SU1530097A3

SU1530097A3 - Способ получени пептидов

Info

Publication number: SU1530097A3
Application number: SU853898058A
Authority: SU
Inventors: Уолкер Вейл Вили (Младший); Эдуард Фредерик Ривье Жан
Original assignee: Дзе Салк Институт Фор Биолоджикал Стадиз (Фирма)
Priority date: 1984-05-18
Filing date: 1985-05-17
Publication date: 1989-12-15
Also published as: NO851947L; PT80450A; PH20976A; FI92210B; KR850008681A; FI851842A0; FI92210C; NO168043C; DK162103C; ATE73823T1; KR910000379B1; DK220685A; EG17394A; YU46153B; PT80450B; NO168043B; IL75088A0; DD236536A5; ES543235A0; US4528190A

Abstract

Изобретение касаетс пептидов, в частности получени соединений общей ф-лы I: R₁ - R₂ - ASP - ALA - ILE - PHE - THR - R₈ - SER - R₁₀ - ARG - R₁₂ - R₁₃ - R₁₄ - GLY - GLN - LEU - R₁₈ - ALA - ARG - LYS - LEU - LEU - R₂₄ - R₂₅ - R₂₆ - NLE - R₂₈ - R₂₉ - Y, где R₁ - TYR, HIS

R₂ - ALA, DNMA

R₈ - SER, ASN

R₁₀ - TYR, D=TYR

R₁₂ - ARG, LYS

R₁₃ - ILE, VAL

R₁₄ - D=LEU, LEU

R₁₈ - TYR, SER

R₂₄ - HIS, GLN

R₂₅ - GLN, ASP

R₂₆ - ILE

R₂₈ - ASN, SER

R₂₉ - ARG, D=ARG

Y - NH₂, NHC₂H₅ при условии, что или R₂ - DNMA, или R₁₄ - D=LEU, или R₂₉ - D=ARG, которые способны вызывать секрецию природного гормона роста, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных пептидов. Их синтез ведут из BOC-ARGTOS или BOC-D-ARG(TOS), который св зывают с полимерной смолой MBHA или NEAM с последующим отщеплением BOC-защитной группы. Затем провод т постепенное наращивание пептидной цепи в последовательности, указанной в ф-ле I. Полученный пептидилполимер общей ф-лы II: X₁ - R₁(X или X₂) - R₂ - ASP(X₃) - ALA - ILE - PHE - THR(X₄) - R₈(X₄ или X₅) - SER(X₄) - R₁₀(X₂) - ARG(X₆) - R₁₂(X₆ или X₇) - R₁₃ - R₁₄ - GLY - GLN(X₅) - LEU - R₁₈(X₂) - ALA - ARG(X₆) - LYS(X₇) - LEU - LEU - R₂₄(X или X₅) - R₂₅(X₃) - ILE - NLE - R₂₈(X₄ или X₅) - R₂₉(X₆) - X₉, где X - тозил

X₁ - BOC

X₂ - 2,6- дихлорбензил

X₃ - OBZL

X₄ - бензиловый эфир

X₅ - ксантил

X₆ - тозил

X₇ - 2-хлорбензилоксикарбонил

X₉ - смола-носитель MBHA или NEAM, подвергают деблокированию и отщеплению пептида от смолы-носител с использованием фтористого водорода в сочетании с анизолом или метилэтилсульфидом, или их смесью в качестве акцептора при температуре от 0 до(-20)°С с последующим растворением полученного продукта в уксусной кислоте и очисткой, например, тонким фильтрованием через гель сефадекс G-50. Новые пептиды оказывают вли ние на секрецию гипофизарных желез, что можно использовать дл промотировани роста животных или в диагностической практике. 1 табл.

Description

Изобретение относитс к спосоЬу получени пептидов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретени - способ получени новых соединений в р ду пептидов , малотоксимных и обладающих более высокой эффективностью в отношении стимулировани выделени гипофизом гормона роста.

Пример 1. Синтез пептида D-NMA , -гСКГ(1-29)-Ш2 имеющего следующую формулу: H-His-D- -NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser- -Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Oly-Gln-Leu- -Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-mi7A осуществл ют последовательно с применением пептидного синтезатора Бекман 990 на смоле МВНА, имеюи ей интервал замещени около 0,1-0,5 ммоль/г смолы. Св зывание Boc-ArgCToS) со смолой осуществл ют обычным способом с использованием смеси хлористого метилена и ДМФ при температуре около 60 С, в течение ч при перемешивании с использованием 2 г смолы и 2 ммолей Arg и получают замещение около 0,35 ммолей Arg на 1 г смолы.

После деблокировани и нейтрализации пептидна св зь постепенно образуетс на смоле. Деблокирование, нейтрализацию и прибавление каждой аминокислоты провод т обычным способом . Все растйорители, которые примен ют , тщательно дегазируют посредством продувки инертным газом, например , гелием или азотом.

Деблокирование предпочтительно провод т согласно режиму А:

РеагентВрем сме60 TFA 11% этандитиол 60% TFA /2% Этандитиол IPA зтандитиол (10%) в Me ОН

Et,N (10%) в МеОН (дважды) (дважды)

Сочетани предпочтидили согласно режиму В

Реагент

DCC1 вое - аминокислота

МеОН (дважды) (дважды) (ЗМ) в

0,5 0,5 15,0 0,5

МеОН0,5

(дважды)0,5

В общем от 1 до 2 ммоль аминокислоты , защищенной БОС, (трет-бутоксикарбонил ), в хлористом метилене, ДМФ или их смеси, примен ют на 1 г смолы плюс один эквивалент 1,0 моль DCC1 (Ы,ы -дициклогексилкарбодиимида) в хлористом метилене в течение 2 ч.

При сочетании BOC-Arg (ToS) примен ют смесь 50DMF (диметилформамид) и хлористый метилен. Эфир PZI примен ют как группу, защищающую гидроксил боковой цепи дл защиты 8ег(серин)

Q и Thr (треонин). Амидогруппу Авп

(аспарагин) или Gin (глютамин) защищают ксантилом (Хап), когда примен ют предпочтительную св зь DCC (М,н - дициклогексилкарбодиимид). Можно

5 также примен ть Р-нитрофениловый

сложный эфир (ONp) дл активировани концевой карбоксильной группы Asn или Gin и, например, можно св зывать BOC-Asn (ONp) в течение ночи, примен один эквивалент HOBt в смеси диметилформамида (DHF) и хлористого метилена, причем в этом случае DCC не добавл ют. Дл защиты Lys (лизин) с боковой цепью примен ют 2-хлор-бензилоксикарбон14Л- (2C1-Z)TO8

5 примен ют дл защиты гуанидиновой группы Arg и имидазольный азот His, карбоксильную группу в боковой цепи Gin или Asp защищают OBZ1. Фенольную гидроксильную группу защищает 2,6-ди0 хлорбензил (DCB). В конце синтеза по- лучают следующий состав: Bpc-His-D- -NMA-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-- -Ser(XO-Ser(X)-Tyr(Xг)-Arg(Xй)- -Arg(Xj)-lle-Leu-Gly-Gln(X)-Leu5 -Туr(XT)-Ala-Arg(Xe)-Lys (X-j)-Leu-Leu- -His-Gln(Xj)-Ile-Nle-A8n(Xf)-Arg(X)- MBHA , где X - DCB (2,6 где Xj - DCB (2,6-дихлорбензи ), X, - OBZl;

0 X,. - BZ (дибензиловый эфир), Xg- - Xan, Хб - ToS; X7 - 2C1-Z.

5 Xan (ксантил) можно частично или полностью удал ть посредством обработки с TFA, примен емой дл деблокировани группы защиты об -аминокислоты.

51

Дл отделени и сн ти защиты с защищенного пептида на смоле его обрабатывают 1,5 мл анизола, 0,5 мл ме тилэтилсульфида и 15 мл фтористого водорода на 1 г пептида-смолы при 0°С в течение 30 мин. После удалени фтористого водорода в услови х высокого вакуума остаток из смолы и пептида попеременно промывают сухим диэтиловым эфиром и хлороформом и затем пептид извлекают с помощью дегазированной 2 н. водной уксусной кислоты и отдел ют от смолы путем фильтровани .

После этого отделенный пептид, освобожденный от защиты, раствор ют в 0-5%-ной уксусной кислоте и подвергают очистке, котора может включать тонкое фильтрование через гель сефадекс G-50.

Затем пептид дальше посредством препаративной или полупрепаративной HPLC. Патроны, снабженные составом LC-500 фирмы Уотера Лссо- сиэйтз, набивают 15-20 мг кремнеземом С,} от Vydac (ЗООЛ). Градиент CHjCN в ТЕАР создаетс устройством низкого давлени Eldex gradient maker . Хроматографические фракции тщательно контролируют посредством HPLC причем собирают только фракции, показывающие значительную чистоту; Обес- соливание очищенных фракций, отдельно проведенных на чистоту, достигаетс при применении градиента вО,.1%ТРА (трифторуксусной кислоте). Затем вырезанную центральную часть лиофилизируют дл получени требуемого пегТтида чистотой свыше 98.

Получают 7,2 мг пептида, имеющего амидированный конец С цепи, с выходом около 5% от количества отщепленного пептида.

П р и м е р 2. Синтез пептида ID-NMA ,ser ,ine -гскг(1-29)-Шг,

имеющий формулу: H-His-D-N IA-Asp-Ala -Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile -Leu-Gly-Gln-T,eu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Gln-Ile-tlle-Asn-Arg-MH провод т постепенно в синтезаторе Бекман 990 на смоле МВНА, аналогично примеру 1. При применении TLC с HPLC получают очень чистый пептид.

П р и м е р 3. Синтез hGRF-- аналогового фрагмента .D-№1A , -hGRF(1-29)-™2., имеющего формулу: H-Tyr-D-miA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn- -Ser-Tvr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gl n-Leu

15

300976

-Ser-Ala-Arg-Ly s-I,eij-J,eu-Cln-Asp-lI e -Nle-Ser-Arg-mia

провод т постепенно в синтезаторе дл пептидов типа Бекман 990 на смо- 5 ле МВНА согласно примеру 2.

Примен TLC (тонкослойную хроматографию ) и HPLC, устанавливают, что получают практически чистый пептид. Q Примера. Синтез части аналога hGRF b-NMA ,Nle ,D-Arg J -ЬСГ.Г

(1-29)-KHt. имеющего формулу: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ald-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-C-ly-Gln-Leu- -Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp- -Ile-Nle-Ser-D-Arg-m; провод т последовательно в синтезаторе Бекман 990 дл синтеза пептида на смоле ШHA аналогична примеру 1,

2Q При применении 1ЪС и HPLC получают практически чистый пептид.

П р и м е р 5. СинтезtD-Leu , Nle J-rGRF(1-29)-Wl2, имеющего формулу:

25 H-His-AIa-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser- -Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-Cly-Gln- -Leu-tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Gln-Ile-Nle-Asn-Arg-m 2 провод т последовательно в синтезаторе Бекман 990 дл синтеза пептидов на смоле МВНА, как в примере 1. При применении TLC и HPLC получают практически чистый пептид.

П р и м е р 6. Синтез П-ГО1А , ,Asn J-hGRF-(1-29)-mig, имею- 35 щего формулу:

H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile Phe-Thr- -Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu- }ly Gln- -Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp- -II e-Nle-Asn-Arg-IIHj

30

40

провод т последовательно в пептидном

синтезаторе Бекман 990 на смоле МБНА, как в примере 1. Пептид оценен как практически чистый, примен TLC и HPLC.

Пример7. Синтез fNle, D-Arg 2j -rGPJ (1-29)-HH2, имеющего формулу:

H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Tbr-Ser- -Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Gln-Ile- -Nle- sn-D-Arg-NH2 провод т постепенно в синтезаторе Бекман 990 на смоле ШHA, как в примере 1. По данным TLC и HPLC, получаетс практически чистый пептид.

П р и м е р 8. Синтез аналогового hGRF фрагмента fn-roiA ,D-Tyr ° , Nle -hGRF(1-29), имеющего формулу :

H-Tyr-D-ri A-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr- -Asn-Ser-D-Tyr-Arg-Lys- VAl-Leu-Gly- -Gln-Leu-Ser-Ala-Arp,-Ly8-Leu-Leu-Gln- -Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-mij

провод т, постепенно в синтезаторе Бекман 990 на смоле ШHA, как в примере 1. При применении TLC и HPLC получают в основном чистый пептид.

Примерз. Синтез аналогового hCRF фрагмента /JD-NMA .Nle U-hCRT (l-29)-NHEt, имеющего следующую формулу :

H-Tyr-D-IJMA-Asp-Ala-lle-Phe-Thr- -Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln- -Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp- -Ile-Nle-Ser-Arg-iraCHjCH осуществл ют последовательно в пептидном синтезаторе Бекман 990 на N-алкиламиновой смоле, называемой также N-этиламинометиловой смолой (смолой NEAM). Приблизительно 10 г 1 сшитой хлорметилированной поли стирольной смолы ввод т в реакцию с 50 мл этиламина при температуре око- ло k С в течение приблизительно 36 ч при непрерывном перемешивании дл замены хлорбензильных групп на N-этил- аминобензильные группы и после завершени реакции несколько раз про- мывают метанолом и водой. Затем на первоначальной замещенной амидной св зи синтезируют пептид. После получени нужной рептидной последовательности провод т сн тие защиты и отщепление от смолы обработкой фтористоводородной кислотой с анизолом в качестве акцептора, провод сначала перемешивание , при О С, а затем оставл смесь медленно нагреватьс при .пере- мешивании до комнатной температуры в течение приблизительно 3 ч, при этом пептид отщепл ют от смолы в виде этиламида. По данным TLC и HPLC получают практически чистый пептид.

Примерю. Синтез D-NMA , Nle ,(1-29)-miEt имеющего следующую формулу:

H-Tyr-D-tlMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr- -Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln -Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp -Ile-Nle-Asn-Arg-ITHGH Ql, провод т последовательно с использованием пептидного синтезатора Бекман 990 на смоле МЕАМ аналогично приме- ру 9. По данным TLC и HPLG этот аналоговый пептид вл етс практически чистым.

0

5 5 Q

:)

0 5

5

0

П р и м е р 1 1 .

Синтез аналогового liGRF фрагмента His ,D-NMA2, -hGRF(l-29)-NH имеющего следующую формулу:

H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr- -Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln- -Leu-Ser-Ala-Arp.-I.ys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-IIH

осуществл ют последовательно с использованием пептидного синтезатора Бекман 990 на смоле ШНА аналогично примеру 1. По данным TLG и HPLG пептид вл етс практически чистым.

Результаты анализа приведены в таблице.

Проведены биологические испытани синтетических пептидов, приготовленных в примерах.

Дл сравнени использован искусственный человеческий фактор выделени гормона роста. В опытах in vitro обнаружено, что пептиды, полученные в услови х предлагаемого способа обладают в общем большей мощностью дл секреции гормона роста (GH) и подоб- ных присущих им активностей. Все эти искусственные пептиды рассматриваютс как биологически активные и потенциально полезные дл стимул ции выделени гормона роста через гипофиз.

При проведении испытаний примен ли культуры, включающие клетки гипофиза крысы, удаленные 3-5 дней назад.

Такие культуры считаютс оптимальными дл секреции гормона роста и их примен ют в сравнительном испытании, проводимом согласно способу Вейла. Инкубационный период дл испытываемого вещества составил З- ч. Лликвоты культивируемой среды удалили и обрабатывали дл измерени их содержимого в иммунореактивном гормоне роста GH(ir GH) способом радиоиммунологии.

Результаты сравнительного испытани дл эквимомерЯых концентраций показаны в таблице.

Испытани in vitro искусственных пептидов показывает, что многие из них обладают более высокой биологи- ческой силой, чем, например (в части мозга под зрительным бугром) hpGRF (1- «0)-ОН: минимальна эффективна концентраци , Д-изомер аланина, нор- лейцин -человеческий hGRF(1-29)ами- ногруппа составл ет примерно 1 ммоль.

Помимо испытаний in vitro дл секреций гормона роста искусственные пептиды вводили внутривенно крысамсамц- м с анес (езиуованием уретаном. При этом 1;скусстренные пептиды подавл ют самопроизвольную секрецию гормона роста без уничтожени реакции на наружный фактор выделени гормона роста (GH). До инъекции спуст 10, 30 и 90 мин брали анализ крови. Уровни гормона роста (СИ) в крови, измеренные пробирочной радиоиммунологией,

показали, что искусственный Гл-изо5 - 27 т

мер аланина, норлеицин J-человеческий hGRF( 1-29)-Mil J примерно в 6 раз сильнее, чем человеческий hGRF(1- jO)pH в отношении уровней в крови гормона роста, выдел емого гипофизом, при измерении через 10 и 30 мин после инъекции. Дл подтверждени этих результатов примен ли другие известные испытани in vitro фактора выделени гормона роста (GRF), которые эффективны в определении секреции гормона роста. Считают, что дозы примерно 50 нг и примерно 5 мг этих пептидов на 1 кг веса тела вл ютс эффективными , чтобы вызвать секрецию гормона роста.

Некоторые пептиды, которые обладают равной или даже слегка меньшей биологической силой в испытани х in vitro, чем стандарт, в жизни имеют значительно большую силу.

Такие искусственные аналоги человеческого hGRF и крысиного GRT, бычьего и порос чего аналогов (в upGRF)

R -Rj-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R -Ser- -Arp-R,4.-R,5-Ri4 C-ly-Gln-Leu-R 8 - -Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R -R j-R -Nle- 49 Y,

His;

DOTIA;

где R - Tyir, R - Ala.

10

15

Rg - Ser,Asn;

-Tyr,DTyr;

R,i -Arg,Lys;

R,, - lie,Val; R, - DLeu, Leu;.

Rie -Tyr,Ser;

Rg -His,Gin;

Rjj - Gin,Asp; 26 - lie;

R-jg - Asn,Ser;

20

25

30

28

Rja -Arg, DArg; Y- - NH, при условии, что или RZ DOTIA,

или R - DLeu, или - DArg,

отличающийс тем, что Вое Arg(Tos) или Вое D Arg(tos) св зывают с полимерной смолой НБНА или NEDM, Вос-защитную группу отщепл ют и затем стро т пептидную цепь, постепенно присоедин аминокислотные в последовательности, обусловленной формулой I, полученный при этом пептидилполимер общей формулы II

X,-R,(X или X)-Rz.,)-Ala- -Ile-Phe-Thr(X)-Rg-(X4. или Xj-)- -Ser(X4) (Xj)-Arg(X6)-Ri (Xg или X7)-R,, -R ,4-Gly-Gln(X5-)-Leuмогут быть отнесены к категории мало- 35 (X)-Ala-Arg(X6,)-Lys(X7)-Leu-Leu-R24 (X или Xj))Ile-Nle-R2g(X или X5.)-R29(X6)-Xg, где X - тозил, Х, Вое; Y - 2,6-дихлорбензил,

токсичных соединении.

Таким образом, проведенные биологические , испытани показали, что пептиды , полученные в услови х предлагаемого способа, малотоксичны и обладают более высокой эффективностью в отношении стимулировани выделени гормона роста гипофизом в сравнении с синтетическим человеческим фактором выделени гормона роста hGRF()OH. Кроме того, получаемые данным способом пептиды имеют более короткую цепь (29 аминокислотных остатков), что значительно упрощает их получение.

Формула

зобретени

Способ полумени пептидов общей формулы I

His;

DOTIA;

где R - Tyir, R - Ala.

0

5

Rg - Ser,Asn;

-Tyr,DTyr;

R,i -Arg,Lys;

R,, - lie,Val; R, - DLeu, Leu;.

Rie -Tyr,Ser;

Rg -His,Gin;

Rjj - Gin,Asp; 26 - lie;

R-jg - Asn,Ser;

0

5

0

28

Rja -Arg, DArg; Y- - NH, при условии, что или RZ DOTIA,

или R - DLeu, или - DArg,

X,-R,(X или X)-Rz.,)-Ala- -Ile-Phe-Thr(X)-Rg-(X4. или Xj-)- -Ser(X4) (Xj)-Arg(X6)-Ri (Xg или X7)-R,, -R ,4-Gly-Gln(X5-)-Leu5 (X)-Ala-Arg(X6,)-Lys(X7)-Leu-Leu-R g (X)-Ala-Arg(X6,)-Lys(X7)-Leu-Leu

-R24(X или Xj))Ile-Nle-R2g(X или X5.)-R29(X6)-Xg, где X - тозил, Х, Вое; Y - 2,6-дихлорбензил,

OBZ1,

бензиловый эфир,

ксантил,

тозил,

2-С1-бензилоксикарбонил,

смола-носитель ГВНА или NEAJ, деблокируют и отцепл ют пептид от смолы-носител и/или с использованием фтористого водорода в сочетании с анизолом или метил-этилсульфидом или их смесью в качестве акцептора при температуре от О до -20°С, полученный продукт растрзор ют в уксусной кислоте и очищают.

X. - Х4

хГ

XT Х-

Claims

Формула изобретения

Способ получения пептидов общей формулы I

R< -Rj, -Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-F.g-Ser—Rjq —Arg—R —R. —R —C-ly—Gin—Leu—R₄g — -Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R^₄-R_i5 -P^-Nle

Y, - Tyr, His; Ala, DNMA; ^R3 - Ser, Asn; ^Rio - Tyr, DTyr; R*i - Arg, Lys; ^R13 - He, Vai; R_K - DLeu, Leu;. ^Rw - Tyr, Ser; r₂₄ - His, Gin; R₂₅ - Gin, Asp;· ^R26 “ lie; ^R28 ~ Asn, Ser; ^R29 Arg, DArg; y - NH, NHC^Hy

при условии, что или R₂ - DN1IA, или - DLeu, или R₂₉ DArg , отличающийся тем, что Вос Arg(Tos) или Вос D Arg(Tos) связывают с полимерной смолой МБНА или NEDM, Вос-защитную группу отщепляют и затем строят пептидную цепь, постепенно присоединяя аминокислотные остатки в последовательности, обусловленной формулой I, полученный при этом пептидилполимер общей формулы II X₄~R₄(X или Х_г)-R^-AspiX,)-Ala-Ile-Phe-Thr(Х₄)-Rg-(X₄ или Х^)—Ser(X₄)-R_<0 (X₂)-Arg(X₆)-R_1? (Xg или X_T)-R_n -R ₁₄-Gly-Gln(X.5-)-Leu-R_ift(X₂)-Ala-Arg(X_&)-Lys (X₇)-Leu-Leu-R₂₄(X или X^-^iX^-Ile-nie-RjgCX,. или X_?)-R₂₉ (X₆)-X₉ , где X - тозил,

X₄ = Вос;

X^ - 2,6-дихлорбензил, х_э - OBZ1,

X₄ - бензиловый эфир, Χ₅ - ксантил, Χ₆ - тозил,

Χγ - 2-С1-бензилоксикарбонил, Х<? - смола-носитель ΙΓΒΗΑ или MEAl·!, деблокируют и отщепляют пептид от смолы-носителя и/или с использованием фтористого водорода в сочетании с анизолом или метил-этилсульфидом или их смесью в качестве акцептора при температуре от 0 до -20°С, полученный продукт растворяют в уксусной кислоте и очищают.

I I

I

I I t

I I

I I I

I

I I

L

I

I I

I

I I

I

X ф S и Ф с X «к X >х q J 3 X о X ь

ь- — 1 1 1 с 1 0) —1 1 1 1 со с 1 ф 1 1 1- | н I Ф i X 1 q •к 1 X t о q 1 о 1 X X 1 1 о н 1 ί * 1 1 <0 1 • q 1 1 О и 1 1 X 1 1 о 1

I I

Ι- 1 Ο Ф 1 q х Ф 1 о q X 1 х ф о) ф 1 X X Μ * 1 ο φ о а 1 ί q о 1 х >х х ю 1 X 3 О. 3 1 <. X с а> 1

L

1 1 1 и 1 1 1 о X о ί q X X 1 с ф q | АГ1 1 ф 1 Ф О ~έ ό’Ρ о. 1 X С|_1 г- ф L· 1 X X 1 Ф X X и * 1 н 1- X >» Ф ί Ф О ΣΓ II ф Н ί а О Ф ж о 1 со * со о >» q • 1 1 1 4 ф 1 Ф - q 3 1 X О Ф X 1 X О. ь I 1 Ф Н X ф 1 ь X X q <>₽ ί з со со 1 с ф Ф 1 и х а 3 I i*. X X

I

J

I

I t

I

СО 00 ил г** (4 о

ЦЛ 40 сч ил ел со

Г*-· ч0 ил

I ил I

СЧ -е Г- -г сч сч л*» г**

СЛ Г** CN CM

ЧЛ ил сч

СЧ

Гхол*— ОЛСЧ40Г**<Л Гх«— J- ΠΊ г- — илоо о о о ел пл оо нл сч (Ч ил

ЦЛ ил сч

ЦЛ ил (XI (XI ил пл пл ил сч (XI пл (XI (XI ил *— *— пл г* <*л сч ил о ч0 чо г·- ол со ил сч плоо пл ол ил ел ил I ил

I

I I

I .

I

1 I

I

I I I

1 t

I I I I

I I

I I I

I

СЧ сч ил LT5

I

СЧ 40 40 ил ил

О о о о о о чэ о о о о о о о о о о о • о ел ил пл СЧ сч 00 о оо ч0 ПЛ 40 ОЛ 40 Г— «а- сч 1 со »— г— ил ·— г*л ол сч ил сч сч ил *— 00 1

II

II !!

I CII

I XI

I I-I

I CI

I 0)I

I CZI

II

II tI

II

I1

II

-С

I о о и и х: х

IX ел cd ем

FSS

X С О л х X <

fj frJ <л <М 1 В *—4 1 1 >> М 1 N S Е Л-к ОЛ £ S 4J 1 1 1 ь сч 1 1 И Е ! /*ч г~х к 1 JE /4 ш £ ί т ел ел о *— Й ел ел 1 1 Z-4 сч сч л 1 сч сч 1 1

ZC о

М ь- ьо ^r4

О Z Р

I

•Ή О >—!*- * см | г сч г- Ui t- < Q *> ф S *· см и Т—1 и а) н ф г*- <* и 55 <} г—< 1 »“< | J-4 У Z * 1 Z Q 55 Q 5л Й *м- Q * * * Е-ч 1 ·- *- см г⁴ м -И е. см — Ф L·. *Г* Q