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KR927003812A - 인자 viii:c 활성을 갖는 단백질 복합체 및 그의 제조 - Google Patents

인자 viii:c 활성을 갖는 단백질 복합체 및 그의 제조 Download PDF

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KR927003812A
KR927003812A KR1019920701170A KR920701170A KR927003812A KR 927003812 A KR927003812 A KR 927003812A KR 1019920701170 A KR1019920701170 A KR 1019920701170A KR 920701170 A KR920701170 A KR 920701170A KR 927003812 A KR927003812 A KR 927003812A
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린 버크 레이
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Abstract

내용 없음

Description

인자 Ⅷ : C 활성을 갖는 단백질 복합체 및 그의 제조
[도면의 간단한 설명]
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (36)

  1. (a) (i) 분비를 시킬 수 있는 첫 번째 신호서열, 및 (ii) 인간인자 Ⅷ : C의 A 도메인에 상동인 아미노산 서열을 갖는 첫번째 부위로 구성되는 첫번째 폴리펩티드를 코딩하는 첫번째 폴리뉴클레오티드 및 (b) (i) 분비를 시킬수 있는 두 번째 신호서열 및 (ii) 인간인자 Ⅷ : C의 C 도메인에 상동인 아미노산을 갖는 두번째 폴리펩티드를 코딩하는 두번째 폴리뉴클레오티드를, 세포 성장 배지에서 배양시킨 진핵 형질변환 숙주 세포에서 공-발현시키고, 상기 세포배지에서 분비된 재조합 단백질 복합체를 얻는 것으로 구성되는 것을 특징으로 하는; 인간인자 Ⅷ : C의 A도메인에 상동인 첫번째 폴리펩티드, 및 인간인자 Ⅷ : C의 C 도메인에 상동인 두번째 폴리펩티드로 구성되나 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 실질적 부분이 없거나 또는 모두가 없는 인간인자 Ⅷ : C 활성을 갖는 재조합 단백질 복합체를 제조하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 아미노산 서열의 아미노산의 수의 약 5% 이하 만이 선천적 인자 Ⅷ : C A 및 C도메인의 아미노산 서열과 다른 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 두번째 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드의 아미노산서열이 인간인자 Ⅷ : C의 아미노산 1649-2322의 아미노산 서열과 같은 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 3항에 있어서, 첫 번째 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드의 아미노산 서열이 인간인자 Ⅷ : C의 아미노산 1-740의 아미노산 서열과 같은 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 3항에 있어서, 첫번째 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드의 아미노산 서열이 인간인자 Ⅷ : C의 아미노산 1-1102의 아미노산 서열과 같은 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 3항에 있어서, 첫번째 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드의 아미노산 서열이 인간인자 Ⅷ : C의 아미노산 1-1315의 아미노산서열과 같은 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 3항에 있어서, 첫번째 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드의 아미노산서열이 인간인자 Ⅷ : C의 아미노산 1-1405의 아미노산 서열과 같은 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 첫번째 폴리펩티드가 상기 첫번째 폴리펩티드에 더하여 (a) 인간인자 Ⅷ : C의 B도메인의 N-터미날 (b) 약 3 내지 약 100 아미노산으로 구성되며 N-연결 글리코실된 부위가 5개 보다 적은 폴리펩티드 스페이서 (c) 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인 C 말단으로 구성되는 두번째 부위를 더 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 N-말단서열의 아미노산 서열이 Ser-Phe-Ser-Gln-Asn-Ser-Arg-His-Pro-Ser-Thr-Arg-Gln-Lys-Gln-Phe-Asn-Ala-Thr로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 8항에 있어서, 상기 폴리펩티드 스페이서는 인간 Ig 중사슬 한지 부위에 상동인 펩티드로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 폴리펩티드 스페이서의 아미노산 서열이 Pro-Pro-Thr-Pro-Pro-Thr로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 8항에 있어서, B도메인의 C-말단 서열이 Pro-Pro-Val-Leu-Lys-Arg-His-Clu-Arg로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 1항에 있어서, 상기 첫번째 폴리뉴클레오티드가 상기 첫번째 폴리뉴클레오티드에 대하여, (a) 첫 번째 폴리펩티드 발현을 증가시키는 5'비번역 DNA 서열; (여기서 상기 5'비번역 DNA 서열은 상기 첫번째 부위 5'에 위치하고, 상기 5'비번역 DNA는 인간인자 Ⅷ;C5' 비번역 DNA SV40t 항원 5'비번역 DNA, 및 인간 시토메갈로 바이러스 1E1 단백질 5'비번역 DNA로 구성되는 군에서 선택된다.) 또는 (b) 첫번째 폴리펩티드 발현을 증폭시키는 3'비번역 DNA 서열; (여기서 상기 3'비번역 DNA 서열은 상기 폴리펩티드 코딩부위 3'에 위치하고, 상기 3'비번역 DNA는 인간인자 Ⅷ : C 3'비번역 DNA, 인간조직 플라스미노겐 활성화제 3'비번역 DNA 및 SV40t-항원 3'비번역 DNA로 구성되는 군에서 선택된다.)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 1항에 있어서, 상기 두번째 신호서열은 인간 α1-안티트립신의 신호서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 14항에 있어서, 상기 α1-안티트립신 신호서열이 N-Met-Pro-Ser-Ser-Val-Ser-Trp-Gly-Ile-Leu-Leu-Ala-Gly-Leu-Val-Pro-Val-Ser-Leu-Als로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 1항에 있어서, 상기 두번째 폴리뉴클레오티드가 상기 두번째 폴리뉴클레오티드에 더하여, (a) 상기 두번째 폴리펩티드의 발현을 증가시키는 5'비번역 DNA 서열; (여기서 상기 5'-비변역 서열은 상기 두 번째 부위 5'에 위치하고, 상기 5'-비번역 DNA는 인간인자 Ⅷ : C 5'비번역 DNA, SV40 t 항윈 5'비번역 DNA, 및 인간 시토메갈로 바이러스 1E1 단백질 5'비번역 부위로 구성되는 군에서 선택되어 진다.) 또는 (b) 두 번째 폴리펩티드 발현을 증폭시키는 3'비번역 DNA 서열; (여기서 상기 3'비번역 서열은 상기 폴리펩티드 코딩 부위 3'에 위치하고, 상기 3'비번역 DNA는 인간인자 Ⅷ : C 3'비번역 DNA, 인간조직 플라스미노겐 활성화제 3'비번역 DNA 및 SV40 t-항원 3' 비번역 DNA로 구성되는 군에서 선택되어 진다.)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 1항에 있어서. 진행 형질변환 숙주세포가 포유동물 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 1항에 있어서, 첫번깨 폴리뉴콜클오티드 및 두번째 -폴리뉴클레오티드가 별개의 발현 플라스미드에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 8항에 있어서, 첫번깨 폴리뉴콜클오티드 및 두번째 -폴리뉴클레오티드가 별개의 발현 플라스미드에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 1항에 있어서, DNA 조성물로 진핵 숙주세포를 형질변환시키고,(여기서 DNA 조성물은 첫번째 발현 카세트와 두번째 발현카세트로 구성되며, 상기 첫번째 발현카세트는 인간인자 Ⅷ : C 의 A 도메인에 상동인 아미노산 서열을 갖는 첫 번째 부위로 구성되는 첫번째 폴리펩티드를 분비하도록 할수 있는 첫번째 신호서열을 코팅하는 첫번째 폴리뉴클레오티드로 구성되고, 상기 두번째 발현카세트는 분비하도록 할수 있는 두번째 신호서열 및 인간인자 Ⅷ :C의 C 도메인에 상동인 아미노산 서열을 갖는 두번째 폴리펩티드를 코딩하는 두 번째 폴리 뉴클레오티드로 구성된다.
    세포성장 배지에서 형질변환 숙주세포를 배양하여 재조합 단백질 복합체를 공-발현시키고, 분비된 재조합 단백질 복합체를 상기 세포배지에서 얻는 것을 특징으로 하는 인간인자 Ⅷ : C의 A 도메인에 상동인 첫 번째 폴리펩티드와 인간인자 Ⅷ : C의 C 도메인에 상동인 두번째 폴리펩티드로 구성되나 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 실질적부분이 없거나 또는 B 도메인의 모두가 없는 인간인자 Ⅷ : C 활성을 갖는 재조합 단백질 복합체를 제조하는 방법.
  21. 제26항에 있어서, 상기 첫번째 폴리뉴클에오티드는 상기 첫번째 폴리뉴클레오티드에 더하여 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 N-말단서열, 약 3 내지 40 아미노산으로 구성되며 N-연결 글리코실된 부위가 5개 보다 적은 폴리펩티드 스페이서, 및 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 C-말단신호서열로 구성되는 두번째 부위를 더 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제26항에 있어서, 상기 첫번째 카세트 폴리뉴클레오티드는 인간인자 Ⅷ : C 아미노산 1-740의 아미노산 서열의 최소한 약 90%이상으로 구성되는 폴리펩티드를 코드하고 상기 두번째 카세트 폴리뉴클레오티드는 인간인자 Ⅷ : C 아미노산 1649-2332의 아미노산 서열 약 90% 이상으로 구성되는 폴리팹티드를 암호하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 1항 내지 제19항중 어느 한 항에 의하여 제조된 인간인자 Ⅷ : C 활성을 갖는 재조합 단백질 복합체로 구성되며, 동결건조시키 위해 종래의 부형제와 섞은 세포배지에서 상기 재조합 단백질 복합체는 분리하여 동결건조시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 내용없음
  25. 내용없음
  26. 내용없음
  27. 내용없음
  28. 내용없음
  29. 제26항의 DNA 조성물로 구성되는 것을 특징으로 하는 포유동물 숙주세포.
  30. 제27항의 DNA 조성물로 구성되는 것을 특징으로 하는 포유동물 숙주세포.
  31. 폴리펩티드의 N-말단에서 C-말단까지가 인간인자 Ⅷ; C의 A 도메인에 상동인 아미노산 서열을 갖는 첫번째 부위 및 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 N 말단, N-연결글리코실화된 부위가 5개 보다 적은 약 3 내지 40 폴리펩티드의 스페이서, 및 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 C-말단으로 구성되며, 인간인자 Ⅷ : C Mr 80 K 단백질에 상동인 폴리펩티드와 결합하였을때 인간인자 Ⅷ : C 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  32. 제31항에 있어서, 상기 첫번째 부위의 아미노산서열의 아미노산의 수의 약 5% 이하가 선천적인자 Ⅷ : C A 도메인의 아미노산 서열과 다른 폴리펩티드.
  33. 제31항에 있어서, 첫번째 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 아미노산 서열이 인간인자 Ⅷ : C의 아미노산 1-759의 아미노산서열과 같은 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  34. 제3l항에 있어서, 인간인자 Ⅷ : C의 B 도메인의 N-말단서열의 아미노산 서열이 Ser-Pher-Ser-Gln-Asn-Ser-Arg-His-Pro-Ser-Thr-Arg-Gln-Arg-Gln-Lys-Gln-Phe-Asn-Ala-Thr으로 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  35. 제31항에 있어서, 폴리펩티드 스페이서의 아미노산서열이 Pro-Pro-Thr-Pro-Pro-Thr으로 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  36. 제3l항에 있어서, B 도메인의 C-말단서열이 Pro-Pro-Va1-Leu-Lys-Arg-His-Gln-Arg으로 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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