RU2001118287A

RU2001118287A - Композиции и способ для выделения нуклеиновых кислот из любых комплексных исходных материалов и последующий комплексный генный анализ

Info

Publication number: RU2001118287A
Application number: RU2001118287/13A
Authority: RU
Inventors: Тимо ХИЛЛЕБРАНД; Петер Бендцко
Original assignee: Инвитек Гмбх
Priority date: 1998-12-04
Filing date: 1999-07-23
Publication date: 2003-07-27

Claims

1. Композиции без хаотропных компонентов для выделения нуклеиновых кислот путем связывания с твердой фазой, в особенности ДНК, из любых комплексных исходных материалов, содержащие буферную систему для лизиса/связывания, которая включает по меньшей мере один антихаотропный солевой компонент; твердую фазу; буферы для промывки и элюирования.

2. Композиции по п. 1, отличающиеся тем, что антихаотропным компонентом является соль аммония, цезия, натрия и/или калия, предпочтительно хлорид аммония.

3. Композиции по п. 1 или 2, отличающиеся тем, что буферная система для лизиса/связывания содержит детергенты и, в случае необходимости, добавки.

4. Композиции по п. 3, отличающиеся тем, что детергентами и добавками являются трис-HCl, ЭДТУ, поливинилпирролидон, СТАВ, тритон Х-100, N-лаурилсаркозин, цитрат натрия, DTT, додецилсульфат натрия и/или твин.

5. Композиции по любому из пп. 1-4, отличающиеся тем, что буферная система для лизиса/связывания для связывания с твердой фазой содержит спирт.

6. Композиции по любому из пп. 1-5, отличающиеся тем, что буферная система для лизиса/связывания содержит ферменты, предпочтительно ферменты, расщепляющие протеин.

7. Композиции по любому из пп. 1-6, отличающиеся тем, что буферная система для лизиса/связывания находится в виде водного раствора.

8. Композиции по любому из пп. 1-6, отличающиеся тем, что буферная система для лизиса/связывания находится в виде твердой, устойчивой при хранении композиции в готовых для использования реакционных сосудах.

9. Композиции по любому из пп. 1-8, отличающиеся тем, что в качестве твердой фазы служат все носители, используемые для выделения с помощью хаотропных реагентов, предпочтительно стекловолокнистые прочесы, стеклянные мембраны, стекла, цеолиты, керамические изделия, кремнийсодержащие носители.

10. Композиции по любому из пп. 1-8, отличающиеся тем, что в качестве твердой фазы служат носители, обладающие отрицательно функционализированной поверхностью или имеют функционализированные поверхности, которые можно переводить в отрицательный потенциал заряда.

11. Композиции по п. 10, отличающиеся тем, что поверхность носителя модифицирована с помощью ацетильной группы, карбоксильной группы или гидроксильной группы.

12. Способ выделения нуклеиновых кислот, в особенности ДНК, из любых комплексных исходных материалов при использовании композиций по любому из п.п. 1-9, отличающийся тем, что лизируют исходный материал; осуществляют связывание нуклеиновых кислот с твердой фазой; промывают связанные с носителем нуклеиновые кислоты и осуществляют элюирование нуклеиновых кислот.

13. Способ выделения нуклеиновых кислот по п. 12, отличающийся тем, что содержащий ДНК материал вводят в контакт с буферной системой для лизиса/связывания, включающей водный раствор, содержащий антихаотропный солевой компонент, по меньшей мере один детергент, в случае необходимости, добавки, а также, в случае необходимости, протеолитический фермент; и с твердой фазой, в случае необходимости, при добавлении спирта; затем промывают и нуклеиновую кислоту отделяют от твердой фазы путем растворения.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что исходными материалами являются компактные растительные материалы, как плоды, семена, листья, иглы и т.д.; клинически релевантные образцы, как цельная кровь, ткань, микробиоптаты, парафинированные материалы, пробы эндоскопической холангиопанкреатографии, тупферный материал мазков; пищевые продукты, как рыба, колбаса, консервы, молоко; образцы для судебно-медицинской экспертизы, как корни волос, окурки, следы крови, и другие образцы, которые содержат ДНК.

15. Способ по любому из пп. 12-14, отличающийся тем, что ионные силы антихаотропных солей для лизиса/связывания составляют 0,1-8 М.

16. Способ выделения нуклеиновых кислот, в особенности ДНК, из любых комплексных исходных материалов при использовании композиций по любому из пп. 1-8 и 10-11, отличающийся тем, что исходный материал по осуществляемому "в одной пробирке", соответственно, одностадийному способу вводят в контакт с отрицательно функционализированной поверхностью или поверхностью, которая химически модифицирована так, что ее можно переводить в отрицательный потенциал заряда, и лизируют; осуществляют связывание нуклеиновой кислоты с поверхностью; связанную нуклеиновую кислоту промывают и, в случае необходимости, элюируют.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что отрицательно функционализированными поверхностями являются соответственно модифицированные планарные поверхности, фильтровальные мембраны, обычные пластиковые сосуды или микробиологические планшеты.

18. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что нуклеиновую кислоту затем в той же реакционной смеси подвергают реакции амплификации выбранного участка последовательности и, в случае необходимости, затем там же осуществляют анализ последовательностей генов.

19. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что нуклеиновую кислоту затем в той же реакционной смеси гибридизируют или секвенируют.

20. Применение антихаотропных компонентов в буферной системе для лизиса/связывания для выделения и очистки нуклеиновых кислот при связывании с твердой фазой.

21. Применение по п.20, отличающееся тем, что антихаотропными компонентами являются соли аммония, цезия, натрия и/или калия, предпочтительно хлорид аммония.

22. Применение по п. 20 или 21, отличающееся тем, что для лизиса/связывания используют антихаотропные соли с ионной силой 0,1-8 М.

23. Применение по любому из пп. 20-22, отличающееся тем, что буферную систему для лизиса/связывания используют в виде водного раствора.

24. Применение по любому из пп. 20-22, отличающееся тем, что буферная система для лизиса/связывания находится в виде твердой, устойчивой при хранении композиции.

25. Применение по любому из пп. 20-24 для препаративного выделения и очистки ДНК для использования в генной терапии.