RS49928B - Derivati eritropoetina - Google Patents
Derivati eritropoetinaInfo
- Publication number
- RS49928B RS49928B YUP-407/00A YUP40700A RS49928B RS 49928 B RS49928 B RS 49928B YU P40700 A YUP40700 A YU P40700A RS 49928 B RS49928 B RS 49928B
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- glycoprotein
- sequence
- erythropoietin
- conjugate
- group
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Virology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Konjugat, naznačen time što obuhvata eritropoetin glikoprotein koji ima najmanje jednu slobodnu amino grupu i ispoljava in viva biološku aktivnost uzrokovanja povećane produkcije retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži i izabran je iz grupe koja se sastoji od humanog eritropoetina i humanog eritropoetina modifikovanog adicijom od 1 do 6 mesta glikozilacije ili rearanžmanom najmanje jednog mesta glikozilacije; pri čemu je navedeni glikoprotein kovalentno vezan za"n" poli(etilen glikol) grupe formule-CO-(CH2)X-(OCH2CH2)m –OR s tim da -CO svake poli(etilen glikol) grupe formira amidnu vezu sa jednom od navedenih amino grupa; gde R je C1-C6-alkil x je 2 ili 3; m je od 450 do 900; n je od 1 do 3; I n i m su izabrani tako da molekulska težina konjugata bez eritropoetin glikoproteina iznosi od 20 kilodaltona do 100 kilodaltona. Prijava ima 5 nezavisnih i 19 zavisnih zahteva.
Description
OSNOVA PREDMENTOG PRONALASKA
Eritropoeza predstavlja proces nastanka crvenih krvnih zrnaca, koji se dešava kako bi se kompenzovao gubitak ovih ćelija usleđ destrukcije. Eritropoeza je kontrolisani fiziološki mehanizam koji obezbeđuje dovoljan broj eritrocita za adekvatnu oksigenaciju tkiva. Prirodni humani eritropoetin (hEPO), koji nastaje u bubrezima je humoralni faktor plazme koji stimuliše produkciju crvenih krvnih zrnaca (Carnot P. i Deflandre C (1906) C.R. Acad Sci. 143: 432, Erslev AJ (1953Blood8:349; Reissmann, KR (1950) Blood 5:372; Jacobson, LO, Goldwasser, E., Freid, W. i Plzak, LF. (1957) Nature 179: 6331-4). Prirodni EPO stimuliše deobu i diferencijaciju predodređenih eritroidnih progenitorskih ćelija u koštanoj srži i ostvaruje svoju fiziološku aktivnost vezujući se za receptore na eritroidnim prekursorima (Krantz, BS. (1991) Blood 77: 419).
Eritropoetin je proizveden biosintetički, primenom tehnologije rekombinantne DNK (Egrie, JC, Strickland, TW, Lane J. i sar. (1986) Immunobiol. 72: 213-224) i to je proizvod kloniranog humanog EPO gena ugrađenog i eksprimiranog ćelijama ovarijalnog tkiva kineskog hrčka (CHO ćelije). Primarna struktura preovladavajuće, potpuno obrađene forme hEPO ilustrovana je u SEQ ID NO:l. Postoje dva disulfidna mosta između Cys<7->Cys'<61>i Cys<2>9-Cys3<3>. Molekulska težina polipeptidnog lanca EPO, bez ugljeno-hidratnog dela, iznosi 18 236 D. U intaktnom EPO molekulu, oko 40% molekulske težine otpada na ugljeno-hidratne grupe koje glikolizuju protein na mestima glikolizacije (Sasaki, H, Bothner, B, Dell, A. i Fukuda, M. (1987) J. Biol. Chem. 262: 12059).
S obzirom daje eritropoetin neophodan za formiranje crvenih krvnih ćelija, ovaj hormon se može primeniti u terapiji poremećaja krvi koji se odlikuju smanjenom ili defektnom produkcijom eritrocita. Klinički, EPO se primenjuje u terapiji anemija kod pacijenata koji boluju od hronične renalne insuficijencije (CRF)
(Eschbach, JW, Egri, JC, Dovvning, MR i sar. (1987) NEJM 316: 73-78; Eschbach, JW, Abdulhadi, MH, Browne, JK, i sar. (1989) Ann. Intern. Med. 111: 992; Egrie, JC, Eschbach, JW, McGuire, T, Adamson, JW (1988) Kidney Intl. 33: 262; Lim, VS, Degowin, RL, Zavala, D i sar. (1989) Ann. Intern. Med. 110: 108-114), kao i kod pacijenata od AIDS i kancera koji primaju hemoterapiju (Danna, RP, Rudnick, SA, Abels, RI, U: MB Garnick , ur. Erythropoietin in Clinical Applications - An International Perspective. New York, NY: Marcel Dekker; 1990: str. 301-324). Ipak, biološka dostupnost komercijalnih proteinskih terapeutika kao što je EPO ograničena je njihovim kratkim polu-životom u plazmi i usled podložnosti degradaciji proteazama. Ove mane onemogućavaju im da postignu maksimalnu kliničku potenciju.
SAŽETAK PREDMETNOG PRONALASKA
Predmetni pronalazak obezbeđuje konjugat eritropoetina, koji konjugat sadrži eritropoetin glikoprotein sa najmanje jednom slobodnom amino-grupom i koji ispoljavain vivobiološku aktivnost koja uzrokuje povećanje produkcije retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži, pri čemu je konjugat izabran iz grupe koja se sastoji od humanog eritropoetina i njegovih analoga, koji poseduju sekvencu humanog eritropoetina modifikovanog adicijom od jednog do šest mesta glikolizacije ili rearanžmanom najmanje jednog mesta glikolizacije; pri čemu je glikoprotein kovalentno vezan za "n" poli(etilen glikol) grupe formule CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, u kojoj -CO (tj. karbonil) svake poli(etilen glikol) grupe formira amidnu vezu sa jednom od navedenih amino-grupa; gde je R niži alkil; x je 2 ili 3; m je od oko 450 do 900; nje od 1 do 3; a n i m se biraju tako da molekulska težina konjugata bez glikoprotein eritropoetina iznosi od 20 kilodaltona do 100 kilodaltona. Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje kompozicije koje sadrže ovde opisane konjugate u kojima je procentni sastav konjugata u kompoziciji u kojoj je n jednako 1 najmanje 90 procenata.
U poređenju sa nemodifikovanim EPO (tj. EPO bez vezanog PEG) i konvencionalnim PEG-EPO konjugatima, predmetni konjugati imaju povećani polu-život u cirkulaciji i vreme zadržavanja u plazmi, smanjeni klirens i povećanu kliničku aktivnostin vivo.Konjugati iz predmetnog pronalaska imaju istu primenu kao EPO. Konkretno, konjugati iz predmetnog pronalaska se primenjuju u tretmanu pacijenata, stimulisanjem deoba i diferencijacije predodređenih eritroidnih progenitroskih ćelija u koštanoj srži, na isti način kao što se EPO primenjuje u tretmanu pacijenata.
DETALJAN OPIS PREDMETNOG PRONALSKA
Predmetni pronalazak obezbeđuje konjugate, koji konjugati sadrže eritropoetin glikoprotein sa najmanje jednom slobodnom amino grupom i sa biološkom aktivnošćuin vivokoja uzrokuje povećanu produkciju retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži, a izabrani su iz grupe koja se sastoji od humanog eritropoetina i njegovih analoga koji poseduju sekvencu humanog eritropoetina modifikovanu adicijom od 1 do 6 mesta glikolizacije ili rearanžiranjem najmanje jednog mesta glikolizacije; pri čemu je pomenuti glikoprotein kovalentno vezan za "n" poliCetilen glikol) grupe formule - CO-(CH2),-(OCH2CH2)«-OR, pri čemu je - CO (tj. karbonil) svake poli(etilen glikol) grupe formira amidnu vezu sa jednom od amino grupa; gde je R niži alkil; x je 2 do 3; m je od oko 450 do 900; nje od 1 do 3; a n i m su izabrani tako da molekulska težina konjugata bez eritropoetin glikoproteina iznosi od 20 do 100 kilodaltona.
Uočeno je da se konjugati iz predmetnog pronalaska mogu primeniti na isti način kao nemodifikovani EPO. Ipak, konjugati predmetnog pronalaska imaju povećani polu-život u cirkulaciji i vreme zadržavanja u plazmi, smanjeni klirens i povećanu kliničku aktivnostin vivo.Zbog ovih boljih svojstava, konjugati iz predmetnog pronalaska mogu se primenjivati jednom nedeljno, umesto tri puta nedeljno, kao što je to slučaj sa nemodifikovanim EPO. Očekuje se da smanjena učestalost primene rezultira povećanom saradnjom pacijenata, što uslovljava bolji rezultat tretmana, kao i poboljšanje kvaliteta života pacijenata. Upoređivanjem sa konvencionalnim EPO vezanim za poli(etilen glikol), utvrđeno je da konjugati sa molekulskom težinom i veznom strukturom konjugata iz predmetnog pronalaska imaju povećanu potenciju, stabilnost, AUC, polu-život u cirkulaciji i ekonomičnost.
Konjugati u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu se dati pacijentima u terapeutski efektivnoj količini na isti način kako se primenjuje EPO. Terapeutski efektivna količina je količina konjugata neophodna zain vivobiološku aktivnost koja uzrokuje povećane produkcije retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži. Tačna količina konjugata je stvar izbora i zavisi od faktora kao što su precizan tip stanja koje se tretira, stanje pacijenta koji se tretira, kao i drugi sastojci kompozicije. Na primer, može se primeniti 0.01 do 10 p.g po kilogramu telesne težine, poželjno 0.1 do 1 |Ag po kilogramu telesne težine, na primer jednom nedeljno.
Farmaceutske kompozicije koje sadrže konjugate mogu se formulisati u jačini koja je efikasna za različite načine primene pacijentima koji boluju od poremećaja krvi koji se karakterišu niskom ili defektnom produkcijom eritrocita. Prosečne terapeutski efektivne količine konjugata mogu varirati i trebalo bi da budu zasnovane na preporuci ili receptu kvalifikovanog lekara.
Proizvodi eritropoetin glikoproteini pripremljeni u skladu sa ovim pronalaskom mogu se pripremiti u obliku farmaceutskih kompozicija pogodnih za injekciju sa farmaceutski pogodnim nosačem, primenom metoda poznatih u nauci. Na primer, odgovarajuće kompozicije opisane su u WO97/09996, WO97/40850, WO98/58660 i WO99/07401. Među poželjnim farmaceutski prihvatljivim nosačima za formulisanje proizvoda iz predmetnog pronalaska su humani serum albumin, humani proteini plazme, itd. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se pripremiti u 10 mM natrij um/kalij um fosfatnom puferu na pH 7, koji sadrži tonični agens, na primer, 132 mM natrijum hlorid. Po izboru, farmaceutske kompozicije mogu sadržati konzervans. Farmaceutske kompozicije mogu sadržati različite količine eritropoetina, na primer, 10 - 1000 ug/ml, na primer, 50 ug ili 400 ug.
Termin "eritropoetin" ili "EPO" odnosi se na glikoprotein sa amino kiselinskom sekvencom publikovanom u (SEQ ID NO:l) ili (SEQ ID NO: 2) ili amino kiselinskom sekvencom koja je njima suštinski homologa, čija se biološka svojstva odnose na stimulaciju produkcije eritrocita i na stimulaciju deobe i diferencijacije predodređenih eritroiđnih progenitora u koštanoj srži. Kao što je ovde primenjeno, ovi termini uključuju namerno mođifikovane proteine, na primer, mutagenezom usmerenom prema određenom mestu na proteinu (engl. site-đirected mutagenesis) ili mođifikovane slučajnim mutacijama. Ovi termini takođe obuhvataju analoge koji sadrže od 1 do 6 dodatnih mesta glikolizacije, analoge sa najmanje jednom dodatnom amino-kiselinom na karboksi kraju glikoproteina, pri čemu dodatna amino kiselina sadrži najmanje jedno mesto glikolizacije, i analoge sa amino kiselinskom sekvencom koja sadrži rearanžman najmanje jednog mesta glikolizacije. Ovi termini obuhvataju kako prirodni, tako i rekombinantno proizvedeni humani eritropoetin.
Konjugati eritropoetina iz predmetnog pronalaska mogu se predstaviti Formulom 1:
u kojoj su x, m, n i R kao Što je gore opisano. U Formuli I, P je ostatak glikoproteina eritropoetina već opisanog (tj. bez amino grupe ili amino grupa koje formiraju amidnu vezu sa karbonilom pokazanim u Formuli I), koji ispoljavain vivobiološku aktivnost, koja uzrokuje povećanu produkciju retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži.
U poželjnom obliku izvođenja predmetnog pronalaska R je metil grupa. Poželjno je da je m od oko 650 do oko 750, a n je poželjno 1.
U najpoželjnijem obliku izvođenja predmetnog pronalaska, R je metil grupa, m je od oko 650 do oko 750, a nje 1, tj konjugat, kao što je već opisan ima formulu
[CH3O(CH2CH20)mCH2CH2CH2C0-NH]n-P
gde je m od oko 650 do 750, nje 1, a P je kao Što je gore opisano. Poželjno je da je prosečna vrednost m oko 680.
Poželjno je daje prethodno đefinisani glikoprotein konjugata, humani eritropoetin. Humani eritropoetin i njegovi analozi, kao što je to ovde opisano, mogu biti eksprimirani aktivacijom endogenog gena. Poželjni humani eritropoetin glikoproteini su oni sa SEQ ID NO:l i SEQ ID NO:2, najpoželjniji sa sekvencom
SEQ ID NO:l.
Dalje, P se može izabrati iz grupe koja se sastoji od ostataka humanog eritropoetina i njegovih analoga, a koji sadrže od 1 do 6 dodatnih mesta za glikolizaciju. Kao što će to kasnije biti detaljno opisano, priprema i prečišćavanje EPO su poznati u nauci. Pod EPO se misli na prirodni ili rekombinovani protein, poželjno humani, dobijen iz bilo kog konvencionalnog izvora, kao što su tkiva, proteinskom sintezom, u ćelijskoj kulturi sa prirodnim ili rekombinovanim ćelijama. Obuhvaćeni su svi proteini koji poseduju aktivnost EPO, kao što su muteini, ili na drugi način modiflkovani proteini. Rekombinantni EPO može se proizvesti ekspresijom u CHO-, BHK- ili HeLa ćelijskim linijama, tehnologijom rekombinantne DNK ili aktivacijom endogenog gena. Ekspresija proteina, uključujući i EPO, aktivacijom endogenog gena, dobro je poznata u nauci i opisana je na primer, u U.S. patentima br. 5,733,761, 5,641,670 i 5,733,746 i u međunarodnim patentnim publikacijama br. WO93/09222, WO94/12650, WO95/31560, WO90/11354, WO91/06667 i W091/09955, pri čemu je sadržaj svakog od navedenih patenata inkorporiran u sadržaj predmetnog pronalaska putem referenci. Poželjna EPO vrsta za pripremu glikoproteina eritropoetinskih proizvoda je humana EPO vrsta. Još poželjnije, EPO vrsta je humani EPO sa amino kiselinskom sekvencom predstavljenom u SEQ ID NO: 1 ili SEQ ID NO: 2, poželjnije amino kiselinska sekvenca SEQ ID NO:l.
U jednom obliku izvođenja, P može biti ostatak glikoproteinskog analoga koji sadrži od 1 do 6 dodatnih mesta za glikolizaciju. Glikolizacija proteina, sa jednom ili više oligosaharidnih grupa, odigrava se na specifičnim mestima duž polipeptidnog kostura i u velikoj meri utiče na fizička svojstva proteina, kao što su stabilnost proteina, sekrecija, subcelularna lokalizacija i biološka aktivnost. Obično postoje dva tipa glikolizacije. O-vezani oligosaharidi su prikačeni za serinske ili treoninske ostatke i N-vezani oligosaharidi, koji su vezani za ostatke asparagina. Jedan tip oligosaharida, nađen u formi i O-vezanih i N-vezanih oligosaharida, je N-acetilneuraminska kiselina (sijalinska kiselina), koja predstavlja familiju amino šećera sa 9 ili više ugljenikovih atoma. Sijalinska kiselina najčešće je terminalni ostatak i kod N-vezanih i kod O-vezanih oligosaharida, i s obzirom da nosi negativno naelektrisanje, ona uslovljava acidna svojstva glikoproteina. Humani eritropoetin, sa 165 amino kiselina, sadrži tri N-vezana ijedan O-vezani oligosaharidni lanac, koji čine oko 40% ukupne molekulske težine glikoproteina. N-vezana glikolizacija dešava se na ostatku asparagina koji se nalazi na pozicijama 24, 38 i 83, dok se O-vezana glikolizacija dešava na ostatku serina na poziciji 126. Oligosaharidni lanci su modifikovani terminalnim ostacima sijalinske kiseline. Enzimatsko uklanjanje svih ostataka sijalinske kiseline sa glikolizovanog eritropoetina rezultira gubitkomin vivoaktivnosti, ali nein vitroaktivnosti, jer sijalizacija eritropoetina sprečava njegovo vezivanje za hepatički vezujući protein, pa samim tim i njegov klirens.
Glikoproteini iz predmetnog pronalaska obuhvataju analoge humanog eritropoetina, sa jednom ili više promena u amino kiselinskoj sekvenci humanog eritropoetina, koje rezultiraju povećanjem broja mesta za vezivanje sijalinske kiseline. Ovi glikoproteinski analozi mogu se proizvesti usmerenom mutagenezom, adicijama, delecijama ili substitucijama amino kiselina, koje povećavaju broj ili menjaju mesta dostupna za glikolizaciju. Analozi glikoproteina koji sadrže nivo sijalinske kiseline veći od onog u humanom eritropoetinu proizvode se dodavanjem mesta za glikolizacije koja ne remete sekundarnu ili tercijarnu konformaciju potrebnu za biološku aktivnost. Glikoproteini iz predmetnog pronalaska takođe obuhvataju analoge koji pokazuju veći nivo ugljenohidratnih veza na mestu za glikolizaciju, koje obično uključuju substituciju jedne ili više amino kiselina u neposrednoj blizini N-veznih ili O-veznih mesta. Glikoproteini iz predmetnog pronalaska takođe obuhvataju analoge sa jednom ili više amino kiselina koje se pružaju iza karboksi kraja eritropoetina i koje sadrže najmanje jedno dodatno mesto glikolizacije. Glikoproteini iz predmetnog pronalaska takođe obuhvataju analoge sa amino kiselinskom sekvencom koja sadrži rearanžman najmanje jednog mesta za glikolizaciju. Ovakvi rearanžmani mesta za glikolizaciju uključuju delecije jednog ili više mesta za glikolizaciju u humanom eritropoetinu i adiciju jednog ili više mesta za glikolizaciju kojih nema u prirodnom proteinu. Povećavanje broja ugljeno-hidratnih lanaca na eritropoetinu. a time i broja molekula sijalinske kiseline po molekulu eritropoetina može pojačati korisna svojstva, kao što su povećana solubilnost, veća otpornost na proteolizu, smanjena imunogenost, povećan polu-život u serumu i povećana biološka aktivnost. Analozi eritropoetina sa dodatnim mestima glikolizacije opisani su detaljnije u evropskoj patentnoj prijavi 640 619, Elliot, publikovanoj 1. marta 1995. g.
U poželjnom obliku izvođenja, glikoproteini iz predmetnog pronalaska sadrže amino kiselinsku sekvencu koja obuhvata najmanje jedno dodatno mesto za glikolizaciju, kao što su, ali ne samo oni, eritropoetini koji sadrže sekvencu humanog eritropoetina sa modifikacijama izabranim između sledećih: Asn<30>Thr<32>;
Asn<51>Thr<53>;
Asn<57>Thr<59>:
Asn<69>;
Asn<69>Thr<71>;
Ser<68>Asn<69T>hr<7>,;
Val<87>As<n88>Thr<90>;
Ser<87>Asn<88>Thr<90>;
Ser<87>Asn<88>Gly<89>Thr<90>;
Ser<87>Asn<88>Thr90Thr<92>;
Ser<87>Asn<88>Thr90Ala<162>;
Asn<69>Thr<71>Ser<87>Asn<88>Thr<90>;
Asn<3>°Thr<32>Val<87>Asn<88>Thr<90>;
Asn<89>Il<e90>Thr<91>;
Ser<87>Asn<89>Ile<90>Thr<9>,;
Asn<136>Thr<m;>
Asn<138>Thr140;
Thr'<25>; i
Pro,<24>Thr125.
Oznake ovde korišćene za modifikacije amino kiselinske sekvence znače da su pozicije odgovarajućeg nemodifikovanog proteina (na primer, hEPO sa SEQ ID NO:l ili SEQ ID NO:2), označene brojem u superskriptu, promenjene u amino kiselinu koja neposredno prethodi odgovarajućem broju u superskriptu.
Glikoprotein može takođe biti analog sa najmanje jednom dodatnom amino kiselinom na karboksi kraju glikoproteina, gde amino kiselina sadrži najmanje jedno mesto za glikolizaciju, tj, konjugat kao stoje gore opisano, se takođe odnosi na jedinjenja gde glikoprotein ima sekvencu koja sadrži sekvencu humanog eritropoetina i drugu sekvencu na karboksi kraju sekvence humanog eritropoetina, gde druga sekvenca sadrži najmanje jedno mesto za glikolizaciju. Dodatne amino kiseline mogu sadržati peptidni fragment nastao od karboksi terminusa humanog horinskog gonadotropina. Poželjno je daje glikoprotein izabran iz grupe koja se sastoji od( a)humanog eritropoetina koji poseduje amino kiselinsku sekvencu Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro lle Leu Pro Gln (SEQ ID NO:3), koja se pruža iza karboksi kraja; (b) analoga (a) koji dodatno sadrži Ser Asn Thr EPO; i (c) analoga (a) koji dodatno sadrži Asn<30>Thr<32>Val<87>Asn88Thr<90>EPO.
Glikoprotein može takođe biti analog, sa amino kiselinskom sekvencom koja uključuje rearanžman najmanje jednog mesta za glikolizaciju. Rearanžman može sadržati deleciju jednog od N-vezanih ugljeno-hidratnih mesta u humanom eritropoetinu i adiciju N-veznog ugljeno-hidratnog mesta na poziciji 88 amino-kiselinske sekvence humanog eritropoetina. Poželjno je daje glikoprotein analog izabran iz grupe koja se sastoji od Gln<24>Ser<87>Asn<88>Thr<90>EPO; Gln<38>Ser87Asn<88>Thr9<0>EPO; i Gln83Ser87 Asn<88>Thr<90>EPO.
Termin "niži alkil" ovde je primenjen u značenju linearne ili razgranate alkil grupe koja sadrži od jedan do šest ugljenikovih atoma. Primeri nižih alkil grupa obuhvataju metil, etil i izopropil grupu. U skladu sa predmetnim pronalaskom, R je bilo koji niži alkil. Poželjni su konjugati u kojima je R metil grupa.
Simbol "m" predstavlja broj etilen oksidnih ostataka (OCH2CH2) na poli(etilen oksid) grupi. Jedinična PEG subjedinica ima molekulsku težinu od oko 44 daltona. Stoga, molekulska težina konjugata (bez molekulske težine EPO) zavisi od broja "m". Kod konjugata iz ovog pronalaska "m" je od oko 450 do oko 900 (što odgovara molekulskoj težini od oko 20 do oko 40 kDa), poželjno od oko 650 do oko 750 (što odgovara molekulskoj težini od oko 30 kDa). Broj m se bira tako da rezultujući konjugat iz ovog pronalaska ima fiziološku aktivnost približnu kao i nemodifikovani EPO, pri čemu ta aktivnost može biti jednaka, veća ili frakcija aktivnosti nemodifikovanog EPO. Molekulska težina od "oko" nekog broja znači da je ona unutar razumnog opsega oko tog broja, određeno konvencionalnim analitičkim tehnikama. Broj "m" se bira tako da molekulska težina svake poli(etilen glikol) grupe, kovalentno vezane za glikoprotein eritropoetin, iznosi oko 20 kDa do oko 40 kDa, a poželjno je daje oko 30 kDa.
Kod konjugata iz predmetnog pronalaska, broj "n" predstavlja broj polietilen glikol grupa, kovalentno vezanih amidnim vezama za slobodne amino grupe na proteinu eritropoetinu (uključujući e-amino grupe amino kiseline lizin i/ili amino-terminalnu amino grupu). Konjugat iz ovog pronalaska može imati jednu, dve ili tri PEG grupe po molekulu EPO. Broj "n" je ceo broj u opsegu od 1 do 3, a poželjno je daje "n" 1 ili 2, najpoželjnije je daje "n" jednako 1.
Jedinjenje formule I može se dobiti iz poznatog polimernog materijala:
u kojem su R i m kao što su gore opisani, kondenzovanjem jedinjenja Formule II sa glikoproteinom eritropoetinom. Jedinjenja sa Formulom II u kojima jex jednako3, su alfa-niži alkoksili, sukcinimidil estri buterne kiseline poli(etilen glikola) (niži alkoksi-PEG-SBA). Jedinjenja Formule II u kojima je * jednako 2, su alfa-niži alkoksili, sukcinimidil estri propionske kiseline poli(etilen glikola) (niži alkoksil-PEG-SPA). Može se primeniti bilo koja od konvencionalnih metoda reakcije
aktiviranog estra sa aminom kako bi se formirao amid. U gore opisanoj reakciji, sukcinimidil estar je grupa koja odlazi, kako bi se formirao amid. Primena sukcinimidil estra kao jedinjenja iz Formule II u cilju dobijanja konjugata sa proteinima, opisana je u U.S. patentu br. 5,672,662, objavljenom 30 septembra 1997.
(Harris et al.).
Humani EPO sadrži devet slobodnih amino grupa, amino-terminalnu amino grupu i s-amino grupe 8 ostataka lizina. Kada se reagens za pegilaciju (nastanak PEGkonjugata, prim. prev.)kombinuje sa SBA jedinjenjem Formule II, uočeno je da na pH 7.5, odnos protein : PEG iznosi 1:3, i da na temperaturi reakcije 20-25°C, nastaje smeša mono-, di-, i u tragovima, tri-pegilovanih molekulskih vrsta. Kada je reagens za pegilaciju SPA jedinjenja Formule II, pod sličnim uslovima osim kada je odnos protein:PEG 1:2, prevashodno nastaju mono-pegilovane molekulske vrste. Pegilovani EPO može se primeniti kao kompozicija, ili u formi različitih pegilovanih vrsta razdvojenih katjon-izmenjivačkom hromatografijom. Menjanjem uslova reakcije (na primer, odnosa reagenasa, pH, temperature, koncentracije proteina, trajanja reakcije, itd.) menjaće se relativna količina različitih pegilovanih molekulskih vrsta.
Humani eritropoetin (EPO) je humani glikoprotein koji stimuliše formiranje eritrocita. Njegova priprema i terapeutska primena opisane su detaljno, na primer, u U.S. patentu br. 5,547,933 i 5,621,080, EP-B 0 148 605, Huang, S.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1984) 2708-2712, EP-B 0 205 564, EP-B 0 209 539 i EP-B 0 411 678, kao i kod Lai, P.H. et al. J. Biol. Chem. 261 (1986) 3116-3121; Sasaki, H. et al. ./.Biol. Chem.262 (1987) 12059-12076. Eritropoetin za terapeutske primene može se proizvesti rekombinantnim sredstvima (EP-B 0 148 605, EP-B 0 209 539 i Egrie, J.C., Strickland, T.W., Lane, J. et al. (1986) Immunobiol. 72: 213-224).
Postupci za ekspresiju i pripremu eritropoetina u medijumu bez seruma opisani su, na primer, u W096/35718, Burg, objavljenom 14. novembra 1996., i u evropskoj patentnoj publikaciji br. 513 738, Koch, objavljenoj 12. juna 1992. Osim navedenih publikacija, poznato je daje moguće sprovesti fermentaciju rekombinovanih CHO ćelija koje sadrže EPO gen, bez prisustva seruma. Ove metode su opisane na primer, u EP-A 0 513 738, EP-A 0 267 678 i uopšteno od strane Kavvamoto T. et al. Analvtical Biochem. 130 (1983) 445-453, EP-A 0 248 656, Kowar, J. i Franek, F. Methods in Enzymology 421 (1986) 277-292, Bavister, B., Expcology 271 (1981) 45-51, EP-A 0 481 791, EP-A 0 307 247, EP-A 0 343 635, WO88/00967.
U EP-A 0 267 678 opisane su jon-izmenjivačka hromatografija na S-sefarozi, preparativna HPLC reverzne faze na Cg koloni i gel filtrirajuća hromatografija, kao metode za prečišćavanje EPO, proizvedenog u kulturi bez prisustva seruma, nakon dijalize. U ovom kontekstu, faza gel filtrirajuće hromatografije može se zameniti jon-izmenjivačkom hromatografijom na S-sefarozi pod brzim protokom. Takođe je predloženo, da se bojena hromatografija na Trisakril plavoj koloni obavi pre jon-izmenjivačke hromatografije.
Postupak za prečišćavanje rekombinantnog EPO opisan je kod Nobuo, I. et al. J. Biochem. 107 (1990) 352-359. U ovom postupku EPO se tretira rastvorom Tween® 20, fenilmetilsulfonil fluoridom, etilmaleimidom, pepstatinom A, bakar sulfatom i oksaminskom kiselinom, pre faze prečišćavanja. Publikacije, uključujući W096/35718, za Burg, objavljena 14. novembra 1996., opisuju postupak za pripremu eritropoetina u fermentacionom procesu bez prisustva seruma (EPOsf).
Specifična aktivnost EPO ili EPO konjugata u skladu sa predmetnim pronalaskom može se odrediti različitim testovima poznatim u nauci. Biološka aktivnost prečišćenih EPO proteina iz ovog pronalaska je takva da injektiranje EPO proteina kod pacijenata rezultira povećanom produkcijom retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži, u poređenju sa netretiranim ili kontrolnim grupama ispitanika. Biološka aktivnost EPO proteina , ili njihovih fragmenata, dobijenih i prečišćenih u skladu sa ovim pronalaskom, može se testirati postupcima u skladu sa Annable, et al., Buli. Wld. Hlth. Org. 47 (1972) 99-112 i Pharm Europa Spec Issue Erythropoietin BRP Bio 1997 (2). Drugi biološki test za određivanje aktivnosti EPO proteina, test normocitemičnog miša, opisan je u Primeru 4.
Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja se sastoji od konjugata, kao stoje to opisano. Kompozicija koja sadrži najmanje devedeset procenata mono-PEG konjugata, tj. u kojoj je n jednako 1, priprema se kao u Primeru 5. Najčešće su poželjni mono-PEG konjugati eritropoetin glikoproteina, jer ispoljavaju veću aktivnost od di-PEG konjugata. Procenat mono-PEG konjugata, kao i relativan odnos mono- i di-PEG molekulskih vrsta može se kontrolisati prikupljanjem Širih frakcija oko elucionog vrha, kako bi se smanjio procenat mono-PEG, ili prikupljanjem užih frakcija, kako bi se povećao procenat mono-PEG u kompoziciji. Sadržaj mono-PEG konjugata od oko 90 procenata omogućava dobru ravnotežu prinosa i aktivnosti. U nekim slučajevima mogu biti poželjne kompozicije koje sadrže najmanje devedesetdva procenta ili najmanje devedesetšest procenta mono-PEG molekulskih vrsta (n jednako 1). U jednom obliku izvođenja ovog pronalaska procenat konjugata u kojima je n jedanko 1, iznosi od devedeset do devedesetšest procenata.
Pronalazak se takođe odnosi na odgovarajuće farmaceutske kompozicije koje sadrže konjugat ili kompozicije kakve su već opisane i farmaceutski prihvatljive inertne nosače.
Konjugati i kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu se naročito primeniti za pripremu medikamenata za tretiranje ili profilaksu bolesti vezanih sa anemijom kod pacijenata sa hroničnom renalnom insuficijencijom (CRF), AIDS ili za tretiranje pacijenata na hemoterapiji koji boluju od kancera.
Dodatni oblik izvođenja ovog pronalaska odnosi se na postupak za profilaktički i/ili terapeutski tretman poremećaja vezanih za anemiju u hroničnoj renalnoj insuficijenciji (CRF), AIDS-u, kao i pacijenata bolesnih od kancera, koji primaju hemoterapiju, pri čemu postupak sadrži fazu primene opisanih kompozicija pacijentima.
Dalje, pronalazak se odnosi na postupak pripreme opisanih jedinjenja, pri Čemu se postupak sastoji od kondenzovanja jedinjenja Formule II sa eritropoetin glikoproteinom, gde su R, m i x, kao što je to opisano. Pronalazak se takođe odnosi na gore opisana jedinjenja za terapiju bolesti vezanih za anemiju kod pacijenta koji boluju od hronične renalne insuficijencije, AIDS-a i tumora, a koji primaju hemoterapiju.
Pronalazak će biti jasnije objašnjen narednim primerima koji ilustruju ali ničim ne ograničavaju ovde opisani pronalazak.
PRIMERI
PRIMER 1: Fermentacija i prečišćavanje humanog EPO
a) Priprema inokuluma i fermentacija
Jedna vajla radne ćelijske banke (Working Cell Bank), koja potiče od
CHO ćelijske linije koja proizvodi EPO (može se koristiti ATCC CRL8695, opisana u EP 411 678 (Genetic Institute)) uzeta je iz gasovite faze rezervoara sa tečnim azotom. Ćelije su prenete u staklene rotacione flaskove i kultivisane u medijumu puferisanom karbonantnom kiselinom, u CO2inkubatoru na kontrolisanoj vlažnosti. Tipični medijumi bez seruma primenjeni za pripremu inokuluma i fermentaciju, opisani su u evropskoj patentnoj prijavi 513 738, Koch, publikovanoj 12. juna 1992., ili u W096/35718s Burg, objavljenom 14. novembra 1996., na primer, sadrži kao medijum DMEM/F12 (na primer, JRH Biosciences/Hazleton Biologics, Denver, US, order No. 57-736) i uz to, natrij um hidrogenkarbonat, L-glutamin, D-glukozu, rekombinantni insulin, natrij um selenit, diaminobutan, hiđrokortizon, gvožde (II) sulfat, asparagin, aspartatnu kiselinu, serin i stabilizator sisarskih ćelija, kao što je polivinil alkohol, metil celulozu, polidekstran, polieilen glikol, Pluronic F68, plazmin ekspander poligelin (HEMACCEL®) ili polivinil pirolidon (W096/35718).
Kulture su mikroskopski proverene na prisustvo kontaminirajućih mikroorganizama, i određene su ćelijske gustine. Ovi testovi obavljeni su tokom svake od faza razdvajanja.
Nakon perioda inicijalnog rasta, ćelijske kulture su razblažene svežim medijumom do početne ćelijske gustine i puštene su da prođu kroz još jedan ćelijski ciklus. Ovaj postupak ponovljan je sve dok nije dobijena zapremina kulture od oko 2 1 po staklenom rotacionom flasku. Nakon otprilike 12 udvajanja, dobijeno je oko 1 do 5 litara kulture koja je zatim korišćena kao tnokulum za 10 I fermentator inokuluma.
Nakon 3-5 dana, kulture u 10 1 fermentatoru mogu se koristiti kao inokulum za 100 1 frementator inokuluma.
Nakon sledećih 3-5 dana kultivacije, kulture u 100 1 fermentatoru mogu se koristiti kao inokulum za 1000 1 proizvodni fermentator.
b) Prikupljanje ćelija i njihova separacija
Primenjen je tzv. "batch refeed" postupak, tj, kada je postignuta željena
ćelijska gustina, prikupljeno je oko 80 % kulture. Ostatak kulture se napuni svežim medijumom i kultiviše se do narednog prikupljanja. Jedan ciklus produkcije sastoji se od najviše 10 uzastopnih prikupljanja: 9 delimičnih prikupljanja i 1 totalnog prikupljanja na kraju fermentacije. Prikupljanje se vrši svaka 3-4 dana.
Prikupljena zapremina se meri i prebacuje u rashlađeni sud. Ćelije se uklanjaju centrifugiranjem ili filtracijom i odbacaju se. Supernatant dobijen centrifugiranjem sadrži EPO i on se filtrira i prikuplja u drugi rashlađeni sud. Svaki pul se zasebno prečišćava.
Tipičan proces prečišćavanja EPO-proteina opisan je u W096/35718, za Burg, objavljenom 14 novembra 1996. Opis postupka prečišćavanja sledi.
a) Hromatografija na plavoj sefarozi
Plava sefaroza (Blue Sepharose, Pharmacia) sastoji se od zrnaca sefaroze za
čiju je površinu kovalentno vezana Cibacron plava boja. S obzirom da se EPO vezuje za plavu sefarozu znatno jače od većine drugih ne-proteinskih kontaminanata, nekih proteinskih nečistoća i PVA, tokom ove faze se frakcija EPO obogaćuje. Ispiranje kolone od plave sefaroze se vrši rastvorima sa rastućim koncentracijama sofi i rastućim pH.
Kolona se puni sa 80 - 100 1 plave sefaroze, regeneriše se sa NaOH i ekvilibrira ekvilibracionim puferom (natrijum/kalcijum hlorid i natrijum acetat). Zakišeljeni i pro filtrirani supernatant iz fermentera se nanosi na kolonu. Nakon toga, kolona se prvo ispira puferom koji je sličan ekvilibracionom puferu, ali koji sadrži veću koncentraciju natrijum hlorida, a zatim nekim Tris puferom. Proizvod se ispira Tris puferom i prikuplja kao jedna frakcija na osnovu dobijenog elucionog profila.
b) Hromatografija na butil-tojo perlicama
Butil-tojo perlice 650 C (Butyl Toyopearl 650 C, Toso Haas) je polistirenski
matriks za koji se kovalentno vezuju alifatični butil-ostaci. S obzirom da se EPO vezuje za ovaj gel jače od većine nečistoća i PVA, EPO se mora isprati puferom koji sadrži izopropanol.
Kolona se pakuje sa 30 - 40 1 butil-tojo perlica 650 C, regeneriše se sa NaOH, ispira Tris puferom i ekvilibriše Tris puferom koji sadrži izopropanol.
Eluat sa plave sefaroze se podešava na koncentraciju izopropanola u koloni ekvilibrisanoj puferom, a zatim se nanosi na kolonu. Kolona se zatim ispira ekvilibracionim puferom koji sadrži veću koncentraciju izopropanola. Proizvod se eluira elucionim puferom (Tris pufer sa visokim sadržajem izopropanola) i prikuplja u jednoj frakciji, saglasno dobijenom elucionom profilu.
c) Hromatografija na hidroksiapatitnom ultrogelu
Hidroksiapatitni ultrogel (Hydroxyapatite Ultrogel, Biosepra) sastoji se od
hidroksiapatita koji je inkorporiran u agarozni matriks kako bi se poboljšala njgova mehanička svojstva. EPO ima nizak afinitet prema hidroksiapatitu, pa se može spirati pri nižim koncentracijama fosfata nego proteinske nečistoće.
Kolona se puni sa 30 - 40 1 hidroksiapatit ultrogela, regeneriše se sa kalijum fosfatnim/kalcijum hloridnim puferom i NaOH, a nakon toga Tris puferom. Zatim se ekvilibriše Tris puferom koji sadrži nisku koncentraciju izopropanola i natrijum hlorida.
Eluat sa hromatografije na butil-tojo perlicama koje sadrže EPO, nanosi se na kolonu. Kolona se zatim ispira ekvilibracionim puferom i Tris puferom koji ne sadrži izopropanol i natrijum hlorid. Proizvod se eluira Tris puferom koji sadrži nisku koncentraciju kalijum fosfata i prikuplja se u jednoj frakciji u skladu sa elucionim profilom.
d) HPLC reverzne faze na Vydac-u C4
Materijal za RP-HPLC, Vydac C4 (Vyđac) sastoji se od zrnaca silika gela, na
čijoj se površini nalaze C4-alkilni lanci. Razdvajanje EPO od proteinskih nečistoća zasniva se na razlici jačine hidrofobnih interakcija. Elucija se vrši acetonitrilnim gradijentom u razblaženoj trifluorosirćetnoj kiselini.
Preparativna HPLC se obavlja primenom kolona napravljenih od nerđajućeg čelika (napunjenih sa 2.8 do 3.2 1 Vydac C4 silika gela). Eluat sa hidroksiapatit ultragela se acidifikuje dodavanjem trifluoro sirćetne kiseline i nanosi se na Vydac C4 kolonu. Za ispiranje i eluciju koristi se acetonitrilni gradijent u razblaženoj trifluoro sirćetnoj kiselini. Frakcije se prikupljaju i odmah neutrališu fosfatnim puferom. Prikupljaju se frakcije EPO koje su unutar IPC granica.
e) Hromatografija na DEAE sefarozi
DEAE sefaroza (Pharmacia) sastoji se od đietilaminoetil (DEAE) grupa
kovalentno vezanih za površinu sefaroznih zrnaca. Vezivanje EPO za DEAE grupe posredovano je jonskim interakcijama. Acetonitril i trifluor sirćetna kiselina prolaze kroz kolonu bez zadržavanja. Nakon ispiranja ovih susptanci, tragovi nečistoća uklanjaju se ispiranjem kolone acetatnim puferom niske pH vrednosti. Kolona se zatim ispira neutralnim fosfatnim puferom, a EPO se eluira puferom sa većom jonskom jačinom.
Kolona se pakuje sa DEAE sefarozom na brzom protoku. Zapremina kolone se podešava kako bi se osiguralo da se EPO nanosi u opsegu od 3 - 10 mg EPO/ml gela. Kolona se ispira vodom i ekvilibracionim puferom (natrijum/kalijum fosfat). Prikupljene i spojene frakcije sa HPLC eluata nanose se na kolonu i kolona se ispira ekvilibracionim puferom. Neposredno nakon toga, EPO se eluira sa kolone elucionim puferom (natrijum hlorid, natrijum/kalijum fosfat) i prikuplja u jednoj frakciji saglasno dobijenom elucionom profilu.
Eluat sa DEAE sefarozne kolone se podešava na određenu provodljivost. Rezultujuća supstanca se sterilno filtrira u teflonske boce i čuva na -70°C.
PRIMER 2: Pegilacija EPO sa mPEG- SBA
Primenom analitičkih metoda utvrđeno je daje EPO, prečišćen u skladu sa postupkom bez prisustva seruma, opisanom u Primeru 1 (EPOsf), homogen i da pokazuje tipičan obrazac izoformi sastojeći se od 8 izoformi. On ispoljava biološku aktivnost od 190,000 IU/mg, što je određeno testom normocitemičnog miša. Agens korišćen za pegilaciju je metoksi-PEG-SBA, a to je jedinjenje Formule II u kojem je R- metil; x je 3; m je od 650 do 750 (prosečno oko 680, što odgovara prosečnoj molekulskoj težini od oko 30 kDa).
Reakcija pegilacije
Jednoj stotini miligrama EPOsf (9.71 ml od 10.3 mg/ml EPOsf Štoka, 5.48 umol) dodato je 10 ml 0.1M rastvora kalijum fosfatnog pufera, pH, 7.5 koji sadrži
506 mg 30 kDa metoksi-PEG-SBA (16.5 umol) (dobijeno od Shearwater Polymers, Inc., Huntsville, Alabama), i to je mešano 2 sata na sobnoj temperaturi (20 - 23°C). Finalna koncentracija proteina bila je 5 mg/ml, a odnos proteimPEG reagens iznosio je 1:3. Nakon dva sata, reakcija je zaustavljena promenom pH na 4.5, dodavanjem glacijalne sirćetne kiseline i zamrzavanjem na -20°C do prečišćavanja.
Prečišćavanje
1. Smcšakonjugata:Približno 28 ml SP-SEPHAROSE FF (sulfo-propil katjon izmenjivačka smola) spakovana je u AMICON staklene kolone (2.2 x 7.5 cm) i ekvilibrisana 20 mM acetatnim puferom, pH 4.5 na protoku od 150 ml/h. Šest mililitara reakcione smeše koja sadrži 30 mg proteina, razblaženo je 5 puta u ekvilibracionom puferu i naneto je na kolonu. Neadsorbovani materijal ispran je puferom, a adsorbovana smeša PEG konjugata eluirana je sa kolone primenom 0.175 M NaCl u ekvilibracionom puferu. Nemodifikovani EPOsf koji je zaostao na koloni ispran je sa 750 mM NaCl. Kolona je reekvilibrisana u početnom puferu. Uzorci su analizirani SDS-PAGE elektroforezom, i određenje njihov stepen pegilacije. Utvrđeno je da 0.175 M NaCl eluat sadrži mono-, kao i di- I, u tragovima, tri-pegilovane molekulske vrste, dok 750 mM NaCl eluat sadrži
nemodifikovane EPOsf.
2. Di-PEG i mono-PEG-EPOsf: Prečišćena smeša konjugata, eliurana sa kolone u prethodnoj fazi, razblažena je puferom 4 puta, ponovo je naneta na kolonu i isprana kako je opisano. Di-PEG-EPOsf i mono-PEG-EPOsf su posebno eluirani sa kolone primenom 0.1 M NaCl, odnosno 0.175 M NaCl. Eluiranje je izvedeno rastvorom 750 mM NaCl, kako bi se isprao zaostali nemodifikovani EPOsf. S druge strane, reakciona smeša se može razblažiti 5 puta acetatnim puferom i naneti na SP-sefaroznu kolonu (~0.5 mg proteina/ml gela). Kolona se ispira, a adsorbovani mono-PEG-EPOsf, di-PEG-EPOsf i nemodifikovani EPOsf eluiraju se kao što je opisano u prethodnom odeljku.
Rezultati
PEG-EPOsf je sintetisan hemijskom konjugacijom linearnog PEG molekula sa velikim brojem molekula prosečne molekulske težine od 30 kDa. PEG-EPOsf nastao je u reakciji između primarnih amino grupa EPOsf i sukcinimid estarskog derivata PEG-buterne kiseline molekulske težine od 30 kDa, formiranjem amidne veze.
Rezultati su sažeto prikazani u Tabeli 1. Prečišćena smeša konjugata sastoji se od mono- i di-PEG-EPOsf, a oslobođena je prisustva nemodifikovanog EPOsf, što je utvrđeno SDS-PAGE elektroforetskom analizom. Smeša konjugata činila je 23.4 mg ili 78% početnog materijala. Razdvajanje katjon izmenjivačkom hromatografijom mono- i di-PEG-EPOsf, ukazala je da je odnos mono- i di-PEG u smeši konjugata iznosio skoro 1:1. Nakon završetka reakcije odnos individualnih komponenti mono.di: nemodifikovanim iznosio je 40:38:20 (%). Ukupni prinos je bio skoro kvantitativan.
PRIMER 3: Pegilacija EPO sa mPEG- SPA
Različiti alikvoti EPOsf primertjeni u Primeru 2 stavljeni su u reakciju sa metoksi-PEG-SPA od 30 kDa (Shearvvater Polvmers, Inc., Huntsville, Alabama). Reakcija se odvijala pri odnosu protehr.reagens od 1:2, a tehnike prečišćavanja su bile kao u Primeru 2. Dobijene su prevashodno mono-pegilovane molekulske vrste.
PRIMER 4: In vivo aktivnost pegilovanog EPO određena testom
normocitemičnog miša
Biološki test normocitemičnog miša poznata je u nauci (Pharm. Europa Spec. Issue Ervthropoietin BRP Bio 1997 (2)) a metoda u monografiji o eritropoetinu u Ph. Eur. BRP. Uzorci su razblaženi sa BSA-PBS. Normalnim zdravim miševima, starim 7-15 nedelja, dato jes, c.0.2 ml EPO-frakcije koja sadrži nepegilovane EPO ili tri-, di- ili mono-pegilovane EPO iz Primera 2 ili 3. Tokom perioda od 6 dana uzorkovana je krv punkcijom repne vene i razblažena tako daje 1 p.1 krvi prisutan u 1 ml 0.15 u.mol rastvora akridin oranž boje. Vreme bojenja bilo je 3 do 10 minuta. Brojanje retikulocita izvršeno je mikrofluorometrijski u protočnom citometru, analizom histograma crvene fluorescencije. Broj retikulocita predstavljen je u apsolutnim brojevima (na 30 000 analiziranih ćelija). Za predstavljene rezultate, svaka grupa se sastojala od 5 miševa po danu, a životinje su iskrvavljene samo po jedanput.
U posebnom eksperimentu miševi su tretirani jednom dozom nemodifikovanog EPO (25 ng EPO), PEG(SBA-)-EPO smeše iz primera 2 (10 ng konjugata), mono- i di-pegilovanim EPO iz Primera 2 (10 ng konjugata), PEG(SPA-)-EPO iz primera 3(10 ng konjugata) ili rastvorom pufera. Rezultati su prikazani u Tabeli 2. Rezultati pokazuju superiorno veću aktivnost i produženi polu-život pegilovanih EPO vrsta,.na osnovu značajnog povećanja broja retikulocita i promene maksimuma broja retikulocita primenom iste doze po mišu (10 ng) kod pegilovanih, u poredenju sa dozom od 25 ng za nemodifikovani EPO.
PRIMER 5: Priprema predominantno mono- PEG- EPO
Reakcija pegilacije
Količini od 100 mg (5.48 umol) EPOsf rastvorenim u 100 mM kalijum fosfatnom puferu pH 7.5, koji je pripremljen saglasno Primeru 1, dodato je 329 mg (10.96 umol) 30 kDa PEG-SBA reagensa rastvorenog u 3 ml ratsvora 1 mM HC1. Dodata je potrebna količina 100 mM kalijum fosfatnog pufera pH 7.5, kako bi se zapremina reakcione smeše dopunila do 20 ml. Finalna koncentracija proteina bila je 5 mg/ml a relativan odnos proteina prema PEG reagensu bila je 1:2. Reakciona smeša mešana je 2 sata na sobnoj temperaturi (20 - 22°C). Nakon 2 sata, reakcija je zaustavljena promenom pH na 4.5, dodavanjem glacijalne sirćetne kiseline i zamrzavanjem na -20°C, sve do prečišćavanja.
Prečišćavanje
Reakciona smeša iz prethodne faze razblažena je 1:5 sa 10 mM natrijum acetatom«pH 4.5 i nanešena na 300 ml SP-sefarose FF (sulfopropil katjon-izmenjivačka smola) upakovane u kolonu 4.2 x 19 cm. Kolona je prethodno ekvilibrisana istim puferom. Efluenti sa kolone su mereni na 280 nm primenom Gilson UV monitora i snimljeni Kipp & Zonen rikorderom. Kolona je isprana sa 300 ml ekvilibracionog pufera ili 1 zapreminom kolone, kako bi se uklonio višak reagenasa, reakcionih nus-proizvoda i oligomerni PEG-EPO. Nastavljeno je sa ispiranjem sa 2 zapremine kolone rastvorom 100 mM NaCl, kako bi se uklonio di-PEG-EPO. Mono-PEG-EPO je zatim eluiran sa 200 ml NaCl. Tokom elucije mono-PEG-EPO, prvih 50 ml proteinskog vrha je odbačeno, a mono-PEG-EPO je prikupljen kao frakcija od 150 ml. Nemodifikovani EPOsf preostao na koloni ispran je sa 750 mM NaCl. Svi elucioni puferi napravljeni su u ekvilibracionom puferu. Svi eluirani uzorci analizirani su primenom SDS-PAGE i SEC hromatografijom (engl. Siže Exclusion Chromatographv). Mono-PEG-EPO đobijen iz frakcije od 150 ml, u kojem nije bilo nemodifikovanog EPO u detektabilnim količinama, koncentrovan je na oko 4.5 - 7.5 mg/ml i dijafiltriran u puferu za čuvanje, 10 mM kalijum fosfat, 100 mM NaCl, pH 7.5. Koncentrovanje/dijaftltracija obavljena je na Millipore Labscale™ TFF sistemu, podešenom sa 50 kDa isečkom Millipore Pellicon XL Biomax 50 membrane, na ambijentalnoj temperaturi. Koncentrovani mono-PEG-EPO sterilno je profiltriran i čuvan zamrznut na -20°C.
Oko 75% EPOsf je pegilovano. Nakon prečišćavanja, ukupan prinos iznosio je oko 30 % mono-PEG-EPO sa nemerljivim količinama nemodifikovanog EPOsf i oko 25 % di-PEG-EPO. Oligomeri i nepegilovani EPOsf čine ostatak proteina. Mono-PEG-EPO pul, prikupljen iz frakcije od 150 ml, sadržao je oko 90% mono-PEG-EPO i oko 10 %di-PEG-EPO.
Claims (25)
1. Konjugat, naznačen time što obuhvata eritropoetin glikoprotein koji ima najmanj jednu slobodnu amino grupu i ispoljavain vivobiološku aktivnost uzrokovanja povećane produkcije retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži i izabran je iz grupe koja se sastoji od humanog eritropoetina i humanog eritropoetina modifikovanog adicijom od 1 do 6 mesta glikozilacije ili rearanžmanorn najmanje jednog mesta glikozilacije; pri čemu je navedeni glikoprotein kovalentno vezan za "n" polifetilen glikol) grupe formule
s tim da —CO svake poli(etilen glikol) grupe formira amidnu vezu sa jednom od navedenih amino grupa; gde
R je Cj-C6-alkil;
x je 2 ili 3;
m je od 450 do 900;
n je od 1 do 3; i
n i m su izabrani tako da molekulska težina konjugata bez eritropoetin glikoproteina iznosi od 20 kilodaltona do 100 kilodaltona.
2. Konjugat prema zahtevu 1, formule:
naznačen time što su x, m, n i R đeftnisani kao u zahtevu 1, dok je P ostatak glikoproteina bez n amino-grupe (grupa), koje formiraju amidnu vezu(e) sa poli(etilen glikol) grupom (grupama).
3. Konjugat prema btlo kojem od prethodnih zahteva, naznačen time što je R metil grupa.
4. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahteva, naznačen time što je m od oko 650 do oko 750.
5. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahteva, naznačen time što je n jednako 1.
6. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahteva, naznačen time što ima formulu
u kojoj je m od 650 do 750, n je 1, a P je kao što je definisano u zahtevu 2.
7. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahteva, naznačen time što je glikoprotein humani eritropoetin.
8. Konjugat prema bilo kojem od zahteva 1 do 6, naznačen time što se humani eritropoetin glikoprotein eksprimira aktivacijom endogenog gena.
9. Konjugat prema bilo kojem od zahteva 1 do 8, naznačen time što je glikoprotein sa sekvencom SEQ ID NO*. l.
10. Konjugat prema bilo kojem od zahteva 1 do 7, naznačen time što glikoprotein ima sekvencu humanog eritropoetina, modifikovanog adicijom od 1 do 6 mesta glikozilacije.
11. Konjugat prema bilo kojem od zahteva 1 do 10, naznačen time što glikoprotein ima sekvencu humanog eritropoetina izmenjenu modifikacijom izabranom iz grupe koja se sastoji od:
12. Konjugat prema bilo kojem od zahteva 1 do 11, naznačen time što glikoprotein ima sekvencu koja sadrži sekvencu humanog eritropoetina i drugu sekvencu na karboksi kraju sekvence humanog eritropoetina, pri čemu druga sekvenca sadrži najmanje jedno mesto glikozilacije.
13. Konjugat prema zahtevu 12, naznačen time što druga sekvenca sadrži sekvencu nastalu od karboksi terminalne sekvence humanog horionskog gonadotropina.
14. Konjugat prema zahtevu 12, naznačen time što glikoprotein ima sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od: (a) sekvence humanog eritropoetina i sekvence SEQ ID NO:3 na karboksi kraju sekvence humanog eritropoetina; (b) sekvence u (a) mođifikovane sa Ser<8>' Asn<88>Thr<90>; i (c) sekvence u (a) mođifikovane sa Asn30 Thr" Val<87>Asn88Thr<90>.
15. Konjugat prema bilo kojem od zahteva 1 do 6, naznačen time što glikoprotein ima sekvencu humanog eritropoetina, modifikovanu rearanžmanom najmanje jednog mesta glikozilacije.
16. Konjugat prema zahtevu 15, naznačen time Što rearanžman obuhvata deleciju nekog od N-veznih mesta glikozilacije u humanom eritropoetinu i ađiciju N-veznog mesta glikozilacije na poziciji 88 sekvence humanog eritropoetina.
17. Konjugat prema zahtevu 16, naznačen time Što glikoprotein ima sekvencu humanog eritropoetina izmenjenu modifikacijom izabranom iz grupe koja se sastoji od:
18. Kompozicija koja se sastoji od konjugata od kojih svaki od konjugata ispoljavain vivobiološku aktivnost koja uzrokuje povećanje produkcije retikulocita i eritrocita u ćelijama koštane srži, naznačena time što svaki od pomenutih konjugata obuhvata eritropoetin glikoprotein koji ima najmanje jednu slobodnu amino grupu i izabran je iz grupe koja se sastoji od humanog eritropoetina i humanog eritopoetina modifikovanog adicijom 1 do 6 mesta glikozilacije ili rearanžmanom najmanje jednog mesta glikozilacije; pri čemu je glikoprotein u svakom od navedenih konjugata kovalentno vezan za "n" poli(etilen glikol) grupe formule — CO-(CH2)^-(OCH2CH2)w-OR s tim da -CO svake poli(etilen glikol) grupe formira amidnu vezu sa jednom od navedenih amino grupa; gde je R konjugata C^-C^x je 2 ili 3; m je od oko 450 do oko 900; n je od 1 do 3; n i m su izabrani tako da molekulska težina svakog konjugata bez eritropoetin glikoproteina iznosi od 20 kilodaltona do 100 kilodaltona; procentna zastupljenost konjugata u kojima je n 1, iznosi najmanje devedeset procenata.
19. Kompozicija koja obuhvata konjugate kao što su definisani u bilo kojem od zahteva 1 do 17, naznačena time što procenat konjugata u kojima je n 1, iznosi najmanje devedeset procenata.
20. Kompozicija prema zahtevima 18 ili 19, naznačena time što procenat konjugata u kojima je n 1, iznosi najmanje devedesetdva procenta.
21. Kompozicija prema zahtevu 20, naznačena time što procenat konjugata u kojima je n 1, iznosi najmanje devedesetšest procenata.
22. Kompozicija prema zahtevima 18 ili 19, naznačena time što je procenat konjugata u kojima je n 1, od devedeset do devedesetšest procenata.
23. Farmaceutska kompozicija koja se sadrži konjugat ili smešu prema bilo kojem od zahteva 1 do 22 i farmaceutski prihvatljivi nosač.
24. Upotreba konjugata ili kompozicije prema bilo kojem od zahteva 1 do 22 za pripremu medikamenata za tretman ili profilaksu bolesti povezanih sa anemijom kod pacijenata koji boluju od hronične bubrežne insuficijencije (CRF), AIDS-a ili u terapiji pacijenata koji boluju od raka, a koji su podvrgnuti hemoterapiji.
25. Postupak pripreme konjugata prema bilo kojem od zahteva 1 do 22, naznačen
time što obuhvata kondenzovanje jedinjenja formule II
sa eritropoetin glikoproteinom, pri čemu su R, m i x definisani kao u zahtevima 1 do 5.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14225499P | 1999-07-02 | 1999-07-02 | |
| US15022599P | 1999-08-23 | 1999-08-23 | |
| US15154899P | 1999-08-31 | 1999-08-31 | |
| US16615199P | 1999-11-17 | 1999-11-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| YU40700A YU40700A (sh) | 2003-12-31 |
| RS49928B true RS49928B (sr) | 2008-09-29 |
Family
ID=27495518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| YUP-407/00A RS49928B (sr) | 1999-07-02 | 2000-06-28 | Derivati eritropoetina |
Country Status (51)
Families Citing this family (231)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2590912T3 (es) | 1997-12-08 | 2016-11-24 | Merck Patent Gmbh | Proteínas de fusión heterodiméricas útiles para inmunoterapia dirigida y estimulación general del sistema inmunitario |
| US20030105294A1 (en) * | 1998-02-25 | 2003-06-05 | Stephen Gillies | Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins |
| MXPA00010070A (es) * | 1998-04-15 | 2004-03-10 | Lexigen Pharm Corp | Mejora de respuestas inmunes medidas de proteina de fusion anticuerpo-citoquina por co-administracion con inhibidor de angiogenesis. |
| US7304150B1 (en) | 1998-10-23 | 2007-12-04 | Amgen Inc. | Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia |
| US7345019B1 (en) * | 1999-04-13 | 2008-03-18 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| SK782002A3 (en) | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| US7067110B1 (en) | 1999-07-21 | 2006-06-27 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| JP4793971B2 (ja) * | 1999-08-09 | 2011-10-12 | メルク パテント ゲーエムベーハー | 複合サイトカイン−抗体複合体 |
| US20050202538A1 (en) * | 1999-11-12 | 2005-09-15 | Merck Patent Gmbh | Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics |
| EP1228214A2 (en) | 1999-11-12 | 2002-08-07 | MERCK PATENT GmbH | Erythropoietin forms with improved properties |
| ATE336514T1 (de) * | 2000-02-11 | 2006-09-15 | Merck Patent Gmbh | Steigerung der zirkulierenden halbwertzeit von auf antikörpern basierenden fusionsproteinen |
| US6586398B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| DE60109625T3 (de) † | 2000-05-15 | 2017-08-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Flüssige arzneizubereitung enthaltend ein erythropoietin derivat |
| RU2272644C2 (ru) * | 2000-06-29 | 2006-03-27 | Мерк Патент Гмбх | Усиление иммунной реакции, медиатором которой является слитый протеин антитело-цитокин, при помощи комбинированного лечения агентами, увеличивающими поглощение иммуноцитокина |
| JP5170931B2 (ja) * | 2000-10-16 | 2013-03-27 | 中外製薬株式会社 | Ｐｅｇ修飾エリスロポエチン |
| ATE505204T1 (de) * | 2000-12-20 | 2011-04-15 | Hoffmann La Roche | Konjugate von erythropoietin (epo) mit polyethylenglykol (peg) |
| ES2361824T3 (es) * | 2000-12-20 | 2011-06-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conjugados de eritropoyetina (epo) con polietilenglicol (peg). |
| US20030072737A1 (en) * | 2000-12-29 | 2003-04-17 | Michael Brines | Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs |
| US7767643B2 (en) | 2000-12-29 | 2010-08-03 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
| EP1234583A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
| DK1366067T3 (da) * | 2001-03-07 | 2012-10-22 | Merck Patent Gmbh | Ekspressionsteknologi for proteiner indeholdende en hybrid isotype-antistof-enhed |
| DE10112825A1 (de) | 2001-03-16 | 2002-10-02 | Fresenius Kabi De Gmbh | HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung |
| US6992174B2 (en) * | 2001-03-30 | 2006-01-31 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| US6969517B2 (en) | 2001-05-03 | 2005-11-29 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Recombinant tumor specific antibody and use thereof |
| US6818613B2 (en) | 2001-11-07 | 2004-11-16 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Aqueous sustained-release formulations of proteins |
| KR100467751B1 (ko) | 2001-12-03 | 2005-01-24 | 씨제이 주식회사 | 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질 |
| BR0214650A (pt) * | 2001-12-04 | 2005-05-03 | Merck Patent Gmbh | Imunocitoquinas com seletividade modulada |
| CN102552263A (zh) * | 2001-12-06 | 2012-07-11 | 法布罗根股份有限公司 | 提高内源性红细胞生成素(epo)的方法 |
| DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| DE10209822A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| US7129267B2 (en) | 2002-03-11 | 2006-10-31 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Methods for SHP1 mediated neuroprotection |
| WO2004003176A2 (en) * | 2002-07-01 | 2004-01-08 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs |
| MXPA05000796A (es) | 2002-07-24 | 2005-04-19 | Hoffmann La Roche | Aditivos de acidos polialquilenglicolicos. |
| US7459435B2 (en) * | 2002-08-29 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| WO2004022593A2 (en) * | 2002-09-09 | 2004-03-18 | Nautilus Biotech | Rational evolution of cytokines for higher stability, the cytokines and encoding nucleic acid molecules |
| US20050176627A1 (en) * | 2002-09-09 | 2005-08-11 | Anthony Cerami | Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin |
| CN100348618C (zh) | 2002-09-11 | 2007-11-14 | 弗雷泽纽斯卡比德国有限公司 | 生产羟烷基淀粉衍生物的方法 |
| US7459436B2 (en) * | 2002-11-22 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US7388079B2 (en) * | 2002-11-27 | 2008-06-17 | The Regents Of The University Of California | Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor |
| ATE471946T1 (de) * | 2002-12-17 | 2010-07-15 | Merck Patent Gmbh | Humanisierter antikörper (h14.18) des maus antikörpers 14.18, der gd2 bindet und seine fusion mit il-2 |
| US7553930B2 (en) | 2003-01-06 | 2009-06-30 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| US7587286B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-09-08 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7610156B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
| US7279174B2 (en) * | 2003-05-08 | 2007-10-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings comprising hydrophilic additives |
| AU2004238364A1 (en) | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Affymax, Inc. | Spacer moiety for poly(ethylene glycol) -modified peptides |
| CA2525497A1 (en) * | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Affymax, Inc. | Peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| BRPI0411160A (pt) * | 2003-05-12 | 2006-07-11 | Affymax Inc | novos compostos modificados com poli(glicol etilênico) e usos dos mesmos |
| AU2004238870B8 (en) * | 2003-05-12 | 2010-04-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| CA2527665A1 (en) * | 2003-05-30 | 2004-12-16 | Centocor, Inc. | Formation of novel erythropoietin conjugates using transglutaminase |
| WO2005011587A2 (en) * | 2003-07-30 | 2005-02-10 | New Century Pharmaceuticls | Chalaropsis lysozyme protein and its method of use in anti-bacterial applications |
| WO2005014655A2 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein |
| MXPA06003234A (es) * | 2003-09-29 | 2006-06-08 | Warren Pharmaceuticals Inc | Citosinas protectoras de los tejidos para el tratamiento y prevencion de la sepsis y la formacion de adhesiones. |
| AU2004279895A1 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Xencor, Inc | Protein based TNF-alpha variants for the treatment of TNF-alpha related disorders |
| ES2460671T3 (es) * | 2003-12-19 | 2014-05-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Uso de eritropoyetina en el tratamiento de alteraciones de la distribución del hierro en enfermedades intestinales inflamatorias crónicas |
| EP1548031A1 (en) * | 2003-12-22 | 2005-06-29 | Dubai Genetics FZ-LLC | Nature-identical erythropoietin |
| EP1699821B1 (en) * | 2003-12-31 | 2012-06-20 | Merck Patent GmbH | Fc-ERYTHROPOIETIN FUSION PROTEIN WITH IMPROVED PHARMACOKINETICS |
| CN1934143B (zh) * | 2004-01-21 | 2010-10-20 | 耐科塔医药公司 | 丙酸封端聚合物的制备方法 |
| ZA200606224B (en) * | 2004-02-02 | 2007-11-28 | Ambrx Inc | Modified human growth hormone polypeptides and their uses |
| EA010501B1 (ru) | 2004-03-11 | 2008-10-30 | Фрезениус Каби Дойчланд Гмбх | Конъюгаты гидроксиалкилкрахмала и белка, полученные восстановительным аминированием |
| US7588745B2 (en) * | 2004-04-13 | 2009-09-15 | Si Options, Llc | Silicon-containing products |
| US7253650B2 (en) | 2004-05-25 | 2007-08-07 | International Business Machines Corporation | Increase productivity at wafer test using probe retest data analysis |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| JP2008519858A (ja) * | 2004-11-11 | 2008-06-12 | アフィーマックス・インコーポレイテッド | エリスロポエチンレセプターに結合する新規ペプチド |
| BRPI0606934A2 (pt) | 2005-01-25 | 2017-07-11 | Cell Therapeutics Inc | Conjugado de proteína biologicamente ativa, composição, molécula de dna quimérica, vetor, célula, e, métodos para preparar conjugado de proteína biologicamente ativa, e para determinar se um dado conjugado de proteína exibe uma meia-vida de plasma modificada comparada com a meia-vida intrínseca do polipeptídeo biologicamente ativo não conjungado |
| EP1848461A2 (en) * | 2005-02-16 | 2007-10-31 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Conjugates of an epo moiety and a polymer |
| US8324159B2 (en) * | 2005-06-03 | 2012-12-04 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7550433B2 (en) | 2005-06-03 | 2009-06-23 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7919461B2 (en) | 2005-06-03 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US20070072795A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Anton Haselbeck | Treatment of neurodegenerative disorders |
| ES2357152T3 (es) * | 2005-10-04 | 2011-04-19 | Zymogenetics, L.L.C. | Producción y purificación de il-29. |
| US8142781B2 (en) * | 2005-10-07 | 2012-03-27 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for blood-brain barrier delivery |
| US8741260B2 (en) * | 2005-10-07 | 2014-06-03 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS |
| US8124095B2 (en) * | 2005-10-07 | 2012-02-28 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS |
| JP2009514814A (ja) * | 2005-10-21 | 2009-04-09 | シナジェバ・バイオファーマ・コーポレイション | グリコール化およびグリコシル化された家禽類由来の治療用たんぱく質 |
| US20080171696A1 (en) * | 2005-10-21 | 2008-07-17 | Avigenics, Inc. | Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins |
| US20130172274A1 (en) | 2005-12-20 | 2013-07-04 | Duke University | Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties |
| US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
| JP5528710B2 (ja) * | 2006-02-28 | 2014-06-25 | オリガシス コーポレイション | アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン含有ポリマー抱合体及びその製法 |
| WO2007108505A1 (ja) | 2006-03-22 | 2007-09-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | エリスロポエチン溶液製剤 |
| CA2659990C (en) * | 2006-08-04 | 2016-03-22 | Prolong Pharmaceuticals, Inc. | Polyethylene glycol erythropoietin conjugates |
| US8497246B2 (en) * | 2006-08-18 | 2013-07-30 | Armagen Technologies, Inc. | Methods for diagnosing and treating CNS disorders by trans-blood-brain barrier delivery of protein compositions |
| JP2010510794A (ja) * | 2006-11-28 | 2010-04-08 | ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途 |
| JP2010517529A (ja) * | 2007-02-02 | 2010-05-27 | アムジエン・インコーポレーテツド | ヘプシジン及びヘプシジン抗体 |
| WO2008137066A1 (en) * | 2007-05-02 | 2008-11-13 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases |
| CL2008002054A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-05-29 | Hoffmann La Roche | Metodo para la regeneracion de una columna de cromatografia de intercambio cationico despues de la elusion de eritropoyetina monopeguilada y metodo para obtener una eritropoyetina monopeguilada, incorporando el metodo de regeneracion de la columna de intercambio cationico. |
| AR067537A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-10-14 | Hoffmann La Roche | Purificacion de polipeptidos pegilados |
| CA3184105A1 (en) | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Armagen Inc. | Methods and compositions for increasing alpha-l-iduronidase activity in the cns |
| EP2205280B1 (en) * | 2007-09-27 | 2019-09-04 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
| US8796206B2 (en) | 2007-11-15 | 2014-08-05 | Amgen Inc. | Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stabilised by antioxidants for parenteral administration |
| WO2009089542A2 (en) | 2008-01-11 | 2009-07-16 | Serina Therapeutics, Inc. | Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same |
| US8101706B2 (en) | 2008-01-11 | 2012-01-24 | Serina Therapeutics, Inc. | Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same |
| MX2010008096A (es) | 2008-01-25 | 2010-09-22 | Amgen Inc | Anticuerpos de ferroportina y metodos de uso. |
| SG188143A1 (en) | 2008-02-08 | 2013-03-28 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
| EP2285402A2 (en) | 2008-04-14 | 2011-02-23 | Halozyme, Inc. | Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions |
| EP2294087B1 (en) | 2008-05-01 | 2014-05-14 | Amgen, Inc. | Anti-hepcidin antibodies and methods of use |
| EP4074327A1 (en) | 2008-06-27 | 2022-10-19 | Duke University | Therapeutic agents comprising elastin-like peptides |
| HUE035168T2 (en) | 2008-09-26 | 2018-05-02 | Ambrx Inc | Modified animal erythropoietin polypeptides and their applications |
| WO2010056981A2 (en) | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Massachusetts General Hospital | Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation bmp-6 |
| US8927249B2 (en) | 2008-12-09 | 2015-01-06 | Halozyme, Inc. | Extended soluble PH20 polypeptides and uses thereof |
| US9533055B2 (en) | 2009-03-18 | 2017-01-03 | Armagen Technologies, Inc. | Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of IgG-decoy receptor fusion proteins |
| EP2459291B1 (en) | 2009-07-30 | 2018-03-14 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Moveable chromatography column separator |
| WO2011024025A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Avesthagen Limited | An erythropoietin analogue and a method thereof |
| DK2477603T3 (en) | 2009-09-17 | 2016-06-13 | Baxalta Inc | STABLE CO-DEVELOPMENT OF hyaluronidase and Immunoglobulin, AND METHODS OF USE THEREOF |
| EP2480569B1 (en) * | 2009-09-23 | 2016-04-13 | ratiopharm GmbH | Process for the purification of recombinant human erythropoietin (epo) |
| DK2485761T3 (da) * | 2009-10-09 | 2019-05-06 | Armagen Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger til øgning af iduronat-2-sulfatase-aktivitet i CNS |
| US9662271B2 (en) | 2009-10-23 | 2017-05-30 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
| WO2011075185A1 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Oligasis | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
| SG10201908916UA (en) * | 2010-04-27 | 2019-11-28 | Scil Tech Gmbh | Stable MIA/CD-RAP formulations |
| PL2575935T5 (pl) | 2010-06-07 | 2023-12-11 | Amgen Inc. | Urządzenie do podawania leku |
| US9878046B2 (en) | 2010-07-20 | 2018-01-30 | Halozyme, Inc. | Adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent and methods for ameliorating or preventing the side-effects |
| RU2566267C2 (ru) | 2010-09-14 | 2015-10-20 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Способ очистки пегилированного эритропоэтина |
| MX347297B (es) | 2011-02-02 | 2017-04-21 | Hoffmann La Roche | Soporte para columna de cromatografía. |
| EP2907504B1 (en) | 2011-02-08 | 2017-06-28 | Halozyme, Inc. | Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia |
| CA2831100C (en) | 2011-03-31 | 2020-02-18 | Mark Dominis Holt | Vial adapter and system |
| SI2699293T1 (sl) | 2011-04-20 | 2019-05-31 | Amgen Inc. | Avtoinjekcijski aparat |
| US20130011378A1 (en) | 2011-06-17 | 2013-01-10 | Tzung-Horng Yang | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| DK3045189T3 (en) | 2011-10-14 | 2018-06-18 | Amgen Inc | Injector and mounting method |
| CN104093415B (zh) | 2011-10-24 | 2017-04-05 | 哈洛齐梅公司 | 抗乙酰透明质酸剂疗法的同伴诊断剂及其使用方法 |
| JP6266529B2 (ja) | 2011-12-02 | 2018-01-24 | アーマジェン・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ， Ｉｎｃ． | Ｃｎｓにおけるアリールスルファターゼａ活性を増加するための方法および組成物 |
| CA2861919C (en) | 2011-12-30 | 2019-04-02 | Halozyme, Inc. | Ph20 polypeptide variants, formulations and uses thereof |
| KR101626703B1 (ko) | 2012-04-04 | 2016-06-02 | 할로자임, 아이엔씨 | 항-히알루로난 제제 및 종양-표적 탁산을 이용한 병용 치료 |
| CN102816227A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-12 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 回收促红细胞生成素的方法 |
| US9278124B2 (en) | 2012-10-16 | 2016-03-08 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
| ES2860954T3 (es) | 2012-11-21 | 2021-10-05 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de fármacos |
| EP2968760B1 (en) | 2013-03-15 | 2024-01-03 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
| KR102295834B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-08-30 | 암젠 인크 | 인체 윤곽 적응성을 가진 자기 주사기 장치 |
| EP2968503B1 (en) | 2013-03-15 | 2018-08-15 | Intrinsic LifeSciences LLC | Anti-hepcidin antibodies and uses thereof |
| US10492990B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-03 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
| CA2897825C (en) | 2013-03-22 | 2022-05-24 | Scott R. Gibson | Injector and method of assembly |
| TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途 |
| WO2015035342A2 (en) | 2013-09-08 | 2015-03-12 | Oligasis Llc | Factor viii zwitterionic polymer conjugates |
| CA3168888A1 (en) | 2013-10-24 | 2015-04-30 | Amgen Inc. | Drug delivery system with temperature-sensitive control |
| AU2014340171B2 (en) | 2013-10-24 | 2019-05-30 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
| WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
| WO2015171777A1 (en) | 2014-05-07 | 2015-11-12 | Amgen Inc. | Autoinjector with shock reducing elements |
| KR102416904B1 (ko) | 2014-06-03 | 2022-07-04 | 암겐 인코포레이티드 | 약물 전달 디바이스에 의해 수집된 데이터를 원격으로 프로세싱하기 위한 시스템들 및 방법들 |
| US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
| WO2016033555A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor |
| WO2016049036A1 (en) | 2014-09-22 | 2016-03-31 | Intrinsic Lifesciences Llc | Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof |
| US10695506B2 (en) | 2014-10-14 | 2020-06-30 | Amgen Inc. | Drug injection device with visual and audio indicators |
| CA2964317C (en) | 2014-10-14 | 2021-10-05 | Halozyme, Inc. | Compositions of adenosine deaminase-2 (ada2), variants thereof and methods of using same |
| KR20210013299A (ko) | 2014-10-17 | 2021-02-03 | 코디악 사이언시스 인코포레이티드 | 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트 |
| US10799630B2 (en) | 2014-12-19 | 2020-10-13 | Amgen Inc. | Drug delivery device with proximity sensor |
| US11357916B2 (en) | 2014-12-19 | 2022-06-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
| US10538589B2 (en) | 2015-01-14 | 2020-01-21 | Armagen Inc. | Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU |
| AU2016220141B2 (en) | 2015-02-17 | 2018-07-12 | Amgen Inc. | Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback |
| ES2905870T3 (es) | 2015-02-27 | 2022-04-12 | Amgen Inc | Dispositivo de suministro de fármacos que tiene un mecanismo de protección de aguja con un umbral de resistencia ajustable al movimiento de la protección de aguja |
| WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
| ES2755717T3 (es) | 2015-12-09 | 2020-04-23 | Amgen Inc | Autoinyector con tapa de señalización |
| NZ783685A (en) | 2015-12-30 | 2025-09-26 | Kodiak Sciences Inc | Antibodies and conjugates thereof |
| US11154661B2 (en) | 2016-01-06 | 2021-10-26 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
| WO2017160799A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-21 | Amgen Inc. | Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices |
| CN105820232B (zh) * | 2016-04-08 | 2019-05-17 | 昂德生物药业有限公司 | 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用 |
| US11541168B2 (en) | 2016-04-29 | 2023-01-03 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
| US11389588B2 (en) | 2016-05-02 | 2022-07-19 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
| WO2017197222A1 (en) | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Amgen Inc. | Vial sleeve assembly |
| EP3458988B1 (en) | 2016-05-16 | 2023-10-18 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
| EP3465124B1 (en) | 2016-06-03 | 2026-02-11 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
| US11285266B2 (en) | 2016-07-01 | 2022-03-29 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
| AU2017295037B2 (en) | 2016-07-15 | 2021-07-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for purifying PEGylated erythropoietin |
| WO2018034784A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
| WO2018081234A1 (en) | 2016-10-25 | 2018-05-03 | Amgen Inc. | On-body injector |
| US20190358411A1 (en) | 2017-01-17 | 2019-11-28 | Amgen Inc. | Injection devices and related methods of use and assembly |
| MX2019009625A (es) | 2017-02-17 | 2019-10-09 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con trayectoria de flujo de fluido esteril y metodo relacionado de ensamblaje. |
| JP7280189B2 (ja) | 2017-02-17 | 2023-05-23 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物送達装置用の挿入機構 |
| JP2020508803A (ja) | 2017-03-06 | 2020-03-26 | アムジエン・インコーポレーテツド | 作動防止特徴部を備える薬物送達デバイス |
| IL268478B2 (en) | 2017-03-07 | 2023-10-01 | Amgen Inc | Inserting a needle using super pressure |
| AU2018230486B2 (en) | 2017-03-09 | 2023-05-11 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
| EP3570871B1 (en) | 2017-03-20 | 2020-11-18 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Method for in vitro glycoengineering of an erythropoiesis stimulating protein |
| KR20240042212A (ko) | 2017-03-28 | 2024-04-01 | 암겐 인코포레이티드 | 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법 |
| CN110709121B (zh) | 2017-06-08 | 2022-06-24 | 安进公司 | 扭矩驱动式药物递送装置 |
| EP3634539A1 (en) | 2017-06-08 | 2020-04-15 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
| SG10202110500TA (en) | 2017-06-22 | 2021-11-29 | Catalyst Biosciences Inc | Modified membrane type serine protease 1 (mtsp-1) polypeptides and methods of use |
| MA49447A (fr) | 2017-06-22 | 2020-04-29 | Amgen Inc | Réduction des impacts/chocs d'activation d'un dispositif |
| US11395880B2 (en) | 2017-06-23 | 2022-07-26 | Amgen Inc. | Electronic drug delivery device |
| ES2972207T3 (es) | 2017-07-14 | 2024-06-11 | Amgen Inc | Sistema de inserción-retracción de agujas con sistema de resorte de torsión doble |
| EP4292576A3 (en) | 2017-07-21 | 2024-01-17 | Amgen Inc. | Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly |
| JP7242562B2 (ja) | 2017-07-25 | 2023-03-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | 容器アクセスシステムを有する薬物送達デバイス及び関連する組立方法 |
| US11617837B2 (en) | 2017-07-25 | 2023-04-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with gear module and related method of assembly |
| MA49838A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Amgen Inc | Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre |
| MA49897A (fr) | 2017-08-18 | 2020-06-24 | Amgen Inc | Injecteur sur-corps avec patch adhésif stérile |
| US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
| WO2019070472A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Amgen Inc. | FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE |
| US11813426B2 (en) | 2017-10-06 | 2023-11-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device including seal member for needle of syringe |
| MA50348A (fr) | 2017-10-09 | 2020-08-19 | Amgen Inc | Dispositif d'administration de médicament comprenant un ensemble d'entraînement et procédé d'assemblage associé |
| US11305026B2 (en) | 2017-11-03 | 2022-04-19 | Amgen Inc. | Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device |
| ES2994389T3 (en) | 2017-11-06 | 2025-01-23 | Amgen Inc | Drug delivery device with placement and flow sensing |
| EP3707075A1 (en) | 2017-11-06 | 2020-09-16 | Amgen Inc. | Fill-finish assemblies and related methods |
| CA3079665A1 (en) | 2017-11-10 | 2019-05-16 | Amgen Inc. | Plungers for drug delivery devices |
| CA3079540A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Amgen Inc. | Door latch mechanism for drug delivery device |
| EP3710089A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-09-23 | Amgen Inc. | Autoinjector with stall and end point detection |
| KR102523239B1 (ko) | 2017-12-29 | 2023-04-18 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 페길화 단백질 조성물을 제공하기 위한 방법 |
| CN111727063A (zh) | 2017-12-29 | 2020-09-29 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于提供聚乙二醇化蛋白质组合物的方法 |
| PL3731872T3 (pl) | 2017-12-29 | 2022-03-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Sposób dostarczania kompozycji pegylowanego białka |
| SG11202008242XA (en) | 2018-03-02 | 2020-09-29 | Kodiak Sciences Inc | Il-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof |
| US20190351031A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
| US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
| US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
| WO2020023336A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
| CN112351804A (zh) | 2018-07-24 | 2021-02-09 | 安进公司 | 用于施用药物的输送装置 |
| US12303677B2 (en) | 2018-07-24 | 2025-05-20 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation |
| CN112469454B (zh) | 2018-07-24 | 2024-01-26 | 安进公司 | 用于施用药物的输送装置 |
| US12109389B2 (en) | 2018-07-31 | 2024-10-08 | Amgen Inc. | Fluid path assembly for a drug delivery device |
| DK3613486T3 (da) * | 2018-08-24 | 2021-01-04 | Uga Biopharma Gmbh | Metode og anlæg til rengøring af epo og/eller et epo-derivat |
| AU2019347710B2 (en) | 2018-09-24 | 2025-05-08 | Amgen Inc. | Interventional dosing systems and methods |
| AU2019350660B2 (en) | 2018-09-28 | 2024-09-26 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
| EP3860685A1 (en) | 2018-10-02 | 2021-08-11 | Amgen Inc. | Injection systems for drug delivery with internal force transmission |
| AR116607A1 (es) | 2018-10-05 | 2021-05-26 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de fármacos con indicador de dosis |
| EP3866889A1 (en) | 2018-10-15 | 2021-08-25 | Amgen Inc. | Platform assembly process for drug delivery device |
| MX2021004219A (es) | 2018-10-15 | 2021-05-27 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con mecanismo de amortiguacion. |
| TWI831847B (zh) | 2018-11-01 | 2024-02-11 | 美商安進公司 | 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法 |
| US12485219B2 (en) | 2018-11-01 | 2025-12-02 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
| MA54048A (fr) | 2018-11-01 | 2022-02-09 | Amgen Inc | Dispositifs d'administration de médicament avec rétraction partielle de l'organe d'administration de médicament |
| JOP20210146A1 (ar) | 2018-12-28 | 2023-01-30 | Vertex Pharma | بولي ببتيدات منشط بلازمينوجين من نوع يوروكيناز معدلة وطرق استخدامها |
| US11613744B2 (en) | 2018-12-28 | 2023-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
| AU2020263289B2 (en) | 2019-04-24 | 2025-05-22 | Amgen Inc. | Syringe sterilization verification assemblies and methods |
| CA3148261A1 (en) | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
| AU2020364071A1 (en) | 2019-10-10 | 2022-05-26 | Kodiak Sciences Inc. | Methods of treating an eye disorder |
| CN116194585A (zh) | 2020-09-22 | 2023-05-30 | 美国杰科实验室有限公司 | 一种糖基化修饰的促红细胞生成素及其应用 |
| WO2022159414A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-07-28 | University Of Rochester | Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction |
| AU2022271741A1 (en) | 2021-05-10 | 2023-11-23 | Chiome Bioscience Inc. | Purification method of antibody composition |
| CN117320964A (zh) | 2021-05-21 | 2023-12-29 | 美国安进公司 | 优化药物容器的灌装方案的方法 |
| WO2023209074A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods of restoring erythropoiesis in patients suffering from a sf3b1 mutant myelodysplastic syndrome by correcting coasy mis-splicing |
| AU2023374183A1 (en) | 2022-11-02 | 2025-03-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing glycoprotein compositions |
| CN116492448A (zh) * | 2023-04-12 | 2023-07-28 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 负载peg-epo及间充质干细胞的组合物、药物及其制备方法 |
| WO2025227129A2 (en) | 2024-04-25 | 2025-10-30 | Starrock Pharma Llc | Delivery vehicles comprising proglucagon derived polypeptides and anabolic polypeptides and uses thereof |
| WO2026030152A1 (en) | 2024-07-29 | 2026-02-05 | Amgen Inc. | System and method for assessing transferability of a fill recipe |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| KR850004274A (ko) * | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
| DE3572982D1 (en) | 1984-03-06 | 1989-10-19 | Takeda Chemical Industries Ltd | Chemically modified lymphokine and production thereof |
| JPS6197229A (ja) | 1984-10-18 | 1986-05-15 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定なエリトロポエチン製剤 |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5641663A (en) * | 1985-11-06 | 1997-06-24 | Cangene Corporation | Expression system for the secretion of bioactive human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and other heterologous proteins from steptomyces |
| US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5166322A (en) | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
| US5674534A (en) * | 1992-06-11 | 1997-10-07 | Alkermes, Inc. | Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin |
| NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
| US5359030A (en) * | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| US5681811A (en) | 1993-05-10 | 1997-10-28 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| IL110669A (en) * | 1993-08-17 | 2008-11-26 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
| US5643575A (en) * | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5919455A (en) * | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| EP0741187A2 (en) * | 1995-05-05 | 1996-11-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant obese (Ob) proteins |
| US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| US6025324A (en) * | 1996-05-15 | 2000-02-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Pegylated obese (ob) protein compositions |
| TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
| DE69726571T2 (de) * | 1997-09-01 | 2004-11-04 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Rekombinantes humanes Erythropoietin mit vorteilhaftem Glykosylierungsmuster |
| EP1135493A2 (en) | 1998-11-30 | 2001-09-26 | Eli Lilly And Company | Erythropoietic compounds |
| JO2291B1 (en) * | 1999-07-02 | 2005-09-12 | اف . هوفمان لاروش ايه جي | Erythropoietin derivatives |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| WO2001068141A2 (en) | 2000-03-17 | 2001-09-20 | Maxygen Aps | Dispersions of polypeptide conjugates |
| US6586398B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| DE60109625T3 (de) * | 2000-05-15 | 2017-08-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Flüssige arzneizubereitung enthaltend ein erythropoietin derivat |
-
2000
- 2000-06-23 CZ CZ20002386A patent/CZ299516B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 SK SK987-2000A patent/SK286301B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 US US09/604,938 patent/US6583272B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 IL IL13705600A patent/IL137056A0/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-28 DK DK00113115T patent/DK1064951T3/da active
- 2000-06-28 AT AT00113115T patent/ATE370748T1/de active
- 2000-06-28 CA CA002310536A patent/CA2310536C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 DE DE60036053T patent/DE60036053T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 TR TR2000/01956A patent/TR200001956A2/xx unknown
- 2000-06-28 AU AU42744/00A patent/AU736067B2/en not_active Expired
- 2000-06-28 DO DO2000000030A patent/DOP2000000030A/es unknown
- 2000-06-28 NO NO20003372A patent/NO327043B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 HR HR20000436A patent/HRP20000436B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 PE PE2000000654A patent/PE20010297A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 NZ NZ505454A patent/NZ505454A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 ES ES00113115T patent/ES2289985T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 SI SI200030963T patent/SI1064951T1/sl unknown
- 2000-06-28 RS YUP-407/00A patent/RS49928B/sr unknown
- 2000-06-28 DE DE122007000064C patent/DE122007000064I2/de active Active
- 2000-06-28 ID IDP20000533D patent/ID26447A/id unknown
- 2000-06-28 EP EP00113115A patent/EP1064951B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 PT PT00113115T patent/PT1064951E/pt unknown
- 2000-06-28 EP EP07010693A patent/EP1839676A3/en not_active Withdrawn
- 2000-06-29 SG SG200003658A patent/SG92717A1/en unknown
- 2000-06-29 GT GT200000109A patent/GT200000109A/es unknown
- 2000-06-29 CN CNB001078895A patent/CN1184233C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 MY MYPI20002954A patent/MY128500A/en unknown
- 2000-06-29 GE GEAP20005430A patent/GEP20022804B/en unknown
- 2000-06-29 CN CNB2004100036029A patent/CN1283664C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 CO CO00048963A patent/CO5190661A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 PA PA20008497801A patent/PA8497801A1/es unknown
- 2000-06-29 AR ARP000103318A patent/AR024625A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 OA OA1200000197A patent/OA11442A/fr unknown
- 2000-06-30 IT IT2000MI001479A patent/IT1318606B1/it active
- 2000-06-30 IS IS5554A patent/IS2492B/is unknown
- 2000-06-30 DE DE10031839A patent/DE10031839A1/de not_active Ceased
- 2000-06-30 UY UY26228A patent/UY26228A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 HU HU0002553A patent/HU226233B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-30 MA MA26014A patent/MA26746A1/fr unknown
- 2000-06-30 SV SV2000000120A patent/SV2002000120A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 TW TW089112948A patent/TWI235667B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 ES ES200001625A patent/ES2191511B1/es not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-30 GB GB0400086A patent/GB2393960C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-30 GB GB0016205A patent/GB2353281B/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-30 MX MXPA00006547A patent/MXPA00006547A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 TN TNTNSN00147A patent/TNSN00147A1/fr unknown
- 2000-06-30 BG BG104570A patent/BG65449B1/bg unknown
- 2000-06-30 KR KR1020000036976A patent/KR100593143B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-02 GC GCP2000749 patent/GC0000197A/en active
- 2000-07-03 BR BRPI0002276A patent/BRPI0002276B8/pt unknown
- 2000-07-03 JP JP2000201525A patent/JP3727009B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 EA EA200000607A patent/EA003777B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 PL PL341187A patent/PL202758B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 BR BR0002276-4A patent/BR0002276A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 FR FR0008609A patent/FR2795734B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-11-14 US US10/293,551 patent/US20030120045A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-12-17 JP JP2003419520A patent/JP2004155787A/ja active Pending
-
2006
- 2006-09-25 AR ARP060104175A patent/AR055650A2/es unknown
-
2007
- 2007-08-23 CY CY20071101097T patent/CY1107719T1/el unknown
- 2007-09-05 NL NL300289C patent/NL300289I9/nl unknown
- 2007-09-06 CY CY200700021C patent/CY2007021I2/el unknown
- 2007-09-12 LU LU91363C patent/LU91363I2/fr unknown
- 2007-10-19 FR FR07C0051C patent/FR07C0051I2/fr active Active
-
2009
- 2009-05-05 NO NO2009010C patent/NO2009010I2/no unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2310536C (en) | Erythropoietin derivatives | |
| CA2378533C (en) | Erythropoietin conjugates with polyethylenglycol | |
| CN100365117C (zh) | 聚乙二醇化和双糖基化的红细胞生成素 | |
| EP1311285B2 (en) | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivative |