SK10782000A3

SK10782000A3 - Syntetické polysacharidy, spôsob ich prípravy, farmaceutické kompozície, ktoré ich obsahujú

Info

Publication number: SK10782000A3
Application number: SK1078-2000A
Authority: SK
Inventors: Johannes Basten; Cornelia Dreef-Tromp; Pierre-Alexandre Driguez; Philippe Duchaussoy; Jean-Marc Herbert; Maurice Petitou; Boeckel Constant Van
Original assignee: Sanofi-Synthelabo; Akzo Nobel N. V.
Priority date: 1998-01-19
Filing date: 1999-01-13
Publication date: 2001-02-12
Also published as: HU228333B1; PE20000269A1; DE69900718D1; GT199900003A; JP4402835B2; MY119090A; RU2211224C2; AU1974599A; US6528497B1; AR013019A1; FR2773804B1; UA60352C2; IL137241A0; ES2168000T3; SK283411B6; EP1049721A1; EG23982A; MA26597A1; BR9907025A; UY25356A1

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa týka nových syntetických polysacharidov, ktoré majú antikoagulačnú a antitrombotickú farmakologic<ú aktivitu heparínu.

Doterajší stav techniky

Heparín patrí do skupiny glykozaminoglykánov (GAG), čo sú heterogénne prírodné sulfatované polysacharidy.

Heparínové prostriedky sú zmesi reťazcov obsahujúcich rad monosacharidových jednotiek v počte od 10 do 100 alebo viac. Táto heterogenita molekulovej velkosti je sprevádzaná štruktúrnou heterogenitou, čo platí nielen o povahe základných monosacharidov ale aj o substituentoch, ktoré nesú (L. Rcdén, „The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminoglycans, vydal W. J. Lennarz, Plénum Press, New York a Londýn, strany 267-371, 1980)

Každá skupina prírodných GAG má vo všeobecnosti niekolko farmakologických účinkov. Všetky sú kombinované v prostriedkoch, ktoré sa dajú získať z prírodných produktov. Tak majú napríklad heparíny a heparínsulfáty antitrombotickú aktivitu, ktorá je spojená so súčasným pôsobením na niekolko koagulačných faktorov.

Heparín katalyzuje (najmä cez antitrombín III (AT III)) inhibíciu dvoch enzýmov, ktoré sa zúčastňujú kaskády zrážania krvi, t. j. faktora Xa a faktora Ila (alebo trombínu). Prostriedky obsahujúce heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou (LMWHS) obsahujú reťazce tvorené 4 až 30 monosacharidmi a pôsobia na faktor Xa selektívnejšie než na trombín.

Niektoré syntetické oligosacharidy, najmä tie, ktoré sú opísané v patentovej prihláške EP 84,999, selektívne inhibujú cez antitrombín III faktor Xa bez akéhokoľvek účinku na trombín.

Je známe, že inhibícia faktora Xa vyžaduje väzbu heparínu na AT III cez antitrombínovú väzbovú doménu (ABD) a že inhibícia faktora Ila (trombín) vyžaduje väzbu na AT III cez ABD a na trombín cez horšie definovanú väzbovú doménu (T3D).

Syntetické oligosacharidy korešpondujúce s ABD heparínu sú známe a vyznačujú sa antitrombotickou aktivitou pri žilovej trombóze. Tieto zlúčeniny sú opísané v patentovej prihláške EP 529 715 a EP 621 282 a v patente CA 2 040 905.

Účinnosť týchto oligosacharidov pri prevencii tepnovej trombózy je ale zmarená ich neschopnosťou inhibovať trombín.

Syntéza heparínových glykozaminoglykánov schopných inhibovať trombín cez aktiváciu AT III je opísaná v patentovej prihláške PCT/FR 97/01344.

Táto patentová prihláška opisuje nové biologicky aktívne polysacharidové deriváty. Sú to najmä antikoagulanty a antitrombotiká. Ďalej, pretože sa tieto polysacharidy získavajú syntézou, je možné selektívne modifikovať ich štruktúru a najmä odstrániť nežiaduce sulfátové substituenty, ktoré sa zúčastňujú interakcie s niektorými bázickými proteínmi, ako je faktor krvných doštičiek 4 (PF4), ktorý sa uvoľňuje v priebehu aktivácie došričiek, čo vedie k značnej neutralizácii heparínu v oblasti zrazeniny. Tak sa dajú získať polysacharidy, ktoré sú účinnými antitrombotickými a antikoagulačnými činidlami a ktoré môžu ďalej odolať in vivo pôsobeniu proteínov ako je PF 4, ktoré neutralizujú účinok heparínu najmä na trombín.

Dokázalo sa, že najmä tieto sulfátované a alkylované polysacharidy môžu byť v závislosti od usporiadania alkylových a sulfátových skupín vytvorenom pri tvorbe uhľovodíkového skeletu, silnými antitrombotickými a antikoagulačnými činidlami.

Všeobecnejšie sa objavilo, že sa pri výstavbe polysachariaových sekvencií môže presne modifikovať GAG aktivita s cieľom získat veľmi aktívne produkty, ktoré majú vlastnosti heparínu.

Ale použitie niektorých produktov opísaných v patentovej prihláške PCT/FR 97/01344 v humánnej medicíne môže byť spojené s ťažkosťami, najmä ak majú dlhý polčas života. Pri prevencii alebo liečení trombózy uvedenými produktmi sa musí obnoviť alebo udržiävať tekutosť krvi a súčasne sa musí brániť indukcii krvácania. Vitálna povaha s tým spojených funkcií je taká, že je výhodné použiť (s cieľom udržať túto rovnováhu) iba zlúčeniny, ktoré majú krátky polčas života a s ktorými sa lepšie pracuje.

Dôvodom na to je dobre známy fakt, že u liečených pacientov sa môže pri akejkoľvek nehode spúšťať krvácanie. Rovnako môže byť nevyhnutné u liečeného pacienta uskutočniť chirurgický zákrok. Aj z týchto rôznych dôvodov je vhodné použiť zlúčeniny s krátkym polčasom života.

Polčas života syntetických polysacharidov podlá predkladaného vynálezu sa stanovil u potkanov, kde sa neočakávane pozorovalo, že ho ovplyvňuje štruktúra molekuly a najmä ABD domény, TBD (trombínová väzbová doména)domény a spacer.

Podstata vynálezu

Predkladaný vynález sa týka nových syntetických polysacharidov, ktoré majú podobnú štruktúru ako zlúčeniny opísané v patentovej prihláške PCT/FR 97/01344, ale ktoré majú špecifické vlastnosti. Príčinou toho je, že tieto zlúčeniny majú neočakávane polčas života vylúčenia (určený pomocou anti-Xa aktivity po intravenóznom podaní potkanom) kratší než 1,5 hodiny.

Tieto zlúčeniny sú hexadekasacharidy obsahujúce tri odlišné sekvencie: sulfatovanú pentasacharidovú sekvenciu DEFGH, nesulfatovanú heptasacharidovú sekvenciu Z(MN)₃a sulfatovanú tetrasacharidovú sekvenciu VWXY.

Zlúčeniny podlá predkladaného vynálezu sú syntetické polysacharidy v kyslej forme a ich farmaceutický prijateľné soli s farmaceutický prijateľnými katiónmi, ktorých aniónová forma korešponduje s jedným zo vzorcov I, II, III, IV a V:

ruktúry podľa vynále

Vynález zahŕňa polysacharidy v ich kyslej forme alebo vo forme akejkoľvek ich farmaceutický prijateľnej soli. V kyslej forme sú skupiny -COO a -SO3“ prítomné ako skupiny -COOH a -SO3H.

Výraz „farmaceutický prijateľná soľ polysacharidu podľa predkladaného vynálezu sa týka polysacharidu, v ktorom je jedna alebo niekolko skupín -COO' a/alebo -SO3 iónovc viazaná s farmaceutický použiteľným katiónom kovu. Výhodné soli podľa predkladaného vynálezu sú tie, kde je katión vybraný z katiónov alkalických kovcv, výhodnejšie Na' alebo K⁺.

Predkladaný vynález sa týka aj spôsobu prípravy polysacharidov podľa predkladaného vynálezu.

Tento spôsob v princípe využíva di- alebo oligosacharidové syntóny pripravené tak, ako sa už skôr uviedlo v literatúre. Odkazujeme najmä na patentové prihlášky EP 300 099, EP 529 715, EP 621 292 a EP 649 854 a na prácu C. van Boeckel, M. Petitcu, Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 32, 1671-1690 (1993). Tieto syntóny sa potom spolu spájajú, pričom vznikne úplne chránený prekurzor hexadekasacharidu podľa predkladaného vynálezu, z ktorého sa potom selektívne odstránia ochranné skupiny a sulfatuje sa, pričom vznikne hexadekasacharid podľa predkladaného vynálezu.

V uvedenej spájacej reakcii reaguje „donor di- alebo oligosacharidu aktivovaný na svojom anomérnom uhlíku s „akceptorom di- alebo oligosacharidu obsahujúcim voľnú hydroxylovú skupinu.

Hexadekasacharidy podľa predkladaného vynálezu sa dajú syntetizovať nasledovnou sekvenciou operácií, ktorá sa týka sacharidcvých jednotiek uvedených vo vzorci I.

Najskôr sa pripraví chránený prekurzor GH, pGH (ktorý má v polohe 4' alkoholovú skupinu) a chránený prekurzor EF, pEF (ktorého ancmérr.y atóm uhlíka je aktivovaný) . Intermediáty pGH a pEF spolu reagujú, pričom vznikne EFGH. Z polohy 4 nereduktívnej koncovej jednotky sa potom odstráni ochranná skupina, pričom vznikne prekurzor pEFGH.

Paralelne sa rovnakým spôsobom pripraví prekurzor pYZ(MN)₃D časti YZ(MN)₃D (ktorej anomérny atóm uhlíka je aktivovaný).

Tetrasacharid pEFGH potom reaguje s pYZ(MN)₃D, pričom sa získa YZ(MN)₃DEFGH. Z nereduktívnej koncovej jednotky sa odstránia ochranné skupiny, pričom sa získa prekurzor pYZ(MN)₃DEFGH.

Paralelne sa pripraví prekurzor pVWX látky VWX.

Reakcia medzi pVWX a pYZ(MN)3DEFGH tak poskytne priamy prekurzcr hexadekasacharidu, z ktorého sa odstráni ochranná skupina a ktorý sa sulfatuje, pričom sa získa požadovaný hexadekasachand.

Odborníkom v tejto oblasti je zrejmé, že je k dispozícii niekoľko syntetických stratégií (v závislosti od vybraného akceptora a donora). Napríklad sa môže pripraviť donor VWXYZ(MN)₃D, ktorý sa môže spojiť s látkou EFGH, s cieľom získať prekurzor požadovaného hexadekasacharidu. Odkázať sa môže na už uvedené referencie a na prácu „Monosacharides, Their Chemistry and Their Roles in Natural Products, P. M. Collins a R. J. Ferrier, J. Wiley & Sons, 1995 a na prácu G. J. Boons, Tetrahedrcn, 52, 1095-1121 (1996).

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa podrobili biochemickým a farmakologickým testom, ktoré ukázali, že majú navyše cvela výhodnejšie vlastnosti ako produkty opísané v patentovej prihláške PCT/FR 97/01344.

Zlúčeniny podlá predkladaného vynálezu, ktoré sa selektívne viažu na AT III s afinitou rovnakou alebo väčšou než heparín, majú antikoagulačné a antitrombotické vlastnosti, ktoré sú lepšie než v prípade heparínu.

Všeobecná antitrombotické aktivita produktov vzorca I až V sa hcdnctila po intravenóznom alebo podkožnom podaní u potkanov v modeli hromadenia krvi v žilách a indukcie s tromboplastínom spôsobom opísaným J. Reyersom a ďalšími v práci Thrombosis Research, 16, 669-674 (1980), a v modeli tepnovej trombózy tvorenej výhybkou implantovanou medzi krčnú tepnu a krčnú žilu u potkanov, ako opísal Umetsu a ďalší, Thromb. Haemost., 39, 74-83 (1978). V týchto dvoch experimentálnych modeloch je ED50 zlúčenín podía predkladaného vynálezu aspoň rovnakého rádu alebo menšie než u iných už známych syntetických heparinoidov (ED50 medzi 1 a 50 nmol/kg. Zlúčeniny podía predkladaného vynálezu tak majú najmä výhodnú špecifickost pôsobenia a najmä výhodnú antikoagulačnú aktivitu.

Kvôli svojej biochemickej a farmaceutickej aktivite sú zlúčeniny podía predkladaného vynálezu veími výhodnými liečivami. Ich toxicita je úplne kompatibilná s týmto použitím. Zároveň sú veími stabilné a preto vhodné najmä ako aktívne zložky farmaceutických špecialít.

Zlúčeniny podía predkladaného vynálezu nie sú ďalej neutralizované vysokými dávkami katiónových doštičkových proteínov ako PF4, ktoré sa uvoľňujú pri aktivácii doštičiek v priebehu procesu trombózy. Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú tak najvýhodnejšie na liečenie a prevenciu trombózy tepnového alebo žilového pôvodu.

Zlúčeniny podía predkladaného vynálezu sa dajú použiť pri rôznych patologických stavoch nasledujúcich po modifikácii homeostázy koagulačného systému spôsobených poruchami kardiovaskulárneho a cerebrovaskulárneho systému, ako sú tromboembolické poruchy spojené s artériosklerózou a diabetom, ako je nestabilná angína, mŕtvica, restenóza po angioplastike, endarteriektómia, inštalácia endovaskulárnej protézy, alebo tromboembolické poruchy spojené s retrombózou po trombolýze, infarkt, demencia ischemického pôvodu, s poruchami periférnych tepien, s hemodialýzou, s aurikulárnou fibriláciou alebo v priebehu použitia aortokoronárnej mostíkovej vaskulárnej protézy. Tento produkt podľa predkladaného vynálezu sa dá ďalej použiť na liečenie alebo prevenciu tromboembolických patologických stavov žilového pôvodu, ako je pľúcny embolizmus. Produkty podía predkladaného vynálezu sa dajú použiť na prevenciu alebo liečenie tromboembolických komplikácií vzniknutých v priebehu chirurgického zákroku alebo v súvislosti s iným patologickým stavom ako je rakovina a bakteriálna alebo vírusová infekcia. V prípade použitia v priebehu inštalácie protézy môže zlúčenina podía predkladaného vynálezu pokryť protézu a tak ju urobiť kompatibilnú s krvou. Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa môžu viazať najmä na intravaskulárne protézy. V tomto prípade sa môžu voliteľne chemicky modifikovať zavedením vhodných vetiev na nereduktívnom alebo redukoívnom konci, ako opisuje patentová prihláška EP 649,854.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa dajú použiť aj ako pomocné látky v priebehu endarteriektómie uskutočňovanej poréznymi balónikmi.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú veľmi stabilné a preto sú vhodné najmä na vytvorenie aktívnej zložky liečiva.

Preto sa dajú zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu použiť na prípravu liečiv na liečenie uvedených chorôb.

V inom aspekte vynálezu je tak jeho predmetom farmaceutický prostriedok obsahujúci ako aktívnu zložku už definovaný syntetický polysacharid.

Vynález sa výhodne týka farmaceutických prostriedkov obsahujúcich ako aktívnu zložku zlúčeninu podľa predkladaného vynálezu vo forme kyseliny alebo jednej z jej farmaceutický prijateľných solí, prípadne v kombinácii s jednou alebo niekoľkými inertnými a zodpovedajúcimi prísadami. Vo všeobecnosti sa dajú polysacharidy podľa predkladaného vynálezu použiť pri liečení patologických stavov spojených s poruchami koagulácie.

V každej dávkovej jednotke je aktívna zložka prítomná v množstve vhodnom pre konkrétnu dennú dávku. Vo všeobecnosti sa každá dávková jednotka upraví zodpovedajúcim spôsobom podlá konkrétnej dávky a spôsobu podávania, napríklad ako tablety, želatínové kapsule a pod., vrecká, ampule, sirupy a pod., kvapky, transdermálne alebo sliznicové náplasti tak, že uvedená dávková jednotka obsahuje od 0,1 do 100 mg aktívnej zložky, výhodne 0,5 až 50 mg.

Zlúčeniny podía predkladaného vynálezu sa dajú použiť aj v kombinácii s jednou alebo niekoľkými ďalšími aktívnymi zložkami, ktoré sú vhodné na požadovanú terapiu, ako napríklad antitrombotické činidlá, antikoagulanty, činidlá proti agregácii krvných doštičiek, ako je napríklad dipyridamol, aspirín, tiklopidín, klcpidcgrel alebo antagonisti glykoproteínového komplexu Iľb/ľlla.

Farmaceutické prostriedky sú formulované na podávanie cicavcom, vrátane človeka, s cielom liečiť uvedené choroby.

Takto získané farmaceutické prostriedky sú výhodné v rôznych formách ako napríklad roztoky na injekcie alebo nápoje, cukrom potiahnuté tablety, bežné tablety alebo želatínové kapsule. Výhodnou formou sú roztoky na injekcie. Farmaceutické prostriedky podľa predkladaného vynálezu sú vhodné najmä na preventívne alebo akútne liečenie chorôb cievnych stien, ako je artérioskleróza, hyperkoagulabilita napríklad po chirurgickom zákroku alebo na nádore alebo po deregulácii koagulácie spôsobenej bakteriálnymi, vírusovými alebo enzymatickými aktivátormi. Dávkovanie sa môže líšiť v rámci širokej škály v závislosti od veku pacienta, hmotnosti, zdravotného stavu, povahy a závažnosti ťažkostí a aj spôsobu podávania. Dávkovanie zahŕňa podanie jednej alebo niekoľkých dávok 0,1 mg až 100 mg za deň, výhodne 0,5 až 50 mg za deň, a to intramuskulárne alebo podkožné, kontinuálne alebo v pravidelných intervaloch.

Predmetom predkladaného vynálezu sú tak aj farmaceutické prostriedky, ktoré obsahujú ako aktívnu zložku jednu z uvedených zlúčenín prípadne v kombinácii s ďalšou aktívnou zložkou. Tieto prostriedky sú upravené tak, aby sa dali podávať do tráviacej sústavy alebo mimo tráviacu sústavu.

Farmaceutické prostriedky podľa predkladaného vynálezu na perorálne, podjazykové, podkožné, intramuskulárne, intravenózne, transdermálne, sliznicové, lokálne alebo rektálne podávanie sa podávajú ľuďom alebo zvieratám ako jednotková dávka s aktívnou zložkou zmiešanou so štandardnými farmaceutickými prísadami.

Vhodné jednotkové formy na podávanie zahŕňajú perorálne formy ako tablety, želatínové kapsule, prášky, granule a perorálne suspenzie alebo roztoky, podjazykové a ústne formy, podkožné, intramuskulárne, intravenózne, intranazálne a očné formy a rektálne formy.

Keď sa pripravuje tuhý prostriedok vo forme tabliet, zmieša sa hlavná aktívna zložka s farmaceutickým nosičom ako je želatína, škrob, laktóza, stearan horečnatý, mastenec, arabská guma a pod. Tablety sa môžu pofahovať sacharózou alebo inými vhodnými materiálmi alebo alternatívne sa môžu upraviť tak, že majú dlhodobú alebo oneskorenú aktivitu a že plynulé uvolňujú vopred stanovené množstvo aktívnej zložky.

Želatínové kapsule sa získajú zmiešaním aktívnej zložky s riedidlom a naliatím získanej zmesi do kapslí z mäkkej alebo tvrdej želatíny.

Prášky, ktoré sa dispergujú vo vode alebo granule mcžu obsahovať aktívnu zložku v zmesi s disperzným, suspenzným alebo zvlhčujúcim činidlom ako je polyvinylpyrolidón, a so sladidlami alebo príchuťami.

Na rektálne podávanie sa pripravujú čapíky, ktoré sa vyrábajú zo spájadiel, ktoré sa topia pri teplote rekta, napríklad z kakaového masla alebo polyetyiénglykolov.

Na parenterálne, intranazálne alebo očné podávanie sa používajú vodné suspenzie, izotonické fyziologické roztoky alebo roztoky na sterilné injekcie, ktoré obsahujú farmakologicky kompatioilné disperzné činidlá a/alebo zvlhčujúce činidlá, napríklad propylénglykol alebo butylénglykol.

Na podávanie cez sliznicu môže byť aktívna zložka vo forme zmesi s promotérom ako je žlčová soľ, hydrofilný polymér, ako napríklad hydroxypropylcelulóza, hydroxypropylmetylcelulóza, hydroxyetylcelulóza, etylcelulóza, karboxymetylcelulóza, dextrán, polyvinylpyrolidón, pektíny, škroby, želatína, kazeín, kyseliny akrylové a ich estery a ich kopolyméry, vinylové polyméry alebo kopolyméry, vinylalkoholy, alkoxypolyméry, polyetylénoxidcvé polyméry, polyétery alebo ich zmesi.

Aktívna zložka môže byť aj vo forme mikrokapslí, prípadne s jednou alebo niekolkými prísadami alebo nosičmi.

Aktívna zložka môže byť aj vo forme komplexu s cyklodextrínom, napríklad α-, β- alebo γ-cyklodextrínom, 2-hydroxypropyl-3~ -cyklodextrínom alebo metyl-3-cyklodextrínom.

Aktívna zložka sa môže uvoľňovať aj z balónikov, ktoré ju obsahu j u alebo z endovaskulárnych extenderov zavedených dc ciev. Farmakologická účinnosť aktívnej zložky nie je ovplyvnená.

Výhodnou cestou podávania je podkožný spôsob.

Nasledovné spôsoby prípravy a schémy ilustrujú syntézy rôznych intermediátcv, ktoré sú vhodné na získanie polysacharidov pcdľa predkladaného vynálezu.

Ďalej sú požité nasledovné skratky:

T5DMS: zerc-butyldimetylsilylová skupina; Lev: ievulinoylcvá skupina; Bn: benzylcvá skupina; Bz: benzoylcvá skupina; TLC: tenkovrstvová cnrcmatcgrafia; Olm: trichlóracetimidoyiová skupina; LSIM5: kvapalinová hmotnostná spektrometria sekundárneho Iónu; ΕΞΙΜ3: elektró.tspre jová ionizačná hmotnostná spektrometria; ΤΜΞ: trirr.etylsilylová skupina; TSP: trimetyisilyltetradeutenoprcpionát sodný; Tf: triflát; MS: molekulové sitá; PM3: p-metoxybenzylová skupina; MP: p-metoxyfenylová skupina; TS: tozylová skupina; Et: etylové skupina; Ph: fenylová skupina; Me: metylová skupina; Ac: acetylová skupina.

Dowex¹“, Sep’nadex®, Chelex³ a Toyopearl® sú registrované ochranné známky.

V spôsoboch, prípravách a príkladoch opísaných v ďalšej časti predkladaného vynálezu sa všeobecné postupy katalytického spojenia imidátov, štiepenia levulových esterov, katalytického spojenia tioglykozidov, zmydelnenia, metylácie a selektívneho odstránenia ochrannej skupiny z p-metoxybenzylovej skupiny, odstránenia ochrannej skupiny a sulfatácie oligo- a polysacharidov, hydrogenolýzy benzylesterov alebo éterov, zmydelnenia esterov alebo sulfatácie, uskutočňujú pomocou všeobecných postupov s príslušnými intermediátmi.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Ďalej sú iba na ilustráciu uvedené príklady syntézy zlúčenín podlá predkladaného vynálezu.

Schéma 1 - Syntéza pentasacharidu 9

Príprava 1

Etyl-O-(2,3-di-0-benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)- l->'4) -2,3, 6-tri-O-benzoyl-l-tio-p-D-glukopyranozid (2)

K roztoku 16,7 g (35,2 mmol) zlúčeniny 1 (J. Westman a M. Nilsson, J. Carbohydr. Chem., 14(7), 949-960 (1995)) v 202 ml pyridínu chladenému na teplotu 0 °C sa po kvapkách počas 2' minút pridá 24,5 ml (211 mmol) benzoylchloridu. Reakčná zmes sa počas 20 hodín mieša pri teplote miestnosti; podľa tenkovrstvovej chromatografie je konverzia 50 %. Zmes sa zriedi vodou a dichlórmetánom. Po extrakcii sa organická fáza premyje 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí sa. Zvyšok reaguje s benzoylchloridom opísaným postupom. Surový produkt sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 22 g zlúčeniny 2.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,80, silikagél, 9/1 (objemový pomer) toluén/etanol

Príprava 2

C-(2,3-Di-0-benzoyl-4,6-O-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyΙ-β-D-glukopyranóza (4)

Zmes 1,05 g (1,05 mmol) tioglykozidu 2, 200 mg (1,05 mmol) zlúčeniny 3 (Jeanloz a ďalší, J. Org. Chem., 26, 3939-3944 (1961)) a 1,1 g práškových molekulových sít 4A sa v 18 ml toluénu mieša v atmosfére dusíka počas 15 minút. Zmes sa potom ochladí na teplotu -20 °C a pridá sa čerstvo pripravený roztok 1,11 mmol N-jódsukcínimidu a 1,25 mmol kyseliny trifluórmetánsulfčnovej v 6 ml zmesi 1/1 (objemový pomer) dichlórmetán/dicxán. Po 10 minútach sa červená reakčná zmes prefiltruje, zriedi sa dichlórmetánom, extrahuje sa, dôkladne sa premyje 10 % roztokom tiosíranu sodného, 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší sa síranom horečnatým a potom sa zahustí vo vákuu. Zvyšok sa prečistí chromatografiou r.a silikagéli, čím sa získa 1,25 g zlúčeniny 4.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,55, silikagél, 4/6 (objemový pomer) heptán/etylacetát

Príprava 3

O-(4,6-O-Benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(β-D-glukopyranozyi)-(1->4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (5)

Dc roztoku 1,24 g (1,11 mmol) zlúčeniny 4 v 7 ml zmesi 1/1 (objemový pomer) metanol/dioxán sa pridá 50 mg terc-butoxidu draselného. Zmes sa mieša počas 1 hodiny a potom sa pridá ďalších 50 mg terc-butoxidu draselného. Zmes sa potom mieša počas ďalších 60 minút a potom sa neutralizuje živicou Dowex® 50WX8 H⁺, prefiltruje sa a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa prečistí chromátcgrafiou na silikagéli, čím sa získa 665 mg zlúčeniny 5 vc forme oleja.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,50, silikagél, 85/15 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 4

0-(4,6-O-Benzylidén-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (6)

K chladenému (5 °C) roztoku 660 mg (1,1 mmol) zlúčeniny 5 v 8 ml suchého tetrahydrofuránu sa v dusíkovej atmosfére pridá 38⁷ mg (9,65 mmol) hydridu sodného. Potom sa po kvapkách pridá 0,51 mi (8,22 mmol) metyljodidu a zmes sa mieša počas 20 hodín pri teplote miestnosti. Nadbytok hydridu sodného sa odstráni metanolom a zmes sa naleje do 50 ml zmesi vody a ladu. Po extrakcii etylacetátom (3 x 20 ml) sa organická fáza premyje nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí sa, čím sa získa 690 mg zlúčeniny 6.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,25, silikagél, 95/5 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 5

0-(2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-C-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-C-glukopyranóza (7)

690 mg (1,03 mmol) zlúčeniny 6 sa rozpustí v 7,3 ml 80 % kyseliny octovej a mieša sa počas 20 hodín pri teplote 40 °C. Zmes sa zahustí vo vákuu a odparí sa s toluénom. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, elúcia zmesou 8/1/1 dichlórmetán/etylacetát/metanol, čím sa získa 569 mg zlúčeniny 7.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,40, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 6

0-(6-0-3enzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-C-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-1,6-anhydrc-2,3-oi-O-metyl-p-D-glukopyranóza (8)

227 mg (1,05 mmol) 1-benzyloxy-lH-benzotriazcíu a (1,15 mmol) trietylamínu sa pridá k roztoku 560 mg (0,96 mmol) zlúčeniny 7 v dichlórmetáne a zmes sa potom mieša počas 20 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa potom zriedi dichlórmetánom a premyje sa 10 % roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou. Organická fáza sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí dosucha. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 600 mg zlúčeniny 8.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,50, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 7

0-(2,3-Di-0-benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-Z?-glukopyranóza (9)

Zlúčenina 8 sa prevedie na zlúčeninu 9 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 4. Spájacia reakcia sa uskutoční pri teplote 5 °C.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,50, silikagél, 2/8 (objemový pomer) heptán/etylacetát

Schéma 2 - syntéza heptasacharidu 14 9

Príprava 8

O-(4,6-O-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(β-D-glukopyranozyl)- íl->4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-1,6-anhyaro-2,3-di-O-m.etyl-p-D-glukopyranóza (10)

Zlúčenina 9 sa prevedie na zlúčeninu 10 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 5.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,35, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 9

O-(4,6-O-benzylidén-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-C-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-C-metyl-p-D-glukcpyranozyl) - (l->4) -1, 6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-3-glukopyrar.óza (11!

Zlúčenina 10 sa prevedie na zlúčeninu 11 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 6.

Príprava 10

0-(2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-meζνΙ-β-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukcpyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyi-p-D-glukcpyranozyl)-(l->4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (12)

Zlúčenina 11 sa prevedie na zlúčeninu 12 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 7.

Tenkovrstvové chromatografia: Rf = 0,35, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 11

O-(6-0-Benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (13)

Zlúčenina 12 sa prevedie na zlúčeninu 13 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 8.

Tenkovrstvové chromatografia: R_f = 0,40, silikagél, 7,0/1,5/1,5 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 12

0-(2,3-Di-0-benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(6-0-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (14)

Kondenzácia zlúčeniny 13 s disacharidom 2 sa uskutočni postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 9, čím sa získa zlúčenina 14.

Schéma 3 - Syntéza nonasacharidu 19

Príprava 13

0-(4,6-O-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(β-D-glukopyranozyl)- C1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p~D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranczyl)-{1—>4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (15)

Zlúčenina 14 sa prevedie na zlúčeninu 15 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 5.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,60, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 14

0-(4,6-O-benzylidén-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2, 3, 6-tri-0-metyl-3-D-giukopyranozyl) -(l->4)-[0-(2,3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]2-1, 6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (16)

Zlúčenina 15 sa prevedie na zlúčeninu 16 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 6.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,70, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 15

0-(2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3, 6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)- (L—>4)]π-l, 6-anhydro-2,3-di-0-metyl-P~D-glukopyranóza (17)

Roztok 5,05 g (2,0 mmol) zlúčeniny 16 v 50 ml 80 % kyseliny octovej sa mieša počas 20 hodín pri teplote 40 °C. Zmes sa zahustí vo vákuu a odparí sa s toluénom. Zvyšok sa rozpustí v ety24 lacetáte a extrahuje sa vodou. Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom a organická fáza sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí sa dosucha, čím sa získa 2,68 g zlúčeniny 17.

Tenko'vrstvová chromatografia: Rf = 0,50, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 16

O-(6-0-Benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-C-metyl-p-D-glukopyranozyl) - (l->4) ] ₂-l, 6-anhydro-2, 3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (18)

Zlúčenina 17 sa prevedie na zlúčeninu 18 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 8.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,80, silikagél, 7,0/1,5/1,5 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 17

0-{2,3-Di-0-benzoyl-4,6-O-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-β-Γ-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopyrano zyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₂-1,6-ar.hydro-2, 3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (19)

Zmes 1,97 g (2,0 mmol, 3,5 ekvivalentu) tioglykozidu 2, 0,86 g (0,57 mmol) heptasacharidu 18 a práškových molekulových sít 4A v 22 ml toluénu sa mieša v atmosfére dusíka počas 15 minút. Potom sa po kvapkách pridá pri teplote miestnosti čerstvo pripravený roztok 496 mg (2,2 mmol) N-jódsukcínimidu a kyseliny trifluórmetánsulfónovej(0,808 mmol) v 12 ml zmesi 1/1 (objemový pomer) dichlórmetán/dioxán. Po 10 minútach sa reakčná zmes prefiltruje, zriedi sa dichlórmetánom, extrahuje sa, premyje sa 10 % roztokom tiosíranu sodného a 10 % roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 1,09 g zlúčeniny 19.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,80, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) coluén/etylacetát/etanol

Príprava 18

0-(4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(β-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-[(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl) ]₂- (l->4) -1, 6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (20)

Zlúčenina 19 sa prevedie na zlúčeninu 20 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 5.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,25, silikagél, 5,0/2,5/2,5 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 19

0-(4,6-O-Benzylidén-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3, 6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4) — [0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (l->4)]₃-l,6-annydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (21)

Zlúčenina 20 sa prevedie na zlúčeninu 21 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 6.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,50, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 20

0-(2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (l->4)]₃-l, 6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (22)

Zlúčenina 21 sa prevedie na zlúčeninu 22 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 7.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,20, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 21

C- (6-0-3enzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranczyl)-(1—>4)]₃-l, 6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (23)

Zlúčenina 22 sa prevedie na zlúčeninu 23 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 8.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,20, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 22

0-(6-0-benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-C-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0- 12,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3, 6-tri-C-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-metyl-p~ -D-glukcpyranóza (24) mg (0,25 mmol) hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylxarbodiimidu, 29 mg (0,25 mmol) kyseliny levulovej a 4 mg (0,033 mmol) dimetylaminopyridínu sa pridá k roztoku 320 mg (0,167 mmol) zlúčeniny 23 v 1 ml dioxánu. Reakčná zmes sa mieša počas 3 hodín pri teplote miestnosti v atmosfére dusíka. Potom sa pridá dichlórmetán a voda a po extrakcii sa premyje organická fáza vodou, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a zahustí sa. Surový produkt sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 312 mg zlúčeniny 24.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,50, silikagél, 6/2/2 (obje29 mový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 23

0-(6-0-Benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0- (2, 3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl) - (1—>4) -0- (2,3., 6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]3-i, 6-di-O-acetyl-2,3-di-0-metyl-a,p-D-glukopyranóza (25)

Roztok 312 mg (0,155 mmol) zlúčeniny 24 sa mieša počas 4 hodín pri teplote miestnosti v zmesi 2,25 ml acetanhydridu, 50 μΐ kyseliny octovej a 0,14 ml kyseliny trifluóroctovej. Po pridaní 10 ml toluénu sa zmes zahustí a odparí sa s toluénom (3 x 10 ml) . Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 324 mg zlúčeniny 25.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,65, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Schéma 5 - Syntéza nonasacharidu 27 25

Príprava 24

O-(6-0-Benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)—(1—>4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[O—(2,3,

6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3, 6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl) - (l->4) ] 3-6-O-acetyl-2, 3-di-O-metyl-a,p-D-glukopyranóza (26)

Roztok 324 mg (0,153 mmol) zlúčeniny 25 a 22,3 μΐ (0,256 mmol) morfolínu v 2 ml toluénu sa počas 4 hodín mieša pri teplote 35 °C. Potom sa pridá ďalších 22,3 μΐ morfolínu a reakčná zmes sa mieša počas 20 hodín pri teplote 35 °C. Zmes sa potom rýchlo ochladí vodou, extrahuje sa dichlórmetánom, organická fáza sa dôkladne premyje O,1N kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší sa a odparí sa dosucha. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 280 mg zlúčeniny 26.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,45, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 25

Trichlóracetimidát O-(6-0-benzoyl-4-0-levuoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2, 3, 6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)]₃-6-O-acetyl-2,3-di-0-metyl-a,p-D-glukopyranózy (27) μΐ (0,39 mmol) trichlóracetonitrilu a 4,7 mg uhličitanu cézneho sa pridá do roztoku 138 mg (0,066 mmol) zlúčeniny 26 v 1,5 ml dichlórmetánu. Zmes sa mieša počas 2 hodín, potom sa prefiltruje, zahustí a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 152 mg imidátu 27.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,35, silikagél, 8/1/1 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

B:

MeC-

Príprava 26

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl-(1—>4) -2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (29)

2,5 g (3,53 mmol) zlúčeniny 28 (M. Petitou a ďalší, J. Med. ľr.^m. , 40, 1600 (1997)) sa nechá reagovať rovnakým spôsobom ako pri syntéze zlúčeniny 5. Zvyšok sa prečistí chromatografiou r.a .-'ilikagéli (2/1 cyklohexán/etylacetát), čím sa získa 2,1 g ’?3 %) zlúčeniny 29.

ľsľikovrsrvová chromatografia: R_£ = 0,32, silikagél, 2/1 (objemový pomer) cyklohexán/etylacetát

Príprava 27

Metyi-C-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl- : i->4;-2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (30)

2,0 g (3,3 mmol) zlúčeniny 29 sa nechá reagovať rovnako ako pri syntéze zlúčeniny 6. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli (5/1 cyklohexán/etylacetát), čím sa získa 1,83 g s? %} zlúčeniny 30.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,38, silikagél, 5/2 (objemový pomer) cyklohexán/etylacetát

Príprava 28

Ketyl-C- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl- (l->4) -2,6-di-O-ber.zyl-ŕ-O-metyl-a-D-glukopyranozid (31)

K roztoku 1,76 g (2,84 mmol) zlúčeniny 30 v 16 ml dichlórmetánu sa pridá 3,14 ml vodného 70 % roztoku kyseliny trifluórcctovej. Po 50 minútach sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom a premyje sa vodou do neutrálnej reakcie. Organická fáza sa potom vysuší síranom sodným, prefiltruje sa a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 1,45 g (88 %) zlúčeniny 31.

[aj_D ^Z0 = +10 (c = 1,0;dichlórmetán) .

Príprava 29

Metyl-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)- l->4) -2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (32)

2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloxy (3,3 mg), 4 ml roztoku hydrcger.uhličitanu sodného a 22 mg bromidu draselného a 29 mg tetrabutylamóniumchloridu sa pridá k roztoku 1,16 g zlúčeniny 31 v 6 ml dichlórmetánu. Zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a počas 15 minút sa pridá zmes 4,4 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, 2,2 mi nasýtenéno roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 5 mi 1,3M roztoku chlórnanu sodného. Zmes sa mieša počas 1 hodiny, potom sa zriedi vodou a extrahuje sa trikrát dichlórmetánom. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí sa dosucha, čím sa získa 1,34 g surovej zlúčeniny 32.

Tenkovrstvové chromatografia: Rf = 0,22, silikagél, 10/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 30

Metyl-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(1—>4)-2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (33)

Zlúčenina 32 sa v atmosfére dusíka rozpustí v 11 ml Ν,Ν-dimetylformamidu. Potom sa pridá 0,67 g hydrogénuhličitanu draselného a 1,07 ml benzylbromidu a zmes sa mieša počas 90 minút. Potom sa pridá etylacetát a voda a po extrakcii sa organická fáza zahustí. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 0,99 g zlúčeniny 33.

Tenkovrstvové chromatografia: Rf = 0,58, silikagél, 1/4 (objemový pomer) toluén/dietyléter

Schéma 7

Syntéza tetrasacharidu 36 + 34

ZAc

□Me

Príprava 31

Mety1-0-(benzyl-4-0-levuloyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-0-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl-l->4)-0-(benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(1—>4)-2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (35)

274 mg (0,31 mmol) zlúčeniny 34 (M. Petitou a ďalší, J.

Med. Chem., 40, 1600 (1997)) a 200 mg (0,29 mmol) zlúčeniny 33 v 10 ml toluénu sa nechá reagovať v prítomnosti 220 mg molekulových sít pri teplote -20 °C s terc-butyldimetylsilyltrifluórmetánsulfonátom (0,15 ml IM roztoku v toluéne). Zmes sa mieša počas 10 minút, potom sa zneutralizuje hydrogénuhličitanom sodným, prefiltruje sa a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 334 mg (80 %) zlúčeniny 35.

[a]_D‘° = +31 (c = 0,76, dichlórmetán).

Príprava 32

Metyl-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-O-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl-(1—>4)-O-(benzyi-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(l->4)-2,6-di-0-benzyl-3-O-metyi-a-D-glukopyranczid (36)

308 mg (0,22 mmol) zlúčeniny 35 sa rozpustí v 43 ml zmesi toluén/etanol (1/2) a potom sa pridá 101 mg hydrazínacetátu (5 ekvivalentov). Zmes sa mieša počas 45 minút, potom sa zahustí a zvyšok sa prečisti chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 162 mg (89 %) zlúčeniny 36.

[a]d²⁰ = +29 (c = 1,05, dichlórmetán)

Schéma 8 - Syntéza polysacharidu 38

Príprava 33

Metyl-O-(6-0-benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranczyí)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-C-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)]3-0-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-α-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyiuronát)-(1->4)-O-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(l->4)-2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (37)

177 mg (76,6 pmcl)) imidátu 27 a 201 mg (0,15 mmol) akceptora 36 v 2,8 ml zmesi 2/1 dietyléter/dichlórmetán sa nechá reagovať s 11,5 μΐ IM roztoku terc-butyldimetylsilyltrifluórmetánsulfonátu v dichlórmetáne ako pri syntéze zlúčeniny 35. Zlúčenina sa prečistí na chromatografickom stĺpci Sephadex® LH-20 v zmesi 1/1 dichlórmetán/etanol a potom na stĺpci silikagélu v zmesi 3/0,5/1 toluén/acetón/etanol a nakoniec na stĺpci silikagélu v zmesi 3/2 diizopropyléter/etanol, čím sa získa 116 mg (44 %) derivátu 37.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,31, silikagél, 3/0,5/0,4 (objemový pomer) diizopropyléter/acetón/etanol

Príprava 34

Metyl-O-(6-0-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4) -0-(2, 3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(i->4)]₃-0-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukocyranozyl)-(1—>4)-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(l->4)-0-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(l->4)-2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (38)

110 mg (0,032 mmol) zlúčeniny 37 sa prevedie na 95 mg (89 %) zlúčeniny 38 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 36.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,32, silikagél, 1/1 (objemový pomer) toluén/acetón

Schéma 9

- Syntéza trisacharidu 43

Príprava 35

O-'2,3,4,6-Tetra-0-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3, 6-tri-O-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-1,2,3,6-tetra-0-acetyl-β-D-glukopyranóza (40) g (13,9 mmol) komerčne dostupnej maltotriôzy sa po častiach pridá k suspenzii 7 g (85 mmol) octanu sodného v 70 ml acetanhydridu pri teplote 155 ’C. Po 15 minútach sa roztok ochladí a naleje sa do 700 ml zmesi vody a ľadu. Po extrakcii etylacetátom sa organická fáza premyje vodou, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a zahustí sa, čím sa získa 13,1 g zlúčeniny 40.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,53, silikagél, 7/3 (objemový pomer) dichlcrmetán/etylacetát

Príprava 36

Etyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-acetyi-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-2,3,6-tri-O-acetyl-l-tio-p-D-glukopyranozid (41) g (13,5 mmol) zlúčeniny 40 sa rozpustí v 80 ml toluénu. Potom sa v dusíkovej atmosfére pridá 1,97 ml (26,9 mmol) etántiolu a 13,7 ml IM roztoku dietyléterátu fluoridu boritého v toluéne. Zmes sa mieša počas 60 hodín, potom sa zriedi vodou a dichlórmetánom a extrahuje sa. Organická fáza sa premyje IC % roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou, vysuší sa, prefiltruje a zahustí. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 8,6 g zlúčeniny 41.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,60, silikagél, 7/3 (objemový pomer) dicnlórmetán/etylacetát

Príprava 37 tyl-O-(α-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(α-D-glukopyranozyl)42

- (1—>4)-l-tio-p-D-glukopyranozid (42)

Zlúčenina 41 sa prevedie na zlúčeninu 42 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 5.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,80, silikagél, 13/7/1,6/4 objemový pomer) etylacetát/pyridín/kyselina octová/voda

Príprava 38

Etyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranozyl) — (1—>4)-0-(2,3, 6-tri-O-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-2,3,6-tri-O-benzoyl-l-tio-p-D-glukopyranozid (43)

Zlúčenina 42 sa prevedie na zlúčeninu 43 postupom opísaným pri príprave zlúčeniny 2.

- Príprava polysacharidu 46

s

Príprava 39

Metyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0- í2,3,6-tri-0-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-{1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-ber.zoyl-p-D-glukopyranozyl) - (l->4) -0- (6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)j 3-0-(6-C-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-0-(3, 6-di-0-acetyi-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4}-0-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(1—>4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozid (44)

170 mg (106,7 pmol) tioglykozidu 43 a 90 mg (27 pmol) akceptora 38 sa spojí postupom opísaným pre zlúčeninu 4. Produkt sa najskôr prečistí chromatografiou na Sephadex^e LH-20 (elúcia zmesou 1/1 dichlórmetán/etanol) a potom chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúcia zmesou 12/10 (objemový pomer) cyklohezár./acetón), čím sa získa 89,5 mg (68 %) zlúčeniny 44.

Tenkovrstvová chromatografia: R_ť = 0,43, silikagél, 12/10 (objemový pomer) cyklohexán/acetón

Príprava 40

Metvl-2-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-ben=oyl-3-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranczyl) - (1—>4) - [O- (2,3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopyrar.ozyl) -(l->4 : -0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]3-0- (6-0-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3-di-0-metyl-3-D-glukopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-O-(3,6-di-0-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopy45 ranozylurónová kyselina)-(1—>4)-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (45)

Roztok 80 mg (0,0163 mmol) zlúčeniny 44 v 3 ml kyseliny octovej sa nechá reagovať v prítomnosti 160 mg 10 % paládia na uhli s vodíkom pri tlaku 106 Pa resp. 10 bar. Po filtrácii sa roztok zahustí, čím poskytne zlúčeninu 45, ktorá sa použije v nasledovnom kroku bez ďalšieho čistenia.

Príprava 41

Metyl-O-(α-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(α-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(β-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3, 6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)]₃-O-(2, 3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)-{1—>4)-O-(α-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (46)

K 72 mg (0,016 mmol) zlúčeniny 45 sa pridá zmes 2,8 ml metanolu a 0,69 ml 5N roztoku hydroxidu sodného. K roztoku esteru v metanole (150 ml/mmol) sa pridá 5M roztok hydroxidu sodného v takom množstve, aby výsledná koncentrácia hydroxidu sodného po pridaní bola 0,5M. Po 2,5 hodinách sa pridá voda a zmes sa preleje cez kolónu Sephadex® G-25 (1,6 x 115 cm), pričom sa eluuje vodou. Vymytý roztok sa zahustí a preleje sa cez kolónu Dowex® 50 H’ (2 ml) a lyofilizuje sa. V tomto štádiu sa pomocou NMR potvrdí, že sa odstránili všetky ochranné skupiny. V prípade potreby sa produkt znovu podrobí hydrogenácii a/alebo saponifikácii. Tým sa získa 34 mg zlúčeniny 46 (68 % v dvoch krokoch).

Schéma 11

Príprava disacharidu 54

He0‘

CMe

Príprava 42

Metyl-O-4,6-0-benzylidén-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozid (48) g komerčne dostupnej zlúčeniny 47 sa rozpustí v 858 ml Ν,Ν-dimetylformamidu a 50,5 ml benzylbromidu. Roztok sa ochladí na teplotu 10 °C a po kvapkách sa za miešania pridá 20 % vodný roztok hydroxidu sodného. Po 1 hodine sa reakčná teplota zvýši na 20 °C a zmes sa mieša počas ďalších 20 hodín. Roztok sa potom naleje do zmesi vody, ľadu a toluénu a extrahuje sa. Organická fáza sa zahustí a surový produkt sa prečistí kryštalizáciou, čím sa získa 30 g zlúčeniny 48 opísanej J. M. Kusterom a ďalšími v Justus Liebigs Ann. Chem. 1975, 2179-2189.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,60, silikagél, 7/3 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 43

Metyl-O-4,6-0-benzylidén-2-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid

26,4 g zlúčeniny 48 sa rozpustí v 211 ml Ν,Ν-dimetylformamidu a ochladí sa na teplotu 5 °C. Potom sa v atmosfére dusíka pridá 3,2 g hydridu sodného a potom po kvapkách 11,3 g jódmetánu. Zmes sa mieša počas 1 hodiny pri teplote miestnosti, potom sa zriedi etylacetátom, premyje sa dvakrát vodou a zahustí sa, čím sa získa 28 g surovej zlúčeniny 49 opísanej M. Petitouom a ďalšími v J. Med. Chem., 40, 1600-1607 (1997).

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,70, silikagél, 7/3 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 44

Metyl-C-2-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozid (50) g zlúčeniny 4 9 sa rozpustí v 4 68 ml metanolu, pridá sa 1,35 g kyseliny p-toluénsulfónovej a zmes sa mieša počas 20 hodín pri teplote 20 °C. Zmes sa zriedi toluénom a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 21 g zlúčeniny 50.

Tenkovrstvové chromatografia: Rf = 0,07, silikagél, 6/4 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 45

Metyl-O-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (51)

11,8 g zlúčeniny 50 sa rozpustí v dusíkovej atmosfére v 160 ml dichlórmetánu. Potom sa pri teplote miestnosti pridá 7,0 g trimetyloxóniumtetrafluoroborátu a 10,6 g 2,6-di-terc-butyl-4-metylpyridínu. Po 2 hodinách sa zmes naleje do zmesi vody a ľadu a extrahuje sa dichlórmetánom. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa

10,1 g zlúčeniny 51

Tenkovrstvové chromatografia: R; = 0,25, silikagél, 7/3 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 46

Etyl-2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-l-tio-a-L-idcpyranóza (52)

48,4 g 1,2,4,6-tetra-0-acetyl-3-0-metyl-a-L-idopyranózy (pripravenej podľa postupu pre jej perbenzoylovaný analóg náhradou benzoylc’nloridu acetanhydridom; Jaura a ďalší, Bio. Med. Chem. Lett., 2, 897-900 (1992)) sa rozpustí v 175 ml toluénu.

Potom sa v atmosfére dusíka pridá 20 ml etántiolu a 134 ml éterátu fluoridu boritého (IM roztok v toluéne). Zmes sa mieša počas 1 hodiny, potom sa pridá 400 ml roztoku hydrogénuhličitanu sodného a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Potom sa naleje do etylacetátu a organická fáza sa premyje dvakrát vodou a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 29,6 g zlúčeniny 52.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,45, silikagél, 6/4 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 47

Metyl-O-(2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1->4)-2-O-benzyl-3,6-di-0-metyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (53)

10,1 g zlúčeniny 51 a 16,0 g zlúčeniny 52 sa rozpustí v atmosfére dusíka v 304 ml toluénu. Po pridaní práškových molekulových sít (4A) sa reakčná zmes ochladí na teplotu -20 °C a po kvapkách sa v atmosfére dusíka pridá čerstvo pripravený 0,lM roztok 10,1 g N-jódsukcínimidu a 0,80 ml kyseliny trifluórmetánsulfcnovej v zmesi 1/1 (objemový pomer) dioxán/dichlórmetán. Po 10 minútach sa reakčná zmes prefiltruje a premyje sa dôkladne vocnými roztokmi tiosíranu sodného a hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáza sa zahustí a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 21,1 g zlúčeniny 53.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,30, silikagél, 6/4 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 48

Metyl-O-(3-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1—>4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (54)

21,1 g zlúčeniny 53 sa rozpustí v 295 ml zmesi metanol/dioxán (1/1, objemový pomer) a pridá sa terc-butoxid draselný. Po 30 minútach sa zmes neutralizuje živicou Dowex 50WX8 v H+ forme a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 12,7 g zlúčeniny 54.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,08, silikagél, 3/7 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Schéma 12

Príprava tetrasacharidu 62

Príprava 49

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-{1—>4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (55)

12,7 g zlúčeniny 54 sa v dusíkovej atmosfére rozpustí v 67 ml tetrahydrofuránu. Potom sa pridá 19 ml 2,2-dimetoxypropánu a kyselina ρ-toluénsulfónová a zmes sa mieša počas 16 hodín pri teplote miestnosti. Zmes sa potom zriedi nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje sa etylacetátom, organická fáza sa odparením zbaví rozpúšťadla a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 10,4 g zlúčeniny 55.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,35, silikagél, 1/1 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 50

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l->4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (56)

10,4 g zlúčeniny 55 sa rozpustí v 140 ml tetrahydrofuránu a ochladí sa na teplotu 10 °C. Potom sa v atmosfére dusíka pridá 1,33 g hydridu sodného (60 % disperzia v oleji) a 1,84 ml jódmetánu. Po 4 hodinách sa nadbytok hydridu sodného rozloží metanolom a zmes sa extrahuje dichlórmetánom a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 11,1 g zlúčeniny 56.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,55, silikagél, 95/5 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Fríprava 51

Metyl-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1—>4 J-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (57)

11,1 g zlúčeniny 56 sa rozpustí v zmesi 7/3 (objemový po52 mer) kyselina octová/voda a zmes sa mieša cez noc. Potom sa dvakrát odparí s toluénom a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 9,2 g zlúčeniny 57.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,09, silikagél, 1/1 (objemový pomer’ tcluén/etylacetát

Príprava 52

Metyl-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (58)

K roztoku 4,7 g zlúčeniny 57 v 28 ml dichlórmetánu sa pridá 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloxy (13 mg), 16 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného, 88 mg bromidu draselného a 117 mg tetrabutylamóniumchloridu. Zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a počas 15 minút sa pridá zmes 17,8 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, 8,8 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 20 ml 1,3M roztoku chlórnanu sodného. Zmes sa mieša počas 1 hodiny, potom sa zriedi etylacetátom, premyje sa nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí sa dosucha, čím sa získa 3,5 g surovej zlúčeniny 58.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,14, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 53

Metyl-C-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(l->4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (59)

3,5 g zlúčeniny 58 sa v atmosfére dusíka rozpustí v 29 ml Ν,Ν-dimetylformamidu. Potom sa pridá 1,76 g hydrogénuhličitanu draselného a 2,85 ml benzylbromidu a zmes sa mieša počas 4 hodín. Potom sa pridá etylacetát a voda a po extrakcii sa organická fáza zahustí. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 3,4 g zlúčeniny 59.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,43, silikagél, 4/6 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 54

Metyl-O-(benzyl-4-levuloyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluror.át) - (1 ->4) -0- (3-0-acetyl-2-0-benzyi-6-0-metyl-<x-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(l->4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (61)

Zmes 0,53 g zlúčeniny 59 a 1,0 g zlúčeniny 60 sa odparí v prítomnosti toluénu a v atmosfére dusíka sa rozpustí v 16,2 ml dichlórmetánu. Po pridaní práškových molekulových sít sa zmes ochladí na teplotu -20 °C. Potom sa mieša počas 15 minút a pridá sa 15 molárnych % (vzhľadom na zlúčeninu 60) trimetylsilyltrifluórmetánsulfonátu. Po 15 minútach sa pridá vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Po odfiltrovaní molekulových sít sa filtrát zriedi dichlórmetánom, premyje sa vodou, zahustí sa a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 0,75 g zlúčeniny 61.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,45, silikagél, 3/7 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 55

Metyl-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-O-(3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-C-(benzyl-2,3-di-C-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(1—>4)-2-0-benzyl-3,6-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (62)

0,74 g zlúčeniny 61 sa rozpustí v 3,0 ml pyridínu a pri teplote miestnosti sa pridá zmes 4,1 ml kyseliny octovej a 0,47 ml hydrátu hydrazínu v 3,0 ml pyridínu. Zmes sa mieša počas 9 hodín a potom sa pridá dichlórmetán a voda. Organická fáza sa oddelí a dôkladne sa premyje l,0N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou, potom sa zahustí a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 0,66 g zlúčeniny 62.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,25, silikagél, 98/2 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Tetrasacharid 68 sa pripraví rovnakým spôsobom podlá nasledovnej reakčnej schémy 13, vychádza sa z disacharidu 55.

Schéma 13 - Príprava tetrasacharidu 68

OMe

Meo

OBn OMe

Schéma 14 - Príprava disacharidu 75

Príprava 56

Metyl-2-O-benzyl-4,6-di-0-benzylidén-3-0-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozid (69)

26,4 g zlúčeniny 48 sa rozpustí v 211 ml N,N-dimetylformamidu a ochladí sa na teplotu 5 °C. Potom sa v atmosfére dusíka pridá 2,5 g hydridu sodného a potom po kvapkách 13,3 g 4-metoxybenzylchloridu. Zmes sa mieša počas 1 hodiny pri teplote miestnosti, potom sa zriedi etylacetátom, dvakrát sa premyje vodou a zahustí sa, čím sa získa 40,7 g zlúčeniny 69.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,80, silikagél, 7/3 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 57

Metyl-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozid (70)

34,9 g zlúčeniny 69 sa rozpustí v 60 % vodnej kyseline octovej a mieša sa počas 4 hodín pri teplote 60 °C. Zmes sa zriedi toluénom a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 26,4 g zlúčeniny 70.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,07, silikagél, 7/3 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 58

Metyl-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (71)

26,4 g zlúčeniny 70 sa v atmosfére dusíka rozpustí v 263 ml dichlórmetánu. Potom sa pri teplote miestnosti pridá 11,6 g trimetyloxóniumtetrafluoroborátu a 17,4 g 2,6-di-terc-butyl-4-metylpyridínu. Po 4 hodinách sa zmes naleje do zmesi vody a ľadu a extrahuje sa dichlórmetánom. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 18,5 g

18,5 g zlúčeniny 71.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,25, silikagél, 7/3 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 59

Metyl-0(2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l->4)-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (72)

17,5 g zlúčeniny 71 a 28,2 g zlúčeniny 52 sa v atmosfére dusíka rozpustí v 525 ml toluénu. Po pridaní molekulových sít 4A sa reakčná zmes ochladí na teplotu -20 °C. Potom sa za plynulého zavádzania dusíka po kvapkách pridá čerstvo pripravený 0,lM roztok 17,4 g N-jódsukcínimidu a 1,38 g kyseliny trifluórmetánsulfónovej v zmesi 1/1 (objemový pomer) dioxán/dichlórmetán. Po 10 minútach sa červená reakčná zmes prefiltruje a dôkladne sa premyje vodným tiosíranom sodným a nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáza sa zahustí vo vákuu, čím sa získa 30,0 g zlúčeniny 72.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,45, silikagél, 8/2 (objemový pomer) dichlórmetán/etylacetát

Príprava 60

Metyl-O-(3-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1—>4)-2-O-benzyl-3-O-p-metoxybenzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (73)

30,0 g zlúčeniny 72 sa rozpustí v 460 ml zmesi 1/1 (objemový pomer) metanol/dioxán a pridá sa terc-butoxid draselný. Po 15 minútach sa zmes neutralizuje živicou Dowex® 50WX8 H* a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 17,4 g zlúčeniny 73.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,25, silikagél, 95/5 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 61

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l->4)-2-Q-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (74)

17.4 g zlúčeniny 73 sa v atmosfére dusíka rozpustí v 77 ml N,N-dimetylformamidu. Potom sa pridá 26 ml 2,2-dimetoxypropánu a kyselina p-toluénsulfónová a zmes sa mieša počas 30 minút. Zmes sa zriedi nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a extrahuje sa etylacetátom. Po odparení rozpúšťadla sa získa 19,7 g zlúčeniny 74.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,45, silikagél, 95/5 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 62

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1—>4)-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (75)

18.5 g zlúčeniny 74 sa rozpustí v 26,4 ml N,N-dimetylformamidu a ochladí sa na teplotu 0 °C. Potom sa v atmosfére dusíka pridá 1,47 g hydridu sodného (60 % disperzia v oleji) a 2,26 ml jódmetánu. Po 1 hodine sa nadbytok hydridu sodného rozloží metanolom a zmes sa extrahuje dichlórmetánom a zahustí sa, čím sa získa 20,0 g zlúčeniny 75.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,85, silikagél, 95/5 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Syntéza 15 - Syntéza disacharidu 60 75

Príprava 63

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1->4)-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (76)

18.4 g zlúčeniny 75 sa rozpustí v 838 ml dichlórmetánu a 168 ml vody. Potom sa pridá 7,1 g 2,3-dichlór-5,6-dikyano-l,4-benzochinónu a zmes sa mieša počas 18 hodín pri teplote 4 °C. Potom sa naleje do vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a extrahuje sa dichlórmetánom. Zahustenie organickej fázy poskytne 12,7 g zlúčeniny 76.

Tenkovrstvové chromatografia: Rf = 0,40, silikagél, 95/5 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 64

Metyl-O-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1—>4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (77)

10.5 g zlúčeniny 76 sa rozpustí v 178 ml suchého Ν,Ν-dimetylformamidu a potom sa v atmosfére dusíka ochladí na teplotu 0 °C. Potom sa pridá 1,91 g hydridu sodného (60 % disperzia v oleji) a po kvapkách 3,3 ml benzylbromidu. Po 30 minútach sa reakcia ukončí a nadbytok hydridu sodného sa rozloží metanolom. Pridá sa voda a zmes sa extrahuje dvakrát etylacetátom. Odparenie rozpúšťadla poskytne 13,6 g zlúčeniny 77.

Tenkovrstvové chromatografia: Rf = 0,50, silikagél, 1/1 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Fríprava 65

Metyl-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1->4-2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (78)

Zlúčenina 77 sa rozpustí v zmesi 77/33 (objemový pomer) kyselina octová/voda a mieša sa cez noc. Zmes sa dvakrát odparí s toluénom a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 11,5 g zlúčeniny 78.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,09, silikagél (objemový pomer) toluén/etylacetát; Rf = 0,68, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 66

Metyl-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (79)

2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidyloxy (33 mg), 40 ml roztoku hydrogénuhličitanu sodného, 218 mg bromidu draselného a 289 mg tetrabutylamóniumchloridu sa pridá k roztoku 11,6 g zlúčeniny 78 v 60 ml dichlórmetánu. Zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a počas 15 minút sa pridá 44 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, 21,8 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 50 ml chlórnanu sodného (1,3M roztok). Zmes sa mieša počas 1 hodiny, potom sa zriedi vodou a extrahuje sa trikrát dichlórmetánom. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí sa dosucha, čím sa získa 13,4 g surovej zlúčeniny 79.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,14, silikagél, 9/1 (objemový pomer) dichlórmetán/metanol

Príprava 67

Metyl-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(l->4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (80)

Zlúčenina 79 sa v dusíkovej atmosfére rozpustí v 110 ml N,N-dimetylformamidu. Potom sa pridá 6,7 g hydrogénuhličitanu draselného a 10,7 ml benzylbromidu a zmes sa mieša počas 90 minút. Potom sa pridá etylacetát a voda a po extrakcii sa organická fáza zahustí. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 9,9 g zlúčeniny 80.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,43, silikagél, 4/6 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 68

Metyl-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (81)

9,9 g zlúčeniny 80 sa rozpustí v 300 ml metanolu a v atmosfére dusíka sa refluxuje. Potom sa po kvapkách pridá 65,2 ml IM roztoku metoxidu sodného v metanole a zmes sa mieša a refluxuje počas ďalších 3 hodín. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti, pridá sa 22,2 ml IN roztoku hydroxidu sodného a zmes sa mieša počas ďalších 90 minút. Po neutralizácii živicou Dowex® 50WX8 H* a po filtrácii sa zmes zahustí. Čistý produkt sa rozpustí v 192 ml N,N-dimetylformamidu a v atmosfére dusíka sa pridajú molekulové sitá. Potom sa pridá 3,2 g hydrogénuhličitanu draselného a 4,8 ml benzylbromidu a zmes sa mieša počas 5 hodín. Po pridaní etylacetátu a vody a extrakcii sa oddelia fázy a organická fáza sa zahustí. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 6,19 g zlúčeniny 81 a 1,88 g východiskovej zlúčeniny 80.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,55, silikagél, 4/6 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 69

Mety1-0-(benzyl-4-0-levuloyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluror.át) - (l->4) -2, 3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (82)

6,2 g zlúčeniny 81 sa rozpustí v 40 ml dioxánu. Potom sa pridá 2,1 g kyseliny levulovej, 3,75 g dicyklohexylkarbodiimidu a 0,2 g 4-dimetylaminopyridínu a zmes sa mieša počas 2 hodín v atmosfére dusíka. Potom sa pridá 95 ml dietyléteru a vzniknutá zrazenina sa odfiltruje. Filtrát sa premyje vodným roztokom hydroger.síranu draselného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a zahustí sa. Kryštalizácia zo zmesi éter/heptán poskytne

6,2 g zlúčeniny 82.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,26, silikagél, 95/5 (objemo64 vý pomer) dichlórmetán/acetón

Príprava 70

C-(Benzyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)- (1 ->4; -1, 3-di-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a,p-D-glukopyranóza (83)

6.1 g zlúčeniny 82 sa v atmosfére dusíka rozpustí v 256 ml acetanhydridu a ochladí sa na teplotu -20 °C. Potom sa v priebehu 30 minút po kvapkách pridá zmes 4,9 ml kyseliny sírovej v 49 ml acetanhydridu. Po 60 minútach sa pridá octan sodný v takom množstve, aby pH zmesi bolo neutrálne. Potom sa pridá etylacetát a voda a organická fáza sa zahustí. Zvyšok sa prečisti chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 4,2 g zlúčeniny 83.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,24, silikagél, 8/2 (objemový pomer) dichlórmetán/etylacetát

Príprava 71

O-(Benzyl-4-0-levuloyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)- (l->4) -3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a,p-D-glukopyranóza (84:

4.2 g zlúčeniny 83 sa rozpustí v 42 ml tetrahydrofuránu a pridá sa 4,1 ml piperidínu. Zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti. Potom sa pridá etylacetát a zmes sa premyje 0,5N kyselinou chlorovodíkovou. Organická fáza sa zahustí a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 3,2 g zlúčeniny 84.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,33, silikagél, 1/1 (objemový pomer) dichlórmetán/etylacetát

Príprava 72

Trichlóracetimidát O-(benzyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-Dglukopyranozyluronát)-(1—>4)-3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-α,β-D-glukopyranózy (60)

1,59 g zlúčeniny 84 sa v atmosfére dusíka rozpustí v suchom dichlórmetáne. Pridá sa 1,1 ml trichlóracetonitrilu a 72 mg uhličitanu cézneho a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Uhličitan cézny sa odfiltruje a filtrát sa zahustí. Zvyšok sa prečistí chromatograf i'ou na silikagéli, čím sa získa 1,57 g zlúčeniny 60.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,60, silikagél, 3/7 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Schéma 16 - Syntéza tetrasacharidu 86 60 + 80

CMe

Príprava 73

Mety1-0-(benzyl-4-O-levuloyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-O-(3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyrar.ozyl) - (1—>4) -0- (benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát) -(l->4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (85)

Zmes 300 mg zlúčeniny 80 a 455,6 mg zlúčeniny 60 sa odparí s toluénom a v atmosfére dusíka sa rozpustí v 6 ml dichlórmetánu. Po pridaní molekulových sít 4A sa zmes ochladí na teplotu -20 ³C a mieša sa počas 20 minút. Potom sa pridá 15 % molárnych (vzhľadom na zlúčeninu 60) trimetylsilyltrifluórmetánsulfcnátu a po 10 minútach sa zmes neutralizuje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Po odfiltrovaní molekulových sít sa filtrát zriedi dichlórmetánom, premyje sa vodou, zahustí sa a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 560 mg zlúčeniny 85.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,50, silikagél 3/7 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príklad 74

Metyľ-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozyluronát)-(1—>4)-0-(3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4) -0-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyluronát)-(1—>4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (86)

532, 6 mg zlúčeniny 85 sa rozpustí v 1,9 ml pyridínu a pri teplote miestnosti sa pridá zmes 2,4 ml kyseliny octovej a 0,3 ml hydrátu hydrazínu v 1,9 ml pyridínu. Zmes sa mieša počas S minút a potom sa pridá dichlórmetán a voda. Organická fáza sa codelí a dôkladne sa premyje O,1M kyselinou chlorovodíkovou, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou, zahustí sa a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 451 mg zlúčeniny 86.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,45, silikagél 3/7 (objemový pomer) toluér./etylacetát

Schéma 17 - Syntéza monosacharidu 93

Príprava 75

1.6- Anhydro-4-0-p-metoxyfenyl-2-0-tozyl-p-D-glukopyranóza (88)

Zmes 20 g (67 mmol) epoxidu 87 (Cerny a ďalší, Collect. Czech. Chem. Commun., 26, 2542 (1961)) a 33,3 g (268 mmol) p-metoxyfenolu sa v atmosfére argónu zohrieva na teplotu 90 °C. Keď je zmes kvapalná, pridá sa po častiach 0,3 g (2,35 mmol) chloridu hlinitého. Zmes sa mieša počas 30 minút a potom sa ochladí späť na teplotu miestnosti, zriedi sa 600 ml dichlórmetánu, neutralizuje sa 0,5 ml trietylamínu, premyje sa 120 ml IM vodného roztoku hydroxidu sodného, 3 x 60 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, 50 ml vodného 10 % roztoku hydrogensíranu sodného a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysuší síranom sodným, prefiltruje sa a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí zrážaním z éteru a chromatografiou na silikagéli, čím sa získa

19.4 g (69 %) zlúčeniny 88.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,37, silikagél, 6/1 (objemový pomer) dichlórmetán/dietyléter

Príprava 76

1.6- Anhydro-4-0-p-metoxyfenyl-3-0-metyl-2-0-tozyl-p-D-glukopyranóza (89)

K roztoku 3,36 g (7,95 mmol) zlúčeniny 88 v 8 ml suchého N,N-dimetylformamidu sa pridá 54 ml (954 mmol) metyljodidu a

18.4 g (79,5 mmol) oxidu strieborného. Zmes sa mieša počas 16 hodín, prefiltruje sa (Celíte), zriedi sa 300 ml etylacetátu, premyje sa 3 x 100 ml vody, vysuší sa síranom sodným, prefiltruje a zahusti sa a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 3,23 g (80 %) zlúčeniny 89.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,36, silikagél, 2/3 (objemový pomer) cyklohexán/dietyléter

Príprava 77

1.6- Anhydro-4-0-p-metoxyfenyl-3-0-metyl-2-0-benzoyl-p-D-glukopyranóz'a (90)

27,4 g (62,7 mmol) zlúčeniny 89 sa rozpustí v 315 ml N,N-dimetylformamidu. Potom sa pridá 341 g (940 mmol) tetrabutylamóniumbenzoátu a roztok sa počas 3 hodín zohrieva na teplotu 150 °C. Po ochladení na teplotu miestnosti sa zmes zriedi etylacetátom (300 ml), premyje sa vodou do neutrálnej reakcie, vysuší a zahustí sa. Zvyšok zodpovedajúci zlúčenine 90 sa priamo použije v ďalšom kroku.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,53, silikagél, 10/1 (objemový pomer) dichlórmetán/dietyléter

Príprava 78

1.6- Anhydro-4-0-p-metoxyfenyl-3-0-metyl-p-D-manopyranóza (91)

K roztoku surovej zlúčeniny 90 v 540 ml zmesi dichiórmetán/metanol (1/1) sa pridá 13,5 g (250 mmol) metoxidu sodného. Zmes sa mieša počas 1 hodiny, potom sa zriedi 500 ml dichlórmetánu a premyje sa 3 % vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej a vodcu. Po vysušení, filtrácii a zahustení sa zvyšok prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 10,5 g zlúčeniny 91 (59 ΐ v dvoch krokoch).

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,29, silikagél, 1/1 (objemový pomer) toluén/etylacetát

Príprava 79

1.6- Anhydro-2-0-benzyl-4-0-p-metoxyfenyl-3-0-metyl-p-D-manopyranóza (92)

K roztoku 9,8 g (34,6 mmol) zlúčeniny 91 v 180 ml N,N-dimetylformamidu sa pridá 6,2 ml (51,9 mmol) benzylbromidu a potom pri teplote 0 °C 1,16 g (48,4 mmol) hydridu sodného. Zmes sa mieša počas 16 hodín, pri teplote 0 °C sa pridajú 3 ml metanolu a reakčná zmes sa zriedi 200 ml etylacetátu. Potom sa premyje vodou, vysuší sa, prefiltruje a zahustí. Zvyšok zodpovedajúci zlúčenine 92 sa priamo použije bez ďalšieho čistenia v nasledovnom kroku. Na silikagéli sa ale izoluje analytická frakcia:

[aJc“'· = -49 (c = 0,73, dichlórmetán)

Príprava 80

1,6-Anhydro-2-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-manopyranóza (93)

Surová zlúčenina 92 sa rozpustí v 311 ml zmesi tetrahydrofurán/voda (17/1) a pri teplote 0 °C sa pridá 76 g (138 mmol) dusičnanu ceričitoamónneho. Zmes sa mieša počas 30 minút, potom sa zriedi 1 litrom dichlórmetánu a premyje sa vodným 2 % roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou. Po vysušení, filtrácii a zahustení sa zvyšok prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 6,63 g zlúčeniny 93 (72 % v dvoch krokoch).

[a] ₃ ²⁰ = -68 (c = 1,02, dichlórmetán)

Nonasacharid 94 sa pripraví z moncsacharidu 93 reakčnou sekvenciou ako v prípade ncnasacharidu 24 z monosachariau 3.

Príprava 81

O-(6-0-3enzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (l->4)]₃-l, 6-anhydro-3-0-metyl-p-D-manopyranóza (95)

K roztoku 759 mg (0,36 mmol) zlúčeniny 94 v 3,3 ml zmesi dichlórmetán/terc-butanol (1/2) sa pridá 109 mg 5 % paládia na uhlí. Zmes sa mieša počas 16 hodín v atmosfére vodíka (10⁶ Pa resp. 10 bar) pri teplote 55 °C, potom sa prefiltruje a zahustí. Zlúčenina 95 sa použije v nasledovnom kroku bez ďalšieho čistenia a charakterizácie.

Príprava 82

O-(6-0-Benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-{1->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (1—>4)]₃-l, 6-anhydro-2-0-benzoyl-3-0-metyl-p-D-manopyranóza (96)

K roztoku 726 mg (0,36 mmol) zlúčeniny 95 v 5,4 ml bezvodého pyridínu sa pridá 62 μΐ (0,54 mmol) benzoylchloridu a 9 mg (0,073 mmol) dimetylaminopyridínu. Zmes sa mieša počas 2 hodín pri teplote 60 °C a potom sa ešte raz pridá rovnaké množstvo benzoylchloridu a po 35 minútach sa roztok zahustí, zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne, premyje sa vodným 10 % roztokom hydrogensíranu draselného, vodným 2 % roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou. Organická fáza sa vysuší síranom sodným, prefiltruje a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 684 mg zlúčeniny 96 (90 % v dvoch krokoch) .

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,5, silikagél, 1/1 (objemový pomer) toluén/acetón

Schéma 19 - Syntéza nonasacharidu 99 96

Príprava 83

0-(6-0-Benzoyl-4-0-levuoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(1->4)-[0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1->4)]₃-l, 6-di-0-acetyl-2-0-benzoyl-3-0-metyl-a,P-D-manopyranóza (97)

657 mg (0,31 mmol) zlúčeniny 96 sa nechá reagovať so zmesou 4,5 ml acetanhydridu, 100 μΐ kyseliny octovej a 0,19 ml kyseliny trifluóroctovej ako v príklade 23. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 432 mg (92 %) zlúčeniny 97.

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,53, silikagél, 1/1 (objemový pomer) toluén/acetón

Príprava 84

C-(6-0-Benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4) - [0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)]₃-6-0-acetyl-2-0-benzoyl-3-0-metyl-a,P-D-manopyranóza (98)

Pripraví sa roztok 382 mg (0,17 mmol) zlúčeniny 97 a 736 μΐ (6,74 mmol) benzylamínu v 6 ml tetrahydrofuránu a mieša sa počas 5 hodín. Zmes sa naleje na ľad a po extrakcii dietyléterom sa organická fáza dôkladne premyje 3 % kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší sa a zahustí sa. Zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 241 mg zlúčeniny 98.

Tenkovrstvová chromatografia: R_f = 0,37, silikagél, 6/2/2 (objemový pomer) toluén/etylacetát/etanol

Príprava 85

Trichlóracetimidát O-(6-0-benzoyl-4-0-levuloyl-2,3-di-O-metyl-α-D-glukopyranozyl)—(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2, 3, 6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-6-O-acetyl-2-0-benzoyl-3-0-metyl-a,p-D-manopyranózy (99)

K roztoku 241 mg zlúčeniny 98 v 2,2 ml dichlórmetánu sa pridá 57 μΐ (0,56 mmol) trichlóracetonitrilu a 58 mg uhličitanu cézneho. Zmes sa mieša počas 1 hodiny, prefiltruje sa, zahustí sa a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli, čím sa získa 221 mg imidátu 99 (56 % v dvoch krokoch).

Tenkovrstvová chromatografia: Rf = 0,19, silikagél, 3/2 (objemový pomer) cyklohexán/acetón

Príklad 1

Sodná sol metyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)- :i->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0- i2,3, 6-tri-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-C-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3, 6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (l->4)]3-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(l->4)-3-0-metyl-2, 6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (I) mg (11 μιηοΐ) hexadekasacharidu 4 6 sa rozpustí v 1 ml N,N-dimetylformamidu. Potom sa pridá 180 mg (0,89 mmol) komplexu oxid sírový/trietylamín a zmes sa mieša počas 20 hodín pri teplote 55 °C. K roztoku 5 mg/ml sulfatovanej zlúčeniny v N,N-dimetylformamidu sa potom pridá 5 mmol/mol hydroxylových skupín komplexu oxid sírový/trietylamín. Po 1 hodine pri teplote 55 °C sa roztok nanesie na kolónu Sephadex G-25 (lm,6 x 115 cm) a vymýva sa 0,2M roztokom chloridu sodného. Frakcie obsahujúce prcdukt sa zahustia a zbavia sa soli na rovnakej kolóne, pričom sa vymýva vedou. Po lyofilizácii sa získa 47 mg (87 %) zlúčeniny I vo forme bieleho prášku.

[a]_D = +65 (c = 1,0, voda)

Príklad 2

Sodná sol metyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3, 6-tri-O-metyl-a-D-glukopy77 ranozyl)- (1—>4)-0-¢2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl-(1—>4)] ₃· -0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-0-(6-0-me tyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-α-Ľ-idopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-3,6-di-O-metyl-2-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (II)

Príklad 3

Sodná sol metyl-0-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-{1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (l->4)]3-0-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-manopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-0-(6-0-metyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(l->4)-6-0-metyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (III)

Príklad 4

Sodná sol metyl-0-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3, 6-tri-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (l->4)]3-0-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-manopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-0-(6-O-metyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-{1—>4)-3,6-di-078

-metyl-2-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (IV)

Príklad 5

Sodná sol metyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(i->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)—(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)- (1—>4)]3-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)-(l->4)-0-(G-O-metyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1->4)-0-(3-0-metyl-2-0-sulfo-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-3,6-0-metyl-2-0-sulfo-a-D-glukopyranozidu (V)

Zlúčeniny z príkladov 2 až 5 sa pripravia podobným spojením príslušných tetrasacharidov s príslušnými nonasacharidmi a potom spojením s trisacharidom 41 alebo 43 (ako opisuje príprava 36 alebo 38). Nasleduje zvyčajná ochrana a sulfatačná reakcia.

V prípade príkladu 2 sa použitý tetrasacharid opisuje v príprave 55 (zlúčenina 62) a použitý nonasacharid sa opisuje v príprave 25 (zlúčenina 27).

V prípade príkladu 3 sa použitý tetrasacharid opisuje v príprave 74 (zlúčenina 86) a použitý nonasacharid sa opisuje v príprave 85 (zlúčenina 99) .

V prípade príkladu 4 sa použitý tetrasacharid opisuje v príprave 55 (zlúčenina 62) a použitý nonasacharid sa opisuje v príprave 85 (zlúčenina 99) .

V prípade príkladu 5 je použitý tetrasacharid zlúčeninou 68 a použitý nonasacharid sa opisuje v príprave 25 (zlúčenina 27).

Tabulka I ‘K-NMR (D2O, 4,80 ppm) δ H-l protónov (ppm): jednotka 1 = jednotka s redukujúcim koncom jednotka 16 = jednotka s neredukujúcim koncom

Jednotka	Príklad 2	Príklad 3	Príklad 4	Príklad 5
	5,08	4,68	5,07	5,08
2	4,93	5,02	5,02	4,93
3	5, 37	5,41	5,43	5,37
5	5, 49	5,57	5,48	5,57
6	4, 66	4,71	4,65	4,70
7, 9, 11	5, 67	5, 67	5,68	5, 67
4, 8, 10, 12	4,39 - 4,49	4,39 - 4,49	4,37 - 4,47	4,39 - 4,39
13	5, 61	5,61	5,60	5, 61
14	OO	4,94	4,93	4, 93
15	5,59	5,59	5,59	5, 59
16	5, 69	5, 69	5,69	5, 68

Tabuľka II

Molekulový pík metódou „elektrónsprejovej ionizácie negatívneho iór.u (ESI)

Príklad	Vzorec	Vypočítané	Nájdené
2	Cl29H224Ol2flSi5	4304,1	4304,5
3	C127H220O134S17	4436,2	4436,2
4	Ci2gH222Ol3lSl6	4370,1	4370,4
5	Ci2eH222Ol3lSl6	4370,1	4370,5

? V 1Cf$-ZCCC

Claims

1. Syntetický polysacharid v kyslej forme a vo forme jeho farmaceutický prijateľných solí, ktorého aniónová forma zodpovedá jednému z nasledovných vzorcov I až V

R’ = CHj > >

2. Polysacharid podľa nároku 1 vo forme sodnej alebo draselnej soli.

3. Polysacharid podľa nároku 1 a 2, ktorým je sodná soľ metyl-O- :2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-β-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1->4)]3-0- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranozylurónová kyselina)- (l->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozylurónová kyselina)-(1—>4)-3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu.

4. Farmaceutické kompozície, vyznačujúce sa tým, že ako aktívnu zložku obsahujú polysacharid podľa ktoréhokoľvek nároku 1 až 3 vo forme soli s farmaceutický prijateľnou bázou alebc v kyslej forme, v kombinácii alebo v zmesi s inertnou, netoxickou, farmaceutický prijateľnou prísadou.

5. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 4 v jednotkovej dávkovej forme, vyznačujúca sa tým, že je v nej aktívna zložka zmiešaná s aspoň jednou farmaceutickou prísadou.

6. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 5, vyznačujúca sa tým, že v každej dávkovej jednotke obsahuje 0,1 až 100 mg aktívnej zložky.

7. Farmaceutická kompozícia podía nároku 6, vyznačujúca sa tým, že v každej dávkovej jednotke obsahuje 0,5 až 50 mg aktívnej zložky.

š. Použitie polysacharidu podľa ktoréhokolvek nároku 1 až 3 na prípravu liečiva vhodného na liečenie patologických stavov spojených s poruchami zrážania krvi.

3. Použitie polysacharidu podía ktoréhokolvek nároku 1 až 3 na prípravu liečiva vhodného na liečenie a prevenciu ochorení kardiovaskulárneho a cerebrovaskulárneho systému, tromboembolických ochorení spojených s artériosklerózou a diabetom alebo tromboembolických ochorení spojených s retrombózou po trombolýze, s infarktom, s demenciou ischemického pôvodu, s periférnymi arteriálnymi chorobami, s hemodialýzou alebo s aurikulárnymi fibriláciami alebo alternatívne v priebehu použitia aortokoronárnej mostíkovej vaskulárnej protézy.

10. Použitie podľa nároku 9, pričom sa pripravené liečivo použije pri prevencii alebo liečení tromboembolických chorôb.

11. Použitie podía nároku 10, pričom sa pripravené liečivo použije pri prevencii alebo liečení nestabilnej angíny, mŕtvice, restenózy po angioplastike, endarteriektómii alebo inštalácii endovaskulárnej protézy.