MX2007005698A - Composiciones de curcuminoides que exhiben la inhibicion sinergista de la expresion y/o actividad de ciclooxigenasa-2. - Google Patents

Abstract

Se proporciona una composicion novedosa que sirve para inhibir la respuesta inflamatoria en animales. La composicion comprende como un primer componente una cantidad efectiva de una espacie de curcuminoide y una cantidad efectiva de un segundo componente seleccionado del grupo que consiste de una especie de acido alfa o una especie de acido beta o derivados de las mismas. La composicion proporciona efectos antiinflamatorios sinergistas en respuesta a una lesion fisica o quimica o la estimulacion inmune anormal debido a un agente biologico o una etiliologia desconocida.

Description

COMPOSICIONES DE CURCUMINOIDES QUE EXHIBEN INHIBICIÓN SINERGISTA DE LA EXPRESIÓN Y/O ACTIVIDAD DE CICLOOXIGENASA-2 Antecedentes de la Invención Campo de la Invención La presente invención se refiere en general a una composición que exhibe una inhibición sinergista de la expresión y/o actividad de ciclooxigenasa-2 inducible (COX-2) . La composición puede funcionar de manera sinergista para inhibir la expresión inducible y/o actividad de la ciclooxigenasa inducible (COX-2) con un efecto significativo pequeño o nulo sobre la ciclooxigenasa constitutiva (COX-1) .

Descripción de la Técnica Relacionada Las enfermedades inflamatorias afectan a más de cincuenta millones de estadounidenses. Como resultado de la investigación básica en la inmunología molecular y celular durante los últimos diez a quince años, los planteamientos para la diagnosis, tratamiento y prevención de estas enfermedades inmunológicamente basadas han sido alterados dramáticamente. Un ejemplo de esto es el descubrimiento de una forma inducible de la enzima ciclooxigenasa. La ciclooxigenasa constitutiva (COX), purificada primero en 1976 y clonada en 1988, funciona en la síntesis de prostaglandinas (PGs) de ácido araquidónico (AA) . Tres años después de su purificación, una enzima inducible con actividad de COX se identificó y se le dio el nombre de COX-2, mientras que a la COX constitutiva se denominó COX-1. La expresión de genes de COX-2 está bajo el control de las citocinas pro-inflamatorias y factores de crecimiento. De esta manera, la inferencia es que la COX-2 funciona en tanto la inflamación como el control del crecimiento celular. Mientras que la COX-2 es inducible en muchos tejidos, está presente constitutivamente en el cerebro y la médula espinal, donde puede funcionar en la transmisión nerviosa para el dolor y la fiebre. Las dos isoformas de COX son casi idénticas en su estructura pero tienen diferencias importantes en la selectividad hacia substratos e inhibidores y en sus ubicaciones intracelulares. Las PGs protectoras, las cuales conservan la integridad del recubrimiento del estómago y mantienen una función renal normal en un riñon afectado, son sintetizadas por la COX-1. Por otra parte, las PGs sintetizadas por la COX-2 en células inmunes son fundamentales para el proceso inflamatorio. Una formulación ideal para el tratamiento de la inflamación inhibiría la inducción y la actividad de la COX-2 sin afectar la actividad de la COX-1. Sin embargo, los fármacos anti-inflamatorios tanto esteroidales como no esteroidales convencionales carecen de especificidad para inhibir la COX-2 sin afectar la COX-1 y tienen el riesgo de causar daños al sistema gastrointestinal cuando se utilizan durante períodos prolongados . Numerosos estudios han mostrado que la incidencia relativa de efectos secundarios gastrointestinales (Gl, por sus siglas en inglés) puede estar correlacionada con la especificidad relativa para COX-2 de los agentes. Mientras más alta sea la especificidad para COX-2 sobre COX-1, más baja será la incidencia de malestar Gl . De esta manera, la aspirina, con una especificidad para COX-2 de únicamente 0.6, produce una incidencia mayor de aflicción Gl que los curcuminoides, con una especificidad reportada para COX-2 de casi 3.0. Sin embargo, la especificidad para COX-2 generalmente aceptada que es necesaria para reducir significativamente la probabilidad de malestar Gl es 5.0. Por lo tanto, sería útil identificar una composición que inhibiera o previniera específicamente la expresión de la actividad enzimática de COX-2, mientras que tuviera un efecto pequeño o nulo sobre el metabolismo de COX-1 de manera que pudiera utilizarse en dosis suficientemente bajas o en dosis clínicas actuales sin efectos secundarios adversos.

Los médicos utilizan generalmente fármacos antiinflamatorios esteroidales y no esteroidales para el tratamiento de la osteoartritis. Sin embargo, estos fármacos no están bien adaptados para la terapia a largo plazo debido a que no únicamente carecen de la capacidad para promover y proteger el cartílago; pueden conducir realmente a la degeneración del cartílago o la reducción de su síntesis. Además, la mayoría de fármacos antiinflamatorios no esteroidales dañan el sistema gastrointestinal cuando se utilizan durante períodos prolongados. De esta manera, se necesitan urgentemente nuevos tratamientos para la artritis. Las propiedades protectoras de articulaciones de la glucosamina la harían un agente terapéutico atractivo para la osteoartritis excepto por dos desventajas: (i) la velocidad de respuesta al tratamiento con glucosamina es más lenta que para el tratamiento con fármacos anti-inflamatorios y (ii) la glucosamina puede dejar de satisfacer la expectativa de una remisión degenerativa. En estudios que comparan la glucosamina con los agentes antiinflamatorios no esteroidales, por ejemplo, un estudio dobleciego que compara 1500 mg de sulfato de glucosamina al día con 1200 mg de ibuprofeno, demostraron que los registros de dolor disminuyeron más rápido durante las primeras dos semanas en los pacientes tratados con ibuprofeno que en los pacientes tratados con glucosamina. Sin -embargo, la reducción en los registros de dolor continuó por todo el período de prueba en pacientes que recibían la glucosamina y la diferencia entre los dos grupos se volvió significativamente a favor de la glucosamina en la semana ocho. Lopes Vaz, A., Double-blind clinical evaluation of the relative efficacy of ibuprofen and glucosamine sulphate in the management of osteoarthritis of the knee in outpatients, 8 Curr. Med Res Opin. 145-149 (1982) . De esta manera, la glucosamina puede aliviar el dolor y la inflamación de la artritis pero a una velocidad más lenta que los fármacos anti-inflamatorios disponibles. Además, las formulaciones de glucosamina actualmente disponibles no han sido formuladas para atacar y aliviar óptimamente las causas fundamentales de la osteoartritis y la artritis reumatoide. También, como con muchos complementos herbarios y dietéticos comercialmente disponibles, las formulaciones disponibles no tienen un historial de uso, ni una prueba clínica controlada, que pudiera asegurar su seguridad y eficacia. Una formulación ideal para la normalización del metabolismo del cartílago o el tratamiento de la osteoartritis proporcionaría una condroprotección adecuada con una potente actividad anti-inflamatoria. El complemento dietético óptimo para la osteoartritis debe mejorar las cualidades generales de reconstrucción de articulaciones ofrecidas por la glucosamina y debe atenuar la respuesta inflamatoria sin introducir ningún efecto secundario dañino. Debe manufacturarse de manera económica y debe cumplir con todas las regulaciones gubernamentales .

Breve Descripción de la Invención De esta manera, sería útil identificar una formulación natural de compuestos que inhibieran o previnieran específicamente la síntesis de prostaglandinas por la COX-2 con un efecto pequeño o nulo sobre la COX-1. Esta formulación, la cual sería útil para conservar la salud de tejidos articulares, para tratar la artritis u otras condiciones inflamatorias, no ha sido descubierta previamente. El término "inhibidor específico o selectivo de COX-2" incluye compuestos o mezclas de compuestos que inhiben selectivamente la COX-2 sobre la COX-1. Preferiblemente, los compuestos tienen una concentración efectiva promedio para la inhibición de COX-2 que es mínimamente cinco veces más grande que la concentración efectiva promedio para la inhibición de COX-1. Por ejemplo, si la concentración inhibitoria promedio para COX-2 de una formulación de prueba fue 0.2 µg/mL, la formulación no se consideraría específica para COX-2 a menos que la concentración inhibitoria promedio para COX-1 fuera igual o mayor que 1 µg/mL . Las modalidades preferidas proporcionan una composición que comprende, como un primer componente, una especie de curcuminoides y un segundo componente que puede mejorar de manera sinergista el efecto anti-inflamatorio del curcuminoide . La composición comprende una cantidad efectiva de un primer componente que comprende una especie de curcuminoides y un segundo componente que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de un alíaácido, un beta-ácido y derivados de los mismos. En una cierta modalidad, el alfa-ácido es humulona. En otra modalidad, el beta-ácido es lupulona. En otra modalidad, el curcuminoide es curcumina. En una cierta modalidad, la composición comprende además un miembro seleccionado del grupo que consiste de glucosamina y sulfato de condroitina. Las modalidades preferidas también proporcionan un método para tratar la inflamación o enfermedades basadas en la inflamación en un animal el cual comprende proporcionar al animal que sufre de síntomas de inflamación una composición que comprende una cantidad efectiva de un primer componente que comprende una especie de curcuminoides y un segundo componente que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de un alfa-ácido, un beta-ácido y derivados de los mismos.

Las modalidades preferidas también proporcionan un método para reducir los síntomas de osteoartritis en un animal que comprende proporcionar al animal que sufre de síntomas de inflamación una composición que comprende una cantidad efectiva de un primer componente que comprende una especie de curcuminoides y un segundo componente que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de un alfa-ácido, un beta-ácido y derivados de los mismos.

Breve Descripción de los Dibujos Las Figuras 1 [A] - [F] ilustran la estructura química general de [A] el género curcuminoide y [B] , [C] , [D] , [E] y [F] , respectivamente, como curcumina, desmetoxicurcumina, bisdesmetoxicurcumina, el isómero geométrico cis-trans de curcumina y ciclocurcumina como especies dentro de ese género. Las Figuras 2 [A] y [B] , respectivamente, ilustran las estructuras químicas generales del género alfa-ácido y humulona como una especie dentro de ese género . Las Figuras 3 [A] y [B] , respectivamente, ilustran las estructuras químicas generales del género beta-ácido y lupulona.

Descripción Detallada de la Modalidad Preferida Se debe observar que, como se utiliza en esta especificación y las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un", "una", "el" y "la" incluyen referencias plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario . Las modalidades preferidas proporcionan composiciones que tienen un efecto inhibitorio sinergista sobre la expresión y/o actividad de la COX-2. Más particularmente, la composición comprende, como un primer componente, un curcuminoide y, como un segundo componente, un miembro seleccionado del grupo que consiste de un alfa-ácido, un beta-ácido y derivados de los mismos como se describiera más específicamente con anterioridad. La composición proporcionada por las modalidades preferidas puede formularse como un complemento dietético o una composición terapéutica. La composición puede funcionar de manera sinergista para inhibir la expresión inducible y/o actividad de COX-2 sin un efecto significativo sobre la COX-1. Como se utiliza en este documento, el término "complemento dietético" se refiere a composiciones consumidas para afectar los cambios estructurales o funcionales en la fisiología. El término "composición terapéutica" se refiere a cualquier compuesto administrado para tratar o prevenir una enfermedad. Como se utiliza en este documento, los términos "curcuminoide" y "curcuminoide activo" se refieren a una especie dentro de los géneros de curcuminoides que es capaz de inhibir la expresión inducible y/o actividad de COX-2 mientras que tiene un efecto pequeño o nulo sobre la COX-1 o es capaz de inhibir o reducir la gravedad de una respuesta inflamatoria. El curcuminoide puede extraerse de productos naturales o puede sintetizarse químicamente. Una fracción pigmentada de color amarillo que es aislada de los rizomas de Cúrcuma longa contiene curcuminoides que pertenecen al grupo de dicinamoil-metano. Los curcuminoides están presentes al grado de 3 a 5 por ciento . Se consideran los ingredientes activos más importantes y se cree que son responsables de la actividad biológica de Cúrcuma longa . Aunque su actividad principal es anti-inflamatoria, se ha reportado que los curcuminoides también poseen actividad antioxidante, antialérgica, de curación de heridas, antiespasmódica, antibacteriana, antifungal y antitumoral . La curcumina (Figura IB) se aisló en 1815 y se definió estructuralmente en 1910. Otros curcuminoides aislados de Cúrcuma longa incluyen desmetoxicurcumina (Figura 1C) , bisdesmetoxicurcumina (Figura ID) , un isómero geométrico cis-trans de curcumina (Figura 1E) y ciclocurcumina (Figura 1F) . Los curcuminoides se pueden encontrar en otros materiales botánicos además de la C rcuma longa, tales como Cúrcuma xanthorrhiza y Cúrcuma zedoaria . Los curcuminoides son bien conocidos por su actividad anti-inflamatoria. La cureuma o tumerico es uno de los fármacos anti-inflamatorios más antiguos que se utilizan en la medicina Ayurveda. La actividad antiinflamatoria de los curcuminoides ha sido evaluada en modelos de reacción inflamatoria tales como irritantes químicos o físicos como carragenina, pelotillas de algodón, formaldehído y el saquillo de granuloma. Las pruebas clínicas dobleciego en humanos han demostrado eficacia en la artritis reumatoide a una dosis de 1200 mg de curcuminoides/día durante cinco a seis semanas. Sin embargo, a estas dosis se reportan frecuentemente signos de molestia gastrointestinal (Gl) e irritación estomacal. El malestar Gl y la irritación estomacal causados por las altas dosis de curcuminoides pueden ser debido al hecho que los curcuminoides actúan sobre la producción de prostaglandinas de una manera similar a aquella de la aspirina y agentes anti-inflamatorios similares a la aspirina. Preferiblemente, el género de curcuminoides, representado por la FIGURA 1 [A] y ejemplificado específicamente por curcumina en la FIGURA 1 [B] es un extracto botánico de grado farmacéutico tal como se puede obtener comercialmente, por ejemplo, de Sabinsa (121 Ethel Road West, Piscataway, NJ) . Otros curcuminoides que se pueden emplear incluyen desmetoxicurcumina (FIGURA 1 [C] ) , bisdes etoxicurcumina (FIGURA 1 [D] ) , una curcumina cis-trans (Figura [1E] ) y ciclocurcumina (FIGURA [1F] ) . El curcuminoide utilizado puede obtenerse fácilmente a partir de Cúrcuma longa L. El extracto de curcuminoide de grado farmacéutico es estandarizado para tener un contenido de curcuminoide mayor que aproximadamente 70 por ciento. El extracto farmacéutico de grado botánico preferiblemente debe pasar procedimientos extensivos de seguridad y eficacia. Como se emplea en las modalidades preferidas, el extracto tiene un contenido de curcuminoide de aproximadamente 1 a 99 ciento en peso. Preferiblemente, el contenido mínimo de curcuminoide es aproximadamente 70 por ciento en peso. Alternativamente, el curcuminoide puede sintetizarse utilizando técnicas estándar que son conocidas en la síntesis química. Como se utiliza en este documento, el término "extracto de lúpulos" se refiere a un material sólido que resulta de (1) la exposición de un producto vegetal de lúpulos a un solvente, (2) la separación del solvente del producto vegetal de lúpulos y (3) la eliminación del solvente . Como se utiliza en este documento, el término "solvente" se refiere a un líquido de carácter acuoso u orgánico que posee las características necesarias para extraer un material sólido del producto vegetal de lúpulos. Los ejemplos de solventes incluirían, pero no están limitados a agua, vapor, agua sobrecalentada, metanol, etanol, hexano, cloroformo, C02 líquido, N2 líquido o cualquier combinación de estos materiales. Como se utiliza en este documento, el término "extracto en C02" se refiere al material sólido que resulta de la exposición de un producto vegetal de lúpulos a una preparación de C02 líquido o supercrítico seguido por la remoción del C02. Como se utiliza en este documento, el término "alfa-ácidos" se refiere a compuestos aislados de productos vegetales de lúpulos que incluyen, pero no están limitados a humulona, cohumulona, isohumulona, isoprehumulona, hulupona, adhumulona, xantohumol A y xantohumol B. Como se utiliza en este documento, el término "beta-ácidos" se refiere a compuestos conocidos colectivamente como lupulonas que incluyen, pero no están limitados a lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona y hexahidrocolupulona. Como se utiliza en este documento, el término "fracción de aceite esencial" se refiere a una mezcla compleja de componentes que comprenden mirceno, humuleno, beta-cariofilina, undecan-2-on y 2-metil-but-3-en-ol .

Como se utiliza en este documento, el término "grasas" se refiere a esteres de triacilglicerol de ácidos grasos . Como se utiliza en este documento, el término "ceras" se refiere a éteres o esteres de triacilglicerol de alcoholes o ácidos grasos de cadena extremadamente larga (>25 átomos de carbono) . La extracción de lúpulos en una forma o en otra se remonta 150 años a principios del siglo diecinueve cuando se intentó por primera vez la extracción en agua y etanol . Aún hoy en día un extracto en etanol está disponible en Europa, pero por mucho los extractos predominantes son extractos en solventes orgánicos (hexano) y extractos en C02 (supercrítico y líquido) . El C02 (típicamente a una presión de 60 bares y de 5 a 10 °C) está en un estado líquido y es un solvente no polar relativamente suave que es sumamente específico para resinas y aceites suaves de lúpulos. Además del punto crítico, típicamente a una presión de 300 bares y a 60°C, el C02 tiene las propiedades de tanto un gas como un líquido y es un solvente mucho más fuerte . Los componentes aproximados de varios extractos se comparan en la Tabla 1.

Tabla 1. Extractos de Lúpulos (Porcentaje P/P) En su forma más simple, la extracción de lúpulos implica moler, granular y volver a moler los lúpulos para esparcir la lupulina, pasar un solvente a través de una columna empacada para recolectar los componentes de resina y finalmente, la remoción del solvente para producir un extracto de resina completo o "puro" . Los extractantes orgánicos principales son solventes fuertes y además de virtualmente todos los componentes de lupulina, éstos extraen pigmentos de las plantas, ceras cuticulares, agua y materiales solubles en agua. El C02 supercrítico es más selectivo que los solventes orgánicos y extrae una menor cantidad de los taninos y ceras y menos agua y por lo tanto componentes solubles en agua. Extrae algunos de los pigmentos de las plantas como la clorofila pero menos que los solventes orgánicos. El C02 líquido es el solvente mucho más selectivo que se utiliza comercialmente para lúpulos y por lo tanto produce el extracto de resina completa y aceite más puro. No extrae ninguna de las resinas duras o taninos, extrae niveles mucho más bajos de ceras vegetales, no extrae pigmentos de las plantas y extrae menos agua y materiales solubles en agua. Como consecuencia de esta selectividad y las propiedades de solvente más suaves, el rendimiento absoluto del extracto en C02 líquido por unidad de peso de lúpulos es menor que cuando se utilizan los otros solventes mencionados. Adicionalmente, el rendimiento de alfa-ácidos con C02 líquido (aproximadamente 89-93%) es más bajo que aquel del C02 supercrítico (aproximadamente 91-94%) o los solventes orgánicos (aproximadamente 93-96%) . Después de la extracción existe el proceso de remoción de solventes, el cual para los solventes orgánicos implica el calentamiento para causar la volatilización. A pesar de esto, cantidades traza del solvente permanecen en el extracto. Sin embargo, la remoción de C02 implica simplemente una liberación de la presión para volatilizar el C02. En las modalidades preferidas, el alfa-ácido, el beta-ácido o un derivado de los mismos pueden extraerse de lúpulos o puede sintetizarse químicamente. Preferiblemente, el alfa-ácido, el beta-ácido o un derivado de los mismos se extrae de lúpulos, más preferiblemente se extrae por medio de C02 supercrítico. Preferiblemente, el género de alfa-ácido, representado por la FIGURA 2 [A] y ejemplificado específicamente por humulona en la FIGURA 2 [B] , y el género de beta-ácido, representado por la FIGURA 3 [A] y ejemplificado específicamente por lupulona (FIGURA 3 [B] ) es una preparación de grado farmacéutico tal como se puede obtener comercialmente, por ejemplo, de Hopunion (Ya ima, WA) . La identificación de humulona del extracto de lúpulos como un inhibidor de la resorción ósea es reportada en Tobe, H. y colaboradores 1997. [Bone resorption Inhibitors from hop extract. Biosci. Biotech. Biochem 61(1)158-159]. Los últimos estudios del mismo grupo caracterizaron el mecanismo de acción de la humulona como la inhibición de la transcripción de genes de COX-2 después de la estimulación con TNFalfa de células MC3T3—El [Yamamoto K. 2000. Suppression of cyclooxygenase-2 gene transcription by humulon of bee hop extract studied with reference to glucocorticoid. FEBS Letters 465:103-106]. Sin embargo, estas referencias describen el uso de humulona sola para las aplicaciones de osteoporosis y transcripción de genes de COX-2. Las modalidades preferidas proporcionan la modificación de la molécula de curcuminoide para lograr una mayor eficacia y una menor toxicidad y se agrega un segundo componente que actúa de una manera sinergista. Por lo tanto, las modalidades preferidas se refieren a un descubrimiento que cuando se combina un curcuminoide con una segunda molécula, seleccionada del grupo que consiste de un alfa-ácido, un beta-ácido y derivados de los mismos, la combinación produce un efecto sinergista en la célula objetivo. Una de estas respuestas sinergistas sería la inhibición específica de COX-2 inducible. Las especies representativas dentro de cada género se listan en la Tabla 2. De las especies listadas conforme a cada género en la Tabla 2, se prefieren aquellas que contienen al menos un asterisco (*) y son particularmente preferidas aquellas que contienen dos asteriscos (**) .

TABLA 2. Componentes de la Composición Preferiblemente, las modalidades preferidas utilizan curcuminoides activos e ingredientes activos de extracto de lúpulos o derivados del mismo. Como se utiliza en este documento, el término "curcuminoide activo", "ingrediente activo de extracto de lúpulos" o derivados de los mismos se refieren a derivados de origen natural o sintéticos de especies dentro del alcance de los géneros respectivos que son capaces de inhibir la expresión inducible y/o actividad de COX-2 mientras que tienen un efecto pequeño o nulo sobre la COX-1 o son capaces de inhibir o reducir la gravedad de una respuesta inflamatoria . Las modalidades preferidas también pueden utilizar conjugados de curcuminoides, alfa- y beta-ácidos o derivados de los mismos. "Conjugados" de curcuminoides, alfa- y beta-ácidos o derivados de los mismos significa curcuminoides, alfa-ácidos y beta-ácidos enlazados covalentemente o conjugados a un miembro seleccionado del grupo que consiste de mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato y glutationa. Preferiblemente, el mono- o di-sacárido es un miembro seleccionado del grupo que consiste de glucosa, mañosa, ribosa, galactosa, ra nosa, arabinosa, maltosa y fructosa. Una cierta modalidad es una composición que comprende una cantidad efectiva de curcumina y al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste de humulona y lupulona. La inhibición de la actividad de la enzima COX-2 por medio de alfa-ácidos o beta-ácidos puede proporcionar un efecto sinergista doble con los curcuminoides. De esta manera, el segundo compuesto seleccionado del grupo que consiste de alfa-ácidos y beta-ácidos puede incrementar la actividad anti-inflamatoria de los curcuminoides. El resultado de las composiciones de las modalidades preferidas es un efecto más selectivo sobre la actividad de COX-2 en dosis más bajas de curcuminoides que aquellas que se requerirían normalmente. Al disminuir la dosis de curcuminoides para lograr la inhibición deseada de COX-2, la probabilidad de efectos secundarios de este compuesto disminuye casi exponencialmente . El segundo compuesto seleccionado del grupo que consiste de alfa-ácidos y beta-ácidos puede proporcionar beneficios, tales como, pero no limitados a, hepatoprotección, promoción antitumoral, antihiperlipidemia, antihiperglicemia y protección contra la formación de úlceras a partir de la inhibición de COX-1 por los curcuminoides . Preferiblemente, una dosis diaria (mg/kg-día) del complemento dietético preferido sería formulada para suministrar, por kg de peso corporal del animal, de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 30.0 mg de curcuminoides y de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20.0 mg de alfa-ácidos o beta-ácidos. La composición de las modalidades preferidas para la aplicación tópica contendría uno de los siguientes: de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 1% en peso, preferiblemente de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1% en peso de curcuminoides y de aproximadamente 0.025 a aproximadamente 1% en peso, preferiblemente de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 1% en peso de alfa-ácidos o beta-ácidos. La composición de las modalidades preferidas produciría concentraciones en el suero en el siguiente intervalo: de aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 10 µM de curcuminoides y de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 10 µM de alfa-ácidos o beta-ácidos. En las modalidades preferidas, la composición puede comprender además glucosamina o sulfato de condroitina. La glucosamina es aceptada generalmente ya que es efectiva y segura para tratar la osteoartritis. Por lo tanto, las composiciones que comprenden además glucosamina o sulfato de condroitina pueden ayudar en la normalización de la función de articulaciones o la reducción de los síntomas de la osteoartritis. Además de la combinación de curcuminoides y alfa-ácidos, beta-ácidos o derivados, la presente composición para la aplicación dietética puede incluir varios aditivos tales como, pero no limitados a, otros componentes naturales de metabolismo intermedio, antioxidantes, vitaminas, minerales, proteínas, grasas, carbohidratos y aminoazúcares , así como también ingredientes inertes tales como, pero no limitados a, talco y estearato de magnesio que son excipientes estándar en la manufactura de tabletas y cápsulas. La composición de las modalidades preferidas puede comprender además un portador farmacéuticamente aceptable. Como se utiliza en este documento, un "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y la totalidad de solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes isotónicos y de retardo de la absorción, edulcorantes y similares. Estos portadores farmacéuticamente aceptables pueden prepararse a partir de una amplia gama de materiales que incluyen, pero no están limitados a, diluyentes, sustancias aglutinantes y adhesivos, lubricantes, agentes desintegrantes, agentes colorantes, agentes de carga, agentes saborizantes, agentes edulcorantes y materiales misceláneos tales como amortiguadores y absorbedores que pueden ser necesarios a fin de preparar una composición terapéutica particular. El uso de estos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en el campo. Excepto en tanto que cualquier medio o agente convencional sea compatible con los ingredientes activos, se contempla su uso en las modalidades preferidas. En una modalidad, el talco y el estearato de magnesio se incluyen en la formulación. Los componentes preferibles son el talco en polvo Astac Brand 400 USP y el grado verdadero de estearato de magnesio. Otros ingredientes que se sabe que afectan la manufactura de esta composición como una barra dietética o alimento funcional pueden incluir saborizantes, azúcares, amino-azúcares, proteínas y/o almidones modificados, así como también grasas y aceites. Los complementos dietéticos, lociones o composiciones terapéuticas de las modalidades preferidas pueden formularse de cualquier manera conocida por una persona experta en el campo. En una modalidad, la composición se formula en una cápsula o tableta utilizando técnicas disponibles para una persona experta en el campo. En forma de cápsula o tableta, la dosis diaria recomendada para un humano o animal adulto estaría contenida preferiblemente en una a seis cápsulas o tabletas. Sin embargo, las presentes composiciones también pueden formularse en otras formas convenientes, tales como una solución o suspensión inyectable, solución o suspensión para pulverización, elementos de loción, goma, pastilla, alimento o refrigerio. Los elementos de alimento, refrigerio, goma o pastilla rombótica pueden incluir cualquier ingrediente ingerible, inclusive edulcorantes, saborizantes, aceites, almidones, proteínas, frutas o extractos de frutas, vegetales o extractos de vegetales, granos, grasas o proteínas de origen animal. De esta manera, las presentes composiciones pueden formularse en cereales, elementos tipo refrigerio tales como papas fritas, barras, pastillas de goma, dulces masticables o pastillas de disolución lenta. Las modalidades preferidas contemplan el tratamiento de todos los tipos de enfermedades basadas en la inflamación, tanto agudas como crónicas. La presente formulación reduce la respuesta inflamatoria y promueve con lo cual la curación de, o impide el daño adicional a, el tejido afectado. También se puede utilizar un portador farmacéuticamente aceptable en las presentes composiciones y formulaciones. De acuerdo con las modalidades preferidas, el animal puede ser un miembro seleccionado del grupo que consiste de humanos, primates no humanos, perros, gatos, aves, caballos, rumiantes u otros animales de sangre caliente. Las modalidades preferidas se dirigen principalmente al tratamiento de seres humanos . La administración puede ser por medio de cualquier método disponible para el artífice experto, por ejemplo, por medio de las rutas oral, tópica, transdérmica, transmucosa o parenteral . La TABLA 3 a continuación proporciona una lista de enfermedades en las cuales la expresión y la actividad de la enzima COX-2 pueden jugar un papel importante y por lo tanto son objetivos apropiados para la normalización o el tratamiento por medio de las composiciones de las modalidades preferidas.

TABLA 3. Enfermedades Asociadas con la COX-2 El descubrimiento de la COX-2 ha hecho posible el diseño de fármacos que reducen la inflamación sin retirar las PGs protectoras en el estómago y el riñon hechas por la COX-1. Las composiciones de las modalidades preferidas serían útiles para, pero no están limitadas a, el tratamiento de la inflamación en un sujeto y para el tratamiento de otros trastornos asociados con la inflamación, como por ejemplo como un analgésico en el tratamiento del dolor y cefalalgias o como un antipirético para el tratamiento de la fiebre. Las composiciones de las modalidades preferidas serían útiles en el tratamiento de la inflamación en enfermedades tales como enfermedades vasculares, cefalalgias de migraña, periarteritis nodosa, tiroiditis, anemia aplástica, enfermedad de Hodgkin, escleroderma, fiebre reumática, diabetes tipo I, miastenia grave, esclerosis múltiple, sarcoidosis, síndrome nefrótico, síndrome de Behchet, polimiositis, gingivitis, hipersensibilidad, hinchamiento que ocurre después de una lesión, isquemia de miocardio y similares. Las composiciones de las modalidades preferidas son útiles como agentes anti-inflamatorios con el beneficio adicional de tener efectos secundarios significativamente menos dañinos. Las modalidades preferidas también pueden proporcionar una composición de un material para incrementar la velocidad a la cual funciona la glucosamina o el sulfato de condroitina para normalizar el movimiento de las articulaciones o para reducir los síntomas de la osteoartritis. Por ejemplo, las composiciones de las modalidades preferidas serían útiles para tratar la artritis, inclusive pero no limitado a la artritis reumatoide, espondiloartropatías, artritis gotosa, osteoartritis, lupus eritomatoso sistémico y artritis juvenil . Estas composiciones de las modalidades preferidas también serían útiles en el tratamiento del asma, bronquitis, espasmos menstruales, tendonitis, bursitis y condiciones relacionadas con la piel tales como psoriasis, eczema, quemaduras y dermatitis. Las composiciones de las modalidades preferidas también serían útiles para tratar condiciones gastrointestinales tales como enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de Crohn, gastritis, síndrome de intestino irritable y colitis ulcerativa y para la prevención o el tratamiento de cáncer tal como cáncer colorrectal . Las composiciones de las modalidades preferidas también serían útiles en el tratamiento de enfermedades oftálmicas, tales como retinopatías, conjuntivitis, uveítis, fotofobia ocular y de la lesión aguda al tejido ocular. Los compuestos también serían útiles en el tratamiento de la inflamación pulmonar, tal como aquella asociada con infecciones virales y fibrosis cística. Los compuestos también serían útiles para el tratamiento de ciertos trastornos del sistema nervioso, tales como demencias corticales que incluyen la enfermedad de Alzheimer. Como inhibidores de la biosíntesis de PGE2 mediada por COX-2, estas composiciones también serían útiles en el tratamiento de rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque por endotoxínas, aterosclerosis y daño al sistema nervioso central resultante de apoplejía, isquemia y trauma.

Los siguientes ejemplos se proponen para ilustrar pero de ninguna manera para limitar las modalidades preferidas : EJEMPLO 1 Inhibición Sinergista de la Producción de Prostaglandina E2 en Células B de Murino por medio de Curcuminoides y un Extracto de Lúpulos Este ejemplo ilustra la potencia inhibitoria superior de COX-2 y la selectividad de la combinación de curcuminoides y extracto de lúpulos de las modalidades preferidas en comparación con los curcuminoides solos .

Inhibición de la Producción de PGE2 Mediada por COX-2 en Células RAW 264.7 Equipo - balanza analítica, Ohaus Explorer"11 (Ohaus Modelo #EO1140, Suiza), gabinete de bioseguridad (Forma Modelo #F1214, Marietta, Ohio), pipeta automática de 100 a 1000 µL (VWR Catálogo #4000-208, Rochester, NY) , contador manual de células (VWR Catálogo #23609-102, Rochester, NY) , incubadora de C02 (Forma Modelo #F3210, Marietta, Ohio), hemacitómetro (Hausser Modelo #1492, Horsham, PA) , microscopio invertido (Leica Modelo #DM IL, Wetzlar, Alemania) , pipeta automática de múltiples canales, 12-Canales (VWR Catálogo #53501-662, Rochester, NY) , Asistencia para la Pipeta (VWR Catálogo #53498-103, Rochester, NY) , Pipeta automática de 0.5 a 10 µL (VWR Catálogo #4000-200, Rochester, NY) , pipeta automática de 100 a 1000 µL (VWR Catálogo #4000-208, Rochester, NY) , pipeta automática de 2 a 20 µL (VWR Catálogo #4000-202, Rochester, NY) , pipeta automática de 20 a 200 µL (VWR Catálogo #4000-204, Rochester, NY) , Sistema de Pulido con Agua PURELAB Plus"11 (U.S. Filter, Lowell, MA) , refrigerador, 4°C (Forma Modelo #F3775, Marietta, Ohio) , mezcladora vortical (VWR Catálogo #33994-306, Rochester, NY) , baño de agua (Shel Lab Modelo #1203, Cornelíus, OR) . Células, Sustancias Químicas, Reactivos y Amortiguadores - Raspadores de células (Corning Catálogo #3008, Corning, NY) , sulfóxido de dimetilo (DMSO) (VWR Catálogo #5507, Rochester, NY) , Modificación de Dulbecco del Medio de Eagle (DMEM) (Mediatech Catálogo #10-013-CV, Herndon, VA), suero bovino fetal, inactivado térmicamente (FBS-HI) (Mediatech Catálogo #35-011-CV, Herndon, VA) , lipopolisacárido (LPS) (Sigma Catálogo #L-2654, St . Louis, MO) , tubos para microcentrífuga, 1.7 mL (VWR Catálogo #20172-698, Rochester, NY) , penicilina/estreptomicina (Mediatech Catálogo #30-001-CI, Herndon, VA), puntas de pipeta para pipeta automática de 0.5 a 10 µL (VWR Catálogo #53509-138, Rochester, NY) , puntas de pipeta para pipeta automática de 100-1000 µL (VWR Catálogo #53512-294, Rochester, NY) , puntas de pipeta para pipetas automáticas de 2-20 µL y 20-200 µL (VWR Catálogo #53512-260, Rochester, NY) , pipetas, 10 L (Becton Dickinson Catálogo #7551, Marietta, OH) , pipetas, 2 mL (Becton Dickinson Catálogo #7507, Marietta, OH) , pipetas, 5 mL (Becton Dickinson Catálogo #7543, Marietta, OH), Células RAW 264.7 (American Type Culture Collection Catálogo #TIB-71, Manassas, VA) , compuestos de prueba (extracto de lúpulos en C02 líquido de Hopunion, Yakima, WA) , (curcumina de Sigma (St. Louis, MO) (Producto C 1386), 65-70% de polvo de Cúrcuma longa) , placas para cultivo de tejidos, 96 pozos (Becton Dickinson Catálogo #3075, Franklin La es, NJ) , agua ultra pura (Resistencia = 18 megaOhm-cm de agua desionizada) . Procedimiento General - Las células RAW 264.7, obtenidas de ATCC, se desarrollaron en medio DMEM y se mantuvieron en fase de crecimiento logarítmica. El medio de cultivo DMEM se hizo de la siguiente manera: 50 mL de FBS inactivado térmicamente y 5 L de penicilina/estreptomicina se agregaron a una botella de 500 mL de DMEM y se almacenaron a 4°C. Esto se calentó a 37 °C en un baño de agua antes del uso y para obtener mejores resultados se debe utilizar dentro de un período de tres meses. En el día uno del experimento, las células 264.7 en fase log se colocaron en placas a 8 x 104 células por pozo en 0.2 mL de medio de cultivo por pozo en una placa para cultivo de tejido de 96 pozos en la mañana. Después de 6 a 8 horas posteriores a la colocación en placas, se retiraron 100 µL de medio de cultivo de cada pozo y se reemplazaron por 100 µL de medio totalmente nuevo. Una solución de 1.0 mg/mL de LPS, la cual se utilizó para inducir la expresión de COX-2 en las células RAW 264.7, se preparó al disolver 1.0 mg de LPS en 1 mL de DMSO. Se mezcló hasta que se disolvió y se almacenó a 4°C. Inmediatamente antes del uso, se descongeló a temperatura ambiente o en un baño de agua a 37°C. En el día dos del experimento, los materiales de prueba se prepararon como una solución madre 1000X en DMSO. Por ejemplo, si la concentración final del material de prueba debía ser 10 µg/mL, se preparó una solución madre de 10 mg/mL al disolver 10 mg del material de prueba en 1 mL de DMSO. Los materiales de prueba totalmente nuevos se prepararon en el día 2 - del experimento . En tubos para microcentrífuga de 1.7 mL, se agregó 1 mL de DMEM sin FBS para obtener las concentraciones de prueba de 0.05, 0.10, 0.5 y 1.0 µg/mL. 2 µL de la solución madre de DMSO 1000X del material de prueba se agregaron a 1 mL de medio sin FBS . El tubo que contenía la concentración final del material de prueba se concentró dos veces . El tubo se colocó en una incubadora durante 10 minutos para equilibrarse. 100 mL de medio se retiraron de cada pozo de las placas de células preparadas en el día uno. 100 mL de los compuestos de prueba a la concentración final 2X equilibrados se agregaron a las células y se incubaron durante 90 minutos. El LPS en DMEM sin FBS se preparó al agregar 44 µL de la solución madre de 1 mg/mL de DMSO a 10 mL de medio. Para cada pozo de células a ser estimulado, se agregaron 20 µL de LPS (la concentración final de LPS es 0.4 µg/mL de LPS) . La estimulación con LPS continuó durante 24 horas, después de lo cual el medio de sobrenadante de cada pozo se transfirió a un tubo limpio para microcentrífuga para la determinación del contenido de PGE2 en el medio .

Determinación de la Inhibición de la Enzima COX-1 por medio de Curcuminoides y el Extracto de Lúpulos La capacidad de un material de prueba para inhibir la síntesis de COX-1 de PGE2 se determinó esencialmente como se describió por Noreen, Y. y colaboradores (J. Nat . Prod . 61, 2-7, 1998) . Equipo - balanza (2400 g, Acculab VI-2400, VWR Catálogo #11237-300, Rochester, NY) , balanza analítica, Ohaus ExplorerMR (Ohaus Modelo #EO1140, Suiza), gabinete de bioseguridad (Forma Modelo #F1214, Marietta, Ohio) , Congelador, -30°C (Forma Modelo #F3797) , Congelador, -80°C Ultralow" (Forma Modelo #F8516, Marietta, OH) , placa de agitación calentada (VWR Catálogo #33918-262, Rochester, NY) , fábrica de hielo (Scotsman Modelo #AFE400A-1A, Fairfax, SC) , pipeta automática de múltiples canales, 12-Canales (VWR Catálogo #53501-662, Rochester, NY) , Pipeta Automática de Múltiples Canales, 8-Canales (VWR Catálogo #53501-660, Rochester, NY) , plataforma de agitador orbital (Scienceware #F37041-0000, Pequannock, NJ) , medidor de pH (VWR Catálogo #33221-010, Rochester, NY) , asistencia para la pipeta (VWR Catálogo #53498-103, Rochester, NY) , pipeta automática de 0.5 a 10 µL (VWR Catálogo #4000-200, Rochester, NY) , pipeta automática de 100 a 1000 µL (VWR Catálogo #4000-208, Rochester, NY) , pipeta automática de 2 a 20 µL (VWR Catálogo #4000-202, Rochester, NY) , pipeta automática de 20 a 200 µL (VWR Catálogo #4000-204, Rochester, NY) , Sistema de Pulido con Agua PURELAB Plus"11 (U.S. Filter, Lowell, MA) , refrigerador, 4°C (Forma Modelo #F3775, Marietta, Ohio) , cámara de vacío (Sigma Catálogo #Z35, 407-4, St. Louis, MO) , mezcladora vortical (VWR Catálogo #33994-306, Rochester, NY) . Abastecimientos y Reactivos - placa de fondo redondo de 96 pozos (Nalge Nunc #267245, Rochester, NY) , ácido araquidónico (Sigma Catálogo #A-3925, St . Louis, MO) , tubos cónicos estériles para centrífuga de 15 L (VWR Catálogo #20171-008, Rochester, NY) , enzima COX-1 (ovina) 40,000 unidades/mg (Cayman Chemical Catálogo #60100, Ann Arbor, MI) , sulfóxido de dimetilo (DMSO) (VWR Catálogo #5507, Rochester, NY) , etanol 100% (VWR Catálogo #MK701908, Rochester, NY) , epinefrina (Sigma Catálogo #E-4250, St . Louis, MO) , glutationa (reducida) (Sigma Catálogo # G-6529, St. Louis, MO) , cilindro graduado, 1000 mL (VWR Catálogo #24711-364, Rochester, NY) , hematina (porcina) (Sigma Catálogo # H-3281, St . Louis, MO) , ácido clorhídrico (HCl) (VWR Catálogo #VW3110-3, Rochester, NY) , pañuelos KimWipesMR (Kimberly Clark Catálogo #34256, Roswell, GA) , tubos para microcentrífuga, 1.7 mL (VWR Catálogo #20172-698, Rochester, NY) , NaOH (Sigma Catálogo #S-5881, S . Louis, MO) , puntas de pipeta para pipeta automática de 0.5 a 10 µL (VWR Catálogo #53509-138, Rochester, NY) , puntas de pipeta para pipeta automática de 100-1000 µL (VWR Catálogo #53512-294, Rochester, NY) , puntas de pipeta para pipetas automáticas de 2-20 µL y 20-200 µL (VWR Catálogo #53512-260, Rochester, NY) , prostaglandina E2 (Sigma Catálogo # P-5640, St . Louis, MO) , prostaglandina F2alfa (Sigma Catálogo # P-0424, St. Louis, MO) , barra de agitación magnética (VWR Catálogo #58948-193, Rochester, NY) , botella de almacenamiento, 1000 L (Corning Catálogo #1395-1L, Corning, NY) , botella de almacenamiento, 100 mL (Corning Catálogo #1395-100, Corning, NY) , extracto de lúpulos en C02 (Hopunion, Yakima, WA) , curcumina (Sigma, St . Louis, MO, (Producto C 1386) , 65-70% de polvo de Cúrcuma longa) , Tris-HCl (Sigma Catálogo #T-5941, St . Louis, MO) , agua ultra pura (Resistencia = 18 megaOhm-cm de agua desionizada) . Procedimiento General - El amortiguador de Tris- HCl 1. OM libre de oxígeno (pH 0.8) se preparó de la siguiente manera. En un vaso de precipitados de 1000 mL, 12.11 g de HCl de Trizma se disolvieron en 900 mL de agua ultra pura. El vaso de precipitados se colocó sobre una placa de agitación con una barra de agitación. Se agregó NaOH hasta que el pH alcanzó 8.0. El volumen se ajustó a un volumen final de 1000 mL y se almacenó en una botella de almacenamiento de 1000 mL. El amortiguador de Tris-HCl se colocó en una cámara de vacío con la parte superior aflojada y la bomba de aire se activó hasta que el amortiguador dejó de burbujear. La cámara de vacío entonces se desactivó y la botella de almacenamiento se cubrió herméticamente. Este paso se repitió cada vez que se utilizó el amortiguador de Tris-HCl libre de oxígeno. Una solución de 1 mL de cofactor se preparó al agregar 1.3 mg de (-) epinefrína, 0.3 mg de glutationa reducida y 1.3 mg de hematina a 1 mL de amortiguador de Tris-HCl libre de oxígeno. Las soluciones del material de prueba se prepararon como fuera necesario es decir que se pesaron 10 mg de aspirina y se disolvieron en 1 mL de DMSO. Las enzimas, es decir prostaglandina E2 o prostaglandina F2alfa, se disolvieron en un amortiguador de Tris-HCl libre de oxígeno de la siguiente manera, es decir sobre hielo, se tomaron 6.5 µL de enzima a 40,000 unidades/mL y se agregaron a 643.5 µL de amortiguador de Tris-HCl libre de oxígeno. Esta solución de enzima es suficiente para 60 reacciones. La solución de enzima de COX-1 se preparó de la siguiente manera: En un tubo para centrífuga de 15 mL, se agregaron 10 µL de enzima COX-1 a 40,000 unidades/mL a Tris-HCl libre de oxígeno con 50 µL de la solución de cofactor por reacción. La mezcla se incubó sobre hielo durante 5 minutos. Para 60 reacciones, se agregaron 650 µl de enzima en amortiguador de Tris-HCl libre de oxígeno con 3.25 mL de solución de cofactor. 60 µl de la solución de enzima se combinaron con 20 µL de la solución de prueba en cada pozo de una placa de 96 pozos. Las concentraciones finales de las soluciones de prueba fueron 100, 50, 25, 12.5, 6.26 y 3.12 µg/mL. Las placas se incubaron previamente sobre hielo durante 10 minutos. Se agregaron veinte µL de ácido araquidónico (30 µM) y se incubaron durante 15 minutos a 37°C. El HCl 2M se preparó al diluir HCl 12.1 N en una botella de almacenamiento de 100 mL. Se agregaron 83.5 mL de agua ultra pura y entonces se agregaron 16.5 L de HCl 12.1 N. Se almacenó en una botella de almacenamiento de 100 mL y se colocó en el gabinete de Bioseguridad. La reacción se consumó al agregar 10 µL de HCl 2M. La solución final se utilizó como el sobrenadante para el ensayo de PGE2.

Determinación de la Concentración de PGE2 en un Medio El procedimiento que se siguió fue aquel descrito esencialmente por Hamberg, M. y Samuelsson, B. (J. Biol . Chem . 1971. 246, 6713-6721); sin embargo se empleó un procedimiento comercial que no es radioactivo. Equipo - congelador, -30°C (Forma Modelo #F3797) , placa de agitación calentada (VWR Catálogo #33918-262, Rochester, NY) , pipeta automática de múltiples canales, 12-Canales (VWR Catálogo #53501-662, Rochester, NY) , plataforma de agitador orbital (Scienceware #F37041-0000 , Pequannock, NJ) , Asistencia para la Pipeta (VWR Catálogo #53498-103, Rochester, NY) , pipeta automática de 0.5 a 10 µL (VWR Catálogo #4000-200, Rochester, NY) , pipeta automática de 100 a 1000 µL (VWR Catálogo #4000-208, Rochester, NY) , pipeta automática de 2 a 20 µL (VWR Catálogo #4000-202, Rochester, NY) , pipeta automática de 20 a 200 µL (VWR Catálogo #4000-204, Rochester, NY) , lector de placas (Bio-tek Instruments Modelo #Elx800, Winooski, VT) , Sistema de Pulido con Agua PURELAB PlusMR (U.S. Filter, Lowell, MA) , refrigerador, 4°C (Forma Modelo #F3775, Marietta, Ohio) . Sustancias Químicas, Reactivos y Amortiguadores -Equipo EIA de prostaglandina E2-Monoclonal de 480 pozos (Cayman Chemical Catálogo # 514010, Ann Arbor, MI), tubo cónico estéril para centrífuga de 50 mL (VWR Catálogo #20171-178, Rochester, NY) , Modificación de Dulbecco del Medio de ?agle (DMEM) (Mediatech Catálogo #10-013-CV, Herndon, VA) , cilindro graduado, 100 mL (VWR Catálogo #24711-310, Rochester, NY) , pañuelos KimWipes"* (Kimberly Clark Catálogo #34256, Roswell, GA) , tubos para microcentrífuga, 1.7 L (VWR Catálogo #20172-698, Rochester, NY) , penicilina/estreptomicina (Mediatech Catálogo #30-001-CI, Herndon, VA) , puntas de pipeta para pipeta automática de 0.5 a 10 µL (VWR Catálogo #53509-138, Rochester, NY) , puntas de pipeta para pipeta automática de 100-1000 µL (VWR Catálogo #53512-294, Rochester, NY) , puntas de pipeta para pipetas automáticas de 2-20 µL y 20-200 µL (VWR Catálogo #53512-260, Rochester, NY) , pipetas, 25 mL (Becton Dickinson Catálogo #7551, Marietta, OH) , botella de almacenamiento, 100 mL (Corning Catálogo #1395-100, Corning, NY) , botella de almacenamiento, 1000 mL (Corning Catálogo #1395-1L, Corning, NY) , agua ultra pura (Resistencia = 18 megaOhm-cm de agua desionizada) . Procedimiento General - El amortiguador de EIA se preparó al diluir los contenidos del Concentrado de Amortiguador de EIA (frasquito #4) con 90 ml de agua ultra pura. El frasquito #4 se enjuagó varias veces para asegurar que todos los cristales habían sido retirados y entonces se colocó en una botella de almacenamiento de 100 L y se almacenó a 4°C. El Amortiguador de Lavado se preparó al diluir el Concentrado de Amortiguador de Lavado (frasquito #5) 1:400 con agua ultra pura. Entonces se agregaron 0.5 ml/litro de Tween 20 (frasquito #5a) (utilizando una jeringa para la medición precisa) . Para preparar un litro de Amortiguador de Lavado agregar 2.5 ml de Concentrado de Amortiguador de Lavado, 0.5 ml de Tween-20 y 997 ml de agua ultra pura. La solución se almacenó en una botella de almacenamiento de 1 litro a 4°C. El estándar de Prostaglandina E2 se reconstituyó de la siguiente manera. Una punta de pipeta de 200 µl se equilibró al llenar y expulsar repetidamente la punta varias veces en etanol . La punta se utilizó para transferir 100 µL del estándar de PGE2 (frasquito #3) en un tubo para microcentrífuga de 1.7 mL. 900 µl de agua ultra pura se agregaron al tubo y se almacenaron a 4°C, lo cual fue estable durante ~6 semanas. El trazador de Prostaglandina E2 acetilcolinesterasa se reconstituyó de la siguiente manera. 100 µL del trazador de PGE2 (frasquito #2) se mezclaron con 30 mL del Amortiguador de EIA en un tubo para centrífuga de 50 mL y se almacenaron a 4°C. El anticuerpo monoclonal de Prostaglandina E2 se reconstituyó de la siguiente manera. 100 µL de Anticuerpo de PGE2 (frasquito #1) se mezclaron con 30 mL del amortiguador de EIA en un tubo para centrífuga de 50 mL y se almacenaron a 4°C. El DMEM con penicilina/estreptomicina se preparó al agregar 5 mL de penicilina/estreptomicina en 500 mL de DMEM y se almacenó a 4°C. Las placas se constituyeron de la siguiente manera: Cada placa contenía un mínimo de dos modelos (B) , dos pozos de enlace no específico (NSB, por sus siglas en inglés) , dos pozos de enlace máximo (B0) y una curva estándar de ocho puntos se condujo por duplicado (S1-S8) . Cada muestra se sometió a ensayo en un mínimo de dos diluciones y cada dilución se condujo por duplicado. El estándar se preparó de la siguiente manera: Ocho tubos para microcentrífuga de 1.7 mL se etiquetaron como tubos 1-8. Se agregaron 900 µL de DMEM en el tubo 1 y 500 µL de DMEM a los tubos 2-8. Se agregaron 100 µL del estándar de PGE en el tubo 1 y se mezclaron. Quinientos mL de solución se tomaron del tubo 1 y se colocó en el tubo 2 y este proceso se repitió hasta el tubo 8. 50 mL del Amortiguador de EIA y 50 µl de DMEM se agregaron en los pozos de NSB. Cincuenta µl de DMEM se agregaron a los pozos B0. 50 mL de solución se tomaron del tubo #8 y se agregaron a ambos pozos estándar más bajos (S8) . 50 mL se tomaron del tubo #7 y se agregaron a cada uno de los siguientes dos pozos . Esto continuó hasta el tubo #1. (Se utilizó la misma punta de pipeta para los 8 estándares, haciendo seguro el equilibrio de la punta en cada nuevo estándar al hacer ascender y descender ese estándar en la pipeta. Utilizando un dispositivo P200, agregar 50 µl de cada muestra en cada dilución a los pozos de muestra) . Utilizando una pipeta automática de 12 canales, se agregaron 50 µl del trazador de Prostaglandina E2 acetilcolinesterasa a cada pozo excepto los pozos de Actividad Total (TA) y Modelo (B) . Utilizando la pipeta automática de 12 canales, se agregaron 50 µl del anticuerpo monoclonal de Prostaglandina E2 a cada pozo excepto los pozos de Actividad Total (TA) , (NSB) y Modelo (B) . La placa se cubrió con una película de plástico (artículo #7) y se incubó durante 18 horas a 4°C. Las placas se desarrollaron de la siguiente manera: Un frasquito de 100 µL de Reactivo de Ellman (frasquito #8) se reconstituyó con 50 ml de agua ultra pura en un tubo para centrífuga de 50 mL. Se protegió de la luz y se utilizó el mismo día. Los pozos se lavaron y se enjuagaron cinco veces con Amortiguador de Lavado utilizando una pipeta automática de 12 canales. Doscientos mL del Reactivo de Ellman se agregaron a cada pozo utilizando una pipeta automática de 12 canales y 5 µl del Trazador para los pozos de actividad total (TA) entonces se agregaron a cada pozo utilizando una pipeta PlO. La placa se cubrió con una película de plástico y se colocó en un agitador orbital en la oscuridad durante 60-90 minutos. La placa se leyó en un lector de placas Bio-tek en una longitud de onda individual entre 405 y 420 nm. Antes de la lectura de cada placa, el fondo se limpió con un pañuelo KimMR. La placa debe leerse cuando la absorbancia de los pozos está en el intervalo de 0.3-0.8 A.U. Si la absorbancia de los pozos excede 1.5, se lavaron y se agregó Reactivo de Ellman totalmente nuevo y entonces se volvieron a desarrollar.

Cálculo de sinergia e índice de combinación La sinergia entre los curcuminioides y la andrografolia se evaluó utilizando CalcuSyn (BIOSOFT, biosoft.com). Este paquete estadístico realiza múltiples cálculos de dosis de fármaco-efecto utilizando los métodos de Efecto Promedio descritos por T-C Chou y P. Talaly (Trends Pharmacol. Sci. 4:450-454), por lo cual se incorpora a manera de referencia. En resumen, correlaciona la "Dosis" y el "Efecto" en la forma más simple posible: fa/fu = (C/Cm)m, donde C es la concentración o dosis del compuesto y Cm es la dosis efectiva promedio que significa la potencia. Cm se determina a partir de la intercepción x del diagrama de efecto promedio. La fracción afectada por la concentración del material de prueba es fa y la fracción no afectada por la concentración es fu (fu = 1 — fa) . El exponente m es el parámetro que significa la sigmoidicidad o forma de la curva de dosis-efecto. Se evalúa por medio de la pendiente del diagrama de efecto promedio. El diagrama de efecto promedio es un diagrama de x = log(C) vs y = log (fa/fu) y se basa en la forma logarítmica de la ecuación de efecto promedio de Chou. La eficacia del ajuste para los datos a la ecuación de efecto promedio es representada por el coeficiente de correlación lineal r del diagrama de efecto promedio. Usualmente, los datos experimentales de sistemas de enzimas o receptores tienen un coeficiente r > 0.96, del cultivo de tejidos un coeficiente r > 0.90 y de sistemas de animales un coeficiente r > 0.85. La sinergia de los componentes de prueba es cuantificada utilizando el parámetro de índice de combinación (Cl, por sus siglas en inglés) . El Cl de Chou-Talaly se basa en el efecto de fármaco múltiple y se deriva de modelos cinéticos de enzimas (Chou, T.-C. y Talalay, P. (1977) . A simple generalized equation for the analysis of múltiple inhibitions of Michaelis-Menten kinetic systems. J. Biol. Chem. 252:6438-6442). La ecuación determina únicamente el efecto acumulativo preferiblemente que el sinergismo o antagonismo. Sin embargo, se define el sinergismo como un efecto acumulativo más que esperado y el antagonismo como un efecto acumulativo menos que esperado como fue propuesto por Cho y Talalay en 1983 (Trends Pharmacol. Sci. (1983) 4:450-454) . Utilizando la designación de Cl = 1 como el efecto acumulativo, se obtienen compuestos mutuamente exclusivos que tienen el mismo modo de acción o fármacos mutuamente no exclusivos que tienen modos de acción totalmente independientes en las siguientes relaciones: Cl < 1, = 1 y > 1 indicando sinergismo, aditividad y antagonismo, respectivamente. Las concentraciones inhibitorias, promedio, esperadas de las combinaciones de dos componentes se evaluaron utilizando la relación: [I/IC50 esperado] = [A/IC50A] + [B/ICS0B] donde A = fracción en mol del componente A en la combinación y B = fracción en mol del componente B en la combinación. La TABLA 4 ilustra las concentraciones inhibitorias, promedio, observadas y esperadas para la curcumina y el extracto de lúpulos para la producción de PGE2 por medio de COX-2 en el ensayo de células RAW 264.7. Mientras que el valor IC50 esperado para la combinación 10:1 de curcumina y extracto de lúpulos fue 1.6 µg/mL, el valor observado fue 0.77 µg/mL o 2 veces mayor. Este nivel de diferencia fue inesperado y constituye un descubrimiento novedoso para la actividad inhibitoria de COX-2 combinada de la combinación 1:10 de curcumina y extracto de lúpulos.

TABLA 4. Concentraciones Inhibitorias, Promedio, Observadas y Esperadas para una Formulación (10:1) de Curcumina y Extracto de Lúpulos Composición Relación IC50 (//g/ml) Extracto de Lúpulos 0.216 Curcumina 4.5 Combinada Contribución del Extracto de Lúpulos 0.071 Contribución de la Curcumina 10 0.715 Observada 0.786 Calculada 1.605 El análisis estadístico de la inhibición de la producción de COX-2 de PGE2 en el modelo de células RAW 264.7 para la combinación 1:10 de curcumina y extracto de lúpulos se presenta en la TABLA 5. El valor Cl para esta combinación fue 0.490, 0.472 y 0.454, respectivamente, para los valores IC50, IC75 e IC90. Estos valores Cl indican una fuerte sinergia entre la curcumina y el extracto de lúpulos sobre la curva completa de respuesta a la dosis.

TABLA 5. índice de Combinación para una Formulación 1:10 de Curcumina y Extracto de Lúpulos índice de Combinación Cl Promedio 0.490 0.472 0.454 0.472 La concentración inhibitoria promedio de la COX-2 por medio de la curcumina sola en el modelo de células RAW 264.7 fue 4.01 µg/mL (TABLA 6). La inhibición de la actividad de la enzima COX-1 por medio de la curcumina fue algo más alta con un valor IC?0 de 10.0 µg/mL. El extracto de lúpulos exhibió un valor ICS0 de inhibición de PGE2 por medio de COX-2 de 0.21 µg/mL y un valor IC50 para la inhibición de la enzima COX-1 evaluada a 6.25 µg/mL; la especificidad de la curcumina sola para COX-2 fue 2.5 y del extracto de lúpulos fue 29.5. Once formulaciones de curcumina y extracto de lúpulos exhibieron especificidad para COX-2 que variaba de 48.6 a 11.2, con una especificidad promedio para COX-2 de 17.4. Todas la combinaciones de curcumina y extracto de lúpulos demostraron inesperadamente especificidad para COX-2 mayor que 5.0 nominal sugerido como el mínimo para productos farmacéuticos diseñados para limitar la producción de PGE2 específicamente a través de la inhibición de COX-2. Este descubrimiento indica que las combinaciones de curcumina y un extracto de lúpulos podrían funcionar como potentes formulaciones anti-inflamatorias sin los efectos secundarios de Gl observados con la inhibición de COX-1.

TABLA 6. Especificidad de COX-2 para Curcumina, Extracto de Lúpulos y Once Formulaciones de Curcumina y Extracto de Lúpulos EJEMPLO 2 Normalización del Funcionamiento de las Articulaciones Después de un Traumatismo Una composición representativa de la presente invención como un complemento dietético sería en una formulación oral, es decir tabletas, que suministraría una de las siguientes combinaciones: (a) 15 mg de curcuminoide/kg al día y 6.0 mg humulona/kg al día; (b) 15 mg de curcuminoide/kg al día y 6.0 mg de upulonas/kg al día; (c) 15 mg de curcuminoide/kg al día y 6.0 mg de dihidroisohumulonas/kg al día. Se esperaría que la normalización del movimiento de las articulaciones después de un traumatismo físico debido al ejercicio o la tensión de movimiento repetitivo ocurriera después de dos a diez dosis. Este resultado se esperaría en todos los animales.

EJEMPLO 3 Efectividad Clínica de Formulaciones de Loción en el Tratamiento de Acné Rosacea Una loción diseñada para contener uno de los siguientes: (a) 0.1% en peso de curcuminoides y 0.5% de humulona; o (b) 0.1% en peso de curcuminoides y 0.5% de lumulona se aplica a las áreas afectadas de pacientes quienes han exhibido acné rosacea diagnosticado por su profesional sanitario y confirmado por un dermatólogo certificado por una comisión independiente. Las pruebas de autoevaluación se administran una semana antes del estudio para cuantificar el área de superficie afectada y la coloración roja. Además, las variables similares son registradas por el personal clínico profesional que no está consciente del estado de tratamiento de los pacientes . Estas evaluaciones se repiten en los Días 0, 7, 14 y 21. Los pacientes son asignados aleatoriamente a la formulación de prueba o al placebo al inicio del estudio. La formulación de prueba y el placebo se aplican al área afectada una o dos veces al día. El tratamiento para condiciones de salud tales como diabetes, hipertensión, etcétera se permite durante el estudio. Los registros se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo por cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de la presente invención en una formulación de loción se consideran mejorados si los registros del paciente mejoran por más de 20% de los registros previos a la prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que exhiben un mejoramiento se compara entre las formulaciones de combinación y el control de placebo. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es verdadera es menor que cinco por ciento.

EJEMPLO 4 Efectividad Clínica de una Formulación de Loción en el Tratamiento de la Psoriasis Este ejemplo se realiza de la misma manera como se describiera en el Ejemplo 3, excepto que la composición se aplica a áreas afectadas de pacientes quienes han exhibido psoriasis diagnosticada por su propio profesional sanitario y confirmada por un dermatólogo certificado por un consej o independiente . Las pruebas de autoevaluación se administran una semana antes del estudio para cuantificar el área de superficie afectada y la condición de la piel. Además, las variables similares son registradas por el personal clínico profesional que no está consciente del estado de tratamiento de los pacientes . Estas evaluaciones se repiten en los Días 0, 7, 30 y 60. Los pacientes son asignados aleatoriamente a la formulación de prueba o al placebo al inicio del estudio . La formulación de prueba y el placebo se aplican al área afectada una o dos veces al día. El tratamiento para condiciones de salud tales como diabetes, hipertensión, etcétera se permite durante el estudio. Los registros se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo por cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de la presente invención como la formulación de loción de prueba se consideran mejorados si los registros del paciente mejoran por más de 20% de los registros previos a la prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que exhiben un mejoramiento se compara entre la formulación de prueba y el control de placebo. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es verdadera es menor que cinco por ciento.

EJEMPLO 5 Efectividad Clínica de una Formulación en el Tratamiento de la Enfermedad de Alzheimer Una formulación oral como se describiera en el Ejemplo 2 se administra a pacientes quienes han manifestado una primera etapa de la Enfermedad de Alzheimer (AD, por sus siglas en inglés) , diagnosticada por su profesional sanitario y confirmada por un neurólogo certificado por un consejo independiente. Dos semanas antes de la prueba clínica, los pacientes se someten a pruebas psiconeurológicas apropiadas tales como el Miniexamen del Estado Mental (MMSE, por sus siglas en inglés) , la Escala de Evaluación de la Enfermedad de Alzheimer (ADAS, por sus siglas en inglés) , la Prueba de Denominación de Boston (BNT, por sus siglas en inglés) y la Prueba de Señales (TT, por sus siglas en inglés) . Las pruebas neuropsicológícas se repiten en el Día 0, 6 semanas y 3 meses de la prueba clínica. Las pruebas son realizadas por neuropsicólogos quienes no están conscientes del régimen de tratamiento de los pacientes . Los pacientes son asignados aleatoriamente a la formulación de prueba o al placebo al inicio del estudio. La formulación de prueba y el placebo se toman oralmente una o dos veces al día. El tratamiento para las condiciones tales como diabetes, hipertensión, etcétera se permite durante el estudio. Los registros se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo por cada uno de los tres períodos de observación. Sin el tratamiento, el curso natural de la AD es el deterioro significativo en los registros de la prueba durante el curso de la prueba clínica. Los pacientes tratados con la composición de la presente invención como la formulación de prueba se consideran mejorados si los registros de los pacientes permanecen iguales o mejoran durante el curso de la prueba clínica.

EJEMPLO 6 Formulación Oral en el Tratamiento y la Prevención del Cáncer de Colon Una formulación oral como se describiera en el Ejemplo 2 se administra a pacientes quienes han manifestado una primera etapa de cáncer de colon diagnosticada por su propio profesional sanitario y confirmada por un oncólogo certificado por un consejo independiente. Los pacientes son asignados aleatoriamente a la formulación de prueba o a un placebo al inicio del estudio. La formulación de prueba y el placebo se toman oralmente una o dos veces al día. El tratamiento para condiciones tales como diabetes, hipertensión, etcétera se permite durante el estudio. Las evaluaciones endoscópicas se hacen en uno, dos, seis y doce meses. La evaluación de la reaparición del tumor durante cualquiera de las cuatro visitas clínicas complementarias se considera un fracaso del tratamiento. El porcentaje de fracasos de tratamiento se compara entre la formulación de prueba y el control de placebo. Bajo las condiciones experimentales descritas, se espera que el material de prueba disminuya la incidencia de tumores con respecto al grupo de control . La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es verdadera es menor que cinco por ciento.

EJEMPLO 7 Formulación Oral para el Tratamiento de Síndrome de Intestino Irritable Una formulación oral como se describiera en el Ejemplo 2 se administra a pacientes quienes tienen el síndrome de intestino irritable manifestado diagnosticado por su profesional sanitario . El funcionamiento normal del intestino se reestablece dentro de 24 horas .

EJEMPLO 8 Normalización del Funcionamiento de las Articulaciones en la Osteoartritis Utilizando las composiciones descritas en el Ejemplo 2 ocurre la normalización de la rigidez de las articulaciones debido a la osteoartritis después de cinco a veinte dosis, en presencia o ausencia de glucosamina o sulfato de condroitina. Además, la composición no interfiere con los efectos de reconstrucción de articulaciones normales de estos dos constituyentes de proteoglicano, a diferencia de los agentes antiinflamatorios no esteroidales tradicionales . En resumen, una cierta modalidad es una composición para la inhibición de la actividad de COX-2 inducible y que tiene un efecto mínimo sobre la actividad de COX-1, la composición comprende, como un primer componente una cantidad efectiva de una especie de curcuminoides y una cantidad efectiva de un segundo componente seleccionado del grupo que consiste de una especie de alfa-ácidos y una especie de beta-ácidos o derivados de los mismos . La especie de curcuminoides es curcumina, desmetoxicurcumina o bisdesmetoxicurcumina. La especie de alfa-ácidos es preferiblemente humulona, cohumulona, isohumulona, isoprehumulona, hulupona, adhumulona, xantohumol A o xantohumol B. La especie de beta-ácidos es preferiblemente lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona, hexahidrocolupulona o dihidro-isohumulona. El primer componente o el segundo componente de la presente composición puede ser de grado farmacéutico o puede derivarse de plantas o extractos de plantas . El primer componente o el segundo componente también pueden conjugarse con compuestos tales como mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinatos, acetatos o glutationa. Las composiciones de las modalidades preferidas pueden formularse en un portador farmacéuticamente aceptable y pueden contener aditivos tales como antioxidantes, vitaminas, minerales, proteínas, grasas, carbohidratos, glucosamina, sulfato de condroitina y aminoazúcares . Otras modalidades incluyen métodos para la complementación dietética de las composiciones de las modalidades preferidas para reducir los síntomas en animales que sufren de síntomas de inflamación. La composición se formula en una forma de dosificación de tal manera que la administración proporcione de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 30.0 mg/kg de peso corporal al día de cada una de las especies de curcuminoides y de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20.0 mg/kg de peso corporal al día de especies de alfa-ácidos y especies de beta-ácidos. La composición se administra en una cantidad suficiente para mantener una concentración en el suero de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 50 µM de cada especie de curcuminoides y de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 50 µM de cada de una de las especies de alfa-ácidos o especies de beta-ácidos. Los animales pueden ser humanos, primates no humanos, perros, gatos, aves, reptiles, anfibios, caballos o rumiantes. La administración puede ser un sistema de suministro oral, parenteral, tópico, transdérmico o transmucosa. De esta manera, entre las diversas formulaciones enseñadas se ha descrito una formulación que comprende curcuminoides, como el primer componente, y un segundo compuesto seleccionado del grupo que consiste de alfa-ácidos y beta-ácidos. Estas combinaciones pueden proporcionar un efecto anti-inflamatorio sinergista en respuesta a la lesión física o química o la estimulación inmune anormal debido a un agente biológico o una etiología desconocida. Será fácilmente aparente para aquellas personas expertas en el campo que se pueden hacer varios cambios y modificaciones de carácter obvio sin apartarse del espíritu de la invención y se considera que todos estos cambios y modificaciones se encuentran dentro del alcance de la invención definida por las reivindicaciones anexas .

Claims (13)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para tratar la diabetes, caracterizado porque comprende administrar a un paciente que tiene diabetes una composición que comprende un primer componente seleccionado de un curcuminoide y un segundo componente seleccionado de un alfa-ácido y un beta-ácido.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el curcuminoide se selecciona de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina.
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los alfa-ácidos se seleccionan del grupo que consiste de humulona, cohumulona, isohumulona, isoprehumulona, hulupona, adhumulona, xantohumol A y xantohumol B.
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los beta-ácidos se seleccionan del grupo que consiste de lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona, hexahidrocolupulona y dihidro-isohumulona.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición se formula en un portador farmacéuticamente aceptable.
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición comprende además uno o más miembros seleccionados del grupo que consiste de antioxidantes, vitaminas y minerales.
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición comprende además uno o más miembros seleccionados del grupo que consiste de proteínas, grasas, carbohidratos, glucosamina, sulfato de condroitina y aminoazúcares .
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el primer componente o el segundo componente se conjuga con monosacáridos, disacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinatos, acetatos o glutationa.
9. 9. Un método para tratar la diabetes, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que tiene diabetes una composición que comprende un extracto de lúpulos en C02 •
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque los alfa-ácidos se seleccionan del grupo que consiste de humulona, cohumulona, isohumulona, isoprehumulona, hulupona, adhumulona, xantohumol A y xantohumol B.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque los beta-ácidos se seleccionan del grupo que consiste de lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona, hexahidrocolupulona y dihidro-isohumulona .
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque los aceites esenciales se seleccionan del grupo que consiste de mirceno, humuleno, beta-cariofilina, undecan-2-on y 2-metil-but-3-en-ol .
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la composición se formula en un portador farmacéuticamente aceptable.