TW201219401A - Bicyclic inhibitors of Notum Pectinacetylesterase and methods of their use - Google Patents

Description

201219401 六、發明說明： 本申請案主張2010年W 14曰申請的美國臨時專利 申請案第61/382,526號的權益’將美國臨時專利申請案 的王文以引用之方式併入本文。 【發明所屬之技術領域】 人本發明有關於背板果膠乙醯酯酶的小分子抑制劑、包 含背板果膠乙醯酯酶的小分子抑制劑的組合物以及上: 小分子抑制劑與組合物的應用方法。 【先前技術】 月健康取決於形成骨的骨母細胞以及吸收骨的破骨細 胞的協調活性。「骨置換作用（bQne t则。糟）反應該等合 成與代謝細胞功能間的平衡，並確保成熟骨架受傷時能 自行修復並藉由釋出礦物質（諸如，鈣與磷）進入循環維 持骨的内分泌功能」AUen，LG•等人，j Med Chem , 53 (2010年6月1〇日），第4332至435:3頁中的第4332頁。 許多疾病狀態影響此平衡，此造成骨質量的增加或減少 或月。π質的改變。骨礦物質密度的逐漸減少被稱為骨質 缺乏；骨的嚴重損失被稱為骨質疏鬆。同上文獻註記。

骨質疏鬆治療與預防的目酋標準照顧利用雙磷酸鹽類 的服小刀子抗骨吸收物（antiresportives)。同上文獻註 »己的第4333頁。在骨質疏鬆治療中亦通常應用唑來磷酸 (Z〇ledr〇nic acid)、雷洛西芬（raloxifene)、鈣與維生素 D 201219401 補充。同上文獻§主記。雖然抗骨吸收劑有助於預防骨損 失，但合成劑「能夠增加骨質量至較大程度......且夺具 有能力來改善骨品質並提高骨強度。」Guo, η.等人，j Med· Chem.，53 (2010 年 2 月 25 曰），第 1819 至 1829 頁 中的第1819頁。在美國，人類pTH是唯一 FDA認可的 合成劑。上述Allen文獻的第4333頁。「由於骨質疏鬆 治療的可用合成劑的缺乏，迫切需要可治療此疾病且非 毒性、具成本效益且施加容易的小分子化合物的發展」 上述Guo文獻的第1819頁。 雖然相較於抗骨吸收治療而言，刺激骨形成的藥物 劑的發展較不先進，但習知有許多路徑可促進骨母細胞 功能」上述Allen文獻的第4338頁。該等路徑包括骨型 態蛋白、轉化生長因子β、副甲狀腺素、類姨島素生長 因子、纖維母細胞生長因子及無翼型ΜΜτν嵌入位置 (WNT)L號。同上文獻註記。與同事近來描述關於 該等路徑的第—路徑的結果。Gu。上述文獻。明確地說， 他們描述某些經取枝& # # &、& β , 一’ 代的本并噻吩與笨弁呋喃化合物提高 J鼠與大既中的骨型態蛋白2表現。報導化合物的兩個 化合物在活體内刺激骨形成與骨小梁連接恢復。上述文 獻的第1 8 19頁。 該等路徑的另-路徑為猜路程，爾路徑牵涉於 夕種發育與再生過程。上述Allen文獻的第434〇頁。然 而’路牷是複雜的，且關於路徑的大部分以及路徑的成 分如何影響骨頭尚未清楚 舉例而言，已經暗示LRP-5 201219401 〃 β連環素無法直接連接通過信號來控制骨質量」， LRP-5的突變與人類中骨質量增加有關，而典範信 號通過β-連環素而發生，同上文獻註記。 基因表現數據的近來分析已經導致辨別出WNT信號 的新標的。參見例如Torisu，γ等人，Cancer Sci，99(6): 1139-H46, U43 (2008)。上述標的之一為背板果膠乙醯 酉旨酶（亦稱為NOTUM與LOC174111)。 【發明内容】 本發明包含式

的化合物與該等化合物之藥物可接受鹽類，其中£與 G之一為氮，而E與G之另一者為氮或（：尺4;¥與2：之 —為CR5’而Y與z之另一者為〇或s(〇)n，其中n為〇、 1或2 ; R,為鹵 基、-Ria、-OR1A、-S(0)mR1A、-S(0)m〇RlA 或-8(〇)„^(1^)2’其中m為0、1或2;各個u蜀立地 為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；^為 氫、i基、 -co2r2a、-c(o)n(r2A)2、_sr2a、_〇r2a、.n(r2a)2 戍任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；各個R2A獨立地 為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；為 201219401 氫、鹵基、氰 基、-c〇2R3A、-C⑼n(R3a)2、_SR3a、_〇R3a、_n(r3a) 、任選取代的院基、芳基、㈣基或料，或者〜與

Rs起與R3與Rs附接的原子形成任選取代的環狀基 團，各個RSA獨立地為氫或任選取代的烷基、芳基、雜 烧基或雜％，R4為氫、_基或任選取代的烧基、芳基、 雜烷基或雜環；r5為氫、鹵基、 -C02R5A、-C(0)N(R5A)2、_SR5A、_〇R5A、_N(R5A)2 或任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環，或者心與1 一 起與R5與R3附接的原子形成任選取代的環狀基團；及 各個Rm為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環 本發明亦包含藥物組合物與藥物組合物的應用方法， 且藥物組合物包括本文揭露的化合物。 本發明進一步包含抑制背板果膠乙醢酯酶（「N〇TUM」) 的方法、刺激内皮質骨形成的方法、以及治療、管理與 預防骨損失（例如，骨質疏鬆）相關的疾病與異常的方法。 【實施方式】 本發明部分係基於發現NOTUM的抑制可影響内皮質 骨形成而完成。本發明的特定態樣係基於下列研究：缺 少功能性NOTUM基因的小鼠（「基因剔除小鼠」），抑制 NOTUM的化合物的發現’以及上述化合物可用來在小鼠 與大鼠中刺激皮質骨形成的發現。 201219401 1 ·ι.定義 除非另有明示，否則「烯基（alkenyl )」一詞意指具 有2至20個（例如，2至10個或2至6個）碳原子且至少 一個碳-碳雙鍵的直鏈、支鏈及/或環狀碳氫化合物。代 表性之稀基基團包括乙浠基、缔丙基、1_ 丁稀基、2_丁 烯基、異丁烯基（isobutylenyl)、1-戊稀基、2-戊烯基、3-曱基-1-丁稀基、2 -甲基-2-丁稀基、2,3-二甲基-2-丁稀 基、1-己烯基、2 -己稀基、3 -己稀基、1-庚浠基、2-庚稀 基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬稀 基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基及3-癸烯 基。 除非另有明示，否則「烷氧基（alkoxy)」一詞意指_〇_ 烧基。烷氧基的實例包括（但不限於）_〇CH3、-〇CH2CH3、 -〇(CH2)2CH3、-0(CH2)3CH3、-0(ch2)4ch3 及 -0(CH2)5CH3 ο 除非另有明示，否則「烷基（alkyl)」一詞意指具有 1至20個（例如，1至1〇個或1至4個）碳原子的直鏈、 支鏈及/或環狀（「環院基（cycloalkyl)」）碳氫化合物。具 有1至4個奴原子之烧基基團稱為「低級烧基（i〇wer alkyl )」。烷基基團的實例包括（但不限於）曱基、乙基、 丙基、異丙基、正-丁基、第三-丁基、異丁基、戊基、 己基、異己基、庚基、4,4-二甲基戊基、辛基、2,2,4-三 甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基及十二院基。環烷基 201219401 基團可為單環或多環，環烷基基團的實例包括環丙基、 環丁基、環戊基、環己基及金剛烷基（adamantyl)。烷基 基團的其他實例具有線性、分支及/或環狀的部分（例 如’ i-乙基-4-甲基-環己基）。「院基」一詞包括飽和碳 氫化合物以及烯基與炔基基團。 除非另有明示，否則「烷芳基」或「烷基-芳美一 意指一個烷基基團連結至一個芳基基團。 除非另有日月*，否則「烧基雜芳基」或「院基-雜芳基」 一岡意指一個烷基基團連結至一個雜芳基基團。 除非另有明示’否則「烧基雜環J或「院基_雜環」一 詞意指一個烷基基團連結至一個雜環基團。 除非另有明示，否則「炔基（alkynyl)」一詞意指呈 有2至20個（例如’ 2至2〇個或2至6個）碳原子且至少 一個碳_碳三鍵的直鏈、支鏈與/或環狀碳氫化合物。代 表性之炔基基團包含乙炔基、丙块基、卜丁炔基、2_丁 炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3_曱 丫丞-卜丁炔基、4 -戊炔 基、1-己炔基、2-己炔基、5 巷、ι_庚快基、2_庚炔 基、6·庚炔基、1-辛炔基、2_ 、 千厌暴 7-辛快基、1-壬炔 基、2-壬炔基、8 -壬炔基、]* 1-六炔基、2-癸炔基及9-癸炔 I 〇 ' 土 V aryi )」 π思伯田啜肩 子及氫原子所組成之一芳香 , 方香環或一芳香環或部分芳香 系統。一個芳基基團可㊁八 匕3數個連結或稠合（化“ 一 起的環。芳基基團之實例句人^ ]包含（但不限於）蒽基 201219401 (anthracenW)、奠基（azulenyl)、聯苯（biphenyl)、 第基（fluorenyl )、二氫茚基（indan )、節基（indenyl )、 备基（naphthyl )、菲基（phenanthrenyl ) ' 苯基（phenyl ) 及 1，2,3,4-四虱-| ( i，2,3,4-tetrahydro-naphthalene)。 除非另有明示，否則「芳烷基」或「芳基_烷基」一詞 意指一個芳基基團連結至一烷基基團。 除非另有明示’否則「鹵素（halogen)」及「鹵基（halo)」 二詞涵括氟、氣、溴及碘。 除非另有明示，否則「雜烷基（heteroalkyl)」一詞 指的是一烷基基團（諸如，直鏈、支鏈或環狀），其中 至少有一個碳原子已被一個雜原子（例如，N、〇或s ) 所取代。 除非另有明示，否則「雜烷芳基」或「雜烷基-芳基」 二詞代表雜烷基基團連結至烷基基團。 除非另有明示，否則「雜烷基雜環」或「雜烷基-雜環」 二詞代表雜烷基基團連結至雜環基團。 除非另有明示’否則「雜芳基（heteroaryl )」一詞意 才曰一芳基基團，其中至少有一個碳原子已被一個雜原子 (例如’ N、0或S )所取代。實例包含（但不限於）吖啶 基（acridiny 1 )、本並 p米峻基（benzimidazoly 1 )、苯並 呋喃基（benzofuranyl)、苯並異嘆唾基 (benzoisothiazolyl)、苯並異口号唑基 (benzoisoxazolyl )、苯並啥唾琳基 (benz〇qUinaz〇iiny丨）、苯並噻唑基（benz〇thiaz〇lyl)、 201219401 苯並口号唾基（benzoxazolyl)、咬喃基（furyl)、味唾 基（imidazolyl)、吲哚基（ind〇lyl)、異噻唑基 (isothiazolyl )、異口号唾基（isoxaz〇iyi ) 、口夸二。坐基 (oxadiazolyl ) 、口号。坐基（oxazolyl )’、吹口井基 (phthalazinyl)、。比 口井基（pyrazinyi)、吼。坐基 (pyrazolyl )、。荅 口井基（pyridaziny 1 )、η比咬基（pyridy 1 )、 喷咬基（pyrimidinyl)、呱嗪基（pyrimidy 1 )、吡咯基 (pyrrolyl)、啥唾琳基（qUinaz〇iinyi)、喧淋基 (quinolinyl )、四唑基（tetraz〇lyl )、噻唑基（thiaz〇lyl )、 及三 °秦基（triazinyl )。 除非另有明示’否則「雜芳烧基（heter〇arylalkyl )」 或「雜芳基-烷基（heteroaryl-alkyl)」一詞意指一個雜 芳基基團連結至一個烷基基團。 除非另有明示，否則「雜環（heter〇cycle)」一詞指 的是由碳與氫與至少一雜原子（例如，N、〇或s)所構成 之芳香族、部分芳香族或非芳香族的單環或多環或環系 統。一個雜環可包含數個（即，2個或更多個）稠合或 連結在一起的環。雜環類包含雜芳類。實例包含（但不限 於）苯並[1，3]間二口 咢唑基（benz〇[13]di〇x〇iyl) 、23_ 二氫-苯並[1，4]二π号英基（2,3_二氫 -benzo[l，4]dloxinyl；)、口 辛琳基（— — ο 、呋喃基 (furanyl)、脲乙醯基（、口末淋基 (m〇1：Ph〇llnyl )、氧雜環丁基（oxetanyl)、環氧乙基 (oxiranyl)、，瓜口井基、呱啶基 10 201219401 (piperidinyl)、α比 0各烧酮基（pyrrolidinonyl)、D比略咬 基（pyrrolidinyl )、四氫 **夫喃基（tetrahydrofurany 1 )、 四氫°比喃基（tetrahydropyranyl)、四氫。比。定基 (tetrahydropyridinyl )、四氫嘴咬基 (tetrahydropyrimidinyl )、四氫嘆吩基 (tetrahydrothiophenyl)、四氫噻〇比喃基 (tetrahydrothiopyranyl)及戊内醯胺基 (valerolactamy 1 ) ° 除非另有明示’否則「雜環燒基（heterocyclealkyl)」 或「雜環-烷基（heterocycle-alkyl)」一詞指的是一雜環基 團連結至一烷基基團。 除非另有明示’否則「雜環烧基（heterocycloalkyl)」 一詞指的是一非芳香族雜環。 除非另有明示，否則「雜環烷基烷基 (heterocycl〇a丨kylalkyl)」或「雜環烷基_烷基」一詞指 的是一雜環烧基基團連結至一烧基基團。 除非另有明示，否則「管理（“manage ”、 “managing”及“ management”）」一詞係包含預防患者 (已經罹患疾病或異常）某特定疾病或異常的復發，與/或 L長罹患„亥疾病或異常之患者保持緩解（emission)的時 間。該等詞彙包括調節該疾病或異常的閾值 (threshold)、發展及/或持續時間，《改變該患者對於該 疾病或異常的反應方式。 201219401 除非另有明示，否則「藥物可接受鹽類」一詞係指自 藥物可接受之無毒性酸類或鹼類（包含無機酸及無機鹼 以及有機酸及有機鹼）所製備之鹽類。適當的藥物可接受 之鹼加成鹽類（base addition salt)包括但不限於：由鋁、 • 鈣、鋰'鎂、鉀、鈉及鋅所形成的金屬鹽類（metallic salt” 或由離胺酸（lysine)、N，N’ -二苄基乙二胺（n，N， -dibenzylethylenediamine) ' 氯普魯卡因 (chloroprocaine)、膽驗（choline)、二乙醇胺 (diethanolamine)、乙二胺（ethylenediamine)、葡胺 (meglumine)(N-葡甲胺）及普魯卡因（procaine)所形成的 有機鹽類（organic salt)。適當的無毒性酸類包括但不限 於：諸如乙酸（acetic acid)、藻酸（alginic acid)、鄰胺基 苯曱酸（anthranilic acid)、苯石黃酸（benzenesulfonic acid)、苯曱酸（benzoic acid)、樟腦續酸（camphorsulfonic acid)、檸檬酸（citric acid)、乙烯基續酸（ethenesulfonic acid)、蟻酸（formic acid)、反-丁 稀二酸（fumaric acid) ' 0夫味甲酸（furoic acid)、半乳糖搭酸（galacturonic acid)、 葡萄糖酸（gluconic acid)、葡萄糖酸·酸（glucuronic acid)、 麵胺酸（glutamic acid)、乙醇酸（glycolic acid)、氫漠酸

V (hydrobromic acid)、鹽酸（hydrochloric .acid)、經基乙續 酸（isethionic acid)、乳酸（lactic acid)、順-丁 稀二酸 (maleic acid)、蘋果酸（malic acid)、苯乙醇酸（mandelic acid)、甲基石黃酸（methanesulfonic acid)、黏液酸（mucic acid)、硝酸（nitric acid)、雙羥萘酸（pamoic acid)、泛酸 12 201219401 (pantothenic acid)、苯乙酸（phenylacetic acid)、磷酸 (phosphoric acid)、丙酸（propionic acid)、柳酸（salicylic acid)、硬脂酸（stearic acid)、琥 ϊ白酸（succinic acid)、石黃 胺酸（sulfanilic acid)、硫酸（sulfuric acid)、酒石酸（tartaric acid)、及對甲苯續酸（p-t〇luenesulfonic acid)等無機酸與 有機酸。特定的無毒性酸包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫 酸及甲基磺酸。因此，特定的鹽類包括鹽酸鹽 (hydrochloride salt)及曱石夤酸鹽（mesylate salt) ° 其他貝丨J 為 此技術已知之鹽類，參照例如穴’ s Pharmaceutical Sciences,第 1 8 版(Mack Publishing,

Easton PA: 1990)及 r/ze Science aW /Vaciz'cre o/P/zarwacj，第 19 版（Mack Publishing，Easton PA: 1995)。 除非另有明示，否則「預防（“prevent” 、 “preventing”及“prevention” ）」此詞意指發生於患 者開始罹患特定疾病或異常之前的行動，此行動可抑制 或減少該疾病或異常的嚴重度。換句話說，該詞囊包括 預防法（prophylaxis)。 除非另有明示，否則化合物之「預防有效劑量 (prophylactically effective amount)」係足以預防疾病或 徵死（或是與該疾病或異常相關之一或更多種症狀）或預 防疾病或徵兆（或是與該疾病或異常相關之一或更多種 症狀）復發之劑量。化合物的「預防有效劑景 ⑴里」玲台療藥 劑的劑量，「預防有效劑量」可單獨或搭配其他藥劑在 13 201219401 該疾病的預防中提供預防疾病的好處。「預防有效劑量」 一詞可以包括可改善整體預防法或提高另一預防藥劑之 預防效應的劑量。 除非另有明示’否則當詞彙「經取代（substituted)」用 於描述化學結構或基團時，該詞彙意指該結構或基團之 衍生物’其中該結構或基團之一或更多個氫原子係經化 學基團或官能基（functi〇nal group)取代，該化學基團或 官能基諸如（但不限於）：醇類、醛類、烷氧基、鏈烷氧 基（alkanoyloxy)、烧氧基獄基（aikoxycarbonyl)、稀基、 烷基（諸如’甲基、乙基、丙基、第三-丁基）、炔基、烷 艘氧基（alkylcarbonyloxy) (-OC(O)烧基）、酿胺 (-C(0)NH-烷基-或-烷基NHC(O)烷基）、脒基 (-C(NH)NH-烷基或-C(NR)NH2 )、胺類（一級、二級及 三級’諸如烧胺基（alkylamino)、芳胺基（arylamino)、 芳基烧胺基（arylalkylamino))、芳醯基（aroyl)、芳基、 芳氧基、偶氮、胺曱醯基（胺甲醯基）（-NHC(0)0-烷基-或-0C(0)NH-烧基）、胺基曱酿基（carbamyl)(例如， CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基及CONH-芳烷基）、 羰基、羧基、羧酸、羧酸酐、氣化羧酸、氰基、酯類、 環氧化物、醚類（例如，甲氧基、乙氧基）、脈基 (guanidino )、鹵基（halo)、鹵烧基（例如，-CC13、 -CF3、-C(CF3)3)、雜院基、半縮酸（hemiacetal)、亞 胺（一級及二級）、異氰酸鹽、異硫氰酸鹽、酮類、亞 硝酸鹽、硝基、側氧基（0X0)、磷酸二酯 201219401 (phosphodiester)、硫化物、確醯胺基（suif〇namid〇) (例如 ’ SO2NH2 )、；ε風類（suif〇ne )、項醯基（suif〇nyi ) (包含炫確醯基、芳磺醯基及芳烷基磺醯基）、亞砜 (sulfoxide)、硫醇基（thi〇1)(例如，硫氫基 (sulfhydryl)、硫醚（thi〇ether))及尿素（urea) (-NHC0NH-烷基-)。 除非另有明示，否則化合物之「治療有效劑量 (therapeutically effective am〇unt )」係足以在疾病或症 狀的治療或管理中提供治療好處的劑量，或U以延緩 或使-或更多個與該疾病或異常相關之症狀減至最輕的 劑里。化合物的「治療有效劑量」意指治療藥劑的劑量， 該劑量可早獨或搭配其他治療在該疾病或症狀之治療或 s理上提供治療好處。詞冑「治療有效劑量」包括,可:文 善整體治療、減少或避免疾病或症狀的徵候或起因或？ 提高另一治療藥劑之治療效應的劑量。 /疋 除非另有明示，否則「治療（‘‘ treat” 、 jr + ,，、 treating，’ )」此詞乃盤計一種在患者正 疾病或異常時所採取的行動，該行動減輕該疾，

V 的嚴重度’或是阻滞或減緩該疾病或異常之進展或異’ 除非另有明示’否則「包含」一詞*「包人 於」具有相同之意義。同樣地，「諸如」一詞3，「但不阳 仁不限於」具有相同的意義。 諸如 除非另有明示，否則—連串名詞前方的 詞被視為應用於該些名詞的各者上。例 '夕個形容 任選取代之 15 201219401 &基1基或㈣基」此句和「任選取代之烧基、任選 取代之芳基、任選取代之雜芳基」具有相同之意義。 應左思的是，一個形成一個較大型化合物的一部分之 化學基團，在文中可伟用+却· 、 使用田該一口P分之化學基團以單獨 存在時般所賦予之名稱或是—般賦予該單獨分子 基團之名稱。例如當用於描述一個連接在其他化學基團 的基團時’「。比啶」及「°比啶基」被賦予了相同的意義。 因此，「簡’其中w」及「細，其中又為 。二」該兩個句子被賦予了相同之意義，且包含化合物 吡啶-2·醇、吡啶_3_醇、吡啶_4_醇。 亦應注意者係假如結構或結構之—部分的立體化學並 =例如粗線或虛線標示’則該結構或該結構的該部分 應被視為包含該結構或該結構的該部分所有立體異構 ^ 1〇 # ml (unsatisfied =:)的任何原子係假定連接足夠的氮原子以滿 何……的原子價。此外，要是原子 、— 於虛線所示之化學鍵包人、夺5以實線平行 干鍵包含早鍵及雙（例如芳香族）鍵。 1.2.化合物 本發明包含式：

的 、該化合物之藥物可接受鹽類，其中：E^ 之一為氣，而E與. 、 /、 0之另-者為氮或CR4; ¥與z之 16 201219401 為CR5,而Y與z之另一者為0或s(0)n，其中n為〇、 1或2 ; Ri為鹵 基、-R1A、-ORia、-S(〇)mR1A、-S(0)m0R1A 或-3(0)0^(111八)2’其中〇1為〇、1或2;各個11丨八獨立地 為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；R2為 氫、鹵基、 -C02R2A、-C(0)N(R2A)2、-SR2A、_〇r2a、_Ν(υ2 或任 選取代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；各個獨立地 為氫或任選取代的炫基、芳基、雜烷基或雜環；^為 氫、鹵基、氰 基、-C02R3a、-C(0)N(R3A)2、-SR3A、-〇R3A、_n(r3a)2 、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環，或者尺3與 Rs —起與R3與Rs附接的原子形成任選取代的環狀基 團；各個尺“獨立地為氫或任選取代的烷基、芳基、雜 烧基或雜環，R4為氫、鹵基或任選取代的烧基、芳基、 雜烷基或雜環；R5為氫、鹵基、 -co2r5a、.·ο(0)Ν(Ιΐ5Α)2、_SR5A、_〇R5a、·ν(Κ5α)2 或任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環，或者尺5與R3_ 起與R5與I附接的原子形成任選取代的環狀基團；及 各個R5A為t或任選取代的&基、芳基、雜烧基或雜環。 某些化合物中，E與G兩者皆為氮。 某些化合物中，Z為S。 某些化合物中，Y為S。 17 201219401 某些化合物中，Ri為-R1A或- S(0)nR1A。某些化合物 中’ Ria為經取代之烷基。特定化合物中，ria由下列一 或更多者任選取代：氰基、_基、羥 基、-n(R1b)2、_s(0)pRiB、_s(〇)p〇Rib、-s(0)pN(RiB)2 、—c(0)0RlB、-C(0)N(R1B)2 或-C(0)N(R1B)S(0)pR1B ;其 中各個R1B獨立地為氫或任選取代的烷基 '芳基、雜烷 基或雜環；及P為0、1或2。某些化合物中，R1B由下 列一或更多者任選取代：烷氧基、烷基、胺基（包括烷胺 基、二院胺基）、芳基、羧酸、氰基、鹵基、雜環或羥基。 某些化合物中，Ria由-C(0)0R1B取代。其他化合物 中’ R1A由-C(〇)N(R1B)2取代。特定化合物中，rib為氫 或低級烷基。 某些化合物中’尺2為氫、鹵基或低級烧基。特定化合 物中，R2為氫。 某些化合物中’尺3為氰基、鹵基、羥基或任選取代的 烷基。 某些化合物令，R4為氫。 某些化合物中’ I為氰基、鹵基、羥基或任選取代的 烷基》 某些化合物的式為：

其他化合物的式為： 18 201219401

本發明實施例包括式：

的化合物與該式的化合物之藥物可接受鹽類，其中.

Rib為氫或任選取代的烧基、芳基、雜+ 雜双*暴或雜環；r2 為氫或任選取代的烧基；各個r 猫☆从炎斤 2A獨立地為氫或任選取 代的院基、芳基、雜院基或雜環；為函 基、-c(o)n(r3A)2、-sr3a、-0R3a、_N(R3A)2、任選取代 的炫基、芳基、雜烧基或雜環；各個RSA獨立地為氣、 任選取代的烧基、芳基、雜烷基或雜環；1為函基、 -co2r5A、-c(〇)n(r5A)2、-SR5A、_0R5A、_N(R5A)2 或任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；及各個R5A獨立 地為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環。 v 特定化合物係如··當R2為氫、I為甲基且1為氯時， R1B非為乙基；且當R3為甲基時，R5非為甲基或任選取 代的苯基。某些化合物中，R3非為低級烷基（例如，甲 基）。某些化合物中，R5非為低級烷基（例如，曱基）。 某些化合物中，R〗B為氫或任選取代的烷基（例如，低 級烷基）或芳基。特定化合物中，R1B為氫或烷基。 某些化合物中，R3為烷基或鹵基（例如，氯）。 19 201219401 某些化合物中，Rs為烷基（例如，低級烷基）或齒基 本發明實施例包括式：

的化合物與該式的化合物之藥物可接受鹽類，其中： Rib為氫或任選取代的烧基、芳基、雜烷基或雜環；^ 為氫、鹵基、-C02R2A、-C(0)N(R2A)2、_SR2A、_OR 2 Ai 或-N(R2A)2或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環； 各個RZA獨立地為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烧基 或雜環；R3為氫、鹵基、氰基、 -C02R3A、-C(0)N(R3A)2、-SR3A、-〇R3A、_N(R3A)2、任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；各個R3A獨立地 為風、任選取代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；為 氫、鹵基、 -CO2R5A、-C(0)N(R5A)2、—SR5A、-0R5A、_n(r5a)2 或任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；各個R5A獨立地 為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；及η為 1或2。 某些化合物中’ R1B為氫或任選取代的烷基（例如，低 級烷基）或芳基。特定化合物中，R1B為氫或烧基。 此式的某些化合物中，R2為氫或任選取代的炫>基。 20 201219401 某些化合物中，R_3為烷基或鹵基（例如，氣）。某些化 合物中，R3非為低級烷基Γ例如，甲基）。 某些化合物中’ R_5為烧基（例如’低級烷基）或函基。 某些化合物中，R·5非為低級院基（例如，曱基）。 本發明實施例包括式： O^^ORib

的化合物與該式的化合物之藥物可接受鹽類，其中： Rib為氫或任選取代的院基、芳基、雜烧基或雜環； 為氫或任選取代的烷基；各個Rm獨立地為氫或任選取 代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；r3為鹵基、 -C02R3A、-C(0)N(R3A)2、-SR3A、-〇r3a 4_n(R3a)2、任 選取代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；各個R3 A獨立地 為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；Rs為齒 基、-C02R5A、-C(0)N(R5A)2、-SH5a ' _()r5a、_n(r5a)2 或任選取代的烧基、^•基、雜烧基或雜環；及各個

〇 A 獨立地為氫、任選取代的烷基、芳基 '雜烷基或雜環。 此式的某些化合物中，R·2為氩或任選取代的烧基。 某些化合物中’ R1B為氫或任選取代的烷基（例如，低 級烷基）或芳基。特定化合物中，r1b為氫或烷基。 某些化合物中’R3為炫基或鹵基（例如，氣）。某些化 合物中，R3非為低級烷基（例如，曱基）。 21 201219401 某些化合物中，Rs為烷基（例如，低級烷基）或鹵基 某些化合物中，R5非為低級烷基（例如，曱基）。 本發明實施例包括式：

广R3 r5

的化合物與該式的化合物之藥物可接受鹽類，其中. Rib為氫或任選取代的烧基、^•基、雜烧基或雜環；汉 為氫、齒基、-C02R2A、-C(0)N(R2A)2、_SR

^ AV2 A 或_N(R2a)2或任選取代的烧基、芳基、雜烷基或雜環； 各個RZa獨立地為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基 或雜壤，R3為氩、鹵基、氰基、

-C02R3A、-C(0)N(R3A)2、-Sr3a、_〇R3a、_n(R3a)2、任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；各個R3a獨立地 為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；心為 氫、齒基或任選取代的烷基、芳基、綠烷基或雜環；R

-〇R5a、-N(R5a)2 或任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環：各個R5A獨立地 為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；及η為 1或2 〇 某些化合物中’ R1 Β為氫或任選取代的烧基（例如，低 級烷基）或芳基。特定化合物中，Rib為氫或烷基。 22 201219401 此式的某些化合物中，r2為氫或任選取代的烷基。 某二化。物中’ R3為烧基或鹵基（例如’氣）。某些化 合物中’汉3非為低級烷基Γ例如，曱基）。 某些化合物中，R5為烷基（例如，低級烷基）或鹵基。 某些化合物中’尺5非為低級烷基（例如，甲基）。 本發明實施例包括式： R1A、 ^(〇)n R5

的化合物與該式的化合物之藥物可接受鹽類，其中： 各個R1A獨立地為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷美 或雜環；R2為氫或任選取代的烷基；各個Ru獨立地為 氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；^為函基、 -C02R3A、-C(0)N(R3A)2、-SR3A、-〇R3A 或 _n(R3a)2、任 選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；各個r;a獨立地 為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；I為鹵 基、-C02R5A、-C(0)N(R5A)2、_SR5A、_〇R5A、·州I幻 或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環；各個獨 立地為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環1及 η為0、1或2。 特定化合物係如··當R2為氫時，R，盥β * 3丹h非兩者皆為 苯基；當Ria為經取代之嘧啶、R2為氫且 J乳且K3為經取代

苯基時，Rs非為曱基；當R2為氫時，R 3 〃尺5非兩者皆 23 201219401 為甲基；且當r1a為經取代之苯基、R2為氫且R3為經取 代之笨基時，R5非為氫。 某些化合物中，R, A為經取代之烧基。特定化合物中’ Ria由下列一或更多取代：氰基、鹵基、羥 基、'N(R1B)2、-s(o)pR1B、-s(o)por1b、-S(0)pN(R1B)2 、-c(〇)or1b、-c(o)n(r1b)2 或-c(o)N(R1B)s(o)pR1B;其 中各個R1B獨立地為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷 基或雜環；及P為0、1或2。 某些化合物中，R1B由下列一或更多任選取代：烷氧 基、烷基、胺基（包括烷胺基、二烷胺基）、芳基、羧酸、 氰基、齒基、雜環或羥基。特定化合物中，R】B為氫或任 選取代的院基（例如，低級烧基）或芳基。某些化合物中， Rib為氫或烷基。 某些化合物中，R2為氫或任選取代的烷基。 某些化合物中，R3為烷基或鹵基。 某些化合物中，115為烷基或鹵基。 本發明實施例包括式：

广R3 r5 的化合物及該式之化合物之藥物可接受鹽類，其中. 各個R1A獨立地為氫或任選取代的烷基、芳基、雜貌其 或雜環；R2為氫或任選取代的烷基；各個Rza獨立地為 風或任選取代的烧基、芳基、雜院基或雜環；h為齒美 24 201219401 -co2r3A、-c(o)n(r3A)2、-sr3A、-or3a 或 _n(R3a)” 任 選取代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；各個R3A獨立地 為氫、任選取代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；為齒 基、-CO2R5A、_c(o)n(r5A)2、_sr5a、-〇r5a、_n(r5a)2 或任選取代的烧基、芳基、雜炫基或雜環；各個獨 立地為氫、任選取代的烧基、芳基、雜烧基或雜環；及 η為0、1或2。 特定實施例係如：化合物非為2-((6,7-二苯基。夫。南 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）-1-口末啉乙酮。實施例係例如R3 與R5非兩者皆為苯基。 某些化合物中，R! a為經取代之烷基。特定化合物中， R1A由一或更多下列取代：氰基、鹵基、羥 基、-N(R1B)2、-s(o)pr1b、-s(o)por1b、-s(0)pn(r1b)2 、-C(0)0R1B、-C(0)N(R1b)2 4-C(0)N(R,b)S(0)pR1b ;其 中各個R1B獨立地為氫或任選取代的烧基、芳基、雜燒 基或雜環；及p為0、1或2。 某些化合物中，R1B由下列一或更多任選取代：烷氧 基、烧基、胺基（包括烧胺基、二烧胺基）、芳基、竣酸、 氰基、鹵基、雜環或羥基。特定化合物中，R1B為氣或任 選取代的烷基（例如，低級烷基）或芳基。某些化合物中， Rib為氮或烧基。 某些化合物中，R2為氫或任選取代的烷基。 某些化合物中’ R3為烧基或鹵基。 某些化合物中，R5為院基或齒基。 25 201219401 如本文所述的結合試驗所確定’特定化合物的ICs〇低 於約0.1、0.05或0.025 μΜ。如本文所述的報導基因試 驗所確定，特定化合物的ECsq低於約5、2.5或1 μΜ。 可藉由本文揭露的方法以及技術習知的方法來製備本 • 發明的化合物（即’本文揭露的化合物）。參見例如Stewan 、 荨人的美國專利第6,579,882號；Wiesenfeldt等人的歐 洲專利0447891。 1.3 ·治療方法 本發明包含刺激患者中内皮質骨形成的方法，該方法 包括對有需要的患者施加有效劑量的本發明化合物❶本 發明亦包含增加皮質骨厚度的方法，該方法包括對有需 要的患者施加有效劑量的本發明化合物。 本發明包含治療、管理或預防與骨損失相關的疾病或 異常的方法，該方法包括對有需要的患者施加治療或預 防有效劑量的本發明化合物。疾病與異f的實例包括骨 質疏鬆（例如’停經後骨質疏鬆、類固醇或糖皮質類固醇 引發的骨質疏鬆）、骨質缺乏與佩吉特氏病（paget，s disease) 〇 本I明亦包含治療、管理或預防骨折的方法，該方法 包括對有需要的患者施加治療或預防有效劑量的本發明 化口物4寺疋骨折與轉移性骨疾病（即，轉移至骨的癌症） 相關。可轉移至骨的癌症實例包括前列腺癌、乳癌、肺 癌、曱狀腺癌與腎臟癌。 26 201219401 本么月亦包含治療、管理或預防與疾病或異常相關或 :疾病或異常所導致之骨㈣的方法，該方法包括對有 品要的心者施力σ冶療或預防有效劑量的本發明化合物。 疾病與異常之實例包括腹腔性疾病(Μ—、克 隆氏症（Crohns Disease)、庫欣氏症候群（Cushing，s y rome)副甲狀腺機能亢進症、發炎性腸道疾病與 潰瘍性大腸炎。 可自本發明之方法受益的患者實例包括年滿5 5歲或 更老的男人與女人、停經後婦女、與罹患腎功能不全的 患者。 可搭配（例如，同時或不同時）其他習知可用於治療、 管理或預防影響骨骼之疾病或症狀的藥物來施加本發明 之化合物《實例包括：雄激素受體調節劑；雙磷酸鹽； 抑轉激素（calcitonin);詞感測受體结抗劑；組織蛋白酶 K(Cathepsin K)抑制劑；雌激素與雌激素受體調節劑；整 合素（integrin)結合劑、抗體與受體拮抗劑；副曱狀腺素 (PTH)與副甲狀腺素之類似物與模擬物；以及維生素〇 與合成維生素D類似物。 .雄激素受體調節劑的實例包括菲那雄胺（finasteride) 與其他5α-還原酶抑制劑、尼魯米特（niiutamide)、氟他 胺（flutamide)、比卡魯胺（bicalutamide)、利阿口坐 (liarozole)與乙酸阿比特龍醋（abiraterone acetate)。 雙峨酸鹽的實例包括阿余膦酸鹽（alendronate)、西米 德諾内（cimadronate)、克羅多納（clodronate)、依替鱗酸 27 201219401 鹽（etidronate)、伊班膦酸鹽（ibandronate)、因卡膦酸鹽 (incadronate)、米諾膦酸鹽（minodronate)、奈立膦酸鹽 (neridronate)、奥帕膦酸鹽（〇lpadronate)、帕米德諾内 (pamidronate)、派里德諾内（piridronate)、利塞膦酸鹽 (risedronate)、泰魯膦酸鹽（tiludronate)與唑來膦酸鹽 • (zolendronate)與上述藥物之可接受鹽類與酯類。 * 組織蛋白酶K抑制劑的實例包括VEL-0230、 AAE581(巴利卡替（balicatib))、MV061 194、 SB-462795(瑞拉卡替（relacatib))、MK-0 822(奥達卡替 (odanacatib))與 MK-1256。 雌激素與雌激素受體調節劑的實例包括天然雌激素 (例如，7-雌二醇、雌酮與雌三醇）、結合態雌激素（例如， 結合態馬雌激素）、口服避孕劑、硫酸化雌激素、黃體 素、雌二醇、曲洛西芬（dr〇l〇xifene) '雷洛西芬、拉索 西芬（lasofoxifene)、TSE-424、泰莫西芬（tamoxifen)、 艾多西芬（idoxifene)、LY353381、LY1 17081、托瑞米 芬〇〇^11^€6116)、氟維司群（£\11”以^11〇、4-[7-(2,2-二甲 基-1-側氧丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(l-孤咬基）乙氡基]笨 基]-2H-1-本弁旅喃基-3-基]-苯基-2,2-二曱基丙酸g旨、 % 4,4 一經·—本基嗣_2,4 -二石肖苯基-膝與SH646。 整合素結合劑、抗體與受體拮抗劑的實例包括維他新 (vitaxin)(MEDI-522)、西侖吉肽（cilengitide)與 L-000845704 。 28 201219401 14·藥物配方 本發明包含藥物組合物，該等藥物組合物包括—或更 多本發明的化合物與選擇性的一或更多其他藥物（例如 上述那些藥物）。 某些藥物組合物係適合口服、黏膜式施用（例如，鼻 部 '舌下 '陰道、頰内或直腸式）、非腸胃式施用（例如， 皮下、靜脈内、快速注射（bolus injection)、肌肉内或動 脈内）或皮膚渗透式施用於患者的單一單位（single unit) 劑型。劑型的實例包括（但不限於）：藥片（tablet);糖衣 錠（caplet);膠囊（capsuie) ’例如軟式彈性凝膠膠囊（⑽衍 elastic gelatin capsule);膠囊（cachet);片劑（troche);錠 劑（lozenge);擴散劑（dispersion);栓劑（SUpp0sit〇ry);藥 膏（ointment);泥罨劑（cataplasm)(糊藥（p0ultice));糊劑 (paste)’ 藥粉（pOW(jer);軟膏（dressing);乳膏（cream); 膏藥（plaster);藥水（s〇iuti〇n);貼片（patch);氣霧劑 (aerosol)(例如，鼻部喷霧器或吸入器）；凝膠（gei);適合 口服或黏膜式施用於患者的液體劑型，包括懸浮劑（例 如’水相或非水相液體懸浮劑，水基乳劑（〇il_in_water emulsion)或油基液體乳劑（water-in-oil liquid emulsion))、藥水與酏劑（eHxir);適合非腸胃式施用於患 者的液體劑型，以及滅菌固體（例如，結晶或非晶固體）， 該滅菌固體可經重新構成以提供適合非腸胃式施用於患 者的液體劑型。 29 201219401 該配方應與施用模式相稱。例如，口服需要腸溶包膜 ㈣一㈣)以保護本發明之化合物在胃腸道中不被 分解。同樣地，配方可合古封丄 c万了 3有忐幫助運送活性成分至作用 位置的成分。例如’為了保護化合物免於酵素的分解、 • 幫助化合物在循環系統内的運送及使化合物有效穿透細 胞膜至細胞内等目的，可用脂質體配方來施用化合物。 . ㈣之成分、外形與類型將取決於劑型之應用而有所 改變。例如’用在疾病急性治療之劑型比㈣在相同疾 病慢性治療之劑型而言包含較大量的一或更多種活性成 分。同樣地，非腸胃式劑型比起用於治療相同疾病之口

服劑型而言包含齡/|>旦M 各权V里的一或更多種活性成分。本發明 已S之特.疋劑型的该等與其他方面彼此之間有所不同， 且熟悉技術人士可輕易理解之。參㈤，例如•叹

Pharmaceutical Sciences,% 18 Mack Publishing,

Easton PA (1990)。 本發明的藥物組合物較適合口服。適合口服施用的劑 型包括藥片（例如，可咀嚼的藥片）、糖衣錠、膠囊及液 , 體（例如’調味糖漿）。該等劑型含有預定劑量的活性成 分’並且可以利用熟悉技術人士習知的藥學方法來製 備 V人参照 Remingt〇n，s pharmciceu“cai Sciences,第 18 版（Mack Publishing, Easton PA: 1990)。 典型口服劑型的製備，依照習知的藥物化合技術，係 於適當的混合物中以至少一賦形劑（excipient)化合活性 30 201219401 成刀賦形剑.可以依據施用所欲之製備劑型而有許多不 同的種類選擇。 因為施用的便利性，藥片及膠囊為最有效的口服單位 劑型。如果有需要，藥片可以利用標準水溶液或非水溶 液技術進行外部塗層。該等劑型可以利用習知的配藥學 方法來製備。一般來說，藥物組合物及劑型的製備，係 將活f生成刀與液體載體（Uquid carrier)、微細的固體載體 (solid carrier)或二者，進行均質且充分的混合然後若 需要的話形塑所得產物成為所欲形狀。固體劑型必須添 加朋解劑（disintegrant)以幫助快速的溶解。亦可添加潤 滑劑（lubricant)以助於劑型（例如，藥片）的製造。 2.實例 2·1·基因剔除小鼠 利用來自ΟΜΝΙΒΑΝΚ的突變鼠科ES細胞株集合的相 應犬變胚胎幹細胞（ES)株，來產生在人類NOTUM基因 的鼠科同源中基因工程突變的同型合子小鼠（大致參見 美國專利第6,080,576號）。簡而言之，將包含突變病毒 插入鼠科NOTUM基因座的ES細胞株顯微注入囊胚中， 接著將囊胚植入假孕雌性宿主並承載至足月（t〇 term)。 將得到的嵌合後代接著與C57BL/6雌性小鼠繁殖，並檢 查後代基因剃除N0TUM對偶基因的生殖腺傳遞。接著 31 201219401 繁殖突變NOTUM對偶基因的異型合子動物以產生比例 大致為1 : 2 : 1的突變NOTUM對偶基因的同型合子後 代、突變NOTUM對偶基因異㉟合子的後代或野:型後 代。 搭配破壞NOTUM基因的異型合子（+/_)小鼠與野生型 (+/+)同窩小鼠來研究破壞NOTUM基因的同型合子（_厂） 小鼠。此研究過程中，小鼠接受醫療作業，該醫療作業 利用醫療診斷程序的整合套件來評估哺乳類個體的主要 器官系統的功能。藉由在上述數目的「基因剃除」同型 合子（-/-)小鼠中研究並搭配異型合子（+Λ)小鼠與野生型 (+/+)同窩小鼠，可取得更可靠且重複性的數據。 如第1圖所不，在16周大時，具有破壞N〇TUM基因 的同型合子雄性小鼠（「homs」）相較於具有破壞n〇tum 基因之野生型同窩小鼠而言，在不同骨骼位置呈現較大 的皮質厚度（兩組的小鼠數目Ν = 1〇)β藉由微型電腦斷 層掃描（SCanc〇pCT40)來測量該等差異：中段股骨處的 28%(p<0.001);中段肱骨處的 19%(ρ<〇 〇〇ι);中段 脛骨處的17%(ρ<〇·〇〇ΐ);與脛骨_腓骨結合處的11%(p < 0.001)。如第2圖所示，在16周大時，NOTUM突變的 異型合子小鼠（「hets」）的中段股骨皮質骨厚度亦比 NOTUM突變的野生型同窩小鼠來的大：雄性以“（N = 5〇)比起雄性野生型同窩小鼠（N = 23)呈現6% (p = 〇.〇〇7) 的提高；而雌性hets (N = 57)比起雌性野生型同窩小鼠 (N = 22)呈現 9°/。（p < 0.001)的提高。 32 201219401 NOTUM動物中觀察的骨形成再分配的實際表現由第3 圖與第4圖所反映，第3圖與第4圖顯示利用標準4點 彎曲試驗的股骨斷裂強度試驗的結果（由SkeleTech(現為 RicercaBiosciences)所執行）。第3圖提供自16周大的雄 性小鼠取得的結果’如第3圖所示，比起雄性野生型同 窩小鼠（N = 23)’ hets (N = 20)呈現股骨斷裂強度5% ( p = 〇.54)的提高，而11〇1^(]^=17)呈現股骨斷裂強度28%化 < o.ool)的提高。另一方面，N0TUM h〇ms與hets兩者 的脊椎骨壓迫試驗並未顯示最大脊椎骨壓迫負載如同野 生型對照般顯著降低。在丨6周大的雌性小鼠上取得相似 結果。如第4圖所示，比起雌性野生型同窩小鼠（N = 21)，hetS(N = 20)呈現股骨斷裂強度12%(p = 〇〇4)的 提高，而h〇ms(N= 18)呈現股骨斷裂強度28%(ρ<〇 〇〇1) 的提局。该等數據與其他數據的分析顯示皮質厚度與股 骨斷裂強度間的強烈關連。 2 · 2 ·報導分析 利用此分析來測定化合物的ECw值，此分析利用如下 所述配置的條件培養基。將包含人類背板果膠乙醯轉移 酶於、pcDNA3.1( + )載體中之質體轉染進入HEK293細 I並在400 gg/mL的G418存在下生長來選擇株落。維 、、牛σ養基中包含最尚表現的人類背板果膠乙酿轉移 酶的株落以用於所有未來的活性分析。自ATCC購買過 Μ現與分泌進人條件培養基的1細胞。 33 201219401 分析步驟如下。在1 5-cm盤中將五百萬個

CellSensor®LEF/TCF-bla FreeStyle™ 293F 細胞生長至 接近滿盤。細胞生長培養基由DMEM與10%透析fBs、

5 pg/ml Blasticidin (Invitrogen，R210-01)、0.1 mM NEAA、25 mM HEPES與1 xGPS所構成。接著以胰蛋白 酵素處理細胞，步驟如下：首先以PBS清洗細胞，接著 添加5 mL的胰蛋白酵素並讓盤在室溫下培養兩分鐘。接 著在每個1 5 cm盤添加總共1 〇 mL的分析媒介

(Opti-MEM ’ 添加 0.5%透析 FBS、0.1 mM NEAA、ImM 丙酮酸鈉、10 mM HEPES、lx GPS)。計算細胞數目並懸 浮成每毫升0.75百萬個細胞。將細胞以每個孔每2〇 有15000個細胞的密度植入Biocoat 384孔的盤（Fisher， 目錄號#3 56663)。在37°C下培養細胞3個小時後，在每 個孔中添加1 0 μΐ^的分析媒介中的30 mM LiCl，接著在 3 7°C下培養另外3個小時。同時，利用ECHO將化合物 聲學上擊入Greiner 384孔的盤（目錄號# 781076)，接著 添加每孔10 pL的Wnt3a條件培養基與每孔1 〇 的背 板果膠乙醯醋酶-條件培養基。接著自Greiner盤將1 〇 μΐ 的Wnt3a/背板果膠乙醯轉移酶混合物轉移至384孔的盤 (含有CellSensor細胞）的各個孔。在37。(：下培養細胞整 仗後，藉由添加5pL的lxCCF4(Invitrogen，目錄編號 K1085)至各個孔來讓反應展開，覆蓋整個384孔的盤， 並在黑暗中且室溫下溫和地搖擺3小時。接著在Envision 34 201219401

Plate Reader上利用400 nm的激發波長與460 nm與535 nm的發射波長來讀取盤。 2.3.結合分析 利用此分析來測定化合物的ICso值，此分析利用8_辛 醯氧运-1，3,6-三磺酸三鈉（0PTS)’ OPTS為酯酶與脂肪酶 之螢光分析的水溶性酵素基質。將包含人類背板果膠乙 醯轉移酶於pcDNA3.1( + )載體中之質體轉染進入 HEK293細胞，並在400 gg/mL的G418存在下生長來選 擇株落。將來自該專細胞的狀態培養基（condition 用於分析。 利用ECHO以聲學上配置75 nL的化合物進入乾

Greiner 3 84孔的盤（目錄號# 781076)，接著添加1〇 uL 的50 mM Tris/HCl (pH 6.8)至該等384孔的分析盤的每 個孔中。以分析緩衝液（5〇 mM Tris，pH 6.8，5 mM CaCl2，0.5 mM MgCh)稀釋含有人類背板果膠乙醯轉移 酶的條件培養基75倍，並將25 pL的此種「酵素混合」 添加至各個孔接著為10分鐘的預培養。藉由添加15 的OPTS基質（Sigma，目錄號# 74875)至5 μΜ的最終濃 度來啟動酵素反應且在室溫下反應時間為1〇分鐘。在

Envision Plate Reader 上以 485nm 的激發波長與 535 nm 的發射波長來讀取所有盤。 35 201219401 2·4. 一般合成方法A : 3_氣_2_甲基噻吩駢[2,3 吡啶 _4_醇（2) ; 3-淳-2-甲基③吩耕[2’3-b]吼咬-4-醇（3)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化人 物的此種一般方法：

在100 mL的圓底燒瓶中，6_曱基噻吩駢[2,3_d]嘧啶_4_ 醇1 (lg，6.2 mm〇l)溶解於乙酸〇2 mL)t並在室溫下攪 拌。對此添加溴（0.3 mL，6.2 mmol)並在室溫下攪拌反應 混合物整夜。接著以冰淬滅反應並攪拌至冰融化。接著 過濾產物、以水清洗產物並乾燥以取得乾燥產物狀的3· 溴-2-曱基噻吩駢[2,3-b]吡啶_4_醇2 (lg，66%產率）。 在3 L的圓底燒瓶中，6_曱基噻吩駢[2,3_d]嘧啶_4_醇艾 (50 g，310 mmol)溶解於乙酸（525 mL)中並添加NCS (37 5 g’ 372 mmol)。在55°C下加熱反應達8小時。反應接著 冷卻至室温，以水淬滅反應，並二氣曱烷萃取化合物（2χ 250 mL)。以鹵水清洗結合之有機層並在MgS〇4上乾燥， 過濾並濃縮，產出3-氯-2-甲基噻吩駢[2,3 b]吼啶_4_醇的 固體 3 (42.15 g，70%產率）。 36 201219401 2.5. —般合成方法B : 2-(5-氣-6-甲基嘍吩駢[2,3-rf]嘧 咬-4-基硫）乙酸（6)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

4的合成：將氯_2-曱基噻吩駢[2,3_b]吡啶-4-醇3 (4〇 g，2000 mmol，1 當量）懸浮於 P0C13 (368 mL，4000 mmol，20當量）中並加熱至90°C達4小時。在冷卻後， 濃縮反應並將殘餘物冷卻至0°C。接著缓慢添加冰水以 確保P0C13的完整消耗。用乙酸乙酯萃取黑色溶液三 次。以飽和NaHC〇3水溶液清洗結合之有機萃取物兩次， 以鹵水清洗結合之有機萃取物’在MgS04上乾燥，過渡 並濃縮，產出淺棕色固體4,5-二氯-6-甲基噻吩駢[2,3_d] 嘧啶4 (41.6 g，93%產竿）’在完全乾燥後隨即應用4。 5的合成：將4,5·二氣-6-曱基°塞吩耕[2，3-d]鳴咬4(40 g，182.2 mmol，1當量）懸浮於曱醇（500 mL)中並冷卻至 〇°C。緩慢地添加2-巯基乙酸曱酯（27 mL，191.5 mmc)1， 1.05當量），接著緩慢地添加TEA (53 mL，3 82.6 mmo卜 2·1當量）◊在擾拌90分鐘後，濃縮反應。殘餘物溶解於 37 201219401 乙酸乙酯中並透過石夕膠塞過渡以移除鹽類與某此色素。 >辰縮過濾物並利用石夕膠層析法（具有己烧中的〇 _ 1 5 %乙酸 乙酷）純化過遽物’產出2-(5-氣-6-曱基售吩骄[2,3_d]嘴 啶-4-基硫）乙酸曱酯5 (47.30 g，91%產率）的灰白色固體。 6的合成：2-(5-氣-6-曱基噻吩駢[2,3_d]嘧啶_4_基硫） 乙酸酯5 (45 g，150 mmo卜1當量）溶解於THF (35〇社） 中，並添加1 N的NaOH水溶液（300 m]L，3〇〇 mm〇1，2 &里），且有效地攪拌。在40分鐘後，濃縮反應並讓殘 餘物溶解於水中，冷卻至〇°C並以i N HC1酸化至低 透過真空過濾收集沉澱物，並以水清洗沉澱物。在真空 下乾燥沉澱物整夜，產出純2_(5_氯_6_甲基噻吩駢[2,3_d] 嘧0疋-4_基硫）乙酸6 (4〇.5 g，94%產率）的白色固體。MS w/z C9H7CIN2O2S2 [M+l]+ = 275 and [M+l] + 3 = 277 ° !H NMR (400 MHz > f S|-c/4) δ ppm 8.66 (s, 1 H), 4.05 (s, 2 H)» 2-54 (s, 3 H) 〇 13C NMR (101 MHz, DMSO-J6) δ ppm 170.04 (S), 162.55 (s, 1C), 162.48 (s, 1C), 152.55 (s, 1C), 135·〇3 (s，1C)，125·03 (s，1C)，1 14 36 (s，1C)，32 17 (s， 1C)，14.05 (s，lc)。 2 6 般合成方法C : 2-(6-溴-5_甲基噻吩駢[2,3_rf]嘧 咬基硫）乙酸（10)的製備 tfij "C*、十、 地之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法： 38 201219401

8的合成：將根據一般合成方法b製備的4-氣_5_曱基 噻吩駢[2,3-d]嘧啶7 (lg，5.4mmol)溶解於乙酸中，並在 室溫下搜拌。對此反應混合物，添加溴（1當量=2 7 5 pL， 5.4 mmol)並攪拌反應混合物整夜。接著以冰淬滅反應並 授拌到冰融化。接著過濾出產物，以水清洗產物，並乾 燥之以取得lg淡黃色固體的6_溴_4_氯_5_曱基。塞吩騎 [2,3-d]嘧啶 8 (786 mg，55%產率）。 根據一般合成方法B來製備化合物9與1 〇。 2.7· —般合成方法D: 2-(5-環丙基_6_甲基嗟吩耕 嘧啶-4-基硫）乙酸甲酯（I2)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明 β所包含之化合 物的此種一般方法：

在100mL的圓底燒瓶中’填充的2_(5、填 駢[2,3-d]嘧啶-4-基硫）乙酸甲酯u (0 1〇〇 渴-6-甲基噻吩 E 5 0.3 mmol > 1當量）、環丙基棚酸（51mgs，以襲。!）輿三環己鱗（8 4

39 201219401 甲苯與水混合物（4 mL ’ 1 : 1)中。在室溫下且n2氛圍中 攪拌此混合物。對此攪拌溶液添加二乙醯氧基鈀 mgs，0.015 mmol)。接著在100。(：下加熱反應混合物達8 小時。添加1 N HC1來淬滅反應，並以EtOAc萃取水相 部分三次。在MgS〇4上乾燥結合之有機部分，過濾並濃 縮以產生淡黃色固體的2-(5-環丙基-6-甲基噻吩駢[2.3-d] 嘴咬-4-基硫）乙酸曱酯（4〇 mgs，45%產率）12。 2.8. —般合成方法E: 2-(6-乙基-5-甲基噻吩駢[2，3-</】 嘧啶-4-基硫）乙酸甲酯（13)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

9

在100 mL的圓底燒瓶中，將填充的根據一般合成方法 C製備的2-(6 -溴-5-曱基。塞吩餅[2,3-d]脅咬-4-基硫）乙酸 甲酯9 (50mg，0· 15mmol)、與二乙基鋅（甲苯中11M， 2〇4 μί，〇.23mmol)、Pd(dba)3 (4 mg，0.0075 mmol)與 2- 一環己膦-2’，6’-異丙氧二苯基（13 mg，〇〇3 mmol)溶解於 微波容器中的乾燥DMF (2.5 mL)，並在160。C下的微波 照射下加熱10分鐘。在將上述溶液冷卻至室溫後，透過 石夕藻土過滤並濃縮之。上述溶液溶解於EtOAc中並以水 清洗之。以齒水清洗有機層，在硫酸鎂上乾燥，並濃縮 201219401 以產生2-(6-乙基_5_甲&ι(塞吩騎[2,3_ 甲酿U(17mgs，4〇%產率）。 基硫）乙酸 2·9. —般合成方法F : 2_(5 (二甲胺卜 [2,34]嘧啶_4_基硫）乙酸（1句的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本 ,, β所包含之仆 物的此種一般方法

將利用一般合成方法C製備的2-(5-溴-6_曱基噻吩駢 [2.3-d]嘧啶-4-基硫）乙酸甲酯11 U〇〇mg，0.3 mm〇1)溶解 於ImL (過量，作為溶劑）的二甲胺（40%，水中）中。接著 添加催化數量的氧化銅，並在140。^下的微波照射下加 熱反應15分鐘。接著藉由製備級HPLC (乙酸銨/乙腈水 /谷液）純化反應分解物。分離物14為白色固趙（60 mgs， 71%產率）。 2.10. —般合成方法g : 2-(5,6-二甲基嘍吩駢i2,3-rf] 嘧啶-4-基硫甲氧基乙基）乙醯胺（I7)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

17 41 201219401 將可商業上取付並亦可利用—般合成方法B製備的 ( 甲基嗔巧餅[2,3」]嘴咬-4-基硫）乙酸15 (0.050 g，0.2 mmol，1 當晉 v^ 田罝），合解於DMF (2.2 mL)中。對此混 合物添加2-甲氧基乙胺j 妝上& (0.019 g ’ 0.24 mmol，1.2 當 量）、HATU (0.076 g，〇 2 m ,,, 8 U·2 mm〇1 ’ 1 當量）與 Ν,Ν-二異丙 基乙胺（0.0 8 m L，〇. 4 4 摔反應混合物8小時。 mmol，2.2當量），並在室溫下搜 添加水以淬滅反應，且以EtOAc 萃取液相4刀二次。在MgS〇4上乾燥結合之有機層，過 遽並濃縮之。藉由制巾性條件之製備級Ηριχ來純化 殘餘物，產出灰白色固體的2_(5,6_二甲基嗟吩耕[2,3_d] 嘧啶-4-基硫）-N_(2_甲氧基乙基）乙醯胺n(56mg，9〇% 產率）。 2.11· 一般合成方法Η·· 2-(5,6·二甲基噻吩駢[23</] 嘧啶-4-基硫）乙酸異丙酯的製備（19) 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

將可商業上取得並亦可利用一般合成方法B製備的化 合物15 (100 mg，0.4 mmol)溶解於乾DCM中，並添加 亞硫酿氣（56 uL，0.8 mmol)且在室溫下搜摔1小時接 著添加過量的丙烷-2-醇18，並在室溫下再授掉丨小時。 42 201219401 接者，、/辰細反應混合物’並利用中性相製備級hplc (乙 酸銨/乙腈水溶液）純化以產生固體的19(1〇〇 mg，85%產 率）。 2.12· 般合成方法1:2-(5 -氣-6-異丙基嘆吩耕 [2,3_£?]嘧啶-4-基硫）乙酸（2 4)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

21的合成：將可商業上取得並亦可利用一般合成方法 D製備的°密咬酮20( p〇Cl3 (95 niL，1〇28 4小時。冷卻後，濃 緩慢添加冰水以確保 取黑色溶液三次。用 機萃取物兩次，用齒 濾並濃縮，產出淺棕 [2,3-d]嘧^： 嗣20 (10 g ’ 51.4 mm〇h !當量）懸浮於 ，l〇28mmo卜20當量）中並加熱至9〇〇c達 I》辰縮反應，並冷卻殘餘物至〇。C。接著 以確保POCI3的完全消耗。用乙酸乙酯萃 即應用21。 三次。用飽和NaHC〇3水溶液清洗結合之有 次’用_水清洗-次，在MgS〇4上乾燥，過 產出淺棕色固體的4-氯-6_異丙基噻吩駢

43 201219401 22的合成：將固體4-氣-6-異丙基噻吩駢[2,3-d]嘴咬 21 (9.2 g ’ 43.2 mmol，1當量）溶解於乙酸（75 mL)中，並 添加 NCS(8.65g’ 86.5 mmol，2 當量）。在 550C 下加熱 反應6小時。冷卻反應’以水淬滅之，並用二氣甲烧（2 χ 50 mL)萃取化合物。用鹵水清洗結合之有機層並在 MgSCU上乾燥，過濾並濃縮，產出固體的4,5-二氯_6_異 丙基嗟吩駢[2,3-d]e密咬22 (6.2 g，58%產率）。 23的合成：將4,5-二氣-6-異丙基噻吩駢[2,3-d]嘧唆22 (11.6 g，47 mmol ’ 1當量）懸浮於甲醇（125 mL)中並冷卻 至0°C。緩慢地添加2-巯基乙酸甲酯（6.86 mL，49.35 mmol，1.05當量）’接著緩慢地添加tea (13.7 mL，98.7 mmol ’ 2.1當量）。攪拌90分鐘後，濃縮反應。將殘餘物 溶解於乙酸乙酯中，並透過矽膠塞過濾以移除鹽類與某 些色素。濃縮過濾物並利用矽膠層析法（己烧中的〇_丨5 % 乙酸乙酯）純化，產出灰白色固體的2_(5_氣_6_異丙基噻 吩駢[2,3-d]嘧啶-4-基硫）乙酸曱酯23 (13 6 g，92〇/〇產率）。 24的合成：將化合物23(5.0g’ 15.8mmol，i當量） 溶解於THF(5〇mL)中並添加…的Na〇H水溶液（32 mL，32mmM’ 2當f )且有效率地攪拌。在4〇分鐘後， 濃縮反應並將殘餘物溶解於水巾，冷卻至^並用in 馼化至低pH。透過真空過濾法收集沉澱物，並用水

產率）。MS w/z C丨丨11 J Φ 芡-4-基硫）乙酸 24 (4.5 g，94% llC1^2〇2S2 [M+l]+ = 303 and [M+l]+3 44 201219401 =305。4 NMR (400 MHz, DMSO-c?6) δ ppm 12.83 (s，1 Η)’ 8.81 (s，1 H)，4.12 (s，2 H)，3.52 - 3.76 (m，1 H)，1.32 (d， «7=7.03 Hz，6 H)。13C NMR (101 MHz，DMSO〇 δ ppm 170.0 (s, 1C), 162.8 (s，1C)，162.2 (s, 1C), 152.6 (s， 1C)，146.9 (s, 1C)，125.1 (s，1C)，112.3 (s，1C)， 32.2 (s, 1C), 28.6 (s, 1C), 23.4 (s, 1C), 23.1 (s， 1C)。 2.13. —般合成方法J : 2-(6-氣-7-環丙基噻吩駢 [1,2_«Π嘧啶_3_基硫）乙酸（21)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

45 1 6的合成：在500 mL圓底燒瓶中，將装填的7-溴-4- 2 甲氧基噻吩駢[3，2-d]嘧啶25 (4 g，16.32 mmol，1當量） 3 與環丙基蝴酸（2.81 g’ 32.6 mmol，2當量）與碳酸狎（6.76 g’49 mmo1’2 當量）與催化劑 PdCl2(Ph3P)2 (575 mg，0.816 0·05當量）溶解於甲苯（⑽爪“與H2〇(i6mL)的混 201219401 合物中。肖N2強烈淨化反應混合物5分鐘，並在ι〇〇。。 下加熱反應混合物6小^在冷卻至室溫後，過渡反應 混合物並分成兩層。用曱苯清洗液相層並濃縮結合之有 機溶劑。利用矽膠管柱層析法（利用Et〇Ac與庚烷（1〇_ 30%)溶劑）來純化粗製材料，產出淡黃色固體的八環丙基 -4 -曱氧基嗟吩耕[3,2-d]鳴咬26 (3 g，90%產率）。 利用一般合成方法A合成化合物2 7。 28的合成：將6-氯-7-環丙基-4-甲氧基噻吩駢[3，2_d] 嘧啶（2 g’ 8·25 mmol)溶解於 12 N HC1 (6 mL，72.5 mmol) 中’並在70°C下加熱反應混合物4〇分鐘。在反應混合 物冷卻至室溫後’將水（1 5 mL)添加至此淺褐色漿狀物並 適當地混合。過濾出沉澱物並用水與庚烷清洗之。將沉 澱物在40°C下乾燥整夜後’產出淡黃色固體（丨6 g，9〇〇/〇 產率）。 利用一般合成方法B合成化合物2 9。利用一般合成方 法 B 合成化合物 30=MS 所/z (：ηΗ9(：1Ν20282 [M+l]+ = 301 and [M+l] + 3 = 303。4 NMR (400 MHz，DMSO-A) δ ppm 8.92 (s, 1 H), 4.22 (s, 2 H), 2.10 - 2.20 (m, 1 H), 1.45 -1.52 (m，2 H)，0.96 - 1.06 (m，2 H) 〇 13C NMR (101 MHz， DMSO-A) δ ppm 169.6 (s, 2C)，161.4 (s，1C), 156.2 (s， 1C), 154.l(s, 2C), 134.4 (s, 1C), 125.9 (s, 1C), 31.9 (s, 1C)，10.2 (s，1C)，6.3 (s，2C)。 46 201219401 *14* —般合成方法K ·· 2-(7_環丙基-6_，基噻吩駢 [2,3_</】嘧啶-4-基硫）乙酸（35)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

利用一般合成方法J合成化合物26。 31的合成：對THF (60 mL)中的Ν，Ν-二異丙基乙胺（14 mL ’ 80 mmol)，在 _60〇c 下逐滴地添加 n_BuU (37 5 mL， 1.6 Μ，60 mm〇1)。在相同溫度下攪拌15分鐘後，添加 一部分的化合物31 (4.14 g，20 mmol)並讓該化合物31 在45分鐘内回溫至_45。(：。接著將該化合物31再度冷 卻至-60°C，並藉由緩慢地添加MeI (5 ，80 mm〇l)將

Mel淬滅，並攪拌2小時將反應混合物回溫至室溫。在2 小時後’用鹵水與水的混合物（1 〇〇 mL)淬滅並分隔thf 層。用二氯甲烷萃取液相層，並再度用_水清洗結合之 有機溶劑’並通過MgSCU。利用矽膠層析法（利用乙酸乙 酯/己烷混合物（1 〇〇/0 _ 3〇 %))來純化粗製產物，產出化合 物 32 (2·64 g，60%產率）。 47 201219401 利用一般合成方法B合成化合物32-35。MS m/z C12H12N202S2 [m+1]+ = 281 ° !H NMR (400 MHz, DMSO-J6) δ ppm 12 g6 (br. s., 1 H), 8.85 (s, 1 H), 4.20 (s, 2 H), 2.65 (s, 3 H) 1-99 (tt, J=8.63, 5.43 Hz, 1 H), 1.23 -1.30 (m, 2 H), 〇 88 . 〇.97 (m, 2 H) ° 2.15.—般合成方法L : 4-(叛甲基硫）-7 -甲基嘆吩耕 [3,2_d]鳴咬-心緩酸（4〇)的製備 錯由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法：

可商業上取得化合物36。利用一般合成方法B合成化 合物37。

T ' C下無水THF (5 mL)中噻吩37 (368 i.0當量）的攪拌溶液添加THf中的LDA

THF中的LDA

的合成：對_3〇 〇c mg，2 mmol，l.o 當量 浴液（2.2 mmol " 中混合0.34 mL 新鮮配置）。反 添加氯甲酸乙西丨 48 201219401 槽中回溫至室溫後，藉由水來碎滅反應。帛1GmL的乙 酸乙醋來稀釋混合物，並用乙酸乙醋（10 mL，兩次）來萃 取之il水清洗結合之有機層’在ν^〇4上乾燥，並 濃縮。接著在矽膠上吸收粗製混合物，並藉由快迷 法（由10%dcm/ea洗提）純化以提供白色固體的 (127mg，25%產率）。 利用一般合成方法B合成化合物39與4〇。 2.16· 一般合成方法2-(6_氰基·7_甲基噻吩駢 [3,2-d]嘧啶-4-基硫）乙酸（44)與2(6胺甲醯基_7甲基噻 吩駢【3,2-d】嘧啶-4-基硫）乙酸（46)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化八 物的此種一般方法： 13

41的合成：對-30 0C下無水THF (5 mL)中利用—般人 成方法B製備的37 (368 mg，2 mmol，1.0當量）的、、容液 添加丁1^中的1^八溶液（2.2 111111〇1，1.1當量）（藉由在3〇 °C下5 mL的THF中混合0.34 mL的二異丙胺與0 96坩乙 的2.5MnBuLi來新鮮配置）。反應由清澈轉為黃色。在 49 201219401 2〇分鐘後’逐滴添加碘（609 mg，2.4 mmol，1.2當量）。 在冷浴槽中回溫至室溫後，藉由水來淬滅反應。用1〇 mL 的乙酸乙酯來稀釋混合物，並用乙酸乙酯（i 〇 mL，兩次） 來萃取之。用鹵水清洗結合之有機層，在Na2s04上乾 燥，並濃縮。接著在矽膠上吸收粗製混合物，並藉由快 速層析法（由10%己烷/乙酸乙酯洗提）純化以提供白色固 體的化合物41 (407 mg，65%產率）。 利用一般合成方法B合成化合物42與43。 44的合成：對DMF (1 m卩中的化合物43 (7〇叫，〇 b 賴〇卜 1 當量）添加 Pd(PPh3)4 (44 mg，〇.〇38 賴0卜 〇 2 田里）與 Zn(CN)2 (30mg，0.25 mmol，1.1 當量）。在蓋上 玻璃瓶之前，用％對玻璃瓶進行除氣5分鐘。接著在 1 〇〇 c下且微波照射下加熱反應i·5小時。移除所有溶 劑，並藉由製備級薄層層析法純化殘餘物，產出白色固 體（28mg’ 42%產率）。MSm/zC,0H7N3〇2S2 [M+l]+ = 266.0 , H NMR (400 MHz, DMSO-^6) δ ppm 9.09 (Sj { H)j 4·12 (br. s.，2 H) 2.60 (s，3 h)。 ’ ’ 46的合成：⑯利用-般合成方法M製備的化合物45 (4〇mg’ 〇.142mm〇卜1當量）溶解於ImL的Me0H中。 對此溶，添加1N的Na〇H(2.lmL)。在藉由添加則 HC1將侍到之混合物中和之前，在室溫下攪拌得到之混 ^物。藉由製備級HPLC純化反應以提供白色固體的化 ，物 46(l2mg，29%產率）。MS “啊〇而陶]+ 一 284.〇,觀察到的 224。iH MHz，氣仿 4 δ ppm 50 201219401 8.83 (s, 1 Η) 6.06 H)。 6.3 6 (m，2 Η) 4.2 0 (s 2 Η) 2.77 (s, 3 基嘍吩骈[3,2-c】 2.17. 一般合成方法N: 2-(3-氣-2-甲 吡啶_4_基硫）乙酸（50)的製備 所包含之化合 措由下述之特定貫例來描述合成本發明 物的此種一般方法：

可商業上取得化合物4 7。利用一般合成方法a合成化 合物48。利用一般合成方法B合成化合物49與50。 2·18· —般合成方法Ο: 2-(5,6-二甲基呋喃[2,3-d】吡 啶基硫）乙酸（55)的製備 藉由下述之特定實例來描述合成本發明所包含之化合 物的此種一般方法： 51 201219401

52

52的合成：在50 mL圓底燒版中，將2胺Μ.二甲基 吱喃-3-曱腈51(lg’7 4mm〇1)溶解於作為溶劑的甲酸⑴ mL)中。加熱此混合物至回流溫度達6小時。將反應冷卻 至室溫並在真空幫浦下濃縮。接著將上述混合物溶解於 二氣曱烷，並用Hw清洗。接著讓粗製產物通過Na2S〇4, 並濃縮以取得粗製二甲基呋喃嘧啶醇52作為粗製產 物’ 52係直接用於下一步驟。 53的合成：將5,6-二曱基呋喃[2,3-d]嘧啶_4_醇52 (700 1^’4.3 1111110卜1當量）懸浮於1)〇(：13(1()1^，1()〇111111〇1， 23當量）中並加熱至9〇〇c達3小時。在冷卻後，濃縮反 應並將殘餘物冷卻至（TC。接著緩慢添加冰水以確保 POCl3的完全消耗。用乙酸乙醋萃取黑色溶液三次。用 飽和NaHC〇3水溶液清洗結合之有機萃取物兩次，用鹵 水清洗一次’在MgS04上乾燥’過濾並濃縮，產出淺棕 色固體的4 -氯-5,6-二曱基0夫π南[2,3-d]嘴咬53 (350 mg， 55%產率），在53完全乾燥後隨即應用53。 54的合成·將4 -氣-5,6-二甲基。夫喃[2,3-d]嘴咬53(350 mg ’ 1.91 inmol，1當量）懸浮於甲醇（10 mL)中並冷卻至 52 201219401 0°C。緩慢地添加2_酼基乙酸曱酯（〇 13 mL，2.0 mmQl， 1.05當量），接著緩慢地添加tea (0.3 9 mL，3.84 mm〇l， 2· 1當量）。在攪拌90分鐘後，濃縮反應。將殘餘物溶解 於乙酸乙酯中並透過矽膠塞過濾以移除鹽類與某些色 素。濃縮過濾物並利用矽膠層析法（己烷中的〇_丨5〇/。乙酸 乙醋）純化’產出固體的2-(5,6-二甲基呋喃[2,3-d]嘧啶-4-基硫）乙酸甲酯54 (420 mg，90%產率）。 55的合成：將2-(5,6-二曱基呋喃[2,3-d]嘧啶-4-基硫） 乙酸甲酯54 (400mg，1.58 mmol，1當量）溶解於THF (1 0 mL)中，並添加 1 N 的 NaOH 水溶液（3.2 mL，3.2 mmol， 2當量）且有效地攪拌。在40分鐘後，濃縮反應並將殘餘 物溶解於水中，冷卻至〇〇C並用1 N的HC1酸化至低pH。 透過真空過濾收集沉澱物，以水清洗之。將沉澱物在真 空下乾燥整夜，產出固體的純2-(5,6-二甲基呋喃[2,3-d] 嘧啶-4-基硫）乙酸55 (353 mg，94%產率）。 53 201219401 2.19. 一般合成方法P : 2-(7-環丙基-6-(三氟甲基）噻 吩駢[3,2_d】嘧啶-4-基）硫）乙酸（6〇)的製備：

cf3so2ci Ru(Ph)3CI2

k2hpo4 ch3cn -78叱至室溫，2天 25 W蛋光燈泡

利用一般合成方法J合成化合物化合物26、56、57、 58 與 60。 59的合成：在100 mL圓底燒瓶中裝配Ru(phen)3Cl2 (14 mg，0.01當量）與K2HP04 (930 mg，3當量），並在藉由 庄射器添加MeCN (20 mL·，0.125 M)與2-(7-環丙基噻吩 行除氣。在_78 下透 對得到的溶液進行除氣 駢[3,2-d]嘧啶_4_基）硫）乙酸乙酯S8 (5〇〇 mg，i當量）之 J透過交替的真空排出與氮回填（χ3)對反應混合物進 下透過交替的真空排出與氮回填（x3) 除氣，並在各個重複之間讓溶液在氮 54 201219401 氣下回至至溫。藉由注射器添加三氟曱烧石黃酿氣（4 mL，2當量）並用石蠟膜（parafilm)密封玻璃瓶，並將玻璃 瓶置放於25 W小型螢光燈泡約2 cm處。在48小時後， 用水（2 mL)淬滅反應，並用ci^Ch (X2)萃取之，並將結 合之有機層在MgS〇4上乾燥並在真空中濃縮。接著藉由 製備級HPLC(利用中性條件）來純化粗製材料以提供丨〇% 產率的2-(7-環丙基-6-(三氟曱基）噻吩駢[3,2-d]嘧啶_4-基）硫）乙酸曱酯59 (62 mgs)。 2.20. 代表性化合物 在本文所述的一或更多個分析中製造多種化合物並試 驗多種化合物之活性。將該等化合物的某些列示於下表 1中’表1中’欄「製備」代表用於製造列舉化合物的 一般合成方法。欄「HPLC方法&時間（分鐘）」代表下列 HPLC條件： A : Sunfire C18 5u 4.6 X 50 mm，10%至 90〇/〇 B， 梯度時間=2分，流率=3.5 mL/分，波長=220與254 nm， 溶劑A = 1 〇 mM乙酸銨水溶液，溶劑b =乙猜。

Sunfire C1 8 5u 4·6 X 50 mm，1 〇%至 90% B， 梯度時間=2分，流率=3.5 mL/分，波長=254與28〇 nm， /容劑A =純水’溶劑B = 9 5 0/〇甲醇/ 5 〇/〇水以及〇. 1 〇/〇三氟乙 酸（ν/ν) 〇 55 201219401 棚「IC5 〇」提供赤丨 J用本文所述的結合分析測量的化合 物的IC5〇’其中：****处主v 代表低於或4於0.025 μΜ的數值； ***代表低於或等；^〇nsiV/rAAtv：fc ’ 、〇.〇5 μΜ的數值；**代表低於或等於 〇· 1 μΜ的數值；*代矣柄於七楚 代畏低於或4於〇·2 5 μΜ的數值；而― 代表為測定不到ICsn。棚「ec Λ 4« m , 50 m tC50」扣供利用本文所述的 報導分析測量的化合物的ECw，其中：****代表低於或 等於1 μΜ的數值；***代表低於或等於5 μΜ的數值； "代表低於或等於10 μΜ的數值；*代表低於或等於15 μΜ的數值；而―代表為測定不到ec5〇。 表 化合物 製備 HPLC 方法& 時間 (分） 純度 (%) ic50 ECS〇 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）_Ν-(σ夫味- 2-基甲基）乙醯胺 G A (1.742) 99 氺氺氺氺 — 56 201219401 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸 B A (1.047) 99 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5,6-二曱基 噻吩駢[2,3-d] 嘯咬-4-基） 硫）-N-(5-曱基 異口咢唑-3-基） 乙醯胺 G A (1.763) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((6,7-二氫 -5H-環戊[4,5] 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸 B A (1.188) 100 氺氺氺氺 氺氺氺 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）-N-(2-氟苯 基）乙醯胺 G -- 90 氺氺氺氺 -- 57 201219401 2-((5,6-二曱基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸曱酯 Η A (1.927) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] °密咬-4 -基） 硫）-N -曱基乙 醯胺 G A (1.493) 98 氺氺氺氺 氺氺氺氺 1-(2-((5,6-二 曱基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙醯）哌 啶-4-甲醯胺 G A (1.397) 99 * -- 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸丙酯 Η A (2.235) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 58 201219401 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸丁酯 Η A (2.370) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸異丙酯 Η A (2.217) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((6-甲基噻 吩駢[2,3-d]嘧 淀-4-基）疏）乙 酸 Β A (0.915) 100 氺 氺氺 2-((7-甲基噻 吩駢[3,2-d]嘧 啶-4-基）硫）乙 酸 Β A (0.915) 100 氺 氺 2-((5-甲基噻 吩駢[2,3-d]嘧 喊-4*·基）硫）乙 酸 Β A (0.925) 100 氺* -- 59 201219401 2-((5,6-二曱基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）-N -(乙石黃酿 基）乙醯胺 G A (1.218) 100 氺氺氺氺 -- 2-((5,6-二曱基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙醯胺 G A (1.440) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）-N-((四氮 -2 Η -旅喃-2 -基）氧）乙醯胺 G A (1.760) 100 氺氺本氺 氺氺氺氺 Ν-(環丙基石黃 醯）-2-((5,6-二 甲基噻吩駢 [2,3 -d]嘲 °定-4-基）硫）乙醯胺 G A (1.235) 100 氺氺氺氺 -- 201219401 2-((5,6-二曱基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）-N-羥乙醯 胺 G A (1.970) 100 本本氺本 * * * * 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）-N-((5-甲基 吡啶-2-基）磺 醯）乙醯胺 G A (1.273) 97 氺氺 -- 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫1 _(異0引。朵 琳· 2 -基）乙綱 G A (1.917) 99 本本*氺 氺氺 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 嘧啶-4-基） 硫）-N-甲氧基 -N-曱基乙酿 胺 G A (1.700) 97 ♦本丰申 氺氺氺氺 61 201219401 2-((5,6-二甲基 噻吩駢[2,3-d] 喊D定-4 -基） 硫）-N - (σ塞吩-2 _ 基曱基）乙醯胺 G A (1.820) 99 氺氺 -- 1-(5,6-二甲氧 基異吲哚啉-2-基）-2-((5,6-二 曱基噻吩駢 [2,3 - d]。密。定- 4-基）硫）乙酮 G A (1.745) 100 氺氺氺氺 -- N-氰基 -2-((5,6-二甲 基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙醯胺 G A (1.162) 98 氺氺氺本 氺氺伞氺 N-(4-氯-ΙΗ-η 弓 | 唑-3- 基）-2 - ( ( 5，6 -二 甲基噻吩駢 [2,3-(1]°¾ 咬-4-基）硫）乙醯胺 G A (1.733) 100 氺氺* « — 62 201219401 N-(2-(二甲胺） 乙基）-2-((5,6-二甲基11塞吩耕 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙醯胺 G B (1.490) 99 -- -- N-(3-(二甲胺） 丙基）-2-((5,6-二曱基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙醯胺 G B (1.522) 99 -- -- 2 - ( ( 6 -乙基-5 -甲基噻吩駢 [2,3-d]嘴唆-4-基）硫）乙酸 B，E A (1.212) 100 氺氺氺氺 -- 2-((6-溴-5-甲 基噻吩耕 [2,3-d]13密咬-4- 基）硫）乙酸 B，C A (1.145) 100 氺氺氺氺 1 本本本本 63 201219401 2-((5-溴-6-曱 基嗟吩騎 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸 B A (1.213) 99 氺水氺氺 氺氺氺氺 2-((6-異丙基 -5-甲基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸 B，D A (1.305) 100 氺氺氺 -- 2-((5-環丙基 -6 -甲基11塞吩耕 [2,3-d]痛咬-4-基）硫）乙酸甲 酯 B,D A (2.137) 100 氺氺氺氺 -- 2-((6-環丙基 -5-甲基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸曱 酯 B，D A (2.190) 100 氺氺氺氺 -- 64 201219401 2-((5-環丙基 -6 -曱基嗟吩耕 [2,3-d]°f 咬-4-基）硫）乙酸 B,D A (1.238) 100 氺氺氺氺 氺氺氺 2-((6-環丙基 -5-曱基噻吩駢 [2,3-d]哺咬-4-基）硫）乙酸 B,D A (1.257) 99 -- 氺氺氺 2-((5-溴-6-乙 基噻吩駢 [2,3-d] °密咬-4-基）硫）乙酸 B A (1.408) 100 氺本氺氺 氺氺氺氺 2-((6-溴-7-甲 基11塞吩耕 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸 B A (1.267) 99 氺氺氺氺 -- 2-((5-溴-6-異 丙基D塞吩骄 [2,3-(1]°密咬-4-基）硫）乙酸 B A (1.345) 100 氺氺水.氺 氺氺氺氺 65 201219401 2-((5-氣-6-甲 基噻吩駢 [2,3 -d]嘴咬-4-基）硫）乙酸 B A (1.220) 92 氺承氺氺 氺氺氺氺 2-((6-氯-5-曱 基11塞吩骄 [2,3-d]喊唆-4-基）硫）乙酸 B A (1.265) 100 氺氺氺氺 -- 2-((6,7-二曱基 噻吩駢[3,2-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸 B,D A (1.127) 99 氺氺氺氺 2-((6-環丙基 -7-曱基噻吩駢 [3,2-<1]°密咬-4-基）硫）乙酸 B,D A (1.357) 98 -- -- 2-((6-氣-7-甲 基噻吩餅 [3,2-<5]°密 °定- 4-基）硫）乙酸 B A (1.138) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 66 201219401 2-((7-氣-6-曱 基噻吩駢 [3，2-d] °密咬-4-基）硫）乙酸 B A (1.052) 100 -- -- 2-((5-(二曱 胺）-6-甲基噻 吩駢[2,3-d]嘧 °定-4 -基）硫）乙 酸 B，F A (1.088) 100 -- — 2-((6-氣-7-曱 基11塞吩骄 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸甲 酯 B A (1.983) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((7,9-二甲基 吡啶并 [3’,2':4,5]噻吩 駢[3,2-d]嘧啶 -4-基）硫）乙酸 B A (1.320) 100 -- -- 67 201219401 2-(。比啶并 [3'，2\4,5]噻吩 駢[3,2-d]嘧啶 -4-基硫）乙酸 B A (1.045) 100 -- — 2-(吡啶并. [3’,2':4,5]噻吩 駢[3,2-d]嘧啶 -4-基硫）乙酸 曱酯 B A (1.770) 100 -- -- 2-((5 -氣-6-乙 基噻吩駢 [2，3-d]哺 °定- 4-基）硫）乙酸 B A (1.220) 100 氺氺氺中 2-((5-氣-6-異 丙基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸 I A (1.325) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 68 201219401 2-((6-氣-7-甲 基噻吩駢 [3,2-d]°^ °定-4-基）硫）-N-(2-氰 基乙基）乙醯胺 G A (1.893) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((6-氯-7-甲 基噻吩耕 [3,2-d]°密 σ定-4-基）硫）-Ν-(2-甲 氧基乙基）乙醯 胺 G A (1.937) 100 氺氺氺氺 *氺氺氺 2-((6-氯-7-甲 基噻吩駢 [3,2-<1]哺咬-4-基） 硫）-1^-(2-(。底咬 -1-基）乙基）乙 醯胺 G A (1.663) 100 -- 氺氺氺氺 69 201219401 2-((6-氯-7-甲 基11 塞吩朝· [3，2 - d ]σ密 α定-4 -基）硫）-Ν-(2-曱 基-2 - 口末琳丙 基）乙醯胺 G A (2.123) 100 -- -- 2-((6-氣-7-曱 基噻吩耕 [3，2-d]鳴咬-4-基）硫）-N-(2-甲 基-2 - (D比洛咬 -1-基）丙基）乙 醯胺 G A (1.638) 99 -- -- 2-((5-氯-6-甲 基噻吩耕 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(2-曱 氧基乙基）乙醯 胺 G A (1.687) 96 -- — 201219401 2-((5-氣-6-曱 基σ塞吩朝· [2,3-d]嘧啶-4-基） 硫）-N-(2-(哌啶 -1-基）乙基）乙 醯胺 G A (1.658) 100 -- -- 2-((5-氯-6-曱 基塞吩騎 [2,3 -d]嘴咬-4-基）硫）-N-(2-氰 基乙基）乙醯胺 G A (1.805) 100 氺氺本氺 氺氺氺* 2-((6-氯-7-甲 基π塞吩骄 [3,2-d]喷咬-4-基）硫）-N-乙基 乙醯胺 G A (2.008) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((6-氯-7-甲 基11塞吩耕 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）-N，N-二 曱基乙醯胺 G A (2.020) 100 -- -- 71 201219401 2-((6-氣-7-曱 基嗟吩餅 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(2 - 口 末啉乙基）乙醯 胺 G A (1.818) 98 — -- 2-((6-氯-7-曱 基售吩联 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）_N-丙基 乙醯胺 G A (2.150) 99 -- -- 2-((5-氯-6-曱 基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-乙基 乙醯胺 G A (1.918) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 72 201219401 2-((5-氣-6-曱 基1ί吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(2-曱 基- 2- (旅咬-1-基）丙基）乙醯 胺 G A (1.580) 99 -- -- 2-((5-氣-6-曱 基噻吩骄 [2,3-d] °密咬-4-基）硫）_Ν-丙基 乙醯胺 G A (2.105) 100 氺氺氺氺 — 2-((5-氣-6-曱 基噻吩駢 [2，3 - d ]痛咬-4-基）硫）-Ν-(2·-口 末啉乙基）乙醯 胺 G A (1.778) 99 氺氺氺氺 氺氺氺* 73 201219401 2-((5-氣-6-甲 基α塞吩餅 [2,3 -d],咬-4-基）硫）-Ν,Ν-二 甲基乙醯胺 G A (2.523) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5-氯-6-甲 基噻吩.駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(4-甲 氧基苄基）乙醯 胺 G A (2.172) 100 — -- 2-((5-氣-6-曱 基嗟吩骄 [2,3-(1]0¾ 咬-4- 基）硫） 啶-4-基曱基） 乙醯胺 G A (1.768) 99 氺氺氺氺 -- 74 201219401 2-((5-氯-6-甲 基噻吩駢 [2，3 - d ] °密咬-4 -基）硫）-N-(噻 吩-2-基甲基） 乙醯胺 G A (2.155) 100 氺氺*氺 -- 2-((5-氣-6-曱 基噻吩駢 [2，3 - d ] °密 °定-4 -基） 硫）-Ν-(2-(4-曱 基噻唑-2-基） 乙基）乙醯胺 G A (1.968) 99 氺*氺氺 -- 2-((6-氯-7-甲 基噻吩駢 [3,2-d] °密咬-4-基）硫）-1-(4，4- G A (2.320) 100 二氟哌啶-1 - 基）乙酮 75 201219401 Ν-(2-(1Η-。比唑 -4-基）乙 基）-2-((5-氣 -6 -甲基。塞吩騎 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙醯胺 G A (1.712) 100 氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5-氣-6-曱 基噻吩餅 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(4-氰 基苄基）乙醯胺 G A (2.107) 100 -- -- 2-((5-氯-6-曱 基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(4 -氣 苄基）乙醯胺 G A (2.203) 100 -- -- 2-((5-氣-6-甲 基噻吩駢 [2,3-<^]°密 °定-4-基）硫）-Ν-(π夫 喃-2-基甲基） 乙醯胺 G A (2.083) 100 氺氺氺氺 氺氺氺氺 76 201219401 2-((6-氣-7-甲 基。塞吩騎 [3，2-d] 〇密。定-4-基）硫）-Ν-(4-曱 氧基苄基）乙醯 胺 G A (2.257) 99 -- -- 2-((6-氣-7-曱 基嗟吩耕 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(4-氟 苄基）乙醯胺 G A (1.970) 97 -- — 2-((6-氣-7-曱 基噻吩駢 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫） 吩-2-基曱基） 乙醯胺 G A (2.247) 100 -- 氺氺氺氺 77 201219401 2-(2-((6-氯-7-曱基嗟吩餅 [3,2-(1]°密咬-4-基）硫）乙醯）異 吲哚琳-4 -曱酸 甲酯 G A (2.420) 100 -- — Ν-(2-(1Η-咪唑 -4-基）乙 基）-2-((5-氣 -6-甲基嗟吩骄 [2,3-d]喂唆-4-基）硫）乙醯胺 G A (1.532) 100 氺氺氺氺 -- 2-((5-氣-6-甲 基α塞吩餅 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(氰 基曱基）乙醯胺 G A (1.930) 100 氺jj«氺氺 氺氺氺氺 2-((6-(三級丁 基）噻吩駢 [3,2-d]°f °定-4- 基）硫）乙酸甲 酯 B A (2.375) 100 -- 78 201219401 2-((6-氰基-7-甲基嗟吩騎 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸曱 酉旨 • Β (2.498) 97 -- 氺氺本氺 2-((6-氰基-7-曱基噻吩駢 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸 Μ A (1.330) 96 -- 氺氺氺氺 2-((6-氯-7-甲 基噻吩駢 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(氰 基曱基）乙醯胺 G A (2.003) 99 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5-氯-6-曱 基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸異 丙酯 Η A (2.587) 100 氺氺氺氺 79 201219401 2-((6-氣-7-甲 基塞吩餅 [3,2-d]°密咬-4-基）硫）-N-(l-曱 基旅。定-4 -基） 乙醯胺 G A (1.605) 100 -- -- 2-((5-氣-6-曱 基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-1 -(4-異 丙基派口井-1 · 基）乙酮 G A (1.947) 100 -- -- 2-((5-氣-6-甲 基噻吩駢 [2,3-d]嘧啶-4-基）硫）-N-(l-甲 基哌啶-4-基） 乙醯胺 G A (1.557) 99 — 201219401 2-(2-((5-氣-6-曱基噻吩駢 [2,3-d]11 密咬-4-基）硫）-N-曱基 乙醯胺）乙酸 G，B A (1.648) 100 -- 氺氺氺* 2-((5-氯-6-甲 基噻吩駢 [2,3-d]嘴咬-4-基）硫）-N-(曱 基續酸）乙酿胺 G A (1.522) 100 -- 氺氺本本 2-((6-氣-7-環 丙基噻吩駢 [3,2-<1]°密唆-4-基）硫）乙酸 J A (1.927) 97 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((5-氣-6-甲 基嗟吩联 [2,3-<1]°密。定-4-基）硫）-N-(l -經 丙烧-2-基）乙 醯胺 G B (2.543) 100 -- I : 丰本本 81 201219401 2-((5-氣-6-曱 基n塞吩騎 [2,3-d]°密咬-4-基）硫）-N-(l，3- G A (1.623) 99 一經丙烧-2 - 基）乙醯胺 (S)-l-(2-((5-氣 -6-甲基噻吩駢 [2,3-(1]嘴 °定- 4-基）硫）乙醯）吡 咯啶-2-甲酸甲 酯 G A (2.173) 99 -- — 2-((5-氣-6-丙 基噻吩骈 [2,3-d]嘴咬-4-基）硫）乙酸 B A (1.452) 97 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-((6-氣-7-環 丙基D塞吩餅 [3，2-d]喊咬-4-基）硫）乙酸甲 酯 J A (2.858) 100 氺氺氺氺 ： 82 201219401 2-((7-環丙基 -6-甲基噻吩駢 [3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸 K A (1.305) 100 氺氺氺氺 氺本氺氺 2-((3-氯-2-曱 基11塞吩耕 [3,2-c]吡啶-4-基）硫）乙酸 -- -- -- — 氺氺氺 2-(7-環丙基 -6-(三氟曱基） 噻吩駢[3,2-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸 J,P A (1.665) 96 氺氺氺氺 氺氺氺氺 2-(7-環丙基 -6-(三氟甲基） 噻吩駢[3,2-d] 嘧啶-4-基）硫） 乙酸酯 J,p A (2.495) 95 氺氺氺氺 氺氺氺氺 83 201219401 2.21· 2-((5,6-二甲基噻吩駢[2,34]嘧啶_4_基）硫）乙 酸的藥理學

第一研究中，藉由在第10.7周大時開始用化合物治療 F1雄性雜交（129XC57)小鼠達25天，來確定2_((5,6_二 甲基°塞吩耕[2，3 - d ]從。定-4 -基）硫）乙酸的活體内效應。在 動物的飲食中施加化合物。應用四組小鼠：對照（N = 12) ; 25 mg/kg 的化合物（N = 9) ; 83 mg/kg 的化合物（N = 9);與額外組’其中在飲食中施加Li2C03 (〇.ι%)(Ν = 9>。 利用Scanco μ(：Τ40來測量中段股骨的皮質厚度。相較 於對照組，在化合物兩個劑量上均發現皮質骨厚度的增 加：25 mg/kg 的 9% (ρ = 〇.〇4);與 83 mg/kg 的 8% (ρ = 0.07)。至於Li/O3組’發現皮質骨厚度減少2% (ρ = 0.90)。 第二研究中，一樣藉由在第10.7周大時開始用化合物 治療F1雄性雜交（129 X C57)小鼠達25天，來確定 2-((5，6-二甲基噻吩駢[2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸的活體内 效應。在動物的飲食中施加化合物。應用四組小鼠：對 照（N = 12) ; 1 mg/kg 的化合物（N = 9) ; 8 mg/kg 的化合 物（N = 9);與24 mg/kg的化合物（N = 9)。如第5圖所示， 用8 mg/kg處理的小鼠呈現中段股骨皮質厚度增加4% (p 84 201219401 =〇·19)，而用24 mg/kg處理的小 度增加60/〇 (p = 0.05)。 段股骨皮質厚 d】t啶-4-基）硫）乙 2.22. 2-((5-氯-6-甲基噻吩駢[2,3 酸的藥理學

在F1SCher 344印巢切除大鼠中研究2_((%氯冬甲基4 ㈣2,3-物定-4_基）硫）乙酸的藥理學。大鼠在第⑴ 46周大時進㈣巢切除或佯料術，並在純用化合在 開始37或40周的治療，到第83周大。 應用四個治療組：佯作手術，給^對照飲食（n = i4); 佯作手術，給予化合物（Ν= 12) ; 〇νχ_手術給予對照 飲食（Ν= 14);與0VX_手術’給予化合物（Ν= 12)。藉 由將化合物併入大鼠飲食中來給藥：每公斤飲食中〇 W 克化合物。目標劑量為3〇 mg/kg。服藥存在五周。 藉由microCT利用Scanco μ(：Τ40來測定骨質與骨路結 構。如第ό圖所示，治療增加了佯作與〇νχ兩組的中段 股骨皮質骨厚度：完整大鼠的3%與卵巢切除大鼠的 5%。佯作對照與〇νχ對照的皮質骨厚度之間的差異為 -13%。二因子anOVA值為：OVX手術的ρ < 0.001 ;治 療的ρ = 〇.〇5;而互動的ρ = 〇·65。 85 201219401 如第7圖所示，治療亦增加佯作與〇νχ兩組的中段脛 骨皮質厚度：完整大鼠的2%與卵巢切除大鼠的5%。二 因子ANOVA值為：OVX手術的ρ = 〇 79 ;治療的ρ = 0.05 ;而互動的ρ = 〇 52。 2*23* 2_((5·氣異丙基噻吩駢[2,3-d]嘧啶-4-基）硫） 乙酸的藥理學

藉由在第8 · 7周大時開始用化合物治療ρ 1雄性雜交 (129 X C57)小鼠達25天，來確定2-((5-氣-6-異丙基噻吩 駢[2,3-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸的活體内效應。藉由管餵每 曰施加兩次化合物（載體=水中的0.1% Tween 80)。應用 四組小鼠：對照（N = 13) ; 5 mg/kg的化合物（N = 13); 1 〇 mg/kg 的化合物（n = 13); 1 5 mg/kg 的化合物（N = 13)。 藉由microCT (Scanco μϋΤ40)來測量中段股骨的皮質 厚度°相較於對照組，在所有劑量上均發現皮質骨厚度 的增加：5 mg/kg 的 6% (ρ = 0.002) ; 10 mg/kg 的 5% (ρ = 0.007);與 15 mg/kg 的 6% (ρ = 0.001)。 86 201219401 2.24. 2-((6-氯-7-環丙基噻吩駢[3,2_d丨嘧啶-4-基）硫> 乙酸的藥理學

藉由在第8 · 7周大時開始用化合物治療f 1雄性雜交 (129 X C5 7)小鼠達25天，來確定2_((6_氯_7_環丙基噻吩 駢[3，2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸的活體内效應。藉由管餵每 曰施加化合物（載體=水中的0.1〇/〇 Tween 80)。應用四組 小鼠：對照（N = 13); 3 mg/kg 的化合物（N = 13); 10 mg/kg 的化合物（N = 13) ; 30 mg/kg的化合物（N = 13)。 藉由microCT (Scanco μ(：Τ40)來測量中段股骨的皮質 厚度。如第8圖所示’相較於對照組，在所有劑量上均 發現皮質骨厚度的增加：3 mg/kg的7% (ρ = 0.003) ; 10 mg/kg 的 10% (p < 0.001);與 30 mg/kg 的 13〇/〇 (p < 〇 〇〇1)。 2.25. 2-((6-氣·7-曱基嘆吩耕[3,2-d]鳴唆_4_基）琉）乙 酸的藥理學

87 201219401 第一實驗中，藉由在第54周大時開始用化合物治療 F1雄性雜交（129 X C57)小鼠達25天，來確定2_((6氣、7 甲基噻吩駢[3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸的活體内效應。藉 由管餵每日施加化合物（載體=水中的〇.1〇/0 Tween 80)。應用三組小鼠：對照（N = 10) ; 10 mg/kg的化合物 (N=l〇);與1〇〇 mg/kg的化合物（N = 1 〇)。相較於對照 組’在兩個劑量上發現中段股骨的皮質骨厚度的增加（由 microCT (Scanco μΟΤ40)所測量）：1〇 mg/kg 的 6% (p = 0.06);與 1〇〇 mg/kg 的 7% (p = 0.03)。此實驗中，如同一 般實例般，利用各個小鼠的右股骨來取得中段股骨的皮 質厚度數據。此實驗中’ 10 mg/kg劑量組的結果包括一 個小鼠的左股骨測量’該小鼠的右股骨測量為異常的。 第二實驗中’藉由在第8.1周大時開始用化合物治療 F1雄性雜交〇29 xC57)小鼠達7天與18天，來確定2_((6_ 氣-7-曱基噻吩駢[3，2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸的活體内效 應。在動物飲食中施加化合物。應用三組小鼠：對照（N = 9) ; 34 mg/kg的化合物進行7天（N = 9);與34 mg/kg的 • 化合物進行18天（N = 9)。如第9圖所示，相較於對照組， . 在兩個治療組上發現中段股骨的皮質骨厚度的增加：7 天治療後的6%(p = 0.13);與18天治療後的1〇%(p< 0.01) 〇 將所有列示於上的參考資料（例如，專利與專利申請案） 的全文以引用之方式併入本文中。 88 201219401 【圖式簡單說明】 货Λ +贫啊的某些態樣。 第1圖提供背板同型人 典缸财Α 主D子基因剔除小鼠（「ΗΟΜ」）與 月板野生型的那些同窩 由胃ρ择 。J鼠（WT」）中不同骨頭位置的 皮質异度之間差異的圖解表示。 第2圖提供背板同型合子與異型合子(「丽」)基因剔 T小鼠兩者相對於背板野生型同寓小鼠觀察到的皮質骨 厚度的增加的圖解表示。 第®提供在雄性背板同型合子與異型合子基因剔除 小鼠與雄性背板野生型同离小鼠的㈣上執行的股骨斷 裂強度與脊椎骨壓迫試驗取得之結果的圖解表示。 第4圖提供在雌性背板同型合子與異型合子基因剔除 小鼠與雌性背板野生型同窩小鼠的骨頭上執行的股骨斷 裂強度與脊椎骨壓迫試驗取得之結果的圖解表示。 第5圖-提供用i mg/kg、8 mg/kg與μ mg/kg的背板抑 制劑2-((5,6-二曱基噻吩駢[2,3_d]嘧啶_4_基)硫)乙酸對 F1雄性雜交（129 x C57)小鼠給藥25天後取得之中段股 骨皮質厚度測量的圖解表示。 第6圖提供用2_((5_氣_6_甲基噻吩駢[2,3_勾嘧啶_4_基） 硫）乙酸對Fischer 344卵巢切除大鼠給藥5周後取得之 中段股骨皮質厚度測量的圖解表示，其中「佯作對照」 代表大取並未切除卵巢且未施加化合物；「佯作加上化合 89 201219401 大乳並未切除卵巢但卻施加化合物；「〇νχ對

’、’、」代表大氣進行卵巢切除但卻未施加化合物：而「OVX 加上化合物，#主0 J代表大鼠進行卵巢切除且施加化合物。 第7圖提供與第6圖相關之相同實驗取得之中段脛骨 皮質厚度測量的圖解表示。 第8圖提供用3 mg/kg、10 mg/kg與30 mg/kg的背板 抑制劑2-((6_氯_7_環丙基噻吩駢[3,2_d]嘧啶_4_基）硫）乙 酸對F1雄性雜交（129 X C57)小鼠給藥25天後取得之中 段股骨皮質厚度測量的圖解表示。 第9圖提供用34 mg/kg的背板抑制劑2-((6-氯-7-曱基 售吩駢[3,2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸對F1雄性雜交（129 X C57)小鼠給藥7天與1 8天後取得之中段股骨皮質厚度測 量的圖解表示。 【主要元件符號說明】 90

Claims (1)

1. 201219401 七、申請專利範圍： 1. 一種式：

   的化合物或該化合物之一藥物可接受鹽類，其中： Rib為氫或任選取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環； Κ·2為氫、鹵基、 -C02R2A、-C(0)N(R2A)2、-SR2A、_〇r2a 或-N(R2A)2 或任選 取代的院基、芳基、雜烧基或雜環； 各個rza獨立地為氫、任選取代的烷基、芳基、雜院 基或雜環； R3為乳、_基、氛基、 co2R3A、-C(0)N(R3A)2、-SR3A、-〇R3A、-N(R3A)2、任選 取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環； 各個Rsa獨立地為氫、任選取代的烷基、芳基、雜烷 基或雜環； R4為氫、鹵基或任選取代的烧基、芳基、雜坑基或雜 環： 91 201219401 R5為氫、鹵基、 -C02R5a、-C(0)N(R5a)2、-SR5A、_〇R5A、-N(R5A)2 或任選 取代的烷基、芳基、雜烷基或雜環； 各個R_1A獨立地為鼠、任選取代的炫基、芳基、雜烧 基或雜環；及 η為0 ' 1或2 ; 其中「任選取代的」意指由一或更多下列任選取代： 烷氧基 '烷基、胺基（包括烷胺基、二烷胺基）、芳基、 羧酸、氰基、_基、雜環或羥基。 2. 如請求項1所述之化合物，其中rib為氫或任選 取代的烷基或芳基。 3. 如請求項丨所述之化合物’其中K·2為氫或任選取 代的烷基。 4· 如請求項1所述之化合物，其中R3為任選取代的 燒基或產基。 92 1 · 如請求項4戶斤述之化合物’其中為氯。 述之化合物，其中為任選鹵化烧 201219401 6. 如睛求項4所' 基。 7. 如請求項1所述之化合物，: 8. 如請求項7所述之化合物， 9. 如請求項丨所述之化合物， 0丫0rib

   10. 如請求項9所述之化合物 取代的烷基或芳基。 11. 如請求項9所述之化合物 代的烷基。 12. 如請求項9所述之化合物 烷基或自基。 中R5為燒基或鹵基。 其中RS為低級烷基。 該化合物為式： 其中1為氫或任選 化為氫或任選取 3為任選取代的 93 201219401 13 ·如請求項丨2所述之化合物’其中R3為氣。 14. 如請求項丨2所述之化合物，其中&為任選鹵化 烷基。 15. 如請求項9所述之化合物，其中&為烧基或鹵基。 16. 如請求項1 5所述之化合物’其中為低級烷基。 1 7.如請求項1所述之化合物，該化合物為2-((6-氣-7-環丙基噻吩駢[3，2-d]嘧啶-4-基）硫）乙酸或該化合物之一藥 物可接受鹽類》 .如請求項1所述之化合物， 基-6-(三氟甲基）噻吩駢[3,2_d]嘧啶 物之一藥物可接受鹽類。 ’該化合物為2-(7-環丙 4-基）硫）乙酸或該化合 19. 一種藥物組合物，包與 藥物可接受的賦形劑或稀釋劑。 包括請求項j 之一化合物與一 94 201219401 20 藥物用 疾病或 .請求項1之一化合物用於製備一藥物的應用，該 於治療或管理一與骨損失（例如，骨質疏鬆）相關之 異常。 95