RU2261916C2 - Амикомицин, способ его получения и его применение в качестве фармацевтического средства - Google Patents
Амикомицин, способ его получения и его применение в качестве фармацевтического средства Download PDFInfo
- Publication number
- RU2261916C2 RU2261916C2 RU2002118116/13A RU2002118116A RU2261916C2 RU 2261916 C2 RU2261916 C2 RU 2261916C2 RU 2002118116/13 A RU2002118116/13 A RU 2002118116/13A RU 2002118116 A RU2002118116 A RU 2002118116A RU 2261916 C2 RU2261916 C2 RU 2261916C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amycomycin
- pharmaceutically acceptable
- amikomycin
- derivatives
- antibacterial activity
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 title claims 2
- VNFAKMBHDHVYLZ-HSTNYJNZSA-N (3E,5Z)-1-methyl-5-(2-methylpropylidene)-3-[(2E,20E,24E)-1,5,7,11,13,17,19,26,27,29,31,35,37,41,43-pentadecahydroxy-2,10,12,18,20,22,24,32,40,42,44-undecamethyl-23-oxopentatetraconta-2,20,24-trienylidene]pyrrolidine-2,4-dione Chemical compound CC(C)\C=C1/N(C)C(=O)\C(=C(\O)/C(/C)=C/CC(O)CC(O)CCC(C)C(O)C(C)C(O)CCCC(O)C(C)C(O)C(\C)=C\C(C)C(=O)C(\C)=C\C(O)C(O)CC(O)CC(O)C(C)CCC(O)CC(O)CCC(C)C(O)C(C)C(O)C(C)C)C1=O VNFAKMBHDHVYLZ-HSTNYJNZSA-N 0.000 title abstract 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims 3
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 19
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 abstract description 8
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 abstract description 8
- 108010053950 Teicoplanin Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 6
- DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N chembl2367892 Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(O)C=C(C=4)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CC=4C=C(Cl)C(O5)=CC=4)C(=O)N3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1Cl)=CC=C1OC1=C(O[C@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O3)NC(C)=O)C5=CC2=C1 DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N 0.000 abstract description 6
- 229960001608 teicoplanin Drugs 0.000 abstract description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 241001522168 Amycolatopsis sp. Species 0.000 abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 abstract description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 Fractogel® TSK HW-40 Chemical compound 0.000 description 6
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 5
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RUXHWBMJNBBYNL-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2-dihydropyrrol-5-one Chemical group OC1=CC(=O)NC1 RUXHWBMJNBBYNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000187643 Amycolatopsis Species 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N oxybenzone Chemical compound OC1=CC(OC)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 3-chloroperbenzoic acid Chemical compound OOC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- 244000066764 Ailanthus triphysa Species 0.000 description 1
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 239000012541 Fractogel® Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 1
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 208000037942 Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001464947 Streptococcus milleri Species 0.000 description 1
- 241001134658 Streptococcus mitis Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001429 cobalt ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004185 countercurrent chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000002000 high resolution fast-atom bombardment mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N methanol-d1 Chemical compound [2H]OC OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- AGPXPIZWMMLJPG-UHFFFAOYSA-N methylsulfomycin I Natural products COC1NC(=O)c2nc(oc2C)C(=C/C(C)O)NC(=O)C(NC(=O)c3csc(n3)c4ccc(nc4c5nc(oc5C)C(=C)NC(=O)C(=C)NC(=O)c6nc(oc6C)C(=C/C)NC(=O)c7csc1n7)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(=O)N)C(C)O AGPXPIZWMMLJPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028444 methylsulfomycin I Proteins 0.000 description 1
- AGPXPIZWMMLJPG-QJBUXTFLSA-N methylsulfomycin i Chemical compound N([C@H](C=1SC=C(N=1)C(=O)NC(/C1=NC(=C(O1)C)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C1=NC(=C(O1)C)C1=NC(=CC=C11)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(N)=O)=C\C)OC)C(=O)C(=C(O2)C)N=C2\C(=C/C(C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)C2=CSC1=N2 AGPXPIZWMMLJPG-QJBUXTFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pyrrole Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в медицине. Новое соединение амикомицин имеет молекулярную формулу С65Н115NO18 (структурная ф-ла приведена в формуле изобретения) и обладает противомикробной активностью. Амикомицин, его фармацевтически приемлемые соли и производные во всех их стереоизомерных и таутомерных формах могут быть получены культивированием микроорганизма Amycolatopsis sp., ST101170 (DSM 12216) в аэробных условиях в питательной среде, содержащей необходимые питательные компоненты, с последующим выделением и очисткой целевого продукта и, при необходимости, превращением его в фармакологически приемлемую соль, сложный эфир, простой эфир и другие химические эквиваленты, обладающие тем же спектром противомикробной активности. Амикомицин входит в качестве активного компонента в фармацевтическую композицию, обладающую противомикробной активностью. Амикомицин выполняет функцию антибиотика. Использование изобретения позволит ингибировать микроорганизмы, резистентные к ванкомицину и тейкопланину, используемые для лечения инфекций, вызываемых Staphylococcus aureus (MRSA). 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 табл.
Description
Данное изобретение относится к соединению под названием "амикомицин", которое может быть получено путем культивирования микроорганизма Amycolatopsis sp., ST 101170 (DSM 12216), и к его фармацевтически приемлемым солям и производным. Данное изобретение также относится к способу получения амикомицина, к применению амикомицина и его фармацевтически приемлемых солей и производных в качестве фармацевтических средств, в частности к их применению в качестве антибиотиков, а также фармацевтических композиций, включающих амикомицин, или его фармацевтически приемлемую соль, или производное.
Известно, что резистентные к метициллину инфекции Staphylococcus aureus (MRSA) преобладают при некоторых инфекционных состояниях, таких как раны и ожоги. Ванкомицин и тейкопланин, принадлежащие к классу гликопептидов, являются единственными двумя антибиотиками, применяемыми в клинике для лечения инфекций MRSA. Однако вследствие недавнего появления ванкомицин- и тейкопланин-резистентных штаммов сообщается, что данные инфекции стали угрожающими и смертельными. Поэтому был начат интенсивный поиск структурно иного класса соединений, активных против указанных ванкомицин- и тейкопланин-резистентных штаммов. Например, в качестве антибиотика, активного против ванкомицин- и тейкопланин-резистентных штаммов, ранее был описан (ЕР-А-0818539, поданная 11 июля, 1996 г.) метилсульфомицин I, циклический тиопептид.
Было обнаружено, что новое соединение под названием "амикомицин" обладает активностью антибиотика. Таким образом, настоящее изобретение относится к соединению формулы:
а также к его фармацевтически приемлемым солям и производным, таким как сложные эфиры, простые эфиры и другие очевидные химические эквиваленты, включая все стереоизомерные формы и все таутомерные формы.
Амикомицин имеет характерный остаток тетрамовой кислоты с высокоокисленной боковой цепью С45. Он имеет молекулярную формулу C65H115NO18 и может быть получен путем культивирования микроорганизма Amycolatopsis species ST101170 (DSM 12216) в аэробных условиях и питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим выделением и очисткой обычным образом. Микроорганизм ST101170 принадлежит к отряду Actinomycetales, род Amycolatopsis, и 4 июня 1998 г. он был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH), Braunschweig, Deutschland, и ему был присвоен порядковый номер DSM №12216.
Настоящее изобретение также предоставляет способ получения соединения под названием "амикомицин" из Amycolatopsis species ST101170, его мутантов и вариантов в аэробных условиях в питательной среде, содержащей один или несколько источников углерода и один или несколько источников азота и необязательно питательные неорганические соли и/или следовые элементы, с последующим выделением указанного соединения и очисткой обычным образом.
Мутанты и варианты микроорганизма ST101170 могут быть также способны синтезировать соединение в соответствии с настоящим изобретением. Такие мутанты могут быть получены известным образом с помощью физических средств, например облучением, таким как ультрафиолетовыми или рентгеновскими лучами, или с помощью химических мутагенов, таких как этилметилансульфонат (EMS), 2-гидрокси-4-метоксибензофенон (MOB) или N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин (MNNG).
Скрининг подходящих мутантов и вариантов, которые могут продуцировать соединение в соответствии с изобретением, может быть подтвержден определением биологической активности активных соединений, накопленных в культуральном бульоне, например испытанием антибактериального действия, в частности против ванкомицин-резистентных штаммов (см. таблицу 2 ниже).
Предпочтительными источниками углерода, подходящими для аэробной ферментации, являются ассимилируемые углеводные и сахарные спирты, такие как глюкоза, лактоза или D-маннит, а также углеводсодержащие природные продукты, такие как солодовый экстракт. Подходящие источники азота включают, например, аминокислоты, пептиды и белки, включая продукты их распада, такие как пептоны или триптоны, мясной экстракт, измельченные семена, например, кукурузы, белых бобов, сои или хлопковых растений, остатки дистилляции от получения спирта, мясную муку и дрожжевые экстракты, а также соли аммония и нитраты. Подходящими неорганическими солями, которые может содержать питательный раствор, являются, например, хлориды, карбонаты, сульфаты или фосфаты щелочных или щелочноземельных металлов, ионов цинка, кобальта или марганца.
Образование амикомицина происходит особенно хорошо, например, в питательной среде, включающей около 0,5-5% крахмала (растворимого), предпочтительно 1-2%, около 0,5-5% глюкозы, предпочтительно 1-3%, около 0,5-5% глицерина, предпочтительно 1-2%, около 0,1-0,5% кукурузного экстракта, предпочтительно 0,2-0,3%, около 0,2-1% пептона, предпочтительно 0,4-0,6%, около 0,1-0,5% дрожжевого экстракта, предпочтительно 0,2-0,4%, около 0,05-0,2% хлорида натрия, предпочтительно 0,1-0,2%, и около 0,1-0,5% СаСО3, предпочтительно 0,2-0,3%. Указанные количества приведены в расчете на массу всей питательной среды.
Культивирование ST101170 осуществляют аэробно, например, погружением с встряхиванием или перемешиванием в качалочных колбах или лабораторных ферментерах, необязательно с введением воздуха или кислорода. Культивирование ферментацией может осуществляться, например, в стерильных широкогорлых бутылях или круглодонных колбах различных объемов, в стеклянных ферментерах или емкостях из V2A-стали.
Культивирование ST101170 может осуществляться при температуре между примерно 20 и 35°С, предпочтительно примерно между 25 и 30°С, и рН между 4 и 10, предпочтительно между 6 и 8. При данных условиях микроорганизм культивируется в общем на протяжении периода времени 20-200 часов, предпочтительно 24-150 часов.
Культивирование преимущественно осуществляется в несколько стадий. Сначала в жидкой питательной среде могут быть получены одна или несколько предкультур. Основную культуру, фактическую производственную среду, затем инокулируют предкультурой, например, при объемном соотношении, составляющем 1:10. Предкультуру получают, например, инокулированием питательной среды мицелием со спорами и оставлением ее для роста в течение примерно от 20 до примерно 120 часов, предпочтительно 24-90 часов. Мицелий со спорами может быть получен, например, в результате роста микроорганизма в течение около 1 - около 40 дней, предпочтительно 5-12 дней, на твердой или жидкой питательной среде, такой как солодово-дрожжевой агар или картофельно-декстрозный агар.
Ход ферментации и образования амикомицина можно контролировать способами, известными специалистам, такими как измерение биологической активности культурального бульона с помощью биологических анализов, или хроматографическими методами, такими как тонкослойная хроматография (ТСХ) или высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).
Соединение амикомицин присутствует в фильтрате культуры, а также в мицелии. Однако обычно основное количество присутствует в мицелии. Соединение может быть выделено с применением известных приемов разделения. Так, оно может быть выделено из фильтрата культуры, например, фильтрованием или центрифугированием. Фильтрат может экстрагироваться несмешиваемым с водой растворителем, таким как 1-бутанол, этилацетат, хлороформ, дихлорметан или аналогичный, предпочтительно бутанол или этилацетат.
Активный материал также может выделяться из мицелия экстрагированием смешиваемым с водой растворителем, таким как метанол, ацетон, ацетонитрил, н-пропанол или изопропанол, предпочтительно метанол или ацетон, или несмешиваемым с водой растворителем, таким как трет-бутанол, этилацетат, хлороформ, дихлорметанол или аналогичный, предпочтительно бутанол или этилацетат.
Экстрагирование фильтрата культуры может осуществляться в широком интервале рН. Однако предпочтительно проводить экстрагирование в нейтральной или слабокислой среде, предпочтительно при рН между 4 и 9. Органический экстракт может концентрироваться в вакууме и сушиться, давая активный сырой материал.
Выделение или очистка амикомицина может осуществляться известным способом с учетом химических, физических и биологических характеристик природного соединения.
Одним из методов выделения амикомицина в соответствии с изобретением является распределение раствора известным per se образом.
Еще одним способом очистки амикомицина является хроматография на абсорбционных смолах, таких как Diaion® HP-20 (Mitsubishi Casei Corp., Tokyo), на Amberlite® XAD 7 (Rohm and Haas, USA), на Amberchrom® CG (Toso Haas, Philadelphia, USA), или на аналогичных смолах. Разделение может осуществляться в широком интервале рН. Интервал рН предпочтительно составляет от 1 до 9, более предпочтительно от 2 до 8. Подходящими являются также многочисленные подложки с обращенной фазой, например RP8 и RP18, такие как описаны в общем в контексте высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Следующая возможность очистки соединения в соответствии с изобретением состоит в использовании так называемых "хроматографических подложек с нормальной фазой", таких как силикагель или Al2O3 (окись алюминия), или другие, способом, известным per se. Для этого подходящими являются многие элюенты, такие как дихлорметан, хлороформ, метанол, этилацетат, ацетон, петролейный эфир, или их сочетания. рН можно варьировать, например, добавлением триэтиламина. Альтернативный способ выделения амикомицина заключается в использовании молекулярных сит, таких как Fractogel® TSK HW-40, Sephadex® LH-20 и другие, способом, известным per se. Кроме того, амикомицин можно также выделить из сырого материала с помощью кристаллизации. Для этого подходящими являются, например, органические растворители и их смеси, безводные или с добавлением воды.
Дополнительный способ выделения и очистки соединения в соответствии с изобретением включает применение анионообменников, предпочтительно в интервале рН от 7 до 10, и катионообменников, предпочтительно в интервале рН от 3 до 7. Особенно подходящим для данной цели является использование буферных растворов, к которым добавлены некоторые количества органических растворителей.
Возможным способом очистки дополнительно является противоточная хроматография с использованием двухфазной системы элюента, состоящей из двух и более растворителей, таких как вода, метанол, этанол, бутанол, изопропанол, ацетон, дихлорметан, этилацетат или петролейный эфир.
Амикомицин или его химические производные могут быть превращены в соответствующие фармакологически приемлемые соли способами, известными специалистам в данной области.
Фармакологически приемлемыми солями соединений согласно изобретению являются неорганические или органические соли, такие как описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (17. Edition, page 1418 (1985)). Возможными солями являются соли щелочных металлов, соли аммония, соли щелочноземельных металлов, соли с физиологически приемлемыми аминами и соли с неорганическими или органическими кислотами, такими как HCl, HBr, H2SO4, малеиновая кислота и фумаровая кислота.
Очевидными химическими эквивалентами соединений изобретения являются соединения с небольшими химическими различиями, но имеющие такую же или сходную активность, или которые могут превращаться в мягких условиях в соединения согласно изобретению. Примерами очевидных химических эквивалентов являются сложные эфиры, простые эфиры, аминопроизводные, комплексы или аддукты соединений или с соединениями согласно изобретению.
Сложные эфиры могут быть получены, например, взаимодействием амикомицина с карбоновыми кислотами в присутствии реагентов, таких как дициклогексилкарбодиимид (DCC), или обработкой соединения ацилирующим агентом, таким как хлорангидрид кислоты.
Простые эфиры могут быть получены, например, из амикомицина взаимодействием с алкилирующими агентами в основных условиях.
Другие способы получения сложных и простых эфиров описаны в литературе, например, в Advanced Organic Synthesis, 4th Edition, J. March, John Wiley & Sons., 1992.
Химические эквиваленты могут представлять собой стабильные комплексы с ионами металлов, например переходных металлов, таких как La3+, Sm3+, Eu3+, Gd3+, которые являются типичными для производных тетрамовой кислоты и могут быть получены способами, описанными в литературе (К. Tanaka et al., Chem. Pham. Bull. 1979, 27, 1901. К. Matsuo, Chem. Pharm. Bull. 1980, 28, 2494).
Двойные связи алкильной боковой цепи могут восстанавливаться способами, описанными в литературе, например, в Р. N. Rylander, "Hydrogenation Methods", Academic Press, New York (1985), Chpt. 2, или гидрогалогенироваться способами, описанными Н. О. House в "Modern Synthetic Reactions", W. A. Benjymin, Inc., New York (1972), pp.446-452. Гидроксилированные производные могут быть получены взаимодействием двойных связей с такими реагентами, как OsO4, как описано в литературе, например в Chem. Rev. 1980, 80, 187.
Производные могут также получаться с помощью превращения двойных связей в эпоксидные окислением, например, с применением МСРВА, как описано в Advanced Organic Synthesis, 4th Edition, J. March, John Wiley & Sons., 1992.
Амикомицин согласно изобретению имеет следующие физико-химические, а также спектроскопические характеристики:
Внешний вид: бесцветное твердое вещество, растворимое в метаноле, ДМСО, пиридине.
Молекулярная формула: C65H115NO18.
ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография):
Колонка: Purospher Star RP.18e (Merck), 55×4 мм, 3 мкм
Элюент: CH3CN/0,01% Н3PO4 (85%)
| Градиент: | Время (мин) | % СН3CN |
| 0,00 | 5,0 | |
| 3,00 | 95,0 | |
| 5,00 | 95,0 | |
| 6,00 | 5,0 | |
| 10,00 | 5,0 |
Скорость: 2 мл/мин
Температура: 40°С
Детектирование: 210 нм, 254, 280, 320, 380
tR: 2,67 мин
Молекулярная масса: 1198,64 Da
HR-FAB-MS: 1220,801187 [M+Na]+
1H и 13С-ЯМР: см. таблицу 1
УФ/VIS: МеОН, max(log)=229 нм (3,29), 281 (3,16)
| Таблица 1 Химический сдвиг амикомицина в MeOD при 300 К |
||
| 1H | 13С | |
| 1 | 0,86 | 14,76 |
| 2 | 0,97 | 20,83 |
| 3 | 1,89 | 31,20 |
| 4 | 3,41 | 82,20 |
| 5 | 1,70 | 39,55 |
| 6 | 0,77 | 13,63 |
| 7 | 3,54 | 80,19 |
| 8 | 1,65 | 36,32 |
| 9 | 0,86 | 12,71 |
| 10 | 1,43 | 31,20 |
| 11 | 1,44 | 36,46 |
| 12 | 3,75 | 71,98 |
| 13 | 1,62/1,54 | 44,79 |
| 14 | 3,74 | 72,22 |
| 15 | 1,58/1,37 | 36,46 |
| 16 | 1,63/1,14 | 29,27 |
| 17 | 1,51 | 40,69 |
| 18 | 0,90 | 15,70 |
| 19 | 3,70 | 72,90 |
| 27 | 1,51/1,46 | 42,12 |
| 28 | 4,07 | 66,31 |
| 29 | 1,52 | 42,12 |
| 30 | 3,80 | 72,54 |
| 31 | 4,33 | 73,26 |
| 32 | 6,62 | 142,18 |
| 33 | - | 138,47 |
| 34 | 1,83 | 12,75 |
| 35 | - | 206,04 |
| 36 | 4,21 | 41,00 |
| 37 | 1,14 | 17,77 |
| 38 | 5,36 | 128,37 |
| 39 | - | 138,72 |
| 40 | 1,69 | 12,75 |
| 41 | 3,98 | 80,54 |
| 42 | 1,64 | 41,25 |
| 43 | 0,88 | 8,02 |
| 44 | 3,59 | 73,88 |
| 45 | 1,49 | 36,46 |
| 46 | 1,62/1,32 | 23,50 |
| 47 | 1,55/1,32 | 33,34 |
| 48 | 3,80 | 75,09 |
| 49 | 1,74 | 42,71 |
| 50 | 0,77 | 11,92 |
| 51 | 3,41 | 77,87 |
| 52 | 1,61 | 36,46 |
| 53 | 0,86 | 12,75 |
| 54 | 1,55/1,32 | 31,37 |
| 55 | 1,61/1,44 | 36,46 |
| 56 | 3,77 | 71,83 |
| 57 | 1,67 | 44,53 |
| 58 | 3,92 | 71,12 |
| 59 | 2,30 | 37,54 |
| 60 | 5,84 (b) | ~131,7 (с) |
| 61 | - | (с) |
| 62 | 1,82 | 13,81 |
| 63 | - | (с) |
| 64 | - | (с) |
| 65 | 3,24 (b) | 27,91 |
| 66 | - | (с) |
| 67 | - | (с) |
| 68 | - | (с) |
| 69 | 5,50 (b) | ~119,3 (с) |
| 70 | 3,09 | 26,52 |
| 71 | 1,10 | 24,31 |
| 72 | 1,10 | 24,31 |
| b) Широкие сигналы c) Данные сигналы невидимы. С60 и С69 могут быть получены только с помощью спектра HMQC. |
||
Амикомицин имеет чрезвычайно высокую антибактериальную активность, особенно против грам-положительных бактерий, таких как, например, Staphylo- и Enterococcen. Минимальные ингибирующие концентрации Амикомицина против широкого ряда бактерий указаны ниже в таблице 2. В частности, данные штаммы в последнее время становятся все более проблемными, т.е. микроорганизмами, которые становятся устойчивыми к существующим антибиотикам. Превосходство данного соединения по сравнению с другими антибиотиками показано, например, при ингибировании ванкомицин- и тейкопланин-резистентных штаммов, таких как, например, Е.faecalis, E.faecium или Е.gallinarium.
| Таблица 2 Минимальная ингибирующая концентрация (мг/л) (испытания с микроразбавлениями) |
||||
| Грам-положительный штамм | Код | Амикомицин | Ванкомицин | |
| S.aureus | 011HT3 | oxa S ery S | 0,08 | 0,3 |
| S.aureus | 011HT18 | ATCC 13709 Smith | 0,08 | 0,3 |
| S.epidermidis | 012G020 | oxa S ery S tet R | 0,3 | 0,6 |
| S.aureus | 011HT1 | nov R | <=0,04 | 0,08 |
| S.aureus | 011DU5 | nov R tet R | 0,08 | 0,15 |
| S.aureus | 011CB20 | oxa R ery Rc tet R | 0,08 | 0,15 |
| S.aureus | 011G071 | ofl S oxa R ery S tet R | 0,15 | 0,6 |
| S.aureus | 011G064 | ofl R oxa R ery Re tet R | 0,3 | 1,2 |
| S. epidermidis | 012G042 | oxa R | 0,3 | 1,2 |
| Staph. coag. Negative | 012HT5 | ofl R oxa R tet R | 0,15 | 0,6 |
| S.aureus | 011GR91 | pri R oxa R ery R nov R | 1,2 | 1,2 |
| S.pyogenes | O2A1SJ1 | van S ery Rc | 0,3 | 0,15 |
| S.pyogenes | O2A1UC1 | van S ery Rc | 0,6 | 0,15 |
| S.pyogenes | O2A1F16 | ery R | 0,6 | 0,08 |
| Strepto gr.G | O2GOCB2 | tet R rif R nov R | 0,6 | 0,15 |
| S.pneumoniae | 030B12 | ery R | 0,15 | 0,15 |
| S.milleri | 02milGR12 | ery S van S | 1,2 | 0,3 |
| S.mitis | 02mitGR16 | ery Ri van S | 1,2 | 0,3 |
| E.faecium | 02D3AP9 | nov S van R ery S tei R | 0,6 | >40 |
| E.faecium | 02D3HT12 | tei R van R ery R tet R | 0,6 | >40 |
| Е.faecium. | O2D31P2 | tei R van R ery R tet R | не опр. | >40 |
| E.faecium | O2D3HM3 | nov S van A ery R tei R | 1,2 | >40 |
| E.gallinarium | O2DOHM8 | van С tet R ery S | 1,2 | >40 |
| E.faecalis | O2D2HM9 | nov R van В ery R tei S | 2,5 | >40 |
| E.faecalis | O2D2UC5 | ATCC 29212 nov R | 2,5 | 2,5 |
| E.faecalis | O2D2DU18 | tet R nov R | 1,2 | 0,3 |
| E.faecalis | O2D2HT10 | nov R van S tet R | 1,2 | 0,6 |
| Грам-отрицательный штамм | Код | |||
| E.coli | DB102501P5 | ery S fuc S nov S | не опр. | >40 |
| P.aeruginosa | 1771391НТ2 | >40 | >40 | |
| P.aeruginosa | 1771m391HT3 | мутант пермессивный | >40 | >40 |
Амикомицин и его фармацевтически приемлемые соли и производные могут быть введены животным, предпочтительно млекопитающим, в частности людям, в виде фармацевтических средств самих по себе, в смеси друг с другом и в виде фармацевтических композиций, позволяющих вводить их парентерально или иными способами. Соответственно, настоящее изобретение также относится к амикомицину и его фармацевтически приемлемым солям и производным для применения их в качестве фармацевтических средств, и к применению амикомицина и его фармацевтически приемлемых солей и производных для получения лекарственных средств, обладающих антибактериальной активностью. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество амикомицина и/или одну или несколько его фармацевтически приемлемых солей, и/или производных вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
Амикомицин может вводиться энтерально (перорально), парентерально (внутривенно или внутримышечно), ректально или локально (местное введение). Фармацевтические композиции, содержащие амикомицин или его фармацевтически приемлемую соль или производное с другими фармацевтически активными веществами, могут быть получены смешением активных соединений с одним или несколькими фармакологически переносимыми вспомогательными средствами и/или эксципиентами и превращением смеси в подходящую фармацевтическую форму, такую как растворы, порошки (таблетки, капсулы, включая микрокапсулы), мази (кремы или гели), липосомные препараты, липидные комплексы, коллоидальные дисперсии или суппозитории, подходящие для введения.
Возможными вспомогательными средствами и/или эксципиентами для готовых форм данного типа являются обычные фармацевтические жидкие или твердые наполнители и экстендеры, растворители, эмульгаторы, смазывающие агенты, вкусовые корригенты, красители и/или буферные вещества.
Как принято, галеновые готовые формы и способ введения, а также интервал доз, подходящих для конкретного случая, зависят от вида, против которого направлено лечение, и от тяжести соответствующего состояния или заболевания, и могут оптимизироваться с применением способов, известных в данной области. В качестве примера подходящей может быть доза 0,001-10 мг, предпочтительно 0,1-5 мг, более предпочтительно 1,0 мг, для массы тела приблизительно 75 кг. Доза должна быть, по крайней мере, достаточной для достижения желаемого эффекта.
Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, но не ограничивают его объем.
Пример 1
Получение посевного материала
100 мл питательного раствора (4 г/л дрожжевого экстракта, 15 г/л растворимого крахмала, 1 г/л К2HPO4, 0,5 г/л MgSO4×7Н2О, дополненные водой до 1000 мл, рН 7,0 до стерилизации) в стерильной колбе Эрленмейера инокулируют штаммом Amycolatopsis sp.(DSM 12216) и инкубируют в течение 5 дней при 28°С и 180 об./мин на роторной качалке. 1,5 мл данной культуры впоследствии разбавляют 1,5 мл 99% глицерина и хранят при 20°С.
Пример 2
Получение культуры или предкультуры Amycolatopsis sp., ST101170 (DSM 12216) в колбах Эрленмейера
Стерильную колбу Эрленмейера, содержащую 100 мл следующей питательной среды: 10 г/л раствора крахмала, 10 г/л глюкозы, 10 г/л глицерина 99%, 2,5 г/л кукурузного экстракта или жидкости, 5 г/л пептона, 2 г/л дрожжевого экстракта, 1 г/л NaCl и 3 г/л СаСО3, инокулируют полной петлей выращенной культуры (такой же питательный раствор, но с 2% агара) или 1 мл глицериновой культуры (см. пример 1) и инкубируют в шейкере при 180 об./мин и 28°C. Максимальное продуцирование соединения амикомицин достигается через 72 часа.
72-Часовой погруженной культуры (полученной в соответствии с описанным способом для шейкерной культуры, пример 1, но со следующей средой: 15 г/л глюкозы, 15 г/л соевой муки, 3 г/л СаСО3 и 5 г/л NaCl, pH 7,5) достаточно для инокуляции 10 и 200-л ферментеров с инокуляционным количеством 10%.
Пример 3
Получение соединения амикомицин
200-л ферментер эксплуатировался со следующими параметрами:
| Питательная среда: | 10 г/л крахмала |
| 10 г/л глюкозы | |
| 10 г/л глицерина 99% | |
| 2,5 г/л кукурузного экстракта | |
| 5 г/л пептона | |
| 2 г/л дрожжевого экстракта | |
| 7 г/л NaCl | |
| 3 г/л СаСО3 | |
| pH 7,2 (перед стерилизацией) | |
| Инокулюм: | 10% объема ферментера |
| Время инкубации: | 60-80 часов |
| Температура инкубации: | 28°С |
| Перемешивание: | 50 об./мин |
| Аэрация: | 150 л/мин |
Добавлением 1-2 мл этанольного раствора полиола можно ограничить образование пены. Максимальное продуцирование достигается через 69 часов.
Пример 4
Выделение соединения амикомицин
200 л раствора культуры, полученного в примере 3, центрифугируют и мицелий полностью экстрагируют метанолом. Метанольный экстракт концентрируют до соотношения приблизительно 1:10, получая бесцветный осадок, который отфильтровывают. Данную процедуру повторяют до тех пор, пока в фильтрате больше не будет обнаруживаться амикомицин (ВЭЖХ). Остаток лиофилизуют, а затем очищают с помощью ВЭЖХ:
1. Колонка: ®Fractogel TSK-HW 40 (4 л, 500×100 мм)
Элюент: МеОН
Скорость потока: 20 мл/мин
Детектирование: 204 и 236 нм
Фракции, обогащенные амикомицином, элюируются через 125 минут. Фракции сливают вместе на основании ВЭЖХ (указанные выше условия). Активные объединенные фракции с желаемым соединением концентрируют в вакууме и лиофилизуют.
Активное соединение амикомицин элюируется через 42 минуты. Фракции объединяют на основании ВЭЖХ (указанные выше условия). Активные объединенные фракции с желаемым соединением концентрируют в вакууме и лиофилизуют.
3. Колонка: ®Fractogel TSK-HW 40 (1 л, 500×50 мм)
Элюент: МеОН
Скорость потока: 5 мл/мин
Детектирование: 204 и 236 нм
Активный компонент амикомицин элюируется через 112 минут.
В соответствии с описанным выше процессом из 200 л ферментационного бульона может быть выделено 110 мг амикомицина.
Claims (7)
1. Амикомицин формулы
и его фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, простые эфиры и другие очевидные химические эквиваленты во всех их стереоизомерных и таутомерных формах.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что используется в качестве фармацевтического средства.
3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что используется в качестве антибиотика.
4. Амикомицин молекулярной формулы C65H115NO18, обладающий противомикробной активностью, полученный культивированием микроорганизма Amycolatopsis species, ST101170 (DSM 12216) в аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим выделением и очисткой обычным способом, и его фармацевтически приемлемые соли и производные во всех их стереоизомерных и таутомерных формах.
5. Способ получения соединения по п.1 или 2, включающий культивирование микроорганизма Amycolatopsis species, ST 101170 (DSM 12216) в аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим выделением и очисткой соединения.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что он включает дополнительную стадию превращения полученного целевого продукта в фармакологически приемлемую соль, сложный эфир, простой эфир и другие очевидные химические эквиваленты, обладающие противомикробной активностью.
7. Фармацевтическая композиция, обладающая противомикробной активностью, включающая эффективное количество соединения по п.1 или 2, и/или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира, простого эфира или другого очевидного химического эквивалента, и фармацевтически приемлемый носитель.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99124456.7 | 1999-12-08 | ||
| EP99124456A EP1106604A1 (en) | 1999-12-08 | 1999-12-08 | Amycomycin, a process for its production and its use as a pharmaceutical |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002118116A RU2002118116A (ru) | 2004-02-27 |
| RU2261916C2 true RU2261916C2 (ru) | 2005-10-10 |
Family
ID=8239554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002118116/13A RU2261916C2 (ru) | 1999-12-08 | 2000-11-25 | Амикомицин, способ его получения и его применение в качестве фармацевтического средства |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6642391B2 (ru) |
| EP (2) | EP1106604A1 (ru) |
| JP (1) | JP4750993B2 (ru) |
| KR (1) | KR100728514B1 (ru) |
| CN (1) | CN1217929C (ru) |
| AT (1) | ATE298744T1 (ru) |
| AU (1) | AU781398B2 (ru) |
| BR (1) | BR0016223A (ru) |
| CA (1) | CA2393518C (ru) |
| CZ (1) | CZ294370B6 (ru) |
| DE (1) | DE60021109T2 (ru) |
| DK (1) | DK1237866T3 (ru) |
| EE (1) | EE05219B1 (ru) |
| ES (1) | ES2243332T3 (ru) |
| HK (1) | HK1048998A1 (ru) |
| HR (1) | HRP20020497B1 (ru) |
| HU (1) | HU225194B1 (ru) |
| IL (2) | IL149904A0 (ru) |
| ME (1) | MEP28508A (ru) |
| NO (1) | NO322565B1 (ru) |
| PL (1) | PL201809B1 (ru) |
| PT (1) | PT1237866E (ru) |
| RS (1) | RS50288B (ru) |
| RU (1) | RU2261916C2 (ru) |
| SI (1) | SI1237866T1 (ru) |
| SK (1) | SK286776B6 (ru) |
| WO (1) | WO2001042210A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200204420B (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102417919B (zh) * | 2011-09-02 | 2017-05-24 | 山东鲁抗医药股份有限公司 | 一种发酵法生产高纯度替考拉宁的方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8700513D0 (en) * | 1987-01-09 | 1987-02-11 | Pfizer Ltd | Antibiotics produced by fermentation |
| CA2016382A1 (en) * | 1989-05-12 | 1990-11-12 | Marvin M. Hoehn | A59770 antibiotics |
| JPH05163289A (ja) * | 1991-08-27 | 1993-06-29 | Microbial Chem Res Found | 新規な免疫抑制物質、ｍｉ７１０−５１ｆ６物質およびその製造法 |
| JPH05286990A (ja) * | 1992-04-08 | 1993-11-02 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 新規マクロライド抗生物質および微生物変換を利用したマクロライド抗生物質の製造法 |
| JP3107455B2 (ja) * | 1992-05-08 | 2000-11-06 | 財団法人微生物化学研究会 | 新規抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ及びその製造方法 |
| JPH05317068A (ja) * | 1992-05-14 | 1993-12-03 | Kaiyo Bio Technol Kenkyusho:Kk | 抗生物質マグネシジンの一成分の選択的製造法 |
| JPH0733736A (ja) * | 1993-07-26 | 1995-02-03 | Microbial Chem Res Found | 新規抗生物質アジセマイシンｂおよびその製造方法 |
| JPH09157266A (ja) * | 1995-12-04 | 1997-06-17 | Microbial Chem Res Found | 新規抗生物質エポキシキノマイシンａおよびｂとその製造法 |
| EP0816539A1 (de) | 1996-07-05 | 1998-01-07 | Maschinenfabrik Rieter Ag | Verfahren und Vorrichtung zur Produktionssteuerung an einer Karde |
| JPH1045738A (ja) * | 1996-07-29 | 1998-02-17 | Microbial Chem Res Found | 抗生物質エポキシキノマイシンｃおよびｄとその製造法ならびに抗リウマチ剤 |
| JPH10114777A (ja) * | 1996-10-09 | 1998-05-06 | Microbial Chem Res Found | 抗生物質スピロキシマイシンとその製造法 |
-
1999
- 1999-12-08 EP EP99124456A patent/EP1106604A1/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-11-25 PT PT00983165T patent/PT1237866E/pt unknown
- 2000-11-25 ME MEP-285/08A patent/MEP28508A/xx unknown
- 2000-11-25 PL PL355627A patent/PL201809B1/pl unknown
- 2000-11-25 RS YUP-131/02A patent/RS50288B/sr unknown
- 2000-11-25 CA CA002393518A patent/CA2393518C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-25 DK DK00983165T patent/DK1237866T3/da active
- 2000-11-25 SK SK787-2002A patent/SK286776B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-11-25 IL IL14990400A patent/IL149904A0/xx active IP Right Grant
- 2000-11-25 AT AT00983165T patent/ATE298744T1/de active
- 2000-11-25 BR BR0016223-0A patent/BR0016223A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-11-25 HU HU0203593A patent/HU225194B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-11-25 ES ES00983165T patent/ES2243332T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-25 DE DE60021109T patent/DE60021109T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-25 KR KR1020027007292A patent/KR100728514B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-11-25 AU AU20019/01A patent/AU781398B2/en not_active Ceased
- 2000-11-25 SI SI200030729T patent/SI1237866T1/xx unknown
- 2000-11-25 CZ CZ20021891A patent/CZ294370B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-11-25 WO PCT/EP2000/011752 patent/WO2001042210A1/en active IP Right Grant
- 2000-11-25 EP EP00983165A patent/EP1237866B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-25 EE EEP200200280A patent/EE05219B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-11-25 RU RU2002118116/13A patent/RU2261916C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-11-25 JP JP2001543511A patent/JP4750993B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-25 CN CN008135207A patent/CN1217929C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-12-07 US US09/730,844 patent/US6642391B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-05-29 IL IL149904A patent/IL149904A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 ZA ZA200204420A patent/ZA200204420B/xx unknown
- 2002-06-05 NO NO20022654A patent/NO322565B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-06-06 HR HR20020497A patent/HRP20020497B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-02-18 HK HK03101176A patent/HK1048998A1/xx not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЕГОРОВ Н.С. Основы учения об антибиотиках, М.: Высшая школа, 1986. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4946941A (en) | Novel glycopeptide antibiotics | |
| US6387943B1 (en) | Vancoresmycin, a process for its production and its use as a pharmaceutical | |
| RU2261916C2 (ru) | Амикомицин, способ его получения и его применение в качестве фармацевтического средства | |
| US5939399A (en) | Polyene antibiotics, 3874 H1 to H6, processes for their preparation and use | |
| US20020055465A1 (en) | Nocathiacin antibiotics prepared by biotransformation or chemical methods | |
| RU2221870C2 (ru) | Мумбайстатин, способ его получения и его применение в качестве фармацевтического препарата | |
| CA2047997C (en) | Antibiotic, balhimycin, a process for its production and its use as pharmaceutical | |
| US6500936B2 (en) | Pluraflavins and derivatives thereof, process for their preparation and use thereof | |
| US5994307A (en) | Methods of treatment with novel antibiotic feglymycin | |
| EP0818539A1 (en) | Methylsulfomycin I, a process for its production and its use | |
| US7148254B2 (en) | 2-Phenylbenzofuran derivatives, a process for preparing them, and their use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171126 |