PT739343E - Sal onio de taxo-diterpenoide, soluvel em agua - Google Patents
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Description
DESCRICÃQ “Sal ónio de taxo-diterpenóide, solúvel em água”
Campo técnico: O presente invento refere-se a pródrogas de taxol. Mais particularmente, o invento refere-se a taxol e a miméticos de taxol derivados com sais ónio de aza-arenos para formarem pródrogas solúveis em água que são activadas por contacto com proteína sérica.
Antecedentes: O Taxol, um agente anti-neoplásico originalmente isolado de Taxus brevifolia, está aprovado para o uso no tratamento do cancro dos ovários e espera-se que também venha a ser usado nos cancros da mama, pulmão e da pele. Contudo, uma vez que o Taxol possui uma solubilidade em água extremamente baixa, i.e. menos do que 1,5x10'6 M, tem sido necessário formular o Taxol numa mistura de Cremaphor ™, um óleo de rícino poli-oxietilado e etanol, de modo a ser conseguida uma concentração terapêutica. Esta formulação pode induzir uma variedade de efeitos secundários significativos, incluindo reacções de hipersensibilidade.
Embora pré-medicação e administração lenta da droga possam contornar estes problemas na prática clínica, todo o protocolo é bastante incómodo e requer monitorização extensiva e próxima dos pacientes. Embora a eficiência dramática do taxol tenha levado ao seu uso clínico apesar destes problemas, uma forma de taxol solúvel em água poderia obviar, completamente, a necessidade para este protocolo problemático.
Uma abordagem para ultrapassar estas dificuldades de formulação, tentadas anteriormente por vários grupos, incluindo o nosso, consiste na introdução de funcionalidade de solubilização que as vias metabólicas normais podem remover in vivo. Compostos deste tipo, designados por pródrogas, consistem, no caso do taxol, principalmente em derivados éster nas posições 2’ e 7. Ver por exemplo EP-A-0473326. Correntemente nenhum destes prótaxóis tiveram sucesso na prática clínica. Em qualquer caso, a pródroga é rapidamente eliminada da circulação pelos rins. O Taxol é apenas um de uma classe de taxo-diterpenóides com bioactividade. Outro taxo-diterpenóide preferido com actividade clinicamente significativa é o Taxotere™. Também se sabe que análogos de taxol com substituição em C-2 têm bioactividade. 2 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ
Infelizmente, todos os taxo-diterpenóides bioactivos conhecidos têm uma baixa solubilidade aquosa. O necessário consiste numa pródroga que seja activada por contacto com o soro e que seja retida durante um período clinicamente significativo após administração.
Sumário: O invento consiste num sal ónio de um taxo-diterpenóide-Cn,2-O-aza-areno. O sal ónio de aza-areno inclui uma carga deslocalizada que confere solubilidade aquosa. O presente invento ensina que sais ónio de taxo-diterpenóide-Cn,2-0-aza-arenos são solúveis e estáveis em meios aquosos; que, com a adição de proteína sérica o 2-O-aza-areno é deslocado e é formado um intermediário proteína:taxo-diterpenóide; e que o intermediário proteína:taxo-diterpenóide se dissocia com ao longo do tempo para proporcionar um taxo-diterpenóide bioactivo. Taxo-diterpenóides preferidos incluem taxol, análogos de taxol substituídos em C-2 e Taxotere™. O taxo-diterpenóide-Cn,2-O-aza-areno pode ser produzido numa síntese em um passo, por reacção de sais ónio de aza-arenos halogenados em 2 com hidroxilos reactivos do taxo-diterpenóide. Hidroxilos reactivos do taxol e do Taxotere™ estão localizados em C e C . Um sal ónio de aza-areno halogenado em 2 preferido é o tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio. Outros sais ónio de aza-arenos halogenados em 2 utilizáveis são descritos por T. Mukaiyama, Angewandte Chemie, 1979, 18(1$), 707-808, aqui incorporado por referência.
Mais particularmente, o invento é dirigido a taxo-diterpenóides solúveis em água
na qual Rx é Ph ou íBuO; R10 é OAc ou OH; RY é um substituinte de C-2, definido seguidamente; e R e R são, cada um, seleccionados de entre o grupo consistindo em OH e um sal ónio de um 2-O-aza-areno, com a condição de que pelo menos um de R2 e R7 seja o sal ónio do 2-O-aza-areno. O sal ónio do 2-O-aza-areno pode ser representado por qualquer
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ uma das fórmulas seguintes para o sal ónio I ou o sal ónio II: R*
sal ónio Π
3R
2R^N^O
I R1
sal ónio I ♦ i 2 3 Y 1 8 nas quais Z,Z,Z,R XeR aR são tal como definidos na reivindicação 1 em anexo.
Breve descricão dos desenhos: A Figura 1 ilustra a cinética da libertação de taxol a partir de taxol-2’-MPT (2) em várias soluções aquosas, a 25°C (linha horizontal). Embora estável em água e em soluções tampão aquosas, a extracção com cloreto de metileno de plasma tratado com o composto 2 mostrou conversão completa de 2 em taxol (1) em 10 minutos (curva, 20% do total recuperado). A Figura 2 A ilustra uma micrografia de transmissão de electrão (TEM) de nano-estruturas fibrosa, helicoidais, auto-formadas, de taxol-2’-MPT, i.e. composto 2, em soluções tamponadas (2,1 mM em PBS 100 mM), acima da concentração crítica de agregação (CCA) deste composto, usando um processo de mancha negativa por fosfotungstato e uma ampliação de 25000 x. O pormenor mostra uma porção de uma das fibrilas ampliada adicionalmente para ilustrar a natureza helicoidal da estrutura. A Figura 2 B ilustra uma micrografia de transmissão de electrão (TEM) de nano-estruturas esféricas, auto-formadas, de taxol-2’-MPT (composto 2), em soluções não tamponadas (2,1 mM em H20), acima da concentração crítica de agregação (CCA) deste composto, usando um processo de mancha negativa com acetato de uranilo e uma ampliação de 45000 x. A Figura 3 ilustra medições de uma polimerização-despolimerização de tubulina com controlo negativo (triângulos), controlo positivo de taxol (losangos) e taxol-2’-MPT, i.e. composto 2 (pontos). A despolimerização promovida por cloreto de cálcio é suprimida pelo taxol mas não pelo taxol-2’-MPT. A Figura 4 ilustra as citotoxicidades relativas do taxol-2’-MPT (composto 2) e do » 4 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ taxol contra uma variedade de linhas celulares. A Figura 5 ilustra a eficiência do taxol-2’-MPT no modelo do xeno-enxerto de tumor do pulmão no ratinho nu: dextrose a 5% (triângulos), taxol (losangos) e taxol-2’-MPT (pontos).
Descricão detalhada: São descritos a síntese, propriedades físicas e perfis farmacêuticos de sais ónio de taxo-diterpenóide-Cn,2-0-aza-arenos, solúveis em água. Síntese de taxol-2’-MPT: O taxol-2’-MPT (tosilato de metilpiridínio), composto 2, foi sintetizado de acordo com o método de T. Mukaiyama, Angewandte Chemie, 1979, 18(18), 707-808, aqui incorporado por referência. Foi seco taxol (10 mg, 0,012 mM), de NaPro Biochemicals, Boulder CO, USA, por destilação azeotrópica com tolueno (2x1,0 ml) e, depois, foi dissolvido em cloreto de metileno (0,4 ml) e tratado sequencialmente, sob uma atmosfera de árgon seco, com trietilamina recém-destilada (5 microl, 0,04 mM, 3 equivalentes) e com tosilato de 2-fluoro-l -metilpiridínio (5 mg, 0,018 mM, 1,5 equivalentes) Aldrich Chemicals e deixou-se em agitação, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A solução, límpida, incolor virou rapidamente para um amarelo claro. O decurso da reacção foi seguido por cromatografia em camada fma (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofurano 65:água 35, UV/ácido fosfomolíbdico e, após, trinta minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas um composto era evidente por CCF (Rf 0,8). A purificação por cromatografia líquida de alta pressão, de fase inversa (HPLC) (coluna C18, tampão NH4OAc 1 mM, pH 6,5/gradiente de metanol, 1,5 ml/min., UV) originou, após remoção do solvente in vacuo. taxol-2’-MPT (2) puro (12 mg, rendimento de 93%) como um sólido branco, amorfo. Todos os dados espectroscópicos (*H RMN e HRMS) estavam de acordo com a estrutura atribuída a 2. !H RMN (CDC13, 125 MHz) Ô: 1,055 (s, 3H, C17-H), 1,083 (s, 3H, C19-H), 1,724 (s, 3H, C19-H), 1,858 (m, 1H, C-6-8H), 1,913 (s, 3H, CH3-Ph), 2,193 (s, 3H, C10-OC(O)CH3), 2,514 (m, 1H, C6-aH), 3,663 (d, 1H, J=7,0 Hz, C3-H), 4,110 (d, 1H, J=8,5, C20-8H, A de AB), 4,133 (s, 3H, N-CH3), 4,230 (d, 1H, J=8,5, C20-aH, B de AB), 4,315 (dd, 1H, J=8,7, 10,7, C7-H), 4,901 (dd, 1H, /=1,0, 7,7, C5-H), 5,501 (d, 1H, C2-H, J=7,0), 5,702 (bt, 1H, C2’-H, J=8,0), 5,951 (dd, 1H, C13-H, J=1,0, 8,0), 6,120 (bd, 1H, C3’-H, J=10,0), 6,181 (s, 1H, C10-H) 7,702 (t, 1H, N-H, J=7,5) 7,33-7,45 (m, 8 H, Ar-H), 7,56-7,62 (m, 4 H, Ar-H), 7,56-7,62 (m, 4 H, Ar-H), 7,68-7,75 (m, 4H, Ar-H), 8,00-8,05 (m, 1H Ar-H), 8,23-8,28 (m, 1H, Pyr-H), 8,41 (m, 5 83 835 ΕΡ Ο 73§343/ΡΤ 1Η, Pyr-H). IV (puro, pastilha de KC1) cm1: 3640-3120 (bm), 3030-2870 (bm), 2320 (m). 1720 (s), 1630 (m), 1560 (m), 1500 (m), 1360 (s), 1160 (m), 1070 (m), 700 (m). UV/Vis (CHC13) nm: 254, 280. FAB HRMS: calculado para C53H57014N2: 945,3810; determinado: 945,3810.
As estruturas moleculares do taxol, composto 1, e do taxol-2’-MPT, composto 2, são ilustradas no Esquema IA. A síntese do taxol-2’-MPT é ilustrada no Esquema 1B.
1. 1 axol s (>axojj—-OH 2: tosilato de taxol-2’-metilpiridmio (taxol-2’-MPT)
(CKjCHjJaN, CHjCij 90%
Θ
Esquemas IA e 1B Síntese de Taxol-7-MPT: A síntese do taxol-7-ΜΡΤ diferiu levemente ligeiramente da síntese do taxol-2’-MPT. O taxol (10 mg, 0,012 mM), de NaPro Biochemicals, Boulder CO, EUA, foi dissolvido em cloreto de metileno (2,0 ml) e foi tratado sequencialmente com trietilamina (67 microl, 0,48 mM, 40 equivalentes) e com tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (34 mg, 0,12 mM, 10 equivalentes) Aldrich Chemicals e foi deixado em agitação, à temperatura, ambiente, durante 5 minutos. A purificação por cromatografia líquida de alta pressão, de fase inversa (HPLC) originou taxol-2’-MPT (2) puro (12 mg, 93% de rendimento) como um sólido branco amorfo. O Rf do taxol-7-ΜΡΤ é cerca de 0,3 minutos inferior ao Rf do taxol-2’-MPT. O rendimento foi 11 mg ou 85%. Os dados espectroscópicos ('h RMN e HRMS) foram os esperados. i; 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 6
Síntese de taxol-bis-2’.7-MPT: A síntese do taxol-bis-2’,7-MPT diferiu da síntese do taxol-7-ΜΡΤ apenas no que se refere ao tempo de reacção. O taxol (10 mg, 0,012 mM), de NaPro Biochemicals, Boulder CO, EUA, foi dissolvido em cloreto de metileno (2,0 ml) e foi tratado sequencialmente com trietilamina (67 microl, 048 mM, 40 equivalentes) e com tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (34 mg, 0,12 mM, 10 equivalentes) Aldrich Chemicals e foi deixado em agitação, à temperatura ambiente, durante 18 horas. A purificação por cromatografia líquida de alta pressão, de fase inversa (HPLC) originou taxol-2’-MPT (2) puro (12 mg, 93% de rendimento) como um sólido branco amorfo. O Rf do taxol-bis-2’,7-MPT é cerca de 0,3 minutos inferior ao Rf do taxol-2’-MPT. O rendimento foi 13 mg ou 85%. Os dados espectroscópicos (*Η RMN e HRMS) foram os esperados. São ilustrados no esquema seguinte esquemas sintéticos alternativos com base no método de T. Mukaiyama (Angewandte Chemie 1979, 18 (18), 707-808), usando uma variedade de sais ónio de aza-arenos halogenados em 2 para conseguir a derivação de qualquer uma das posições 2’ e 7 do taxol:
Ae° OH sal halónio 2,6-lutidina CH2CL2
1) TESOTf, 2,6-lutidina, CH2CL2 2) sal halónio, 2,6-lutidina, V CH2CL2
Alquilo
J X = BF4 ; TsO ; haíogenetos 7 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Medições de estabilidade e Cinética de libertação de Taxol:
Devido a uma diferença no tempo de retenção usando as nossas condições padrão de HPLC (ver Fig. 1) e a máximos de absorção no ultravioleta diferentes (l28(/l254=l>6 para 2 e 0,3 para 1) a estabilidade de 2 foi facilmente ensaiada por HPLC (Fig. 1). Em todos os estudos seguintes, os únicos produtos de degradação detectados foram taxol e a piridinona que resulta da hidrólise dos sais de piridínio (Fig. lc.). O taxol-2’-MPT parece completamente estável, no estado sólido, numa gama de temperaturas -80°C a 25°C independentemente da presença de uma atmosfera inerte. Em água, dextrose a 5% e solução salina a 1,5%, 2 é estável durante vários dias, mas começa a exibir degradação lenta após 4 dias. Em solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou em sistemas tampão acetato de amónio-fosfato com pH de 6,0 a 7,3, 2 é estável a 25°C durante mais do que 21 dias. O taxol-2’-MPT (2) é, no entanto, instável em HC1 a 5% (pH 1,1) e salmoura. Muito significativamente, 2 decompõe-se rapidamente quando é incubado com plasma humano a 37°C. Este resultado sugere a presença de factores no plasma que iniciam a degradação de 2 em taxol. Uma vez que se mostrou que o taxol se liga a albumina, em soros, numa extensão de cerca de 85%, suspeita-se que resíduos básicos de lisina desta proteína possam iniciar a decomposição. A cinética de libertação do taxol, a partir de taxol-2’-MPT (2) em várias soluções aquosas, a 25°C, é apresentada na Figura 1. Em água estéril, solução salina tamponada com fosfato, pH 6,2, ou dextrose a 5%, não é observada qualquer libertação de taxol durante um período de 11 minutos, tal como indicado pela linha horizontal. Embora seja estável em água e soluções tampão aquosas, a extracção com cloreto de metileno de plasma tratado com composto 2 mostraram conversão completa de 2 em taxol (1) em 10 minutos, tal como indicado pela linha curva. Nestas condições, é recuperado 20% do total. Mais particularmente, o taxol-2’-MPT (2) foi dissolvido no sistema aquoso, com auxílio de ultra-sons, durante cinco minutos. Foram, então, removidas alíquotas aos tempos indicados e foram submetidas a partição em cloreto de metileno para a extinção da reacção. Foram, então, analisadas amostras usando um instrumento de HPLC Waters Maxima, equipado com um auto-injector (coluna C18, 3,9x300 mm, equipada com uma pré-coluna. O caudal era de 1,5 ml/minuto. O gradiente de eluente A-B foi prolongado durante 30 minutos. “A” era 80% de acetato de amónio 80 mM, pH 6,0. “B” era 100% de metanol. Foi empregue um detector de matriz de díodos de ultravioleta. A razão de composto 2 (Rf 16,2 min.) para o taxol remanescente (composto 1, Rf 16,8 min.) foi determinada a partir das áreas relativas dos picos após normalização com curvas de calibração previamente determinadas. % 8 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Medições de Solubilidade:
Os dados de solubilidade e de coeficiente de partição para 2 e para taxol foram determinados usando um método de HPLC.
Taxol Taxol-2’-MPT Solubilidade em Água < 1,5x10’6 1,7x10'3 Coeficiente de Partição [octanol] / [água] >10000 50 A solubilidade foi determinada formando uma solução em água com o auxílio de ultra-sons, durante cinco minutos, centrifugação das amostras e injecção do sobrenadante. Os valores referidos foram normalizadas usando curvas de calibração construídas para ambos os compostos por preparação de concentrações conhecidas na gama de lxlO’6 a lxlO’3 M em cloreto de metileno e submetendo-as a análise por HPLC nas mesmas condições. Deverá ser referido que a solubilidade do taxol se situa no limite de detecção do instrumento e representa, assim, um limite superior. A solubilidade de 2 foi determinada a uma concentração à qual a solução era límpida (ver abaixo) e, assim, representa um limite inferior. O composto 2 exibiu solubilidades semelhantes para vários sistemas tampão na gama de pH de 6,2 a 7,4. Os coeficientes de partição foram determinados por dissolução do composto na fase orgânica, agitação da solução resultante com água, durante dez minutos, e por análise de cada fase por HPLC tal como mencionado anteriormente. Não foi notada, durante estes estudos, qualquer degradação de 2. Estes dados mostram claramente que 2 é significativamente mais solúvel em água do que o taxol de origem. A solubilidade posta em evidência numa gama de sistemas aquosos é mais elevada do que as dosagens clinicamente relevantes (3 a 30 mM).
Estruturas auto-formáveis:
Embora as soluções em água de 2 fossem opticamente límpidas a todas as concentrações examinadas, soluções tamponadas com concentrações superiores a lxlO'3 M exibiam um halo a olho nu e dispersão difusa de luz monocromática. Medidas de absorção espectroscópica no ultravioleta a 340 nm (Fig. 3) mostraram um aumento exponencial na 9 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ densidade óptica (DO) acima de uma concentração crítica de 4x1o"4 M, um resultado característico de estrutura macromolecular em solução. A microscopia de transmissão de electrão (TEM) confirmou a presença de estruturas supramoleculares nestas soluções. Foram observados agregados uniformes de estrutura fibrilar (Fig. 2a) com conformações helicoidais. Estas estruturas exibiam comprimentos variáveis (até 800 Â), mas diâmetro consistente de cerca de 80 Â com um passo helicoidal de cerca de 7. Adicionalmente, soluções de 2 recém-analisadas por ultra-sons, mostraram a presença de estruturas esféricas (Fig. 2b) com diâmetros de cerca de 50 Â. É provável que a estabilidade a longo prazo destas soluções seja devida, pelo menos em parte, à estabilização proporcionada por este meio estruturado.
Medições de polimerizacão-despolimerizacão de microtúbulos
As medições de polimerização-despolimerização de microtúbulos (Fig. 3) com taxol-2’-MPT (2) foram muito semelhantes aos controlos com GTP-solução salina e eram drasticamente diferentes das do taxol. O composto 2 não parece ligar-se à tubulina do mesmo modo que o taxol. No meio aquoso tamponado deste ensaio, 2 não é convertido em taxol e, assim, não afecta os equilíbrios tubulina-microtúbulos. O taxol, recuperado de plasma humano tratado com 2, exibiu a esperada estabilização de microtúbulos, indicando que 2 actua, de facto, como uma pródroga para o taxol.
As medições de polimerização-despolimerização de tubulina são ilustradas na Figura 3. Os controlos negativos são representados com triângulos; os controlos positivos de taxol são representados com losangos; e o taxol-2’-MPT. i.e., composto 2 é representado com pontos. As medições indicam que a despolimerização promovida por cloreto de cálcio é suprimida pelo taxol, mas não pelo taxol-2’-MPT.
Mais particularmente, foram realizadas medições em placas de 96 poços, a 37°C, seguindo o protocolo de R. Merlock e W. Wrasidlo (Analytical Biochemistry 1993, no prelo). A adição do cloreto de cálcio é indicada pela seta. Em cada caso, foi usado GTP 1,0 mM para promover a polimerização inicial de tubulina. O controlo negativo empregou tubulina sozinha (1,0 mg/ml), sendo adicionado CaCl2 (0,25 mM) passados 20 minutos. O controlo positivo com taxol empregou tubulina (1,0 mg/ml) com taxol (10"6M) sendo adicionado CaCl2 (0,25 mM) passados 20 minutos. O taxol-2’-MPT experimental empregou tubulina (1,0 mg/ml) com taxol-2’-MPT (106) e adição de CaCl2 (0,25 mM) passados 20 minutos. A turbidez foi medida como densidade óptica a 340 nm usando um leitor de microplacas (Molecular Devices Thermomax).
a. 83 835 EP 0 739 343 / PT 10
Medições de Toxicidade: O composto 2 foi testado quanto à sua citotoxicidade contra um painel de linhas celulares, incluindo células de leucemia, carcinoma do ovário, pulmão e da mama (Fig. 4). Os perfis de citotoxicidade diferencial para 2 e para taxol foram semelhantes, embora tenham sido notadas algumas diferenças. Ambos os compostos exibiram valores de IC50 variando de IO'5 a 10"12 M com médias próximas de um nanomolar. Células normais tinham níveis de citotoxicidade três a quatro ordens de magnitude abaixo dos valores médios. Foram registados níveis de citotoxicidade extremamente altos para leucemia, melanoma metastático e carcinoma cervical humanos. Tal como é esperado para uma pródroga de taxol no ambiente celular, 2 mostra as mesmas selectividade para as células tumorais e especificidade para linha celular, notáveis, como o taxol.
As citotoxicidades relativas do taxo 1-2 ’-MPT (composto 2) e taxol contra uma variedade de linhas celulares são ilustradas na Figura 4. Mais particularmente, foram plaqueadas células em placas de 96 poços com os controlos seguintes: sem células e sem controlo tóxico (SDS lxlO’3 Μ). A droga foi adicionada ao primeiro conjunto de poços e foi diluída pelo método de diluição comum a partir da solução base. As placas foram incubadas, a 37°C, 5% de C02, em ar estéril, numa incubadora humidificada, durante 72 horas. Foi adicionada aos alvéolos uma alíquota de 50 pL de uma solução de hidróxido de 2,3-bis(metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-[(fenilamino)carbonil]-lH-tetrazólio (XTT), 1 mg ml*1, em solução salina tamponada com fosfato (PBS, 100 mM). Na presença de células viáveis, estes meios límpidos, incolores, são alterados enzimaticamente para originar uma coloração cor de rosa. As placas foram listas a 450 nm usando um leitor de placas. A percentagem de citotoxicidade foi calculada usando a fórmula : %C=l-(OD da toxina) (OD do controlo de crescimento)*1 (100).
Eficiência do taxol-2’-MPT em xeno-enxerto de tumor do pulmão
Os encorajadores dados obtidos in vitro com o taxol-2’-MPT (2) levaram-nos a averiguar a sua acção in vivo usando ratinhos nus aos quais tinham sido infligidos xeno-enxertos de carcinoma de pulmão humano (Fig. 1). As amostras de 2 usadas para este estudo foram formuladas em PBS estéril sem Cremophor™, indicando a adequação deste composto para simples administração em bólus. Os dados preliminares mostram que o controlo do desenvolvimento do tumor exibido por 2 é, pelo menos, comparável ao do taxol e significativamente diferente dos controlos (valor-p 0,001, modelo de regressão linear múltipla). Esses resultados proporcionam uma indicação razoável de que 2 é convertido rapidamente, in vivo, em taxol e deveria, assim, exibir farmacologia semelhante ao taxol. De 11 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ facto, em estudo metabólico usando 2 tritiado, apenas 5% do composto foi excretado através do rins, um resultado que está completamente de acordo com o comportamento do taxol. A eficiência do taxol-2’-MPT no modelo do xeno-enxerto de tumor do pulmão no ratinho nu, é ilustrada na Figura 5. O modelo de tumor foi gerado a partir de uma linha celular de adenocarcinoma de pulmão, de célula não pequena, ATCC A549, que foi mantida em condições de proliferação celular padrão (37°C, 5% de dióxido de carbono em ar estéril). Células contadas em hemocitómetro, suspensas em meio de Hanks (Gibco, Grand Island NY) foram implantadas S.C. (IO6 células em 0,4 ml por volume de tumor, determinado usando a equação (comprimento).(largura)2/2. Os compostos de teste (1,0 microM) foram injectados I.P. nos dias 1, 3 e 7 usando os meios seguintes: controlo, dextrose a 5% em água (D5W), triângulos; taxol, suspenso em Cremaphor/D5W (5/95, 18,0 mg/kg de peso do animal), losangos; e taxol-2’-MPT dissolvido em D5W (23,9 mg/kg do peso do animal, pontos. Os procedimentos usados para a manutenção dos tumores e os detalhes experimentais estavam de acordo com os protocolos apresentados por Development Therapeutics Program, National Câncer Institute, nomeadamente em National Câncer Institute Câncer Chemotherapy Reports, 3 (1972).
Mecanismos de libertação do taxol O mecanismo da libertação, catalisada por ácido, do taxol (1) a partir de taxol-2’-MPT é ilustrado no Esquema 2. c
1-metilpiridinona
Esquema 2
Contudo, a libertação do taxol a partir de taxol-2’-MPT também pode ser catalisada por proteínas séricas e por proteínas com grupos nucleófilos. Quando feito contactar com a proteína sérica, observa-se que o taxol-2’-MPT desloca o seu grupo MPT e forma um intermediário proteína:taxol. A diálise do intermediário proteína:taxol indica um período de dissociação de horas ou de dias. O deslocamento do grupo MPT pelas proteínas séricas parece ser específico para essas proteínas séricas. Proteínas não séricas testadas pareciam não 12
X 83 835 ΕΡ Ο 739 343 /PT ter esta actividade. Em particular as imunoglobulinas e albumina de soro parecem ser particularmente eficazes no deslocamento do grupo MPT e na formação de intermediários proteína:taxol. A natureza exacta da ligação entre a proteína e o taxol não foi caracterizada. O esquema 2 ilustra vias alternativas para a libertação do MPT.
Discussão O taxol-2’-MPT provou ser um composto notavelmente estável na maior parte dos meios aquosos. É provável que esta estabilidade seja conferida a 2 pela fácil formação de agregados supra-moleculares, um processo que é provavelmente accionado pela natureza anfifilica do composto. A estabilidade, solubilidade em água e ausência de citotoxicidade do taxol-2’-MPT toma esta classe de compostos uma pródroga ideal para o taxol e miméticos de taxol. Embora essencialmente, completamente, estável em meio aquoso a pH e força iónica fisiológicos, o composto descarrega rapidamente o taxol nos soros. Este perfil é ideal para uma pródroga de taxol útil clinicamente. É possível que essas propriedades permitam a formulação de taxol-2’-MPT (2) sem o uso de Cremaphor™ ou de etanol. (Segue Esquema 3)
83 835 ΕΡ Ο 739 343/PT 14
Métodos Sintéticos
Preparação de 7-TES-desacetil-bacatina III (4)
10-desacetilbacatina III (3) 4 7-TES-desacetil-bacatina III (4). A uma solução de 10-desacetil-bacatina ΙΠ (3, 3,0 g, 5,51 mmol, Indena Corporation, Itália) em piridina (250 ml) foi adicionado, gota a gota, clorotrietilsilano (18,5 ml, 110 mmol). A solução resultante foi agitada a 25°C, durante 17 horas. Depois de diluição com éter dietílico (750 ml), a solução foi lavada com CuS04 aquoso (3x200 ml) e com salmoura (200m ml). A camada orgânica foi seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 35-»50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar o álcool 4 (3,39 g, 91%) como um sólido branco.
Dados Físicos para 7-TES-desacetil-bacatina III (4). Rf=0,32 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película fina) vmax 3464, 2954, 2282, 1710, 1453, 1362, 1271,1242,1105, 994 cm'1; !H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,06 (dd, >8,0, 0,9 Hz, 2H, Bz), 7,57 (t, >7,9 Hz, 1H, Bz), 7,44 (t, >7,9 Hz, 2 H, Bz), 5,56 (d, >7,0 Hz, 1H, 2-H), 5,14 (d, >1,9 Hz, 1H, 10-H), 4,92 (d, >9,5 Hz, 1H, 5-H), 4,84-4,78 (m, 1H, 13-H), 4,37 (dd, >10,6, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,27 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,25 (d, >1,9 Hz, 1H, 10-OH), 4,12 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,91 (d, >7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,48-2,40 (m, 1H, 6-H), 2,25 (s, 3H,
Me), 2,25-2,17 (m, 2H, 14-CH2), 2,04 (s, 3H, Me), 1,90-1,82 (m, 1H, 6-H), 1,70 (s, 3H, Me), 1,03 (s, 6 H, Me, Me), 0,90 (t, >8 Hz, 9 H, Si(CH2CH3)3), 0,58-0,42 (banda, 6 H, Si(CH2CH3)3); 13C RMN (125 MHz, CDC13) δ 210,3, 170,8, 167,0, 141,8, 135,1, 133,6, 130,1, 129,4,128,6, 84,2, 80,7, 78,8, 76,5, 74,8, 74,6, 72,9, 67,9, 57,9,47,0, 42,7, 38,6, 37,2, 26,8, 22,6,19,5, 15,2, 9,9, 6,7, 5,1; FAB HRMS (NBA/Csl) m/e 791,2251, M+Cs+ calculado para C35H50O10Si 791,2228. 15 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Preparação da enona 5 HO Ο
HO- OBz OAc 4
Enona 5. A uma solução de 7-TES-desacetil-bacatina III (4, 1,5 g, 2,28 mmol) e de N-óxido de 4-metilmorfolina (NMO, 240 mg, 2,05 mmol) em CH2C12 (5 ml) foram adicionados peneiros moleculares de 4 Â (200 mg) e a suspensão foi agitada, a 25°C, durante 10 minutos. Foi adicionada, em porções, uma quantidade de perrutenato de tetrapropilamónio de Aldrich Chemical Company Inc. (TPAP, 40 mg, 0,11 mmol) e a mistura reaccional foi agitada, a 25°C, durante 0,5 horas. Foram adicionadas, altemativamente, a intervalos de 0,5 horas, pequenas quantidades de N-óxido de 4-metilmorfolina e de TPAP, até que o material de partida fosse consumido na extensão de cerca de 95%, de acordo com CCF. A mistura reaccional foi filtrada através de sílica-gel, eluída com CH2C12 (100 ml) e foi concentrada para originar a enona 5 (1,44 g, 96%) como um sólido branco.
Dados Físicos para a Enona 5. Rt=0,5 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película fina) vmax 3446, 2957, 2882, 1726, 1672, 1456, 1367, 1243, 1106 cm'1; lH RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,05 (dd, >8,0, 1,0 Hz, Bz), 7,61 (t, >7,5 Hz, 1H, Bz), 7,45 (t, >7,5 Hz, 2 H, Bz), 5,63 (d, >7,5 Hz, 1H, 2-H), 5,30 (d, >2,0 Hz, 1H, 10-H), 4,90 (d, >8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,36 (dd, >10,5, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,31 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,30 (d, >2,0 Hz, 1H, 10-OH), 4,11 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,93 (d, >7,5 Hz, 1H, 3-H), 2,92 (d, >19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,62 (d, >19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,50-2,42 (m, 1H, 6-H), 2,17 (s, 3H, Me), 2,08 (s, 3H, Me), 1,90-1,82 (m, 1H, 6-H), 1,77 (s, 1H, 1-OH), 1,70 (s, 3H, Me), 1,21 (s, 3H, Me), 1,14 (s, 3H, Me), 0,90 (t, >8,0 Hz, 9 H, Si(CH2CH3)3), 0,60-0,42 (banda, 6 H, Si(CH2CH3)3); 13C RMN (125 MHz, CDC13) δ 208,2, 198,1, 170,2, 166,8, 156,6, 139,1, 134,0,130,0, 128,8, 84,0, 80,4, 78,5, 76,2, 75,7, 72,9, 72,8, 58,8, 45,9, 43,4,42,5, 37,2, 33,0, 21,7, 17,5, 13,6, 9,6, 6,7, 5,1; FAB HRMS (NBA/Nal) m/e 657,3070, M+Na+ calculado para C35H48O10Si 657,3095.
Preparação do triol 6
Triol 6. A uma solução da enona 5 (1,44 g, 2,19 mmol) em MeOH (300 ml), a 0°C, foi adicionada, lentamente, uma solução aquosa de K2C03 (3,0 g em 32 ml de H20). A solução foi agitada, a 0°C, durante 2,5 horas. A reacção foi, então, extinta com NH4C1 aquoso (150 ml) e a mistura resultante foi extractada com CH2C12 (2x200 ml). A camada orgânica foi seca (Na2S04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 35—>50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar a enona 5 (270 mg, 19%) e o triol 6 (912 mg, 93% com base em conversão de 81%).
Dados Físicos Para o Triol 6. RF=0,24 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película fina) 3414, 2957, 2881, 1727, 1664, 1370 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 5,23 (d, 7=9,5 Hz, 1H, 10-H) 4,89 (d, 7=9,5 Hz, 1H, 5-H), 4,63 (d, 7=9,5 Hz, 1H, 20-H), 4,56 (d, 7=9,5 Hz, 1H, 20-H), 4,32 (dd, 7=11,0, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,28 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 3,89 (dd, 7=6,5, 4,0 Hz, 1H, 2-H), 3,57 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,78 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,58 (d, 4,0 Hz, 1H, 2-OH), 2,52 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,49-2,42 (m, 1H, 6-H), 2,03 (s, 3H, Me), 1,92-1,84 (m, 1H, 6-H), 1,68 (s, 3H, Me), 1,21 (s, 3H, Me), 1,04 (s, 3H, Me), 0,90 (t, 7=8,0 Hz, 9 H, Si(CH2CH3)3), 0,60-0,40 (banda, 6 H, Si(CH2CH3)3); 13C RMN (125 MHz, CDC13) δ 208,9, 198,5, 170,1, 156,7, 138,8, 83,8, 81,2, 77,6, 75,7, 72,8, 72,5, 58,8, 45,8, 43,1, 42,8, 37,3, 32,7, 21,6, 17,5, 13,6, 9,7, 6,7, 5,1; FAB HRMS (NBA/Nal) m/e 575,2648, M+Na+ calculado para C28H4409Si 575,2652.
Preparação do Carbonato 7
17 * 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ
Carbonato 7. Uma solução do triol 6 (60,0 mg, 0,109 mmol) em THF (2 ml) foi tratada com carbonildiimidazolo (110,0 mg, 0,678 mmol) e foi agitada, a 40°C, durante 0,5 horas. A mistura reaccional foi concentrada e redissolvida em THF (5 ml). A análise por CCF confirmou o consumo total do material de partida. Foi adicionado HC1 aquoso IN (5 ml) e a solução resultante foi deixada em agitação durante 15 minutos, a 25°C. Foi adicionado éter dietílico (25 ml), a camada orgânica foi separada, lavada com NaHC03 (10 ml) e com salmoura (10 ml), seca (MgS04) e foi concentrada para originar o carbonato 7 (58 mg. 93%) como uma espuma branca.
Dados Físicos para o Carbonato 7. Rt=0,50 (sílica, 35% de acetato de etilo em hexanos); IV (película fina) 3438, 2957, 2882, 1820, 1731, 1685, 1370, 1236 cm"1, 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 5,27 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,89 (d, /=9,0 Hz, 1H, 5-H), 4,60 (d, /=9,0 Hz, 1H, 20-H), 4,45 (d, /=9,0 Hz, 1H, 20-H), 4,43 (d, /=6,0 Hz, 1H, 2-H), 4,33 (dd, /=10,0, 7,5 Hz, 1H, 7-H), 4,28 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 3,54 (d, /=6,0 Hz, 1H, 3-H), 2,88 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,75 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,54-2,47 (m, 1H, 6-H), 2,08 (s, 3H, Me), 2,06 (s, 3H, Me), 1,92-1,84 (m, 1H, 6-H), 1,77 (s, 3H, Me), 1,31 (s, 3H, Me), 1,15 (s, 3H, Me), 0,88 (t, /=8,5 Hz, 9H, Si(CH2CH3)3), 0,55-0,45 (banda, 6H, Si(CH2CH3)3); 13C RMN (125 MHz, CDC13) δ 208,4, 195,5, 170,5, 154,0, 152,0, 141,2, 88,4, 83,9, 79,8, 79,0, 76,7, 75,7, 71,9, 60,3, 43,0, 41,6, 39,8, 37,7, 31,6, 21,5, 17,8, 14,4, 9,7, 6,6, 5,0; FAB HRMS (NBA) m/e 579,2652, M+H+ calculado para C29H42O10Si 579,2626.
Preparação do derivado éster «Butiblico em C-2 (Álcool 8)
Álcool 8. Uma solução do carbonato 7 (10 mg, 0,0173 mmol) em tetra-hidrofiirano (1 ml) foi tratada, a -78°C, com n-butil-lítio de Aldrich Chemical Company, Inc. (0,087 ml de uma solução 1,6 M em hexanos, 0,139 mmol) e foi agitada durante 1,0 hora. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de éter dietílico (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com éter dietílico (2x5 ml). 18 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ A camada orgânica combinada foi lavada com uma solução saturada de salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 35 —► 50% de acetato de etilo em hexanos) para originar 8 (7,9 mg, 72%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 8. Rt=0,36 (sílica, 35% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax3437, 2962, 2865, 1726, 1671, 1367, 1239, 1105 cm'1; *Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 5,36 (d, .7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,26 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,89 (br d, 7=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,47 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,32 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,26 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,15 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,81 (d, 7=6,5 Hz, 1 0-H, 3-H), 2,73 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,57 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,49-2,41 (m, 1H, 6-H), 2,38-2,23 (m, 2 H, OCCH2(CH2)2CH3), 2,06 (s, 3H, Me), 2,04 (s, 3H, Me), 1,90-1,82 (m, 1H, 6-H), 1,67 (s, 1H, OH), 1,64 (s, 3H, Me), 1,68-1,52 (m, 2H, OCCH2CH2CH2CH3), 1,41-1,30 (m, 2H, OC(CH2)2CH2CH3), 1,19 (s, 3H, Me), 1,07 (s, 3H, Me), 0,94-0,86 (banda, 12H, CH3 de Bu, OSi(CH2CH3)3), 0,58-0,45 (banda, 6 H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA) m/e 637,3421, M+H+ calculado para C33H52O10Si 637,3408.
Preparação do derivado éster vinílico em C-2 (álcoois 9 e 10)
Álcoois 9 e 10. Uma solução do carbonato 7 (111,3 mg, 0,192 mmol) em tetra-hidrofurano (2 ml) foi tratada, a -78°C, com vinil-lítio (3,7 ml de uma solução 0,52 M em éter dietílico, 1,92 mmol, preparada a partir de tetra-vinil-estanho e de «butil-lítio:
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 19 metodologia de Wakefield, BJ. Organolithium Methods, Academic Press: Londres, 1988, p. 46) e foi agitada durante 2,25 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de CH2C12 (20 ml) e de NH4C1 aquoso (10 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (15 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografía flash (sílica, 30—>50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 9 (60,0 mg, 52%) e 10 (25,7 mg, 24%) como espumas brancas.
Dados Físicos para o Álcool 9. Rt=0,52 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax3442, 2956, 2882, 1727, 1672, 1407, 1368, 1243, 1182, 1110, 1050, 986, 826, 736 cm1; !H RMN (500 MHz, CDC13) δ 6,51 (dd, >17,0, 1,0 Hz, 1H, H do vinilo), 6,13 (dd, 7=17,0, 10,5 Hz, 1H, H do vinilo), 6,00 (dd, 7=10,5, 1,0 Hz, 1H, H do vinilo), 5,45 (br d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,30 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,91 (br, d, 7=9,5 Hz, 1H, 5-H), 4,44 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,35 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,30 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,14 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,88 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,79 (d, >20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,61 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,48 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,09 (s, 3H, Me), 2,08 (s, 3H, Me), 1,89 (ddd, 7=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,72 (s, 1H, OH), 1,68 (s, 3H, Me), 1,22 (s, 3H, Me), 1,12 (s, 3H, Me), 0,92 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,62-0,46 (banda, 6H, OSi(ÇH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 739,1925, M+Cs+ calculado para C31H46O10 Si 739,1915.
Dados Físicos para o Álcool 10. Rf =0,24 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax 3439, 2955, 2881, 1711, 1671, 1409, 1365, 1188, 1115, 980, 833, 735 cm'1; RMN (500 MHz, CDC13) δ 6,48 (br d, 7=17,0 Hz, 1H, H do vinilo), 6,10 (dd, 7=17,0, 10,5 Hz, 1H, H do vinilo), 5,97 (br d, 7=10,5 Hz, 1H, H do vinilo), 5,47 (br d, 7=6,0 Hz, 1H, 2-H), 5,25 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,75 (dd, 7=9,5, 3,5 Hz, 1H, 5-H), 4,38 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,30 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,24 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,90 (dd, 7=11,5, 6,0 Hz, 1H, 7-H), 3,28 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 3,24 (d, 7=6,0 Hz, 1H, 3-H), 3,06 (br s, 1H, OH), 2,58 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,38 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,0 Hz, 1H, 6-H), 2,07 (s, 3H, Me), 1,98 (ddd, 7=14,5, 11,5, 3,5 Hz, 1H, 6-H), 1,87 (s, 1H, OH), 1,61 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me), 0,90 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,59-0,45 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 697,1802, M+Cs+ calculado para C^H^OgSi 697,1809. 20 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Preparação do derivado éster 2-furílico em C-2 (Álcool 11)
H9 P OTES O
7 11 r Álcool 11. Uma solução do carbonato 7 (46 mg, 0,0795 mmol) em tetra-hidrofurano (3 ml) foi tratada, a -78°C, com 2-furil-lítio (4 ml de uma suspensão 0,47 M em éter dietílico, 1,88 mmol, preparada a partir de furano (Aldrich Chemical Company, Inc.) e de n-butil-lítio (Aldrich Chemical Company, Inc); metodologia de Ramanathan, V.; Levine, R. J Org. Chem. 1962, 27, 1216) e foi agitada durante 10 minutos. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de CH2C12 (15 ml) e de NH4C1 aquoso (20 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2CI2 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), seca (MgS04) e foi concentrada para originar 11 que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.
Dados Físicos para o Álcool 11. Rf=0,38 (sílica, 20% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3442, 2956, 2882, 1727, 1672, 1468, 1300, 1240, 1110, 1007, 733 cm"1; ’h RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,66-7,64 (m, 1H, furano), 7,24 (br d, 7=3,5 Hz, 1H, furano), 6,58 (dd, 7=3,5, 1,5 Hz, 1H, furano), 5,55 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,31 (d, 7=2,0 Hz, 1H, 10-H), 4,92 (br d, 7=9,0 Hz, 1H, 5-H), 4,43 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,37 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,32 (d, 7=2,0 Hz, 1H, 10-OH), 4,18 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,93 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,88 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,63 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,55-
OSi(CH2CH3)3), 0,62-0,42 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/Nal) m/e 669,2717, M+Na+ calculado para C33H46011Si 669,2707. 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ 21
Preparação do derivado éster 2-tiofenílico em C-2 (Álcool 12)
Álcool 12. Uma solução do carbonato 7 (50,0 mg, 0,0864 mmol) em tetra-hidrofurano (5 ml) foi tratada, a -78°C, com 2-tienil-lítio de Aldrich Chemical Company, Inc. (1,30 ml de uma solução 1,0 M em tetra-hidrofurano, 1,30 mmol) e foi agitada durante 0,5 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de éter dietílico (10 ml) e de NH4CI aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com éter dietílico (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 10-»35% de acetato de etilo em hexanos) para originar 7 (16,5 mg, 33%), 12 (36,8 mg, 96% com base em conversão de 67%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 12. Rf=0,56 sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) Vmax 3403, 2945, 2881, 1717, 1669, 1520, 1413, 1360, 1248, 1078; 'H RMN (500 MHz, CDC13) Ô 7,84 (dd, /=3,5, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,64 (d, /=1,0, 5,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,14 (dd, /=5,0, 3,5 Hz, 1H, tiofeno), 5,53 (br d, /=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,29 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,90 (br d, /=7,5 Hz, 1H, 5-H), 4,44 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,35 (dd, >=10,5 Hz, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,29 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,19 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,90 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,89 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,62 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,49-2,43 (m, 1H, 6-H), 2,15 (s, 3H, Me), 2,07 (s, 3H, Me), 1,92-1,84 (m, 1H, 6-H), 1,73 (s, 1H, OH), 1,71 (s, 3H, Me), 1,21 (s, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me), 0,91 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,56-0,49 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA) m/e 663,2655, M+H+ calculado para C33H46O10SSi 663,2659. 22 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Preparação de derivados éster 3-tiofenílicos em C-2 (Álcool 13 e 14)
14 Álcoois 13 e 14. Uma solução do carbonato 7 (107,9 mg, 0,186 mmol) em tetra-hidrofurano (6,2 ml) foi tratada, a -78°C, com 3-tienil-lítio (2,76 ml de uma solução 0,41 M em éter dietílico:tetra-hidroíurano:hexanos (4,5:1:2:), 1,13 mmol, preparada a partir de 3-bromo-tiofeno e de n-butil-lítio; metodologia de Camici, L.; Ricci A.; Taddei, M. Tetrahedron Lett. 1986, 27, 5155) e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de CH2C12 (15 ml) e de NH4C1 aquoso (20 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 20-»30% de acetato de etilo em hexanos) para originar 7 (16,9 mg, 16%), 13 (87,0 mg, 83% com base em conversão de 84%), e acetato hidrolizado C4 14 (produto secundário hidrolizado-C4, 9,7 mg, 10% com base em conversão de 84%) como sólidos amorfos 23 f 83 835
EP 0 739 343 / PT
Dados Físicos para o Álcool 13. Rf=0,74 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos), 0,41 (sílica, 10% de acetato de etilo e, benzeno, 3 eluições); IV (película fina) . vmax 3442, 3110, 2956, 2882, 1725, 1672, 1410, 1368, 1244, 1198, 1101, 988, 825, 744 cm'1 ; 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,18 (dd, 7= 3,0, 1,2 Hz, 1H, tiofeno), 7,54 (dd, 7=5,0, 1,2 Hz, 1H, tiofeno), 7,37 (dd, 7=5,0, 3,0 Hz, 1H, tiofeno), 5,56 (dd, 7=6,5, 1,0 Hz, 1H, 2-H), 5,31 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,92 (dd, 7=7,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,40-4,34 (m, 2H, 20-H, 7-H), 4,31 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,15 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,93 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,88 (d, 7=20 Hz, 1H, 14-H), 2,63 (dd, 7=20,0, 1,0 Hz, 1H, 14-H), 2,47 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,18 (s, 3H, Me), 2,10 (s, 3H, Me), 1,89 (ddd, 7=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,81 (br s, 1H, OH), 1,72 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,15 (s, 3H, Me), 0,93 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,62-0,48 (banda, 6H, Si(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 795,1640, M+Cs+ calculado para C33H46Ol0SSi 795,1635.
Dados Físicos para o Álcool 14: Rt=0,54 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película fina) vmax 3437, 3108, 2955, 2880, 1709, 1674, 1605, 1520, 1410, 1360, 1258, 1194, 1103, 1004, 829, 744 cm'1; 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,15 (dd, 7=3,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,49 (dd, 7=5,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,35 (dd, 7=5,0, 3,0 Hz, 1H, tiofeno), 5,59 (d, 7=6,0, 1H, 2-H), 5,27 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,73 (dd, 7=9,5, 3,5 Hz, 1H, 5-H), 4,40 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,32 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,15 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,92 (dd, 7=11,5,6,0 Hz, 1H, 7-H), 3,44 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 3,30 (d, 7=6,0 Hz, 1H, 3-H), 2,91 (br s, 1H, OH), 2,61 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,38 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,0 Hz, 1H, 6-H), 2,09 (s, 3H, Me), 1,99 (ddd, 7=14,5,11,5, 3,5 Hz, 1H, 6-H), 1,81 (br s, 1H, OH), 1,65 (s, 3H, Me), 1,24 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,91 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,60-0,46 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 753,1530, M+Cs+ calculado para C^H^OçSSi 753,1530.
Preparação de derivados éster 2-piridinílico em C-2 (Álcool 15,16 e triol 6)
7 15 24 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Álcool 15 e 16 e triol 6. Uma solução do carbonato 7 (62,6 mg, 0,108 mmol) em tetra-hidrofurano (5,4 ml) foi tratada, a -78°C, com 2-lítio-piridina (1,15 ml de uma solução 0,44 M em éter dietílico-pentano 1:1, 0,506 mmol, preparada a partir de 2-bromopiridina e de ί-butil-lítio; metodologia de Malmberg, H.; Nilsson, M. Tetrahedron, 1986, 42, 3981) e foi agitada durante 1,3 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 70-»100% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 6 (16,3 mg, 27%), 15 (28,0 mg, 39%) e 16 (8,4 mg, 13%) como sólidos amorfos.
Dados Físicos para o Álcool 15. Rf=0,60 (sílica, acetato de etilo); 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,77 (ddd, /=4,5, 1,7, 1,0 Hz, 1H, piridina), 8,05 (br d, /=7,5 Hz, 1H, piridina), 7,89 (ddd, /=7,5, 7,5, 1,7 Hz, 1H piridina), 7,53 (ddd, /=7,5, 4,5, 1,0 Hz, 1H, piridina), 5,61 (dd, /=6,5, 1,0 Hz, 1H, 2-H), 5,33 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,92 (dd, /=9,5, 2.0 Hz, 1H, 5-H), 4,39 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,36 (d, /=9,0 Hz, 1H, 20-H), 4,33 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,28 (d, /=9,0 Hz, 1H, 20-H), 3,96 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,98 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,71 (dd, /=20,0, 1,0 Hz, 1H, 14-H), 2,50 (s, 1H, OH), 2,48 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,15 (s, 3H, Me), 2,11, (s, 3H, Me), 1,90 (ddd, /=14,5, 10,5, 2.0 Hz, 1H, 6-H), 1,76 (s, 3H, Me), 1,24 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,93 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,63-0,47 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 790,2060, M+Cs+ calculado para C34H47O10NSi 790,2024.
Dados Físicos para o Álcool 16. Rf=0,45 (sílica, acetato de etilo); IV (película) 3435, 2954, 2879, 1732, 1674, 1589, 1362, 1305, 1241, 1116, 998, 829, 741 cm'1; lH RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,73 (br d, /=4,5 Hz, 1H, piridina), 8,15 (br d, /=7,5 Hz, 1H, piridina), 7,90 (ddd, /=7,5, 7,5, 1,7 Hz, 1H, piridina), 7,56 (ddd, /=7,5, 4,5, 1,0 Hz, 1H, piridina), 5,53 (dd„/=7,5, 1,0, 1H, 2-H), 5,30 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,84 (dd, /=9,5, 3,0 Hz, 1H, 5-H), 25 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ 4,81 (br s, 1Η, ΟΗ), 4,31 (d, /=2,5 Hz, 1Η, ΙΟ-ΟΗ), 4,25 (s, 2Η, 20-CH2), 3,97 (dd, /=11,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 3,31 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 3,23 (d, /=7,5 Hz, 1H, 3-H), 2,57 (br d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,43 (ddd,/=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,11 (s, 3H, Me), 1,95 (ddd, /=14,5, 11,5, 3,0 Hz, 1H, 6-H), 1,92 (br s, 1H, OH), 1,70 (s, 3H, Me), 1,24 (s, 3H, Me), 1,17 (s, 3H, Me), 0,91 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,60-0,46 (banda, 6H, OSKCHjCH^).
Dados Físicos para o triol 6. Rf—0 ,24 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película fina) 3414, 2957, 2881, 1727, 1664, 1370 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 5,23 (d, /=9,5 Hz, 1H, 10-H), 4,89 (d, /=9,5 Hz, 1H, 5-H), 4,63 (d, /=9,5 Hz, 1H, 20-H), 4,56 (d, /=9,5 Hz, 1H, 20-H), 4,32 (dd, /=11,0, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,28 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 3,89 (dd, /=6,5, 4,0 Hz, 1H, 2-H), 3,57 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,78 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,58 (d, 4,0 Hz, 1H, 2-OH), 2,52 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,49-2,42 (m, 1H, 6-H), 2,03 (s, 3H, Me), 1,92-1,84 (m, 1H, 6-H), 1,68 (s, 3H, Me), 1,21 (s, 3H, Me), 1,04 (s, 3H, Me), 0,90 (t, /=8,0 Hz, 9H, Si(CH2CH3)3), 0,60-0,40 (banda, 6H, SitCI^CH^); I3C RMN (125 MHz, CDC13) δ 208,9, 198,5, 170,1, 156,7, 138,8, 83,8, 81,2, 77,6, 75,7, 72,8, 72,5, 58,8, 45,8, 43,1, 42,8, 37,3, 32,7, 21,6, 17,5, 13,6, 9,7, 6,7, 5,1; FAB HRMS (NBA/Nal) m/e 575,2648, M+Na+ calculado para C28H4409Si 575,2652.
Preparação do derivado éster 3-piridinílico em C-2 (Álcool 17)
Álcool 17. A uma solução de 3-lítio-piridina (1,15 mmol) em tetra-hidrofurano (7 ml), preparada a partir de 3-bromo-piridina (Aldrich Chemical Company Inc.) e de n-butil-lítio (Aldrich Chemical Company Inc.) (metodologia de Parham, W.E.; Piccirilli, R. M. /. Org. Chem. 1977, 42, 257), foi adicionada, a -100°C, uma solução do carbonato 7 (133, 1 mg, 0,230 mmol) em tetra-hidrofurano (2 ml) através de cânula. A solução resultante foi agitada durante 1 hora, deixada aquecer até -78°C, agitada durante 1 hora e foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NH4C1 aquoso (10 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), seca (MgS04), concentrada e foi
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 26 purificada por cromatografia flash (sílica, 70—>95% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 7 (64,8 mg, 49%) e 17 (43,9 mg, 57% com base em conversão de 51%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 17. Rf=0,56 (sílica, acetato de etilo); IV (película) 3435, 2956, 2882, 1731, 1671, 1592, 1366, 1280, 1240, 1109, 991, 824, 739 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 9,24 (br s, 1H, piridina), 8,81 (d, 7=1,0, 4,5 Hz, 1H, piridina), 8,30 (ddd, .7=8,0, 2,0, 2,0 Hz, 1H, piridina), 7,44 (dd, 7=8,0, 4,5 Hz, 1H, piridina), 5,66 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,32 (s, 1H, 10-H), 4,92 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,38 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,32 (br s, 1H, OH), 4,30 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,13 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,96 (d, ,7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,92 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,66 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,48 (ddd, 7=15,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,18 (s, 3H, Me), 2,10 (s, 3H, Me), 2,03 (s, 1H, OH), 1,89 (ddd, 7=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,72 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,92 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,62-0,48 (banda, 6H, OSiíQfcCHj^); FAB HRMS (NBA/CSI) m/e 790,2030, M+Cs+ calculado para C34H47OI0NSi 790,2024.
Preparação do derivado éster 4-V,iV-dimetilanilínico em C-2 (Álcool 18)
Álcool 18. Uma solução do carbonato 7 (150 mg, 0,259 mmol) em tetra-hidrofiirano (20 ml) foi tratada, a -78°C, com 4-lítio-VV-dimetilanilina (6,5 ml de uma solução 0,39 M em éter dietílico :pentano (3:1), 2,54 mmol, preparado a partir de 4-bromo-W-dimetilanilina e de ί-butil-lítio; metodologia de Jones, F.N.; Hauser, C. R. 7 Org. Chem. 1962, 27, 4389) e foi agitada durante 15 minutos. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de CH2C12 (35 ml) e de NH4C1 aquoso (20 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x20 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 10—>35% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 18 (55,0 mg, 30%) como um 27 . 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 18. Rf=0,26 (sílica, 35% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax3414, 2924,1706,1669, 1605, 1530, 1094; *Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,90 (d, /=9,0 Hz, 2H, Ar), 6,64 (d, /=9,0 Hz, 2H, Ar), 5,60 (br d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 5,29 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,89 (br, d, /=9,5 Hz, 1H, 5-H), 4,37 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,36 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,31 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,13 (br d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,90 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,05 (s, 6H, NMe2), 2,93 (s, 1H, OH), 2,90 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,61 (br d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,49-2,40 (m, 1H, 6-H), 2,16 (s, 3H, Me), 2,08 (s, 3H, Me), 1,90-1,83 (m, 1H, 6-H), 1,69 (s, 3H, Me), 1,20 (s, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me), 0,90 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,56-0,49 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/Nal) m/e 722,3354, M+Na+calculado para C37H53O10NSi 722,3336.
Preparação do derivado éster 1-naftalénico em C-2 (Álcool 19)
U
Álcool 19. Uma solução do carbonato 7 (47 mg, 0,0812 mmol) em tetra-hidrofurano (2 ml) foi tratada, a -78°C, com 1-lítio-naftaleno (6,3 ml de uma solução 0,32 M em éter dietílico, 2,03 mmol, preparado a partir de 1-bromo-naftaleno de Aldrich Chemical Company Inc. e de íòutil-lítio; metodologia de Gilman, H.; Moore, F.W. / Am. Chem. Soc. 1940, 62, 1843) e foi agitada durante 5 minutos. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de CH2C12 (15 ml) e de NH4C1 aquoso (20 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), seca (MgS04) e foi concentrada para originar o álcool 19 que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.
Dados Físicos para o Álcool 19. Rf=0,27 (20% de acetato de etilo em éter de 28 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ petróleo); IV (película) vmax 3442, 2954, 2882, 1724, 1671, 1461, 1362, 1279, 1228, 1195, 1092, 987, 826, 736 cm'1; 'Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,66 (s, 1H, naftaleno), 8,07 (dd, /=9,0, 2,0 Hz, 1H, naftaleno), 7,97-7,89 (m, 3H, naftaleno), 7,68-7,57 (m, 2H, naftaleno), 5,71 (br d, /-6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,35 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,94 (br d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,41 (dd, /=11,0, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,37 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,35 (d,/=2,0 Hz, 1H, 10-OH), 4,18 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,00 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 3,02 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,69 (d, /=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,54-2,45 (m, 1H, 6-H), 2,27 (s, 3H, Me), 2,13 (s, 3H, Me), 1,94-1,87 (m, 1H, 6-H), 1,86 (s, 1H, OH), 1,75 (s, 3H, Me), 1,25 (s, 3H, Me), 1,20 (s, 3H, Me), 0,94 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSiíCHjCH^), 0,63-0,49 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA) m/e 707,3270, M+H+ calculado para C39H50Ol0Si 707,3252:
Preparação do derivado éster fenil-acetileto em C-2 (Álcool 20)
Álcool 20. Uma solução do carbonato 7 (5,0 mg, 0,00864 mmol) em tetra-hidrofurano (0,5 ml) foi tratada, a -78°C, com fenil-acetileto de lítio de Aldrich Chemical Company Inc. (0,13 ml de uma solução 1,0 M em tetra-hidrofurano, 0,13 mmol) e foi agitada durante 0,5 horas. A mistura reaccional foi tratada com NH4C1 aquoso (0,5 ml), deixada aquecer até 25°C e diluída com H20 (5 ml) e éter dietílico (5 ml). A camada orgânica foi separada, seca e foi concentrada para originar uma mistura 9:1 do carbonato 7 e do álcool 20 (5,0 mg, 95%) como uma película.
Dados Físicos para o Álcool 20. Rf=0,59 (50% de acetato de etilo em hexanos); *H RMN (300 MHz, CDC13) δ 7,63-7,57 (m, 2H, Ar), 7,53-7,27 (m, 3H, Ar), 5,43 (d, /=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,28 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,90 (br d, /=7,5 Hz, 1H, 5-H), 4,67 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,44 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,37-4,30 (m, 1H, 7-H), 4,28 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 3,88 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,85 (d, /=20,2 Hz, 1H, 14-H), 2,63 (d, /=20,2 Hz, 1H, 14-H), 2,55-2,47 (m, 1H, 6-H), 2,11 (s, 3H, OAc), 2,08 (s, 3H, 18-Me), 1,94-1,85 (m, 1H, 6-
·%. ψ· 83 835 ΕΡ Ο 739 343 /PT 29
Η), 1,67 (s, 3Η, Me), 1,41 (s, 3Η, Me), 1,21 (s, 3H, Me), 0,91 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,59-0,42 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3).
Preparação do derivado éster hidroxi-carbamato em C-2 (Álcool 21)
Álcool 21. Uma solução do carbonato 7 (5,0 mg, 0,00864 mmol) em MeOH (0,5 ml) foi tratada), a 25°C, com n-butil-NH2 de Aldrich Chemical Company Inc. (0,05 ml, 0,506 mmol) e foi agitada durante 10 minutos. A mistura reaccional foi concentrada e purificada por cromatografia flash (sílica, 30—>50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 21 (5,2 mg, 92%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 21. R.^0,13 (sílica, 30% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3434, 2957, 2881, 1711, 1671, 1368, 1243, 1108, 987, 829 cm'1; lH RMN (500 MHz, CDC13) δ 5,27 (d, 7=2,0 Hz, 1H, 10-H), 5,23 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 4,91 (br d, 7=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,79 (t, 7=6,0 Hz, 1H, NH), 4,47 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,34 (dd, 7=11,0, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,30 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,28 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,78 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 3,29-3,12 (m, 2H, NHCH2), 2,70 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,60 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,51-2,42 (m, 1H, 6-H), 2,24 (s, 1H, OH), 2,06 (s, 3H, Me), 2,05 (s, 3H, Me), 1,94-1,86 (m, 1H, 6-H), 1,69 (s, 3H, Me), 1,55-1,46 (m, 2H, NHCH2CH2), 1,40-1,30 (m, 2H, NHCH2CH2CH2), 1,21 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 0,95-0,80 (m, 12H, CH3 de Bu, 0Si(CH2CH3)3), 0,61-0,47 (banda, 6H, OSiíCHjO^); FAB HRMS (NBA/Nal) m/e 674,3336, M+Na+ calculado para C33H53O10NSi 674,3336. |4 30 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Preparação do derivado éster MV-metil-fenil-hidroxi-carbamato em C-2 (Álcool 22)
Álcool 22. Uma solução do carbonato 7 (5,0 mg, 0,00864 mmol) em tetra-hidrofurano (0,5 ml) foi tratada, a -78°C, com LiNMePh (0,2 ml de uma solução 0,47 M em éter dietílico, 0,094 mmol, preparada a partir de N-metilanilina (Aldrich) e de n-butil-lítio) e foi agitada durante 1,25 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de éter de dietílico (5 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com éter dietílico (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 15—»35% de acetato de etilo em hexanos) para originar 7 (2,5 mg, 50%) e 22 (2,8 mg, 93% com base em conversão de 50%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 22. Rf=0,22 (sílica 35% de acetato de etilo em éter de petróleo); !H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,45-7,18 (banda, 5H), 5,25 (br. d, /=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,20 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,70 (br d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,26 (d, /=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,22 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,19 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,16 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,58 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,27 (s, 3H, MeN), 2,52 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,35 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,40-2,31 (m, 1H, 6-H), 2,03 (s, 1H, OH), 1,97 (s, 3H, Me), 1,85-1,76 (m, 1H, 6-H), 1,66 (s, 3H, Me), 1,57 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 1,08 (s, 3H, Me), 0,87 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,55-0,43 (banda, 6H, OSiíCHjCH-,)·,); FAB HRMS (NBA) m/e 686,3358, M+H+ calculado para C36H51O10NSi 686,3361. 31 83 835. ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Preparação de derivado éster-tio-éter em C-2 (Álcool 23)
Álcool 23. Uma solução do éster vinílico 9 (55,6 mg, 0,0916 mmol) e de 4-dimetil-aminopiridina de Aldrich Chemical Company Inc. (DMAP, 1,8 mg, 0,0147 mmol) em CH2C12 (4,3 ml) foi tratada, a 25°C, com PhSH de Aldrich Chemical Company Inc. (0,030 ml, 0,292 mmol) e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi concentrada e purificada por cromatografia flash (sílica, 30% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 23 (58,1, 88%) como um sólido branco.
Dados Físicos para o Álcool 23. Rf=0,37 (sílica, 30% de acetato de etilo em hexanos), 0,34 (10% de acetato de etilo em PhH, 2 eluições); IV (película) vmax 3441, 3057, 2956, 2883, 1732, 1672, 1600, 1367, 1238, 1111, 988, 825, 739 cm'1; Ή RMN (500 MHz, CDC13) Ô 7,39-7,24 (banda, 5H), 5,44 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 5,28 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-H), 4,90 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,38 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,33 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,29 (d, 7=2,5 Hz, 1H, 10-OH), 4,18 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,83 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 3,24-3,13 (m, 2H, CH2SPh), 2,76 (d, 7=19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,72-2,58 (m, 3H, 14-H, CH2CH2SPh), 2,47 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,39 (s, 1H, OH), 2,07 (s, 3H, Me), 2,05 (s, 3H, Me), 1,89 (ddd, 7=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,68 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,12 (s, 3H, Me), 0,92 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,61-0,47 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 849,2085, M+Cs+ calculado para C37H52Oi0SSi 849,2105. 83 835
ΕΡ Ο 739 343/PT 32
Preparação dos intermediários taxóide 25-27 e 2-furanil-C-2-taxóide (28)
Acetato 25. Uma solução do álcool 11 e de 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 100 mg, 0,819 mmol) em CH2C12 (3 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,50 ml, 5,30 mmol) e foi agitada durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (5 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 10% de acetato de etilo em benzeno, 3 eluições) para originar 25 (36 mg, 66% a partir do carbonato 7) como uma espuma branca.
Dados Físicos para o Acetato 25. Rf=0,38 (20% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3509, 2956, 2881, 1727, 1674, 1469, 1371, 1299, 1227, 1108, 746 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,65 (br s, 1H, furano), 7,24 (br d, .7=3,0 Hz, 1H, furano), 6,58-6,54 (m, 2H, 10-H, furano), 5,59 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 4,92 (br d, 7=7,5 Hz, 1H, 5-H), 4,46 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,42 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,16 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,87 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,89 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,63 (d, 7=20,0
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 33
Hz, 1Η, 14-Η). 2,59-2,48 (m, 1Η, 6-Η), 2,22 (s, 3Η, Me), 2,17 (s, 3Η, Me), 2,14 (s, 3H, Me), 1,90-1,83 (m, 1H, 6-H), 1,65 (s, 3H, Me), 1,25 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 0,91 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,64-0,52 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 821,1966, M+Cs+calculado para C35H48012Si 821,1969. Álcool 26. Uma solução da enona 25 (36 mg, 0,0523 mmol) em MeOH (3 ml) contendo duas gotas de CH3COOH foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (200 mg, 5,29 mmol, adicionado em porções) e foi agitada durante 6 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (10 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 26 (30 mg, 83%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 26. Rf=0,42 (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo); ‘h RMN (300 MHz, CDC13) Ô 7,62 (br s, 1H, furano), 7,25 (d, /=3,5 Hz, 1H, furano), 6,58 (d, /=3,5 Hz, 1H, furano), 6,43 (s, 1H, 10-H), 5,51 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,96 (d, /=7,5 Hz, 1H, 5-H), 4,85-4,79 (m, 1H, 13-H), 4,48 (dd, /=10,5, 7,5 Hz, 1H, 7-H), 4,38 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,15 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,82 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,61-2,48 (m, 2H, 6-H e 14-H), 2,28 (s, 3H, OAc), 2,20-2,10 (m, 1H, 14-H), 2,18 (s, 6H, OAc e 18-Me), 1,98-1,80 (m, 1H, 6-H), 1,18 (s, 3H, 16-Me), 1,04 (s, 3H, 17-Me), 0,90 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,65-0,50 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3).
DiTES-taxóide 27. A uma solução do álcool 26 (30,0 mg, 0,0434 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e da β-lactama 24 (28,0 mg, 0,0734 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes com benzeno) em THF (2 ml), preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G.I.; Jayasinghe, L. R. /. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012) foi adicionado, gota a gota, a 0°C, NaN(SiMe3)2 (0,130 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,130 mmol). A solução resultante foi agitada durante 5 minutos e foi vertida numa mistura de CH2C12 (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 60% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 27 (12 mg, 26%) como um sólido amorfo que foi utilizado directamente no passo seguinte.
34 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Taxóide 28. Uma solução do éter silílico 27 (6 mg, 0,00560 mmol) em THF (1 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (1 ml) e foi agitada durante 1 hora. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (10 ml) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 60% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 28 (3 mg, 64%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 28. Rf=0,l (50% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3383, 2933, 2898, 1729, 1649, 1519, 1242, 1110, 1071 cm'1; ]H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,77-7,73 (m, 2H), 7,68-7,66 (m, 1H, furano), 7,55-7,33 (banda, 9H), 6,98 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,58 (dd, /=3,5,1,5 Hz, 1H, furano), 6,27-6,21 (m, 2H, 10-H, 13-H), 5,80 (dd, /=9,0, 2,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,57 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,96 (dd, /=10,0, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,80 (d, /=2,0 Hz, 1H, 2’-H), 4,43- 4,37 (m, 2H, 7-H, 20-H), 4,24 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,77 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,60-2,52 (m, 1H, 6-H), 2,47 (d, /=4,0 Hz, 1H, OH), 2,38 (s, 3H, Me), 2,35-2,21 (m, 2H, 14-CH2), 2,25 (s, 3H, Me), 1,94-1,86 (m, 1H, 6-H), 1,81 (br s, 3H, Me), 1,76 (s, 1H, OH), 1,68 (s, 3H, Me), 1,25 (s, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me).
Preparação de 2-tiofenil-C-2-taxol (32)
TESO, Pb n o 24 Bz
1'
30 35 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Acetato 29. Uma solução do álcool 12 (36,0 mg, 0,0543 mmol) e 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 33,0 mg, 0,270 mmol) em CH2C12 (3,0 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,50 ml, 5,30 mmol) e foi agitada durante 1 hora. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (10 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml), e foi agitada vigorosamente durante 0,5 horas. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 10-»35% de acetato de etilo em hexanos) para originar 29 (29,5 mg, 77%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Acetato 29. Rf=0,56 (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) 3457, 2956, 1712, 1669, 1525, 1413, 1376, 1264, 1227, 1073; lR RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,84 (dd, >4,0, 1,5 Hz, 1H, tiofeno), 7,63 (dd, >5,0, 1,5 Hz, 1H, tiofeno), 7,13 (dd, >5,0, 4,0 Hz, 1H, tiofeno), 6,56 (s, 1H, 10-H), 5,58 (br d, >6,5 Hz, 1H, 2-H), 4,90 (br d, >8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,44 (dd, >10,5, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,42 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,18 (d, >8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,85 (d, >6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,91 (d, >19,5 Hz, 1H, 14-H), 2,64 (dd, >19,5, 1,0 Hz, 1H, 14-H), 2,55-2,48 (m, 1H, 6-H), 2,20 (s, 3H, Me), 2,15 (s, 3H, Me), 2,14 (s, 3H, Me), 1,89-1,82 (m, 1H, 6-H), 1,65 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,88 (t, >8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,59-0,53 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI m/e 837,1736, M+Cs+ calculado para C35H480„SSi 837,1741. Álcool 30. Uma solução da enona 29 (29,0 mg, 0,0411 mmol) em MeOH (5 ml) foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (30,2 mg, 0,80 mmol, adicionado em porções) e foi agitada durante 2,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (15 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 25->50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 29 (4,0 mg, 14%) e 30 (14,7 mg. 59% com base em conversão de 86%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 30. Rf 0,34 (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) v,^ 3478, 2946, 2892, 1717, 1520, 1365, 1238, 1083; 'h RMN ( 500 MHz, CDC13) δ 7,85 (dd, >3,5, 1,5 Hz, 1H, tiofeno), 7,61 (dd, >5,0, 1,5 Hz, 1H, tiofeno), 7,12 (dd, >5,0, 3,5 Hz, 1H, tiofeno), 6,43 (s, 1H, 10-H), 5,51 (d, >7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,94 (br d, >7,5 Hz, 1H, 5-H), 4,83-4,77 (m, 1H, 13-H), 4,45 (dd, >10,5, 7,5 Hz, 1H, 7-H), 4,41 (d, >8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,19 (br d, >8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,82 (d, >7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,55-2,48 (m, 1H, 6-H), 2,24 (s, 3H, Me), 2,26,2,21 (m, 2H, 14-CH2), 2,16 (d, >1,0 Hz, 3H, 18-Me), 2,15 (s, 3H, Me), 2,00 (d, >5,0 Hz, 1H, OH), 1,90-182 (m, 1H, 6-H), 1,66 36 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ (s, 3Η, Me), 1,58 (s, 1Ή, OH), 1,15 (s, 3H, Me), 1,02 (s, 3H, Me), 0,90 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSiCH2CH3)3), 0,59-0,55 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI m/e 839,1893, M+Cs+calculado paraC35H5oOnSSi 839,1897.
DiTES-Taxóide 31. A uma solução do álcool 30 (14,5 mg, 0,0205 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e da β-lactama 24 (16,0 mg, 0,0420 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) em THF (1,0 ml), preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem. Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G. I.; Jayasinghe, L.R. 7. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Hàbus, I.;Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012), foi adicionado, a -78°C, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,051 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,051 mmol). A solução resultante foi agitada durante 0,5 horas e foi vertida niuna mistura de éter dietílico (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com éter dietílico (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 10—»35% de acetato de etilo em hexanos) seguida de CCF preparativa (sílica, 15% de acetato de etilo em benzeno) para originar 30 (3,0 mg, 21%) e 31 (7,6 mg. 43% com base em conversão 79%) como um sólido branco.
Dados Físicos para DiTES-Taxóide 31. Rt- = 0,48 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) 3382, 2913, 2850, 1722, 1653, 1461, 1243, 1083, 1014; Ή RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,90 (br d, 7=4,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,74 (d, 7=8,0 Hz. 2H, NBz), 7,62 (br d, 7=5,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,48 (t, 7=7,0 Hz. 1H, Ar), 7,42-7,28 (banda, 7H, Ar), 7,14 (dd, 7=5,0, 4,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,10 (d, 7=9,0 Hz, 1H, NH), 6,42 (s, 1H, 10-H), 6,20 (br, t, 7=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,65 (br d, 7=9,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,57 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,94 (br d, 7=8,5 Hz, 1H, 5-H), 4,67 (d, 7=1,5 Hz, 1H, 2’-H), 4,44 (dd, 7=11,0, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,43 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,26 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,77 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,51 (s, 3H, Me,), 2,54-2,47 (m, 1H, 6-H), 2,34 (dd, 7=15,0, 9,5 Hz, 1H, 14-H), 2,15 (s, 3H, Me), 2,10 (dd, 7=15,0, 9,0 1H, 14-H), 1,99 (s, 3H, Me), 1,93-1,86 (m, 1H, 6-H), 1,72 (s, 1H, OH), 1,68 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,90 (t, 7=8,0 Hz, 9H, Si(CH2CH3)3), 0,79 (t, 7=8,0 Hz, 9H, Si(CH2CH3)3), 0,57-0,55 (banda, 6H, Si(CH2CH3)3), 0,45-40 (banda, 6H, S^CI^CH^), FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 1220,3685 M+Cs+ calculado para C57H77014NSSi2 1220,3658.
Taxóide 32. Uma solução do éter silílico 31 (7,5 mg, 0,00689 mmol) em THF (0,8 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (0,150 ml) e foi agitada durante 1 hora. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (5 ml) e
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 37 a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica 50-)-100% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 32 (4,2 mg, 71%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 32. Rf = 0,44 (sílica, 75% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3417, 2929, 1716, 1649, 1521, 1460, 1417, 1368, 1247, 1076; ‘H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,90 (dd, /=4,0, 1,0 Hz, tiofeno), 7,73 (d, /=7,0 Hz, 2H, NBz), 7,63 (dd, /=5,0, 1,0 Hz, tiofeno), 7,51-7,32 (banda, 8H, Ar), 7,14 (dd, /=5,0, 4,0 Hz, 1H, tiofeno), 6,96 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,24 (s, 1H, 10-H), 6,19 (br t, /=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,75 (dd, /=9,0, 2,5 Hz, 1H, 3’-H), 5,55 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,94 (br d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,76 (dd, /=5,0, 2,5 Hz, 1H, 2Ή), 4,41 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,40-4,33 (m, 1H, 7-H), 4,24 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,73 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,52 (d, /=5,0 Hz, 1H, 2’-OH), 2,58-2,49 (m, 1H, 6-H), 2,44 (d, /=4,0 Hz, 1H, 7-OH), 2,35 (s, 3H, Me), 2,29 (d, /=9,0 Hz, 2H, 14-CH2), 2,22 (s, 3H, Me), 1,91-1,83 (m, 1H, 6-H), 1,76 (s, 3H, Me), 1,66 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me) 1,10 (s, 3H, Me); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 992,1252, M+Cs+ calculado para C45H49N014S 992,1928.
Preparação de 3-tiofenil-C-2-taxol (36)
34 38 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Acetato 33. Uma solução do álcool 13 (68,4 mg, 0,103 mmol) e 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 37,8 mg, 0,309 mmol) em CH2C12 (4,4 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,370 ml, 3,92 mmol) e foi agitada durante 2 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (5 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e foi agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 30% de acetato de etilo em hexanos) para originar 33 (66,0 mg, 91%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Acetato 33. Rf = 0,48 (sílica, 10% de acetato de etilo em benzeno, 3 eluições) IV (película) vmax 3518, 2956, 2881, 1727, 1676, 1520, 1460, 1371, 1236, 1098, 985, 824, 744 cm'1; 'h RMN ((500 MHz, CDC13) δ 8,19 (dd, /= 3,0, 1,1 Hz, 1H, tiofeno), 7,55 (dd, /=5,0, 1,1 Hz, 1H, tiofeno), 7,38 (dd, /=5,0, 3,0 Hz, 1H, tiofeno), 6,58 (s, 1H, 10-H), 5,61 (dd, /=6,5, 0,7 Hz, 1H, 2-H), 4,92 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,47 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H,7-H), 4,38 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,14 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,88 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,89 (d, /=20 Hz, 1H, 14-H), 2,64 (br d, /=20 Hz, 1H, 14-H), 2,54 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,23 (s, 3H, Me), 2,18 (s, 3H, Me), 2,17 (s, 3H, Me), 1,87 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0, 1H, 6-H), 1,85 (s, 1H, OH), 1,66 (s, 3H, Me), 1,26 (s, 3H, Me), 1,19 (s, 3H, Me), 0,92 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,65-0,54 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 837,1760, M+Cs+ calculado para C35H48011SSi 837,1741. Álcool 34. Uma solução da enona 33 (57,3 mg, 0,0813 mmol) em MeOH-THF (5:1, 4,1 ml) foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (69,1 mg, 1,83 mmol, adicionada em porções) e foi agitada durante 2,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (10 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 30% de acetato de etilo em hexanos) para originar 33 (6,8 mg, 12%) e 34 (45,2 mg, 89% com base em conversão de 88%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 34. Rf = 0,48 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax 3520, 2953, 2881, 1719, 1520, 1370, 1238, 1100, 979, 823, 746 cm'1; 'H RMN ((500 MHz, CDC13) δ 8,20 (dd, /=3,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,57 (dd, /=5,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,35 (dd, /=5,0, 3,0 Hz, 1H, tiofeno), 6,45 (s, 1H, 10-H), 5,54 (d, /=7,0, Hz, 1H, 2-H), 4,96 (br d, /=8,5, Hz, 1H, 5-H), 4,82 (br dd, / =12,0, 8,0 Hz, 1H, 13-H), 4,48 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,36 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,15 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,85 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,53 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5, 1H, 6-H), 2,27 (s, 3H, 39 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ
Me), 2,28-2,21 (m, 2Η, 14-CH2), 2,18 (s, 6H, Me, Me), 2,03 (s, 1H, OH), 187 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,67 (s, 3H, Me), 1,65 (s, 1H, OH), 1,18 (s, 3H, Me), 1,04 (s, 3H, Me), 0,92 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,64-0,50 (banda, 6H, OSi^O^)-,); FAB HRMS (NBA/CsI m/e 839,1908 M+Cs+ calculado para C35H50OnSSi 839,1897.
DiTES-Taxóide 35. A uma solução do álcool 34 (19,5 mg, 0,0276 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e da β-lactama 24 (27,5 mg, 0,0271 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) em THF (1,4 ml), preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I; Habus, 1.; Zhao, M.; Georg, G.I.; Jayasinghe, L.R. J Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012) foi adicionado, a 0°C, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,066 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,066 mmol). A solução resultante foi agitada durante 0,5 horas e foi vertida numa mistura de CH2C12 (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 20->30% de acetato de etilo em hexanos) para originar 34 (1,1 mg, 6%) e 35 (17,3 mg, 61% com base em conversão de 94%) como um sólido branco
Dados Físicos para DiTES-Taxóide 35. Rf = 0,86 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) 3519, 3437, 2953, 2879, 1726, 1666, 1515, 1483, 1369, 1240, 1100, 979, 825, 746 cm'1; !H RMN ((500 MHz, CDC13) δ 8,32 (dd, /=3,0,1,2 Hz, 1H, tiofeno), 7,76-7,73 (m, 2H), 7,60 (dd, /=5,0, 1,2 Hz, 1H, tiofeno), 7,52-7,29 (banda, 9H), 7,10 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,44 (s, 1H, 10-H), 6,26 (br t, /=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,72 (dd, /=9,0, 2,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,61 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,95 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,70 (d, /=2,0 Hz, 1H, 2’-H), 4,48 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,37 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,23 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,81 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,56-2,49 (m, 1H, 6-H), 2,54 (s, 3H, Me), 2,35 (dd, /=15,5,9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,17 (s, 3H, Me), 2,07 (dd, /=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,03 (d, /=1,0 Hz, 3H, 18-Me), 1,94-1,87 (m, 1H, 6-H), 1,69 (s, 3H, Me), 1,68 (s, 1H, OH), 1,20 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 0,93 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,81 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,63-0,53 (banda, 6H, OSiíQ^CH^), 0,52-0,36 (banda, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 1220,3675, M+Cs+ calculado para C57H77014Ssi2N 1220,3658.
Taxóide 36. Uma solução do éter silílico 35 (17,3 mg, 0,0159 mmol) em THF (0,6 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (0,150 ml) e foi agitada durante 2 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHCQ3 aquoso (5 ml) e 40 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 25% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 36 (7,7 mg, 56%) como uma película incolor.
Preparação do Taxóide 36. Rf = 0,11 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax 3496, 3434, 2940, 1723, 1648, 1519, 1370, 1243, 1071, 975 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,32 (dd, /=3,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,75-7,72 (m, 2H), 7,60 (dd, /=5,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,53-7,33 (banda, 9H), 6,95 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,28-6,23 (m, 2H, 10-H, 13-H), 5,81 (dd, /=9,0, 2,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,58 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,95 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,80 (dd, /=4,5, 2,0 Hz, 1H, 2’-H), 4,41 (br t, /=7,5 Hz, 1H, 7-H), 4,36 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,22 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,78 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,49 (d, /=4,5 Hz, 1H, 2’-OH), 2,55 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,45 (br, s 1H, OH), 2,40 (s, 3H, Me), 2,34 (dd, /=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,25 (dd, /=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,24 (s, 3H, Me), 1,89 (ddd, /=14,5, 11,0, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,81 (d, /=2,0 Hz, 3H, 18-Me), 1,74 (br s, 1H, OH), 1,67 (s, 3H, Me), 1,24 (s, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 992,1940, M+Cs+ calculada para C45H49014NS 992,1928.
Preparação de 2-piridinil-C-2-taxoI (40)
Otb
AcO O OTES
38
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 41
Acetato 37. Uma solução do álcool 15 (23,2 mg, 0,0353 mmol) e 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 12,9 mg, 0,106 mmol) em CH2C12 (1,5 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,126 ml, 1,34 mmol) e foi agitada durante 2 horas. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (5 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e foi agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 70->100% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 37 (19,0 mg, 77%) como um sólido amorfo.
Preparação do acetato 37. Rf = 0,58 (sílica, acetato de etilo); IV (película) v^ 3482, 2954, 2881, 1730, 1675, 1370, 1304, 1231, 1118, 987, 823, 739 cm'1; 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,77 (ddd, 7=4,5, 1,7, 1,0 Hz, 1H, piridina), 8,05 (ddd, 7=8,0, 1,0, 1,0 Hz, 1H, piridina), 7,89 (ddd, 7=8,0, 8,0, 1,7 Hz, 1H, piridina), 7,53 (ddd, 7=8,0,4,5, 1,0 Hz, 1H, piridina), 6,59 (s, 1H, 10-H), 5,65 (dd, 7=6,6, 1,0 Hz, 1H, 2-H), 4,92 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,48 (dd, 7=10,5, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,35 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,26 (dd, 7=8,5, 1,0 Hz, 1H, 20-H), 3,91 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 3,00 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,71 (dd, 7=20,0, 1,0 Hz, 1H, 14-H), 2,54 (ddd, 7=14,5, 9,5, 7,0 Hz, 1H, 6-H), 2,53 (s, 1H, OH), 2,23 (s, 3H, Me), 2,18 (s, 3H, Me), 2,14 (s, 3H, Me), 1,88 (ddd, 7=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,70 (s, 3H, Me), 1,27 (s, 3H, Me), 1,20 (s, 3H, Me), 0,92 (t, 9H, 7 =8,0 Hz, OSi(CH2CH3)3)), 0,64-0,52 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 832,2139, M+Cs+ calculado para C36H49OuNSi 832,2129. Álcool 38. Uma solução da enona 37 (47,6 mg, 0,0680 mmol) em MeOH-THF (5:1, 3,8 ml) foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (46,0 mg, 1,22 mmol, adicionado em porções) e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (10 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (alumina básica, acetato de etilo—>10% de MeOH em acetato de etilo) para originar 27f (28,0 mg, 59%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para 0 Álcool 38. Rf = 0,36 (sílica, acetato de etilo); IV (película) vmax 3487, 2951, 2880, 1736, 1583, 1369, 1307, 1236, 1132, 983, 824, 739 cm'1; :H RMN (500 MHz, CDCI3) δ 8,79 (dm, 7=4,5 Hz, 1H, piridina), 8,13 (br d, 7=7,5 Hz, 1H, piridina), 7,88 (ddd, 7=7,5, 7,5,1,7 Hz, 1H, piridina), 7,51 (ddd, 7=7,5, 4,5, 1,0 Hz, 1H, piridina), 6,46 (s, 1H, 10-H), 5,64 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,96 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,85 (br t, 7=8,0 Hz, 1H, 13-H), 4,49 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,31 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,25 42 83 835
ΕΡ Ο 739 343/PT (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,89 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,53 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,36-2,11 (m, 2H, 14-CH2), 2,25 (s, 3H, Me), 2,19 (d, /=1,0 Hz, 3H, 18-Me), 2,18 (s, 3H, Me), 1,88 (ddd, /=14,0, 10,5, 2,5 Hz, 1H, 6-H), 1,70 (s, 3H, Me), 1,20 (s, 3H, Me), 1,05 (s, 3H, Me), 0,92 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,65-0,51 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 834,2311, M+Cs+ calculado para C36H51OnNSi 834,2286.
DiTES-Taxóide 39. A uma solução do álcool 38 (10,3 mg, 0,0147 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e da β-lactama 24 (17,0 mg, 0,0446 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) em THF (0,75 ml), a 0°C, preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G. I.; Jayasinghe, L.R. /. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012), foi adicionado, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,038 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,038 mmol). A solução resultante foi agitada durante 20 minutos e foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 60% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 39 (2,7 mg, 17%) como uma película.
Dados Físicos para DiTES-Taxóide 39. Rf = 0,28 (sílica, 50% de acetato de etilo emhexano); IV (película) vmax 3429,2952,2927, 2878,1728,1662,1585,1369,1236,1124, 1016, 984, 742 cm'1; !H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,78 (br d, /=4,5 Hz, 1H, piridina), 8,21 (d, /=8,0 Hz, 1H, piridina); 7,95 (ddd, /=8,0, 8,0, 1,7 Hz, 1H, piridina), 7,75-7,70 (m, 2H), 7,54-7,22 (banda, 9H), 7,12 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,45 (s, 1H, 10-H), 6,27 (br t, /=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,73-5,67 (m, 2H, 2-H, 3’-H), 4,95 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,70 (d, /=2,0 Hz, 1H, 2’-H), 4,48 (dd, /=10,5, 6,5, 1H, 7-H), 4,32 (br s, 2H, 20-CH2), 3,85 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,56-2,48 (m, 1H, 6-H), 2,52 (s, 3H, Me), 2,40 (dd, /=15,0 Hz, 9,5 Hz, 1H, 14-H), 2,20-2,12 (m, 2H, 14-H, OH), 2,18 (s, 3H, Me), 2,04 (s, 3H, Me), 1,92 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0 Hz. 1H, 6-H), 1,72 (s, 3H, Me), 1,22 (s, 3H, Me), 1,19 (s, 3H, Me), 0,93 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,81 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH))3), 0,64-0,34 (banda, 12H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 1215,4065, M+Cs+ calculado para C58H78014N2Si2 1215,4046.
Taxóide 40. Uma solução do éter silílico 39 (2,7 mg, 0,00249 mmol) em THF (0,4 ml) foi tratada, a 25°C, com HF•piridina (0,170 ml) e foi agitada durante 3 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (5 ml) e 43 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, acetato de etilo) para originar 40 (0,8 mg, 38%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 40. Rf = 0,54 (sílica, acetato de etilo); *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,80 (br d, /=4,5 Hz, 1H, piridina), 8,22 (d, /=7,5 Hz, 1H, piridina), 7,93 (ddd, /=7,5, 7,5, 1,5 Hz, 1H, piridina), 7,75-7,71 (m, 2H), 7,54-7,30 (banda, 9H), 6,98 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,30-6,24 (m, 2H, 10-H, 13-H), 5,82 (dd, /=9,0, 2,5 Hz, 1H, 3’-H), 5,67 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,95 (dd, /=10,0, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,81 (dd, /=4,5, 2,5 Hz, 1H, ΤΗ), 4,41 (ddd, /=11,0, 7,0, 4,5 Hz, 1H, 7-H), 4,31 (s, 2H, 20-CH2), 3,81 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,52 (br s, 1H, OH), 3,50 (d, /=4,5 Hz, 1H, 2’-OH), 2,56 (ddd, /=14,5, 9,5, 7,0 Hz, 1H, 6-H), 2,46 (d, /=4,0 Hz, 1H, 7-OH), 2,43-2,30 (m, 2H, 14-CH2), 2,38 (s, 3H, OAc), 2,25 (s, 3H, OAc), 1,90 (ddd, /=14,5, 11,0, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,81 (s, 3H, Me), 1,71 (s, 3H, Me), 1,26 (s, 3H, Me), 1,15 (s, 3H, Me).
Preparação de 3-piridinil-C-2-taxol (44)
83 835 ΕΡ Ο 739343/ΡΤ 44
Acetato 41. Uma solução do álcool 17 (42,9 mg, 0,0652 mmol) e de 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 23,9 mg, 0,196 mmol em CH2C12 (2,8 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,235 ml, 2,49 mmol) e foi agitada durante 2 horas. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (5 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e foi agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, acetato de etilo) para originar 41 (43,5 mg, 095%) como um sólido branco.
Dados Físicos para o Acetato 41. Rf = 0,61 (sílica, acetato de etilo); IV (película) Vmax 3470, 3327, 2955, 2881, 1731, 1675, 1592, 1370, 1279, 1229, 1108, 822, 738 cm'1; !H RMN (500 MHz, CDC13) δ 9,23 (br s, 1H, piridina), 8,79 (br s, 1H, piridina), 8,30 (ddd, /=8,0, 2,0, 2,0 Hz, 1H, piridina), 7,43 (dd, /=8,0, 5,0 Hz, 1H, piridina), 6,58 (s, 1H, 10-H), 5,70 (dd, /=6,5, 1,0 Hz, 1H, 2-H), 4,91 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,47 (dd, /=10,5, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,28 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,11 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,91 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 2,93 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,68 (dd, /=20,0, 1,0 Hz, 14-H), 2,53 (ddd, /=14,5, 9,5 7,0 Hz, 1H, 6-H), 2,24 (br s, 1H, OH), 2,22 (s, 3H, Me), 2,18 (s, 3H, Me), 2,17 (s, 3H, Me), 1,85 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,66 (s, 3H, Me), 1,26 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 0,90 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,63-0,51 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 832,2145, M+Cs+ calculado para C36H49OnNSi 832,2129. Álcool 42. Uma solução da enona 41 (39,8 mg, 0,0569 mmol) em MeOH-THF (5:1, 3,1 ml) foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (65,0 mg, 1,72 mmol, adicionado em porções) e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (10 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, acetato de etilo) para originar 41 (3,7 mg, 9%) e 42 (24,3 mg, 67% com base em conversão de 91%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 42. Rf = 0,42 (sílica, acetato de etilo); IV (película) vmax 3490, 2953, 2881, 1727, 1592, 1369, 1235, 1110, 822, 740 cm'1; 'Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 9,30 (d, /=2,0 Hz, 1H, piridina), 8,81 (dd, /=5,0, 2,0 Hz, 1H, piridina), 8,35 (ddd, /=8,0, 2,0, 2,0 Hz, 1H, piridina), 7,44 (dd, /=8,0, 5,0 Hz, 1H, piridina), 6,46 (s, 1H, 10-H), 5,64 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,96 (dd, /=9,5, 1,5 Hz, 1H, 5-H), 4,83 (br dd, /=12,5, 7,5 Hz, 1H, 13-H), 4,49 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,28 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,15 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,89 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,53 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,30-
83 835
ΕΡ Ο 739 343/PT 45 2,20 (m, 2Η, 14-CH2), 2,28 (s, 3H, Me), 2,19 (d, /=1,0 Hz, 3H, 18-Me), 2,18 (s, 3H, Me), 1,87 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,68 (s, 3H, Me), 1,63 (br s, 2H, OH, OH), 1,19 (s, 3H, Me), 1,04 (s, 3H, Me), 0,92 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,64-0,51 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 834,2270, M+Cs+ calculado para C36H510MNSi 834,2286.
DiTES-Taxóide 43. A uma solução do álcool 42 (12,6 mg, 0,018 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes com benzeno) e da β-lactama 24 (17,0 mg, 0,0446 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno), em THF (0,97 ml) a 0°C, preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990,114,164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G. I.; Jayasinghe, L.R. /. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012), foi adicionado, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,054 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,054 mmol). A solução resultante foi agitada durante 30 minutos e foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 50—»95% de acetato de etilo em hexanos) para originar 42 (1,0 mg, 8%) e 43 (8,6 mg, 48% com base em conversão de 92%) como um sólido branco.
Dados Físicos para DiTES-Taxóide 43. Rf = 0,40 (sílica, 50% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) 3433, 2955, 2880, 1730, 1662, 1370, 1238, 1112, 1018, 985, 824, 740 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 9,34 (d, /=2,0 Hz, 1H, piridina), 8,82 (dd, /=5,0, 2,0 Hz, 1H, piridina), 8,42 (ddd, /=8,0, 2,0, 2,0 Hz, 1H, piridina), 7,74-7,69 (m, 2H), 7,51-7,20 (banda, 9H), 7,08 (d, /=9,0 Hz, 1H, NH), 6,46 (s, 1H, 10-H), 6,22 (br t, /=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,74-5,66 (m, 2H, 2-H, 3’-H), 4,95 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,70 (d, /=2,0 Hz, 1H, 2’-H), 4,48 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,30 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,21 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,86 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,58-2-48 (m, 1H, 6-H), 2,54 (s, 3H, Me), 2,40 (dd, /=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,17 (s, 3H, Me), 2,14 (dd, /=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H),2,03 (br s, 3H, Me), 1,95- 1,86 (m, 1H, 6-H), 1,73 (s, 4H, Me, OH), 1,22 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me), 0,93 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,82 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,65-0,37 (banda, 12H, OSi(CH2CH3)3), OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS NBA/CsI m/e 1215,4066, M+Cs+ calculado para C58H78014N2Si2 1215,4046.
Taxóide 44. Uma solução do éter silílico 43 (6,4 mg, 0,0059 mmol) em THF (0,4 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (0,160 ml) e foi agitada durante 1,25 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (5 ml) e 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 46
a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, acetato de etilo) para originar 44 (3,8 mg, 75%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 44. Rf = 0,59 (sílica, acetato de etilo); IV (película) Vmax 3396, 2928, 1728, 1644, 1371, 1273, 1241, 1111, 1071 cm'1; 'Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 9,34 (br s, 1H, piridina), 8,83 (br d, 7=3,5 Hz, 1H, piridina), 8,41 (br d, 7=8,0 Hz, 1H, piridina), 7,75-7,68 (m, 2H), 7,53-7,34 (banda, 9H), 6,91 (d, 7=9,0 Hz, 1H, NH), 6,27 (s, 1H, 10-H), 6,23 (br t, 7=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,78 (dd, 7=9,0, 2,5 Hz, 1H, 3’-H), 5,69 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,95 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,79 (dd, 7=5,5, 2,5 Hz, 1H, 2’-H), 4,41 (ddd, 7=11,0, 6,5, 4,0 Hz, 1H, 7-H), 4,29 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,20 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,82 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,54 (d, 7=5,5 Hz, 1H, 2’-OH), 2,56 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,49 (d, 7=4,0 Hz, 1H, 7-OH), 2,43-2,26 (m, 2H, 14-CH2), 2,38 (s, 3H, Me), 2,24 (s, 3H, Me), 1,89 (ddd, 7=14,5,11,0,2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,83 (s, 1H, OH), 1,82 (s, 3H, Me), 1,69 (s, 3H, Me), 1,25 (s, 3H, Me), 1,14 (s, 3H, Me); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 987,2325, M+Cs+ calculado para 987,2316.
Preparação de 4-7V,7V-dimetil-anilina-C-2-taxol (48)
47 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Acetato 45. Uma solução do álcool 18 (50,0 mg, 0,0714 mmol) e 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 26,0 mg, 0,213 mmol) em CH2C12 (3,0 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,250 ml, 2,65 mmol) e foi agitada durante 2,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (10 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e foi agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 10% de acetato de etilo em benzeno) para originar 45 (41,0 mg, 77%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Acetato 45. Rf = 0,27 (sílica, 35% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax3425, 2945, 1722, 1674, 1605, 1365, 1275, 1232, 1179, 1094; 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,89 (d, /=9,0 Hz, 2H, Ar), 6,64 (d, /=9,0 Hz, 2H, Ar), 6,56 (s, 1H, 10-H), 5,64 (d, /=6,5 Hz, 1H, 2-H), 4,90 (br d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,45 (dd, /=10,5, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,36 (d, /=9,0 Hz, 1H, 20-H), 4,11 (d, /=9,0 Hz, 1H, 20-H), 3,85 (d, /=6,5 Hz, 1H, 3-H), 3,05 (s, 6H, NMe2), 2,90 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,62 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,51 (ddd, /=14,0, 8,0, 7,0, 1H, 6-H), 2,20 (s, 3H, Me), 2,16 (s, 3H, Me), 2,15 (s, 3H, Me), 2,04 (s, 1H, OH), 1,84 (ddd, /=14,0, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,63 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,89 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,58-0,53 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 874,8589, M+Cs+ calculado para C39H55OnNSi 874,8594. Álcool 46. Uma solução da enona 45 (40,0 mg, 0,0539 mmol) em MeOH-THF (5,8:1, 4,1 ml) foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (30,2 mg, 0,80 mmol, adicionada em porções), foi agitada durante 1 hora, deixada aquecer até 25°C e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (15 mi), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 25->50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 45 (6,0 mg, 15%) e 46 (30,0 mg, 88% com base em conversão de 85%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para 0 Álcool 46. Rf = 0,30 (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo); 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,93 (d, /=9,0 Hz, 2H, Ar), 6,64 (d, /=9,0 Hz, 2H, Ar), 6,42 (s, 1H, 10-H), 5,57 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,94 (br d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,83-4,75 (m, 1H, 13-H), 4,46 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,34 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,13 (d, /=Hz, 1H, 20-H), 3,82 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,04 (s, 6H, Me2N), 2,54-2,44 (m, 1H, 6-H), 2,26 (s, 3H, Me), 2,23 (d, /=7,5 Hz, 2H, 14-CH2), 2,16 (s, 6H, Me, Me), 2,08 (d, /=4,5
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 48
Hz, 1Η, ΟΗ), 1,89-1,80 (m, 2Η, 6-Η, ΟΗ), 1,64 (s, 3Η, Me), 1,16 (s, 3Η, Me), 1,01 (s, 3H, Me), 0,89 (t, 7=8,5 Hz, 9H, OSiCH^H^), 0,62-0,48 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3).
DiTES-Taxóide 47. A uma solução do álcool 46 (14,0 mg, 0,0188 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e da β-lactama 24 (25,0 mg, 0,0656 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas, vezes com benzeno) em THF (0,75 ml) a 0°C, preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G. I.; Jayasinghe, L.R. 7. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012), foi adicionado, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,056 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,056 mmol). A solução resultante foi agitada durante 20 minutos e foi vertida numa mistura de CH2C12 (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 10—»15% de acetato de etilo em benzeno, depois 50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 47 (12,0 mg, 57%) como um sólido branco.
Dados Físicos para DiTES-Taxóide 47. Rf = 0,26 (sílica, 15% de acetato de etilo em PhH); IV (película) 3425, 2946, 2882, 1722, 1669, 1600, 1365,1275, 1238, 1179, 1094 cm'1; lH RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,96 (d, 7=9,0 Hz, 2H, Ar), 7,77-7,72 (m, 2H), 7,54-7,26 (banda, 8H), 7,12 (d, 7-8,5 Hz, 1H, NH), 6,69 (d, 7=9,0 Hz, 2H), 6,43 (s, 1H, 10-H), 6,23 (br t, 7=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,68-5,63 (m, 2H, 2-H, 3’-H), 4,93 (br d, 7=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,67 (d, 7=2,0 Hz, 1H, 2’-H), 4,45 (dd, 7=10,5 Hz, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,36 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,20 (d, 7=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,78 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,04 (s, 6H, Me2N), 2,55-2,46 (m, 1H, 6-H), 2,53 (s, 3H, OAc), 2,36 (dd, 7=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,15 (s, 3H, Me), 2,09 (dd, 7=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,00 (d, 7=1,0 Hz, 3H, Me), 1,92-1,84 (m, 2H, 6-H, OH), 1,67 (s, 3H, Me), 1,20 (s, 3H, Me), 1,16 (s, 3H, Me), 0,90 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,79 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,63-0,35 (banda, 12 H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 1257,4503, M+Cs+ calculado para C61H84014N2Si2 1257,4515.
Taxóide 48. Uma solução do éter silílico 47 (12,0 mg, 0,0107 mmol) em THF (1,0 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (0,05 ml) e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (5 ml) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10) ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por
49 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ cromatografia flash (sílica, 50—>75% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 48 (8,0 mg, 84%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 48. Rf= 0,44 (sílica, 75% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3414, 2914, 2850, 1722, 1664, 1660, 1371, 1275, 1243, 1179 cm'1; 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,95 (d, /-9,0 Hz, 2H), 7,77-7,72 (m, 2H), 7,55-7,30 (banda, 8H), 7,03 (d, /-9,0 Hz, 1H, NH), 6,67 (d, /=9,0 Hz, 2H), 6,24 (s, 1H, 10-H), 6,20 (br t, /=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,76 (dd, /-9,0, 2,5 Hz, 1H, 3’-H), 5,62 (d, /-7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,93 (br d, /=7,5 Hz, 1H, 5-H), 4,76 (dd, /=5,0, 2,5 Hz, 1H, 2’-H), 4,37 (ddd, /=11,5, 6,5, 4,0 Hz, 1H, 7-H), 4,34 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,18 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,73 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,57 (d, /=5,0 Hz, 1H, 2’-OH), 3,04 (s, 6H, Me2N), 2,58- 2,48 (m, 1H, 6-H), 2,44 (d, /=4,0 Hz, 1H, 7-OH), 2,37 (s, 3H, Me), 2,30-2,25 (m, 2H, 14-CH2), 2,22 (s, 3H, Me), 1,95 (s, 1H, OH), 1,88-1,81 (m, 1H, 6-H), 1,74 (d, /=1,0 Hz, 3H, Me), 1,65 (s, 3H, Me), 1,21 (s, 3H, Me), 1,11 (s, 3H, Me); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 1029,2760, M+Cs+ calculado para C49H56N2Oi4 1029,2786.
Preparação de l-naftaleno-C-2-taxol (52)
50 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Acetato 49. Uma solução do álcool 19 anterior e de 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 100 mg, 0,819 mmol) em CH2C12 (3 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,50 ml, 5,30 mmol) e foi agitada durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (5 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e foi agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10) ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 10% de acetato de etilo em benzeno) para originar 49 (54,1 mg, 89% a partir do carbonato 7) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Acetato 49. Rf = 0,27 (20% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3416, 2953, 2879, 1726,1676, 1370, 1224, 1089 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,66 (s, 1H, naftaleno), 8,06 (dd, 1H, /=9,0, 2,0 Hz, naftaleno), 7,98-7,89 (m, 3H, naftaleno), 7,68-7,55 (m, 2H, naftaleno), 6,61 (s, 1H, 10-H), 5,75 (d, «7=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,95 (br d, /=8,0 Hz, 5-H), 4,50 (dd, /=10,5, 7,0 Hz, 1H, 7-H), 4,35 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,16 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,96 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,96 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,03 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,70 (d, /=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,61-2,50 (m, 2H, 6-H, OH), 2,27 (s, 3H, Me), 2,24 (s, 3H, Me), 2,21 (s, 3H, Me), 1,91-1,83 (m, 1H, 6-H), 1,70 (s, 3H, Me), 1,30 (s, 3H, Me), 1,20 (s, 3H, Me), 0,93 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,66-0,57 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 881,2326, M+Cs+ calculado para C41H52OnSi 881,2333. Álcool 50. Uma solução da enona 49 (54,1 mg, 0,0722 mmol) em MeOH (10 ml) foi tratada, a 25°C, com NaBH4 (54,5 mg, 1,44 mmol, adicionado em porções) e foi agitada durante 2,0 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (10 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 20% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 50 (26 mg, 48%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para o Álcool 50. Rf = 0,12 (20% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) 3524, 2953, 1719, 1369, 1231, 1093, 829 cm'1; 'H RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,70 (s, 1H, naftaleno), 8,11 (dd, /=8,5, 1,5 Hz, 1H, naftaleno), 7,96-7,86 (m, 3H, naftaleno), 7,65-7,54 (m, 2H, naftaleno), 6,45 (s, 1H, 10-H), 5,68 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2- H), 4,98 (br d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,88-4,81 (m, 1H, 13-H), 4,51 (dd, /=10,5, 7,0, Hz, 1H, 7-H), 4,34 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 4,19 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,93 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,58-2,50 (m, 1H, 6-H), 2,41-2,14 (m, 3H, 14-CH2, 13-OH), 2,37 (s, 3H, Me), 2,21 51 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ (br s, 3Η, Me), 2,19 (s, 3Η, Me), 1,92-1,84 (m, 1H, 6-H), 1,72 (s, 1H, OH), 1,71 (s, 3H, Me), 1,22 (s, 3H, Me), 1,05 (s, 3H, Me), 0,93 (t, .7=8,0 Hz, 9H, OSKCH.CH^), 0,65-0,51 (banda, 6H, OSi(CH2CH3)); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 883,2484, M+Cs+ calculado para C41H54OuSi 883,2490.
DiTES-Taxóide 51. A uma solução do álcool 50 (20,0 mg, 0,0266 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e da β-lactama 24 (20,0 mg, 0,0525 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) em THF (1,1 ml) a -78°C, preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G. I.; Jayasinghe, L.R. J. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sun, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012), foi adicionado, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,065 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,065 mmol). A solução resultante foi agitada durante 10 minutos e foi vertida numa mistura de CH2C12 (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 20% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 51 (18,7 mg, 62%) como um sólido branco.
Taxóide 52. Uma solução do éter silílico 51 (18,7 mg, 0,0165 mmol) em THF (2 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (1 ml) e foi agitada durante 1 hora. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (5 ml) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 52 (12,8 mg, 86%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 52. Rf = 0,16 (sílica, 50% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax3420, 2967, 2896, 1721, 1652, 1519, 1370, 1233, 1073, 776 cm'1; ‘H RMN (500 MHz, CDC13) Ô 8,67 (s, 1H, naftaleno), 8,04 (dd, /=8,5, 1,5 Hz, 1H, naftaleno), 7,95 (br d, /=8,5 Hz, 1H, naftaleno), 7,87 (br d, /=9,0 Hz, 1H), 7,81 (br d, /=8,5 Hz, 1H), 7,65-7,61 (m, 2H), 7,56-7,51 (m, 1H), 7,49-7,22 (banda, 9H), 6,94 (d, /=9,0 Hz, 1H, ΝΉ), 6,23-6,16 (m, 2H, 10-H, 13-H), 5,78 (dd, /=9,0, 2,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,64 (br d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,87 (br, d, /=8,0 Hz, 1H, 5-H), 4,78-4,72 (m, 1H, 2’-H), 4,38-4,31 (m, 1H, 7-H), 4,24 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20.H), 4,16 (d, /=8,5 Hz, 1H, 20-H), 3,76 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,53 (br s, 1H, OH), 2,52-2,43 (m, 1H, 6-H), 2,42 (d, /=4,0 Hz, 1H, OH), 2,40 (s,
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 52 3Η, Me), 2,36 (dd, 7=15,5, 9,0 Hz, 1Η, 14-H), 2,25 (dd, 7=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,17 (s, 3H, Me), 1,85-1,77 (m, 2H, 6-H, OH), 1,74 (br s, 3H, Me), 1,63 (s, 3H, Me), 1,17 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 1036,2505, M+Cs+ calculado para C5]H53N014 1036,2520.
Preparação do tioéter-C-2-taxol (56)
Acetato 53. Uma solução do álcool 23 (25,2 mg, 0,0351 mmol) e de 4-dimetil-aminopiridina (DMAP, 12,2 mg, 0,0999 mmol) em CH2C12 (1,5 ml) foi tratada, a 25°C, com anidrido acético (0,120 ml, 1,27 mmol) e foi agitada durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (5 ml), tratada com NaHC03 aquoso (7 ml) e foi agitada vigorosamente durante 25 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 30% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 53 (25,3 mg, 95%) como um óleo incolor.
Dados Físicos para o Acetato 53. Rf = 0,41 (sílica, 10% de acetato de etilo em benzeno, 2 eluições); IV (película) vmax3471, 2954, 2881, 1729, 1675, 1370, 1226, 986, 824, 738 cm'1; 'Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,38-7,25 (banda, 5H, SPh), 6,54 (s, 1H, 10- H), 5,49 (br d, 7=6,5 Hz, 1H, 2-H), 4,90 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,42 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,37 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,17 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,78 (d, 7=6,5 Hz, 1H, 3-H), 3,23-3,13 (m, 2H, Cl^SPh), 2,78 (d, 7=20,0 Hz, 1H, 14-H), 2,72-2,58 (m, 3H, 53 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ CH2CH2SPh, 14-Η), 2,52 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5, 1Η, 6-Η), 2,45 (s, 1Η, ΟΗ), 2,21 (s, 3Η, Me), 2,15 (s, 3Η, Me), 2,04 (s, 3H, Me), 1,86 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,62 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,19 (s, 3H, Me), 0,91 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,64-0,52 (banda, 6H, OSiíCHjOl·^); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 891,2225, M+Cs+ calculado para C^H^OuSSi 891,2210. Álcool 54. Uma solução da enona 53 (24,4 mg, 0,032 mmol) em MeOH-THF (5:1, 1,9 ml) foi tratada, a 0°C, com NaBH4 (18,1 mg, 0,48 mmol, adicionado em porções) e foi agitada durante 1,25 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2C12 (5 ml), tratada com NH4C1 aquoso (5 ml) e foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com CH2C12 (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 30% de acetato de etilo em hexanos) para originar 54 (14,6 mg, 60%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para 0 Álcool 54. Rf = 0,11 (sílica, 30% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) vmax3487, 2938, 2880, 1729, 1586, 1369, 1234, 977, 738 cm'1; *H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,40-7,23 (banda, 5H, SPh), 6,42 (s, 1H, 10-H), 5,43 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,94 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,85-4,78 (m, 1H, 13-H), 4,43 (dd, /=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,37 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,18 (d, /=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,74 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,25-3,15 (m, 2H, CH2SPh), 2,71-2,57 (m, 2H, CI^CHjSPh), 2,51 (ddd, /=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,25 (dd, /=15,5, 9,5 Hz, 1H, 14-H), 2,16 (s, 3H, Me), 2,15 (d, /=1,0 Hz, 3H, 18-Me), 2,15 (s, 3H, Me), 2,09 (dd, /=15,5, 7,0 Hz, 1H, 14-H), 2,05 (br s, 1H, OH), 1,99-1,96 (m, 1H, OH), 1,86 (ddd, /=14,5, 10,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,63 (s, 3H, Me), 1,15 (s, 3H, Me), 1,04 (s, 3H, Me), 0,91 (t, /=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,64-0,50 (banda, 6H, Si(CH2CH3)3); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e 893,2350, M+Cs+ calculado para C39H56OuSSi 893,2367.
DiTES-Taxóide 55. A uma solução do álcool 54 (21,8 mg, 0,0286 mmol, previamente submetido a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) e de β-lactama 24 (33,0 mg, 0,0866 mmol, previamente submetida a destilação azeotrópica, por duas vezes, com benzeno) em THF (1,1 ml), a 0°C, preparada de acordo com o protocolo de Ojima-Holton (Holton, R.A. Chem Abstr. 1990, 114, 164568q; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Georg, G. I.; Jayasinghe, L.R. /. Org. Chem. 1991, 56, 1681-1683; Ojima, I.; Habus, I.; Zhao, M.; Zucco, M.; Park, Y.H.; Sim, C. M.; Brigaud, T. Tetrahedron 1992, 48, 6985-7012), foi adicionado, gota a gota, NaN(SiMe3)2 (0,086 ml de uma solução 1,0 M em THF, 0,086 mmol). A solução resultante foi agitada durante 20 minutos e foi vertida numa mistura de CH2C12 (10 ml) e de NH4C1 aquoso (5 ml). A camada orgânica foi separada e a camada 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 54
aquosa foi extractada com CH2C12 (2x5 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por cromatografia flash (sílica, 15—>30—>50% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 55 (13,8 mg, 42%) como um sólido amorfo.
Dados Físicos para DiTES-Taxóide 55. Rf = 0,40 (sílica, 30% de acetato de etilo em hexanos); IV (película) 3437, 2952,2879,1735, 1662, 1482,1369, 1236,1128, 981, 740 cm'1; !H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,82-7,76 (m, 2H), 7,54-7,16 (banda, 13-H), 7,11 (d, 7=9,0 Hz, 1H, NH), 6,41 (s, 1H, 10-H), 6,18 (br t, .7=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,62 (dd, 7=9,0, 2,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,49 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,93 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H,) 4,64 (d, 7=2,0 Hz, 1H, 2Ή), 4,42 (dd, 7=10,5, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 4,40 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,21 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,70 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,23-3,17 (m, 2H, CH2SPh), 2,78-2,69 (m, 1H, HCHCH2SPh), 2,67-2,57 (m, 1H, HCHCH2SPh), 2,55-2,46 (m, 2H, 6-H, OH), 2,38 (s, 3H, Me), 2,27-2,10 (m, 2H, 14-CH2), 2,16 (s, 3H, Me), 1,98 (d, 7=1,0 Hz, 3H, Me), 1,89 (ddd, 7=14,0, 11,0, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,64 (s, 3H, Me), 1,18 (s, 3H, Me),1,17 (s, 3H, Me), 0,91 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OSi(CH2CH3)3), 0,81 (t, 7=8,0 Hz, 9H, OS^O^CH^), 0,64-0,36 (banda, 12 H, OSiíCHjCH^); FAB HRMS (NBA/CsI) m/e M+Cs+ 1274,4125 calculado para C61H83014SSi2 1274,4127.
Taxóide 56. Uma solução do éter silílico 55 (8,1 mg, 0,0071 mmol) em THF (0,5 ml) foi tratada, a 25°C, com HF*piridina (0,150 ml) e foi agitada durante 3,75 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de acetato de etilo (10 ml) e de NaHC03 aquoso (5 ml) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca (MgS04), concentrada e foi purificada por CCF preparativa (sílica, 60% de acetato de etilo em éter de petróleo) para originar 56 (3,2 mg, 49%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o Taxóide 56. Rf = 0,39 (sílica, 60% de acetato de etilo em éter de petróleo); IV (película) vmax 3426, 2928, 1731, 1642, 1371, 1238, 1070, 739, 709 cm'1; *Η RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,80-7,75 (m, 2H), 7,55-7,18 (banda, 13H), 6,94 (d, 7=9,0 Hz, 1H, NH), 6,23 (s, 1H, 10-H), 6,19 (br t, = 9,0 Hz, 1H, 13-H) 5,74 (dd, 7=9,0, 2,5 Hz, 1H, 3Ή), 5,47 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,93 (dd, 7=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,74 (dd, 7=5,0, 2,5 Hz, 1H, 2’-H), 4,38 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 4,35 (ddd, 7=11,0, 6,5 Hz, 4,5 Hz, 1H, 7-H), 4,21 (d, 7=8,0 Hz, 1H, 20-H), 3,67 (d, 7=7,0 Hz, 1H, 3-H), 3,51 (d, 7=5,0 Hz, 1H, 2’-OH). 3,28-3,14 (m, 2H, CHsSPh), 2,77-2,68 (m, 1H, HCHCH2SPh), 2,67-2,59 (m 1H, HCHCH2SPh), 2,54 (ddd, 7=14,5, 9,5, 6,5 Hz, 1H, 6-H), 2,44 (d, 7=4,5 Hz, 1H, 7-OH), 2,36 (dd, 7=15,5, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 2,26 (br s, 1H, OH), 2,23 (s, 3H, Me), 2,21 (s, 3H, Me), 2,18 55 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ (dd, /=15,5, 9,0 Hz, 1Η, 14-Η), 1,88 (ddd, /=14,5, 11,0, 2,0 Hz, 1Η, 6-Η), 1,75 (d, /=1,0 Hz, 3Η, Me), 1,63 (s, 3Η, Me), 1,24 (s, 3H, Me), 1,10 (s, 3H, Me); FAB HRMS (NBA/CsI) mie 1046,2410, M+Cs+ calculado para C49H55014NS 1046,2398.
Preparação do MPA-taxóide 57
MPA-taxóide 57. Uma solução do taxóide 36 (4,3 mg, 0,005 mmol) e de trietilamina (0,0033 ml, 0,0237 mmol) em CH2C12 (0,2 ml) foi tratada, a 25°C, com /?-toluenossulfonato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (2,1 mg, 0,0075 mmol) e foi agitada durante 35 minutos. A solução incolor límpida virou rapidamente para um amarelo claro. O decurso da reacção foi seguido através de cromatografia em camada fina (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofurano 65:água 35, UV/ácido fosfomolíbdico) e, após, trinta minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada como completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas era aparente um composto por CCF. A mistura reaccional foi directamente purificada por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, linear A—»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar 36 (0,8 mg, 19%) e 57 (4,1 mg, 100% com base em conversão de 81%) como uma película incolor.
Dados Físicos para o taxóide 57 ‘H RMN (500 MHz, CDC13) δ 10,5 (d, /=7,5 Hz, 1H), 8,44 (ddd, /=9,0, 7,5,2,0 Hz, 1H), 8,33-8,29 (m, 2H), 8,15 (dd, /=3,0,1,0 Hz, tiofeno), 8,12 (br d, /=6,0 Hz, 1H), 7,84 (br d, /=8,5 Hz, 1H), 7,74-7,69 (m, 2H), 7,53 (dd, /=5,0, 1,0 Hz, 1H, tiofeno), 7,48-7,34 (banda, 7H), 7,16-7,12 (m, 1H), 6,53-6,43 (m, 1H, 2’-H), 6,21 (s, 1H, 10-H), 6,03 (dd, /=10,5, 8,0 Hz, 1H, 3’-H), 5,82 (br t, /=9,0 Hz, 1H, 13-H), 5,44 (d, /=7,0 Hz, 1H, 2-H), 4,90 (dd, /=9,5, 2,0 Hz, 1H, 5-H), 4,33 (dd, /=11,0, 6,5 Hz, 1H, 7-H), 56 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 4,30 (d, /=8,0 Hz, 1Η, 20-Η), 4,15 (d, /=8,0 Hz, 1Η, 20-Η), 4,08 (s, 3Η, N+Me), 3,68 (d, /=7,0 Hz, 1H, 3-H), 2,58-2,49 (m, 1H, 6-H), 2,52 (s, 3H, OAc), 2,21 (s, 3H, OAc), 2,04 (s, 3H, OAc) 2,02 (br s, 2H, OH, OH), 1,88 (ddd, /=14,5, 11,5, 2,0 Hz, 1H, 6-H), 1,78 (br s, 3H, 18-Me), 1,64 (s, 3H, Me), 1,61 (dd, /=16,0, 7,0 Hz, 1H, 14-H), 1,18 (dd, /=16,0, 9,0 Hz, 1H, 14-H), 1,13 (s, 3H, Me) 1,08 (s, 3H, Me).
Preparação de MPA-taxóide 58
MPA-taxóide 58. Uma solução do taxóide 32 (1,0 equiv.) e de trietilamina (4,7 equiv.) em CH2C12 (0,025 M) é tratada, a 25°C, com />-toluenossulfonato de 2-fluoro-l-metilpiridínio de Aldrich Chemical Company Inc. (1,5 equiv.) e foi agitada durante 35 minutos. O decurso da reacção foi seguido por cromatografia em camada fina (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofurano 65:água 35, UV/ácido fosfomolíbdico e após 30 minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas era aparente um composto por CCF. A mistura reaccional é depois purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A—»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar 58 como uma película incolor.
Preparação de MPA-taxóide 59
32 57 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ MPA-taxóide 59. A síntese do taxóide-7-ΜΡΑ 59 difere apenas ligeiramente da síntese do taxóide-2’-MPA 58. O taxóide C-2 32 é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) ê tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) e tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals e foi deixado em agitação à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional é então purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A-»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar 59 como uma película incolor.
Preparação de MPA-taxóide 60
MPA-taxóide 60. A síntese do taxóide-7-ΜΡΑ 60 difere apenas ligeiramente da síntese do taxóide-2’-MPA 57. O taxóide C-2 36 é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) e é tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) è tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals, e é deixado em agitação à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional é, então, purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A-»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar 60 como uma película incolor.
Preparação de sais C-2-taxóide-2’-metiIpiridínio
O J i I. X = CH3COO'; TsO ; BF4 ; halogenetos. II.
Sais 2’-ónio em C-2 de taxóide (62-66). Uma solução de taxóide (62-66) I. (1,0 58 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ equiv.) e de trietilamina (4,7 equiv.) em CH2C12 (0,025 M) é tratada, a 25°C, com p-toluenossulfonato de 2-fluoro-l-metilpiridínio de Aldrich Chemical Company Inc. (1,5 equiv.) e é agitada durante 35 minutos. O decurso da reacção foi seguido por cromatografia em camada fina (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofurano 65:água 35, UV/ácido fosfomolibidico e após 30 minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas era aparente um composto por CCF. A mistura reaccional é, depois, purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A—»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (62-66) II. como uma película incolor.
Preparação de sais C-2-taxóide-7-metilpiridínio
Sais 7-ónio em C-2 de taxóide (67-72). A síntese dos sais taxóide-7-metilpiridínio II (67-72) difere apenas ligeiramente da síntese dos sais taxóide-2’-metilpiridínio II (62-66). O taxóide C-2 I (67-72) é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) e é tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) e com tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals, e é deixado em agitação à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional é. então, purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A-»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (67-72) II como uma película incolor.
83 835 ΕΡ Ο 739 343/PT 59
Preparação de sais C-2-taxóide-bis-2’,7-metilpiridínio
Sais bis-2’,7-ónio em C-2 de taxóide (73-80). A síntese de sais de C-2-taxóide-bis-2’,7-metilpiridínio II (73-80), difere da síntese dos sais C-2-taxóide-7-metilpiridínio (67-72) II apenas no que se refere ao tempo de reacção. O taxóide-C-2 (73-80) I é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) e é tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) e tosilato de 2-fluoro-l-metilpiridínio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals, e é deixado em agitação à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional é então purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A—>B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (73-80) Π como uma película incolor.
Preparação de sais C-2-taxóide-2’-benzotiazólio
83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Sais 2’-benzotiazólio em C-2 de taxóide (81-88). Uma solução do taxóide (81-88) I (1,0 equiv.) e de trietilamina (4,7 equiv.) em CH2C12 (0,025 m) é tratada, a 25°C, com />-toluenossulfonato de 2-fluoro-l-metilpiridínio de Aldrich Chemical Company Inc. (1,5 equiv.) e é agitada durante 35 minutos. O decurso da reacção foi seguido por cromatografia em camada fina (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofurano 65:água 35, UV/ácido fosfomolibidico) e após 30 minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas era aparente um composto por CCF. A mistura reaccional é depois purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A-»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (81-88) II. como uma película incolor.
Preparação de sais C-2-taxóide-7-benzotiazólio
Sais 7-benzotiazólio em C-2 de taxóide (89-96). A síntese dos sais taxóide-7-benzotiazólio (89-96) II, difere apenas ligeiramente da síntese dos sais taxóide-2’-benzotiazólio (81-88) II. O taxóide C-2 (89-96) I é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) e tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) e tosilato de tetrafluoro-borato de 2-fluoro-3-etilbenzotiazólio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals, e é deixado em agitação à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional é, então, purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A—»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (89-96) II como uma película incolor. 61 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Preparação de sais C-2-taxóide-2’-benzoxazólio
I. X = CH3COO- ; TsO ; BF4 ; halogenetos. II.
Sais 2’-benzoxazólio em C-2 de taxóide (97-104). Uma solução de taxóide 97-104 I. (1,0 equiv.) e de trietilamina (4,7 equiv.) em CH2C12 (0,025 M) é tratada, a 25°C, com /7-toluenossulfonato de 2-fluoro-l-metilpiridínio de Aldrich Chemical Company Inc. (1,5 equiv.) e foi agitada durante 35 minutos. O decurso da reacção foi seguido por cromatografia em camada fina (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofiirano 65:água 35, UV/ácido fosfomolíbdico) e após 30 minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas era aparente um composto por CCF. A mistura reaccional é depois purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A-»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar 97-104 II. como uma película incolor.
Preparação de sais C-2-taxóide-7-benzoxazólio
,SPh y_J (I^J 105 106 10? ιοβ 109 110 111
X 112 62 83 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ
Sais 7-benzoxazólio em C-2 de taxóide (105-112). A síntese dos sais taxóide-7-benzoxazólio (105-112) II, difere apenas ligeiramente da síntese dos sais taxóide-2’-benzoxazólio (97-104) II. O taxóide C-2 (105-112) I é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) e é tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) e tosilato de tetrafluoro-borato de 2-fluoro-3-etilbenzotiazólio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals, e é deixado em agitação à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional é então purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A -» B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (105-112) II como uma película incolor.
Preparação de sais C-2-taxóide-2’-pirimidínio
AcOO . OH BzNH O \ ‘ "
BzNH O(V jj. Alquilo R“K
" o L ° X = CH3COO" ; TsO ; BF4 ; halogenetos. II
Sais 2’-pirimidínio em C-2 de taxóide (113-120). Uma solução de taxóide (113-120) I (1,0 equiv.) e de trietilamina (4,7 equiv.) em CH2C12 (0,025 M) é tratada, a 25°C, com /7-toluenossulfonato de 2-fluoro-l-metilpiridínio de Aldrich Chemical Company Inc. (1,5 equiv.) e é agitada durante 35 minutos. O decurso da reacção foi seguido por cromatografia em camada fina (CCF) (E. Merck sílica RP-18, tetra-hidrofurano 65:água 35, UV/ácido fosfomolibidico) e após 30 minutos de agitação à temperatura ambiente, foi considerada completa uma vez que não permanecia qualquer taxol e apenas era aparente um composto por CCF. A mistura reaccional é depois purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A-»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (113-120) II. como uma película incolor. 63 83 835
ΕΡ Ο 739 343/PT
Preparação de sais C-2-taxóide-7-pirimidínio
Sais 7-pirimidínio em C-2 de taxóide (121-128). A síntese dos sais taxóide-7-pirimidínio (121-128) II, difere apenas ligeiramente da síntese dos sais taxóide-2’-pirimidínio (113-120) II. O taxóide C-2 (121-128) I é dissolvido em cloreto de metileno (0,006 M) e é tratado sequencialmente com trietilamina (40 equivalentes) e com tosilato de tetrafluoro-borato de 2-fluoro-3-etilbenzotiazólio (10 equivalentes) Aldrich Chemicals, e é deixado em agitação à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional é, então, purificada directamente por HPLC (Vydak RP-18, 22,5x3 mm, A—»B 0,5 h, linear, A: 20% de MeOH em NH4OAc 20 mM, B: 100% de MeOH, 9 ml/minuto, RT = 26,12) para originar (121-128) II como uma película incolor.
Lisboa, 22 Mi 2000
Por THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE - O AGENTE OFICIAL -
Claims (9)
- 83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1 - Taxo-diterpenóide representado pela fórmula seguinte:R é seleccionado de entre o grupo consistindo em Ph e íBuO; R10 é seleccionado de entre o grupo consistindo em OAc e OH; γ R é seleccionado de entre o grupo consistindo em fenilo e substituintes representados pelas estruturas seguintes:2» 7 i e R e R são, cada um, seleccionados de entre o grupo consistindo em OH e um sal ónio de um 2-O-aza-areno, com a condição de pelo menos um de R2 e R7 ser o referido sal ónio de 2-O-aza-areno, sendo o referido sal ónio de 2-O-aza-areno seleccionado de entre o grupo consistindo em sal ónio I e sal ónio Π representado pelas fórmulas seguintes:83 835 ΕΡ Ο 739 343/ΡΤ nas quais: Ζ e Ζ são, cada um, seleccionados de entre o grupo consistindo em C e N; Z3 é seleccionado de entre o grupo consistindo em S e O; R1 é seleccionado de entre o grupo consistindo em alquilo C,-C6 e alilo; R2 é seleccionado de entre o grupo consistindo em H, alquilo Ci*C6 e alilo; R4 é seleccionado de entre o grupo consistindo em H, alquilo c,-c6, alilo, O-alquilo QQ OH e halogéneo; se Z1 é C, então R3 é seleccionado de entre o grupo consistindo em H, alquilo C(-C6, alilo, O-alquilo CrC6, OH e halogéneo; se Zl é N, então R3 está ausente; R1 é seleccionado de entre o grupo consistindo em H, alquilo CpQ e alilo ou em o conjunto com R e o grupo vinileno interveniente forma um sistema de anel aromático condensado de seis membros; R8 é seleccionado de entre o grupo consistindo em H, alquilo CrC6, alilo, O-alquilo CrC6, OH e halogéneo, ou em conjunto com R1 e com o grupo vinileno interveniente forma um sistema de anel aromático condensado de seis membros; e se Z2 é C, então R5 é seleccionado de entre o grupo consistindo em H, alquilo C|-C6, alilo, O-alquilo CpCg, OH e halogéneo; se Z2 é N, então R5 está ausente; X' é um contra-ião
- 2 - Taxo-diterpenóide de acordo com a reivindicação 1 no qual: X" é seleccionado de entre o grupo consistindo em contra-iões Cl’, Br', Γ, CH3COO’, BF4‘, C104’, ArS03' e alquil CrC6 S03\
- 3 - Taxo-diterpenóide de acordo com a reivindicação 1 no qual: R2 é o referido sal ónio e R7 é OH.
- 4 - Taxo-diterpenóide de acordo com a reivindicação 1 no qual: 2 7 R ’ e R são ambos o referido sal ónio
- 5 - Taxo-diterpenóide de acordo com a reivindicação 1 no qual: R7 é o referido sal ónio e R2’ é OH. 1 - Taxo-diterpenóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 5 no qual: 83· 835 ΕΡ Ο 739 343 / ΡΤ 3/3 RxéPh; R10 é AcO; e o referido sal ónio é sal ónio I no qual: Z1 e Z2 são ambos C; R1 é alquilo C]-C6; R2, R3, R4 e R5 são cada um H; e X' é seleccionado de entre o grupo de contra-iões consistindo em Cl’, Br‘, Γ, CH3COO\ BF4\ C104\ ArS03' e alquil C,-C6 S03’.
- 7 - Taxo-diterpenóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 5 no qual: Rx é íBuO; R10 é OH; e o referido sal ónio é sal ónio I no qual: Z e Z são ambos C; R1 é alquilo CrC6; R2, R3, R4 e R5 são cada um H; e X’ é seleccionado de entre o grupo de contra-iões consistindo em Cl’, Br, Γ, CH3COO', BF4\ C104’, ArS03' e alquil C,-C6 S03‘.
- 8 - Taxo-diterpenóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 e 7 no qual: R1 é metilo; e X' é ArSo3' ou CH3COO’.
- 9 - Taxo-diterpenóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 para uso em terapia.
- 10 - Utilização de taxo-diterpenóides de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 no fabrico de um medicamento para 0 tratamento de neoplasmas. Lisboa, 22. MM Zm Por THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE - O AGENTE OFICIAL -Ag. Of. Pr. Ind. -çj aUiumto ^emg, ântón(0 joAô DÁ CUNHA FERREIRA Rua das Flores, 74 - 4.· 1200 LISBOA
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