SK287561B6

SK287561B6 - Kamptotecínové deriváty majúce protinádorovú aktivitu, spôsob ich prípravy, medziprodukty tohto postupu, farmaceutická kompozícia s ich obsahom a ich použitie

Info

Publication number: SK287561B6
Application number: SK1164-2001A
Authority: SK
Inventors: Sergio Penco; Lucio Merlini; Franco Zunino; Paolo Carminati
Original assignee: Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A.; Instituto Nazionale Per Lo Studio E La Cura Dei Tumori
Priority date: 1999-03-09
Filing date: 2000-03-08
Publication date: 2011-02-04
Also published as: AR022860A1; TR200102603T2; EE04679B1; NZ513393A; TNSN00045A1; SK11642001A3; BR0008840A; BG105810A; ME00017B; US6589939B2; ATE216998T1; HRP20010667B1; US20010008939A1; CO5180590A1; EG23999A; CA2362760C; JP4610743B2; MEP4008A; PL222208B1; DK1044977T3

Abstract

Kamptotecínové deriváty všeobecného vzorca (I), spôsob ich prípravy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie na prípravu liečiva na liečenie nádorov.

Description

Tento vynález sa týka zlúčenín majúcich protinádorovú aktivitu, najmä nových derivátov kamptotecínu, postupov ich prípravy ich použitia ako protinádorových liečiv a farmaceutických zlúčenín, ktoré ich obsahujú ako svoje aktívne zložky.

Doterajší stav techniky

Kamptotecín je alkaloid, ktorý po prvý raz izoloval Wall et al (J. Am. Chem. Soc. 88, 3888-3890 (1966)) zo stromu Camptoteca acuminata, rastliny pochádzajúcej z Číny, z rodu Nyssaceae.

Molekula sa skladá z pentacyklickej štruktúry majúcej laktón v kruhu E, ktorý je podstatný pre cytotoxicitu.

Liečivo vykazuje široké spektrum protinádorovej aktivity, najmä proti nádorom hrubého čreva, ďalším pevným nádorom a leukémiám, a prvé klinické pokusy boli vykonané na začiatku 70-tych rokov. Keďže kamptotecín má slabú rozpustnosť vo vode, pri príprave klinických pokusov pripravil National Cancer Inštitúte (NCI) sodnú soľ (NSC100880), ktorá je vo vode rozpustná. Klinické pokusy vo fáze I a II neboli ukončené pre vysokú toxicitu, ktorú zlúčenina vykazovala (hemoragická cystitída, gastrointestinálna toxicita, ako je zvracanie, dávenie, hnačka a myelosupresia, najmä leukopénia a trombocystopénia).

V každom prípade sodná soľ vykazovala nižšiu aktivitu než kamptotecín, pretože pri pH 7,4 prevažovala neaktívna forma (otvorený kruh) na aktívnom laktóne (uzavretý kruh), ktorá prevažovala pri pH < 4,0.

Následne bolo syntetizovaných veľa analógov kamptotecínu na získanie zlúčenín s nižšou toxicitou a vyššou rozpustnosťou vo vode. Dve liečivá boli predávané, Irinotecan (CPT-11), predávaný pod ochrannou známkou Camptosar ® od fy Upjohn a liečivo Topotecan, predávané pod ochrannou známkou Hymcamptamin ® alebo Thycantin ® od fy Smith Kline & Beecham. Ďalšie deriváty sú v rôznych stupňoch klinického vývoja vo fáze II, ako je NSC-603071 (9-amino-kamptotecín), 9-NC alebo 9-nitrokamptotecín, a orálne proliečivá konvertované na 9-aminokamptotecín, GG-211 (GI 147211) a DX-8591f, z ktorých posledne uvedené je vo vode rozpustné. Bolo ukázané, že modifikácie na prvom kruhu, napríklad v prípade uvedených liečiv, zvyšujú rozpustnosť vo vode a umožňujú vyššiu toleranciu liečiva.

Vo vode rozpustný Irinotecan bol odskúšaný pri liečbe množstva pevných nádorov a ascitov (hrubého čreva, konečníka, kože, žalúdka, hrudníka, malých i veľkých buniek pľúc, krčka maternice a vaječníkov a neHodgkinovho lymfómu. Navyše, Irinotecan bol aktívny pri pevných nádoroch rezistentných na Topotecan, vincristin alebo melphalan a MDR-1 bunky boli okrajovo rezistentné na toto liečivo. Aktívny metabolit bol označený ako 10-hydroxyderiváty (SN-38), produkované účinkom karboxylesteráz. CPT-11 vykazoval dobrú aktivitu pri použití rôznych ciest jeho podávania, ako je intraperitoneálne, intravenózne, orálne (Costin D., Potmhexyl M. Advances in Pharmacol. 29B, 51-72, 1994).

CPT-11 bol podávaný tiež ako cisplatin alebo etopozid, vykazujúc synergický účinok vďaka schopnosti zabraňovať posilneniu DNA. V tomto prípade však tiež vzniká leukopénia stupňa 3 a 4 a hnačka (Sinha B.K. (1995) Topoizomerase Infhibitors, Drugs 49, 11-19, 1995).

Topotecan má výraznú orálnu biofunkcieschopnosť. Bolo dokázané, že orálne podávanie je vhodné na dosiahnutie predĺženej expozície liečiva bez nevyhnutného použitia dočasných katétrov (Rothenberg M.L. Annals of Oncology 8, 837-855, 1997). Taktiež tento vo vode rozpustný analóg kamptotecínu vykazoval aktivitu proti rôznym typom nádorov, rôznymi cestami podávania, intraperitoneálnou, intravenóznou, subkutánnou, orálnou. Najsľubnejšie výsledky boli získané pomocou Topotecan hydrochloridu, intravenóznymi infúziami počas piatich dní, pri rôznych nádoroch, ako sú nádory malých a veľkých buniek pľúc, vaječníkov, žalúdka, pečene, prostaty, sarkóm mäkkého tkaniva, hlavy a krku, pažeráku, rezistentné nádory hrubého čreva a konečníka, multiformový glioblastóm, chronické a akútne myelocytické leukémie. Ale v tomto prípade sa tiež vyskytli niektoré vedľajšie účinky, ako je neutropénia a trombocytopénia, pričom gastrointestinálna toxicita, ako sú zvracanie, dávenie a hnačka, boli miernejšie.

Bolo ukázané, že hlavné transformačné a eliminačné cesty liečiva zahrnujú hydrolýzu laktónu a urinámu exkréciu : v skutočnosti laktónová forma je hydrolyzovaná na 50 %, na otvorenie kruhu, 30 minút po infúzii. Topotecan prechádza cez hematoencefalitickú bariéru 10 minút po infúzii (30 % v cerebrospinálnej tekutine vzhľadom na plazmu). Naopak, kamptotecín neprechádza hematoencefalitickú bariéru vo výraznom množstve, pravdepodobne pre jeho viazanie s proteínmi.

Klinickému vývoju 9-aminokamptotecínu bolo bránené jeho nedostatočnou rozpustnosťou vo vode. Nedávno bola pripravená koloidná zlúčenina, ktorá umožnila vstup do fázy II klinických pokusov. Predĺžená expozícia (zo 72 hodín na 21 dní) sa javila ako podstatná na ukázanie protinádorovej aktivity z dôvodu jej krátkeho polčasu rozpadu (Dahut et al., 1994). Boli zaznamenané účinky u pacientov trpiacich neliečeným karcinómom hrubého čreva-konečníka a karcinómom hrudníka a rezistentným lymfómom. Aktivita ukázaná proti Pgp-pozitívnym nádorom poukázala na neprítomnosť prechodovej rezistencie proti rezistentným MDR-1 bunkám. Znovu bola sledovaná kostná dreň a gastrointestinálna toxicita.

Lurtotecan je najviac vo vode rozpustný analóg, s aktivitou porovnateľnou Topotecanu in vitro. Boli prijaté dva režimy: jedna 30 minútová infúzia denne počas 5 dní každé tri týždne a jedna 72-hodinová infúzia raz za 3 týždne. Boli pozorované účinky na pacientov trpiacich nádorom krku, vaječníkov, hrudníka a pečene. V tomto prípade bola tiež zistená hematická toxicita.

Molekula je nasledovná:

9-Nitrokamptotecín je orálne proliečivo, ktoré je po podaní rýchlo konvertované na 9-aminokamptotecín. Boli pozorované účinky u pacientov trpiacich karcinómom pankreasu, vaječníkov a hrudníka.

Aj keď väčšia časť nádorových buniek je vysoko senzitívna na topoizomeráza I inhibítory pre vysoké hladiny enzýmu, niektoré nádorové spojenia sú rezistentné. To je kvôli iným mechanizmom, skôr ako preexpresia MDR1 a MRP (proteín spojený s multiliečivovou rezistenciou) génov a ich produktov, P(Pgp) glykoproteínu a MRP proteínu, pre ktoré Topotecan alebo CPT-11 nie sú veľmi dobré substráty (Kawato Yet al J. Pharm. Pharmacol. 45, 444-448, (1993)).

V skutočnosti bolo pozorované, že niektoré rezistentné nádorové bunky obsahujú mutantné formy topo I, preto je vytvorenie topo I-DNA komplexu poškodené alebo niektoré bunky nemajú karboxylesterázovú aktivitu potrebnú na konvertovanie CPT-11 na aktívny metabolit SN-38, a sú teda rezistentné proti tomuto liečivu (Rothenberg, 1997, ibid.).

V rámci liečiv používaných na terapiu nádoru sa pripisuje záujem o topoizomeráza I inhibítory enzýmov z nasledujúcich hľadísk a) účinnosť proti nádorom prirodzene rezistentným proti konvenčným liečivám vrátane topoizomeráza II inhibítorov; b) hladiny topo I enzýmu ostávajúcemu zvýšenému vo všetkých fázach cyklu; c) veľa nádorov vytláča vysoké hladiny cieľového enzýmu; d) nedostatok rozlišovania proteínmi obsiahnutými vo fenoméne multiliečivovej rezistencie (pgp alebo MRP) a neprítomnosť detoxikácie enzýmom sprostredkovaného metabolizmu, spojenej so systémom závislom od glutatiónu (glutatión peroxidáza a glutatión S-transferáza) (Gerrits CJH., et al., Brit. J. Cancer 76, 952-962).

Po vzatí do úvahy potenciálnych klinických výhod topoizomeráza I inhibítorov, tak v podmienkach protinádorovej aktivity odskúšanej na širokej škále nádorov, ako aj slabej indukcie farmakorezistencie, súčasný výskum má za cieľ identifikovať topo I inhibítory s nízkou toxicitou vzhľadom na tú, ktorú vykazujú liečivá na trhu, alebo ktoré sú v klinickej fáze. Faktory determinujúce relatívnu potenciu kamptotecínových analógov zahrnujú: a) skutočnú aktivitu inhibície topoizomerázy I; b) životu významné liečivo; c) interakciu s plazmovými proteinmi; d) pomer medzi cirkulujúcou aktívnou formou (laktón) a neaktívnou formou (karboxylát); e) liečivovú senzitivitu vzhľadom na odtekanie sprostredkované glykoproteinom P alebo MRP; f) väzbovú stabilitu s topoizomerázou I (Rothenberg, 1997, ibid.).

Spomedzi hlavných nepriaznivých účinkov Irinotecanu a ďalších kamptotecínových derivátov bola pozorovaná myelosupresia a gastrointestinálna toxicita, ako je hnačka a zvracanie. Hnačka môže mať skorý alebo neskorý začiatok a môže byť dávku obmedzujúcim faktorom. Zvracanie a neskorá hnačka sú vyvolané mnohými protinádorovými liečivami, pričom skorá hnačka vyskytujúca sa počas alebo okamžite po infúzii je takmer špecifická pre Irinotecan a niektoré kamptotecínové deriváty.

Toxické účinky sa vyskytujú väčšinou v intestinálnom trakte.

Na redukovanie hnačky bol pri niektorých pokusoch podávaný CPT-11 v kombinácii s loperamidom, syntetickým opioidom agonistom muopioidových enterických receptorov (Abigerges, 1994; Abigerges, 1995), ako aj s inhibítorom enkephalinázy (acertofan) alebo s ondansertonom, antagonistom 5-HT3 receptorov, alebo s diphenidraminom, antagonistom Hl receptorov.

V súčasnosti boli problémy spojené s použitím kamptotecínových derivátov ako protinádorových liečiv sumarizované do nasledujúcich bodov:

- kamptotecín (CPT) a veľa jeho aktívnych derivátov má vo vode slabú rozpustnosť;

- následné deriváty oplývajú niektorými vedľajšími účinkami na gastrointestinálny trakt a kostnú dreň;

- pri niektorých nádorových bunkách sa vyvinula rezistentnosť proti topoizomeráza I inhibítorom;

- je stále hľadanie lepšieho terapeutického indexu.

Patentová prihláška W097/31003, tu zahrnutá referenciou, opisuje deriváty kamptotecínu substituované v polohe 7, 9 a 10. Poloha 7 dáva nasledujúce substitúcie; -CN, -CH(CN)-R⁴, -CH=C(CN)-R⁴, -CH2-CH=C(CN)-R⁴, -C(=NOH)-NH2, -CH=C(NO₂)-R⁴, -CH(CN)-R⁵, -CH(CH2 NO2)-R⁵ , 5-tetrazolyl, 2-(4,5-dihydroxazolyl), l,2,4-oxadiazolidin-3-yl-5-ón, v ktorých R⁵ je vodík, lineárny alebo rozvetvený alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, nitril, karboxyalkoxy. Z týchto možných zlúčenín W097/31003 poskytuje opis len kamptotecínových derivátov nesúcich v polohe 7 skupinu -CN a -CH=C(CN)2, s nesubstituovanou polohou 9 a

10.

Z týchto zlúčenín bol najlepšie dokázaný 7-nitril (R⁴ = -CN), ďalej nazvaný CPT 83, s cytotoxickou aktivitou na veľkých bunkách pľúcneho karcinómu (non-SCLS, H-460). Tento nádorový druh je skutočne rezistentný na cytotoxickú terapiu a je len mierne reagujúci na topoizomeráza I inhibítory, napriek preexpresii cieľového enzýmu. CPT 83 je viac aktívny než Topotecan, braný ako referenčná zlúčenina a celkovo ponúka lepší farmakologický profil, dokonca aj pri tolerancii, a vtedy aj lepší terapeutický index.

CPT 83 je pripravený prostredníctvom syntézy zahrnujúcej oxidáciu 7-hydroxymetylkamptotecínu na kamptotecín-7-aldehyd, transformáciu posledne uvedenej zlúčeniny na oxím a konečnú konverziu na nitril.

Východisková zlúčenina a medziprodukty sú opísané v Sawada et al. Chem. Pharm. Bull. 39, (10) 2574 (1991). Tento dokument vytvára referenciu na patentovú skupinu s prioritou z roku 1981, napríklad Európsku patentovú prihlášku EP 0056692, zverejnenú v roku 1982, ktorá je tu zahrnutá referenciou. V týchto zverejneniach sú medzi inými opísané aj zlúčeniny kamptotecín-7-aldehyd a jeho oxímy. Užitočnosť týchto derivátov je poskytnutie zlúčenín s protinádorovou aktivitou majúcich nízku toxicitu počnúc 7-hydroxymetylkamptotecínom. V dokumente zverejnenom v Chem. Pharm. Bull. 39, (10) 2574 (1991) autori demonštrujú, že vzhľadom na kamptotecín, 7-alkyl a 7-acyloxymetyderiváty, ktoré neboli predvídané v uvedenej patentovej prihláške, sú najaktívnejšími zlúčeninami na línie murín leukémia L1210, pričom nízka aktivita, vždy vzhľadom na kamptotecín, bola pozorovaná pri zlúčeninách nesúcich 7-substitúcie s vysokým polárnym charakterom, ako je hydrazón oxím -CH(=NOH).

Podstata vynálezu

Teraz bolo prekvapujúco zistené, že kamptotecíny nesúce alkyoxím O-substituovaný v polohe 7 majú protinádorovú aktivitu vyššiu než referenčná zlúčenina Topotecan. Ešte prekvapujúcejšie bolo zistené, že kamptotecíny nesúce enaminoskupinu v polohe 7 majú protinádorovú aktivitu. Uvedené zlúčeniny majú lepší terapeutický index.

V súlade s tým, sú predmetom predkladaného vynálezu zlúčeniny všeobecného vzorca (I):

kde:

R¹ je -C(R⁵)=N-O(n)R⁴ skupina, kde R⁴ je Ci-C8 lineárny alebo rozvetvený alkyl alebo C_rC₈ lineárna alebo rozvetvená alkenylová skupina alebo (C₃-Cio)cykloalkyl-(C|-C₈) lineárna alebo rozvetvená alkylová skupina, alebo C₆-Ci₄ aryl, alebo C₆-C₁₄ aryl-(C_rC₈) lineárna alebo rozvetvená alkylová skupina, alebo heterocyklo(Cj-C₈) lineárna alebo rozvetvená alkylová skupina, pričom heterocyklická skupina obsahuje najmenej jeden heteroatóm vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu dusíka, prípadne substituovaného s (C_rC₈) alkylovou skupinou, a/alebo kyslíka, a/alebo síry; pričom uvedená alkylová, alkenylová, cykloalkylová, cykloalkylalkylová, arylová, aryl-alkylová, heterocyklická alebo heterocyklo-alkylová skupina sú prípadne substituované s jednou alebo viacerými skupinami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, hydroxy, keto, C_r-C₈ alkyl, C_rC₈ alkoxy, fenyl, kyano, nitro, -NR⁶R⁷, kde R⁶ a R⁷, rovnaké alebo rôzne, sú vodík, (C_rC₈) li neámy alebo rozvetvený alkyl; COOH skupma alebo jej farmaceutický prijateľný ester; alebo COONR⁸R⁹skupma, kde R⁸ a R⁹, rovnaké alebo rôzne, sú vodík, (Ci-C₈) lineárny alebo rozvetvený alkyl, fenyl; alebo

R⁴ je glykozyl skupina vybraná zo 6-D-galaktozyl, 6-D-glukozyl, D-galaktopyranozyl, glykozyl skupma je prípadne chránená vhodnou ketal skupinou;

n je číslo 1;

R⁵ je vodík, C,-C₈ lineárny alebo rozvetvený alkyl;

R² a R³, rovnaké alebo navzájom rôzne, sú vodík, hydroxy, C_rC₈ lineárny alebo rozvetvený alkoxy;

ich jednotlivé izoméry, najmä syn- a antiizoméry -C(R⁵)=N-O_(n)R⁴ skupiny, ich možné enantioméry, diastereoméry a ich príslušné zmesi, ich farmaceutický prijateľné soli.

Predkladaný vynález zahrnuje použitie zlúčenín uvedeného vzorca (I) ako aktívnych zložiek liekov, najmä liekov vhodných na liečbu nádorov. Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je tiež použitie zlúčenín vzorca (I) ako aktívnych zložiek liekov vhodných na liečenie vírusových infekcií, ďalším predmetom predkladaného vynálezu je tiež použitie zlúčenín vzorca (I) ako aktívnych zložiek liekov majúcich aktivitu antiplazmódia falciparum.

Predkladaný vynález zahrnuje farmaceutické kompozície obsahujúce zlúčeniny vzorca (I) ako aktívne prísady v prímesi s farmaceutický prijateľnými nosičmi a excipientmi.

Predkladaný vynález zahrnuje tiež postupy prípravy zlúčenín vzorca (I) a ich kľúčové medziprodukty.

Príklady uskutočnenia vynálezu

V rámci rozsahu predkladaného vynálezu sú ako príklady uvažované C_rC₈ lineárna alebo rozvetvená alkyl skupina, metyl, etyl, propyl, butyl, pentyl a oktyl a ich možné izoméry, ako je napríklad izopropyl, izobutyl, terc-butyl.

Príkladmi Ci-C₈ lineárnej alebo rozvetvenej alkyl skupiny sú metylén, etylidén, vinyl, allyl, propargyl, butylén, pentylén, v ktorých dvojitá väzba uhlík-uhlík, prípadne ďalšia nenasýtená väzba uhlík-uhlík, môžu byť situované v rôznych možných polohách alkylového reťazca, ktorý môže byť tiež rozvetvený v rámci možných izomérov.

Príkladmi C₃-C₁₀ cykloalkyl skupiny sú cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklooktyl, polycyklické skupiny, ako je napríklad adamantyl.

Príkladmi (C₃-C₈) cykloalkyl-(C_rC_s) lineárnej alebo rozvetvenej alkyl skupiny sú cyklopropylmetyl, 2-cyklopropyletyl, 1-cyklopropyletyl, 3-cyklopropylpropyl, 2-cyklopropylpropyl, 1-cyklopropylpropyl, cyklobutylmetyl, 2-cyklobutyletyl, 1-cyklobutyletyl, 3-cyklobutylpropyl, 2-cyklobutylpropyl, 1-cyklobutylpropyl, cyklohexylmetyl, 2-cyklohexyletyl, 1-cyklohexyletyl, 3-cyklohexylpropyl, 2-cyklohexylpropyl, 1-cyklohexylpropyl, 5-cyklohexylpentyl, 3-cyklohexylpentyl, 3-metyl-2-cyklohexylbutyl, adamantyletyl, 2-adamantyletyl, adamantylmetyl.

Príkladmi (C₆-C_u) aryl, alebo (C₆-C[₄) aryl-(C_rC₈) lieámej alebo rozvetvenej alkyl skupiny sú fenyl, 1alebo 2-naftyl, antryl, benzyl, 2-fenyletyl, 1-fenyletyl, 3-fenylpropyl, 2-antrylpropyl, 1-antrylpropyl, naftylmetyl, 2-naftyletyl, 1-naftyletyl, 3-neftylpropyl, 2-naftylpropyl, 1-nafty lpropyl, cyklohexylmetyl, 5-fenylpentyl, 3-fenylpentyl, 2-fenyl-3-metylbutyl.

Príkladmi heterocyklickej alebo heterocyklo-(Ci-C₈) lineárnej alebo rozvetvenej alkyl skupiny sú tienyl, quinolyl, pyridyl, N-metylpyperidinyl, 5-tetryzolyl, 2-(4,5-dihydroxyzolyl), l,2,4-oxadiazolidin-3-yl-5-ón, purínové a pyrimidínové zásady, napríklad uracyl, prípadne substituovaný, ako je ukázané v uvedených všeobecných definíciách.

Príkladmi (C₆-C₁₀) aroyl skupín sú benzoyl, naftoyl.

Príkladmi (C₆-Ci₀) arylsulfonyl skupín, prípadne substituovaných alkyl skupinou, sú tozyl, benzénsulfonyl. Ako halogén je uvažovaný fluór, chlór, bróm, jód.

Príkladmi substituovaných skupín sú pentafluorofenyl, 4-fenylbenzyl, 2,4-difluorobenzyl, 4-aminbutyl, 4-hydroxybutyl, dimetylaminoetyl, p-nitrobenzoyl, p-kyanobenzoyl.

Príkladmi polyaminoalkyl skupiny je -(CH₂)_m-NR¹²-(CH2)p-NR¹³-(CH2)_q-NH₂, v ktorom m, p, sú číslo od 2 do 6 a q je číslo od 0 do 6, vrátane čísel ohraničujúcich tento interval, a R¹² a R¹³sú (Ci-C₈) lineárna alebo rozvetvená alkyl skupma, napríklad N-(4-aminobutyl-)-2-aminoetyl, N-(3-aminopropyl)-4-aminobutyl, N-[N-(3-aminopropyl)-N-(4-aminobutyl)]-3aminopropyl.

Príkladmi glykozyl skupiny sú 6-D-galaktozyl, 6-D-glukozyl, D-galaktopyranozyl, glykozylová skupina je prípadne chránená vhodnou ketalovou skupinou, napríklad izopropylidénom.

Príkladmi farmaceutický prijateľných solí sú, v prípade atómov dusíka majúcich zásaditý charakter, soli s farmaceutický prijateľnými kyselinami, anorganické aj organické, ako je napríklad kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina octová, alebo v prípade kyslej skupiny, napríklad karboxyl, soli s farmaceutický prijateľnými zásadami, anorganické aj organické, ako sú napríklad alkalické hydroxidy a hydroxidy alkalických zemín, hydroxid amónny, amín a tiež ich heterocykly.

Prvá skupina prednostných zlúčenín zahrnuje zlúčenina vzorca (I), v ktorých n je 1.

Druhá skupina prednostných zlúčenín zahrnuje zlúčeniny vzorca (I), v ktorých n je 0.

V dvoch uvedených prednostných skupinách sú zlúčeniny vzorca (I) prednostné, keď R⁴ nie je vodík, najmä je CrC8 lineárny alebo rozvetvený alkyl alebo Ci-C8 lineárna alebo rozvetvená alkenyl skupina, alebo C3-C10 cykloalkyl, alebo (C3-C10) cykloalkyl-(Ci-C8) lineárny alebo rozvetvený alkyl, alebo C6-C14 aryl, alebo (C6-C]4) aryl-(CrC8) lineárny alebo rozvetvený alkyl, alebo heterocyklická alebo heterocyklo-(C,-C8) lineárna alebo rozvetvená alkyl skupina, uvedená heterocyklická skupina obsahujúca najmenej heteroatóm vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm dusíka, prípadne substituovaný (CrC8) alkyl skupinou, a/alebo kyslíkom a/alebo sírou; uvedený alkyl, alkenyl, cykloalkyl, aryl, aryl-alkyl, heterocyklické alebo heterocyklo-alkyl skupiny, ktoré sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami vybranými zo skupiny obsahujúcej: halogén, hydroxy, CrC8 alkyl, CrC8 alkoxy, fenyl, kyano, nitro, -NR⁶R , kde R⁶ a R⁷ sú rovnaké alebo navzájom rôzne a sú vodík, (CrC₈) lineárny alebo rozvetvený alkyl; -COOH skupina alebo jej farmaceutický prijateľný ester; alebo CONR⁸R⁹ skupina, kde R⁸ a R⁹ sú rovnaké alebo navzájom rôzne a sú vodík, (C_rC₈) lineárny alebo rozvetvený alkyl, podľa definícií uvedených prostredníctvom príkladu.

Prvá skupina zvlášť prednostných zlúčenín zahrnuje:

7-metoxyiminometylkamptotecín (CPT 179);

7-metoxyiminometyl-10-hydroxykamptotecín (CPT 211);

7-(terc-butoxykarbonyl-2-propoxy)iminometylkamptotecín (CPT 224);

7-etoxyiminometylkamptotecín;

7-izopropoxyiminometylkamptotecín;

7-(2-metylbutoxy)iminometylkamptotecín;

7-t-butoxyiminometylkamptotecín (CPT 184); 7-t-butoxyiminometyl-10-hydroxykamptotecín (CPT 212); 7-t-butoxyiminometyl-10-metoxykamptotecín (CPT 220); 7-(4-hydroxybutoxy)iminometylkamptotecín;

7-trifenylmetoxyiminometylkamptotecín (CPT 192);

7-karboxymetoxyiminometyl kamptotecín (CPT 183);

7-(2-aminoetoxyiminometylkamptotecín (CPT 188); 7-(2-N,N-dimetylamino)etoxyiminometylkamptotecín (CPT 197);

7-allyloxyiminometylkamptotecm (CPT 195);

7-cyklohexyliminometylkamptotecín;

7-cyklohexylmetoxyiminometylkamptotecín; 7-cyklooktyloxyiminometylkamptotecín;

7-cyklooktylmetoxyiminometylkamptotecín; 7-benzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 172);

7-[(l-benzyloxyimino)-2-fenyletyl]kamptotecín;

7-(l-benzyloxyimino)etylkamptotecín (CPT 186);

7-fenoxyiminometylkamptotecín;

7-( 1 -t-butoxyimino)etylkamptotecín;

7-p-nitrobenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 177);

7-p-metylbenzoxyiminometylkamptotecín (CPT 178); 7-pentafluorobenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 182); 7-p-fenylbenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 187);

7-[2-(2,4-difluorofenyl)etoxy] iminometylkamptotecin; 7-(4-t-butylbenzyloxy)iminometylkamptotecín;

7-( 1 -adamantyloxy) iminometylkamptotecin;

7-( 1 -adamantylmetoxy)iminometylkamptotecín;

7-(2-naftyloxy)iminometylkamptotecín;

7-(9-antrylmetoxy)iminometylkamptotecín;

7-oxiranylmetoxyiminometylkamptotecin (CPT 213); 7-(6-uracyl)metoxyiminometylkamptotecín;

7-[2-(l-uracyl)etoxy]iminometylkamptotecín (CPT 199); 7-(4-pyridyl)metoxyiminometylkamptotecín (CPT 189);

7-(2-tienyl)metoxyiminometylkamptotecín; 7-[(N-metyl)-4-piperidinyl]metoxyiminometylkamptotecín (CPT 190); 7-[2-(4-morfolininyl)etoxy]iminometylkamptotecín (CPT 210);

7-(benzoyloxyiminometyl)kamptotecín (CPT 191);

- 7-[(l-hydroxyimino)-2-fenyletyl]kamptotecín (CPT 185);

- 7-terc-butyloxyiminometylkamptotecín-N-oxid (CPT 198);

- 7-metoxyiminometylkamptotecín-N-oxid (CPT 208);

Druhá skupina zvlášť prednostných zlúčenín zahrňuje:

- 7-[N-(4-aminobutyl)-2-aminoetoxy]iminometylkamptotecín;

- 7-[N-[N-(3-amino-l-propyl)-4-amino-l-butyl]-3-aminopropoxy]iminometyl-kamptotecín;

- 7-(6-D-galaktozyloxy)iminometylkamptotecín;

- 7-(l,2:3,4-di-O-izopropylidén-D-galaktopyranozyloxy)iminometylkamptotecín (CPT 215);

- 7-(6-D-glukozyloxy)iminometylkamptotecm (CPT 216);

Tretia skupina zvlášť prednostných zlúčenín zahrňuje:

- 7-t-butyliminometylkamptotecín;

- 7-(4-amino)butyliminometylkamptotecín;

- 7-(4-hydroxy)butyliminometylkamptotecín (CPT 169);

- 7-(2-N,N-dimetylamino)etyliminometylkamptotecín (CPT 171);

- 7-allyliminometylkamptotecín;

- 7-cyklohexyliminometylkamptotecín (CPT 156);

- 7-fenyliminometylkamptotecín (CPT 154);

- 7-p-nitrofenyliminometylkamptotecín (CPT 160);

- 7-benzyliminometylkamptotecín (CPT 175);

- 7-(2-antrylmetyl)iminometylkamptotecín;

- 7-(2-quinolylmetyl)iminometylkamptotecín;

- 7-(2-tienyl)iminometylkamptotecín;

- 7-[N-[N-(3-amino-1 -propyl)-4-amino-1 -butyl]-3-aminopropyl]iminometyl-kamptotecín;

- 7-(6-D-galaktozyl)iminometylkamptotecín.

V prvom uskutočnení tohto vynálezu sú uskutočnené zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorých n je 1, teda kamptotecín-7-oxím, a R4 je alkyl alebo aralkyl skupina, ako je definované.

Spomedzi nich vysoko prednostnými zlúčeninami sú:

- 7-(t-butoxy)iminometylkamptotecín (CPT 184) vzorca

a

- 7-benzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 172).

Zlúčeniny vzorca (I) môžu byť pripravené rôznymi postupmi podľa povahy R⁴ skupiny a prítomnosti kyslíka viazaného na dusík 7-iminometyl skupiny.

Zlúčeniny vzorca (I), v ktorých n je 1 a R⁴ je také, ako bolo definované, s výnimkou aroylu a arylosulfonylu, môžu byť pripravené z kamptotecín-7-aldehydu (vzorec (la), R⁵ vodík) alebo kamptotecínu (vzorec (la), R⁵ nie je vodík).

kde R¹ je skupina -C(R⁵)=O, a R⁵ je definované ako pri vzorci (I), R² a R³ sú definované vo vzorci (I). Zlúčenina vzorca (la) reaguje so zlúčeninou vzorca (Ila) R⁴O-NH₂, v ktorom R⁴ je, ako je definované, pri vzniku zlúčenín vzorca (I), v ktorom R¹ je skupina -C(R⁵)=N-OR⁴, R⁴ je definované ako vo vzorci (I), s výnimkou aroylu a arylsulfonylu. Reakcia sa môže uskutočniť konvenčnými spôsobmi, ktoré sú známe odborníkom v stave techniky, s obvyklým vytvorením oxímu. Prednostne je molámy pomer 7-aldehydu alebo Ίketokamptotecínu a hydroxylamínu medzi 1 : 3 až 3 : 1. Tiež sa môžu použiť príslušné soli hydroxylamínu. Reakcia je uskutočnená v prítomnosti zásady, napríklad anorganickej zásady, ako je uhličitan draselný, alebo organickej zásady, ako je trietylamín alebo diazabicyklononén, s použitím polárnych rozpúšťadiel, prednostne metanol alebo etanol a reakcia prebieha pri teplote medzi izbovou teplotou a teplotou varu použitého rozpúšťadla, prípadne v prítomnosti dehydratačných činidiel, napríklad síranu sodného alebo horečnatého, na molekulovej triedy. Ak je to žiaduce, tiež je možné uskutočniť reakciu v prítomnosti katalyzátora, napríklad Lewisovej kyseliny.

Alternatívne môžu byť uvedené zlúčeniny pripravené z oxímu kamptotecín-7-aldehydu (získaného podľa opisu u Sawada et al. Chem. Pharm. Bull. 39, (10) 2574 (1991)), alebo zo 7-keto reagovaním halogenidu R⁴X, v ktorom X je prednostne jód, v polárnom rozpúšťadle, napríklad tetrahydrofuráne alebo alkoholoch, a v prítomnosti zásady, napríklad hydridu sodného alebo uhličitanu sodného.

Pokiaľ ide o zlúčeniny vzorca (I), v ktorých n je 1 a R⁴ je aroyl alebo arylsulfonyl, ako je definované vo vzorci (I), tieto môžu byť pripravené z kamptotecín 7-oxímu, ktorého príprava je opísaná v predchádzajúcich odsekoch, s acylchloridmi R⁴-COC1, v polárnych rozpúšťadlách, a v prítomnosti zásady, prednostne pyridínu, alebo priamo v pyridíne, ako je opísané u Cho et al. J. Org. Chem. 62, 2230 (1997).

Ak ide o zlúčeniny vzorca (I), v ktorých n je 0 a R⁴ je také, ako je definované, s výnimkou aroylu, tieto môžu byť pripravené z kamptotecín-7-aldehydu (vzorec (la), R⁵ vodík) alebo 7-ketokamptotecínu vzorec (vzorec (la), R⁵ nie je vodík).

v ktorom R⁵ je skupina -C(R⁵)=O, a R⁵ je definované pre vzorec (I), R² a R³ sú definované vo vzorci (I). Zlúčenina vzorca (la) reaguje so zlúčeninou vzorca (Ilb) R⁴O-NH₂, v ktorom R⁴ je, ako je definované, pri vzniku zlúčenín vzorca (I), v ktorom R¹ je skupina -C(R⁵)=N-OR⁴, R⁴ je definované ako vo vzorci (I), s výnimkou aroylu. Reakcia sa môže uskutočniť konvenčnými spôsobmi, ktoré sú známe odborníkom v stave techniky, s obvyklým vytvorením oxímu. Prednostne je molámy pomer 7-aldehydu alebo 7-ketokamptote-cínu a amínu medzi 1 : 3 až 3 : 1. Tiež sa môžu použiť príslušné soli amínu. Reakcia je uskutočnená v prítomnosti zásady, napríklad anorganickej zásady, ako je uhličitan draselný, alebo organickej zásady, ako je trietylamín alebo diazabicyklononén, s použitím polárnych rozpúšťadiel, prednostne metanol alebo etanol a reakcia prebieha pri teplote medzi izbovou teplotou a teplotou varu použitého rozpúšťadla, prípadne v prítomnosti dehydratačných činidiel, napríklad síranu sodného alebo horečnatého, molekulovej triedy. Ak je to žiaduce, tiež je možné uskutočniť reakciu v prítomnosti katalyzátora, napríklad Lewisovej kyseliny ako je opísané napríklad u Moretti a Torre, Synthesis, 1970, 141; alebo u Kobayashi et al, Synlett, 1977, 115).

Kamptotecín-7-aldehyd a kamptotecín-7-oxím sú opísané v patetovej prihláške EP 0056692 a v uvedenom Sawada et al. Cehm. Pharm. Bull. 39, (10) 2574 (1991)).

N i-oxidy zlúčenín vzorca (I) sú pripravené podľa dobre známych spôsobov oxidácie heteroaromatického dusíka, prednostne oxidáciou s kyselinou octovou alebo trifluorctovou a peroxidom vodíka, alebo reakciou s organickými peroxykyselinami (A. Albíni a S. Pietra, Heterocyclic N-oxides, CRC, 1991).

Pokiaľ ide o rôzne významy R⁴, prítomné v rôznych reagentoch vzorca (II), tieto reagenty sú dostupné na trhu, alebo môžu byť pripravené podľa dobre známych spôsobov v literatúre, ktoré môže odborník v stave techniky použiť, zosúladiac ich vlastný poznatok s dôvodom.

Farmaceutický prijateľné soli sú získané obvyklými spôsobmi nájdenými v literatúre a nie je pre ne potrebný ďalší nový opis.

Zlúčeniny opísané v tomto vynáleze ukazujú antiproliferatívnu aktivitu, teda sú užitočné pre ich terapeutickú aktivitu a majú fyzikálno-chemické vlastnosti, ktoré ich robia vhodnými na formulovanie vo farmaceutických kompozíciách.

Farmaceutické kompozície zahrňujú najmenej zlúčeninu vzorca (I) v takom množstve, aby bol vytvorený výrazný terapeutický účinok, najmä protinádorový účinok.

Kompozície zahrnuté v predkladanom vynáleze sú konvenčné a sú získané obvykle použitými spôsobmi vo farmaceutickom priemysle. Podľa požadovanej cesty podávania môžu byť kompozície v tuhej alebo kvapalnej forme, vhodnej na orálnu, parenterálnu, intravenóznu cestu. Kompozície podľa predkladaného vynálezu zahrnujú spolu s aktívnymi zložkami najmenej tiež farmaceutický prijateľný nosič alebo excipient. Zvlášť môžu byť užitočné aj formulačné koadjuvanty, napríklad rozpúšťacie, disperzné, suspenzné, emulzné činidlá.

Zlúčeniny vzorca (I) môžu byť použité tiež v kombinácii s inými aktívnymi zložkami, napríklad inými protinádorovými liečivami, tak v oddelených formách, ako aj v jednodávkovej forme.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú užitočné ako lieky s protinádorovou aktivitou, napríklas pri pľúcnych tumoroch, ako sú veľkobunkový pľúcny nádor, nádory čreva-konečníka, prostaty, gliómu.

Cytotoxická aktivita zlúčenín predkladaného vynálezu bola analyzovaná v bunkových systémoch ľudských nádorových buniek pri použití testu antiproliferatívnej aktivity ako spôsobu hodnotenia cytotoxického potenciálu.

Bunková línia, ktorá bola použitá, je pľúcny veľkobunkový karcinóm, ktorý patrí k veľkobunkovému hystotypu nazvanému NCIH460.

Prednostné zlúčeniny 7-(t-butoxyiminometylkamptotecín (CPT 184) a 7-benzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 172) boli analyzované v porovnaní s Topotecanom (TPT), referenčným štandardom prijatým odborníkmi v tejto oblasti, a s 7-hydroxyiminometylkamptotecínom (CPT 181), opísaným u Sawada et al. v Chem. Pharm. Bull. 39(10), 2574-2580, (1991), ktorý je najbližším štruktúrnym analógom k zlúčeninám vzorca (I) podľa predkladaného vynálezu.

V in vivo štúdiách bolo uskutočnené rozpustenie v 10 % DMSO v dvakrát destilovanej vode, nebolo možné rozpustenie v soľnom roztoku, a podávanie orálnou cestou sa vykonalo v objeme 10 ml/kg.

Protinádorová aktivita

Boli použité atimické/švajčiarske myši (Charles River, Calco, Taliansko), vo veku 10 - 12 týždňov. Zvieratá boli udržované v miestnosti s laminámym prúdením, podľa princípov United Kingdom Co-ordination Committee Cancer Research. Experimentálne protokoly boli schválené Ethical Committee pre experimenty na zvieratách z Instituto Nazionale per lo Štúdio e Cura dei Tumori.

Nádorové fragmenty s veľkosťou asi 2 x 2 x 2 mm z myší, do ktorých bolo jednotlivo naočkované 10 buniek NCI H460/topo, boli implantované jednotlivo v skupinách skladajúcich sa z piatich myší.

Zvieratá boli liečené zlúčeninami po tom, ako bol nádor hmatateľný, podľa nasledujúceho programu:

- CPT 172 (8 mg/kg, po) q4dx4

- CPT 172(16 mg/kg, po) q4dx4

- CPT 172 (24 mg/kg, po) q4dx4

CPT172 (2 mg/kg, po) q5dxl0

CPT181 (15 mg/kg, po) q4dx4

CPT181 (25 mg/kg, po) q4dx4

CPT184 (2 mg/kg, po) q4dx4

CPT184 (5 mg/kg, po) qlOdxó

Topotecan (15 mg/kg, po) q4dx4

Topotecan (10 mg/kg, po) q4dx4

Dvakrát za týždeň, s použitím Vemierovho posuvného meradla, bola meraná v mm šírka, minimálny priemer (1), dĺžka a maximálny priemer (L) nádorov. Objem nádorov (mm³) boly vypočítaný podľa vzorca l²x L / 2. Účinnosť molekuly bola vypočítaná hodnotením TVI percenta liečenej skupiny oproti kontrolnej skupine podľa vzorca TVI% = 100-(T / C x 100), kde T je stredná hodnota objemu nádoru liečenej skupiny a C je táto hodnota kontrolnej skupiny. Zlúčenina bola považovaná za aktívnu, keď TVI% > 50.

Nasledujúca tabuľka 1 zaznamenáva experimentálne výsledky.

Tabuľka 1

Protinádorová aktivivta analógov kamptotecínu pri liečení pľúcneho karcinómu NCIH460

Zlúčenina	Dávka (mg/kg,po)	Program liečby	Účinnosť(TVI%)	Toxicita
Úmrtnosť	Strata hmotnosti %
CPT 172	8	q4dx4	77
	16	q4dxx4	88
	24	q4dx4	97	0/4	6
	2	qdx5xl0w	90	0/3	0
CPT181	15	q4dx4	40	0/4	0
	25	q4dx4	70	0/5	0
CPT 184	2	q4dx4	100	0/5	0
	5	qlOdxó	99	0/4	9
TPT	15	q4dx4	94	0/4	0
	15	q4dx4	89	0/5	10
	10	q4dx4	64	0/5	0

TVI% bolo hodnotené 5-10 dní po poslednej liečbe

CPT172 ukázalo protinádorovú aktivitu pri rôznych dávkach a pri rôznych programoch liečby; CPT184 odhalilo, že je aktívnou zlúčeninou pri nízkych dávkach pri rôznych programoch liečby, podľa toho obe zlúčeniny sú výrazne sľubnými molekulami na klinickú aplikáciu.

Ďalšie výhody týchto molekúl môžu byť identifikované v širokom intervale účinných dávok, indikujúcich zvýšenie terapeutického indexu a väčšie ovládanie pri terapeutickom použití, najmä ak je predpokladané časovo predĺžené podávanie, predovšetkým pri injetovateľných formuláciách, s použitím rôznych programov a dávok. Na takéto použitia sa zdá zlúčenina CPT 172 najpriaznivejšou vzhľadom na jej najnižšiu toxicitu.

Dôležitou nevýhodou konvenčných kamptotecínov je reverzibilnosť ich väzby v temámom komplexe (liečivo-DNA-enzým). Táto reverzibilnosť pôsobí na účinnosť liečiva, keďže neumožňuje pri syntéze DNA transformáciu štiepenia jednovetvovej DNA na štiepenie dvojvetvovej DNA.

Tabuľka 2 ukazuje stálosť štiepenia DNA na vybranom počte in-vitro štiepnych miest. Po 20 minútach inkubácie liečiva v reakčnej zmesi obsahujúcej označenú DNA s čistený enzým bol pridaný chlorid sodný (0,6 M) v rozsahu napomáhajúcemu disociácii temámeho komplexu. Výsledok, ukázaný v tabuľke ako percentá stálosti štepenia DNA v miestach, skúmaný po asi 10 minútach, je indikáciou takmer úplnej reverzibilnosti štiepenia v prípade kamptotecínu a Topotecanu a znamenal stálosť v prípade CPT 172 a CPT 184.

Tabuľka 2

Stálosť štiepenia DNA stimulovaného kamptotecínmi a sprostredkovaného topoizomerázou i na vybraných miestach

Liečivo (10 im)	Stálosť (%)
Camptotecín	16
Topotecan	16
CPT 181	28
CPT 184	72
CPT 172	80

Výhoda ponúkaná zlúčeninami podľa predkladaného vynálezu je dokázaná pri prekonaní obmedzenia reverzibilnosti temámeho komplexu vzhľadom na stav techniky.

V predklinických skúmaniach ukázalo CPT 184 cytotoxickú aktivitu pri rôznych líniách nádorových buniek.

Toto široké spektrum protinádorovej aktivity bolo potvrdené u myší s transplantovanými štepmi tkaniva ľudského nádoru, zahrnujúceho NSCLC (H460, A549), karcinóm prostaty (JCA-1), gliómblastóm (GBM/7), garstokarcinóm (MKN28), osteosarkóm (U2OS), ovaria karcinóm (A2780/Dx, A2780/DDP) a karcinómy čreva (HT29, CoBA), ako aj murín karcinóm pľúc (M109) a leukémia móde (L1210).

Predklinické údaje naznačujú, že CPT 184 môže byť aktívnym protinádorovým činidlom proti rakovine u ľudí a najmä proti nádorom veľkých buniek pľúc (NSCLC), gliómblastómu a karcinómu prostaty (tabuľka

3).

Tabuľka 3

Protinádorová aktivita CPT 172, CPT 184 oproti TPT na rôznych modeloch nádorov

	CPT 184 2 mg/kg	3 mg/kg	CPT 172 20 mg/kg	25 mg/kg	TPT 15 mg/kd
H460	99 (5/8*)	-	-	97	98
HT29	92	-	-	88	65
CoBA	84	87	84	93	85
GBM/7	97	98	93	98	96
	(3/10*)	(2/8*)	(3/11*)	(9/12*)	(1/10*)
U87	80	87	-	-	82
A2780	100 (1/8*)	-	-	-	96
A2780/ĎX	92 (1/8*)	100 (8/8*)			92 (2/10*)
A2780/DDP	77	90	-	-	92
IGROV-1	93	96	-	-	89
JCA-1	98 (5/8*)	-	98		95
DU145	95	-	-	-	77
L1210	>400***	-	-	>400***	39

Výsledky sú vyjadrené pre pevné nádory ako TVI% = inhibícia objemu tumoru =100-(hmotnosť nádoru liečenej skupiny / hmotnosť nádoru kontrolnej skupiny x 100) a pre L1210 ako ILS% = percento zvýšenia obdobia života [(MST liečenej skupiny /MST kontrolnej skupiny)xl00]-100.

* žiaden dôkaz nádoru na konci liečby trvajúcej asi 10 dní odo dňa posledného podávania.

** >50% a ***>80% liečených myší prežilo 120 dní od injektovania leukémie.

H460 = NSCLC

HT29 a CoBA = karcinóm čriev

IGROV-1, A2780, A2780/Dx a A2780/DDP = karcinóm vaječníkov

GBM/7 a U87 = gliómblastóm

JCA-1 a DU145 = karcinóm prostaty

L1210 = murín leukémia

Vysoká cytotoxická potencia zlúčenín predkladaného vynálezu, tu prezentovaná ako príkladný spôsob s každou z prednostných zlúčenín, CPT 184, je tiež odrazená v možnej protinádorovej aktivite. Použitím panelu Stepného tkaniva nádoru charakterizovaného výraznou citlivosťou na Topotecan (TPT (t. j. TVI >80 % ), bolo spektrum protinádorovej aktivity CPT 184, a v širšom zmysle zlúčenín podľa predkladaného vynále30 zu, proti značnému počtu modelov nádorov ľudí, podstatne zlepšené. Zvlášť pôsobivá protinádorová aktivita bola zistená pri liečbe nádorových modelov, kde bola dosiahnutá úplná regresia pri veľkom počte liečených zvierat. Navyše, zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu, najmä CPT 184, boli schopné vyvolať 100 % CR u A2780/DX nádoru charakterizované fenotypom MDR. Toto pozorovanie má veľký význam indikujúci, že zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu nie sú substrátom u P-glykoproteínu.

Ďalšie terapeutické výhody zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sa týkajú a) zlepšenia terapeutického indexu, b) účinnosti liečiva vo veľkom rozsahu dávok, c) dôkazu účinnosti použitím celkom rozdielnych prrogramov, robiac zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu menej závislými od programu liečby, než je to pri Topotecane.

Ďalej ilustrujú tento vynález nasledujúce príklady.

Príklad 1

7-Benzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 172)

500 mg (1,33 mmól) 7-formylkamptotecínu bolo rozpustené v 100 ml etanolu. Bolo pridané 15 ml pyridínu a 638 mg (4 mmól) O-benzylhydroxylamín hydrochloridu a bolo to ponechané 5 hodín refluxovať. Rozpúšťadlo bolo odparené pri vákuu a zvyšok takto získaný bol čistený prostredníctvom svetelnej chromatografie na silikagéli použitím zmesi hexán / etylacetát 4/6 ako eluenta.

Výťažok 65 %

Teplota topenia: 200 - 205 °C

Získaný produkt bol tvorený asi 8 : 2 zmesi dvoch syn a anti izomérov (izomér A: Rf: 0,32; izomér B: Rf: 0,19 na silikagéle Merck 60 F₂₅₄,eluent hexán/etylacetát 3/7).

HPLC: analýzy boli uskutočnené na prístroji vybavenom kvartémym čerpadlom (HP 1050) s Rheodyne injektorom (20 μΐ oko) a s detektorom skupiny diód (Hp 1050) riadeným softvérom HLPC-ChemStation. Zisťovanie spektra bolo vykonané od 200 do 600 nm a chromatogramy boli registrované pri 360 a 400 nm.

C18 reverzný fázový stĺpec (Rainin C18; 250x0,4 cm, Varian) bol použitý s RP18 predstĺpcom. Analýza bola vykonaná s lineárnym elučným gradientom (stúpaním), počnúc od acetonitril: voda 30 : 70 po acetonitril 100 % pri 20 min. s prietokom 1 ml/min. Retenčné časy boli: 12,51 u izoméru B a 14,48 u izoméru A. 'H-NMR (300 MHz; DMSO-Ô₆): δ: 0,88 (t, H3-18A + H3-18B), 1,87 (m, H2-19A + H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,21 (s, H2-PhB), 5,30 (H2-PhA), 5,40 (s, H2-5A), 5,45 (s, H2-17A + H2-17B), 6,53 (s, OHA + OHB),

7,3-7,6 (m, ArA + ArB + H-14A + H-14B), 7,75 (m, H-l 1A, + H-l IB), 7,85-7,95 (m, H10A + H-10B), 7,98 (dd, H-12B), 8,18-8,27 (m, H-12A + H9-B), 8,45 (s, CH=NB), 8,59 (dd, H-9A), 9,38 (s, CH=N A). Hmotnosť m/z 481 (M⁺ 100) 374 (30) 330 (70) 300 (30) 273 (20) 91 (34).

Príklad 2

7-t-Butoxyiminometylkamptotecín (CPT 184)

400 mg (1,06 mmól) 7-formylkamptotecínu bolo rozpustené v 80 ml etanolu. Bolo pridané 12 ml pyridínu a 400 mg (3,18 mmól) O-t-butylhydroxylamín hydrochloridu a bolo to ponechané 4 hodiny refluxovať. Rozpúšťadlo bolo odparené pri vákuu a zvyšok takto získaný bol čistený prostredníctvom svetelnej chromatografie na silikagéli použitím zmesi hexán/etylacetát 4/6 ako eluenta. Bolo získané 322 mg (0,72 mmól) žltej pevnej látky.

Výťažok 68 %

Teplota topenia: 250 °C

Získaný produkt bol tvorený asi 8 : 2 zmesi dvoch syn a anti izomérov (izomér A: Rf: 0,31; izomér B: Rf: 0,24 na silikagéle Merck 60 F₂₅₄, eluent hexán/etylacetát 3/7).

C18 reverzný fázový stĺpec (Rainin C18; 250x0,4 cm, Varian) bol použitý s RP18 predstĺpcom. Analýza bola vykonaná s lineárnym elučným gradientom (stúpaním), počnúc od acetonitril: voda 30 : 70 po acetonitril 100 % pri 20 min. s prietokom 1 ml/min. Retenčné časy boli: 12,92 u izoméru B a 14,61 u izoméru A. ’H-NMR (300 MHz; DMSO-Ó₆): δ: 0,88 (t, H3-18A + H3-18B), 1,30 (s, t-but.B) 1,47 (s, t-but.A), 1,87 (m, H2-19A + H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,18 (s, H2-5B), 5,37 (H2-5A), 5,42 (s, H2-17A + H2-17B), 6,54 (s, OHA + OHB), 7,35 (s, H-14A), 7,36 (s, H-14B), 7,69-7,83 (m, H-11A + H-11B), 7,85-7,98 (m, H-10A + H-10B), 8,07 (dd, H-9B), 8,16-8,27 (m, H-9A + H-12B), 8,40 (s, CHB), 8,62 (dd, H-12A), 9,31 (s, CHA). Hmotnosť m/z 488 (M⁺ 28) 391(40) 374 (100) 362 (40) 330 (34) 57 (17).

Podľa rovnakého postupu boli pripravené nasledujúce zlúčeniny:

7-t-butoxyiminometyl-10-hydroxykamptotecín (CPT 212);

Teplota topenia: 195 °C ’H-NMR (DMSO-de) δ = 0,88 (t, J=7,35 Hz, H₃ - 18), 1,45 (s, 3-CH₃), 1,80-1,90 (m, H₂ -19), 5,12 (s, H₂-5 anti), 5,33 (s, H₂-5 syn), 5,45 (m, H₂-17 syn; H₂-17 anti), 6,50 (s, -OH), 7,25 (d, J=2,57 Hz, H-9 anti), 7,30 (s, H-14 syn; H-14 anti), 7,43-7,50 (m, H-l 1 syn; H-l 1 anti), 7,70 (d, J=2,57 Hz, H-9 syn), 8,15 (d, J=9,9 Hz; H-12 syn, H-12 anti), 8,25 (s, -CH=N anti), 9,00 (s, -CH=N syn).

Hmotnosť m/z : 463 (M⁺ 16) 419 (15) 407 (25) 390 (43) 346 (100) 318 (10).

7-t-butoxyiminometyl-10-metoxykamptotecín (CPT 220);

Teplota topenia: 280 °C ’H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J=7,35 Hz, H₃ - 18), 1,47 (s, 3-CH₃), 1,80-1,93 (m, H₂-19), 3,95 (s, -OCH₃anti), 3,98 (s, OCH₃ syn), 5,17 (s, H₂-5 anti), 5,30-5,45 (m, H₂ -5 syn; H₂-17 syn; H₂-17 anti), 6,50 (s, -OH), 7,29 (s, H-14), 7,56 (dd, J=9,19 Hz; J=2,57 Hz; H-l 1), 7,90 (d, J=2,57 Hz; H-9), 8,12 (d, J=9,19 Hz; H-12), 8,39 (s, -CH=N anti), 9,33 (s, -CH=N syn).

Hmotnosť m/z : 477 (M56, M) 421 (74) 404 (100) 392 (66) 360 (18,5) 303 (6) 274 (7,5).

7-p-nitrobenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 177); 7-p-metylbenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 178

Teplota topenia: 203 °C

7-metoxyiminometylkamptotecín (CPT 179)

Teplota topenia: 230 °C 7-metoxyiminometyl-10-hydroxykamptotecín (CPT 211)

Teplota topenia: 268 °C 'H-NMR (DMSO-de) δ = 0,87 (t, J=7,35 Hz, H₃ - 18), 1,80-1,90 (m, H₂-19), 4,13 (s, -OCH₃), 5,32 (s, H₂-5),

5,41 (s, H₂-17), 6,50 (s, -OH), 7,26 (s, H-14), 7,47 (dd, J=9,19 Hz; J=2,56 Hz, H-ll), 7,75 (d, J=2,56 Hz, H-9), 8,08 (d, J=9,19 Hz, H-12), 9,04 (s, -CH=N).

7-pentaflurobenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 182)

Teplota topenia: 200 °C 7-karboxymetoxyiminometylkamptotecín (CPT 183);

7-(karboxydimetylmetoxy)iminometylkamptotecín;

Teplota topenia: 193 °C 'H-NMR (DMSO-de) δ = 1,02 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,69 (s, -CH₃), 1,72 (s, -CH₃), 1,81-1,95 (m, H₂-19), 3,60 (s, -OH), 5,24 (d, J=16,55 Hz, H-17A), 5,32 (s, H₂-5), 5,65 (d, J=16,55, H-17B), 7,64 (s, H-14), 7,67 (ddd, J=6,99 Hz; J=8,47 Hz; J=l,47 Hz, H-ll), 7,80 (ddd, J=6,99 Hz; J=8,47 Hz; J=l,47 Hz, H-10), 8,10-8,16 (m, H-9; H-12), 9,10 (s, CH=N).

7-(terc-butoxykarbonyl-2-propoxy)iminometylkamptotecín (CPT 224);

Teplota topenia: 180 °C 'H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J=7 Hz, H₃ -18), 1,44 (s, 3-CH₃), 1,60 (s, 2-CH₃), 1,80-1,92 (m, H₂-19),

5,27 (s, H₂-5), 5,43 (s, H₂-17) 6,53 (s, -OH), 7,35 (s, H-14), 7,76 (ddd, J=8,46 Hz,J=8,46 Hz; J=l,47 Hz, H-11), 7,92 (ddd, J=8,46 Hz; J=8,46 Hz; J=l,47 Hz, H-10), 8,23 (dd, J=8,46 Hz; J=l,47 Hz, H-12), 8,65 (dd, J=8,46 Hz; J=1,47 Hz, H-9), 9,20 (s, CH=N).

Hmotnosť m/z : 534 (M⁺13) 477 (29) 374 (55) 273 (10) 57 (100) 41 (57).

7-p-fenylbenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 187)

Teplota topenia: 200 - 202 °C 7-oxiranylmetoxyiminometylkamptotecín (CPT 213);

'H-NMR (DMSO-de) δ = 0,87 (t, J=7 Hz, H₃ -18), 0,80-2,00 (m, J=7 Hz, H₂-19), 2,80 (1H, m, -CH₂-O), 3,05 (s, 3-CH₂O), 3,40 (m, -CHO), 3,75 (s, -OH), 4,30 (1H, m, -CH₂O), 3,75 (s, -OH), 4,30 (1H, m, -CH₂O), 4,73 (1H, m, -CH₂-O-N), 5,33 (d, J=16 Hz, H-17A), 5,45 (s, H₂-5), 5,75 (d, J=16 Hz, H-17B), 7,70 (s, H-14), 7,75 (m, H-ll), 7,85 (m, H-10), 8,15-8,35 (m, H-9; H-12), 9,12 (s, -CH=N).

7-(2-amino)etoxyiminometylkamptotecín (CPT (188);

Teplota topenia: 220 °C 7-(4-pyridyl)metoxyiminometylkamptotecín (CPT 189)

Teplota topenia: 220 °C

Hmotnosť m/z M⁺482

7-[(N-metyl)-4-pyperidinyl]metoxyiminometylkamptotecín (CPT 190)

Teplota topenia: 185 - 190 °C

Hmotnosť m/z M⁺502

7-etoxyiminometylkamptotecín;

7-izopropyloxyiminometylkamptotecín; 7-(2-metylbutoxy)iminometylkamptotecín;

7-cyklohexyloxyiminometylkamptotecín; 7-cyklohexylmetoxyiminometylkamptotecín;

7-cyklooktyloxyiminometylkamptotecín; 7-cyklooktylmetoxyiminometylkamptotecín;

7-( 1 -adamatyloxy)iminometylkamptotecín;

7-( 1 -adamantylmetoxy)iminometylkamptotecín;

7-fenyoxyiminometylkamptotecín (CPT 223);

'H-NMR (DMSO-dj δ = 0,89 (t, J=7,35 Hz, H₃ -18), 1,81-1,95 (m, H₂-19), 5,25 (s, H₂-5 anti), 5,42 (s, H₂-17 anti), 5,45 (s, H₂-5 syn), 5,52 (s, H₂-17 syn), 6,56 (s, -OH), 7,15-7,55 (m, 5Ar; H-14), 7,83 (m, H-ll), 7,96 (m, H-10), 8,28 (dd, J=8,09; J=l,10 Hz, H-12), 8,73 (dd, J=8,09 Hz; J=l,10 Hz, H-9), 8,92 (s, -CH=N anti),

9,84 (s, -CH=N syn).

Hmotnosť m/z : 467 (M+33) 373 (100) 329 (62) 314 (72) 273 (62) 244 (52) 135 (38) 57 (25) 43 (39). 7-(2-naftyloxy)iminometylkamptotecín;

7-(9-antrylmetoxy)iminometylkamptotecín; 7-[2-(2,4-difluorofenyl)etoxy]iminometylkamptotecín;

7-(4-t-butylbenzyloxy)iminometylkamptotecín; 7-trifenylmetoxyiminometylkamptotecín (CPT 192)

Teplota topenia: 140 °C; 7-(2-N,N-dimetylaminoetoxy)iminometylkamptotecín (CPT 197); 7-[N-(4-aminobutyl)-2-aminoetoxy]iminometylkamptotecín;

7-[N-[N-(3-amino-l-propyl)-4-amino-l-butyl]-3-aminopropoxy]iminometyl-kamptotecín; 7-[2-(l-uracyl)-etoxy]iminomrtylkamptotecín (CPT 199);

Teplota topenia: 197 - 200 °C.

'H-NMR (DMSO-de) δ = 0,88 (t, J=7,35 Hz, H₃ -18), 1,80-1,95 (m, H₂-19), 3,90 (t, J=6 Hz, -CH₂N anti),

4,15 (t, J=6 Hz, -CH₂N syn), 4,35 (t, J=6 Hz, -CH₂O anti), 4,58 (t, J=6 Hz, -CH₂O syn), 5,00 (d, J=8 Hz, H-5 U anti), 5,35-5,50 (m, H₂-5 anti; H₂-5 syn; H₂-17 anti; H₂-17 syn), 5,55 (d, J=8 Hz, H-5 U syn), 6,55 (s, -OH), 7,15 (d, J=8 Hz, H-6 U anti), 7,40 (s, H-14), 7,64 (d, J=8 Hz, H-6 U syn), 7,70-7,82 (m, H-10 syn; H-10 anti), 7,85-8,00 (m, H-ll syn; H-ll anti; H-12 anti), 8,23 (m, H-12 syn; H-9 anti), 8,48 (s, -CH=N anti), 8,60 (dd, J=8,46 Hz; J=1,47 Hz, H-9 syn), 9,35 (s, -CH=N syn), 11,3 (br s, NH U).

7-[2-(4-morfolininyl)etoxy]iminometylkamptotecín (CPT 210);

Teplota topenia: 158 - 160 °C;

‘H-NMR (DMSO-d₆) δ = 1,06 (t, J=7,35 Hz, H₃ -18), 1,84-2,00 (m, H₂-19), 2,62 (t, J=4,78 Hz, -CH₂N morf.), 2,87 (t, J=5,52 Hz, -CH₂N), 3,60 (s, -OH), 3,79 (t, J=4,78 Hz, -CH₂O morf.), 4,59 (t, J=5,52 Hz, -CH₂O), 5,33 (d, J=16,18 Hz, H-17A), 5,45 (s, H₂-5), 5,77 (d, J=16,18 Hz; H-17B), 7,69 (s, H-14), 7,73 (ddd, J=l,47 Hz; J=8,46 Hz, H-ll), 7,87 (ddd, J=l,47 Hz; J=8,46 Hz; J=8,46 Hz, H-10), 8,19-8,31 (m, H-9; H-12), 9,12 (s, -CH=N).

Hmotnosť m/z: 504 (M+4)373(23)329(26)272(l 8)244(20)216(13) 100(100). 7-(6-uracyl)metoxyiminometylkamptotecín;

7-(4-hydroxybutoxy)iminometylkamptotecín; 7-(2-tienyl)metoxyiminometylkamptotecín;

7-(4-tiazolyl)metoxyiminometylkamptotecín; 7-(6-D-galaktozyloxy)iminometylkamptotecín;

7-(6-D-glukozyloxy)iminometylkamptotecín; 7-(6-D-glukozyloxy)iminometylkamptotecín;

7-(6-D-glukozyloxy)iminometylkamptotecín (CPT 216);

Teplota topenia: 210 °C;

'H-NMŔ (DMSO-d₆) δ = 0,85 (t, J=7,3 Hz, H₃ -18), 1,75-1,95 (m, H₂-19), 3,50-5,00 (m, 10H galakt.), 5,35 (s, H₂-5), 5,45 (s, H₂-17), 6,25 (d, -OH galakt.), 6,55 (s, -OH), 6,65 (d, -OH galakt), 7,35 (s, H-14), 7,80 (m, H-10), 7,98 (m, H-ll), 8,25 (dd, J=8,47 Hz; J=l,46 Hz,H-12) 8,60 (dd, J=8,47 Hz; J=l,46 Hz, H-9), 9,35 (s, -CH=N).

7-( 1,2,3-di-O-izopropylydén-D-galaktopyranozyloxy)iminometylkamptotecín (CPT 215);

'H-NMR (DMSO-dfi) δ = 0,87 (t, J=7,30 Hz, H₃ -18), 1,30-1,45 (m, 4-CH₃), 3,90-4,70 (m, H₂-6'; H-5’; H-4'; H-3'; H-2'), 1,80-1,93 (m, H₂-19), 5,35 (s, H₂-5), 5,45 (s, H₂-17), 5,60 (d, J=5,52 Hz, H-ľ), 6,52 (s, -OH), 7,35 (s, H-14), 7,75 (m, H-10 syn; H-10 anti), 7,90 (m, H-ll syn; H-ll anti), 8,05 (dd, J=8,47 Hz; J=l,47 Hz, H-12 anti), 8,20 (m, H-12 syn; H-9 anti), 8,50 (s, -CH=N anti), 8,65 (dd, J=8,47 Hz;J=l,47 Hz; H-9 syn),

9,41 (s, -CH=N syn).

Hmotnosť m/z: 634 (M+l 13) 576 (10) 486 (18) 347 (35) 329 (45) 314 (49) 302 (28) 246 (100) 242 (55) 187 (26).

7-(l-benzyloxyimino)etylkamptotecín (CPT 186);

7-[ 1 -(t-butoxyimino)etyl]kamptotecín.

Príklad 3

7-Benzoylkamptotecín (CPT 170)

Koncentrovaná kyselina sírová (0,17 ml) a benzaldehyd (304 mg, 2,87 mmól) boli po kvapkách pridané do suspenzie kamptotecínu (200 mg, 0,57 mmól) v kyseline octovej (0,8 ml) a vode (0,8 ml). Reakčná zmes bola ochladená na 0 °C a následne boli pridané 80 % t-butylperoxid (128 mg, 1,14 mmól) a roztok FeSO₄(317 mg, 1,14 mmól) vo vode (0,56 ml).

Po miešaní cez noc pri izbovej teplote bola pridaná voda, získala sa zrazenina, ktorá bola prefíltrovaná pri vákuu. Materský lúh bol extrahovaný s metylénchloridom (trikrát); organické fázy boli vysušené Na₂SO₄, prefiltrované a odparené pri vákuu. Pevná látka takto získaná bola sústredená so zrazeninou, ktorá bola predtým separovaná. Produkt bol čistený prostredníctvom svetelnej chromatografie na silikagéli použitím ako eluenta zmesi metylénchlorid / metanol 98/2. Bolo získané 90 mg (0,2 mmól) produktu.

Výťažok 35 % ‘H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆) δ = 0,9 (t, 3H, H3-18), 1,85 (m, 2H, H2-19), 5 (s, 2H, H2-5), 5,4 (2H, H2-5), 5,4 (s, 2H, H2-17), 6,6 (s, -1H, OH), 7,4 (s, 1H, hl4), 7,55-7,85 (m, 5H, Hl-10, H-ll, 3Ar), 7,95-8 (m, H12, 2Ar), 8,3 (dd, 1H-H-9).

Príklad 4

7-[a-(Hydroxyimino)benzyl]kamptotecm (CPT 185);

Bol pripravený roztok 7-benzoylkamptotecínu (50 mg, 0,11 mmól), hydroxylamín hydrochloridu (24 mg, 0,33 mmól), pyridínu (1,4 ml) v 10 etanolu a ponechaný 24 hodín refluxovať. Rozpúšťadlo bolo eliminované pri vákuu. Produkt bol čistený prostredníctvom svetelnej chromatografie na silikagéli použitím zmesi metylénchlorid / metanol 98/2 ako eluenty. Bolo získané 25 mg žltej pevnej látky.

Výťažok 48 %

Získaný produkt je tvorený zmesou dvoch syn a anti izomérov (izomér A: Rf: 0,35; izomér B: Rf :0,3 i na silikagéli Merck 60 F254 eluent metylénchlorid / metanol 95/5.

'H-NMR (300 MHz; DMSO-de) δ = 0,9 (t, H3-18A + H3 - 18B), 1,86 (m, H2- 19A + H2-19B), 4,8 (m, H2-5A + H2-5B), 5,85 (s, H2-17A + H2-17B), 6,55 (s, -OH B), 7,60 (s, OH A), 7,35-7,55 (m, Ar A + Ar B + H-10A + H-10B + H-l 1A + H-l IB + H-14A + H-14B), 7,6-7,7 (m, H-12A + H-12B).

Príklad 5

7-Fenyliminometylkamptotecín (CPT 154)

100 mg (0,26 mmól) 7-formylkamptotecínu rozpusteného v 20 ml metylénchloridu a 25 μΐ (0,26 mmól) anilínu rozpusteného v 0,5 ml metylénchloridu bolo pridané do suspenzie yterbia triflátu (16,5 mg, 0,026 mmól, 10% mol) v 5 ml metylénchloridu obsahujúceho MS 4A a bolo miešané 3,5 hodiny pri izbovej teplote, potom bolo rozpúšťadlo odparené pri vákuu. Produkt bol čistený prostredníctvom svetelnej chromatografie na silikagéli použitím zmesi metylénchlorid / metanol 98/2 ako eluenta. Bolo získané 60 mg žltej pevnej látky.

Výťažok 51 %

Teplota topenia: 255 - 258 °C ‘H-NMR (300 MHz; DMSO-de) δ = 0,8 (t, H3, H3-18), 1,75 (m, 2H, H2-19), 5,35 (s, 2H, H2-5), 5,5 (s, 2H, H2-17), 6,45 (s, -1H OH), 7,25-7,35 (m, 2H, Hl-Ar + H-14), 7,4-7,5 (m, 4H Ar), 7,75 (1H, ddd, H-ll), 7,85 (ddd, 1H-H10), 8,2 (dd, 1H, H-12), 8,9 (dd, 1H, H-9), 9,6 (s, 1H, CH=N).

Podľa rovnakého postupu boli pripravené nasledujúce zlúčeniny: 7-cyklohexyliminometylkamptotecm (CPT 156); 7-p-nitrofenyliminometylkamptotecín (CPT 160), teplota topenia: 260 - 265 °C;

7-(4-hydroxy)butyliminometylkamptotecín (CPT 169), teplota topenia: 140 °C;

7-dimetylammoetyliminometylkamptotecín (CPT 171); 7-benzyliminometylkamptotecín (CPT 175);

7-t-butyliminometylkamptotecín;

7-allyliminometylkamptotecín;

7-(2-tienyl)iminometylkamptotecín; 7-(4-amino)butyliminometylkamptotecín; 7-(3-aminopropyl-4-aminobutyl-3-aminopropyl)iminometylkamptotecín; 7-(2-antrylmetyl)iminometylkamptotecín;

7-(6-D-galaktozyl)iminometylkamptotecín; 7-(2-quinolylmetyl)iminometylkamptotecín.

Príklad 6

7-(Benzoyloxyiminometylmetyl)kamptotecín (CPT 191)

Bol pripravený roztok benzoylchloridu (0,16 ml, 1,4 mmól) v 5 ml pyridínu a bolo pridané 500 mg (1,3 mmól) 7-hydroxyiminometylkamptotecínu a ponechané pri miešam pri izbovej teplote. Po odparení pyridínu pri vákuu bol pridaný roztok hydrouhličitanu sodného a bol extrahovaný trikrát s metylénchloridom. Po sušení síranom sodným a filtrácii bolo rozpúšťadlo celkom odparené. Produkt bol čistený prostredníctvom svetelnej chromatografie na silikagéli použitím zmesi metylénchlorid / metanol 98/2 ako eluenta. Bolo získané 200 mg (0,04 mmól) žltej pevnej látky.

Výťažok 32 %

SK 287S61 B6

Teplota topenia: 210 °C 'H-NMR (300 MHz; DMSO-d«) δ = 0,8 (t, H3-), 1,8 (m, H2), 5,45 (s, H2-5), 5,55 (s, H2-17), 6,6 (s, 1H - OH), 7,3 (s, 1H, H-14), 7,75-8 (m, 5H, H-10 + H-ll + 3Ar), 8,25 (m, 2H, 2Ar), 8,3 (dd, 1H, H-12), 8,75 (dd, 1H, H-9), 10,05 (s, 1H, CH=N).

Podľa rovnakého postupu boli pripravené nasledujúce zlúčeniny:

-p-nitrobenzoyloxyiminocymptotecín

7-p-kyanobenzoyloxyiminometylkamptotecín 7-p-tolylsulfonyloxyiminometylkamptotecín.

Príklad 7

7-t-Butoxyiminometylkamptotecín-N-oxid (CPT 198)

7-t-Butoxyiminometylkamptotecín (30 mg, 0,067 mmól) bol rozpustený v kyseline octovej (5,2 ml) a bol pridaný 30 % peroxid vodíka Zmes bola zohrievaná pri 70 - 80 °C počas 9 hodín, kondenzovaná na asi jednu tretinu a zvyšok bol vyliaty so ľadovej vody. Zrazená látka bola odobratá odsávaním a čistená svetelnou chromatografiou použitím zmesi hexán / etylacetát 1/1 ako eluenta pre získanie 7-t-butoxyiminometylkamptotecín-N-oxidu ako žltého prášku (15,5 mg).

Výťažok 50 %

Teplota topenia: 185 - 190 °C 'H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,87 (t, J=7 Hz, H₃-18), 1,48 (s, 3-CH₃), 1,76-1,95 (m, H₂-19), 5,37 (s, H₂-5), 5,42 (s, H₂-17), 6,60 (s, -OH), 7,85-8,00 (m, H-10; H-ll), 8,15 (s, H-14), 8,65-8,75 (m, H-9; H-12), 9,2 (s, -CH=N).

Podľa rovnakého postupu boli pripravené nasledujúce zlúčeniny: 7-metoxyiminometylkamptotecín-N-oxid (CPT 208) 'H-NMR (DMSO-dJ δ = 0,87 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,78-1,93 (m, H₂-19), 4,12 (s, -OCH₃), 5,35 (s, H₂-5), 5,43 (s, H₂-17), 6,54 (s, -OH), 7,84-8,00 (m, H-10; H-ll), 8,11 (s, H-14), 8,68-8,73 (m, H-9; H-12), 9,21 (s, -CH=N).

7-(karboxydimetylmetoxy)iminometylkamptotecín-N-oxid 7-(hydroxymetyldimetylmetoxy)iminometylkamptotecín-N-oxid.

Príklad 8

7-p-Nitrobenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 177)

K suspenzii 7-hydroxyiminometylkamptotecínu (40 mg, 0,102 mmól) a uhličitanu sodného (10,9 mg, 0,102 mmól) v etanole (4 ml) bol pridaný 4-nitrobenzylbromid (22 mg, 0,102 mmól) a zmes bola refluxovaná

2,5 hodiny. Rozpúšťadlo bolo odparené pri redukovanom tlaku a zvyšok bol čistený svetelnou chromatografiou použitím zmesi hexán / etylacetát 3/7 ako eluenta pre získanie 10,5 mg 7-p-nitrobenzyloxyiminometylkamptotecínu.

Výťažok 20 % 'H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J= 7,35 Hz, H₃-18), 1,80-1,92 (m, H₂-19), 5,23 (s, CH₂-O), 5,45 (s, H₂-5), 5,57 (s, H₂-17), 6,55 (s, -OH), 7,35 (s, H-14), 7,75-7,95 (m, 2Ar; H-10; H-ll), 8,2-8,4 (m, 2Ar; H-12), 8,65 (dd, J=8,46 Hz; J=l,47 Hz, H-9), 9,50 (s, -CH=N).

Podľa rovnakého postupu boli pripravené nasledujúce zlúčeniny. 7-p-metylbezyloxyiminometylkamptotecín (CPT 178) Teplota topenia: 203 °C 7-pentafluorobenzyloxyiminometylkamptotecín (CPT 182) Teplota topenia: 200 °C.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Zlúčeniny vzorca (I) (I), kde: R¹ je -C(R⁵)=N-O(n)R⁴ skupina, kde R⁴ je Ct-C₈ lineárny alebo rozvetvený alkyl alebo C_rC₈ lineárna alebo rozvetvená alkenylová skupina alebo (C₃-Cio)cykloalkyl-(Ci-C₈) lineárna alebo rozvetvená alkylová skupina, alebo C₆-C₁₄ aryl, alebo C₆-Ci₄ aryl-(C]-C₈) lineárna alebo rozvetvená alkylová skupina, alebo heterocyklo-(Ci-Cg) lineárna alebo rozvetvená alkylová skupina, pričom heterocyklická skupina obsahuje najmenej jeden heteroatóm vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu dusíka, pripadne substituovaného s (C_rC₈) alkylovou skupinou, a/alebo kyslíka, a/alebo síry; pričom uvedená alkylová, alkenylová, cykloalkylová, cykloalkylalkylová, arylová, aryl-alkylová, heterocyklická alebo heterocyklo-alkylová skupina sú pripadne substituované s jednou alebo viacerými skupinami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, hydroxy, keto, C_rC₈ alkyl, C_rC₈ alkoxy, fenyl, kyano, nitro, -NR⁶R⁷, kde R° a R⁷, rovnaké alebo rôzne, sú vodík, (Cj-C8) lineárny alebo rozvetvený alkyl; COOH skupina alebo jej farmaceutický prijateľný ester; alebo COONR⁸R⁹ skupina, kde R⁸ a R⁹, rovnaké alebo rôzne, sú vodík, (CrC₈) lineárny alebo rozvetvený alkyl, fenyl; alebo

R⁴ je glykozyl skupina vybraná zo 6-D-galaktozyl, 6-D-glukozyl, D-galaktopyranozyl, glykozyl skupina je pripadne chránená vhodnou ketal skupinou;

n je číslo 1;

R⁵ je vodík, C_rC₈ lineárny alebo rozvetvený alkyl;

ich jednotlivé izoméry, najmä syn- a antiizoméry -C(R^s)=N-O_(n)R⁴ skupiny, ich možné enantioméry, diastereoméry a ich príslušné zmesi, ich farmaceutický prijateľné soli.

2. Zlúčeniny podľa nároku 1 vybrané zo skupiny pozostávajúcej z:

7-metoxyiminometylkamptothecinu;

7-metoxyiminometyl-10-hydroxykamptothecinu; 7-(/erc-butoxykarbonyl-2-propoxy)iminometylkaptothecinu; 7-etoxyiminometylkamptothecinu;

7-isopropoxyiminometylkamptothecinu;

7-(2-metylbutoxy)iminometylkamptothecinu;

7-t-butoxyiminometylkamptothecinu;

7-t- butoxyiminometyl-10-hydroxykamptothecinu;

7-t- butoxyiminometyl-10-metoxykamptothecinu;

7-(4-hydroxybutoxy) iminometylkamptothecinu;

7-trifenylmetoxyiminometylkamptothecinu; 7-karboxymetoxyiminometylkamptothecinu; 7-(2-amino)etoxyiminometylkamptothecinu; 7-(2-N,N-dimetylamino)etoxyiminometylkamptothecinu;

7-allyloxyiminometylkamptothecinu;

7-cyklohexylmetoxyiminometylkamptothecinu; 7-cyklooktylmetoxyiminometylkamptothecinu;

7-benzyloxyiminometylkamptothecinu;

7-[( 1 -benzyloxyimino)-2-fenyletyl]kamptotecinu;

7 -(1 -benzyloxy iminojetylkamptothecinu;

7-fenoxyiminometylkamptothecinu;

7-( 1 -t-butoxyimino)etylkamtothecinu;

7-p-nitrobenzyloxyiminometylkamptothecinu; 7-p-metylbenzyloxyiminometylkamptothecinu;

7-pentafluorobenzyloxyiminometylkamptothecinu; 7-p-fenylbenzyloxyiminometylkamptothecinu;

7-[2-(2,4-difluorofenyl)etoxy]iminometylkamptothecinu; 7-(4-t-butylbenzyloxy)iminometylkamptothecinu;

7-( 1 -adamantylmetoxyjiminometylkamptothecinu;

7-(2-naftyloxy)iminometylkamptothecinu; 7-(9-antrylmetoxy)iminometylkamptothecinu;

7-oxiranylmetoxyiminometylkamptothecinu; 7-(6-uracyl)metoxyiminometylkamptothecinu;

7-[2-(l-uracyl)etoxy]iminometylkamptothecinu; 7-(4-pyridyl)metoxyiminometylkamptothecinu;

7-(2-tienyl)metoxyiminometylkamptothecinu; 7-[(N-metyl)-4-piperidinyl]metoxyiminometylkamptothecinu;

7 - [2 -(4 -morfolininy 1) etoxy] iminometylkamptothecinu;

7-[(l-hydroxyimino)-2-fenyletyl)kamptothecinu; 7-íerc-butyloxyiminometylkamptothecin-N-oxidu;

7-metoxyiminometylkamptothecin-N-oxidu.

3. Zlúčeniny podľa nároku 1, vybrané zo skupiny pozostávajúcej z:

7-(l,2:3,4-di-0-izopropylydén-D-galaktopyranozyloxy)iminometylkamptothecinu;

7-(6-D-galaktozyloxy)iminometylkamptothecinu;

7-(6-D-glukozyloxy)iminometylkamptothecinu.

4. Zlúčenina podľa nároku 2, ktorou je 7-(t-butoxy)iminometylkamptothecin.

5. Zlúčenina podľa nároku 2, ktorou je 7-benzyloxyiminometylkamptothecin.

6. Spôsob prípravy zlúčenín podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že n je 1 a R⁴ je ako definované skôr, okrem aroylu a arylsulfonylu, a zahŕňa reakciu zlúčeniny vzorca (la) kde R¹ je skupina -C(R⁵)=O a R⁵ je definované vo vzorci (I), R² a R³ sú definované vo vzorci (I) so zlúčeninou vzorca (Ila) R⁴O-NH₂, kde R⁴ je definované skôr, pri vzniku zlúčenín vzorca (I), kde R¹ je skupina -C(R⁵)=N-OR⁴, R⁴ je definované vo vzorci (I), okrem aroyl a arylsulfonyl.

7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že molámy pomer zlúčeniny vzorca (la) a zlúčeniny vzroca (Ila) je od 1 : 3 do 3 : 1.

8. Spôsob prípravy zlúčenín podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým,ženjelaR⁴je definované skôr, okrem aroylu a arylsulfonylu, a zahŕňa reakciu zlúčeniny vzorca (la) kde R¹ je skupina -C(R⁵)=N-OH a R⁵ je definované vo vzorci (I), R² a R³ sú definované vo vzorci (I), s halogenidom R⁴X, kde X je halogén a R⁴ je definované, pri vzniku zlúčenín vzorca (I), kde R¹ je skupina -C(R⁵)=N-OR⁴, R⁴ je definované vo vzorci (I), okrem aroyl a arylsulfonyl.

9. Zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, ako liečivá.

10. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo najmenej jednej zlúčeniny podľa nárokov 1 až 5 v zmesi s farmaceutický prijateľnými nosičmi a excipientmi.

11. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo najmenej jednej zlúčeniny podľa nárokov 1 až 5 v zmesi s farmaceutický prijateľnými nosičmi a excipientmi a prípadne v kombinácii s inými účinnými zložkami.

12. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 11,vyznačujúci sa tým, že iná aktívna zložka je protinádorová.

13. Použitie zlúčeniny podľa nárokov 1 až 5 na prípravu liečiva vhodného na liečenie nádorov.

14. Použitie zlúčenín vzorca (la) kde R¹ je skupina -C(R⁵)=O a R⁵ je definované vo vzorci (I), R² a R³ sú definované vo vzorci (I) ako medziproduktov v spôsobe podľa nároku 6.

Koniec dokumentu