RU2507206C2 - Новое соединение, содержащееся в голубой розе - Google Patents
Новое соединение, содержащееся в голубой розе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2507206C2 RU2507206C2 RU2011143378/04A RU2011143378A RU2507206C2 RU 2507206 C2 RU2507206 C2 RU 2507206C2 RU 2011143378/04 A RU2011143378/04 A RU 2011143378/04A RU 2011143378 A RU2011143378 A RU 2011143378A RU 2507206 C2 RU2507206 C2 RU 2507206C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plant
- compound
- pigment
- blue
- rose
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 69
- 241000220317 Rosa Species 0.000 title claims abstract description 32
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 57
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 21
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 claims abstract description 13
- 235000011449 Rosa Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 7
- JGLMVXWAHNTPRF-CMDGGOBGSA-N CCN1N=C(C)C=C1C(=O)NC1=NC2=CC(=CC(OC)=C2N1C\C=C\CN1C(NC(=O)C2=CC(C)=NN2CC)=NC2=CC(=CC(OCCCN3CCOCC3)=C12)C(N)=O)C(N)=O Chemical compound CCN1N=C(C)C=C1C(=O)NC1=NC2=CC(=CC(OC)=C2N1C\C=C\CN1C(NC(=O)C2=CC(C)=NN2CC)=NC2=CC(=CC(OCCCN3CCOCC3)=C12)C(N)=O)C(N)=O JGLMVXWAHNTPRF-CMDGGOBGSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003419 tautomerization reaction Methods 0.000 claims description 5
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 abstract description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000001055 blue pigment Substances 0.000 description 51
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 description 22
- 239000001054 red pigment Substances 0.000 description 19
- 229930184348 Rosacyanin Natural products 0.000 description 18
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 16
- VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O cyanidin Natural products [O+]=1C2=CC(O)=CC(O)=C2C=C(O)C=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 16
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 108010062650 Flavonoid 3',5'-hydroxylase Proteins 0.000 description 11
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 11
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 11
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 11
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 244000165082 Lavanda vera Species 0.000 description 7
- 235000010663 Lavandula angustifolia Nutrition 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000001102 lavandula vera Substances 0.000 description 7
- 235000018219 lavender Nutrition 0.000 description 7
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 235000007336 cyanidin Nutrition 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 5
- 241001533590 Junonia Species 0.000 description 5
- 235000004031 Viola x wittrockiana Nutrition 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- HBQJTBXZMPSVBP-UHFFFAOYSA-N Cyanidine Natural products OC1=CC(=C2/Oc3cc(O)cc(O)c3C=C2O)C=CC1=O HBQJTBXZMPSVBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150002919 DFR gene Proteins 0.000 description 4
- 229920001301 Hexahydroxydiphenic acid Polymers 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- 101150017816 40 gene Proteins 0.000 description 3
- 241001071795 Gentiana Species 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- DKOQTUOFLKDZKY-UHFFFAOYSA-O Rosacyanin B Natural products [O+]=1C(C=23)=CC(O)=CC=2OC2=C(O)C(O)=CC(C(O4)=O)=C2C3=C4C=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 DKOQTUOFLKDZKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-[(4-methyl-2-nitrophenyl)diazenyl]-N-(3-nitrophenyl)naphthalene-2-carboxamide Chemical compound Cc1ccc(N=Nc2c(O)c(cc3ccccc23)C(=O)Nc2cccc(c2)[N+]([O-])=O)c(c1)[N+]([O-])=O MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQMDJECDLYTUCE-LCENJUANSA-N Delphinidin-3,5-diglucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)OC2=CC(=O)C=C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C2=C1 ZQMDJECDLYTUCE-LCENJUANSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-DYCDLGHISA-N Deuterium chloride Chemical compound [2H]Cl VEXZGXHMUGYJMC-DYCDLGHISA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101100288095 Klebsiella pneumoniae neo gene Proteins 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108091007187 Reductases Proteins 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 2
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 2
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- YEDFEBOUHSBQBT-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroflavon-3-ol Chemical compound O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)C1C1=CC=CC=C1 YEDFEBOUHSBQBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- DIRROHKULXIUCB-DHJOXOLYSA-N 3,5-Bis(glucosyloxy)-4',7-dihydroxyflavylium chloride Chemical compound [Cl-].O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=[O+]C1=CC(O)=C2)C=3C=CC(O)=CC=3)=CC1=C2O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DIRROHKULXIUCB-DHJOXOLYSA-N 0.000 description 1
- 241000207875 Antirrhinum Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 1
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 0 COc(cc1C(OCC([C@](C(C2OC(c3cc(*)c(*)c(*)c3)=O)OC(c3cc(*)c(*)c(*)c3)=O)O3)O[C@@]2OC(c2cc(*)c(*)c(*)c2)=O)=O)c(*)c(*)c1-c1c(*)c(*)c(*)cc1C3=O Chemical compound COc(cc1C(OCC([C@](C(C2OC(c3cc(*)c(*)c(*)c3)=O)OC(c3cc(*)c(*)c(*)c3)=O)O3)O[C@@]2OC(c2cc(*)c(*)c(*)c2)=O)=O)c(*)c(*)c1-c1c(*)c(*)c(*)cc1C3=O 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 240000004385 Centaurea cyanus Species 0.000 description 1
- 235000005940 Centaurea cyanus Nutrition 0.000 description 1
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 240000005250 Chrysanthemum indicum Species 0.000 description 1
- RDFLLVCQYHQOBU-GPGGJFNDSA-O Cyanin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(-c2cc(O)c(O)cc2)[o+]c2c(c(O[C@H]3[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O3)cc(O)c2)c1 RDFLLVCQYHQOBU-GPGGJFNDSA-O 0.000 description 1
- 241000612152 Cyclamen hederifolium Species 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 102000003849 Cytochrome P450 Human genes 0.000 description 1
- XCTGXGVGJYACEI-BYNFETKLSA-O Delphin Natural products O([C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(-c2cc(O)c(O)c(O)c2)[o+]c2c(c(O[C@H]3[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)cc(O)c2)c1 XCTGXGVGJYACEI-BYNFETKLSA-O 0.000 description 1
- 240000006497 Dianthus caryophyllus Species 0.000 description 1
- 235000009355 Dianthus caryophyllus Nutrition 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 241000597000 Freesia Species 0.000 description 1
- 241000208150 Geraniaceae Species 0.000 description 1
- 241000735332 Gerbera Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101001018064 Homo sapiens Lysosomal-trafficking regulator Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 241000344726 Iris spuria Species 0.000 description 1
- 241001091572 Kalanchoe Species 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 108010022337 Leucine Enkephalin Proteins 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 102100033472 Lysosomal-trafficking regulator Human genes 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 1
- 244000038561 Modiola caroliniana Species 0.000 description 1
- 235000010703 Modiola caroliniana Nutrition 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 241000208181 Pelargonium Species 0.000 description 1
- IPVSUYLZIAYTOK-VWVAXHKFSA-O Peonin Natural products O(C)c1c(O)ccc(-c2c(O[C@H]3[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)cc3c(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)cc(O)cc3[o+]2)c1 IPVSUYLZIAYTOK-VWVAXHKFSA-O 0.000 description 1
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 235000002315 Rosa hybrid cultivar Nutrition 0.000 description 1
- 244000037691 Rosa hybrida Species 0.000 description 1
- ZONYXWQDUYMKFB-UHFFFAOYSA-N SJ000286395 Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)CC1C1=CC=CC=C1 ZONYXWQDUYMKFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 241000722921 Tulipa gesneriana Species 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229930014669 anthocyanidin Natural products 0.000 description 1
- 150000001452 anthocyanidin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008758 anthocyanidins Nutrition 0.000 description 1
- 235000021015 bananas Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- YTMNONATNXDQJF-UBNZBFALSA-N chrysanthemin Chemical compound [Cl-].O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC2=C(O)C=C(O)C=C2[O+]=C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 YTMNONATNXDQJF-UBNZBFALSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 150000001914 cyanidin Chemical class 0.000 description 1
- RDFLLVCQYHQOBU-ZOTFFYTFSA-O cyanin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=[O+]C1=CC(O)=C2)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=CC1=C2O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RDFLLVCQYHQOBU-ZOTFFYTFSA-O 0.000 description 1
- 229930186364 cyclamen Natural products 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- AYVZVUMKUBCNQZ-UHFFFAOYSA-N delphinidin 3,5-diglucoside Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)COC1=C(Oc2cc(O)cc(OCC(O)C(O)C(O)C(O)CO)c2C1)c3cc(O)c(O)c(O)c3 AYVZVUMKUBCNQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003949 flavanone Natural products 0.000 description 1
- 150000002208 flavanones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011981 flavanones Nutrition 0.000 description 1
- -1 for example Natural products 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 101150054900 gus gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-UHFFFAOYSA-N leu-enkephalin Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1CC(N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- CAHGSEFWVUVGGL-UBNZBFALSA-N pelargonidin 3-O-beta-D-glucoside chloride Chemical compound [Cl-].O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC2=C(O)C=C(O)C=C2[O+]=C1C1=CC=C(O)C=C1 CAHGSEFWVUVGGL-UBNZBFALSA-N 0.000 description 1
- ZZWPMFROUHHAKY-OUUKCGNVSA-O peonidin 3-O-beta-D-glucoside Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(=CC=3C(O)=CC(O)=CC=3[O+]=2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=C1 ZZWPMFROUHHAKY-OUUKCGNVSA-O 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/74—Rosaceae, e.g. strawberry, apple, almonds, pear, rose, blackberries or raspberries
- A01H6/749—Rosa, i.e. roses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/12—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D493/16—Peri-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
- C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
- C07H13/08—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals directly attached to carbocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H9/00—Compounds containing a hetero ring sharing at least two hetero atoms with a saccharide radical
- C07H9/02—Compounds containing a hetero ring sharing at least two hetero atoms with a saccharide radical the hetero ring containing only oxygen as ring hetero atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/825—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving pigment biosynthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0073—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen 1.14.13
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Botany (AREA)
- Physiology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к новому соединению, представляющему собой пигмент растения, которое относится к семейству Rosaceae рода Rosa, конкретно розе. Это новое соединение, содержащееся в голубой розе, способно изменять окраску цвета растения и имеет химическую структуру, представленную общей формулой (I), указанную ниже, где R1 представляет группу, как указано в п.1, и R2 представляет -ОН или R1 и R2 вместе образуют -O-. Также раскрыто, что изменение цвета происходит именно в важной части растения - в срезанном цветке, 6 н. и 1 з.п. ф-лы, 3 пр., 14 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новому соединению, представляющему собой пигмент растения, конкретно розы, которая лишена способности производить дельфинидин путем генетической рекомбинации, и к такому растению, как роза, которая содержит этот пигмент и его части. Дополнительно, настоящее изобретение относится к способу изменения окраски цветов растения с применением этого соединения.
Уровень техники
Розы являются важными растениями в качестве срезанных цветов и их цвет детально исследован. Например, известны примеры пигментов на основе антоциана, включающие цианидин-3,5-диглюкозид, пеларгонидин-3,5-диглюкозид, цианидин-3-глюкозид, пеларгонидин-3-глюкозид, пеонидин-3,5-диглюкозид и пеонидин-3-глюкозид. Пути биосинтеза антоцианов, включающих эти пигменты, известны.
Дополнительно, розы, экспрессирующие ген флавоноид-3',5'-гидроксилазы благодаря генетической рекомбинации (ссылка на патентные документы 1 и 2), продуцируют дельфинидин (называемый также дельфинидин-3,5-диглюкозидом). Полагают, что в этом случае реакция гидроксилирования по положению 5' в кольце В флавоноида происходит на стадии флаванона или дигидрофлавонола. Поскольку флавоноид-3',5'-гидроксилаза представляет собой род цитохрома Р450, присутствующего в эндоплазматическом ретикулуме, считается, что это гидроксилирование происходит в эндоплазматическом ретикулуме. В связи с отсутствием последовательности, например, -сигнального пептида и поскольку ферменты, например, антоцианиидингликозилтрансфераза, катализирующие реакции биосинтеза антоцианов, являются растворимыми белками, они присутствуют в клеточной цитоплазме. Антоцианы переносятся в вакуоли с помощью помп (мембранных переносчиков) после гликозилирования.
С другой стороны показано, что соединения розацианины (см. фигуру 1) присутствуют, по меньшей мере, в некоторых розах и структуры розацианинов, таких как розацианин А1, розацианин В и розацианин А2, определены (см, например, патентный документ 3 или непатентный документ 1):
Поскольку розацианины включают скелет цианидина в части своей структуры, имеется вероятность того, что они синтезируются на основе цианидина, общего с цианидином предшественника или аналога цианидина. Однако, поскольку это предположение остается спекуляцией, следует еще ясно определить, какой тип соединения на самом деле является предшественником и какие применяются типы путей синтеза.
С другой стороны, дельфинидин синтезируется вместо части цианидина в розах, у которых ген флавоноид-3',5'-гидроксилазы экспрессируется в результате генетической рекомбинации, как описано ранее. Если вышеупомянутая гипотеза относительно путей синтеза розацианина, а именно то, что розацианин синтезируется с применением цианидина в качестве предшественника, верна, то розацианин не синтезировался бы у этих генетически модифицированных роз, у которых цианидин, служащий предшественником, практически отсутствует.
Когда авторы настоящего изобретения проводили анализ для получения данных относительно синтеза розацианина с применением вышеупомянутых генетически модифицированных роз, которые вряд ли содержат сколько-нибудь цианидина или имеют значительно пониженное содержание цианидина по сравнению с хозяином, как описано в патентных документах 1 или 2, в противоположность ожиданиям было обнаружено наличие нового соединения с химической структурой, явно отличной от таковой розацианинов, унаследованных розами. Более того, ясно определено, что это новое соединение уникальным образом присутствует в розах, у которых ген флавоноид-3',5'-гидроксилазы экспрессируется благодаря генетической рекомбинации, что завершает настоящее изобретение.
Аналоги
Патентные документы
Патентный документ 1: международная публикация WO 2004/020637
Патентный документ 2: международная публикация WO 2005/017147
Патентный документ 3: Японская патентная публикация (Kokai) No. 2002-201372
Документы, не относящиеся к патентам
Непатентный документ 1: Tetrahedron, 62, 2006, 9661-9670
Раскрытие изобретения
Задачи изобретения
Объектом настоящего изобретения является новое соединение, представляющее собой пигмент растений, и конкретно, розы, лишенные способности продуцировать дельфинидин путем генетической рекомбинации, и растение, такое как роза, содержащая это пигмент, и его части. Дополнительно объектом настоящего изобретения является способ изменения окраски цветов растения с применением этого соединения.
Подходы к решению задач
Настоящее изобретение описано ниже.
(1) Соединение общей формулы (I)
(химическая формула 1)
где R1 представляет следующую группу:
(химическая формула 2)
и R2 представляет -ОН или R1 и R2 вместе образуют -О-, или R1 представляет следующую группу:
(химическая формула 3)
и R2 представляет -ОН, предоставленный таким образом, что связь (волнистая линия) гидроксильной группы в положении 1 глюкозы в R1 проявляет таутомерию с α-формой и β-формой.
(2) Соединение следующей формулы:
(химическая формула 4)
(3) Соединение следующей формулы:
(химическая формула 5)
(4) Соединение следующей формулы:
(химическая формула 6)
(5) Растение, содержащее соединение, описанное в любом из п.п.1-4 выше, отличающееся тем, что растение не содержит этого соединения от природы.
(6) Растение по п.5 выше, являющееся представителем семейства Rosaceae.
(7) Растение по п.6 выше, где растение, являющееся представителем семейства Rosaceae, представляет собой растение семейства Rosaceae, рода Rosa.
(8) Растение по п.7 выше, где растение семейства Rosaceae, рода. Rosa представляет собой розу.
(9) Часть растения по любому из пунктов 5-8 выше.
(10) Часть растения по п.9 выше, представляющая собой срезанный цветок.
(11) Продукт обработки срезанного цветка, который применяет срезанный цветок по п.10 выше.
(12) Способ изменения окраски цветка растения с применением соединения по любому из пп.1-4 выше.
(13) Способ по п.12 выше, где растение является представителем семейства Rosaceae.
(14) Способ по п.13 выше, где растение, являющееся представителем семейства Rosaceae, представляет собой растение семейства Rosaceae, рода Rosa.
(15) Способ по п.14 выше, где растение семейства Rosaceae рода Rosa представляет собой розу.
Эффекты изобретения
Согласно настоящему изобретению новый пигмент, присутствующий в лепестках голубой розы, экстрагирован, выделен и очищен и определена его химическая структура. Это основано на исследовании, включающем генетически измененный цвет розы и создание нового растения семейства Rosaceae. Дополнительно, новый пигмент согласно настоящему изобретению можно применять, например, для улучшения цвета срезанных цветов путем абсорбции в розу или другой срезанный цветок и можно также применять для окрашивания пищи и напитков, например, в качестве природного растительного пигмента.
Краткое описание фигур
На фигуре 1 показаны химические структурные формулы цианидина, дельфинидина и розацианина.
На фигуре 2 показана структура плазмиды pSPB919, трансфицированной в розово-лиловые (mauve) розы варианта «лаванда».
На фигуре 3 приведен спектр поглощения в видимом свете и ультрафиолете синего пигмента (1) в 30% ацетонитриле и 0,5% ТФУ.
На фигуре 4 показана хроматограмма, полученная при анализе синего пигмента (1) с помощью HPLC, где два пика наблюдаются в результате того, что гидроксильная группа в положении 1 глюкозы проявляет таутомерию между α-формой и β-формой.
На фигуре 5 приведен спектр поглощения в видимом свете и ультрафиолете красного пигмента (2) в 30% ацетонитриле и 0,5% ТФУ.
На фигуре 6 показана хроматограмма, полученная при анализе красного пигмента (2) с помощью HPLC.
На фигуре 7 приведен спектр поглощения в видимом свете и ультрафиолете синего пигмента (3) в 30% ацетонитриле и 0,5% ТФУ.
На фигуре 8 приведена химическая структурная формула синего пигмента (1), где связь (волнистая линия) гидроксильной группы в положении 1 глюкозы в R1 проявляет таутомерию между α-формой и β-формой.
На фигуре 9 приведена химическая структурная формула красного пигмента (2).
На фигуре 10 приведена химическая структурная формула синего пигмента (3).
На фигуре 11 приведен 1H-NMR спектр синего пигмента (1), показанного на фигуре 8.
На фигуре 12 приведен 13C-NMR спектр синего пигмента (1), показанного на фигуре 8.
На фигуре 13 приведен 1H-NMR спектр красного пигмента (1), показанного на фигуре 9.
На фигуре 14 показана структура плазмиды pSPB130, трансфицированной в розово-лиловую розу варианта "WKS82".
Осуществление изобретения
Новый пигмент согласно настоящему изобретению имеет структуру, в которой одна гидроксильная группа дополнительно добавлена к кольцу В известного вещества в форме розацианина А1, розацианина В и розацианина А2 (у которых число гидроксильных групп в кольце В равно 2). То есть можно сказать, что новый синий пигмент согласно настоящему изобретению является новым соединением, включающим часть структуры синего пигмента дельфинидина, который является известным веществом, присутствие которого в голубых розах подтверждено (у которого число гидроксильных групп в кольце В равно 3).
Как описано в патентных документах 1 или 2, синий пигмент, не присутствующий в обычных вариантах роз (имеющий три гидроксильные группы в кольце В), присутствует в голубой розе благодаря функции «голубого» гена (флавоноид-3',5'-гидроксилазы). В настоящее время соединения структуры, в которой одна гидроксильная группа дополнительно добавлена в кольцо В известных веществ в форме розацианина А1, розацианина В и розацианина А2 (у которого число гидроксильных групп в кольце В равно 2), выделены и очищены в качестве синих пигментов, они идентифицированы с помощью TOF-MS (масс-спектрометрии) и NMR (ЯМР) и их структуры определены.
Три типа соединений согласно настоящему изобретению представляют собой соединение, характеризующееся параметрами, показанными на фигурах 3, 4, 11 и/или 12, соответственно, соединение, характеризующееся параметрами, показанными на фигурах 5, 6, 9 и/или 13, соответственно, или соединение, характеризующееся параметрами, приведенными на фигуре 7.
В связи с дополнительным усилением эффекта улучшения растворимости благодаря наличию трех гидроксильных групп в результате дополнительного добавления гидроксильной группы в кольцо В считается, что антоцианы, например, розацианины с большим молекулярным весов, чем у цианидина, являются более действенными пигментами в смысле переноса в вакуоли клеток лепестков цветов и проявления синего цвета. Дополнительно, розацианины характеризуются как преобладающие по сравнению с обычными пигментами в плане синтеза в организме растения. Дополнительно, настоящее изобретение предоставляет растение, содержащее соединение, показанное на фигурах 8-10. Однако растение от природы не содержит соединения или соединение не присутствует в лепестках его цветов в различимом количестве. Дополнительно, настоящее изобретение предоставляет способ изменения окраски цветов растения с применением соединения, показанного на фигурах 8-10. Например, соединение согласно настоящему изобретению можно получить только путем трансфекции гена фермента, включенного в синтез соединения согласно настоящему изобретению, в растение мишень с помощью техники генной инженерии и затем синтеза различимого предписанного количества соединения в лепестках цветов растения. Альтернативно, поскольку соединение согласно настоящему изобретению можно также получить физическим путем, например, путем прямой абсорбции соединения согласно настоящему изобретению растением, способ, согласно которому растение-мишень содержит соединение, не ограничен.
Организм растения согласно настоящему изобретению содержит соединение, показанное на фигурах 8-10, в лепестках своих цветов. Хотя нет конкретного ограничения относительно количества соединения в лепестках цветов организма растения, предпочтительно оно составляет 0,00001 мг/г или более относительно сырого веса цветочных лепестков. Нижний предел содержания соединения более предпочтительно составляет 0,0001 мг/г или более, еще более предпочтительно 0,0007 мг/г или более. Верхний предел содержания соединения составляет предпочтительно 1 мг/г или менее, более предпочтительно 0,5 мг/г или менее и еще более предпочтительно 0,13 мг/г или менее.
Примеры растений мишеней включают, не ограничиваясь этим, розы, хризантемы, гвоздики, львиный зев, цикламены, орхидеи, горечавку прерий, фрезии, герберу, гладиолусы, качим метельчатый, каланхоэ, лилии, пеларгонии, герани, петунии, торении, тюльпаны, рис, ячмень, пшеницу, рапс, картофель, помидоры, тополь, бананы, эвкалипт, сладкий картофель, сою, альфальфа, люпины, кукурузу и цветную капусту.
Предпочтительные примеры растений мишеней включают растения семейства Rosaceae, более предпочтительно растения семейства Rosaceae рода Rosa и еще более предпочтительно розы, где в качестве примера выступает Rosa hybrida. Настоящее изобретение относится к частям вышеупомянутых растений и конкретно к срезанным цветам и продуктам переработки цветов с применением срезанных цветов. В данном случае продукты переработки срезанных цветов включают, не ограничиваясь этим, прессованные цветы, консервированные цветы, засушенные цветы и заключенные в носитель (матрицу) продукты с применением таких срезанных цветов.
ПРИМЕРЫ
Ниже предоставлено более детальное объяснение настоящего изобретения с помощью примеров.
Пример 1. Выделение и очистка пигментного соединения
Пигментное соединение согласно настоящему изобретению очищают и изолируют с применением голубой розы в качестве источника для проведения экстракции.
Получение лавандового варианта, трансфицированного плазмидой pSPB919
Голубую розу получают для применения в качестве источника для проведения экстракции. Лавандовый вариант, трансфицированный плазмидой pSPB919, получают по способу, описанному ниже.
РНК получают из лепестков срезанных цветов голубого ириса и далее из РНК получают поли-А РНК. Библиотеку кДНК (cDNA) получают из этой поли-А РНК с применением λZAPII (Stratagene) в качестве вектора с помощью набора для получения библиотек cDNA (Stratagene) по способу, рекомендованному производителем. Фрагмент гена DRF из ириса получают по способу, описанному для получения фрагмента DFR из японской горечавки (Tanaka, et al., Plant Cell Physiol., 37, 711-716, 1996).
Полученный фрагмент ДНК размером примерно 400 bp (пар оснований) выделяют с помощью GeneClean со способу, рекомендованному производителем, и суб-клонируют в pCR-TOPO. После определения его нуклеотидной последовательности обнаружено, что последовательность гомологична гену DFR розы. Библиотеку кДНК ириса подвергают скринингу с применением этого фрагмента ДНК для получения кДНК DFR ириса, соответствующего полной длине аминокислотной последовательности. Затем определяют полную нуклеотидную последовательность кДНК, содержащуюся в клоне, названном pSPB906 (см SEQ ID NO. 9 и SEQ ID NO. 10 патентного документа 2 для нуклеотидной последовательности и аминокислотной последовательности).
Далее фрагмент размером примерно 3,9 kb, полученный путем обработки pSPB580 рестриктазами BamHI и XhoI, и фрагмент ДНК размером примерно 1,5 kb, полученный путем обработки pSPB906 с помощью BamHI и XhoI, лигируют и полученную плазмиду называют pSPB909.
Транскрипцию двухцепочечной РНК с кДНК DFR розы проводят в растениях по следующему способу. Фрагмент ДНК размером примерно 3,5 kb (содержащий промотор Mac1, кДНК DFR розы и терминатор mas), полученный путем частичного расщепления pCGP1364 (Tanaka, et al., Plant Cell Physiol., 36, 1023-1031, 1995) с помощью PstI, вводят в PstI участок pUC19 (Yanisch-Perron, С. et al., Gene, 33, 103-119, 1985) и часть полученной плазмиды, у которой HindIII участок pUC19 находится близко к промотору MacI, называют pCGP 1394.
Затем фрагмент ДНК размером примерно 1,4 kb, полученный путем обработки pCGP1394 с помощью HindIII и SacII, фрагмент ДНК размером примерно 1,9 полученный путем обработки pCGP1394 с помощью PstI с последующим получением тупых концов и дополнительной обработкой рестриктазой SacI, и фрагмент бинарного вектора, полученный путем обработки pBinPLUS рестриктазой SacI с последующим получением тупых концов и дополнительной обработкой рестриктазой HindIII, лигируют с получением pSPB185. pSPB185 далее обрабатывают XbaI, получают тупые концы и лигируют с линкером SalI для получения pSPB521. Фрагмент ДНК размером примерно 700 bp DNA, полученный путем обработки pUE6 с помощью HindIII и BamHI, фрагмент ДНК бинарного вектора, полученный путем обработки pSPB521 ректриктазами HindIII и SacI, фрагмент ДНК гена GUS, полученный путем обработки рЕ2113 с помощью BamHI и SacI, лигируют с получением pSPB528.
pSPB528 представляет собой бинарный вектор, способный вставлять структурный ген между вирусом мозаики цветной капусты 35S, имеющим энхансер (enhancer), и терминатором маннопинсинтазы для экспрессии в растениях. Дополнительно, поскольку это укорачивает последовательность 5'-нетранслируемого района кДНК DFR розы, содержащегося в pCGP645, pCGP645 получают путем обработки pCGP645 рестриктазами SmaI и PvuI с последующим получением тупых концов и лигированием.
Последовательность с 5'-конца кДНК DFR розы получают путем амплификации с помощью ПЦР с применением pCGP645 в качестве матриц и с помощью анти-смыслового праймера и смыслового праймера RDF310 (см SEQ ID NO. 19 патентного документа 2) в качестве праймеров и последующего клонирования в pCR-TOPO. Нуклеотидную последовательность ДНК определяют и подтверждают отсутствие ошибок в результате ПЦР. Продукт называется pSPB569. Дополнительно, получают последовательность другой длины с 5'-стороны кДНК DFR розы путем амплификации с помощью ПЦР с применением pCGP645 в качестве матриц и с помощью анти-смыслового праймера и смыслового праймера RDF830 (см. SEQ ID NO. 20 патентного документа 2) в качестве праймеров с последующим клонированием в pCR-TOPO. Нуклеотидную последовательность ДНК определяют и подтверждают отсутствие ошибок в результате ПЦР.
Продукт называют pSPB570. Фрагмент ДНК бинарного вектора, полученный путем обработки pSPB528 рестриктазами BamHI и SacI, фрагмент ДНК размером примерно 0,3 kb, полученный путем обработки pSPB569 рестриктазами SacI и XhoI, и фрагмент ДНК, полученный путем обработки pSPB570 с помощью BamHI и SalI, лигируют с получением pSPB572. Этот вектор создан для осуществления транскрипции двухцепочечной РНК на кДНК DFR розы в растении.
pUE6 обрабатывают рестриктазой SacI и получают тупые концы с последующей вставкой линкера SalI для получения pUE8. Фрагмент ДНК, полученный путем обработки pUE8 ректриктазами HindIII и EcoRI, лигируют в HindIII и EcoRI участки pBinPLUS для (получения) pSPB189. Фрагмент ДНК размером примерно 3,7 kb, полученный путем обработки pSPB189 ректриктазами BamHI и SalI, и фрагмент ДНК размером примерно 1,8 kb, полученный путем полной обработки pCGP1961 с помощью BamHI и дополнительной частичной обработки с помощью XhoI, лигируют для получения pSPB567. После обработки pSPB572 с помощью Pad и дефосфорилирования фрагмент ДНК размером примерно 2,8 kb, полученный путем обработки pSPB567 с помощью Pad, лигируют и отбирают плазмиду, в которой транскрипция идет в том же направлении, что и для nptII гена и полученного из анютиных глазок F3'5'H#40, которую называют pSPB905.
После обработки pSPB905 ректриктазой AscI и дефосфорилирования фрагмент ДНК размером примерно 2,5 kb, полученный путем обработки pSPB909 ректриктазой AscI, лигируют для получения плазмиды, в которой транскрипция гена DFR из ириса происходит в том же направлении, что и гена nptII, и такую плазмиду называют pSPB919 (см. фигуру 2). Ожидается, что с этой плазмиды идет транскрипция гена DFR, полученного из ириса, и гена F3'5'H#40, полученного из анютиных глазок, в розе и осуществляется контроль экспрессии гена DFR розы путем транскрипции двухцепочечной РНК. Эту плазмиду трансфицируют в Agrobacterium tumefaciens штамм Ag10.
pSPB919 (см фигуру 2) трансфицируют в розово-лиловую розу, вариант «лаванда» путем инфицирования Agrobacterium для получения трансгенного растения. Трансформированные клетки пигментных соединений затем регенерируют для получения трансгенного растения в виде голубой розы (вариант лаванда, трансфицированный плазмидой pSPB919) и ему дают зацвести.
Экстракция, выделение, очистка и идентификация пигментных соединений
Пигментные соединения очищают из 230 г цветочных лепестков голубой розы, полученной по способу, описанному выше (вариант лаванда, трансфицированный плазмидой pSPB919) по способу, описанному ниже.
230 г цветочных лепестков замораживают и измельчают в жидком азоте с помощью гомогенизатора, вслед за чем добавляют 1 л 50% ацетонитрила, содержащего 0,5% ТФУ, и вымачивают в течение ночи. Фильтрат, полученный путем фильтрации через диатомовую землю, концентрируют до примерно 2/5 исходного объема с помощью роторного испарителя.
Этот концентрированный экстракт наносят на 400 мл абсорбционной смолы НР-20 (Mitsubishi Chemical). После промывки 800 мл воды экстракт последовательно элюируют с помощью 1 л 20% ацетонитрила с 0,1% ТФУ и 60% ацетонитрила с 0,1% ТФУ. Фракции, содержащие синий пигмент, элюируются с 60% ацетонитрилом.
Эту фракцию затем очищают с помощью препаративной HPLC. Применяют колонку Develosil ODS-UG (Nomura Chemical, 5 см диаметром ×50 см), подвижная фаза состоит из воды (раствор А) и 50% ацетонитрила с 0,5% ТФУ (раствор В), скорость тока составляет 32 мл/мин, применяют линейный градиент концентрации, включающий 30% В (держат в течение 30 мин), увеличение от 30% В до 100% В (50 мин) и затем поддержание при 100% В в течение 20 мин. Детектирование проводят при 260 нм. Фракцию, содержащую синий пигмент, которая элюируется от 67 мин до 82 мин, собирают и лиофилизуют. Хроматографию повторяют дважды.
1,2 г лиофилизованного продукта наносят на колонку Sephadex LH-20 (Pharmacia) (1,2 л), уравновешенную 50% ацетонитрилом. После элюции 2,5 л 50% ацетонитрила элюируют фракцию, содержащую синий пигмент, с помощью дополнительных 2,5 л 50% ацетонитрила, ее собирают и лиофилизуют.
Снова проводят препаративную HPLC с применением полученного лиофилизованного продукта.
Применяют колонку YMC Pack Polymer CI8 (YMC, 2 см в диаметре ×30 см) и подвижную фазу, состоящую из 0,5% ТФУ в воде (раствор А) и 0,5% ТФУ в 50% ацетонитриле (раствор В), скорость тока составляет 6 мл/мин; хроматографию проводят с применением следующего градиента концентрации: 65% В (держат в течение 30 мин), увеличение от 65% В до 90% В (20 мин) и затем держат при 90% В в течение 30 мин. Детектирование проводят при 260 нм. Красный пигмент (2), который элюируется от 50 до 52 мин, синий пигмент (1), который элюируется от 60 до 65 мин, и синий пигмент (3), который элюируется от 65 до 73 мин, собирают и лиофилизуют. Хроматографию повторяют в общем три раза.
Лиофилизованный продукт, синий пигмент (1), красный пигмент (2) и синий пигмент (3), полученные по способу, описанному выше, рассматривают визуально на оттенок цвета. В результате они демонстрируют глубокий синий, глубокий красный и глубокий синий цвет, соответственно.
При измерении содержания в цветочных лепестках синего пигмента (1) обнаружено, что его содержание находится в интервале от 0,0007 мг/г до 0,13 мг/г сырого веса цветочных лепестков.
Пример 2. Структурный анализ пигментных соединений путем инструментального анализа
Синий пигмент (1), красный пигмент (2) и синий пигмент (3) анализируют с помощью различных приборов (инструментальных подходов) с применением повторно очищенных образцов при необходимости.
Синий пигмент (1), красный пигмент (2) и синий пигмент (3) анализируют с помощью HPLC и их спектры поглощения от 650 до 250 нм в 30% ацетонитриле с 0,5% ТФУ регистрируют с помощью детектора с фотодиодной матрицей (см фигуры 3, 5 и 7).
HPLC проводят с применением колонки Shodex Asahipak ODP50 (Showa Denko, 4,6 мм в диаметре ×25 см) и изократического раствора подвижной фазы, содержащего 30% ацетонитрил и 0,5% ТФУ, при скорости тока 0,6 мл/мин. Детектирование проводят путем регистрации спектра поглощения от 650 нм до 250 нм с помощью детектора с фотодиодной матрицей (SPDM10Avp, Shimadzu) и мониторинга хроматограммы при 560 нм.
Результаты суммированы ниже (см время удержания (R.T.) на фигурах 4, и 6).
Синий пигмент (1) λmax 593 нм R.T. 14,6 и 18,5 мин*
Красный пигмент (2) λmax 535 нм R.T. 8,9 мин
Синий пигмент (3) λmax 594 нм R.T. 21, мин
* - синий пигмент (1) проявляет два пика в результате того, что гидроксильная группа в положении 1 глюкозы демонстрирует таутомерию с α-формой и β-формой.
Проводят масс-спектрометрический анализ (TOF-MS) синего пигмента (1), красного пигмент (2) и синего пигмента (3).
Масс-спектрометрию (МС) проводят путем измерения в режиме положительного напряжения (positive V mode) с помощью Q-TOF Premier (Micromass, U.K.), снабженного источником ионов Z-spray. МС проводят с применением напряжения в пучке (cone voltage) 60 В и капиллярного напряжения 3 кВ, калибровку по массе проводят с помощью lock spray и в качестве стандарта применяют лейцин-энкефалин (m/z: 556.2771 [М+Н]+).
В результате (1) характеризуется m/z=1221.1352 [М]+, красный пигмент (2) характеризуется m/z=435.0380 [М]+ и синий пигмент (3) характеризуется m/z=1373.1442 [М]+, что хорошо согласуется с молекулярными формулами С56Н37О32 (погрешность +6.9 ppm), C22H11O10 (погрешность +6.4 ppm) и С63Н41О36 (погрешность +4.6 ppm), соответственно.
Спектры поглощения синего пигмента (1), красного пигмента (2) и синего пигмента (3) в 30% ацетонитриле с 0,5% ТФУ показаны на фигурах 3, 5 и 7, соответственно.
Максимумы поглощения в видимом диапазоне синего пигмента (1) и синего пигмента (3) сдвинуты в сторону больших длин волн по сравнению с максимумом поглощения соединения формулы (II), описанного в примере 1 патентного документа 3.
Соединение формулы (II) патентного документа 3 демонстрирует синий цвет, как описано в патентном документе 3. Однако, поскольку полученные максимумы поглощения в видимом диапазоне синего пигмента (1) и синего пигмента (3) располагаются при больших длинах волн, чем максимум поглощения соединения формулы (II), описанного в патентном документе 3, они проявляют более глубокий синий цвет, чем соединение формулы (II). Соответственно, синий пигмент (1) и синий пигмент (3), впервые открытые в настоящем изобретении, ясно определяются как более эффективные для придании темно-синего цвета растениям. Когда определяют молекулярный вес синего пигмента (1) с помощью TOF-MS, получают значение m/z=1221.13 [М]+, что на 16 единиц массы больше молекулярного веса 1205 соединения формулы (II), описанного в примере 1 патентного документа 3. Это указывает, что пигментное соединение с молекулярным весом на 16 единиц массы выше, чем у известного пигментного соединения патентного документа 3, содержится в лавандовой разновидности, трансфицированной плазмидой pSPB919, описанной в патентном документие 2. Поскольку увеличение молекулярного веса, обусловленное реакцией гидроксилирования с помощью флавоноид-3',5'-гидроксилазы, представляет собой увеличение на 16 единиц массы, возникающее в результате добавления одного атома кислорода, полагают, что синий пигмент (1) имеет на один атом кислорода больше, чем соединение формулы (II), описанное в примере 1 патентного документа 3. Поскольку флавоноид-3',5'-гидроксилаза специфично катализирует гидролиз В кольца флавоноидов, сделано заключение, что соединение, идентифицированное в данной заявке, не является розацианином А1-гликозидом, описанным в непатентном документе 1, а скорее представляет собой соединение с частичной структурой дельфинидина, который имеет три гидроксильные группы в кольце В. А именно, сделано заключение, что структуры синего пигмента (1), красного пигмента (2) и синего пигмента (3) представляют собой структуры, приведенные на фигурах 8, 9 и 10, соответственно.
Дополнительно, каждое из соединений исследуют с помощью ЯМР. Соединения растворяют в диметсульфоксиде DMSO-d6 (((CD3)2SO)), содержащем 1% DCl (хлористого дейтерия), и остаточные пики 1Н и 13С при δ2.50 и δ39.43 применяют в качестве внутренних стандартов. Измеряемые параметры, включающие 1H-NMR, 1H{13C}-HSQC, 1Н{13С}-НМВС, TOCSY, DQF-COSY и ROE, регистрируют с помощью спектрометра DMX-750 (Bruker Biospin, Germany). В результате получают структуры, приведенные на фигурах 8, 9 и 10, для синего пигмента (1), красного пигмента (2) и синего пигмента (3), соответственно.
Результаты анализа с помощью 1H-NMR синего пигмента (1) показаны на фигуре 11, тогда как результаты анализа с помощью 13C-NMR показаны на фигуре 12.
В случае синего пигмента (1), сигналы 1H-NMR наблюдаются при δ3.67 (1H, d12, Glc-6α), δ4.48 (1H, dd2,9, Glc-5δ), δ4.84 (1H, t9, Glc-4α), δ4.94 (1H, dd2,9, Glc-2α), δ4.99 (1Hdd2, 12, Glc-6α), δ5.30 (1H, d2, Glc-1α), δ5.64 (1H, t9, Glc-3α), δ6.22 (1H, s, HHDP), δ6.27 (1H, s, HHDP), δ6.77 (2H, s, gallate-2,6), δ6.79 (1H, s, D-3''), δ6.83 (1H, d2, A-6), δ6.85 (2H, s, gallate-2,6), δ7.03 (1H, d2, A-8) и δ7.87 (2H, s, B-2',6'). HHDP представляет собой сокращение для гексагидроксидифеноила. Дополнительно, гидроксильная группа в положении 1 сахара наблюдается в виде минорного сигнала среди сигналов β-типа глюкозы.
Результаты анализа 1H-NMR красного пигмента (2) показаны на фигуре 13.
В случае красного пигмента (2), сигналы 'H-NMR наблюдаются при δ7.32 (1H, d1.5, A-6), δ7.40 (1H, d1.5, A-8), δ7.68 (2H, s, B-2', 6') и δ7.92 (1H, s, D-3'').
Пример 3. Подтверждение (присутствия) пигментных соединений в различных вариантах голубой розы
Присутствие соединений согласно настоящему изобретению подтверждается для различных вариантов голубой розы, отличных от такового из примера 1.
Получение варианта "WKS82", трансфицированного плазмидой pSPB130
Вариант "WKS82", трансфицированный плазмидой pSPB130, получают по способу, описанному ниже.
Антоцианы можно стабилизировать и придать им синий цвет путем модификации с помощью ароматической ацильной группы (см например, WO 96/25500). Проводят следующий эксперимент с целью получения ацилированного антоциана типа дельфинидина.
РНК получают из цветочных лепестков торении варианта «летняя волна» и далее из этой РНК получают поли-А РНК. Из этой поли-А РНК получают библиотеку кДНК с применением λZAPII (Stratagene) в качестве вектора с помощью набора для направленного получения библиотек (Stratagene) по способу, рекомендованному производителем. Поскольку основной антоциан торении имеет глюкозу в положении 5, модифицированную ароматической ацильной группой (Suzuki, et al., Molecular Breeding, 6, 239-246, 2000), антоцианинацилтрансфераза экспрессируется в цветочных лепестках торении.
Антоцианинацилтрансфераза имеет специфичную аминокислотную последовательность и ген антоцианинацилтрансферазы можно получить с применением синтетической ДНК, соответствующей ему, в качестве праймера (WO 96/25500). Более конкретно, ПЦР проводят в условиях, рекомендованных производителем, с применением 10 нг одноцепочечной кДНК, синтезированной при получении библиотеки кДНК из торении, в качестве матрицы, с применением 100 нг праймера АТС (см SEQ ID NO. 17 патентного документа 2) и 100 нг олиго-dT праймера (см SEQ ID NO. 18 патентного документа 2) в качестве праймеров и с применением Taq полимеразы (Takara, Japan).
ПЦР проводят за 25 циклов, состоящих из 1 мин при 95°С, 1 мин при 55°С и 1 мин при 72°С. Полученный фрагмент ДНК размеров примерно 400 bp выделяют с помощью GeneClean II (Bio 101 Inc.) по способу, рекомендованному производителем, и суб-клонируют в pCR-TOPO. После определения его нуклеотидной последовательности обнаружено, что последовательность гомологична таковой гена ацилтрансферазы японской горечавки (Fujiwara, et al., Plant J., 16, 421-431, 1998). Далее определяют нуклеотидную последовательность по способу с маркированными красителем праймерами (Applied Biosystems) с помощью установки Sequencer 310 или 377 (Applied Biosystems).
Этот фрагмент ДНК метят с помощью набора для определения метки DIG (Nippon Roche) и проводят скрининг библиотеки кДНК из торении с применением способа гибридизации бляшек, как описано производителем. Двенадцать из полученных клонов, проявляющих положительные сигналы, отбирают случайным образом и из клонов выделяют плазмиды с последующим определением нуклеотидной последовательности. Эти последовательности демонстрируют предпочтительную гомологию с геном антоцианинацилтрансферазы. Среди этих клонов полную нуклеотидную последовательность определяют для кДНК, содержащейся в клоне, называемом рТАТ7 (см SEQ ID NO. 7 патентного документа 2 для нуклеотидной последовательности и SEQ ID NO. 8 патентного документа 2 для аминокислотной последовательности).
pBE2113-GUS (Mitsuhara, et al, Plant Veil. Physiol., 37, 45-59, 1996) обрабатывают рестриктазой SacI с последующим получением тупых концов и вставкой линкера 8 bp XhoI. Фрагмент ДНК размеров примерно 1,7 kb, полученный путем обработки рТАТ7 рестриктазами BamHI и XhoI, вставляют в участки BamHI и XhoI этой плазмиды для получения pSPB120. pSPB120' получают путем обработки pSBP120 рестриктазами SanBI и BamHI с последующим получением тупых концов и лигированием. С другой стороны, плазмиду pCGP1961, содержащую полученную из анютиных глазок кДНК F3'5'H#40, полностью обрабатывают с помощью BamHI и затем частично обрабатывают с помощью XhoI, полученный фрагмент ДНК размеров примерно 1,8 kb DNA выделяют и лигируют с pUE5H, обработанной рестриктазами BamHI XhoI, и полученную плазмиду называют pUEBP40.
pUEBP40' получают путем обработки pEUBP40 с помощью SnaBI и BamHI с последующим получением тупых концов и лигированием. pUEBP40' частично обрабатывают с помощью HindIII и полученный фрагмент ДНК размеров примерно 2,7 kb DNA выделяют и лигируют с фрагментом ДНК, полученным путем частичной обработки pSPB120' с помощью HindIII. Среди полученных плазмид бинарный вектор, в котором ген неомицинфосфотрансферазы, ген F3'5'H#40, выделенный из анютиных глазок, и выделенный из торени ген 5АТ лигированы в таком порядке от правой границы бинарного вектора, называют pSPB130 (см фигуру 12). Эта плазмида создана для конститутивной экспрессии выделенного из анютиных глазок гена F3'5'H#40 и выделенного из торении гена 5АТ в растениях и специфичной транскрипции генов в цветочных лепестках. Эту плазмиду трансфицируют в Agrobacterium tumefaciens штамм Ag10. В результате инфицирования этим штаммом Agrobacterium pSPB130 (фиг.12) трансфицирует разновидность розово-лиловых роз "WKS82" с получением трансформированного растения. Трансформированные клетки затем регенерируют с получением рекомбинантного растения в виде голубой розы (вариант "WKS82", трансфицированный плазмидой pSPB130) и дают ему зацвести.
Экстракция, выделение, очистка и идентификация пигментных соединений
Экстракцию, выделение и очистку проводят с применением 230 г цветочных лепестков голубой розы, полученных по способу, описанному выше (вариант "WKS82", трансфицированный плазмидой pSPB130) по тому же способу, как описано в примере 1, для получения синего пигмента (1), красного пигмента (2) и синего пигмента (3).
Синий пигмент (1), красный пигмент (2) и синий пигмент (3) оценивают визуально на оттенок цвета. В результате они демонстрируют глубокий синий, глубокий красный и глубокий синий цвет, соответственно.
Дополнительно, с помощью масс-спектрометрии LC-TOF-MS подтверждают, что синий пигмент (1), красный пигмент (2) и синий пигмент (3), соответственно, представляют собой те же пигментные соединения, что и пигментные соединения, описанные в примере 1.
Промышленное применение
Согласно настоящему изобретению новый пигмент, присутствующий в цветочных лепестках голубых роз, экстрагирован, выделен и очищен и его химическая структура определена. Соединение впервые открытое в настоящем изобретении проявляет более синий цвет, чем розацианины, присутствующие, как известно, в обычных розах розово-лилового цвета. Соответственно, окраска цветов растения может быть изменена с помощью этого соединения, открытого в настоящем изобретении. Альтернативно, это соединение можно также применять для окрашивания пищи и напитков, например, с помощью растительного пигмента.
Claims (7)
1. Соединение следующей общей формулы (I)
где R1 представляет следующую группу:
(химическая формула 2)
и R2 представляет -ОН или R1 и R2 вместе образуют -O-, или R1 представляет следующую группу:
и R2 представляет -ОН, предоставленный таким образом, что связь (волнистая линия) гидроксильной группы в положении 1 глюкозы в R1 проявляет таутомерию между α-формой и β-формой.
где R1 представляет следующую группу:
(химическая формула 2)
и R2 представляет -ОН или R1 и R2 вместе образуют -O-, или R1 представляет следующую группу:
и R2 представляет -ОН, предоставленный таким образом, что связь (волнистая линия) гидроксильной группы в положении 1 глюкозы в R1 проявляет таутомерию между α-формой и β-формой.
2. Соединение следующей формулы:
3. Соединение следующей формулы:
4. Соединение следующей формулы:
5. Растение семейства Rosaceae, рода Rosa, содержащее соединение по любому из пп.1-4.
6. Растение по п.5, отличающееся тем, что оно представляет собой розу.
7. Срезанный цветок растения по п.5 или 6.
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009080524 | 2009-03-27 | ||
| JP2009-080524 | 2009-03-27 | ||
| JP2009115722 | 2009-05-12 | ||
| JP2009-115722 | 2009-05-12 | ||
| JP2009-173096 | 2009-07-24 | ||
| JP2009173096 | 2009-07-24 | ||
| PCT/JP2010/055262 WO2010110382A1 (ja) | 2009-03-27 | 2010-03-25 | 青いバラに含まれる新規化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011143378A RU2011143378A (ru) | 2013-05-10 |
| RU2507206C2 true RU2507206C2 (ru) | 2014-02-20 |
Family
ID=42781073
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011143378/04A RU2507206C2 (ru) | 2009-03-27 | 2010-03-25 | Новое соединение, содержащееся в голубой розе |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9057076B2 (ru) |
| EP (2) | EP2947083A1 (ru) |
| JP (3) | JP5099653B2 (ru) |
| KR (1) | KR101659525B1 (ru) |
| CN (1) | CN102365287A (ru) |
| AU (1) | AU2010228224B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI1009803A8 (ru) |
| CA (1) | CA2756087C (ru) |
| CO (1) | CO6430465A2 (ru) |
| EC (1) | ECSP11011356A (ru) |
| IL (1) | IL215359A0 (ru) |
| MX (1) | MX2011009991A (ru) |
| RU (1) | RU2507206C2 (ru) |
| TW (1) | TWI493033B (ru) |
| WO (1) | WO2010110382A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2949465A1 (en) * | 2014-05-19 | 2015-11-26 | Suntory Holdings Limited | Uses of rose pigment compounds |
| AU2020250337A1 (en) | 2019-03-29 | 2021-09-16 | Suntory Holdings Limited | LTBP-1 expression promoting composition and method for screening for substance having LTBP-1 expression promoting function |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002201372A (ja) * | 2000-09-29 | 2002-07-19 | Suntory Ltd | 植物色素化合物及びその利用 |
| WO2004020637A1 (en) * | 2002-08-30 | 2004-03-11 | International Flower Developments Pty. Ltd. | Flavonoid 3',5'hydroxylase gene sequences and uses therefor |
| EP1652916A1 (en) * | 2003-08-13 | 2006-05-03 | INTERNATIONAL FLOWER DEVELOPMENTS Proprietary Limited | Process for producing rose with modified color |
| WO2007011776A2 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Novartis Ag | Pamps, pathogen associated molecular patterns |
| WO2008156214A1 (ja) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボン及びデルフィニジンを含むバラ及びその生産方法 |
| WO2008156206A1 (ja) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボン及びマルビジンを含むバラ及びその生産方法 |
| WO2008156211A1 (ja) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボンを含むバラ及びその生産方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993001290A1 (en) * | 1991-07-11 | 1993-01-21 | International Flower Developments Pty. Ltd. | Genetic sequences encoding flavonoid pathway enzymes and uses therefor |
| JPH05184370A (ja) * | 1992-01-14 | 1993-07-27 | Kirin Brewery Co Ltd | フラボノイド水酸化酵素遺伝子 |
| JPH0970290A (ja) | 1995-02-17 | 1997-03-18 | Suntory Ltd | アシル基転移活性を有する蛋白質をコードする遺伝子 |
| AUPN298895A0 (en) * | 1995-05-16 | 1995-06-08 | International Flower Developments Pty Ltd | Transgenic plants exhibiting altered flower colour and methods for producing same |
| JP5285304B2 (ja) * | 2007-03-15 | 2013-09-11 | 石原産業株式会社 | ツユクサのフラボノイド３’，５’−水酸化酵素遺伝子 |
| CN101675161A (zh) | 2007-03-29 | 2010-03-17 | 国际花卉开发有限公司 | 表层嵌合体（surface chimera）转基因植物的培育方法 |
-
2010
- 2010-03-25 MX MX2011009991A patent/MX2011009991A/es active IP Right Grant
- 2010-03-25 RU RU2011143378/04A patent/RU2507206C2/ru active
- 2010-03-25 JP JP2011506120A patent/JP5099653B2/ja active Active
- 2010-03-25 AU AU2010228224A patent/AU2010228224B2/en active Active
- 2010-03-25 CA CA2756087A patent/CA2756087C/en active Active
- 2010-03-25 EP EP15164556.1A patent/EP2947083A1/en not_active Withdrawn
- 2010-03-25 CN CN2010800139531A patent/CN102365287A/zh active Pending
- 2010-03-25 US US13/259,749 patent/US9057076B2/en active Active
- 2010-03-25 BR BRPI1009803A patent/BRPI1009803A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2010-03-25 EP EP10756178A patent/EP2412715A4/en not_active Withdrawn
- 2010-03-25 WO PCT/JP2010/055262 patent/WO2010110382A1/ja active Application Filing
- 2010-03-25 KR KR1020117022593A patent/KR101659525B1/ko active IP Right Grant
- 2010-03-26 TW TW099109119A patent/TWI493033B/zh active
-
2011
- 2011-09-25 IL IL215359A patent/IL215359A0/en unknown
- 2011-09-27 CO CO11126046A patent/CO6430465A2/es active IP Right Grant
- 2011-09-27 EC EC2011011356A patent/ECSP11011356A/es unknown
-
2012
- 2012-08-02 JP JP2012172153A patent/JP5569822B2/ja active Active
-
2014
- 2014-06-11 JP JP2014120785A patent/JP5766334B2/ja active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002201372A (ja) * | 2000-09-29 | 2002-07-19 | Suntory Ltd | 植物色素化合物及びその利用 |
| WO2004020637A1 (en) * | 2002-08-30 | 2004-03-11 | International Flower Developments Pty. Ltd. | Flavonoid 3',5'hydroxylase gene sequences and uses therefor |
| EP1652916A1 (en) * | 2003-08-13 | 2006-05-03 | INTERNATIONAL FLOWER DEVELOPMENTS Proprietary Limited | Process for producing rose with modified color |
| WO2007011776A2 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Novartis Ag | Pamps, pathogen associated molecular patterns |
| WO2008156214A1 (ja) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボン及びデルフィニジンを含むバラ及びその生産方法 |
| WO2008156206A1 (ja) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボン及びマルビジンを含むバラ及びその生産方法 |
| WO2008156211A1 (ja) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボンを含むバラ及びその生産方法 |
| RU2463348C2 (ru) * | 2007-06-20 | 2012-10-10 | Сантори Холдингз Лимитед,Jp | Роза, содержащая флавон и мальдивин, и способ ее получения |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Fukui Y. Et al, "Two novel blue pigments with ellagitannin moiety, rosacyanins A1 and A2, isolated from the petals of Rosa hybrida", Tetrahedron, 2006, n.62, p.9661-9670. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2010228224B2 (en) | 2015-09-17 |
| TWI493033B (zh) | 2015-07-21 |
| CA2756087A1 (en) | 2010-09-30 |
| BRPI1009803A2 (pt) | 2015-08-25 |
| JP5569822B2 (ja) | 2014-08-13 |
| KR20120018741A (ko) | 2012-03-05 |
| KR101659525B1 (ko) | 2016-09-23 |
| EP2947083A1 (en) | 2015-11-25 |
| CN102365287A (zh) | 2012-02-29 |
| US9057076B2 (en) | 2015-06-16 |
| RU2011143378A (ru) | 2013-05-10 |
| ECSP11011356A (es) | 2011-11-30 |
| MX2011009991A (es) | 2011-12-08 |
| CA2756087C (en) | 2017-04-18 |
| AU2010228224A1 (en) | 2011-10-13 |
| JP2014210786A (ja) | 2014-11-13 |
| JP5766334B2 (ja) | 2015-08-19 |
| JPWO2010110382A1 (ja) | 2012-10-04 |
| BRPI1009803A8 (pt) | 2017-02-14 |
| JP2013014589A (ja) | 2013-01-24 |
| US20120011771A1 (en) | 2012-01-19 |
| IL215359A0 (en) | 2011-12-29 |
| TW201038736A (en) | 2010-11-01 |
| EP2412715A4 (en) | 2012-09-26 |
| JP5099653B2 (ja) | 2012-12-19 |
| WO2010110382A1 (ja) | 2010-09-30 |
| EP2412715A1 (en) | 2012-02-01 |
| CO6430465A2 (es) | 2012-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2537065C (en) | Method for producing rose with altered petal colors | |
| US7514597B2 (en) | Glycosyltransferase gene | |
| US8350125B2 (en) | Method for producing yellow flower by controlling flavonoid synthetic pathway | |
| KR101318414B1 (ko) | 수식된 안토시아닌을 꽃잎에 함유하는 국화 식물을 생산하는 방법 | |
| JP6782450B2 (ja) | 青系花色を有するキクの作出方法 | |
| RU2507206C2 (ru) | Новое соединение, содержащееся в голубой розе | |
| Selvaraj | Identification and characterization of genes involved in the fruit color development of European plums (Prunus domestica L.) | |
| MXPA06001621A (es) | Proceso para producir rosas con color modificado |