TW200413378A

TW200413378A - Novel imidazopyrazines as cyclin dependent kinase inhibitors

Info

Publication number: TW200413378A
Application number: TW092125979A
Authority: TW
Inventors: Kamil Paruch; Timothy J Guzi; Michael P Dwyer; Ronald J Doll; Viyyoor M Girijavallabhan; K Mallams Alan
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 2002-09-23
Filing date: 2003-09-19
Publication date: 2004-08-01
Also published as: AU2003272476A1; NZ538685A; MXPA05003120A; JP4799864B2; PE20050081A1; CA2499756C; ATE377600T1; KR20050057520A; CN1694886A; ES2293015T3; CA2499756A1; ZA200502375B; AU2003272476B2; US7432265B2; US6919341B2; AR041347A1; EP1543008A1; US20050130980A1; HK1072056A1; WO2004026877A1

Description

玫、發明說明：【發明所屬之技術領域】 X月係關於用作蛋白激酶抑制劑(如例如週期素依賴性激酶抑制劑、以促細胞分裂劑活化之蛋白激酶 (MAPK/ERK)、糖原合成酶激酶训及類似物卜米唾并[，2 a]比秦化合物、包括化合物之醫藥組合物、以及使用化合物和組合物治療疾病的方法，如例如癌症 '發炎、，節炎、病毒疾病、神經變性疾病（如阿兹海默氏病）、心血 s疾病及霉菌性疾病之類的疾病。本申請案比在細2年9 月23日提出申請之美國臨時申請序案第60/412,997號優先提出。【先前技術】蛋白激酶抑制劑包括如例如週期素依賴性激酶抑制劑 ( )以促細胞分裂劑活化之蛋白激酶（MAPK/ERK)、糖原合成酶激酶3(GSK3p)及類似物之類的激酶。週期素依賴性激酶係絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶，其係在細胞循環及細胞增殖之後的起動力。個別的CDK (如CDIU、CDK2、CDK3、 CDK4、CDK5、咖6和CDK7、隱8及類似物）在細胞循環進度中執行不同的角&，並可以分類成或〇1、WG2m相酵素。不受控制的增殖作用係癌症細胞的標記，並在許多重要的固體腫瘤中經常發生不規則的CDK機能。CDK2及 CDK4具有特別的利害關係，因為彼等在各種廣泛的人類癌症中常常有不規則的活性。CDK2活性係經由細胞循環的Gl 進展至S相所必要的，以及CDK2係G1檢查點的重要組成之

O:\87\87869.DOC 200413378 一。檢查點具有維持適當的細胞循環事件的序列及允許細胞回應傷害或增殖信號，而且喪失在癌症細胞中適當的檢查點控制會助長腫瘤生成作用。CDK2路徑會影響腫瘤抑制機能（例如，p52、RB及p27)及致癌基因活化（週期素E)程度的腫瘤生成作用。許多報告已證明輔助活化劑，週期素E 及CDK2之抑制劑（p27)兩者分別在乳癌、直腸癌、非小細胞肺癌、胃癌、攝護腺癌、膀胱癌、非何杰金氏淋巴瘤（non-Hodgkin’s)、卵巢癌及其它癌症中或過度表現或表現不足。已證明彼等不同的表現與增加的CDK2活性值及差的總存活率有相互的關係。該觀察係以CDK2及其調整路徑為多年發展的強制標的，已在文獻中提出以許多腺苷5-三磷酸（ATP)競爭性小有機分子與肽作為有效的癌症治療的CDK抑制劑。美國專利第6,413,974號第1段第23行至第15段第10行提供各種 CDK的完整說明及彼等與各種癌症型式的相互關係。已知CDK抑制劑。例如，氟維皮瑞多（flavopiridol)(式 I)係目前正在進行人類臨床試驗的非選擇性CDK抑制劑。Α·Μ·山德若威茲（Sanderowicz)等人之J. Clin· Oncol.(1998)M，2986-2999。 ch3

OH Ο

O:\87\87869.DOC 200413378 其它已知的CDK抑制劑包括例如歐羅茂辛（〇1〇m〇ucine)(j· 維斯理（Vesely)等人之 Eur. J. Biochem.?( 1 994)224,771 - 786) 及若斯可維提（roscovitine)(I.梅傑爾（Meijer)等人之Eur. J· Biochem.，（1997)Ml，527-536)。U.S. 6，1〇7,305 說明作為 CDK抑制劑特定的吡唑并[3,4-b]吡啶化合物。所有以’305 專利例證的化合物具有式II :

K.S·金姆（Kim)等人之 J. Med. Chem. 41(2002)3905-3927 及WO 02/10162揭示作為CDK抑制劑特定的胺基噻唑化合物。鲁已知吡唑并嘧啶。例如，WO92/18504、W002/50079、 . W095/35298、W002/40485、EP94304104.6、EP0628559(相當於美國專利第5,602，136號、第5,602，137號及第5,571，813 號）、U.S. 6,383,790、Chem. Pharm. Bull.，（1999)iZ 928、J.

Med. Chem.，（1977)^l，296、J. Med. Chem.，（1976)ii517及 Chem· Pharm. Bull.，（1962)M 620揭示各種吡唑并嘧啶。對用於治療與CDK有關連之疾病及異常的新化合物、調

O:\87\87869.DOC 200413378 配物、治療及治療法有需求。治療或預防或改善這些疾病及【發明内容】因此本發明的目的係提供在異常有用的化合物。在本發明的許夕具體實施例中，其係提供—種作素依賴性激酶抑制劑之❹并π，2_啦嗪化合物的新賴類別、製備這些化合物的方法、包含一或多種這些化合物之醫藥組合物、製備含有一或多種這些化合物之醫藥調配物的方法、以及使用這些化合物或醫藥組合物治療、預防、抑制或改善一或多種與CDK有關連之疾病的方法。在本發明的一個觀點中，其係揭示一種化合物或該化合物在醫藥上可接受之鹽類或媒合物，該化合物具有以式m 所示之通式結構：

r3，n、h

式III 其中： R係選自由Η、鹵素、芳基、雜芳基、環烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基、烯基、炔基、_C(0)R7、

O:\87\87869.DOC -9- 200413378 所組成的群組，其中每一個該芳基、雜芳基、環燒基、芳烧基、稀基、雜環基及其結構係如以上在R中所示之雜環其部份，可以未經取代，或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、燒基、環烧基、CF3、CN、-OCF3、-OR6、-C(0)R7、-NR5R6、-C(〇2)r6、 -C(0)NR5R6、-(CHR5)nOR6、-SR6、-S(02)R7、-S(02)NR5r6、 -N(R5)S(02)R7、-N(R5)C(0)R7及-N(R5)C(0)NR5r6所組成的群組； R1係Η、鹵素或烷基； R2係選自由R9、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳燒基、雜環基、烯基、炔基、環烷基、環烷基烷基、雜環烷基、-CF3、-C(0)R7、以1-6個可以相同或不相同的反9基取代 N—R8 之烷基所組成的群組，每一個R9係獨立選自丨一(CH丄一N/ Λ \/(CH2)m^〇N^R8 、j一aryl—^R8 及 ,N—R8· 其中每一個該芳基、雜芳基、環烷基、芳烷基及雜環基可以未經取代或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代’母一部份係獨立選自由鹵素、烧基、環烧基、c f、 CN、-OCF3、崎OR6、(：(〇<、_NR5R6、c(〇2)r6、c⑼取5尺36、 -sr6、-s(o2)r7、-s(o2)nr5r6、-n(r5)s(〇2)r7、n(r5)c(〇)r7 及-n(r5)c(o)nr5r6所組成的群組； R3係選自由H、芳基、雜芳基、雜環基、-(CHR5^芳基、 O:\87\87869.DOC -10- 200413378 -(CHR5)n-雜芳基' -(CHR5)n-環烷基、-(cHR5)n-雜環烷基、 -(CHR5)n-CH(芳基）2、-(CHR5)n—、 -(CHR5)n_N^N_R8 、 -(CHR5)n-OR6、-S(02)R6、-C(〇)R6、-S(02)NR5R6、-C(0)0R6、 -C(0)NR5R6、環烷基、-CH(芳基）2、-CH(雜芳基）2、-(CH2)m-NR8 及' \_/N—R 所組成的群組，其中每一個該芳基、雜芳基及雜環基可經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由齒素、烷基、芳基、環烷基、CF3、CN、-〇CF3、-OR5、-NR5R6、-C(02)R5、 -C(0)NR5R6、-SR6、-s(o2)r6、-S(〇2)NR5R6、-n(r5)s(o2)r7、 -n(r5)c(o)r7 及-n(r5)c(0)nr5r6所組成的群組； R5係H或烷基； R6係選自由Η、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基所組成的群組，其中每一個該烷基、雜芳烷基、芳基、雜芳基及芳烷基可以未經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由_素、烷基、芳基、環烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、-CH2OR5、 -C(02)R5、-C(0)NR5R6、-SR6、-S(02)R7、-S(〇2)NR5R6、 -n(r5)s(o2)r7、-N(R5)C(0)R7及-N(R5)C(0)NR5R6所組成的群組； R7係選自由烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基所 O:\87\87869.DOC -11 - 200413378 組成的群組’其中母一個5亥燒基、雜芳烧基、芳基、雜芳基及芳烷基可以未經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由卣素、炫基、芳基、環烧基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、-CH2OR5、 -C(02)R5、-C(0)NR5R6、-SR6、_S(〇2)r7、_s(〇2)nr5r6、 -n(r5)s(02)r7、-n(r5)c(o)r7及-N(R5)c(0)NR5RV/t 組成的群組； R8係選自由 R6、-C(0)NR5R6、-S(〇2)NR5R6、_c(〇)r7、 -C(〇2)R6、-S(〇2)R7及-(CH2)-芳基所組成的群組； R9係選自由鹵素、cn、nr5r6、_c(〇2)r6、_c(0)nr5r6、_〇r6、 -C(0)R7、-SR6、_S(02)R7、_S(〇2)NR5R6、n(r5)s(〇2)r7、 -N(R5)C(0)R7及-N(R5)c(〇)NR5RV;f 組成的群組； m係0至4 ; η係1-4 ;及 ρ係 0-3。可將式III化合物用作蛋白激酶抑制劑，並可用於治療及預防增殖性疾病，例如，癌症、發炎及關節炎。也可用於治療神經變性疾病（如阿兹海默氏病）、心血管疾病、病毒疾病及霉菌性疾病。【實施方式】在本發明的—個具體實施例巾，其係揭#以結構式m代表的咪唑并Ua]吡嗪化合物、其纟醫藥上可接受之鹽或媒合物’I中各種部份係'如以上所述。在另一個具體實施例中，R係選自由H、齒素、芳基、雜

O:\87\87869.DOC -12- 200413378 方基、知基及-C (Ο) R所組成的群組，其中每一個該芳基及亦隹务基可以未經取代或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由_素、烧基、 CF3、CN、-0CF3及-OR6所組成的群組。在另一個具體實施例中，Ri係Η或低碳烷基。在另一個具體實施例中，R2係選自由鹵素、烷基、芳基、雜芳基、烯基及-C(0)R7所組成的群組，其中每一個該烷基、芳基及雜芳基可以未經取代或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、CF3、CN、-〇CF3及-OR6所組成的群組。在另一個具體實施例中，R3係選自、芳基、雜芳基、 (CHR )n 芳基、-(CHR )n-雜芳基、(cHR5)n_〇R6、、

環烷基、-CH(芳基）2、-(CHRV

及 (CH2)n 一 R8 所組成的群組，其中每一個需要以一或多個可以相同或係獨立選自由鹵素、烷基、 -S(〇2)R6所組成的群組。 5亥芳基及雜芳基可經取代或視不相同的部份取代，每一部份芳基、CF3、CN、-C(02)R5及，111係 0至 2。，η係1至3。，尺係選自由Η、苯基及雜芳基所在另一個具體實施例中在另一個具體實施例中在額外的具體實施例中組成的群組。

O:\87\87869.DOC -13- 200413378 在額外的具體實施例中，R1係H、Br或曱基。在額外的具體實施例中，R2係F、Cl、Br、I、芳基、稀基、雜芳基或CF3。在額外的具體實施例中，R3係苯基、（°比°定-2-基）甲基土 I 口比 σ疋-3-基）甲基、比唆基）甲基、2-[(0比σ定_3_基）]乙基、2·[(吧啶_4_基）]乙基、2-基丙醇、3-基丙基-1-吡咯垸綱咬 -C(〇)CH3，其中該π比啶基可以未經取代或視需要以—咬多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由 F、Cl、Br、CF3、低碳烧基、甲氧基及CN所組成的群組。在額外的具體實施例中，R5係Η。在額外的具體實施例中，m係〇。在額外的具體實施例中，η係1或2。將本發明的化合物群組展示在表1中。

O:\87\87869.DOC 14- 200413378 表1

-15-

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O:\87\87869.DOC -16 - 200413378

以另一個具體實施例揭示以下化學式之化合物：

O:\87\87869.DOC

200413378

應瞭解的是如本文及在整個揭示内容所使用的以下術語具有以下的意義，除非有其它另外的指定：以’’病患’’同時包括人類及動物。以哺乳類’’代表人類及其它哺乳類動物。以’’烧基’’代表可以係直鏈或支鏈及包含約1至約2〇個在鍵中的碳原子之脂肪族烴基。較佳的烷基包括約1至約i 2 個在鏈中的碳原子。更佳的烷基包括約1至約6個在鏈中的碳原子。以支鏈代表以一或多個低碳烷基（如甲基、乙基或丙基）附接於直鏈烷基。以，，低碳烷基”代表具有約1至約6個在鏈中的碳原子之基，其可以係直鏈或支鏈。以”經取代之烧基術语代表可將烧基以一或多個可以相同或不相同的取代基取代，每一個取代基係獨立選自由鹵基、烷基、芳基、環烷基、氰基、羥基、烷氧基、烷硫基、胺基、-NH(烷 O:\87\87869.DOC -18- 200413378 基）、-NH(垓烷基）、-N(烷基h、羧基及_c(〇)〇_烷基所組成的群組。適合的烷基的非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基及特丁基。以”炔基”代表包括至少一個碳_碳參鍵和其可以係直鏈或支鏈及包含約2至約15個在鏈中的碳原子之脂肪族烴基。較佳的炔基具有約2至約12個在鏈中的碳原子，並以約 2至約4個在鏈中的碳原子更佳。以支鏈代表以__或多個低碳烧基（如甲基、乙基或丙基）附接於直鍵块基。以”低碳快基”代表約2至約6個在鏈中的碳原子，其可以係直鏈或支鍵。適合的块基的非限制性實例包括乙快基、丙快基、2_ 丁炔基及3_甲基T絲。以"經取代之絲"術語代表可將快基以一或多個可以相同或不相同的取代基取代，每一個取代基係獨立選自由烧基、芳基及環絲所組成的群組。以"芳基，，代表含有約6至約14個碳原子之芳族單環或多環系環系統，以約6至約1〇個碳原子較佳。可將芳基視需要以-或多個可以相同或不相同及如本文定義之”環系統取代基”取代。適合的芳基的非限制性實例包括苯基及蔡基。户1雜// "代表含有約5至約14個環原子之芳族單環或多環系環系統，以約5至約1〇個環原子較佳環原子係除了叙相元素，例如，單獨或組合的氮Γ 或硫。較佳的雜芳基包括約5至約_環原子。可將”雜芳基" ’見需要以一或多個可以相同或不相同及如本文定義之％系統取代基，，取代。在雜芳基根命名之前附加 ^ 或硫雜分別代表至少-個氮、氧或疏原子以環原子存在風雜

O:\87\87869.DOC -19- 200413378 可將雜芳基的氮原子視需要氧化成對應之N-氧化物。適合的雜芳基的非限制性實例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻嗯基、嘧啶基、吡啶酮（包括以N-取代之吡啶酮）、異噁 σ坐基、異嗟α坐基、σ惡唾基、嘆σ坐基、π比嗤基、吱咱基、tr比略基、σ比啥基、三唾基、1，2，4 -σ塞二σ坐基、ϋ比嗪基、噠嗓基、啥°惡琳基、酜嗪基、經υ朵基、味tr坐并[1，2-a] °比唆基、口米唾并[2,1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮雜吲哚基、苯并咪唾基、苯并嗟嗯基、喧琳基、咪唾基、σ塞嗯并σ比唆基、喹唑啉基、噻嗯并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡唆基、異喹啉基、苯并氮雜吲哚基、H4 —三嗪基、苯并噻唾基及類似物。”雜芳基”術語也表示部份飽和雜芳基部份’如例如四氫異喹啉基、四氫喹啉基及類似物。以”芳烷基”或”芳基烷基”代表其中芳基及烷基係如先前所述之芳基-烷基-。較佳的芳烷基包含低碳烷基。適合的芳烷基的非限制性實例包括苄基、2_苯乙基及萘甲基。與母體部份係經由烷基結合。以”烷基芳基”代表其中烷基及芳基係如先前所述之烷基芳基。較佳的烷基芳基包含低碳烷基。適合的烷基芳基的非限制性實例包括甲苯基。與母體部份係經由芳基結合。以％烷基代表含有約3至約1〇個碳原子之非芳族單-或多環系環系統，以約5至約1〇個碳原子較佳。較佳的環烷基環包括約5至約7個環原子。可將環絲視需要以-或多個相同或不相同及如本文定義之，，環系統取代& "取代。適合的單環系環烧基的非限制性實例包括環丙基、環戊基、環

O:\87\87869.DOC -20 - 200413378 己基、環庚基及類似物。適合的多環系環院基的非限制性貫例包括1 -萘院基、降冰片烧基、金鋼烧基及類似物與部份飽和物種，如例如茚滿基、四氫萘基及類似物。以’’鹵素π代表氟、氯、溴或碘。以’’環系統取代基’’代表附接於芳族或非芳族環系統之取代基，以其例如置換在環系統上可用的氫。環系統取代基可以相同或不相同，每一個係獨立選自由烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、烷基芳基、雜芳烷基、雜芳烯基、雜芳炔基、烷基雜芳基、羥基、羥烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、醯基、芳醯基、_基、硝基、氰基、竣基、烧氧基、芳氧基絲、芳烧氧基㈣、燒績酿基、芳磺醯基、雜芳磺醯基、烷硫基、芳硫基、雜芳硫基、芳烷硫基、雜芳烷硫基、環烷基、雜環基、_c(==n_cn)_nH2、 _C(=NH)-NH2、-C(=NH)-NH(燒基）、YiH YiY2N_烷基… 、YlY2NS〇2·及 _s〇2NYiY2，其中 \及 I可以相同或不相同，並係獨立選自由氫、烷基、芳基、環烷基及芳烷基所組成的群組。”環系統取代基，，也可以代表同時置換在環系統上兩個鄰接的碳原子上的兩個可用的氫每 -個碳上一個氫)之單一部份。該部份的實例係亞甲二氧基、乙二氧撐、類似物，其形成如例如：

之部份。

°：\S7\87869.D〇C -21 - 200413378 以’’雜環基”代表令有、、，々3至約1 〇個環原子之非芳族飽和早％或多環系環系絲、、’、至約1 0個環原子較佳，其中一或多個在環系統尹的 τ 猫h Α 的原子係除了碳之外的元素，例如，單獨或組合的氮、氧或平 ^虱飞&有任何鄰接的氧及/或硫原子出雜浐其相入的雜核基包括約5至約6個環原子。在本隹％基根命名之箭_ 4 # _ 产，口的虱雜、氧雜或硫雜分別代表至少们虱、乳或硫原子以環原中的-NH以經保護成^ _子\ 了將任何在雜環基環類似物存在A ( )、·Ν((：ΒΖ)、-Ν(Τ〇5)基及頰似物存在，也可將可將雜環基視需要以二:為本發明的-部份。 …… 或多個可以相同或不相同及如本文義之㈣絲代基”取代。可將㈣基的氮或需要氧化成對應之Ν-氧化物、s-氧化物或s，s :; 合的單環系雜環基環的非限制二―:力。適口夂0 I 卜員1^ ^括〆、虱吡啶基、口比二m秦基、嗎録、硫代嗎琳基、❹ 1，4·一氧雜環己烧基、氫夫去其凡土如匕南基、四氯0塞吩基、内醉脸内酯及類似物。 ^ ^知、 ’在與N、〇一個雜原子 ’在環中：應注意的是在本發明的含雜原子之環系統中或S鄰接之碳原子上沒有任何羥基，以及在與另鄰接的碳原子上沒有任何N或S基。因此，例如

沒有任何-0H直接附接於以2及5標記之碳上也應注思的是如例如

O:\87\87S69.DOC -22- 200413378

之邛伤的互、又體型式在本發明特定的具體實施例中被視為是相同的。以”块烧基”代表其中块基及炫基係如先前所述之快基_ 烷基_。較佳的炔烷基包括低碳炔基及低碳烷基。與母體部份係經由烧基結合。適合的块絲的非限制性實例包括快丙基甲基。以”雜芳烷基”代表其中雜芳基及烷基係如先前所述之雜芳基-烷基-。較佳的雜芳烷基包括低碳烷基。適合的雜芳烷基的非限制性貫例包括。比啶基甲基及喹啉-3_基甲基。與母體部份係經由烷基結合。以’’羥烷基’’代表其中烷基係如先前定義之H〇_烷基_。較佳的經烧基包括低碳烧基。適合的經烧基的非限制性實例包括羥甲基及2-羥乙基。以π醯基’’代表其中各種基係如先前所述之、烷基 -C(O)-或環烧基-c(0)-。與母體部份係經由羰基結合。較佳的酸基包括低碳烷基。適合的醯基的非限制性實例包括甲醯基、乙醯基及丙醯基。以方&&基代表其中芳基係如先前所述之芳基- C(〇)·。與母體部份係經由羰基結合。適合的芳醯基的非限制性實例包括苯酿基及1-萘酸基。以π烧氧基π代表其中烧基係如先前所述之烧基-0 -。適合 O:\87\87869.DOC -23- 200413378 的烷氧基的非限制性實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基及正丁氧基。與母體部份係經由醚氧結合。以”芳氧基”代表其中芳基係如先前所述之芳基-0-。適合的芳氧基的非限制性實例包括苯氧基及萘氧基。與母體部份係經由醚氧結合。以π芳烷氧基’’代表其中芳烷基係如先前所述之芳烷基 -0-。適合的芳烷氧基的非限制性實例包括苄氧基及1-或2-萘甲氧基。與母體部份係經由醚氧結合。以’’烷硫基’’代表其中烷基係如先前所述之烷基-S-。適合的烷硫基的非限制性實例包括甲硫基及乙硫基。與母體部份係經由硫結合。以’’芳硫基’’代表其中芳基係如先前所述之芳基-S-。適合的芳硫基的非限制性實例包括苯硫基及萘硫基。與母體部份係經由硫結合。以’’芳烷硫基’’代表其中芳烷基係如先前所述之芳烷基 -S-。適合的芳烷硫基的非限制性實例包括苄硫基。與母體部份係經由硫結合。以’’烷氧基羰基’’代表烷基-0-C0-。適合的烷氧基羰基的非限制性實例包括甲氧基羰基及乙氧基羰基。與母體部份係經由幾基結合。以”芳氧基羰基’’代表芳基-o-c(o)-。適合的芳氧基羰基的非限制性實例包括苯氧基羰基及萘氧基羰基。與母體部份係經由羰基結合。以’’芳烷氧基羰基’’代表芳烷基-o-c(o)-。適合的芳烷氧基 O:\87\87869.DOC -24- 200413378 羰基的非限制性實例包括苄氧基羰基。與母體部份係經由羰基結合。以”烷磺醯基”代表烷基_S(〇2)_。以那些其中烷基係低碳院基之基較佳。與母體部份係經由磺醯基結合。以”芳磺醯基”代表芳基_S(〇2)_。與母體部份係經由磺醯基結合。以”經取代”術語代表以選自指定的基置換在選定的原子上的一或多個氫原子，其先決條件係不超過選定的原子在現存環境下的正常價數及以取代作用生成安定的化合物。取代基及/或變異體之組合受到許可，假設這些組合會生成安定的化合物。以”安定的化合物，，或，，安定的結構”代表自反應混合物充份健全分離成有用的純度及調配成有效率的治療劑之化合物。以’’視需要經取代’’術語代表以指定的基、基團或部份視需要取代。以’’分離”或化合物的”分離型式”表示在自合成法分離之後或來自天然來源的該化合物或其結合物的物理狀態。以 ”純化”或化合物的”純化型式”表示自純化法或本文所述之方法或熟悉的技術員熟知的方法獲得之後的該化合物的物理狀態，具有以本文所述或熟悉的技術員熟知的標準分析技術為特徵之充份純度。也應注意的是假設在本文的文章、方程式、實例及表格中任何具有不滿意的價數之雜原子具有使價數滿意的氫原子0 O:\87\87869.DOC -25- 200413378 在將化合物中的官能基稱為 '經保護’f時，則其代表當化合物進行反應時具有修改型的基，預先阻止在保護位置上不希望的副反應。那些一般熟悉本技藝的人與以參考標準的參考書（如例如T.W·桂尼（Greene)等人之Protective Groups in organic Synthesis (1991)，Wiley，New York)認知適合的保護基。當任何變異體（例如，芳基、雜環、R2等）在任何成份或式III中出現一次以上時，則其在每一種情況中的定義與其在每一種其它情況中的定義無關。如本文所使用的π組合物’’術語希望包含含有指定量的指定成份之產物與任何自指定量的指定成份之組合直接或間接生成的產物。本文也涵蓋本發明化合物的前體藥物及媒合物。如本文所使用的π前體藥物π術語代表係藥物前驅體之化合物，在一經投予病人時，以代謝或化學過程進行化學轉化作用，產生式III化合物或其鹽及/或媒合物。在A.C.S. Symposium Series 之 Τ·亥固奇（Higuchi)及 V·史黛拉（Stella)之 Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987)14 及在 Bioreversible Carriers in Drug Design，（1987)愛德華（Edward) B_ 羅曲 (Roche)編輯之 American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中提供前體藥物的討論，將兩種併入本文以供參考。以’’媒合物’’代表本發明化合物與一或多種溶劑分子的物理締結作用。該物理締結作用包含不同的離子及共溶劑鍵 O:\87\87869.DOC -26- 200413378 、，，。程度，包括氫鍵結。在特定的實例中，媒合物能夠分離，例如’在將-或多個溶劑分子併人結晶固體的晶格中時。 "媒合物”包含溶液相及可分離媒合物兩種。適合的媒八物的非限制性實例包括乙醇酸鹽1醇酸鹽及_物。”水合物ff係其中溶劑分子係HA之媒合物。 ”有效量”或’’有效治療劑量”意味說明有效抑制cdk及因此產生預期的治療、改善、抑制或預防效果的本發明化合物置或組合物量。式III化合物可以形成也在本發明範圍内的鹽類。本文說明的式III化合物當然包括其鹽類的說明，除非有其它另外的指定。如本文所使用的，，鹽（類），，術語說明以無機及/或有機酸所形成的酸性鹽類與以無機及/或有機鹼所形成的鹼性鹽類。此外，當式⑴化合物包括鹼性部份（如吡啶或= 唑，但不限於此）及酸性部份（如羧酸，但不限於此）時，則可以形成及包括在本文所使用的，，鹽（類），，術語内的兩性離子Γ内鹽類’’）。以在醫藥上可接受之鹽類（在身體上可接受的無毒性鹽類）較佳，雖然其它的鹽類也有用。例如，以式 III化合物分別與酸量或驗量（如等量）在介質中（如使鹽沉;殿之介質）或在水性介質中反應，接著以親液化作用，可以形成式III化合物的鹽類。以實例說明的酸加成鹽類包括醋酸鹽、抗壞血酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、摔樣酉々鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、富馬酸鹽、氫氯酸鹽、氣漠酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲烷磺酸鹽、蔡谱 O:\87\87869.DOC -27- 200413378 酸鹽、确酸鹽、草酸鹽、麟酸鹽、丙酸鹽、水揚酸鹽、號 ί白酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、甲苯磺酸鹽（也係已知的甲苯磺酸鹽）及類似物。此外，例如以S.博格（Berge) 等人之 Journal of Pharmaceutical Sciences (1977)66( 1)1-19 ; Ρ· 高德（Gould)之 International J. of Pharmaceutics( 1986)33. 20 1 -217 ;紐約Academic出版社的安德森（Anderson)等人之 The Practice of Medicinal Chemistry(1996)及在 The Orange Book (華聖頓D.C.的食品藥物管理局（Food & Drug Administration) 的網頁上）討論通常被視為適合於自鹼性醫藥化合物形成在醫藥上有用的鹽類之酸。將這些揭示内容併入本文以供參考。以實例說明的鹼性鹽類包括銨鹽、鹼金屬鹽類（如鈉、鋰及鉀鹽）、鹼土金屬鹽類（如鈣及鎂鹽）、具有有機鹼之鹽類 (例如，有機胺，如二環己胺、特丁胺）及具有胺基酸之鹽類 (例如，精胺酸、賴胺酸及類似物）。可將驗性含氮基以如低碳烷基鹵（甲基、乙基及丁基氯、溴及碘）、硫酸二烷基酯（例如，硫酸二甲酯、二乙酯及二丁酯）、長鏈鹵化物（例如，癸基、月桂基及硬脂基氯、溴及碘）、芳烷基i (例如，苄基及苯乙基溴）及其它之類的試劑季鹼化。希望所有這些酸性鹽類及鹼性鹽類係在本發明範圍内的在醫藥上可接受之鹽類，並將所有酸性及鹼性鹽類視為以本發明為目的的對應化合物之自由型式的等同物。式III化合物及其鹽類、媒合物和前體藥物可以其互變體型式存在（例如，成為醯胺或亞胺醚）。在本文涵蓋所有的這 O:\87\87869.DOC -28- 些互變體型式，成為本發明的一部份。在本發明的II圍内涵蓋本發明化些鹽類、媒合物和前 ° (匕括化合物的那引體樂物與前體藥物有的立體異構物(例如，幾何異構昱=)所物），如那歧由於在尤子異構物及類似立體显構物# 代基上不_的碳㈣以存在的立體異構物，包括對映牡的存在下而可以在乂、甚至在沒有不對稱的碳異構型式，成為位置1構物(=、轉異構物及非對映 _ /、冓物（如例如4-吡啶基及3-吡啶）。太杳明化合物的各個立濟盈物，或可心A ^ 可以例如辭不含其它異構、登/ / °纟為外消旋物’或與所有其它或其它經、擇之立體異構物摻合。 4Θ扪對旱性中心可以具有如，以UPAC 19,74推荐書所定義之組態。希望的”鹽”、 ’媒合物前體藥物”及類似術語的使用同樣適用於本發明化合物的對映異構物、立體異構物、幾何異構物、互變體、位置異構物、外消旋物或前體藥物的鹽、媒合物和前體藥物0 根據本發明的化合物具有醫藥特性：特定言之，式m化合物可以錢自激酶抑制，如例如週期素依賴性激酶抑制劑、以促細胞分裂劑活化之蛋白激酶（mapk/祖）、糖原合成酶激酶3(GSK3P)及類似物。週期素依賴性激酶（cdKs) 包括例如 CDC2(CDK1)、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、 CDK7和CDK8。期待新穎的式m化合物係增殖性疾病治療法中有用的化合物，如癌症、自身免疫疾#、病毒疾病、霉菌性疾病、神經性/神經變性異常、關節炎、發炎、抗增 O:\87\87869.DOC -29- 200413378 殖性（例如，眼部視網膜病變）、神經元、脫髮及心血管疾病。在以上引用的U.s· 6,413,974中陳列許多這些疾病及異常，將该揭示内容併入本文以供參考。更特定言之，式III化合物可用於治療各種癌症，包括（但不限於此）以下：瘤，包括膀胱瘤、乳房瘤、直腸瘤、腎瘤、肝瘤、肺瘤（包括非小細胞肺癌）、食道瘤、膽囊瘤、卵巢瘤、騰臟瘤、胃瘤、子宮頸瘤、甲狀腺瘤、攝護腺瘤及皮膚瘤（包括鱗狀細胞瘤）；淋巴系統的造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性淋巴性白血病、B_細胞淋巴瘤、τ_細胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、髮狀細胞淋巴瘤及巴奇氏（Burkett，s)惡性淋巴瘤；骨髓細胞系統的造血腫瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓發育不良徵候群及前骨髓細胞白血病；間葉來源的腫瘤’包括纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤；中樞及末梢神經細統的腫瘤，包括星狀細胞瘤、神經細胞瘤、神經膠質瘤及神經鞘瘤；及 /、匕腫瘤，包括黑色素細胞瘤、精母細胞瘤、崎胎癌、月癌、著色性乾皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌及卡波西氏（Kaposi’s)肉瘤。由於CDKs在一般細胞增殖的調節作用中的關鍵性角色，可將抑制劑當作可逆式細胞抑制劑，其可用於治療任何以不正$的細胞增殖為特點的疾病過程，例如，良性攝護腺肥大豕方矢II大腸腺腫症、神經纖維瘤、動脈粥樣硬化症、

O:\87\87869.DOC -30- 200413378 肺纖維化、關節炎、牛皮癖、腎絲球腎炎、在金管形成術或血官手術之後的再狹窄症、肥厚性疤痕形成、發炎性腸道疾病、移植排斥、内毒性休克及霉菌性感染。式III化合物也可用於治療阿茲海默氏病，如最近的發現建議CDK5涉及變性蛋白質的磷酸化作用（J. Bi〇chem， (1995)117,741-749) ° 式III化合物可以誘發或抑制細胞凋零。細胞凋零反應係各種人類疾病中的異常。作為細胞凋零調節劑的式ΠΙ化合物可用於治療癌症（包括那些上述型式的癌症，但不限於此）、病毒感染（包括疱疹病毒、痘病毒、愛波斯坦_巴爾 (Epstem-Barr)病毒、辛德比斯（Sindbis)病毒及腺病毒，但不限於此）、預防在以HIV感染之個體中發生AIDS、自身免疫疾病（L括王身性紅斑性狼瘡、紅斑性狼瘡、以自身免疫介入之腎絲球腎炎、類風濕性關節炎、牛皮癖、發炎性腸道疾病及自身免疫性糖尿病，但不限於此）、神經變性異常 (包括阿兹海默氏病、以AIDS介人之癡呆症、巴金生氏病、肌委细性脊髓側索硬化症、視網膜色素變性、脊體性肌肉二、、値症及小腦退化症，但不限於此）、骨髓發育不良徵候群再生不良性貧血、與心肌梗塞有關連的缺血性傷害、中風和再灌注傷害、心律不整、動脈粥樣硬化症、以毒素誘卷或與酒精有關的肝疾病、造血功能性疾病（包括慢性貧血及再生不良性貧血，但不限於此）、肌肉骨H统的退化 ;、、病（括月貝疏鬆症及關節炎，但不限於此）、阿司匹靈 A感丨生π Θ欠、囊腫纖維化、多發性硬化症、腎臟疾病及

O:\87\87869.DOC -31 - 200413378 癌症疼痛。作為CDKs抑制劑的式III化合物可以調節細胞rna及 DNA合成程度。這些試劑因此可用於治療病毒感染（包括 HIV、人類乳突狀病毒、疱療病毒、疫病毒、愛波斯與-巴爾病毒、辛德比斯病毒及腺病毒，但不限於此）。式III化合物也可用於癌症的化學預防作用。將化學預防作用定義成以或阻斷使突變事件開始或阻斷已承受傷害之癌症前期的細胞進展或抑制腫瘤復發的方式抑制侵犯性癌症的發生。式III化合物也可用於抑制腫瘤血管新生及轉移。

式III化合物也可以當作其它的蛋白激酶抑制劑（例如，蛋白激酶C' her2、rafl、MEK卜 MAp激酶、EGF受體、PDGF 文體、IGF受體、PI3激酶、weel激酶、如、八叫及因此有效治療與其它蛋白激酶有關連的疾病。、本發明的另-個觀點係治療具有與CDKs有關連的疾病或症狀之哺乳類（例如，人類）的Μ，其係以有效治療劑量的至ν —種式m化合物或該化合物在醫藥上可接受之鹽或媒合物投予哺乳類。較佳的劑量係約〇顧至毫克/以公斤計之體重/天之工化°物。尤其較佳的劑量係約〇.G 1至25毫克/以公斤計 :體重/天之式III化合物或該化合物在醫藥上可或媒合物。 π 本發明的化合物也可田# t 用於與一或多種抗癌症治療（如射治療法）及/或與一哎客、 4夕種抗癌劑的組合療法（一起或連

O:\87\87869.DOC -32- 200413378 投藥），如選自由細胞抑制劑、胞毒劑（如例如DNA交互作用劑（如順氯氨翻（cisplatin)或阿霉素（doxorubicin)，但不限於此）、紫杉烧（例如，对癌易（taxotere)、紅豆杉醇（taxol))、拓樸異構酶II抑制劑（如順鉑）、拓樸異構酶I抑制劑（如伊利替康（irinotecan)(或 CPT-11)、子丨J 普托斯塔（camptostar)或托波替康（topotecan))、微管交互作用劑（如紫杉醇、歐洲紫杉醇（docetaxel)或埃波霉素（epothilones))、荷爾蒙劑（如三苯氧胺）、胸苷酸合成酶抑制劑（如5-氟尿嘧啶）、抗代謝劑（如氨甲蝶呤）、烧基化試劑（如帝蒙柔羅麥德（temozolomide) (來自新澤西州肯尼沃斯（Kenilworth)之仙靈葆雅 (Schering-Plough)公司的 TEMODAR™)、環構醯胺）、法呢基蛋白轉移酶抑制劑（如來自新澤西州肯尼沃斯之仙靈葆雅公司的 SARASARtm(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴基-8-氯基 -6，11-二氫-511-苯并[5,6]環庚[1，2-13]咄啶-11-基]-1-六氫吡啶基]-2-氧乙基]-1-六氫吡啶羧醯胺或SCH 66336)、提皮法尼畢（tipifamib)(來自楊森製藥（Janssen Pharmaceuticals)之 Zarnestra®或R115777)、L778，123 (來自新澤西州白屋站 (Whitehouse Station)之默沙東公司（Merck & Company)的法呢基蛋白轉移酶抑制劑）、BMS 214662 (來自新澤西州普林斯頓（Princeton)之必治妥施貴寶製藥（Bristol-Myers Squibb Pharmaceuticals)的法呢基蛋白轉移酶抑制劑））、信號轉導抑制劑（如艾瑞沙（Iressa)(來自英國阿斯特捷利康（Astra Zeneca) 製藥）、塔西伐（Tarceva)(EGFR激酶抑制劑）、EGFR的抗體 (例如，C225)、GLEEVEC® (來自新澤西州東漢諾威市（East O:\87\87869.DOC -33- 200413378

Hanover)之諾華（Novartis)製藥的C-abl激酶抑制劑））、干擾素（如例如内含子（來自仙靈摇雅公司）、長效干擾素（來自仙靈葆雅公司））、荷爾蒙治療組合法、芳香酶組合法、ara-C、亞德里亞霉素、環碟酿胺及吉西它賓（gemcitabine)所組成的群組之抗癌劑。其它的抗癌劑（也稱為抗腫瘤劑）包括（但不限於此）尿嘧 σ定氮芥、氮芥、異環麟酸胺（ifosfamide)、美法蘭 (Melphalan)、苯丁酸氮芥、皮波伯曼（Pipobroman)、三乙樓蜜胺、三乙撐硫代磷酸醯胺、白消安（Busulfan)、卡幕司他丁（Carmustine)、路幕司他、;丁（Lomustine)、鏈脲佐菌素、達卡巴唤（Dacarbazine)、氟脫氧尿苷、阿糖胞苷、6-魏基嘌呤、 6-硫代鳥嗓呤、氟達拉賓（Fludarabine)填酸鹽、奥沙利I白 (oxaliplatin)、琉可維瑞（leucovirin)、奥沙利賓（來自法國賽諾菲聖德拉堡製藥（Sanofi_Synthelabo Pharmaceuticals)之 ELOXATIN™)、潘托司他汀（Pentostatine)、長春花鹼、長春新驗、長春地辛、博萊霉素、放線霉素、道諾紅菌素、阿霉素、表阿霉素（Epirubicin)、伊達比辛（Idarubicin)、光神霉素、脫氧肋間型霉素（Deoxycoformycin)、絲裂霉素-C、 L-天冬驢胺酶、替尼泊苷（Teniposide)17 α ·快雌二醇、二乙基己稀雌紛、睪酮、脫氫可的松、氟甲睪酮（Fluoxymesterone)、拓莫斯丹諾酮（Dromostanolone)丙酸鹽、睪内g旨（Testolactone)、曱地孕酮醋酸鹽、曱基脫氫皮醇、曱基睪酮、脫氫皮醇、氫經脫氫皮醇、氣稀雌醚（Chlorotrianisene)、經基孕激素類、胺格魯米德（Aminoglutethimide)、雌莫司汀（Estramustine)、 O:\87\87869.DOC -34- 200413378 甲孕_ (Medroxyprogesterone)醋酸鹽、琉普利德 (Leuprolide)、氟塔麥德（Flutamide)、托瑞米芬（Toremifene)、固色林（goserelin)、順氯氨翻、卡翻（Carboplatin)、經基脲、安 σ定（Amsacrine)、普卡巴嗓（Procarbazine)、米托坦 (Mitotane)、米托杉酮（Mitoxantrone)、左美素（Levamisole)、納維賓（Navelbene)、安納退唾（Anastrazole)、來退嗤 (Letrazole)、訊普西塔賓（Capecitabine)、瑞羅杉芬 (Reloxafine)、拓羅山芬（Droloxafine)或六甲基蜜胺。如果調配成固定劑量時，則這些組合產物使用在本文所 _ 述之劑量範圍内的本發明化合物及其它在其劑量範圍内的醫藥活性劑或治療劑。例如，已發現CDC2抑制劑歐魯幕辛 (olomucine)與減低細胞凋零的已知的胞毒劑具有協乘作用 (J. Cell Sci.,(1995)108.,2897)。當組合調配物不適合時，貝U 也可將式III化合物與已知的抗癌劑或胞毒劑連續投藥。本發明不限於以連續投藥，可在投予已知的抗癌劑或胞毒劑之前，或之後投予式III化合物。例如，與抗癌劑的投藥順序會影響週期素依賴性激酶抑制劑（氟維皮瑞多）的胞毒活 β 性（Cancer Research，（l 997)ϋ3375)。這些技術係在熟悉本技藝的人與主診醫師的技巧内。因此，在本發明的觀點中，本發明包括含有至少一種式 III化合物或其在醫藥上可接受之鹽或媒合物之劑量及一或多種以上陳列的抗癌治療和抗癌劑之劑量的組合，其中以化合物/治療劑之劑量得到預期的療效。可以許多藥理檢定確認本發明化合物的藥理特性。以根 O:\87\87869.DOC -35- 200413378 據本發明的化合物及其鹽類進行以下所述以實例說明的藥理檢定。本發明也關於含有至少一種式III化合物或該化合物在醫藥上可接受之鹽或媒合物及至少一種在醫藥上可接受之載體的醫藥組合物。為了以本發明所述之化合物製備醫藥組合物，故在醫藥上可接受之惰性載體可以係固體或液體。固體型製劑包括某物市片、分散型藥粒、膠囊、醜劑及栓劑。藥粉及藥片可由從約5至約95%之活性成份所組成的。在本技藝已知適合的固體載體，例如，碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、糖或乳糖。可以使用適合於口服投藥的固體劑型之藥片、藥粕酏J及膠囊。可在負州伊斯頓（East〇n)之馬克出版公司 (Mack Publishing C。·）以Α·吉納若（Genn⑽)(編輯）之第邮

Remmgtons Pharmaceutical SciencesG99〇)中發現用於各種組合物的在醫藥上可接受之載體及製造方法的實例。液體型製劑包括溶液、懸浮液及乳液。可以用於非經腸注射之水或丙二醇水溶液料實例說明，或以甜味劑及遮光劑加入口服溶液、懸淫為 . 夜及礼液中。液體型製劑也可以包括用於鼻内投藥之溶液。、，合於吸入的喷霧製劑可以包括溶液或粉末型固體，可以，、與在醫藥上可接受之載體如，氮氣。 …如惰性i縮氣體’例於口服或非經腸投液體型包括溶液、一也包括計劃在使用之前旋即轉化成用藥之液體型製劑之固體型製劑。這此

O:\87\87869.DOC -36 - 200413378 懸浮液及乳液。本發明的化合物也可經皮膚輸送。皮膚用組合物可以採用乳胃、水乳液、喷霧及/或乳液型式，並可以包括在就該目的而言為本技藝所熟知的基質或貯存型之皮膚貼片中。也可將本發明的化合物經皮下輸送。化合物以經由口服投藥較佳。百藥製劑係以單位劑型較佳。在該劑型中，將製劑再分成包括適當的活性組份量之適當尺寸的單位劑型，例如，達成預期目的的有效劑量。根據特殊的應用，可將在製劑的單位劑量中的活性化合物量從約1毫克改變或調整至約100毫克，以從約1毫克至約 50毫克較佳，以從約1毫克至約25毫克更佳。所使用白勺$際劑量可依據病患、的f求及欲治療的病狀嚴重1±而改邊。對特殊情況適當的劑量攝取的決定係在本技藝的技巧範圍内。盔τ 士 μ & a 為了方便起見，可將總日劑量依需要在一天之内分批投藥。根據主診醫師者旦l ^ ^ ^ 号里如年#、病患的病況和重量與欲治療之徵候的嚴重神夕4CS m Jr 之颁的因素調節本發明的化合物及/或其在醫藥上可接受之窃之a W員的劑Ϊ及頻率。用於口服投藥的代表性建議日劑晋π — 里了在k約1¾克/天至約5〇〇毫克/天為範圍的2至4次分次劑I，丨、,1古士里以1写克/天至200毫克/天較佳。本發明的另—Jlil於曰〆a 、威2係含有有效治療劑量的至少一種式 ^ 物^ 4化合物在醫藥上可接受之鹽或媒合物及在醫樂1可接X之_、媒劑或稀釋劑之套組。

O:\87\87869.DOC -37- 200413378 本發明還有的另一個觀點係含有至少一種式III化合物或該化合物在醫藥上可接受之鹽或媒合物之劑量及至少一種以上陳列的抗癌治療劑及/或抗癌劑之劑量的套組，其中以二或多種成份之劑量得到預期的療效。由以下的製備作用及實例為例證說明在本文揭示的本發明，不應該將其解釋成限制本發明的範圍。那些熟悉本技藝的人將會明白可替換的機制路徑及類似結構。在提出 NMR數據時，在Varian VXR-200(200 ΜΗζ，1!!)， Varian Gemini-300(300 MHz)或 XL-400(400 MHz)上獲得 b 光譜，並自具有數個質子（多重性）之Me4Si的高磁場方向 ppm及以括弧表示之赫茲（Hertz)計的偶合常數提出報告。在提出 LC/MS數據時，則使用 Applied Biosystems API-100 質譜儀及 Shimadzu SCL-10A LC管柱：Altech始 C18，3微米， 33毫米x 7毫米ID ;梯度流動：0分鐘-10%CH3CN，5分鐘 -95%CH3CN，7 分鐘-95%CH3CN，7.5 分鐘-10%CH3CN，9 分鐘-終止進行分析。提供逗留時間及觀察的母體離子。以括弧中的縮寫可以表示以下的溶劑及試劑：薄層色層分離法：TLC 二氯甲烷：CH2C12 醋酸乙酯：AcOEt或EtOAc 甲醇：MeOH 三氟醋酸酯：TFA 三乙胺：Et3N或TEA 丁氧基幾基· N-Boc或Boc O:\87\87869.DOC -38- 200413378

核磁共振光譜：NMR

液態色層分離質譜法：LCMS

高解析質譜法：HRMS

毫升：mL 毫莫耳：mmol 微升：μΐ 公克：g 毫克：mg

室溫或rt (周圍溫度）：約25°C 實例製備實例1 :

H ΒΓ n ch3 〇將在無水CH3CN (90毫升）中的1-甲基咪唑羧酿胺 (3·〇〇公克，24毫莫耳）與苯醯甲基溴（5.73公克，29毫莫耳）之混合物在A下攪拌及回流1天。將混合物過濾，將固體在過濾器上以CHsCN (2x30毫升）清洗及在直空中史ρ 年己琛。獲得白色固體（5.86公克，80%)。复J1實例1.1及1.2 : 與製備實例1所提供基本上相同的步驟，以1 _ 、， Τ基。米。坐-2 - 觀胺與在表1 · 1的攔1中所提供的溴基酮結合」以製備為攔2中所提供的化合物。

O:\87\87869.DOC -39- 200413378 表1·1

與製備實例1所述基本上相同的步驟製備該化合物。製備實例3 :

將來自製備實例1的產物（4.62公克，1 5毫莫耳）與咪唑 (25.50公克，375毫莫耳）之混合物在Ν2及175°C下攪拌20小 O:\87\87869.DOC -40- 200413378 時，接著將其冷卻至loot：，並倒入攪拌的冰冷水中。將混合物攪拌15分鐘及接著過濾。將（〇〇宅升）、 U體在過、声时以水（2x1 〇〇毫升）清洗及在真空中以1〇〇它乾燥。庐曰’思為上體（2.43公克，77%)。又伸白色固复J1：實例3.1及3.2 : 與製備實例3所提供基本上相同的步驟，可自在表2丄的襴1中所提供的化合物製備在攔2中所提供的化合物。 __ __ 表 2·1 製備實例棚 1 棚 2 3.1 〇γΝθγ. Ί HN^bHBr 丫 Ί ηνΤ^ν> 丨 ο 3.2 〇 0人 ΗΝγ^^ Br 〇 CH3 〇〇人N^j HNyV 〇例 4 : O:\87\87869.DOC -41 - 200413378 方法1 : 與製備實例3所述基本上相同的步驟製備該化合物。 LCMS; MH+=246。方法2 : 將錢鹽酸（378.6公克，3·28莫耳）放入2公升圓底燒瓶中及在溫和的氮氣流下以回流加熱，直到所有的物質溶融為止。加入一份來自製備實例2的標題化合物[以基本上如製備貫例2所述，自1-甲基咪唑羧醯胺（1〇公克，79·9毫莫耳）製得的31.64公克粗物質]，並將混合物在回流下以215 °C加熱15分鐘。將熱溶液倒入16公升之冰與濃縮1^14〇11 (500¾升）之混合物中。pH係〜1〇.5。將混合物蒸發至乾燥及貯存在冷凍器中。將所得物質以Me〇H (4公升）濕磨，過濾及將固體以另外的MeOH (2公升）清洗。將合併的過濾物蒸發至乾燥’得到固體（49.75公克）。將該固體弄碎及以蒸餾水（250毫升）濕磨’並接著過濾。將過濾物棄置，並將固體溶解在熱MeOH (850毫升）中，並加入石夕膠（〜8〇〇毫升）及海砂（〜350毫升）中，將混合物蒸發至乾燥。將所得混合物當作填充物引入矽膠管柱上（4〇x9公分），並將管柱以CH2C12(4 公升）、接著以在CH2C12中的l%-2.5%MeOH及接著以純 MeOH溶離，得到標題化合物（8 〇6公克，41%): FAbms: m/z 246·0(ΜΗ+); HRFABMS: m/z 246·0434(ΜΗ+)，C12H9C1N30要求： m/z 246.0434 ° O:\87\87869.DOC -42- 200413378 Άλ% Ψ PI 5 ：

〇

將在POCI3 (6·5毫升）中來自製備實例3的產物（1·2〇公克，5.71*莫耳）與吡啶（〇·32毫升，4〇毫莫耳）之混合物攪拌及在％下回流5小時。將混合物倒入1〇〇毫升冰中，加入在h2o (loo*升)中的Na〇H (1〇公克)之溶液，並將混合物、CHaCl2 (4x50^：升）卒取。將萃取物經乾燥，過濾及將溶劑蒸發。在矽膠上以CH2C12/Et〇Ac(2:丨）之管柱色層分離法供給灰白色固體（52〇毫克，4〇%)。篁備實例5.1及5.2 : 與製備實例5所提供基本上相同的步驟，可自在表的攔1中所提供的化合物製備在欄2中所提供的化入物义

O:\87\87869.DOC -43- 200413378

Cl 與製備貫例5所述基本上相同的步驟製備該化合物。灰白色固體；LCMS; MH+=264。 1備實例7 :

在無水CHsCN (5毫升）中的N—溴基琥珀醯亞胺（”NBS，’) 080¾克’ ΐ·〇毫莫耳）之溶液在^下加入在無水ch3Cn (5 笔升）及CI^Cl2 (3毫升）中來自製備實例5的產物（23〇毫克，毛莫耳）之攪拌溶液中。將混合物在25。〇下攪拌5小時及接著將劑瘵發。在矽膠上以之色層分離法供給白色U體（294毫克，96%)。复复^Αΐ·1及7·2 : 椚工衣備貫例7所提供基本上相同的步驟，可自在表4_ 1的斤提供的化合物製備在欄2中所提供的化合物。

O:\87\87869.DOC -44-

Μ 4備貫例7所述基本上相同的步驟製備該化合物。白色固體；LCMS; ΜΗ、342。复例9 :

在無水CH/N (1〇毫升）中的1碘基琥珀醯亞胺（”NIS，’) (450毫克，2.0毫莫耳）之溶液在％下加入在無水Ch3CN (6 O:\87\87869.DOC -45- 200413378 笔升）及1，2-二氯乙烷（1〇毫升）中來自製備實例$的產物（46〇毫克，2·〇毫莫耳）之攪拌溶液中。將混合物回流3〇小時及接者將溶劑蒸發。在矽膠上以CH2C12/Et〇Ac(1〇:i)之色層分離法供給白色固體（602毫克，85%)。皇AA例10 :

與製備實例9所述基本上相同的步驟製備該化合物。白色固體；LCMS; MH+=390。复复f例11 :

與製備實例9所述基本上相同的步驟製備該化合物。白色固體。實例11

將來自製備實例的產物（78毫克，Q.2〇毫莫耳）、3-(胺曱基）吡啶（24毫克，〇·22毫莫耳）、二異丙基乙胺（〇·5毫升） O:\87\87869.DOC -46- 200413378 與無水二噁烷（1.0毫升）之混合物在90°C及N2下攪拌48小時。將溶劑蒸發，並將殘餘物在矽膠上以CH2Cl2/MeOH/濃縮水性ΝΗ4ΟΗ(50:1:0·1)之管柱色層分離法純化。獲得白色固體（67毫克，78%)。LCMS; ΜΗ+=462，溶點 173-175°C。實例11.1及11 .2 : 與製備貫例11所提供基本上相同的步驟，可自在表5 1的欄1中所提供的化合物製備在攔2中所提供的化合物。

O:\87\87869.DOC -47- 200413378

表2 實例搁 2 搁 3 DATA 12 Cl HN ό N LCMS: (M+2H)+= 382，M.P·〉 205〇C 13 Νγ^Ν Cl HN 6 LCMS: (M+2H)+= 382，M.P:185-188〇C . 14 CVn< Cl cvN< HN LCMS:MH+= 394, Μ·Ρ:177-179〇C 15 NyS/ Cl CVn< HN X? LCMS:MH+ = 394, Μ·Ρ:120-122〇C O:\87\87869.DOC -48- 200413378

16 CVrf Cl NyV HNO LCMS:MH+= 371, M.P:145-146〇C 17 Cl HN φ cf3 LCMS:MH+ = 449, M.P:177-179〇C 18 nY^n7 Cl nY^n HN 6 LCMS:MH+= 428, Μ·Ρ:204-206〇C 19 Ογ-〆 nY^n Cl nY^n HN ό N LCMS:MH+ = 428, Μ·Ρ:139-141°C O:\87\87869.DOC 49- 200413378

20 α CI α nyS/ ΗΝ 0 LCMS:MH+= 415, Μ·Ρ:150-152〇C 21 α CI Cl Νγ^Ν’ ΗΝ ά LCMS:MH+= 415, M.P:146-147〇C 22 α nySi Cl 9Vr<r α nySj ΗΝ k^NC〇2Et LCMS:MH+= 479, M.P:78-80°C 23 α Cl c, Nr^N cf3 〇 LCMS:MH+= 578, Μ·Ρ:175-177〇C O:\87\87869.DOC -50- 200413378

實例25.1及25.2 : 以酸性水解作用（在H20中的HC1)，接著以中和作用 (K2C03)及管柱色層分離法，可自表6.1的欄1中所提供的化合物製備在欄2中所提供的化合物。

O:\87\87869.DOC -51 - 200413378 實例26 :

將在二異丙基乙胺（1 ·5毫升）中來自製備實例7的產物（8 1 *克’ 0.20毫莫耳）與4-曱基磺醯基苯胺鹽酸（55毫克，0.32 笔莫耳）之混合物在11 〇。〇下攪拌3天。將溶劑蒸發，並將殘餘物在石夕膠上以CH2Cl2/MeOH/濃縮水性ΝΗ4ΟΗ(20:1:0·1) 之管柱色層分離法純化。獲得白色固體（22毫克，2〇%)。熔點 251-254°C，LCMS: (Μ+2Η)+=445。實例27 :

與以上實例所述基本上相同的步驟製備該化合物。熔點 169-170〇C，LCMS:(M+2H)+=367。製備實例28 :

O:\87\87869.DOC -52- 200413378 將來自製備實例7的產物（185毫克，0.60毫莫耳）與濃縮水性NH4OH (3毫升）及在2-丙醇中的2克分子量NH3(6毫升）在封閉的壓力管中以90°C攪拌24小時。將溶劑蒸發，並將殘餘物在矽膠上以CH2Cl2/MeOH/濃縮水性NH4OH (20:1 之管柱色層分離法純化。獲得淺黃色固體（138毫克，8〇%)。熔點 215-217°C，LCMS: MH+=291。製備膏例2Q ：

將在2-丙醇（30毫升）中的2-胺基-3,5-二溴基吨嗪（阿德瑞曲（Aldrich)，6.0公克，24.0毫莫耳）與50%氯基乙醛水溶液 (阿德瑞曲，4.8毫升）之混合物在A下攪拌及回流24小時。加入(300毫升）及三乙胺（12毫升），並將溶劑蒸發。將殘餘物懸浮在10:1之HbO : 2-丙醇（200毫升）中，過濾及將固體在過濾器上以10:1之Ηβ : 2-丙醇（2x100毫升）清洗。將其在真空中乾燥，產生淡米黃色固體（4.81公克，74%)。製備實例30 :

將來自製備實例29的產物（1·80公克，6.45毫莫耳）與濃縮 O:\87\87869.DOC -53- 200413378 水性NH4〇H (27.0¾升）之混合物在封閉的壓力管中以9〇它攪拌24小日守。將浴劑瘵發，並將殘餘物在矽膠上以Et〇Ac 之管柱色層分肖隹法純化。獲得白色固體（丨〇1公克，73%)。 LCMS: ΜΗ+=213。製備實例3 1 :

將在1，2-二甲氧基乙烷（30毫升(8毫升）中來自製備實例30的產物（5〇〇毫克，2.36毫莫耳）、苯基_酸（431毫克，3.53毫莫耳）、Pd(PPh3)4(277毫克，〇·24毫莫耳）與1^乂〇3 (2.50公克，23.6毫莫耳）之混合物在A下攪拌及回流以小時。將混合物倒入HA (500毫升）中，以CH2Cl2(4x5〇毫升）萃取，並將萃取物經NkSO4乾燥及過濾。將溶劑蒸發，並將殘餘物在矽膠上以PhCH3/在Me〇H中的7當量νη; (ι〇: 〇之管柱色層分離法純化。以其供給成為淡橘色固體之少量雜質的產物，供以下的步驟使用。製備實例32」 —

將在1，2-二氯乙烷（5毫升）中來自製備實例31的產物pH

O:\87\87869.DOC -54- 200413378 毫克，1·〇毫莫耳）、乙醯氯（0·286毫升，4 〇毫莫耳）與11比啶 (0.657毫升，8.0毫莫耳）之混合物攪拌及回流72小時。將混合物倒入10%水性NkCO3中及以CH2C12 (3x20毫升）萃取。將萃取物經NadCU乾燥，過濾及將溶劑蒸發。在矽膠上以

EtOAc作為溶離劑之色層分離法供給141毫克（56%)淡黃色固體。製備f例33 :

在無水CH3CN (2.0毫升）中的NBS (72毫克，0·40毫莫耳）之溶液在Ν2下加入在無水CH3CN (2·0毫升）及CH2C12 (6.0毫升）中來自製備實例32的產物（1〇〇毫克，0.40毫莫耳）之攪拌溶液中。將混合物在25 °C下攪拌48小時及接著將溶劑蒸發。在矽膠上以CH2Cl2/EtOAc(4:l)之色層分離法供給淡黃色固體（41毫克，31%)。熔點 163-165Ό，LCMS:(M+2H)+=333。實例34 :

O:\87\87869.DOC -55- 200413378 將在1，2-二甲氧基乙烧（3.2毫升）及η2〇 (〇·8毫升）中來自實例17的產物（85毫克，0_20毫莫耳）、苯基晒酸（37毫克， 0.30¾ 莫耳）、Pd(PPh3)4 (23 毫克，0.02毫莫耳）與 Na2C〇3 (212 公克，2.00毫莫耳）之混合物在a下攪拌及回流24小時。將混合物倒入H20 (1〇〇毫升）中，以CH2Cl2(4xl5毫升）萃取，並將萃取物經NajO4乾燥及過濾。將溶劑蒸發，並將殘餘物在石夕膠上以EtOAc/MeOH(30:1)之管柱色層分離法純化，供給無色蠟狀固體（46毫克，61%)。熔點138_14(rc， LCMS:(M+2H)+=378。實例35及36 :

35 36 與以上實例34所述基本上相同的步驟製備這些化合物。化合物 35 :熔點 168_169°c，LCMS:MH+=3 84 ;化合物 36 : 溶點 154-156°C，LCMS:MH+=384;。實例37 :

O:\87\87869.DOC -56- 200413378

將在Μ-二。惡烧（Π)毫升）中來自實例17的產物（2i4毫克’0·50毫莫耳三T基（乙浠基）錫〇74毫克，〇55毫莫耳）與Pd(PPh3)4 (58毫克，0.05毫莫耳）人斗）之此合物在化下攪拌及回流24小時。將溶劑蒸發，並將 τ A餘物在矽膠上以 CH2Cl2/MeQH/濃縮水性NH4qH(4g:1:()丨）之管柱色層分離法純化。獲得淡黃色固體⑽毫克’75%)。熔點13㈣。c， LCMS:MH+=328 〇實例3 8 :

"ά、丈元（10毫升）中爽白每 )甲木自男、例17的產物（214^ 克，0.50毫莫耳）、二丁其f > 一土（乙虱基乙烯基）錫（199毫克，〇5

O:\87\87869.DOC -57- 200413378 愛莫耳）與Pd(PPh3)4(58毫克，0.05毫莫耳）之混合物在％下攪拌及回流24小時。加入5克分子量HC1 (1.0毫升），將混合物攪拌5分鐘，接著加入三乙胺（5毫升）及將溶劑蒸發。將殘餘物在矽膠上以EtOAc/MeOH(10:l)之管柱色層分離法純化及接著以環己烷（10毫升）濕磨。獲得淡黃色固體（1〇4毫克， 65〇/〇) 0 熔點 192-194。。，LCMS:MH+=344。實例39 :

將MeMgl (在Et2〇中的3·〇克分子量溶液，〇·2〇毫升，〇.6〇毫莫耳）加入在無水EhO (3毫升）及CH2C12(6毫升）中來自實例38的產物（51毫克，〇·15毫莫耳）之攪拌溶液中。將混合物在25 C下攪拌3小時，並接著倒入Η" (1〇〇毫升）中及以 CHWl2 (3x20毫升）萃取。將萃取物經乾燥，過濾及將溶劑蒸發。將殘餘物在矽膠上以CHAWMeQHpo:〗）之管柱色層分離法純化，供給淡黃色固體（27毫克，5〇%)。熔點 184-1 85°C，LCMS:MH+=360。製備實例40 :

C!

O:\87\87869.DOC -58- 200413378 根據文獻步驟製得該化合物（J. Med. Chem. 1983, 26, 357 及 J. Med. Chem. 1992, 35, 3845) 〇實例41 :

將在無水1，4 -二。惡烧（〇 · 5 0毫升）中來自製備實例4 0的產物 (50毫克，0.30毫莫耳）、2-(胺甲基）吡啶（45毫克，0.42毫莫耳）與二異丙基乙胺（0.20毫升）之混合物在N2及1〇〇。〇下攪拌24小時。將溶劑蒸發，並將殘餘物在石夕膠上以 CHKh/MeOH/濃縮水性NH4OH(2:1 :〇· 1)之管柱色層分離法純化。獲得白色固體（45毫克，63%)。炼點125-127 ， LCMS:MH+=240。實例42-48 : 與製備實例41所述基本上相同的步驟製備在表3的欄3中所提供的化合物。 O:\87\87869.DOC -59- 200413378 表3

實例欄 2 欄 3 DATA

ci 42 154°C，LCMS: ΜΗ+=239·

43

Μ·Ρ· 130-132°C，LCMS: ΜΗ+=254· 44

HN' M.P. 104-105〇C，LCMS: MH+=207.

、〇CH

ci 45 HNV^i M.P. 182- 184°c，LCMS: MH+=225. O:\87\87869.DOC -60- 200413378

將在恶水™1" (20毫升）中來自製備實例28的產物（1· 16公克’ 4·〇〇毫莫耳）、°密咬-5邊醛（540毫克，5.00毫莫耳）與 Ti(OiPr)4(4.54公克，16〇毫莫耳）之混合物在化及5〇。〇下攪拌3小時。將混合物冷卻至25r，加入ΝαΒΗ/Ν (1·26公克， 20.0毫莫耳），並將混合物在25它下攪拌3〇分鐘。將混合物 O:\87\87869.DOC -61 - 200413378 倒入5%水性NaOH (500毫升）中，力口入飽和水性NaCl (50毫升），並將混合物以CH2C12(3x100毫升）萃取。將合併的萃取物經Na2S04乾燥，過濾及將溶劑蒸發。將殘餘物在矽膠上以（：112(^12/以6〇11/濃縮水性1^114〇11(20:1:0.1)之管柱色層分離法純化。獲得淡黃色固體（410毫克，27%)。熔點201-203 °C，LCMS:MH+=383。實例50 : 製備在無水CH3CN (120毫升）中來自製備實例8的標題化合物（12公克）之儲備溶液，並將一份（1毫升，10毫克，0.0291 毫莫耳）放入每一個包括PS-DMAP樹脂（77.6毫克，0.1164毫莫耳）之X-Block的井中。將新鮮製備的1克分子量之96—級胺儲藏溶液（0.0873毫升，0.0873毫莫耳）加入每一個 X-Block的96井中。將單元密封及在60-70°C加熱26小時。將block冷卻，開封，並過濾成包括PS-異氰酸酯樹脂（35毫克，0.073毫莫耳）及PS-參胺樹脂（35毫克，0.1 5毫莫耳）之新 X-Block，並將PS-DMAP樹脂以CH3CN(0.5毫升/井）清洗。將X-Block密封及在25°C下搖動71小時。將block開封，過濾及將每一個井以CH3CN (0.5毫升）清洗。將井在Speedvac濃縮器上蒸發至乾燥。將樣品以LCMS分析，並在若必要時，將<90%純度之樣品以製備性LCMS進一步純化。將樣品分別溶解在60%DMSO-CH3CN (1毫升）中，並分別將0.8毫升注射在製備性HPLC 上（使用 Phenomenex Luna 5n C-18(2)管柱；60x21.2毫米；5n微米：20毫升/分鐘之流速；使用水 -CH3CN-1%水性甲酸之梯度溶離），並收集對應於預期分子量之產物+/-1 mu的德份。將所有>90%純度之最終產物陳列在表4中。 O:\87\87869.DOC -62- 200413378 表4 結構 MW LCMS m/z % 純度圓 377.7 379.2 97 sgygWBMrjas^y^iaaas^yf^yaatayMte 379.7 381.2 90 391.7 393.2 93 393.7 395.2 i 99 _ 395.7 397.1 98 画 i 405.7 407.1 100 O:\87\87869.DOC -63- 200413378 _ 407.7 409.2 93 m 409.7 411.2 99 '419.7 I 421.1 100 419.8 421.2 94 画國 423.7 425.2 100 I 427.7 429.2 99 I 427.7 429.2 91 O:\87\87869.DOC -64- 200413378 1 437.8 439.2 95 441.8 443.2 90 441.8 443.2 94 agjgaiaasaagjtfgag^^^sa 443.7 445.1 100 _ 麵 448.2 449.1 91 _ 455.8 457.3 99 O:\87\87869.DOC -65- 200413378 _ 462.2 463.1 99 478.8 480.1 ί 100 481.7 I ! 483.3 ί 97 503.8 505.1 94 ί _ ...- 517.9 519.1 100 _ 1 445.8 447.2 98 _ _ 381.7 383.1 99 O:\87\87869.DOC -66 - 200413378 ί 1 ： 394.7 396.2 98 395.7 t 397.1 92 408.7 410.2 98 j 409.7 411.1 100 瞧 409.7 411.2 96 _ 圓 414.7 I 416.1 ! 97 O:\87\87869.DOC -67- 200413378 _ 422.8 424.2 98 430.7 432.2 94 431.7 433.2 94 434.8 436.1 100 434.8 436.1 100 _ B 434.8 436.2 95 _ 436.7 438.1 100 O:\87\87869.DOC -68- 200413378 436.8 438.2 98 g^g^|^BSi|ggfcsBaBBBtj|jM^fc3^ gMwBwBBiPMByii'i μΡΙ^^^^γρίΒ 436.8 438.2 98 ΒΜΜΗΜίΓίΐΙ iTIwiTOltii CeBBMMBSSKSKISWOTQW^^NBRS 448.8 450.2 95 450.8 452.2 95 m 國 462.8 464.3 99 H _ 463.8 465.3 92 O:\87\87869.DOC -69- 200413378

1備實例51 : B「

Br Br 將在無水CHsCN (2.0毫升）中的NBS (1當量）之溶液在％下加入在無水CH/N及CHWl2中來自製備實例29的產物之攪拌溶液中。將混合物在25°C下攪拌48小時及接著將溶劑条發。在矽膠上以CHKh/EtOAc之色層分離法供給產物。實例52 ：

將來自製備實例5 1的產物、3-(胺甲基）吨咬（1 · 1當量）、二異丙基乙胺（3.0當量）與無水二噁烷之混合物在9(rc及^2下攪拌48小時。將溶劑蒸發，並將殘餘物在矽膠上以 O:\87\87869.DOC -70- 200413378 CHWh/MeOH/濃縮水性NHUOH之管柱色層分離法純化，產生產物。實例53 :

將在1，2-^一氣乙烧中來自貫例52的產物、乙醯_氯（4.0當量）與吡啶（8.0當量）之混合物攪拌及回流72小時。將混合物倒入10%水性Na2C03中及以CH2C12萃取。將萃取物經Na2S〇4 乾燥，過濾及將溶劑蒸發。在矽膠上以EtOAc作為溶離劑之色層分離法供給產物。實例54 :

將在二噁烧中來自實例5 3的產物、胺醇（1 · 5當量）與三乙胺（2.0當量）之混合物攪拌及回流72小時。將混合物倒入 10%Na2CO3中及以CH2C12萃取。將萃取物經Na2S〇4乾燥， O:\87\87869.DOC -71 - 200413378 過濾及將溶劑蒸發。在矽膠上以CH2Cl2:MeOH作為溶離劑之色層分離法供給產物。表5 與實例54所提供基本上相同的夕驟，以來自製備實例53 之中間物與在柢11中所提供的胺、结合，可以製備在攔2中所

O:\87\87869.DOC -72- 200413378 實例58 ··

將在1:1之EtOH:H20中來自實例54的產物與K2C03 (2.0當量）之混合物在60°C下攪拌2小時。將混合物倒入Η20中及以 CH2C12萃取。將萃取物經Na2S〇4乾燥，過濾及將溶劑蒸發。在石夕膠上以CHzClyMeOH··濃縮NH4OH之色層分離法供給產物。

O:\87\87869.DOC -73- 200413378

檢定· 桿狀病毒建構作用:將週期素A及E以PCR選殖成 pFASTBAC(Invitrogen)，在胺基末端力口入GluTAG序歹U ，允許在抗-GluTAG親和性管柱上的純化作用。表現蛋白質具有約46 kDa (週期素E)及50 kDa (週期素A)之尺寸。也將 CDK2以PCR選殖成pFASTBAC，在羧基末端加入血球凝集素抗原決定部位標籤（YDVPDYAS)。表現蛋白質具有約34 kDa之尺寸。酵素生產作用:將表現週期素A、E與CDK2之重組體桿狀病毒以5的多重感染劑量（MOI)經48小時感染成SF9細胞。在1000 RPM下以離心10分鐘收成細胞，接著將含週期素（E或A)之細胞片與含CDK2之細胞片結合及在冰上經30 分鐘溶解在5倍細胞片體積的溶胞緩衝液中（該緩衝液包括 50毫克分子量Tris ρΗ8·0、0·5%ΝΡ40、1毫克分子量DDT及蛋白酶/鱗酸酶抑制劑（德國曼海姆（Mannheim)之Roche Diagnostics GmbH))。將混合物攪:拌30-60分鐘，促進週期素-CDK2複合物形成作用。接著將混合的溶胞液在15000 RPM下旋轉10分鐘，並保留上澄液。接著使用5毫升抗 -GluTAG珠（對1公升SF9細胞而言）捕獲週期素-CDK2複合物。將束缚的珠在溶胞緩衝液中清洗3次。將蛋白質以包括 O:\87\87869.DOC -74- 200413378 100-200微克/毫升GluTAG肽之溶胞緩衝液以競爭方式溶離。將溶離液在包括50毫克分子量Tds pH8.0、1毫克分子量DTT、10毫克分子量MgCl2、100微克分子量原釩酸鈉及 20%甘油的2公升激酶緩衝液中經隔夜透析。將酵素整份貯存在-70°C下。在活體外的激酶檢定：在以低蛋白質結合之96井平盤（紐約寇尼（Corning)之寇尼公司）中進行CDK2激酶檢定（或週期素A或E-依賴性）。將酵素在包括50毫克分子量Tds ρΗ8·0、10毫克分子量MgCl2、1毫克分子量DTT及0.1毫克分子量原叙酸納之激酶緩衝液中稀釋成5 0微克/毫升之最終濃度。在這些反應中所使用的基質係衍生自抗組蛋白抗體H1(來自英國安莫山（Amer sham))之生物素化肽。將基質在冰上解康及在激酶缓衝液中稀釋成2微克分子量。將化合物在10%DMSO中稀釋成預期濃度。對每一種激酶反應而言，將20微升之50微克/毫升酵素溶液（1微克酵素）與20微升之1微克分子量基質溶液混合，接著與在每一個井中的10 微升稀釋化合物合併，以供測試。以加入50微升之4微克分子量ATP及lgCi之3 3P-ATP (來自英國安莫山）開始激酶反應。允許反應在室溫下進行1小時。以加入包括0.1%Triton X-100、1毫克分子量ATP、5毫克分子量EDTA及5毫克/毫升以抗生蛋白鏈菌素塗佈之SPA珠（來自英國安莫山）之200微升終止緩衝液經15分鐘終止反應。接著使用Filtermate萬能的捕獲器（帕卡德/顧金艾爾默生物科技（Packard/Perkin Elmer Life Sciences))將SPA珠捕獲在96-井GF/B過濾盤上（帕卡德/ 鉑金艾爾默生物科技）。以2克分子量NaCl清洗珠兩次及接著以具有1%構酸之2克分子量NaCl清洗珠兩次，以消除非 O:\87\87869.DOC -75- 413378 特異性信號。接著使用ToPC〇unt 96井液體閃爍計數器（來自帕卡德7翻金艾爾默生物科技）測量放射活性信號。自每次重複的8點連續的抑制化合物稀釋劑產生的抑制數據作出劑量反應曲線圖。以化合物濃度對以未治療之樣品的CPM除以治療之樣品的CPM計算的激酶活性 /〇作圖。為了產生IC5〇值，接著將劑量反應曲線配合標準的 S型曲線，並以非線性回歸分析得到ICs◦值。將因此獲得的本發明化合物之ICm值展示在表7中。使用上述檢定以週期素A或週期素E產生這些激酶活性。

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O:\87\87869.DOC -79- 200413378 由以上的檢定值證明本發明的化合物展現極佳的CDK抑制特性。雖然已連同以上所述特殊的具體實施例說明本發明，但是那些一般熟悉本技藝的人會明白許多其替換實例、修改實例及其它變化實例。計劃將所有的這些替換實例、修改實例及變化實例落在本發明的精神及範圍内。 O:\87\87869.DOC -80-

Claims

413378 拾、申請專利範園·· • 種以結構式代表的化合物： R

r3 /N、 Η 式III 其中：尺係遥自由H、i素、芳基、雜芳基、環烷基、芳烷基、雜環基、雜環烷基、烯基、炔基、-C(0)R7、

所組成的群組，其中各 ^ 雜芳基、㈣基、 :土雜環基及其結構係如以上在R中所干之雜環基部份，可以去γ π 、、你氏^所不之亦隹、、二代，或視需要獨立以一戋多個可以相同或不相同的〆次夕個了素、烧基、環垸爲V 一部份係獨立選自由齒坑基、CF3、CN、mc(〇)R' O:\87\87869.DOC 200413378 -NR5R6、-C(02)R6、-C(0)NR5R6、-(CHR5)nOR6、-SR6、 -s(o2)r7、-s(o2)nr5r6、-n(r5)s(o2)r7、-n(r5)c(o)r7 及-n(r5)c(o)nr5r6所組成的群組； R1係Η、鹵素或烷基； R2係選自由鹵素、R9、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜環基、烯基、炔基、環烷基、-CF3、-C(0)R7、以1-6個可以相同或不相同的R9基取代之烷基所組成的群組，每一個R9係獨立選自丨一(CH2)m — f/l一R8 (CH2)n

N—R8 I一3ryl一^N~R8 及 Nraryl^~^N一R8 ，其中每一個該芳基、雜芳基、芳烷基及雜環基可以未經取代或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、環烷基、CF3、CN、-〇CF3、 -OR6、_C(0)R7、-NR5R6、-C(02)R6、-C(0)NR5R6、-SR6、 -s(o2)r7、-s(o2)nr5r6、-n(r5)s(o2)r7、-n(r5)c(o)r7 及-n(r5)c(o)nr5r6所組成的群組； R3係選自由H、芳基、雜芳基、雜環基、-(CHR5)n-芳基、 -(CHR5)n-雜芳基、-(CHR5)n-OR6、-S(02)R6、-C(〇)R6、 -S(02)NR5R6、-C(0)0R6、-C(0)NR5R6、環烷基、-CH(芳基）2、 -(CH2)m-NR8、-(CHR5)n-CH(芳基）2，(CHR5)n—p 所組成的群組，其中每一個該芳基、雜芳基及雜環基可 O:\87\87869.DOC 200413378 經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、芳基、環烷基、 CF3、CN、-OCF3、-OR5、-NR5R6、-C(02)R5、-C(0)NR5R6、 _SR6、-s(o2)r6、-s(o2)nr5r6、-n(r5)s(o2)r7、-n(r5)c(o)r7 及-n(r5)c(o)nr5r6所組成的群組； R5係H或烷基； R6係選自由Η、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基所組成的群組，其中每一個該烷基、雜芳烷基、芳基、雜芳基及芳烷基可以未經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、芳基、環烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、 -CH2OR5、·0(02)Ι15、-C(0)NR5R6、-SR6、-s(o2)r7、-S(02)NR5R6、 -n(r5)s(o2)r7、-n(r5)c(o)r7 及-N(R5)C(0)NR5R6所組成的群組； R7係選自由烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基所組成的群組，其中每一個該烷基、雜芳烷基、芳基、雜芳基及芳烷基可以未經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、芳基、環烷基、CF3、〇CF3、CN、-OR5、-NR5R6、 -CH2OR5、-C(02)R5、-C(0)NR5R6、-SR6、-s(o2)r7、-S(02)NR5R6、 -n(r5)s(o2)r7、-n(r5)c(o)r7 及-n(r5)c(o)nr5r6所組成的群組； R8係選自由 R6、-C(0)NR5R6、-S(02)NR5R6、-C(0)R7、 -C(02)R6、-S(02)R7及-(CH2)-芳基所組成的群組； O:\87\87869.DOC 200413378 R9係選自由鹵素、CN、NR5R6、-C(02)R6、-C(0)NR5R6、 -OR6、-C(0)R7、-SR6、-S(〇2)R7、_s(〇2)Nr5r6、 -N(R5)S(02)R7、-N(R5)C(0)R7及-N(R5)c(〇)NR5R6所組成的群組； m係0至4 ; η係1-4 ;及 ρ 係 0 - 3 〇 2·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中R係選自、崮素、芳基、雜芳基、烯基及_C(〇)R7所組成的群組，其中每一個該芳基及雜芳基可以未經取代或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、CF3、CN、_〇〇3及-〇R6所組成的群組； R1係Η或低碳烷基； R2係選自由齒素、烷基、芳基、雜芳基、烯基及_c(〇)r7 所組成的群組，《中每一個該烧基 '芳基及雜芳基可以未經取代或視需要獨立以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由函素、烷基、CF3、cN、 -OCF3及- OR6所組成的群組； R3係選自由H、芳基、雜芳基、-(CHR5)n-芳基、_(Chr5) 雜芳基、-(CHRVOR6、-C(0)r6、環烷基、_CH(芳基二 -(CHR5)n—N 0

及、/陶π N—R8 所組成的群組，其 O:\87\87869.DOC -4- 200413378 中每一個該芳基及雜芳基可經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由鹵素、烷基、芳基、CF3、CN、-C(02)R5及-S(02)R6所組成的群組； R5係Η或低碳烧基； m係0至2 ;及 η係1或2。 3·根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R係Η。 4.根據申請專利範圍第2項之化合物，其中r係未經取代之苯基。 5·根據申請專利範圍第2項之化合物，其中r係以一或多個選自由F、Cn、Br及〇Cf3所組成的群組之部份取代之苯基。 6·根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R2係f、◦卜Br、 I、甲基、乙烯基或-C(CH3)2-OH。 7·根據申請專利範圍第6項之化合物，其中“係份^或甲基。 8·根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R3係η、2_基丙醇、苯基、节基、卜比„定-2·基）甲基、（吼咬_3_基）甲基、卜比參。疋_4-基）甲基、2_[(吡啶_3_基）]乙基及2_[(吡啶_4_基乙基，其中每一個該笨基（包括該节基之苯基）及呢啶基可以未經取代或視需要以一或多個可以相同或不相同的部份取代，每一部份係獨立選自由F、a、Br、CF3、低碳烧基、-s(o)2ch3、ψ氧基及c_組成的群組。 9.根據申請專利範圚筮Q 视国弟8項之化合物，其中R3係苄基。 10 ·根據申請專利範圖楚乾固弟8項之化合物，其中R3係（呲啶-2-基）一 O:\87\87869.DOC 200413378 甲基。 11. 根據申請專利範圍第8項之化合物，其中R3係（吡啶-3-基）甲基。 12. 根據申請專利範圍第8項之化合物，其中R3係（吡啶-4-基）甲基。 13. 根據申請專利範圍第8項之化合物，其中R3係2-基丙醇。 14. 根據申請專利範圍第8項之化合物，其中R3係3_基-丙基 -l-处嘻烧-2-酮。 15. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R3係苯基。 16. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中m係0。 17. —種以下化學式之化合物：

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OA87\S7869.DOC 200413378

O:\87\87869.DOC 200413378 或其在醫藥上可接受之鹽或媒合物。 18. —種以下化學式之化合物：

或其在醫藥上可接受之鹽或媒合物。 19. 一種用於抑制一或多種週期素依賴性激酶之醫藥組合物，其包含有效治療劑量的至少一種如申請專利範圍第1 項之化合物，與至少一種在醫藥上可接受之載體。 O:\87\87869.DOC -9- 200413378 2〇· —種用於治療一或多種與週期素依賴性激酶有關連之疾病的醫藥組合物，其包含有效治療劑量的至少一種如申請專利範圍第1項之化合物，與至少一種在醫藥上可接受之載體。 21·根據申請專利範圍第20項之醫藥組合物，其中該週期素依賴性激酶係CDK2。 22·根據申請專利範圍第2〇項之醫藥組合物，其中該週期素依賴性激酶係以促細胞分裂劑活化之蛋白激酶 (MAPK/ERK)。 23·根據申請專利範圍第2〇項之醫藥組合物，其中該週期素依賴性激酶係糖原合成酶激酶3(GSK3P)。 24.根據申請專利範圍第2〇項之醫藥組合物，其中該疾病係選自由膀胱癌、乳癌、直腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、攝護腺癌及皮膚癌（包括鱗狀細胞瘤疒白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性淋巴性白血病、 B-細胞淋巴瘤、T-細胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、髮狀細胞淋巴瘤及巴奇氏惡性淋巴瘤；心〖生和慢性骨趙性白血病、骨髓發育不良徵候群及前骨髓:細胞白血病；纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤；星狀細胞瘤、神經細胞瘤、神經膠質瘤及神經鞘瘤；黑色素細胞瘤、精母細胞瘤、畸胎瘤、骨瘤、著色性 O:\87\87869.DOC -10- 200413378 乾皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌及卡波西氏肉瘤所組成的群組。 25.種用於治療一或多種與週期素依賴性激酶有關連之疾病的醫藥組合，其包含第一種化合物之劑量，其係一種如申請專利範圍第i項之化合物或其在醫藥上可接受之鹽或媒合物；及至少一個第二種化合物之劑量，該第二種化合物係抗癌劑；其中以第一種化合物及該第二種化合物之劑量得到療效0 其進一步包含照根據申請專利範圍第25項之醫藥組合射‘治療法。 27.根據申請專利範圍第25項之醫藥組合，其中該抗癌劑係選自由細胞抑制劑、順氯氨鉑、阿霉素、效癌易、紅豆杉醇、順鉑、CPT-11、伊利替康、刊普托斯塔、托波替康、紫杉醇、歐洲紫杉醇、埃波霉素、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、氨曱蝶呤、5FU、帝蒙柔羅麥德、環磷醯胺、SCH 66336、R115777、L778，123、BMS 214662、艾瑞沙、塔西伐、EGFR的抗體、格里維克、内含子、ara_c、亞德里亞霉素、環磷醯胺、吉西它賓、尿嘧啶氮芬、氮芥、異環磷醯胺、美法蘭、苯丁酸氮芥、皮波伯曼、三乙撐蜜胺、三乙撐硫代磷酸醯胺、白消安、卡幕司他、汀、路幕司他汀、鏈脲佐菌素、達卡巴嗪、氟脫氧尿苷、阿糠胞苷、6-酼基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、氟達拉賓磷酸鹽、奥沙 O:\87\87869.DOC -11 - 200413378 利翻、琉可維瑞、el〇xatintm、潘托司他汀、長春花驗、長春新鹼、長春地辛、博萊霉素、放線霉素、道諾紅菌素阿霉素、表阿霉f、伊達比辛、光神霉素、脫氧肋間型霉素、絲裂霉素、L_天冬醯胺酶、替尼泊苷Η心炔雌二醇、二乙基己烯雌酚、睪酮、脫氫可的松、氟甲睪酮、拓莫斯丹諾酮丙酸鹽、睪内酯、甲地孕酮醋酸鹽、甲基脫氫皮醇、甲基睪酮、脫氫皮醇、氫羥脫氫皮醇、氯烯雌醚、羥基孕激素、胺格魯米德、雌莫司汀、甲孕酮醋酸鹽、琉普利德、氟塔麥德、托瑞米芬、固色林、順氯氨鉑、卡鉑、羥基脲、安吖啶、普卡巴嗪、米托坦、米托杉酮、左美素、納維賓、cpT_u、安納退唑、來退唑、凱普西塔賓、瑞羅杉芬、拓羅山芬或六甲基蜜胺所組成的群組。 28. —種醫藥組合物，其包含有效治療劑量的至少一種如申請專利範圍第1項之化合物與至少一種在醫藥上可接受之載體的組合。 29. 根據申請專利範圍第28項之醫藥組合物，其另外包含一或多種選自由細胞抑制劑、順氯氨鉑、阿霉素、姓癌易、紅豆杉醇、順鉑、CPT-Π、伊利替康、刊普托斯塔、托波替康、备、杉醇、歐洲紫杉醇、埃波霉素、二苯氧胺、 5-氟尿嘧啶、氨甲蝶呤、5FU、帝蒙柔羅麥德、環磷醯胺、 SCH 66336、、Rl15777、L778，123、BMS 214662、艾瑞沙、塔西伐、EGFR的抗體、格里維克 '内含子、ara-c、亞德里亞霉素、環磷酸胺、吉西它賓、尿嘧啶氮芥、氮 O:\87\87869.DOC -12- 200413378 芥、異環磷醯胺、美法蘭、苯丁酸氮芥、皮波伯曼、三乙撐蜜胺、三乙撐硫代磷酸醯胺、白消安、卡幕司他汀、路幕司他汀、鏈腺佐菌素、達卡巴嗪、敦脫氧尿普、阿糖胞苦、6-疏基嗓吟、6_硫代鳥嗓呤、氣達拉賓碟酸趟、潘托司他汀、長春花驗、長春新驗、長春地辛、博萊霉素、放線霉素、道諾紅菌素、阿霉素、表阿霉素、伊比辛、光神霉素、脫氧肋間型霉素、絲裂霉素心冬醯胺酶、替尼泊普Ι7α_块雖天里并一乙基己烯雌盼、睪脫虱可的松、氟甲睪’、拓莫斯丹諾S同丙酸鷓、畢内醋、甲地孕酮醋酸鹽、甲基二脫氫皮醇、氫-脫氣皮醇、氯㈣二：Γ、格魯米德、雌莫司々、甲孕工：/素、胺麥德、托瑞米芬、s $ Μ ^故普利德、氟塔固色林、順氯氨鉑安…普卡巴嗪、米托 +銘、經基脲、賓、咖]卜安納退唾、來托左美素、納維芬、拓羅山芬或丄讯普西塔賓、瑞羅杉 30. , //、甲基贫胺所組成的群％之浐卢^ 一種純化型式的如 I且之抗癌劑》明專利乾圍第1項之化合物。 O:\87\87869.DOC -13- 200413378 柒、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明：捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： R

式III O:\87\87869.DOC