PT100638B

PT100638B - Metodo para evitar e tratar a alopecia induzida por quimioterapia

Info

Publication number: PT100638B
Application number: PT100638A
Authority: PT
Inventors: Joaquin J Jimenez; Adel A Yunis
Original assignee: Univ Miami
Priority date: 1991-06-28
Filing date: 1992-06-26
Publication date: 1999-09-30
Also published as: PH31673A; CA2112496A1; WO1993000079A1; SK149093A3; TW272128B; DE69228814D1; IE922088A1; IL102344A0; CZ289293A3; JPH06509072A; AU2240592A; SK279673B6; CZ280874B6; EP0591378A1; EP0591378B1; EP0591378A4; PT100638A; IL102344A; AU667675B2; DE69228814T2

Description

MÉTODO PARA EVITAR E TRATAR A ALOPECIA INDUZIDA POR

QUIMIOTERAPIA

DOMÍNIO TÉCNICO

A presente invenção refere-se, de um modo geral, a um método para evitar ou tratar a alopecia e, de acordo com um aspecto específico,refere-se a um método para evitar ou tratar a alopcia induzida por agentes quimioterapêuticos.

ANTECEDENTES

A alopecia é um efeito secundário vul gar e angustiante originado por muitos agentes auimioterapêu ticos e para o qual não existe actualmente nenhuma medida pre ventiva eficaz. Num estudo recente 35 de 46 pacientes submetidos a quimioterapia consideraram a alopecia mais importante do que os vómitos ftierney el al. , 3. J. Câncer , 62 , (1990)

527-528. ]

Recentemente utilizando o modelo de ratos jovens, a Requerente demonstrou que o produto ImuVert, que é um modificador da resposta biológica, preparado a partir da bactéria Serratia marcescens, protegeu os animais contra a alopecia induzida .pelo produto citosina aracincsi-

do ou adriamicina [Hussein et al., Science, 2^9 (1990) 1564-1566]. Em estudos posteriores observou-se protecção idêntica da alopecia induzida pelo agente ARA-C a partir de interleucina-1 beta recombinante (I'L-1 ) [Jimenez et al. , FASEB J. , (1991)1.

A presente invenção proporciona um?

método independente para evitar e para tratar a alopecia induzida por quimioterapia. Este método: implica a utilização de um. factor de crescimento tal cotd o factor dê crescinerito epidécmco-(FCE) cu o fõctcr de crescimento do s fibroblastos (FCF). Deve .· notar-se que, tanto quando é do conhecimento da Requerente, não foi demons trado que o produto ImuVert estimulasse a produção do FCE ou do FCF nem foi sugerido que possa estimular essa produção.

A presente invenção refere-se também à utilização da vitamina

D_o ou do seu metabolito, isoladamente ou em combinação com o

FCE para evitar ou para tratar a alopecia.

Ã vitamina

é’ absorvida após ingestão de óleos de fígado dos peixes ou de leveduras irradiadas

As fontes de origem vegetal e animal contêm apenas precursores de vitamina D inactivos, 7-desidrocolesterol ou ergosterol. 0 7-desidrocolesterol é armazenado na pele e pode ser convertido em vitamina por acção da luz solar.

Todavia , quando a vitamina D e ingerida ou formada por irradiação bolitcs activos. A vitamina e convertida em 25-hidre ultravioleta sobre a pele, tem de ser transformada em meta3 colecalciferol pelas enzimas dos fígados. Formam-se então nos rins dois compostos, designadamente o 1,25-di-hidroxicolecalciferol e o 24,25-di-hidroxicolecalciferol. Os meta, bolitos activos da vitamina D desempenham uma função importante na absorção do cálcio a partir do tracto intestinal, na deposição óssea e na reabsorção óssea.

Demonstrou-se que a 1,25-di-hidroxi-

aumenta os receptores do FCE sobre as células do cancro da mama [Falette et al. , Molec. and Cell. Endocrinol., 63 (1-2) (1989) 189-198] e sobre uma linha de células determinada a partir da caivária do rato (Petkovich et al., J.Biol. Chem., 262 (28) (1987) 13424-13428. Contudo, tanto quanto é do conhecimento da Requerente, nunca foram demonstrados ou sugeridos os efeitos da vitamina ou de um seu metabolito sobre a alopecia.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Constitui um objectivo geral da presente invenção proporcionar um método para evitar ou para tratar a alopecia; Constitui”um objectivo específico da pre sente invenção evitar ou tratar a alopecia em pacientes sujeitos a tratamento com agentes quimioterapêuticos, incluin do agentes específicos de um ciclo (tais como o agente eitosina arabinosido (ARA-C)) e agentes não específicos de

qualquer ciclo (tais como o agente citoxano), individualmente ou em combinação.

Outros objectivos e vantagens da presente invenção tornar-se-ão evidentes ao longo da descrição seguinte.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A FIGURA 1 representa uma fotografia de 10 ratos da Experiência I, Quadro I (veja-se adiante). Todos os ratos receberam ARA-C na dose de 50 mg/kg x 7 dias. Os 5 ratos da parte superior receberam solução tampão s.c. Os 5 ratos da parte inferior receberam o agente FCE de murino na dose de 2 yug s.c. diariamente x 7 dias.

A FIGURA 2 representa uma fotografia de 6 ratos da Experiência III, Quadro I (veja-se adiante). Todos os ratos receberam o agente ARA-C na proporção de 50 mg/kg x 7 dias. Os 3 ratos da parte superior receberam solução tampão s.c. Os 3 ratos da parte inferior receberam o agente rHu-FCE na dose de 2 ^ig s.c. diariamente x 7 dias.

....... A FIGURA 3 representa uma fotografia de 4 ratos da experiência tópica efectuada com o agente FCE dos murinos (veja-se adiante). Todos os ratos receberam ARA-C na dose de 50 mg/kg x 7 dias. Os 2 ratos do lado esquerdo receberam o ager.te FCE dos murinos na proporção

de 10 jjg em DMSO diariamente x 7 dias por esfrega efectuada topicamente entre as omoplatas sobre uma área de 1 cm . Os 2 ratos do lado direito receberam solução tampão aplicada topicamente.

A FIGURA 4 representa uma fotografia de 12 ratos da experiência efectuada com o agente ARA-C-aFCF (veja-se adiante). Todos os ratos receberam o agente ARA-C na proporção de 50 mg/kg x 7 dias. Os 6 ratos da parte superior receberam solução tampão s.c. Os 6 ratos da parte inferior receberam o agente aFCF na proporção de 2 pg s.c. diariamente x 7 dias.

A FIGURA 5 representa uma fotografia de 8 ratos tratados com uma combinação quimioterapêutica de citoxina e adriamicina. Os 4 ratos da parte superior foram tratados também com o agente FCE dos murinos. Os 4 ratos da parte inferior foram tratados com solução tampão.

A FIGURA 6 representa uma fotografia de ratos tratados com o agente VP-16.

Todos os ratos recebe ram o agente VP-16 na proporção de 1,5 mg/kg x 3 dias

Os 5 ratos da parte superior receberam solução tampão durante dias antes do tratamento. Os 5 ratos da parte inferior receberam vitamina na proporção antes do tratamento.

A FIGURA 7 representa uma fotografia de 6 ratos tratados com uma combinação auimioterapêutica de citoxano e adriamicina (25 mg/kg i.p. x 1 dia e 2,5 mg/kg i.p. x 3 dias, respectivamente). Os 3 ratos da parte superior receberam solução tampão durante 4 dias antes do tratamento. Os 3 ratos da parte inferior receberam vitamina na proporção de 50 yjg/dia durante 4 dias antes do tratamento.

.. FIGURA 8 (A-C). Para cada experiência procedeu-se à divisão aleatória em número igual de rates com 5 dias de idade. 0 grupo experimentai de ratos (grupo da par te superior) recebeu 0,2 jug de 1 ,25-di-hidroxi vi tamina em 0,15 mi de etanol absoluto diariamente sobre a cabeça e sobre o pescoço durante 5 dias. Os ratos do grupo de controlo (grupo da parte inferior) foram tratados identicamente com 0,15 ml de etanol absoluto.

Decorrido 1 dia após o último tratamento tópico, os ratos da Figura 8A foram tratados com citoxano (CTX), os ratos da Figura 8B foram submetidos a um regime de tratamento com o agente Etoposido (VP-16) e os ratos da Figura 8C foram submetidos a um regime de tratamento com os agentes CTX + Adriamicina (ADM).

FIGURA 9· Efectuou-se a divisão aleatória de ratos com 5 dias de idade em dois grupos constituídos por 10 ratos cada-um. 0 grupo experimentai de ratos (grupo da parte superior) recebeu 0,1 pg do agente 1,25 (OH) durante apenas 5 dias. Os ratos do grupo de controlo (grupo da parte inferior) foram tratados de modo idêntico com 0,1 ml de etanol absoluto.

Decorrido 1 dia após o último tratamento todos os ratos foram submetidos a um regime de o agente

VP-16.

FIC-URA 10. Procedeu-se a distribuição aleatória de 13 ratos com 9 dias de idade por dois gru pos. 0 grupo experimental constituído por ratos (grupo /ig do agente

0,2 ml de etanol absoluto diariamente por via tópica sobre o pescoço e? sobre. b cfcrso durante 16 :dias. 0 grupo de controlo constituído por ratos (grupo da parte inferior) foi tratado de modo idên tico com 0,2 ml de etanol absoluto.

Decorrido um dia apos o último tratamento todos os ratos foram submetidos a um regime de tratamento com o agente

VP-16.

A FIGURA 11 mostra o efeito do agente

1,25-di-hidroxivitamina D^ sobre o crescimento do pelo.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se generica mente a um método para evitar ou para reduzir a alopecia , particularmente em pacientes sujeitos a quimioterapia. A Requerente demonstrou que um factor de crescimento, tal como o FCE , e a vitamina parecem tornar o folículo piloso re sistente ao efeito tóxico dos agentes quimioperapêuticos evitando assim a perda de pêlo ou de cabelo.

De acordo com um aspecto do presente método, administra-se a um paciente sujeito a quimioterapia um factor de crescimento numa quantidade suficiente para evitar ou para reduzir a perda de pêlo ou de cabelo que nor malmente se encontra associada aquele regime de tratamento.

Os factores de crescimento adequados para utilização no presente método englobam os FCE, FCF , os factores de crescimento transformantes (FCT) e o factor de crescimento derivado das plaquetas (FCDP). Os factores de crescimento podem provir de fontes naturais (por exemplo,de tecidos humanos ou de tecidos de roedores); contudo, dá-se preferência á produção recombinante, uma vez que é possível produzir grandes quantidades a um custo relativamente baixo. Também é possível utilizar factores sintetizados quimicamente. Está contemplada também a utilização de porções ou de derivados de factores de crescimento, tais como os FCE e FCF, na medida em que essas porções ou derivados podem proporcionar o mesmo resultado observado com o próprio factor.

De acordo com outro aspecto da presente invenção , administra-se a vitamina

ou um seu metabolito, análogo, derivado ou variante estrutural (por exemplo os

Q agentes 1,25-di-hidroxi-1ó-eno-23-ino-colecalciferol; 1 o<-hidroxivitamina

MC

903, etc) a um animal de sangue quente, por exemplo, a um ser humano, numa quantidade suficiente para evitar ou para reduzir a perda de pêlo ou de cabelo ou para estimular o crescimento de pêlo ou de cabelo. A perda de pêlo ou de cabelo susceptível de ser tratada ou susceptível de ser evitada utilizando a vitamina D_, pode ser devido a quimiote rapia ou a outra causa, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, a calvicie masculina. Como exemplos de metabolitos da vitamina adequados para utilização no método da presente invenção refere-se, sem que isso constitua qualquer limitação, os agentes 1 ,25-di-hidroxivitamina

D-, e 1 ,25-di-hidroxi-16-eno-23-ino-colecalciferol.

As composições adequadas para utilização no método agora reivindicado incorporam como agente activo um factor de crescimento, a vitamina (ou um seu metabolito ou análogo) ou uma associação de ambos. Essas composições podem ser formuladas mediante associação de um agente activo com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico (veículo, diluente ou excipiente)_ numa quantidade suficiente para proporcionar o efeito preventivo ao efectuar-se a administração de acordo com um.protocolo de tratamento adequadamente concebido. A composição pode ser apresentada sob a forma de uma dose unitária.

Embora não se pretenda limita..

cia presente invenção a um te-se que a vitamina

modo particular de acção, admiproporciona protecção contra a alopecia mediante aumento dos receptores para o FCE ao nível do folículo piloso.

é de prever que a admi nistração de uma associação de um factor de crescimento e de vitamina

possa proporcionar maior protecção.

As composições adequadas para utilique se refere a presente invenção podem uma forma adequada para administração tópica.

Nesse caso , a composição pode assumir a forma de uma solução, loção , creme , gel ou unguento. No caso de a compo sição se destinar a ser administrada por injecção, assume van tajosamente a forma de uma solução. 0 veículo' utilizado, forma assumida pela composição, pode ser inerte ou pode possuir um efeito benéfico sob o ponto de vista fisiológico ou farmacêutico.

na composição.

É possível incorporar diversos aditivos este respeito refere-se que está contemplada a situação em que se incorpora na composição um agente que estímula a produção do factor de crescimento do próprio paciente.

É preferível incorporar nas composições adequadas para administração tópica agentes que aumentam a penetração , tais como o DMSO ou o etanol. Também podem ser incorporados agentes es tabilizadores que prolonguem o período de vida da composição, independentemente do modo como esta possa ser formulada.

1

Qualquer especialista na matéria verificará que é possível utilizar diversas concentrações de factor de crescimento e/ou de vitamina na composição des crita antes. As concentrações óptimas podem ser determinadas facilmente por qualquer especialista na matéria.

Conforme se observou antes, o método a que se refere a presente invenção pode implicar a aplicação tópica do agente activo (um factor de crescimento e/ou vita mina ou um seu metabolito) ou a administração por injec ção. A quantidade de agente activo e a frequência de administração podem variar consoante o indivíduo e pode ser facil mente optimizada por qualquer especialista na matéria. Contudo, a título de exemplo, refere-se que é possível preparar

uma solução contendo	entre 2 e 100 ^ug/ml de composto 1,25-di-
-hidroxivitamina	em etanol absoluto, aplicando-se entre 3
e 5 ml dessa solução	directamente sobre o couro cabeludo em
diversos pontos com	um conta-gotas, procedendo-se depois a

uma massagem do couro cabeludo durante um intervalo de tempo compreendido entre 3 θ 5 minutos para se garantir uma distri

buição uniforme.	No caso de se estar em presença de um regime
de quimioterapia ,	este tratamento é vantajosamente adminis-

trado uma ou duas vezes por dia^_com início 5’ou’8“dias”antes

de se iniciar a	quimioterapia e mantendo-se no decurso da
quimioterapia.	Contudo , deve notar-se também que o agente
activo pode ser	administrado praticamente em simultâneo com

a administração do agente quimioterapêutico ou após a sua

administração .

Nos exemplos que se seguem demonstra-se que o método a que se refere a presente invenção é eficaz quando o fármaco específico do ciclo celular ARA-C é o agente quimioterapêutico utilizado e quando se utiliza a asso ciação de adriamicina (específica do ciclo celular) e citoxano (não específico do ciclo celular). Contudo, é tomado em linha de conta que utilizando o método da presente invenção é possível evitar a perda de pêlo e de cabelo resultante do tratamento com outros agentes quimioterapêuticos. Além disso, está previsto que é possível utilizar um factor de crescimento e/ou vitamina para evitar ou para retardar a perda de cabelo nos casos de calvície masculina, desde que essa utilização se processe regularmente e com vantagem se inicie aos primeiros sinais de calvície, por exemplo uma vez por dia ou com regularidade diária sobre a área afectada do couro cabeludo.

efeito preventivo da alopecia obser vado pela Requerente foi completamente inesperado. Admite-se que os factores de crescimento, tais como o FCE, sejam estimuladores do crescimento das células da pele. Em consequência , seria de admitir que esses agentes induzissem o folículo piloso a entrar no ciclo celular tornando assim o folículo mais susceptível aos agentes quimioterapêuticos, particularmente aos fármacos específicos do ciclo celular, tais como o agente ARA-C. Sendo assim, seria de prever que

a administração de factores de crescimento a pacientes sujeitos a quimioterapia viesse a agravar a perda de cabelo. Contudo, conseguiu-se atingir o efeito inverso. Consequentemente , deve notar-se que as observações registadas agora com os agentes FCE e FCF constituem aspectos novos nunca antes propostos ou descritos na literatura. De modo idêntico nada existe sobre as funções da vitamina no corpo que sugira que essa vitamina proporcione tão excelente protecção contra a aiopecia induzida por tratamento quimioterapêutico ou por qualquer outra forma.

Os exemplos seguintes não limitativos descrevem diversos aspectos da presente invenção com maior pormenor.

EXEMPLOS

Os pormenores experimentais referem-se aos Exemplos I-IV adiante descritos.

Adquiriu-se ratos da estirpe Sprague

Dawley a Charles River Laboratories, Wilmington, MA. 0 agente Cytosar-(J (ARA-C) foi adquirido à Upjohn Company, Kalamazo, MI. 0 FCE de qualidade para receptor proveniente de glândulas submaxilares de murganho, o FCE recombinante de origem humana, o dimetilsulfóxido (DMSO) e a adquiridos á Sigma Chemical Co.,

St. Louis , vitamina foram

MO. 0 agente aFCF foi adquirido a AMGEN Corp.

, Thousand

Oaks, CA.

Todos os ratos de cada experiência foram tratados com o agente ARA-C na proporção de 50 ml/kg por via intraperitoneai (i.p.) diariamente durante 7 dias. Para as injecções subcutâneas (s.c.) preparou-se os agentes FCE e FCF em PBS contendo 1 * de BSA. Procedeu-se ao registo da alopecia ao 122 dia da experiência classi ficando-se conforme descrito previamente [Hussein et al., Science , 249 ( 1 990 ) 1 564- 1 566; J.imenez et al. , FASEB J , (1991)1Para o tratamento tópico preparou-se o FCE dos murinos do modo seguinte: Dissolveu-se um frasco-ampola de FCE (100 ^ig) em 0,2 ml de PBS contendo 1 % de BSA e adicionou-se 0,12 ml desta solução a 0,48 ml de DMSO. Três horas antes da injecção do agente ARA-C aplicou-se 0,1 ml de uma mistura de FCE e DMSO a cada rato sobre uma area de 1 cm entre as omoplatas utilizando para o efeito um aplicador com ponta de borracha. Manteve-se os ratos individualmente separados durante um período de 3 horas, após o que a área tratada foi lavada cuidadosamente com água e sabão e depois secou-se. Manteve-se o tratamento durante 7 dias. Os animais de controlo foram tratados de modo semelhante utilizando apenas DMSO sem FCE.

Exemplo I

Efeito Protector do FCE

Efectuou-se duas experiências separaradas para testar a capacidade do FCE dos murinos p;pro -

porcionar protecção contra a alopecia induzida pelo agente ARA-C. Na Experiência I distribuiu-se aleatoriamente 22 ratos com 7 dias de idade por dois grupos de 11 ratos cada um. Para além do agente ARA-C, o Grupo I recebeu 2 pg de FCE de murganho s.c. na parte dorsal entre as duas patas posteriores 3 horas antes das injecçOes diárias do agente ARA-C, durante 7 dias. 0 Grupo II recebeu de um modo idêntico solução tam pão e serviu como grupo de controlo. Dez dos 11 ratos do Grupo II desenvolveram virtualmente uma alopecia corporal total e 1 dos ratos apresentou uma perda de pêlos superior a 50 %. Pelo contrário, o Grupo I, 5 ratos não exibiam qual_ quer perda de pêlo detectável e 6 ratos apresentavam apenas ligeiras perdas de pêlo (Quadro I, Experiência I (FIGURA 1)). Na Experiência II distribuiu-se aleatoriamente 12 ratos com 7 dias de idade por dois grupos de 6 ratos cada um. Para além do agente ARA-C, o Grupo I recebeu FCE de murganho na quantidade de 1 pg s.c. diariamente durante 7 dias. 0 Grupo II recebeu tampão s.c.. Todos os 6 ratos do Grupo II desenvolveram uma alopecia classificada entre moderadamente grave e grave ao passo que no Grupo I 1 dos ratos não apreseri tou qualquer perda de pêlo detectável e 5 ratos desenvolveram apenas uma perda de pêlo mínima (Quadro I, Experiência II).

Para a experiência seguinte utilizou-se o agente rHu-FCE. Distribuiu-se aleatoriamente 12 ratos com 7 dias de idade por dois grupos de 6 ratos cada um. Para

além cio agente ARA-C, o Grupo I recebeu o agente rHu-FCE na quantidade de 2 yjg s.c. na área do flanco diariamente duran te 7 dias. 0 Grupo II recebeu tampão s.c.. Todos os 6 ra tos do Grupo II desenvolveram uma alopecia corporal total, ao passo que no Grupo I nenhum dos ratos apresentou alopecia corporal total , de tal modo que 1 dos ratos não apresentou nenhuma perda de pêlo detectável, 4 ratos apresentaram uma alopecia suave e rada (Quadro I, dos ratos apresentou uma alopecia modeExperiência III, (FIGURA 2)).

QUADRO I

OCORRÊNCIA DE ALOPECIA EM RATOS TRATADOS COM ARA-C. EFEITO

DO FCE DOS MURINOS E DO rHu-FCE.

*

Alopecia

	0	1 +	2 +	3+
ARA-C	0	Experiência I 0 1	10
ARA-C + FCE dos murinos 2 yug	5	6	0	0

Experiência II

ARA-C					0	0 3	3
ARA-C	+ ECE	dos	murinos	1 /Jg	1	5 0	0
						Experiência	III
ARA-C					0	0 0	6
ARA-C	+ rHu-	FCE	2 pg		1	4 1	Ά U

Foram utilizados ratos com 7 dias de idade em todas as experiências. Todos os ratos receberam o agente ARA-C na propor ção de 50 mg/kg x 7 dias I.P. em 0,1 ml. Administrou-se FCF de murino e rHu-FCE em PBS contendo 1 $ de BSA 3 horas antes da administração do agente ARA-C, uma vez por dia em 0,1 ml s.c. x 7 dias. Os ratos do grupo de controlo receberam PBS contendo 1 % de BSA em 0,1 ml s.c. x 7 dias. Os dados foram registados no 12® dia.

* Nenhuma alopecia detectável, 0; alopecia ligeira definida por uma perda de pêlo inferior a 50 J, 1+; alopecia moderadamente grave ,canuia per da de pêlo superior a 50 %, 2+ ; eperda de pêlo total ou virtualmente total ( > 90 £), 3+.

Na experiência seguinte distribuiu-se aleatoriamente 12 ratos com 7 dias de idade em dois grupos de 6 ratos cada um. 0 Grupo I para além do agente ARA-C recebeu FCE de murinos na quantidade de 10 yig em DMSO diariamente x 7 dias por esfrega tópica com um aplicador de ponta de algodão entre as omoplatas sobre uma area de 1 cm . 0

Grupo II recebeu topicamente apenas solução de controlo. No Grupo II todos os ratos desenvolveram uma alopecia corporal completa. No Grupo I todos os ratos desenvolveram alopecia corporal completa com excepção do local onde o agente FCE havia sido aplicado topicamente (FIGURA 3).

Exemplo II

Efeito Protector do aFCF

Distribuiu-se aleatoriamente 14 ratos com 7 dias de idade por dois grupos. Todos os ratos receberam o agente ARA-C na proporção de 50 mg/kg/dia durante 7 dias. Além disso, o Grupo I recebeu o agente aFCF na auan tidade de 2 /jg s.c. sobre a parte dorsal da cabeça diariamente durante 7 dias. 0 grupo II recebeu injecções de solução tampão e serviu como grupo de controlo. Registou-se a alopecia ao 122 dia da experiência. Todos os ratos do Grupo II desenvolveram uma alopecia corporal completa. Pelo contrário , todos os ratos do Grupo I foram protegidos localmente no sítio da injecção (FIGURA 4).

Exemplo III

Protecção contra a alopecia induzida por Citoxano/Adriamicina

Distribuiu-se aleatoriamente 8 ratos com 4 dias de idade, da estirpe Sprague Dawley, em dois grupos de 4 ratos cada um. 0 Grupo I recebeu o agente FCE na quantidade de 2 jug s.c. na zona da cabeça diariamente durante 7 dias. 0 Grupo II recebeu injecções de solução tampão e serviu como grupo de controlo. Um dia depois de se ter interrompido as injecções de FCE ou de solução tampão todos os ratos receberam citoxano na quantidade de 25 mg/kg i.p. x 1 dia e adriamicina na quantidade de 2,5 mg /kg i.p. x 3 dias.

No Grupo II todos os ratos apresentaram alopecia de classifi cação 3+ sobre a cabeça e sobre a área do pescoço.Pelo contrário, no Grupo I um dos ratos apresentou uma alopecia ligei ra , outro rato apresentou alopecia mínima e dois ratos não apresentaram quaisquer sinais detectáveis de alopecia sobre a cabeça e sobre o pescoço (FIGURA 5). No caso de se utilizar o agente ImuVert sob condições semelhantes este não protege contra a alopecia provocada por uma associação cito xano/adriamicina .

Exemplo IV

Efeito Protector da Vitamina ^D3

Distribuiu-se aleatoriamente 12 ratos com dias de idade por dois grupos. 0 grupo I foi tratado dia riamente com solução tampão na quantidade de 0,1 ml s.c. durante 4 dias.

segundo grupo foi tratado diariamente com vitamina ^D3 rante 4 dias.

na quantidade de yjg s.c. sobre a cabeça duDepois de se ter interrompido o tratamento com solução tampão uma quantidade ou com vitamina D^ ,5 mg/kg i.p.

todos os ratos receberam de de agente VP-16 (Etoposido) diariamente durante 3 dias. Todos os ratos do Grupo I desenvolveram alopecia corporal completa ao passo que os ratos do Grupo II ficaram protegidos (a FIGURA 6 mostra 4 ratos de cada grupo).

Noutras experiências os ratos previamente tratados com vitamina D_q demonstraram excelente protecção contra a alopecia produzida pelos agentes Etoposido, Citoxano, Citarabina e por uma associação de Citoxano e de Adriamicina (FIGURA 7). Os resultados estão especificados no Qua dro II seguinte.

QUADRO II

PROTECÇÃO CONTRA A ALOPECIA PRODUZIDA POR QUIMIOTERAPIA,

PROPORCIONADA PELO PRÉ-TRATAMENTO COM VITAMINA D₃

Farmacos alopécicos testados	N2 total de experiências	N2 total de animais	Protecção contra a alopecia
Etoposido (VP-16)	2	22	Sim*
Citoxano (CTX)	7	89	Sim*
Citarabina (ARA-C)	1	8	Sim*
Associação de
Adriamicina + CTX	6	77	Sim*

Os agentes quimioterapêuticos foram administrados do modo seguinte: o agente VP-16 na proporção de 1,5 mg/kg i.p.

diariamente durante 3 dias; o agente Citoxano na proporção, de 32,5 mg/kg sob a forma de uma injecção única; o agente ARA-C na proporção de 50 mg/kg i.p. diariamente durante 7 dias; no caso da associação (adriamicina na proporção de 2,5 mg/kg i.p. diariamente durante 3 dias + citoxano na pro porção de 25 mg/kg) sob a forma de uma injecção única, .-.ic.:.21

era doses diárias de 50 /ig i.p.

nistrou-se a vitamina

ou

s.c. durante 4 dias antes do tratamento quimioterapêutico.

* Nessas experiências observou-se uma protecção uniforme con tra a alopecia induzida por quimioterapia em todos os animais tratados com vitamina D

3‘

Noutras experiências aplicou-se topi^ camente o agente mente ) em %

de

1,25-di-hidroxivitamina sido também conseguida etanol ou

DMSO tendo protecção dos ratos contra a alopecia (0,5 /ig d ia riaVP-16 .

Exemplo V

Efeito

Protector do pré-tratamento com Vitamina

Aplicação tópica do agente

1,25 di-hidroxivitamina ^D3^:

Dissolveu-se o agente 1,25 di-hidroxivitamina em etanol absoluto e aplicou-se topicamente utilizando um aplicador. Os animais de controlo foram tratados de modo idêntico com a mesma quantidade de etanol. Os animais foram depois individualmente separados durante um período de 3 horas após o que a área tratada foi cuidadosamente lavada com sabão e água e depois secou-se. 0 tratamento foi administrado diariamente com início ao 5² dia após o nascimento e terminando ao 102 dia.

Quimioterapia:

tradas i.p. com o agente CTX na Administrou-se o

Todas as início aos 11 proporção de agente VP-16 quimioterapias dias de idade.

mg/kg apenas na proporção de foram adminisAdministrou-se durante 1 dia.

,5 mg/kg durante 3 dias. No caso da associação dos agentes CTX e ADM administrou-se o agente CTX na proporção de 25 mg/kg apenas durante 1 dia e administrou-se o agente ADM na proporção de 2,5 mg/kg durante 3 dias. Para essas doses, nem o agente CTX nem o agente ADM isoladamente produzem alopecia. Regis_ tou-se a alopecia ao 10⁵ dia contado a partir do início da quimioterapia.

Efectuou-se um número total de 4 experiências. Na primeira experiência examinou-se a protecção contra a alopecia induzida pelo

Citoxano. Tratou-se o grupo experimental previamente com 0 em 0,15 ml de etanol ,2 yng de 1 ,25-di-hidroxiviabsoluto com aplicação tótamina D^ pica sobre a cabeça e sobre o pescoço e os animais do grupo de controlo receberam apenas 0,15 ml de álcool. Todos os 10 ratos do grupo

Pelo contrário de controlo ficaram totalmente alopécicos.

todos os animais do grupo experimental fica ram protegidos (Fig. 8A). Efectuou-se a segunda experiência sob condições semelhantes para se examinar a protecção contra a alopecia induzida pelo agente VP-16.

Pelo cont io, todos os ratos do grupo experimental do grupo de controlo desenvolveram alopecia corporal total.

ram bida protegidos (Fig. 8B). A terceira experiência foi concepara se examinar a protecção contra a alopecia indúzida por uma associação de Citoxano e Adriamicina. Havia 11 ratos em cada grupo. Seis ratos do grupo de controlo desenvolveram alopecia sobre a cabeça e sobre o pescoço e 5 ratos desenvolveram alopecia corporal total. Pelo contrário todos os ratos do grupo experimental ficaram protegidos (Fig.

. Na quarta experiência examinou-se de modo semelhante a protecção contra a alopecia induzida pelo agente VP—16 com a excepção de se ter reduzido dose de 1 , 25-di-hidroxivipara tamina D„ aplicação tópica

0,1 yjg em 0 apenas sobre

1.

ml de etanol absoluto com area da cabeça. Todos os 10 ratos do grupo de controlo ficaram completamente alopécicos. Pelo contrário, todos os ratos do grupo exterimental ficaram protegidos principalmente no sítio de aplicação de 1,25-dihidroxi vitamina (Fig. 9).

Deve notar-se que a protecção proporcio nada por 0,2 ^ig de 1 ,25-di-hidroxivitamina D^ não ficou limi tada ao sítio de aplicação mas estendeu-se a todo o corpo sugerindo que houve uma absorção sistémica. Quando a dose foi reduzida para 0,1 ^ig aplicados apenas sobre a área da cabeça a protecção contra a alopecia induzida pelo agente VP-16 foi menos generalizada e foi mais limitada ao sítio da aplicação.

Exemplo VI

Protecção contra a alopecia induzida pelo agente VP-16 proporcionada por aplicação tópica do agente RO 23-7553

Dissolveu-se o agente RO 23-7553 (1,25-di-hidroxi-1 ó-eno-ino-Golecalciferol) em etanol absoluto e apli cou-se topicamente com um aplicador. Os animais do grupo.de controlo foram tratados de modo semelhante com a mesma quantidade de etanol. Os animais foram mantidos separados indivi dualmente durante um período de 3 horas, após o que a área tratada foi cuidadosamente lavada com água e sabão e depois secou-se. 0 tratamento foi administrado diariamente com iní_ cio ao 9² dia após o nascimento e terminando ao 142 dia.

Ao 15^ã dia os animais receberam o agente VP-16 na proporção de 1,5 mg/kg i.p. durante 3 dias. Registou-se a alopecia ao 25² dia.

Distribuiu-se aleatoriamente 13 ratos por dois grupos. 0 grupo experimental ficou constituído por 7 ratos e o grupo de controlo ficou constituído por 6 ratos. 0 grupo experimental foi previamente tratado com um micrograma de agente. RO. 23-7553 em 0,2 ml de etanol absoluto com aplicação tópica sobre o pescoço e sobre o dorso e o grupo de controlo recebeu 0,2 ml de etanol absoluto. Todos os 6 ratos do grupo de controlo ficaram totalmente alopécicos sobre ó pescoço e sobre o dorso. Pelo contrário, todos os animais

do grupo experimental ficaram protegidos (Fig. 10). Deve notar-se que no caso de se iniciar a quimioterapia com a idade de 14 dias a área da cabeça não fica alopécica.

Exemplo VII

Estímulo do Crescimento do pêlo provocado pela Vitamina critos sobre logo

-se

No decurso dos estudos anteriormente des a protecção contra a alopecia induzida por proporcionada pela vitamina θ pelo seu anáagente 1,25-di-hidroxivitamina , que os ratos tratados com o agente 1 , 25-dihidroxivitaactivo o verificoumina ⁿão so ficaram protegidos contra a alopecia induzida pela quimioterapia como também esses ratos conseguiram uma melhor cobertura de pêlo constituída por pêlo mais longo sobre a area tratada. Essas observações originaram as experiências a seguir indicadas sobre estimulação do crescimento do pêlo proporcionada pelo agente 1,25-di-hidroxivitamina .

Os dorsos de 19 ratos da estirpe Sprague

Dawley com 25 dias de idade foram rapados e os animais distribuídos aleatoriamente por dois grupos.

Grupo I (10 ratos de controlo) recebeu 0,1 ml de etanol aplicado topicamente uma vez por dia sobre a área rapada durante 14 dias.

Grupo II (9 ratos tratados com calei26

triol)	recebeu 50 ng de agente 1 ,25-di-hidroxivitamina D^ em
0,1 ml	de etanol com aplicação tópica uma vez por dia sobre
a área	rapada durante 14 dias.

Ao 15² dia de estímulo avaliou-se o cres cimento de pêlo novo rapando outra vez uma área com um diâmetro de 6 cm. Recolheu-se e pesou-se o pêlo. A diferença entre os dois grupos foi altamente significativa sob o ponto de vista estatístico. Obteve-se um valor P de 0,003 (veja-se o Quadro III e a Figura 11).

QUADRO III

ESTÍMULO DO CRESCIMENTO DO PÊLO ORIGINADO

PELO CALCITRIOL NOS RATOS

Massa do p

Controlo

131

102

44

115

129

125

30 média + d.p.

113 + 8

Lo em mg.

Calcitriol

202

143

150

253

30

............... 177

140

147

135 média -> d.p.

164 - 13

Tomando como base estes dados que demons tram a estimulação do crescimento do pêlo originada pelo age te

25-di-hidroxivitamina

quando administrada topicame |3 Ira te ao rato, é de admitir que a 1 ,25-di-hidroxivitamina D possa ser utilizada como estimulador do crescimento do cabelo em casos de alopecia de qualquer origem. Além disso, os resul tados sugerem que a vitamina e os seus metabolitos são necessários para o crescimento óptimo do pêlo e cabelo pelo que podem ser utilizados para evitar as perdas de pêlo e cabelo provocadas por qualquer causa incluindo a calvície mas culina.

Exemplo VIII

Formulações

Indica-se seguidamente 4 formulações que contém 1,25-di-hidroxivitamina como ingrediente activo referindo-se também os métodos para a sua preparação.

. SOLUÇÃO TÓPICA

Ingredientes	? p/p
1 ,25-di-hidrovitamina	0,0002-0,10
Propilenoglicol	10,00
a Dicapnlato/Dica prato
de propilenoglicol	30,00
Hidroxitolueno butilado (HTB)	0,05
Hldroxianiso1 butilado (BHA)	0,05
Álcool Etílico, Absoluto q.s. para	100,00

Pode ser substituído pelos produtos seguintes (1) triglicéridos de cadeia média; (2) isossorbeto de dimetilo; (3) polietilenoglicóis; (4) etoxidiglicol.

Processo de Preparação

i. Pesa-se as quantidades adequadas de dicaprilato/dicaprato de propilenoglicol, álcool etí lico e propilenoglicol e introduz-se num recipiente de aço inoxidável.

ii.

Dissolve-se o HTB e o HAB na solução do passo (i) · iii.

Adiciona-se o agente ,25-di-nidroxivitamina à mistura do passo (ii) e agita-se ate à dissolução completa.

2. SOLUÇÃO TÓPICA TAMPONADA

Ingredientes % p/p

1,25-di-hidrovitamina D^ 0,0002-0,10

Propileno glicol	50,00
Hidroxipropil-celulose (Klucel MF)	0,50
Metilparabeno	0,20
Hidroxitolueno butilado (HTB)	0,05
Hidroxianisol butilado (BHA)	0,05
Fosfato de sódio monobásico	0,43
Fosfato de sódio dibásico	0,70
Hidróxido de sódio (q.s. para pH=7)	0,04
Álcool Etílico, Álcool a 95 í (Proof)	30,00
Água q.s. para	100,00

Processo de Preparação

i. Dissolve-se o fosfato de sódio monobásico, O’fos- fato de sódio dibásico e o hidróxido de sódio em água num recipiente de aço inoxidável. Mede-se o valor do p’H da solução. Esse valor do pH da solução deve ser 7,0; caso contrário, ajustar o valor do pH.

Adiciona-se o propilenoglicol e o álcool etílico à solução do passo (i).

iii. Dissolve-se o agente

25-di-hidroxivitamina e os compostos metil parabeno, HBT e HAB na solu ção do passo (ii).

iv. Dissolve-se o componente Klucel MF na solução do passo (iii) .

3. LOÇÃO TÓPICA TAMPONADA DE TIPO ÓLEO-EM-ÀGDA

Ingredientes	% p/p
1,25-di-hidrovitamina Álcool cetílico	0,0002-0,10 0,25
Álcool estearílico	0,50
Monoestearato de sorbitano	2,00

Mistura de monoestearato de glicerilo e de es

tearato polioxietileno (Arlacel 165)	4,00
Polissorbato 60	1 ,00

_ 30

Ingredientes (Cont.)	? p/p
Óleo mineral	4,00
Propilenoglicol	5,00
Hidroxianisol butilado	0,05
Propilparabeno	0,05
Agente tampão q.s. até pH	7,00
Solução de sorbitol	2,00
Edetato de dissódio	0,10
Metilparabeno	0,18
Água q.s. até	100,00

Processo de preparação

i. Prepara-se a solução tampão (pH 7,0) num recipiente de aço inoxidável.

ii. Num recipiente de aço inoxidável, à temperatura o . , .

de 70 C, funde-se o álcool cetilico, o álcool estearílico, o monoestearato de sorbitano, o Arlacel 165, o polissorbato 60, o óleo mineral o hidroxianisol butilado, o propilparabeno- e o propilenoglicol a 50 %, conjuntamente.

iii. Adiciona-se o sorbitol à solução do passo (i) e aquece-se a solução até à temperatura de 70°C.

iv. Adiciona-se o edetato de dissódio e o metilparabeno à solução do passo (iii).

v. Dissolve-se o agente 1,25-di-hidroxivitamina

L·., em propilenoglicol a 40 % , aproximadamente, ?1 _ num copo, e adiciona-se ao material resultante do passo (ii), sob agitação. Lava-se o recipiente com propilenoglicol a 10 % e adiciona-se à mistura do passo (ii).

vi. Adiciona-se o produto do passo (v) ao produto do passo (iv) quando as duas fases estiverem o a temperatura de 70 C e depois homogeniza-se. Deixa-se a emulsão arrefecer até á temperatura ambiente.

4. GEL PARA APLICAÇÃO TÓPICA

Ingredientes	í p/p
1,25-di-hidrovitamina Hidroxitolueno butilado (HTB)	'0,0002-0,10 0,05
Hidroxianisol butilado (HAB)	0,05
Hidroxipropi1-celulose	3,00
Álcool Etílico, a 95 í (Proof)	50,00
Agua q.s. para	100,00

Técnica de	Preparação
i.	. Pesa-se o álcool etílico e a água e introduz- -se num recipiente de aço inoxidável·
ii.	Dissolve-se o agente 1,25-di-hidrovitamina e os compostos HTB e HAB na solução do passo (i).

w iii. Dissolve-se o componente hidropropil-celulose na solução do passo (ii).

******

Considera-se aqui incorporado por referência todo o conteúdo das referências citadas anteriormente .

Embora a presente invenção tenha sido descrita com bastante pormenor por razões de clareza e compreenção , qualquer especialista na matéria entenderá facilmente que é possível efectuar diversas modificações de forma e de pormenor sem que haja afastamento do âmbito real da pre sente invenção.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1, - Utilização de vitamina D3, ou um seu derivado, um seu análogo ou um seu análogo estrutural, caracterizada pelo facto de se preparar medicamentos apropriados para evitar ou reduzir a alopecia induzida por quimioterapia quando administrados a um paciente sujeito a quimioterapia em uma quantidade suficiente para conseguir a prevenção ou a redução.
2, - Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo facto de o referido derivado ser 1,25-di-hidroxi-vitamina D3 ou l,25-di-hidroxi-16-eno-23-ino-colecalciferol.
3, - Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo facto de partindo da vitamina D3, um seu derivado, um seu análogo, ou um seu análogo estrutural, se obter um medicamento para administração por via tópica.
4, - Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo facto de o referido agente quimioterapêutico ser especifico do ciclo celular.
5. - Método de acordo com a reivindicação 4, carac terizado pelo facto de o referido agente quimioterapêutico ser citosina arabinosido.
6. - Método de acordo com a reivindicação 1, carac terizado pelo facto de o referido agente quimioterapêutico ser nao específico do ciclo celular.
7. - Método de acordo com a reivindicação 6, carac terizado pelo facto de o referido agente quimioterapêutico ser o citoxano.
8. - Método de acordo com a reivindicação 1, carac terizado pelo facto de o agente quimioterapêutico ser um agen te específico do ciclo celular em combinação com um agente não específico do ciclo celular.
9. - Método de acordo com a reivindciação 1, carac terizado pelo facto de a vitamina um seu derivado, um seu análogo ou uma sua variante estrutural serem administradas an tes de se iniciar a referida quimioterapia.
10. - Método de acordo com a reivindicação 1, carac terizado pelo facto de se administrar ainda ao referido pacien te pelo menos um factor proteico de crescimento em uma quarvtl dade suficiente para conseguir a referida prevenção ou redução .
11. - Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo facto de o referido factor de crescimento ser o factor de crescimento epidérmico.
12. - Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo facto de o referido factor de crescimento ser o factor de crescimento fibroblástico.
13. - Método para evitar ou reduzir a alopecia induzida por quimioterapia, caracterizado pelo facto de se administrar, a um paciente sujeito a quimioterapia, um factor proteico de crescimento em uma quantidade suficiente para conseguir a referida prevenção ou redução.
14. - Método de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo facto de o referido factor de crescimento ser o factor de crescimento epidérmico.
15. - Método para estimular o crescimento do cabelo, caracterizado pelo facto de se administrar a um animal de san gue quente que necessite desse estímulo vitamina ou um seu metabólico, análogo ou derivado, em uma quantidade suficiente para proporcionar esse estímulo.
16. - Método de acordo com a reivindicação 15, carac terizado pelo facto de se administrar ainda ao referido animal um factor proteico de crescimento.
17. - Método de acordo com a reivindicação 16, carac terizado pelo facto de o referido factor de crescimento ser o factor de crescimento epidérmico.
18. - Método de acordo com a reivindicação 15, carac terizado pelo facto de o referido animal de sangue quente ser um ser humano que sofra de calvície.
19. - Composição adequada para estimular o crescimen to do cabelo, caracterizada pelo facto de compreender uma quantidade eficaz de uma combinação de vitamina , ou um seu metabolito, análogo ou derivado e um factor proteico do crescimento em conjunto com um veículo aceitável sob o ponto de vista farma cêutico.
20. - Composição de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo facto de se representar sob a forma de gel, creme, loção ou pomada.