MX2009000103A - Esteres del acido docosahexaenoico y su utilizacion en el tratamiento y la prevencion de enfermedades cardiovasculares. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un éster de ácido decosahexaenoico con un alcohol elegido entre el grupo de vitaminas o provitaminas del grupo B, que comprende ventajosamente: alcohol nicotinilo de la siguiente fórmula (I) (ver fórmula) pantenol de la siguiente fórmula (II) (ver fórmula) e inositol de la siguiente fórmula (III) (ver fórmula) o con isosorbida de la siguiente fórmula (IV) (ver fórmula) o mononitrato de isosorbida de la siguiente fórmula (V); (ver fórmula) también se refiere a un método para la preparación del mismo, una composición farmacéutica que comprende el mismo y al uso del mismo en el tratamiento o prevención de una enfermedad cardiovascular, en particular fibrilación auricular.

Description

ESTERES DEL ACIDO DOCOSAHEXAENOICO Y SU UTILIZACION EN EL TRATAMIENTO Y LA PREVENCION DE ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere a los ésteres del ácido docosahexaenoico (DHA) con alcoholes seleccionados de entre las vitaminas o provitaminas del grupo B tales como alcohol nicotinol (B3), pantenol (B5) o con inositol (B7), o con isosorbida o mononitrato de ¡sosorbida, y en particular el docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo, y a su utilización como fármaco en el tratamiento y la prevención de enfermedades cardiovasculares. Los ácidos grasos poliinsaturados de la serie de los Omega 3, en particular el EPA y el DHA ventajosamente purificados y concentrados en forma de éster etílico, se conocen por su potencial para la utilización en el tratamiento de ciertas enfermedades cardiovasculares y la modulación de los factores de riesgo correspondientes. En particular, se conocen en el tratamiento de la hiperlipidemia, de la hipercolesterolemia y de la hipertensión. Los ensayos clínicos realizados con formulaciones que contienen una fuerte concentración en éster etílico de EPA y de DHA con pacientes que habían experimentado un infarto de miocardio han demostrado su eficacia reduciendo la mortalidad y en particular la muerte súbita. Estos resultados se han atribuido en parte a un efecto de estabilización de las membranas celulares de los cardiomiocitos ventriculares, lo que evita la aparición de la arritmia maligna en presencia de miocitos isquémicos como en los pacientes tras un infarto o en modelos experimentales que reproducen tales condiciones. Además, se conoce asimismo según la solicitud de patente WO 2004/047835 que los ésteres etílicos de DHA y de EPA pueden utilizarse para prevenir la fibrilación auricular. No obstante, de manera sorprendente, los inventores de la presente solicitud han descubierto que el DHA y el EPA no tenían el mismo efecto sobre la fibrilación auricular: el DHA tiene un efecto mucho más importante sobre la fibrilación auricular que el EPA. Por tanto, resulta más ventajoso utilizar DHA solo que una mezcla de DHA y EPA en el tratamiento de la fibrilación auricular y sin duda en el tratamiento de la mayoría de las enfermedades cardiovasculares. Las vitaminas del grupo B comprenden moléculas hidrosolubles que pertenecen a muy diferentes clases químicas, pero que presentan en su totalidad como función principal la capacidad de controlar las actividades enzimáticas en cualquier lugar en el metabolismo. Estas vitaminas son las denominadas: tiamina (B1 ), riboflavina (B2), niacina (B3), ácido pantoténico (B5), piridoxina (B6), biotina (B8), ácido fólico (B9) y cianocobalamina (B12). Las vitaminas o provitaminas del grupo B presentan las ventajas relacionadas con su función. En particular, el alcohol nicotinol es el alcohol derivado del ácido nicotínico (vitamina B3). Se convierte rápidamente en ácido nicotínico en el cuerpo humano.

El ácido nicotínico, también denominado niacina, es una vitamina hidrosoluble del grupo B que puede sintetizarse a partir del triptofano. Sin embargo, las dosis terapéuticas eficaces con fines hipocolesterolemiant.es e hipolipemiantes son superiores a las cantidades sintetizadas por el organismo. Por lo tanto, resulta esencial un complemento oral con un objetivo hipocolesterolemiante y/o hipotrigliceridemiante. En cuanto al mecanismo de acción, se sospecha que el ácido nicotínico inhibe la liberación de ácidos grasos libres de tejidos adiposos, lo que conlleva una disminución del aporte de ácidos grasos a nivel del hígado. Al esterificarse menos ácidos grasos para dar triglicéridos, menos se incorporan en las lípoproteínas de baja densidad (LDL), lo que conlleva una reducción del LDL-colesterol. También se ha observado que el ácido nicotínico aumenta de manera apreciable la tasa de HDL-colesterol, de la manera más probable mediante inhibición del catabolismo de esta forma de HDL-colesterol. En particular, el ácido nicotínico presenta un fuerte efecto vasodilatador periférico. Por tanto, la inyección intravenosa de alcohol nicotinol tras su conversión en ácido nicotínico conllevará una vasodilatacion favorable para una reducción de la tensión arterial. El ácido nicotínico se utiliza ampliamente en los tratamientos hipocolesterolemiantes e hipolipemiantes. También se indica que el ácido nicotínico puede asociarse con inhibidores de HMG Co-A reductasa, tales como estatinas por ejemplo, en los casos en los que la reducción del colesterol por estos inhibidores de HMG Co-A reductasa no resulta ser suficiente. Una asociación de este tipo puede ser beneficiosa cuando se desea aprovechar los efectos de cada uno de los compuestos, en particular la reducción del LDL-colesterol en lo que se refiere a las estatinas y el aumento del HDL-colesterol en lo que se refiere al ácido nicotínico. Por otra parte, el ácido nicotínico está adaptado para el tratamiento de las dislipidemias mixtas y por tanto puede influir tanto sobre la tasa de colesterol como sobre la tasa de triglicéridos. El pantenol es el alcohol derivado del ácido pantoténico, más conocido con el nombre de vitamina B5. En el organismo, el pantenol se transforma en ácido pantoténico. El ácido pantoténico se convierte entonces en una parte importante del compuesto "coenzima A", que es particularmente interesante en el metabolismo celular. De hecho, forma parte del metabolismo de los lípidos, de los carbohidratos y de las proteínas. El pantenol participa asimismo en la formación de la acetilcolina y los esteroides adrenales. Interviene asimismo en la desintoxicación de los cuerpos extraños y en la resistencia frente a las infecciones. El inositol (vitamina B7) moviliza las grasas evitando su acumulación. Presenta asimismo un efecto ansiolítico, estimula el sistema nervioso y el hígado y disminuye la tasa de colesterol en la sangre. Está implicado en el aumento de la actividad de serotonina, el control de la concentración de calcio intracelular, el mantenimiento del potencial de membrana de las células y el ensamblaje del citoesqueleto.

La ¡sosorbida, en particular el mononitrato de isosorbida vasodilatador periférico potente. De manera sorprendente, los inventores han descubierto que los ésteres del ácido docosahexaenoico (DHA) con los alcoholes seleccionados de entre las vitaminas o provitaminas del grupo B tales como alcohol nicotinol (B3), pantenol (B5) e inositol (B6), o con isosorbida o mononitrato de isosorbida, en particular el docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo (éster de ácido docosahexaenoico (DHA) con alcohol nicotinol), presentaban asimismo una actividad interesante sobre las enfermedades cardiovasculares. La presente invención se refiere así a un éster del ácido docosahexaenoico con un alcohol seleccionado de entre las vitaminas o provitaminas del grupo B, constituido ventajosamente por - el alcohol nicotinol de la fórmula siguiente: - el pantenol de la fórmula siguiente: - el inositol de la fórmula siguiente: o con la ¡sosorbida de la fórmula siguiente: o el mononitrato de isosorbida de la fórmula siguiente: Ventajosamente, el éster según la presente invención es el docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo de la fórmula general (1 ) siguiente: (1 ) La presente invención se refiere además a un método de preparación del éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención, en particular del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo (1 ) según la presente invención, mediante transesterificación del éster etílico del ácido docosahexaenoico con el alcohol seleccionado de entre el grupo constituido por alcohol nicotinol, pantenol, isosorbida, mononitrato de ¡sosorbida e inositol, ventajosamente con alcohol nicotinol. La transesterificación puede realizarse mediante métodos bien conocidos por el experto en la técnica. Ventajosamente, la transesterificación según la presente invención se realiza en presencia de un catalizador. De manera ventajosa, este catalizador es un carbonato de metales alcalinos o alcalino-térreos, ventajosamente el K2CO3. Ventajosamente, la relación molar de carbonato de metales alcalinos o alcalino-térreos a éster etílico de DHA está comprendida en la escala de 1/1 a 6/1. De manera ventajosa, la relación molar de alcohol a éster etílico de DHA está comprendida en la escala de 1/1 a 6/1 , de manera aún más ventajosa la relación molar de alcohol nicotinol a éster etílico de DHA está comprendida en la escala de 1/1 a 6/1 . Ventajosamente la reacción de transesterificación se realiza en un disolvente, ventajosamente seleccionado de entre dioxano o THF, de manera ventajosa es seleccionado THF. De manera ventajosa, se desgasifica el THF mediante burbujeo de nitrógeno. De manera aún más ventajosa, el medio de reacción se calienta a reflujo, ventajosamente durante al menos 14 h. En otra modalidad específica de la invención, el catalizador del método de transesterificación según la presente invención es una lipasa, ventajosamente la lipasa de Candida antartica. En particular la lipasa es una forma inmovilizada. De manera ventajosa, la lipasa es la Novozyme® comercializada por Novo Nordisk. De manera ventajosa la reacción tiene lugar en un medio libre de disolvente, o en un disolvente tal como el 2-metil-2-butanol o el acetonitrilo, de manera ventajosa en un medio libre de disolvente en el caso del alcohol nicotinol y en un disolvente en el caso del pantenol.

Ventajosamente, en el caso del inositol, el disolvente utilizado es un disolvente iónico polar tal como el 1-butil-3-metilimidazolio BF4 o el 1 -butil-3-metilimidazolio C(CN)2. Ventajosamente, la reacción tiene lugar a una temperatura superior a la temperatura ambiente, de manera ventajosa a 60°C. Ventajosamente, el etanol se elimina en el transcurso de la reacción, de manera ventajosa a vacío o mediante burbujeo de nitrógeno, de manera aún más ventajosa mediante burbujeo de nitrógeno. Esto permite aumentar la tasa de conversión, acelerar la reacción y eliminar la reacción parásita de hidrólisis. De manera ventajosa, la relación molar de alcohol a éster etílico de DHA está comprendida entre 1 y 5, de manera ventajosa entre 1.5 y 4.5. Ventajosamente, el tiempo de reacción está comprendido entre 1 hora y 100 horas, ventajosamente entre 1 hora y 72 horas, de manera ventajosa entre 1 hora y 48 horas, de manera aún más ventajosa entre 1 hora y 3 horas. En otra modalidad específica del método según la presente invención, la reacción de transesterificación tiene lugar en un disolvente anhidro, o en un disolvente no anhidro pero en presencia de una trampa de agua tal como por ejemplo cloruro de litio, MgCI2 o gel de sílice, o sin disolvente en atmósfera seca. Esto permite eliminar la reacción parásita de hidrólisis. De manera ventajosa, la reacción de transesterificación tiene lugar con éster etílico de ácido docosahexaenoico puro (al menos al 95% de pureza disponible comercialmente o purificado mediante métodos bien conocidos por el experto en la técnica a partir de una mezcla de éster etílico de ácidos grasos) o con una mezcla que contiene al menos el 70% molar de éster etílico de DHA. En el caso en el que el éster etílico de DHA utilizado sea una mezcla, convendrá purificar el éster obtenido tras la reacción de transesterificación. La presente invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende el éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención, y en particular el docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo según la presente invención, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas según la presente invención pueden formularse para la administración a mamíferos, comprendido el ser humano. La dosificación varía según el tratamiento y según la afección en cuestión. Estas composiciones se realizan de manera que puedan administrarse por vía oral, sublingual, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, local o rectal. En este caso, el principio activo puede administrarse en formas unitarias de administración o en mezcla con vehículos farmacéuticos clásicos, a los animales o seres humanos. Las formas unitarias de administración apropiadas comprenden las formas por vía oral tales como los comprimidos, las cápsulas de gelatina, los polvos, los gránulos y las disoluciones o suspensiones orales, las formas de administración sublingual y bucal, las formas de administración subcutánea, tópica, intramuscular, intravenosa, intranasal o intraocular y las formas de administración rectal. Cuando se prepara una composición sólida en forma de comprimidos, se mezcla el principio activo principal con un vehículo farmacéutico tal como la gelatina, el almidón, la lactosa, el estearato de magnesio, el talco, la goma arábiga, la sílice o análogos. Pueden recubrirse los comprimidos con sacarosa u otras materias apropiadas o incluso pueden tratarse de tal manera que tengan una actividad prolongada o retardada y que administren de manera continua una cantidad predeterminada de principio activo. Se obtiene una preparación en cápsulas de gelatina mezclando el principio activo con un diluyente y vertiendo la mezcla obtenida en cápsulas de gelatina blandas o duras. Una preparación en forma de jarabe o elixir puede contener el principio activo junto con un edulcorante, un antiséptico, así como un agente que proporciona sabor y un colorante apropiado. Los polvos o los gránulos dispersables en agua pueden contener el principio activo en mezcla con agentes de dispersión o agentes humectantes, o agentes de suspensión, al igual que con correctores del sabor o edulcorantes. Para una administración por vía rectal, se recurre a supositorios que se preparan con aglomerantes que funden a la temperatura rectal, por ejemplo manteca de cacao o polietilenglicoles. Para una administración por vía parenteral (intravenosa, intramuscular, etc.), intranasal o intraocular, se utilizan suspensiones acuosas, soluciones salinas isotónicas o disoluciones estériles e inyectables que contienen agentes de dispersión y/o agentes humectantes farmacéuticamente compatibles. El principio activo puede formularse asimismo en forma de microcápsulas, eventualmente con uno o varios aditivos de apoyo. Ventajosamente, la composición farmacéutica según la presente invención se destina a una administración por vía oral o intravenosa, de manera ventajosa por vía intravenosa en el caso de los tratamientos tras el infarto. La composición farmacéutica según la presente invención puede comprender otros principios activos que conducen a un efecto complementario o eventualmente sinérgico. Ventajosamente la composición farmacéutica no comprende éster de EPA. La presente invención se refiere además al éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención, en particular al docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo según la presente invención, o a la composición farmacéutica según la presente invención para su utilización como fármaco. La presente invención se refiere además al éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención, en particular al docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo según la presente invención, o a la composición farmacéutica según la presente invención para su utilización como fármaco destinado a la prevención y/o al tratamiento de las enfermedades cardiovasculares, ventajosamente relacionadas con el ritmo cardíaco (preferentemente trastornos rítmicos o trastornos de conducción), seleccionadas preferentemente de entre la arritmia auricular y/o ventricular, la taquicardia y/o la fibrilación; a la prevención y/o al tratamiento de enfermedades representadas por defectos de la conducción eléctrica de las células del miocardio; a la prevención y/o al tratamiento de factores de riesgo múltiples de enfermedades cardiovasculares, ventajosamente seleccionadas de entre la hipertrigliceridemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperlipidemia, las dislípidemias, ventajosamente las dislipidemias mixtas, y/o la hiperactividad de factor VII de coagulación sanguínea; al tratamiento y/o a la prevención primaria o secundaria de enfermedades cardiovasculares que derivan de la arritmia auricular y/o ventricular, de la taquicardia, de la fibrilación y/o de defectos de la conducción eléctrica inducidos por el infarto de miocardio, ventajosamente de la muerte súbita; y/o al tratamiento tras el infarto.

Los trastornos rítmicos comprenden en particular los problemas del nodo sinoatrial, tal como la taquicardia sinusal; la arritmia atrial tal como los extrasístoles atriales, la taquicardia atrial regular o la fibrilación auricular; taquicardia de la unión tal como la taquicardia de la unión paroxística o el síndrome de Wolff-Parkinson-White; o la arritmia ventricular tal como la contracción ventricular prematura, la taquicardia ventricular o la fibrilación ventricular. Los trastornos de conducción comprenden en particular la bradicardia. La presente invención se refiere por último al éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención, y en particular al docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo según la presente invención, o a la composición farmacéutica según la presente invención para su utilización como fármaco destinado a la prevención y/o al tratamiento de la fibrilación auricular. Sin limitarse por la teoría, parece que el éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención, en particular el docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo según la presente invención, libera en el cuerpo el alcohol y el DHA, y en particular el alcohol nicotinol y el DHA en el caso del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo, mediante una actividad esterásica. Por tanto, el éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención parece presentar la misma actividad que una mezcla de DHA y de alcohol. Por tanto, si este alcohol es una vitamina o una provitamina del grupo B, el éster del ácido docosahexaenoico según la presente invención presentará el mismo efecto que una mezcla de DHA y de vitamina o provitamina del grupo B. Además, parece que, en el caso del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo, el alcohol nicotinol se transforma en el organismo en ácido nicotínico. Por tanto, el docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo según la presente invención parece presentar la misma actividad que una mezcla de DHA y de ácido nicotínico. La ventaja del efecto vasodilatador del ácido nicotínico es la mejor distribución del DHA en la periferia, en particular en el caso de la inyección por vía intravenosa del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo, tras la conversión del alcohol nicotinol en ácido nicotínico. La invención se pondrá más claramente de manifiesto a partir de la figura y de los ejemplos siguientes. La figura 1 representa el porcentaje de consumo de DHA-EE en función del tiempo para los ejemplos 3.1 (tubo abierto), 3.2 (bajo vacío) y 3.3 (con burbujeo de nitrógeno) durante la reacción de transesterificación en presencia de 200 mg de Novozyme a 60°C con una relación de alcohol a éster de 3. Los ejemplos siguientes se facilitan a título indicativo y no limitativo.

EJEMPLO 1 Síntesis del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo utilizando el K2CO3 Se coloca 1 g (2.8 mmoles) de docosahexaenoato de etilo (pureza superior al 95% - proveedor: Interchim) en 5 mi de THF desgasificado mediante burbujeo de nitrógeno en presencia de 1.53 g (11 mmoles) de K2CO3 molido y 1.06 mi (10.9 mmoles) de alcohol nicotinol (pureza superior al 98% - proveedor: Acros). Se calienta la mezcla de reacción a reflujo durante 7 h, después se añaden 0.76 g (5.5 mmoles) de K2CO3 y se continúa el calentamiento durante 7 h. Tras enfriar, se retoma la mezcla de reacción en agua y luego se extrae con acetato de etilo. Se secan las fases orgánicas sobre MgS04) se filtran y luego se concentran a seco. Se purifica el residuo obtenido mediante cromatografía ultrarrápida sobre sílice (gradiente CH2CI2 - CH2Cl2/acetato de etilo: 90/10 durante 15 min). Se aisla un aceite claro (0.84 g, rendimiento del 71%). CCF de gel de sílice 60 F 254 Merck, CH2CI2-AcOEt: 90-10, Rf = 0.35.

EJEMPLO 2 Síntesis del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo utilizando una lipasa Todas las reacciones se realizan en un reactor de tipo discontinuo con agitación (agitación magnética) y a la temperatura óptima de cada enzima. Los productos utilizados son: - Una mezcla de ésteres etílicos enriquecida al 70% en éster etílico de DHA (DHA-EE) (comercializada por Croda Chemical Ltd) que se denominará "mezcla de ésteres DHA-EE 70%" - La Novozyme®, forma inmovilizada de la lipasa de Candida antárctica, comercializada par Novo Nordisk. - El alcohol nicotinol. La mezcla de reacción es o bien: - un medio sin disolvente que hace intervenir únicamente los sustratos, o bien - un medio orgánico que hace intervenir diferentes disolventes Los disolventes utilizados en este medio orgánico son: - el 2-metil-2-butanol (2M2B), disolvente medianamente polar que puede permitir la solubilizacion conjunta de compuestos hidrófobos tales como los ésteres de ácidos grasos poliinsaturados y de compuestos hidrófilos tales como el alcohol nicotinol o - el acetonitrilo, por los mismos motivos que el 2M2B.

Las condiciones de reacción se resumen en el cuadro 1 siguiente: CUADRO 1 Condiciones de reacción sometidas a prueba para la trans-esterificación de los ésteres DHA-EE 70% con el alcohol nicotinol Se incubó cada condición con 200 mg de Novozyme a 60°C. Se sometieron a prueba reacciones en 2M2B realizadas al aire libre (bajo campana) a 60°C con 200 mg de Novozyme. Se realizan tomas de muestras de 500 µ? regularmente hasta el final de las reacciones. Se detiene el proceso de reacción mediante centrifugación durante 5 minutos a 13000 revoluciones por minuto, lo que permite retirar la enzima inmovilizada del medio. Se conservan todas las muestras a 4°C hasta su análisis. Se llevaron a cabo en paralelo reacciones de control sin enzima y reacciones de control sin co-substrato (alcohol nicotinol).

Se realizan los análisis utilizando dos métodos de HPLC (serie Agilent 1100), siguiendo los parámetros siguientes: Método 1 · Columna Zorbax SB-C18 (4.6 mm x 25 cm) Temperatura: 40°C Velocidad de Flujo 1 ml/min, Eluyente: Metanol/Ácido acético al 0.02% Detección: Refractometría · Duración de la secuencia: 15 minutos.

Método 2 Columna Zorbax SB-C18 (4.6 mm x 25 cm) Temperatura: 40°C · Velocidad de Flujo 3 ml/min, Eluyente: Acetonitrilo/Acetona 50/50 Detección: Refractometría Duración de la secuencia: 15 minutos. Las muestras tomadas durante las diferentes reacciones se diluyen previamente hasta la obtención de una concentración inferior a 100 mM en una mezcla de metanol/ácido acético al 0.02% en el caso del método 1 y en acetona en el caso del método 2.

Resultados y discusión: Durante la reacción de transesterificación aparecen dos especies en el transcurso de la reacción. La primera eluye a 4.15 minutos, y corresponde al producto de hidrólisis del éster, y la segunda a 4.85 minutos en las condiciones de análisis. Este último compuesto corresponde al producto de la transesterificación entre los ésteres DHA-EE 70% y el alcohol nicotinol.

Aquí, se espera un único producto, presentando el alcohol nicotinol un único grupo hidroxilo primario.

Los porcentajes de conversión obtenidos en las diferentes condiciones de reacción se facilitan en el cuadro 2 siguiente: CUADRO 2 Porcentaje de conversión obtenido durante la trans-esterificación de los ésteres etílicos DHA-EE 70% con el alcohol nicotinol (*: en este caso, el tubo se deja abierto para permitir la evaporación del etanol producido en el transcurso de la reacción).

Porcentaje de Condiciones de conversión de los reacción DHA-EE en DHA- Nicotinol Acetonitrilo el 31 % en 72 h 2M2B el 47% en 48 h 2M2B al aire libre* el 60% en 118 h Sin disolvente el 1 1 % en 72 h Sin disolvente al aire el 100% en 72 h libre* Las tasas de conversión aumentan cuando las reacciones se realizan al aire libre, el etanol producido se evapora, lo que desplaza el equilibrio de reacción hacia la síntesis de DHA-alcohol nicotinol. Estas reacciones de trans-esterificación se acompañan por un fuerte ennegrecimiento de la mezcla de reacción. Los productos de hidrólisis aparecen preferentemente cuando se emplea 2M2B como disolvente de reacción. No obstante, una débil reacción de hidrólisis está asimismo presente en medio sin disolvente. Esto hace pensar que también hay agua presente en el alcohol nicotinol utilizado o que la humedad ambiente genera esta reacción parásita. Se ha demostrado la viabilidad de la reacciones de trans-esterificación de los ésteres DHA-EE 70% con el alcohol nicotinol y dichas reacciones presentan tasas de conversión ventajosas, próximas o superiores al 90%, especialmente cuando el etanol producido en el transcurso de la reacción se elimina del medio de reacción. No obstante, una reacción de hidrólisis debida a la presencia de agua en los disolventes utilizados y/o a la humedad ambiente parásita estas síntesis. Parece interesante intentar liberarse de la reacción parásita de hidrólisis observada. Por ejemplo, podrán utilizarse disolventes totalmente anhidros. Es asimismo posible realizar estas mismas reacciones en presencia de una trampa de agua (cloruro de litio, MgCI2, gel de sílice, por ejemplo) para eliminar cualquier posibilidad de hidrólisis.

Para la reacción de síntesis de los ésteres de alcohol nicotinol-DHA, el etanol producido en el transcurso de la reacción aparece como un elemento limitante de las reacciones. Su eliminación desplaza el equilibrio de reacción hacia la síntesis de los ésteres considerados. Por tanto, conviene optimizar esta eliminación especialmente considerando realizar las síntesis a presión reducida. Esto permitiría una evaporación rápida del etanol y por tanto un aumento de las velocidades de reacción.

EJEMPLO 3 Síntesis del docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo utilizando una lipasa: optimización de la trans-esterificación: evaporación del etanol producido en el transcurso de la reacción y detención de los pardeamientos oxidativos.

Se realizó la reacción de síntesis similar a la del ejemplo 2 utilizando los mismos productos de partida (alcohol nicotinol, mezcla de ésteres DHA-EE 70%, Novozyme) en un medio sin disolvente a 60°C en presencia de 200 mg de Novozyme con una relación de alcohol a éster = 3. El reactor utilizado es el mismo que el del ejemplo 2 y los métodos de análisis son los mismos.

EJEMPLO 3.1 : La única diferencia con respecto al ejemplo 2 es que la reacción se realizó en un recipiente abierto (tubo abierto). Resultados (figura 1 ): La reacción de transesterificación es "lenta": ocupando aproximadamente 80 h. Hay presencia de pardeamientos oxidativos. Está presente una hidrólisis parásita "fuerte".

EJEMPLO 3.2: La única diferencia con respecto al ejemplo 2 es que la reacción se realizó bajo vacío. Resultados (figura 1 ): Hay una aceleración de la reacción con respecto al ejemplo 3.1 pero sigue siendo "lenta": ocupando aproximadamente 48 h. Además hay persistencia de pardeamientos oxidativos y de hidrólisis parásita.

EJEMPLO 3.3: La única diferencia con respecto al ejemplo 2 es que la reacción se realizó con burbujeo de nitrógeno.

Resultados (figura 1 ): Hay una aceleración muy importante de la reacción que se vuelve total en menos de 3 h debido a una eliminación instantánea del etanol producido en el transcurso de la reacción y a una mezcla mejorada. Se observa la ausencia de pardeamientos oxidativos. Se reduce fuertemente la hidrólisis parásita.

EJEMPLO 4 Síntesis del éster de DHA con el pantenol utilizando una lipasa Las condiciones experimentales y de análisis son las mismas que en el ejemplo 2 aparte de las diferencias siguientes: Las condiciones de reacción se resumen en el cuadro 3 siguiente: CUADRO 3 Condiciones de reacción sometidas a prueba para la trans-esterificación de los ésteres DHA-EE 70% con el pantenol.

Resultados y discusión: Dos especies eluyen a 3.9 minutos y a 4.14 minutos en las condiciones de análisis. El pantenol presenta dos alcoholes primarios. Por tanto, podría esperarse la producción de varios productos (tres como máximo). No obstante, durante el control sin co-substrato (pantenol), aparece el pico a 4.14 minutos. Este corresponde entonces a una hidrólisis de los ésteres etílicos relacionada con la presencia de agua en el disolvente utilizado. Esta reacción sólo se observa en presencia de la enzima. Como consecuencia, sólo el primer pico corresponde a la síntesis de ésteres pantenol-DHA. Los porcentajes de conversión obtenidos en las diferentes condiciones de reacción se facilitan en el cuadro 4 siguiente: CUADRO 4 Porcentaje de conversión obtenido durante la trans-esterificación de los ésteres etílicos DHA-EE 70% con el pantenol (*: en este caso, el tubo se deja abierto para permitir la evaporación del etanoi producido en el transcurso de la reacción).

Parece que el porcentaje de conversión de los ésteres DHA-EE 70% aumenta cuando la reacción se realiza al aire libre. De hecho, en estas condiciones, el etanoi producido en el transcurso de la reacción se evapora. Por tanto, el equilibrio de reacción se desplaza hacia la síntesis de los ésteres pantenol-DHA. Además, estos valores de conversión están ciertamente infraevaluados debido a la evaporación conjunta del disolvente 2M2B (efecto de concentración del medio). Estas reacciones de trans-esterificación están acompañadas además por un fuerte ennegrecimiento de la mezcla de reacción. Se ha demostrado la viabilidad de las reacciones de trans-esterificación de los ésteres DHA-EE 70% con el pantenol, éstas presentan unas tasas de conversión interesantes, próximas o superiores al 90%, especialmente cuando el etanoi producido en el transcurso de la reacción se elimina del medio de reacción. No obstante, una reacción de hidrólisis debida a la presencia de agua en los disolventes utilizados y/o a la humedad ambiente parásita estas síntesis. Parece interesante intentar liberarse de la reacción parásita de hidrólisis observada. Por ejemplo, podrán utilizarse disolventes totalmente anhidros. Asimismo es posible realizar estas mismas reacciones en presencia de una trampa de agua (cloruro de litio, MgC , gel de sílice, por ejemplo) para eliminar cualquier posibilidad de hidrólisis. Para la reacción de síntesis de los ésteres pantenol-DHA, el etanol producido en el transcurso de la reacción aparece como un elemento limitativo de las reacciones. Su eliminación desplaza el equilibrio de reacción hacia la síntesis de los ésteres considerados. Por tanto, conviene optimizar esta eliminación especialmente considerando realizar las síntesis a presión reducida. Esto permitirá una evaporación rápida del etanol y por tanto un aumento de las velocidades de reacción.

EJEMPLO 5 Resultados comparativos de la acción del EPA y del DHA sobre la corriente de potasio ultrarrápida y por tanto sobre la fibrilación auricular El potencial de acción cardiaca es la unidad eléctrica de base de las células excitables cardiacas y representa la actividad de varios tipos de canales de iones responsables de diferentes fases del potencial de acción. A diferentes territorios cardiacos les corresponden diferentes tipos de potencial de acción, permitiendo así una actividad secuencial y coordinada de estos territorios. Para ello, los canales de potasio del tipo Kv1.5, codificados por el gen KCNA5, se expresan solamente en tejido de las aurículas y son responsables de la corriente de potasio lKur (ultrarrápida) que interviene en la repolarización del potencial de acción auricular. Esta expresión muy localizada de Kv1.5 constituye una diana de elección en el tratamiento de la fibrilación auricular, patología en el transcurso de la cual se observan modificaciones del potencial de acción auricular. Por tanto, se han estudiado los efectos de DHA y EPA sobre la corriente lKur- Para ello se ha transfectado la isoforma humana del canal Kv1.5 (hKv 1.5) de manera estable en células HEK 293 (células humanas de riñon embrionarias) y se ha estudiado la corriente resultante de la actividad de estos canales mediante la técnica de "patch-clamp" (fijación de voltaje) en configuración de células enteras.

Materiales y métodos Mantenimiento de la línea celular Se cultivan las células HEK 293-hKv1.5 en condiciones habituales (37°C, incubador al 95% de O2-el 5% de CO2) en placas Falcon hasta el 80% de confluencia. A continuación se despegan y se siembran en placas de petri de 35 mm que contienen el medio de cultivo siguiente: DMEM (Invitrogen), un 10% de suero de ternera fetal (Invitrogen), una mezcla penicilina-estreptomicina-glutamina (Invitrogen) respectivamente a 100 U/ml, 100 pg/ml y 0.25 mg/ml, y 1.25 mg/ml de geneticina como antibiótico de selección.

Electrofisiología Se realizó el estudio de lKur mediante la técnica de fijación de voltaje en la configuración de células enteras a temperatura ambiente (19-22°C). Los medios dentro de las pipetas contienen (en mM): aspartato de K 125, KCI 20, EGTA 10, HEPES 5, Mg-ATP 5, MgCI2 1 , pH 7.3 (KOH). Los medios extra ce lula res contienen (en mM): NaCI 140, HEPES 20, D(+)-glucosa 5, KCI 5, CaCI2 2, MgCI2 1 , pH 7.4 (NaOH). Se induce lKur cada 15 segundos mediante pulsos despolarizantes de 300 ms de duración a +60 mV a partir de un potencial de mantenimiento de -80 mV, seguido por una repolarización a -50 mV. Se determina la amplitud del pico de corriente como el máximo de la corriente obtenido durante los 100 primeros ms del pulso despolarizante. Se determina la amplitud de la corriente al final del pulso durante los 20 últimos ms del pulso despolarizante.

Reactivos El DHA y el EPA provienen de Sigma. Las disoluciones madre (10 mM) se preparan en etanol y la concentración final de disolvente es del 0.25%.

Resultados Los resultados se resumen en el cuadro 5 siguiente.

CUADRO 5 Porcentaje de inhibición de IKUT mediante DHA y EPA a diferentes concentraciones El EPA disminuye débilmente la amplitud del pico de ur (inhibición máxima del 17.5 ± 6.4%, n=10, P<0.05 a 10 µ?) y la amplitud de la corriente de final del pulso (el 61 .6 ± 7.3%, n=5, P<0.05 a 25 µ?).

El DHA inhibe la amplitud del pico de l«ur con un máximo del 58.1 ± 13.6% (n=5, P<0.005) y la de la corriente de final del pulso del 86.5 ± 3.4% (n=5, P<0 ,005) á 25 µ?.

Conclusión: Estos resultados muestran que la aplicación de DHA inhibe, más fuertemente que el EPA y de manera dependiente de la concentración, la corriente de potasio (lKur) de los canales Kv1.5 humanos transfectados en las células HEK293. El DHA actúa preferentemente sobre la corriente al final del pulso, sugiriendo un efecto sobre la inactivación de los canales Kv1.5. Además, este efecto está acompañado por una disminución del pico de \Kur (al contrario de lo que se observa para el EPA) potenciando la inhibición por DHA Estos efectos sobre lKur indican una acción beneficiosa de DHA sobre la fibrilación auricular.

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1. Un éster del ácido docosahexaenoico con un alcohol seleccionado de entre el grupo que consiste en - el pantenol de la fórmula siguiente: el inositol de la fórmula siguiente: la isosorbida de la fórmula siguiente: o el mononitrato de isosorbida de la fórmula siguiente: H OH NO2

2. Un método para la preparación del éster del ácido docosahexaenoico de conformidad con la reivindicación 1 ó 2 mediante transesterificación del éster etílico de ácido docosahexaenoico con el alcohol seleccionado de entre el grupo constituido por el pantenol, la isosorbida, el mononitrato de isosorbida y el inositol.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque dicho método se realiza en presencia de un catalizador.

4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque el catalizador es una lipasa, ventajosamente la lipasa de Candida antárctica.

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque el etanol se elimina en el transcurso de la reacción, ventajosamente mediante burbujeo de nitrógeno.

6. El método de conformidad con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, caracterizado además porque la reacción tiene lugar en un disolvente anhidro o sin disolvente en atmósfera seca.

7. Una composición farmacéutica que comprende el éster del ácido docosahexaenoico de conformidad con la reivindicación 1 , y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

8. Un éster del ácido docosahexaenoico de conformidad con la reivindicación 1 o composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7 para su uso como medicamento.

9. El uso de un éster del ácido docosahexaenoico de la reivindicación 1 , o docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo, o una composición farmacéutica de la reivindicación 7, para la fabricación de un medicamento útil para la prevención y/o al tratamiento de enfermedades cardiovasculares, relacionadas con la arritmia cardiaca, preferiblemente seleccionada de arritmia auricular y/o ventricular, la taquicardia y/o la fibrilación; a la prevención y/o al tratamiento de enfermedades representadas por defectos de la conducción eléctrica de las células del miocardio; a la prevención y/o al tratamiento de factores de riesgos múltiples de enfermedades cardiovasculares, seleccionadas de entre la hipertrigliceridemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperlipidemia, las dislipidemias, ventajosamente las dislipidemias mixtas; para el tratamiento y/o a la prevención primaria o secundaria de enfermedades cardiovasculares que derivan de trastornos del ritmo cardiaco, tal como la arritmia auricular y/o ventricular, de la taquicardia, de la fibrilación y/o de defectos de la conducción eléctrica inducidos por infarto de miocardio, ventajosamente de la muerte súbita; y/o al tratamiento postinfarto.

10. El uso de un éster del ácido docosahexaenoico de la reivindicación 1 , o docosahexaenoato de piridin-3-ilmetilo, o una composición farmacéutica de la reivindicación 7, para la fabricación de un medicamento útil para la prevención y/o al tratamiento de la fibrilación auricular. RESUMEN DE LA INVENCION La presente invención se refiere a un éster de ácido decosahexaenoico con un alcohol elegido entre el grupo de vitaminas o provitaminas del grupo B, que comprende ventajosamente: alcohol nicotinilo de la siguiente fórmula (I) pantenol de la siguiente fórmula (II) e inosítol de la siguiente fórmula (III) o con isosorbida de la siguiente fórmula (IV) o mononitrato de isosorbida de la siguiente fórmula (V); también se refiere a un método para la preparación del mismo, una composición farmacéutica que comprende el mismo y al uso del mismo en el tratamiento o prevención de una enfermedad cardiovascular, en particular fibrilación auricular. 3A P08/1988F