DE60317353T2

DE60317353T2 - Imidazopyrazine als cdk-inhibitoren

Info

Publication number: DE60317353T2
Application number: DE60317353T
Authority: DE
Inventors: Kamil Garwood PARUCH; Timothy J. Chatham GUZI; Michael P. Scotch Plains DWYER; Ronald J. Convent Station DOLL; Viyyoor M. Parsippany GIRIJAVALLABHAN; Alan K. Hackettstown MALLAMS
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2002-09-23
Filing date: 2003-09-19
Publication date: 2008-08-28
Anticipated expiration: 2023-09-20
Also published as: AU2003272476A1; NZ538685A; MXPA05003120A; JP4799864B2; PE20050081A1; CA2499756C; ATE377600T1; KR20050057520A; CN1694886A; ES2293015T3; CA2499756A1; ZA200502375B; AU2003272476B2; US7432265B2; TW200413378A; US6919341B2; AR041347A1; EP1543008A1; US20050130980A1; HK1072056A1

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Imidazo[1,2-a]pyrazinverbindungen, die als Proteinkinaseinhibitoren (wie beispielsweise Inhibitoren der cyclinabhängigen Kinase, mitogenaktivierte Proteinkinase (MAPK/ERK), Glykogensynthasekinase 3 (GSK3β) und dergleichen) brauchbar sind, pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Verbindungen enthalten, und deren Verwendung zur Herstellung eines Medikaments, das in Behandlungsverfahren unter Verwendung der Verbindungen und Zusammensetzungen verwendet wird, um Erkrankungen wie beispielsweise Krebs, Entzündung, Arthritis, Viruserkrankungen, neurodegenerative Erkrankungen, wie Morbus Alzheimer, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und Pilzerkrankungen zu behandeln. Diese Anmeldung beansprucht die Priorität der vorläufigen US-Patentanmeldung mit dem Aktenzeichen Nr. 60/412,997, eingereicht am 23. September 2002.
Hintergrund der Erfindung
Proteinkinaseinhibitoren schließen Kinasen wie beispielsweise die Inhibitoren der cyclinabhängigen Kinasen (CDKs), mitogenaktivierten Proteinkinase (MAPK/ERK), Glykogensynthasekinase 3 (GSK3β) und dergleichen ein. Die cyclinabhängigen Kinasen (CDKs) sind Serin/Threonin-Proteinkinasen, die die treibende Kraft hinter dem Zellzyklus und der Zellproliferation sind. Individuelle CDKs, wie CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6 und CDK7, CDK8 und dergleichen, übernehmen bestimmte Rol len in der Progression des Zellzyklus und können als G1-, S- oder G2M-Phasenenzyme klassifiziert werden. Unkontrollierte Proliferation ist ein Anzeichen für Krebszellen, und Fehlregulation der CDK-Funktion tritt mit großer Häufigkeit bei vielen bedeutsamen soliden Tumoren auf. CDK2 und CDK4 sind von besonderem Interesse, weil ihre Aktivitäten oft in einer weiten Vielfalt von menschlichen Krebserkrankungen fehlreguliert werden. Die CDK2-Aktivität ist für die Progression durch die G1- bis S-Phase des Zellzyklus erforderlich, und CDK2 ist eine der Schlüsselkomponenten des G1-Checkpunkts. Checkpunkte dienen dazu, die richtige Sequenz der Ereignisse des Zellzyklus aufrechtzuerhalten und der Zelle die Reaktion auf Verletzungen oder Proliferationssignale zu ermöglichen, während der Verlust der richtigen Checkpunktkontrolle bei Krebszellen zur Tumorgenese beiträgt. Der CDK2-Stoffwechselweg beeinflusst die Tumorgenese auf der Ebene der Tumorsuppressorfunktion (z. B. p52, RB und p27) und der Onkogenaktivierung (Cyclin E). Viele Berichte haben gezeigt, dass sowohl der Coaktivator, Cyclin E, als auch der Inhibitor, p27, von CDK2 bei Brust-, Kolon-, nicht-kleinzelligem Lungenkrebs, Magen-, Prostata-, Blasenkrebs, Non-Hodgkins Lymphom, Eierstockkrebs und anderen Krebsarten entweder zu stark oder zu schwach exprimiert werden. Es ist gezeigt worden, dass ihre geänderte Expression mit erhöhten CDK2-Aktivitätsniveaus und schlechten Gesamtüberlebensraten korreliert. Diese Beobachtung macht CDK2 und seine Regulierungsstoffwechselwege zu interessanten Zielen für die Entwicklungsjahre, in der Literatur ist über eine Reihe Adenosin-5'-triphosphat (ATP)-kompetitiver kleiner organischer Moleküle sowie Peptide als CDK-Inhibitoren für die mögliche Behandlung von Krebserkrankungen berichtet worden. US 6,413,974 , Spalte 1, Zeile 23 bis Spalte 15, Zeile 10, gibt eine gute Beschreibung der verschiedenen CDKs und ihrer Beziehung zu den verschiedenen Krebstypen.
CDK-Inhibitoren sind bekannt. Flavopiridol (Formel I) ist beispielsweise ein unselektiver CDK-Inhibitor, mit dem momentan klinische Versuche am Menschen durchgeführt werden, A. M. Sanderowicz et al., J. Clin. Oncol. (1998) 16, 2986–2999.
Formel I
Andere bekannte Inhibitoren für die CDKs schließen beispielsweise Olomoucin (J. Vesely et al., Eur. J. Biochem., (1994) 224, 771–786) und Roscovitin (I. Meijer et al., Eur. J. Biochem., (1997) 243, 527–536) ein. US 6,107,305 beschreibt bestimmte Pyrazolo[3,4-b]pyridinverbindungen als CDK-Inhibitoren. Eine veranschaulichende Verbindung aus US 6,107,305 hat die Formel II:
Formel II
K. S. Kim et al., J. Med. Chem. 45 (2002) 3905–3927 und WO 02/10162 offenbaren bestimmte Aminothiazolverbindungen als CDK-Inhibitoren.
Pyrazolopyrimidine sind bekannt. WO 92/18504 , WO 02/50079 , WO 95/35298 , WO 02/40485 , EP 94304104.6 , EP 0628559 (entsprechen US-Patenten 5,602,136 , 5,602,137 und 5,571,813 ), US 6,383,790 , Chem. Pharm. Bull. (1999) 47, 928, J. Med. Chem., (1977) 20, 296, J. Med. Chem. (1976) 19, 517 und Chem. Pharm. Bull. (1962) 10, 620 offenbaren verschiedene Pyrazolopyrimidine.
US 5,028,605 offenbart 8-Alkylaminoimidazo(1,2-α)pyrazine und ihre Verwendung auf dem Gebiet der Antispastika, Uterusrelaxantien, Bronchiodilatoren, Herzanaleptika und Neurosedativa.
Vitse et al. berichten zudem über die Synthese von Imidazo[1,2-a]pyrazinderivaten mit Bronchiodilation und cyclische Nukleotidphosphodiesterase inhibierenden Aktivitäten (Olivier Vitse et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 7 (1999), 1059–1065).
Es sind ferner Untersuchungen verschiedener Imidazo[1,2-α]pyrazinderivaten und ihrer inhibierenden Potenz auf PDE-Isoenzyme, die aus Dami-Zellen isoliert wurden, bekannt (Katja Zurbonsen et al., Biochemical Pharmacology 54, 1997, 365–371; Katja Zurbonsen et al., European Journal of Pharmacology 320, 1997, 215–221).
WO 02/060492 offenbart außerdem Verfahren zum Inhibieren von Proteintyrosinkinasen, wie JAK, unter Verwendung von 6-Carba-8-amino-disubstituierten Imidazo[1,2-α]pyrazinen.
Es besteht ein Bedarf an neuen Verbindungen, Formulierungen, Behandlungen und Therapien zur Behandlung von Erkrankungen und Störungen, die mit CDKs zusammenhängen. Es ist daher eine Aufgabe dieser Erfindung, Verbindungen zu liefern, die zur Behandlung oder Prävention oder Linderung derartiger Erkrankungen und Störungen brauchbar sind.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung liefert in ihren vielen Ausführungsformen eine neue Klasse von Imidazo[1,2-a]pyrazinverbindungen als Inhibitoren von cyclinabhängigen Kinasen, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen, pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine oder mehrere derartige Verbindungen enthalten, Verfahren zur Herstellung pharmazeutischer Formulierungen, die eine oder mehrere derartige Verbindungen enthalten, ihre Verwendung zur Herstellung eines Medikaments, das in Verfahren zur Behandlung, Prävention, Inhibierung oder Linderung von einer oder mehreren Erkrankungen verwendet wird, die mit den CDKs zusammenhängen, unter Verwendung dieser Verbindungen oder pharmazeutischen Zusammensetzungen.
Die vorliegende Anmeldung offenbart in einem Aspekt eine Verbindung oder pharmazeutisch annehmbare Salze oder Solvate der Verbindung, wobei die Verbindung die in Formel III gezeigte allgemeine Struktur hat:
Formel III worin:
R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Arylalkyl, Heterocyclyl, Heterocyclylalkyl, Alkenyl, Alkinyl, -C(O)R⁷,
wobei jedes von dem Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Arylalkyl, Alkenyl, Heterocyclyl und jede von den Heterocyclyleinheiten, deren Strukturen unmittelbar oben für R gezeigt sind, unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Cycloalkyl, CF₃, CN, -OCF₃, -OR⁶, -C(O)R⁷, -NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -(CHR⁵)_nOR⁶, -SR⁶, -S(O₂)R⁷, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶;
R¹ H, Halogen oder Alkyl ist;
R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus R⁹, Alkyl, Aryl, Arylalkyl, Heteroaryl, Heteroarylalkyl, Heterocyclyl, Alkenyl, Alkinyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Heterocyclylalkyl, -CF₃, -C(O)R⁷, mit 1 bis 6 R⁹-Gruppen substituiertem Alkyl, wobei die Gruppen gleich oder verschieden sein können, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus

wobei jedes von dem Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Arylalkyl und Heterocyclyl unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Cycloalkyl, CF₃, CN, -OCF₃, -OR⁶, -C(O)R⁷, -NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -SR⁶, -S(O₂)R⁷, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶;
R³ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, -(CHR⁵)_n-Aryl, -(CHR⁵)_n-Heteroaryl, -(CHR⁵)_n-Cycloalkyl, -(CHR⁵)_n-Heterocycloalkyl, -(CHR⁵)_n-CH(aryl)₂,
-(CHR⁵)_n-OR⁶, -S(O₂)R⁶, -C(O)R⁶, -S(O₂) NR⁵R⁶, -C(O)OR⁶, -C(O)NR⁵R⁶, Cycloalkyl, -CH(Aryl)₂ _, -CH(Heteroaryl)₂, -(CH₂)_m-NR⁸, und
wobei jedes von dem Aryl, Heteroaryl und Heterocyclyl unsubstituiert oder gegebenenfalls mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, Cycloalkyl, CF₃, CN, -OCF₃, -OR⁵, -NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁵, -O(O)NR⁵R⁶, -SR⁶, -S(O₂)R⁶, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶;
R⁵ H oder Alkyl ist;
R⁶ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Arylalkyl und Heteroarylalkyl, wobei jedes von dem Alkyl, Heteroarylalkyl, Aryl, Heteroaryl und Arylalkyl unsubstituiert ist;
R⁷ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Arylalkyl und Heteroarylalkyl, wobei jedes von dem Alkyl, Heteroarylalkyl, Aryl, Heteroaryl und Arylalkyl unsubstituiert ist;
R⁸ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -S(O₂)NR⁵R⁶, -C(O)R⁷, -C(O₂)R⁶, -S(O₂)R⁷ und -(CH₂)-Aryl;
R⁹ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, CN, NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -OR⁶, -C(O)R⁷, -SR⁶, -S(O₂)R⁷, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶;
m 0 bis 4 ist;
n 1 bis 4 ist und
p 0 bis 3 ist.
Die Verbindungen der Formel III können als Proteinkinaseinhibitoren brauchbar sein und können zur Behandlung und Prävention von proliferierenden Erkrankungen brauchbar sein, beispielsweise Krebs, Entzündung und Arthritis. Sie können auch zur Behandlung neurodegenerativer Erkrankungen brauchbar sein, wie Morbus Alzheimer, kardiovaskulärer Erkrankungen, Viruserkrankungen und Pilzerkrankungen.
Detaillierte Beschreibung
Die vorliegende Erfindung offenbart in einer Ausführungsform Imidazo[1,2-a]pyrazinverbindungen, die durch Strukturformel III wiedergegeben werden, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon, wobei die verschiedenen Einheiten wie oben beschrieben sind.
R ist in einer anderen Ausführungsform ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Aryl, Heteroaryl, Alkenyl und -C(O)R⁷, wobei jedes von dem Aryl und Heteroaryl unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, CF₃, CN, -OCF₃ und -OR⁶.
Gemäß einer anderen Ausführungsform ist R¹ H oder niederes Alkyl.
R² ist in einer anderen Ausführungsform ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Alkenyl und -C(O)R⁷, wobei jedes von dem Alkyl, Aryl und Heteroaryl unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, CF₃, CN, -OCF₃ und -OR⁶.
R³ ist gemäß einer anderen Ausführungsform ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus H, Aryl, Heteroaryl, -(CHR⁵)_n-Aryl, -(CHR⁵)_n-Heteroaryl, -(CHR⁵)_n-OR⁶, -C(O)R⁶ ^, Cycloalkyl, -CH(Aryl)₂,
wobei jedes von dem Aryl oder Heteroaryl unsubstituiert oder gegebenenfalls mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jede Einheit unabhängig aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, CF₃, CN, -C(O₂)R⁵ und -S(O₂)R⁶ ausgewählt ist.
Gemäß einer anderen Ausführungsform ist R⁵ H oder niederes Alkyl.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist m 0 bis 2.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist n 1 oder 3.
R ist gemäß einer weiteren Ausführungsform ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Phenyl und Heteroaryl.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist R¹ H, Br oder Methyl.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist R² F, Cl, Br, I, Aryl, Alkenyl, Heteroaryl oder CF₃.
R³ ist gemäß einer weiteren Ausführungsform Phenyl, (Pyrid-2-yl)methyl, (Pyrid-3-yl)methyl, (Pyrid-4-yl)methyl, 2-[(Pyrid-3-yl)]ethyl, 2-[(Pyrid-4-yl)]ethyl, 2-Ylpropanol, 3-Ylpropyl-1-Pyrrolidin-2-on, oder -C(O)CH₃, wobei das Pyridyl unsubstituiert oder gegebenenfalls mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus F, Cl, Br, CF₃, niederem Alkyl, Methoxy und CN.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist R⁵ H.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist m 0.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist n 1 oder 2.
In Tabelle 1 ist eine erfindungsgemäße Gruppe von Verbindungen gezeigt.
Tabelle 1
Eine weitere Ausführungsform offenbart Verbindungen mit der Formel:
Die folgenden Begriffe haben, wenn nicht anders angegeben, oben und in dieser Offenbarung die folgenden Bedeutungen: "Patient" schließt sowohl Menschen als auch andere Tiere ein. "Säuger" bedeutet Menschen und andere Säugetiere.
"Alkyl" bedeutet eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe, die geradkettig oder verzweigt sein kann und etwa 1 bis etwa 20 Kohlenstoffatome in der Kette enthält. Bevorzugte Alkylgruppen enthalten etwa 1 bis etwa 12 Kohlenstoffatome in der Kette. Besonders bevorzugte Alkylgruppen enthalten etwa 1 bis etwa 6 Kohlenstoffatome in der Kette. Verzweigt bedeutet, dass eine oder mehrere niedere Alkylgruppen, wie Methyl, Ethyl oder Propyl, an eine lineare Alkylkette gebunden sind. "Niederes Alkyl" bedeutet eine Gruppe mit etwa 1 bis etwa 6 Kohlenstoffatomen in der Kette, die geradkettig oder verzweigt sein kann. Der Begriff "substituiertes Alkyl" bedeutet, dass die Alkylgruppe mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jeder Substituent unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe be stehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, Cycloalkyl, Cyano, Hydroxy, Alkoxy, Alkylthio, Amino, -NH(Alkyl), -NH(Cycloalkyl), -N(Alkyl)₂, Carboxy und -C(O)O-Alkyl. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Alkylgruppen schließen Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl und t-Butyl ein.
"Alkinyl" bedeutet eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe, die mindestens eine Kohlenstoff-Kohlenstoff-Dreifachbindung enthält und geradkettig oder verzweigt sein kann und etwa 2 bis etwa 15 Kohlenstoffatome in der Kette enthält. Bevorzugte Alkinylgruppen haben etwa 2 bis etwa 12 Kohlenstoffatome in der Kette und insbesondere etwa 2 bis etwa 4 Kohlenstoffatome in der Kette. Verzweigt bedeutet, dass eine oder mehrere niedere Alkylgruppen, wie Methyl, Ethyl oder Propyl, an eine lineare Alkinylkette gebunden sind. "Niederes Alkinyl" bedeutet etwa 2 bis etwa 6 Kohlenstoffatome in der Kette, die geradkettig oder verzweigt sein kann. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Alkinylgruppen schließen Ethinyl, Propinyl, 2-Butinyl und 3-Methylbutinyl ein. Der Begriff "substituiertes Alkinyl" bedeutet, dass die Alkinylgruppe durch einen oder mehrere Substituenten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jeder Substituent unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl.
"Aryl" bedeutet ein aromatisches monocyclisches oder multicyclisches Ringsystem, das etwa 6 bis etwa 14 Kohlenstoffatome, vorzugsweise etwa 6 bis etwa 10 Kohlenstoffatome enthält. Die Arylgruppe kann gegebenenfalls mit einem oder mehreren "Ringsystemsubstituenten" substituiert sein, die gleich oder verschieden sein können und wie oben definiert sind. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Arylgruppen schließen Phenyl und Naphthyl ein.
"Heteroaryl" bedeutet ein aromatisches monocyclisches oder multicyclisches Ringsystem, das etwa 5 bis etwa 14 Ringatome, vorzugsweise etwa 5 bis etwa 10 Ringatome enthält, wobei ein oder mehrere der Ringatome ein von Kohlenstoff verschiedenes Element ist, beispielsweise Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel allein oder in Kombination. Bevorzugte Heteroaryle enthalten etwa 5 bis etwa 6 Ringatome. Das "Heteroaryl" kann gegebenenfalls mit einem oder mehreren "Ringsystemsubstituenten" substituiert sein, die gleich oder verschieden sein können und wie oben definiert sind. Der Präfix Aza, Oxa oder Thia vor der Heteroarylstammbezeichnung bedeutet, dass mindestens ein Stickstoff-, Sauerstoff- beziehungsweise Schwefelatom als Ringatom vorhanden ist. Ein Stickstoffatom eines Heteroaryls kann gegebenenfalls zu dem entsprechenden N-Oxid oxidiert werden. Nicht einschränkende Beispiele für geeignete Heteroaryle schließen Pyridyl, Pyrazinyl, Furanyl, Thienyl, Pyrimidinyl, Pyridon (einschließlich N-substituierter Pyridone), Isoxazolyl, Isothiazolyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Pyrazolyl, Furazanyl, Pyrrolyl, Pyrazolyl, Triazolyl, 1,2,4-Thiadiazolyl, Pyrazinyl, Pyridazinyl, Chinoxalinyl, Phthalazinyl, Oxindolyl, Imidazo[1,2-a]pyridinyl, Imidazo[2,1-b]thiazolyl, Benzofurazanyl, Indolyl, Azaindolyl, Benzimidazolyl, Benzothienyl, Chinolinyl, Imidazolyl, Thienopyridyl, Chinazolinyl, Thienopyrimidyl, Pyrrolopyridyl, Imidazopyridyl, Isochinolinyl, Benzoazaindolyl, 1,2,4-Triazinyl, Benzothiazolyl und dergleichen ein. Der Begriff "Heteroaryl" bezieht sich auch auf teilweise gesättigte Heteroaryleinheiten, wie beispielsweise Tetrahydroisochinolyl, Tetrahydrochinolyl und dergleichen.
"Aralkyl" oder "Arylalkyl" bedeutet eine Arylalkylgruppe, in der das Aryl und Alkyl wie zuvor beschrieben sind. Bevorzugte Aralkyle enthalten eine niedere Alkylgruppe. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Aralkylgruppen schließen Benzyl, 2-Phenethyl und Naphthenylmethyl ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Alkyl.
"Alkylaryl" bedeutet eine Alkylarylgruppe, in der das Alkyl und Aryl wie zuvor beschrieben sind. Bevorzugte Alkylaryle enthalten eine niedere Alkylgruppe. Ein nicht-einschränkendes Beispiel für eine geeignete Alkylarylgruppe ist Tolyl. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Aryl.
"Cycloalkyl" bedeutet ein nicht-aromatisches monocyclisches oder multicyclisches Ringsystem, das etwa 3 bis etwa 10 Kohlenstoffatome, vorzugsweise etwa 5 bis etwa 10 Kohlenstoffatome enthält. Bevorzugte Cycloalkylringe enthalten etwa 5 bis etwa 7 Ringatome. Das Cycloalkyl kann gegebenenfalls mit einem oder mehreren "Ringsystemsubstituenten" substituiert sein, die gleich oder verschieden sein können und wie oben definiert sind. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete monocyclische Cycloalkyle schließen Cyclopropyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl und dergleichen ein. Zu nicht einschränkenden Beispielen für geeignete multicyclische Cycloalkyle gehören 1-Decalinyl, Norbornyl, Adamantyl und dergleichen sowie teilweise gesättigte Spezies, wie beispielsweise Indanyl, Tetrahydronaphthyl und dergleichen.
"Halogen" bedeutet Fluor, Chlor, Brom oder Iod.
"Ringsystemsubstituent" bedeutet einen an ein aromatisches oder nicht-aromatisches Ringsystem gebundenen Substituenten, der beispielsweise einen verfügbaren Wasserstoff an dem Ringsystem ersetzt. Die Ringsystemsubstituenten können gleich oder unterschiedlich sein und sind jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, Aryl, Heteroaryl, Aralkyl, Alkylaryl, Heteroaralkyl, Heteroarylalkenyl, Heteroarylalkinyl, Alkylheteroaryl, Hydroxy, Hydroxyalkyl, Alkoxy, Aryloxy, Aralkoxy, Acyl, Aroyl, Halogen, Nitro, Cyano, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, Aralkoxycar bonyl, Alkylsulfonyl, Arylsulfonyl, Heteroarylsulfonyl, Alkylthio, Arylthio, Heteroarylthio, Aralkylthio, Heteroaralkylthio, Cycloalkyl, Heterocyclyl, -C(=N-CN)-NH₂, -C(=NH)-NH₂, -C(=NH)-NH(alkyl), Y₁Y₂N-, Y₁Y₂N-Alkyl-, Y₁Y₂NC(O)-, Y₁Y₂NSO₂- und -SO₂NY₁Y₂, wobei Y₁ und Y₂ gleich oder unterschiedlich sein können und jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Alkyl, Aryl und Aralkyl. "Ringsystemsubstituent" kann auch eine einzelne Einheit bedeuten, die gleichzeitig zwei verfügbare Wasserstoffe an zwei benachbarten Kohlenstoffatomen (ein H an jedem Kohlenstoff) an einem Ringsystem ersetzt. Beispiele für eine derartige Einheit sind Methylendioxy, Ethylendioxy, -C(CH₃)₂- und dergleichen, die Einheiten wie beispielsweise die Folgenden bilden:
"Heterocyclyl" bedeutet ein nicht-aromatisches gesättigtes monocyclisches oder multicyclisches Ringsystem, das etwa 3 bis etwa 10 Ringatome, vorzugsweise etwa 5 bis etwa 10 Ringatome enthält, wobei ein oder mehrere der Atome des Ringsystems ein von Kohlenstoff verschiedenes Element ist bzw. sind, beispielsweise Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel allein oder in Kombination. In dem Ringsystem sind keine benachbarten Sauerstoff- und/oder Schwefelatome vorhanden. Bevorzugte Heterocyclyle enthalten etwa 5 bis etwa 6 Ringatome. Der Präfix Aza, Oxa oder Thia vor der Heterocyclylstammbezeichnung bedeutet, dass mindestens ein Stickstoff-, Sauerstoff- beziehungsweise Schwefelatom als Ringatom vorhanden ist. Jegliches -NH in einem Heterocyclylring kann in geschützter Form vorliegen, wie beispielsweise als -N(Boc), -N(CBz), -N(Tos)-Gruppe und dergleichen, und diese geschützten Einheiten werden auch als Teil dieser Erfindung angesehen. Das Heterocyclyl kann gegebenen falls mit einem oder mehreren "Ringsystemsubstituenten" substituiert sein, die gleich oder verschieden sein können und wie oben definiert sind. Das Stickstoff- oder Schwefelatom des Heterocyclyls kann gegebenenfalls zu dem entsprechenden N-Oxid, S-Oxid oder S,S-Dioxid oxidiert sein. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete monocyclische Heterocyclylringe schließen Piperidyl, Pyrrolidinyl, Piperazinyl, Morpholinyl, Thiomorpholinyl, Thiazolidinyl, 1,4-Dioxanyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothiophenyl, Lactam, Lacton und dergleichen ein.
Es sei darauf hingewiesen, dass es in einem erfindungsgemäßen Heteroatom enthaltenden Ringsystem keine Hydroxylgruppen an Kohlenstoffatomen neben einem N, O oder S gibt, sowie keine N- oder S-Gruppen an Kohlenstoff neben einem anderen Heteroatom gibt. In dem Ring
gibt es beispielsweise kein -OH, das an Kohlenstoffatome mit den Bezeichnungen 2 und 5 gebunden ist.
Es sei auch darauf hingewiesen, dass tautomere Formen, wie beispielsweise die Einheiten:
in bestimmten Ausführungsformen dieser Erfindung als Äquivalent angesehen werden.
"Alkinylalkyl" bedeutet eine Alkinylalkylgruppe, in der das Alkinyl und Alkyl wie zuvor beschrieben sind. Bevorzugte Alkinylalkyle enthalten eine niedere Alkinyl- und eine niedere Alkylgruppe. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Alkyl. Zu nicht einschränkenden Beispielen für geeignete Alkinylalkylgruppen gehören Propargylmethyl.
"Heteroaralkyl" bedeutet eine Heteroarylalkylgruppe, in der das Heteroaryl und Alkyl wie zuvor beschrieben sind. Bevorzugte Heteroaralkyle enthalten eine niedere Alkylgruppe. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Aralkylgruppen schließen Pyridylmethyl und Chinolin-3-ylmethyl ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Alkyl.
"Hydroxyalkyl" bedeutet eine HO-Alkylgruppe, in der Alkyl wie zuvor definiert ist. Bevorzugte Hydroxyalkyle enthalten niederes Alkyl. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Hydroxyalkylgruppen schließen Hydroxymethyl und 2-Hydroxyethyl ein.
"Acyl" bedeutet eine H-C(O)-, Alkyl-C(O)- oder Cycloalkyl-C(O)-Gruppe, in der die verschiedenen Gruppen wie zuvor beschrieben sind. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Carbonyl. Bevorzugte Acyle enthalten ein niederes Alkyl. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Acylgruppen schließen Formyl, Acetyl und Propanoyl ein.
"Aroyl" bedeutet eine Aryl-C(O)-Gruppe, in der die Arylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Carbonyl. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Aralkenylgruppen schließen Benzoyl und 1-Naphthoyl ein.
"Alkoxy" bedeutet eine Alkyl-O-Gruppe, in der die Alkylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Alkoxygruppen schließen Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy und n-Butoxy ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über den Ethersauerstoff.
"Aryloxy" bedeutet eine Aryl-O-Gruppe, in der die Arylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Aryloxygruppen schließen Phenoxy und Naphthoxy ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über den Ethersauerstoff.
"Aralkyloxy" bedeutet eine Aralkyl-O-Gruppe, in der die Aralkylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Aralkyloxygruppen schließen Benzyloxy und 1- und 2-Naphthalinmethoxy ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über den Ethersauerstoff.
"Alkylthio" bedeutet eine Alkyl-S-Gruppe, in der die Alkylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Zu nicht-einschränkenden Beispielen für geeignete Alkylthiogruppen gehören Methylthio und Ethylthio. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über den Schwefel.
"Arylthio" bedeutet eine Aryl-S-Gruppe, in der die Arylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Arylthiogruppen schließen Phenylthio und Naphthylthio ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über den Schwefel.
"Aralkylthio" bedeutet eine Aralkyl-S-Gruppe, in der die Aralkylgruppe wie zuvor beschrieben ist. Ein nicht-einschränkendes Beispiel für eine geeignete Aralkylthiogruppe ist Benzylthio. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über den Schwefel.
"Alkoxycarbonyl" bedeutet eine Alkyl-O-CO-Gruppe. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Alkoxycarbonylgruppen schließen Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Carbonyl.
"Aryloxycarbonyl" bedeutet eine Aryl-O-C(O)-Gruppe. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Aryloxycarbonyl gruppen schließen Phenoxycarbonyl und Naphthoxycarbonyl ein. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Carbonyl.
"Aralkoxycarbonyl" bedeutet eine Aralkyl-O-C(O)-Gruppe Ein nicht-einschränkendes Beispiel für eine geeignete Aralkoxycarbonylgruppe ist Benzyloxycarbonyl. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Carbonyl.
"Alkylsulfonyl" bedeutet eine Alkyl-S(O₂)-Gruppe. Bevorzugte Gruppen sind jene, in denen die Alkylgruppe niederes Alkyl ist. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Sulfonyl.
"Arylsulfonyl" bedeutet eine Aryl-S(O₂)-Gruppe. Die Bindung an die Stammeinheit erfolgt über das Sulfonyl.
Der Begriff "substituiert" bedeutet, dass ein oder mehrere Wasserstoffe an dem angegebenen Atom durch eine Auswahl aus der angegebenen Gruppe ersetzt wird, vorausgesetzt, dass die normale Wertigkeit des angegebenen Atoms unter den bestehenden Bedingungen nicht überschritten wird und die Substitution zu einer stabilen Verbindung führt. Kombinationen von Substituenten und/oder Variablen sind nur dann zulässig, wenn solche Kombinationen zu stabilen Verbindungen führen. Mit "stabiler Verbindung" oder "stabiler Struktur" ist eine Verbindung gemeint, die ausreichend robust ist, um die Isolierung zu einem brauchbaren Reinheitsgrad aus einer Reaktionsmischung und die Formulierung zu einem wirksamen therapeutischen Mittel zu überstehen.
Der Begriff "gegebenenfalls substituiert" bedeutet gegebenenfalls mit den angegebenen Gruppen, Resten oder Einheiten substituiert.
Der Begriff "isoliert" oder "in isolierter Form" bezieht sich bei einer Verbindung auf den physischen Zustand dieser Verbindung, nachdem sie aus einem Syntheseverfahren oder einer natürlichen Quelle oder Kombination davon isoliert worden ist. Der Begriff "gereinigt" oder "in gereinigter Form" bezieht sich bei einer Verbindung auf den physischen Zustand der Verbindung, nachdem sie aus einem oder mehreren Reinigungsverfahren erhalten wurde, die hier beschrieben sind oder dem Fachmann gut bekannt sind, in ausreichender Reinheit, um durch Standardanalysetechniken charakterisierbar zu sein, die hier beschrieben sind oder dem Fachmann gut bekannt sind.
Es sei darauf hingewiesen, dass von jeglichem Heteroatom mit nicht abgesättigten Valenzen in dem Text, den Schemata, Beispielen und Tabellen hier angenommen wird, dass es das Wasserstoffatom/die Wasserstoffatome aufweist, um die Valenzen abzusättigen.
Wenn eine funktionale Gruppe in einer Verbindung als "geschützt" bezeichnet wird, bedeutet dies, dass die Gruppe in modifizierter Form vorliegt, um unerwünschte Nebenreaktionen an der geschützten Stelle auszuschließen, wenn die Verbindung einer Reaktion unterzogen wird. Geeignete Schutzgruppen sind Fachleuten bekannt, wobei auf Standardlehrbücher wie beispielsweise T. W. Greene et al., Protective Groups in organic Synthesis (1991), Wiley, New York, verwiesen wird.
Wenn irgendeine Variable (z. B. Aryl, Heterocyclus, R², usw.) mehr als ein Mal in irgendeinem Bestandteil oder in Formel III vorkommt, ist ihre Definition bei jedem Vorkommen unabhängig von ihrer Definition bei jedem anderen Vorkommen.
Der Begriff "Zusammensetzung" soll ein Produkt einschließen, das die angegebenen Bestandteile in den spezifizierten Mengen enthält, sowie jegliches Produkt, das direkt oder indirekt aus der Kombination der spezifizierten Bestandteile in den spezifizierten Mengen resultiert.
Es sind hier auch Solvate der erfindungsgemäßen Verbindungen eingeschlossen.
"Solvat" bedeutet eine physikalische Assoziation einer erfindungsgemäßen Verbindung mit einem oder mehreren Lösungsmittelmolekülen. Diese physikalische Assoziation beinhaltet variierende Grade von ionischer und kovalenter Bindung einschließlich Wasserstoffbrückenbindung. In bestimmten Fällen kann das Solvat isoliert werden, beispielsweise wenn ein oder mehr Lösungsmittelmoleküle in das Kristallgitter des kristallinen Feststoffs eingebaut werden. "Solvat" schließt sowohl Lösungsphasensolvate als auch isolierbare Solvate ein. Nicht-einschränkende Beispiele für geeignete Solvate schließen Ethanolate, Methanolate und dergleichen ein. "Hydrat" ist ein Solvat, wobei das Lösungsmittelmolekül H₂O ist.
"Wirksame Menge" oder "therapeutisch wirksame Menge" soll eine Menge der erfindungsgemäßen Verbindung oder einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung beschreiben, die effektiv die CDK(s) inhibieren und somit den gewünschten therapeutischen, lindernden oder prävantiven Effekt erzeugen.
Die Verbindungen der Formel III können Salze bilden, die auch innerhalb des Umfangs dieser Erfindung liegen. Die Bezugnahme auf eine Verbindung der Formel III soll hier die Bezugnahme auf deren Salze einschließen, wenn nicht anders angegeben. Der Begriff "Salz(e)" bezeichnet hier saure Salze, die mit anorganischen und/oder organischen Säuren gebildet sind, sowie basische Salze, die mit anorganischen und/oder organischen Basen gebildet sind. Wenn eine Verbindung der Formel III zudem sowohl eine basische Einheit wie, jedoch nicht begrenzt auf ein Pyridin oder Imidazol, als auch eine saure Einheit enthält, wie eine Carbonsäure, jedoch nicht darauf begrenzt, können Zwitterionen ("innere Salze") gebildet werden und sind hier in den Begriff "Salz(e)" eingeschlossen. Pharmazeutisch annehmbare (d. h. nicht-toxische, physiologisch annehmbare) Salze sind bevorzugt, obwohl auch andere Salze brauchbar sind. Salze der Verbindungen der Formel III können beispielsweise gebildet werden, indem eine Verbindung der Formel III mit einer Menge an Säure oder Base, wie einer äquivalenten Menge, in einem Medium umgesetzt werden, wie einem, in dem das Salz ausfällt, oder in einem wässrigen Medium, gefolgt von Lyophilisierung.
Zu beispielhaften Säureadditionssalzen gehören Acetate, Ascorbate, Benzoate, Benzolsulfonate, Eisulfate, Borate, Butyrate, Citrate, Camphorate, Kamphersulfonate, Fumarate, Hydrochloride, Hydrobromide, Hydroiodide, Lactate, Maleate, Methansulfonate, Naphthalinsulfonate, Nitrate, Oxalate, Phosphate, Propionate, Salicylate, Succinate, Sulfate, Tartrate, Thiocyanate, Toluolsulfonate (auch als Tosylate bekannt) und dergleichen. Säuren, die allgemein für die Bildung pharmazeutisch brauchbarer Salze aus basischen pharmazeutischen Verbindungen als geeignet angesehen werden, sind zudem beispielsweise in S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66 (1) 1–19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201–217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York, und in The Orange Book (Fond & Drug Administration, Washington, DC, auf ihrer Website) erörtert. Auf diese Offenbarungen wird hier Bezug genommen.
Beispielhafte basische Salze schließen Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze wie Natrium-, Lithium- und Kaliumsalze, Erdalkalimetallsalze wie Calcium- und Magnesiumsalze, Salze mit organischen Basen (beispielsweise organischen Aminen) ein, wie Dicyclohexylaminen, t-Butylaminen und Salzen mit Aminosäuren wie Arginin, Lysin und dergleichen. Basische stickstoffhaltige Gruppen können mit Mitteln wie niederen Alkylhalogeniden (z. B. Methyl-, Ethyl- und Butylchloriden, -bromiden und -iodiden), Dialkylsulfaten (z. B. Dimethyl-, Diethyl- und Dibutylsulfaten), langkettigen Halogeniden (z. B. Decyl-, Lauryl- und Stearylchloriden, -bromiden und -iodiden), Aralkylhalogeniden (z. B. Benzyl- und Phenethylbromiden) und anderen quaternisiert werden.
Alle derartigen Säuresalze und Basesalze sollen pharmazeutisch annehmbare Salze innerhalb des Umfangs der Erfindung sein, und alle Säure- oder Basensalze werden für erfindungsgemäße Zwecke als zu den freien Formen der entsprechenden Verbindungen äquivalent angesehen.
Verbindungen der Formel III und Salze und Solvate und Prodrugs davon können in ihrer tautomeren Form vorliegen (beispielsweise als Amid oder Iminoether). Alle derartigen tautomeren Formen werden hier als Teil der vorliegenden Erfindung angesehen.
Alle Stereoisomere (beispielsweise geometrische Isomere, optische Isomere und dergleichen) der vorliegenden Verbindungen (einschließlich jene der Salze, Solvate und Prodrugs der Verbindungen sowie der Salze und Solvate der Prodrugs), wie jene, die aufgrund von asymmetrischen Kohlenstoffatomen an verschiedenen Substituenten vorliegen können, einschließlich enantiomeren Formen (die sogar in Abwesenheit asymmetrischer Kohlenstoffatome vorliegen können), rotameren Formen, Atropisomeren und diastereomeren Formen, sind hier in den Umfang dieser Erfindung eingeschlossen, ebenso wie Positionsisomere (wie beispielsweise 4-Pyridyl und 3-Pyridyl). Individuelle Stereoisomere der erfindungsgemäßen Verbindungen können beispielsweise im Wesentlichen frei von anderen Isomeren sein, oder können beispielsweise als Racemate oder mit allen anderen oder anderen ausgewählten Stereoisomeren gemischt sein. Die chiralen Zentren der vorliegenden Erfindung können die S- oder R-Konfiguration haben, wie durch die Empfehlungen der IUPAC von 1974 definiert. Die Verwendung der Betriffe "Salz", "Solvat", "Prodrug" und dergleichen soll gleichermaßen für das Salz, Solvat und Prodrug von Enantiomeren, Stereoisomeren, Rotameren, Tautomeren, Positionsisomeren, Racematen oder Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen gelten.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben pharmakologische Eigenschaften; die Verbindungen der Formel III können insbesondere Inhibitoren von Proteinkinasen sein, wie beispielsweise Inhibitoren der cyclinabhängigen Kinasen, mitogenaktivierten Proteinkinase (MAPK/ERK), Glykogensynthasekinase 3 (GSK3β) und dergleichen. Zu den cyclinabhängigen Kinasen (CDKs) gehören beispielsweise CDC2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7 und CDK8. Es wird erwartet, dass die neuen Verbindungen der Formel III zur Therapie proliferierender Erkrankungen brauchbar sind, wie Krebs, Autoimmunerkrankungen, viralen Erkrankungen, Pilzerkrankungen, neurologischen/neurodegenerativen Störungen, Arthritis, Entzündung, antiproliferierenden (z. B. Rethinopathie des Auges), neuronalen Erkrankungen, Alopezie und Herz-Kreislauf-Erkrankung. Viele dieser Erkrankungen und Störungen sind in der bereits genannten US 6,413,974 genannt, auf deren Offenbarung hier Bezug genommen wird.
Die Verbindungen der Formel III können spezieller zur Behandlung einer Vielzahl von Krebserkrankungen brauchbar sein, einschließlich der folgenden (jedoch nicht auf diese begrenzt): Karzinomen einschließlich jenen der Blase, Brust, des Kolons, der Niere, Leber, Lunge einschließlich kleinzelligem Lungenkrebs, Ösophagus, Gallenblase, Ovar, Pankreas, Magen, Zervix, Schilddrüse, Prostata und Haut einschließlich Schuppenzellkarzinom;
hämatopoietischen Tumoren des Lymphsystems einschließlich Leukämie, akuter Lymphozytenleukämie, akuter Lymphoblastenleu kämie, B-Zellen-Lymphom. T-Zellen-Lymphom, Hodgkins Lymphom, Non-Hodgkins-Lyphom, Haarzellenlymphom und Burkett-Lymphom;
hämatopoietischen Tumoren des Myeloidsystems, einschließlich akuten und chronischen myelogenen Leukämien, myelodysplastischem Syndrom und Promyelozytenleukämie;
Tumoren mesenchymalen Ursprungs, einschließlich Fibrosarkom und Rhabdomyosarkom;
Tumoren des zentralen und peripheren Nervensystems, einschließlich Astrozytom, Neuroblastom, Gliom und Schwannomen, und
anderen Tumoren, einschließlich Melanom, Seminom, Teratokarzinom, Osteosarkom, Xenoderoma pigmentosum, Keratoxanthom, Schilddrüsenfollikelkrebs und Kaposi-Sarkom.
Wegen der Schlüsselrolle von CDKs bei der Regulierung der zellulären Proliferation im Allgemeinen können Inhibitoren als reversible zytostatische Mittel wirken, die zur Behandlung jeglichen Krankheitsprozesses brauchbar sein können, der abnormale zelluläre Proliferation zeigt, z. B. gutartige Prostatahyperplasie, familiäre adenomatöre Polyposis, Neurofibromatose, Atherosklerose, Lungenfibrose, Arthritis, Psoriasis, Glomerulonephtiritis, Restenose nach Angioplastik oder Gefäßchirurgie, hypertrophe Narbenbildung, entzündliche Darmerkrankung, Transplantatabstoßung, Endotoxinschock und Pilzinfektionen.
Verbindungen der Formel III können auch zur Behandlung von Morbus Alzheimer brauchbar sein, wie durch die neuere Feststellung nahegelegt wird, dass CDK5 an der Phosphorylierung von tau-Protein beteiligt ist (J. Biochem, (1995) 117, 741–749).
Verbindungen der Formel III können Apoptose induzieren oder inhibieren. Die apoptotische Reaktion erfolgt bei einer Vielfalt von Krankheiten des Menschen irrtümlich. Verbindungen der Formel III sind als Modulatoren der Apoptose zur Behandlung von Krebs (einschließlich der hier genannten Typen, jedoch nicht auf diese begrenzt), Virusinfektionen (einschließlich, aber nicht begrenzt auf Herpesvirus, Pockenvirus, Epstein-Barr-Virus, Sindbisvirus und Adenovirus), Prävention der AIDS-Entwicklung bei HIV-infizierten Individuen, Autoimmunerkrankungen (einschließlich, jedoch nicht begrenzt auf systemischen Lupus erythematosus, autoimmunvermittelte Glomerulonephritis, rheumatoide Arthritis, Psoriasis, entzündliche Darmerkrankung und Autoimmun-Diabetes mellitus), neurodegenerative Erkrankungen (einschließlich, aber nicht begrenzt auf Morbus Alzheimer, mit AIDS zusammenhängender Demenz, Morbus Parkinson, amyotropher Lateralsklerose, Retinitis pigmentosa, spinaler Muskelatrophie und zerebellarer Degeneration), myelodysplastischen Syndromen, aplastischer Anämie, ischämischer Verletzung im Zusammenhang mit Herzinfarkt, Schlaganfall und Reperfusionverletzung, Arrhythmie, Atherosklerose, toxininduzierten oder mit Alkohol zusammenhängenden Lebererkrankungen, hämatologischen Erkrankungen (einschließlich, aber nicht begrenzt auf chronische Anämie und aplastische Anämie), degenerative Erkrankungen des Muskel- und Skelettsystems (einschließlich, aber nicht begrenzt auf Osteoporose und Arthritis), aspirin-sensitive Rhinosinusitis, zystische Fibrose, multiple Sklerose, Nierenerkrankungen und Krebsschmerz brauchbar.
Verbindungen der Formel III können als Inhibitoren der CDKs das Niveau der zellulären RNA- und DNA-Synthese modulieren. Diese Mittel wären daher bei der Behandlung viraler Infektionen brauchbar (einschließlich, aber nicht begrenzt auf HIV, humanes Papillomavirus, Herpesvirus, Pockenvirus, Epstein-Barr-Virus, Sindbisvirus und Adenovirus).
Verbindungen der Formel III können auch bei der Chemoprävention von Krebs brauchbar sein. Chemoprävention ist definiert als Inhibierung der Entwicklung von invasivem Krebs, indem entweder das initiierende mutagene Ereignis blockiert wird oder die Progression der prämalignen Zellen blockiert wird, die bereits eine Schädigung erlitten haben, oder Inhibierung des Wiederauftretens des Tumors.
Verbindungen der Formel III können auch zur Inhibierung von Tumorangiogenese und Metastase brauchbar sein.
Verbindungen der Formel III können auch als Inhibitoren anderer Proteinkinasen wirken, z. B. Proteinkinase C, her2, raf1, MEK1, MAP Kinase, EGF Rezeptor, PDGF Rezeptor, IGF Rezeptor, PI3 Kinase, wee1 Kinase, Src, Abl, und somit zur Behandlung von Erkrankungen wirksam sein, die mit anderen Proteinkinasen assoziiert sind.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in einem Verfahren zur Behandlung eines Säugers (z. B. Menschen) mit einer Erkrankung oder einem Zustand, die bzw. der mit den CDKs assoziiert sind, verwendet werden, indem dem Säuger eine therapeutisch wirksame Menge von mindestens einer Verbindung der Formel III oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat der Verbindung verabreicht wird.
Eine bevorzugte Dosis ist etwa 0,001 bis 500 mg/kg Körpergewicht/Tag der Verbindung der Formel III. Eine besonders bevorzugte Dosis ist etwa 0,01 bis 25 mg/kg/Tag von einer Verbindung der Formel I oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz oder Solvat der Verbindung.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Kombination (zusammen oder nacheinander verabreicht mit) mit einer oder mehreren Antikrebsbehandlungen verwendet werden, wie Strahlungstherapie und/oder einem oder mehreren Antikrebsmit teln ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus zytostatischen Mitteln, zytotoxischen Mitteln (wie beispielsweise, ohne darauf begrenzt zu sein, DNA-interaktiven Mitteln (wie Cisplatin oder Doxorubicin)); Taxanen (z. B. Taxoter, Taxol); Topoisomerase II Inhibitoren (wie Etoposid); Topoisomerase I Inhibitoren (wie Irinotecan (oder CPT-11), Camptostar oder Topotecan); Tubulin-interagierenden Mitteln (wie Paclitaxel, Docetaxel oder den Epothilonen); Hormonmitteln (wie Tamoxifen); Thymidilat-Synthaseinhibitoren (wie 5-Fluoruracil); Antimetaboliten (wie Methoxtrexat); Alkylierungsmitteln (wie Temozolomid (TEMODAR^TM von Schering-Plough Corporation, Kenilworth, New Jersey, USA), Cyclophosphamid); Farnesylproteintransferaseinhibitoren (wie SARASAR^TM(4-[2-[4-[(11R)-3,10-Dibrom-8-chlor-6,11-dihydro-5H-benzo[5,6]cyclohepta[1,2-b]pyridin-11-yl-]-1-piperidinyl]-2-oxoethyl]-1-piperidincarboxamid oder SCH 66336 von Schering-Plough Corporation, Kenilworth, New Jersey, USA), Tipifarnib (Zarnestra^® oder R115777 von Janssen Pharmaceuticals), L778.123 (ein Farnesylproteintransferaseinhibitor von Merck & Company, Whitehouse Station, New Jersey, USA), BMS 214662 (ein Farnesylproteintransferaseinhibitor von Bristol-Myers Squibb Pharmaceuticals, Princeton, New Jersey, USA); Signalweiterleitungsinhibitoren (wie Iressa (von Astra Zeneca Pharmaceuticals, England), Tarceva (EGFR-Kinaseinhibitoren), Antikörper für EGFR (z. B. C225), GLEEVEC^TM (C-abl-Kinaseinhibitor von Novartis Pharmaceuticals, East Hanover, New Jersey, USA); Interferone wie beispielsweise Intron (von Schering-Plough Corporation), Peg-Intron (von Schering-Plough Corporation); Hormontherapiekombinationen; Aromatasekombinationen; Ara-C, Adriamycin, Cytoxan und Gemcitabin.
Zu anderen Antikrebsmitteln (auch als antineoplastische Mittel bekannt) gehören, ohne auf diese begrenzt zu sein Uracil-Lost, Chlormethin, Cyclophosphamid, Ifosfamid, Melphalan, Chlorambucil, Pipobroman, Triethylenmelamin, Triethylenthiophosphoramin, Busulfan, Carmustin, Lomustin, Streptozocin, Dacarbazin, Floxuridin, Cytarabin, 6-Mercaptopurin, 6-Thioguanin, Fludarabinphosphat, Oxaliplatin, Leucovirin, Oxaliplatin (ELOXATIN(tm) von Sanofi-Synthelabo Pharmaceuticals, Frankreich), Pentostatin, Vinblastin, Vincristin, Vindesin, Bleomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Mithramycin, Deoxycoformycin, Mitomycin-C, L-Asparaginase, Teniposid, 17α-Ethinylestradiol, Diethylstilbestrol, Testosteron, Prednison, Fluoxymesteron, Dromostanolonpropionat, Testolacton, Megestrolacetat, Tamoxifen, Methylprednisolon, Methyltestosteron, Prednisolon, Triamcinolon, Chlortrianisen, Hydroxyprogesteron, Aminoglutethimid, Estramustin, Medroxyprogesteronacetat, Leuprolid, Flutamid, Toremifen, Goserelin, Cisplatin, Carboplatin, Hydroxyharnstoff, Amsacrin, Procarbazin, Mitotan, Mitoxantron, Levamisol, Navelben, Anastrazol, Letrazol, Capecitabin, Droloxifin und Hexamethylmelamin.
Diese Kombinationsprodukte verwenden, wenn sie als feste Dosis formuliert sind, die erfindungsgemäßen Verbindungen in dem hier beschriebenen Dosierbereich und das andere pharmazeutisch aktive Mittel oder die Behandlung innerhalb seines/ihres Dosierbereichs. Es ist beispielsweise gefunden worden, dass der CDC2-Inhibitor Olomucin synergistisch mit bekannten zytotoxischen Mitteln wirkt, um Apoptose zu induzieren (J. Cell Sci., (1995) 108, 2897). Verbindungen der Formel III können auch sequentiell mit bekannten Antikrebs- oder zytotoxischen Mitteln verabreicht werden, wenn eine Kombinationsformulierung unangebracht ist. Die Erfindung ist hinsichtlich der Verabreichungsreihenfolge nicht begrenzt; Verbindungen der Formel III können vor oder nach Verabreichung des bekannten Antikrebs- oder zytotoxischen Mittels verabreicht werden. Die zytotoxi sche Aktivität des cyclinabhängigen Kinaseinhibitors Flavopiridol wird durch die Reihenfolge der Verabreichung mit Antikrebsmitteln beeinflusst, Cancer Research, (1997) 57, 3375. Derartige Techniken liegen innerhalb des Wissens von Fachleuten sowie behandelnden Ärzten.
Diese Erfindung schließt demnach in einem Aspekt Kombinationen ein, die eine Menge von mindestens einer Verbindung der Formel III oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon sowie eine Menge von einer oder mehreren Antikrebsbehandlungen und oben aufgeführten Antikrebsmitteln enthalten, wobei die Mengen der Verbindungen/Behandlungen zu einer erwünschten therapeutischen Wirkung führen.
Die pharmakologischen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen können durch eine Reihe pharmakologischer Assays bestätigt werden. Die beispielhaften pharmakologischen Assays, die nachfolgend beschrieben werden, sind mit den erfindungsgemäßen Verbindungen und ihren Salzen durchgeführt worden.
Diese Erfindung betrifft auch pharmazeutische Zusammensetzungen, die mindestens eine Verbindung der Formel III oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat der Verbindung und mindestens einen pharmazeutisch annehmbaren Träger dafür enthalten.
Inerte, pharmazeutisch annehmbare Träger zur Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen aus den in dieser Erfindung beschriebenen Verbindungen können fest oder flüssig sein. Zubereitungen in fester Form schließen Pulver, Tabletten, dispergierbare Körner, Kapseln, Oblatenkapseln und Zäpfchen ein. Die Pulver und Tabletten können aus etwa 5 bis etwa 95 aktivem Bestandteil zusammensetzt sein. Geeignete feste Träger sind in der Technik bekannt, z. B. Magnesiumcarbonat, Magnesiumstearat, Talkum, Zucker oder Lactose. Tabletten, Pulver, Kapseln und Oblatenkapseln können als feste Dosierungsformen verwendet werden, die für die orale Verabreichung geeignet sind. Beispiele für pharmazeutisch annehmbare Träger und Fertigungsverfahren für verschiedene Zusammensetzungen finden sich in A. Gennaro (Herausgeber), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Auflage (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, USA.
Zubereitungen in flüssiger Form schließen Lösungen, Suspensionen und Emulsionen ein. Wasser oder Wasser-Propylenglykol-Lösungen für die parenterale Injektion oder Zugabe von Süßungsmitteln oder Opazifizierungsmittel für orale Lösungen, Suspensionen und Emulsionen können beispielhaft genannt werden. Zubereitungen in flüssiger Form können auch Lösungen für intranasale Verabreichung einschließen.
Aerosolzubereitungen, die zur Inhalation geeignet sind, können Lösungen und Feststoffe in Pulverform einschließen, die in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger wie inertem komprimiertem Gas, z. B. Stickstoff, vorliegen können.
Ebenfalls eingeschlossen sind Zubereitungen in fester Form, die kurz vor Gebrauch in Zubereitungen in flüssige Form für orale oder parenterale Verabreichungen überführt werden sollen. Solche flüssigen Formen schließen Lösungen, Suspensionen und Emulsionen ein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch transdermal verabreichbar sein. Die transdermalen Zusammensetzungen können die Form von Cremes, Lotionen, Aerosolen und/oder Emulsionen annehmen, und können in ein Transdermalpflaster vom Matrix- oder Reservoirtyp eingeschlossen werden, wie in der Technik zu diesem Zweck konventionell ist.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch subkutan verabreichbar sein.
Die Verbindung wird vorzugsweise oral verabreicht.
Die pharmazeutische Zubereitung liegt vorzugsweise in Einheitsdosisform vor. In einer solchen Form wird die Zubereitung in geeignet bemessene Einheitsdosen unterteilt, die geeignete Mengen der aktiven Komponente enthalten, z. B. eine wirksame Menge, um den gewünschten Zweck zu erreichen.
Die Menge an aktiver Verbindung in einer Einheitszubereitungsdosis kann gemäß der speziellen Anwendung auf etwa 1 mg bis etwa 100 mg, vorzugsweise etwa 1 mg bis etwa 50 mg, insbesondere etwa 1 mg bis etwa 25 mg variiert oder eingestellt werden.
Die tatsächlich verwendete Dosis kann gemäß den Erfordernissen des Patienten und dem Schweregrad des behandelten Zustands variiert werden. Die Bestimmung des richtigen Dosierschemas für eine spezielle Situation liegt innerhalb des Wissens des Fachmanns. Der Bequemlichkeit halber kann die gesamte Tagesdosis unterteilt und nach Bedarf portionsweise über den Tag verabreicht werden.
Die Menge und Frequenz der Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen und/oder der pharmazeutisch annehmbaren Salze derselben werden gemäß der Beurteilung des behandelnden Arztes unter Berücksichtigung von Faktoren wie Alter, Zustand und Größe des Patienten sowie dem Schweregrad der zu behandelnden Symptome festgelegt. Ein typisches empfohlenes Tagesdosierschema für die orale Verabreichung kann im Bereich von etwa 1 mg/kg/Tag bis etwa 500 mg/kg/Tag, vorzugsweise 1 mg/Tag bis 200 mg/Tag, in zwei bis vier unterteilten Dosen liegen.
Ein weiterer Aspekt der Erfindung ist ein Kit, der eine therapeutisch wirksame Menge von mindestens einer Verbindung der Formel III oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat der Verbindung und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger, ein Vehikel oder Verdünnungsmittel enthält.
Ein weiterer Aspekt dieser Erfindung ist ein Kit, der eine Menge von mindestens einer Verbindung der Formel III oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat der Verbindung und eine Menge von mindestens einer Antikrebstherapie und/oder einem oben aufgeführten Antikrebsmittel enthält, wobei die Mengen der zwei oder mehr Bestandteile zu einer gewünschten therapeutischen Wirkung führt.
Die hier offenbarte Erfindung wird durch die folgenden Zubereitungen und Beispiele veranschaulicht, die nicht als den Umfang der Offenbarung einschränkend angesehen werden sollen. Alternative mechanistische Wege und analoge Strukturen ergeben sich Fachleuten von selbst.
Wenn NMR-Daten angegeben sind, wurden ¹H-Spektren auf entweder einem Varian VXR-200 (200 MHz, ¹H), Varian Gemini-300 (300 MHz) oder XL-400 (400 MHz) erhalten und sind als ppm in tieferem Feld als Me₄Si angegeben, wobei Anzahl der Protonen, Multiplizitäten und Kopplungskonstanten in Klammern angegeben sind. Wenn LC/MS-Daten angegeben sind, wurden die Analysen mit einem Applied Biosystems API-100 Massenspektrometer und Shimadzu SCL-10A LC Säule durchgeführt: Altech platinum C18, 3 μm; 33 mm × 7 mm Innendurchmesser; Gradientendurchfluss: 0 Min – 10% CH₃CN, 5 Min – 95% CH₃CN, 7 Min – 95% CH₃CN, 7,5 Min – 10% CH₃CN, 9 Min – Stopp. Angegeben sind die Retentionszeit und das beobachtete Stammion.
Die folgenden Lösungsmittel und Reagenzien können hier durch ihre Abkürzungen in Klammern bezeichnet werden:
Dünnschichtchromatographie: (DC),
Dichlormethan: CH₂Cl₂
Ethylacetat: (AcOEt oder EtOAc),
Methanol: (MeOH),
Trifluoracetat: TFA
Triethylamin: (Et₃N oder TEA),
Butoxycarbonyl: n-Boc oder Boc
Kernmagnetresonanzspektroskopie: NMR
Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie: LCMS
hochauflösende Massenspektroskopie: HRMS
Milliliter: ml
Millimol: mmol
Mikroliter: μl
Gramm: g,
Milligramm: mg
Raumtemperatur oder RT (Umgebungstemperatur): etwa 25°C.
Beispiele
Präparatives Beispiel 1:
Eine Mischung von 1-Methylimidazol-2-carboxamid (3,00 g, 24 mmol) und Phenacylbromid (5,73 g, 29 mmol) wurde in wasserfreiem CH₃CN (90 ml) gerührt und einen Tag unter N₂ unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde filtriert, der Feststoff auf dem Filter mit CH₃CN (2 × 30 ml) gewaschen und im Vakuum getrocknet. Es wurde ein weißer Feststoff (5,86 g, 80%) erhalten.
Präparatives Beispiel 1.1 und 1.2:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das im präparativen Beispiel 1 beschrieben ist, können die in Spalte 2 von Tabelle 1.1 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt werden, indem 1-Methylimidazol-2-carboxamid mit den in Spalte 1 gezeigten Bromketonen kombiniert wird.
TABELLE 1.1
Präparatives Beispiel 2:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im präparativen Beispiel 1 beschrieben ist.
Präparatives Beispiel 3:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 1 (4,62 g, 15 mmol) und Imidazol (25,50 g, 375 mmol) wurde 20 Stunden lang bei 175°C unter N₂ gerührt, danach wurde sie auf 100°C abgekühlt und in gerührtes eiskaltes Wasser (400 ml) gegossen. Die Mischung wurde 15 Minuten gerührt und danach filtriert. Der Feststoff wurde auf dem Filter mit Wasser (2 × 100 ml) gewaschen und bei 100°C im Vakuum getrocknet. Es wurde ein weißer Feststoff (2,43 g, 77%) erhalten.
Präparatives Beispiel 3.1 und 3.2:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das im präparativen Beispiel 3 gezeigt ist, können die in Spalte 2 von Tabelle 2.1 wiedergegebenen Verbindungen aus den in Spalte 1 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt werden.
TABELLE 2.1
Präparatives Beispiel 4:
Verfahren 1:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im präparativen Beispiel 3 beschrieben ist. LCMS: MH⁺ = 246.
Verfahren 2:
Pyridiniumhydrochlorid (378,6 g, 3,28 Mol) wurde in einen 2 L Rundkolben gegeben und unter Rückfluss unter einem leichten Stickstoffstrom erwärmt, bis das gesamte Material geschmolzen war. Die Titelverbindung aus dem präparativen Beispiel 2 [31,64 g Rohmaterial, hergestellt aus 1-Methylimidazol-2-carboxamid (10 g, 79,9 mmol), im Wesentlichen wie im präparativen Beispiel 2 beschrieben] wurde in einer Portion zugegeben, und die Mischung wurde 15 Minuten lang unter Rückfluss auf 215°C erwärmt. Die heiße Lösung wurde in eine Mischung aus 1,6 L Eis und konz. NH₄OH (500 ml) gegossen. Der pH-Wert betrug etwa 10,5. Die Mischung wurde zur Trockne eingedampft und im Gefrierschrank gelagert. Das resultierende Material wurde mit MeOH (4 L) trituriert, filtriert und die Feststoffe mit weiterem MeOH (2 L) gewaschen. Die kombinierten Filtrate wurden zur Trockne eingedampft, um einen Feststoff (49,75 g) zu ergeben. Letzterer wurde aufgebrochen und mit destilliertem Wasser (250 ml) trituriert und danach filtriert. Das Filtrat wurde verworfen und der Feststoff in heißem MeOH (850 ml) gelöst und zu Silikagel (etwa 800 ml) und Seesand (etwa 350 ml) gegeben, und die Mischung wurde zur Trockne eingedampft. Die resultierende Mischung wurde als Pfropfen auf eine Silikagelsäule (40 × 9 cm) gegeben, und letztere wurde mit CH₂Cl₂ (4 L), gefolgt von 1% bis 2,5% MeOH in CH₂Cl₂ und danach reinem MeOH eluiert, um die Titelverbindung zu ergeben (8,06 g, 41%). FABMS: m/z 246,0 (MH⁺); HRFABMS: m/z 246,0434 (MH⁺), C₁₂H₉ClN₃O erfordert: m/z 246,0434.
Präparatives Beispiel 5:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 3 (1,20 g, 5,71 mmol) und Pyridin (0,32 ml, 4,0 mmol) in POCl₃ (6,5 ml) wurde 5 Stunden lang unter N₂ gerührt und unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde in 100 ml Eis gegossen, es wurde eine Lösung von NaOH (10 g) in H₂O (100 ml) zugegeben und die Mischung mit CH₂Cl₂ (4 × 50 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel verdampft. Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/EtOAc (2:1) ergab einen schmutzigweißen Feststoff (520 mg, 40%).
Präparatives Beispiel 5.1 und 5.2:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das im präparativen Beispiel 5 gezeigt ist, können die in Spalte 2 von Tabelle 3.1 wiedergegebenen Verbindungen aus den in Spalte 1 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt werden.
TABELLE 3.1
Präparatives Beispiel 6:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im präparativen Beispiel 5 beschrieben ist. Schmutzigweißer Feststoff; LCMS; MH⁺ = 264.
Präparatives Beispiel 7:
Eine Lösung von N-Bromsuccinimid ("NBS" (180 mg, 1,0 mmol) in wasserfreiem CH₃CN (5 ml) wurde unter N₂ zu einer gerührten Lösung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 5 (230 mg, 1,0 mmol) in wasserfreiem CH₃CN (5 ml) und CH₂Cl₂ (3 ml) gegeben. Die Mischung wurde 5 Stunden bei 25°C gerührt und dann das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/EtOAc (10:1) ergab einen weißen Feststoff (294 mg, 96%).
Präparatives Beispiel 7.1 und 7.2:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das im präparativen Beispiel 7 gezeigt ist, können die in Spalte 2 von Tabelle 4.1 wiedergegebenen Verbindungen aus den in Spalte 1 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt werden.
TABELLE 4.1
Präparatives Beispiel 8:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im präparativen Beispiel 7 beschrieben ist. Weißer Feststoff; LCMS; MH⁺ = 342.
Präparatives Beispiel 9:
Eine Lösung von N-Iodsuccinimid ("NIS") (450 mg, 2,0 mmol) in wasserfreiem CH₃CN (10 ml) wurde unter N₂ zu einer gerührten Lösung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 5 (460 mg, 2,0 mmol) in wasserfreiem CH₃CN (6 ml) und 1,2-Dichlorethan (10 ml) gegeben. Die Mischung wurde 30 Stunden unter Rückfluss gehalten, und dann wurde das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/EtOAc (10:1) ergab einen weißen Feststoff (602 mg, 85%).
Präparatives Beispiel 10:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im präparativen Beispiel 9 beschrieben ist. Weißer Feststoff; LCMS: MH⁺ = 390.
Präparatives Beispiel 11:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im präparativen Beispiel 9 beschrieben ist. Weißer Feststoff.
BEISPIEL 11:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 10 (78 mg, 0,20 mmol), 3-(Aminomethyl)pyridin (24 mg, 0,22 mmol), Diisopropylethylamin (0,5 ml) und wasserfreiem Dioxan (1,0 ml) wurde 48 Stunden lang unter N₂ bei 90°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (50:1:0,1) gereinigt. Es wurde ein weißer Feststoff (67 mg, 78%) erhalten. LCMS; MH⁺ = 462; Schmelzpunkt = 173–175°C.
Beispiele 11.1 und 11.2:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das im präparativen Beispiel 11 gezeigt ist, können die in Spalte 2 von Tabelle 5.1 wiedergegebenen Verbindungen aus den in Spalte 1 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt werden.
TABELLE 5.1
Beispiel 12–25:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das in Beispiel 11 gezeigt ist, wurden die in Spalte 3 von Tabelle 2 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt.
TABELLE 2
Beispiele 25.1 und 25.2:
Die in Spalte 2 von Tabelle 6.1 wiedergegebenen Verbindungen wurden aus den in Spalte 1 wiedergegebenen Verbindungen durch saure Hydrolyse (HCl in H₂O), anschließende Neutralisierung (K₂CO₃) und Säulenchromatographie hergestellt.
Tabelle 6.1
BEISPIEL 26:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 7 (81 mg, 0,20 mmol) und 4-Methylsulfonylanilinhydrochlorid (55 mg, 0,32 mmol) in Diisopropylethylamin (1,5 ml) wurde 3 Tage lang bei 110°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (20:1:0,1) gereinigt. Es wurde ein weißer Feststoff (22 mg, 20%) erhalten. Schmelzpunkt 251–254°C, LCMS: (M+2H)⁺ = 445.
BEISPIEL 27:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das im obigen Beispiel beschrieben ist. Schmelzpunkt 169–170°C, LCMS: (M+2H)⁺ = 367.
Präparatives Beispiel 28:
Das Produkt aus dem präparativen Beispiel 7 (185 mg, 0,60 mmol) wurde mit konz. wässrigem NH₄OH (3 ml) und 2 M NH₃ in 2-Propanol (6 ml) in einem geschlossenen Druckrohr 24 Stunden lang bei 90°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (20:1:0,1) gereinigt. Es wurde ein gelblicher Feststoff (138 mg, 80%) erhalten. Schmelzpunkt 215–217°C, LCMS: MH⁺ = 291.
Präparatives Beispiel 29:
Eine Mischung von 2-Amino-3,5-dibrompyrazin (Aldrich, 6,0 g, 24,0 mmol) und eine 50 wässrige Lösung von Chloracetaldehyd (Aldrich, 4,8 ml) in 2-Propanol (30 ml) wurde 24 Stunden lang unter N₂ gerührt und unter Rückfluss gehalten. CH₂Cl₂ (300 ml) und Triethylamin (12 ml) wurden zugefügt, und das Lösungsmittel wurde verdampft. Der Rückstand wurde in 10:1 H₂O:2-Propanol (200 ml) suspendiert, filtriert, und der Feststoff auf dem Filter mit 10:1 H₂O:2-Propanol (2 × 100 ml) gewaschen. Er wurde im Vakuum getrocknet, um blassbeigen Feststoff (4,81 g, 74%) zu ergeben.
Präparatives Beispiel 30:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 29 (1,80 g, 6,45 mmol) und konzentriertem wässrigem NH₄OH (27,0 ml) wurde in einem geschlossenen Druckgefäß 24 Stunden bei 90°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde verdampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silikagel mit EtOAc gereinigt. Es wurde ein weißer Feststoff (1,01 g, 73%) erhalten. LCMS: MH+ = 213.
Präparatives Beispiel 31:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 30 (500 mg, 2,36 mmol), Phenylboronsäure (431 mg, 3,53 mmol), Pd (PPh₃)₄ (277 mg, 0,24 mmol) und Na₂CO₃ (2,50 g, 23,6 mmol) in 1,2-Dimethoxyethan (30 ml) und H₂O (8 mL) wurde 24 Stunden lang unter N₂ gerührt und unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde in H₂O (500 ml) gegossen, mit CH₂Cl₂ (4 × 50 ml) extrahiert und die Extrakte über Na₂SO₄ getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit PhCH₃/7 N NH₃ in MeOH (10:1) gereinigt. Dies ergab ein etwas unreines Produkt als blassorangen Feststoff, der für die nächste Stufe verwendet wurde.
Präparatives Beispiel 32:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 31 (210 mg, 1,0 mmol), Acetylchlorid (0,286 ml, 4,0 mmol) und Pyridin (0,657 ml, 8,0 mmol) in 1,2-Dichlorethan (5 ml) wurde 72 Stunden lang gerührt und unter Rückfluss gehalten. Die Mi schung wurde in 10% wässriges Na₂CO₃ gegossen und mit CH₂Cl₂ (3 × 20 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit EtOAc als Eluierungsmittel ergab 141 mg (56%) blassgelben Feststoff.
Präparatives Beispiel 33:
Eine Lösung von NBS (72 mg, 0,40 mmol) in wasserfreiem CH₃CN (2,0 ml) wurde unter N₂ zu einer gerührten Lösung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 32 (100 mg, 0,40 mmol) in wasserfreiem CH₃CN (2,0 ml) und CH₂Cl₂ (6,0 ml) gegeben. Die Mischung wurde 48 Stunden bei 25°C gerührt und dann das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/EtOAc (4:1) ergab einen blassgelben Feststoff (41 mg, 31%). Schmelzpunkt 163–165°C, LCMS: (M+2H)⁺ = 333.
BEISPIEL 34:
Eine Mischung des Produkts aus Beispiel 17 (85 mg, 0,20 mmol), Phenylboronsäure (37 mg, 0,30 mmol), Pd(PPh₃)₄ (23 mg, 0,02 mmol) und Na₂CO₃ (212 g, 2,00 mmol) in 1,2-Dimethoxyethan (3,2 ml) und H₂O (0,8 mL) wurde 24 Stunden lang unter N₂ gerührt und unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde in H₂O (100 ml) gegossen, mit CH₂Cl₂ (4 × 15 ml) extrahiert und die Extrakte über Na₂SO₄ getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde eingedampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit EtOAc/MeOH (30:1) gereinigt, um einen farblosen wachsartigen Feststoff (46 mg, 61%) zu ergeben. Schmelzpunkt 138–140°C, LCMS: (M+2H)⁺ = 378.
Beispiele 35 und 36:
Diese Verbindung wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren hergestellt, das in Beispiel 34 beschrieben ist. Verbindung 35: Schmelzpunkt 168–169°C, LCMS: MH⁺ = 384; Verbindung 36: Schmelzpunkt 154–156°C, LCMS: MH⁺ = 384.
BEISPIEL 37:
Eine Mischung des Produkts aus Beispiel 17 (214 mg, 0,50 mmol), Tributyl(vinyl)zinn (174 mg, 0,55 mmol) und Pd(PPh₃)₄ (58 mg, 0,05 mmol) in 1,4-Dioxan (10 ml) wurde 24 Stunden lang unter N₂ gerührt und unter Rückfluss gehalten. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (40:1:0,1) gereinigt. Es wurde ein blassgelber Feststoff (123 mg, 75%) erhalten. Schmelzpunkt 138–141°C, LCMS: MH⁺ = 328.
BEISPIEL 38:
Eine Mischung des Produkts aus Beispiel 17 (214 mg, 0,50 mmol), Tributyl(ethoxyvinyl)zinn (199 mg, 0,55 mmol) und Pd(PPh₃)₄ (58 mg, 0,05 mmol) in 1,4-Dioxan (10 ml) wurde 24 Stunden lang unter N₂ gerührt und unter Rückfluss gehalten. Es wurde 5 M HCl (1,0 ml) zugefügt, die Mischung 5 Minuten gerührt, danach Triethylamin (5 ml) zugegeben und das Lösungsmittel verdampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silikagel mit EtOAc/MeOH (10:1) gereinigt und danach mit Cyclohexan (10 ml) trituriert. Es wurde ein blassgelber Feststoff (104 mg, 65%) erhalten. Schmelzpunkt 192–194°C, LCMS: MH⁺ = 344.
BEISPIEL 39:
MeMgI (3,0 M in Et₂O, 0,20 ml, 0,60 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung des Produkts aus Beispiel 38 (51 mg, 0,15 mmol) in wasserfreiem Et₂O (3 ml) und CH₂Cl₂ (6 ml) gegeben. Die Mischung wurde 3 Stunden lang bei 25°C gerührt, danach in H₂O (100 ml) gegossen und mit CH₂Cl₂ (3 × 20 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel verdampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂:MeOH (20:1) gereinigt, um blassgelben Feststoff (27 mg, 50%) zu ergeben. Schmelzpunkt 184–185°C, LCMS: MH⁺ = 360.
Präparatives Beispiel 40:
Diese Verbindung wurde nach dem Literaturverfahren hergestellt (J. Med. Chem. 1983, 26, 357, und J. Med. Chem. 1992, 35, 3845).
BEISPIEL 41:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 40 (50 mg, 0,30 mmol), 2-(Aminomethyl)pyridin (45 mg, 0,42 mmol) und Diisopropylethylamin (0,20 ml) in wasserfreiem Dioxan (0,50 ml) wurde 24 Stunden lang unter N₂ bei 100°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (2:1:0,1) gereinigt. Es wurde ein weißer Feststoff (45 mg, 63%) erhalten. Schmelzpunkt 125–127°C, LCMS: MH⁺ = 240.
BEISPIELE 42–48:
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das in präparativen Beispiel 41 gezeigt ist, wurden die in Spalte 3 von Tabelle 3 wiedergegebenen Verbindungen hergestellt.
TABELLE 3
BEISPIEL 49:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 28 (1,16 g, 4,00 mmol), Pyrimidin-5-carboxaldehyd (540 mg, 5,00 mmol) und Ti(OiPr)₄ (4,54 g, 16,0 mmol) in wasserfreiem THF (20 ml) wurde 3 Stunden lang unter N₂ bei 50°C gerührt. Die Mischung wurde auf 25°C abgekühlt, NaBH₃CN (1,26 g, 20,0 mmol) zugegeben und die Mischung 30 Minuten lang bei 25°C gerührt. Die Mischung wurde in 5% wässrige NaOH (500 ml) gegeben, es wurde gesättigte wässrige NaCl (500 ml) zugegeben und die Mischung mit CH₂Cl₂ (3 × 100 ml) extrahiert. Die kombinierten Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel verdampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (20:1:0,1) gereinigt. Es wurde ein blassgelber Feststoff (410 mg, 27%) erhalten. Schmelzpunkt 201–203°C, LCMS: MH⁺ = 383.
BEISPIEL 50:
Es wurde eine Vorratslösung der Titelverbindung aus dem präparativen Beispiel 8 (1,2 g) in wasserfreiem CH₃CN (120 ml) hergestellt, und in jede der Mulden eines X-Blocks, die PS-DMAP-Harz (77,6 mg, 0,1164 mmol) enthielt, wurde eine Aliquote (1 ml, 10 mg, 0,0291 mmol) gegeben. In jede der 96 Mulden des X-Blocks wurden frisch hergestellte 1 M Lösungen einer Bibliothek von 96 primären Aminen (0,0873 ml, 0,0873 mmol) gegeben. Die Einheit wurde versiegelt und 26 Stunden lang auf 60 bis 70°C erwärmt. Der Block wurde abgekühlt, geöffnet und in einen neuen X-Block filtriert, der PS-Isocyanat-Harz (35 mg, 0,073 mmol) und PS-Trisamin-Harz (35 mg, 0,15 mmol) enthielt, und das PS-DMAP-Harz wurde mit CH₃CN (0,5 ml/Mulde) gewaschen. Der X-Block wurde versiegelt und 71 Stunden lang bei 25°C geschüttelt. Der Block wurde geöffnet, filtriert, und jede Mulde wurde mit CH₃CN (0,5 ml) gewaschen. Die Mulden wurden auf einem Speedvac-Konzentrator zur Trockne eingedampft. Die Proben wurden durch LCMS analysiert, und Proben, die < 90% rein waren, wurden nach Bedarf weiter durch präparative LCMS gereinigt. Die Proben wurden jeweils in 60% DMSO-CH₃CN (1 ml) gelöst, und 0,8 ml von jeder wurden auf die präparative HPLC injiziert (wobei eine Phenomenex Luna 5n C-18(2) Säule, 60 × 21,2 mm; 5n μm: Durchflussrate 20 ml/Min; Gradienteneluierung mit Wasser-CH₃CN-1% wässrige Ameisensäure verwendet wurde), und es wurden die Fraktionen aufgefangen, die dem gewünschten Molekulargewicht des Produkts ± 1 Moleküleinheit entsprachen. Die Endprodukte, die alle > 90% rein waren, sind in Tabelle 4 gezeigt.
TABELLE 4
Präparatives Beispiel 51:
Eine Lösung von NBS (1 Äq.) in wasserfreiem CH₃CN (2,0 ml) wurde unter N₂ zu einer gerührten Lösung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 29 in wasserfreiem CH₃CN und CH₂Cl₂ gegeben. Die Mischung wurde 48 Stunden bei 25°C gerührt und dann das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/EtOAc ergab das Produkt.
BEISPIEL 52:
Eine Mischung des Produkts aus dem präparativen Beispiel 51, 3-(Aminomethyl)pyridin (1,1 Äq.), Diisopropylethylamin (3,0 Äq.) und wasserfreiem Dioxan wurde 48 Stunden lang bei 90°C unter N₂ gerührt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂/MeOH/konz. wässrigem NH₄OH (2:1:0,1) gereinigt, um das Produkt zu ergeben.
BEISPIEL 53:
Eine Mischung des Produkts aus Beispiel 52, Acetylchlorid (4,0 Äq.) und Pyridin (8,0 Äq.) in 1,2-Dichlorethan wurde 72 Stunden lang gerührt und unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde dann in 10% wässrige Na₂CO₃ gegossen und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit EtOAc als Eluierungsmittel ergab das Produkt.
BEISPIEL 54:
Eine Mischung des Produkts aus Beispiel 53, dem Aminoalkohol (1,5 Äq.) und Triethylamin (2,0 Äq.) in Dioxan wurde 72 Stunden lang gerührt und unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde dann in 10% wässrige Na₂CO₃ gegossen und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂:MeOH als Eluierungsmittel ergab das Produkt.
Tabelle 5
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das in Beispiel 54 gezeigt ist, wobei Intermediate aus dem präparativen Beispiel mit den in Spalte 1 wiedergegebenen Aminen kombiniert wurden, können die in Spalte 2 gezeigten Verbindungen hergestellt werden.
BEISPIEL 58:
Eine Mischung des Produkts aus Beispiel 54 und K₂CO₃ (2,0 Äq.) in 1:1 EtOH:H₂O wurde 2 Stunden lang bei 60°C gerührt. Die Mischung wurde in H₂O gegossen und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lö sungsmittel verdampft. Chromatographie an Silikagel mit CH₂Cl₂:MeOH:konz. NH₄OH ergab das Produkt.
TABELLE 6
Nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren, das in Beispiel 58 gezeigt ist, wobei von den in Spalte 1 gezeigten Verbindungen ausgegangen wird, können die in Spalte 2 gezeigten Verbindungen hergestellt werden.
ASSAY:
BACULOVIRUS-KONSTRUKTIONEN: Die Cycline A und E wurden in pFASTBAC (Invitrogen) von PCR kloniert, wobei eine GluTAG Sequenz (EYMPME) an das Amino-terminale Ende addiert wurde, um Reinigung an Anti-GluTAG-Affinitätssäulen zu ermöglichen. Die exprimierten Proteine waren ungefähr 46 kDa (Cyclin E) und 50 kDa (Cyclin A) groß. CDK2 wurde mit PCR in pFASTBAC geklont, wobei am carboxyterminalen Ende ein Haemaglutinin-Epitoptag zugefügt wurde (YDVPD-YAS). Das exprimierte Protein hatte eine Größe von ungefähr 34 kDa.
ENZYMPRODUKTION: Rekombinante Baculoviren, die Cyclins A, E und CDK2 exprimieren, wurden in einer gleichen Multiplizität der Infektion (MOI = 5) 48 Stunden lang in SF9-Zellen infiziert Die Zellen wurden durch 10-minütiges Zentrifugieren mit 1000 UpM geerntet. Cyclinhaltige (E oder A) Pellets wurden mit EDK2 enthaltenden Zellpellets kombiniert und 30 Minuten auf Eis in dem fünffachen des Pelletvolumens an Lysepuffer lysiert, der 50 mM Tris-pH 8,0, 0,5% NP40, 1 mM DTT und Protease/Phosphatase-Inhibitoren (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Deutschland) enthielt. Die Mischungen wurden 30 bis 60 Minuten gerührt, um die Bildung des Cyclin-CDK2-Komplexes zu fördern. Die gemischten Lysate wurden dann 10 Min mit 15000 UpM geschleudert und der Überstand behalten. 5 ml Anti-GluTAG-Perlen (für einen Liter SF9-Zellen) wurden dann zum Einfangen der Cyclin-CDK2-Komplexe verwendet. Gebundene Perlen wurden drei Mal in Lysepuffer gewaschen. Die Proteine wurden kompetitiv mit Lysepuffer eluiert, der 100 bis 200 μg/ml des GluTAG-Peptids enthielt. Das Eluat wurde über Nacht in 2 Litern Kinasepuffer dialysiert, der 50 mM Tris pH 8,0, 1 mM DTT, 10 mM MgCl₂, 100 μM Natriumorthovanadat und 20% Glycerin enthielt. Das Enzym wurde in Aliquoten bei –70°C gelagert.
IN VITRO-KINASE-ASSAY: CDK2-Kinaseassays (entweder Cyclin A- oder E-abhängig) wurden in 96-Mulden-Platten mit niedriger Proteinbindung (Corning Inc, Corning, New York, USA) durchgeführt. Das Enzym wurde in Kinasepuffer, der 50 mM Tris pH 8,0, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT und 0,1 mM Natriumorthovanadat enthielt, auf eine Endkonzentration von 50 μg/ml verdünnt. Das in diesen Reaktionen verwendete Substrat war ein biotinyliertes Peptid, das von Histon H1 (von Amersham, GB) abgeleitet war. Das Substrat wurde auf Eis getaut und in Kinasepuffer auf 2 μM verdünnt. Die Verbindungen wurden in 10% DMSO auf erwünschte Konzentrationen verdünnt. Für jede Kinasereaktion wurden 20 μl der 50 μg/ml Enzymlösung (1 μg Enzym) und 20 μl der 1 μM Substratlösung gemischt, danach in jeder Mulde zum Test mit 10 μl verdünnter Verbindung kombiniert. Die Kinasereaktion wurde durch Zugabe von 50 μl 4 μM ATP und 1 μCi ³³P-ATP (von Amersham, GB) gestartet. Die Reaktion wurde eine Stunde bei Raumtemperatur laufen gelassen. Die Reaktion wurde gestoppt, indem 15 Minuten lang 200 μl Stopppuffer, der 0,1% Triton X-100, 1 mM ATP, 5 mM EDTA und 5 mg/ml Streptavidin-beschichtete SPA-Perlen (von Amersham, GB) enthielt, zugefügt wurde. Die SPA-Perlen wurden danach auf einer 96 Mulden-GF/B Filterplatte (Packard/Perkin Elmer Life Sciences) unter Verwendung eines Filtermate Universalernters (Packard/Perkin Elmer Life Sciences.) eingefangen. Die unspezifischen Signale wurden eliminiert, indem die Perlen zwei Mal mit 2 M NaCl, danach zwei Mal mit 2 M NaCl mit 1% Phosphorsäure gewaschen wurden. Dann wurde das radioaktive Signal mit einem TopCount 96 Mulden Flüssigszintillationszähler gemessen (von Packard/Perkin Elmer Life Sciences).
IC₅₀-BESTIMMUNG: Dosis-Reaktions-Kurven wurden aus Inhibierungsdaten aufgetragen, die jeweils doppelt aus seriellen 8-Punkt-Verdünnungen der inhibierenden Verbindungen erzeugt wurden. Die Konzentrationen der Verbindung wurden gegen % Kinaseaktivität aufgetragen, berechnet durch CPM der behandelten Proben, geteilt durch CPM der unbehandelten Proben. Um IC₅₀-Werte zu erzeugen, wurden die Dosis-Reaktions-Kurven dann an eine Sigmoid-Standardkurve angepasst, und die IC₅₀-Werte wurden durch nicht-lineare Regressionsanalyse abgeleitet. Die so erhaltenen IC₅₀-Werte für einige der erfindungsgemäßen Verbindungen sind in Tabelle 7 gezeigt. Die Kinaseaktivitäten wurden unter Verwendung von Cyclin A oder Cyclin E unter Verwendung des oben beschriebenen Assays erhalten.
Tabelle 7
Wie oben durch die Assaywerte gezeigt wird, zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen hervorragende CDK inhibierende Eigenschaften.

Claims

Verbindung mit der Strukturformel:
Formel III oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon, worin: R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Arylalkyl, Heterocyclyl, Heterocyclylalkyl, Alkenyl, Alkinyl, -C(O)R⁷
wobei jedes von dem Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Arylalkyl, Alkenyl, Heterocyclyl und jede von den Heterocyclyleinheiten, deren Strukturen unnmittelbar oben für R gezeigt sind, unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Cycloalkyl, CF₃, CN, -OCF₃, -OR⁶, -C(O)R⁷, -NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -(CHR⁵)_nOR⁶, -SR⁶, -S(O₂)R⁷, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶; R¹ H, Halogen oder Alkyl ist; R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, R⁹, Alkyl, Aryl, Arylalkyl, Heteroaryl, Heteroarylalkyl, Heterocyclyl, Alkenyl, Alkinyl, Cycloalkyl, -CF₃, -C(O)R⁷, mit 1 bis 6 R⁹-Gruppen substituiertem Alkyl, wobei die Gruppen gleich oder verschieden sein können, wobei jedes R⁹ unabhängig ausgewählt ist aus
und
wobei jedes von dem Aryl, Heteroaryl, Arylalkyl und Heterocyclyl unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Cycloalkyl, CF₃, CN, -OCF₃, -OR⁶, -C(O)R⁷, -NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -SR⁶, -S(O₂)R⁷, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶; R³ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, -(CHR⁵)_n-Aryl, -(CHR⁵)_n-Heteroaryl, -(CHR⁵)_n-OR⁶, -S(O₂)R⁶, -C(O)R⁶, -S(O₂)NR⁵R⁶, -C(O)OR⁶, -C(O)NR⁵R⁶, Cycloalkyl, -CH(Aryl)₂, -(CH₂)_m-NR⁸, -(CHR⁵)_n-CH(Aryl)₂,
wobei jedes von dem Aryl, Heteroaryl und Heterocyclyl unsubstituiert oder gegebenenfalls mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, Cycloalkyl, CF₃, CN, -OCF₃, -OR⁵, -NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁵, -C(O)NR⁵R⁶, -SR⁶, -S(O₂)R⁶, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶; R⁵ H oder Alkyl ist; R⁶ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Arylalkyl und Heteroarylalkyl, wobei jedes von dem Alkyl, Heteroarylalkyl, Aryl, Heteroaryl und Arylalkyl unsubstituiert ist; R⁷ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Arylalkyl und Heteroarylalkyl, wobei jedes von dem Alkyl, Heteroarylalkyl, Aryl, Heteroaryl und Arylalkyl unsubstituiert ist; R⁸ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -S(O₂)NR⁵R⁶, -C(O)R⁷, -C(O₂)R⁶, -S(O₂)R⁷ und -(CH₂)-Aryl; R⁹ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, CN, NR⁵R⁶, -C(O₂)R⁶, -C(O)NR⁵R⁶, -OR⁶, -C(O)R⁷, -SR⁶, -S(O₂)R⁷, -S(O₂)NR⁵R⁶, -N(R⁵)S(O₂)R⁷, -N(R⁵)C(O)R⁷ und -N(R⁵)C(O)NR⁵R⁶; m 0 bis 4 ist; n 1 bis 4 ist und p 0 bis 3 ist.
Verbindung nach Anspruch 1, bei der R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, Heteroaryl, Alkenyl und -C(O)R⁷, wobei jedes von dem Aryl und Heteroaryl unsubstituiert oder gegebenenfalls mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, CF₃, CN, -OCF₃ und -OR⁶, R¹ H oder (C₁-C₆)-Alkyl ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Alkenyl und -C(O)R⁷, wobei jedes von dem Alkyl, Aryl und Heteroaryl unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, OF₃, CN, -OCF₃ und -OR⁶, R³ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, Aryl, Heteroaryl, -(CHR⁵)_n-Aryl, -(CHR⁵)_n-Heteroaryl, -(CHR⁵)_n-OR⁶, -C(O)R⁶, Cycloalkyl, -CH(Aryl)₂,
wobei jedes von dem Aryl und Heteroaryl unsubstituiert oder gegebenenfalls mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder unterschiedlich sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Alkyl, Aryl, CF₃, CN, -C(O₂)R⁵ und -S(O₂)R⁶; R⁵ H oder niederes Alkyl ist; m 0 bis 2 ist und n 1 oder 2 ist.
Verbindung nach Anspruch 2, bei der R unsubstituiertes Phenyl ist.
Verbindung nach Anspruch 2, bei der R Phenyl ist, das mit einer oder mehreren Einheiten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus F, Cl, Br und OCF₃ substituiert ist.
Verbindung nach Anspruch 2, bei der R² F, Cl, Br, I, Methyl, Ethenyl oder -C(CH₃)₂-OH ist.
Verbindung nach Anspruch 5, bei der R² Br, I oder Methyl ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei R³ H, 2-Ylpropanol, Phenyl, Benzyl, (Pyrid-2-yl)methyl, (Pyrid-3-yl)methyl, (Pyrid-4-yl)methyl, 2-[(Pyrid-3-yl)]ethyl und 2-[(Pyrid-4-yl)]ethyl ist, wobei jedes von dem Phenyl (einschließlich des Phenyls von dem Benzyl) und Pyridyl unsubstituiert oder gegebenenfalls unabhängig mit einer oder mehreren Einheiten substituiert sein kann, die gleich oder verschieden sein können, wobei jede Einheit unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus F, Cl, Br, CF₃, (C₁-C₆)-Alkyl, -S(O₂)CH₃, Methoxy und CN.
Verbindung nach Anspruch 7, bei der R³ Benzyl ist.
Verbindung nach Anspruch 7, bei der R³ (Pyrid-2-yl)methyl ist.
Verbindung nach Anspruch 7, bei der R³ (Pyrid-3-yl)methyl ist.
Verbindung nach Anspruch 7, bei der R³ (Pyrid-4-yl)methyl ist.
Verbindung nach Anspruch 7, bei der R³ 2-Ylpropanol ist.
Verbindung nach Anspruch 2, bei der R³ 3-Ylpropyl-1-pyrrolidin-2-on ist.
Verbindung nach Anspruch 2, bei der R³ Phenyl ist.
Verbindung nach Anspruch 2, bei der m 0 ist.
Verbindung mit der Formel:

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon.
Verbindung mit der Formel:

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 17 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von einer oder mehreren Erkrankungen, die mit cyclinabhängiger Kinase zusammenhängen.
Verwendung nach Anspruch 18, bei der die cyclinabhängige Kinase CDK2 ist.
Verwendung nach Anspruch 18, bei der die cyclinabhängige Kinase mitogenaktivierte Proteinkinase (MAPK/ERK) ist.
Verwendung nach Anspruch 18, bei der die cyclinabhängige Kinase Glykogensynthasekinase 3 (GSK3beta) ist.
Verbindung nach Anspruch 18, bei der die Erkrankung ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus: Krebs der Blase, Brust, des Kolons, der Niere, Leber, Lunge, kleinzelligem Lungenkrebs, Ösophagus, Gallenblase, Ovar, Pankreas, Magen, Zervix, Schilddrüse, Prostata und Haut einschließlich Schuppenzellkarzinom, Leukämie, akuter Lymphozytenleukämie, akuter Lymphoblastenleukämie, B-Zellenlymphom T-Zellenlymphom, Hodgkins-Lymphom, Non-Hodgkins-Lymphom, Haarzellenlymphom und Burkett-Lymphom, akuter und chronischer myelogener Leukämie, myelodysplastischem Syndrom, Promyelozytenleukämie, Fibrosarkom, Rhabdomyosarkom, Astrozytom, Neuroblastom, Gliom und Schwannom, Melanom, Seminom, Teratokarzinom, Osteosarkom, Xenoderoma pigmentosum, Keratoakanthom, Schilddrüsenfollikelkrebs und Kaposi-Sarkom.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 17 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von einer oder mehreren Erkrankungen, die mit cyclinabhängiger Kinase zusammenhängen, bei der einem Säuger, der dieser Behandlung bedarf, eine Menge einer ersten Verbindung, die eine Verbindung der Ansprüche 1 bis 17 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon ist, und eine Menge von mindestens einer zweiten Verbindung verabreicht ist, wobei die zweite Verbindung ein Antikrebsmittel ist, wobei die Mengen der ersten Verbindung und der zweiten Verbindung zu einer therapeutischen Wirkung führen.
Verwendung nach Anspruch 23, die ferner Strahlungstherapie umfasst.
Verwendung nach Anspruch 23, bei der das Antikrebsmittel ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus zytostatischem Mittel, Cisplatin, Doxorubicin, Taxoter, Taxol, Etoposid, CPT-11, Irinotecan, Camptostar, Topotecan, Paclitaxel, Docetaxel, Epothilonen, Tamoxifen, 5-Fluoruracil, Methoxtrexat, 5FU, Temozolomid, Cyclophosphamid, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, Antikörper gegen EGFR, Gleevec, Intron, Ara-C, Adriamycin, Cytoxan, Gemcitabin, Uracil-Lost, Chlormethin, Ifosfamid, Melphalan, Chlorambucil Pipobroman, Triethylenmelamin, Triethylenthiophosphoramin, Busulfan, Carmustin, Lomustin, Streptozocin, Dacarbazin, Floxuridin, Cytarabin, 6-Mercaptopurin, 6-Thioguanin, Fludarabinphosphat, Oxaliplatin, Leucovirin, ELOXATIN^TM, Pentostatin, Vinblastin, Vincristin, Vindesin, Bleomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Mithramycin, Deoxycoformycin, Mitomycin C, L-Asparaginase, Teniposid, 17α-Ethinylestradiol, Diethylstilbestrol, Testosteron, Prednison, Fluoxymesteron, Dromostanolonpropionat, Testolacton, Megestrolacetat, Methylprednisolon, Methyltestosteron, Prednisolon, Triamcinolon, Chlortrianisen, Hydroxyprogesteron, Aminoglutethimid, Estramustin, Medroxyprogesteronacetat, Leuprolid, Flutamid, Toremifen, Goserelin, Cisplatin, Carboplatin, Hydroxyharnstoff, Amsacrin, Procarbazin, Mitotan, Mitoxantron, Levamisol, Navelbene, CPT-11, Anastrazol, Letrazol, Capecitabin, Reloxafin, Droloxafin oder Hexamethylmelamin.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge von mindestens einer Verbindung gemäß Anspruch 1 bis 17 in Kombination mit mindestens einem pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 26, die zusätzlich ein oder mehrere Antikrebsmittel enthält, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus einem zytostatischen Mittel, Cisplatin, Doxorubicin, Taxoter, Taxol, Etoposid, CPT-11, Irinotecan, Camptostar, Topotecan, Paclitaxel, Docetaxel, Epothilonen, Tamoxifen, 5-Fluoruracil, Methoxtrexat, 5FU, Temozolomid, Cyclophosphamid, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, Antikörper gegen EGFR, Gleevec, Intron, Ara-C, Adriamycin, Cytoxan, Gemcitabin, Uracil-Lost, Chlormethin, Ifosfamid, Melphalan, Chlorambucil, Pipobroman, Triethylenmelamin, Triethylenthiophosphoramin, Busulfan, Carmustin, Lomustin, Streptozocin, Dacarbazin, Floxuridin, Cytarabin, 6-Mercaptopurin, 6-Thioguanin, Fludarabinphosphat, Pentostatin, Vinblastin, Vincristin, Vin desin, Bleomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Mithramycin, Deoxycoformycin, Mitomycin-C, L-Asparaginase, Teniposid, 17α-Ethinylestradiol, Diethylstilbestrol, Testosteron, Prednison, Fluoxymesteron, Dromostanolonpropionat, Testolacton, Megestrolacetat, Methylprednisolon, Methyltestosteron, Prednisolon, Triamcinolon, Chlortrianisen, Hydroxyprogesteron, Aminoglutethimid, Estramustin, Medroxyprogesteronacetat, Leuprolid, Flutamid, Toremifen, Goserelin, Cisplatin, Carboplatin, Hydroxyharnstoff, Amsacrin, Procarbazin, Mitotan, Mitoxantron, Levamisol, Navelbene, CPT-11, Anastrazol, Letrazol, Capecitabin, Reloxafin, Droloxafin oder Hexamethylmelamin.
Verbindung nach Anspruch 1 in gereinigter Form.