳一起形成羰基。在一實施例中，n為0。在一實施例中，化合物包含沙立度胺，例如2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮，或其醫藥學上可接受之鹽。在一實施例中，產物為沙立度胺，例如如下式：
。
在一實施例中，X為O。在一實施例中，R1 為雜環基(例如，哌啶-2,6-二酮基)。在一實施例中，R2a 及R2b 各獨立地為氫。在一實施例中，n為1。在一實施例中，R3 為C1 -C6 雜烷基(例如，CH2 NHC(O)CH2 -苯基-第三丁基)。在一實施例中，化合物包含2-(4-(第三丁基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基異吲哚啉-5-基)甲基)乙醯胺，或其醫藥學上可接受之鹽。在一實施例中，化合物具有如下式中所展示之結構：
。
在一些實施例中，化合物為式(I-a)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽、酯、水合物或互變異構體，其中：
環A為碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其各自視情況經一或多個R4 取代；
M為不存在的、C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基或C1 -C6 雜烷基，其中各烷基、烯基、炔基及雜烷基視情況經一或多個R4 取代；
R2a 及R2b 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基；或R2a 及R2b 與其所連接之碳原子一起形成羰基或硫羰基；
R3a 為氫、C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )或-N(RC )S(O)x RE ，其中各烷基、烯基、炔基及雜烷基=視情況經一或多個R6 取代；
R3 各獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )或-N(RC )S(O)x RE ，其中各烷基、烯基、炔基及雜烷基獨立地且視情況經一或多個R6 取代；
R4 各獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、側氧基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )、-N (RC )S(O)x RE 、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其中各烷基、烯基、炔基、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基獨立地且視情況經一或多個R7 取代；
RA 、RB 、RC 、RD 及RE 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基；
R6 各獨立地為C1 -C6 烷基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、芳基或雜芳基，其中各芳基或雜芳基獨立地且視情況經一或多個R8 取代；
R7 各獨立地為鹵基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ；
R8 各獨立地為C1 -C6 烷基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ；
n為0、1、2或3；
o為0、1、2、3、4或5；且
x為0、1或2。
在一些實施例中，X為O。
在一些實施例中，M不存在。
在一些實施例中，環A為雜環基。在一些實施例中，環A為雜環基，例如6員雜環基或5員雜環基。在一些實施例中，環A為含氮雜環基。在一些實施例中，環A為哌啶基(例如，哌啶-2,6-二酮基)。
在一些實施例中，M不存在且環A為雜環基(例如，哌啶基，例如哌啶-2,6-二酮基)。
在一些實施例中，R2a 及R2b 各獨立地為氫。在一些實施例中，R2a 及R2b 連同其所連接之碳一起形成羰基。
在一些實施例中，R3a 為氫、-N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA 。在一些實施例中，R3a 為氫。在一些實施例中，R3a 為-N(RC )(RD ) (e.g., -NH2 )。在一些實施例中，R3a 為-N(RC )C(O)RA (例如NHC(O)CH3 )。
在一些實施例中，R3 為C1 -C6 雜烷基(例如，CH2 NHC(O)CH2 -苯基-第三丁基)。在一些實施例中，n為0或1。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。
化合物可包含一或多個對掌性中心或以一或多個立體異構體之形式存在。在一些實施例中，化合物包含單一對掌性中心且為立體異構體，例如R立體異構體及S立體異構體之混合物。在一些實施例中，混合物包含一定比率之R立體異構體與S立體異構體，舉例而言，R立體異構體與S立體異構體之比率為約1:1 (亦即，外消旋混合物)。在一些實施例中，混合物包含的R立體異構體與S立體異構體之比率為約51:49、約52:48、約53:47、約54:46、約55:45、約60:40、約65:35、約70:30、約75:25、約80:20、約85:15、約90:10、約95:5或約99:1。在一些實施例中，混合物包含的S立體異構體與R立體異構體之比率為約51:49、約52:48、約53:47、約54:46、約55:45、約60:40、約65:35、約70:30、約75:25、約80:20、約85:15、約90:10、約95:5或約99:1。在一些實施例中，化合物為單一式(I)或式(I-a)立體異構體，例如單一R立體異構體或單一S立體異構體。
激酶抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與激酶抑制劑組合投與。在一個實施例中，激酶抑制劑為CDK4抑制劑，例如本文所述之CDK4抑制劑，例如CDK4/6抑制劑，諸如6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪基-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H -吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7-酮鹽酸鹽(亦稱作帕博西里(palbociclib)或PD0332991)。在一個實施例中，激酶抑制劑為BTK抑制劑，例如本文所述之BTK抑制劑，諸如依魯替尼。在一個實施例中，激酶抑制劑為mTOR抑制劑，例如本文所述之mTOR抑制劑，諸如雷帕黴素、雷帕黴素類似物、OSI-027。mTOR抑制劑可為例如mTORC1抑制劑及/或mTORC2抑制劑，例如本文所述之mTORC1抑制劑及/或mTORC2抑制劑。在一個實施例中，激酶抑制劑為MNK抑制劑，例如本文所述之MNK抑制劑，諸如4-胺基-5-(4-氟苯胺基)-吡唑并[3,4-d ]嘧啶。MNK抑制劑可為例如MNK1a、MNK1b、MNK2a及/或MNK2b抑制劑。在一個實施例中，激酶抑制劑為本文所述之雙重PI3K/mTOR抑制劑，諸如PF-04695102。在一個實施例中，激酶抑制劑為DGK抑制劑，例如本文所述之DGK抑制劑，諸如DGKinh1 (D5919)或DGKinh2 (D5794)。
在一個實施例中，激酶抑制劑為BTK抑制劑，其選自依魯替尼(PCI-32765)；GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；及LFM-A13。在一較佳實施例中，BTK抑制劑不降低或抑制介白素-2誘導性激酶(ITK)之激酶活性，且係選自GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；及LFM-A13。
在一個實施例中，激酶抑制劑為BTK抑制劑，例如依魯替尼(PCI-32765)。在實施例中，本文所述之表現CAR之細胞與BTK抑制劑(例如，依魯替尼)組合投與個體。在實施例中，本文所述之表現CAR之細胞與依魯替尼(亦稱為PCI-32765)組合投與個體。依魯替尼(1-[(3R )-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H -吡唑并[3,4-d ]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮)之結構展示於下文中。
在實施例中，個體患有CLL、套細胞淋巴瘤(MCL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。舉例而言，個體在染色體17之短臂中具有缺失(del(17p)，例如白血病細胞中)。在其他實例中，個體不具有del(17p)。在實施例中，個體患有復發性CLL或SLL，例如個體先前已投與癌症療法(例如，先前投與一種、兩種、三種或四種先前癌症療法)。在實施例中，個體患有難治性CLL或SLL。在其他實施例中，個體患有濾泡性淋巴瘤，例如復發性或難治性濾泡性淋巴瘤。在一些實施例中，依魯替尼以約300至600毫克/日之劑量(例如，約300至350、350至400、400至450、450至500、500至550或550至600毫克/日，例如，約420毫克/日或約560毫克/日)投與，例如經口投與。在實施例中，依魯替尼以約250 mg、300 mg、350 mg、400 mg、420 mg、440 mg、460 mg、480 mg、500 mg、520 mg、540 mg、560 mg、580 mg、600 mg (例如，250 mg、420 mg或560 mg)之劑量每日投與持續一段時間，例如每日投與持續21日週期，或每日投與持續28日週期。在一個實施例中，投與1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個或12個以上週期的依魯替尼。在一些實施例中，依魯替尼與利妥昔單抗組合投與。參見例如Burger等人 (2013) Ibrutinib In Combination With Rituximab (iR) Is Well Tolerated and Induces a High Rate Of Durable Remissions In Patients With High-Risk Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL): New, Updated Results Of a Phase II Trial In 40 Patients, Abstract 675 presented at 55th ASH Annual Meeting and Exposition, New Orleans, LA 12月7-10日。不受理論束縛，認為添加依魯替尼增強T細胞增生性反應且可將T細胞自T輔助-2(Th2)變成T輔助-1(Th1)表型。Th1及Th2為輔助T細胞之表型，其中Th1對比Th2，引導不同免疫反應路徑。Th1表型與促炎性反應相關，例如以殺死細胞，諸如細胞內病原體/病毒或癌細胞，或使自身免疫反應永存。Th2表現型與嗜伊紅血球累積及消炎反應相關。
EGFR 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與表皮生長因子受體(EGFR)之抑制劑組合投與。
在一些實施例中，EGFR抑制劑為(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物。
在一些實施例中，EGFR抑制劑，(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物係共價不可逆酪胺酸激酶抑制劑。在某些實施例中，EGFR抑制劑，(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物抑制激活EGFR突變(L858R, ex19del)。在其他實施例中，EGFR抑制劑，(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物不抑制，或實質上不抑制野生型(wt) EGFR。化合物A40已展示在EGFR突變NSCLC患者中之功效。在一些實施例中，EGFR抑制劑，(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物亦抑制TEC家族激酶中之一或多種激酶。Tec家族激酶包括例如ITK、BMX、TEC、RLK及BTK，且在傳播T細胞受體及趨化細胞素受體信號傳導中係重要的(Schwartzberg等人(2005)Nat. Rev. Immunol . 第284-95頁)。舉例而言，化合物A40可以1.3 nM之生物化學IC50抑制ITK。ITK係對Th2細胞之存活至關重要的酶，且其抑制引起Th2細胞與Th1細胞之間的平衡移動。
在一些實施例中，EGFR抑制劑係選自埃羅替尼、吉非替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗、萊西單抗、PF-00299804、尼妥珠單抗或RO5083945中之一或多者。
腺苷 A2A 受體抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與腺苷A2A受體(A2aR)拮抗劑(例如，A2aR路徑之抑制劑，例如腺苷抑制劑，例如A2aR或CD-73之抑制劑)組合投與。在一些實施例中，A2aR拮抗劑係選自PBF509 (Palobiofarma/Novartis)、CPI444/V81444 (Corvus/Genentech)、AZD4635/HTL-1071 (AstraZeneca/Heptares)、韋帕迪蘭(Redox/Juno)、GBV-2034 (Globavir)、AB928 (Arcus Biosciences)、茶鹼、伊曲茶鹼(Kyowa Hakko Kogyo)、托紮耐特/SYN-115 (Acorda)、KW-6356 (Kyowa Hakko Kogyo)、ST-4206 (Leadiant Biosciences)或普雷迪南/SCH 420814 (Merck/Schering)。
在一些實施例中，A2aR拮抗劑包含PBF509或美國專利第8,796,284號或國際申請公開案第WO 2017/025918號中揭示之化合物，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，A2aR拮抗劑包含式(I)化合物：

其中
R1 表示選自由以下組成之群的五員雜芳基環：吡唑、噻唑及三唑環，其視情況經一或兩個鹵素原子或一或兩個甲基取代；
R2 表示氫原子；
R3 表示溴或氯原子；
R4 獨立地表示：
a) 五員雜芳基，其視情況經一或多個鹵素原子或一或多個選自由以下組成之群的基團取代：烷基、環烷基、烷氧基、烷基硫基、胺基、單或二烷基胺基
b)基團—N(R5 )(R6 )，其中R5 及R6 獨立地表示：
氫原子；
3至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基或環烷基，其視情況經一或多個鹵素原子或一或多個選自由以下組成之群的基團取代：環烷基(3-8個碳原子)、羥基、烷氧基、胺基、單及二烷基胺基(1-8個碳原子)；
或R5 及R6 與其所連接之氮原子一起形成可插入其他雜原子之4至6員飽和雜環基，其視情況經一或多個鹵素原子或一或多個烷基(1-8個碳原子)、羥基、低碳烷氧基、胺基、單或二烷基胺基取代，或
c) 基團-OR7 或-SR7 ，其中R7 獨立地表示：
直鏈或分支鏈烷基(1-8個碳原子)或環烷基(3-8個碳原子)，其視情況經一或多個鹵素原子或一或多個選自由以下組成之群的基團取代：烷基(1-8個碳原子)、烷氧基(1-8個碳原子)、胺基、單或二烷基胺基(1-8個碳原子)；或
苯基環，其視情況經一或多個鹵素原子取代。
在某些實施例中，A2aR拮抗劑包含5-溴-2,6-二-(1H -吡唑-1-基)嘧啶-4-胺。
在某些實施例中，A2aR拮抗劑包含CPI444/V81444。CPI-444及其他A2aR拮抗劑揭示於國際申請公開案第WO 2009/156737號中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在某些實施例中，A2aR拮抗劑為(S )-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H -[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。在某些實施例中，A2aR拮抗劑為(R )-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H -[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物。在某些實施例中，A2aR拮抗劑為7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H -[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。
在某些實施例中，A2aR拮抗劑為AZD4635/HTL-1071。A2aR拮抗劑揭示於國際申請公開案第WO 2011/095625號中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在某些實施例中，A2aR拮抗劑為6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。
在某些實施例中，A2aR拮抗劑為ST-4206 (Leadiant Biosciences)。在某些實施例中，A2aR拮抗劑為美國專利第9,133,197號中描述之A2aR拮抗劑，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，A2aR拮抗劑為美國專利第8,114,845號及第9,029,393號、美國申請公開案第2017/0015758號及第2016/0129108號中描述之A2aR拮抗劑，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，A2aR拮抗劑為伊曲茶鹼(CAS註冊號：155270-99-8)。伊曲茶鹼亦稱為KW-6002或8-[(E)-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙烯基]-1,3-二乙基-7-甲基-3,7-二氫-1H-嘌呤-2,6-二酮。伊曲茶鹼揭示於例如LeWitt等人 (2008)Annals of Neurology 63 (3): 295-302)中。
在一些實施例中，A2aR拮抗劑為托紮耐特(tozadenant) (Biotie)。托紮耐特亦稱為SYN115或4-羥基-N-(4-甲氧基-7-嗎啉-4-基-1,3-苯并噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲醯胺。托紮耐特阻斷A2a受體處內源性腺苷之作用，引起D2受體處多巴胺作用之增強及mGluR5受體處麩胺酸作用之抑制。在一些實施例中，A2aR拮抗劑為普雷迪南(preladenant) (CAS登記號：377727-87-2)。普雷迪南亦稱為SCH 420814或2-(2-呋喃基)-7-[2-[4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-1-哌嗪基]乙基]7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺。普雷迪南係作為起腺苷A2A受體處之強效及選擇性拮抗劑之作用的藥物研發。
在一些實施例中，A2aR拮抗劑為維帕德南(vipadenan)。維帕德南亦稱為BIIB014、V2006或3-[(4-胺基-3-甲基苯基)甲基]-7-(呋喃-2-基)三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。
其他例示性A2aR拮抗劑包括例如ATL-444、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、VER-6623、VER-6947、VER-7835、CGS-15943或ZM-241,385。
IDO/TDO 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)及/或色胺酸2,3-二加氧酶(TDO)組合投與。在一些實施例中，IDO抑制劑係選自(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺(亦稱為艾帕斯塔或INCB24360)、因多莫得(NLG8189)、(1-甲基-D-色胺酸)、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇(亦稱為NLG919)、因多莫得、BMS-986205 (先前為F001287)。
在一些實施例中，IDO/TDO抑制劑為因多莫得(New Link Genetics)。因多莫得(1-甲基-色胺酸之D異構體)為經口投與之小分子吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)路徑抑制劑，其干擾腫瘤藉以逃避免疫介導之摧毀的機制。
在一些實施例中，IDO/TDO抑制劑為NLG919 (New Link Genetics)。NLG919為強效IDO (吲哚胺-(2,3)-二加氧酶)路徑抑制劑，其在無細胞分析中具有7 nM/75 nM之Ki/EC50。
在一些實施例中，IDO/TDO抑制劑為艾帕斯塔(CAS登記號：1204669-58-8)。艾帕斯塔亦稱為INCB24360或INCB024360 (Incyte)。艾帕斯塔為強效及選擇性吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO1)抑制劑，其IC50為10 nM，與其他相關酶(諸如IDO2或色胺酸2,3-二加氧酶(TDO))相比具有高選擇性。
在一些實施例中，IDO/TDO抑制劑為F001287 (Flexus/BMS)。F001287為吲哚胺2,3-二加氧酶1 (IDO1)之小分子抑制劑。
CD19 CAR
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與表現CD19 CAR之細胞療法組合投與。
在一個實施例中，CD19 CAR之抗原結合域與描述於Nicholson等人 Mol. Immun. 34(16-17):1157-1165(1997)中之FMC63 scFv片段具有相同或類似結合特異性。在一個實施例中，CD19 CAR之抗原結合域包括描述於Nicholson等人Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997)中之scFv片段。
在一些實施例中，CD19 CAR包括如以引用之方式併入本文中之WO2014/153270之表3的抗原結合域(例如，人類化抗原結合域)。WO2014/153270亦描述分析各種CAR構築體之結合及功效之方法。
在一個態樣中，親本鼠類scFv序列為提供於PCT公開案WO2012/079000 (以引用之方式併入本文中)中之CAR19構築體。在一個實施例中，抗CD19結合域為描述於WO2012/079000中之scFv。
在一個實施例中，CAR分子包含如PCT公開案WO2012/079000中SEQ ID NO: 12所提供之融合多肽序列，其提供特異性結合至人類CD19之鼠源scFv片段。
在一個實施例中，CD19 CAR包含如PCT公開案WO2012/079000中之SEQ ID NO: 12所提供之胺基酸序列。在實施例中，胺基酸序列為
(MALPVTALLLPLALLLHAARP)diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdiskylnwyqqkpdgtvklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnleqediatyfcqqgntlpytfgggtkleitggggsggggsggggsevklqesgpglvapsqslsvtctvsgvslpdygvswirqpprkglewlgviwgsettyynsalksrltiikdnsksqvflkmnslqtddtaiyycakhyyyggsyamdywgqgtsvtvsstttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr (SEQ ID NO: 2029)，或與其實質上同源的序列。信號肽之視情況存在之序列以大寫字母及括號展示。
在一個實施例中，胺基酸序列為：
Diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdiskylnwyqqkpdgtvklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnleqediatyfcqqgntlpytfgggtkleitggggsggggsggggsevklqesgpglvapsqslsvtctvsgvslpdygvswirqpprkglewlgviwgsettyynsalksrltiikdnsksqvflkmnslqtddtaiyycakhyyyggsyamdywgqgtsvtvsstttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr (SEQ ID NO: 2030)，或與其實質上同源的序列。
在一個實施例中，CD19 CAR具有USAN命名TISAGENLECLEUCEL-T。在實施例中，CTL019藉由T細胞之基因修飾製得，藉由在EF-1 α啟動子之控制下經由用含有CTL019轉殖基因之自身不活化、缺乏複製之慢病毒(LV)載體轉導之穩定插入介導。CTL019可為基於轉殖基因陽性T細胞百分比向個體傳遞之轉殖基因陽性及陰性T細胞之混合物。
在其他實施例中，CD19 CAR包含如以引用之方式併入本文中之WO2014/153270之表3的抗原結合域(例如，人類化抗原結合域)。
鼠類CD19抗體之人類化為臨床配置所需，其中小鼠特異性殘基可在接受CART19處理，亦即藉由經CAR19構築體轉導之T細胞處理的患者中誘導人類抗小鼠抗原(HAMA)反應。人類化CD19 CAR序列之產生、特徵及功效描述於國際申請案WO2014/153270中，該等文獻以全文引用之方式併入本文中，包括實例1-5 (第115-159頁)。
在一些實施例中，CD19 CAR構築體描述於以引用之方式併入本文中的PCT公開案WO 2012/079000中，且鼠類CD19 CAR及scFv構築體之胺基酸序列展示於以下表8中，或與任一前述序列實質上一致(例如，與本文所述之任一序列具有至少85%、90%、95%或大於95%一致性)的序列。


表 8 . CD19 CAR構築體
含有人類化抗CD19 scFv域之CD19 CAR構築體描述於PCT公開案WO 2014/153270中，該文獻以引用之方式併入本文中。
抗CD19 scFv域之鼠類及人類化CDR序列之重鏈可變域序列展示於表9中且輕鏈可變域序列展示於表10中。SEQ ID NO參照表8中所見之彼等。
表 9 . CD19抗體之重鏈可變域CDR (Kabat) SEQ ID NO


表 10 . CD19抗體之輕鏈可變域CDR (Kabat) SEQ ID NO
可根據本發明使用此項技術中之任何已知CD19 CAR，例如任何已知CD19 CAR之CD19抗原結合域。舉例而言，LG-740；CD19 CAR，其描述於美國專利第8,399,645號、美國專利第7,446,190號；Xu等人, Leuk Lymphoma. 2013 54(2):255-260 (2012)；Cruz等人, Blood 122(17):2965-2973 (2013)；Brentjens等人, Blood, 118(18):4817-4828 (2011)；Kochenderfer等人, Blood 116(20):4099-102 (2010)；Kochenderfer等人, Blood 122(25):4129-39 (2013)；及16th Annu Meet Am Soc Gen Cell Ther (ASGCT) (5月15-18日, Salt Lake City) 2013, Abst 10中。
例示性CD19 CAR包括本文(例如本文所述之一或多個表中)所述之CD19 CAR或描述於以下中之抗CD19 CAR：Xu等人 Blood 123.24(2014):3750-9；Kochenderfer 等人 Blood 122.25(2013):4129-39；Cruz等人Blood 122.17(2013):2965-73；NCT00586391、NCT01087294、NCT02456350、NCT00840853、NCT02659943、NCT02650999、NCT02640209、NCT01747486、NCT02546739、NCT02656147、NCT02772198、NCT00709033、NCT02081937、NCT00924326、NCT02735083、NCT02794246、NCT02746952、NCT01593696、NCT02134262、NCT01853631、NCT02443831、NCT02277522、NCT02348216、NCT02614066、NCT02030834、NCT02624258、NCT02625480、NCT02030847、NCT02644655、NCT02349698、NCT02813837、NCT02050347、NCT01683279、NCT02529813、NCT02537977、NCT02799550、NCT02672501、NCT02819583、NCT02028455、NCT01840566、NCT01318317、NCT01864889、NCT02706405、NCT01475058、NCT01430390、NCT02146924、NCT02051257、NCT02431988、NCT01815749、NCT02153580、NCT01865617、NCT02208362、NCT02685670、NCT02535364、NCT02631044、NCT02728882、NCT02735291、NCT01860937、NCT02822326、NCT02737085、NCT02465983、NCT02132624、NCT02782351、NCT01493453、NCT02652910、NCT02247609、NCT01029366、NCT01626495、NCT02721407、NCT01044069、NCT00422383、NCT01680991、NCT02794961或NCT02456207，其中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
CD20 CAR
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與表現CD20 CAR之細胞療法組合投與。
在一個實施例中，CD20 CAR包含以下各項中之一或多者：LC CDR1、LC CDR2、LC CDR3、HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、VH、VL、scFv或表 11 、表 12 、表 13 之構築體之全長序列，例如CAR20-1、CAR20-2、CAR20-3、CAR20-4、CAR20-5、CAR20-6、CAR20-7、CAR20-8、CAR20-9、CAR20-10、CAR20-11、CAR20-12、CAR20-13、CAR20-14、CAR20-15或CAR20-16，或與其實質上一致的序列(例如，與其共有80%、85%、90%或95%一致性之序列)。表11中之全長CD20 CAR胺基酸序列各包括視情況存在之對應於以下胺基酸序列之21個胺基酸的信號肽序列：MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID NO: 2031)。表11中之全長CAR核苷酸序列各包括視情況存在之對應於以下核苷酸序列對應之前63個胺基酸的核苷酸信號肽序列：ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCC (SEQ ID NO: 2032)。
表 11 . CD20 CAR構築體
表11之CD20 scFv域之重鏈可變域之CDR (Kabat)序列之序列標識的概述展示於表12中，且輕鏈可變域之CDR (Kabat)序列之序列標識的概述展示於表13中。SEQ ID NO參考見於表11中之彼等。
表 12 . CD20 CAR分子之重鏈可變域CDR (Kabat) SEQ ID NO
表 13 . CD20抗體分子之輕鏈可變域CDR (Kabat) SEQ ID NO
其他 CD20 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與CD20抑制劑組合投與。
在一個實施例中，CD20抑制劑為抗CD20抗體或其片段。在一個實施例中，抗體為單特異性抗體，且在另一實施例中，抗體為雙特異性抗體。在一實施例中，CD20抑制劑為嵌合小鼠/人類單株抗體，例如利妥昔單抗。在實施例中，CD20抑制劑為人類單株抗體，如奧法木單抗(ofatumumab)。在一實施例中，CD20抑制劑為人類化抗體，諸如奧克珠單抗(ocrelizumab)、維托珠單抗(veltuzumab)、歐比托珠單抗(obinutuzumab)、奧卡拉珠單抗(ocaratuzumab)或PRO131921 (Genentech)。在一實施例中，CD20抑制劑為包含一部分抗CD20抗體之融合蛋白，諸如TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals)。
CD22 CAR
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與表現CD22 CAR之細胞療法(例如，表現結合至人類CD22之CAR之細胞)組合投與。
在一些實施例中，表現CD22 CAR之細胞療法包括如以引用之方式併入本文中之WO2016/164731的抗原結合域。
CD22 CAR之序列提供於下文中。在一些實施例中，CD22 CAR為CD22-65。在一些實施例中，CD22 CAR為CD22-65s。在一些實施例中，CD22 CAR為CD22-65ss。
人類CD22 CAR CD22-65 scFv序列


人類CD22 CAR CD22-65s scFc序列(連接子由斜體及底線展示)

人類CD22 CAR CD22-65ss scFc序列

人類CD22 CAR重鏈可變區

人類CD22 CAR輕鏈可變區

表 14 . CD22 CAR (CAR22-65)之重鏈可變域CDR
表 15 . CD22 CAR (CAR22-65)之輕鏈可變域CDR。此表中之LC CDR序列在Kabat或組合定義下具有相同序列。
在一些實施例中，抗原結合域包含表 14 中所列之任何重鏈結合域胺基酸序列之HC CDR1、HC CDR2及HC CDR3。在實施例中，抗原結合域進一步包含LC CDR1、LC CDR2及LC CDR3。在實施例中，抗原結合域包含表 15 中所列之LC CDR1、LC CDR2及LC CDR3胺基酸序列。
在一些實施例中，抗原結合域包含表 15 中所列之任何輕鏈結合域胺基酸序列之一個、兩個或所有LC CDR1、LC CDR2及LC CDR3，且表 14 中所列之任何重鏈結合域胺基酸序列之一個、兩個或所有HC CDR1、HC CDR2及HC CDR3。
在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號方案、Chothia編號方案或其組合定義。
VL域及VH域在scFv中呈現之次序可以變化(亦即，VL-VH或VH-VL定向)，且其中「G4S」 (SEQ ID NO: 1032)次單元之一、二、三或四個複本中之任一者可連接可變域以建立整個scFv域，其中各次單元包含序列GGGGS (SEQ ID NO: 1032) (例如, (G4S)3 (SEQ ID NO: 1040)或(G4S)4 (SEQ ID NO: 1039))。或者，CAR構築體可包括例如包括序列GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 1985)之連接子。或者，CAR構築體可包括例如包括序列LAEAAAK (SEQ ID NO: 2033)之連接子。在一實施例中，CAR構築體不包括VL域與VH域之間的連接子。
此等純系在來源於CD3ζ鏈之共刺激域的信號域中均含有Q/K殘基變化。
其他 CD22 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與CD20抑制劑組合投與。在一些實施例中，CD20抑制劑為小分子或抗CD20抗體分子。
在一實施例中，抗體為單特異性抗體，視情況共軛至第二試劑，如化學治療劑。舉例而言，在一實施例中，抗體為抗CD22單株抗體-MMAE共軛物(例如DCDT2980S)。在一實施例中，抗體為抗CD22抗體之scFv，例如抗體RFB4之scFv。此scFv可融合至綠膿桿菌外毒素-A (例如，BL22)之全部或片段。在一實施例中，抗體為人類化抗CD22單株抗體(例如，依帕珠單抗)。在一實施例中，抗體或其片段包含抗CD22抗體之Fv部分，其視情況共價融合至綠膿桿菌外毒素-A (例如，莫昔土莫單抗(moxetumomab pasudotox))之全部或片段(例如，38 KDa片段)。在一實施例中，抗CD22抗體為抗CD19/CD22雙特異性抗體，視情況共軛至毒素。舉例而言，在一個實施例中，抗CD22抗體包含抗CD19/CD22雙特異性部分(例如，兩個scFv配位體，其識別人類CD19及CD22)，其視情況連接至白喉毒素(DT)之全部或一部分，例如白喉毒素(DT)之前389個胺基酸，DT 390，例如配位體定向毒素，諸如DT2219ARL)。在另一實施例中，雙特異性部分(例如，抗CD19/抗CD22)連接至毒素，諸如脫糖基化蓖麻毒素A鏈(例如，Combotox)。
在一些實施例中，CD22抑制劑為多特異性抗體分子，例如雙特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3之雙特異性抗體分子。結合至CD20及CD3之例示性雙特異性抗體分子揭示於WO2016086189及WO2016182751中，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，結合至CD20及CD3之雙特異性抗體分子為如圖74所揭示之XENP13676，WO2016086189之SEQ ID NO: 323、324及325。
多特異性 CAR
在一些實施例中，本文揭示之CAR分子為多特異性，例如雙特異性CAR分子，其包含一種、兩種或兩種以上結合特異性，例如對第一抗原，例如B細胞抗原決定基之第一結合特異性，及對相同或不同抗原，例如B細胞抗原決定基之第二結合特異性。
在一個實施例中，第一及第二結合特異性為抗體分子，例如抗原結合域(例如，scFv)。在雙特異性CAR分子之各抗體分子(例如，scFv)內，VH可在VL上游或下游。在一些實施例中，上游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VH (VH1 )在其VL (VL1 )之上游，且下游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VL (VL2 )在其VH (VH2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VH1 -VL1 -VL2 -VH2 。
在一些實施例中，上游抗體或抗體片段或抗原結合域(例如，scFv)經配置使其VL (VL1 )在其VH (VH1 )之上游，且下游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VH (VH2 )在其VL (VL2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VL1 -VH1 -VH2 -VL2 。
在一些實施例中，上游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VL (VL1 )在其VH (VH1 )之上游，且下游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VL (VL2 )在其VH (VH2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VL1 -VH1 -VL2 -VH2 。
在一些實施例中，上游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VH (VH1 )在其VL (VL1 )之上游，且下游抗體或抗體片段(例如，scFv)經配置使其VH (VH2 )在其VL (VL2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VH1 -VL1 -VH2 -VL2 。
在前述組態中之任一者中，視情況，連接子安置在兩個抗體或抗體片段(例如，scFvs)，例如若構築體經配置為VH1 -VL1 -VL2 -VH2 ，則在VL1 與VL2 之間；若構築體經配置為VL1 -VH1 -VH2 -VL2 ，則在VH1 與VH2 之間；若構築體經配置為VL1 -VH1 -VL2 -VH2 ，則在VH1 與VL2 之間；或若構築體經配置為VH1 -VL1 -VH2 -VL2 ，則在VL1 與VH2 之間。一般而言，兩個抗體片段或抗原結合域，例如scFvs之間的連接子應足夠長以避免兩個scFv之域之間的錯配。連接子可為如本文所述之連接子。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n=3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，連接子包含以下胺基酸序列，例如由以下胺基酸序列組成：LAEAAAK (SEQ ID NO: 2033)。
在前述組態中之任一者中，視情況，連接子安置在第一抗原結合域，例如scFv之VL及VH之間。視情況，連接子安置在第二抗原結合域，例如scFv之VL及VH之間。在具有多個連接子之構築體中，任兩個或兩個以上連接子可相同或不同。因此，在一些實施例中，雙特異性CAR在如本文所述之配置中包含VL、VH及視情況存在之一或多個連接子。
在一些實施例中，各抗體分子，例如各抗原結合域(例如，各scFv)包含在VH區及VL區之間的連接子。在一些實施例中，在VH區及VL區之間的連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在其他實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，VH區與VL區在無連接子之情況下連接。
在某些實施例中，CAR分子為具有對於第一B細胞抗原決定基之第一結合特異性及對於相同或不同B細胞抗原之第二結合特異性的雙特異性CAR分子。舉例而言，在一些實施例中雙特異性CAR分子具有對於BCMA之第一結合特異性及對於以下中之一或多者的第二結合特異性：BCMA、CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、FLT-3、ROR1、CD79b、CD179b或CD79a。在一些實施例中，雙特異性CAR分子具有對於BCMA之第一結合特異性及對於CD19之第二結合特異性。在一些實施例中，雙特異性CAR分子具有對於BCMA之第一結合特異性及對於CD20之第二結合特異性。在一些實施例中，雙特異性CAR分子具有對於BCMA之第一結合特異性及對於CD22之第二結合特異性。
在一個實施例中，CAR分子為具有結合特異性，例如與BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性的雙特異性CAR分子。在一些實施例中，結合特異性經配置使其VL (VL1 )在其VH (VH1 )之上游，且下游抗體或抗體片段或抗原結合域(例如，scFv)經配置使其VL (VL2 )在其VH (VH2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VL1 -VH1 -VL2 -VH2 。在一些實施例中，對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性(例如，BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二scFv)包含在VH區及VL區之間的連接子。在一些實施例中，在VH區及VL區之間的連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，VH區與VL區在無連接子之情況下連接。
在另一實施例中，結合特異性，例如對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性經配置使其VL (VL1 )在其VH (VH1 )之上游，且下游抗體或抗體片段或抗原結合域(例如，scFv)經配置使其VH (VH2 )在其VL (VL2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VL1 -VH1 -VH2 -VL2 。在一些實施例中，對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性(例如，BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二scFv)包含在VH區及VL區之間的連接子。在一些實施例中，在VH區及VL區之間的連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，VH區與VL區在無連接子之情況下連接。
在另一實施例中，結合特異性，例如對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性經配置使其VH (VH1 )在其VL (VL1 )之上游，且下游抗體或抗體片段或抗原結合域(例如，scFv)經配置使其VL (VL2 )在其VH (VH2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VH1 -VL1 -VL2 -VH2 。在一些實施例中，對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性(例如，BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二scFv)包含在VH區及VL區之間的連接子。在一些實施例中，在VH區及VL區之間的連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，VH區與VL區在無連接子之情況下連接。
在另一實施例中，結合特異性，例如對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性經配置使其VH (VH1 )在其VL (VL1 )之上游，且下游抗體或抗體片段或抗原結合域(例如，scFv)經配置使其VH (VH2 )在其VL (VL2 )上游，使得整個雙特異性CAR分子在自N端至C端定向上具有配置VH1 -VL1 -VH2 -VL2 。在一些實施例中，對BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二結合特異性(例如，BCMA、CD19、CD20及/或CD22之第一及/或第二scFv)包含在VH區及VL區之間的連接子。在一些實施例中，在VH區及VL區之間的連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，VH區與VL區在無連接子之情況下連接。
在一些實施例中，雙特異性CAR分子包含對BCMA之第一結合特異性，例如本文所述之對BCMA之任一結合特異性，及對CD19之第二結合特異性，例如如本文所述之對CD19之任一結合特異性。在一些實施例中，雙特異性CAR分子包含對BCMA之第一結合特異性，例如本文所述之對BCMA之任一結合特異性，及對CD20之第二結合特異性，例如如本文所述之對CD20之任一結合特異性。在一些實施例中，雙特異性CAR分子包含對BCMA之第一結合特異性，例如本文所述之對BCMA之任一結合特異性，及對CD22之第二結合特異性，例如如本文所述之對CD22之任一結合特異性。在一個實施例中，第一及第二結合特異性存在於相鄰多肽鏈、例如單鏈中。在一些實施例中，第一及第二結合特異性視情況包含如本文所述之連接子。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n=3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，連接子包含以下胺基酸序列，例如由以下胺基酸序列組成：LAEAAAK (SEQ ID NO: 2033)。
在一些實施例中，本文所揭示之CAR分子包含雙特異性CAR，其包含第一結合特異性及第二結合特異性，例如，如本文所述(例如兩種抗體分子，例如兩種如本文所述之scFv)。在一些實施例中，雙特異性CAR包含兩種抗體分子，其中第一結合特異性，例如第一抗體分子(例如，第一抗原結合域，例如第一scFv)更接近跨膜域，在本文中亦被稱作近端抗體分子(例如，近端抗原結合域)，且第二結合特異性，例如第二抗體分子(例如，第二抗原結合域，例如第二scFv)更遠離膜，在本文中亦被稱作遠端抗體分子(例如，遠端抗原結合域)。因此，自N端至C端，CAR分子包含遠端結合特異性，例如遠端抗體分子(例如，遠端抗原結合域，例如遠端scFv或scFv2)，視情況存在之連接子，之後為近端結合特異性，例如近端抗體分子(例如，近端抗原結合域，例如近端scFv或scFv1)，視情況經由連接子至跨膜域及胞內域，例如如本文所述。在一些實施例中，CAR分子包含對於BCMA之近端或遠端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性。在一個實施例中，CAR分子包含對於BCMA之近端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性，及對於CD19之遠端結合特異性，例如如本文所述之CD19結合特異性。在一個實施例中，CAR分子包含對於BCMA之近端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性，及對於CD20之遠端結合特異性，例如如本文所述之CD20結合特異性。在一個實施例中，CAR分子包含對於BCMA之近端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性，及對於CD22之遠端結合特異性，例如如本文所述之CD22結合特異性。在一個實施例中，CAR分子包含對於BCMA之遠端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性，及對於CD19之近端結合特異性，例如如本文所述之CD19結合特異性。在一個實施例中，CAR分子包含對於BCMA之遠端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性，及對於CD20之近端結合特異性，例如如本文所述之CD20結合特異性。在一個實施例中，CAR分子包含對於BCMA之遠端結合特異性，例如如本文所述之BCMA結合特異性，及對於CD22之近端結合特異性，例如如本文所述之CD22結合特異性。
在一個實施例中，CAR分子包含遠離膜之對BCMA之結合特異性，例如對BCMA之VL1-VH1結合特異性，及靠近膜之對CD19、CD20或CD22之結合特異性，例如對CD19之VL2-VH2或VH2-VL1結合特異性。在一個實施例中，第一及第二結合特異性存在於相鄰多肽鏈、例如單鏈中。在一些實施例中，第一及第二結合特異性視情況包含如本文所述之連接子。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n=3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，連接子包含以下胺基酸序列，例如由以下胺基酸序列組成：LAEAAAK (SEQ ID NO: 2033)。
在一個實施例中，CAR分子包含靠近膜之對BCMA之結合特異性，例如對BCMA之VL1-VH1結合特異性，及遠離膜之對CD19、CD20或CD22之結合特異性，例如對CD19、CD20或CD22之VL2-VH2或VH2-VL1結合特異性。在一個實施例中，第一及第二結合特異性存在於相鄰多肽鏈、例如單鏈中。在一些實施例中，第一及第二結合特異性視情況包含如本文所述之連接子。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n 連接子(SEQ ID NO: 2034)，其中n為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n = 1 (SEQ ID NO: 1032)，例如，連接子具有胺基酸序列Gly4 -Ser (SEQ ID NO: 1032)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n=3 (SEQ ID NO: 1040)。在一些實施例中，連接子為(Gly4 -Ser)n ，其中n= 4 (SEQ ID NO: 1039)。在一些實施例中，連接子包含以下胺基酸序列，例如由以下胺基酸序列組成：LAEAAAK (SEQ ID NO: 2033)。
FCRL2 或 FCRL5 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與FCRL2或FCRL5抑制劑組合投與。在一些實施例中，FCRL2或FCRL5抑制劑為抗FCRL2抗體分子，例如雙特異性抗體分子，例如結合至FCRL2及CD3之雙特異性抗體。在一些實施例中，FCRL2或FCRL5抑制劑為抗FCRL5抗體分子，例如雙特異性抗體分子，例如結合至FCRL5及CD3之雙特異性抗體。在一些實施例中，FCRL2或FCRL5抑制劑為表現FCRL2 CAR之細胞療法。在一些實施例中，FCRL2或FCRL5抑制劑為表現FCRL5 CAR之細胞療法。
例示性抗FCRL5抗體分子揭示於US20150098900、US20160368985、WO2017096120中(例如，揭示於WO2017096120中之抗體ET200-001、ET200-002、ET200-003、ET200-006、ET200-007、ET200-008、ET200-009、ET200-010、ET200-011、ET200-012、ET200-013、ET200-014、ET200-015、ET200-016、ET200-017、ET200-018、ET200-019、ET200-020、ET200-021、ET200-022、ET200-023、ET200-024、ET200-025、ET200-026、ET200-027、ET200-028、ET200-029、ET200-030、ET200-031、ET200-032、ET200-033、ET200-034、ET200-035、ET200-037、ET200-038、ET200-039、ET200-040、ET200-041、ET200-042、ET200-043、ET200-044、ET200-045、ET200-069、ET200-078、ET200-079、ET200-081、ET200-097、ET200-098、ET200-099、ET200-100、ET200-101、ET200-102、ET200-103、ET200-104、ET200-105、ET200-106、ET200-107、ET200-108、ET200-109、ET200-110、ET200-111、ET200-112、ET200-113、ET200-114、ET200-115、ET200-116、ET200-117、ET200-118、ET200-119、ET200-120、ET200-121、ET200-122、ET200-123、ET200-125、ET200-005及ET200-124)，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。
例示性FCRL5 CAR分子揭示於WO2016090337中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
IL - 15 及 / 或 IL - 15Ra
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與IL-15組合投與。在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與IL15/IL-15Ra複合物組合投與。在一些實施例中，IL-15/IL-15Ra複合物係選自NIZ985 (Novartis)、ATL-803 (Altor)或CYP0150 (Cytune)。
例示性 IL - 15 / IL - 15Ra 複合物
在一個實施例中，IL-15/IL-15Ra複合物包含與可溶形式之人類IL-15Ra複合的人類IL-15。複合物可包含與可溶形式之IL-15Ra共價或非共價結合的IL-15。在一特定實施例中，人類IL-15非共價結合至可溶形式之IL-15Ra。在一特定實施例中，如WO 2014/066527中所述，組合物之人類IL-15包含表16中之胺基酸序列SEQ ID NO: 1001，且可溶形式之人類IL-15Ra包含表16中之胺基酸序列SEQ ID NO:1002，該文獻以全文引用之方式併入。本文所述之分子可藉由WO 2007/084342中所述之載體、宿主細胞及方法製得，該文獻以全文引用之方式併入。
表 16 . 例示性IL-15/IL-15Ra複合物之胺基酸及核苷酸序列
其他例示性 IL - 15 / IL - 15Ra 複合物
在一個實施例中，IL-15/IL-15Ra複合物為ALT-803，一種IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白(IL-15N72D:IL-15RaSu/Fc可溶性複合物)。ALT-803揭示於WO 2008/143794中，該文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白包含如表17中所揭示之序列。
在一個實施例中，IL-15/IL-15Ra複合物包含與IL-15Ra之sushi域融合的IL-15 (CYP0150，Cytune)。IL-15Ra之sushi域係指開始於IL-15Ra之信號肽之後的第一半胱胺酸殘基且結束於該信號肽之後的第四半胱胺酸殘基的域。IL-15與IL-15Ra之sushi域融合的複合物描述於WO 2007/04606及WO 2012/175222中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，IL-15/IL-15Ra sushi域融合包含如表17中所揭示之序列。
表 17 . 其他例示性IL-15/IL-15Ra複合物之胺基酸序列
PD - 1 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與PD-1抑制劑組合投與。在一些實施例中，PD-1抑制劑係選自PDR001 (Novartis)、納武單抗(Bristol-Myers Squibb)、派立珠單抗(Merck & Co)、皮立珠單抗(CureTech)、MEDI0680 (Medimmune)、REGN2810 (Regeneron)、TSR-042 (Tesaro)、PF-06801591 (Pfizer)、BGB-A317 (Beigene)、BGB-108 (Beigene)、INCSHR1210 (Incyte)或AMP-224 (Amplimmune)。
例示性 PD - 1 抑制劑
在一個實施例中，PD-1抑制劑為抗PD-1抗體分子。在一個實施例中，PD-1抑制劑為如2015年7月30日公開之題為「Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof」之US 2015/0210769中所述之抗PD-1抗體分子，該案以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含來自包含表18中所展示之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區(例如，來自表18中所揭示之BAP049-純系-E或BAP049-純系-B之重鏈及輕鏈可變區序列)，或由表18中所展示之核苷酸序列編碼之重鏈及輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR) (或集合地所有CDR)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat定義(例如，如表18中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Chothia定義(例如，如表18中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat與Chothia之組合CDR定義(例如，如表18中所闡述)。在一個實施例中，VH CDR1之Kabat及Chothia CDR之組合包含胺基酸序列GYTFTTYWMH (SEQ ID NO: 541)。在一個實施例中，相對於表18中所展示之胺基酸序列或由表18中所展示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一或多個CDR (或集合地所有CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或超過六個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含：重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 501之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 502之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 503之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 510之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 511之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 512之VLCDR3胺基酸序列，其各自揭示於表18中。
在一個實施例中，抗體分子包含VH，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 524編碼的VHCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 525編碼的VHCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 526編碼的VHCDR3；及VL，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 529編碼的VLCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 530編碼的VLCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 531編碼的VLCDR3，其各自揭示於表18中。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 506或與SEQ ID NO: 506具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 520或與SEQ ID NO: 520具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 516或與SEQ ID NO: 516具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 506之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 520之VL。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 506之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 516之VL。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 507或與SEQ ID NO: 507具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 521或SEQ ID NO: 517或與SEQ ID NO: 521或SEQ ID NO: 517具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 507編碼的VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 521或SEQ ID NO: 517編碼的VL。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 508或與SEQ ID NO: 508具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 522或與SEQ ID NO: 522具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 518或與SEQ ID NO: 518具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 508之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 522之輕鏈。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 508之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 518之輕鏈。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 509或與SEQ ID NO: 509具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 523或SEQ ID NO: 519或與SEQ ID NO: 523或SEQ ID NO: 519具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 509編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 523或SEQ ID NO: 519編碼的輕鏈。
本文所述之抗體分子可藉由US 2015/0210769中所述之載體、宿主細胞及方法製得，該文獻以全文引用之方式併入。
表 18 . 例示性抗PD-1抗體分子之胺基酸及核苷酸序列
其他例示性 PD - 1 抑制劑
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為納武單抗(Bristol-Myers Squibb)，亦稱為MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或OPDIVO®。納武單抗(純系5C4)及其他抗PD-1抗體揭示於US 8,008,449及WO 2006/121168中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含納武單抗之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表19所揭示。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為派立珠單抗(Merck & Co)，亦稱為拉立珠單抗、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA®。派立珠單抗及其他抗PD-1抗體揭示於Hamid, O.等人(2013)New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44、US 8,354,509及WO 2009/114335中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含派立珠單抗之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表19所揭示。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為皮立珠單抗(CureTech)，亦稱為CT-011。皮立珠單抗及其他抗PD-1抗體揭示於Rosenblatt, J.等人(2011)J Immunotherapy 34(5): 409-18、US 7,695,715、US 7,332,582及US 8,686,119中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含皮立珠單抗之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表19所揭示。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為MEDI0680 (Medimmune)，亦稱為AMP-514。MEDI0680及其他抗PD-1抗體揭示於US 9,205,148及WO 2012/145493中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含MEDI0680之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為REGN2810 (Regeneron)。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含REGN2810之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為PF-06801591 (Pfizer)。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含PF-06801591之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為BGB-A317或BGB-108 (Beigene)。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含BGB-A317或BGB-108之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為INCSHR1210 (Incyte)，亦稱為INCSHR01210或SHR-1210。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含INCSHR1210之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子為TSR-042 (Tesaro)，亦稱為ANB011。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包含TSR-042之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
其他已知抗PD-1抗體包括例如以下文獻中所述之彼等抗體：WO 2015/112800、WO 2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO 2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731及US 9,102,727，該等文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗PD-1抗體為與本文所述之抗PD-1抗體之一競爭結合PD-1且/或與本文所述之抗PD-1抗體之一結合至PD-1上之相同抗原決定基的抗體。
在一個實施例中，PD-1抑制劑為抑制PD-1信號傳導路徑之肽，例如如US 8,907,053中所述，該文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，PD-1抑制劑為與恆定區(例如，免疫球蛋白序列之Fc區)融合之免疫黏附素(例如，包含PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1結合部分的免疫黏附素)。在一個實施例中，PD-1抑制劑為AMP-224 (B7-DCIg (Amplimmune)，例如揭示於WO 2010/027827及WO 2011/066342中，該等文獻以全文引用之方式併入。
表 19 . 其他例示性抗PD-1抗體分子之胺基酸序列
PD - L1 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與PD-L1抑制劑組合投與。在一些實施例中，PD-L1抑制劑係選自FAZ053 (Novartis)、阿特珠單抗(Atezolizumab) (Genentech/Roche)、艾維路單抗(Merck Serono及Pfizer)、德瓦魯單抗(MedImmune/AstraZeneca)或BMS-936559 (Bristol-Myers Squibb)。
例示性 PD - L1 抑制劑
在一個實施例中，PD-L1抑制劑為抗PD-L1抗體分子。在一個實施例中，PD-L1抑制劑為如2016年4月21日公開之題為「Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof」之US 2016/0108123中所揭示之抗PD-L1抗體分子，該文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含來自包含表20中所展示之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區(例如，來自表20中所揭示之BAP058-純系O或BAP058純系N之重鏈及輕鏈可變區序列)，或由表20中所展示之核苷酸序列編碼之重鏈及輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR) (或集合地所有CDR)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat定義(例如，如表20中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Chothia定義(例如，如表20中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat與Chothia之組合CDR定義(例如，如表20中所闡述)。在一個實施例中，VH CDR1之Kabat及Chothia CDR之組合包含胺基酸序列GYTFTSYWMY (SEQ ID NO: 647)。在一個實施例中，相對於表20中所展示之胺基酸序列或由表20中所展示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一或多個CDR (或集合地所有CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或超過六個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含：重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 601之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 602之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 603之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 609之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 610之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 611之VLCDR3胺基酸序列，其各自揭示於表20中。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含VH，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 628編碼的VHCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 629編碼的VHCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 630編碼的VHCDR3；及VL，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 633編碼的VLCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 634編碼的VLCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 635編碼的VLCDR3，其各自揭示於表20中。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 606或與SEQ ID NO: 606具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 616或與SEQ ID NO: 616具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 620或與SEQ ID NO: 620具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 624或與SEQ ID NO: 624具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 606之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 616之VL。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 620之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 624之VL。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 607或與SEQ ID NO: 607具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 617或與SEQ ID NO: 617具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 621或與SEQ ID NO: 621具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 625或與SEQ ID NO: 625具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 607編碼的VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 617編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 621編碼的VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 625編碼的VL。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 608或與SEQ ID NO: 608具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 618或與SEQ ID NO: 618具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 622或與SEQ ID NO: 622具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 626或與SEQ ID NO: 626具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 608之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 618之輕鏈。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 622之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 626之輕鏈。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 615或與SEQ ID NO: 615具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 619或與SEQ ID NO:619具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 623或與SEQ ID NO: 623具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 627或與SEQ ID NO:627具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 615編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 619編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 623編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 627編碼的輕鏈。
本文所述之抗體分子可藉由US 2016/0108123中所述之載體、宿主細胞及方法製得，該文獻以全文引用之方式併入。
表 20 . 例示性抗PD-L1抗體分子之胺基酸及核苷酸序列
其他例示性 PD - L1 抑制劑
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子為阿特珠單抗(Genentech/Roche)，亦稱為MPDL3280A、RG7446、RO5541267、YW243.55.S70或TECENTRIQ™。阿特珠單抗及其他抗PD-L1抗體揭示於US 8,217,149中，該文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含阿特珠單抗之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表21所揭示。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子為艾維路單抗(Merck Serono及Pfizer)，亦稱為MSB0010718C。艾維路單抗及其他抗PD-L1抗體揭示於WO 2013/079174中，該文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含艾維路單抗之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表21所揭示。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子為德瓦魯單抗(MedImmune/AstraZeneca)，亦稱為MEDI4736。德瓦魯單抗及其他抗PD-L1抗體揭示於US 8,779,108中，該文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含德瓦魯單抗之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表21所揭示。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子為BMS-936559 (Bristol-Myers Squibb)，亦稱為MDX-1105或12A4。BMS-936559及其他抗PD-L1抗體揭示於US 7,943,743及WO 2015/081158中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含BMS-936559之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表21所揭示。
其他已知抗PD-L1抗體包括例如以下文獻中所述之彼等抗體：WO 2015/181342、WO 2014/100079、WO 2016/000619、WO 2014/022758、WO 2014/055897、WO 2015/061668、WO 2013/079174、WO 2012/145493、WO 2015/112805、WO 2015/109124、WO 2015/195163、US 8,168,179、US 8,552,154、US 8,460,927及US 9,175,082，該等文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體為與本文所述之抗PD-L1抗體之一競爭結合PD-L1且/或與本文所述之抗PD-L1抗體之一結合至PD-L1上之相同抗原決定基的抗體。
表 21 . 其他例示性抗PD-L1抗體分子之胺基酸序列
LAG - 3 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與LAG-3抑制劑組合投與。在一些實施例中，LAG-3抑制劑係選自LAG525 (Novartis)、BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb)或TSR-033 (Tesaro)。
例示性 LAG - 3 抑制劑
在一個實施例中，LAG-3抑制劑為抗LAG-3抗體分子。在一個實施例中，LAG-3抑制劑為如2015年9月17日公開之題為「Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof」之US 2015/0259420中所揭示之抗LAG-3抗體分子，該文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含來自包含表22中所展示之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區(例如，來自表22中所揭示之BAP050-純系I或BAP050-純系J之重鏈及輕鏈可變區序列)，或由表22中所展示之核苷酸序列編碼之重鏈及輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR) (或集合地所有CDR)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat定義(例如，如表22中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Chothia定義(例如，如表22中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat與Chothia之組合CDR定義(例如，如表22中所闡述)。在一個實施例中，VH CDR1之Kabat及Chothia CDR之組合包含胺基酸序列GFTLTNYGMN (SEQ ID NO: 766)。在一個實施例中，相對於表22中所展示之胺基酸序列或由表22中所展示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，CDR中之一或多者(或集合地所有CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或超過六個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含：重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 701之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 702之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 703之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 710之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 711之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 712之VLCDR3胺基酸序列，其各自揭示於表22中。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含VH，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 736或SEQ ID NO: 737編碼的VHCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 738或SEQ ID NO: 739編碼的VHCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 740或SEQ ID NO: 741編碼的VHCDR3；及VL，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 746或SEQ ID NO: 747編碼的VLCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 748或SEQ ID NO: 749編碼的VLCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 750或SEQ ID NO: 751編碼的VLCDR3，其各自揭示於表22中。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含VH，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 758或SEQ ID NO: 737編碼的VHCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 759或SEQ ID NO: 739編碼的VHCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 760或SEQ ID NO: 741編碼的VHCDR3；及VL，其包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 746或SEQ ID NO: 747編碼的VLCDR1、由核苷酸序列SEQ ID NO: 748或SEQ ID NO: 749編碼的VLCDR2及由核苷酸序列SEQ ID NO: 750或SEQ ID NO: 751編碼的VLCDR3，其各自揭示於表22中。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 706或與SEQ ID NO: 706具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 718或與SEQ ID NO: 718具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 724或與SEQ ID NO: 724具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 730或與SEQ ID NO: 730具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 706之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 718之VL。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 724之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 730之VL。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 707或SEQ ID NO: 708或與SEQ ID NO: 707或SEQ ID NO: 708具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 719或SEQ ID NO: 720或與SEQ ID NO: 719或SEQ ID NO: 720具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 725或SEQ ID NO: 726或與SEQ ID NO: 725或SEQ ID NO: 726具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 731或SEQ ID NO: 732或與SEQ ID NO: 731或SEQ ID NO: 732具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 707或SEQ ID NO: 708編碼的VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 719或SEQ ID NO: 720編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 725或SEQ ID NO: 726編碼的VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 731或SEQ ID NO: 732編碼的VL。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 709或與SEQ ID NO: 709具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 721或與SEQ ID NO: 721具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 727或與SEQ ID NO: 727具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 733或與SEQ ID NO: 733具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 709之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 721之輕鏈。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 727之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 733之輕鏈。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 716或SEQ ID NO: 717或與SEQ ID NO: 716或SEQ ID NO: 717具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 722或SEQ ID NO: 723或與SEQ ID NO: 722或SEQ ID NO: 723具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 728或SEQ ID NO: 729或與SEQ ID NO: 728或SEQ ID NO: 729具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 734或SEQ ID NO: 735或與SEQ ID NO: 734或SEQ ID NO: 735具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 716或SEQ ID NO: 717編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 722或SEQ ID NO: 723編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 728或729編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 734或735編碼的輕鏈。
本文所述之抗體分子可藉由US 2015/0259420中所述之載體、宿主細胞及方法製得，該文獻以全文引用之方式併入。
表 22 . 例示性抗LAG-3抗體分子之胺基酸及核苷酸序列
其他例示性 LAG - 3 抑制劑
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子為BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb)，亦稱為BMS986016。BMS-986016及其他抗LAG-3抗體揭示於WO 2015/116539及US 9,505,839中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含BMS-986016之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表23所揭示。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子為TSR-033 (Tesaro)。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含TSR-033之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子為IMP731或GSK2831781 (GSK及Prima BioMed)。IMP731及其他抗LAG-3抗體揭示於WO 2008/132601及US 9,244,059中，該等文獻以全文引用之方式併入。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含IMP731之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表23所揭示。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含GSK2831781之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子為IMP761 (Prima BioMed)。在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含IMP761之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
其他已知抗LAG-3抗體包括例如以下文獻中所述之彼等抗體：WO 2008/132601、WO 2010/019570、WO 2014/140180、WO 2015/116539、WO 2015/200119、WO 2016/028672、US 9,244,059、US 9,505,839，該等文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體為與本文所述之抗LAG-3抗體之一競爭結合LAG-3且/或與本文所述之抗LAG-3抗體之一結合至LAG-3上之相同抗原決定基的抗體。
在一個實施例中，抗LAG-3抑制劑為可溶性LAG-3蛋白，例如IMP321 (Prima BioMed)，例如如WO 2009/044273中所揭示，該文獻以全文引用之方式併入。
表 23 . 其他例示性抗LAG-3抗體分子之胺基酸序列
TIM - 3 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與TIM-3抑制劑組合投與。在一些實施例中，TIM-3抑制劑為MGB453 (Novartis)或TSR-022 (Tesaro)。
例示性 TIM - 3 抑制劑
在一個實施例中，TIM-3抑制劑為抗TIM-3抗體分子。在一個實施例中，TIM-3抑制劑為如2015年8月6日公開之題為「Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof」之US 2015/0218274中所揭示之抗TIM-3抗體分子，該文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含來自包含表24中所展示之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區(例如，來自表24中所揭示之ABTIM3-hum11或ABTIM3-hum03之重鏈及輕鏈可變區序列)，或由表24中所展示之核苷酸序列編碼之重鏈及輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR) (或集合地所有CDR)。在一些實施例中，CDR係根據Kabat定義(例如，如表24中所闡述)。在一些實施例中，CDR係根據Chothia定義(例如，如表24中所闡述)。在一個實施例中，相對於表24中所展示之胺基酸序列或由表24中所展示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一或多個CDR (或集合地所有CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或超過六個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含：重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 801之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 802之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 803之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 810之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 811之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 812之VLCDR3胺基酸序列，其各自揭示於表24中。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含：重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 801之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 820之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 803之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 810之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 811之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 812之VLCDR3胺基酸序列，其各自揭示於表24中。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 806或與SEQ ID NO: 806具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 816或與SEQ ID NO: 816具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 822或與SEQ ID NO: 822具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VH。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 826或與SEQ ID NO: 826具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的VL。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 806之VH及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 816之VL。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有SEQ ID NO: 822之胺基酸序列的VH及含有SEQ ID NO: 826之胺基酸序列的VL。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 807或與SEQ ID NO: 807具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 817或與SEQ ID NO: 817具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 823或與SEQ ID NO: 823具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VH。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 827或與SEQ ID NO: 827具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 807編碼之VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 817編碼的VL。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 823編碼的VH及由核苷酸序列SEQ ID NO: 827編碼的VL。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 808或與SEQ ID NO: 808具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 818或與SEQ ID NO: 818具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 824或與SEQ ID NO: 824具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的重鏈。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 828或與SEQ ID NO: 828具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之胺基酸序列的輕鏈。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 808之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 818之輕鏈。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 824之重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 828之輕鏈。
在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 809或與SEQ ID NO: 809具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 819或與SEQ ID NO: 819具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 825或與SEQ ID NO: 825具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 829或與SEQ ID NO: 829具有至少85%、90%、95%或99%或大於99%一致性之核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 809編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 819編碼的輕鏈。在一個實施例中，抗體分子包含由核苷酸序列SEQ ID NO: 825編碼的重鏈及由核苷酸序列SEQ ID NO: 829編碼的輕鏈。
本文所述之抗體分子可藉由US 2015/0218274中所述之載體、宿主細胞及方法製得，該文獻以全文引用之方式併入。
表 24 . 例示性抗TIM-3抗體分子之胺基酸及核苷酸序列
其他例示性 TIM - 3 抑制劑
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子為TSR-022 (AnaptysBio/Tesaro)。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含TSR-022之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含APE5137或APE5121之一或多個CDR序列(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列，例如如表25中所揭示。APE5137、APE5121及其他抗TIM-3抗體揭示於WO 2016/161270中，該文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子為抗體純系F38-2E2。在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包含F38-2E2之一或多個CDR序列中(或集合地所有CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列或重鏈或輕鏈序列。
其他已知抗TIM-3抗體包括例如以下文獻中所述之彼等抗體：WO 2016/111947、WO 2016/071448、WO 2016/144803、US 8,552,156、US 8,841,418及US 9,163,087，該等文獻以全文引用之方式併入。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體為與本文所述之抗TIM-3抗體之一競爭結合TIM-3且/或與本文所述之抗TIM-3抗體之一結合至TIM-3上之相同抗原決定基的抗體。
表 25 . 其他例示性抗TIM-3抗體分子之胺基酸序列
TGF - β 抑制劑
在某些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與轉型生長因子β (亦稱為TGF-β、TGFβ、TGFb或TGF-貝他，在本文中可互換使用)抑制劑組合投與。
TGF-β屬於結構相關細胞介素之大家族，包括例如骨骼形態發生蛋白質(BMP)、生長及分化因子、活化素及抑制素。在一些實施例中，本文所述之TGF-β抑制劑可結合及/或抑制一或多種TGF-β之同功異型物(例如，TGF-β1、TGF-β2或TGF-β3中之一種、兩種或全部)。
在一些實施例中，TGF-β抑制劑包含XOMA 089或國際申請公開案第WO 2012/167143號中揭示之化合物，該文獻以全文引用之方式併入。
XOMA 089亦稱為XPA.42.089。XOMA 089為完全人類單株抗體，其特異性結合且中和TGF-β 1及2配位體。
XOMA 089之重鏈可變區具有胺基酸序列：QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLWEVRALPSVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1986) (在WO 2012/167143中揭示為SEQ ID NO: 6)。XOMA 089之輕鏈可變區具有胺基酸序列：SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGANDIGSKSVHWYQQKAGQAPVLVVSEDIIRPSGIPERISGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRDSDQYVFGTGTKVTVLG (SEQ ID NO: 1987) (在WO 2012/167143中揭示為SEQ ID NO: 8)。
XOMA 089以高親和力結合至人類TGF-β同功異型物。一般而言，XOMA 089以高親和力結合至TGF-β1及TGF-β2，且程度較低地結合至TGF-β3。在Biacore檢定中，人類TGF-β上XOMA 089之KD 對於TGF-β1為14.6 pM，對於TGF-β2為67.3 pM，且對於TGF-β3為948 pM。考慮到與所有三種TGF-β同功異型物之高親和力結合，在某些實施例中，預期XOMA 089以如本文所述的XOMA 089之劑量結合至TGF-β1、2及3。XOMA 089與嚙齒動物及食蟹獼猴TGF-β交叉反應且展示活體外及活體內功能活性，使得嚙齒動物及食蟹獼猴為毒理學研究之相關物種。
在一些實施例中，TGF-β抑制劑包含福萊索單抗(CAS登記號：948564-73-6)。福萊索單抗亦稱為GC1008。福萊索單抗為人類單株抗體，其結合於且抑制TGF-β同功異型物1、2及3。
福萊索單抗之重鏈具有以下胺基酸序列： 。
福萊索單抗之輕鏈具有以下胺基酸序列： 。
福萊索單抗揭示於例如國際申請公開案第WO 2006/086469號及美國專利第8,383,780號及第8,591,901號中，該等文獻以全文引用之方式併入。
抗 CD73 抗體分子
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與抗CD73抗體分子組合投與。在一個實施例中，抗CD73抗體分子為全長抗體分子或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗CD73抗體分子係選自表26中所列之抗體分子中之任一者。在其他實施例中，抗CD73抗體分子包含重鏈可變域序列、輕鏈可變域序列或兩者，如表26所揭示。在某些實施例中，抗CD73抗體分子結合至CD73蛋白且降低，例如抑制或拮抗CD73，例如人類CD73之活性。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2016/075099中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子為MEDI 9447，例如如WO2016/075099所揭示。MEDI 9447之替代名稱包括純系10.3或73combo3。MEDI 9447為抑制，例如拮抗CD73之活性的IgG1抗體。MEDI 9447及其他抗CD73抗體分子亦揭示於WO2016/075176及US2016/0129108中，該等文獻之全部內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含MEDI 9477之重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。MEDI 9477之重鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 1990 (參見表26)。MEDI 9477之輕鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 1991 (參見表26)。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2016/081748中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子為11F11，例如如WO2016/081748所揭示。11F11為抑制，例如拮抗CD73之活性的IgG2抗體。衍生自11F11之抗體，例如CD73.4及CD73.10；11F11之純系，例如11F11-1及11F11-2；及其他抗CD73抗體分子揭示於WO2016/081748及US 9,605,080中，該等文獻之全部內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含11F11-1或11F11-2之重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。11F11-1之重鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 1998 (參見表26)。11F11-1之輕鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 1999 (參見表26)。11F11-2之重鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 1994 (參見表26)。11F11-2之輕鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 1995 (參見表26)。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含11F11-1或11F11-2之重鏈、輕鏈或兩者。11F11-1之重鏈胺基酸序列及輕鏈胺基酸序列分別揭示為SEQ ID NO: 1996及SEQ ID NO:1997 (參見表26)。11F11-2之重鏈胺基酸序列及輕鏈胺基酸序列分別揭示為SEQ ID NO: 1992及SEQ ID NO:1993 (參見表26)。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為例如US 9,605,080中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為CD73.4，例如如US 9,605,080所揭示。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含CD73.4之重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。CD73.4之重鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 2000 (參見表26)。11F11-2之輕鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 2001 (參見表26)。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為CD73.10，例如如US 9,605,080所揭示。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含CD73.10之重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。CD73.10之重鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 2002 (參見表26)。11F11-2之輕鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 2003 (參見表26)。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2009/0203538中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子為067-213，例如如WO2009/0203538所揭示。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含067-213之重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。067-213之重鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 2004 (參見表26)。067-213之輕鏈可變域的胺基酸序列揭示為SEQ ID NO: 2005 (參見表26)。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為US 9,090,697所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子為TY/23，例如如US 9,090,697所揭示。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含TY/23之重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2016/055609中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含WO2016/055609中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2016/146818中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含WO2016/146818中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗抗CD73抗體分子為WO2004/079013中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含WO2004/079013中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2012/125850中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含WO2012/125850中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2015/004400中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含WO2015/004400中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為WO2007/146968中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含WO2007/146968中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為US2007/0042392中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含US2007/0042392中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為US2009/0138977中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含US2009/0138977中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為Flocke等人, Eur J Cell Biol. 1992年6月;58(1):62-70中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含Flocke等人, Eur J Cell Biol. 1992年6月;58(1):62-70中所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。
在一個實施例中，抗CD73抗體分子為Stagg等人, PNAS. 2010年1月107(4): 1547-1552中所揭示之抗CD73抗體，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，抗CD73抗體分子為TY/23或TY11.8，如Stagg等人所揭示。在一個實施例中，抗CD73抗體分子包含Stagg等人所揭示之抗CD73抗體的重鏈可變域、輕鏈可變域或兩者。


表 26 ： 例示性抗CD73抗體分子之序列
本文所揭示之組合療法中所使用的抗CD73抗體分子可包括表26中所揭示之任一VH/VL序列，或與其實質上一致(例如，與其具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列。CD73抗體之例示性序列包括：
(i) MEDI 9447之VH胺基酸序列及VL胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 1990-SEQ ID NO: 1991，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 1990-SEQ ID NO: 1991具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；
(ii) 11F11-2之HC胺基酸序列及LC胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 1992-SEQ ID NO: 1993，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 1992-SEQ ID NO: 1993具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；
(iii) 11F11-2之VH胺基酸序列及VL胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 1994-SEQ ID NO: 1995，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 1994-SEQ ID NO: 1995具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；
(iv) 11F11-1之HC胺基酸序列及LC胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 1996-SEQ ID NO: 1997，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 1996-SEQ ID NO: 1997具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；
(v) 11F11-1之VH胺基酸序列及VL胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 1998-SEQ ID NO: 1999，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 1998-SEQ ID NO: 1999具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；
(vi) CD73.4之VH胺基酸序列及VL胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 2000-SEQ ID NO: 2001，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 2000-SEQ ID NO: 2001具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；
(vii) CD73.10之VH胺基酸序列及VL胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 2002-SEQ ID NO: 2003，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 2002-SEQ ID NO: 2003具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列；或
(viii) 067-213之VH胺基酸序列及VL胺基酸序列，分別SEQ ID NO: 2004-SEQ ID NO: 2005，或與其實質上一致(例如，與SEQ ID NO: 2004-SEQ ID NO: 2005具有至少80%、85%、90%、95%、99%或大於99%一致性)的胺基酸序列.
IL - 17 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與介白素-17 (IL-17)抑制劑組合投與。
在一些實施例中，IL-17抑制劑為塞庫金單抗(CAS註冊號：875356-43-7 (重鏈)及875356-44-8 (輕鏈))。塞庫金單抗亦稱為AIN457及COSENTYX®。塞庫金單抗為特異性結合於IL-17A之重組型人類單株IgG1/κ抗體。其表現於重組型中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary；CHO)細胞株中。
塞庫金單抗描述於例如WO 2006/013107、US 7,807,155、US 8,119,131、US 8,617,552及EP 1776142中。塞庫金單抗之重鏈可變區具有胺基酸序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVAAINQDGSEKYYVGSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRVEDTAVYYCVRDYYDILTDYYIHYWYFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2006) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 8)。塞庫金單抗之輕鏈可變區具有胺基酸序列：EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPCTFGQGTRLEIKR (SEQ ID NO: 2007) (如WO 2006/013107中SEQ ID NO: 10所揭示)。塞庫金單抗之重鏈CDR1具有胺基酸序列NYWMN (SEQ ID NO: 2008) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 1)。塞庫金單抗之重鏈CDR2具有胺基酸序列AINQDGSEKYYVGSVKG (SEQ ID NO: 2009) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 2)。塞庫金單抗之重鏈CDR3具有胺基酸序列DYYDILTDYYIHYWYFDL (SEQ ID NO: 2010) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 3)。塞庫金單抗之輕鏈CDR1具有胺基酸序列RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 2011) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 4)。塞庫金單抗之輕鏈CDR2具有胺基酸序列GASSRAT (SEQ ID NO: 2012) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 5)。塞庫金單抗之輕鏈CDR3具有胺基酸序列GASSRAT (SEQ ID NO: 2013) (在WO 2006/013107中揭示為SEQ ID NO: 6)。
在一些實施例中，IL-17抑制劑為CJM112。‎ CJM112亦稱為XAB4。CJM112為靶向IL-17A之完全人類單株抗體(例如，具有IgG1/κ同型)。
CJM112揭示於例如WO 2014/122613中。CJM112之重鏈具有胺基酸序列：EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGSLYYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 2014) (在WO 2014/122613中揭示為SEQ ID NO: 14)。CJM112之輕鏈具有胺基酸序列：AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQGINW ELAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLEQGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 2015) (在WO 2014/122613中揭示為SEQ ID NO: 44)。
CJM112可在活體外及活體內結合至人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-17A且中和此等細胞介素之生物活性。IL-17家族成員IL-17A係一種主要的促炎性細胞介素，已表明其在諸如牛皮癬及癌症之多種免疫介導之病狀中起重要作用(Witowski等人(2004)Cell Mol . Life Sci . 第567-79頁；Miossec及Kolls (2012)Nat . Rev . Drug Discov . 第763-76頁)。
在一些實施例中，IL-17抑制劑為伊科奇單抗(CAS註冊號：1143503-69-8)。伊科奇單抗亦稱為LY2439821。伊科奇單抗為靶向IL-17A之人類化IgG4單株抗體。
伊科奇單抗描述於例如WO 2007/070750、US 7,838,638及US 8,110,191中。伊科奇單抗之重鏈可變區具有胺基酸序列：QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYSFTDYHIHWVRQAPGQGLEWMGVINPMYGTTDYNQRFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYDYFTGTGVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2016) (在WO 2007/070750中揭示為SEQ ID NO: 118)。伊科奇單抗之輕鏈可變區具有胺基酸序列：DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSRSLVHSRGNTYLH WYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFIGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHLPFTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2017) (在WO 2007/070750中揭示為SEQ ID NO: 241)。
在一些實施例中，IL-17抑制劑為布羅達單抗(CAS註冊號：1174395-19-7)。布羅達單抗亦稱為AMG 827或AM-14。布羅達單抗結合於介白素-17受體A (IL-17RA)且防止IL-17活化受體。
布羅達單抗揭示於例如WO 2008/054603、US 7,767,206、US 7,786,284、US 7,833,527、US 7,939,070、US 8,435,518、US 8,545,842、US 8,790,648及US 9,073,999。布羅達單抗之重鏈CDR1具有胺基酸序列RYGIS (SEQ ID NO: 2018) (在WO 2008/054603中揭示為SEQ ID NO: 146)。布羅達單抗之重鏈CDR2具有胺基酸序列WISTYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO: 2019) (在WO 2008/054603中揭示為SEQ ID NO: 147)。布羅達單抗之重鏈CDR3具有胺基酸序列RQLYFDY (SEQ ID NO: 2020) (在WO 2008/054603中揭示為SEQ ID NO: 148)。布羅達單抗之輕鏈CDR1具有胺基酸序列RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 2021) (在WO 2008/054603中揭示為SEQ ID NO: 224)。布羅達單抗之重鏈CDR2具有胺基酸序列DASTRAT (SEQ ID NO: 2022) (在WO 2008/054603中揭示為SEQ ID NO: 225)。布羅達單抗之重鏈CDR3具有胺基酸序列QQYDNWPLT (SEQ ID NO: 2023) (在WO 2008/054603中揭示為SEQ ID NO: 226)。
IL - 1 β 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與介白素-1β (IL-1β)抑制劑組合投與。
細胞介素之介白素-1 (IL-1)家族為在炎症及免疫反應中具有中心作用之一組分泌性多效性細胞介素。在包括癌症之多個臨床配置中觀測到IL-1增加(Apte等人 (2006)Cancer Metastasis Rev . 第387-408頁；Dinarello (2010)Eur . J . Immunol . 第599-606頁)。IL-1家族包含尤其IL-1 β (IL-1β)及IL-1α (IL-1a)。IL-1β在肺癌、乳癌及結腸直腸癌中升高(Voronov等人 (2014)Front Physiol . 第114頁)且與不良預後相關(Apte等人 (2000)Adv . Exp . Med . Biol . 第277-88頁)。不希望受理論所束縛，咸信在一些實施例中，自腫瘤微環境且藉由惡性細胞衍生之分泌IL-1b部分藉由募集抑制性嗜中性球促進腫瘤細胞增生、增加侵襲性且減弱抗腫瘤免疫反應(Apte等人(2006)Cancer Metastasis Rev . 第387-408頁；Miller等人(2007) J. Immunol. 第6933-42頁)。實驗資料表明抑制IL-1b引起腫瘤負荷及癌轉移降低(Voronov等人 (2003)Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A . 第2645-50頁)。
在一些實施例中，IL-1β抑制劑係選自阿那白滯素或利納西普。
在一些實施例中，IL-1β抑制劑為阿那白滯素(Amgen)，亦稱為Kineret。阿那白滯素為與IL-1β競爭結合細胞表面受體之IL-1Ra拮抗劑。
在一些實施例中，IL-1β抑制劑為利納西普(Regeneron)，亦稱為Arcalyst。利納西普為由人類介白素-1受體組分(IL-1R1)及IL-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)連接於人類IgG1之片段可結晶部分(Fc區)的細胞外部分之配體結合域組成之融合蛋白。利納西普為例如結合且中和IL-1之IL-1β抑制劑。
CD32B 抑制劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與CD32B抑制劑組合投與。
在一些實施例中，CD32B抑制劑為抗CD32B抗體分子。例示性抗CD32B抗體分子揭示於US8187593、US8778339、US8802089、US20060073142、US20170198040、US20130251706及WO2009083009中，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，抗CD32B抗體分子為揭示於US20170198040中之抗體分子。
化學治療劑
在一些實施例中，表現BCMA CAR之細胞療法與化學治療劑組合投與。例示性化學治療劑包括蒽環黴素(例如小紅莓(例如脂質小紅莓))、長春花生物鹼(例如長春鹼、長春新鹼、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine))、烷化劑(例如環磷醯胺、達卡巴嗪、美法侖、異環磷醯胺、替莫唑胺)、免疫細胞抗體(例如阿倫妥單抗(alemtuzamab)、吉妥珠單抗、利妥昔單抗、托西妥莫單抗)、抗代謝物(包括例如葉酸拮抗劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物及腺苷脫胺酶抑制劑(例如氟達拉賓))、mTOR抑制劑、TNFR糖皮質激素誘發TNFR相關蛋白(GITR)促效劑、蛋白酶體抑制劑(例如阿克拉黴素(aclacinomycin) A、膠毒素(gliotoxin)或硼替佐米)、諸如沙立度胺或沙立度胺衍生物(例如來那度胺)之免疫調節劑。
考慮用於組合療法之一般化學治療劑包括阿那曲唑(Arimidex®)、比卡魯胺(Casodex®)、硫酸博萊黴素(Blenoxane®)、硫酸布他卡因(Myleran®)、白消安注射劑(Busulfex®)、卡培他濱(Xeloda®)、N4-戊氧基羰基-5-去氧-5-氟胞苷、卡鉑(Paraplatin®)、卡莫司汀(BiCNU®)、氯芥苯丁酸(Leukeran®)、順鉑(Platinol®)、克拉屈濱(Leustatin®)、環磷醯胺(Cytoxan®或Neosar®)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(Cytosar-U®)、阿糖胞苷脂質體注射劑(DepoCyt®)、達卡巴嗪(DTIC-Dome®)、更生黴素(放線菌素D，Cosmegan)、鹽酸道諾黴素(Cerubidine®)、檸檬酸道諾黴素脂質體注射劑(DaunoXome®)、地塞米松、多西他賽(Taxotere®)、鹽酸小紅莓(Adriamycin®、Rubex®)、依託泊苷(Vepesid®)、磷酸氟達拉濱(Fludara®)、5-氟尿嘧啶(Adrucil®、Efudex®)、氟他胺(Eulexin®)、替紮他濱、吉西他濱(二氟去氧胞苷)、羥基尿素(Hydrea®)、艾達黴素(Idamycin®)、異環磷醯胺(IFEX®)、伊立替康(Camptosar®)、L-天冬醯胺酶(ELSPAR®)、甲醯四氫葉酸鈣、美法侖(Alkeran®)、6-巰基嘌呤(Purinethol®)、甲胺喋呤(Folex®)、米托蒽醌(Novantrone®)、麥羅塔、太平洋紫杉醇(Taxol®)、菲尼克斯(Yttrium90/MX-DTPA)、噴司他丁、具有卡莫司汀插入物之聚苯丙生20 (Gliadel®)、檸檬酸他莫昔芬(Nolvadex®)、替尼泊甙(Vumon®)、6-硫代鳥嘌呤、噻替派、替拉紮明(Tirazone®)、用於注射之鹽酸拓朴替康(Hycamptin®)、長春鹼(Velban®)、長春新鹼(Oncovin®)及長春瑞賓(Navelbine®)。
例示性烷基化劑包括(但不限於)氮芥、伸乙基亞胺衍生物、磺酸烷基酯、亞硝基脲及三氮烯：尿嘧啶氮芥(Aminouracil Mustard®、Chlorethaminacil®、Demethyldopan®、Desmethyldopan®、Haemanthamine®、Nordopan®、Uracil nitrogen mustard®、Uracillost®、Uracilmostaza®、Uramustin®、Uramustine®)；氮芥(Mustargen®)；環磷醯胺(Cytoxan®、Neosar®、Clafen®、Endoxan®、Procytox®、RevimmuneTM )；異環磷醯胺(Mitoxana®)；美法侖(Alkeran®)；氯芥苯丁酸(Leukeran®)；哌泊溴烷(Amedel®、Vercyte®)；三伸乙基蜜胺 (Hemel®、Hexalen®、Hexastat®)；三伸乙基硫代磷胺；替莫唑胺(Temodar®)；噻替派(Thioplex®)；白消安(Busilvex®、Myleran®)；卡莫司汀(BiCNU®)；洛莫司汀(CeeNU®)；鏈脲菌素(Zanosar®)及達卡巴嗪(DTIC-Dome®)。其他例示性烷基化劑包括(但不限於)奧沙利鉑(Oxaliplatin，Eloxatin®)；替莫唑胺(Temodar®及Temodal®)；更生黴素(亦稱為放線菌素-D，Cosmegen®)；美法侖(亦稱為L-PAM、L-溶肉瘤素及苯丙胺酸氮芥，Alkeran®)；六甲蜜胺(Altretamine/hexamethylmelamine(HMM)，Hexalen®)；卡莫司汀(BiCNU®)；苯達莫司汀(Bendamustine，Treanda®)；白消安(Busulfex®及Myleran®)；卡鉑(Paraplatin®)；洛莫司汀(亦稱為CCNU，CeeNU®)；順鉑(亦稱為CDDP，Platinol®及Platinol®-AQ)；苯丁酸氮芥(Leukeran®)；環磷醯胺(Cytoxan®及Neosar®)；達卡巴嗪(亦稱為DTIC、DIC及咪唑甲醯胺，DTIC-Dome®)；六甲蜜胺(Altretamine/hexamethylmelamine(HMM)，Hexalen®)；異環磷醯胺(Ifex®)；普莫司汀；丙卡巴肼(Procarbazine，Matulane®)；氮芥(Mechlorethamine/nitrogen mustard/mustine/鹽酸甲氯乙胺，Mustargen®)；鏈脲菌素(Zanosar®)；噻替派(亦稱為硫代磷醯胺、TESPA及TSPA，Thioplex®)；環磷醯胺(Endoxan®、Cytoxan®、Neosar®、Procytox®、Revimmune®)；及苯達莫司汀HCl (Treanda®)。
例示性mTOR抑制劑包括例如坦羅莫司；地磷莫司(正式地被稱為迪福莫司，二甲基次膦酸(1R ,2R ,4S )-4-[(2R )-2 [(1R ,9S ,12S ,15R ,16E ,18R ,19R ,21R ,23S ,24E ,26E ,28Z ,30S ,32S ,35R )-1,18-二羥基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23, 29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五側氧基-11,36-二氧雜-4-氮雜三環[30.3.1.04 , 9 ]三十六基-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基環己酯，亦稱為AP23573及MK8669，且描述於PCT公開案第WO 03/064383號中)；依維莫司(Afinitor®或RAD001)；雷帕黴素(AY22989，Sirolimus®)；斯馬匹莫(CAS 164301-51-3)；安羅莫司，(5-{2,4-雙[(3S )-3-甲基嗎啉--4-基]吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7-基}-2-甲氧苯基)甲醇(AZD8055)；2-胺基-8-[反-4-(2-羥基乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7(8H )-酮(PF04691502，CAS 1013101-36-4)；及N2 -[1,4-二側氧基-4-[[4-(4-側氧-8-苯基-4H -1-苯并吡喃-2-基)嗎福啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精胺醯甘胺醯基-L-α-天冬胺醯基L-絲胺酸-(SEQ ID NO: 2035)，內鹽(SF1126，CAS 936487-67-1)及XL765。
例示性免疫調節劑包括例如阿夫妥珠單抗(afutuzumab) (獲自Roche®)；派非格司亭(pegfilgrastim) (Neulasta®)；來那度胺(CC-5013，Revlimid®)；沙立度胺(Thalomid®)；艾可米得(actimid) (CC4047)；及IRX-2(包括介白素1、介白素2及干擾素γ之人類細胞激素混合物，CAS 951209-71-5，獲自IRX療法)。
例示性蒽環黴素包括例如小紅莓(Adriamycin®及Rubex®)；博萊黴素(lenoxane®)；道諾黴素(鹽酸道諾黴素、柔紅黴素(daunomycin)及鹽酸紅比黴素(rubidomycin hydrochloride)，Cerubidine®)；道諾黴素脂質體(檸檬酸道諾黴素脂質體，DaunoXome®)；米托蒽醌(DHAD，Novantrone®)；表柔比星(epirubicin) (Ellence™)；艾達黴素(Idamycin®、Idamycin PFS®)；絲裂黴素C (mitomycin C) (Mutamycin®)；格爾德黴素(geldanamycin)；除莠黴素(herbimycin)；拉維黴素(ravidomycin)；及去乙醯基拉維黴素(desacetylravidomycin)。
例示性長春花生物鹼包括例如酒石酸長春瑞賓(Navelbine®)、長春新鹼(Oncovin®)及長春地辛(Eldisine®)；長春鹼(亦稱為硫酸長春鹼、長春花鹼(vincaleukoblastine)及VLB，Alkaban-AQ®及Velban®)；及長春瑞賓(Navelbine®)。
例示性蛋白酶體抑制劑包括硼替佐米(Velcade®)；卡非佐米(carfilzomib) (PX-171-007，(S )-4-甲基-N -((S )-1-(((S )-4-甲基-1-((R )-2-甲基環氧乙烷-2-基)-1-側氧基戊-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-2-((S )-2-(2-嗎啉基乙醯胺基)-4-苯基丁醯胺基)-戊醯胺)；馬瑞佐米(marizomib) (NPI-0052)；檸檬酸依薩佐米(ixazomib citrate) (MLN-9708)；迪蘭佐米(delanzomib) (CEP-18770)；及O -甲基-N -[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-L-絲胺醯基-O -甲基-N -[(1S )-2-[(2R )-2-甲基-2-環氧乙烷基]-2-側氧基-1-(苯基甲基)乙基]-L-絲胺醯胺(ONX-0912)。
用於組合之其他藥劑
表 27 . 可以例如以單一藥劑形式或與本文所述之其他藥劑組合與表現BCMA CAR之細胞療法組合投與之所選擇的治療劑 此表中所列之各公開案以全文引用的方式併入本文中，包括其中的所有結構式。
生物聚合物遞送方法
在一些實施例中，一或多個如本文所揭示之表現CAR之細胞可經由生物聚合物骨架(例如，生物聚合物植入物)投與或遞送至個體。生物聚合物骨架可支撐或增強本文所述之表現CAR之細胞之遞送、擴增及/或分散。生物聚合物骨架包含可天然存在或合成之生物相容性(例如，不實質上誘導發炎性或免疫反應)及/或生物可降解之聚合物。
適合生物聚合物之實例包括(但不限於)單獨或與任何其他聚合物組合物以任何濃度及任何比率組合的瓊脂、瓊脂糖、海藻酸鹽、海藻酸鹽/磷酸鈣水泥(CPC)、β-半乳糖苷酶(β-GAL)、(1,2,3,4,6-五乙醯基a-D-半乳糖)、纖維素、甲殼素、聚葡萄胺糖、膠原蛋白、彈性蛋白、明膠、玻尿酸膠原蛋白、羥基磷灰石、聚(3-羥基丁酸酯-共-3-羥基-己酸酯) (PHBHHx)、聚(丙交酯)、聚(己內酯) (PCL)、聚(丙交酯-共-乙交酯) (PLG)、聚氧化乙烯(PEO)、聚(乳酸-共-乙醇酸) (PLGA)、聚氧化丙烯(PPO)、聚乙烯醇(PVA)、蠶絲蛋白、大豆蛋白及分離大豆蛋白。生物聚合物可經促進附著或遷移之分子，例如結合於淋巴細胞之膠原蛋白受體的膠原蛋白模擬肽，及/或增強待遞送之細胞之遞送、擴增或功能(例如，抗癌活性)的刺激分子強化或改質。生物聚合物骨架可為可注射劑，例如凝膠或半固體，或固體組合物。
在一些實施例中，在傳遞至個體之前本文所述之表現CAR之細胞接種至生物聚合物骨架上。在實施例中，生物聚合物骨架進一步包含本文所述之一或多種額外治療劑(例如，另一表現CAR之細胞、抗體或小分子)或增強表現CAR之細胞之活性的試劑，例如併入或共軛於骨架之生物聚合物。在實施例中，生物聚合物骨架例如瘤內注射或以手術方式植入腫瘤或植入足以介導抗腫瘤作用之腫瘤附近位置內。生物聚合物組合物及其遞送方法之額外實例描述於Stephan等人,Nature Biotechnology , 2015, 33:97-101；及WO2014/110591中。
醫藥組合物及治療
本發明之醫藥組合物可包含表現CAR之細胞，例如複數種如本文所述之表現CAR之細胞，其與一或多種醫藥學上或生理學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑組合。此類組合物可包含緩衝劑，諸如中性緩衝生理鹽水、磷酸鹽緩衝生理鹽水及其類似物；碳水化合物，諸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露糖醇；蛋白質；多肽或胺基酸，諸如甘胺酸；抗氧化劑；螯合劑，諸如EDTA或麩胱甘肽；佐劑(例如氫氧化鋁)；及防腐劑。在一個態樣中，本發明之組合物調配用於靜脈內投與。
本發明之醫藥組合物可以適於待治療(或預防)疾病之方式投與。儘管可藉由臨床試驗確定適當劑量，但投與數量及頻率將由諸如以下之因素決定：患者之條件，及患者之疾病的類型及嚴重程度。
在一個實施例中，醫藥組合物實質上不含，例如不存在可偵測含量之例如選自由以下組成之群的污染物：內毒素、黴漿菌、複製勝任型慢病毒(RCL)、p24、VSV-G核酸、HIV gag、殘餘抗CD3/抗CD28塗佈之珠粒、小鼠抗體、合併之人類血清、牛血清白蛋白、牛血清、培養基組分、載體封裝細胞或質體組分、細菌及真菌。在一個實施例中，細菌為選自由以下組成之群的至少一者：糞產鹼桿菌(Alcaligenes faecalis)、白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌、流行性嗜血桿菌(Haemophilus influenza)、腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitides)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumonia)及A群化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes group A)。
當指示「免疫有效量」、「抗腫瘤有效量」、「腫瘤抑制有效量」或「治療量」時，待投與之本發明組合物之精確量可由醫師考慮個體之年齡、體重、腫瘤大小、感染或轉移程度及患者(個體)條件的差異來決定。一般可規定包含本文所述之T細胞之醫藥組合物可以104 至109 個細胞/公斤體重，在一些情況下105 至106 個細胞/公斤體重(包括彼等範圍內之全部整數值)之劑量投與。T細胞組合物亦可以此等劑量多次投與。細胞可藉由使用免疫療法中通常已知之輸注技術投與(參見例如Rosenberg等人, New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988)。
在某些態樣中，可能需要向個體投與活化之T細胞，且隨後再抽血(或進行血球分離術)，根據本發明自其活化T細胞，且使患者再輸注此等活化及擴增之T細胞。此過程可每幾週進行多次。在某些態樣中，T細胞可自抽出的10cc至400cc血液活化。在某些態樣中，T細胞自抽取的20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc或100cc血液活化。
可以任何適宜方式進行標的組合物之投與，包括藉由氣霧劑吸入、注射、攝入、輸注、植入或移植。可藉由反式動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌肉內、靜脈內(i.v.)注射或腹膜內向患者投與本文所述之組合物。在一個態樣中，藉由皮內或皮下注射向患者投與本發明之T細胞組合物。在一個態樣中，本發明之表現CAR之細胞(例如，T細胞或NK細胞)組合物藉由i.v.注射投與。表現CAR之細胞(例如，T細胞、NK細胞)之組合物可直接注射至腫瘤、淋巴結或感染位點中。
在一特定例示性態樣中，個體可經歷白血球清除術，其中離體收集、增濃或耗盡白細胞以選擇及/或分離所關注的細胞，例如免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)。此等免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)分離株可藉由此項技術中已知之方法擴增且經處理使得可引入一或多個本發明CAR構築體，藉此產生本發明之表現CAR之細胞(例如，CAR T細胞或表現CAR之NK細胞)。有需要之個體可隨後經歷使用高劑量化學療法繼之以末梢血液幹細胞移植的標準治療。在某些態樣中，移植之後或與移植並行，個體接受本發明之擴增之表現CAR之細胞(例如，CAR T細胞或NK細胞)的輸注。在一額外態樣中，在手術之前或之後投與經擴增細胞。
在實施例中，對個體進行淋巴細胞耗盡，例如在投與一或多種表現本文所述之CAR，例如本文所述之BCMA結合CAR的細胞之前進行。在實施例中，淋巴細胞耗盡包含投與美法侖、賽特杉、環磷醯胺及氟達拉賓中之一或多者。
上述待向患者投與的治療之劑量將隨所治療之精確病狀性質及治療接受者而變化。可根據此項技術中接受之實踐對用於人類投與之劑量進行按比例調整。CAMPATH之劑量例如對成年患者而言一般將在1 mg至約100 mg範圍內，通常每日投與持續1至30天之時段。較佳每日劑量為每日1 mg至10 mg，然而在一些情況下，可使用高達每日40 mg之較大劑量(描述於美國專利第6,120,766號中)。
在一個實施例中，例如使用活體外轉錄將CAR引入至免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)中，且個體(例如，人類)接受本發明之CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)之初始投與，及本發明之CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)之一或多次後續投與，其中一或多次後續投與在先前投與之後少於15日、例如14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2日投與。在一個實施例中，每週向個體(例如，人類)投與本發明之CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)的一次以上投與，例如每週投與本發明之CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)的2、3或4次投與。在一個實施例中，個體(例如，人類個體)接受每週超過一次CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)之投與(例如，每週2、3或4次投與) (在本文中亦被稱作一個週期)，之後一週不投與CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)，且隨後向個體投與一或多次CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)之額外投與(例如，每週超過一次CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)之投與)。在另一實施例中，個體(例如，人類個體)接受CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)之多於一個週期，且在各循環之間的時間少於10、9、8、7、6、5、4或3日。在一個實施例中，CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)隔日投與，每週進行3次投與。在一個實施例中，本發明之CAR免疫效應細胞(例如，T細胞或NK細胞)投與至少二、三、四、五、六、七、八週或八週以上。
在一個態樣中，使用慢病毒病毒載體(諸如慢病毒)產生表現BCMA CAR之細胞(例如，BCMA CART或表現BCMA CAR之NK細胞)。彼方式產生之表現CAR之細胞(例如，CART或表現CAR之NK細胞)將具有穩定CAR表現。
在一個態樣中，使用病毒載體(諸如γ反轉錄病毒載體，例如本文所述之γ反轉錄病毒載體)產生表現CAR之細胞，例如CART。使用此等載體產生之CART可具有穩定CAR表現。
在一個態樣中，表現CAR之細胞(例如，CART或表現CAR之NK細胞)在轉導之後短暫表現CAR載體持續4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15天。可藉由RNA CAR載體遞送實現CAR短暫表現。在一態樣中，CAR RNA藉由電穿孔轉導至細胞(例如，NK細胞或T細胞)中。
在使用短暫表現表現CAR之細胞(例如，CART或表現CAR之NK細胞)治療(特定言之經帶有表現CAR之細胞(例如，CART或表現CAR之NK細胞)之鼠scFv治療)之患者體內可能產生的潛在問題係在多次治療之後的全身性過敏反應。
不受此理論束縛，咸信此類過敏性反應可由產生體液抗CAR反應(亦即具有抗IgE同型之抗CAR抗體)之患者引起。當存在十天至十四天抗原暴露中斷時，認為患者之抗體製造細胞經歷IgG同型(不引起全身性過敏反應)至IgE同型的類別轉換。
若患者在短暫CAR療法過程期間處於產生抗CAR抗體反應之高風險(諸如由RNA轉導產生之彼等風險)下，則表現CAR之細胞(例如，CART或表現CAR之NK細胞)輸注中斷不應持續超過十天至十四天。
實例
參考以下實驗性實例來進一步詳細描述本發明。除非另外規定，否則提供此等實例僅出於說明的目的，且不意欲限制。因此，本發明決不應解釋為限於以下實例，但確切而言應解釋為涵蓋由於本文所提供之教示而變得明顯之任何及所有變化形式。
無需進一步描述，咸信一般技術者可藉由使用前述描述及以下說明性實例製造及利用本發明之組合物且實施所主張之方法。以下實施例特定指出本發明之各種態樣，且不應解釋為以任何方式限制本發明之剩餘部分。
實例 1 ： 在多發性骨髓瘤中之 BCMA - CART
CART - BCMA ( MCM998 ) 在 活體內展現強力抗腫瘤活性
在輸注PBS、未轉導之T細胞(「UTD」)或經工具CAR (「J6MO」)、BCMA-4、BCMA-9、BCMA-10 (「MCM998」)、BCMA-13或BCMA-15轉導之T細胞之後，在KMS11腫瘤模型中評估腫瘤負荷水準。BCMA-10展現最強力抗腫瘤活性(圖14)。
在多發性骨髓瘤臨床試驗 ( NCT 號： NCT02546167 ； UPCC 14415 ) 中之 CART - BCMA
設計評估輸注表現具有串聯4-1BB及CD3ζ信號傳導域之BCMA特異性嵌合抗原受體的自體T細胞(在本文中被稱作「CART-BCMA」)在患有多發性骨髓瘤(MM)之成年患者中之安全性及可行性的開放標記單中心預備試驗(圖15)。
將患者分成三組(圖15)。第1組患者接受以歷時3日之分次劑量輸注形式給與之1-5×108 CART-BCMA細胞。第2組患者接受環磷醯胺輸注，隨後接受以歷時3日之分次劑量輸注形式投與之1-5×107 CART-BCMA細胞。第3組患者接受環磷醯胺輸注，隨後接受以歷時3日之分次劑量輸注形式投與之1-5×108 CART-BCMA細胞。圖16A提供患者疾病特徵。圖16B提供關於歸因於疾病及之前療法之基線淋巴球減少症之存在情況的資訊。
CART - BCMA ( MCM998 ) 製造及給藥
成功地製造具有最小目標閾值劑量之所有CART-BCMA產品。所製造之產物的中值轉導效率為22.5% (9.6 - 33.3%)；中值倍擴增為20.7 (7.9 - 60.4)；中值群體倍增數為4.4 (2.98 - 5.92)；中值去除術CD4/CD8比率為1.03 (0.61 - 3.2)；且中值產物CD4/CD8比率為1.72 (0.84 - 3.9)。十四名患者中之十三名實現5×108 或5×107 之最大目標劑量。第1組之患者2接受1.9×108 個細胞，包括產物中之69% T細胞。十四名患者中之十二名接受100%之計劃劑量。歸因於在第2天發熱，第1組之患者1及患者3僅接受前兩次輸注(40%)。此等資料展現在很大程度上經預治療之多發性骨髓瘤患者中CART-BCMA製造係可行的。
臨床結果
第1組、第2組及第3組之臨床活性分別在圖17A、圖17B及圖17C中展示。
藉由流式細胞量測術(圖18A及圖18B)及藉由PCR (圖19A及圖19B)評估CART-BCMA之擴增。CART-BCMA之活體內擴增可能與對療法之反應相關且預測對療法之反應(圖20A及圖20B)。未觀測到如藉由流式細胞量測術所測定之多發性骨髓瘤細胞上之BCMA表面表現與臨床結果之間的相關性(資料未展示)。
實例 2 ： 對臨床試驗資料之相關性分析
為鑑別預測患者對CART-BCMA治療之反應的生物標記，對表28中所列之參數進行分析。
表 28 . 生物標記參數
在CART-BCMA輸注後之各種時間點針對反應者(具有完全反應(CR)、極佳部分反應(VGPR)或部分反應(PR)之患者)及無反應者(具有輕微反應(MR)、穩定疾病(SD)或進行性疾病(PD)之患者)獲取CAR+ CD4/CD8細胞在患者樣品中之分率(圖21A、圖21B、圖21C及圖21D)。此等資料展現，相比於無反應者，反應者具有隨時間推移更大存留之CAR+ CD4/CD8細胞群。
細胞介素含量之評估
在CART-BCMA輸注後之各種時間點評估細胞介素表現量之改變(圖22)。此等資料展現自基線(第0天)之最大變化出現在IL-6 (圖23A及圖23B)、IL-10、由γ干擾素誘導之單核球激素(MIG)及IFN-γ (圖24A及圖24B)之含量中。重要的是，IFN-γ可區分CART-BCMA治療之反應者與無反應者。
血清中 BCMA 含量之評估
在14個正常供體及12名骨髓瘤患者中評估BCMA之血清含量(圖25A及圖25B)。BCMA以約40 ng/mL之血清濃度存在於正常供體中，且在基線處以176 ng/mL之中值血清濃度存在於骨髓瘤患者中。亦在CART-BCMA輸注後之各種時間點獲取BCMA之血清含量(圖26A、圖26B、圖26C及圖26D)。此等資料展現一些具有高基線血清BCMA含量之患者對CART-BCMA治療反應良好(圖26A)。另外，血清BCMA含量可充當對CART-BCMA治療之反應的標記(圖26C及圖26D)。
對 CD4 + CART 細胞 及 CD8 + CART 細胞之百分比的評估
在CART-BCMA輸注後各種時間點在三名患者中獲取CD4+ CART細胞及CD8+ CART細胞之百分比(圖27A、圖27B及圖27C)。如圖27A及圖27C中所展示之反應者具有如藉由高BBz複本數所見之CAR T細胞的劇烈擴增。擴增主要由CD8+ CART驅動。儘管無反應者亦具有高BCMA含量，未發現擴增(圖27B)。
CD4 + T 細胞亞群及 CD8 + T 細胞亞群之評估
對正常供體及多發性骨髓瘤(MM)患者之CD4+T細胞亞群及CD8+T細胞亞群之含量進行比較(圖28A、圖28B、圖28C及圖28D)。與正常供體相比，MM患者具有較低百分比之Tnl細胞。Tscm細胞及Te細胞之含量在正常供體及MM患者中類似。MM患者具有較高中值百分比之Tem細胞。亦自MM患者獲取血球分離樣品中CD4+ T細胞亞群及CD8+ T細胞亞群之含量(圖28E及圖28F)。
自MM患者獲取血球分離樣品中之T細胞分化(圖29)。亦在MM患者中測定CD4+ T細胞亞群及CD8+T細胞亞群(例如，按PD1、CD27及/或GzB之表現計的CD4+細胞或CD8+細胞)之含量(圖30A及圖30B)。
實例 3 ： 在患有多發性骨髓瘤之患者中對 BCMA 嵌合抗原受體 ( CAR ) T 細胞療法之反應的預測相關因素
此實例描述旨在發現可在製造CART-BCMA之前預測個體對用CART-BCMA進行之治療之臨床反應之生物標記的研究。
自總共八名多發性骨髓瘤(MM)人類患者收集末梢血液樣品，且將其用14參數流式細胞量測板染色且在流式細胞量測儀器上進行分析。
此等MM患者接受如實例1中所述之CART-BCMA治療。基於在輸注後28日時之臨床反應，將患者樣品分類為反應者(R，定義為具有CR、VGPR或PR、NR = 3之患者)或無反應者(NR，定義為具有MR、SD或PD、NNR = 5之患者)。
為鑑別與臨床反應相關之生物標記簽名，進行預閘控以將分析限制至存活、單峰、淋巴球。隨後，使用基於R+ (https://www.r-project.org/about.html)之生物統計自動化演算法flowType(Aghaeepour等人Bioinformatics . 28(7):1009-1016, 2012)將預閘控資料用於資料採擷及生物標記鑑定。基於標記不係表現就係不表現(亦即，存在兩個相異的群體)之假設，FlowType使用簡單閾值或叢集演算法以將每一通道/標記密度分割成陽性細胞群體及陰性細胞群體。隨後將此等分割合併以產生一組多維表型。另外，且為允許自亞型鑑定排除標記，亦可對各標記指定「中性」值(亦即，表型不包括標記)。此演算法產生總數目為3N 之可能表型，其中N為標記之數目(在本實驗中N=14)。
將表型之長度限於四個標記之最大值以允許鑑定生物學上有意義之表型，因為過多標記會引起產生具有將難以解釋之極小細胞計數的表型。此程序產生1,697種可能表型之集合。除此等探索性表型以外，亦考慮以上表型之組合的子集，諸如CD4:CD8比率，存活T細胞(%)、單核球%及B細胞%。
為量測各表型之預測能力，使用T測試以評估在反應者(R)及無反應者(NR)中之量測表型之細胞頻率(該表型中細胞之數目除以親代群體中之細胞總數目)之間的偏差。使用FlowJo選擇在統計學上最顯著之表型用於手動確認。
就臨床反應而言，發現CD4:CD8比率係血球分離樣品中之清楚的微分器(圖1A及圖1B)。最可能將反應者與無反應者分離之區域對應於在1與1.6之間的CD4:CD8比率範圍，表明血球分離樣品中CD4群體含量較高(例如，CD4:CD8比率大於或等於1.6)之患者可能對CART-BCMA治療起反應(圖1B)。
相比於無反應者，在反應者中亦觀測到較高含量之CD8+記憶T幹細胞(TSCM)群體HLADR-CD95+CD27+ (圖2A)、CD45RO-CD27+ (圖2B)及CCR7+CD45RO-CD27+ (圖2C)，表明在血球分離樣品中具有較高含量之此等TSCM群體的患者可能對CART-BCMA治療起反應。
上文所述之對來自多發性骨髓瘤患者之製造BCMA之前的血球分離樣品中之T細胞的分析展現之後對CART-BCMA療法起反應之患者中CD4:CD8比率高，且無反應者中CD4:CD8比率低。因此，選擇血球分離材料中CD4:CD8比率高之患者可能增強較有效之治療結果。另外，此等資料及生物資訊工具表明可將免疫生物標記整合成鑑別最可能對CART-BCMA療法起反應之患者的手段，產生細胞療法之理想的個體化方法。
實例 4 ： 對多發性骨髓瘤腫瘤活體組織切片之分析
自參與賓夕法尼亞大學題為「Pilot Study Of Redirected Autologous T Cells Engineered To Contain an Anti-BCMA scFv Coupled To TCRζ And 4-1BB Signaling Domains in Patients With Relapsed and/or Refractory Multiple Myeloma」(NCT號：NCT02546167；UPCC 14415)之臨床試驗的患者獲取骨髓芯活體組織切片樣品以便分析。在投與之前(「治療前」或「前」)或在輸注後第28天、第43天或第90天收集骨髓芯活體組織切片樣品。將活體組織切片樣品用Immunocal™脫鈣作用經福馬林固定且包埋於石蠟中；且藉由與管家基因PPIB RNA原位雜交(ISH)確認樣品加工品質。
對 CD138 + MM 細胞定位及 BCMA 表現之分析
在投與之前(「治療前」或「前」)或在輸注後第28天及第90天(「3個月」)獲取來自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17骨髓芯活體組織切片樣品之CD138+MM細胞定位資料(圖3)。患者13在其治療前、第28天及第90天樣品中具有極少CD138表現(圖3)。與治療前樣品相比，患者14在其第28天樣品中CD138+ MM細胞數目增加(圖3)。患者15、患者16及患者17在基線時各自具有廣泛CD138+ MM細胞浸潤，隨後在第28天樣品中減少，且在3個月樣品中增加(圖3)。
用CART-BCMA進行之治療的患者結果及估計CD138浸潤%提供於表29中。


表 29 . CART-BCMA治療之患者結果及估計CD138浸潤%
骨髓芯活體組織切片樣品之BCMA表現資料以類似地方是取德且進行分析(圖4)。
在患者13及患者14體內觀測到如藉由IHC所量測之BCMA蛋白質表現及如藉由ISH所量測之BCMA mRNA表現之間的不一致(圖5)。
在患者15中，在治療前樣品中觀測到高BCMA蛋白質及mRNA含量，隨後在第28天樣品中顯著降低，且在第90天樣品中復發(圖6A)。在第28天樣品及第90天樣品中觀測到罕見的CARLo 陽性細胞(圖6A)。在患者16中，在第28天觀測到BCMA蛋白質及mRNA信號顯著減小，隨後在第90天增加(圖6B)。在第28天及第90天觀測到罕見的CARLo 陽性細胞(圖6B)。在患者17中，在第28天觀測到BCMA陽性細胞之數目減少及BCMA mRNA信號/細胞減少(圖6C)。在第90天BCMA mRNA信號/細胞返回至基線水準(圖6C)。在第90天偵測到不明確的CARLo mRNA信號(圖6C)。
總體而言，在基線時觀測到BCMA蛋白質及mRNA表現之可變性且其似乎與所檢測之樣品集中之反應相關。在第28天在5名患者中之3名中觀測到CD138陽性細胞浸潤減少，且其與BCMA蛋白質及mRNA表現減少相關聯。在3個月時在此等相同患者中觀測到CD138陽性細胞浸潤增加，且其與BCMA表現恢復相關聯。
對 IDO1 、 IFN - γ 及 TGFβ mRNA 含量之分析
藉由ISH在自患者15 (圖7A)、患者16 (圖7B)及患者17 (圖7C)獲取之治療前、第28天及第90天骨髓芯活體組織切片樣品測定IDO1、IFN-γ及TGFβ mRNA含量之表現。
在患者15中，相比於治療前樣品，在第28天樣品及第90天樣品中觀測到IDO1 mRNA含量增加(圖7A)。在所有測試樣品中，在IFN-γ mRNA之含量中觀測到最小改變(圖7A)。相比於治療前樣品，在第28天樣品及第90天樣品中觀測到TGFβ mRNA含量減少，且此改變可歸因於MM細胞之含量減少(圖7A)。
在患者16中，在持久性MM細胞之位點處觀測到IDO1 mRNA含量增加(圖7B)。在第28天樣品及第90天樣品中觀測到罕見的IFN-γ mRNA陽性細胞，而在第90天樣品中之MM細胞中觀測到TGFβ mRNA含量相比於基線顯著增加(圖7B)。
在患者17中，相比於治療前樣品，在第28天樣品中觀測到IDO1 mRNA含量增加(圖7C)。在所有時間點觀測到低含量之IFN-γ mRNA (圖7C)。相比於治療前樣品，在第28天樣品中觀測到TGFβ mRNA含量減少，且此改變可歸因於MM細胞之含量減少(圖7C)。
此等資料展示在第28天時之骨髓中觀測到IDO1 mRNA表現之輕度增加。
在自患者19 (圖7D)及患者20 (圖7E)獲取之治療前、第10天及第28天活體組織切片樣品中進行類似ISH分析。在第10天觀測到IFN-γ及IDO1 mRNA表現增加。
對 PD - L1 、 PD1 、 CD3 及 FoxP3 蛋白表現量之分析
藉由IHC在自患者15 (圖8A)、患者16 (圖8B)及患者17 (圖8C)獲取之治療前、第28天及第90天骨髓芯活體組織切片中測定PD-L1、PD1、CD3及FoxP3蛋白表現量。
在患者15中，在第90天觀測到PD-L1基質細胞表現增加(圖8A)。在測試樣品中未觀測到PD1、CD3或FoxP3表現改變(圖8A)。
在患者16中，在第90天觀測到PD-L1基質細胞表現增加(圖8B)。未偵測到PD1+細胞浸潤(圖8B)。未偵測到CD3+或FoxP3+細胞數目改變(圖8B)。
在患者17中，在所有時間點觀測到PD-L1基質細胞表現(圖8C)。在測試樣品中未偵測到PD1+細胞浸潤且未觀測到CD3或FoxP3表現改變(圖8C)。
在自患者19 ( 圖8D)及患者20 (圖8E)獲取之治療前、第10天及第28天活體組織切片樣品中進行類似IHC分析。此等兩名患者在第10天樣品中展示PD1或PD-L1增加。
此等資料展示儘管未觀測到PD-L1、PD1、CD3及FoxP3中之一致變化，但在一些患者中PD-L1及/或PD1之上調可表示潛在逃避機制。
對 CD19 蛋白表現量之分析
藉由IHC在自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲取之治療前、第28天及第90天骨髓芯活體組織切片測定CD19蛋白表現(圖9)。在第28天及3個月時在患者15及患者17中觀測到CD19陽性MM細胞之相對比例增加(圖9)。
在獲自患者15之治療前及第90天骨髓芯活體組織切片中確定BCMA陽性細胞及CD19陽性細胞為獨立群體(圖11A及圖11B)。
CD19+ CD34暗 細胞群體存在於獲自患者15 (圖12A)及患者17 (圖12B)之治療前骨髓芯活體組織切片。
在獲自患者15之治療前樣品中CD19群體不定地為CD138+及CD138- (圖13)。
此等資料表明包括CART-BCMA及CD19靶向療法之組合療法對MM患者之治療可為有益的。
對 CD20 蛋白表現量之分析
藉由IHC在投與之前及在CART-BCMA輸注後第28天及第90天自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲取之骨髓芯活體組織切片測定CD20蛋白表現(圖10)。在獲自患者14之樣品中觀測到預先存在之CD20陽性MM細胞(圖10)。在患者15及患者17中觀測到CD20陽性MM細胞之出現(圖10)。
此等資料表明 包括CART-BCMA及CD20靶向療法之組合療法對MM患者之治療可為有益的。
實例 5 ： B 細胞成熟抗原特異性嵌合抗原受體 T 細胞 ( CART - BCMA ) 在難治性多發性骨髓瘤中之臨床及生物活性
概述
嵌合抗原受體(CAR) T細胞作為血液科惡性疾病中之有前景的新穎療法出現。B細胞成熟抗原(BCMA)為表現主要限於漿細胞之細胞表面受體，使得其成為多發性骨髓瘤(MM)療法之合理目標。在3個或3個以上之前療法線之後患有復發性/難治性MM之個體中進行經含有CD3ζ及4-1BB信號傳導域之新穎完全人類BCMA特異性CAR轉導之自體T細胞(CART-BCMA)的I期研究。此處報導來自此研究之第1組的成熟結果，該研究在先前不進行化學療法調節之情況下使用投與1-5×108 CART-BCMA細胞之劑量進行。治療九名先前療法線中值為9之個體；所有個體具有高風險細胞遺傳學。在所有情況下成功地製造CAR T細胞且其在輸注後可偵測。四名個體(44%)具有目標反應(1 PR、2 VGPR、1 sCR)，其中反應持續時間中值為4個月，包括1名在CART-BCMA治療之後21個月具有進行中的嚴格的完全反應之個體。與無反應者相比，反應者具有更大量值之活體內CART-BCMA擴增，其又與製造前CD4:CD8比率及製造期間擴增量值相關聯。細胞介素釋放症候群為最頻繁之治療相關不良事件，在9名個體中之8中發生(3/4為3級)。在2名個體中觀測到4級腦病。估計中值總存活期為551天。在不存在淋巴球耗乏化學療法之情況下，在很大程度上經預治療之MM患者中給與CART-BCMA輸注具有臨床上活性，且表示MM療法之新穎方法。
結果
方案設計及登記
開放I期研究(NCT02546167)以評估製造CART-BCMA細胞及將CART-BCMA細胞向復發性/難治性骨髓瘤患者投與之可行性、安全性、臨床活性及生物活性。藉由流式細胞量測術評定骨髓瘤細胞上之BCMA表現，但登記不需要預先指定含量。在療法之2週清除之後，個體經受穩態白血球清除術以收集T細胞用於CART-BCMA製造，典型地3至4週程序。在製造期間抗骨髓瘤療法可恢復，直至在第一次CART-BCMA輸注之前2週。在門診研究單元中歷時3天將CART-BCMA細胞以分次劑量靜脈內輸注投與(10%之劑量在第0天給與；30%在第1天給與且60%在第2天給與)，如先前成年CTL019試驗(Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015))。在第2組及第3組(下文所述)中，在第一次CART-BCMA輸注之前3日投與環磷醯胺(Cy)以使淋巴細胞耗盡(圖31)。
初始使用標準3+3劑量遞增設計，探究3個依序組：1)單獨的1-5×108 CART-BCMA細胞；2) Cy 1.5 g/m2 + 1-5×107 CART-BCMA細胞；及3) Cy 1.5 g/m2 + 1-5×108 CART-BCMA細胞。之後修正方案以允許在各組中治療額外個體，以便增加更多關於CART-BCMA細胞在存在及不存在淋巴球耗乏調節(亦即Cy)下及在較高(1-5×108 )及較低(1-5×107 )劑量下之安全性及功效的資訊。此處報導在第1組用單獨的CART-BCMA細胞治療之9名個體之結果，該等個體目前具有成熟隨訪。第2組及第3組之參與及隨訪在進行中。
在第1組參與期間十二名個體同意；2名未曾收集T細胞(1名歸因於嚴重限制性肺病不合格；1名具有快速疾病進展/臨床衰退)。十名成功地製造CART-BCMA細胞；1名歸因於快速進展/臨床衰退未曾輸注，且9名在2015年11月與2016年9月之間輸注(圖37)。
個體及 CART - BCMA 產物特徵
個體人口統計資料、先前療法線及疾病特徵概述於表30，其中個別細節在表32中展示。經治療個體之中值年齡為57歲，其中67%為男性。此等個體之先前療法線中值為9，且8/9 (89%)難以用至少1種蛋白酶體抑制劑及免疫調節劑二者治療。所有個體具有至少1種高風險細胞遺傳學異常；67%具有缺失17p或TP53 突變。基線腫瘤負荷高(在治療前骨髓活體組織切片上之中值80%骨髓瘤細胞)，且2/9 (22%)患有髓外疾病。白血球清除術前中值絕對淋巴球計數(ALC)及總CD3計數分別為830細胞/微升及325細胞/微升，且截至CART-BCMA輸注之時間，已分別下降至500細胞/微升及258細胞/微升，反映此組中之重病及廣泛的先前治療。
所有9名個體成功地製造最小目標CART-BCMA細胞(1×108 )，不過1名個體需要2次白血球清除術/製造嘗試。中值轉導效率為22.2%(範圍9.6-33.3%)，其中在製造期間種細胞擴增中值為12.7倍。最終產物由中值為96%之CD3+ T細胞構成，其中中值CD4/CD8比率為1.6。六名個體接受所有3次計劃CART-BCMA輸注，3名(個體01、個體03及個體15)僅接受計劃劑量之40% (由於發熱及CRS之徵象保留第3次輸注)。每一個體之製造、產物特徵及給藥的其他細節展示於表33中。
臨床結果
9名個體中之四名(44%)實現部分反應(PR)或更佳，包括1個PR、2個極佳部分反應(VGPR)及1個嚴格的完全反應(sCR)。兩名其他個體具有極小反應(MR)，且3名不具有反應(圖32A)。達至第一反應之中值時間為14天。基於卡本-麥爾估計值，反應之中值持續時間(對於具有PR或更佳之彼等)為120天(範圍29-665+)；且中值無進展存活期(PFS)為65天(範圍13-679+)。藉由在CART-BCMA輸注之後第28天(個體01、個體15)或第45天(個體03)進行骨髓抽吸物之流細胞量測術(估計靈敏度10- 5 )，三名個體不具有可偵測骨髓瘤。個體03及個體15實現VGPR但分別在5個月及4個月時進展。個體01具有11個先前療法線，難以用硼替佐米、來那度胺、卡非佐米及泊利度胺治療，且具有缺失17p以及TP53 及NRAS 中之突變，反映風險極大之疾病。他在CART-BCMA療法之前快速進展，具有70%骨髓漿細胞，血清M峰值為2.0 g/dL，24小時尿液M峰值為3900 mg，不含血清之κ為6794 mg/L，患有高鈣血症及急性腎功能衰竭(血清肌酐1.82 mg/dL)。他的反應自PR (第14天)逐漸演進至VGPR (第3月)、CR (第6月)，且隨後演進至sCR (第9月)，且在CART-BCMA輸注之後21個月保持sCR。在CART-BCMA輸注5週之後，一名具有脊柱旁肌肉及胸膜之髓外受累的個體(03)在PET/CT上具有完全代謝反應，包括惡性胸膜積液之消解(圖32B)，表明CART-BCMA細胞在血液及骨髓隔室外通行之能力。另一患有髓外疾病之個體(08)不具有反應。在資料截止時間(9/11/17)，5名個體死亡，且估計中值總存活期(圖32C)為551天(範圍24-679+)。
安全性
3級或更高級之不良事件見於8/9 (88%)之個體中且概述於表31中，其中每一個體之所有不良事件列於表34中。在8名個體中觀測到CAR T細胞療法之充分描述的併發症細胞介素釋放症候群(CRS)：1個1級，4個2級，3個3級及1個4級。CRS發病之中值時間為在第一次輸注之後3.5天(範圍1-8)，其中中值持續時間為8天(範圍3-12)，且住院之中值持續時間為9天(範圍3-40)。CRS與鐵蛋白及C反應蛋白升高相關聯。四名個體接受抗IL6受體抗體托西利單抗，其中3名需要第二次投與(個體01、個體03、個體08)，且2名需要在重症監護病房中之護理。
神經毒性係在CAR T細胞療法之後常見的不良事件，其範圍介於輕度意識模糊或注意力缺陷至病灶性神經缺乏、總體腦病、失語症、癲癇及/或遲鈍。個體01在3級CRS之情況下具有1級意識模糊，其不經干預而消退。在CART-BCMA輸注之後，兩名個體(03及08)出現嚴重(4級)神經毒性。兩名個體在治療時均具有伴隨髓外疾病且快速進展之高腫瘤負荷，且均接受用於嚴重CRS之托西利單抗。在表明CART-BCMA快速增生之周邊淋巴球計數升高之情況下，個體03出現遲鈍及需要插管之復發性癲癇。第15天之大腦MRI展示在後葉中瀰漫性白質增加最明顯，其中溝消失暗示早期腦水腫。此時腦水腫尚未被描述為CAR T細胞療法之後果(Abbasi等人, JAMA 317, 2271 (2017))，且感覺其臨床及放射學圖片與後部可逆腦病症候群(PRES)最相符。她接受高劑量靜脈內類固醇(甲基潑尼龍1 公克/日×3日)而未改善，且隨後在第17天接受1.5 g/m2 環磷醯胺，其中在48小時內神經快速改善，在第23天MRI上異常增強之消退接近完全，且不具有殘餘神經缺乏。其他細節分開地描述(Garfall等人, Blood 128, 5702-5702 (2016)，以全文引用之方式併入)。
在CART-BCMA輸注時，個體08患有快速進行性骨髓瘤，其中80%骨髓漿細胞受累且皮膚、淋巴結、肝臟、腎上腺及腎臟髓外受累，且患有進行性腎功能異常(Cr 2.87 g/dL)。他在第15天罹患與惡化腎損傷、心房震顫低氧症、低血壓、凝血病、譫妄及轉胺酶升高相關聯之4級CRS。在接受託西利單抗之後，他的血液動力學變得穩定，但在第17天患有需要插管之進行性4級腦病/遲鈍。大腦之MRI不顯著，沒有腦水腫證據，但注意到顱底之進行性骨髓瘤。他接受類固醇，精神狀態改善且在第20天拔管。在第22天，他出現需要插管之復發性休克及低氧症；隨後血液培養物展示念珠菌血症。末梢血液現展示13%循環漿細胞且實驗室證實進行性骨髓瘤；在此情況下中他的家人選擇僅進行舒適護理且他在第24天死亡。研究中未出現其他死亡。
CART - BCMA 移植及存留之動力學
所有經輸注個體均具有可藉由qPCR分析偵測之CART-BCMA細胞，且8/9個體中之CAR+ T細胞可藉由流式細胞量測術偵測(圖33A；圖38用於代表性染色)。對於大部分個體而言，擴增在第10天達至峰值，其中在具有最大擴增之兩名個體(01、03)中，CART-BCMA細胞包含超過75%之所有循環CD3+ T細胞，分別對應於在擴增峰值時每毫升血液5300及8700個循環CART-BCMA細胞(圖39)。儘管在輸注前CD4+ T細胞在CART-BCMA產物中占主導地位，但在血液中循環之CART-BCMA細胞主要為CD8+，且高度活化，在峰值擴增期間表現HLA-DR之CAR+CD3+細胞之中值為94% (範圍33-98%) (表35)。骨髓抽出物中之CART-BCMA含量與末梢血液中之彼等大體上成鏡像，且對於個體03，胸膜液及腦脊髓液中之CART-BCMA含量亦升高(表36)。在大部分個體之血液內，CART-BCMA細胞展示有限偵測持續時間。在除2名個體(01、03)之外之全部個體中，在第28天之後CART-BCMA細胞不再可藉由流式細胞量測術偵測，但在經測試之7/8中直至第60天仍可藉由qPCR偵測，包括在個體01中(以嚴格的CR)，其在21個月時繼續具有可偵測細胞(圖33A)。藉由qPCR，反應與峰值擴增顯著關聯(對於≥PR，中值102507複本/微克DNA與對於＜PR，4187複本/微克DNA，p=0.016)，且與如藉由曲線下面積(AUC0 - 28d )所量測之最初28天內之存留顯著關聯(對於≥PR，中值885181複本×天/微克DNA與對於＜PR，26183複本×天/微克DNA，p=0.016) (圖33B)。
CART - BCMA 後可溶因子之變化
在CART-BCMA輸注之前及之後，在末梢血液血清中對總共30種細胞介素定量。對於IL-6、IL-10、由干擾素γ誘導之單核球激素(MIG、CXCL9)、IP10及IL-1受體α，發現相對於基線最一致的之變化(＞5倍增加) (圖40)。在具有最大擴增及反應之個體體內，細胞介素增加最明顯，在峰值擴增時達至峰值，且伴隨細胞介素釋放症候群之臨床表現，類似於先前在導向CD19之CAR T細胞之情況下所述之模式(Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)；Teachey等人, Cancer Discov. 6, 664-679 (2016))。具有最深反應之個體(01、03、15)均具有超過基線＞50倍之峰值IL-6、IL-10及MIG濃度。CRS之時序亦與反應相關聯，其中相比於不具有PR之個體中之4.5天(範圍4-8)，在具有PR或更佳之個體中，在第一次輸注之後中值發病為2天(範圍1-3) (p=0.029，曼-惠特尼檢驗)。
BCMA藉由γ分泌酶介導之裂解自漿細胞表面脫落(Laurent等人, Nat Commun 6, 7333 (2015))，產生在循環中可偵測之可溶形式(sBCMA)。在骨髓瘤患者體內發現較高sBCMA含量，且較高濃度之sBCMA與較不良臨床結果相關聯(Sanchez等人, Br. J. Haematol. 158, 727-738 (2012))。依序評定CART-BCMA對sBCMA以及其配位體BAFF及APRIL之血清濃度的影響。與一組健康供體(HD，n=6，中值sBCMA 41.6 ng/ml，範圍25.2 - 84.4)相比，大部分個體在基線時具有較高sBCMA血液濃度(中值1532 ng/ml，範圍78.2-6101.3)，連同伴隨的APRIL抑制(與中值5.69 ng/ml、範圍3.07-6.24之HD相比，中值0.04 ng/ml，範圍0.01 - 0.96)。BAFF濃度(中值0.84 ng/ml，範圍0.51 - 4.98)顯著不同於HD (中值0.93 ng/ml，範圍0.58 - 1.24)。基線sBCMA濃度與反應不相關(圖41)，但在具有最深反應之個體(01、03、15)體內，在CART-BCMA之後sBCMA濃度衰退最明顯。對於個體03、個體07、個體15，在進展時sBCMA亦開始上升(圖34)，表明sBCMA血液濃度可能係適用於評定骨髓瘤疾病負荷之生物標記。
在基線時，所有個體具有較低頻率之血液CD19+ B細胞(CD45+CD14閘之中值為1.9%，範圍0.1%-4.5%)，其可能因來自進行性骨髓瘤及廣泛先前療法之免疫抑制所致。然而，與經導致長期B細胞發育不全之導向CD19之CAR T細胞(Maude等人, N. Engl. J. Med. 371, 1507-1517 (2014))治療之患者相比，經CART-BCMA細胞治療之9名個體中之6名典型地在輸注後2至3個月恢復B細胞。B細胞恢復在具有最深反應之個體中最明顯(01、03、15)，且一般而言，儘管未必總是，與已知促進正常B細胞發育、增生及存活之配位體BAFF及/或APRIL之血清濃度增加(圖34)相關聯(Rickert等人, Immunol. Rev. 244, 115-133 (2011))。重要地，儘管循環CART-BCMA細胞之存留延長，個體01中B細胞頻率保持正常，其與此前所報導之在大部分循環B細胞上不存在BCMA表現一致(Seckinger等人, Cancer Cell 31, 396-410 (2017)；O'Connor等人, J. Exp. Med. 199, 91-98 (2004))。
在骨髓瘤細胞上之 BCMA 表現
在治療之前，八名個體可藉由骨髓瘤細胞上之流式細胞量測術評估BCMA表現，且所有個體具有可偵測BCMA表現(圖35) (參見圖42以獲得代表性閘控)。在此小組中，BCMA之基線強度在個體之間變化，且似乎不與CART-BCMA擴增或反應之程度相關(圖43)。治療後，7名個體具有可評估BCMA表現之骨髓瘤細胞。相對於螢光扣除(FMO)對照，與治療前相比，在進展時(第164)天，一名個體(03)具有顯著降低之BCMA染色強度，表明表面表現下調、BCMA暗/陰性變異體之免疫選擇及/或自細胞表面排出增加。
CART - BCMA 擴增之預測子
如上文所述，且與先前CAR T細胞研究(Turtle等人, Sci. Transl. Med. 8, 355ra116 (2016)；Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)；Ali等人, Blood 128, 1688-1700 (2016))一致，反應個體具有比無反應者更大對CART-BCMA細胞擴增及存留及更深的細胞介素釋放。為了探究與強烈擴增潛在關聯之治療前特徵，在製造之前、期間及結束時分析CART-BCMA產物之特徵。發現在白血球清除產物中以及在製造開始時(亦即在去除單核球之淘析步驟之後)之種細胞培養物中的較高CD4/CD8比率與個體中之較大CART-BCMA擴增相關聯(圖36A及圖36B)，而白血球清除產物或種細胞培養物中之總CD3 T細胞數目或在製造結束時之最終產物中的CD4/CD8比率不與個體中之CART-BCMA擴增關聯(資料未示出)。在製造期間之種細胞的擴增倍數亦與活體內CART-BCMA擴增相關(圖36C)，表明活體外增生能力可預測活體內活性。最後，在接受導向CD19之CAR T細胞之CLL患者中之先前分析展現較好CART細胞擴增及臨床反應與在表現CD27+CD45RO表型(24 )之白血球清除術樣本內之較高百分比的CD8+ T細胞相關聯。檢測在僅經CART-BCMA細胞治療之9名個體之白血球清除術產物內之CD8+ T細胞，且發現在CD27+CD45RO細胞之頻率與CART-BCMA活體內擴增之間的類似相關性(圖36D)。
論述
CAR T細胞療法作為B細胞惡性疾病之有前景的治療選項出現，其具有在單次治療之後持久控制疾病之潛能，使其與需要重複及/或連續投與之其他療法區分開。在此報導中，展現CAR T細胞療法在晚期及難治性骨髓瘤中之潛能，其中4/9個體實現部分反應或更佳，包括輸注後21個月之進行中之嚴格的完全緩解，以及具有輕微反應之另外2名個體。考慮到參與個體之骨髓瘤的高度不良生物特徵，包括高腫瘤負荷、快速進行性疾病及高風險遺傳，此值得注意。儘管具有基線T細胞淋巴細胞減少症，但自所有個體成功地製造CAR T細胞產物，且移植亦見於所有個體中，不過在個體中CAR T細胞之峰值含量及存留顯著不同。
骨髓瘤長期以來與T細胞中之定量及功能性缺乏相關聯，尤其在較晚期、難治性疾病中，與CD4/CD8T細胞比率反轉、離體抗腫瘤活性減弱及獲得耗竭或衰老表型相關聯(Kay等人, Blood 98, 23-28 (2001)；Dhodapkar等人, J. Exp. Med. 198, 1753-1757 (2003)；Suen等人, Leukemia 30, 1716-1724 (2016))。在此研究中，反應與活體內擴增之程度相關，其繼而與較高製造前CD4/CD8 T細胞比率、製造前CD45RO-CD27+CD8+ T細胞頻率及在製造期間活體外增生之量值相關聯。此表明更有效之CART-BCMA產物可衍生自具有如先前在使用導向CD19之CAR T細胞之CLL試驗中所觀測到的較少分化、較多「類原始」T細胞之個體(Fraietta等人, Blood 128, 57-57 (2016))。此等研究結果表明治療前表型及/或功能性T細胞特徵可最終幫助預測個體可能對CART-BCMA療法反應與否。其亦表明在T細胞可能本質上「更適合」之患者疾病過程的早期治療患者可能更有效。
由於此組中不具有作為輸注前調節給與之任何化學療法，所觀測到之CAR T細胞擴增及臨床活性亦值得注意的。已證明諸如環磷醯胺之化學治療劑經由多種潛在機制增強T細胞介導之抗腫瘤免疫，該等機制包括：減少導致IL-7及IL-15之可用性增加的細胞「槽」；耗乏諸如調節T細胞之抑制子細胞群；利用促進抗原呈現細胞之成熟的類鐸受體促效劑之釋放誘導黏膜損傷；及改變腸道微生物群(Gattinoni等人, Nat. Rev. Immunol. 6, 383-393 (2006)；Viaud等人, Science 342, 971-976 (2013))。因此，包括CAR T細胞之腫瘤特異性T細胞在人體內之授受性轉移最常在某種形式之淋巴球耗乏調節之後出現(Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)；Rapoport等人, Nat. Med. 21, 914-921 (2015)；Noonan等人, Sci. Transl. Med. 7, 288ra278 (2015)；Morgan等人, Science 314, 126-129 (2006))，其中一些研究展示調節強度之遞增增加引起甚至更佳的移植及臨床結果(Turtle等人, Sci. Transl. Med. 8, 355ra116 (2016)；Dudley等人, J. Clin. Oncol. 26, 5233-5239 (2008))。與此一致，在不進行淋巴球耗乏調節之情況下給與之CAR T細胞療法的早期研究僅發現轉移T細胞之低層級擴增及有限存留，不過誠然此等研究使用第一代CAR構築體，其不具有共刺激域且含有亦對不良移植作出貢獻之免疫原性序列(Pule等人, Mol. Ther. 15, 825-833 (2007)；Park等人, Mol. Ther. 15, 825-833 (2007)；Till等人, Blood 112, 2261-2271 (2008))。
然而，此研究清楚地證明至少在一些患者(例如個體01)中，化學療法調節對於穩健且持續CAR T細胞移植及臨床功效而言不必需。可能對此成功作出貢獻之條件包括在CAR構築體中包涵4-1BB共刺激域、具有廣泛抗原可用性之高腫瘤負荷及患者群體中之顯著基線淋巴球減少症。儘管如此，考慮到如上文所述之化學療法調節的已知有利效果，淋巴細胞耗盡將增加具有成功CART-BCMA擴增及存留及可能臨床反應之個體的比例仍有可能。此問題將在第2組及第3組中解決，其在CART-BCMA細胞之前接受環磷醯胺。
連同由NCI報導之先前BCMA特異性CAR T細胞試驗(Ali等人, Blood 128, 1688-1700 (2016))，此研究驗證BCMA為在骨髓瘤中具有高度吸引力的靶。此藉由由靶向BCMA之雙特異性抗體及抗體-藥物共軛物標示之有前景的臨床前及早期臨床活性進一步加強(Tai等人, Blood 123, 3128-3138 (2014)；Hipp等人, Leukemia 31, 1743-1751 (2017)；Cohen等人, Blood 128, 1148-1148 (2016))。另外，與淋巴球耗乏化學療法結合及在經較不大量之預治療的患者群體中給與之BCMA特異性CAR T細胞之兩個其他研究的初步報導已展示甚至較高的反應率，其中數個在報導時耐用＞1年(Fan等人, J. Clin. Oncol. 35, 摘要LBA3001 (2017)；Berdeja等人, J. Clin. Oncol. 35, 摘要3010 (2017))。重要地，此等研究中之每一者均未報導任何未預期脫靶或腫瘤外毒性，證實BCMA之有限正常組織表現，且將其與骨髓瘤中具有較廣泛表現之其他潛在CAR T細胞靶(例如CD138、CD38、CS1/SLAMF7)區分(Jiang等人, Mol. Oncol. 8, 297-310 (2014)；Drent等人, Haematologica 101, 616-625 (2016)；Chu等人, Clin. Cancer Res. 20, 3989-4000 (2014))。
對於靶向BCMA之CAR T細胞，一個重要的未回答的問題係是否存在最佳識別及殺滅所必需的MM細胞上BCMA表現之閾值。此研究並不需要BCMA之任何特定含量作為合格要求，其與所報導之3個其他BCMA特異性CAR T細胞研究形成對比，該等研究需要藉由免疫組織化學(IHC)或流式細胞量測術量測至少50%之骨髓瘤細胞表現BCMA (Ali等人, Blood 128, 1688-1700 (2016)；Fan等人, J. Clin. Oncol. 35, 摘要LBA3001 (2017)；Berdeja等人, J. Clin. Oncol. 35, 摘要3010 (2017))。在NCI試驗中，僅52/85 (62%)之藉由IHC針對BCMA染色之預篩選骨髓活體組織切片符合此閾值，意謂將排除大於三分之一的潛在合格MM患者(Ali等人, Blood 128, 1688-1700 (2016))。儘管本方法可富集更可能反應之患者仍然可能，但其亦可能排除可受益之彼等，且在此研究中之至少此初始組中，藉由流式細胞量測術量測，反應與基線BCMA表現並不相關(圖43)。需要更大數據集以更完全地解決此問題。另一問題係關於CAR T細胞療法後BCMA之潛在下調或選擇BCMA暗/陰性變異體，如迄今為止在此研究及NCI研究(Ali等人, Blood 128, 1688-1700 (2016))中各在1名患者中所觀測到。更大研究及更長隨訪將幫助確定此現象之真實頻率，但其表明其可能係MM細胞逃避之手段。
CAR T細胞之主要毒性仍為細胞介素釋放症候群(CRS)及神經毒性。在此組中，CRS之頻率及嚴重程度類似於在靶向CD19之CAR T細胞試驗(Maude等人, N. Engl. J. Med. 371, 1507-1517 (2014)；Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015))中所報導之頻率及嚴重程度，且幸而利用IL-6受體阻斷療法消除。考慮到明顯缺少托西利單抗對輸注CAR T細胞之擴增及存留的影響，探究其在輸注後早期(即使CRS僅為低級)之用途的研究目前在進行中(例如NCT02906371)，其可限制嚴重或危及生命之毒性的出現。神經毒性已在一些CAR T細胞試驗中之至多50%個體中報導(Turtle等人, Sci. Transl. Med. 8, 355ra116 (2016)；Turtle等人, J. Clin. Invest. 126, 2123-2138 (2016)；Kochenderfer等人, J. Clin. Oncol. 33, 540-549 (2015))，且繼續為更大的挑戰。其可與CRS並行或在CRS之後出現，且在托西利單抗之後通常不改善(或可能惡化)。CAR T細胞在中樞神經系統(CNS)內之存在(如藉由對腦脊髓液之分析評定)本身不一定預測神經毒性，但神經毒性與CRS之早期發病及血清及CNS兩者內之炎性細胞介素(例如IL6、IFN-γ)的快速升高相關聯，可能導致CNS血管滲透性增加(Gust等人, Cancer Discov., (2017))。支持地治療輕度病例，針對更嚴重病例通常投與類固醇。幸而，大部分病例可逆且自我限制，不過已報導具有腦水腫之致死病例(Abbasi等人, JAMA 317, 2271 (2017)；Gust等人, Cancer Discov., (2017))。此研究中之經歷證明使用環磷醯胺，個體03之類PRES症候群快速恢復，表明此可能係在難以用類固醇治療之病例中的合理選項，尤其若症狀與廣泛伴隨CAR T細胞擴增相關聯。
總體而言，在難治性MM患者中，表現完全人類BCMA特異性CAR之自體T細胞可甚至在不存在淋巴球耗乏化學療法之情況下擴增且誘導目標反應。探究與環磷醯胺調節之不同劑量的後續組將幫助進一步使此方法之安全性及功效達最佳。
材料及方法
個體
在至少3線先前療法，或若難以用蛋白酶體抑制劑及IMiD兩者治療，則2線先前療法之後，個體患有復發性或難治性(定義為在最近療法之60天時或60天內進展)之多發性骨髓瘤。其他關鍵合格標準包括可量測疾病；ECOG機能狀態為0-2；血清肌酐≤ 2.5 mg/dL或估計肌酐清除≥30 ml/min；絕對嗜中性白血球計數≥1000/μl且血小板計數≥50,000/μl (若骨髓漿細胞≥50%細胞含量，則≥30,000/μl)；SGOT ≤ 3×正常值上限且總膽紅素≤ 2.0 mg/dl (除高膽紅素血症歸因於吉伯特氏症候群之患者以外)；左心室射血分數≥ 45%；未患有活性自體免疫疾病；及不具有骨髓瘤之情況下的中樞神經系統受累。所有個體具有基線大腦MRI及藉由指定研究神經學家進行之連續評估。自每一個體獲得知情同意書且研究在賓夕法尼亞大學IRB批准之情況下根據赫爾辛基宣言(Declaration of Helsinki)進行。
研究設計
此臨床試驗為1期開放標記研究，其中主要目標為安全性。根據美國國立癌症研究所之不良事件的普通術語標準4.0版(National Cancer Institute's Common Terminology Criteria for Adverse Events version 4.0)測定毒性級別，例外為細胞介素釋放症候群，其按照賓夕法尼亞大學CRS定級系統(表38)分級，如所述(Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015))。研究經Recombinant DNA Advisory Committee, FDA, Abramson Cancer Center Clinical Trials Scientific Review Committee及Penn Institutional Biosafety Committee及Institutional Review Board批准。試驗在NCT02546167下登記在clinicaltrials.gov中，且如結果章節之「方案設計及參與」及圖31中所述進行。藉由經更新的International Myeloma Working Group標準(Kumar等人, Lancet Oncol. 17, e328-346 (2016)在此以全文引用之方式併入本文中)評定骨髓瘤反應。對於此分析，資料截止為9/11/17。
CART - BCMA 製造及輸注
末梢血液T細胞經編碼CAR之豆狀病毒載體刺激及轉導：融合至CD8之鉸鏈及跨膜域及人類4-1BB胞內信號轉導域及CD3z胞內信號轉導域之人類抗BCMA單鏈可變片段。CART-BCMA細胞在賓夕法尼亞大學之Clinical Cell and Vaccine Production Facility製造，其經FACT認可(http://www.factwebsite.org)，如先前所述(Porter等人, Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)；Kalos等人, Sci. Transl. Med. 3, 95ra73 (2011))。在製造開始時(在淘析以減少單核球之後) (Powell等人, Cytotherapy 11, 923-935 (2009))及製造結束時之種細胞培養物中之白血球清除產物內藉由流式細胞量測術測定CD3、CD4及CD8細胞之頻率。藉由Coulter MultisizerTM 上之細胞計數量測種細胞之擴增倍數及群體倍增數。調配CART-BCMA細胞且將其低溫保藏直至輸注時間，隨後在品質控制效能測試及品質保證檢閱之後藉由靜脈內輸注歷時3天投與，其中每日給與10%、30%及60%之劑量。
CART - BCMA 擴增之量測
使用樣品接收、加工、冷凍及分析之已建立的標準操作程序(SOP)在賓夕法尼亞大學之Translational and Correlative Studies Laboratory進行研究樣品加工、冷凍及實驗室分析。自在方案指定時間點所獲得之末梢血液或骨髓樣品將CART-BCMA細胞定量。樣品收集於淡紫色頂部(K2EDTA)真空管或紅色頂部(無添加劑)真空管(Becton Dickinson)。在樣品抽取之2小時內，將淡紫色頂部管遞送至實驗室。在抽取之16小時內，根據已建立之SOP加工樣品。將PBMC純化、加工且儲存於液氮氣相中。在包括凝固時間之抽取的2小時內，加工紅色頂部管，且將血清藉由離心分離、等分且儲存於−80℃處。
在菲科爾-帕克加工(Ficoll-Paque processing)之後藉由流式細胞量測術直接評估細胞。根據取決於樣品中之細胞產量之條件使用約 2×105 至5×105 個總細胞進行PBMC之免疫表型分型。FMO (螢光扣除對照)單二級對照物用於CART-BCMA及BCMA評估。用於流式細胞量測術之反應劑及方案描述於補充方法中。
自全血或骨髓抽出物直接分離基因體DNA，且對於末梢血液及骨髓樣品使用ABI TaqMan技術及經驗證之檢定進行qPCR分析，以使用每時間點一式三份之200 ng基因體DNA偵測如所述之整合式CAR轉基因序列(Kalos等人, Sci. Transl. Med. 3, 95ra73 (2011))。為測定每單元DNA之複本數，產生由摻加至100 ng未經轉導的對照基因體DNA之5至106 複本之慢病毒質體組成的八點標準曲線。存在於標準曲線中之質體的複本數使用具有相同引子/探針設定之數位qPCR檢驗且在QuantStudio 3D數位PCR儀器(Life Technologies)上進行。重複三次評估每一資料點(樣品及標準曲線)，其中對於所有可定量值，在三次重複實驗中之三次中的陽性Ct值具有小於0.95%之變化係數百分比。為控制詢問DNA之品質，使用20 ng基因體DNA及如所述之對CDKN1A (p21)基因上游之非轉錄基因組序列具有特異性之引子/探針組合(Kalos等人, Sci. Transl. Med. 3, 95ra73 (2011))進行平行擴增反應。此等擴增反應產生調節計算與實際DNA輸入之修正係數。每微克DNA轉殖基因複本根據以下式計算：每微克基因體DNA複本=(由CART-BCMA標準曲線計算之複本)×修正係數/(以奈克為單位之經評估DNA量)×1000 ng。
血清細胞介素之量測
人類細胞介素磁性30叢板(LHC6003M)來自Life Technologies。
在CART-BCMA輸注前1天或自基線且在安排時間點直至輸注後28天收集之血清樣品在-80℃下低溫保藏。根據製造商方案解凍且分析分批樣品。使用FlexMAP 3D儀器來量測檢定板，且使用xPONENT軟體進行資料獲取及分析。基於以下標準檢測資料品質。使用xPONENT軟體，在具有或不具有輕微擬合之情況下各分析物之標準曲線之5P R2 值＞ 0.95。為通過品質控制，自產對照血清之結果需要在衍生自＞25種經測試分析物之歷史自產控制資料之CI (信賴區間)的95%內。對具有出自低範圍(＜OOR)之結果的樣品不進行另外測試。在較高稀釋下對具有出自高範圍(＞OOR)或大於標準曲線最大值(SC max)兩倍之結果的樣品再測試。報導通過以上品質控制或再測試之結果。
可溶 BCMA 、 BAFF 及 APRIL 之量測
人類BCMA (DY193)、APRIL (DY884B)及BAFF (DT124-05)之抗體集來自R&D Systems。ELISA珠粒條及4柱儲集器(SOW-A16735)來自Assay Depot。ELISA受質ADHP(10010469)來自Cayman Chemical。檢定板(OX1263)來自E&K Scientific。所有ELISA反應劑根據DuoSet ELISA之方案製備，除補充有100 uM之ADHP的色彩反應劑B以外。歸因於血清之有限體積及流式螢光檢測術檢定缺少對BCMA、APRIL及BAFF之可用性，使用ELISA珠粒條來量測三種分析物。將捕捉抗體(cAB)塗佈於大球表面上而非ELISA板之孔，使得能夠使用100ul血清量測所有三種分析物。遵循抗體集之方案，基於檢定映圖使用檢定板中之珠粒條設置檢定。在檢定結束時，藉由添加100微升/孔之受質溶液(1:1之色彩反應劑A及ADHP)來製備每12個珠粒條一個的受質板。根據檢定映圖將每一珠粒條置於受質板之一個柱中。顯色10至30分鐘。在FLUO STAR OMEGA儀器上讀取板。進行如針對流式螢光檢測術資料描述之資料品質控制。
骨髓之骨髓瘤細胞的評定 ， 包括 BCMA 表現
在短時氯化銨紅血球裂解步驟之後，在抽出物上直接進行骨髓抽出物材料之流式細胞量測術評定。根據如(Flores-Montero等人, Leukemia 31, 2094-2103 (2017))中所述之EuroFlow方案調適程序。簡言之，將至多2ml骨髓抽出物用48ml Pharm Lyse溶液(BD Biosciences目錄號555899)稀釋，且在室溫下在振盪裝置上培育15分鐘。隨後藉由在800g下離心10分鐘收集細胞，將其用流式細胞量測術緩衝劑(具有1%胎牛血清之PBS)洗滌兩次，用L/D Aqua存活染料(Thermo Fisher目錄號L34957)染色。用CD45、CD19、CD138、CD38、CD14、CD56、CD20、CD3、CD269 (BCMA)、CD274 (PD-L1)之抗體的混合物進行表面染色。FMO (螢光扣除對照)單二級對照物用於BCMA評估。同時將正常供體PBMC細胞之等分試樣染色作為對照物。隨後洗滌細胞，隨後在室溫下使用Cytofix/Cytoperm反應劑(BD Biosciences)滲透/固定20分鐘、洗滌且用κ及λ免疫球蛋白輕鏈之抗體的混合物染色。隨後洗滌樣品，隨後將其在PBS中再懸浮且在配備有紫色、藍色、綠色及紅色雷射之17色LSR Fortessa Special Order Research Product流式細胞儀(BD)上採集。使用FlowJo (Treestar)或FCS Express分析清單模式檔案。
統計資料
研究之統計分析主要為描述性的，此係由於試驗之前導性質及患者之樣本大小較小。卡本-麥爾方法用於估計反應持續時間、無進展及總存活期及關聯中值存活時間。曼-惠特尼檢驗用於評估反應與峰值CART-BCMA擴增、在最初28天(AUC-28)內之擴增的曲線下面積、基線可溶BCMA含量及MM細胞上基線BCMA表現之間的關聯的顯著性。斯皮爾曼相關度用於量測兩個連續變數之間的相關度。針對無相關度之虛無假設之斯皮爾曼相關度的顯著性基於變換計算。使用Graphpad Prism 6.0版進行分析。
表 30 . 個體特徵
*包括複雜核型、增加1q、缺失17p及/或t(4；14)。Bort=硼替佐米；Carf=卡非佐米；Dara=達雷木單抗；Del=缺失；雙重難治性=難以用蛋白酶體抑制劑(PI)及免疫調節劑(IMiD)兩者治療；LDH=乳酸脫氫酶；Len=來那度胺；五重難治性=難以用2種PI、2種IMiD及dara治療；Pom=泊利度胺；四重難治性=難以用2種PI及2種IMiD治療；SCT=幹細胞移植。
表 31 . 3級或更高級不良事件
n=發生事件之個體的數目。表中報導個體所經歷之最高級別毒性。*神經毒性包括1名患有3級癲癇、4級譫妄及4級可逆後腦白質病症候群(RPLS) (亦稱為後可逆腦病症候群(PRES))之個體；及1名患有3級譫妄及4級腦病之個體。
**在患有念珠菌血症及快速進行性骨髓瘤之個體08中之死亡NOS (未另列出)；家人選擇僅採取舒適措施。
補充方法
用於流式細胞量測術之反應劑及方案
用於T細胞偵測板之抗體為抗CD45 V450 (純系HI30)、抗CD14 V500 (純系M5E2)、抗CD56 Ax488 (純系B159)、抗CD4 PerCP-Cy5.5 (純系 RPA-T4)、抗CD8 APC-H7 (純系SK1) (均來自BD Bioscience)。此外，使用來自Biolegend之抗CD3 BV605 (純系OKT3)、抗HLA-DR BV711 (純系L243)、抗CD19 PE-Cy7 (純系H1B19)。藉由使用雙生物素BCMA-Fc重組蛋白及來自BD Bioscience之第二染色反應劑抗生蛋白鏈菌素PE (目錄號554061)評定CART-BCMA表現。將細胞再懸浮於含有1%胎牛血清、0.02%疊氮化鈉及雙生物素標記BCMA-Fc之100 μL PBS中且在冰上培育30分鐘，洗滌，再懸浮於含有1%胎牛血清、0.02%疊氮化鈉、表面抗體及SA-PE之100 μL PBS中，且在冰上培育30分鐘，洗滌，再懸浮於含有1%胎牛血清及0.02%疊氮化鈉之250ul PBS中，且使用配備有紫色(405 nm)、藍色(488 nm)、綠色(532 nm)及紅色(628 nm)雷射之Fortessa流式細胞儀獲得。使用FlowJo軟體(10版，Treestar)分析資料。使用eBiosciene UltraComp eBeads (eBioscience目錄號01-222-42及DIVA軟體建立補償值。
表 32 . 個別個體特徵
*療法線根據IMWG標準定義。放射不視為線。**在T細胞收集(「血球分離術」-頂線)及CART-BCMA輸注(「輸注」-底線)之前接受的最近療法。所有療法在血球分離術之前保留至少2週且在輸注之前同樣保留至少2週。
Carfilz=卡非佐米；cyclo=環磷醯胺；D-AC=地塞米松+輸注小紅莓及環磷醯胺；D-PACE=地塞米松+輸注順鉑、小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；Dex=地塞米松；Dx=診斷；Len=來那度胺；Pano=帕比諾他；Pembro=派立珠單抗；Pom=泊利度胺；Pom/Dex-ACE= 泊利度胺、地塞米松+輸注小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；Tx=治療；VDT-PACE=硼替佐米、地塞米松、沙立度胺+輸注順鉑、小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；Yr=年。
表 33 . CART-BCMA製造及產物細節
在製造開始時(在淘析之後的「種細胞培養物」)及在製造結束時(「在採集時」)在血球分離產物中藉由流式細胞量測術評定總CD3+細胞、CD3+CD4+細胞及CD3+CD8+細胞之頻率。Aph=血球分離產物；exp倍數=擴增倍數；pop dblgs=群體倍增數；trans eff=轉導效率。MR=極小反應；PD=進行性疾病；PR=部分反應；sCR=嚴格的完全反應；SD=穩定疾病；VGPR=極佳部分反應
*歸因於發熱/早期CRS，個體01、03及15僅接受40%之計劃劑量。
表 34 . 個別個體不良事件
無關於歸因，列出所有事件。若在相同患者中事件出現多於一次，則報導最高級別。Alk phos=鹼性磷酸酶；AST=天冬胺酸轉胺酶；CRS=細胞介素釋放症候群；DIC=瀰漫性血管內凝血；NOS=未另列出；RPLS=可逆後腦白質病症候群；SQ=皮下；SVT=室上性心動過速；UTI=泌尿道感染


表 35 . 在峰值擴增時末梢血液CART-BCMA+細胞之特徵
CART-BCMA細胞藉由如圖38中之流式細胞量測術評定。列出在峰值擴增之日，在CD3+群體、CD4+群體及CD8+群體內之CAR+細胞的頻率。亦展示在峰值擴增(如藉由表現HLA-DR之CAR+細胞%所量測)時之活化狀態。MR=極小反應；PD=進行性疾病；PR=部分反應；sCR=嚴格的完全反應；SD=穩定疾病；VGPR=極佳部分反應
*藉由qPCR測定峰值；CAR+細胞不可藉由流式細胞量測術偵測。
表 36 . 藉由qPCR量測之血液、骨髓及其他位點中之CART-BCMA移植
在測試時間點，CART-BCMA含量(複本/微克基因體DNA)在血液及骨髓中大體相當。在個體03之CSF及胸膜液中發現高含量之CART-BCMA。BM=骨髓；CSF=腦脊髓液。*在第45天進行檢定。
表 37 . 骨髓瘤細胞上BCMA表現之細節
對骨髓之骨髓瘤細胞進行閘控且分析BCMA表現。描繪表現BCMA之骨髓瘤細胞%，以及BCMA及FMO陰性對照之平均螢光強度(MFI)。n/a=不可獲得。tx前=治療前。tx後=治療後，除非另外規定，否則在第28天時間點。


表 38 . 細胞介素釋放症候群(CRS)之Penn定級系統
*定義為需要多個流體大丸劑以便支持血壓的低血壓。
實例 6 ： 不為多發性骨髓瘤之B細胞惡性疾病中之BCMA表面表現
材料及方法
測試以下經活化B細胞亞型瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)：HBL-1、Oci-Ly3及TMD-8。此外，測試以下生發中心B細胞(GCB)亞型DLBCL線：SuDHL-4、SuDHL-6及SuDHL-10。多發性骨髓瘤(MM)線U266及KMS11充當陽性對照且急性淋巴母細胞白血病線Nalm6以及慢性骨髓性白血病(CML)線K562用作陰性對照。將細胞用1:50稀釋之經PE標記之抗BCMA抗體(Biolegend，目錄號357504)染色。根據製造商之方案用Quantum Simply Cellular定量套組(Bangs Laboratories，目錄號815)測定抗體結合能力ABC)。於BD Fortessa流式細胞儀上分析細胞且使用FlowJo分析資料。
結果
圖44A展示BCMA表現之直方圖，且在圖44B中，繪製各細胞株之抗體結合能力。兩種陽性對照線均展示高BCMA表現，如在直方圖中及藉由定量所見(圖44A及圖44B)。所有其他線展示顯著較低BCMA表現。然而，除Oci Ly3之外，所有經測試DLBCL線明顯地為BCMA陽性。HBL-1及SuDHL-6展示最高表現，抗體結合能力＞5,000。
實例 7 ： 在針對復發性 / 難治性多發性骨髓瘤 ( MM ) 之 B 細胞成熟抗原特異性嵌合抗原受體 T 細胞療法 ( CART - BCMA ) 之後 T 細胞擴增及臨床反應的預測子
背景： 復發性/難治性(rel/ref) MM與進行性免疫功能異常相關，包括CD4:CD8 T細胞比率恢復及獲得末端分化T細胞表型。導向BCMA之CAR T細胞在MM中具有有前景的活性，但預測穩健活體內擴增及反應之因子未知。在難治性MM患者(中值7次先前療法、96%高風險細胞遺傳學)中之CART-BCMA (表現具有CD3ζ/4-1BB信號傳導域之人類BCMA特異性CAR的自體T細胞)的1期研究中，在12/25 (47%)中觀測到部分反應(PR)或更佳(Cohen等人, ASH 2017, 505號，以全文引用之方式併入本文中)。最近，在接受導向CD19之CAR T細胞之CLL患者中展現在CAR T產物產生之前特定T細胞表型與改善之活體內擴增及臨床結果相關聯(Fraietta等人, Nat Med 2018，以全文引用之方式併入本文中)。此研究由此試圖鑑別與CART-BCMA擴增及/或反應相關聯之治療前臨床或免疫特徵。
方法 ： 三個組參與：1)單獨的1-5×108 CART細胞；2)環磷醯胺(Cy) 1.5 g/m2 + 1-5×107 CART細胞；及3) Cy 1.5 g/m2 + 1-5×108 CART細胞。在製造期間藉由流式細胞量測術進行對末梢血液(PB)及骨髓(BM)單核細胞、冷凍白血球清除術等分試樣之表型分析及CART-BCMA生長之表型及活體外動力學。藉由流式細胞量測術及qPCR評定CART-BCMA活體內擴增。藉由IMWG標準評定反應。
結果 ： 反應(≥PR)見於第1組之4/9患者(44%，1 sCR、2 VPGR、1 PR)；第2組之1/5 (20%，1 PR)；及第3組之7/11 (64%，1 CR、3 VGPR、3 PR)中。截至7/9/2018，3/25 (12%)在輸注後11、14及32個月保持無進展。如先前所述，反應與峰值活體內CART-BCMA擴增(p=0.002)以及灌注後第一個月內之擴增(AUC-28, p=0.002)相關聯。無基線臨床或MM相關特徵與擴增或反應顯著關聯，包括年齡、同型、診斷後之時間、之前療法數、四重或五重難治性、存在del 17p或TP53 突變、血清血紅素、BM MM細胞百分比、MM細胞BCMA強度或可溶BCMA濃度。在白血球清除術或CART-BCMA輸注之前給與之治療方案亦不具有預測值。然而，發現在白血球清除產物內較高CD4:CD8 T細胞比率與較大活體內CART-BCMA擴增相關聯(斯皮爾曼r=0.56，p=0.005)，且與臨床反應相關聯(PR或更佳；p=0.014，曼-惠特尼)。另外，且類似於CLL資料，發現具有CD45RO-CD27+之「早期記憶」表型之白血球清除產物內之CD8 T細胞的較高頻率亦與改善之擴增相關聯(斯皮爾曼r=0.48，p=0.018)，且與反應相關聯(p=0.047)。對製造資料之分析證實在培養開始時較高CD4:CD8比率與較大擴增相關聯(r=0.41，p=0.044)，且在較低程度上與反應相關聯(p=0.074)，而不與最終CART-BCMA產物中之絕對T細胞數目或CD4:CD8比率相關聯(p=NS)。在製造期間之活體外擴增確實與活體內擴增相關聯(r=0.48，p=0.017)，但不直接預測反應。在CART-BCMA輸注時，PB或BM內之總T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞及CD3+CD56+細胞之頻率不與後續CART-BCMA擴增或臨床反應相關聯；輸注前較高PB及BM CD4:CD8比率與擴增相關(分別r=0.58，p=0.004及r=0.64，p=0.003)，但不與反應相關。
結論： 在此研究中，發現在很大程度上經預治療之MM患者中CART-BCMA擴增及反應不與腫瘤負荷或其他臨床特徵相關聯，但確實與T細胞收集及製造之前特定免疫特徵相關，亦即保持正常CD4:CD8比率且增加具有CD45RO-CD27+表型之CD8 T細胞的頻率。此表明具有較少調節異常免疫系統之患者可產生在MM中更有效的CART細胞產物，且具有使患者選擇、T細胞收集時序及製造技術最佳化以解決MM患者中之此等限制的意義。
實例 8 ： 在多發性骨髓瘤中用於 CAR T 細胞製造及功效之 T 細胞適合度的臨床預測子
引言 ： 在多發性骨髓瘤(MM)中，用於嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法之最佳臨床配置及細胞產物特徵不明確。在經抗CD19 CAR T細胞(CART19)治療之CLL患者中，在白血球清除術時，早期記憶(早期mem) T細胞表型(CD27+ CD45RO- CD8+)之盛行率獨立於其他患者或疾病特異性因子預測臨床反應，且與活體外T細胞擴增及CD19反應性活化能力增強相關聯(Fraietta等人Nat Med 2018，以全文引用之方式併入本文中)。T細胞適合度因此為對CAR T細胞療法之主要決定因素。在此研究中，將在誘導療法完成時(ind後)自MM患者獲得之白血球清除樣品與復發性/難治性(rel/ref)患者中所獲得之彼等比較早期mem T細胞之頻率、CD4/CD8比率及活體外T細胞擴增。
方法 ： 在抗CD3/抗CD28珠粒刺激期間，藉由流式細胞量測術分析低溫保藏白血球清除樣品之早期mem T細胞之百分比及CD4/CD8比率，及活體外擴增動力學。在2007與2014之間自先前所報導之MM試驗獲得ind後樣品，其中在ASCT後輸注離體擴增自體T細胞以便於免疫復水(NCT01245673、NCT01426828、NCT00046852)；rel/ref樣品來自CART-BCMA之一期研究中經治療之MM患者(NCT02546167)。
結果 ： ind後之組包括38名患者，其中值年齡為55y (範圍41-68)，且先前暴露於來那度胺(22)、硼替佐米(21)、地塞米松(38)、環磷醯胺(8)、長春新鹼(2)、沙立度胺(8)及小紅莓(4)；第一次全身療法至白血球清除術之中值時間為152天(範圍53-1886)，其中先前療法線之中值為1(範圍1-4)。rel/ref組包括25名患者，其中值年齡為58y (範圍44-75)，先前療法線中值為7(範圍3-13)，且此前暴露於來那度胺(25)、硼替佐米(25)、泊利度胺(23)、卡非佐米/奧普洛佐米(24)、達雷木單抗(19)、環磷醯胺(25)、自體SCT(23)、同種異體SCT(1)及抗PD1 (7)。相比於rel/ref組(65%，範圍0-95%)，ind後組在白血球清除術時之中值骨髓漿細胞含量較低(12.5%，範圍0-80, n=37)。與rel/ref組相比，ind後組中早期mem T細胞之百分比較高(中值43.9%對29.0%，p=0.001，圖45A)。同樣地，與rel/ref組相比，ind後組中CD4/CD8比率較高(中值2.6對0.87，p＜0.0001，圖45B)。與rel/ref組相比，ind後組中在製造期間之活體外T細胞擴增量值(如藉由第9天之群體倍增數或PDL9量測)較高(中值PDL9 5.3對4.5，p=0.0008，圖45C)，其與對CLL中之CART19之反應相關。自兩組合併資料，PDL9與早期mem T細胞百分比相關(斯皮爾曼ρ 0.38，多樣性調節p=0.01)且與CD4/CD8比率相關(斯皮爾曼ρ 0.42，多樣性調節p=0.005)。在ind後組內，在早期mem T細胞百分比及MM診斷後之時間、療法持續時間、暴露於特異性療法(包括環磷醯胺、硼替佐米或來那度胺)或血球分離術時之骨髓漿細胞含量之間不存在顯著關聯。然而，在ind後組中，與組中其餘患者(n=35)相比，在血球分離術之前必需＞2線療法在患者(n=3)中，存在朝向較低百分比早期mem表型(29%對49%，p=0.07)及較低CD4/CD8比率(中值1.4對2.7，p=0.04)之趨勢。
結論 ： 在MM患者中，與復發性/難治性設置相比，在誘導療法之後所獲得之白血球清除產物中，CAR T細胞製造之適合度的在功能上經驗證之生物標記早期mem T細胞表型的頻率顯著較高，CD4/CD8比率及活體外T細胞擴增之量值亦如此。此結果表明在病程中之早期點，在疾病負荷相對低之時段及暴露於多線療法之前，用於MM之CAR T細胞將產生較好臨床反應。
實例 9 ： 作為在導向 CART 細胞之後進展之復發性 / 難治性多發性骨髓瘤 ( MM ) 患者之補救療法的 PD - 1 抑制劑組合
背景： 在難治性MM中，表現對B細胞成熟抗原具有特異性之嵌合抗原受體(CAR)之自體T細胞(CART-BCMA細胞)展示活性，但復發仍常見。抗-PD-1抗體(Ab)臨床前增強CART細胞活性，且在CD19特異性CART細胞之後進展的DLBCL患者中誘導CART細胞再擴增及反應(Chong等人, Blood 2017，以全文引用之方式併入本文中)。IMiD來那度胺(len)及泊利度胺(pom)可增強CART細胞及PD-1抑制劑兩者在MM中之功效以及毒性。埃羅妥珠單抗(elo)具有與IMiD及地塞米松(dex)組合之臨床抗MM活性，且在臨床前模型中與抗-PD-1 Ab協同。
方法： 先前描述復發性/難治性MM中之CART-BCMA細胞之1期研究中參與的25名個體之結果(Cohen等人, ASH 2017, 505號，以全文引用之方式併入本文中)。鑑別且回顧性地檢閱在CART-BCMA之後進展且接受PD-1抑制劑(派立珠單抗(pembro))組合作為其隨後療法之五名個體。藉由IMWG標準評定反應。治療前、在第一pembro劑量之後2至4週隨後4週一次直至進展藉由流式細胞量測術及qPCR評定CART-BCMA含量。Pembro劑量為每3週200mg；dex劑量為20-40毫克/週。
結果 ： 五名個體之特徵展示於表39中。中值先前線為9；所有患者具有高風險細胞遺傳學。所有患者難以用pom治療，2名難以用pembro/pom/dex治療，且1名難以用elo治療。對CART-BCMA之最佳反應為2名患者中之PR、2名患者中之MR及1名患者中之PD. CART-BCMA至基於pembro之療法的中值時間為117天。在補救療法起始時，所有患者仍具有可藉由qPCR偵測之CART-BCMA細胞，其中2名(患者07及患者21)仍可藉由流式細胞量測術偵測。第一患者(02)接受pembro/pom/dex且具有MR但在2個月時進展，不具有可偵測之CART-BCMA再擴增。第二患者(07)在CART-BCMA後2個月患有快速進行性κ輕鏈MM，且此前在pembro/pom/dex時進展。他開始elo/pembro/pom/dex且在第12天具有MR(自由κ 1446至937mg/L)，其與CART-BCMA細胞之穩健擴增(藉由qPCR量測，875.64至20505.07複本/µg DNA；藉由流式細胞量測術量測，0.7%至6.4%周邊CD3+細胞)相關聯。再擴增CART-BCMA細胞主要為CD8+且經高度活化(89% HLA-DR+，自療法前18%上升)。然而，此反應係短暫的，在1週後進展，且在第5週時CART-BCMA含量返回至基線。三名後續個體隨後接受伴有len或pom之elo/pembro/dex；其中2個MR及1個SD，及3至4個月之PFS。無CART-BCMA細胞之再擴增。觀測到非特異性免疫調節且其包括CD4:CD8 T細胞比率改變(n=5)、NK細胞頻率增加/T細胞頻率減少(n=4)及在CAR陰性T細胞上HLA-DR上調(n=2)。對CART及其他免疫細胞更詳細的表型分型，包括PD-1表現在進行中。就毒性而言，在pembro/pom/dex之後4週，患者02患有自我限制低度發熱及肌痛，其與鐵蛋白/CRP輕度升高相關聯，暗示輕度CRS。未標記其他CRS，包括患者07，儘管CART-BCMA再擴增。一名患者(17)罹患在elo/pembro/pom/dex之後2個月開始之復發性表達性失語症，而不具有CRS之徵象且未觀測到CART-BCMA細胞在血液或CSF中之擴增。此隨著停止療法及短時類固醇減少消退。
結論： 此研究展現在CART-BCMA療法之後進展的MM患者中，PD1抑制劑組合可誘導CART細胞再擴增及抗MM反應。由於此患者此前在pembro/pom/dex時進展，所觀測之臨床活性可能與CART細胞相關，埃羅妥珠單抗亦可能起作用。此原理證明觀測結果表明在BCMA CART細胞療法之後，一子集之患者可對檢查點阻斷或其他免疫調節方法起反應，值得進一步研究。


表 39 . 患者特徵
第1組=單獨的5×108 個CART-BCMA細胞；第2組=1.5 g/m2 Cy及5×107 個細胞；第3組=1.5 g/m2 Cy及5×108 個細胞
Pembro=派立珠單抗；Elo=埃羅妥珠單抗；Pom=泊利度胺；Len=來那度胺；Dex=地塞米松；Cy=環磷醯胺
SD=穩定疾病；MR=極小反應；PR=部分反應；PD=進行性疾病；PFS=無進展存活期；
^ 單位為複本/微克基因體DNA
實例 10 ： 在難治性多發性骨髓瘤中之 B 細胞成熟抗原特異性嵌合抗原受體 T 細胞 ( CART - BCMA ) 之臨床及生物活性 ： 單中心開放標記 1 期試驗
摘要
背景 ：嵌合抗原受體(CAR) T細胞為血液科惡性疾病之有前景的新穎療法。B細胞成熟抗原(BCMA)為表現主要限於漿細胞之細胞表面受體，使得其成為多發性骨髓瘤(MM)療法之合理目標。方法 ：在患有復發性/難治性MM之個體中進行經含有CD3ζ及4-1BB信號傳導域之新穎完全人類BCMA特異性CAR轉導之自體T細胞(CART-BCMA)的I期研究。在3個劑量組中治療二十五名個體：1) 單獨的1-5×108 CART-BCMA細胞；2)環磷醯胺(Cy) 1.5 g/m2 + 1-5×107 CART-BCMA細胞；將 3) Cy 1.5 g/m2 + 1-5×108 CART-BCMA細胞。預先指定之BCMA表現量不必需。研究結果 ：個體之先前療法線中值為7；96%為難以用蛋白酶體抑制劑及免疫調節藥物兩者治療；96%具有高風險細胞遺傳學。在所有情況下成功地製造CAR T細胞。毒性包括細胞介素釋放症候群及神經毒性，其分別為8名(32%)個體及3名(12%)個體中之3/4級，且可逆。在所有個體中CART-BCMA細胞擴增，在第3組中最持續。臨床反應見於第1組之4/9 (44%)中，第2組之1/5 (20%)中及第3組之7/11 (63%)中，包括5個部分反應、5個極佳部分反應及2完全反應。三名個體在11、14及32個月具有進行中的反應。在反應者中注意到殘餘MM細胞上BCMA表現減少；在大部分個體中在進展時表現增加。反應與CART-BCMA擴增相關聯，其與製造前白血球清除產物中CD4:CD8 T細胞比率及CD45RO-CD27+CD8+ T細胞之頻率相關聯。解釋 ：在存在或不存在淋巴球耗乏化學療法之情況下給與之CART-BCMA輸注在很大程度上經預治療之MM患者中具有臨床上活性，且表示MM療法之新穎方法。
此研究進一步提供BCMA作為骨髓瘤療法之合理目標的臨床驗證，且表徵含有4-1BB共刺激域之新穎完全人類BCMA特異性CAR構築體之安全性及功效。此研究進一步描述在存在或不存在淋巴球耗乏化學療法之情況下，BCMA特異性CAR T細胞之生物及臨床活性；展現輸注後，尤其在反應患者中在骨髓瘤細胞上之動態BCMA表現；且鑑別CAR T細胞擴增及臨床反應之潛在新穎生物標記。
方法
研究設計及參與者
符合條件的個體在至少3個先前方案之後，或若難以用蛋白酶體抑制劑(PI)及免疫調節藥物(IMiD)兩者治療，則2個先前方案之後，患有復發性及/或難治性MM。在篩選時其他關鍵合格標準包括ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group)機能狀態為0-2；血清肌酐≤2.5 mg/dL或估計肌酐清除≥30 ml/min；絕對嗜中性白血球計數≥1000/μl且血小板計數≥50,000/μl (若骨髓漿細胞≥50%細胞含量，則≥30,000/μl)；SGOT≤3倍正常值上限且總膽紅素≤2.0 mg/dl；左心室射血分數≥45%；未患有活性自體免疫疾病；及不具有骨髓瘤之情況下的中樞神經系統受累。MM細胞上預先指定之BCMA表現量不必需。
此臨床試驗(NCT02546167)為1期單中心開放標記研究。初始地使用標準3+3劑量遞增設計，探究3個依序組：1)單獨的1-5×108 CART-BCMA細胞；2)環磷醯胺(Cy) 1.5 g/m2 + 1-5×107 CART-BCMA細胞；及3) Cy 1.5 g/m2 + 1-5×108 CART-BCMA細胞。修正方案以將各組擴增至9名經治療個體，以便增加更多關於CART-BCMA細胞在存在及不存在淋巴球耗乏調節下及在較高(1-5×108 )及較低(1-5×107 )劑量下之安全性及功效的資訊。歸因於次佳功效，在5名個體之後，後續修正停止第2組中之參與，且第3組中允許至多13名個體；然而，融資限制最終在11名經治療之第3組個體之後結束參與(總計經治療個體n=25)。
程序
在療法之2週清除(對於單株抗體4週)之後，個體經受穩態白血球清除術以收集T細胞用於CART-BCMA製造。在製造期間抗骨髓瘤療法可恢復，直至在第一次CART-BCMA輸注之前2週。歷時3天靜脈內投與CART-BCMA細胞(在第0天投與10%之劑量；在第1天投與30%且在第2天投與60%)，如Porter DL等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139中所述。若個體出現CRS在徵象，則可保留30%或60%劑量。在第一次CART-BCMA輸注之前3天投與Cy。按照圖46進行臨床及實驗室評估。
CART-BCMA細胞在賓夕法尼亞大學之經FACT認可的Clinical Cell and Vaccine Production Facility製造，如Porter DL等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139；Kalos M等人, Sci Transl Med 2011；3(95): 95ra73中所述。在製造開始及結束時在種細胞培養物中藉由流式細胞量測術測定CD3細胞、CD4細胞及CD8細胞之頻率。藉由Coulter MultisizerTM 上之細胞計數量測種細胞之擴增倍數及群體倍增。在製造及品質控制測試之後，將CART-BCMA細胞低溫保藏直至輸注時。
自第一次CART-BCMA輸注(或對於第2組及第3組，Cy投與)時收集關於不良事件(AE)之資料。根據美國國立癌症研究所之不良事件的普通術語標準4.0版測定毒性級別，例外為細胞介素釋放症候群，其按照賓夕法尼亞大學CRS定級系統(表38) (Porter DL等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139)分級。藉由經更新的International Myeloma Working Group標準(Kumar等人, Lancet Oncol 2016；17(8): e328-46)評定骨髓瘤反應。
在賓夕法尼亞大學之Translational and Correlative Studies Laboratory進行研究樣品加工、冷凍及實驗室分析，如所述(Maude SL等人, N Engl J Med 2014；371(16): 1507-17；Porter DL 等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139；Kalos M等人., Sci Transl Med 2011；3(95): 95ra73)。藉由流式細胞量測術及定量PCR自末梢血液或骨髓樣品將CART-BCMA細胞定量。流式細胞量測術之反應劑及方案描述於補充方法中。自全血或骨髓抽出物直接分離基因體DNA，且使用ABI TaqMan技術及經驗證之檢定進行qPCR分析，以按照補充方法及如Kalos M等人, Sci Transl Med 2011；3(95): 95ra73中所述偵測之整合式CAR轉基因序列。
使用來自Life Technologies之人類細胞介素磁性30叢板(LHC6003M)在分批低溫保藏樣品上評定血清細胞介素水準，如Maude SL等人, N Engl J Med 2014；371(16): 1507-17中所述。使用來自R&D Systems之人類BCMA (DY193)、APRIL (DY884B)及BAFF (DT124-05)之抗體集在血清中藉由ELISA進行可溶BCMA、BAFF及APRIL濃度之量測。參見補充方法以獲得細節。
根據如Flores-Montero J等人, Leukemia 2017；31(10): 2094-103及補充方法中所述之EuroFlow方案調適在新鮮骨髓抽出物材料上之MM細胞的流式細胞量測評定，包括BCMA表現。如Fraietta JA等人, Nat Med 2018；24(5): 563-71中所述在低溫保藏白血球清除樣本中進行T細胞表型之流式細胞量測評定且對其進行分析。
結果
主要目標為評估CART-BCMA在患有復發性/難治性骨髓瘤之患者中之安全性。主要終點為發生研究相關3級或更高級AE，包括劑量限制性毒性(DLT)。DLT定義為與研究療法之關係無法排除之嚴重且未預期的AE，其在接受方案療法之4週內發生。血液毒性不視為DLT，此係由於潛在疾病之難治性及來自環磷醯胺之預期骨髓抑制。另外，與方案治療相關之任何死亡，以及儘管進行醫學處理，但在發病4週內不消散或改善至2級或更低級在任何預期4級器官毒性或4級神經毒性亦視為DLT。次要目標為評估製造CART-BCMA細胞之可行性及臨床活性。次要終點為成功製造之頻率及臨床結果，包括反應率、無進展存活期及總存活期。探索性終點包括CART-BCMA活體內擴增及存留；血清細胞介素及可溶BCMA之濃度變化，及MM細胞上之BCMA表現變化。
統計分析
研究之統計分析主要為描述性的，此係由於試驗之前導性質及各組之樣本大小較小。卡本-麥爾方法用於估計反應持續時間、無進展及總存活期及關聯中值存活時間。使用曼-惠特尼檢驗評估二進制端點(例如反應)與連續因數(例如CAR T細胞數目)之間的關聯。使用費雪精確檢定評估二進制端點與分類因數(例如存在或不存在缺失17p)之間的關聯。斯皮爾曼相關度用於量測兩個連續變數之間的相關度。針對無相關度之虛無假設之斯皮爾曼相關度的顯著性基於變換計算。因為此處進行之統計分析在本質上係探索性且產生假設的，所以未對多重比較進行p值之調節。適當時報導精確p值。使用Graphpad Prism 6.0版進行分析。
結果
2015年11月至2017年12月，34名個體同意且29名符合條件且開始製造，其中25名接受CART-BCMA輸注。歸因於在製造及橋接療法期間快速疾病進展/臨床退化，四名未經治療(圖52)。基線特徵及先前療法線概述於表40中，其中個別細節展示於表42中。個體之先前療法線中值為7，96%為難以用蛋白酶體抑制劑(PI)及免疫調節藥物(IMID)兩者治療，72%難以用達雷木單抗治療，且44%難以用2種PI、2種IMID及達雷木單抗五者治療。96%具有至少1種高風險細胞遺傳學異常；68%具有缺失17p或TP53 突變。基線腫瘤負荷高(在骨髓活體組織切片上中值65%骨髓瘤細胞)，且28%患有髓外疾病。
表 40 . 個體特徵
*包括複雜核型、增加1q、缺失17p、t(14;16)及/或t(4;14)。**包括1名接受奧普洛佐米之患者。***n=23 (個體01及個體02未完成白血球清除術前T細胞計數)。正常範圍=900-3245 細胞/微升
Bort=硼替佐米；Carf=卡非佐米；Dara=達雷木單抗；Del=缺失；雙重難治性=難以用蛋白酶體抑制劑(PI)及免疫調節劑(IMiD)兩者治療；LDH=乳酸脫氫酶；Len=來那度胺；五重難治性=難以用2種PI、2種IMiD及dara治療；Pom=泊利度胺；四重難治性=難以用2種PI及2種IMiD治療；SCT=幹細胞移植。
所有個體成功地製造最小靶目標之CART-BCMA細胞，不過1名個體需要2次白血球清除術及製造嘗試。最終產物由中值97% CD3+ T細胞構成，其中中值CD4/CD8比率為1.7。二十一名個體接受所有3次計劃CART-BCMA輸注，4名接受40%之計劃劑量(由於早期CRS保留第3次輸注)。每一個體之製造、產物特徵及給藥的其他細節展示於表43中。
無關於歸因，3級或更高級之不良事件見於24/25個體(96%)中且概述於表41中，其中每一個體之個別不良事件列於表44中。細胞介素釋放症候群(CRS)在22/25個體(88%)中觀測到，且在8名個體(32%)中在Penn定級量表(Porter DL等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139) (表38)上為3/4級，所有個體在1-5×108 劑量下治療。達至CRS發病之中值時間為4天(範圍1-11)，中值持續時間為6天(範圍1-18)，且住院之中值持續時間為7天(範圍0 - 40)。CRS與鐵蛋白及C反應蛋白升高相關聯，如先前所述(Maude SL等人, N Engl J Med 2014；371(16): 1507-17)。七名個體(28%)接受利用托西利單抗(n=6)或司妥昔單抗(n=1)之IL-6阻斷。
表 41 . 無關於歸因，3級或更高級不良事件
表中報導個體所經歷之最高級別毒性。n=發生事件之個體的數目；Alk phos=鹼性磷酸酶；AST=天冬胺酸轉胺酶。*神經毒性包括1名患有3級癲癇、4級譫妄及4級可逆後腦白質病症候群(RPLS) (亦稱為後可逆腦病症候群(PRES))之個體；1名患有3級譫妄及4級腦病之個體；及1名患有3級腦病之個體。**在患有念珠菌血症及快速進行性骨髓瘤之個體08中之死亡NOS (未另列出)；家人選擇僅採取舒適措施。
神經毒性見於7/25個體(28%)中，且在4名個體中為輕度(1/2級) (暫時意識模糊及/或失語)。三名(12%)患有3/4級腦病，包括第1組中之1名個體(03)，該個體具有PRES (後可逆腦病症候群)之DLT，伴隨嚴重遲鈍、復發性癲癇及MRI (磁共振成像)上之輕度腦水腫，其在利用高劑量甲基潑尼龍(1公克/天×3)及環磷醯胺1.5 g/m2 之治療後完全消退。其他人在MRI上無目標變化。具有嚴重神經毒性之所有3名個體具有高腫瘤負荷(2名患有髓外疾病)；接受5×108 CART-BCMA細胞之劑量；且具有3或4級CRS。唯一其他DLT為在CRS、凝血病、血小板減少症及廣泛骨髓瘤肋病變之情況下在個體27 (第3組)中之3級心肌病及4級胸膜出血/自發性血胸；所有此等毒性完全消退。患有4級腦病及CRS之一名個體(08)在最初托西利單抗及類固醇之情況下改善，隨後罹患念珠菌血症及進行性骨髓瘤/進化的漿細胞白血病。家人選擇舒適護理且他在第24天死亡。在研究時未出現其他死亡。未觀測到未預期脫靶毒性。
關於臨床結果，在第1組中之4/9個體(44%)、第2組中之1/5個體(20%)及第3組之7/11個體(63%)中證實目標反應(部分反應(PR)或更佳) (圖47A至圖47C)，包括5個PR、5個極佳部分反應(VGPR)、1個完全反應(CR)及1個嚴格的完全反應(sCR)。因此整體反應率為12/25 (48%)，且在1-5×108 CART-BCMA細胞之更有效劑量下為11/20 (55%)。另外五名個體具有極小反應(MR)。患有髓外疾病之7名個體中的四名反應(圖32B)。自輸注後1個月及/或3個月時之骨髓抽出物藉由流式細胞量測術(估計靈敏度10- 5 )量測，四名個體(01、03、15、19)不具有可偵測骨髓瘤(亦即MRD陰性)。達至第一反應之中值時間為14天。基於卡本-麥爾估計值，反應(對於PR或更佳)之中值持續時間為124.5天(範圍29 - 939+) (圖53A)。在資料截止時，3名個體(01、19、33)分別在953、427及322天(大致32、14及11個月)時保持無進展。所有其他個體進展，且對於第1組、第2組及第3組，中值無進展存活期(PFS)分別為65、57及125天(圖53C)。在資料截止時，13名個體死亡，對於所有個體中值總存活期為502天(圖53B)，且對於第1組、第2組及第3組，分別為359天、502天及未到達(圖47D)。
所有經輸注個體在末梢血液中具有可藉由qPCR偵測之CART-BCMA細胞(圖48A至圖48C)，且24/25具有可藉由流式細胞量測術偵測之CAR+ T細胞(圖54A至圖54C；圖38用於代表性染色)。擴增大體上在第10天至第14天時達至峰值，且在具有Cy調節及較高劑量之CART-BCMA細胞的第3組中呈現最均勻，而其在第1組及第2組中較不均勻，不過此差異並不滿足統計顯著性(圖48D)。儘管在輸注產物中CD4+ T細胞占主導地位，但在血液中循環之CART-BCMA細胞主要為CD8+，且高度活化，在峰值擴增期間表現HLA-DR之CAR+CD3+細胞之中值為94% (範圍21-94%) (表45)。骨髓抽出物中之CART-BCMA含量與末梢血液中之彼等大體上成鏡像，且個體03之胸膜液及腦脊髓液及來自個體27之胸膜液中之CART-BCMA含量亦升高，表明廣泛遷移(表46)。在峰值擴增之後，在大部分患者中藉由qPCR量測之CART-BCMA細胞含量以對數-線性方式下降(圖48A至圖48C)，且在輸注後3個月時在20/20 (100%)測試個體中，及輸注後6個月時在14/17 (82%)測試個體中仍可偵測。在輸注後2.5年最後一次測試時，在個體01 (以嚴格的CR)繼續具有可藉由qPCR偵測之細胞。
在CART-BCMA輸注之前及之後，在末梢血液血清中對三十種細胞介素定量。在超過1名個體中，此等細胞介素中之十九種相比於基線增加＞5倍，其中對於IL-6、IL-10、由干擾素γ誘導之單核球激素(MIG、CXCL9)、IP10、IL-8、GM-CSF及IL-1受體拮抗劑(IL-1RA)，觀測到最頻繁增加(圖55)。較嚴重CRS (3/4級，或接受託西利單抗之2級)與多種細胞介素增加相關聯(表47)，與IL-6、IFN-γ、IL-2受體α (IL2-Rα)、巨噬細胞炎性蛋白1α (MIP-1α)及IL-15最顯著關聯(圖49A至圖49E)。神經毒性與IL-6、IFN-γ、IL-1RA及MIP-1α增加最強烈關聯(圖49F至圖49I，參見表48以獲得全分析)。在第1組與第3組之間未觀測到峰值細胞介素增加倍數之顯著差異，該等組在存在或不存在Cy調節之情況下分別接受相同劑量在CART-BCMA細胞(圖55)。
亦評定sBCMA以及其配位體BAFF及APRIL之血清濃度。與一組健康供體(HD)相比，在基線時參與個體具有顯著較高sBCMA及較低APRIL含量，其中在個體中具有高可變性(圖50A)。個體中之BAFF濃度顯著不同於HD。對血清sBCMA之連續評定展示在CART-BCMA輸注之後的降低，相比於無反應個體，其在反應個體中較明顯(圖50B)，且其隨著個體罹患進行性疾病而增加，表明血清sBCMA濃度可能為適用於評估骨髓瘤疾病負荷的輔助生物標記。
在治療之前，二十名個體可藉由對新鮮骨髓抽出物進行之流式細胞量測術評估MM細胞上之BCMA表面表現，且所有個體具有可偵測BCMA表現，不過強度不同(中值平均螢光強度(MFI)=3741，範圍206 - 24842；參見圖42以獲得代表性閘控)。在1個月(n=16)、3個月(n=8)及/或5.5個月(n=1)時具有可評估連續BCMA表現之18名個體中(圖50C)，12名(67%)在至少1個輸注後時間點時BCMA強度衰退，包括8/9反應者及4/9無反應者(圖50D)。在CART-BCMA後1個月，在殘餘MM細胞上BCMA強度最低，且在大部分，但並非全部進行後續測試之個體中朝向基線回升。個別個體細節提供於表49中。
反應與藉由qPCR量測之峰值擴增顯著關聯(對於≥PR，中值75339複本/微克DNA與對於＜PR，6368複本/微克，p=0.0002)，且與如藉由曲線下面積(AUC0 - 28d )所量測之最初28天內之存留顯著關聯(對於≥PR，中值561796複本×天/微克DNA與對於＜PR，52391複本×天/微克DNA，p=0.0002) (圖51A至圖51B)。在更嚴重CRS (3/4級或需要托西利單抗之2級)之情況下，更可能具有擴增及反應兩者(圖51C至圖51D)。擴增及反應均不與以下顯著關聯：年齡、診斷後之年數、先前療法線、存在del17p或TP53 突變、五重難治性、血球分離術前最近療法、骨髓MM細胞百分比、基線血清sBCMA濃度或MM細胞BCMA強度(圖56A至圖56L及圖57A至圖57L)。
為了探究與擴增及/或反應潛在關聯之其他治療前特徵，在製造之前、期間及結束時分析CART-BCMA產物之特徵。發現製造前白血球清除產物中較高CD4/CD8 T細胞比率與較大活體內CART-BCMA擴增相關聯(圖51E)，且在更小程度上與反應相關聯(圖51F)，而白血球清除產物中絕對CD3+、CD4+或CD8+ T細胞數目，或在製造結束時之最終CART-BCMA產物中之CD4/CD8 T細胞比率不關聯(資料未示出)。在製造期間之種細胞的擴增倍數亦與活體內CART-BCMA擴增相關(圖51G)，表明活體外增生能力可預測活體內活性。最後，檢測經CART-BCMA細胞治療之個體中之白血球清除產物內的CD8+ T細胞，且發現具有較高頻率CD27+CD45RO-CD8+ T細胞之個體更可能具有穩健活體內擴增及臨床反應(圖51H至圖51I)。
論述
CAR T細胞療法作為B細胞惡性疾病之有前景的治療選項出現，其具有在單次治療之後持久控制疾病之潛能，使其與需要重複及/或連續投與之其他療法區分開。在此報導中，展現CAR T細胞療法在晚期及難治性骨髓瘤中之潛能，其中12/25個體(48%)實現部分反應或更佳，包括在淋巴球耗乏化學療法之後以最佳劑量(＞108 CART-BCMA細胞)治療之7/11個體(63%)。在CART-BCMA療法之後＞11個月，三名個體具有進行中的緩解，包括一個在2.5年時進行中的sCR。考慮到參與個體之骨髓瘤的高度不良生物特徵，包括高腫瘤負荷、快速進行性疾病及高風險遺傳，此值得注意。此臨床活性進一步驗證BCMA為骨髓瘤中具有高度吸引力的靶。重要地，儘管此研究不同於先前研究，並不排除具有低BCMA表現或高腫瘤負荷之患者，且與先前研究(Ali SA等人, Blood 2016；128(13): 1688-700；Brudno JN等人, J Clin Oncol 2018；36(22): 2267-80)中之Cy+氟達拉賓相比，不使用淋巴細胞耗盡或使用單獨的Cy，但發現此活性。儘管具有基線T細胞淋巴細胞減少症，但自所有個體成功地製造CAR T細胞產物，且移植同樣見於所有個體中，不過在個體中CAR T細胞之峰值含量及存留顯著不同。
在此研究中，反應與活體內擴增之程度相關，其繼而與較高製造前CD4/CD8 T細胞比率、製造前CD45RO-CD27+CD8+ T細胞頻率及在製造期間活體外增生之量值相關聯。此表明更有效之CART-BCMA產物可衍生自具有較少分化、較多原始及/或幹細胞記憶體狀T細胞隔室的個體。此等資料表明治療前表型及/或功能性T細胞特徵可輔助預測對CART-BCMA療法之反應。其亦表明在T細胞可能本質上「更適合」之患者疾病過程的早期治療患者，或修改製造技術以產生較多在表現型上有利的CAR+ T細胞可能更有效。
包括CAR T細胞之腫瘤特異性T細胞的成功授受性轉移在人體內最常在某種形式之淋巴球耗乏調節之後出現(Turtle CJ等人, Sci Transl Med 2016；8(355): 355ra116；Maude SL等人, N Engl J Med 2014；371(16): 1507-17；Porter DL等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139；Dudley ME等人, J Clin Oncol 2008; 26(32): 5233-9)，已證明其經由多種潛在機制增強T細胞介導之抗腫瘤免疫，該等機制包括減少導致恆穩細胞介素之可用性增加的細胞「槽」及耗乏諸如調節T細胞之抑制因子細胞群以及其他(Gattinoni L等人, Nat Rev Immunol 2006；6(5): 383-93)。此研究表明淋巴細胞耗盡對於穩健及持續CAR T細胞擴增及臨床活性而言並不絕對必需，如在第1組之個體01及個體03之情況下所見。然而，在第3組中較持續地觀測到短期擴增，其中與第1組相比，個體接受Cy調節(圖48A及圖48C)，表明在授受性轉移之後淋巴細胞耗盡對CAR-T細胞動力學之效果。修改淋巴細胞耗盡(例如將氟達拉賓添加至Cy)有可能可進一步增強CART-BCMA細胞之活性。
對於靶向BCMA之CAR T細胞，一個重要的未回答的問題係是否存在最佳識別及殺滅所必需的MM細胞上BCMA表現之閾值。在此前所報導之NCI試驗中，52/85 (62%)之藉由IHC針對BCMA染色之預篩選骨髓活體組織切片符合其預先指定之合格閾值，意謂將排除大於三分之一的潛在合格MM患者(Ali SA等人, Blood 2016；128(13): 1688-700)。此研究並不需要BCMA之任何特定含量作為合格要求，且在所有個體中藉由流式細胞量測術鑑別MM細胞BCMA表現，與為此目的流式細胞量測術比IHC靈敏之最近資料(Salem DA等人, Leuk Res 2018；71: 106-11)一致。在此研究中，藉由流式細胞量測術量測之基線BCMA強度與擴增或反應不相關(圖56A至圖56L及圖57A至圖57L)，表明基於基線BCMA表現排除患者可能並不必需。
所觀測到之MM細胞上BCMA表面表現之動力學，其中在CAR T細胞療法之後來自此研究之數個個體之殘餘MM細胞具有顯著減弱之BCMA強度(圖50A至圖50D)，突顯未來研究對CART-BCMA療法之抗性的重要區域。亦在NCI研究(Brudno JN等人, J Clin Oncol 2018；36(22): 2267-80)之至少1名個體中觀測到BCMA表現下調，表明其可能為MM細胞逃避導向BCMA之CAR-T細胞療法之常用手段。在進展後大部分個體中之表面BCMA表現隨後增加，表明轉錄或轉錄後機制，諸如自細胞表面脫落增加。替代性地，可存在針對BCMA-暗/陰性純系變異體之免疫選擇，其隨後在與損失CART-BCMA細胞後之殘餘BCMA+純系的競爭中失敗。此表明大部分在CART-BCMA之後進展之患者將仍為其他BCMA靶向療法的候選物。
CAR T細胞之主要毒性仍為細胞介素釋放症候群(CRS)及神經毒性。在此研究中CRS之頻率及嚴重程度類似於靶向CD19之CAR T細胞試驗(Maude SL等人, N Engl J Med 2014；371(16): 1507-17；Porter DL等人, Sci Transl Med 2015；7(303): 303ra139)中所報導之頻率及嚴重程度，且利用IL-6受體阻斷療法消除。儘管患者數目較小，但在CAR T細胞劑量保持相同時，在存在或不存在Cy淋巴細胞耗盡之情況下峰值血清細胞介素增加似乎並不顯著不同(第1組與第3組，圖55)。然而，引起關注地，儘管此研究中之腫瘤負荷較高，但此研究中IL-6及數種其他細胞介素(例如IFN-γ、IL-10、GMCSF、IL-17)之中值峰值增加倍數比NCI BCMA CAR T細胞研究(Brudno JN等人, J Clin Oncol 2018；36(22): 2267-80)中所報導的小1至2個數量級。對此差異之一個解釋可以係2種CAR構築體內所使用之共刺激域，因為與此CAR構築體中所使用之4-1BB域相比，諸如NCI CAR構築體中所使用之CD28域與更快速的CART細胞增殖相關聯(Milone MC等人, Mol Ther 2009；17(8): 1453-64)。然而，患者之較小數目及在關於納入標準、劑量、時間表及淋巴細胞耗盡方案之間的多種差異排除決定性結論。
神經毒性已在一些CAR T細胞試驗中之至多50%個體中報導(Turtle CJ等人, Sci Transl Med 2016；8(355): 355ra116；Turtle CJ等人, J Clin Invest 2016；126(6): 2123-38；Kochenderfer JN等人, J Clin Oncol 2015；33(6): 540-9)；可與CRS並行出現或在CRS之後出現；在托西利單抗之情況下通常不改善；且在大部分，但並非全部病例中可逆。神經毒性與CRS之早期發病及血清及CNS兩者內之炎性細胞介素的快速升高相關聯，可能導致CNS血管滲透性增加(Gust J等人, Cancer Discov 2017)。與此一致，此研究將IL-6、IFN-γ及MIP-1α之峰值血清增加鑑別為與此研究中之神經毒性關聯度最高(圖49A至圖49I)。引起關注地，神經毒性亦與涉及CAR T細胞相關神經毒性之IL-1α及IL-1β之促發炎效果的內源性抑制劑IL-1RA的峰值增加倍數相關聯(Giavridis T等人, Nat Med 2018；24(6): 731-8; Norelli M等人, Nat Med 2018；24(6): 739-48)。此可能反映在具有神經毒性之患者中(最終低效的)回饋機制之誘導，且表明在此配置中經由重組型IL-1RA阿那白滯素加強IL-1阻斷可具有治療效益，如臨床前模型中所顯示(Giavridis T等人, Nat Med 2018；24(6): 731-8；Norelli M等人, Nat Med 2018；24(6): 739-48)。顯示個體03之類PRES症候群快速恢復之此研究表明，環磷醯胺亦可為難以用類固醇治療之病例中的選項。
總體而言，在患有晚期難治性MM之患者中，表現完全人類BCMA特異性CAR之自體T細胞可在存在及不存在淋巴球耗乏化學療法之情況下擴增且誘導目標反應，且代表有前景的新穎治療方法。毒性概況似乎類似於在B細胞惡性疾病中之導向CD19之CAR T細胞之情況下所見的毒性概況。挑戰包括在製造期間疾病進展、歸因於BCMA表現變化之抗原逃避的可能及反應持久性。探究不在很大程度上經預治療/難治性患者群體、靶向雙抗原之CAR構築體、新穎淋巴細胞耗盡方案或製造方案及現成的CART產物之後續研究可使此方法之安全性及長期功效達最佳。
補充方法
用於流式細胞量測術之反應劑及方案 ： 用於CAR T細胞偵測板之抗體為抗CD45 V450 (純系HI30)、抗CD14 V500 (純系M5E2)、抗CD56 Ax488 (純系B159)、抗CD4 PerCP-Cy5.5 (純系RPA-T4), 抗CD8 APC-H7 (純系SK1) (均來自BD Bioscience)。此外，使用來自Biolegend之抗CD3 BV605 (純系OKT3)、抗HLA-DR BV711 (純系L243)、抗CD19 PE-Cy7 (純系H1B19)。藉由使用雙生物素BCMA-Fc重組蛋白及來自BD Bioscience之第二染色反應劑抗生蛋白鏈菌素PE (目錄號554061)評定CART-BCMA表現。將細胞再懸浮於含有1%胎牛血清、0.02%疊氮化鈉及雙生物素標記BCMA-Fc之100 μL PBS中且在冰上培育30分鐘，洗滌，再懸浮於含有1%胎牛血清、0.02%疊氮化鈉、表面抗體及SA-PE之100 μL PBS中，且在冰上培育30分鐘，洗滌，再懸浮於含有1%胎牛血清及0.02%疊氮化鈉之250ul PBS中，且使用配備有紫色(405 nm)、藍色(488 nm)、綠色(532 nm)及紅色(628 nm)雷射之Fortessa流式細胞儀獲得。使用FlowJo軟體(10版，Treestar)分析資料。使用eBioscience UltraComp eBeads (eBioscience目錄號01-222-42)及DIVA軟體建立補償值。
定量 PCR ： 自全血或骨髓抽出物直接分離基因體DNA，且對於末梢血液及骨髓樣品使用ABI TaqMan技術及經驗證之檢定進行qPCR分析，以使用每時間點一式三份之200 ng基因體DNA偵測如Kalos M等人, Sci Transl Med 2011；3(95): 95ra73中所述之整合式CAR轉基因序列。為測定每單元DNA之複本數，產生由摻加至100 ng未經轉導的對照基因體DNA之5至106 複本之慢病毒質體組成的八點標準曲線。存在於標準曲線中之質體的複本數使用具有相同引子/探針設定之數位qPCR檢驗且在QuantStudio 3D數位PCR儀器(Life Technologies)上進行。重複三次評估每一資料點(樣品及標準曲線)，其中對於所有可定量值，在三次重複實驗中之三次中的陽性Ct值具有小於0.95%之變化係數百分比。為控制詢問DNA之品質，使用20 ng基因體DNA及如Kalos M等人, Sci Transl Med 2011；3(95): 95ra73中所述之對CDKN1A (p21)基因上游之非轉錄基因組序列具有特異性之引子/探針組合進行平行擴增反應。。此等擴增反應產生調節計算與實際DNA輸入之修正係數。每微克DNA轉殖基因複本根據以下式計算：每微克基因體DNA複本=(由CART-BCMA標準曲線計算之複本)×修正係數/(以奈克為單位之經評估DNA量)×1000 ng。
血清細胞介素之量測： 人類細胞介素磁性30叢板(LHC6003M)來自Life Technologies。在基線時且在安排時間點直至輸注後28天收集之血清樣品在-80℃下低溫保藏。根據製造商方案解凍且分析分批樣品。使用FlexMAP 3D儀器來量測檢定板，且使用xPONENT軟體進行資料獲取及分析。基於以下標準檢測資料品質。使用xPONENT軟體，在具有或不具有輕微擬合之情況下各分析物之標準曲線之5P R2 值＞ 0.95。為通過品質控制，自產對照血清之結果需要在衍生自＞25種經測試分析物之歷史自產控制資料之CI (信賴區間)的95%內。對具有出自低範圍(＜OOR)之結果的樣品不進行另外測試。在較高稀釋下對具有出自高範圍(＞OOR)或大於標準曲線最大值(SC max)兩倍之結果的樣品再測試。報導通過以上品質控制或再測試之結果。
可溶 BCMA 、 BAFF 及 APRIL 之量測 ： 人類BCMA (DY193)、APRIL (DY884B)及BAFF (DT124-05)之抗體集來自R&D Systems。ELISA珠粒條及4柱儲集器(SOW-A16735)來自Assay Depot。ELISA受質ADHP(10010469)來自Cayman Chemical。檢定板(OX1263)來自E&K Scientific。所有ELISA反應劑根據DuoSet ELISA之方案製備，除補充有100 uM之ADHP的色彩反應劑B以外。歸因於血清之有限體積及流式螢光檢測術檢定缺少對BCMA、APRIL及BAFF之可用性，使用ELISA珠粒條來量測三種分析物。將捕捉抗體(cAB)塗佈於大球表面上而非ELISA板之孔，使得能夠使用100ul血清量測所有三種分析物。遵循抗體集之方案，基於檢定映圖使用檢定板中之珠粒條設置檢定。在檢定結束時，藉由添加100微升/孔之受質溶液(1:1之色彩反應劑A及ADHP)來製備每12個珠粒條一個的受質板。根據檢定映圖將每一珠粒條置於受質板之一個柱中。顯色10至30分鐘。在FLUO STAR OMEGA儀器上讀取板。進行如針對流式螢光檢測術資料描述之資料品質控制。
骨髓之骨髓瘤細胞的評定 ， 包括 BCMA 表現： 在短時氯化銨紅血球裂解步驟之後，在抽出物上直接進行骨髓抽出物材料之流式細胞量測術評定。根據如Flores-Montero J等人, Leukemia 2017；31(10): 2094-103中所述之EuroFlow方案調適程序。簡言之，將至多2ml骨髓抽出物用48ml Pharm Lyse溶液(BD Biosciences目錄號555899)稀釋，且在室溫下在振盪裝置上培育15分鐘。隨後藉由在800g下離心10分鐘收集細胞，將其用流式細胞量測術緩衝劑(具有1%胎牛血清之PBS)洗滌兩次，用L/D Aqua存活染料(Thermo Fisher目錄號L34957)染色。用CD45、CD19、CD138、CD38、CD14、CD56、CD20、CD3、CD269 (BCMA)、CD274 (PD-L1)之抗體的混合物進行表面染色。FMO (螢光扣除對照)單二級對照物用於BCMA評估。同時將正常供體PBMC細胞之等分試樣染色作為對照物。隨後洗滌細胞，隨後在室溫下使用Cytofix/Cytoperm反應劑(BD Biosciences)滲透/固定20分鐘、洗滌且用κ及λ免疫球蛋白輕鏈之抗體的混合物染色。隨後洗滌樣品，隨後將其在PBS中再懸浮且在配備有紫色、藍色、綠色及紅色雷射之17色LSR Fortessa Special Order Research Product流式細胞儀(BD)上採集。使用FlowJo (Treestar)或FCS Express分析清單模式檔案。
表 42 . 個別個體特徵
* 療法線根據IMWG標準定義。放射不視為線。**在T細胞收集(「血球分離術」-頂線)及CART-BCMA輸注(「輸注」-底線)之前接受的最近療法。所有療法在血球分離術之前保留至少2週且在輸注之前同樣保留至少2週(對於單株抗體而言，4週)。
AA=非裔美國人；ASCT=自體幹細胞移植；Bort=硼替佐米；Carfilz=卡非佐米；cyclo=環磷醯胺；CPI-610=研究性BET抑制劑；CyBorD=環磷醯胺、硼替佐米、地塞米松；D-AC=地塞米松+輸注小紅莓及環磷醯胺；D-ACE=地塞米松+輸注小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；D-CE：地塞米松+輸注環磷醯胺及依託泊苷；D-PACE=地塞米松+輸注順鉑、小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；Dara=達雷木單抗；Dex=地塞米松；Dx=診斷；hyperdip=超二倍體；ixa=依薩佐米；K=κ輕鏈；L=λ輕鏈；Len=來那度胺；Nelfin=奈非那韋；Pano=帕比諾他；Pembro=派立珠單抗；Pom=泊利度胺；Pom/Dex-ACE=泊利度胺、地塞米松+輸注小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；Tx=治療；VD-AC=硼替佐米、地塞米松+輸注小紅莓及環磷醯胺；VD-CE=硼替佐米、地塞米松+輸注環磷醯胺及依託泊苷；VD-PCE=硼替佐米、地塞米松+輸注順鉑、環磷醯胺、依託泊苷；VDT-PACE=硼替佐米、地塞米松、沙立度胺+輸注順鉑、小紅莓、環磷醯胺及依託泊苷；Yr=年。
表 43 . CART-BCMA製造及產物細節
在製造開始時(在淘析之後的「種細胞培養物」)及在製造結束時(「在採集時」)藉由流式細胞量測術評定總CD3+細胞、CD3+CD4+細胞及CD3+CD8+細胞之頻率。Aph=血球分離產物；exp倍數=擴增倍數；pop dblgs=群體倍增數；trans eff=轉導效率。MR=極小反應；PD=進行性疾病；PR=部分反應；sCR=嚴格的完全反應；SD=穩定疾病；VGPR=極佳部分反應
*歸因於發熱/早期CRS，個體01、03、15及25僅接受40%之計劃劑量。
表 44 . 個別個體不良事件
無關於歸因，列出所有事件。若在相同患者中事件出現多於一次，則報導最高級別。Alk phos=鹼性磷酸酶；ALT=丙胺酸轉胺酶；AST=天冬胺酸轉胺酶；CPK=肌酸磷酸激酶；CRS=細胞介素釋放症候群；DIC=瀰漫性血管內凝血；NOS=未另列出；RPLS=可逆後腦白質病症候群(亦稱為後可逆腦病症候群(PRES))；SQ=皮下；SVT=室上性心動過速；UTI=泌尿道感染
表 45 . 在峰值擴增時末梢血液CART-BCMA+細胞之特徵
CART-BCMA細胞藉由如圖38中之流式細胞量測術評定。列出在峰值擴增之日，在CD3+群體、CD4+群體及CD8+群體內之CAR+細胞的頻率。亦展示在峰值擴增(如藉由表現HLA-DR之CAR+細胞%所量測)時之活化狀態。MR=極小反應；PD=進行性疾病；PR=部分反應；sCR=嚴格的完全反應；SD=穩定疾病；VGPR=極佳部分反應
*藉由qPCR測定峰值；CAR+細胞不可藉由流式細胞量測術偵測。**在第10天至第21天之間無可獲得的樣品，因此無法測定峰值。
表 46 . 藉由qPCR量測之血液、骨髓及其他位點中之CART-BCMA移植
在測試時間點，CART-BCMA含量(複本/微克基因體DNA)在血液及骨髓中大體相當。在個體03之CSF及胸膜液及個體27之胸膜液中發現高含量之CART-BCMA。BM=骨髓；CSF=腦脊髓液。n/a=不可獲得。*在第45天進行檢定。
表 47 . 血清細胞介素及細胞介素釋放症候群(CRS)之嚴重程度的峰值增加倍數
藉由Luminex分析來量測直至第28天的血清細胞介素濃度(pg/ml)。將未患CRS、患有1級CRS或未接受託西利單抗之2級CRS個體(0-2級CRS)之各所列細胞介素相對於基線之中值峰值增加倍數與患有3-4級CRS或接受託西利單抗之2級CRS個體(3-4級CRS或2級CRS+toci)之中值峰值增加倍數進行比較。適當時列出根據曼-惠特尼檢驗之精確p值。
表 48 . 血清細胞介素及神經毒性之峰值增加倍數
藉由Luminex分析來量測直至第28天的血清細胞介素濃度(pg/ml)。將不具有神經毒性(neurotox)之個體之各所列細胞介素相對於基線之中值峰值增加倍數與具有任何級別神經毒性之個體之中值峰值增加倍數進行比較。列出根據曼-惠特尼檢驗之精確p值。
表 49 . 骨髓瘤細胞上BCMA表現之細節
按照圖55對骨髓之骨髓瘤細胞進行閘控且分析BCMA表現。描繪表現BCMA之骨髓瘤細胞之百分比(+%)，以及BCMA及FMO (螢光扣除對照)陰性對照之平均螢光強度(MFI)。n/a=不可獲得。前=治療前。D28=治療後第28天。D90=治療後第90天。Sub=個體。*實際上D164。
等效物
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圖1A及1B為顯示血球分離樣品中之CD4+或CD8+ T細胞佔CD3+ T細胞中之百分比(圖1A)及CD4:CD8 T細胞比率(圖1B)的一對圖，該等血球分離樣品獲自多發性骨髓瘤患者，該等患者後來確定為CART-BCMA輸注療法的有反應者(R，NR =3)或無反應者(NR，NNR =5)。此等資料證明有反應者之血球分離樣品中的CD4+ T細胞百分比高於無反應者且CD8+ T細胞百分比低於無反應者(且因此CD4:CD8比率較高)。發現CD4:CD8比率大於約1.6可預測對CART-BCMA有反應。
圖2A、2B及2C以圖表明，獲自後來確定為對CART-BCMA有反應者(R，NR =3)之多發性骨髓瘤患者之血球分離樣品中的HLADR-CD95+CD27+CD8+ T細胞(圖2A)、CD45RO-CD27+CD8+ T細胞(圖2B)或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ T細胞(圖2C)佔CD8+ T細胞中的百分比高於無反應者(NR，NNR =5)。各圖顯示P值。
圖3為顯示CD138+細胞局域化的一系列影像，如藉由免疫組織化學(IHC)在骨髓核心活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲得。患者用CART-BCMA治療的結果提供於實例中且在本文中如下提及：漸進性疾病(PD)；穩定疾病(SD)；輕微反應(MR)；部分消退(PR)；及極佳的部分消退(VGPR)。獲自患者13的預治療、第28天及第90天樣品分別具有1%、0%及0%的CD138+ MM細胞浸潤。獲自患者14的預治療及第28天樣品分別具有80%及90% CD138+ MM細胞浸潤。獲自患者15的預治療、第28天及第90天樣品分別具有95%、5%及10% CD138+ MM細胞浸潤。獲自患者16的預治療、第28天及第90天樣品分別具有50%、5%及75% CD138+ MM細胞浸潤。獲自患者17的預治療、第28天及第90天樣品分別具有50%、5%及75% CD138+ MM細胞浸潤。
圖4為顯示BCMA蛋白質表現的一系列影像，如藉由IHC在骨髓核心活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲得。
圖5為一系列影像，其顯示在骨髓核心活體組織切片中如藉由IHC所測定之BCMA蛋白質表現與如藉由原位雜交(ISH)所測定之BCMA mRNA含量之間的比較情況，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲得。
圖6A、6B及6C為一系列影像，其顯示在骨髓核心活體組織切片中如藉由IHC所測定的BCMA蛋白質表現、如藉由ISH所測定的BCMA mRNA含量，及如藉由ISH所測定的CART-BCMA mRNA含量，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者15 (圖6A)、患者16 (圖6B)及患者17 (圖6C)獲得。
圖7A、7B及7C為顯示IDO1、IFN-γ及TGFβ mRNA含量的一系列影像，如藉由ISH在骨髓核心活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者15 (圖7A)、患者16 (圖7B)及患者17 (圖7C)獲得。圖7D及7E為顯示CAR、IFN-γ及IDO1 mRNA含量的一系列影像，如藉由ISH在活體組織切片所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及第10天及第28天輸注後自患者19 (圖7D)及患者20 (圖7E)獲得。
圖8A、8B及8C為顯示PD-L1、PD1、CD3及FoxP3蛋白質表現的一系列影像，如藉由IHC在骨髓核心活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者15 (圖8A)、患者16 (圖8B)及患者17 (圖8C)獲得。圖8D及8E為顯示PD1、PD-L1及FoxP3蛋白質表現的一系列影像，如藉由IHC在活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第10天及第28天自患者19 (圖8D)及患者20 (圖8E)獲得。
圖9為顯示CD19蛋白質表現的一系列影像，如藉由IHC在骨髓核心活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲得。
圖10為顯示CD20蛋白質表現的一系列影像，如藉由IHC在骨髓核心活體組織切片中所測定，該等活體組織切片係在CART-BCMA投與之前(「Pre」)及輸注後第28天及第90天(「3個月」)自患者13、患者14、患者15、患者16及患者17獲得。
圖11A及11B為一系列光譜非混合準螢光顯微影像，其表明BCMA陽性細胞及CD19陽性細胞在骨髓核心活體組織切片中為單獨群體，該等活體組織切片係在CAR-BCMA投與之前(「pre」)及輸注後第90天(「3M」)自患者15獲得。
圖12A及12B為一系列光譜非混合準螢光顯微影像，其表明自患者15及患者17獲得的治療前骨髓核心活體組織切片中分別存在CD19+ CD34dim 細胞群。
圖13為一系列光譜非混合準螢光顯微影像，其表明在獲自患者15的治療前骨髓核心活體組織切片中，CD19群體可變地呈CD138+及CD138-。
圖14以圖比較KMS11腫瘤模型在PBS、未轉導之T細胞(「UTD」)或經工具CAR (「J6MO」)、BCMA-4、BCMA-9、BCMA-10 (「MCM998」)、BCMA-13或BCMA-15轉導之T細胞植入及投與之後的腫瘤負荷水準。BCMA-10證明最強的抗腫瘤活性。
圖15為顯示臨床試驗設計(NCT編號：NCT02546167；UPCC 14415)的圖，以評估表現CART-BCMA之自體T細胞在多發性骨髓瘤成人患者中輸注的安全及可行性。
圖16A為顯示MM患者疾病特徵的表。圖16B為顯示MM患者由於疾病而存在基線淋巴球減少症及預先療法的表。
圖17A、17B及17C為分別顯示第1組、第2組及第3組之患者反應的圖。
圖18A及18B為一系列圖，其分別顯示藉由流式細胞術評估CART-BCMA在第1組患者及第2/3組患者中的擴增。
圖19A及19B為一系列圖，其分別顯示藉由PCR評估CART-BCMA在第1組患者及第2/3組患者中的擴增。該等圖在CART輸注後之各別日(x軸)顯示自患者血液分離出之每µg DNA的CART基因偵測數目(y軸)。
圖20A及20B以圖表明BCMA擴增可能與臨床結果相關。
圖21A、21B、21C及21D以圖顯示相較於無反應者，有反應者中之CAR陽性(CAR+) CD4/CD8細胞在輸注後之各時間點的分率。
圖22為一系列圖，其顯示細胞介素表現量在CART-BCMA輸注後之各時間點的變化。各圖中的y軸顯示相對於第0天的變化倍數。各圖中的x軸顯示CART-BCMA輸注後的天數。
圖23A及23B以圖顯示IL-6表現在CART-BCMA輸注後之各時間點的變化。各圖中的y軸顯示相對於第0天的變化倍數。各圖中的x軸顯示CART-BCMA輸注後的天數。
圖24A及24B以圖顯示IFN-γ表現在CART-BCMA輸注後之各時間點的變化。各圖中的y軸顯示相對於第0天的變化倍數。各圖中的x軸顯示CART-BCMA輸注後的天數。
圖25A及25B以圖顯示14位正常供者(圖25A)及12位骨髓瘤患者(圖25B)的血清BCMA含量。
圖26A、26B、26C及26D以圖顯示CART-BCMA輸注後之各時間點的血清BCMA含量。圖26A及26B中的y軸顯示周邊血液(PB)血清BCMA含量。圖26C及26D中的y軸顯示PB血清BCMA含量相對於基線的變化倍數。各圖中的x軸顯示CART-BCMA輸注後的天數。
圖27A、27B及27C以圖顯示自接受CART-BCMA療法之三位多發性骨髓瘤患者所收集的資料。左圖上的y軸顯示CD4+或CD8+ CART細胞百分比。右圖上的y軸顯示血清BCMA含量(ng/mL)或每µg DNA之CART複本數目(BBz)，如藉由qPCR所評估。
圖28A及28B以圖顯示正常供者(圖28A)及多發性骨髓瘤(MM)患者(圖28B)的CD4+ T細胞亞群。圖28C及28D以圖顯示正常供者(圖28C)及MM患者(圖28D)的CD8+ T細胞亞群。圖28E及28F以圖分別顯示獲自MM患者之血球分離樣品中的CD4+及CD8+ T細胞亞群(帶有短斜線的點表示無反應者且白色點表示有反應者)。
圖29為一系列圖，其顯示獲自MM患者之血球分離樣品中的T細胞分化。x軸顯示CD45RO表現且y軸顯示CCR7表現。左上象限中的信號表示初始細胞表型；右上象限中的信號表示中心記憶(TCM )表型；右下象限中的信號表示效應子記憶(TEM )表型；且左下象限中的信號表示TEMRA 。CR表示完全反應。PD表示漸進性疾病。VGPR表示極佳的部分反應。
圖30A及30B為一對圖，其顯示獲自MM患者之血球分離樣品中的CD4+及CD8+ T細胞亞群(帶有短斜線的點表示無反應者且白色點表示有反應者)。
圖31為顯示治療方案的圖。
圖32A、32B及32C為顯示臨床結果的一組圖。圖32A為斯維莫圖(Swimmer's plot)，其顯示各個體的最佳反應及無進展存活期(PFS)。箭頭表示進行中的反應。圖32B為個體03的一對PET/CT掃描影像，其顯示髓外疾病及惡性胸膜積液在治療後消退。圖32C為卡普蘭-邁耶曲線圖(Kaplan-Meier plot)，其顯示第1組的總存活率。MR=最小反應；MRD=微小殘留疾病；PR=部分反應；PD=漸進性疾病；sCR=嚴格完全反應；SD=穩定疾病。
圖33A、33B及33C為顯示CART-BCMA擴增及持久性的一組圖。圖33A為描繪各個體之周邊血液中之CART-BCMA細胞含量相對於時間的一組圖，如藉由流式細胞術(CD3+ T胞內之CAR+ %，▲，左軸)及CAR序列定量PCR(■，右軸)所量測。關於代表性流式細胞術圖，參見圖38。圖33B以圖表明依據qPCR的峰值CART-BCMA含量與反應相關：≥PR相對於＜PR分別為中值102507相對於4187個複本/µg DNA (p=0.016，曼-惠特尼(Mann-Whitney))。圖33C以圖表明AUC-28 (輸注後之前28天期間，依據qPCR的CART-BCMA含量曲線下面積)與反應相關：≥PR相對於＜PR分別為中值885181相對於26183 (複本)x(天數)/µg DNA(p=0.016，曼-惠特尼)。
圖34為顯示CART-BCMA輸注後之可溶性BCMA (sBCMA)、BAFF、APRIL含量及B細胞頻率的一組圖。CART-BCMA輸注前及輸注後，藉由ELISA量測各個體的周邊血液血清sBCMA、BAFF及APRIL含量(ng/ml，左軸)，如上文所指明。臨床反應最深之個體(01 (sCR)、03 (VGPR)、15 (VGPR))的sBCMA出現最大降低且BAFF及APRIL出現可逆的增加。藉由流式細胞術評估指定時間點的周邊血液B細胞頻率(CD45+CD14-閘中之% CD19+，右軸)。
圖35為一組直方圖，其顯示各個體在CART-BCMA輸注之前及之後之骨髓抽出物中之所選MM細胞上的BCMA表現(藉由流式細胞術)。陰影直方圖顯示BCMA；填充直方圖顯示FMO (螢光扣除對照)對照。除非指定，否則輸注後的時間點為第28天。各個體之表現BCMA之細胞百分比以及平均BCMA螢光強度(MFI)列舉於表37中。注意個體03在復發時(D164)的BCMA表現減少。關於代表性閘選，參見圖42。
圖36A、36B、36C及36D為顯示活體內CART-BCMA擴增之預測值的一組圖。收集後立即得到之血球分離產物內(圖36A)及製造開始時(亦即，減少單核球污染之淘析步驟之後)之種細胞培養物內(圖36B)的CD4+相對於CD8+ T細胞比率(CD4/CD8比率)係藉由流式細胞術測定。利用製造開始時及結束時的總細胞計數來計算活體外擴增倍數(圖36C)。具有CD45RO-CD27+表型之血球分離產物內的CD8+ T細胞比例係藉由流式細胞術評估(圖36D)。製造前的CD4/CD8比率及CD45RO-CD27+CD8+ T細胞頻率以及活體外擴增程度係與輸注後的峰值活體內CART-BCMA擴增有關(顯示斯皮爾曼相關度r及p值)。
圖37為顯示個體招募的CONSORT圖。
圖38為一組圖，其顯示對CART-BCMA細胞進行的代表性閘控及染色。顯示個體01在首次CART-BCMA輸注之後第+7天之周邊血液中的染色。細胞係根據前向及側向散射、接著根據單峰、接著根據CD45+CD14-白血球、接著根據T細胞(CD3+CD19-)來閘選。使用生物素標記之重組人類BCMA-Fc及抗生蛋白鏈菌素-PE鑑別CART-BCMA+細胞。陰性對照組為含有抗生蛋白鏈菌素-PE的FMO (螢光扣除對照)管(缺乏生物素標記之BCMA-Fc)。藉由將含有生物素標記之BCMA-FC之管中的CAR+細胞數減去FMO管中的CAR+細胞數(亦即，在此實例中為34.7-0.9=33.8)來計算表現CART-BCMA之CD3+ T細胞%。根據HLA-DR染色來鑑別CART-BCMA+細胞的活化狀態(右下圖)。藉由將% HLA-DR+除以(% HLA-DR+加上% HLA-DR-)(亦即，在此實例中為32.9/(32.9 + 1.5) = 95.6%)來計算各時間點活化的CAR+細胞%。
圖39為顯示各個體之CART-BCMA+ T細胞絕對數的一組圖。根據絕對淋巴細胞計數(ALC，依據臨床全血球計數(CBC)差異報導)及CART-BCMA流式細胞術結果(圖38)，利用下式：(ALC) (% CD45+CD14-)(% CD3+CD19-)(% CAR+)/10000估算每µl血液中的CD3+CAR+細胞絕對數。舉例而言，個體01在第+7天時，ALC為0.08×103 個細胞/µl。循環CAR+ T細胞在此時的絕對數估算值為(0.08)(48.3)(72.1)(33.8)/10000 = 0.019×103 個細胞/µl。
圖40為顯示CART-BCMA治療之後血清細胞介素變化的一組圖。藉由Luminex分析評估周邊血液30種細胞介素在多個時間點的含量。描繪所選細胞介素在前28天的變化。反應最深的個體(01、03、15)典型地在峰值CART-BCMA擴增時或剛好在峰值CART-BCMA擴增之前，細胞介素呈最大倍數的增加。
圖41A及41B為顯示基線可溶性BCMA (sBCMA)含量、峰值擴增及反應的一對圖。治療前藉由ELISA量測周邊血液血清sBCMA含量。圖41A以圖表明根據qPCR，基線sBCMA含量與CART-BCMA峰值擴增的相關性不顯著(斯皮爾曼相關度r=0.43，p=0.25) 圖41B以圖表明sBCMA基線含量與反應的相關性不顯著(p=0.56，曼-惠特尼檢驗)。
圖42為顯示骨髓瘤細胞之代表性閘選及BCMA染色的一組圖。骨髓抽出物細胞係根據前向及側向散射、接著根據單峰、接著根據CD3-CD14-細胞進行閘選。骨髓瘤細胞如下鑑別：首先閘選CD38hi 細胞，接著利用CD19、CD56及κ/λ染色來閘選純系漿細胞。在此實例中，骨髓瘤細胞為CD19-CD56+κ+。使用缺乏抗BCMA抗體的FMO管測定% BCMA+。
圖43A及43B為顯示MM細胞上之基線BCMA表現、峰值擴增及反應的一對圖。根據qPCR，治療前的骨髓瘤細胞BCMA平均螢光強度(MFI)與峰值CART-BCMA擴增不相關(斯皮爾曼相關度r=0.45，p=0.27)(圖43A)，與反應的相關性亦不顯著(p=0.25，曼-惠特尼檢驗)(圖43B)。一位個體(07)的治療前樣品未獲得。
圖44A及44B為顯示B細胞惡性疾病細胞株上之BCMA表現的一組圖。圖44A為顯示各細胞株表面上之BCMA表現的一組直方圖。陰影直方圖表示經PE標記之抗BCMA抗體染色且填充直方圖顯示各別同型對照染色。圖44B中，表現被定量且對所測試之各細胞株的抗體結合能力(ABC)作圖。
圖45A以圖顯示誘導後群組及復發/難治性群組中的CD27+CD45RO-CD8+細胞%。圖45B以圖顯示誘導後群組及復發/難治性群組中的CD4/CD8比率。圖45C以圖顯示誘導後群組及復發/難治性群組截至第9天的活體外群體倍增數。
圖46為顯示治療方案的圖。BM asp/Bx = 骨髓抽出物及活體組織切片；Cytoxan = 環磷醯胺；D = 天；Lenti = 慢病毒；Wk = 週。
圖47A-47C為一組斯維莫圖，其顯示第1組(單獨的1-5×108 CART-BCMA細胞)(圖47A)、第2組(環磷醯胺(Cy) + 1-5×107 CART-BCMA細胞)(圖47B)及第3組(Cy + 1-5×108 CART-BCMA細胞)(圖47C)中之各個體的最佳反應及無進展存活期(PFS)。箭頭表示進行中的反應。圖47D為顯示基於群組之總存活率(OS)的圖，卡普蘭-邁耶曲線圖。MR=最小反應；MRD=微小殘留疾病；PR=部分反應；PD=漸進性疾病；sCR=嚴格完全反應；SD=穩定疾病。
圖48A-48D為顯示CART-BCMA擴增及持久性的圖。圖48A-48C以圖顯示各組之周邊血液中的CART-BCMA細胞含量相對於時間，如藉由定量PCR針對CAR序列所量測。圖48D以圖顯示各個體之峰值CART-BCMA含量(根據qPCR)(除個體34外，其峰值資料未獲得)。中值峰值CART-BCMA含量(灰色條)在各組之間無顯著差異(曼-惠特尼)。
圖49A-49I以圖顯示與CRS嚴重程度及神經毒性有關的血清細胞介素。藉由Luminex分析來量測直至第28天的血清細胞介素濃度(pg/ml)。圖49A-49E：在未患細胞介素釋放症候群(CRS)之個體、未接受託西利單抗(tocilizumab)之1級CRS或2級CRS個體(CRS gr 0-2)與接受託西利單抗之3-4級CRS或2級CRS個體(CRS Gr 3-4或Gr 2 + toci)之間，比較各種細胞介素的相對於基線之中值峰值增加倍數。與CRS嚴重程度相關性最顯著的細胞介素為IL-6 (圖49A)、IFN-γ (圖49B)、IL-2Rα (圖49C)、MIP-1α (圖49D)及IL-15 (圖49E)。圖49F-49I：在無神經毒性之個體(無Ntx)與具有任何分級之神經毒性個體(任何Ntx)之間，比較各種細胞介素的相對於基線之中值峰值增加倍數。與神經毒性相關性最顯著的細胞介素為IL-6 (圖49F)、IFN-γ (圖49G)、IL-1RA (圖49H)及MIP-1α (圖49I)。星形描繪具有3-4級神經毒性的個體。圖示為根據曼-惠特尼檢驗的準確p值。水平線描繪中值。IFN-γ = 干擾素γ；IL-1RA = 介白素1受體拮抗劑；IL-2Rα = 介白素2受體α；IL-6 = 介白素6；IL-15 = 介白素15。MIP-1α = 巨噬細胞發炎蛋白質1α。
圖50A-50D以圖顯示CART-BCMA輸注前及輸注後之可溶性BCMA (sBCMA)、BAFF及APRIL濃度，以及MM細胞上的BCMA表現。圖50A：個體(sub)之周邊血液血清sBCMA及APRIL基線濃度相較於一組健康供者(HD，n=6)分別顯著增加及減小(分別為p=0.017及＜0.001，曼-惠特尼)。基線BAFF濃度無顯著差異。描繪中值濃度。圖50B：CART-BCMA輸注之後，血液學有反應者(PR/VGPR/CR/sCR)之一系列sBCMA濃度的下降比無反應者(MR/SD/PD)更顯著。描繪平均濃度(ng/ml) + SEM。根據不成對t檢驗，*p＜0.05。圖50C：根據流式細胞術，MM細胞上之BCMA表現的代表性實例。關於閘選策略，參見圖42。FMO = 螢光扣除對照。圖50D：具有一系列可評估骨髓抽出物之18位個體之MM細胞的BCMA平均螢光強度(MFI)相對於時間。有反應者的中值MFI在治療前(pre-tx)與第28天(D28)之間有顯著差異(4000相對於944，p=0.02，成對t檢驗)，但無反應者則無顯著差異(2704相對於2140，p=0.19)。有反應者的中值MFI在pre-tx與第90天(D90)之間無顯著差異(4000相對於2022，p=0.26)。*個體15的MM細胞在D28偵測不到。#個體03的MM細胞在D45偵測不到(D28偵測不到)且在D90可表徵的MM細胞幾乎沒有。描繪D90時間點的D164骨髓。
圖51A-51I為顯示活體內CART-BCMA擴增及反應之預測值的圖。如藉由qPCR所量測的血液CART-BCMA峰值擴增(圖51A)以及前28天的總CART-BCMA擴增(作為曲線下面積(AUC)計算)(圖51B)均與臨床反應有關。較大的峰值CART-BCMA擴增(圖51C)及反應(圖51D)亦與更嚴重的CRS (定義為3/4級或2級，需要托西利單抗)有關。白血球清除產物內較高的CD4+相對於CD8+ T細胞比率(CD4/CD8比率)(如藉由流式細胞術所測定)亦與峰值擴增(圖51E)及反應(圖51F)相關，而活體外增殖(作為種細胞在製造期間的增加倍數量測)僅與峰值擴增相關(圖51G)，而與反應不相關(p=0.54，曼-惠特尼檢驗，資料未示)。圖51H-I：具有CD45RO-CD27+表型之白血球清除產物內較高的CD8+ T細胞比例與峰值CART-BCMA擴增顯著相關(圖51H)，且與反應的相關度較小(圖51I)。對於圖51A、51B、51C、51F及51I而言，分析係依據曼-惠特尼檢驗；線條表示中值。對於圖51D而言，分析係依據費雪精確檢驗(Fisher's exact test)。對於圖51E、51G及51H而言，分析係依據斯皮爾曼相關度。
圖52為顯示個體招募的CONSORT圖。ALC = 絕對淋巴球計數。
圖53A-53D為顯示所治療個體之其他臨床結果的圖。圖53A：具有部分反應(PR)或改善之所有個體的反應持續時間(DOR)。圖53B：所有個體的總存活率(OS)。圖53C：各組的無進展存活期(PFS)。圖53D：所有個體的PFS。曲線藉由卡普蘭-邁耶方法(Kaplan-Meier method)推導。
圖54A-54C以圖顯示第1組(圖54A)、第2組(圖54B)或第3組(圖54C)之CART-BCMA細胞的擴增。描繪各個體之如藉由流式細胞術所量測之所有周邊血液CD3+ T胞內的CAR+ T細胞頻率。
圖55為顯示CART-BCMA治療之後血清細胞介素變化的一組圖。藉由Luminex分析來評估周邊血液細胞介素在多個時間點的濃度(pg/ml)。基於群組顯示輸注後前28天期間，最頻繁升高之細胞介素相對於基線的峰值增加倍數。
圖56A-56L以圖表明峰值CART-BCMA擴增與基線臨床特徵、基線BCMA表現或sBCMA濃度無關。依據qPCR的峰值CART-BCMA含量(複本數/µg基因組DNA)與以下的相關性不顯著：招募時年齡(高於或低於中值)(圖56A)；診斷後的年數(高於或低於中值)(圖56B)；依據FISH存在del17p或依據定序存在TP53突變(圖56C)；治療株系的數目(#)(高於或低於中值)(圖56D)；對於2種蛋白酶體抑制劑(PI)、2種免疫調節藥物(IMiD)及達雷木單抗(dara)呈現五重難治性(圖56E)；白血球清除術之前剛好接受含有IMiD (圖56F)、PI (圖56G)、dara (圖56H)或環磷醯胺(Cytoxan)(圖56I)的療法；治療前骨髓漿細胞百分比(% BM PC)(圖56J)；BM PC上之BCMA基線平均螢光強度(MFI)(圖56K)；或血清可溶性BCMA (sBCMA)基線濃度(圖56L)。對於圖56A-56I而言，分析係依據曼-惠特尼檢驗；線條表示中值。對於圖56J-56L而言，分析係依據斯皮爾曼相關度。
圖57A-57L以圖表明反應與基線臨床特徵、基線BCMA表現或sBCMA濃度無關。臨床反應(≥部分反應(PR))與以下的相關性不顯著：招募時年齡(圖57A)；診斷以來的年數(圖57B)；依據FISH存在del17p或依據定序存在TP53突變(圖57C)；治療株系之數目(#)(圖57D)；對於2種蛋白酶體抑制劑(PI)、2種免疫調節藥物(IMiD)及達雷木單抗(dara)呈現五重難治性(圖57E)；白血球清除術之前剛好接受含有IMiD、PI、dara或環磷醯胺(Cytoxan)的療法(圖57F-57I)；治療前骨髓漿細胞百分比(%BM PC)(圖57J)；BM PC上之BCMA基線平均螢光強度(MFI)(圖57K)；或血清可溶性BCMA (sBCMA)基線濃度(圖57L)。對於圖57C、57E-57I而言，分析係依據費雪精確檢驗。對於圖57A、57B、57D、57J-57L而言，分析係依據曼-惠特尼檢驗；線條表示中值。

Claims (93)

  1. 一種評估或預測個體對BCMA CAR表現細胞療法之反應的方法，其中該個體患有與BCMA表現有關的疾病，該方法包含： 獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值： (i)該個體中，例如來自該個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (vi)來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中： (a)相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加；或 (b)相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少， 藉此評估或預測該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應。
  2. 如請求項1之方法，其中相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值增加指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之有反應者； (c)該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  3. 如請求項1或2之方法，其中相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者之值降低指示或預測以下中之一者、兩者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或 (c)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值包含CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率，例如如本文所揭示之分析(例如流式細胞術)所量測。
  5. 如請求項4之方法，其中該比率： (1)大於或等於1 (例如在1與5之間，例如在1與3.5之間)；或 (2)大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)， 指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之有反應者； (c)該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  6. 如請求項4或5之方法，其中該比率少於1 (例如在0.001與1之間)指示或預測以下中之一者、兩者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或 (c)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  9. 如請求項8之方法，其中CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+ CD8+細胞百分比大於或等於25% (例如在30%與90%之間，例如在35%與85%之間，例如在40%與80%之間，例如在45%與75%之間，例如在50%與75%之間)指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之有反應者； (c)該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  10. 如請求項8或9之方法，其中CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+ CD8+細胞百分比小於25% (例如在0.1%與25%之間，例如在0.1%與22%之間，例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間))指示或預測以下中之一者、兩者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或 (c)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  11. 如請求項1至10中任一項之方法，其中CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  12. 如請求項11之方法，其中CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於20% (例如在20%與90%之間，例如在20%與80%之間，例如在20%與70%之間，例如在20%與60%之間)指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之有反應者； (c)該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  13. 如請求項11或12之方法，其中CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於20% (例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間)指示或預測以下中之一者、兩者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或 (c)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  15. 如請求項14之方法，其中CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於15% (例如在15%與90%之間，例如在15%與80%之間，例如在15%與70%之間，例如在15%與60%之間，例如在15%與50%之間)指示或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之有反應者； (c)該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  16. 如請求項14或15之方法，其中CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於15% (例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間，例如在0.1%與8%之間)指示或預測以下中之一者、兩者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或 (c)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  17. 如請求項1至16中任一項之方法，其中來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值包含來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的擴增倍數(例如製造結束時的總細胞計數相對於製造開始時的總細胞計數)，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如藉由細胞計數所量測。
  18. 如請求項1至17中任一項之方法，進一步包含： 使用來自個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 在以下情況時向該個體投與，例如起始投與或繼續投與該BCMA CAR表現細胞療法： (a)指示或預測該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應增加； (b)指示或預測該個體為該BCMA CAR表現細胞療法的有反應者； (c)指示或預測該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)指示或預測該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增已增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  19. 如請求項1至17中任一項之方法，進一步包含實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的該BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為該BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與該BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將該經修改的製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法的製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將該經修改的製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將該經修改的製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、製造該BCMA CAR表現細胞療法開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前的該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如該預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及在以下情況時將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體： (a)指示或預測該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應減少； (b)指示或預測該個體為該BCMA CAR表現細胞療法的無反應者；或 (c)指示或預測該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增已減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  20. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含： 相較於參考值(例如無反應者參考值)，回應於以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加： (i)該個體中，例如來自該個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體的樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)中或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (vi)來自該個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖， 實施： 使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 向該個體投與，例如起始投與或繼續投與BCMA CAR表現細胞療法， 藉此治療患有與BCMA表現有關之疾病的個體。
  21. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含： 相較於參考值(例如有反應者參考值)，回應於以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低： (i)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或 (vi)來自該個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖， 實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改BCMA CAR表現細胞療法的製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改的製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改BCMA CAR表現細胞療法的製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將該經修改的製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前的該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體， 藉此治療患有與BCMA表現有關之疾病的該個體。
  22. 如請求項20之方法，包含：回應於(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加係鑑別或預測以下中之一者、兩者、三者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應已增強； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之有反應者； (c)該個體適於該BCMA CAR表現細胞療法；或 (d)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增已增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  23. 如請求項21之方法，包含：回應於(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低係鑑別或預測以下中之一者、兩者或所有者： (a)該個體對該BCMA CAR表現細胞療法的反應已降低； (b)該個體為該BCMA CAR表現細胞療法之無反應者；或 (c)該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增已降低，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  24. 如請求項20至23中任一項之方法，其中CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值包含CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  25. 如請求項24之方法，包含： 回應於該比率： (1)大於或等於1 (例如在1與5之間，例如在1與3.5之間)；或 (2)大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)，實施： 使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 向該個體投與，例如起始投與或繼續投與BCMA CAR表現細胞療法。
  26. 如請求項24或25之方法，包含： 回應於該比率小於1 (例如在0.001與1之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前之該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如該預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體。
  27. 如請求項20至26中任一項之方法，其中CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  28. 如請求項20至27中任一項之方法，其中HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  29. 如請求項28之方法，其包含： 回應於CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比大於或等於25% (例如在30%與90%之間，例如在35%與85%之間，例如在40%與80%之間，例如在45%與75%之間，例如在50%與75%之間)，實施： 使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 向該個體投與，例如起始投與或繼續投與BCMA CAR表現細胞療法。
  30. 如請求項28或29之方法，包含： 回應於CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比小於25% (例如在0.1%與25%之間，例如在0.1%與22%之間，例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前之該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如該預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體。
  31. 如請求項20至30中任一項之方法，其中CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  32. 如請求項31之方法，其包含： 回應於CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於20% (例如在20%與90%之間，例如在20%與80%之間，例如在20%與70%之間，例如在20%與60%之間)，實施： 使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 向該個體投與，例如起始投與或繼續投與BCMA CAR表現細胞療法。
  33. 如請求項31或32之方法，包含： 回應於CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於20% (例如在0.1%與20%之間，例如在0.1%與18%之間，例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前之該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如該預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體。
  34. 如請求項20至33中任一項之方法，其中CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  35. 如請求項34之方法，其包含： 回應於CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比大於或等於15% (例如在15%與90%之間，例如在15%與80%之間，例如在15%與70%之間，例如在15%與60%之間，例如在15%與50%之間)，實施： 使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 向該個體投與，例如起始投與或繼續投與BCMA CAR表現細胞療法。
  36. 如請求項34或35之方法，包含： 回應於CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比小於15% (例如在0.1%與15%之間，例如在0.1%與12%之間，例如在0.1%與10%之間，例如在0.1%與8%之間)，實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前之該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如該預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體。
  37. 如請求項20至36中任一項之方法，其中來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值包含來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的擴增倍數(例如製造結束時的總細胞計數相對於製造開始時的總細胞計數)，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如藉由細胞計數所量測。
  38. 一種評估或預測BCMA CAR表現細胞療法在個體中之效力的方法，其中該個體患有與BCMA表現有關的疾病且其中該BCMA CAR表現細胞療法係使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製成，該方法包含： 獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值： (i)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或 (vi)來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中： (a)相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的效力增加；或 (b)相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的效力減小， 藉此評估或預測該BCMA CAR表現細胞療法的效力。
  39. 如請求項38之方法，其中相較於參考值(例如無反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加指示或預測該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增增加，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  40. 如請求項38或39之方法，其中相較於參考值(例如有反應者參考值)，(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低指示或預測該BCMA CAR表現細胞療法在該個體中的擴增減少，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如使用qPCR、根據每µg DNA之CAR轉殖基因複本數所量測。
  41. 一種製造BCMA CAR表現細胞療法的方法，其中該BCMA CAR表現細胞療法係使用來自個體的細胞(例如T細胞)製成，該方法包含： 獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值： (i)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或 (vi)來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中： 相較於參考值(例如無反應者參考值)，回應於(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加，使用來自該個體的細胞製造該BCMA CAR表現細胞療法。
  42. 一種製造BCMA CAR表現細胞療法的方法，其中該BCMA CAR表現細胞療法係使用來自個體的細胞(例如T細胞)製成，該方法包含： 獲取以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值： (i)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或 (vi)來自該個體的種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖，例如如根據截至第9天的群體倍增數(PDL9)所量測，其中： 相較於參考值(例如有反應者參考值)，回應於(i)至(vi)中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低，實施以下中之一者、兩者、三者或所有者： 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR之核酸； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加；或 向該個體投與預療法，其中該預療法使該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、該BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前之該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如該預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；及使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法。
  43. 如請求項38至42中任一項之方法，其中CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性的值包含CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  44. 如請求項38至43中任一項之方法，其中CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性的值包含CD8+ T細胞中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  45. 如請求項38至44中任一項之方法，其中HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性的該值包含CD8+ T細胞中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  46. 如請求項38至45中任一項之方法，CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的該值包含CD8+ T細胞中的CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  47. 如請求項38至46中任一項之方法，其中CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性的該值包含CD8+ T細胞中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞百分比，例如如本文所揭示之分析所量測，例如流式細胞術。
  48. 如請求項38至47中任一項之方法，來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間增殖的值包含來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的擴增倍數(例如製造結束時的總細胞計數相對於製造開始時的總細胞計數)，例如如本文所揭示之分析所量測，例如如藉由細胞計數所量測。
  49. 如請求項1至48中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與以下中之一者、兩者或所有者組合投與該個體： (1)使包含該CAR核酸或CAR多肽之該細胞之功效增強的藥劑； (2)改善與投與包含該CAR核酸或CAR多肽之該細胞有關之一或多種副作用的藥劑； (3)治療與BCMA表現有關之該疾病的藥劑。
  50. 如請求項1至49中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與式(I)化合物(COF1)組合投與該個體，其中該COF1為： 或其醫藥學上可接受之鹽、酯、水合物、溶劑合物或互變異構體，其中： X為O或S； R1 為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其各自視情況經一或多個R4 取代； R2a 及R2b 各自獨立地為氫或C1 -C6 烷基；或R2a 及R2b 與其所連接之碳原子一起形成羰基或硫羰基； R3 各獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )或-N(RC )S(O)x RE ，其中各烷基、烯基、炔基及雜烷基獨立地且視情況經一或多個R6 取代； 各R4 獨立地為C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、鹵基、氰基、側氧基、-C(O)RA 、-C(O)ORB 、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、-S(O)x RE 、-S(O)x N(RC )(RD )、-N(RC )S(O)x RE 、碳環基、雜環基、芳基或雜芳基，其中各烷基、烯基、炔基、雜烷基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地且視情況經一或多個R7 取代； RA 、RB 、RC 、RD 及RE 各獨立地為氫或C1 -C6 烷基； 各R6 獨立地為C1 -C6 烷基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )、-N(RC )C(O)RA 、芳基或雜芳基，其中各芳基及雜芳基獨立地且視情況經一或多個R8 取代； 各R7 獨立地為鹵基、側氧基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ； 各R8 獨立地為C1 -C6 烷基、氰基、-ORB 、-N(RC )(RD )、-C(O)N(RC )(RD )或-N(RC )C(O)RA ； n為0、1、2、3或4；及 x為0、1或2，視情況其中： (1)該COF1為免疫調節醯亞胺藥物(IMiD)，或其醫藥學上可接受之鹽； (2)該COF1係選自由以下組成之群：來那度胺(lenalidomide)、泊利度胺(pomalidomide)、沙立度胺(thalidomide)及2-(4-(第三丁基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基異吲哚啉-5-基)甲基)乙醯胺，或其醫藥學上可接受之鹽； (3)該COF1選自由以下組成之群： ，或其醫藥學上可接受之鹽；或 (4)該COF1為來那度胺，或其醫藥學上可接受之鹽。
  51. 如請求項1至50中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與激酶抑制劑組合投與該個體，該激酶抑制劑例如BTK抑制劑，例如依魯替尼(ibrutinib)。
  52. 如請求項1至51中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與第二CAR表現細胞療法組合投與該個體，視情況其中該第二CAR表現細胞療法為： (1) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019，視情況其中該CD19 CAR表現細胞療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD19表現增加之後； (2) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法，視情況其中該CD20 CAR表現細胞療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD20表現增加之後； (3) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法，視情況其中該CD22 CAR表現細胞療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD22表現增加之後； (4)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)，視情況其中該第二CAR選自由以下組成之群：CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)、CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)，及CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或 (5)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至第一抗原及第二抗原的雙特異性CAR，其中該第一抗原為BCMA，視情況其中該第二抗原選自由CD19、CD20及CD22組成之群。
  53. 如請求項1至52中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與CD19抑制劑組合投與該個體，該抑制劑例如本文所揭示之CD19抑制劑，視情況其中該CD19抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD19表現增加之後。
  54. 如請求項1至53中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與CD20抑制劑組合投與該個體，該抑制劑例如本文所揭示之CD20抑制劑，視情況其中該CD20抑制劑為多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338，視情況其中該CD20抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD20表現增加之後。
  55. 如請求項1至54中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與CD22抑制劑組合投與該個體，該抑制劑例如本文所揭示之CD22抑制劑，視情況其中該CD22抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD22表現增加之後。
  56. 如請求項1至55中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與結合至Fc受體樣2 (FCRL2)或Fc受體樣5 (FCRL5)的分子組合投與該個體，視情況其中該分子為： (1) CAR表現細胞療法，其包含表現結合至FCRL2或FCRL5之CAR的細胞；或 (2)多特異性抗體分子，例如結合至第一抗原及第二抗原的雙特異性抗體分子，其中該第一抗原為FCRL2或FCRL5，視情況其中該第二抗原為CD3。
  57. 如請求項1至56中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與介白素-15 (IL-15)多肽、介白素-15受體α (IL-15Ra)多肽，或IL-15多肽與IL-15Ra多肽之組合(例如hetIL-15)，組合投與該個體。
  58. 如請求項1至57中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與TGF β抑制劑組合投與該個體。
  59. 如請求項1至58中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與例如EGF816之EGFRmut -酪胺酸激酶抑制劑(TKI)組合投與該個體。
  60. 如請求項1至59中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與腺苷A2AR拮抗劑組合投與該個體，視情況其中： (1)該腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：PBF509、CPI444、AZD4635、韋帕迪蘭(Vipadenant)、GBV-2034及AB928；或 (2)該腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。
  61. 如請求項1至60中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與抗CD73抗體分子組合投與該個體，該抗CD73抗體分子例如本文所揭示之抗CD73抗體分子。
  62. 如請求項1至61中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與檢查點抑制劑組合投與該個體，視情況其中該檢查點抑制劑為： (1) PD-1抑制劑，視情況其中該PD-1抑制劑選自由以下組成之群：PDR001、納武單抗(Nivolumab)、派立珠單抗(Pembrolizumab)、皮立珠單抗(Pidilizumab)、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591及AMP-224，視情況其中該PD-1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在該個體中的擴增增加； (2) PD-L1抑制劑，視情況其中該PD-L1抑制劑選自由以下組成之群：FAZ053、阿特珠單抗(Atezolizumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)及BMS-936559，視情況其中該PD-L1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在該個體中的擴增增加； (3) LAG-3抑制劑，視情況其中該LAG-3抑制劑選自由以下組成之群：LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280及REGN3767；或 (4) TIM-3抑制劑，視情況其中該TIM-3抑制劑選自由MGB453、TSR-022及LY3321367組成之群。
  63. 如請求項1至62中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與結合至CD32B的抗體分子組合投與該個體。
  64. 如請求項1至63中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與結合至IL-17的抗體分子組合投與該個體，該抗體分子例如為結合至IL-17的拮抗性抗體分子，例如CJM112。
  65. 如請求項1至64中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與結合至IL-1 β的抗體分子組合投與該個體。
  66. 如請求項1至65中任一項之方法，包含將該BCMA CAR表現細胞療法與吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)及/或色胺酸2,3-二加氧酶(TDO)之抑制劑組合投與該個體，該抑制劑例如IDO1抑制劑，視情況其中IDO及/或TDO之該抑制劑係選自： (1) INCB24360、因多莫得(indoximod)、NLG919、艾帕斯塔(epacadostat)、NLG919或F001287；或 (2) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體。
  67. 一種治療患有與BCMA表現有關之疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為： (1) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019，視情況其中該CD19 CAR表現細胞療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD19表現增加之後； (2) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法，視情況其中該CD20 CAR表現細胞療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD20表現增加之後； (3) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法，視情況其中該CD22 CAR表現細胞療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD22表現增加之後； (4)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)，視情況其中該第二CAR選自由以下組成之群：CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)、CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)，及CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或 (5)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至第一抗原及第二抗原的雙特異性CAR，其中該第一抗原為BCMA，視情況其中該第二抗原係選自由CD19、CD20及CD22組成之群。
  68. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為： (1) CD19抑制劑，例如本文所揭示之CD19抑制劑，視情況其中該CD19抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在投與該BCMA CAR表現細胞療法之後，該個體中之CD19表現增加之後； (2) CD20抑制劑，例如本文所揭示之CD20抑制劑，視情況其中該CD20抑制劑為多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338，視情況其中該CD20抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中的CD20表現增加之後；或 (3) CD22抑制劑，例如本文所揭示之CD22抑制劑，視情況其中該CD22抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之CD22表現增加之後。
  69. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為結合至Fc受體樣2 (FCRL2)或Fc受體樣5 (FCRL5)的分子，視情況其中該分子為： (1) CAR表現細胞療法，其包含表現結合至FCRL2或FCRL5之CAR的細胞；或 (2)多特異性抗體分子，例如結合至第一抗原及第二抗原的雙特異性抗體分子，其中該第一抗原為FCRL2或FCRL5，視情況其中該第二抗原為CD3。
  70. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為TGF β抑制劑。
  71. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為EGFRmut -酪胺酸激酶抑制劑(TKI)，例如EGF816。
  72. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為腺苷A2AR拮抗劑，視情況其中： (1)該腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：PBF509、CPI444、AZD4635、韋帕迪蘭(Vipadenant)、GBV-2034及AB928；或 (2)該腺苷A2AR拮抗劑選自由以下組成之群：5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。
  73. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為抗CD73抗體分子，例如本文所揭示之抗CD73抗體分子。
  74. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為檢查點抑制劑，視情況其中該檢查點抑制劑為： (1) PD-1抑制劑，視情況其中該PD-1抑制劑選自由以下組成之群：PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591及AMP-224，視情況其中該PD-1抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之PD-1或PD-L1表現增加之後，視情況其中該PD-1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在該個體中的擴增增加； (2) PD-L1抑制劑，視情況其中該PD-L1抑制劑選自由以下組成之群：FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗及BMS-936559，視情況其中該PD-L1抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之PD-1或PD-L1表現增加之後，視情況其中該PD-L1抑制劑使BCMA CAR表現細胞在該個體中的擴增增加； (3) LAG-3抑制劑，視情況其中該LAG-3抑制劑選自由以下組成之群：LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280及REGN3767，視情況其中該LAG-3抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之LAG-3表現增加之後；或 (4) TIM-3抑制劑，視情況其中該TIM-3抑制劑選自由MGB453、TSR-022及LY3321367組成之群，視情況其中該TIM-3抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中之TIM-3表現增加之後。
  75. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為結合至CD32B的抗體分子。
  76. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為結合至IL-17的抗體分子，例如結合至IL-17的拮抗性抗體分子，例如CJM112。
  77. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為結合至IL-1β的抗體分子。
  78. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含將BCMA CAR表現細胞療法及第二療法投與該個體，其中該第二療法為吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)及/或色胺酸2,3-二加氧酶(TDO)之抑制劑，例如IDO1抑制劑，視情況其中IDO及/或TDO之該抑制劑係選自： (1) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或 (2) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，視情況其中： IDO及/或TDO之該抑制劑係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後投與，例如在該BCMA CAR表現細胞療法投與之後，該個體中的IDO及/或TDO表現增加之後。
  79. 如請求項67至78中任一項之方法，其中該第二療法係在該BCMA CAR表現細胞療法投與之前、同時或之後投與。
  80. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，其中該個體已接受或正接受BCMA CAR表現細胞療法，該方法包含： 相對於參考值，該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後的至少一個時間點回應於該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中之含量或活性值增加，其中該參考值為： (i)該至少一個時間點之前，該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中的該抗原含量或活性(例如該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之前，該個體中的該抗原含量或活性，或該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，該個體中的該抗原含量或活性)； (ii)患有與BCMA表現有關之疾病之不同個體中的該抗原含量或活性；或 (iii)患有與BCMA表現有關之疾病之個體群體中的該抗原之平均含量或活性， 向該個體投與該抗原之抑制劑，其中： (1)該抗原為CD19且該抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中該CD19抑制劑為： (a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019； (b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或 (c)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR， (2)該抗原為CD20且該抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中該CD20抑制劑為： (d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法； (e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)； (f)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR；或 (g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338， (3)該抗原為CD22且該抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中該CD22抑制劑為： (h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法； (i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或 (j)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR， (4)該抗原為PD1或PD-L1且該抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中該抗原抑制劑為： (k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或 (l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559， (5)該抗原為IDO或TDO且該抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中該IDO及/或TDO抑制劑為： (m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或 (n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或 (6)該抗原為TGF-β且該抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
  81. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，其中該個體已接受或正接受BCMA CAR表現細胞療法，該方法包含： 該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點，獲取該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中之抗原含量或活性的值， 相對於參考值，回應於該值增加，其中該參考值為： (i)該至少一個時間點之前，該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中的該抗原含量或活性(例如該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之前，該個體中的該抗原含量或活性，或該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，該個體中的該抗原含量或活性)； (ii)患有與BCMA表現有關之疾病之不同個體中的該抗原含量或活性；或 (iii)患有與BCMA表現有關之疾病之個體群體中的該抗原之平均含量或活性， 向該個體投與該抗原之抑制劑，其中： (1)該抗原為CD19且該抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中該CD19抑制劑為： (a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019； (b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或 (c)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR， (2)該抗原為CD20且該抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中該CD20抑制劑為： (d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法； (e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)； (f)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR；或 (g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338， (3)該抗原為CD22且該抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中該CD22抑制劑為： (h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法； (i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或 (j)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR， (4)該抗原為PD1或PD-L1且該抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中該抗原抑制劑為： (k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或 (l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559， (5)該抗原為IDO或TDO且該抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中該IDO及/或TDO抑制劑為： (m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或 (n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或 (6)該抗原為TGF-β且該抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
  82. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含： 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法， 相對於參考值，該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點，回應於該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中之抗原含量或活性值增加，其中該參考值為： (i)該至少一個時間點之前，該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中的該抗原含量或活性(例如該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之前，該個體中的該抗原含量或活性，或該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，該個體中的該抗原含量或活性)； (ii)患有與BCMA表現有關之疾病之不同個體中的該抗原含量或活性；或 (iii)患有與BCMA表現有關之疾病之個體群體中的該抗原之平均含量或活性， 向該個體投與該抗原之抑制劑，其中： (1)該抗原為CD19且該抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中該CD19抑制劑為： (a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019； (b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或 (c)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR， (2)該抗原為CD20且該抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中該CD20抑制劑為： (d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法； (e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)； (f)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR；或 (g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338， (3)該抗原為CD22且該抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中該CD22抑制劑為： (h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法； (i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或 (j)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR， (4)該抗原為PD1或PD-L1且該抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中該抗原抑制劑為： (k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或 (l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559， (5)該抗原為IDO或TDO且該抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中該IDO及/或TDO抑制劑為： (m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或 (n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或 (6)該抗原為TGF-β且該抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
  83. 一種治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法，包含： 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法， 該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後之至少一個時間點，獲取該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中之抗原含量或活性的值， 相對於參考值，回應於該值增加，其中該參考值為： (i)該至少一個時間點之前，該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中的該抗原含量或活性(例如該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之前，該個體中的該抗原含量或活性，或該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後、但在該至少一個時間點之前，該個體中的該抗原含量或活性)； (ii)患有與BCMA表現有關疾病之不同個體中的該抗原含量或活性；或 (iii)患有與BCMA表現有關疾病之個體群體中的該抗原之平均含量或活性， 向該個體投與該抗原之抑制劑，其中： (1)該抗原為CD19且該抗原抑制劑為CD19抑制劑，視情況其中該CD19抑制劑為： (a) CD19 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD19 CAR表現細胞療法，例如CTL119或CTL019； (b)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD19 CAR (例如本文所揭示之CD19 CAR)；或 (c)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD19的雙特異性CAR， (2)該抗原為CD20且該抗原抑制劑為CD20抑制劑，視情況其中該CD20抑制劑為： (d) CD20 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD20 CAR表現細胞療法； (e)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD20 CAR (例如本文所揭示之CD20 CAR)； (f)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD20的雙特異性CAR；或 (g)多特異性抗體分子，例如結合至CD20及CD3的雙特異性抗體分子，例如THG338， (3)該抗原為CD22且該抗原抑制劑為CD22抑制劑，視情況其中該CD22抑制劑為： (h) CD22 CAR表現細胞療法，例如本文所揭示之CD22 CAR表現細胞療法； (i)包含表現第一CAR及第二CAR之細胞的CAR表現細胞療法，其中該第一CAR為BCMA CAR (例如本文所揭示之BCMA CAR)且該第二CAR為CD22 CAR (例如本文所揭示之CD22 CAR)；或 (j)包含細胞的CAR表現細胞療法，該細胞表現多特異性CAR，例如結合至BCMA及CD22的雙特異性CAR， (4)該抗原為PD1或PD-L1且該抗原抑制劑為抗PD1抗體分子或抗PD-L1抗體分子，視情況其中該抗原抑制劑為： (k) PDR001、納武單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591或AMP-224；或 (l) FAZ053、阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗或BMS-936559， (5)該抗原為IDO或TDO且該抗原抑制劑為IDO及/或TDO抑制劑，視情況其中該IDO及/或TDO抑制劑為： (m) INCB24360、因多莫得、NLG919、艾帕斯塔、NLG919或F001287；或 (n) (4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺、1-甲基-D-色胺酸、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇，或1-甲基-色胺酸之D異構體，或 (6)該抗原為TGF-β且該抗原抑制劑為TGF β抑制劑。
  84. 如請求項80至83中任一項之方法，其中該抗原之含量或活性的值包含該個體中，例如來自該個體之樣品(例如活體組織切片樣品，例如骨髓活體組織切片樣品)中的抗原表現量，如本文所述之分析所量測，例如免疫組織化學。
  85. 如請求項80至84中任一項之方法，其中該至少一個時間點為該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後的第5、10、15、20、25、28、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80或90天。
  86. 如請求項80至85中任一項之方法，其中該個體開始接受該BCMA CAR表現細胞療法之後，該個體經歷BCMA表現的減少。
  87. 如請求項1至86中任一項之方法，其中該BCMA CAR表現細胞療法包含表現BCAM CAR之細胞，其中： (i)該BCMA CAR包含表3或5中所列之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2及HCDR3中之一或多者(例如所有三者)及/或表4或5中所列之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2及LCDR3中之一或多者(例如所有三者)，或與其95-99%一致的序列； (ii)該BCMA CAR包含表2或5中所列之重鏈可變區(VH)及/或表2或5中所列之輕鏈可變區(VL)，或與其具有95-99%一致性的序列； (iii)該BCMA CAR包含表2或5中所列的BCMA scFv域胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 145、 SEQ ID NO: 146、 SEQ ID NO: 147、 SEQ ID NO: 148及SEQ ID NO: 149)，或與其具有95-99%一致性的序列； (iv)該BCMA CAR包含表2或5中所列的全長BCMA CAR胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 109之殘基22-483、SEQ ID NO: 99之殘基22-490、SEQ ID NO: 100之殘基22-488、SEQ ID NO: 101之殘基22-487、SEQ ID NO: 102之殘基22-493、SEQ ID NO: 103之殘基22-490、SEQ ID NO: 104之殘基22-491、SEQ ID NO: 105之殘基22-482、SEQ ID NO: 106之殘基22-483、SEQ ID NO: 107之殘基22-485、SEQ ID NO: 108之殘基22-483、SEQ ID NO: 110之殘基22-490、SEQ ID NO: 111之殘基22-483、SEQ ID NO: 112之殘基22-484、SEQ ID NO: 113之殘基22-485、SEQ ID NO: 213之殘基22-487、SEQ ID NO: 214之殘基23-489、SEQ ID NO: 215之殘基22-490、SEQ ID NO: 216之殘基22-484、SEQ ID NO: 217之殘基22-485、SEQ ID NO: 218之殘基22-489、SEQ ID NO: 219之殘基22-497、SEQ ID NO: 220之殘基22-492、SEQ ID NO: 221之殘基22-490、SEQ ID NO: 222之殘基22-485、SEQ ID NO: 223之殘基22-492、SEQ ID NO: 224之殘基22-492、SEQ ID NO: 225之殘基22-483、SEQ ID NO: 226之殘基22-490、SEQ ID NO: 227之殘基22-485、SEQ ID NO: 228之殘基22-486、SEQ ID NO: 229之殘基22-492、SEQ ID NO: 230之殘基22-488、SEQ ID NO: 231之殘基22-488、SEQ ID NO: 232之殘基22-495、SEQ ID NO: 233之殘基22-490)，或與其具有95-99%一致性的序列；或 (v)該BCMA CAR係由表2或5中所列的核酸序列(例如SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 151、 SEQ ID NO: 152、 SEQ ID NO: 153、 SEQ ID NO: 154、 SEQ ID NO: 155、 SEQ ID NO: 156、 SEQ ID NO: 157、 SEQ ID NO: 158、 SEQ ID NO: 159、 SEQ ID NO: 160、 SEQ ID NO: 161、 SEQ ID NO: 162、 SEQ ID NO: 163、 SEQ ID NO: 164、 SEQ ID NO: 165、 SEQ ID NO: 166、 SEQ ID NO: 167、 SEQ ID NO: 168、 SEQ ID NO: 169、 SEQ ID NO: 170)或與其具有95-99%一致性的序列編碼。
  88. 如請求項1至87中任一項之方法，其中與BCMA表現有關的該疾病為癌症，視情況其中該癌症為血液癌症。
  89. 如請求項1至88中任一項之方法，其中與BCMA表現有關的該疾病為選自以下中之一或多者的急性白血病：B細胞急性淋巴白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴白血病(「TALL」)、急性淋巴白血病(ALL)；慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)；B細胞前淋巴球性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅生物、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴增生病狀、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良及骨髓發育不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅生物、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)；前列腺癌(例如抗去勢或抗治療前列腺癌，或轉移性前列腺癌)、胰臟癌、肺癌；或漿細胞增殖病症(例如無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或頑固性骨髓瘤)、意義待定的單株γ球蛋白血症(MGUS)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、漿細胞瘤(例如漿細胞惡病質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤，及多發性漿細胞瘤)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性，及POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群(Crow-Fukase syndrome)、高槻疾病(Takatsuki disease)，及PEP症候群))，或其組合。
  90. 如請求項1至89中任一項之方法，其中與BCMA表現有關的該疾病為ALL、CLL、DLBCL或多發性骨髓瘤。
  91. 如請求項1至90中任一項之方法，其中該個體為人類患者。
  92. 一種BCMA CAR表現細胞療法，其用於治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法中，該方法包含： 相較於參考值(例如無反應者參考值)，回應於以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值增加： (i)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或 (vi)來自該個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖， 實施： 使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造BCMA CAR表現細胞療法及向該個體投與該BCMA CAR表現細胞療法；或 向該個體投與，例如起始投與或繼續投與BCMA CAR表現細胞療法， 藉此治療患有與BCMA表現有關之該疾病的該個體。
  93. 一種BCMA CAR表現細胞療法，其用於治療患有與BCMA表現有關疾病之個體的方法中，該方法包含： 相較於參考值(例如有反應者參考值)，回應於以下中之一者、兩者、三者、四者、五者或所有者的值降低： (i)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中，或該BCMA CAR表現細胞療法投與之前之該個體周邊血液及/或骨髓中的CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)含量或活性相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)含量或活性， (ii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD8+ Tscm (幹細胞記憶T細胞)含量或活性， (iii)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞含量或活性， (iv)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性， (v)該個體中，例如來自該個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)或BCMA CAR表現細胞療法製造開始時的種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品))中的CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞含量或活性，或 (vi)來自該個體的種細胞在製造BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖， 實施以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有者： 向該個體投與經改變的BCMA CAR表現細胞療法給藥方案(例如比參考給藥方案劑量更高及/或投藥更頻繁的給藥方案)； 向該個體投與第二療法(例如不為BCMA CAR表現細胞療法的第二療法)； 向該個體投與BCMA CAR表現細胞療法及第二療法； 中斷投與BCMA CAR表現細胞療法且視情況向該個體投與第二療法； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如相對於CD8+免疫效應細胞(CD8+ T細胞)富集CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如富集CD8+ Tscm (例如HLADR-CD95+CD27+CD8+細胞、CD45RO-CD27+CD8+細胞，或CCR7+CD45RO-CD27+CD8+細胞)，隨後引入編碼BCMA CAR的核酸，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體； 修改該BCMA CAR表現細胞療法之製造方法，例如使來自該個體之種細胞在製造該BCMA CAR表現細胞療法期間的增殖增加，及將藉由該經修改之製造方法所產生的該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體；或 將預療法投與該個體，其中該預療法使該個體中，例如來自個體之樣品(例如血球分離樣品(例如白血球清除樣品)、BCMA CAR表現細胞療法製造開始時之種細胞培養物(例如使用淘析移除單核球之後的白血球清除樣品)中，或投與該BCMA CAR表現細胞療法之前的該個體周邊血液及/或骨髓中之CD4+免疫效應細胞(例如CD4+ T細胞)數量相對於CD8+免疫效應細胞(例如CD8+ T細胞)數量的比率增加，例如預療法使該比率增加至大於或等於1.6 (例如在1.6與5之間，例如在1.6與3.5之間)；使用來自該個體的細胞(例如T細胞)製造該BCMA CAR表現細胞療法；及將該BCMA CAR表現細胞療法投與該個體， 藉此治療患有與BCMA表現有關之該疾病的該個體。
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