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KR20230053008A - 핵산 기반 조합 백신 - Google Patents

핵산 기반 조합 백신 Download PDF

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KR20230053008A
KR20230053008A KR1020227046214A KR20227046214A KR20230053008A KR 20230053008 A KR20230053008 A KR 20230053008A KR 1020227046214 A KR1020227046214 A KR 1020227046214A KR 20227046214 A KR20227046214 A KR 20227046214A KR 20230053008 A KR20230053008 A KR 20230053008A
Authority
KR
South Korea
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nucleic acid
component
pharmaceutical composition
protein
epi
Prior art date
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Pending
Application number
KR1020227046214A
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English (en)
Inventor
코넬리아 오스트포겔스
벤야민 페취
수잔 라우치
킴 엘렌 슈벤트
Original Assignee
큐어백 에스이
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 큐어백 에스이 filed Critical 큐어백 에스이
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Abstract

본 발명은 특히 코로나바이러스, 바람직하게는 범유행성 코로나바이러스로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 및 추가의 코로나바이러스, 예를들어 인플루엔자 바이러스 또는 RSV 바이러스로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 적어도 하나의 코로나바이러스 감염 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기에 적합하며, 따라서 조합 백신에 포함될 수 있다. 약학적 조성물 및 조합 백신의 핵산 서열은 바람직하게는 중합체 담체, 다가양이온성 단백질 또는 펩타이드, 또는 지질 나노입자(LNP)와 회합된다. 본 발명은 또한 약학적 조성물 및 조합 백신의 1차 및 2차 및 추가 의학적 용도, 및 코로나바이러스 감염 및 추가 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

Description

핵산 기반 조합 백신
소개:
본 발명은 특히 코로나바이러스, 바람직하게는 범유행성 코로나바이러스로부터의 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 및 추가의 바이러스, 예를 들어 인플루엔자 바이러스 또는 RSV 바이러스로부터의 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 적어도 하나의 코로나바이러스 감염 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기에 적합하며, 따라서 조합 백신에 포함될 수 있다. 약학적 조성물 및 조합 백신의 핵산 서열은 바람직하게는 중합체성 담체, 다가양이온성 단백질 또는 펩티드, 또는 지질 나노입자(LNP)와 관련된다. 본 발명은 또한 약학적 조성물 및 조합 백신의 1차 및 2차 및 추가 의학적 용도, 및 코로나바이러스 감염 및 추가 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
코로나바이러스는 코로나비리데(Coronaviridae) 과의 전염성이 높고 외피가 있는 양성 단일 가닥 RNA 바이러스이다. 코로나바이러스(CoV)는 유전적으로 매우 가변적이며 개별 바이러스 종은 종 장벽을 극복하여 여러 숙주 종을 감염시킬 수도 있다. 이러한 전이로 인해 인간이 SARS 관련 코로나바이러스(SARS-CoV-1), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 SARS-CoV-2(COVID-19 질병 유발)에 감염되었다.
중증급성호흡기증후군(SARS)을 일으키는 SARS-CoV-1은 2002년에서 2003년 사이에 37개국에서 8422명의 인간을 감염시켰고 916명의 사망을 초래했다. MERS-CoV는 2012년 중동에서 처음 발견되었다. 한 보고서에서, 2016년 7월 현재 27개국에서 최소 640명 사망 포함하여, 1791명의 MERS-CoV 감염 사례가 확인되었다.
2019/2020년 초 중국 우한에서 (아마도) 시작된 코로나바이러스 대유행은 중증 호흡기 질환(COVID-19)을 유발하는 이전에 알려지지 않은 코로나바이러스(SARS-CoV-2)에 기인했다. 2020년 5월 말까지 거의 6,000,000건의 SARS-CoV-2 감염 사례가 전 세계 거의 모든 국가에 퍼졌으며, 350,000건 이상의 COVID-19 관련 사망자가 발생했다.
이러한 현재 코로나바이러스 발생은 코로나바이러스로 인해 발생할 수 있는 심각한 전 세계적 유행병의 실질적인 위험을 보여준다. (팬데믹) 코로나바이러스에 대한 보호를 제공하는 백신을 제공하는 것이 전 세계 보건에 근본적으로 중요할 것이다. 이러한 코로나바이러스 발생의 재발을 방지하기 위해, 코로나바이러스 감염 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염, 바람직하게는 또한 호흡기 질환을 유발하는 바이러스에 의한 추가 감염으로부터 보호하는 조합 백신(또는 다중 병원체(multipathogen) 백신)을 제공하는 것이 유리할 것이다. 또한, 노인 인구는 이러한 바이러스에 의해 강하게 영향을 받기 때문에, 노인 인구에서 효율적인 조합 백신을 제공하는 것이 유리할 것이다.
이러한 적절한 추가 바이러스의 예는 인플루엔자 바이러스이다. 인플루엔자 바이러스는 외피가 있는 RNA 바이러스이다. 이 과의 3개 속 인플루엔자 바이러스 A, B 및 C는 사람에게 인플루엔자를 유발한다. 이들은 숙주 범위, 표면 당단백질의 가변성, 게놈 구성 및 형태와 관련하여 상이하다. 인플루엔자 바이러스 A와 B는 바이러스 표면 단백질 헤마글루티닌(HA)과 뉴라미니다아제(NA)에 따라 추가로 분류된다. 일반적으로 인플루엔자 계절에는 2~3가지 상이한 종의 인플루엔자가 동시에 유행한다. 전형적인 인플루엔자 전염병은 입원 또는 사망률 증가로 인해 폐렴 및 하부 호흡기 질환의 발병률을 증가시킨다. 고령자나 기저 만성 질환이 있는 사람이 이런 합병증을 겪을 확률이 높지만, 어린 영아도 중증 질환을 겪을 수 있다. 매년 전 세계적으로 10억 건 이상의 인플루엔자 사례가 발생하는 것으로 추산되며, 이로 인해 300만~500만 건의 심각한 질병이 발생하고 30만~50만 명이 사망한다. 또한, 단 며칠 또는 몇 주 만에 경미한 질병을 극복한 사람들의 생산성과 삶의 질 모두에 큰 손실이 있다.
코로나바이러스 및 인플루엔자 바이러스 외에도 뉴모비리데(Pneumoviridae) 바이러스 과의 바이러스도 심각한 호흡기 질환을 일으킨다. 뉴모비리데 바이러스과의 구성원은 예를 들어 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 및 메타뉴모바이러스(hMPV)를 포함한다. RSV는 생후 1년의 소아에서 세기관지염 및 폐렴의 가장 흔한 원인이다. RSV는 또한 모든 연령대, 특히 노인이나 심장, 폐 또는 면역 체계가 손상된 사람들 사이에서 발생할 수 있는 중증 하기도 질환을 포함하여 반복적인 감염을 일으킨다. hPMV는 어린 아이들의 바이러스성 하기도 질환의 중요한 원인이다. hMPV의 계절성 역학은 RSV와 유사하지만 감염 및 질병 발생률은 상당히 낮은 것으로 보인다. 그러나 hMPV는 노인의 인플루엔자만큼 흔하고 심각하다. hMPV는 천식 환자 및 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)이 있는 성인에서 더 심각한 질환과 관련이 있다. 아동 및 성인을 위한 장기 요양 시설에서 수많은 hMPV 발병이 보고되어 사망을 초래했다.
코로나바이러스, 인플루엔자 바이러스 및 뉴모비리데(Pneumoviridae) 외에도 파라믹소비리데(Paramyxoviridae) 과의 바이러스는 심각한 호흡기 질환을 일으킬 수 있다. 파라믹소비리데 바이러스과의 구성원에는 파라인플루엔자 바이러스(PIV) 및 헤니파바이러스(Henipavirus) 바이러스가 포함된다.
파라인플루엔자 바이러스, 예를 들어 PIV 3형(PIV3)은 유아기 및 이른 유년기의 유비쿼터스 급성 호흡기 감염의 주요 원인이다. 발병률은 생후 4~12개월경에 정점을 찍고, 바이러스는 입원의 3~10%를 차지하며, 주로 세기관지염과 폐렴에 해당한다. PIV3는 치명적일 수 있으며, 어떤 경우에는 열성 발작과 같은 신경계 질환과 관련이 있다. 또한 이환율의 중요한 원인인 기도 리모델링을 유발할 수 있다. 세계의 개발도상국에서 영유아는 일차 PIV3 바이러스 감염 또는 박테리아 감염과 같은 이차 결과로 인한 사망 위험이 가장 높다.
헨드라(Hendra) 바이러스 및 니파(Nipah) 바이러스를 포함하는 헤니파바이러스(Henipavirus)는 최근에 대유행할 가능성이 있는 질병의 원인이다. 헨드라 바이러스는 1994년 호주 퀸즐랜드주 헨드라에서 20마리의 말과 2명의 인간 사이에서 호흡기 질환이 발생한 후 처음으로 인식되었다. 1995년에는 1994년 8월 퀸즐랜드 주 맥케이에서 두 마리의 말이 죽고 한 사람에게 발병된 두 번째 발병이 확인되었다. 치사율은 말에서 70% 이상, 인간에서 50% 이상으로 보고되었다. 니파(Nipah) 바이러스는 1999년 말레이시아와 싱가포르의 성인 남성들 사이에서 발생한 뇌염 및 호흡기 질환의 샘플을 조사하면서 처음 분리되었다. 니파 바이러스의 숙주는 아직 알려지지 않았지만 날여우박쥐(flying foxes)가 자연 숙주로 의심된다. 인간의 니파 바이러스 감염은 열과 졸음을 특징으로 하는 뇌염, 및 혼수 상태, 발작 및 호흡 유지 불능과 같은 보다 심각한 중추 신경계 질환과 관련이 있다. 일부 환자는 감염 초기에 호흡기 질환을 앓았다. 1998-1999년에 니파 바이러스 질병이 유행하는 동안 병원에 입원한 심각한 신경 질환 환자의 약 40%가 사망했다.
위에서 약술한 바와 같이, 본 발명의 목적은 적어도 하나의 코로나바이러스, 특히 적어도 하나의 범유행성 코로나바이러스 및 추가로 적어도 하나의 추가 바이러스, 예를 들어 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택된 적어도 하나의 추가 바이러스에 대해 효과적인 보호를 제공하는 핵산 기반 조합 백신을 제공하는 것이다.
이러한 백신의 서로 다른 구성 요소는 종종 서로 호환되지 않기 때문에 조합 백신을 개발하는 것은 큰 도전이다. 또한, 서로 다른 백신 성분이 효과적이기 위해서는 서로 다른 백신 접종 간격이 필요할 수 있으며, 이는 조합 백신의 개발을 방해한다. 그 외에도 조합백신의 모든 성분이 효율적인 면역반응을 유도하고 단일 성분이 면역우세하지 않거나 성분이 면역간섭을 나타내지 않는 것이 중요하다. 특히 SARS-CoV-2의 경우 높은 사망률이 관찰되는 노인 인구를 보호하기 위해 백신이 필요하다.
DNA 또는 RNA를 포함하는 핵산 기반 백신접종은 신종 바이러스에 대한 새로운 백신 및 조합 백신 제공을 위한 유망한 기술을 나타낸다. 핵산은 유전 공학적으로 조작되어 인간 피험자에게 투여될 수 있다. 형질감염된 세포는 인코드된 항원(예를 들어 DNA 또는 RNA, 특히 mRNA에 의해 제공됨)을 직접 생산하여 보호 면역 반응을 일으킨다.
SARS-CoV 감염에 대한 광범위하고 장기적인 보호에서 바이러스 특이적 기억 T 세포의 중추적 역할이 밝혀졌다 (예를 들어 Channappanavar, Rudragouda, et al. "Virus-specific memory CD8 T cells provide substantial protection from lethal severe acute respiratory syndrome coronavirus infection. " Journal of virology 88.19 (2014): 11034-11044 참조). 바이러스 특이 CD8 T 세포는 예를 들어 병원체 제거 및 바이러스 감염 후 매개 보호에 필요하다. 따라서 효과적인 조합 백신, 예를 들어 SARS-CoV-2 백신을 포함하는 백신은 각각의 병원체에 대해 강력한 기능적 체액성 면역 반응을 유도해야할 뿐만 아니라 병원체 특이 CD8+ T-세포 및 CD4+ T-세포 반응, 예를 들어 SARS-CoV-2 특이적 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 반응을 유도해야 한다.
따라서, 기본 발명의 목적은 코로나바이러스 감염에 대한 보호 및 적어도 하나의 추가 바이러스에 대한 보호를 제공하는 핵산 기반 조합 백신 또는 다중 병원체 백신을 제공하는 것이다.
정의들
명확성과 가독성을 위해 다음 정의가 제공된다. 이러한 정의에 대해 언급된 모든 기술적 특징은 본 발명의 각각의 및 모든 구현예에서 나타날 수 있다. 추가적인 정의 및 설명은 본 발명 구현예의 맥락에서 구체적으로 제공될 수도 있다.
숫자의 맥락에서 백분율은 각 항목의 총 수에 대한 상대적인 것으로 이해해야 한다. 다른 경우에, 문맥에서 달리 지시하지 않는 한, 백분율은 중량 백분율(wt.-%)로 이해되어야 한다.
약: "약"이라는 용어는 결정인자(determinant) 또는 값이 동일, 즉 100% 동일할 필요가 없는 경우 사용된다. 따라서, "약"은 결정인자 또는 값들이 0.1% 내지 20%, 바람직하게는 0.1% 내지 10% 차이가 날 수 있음을 의미하고; 특히, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% 차이 날 수 있다. 당업자는 예를 들어 특정 파라미터 또는 결정인자는 파라미터가 결정된 방법에 따라 약간 다를 수 있음을 알 것이다. 예를 들어, 특정 결정인자 또는 값이 예를 들어 "약 1000개 뉴클레오티드"의 길이를 가진다고 본 명세서에서 정의된다면, 길이는 0.1% 내지 20%, 바람직하게는 0.1% 내지 10%로 차이가 날 수 있고; 특히, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% 차이가 날 수 있다. 따라서, 당업자는 그 특정 예에서 길이가 1 내지 200개 뉴클레오티드, 바람직하게는 1 내지 200개 뉴클레오티드로 다양할 수 있음을, 특히 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200개의 뉴클레오티드일 수 있음을 알 것이다.
적응 면역 반응(Adaptive immune response): 본 명세서에 사용된 용어 "적응 면역 반응"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 면역 체계(적응 면역 체계)의 항원 특이적 반응을 의미하는 것으로 의도된다. 항원 특이성은 특정 병원체 또는 병원체에 감염된 세포에 맞춤화된 반응 생성을 허용한다. 이러한 맞춤형 반응을 수행하는 능력은 일반적으로 "기억 세포"(B-세포)에 의해 신체에서 유지된다. 본 발명의 맥락에서, 항원은 코로나바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질(구성 요소 A), 또는 추가 바이러스(구성요소 B)를 코딩하는 핵산(예를 들어, RNA 또는 DNA)에 의해 제공된다.
항원: 본 명세서에 사용된 용어 "항원"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 면역 체계, 바람직하게는 적응 면역 체계에 의해 인식될 수 있고 항원 특이적 면역 반응, 예를 들어, 적응 면역 반응의 일부로서 항체 및/또는 항원 특이적 T 세포의 형성에 의한 항원 특이적 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭하기 위한 것이다. 전형적으로, 항원은 MHC에 의해 T-세포에 제시될 수 있는 펩티드 또는 단백질이거나 이를 포함할 수 있다. 또한 예를 들어, 적어도 하나의 에피토프를 포함하는 펩타이드 또는 단백질의 단편, 변이체 및 유도체는 본 발명의 맥락에서 항원으로 이해된다. 본 발명의 맥락에서, 항원은 본 명세서에 명시된 제공된 핵산의 번역 산물일 수 있다.
항원성 펩티드 또는 단백질: 용어 "항원성 펩티드 또는 단백질" 또는 "면역원성 펩티드 또는 단백질"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 적응 면역 반응을 제공하기 위해 신체의 적응 면역 시스템을 자극하는 (항원 또는 면역원) 단백질에서 유래한 펩타이드 또는 단백질을 의미하는 것으로 의도된다. 따라서 항원/면역원성 펩타이드 또는 단백질은 그것이 유래된 단백질(예를 들어, 코로나바이러스 (바람직하게는 SARS-CoV-2)의 스파이크 단백질(S), 인플루엔자 바이러스의 HA, RSV 바이러스의 F 단백질 등)의 적어도 하나의 에피토프(본 명세서에 정의된 바와 같음) 또는 항원(본 명세서에 정의된 바와 같음)을 포함한다.
양이온성: 특정 맥락에서 다른 의미가 명확하지 않은 한, "양이온성"이라는 용어는 각 구조가 영구적으로 또는 영구적이지 않지만 pH와 같은 특정 조건에 반응하여 양전하를 띠는 것을 의미한다. 따라서 "양이온성"이라는 용어는 "영구적으로 양이온성" 및 "양이온화가능한(cationisable)"을 모두 포함한다.
양이온화가능한(cationisable): 본 명세서에 사용된 용어 "양이온화가능한"은 화합물, 그룹 또는 원자가 더 낮은 pH에서 양전하를 띠고 환경의 더 높은 pH에서 하전되지 않음을 의미한다. 또한 pH 값을 결정할 수 없는 비수성 환경에서 양이온화가능한 화합물, 그룹 또는 원자는 높은 수소 이온 농도에서 양전하를 띠고 수소 이온의 낮은 농도 또는 활성에서는 전하를 띠지 않는다. 이는 양이온화 또는 다중양이온화 가능한 화합물의 개별 특성, 특히 특정 pH 또는 수소 이온 농도에서 하전되거나 하전되지 않은 각각의 양이온화 가능한 그룹 또는 원자의 pKa에 따라 다르다. 희석된 수성 환경에서, 양전하를 갖는 양이온화가능한 화합물, 그룹 또는 원자의 분율(fraction)은 당업자에게 잘 알려진 소위 Henderson-Hasselbalch 방정식을 사용하여 추정될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 화합물 또는 모이어티가 양이온화될 수 있는 경우, pH가 약 1 내지 9, 바람직하게는 4 내지 9, 5 내지 8 또는 심지어 6 내지 8, 보다 바람직하게는 9 이하, 8 이하, 7 이하의 pH 값, 가장 바람직하게는 생리학적 pH 값, 예를 들어 약 7.3 내지 7.4, 즉 생리학적 조건하, 특히 생체내 세포의 생리학적 염 조건하의 pH 값에서 양으로 하전되는 것이 바람직하다. 다른 구체예에서, 양이온화가능한 화합물 또는 모이어티는 생리학적 pH 값, 예를 들어, 약 7.0-7.4에서 주로 중성이지만, 더 낮은 pH 값에서 양전하를 띠게 되는 것이 바람직하다. 일부 실시양태에서, 양이온화성 화합물 또는 모이어티에 대한 pKa의 바람직한 범위는 약 5 내지 약 7이다.
코딩 서열/코딩 영역: 용어 "코팅(암호화) 서열" 또는 "코딩 영역" 및 본 명세서에 사용된 상응하는 약어 "cds"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 펩티드나 단백질로 번역될 수 있는 여러 뉴클레오티드 트리플렛(triplet)의 서열을 의미하도록 의도된다. 본 발명의 맥락에서 코딩 서열은 시작 코돈으로 시작하고 바람직하게는 정지 코돈으로 끝나는 3으로 나눌 수 있는 다수의 뉴클레오티드로 구성된 DNA 서열, 바람직하게는 RNA 서열일 수 있다.
유래: 핵산의 맥락에서 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어 "유래된", 즉 (다른) 핵산으로부터 "유래"한 핵산은 (다른) 핵산으로부터 유래된 핵산이 예를 들어, 그것이 유래한 핵산과 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 가지는 것을 의미한다. 당업자는 서열 동일성이 일반적으로 동일한 유형의 핵산, 즉 DNA 서열 또는 RNA 서열에 대해 계산된다는 것을 알고 있다. 따라서 DNA가 RNA에서 "유래"되거나 RNA가 DNA에서 "유래"되는 경우 첫 번째 단계에서 RNA 서열이 상응하는 DNA 서열로 전환(특히 서열 전체에 걸쳐 우라실(U)을 티미딘(T)으로 대체)되거나 또는 그 반대로 DNA 서열은 상응하는 RNA 서열로 전환(특히 서열 전체에 걸쳐 T를 U로 대체)되는 것으로 이해된다. 그 후, DNA 서열의 서열 동일성 또는 RNA 서열의 서열 동일성이 결정된다. 바람직하게는, 핵산 "유래된" 핵산은 또한 핵산이 유래된 핵산과 비교하여, RNA 안정성을 더욱 증가시키기 위해 및/또는 단백질 생산을 연장 및/또는 증가시키기 위해 변형된 핵산을 의미한다. 아미노산 서열(예: 항원성 펩티드 또는 단백질)과 관련하여 "~로부터 유래된"이라는 용어는 (또 다른) 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열이 그것이 유래한 아미노산 서열과 예를 들어 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성(identity)을 가지는 것을 의미한다.
에피토프: 본 명세서에 사용된 용어 "에피토프"(당업계에서 "항원 결정자(antigen determinant)"라고도 함)는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 T 세포 에피토프 및 B 세포 에피토프를 언급하기 위한 것으로 의도된다. T 세포 에피토프 또는 항원성 펩티드 또는 단백질의 일부는 바람직하게는 약 6 내지 약 20개 또는 그 이상의 아미노산 길이를 갖는 단편, 예를 들어 MHC 클래스 I 분자에 의해 처리되고 제시되는 단편, 바람직하게는 약 8 내지 약 10개 아미노산 길이, 예를 들어 8, 9 또는 10개(또는 심지어 11개 또는 12개 아미노산), 또는 바람직하게는 약 13 내지 약 20개 또는 그 이상의 아미노산 길이를 갖는 MHC 클래스 II 분자에 의해 처리되고 제시되는 단편을 포함한다. 이러한 단편은 일반적으로 펩티드 단편과 MHC 분자로 구성된 복합체 형태로 T 세포에 의해 인식된다. 즉, 단편은 일반적으로 그 자체의 형태로 인식되지 않는다. B 세포 에피토프는 일반적으로 (천연) 단백질 또는 펩티드 항원의 외부 표면에 위치한 단편이며, 바람직하게는 5 내지 15개의 아미노산, 보다 바람직하게는 5 내지 12개의 아미노산, 더욱 더 바람직하게는 6 내지 9개의 아미노산을 가지며, 이는 원래의 형태로 항체에 의해 인식된다. 단백질 또는 펩티드의 이러한 에피토프는 또한 본 명세서에서 언급된 이러한 단백질 또는 펩티드의 임의의 변이체로부터 선택될 수 있다. 이러한 맥락에서 에피토프는 본 명세서에 정의된 단백질 또는 펩티드의 아미노산 서열에서 불연속적이지만 3차원 구조로 함께 결합된 본 명세서에 정의된 단백질 또는 펩티드의 분절(segment)들로 구성된 입체구조(conformational) 또는 불연속 에피토프이거나 단일 폴리펩타이드 사슬로 구성된 연속 또는 선형 에피토프이다.
단편(Fragment): 핵산 서열(예를 들어, RNA 또는 DNA) 또는 아미노산 서열의 맥락에서 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "단편"은 일반적으로 예를 들어 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 전장(full-length) 서열의 더 짧은 부분일 수 있다. 따라서, 단편은 일반적으로 전장 서열 내 대응하는 스트레치와 동일한 서열로 구성된다. 본 발명의 맥락에서 서열의 바람직한 단편은 단편이 유래된 분자에서 엔티티의 연속 스트레치에 해당하는 뉴클레오티드 또는 아미노산과 같은 엔티티의 연속 스트레치로 구성되며, 이는 단편이 유래된 전체(즉, 전장) 분자(예: 코로나바이러스의 스파이크 단백질(S), 인플루엔자 바이러스의 HA/NA 등)의 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%이다. 단백질 또는 펩티드와 관련하여 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어 "단편"은 전형적으로 본 명세서에 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩티드의 서열을 포함할 수 있으며, 이는 그의 아미노산 서열과 관련하여, 원래 단백질의 아미노산 서열과 비교하여 N-말단 및/또는 C-말단이 절단된다. 따라서 이러한 절단(truncation)은 아미노산 수준에서 또는 상응하는 핵산 수준에서 발생할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 정의된 이러한 단편에 대한 서열 동일성은 바람직하게 본 명세서에 정의된 전체 단백질 또는 펩티드 또는 이러한 단백질 또는 펩티드의 전체 (코딩) 핵산 분자에 대한 것이다. 단백질 또는 펩티드의 단편은 그러한 단백질 또는 펩티드의 적어도 하나의 에피토프를 포함할 수 있다.
이종성: 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 맥락에서 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "이종성" 또는 "이종성 서열"은 다른 유전자, 다른 대립유전자, 또는 예를 들어 다른 종 또는 바이러스로부터 유래된 서열인 서열(예: RNA, DNA, 아미노산)을 지칭하는 것으로서 이해되어야 한다. 2개의 서열이 동일한 유전자 또는 동일한 대립유전자로부터 유도될 수 없는 경우 일반적으로 "이종성"인 것으로 이해된다. 즉, 이종 서열이 동일한 유기체 또는 바이러스에서 유래할 수 있지만 자연 상태로 동일한 핵산 또는 단백질에서 발생하지 않는다.
체액성 면역 반응: 용어 "체액성 면역" 또는 "체액성 면역 반응"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 B 세포 매개 항체 생산 및 선택적으로 항체 생산을 수반하는 보조 과정을 의미한다. 체액성 면역 반응은 일반적으로 Th2 활성화 및 사이토카인 생산, 배 중심 형성(germinal center formation) 및 이소타입 전환, 친화성 성숙 및 기억 세포 생성에 의해 특징지어질 수 있다. 체액성 면역은 또한 병원체 및 독소 중화, 클래식한(classical) 보체 활성화, 식균 작용 및 병원체 제거의 옵소닌 촉진을 포함하는 항체의 이펙터 기능을 나타낼 수 있다.
(서열의) 동일성: 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 맥락에서 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "동일성"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 두 시퀀스가 동일한 퍼센트를 나타낸다. 두 시퀀스가 동일한 비율을 결정하려면, 예를 들어 본 명세서에 정의된 핵산 서열 또는 아미노산(aa) 서열, 바람직하게는 본 명세서에 정의된 핵산 서열에 의해 코딩되는 aa 서열 또는 aa 서열 자체가 있는 경우, 서열은 연속적으로 서로 비교하기 위해 정렬될 수 있다. 따라서 예를 들어 제1 서열의 위치는 제2 서열의 대응하는 위치와 비교될 수 있다. 첫 번째 서열의 위치가 두 번째 서열의 위치에서와 같이 동일한 잔기에 의해 점유된다면, 두 서열은 이 위치에서 동일하다. 그렇지 않은 경우 이 위치에서 다르다. 첫 번째 시퀀스와 비교하여 두 번째 시퀀스에서 삽입이 발생하면 첫 번째 시퀀스에 간격을 삽입하여 추가 정렬을 허용할 수 있다. 첫 번째 시퀀스와 비교하여 두 번째 시퀀스에서 삭제가 발생하면 두 번째 시퀀스에 간격을 삽입하여 추가 정렬을 허용할 수 있다. 2개의 서열이 동일한 비율은 동일한 위치의 수를 하나의 서열에서만 차지하는 위치를 포함하는 위치의 총수로 나눈 함수이다. 두 시퀀스가 동일한 비율은 알고리즘, 예를 들어, BLAST 프로그램에 통합된 알고리즘을 사용하여 결정할 수 있다.
면역원(immunogen), 면역원성: 용어 "면역원" 또는 "면역원성"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 면역 반응을 자극/유도할 수 있는 화합물을 의미하도록 의도된다. 바람직하게는, 면역원은 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질이다. 본 발명의 의미에서 면역원은 본 명세서에서 정의된 바와 같은 코로나바이러스 스파이크 단백질 (S) (바람직하게는 SARS-CoV-2로부터) 유래된 적어도 하나의 항원성 펩티드, 단백질을 코딩하는 하나 이상의 코딩 서열을 포함하는 제공된 핵산(구성요소 A 및 B)의 번역 산물이다. 일반적으로 면역원은 적응 면역 반응을 유발한다.
면역 반응: 용어 "면역 반응"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 특정 항원에 대한 적응 면역계의 특이적 반응(소위 특이적 또는 적응 면역 반응) 또는 선천성 면역계의 비특이적 반응(소위 비특이적 또는 선천성 면역 반응), 또는 이들의 조합을 지칭하는 것으로 의도된다.
면역계: 용어 "면역계"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 유기체를 감염으로부터 보호할 수 있는 유기체 시스템을 의미하는 것으로 의도된다. 병원체가 유기체의 물리적 장벽을 통과하는데 성공하여 이 유기체에 들어가면 선천 면역계는 즉각적이지만 비특이적인 반응을 제공한다. 병원체가 이 선천적 반응을 회피하면 척추동물은 두 번째 보호층인 적응 면역 체계를 갖게 된다. 여기에서 면역 체계는 감염 중 병원체에 대한 인식을 개선하기 위해 반응을 조정한다. 이 개선된 반응은 병원체가 제거된 후에도 면역학적 기억의 형태로 유지되며 적응 면역 체계가 이 병원체와 마주칠 때마다 더 빠르고 더 강력한 공격을 가할 수 있도록 한다. 이에 따르면 면역계는 선천 및 적응 면역계로 나뉜다. 이 두 부분 각각은 일반적으로 소위 체액 및 세포성(cellular) 요소를 포함한다.
선천 면역계: 용어 "선천 면역계(면역 시스템)"(비특이적 또는 특이적이지 않은 면역계로도 알려짐)는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 일반적으로 비특이적 방식으로 다른 유기체에 의한 감염으로부터 숙주를 방어하는 기전과 세포를 포함하는 시스템을 의미하도록 의도된다. 이것은 선천적 시스템의 세포가 일반적인 방식으로 병원체를 인식하고 반응할 수 있지만 적응 면역 시스템과 달리 숙주에 오래 지속되거나 보호 면역을 부여하지 않는다는 것을 의미한다. 선천 면역계는 패턴 인식 수용체, 예를 들어, 톨 유사 수용체, NOD 유사 수용체 또는 RIG-I 유사 수용체 등의 리간드에 의해 활성화될 수 있다.
리피도이드 화합물: 단순히 리피도이드라고도 하는 리피도이드 화합물은 지질 유사 화합물, 즉 지질 유사 물리적 특성을 갖는 양친매성 화합물이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 지질은 리피도이드 화합물을 포함하는 것으로 간주된다.
핵산, 핵산 분자: 본원에서 사용되는 "핵산" 또는 "핵산 분자"라는 용어는 특히 성분 A 및 성분 B와 관련하여 본원에서 사용되는 것으로 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이다. "핵산" 또는 "핵산 분자"라는 용어는 바람직하게는 DNA(분자) 또는 RNA(분자)를 지칭한다. 이 용어는 폴리뉴클레오티드라는 용어와 동의어로 사용된다. 바람직하게는, 핵산 또는 핵산 분자는 당/포스페이트-백본의 포스포다이에스터-결합에 의해 서로 공유 결합된 뉴클레오티드 단량체를 포함하거나 이로 구성된 중합체이다. "핵산" 또는 "핵산 분자"라는 용어는 또한 변형된 핵산(분자), 예를 들어 본원에서 정의된 바와 같은 염기-변형, 당-변형 또는 백본-변형 DNA 또는 RNA(분자)를 포함한다. 따라서 성분 A 및 성분 B의 핵산은 DNA 또는 RNA일 수 있다.
핵산 서열, DNA 서열, RNA 서열: "핵산 서열", "DNA 서열", "RNA 서열"이라는 용어는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 뉴클레오타이드 연속의 특정하고 개별적인 순서를 나타낸다.
다가 백신 또는 조합 백신: 두 용어 모두 본 명세서에서 상호 교환적으로 이해되어야 한다. 본 발명의 다가 백신 또는 조합 백신은 하나 이상의 바이러스(예를 들어, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 코로나바이러스 및 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가 바이러스)로부터 유래된 하나 이상의 발란스(valence)(예를 들어, 항원)를 제공한다. 핵산 기반 조합 백신은 또한 "다중병원체 백신"으로 간주될 수 있다.
영구 양이온성: 본 명세서에 사용된 용어 "영구적으로 양이온성"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 각각의 화합물, 또는 그룹 또는 원자가 임의의 pH 값 또는 그 환경의 수소 이온 활성에서 양으로 하전됨을 의미한다. 일반적으로 양전하는 4차 질소 원자의 존재로 인해 발생한다. 화합물이 이러한 양전하를 복수로 운반하는 경우 영구적인 다중양이온성이라고 할 수 있다.
안정화된 RNA: "안정화된 RNA"라는 용어는 그러한 조정이 없는 RNA와 비교하여 환경 요인 또는 효소 분해(예: 엑소- 또는 엔도뉴클레아제 분해)에 의한 해체(disintegration) 또는 분해에 더 안정하도록 변형된 RNA를 의미한다. 바람직하게는, 본 발명의 맥락에서 안정화된 RNA는 원핵 또는 진핵 세포와 같은 세포, 바람직하게는 인간 세포와 같은 포유동물 세포에서 안정화된다. 안정화 효과는 예를 들어, 안정화된 RNA를 포함하는 조성물의 보관을 위한 완충 용액 등에서와 같이, 세포 외부에서도 발휘될 수 있다.
T-세포 반응: 본 명세서에 사용된 용어 "세포 면역" 또는 "세포(성) 면역 반응" 또는 "세포(성) T-세포 반응"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 대식세포, 자연 킬러 세포(NK), 항원 특이적 세포독성 T-림프구의 활성화 및 항원에 대한 반응으로 다양한 사이토카인의 방출을 지칭하도록 의도된다. 보다 일반적인 용어로, 세포 면역은 항체에 기초한 것이 아니라 면역계의 세포 활성화에 기초한다. 전형적으로, 세포 면역 반응은 예를 들어, 표면에 외래 항원의 에피토프를 표시하는 세포, 예를 들어, 수지상 세포 또는 다른 세포와 같은 특정 면역 세포에서 아폽토시스을 유도할 수 있는 항원 특이적 세포독성 T-림프구를 활성화하는 것으로 특징지워질 수 있다.
(서열의) 변이체: 핵산 서열의 맥락에서 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어 "변이체"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 다른 핵산 서열로부터 유래된 핵산 서열의 변이체를 지칭하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 핵산 서열의 변이체는 변이체가 유래된 핵산 서열과 비교하여 하나 이상의 뉴클레오티드 결실, 삽입, 추가 및/또는 치환을 나타낼 수 있다. 핵산 서열의 변이체는 변이체가 유래된 핵산 서열과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일할 수 있다. 변이체는 변이체가 유래된 서열의 기능의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 보유했다는 점에서 기능적 변이체이다. 핵산 서열의 "변이체"는 핵산 서열의 적어도 10, 20, 30, 50, 75 또는 100개의 뉴클레오티드의 스트레치에 있어 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 뉴클레오티드 동일성을 가질 수 있다.
단백질 또는 펩티드와 관련하여 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어 "변이체"는 예를 들어 하나 이상의 치환, 삽입 및/또는 결실된 아미노산(들)과 같이 하나 이상의 변이(들)/치환(들)에서 원래 서열과 상이한 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 펩티드 변이체를 지칭하도록 의도된다. 바람직하게는, 이들 단편 및/또는 변이체는 동일하거나 필적하는 특이적 항원 특성(면역원성 변이체, 항원성 변이체)을 갖는다. 삽입 및 치환은 특히 3차원 구조에 변형을 일으키지 않거나 결합 영역에 영향을 미치지 않는 서열 위치에서 가능하다. 삽입 또는 삭제에 의한 3차원 구조의 수정은 예를 들어, CD 스펙트럼(원형 이색성 스펙트럼(circular dichroism spectra))을 사용하여 쉽게 결정할 수 있다. 단백질 또는 펩티드의 "변이체"는 단백질 또는 펩티드의 적어도 10, 20, 30, 50, 75 또는 100 아미노산의 스트레치에 걸쳐 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 아미노산 동일성을 가질 수 있다. 바람직하게는, 단백질의 변이체는 단백질의 기능적 변이체를 포함하며, 이는 본 발명의 맥락에서 변이체가 그것이 유래한 단백질과 비교하여 본질적으로 동일하거나 그것이 유래한 단백질의 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%의 면역원성을 나타냄을 의미한다.
발명의 간단한 설명
특허청구범위 및 기본 설명에 추가로 정의된 바와 같이, 본 발명의 이러한 목적은 특히 코로나바이러스("구성요소 A")로부터 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 핵산, 예를 들어 RNA 또는 DNA, 및 추가 바이러스("구성요소 B")로부터 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 핵산, 예를 들어 RNA 또는 DNA를 포함하거나 또는 이로 구성된 약학적 조성물을 제공함으로써 해결된다.
적절하게는, 본 발명의 약학적 조성물 또는 조합 백신은 다음의 유리한 특징 중 적어도 일부를 갖는다:
· 주사/백신 접종 부위(예를 들어 근육)에서 성분 A 및 성분 B의 핵산 번역;
· 모든 인코딩된 단백질(구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 제공됨)에 대한 항원 특이적 면역 반응의 유도, 적절하게는 매우 낮은 투여량 및 투여 요법;
· 유아 및/또는 신생아 또는 노인, 특히 노인의 예방 접종에 대한 적합성;
· 근육내 투여에 대한 조성물/백신의 적합성;
· 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2(구성요소 A)에 대한 및 적어도 하나의 추가 바이러스(구성요소 B)에 대한 특이적 및 기능적 체액성 면역 반응의 유도;
· 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2(구성요소 A)에 대한 및 적어도 하나의 추가 바이러스(구성요소 B)에 대한 광범위한, 기능적 세포성 T-세포 반응의 유도;
· 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2(구성요소 A)에 대한 및 적어도 하나의 추가 바이러스(구성요소 B)에 대한 특이적 B-세포 기억의 유도;
· 코로나바이러스, 예를 들어 SARS-CoV-2, 및 적어도 하나의 추가 바이러스를 효과적으로 중화시킬 수 있는 기능적 항체의 유도;
· 코로나바이러스, 예를 들어 SARS-CoV-2의 신종 변종을 효과적으로 중화할 수 있는 기능적 항체의 유도;
· 점막 IgA 항체를 유도하여 점막 IgA 면역 유도;
· 균형 잡힌 B 세포 및 T 세포 반응의 유도;
· 코로나바이러스 감염에 대한, 예를 들어 SARS-CoV-2 또는 이의 신규 변종에 대한 보호 면역 유도;
· 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2(구성요소 A) 및 적어도 하나의 추가 바이러스(구성요소 B)에 대한 면역 보호의 빠른 개시;
· 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2(구성요소 A) 및 적어도 하나의 추가 바이러스(구성요소 B)에 대해 유도된 면역 반응의 지속;
· 백신접종 또는 면역병리학적 효과로 인해 바이러스 감염(예를 들어 SARS-CoV-2 감염)의 증가가 없음;
· 핵산 기반 조합 백신에 의해 유발된 항체 의존성 증강(ADE)이 없음;
· 백신 접종시 바람직하지 않은 높은 반응성을 유발할 수 있는, 백신 적용 후 전신 사이토카인 또는 케모카인 반응의 과도한 유도가 없음;
· 조합 백신의 내약성, 부작용 없음, 무독성;
· 핵신 기반 조합 백신의 유리한 안정성 특성;
· 조합 백신 생산의 속도, 적응성, 단순성 및 확장성;
· 충분한 보호를 위해 1회 또는 2회 백신 접종만 필요한 유리한 백신접종 요법;
· 충분한 보호를 위해 낮은 투여량의 조성물/백신만을 요구하는 유리한 백신접종 요법.
본 발명은 코로나바이러스("구성요소 A")로부터 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 및 추가 바이러스("구성요소 B")로부터 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 약학적 조성물이 인간 세포에서 효과적으로 공동 발현된다는 발명자의 놀라운 발견에 기초한다. 보다 놀랍고 예상치 못하게, 상기 구성요소를 포함하는 이러한 약학적 조성물의 투여는 코딩된 코로나바이러스 항원 및 적어도 하나의 추가 바이러스 항원에 대한 항원 특이적 면역 반응을 유도한다. 이러한 발견은 적어도 하나의 코로나바이러스, 예를 들어 대유행 코로나바이러스, 및 적어도 하나의 추가 바이러스, 예를 들어 인플루엔자 바이러스 및/또는 RSV 바이러스에 대한 보호를 제공하는 본 발명의 핵산 기반 조합 백신의 기초이다 (실시예 부문 참조).
첫번째 측면에서, 본 발명은 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 구성요소 A, 및 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 구성요소 B를 포함하거나 이로 구성된 약학적 조성물을 제공한다.
구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 대유행 코로나바이러스, 예를 들어 SARS-CoV-1, SARS-CoV-2, MERS-CoV로부터 적절하게 유도되거나 선택될 수 있다. 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 추가 바이러스, 예를 들어 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스(예를 들어 호흡기 세포융합 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 메타뉴모바이러스(Metapneumoivrus)), 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스(예를 들어 파라인플루엔자 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스)로부터 적절하게 유도되거나 선택될 수 있다.
두번째 측면에서, 본 발명은 상기 첫번째 측면에서 정의된 약학적 조성물(구성요소 A 및 구성요소 B를 포함)을 포함하는 조합 백신을 제공한다. 이에 따라, 두번째 측면은 다중병원체 백신에 관한 것이다.
세번째 측면에서, 본 발명은 상기 첫번째 측면의 적어도 하나의 약학적 조성물(구성요소 A 및 구성요소 B를 포함), 및/또는
상기 두번째 측면의 적어도 하나의 조합 백신을 포함하는 키트 또는 부품 키트를 제공한다.
본 발명의 추가 측면은 대상체에서 다중 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 방법, 및 약학적 조성물, 조합 백신 또는 키트의 1차 및 2차 의학적 용도에 관한 것이다. 또한 약학적 조성물 또는 조합 백신을 제조하는 방법이 제공된다.
발명의 상세한 설명
본 출원은 설명의 일부인 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다(WIPO 표준 ST.25). 서열 목록에 포함된 정보는 그 전체가 참조로 여기에 포함된다. 본 명세서에서 "서열 번호"가 언급되는 경우, 각각의 식별자를 갖는 서열 목록의 상응하는 핵산 서열 또는 아미노산(aa) 서열이 지칭된다. 많은 서열들의 경우 서열 목록은 추가 세부 정보, 예를 들어, 특정 구조적 특징, 서열 최적화, GenBank(NCBI) 또는 GISAID(epi) 식별자 또는 코딩 능력에 관한 추가 세부 정보와 관련하여 추가 세포 정보를 제공한다. 특히, 이러한 정보는 WIPO 표준 ST.25 시퀀스 목록의 숫자 식별자 <223>에서 제공된다. 따라서, 상기 숫자 식별자 <223> 아래에 제공된 정보는 여기에 그 전체가 명시적으로 포함되며 기본 발명의 설명의 필수적인 부분으로 이해되어야 한다. 공개된 다른 특허출원 또는 특허의 "서열 번호"에 대한 언급이 있는 경우, 상기 서열, 예를 들어 아미노산 서열 또는 핵산 서열은 본원에 명시적으로 참조로 포함된다. 따라서, 이들 서열은 기본 설명의 필수적인 부분을 구성한다. 참조로 포함된 "서열번호"의 경우, 숫자 식별자 <223>(개별 서열 프로토콜의)로 제공된 정보도 이의 전체가 본원에 명시적으로 포함되며, 기본 발명의 설명의 필수적인 부분으로 이해되어야 한다. 따라서, WO2014160463, WO2015024668, WO2017070626, WO2017070622, WO2017172890, WO2018081318, WO2018115527, WO2018170245, WO2018078053, WO2018115507, WO2019092153, WO2019202035에 제공된 "서열 번호"는 본원에 참조로 포함되며, 이에 따라 발명의 설명의 일부이다.
약학적 조성물:
첫번째 측면에서, 본 발명은 조합 백신 또는 다중병원체 백신에 적합한 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 첫번째 측면, 즉 본 발명의 약학적 조성물에 관하여 기술된 특정한 특징 및 구현예는 두번째 측면(본 발명의 조합 백신), 세번째 측면(본 발명의 키트 또는 부품 키트), 또는 예를 들어 의약 용도(제1 및 제2 의약 용도) 및 예를 들어 치료 방법을 포함하는 추가 측면에도 적용 가능하다는 점에 유의해야 한다.
바람직한 구현예에서, 첫번째 측면의 약학적 조성물은 다음을 포함하거나 이로 구성된다
- 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 또는 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 구성요소 A, 및
- 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 또는 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 구성요소 B.
본 발명에 따른 핵산, 예를 들어 DNA 또는 RNA는 핵산 기반 약학적 조성물 또는 핵산 기반 백신에 대한 기초를 형성한다.
본원에 제공된 이러한 핵산 기반 약학적 조성물(첫번째 측면) 또는 핵산 기반 백신(두번째 측면)은 전통적인 백신 접근 방법에 비해 장점들을 갖는다: 일반적으로 단백질 기반 백신, 또는 약독화 생백신은 이들의 높은 생산 비용으로 인해 개발도상국에서 사용하기에 차선책이다. 추가로, 단백질 기반 백신, 또는 약독화 생백신은 개발 기간이 오래 걸리고, 예를 들어 2019/2020년에 발생한 코로나바이러스 SARS-CoV-2와 같은 대유행 바이러스 발생시 신속한 대응에 적합하지 않다. 추가로, 전통적인 접근 방법을 사용하여 코로나바이러스 및 추가 바이러스에 대해 효과적인 조합 백신을 제공하는 것은 여전히 어려운 과제이다(예를 들어 개별 구성요소의 호환성에 관한 문제).
대조적으로, 본 발명에 따른 핵산 기반 약학적 조성물 및 백신은 매우 빠르고 비용 효율적인 제조를 가능하게 한다. 따라서, 알려진 백신과 비교하여, 본 발명의 핵산에 기초한 백신은 훨씬 더 저렵하고 빠르게 생산 및 제조될 수 있으며, 이는 특히 개발도상국에서 또는 세계적인 대유행병의 맥락에서 사용하기에 매우 유리하다.
구성요소 A 및 구성요소 B의 핵산에 기반하는 약학적 조성물 또는 백신의 하나의 추가적인 장점은 상기 구성요소들이 단백질 또는 펩타이드 기반 백신에 비해 열 안정적이라는 것이다. 또한, 본 발명자들은 개별 구성요소들의 효능(예를 들어 세포 및 체액성 면역 반응의 유도)을 방해하지 않고, 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 항원을 인코딩하는 각각의 핵산 서열이 추가 바이러스(예를 들어 다른 코로나바이러스, 인플루엔자 바이러스, RSV 바이러스, PIV, hMPV, 헨드라(Hendra), 니파(Nipah))로부터 선택되거나 유래된 항원을 인코딩하는 핵산 서열과 조합될 수 있음을 발견하였다(실시예 부문 참조).
구성요소 A:
다양한 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 적어도 하나의 구성요소는 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함한다.
코로나바이러스는 알파코로나바이러스, 베타코로나바이러스, 델타코로나바이러스, 감마코로나바이러스 및 분류되지 않은 코로나바이러스 속(genus)으로 분류될 수 있다. 코로나바이러스는 유전적으로 매우 가변적이며, 개별 바이러스 종은 종 장벽을 극복하여 여러 숙주 종을 감염시켜 잠재적으로 범유행성(pandemic)이 될 수 있다.
바람직한 구현예에서 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 적어도 하나의 범유행성 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된다.
다양한 구현예에서 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스, 또는 구성요소 A의 적어도 하나의 범유행성 코로나바이러스는 적어도 하나의 알파코로나바이러스, 적어도 하나의 베타코로나바이러스, 적어도 하나의 감마코로나바이러스, 및/또는 적어도 하나의 델타코로나바이러스, 바람직하게 범유행성 알파코로나바이러스, 베타코로나바이러스, 감마코로나바이러스, 델타코로나바이러스로부터 선택된다.
다양한 구현예서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스, 또는 구성요소 A의 적어도 하나의 범유행성 코로나바이러스는 베타코로나바이러스이다. 적절하게, 베타코로나바이러스는 적어도 하나의 사르베코바이러스(Sarbecovirus), 적어도 하나의 메르베코바이러스(Merbecovirus), 적어도 하나의 엠베코바이러스(Embecovirus), 적어도 하나의 노베코바이러스(Nobecovirus), 및/또는 적어도 하나의 하이베코바이러스(Hibecovirus)로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스, 또는 구성요소 A의 적어도 하나의 범유행성 코로나바이러스는 베타코로나바이러스, 바람직하게 사르베코바이러스이다. 본 발명의 맥락에서, 바람직한 사르베코바이러스는 SARS-관련 코로나바이러스로부터 선택될 수 있다. 바람직한 SARS-관련 코로나바이러스는 SARS-CoV-1 및/또는 SARS-CoV-2로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스, 또는 구성요소 A의 적어도 하나의 범유해성 코로나바이러스는 베타코로나바이러스, 바람직하게 베르베코바이러스이다. 본 발명의 맥락에서, 바람직한 메르베코바이러스는 MERS-관련 코로나바이러스로부터 선택될 수 있다. 바람직한 MERS-관련 코로나바이러스는 MERS-CoV로부터 선택될 수 있다.
"코로나바이러스의 항원성 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 본 발명의 정의된 각각의 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 임의의 펩타이드 또는 단백질뿐만 아니라 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 바람직하게 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 관련된다.
"면역원성 단편" 또는 "면역원성 변이체"라는 용어는 개체에 면역 반응을 일으킬 수 있는 상응하는 코로나바이러스 항원의 임의의 단편/변이체로 이해되어야 한다.
본 발명의 맥락에서, 코로나바이러스, 바람직하게 범유행성 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 임의의 단백질은 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있으며, 구성요소 A의 코딩 서열 또는 핵산 서열에 의해 적절하게 인코딩될 수 있다. 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질이 합성적으로 조작된 또는 인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 구성할 수 있다는 것은 추가로 본 발명의 범위에 속한다. "합성적으로 조작된" 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질이라는 용어, 또는 "인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 천연적으로 발생하지 않는 단백질에 관한 것이다. 따라서, "인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질" 또는 "합성적으로 조작된 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질"은 예를 들어 자연에 존재하는 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질과 비교하여 적어도 하나의 아미노산이 상이할 수 있으며, 및/또는 추가적인 펩타이드 또는 단백질 요소(예를 들어 혼성 요소(heterologous element))를 포함할 수 있으며, 및/또는 N-말단 또는 C-말단이 연장되거나 절단될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 코로나바이러스, 바람직하게 범유행성 코로나바이러스로부터 선택되거나 또는 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 상기 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 구조 단백질, 보조(accessory) 단백질, 또는 복제효소(replicase) 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이들의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함한다.
적절하게, 구조 단백질은 코로나바이러스 스파이크 단백질(S), 코로나바이러스 외피 단백질(E), 코로나바이러스 막 단백질(M) 또는 코로나바이러스 뉴클레오캡시드 단백질(N), 또는 이들의 면역원성 단편 또는 변이체로부터 선택되거나 유래된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 코로나바이러스 스파이크 단백질(S, S1, S2, 또는 S1 및 S2)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
본원에 사용된 스파이크 단백질(S)라는 용어는 코로나바이러스 단백질에 관한 것이다. 스파이크 단백질(S)는 헤드(S1) 및 스템(S2)로 이루어진 각각의 모노머로 바이러스 표면에 삼량체(trimer)로 존재하는 통상적인 제1형 바이러스 융합 단백질이다. 개별적인 전구체 S 폴리펩타이드는 동종삼량체를 형성하며, 개별적인 S1 및 S2 폴리펩타이드 사슬을 생성하기 위해 골지체 내에서 글리코실화를 겪을뿐만 아니라 신호펩티드를 제거하기 위해 처리되며, 세포 프로테아제에 의해 절단되어, 이는 동종삼량체 내에 S1/S2 프로토머로 결합된 상태로 남아 있으며, 이에 따라 이종이량체의 삼량체이다. 스파이크 당단백질의 S1 도메인은 안지오텐신 전환 효소 2 수용체와 결합하고(아마도) 숙주 세포로의 바이러스 융합을 매개하는 수용체 결합 도메인(RBD), 표적 세포와 초기 접촉할 수 있는 N-말단 도메인, 및 2개의 서브도메인을 포함하며, 이들 모두는 중화 항체에 민감성이다. S2 도메인은 숙주 엔도좀 막과 막 융합에 관련된 6개의 나선 다발 융합 코어로 구성되며, 중화 대상이기도 하다. S2 서브유닛은 2개의 헵타드(heptad) 반복 서열(HR1 및 HR2), 융합 당단백질의 전형적인 중심 나선, 막관통 도메인, 및 세포질 꼬리 도메인을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 스파이크 단백질(S)의 단편은 구성요소 A의 핵산에 의해 인코딩되며, 상기 단편은 N-말단이 절단될 수 있으며, 예를 들어 전장 코로나바이러스 S 단백질의 1 내지 100개 N-말단 아미노산이 부족할 수 있다. 구현예에서, 스파이크 단백질(S)의 단편은 구성요소 A의 핵산에 의해 인코딩될 수 있으며, 상기 단편은 C-말단이 절단될 수 있으며, 전장 코로나바이러스 S 단백질의 1 내지 200개 C-말단 아미노산이 부족할 수 있다. 이러한 "스파이크 단백질(S)의 단편"은 아미노산 치환, 및 선택적으로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 포함할 수 있다(아래 특정한 코로나바이러스에 대해 아래에 설명됨). 바람직한 구현예에서, 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)의 단편은 C-말단이 절단될 수 있으며, 이에 따라 C-말단 막관통 도메인이 부족할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)를 포함하거나 구성하며, 상기 스파이크 단백질(S)은 막관통 도메인(TM 또는 TMflex)이 부족하다. 이론에 제한되지 않고, 본원에 정의된 막관통 도메인(TM 또는 TMflex)이 부족한 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)은 단백질이 용해될 수 있고 세포막에 고정되지 않기 때문에 백신에 적절할 수 있다. 따라서 가용성 단백질은 개체 또는 세포에 투여시 더 높은 농도로 생산(번역)될 수 있으며, 이에 따라 면역 반응이 개선될 수 있다.
이론에 제한되지 않고, RBD 및 CND 도메인은 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)의 면역원성에 중요할 수 있다. 두 영역 모두 코로나바이러스 스파이크 단백질의 S1 단편에 위치한다. 따라서, 본 발명의 맥락에서 항원성 펩타이드 또는 단백질이 코로나바이러스의 스파이크 단백질의 S1 단편 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 또는 이로 구성되는 것이 적절할 수 있다. 적절하게, 이러한 S1 단편은 상기 정의된 RBD 및/또는 CND 도메인을 포함할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또난 단백질은 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 스파이크 단백질(S)은 스파이크 단백질 단편 S1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1을 포함하며, 스파이크 단백질 단편 S1의 적어도 70%, 80%, 90%, 바람직하게 100%가 부족하다. 이러한 구현예는 S1 단편이 S1 및 S2를 포함하는 전장 단백질의 잠재적인 문제 없이 중화 에피토프를 포함하기 때문에 유리할 수 있다.
이론에 제한되지 않고, 구성요소 A의 항원성 펩타이드 단백질이 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1 및 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1의 (적어도 단편)을 포함하거나 이로 구성되는 것이 적절할 수 있으며, 이는 면역원성 코로나바이러스 스파이크 단백질의 형성이 촉진될 수 있기 때문이다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)은 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체, 및 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 전장 코로나바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다. "전장 코로나바이러스 스파이크 단백질"이라는 용어는 필수적으로 전체 스파이크 단백질에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 코로나바이러스 스파이크 단백질, 바람직하게 범유행성 코로나바이러스로부터 유래된 것으로 이해되어야 한다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산에 의해 제공된 코로나바이러스 스파이크 단백질(S)은 융합전(pre-fusion) 형태에서 S 항원을 안정화시키기 위해 설계되거나 채용된다. 중화 항체에 대한 몇몇 잠재적 에피토프가 상기 융합전 단백질 형태에 단순히 접근 가능하기 때문에, 융합전 형태는 효율적인 백신의 맥락에서 특히 유리하다. 또한, 융합전 형태 내 S 단백질의 나머지는 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 향상(ADE)과 같은 것을 피하기 위한 것이다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 코로나바이러스, 바람직하게 범유행성 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 상기 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 스파이크 단백질(S)로부터 선택되거나 유래되거나 또는 이를 형성하며, 상기 스파이크 단백질(S)은 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)이다. 적절하게, 상기 융합전 안정화된 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 변이를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "융합전 형태"라는 용어는 분비 시스템에서 성숙한 코로나바이러스 S 단백질로 처리된 후, 코로나바이러스 S를 융합 후 형태로 전환시키는 융합 발생 사건을 촉발하기 전에, 코로나바이러스 S 단백질의 엑토도메인에 의해 채택된 구조적 형태에 관한 것이다.
본원에 기술된 "융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)"은 상응하는 천연 코로나바이러스 S 서열로부터 형성된 코로나바이러스 S 엑토도메인 삼량체에 비해 융합전 형태의 증가된 보유를 제공하는 자연 코로나바이러스 S 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 포함한다. 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입에 의한 융합전 형태의 "안정화"는 예를 들어 에너지 안정화(예를 들어 융합후 개방 형태에 비해 융합전 입체 형태 에너지의 감소), 및/또는 동역학 안정화(예를 들어 융합전 형태에서 융합후 형태로의 전이 속도 감소)일 수 있다. 추가로, 융합전 형태 내 코로나바이러스 S 엑토도메인 삼량체의 안정화는 상응하는 천연 코로나바이러스 S 서열에 비해 변성에 대한 저항성 증가를 포함할 수 있다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 코로나바이러스 스파이크 단백질은 융합전 형태 내 S 단백질을 안정화시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 융합전 형태 내 S 단백질의 막 원위 부분(N-말단 영역 포함)을 안정화시키는 치환을 포함한다.
구현예에서, 융합전 안정화 변이는 S 단백질의 원위 부분(N-말단 영역 포함)의 아미노산 위치에서 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 아미노산은 A, I, L, M, F, V, G 또는 P(참조에 따른 아미노산 위치)로부터 선택된 하나로 치환되며, 바람직하게는 상기 아미노산은 P로 치환된다. 적절하게는, 코로나바이러스 스파이크 단백질의 안정화는 2개의 연속 아미노산을 융합전(perfusion) 형태에서 스파이크 단백질을 안정화시키는 아미노산으로 대체함으로써 얻어질 수 있다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 코로나바이러스 S 단백질의 융합전 상태를 추가로 안정화시키는 공동(cavity) 충전 돌연변이를 포함한다. "공동 충전 돌연변이" 또는 "공동 충전 아미노산 치환"이라는 용어는 코로나바이러스 S 단백질 엑토도메인과 같은 단백질의 단백질 코어 내의 공동을 채우는 아미노산 치환에 관한 것이다. 공동은 본질적으로 아미노산 또는 아미노산 측쇄가 존재하지 않는 접힌 단백질 내의 공극이다. 여러 구현예에서, 공동-충전 아미노산 치환은 융합후 형태로의 전이 후에 붕괴(예를 들어, 감소된 부피를 가짐)하는 코로나바이러스 S 엑토도메인 코어의 융합전 형태에 존재하는 공동을 채우기 위해 도입된다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 융합전 상태를 추가로 안정화시키는 돌연변이된 양성자화(protonation) 부위를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 인공 분자내 이황화 결합을 포함한다. 이러한 인공 분자 이황화 결합은 융합전 형태에서 S 단백질의 막 원위 부분(N-말단 영역 포함)을 추가로 안정화시키기 위해 도입될 수 있다; 즉, 하나 이상의 융합전 사양(specification) 항체에 특이적으로 결합하고 및/또는 융합전 형태에는 존재하지만 S 단백질의 융합후 형태에는 존재하지 않는 적합한 항원 부위를 제시한다. 구현예에서, 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 상이한 인공 분자내 이황화 결합을 포함한다.
본 발명의 맥락에서 임의의 코로나바이러스 S 단백질, 바람직하게는 임의의 범유행성 코로나바이러스 S 단백질이 융합전된 형태의 스파이크 단백질을 안정화시키기 위해 상기 기재된 바와 같이 돌연변이될 수 있다는 것이 강조되어야 한다. 따라서, 스파이크 단백질은 임의의 코로나바이러스, 바람직하게는 임의의 알파코로나바이러스, 베타코로나바이러스, 감마코로나바이러스, 델타코로나바이러스, 보다 바람직하게는 베타코로나바이러스로부터 선택될 수 있다.
다양한 바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 A의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 코로나바이러스, 바람직하게는 범유행성 코로나바이러스로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 및 추가로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 인코딩한다.
적절하게는, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 (예를 들어, 분비 신호 서열을 통해) 인코딩된 코로나바이러스 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 촉진 또는 개선할 수 있고, 원형질막에서 본 발명의 인코딩된 항원성 펩타이드 또는 단백질의 고정을 촉진 또는 개선할 수 있으며(예를 들어, 막관통 요소를 통해), 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선하거나 (예를 들어, 다량체화 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해), 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 A의 핵산은 펩티드 링커 요소, 자가-절단 펩티드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 인코딩할 수 있다.
적합한 다량체화 도메인은 WO2017081082의 서열번호 1116-1167에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 막관통 요소는 WO2017081082의 서열번호 1228-1343에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 VLP를 형성하는 서열은 특허출원 WO2017081082의 서열번호 1168-1227에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 펩타이드 링커는 특허 출원 WO2017081082의 서열 번호 1509-1565에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 자가 절단 펩티드는 특허 출원 WO2017081082의 서열 번호 1434-1508에 따른 아미노산 서열 목록 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 면역 보조제 서열은 특허 출원 WO2017081082의 서열 번호 1360-1421에 따른 아미노산 서열 목록 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 수지상 세포(DC) 표적화 서열은 특허 출원 WO2017081082의 서열 번호 1344-1359에 따른 아미노산 서열 목록 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 분비 신호 펩티드는 공개된 PCT 특허 출원 WO2017081082의 서열번호 1-1115 및 서열번호 1728에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 코딩 서열은 신호 펩타이드, 링커 펩타이드, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 다량체화 요소의 삼량체화, 막관통 요소, 또는 VLP 형성 서열로부터 선택된 하나 이상의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 추가로 인코딩할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 코로나바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원 단백질을 인코딩하는 구성요서 A의 핵산은 추가로 적어도 하나의 이종 삼량체화 요소, 항원 클러스터링 요소 또는 VLP 형성 서열을 인코딩한다.
바람직한 구현예에서, 항원 클러스터링 요소는 페리틴 요소, 또는 루마진 신타제 요소, B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg), 또는 인캡슐린(encapsulin)으로부터 선택될 수 있다. 안정하게 클러스터화된 코로나바이러스 스파이크 단백질을 발현하는 것, 바람직하게 이의 융합전 형태로 발현하는 것은 인코딩된 코로나바이러스 항원에 대한 중화 활성의 크기 및 폭을 증가시킬 수 있다.
루마진 합성효소(Lumazine, LS, LumSynth)는 입자 형성 특성을 가진 효소로, 다양한 유기체에 존재하며 리보플라빈 생합성에 관여한다. 특히 바람직한 구현예에서, 루마진 합성효소는 항원 클러스터링을 촉진하기 위해 사용되며 따라서 본 발명의 인코딩된 코로나바이러스 항원의 면역 반응을 촉진하거나 향상시킬 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 항원 클러스터링 요소(다량체화 요소)는 루마진 합성효소이거나 또는 이로부터 유도되며, 상기 항원 클러스터링 도메인의 아미노산 서열은 바람직하게 아미노산 서열 서열번호: 112, 이의 단편 또는 변이체 중 임의의 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
페리틴은 주요 기능이 세포내 철 저장인 단백질이다. 거의 모든 살아있는 유기체는 24개의 서브유닛으로 구성된 페리틴을 생산하며, 각 하위 단위는 팔면체 대칭의 4차 구조로 자가 조립되는 4개의 알파 나선 다발로 구성된다. 나노입자로 자가 조립하는 특성은 항원을 운반하고 노출시키는데 매우 적합하다.
특히 바람직한 구현예에서, 페리틴은 항원 클러스터링을 촉진하는 데 사용되며 따라서 인코딩된 코로나바이러스 항원, 바람직하게는 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 항원 클러스터링 요소(다량체화 요소)는 바람직하게 페리틴으로부터 선택되거나 유래되며 상기 항원 클러스터링 도메인의 아미노산 서열은 바람직하게 아미노산 서열 서열번호: 113, 이의 단편 또는 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, 항원 클러스터링 도메인은 B형 간염 표면 항원(HBsAg)이다. HBsAg는 구형 입자를 형성한다. B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg) 서열의 단편의 추가는 코로나바이러스에 대한 핵산 기반 백신의 면역 반응을 증진시키는데 특히 효과적일 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, HBsAg는 항원 클러스터링을 촉진하기 위해 사용되며 따라서 인코딩된 코로나바이러스 항원, 바람직하게는 본원에 정의된 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다.
일부 구현예에서, 항원 클러스터링 요소는 캡슐화 요소이다. 캡슐린 서열의 추가는 코로나바이러스에 대한 핵산 기반 백신의 면역 반응을 강화하는 데 특히 효과적일 수 있다. 특히 바람직한 구현예에서, 인캡슐린은 항원 클러스터링을 촉진하기 위해 사용되며 따라서 인코딩된 코로나바이러스 항원, 바람직하게는 본원에 정의된 코로나바이러스 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다.
인캡슐린은 호열성 테르모토가 마리티마(Thermotoga maritima)에서 분리한 단백질로 항원의 자기조립을 통해 항원(나노)입자를 형성하는 요소로 사용될 수 있다. 인캡슐린은 내부 및 외부 직경이 각각 20nm 및 24nm인 얇고 20면체 T = 1 대칭 케이지 구조를 갖는 동일한 31kDa 모노머의 60개 카피들로부터 조립된다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 이종 항원 클러스터링 요소를 추가로 인코딩하는 구현예에서, 항원 클러스터링 요소 및 코로나바이러스로부터 유래된 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바랒믹하고 적합하다. 적합하게, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인(TM)이 부족하거나 또는 C-말단 막관통 도메인(TM)의 일부가 부족하다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 상기 정의된 바와 같은 이종 항원 클러스터링 요소를 인코딩하는 다른 구현예에서, 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1(S2 및/또는 TM 및/또는 TMflex가 부족함)로부터 유래된 항원 클러스터링 요소 및 항원 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생산하는 것이 특히 바람직하고 적절하다. 추가로, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위한 링커 요소를 사용하는 것이 적절할 수 있다(예를 들어 서열번호: 115, 13148, 13152에 따른 링커).
추가로 적절한 다량체화 요소는 WO2017081082의 서열번호: 1116-1167에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. WO2017081082의 서열번호: 1116-1167은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 실시예에서, 삼량체화 요소는 폴드온(foldon) 요소로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 폴드온 요소는 피브리틴 폴드온 요소이다. 바람직하게는 융합 전 형태로 안정한 삼합체 스파이크 단백질을 발현하면 코로나바이러스에 대한 중화 활성의 크기와 폭이 증가할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 피브리틴 폴드온 요소는 항원 삼량체화를 촉진하는 데 사용되며 이에 따라 인코딩된 코로나바이러스 항원, 바람직하게는 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다. 바람직하게는, 폴드온 요소는 박테리오파지, 바람직하게는 박테리오파지 T4, 가장 바람직하게는 박테리오파지 T4의 피브리틴이거나 또는 이로부터 유래된다.
특히 바람직한 구현예에서, 삼량체화 요소는 폴드온으로부터 선택되거나 유래되며, 상기 삼량체화 요소의 아미노산 서열은 바람직하게는 아미노산 서열 서열번호: 114와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하거나, 이들 중 임의의 단편 또는 변이체이다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 이종 삼량체화 요소를 추가로 인코딩하는 구현예에서, 코로나바이러스로부터 유래된 삼량체화 요소 및 항원성 펩티드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게는 C-말단 막관통 도메인이 없거나 C-말단 막관통 도메인(TMflex)의 일부가 결여된 코로나바이러스로부터 유래된 스파이크 단백질이다.
다른 구현예에서, 구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 상기 정의된 이종 삼량체화 요소를 인코딩하는 경우, 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1(S2 및/또는 TM 및/또는 TMflex가 부족)으로부터 유래된 삼량체화 요소 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 추가로, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위한 링커 요소를 사용하기 위해 적합할 수 있다(예를 들어 서열번호: 115, 13148, 13152에 따른 링커).
추가로 적절한 삼량체화 요소는 WO2017081082의 서열번호: 1116-1167에 따른 아미노산 서열 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. WO2017081082의 서열번호: 1116-1167은 참고문헌으로 본원에 포함된다.
바람직한 구현예에서, VLP 형성 서열이 선택되고 본원에 정의된 코로나바이러스 항원에 융합될 수 있다. VLP 형태 내 안정적으로 클러스터화된 스파이크 단백질을 발현하는 것은 코로나바이러스에 대한 중화 활성의 크기 및 폭을 증가시킬 수 있다. VLP는 구조적으로 감염성 바이러스를 모방하며 강력한 세포성 및 체액성 면역 반응을 유도할 수 있다.
적합한 VLP 형성 서열은 B형 간염 바이러스 코어 항원, HIV-1 Gag 단백질, 또는 우드척(Woodchuck) 간염 코어 항원 요소(WhcAg)로부터 유래된 요소로부터 선택될 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 VLP-형성 서열은 우드척 간염 코어 항원 요소(WhcAg)이다. WhcAg 요소는 VLP 형성을 촉진하기 위해 사용되며, 이에 따라 인코딩된 코로나바이러스 항원, 바람직하게 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, VLP 형성 서열은 폴드온으로부터 선택되거나 유래되며, 상기 VLP 형성 서열의 아미노산 서열은 바람직하게 서열번호: 13171과 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하거나, 이들 중 임의의 단편 또는 변이체이다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 이종 VLP 형성 서열을 인코딩하는 구현예에서, 코로나바이러스로부터 유래된 VLP 형성 서열 및 항원성 펩타이드 또는 단백질으ㄹ 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 C-말단 막관통 도메인이 없거나 C-말단 막관통 도메인의 일부가 결여된 코로나바이러스로부터 유래된 스파이크 단백질이다.
다른 구현예에서, 구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 상기 정의된 이종 VLP-형성 서열을 추가적으로 인코딩하는 경우, 코로나바이러스 스파이크 단백질 단편 S1(S2 및/또는 TM 및/또는 TMflex가 부족)으로부터 유래된 VLP-형성 서열 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 추가로, 이는 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위한 링커 요소를 사용하는데 적합할 수 있다(예를 들어 서열번호: 115, 13148, 13152에 따른 링커).
본 발명의 맥락에서 추가로 적합한 VLP 형성 서열은 특허 출원 WO2017081082의 서열번호: 1168-1227에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. WO2017081082 의 서열번호: 1168-1227은 본원에 참고문헌으로 포함된다.
구현예에서, 항원성 펩타이드 또는 단백질은 이종 신호 펩타이드를 포함한다. 이종 신호 펩타이드는 인코딩된 코로나바이러스 항원의 분비를 증진시키는데 사용될 수 있다.
적절한 분비 신호 펩타이드는 공개된 PCT 특허 출원 WO2017081082의 서열번호: 1-1115 및 서열번호: 1728에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. WO2017081082의 서열번호: 1-1115 및 서열번호: 1728은 본원에 참고문헌으로 포함된다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 이종 분비 신호 펩타이드를 추가적으로 인코딩하는 구현예에서, 코로나바이러스로부터 유래된 이종 분비 신호 펩타이드 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적합하게 상기 코로나바이러스로부터 유래된 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 스파이크 단백질은 N-말단 내인성 분비 신호 펩타이드가 부족하다(aa 1 내지 aa 15가 부족).
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 본원에 정의된 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 본원에 정의된 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 상기 적어도 하나의 코로나바이러스는 적어도 하나의 (범유행성) 알파코로나바이러스, 적어도 하나의 (범유행성) 베타코로나바이러스, 적어도 하나의 (범유행성) 감마코로나바이러스, 및/또는 적어도 하나의 (범유행성) 델타코로나바이러스로부터 선택된다.
그러한 맥락에서, 본원에 정의된 코로나바이러스의 적어도 하나의 항원성 단백질 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 임의의 코딩 서열은 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있으며 그에 따라 구성요소 A의 핵산에 포함될 수 있다.
구성요소 A의 핵산에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 하기 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다.
적합하게는, 구성요소 A의 핵산은 제형화 및/또는 복합화된다. 구성요소 A의 핵산 복합화 또는 제형화에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "제형화 및 복합화" 단락에 제공된다.
본 발명의 맥락에서, "핵산 종"은 "하나의 단일 핵산 분자"를 의미하는 것에 제한되지 않으며, 본질적으로 동일한 핵산 분자의 총체를 포함하는 것으로 이해된다. 따라서, 이는 복수의 본질적으로 동일한 핵산 분자, 예를 들어 DNA 또는 RNA 분자에 관한 것일 수 있다.
구현예에서, 구성요소 A는 본원에 정의된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있으며, 각각은 동일한 코로나바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩한다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 코로나바이러스는 (본질적으로) 동일한 단백질 또는 펩타이드의 레파토리를 발현하며, 모든 단백질 또는 펩타이드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 코로나바이러스는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질(polyproteins)을 발현하며, 여기서 이러한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게는 아미노산 서열(들)이 다르지 않다.
구현예에서, 구성요소 A는 본원에 정의된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 훨씬 더 많은 다른 핵산 종, 예를 들어 DNA 또는 RNA를 포함하며, 각각 유전적으로 별개의 코로나바이러스(예를 들어 별개의 코로나바이러스 분리물, 별개의 베타코로나바이러스, 별개의 범유행성 코로나바이러스), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 인코딩한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 "별개의" 또는 "별개의 코로나바이러스"라는 용어는 적어도 2개의 각각의 코로나바이러스(예를 들어, 별개의 코로나바이러스 분리물, 별개의 베타코로나바이러스, 별개의 범유행성 코로나바이러스 등) 사이의 차이로 이해되어야 하며, 여기서 그 차이는 각각의 별개의 코로나바이러스의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 코로나바이러스는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩티드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A는 적어도 하나의 코로나바이러스, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 A는 바람직하게는 근육 내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 A의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 항원 구성의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 A의 투여는 대상에서 RNA의 번역 및 인코드된 코로나바이러스 항원의 생성을 야기한다. 핵산이 DNA(예를 들어 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 DNA의 RNA로의 전사를 초래하고, 대상에서 RNA의 인코드된 코로나바이러스 항원으로의 후속 번역을 야기한다.
구현예에서, 구성요소 A를 포함하는 약학적 조성물을 대상에게 투여하면 중화 항체가 유도되고 질병 강화 항체는 유도되지 않는다. 특히, 코로나바이러스 융합전 안정화 스파이크 단백질을 인코딩하는 구성요소 A를 포함하는 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 것은 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 향상(ADE)을 이끌어내지 않는다.
바람직하게는, 구성요소 A는 백신, 특히 코로나바이러스 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
본 발명의 맥락에서 특정한 코로나바이러스에 관한 구현예는 하기에 제공된다 (구성요소 A-1, 구성요소 A-2, 구성요소 A-3).
구성요소 A-1: SARS-CoV-2
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 SARS-CoV-2이다(구성요소 A-1으로도 언급됨).
따라서, 첫번째 측면의 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 적어도 하나의 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
"구성요소 A" 단락에 기술된 일반적인 구현예 및 특징은 또한 SARS-CoV-2 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에도 적용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
여기에 사용된 용어 "인간 코로나바이러스 2019", "우한 인간 코로나바이러스"(WHCV), "nCoV-2019 코로나바이러스", "nCoV-2019", "우한 해산물 시장 폐렴 바이러스", "우한 코로나바이러스", "WHCV 코로나바이러스", "HCoV-19", "SARS2", "COVID-19 바이러스", "hCoV-19", "SARS-CoV-2" 또는 "coronavirus SARS-CoV-2"는 본 발명 전반에 걸쳐 상호 교환 가능하게 사용될 수 있으며, 2019/2020 전환기에 중국 도시 우한에서 출현한 새로운 유행성 코로나바이러스와 관련하여 COVID-19라는 질병을 유발했다. WHO (2020년 2월)에 따르면 이 바이러스는 공식적으로 "SARS-CoV-2"로 명명되고 관련 질병은 공식적으로 "COVID-19"로 명명된다.
SARS-CoV-2는 코로나비리데(Coronaviridae), 특히 오르소코로나바이러스(Orthocoronaviruses), 더 구체적으로 베타코로나바이러스(Betacoronavirus) 속에 속한다. 예시적인 SARS-CoV-2 코로나바이러스는 아래 목록 A 및 목록 B에 제공된 것을 포함하지만 이에 국한되지 않는 분리주(isolate)이다.
목록 A : 예시적인 SARS-CoV-2 코로나바이러스 분리주(EPI/GISAID):
EPI_ISL_402119, EPI_ISL_402120, EPI_ISL_402121, EPI_ISL_402123, EPI_ISL_402124 (hCoV-19/Wuhan/WIV04/2019), EPI_ISL_402125, EPI_ISL_402127, EPI_ISL_402128 (BetaCoV_Wuhan_WIV05_2019_EPI_ISL_402128), EPI_ISL_402129, EPI_ISL_402130, EPI_ISL_402131, EPI_ISL_402132, EPI_ISL_403928, EPI_ISL_403929, EPI_ISL_403930, EPI_ISL_403931, EPI_ISL_403932, EPI_ISL_403933, EPI_ISL_403934, EPI_ISL_403935, EPI_ISL_403936, EPI_ISL_403937, EPI_ISL_403962, EPI_ISL_403963, EPI_ISL_404227, EPI_ISL_404228, EPI_ISL_404253, EPI_ISL_404895, EPI_ISL_405839, EPI_ISL_406030, EPI_ISL_406031, EPI_ISL_406034, EPI_ISL_406036, EPI_ISL_406223, EPI_ISL_406531, EPI_ISL_406533, EPI_ISL_406534, EPI_ISL_406535, EPI_ISL_406536, EPI_ISL_406538, EPI_ISL_406592, EPI_ISL_406593, EPI_ISL_406594, EPI_ISL_406595, EPI_ISL_406596, EPI_ISL_406597, EPI_ISL_406798, EPI_ISL_406800, EPI_ISL_406801, EPI_ISL_406844, EPI_ISL_406862, EPI_ISL_406716, EPI_ISL_406717, EPI_ISL_406970, EPI_ISL_406973, EPI_ISL_407071, EPI_ISL_407073, EPI_ISL_407079, 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EPI_ISL_417762, EPI_ISL_417763, EPI_ISL_417764, EPI_ISL_417766, EPI_ISL_417774, EPI_ISL_417808, EPI_ISL_417809, EPI_ISL_417813, EPI_ISL_417814, EPI_ISL_417815, EPI_ISL_417816, EPI_ISL_417818, EPI_ISL_417819, EPI_ISL_417820, EPI_ISL_417821, EPI_ISL_417822, EPI_ISL_417823, EPI_ISL_417824, EPI_ISL_417825, EPI_ISL_417826, EPI_ISL_417827, EPI_ISL_417829, EPI_ISL_417830, EPI_ISL_417831, EPI_ISL_417832, EPI_ISL_417833, EPI_ISL_417834, EPI_ISL_417835, EPI_ISL_417836, EPI_ISL_417837, EPI_ISL_417838, EPI_ISL_417839, EPI_ISL_417864, EPI_ISL_417917, EPI_ISL_417918, EPI_ISL_417920, EPI_ISL_417925, EPI_ISL_417926, EPI_ISL_417931, EPI_ISL_417932, EPI_ISL_417933, EPI_ISL_417935, EPI_ISL_417936, EPI_ISL_417937, EPI_ISL_417938, EPI_ISL_417939, EPI_ISL_417940, EPI_ISL_417941, EPI_ISL_417942, EPI_ISL_417943, EPI_ISL_417944, EPI_ISL_417945, EPI_ISL_417946, EPI_ISL_417947, EPI_ISL_417948, EPI_ISL_417949, EPI_ISL_417950, EPI_ISL_417951, EPI_ISL_417953, EPI_ISL_417955, EPI_ISL_417958, EPI_ISL_417959, EPI_ISL_417960, EPI_ISL_417962, EPI_ISL_417964, EPI_ISL_417965, EPI_ISL_417966, EPI_ISL_417968, EPI_ISL_417970, EPI_ISL_417971, EPI_ISL_417973, EPI_ISL_417974, EPI_ISL_417976, EPI_ISL_417977, EPI_ISL_417982, EPI_ISL_417983, EPI_ISL_417984, EPI_ISL_417985, EPI_ISL_418009, EPI_ISL_418017, EPI_ISL_418018, EPI_ISL_418019, EPI_ISL_418020, EPI_ISL_418021, EPI_ISL_418022, EPI_ISL_418023, EPI_ISL_418024, EPI_ISL_418025, EPI_ISL_418026, EPI_ISL_418027, EPI_ISL_418029, EPI_ISL_418030, EPI_ISL_418031, EPI_ISL_418032, EPI_ISL_418033, EPI_ISL_418034, EPI_ISL_418037, EPI_ISL_418038, EPI_ISL_418040, EPI_ISL_418046, EPI_ISL_418047, EPI_ISL_418048, EPI_ISL_418050, EPI_ISL_418052, EPI_ISL_418053, EPI_ISL_418054, EPI_ISL_418063, EPI_ISL_418064, EPI_ISL_418067, EPI_ISL_418071, EPI_ISL_418072, EPI_ISL_418073, EPI_ISL_418074, EPI_ISL_418075, EPI_ISL_418076, EPI_ISL_418077, EPI_ISL_418078, EPI_ISL_418079, EPI_ISL_418080, EPI_ISL_418081, EPI_ISL_418082, EPI_ISL_418101, EPI_ISL_418102, EPI_ISL_418103, EPI_ISL_418104, EPI_ISL_418105, EPI_ISL_418126, EPI_ISL_418127, EPI_ISL_418128, EPI_ISL_418129, EPI_ISL_418130, EPI_ISL_418131, EPI_ISL_418132, EPI_ISL_418133, EPI_ISL_418134, EPI_ISL_418135, EPI_ISL_418136, EPI_ISL_418137, EPI_ISL_418138, EPI_ISL_418139, EPI_ISL_418140, EPI_ISL_418148, EPI_ISL_418149, EPI_ISL_418150, EPI_ISL_418151, EPI_ISL_418152, EPI_ISL_418153, EPI_ISL_418154, EPI_ISL_418155, EPI_ISL_418156, EPI_ISL_418157, EPI_ISL_418158, EPI_ISL_418159, EPI_ISL_418160, EPI_ISL_418161, EPI_ISL_418162, EPI_ISL_418163, EPI_ISL_418164, EPI_ISL_418165, EPI_ISL_418183, EPI_ISL_418184, EPI_ISL_418185, EPI_ISL_418186, EPI_ISL_418187, EPI_ISL_418188, EPI_ISL_418189, EPI_ISL_418190, EPI_ISL_418191, EPI_ISL_418192, EPI_ISL_418193, EPI_ISL_418194, EPI_ISL_418195, EPI_ISL_418197, EPI_ISL_418198, EPI_ISL_418199, EPI_ISL_418200, EPI_ISL_418201, EPI_ISL_418202, EPI_ISL_418203, EPI_ISL_418204, EPI_ISL_418231, EPI_ISL_418232, EPI_ISL_418233, EPI_ISL_418235, EPI_ISL_418236, EPI_ISL_418237, EPI_ISL_418238, EPI_ISL_418239, EPI_ISL_418240, EPI_ISL_418257, EPI_ISL_418260, EPI_ISL_418263, EPI_ISL_418264, EPI_ISL_418265 또는 EPI_ISL_616802 (hCoV-19/Denmark/DCGC-3024/2020).
예시적인 SARS-CoV-2 코로나바이러스는 또한 아래 목록 B에 제공된 GenBank Accession 번호에 의해 제공된 유전 정보에 의해 정의되거나 식별될 수 있다.
목록 B : 다양한 SARS-CoV-2 분리주의 GenBank 접근 번호:
NC_045512, LC528232, LC528233, LC529905, MN908947, MN938384, MN938385, MN938386, MN938387, MN938388, MN938389, MN938390, MN970003, MN970004, MN975262, MN975263, MN975264, MN975265, MN975266, MN975267, MN975268, MN985325, MN988668, MN988669, MN994467, MN994468, MN996527, MN996528, MN996529, MN996530, MN996531, MN997409, MT007544, MT012098, MT019529, MT019530, MT019531, MT019532, MT019533, MT020880, MT020881, MT027062, MT027063, MT027064, MT039873, MT039887, MT039888, MT039890, MT044257, MT044258, MT049951, MT050493, MT066156, MT066175, MT066176, MT072688, MT093571, MT093631, MT106052, MT106053, MT106054, MT118835, MT121215, MT123290, MT123291, MT123292, MT123293, MT126808, MT135041, MT135042, MT135043, MT135044, MT152824, MT159705, MT159706, MT159707, MT159708, MT159709, MT159710, MT159711, MT159712, MT159713, MT159714, MT159715, MT159716, MT159717, MT159718, MT159719, MT159720, MT159721, MT159722, MT163716, MT163717, MT163718, MT163719, MT163720, MT163721, MT184907, MT184908, MT184909, MT184910, MT184911, MT184912, MT184913, MT188339, MT188340, MT188341, MT192759, MT192765, MT192772 또는 MT192773.
SARS-CoV-2 코로나바이러스는 NCBI 분류 ID (NCBI:txid 또는 taxID): 2697049에 따른다.
본 발명의 맥락에서, SARS-CoV-2로부터 선택되거나 그로부터 유래된 임의의 단백질이 사용될 수 있고, 구성요소 A의 핵산 또는 코딩 서열에 의해 적합하게 코딩될 수 있다. 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질이 합성 조작된(synthetically engineered) 또는 인공 SARS-CoV-2 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 구성될 수 있다는 것은 본 발명의 범위에 추가로 속한다. "합성적으로 조작된" SARS-CoV-2 펩타이드 또는 단백질이라는 용어 또는 "인공 SARS-CoV-2 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 자연에서 발생하지 않는 단백질에 관한 것이다. 따라서, "인공 SARS-CoV-2 펩티드 또는 단백질" 또는 "합성적으로 조작된 SARS-CoV-2 펩티드 또는 단백질"은 예를 들어 천연 SARS-CoV-2 펩티드 또는 단백질과 비교하여 적어도 하나의 아미노산이 상이할 수 있고/있거나 추가적인 이종 펩티드 또는 단백질 요소(element)를 포함할 수 있고/있거나, N-말단 또는 C-말단으로 확장되거나 잘릴 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A (특히, 구성요소 A-1)의 상기 핵산은 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 그로부터 유래한 하나 이상의 항원성 펩티드 또는 단백질, 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 코딩하는 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 하나 이상의 항원성 펩티드 또는 단백질은 구조 단백질, 부속 단백질, 또는 레플리카제 단백질 또는 이들 중 임의의 것의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 그로부터 유래된 하나의 펩티드 또는 단백질을 포함한다.
적절하게는, 구조 단백질은 스파이크 단백질(S), 외피 단백질(E), 막 단백질(M) 또는 뉴클레오캡시드 단백질(N), 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 변이체로부터 선택되거나 유래된다.
약학적 조성물의 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 인코드된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S, S1, S2, 또는 S1 및 S2), 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
구성요소 A의 핵산에 의해 제공된 적절한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열은 표 1, 1행 내지 41행, A열 및 B열에 개시되어 있다. 또한, 상기 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 상기 적절한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열에 관한 추가적인 정보는 ST.25 서열목록의 식별자 <223>로 제공된다.
다음에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산에 의해 제공되는 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩티드 또는 단백질 서열이 상세히 기술된다.
SARS-CoV-2의 아미노산(aa) 잔기 및 스파이크 단백질(S)에서의 그들의 위치에 대한 언급이 있는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 임의의 번호는, 서열 번호: 1에 따른, SARS-CoV-2 코로나바이러스 분리주 EPI_ISL_402128 (BetaCoV_Wuhan_WIV05_2019_EPI_ISL_402128)의 대응 스파이크 단백질(S) 내 각 아미노산 잔기의 위치에 관한 것이다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질이 명명되는 경우, 스파이크 단백질(S)에 대한 각 아미노산 위치는 SARS-CoV-2 coronavirus isolate EPI_ISL_402128 (서열 번호: 1)의 스파이크 단백질 (S)에 대해 예시적으로 표시된다. 당업자는 물론 SARS-CoV-2 EPI_ISL_402128 (서열 번호: 1)에 대해 예시적으로 본 명세서에서 제공된 가르침을 다른 SARS-CoV-2 코로나바이러스 분리주, 예를 들어, EPI_ISL_404227, EPI_ISL_403963, EPI_ISL_403962, EPI_ISL_403931, EPI_ISL_403930, EPI_ISL_403929, EPI_ISL_402130, EPI_ISL_402129, EPI_ISL_402128, EPI_ISL_402126, EPI_ISL_402125, EPI_ISL_402124, EPI_ISL_402123, EPI_ISL_402120, EPI_ISL_402119 (추가적인 SARS-CoV-2 isolate들은 목록 A 및/또는 목록 B에 제공됨)를 포함하는, 하지만 이에 한정되지 않는 분리주들 내 다른 항원성 펩티드 또는 단백질에 물론 응용할 수 있다.
참조 단백질로서 서열 번호: 1을 사용하여 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (S)의 단백질 주석을 수행하였다. SARS-CoV-2 참조 단백질의 전장 S는 1273개의 아미노산 잔기를 가지며 다음 요소로 구성된다:
- 분비 신호 펩타이드: 아미노산 위치 aa 1 내지 aa 15 (서열 번호: 28 참조)
- 스파이크 단백질 단편 S1: 아미노산 위치 aa 1 내지 aa 681 (서열 번호: 27 참조)
- 수용체 결합 도메인 (RBD): 아미노산 위치 aa 319 내지 aa 541 (서열 번호: 13243 참조)
- 임계 중화 도메인(critical neutralisation domain) (CND): 아미노산 위치 aa 329 내지 aa 529 (서열 번호: 13310 참조)
- 스파이크 단백질 단편 S2: 아미노산 위치 aa 682 내지 aa 1273 (서열 번호: 30 참조)
- 막관통 도메인 (TM) 아미노산 위치 aa 1212 내지 aa 1273 (서열 번호: 49 참조)
- 막관통 도메인 (TMflex) 아미노산 위치 aa 1148 내지 aa 1273 (서열 번호: 13176 참조)
아미노산 수준의 변화는 서로 다른 SARS-CoV-2 분리주 (예시적인 SARS-CoV-2 분리주가 목록 A 및 목록 B에 제공됨)에서 유래된 스파이크 단백질 사이에서 자연적으로 발생한다는 점에 유의해야 한다. 본 발명의 맥락에서, 이러한 아미노산 변이는 본 명세서에 기재된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질로부터 유래된 각각의 항원성 펩티드 또는 단백질에 적용될 수 있다.
따라서, 본 명세서에 제공되고 본 발명의 맥락에서 적합한 항원으로 고려되는 각각의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 하기 아미노산 변이들/치환들(레퍼런스 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치) 중 하나 이상을 가질 수 있다:
D614G 또는 G614D; H49Y 또는 Y49H; V367F 또는 F367V; P1263L 또는 L1263P; V483A 또는 A483V; S939F 또는 F939S; S943P 또는 P943S; L5F 또는 F5L; L8V 또는 V8L; S940F 또는 F940S; C1254F 또는 F1254C; Q239K 또는 K239Q; M153T 또는 T153M; V1040F 또는 F1040V; A845S 또는 S845A; Y145H 또는 H145Y; A831V 또는 V831A; M1229I 또는 I1229M; H69 또는 H69del/aa 삭제됨; V70 또는 H70del/aa 삭제됨; H69_V70 또는 H69del 및 H70del/aa 삭제됨; A222V 또는 V222A; Y453F 또는 F453Y; S477N 또는 N477S; I692V 또는 V692I; R403K 또는 K403R; K417N 또는 N417K; N437S 또는 S437N; N439K 또는 K439N; V445A 또는 A445V; V445I 또는 I445V; V445F 또는 F445V; G446V 또는 V446G; G446S 또는 S446G; G446A 또는 A446G; L455F 또는 F455L; F456L 또는 L456F; K458N 또는 N458K; A475V 또는 V475A; G476S 또는 S476G; G476A 또는 A476G; S477I 또는 I477S; S477R 또는 R477S; S477G 또는 G477S; S477T 또는 T477S; T478I 또는 I478T; T478K 또는 K478T; T478R 또는 R478T; T478A 또는 A478T; E484Q 또는 Q484E; E484K 또는 K484E; E484A 또는 A484E; E484D 또는 D484E; G485R 또는 R485G; G485S 또는 S485G, F486L 또는 L486F; N487I 또는 I487N; Y489H 또는 H489Y; F490S 또는 S490F; F490L 또는 L490F; Q493L 또는 L493Q; Q493K 또는 K493Q; S494P 또는 P494S; S494L 또는 L494S; P499L 또는 L499P; T500I 또는 I500T; N501Y 또는 Y501N; N501T 또는 T501N; N501S 또는 S501N; V503F 또는 F503V; V503I 또는 I503V; G504D 또는 D504G; Y505W 또는 W505Y; Q506K 또는 K506Q; Q506H 또는 H506Q; H69 또는 H69del/aa 삭제됨; V70 또는 H70del/aa 삭제됨; H69_V70 또는 H69del 및 H70del/aa 삭제됨; A222V 또는 V222A; Y453F 또는 F453Y; S477N 또는 N477S; I692V 또는 V692I; R403K 또는 K403R; K417N 또는 N417K; N437S 또는 S437N; N439K 또는 K439N; V445A 또는 A445V; V445I 또는 I445V; V445F 또는 F445V; G446V 또는 V446G; G446S 또는 S446G; G446A 또는 A446G; L455F 또는 F455L; F456L 또는 L456F; K458N 또는 N458K; A475V 또는 V475A; G476S 또는 S476G; G476A 또는 A476G; S477I 또는 I477S; S477R 또는 R477S; S477G 또는 G477S; S477T 또는 T477S; T478I 또는 I478T; T478K 또는 K478T; T478R 또는 R478T; T478A 또는 A478T; E484Q 또는 Q484E; E484K 또는 K484E; E484A 또는 A484E; E484D 또는 D484E; G485R 또는 R485G; G485S 또는 S485G; F486L 또는 L486F; N487I 또는 I487N; Y489H 또는 H489Y; F490S 또는 S490F; F490L 또는 L490F; Q493L 또는 L493Q; Q493K 또는 K493Q; S494P 또는 P494S; S494L 또는 L494S; P499L 또는 L499P; T500I 또는 I500T; N501Y 또는 Y501N; N501T 또는 T501N; N501S 또는 S501N; V503F 또는 F503V; V503I 또는 I503V; G504D 또는 D504G; Y505W 또는 W505Y; Q506K 또는 K506Q; Q506H 또는 H506Q; Y144 또는 Y144del/aa del; A570D 또는 D570A; P681H 또는 H681P; T716I 또는 I716T; S982A 또는 A982S; D1118H 또는 H1118D; L18F 또는 F18L; D80A 또는 A80D; D215G 또는 G215D; L242 또는 L242del/aa 삭제됨; A243 또는 A243del/aa 삭제됨; L244 또는 L244del/aa 삭제됨; L242_A243_L244 또는 L242del 및 A243del 및 L244del/aa 삭제됨; R246I 또는 I246R; A701V 또는 V701A; T20N 또는 N20T; P26S 또는 S26P; D138Y 또는 Y138D; R190S 또는 S190R; H655Y 또는 Y655H; T1027I 또는 I1027T; S13I 또는 I13S; W152C 또는 C152W; L452R 또는 R452L; R346T 또는 T346R; P384L 또는 L384P; L452M 또는 M452L; F456A 또는 A456F; F456K 또는 K456F; F456V 또는 V456F; E484P 또는 P484E; K417T 또는 T417K; G447V 또는 V447G; L452Q 또는 Q452L; A475S 또는 S475A; F486I 또는 I486F; F490Y 또는 Y490F; Q493R 또는 R493Q; S494A 또는 A494S; P499H 또는 H499P; P499S 또는 S499P; G502V 또는 V502G; T748K 또는 K748T; A522S 또는 S522A; 및/또는 V1176F 또는 F1176V.
하기 아미노산 변이(레퍼런스 서열 번호: 1에 따른 아미노산 위치)가 특히 바람직하다:
· H69del, V70del, Y144del, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, 및 D1118H
· L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, E484K, N501Y, D614G, 및 A701V
· K417N, E484K, N501Y, 및 D614G
· E484K 및 D614G
· L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, 및 T1027I
· S13I, W152C, L452R, 및 D614G
· delH69, delV70, Y453F, D614G, I692V, 및 M1229I
· E484K, E484P, 또는 E484Q
· G446V
· G485R
바람직한 구현예에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 다음 아미노산 변이체(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)를 포함한다: L18F, D80A, D215G, delL242, delA243, delL244, R246I, K417N, E484K, N501Y, D614G, A701V.
적합한 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 하기 표에 따른 새로운 SARS-CoV-2 변이체로부터 선택되거나 유래될 수 있다:
Figure pct00001
특히 바람직한 구현예에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 B.1.351로부터 선택되거나 유래된다.
일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)의 단편은 구성요소 A의 핵산에 의해 코딩될 수 있으며, 여기서 상기 단편은 N-말단이 절단될 수 있고, 전체 길이의 SARS-CoV-2 코로나바이러스 참조 단백질(서열번호: 1)의 N-말단 아미노산 1 내지 최대 100개가 결여될 수 있고/있거나 여기에서 상기 단편은 C-말단이 절단될 수 있고, 전체 길이의 SARS-CoV-2 코로나바이러스 참조 단백질(서열번호: 1)의 C-말단 아미노산 (aa) 531 내지 최대 aa 1273이 결여될 수 있다. 이러한 "스파이크 단백질(S)의 단편"은 아미노산 치환(하기 기재된 바와 같음)을 추가로 포함할 수 있고, 적어도 하나의 이종 펩티드 또는 단백질 요소(하기 기재된 바와 같음)를 추가로 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)의 단편은 C-말단이 절단될 수 있으며, 이것에 의해 C-말단 막횡단 도메인이 결여될 수 있다(즉, aa 1212 내지 aa 1273 또는 aa 1148 내지 aa 1273 결핍).
몇몇 실시양태들에서, 구성요소 A의 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 막횡단 도메인 (TM) (아미노산 위치 aa 1212 내지 aa 1273)이 결여된다. 실시양태에서, 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 막횡단 도메인의 확장된 부분(TMflex)(아미노산 위치 aa 1148 내지 aa 1273)이 결여된다. 어떠한 이론에 얽매이지 않고, 본 명세서에 정의된 막횡단 도메인(TM 또는 TMflex)이 결여된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 SARS-CoV-2 백신에 적합할 수 있는데, 그 이유는 이러한 단백질이 가용성이고 세포막에 고정되지 않기 때문이다. 따라서 가용성 단백질은 피험자에게 투여 시 더 높은 농도로 생산(즉, 번역)되어 면역 반응이 개선될 수 있다.
어떠한 이론에 얽매이지 않고, RBD (aa 319 내지 aa 541) 및 CND (aa 29 내지 aa 529) 도메인은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (S)의 면역원성에 중요할 수 있다. 두 영역 모두 스파이크 단백질의 S1 단편에 위치한다. 따라서, 항원성 펩티드 또는 단백질이 스파이크 단백질의 S1 단편 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 것이 본 발명의 맥락에서 적합할 수 있다.
적합하게는, SARS-CoV-2의 S1 단편은 상기 정의된 바와 같은 적어도 RBD 및/또는 CND 도메인을 포함할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 수용체-결합 도메인(RBD; aa 319 내지 aa 541)을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 RBD는 스파이크 단백질 단편, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 절단된 수용체-결합 도메인(truncRBD; aa 334 내지 aa 528)을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 RBD는 스파이크 단백질 단편, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.
이러한 "스파이크 단백질(S)의 단편"(RBD; aa 319 내지 aa 541 또는 truncRBD, aa 334 내지 aa 528)은 추가로 아미노산 치환(아래에 설명됨)을 포함할 수 있고, 적어도 하나의 이종 펩티드 또는 단백질 요소(아래 설명 참조)를 포함할 수 있다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 스파이크 단백질 단편 S1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.
바람직한 실시양태에서, 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S1을 포함하고, 스파이크 단백질 단편 S2 (aa 682 내지 aa 1273)가 적어도 70%, 80%, 90%, 바람직하게는 100% 결여되어 있다. 이러한 실시양태는 SARS-CoV-2 S1 단편이 S1 및 S2를 포함하는 전장 단백질의 잠재적인 문제 없이 중화 에피토프를 포함하기 때문에 유리할 수 있다.
어떠한 이론에 얽매이지 않고, 구성요소 A의 항원성 펩티드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S1 및 (적어도 단편인) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S2를 포함하거나 이로 이루어지는 것이 적합할 수 있는데, 그 이유는 면역원성 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 형성이 촉진될 수 있기 때문이다.
따라서, 특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S1 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체, 및 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S2 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 코딩된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질은 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 이들 중 임의의 것의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.
"전장(full length) SARS-CoV-2 스파이크 단백질"이라는 용어는 본질적으로 전체 스파이크 단백질에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 바람직하게는 SARS-CoV-2 코로나바이러스로부터 유래된 스파이크 단백질인 것으로 이해되어야 한다. 따라서, "전장 스파이크 단백질"은 aa 1 내지 aa 1273(참조 단백질: 서열번호: 1)을 포함할 수 있다. 따라서, 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 전형적으로 분비 신호 펩티드, 스파이크 단백질 단편 S1, 스파이크 단백질 단편 S2, 수용체 결합 도메인(RBD), 및 임계 중화 도메인 CND, 및 막횡단 도메인을 포함할 수 있다. 특히, 특정 아미노산 치환(예를 들어, S 단백질의 융합전(pre-fusion) 안정화를 허용하기 위한) 또는 천연 발생 아미노산 결실을 포함하는 변이체도 "전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질"이라는 용어에 포함된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 핵산에 의해 제공되는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)은 융합전(pre-fusion) 형태로 항원을 안정화시키도록 설계되거나 적합화된다. 항체를 중화하기 위한 몇 가지 잠재적인 에피토프가 상기 융합전(pre-fusion) 단백질 형태에서만 접근할 수 있기 때문에 융합전 형태는 효율적인 SARS-CoV-2 백신의 맥락에서 특히 유리하다. 또한, 사전 융합 형태에서 단백질의 나머지는 예를 들어, 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 강화(ADE)와 같은 면역병리학적 효과를 피하기 위한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 코딩하는 핵산(또는 조성물 또는 백신)을 대상체에 투여하면 스파이크 단백질 중화 항체를 유도하고 질병-증진 항체를 유도하지 않는다. 특히, 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 암호화하는 핵산(또는 조성물 또는 백신)을 대상체에 투여하는 것은 예를 들어, 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 강화(ADE)와 같은 면역병리학적 효과를 유도하지 않는다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 핵산은 SARS-CoV-2 코로나바이러스로부터 선택되거나 그로부터 유래된 하나 이상의 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 하나 이상의 항원성 펩티드 또는 단백질은 스파이크 단백질(S)로부터 선택되거나 또는 이로부터 유래되며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)이다. 적합하게는, 상기 융합전 안정화된 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함한다.
SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 안정화는 위치 K986 및/또는 V987에서 적어도 하나의 아미노산을 융합전 형태(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치들)에서 스파이크 단백질을 안정화시키는 아미노산으로 치환함으로써 수득될 수 있다.
구현예에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 융합전 안정화 돌연변이는 K986 위치에 아미노산 치환을 포함하며, 상기 K986 아미노산은 A, I, L, M, F, V, G, 또는 P로부터 선택된 하나로 치환되며(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치), 바람직하게 상기 아미노산 K986은 P로 치환된다. 구현예에서, 융합전 안정화 돌연변이는 V987 위치에서 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 V987은 A, I, L, M, F, V, G, 또는 P로부터 선택된 하나로 치환되며(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치), 바람직하게 상기 아미노산 V987은 P로 치환된다.
적합하게, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 안정화는 K986 및 V987 위치에 두 개의 연속적인 아미노산을 융합전(perfusion) 형태 내 스파이크 단백질을 안정화시키는 아미노산으로 대체하여 얻을 수 있다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치).
바람직한 구현예에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 융합전 안정화 돌연변이는 K986 및 V987 위치에 아미노산 치환을 포함하며, 상기 K986 및/또는 V987 아미노산은 A, I, L, M, F, V, G, 또는 P로부터 선택된 하나로 치환된다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치).
바람직하게는, 융합전 형태의 안정화는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 잔기 K986 및 V987(참조 서열 번호: 1에 따른 아미노산 위치들)에서 2개의 연속적인 프롤린 치환을 도입함으로써 얻어진다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2의 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음의 아미노산 치환: K986P 및 V987P (아미노산 위치 참조 서열 번호: 1)을 포함한다.
따라서, 상기 제공된 임의의 NCBI 단백질 접근 번호, 또는 서열 번호: 1-9, 274-340, 22737, 22739, 22741, 22743, 22745, 22747, 22749, 22751, 22753, 22755, 22757, 22929-22946로부터 선택된 임의의 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화, 바람직하게는 아미노산 치환: K986P 및 V987P(참조 서열 번호: 1에 따른 아미노산 위치)를 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 내로 도입하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하나 이상의 융합전 안정화 돌연변이는 융합전 상태를 추가로 안정화시키는 공동 충전(cavity filling) 돌연변이를 포함하며, 여기서 상기 돌연변이/아미노산 치환은 T887W; A1020W; T887W 및 A1020W; 또는 P1069F(참조 서열 번호: 1에 따른 아미노산 위치)를 포함하는 리스트로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 다음 아미노산 치환 T887W; A1020W; T887W 및 A1020W; 또는 P1069F 중 적어도 하나는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 내 (K986P 및 V987P) 치환(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)과 조합될 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, SASRS-CoV-2 스파이크 단백질은 적어도 하나의 다음 아미노산 치환(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치) 중 적어도 하나를 포함한다:
· T887W; K986P 및 V987P
· A1020W; K986P 및 V987P
· T887W 및 A1020W; K986P 및 V987P
· P1069F; K986P 및 V987P
이에 따라, 상기 제공된 SARS-CoV-2의 임의의 NCBI 단백질 접근 번호, 또는 서열번호: 1-9, 274-340, 22737, 22739, 22741, 22743, 22745, 22747, 22749, 22751, 22753, 22755, 22757, 22929-22946로부터 선택된 임의의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화, 적절하게 T887W; A1020W; T887W 및 A1020W; 또는 P1069F로부터 선택된 아미노산 치환; 또는 (T887W; K986P 및 V987P); (A1020W; K986P 및 V987P); (T887W 및 A1020W; K986P 및 V987P); (P1069F; K986P 및 V987P) (참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)로부터 선택된 아미노산 치환을 유도하기 위해 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 다음의 아미노산 치환 F817P, A892P, A899P 및 A942P (참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치) 중 적어도 하나는 (K986P 및 V987P) 치환과 조합될 수 있다.
실시양태에서, SARS-CoV-2 코로나바이러스 스파이크 단백질은 하기 아미노산 치환 중 적어도 하나를 포함한다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치):
ㆍ F817P; K986P 및 V987P
ㆍ A892P; K986P 및 V987P
ㆍ A899P; K986P 및 V987P
ㆍ A942P; K986P 및 V987P
특히 바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 코로나바이러스 스파이크 단백질은 다음의 아미노산 치환(참조 서열 번호: 1에 따른 아미노산 위치)을 포함한다:
ㆍ F817P, A892P, A899P, A942P, K986P 및 V987P (S_stab_PP_hex)
따라서, 상기 제공된 임의의 NCBI 단백질 접근 번호, 또는 서열번호: 1-9, 274-340, 22737, 22739, 22741, 22743, 22745, 22747, 22749, 22751, 22753, 22755, 22757, 22929-22946로부터 선택된 임의의 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화, 적합하게는 F817P, A892P, A899P, A942P로부터 선택된 아미노산 치환; 또는 (F817P; K986P 및 V987P); (A892P; K986P 및 V987P); (A899P; K986P 및 V987P); (A942P; K986P 및 V987P); (F817P, A892P, A899P, A942P, K986P 및 V987P)로부터 선택된 아미노산 치환을 도입하기 위해 당업자에게 선택될 수 있다 (참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치).
바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 융합전 상태를 추가로 안정화시키는 돌연변이된 양성자화 부위를 포함하며, 여기서 상기 돌연변이/아미노산 치환은 H1048Q 및 H1064N; H1083N 및 H1101N; 또는 H1048Q 및 H1064N 및 H1083N 및 H1101N(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)로부터 선택된다.
실시양태에서, 하기 아미노산 치환 H1048Q 및 H1064N; H1083N 및 H1101N; 또는 H1048Q 및 H1064N 및 H1083N 및 H1101N 중 적어도 하나는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 내로 (K986P 및 V987P) 치환과 조합될 수 있다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치).
특히 바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 하기 아미노산 치환(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치) 중 적어도 하나를 포함한다:
ㆍ H1048Q 및 H1064N; K986P 및 V987P
ㆍ H1083N 및 H1101N; K986P 및 V987P
ㆍ H1048Q 및 H1064N 및 H1083N 및 H1101N; K986P 및 V987P
따라서, 상기 제공된 임의의 SARS-CoV-2 NCBI 단백질 접근 번호, 또는 서열 번호: 1-9, 274-340, 22737, 22739, 22741, 22743, 22745, 22747, 22749, 22751, 22753, 22755, 22757, 22929-22946로부터 선택된 임의의 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화, 적합하게는 H1048Q 및 H1064N; H1083N 및 H1101N; 또는 H1048Q 및 H1064N 및 H1083N 및 H1101N로부터 선택된 아미노산 치환; 또는 (H1048Q 및 H1064N; K986P 및 V987P); (H1083N 및 H1101N; K986P 및 V987P); (H1048Q 및 H1064N 및 H1083N 및 H1101N; K986P 및 V987P)로부터 선택된 아미노산 치환 (참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)을 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 내로 도입하기 위해 당업자가 선택할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 인공 분자내 이황화 결합을 포함한다. 이러한 인공 분자내 이황화 결합은 융합전 형태에서 SARS-CoV-2 S 단백질의 막 원위 부분(N-말단 영역 포함)을 추가로 안정화시키기 위해 도입될 수 있으며; 즉, 하나 이상의 융합전 특이(specification) 항체에 특이적으로 결합하고/하거나 융합전 형태에 존재하지만 SARS-CoV-2 S 단백질의 융합 후 형태에는 존재하지 않는 적합한 항원 부위를 제시하는 형태이다.
바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하나 이상의 융합전 안정화 돌연변이는 인공 분자내 이황화 결합을 포함하며, 바람직하게는 여기서 하나 이상의 인공 분자내 이황화 결합은 I712C, I714C, P715C, T874C, G889C, A890C, I909C, N914C, Q965C, F970C, A972C, R995C, G999C, S1003C, L1034C, V1040C, Y1047C, S1055C, P1069C, T1077C, Y1110C, 또는 S1123C (참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)를 포함하는 리스트로부터 선택된 적어도 2개의 아미노산 치환을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 인공 분자내 이황화 결합을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 인공 분자내 이황화 결합은 하기 아미노산 치환: I712C 및 T1077C; I714C 및 Y1110C; P715C 및 P1069C; G889C 및 L1034C; I909C 및 Y1047C; Q965C 및 S1003C; F970C 및 G999C; A972C 및 R995C; A890C 및 V1040C; T874C 및 S1055C, 또는 N914C 및 S1123C(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)의 적어도 하나를 포함한다.
추가 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 하나 이상의 융합전 안정화 돌연변이는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 상이한 인공 분자내 이황화 결합을 포함하고, 여기서 각각은 다음의 아미노산 치환: I712C 및 T1077C; I714C 및 Y1110C; P715C 및 P1069C; G889C 및 L1034C; I909C 및 Y1047C; Q965C 및 S1003C; F970C 및 G999C; A972C 및 R995C; A890C 및 V1040C; N914C 및 S1123C; T874C 및 S1055C, 또는 N914C 및 S1123C(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)으로 부터 선택된다.
실시양태에서, 다음의 아미노산 치환 I712C 및 T1077C; I714C 및 Y1110C; P715C 및 P1069C; G889C 및 L1034C; I909C 및 Y1047C; Q965C 및 S1003C; F970C 및 G999C; A972C 및 R995C; A890C 및 V1040C; T874C 및 S1055C, 또는 N914C 및 S1123C 중 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 그 이상은 (K986P 및 V987P) 치환과 결합될 수 있다. 예를 들어, 융합전 안정화된 SARS-CoV-2 S 단백질은 2개의 상이한 인공 분자내 이황화 결합, 예를 들어, I712C 및 T1077C; P715C 및 P1069C; 및 추가로 K986P 및 V987P 치환 등(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)을 포함할 수 있다.
특히 바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 하기 아미노산 치환(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치) 중 적어도 하나를 포함한다:
ㆍ I712C 및 T1077C; K986P 및 V987P
ㆍ I714C 및 Y1110C; K986P 및 V987P
ㆍ P715C 및 P1069C; K986P 및 V987P
ㆍ G889C 및 L1034C; K986P 및 V987P
ㆍ I909C 및 Y1047C; K986P 및 V987P
ㆍ Q965C 및 S1003C; K986P 및 V987P
ㆍ F970C 및 G999C; K986P 및 V987P
ㆍ A972C 및 R995C; K986P 및 V987P
ㆍ A890C 및 V1040C; K986P 및 V987P
ㆍ T874C 및 S1055C; K986P 및 V987P
ㆍ N914C 및 S1123C; K986P 및 V987P
따라서, 상기 제공된 임의의 SARS-CoV-2 NCBI 단백질 접근 번호, 또는 서열 번호: 1-9, 274-340, 22737, 22739, 22741, 22743, 22745, 22747, 22749, 22751, 22753, 22755, 22757, 22929-22946로부터 선택된 임의의 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화, 적합하게는 I712C 및 T1077C; I714C 및 Y1110C; P715C 및 P1069C; G889C 및 L1034C; I909C 및 Y1047C; Q965C 및 S1003C; F970C 및 G999C; A972C 및 R995C; A890C 및 V1040C; T874C 및 S1055C, 또는 N914C 및 S1123C로부터 선택된 아미노산 치환; 또는 (I712C; T1077C; K986P; V987P) 또는 (I714C; Y1110C; K986P; V987P) 또는 (P715C; P1069C; K986P; V987P) 또는 (G889C; L1034C; K986P; V987P) 또는 (I909C; Y1047C; K986P; V987P) 또는 (Q965C; S1003C; K986P; V987P) 또는 (F970C; G999C; K986P; V987P) 또는 (A972C; R995C; K986P; V987P) 또는 (A890C 및 V1040C; K986P 및 V987P) 또는 (T874C 및 S1055C; K986P 및 V987P) 또는 (N914C 및 S1123C; K986P 및 V987P)로부터 선택되는 아미노산 치환 (참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)을 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 내로 도입하기 위해 당업자가 선택할 수 있다.
본 발명의 맥락에서 임의의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 융합전 형태에서 스파이크 단백질을 안정화시키기 위해 상기 기재된 바와 같이 (참조 단백질 서열번호: 1에 대해 예시됨) 돌연변이되거나 변형(modified)될 수 있음이 강조되어야 한다.
다양한 바람직한 구현예에 따라, 구성요소 A의 핵산은 본원에 정의된 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 및 추가적으로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소, 바람직하게 신호 펩타이드, 링커, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 삼량체화 요소, 막관통 요소, 및/또는 VLP-형성 서열로부터 선택되거나 유래된 것을 인코딩한다.
적합하게는, 상기 적어도 하나의 이종 펩티드 또는 단백질 요소는 SARS-CoV-2의 코딩된 항원성 펩티드 또는 단백질의 분비를 촉진하거나 개선할 수 있거나 (예를 들어, 분비 신호 서열을 통해), 원형질막에서 본 발명의 코딩된 항원성 펩티드 또는 단백질의 고정(anchoring)을 촉진하거나 개선하거나 (예를 들어, 막횡단 요소를 통해), 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선하거나 (예를 들어, 다량체화 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해), 또는 바이러스-유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선한다. 또한, 구성요소 A의 핵산은 펩티드 링커 요소, 자가-절단 펩티드, 면역학적 어쥬번트 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 코딩할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 명세서에서 정의된 바와 같이 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 이로부터 유래된 하나 이상의 항원성 단백질을 코딩하는 구성요소 A의 핵산은 추가로 하나 이상의 이종 삼량체화 요소, 항원 클러스터링 요소, 또는 VLP 형성 서열을 코딩한다.
바람직한 구현예에서, 항원 클러스터링 요소는 페리틴 요소, 또는 루마진 신타제 요소, B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg), 또는 캡슐린으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 융합전 형태로, 안정적으로 클러스터된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 발현하면 코딩된 SARS-CoV-2 펩티드/단백질에 대한 중화 활성의 크기와 폭이 증가할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 루마진 합성효소는 SARS-CoV-2 단백질의 항원 클러스터링을 촉진하는 데 사용되며 따라서 인코딩된 SARS-CoV-2 항원, 바람직하게는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진하거나 증진시킬 수 있다. 바람직한 구현예에서, 페리틴은 SARS-CoV-2 단백질의 항원 클러스터링을 촉진하는 데 사용되며 따라서 인코드된 SARS-CoV-2 항원, 바람직하게는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다. 바람직한 구현예에서, HBsAg는 SARS-CoV-2 단백질의 항원 클러스터링을 촉진하는 데 사용되며 따라서 인코드된 SARS-CoV-2 항원, 바람직하게는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 인캡슐린은 SARS-CoV-2 단백질의 항원 클러스터링을 촉진하는 데 사용되며 따라서 인코드된 SARS-CoV-2 항원, 바람직하게는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다.
구성요소 A의 코딩 서열이 이종 항원 클러스터링 요소를 추가로 코딩하는 일부 실시양태에서, 항원-클러스터링 요소 및 SARS-CoV-2로부터 유래된 항원성 펩티드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적합하게는, 상기 항원성 펩티드 또는 단백질, 바람직하게는 스파이크 단백질은 C-말단 막횡단 도메인(TM)이 결여되어 있거나(aa 1212 내지 aa 1273이 없음) C-말단 막횡단 도메인(TMflex)의 일부가 결여, 예를 들어, aa 1148에서 aa 1273 결여되어 있다.
따라서, 서열번호: 1-26, 274-1278, 13521-13587, 22732, 22737-22758, 22929-22964 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 임의의 아미노산 서열은 aa 1212 내지 aa1273 위치에서 내인성 막관통 도메인??을 제거하기 위해 변형될 수 있으며 이에 따라 본 발명의 맥락에서 "C-말단 절단된" SARS-CoV-2 단백질로 사용될 수 있다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치). 게다가, 서열번호: 1-26, 274-1278, 13521-13587, 22732, 22737-22758, 22929-22964 중 임의의 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 임의의 아미노산 서열은 aa 1148 내지 aa 1273 위치에 부분 내인성 막관통 도메인(TMflex)을 제거하기 위해 변형될 수 있으며 이에 따라 본 발명의 맥락에서 "C-말단 절단된" SARS-CoV-2 단백질로 사용될 수 있다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치). C-말단 막관통 도메인(TM 또는 TMflex)가 부족한 적합한 스파이크 단백질은 서열번호: 31-39, 1614-3623, 13377-13510로부터 선택될 수 있다.
다른 구현예에서, 구성요소 A의 코딩 서열이 상기 정의된 이종 항원 클러스터링 요소를 인코딩하는 경우, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S1 (S2 및/또는 TM 및/또는 TMflex가 부족)로부터 선택되거나 유도된 항원 클러스터링 요소 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는데 특히 바람직하고 적합하다. 추가로, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위한 링커 요소를 사용하는데 적합할 수 있다(예를 들어 서열번호: 115, 13148, 13152에 따른 링커).
바람직한 구현예에서, 삼량체화 요소는 폴드온 요소로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 폴드온 요소는 피브리틴 폴드온 요소이다. 안정한 삼량체 스파이크 단백질을 발현하는 것, 바람직하게 이의 융합전(perfusion) 형태에서 발현하는 것은 SARS-CoV-2에 대한 중화 활성의 크기 및 폭을 증가시킬 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 피브린 폴드온 요소는 항원 삼량체화를 촉진하는데 사용되며, 이에 따라 인코딩된 SARS-CoV-2항원, 바람직하게 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다. 바람직하게 폴드온 요소는 박테리오파지, 바람직하게 박테리오파지 T4, 가장 바람직하게 박테리오파지 T4의 피브리틴이거나 이로부터 유래된다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열은 이종 삼량체화 요소를 추가적으로 인코딩하는 구현예에서, SARS-CoV-2로부터 유래된 삼량체화 요소 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적합하게, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 SARS-CoV-2로부터 유래된 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인이 부족(aa 1212 내지 aa 1273이 부족), 또는 C-말단 막관통 도메인의 일부(TMflex)가 부족, 예를 들어 aa 1148 내지 aa 1273이 부족하다.
다른 실시양태에서, 구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 추가적으로 상기 정의된 이종 삼량체화 요소를 인코딩하는 경우, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S1(S2 및/또는 TM 및/또는 TMflex가 부족)으로부터 유래된 삼량체화 요소 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 추가로, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위한 링커 요소(예를 들어 서열번호: 115, 13148, 13152에 따른 링커)를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
바람직한 구현예에서, VLP를 형성하는 서열이 선택되고 본원에 정의된 SARS-CoV-2 항원에 융합될 수 있다. VLP 형태 내에 안정하게 클러스터화된 SARS-CoV-2스파이크 단백질을 발현하는 것은 SARS-CoV-2에 대한 중화 활성의 크기 및 폭을 증가시킬 수 있다. VLP는 감염성 바이러스와 구조적으로 유사하며, 강력한 세포성 및 체액성 면역 반응을 유도할 수 있다.
적합한 VLP 형성 서열은 B형 간염 바이러스 코어 항원, HIV-1 Gag 단백질, 또는 우드척 간염 코어 항원 요소(WhcAg)로부터 유래된 요소로부터 선택될 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 VLP-형성 서열은 우드척 간염 코어 요소(WhcAg)이다. WhcAg 요소는 VLP 형성을 촉진하는데 사용되며 그에 따라 인코드된 코로나바이러스 항원, 바람직하게 스파이크 단백질의 면역 반응을 촉진할 수 있다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 이종 VLP 형성 서열을 인코딩하는 구현예에서, SARS-CoV-2로부터 유래된 VLP 형성 서열 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적합하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 SARS-CoV-2로부터 유래된 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인이 부족(aa 1212 내지 aa 1273 부족), 또는 C-말단 막관통 도메인의 일부가 부족(TMflex), 예를 들어 aa 1148 내지 aa 1273이 부족하다.
따라서, 서열번호: 1-26, 274-1278, 13521-13587, 22732, 22737-22758, 22929-22964 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 임의의 아미노산 서열은 aa 1212 내지 aa 1273 위치에 내인성 막관통 요소가 부족하게 변형될 수 있으며 이에 따라 본 발명의 맥락에서 "C-말단 절단된" SARS-CoV-2 S 단백질로 사용될 수 있다. 추가로, 서열번호: 1-26, 274-1278, 13521-13587, 22732, 22737-22758, 22929-22964 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 임의의 아미노산 서열은 aa 1148 내지 aa 1273 위치에 내인성 막관통 요소의 일부가 부족(TMflex)하게 변형될 수 있으며 이에 따라 본 발명의 맥락에서 "C-말단 절단된" SARS-CoV-2 S 단백질로 사용될 수 있다(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치). C-말단 막관통 도메인이 부족한(TM 또는 TMflex) 적합한 SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 서열번호: 31-39, 1614-3623, 13377-13510으로부터 선택될 수 있다.
핵산의 코딩 서열이 상기 정의된 바와 같은 이종 VLP-형성 서열을 추가로 코딩하는 다른 실시양태에서, VLP-형성 서열 및 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 단편 S1(S2 및/또는 TM 및/또는 TMflex 결여)로부터 유래된 항원성 펩티드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 추가로, 항원성 펩티드 또는 단백질로부터 이종 항원-클러스터링 요소를 분리하기 위한 링커 요소(예를 들어, 서열 번호: 115, 13148, 13152에 따른 링커)를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
구현예에서, 항원성 펩티드 또는 단백질은 상기 정의된 바와 같은 이종 신호 펩타이드를 포함한다. 이종 신호 펩타이드는 인코드된 SARS-CoV-2 항원의 분비를 개선하는 데 사용될 수 있다.
구성요소 A의 핵산의 코딩 서열이 이종 분비 신호 펩티드를 추가로 코딩하는 실시양태에서, 이종 분비 신호 펩티드 및 SARS-CoV-2로부터 유래된 항원성 펩티드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적합하게는, 상기 항원성 펩티드 또는 단백질, 바람직하게는 SARS-CoV-2로부터 유래된 스파이크 단백질은 N-말단 내인성 분비 신호 펩티드가 결여되어 있다(aa 1 내지 aa 15 결여). 따라서, 서열 번호: 1-26, 274-1278, 13521-13587, 22732, 22737-22758, 또는 22929-22964의 어느 것과 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열은 위치 aa 1 내지 aa 15에서 내인성 분비 신호 펩티드가 결여되도록 변형되어 본 발명의 맥락에서 "N-말단 절단된" SARS-CoV-2 단백질로서 사용될 수 있다.
다음 목록 1에는 위에서 정의한 적절한 SARS-CoV-2 코로나바이러스 항원성 펩티드 및 단백질이 더 자세히 지정되어 있다(예: 명명법, 단백질 요소 등).
목록 1 : 예시적인 적합한 SARS-CoV-2 항원 디자인:
ㆍ aa 1 내지 aa 1273을 포함하는 전장 스파이크 단백질(S);
o 예를 들어 서열 번호: 1, 274를 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P 치환을 포함하는 안정화된 S 단백질(S_stab_PP);
o 예를 들어 서열 번호: 10, 341 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P 치환을 포함하는 안정화된 S 단백질(S_stab_PP);
o 예를 들어 서열 번호: 22961 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P 치환을 포함하는 안정화된 S 단백질(S_stab_PP);
o 예를 들어 서열 번호: 22960 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P, F817P, A892P, A899P, A942P 프롤린 치환을 포함하는 안정화된 S 단백질; S_stab_PP_hex
o 예를 들어 서열 번호: 22732 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P 치환 및 공동 충전 돌연변이(T887W, A1020W)를 포함하는 안정화된 S 단백질; S_stab_PP_cav
o 예를 들어 서열 번호: 408을 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P 치환 및 공동 충전 돌연변이(P1069F)를 포함하는 안정화된 S 단백질; S_stab_PP_cav
o 예를 들어 서열 번호: 475를 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 K986P, V987P 치환 및 공동 충전 돌연변이(H1048Q, H1064N, H1083N, H1101N)를 포함하는 안정화된 S 단백질; S_stab_PP_prot
o 예를 들어 서열 번호: 542를 참조.
ㆍ aa1-aa1273 및 인공 이황화 결합(S_stab_disul) I712C, T1077C를 포함하는 안정화된 S 단백질;
o 예를 들어 서열 번호: 19, 609 참조.
ㆍ aa1-aa1211을 포함하는 막횡단 도메인이 없는 S (S_woTM);
o 예를 들어 서열 번호: 31, 1614 참조.
ㆍ aa1-aa1147을 포함하는 막횡단 도메인 플렉스가 없는 S (S_woTMflex);
o 예를 들어 서열 번호: 2619를 참조.
ㆍ K986P, V987P 치환을 포함하는 S_woTM (S_stab_PP_woTM)
o 예를 들어 서열 번호: 40, 1681 참조.
ㆍ K986P, V987P 치환을 포함하는 S_woTMflex (S_stab_PP_woTMflex)
o 예를 들어 서열 번호: 2686을 참조.
ㆍ aa 1 내지 aa 681을 포함하는 스파이크 단백질 단편 S1 (S1);
o 예를 들어 서열 번호: 27, 1279 참조.
ㆍ 루마진 합성효소를 포함하는 S_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 58, 3624를 참조.
ㆍ 루마진 합성효소를 포함하는 S_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 7644를 참조.
ㆍ 루마진 합성효소를 포함하는 S_stab_PP_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 85, 3691 참조.
ㆍ 루마진 합성효소를 포함하는 S_stab_PP_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 7711 참조.
ㆍ 페리틴 요소를 포함하는 S_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 67, 4629 참조.
ㆍ 페리틴 요소를 포함하는 S_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 8649를 참조.
ㆍ 페리틴 요소를 포함하는 S_stab_PP_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 94, 4696 참조.
ㆍ 페리틴 요소를 포함하는 S_stab_PP_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 8716을 참조.
ㆍ 폴돈(foldon) 요소를 포함하는 S_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 76, 5634 참조.
ㆍ 폴돈 요소를 포함하는 S_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 9654를 참조.
ㆍ 폴돈 요소를 포함하는 S_stab_PP_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 103, 5701 참조.
ㆍ 폴돈 요소를 포함하는 S_stab_PP_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 9721 참조.
ㆍ VLP 서열(WhcAg)를 포함하는 S_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 6639를 참조.
ㆍ VLP 시퀀스(WhcAg)를 포함하는 S_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호 10659를 참조.
ㆍ VLP 시퀀스(WhcAg)를 포함하는 S_stab_PP_woTM;
o 예를 들어 서열 번호: 6706을 참조.
ㆍ VLP 시퀀스(WhcAg)를 포함하는 S_stab_PP_woTMflex;
o 예를 들어 서열 번호: 10726을 참조.
ㆍ 폴돈 요소를 포함하는 truncRBD:
o 예를 들어 서열 번호: 22734를 참조.
ㆍ 루마진 합성효소(C-말단)를 포함하는 truncRBD
o 예를 들어 서열 번호: 22735를 참조.
ㆍ 루마진 합성효소(N-말단)를 포함하는 truncRBD
o 예를 들어 서열 번호: 22736 참조
ㆍ 페리틴 요소를 포함하는 truncRBD:
o 예를 들어 서열 번호: 22733 참조.
목록 1에 제공된 아미노산 위치는 참조 서열 번호 1에 따른 것이다.
상기 정의된 바와 같은 SARS-CoV-2 코로나바이러스로부터 선택되거나 그로부터 유래된 바람직한 항원성 펩티드 또는 단백질은 표 1(1 내지 41행)에 제공된다. 여기에서 각 행 1 내지 41은 적절한 SARS-CoV-2 구조에 해당한다. 표 1의 A열은 적합한 SARS-CoV-2 항원 구조(construct)에 대한 간략한 설명을 제공한다. 표 1의 B열은 각각의 SARS-CoV-2 항원 구조의 단백질(아미노산) 서열 번호를 제공한다. 표 1의 열 C는 상응하는 야생형 또는 참조(reference) 핵산 코딩 서열의 서열 번호를 제공한다. 표 1의 열 D는 상응하는 G/C 최적화 핵산 코딩 서열(opt1, gc)의 서열 번호를 제공한다. 표 1의 열 E는 상응하는 인간 코돈 사용(usage)에 적합한 핵산 코딩 서열(opt 3, 인간)의 서열 번호를 제공한다. 표 1의 열 F는 상응하는 G/C 함량 변형 핵산 코딩 서열(opt10, gc mod)의 서열 번호를 제공한다.
특히, 본 발명의 설명은 본 출원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된 정보를 명시적으로 포함한다. 표 1의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조(construct), 예를 들어, 표 1의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열은 표 3A 및 B에 제공되어 있다.
표 1: 바람직한 SARS-CoV-2 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
행 A B C D E F
1 전장 스파이크 단백질; S 1-9, 274-340, 22737, 22739, 22741, 22743, 22745, 22747, 22749, 22751, 22753, 22755, 22757, 22929-22946 116-131, 11664-11730 136, 11731-11797, 22764, 22766, 22768, 22770, 22772, 22774, 22776, 22778, 22780, 22782, 22784, 22969-23040 11967-12033 12034, 23041-23076
2 안정화된 스파이크 단백질; S_stab_PP 10-18, 341-407, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22947-22964 　 137, 11798, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23077-23148 142 146, 12035, 23149-23184
3 안정화된 스파이크 단백질; S_stab_PP_cav 408-541 　 11799, 11800 　 12036, 12037
4 안정화된 스파이크 단백질; S_stab_PP_prot 542-608 　 11801 　 12038
5 안정화된 스파이크 단백질; S_stab_disul 19-26, 609-1278, 13521-13587 　 11802-11811, 14124 　 12039-12048, 14133
6 스파이크 단백질 단편 S1 27, 1279-1345 132 138, 11812 143 147, 12049
7 스파이크 단백질 단편 S2 30, 1346-1412 135 141, 11813 　 12050
8 스파이크 단백질의 신호 펩타이드; SP 28, 1413-1479 133 139, 11814 144 12051
9 신호 펩타이드가 없는 S1; S1_woSP 29, 1480-1546 134 140, 11815 145 12052
10 스파이크 단백질의 막관통 도메인; TM/TMflex 49-57, 1547-1613, 13176-13242 　 11816, 13511 　 12053, 13516
11 막관통 도메인이 없는 S; S_woTM/woTMflex 31-39, 1614-1680, 2619-2685 　 11817, 11832 　 12054, 12069
12 막관통 도메인이 없는 안정화된 S; S_stab_PP_woTM/woTMflex 40-48, 1681-1747, 2686-2752 　 11818, 11833 　 12055, 12070
13 막관통 도메인이 없는 안정화된 S; S_stab_PP_cav_woTM/ woTMflex 1748-1881, 2753-2886 　 11819, 11820, 11834, 11835 　 12056, 12057, 12071, 12072
14 막관통 도메인이 없는 안정화된 S; S_stab_PP_prot_woTM/ woTMflex 1882-1948, 2887-2953 　 11821, 11836 　 12058, 12073
15 막관통 도메인이 없는 안정화된 S; S_stab_disul_woTM/ woTMflex 1949-2618, 2954-3623, 13377-13510 　 11822-11831, 11837-11846, 13514, 13515 　 12059-12068, 12074-12083, 13519, 13520
16 루마진 합성효소를 포함하는 S_woTM/woTMflex 58-66, 3624-3690, 7644-7710 　 11847, 11907 　 12084, 12144
17 루마진 합성효소를 포함하는 S_stab_PP_woTM/woTMflex 85-93, 3691-3757, 7711-7777 　 11848, 11908 　 12085, 12145
18 루마진 합성효소를 포함하는 S_stab_PP_cav_woTM/ woTMflex 3758-3891, 7778-7911 　 11849, 11850, 11909, 11910 　 12086, 12087, 12146, 12147
19 루마진 합성효소를 포함하는 S_stab_PP_prot_woTM/ woTMflex 3892-3958, 7912-7978 　 11851, 11911 　 12088, 12148
20 루마진 합성효소를 포함하는 S_stab_disul_woTM/ woTMflex 3959-4628, 7979-8648, 13588-13654, 13856-13922 　 11852-11861, 11912-11921, 14125, 14129 　 12089-12098, 12149-12158, 14134, 14138
21 페리틴을 포함하는 S_woTM/woTMflex 67-75, 4629-4695, 8649-8715 　 11862, 11922 　 12099, 12159
22 페리틴을 포함하는 S_stab_PP_woTM/woTMflex 94-102, 4696-4762, 8716-8782 　 11863, 11923 　 12100, 12160
23 페리틴을 포함하는 S_stab_PP_cav_woTM/ woTMflex 4763-4896, 8783-8916 　 11864, 11865, 11924, 11925 　 12101, 12102, 12161, 12162
24 페리틴을 포함하는 S_stab_PP_prot_woTM/ woTMflex 4897-4963, 8917-8983 　 11866, 11926 　 12103, 12163
25 페리틴을 포함하는 S_stab_disul_woTM/ woTMflex 4964-5633, 8984-9653, 13655-13721, 13923-13989 　 11867-11876, 11927-11936, 14126, 14130 　 12104-12113, 12164-12173, 14135, 14139
26 폴드온을 포함하는 S_woTM/woTMflex 76-84, 5634-5700, 9654-9720 　 11877, 11937 　 12114, 12174
27 폴드온을 포함하는 S_stab_PP_woTM/ woTMflex 103-111, 5701-5767, 9721-9787 　 11878, 11938 　 12115, 12175
28 폴드온을 포함하는 S_stab_PP_cav_woTM/ woTMflex 5768-5901, 9788-9921 　 11879, 11880, 11939, 11940 　 12116, 12117, 12176, 12177
29 폴드온을 포함하는 S_stab_PP_prot_woTM/ woTMflex 5902-5968, 9922-9988 　 11881, 11941 　 12118, 12178
30 폴드온을 포함하는 S_stab_disul_woTM/ woTMflex 5969-6638, 9989-10658, 13722-13788, 13990-14056 　 11882-11891, 11942-11951, 14127, 14131 　 12119-12128, 12179-12188, 14136, 14140
31 WhcAg (VLP)를 포함하는 S_woTM/woTMflex 6639-6705, 10659-10725 　 11892, 11952 　 12129, 12189
32 WhcAg (VLP)를 포함하는 S_stab_PP_woTM/woTMflex 6706-6772, 10726-10792 　 11893, 11953 　 12130, 12190
33 WhcAg (VLP)를 포함하는 S_stab_PP_cav_woTM/ woTMflex 6773-6906, 10793-10926 　 11894, 11895, 11954, 11955 　 12131, 12132, 12191, 12192
34 WhcAg (VLP)를 포함하는 S_stab_PP_prot_woTM/ woTMflex 6907-6973, 10927-10993 　 11896, 11956 　 12133, 12193
35 WhcAg (VLP)를 포함하는 S_stab_disul_woTM/ woTMflex 6974-7643, 10994-11663, 13789-13855, 14057-14123 　 11897-11906, 11957-11966, 14128, 14132 　 12134-12143, 12194-12203, 14137, 14141
36 수용체 결합 도메인; RBD 13243-13309, 22917, 22923 　 13512, 22914, 22918, 22919, 22924, 22925 13517, 22915, 22916, 22920-22922, 22926-22928
37 임계 중화 도메인(Critical neutralisation domain); CND 13310-13376 　 13513 13518
38 안정화된 스파이크 단백질; S_stab_PP_hex 22732 22759
39 루마진 합성효소를 포함하는 RBD 22735, 22736 22762, 22763, 22967, 22968
40 페리틴을 포함하는 RBD 22733 22760
41 폴드온을 포함하는 RBD 22734, 26938, 26939 22761, 22966, 26940, 26941
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 1-111, 274-11663, 13176-13510, 13521-14123, 22732-22758, 22917, 22923, 22929-22964, 26938, 26939 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가적인 정보는 또한 표 1(A 및 B열의 1행 내지 41행 참조), 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질(융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab))은 서열번호: 10-26, 40-48, 85-111, 341-1278, 1681-2618, 2686-3623, 3691-4628, 4696-5633, 5701-6638, 6706-7643, 7711-8648, 8716-9653, 9721-10658, 10726-11663, 13377-13510, 13521-14123, 22732, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22947-22964 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가적인 정보는 또한 표 1(A 및 B열의 2 내지 5, 12-15, 17-20, 22-25, 27-30, 및 32-35행 참조), 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 10, 21, 22, 25, 27, 274, 341, 408, 475, 542, 743, 810, 1011, 1145, 1212, 1279, 8716, 10726, 22732-22758, 22929-22942, 22947-22964 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 10-18, 341-407, 22947-22964 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(A 및 B열의 2행 참조), 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가로, 보다 바람직한 구현예에서, 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)은 서열번호: 22960, 22961, 22963 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)은 서열번호: 22961 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다.
더욱 더 바람직한 구현예에서, SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 10 또는 341 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 적어도 하나를 포함하거나 구성된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 상기 정의된 바와 같은 SARS-CoV-2로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 그 맥락에서, 본원에 정의된 적어도 하나의 SARS-CoV-2 항원 단백질을 인코딩하는 임의의 코딩 서열, 또는 이의 단편 및 변이체는 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있으며 따라서 구성요소 A의 핵산에 포함될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 본원에 정의된 SARS-CoV-2 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 서열번호: 1-111, 274-11663, 13176-13510, 13521-14123, 22732-22758, 22917, 22923, 22929-22964, 26938, 26939 또는 이의 변이체의 단편 중 어느 하나를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 구성된다. 핵산 수준에서, 서열번호: 1-111, 274-11663, 13176-13510, 13521-14123, 22732-22758, 22917, 22923, 22929-22964, 26938, 26939 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코드하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열) 또는 이의 단편 또는 변이체가 선택될 수 있는 것으로 이해되어야 하며, 따라서 본 발명의 적합한 코딩 서열로서 이해될 수 있다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(A 및 B열의 1행 내지 41행 참조) 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 116-132, 134-138, 140-143, 145-147, 148-175, 11664-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-13147, 13514, 13515, 13519, 13520, 14124-14177, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23184, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열의 적어도 하나를 포함하는 코딩 서열을 포함한다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(C 내지 F열의 1행 내지 7행, 9행, 11 내지 41행 참조) 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 코돈 변형된 코딩 서열이며, 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코드된 아미노산 서열, 즉 SARS-CoV-2 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코드된 아미노산 서열에 비해 변형되지 않는다.
"참조 코딩 서열"이라는 용어는 변형되거나 및/또는 최적화된 원래 서열인 코딩 서열에 관한 것이다.
특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 A의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이며, 상기 코돈 변형된 코딩 서열은 선택된 G/C 최적화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용에 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 변형된 코딩 서열이다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 136-138, 140-143, 145--175, 11731-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-13147, 14142-14177, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23184, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로 이루어진 군에서 선택된 코돈 변형된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 코돈 변형된 핵산 서열을 포함하거나 구성되는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 각각의 이들 적합한 핵산 서열 인코딩에 관한 추가 정보는 또한 서열 목록, 특히 식별자 <223> 하에 제공된 세부사항으로부터 유래될 수 있다. 첫번째 측면의 적합한 코딩 서열은 표 1에 제공된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(D~F열의 1~7행, 9행, 11~41행 참조), 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 136-138, 140, 141, 148, 149, 152, 155, 156, 159, 162, 163, 166, 169, 170, 173, 11731-11813, 11815, 11817-11966, 12271-12472, 12743-12944, 13514, 13515, 14124-14132, 14142-14150, 14160-14168, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23040, 23077-23148, 23189-23260, 23297-23368, 23409-23480, 23517-23588, 23629-23700, 23737-23808, 23849-23920, 23957-24028, 24069-24140, 24177-24248, 24289-24360, 24397-24468, 24509-24580, 24617-24688, 24729-24800, 24837-24908, 24949-25020, 25057-25128, 25169-25240, 25277-25348, 25389-25460, 25497-25568, 25609-25680, 25717-25788, 25829-25900, 25937-26008, 26049-26120, 26157-26228, 26269-26340, 26377-26448, 26489-26560, 26597-26668, 26709-26780, 26817-26888, 26925-26937로 이루어진 군으로부터 샌택된 코돈 변형된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 최적화된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성되는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 각각의 이들 적합한 핵산 서열 인코딩에 관한 추가 정보는 또한 서열 목록, 특히 식별자 <223> 하에 제공된 세부사항으로부터 유래될 수 있다. 첫번째 측면의 적합한 코딩 서열은 표 1에 제공된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(D열의 1~7행, 9행, 11~41행 참조), 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 142, 143, 145, 150, 153, 157, 160, 164, 167, 171, 174, 11967-12033, 12473-12539, 12945-13011 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 코돈 변형된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 인간 코돈 사용에 적응된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 각각의 이들 적합한 핵산 서열 인코딩에 관한 추가 정보는 또한 서열 목록, 특히 식별자 <223> 하에 제공된 세부사항으로부터 유래될 수 있다. 첫번째 측면의 적합한 코딩 서열은 표 1에 제공된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(E열의 1~7행, 9행, 11~41행 참조), 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 146, 147, 151, 154, 158, 161, 165, 168, 172, 175, 12034-12050, 12052, 12054-12203, 12540-12675, 13012-13147, 13519, 13520, 14133-14141, 14151-14159, 14169-14177, 23041-23076, 23149-23184, 23261-23296, 23369-23404, 23481-23516, 23589-23624, 23701-23736, 23809-23844, 23921-23956, 24029-24064, 24141-24176, 24249-24284, 24361-24396, 24469-24504, 24581-24616, 24689-24724, 24801-24836, 24909-24944, 25021-25056, 25129-25164, 25241-25276, 25349-25384, 25461-25496, 25569-25604, 25681-25716, 25789-25824, 25901-25936, 26009-26044, 26121-26156, 26229-26264, 26341-26376, 26449-26484, 26561-26596, 26669-26704, 26781-26816, 26889-26924 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 코돈 변형된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 변형된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 각각의 이들 적합한 핵산 서열 인코딩에 관한 추가 정보는 또한 서열 목록, 특히 식별자 <223> 하에 제공된 세부사항으로부터 유래될 수 있다. 첫번째 측면의 적합한 코딩 서열은 표 1에 제공된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(F열의 1~7행, 9행, 11~41행 참조), 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
더욱 더 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 136-138, 142, 143, 146, 147, 11731, 11798, 11804, 11805, 11808, 11810, 11811, 11812, 12035, 12049, 22759-22785, 22965-22982, 23077-23094, 23149 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 코돈 변형된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 변형된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 각각의 이들 적합한 핵산 서열 인코딩에 관한 추가 정보는 또한 서열 목록, 특히 식별자 <223> 하에 제공된 세부사항으로부터 유래될 수 있다. 첫번째 측면의 적합한 코딩 서열은 표 1에 제공된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 1(F열의 1~7행, 9행, 11~41행 참조), 표 3A 및 B, 및 각각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 137 에 따른 코돈 변형된 핵산 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 변형된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
보다 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 23090, 23091, 23093, 23094 에 따른 코돈 변형된 핵산 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 변형된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
보다 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 23091에 따른 코돈 변형된 핵산 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 변형된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산은 서열번호: 23113, 23167 에 따른 코돈 변형된 핵산 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 G/C 변형된 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 바람직한 핵산 서열은 표 3A(C 및 D열)에 제공된다. 여기에서 각 행은 본 발명의 특정 적합한 SARS-CoV-2 구조를 나타내며(표 1과 비교), 여기서 SARS-CoV-2 구조에 대한 설명은 표 3A의 A열에 표시되고 각 SARS-CoV-2 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 B열에 제공된다. 각 SARS-CoV-2 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호들은 표 1에 제공된다. 추가적인 정보는 서열목록 내 각각의 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 코딩 서열을 포함하는 상응하는 핵산, 바람직하게 코딩 RNA 서열, 특히 mRNA 서열은 C열 및 D열에 제공되며, C열은 본원에 정의된 UTR 조합 "HSD17B4/PSMB3"을 갖는 핵산 서열을 제공하며, 여기서 D열은 본원에 정의된 "알파-글로빈" 3' UTR을 갖는 핵산 서열을 제공한다.
표 3A: 핵산, 바람직하게 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 mRNA 구조
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
본 발명의 추가 바람직한 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열은 표 3B에 제공된다. 이에, 각 열은 본 발명의 특정한 적합한 SARS-CoV-2(nCoV-2019) 구조를 나타내며(표 1 및 표 3B와 비교), 여기서 B열은 "전장 스파이크 단백질; S"을 나타내며, 표 1 및 표 3A의 1행 및 C열 "안정화된 스파이크 단백질; S_stab_PP", 표 1 및 표 3A의 2열과 비교.
각 SARS-CoV-2 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 1행에 제공된다. 각 SARS-CoV-2 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 1에 제공된다. 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 코딩 서열을 포함하는 상응하는 핵산, 바람직하게 코딩 RNA 서열, 특히 mRNA 서열은 2~16행에 제공되며, 각 행은 UTR 조합 및 적합한 3' 말단을 갖는 핵산 서열을 제공한다.
표 3B: 코로나바이러스 백신에 적합한 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
Figure pct00006
Figure pct00007
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 식별자 <223> 아래, 및 표 3A (특히 C 및 D열 참조) 및 3B(특히 2~16행 참조)에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 162-175, 12676-13147, 14160-14177, 22813-22839, 23189-23404 로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 식별자 <223> 아래, 및 표 3A (특히 D열 참조) 및 3B(2행)에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 148-161, 12204-12675, 14142-14159, 22786-22812, 23409-23624, 24729-24944 로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 식별자 <223> 아래, 및 표 3A (특히 C열 참조) 및 표 3B(3, 7행)에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 149-154, 156-161, 163-168, 170-175, 12338, 12352, 12541, 12555, 12810, 12824, 13013, 13027, 22786, 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, 22804, 22806, 22808, 22810, 22812, 22813, 22819, 22821, 22823, 22825, 22827, 22829, 22831, 22833, 22835, 22837, 22839, 23517-23624, 23297-23404, 24837-24944 로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 식별자 <223> 아래, 및 표 3A (C 및 D열, 2행 및 6행 참조) 및 표 3B(C열 참조)에 제공된다.
더욱 더 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 149, 156, 12338, 150, 157, 151, 158, 12541, 163, 170, 12810, 164, 171, 165, 172, 13013, 12342-12351, 12545-12554, 12814-12823, 13017-13026, 14133로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 식별자 <223> 아래 및 표 3A 및 표 3B에 제공된다.
더욱 더 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 149, 150, 163, 164, 165, 24837, 23311, 23531, 24851, 23310, 23530, 24850, 23313, 23533, 24853, 23314, 23534, 24854 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체로부터 선택된 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 식별자 <223> 아래 및 표 3(C 및 D열, 2행 참조)에 제공된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 163 또는 이 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택된 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 149 또는 이 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택된 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
보다 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 24837의 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열 또는 그 서열의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
보다 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 23311, 23531, 24851 의 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열 또는 그 서열의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
보다 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 23310, 23530, 24850 의 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열 또는 그 서열의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
보다 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 23313, 23533, 24853, 23314, 23534, 24854의 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열 또는 그 서열의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 26633 또는 26907의 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열 또는 그 서열의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
보다 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 RNA 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함한다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래 및 표 3A 및 3B에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937 로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 RNA 서열 내 적어도 하나의, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 교체된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래 및 표 3A 및 3B에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937 로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 RNA 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 상기 RNA 서열 내 적어도 하나의, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 교체된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래 및 표 3A 및 3B에 제공된다.
구성요소 A-1의 핵산에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다.
적합하게 구성요소 A-1의 핵산은 제형화 및/또는 복합화된다. 구성요소 A의 핵산 복합화 또는 제형화에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "제형화 및 복합화" 단락에 제공된다.
구현예에서, 구성요소 A는 적어도 하나의 SARS-CoV-2, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 다수의 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함한다. 바람직하게, 본원에 정의된 구성요소 A(특히 구성요소 A-1)는 본원에 정의된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 A는 본원에 정의된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있으며, 각각은 동일한 SARS-CoV-2로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩한다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 SARS-CoV-2는 단백질 또는 펩타이드의 (본질적으로) 동일한 레퍼토리를 발현하며, 모든 단백질 또는 펩타이드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 SARS-CoV-2는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 이들 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게 이들의 아미노산 서열(들)이 다르지 않다.
구현예에서, 구성요소 A는 본원에 정의된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 DNA 또는 RNA를 포함하며, 각각은 유전적으로 별개의 SARS-CoV-2(예를 들어 별개의 SARS-CoV-2 분리물)로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩한다. 본 명세서 전체에서 사용된 "별개의" 또는 "별개의 SARS-CoV-2"라는 용어는 적어도 두 개의 각 SARS-CoV-2(예를 들어 별개의 SARS-CoV-2 분리물) 간의 차이로 이해되어야 하며, 여기서 상기 차이는 각각의 별개의 SARS-CoV-2의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 SARS-CoV-2는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
구현예에서, 구성요소 A-1은 2, 3, 4 또는 5개 핵산 종(예를 들어 DNA 또는 RNA), 바람직하게 RNA 종, 및 선택적으로 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하며, 상기 핵산 종은 서열번호: 116-132, 134-138, 140-143, 145-175, 11664-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-13147, 13514, 13515, 13519, 13520, 14124-14177, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23184, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 2, 3, 4 또는 5개 핵산 종 각각은 SARS-CoV-2 코로나바이러스의 상이한 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩한다.
따라서, 구현예에서, 구성요소 A-1은 2개 핵산 종(예를 들어 DNA 또는 RNA), 바람직하게 RNA 종, 및 선택적으로 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하며, 상기 핵산 종은 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 2개 핵산 종 각각은 SARS-CoV-2 코로나바이러스의 상이한 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩한다.
구현예에서, 구성요소 A-1은 3개 핵산 종(예를 들어 DNA 또는 RNA), 바람직하게 RNA 종, 및 선택적으로 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하며, 상기 핵산은 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937 로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 2, 3, 4, 또는 5개 핵산 종 각각은 SARS-CoV-2 코로나바이러스의 상이한 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩한다.
바람직하게는, 구성요소 A-1의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종은 각각 상이한 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 인코딩한다(첫번째 측면에서 정의된 바와 같음). 바람직하게는, 스파이크 단백질의 잔기 K986 및 V987(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치)에 2개의 연속적인 프롤린 치환을 도입함으로써 융합전(perfusion) 형태의 안정화가 얻어진다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 융합전 안정화 스파이크 단백질(S_stab) 각각은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 융합전 돌연변이는 다음 아미노산 치환을 포함한다: K986P 및 V987P(참조 서열번호: 1에 따른 아미노산 위치).
적합하게는, 상이한 스파이크 단백질 또는 융합전 안정화된 스파이크 단백질은 적어도 B.1.1.7, B.1.351, P.1 또는 CAL.20C로부터 유래된다.
적합하게는, 상기 상이한 스파이크 단백질 또는 융합전 안정화된 스파이크 단백질은 S 단백질에서 다음을 포함하는 아미노산 변화를 갖는다:
(i) delH69, delV70, Y453F, D614G, I692V 및 M1229I;
(ii) delH69, delV70, delY144, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A 및 D1118H;
(iii) L18F, D80A, D215G, delL242, delA243, delL244, R246I, K417N, E484K, N501Y, D614G 및 A701V;
(iv) L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y 및 T1027I; 및/또는
(v) S13I, W152C, L452R, 및 D614G.
따라서, 구성요소 A-1의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종은 각각 상이한 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 인코딩하며, 상기 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 안정화된 스파이크 단백질은 서열번호: 10-26, 341-407, 609-1278, 13521-13587, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22947-22964 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 서열번호: 10, 22961; 22960, 22963, 22941, 22964 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하는 2개, 3개, 4개, 또는 5개 핵산 종을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 서열번호: 10 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하는 하나의 핵산 종을 포함하며, 여기서 다가(multivalent) 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 2개, 3개, 4개의 추가 RNA 종을 추가로 포함한다
i) 하나의 핵산 종은 서열번호: 22961 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
ii) 하나의 핵산 종은 서열번호: 22960 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iii) 하나의 핵산 종은 서열번호: 22963 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iv) 하나의 핵산 종은 서열번호: 22941중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
v) 하나의 핵산 종은 서열번호: 22964중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 코딩 서열을 포함한다.
바람직하게는, 구성요소 A의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종은 각각 상이한 융합전 안정화 스파이크 단백질을 인코딩하는 핵산 코딩 서열을 포함하고, 상기 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 코딩 서열은 서열번호: 136-138, 140-143, 145-175, 11731-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-12203, 13514, 13515, 13519, 13520, 14124-14141, 22759, 22764-22785, 22969-23184 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 서열번호: 137 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하는 하나의 핵산 종을 포함하며, 다가 조성물은 다음으로부터 선택된 적어도 2개, 3개, 4개 추가 RNA 종을 추가로 포함한다
i) 하나의 핵산 종은 서열번호: 23091 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
ii) 하나의 핵산 종은 서열번호: 23090 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iii) 하나의 핵산 종은 서열번호: 23093 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iv) 하나의 핵산 종은 서열번호: 22999 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
v) 하나의 핵산 종은 서열번호: 23094 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함한다.
바람직하게는, 구성요소 A-1 조성물의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종은 각각 상이한 융합전 안정화 스파이크 단백질을 인코딩하는 핵산 코딩 서열을 포함하고,
여기서 상기 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 핵산 코딩 서열은 서열번호: 149-151, 163-165, 12338, 12541, 12810-12813, 12901, 12931, 13013, 22792, 22794, 22796, 22798, 22802, 22804, 22806, 22810, 22813, 22819, 22821, 22823, 22825, 22827, 22829, 22831, 22833, 22835, 22837, 22839, 23297-23314, 23369, 23517-23520, 23523-23525, 23527, 23529, 23530, 23589, 23737, 23957, 24397, 24837, 25057, 25277, 25717, 26925-26937 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 서열번호: 163 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되는 하나의 RNA 종을 포함하며, 여기서 다가 조성물은 다음으로부터 선택되는 적어도 2개, 3개, 4개 추가 RNA 종을 추가로 포함한다
i) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23311중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되며; 및/또는
ii) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23310중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iii) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23313중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iv) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23219중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
v) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23314중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며;
여기서, 바람직하게, 각각의 mRNA 종은 Cap1 구조를 포함하며, 선택적으로 각각의 mRNA 종은 변형된 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 서열번호: 149 또는 24837 중 엉느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된 하나의 RNA 종을 포함하며, 여기서 다가 조성물은
다음으로부터 선택된 적어도 2개, 3개, 4개 추가 RNA 종을 추가로 포함한다
i) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23531 또는 24851중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되며; 및/또는
ii) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23530 또는 24850 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iii) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23533 또는 24853 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
iv) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23439 또는 24759중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며; 및/또는
v) 하나의 RNA 종은 서열번호: 23534 또는 24854 중 어느 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 코딩 서열을 포함하며;
여기서, 바람직하게, 각각의 mRNA 종은 Cap1 구조를 포함하며, 선택적으로 각각의 mRNA 종은 변형된 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
보다 바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 서열번호: 149 또는 24837, 23531 또는 24851, 23530 또는 24850, 23533 또는 24853, 23439 또는 24759 또는 23534 또는 24854 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 두 개의 RNA 종을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1은 적어도 하나의 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 A는 바람직하게 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게, 상기 구성요소 A-1의 근육내 또는 피내 투여는 대상체에서 인코딩된 SARS-CoV-2 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 A의 투여는 개체 내에서 RNA의 번역 및 인코딩된 SARS-CoV-2 항원의 생산을 초래한다. 핵산이 DNA(예를 들어 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체 내에서 DNA의 RNA로의 전사를 초래하며, RNA의 인코딩된 SARS-CoV-2 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
구현예에서, 개체에 구성요소 A-1을 포함하는 약학적 조성물의 투여는 SARS-CoV-2에 대한 중화 항체를 유도하며 질병 강화 항체는 유도하지 않는다. 특히, 개체에 SARS-CoV-2 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 인코딩하는 구성요소 A-1을 포함하는 약학적 조성물의 투여는 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존적 향상(ADE)와 같은 효과를 유도하지 않는다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-1의 투여는 구성요소 A-1의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코드된 SARS-CoV-2 항원에 대한 T 세포 반응 및/또는 B 세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게, 구성요소 A-1은 백신에 적합하며, 특히 SARS-CoV-2 백신에 적합하며, 바람직하게 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 A-1에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 A-1이 본원에 정의된 다수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 양은 약100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로, 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 본질적으로 질량이 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰(equimolar)이 되도록 선택된다.
이하에서 구성요소 A1의 바람직한 구현예는 항목 목록(아래 참조)의 형태로 제공된다.
항목 1: 구성요소 A-1은 다음을 포함하는 mRNA를 포함하는 조성물에 관련된다:
(a) 서열번호: 10, 341, 22960, 22961, 22963, 바람직하게 서열번호: 10과 적어도 90% 동일한 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열, 즉 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab);
(b) 적어도 하나의 이종 비번역 영역(UTR); 및
(c) 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체,
여기서 mRNA는 지질 나노입자(LNP)로 복합화되거나 결합되며(associated) 상기 LNP는 다음을 포함한다:
(i) 적어도 하나의 양이온성 지질;
(ii) 적어도 하나의 중성 지질;
(iii) 적어도 하나의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체; 및
(iv) 적어도 하나의 PEG-지질,
여기서 (i) 내지 (iv)는 약 20~60% 양이온성 지질, 5~25% 중성 지질, 25~55% 스테롤, 및 0.5~15% PEG-지질의 몰비이다.
항목 2: 항목 1의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 적어도 하나의 폴리(A) 서열, 바람직하게 30 내지 200개 아데노신 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열 및/또는 적어도 하나의 폴리(C) 서열, 바람직하게 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(C) 서열을 포함한다.
항목 3: 항목 1 또는 2의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 5'-캡(cap) 구조, 바람직하게 m7G, cap0, cap1, cap2, 변형된 cap0 또는 변형된 cap1 구조를 포함한다.
항목 4: 상기 항목 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 S 단백질은 융합전 안정화 K986P 및 V987P 돌연변이를 포함한다.
항목 5: 상기 항목 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이며, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열은 C 최대화된 코딩 서열, CAI 최대화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용에 적응된 코딩 서열, G/C 함량 변형된 코딩 서열, 및 G/C 최적화된 코딩 서열, 또는 이의 임의의 조합으로부터 선택된다.
항목 6: 상기 항목 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열은 상응하는 야생형 또는 참조 핵산 서열의 코딩 서열의 G/C 함량에 비해 적어도 10% 20% 또는 30% 증가된 G/C 함량을 갖는다.
항목 7: 상기 항목 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열은 적어도 약 50%, 55%, 또는 60%, 바람직하게 약 63.9%의 G/C 함량을 갖는다.
항목 8: 상기 항목 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 서열번호: 149, 163, 24837, 26633, 26907, 바람직하게 서열번호: 163과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다.
항목 9: 상기 항목 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 적어도 하나의 이종 비번역된 영역은 적어도 하나의 이종 5'-UTR 및/또는 적어도 하나의 이종 3'-UTR로부터 선택된다.
항목 10: 항목 9의 구성요소 A-1, 여기서 적어도 하나의 이종 3'-UTR은 PSMB3, ALB7, 알파-글로빈 ("muag"로도 언급됨), CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 및 RPS9로부터 선택된 유전자의 3'-UTR로부터, 또는 이들 유전자 중 어느 하나의 상동체, 단편 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
항목 11: 항목 9의 구성요소 A-1, 여기서 적어도 하나의 이종 5'-UTR은 HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B 및 UBQLN2로부터 선택된 유전자의 5'-UTR로부터, 또는 이들 유전자의 어느 하나의 상동체, 단편 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
항목 12: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 핵산은 적어도 하나의 히스톤 스템-루프를 포함한다.
항목 13: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 뉴클레오티드 유사체를 포함한다.
항목 14: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 1-메틸슈도우리딘 치환을 포함하지 않는다.
항목 15: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 보다 바람직하게는 적어도 약 70%, 가장 바람직하게는 적어도 약 80%의 RNA 무결성(integrity)을 갖는다.
항목 16: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 RP-HPLC 및/또는 TFF로 정제된 정제된 mRNA이다.
항목 17: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA는 RP-HPLC 및/또는 TFF를 통해 정제된 mRNA이며, RP-HPLC 및/또는 TFF로 정제되지 않은 RNA에 비해 약 5%, 10%, 또는 20% 더 적은 이중 가닥 RNA 부산물을 포함한다.
항목 18: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 LNP는 화학식 III에 따른 양이온성 지질을 포함한다:
Figure pct00008
또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 토토머(tautomer), 전구약물 또는 입체이성질체, 여기서:
L1 또는 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-,
-NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- 또는 -NRaC(=O)O-이며, 바람직하게 L1 또는 L2는 -O(C=O)-이며 또는
-(C=O)O-;
G1 및 G2는 각각 독립적으로 비치환된 C1-C12 알킬렌 또는 C1-C12 알케닐렌이며;
G3는 C1-C24 알킬렌, C1-C24 알케닐렌, C3-C8 사이클로알킬렌, 또는 C3-C8 사이클로알킬렌이며;
Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 C6-C24 알킬 또는 C6-C24 알케닐이며;
R3는 H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 또는 -NR5C(=O)R4이며;
R4는 C1-C12 알킬이며;
R5는 H 또는 C1-C6 알킬이며; 및
x는 0, 1 또는 2임.
항목 19: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 LNP는 화학식 III-3에 따른 양이온성 지질을 포함한다:
Figure pct00009
항목 20: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 LNP는 화학식 IVa에 따른 PEG 지질을 포함한다:
Figure pct00010
항목 21: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 LNP는 다음을 포함한다:
(i) 화학식 (III-3)에 따른 적어도 하나의 양이온성 지질;
(ii) 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)을 포함하는 적어도 하나의 중성 지질;
(iii) 콜레스테롤을 포함하는 적어도 하나의 스테롤; 및
(iv) 화학식 (Iva)에 따른 적어도 하나의 PEG-지질,
여기서 (i) 내지 (iv)는 약 20~60% 양이온성 지질, 5~25% 중성 지질, 25~55% 스테롤, 및 0.5~15% PEG-지질의 몰비이다.
항목 22: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 mRNA의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%는 약 5°C의 온도에서 액체로 저장한 후 적어도 약 2주 후에 온전하다.
항목 23: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 조성물은 약 20% 미만의 유리(free) RNA, 바람직하게 약 15% 미만의 유리 RNA, 보다 바람직하게 약 10% 미만의 유리 RNA를 포함한다.
항목 24: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 LNP는 약 30nm, 35nm, 40nm, 45nm, 50nm, 55nm, 60nm, 65nm, 70nm, 75nm, 80nm, 85nm, 90nm, 95nm, 100nm, 105nm, 110nm, 115nm, 120nm, 125nm, 130nm, 135nm, 140nm, 145nm, 150nm, 160nm, 170nm, 180nm, 190nm 내지 200nm의 평균 직경을 갖는다.
항목 25: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 구성요소 A-1은 COVID-19를 치료 또는 예방하는데 적합하다.
항목 26: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 (투여 시) 구성요소 A-1은 개체에서 SARS-CoV-2에 대한 중화 항체를 유도한다.
항목 27: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 (투여 시) 구성요소 A-1은 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대한 약 10 내지 약 300; 약 20 내지 약 300; 약 20 내지 약 200; 또는 약 30 내지 약 100개 코로나바이러스 스파이크 단백질 결합 항체를 생산하는 항체 반응을 자극한다.
항목 27: 상기 항목들 중 임의의 구성요소 A-1, 여기서 (투여 시) 구성요소 A-1은 개체에 면역 반응을 자극하여 COVID-19로부터 개체를 보호한다.
구성요소 A-2: SARS-관련 바이러스
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1 바이러스(또한 구성요소 A-2로 언급됨)이다.
이에 따라, 첫번째 측면의 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 적어도 하나의 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
"구성요소 A" 단락에서 기술된 일반적인 구현예 및 특징들은 또한 SARS-CoV-1 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에도 적용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
SARS-CoV 관련 바이러스는 코로나비리데(Coronaviridae)에 속하며, 특히 오르소코로나바이러스(Orthocoronaviruses)에 속하며, 보다 구체적으로 베타코로나바이러스 속에 속한다. SARS-CoV-1(중증급성호흡기증후군 코로나바이러스, SARS-코로나바이러스, SCV)은 중증호흡기증후군(SARS)을 일으킨다. 예시적인 SARS-CoV-1 코로나바이러스는 NCBI 분류 ID: 694009, NCBI 참조: DQ182595.1로 식별할 수 있다.
본 발명의 맥락에서 추가로 적합한 SARS-관련 바이러스는 SARS-CoV/Tor2, HCoV/OC43, HCoV/HKU1/N5, HCoV/229E/BN1/GER/2015, HCoV/NL63/RPTEC/2004, Bat SARS-like CoV/WIV1, BatCoV/HKU9-1 BF_005I, PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015, PEDV/NPL-PEDv/2013/P10, PEDV/NPL-PEDv/2013/P10, 또는 MHV/S이다.
본 발명의 맥락에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 임의의 단백질이 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있고 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 코딩 서열 또는 핵산에 의해 적절하게 인코딩될 수 있다. 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질이 합성적으로 조작된 또는 인공 SARS-CoV-1 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 구성할 수 있다는 것은 추가로 기본 발명의 범위에 속한다. "합성적으로 조작된" SARS-CoV-1 펩타이드 또는 단백질라는 용어 또는 "인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 자연에서 발생하지 않는 단백질에 관한 것이다. 따라서 "인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질" 또는 "합성적으로 조작된 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질"은 예를 들어 천연 SARS-CoV-1 펩타이드 또는 단백질과 비교하여 적어도 하나의 아미노산이 다를 수 있고, 및/또는 추가 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 포함할 수 있으며, 및/또는 N-말단 또는 C-말단 연장되거나 절단될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 구조 단백질, 보조 단백질 또는 복제효소 단백질 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함한다.
적절하게는, 구조 단백질은 스파이크 단백질(S), 외피 단백질(E), 막 단백질(M) 또는 뉴클레오캡시드 단백질(N), 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 변이체로부터 선택되거나 유도된다.
약학적 조성물의 특히 바람직한 구현예에서, 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)는 SARS-관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S, S1, S2 또는 S1 및 S2), 또는 이들의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
구성요소 A(특히, 구성요소 A-2)의 핵산에 의해 제공되는 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열은 표 4, 1행 내지 45행, A 및 B열에 개시되어 있다. 추가로, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1에서 선택되거나 유래된 상기 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열에 대한 추가적인 정보는 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
다음에는 구성요소 A의 핵산에 의해 제공되는 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열이 자세히 설명되어 있다.
아미노산 수준의 변화는 다른 SARS 분리주에서 유래된 스파이크 단백질 사이에서 자연적으로 발생한다는 점에 유의해야 한다. 본 발명의 맥락에서, 이러한 아미노산 변이는 SARS 관련 바이러스 또는 본원에 기술된 SARS-CoV-1 스파이크 단백질로부터 유도된 각각의 항원성 펩타이드 또는 단백질에 적용될 수 있다.
구현예에서, SARS 관련 바이러스의 단편, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)은 구성요소 A의 핵산에 의해 인코딩될 수 있으며, 여기서 상기 단편은 N-말단이 절단될 수 있고 및/또는 여기서 상기 단편은 C-말단이 절단될 수 있다. 이러한 "스파이크 단백질(S)의 단편"은 추가로 아미노산 치환(하기 설명됨)을 포함할 수 있고, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 추가로 포함할 수 있다(하기 설명됨).
구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 막관통 도메인(TM)이 결여된다. 이론에 구속되지 않고, 본원에 정의된 막관통 도메인(TM)이 결여된 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)은 이러한 단백질이 가용성이고 세포 막에 고정되지 않기 때문에 조합 백신에 적합할 수 있다. 따라서 가용성 단백질은 개체에게 투여 시 더 높은 농도로 생산(즉 번역)될 수 있고, 증가된 면역 반응을 유도한다.
이론에 구속되지 않고, RBD 및 CND 도메인은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)의 면역원성에 결정적일 수 있다. 두 영역 모두 스파이크 단백질의 S1 단편에 위치한다. 따라서, 항원성 펩타이드 또는 단백질이 스파이크 단백질의 S1 단편 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 것이 본 발명의 맥락에서 적합할 수 있다.
적합하게는, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1의 S1 단편은 적어도 상기 정의된 바와 같은 적어도 RBD 및/또는 CND 도메인을 포함할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 스파이크 단백질 단편 S1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 SARS-관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질 단편 S1을 포함하고, 적어도 70%, 80%, 90%, 바람직하게는 100%의 스파이크 단백질 단편 S2가 결여된다. 이러한 구현예는 SARS-CoV-1 S1 단편이 S1 및 S2를 포함하는 전체 길이 단백질의 잠재적인 문제 없이 중화 에피토프를 포함하므로 유익할 수 있다.
이론에 구속되지 않고, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 항원성 펩타이드 또는 단백질이 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질 단편 S1 및 SARS-CoV-1 스파이크 단백질 조각 S2의 (최소한 조각)을 포함하거나 이로 구성되는 것이 적합할 수 있으며, 면역원성 스파이크 단백질의 형성이 촉진될 수 있기 때문이다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 스파이크 단백질 단편 S1 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체, 및 스파이크 단백질 단편 S2 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 전장 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산에 의해 제공되는 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1 스파이크 단백질(S)은 융합전 형태에서 항원을 안정화시키기 위해 설계 또는 적응된다. 융합전 형태는 효율적인 SARS-CoV-1 백신의 맥락에서 특히 유리하며, 항체를 중화하기 위한 여러 잠재적 에피토프가 상기 융합전 단백질 형태에서 단지 접근할 수 있기 때문이다. 또한, 융합전 형태의 나머지 단백질은 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존 증진(ADE)과 같은 효과를 회피하는 것을 목적으로 한다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 여기에서 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 스파이크 단백질(S)로부터 선택되거나 유래되며, 스파이크 단백질(S)은 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)이다. 적절하게는, 상기 융합전 안정화 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함한다.
SARS-CoV-1 스파이크 단백질의 안정화는 K968 및/또는 V969 위치에서 적어도 하나의 아미노산을 융합전(perfusion) 형태의 스파이크 단백질을 안정화시키는 아미노산으로 치환하여 얻을 수 있다(서열번호: 14906에 따른 아미노산 위치).
구현예에서, SARS-CoV-1 스파이크 단백질의 융합전 안정화 돌연변이는 K968 위치에서 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 아미노산 K968은 A, I, L, M, F, V, G, 또는 P로부터 선택된 하나로 치환되며(참조 서열번호: 14906에 따른 아미노산 위치), 바람직하게 아미노산 K968은 P로 치환된다. 구현예에서, 융합전 안정화 돌연변이는 위치 V969에서 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 아미노산 V969는 A, I, L, M, F, V, G, 또는 P로부터 선택된 하나로 치환되며(참조 서열번호: 14906에 따른 아미노산 위치), 바람직하게 아미노산 V969는 P로 치환된다.
따라서, 바람직한 구현예에서 SARS-CoV-1의 융합전 안정화 스파이크 단백질(S_stab)은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하며, 여기서 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음 아미노산 치환을 포함한다: K968P 및 V969P(참조 서열번호: 14906에 따른 아미노산 위치).
임의의 SARS 관련 바이러스 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체는 그러한 아미노산 변화(예를 들어, 이중 프롤린 돌연변이)를 도입하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예시는 HCoV/OC43 스파이크 단백질 (1-1353)(A1070P_L1071P), HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (1-1362)(A1079P_L1080P), HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (1-1351)(N1067P_L1068P), HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (1-1171)(I869P_I870P), HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (1-1356)(S1052P_I1053P), Bat SARS-유사 CoV/WIV1 스파이크 단백질 (1-1256)(K969P_V970P), BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (1-1274)(G983P_L984P), PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (1-1160)((E855P_V856P), PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (1-1386)(I1076P_L1077P), MHV/S 스파이크 단백질 (1-1361)(A1073P_L1074P)을 포함한다.
구현예에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 공동(cavity) 충전 돌연변이를 포함한다.
구현예에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 돌연변이된 양성자화 부위를 포함한다.
구현예에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 인공 분자내 이황화 결합을 포함한다. 이러한 인공 분자내 이황화 결합은 융합전 형태에서; 즉, 하나 이상의 융합전 사양(specification) 항체에 특이적으로 결합 및/또는 융합전 형태에는 존재하지만 S 단백질의 융합후 형태에는 존재하지 않는 적합한 항원 부위를 제시하는 형태에서 S 단백질의 막 원위 부분(N-말단 영역 포함)을 추가로 안정화시키기 위해 도입될 수 있다.
임의의 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 S 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체는 적어도 하나의 공동 충전 돌연변이, 적어도 하나의 돌연변이 양성자화 부위, 및/또는 적어도 하나의 인공 분자내 이황화 결합을 도입하기 위해 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
다양한 바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 본원에 정의된 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질, 및 추가로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소, 바람직하게는 신호 펩타이드, 링커, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 삼량체화 요소, 막횡단 요소 및/또는 VLP-형성 서열로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 인코딩한다.
적절하게는, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1의 인코딩된 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 촉진하거나 개선할 수 있고(예를 들어 분비 신호 서열을 통해), 원형질막에서 인코딩된 항원 펩타이드 또는 단백질의 고정(anchoring)을 촉진하거나 개선할 수 있고(예를 들어 막관통 요소를 통해), 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선할 수 있고(예를 들어, 다량체화(multimerization) 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해), 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 펩타이드 링커 요소, 자가 절단 펩타이드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 인코딩할 수 있다.
바람직한 구현예에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 본원에 정의된 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원 단백질을 인코딩하는 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 추가로 본원에 정의된 적어도 하나의 이종 삼량체화 요소, 본원에 정의된 항원 클러스터링 요소, 또는 본원에 정의된 VLP 형성 서열을 인코딩한다.
항원 클러스터링 요소는 본원에 정의된 페리틴 요소, 또는 본원에 정의된 루마진 합성효소 요소, 본원에 정의된 B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg), 또는 본원에 정의된 인캡슐린으로부터 선택될 수 있다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 코딩 서열이 이종 항원 클러스터링 요소를 추가로 인코딩하는 구현예에서, SARS-CoV-1으로부터 유래된 항원 클러스터링 요소 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 SARS-CoV-1 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인(TM) 또는 TM의 일부가 결여되어 있다. 또한, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위해 정의된 링커 요소를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
삼량체화 요소는 본 명세서에 정의된 바와 같은 폴드온 요소로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 폴드온 요소는 본원에 정의된 바와 같은 피브리틴 폴드온 요소이다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산의 코딩 서열이 이종 삼량체화 요소를 추가로 인코딩하는 구현예에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1으로부터 유래된 삼량체화 요소 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 스파이크 단백질은 SARS-관련 바이러스, 바람직하게는 C-말단 막관통 도메인 또는 TM의 일부가 결여된 SARS-CoV-1로부터 유래된다. 또한, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위해 정의된 링커 요소를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
VLP 형성 서열은 선택되어 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 본원에 정의된 SARS-CoV-1 항원에 융합될 수 있다. 적합한 VLP 형성 서열은 본원에 정의된 B형 간염 바이러스 코어 항원, 본원에 정의된 HIV-1 Gag 단백질, 또는 본원에 정의된 Woodchuck 간염 코어 항원 요소(WhcAg)로부터 유래된 요소로부터 선택될 수 있다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산의 코딩 서열이 이종성 VLP 형성 서열을 추가로 인코딩하는 구현예에서, SARS-CoV-1으로부터 유래된 VLP 형성 서열 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인(TM) 또는 TM의 일부가 결여된 SARS-CoV-1로부터 유래된다. 또한, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위해 본원에 정의된 바와 같은 링커 요소를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
구현예에서, 항원성 펩타이드 또는 단백질은 상기 정의된 바와 같은 이종 신호 펩타이드를 포함한다. 이종 신호 펩타이드는 인코딩된 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 항원의 분비를 개선하는 데 사용될 수 있다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산의 코딩 서열이 추가로 이종 분비 신호 펩티드를 인코딩하는 구현예에서, SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1로부터 유래된 이종 분비 신호 펩티드 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적합하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 스파이크 단백질은 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 N-말단 내인성 분비 신호 펩타이드가 결여된 SARS-CoV-1로부터 유래된다.
SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 상기 정의된 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질이 표 4(1행 내지 45행)에 제공된다. 여기에서 각 1 내지 45행은 적합한 SARS-CoV-1 구조 또는 SARS 관련 바이러스 구조에 해당한다. 표 4의 A열은 적합한 항원 구조의 짧은 설명을 제공한다. 표 4의 B열은 각 항원 구조의 단백질(아미노산) 서열번호를 제공한다. 표 4의 D열은 상응하는 G/C 최적화된 핵산 코딩 서열(opt1, gc)의 서열번호를 제공한다. 표 4의 E열은 상응하는 인간 코돈 사용에 적응된 핵산 코딩 서열(opt 3, 인간)의 서열번호를 제공한다.
특히, 본 발명의 설명은 본원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공되는 정보를 명시적으로 포함한다. 표 4의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조, 예를 들어 표 4의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열이 표 5에 제공된다.
표 4: SARS-CoV-1 및 SARS-관련 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
행 A B D E
1 SARS-CoV 스파이크 단백질 (1-1255) 14906 14951 14996
2 SARS-CoV 스파이크 단백질 (1-1255)(K968P_V969P) 14907 14952 14997
3 SARS-CoV 스파이크 단백질 (1-17_747-1255) 14908 14953 14998
4 SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (1-1255) 14909 14954 14999
5 SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (1-1255)(K968P_V969P) 14910 14955 15000
6 SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (변이체) 14911 14956 15001
7 SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (변이체) 14912 14957 15002
8 HCoV/OC43 스파이크 단백질 (1-1353) 14913 14958 15003
9 HCoV/OC43 스파이크 단백질 (1-1353)(A1070P_L1071P) 14914 14959 15004
10 HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (1-1362) 14915 14960 15005
11 HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (1-1362)(A1079P_L1080P) 14916 14961 15006
12 HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (변이체) 14917 14962 15007
13 HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (변이체) 14918 14963 15008
14 HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (1-1351) 14919 14964 15009
15 HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (1-1351)(N1067P_L1068P) 14920 14965 15010
16 HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (변이체) 14921 14966 15011
17 HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (변이체) 14922 14967 15012
18 HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (1-1171) 14923 14968 15013
19 HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (1-1171)(I869P_I870P) 14924 14969 15014
20 HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (돌연변이) 14925 14970 15015
21 HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (돌연변이) 14926 14971 15016
22 HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (1-1356) 14927 14972 15017
23 HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (1-1356)(S1052P_I1053P) 14928 14973 15018
24 HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (돌연변이) 14929 14974 15019
25 HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (돌연변이) 14930 14975 15020
26 Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (1-1256) 14931 14976 15021
27 Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (1-1256)(K969P_V970P) 14932 14977 15022
28 Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (돌연변이) 14933 14978 15023
29 Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (돌연변이) 14934 14979 15024
30 BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (1-1274) 14935 14980 15025
31 BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (1-1274)(G983P_L984P) 14936 14981 15026
32 BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (돌연변이) 14937 14982 15027
33 BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (돌연변이) 14938 14983 15028
34 PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (1-1160) 14939 14984 15029
35 PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (1-1160)((E855P_V856P) 14940 14985 15030
36 PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (돌연변이) 14941 14986 15031
37 PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (돌연변이) 14942 14987 15032
38 PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (1-1386) 14943 14988 15033
39 PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (1-1386)(I1076P_L1077P) 14944 14989 15034
40 PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (돌연변이) 14945 14990 15035
41 PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (돌연변이) 14946 14991 15036
42 MHV/S 스파이크 단백질 (1-1361) 14947 14992 15037
43 MHV/S 스파이크 단백질 (1-1361)(A1073P_L1074P) 14948 14993 15038
44 MHV/S 스파이크 단백질 (돌연변이) 14949 14994 15039
45 MHV/S 스파이크 단백질 (돌연변이) 14950 14995 15040
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS 관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14906-14950 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 4(A 및 B열의 1 내지 45행 참조), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 특허출원 WO2017070626의 서열번호: 29, 32, 또는 34 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. WO2017070626의 서열번호: 29, 32 또는 34, 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 특허출원 WO2018081318 의 서열번호: 7 또는 30 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. WO2018081318의 서열번호: 7 또는 30, 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
SARS-CoV-1에서 선택되거나 유래된 추가 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질은 WO2017070626의 표 12에서 선택되거나 유래될 수 있다. 따라서 WO2017070626의 표 12의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS 관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질(융합전 안정화된 스파이크 단백질 (S_stab))은 서열번호: 14907, 14910, 14914, 14916, 14920, 14924, 14928, 14932, 14936, 14940, 14944, 14948 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 4, 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 상기 정의된 SARS-CoV-1로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 이러한 맥락에서, 적어도 하나의 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 본원에 정의된 SARS-CoV-1 항원성 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 임의의 코딩 서열은 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있으며, 따라서 구성요소 A의 핵산에 포함될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 본원에 정의된 SARS-관련 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 서열번호: 14906-14950; WO2018115527의 서열번호: 1-152, 1448-1548; WO2017070626의 서열번호 29, 32 또는 34; WO2018081318의 서열번호: 7 또는 30, 또는 이의 변이체의 단편을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서, 서열번호: 14906-14950; WO2018115527의 서열번호: 1-152, 1448-1548; WO2017070626의 서열번호 29, 32 또는 34; WO2018081318의 서열번호: 7 또는 30, 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)은 선택될 수 있는 것으로 이해되어야 하며, 이에 따라 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 4(A 및 B열의 1행 내지 45행 참조), 표 5, 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 하에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산은 서열번호: 14951-15220로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-관련 바이러스 항원, 바람직하게 SARS-CoV-1 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 코딩 서열을 포함한다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 4(1행 내지 45행 참조), 표 5, 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 SARS 관련 바이러스 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게는 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다.
특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형 코딩 서열은 선택된 G/C 최적화 코딩 서열, 인간 코돈 사용 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 변형 코딩 서열이다.
구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 바람직한 핵산 서열은 표 5(C 및 D열)에 제공된다. 여기에서 각 행은 본 발명의 특정 적합한 SARS 관련 바이러스 구조를 나타내며(표 4와 비교), 여기서 SARS 관련 바이러스 구조에 대한 설명은 표 5의 A열에 표시되며, 각각의 SARS 관련 바이러스 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 B열에 제공된다. 각각의 SARS 관련 바이러스 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 4에 제공된다. 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
표 5: SARS-관련 또는 SARS-CoV-1 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
A B C D
SARS-CoV 스파이크 단백질 (1-1255) 14906 15041, 15086 15131, 15176
SARS-CoV 스파이크 단백질 (1-1255)(K968P_V969P) 14907 15042, 15087 15132, 15177
SARS-CoV 스파이크 단백질 (1-17_747-1255) 14908 15043, 15088 15133, 15178
SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (1-1255) 14909 15044, 15089 15134, 15179
SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (1-1255)(K968P_V969P) 14910 15045, 15090 15135, 15180
SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (변이체) 14911 15046, 15091 15136, 15181
SARS-CoV/Tor2 스파이크 단백질 (변이체) 14912 15047, 15092 15137, 15182
HCoV/OC43 스파이크 단백질 (1-1353) 14913 15048, 15093 15138, 15183
HCoV/OC43 스파이크 단백질 (1-1353)(A1070P_L1071P) 14914 15049, 15094 15139, 15184
HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (1-1362) 14915 15050, 15095 15140, 15185
HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (1-1362)(A1079P_L1080P) 14916 15051, 15096 15141, 15186
HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (변이체) 14917 15052, 15097 15142, 15187
HCoV/OC43/1783A_10 스파이크 단백질 (변이체) 14918 15053, 15098 15143, 15188
HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (1-1351) 14919 15054, 15099 15144, 15189
HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (1-1351)(N1067P_L1068P) 14920 15055, 15100 15145, 15190
HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (변이체) 14921 15056, 15101 15146, 15191
HCoV/HKU1/N5 스파이크 단백질 (변이체) 14922 15057, 15102 15147, 15192
HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (1-1171) 14923 15058, 15103 15148, 15193
HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (1-1171)(I869P_I870P) 14924 15059, 15104 15149, 15194
HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (변이체) 14925 15060, 15105 15150, 15195
HCoV/229E/BN1/GER/2015 스파이크 단백질 (변이체) 14926 15061, 15106 15151, 15196
HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (1-1356) 14927 15062, 15107 15152, 15197
HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (1-1356)(S1052P_I1053P) 14928 15063, 15108 15153, 15198
HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (변이체) 14929 15064, 15109 15154, 15199
HCoV/NL63/RPTEC/2004 스파이크 단백질 (변이체) 14930 15065, 15110 15155, 15200
Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (1-1256) 14931 15066, 15111 15156, 15201
Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (1-1256)(K969P_V970P) 14932 15067, 15112 15157, 15202
Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (변이체) 14933 15068, 15113 15158, 15203
Bat SARS-like CoV/WIV1 스파이크 단백질 (변이체) 14934 15069, 15114 15159, 15204
BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (1-1274) 14935 15070, 15115 15160, 15205
BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (1-1274)(G983P_L984P) 14936 15071, 15116 15161, 15206
BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (변이체) 14937 15072, 15117 15162, 15207
BatCoV/HKU9-1 BF_005I 스파이크 단백질 (변이체) 14938 15073, 15118 15163, 15208
PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (1-1160) 14939 15074, 15119 15164, 15209
PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (1-1160)((E855P_V856P) 14940 15075, 15120 15165, 15210
PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (변이체) 14941 15076, 15121 15166, 15211
PDCoV/Swine/Thailand/S5011/2015 스파이크 단백질 (변이체) 14942 15077, 15122 15167, 15212
PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (1-1386) 14943 15078, 15123 15168, 15213
PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (1-1386)(I1076P_L1077P) 14944 15079, 15124 15169, 15214
PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (변이체) 14945 15080, 15125 15170, 15215
PEDV/NPL-PEDv/2013/P10 스파이크 단백질 (변이체) 14946 15081, 15126 15171, 15216
MHV/S 스파이크 단백질 (1-1361) 14947 15082, 15127 15172, 15217
MHV/S 스파이크 단백질 (1-1361)(A1073P_L1074P) 14948 15083, 15128 15173, 15218
MHV/S 스파이크 단백질 (변이체) 14949 15084, 15129 15174, 15219
MHV/S 스파이크 단백질 (변이체) 14950 15085, 15130 15175, 15220
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)의 핵산, 바람직하게 RNA 서열번호: 15041-15220로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-관련 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래, 및 표 5(특히 C 및 D열 참조)에 제공된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 대체된다.
구성요소 A-2의 핵산에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다.
적합하게는, 구성요소 A-2의 핵산은 제형화 및/또는 복합체화된다. 구성요소 A의 핵산 복합체화 또는 제형화에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "제형화 및 복합화" 단락에 제공된다.
구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)는 적어도 하나의 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종의 복수의 또는 적어도 하나 이상을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 정의된 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)는 본원에 각각 정의된 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)는 동일한 SARS 관련 바이러스로부터 선택된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 각각 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 훨씬 더 많은 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 SARS 관련 바이러스는 단백질 또는 펩타이드의 동일한 레퍼토리를 (본질적으로) 발현하며, 여기서 모든 단백질 또는 펩타이드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 SARS 관련 바이러스는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 이들 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게는 그들의 아미노산 서열(들)이 상이하지 않다.
구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-2)는 각각 유전적으로 별개의 SARS 관련 바이러스(예를 들어 별개의 SARS 관련 바이러스 분리물), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 각각 인코딩하는, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 "별개의" 또는 "별개의 SARS 관련 바이러스"라는 용어는 적어도 2개의 각각의 SARS 관련 바이러스(예를 들어, 별개의 SARS 관련 바이러스 분리주) 사이의 차이로 이해되어야 하며, 여기서 상기 차이는 각각의 별개의 SARS 관련 바이러스의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 SARS 관련 바이러스는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-2는 적어도 하나의 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 A-2는 바람직하게 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 A-2의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 SARS 관련 바이러스 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 A-2의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 SARS 관련 바이러스 항원의 생산을 초래한다. 핵산이 DNA(예: 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 RNA를 인코딩된 SARS 관련 바이러스 항원으로 후속 번역을 초래한다.
구현예에서, 구성요소 A-2를 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하면 SARS 관련 바이러스에 대한 중화 항체가 유도되고 질병 강화 항체는 유도되지 않는다. 특히, SARS 관련 바이러스 융합전 안정화 스파이크 단백질을 인코딩하는 구성요소 A-2를 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 것은 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 향상(ADE)과 같은 효과를 유도하지 않는다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-2의 투여는 구성요소 A-2의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 SARS 관련 바이러스 항원에 대한 T 세포 반응 및/또는 B 세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 A-2는 백신에 적합하며, 특히 SARS 관련 바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-1 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 A-2에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로, 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 A-2가 본원에 정의된 핵산 종의 복수 또는 적어도 하나 이상을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로, 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각각의 핵산 종에 대한 핵산의 양은 본질적으로 질량이 동일하다. 다른 구현예에서, 각각의 핵산 종에 대한 핵산의 양은 등몰이 되도록 선택된다.
구성요소 A-3: MERS-CoV
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 MERS-CoV 바이러스이다(구성요소 A-3으로도 지칭됨).
따라서, 첫번째 측면의 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 적어도 하나의 MERS-CoV, 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
"구성요소 A" 단락에 기술된 일반적인 구현예 및 특징은 MERS-CoV 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에도 적용될 수 있음을 이해해야 한다.
MERS-CoV는 코로나비리데(Coronaviridae), 특히 오르소코로나바이러스, 보다 구체적으로는 베타코로나바이러스 속에 속한다. MERS-CoV(중동 호흡기 증후군 코로나바이러스, MERS-코로나바이러스, EMC/2012(HCoV-EMC/2012))는 중증 호흡기 증후군 질환을 유발한다. 예시적인 MERS-CoV 코로나바이러스는 NCBI 분류 ID: 1335626, NCBI 참조: NC_038294.1로 식별될 수 있다. 적합한 MERS-CoV 균주/분리물은 MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1, MERS-CoV/Al-Hasa_4_2013, MERS-CoV/Riyadh_14_2013, MERS-CoV/Riyadh_14_2013, MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질, MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질, MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체)로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 임의의 단백질은 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있고 구성요소 A(특히, 구성요소 A-3 )의 코딩 서열 또는 핵산에 의해 적합하게 인코딩될 수 있다. 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질이 합성적으로 조작된 또는 인공 MERS-CoV 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성될 수 있다는 것은 추가로 기본 발명의 범위에 속한다. "합성적으로 조작된" MERS-CoV 펩타이드 또는 단백질 또는 "인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 자연에서 발생하지 않는 단백질에 관한 것이다. 따라서, "인공 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질" 또는 "합성적으로 조작된 코로나바이러스 펩타이드 또는 단백질"은 예를 들어 천연 MERS-CoV 펩타이드 또는 단백질과 비교하여 적어도 하나의 아미노산이 상이할 수 있고, 및/또는 추가적인 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 포함할 수 있으며, 및/또는 N-말단 또는 C-말단 연장되거나 절단될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 핵산은 MERS-CoV, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 구조 단백질, 보조 단백질 또는 복제효소 단백질 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함한다.
적절하게는, 구조 단백질은 스파이크 단백질(S), 외피 단백질(E), 막 단백질(M) 또는 뉴클레오캡시드 단백질(N), 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 변이체로부터 선택되거나 유도된다.
약학적 조성물의 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 MERS-CoV 스파이크 단백질(S , S1, S2, 또는 S1 및 S2), 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
구성요소 A(특히, 구성요소 A-3)의 핵산에 의해 제공되는 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열은 표 6, 1 내지 16행, A 및 B열에 개시되어 있다. 추가로, MERS-CoV에서 선택되거나 유래된 상기 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열에 대한 추가 정보는 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
다음에서, 구성요소 A의 핵산에 의해 제공되는 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질 서열이 상세히 기술된다.
서로 다른 MERS-CoV 분리주에서 파생된 스파이크 단백질 간에 자연적으로 아미노산 수준의 변화가 발생한다는 점에 유의해야 한다. 본 발명의 맥락에서, 이러한 아미노산 변이는 본원에 기재된 바와 같은 MERS-CoV 스파이크 단백질로부터 유도된 각각의 항원성 펩타이드 또는 단백질에 적용될 수 있다.
구현예에서, MERS-CoV 스파이크 단백질(S)의 단편은 구성요소 A의 핵산에 의해 인코딩될 수 있으며, 여기서 상기 단편은 N-말단 절단될 수 있고 및/또는 상기 단편은 C-말단 절단될 수 있다. 이러한 "스파이크 단백질(S)의 단편"은 추가로 아미노산 치환(하기 설명됨)을 포함할 수 있고 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소(하기 설명됨)를 추가로 포함할 수 있다.
구현예에서, 구성요소 A의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 스파이크 단백질(S)에는 막관통 도메인(TM)이 결여되어 있다. 이론에 구속됨이 없이, 본원에 정의된 막관통 도메인(TM)이 결여된 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)은 이러한 단백질이 가용성이고 세포막에 고정되지 않기 때문에 조합 백신에 적합할 수 있다. 따라서 가용성 단백질은 개체에게 투여 시 더 높은 농도로 생산(즉 번역)되어, 증진된 면역 반응을 유도할 수 있다.
이론에 구속되지 않고, RBD 및 CND 도메인은 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)의 면역원성에 결정적일 수 있다. 두 영역 모두 스파이크 단백질의 S1 단편에 위치한다. 따라서, 항원성 펩타이드 또는 단백질이 스파이크 단백질의 S1 단편 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 것이 본 발명의 맥락에서 적합할 수 있다.
적합하게는, MERS-CoV의 S1 단편은 적어도 상기 정의된 바와 같은 RBD 및/또는 CND 도메인을 포함할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)은 또는 스파이크 단백질 단편 S1, 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 MERS-CoV 스파이크 단백질 단편 S1을 포함하고, 적어도 70%, 80%, 90%, 바람직하게는 100%의 스파이크 단백질 단편 S2가 결여되어 있다. 이러한 구현예는 MERS-CoV S1 단편이 S1 및 S2를 포함하는 전체 길이 단백질의 잠재적 문제 없이 중화 에피토프를 포함하므로 유익할 수 있다.
이론에 구속됨이 없이, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 항원성 펩타이드 또는 단백질이 MERS-CoV 스파이크 단백질 단편 S1 및 MERS-CoV 스파이크 단백질 단편 S2(적어도 이의 단편)을 포함하거나 이로 구성되는 것이 적합할 수 있으며, 면역원성 MERS-CoV 스파이크 단백질의 형성이 촉진될 수 있기 때문이다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)은 MERS-CoV 스파이크 단백질 단편 S1 또는 이의 면역원성 절편 또는 면역원성 변이체, 및 MERS-CoV 스파이크 단백질 단편 S2 또는 이의 면역원성 절편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 전장 MERS-CoV 스파이크 단백질 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산에 의해 제공되는 MERS-CoV 스파이크 단백질(S)은 융합전 형태에서 항원을 안정화시키도록 설계되거나 적응된다. 융합전 형태는 효율적인 MERS-CoV 백신의 맥락에서 특히 유리하며, 항체를 중화하기 위한 몇 가지 잠재적인 에피토프가 상기 융합전 단백질 형태에서 단지 접근 가능할 수 있기 때문이다. 또한, 융합전 형태의 나머지 단백질은 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 향상(ADE)과 같은 효과를 회피하는 것을 목적으로 한다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산은 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 스파이크 단백질(S)로부터 선택되거나 유도되며, 여기서 스파이크 단백질(S)은 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)이다. 적절하게는, 상기 융합전 안정화된 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함한다.
MERS-CoV 스파이크 단백질의 안정화는 위치 V1060 및/또는 L1061에서 적어도 하나의 아미노산을 융합전(perfusion) 형태에서 스파이크 단백질을 안정화시키는 아미노산(참조 서열번호: 14794에 따른 아미노산 위치)으로 대체함으로써 얻을 수 있다. .
구현예에서, MERS-CoV 스파이크 단백질의 융합전 안정화 돌연변이는 위치 V1060에서 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 아미노산 V1060은 A, I, L, M, F, V, G 또는 P(참조 서열번호: 14794에 따른 아미노산 위치)로부터 선택되 sgksk로 치환되며, 바람직하게는 여기서 아미노산 V1060은 P로 치환된다. 구현예에서, 융합전 안정화 돌연변이는 위치 L1061에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 L1061은 A, I, L, M, F, V, G 또는 P(참조 서열번호: 14794에 따른 아미노산 위치)로부터 선택된 하나로 치환되며, 바람직하게는 여기서 아미노산 L1061은 P로 치환된다.
따라서, 바람직한 구현예에서, MERS-CoV의 융합전 안정화 스파이크 단백질(S_stab)은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음 아미노산 치환을 포함한다: V1060P 및 L1061P (참조 서열번호: 14794에 따른 아미노산 위치).
임의의 MERS-CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화, 바람직하게는 아미노산 치환: V1060P 및 L1061P(참조 서열번호: 14794에 따른 아미노산 위치)를 도입하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있다.
임의의 MERS-CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체는 이러한 아미노산 변화(예: 이중 프롤린 돌연변이)를 도입하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예시는 MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P), MERS-CoV/Al-Hasa_4_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P), MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P), MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P)를 포함한다.
구현예에서, MERS-CoV 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 공동 충전 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, MERS-CoV S 엑토도메인 융합전 형태를 안정화시키기 위한 공동 충전 치환은 다음 아미노산 치환으로부터 선택될 수 있다: N1072F 및 A1083I; N1072F 및 L1086F; N1072F 및 V1087I; N1072F 및 E1090I; T1076F 및 A1083I; T1076F 및 L1086F; T1076F 및 V1087I; T1076F 및 El 0901; T1076I 및 A1083I; T1076I 및 L1086F; T1076I 및 V1087I; T1076I 및 E10901; A1018V; 또는 A1018I.
일부 구현예에서, MERS-CoV 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 돌연변이된 양성자화 부위(R1020Q)를 포함한다.
구현예에서, MERS-CoV 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음 중 하나와 같은 S 엑토도메인 융합전 형태를 안정화하기 위한 리패킹(repacking) 치환을 포함한다: E793M 및 K1102F; E793M, K1102F, 및 H1138F; D1068M 및 R1069W; A1083L; A1083L 및 V1087I; A1083L, V1087, 및 E1090L; A834L 및 Q1084M; Q1066M; S454F; R921W; S612F 및 G1052F; 또는 P476V, T477A, 및 R1057W.
구현예에서, MERS-CoV 스파이크 단백질의 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 인공 분자내 이황화 결합을 포함한다. 이러한 인공 분자내 이황화 결합은 융합전 형태에; 즉, 하나 이상의 융합전 사양(specification) 항체에 특이적으로 결합하고 및/또는 융합전 형태에는 존재하지만 MERS-CoV 스파이크 단백질의 융합후 형태에는 존재하지 않는 적합한 항원 부위를 제시하는 형태에 MERS-CoV 스파이크 단백질(N-말단 영역 포함)의 막 원위 부분을 추가로 안정화시키기 위해 도입될 수 있다.
일부 구현예에서, MERS-CoV S 엑토도메인 융합전 형태를 안정화하기 위한 이황화 결합 치환은 다음 아미노산 치환으로부터 선택될 수 있다: T63C 및 V631C; T63C 및 Q638C; Q733C 및 D940C; S676C 및 D910C; V1087C (천연 서열에 존재하는 시스테인과 이황화 결합을 형성); S 엑토도메인 융합전 형태를 안정화시키는 A432C 및 L1058C; 또는 A432C 및 D1059C.
임의의 MERS-CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체는 적어도 하나의 공동 충전 돌연변이, 적어도 하나의 돌연변이 양성자화 부위 및/또는 적어도 하나의 인공 분자내 이황화 결합을 도입하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있다.
다양한 바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 A의 핵산(특히 구성요소 A-3)은 본원에 정의된 바와 같은 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 및 추가로 적어도 하나의 이종 펩티드 또는 단백질 요소, 바람직하게는 신호 펩타이드, 링커, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 삼량체화 요소, 막횡단 요소 및/또는 VLP-형성 서열로부터 선택되거나 유도된 것을 인코딩한다.
적절하게는, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 MERS-CoV의 인코딩된 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 촉진하거나 개선할 수 있고(예를 들어, 분비 신호 서열을 통해), 원형질막에서 MERS-CoV의 인코딩된 항원성 펩타이드 또는 단백질의 고정을 촉진하거나 개선할 수 있으며(예를 들어 막관통 요소를 통해), 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선할 수 있고(예를 들어 다중화 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해), 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산은 펩타이드 링커 요소, 자가 절단 펩타이드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 인코딩할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본원에 정의된 바와 같은 MERS-CoV로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원 단백질을 인코딩하는 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산은 본원에 정의된 적어도 하나의 이종 삼량체화 요소, 본원에 정의된 항원 클러스터링 요소, 또는 본원에 정의된 VLP 형성 서열을 추가로 인코딩한다.
항원 클러스터링 요소는 본원에 정의된 페리틴 요소, 또는 본원에 정의된 루마진 신타제 요소, 본원에 정의된 B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg), 또는 본원에 정의된 인캡슐린으로부터 선택될 수 있다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 코딩 서열이 이종 항원 클러스터링 요소를 추가로 인코딩하는 구현예에서, MERS-CoV로부터 유도된 항원 클러스터링 요소 및 항원 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 MERS-CoV 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인(TM) 또는 TM의 일부가 결여되어 있다. 또한, 항원 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위해 정의된 링커 요소를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
삼량체화 요소는 본 명세서에 정의된 바와 같은 폴드온 요소로부터 선택될 수 있다. 바람직한 실시예에서, 폴드온 요소는 본원에 정의된 바와 같은 피브리틴 폴드온 요소이다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산의 코딩 서열이 이종 삼량체화 요소를 추가로 인코딩하는 구현예에서, MERS-CoV로부터 유래된 삼량체화 요소 및 항원성 펩티드 또는 단백질로부터 유도된 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인 또는 TM의 일부가 결여된 MERS-CoV로부터 유래된다. 또한, 항원 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위해 정의된 링커 요소를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
VLP 형성 서열은 선택되고 본원에 정의된 MERS-CoV 항원에 융합될 수 있다. 적합한 VLP 형성 서열은 본원에 정의된 B형 간염 바이러스 코어 항원, 본원에 정의된 HIV-1 Gag 단백질, 또는 본원에 정의된 Woodchuck 간염 코어 항원 요소(WhcAg)로부터 유래된 요소로부터 선택될 수 있다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산의 코딩 서열이 이종 VLP 형성 서열을 추가로 인코딩하는 구현예에서, MERS-CoV로부터 유래된 VLP 형성 서열 및 항원성 펩티드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 스파이크 단백질은 C-말단 막관통 도메인(TM) 또는 TM의 일부가 결여된 MERS-CoV로부터 유래된다. 또한, 항원성 펩타이드 또는 단백질로부터 이종 항원 클러스터링 요소를 분리하기 위해 본원에 정의된 바와 같은 링커 요소를 사용하는 것이 적합할 수 있다.
구현예에서, 항원성 펩타이드 또는 단백질은 상기 정의된 바와 같은 이종 신호 펩타이드를 포함한다. 인코딩된 MERS-CoV 항원의 분비를 개선하기 위해 이종 신호 펩타이드가 사용될 수 있다. 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산의 코딩 서열이 추가로 이종 분비 신호 펩티드를 코딩하는 구현예에서, MERS-CoV로부터 유래된 이종 분비 신호 펩티드 및 항원성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하는 것이 특히 바람직하고 적합하다. 적절하게는, 상기 항원성 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게는 MERS-CoV로부터 유래된 스파이크 단백질은 N-말단 내인성 분비 신호 펩타이드가 결여되어 있다.
상기 정의된 바와 같은 MERS-CoV로부터 선택되거나 유도된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질은 표 6(1행 내지 16행)에 제공된다. 여기에서 각 1~16행은 적합한 MERS-CoV 구조에 해당한다. 표 6의 A열은 적합한 MERS-CoV 항원 구조의 간략한 설명을 제공한다. 표 6의 B열은 각각의 MERS-CoV 항원 구조의 단백질(아미노산) 서열번호를 제공한다. 표 6의 D열은 상응하는 G/C 최적화 핵산 코딩 서열(opt1, gc)의 서열번호를 제공한다. 표 6의 E열은 상응하는 인간 코돈 사용 방식에 적응된 핵산 코딩 서열(opt 3, 인간)의 서열번호를 제공한다.
특히, 본 발명의 설명은 본 출원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공되는 정보를 명시적으로 포함한다. 표 6의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조, 예를 들어 표 6의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열이 표 7에 제공된다.
표 6: 바람직한 MERS-CoV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
행 A B D E
1 MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1 스파이크 단백질 (1-1353) 14794 14810 14826
2 MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14795 14811 14827
3 MERS-CoV/Al-Hasa_4_2013 스파이크 단백질 (1-1353) 14796 14812 14828
4 MERS-CoV/Al-Hasa_4_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14797 14813 14829
5 MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353) 14798 14814 14830
6 MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14799 14815 14831
7 MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(R1020Q) 14800 14816 14832
8 MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-17_726-1296)(R1020Q) 14801 14817 14833
9 MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-17_726-1296)(R1020Q)_LeucineZipper 14802 14818 14834
10 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (1-1353) 14803 14819 14835
11 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14804 14820 14836
12 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14805 14821 14837
13 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14806 14822 14838
14 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14807 14823 14839
15 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14808 14824 14840
16 MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14809 14825 14841
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14794-14809, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 6(A 및 B열의 1 내지 16행 참조), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018115527의 서열번호: 1-152 또는 148 내지 1548, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2018115527의 서열번호: 1-152 또는 1448 내지 1548 및 이와 관련된 상응하는 개시내용(예를 들어, 각각의 서열 목록, 표 1-4 및 표 7의 1 또는 2열의 정보)은 본원에 참조로 포함된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018081318의 서열번호: 2-4, 28-29, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2018081318 의 서열번호: 2-4, 28-29 및 이와 관련된 상응하는 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2017070626의 서열번호: 24-28 또는 33또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2017070626 의 서열번호: 24-28 또는 33 및 이와 관련된 상응하는 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 추가의 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질은 WO2017070626의 표 12로부터 선택되거나 유래될 수 있다. 따라서 WO2017070626의 표 12의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질(융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab))은 서열번호: 14795, 14797, 14799-14802, 14804, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 6(A 및 B열), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산은 상기 정의된 바와 같은 MERS-CoV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 그러한 맥락에서, 본 명세서에 정의된 적어도 하나의 MERS-CoV 항원성 단백질을 인코딩하는 임의의 코딩 서열, 또는 이의 단편 및 변이체는 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있고 따라서 구성요소 A의 핵산에 포함될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 MERS-CoV로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게는 서열번호: 14794-14809 중 임의의 하나; WO2018115527의 서열번호: 1-152, 1448-1548; WO2018081318의 서열번호: 2-4, 28-29; WO2017070626의 서열번호: 24-28 또는 33, 또는 이의 변이체 단편을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서, 서열번호: 14794-14809; WO2018115527의 서열번호: 1-152, 1448-1548; WO2018081318의 서열번호: 2-4, 28-29; WO2017070626의 서열번호: 24-28 또는 33, 또는 이의 단편 또는 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있는 것으로 이해되어야 하며, 따라서 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 6, 표 7 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산은 핵산 서열 서열번호: 14810-14905, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 핵산 서열 중 어느 하나를 포함하는 코딩 서열을 포함한다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 6, 표 7 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2018115527의 핵산 서열 서열번호: 153-304 또는 1549-1649, 305-1368, 1650-2356, 2365, 2366, 2373-2378, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 특히, WO2018115527의 서열번호: 153-304 또는 1549-1649, 305-1368, 1650-2356, 2365, 2366, 2373-2378 및 이와 관련된 상응하는 개시(예를 들어, 각각의 서열 목록, 표 1-4 및 표 7의 4열 또는 4)이 본원에 참고로 포함된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2017070626의 핵산 서열 서열번호: 20-23, 65-68 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 특히, WO2017070626의 서열번호: 20-23, 65-68 및 이와 관련된 상응하는 개시(예를 들어, 각각의 서열 목록, 표 1-4 및 표 7의 정보)이 본원에 참고로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 MERS-CoV 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게는 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다.
특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형된 코딩 서열은 선택된 G/C 최적화 코딩 서열, 인간 코돈 사용 적응 코딩 서열, 또는 G/C 변형 코딩 서열이다.
특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 바람직한 핵산 서열은 표 7(C 및 D열)에 제공된다. 여기에서, 각 행은 본 발명의 특정 적합한 MERS-CoV 구조를 나타내며(표 6과 비교), 여기서 MERS-CoV 구조의 설명은 표 7의 A열에 표시되고 각 MERS-CoV 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 B열에 제공된다. 각 MERS-CoV 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 6에 제공된다. 추가 정보는 서열목록에서 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
표 7: MERS-CoV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
A B C D
MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1 스파이크 단백질 (1-1353) 14794 14842, 14858 14874, 14890
MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14795 14843, 14859 14875, 14891
MERS-CoV/Al-Hasa_4_2013 스파이크 단백질 (1-1353) 14796 14844, 14860 14876, 14892
MERS-CoV/Al-Hasa_4_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14797 14845, 14861 14877, 14893
MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353) 14798 14846, 14862 14878, 14894
MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14799 14847, 14863 14879, 14895
MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-1353)(R1020Q) 14800 14848, 14864 14880, 14896
MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-17_726-1296)(R1020Q) 14801 14849, 14865 14881, 14897
MERS-CoV/Riyadh_14_2013 스파이크 단백질 (1-17_726-1296)(R1020Q)_LeucineZipper 14802 14850, 14866 14882, 14898
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (1-1353) 14803 14851, 14867 14883, 14899
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14804 14852, 14868 14884, 14900
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14805 14853, 14869 14885, 14901
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14806 14854, 14870 14886, 14902
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14807 14855, 14871 14887, 14903
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14808 14856, 14872 14888, 14904
MERS-CoV/England 1 스파이크 단백질 (변이체) 14809 14857, 14873 14889, 14905
바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 14842-14905 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에, 및 표 7(특히 C 및 D열 참조)에 제공된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드에 의해 치환된다.
추가 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)의 핵산, 바람직하게 RNA는 WO2018115527의 서열번호: 2373-2378 및 WO2017070626의 서열번호: 65-68로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 WO2018115527 또는 WO2017070626의 서열목록 중 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에, 및 WO2018115527의 표 1-4 및 표 7에 제공된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드에 의해 치환된다.
구성요소 A-3의 핵산에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "핵산 특징 및 구현예" 단락에서 제공된다.
적합하게는, 구성요소 A-3의 핵산은 제형화 및/또는 복합화된다. 구성 요소 A의 핵산 복합화 또는 제형화에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "제형화 및 복합화" 단락에 제공된다.
구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)는 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 다수의 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 정의된 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)는 본원에 정의된 바와 같이 각각 정의된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)는 동일한 MERS-CoV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 각각 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 훨씬 더 많은 다른 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 MERS-CoV는 단백질 또는 펩타이드의 동일한 레퍼토리를 (본질적으로) 발현하며, 여기서 모든 단백질 또는 펩타이드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 MERS-CoV는 본질적으로 동일한 단백질, 펩티드 또는 다단백질을 발현하며, 이들 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게는 그들의 아미노산 서열(들)이 다르지 않다.
구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-3)는 유전적으로 별개의 MRES-CoV(예를 들어 별개의 MERS-CoV 분리물)로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 각각 인코딩하는 본원에 정의된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "별개의" 또는 "별개의 MERS-CoV"는 적어도 2개의 각각의 MERS-CoV(예를 들어, 별개의 MERS-CoV 분리주) 사이의 차이로 이해되어야 하며, 여기서 상기 차이는 각각의 별개의 MERS-CoV의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 MERS-CoV는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩티드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-3은 적어도 하나의 MERS-CoV, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 A- 3은 근육내 또는 피내로 투여하는 것이 바람직하다.
바람직하게는, 상기 구성요소 A-3의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 MERS-CoV 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 A-3의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 MERS-CoV 항원의 생성을 초래한다. 핵산이 DNA(예를 들어 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 인코딩된 MERS-CoV 항원으로 RNA의 후속 번역을 초래한다.
구현예에서, 구성요소 A-3을 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하면 MERS-CoV에 대한 중화 항체가 유도되고 질병 강화 항체는 유도되지 않는다. 특히, MERS-CoV 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 인코딩하는 구성요소 A-3을 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 것은 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 향상(ADE)을 초래하지 않는다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A-3의 투여는 구성요소 A-3의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 MERS-CoV 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 A-3은 백신, 특히 MERS-CoV 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 A-3에 포함되는 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게는 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 A-3이 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
구성요소 B:
다양한 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 적어도 하나의 구성요소 B는 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 가장 넓은 의미에서 "적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 유래된 펩타이드 또는 단백질"은 구성요소 A로부터 선택되지 않은 추가 바이러스로부터 펩타이드 또는 단백질에 관한 것이다. 따라서, SARS-CoV-2가 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스로 선택되는 경우, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 SARS-CoV-2를 제외하는 임의의 바이러스일 수 있다.
바람직한 구현예에서 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데(Pneumoviridae) 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데(Paramyxoviridae) 바이러스로부터 선택되거나 유래된다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스는 적어도 하나의 호흡기 세포융합 바이러스(Respiratory syncytial virus) 및/또는 적어도 하나의 메타뉴모바이러스(Metapneumovirus) 로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 파라믹소비리데(Paramyxoviridae) 바이러스는 적어도 하나의 파라인플루엔자(Parainfluenza) 바이러스 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스(Henipavirus)로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스는 적어도 하나의 파라인플루엔자 바이러스 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택된다.
구현예에 따르면, 구성요소 B의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가 바이러스, 또는 그의 단편 및 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가 바이러스, 또는 그의 단편 및 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하며, 여기서 상기 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택된다.
그러한 맥락에서, 본원에 정의된 바와 같은 추가 바이러스의 적어도 하나의 항원성 단백질을 인코딩하는 임의의 코딩 서열, 또는 그의 단편 및 변이체는 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있고 따라서 구성요소 B의 핵산에 포함될 수 있다.
구성요소 B의 핵산에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다.
적합하게는, 구성요소 B의 핵산은 제형화 및/또는 복합화된다. 구성 요소 A의 핵산 복합화 또는 제형화에 적용되는 적합한 특징 및 구현예는 아래 "제형화 및 복합화" 단락에 제공된다.
구현예에서, 구성요소 B는 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함할 수 있다. 바람직하게, 본원에 정의된 구성요소 B는 본원에 정의된 각각 정의된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 상이한 핵산을 포함할 수 있다.
구현예에서, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어, 본원에 정의된 DNA 또는 RNA, 예를 들어 구성요소 B는 동일한 추가 바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 것을 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 추가 바이러스는 단백질 또는 펩티드의 동일한 레퍼토리를 (본질적으로) 발현하며, 여기서 모든 단백질 또는 펩티드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 추가 바이러스는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 여기서 이들 단백질, 펩티드 또는 다단백질은 바람직하게는 그들의 아미노산 서열(들)이 다르지 않다.
구현예에서, 구성요소 B는 유전적으로 별개의 추가 바이러스(예를 들어, 별개의 인플루엔자 바이러스, 별개의 RSV 바이러스, 별개의 PIV)로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 훨씬 더 많은 다른 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전체적으로 사용된 "별개의" 또는 "별개의 추가 바이러스"는 적어도 두 개의 각각 추가 바이러스 간의 차이로 이해되어야 하며, 여기서 상기 차이는 각각 별개의 추가 바이러스의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 추가 바이러스는 적어도 하나의 아미노산이 상이한 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B는 적어도 하나의 추가 바이러스, 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B는 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 추가 바이러스 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 추가 바이러스 항원의 생성을 초래한다. 핵산이 DNA(예를 들어, 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 RNA의 인코딩된 추가 바이러스 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 투여는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 추가 바이러스 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 B는 백신, 바람직하게는 조합 백신 또는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
본 발명의 맥락에서 특정한 추가 바이러스에 관한 구현예는 아래에 제공된다(구성요소 B-1, 구성요소 B-2, 구성요소 B-3, 구성요소 B-4).
구성요소 B-1: 상이한 코로나바이러스
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스(구성요소 B-1이라고도 함)로부터 선택되며, 여기서 상기 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 성분 A의 코로나바이러스가 아니다.
"구성요소 B" 단락에 기술된 일반적인 구현예 및 특징은 상이한 코로나바이러스 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에도 적용될 수 있음을 이해해야 한다.
구성요소 A(구성요소 A-1, 구성요소 A-2 및 구성요소 A-3 포함)와 관련하여 제공된 특징 및 실시예는 구성요소 B(특히 구성요소 B-1)에도 마찬가지로 적용될 수 있다. 따라서, 임의의 핵산, 예를 들어. 구성요소 A(구성요소 A-1, 구성요소 A-2 및 구성요소 A-3 포함)와 관련하여 제공된 DNA 또는 RNA는 구성요소 B(특히 구성요소 B-1)에 대해 마찬가지로 선택될 수 있다.
구성요소 A가 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 임의의 코로나바이러스, 바람직하게는 임의의 범유행성 코로나바이러스로부터 선택될 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 SARS-CoV-2가 아니다. 따라서, 구성요소 A(구성요소 A-1, 구성요소 A-2 및 구성요소 A-3 포함)와 관련하여 제공된 임의의 핵산은 마찬가지로 구성요소 B(특히 구성요소 B-1)에 대해 선택될 수 있으며, 여기서 구성 요소 B의 적어도 하나의 핵산은 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하지 않는다.
구성요소 A가 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 SARS-CoV-1로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 임의의 코로나바이러스, 바람직하게는 임의의 범유행성 코로나바이러스로부터 선택될 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 SARS-CoV-1이 아니다. 따라서, 구성요소 A(구성요소 A-1, 구성요소 A-2 및 구성요소 A-3 포함)와 관련하여 제공된 임의의 핵산은 마찬가지로 구성요소 B(특히 구성요소 B-1)에 대해 선택될 수 있으며, 여기서 적어도 구성 요소 B의 적어도 하나의 핵산은 SARS-CoV-1 항원을 인코딩하지 않는다.
구성요소 A가 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 임의의 코로나바이러스, 바람직하게는 임의의 범유행성 코로나바이러스로부터 선택될 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 MERS-CoV가 아니다. 따라서, 구성요소 A(구성요소 A-1, 구성요소 A-2 및 구성요소 A-3 포함)와 관련하여 제공된 임의의 핵산은 마찬가지로 구성요소 B(특히 구성요소 B-1)에 대해 선택될 수 있으며, 여기서 적어도 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 MERS-CoV 항원을 인코딩하지 않는다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 1-111, 274-11663, 13176-13510, 13521-14123, 14794-14809, 14906-14950, 22732-22758, 22917, 22923, 22929-22964, 26938, 26939, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 적어도 하나의 코딩 서열은 핵산 서열 서열번호: 116-132, 134-138, 140-143, 145-147, 148-175, 11664-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-13147, 13514, 13515, 13519, 13520, 14124-14177, 14810-14905, 14951-15220, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23184, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 14842-14905, 15041-15220, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-1)는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 복수의 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본원에 정의된 구성요소 B는 본원에 정의된 바와 같이 각각 정의된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 핵산을 포함할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-1은 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B-1은 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B-1의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 상이한 코로나바이러스 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B-1의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 상이한 코로나바이러스 항원의 생성을 초래한다. 핵산이 DNA(예: 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 RNA의 인코딩된 상이한 코로나바이러스 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
구현예에서, 구성요소 B-1을 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하면 상이한 코로나바이러스에 대한 중화 항체가 유도되고 질병 강화 항체는 유도되지 않는다. 특히, 코로나바이러스 융합전 안정화된 스파이크 단백질을 인코딩하는 구성요소 B-1을 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 것은 면역병리학적 효과, 예를 들어 강화된 질병 및/또는 항체 의존성 향상(ADE)을 유도하지 않는다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-1의 투여는 구성요소 B-1의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 상이한 코로나바이러스 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 B-1은 백신, 특히 상이한 코로나바이러스 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 B-1에 포함되는 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게는 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 B-1이 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
구성요소 B-2: 인플루엔자 바이러스
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스(성분 B-2로도 지칭됨)로부터 선택된다. 인플루엔자 바이러스는 오르소믹소비리데(Orthomyxoviridae) 과(NCBI 분류법 ID: 11308)에 속하며, 오르소믹소비리데 과는 알파인플루엔자바이러스(A형 인플루엔자 바이러스를 포함하는 속), 베타인플루엔자바이러스(B형 인플루엔자 바이러스를 포함하는 속), 감마인플루엔자바이러스(C형 인플루엔자 바이러스를 포함하는 속), 및 델타인플루엔자바이러스(D형 인플루엔자 바이러스를 포함하는 속)으로 하위 분류된다.
"구성요소 B" 단락에 기술된 일반적인 구현예 및 특징은 또한 인플루엔자 바이러스 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에 적용될 수 있음을 이해해야 한다.
본 발명의 맥락에서, 특정 유전자형, 종, 균주, 분리주 또는 혈청형에 관계없이 임의의 인플루엔자 바이러스는 구성요소 B의 "적어도 하나의 추가 바이러스"로 선택될 수 있다.
적절하게는, 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스는 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스 (NCBI 분류법 ID: 11320), 및/또는 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스 (NCBI 분류법 ID: 11520), 및/또는 적어도 하나의 C형 인플루엔자 C 바이러스 (NCBI 분류법 ID: 11552), 및/또는 적어도 하나의 D형 인플루엔자 바이러스 (NCBI 분류법 ID: 1511084)로부터 선택될 수 있다.
따라서, 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스는 적어도 하나의 A형 인플루엔자, 및/또는 적어도 하나의 B형 인플루엔자 및/또는 적어도 하나의 C형 인플루엔자로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스는 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스 및/또는 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다.
적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17 및 H18로 구성된 군으로부터 선택되는 헤마글루티닌(HA)을 특징으로 하는 A형 인플루엔자 바이러스로부터 선택될 수 있다. 바람직하게, A형 인플루엔자 바이러스는 H1, H3, H5, H7, H9 또는 H10으로 구성된 군에서 선택되는 헤마글루티닌(HA)을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스에서 선택된다.
또한, N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10 및 N11로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 하는 A형 인플루엔자 바이러스가 특히 바람직하다. 가장 바람직하게는 A형 인플루엔자 바이러스는 N1, N2 및 N8로 구성된 군에서 선택되는 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다.
구현예에서, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스는 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, H10N7 및 H10N8을 포함하는 목록의 적어도 하나로부터, 바람직하게 적어도 하나의 H1N1, H3N2, H5N1, 및 H5N8로부터 선택된 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다.
적합한 A형 및 B형 인플루엔자 바이러스 균주는 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009, FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015, FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009, FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014, FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008, FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013, FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018, FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018, FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019, FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019, FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 NYMC-X-307, FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016-CDC-LV18A, FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017, FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 CBER-22B CDC19A, FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017, FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019, FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/45/2019, FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019, FLUAV/H7N9/A/chicken/Zhejiang/C483/2013(H7N9), FLUAV/H10N8/A/Jiangxi/IPB13/2013(H10N8), FLUAV/Vietnam/1203/2004 (H5N1)로부터 선택될 수 있다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다아제(NA), 핵단백질(NP), 기질 단백질 1(M1), 기질 단백질 2(M2), 비구조 단백질 1(NS1), 비구조 단백질 2(NS2), 핵 수출 단백질(NEP) ), 폴리머라제 산성 단백질(PA), 폴리머라제 염기성 단백질 PB1, PB1-F2 및/또는 폴리머라제 염기성 단백질 2(PB2), 또는 이의 단편 또는 변이체 또는 임의의 합성적으로 조작된 인플루엔자 바이러스 펩타이드 또는 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서 적어도 하나의 코딩 영역은 인플루엔자 바이러스 또는 이의 변이체의 적어도 하나의 헤마글루티닌(HA)의 전장 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)의 적어도 하나의 전장 단백질을 인코딩한다.
다양한 구현예에 따르면, 구성요소 B의 핵산(특히 구성요소 B-2)은 본원에 정의된 인플루엔자 바이러스로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 및 추가로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 인코딩한다.
적절하게는, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 인코딩된 인플루엔자 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 촉진 또는 개선할 수 있고(예를 들어, 분비 신호 서열을 통해), 원형질막에서 본 발명의 인코딩된 항원성 펩타이드 또는 단백질의 고정을 촉진 또는 개선할 수 있고(예를 들어 막관통 요소를 통해), 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선할 수 있으며 (예를 들어, 다량체화 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해), 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 B의 핵산은 추가로 펩타이드 링커 요소, 자가-절단 펩티드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 인코딩할 수 있다.
적합한 다량체화 도메인은 WO2017081082의 서열번호: 1116-1167에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 막관통 요소는 WO2017081082의 서열번호: 1228-1343에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 VLP 형성 요소는 WO2017081082의 서열번호: 1168-1227에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 펩타이드 링커는 WO2017081082의 서열번호: 1509-1565에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 자가 절단 펩타이드는 WO2017081082의 서열번호: 1434-1508에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 면역 보조제 서열은 WO2017081082의 서열번호: 1360-1421에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 수지상 세포(DCs) 표적 서열은 WO2017081082의 서열번호: 1344-1359에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 분비 신호 펩타이드는 WO2017081082의 서열번호: 1-1115 및 서열번호: 1728에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 코딩 서열은 신호 펩타이드, 링커 펩타이드, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 삼량체화 또는 다량체화 요소, 막관통 요소, 또는 VLP 형성 서열로부터 선택된 하나 이상의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 추가적으로 인코딩한다.
상기 정의된 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질은 표 8(1 내지 52행)에 제공된다. 그 안에, 1 내지 52행 각각은 적합한 인플루엔자 구조에 상응한다. 표 8의 A열은 적합한 인플루엔자 항원 구조의 간단한 설명을 제공한다. 표 8의 B열은 각 인플루엔자 항원 구조의 단백질 (아미노산) 서열번호를 제공한다. 표 8의 D열은 상응하는 G/C 최적화된 핵산 코딩 서열의 서열번호를 제공한다(opt1, gc). 표 8의 E열은 상응하는 인간 코돈 사용에 적응된 핵산 코딩 서열의 서열번호를 제공한다(opt3, 인간).
특히, 본 발명의 설명은 본 출원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공되는 정보를 명시적으로 포함한다. 표 8의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조, 예를 들어 표 8의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열은 표 9 및 표 10에 제공된다.
표 8: 바람직한 인플루엔자 바이러스 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
행 A B D E
1 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 헤마글루티닌(HA) 14178 14230 14282
2 FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015 헤마글루티닌 (HA) 14179 14231 14283
3 FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009 헤마글루티닌 (HA) 14180 14232 14284
4 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 헤마글루티닌 (HA) 14181 14233, 26946 14285
5 FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 헤마글루티닌 (HA) 14182 14234 14286
6 FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 헤마글루티닌 (HA) 14183 14235 14287
7 FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018 헤마글루티닌 (HA) 14184 14236 14288
8 FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018 헤마글루티닌 (HA) 14185 14237 14289
9 FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019 헤마글루티닌 (HA) 14186 14238 14290
10 FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019 헤마글루티닌 (HA) 14187 14239 14291
11 FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 헤마글루티닌 (HA) 14188 14240 14292
12 FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 헤마글루티닌 (HA) 14189 14241 14293
13 FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 NYMC-X-307 헤마글루티닌 (HA) 14190 14242 14294
14 FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016-CDC-LV18A 헤마글루티닌 (HA) 14191 14243 14295
15 FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 헤마글루티닌 (HA) 14192 14244 14296
16 FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 헤마글루티닌 (HA) 14193 14245 14297
17 FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 헤마글루티닌 (HA) 14194 14246 14298
18 FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 CBER-22B CDC19A 헤마글루티닌 (HA) 14195 14247 14299
19 FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017 헤마글루티닌 (HA) 14196 14248 14300
20 FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017 헤마글루티닌 (HA) 14197 14249 14301
21 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019 헤마글루티닌 (HA) 14198 14250 14302
22 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019 헤마글루티닌 (HA) 14199 14251 14303
23 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/45/2019 헤마글루티닌 (HA) 14200 14252 14304
24 FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019 헤마글루티닌 (HA) 14201 14253 14305
25 FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019 헤마글루티닌 (HA) 14202 14254 14306
26 FLUAV/H7N9/A/chicken/Zhejiang/C483/2013(H7N9) 헤마글루티닌 (HA) 14203 14255 14307
27 FLUAV/H10N8/A/Jiangxi/IPB13/2013(H10N8) 헤마글루티닌 (HA) 14204 14256 14308
28 FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 헤마글루티닌 (HA) 14205 14257 14309
29 FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 헤마글루티닌 (HA) 14206 14258 14310
30 FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 BX-71 헤마글루티닌 (HA) 14207 14259 14311
31 FLUBV/H0N0/B/Washington/02/2019 헤마글루티닌 (HA) 14208 14260 14312
32 FLUBV/H0N0/B/Washington/02/2019 헤마글루티닌 (HA) 14209 14261 14313
33 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 뉴라미니다제 (NA) 14210 14262 14314
34 FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015 뉴라미니다제 (NA) 14211 14263 14315
35 FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009 뉴라미니다제 (NA) 14212 14264 14316
36 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 뉴라미니다제 (NA) 14213 14265 14317
37 FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 뉴라미니다제 (NA) 14214 14266 14318
38 FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 뉴라미니다제 (NA) 14215 14267 14319
39 FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018 뉴라미니다제 (NA) 14216 14268 14320
40 FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019 뉴라미니다제 (NA) 14217 14269 14321
41 FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 뉴라미니다제 (NA) 14218 14270 14322
42 FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 뉴라미니다제 (NA) 14219 14271 14323
43 FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017-CDC-LV24A 뉴라미니다제 (NA) 14220 14272 14324
44 FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017 뉴라미니다제 (NA) 14221 14273 14325
45 FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017(H3N2)-CDC-LV21A 뉴라미니다제 (NA) 14222 14274 14326
46 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019 뉴라미니다제 (NA) 14223 14275 14327
47 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/45/2019 뉴라미니다제 (NA) 14224 14276 14328
48 FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019 뉴라미니다제 (NA) 14225 14277 14329
49 FLUAV/H7N9/A/chicken/Zhejiang/C483/2013(H7N9) 뉴라미니다제 (NA) 14226 14278 14330
50 FLUAV/H10N8/A/Jiangxi/IPB13/2013(H10N8) 뉴라미니다제 (NA) 14227 14279 14331
51 FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 뉴라미니다제 (NA) 14228 14280 14332
52 FLUBV/H0N0/B/Washington/02/2019 뉴라미니다제 (NA) 14229 14281 14333
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14178-14229 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관하여 추가 정보는 또한 표 8 (A 및 B열의 1 내지 52행 참조), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스(HA)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14178-14181, 14184-14204 (A형 인플루엔자의 HA) 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관하여 추가 정보는 또한 표 8 (A 및 B열), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스(NA)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14210-14213, 14216-14227 (A형 인플루엔자의 NA) 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관하여 추가 정보는 또한 표 8 (A 및 B열), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스(HA 및 NA)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14182-14183, 14205-14209, 14214-14215, 14228-14229 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관하여 추가 정보는 또한 표 8 (A 및 B열), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018170245의 서열번호: 1-444, 458, 460, 462-479, 또는 543-565중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 특히, WO2018170245의 서열번호: 1-444, 458, 460, 462-479, 또는 543-565 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 1-32012, 224269, 224309 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2018078053 의 서열번호: 1-32012, 224269, 224309, 224310 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다. 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스로(HA)부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 1-14031 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2018078053 의 서열번호: 1-14031 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다. 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스로(NA)부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 14032-26397, 224309, 224310 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2018078053 의 서열번호: 14032-26397, 224309, 224310 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다. 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스로(HA)부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 26398-28576 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2018078053 의 서열번호: 26398-28576 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다. 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스로(NA)부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 28577-30504 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2018078053 의 서열번호: 28577-30504 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-2)의 핵산은 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 그러한 맥락에서, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 항원성 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 임의의 코딩 서열은 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있고 따라서 구성요소 B의 핵산에 포함될 수 있다.
구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)의 핵산은 본원에 정의된 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 WO2018170245의 서열번호: 1-444, 458, 460, 462-479, 또는 543-565; WO2018078053의 서열번호: 1-32012, 224269, 224309, 또는 이들 중 임의의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서 WO2018170245의 서열번호: 1-444, 458, 460, 462-479, 또는 543-565; WO2018078053의 서열번호: 1-32012, 224269, 224309, 또는 이들 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있고 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 핵산은 본원에 정의된 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이들 중 임의의 변이체의 단편을 인코딩하는, 바람직하게 서열번호: 14178-14229 중 어느 하나를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서, 서열번호: 14178-14229 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 또는 이들의 임의의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있으며 이에 따라 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2018170245의 서열번호: 447-457, 459, 461, 491-503, 505-523, 524-542, 566-569, 570-573로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2018170245의 서열번호: 447-457, 459, 461, 491-503, 505-523, 524-542, 566-569, 570-573 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 32013-46043, 64025-78055, 224085-224106, 96037-110067, 128049-142079, 160061-174091, 192073-206103, 58410-60588, 90422-92600, 224107-224112, 122434-124612, 154446-156624, 186458-188636, 218470-220648, 46044-58409, 224311, 224312, 78056-90421, 224113, 224313-224317, 110068-122433, 142080-154445, 174092-186457, 206104-218469, 60589-62516, 92601-94528, 124613-126540, 156625-158552, 188637-190564, 220649-222576, 224085-224284로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2018078053의 서열번호: 32013-46043, 64025-78055, 224085-224106, 96037-110067, 128049-142079, 160061-174091, 192073-206103, 58410-60588, 90422-92600, 224107-224112, 122434-124612, 154446-156624, 186458-188636, 218470-220648, 46044-58409, 224311, 224312, 78056-90421, 224113, 224313-224317, 110068-122433, 142080-154445, 174092-186457, 206104-218469, 60589-62516, 92601-94528, 124613-126540, 156625-158552, 188637-190564, 220649-222576, 224085-224284 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019092153의 서열번호: 26-14079, 14080-16264, 16265-28640, 28641로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2019092153의 서열번호: 26 내지 14079, 14080 내지 16264, 16265 to 28640, 28641 및 이에 관한 상응하는 개시 내용은 참고문헌으로 본원에 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 서열번호: 14230-14333, 14334-14541, 26946, 26947-26955로부터 선택된 핵산 서열의 어느 하나, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 8(C-F열), 표 9, 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14230-14233, 14236-14256, 14282-14285, 14288-14308, 14334-14337, 14340-14360, 14386-14389, 14392-14412, 14438-14441, 14444-14464, 14490-14493, 14496-14516, 26949, 26947, 26950, 26948 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체로부터 선택된 핵산 서열의 임의의 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 A형 인플루엔자 바이러스 항원(HA)을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 8(C-F열), 표 9, 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14366-14369, 14372-14383, 14418-14421, 14424-14435, 14470-14473, 14476-14487, 14522-14525, 14528-14539, 26953, 26954 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체로부터 선택된 핵산 서열의 임의의 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 A형 인플루엔자 바이러스 항원(NA)을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 8(C-F열), 표 9, 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14234, 14235, 14257-14261, 14266, 14267, 14280, 14281, 14286, 14287, 14309-14313, 14318, 14319, 14332, 14333, 14338, 14339, 14361-14365, 14370, 14371, 14384, 14385, 14390, 14391, 14413-14417, 14422, 14423, 14436, 14437, 14442, 14443, 14465-14469, 14474, 14475, 14488, 14489, 14494, 14495, 14517-14521, 14526, 14527, 14540, 14541, 26951, 26952, 26955또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체로부터 선택된 핵산 서열의 임의의 하나와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 B형 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 8(C-F열), 표 9, 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형 코딩 서열이고, 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 인플루엔자 바이러스 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게는 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다. 특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 B의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형 코딩 서열은 선택된 G/C 최적화 코딩 서열, 인간 코돈 사용에 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 변형된 코딩 서열이다.
특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 바람직한 핵산 서열은 표 9(C 및 D열)에 제공된다. 여기에서 각 행은 본 발명의 특정 적합한 인플루엔자 바이러스 구조를 나타내며(표 8과 비교), 여기서 인플루엔자 바이러스 구조의 설명은 표 9의 A열에 표시되고, 각각의 인플루엔자 바이러스 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 B열에 제공된다. 각각의 인플루엔자 바이러스 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 8에 제공된다. 추가 정보는 서열 목록에서 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
표 9: 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
A B C D
FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 헤마글루티닌 (HA) 14178 14334, 14386, 26949 14438, 14490
FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015 헤마글루티닌 (HA) 14179 14335, 14387 14439, 14491
FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009 헤마글루티닌 (HA) 14180 14336, 14388 14440, 14492
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 헤마글루티닌 (HA) 14181 14337, 14389, 26947, 26950 14441, 14493, 26948
FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 헤마글루티닌 (HA) 14182 14338, 14390, 26951 14442, 14494
FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 헤마글루티닌 (HA) 14183 14339, 14391, 26952 14443, 14495
FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018 헤마글루티닌 (HA) 14184 14340, 14392 14444, 14496
FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018 헤마글루티닌 (HA) 14185 14341, 14393 14445, 14497
FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019 헤마글루티닌 (HA) 14186 14342, 14394 14446, 14498
FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019 헤마글루티닌 (HA) 14187 14343, 14395 14447, 14499
FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 헤마글루티닌 (HA) 14188 14344, 14396 14448, 14500
FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 헤마글루티닌 (HA) 14189 14345, 14397 14449, 14501
FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 NYMC-X-307 헤마글루티닌 (HA) 14190 14346, 14398 14450, 14502
FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016-CDC-LV18A 헤마글루티닌 (HA) 14191 14347, 14399 14451, 14503
FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 헤마글루티닌 (HA) 14192 14348, 14400 14452, 14504
FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 헤마글루티닌 (HA) 14193 14349, 14401 14453, 14505
FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 헤마글루티닌 (HA) 14194 14350, 14402 14454, 14506
FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 CBER-22B CDC19A 헤마글루티닌 (HA) 14195 14351, 14403 14455, 14507
FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017 헤마글루티닌 (HA) 14196 14352, 14404 14456, 14508
FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017 헤마글루티닌 (HA) 14197 14353, 14405 14457, 14509
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019 헤마글루티닌 (HA) 14198 14354, 14406 14458, 14510
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019 헤마글루티닌 (HA) 14199 14355, 14407 14459, 14511
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/45/2019 헤마글루티닌 (HA) 14200 14356, 14408 14460, 14512
FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019 헤마글루티닌 (HA) 14201 14357, 14409 14461, 14513
FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019 헤마글루티닌 (HA) 14202 14358, 14410 14462, 14514
FLUAV/H7N9/A/chicken/Zhejiang/C483/2013(H7N9) 헤마글루티닌 (HA) 14203 14359, 14411 14463, 14515
FLUAV/H10N8/A/Jiangxi/IPB13/2013(H10N8) 헤마글루티닌 (HA) 14204 14360, 14412 14464, 14516
FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 헤마글루티닌 (HA) 14205 14361, 14413 14465, 14517
FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 헤마글루티닌 (HA) 14206 14362, 14414 14466, 14518
FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 BX-71 헤마글루티닌 (HA) 14207 14363, 14415 14467, 14519
FLUBV/H0N0/B/Washington/02/2019 헤마글루티닌 (HA) 14208 14364, 14416 14468, 14520
FLUBV/H0N0/B/Washington/02/2019 헤마글루티닌 (HA) 14209 14365, 14417 14469, 14521
FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 뉴라미니다제 (NA) 14210 14366, 14418, 26953 14470, 14522
FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015 뉴라미니다제 (NA) 14211 14367, 14419 14471, 14523
FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009 뉴라미니다제 (NA) 14212 14368, 14420 14472, 14524
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 뉴라미니다제 (NA) 14213 14369, 14421, 26954 14473, 14525
FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 뉴라미니다제 (NA) 14214 14370, 14422, 26955 14474, 14526
FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 뉴라미니다제 (NA) 14215 14371, 14423 14475, 14527
FLUAV/H1N1/A/Brisbane/02/2018 뉴라미니다제 (NA) 14216 14372, 14424 14476, 14528
FLUAV/H1N1/A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019 뉴라미니다제 (NA) 14217 14373, 14425 14477, 14529
FLUAV/H3N2/A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 뉴라미니다제 (NA) 14218 14374, 14426 14478, 14530
FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017 뉴라미니다제 (NA) 14219 14375, 14427 14479, 14531
FLUAV/H3N2/A/Kansas/14/2017-CDC-LV24A 뉴라미니다제 (NA) 14220 14376, 14428 14480, 14532
FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017 뉴라미니다제 (NA) 14221 14377, 14429 14481, 14533
FLUAV/H3N2/A/Switzerland/8060/2017(H3N2)-CDC-LV21A 뉴라미니다제 (NA) 14222 14378, 14430 14482, 14534
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/2671/2019 뉴라미니다제 (NA) 14223 14379, 14431 14483, 14535
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/45/2019 뉴라미니다제 (NA) 14224 14380, 14432 14484, 14536
FLUAV/H3N2/A/South Australia/34/2019 뉴라미니다제 (NA) 14225 14381, 14433 14485, 14537
FLUAV/H7N9/A/chicken/Zhejiang/C483/2013(H7N9) 뉴라미니다제 (NA) 14226 14382, 14434 14486, 14538
FLUAV/H10N8/A/Jiangxi/IPB13/2013(H10N8) 뉴라미니다제 (NA) 14227 14383, 14435 14487, 14539
FLUBV/H0N0/B/Colorado/06/2017 뉴라미니다제 (NA) 14228 14384, 14436 14488, 14540
FLUBV/H0N0/B/Washington/02/2019 뉴라미니다제 (NA) 14229 14385, 14437 14489, 14541
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2018078053의 서열번호: 224085-224284 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 바이러스 항원, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 우라실 뉴클레오티드의 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드에 의해 치환된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 핵산, 바람직하게 RNA는 서열번호: 14334-14541, 26946-26955로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 우라실 뉴클레오티드의 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드에 의해 치환된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래에, 및 표 9(특히 C 및 D열 참조)에 제공된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)는 적어도 하나의 인플루엔자로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함한다. 바람직하게, 본원에 정의된 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)는 본원에 정의된 바와 같은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)는 각각 동일한 인플루엔자 바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 인플루엔자 바이러스는 단백질 또는 펩타이드의 동일한 레퍼토리를 (본질적으로) 발현하며, 여기서 모든 단백질 또는 펩타이드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 인플루엔자 바이러스는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 이들 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게는 그들의 아미노산 서열(들)이 다르지 않다.
구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 각각 유전적으로 별개의 인플루엔자 바이러스(예를 들어, 별개의 인플루엔자 바이러스 분리주/균주), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 "별개의" 또는 "별개의 인플루엔자 바이러스"라는 용어는 적어도 2개의 각각의 인플루엔자 바이러스(예를 들어, 별개의 인플루엔자 바이러스 분리물) 사이의 차이로서 이해되어야 하며, 여기서 그 차이는 각각 별개의 인플루엔자 바이러스의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 인플루엔자 바이러스는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)는 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 복수의 핵산 서열, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80 또는 100개 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하며, 바람직하게는 복수의 핵산 서열 각각은 본원에 정의된 바와 같은 인플루엔자 항원을 인코딩하는 핵산 서열로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 복수의 핵산 서열은 본원에 정의된 HA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하며, 바람직하게 본원에 정의된 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스의 본원에 정의된 NA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)의 복수의 핵산 서열은 본원에 정의된 HA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하며, 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스의 본원에 정의된 NA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩한다.
이러한 맥락에서, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 A형 인플루엔자 바이러스 H1, 바람직하게는 헤마글루티닌 (HA) 및/또는 뉴라미니다제 (NA)의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, A형 인플루엔자 바이러스 H3의 단백질, 바람직하게 헤마글루티닌 (HA) 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, A형 인플루엔자 바이러스 H5의 단백질, 바람직하게 헤마글루티닌 (HA) 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및 선택적으로 A형 인플루엔자 바이러스 H7의 단백질, 바람직하게 헤마글루티닌 (HA) 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 선택적으로 A형 인플루엔자 바이러스 H9의 단백질, 바람직하게 헤마글루티닌 (HA) 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
바람직하게, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 A형 인플루엔자 바이러스 H1의 헤마글루티닌 (HA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, A형 인플루엔자 바이러스 H3의 헤마글루티닌 (HA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, A형 인플루엔자 바이러스 H5의 헤마글루티닌 (HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및 선택적으로 A형 인플루엔자 바이러스 H7의 헤마글루티닌 (HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 선택적으로 A형 인플루엔자 바이러스 H9의 헤마글루티닌 (HA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, 및/또는 뉴라미니다제 (NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열을 포함한다.
특정한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)는 A형 인플루엔자 바이러스 H1N1의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, A형 인플루엔자 바이러스 H3N2의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열, A형 인플루엔자 바이러스 H5N1의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열을 포함한다.
추가적으로, 약학적 조성물의 구성요소 B(특히 구성요소 B-2)는 바람직하게 B형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 특히 RNA 서열을 추가로 포함한다.
바람직하게 이러한 맥락에서, 구성요소 B의 핵산 서열(들)은 표 10의 하기 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다 ("바람직한 RNA 서열"):
표 10: 바람직한 인플루엔자 바이러스 RNA 서열
균주/ 유기체 HA NA
FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 14334, 14386, 14438, 14490, 26949 14366, 14418, 14470, 14522, 26953
FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015 14335, 14387, 14439, 14491 14367, 14419, 14471, 14523
FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009 14336, 14388, 14440, 14492 14368, 14420, 14472, 14524
FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 14337, 14389, 14441, 14493, 26947, 26950, 26948 14369, 14421, 14473, 14525, 26954
FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 14338, 14390, 14442, 14494, 26951 14370, 14422, 14474, 14526, 26955
FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 14339, 14391, 14443, 14495, 26952 14371, 14423, 14475, 14527
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 본원에 정의된 핵산, 바람직하게 RNA 서열을 포함하는 4가 인플루엔자 칵테일이다. 이러한 맥락에서 다음 단백질 서열을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 RNA의 조합이 특히 바람직하다(예를 들어 4가 인플루엔자 칵테일에 적합함):
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 HA 단백질
- FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 HA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013의 HA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 HA 단백질
상기 4가 인플루엔자 칵테일의 적합한 RNA 서열은 표 10으로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 본원에 정의된 핵산, 바람직하게 RNA 서열을 포함하는 4가 인플루엔자 칵테일이다. 이러한 맥락에서 다음 단백질 서열을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 RNA의 조합이 특히 바람직하다(예를 들어 4가 인플루엔자 칵테일에 적합함):
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 NA 단백질
- FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 NA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 NA 단백질
상기 4가 인플루엔자 칵테일에 대한 적합한 RNA 서열은 표 10으로부터 선택될 수 있다.
보다 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 본원에 정의된 핵산, 바람직하게 RNA 서열을 포함하는 4가 인플루엔자 칵테일이다. 이러한 맥락에서 다음 단백질 서열을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 RNA의 조합이 특히 바람직하다(예를 들어 4가 인플루엔자 칵테일에 적합함):
- FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009의 HA 단백질
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 HA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 HA 단백질
- A형 인플루엔자/Vietnam/1194/2004 (H5N1)의 HA 단백질
상기 4가 인플루엔자 칵테일에 적합한 RNA 서열은 표 10으로부터 선택될 수 있다.
또한 보다 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 본원에 정의된 핵산, 바람직하게 RNA 서열을 포함하는 7가(septavalent or septivalent) 인플루엔자 칵테일이다. 이러한 맥락에서 다음 단백질 서열을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 RNA의 조합이 특히 바람직하다(예를 들어 7가 인플루엔자 칵테일에 적합함):
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 HA 단백질
- FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 HA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 의 HA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 의 HA 단백질
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 NA 단백질
- FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 NA 단백질
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 NA 단백질
상기 7가 인플루엔자 칵테일에 적합한 RNA 서열은 표 10으로부터 선택될 수 있다.
이에 따라, 구현예에서, 구성요소 B(특히 B-2)는 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 복수의 핵산 서열을 포함하며, 상기 인플루엔자 바이러스는 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009, FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015, FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009, FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014, FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008, FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013를 포함하는 목록으로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B (특히 구성요소 B-2)는 복수의 인플루엔자 바이러스 항원, 바람직하게 7개 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 복수의 핵산 서열, 바람직하게 7개 핵산 서열을 포함하며, 상기 인플루엔자 바이러스 항원은 다음으로부터 선택된다
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 HA 단백질,
- FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 HA 단백질,
- FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013의 HA 단백질,
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 HA 단백질,
- FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 NA 단백질,
- FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 NA 단백질, 및
- FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 NA 단백질
바람직하게 상기 핵산 서열, 바람직하게 RNA 서열은 표 10으로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-2는 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B-2는 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B-2의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 인플루엔자 바이러스 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B-2의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 인플루엔자 바이러스 항원의 생성을 초래한다. 핵산이 DNA(예를 들어, 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사를 초래하고, RNA의 인코딩된 인플루엔자 바이러스 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-2의 투여는 구성요소 B-2의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 인플루엔자 바이러스 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 B-2는 백신, 특히 인플루엔자 바이러스 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 B-2에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 B-2가 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
구성요소 B-3: 뉴모비리데(Pneumoviridae) 바이러스
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 뉴모비리데 과의 적어도 하나의 바이러스로부터 선택된다.
"구성요소 B" 단락에 기술된 일반적인 구현예 및 특징은 또한 뉴모비리데 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에 적용될 수 있음을 이해해야 한다.
뉴모비리데 (NCBI 분류법 ID: 11244)는 Mononegavirales 목의 바이러스과이다. 이는 2015년 현재 용해된 파라믹소바이럴(paramyxoviral) 아과(subfamily) 뉴모비리데를 상승시켜 생성되었다. 현재 뉴모비리데 과에는 5종이 있으며, 2개 속(메타뉴모바이러스 및 오르소뉴모바이러스)으로 나뉜다. 오르소뉴모바이러스(NCBI 분류법 ID: 1868215)는 인간 호흡기 세포융합 바이러스 RSV(예: RSV A, RSV B)를 포함하는 속이다. 메타뉴모바이러스(NCBI 분류법 ID: 162387)는 인간 메타뉴모바이러스(hMPV)를 포함하는 속이다.
뉴모비리데 바이러스의 게놈은 분절되지 않은 네거티브 센스 단일 가닥 RNA로 구성된다. 크기는 약 15kb이며 일반적으로 11개의 단백질을 인코딩한다. 게놈의 독특한 특징은 단백질 M2-1 및 M2-2를 인코딩하는 M2 유전자이다. 이 과의 바이러스는 종종 호흡기 감염과 관련이 있으며 호흡기 분비물을 통해 전염된다
본 발명의 구현예에서, 뉴모비리데 로부터 선택되거나 유래된 임의의 단백질이 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있고 구성요소 B(특히, 구성요소 B-4)의 코딩 서열 또는 핵산에 의해 인코딩될 수 있다.
호흡기 세포융합 바이러스 및/또는 적어도 하나의 메타뉴모바이러스(Metapneumovirus)를 포함하는 병원성 뉴모비리데 바이러스가 본 발명의 맥락에서 적합하다.
구성요소 B-3a: 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV):
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 뉴모비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 호흡기 세포융합 바이러스(RSV)로부터 선택된다(또한 본원에서 구성요소 B-3a로 언급됨).
본원에서 사용되는 "호흡기 세포융합 바이러스"라는 용어 또는 상응하는 약어 "RSV"는 임의의 기원의 호흡기 세포융합 바이러스를 포함하는 특정 바이러스 균주, 변이체, 혈청형 또는 분리주 등에 제한되지 않는다.
본 발명의 맥락에서 적합한 RSV 바이러스는 공개된 PCT 특허 출원 WO2019202035의 목록 1("RSV 바이러스 균주")로부터 선택될 수 있다. 따라서, WO2019202035의 목록 1 및 그와 관련된 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 호흡기 세포융합 바이러스 단리물 RSV Memphis-37(균주 Memphis-37)(NCBI 분류법 ID: 12814) 및/또는 인간 호흡기 세포융합 바이러스 A2, 인간 호흡기 세포융합 바이러스(균주 A2)(NCBI 분류법 ID: 11259)로부터 유래된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 RSV 융합 단백질 F, RSV 기질 단백질 M, RSV 핵단백질 N, RSV M2-1 단백질 및/또는 RSV 인단백질 P, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 RSV 융합 단백질 F, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
RSV F 단백질은 초기에(숙주 세포 감염 후) 단일 폴리펩티드 전구체로서 발현되며, 전체 길이 융합 단백질 F(본원에서 "F0"으로 지칭됨)로 지정된다. F0은 소포체에서 삼량체를 형성하고 두 개의 보존된 부위에서 세포/숙주 푸린(furin) 유사 프로테아제에 의해 처리되어 F1, F2 및 Pep27 폴리펩티드를 생성한다. Pep27 폴리펩티드는 절제되고 성숙한 F 단백질의 일부를 형성하지 않는다. F2 폴리펩티드는 F0 전구체의 N-말단 부분에서 기원하고 2개의 이황화 결합을 통해 F1 폴리펩티드에 연결된다. F1 폴리펩티드는 F0 전구체의 C-말단 부분에서 유래하고 세포질 꼬리에 연결된 막관통 도메인을 통해 성숙한 F 단백질을 막에 고정시킨다. 3개의 F2-F1 헤테로다이머 단위("프로토머")가 조립되어 성숙한 F 단백질을 형성한다. 초기에, 성숙한 F 단백질은 준안정(metastable) 형태(본원에서 "융합전 형태"로 지칭됨)에 있다. 촉발되면 바이러스 및 표적 세포막을 융합시키는 극적이고 비가역적인 형태 변화(본원에서 "융합후 형태"로 지칭됨)를 겪는다.
본 발명의 맥락에서, 적합한 RSV F 단백질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2019202035의 목록 2에 제공된 RSV F 단백질로부터 선택되거나 유도될 수 있다. 따라서, WO2019202035의 목록 2 및 이와 관련된 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, RSV F 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 전장 F 단백질(F0) 또는 C-말단이 결실된 F 단백질(F-del), 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변종이다.
본 발명의 맥락에서, "RSV F 단백질", "RSV 융합 단백질(F)", "RSV F" 또는 "F"는 가장 넓은 의미로 이해될 수 있으며 F0(F 폴리펩타이드 전구체), F1 , F2 및 Pep27 폴리펩타이드, F2-F1 이종이량체, 또는 성숙한 F 단백질(3개의 F2-F1 이종이량체 포함), 또는 이들 중 임의의 단편 및 변이체를 지칭한다. 따라서, "RSV 융합(F) 단백질로부터 유도된 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 예를 들어 F0(F 단백질 폴리펩티드 전구체), F1, F2 및 Pep27 폴리펩티드, F2-F1 이종이량체 또는 성숙한 F 단백질로부터 유래된 펩타이드, 단백질, 단편 또는 변이체를 의미한다. 또한, "RSV 융합(F) 단백질로부터 유도된 펩타이드 또는 단백질"이라는 용어는 예를 들어 특정 단백질 요소(예를 들어 세포질 꼬리, 푸린 절단 부위, Pep27)가 결여되거나 또는 예를 들어 추가 요소(예를 들어 링커 요소, 이종 신호 펩타이드 등)를 포함하도록 유전적으로 조작될 수 있는 상기 정의된 바와 같은 "RSV F 단백질" 또는 "RSV 융합 단백질(F)"로부터 유래된 펩타이드, 단백질, 단편 또는 변이체를 의미한다.
RSV F 단백질에서 아미노산(aa) 잔기 및 이들의 위치에 대한 참조가 이루어진 경우, 본원에서 사용된 임의의 번호는 달리 명시되지 않는 한 HRSV(A2)(WO2019202035의 서열번호: 68)의 상응하는 F0 전구체 단백질 또는 HRSV(Memphis-37)(WO2019202035의 서열번호: 8937 또는 11726)의 상응하는 F0 전구체 단백질에서 각각의 aa 잔기의 위치와 관련된다는 점에 유의해야 하며, 여기서 위치 "1"은 첫 번째 aa 잔기에 해당하고, 즉, HRSV(A2) F0 전구체 단백질 또는 HRSV(Memphis-37) F0 전구체 단백질의 N-말단에 있는 aa 잔기에 해당한다.
특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-3a)의 핵산은 RSV F 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하며, 여기서 상기 RSV F 단백질은 융합전 형태에서 항원을 안정화시키도록 설계된다. 융합전 형태는 항체를 중화시키기 위한 여러 잠재적 에피토프가 상기 단백질 형태에서 단지 접근가능하기 때문에 효율적인 RSV 백신의 맥락에서 특히 유리하다.
따라서, 바람직한 구현예에서, RSV F 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화된 F 단백질(F_stab)로부터 선택되거나 유도된다.
몇몇 구현예에서, RSV F 단백질은 융합전 형태의 F 단백질을 안정화시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 융합전 형태에서 F 단백질의 막 원위 부분(F1 폴리펩타이드의 N-말단 영역 포함)을 안정화시키는 치환을 포함한다. 예를 들어, 아미노산 치환은 비-천연 이황화 결합을 도입할 수 있거나 공동 충전 아미노산 치환일 수 있다.
따라서, 여러 구현예에서, 바람직한 RSV F 단백질은 융합전 형태에서; 즉 하나 이상의 융합전 사양(specification) 항체에 특이적으로 결합하는 형태에서, 단백질을 안정화시키는 비-천연 이황화 결합을 형성하며, 및/또는 융합전 형태에 존재하지만 RSV F 단백질의 융합 후 형태에 존재하지 않는 적합한 항원 부위를 제시하는 S155C 및 S290C 치환을 포함한다. 추가 구현예에서, 재조합 RSV F 단백질은 위치 190, 위치 207, 또는 위치 190 및 207에서 F, L, W, Y, H 또는 M 치환을 추가로 포함할 수 있다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 핵산은 RSV F 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하며, 여기서 RSV F 단백질은 DSCav1 돌연변이(S155C, S290C, S190F 및 V207L), 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 2개의 서브유닛, 단일 폴리펩타이드 사슬로 성숙한 F의 F1 및 F2를 포함하는 조작된 단백질일 수 있으며, 상기 F2 및 F1은 바람직하게 링커(GS)를 통해 연결된다. F2-링커-F1 RSV F 단백질은 aa104-144(푸린 절단 부위 및 Pep27을 포함)가 결여되고 F2 폴리펩타이드 및 F1 폴리펩타이드 사이의 링커(예를 들어 GS 링커)를 포함한다. F2-링커-F1 단백질은 안정성 및/또는 항원성 측면에서 우수한 특성을 나타낼 수 있다.
따라서, 바람직한 구현예에서, RSV F 단백질은 단일 폴리펩타이드 사슬로 융합된 2개의 서브유닛 F2 및 F1을 포함하고, 여기서 F2 및 F1은 링커 요소, 바람직하게는 본원에 명시된 바와 같은 GS 링커를 통해 연결되며, 바람직하게는 안정한 F2-링커-F1 단백질을 생성한다.
바람직하게는, 상기 F2-링커-F1 융합 단백질, 예를 들어 F(1-103)-GS-F(145-574) 또는 F(1-103)-GS-F(145-553)은 위에 약술된 바와 같은 DScav1 돌연변이(본원에서 "mut0"으로 지칭됨)를 추가로 포함한다.
특히 바람직한 구현예에서, RSV F 단백질은 (S46G, A149C, S215P, Y458C, K465Q), (S46G, E92D, A149C, S215P, Y458C, K465Q), (S46G, N67I, E92D, A149C, S215P, Y458C, K465Q), (A149C, Y458C), (N183GC, N428C), (Q98C, Q361C, S46G, E92D, L95M, S215P, I217P, I221M, R429K, K465Q), (Q98C, Q361C, L95M, I221M, R429K), 또는 (N183GC, N428C, S46G, N67I, E92D, S215P, K465Q) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 선택된 적어도 하나의 추가 돌연변이를 추가로 포함할 수 있다.
특히 바람직한 구현예에서, F2-링커-F1 단백질 (F(1-103)-GS-F(145-574) or F(1-103)-GS-F(145-553))은 바람직하게 DSCav1 돌연변이에 추가로, S46G, A149C, S215P, Y458C, K465Q, 본원에서 "mut1"로 지칭됨; S46G, E92D, A149C, S215P, Y458C, K465Q, 본원에서 "mut2"로 지칭됨; S46G, N67I, E92D, A149C, S215P, Y458C, K465Q, 본원에서 "mut3"로 지칭됨; A149C, Y458C, 본원에서 "mut4"로 지칭됨; N183GC, N428C, 본원에서 "mut5"로 지칭됨; Q98C, Q361C, S46G, E92D, L95M, S215P, I217P, I221M, R429K, K465Q, 본원에서 "mut6"; Q98C, Q361C, L95M, I221M, R429K로 지칭됨, 본원에서 "mut7"로 지칭됨; N183GC, N428C, S46G, N67I, E92D, S215P, K465Q, 본원에서 "mut8"로 지칭된 것으로부터 선택된 적어도 하나의 돌연변이를 추가로 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에 따르면, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 RSV로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 및 추가로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 인코딩한다.
적절하게는 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 (예를 들어, 분비 신호 서열을 통해) 인코딩된 RSV 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 촉진하거나 개선할 수 있고, (예를 들어 막관통 요소를 통해) 원형질막에서 인코딩된 RSV 항원성 펩타이드 또는 단백질의 고정을 촉진하거나 개선할 수 있고, (예를 들어 다량체화 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해) 항원 복합체의 형성을 촉진하거나 개선할 수 있고, 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진하거나 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 핵산은 펩타이드 링커 요소, 자가-절단 펩타이드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 인코딩할 수 있다.
적합한 다량체화 도메인은 WO2017081082의 서열번호: 1116-1167에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 막관통 요소는 WO2017081082의 서열번호: 1228-1343 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 VLP 형성 서열은 WO2017081082의 서열번호: 1168-1227 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 펩타이드 링커는 WO2017/081082의 서열번호: 1509-1565 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 자가 절단 펩타이드는 WO2017081082의 서열번호: 1434-1508 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 면역 보조제 서열은 WO2017081082의 서열번호: 1360-1421 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 수지상 세포(DCs) 표적화 서열은 WO2017081082의 서열번호: 1344-1359 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 적합한 분비 신호 펩타이드는 WO2017081082의 서열번호: 1-1115 및 서열번호: 1728 에 따른 아미노산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 코딩 서열은 신호 펩타이드, 링커 펩타이드, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 삼량체화 또는 다량체화 요소, 막관통 요소, 또는 VLP 형성 서열로부터 선택된 하나 이상의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 추가로 인코딩한다.
상기 정의된 바와 같은 RSV로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질은 하기 표 11(1행 내지 10행)에 제공된다. 여기에서 각 1~10행은 적합한 RSV 구조에 해당한다. 표 11의 A열은 적합한 RSV 항원 구조의 간단한 설명을 제공한다. 표 11의 B열은 각각의 RSV 항원 구조의 단백질(아미노산) 서열번호를 제공한다. 표 11의 D열은 상응하는 G/C 최적화 핵산 코딩 서열(opt1, gc)의 서열번호를 제공한다. 표 11의 E열은 상응하는 인간 코돈 사용 방식에 적응된 핵산 코딩 서열(opt 3, 인간)의 서열번호를 제공한다.
특히, 본 발명의 설명은 본 출원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공되는 정보를 명시적으로 포함한다. 표 11의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조, 예를 들어 표 11의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열은 표 12에 제공된다.
표 11: 바람직한 RSV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
행 A B D E
1 HRSV-A/RSVA/Homo sapiens/USA/84I-215A-01/1984 융합 당단백질 (F0) 14542 14552 14562
2 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F0) 14543 14553 14563
3 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del) 14544 14554 14564
4 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F0_DSCav1) 14545 14555 14565
5 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1) 14546 14556 14566
6 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F_DSCav1_mut4) 14547 14557 14567
7 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1_mut4) 14548 14558 14568
8 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F_DSCav1_mut5) 14549 14559 14569
9 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1_mut5) 14550 14560 14570
10 HRSV-A/A2 기질 단백질 (M2-1) 14551 14561 14571
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14542-14551 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 8(A 및 B열의 1 내지 10열 참조), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 핵산에 의해 인코딩될 수 있는 추가 RSV F 단백질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2019202035의 표 1에 제공된다. 이에 따라, 공개된 PCT 특허 출원 WO2019202035의 표 1, 및 이와 관련된 개시 내용 및 설명은 본원에 참조로 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 68, 483, 898, 1267, 1636, 2005, 2374, 2743, 3112, 3481, 3850, 4219, 4588, 4957, 5326, 5695, 6064, 6433, 6802, 7171, 7540, 7909, 11726, 12095, 12464, 12833, 13940, 14309, 14678, 15047, 15416, 15785, 13202, 13571, 16154, 16523, 16892, 17261, 17630, 17999, 18368, 18737, 19106, 19475, 8279-9683 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2019202035의 서열번호: 68, 483, 898, 1267, 1636, 2005, 2374, 2743, 3112, 3481, 3850, 4219, 4588, 4957, 5326, 5695, 6064, 6433, 6802, 7171, 7540, 7909, 11726, 12095, 12464, 12833, 13940, 14309, 14678, 15047, 15416, 15785, 13202, 13571, 16154, 16523, 16892, 17261, 17630, 17999, 18368, 18737, 19106, 19475, 8279-9683 및 이와 관련된 개시 내용(예를 들어 WO2019202035의 표 1에 제공된 정보)은 본원에 참조로 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2014160463 의 서열번호: 1-1428 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2014160463 의 서열번호: 1-1428 및 이와 관련된 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2015024668 의 서열번호: 1-11 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2015024668 의 서열번호: 1-11 및 이와 관련된 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2017070622 의 서열번호: 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 243, 또는 245 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2017070622 의 서열번호: 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 243, 또는 245및 이와 관련된 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2017172890 의 서열번호: 1-65, 81-95, 110-116 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이에 따라, WO2017172890 의 서열번호: 1-65, 81-95, 110-116 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-3a)의 핵산은 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 RSV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 그러한 맥락에서, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 RSV 항원성 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 임의의 코딩 서열은 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있고 따라서 구성요소 B의 핵산에 포함될 수 있다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 핵산은 본원에 정의된 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 WO2019202035의 서열번호: 68, 483, 898, 1267, 1636, 2005, 2374, 2743, 3112, 3481, 3850, 4219, 4588, 4957, 5326, 5695, 6064, 6433, 6802, 7171, 7540, 7909, 11726, 12095, 12464, 12833, 13940, 14309, 14678, 15047, 15416, 15785, 13202, 13571, 16154, 16523, 16892, 17261, 17630, 17999, 18368, 18737, 19106, 19475, 8279-9683; WO2014160463의 서열번호: 1-1428; WO2015024668의 서열번호: 1-11; WO2017070622의 서열번호: 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 243, 245; 및 WO2017172890의 서열번호: 1-65, 81-95, 110-116 또는 이들 서열의 임의의 변이체의 단편 중 어느 하나를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서 WO2019202035의 서열번호: 68, 483, 898, 1267, 1636, 2005, 2374, 2743, 3112, 3481, 3850, 4219, 4588, 4957, 5326, 5695, 6064, 6433, 6802, 7171, 7540, 7909, 11726, 12095, 12464, 12833, 13940, 14309, 14678, 15047, 15416, 15785, 13202, 13571, 16154, 16523, 16892, 17261, 17630, 17999, 18368, 18737, 19106, 19475, 8279-9683; WO2014160463의 서열번호: 1-1428; WO2015024668의 서열번호: 1-11; WO2017070622의 서열번호: 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 243, 245; 및 WO2017172890의 서열번호: 1-65, 81-95, 110-116 또는 이들 서열의 임의의 변이체의 단편 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있고 따라서 본 발명의 적합한 코딩 서열로 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 핵산은 본원에 정의된 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 서열번호: 14542-14551 또는 이들 서열의 임의의 변이체의 단편 중 어느 하나를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서 서열번호: 14542-14551 또는 이들 서열의 임의의 변이체의 단편 중 어느 하나와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있고 따라서 본 발명의 적합한 코딩 서열로 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 69-482, 484-897, 899-1266, 1268-1635, 1637-2004, 2006-2373, 2375-2742, 2744-3111, 3113-3480, 3482-3849, 3851-4218, 4220-4587, 4589-4956, 4958-5325, 5327-5694, 5696-6063, 6065-6432, 6434-6801, 6803-7170, 7172-7539, 7541-7908, 7910-8277, 8278, 11727-12094, 12096-12463, 12465-12832, 12834-13201, 13941-14308, 14310-14677, 14679-15046, 15048-15415, 15417-15784, 15786-16153, 13203-13570, 13572-13939, 16155-16522, 16524-16891, 16893-17260, 17262-17629, 17631-17998, 18000-17998, 18369-18736, 18738-19105, 19107-19474, 19476-19843, 21363-21706 중 어느 하나, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 따라서, WO2019202035의 서열번호: 69-482, 484-897, 899-1266, 1268-1635, 1637-2004, 2006-2373, 2375-2742, 2744-3111, 3113-3480, 3482-3849, 3851-4218, 4220-4587, 4589-4956, 4958-5325, 5327-5694, 5696-6063, 6065-6432, 6434-6801, 6803-7170, 7172-7539, 7541-7908, 7910-8277, 8278, 11727-12094, 12096-12463, 12465-12832, 12834-13201, 13941-14308, 14310-14677, 14679-15046, 15048-15415, 15417-15784, 15786-16153, 13203-13570, 13572-13939, 16155-16522, 16524-16891, 16893-17260, 17262-17629, 17631-17998, 18000-17998, 18369-18736, 18738-19105, 19107-19474, 19476-19843, 21363-21706 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용(또한 WO2019202035 내 표 3-6 참조)은 참조로 본원에 포함된다. 이들 적합한 핵산 서열 인코딩의 각각에 관한 추가 정보는 또한 WO2019202035의 서열목록, 특히 WO2019202035의 서열목록의 식별자 <223> 아래에 제공된 상세 설명으로부터 유래될 수 있다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2014160463 의 서열번호: 383-388 중 어느 하나, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 따라서, WO2014160463의 서열번호: 383-388 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2015024668 의 서열번호: 12-22 중 어느 하나, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 따라서, WO2015024668 의 서열번호: 12-22 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2017070622 의 서열번호: 1, 2, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 242, 244, 246, 257, 258-280 중 어느 하나, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 따라서, WO2017070622 의 서열번호: 1, 2, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 242, 244, 246, 257, 258-280 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다.
다른 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2017172890 의 서열번호: 96-99 중 어느 하나, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 따라서, WO2017172890 의 서열번호: 96-99 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 서열번호: 14552-14571, 14572-14611 중 어느 하나, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 11(C-F열), 표 12 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 RSV 펩티드 또는 단백질은 바람직하게는 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다. 특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 B(특히 구성요소 B-3의)의 적어도 하나의 코딩 서열은 선택된 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형된 코딩 서열은 G/C 최적화된 코딩 서열, 또는 인간 코돈 사용 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 변형 코딩 서열이다.
특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 바람직한 핵산 서열은 표 12(C 및 D열)에 제공된다. 여기에서 각 행은 본 발명의 특정 적합한 RSV 구조을 나타내고(표 11과 비교), 여기서 RSV 구조에 대한 설명은 표 12의 A열에 표시되고 각 RSV 바이러스 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 B열에 제공된다. 각각의 RSV 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 11에 제공된다. 추가 정보는 서열 목록에서 각각의 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
표 12: RSV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
A B C D
HRSV-A/RSVA/Homo sapiens/USA/84I-215A-01/1984 융합 당단백질 (F0) 14542 14572, 14582 14592, 14602
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F0) 14543 14573, 14583 14593, 14603
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del) 14544 14574, 14584 14594, 14604
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F0_DSCav1) 14545 14575, 14585 14595, 14605
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1) 14546 14576, 14586 14596, 14606
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F_DSCav1_mut4) 14547 14577, 14587 14597, 14607
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1_mut4) 14548 14578, 14588 14598, 14608
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F_DSCav1_mut5) 14549 14579, 14589 14599, 14609
HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1_mut5) 14550 14580, 14590 14600, 14610
HRSV-A/A2 기질 단백질 (M2-1) 14551 14581, 14591 14601, 14611
바람직한 구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14572-14611로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래, 및 표 12에 제공된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 내 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 치환된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-3)의 적어도 하나의 핵산 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 78-482, 493-897, 907-1266, 1276-1635, 1645-2004, 2014-2373, 2383-2742, 2752-3111, 3121-3480, 3490-3849, 3859-4218, 4228-4587, 4597-4956, 4966-5325, 5335-5694, 5704-6063, 6073-6432, 6442-6801, 6811-7170, 7180-7539, 7549-7908, 7918-8277, 8278, 21415-21480, 21561-21626, 11735-12094, 12104-12463, 12473-12832, 12842-13201, 13949-14308, 14318-14677, 14687-15046, 15056-15415, 15425-15784, 15794-16153, 13211-13570, 13580-13939, 16163-16522, 16532-16891, 16901-17260, 17270-17629, 17639-17998, 18008-18367, 18377-18736, 18746-19105, 19115-19474, 19484-19843, 21489-21552, 21635-21698로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 이들 적합한 핵산 서열 각각에 관한 추가 정보는 또한 WO2019202035의 서열목록으로부터, 특히 WO2019202035의 서열목록 내 식별자 <223> 아래에 제공된 상세 설명으로부터, 또는 WO2019202035 내 표 5A, 5B, 6A, 6B로부터 유래될 수 있다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 내 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 치환된다.
다양한 구현예에서, 구성요소 B, 특히 본원에 정의된 바와 같은 구성요소 B-3a는 본원에 정의된 바와 같은 핵산 서열 중 복수 또는 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 유전적으로 동일한 RSV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 각각 인코딩하는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 서열을 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서, 구성요소 B, 특히 본원에 정의된 바와 같은 구성요소 B-3은 본원에 정의된 바와 같은 핵산 서열 중 복수 또는 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 유전적으로 동일한 RSV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 각각 인코딩하는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 서열을 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 RSV는 적어도 하나의 상이한 단백질, 펩타이드, 또는 다단백질을 발현하며, 상기 적어도 하나의 상이한 단백질, 펩타이드, 또는 다단백질은 바람직하게 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
일부 구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-3a)는 당단백질 G, 짧은 소수상 단백질 SH, 기질 단백질 M, 핵단백질 N, 거대(large) 폴리머라제 L, M2-1 단백질, M2-2 단백질, 인단백질 P, 비구조 단백질 NS1 또는 비구조 단백질 NS2, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 RSV 항원을 인코딩하는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 추가 핵산, 예를 들어 DNA 또는 RNA 구조를 포함한다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)는 RSV 기질 단백질 M, 핵단백질 N, M2-1 단백질, 및/또는 인단백질 P 또는 이들의 조합으로부터 선택되거나 유래된, 바람직하게는 M2-1로부터 선택된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 1, 2 또는 3개의 추가 핵산 서열을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 구성요소 B는 상기 정의된 바와 같은 RSV F 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산, 및 추가적으로 기질 단백질 M, 핵단백질 N, M2-1 단백질, 및/또는 인단백질 P 또는 이들의 조합으로부터 선택된 RSV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 추가 핵산을 포함할 수 있다.
RSV M, N, M2-1 및/또는 인단백질 P(또는 이들의 조합)로부터 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 추가 핵산의 첨가는 예를 들어 T 세포 면역 반응을 촉진하는데 특히 유리하다.
바람직한 구현예에서, 두번째 측면의 조성물은 RSF F를 인코딩하는 첫번째 측면의 적어도 하나의 인공 RNA, RSV M으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 추가 인공 RNA, RSV N으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 추가 인공 RNA, RSV P으로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 추가 인공 RNA, 및 RSV M2-1로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 추가 인공 RNA를 적합하게 포함할 수 있다.
바람직하게, 구성요소 B(특히 B-3a)의 추가 핵산의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 9684, 10053-10133, 10134, 10503-10636, 10637, 11006-11182, 11183, 11552-11725, 19844, 20213, 20582, 20951 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 인코딩한다. 따라서, WO2019202035의 서열번호: 9684, 10053-10133, 10134, 10503-10636, 10637, 11006-11182, 11183, 11552-11725, 19844, 20213, 20582, 20951 및 이들 서열에 관한 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다. RSV 단백질을 인코딩하는 이들 적합한 아미노산 서열 각각에 관한 추가 정보는 WO2019202035의 서열목록으로부터, 특히 다음에 설명된 식별자 <223> 아래에 제공된 상세 설명으로부터 유래될 수 있다.
추가 구현예에서, 추가 핵산의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 및 추가로 이종 분비 신호 서열 또는 이종 분비 신호 펩타이드를 인코딩한다. 이종 분비 신호 서열은 인코딩된 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 증가시킬 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 추가 핵산 서열의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 9685-9692, 10135-10142, 10638-10645, 11184-11119, 19845-19852, 20214-20221, 20583-20590, 20952-20959, 21385-21388, 21411-21414로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2019202035의 서열번호: 9685-9692, 10135-10142, 10638-10645, 11184-11119, 19845-19852, 20214-20221, 20583-20590, 20952-20959, 21385-21388, 21411-21414, 및 이들 서열에 관한 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다. RSV 단백질을 인코딩하는 이들 적합한 아미노산 서열 각각에 관한 추가 정보는 또한 WO2019202035의 서열목록으로부터, 특히 다음에 설명된 식별자 <223> 아래에 제공된 상세 설명으로부터 유도될 수 있다. 이러한 맥락에서, 각각의 바람직한 RSV 폴리펩타이드, 핵산, 및 mRNA 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 표 7A에 제공된다. WO2019202035의 표 7A의 전체 내용은 참조로 본원에 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3a)의 적어도 하나의 추가 핵산 서열의 적어도 하나의 코딩 서열은 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 핵산은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 9693-10052, 10143-10502, 10646-11005, 11192-11551, 19853-20212, 20222-20581, 20591-20950, 20960-21319, 21481-21488, 21627-21634, 21553-21560, 21699-21706 로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2019202035의 서열번호: 9693-10052, 10143-10502, 10646-11005, 11192-11551, 19853-20212, 20222-20581, 20591-20950, 20960-21319, 21481-21488, 21627-21634, 21553-21560, 21699-21706, 및 이들 서열에 관한 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다. RSV 단백질을 인코딩하는 이들 적합한 아미노산 서열 각각에 관한 추가 정보는 또한 WO2019202035의 서열목록으로부터, 특히 다음에 설명된 식별자 <223> 아래에 제공된 상세 설명으로부터 유도될 수 있다. 이러한 맥락에서, 각각의 바람직한 RSV 폴리펩타이드, 핵산, 및 mRNA 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 표 7A에 제공된다. WO2019202035의 표 7A의 전체 내용은 참조로 본원에 포함된다.
적합하게는, 구성요소 B, 특히 구성요소 B-3a는 적어도 2개의 상이한 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하고, 여기서 적합한 조합은 WO2019202035의 표 7B에 제공되며, WO2019202035의 표 7A의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-3a는 적어도 하나의 RS, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B-3a는 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B-3a의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 RSV 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B-3a의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 RSV 항원의 생성을 야기한다. 핵산이 DNA(예를 들어, 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 RNA의 인코딩된 RSV 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-3a의 투여는 구성요소 B-3a의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 RSV 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 B-3a는 백신, 특히 RSV 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 B-3a에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 B-3a가 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
구성요소 B-3b: 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus):
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 뉴모비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 메타뉴모바이러스(본원에서 성분 B-3b로도 지칭됨)로부터 선택된다. 적절하게는, 메타뉴모바이러스는 인간 메타뉴모바이러스(hMPV)로부터 선택된다.
인간 메타뉴모바이러스(hMPV)는 뉴모비리데 과의 음성 단일 가닥 RNA 바이러스이며 조류 메타뉴모바이러스(AMPV) 하위 그룹 C와 밀접한 관련이 있다. 이는 2001년에 처음으로 분리되었다. 이는 어린 아이들의 하부 호흡기 감염의 인간 orthopneumovirus (RSV) 후 두번째로 가장 흔한 원인이다. hMPV는 노인의 인플루엔자만큼 흔하고 심각하다. hMPV는 천식 환자 및 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)이 있는 성인에서 더 심각한 질병과 관련이 있다. 아동 및 성인을 위한 장기 요양 시설에서 수많은 hMPV 발병이 보고되어 사망을 초래했다.
본 발명의 맥락에서, 임의의 인간 메타뉴모바이러스(hMPV; NCBI 분류법 ID: 162145)는 유전자형, 종, 균주, 분리주 또는 혈청형에 관계없이 선택될 수 있다. 본원에 제공된 바와 같이 사용하기 위한 hMPV의 균주의 비제한적 예시는 CAN98-75 (CAN75) 및 CAN97-83 (CAN83) hMPV 균주, hMPV Al, A2, B l or B2 균주, hMPV 분리물 TN/92-4 (예를 들어, WO2017070626의 서열번호: 1 및 5), hMPV 분리물 NL/1/99 (예를 들어 WO2017070626의 서열번호: 2 및 6), hMPV 분리물 PER/CFI0497/2010/B (예를 들어 WO2017070626의 서열번호: 3 및 7), 또는 hMPV 분리물 00-1을 포함한다.
일부 구현예에서, 메타뉴모바이러스는 hMPV Al, A2, B l 또는 B2 균주, CAN98-75 (CAN75) hMPV 균주, CAN97-83 (CAN83) hMPV, hMPV 분리물 TN/92-4 (예를 들어 WO2017070626의 서열번호: 1 및 5), hMPV 분리물 NL/1/99 (예를 들어 WO2017070626의 서열번호: 2 및 6), hMPV 분리물 PER/CFI0497/2010/B (예를 들어 WO2017070626의 서열번호: 3 및 7)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 메타뉴모바이러스는 HMPV/TN/92-4, HMPV/NL/1/99, HMPV/Sabana, 또는 HMPV/00-1로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 hMPV F 단백질, G 단백질, M 단백질, P 단백질, N 단백질 및/또는 SH 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 hMPV F 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 변이체로부터 선택되거나 유래된다.
바람직한 구현예에서, hMPV F 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 전장 F 단백질(F0) 또는 C-말단이 결실된 F 단백질(F-del), 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체이다.
바람직한 구현예에서, hMPV F 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화 F 단백질(F_stab)로부터 선택되거나 유래된다.
다양한 바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 hMPV로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 및 추가적으로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 인코딩한다.
적절하게는, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 인코딩된 hMPV 항원성 펩타이드 또는 단백질의 분비를 촉진하거나 개선할 수 있고(예를 들어 분비 신호 서열을 통해), 원형질막에서 인코딩된 hMPV 항원성 펩타이드 또는 단백질의 고정을 촉진하거나 개선할 수 있고(예를 들어 막관통 요소를 통해), 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선할 수 있고(예를 들어, 다량체화(multimerization) 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해), 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 핵산은 펩타이드 링커 요소, 자가 절단 펩타이드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 인코딩할 수 있다.
상기 정의된 바와 같은 hMPV로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질이 표 13(1행 내지 29행)에 제공된다. 여기서, 각 1 내지 29행은 적합한 hMPV 구조에 대응한다. 표 13의 A열은 적합한 hMPV 항원 구조의 간단한 설명을 제공한다. 표 13의 B열은 각각의 hMPV 항원 구조의 단백질(아미노산) 서열번호를 제공한다. 표 13의 D열은 상응하는 G/C 최적화 핵산 코딩 서열(opt1, gc)의 서열번호를 제공한다. 표 13의 E열은 상응하는 인간 코돈 사용 방식에 적응된 핵산 코딩 서열(opt 3, 인간)의 서열번호를 제공한다.
특히, 본 발명의 설명은 본 출원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공되는 정보를 명시적으로 포함한다. 표 13의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조, 예를 들어 표 13의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열은 표 14에 제공된다.
표 13 : 바람직한 hMPV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
행 A B D E
1 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (F0) 14626 14650, 26978 14674
2 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14627 14651 14675
3 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14628 14652 14676
4 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14629 14653 14677
5 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14630 14654 14678
6 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14631 14655 14679
7 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14632 14656 14680
8 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14633 14657 14681
9 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14634 14658 14682
10 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14635 14659 14683
11 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14636 14660 14684
12 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14637 14661 14685
13 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14638 14662 14686
14 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14639 14663 14687
15 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14640 14664 14688
16 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14641 14665 14689
17 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14642 14666 14690
18 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14643 14667 14691
19 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14644 14668 14692
20 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14645 14669 14693
21 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14646 14670 14694
22 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14647 14671 14695
23 HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (F0) 14648 14672, 26972 14696
24 HMPV/Sabana 융합 당단백질 (F0) 14649 14673 14697
25 HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (변이체) 26967 26973
26 HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (변이체) 26968 26974
27 HMPV/00-1 융합 당단백질 (F0) 26969 26975
28 HMPV/00-1 융합 당단백질 (변이체) 26970 26976
29 HMPV/00-1 융합 당단백질 (변이체) 26971 26977
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14626-14649, 26966-26971 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 13(A 및 B열의 1 내지 29행 참조), 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2017070626의 서열번호: 5-8 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2017070626의 서열번호: 5-8 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
추가 hMPV 항원은 또한 WO2017070626의 표 4에 제공된 GenBank 접근 번호에 의해 식별 가능한 단백질로부터 유도되거나 선택된 단백질일 수 있다. WO2017070626의 표 4의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B의 핵산(특히 구성요소 B-3b)은 상기 정의된 바와 같은 hMPV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 그러한 맥락에서, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 hMPV 항원성 단백질을 인코딩하는 임의의 코딩 서열, 또는 이의 단편 및 변이체는 구성요소 B의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 hMPV로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게는 서열번호: 14626-14649, 26966-26971; WO2017070626의 서열번호: 5-8, 또는 이의 변이체 단편을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서, 서열번호: 14626-14649, 26966-26971; WO2017070626의 서열번호: 5-8 중 어느 하나, 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있고 따라서 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 13, 표 14 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14650-14697, 14698-14793, 26972-26978, 26979-26991로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 hMPV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 13, 표 14 및 각각의 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 핵산은 공개된 PCT 특허 출원 WO2017070626의 서열번호: 1-4, 57-60으로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 hMPV 항원을 인코딩하는 핵산 서열의 적어도 하나를 포함하는 코딩 서열을 포함한다. 따라서, WO2017070626의 서열번호: 1-4, 57-60, 및 이에 관련된 상응하는 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 hMPV 펩티드 또는 단백질은 바람직하게 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다.
특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형 코딩 서열은 선택된 G/C 최적화 코딩 서열, 인간 코돈 사용 적응 코딩 서열, 또는 G/C 변형 코딩 서열이다.
특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 바람직한 핵산 서열은 표 14(C 및 D열)에 제공된다. 여기서, 각각의 행은 본 발명의 특정 적합한 hMPV 구조를 나타내고(표 13과 비교), 여기서 hMPV 구조의 설명은 표 14의 A열에 표시되고 및 각각의 hMPV 구조의 아미노산 서열의 서열번호는 B열에 제공된다. 각각의 hMPV 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 13에 제공된다. 추가 정보는 서열 목록에서 각각의 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
표 14: hMPV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
A B C D
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (F0) 14626 14698, 14722 14746, 14770
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14627 14699, 14723 14747, 14771
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14628 14700, 14724 14748, 14772
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14629 14701, 14725 14749, 14773
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14630 14702, 14726 14750, 14774
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14631 14703, 14727 14751, 14775
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14632 14704, 14728 14752, 14776
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14633 14705, 14729 14753, 14777
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14634 14706, 14730 14754, 14778
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14635 14707, 14731 14755, 14779
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14636 14708, 14732 14756, 14780
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14637 14709, 14733 14757, 14781
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14638 14710, 14734 14758, 14782
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14639 14711, 14735 14759, 14783
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14640 14712, 14736 14760, 14784
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14641 14713, 14737 14761, 14785
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14642 14714, 14738 14762, 14786
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14643 14715, 14739 14763, 14787
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14644 14716, 14740 14764, 14788
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14645 14717, 14741 14765, 14789
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14646 14718, 14742 14766, 14790
HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (변이체) 14647 14719, 14743 14767, 14791
HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (F0) 14648 14720, 14744, 26979 14768, 14792, 26985
HMPV/Sabana 융합 당단백질 (F0) 14649 14721, 14745 14769, 14793
HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (변이체) 26967 26980 26986
HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (변이체) 26968 26981 26987
HMPV/00-1 융합 당단백질 (F0) 26969 26982 26988
HMPV/00-1 융합 당단백질 (변이체) 26970 26983 26989
HMPV/00-1 융합 당단백질 (변이체) 26971 26984 26990
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14698-14793, 26979-26991로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 hMPV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 중 각 서열번호의 <223> 식별자 아래 및 표 14(C 및 D열)에 제공된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열의 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 치환된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)의 핵산, 바람직하게 RNA는 WO2017070626의 서열번호: 57-60로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 hMPV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 바와 같은 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열의 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 치환된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)는 적어도 하나의 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 복수의 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 정의된 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)는 본원에 정의된 바와 같이 각각 정의된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)는 각각 동일한 hMPV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 hMPV는 단백질 또는 펩타이드의 동일한 레퍼토리를 (본질적으로) 발현하며, 여기서 모든 단백질 또는 펩티드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 hMPV는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 여기서 이들 단백질, 펩티드 또는 다단백질은 바람직하게는 그들의 아미노산 서열(들)이 상이하지 않다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-3b)는 각각 유전적으로 별개의 hMPV(예를 들어, 별개의 hMPV 분리물)로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 "별개의" 또는 "별개의 hMPV"라는 용어는 적어도 2개의 각각의 hMPV(예를 들어, 별개의 hMPV 분리물) 사이의 차이로서 이해되어야 하며, 여기서 상기 차이는 각각의 별개의 hMPV의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 hMPV는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있고, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩티드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-3b는 적어도 하나의 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B-3b는 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B-3b의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 코딩된 hMPV 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B-3b의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 이ㄴ코딩된 hMPV 항원의 생성을 초래한다. 핵산이 DNA(예를 들어, 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사를 초래하고, RNA의 인코딩된 hMPV 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-3b의 투여는 구성요소 B-3b의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 hMPV 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 구성요소 B-3b는 백신, 특히 hMPV 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 B-3에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 B-3이 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
구성요소 B-4: 파라믹소비리데(Paramyxoviridae) 바이러스
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 파라믹소비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 바이러스("파라믹소바이러스")로부터 선택된다.
"구성요소 B" 단락에 기술된 일반적인 구현예 및 특징은 또한 파라믹소비리데 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 핵산에 적용될 수 있음을 이해해야 한다.
파라믹소비리데에는 4개의 아과, 17개의 속 및 77종이 있으며, 그 중 3개의 속은 하나의 아과로 분류되지 않는다. 이 과와 관련된 질병에는 홍역, 볼거리 및 호흡기 감염이 포함된다.
구현예에서, 파라믹소바이러스로부터 선택되거나 유래된 임의의 단백질이 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있고 구성요소 B(특히, 구성요소 B-4)의 코딩 서열 또는 핵산에 의해 인코딩될 수 있다.
인간 파라인플루엔자 바이러스(hPIV) 또는 헤니파바이러스를 포함하는 병원성 파라믹소바이러스가 본 발명의 맥락에서 적합하다.
구성요소 B-4a: 파라인플루엔자바이러스 (PIV):
바람직한 구현예에서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 파라믹소비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 파라인플루엔자 바이러스(PIV), 바람직하게는 파라믹소비리데 바이러스 과의 인간 파라인플루엔자바이러스(hPIV)로부터 선택된다(본원에서 구성요소 B-4a로도 지칭됨).
인간 파라인플루엔자 바이러스(hPIV)는 영유아 호흡기 질환의 두 번째로 흔한 원인이다. hPIV 바이러스는 레스피로바이러스(Respirovirus) 속에 속한다(NCBI 분류법 ID: 186938). 파라인플루엔자 바이러스는 레스피로바이러스로도 지칭된다. HPIV-1, HPIV-2, HPIV-3 및 HPIV-4로 알려진 네 가지 유형의 hPIV가 있다. HPIV-1 및 HPIV-2는 어린이에서 크루프(croup)와 함께 감기와 유사한 증상을 유발할 수 있다. HPIV-3는 세기관지염, 기관지염 및 폐렴과 관련이 있다. HPIV-4는 다른 유형보다 흔하지 않으며, 경증 내지 중증의 호흡기 질환을 유발하는 것으로 알려져 있다. 본 발명의 맥락에서, 임의의 파라인플루엔자바이러스가 선택될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 임의의 파라인플루엔자바이러스, 예를 들어 유전자형, 종, 균주, 분리주 또는 혈청형에 관계없이 임의의 hPIV가 선택될 수 있다.
구현예에서, 적어도 하나의 인간 hPIV는 hPIV-1, hPIV-2, hPIV-3 또는 hPIV-4로부터 선택된다.
구현예에서, 적어도 하나의 인간 hPIV는 hPIV-1 (대체 이름, 인간 레스피로바이러스 1, NCBI 분류법 ID: 12730)로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, hPIV-1 바이러스는 hPIV-1 (human/Washington/1957; NCBI 분류법 ID: 11211), hPIV-1 (CI-14/83; NCBI 분류법 ID: 31606), hPIV-1 (CI-5/73; NCBI 분류법 ID: 31607), hPIV-1 (A1426 / 86-315 / 62M-753; NCBI 분류법 ID: 36412), hPIV-1 (C35; NCBI 분류법 ID: 31605), hPIV-1 (C39; NCBI 분류법 ID: 11210), hPIV-1 (Washington/1964; NCBI 분류법 ID: 188538)로부터 선택될 수 있다.
구현예에서, 적어도 하나의 인간 hPIV는 hPIV-3 (대체 이름, 인간 레스피로바이러스 3, NCBI 분류법 ID: 11216)로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, hPIV-3 바이러스는 hPIV-3 (AUS/124854/74; NCBI 분류법 ID: 11218), hPIV-3 (NIH 47885; NCBI 분류법 ID: 11217), hPIV-3 (TEX/12677/83; NCBI 분류법 ID: 11221), hPIV-3 (TEX/545/80; NCBI 분류법 ID: 11219), hPIV-3 (TEX/9305/82; NCBI 분류법 ID: 11220), hPIV-3 (WASH/1511/73; NCBI 분류법 ID: 11223), hPIV-3 (WASH/641/79; NCBI 분류법 ID: 11222),hPIV-3 (Simian Agent 10; NCBI 분류법 ID: 929831), hPIV-3 (HPIV3/Homo sapiens/PER/FLA4571/2008; NCBI 분류법 ID: 11216), 또는 hPIV-3 (HPIV3/USA/629-D01959/2007; NCBI 분류법 ID: 11216)로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 인간 hPIV는 본원에 정의된 바와 같은 hPIV-3 바이러스로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-4a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 PIV 헤마글루티닌-뉴라미니다아제, 융합(F) 당단백질, 기질 단백질(M), 뉴클레오캡시드 단백질(N), 바이러스 레플리카아제(L), 비구조 V 단백질으로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편을 포함하거나 이로 구성된다.
구조 단백질인 PIV 헤마글루티닌-뉴라미니다아제(PIV HN)는 부착 및 세포 진입에 필요한 바이러스 외피에서 발견된다. 이는 숙주 세포 표면의 시알산 함유 수용체를 인식하고 결합한다. 뉴라미니다제로서 HN은 바이러스 입자에서 시알산을 제거하여 바이러스의 자가 응집을 방지하고 바이러스의 효율적인 확산을 촉진한다. 또한 HN은 융합(F 또는 F0) 단백질의 활성을 촉진하여 숙주 세포 표면의 침투에 기여한다.
PIV 융합 단백질(PIV F)은 바이러스 외피에 위치하여 바이러스 융합 및 세포 진입을 촉진한다. F 단백질은 초기에는 비활성이지만, 단백질 분해 절단은 이황화 결합으로 연결된 활성 형태인 F1 및 F2을 유도한다. 이는 HN 단백질이 숙주 세포 표면의 수용체와 결합할 때 발생한다. 감염의 초기 단계 동안, F 당단백질은 바이러스 외피를 원형질막에 융합시켜 숙주 세포의 침투를 매개한다. 감염 후기 단계에서 F 단백질은 감염된 세포와 인접한 감염되지 않은 세포의 융합을 촉진하여 합포체 형성 및 감염 확산을 유도한다.
PIV 기질 단백질(PIV M)은 바이러스 외피 내에서 발견되며 바이러스 조립을 돕는다. 이것은 바이러스 당단백질 및 뉴클레오캡시드의 세포질 꼬리에 있는 특정 부위와의 상호작용을 통해 자손 바이러스의 발아를 촉진하는 뉴클레오캡시드 및 외피 당단백질과 상호 작용한다. 또한 바이러스 성분을 발아 부위로 운반하는 역할을 한다.
PIV 인단백질(PIV P) 및 PIV 대형 중합효소 단백질(L)은 RNA 중합효소 복합체의 일부를 형성하는 뉴클레오캡시드에서 발견된다. 바이러스 RNA 의존성 RNA 중합효소인 L 단백질은 게놈 전사를 촉진하는 반면 숙주 세포의 리보솜은 바이러스 mRNA를 바이러스 단백질로 번역한다.
PIV V는 감염된 세포에서 IFN 신호를 차단하는 비구조 단백질이며, 이에 따라 독성 인자로 작용한다.
PIV 핵단백질(N)은 게놈을 6개의 리보뉴클레오티드당 1N의 비율로 캡슐화하여 뉴클레아제로부터 보호한다. 뉴클레오캡시드(NC)는 나선형 구조를 가지고 있다. 캡슐화된 게놈 RNA는 NC로 지칭되며 전사 및 복제를 위한 주형 역할을 한다. 복제하는 동안 PIV3 N에 의한 캡슐화는 RNA 합성과 결합되며 모든 복제 산물은 뉴클레아제에 내성이 있다. PrV3 N은 동종-다량체화(homo-multimerizes)되어 뉴클레오캡시드를 형성하고 바이러스 게놈 RNA에 결합한다. PrV3 N은 P 단백질에 결합하여 중합효소를 주형에 위치시킨다.
다양한 바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 PIV로부터의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 및 추가적으로 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 인코딩한다.
적절하게는, 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소는 (예를 들어, 분비 신호 서열을 통해) 인코딩된 PIV 항원성 펩티드 또는 단백질의 분비를 촉진하거나 개선할 수 있고, (예를 들어 막관통 요소를 통해) 원형질막에서 인코딩된 PIV 항원성 펩타이드 또는 단백질의 고정을 촉진하거나 개선할 수 있고, (예를 들어 다량체화 도메인 또는 항원 클러스터링 요소를 통해) 항원 복합체의 형성을 촉진 또는 개선할 수 있고, 또는 바이러스 유사 입자 형성(VLP 형성 서열)을 촉진 또는 개선할 수 있다. 또한, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-4a)의 핵산은 펩타이드 링커 요소, 자가 절단 펩티드, 면역 보조제 서열 또는 수지상 세포 표적화 서열을 추가로 코딩할 수 있다.
상기 정의된 바와 같은 hPIV로부터 선택되거나 유래된 바람직한 항원성 펩타이드 또는 단백질이 표 15에 제공된다. 여기에서, 각각의 행은 적합한 hPIV 구조에 해당한다. 표 15의 A열은 적합한 hPIV 항원 구조의 간단한 설명을 제공한다. 표 15의 B열은 각각의 hPIV 항원 구조의 단백질(아미노산) 서열번호를 제공한다. 표 15의 D열은 상응하는 G/C 최적화 핵산 코딩 서열(opt1, gc)의 서열번호를 제공한다. 표 15의 E열은 상응하는 인간 코돈 사용 방식에 적응된 핵산 코딩 서열(opt 3, 인간)의 서열번호를 제공한다.
특히, 본 발명의 설명은 본 출원의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공되는 정보를 명시적으로 포함한다. 표 15의 코딩 서열을 포함하는 바람직한 핵산 구조, 예를 들어 표 15의 코딩 서열을 포함하는 mRNA 서열은 표 16에 제공된다.
표 15: 바람직한 PIV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열):
A B D E
HPIV3/Homo sapiens/PER/FLA4571/2008 융합 당단백질 (F0) 14612 14614, 26960 14616
HPIV3/BJ/001/08 헤마글루티닌-뉴라미니다제 (HN) 14613 14615 14617
HPIV3/USA/629-D01959/2007 융합 당단백질 (F0) 26956 26958
HPIV3/USA/629-D01959/2007 융합 당단백질 (변이체) 26957 26959
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 PIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14612, 14613, 26956, 26957 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 15(A 및 B열) 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열 목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 PIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 출원 WO2017070626 의 서열번호: 13-14 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, WO2017070626의 서열번호: 13-14, 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다. 추가 PIV 항원은 또한 WO2017070626의 표 7에 제공된 GenBank 접근 번호에 의해 식별 가능한 단백질로부터 유도되거나 선택된 단백질일 수 있다. WO2017070626의 표 7의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 핵산은 상기 정의된 바와 같은 PIV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 그러한 맥락에서, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 PIV 항원성 단백질을 인코딩하는 임의의 코딩 서열, 또는 이의 단편 및 변이체는 구성요소 B의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 핵산은 본원에 정의된 바와 같은 PIV로부터 선택되거나 유도된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게는 서열번호: 14612, 14613, 26956, 26957; WO2017070626의 서열번호: 13-14, 또는 이의 변이체의 단편을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서 서열번호: 14612, 14613, 26956, 26957; WO2017070626의 서열번호: 13-14중 어느 하나, 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있고 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 상기 아미노산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 15(A 및 B열), 표 16 및 각 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14614-14625, 26958-26965로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 PIV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 핵산 서열에 관한 추가 정보는 또한 표 15, 표 16 및 각각의 서열 서열번호의 ST.25 서열목록의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 핵산은 공개된 PCT 특허 출원 WO2017070626의 서열번호: 9-12, 61-64로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 hPIV 항원을 인코딩하는 핵산 서열의 적어도 하나를 포함하는 코딩 서열을 포함한다. 따라서, WO2017070626의 서열번호: 9-12, 61-64 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 PIV 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게는 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다.
특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형 코딩 서열은 선택된 G/C 최적화 코딩 서열, 인간 코돈 사용 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 변형 코딩 서열이다.
특히 바람직한 mRNA 서열을 포함하는 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 바람직한 핵산 서열은 표 16(C 및 D열)에 제공된다. 여기에서 각 행은 본 발명의 특정 적합한 PIV 구조를 나타내며(표 15와 비교), 여기서 PIV 구조에 대한 설명은 표 16의 A열 및 각 PIV 구조의 아미노산 서열의 서열번호에 표시된다. 각각의 PIV 구조를 인코딩하는 코딩 서열의 상응하는 서열번호는 표 15에 제공된다. 추가 정보는 서열목록에서 각각의 서열번호의 <223> 식별자 아래에 제공된다.
표 16: PIV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
A B C D
HPIV3/Homo sapiens/PER/FLA4571/2008 융합 당단백질 (F0) 14612 14618, 14620 14622, 14624
HPIV3/BJ/001/08 헤마글루티닌-뉴라미니다제 (HN) 14613 14619, 14621 14623, 14625
HPIV3/USA/629-D01959/2007 융합 당단백질 (F0) 26956 26961 26963
HPIV3/USA/629-D01959/2007 융합 당단백질 (변이체) 26957 26962 26964
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14618-14625, 26961-26965로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 PIV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 각 핵산 서열에 관한 추가 정보는 서열목록 내 각 서열번호의 <223> 식별자 아래 및 표 16(C 및 D열)에 제공된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 대체된다.
추가 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)의 핵산, 바람직하게 RNA는 WO2017070626의 서열번호: 61-64로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 hPIV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 cap1 구조를 포함하며, 및/또는 상기 RNA 서열 중 적어도 하나, 바람직하게 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 대체된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)는 적어도 하나의 hPIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 정의된 구성요소 B(특히 구성요소 B-4)는 본원에 정의된 바와 같이 각각 정의된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)는 각각 동일한 hPIV로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함한다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 hPIV는 단백질 또는 펩타이드의 (본질적으로) 동일한 레퍼토리를 발현하며, 여기에서 모든 단백질 또는 펩티드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 hPIV는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 여기서 이들 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게는 그들의 아미노산 서열(들)이 다르지 않다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4a)는 각각 유전적으로 별개의 hPIV(예를 들어, 별개의 hPIV 분리물), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 "별개의" 또는 "별개의 hPIV"라는 용어는 적어도 2개의 각각의 hPIV(예를 들어, 별개의 hPIV 분리물) 사이의 차이로서 이해되어야 하며, 여기서 차이는 각각의 별개의 hPIV의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 hPIV는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있고, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-4a는 적어도 하나의 PIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B-4a는 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B-4a의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 PIV 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B-4a의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 PIV 항원의 생성을 야기한다. 핵산이 DNA(예를 들어, 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 RNA의 인코딩된 PIV 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-4a의 투여는 구성요소 B-4a의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 PIV 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 성분 B-4a는 백신, 특히 PIV 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
바람직하게는, 성분 B-4a는 백신, 특히 RSV 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 B-4a에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 B-4a이 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
구성요소 B-4b: 헤나파바이러스(Henipavirus):
구현예에서, 구성요소(특히, 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 추가 바이러스는 파라믹소비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택된다.
"헤니파바이러스"라는 용어는 유전형, 종, 균주, 분리주 또는 혈청형에 관계없이 헤니파바이러스 속의 임의의 바이러스에 관한 것이다(NCBI 분류법 ID: 260964). 헤니파바이러스라는 용어는 세달(Cedar) 헤니파바이러스 또는 세달 바이러스(NCBI 분류법 ID: 1221391), 가나(Ghanaian) 박쥐 헤니파바이러스 또는 박쥐 파라믹소바이러스(NCBI 분류법 ID: 665603), 모지앙(Mojiang) 헤니파바이러스 또는 모지앙 바이러스(NCBI 분류법 ID: 1474807), 헨드라 바이러스(NCBI 분류법 ID: 928303), 니파 바이러스(NCBI 분류법 ID: 121791)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 바이러스 균주를 포함하는 바이러스 속에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 헤니파바이러스는 적어도 하나의 헨드라 바이러스 및/또는 적어도 하나의 니파 바이러스로부터 선택된다.
구현예에서, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 헤니파바이러스 RNA-지정 RNA 중합효소(L), 헤니파바이러스 융합 단백질(F), 헤니파바이러스 비구조 단백질(V), 헤니파바이러스 당단백질(G), 헤니파바이러스 핵단백질(N), 헤니파바이러스 기질 단백질(M), 헤니파바이러스 인단백질(P), 헤니파바이러스 단백질 C, 헤니파바이러스 단백질 W로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히, 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 헤니파바이러스 당단백질 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스 융합 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1-26, 573-598, 807-832, 1041-1066, 1513-1515 중 어느 하나, 또는 이들의 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 특히, 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1-26, 573-598, 807-832, 1041-1066, 1513-1515 및 이와 관련된 상응하는 개시(예를 들어 WO2018115507의 표 1, 표 1B, 표 2, 표 2B, 또는 청구항 1-43)은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에 따르면, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산은 상기 정의된 바와 같은 헤니파바이러스, 특히 헨드라 바이러스 또는 니파 바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 그 맥락에서, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 헤니파바이러스 항원 단백질, 또는 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 임의의 코딩 서열은 구성요소 B의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산은 본원에 정의된 헤니파바이러스, 특히 헨드라 바이러스 또는 니파 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1-26, 573-598, 807-832, 1041-1066, 1513-1515 중 어느 하나 또는 이의 변이체의 단편을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 핵산 수준에서, 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1-26, 573-598, 807-832, 1041-1066, 1513-1515 중 어느 하나 또는 이의 변이체의 단편과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 임의의 서열(DNA 또는 RNA 서열)이 선택될 수 있고 따라서 본 발명의 적합한 코딩 서열로 이해될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B (특히 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 27-234, 599-806, 833-1040, 1067-1274, 1275-1508, 1516-1539, 1540-1548 중 어느 하나 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 헤니파바이러스 항원, 바람직하게 헨드라 바이러스 또는 니파 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 특히, 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 27-234, 599-806, 833-1040, 1067-1274, 1275-1508, 1516-1539, 1540-1548 및 이와 관련된 상응하는 개시 내용(예를 들어, WO2018115507의 표 5 , 6, 7 또는 청구항 1-43)이 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 성분 B-4b)의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 본원에 정의된 바와 같은 코돈 변형 코딩 서열이고, 여기서 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열, 즉 헤니파바이러스 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게는 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다.
특히 바람직한 구현예에서, 핵산 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 코딩 서열은 헤니파바이러스 항원을 인코딩하는 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형된 코딩 서열은 G/C 최적화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용에 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 변형된 코딩 서열로부터 적절하게 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)의 적어도 하나의 핵산은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1275-1508, 1540-1548로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열의 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 헤니파바이러스 항원, 바람직하게 헨드라 바이러스 또는 니파 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 특히, 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1275-1508, 1540-1548, 및 이와 관련된 상응하는 개시내용(예를 들어, WO2018115507의 표 5, 6, 7 또는 청구항 1-43)이 본원에 참조로 포함된다. 선택적으로, 상기 핵산 서열은 본원에 정의된 바와 같은 cap1 구조를 포함하고 및/또는 상기 RNA 서열에서 적어도 하나, 바람직하게는 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 대체된다
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)는 적어도 하나의 헤니파바이러스, 바람직하게 헨드라 바이러스 또는 니파 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 복수의 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA 종을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 정의된 바와 같은 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)는 각각 본원에 정의된 바와 같은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 핵산을 포함한다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)는 각각 동일한 헤니파바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 헤니파바이러스는 단백질 또는 펩타이드의 (본질적으로) 동일한 레퍼토리를 발현하며, 여기서 모든 단백질 또는 펩티드는 (본질적으로) 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 특히, 상기 (유전적으로) 동일한 헤니파바이러스는 본질적으로 동일한 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현하며, 이들 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 바람직하게는 이들의 아미노산 서열(들)이 상이하지 않다.
구현예에서, 구성요소 B(특히 구성요소 B-4b)는 각각 유전적으로 별개의 헤니파바이러스(예를 들어, 별개의 헤니파바이러스 균주 또는 분리물), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 핵산 종, 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 DNA 또는 RNA를 포함한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 "별개의" 또는 "별개의 헤니파바이러스"라는 용어는 적어도 2개의 각각의 헤니파바이러스(예를 들어, 별개의 헤니파바이러스 균주 또는 분리물) 사이의 차이로서 이해되어야 하며, 여기서 차이는 각각의 별개의 헤니파바이러스의 게놈에서 나타난다. 특히, 상기 (유전적으로) 별개의 헤니파바이러스는 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질을 발현할 수 있고, 여기서 적어도 하나의 별개의 단백질, 펩타이드 또는 다단백질은 적어도 하나의 아미노산이 상이하다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-4b는 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 상기 구성요소 B-4b는 바람직하게는 근육내 또는 피내 투여된다.
바람직하게는, 상기 구성요소 B-4b의 근육내 또는 피내 투여는 개체에서 인코딩된 헤니파바이러스 항원 구조의 발현을 초래한다. 핵산이 RNA인 구현예에서, 구성요소 B-4b의 투여는 개체에서 RNA의 번역 및 인코딩된 헤니파바이러스 항원의 생성을 야기한다. 핵산이 DNA(예를 들어, 플라스미드 DNA, 아데노바이러스 DNA)인 구현예에서, 상기 조성물의 투여는 개체에서 DNA의 RNA로의 전사, 및 RNA의 인코딩된 헤니파바이러스 항원으로의 후속 번역을 초래한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-4b의 투여는 구성요소 B-4b의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공되는 인코딩된 헤니파바이러스 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원-특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직하게는, 성분 B-4b는 백신, 특히 헤니파바이러스 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
구현예에서, 본원에 정의된 구성요소 B-4b에 포함된 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
구성요소 B-4b가 본원에 정의된 복수 또는 적어도 하나 이상의 핵산 종을 포함하는 경우, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
일부 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 질량이 본질적으로 동일하다. 다른 구현예에서, 각 핵산 종에 대한 핵산의 함량은 등몰로 선택된다.
핵산 특징 및 구현예:
다음에서, 약학적 조성물에 포함된 핵산에 관한 적절한 특징 및 구현예가 추가로 명시된다. 특히, 구성요소 A(특히, 구성요소 A-1, A-2, A-3) 및/또는 구성요소 B(특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)의 핵산에 관한 적합한 특징 및 구현예가 추가로 명시된다.
따라서, 다음에 제공된 특징 및 구현예는 (i) 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산의 적합한 특징 및 구현예로 읽혀질 수 있다 (구성요소 A, 특히 구성요소 A-1, A-2, A-3). 다음에 제공된 특징 및 구현예는 (ii) 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산의 적합한 특징 및 구현예로 읽혀질 수 있다 (구성요소 B, 특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b).
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 인공 핵산, 예를 들어, 인공 DNA 또는 인공 RNA이다.
본 명세서에 사용된 용어 "인공 핵산"은 자연적으로 발생하지 않는 핵산을 지칭하는 것으로 의도된다. 즉, 인공 핵산은 비천연 핵산 분자로 이해될 수 있다. 이러한 핵산 분자는 개별 서열(예: G/C 함량 변형된 코딩 서열, UTR)로 인해 및/또는 다른 변형, 예를 들어, 뉴클레오타이드의 구조적 변형으로 인해 비천연일 수 있다. 전형적으로, 인공 핵산은 원하는 인공 뉴클레오티드 서열에 상응하도록 유전 공학에 의해 설계 및/또는 생성될 수 있다. 이러한 맥락에서, 인공 핵산은 자연적으로 발생하지 않을 수 있는 서열, 즉 적어도 하나의 뉴클레오티드(예를 들어, 하기에 추가로 명시된 바와 같은 코돈 변형)에 의해 야생형 또는 참조(reference) 서열/자연 발생 서열과 상이한 서열이다. "인공 핵산"이라는 용어는 "하나의 단일 분자"를 의미하는 것으로 제한되지 않고 본질적으로 동일한 핵산 분자의 앙상블(ensemble)을 포함하는 것으로 이해된다. 따라서, 이는 본질적으로 동일한 복수의 핵산 분자와 관련될 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "인공 핵산"은 예를 들어, 인공 DNA 또는 바람직하게는 인공 RNA에 관한 것일 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA는 변형 및/또는 안정화된 핵산, 바람직하게는 변형 및/또는 안정화된 인공 핵산이다.
바람직한 실시양태에 따르면, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 따라서 "안정화된 인공 핵산" 또는 "안정화된 코딩 핵산"으로 제공될 수 있고, 즉 생체내 분해에 개선되는 저항성을 나타내는 핵산 및/또는 생체내에서 개선된 안정성을 나타내는 핵산, 및/또는 생체내에서 개선된 번역성을 나타내는 핵산으로 제공될 수 있다. 다음에서, 이러한 맥락에서 핵산을 "안정화"하기에 적합하게 특정한 적합한 변형/적응이 설명된다. 바람직하게는, 본 발명의 핵산은 "안정화된 RNA", "안정화된 코딩 RNA", "안정화된 DNA" 또는 "안정화된 코딩 DNA"로서 제공될 수 있다.
하기에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산을 "안정화"할 수 있는 적합한 변형이 기술된다.
바람직한 구체예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, RNA 또는 DNA는 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이다. 적합하게는, 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다.
용어 "코돈 변형된 코딩 서열"은 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열과 비교하여 적어도 하나의 코돈(하나의 아미노산을 코딩하는 뉴클레오티드의 트리플렛)이 상이한 코딩 서열에 관한 것이다. 적합하게는, 본 발명의 맥락에서 코돈 변형된 코딩 서열은 생체내 분해에 대한 개선된 저항성 및/또는 생체내 개선된 안정성, 및/또는 생체내 개선된 번역성을 나타낼 수 있다. 가장 넓은 의미의 코돈 변형은 다중 코돈이 동일한 아미노산을 코딩할 수 있고 상호교환적으로 사용될 수 있는 유전 코드의 축퇴성(degeneracy)을 이용하여(WO2020002525의 표 1 참조), 위에서 약술한 바와 같이 생체내 적용을 위한 코딩 서열을 최적화/수정하기 위해 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형된 코딩 서열은 C 최대화된 코딩 서열, CAI 최대화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용(usage)에 적합한 코딩 서열, G/C 콘텐츠 변형된 코딩 서열, 및 G/C 최적화된 코딩 서열, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 적어도 약 50%, 55%, 또는 60%의 G/C 함량을 갖는다. 특정한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 적어도 약 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 또는 70%의 G/C 함량을 갖는다.
포유동물 숙주 세포 내로 형질감염될 때, 코돈 변형된 코딩 서열을 포함하는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B 핵산은 12-18시간, 또는 18시간 초과, 예를 들어, 24, 36, 48, 60, 72, 또는 72시간 초과의 안정성을 갖고, 포유동물 숙주 세포(예: 근육 세포)에 의해 발현될 수 있다.
포유동물 숙주 세포 내로 형질감염될 때, 코돈 변형된 코딩 서열을 포함하는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B 핵산은 단백질로 번역되고, 여기서 단백질의 양은 자연 발생 또는 야생형 또는 포유동물 숙주 세포 내로 형질감염된 참조 코딩 서열에 의해 얻은 단백질의 양과 필적하거나 이들 양보다 바람직하게는 적어도 10% 초과, 또는 적어도 20% 초과, 또는 적어도 30% 초과, 또는 적어도 40% 초과, 또는 적어도 50% 초과, 또는 적어도 100% 초과, 또는 적어도 200% 초과이다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 변형될 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열의 C 함량은 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열의 C 함량과 비교하여 증가, 바람직하게는 최대화될 수 있다 (본 명세서에서 "C 최대화된 코딩 서열"로 명명함). 핵산의 C 최대화 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 바람직하게는 각각의 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다. C 최대화 핵산 서열의 생성은 WO2015/062738에 따른 변형 방법을 사용하여 적절하게 수행될 수 있다. 이러한 맥락에서, WO2015/062738의 개시 내용은 인용을 통하여 본 명세서에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산이 변형될 수 있고, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열의 G/C 함량은 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열의 G/C 함량과 비교하여 최적화될 수 있다(본 명세서에서 "G /C 콘텐츠 최적화 코딩 서열"로 명명함). 그 맥락에서 "최적화된"은 G/C 함량이 바람직하게는 본질적으로 가능한 가장 높은 G/C 함량으로 증가되는 코딩 서열을 지칭한다. 핵산의 G/C 함량 최적화된 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 바람직하게는 각각의 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다. G/C 함량 최적화된 핵산 서열(RNA 또는 DNA)의 생성은 WO2002/098443에 따른 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 맥락에서, WO2002/098443의 개시는 그 전체 내용이 본 발명 내에 포함된다. 서열 목록의 <223> 식별자를 포함하여, 설명 전반에 걸쳐 G/C 최적화된 코딩 서열은 약어 "opt1" 또는 "gc"로 표시된다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 변형될 수 있고, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열의 코돈은 인간 코돈 사용(usage)에 맞게 적응될 수 있다(본 명세서에서 "인간 코돈 사용(usage)에 적응된 코딩 서열"로 지칭됨). 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈은 인간에서 다른 빈도로 발생한다. 따라서, 핵산의 코딩 서열은 바람직하게는 동일한 아미노산을 코딩하는 코돈의 빈도가 인간 코돈 사용에 따른 그 코돈의 자연 발생 빈도에 상응하도록 변형된다. 예를 들어, 아미노산 Ala의 경우, 야생형 또는 참조 코딩 서열은 바람직하게는 코돈 "GCC"가 0.40의 빈도로 사용되고, 코돈 "GCT"는 0.28의 빈도로 사용되고, "GCA" 코돈은 0.22의 빈도로 사용되며, "GCG" 코돈은 0.10의 빈도로 사용되는 등의 방식으로 적응된다 (예를 들어, WO2020002525의 표 1 참조). 따라서, 이러한 절차(Ala에 대해 예시됨)는 인간 코돈 사용에 적합한 서열을 얻기 위해 핵산의 코딩 서열에 의해 코딩된 각 아미노산에 적용된다. 서열 목록의 <223> 식별자를 포함하여, 명세서 설명 전반에 걸쳐, 인간 코돈 사용 적응 코딩 서열은 약어 "opt3" 또는 "인간"으로 표시된다.
양태들에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산이 변형될 수 있고, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열의 G/C 함량은 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열의 G/C 함량과 비교하여 변형될 수 있다(본 명세서에서는 "G/C 함량 변형된 코딩 서열"로 명명됨). 이러한 맥락에서, 용어 "G/C 최적화" 또는 "G/C 함량 변형"은 상응하는 야생형 또는 참조코딩 서열에 비해 변형된, 바람직하게는 증가된 수의 구아노신 및/또는 시토신 뉴클레오티드를 포함하는 핵산에 관한 것이다. 이러한 증가된 수는 아데노신 또는 티미딘 뉴클레오티드를 함유하는 코돈을 구아노신 또는 시토신 뉴클레오티드를 함유하는 코돈으로 치환함으로써 생성될 수 있다. 유리하게는, 증가된 G/C 함량을 갖는 핵산 서열은 증가된 A/U를 갖는 서열보다 더 안정하거나 더 나은 발현을 나타낸다. 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 G/C 함량 변형된 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 바람직하게는 각각의 야생형 또는 참조 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는다. 바람직하게는, 핵산의 코딩 서열의 G/C 함량은 상응하는 야생형 또는 참조 핵산 서열의 코딩 서열의 G/C 함량과 비교하여 적어도 10%, 20%, 30%, 바람직하게는 적어도 40% 증가된다 (본 명세서에서 "opt 10" 또는 "gc mod"로 지칭됨).
양태들에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산이 변형될 수 있고, 여기서 코돈 적응 지수(codon adaptation index, CAI)는 적어도 하나의 코딩 서열에서 증가되거나 바람직하게는 최대화될 수 있다 (본 명세서에서 "CAI 최대화된 코딩 서열"로 지칭됨). 예를 들어, 인간에서 비교적 희귀한 야생형 또는 참조 핵산 서열의 모든 코돈이 예를 들어, 인간 내에서 빈도가 높은 각가의 코돈으로 교환되는 것이 바람직하며, 여기에서 빈도 높은 코돈은 비교적 희귀한 코돈과 동일한 아미노산을 코딩한다. 적합하게는, 가장 빈도 높은 코돈이 코딩된 단백질의 각 아미노산에 사용된다 (WO2020002525의 표 1 참조, 가장 빈도 높은 인간 코돈은 별표로 표시됨). 적합하게는, 핵산은 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 코딩 서열의 코돈 적응 지수(CAI)는 적어도 0.5, 적어도 0.8, 적어도 0.9 또는 적어도 0.95이다. 가장 바람직하게는, 적어도 하나의 코딩 서열의 코돈 적응 지수(CAI)는 1(CAI=1)이다. 예를 들어, 아미노산 Ala의 경우, 야생형 또는 참조 코딩 서열은 가장 빈번한 인간 코돈 "GCC"가 항상 상기 아미노산에 사용되는 방식으로 적응될 수 있다. 따라서, 이러한 절차(Ala에 대해 예시됨)는 CAI 최대화된 코딩 서열을 얻기 위해 핵산의 코딩 서열에 의해 코딩되는 각각의 아미노산에 적용될 수 있다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 본래 핵산 서열(예를 들어 야생형 또는 참조 서열) 내 A 및/또는 U 뉴클레오티드의 수에 관하여 핵산 서열 내 A 및/또는 U 뉴클레오티드의 수를 변환함으로써 변형될 수 있다. 바람직하게, 이러한 AU 변경은 조성물 내 개별 핵산의 유지(retention) 시간을 수정하고, (i) HPLC 방법을 사용한 공동-정제(co-purification)을 허용하고, 및/또는 수득된 핵산 조성물의 분석을 허용하기 위해 수행된다. 이러한 방법은 공개된 PCT 출원 WO2019092153A1에 상세히 기술된다. WO2019092153A1의 청구항 1 내지 70은 참조로 본원에 포함된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이고, 여기서 코돈 변형된 코딩 서열은 G/C 최적화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용빈도에 적합한 코딩 서열, 또는 G/C 변형 코딩 서열에서 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 이종 비번역된 영역(UTR)을 포함한다.
"비번역된 영역" 또는 "UTR" 또는 "UTR 요소"라는 용어는 통상의 기술자에게 인식되고 이해되며, 예를 들어 코딩 서열의 5' 또는 3'에 일반적으로 위치한 핵산 분자의 일부를 지칭하는 것으로 의도된다. UTR은 단백질로 번역되지 않는다. UTR은 핵산, 예를 들어 DNA 또는 RNA의 일부일 수 있다. UTR은 유전자 발현을 조절하기 위한 요소, 소위 조절 요소를 포함할 수 있다. 이러한 조절 요소는 예를 들어 리보좀 결합 부위, miRNA 결합 부위, 프로모터 요소 등이다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 단백질-코딩 영역("코딩 서열" 또는 "cds"), 및 5'-UTR 및/또는 3'-UTR을 포함한다. 특히, UTR은 핵산을 결정하는 조절 서열 요소, 예를 들어, RNA 턴오버, 안정성 및 국소화(localization) 요소를 보유할 수 있다. 또한 UTR에는 번역을 향상시키는 서열 요소가 포함될 수 있다. 핵산 서열(DNA 및 RNA 포함)의 의학적 적용에서, 핵산의 적어도 하나의 펩티드 또는 단백질로의 번역은 치료 효능에 가장 중요하다. 3'-UTR 및/또는 5'-UTR의 특정 조합은 본 발명의 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현을 향상시킬 수 있다. 상기 UTR 조합을 보유하는 핵산 분자는 유리하게는 대상체에 투여 후, 바람직하게는 근육내 투여 후에 항원성 펩티드 또는 단백질의 신속하고 일시적인 발현을 가능하게 한다. 따라서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 3'-UTR 및/또는 5'-UTR의 특정 조합을 포함하는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 백신으로서 투여하기에 특히 적합하고, 특히 개체의 근육, 진피 또는 표피로 투여하기에 적합하다.
적합하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 이종 5'-UTR 및/또는 적어도 하나의 이종 3'-UTR을 포함한다. 상기 이종 5'-UTR 또는 3'-UTR은 자연 발생 유전자로부터 유래되거나 합성 조작될 수 있다. 바람직한 양태에서, 핵산, 바람직하게는 RNA는 적어도 하나의 (이종성) 3'-UTR 및/또는 적어도 하나의 (이종성) 5'-UTR에 작동가능하게 연결된, 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, RNA 또는 DNA는 적어도 하나의 이종 3'-UTR을 포함한다.
"3'-비번역 영역" 또는 "3'-UTR" 또는 "3'-UTR 요소"라는 용어는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 코딩 서열의 3'(즉, 다운스트림)에 위치하고 단백질로 번역되지 않는 핵산 분자의 일부를 지칭하기 위한 것이다. 3'-UTR은 코딩 서열과 (선택적) 말단 폴리(A) 서열 사이에 위치한, 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA의 일부일 수 있다. 3'-UTR은 조절 요소(regulatory element)라고도 하는 유전자 발현을 제어하기 위한 요소를 포함할 수 있다. 이러한 조절 요소는 예를 들어 리보솜 결합 부위, miRNA 결합 부위 등일 수 있다.
바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 반감기가 향상된(즉, 안정한 RNA를 제공하는) RNA와 관련된 유전자로부터 유도될 수 있는 3'-UTR을 포함한다.
일부 양태에서, 3'-UTR은 하나 이상의 폴리아데닐화 신호, 세포 내 위치의 핵산 안정성에 영향을 미치는 단백질에 대한 결합 부위, 또는 하나 이상의 miRNA 또는 miRNA에 대한 결합 부위를 포함한다.
MicroRNA(또는 miRNA)는 핵산 분자의 3'-UTR에 결합하고 핵산 분자 안정성을 감소시키거나 번역을 억제함으로써 유전자 발현을 하향 조절하는 19-25 뉴클레오티드 길이의 비암호화 RNA이다. 예를 들어, microRNA는 RNA를 조절하여 단백질 발현을 조절하는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 간(miR-122), 심장(miR-ld, miR-149), 내피 세포(miR-17-92, miR-126), 지방 조직(let-7, miR-30c), 신장(miR-192, miR-194, miR-204), 골수 세포(miR-142-3p, miR-142-5p, miR-16, miR-21, miR-223, miR-24, miR-27), 근육(miR-133, miR-206, miR-208) 및 폐 상피 세포(let-7, miR-133, miR-126)이 있다. RNA는 하나 이상의 마이크로RNA 표적 서열, 마이크로RNA 서열, 또는 마이크로RNA 시드를 포함할 수 있다. 이러한 서열은 예를 들어 US20050261218 및 US20050059005에 교시된 것과 같은 알려진 microRNA에 해당한다.
따라서, 위에서 정의한 miRNA 또는 miRNA의 결합 부위는 원하는 세포 유형 또는 조직(예: 근육 세포)에서 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA의 발현을 조정하기 위해 3'-UTR에서 제거되거나 3'-UTR로 도입될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 하나 이상의 이종 3'-UTR을 포함하고, 여기서 하나 이상의 이종 3'-UTR은 PSMB3, ALB7, 알파-글로빈("muag"로 지칭됨), CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 및 RPS9, 또는 이러한 유전자들 중 어느 것의 상동체, 단편 또는 변이체로부터 선택된 유전자의 3'-UTR로부터 선택되거나 또는 이들로부터 유래한 핵산 서열, 바람직하게는 서열 번호: 253-268, 22902-22905, 22892-22895 또는 이들 중 어느 것의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열에 따른 서열을 포함한다. 이러한 맥락에서 특히 바람직한 핵산 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019077001A1, 특히 WO2019077001A1의 청구항 9로부터 유래될 수 있다. WO2019077001A1의 제9항의 상응하는 3'-UTR 서열은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다 (예를 들어, WO2019077001A1의 서열 번호: 23-34, 또는 이의 단편 또는 변이체).
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 알파-글로빈 유전자로부터 유래된 3'-UTR을 포함한다. 알파-글로빈 유전자("muag")로부터 유래된 상기 3'-UTR은 서열 번호: 267, 268, 22896-22901, 22906-22911 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
추가적인 양태에서, 핵산은 RPS9 유전자로부터 유래된 3'-UTR을 포함한다. RPS9 유전자로부터 유래된 상기 3'-UTR은 서열 번호: 263, 264, 22894, 22895, 22904, 22905 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
다른 실시양태에서, 핵산은 서열 번호: 22876-22891 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 3'-UTR을 포함한다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 PSMB3 유전자로부터 유래된 3'-UTR을 포함한다. PSMB3 유전자로부터 유래된 상기 3'-UTR은 서열 번호: 253 또는 254 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
다른 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 WO2016107877에 기술된 바와 같은 3'-UTR을 포함할 수 있으며, 3'-UTR 서열과 관련된 WO2016107877의 개시는 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 적합한 3'-UTR은 WO2016107877의 서열 번호: 1-24 및 서열 번호: 49-318, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다. 다른 양태에서, 핵산은 WO2017036580에 개시된 3'-UTR을 포함할 수 있으며, 3'-UTR 서열과 관련된 WO2017036580의 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 적합한 3'-UTR은 WO2017036580의 서열 번호: 152-204, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다. 다른 실시양태에서, 핵산은 WO2016022914에 기재된 바와 같은 3'-UTR을 포함하고, 3'-UTR 서열과 관련된 WO2016022914의 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 특히 바람직한 3'-UTR은 WO2016022914의 서열 번호: 20-36에 따른 핵산 서열, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, RNA 또는 DNA는 적어도 하나의 이종 5'-UTR을 포함한다.
용어 "5'-비번역 영역" 또는 "5'-UTR" 또는 "5'-UTR 요소"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 코딩 서열의 5'(즉, "업스트림")에 위치하며 단백질로 번역되지 않는 핵산 분자의 일부를 지칭하기 위한 것이다. 5'-UTR은 코딩 서열의 5'에 위치한 핵산의 일부일 수 있다. 일반적으로 5'-UTR은 전사 시작 부위에서 시작하여 코딩 서열의 시작 코돈 앞에서 끝난다. 5'-UTR은 조절 요소라고도 하는 유전자 발현을 제어하기 위한 요소를 포함할 수 있다. 이러한 조절 요소는 예를 들어 리보솜 결합 부위, miRNA 결합 부위 등일 수 있다. 5'-UTR은 전사 후 변형될 수 있으며, 예를 들어, 5'-캡 구조의 효소적 또는 전사 후 추가(예: 아래 정의된 mRNA의 경우)에 의해 변형된다.
바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 반감기가 향상된(즉, 안정한 RNA를 제공하는) RNA와 관련된 유전자로부터 유도될 수 있는 5'-UTR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 5'-UTR은 세포 내의 RNA 안정성 또는 RNA 위치에 영향을 미치는 단백질에 대한 하나 이상의 결합 부위, 또는 (상기 정의된 바와 같은) 하나 이상의 miRNA 또는 miRNA에 대한 하나 이상의 결합 부위를 포함한다.
따라서, 원하는 세포 유형 또는 조직(예: 근육 세포)에 대한 핵산 발현을 조정하기 위해 위에서 정의한 miRNA 또는 miRNA에 대한 결합 부위를 5'-UTR에서 제거하거나 5'-UTR에 도입할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 이종 5'-UTR을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 이종 5'-UTR은 HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B, 및 UBQLN2로부터 선택된 유전자의 5'-UTR로부터 선택되거나 이들로부터 유래된 핵산 서열, 또는 서열 번호: 231-252, 22870-22875 또는 이들 중 어느 것의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열에 따른 유전자, 또는 이의 상동체(homolog), 단편 또는 변이체를 포함한다. 이러한 맥락에서 특히 바람직한 핵산 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019077001A1, 특히 WO2019077001A1의 청구항 9로부터 선택될 수 있다. WO2019077001A1의 제9항의 상응하는 5'-UTR 서열은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다(예를 들어, WO2019077001A1의 서열 번호: 1-20, 또는 이의 단편 또는 변이체).
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 RPL31 유전자로부터 유래된 5'-UTR을 포함하고, 여기서 RPL31 유전자로부터 유래된 상기 5'-UTR은 서열 번호: 243, 244, 22872, 22873 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 SLC7A3 유전자로부터 유래된 5'-UTR을 포함하고, 여기서 SLC7A3 유전자로부터 유래된 상기 5'-UTR은 서열 번호: 245, 246, 22874, 22875 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 HSD17B4 유전자로부터 선택되거나 이로부터 유래된 5'-UTR을 포함하고, 여기서 HSD17B4 유전자로부터 유래된 상기 5'-UTR은 서열 번호: 231, 232, 22870, 22871 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
다른 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 서열 번호: 22848-22869 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 5'-UTR을 포함한다.
다른 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 WO2013143700에 기술된 5'-UTR을 포함할 수 있으며, 5'-UTR 서열에 관한 WO2013143700의 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다. 특히 바람직한 5'-UTR은 WO2013143700의 서열번호: 1-1363, 서열번호: 1395, 서열번호: 1421 및 서열번호: 1422로부터 유래된 핵산 서열, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다. 다른 실시양태에서, 핵산은 WO2016107877에 기술된 5'-UTR을 포함하며, 5'-UTR 서열에 관한 WO2016107877의 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다. 특히 바람직한 5'-UTR은 WO2016107877의 서열번호: 25-30 및 서열번호: 319-382에 따른 핵산 서열, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다. 다른 실시양태에서, 핵산은 WO2017036580에 기술된 5'-UTR을 포함하며, 5'-UTR에 관한 WO2017036580의 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다. 특히 바람직한 5'-UTR은 WO2017036580의 서열번호: 1-151에 따른 핵산 서열, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다. 다른 실시양태에서, 핵산은 WO2016022914에 기술된 5'-UTR을 포함하며, 5'-UTR에 관한 WO2016022914의 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다. 특히 바람직한 5'-UTR은 WO2016022914의 서열번호: 3-19에 따른 핵산 서열, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체이다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 다음의 5'UTR/3'UTR 조합 ("또한 UTR 디자인으로 명명됨")으로부터 선택된, 3'-UTR 및/또는 5'-UTR에 작동가능하게 연결된, 본 명세서에서 정의된 적어도 하나의 항원성 단백질을 코딩하는, 본 명세서에서 규정된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다:
a-1 (HSD17B4/PSMB3), a-2 (NDUFA4/PSMB3), a-3 (SLC7A3/PSMB3), a-4 (NOSIP/PSMB3), a-5 (MP68/PSMB3), b-1 (UBQLN2/RPS9), b-2 (ASAH1/RPS9), b-3 (HSD17B4/RPS9), b-4 (HSD17B4/CASP1), b-5 (NOSIP/COX6B1), c-1 (NDUFA4/RPS9), c-2 (NOSIP/NDUFA1), c-3 (NDUFA4/COX6B1), c-4 (NDUFA4 /NDUFA1), c-5 (ATP5A1/PSMB3), d-1 (Rpl31/PSMB3), d-2 (ATP5A1/CASP1), d-3 (SLC7A3/GNAS), d-4 (HSD17B4/NDUFA1), d-5 (Slc7a3/Ndufa1), e-1 (TUBB4B/RPS9), e-2 (RPL31/RPS9), e-3 (MP68/RPS9), e-4 (NOSIP/RPS9), e-5 (ATP5A1/RPS9), e-6 (ATP5A1/COX6B1), f-1 (ATP5A1/GNAS), f-2 (ATP5A1/NDUFA1), f-3 (HSD17B4/COX6B1), f-4 (HSD17B4/GNAS), f-5 (MP68/COX6B1), g-1 (MP68/NDUFA1), g-2 (NDUFA4/CASP1), g-3 (NDUFA4/GNAS), g-4 (NOSIP/CASP1), g-5 (RPL31/CASP1), h-1 (RPL31/COX6B1), h-2 (RPL31/GNAS), h-3 (RPL31/NDUFA1), h-4 (Slc7a3/CASP1), h-5 (SLC7A3/COX6B1), i-1 (SLC7A3/RPS9), i-2 (RPL32/ALB7), i-2 (RPL32/ALB7), 또는 i-3 (알파-글로빈 유전자).
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 항원성 단백질을 코딩하는 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 상기 코딩 서열은 HSD17B4 5'-UTR 및 PSMB3 3'-UTR (HSD17B4/PSMB3 (UTR design a-1))에 작동가능하게 연결된다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 바람직하게는 SARS-CoV-2 (nCoV-2019) 코로나바이러스로부터 유래된, 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 항원성 단백질을 코딩하는 본 명세서에 명시된 바와 같은 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 상기 코딩 서열은 SLC7A3 5'-UTR 및 PSMB3 3'-UTR (SLC7A3/PSMB3 (UTR design a-3))에 작동가능하게 연결된다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 핵산은 바람직하게는 SARS-CoV-2 (nCoV-2019) 코로나바이러스로부터 유래된, 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 항원성 단백질을 코딩하는 본 명세서에 명시된 바와 같은 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 상기 코딩 서열은 RPL31 5'-UTR 및 RPS9 3'-UTR (RPL31/ RPS9 (UTR design e-2))에 작동가능하게 연결된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 항원성 단백질을 코딩하는 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 상기 코딩 서열은 알파-글로빈 ("muag") 3'-UTR에 작동가능하게 연결된다.
일부 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA는 모노시스트론, 바이시스트론 또는 멀티시스트론일 수 있다.
용어 "모노시스트론(monocistronic)"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 하나의 코딩 서열만을 포함하는 핵산을 지칭하는 것으로 의도된다. 본 명세서에 사용된 용어 "바이시스트로닉" 또는 "멀티시스트로닉"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 2개(바이시스트론) 또는 그 이상(멀티시스트론) 코딩 서열을 포함할 수 있는 핵산을 의미한다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 모노시스트론이다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 모노시스트론성이고 상기 핵산의 코딩 서열은 적어도 2개의 상이한 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩한다. 따라서, 상기 코딩 서열은 아미노산 링커 서열이 있거나 없이 연결된, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 및 그 이상의 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩할 수 있으며, 여기서 상기 링커 서열은 강성 링커, 유연성 링커, 절단 가능한 링커, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 구조(construct)는 본 명세서에서 "다중-항원-구조(multi-antigen-construct)"로 지칭된다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 바이시스트론성 또는 멀티시스트론성일 수 있고 2개 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 2개 이상의 코딩 서열은 본 명세서에서 정의된 바와 같이 2개 이상의 상이한 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩한다. 따라서, 바이시스트론 또는 멀티시스트론 핵산 내의 코딩 서열은 본 명세서에 정의된 바와 같은 별개의 항원성 단백질 또는 펩티드 또는 그의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 적합하게 코딩한다. 바람직하게는, 상기 바이시스트론 또는 멀티시스트론 구조의 코딩 서열은 적어도 하나의 IRES(내부 리보솜 진입 부위) 서열에 의해 분리될 수 있다. 따라서, 용어 "2개 이상의 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는"은 비시스트론성 또는 멀티시스트론성 핵산이 바이러스 분리주(isolate)의, 예를 들어, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상(바람직하게는 상이한) 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 것을 의미할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 대안적으로, 바이시스트론 또는 멀티시스트론 핵산은 예를 들어, 동일한 바이러스로부터 유래된 적어도 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상(바람직하게는 상이한) 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩한다. 이러한 맥락에서, 적합한 IRES 서열은 특허 출원 WO2017081082의 서열 번호: 1566-1662에 따른 핵산 서열의 목록, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다. 이러한 맥락에서, IRES 서열에 관한 WO2017081082의 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
본 발명의 맥락에서, 코딩 서열의 특정 조합은, 본 명세서에 정의된 다중 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 핵산 세트를 얻기 위하여, 모노시스트론, 바이시스트론 및 멀티시스트론 DNA 및/또는 RNA 구조 및/또는 다중-항원 구조의 임의의 조합에 의해 생성될 수 있음이 이해되어야 한다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 리보솜 결합 부위의 환경에서 A/U(A/T) 함량은 각각의 야생형 또는 참조 핵산의 리보솜 결합 부위 환경에서의 A/U(A/T) 함량에 비해 증가될 수 있다. 이 변형(리보솜 결합 부위 주변의 증가된 A/U(A/T) 함량)은 핵산, 예를 들어, RNA에 대한 리보솜 결합의 효율성을 증가시킨다. 리보솜 결합 부위에 대한 리보솜의 효과적인 결합은 차례로 핵산의 효율적인 번역 효과를 갖는다.
따라서, 특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 서열 번호: 180, 181, 22845-22847 또는 이의 단편 또는 변이체의 어느 하나와 동일하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 동일한, "Kozak(코작) 서열"이라고도 하는 리보솜 결합 부위를 포함한다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 폴리(N) 서열, 예를 들어, 하나 이상의 폴리(A) 서열, 하나 이상의 폴리(U) 서열, 하나 이상의 폴리(C) 서열, 또는 이들의 조합을 포함한다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 RNA는 적어도 하나의 폴리(A) 서열을 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "폴리(A) 서열", "폴리(A) 테일" 또는 "3'-폴리(A) 테일"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 일반적으로 선형 RNA(또는 원형 RNA)의 3'-말단에 위치하며 최대 약 1000개의 아데노신 뉴클레오티드인 아데노신 뉴클레오티드의 서열로 의도된다. 바람직하게는, 상기 폴리(A) 서열은 본질적으로 단독중합체이며, 예를 들어, 예를 들어 100개의 아데노신 뉴클레오티드의 폴리(A) 시퀀스는 본질적으로 100개의 뉴클레오티드 길이를 갖는다. 다른 양태에서, 폴리(A) 서열은 아데노신 뉴클레오티드와 상이한 적어도 하나의 뉴클레오티드에 의해 끊어질 수 있으며, 예를 들어, 100개의 아데노신 뉴클레오티드의 폴리(A) 서열은 100개 보다 큰 뉴클레오티드의 길이를 가질 수 있다(100개의 아데노신 뉴클레오티드 및 추가로 상기 아데노신 뉴클레오티드와 상이한 적어도 하나의 뉴클레오티드 - 또는 뉴클레오티드의 스트레치를 포함). 본 명세서에 정의된 "폴리(A) 서열"은 일반적으로 RNA에 관한 것이지만, 본 발명의 맥락에서, 용어는 마찬가지로 DNA 분자의 상응하는 서열(예를 들어, "폴리(T) 서열")에 관한 것으로 이해되어야 한다.
폴리(A) 서열은 약 10 내지 약 500개의 아데노신 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 200개의 아데노신 뉴클레오티드, 약 40 내지 약 200개의 아데노신 뉴클레오티드, 또는 약 40 내지 약 150개의 아데노신 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 적합하게는, 폴리(A) 서열의 길이는 적어도 약 10, 50, 64, 75, 100, 200, 300, 400, 또는 500개의 아데노신 뉴클레오티드이거나 이것보다 많을 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 약 30 내지 약 200개의 아데노신 뉴클레오티드를 포함하는 적어도 하나의 폴리(A) 서열을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 폴리(A) 서열은 약 64개의 아데노신 뉴클레오티드(A64)를 포함한다. 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 폴리(A) 서열은 약 100개의 아데노신 뉴클레오티드(A100)를 포함한다. 다른 구체예에서, 폴리(A) 서열은 약 150개의 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다.
추가 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 약 100개의 아데노신 뉴클레오티드를 포함하는 적어도 하나의 폴리(A) 서열을 포함하며, 여기서 폴리(A) 서열은 비-아데노신 뉴클레오티드, 바람직하게는 10개의 비-아데노신 뉴클레오티드(A30-N10-A70)에 의해 끊어진다.
본 명세서에 정의된 폴리(A) 서열은 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 3' 말단, 바람직하게는 RNA의 3' 말단에 직접 위치할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 3'-말단 뉴클레오티드(즉, 폴리뉴클레오티드 사슬의 마지막 3'-말단 뉴클레오티드)는 적어도 하나의 폴리(A) 서열의 3'-말단 A 뉴클레오티드이다. "3' 말단에 직접 위치"라는 용어는 정확히 3' 말단에 위치하는 것으로 이해되어야 한다 - 즉, 핵산의 3' 말단은 A 뉴클레오티드로 종결되는 폴리(A) 서열로 구성된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산 서열, 바람직하게는 RNA는 70개 이상의 아데노신 뉴클레오티드의 폴리(A) 서열, 바람직하게는 70개 이상의 연속적인 아데노신 뉴클레오티드을 포함하고, 여기서 3'-말단 뉴클레오티드는 아데노신 뉴클레오티드이다.
이러한 맥락에서, 아데노신 뉴클레오티드로 끝나는 것은 RNA 백신에 의한 IFN알파의 유도를 감소시키는 것으로 나타났다. 이것은 IFN알파의 유도가 예방접종을 받은 피험자에서 열을 유발하는 주요 요인으로 생각되기 때문에 특히 중요하며, 이는 당연히 피해야 한다.
구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산이 RNA인 실시양태에서, 핵산의 폴리(A) 서열은 바람직하게는 RNA 시험관내 전사 동안 DNA 주형으로부터 수득된다. 다른 양태에서, 폴리(A) 서열은 반드시 DNA 주형으로부터 전사될 필요 없이 화학적 합성의 일반적인 방법에 의해 시험관내에서 수득된다. 다른 실시양태에서, 폴리(A) 서열은 상업적으로 입수가능한 폴리아데닐화 키트 및 당업계에 공지된 상응하는 프로토콜을 사용하여 RNA의 효소적 폴리아데닐화(RNA 시험관내 전사 후)에 의해 생성되거나, 또는 대안적으로, 고정화된 폴리(A) 중합효소를 사용함으로써, 예를 들어, WO2016174271에 기술된 방법 및 수단을 사용하여 생성된다.
구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 효소적 폴리아데닐화에 의해 수득된 폴리(A) 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 대부분의 핵산 분자는 약 100(+/-20) 내지 약 500(+/-50), 바람직하게는 약 250(+/-20) 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 주형 DNA로부터 유래된 폴리(A) 서열을 포함할 수 있고, 여기에 임의로 효소적 폴리아데닐화, 예를 들어, WO2016091391에 기술된 바와 같은 폴리아데닐화에 의해 생성된 적어도 하나의 추가 폴리(A) 서열을 추가로 포함할 수 있다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 폴리(C) 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "폴리(C) 서열"은 약 200개 이하의 시토신 뉴클레오티드의 시토신 뉴클레오티드의 서열인 것으로 의도된다. 바람직한 실시양태에서, 폴리(C) 서열은 약 10 내지 약 200개의 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 100개의 시토신 뉴클레오티드, 약 20 내지 약 70개의 시토신 뉴클레오티드, 약 20 내지 약 60개의 시토신 뉴클레오티드, 또는 약 10 내지 약 40개의 시토신 뉴클레오티드을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 폴리(C) 서열은 약 30개의 시토신 뉴클레오티드를 포함한다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 히스톤 스템-루프(hSL) 또는 히스톤 스템 루프 구조(structure)를 포함한다.
용어 "히스톤 스템-루프"(예를 들어, 서열 목록에서 "hSL"로 약칭됨)는 히스톤 mRNA에서 주로 발견되는 스템-루프 2차 구조를 형성하는 핵산 서열을 지칭하도록 의도된다.
히스톤 스템-루프 서열/구조는 WO2012019780에 개시된 바와 같은 히스톤 스템-루프 서열로부터 적합하게 선택될 수 있으며, WO2012019780의 개시 중 히스톤 스템-루프 서열/히스톤 스템-루프 구조에 관한 개시는 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 본 발명에서 사용될 수 있는 히스톤 스템-루프 서열은 바람직하게는 WO2012019780의 화학식 (I) 또는 (II)로부터 유래될 수 있다. 추가의 바람직한 실시양태에 따르면, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 특허 출원 WO2012019780의 특정 화학식 (Ia) 또는 (IIa) 중 적어도 하나로부터 유래된 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 적어도 하나의 히스톤 스템-루프를 포함하고, 여기서 상기 히스톤 스템-루프(hSL)는 서열 번호: 178 또는 179 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
다른 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 본 명세서에 정의된 바와 같은 hsL를 포함하지 않는다.
실시양태에서, 특히 RNA와 관련된 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 3'-말단 서열 요소를 포함한다. 상기 3'-말단 서열 요소는 폴리(A) 서열 및 선택적으로 히스톤-스템-루프 서열을 포함한다. 따라서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 서열 번호: 182-230, 22912, 22913 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 3'-말단 서열 요소를 포함한다.
바람직한 양태에서, 특히 RNA와 관련된 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 3'-말단 서열 요소를 포함한다. 상기 3'-말단 서열 요소는 폴리(A) 서열 및 선택적으로 히스톤-스템-루프 서열을 포함한다. 따라서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 서열 번호: 182, 187, 189, 192, 199, 207 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 적어도 하나의 3'-말단 서열 요소를 포함한다.
다양한 실시양태, 특히 RNA와 관련된 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 서열 번호: 176, 177, 22840-22844, 또는 이의 단편 또는 변이체에 따른 5'-말단 서열 요소를 포함한다. 이러한 5'-말단 서열 요소는 예를 들어 T7 RNA 중합효소의 결합 부위와같은 결합 부위를 포함한다. 또한, 상기 5'-말단 시작 서열의 첫 번째 뉴클레오티드는 바람직하게는 2'O 메틸화, 예를 들어, 2'O 메틸화 구아노신 또는 2'O 메틸화 아데노신을 포함할 수 있다.
바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, RNA 또는 DNA는 일반적으로 약 50 내지 약 20000개의 뉴클레오티드, 또는 약 500 내지 약 10000개의 뉴클레오티드, 또는 약 1000 내지 약 10000개의 뉴클레오티드, 또는 바람직하게는 약 1000 내지 약 5000개의 뉴클레오티드, 또는 훨씬 더 바람직하게는 약 2000 내지 약 5000개의 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 DNA 또는 RNA이다.
실시양태에서, DNA는 플라스미드 DNA 또는 선형 코딩 DNA 구조이고, 여기서 DNA는 본 명세서에 정의된 바와 같은 핵산 요소(예를 들어 코딩 서열, UTR, 폴리(A/T), 폴리아데닐화 신호, 프로모터)를 포함하거나 이로 이루어진다.
양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 DNA 발현 벡터이다. 이러한 DNA 발현 벡터는 박테리아 플라스미드, 아데노바이러스, 폭스바이러스, 파라폭시바이러스(orf 바이러스), 백시니아 바이러스, 계두 바이러스, 헤르페스 바이러스, 아데노 관련 바이러스(AAV), 알파바이러스, 렌티바이러스, 람다 파지, 림프구성 맥락수막염 바이러스, 리스테리아 종, 및 살모넬라 종로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
적합하게는, DNA는 또한 각각의 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 항원 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함할 수 있다. 항원 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터는 예를 들어 원숭이 바이러스 40(SV40)의 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 프로모터, 예를 들어 소 면역결핍 바이러스(BIV) 장말단 반복(LTR) 프로모터, 몰로니(Moloney) 바이러스 프로모터, 조류 백혈병 바이러스(ALV) 프로모터, 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, 예를 들어 CMV 즉시 초기 프로모터, 엡스타인 바(Epstein Barr) 바이러스(EBV) 프로모터, 또는 Rous 육종 바이러스(RSV) 프로모터일 수 있다. 프로모터는 또한 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 또는 인간 메탈로티오네인과 같은 인간 유전자로부터의 프로모터일 수 있다. 프로모터는 또한 천연 또는 합성의 근육 또는 피부 특이적 프로모터와 같은 조직 특이적 프로모터일 수 있다. 이러한 프로모터의 예는 미국 특허 출원 공개 번호 US20040175727에 개시된다. 바람직한 실시양태에서, 벡터는 pVAX, pcDNA3.0, 또는 provax, 또는 코로나바이러스 항원을 코딩하는 DNA를 발현할 수 있고 세포가 서열을 면역계에 의해 인식되는 항원으로 번역할 수 있게 하는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다.
추가로 적합한 플라스미드 DNA가 생성되어 세포주, 예를 들어, 곤충 세포주에서 암호화된 항원의 효율적인 생산을 허용할 수 있다. 예를 들어, WO2009150222A2에 기술되고 PCT 청구항 1 내지 33에 정의된 벡터를 사용할 수 있으며, WO2009150222A2의 청구항 1 내지 33에 관한 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 아데노바이러스 기반 벡터이다. 이러한 아데노바이러스 기반 벡터는 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질(예를 들어, 구성요소 A의 코로나바이러스 항원, 추가로 구성요소 B의 바이러스 항원)을 코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 맥락에서, WO2005071093 또는 WO2006048215에 기재된 것과 같은 임의의 적합한 아데노바이러스 기반 벡터가 사용될 수 있다. 적절하게는, 사용된 아데노바이러스 기반 벡터는 원숭이 아데노바이러스이므로 AdHu5와 같은 일반적인 인간 개체에 대한 기존 항체에 의한 백신 접종 후 면역 반응의 약화를 방지한다. 적합한 유인원 아데노바이러스 벡터는 AdCh63 (WO2005071093 참조) 또는 AdCh68 (Cohen et al J. Gen Virol 2002 83:151)을 포함하지만 다른 것도 사용될 수 있다. 적절하게는 아데노바이러스 벡터는 E1 영역이 삭제되어 인간 세포에서 복제가 결핍되게 만든다. E3 및 E4와 같은 아데노바이러스의 다른 영역도 삭제될 수 있다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 orf 바이러스 기반 벡터이다. 이러한 orf 이러스 기반 벡터는 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질(예를 들어, 구성요소 A의 코로나바이러스 항원, 추가로 구성요소 B의 바이러스 항원)을 코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 RNA이다.
바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 전형적으로 약 50 내지 약 20000개의 뉴클레오티드, 또는 약 500 내지 약 10000개의 뉴클레오티드, 또는 약 1000 내지 약 10000개의 뉴클레오티드, 또는 바람직하게는 약 1000 내지 약 5000개의 뉴클레오티드, 또는 훨씬 더 바람직하게는 약 2000 내지 약 5000개의 뉴클레오티드를 포함한다.
바람직한 양태에 따르면, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 RNA, 바람직하게는 코딩 RNA이다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 (코딩) RNA는 mRNA, (코딩) 자가-복제 RNA, (코딩) 원형 RNA, (코딩) 바이러스 RNA, 또는 (코딩) 레플리콘 RNA로부터 선택될 수 있다.
양태에서, RNA는 원형 RNA이다. 본 명세서에 사용된 "원형 RNA" 또는 "circRNA"는 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 원형 폴리뉴클레오티드 구조로서 이해되어야 한다. 바람직하게는, 이러한 circRNA는 단일 가닥 RNA 분자이다. 바람직한 구현예에서, 상기 circRNA는 본 명세서에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원성 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다.
실시양태에서, RNA는 레플리콘 RNA이다. 용어 "레플리콘 RNA"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 최적화된 자가 복제 RNA가 되도록 의도된다. 이러한 구조는 예를 들어, 알파바이러스(예: SFV, SIN, VEE 또는 RRV) 및 구조적 바이러스 단백질의 관심 핵산(즉, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 항원성 펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 코딩 서열)으로의 치환으로부터 유래한 레플리카제 요소를 포함한다. 대안적으로, 레플리카제는 독립적인 코딩 RNA 구조 또는 코딩 DNA 구조에 제공될 수 있다. 레플리카제의 다운스트림은 레플리콘 RNA의 복제를 제어하는 서브-게놈 프로모터일 수 있다.
특히 바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 레플리콘 RNA 또는 자가-복제 RNA가 아니다.
특히 바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 mRNA이다.
바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 레플리카제 요소(예를 들어, 레플리카제를 인코딩하는 핵산)를 포함하지 않는다.
용어 "RNA" 및 "mRNA"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 리보핵산 분자, 즉 뉴클레오티드로 구성된 중합체로 의도된다. 이러한 뉴클레오티드는 일반적으로 소위 백본을 따라 서로 연결된 아데노신-일인산, 우리딘-일인산, 구아노신-일인산 및 시티딘-일인산 단량체이다. 백본은 첫 번째의 당, 즉 리보오스와 두 번째 인접한 단량체의 인산염 모이어티 사이의 포스포디에스테르 결합에 의해 형성된다. 단량체의 특정 연속을 RNA-서열이라고 한다. mRNA(메신저 RNA)는 특정 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열로 번역될 수 있는 뉴클레오티드 코딩 서열을 제공한다.
본 발명의 맥락에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA, 바람직하게는 mRNA는 투여 후 (예를 들어, 개체, 예를 들어, 인간에 투여 후) (기능적) 항원으로 번역되는, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 항원성 단백질을 코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 제공한다.
따라서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 코딩 RNA, 바람직하게는 mRNA는 백신, 바람직하게는 본 발명의 조합 백신에 적합하다.
적합하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 5'-캡 구조의 추가에 의해 변형될 수 있으며, 이는 바람직하게는 (개체 투여 후에) RNA를 안정화하고/하거나 코딩된 항원의 발현을 향상시키고/시키거나 선천성 면역계의 자극을 감소시킨다. 5'-캡 구조는 핵산이 RNA, 특히 선형 코딩 RNA인 실시양태, 예를 들어, 선형 mRNA 또는 선형 코딩 레플리콘 RNA에서 특히 중요하다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 5'-캡 구조, 바람직하게는 m7G, cap0, cap1, cap2, 변형된 cap0, 또는 변형된 cap1 구조를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "5'-캡 구조"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 RNA, 예를 들어, mRNA의 5'-말단에 위치한 5' 변형된 뉴클레오티드, 특히 구아닌 뉴클레오티드를 의미하도록 의도된다. 바람직하게는, 5'-캡 구조는 5'-5'-트리포스페이트 연결을 통해 RNA에 연결된다.
본 발명의 맥락에서 적합할 수 있는 5'-캡 구조는 cap0 (첫 번째 핵염기의 메틸화, 예를 들어 m7GpppN), cap1 (m7GpppN의 인접 뉴클레오티드의 리보스의 추가 메틸화), cap2 (m7GpppN의 2번째 뉴클레오티드 다운스트림의 리보스의 추가 메틸화), cap3 (m7GpppN의 다운스트림 3번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가 메틸화), cap4 (m7GpppN의 다운스트림 4번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가 메틸화), ARCA(안티-리버스 cap 유사체), 변형된 ARCA(예: 포스포티오에이트 변형된 ARCA), 이노신, N1-메틸-구아노신, 2'-플루오로-구아노신, 7-데아자-구아노신, 8-옥소-구아노신, 2-아미노-구아노신, LNA-구아노신, 및 2-아지도-구아노신이다.
5'-cap (cap0 또는 cap1) 구조는 cap 유사체를 사용하여 화학적 RNA 합성 또는 RNA in vitro 전사(공-전사(co-transcriptional) 캡핑)에서 형성될 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "캡 유사체(cap analogue)"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 번역 또는 국소화를 촉진하고/하거나 핵산 분자의 5'-말단에 통합될 때 핵산 분자, 특히 RNA 분자의 분해를 방지한다는 점에서 캡 기능을 갖는 비-중합성 디-뉴클레오티드 또는 트리-뉴클레오티드를 지칭하는 것으로 의도된다. 비-중합성(non-polymerizable)은 캡 유사체가 단지 5'-말단에 포함되는 것을 의미하며, 이는 그것이 5' 트리포스페이트가 없기 때문에 템플레이트-의존성 폴리머라제, 특히 템플레이트-의존성 RNA 폴리머라제에 의해 3'-방향으로 확장될 수 없기 때문이다. 캡 유사체의 예는 m7GpppG, m7GpppA, m7GpppC; 메틸화되지 않은 캡 유사체(예: GpppG); 디메틸화된 캡 유사체(예: m2,7GpppG), 트리메틸화된 캡 유사체(예: m2,2,7GpppG), 디메틸화된 대칭 캡 유사체(예: m7Gpppm7G), 또는 안티-리버스 캡 유사체(예: ARCA; m7,2'OmeGpppG, m7,2'dGpppG, m7,3'OmeGpppG, m7,3'dGpppG 및 이들의 테트라포스페이트 유도체들)로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학적 구조를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추가 캡 유사체는 이전에 설명되었졌다 (WO2008016473, WO2008157688, WO2009149253, WO2011015347, 및 WO2013059475). 이러한 맥락에서 추가의 적합한 캡 유사체는 WO2017066793, WO2017066781, WO2017066791, WO2017066789, WO2017/053297, WO2017066782, WO2018075827 및 WO2017066797에 설명되어 있으며, 이들에 개시된 캡 유사체에 대한 개시들은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
실시양태에서, 변형된 cap1 구조는 WO2017053297, WO2017066793, WO2017066781, WO2017066791, WO2017066789, WO2017066782, WO2018075827 및 WO2017066797에 개시된 바와 같은 트리-뉴클레오티드 캡 유사체를 사용하여 생성된다. 특히, WO2017053297의 청구항 1 내지 5에 개시된 구조로부터 유도될 수 있는 임의의 캡 구조는 변형된 cap1 구조를 공동-전사적으로 생성하는 데 적합하게 사용될 수 있다. 또한, WO2018075827의 청구항 1 또는 청구항 21에 정의된 구조로부터 유도가능한 임의의 캡 구조는 변형된 cap1 구조를 공동-전사적으로 생성하는데 적합하게 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA, 특히 mRNA는 cap1 구조를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 5'-캡 구조는 본 명세서에 정의된 바와 같은 트리-뉴클레오티드 캡 유사체를 사용하여, 바람직하게는 본 명세서에 정의된 바와 같은 RNA 시험관내 전사 반응에서 공동-전사적으로 추가될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA의 cap1 구조는 트리-뉴클레오티드 캡 유사체 m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG 또는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG를 사용하여 공동 전사 캡핑을 사용하여 형성된다. 이러한 맥락에서 바람직한 cap1 유사체는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG이다.
다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 RNA의 cap1 구조는 트리-뉴클레오티드 캡 유사체 3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG를 사용하는 공동-전사 캡핑을 사용하여 형성된다.
다른 구체예에서, 본 발명의 RNA의 cap0 구조는 cap 유사체 3'OMe-m7G(5')ppp(5')G를 사용하는 공동-전사 캡핑을 사용하여 형성된다.
다른 구체예에서, 5'-캡 구조는 cap0 또는 cap1 또는 cap2 구조를 생성하기 위해 캡핑 효소(예를 들어, 백시니아 바이러스 캡핑 효소 및/또는 캡 의존적 2'-O 메틸트랜스퍼라제)를 사용하는 효소적 캡핑을 통해 형성된다. 5'-캡 구조(cap0 또는 cap1)는 WO2016193226에 개시된 방법 및 수단을 사용하여 고정된 캡핑 효소 및/또는 캡-의존성 2'-O 메틸트랜스퍼라제를 사용하여 추가할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA (종)의 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%는 캡핑 분석을 사용하여 결정된 바와 같이 cap1 구조를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA(종)의 약 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만은 캡핑 분석을 사용하여 결정된 바와 같이 cap1 구조를 포함하지 않는다. 다른 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA(종)의 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%는 캡핑 분석을 사용하여 결정된 바와 같은 cap0 구조를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA(종)의 약 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만은 캡핑 분석을 사용하여 결정된 바와 같이 cap0 구조를 포함하지 않는다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "RNA 종"은 "하나의 단일 분자"를 의미하는 것으로 제한되지 않고, 본질적으로 동일한 RNA 분자의 앙상블을 포함하는 것으로 이해된다. 따라서, 이는 복수의 본질적으로 동일한 (코딩) RNA 분자의 복수와 관련될 수 있다.
cap0 또는 cap1 구조의 존재/부재를 결정하기 위해, 공개된 PCT 출원 WO2015101416, 특히 공개된 PCT 출원 WO2015101416의 청구항 27 내지 46에 기재된 바와 같은 캡핑 분석이 사용될 수 있다. RNA의 cap0 또는 cap1 구조의 존재/부재를 결정하기 위해 사용될 수 있는 다른 캡핑 분석은 PCT/EP2018/08667 또는 공개된 PCT 출원 WO2014152673 및 WO2014152659에 설명되어 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeA) 캡 구조를 포함한다. 이러한 실시양태에서, RNA는 5'-말단 m7G 캡, 및 m7GpppN의 인접한 뉴클레오티드의 리보스의 추가 메틸화, 일정 경우에는 2'O 메틸화된 아데노신을 포함한다. 바람직하게는, RNA(종)의 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%가 캡핑 분석을 사용하여 결정된 바와 같은 cap1 구조를 포함한다.
다른 바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeG) 캡 구조를 포함한다. 이러한 실시양태에서, RNA는 5'-말단 m7G 캡, 및 인접한 뉴클레오티드의 리보스의 추가 메틸화, 이 경우에 2'O 메틸화된 구아노신를 포함한다. 바람직하게는, 코딩 RNA(종)의 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%가 캡핑 분석을 사용하여 결정된 바와 같은 cap1 구조를 포함한다.
따라서, 상기 RNA 또는 mRNA 서열의 첫 번째 염기, 즉 m7G(5')ppp 구조의 뉴클레오티드 다운스트림은 2'O 메틸화 구아노신 또는 2'O 메틸화 아데노신일 수 있다.
실시양태에 따르면, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 변형된 RNA이고, 여기서 변형은 백본 변형 뿐만 아니라 당 변형 또는 염기 변형을 포함하는 화학적 변형을 지칭한다.
변형된 RNA는 뉴클레오티드 유사체/변형, 예를 들어, 백본 변형, 당 변형 또는 염기 변형을 포함할 수 있다. 본 발명의 맥락에서 백본 변형은 RNA의 뉴클레오티드 골격의 포스페이트가 화학적으로 변형된 변형이다. 본 발명의 맥락에서 당 변형은 RNA의 뉴클레오티드 당의 화학적 변형이다. 또한, 본 발명의 맥락에서 염기 변형은 RNA의 뉴클레오티드의 염기 모이어티의 화학적 변형이다. 이러한 맥락에서, 뉴클레오티드 유사체 또는 변형은 바람직하게는 전사 및/또는 번역에 적용 가능한 뉴클레오티드 유사체로부터 선택된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 변형된 RNA에 혼입될 수 있는 뉴클레오티드 유사체/변형물은 바람직하게는 2-아미노-6-클로로퓨린리보시드-5'-트리포스페이트, 2-아미노퓨린-리보시드-5'-트리포스페이트; 2-아미노아데노신-5'-트리포스페이트, 2'-아미노-2'-데옥시시티딘-트리포스페이트, 2-티오시티딘-5'-트리포스페이트, 2-티오우리딘-5'-트리포스페이트, 2'-플루오로티미딘-5'-트리포스페이트, 2'-O-메틸-이노신-5'-트리포스페이트 4-티오우리딘-5'-트리포스페이트, 5-아미노알릴시티딘-5'-트리포스페이트, 5-아미노알릴우리딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모시티딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모우리딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도시티딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도우리딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도- 2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 5-메틸시티딘-5'-트리포스페이트, 5-메틸우리딘-5'-트리포스페이트, 5-프로피닐-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트, 5-프로피닐-2'-데옥시우리딘 -5'-트리포스페이트, 6-아자시티딘-5'-트리포스페이트, 6-아자우리딘-5'-트리포스페이트, 6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트, 7-데아자아데노신-5'-트리포스페이트, 7-데아자구아노신-5'-트리포스페이트, 8-아자아데노신-5'-트리포스페이트, 8-아지도아데노신-5'-트리포스페이트, 벤즈이미다졸-리보사이드-5'-트리포스페이트, N1-메틸아데노신-5'-트리포스페이트, N1-메틸구아노신-5'-트리포스페이트, N6-메틸아데노신-5'-트리포스페이트, O6-메틸구아노신-5'-트리포스페이트, 슈도우리딘-5'-트리포스페이트, 또는 퓨로마이신-5'-트리포스페이트, 크산토신-5'-트리포스페이트(xanthosine-5'-triphosphate)로부터 선택된다. 특히 바람직한 것들은 5-메틸시티딘-5'-트리포스페이트, 7-데아자구아노신-5'-트리포스페이트, 5-브로모시티딘-5'-트리포스페이트, 및 슈도우리딘-5'-트리포스페이트, 피리딘-4-원 리보뉴클레오사이드, 5-아자-우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 5-하이드록시우리딘, 3-메틸우리딘, 5-카르복시메틸-우리딘, 1-카르복시메틸-슈도우리딘, 5-프로피닐-우리딘, 1-프로피닐-슈도우리딘, 5-타우리노메틸우리딘, 1-타우리노메틸-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-우리딘, 1-타우리노메틸-4-티오-우리딘, 5-메틸-우리딘, 1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 디하이드로우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-메톡시우리딘, 2-메톡시-4-티오-우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 및 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 5-아자-시티딘, 슈도이소시티딘, 3-메틸-시티딘, N4-아세틸시티딘, 5-포르밀시티딘, N4-메틸시티딘, 5-하이드록시메틸시티딘, 1-메틸-슈도이소시티딘, 파이롤로-시티딘, 파이롤로-슈도이소시티딘, 2-티오-시티딘, 2-티오-5-메틸-시티딘, 4-티오-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 제불라린(zebularine), 5-아자-제불라린, 5-메틸-제불라린, 5-아자-2-티오-제불라린, 2-티오-제불라린, 2-메톡시-시티딘, 2-메톡시-5-메틸-시티딘, 4-메톡시-슈도이소시티딘, 및 4-메톡시-1-메틸-슈도이소시티딘, 2-아미노퓨린, 2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노퓨린, 7-데아자-2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린, 1-메틸아데노신, N6-메틸아데노신, N6-이소펜테닐아데노신, N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신, 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신, N6-글리시닐카르바모일아데노신, N6-트레오닐(threonyl)카르바모일아데노신, 2-메틸티오-N6-트레오닐 카르바모일아데노신, N6,N6-디메틸아데노신, 7-메틸아데닌, 2-메틸티오-아데닌, 및 2-메톡시-아데닌, 이노신, 1-메틸-이노신, 와이오신(wyosine), 와이부토신(wybutosine), 7-데아자-구아노신, 7-데아자-8-아자-구아노신, 6-티오-구아노신, 6-티오-7-데아자-구아노신, 6-티오-7-데아자-8-아자-구아노신, 7-메틸-구아노신, 6-티오-7-메틸-구아노신, 7-메틸이노신, 6-메톡시-구아노신, 1-메틸구아노신, N2-메틸구아노신, N2,N2-디메틸구아노신, 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, 1-메틸-6-티오-구아노신, N2-메틸-6-티오-구아노신, 및 N2,N2-디메틸-6-티오-구아노신, 5'-O-(1-티오포스페이트)-아데노신, 5'-O-(1-티오포스페이트)-시티딘, 5'-O-(1-티오포스페이트)-구아노신, 5'-O-(1-티오포스페이트)-우리딘, 5'-O-(1-티오포스페이트)-슈도우리딘, 6-아자-시티딘, 2-티오-시티딘, 알파-티오-시티딘, 슈도-이소-시티딘, 5-아미노알릴(allyl)-우리딘, 5-요오도-우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 5,6-디하이드로우리딘, 알파-티오-우리딘, 4-티오-우리딘, 6-아자-우리딘, 5-하이드록시-우리딘, 데옥시-티미딘, 5-메틸-우리딘, 파이롤로-시티딘, 이노신, 알파-티오-구아노신, 6-메틸-구아노신, 5-메틸-시티딘, 8-옥소-구아노신, 7-데아자-구아노신, N1-메틸-아데노신, 2-아미노-6-클로로-퓨린, N6-메틸-2-아미노-퓨린, 슈도-이소-시티딘, 6-클로로-퓨린, N6-메틸-아데노신, 알파-티오-아데노신, 8-아지도-아데노신, 7-데아자-아데노신로 이루어진 염기-변형 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된 염기 변형을 위한 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드는 슈도우리딘, N1-메틸슈도우리딘, N1-에틸슈도우리딘, 2-티오우리딘, 4'-티오우리딘, 5-메틸시토신, 5-메틸우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-우리딘, 디히드로슈도우리딘, 5-메톡시우리딘 및 2'-O-메틸 우리딘로부터 선택된다.
이와 관련하여 슈도우리딘(ψ), N1-메틸슈도우리딘(m1ψ), 5-메틸시토신 및 5-메톡시우리딘이 특히 바람직하다.
따라서, 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 코딩 서열에서 본질적으로 모두, 예를 들어 본질적으로 100%의 우라실은 화학적 변형을 가지며, 바람직하게 화학적 변형은 우라실의 5-위치에 있다.
예를 들어, 슈도우리딘(ψ), N1-메틸슈도우리딘(m1ψ), 5-메틸시토신 및/또는 5-메톡시우리딘과 같은 변형된 뉴클레오티드를 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA의 코딩 서열에 통합하는 것은 원치 않는 선천성 면역 반응(코딩 RNA 또는 백신의 투여 시)을 (필요하다면) 조정하거나 줄일 수 있어 이득이 될 수 있다.
실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원성 단백질을 코딩하는 하나 이상의 코딩 서열을 포함하고, 여기서 상기 코딩 서열은 슈도우리딘(ψ) 및 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ)으로부터 선택된 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 바람직하게는 여기서 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ) 뉴클레오티드로 대체되며, 선택적으로 여기서 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드로 대체된다.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 치환된 위치를 포함하지 않는다. 추가 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 슈도우리딘(ψ), N1-메틸슈도우리딘(m1ψ), 5-메틸시토신, 및 5-메톡시우리딘 치환된 위치를 포함하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA는 G, C, A 및 U 뉴클레오티드로만 구성된 코딩 서열을 포함하므로 (5' 말단 캡 구조(cap0, cap1, cap2)를 제외하고) 변형된 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 RNA이고, 여기서 RNA는 화학적 합성, 예를 들어 고체상 RNA 합성과 같은 화학적 합성뿐만 아니라, 인비트로(in vitro) 방법, 예를 들어 RNA 인비트로 전사 반응과 같은 인비트로 방법을 포함하는 기술분야에 알려진 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 따라서, 바람직한 구현예에서, RNA는 RNA 인 비트로 전사에 의해 얻어진다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 바람직하게 인비트로 전사된 RNA이다.
"RNA 인비트로 전사" 또는 "인비트로 전사"라는 용어는 RNA가 무세포 시스템(인비트로)에서 합성되는 과정에 관한 것이다. RNA는 본 발명에 따라 선형화된 플라스미드 DNA 주형 또는 PCR-증폭된 DNA 주형인 적절한 DNA 주형의 DNA-의존적 인비트로 전사에 의해 수득될 수 있다. RNA 인 비트로 전사를 제어하기 위한 프로모터는 임의의 DNA-의존성 RNA 폴리머라제에 대한 임의의 프로모터일 수 있다. DNA 의존성 RNA 중합효소의 특정한 예시는 T7, T3, SP6 또는 Syn5 RNA 중합효소이다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, DNA 주형은 RNA 인 비트로 전사에 적용되기 전에 적합한 제한 효소로 선형화된다.
RNA 인비트로 전사에 사용되는 시약은 일반적으로 다음을 포함한다: 이의 각각 RNA 폴리머라제, 예를 들어 박테리오파지-인코딩된 RNA 폴리머라제(T7, T3, SP6, 또는 Syn5)에 대한 높은 결합 친화성을 갖는 프로모터 서열을 갖는 DNA 주형 (선형화된 플라스미드 DNA 또는 PCR 산물); 네 개의 염기(아데닌, 시토신, 구아닌 및 우라실)에 대한 리보뉴클레오티드 트리포스페이트(NTP); 선택적으로 본원에 정의된 캡 유사체; 선택적으로 본원에 정의된 추가 변형된 뉴클레오티드; DNA 주형 내에 프로모터 서열에 결합할 수 있는 DNA-의존 RNA 폴리머라제(예를 들어 T7, T3, SP6, 또는 Syn5 RNA 폴리머라제); 선택적으로, 잠재적으로 오염시킬 수 있는 임의의 RNase를 비활성화하는 리보뉴클레아제(RNase) 억제제; 선택적으로, RNA 인비트로 전사를 억제할 수 있는 피로포스페이트를 분해하는 피로포스파타제; 폴리머라제에 대한 공동 인자로서 Mg2+ 이온을 공급하는 MgCl2; 최적 농도로 항산화제(예를 들어 DTT), 및/또는 스페르미딘과 같은 폴리아민을 또한 포함할 수 있는 적절한 pH 값을 유지하기 위한 버퍼(TRIS 또는 HEPES), 예를 들어 WO2017109161에 개시된 TRIS-시트레이트를 포함하는 버퍼 시스템.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA의 cap1 구조는 트리-뉴클레오티드 캡 유사체 m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG 또는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG를 사용하는 공동 전사 캡핑을 사용하여 형성된다. 본 발명의 코딩 RNA를 제조하는데 적절하게 사용될 수 있는 바람직한 cap1 유사체는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG이다.
다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 RNA의 cap1 구조는 트리-뉴클레오티드 캡 유사체 3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG를 사용하여 공동 전사 캡핑을 사용하여 형성된다.
다른 구현예에서, 본 발명의 RNA의 cap0 구조는 캡 유사체 3'OMe-m7G(5')ppp(5')G를 사용하여 공동-전사 캡핑을 사용하여 형성된다.
구현예에서, RNA 인비트로 전사에 사용되는 뉴클레오티드 혼합물은 본 명세서에서 정의된 바와 같은 변형된 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 그러한 맥락에서, 바람직한 변형된 뉴클레오티드는 슈도우리딘(ψ), N1-메틸슈도우리딘(m1ψ), 5-메틸시토신 및 5-메톡시우리딘으로부터 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 뉴클레오티드 혼합물 내의 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(ψ) 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ)에 의해 (부분적으로 또는 완전히) 대체되어 변형된 RNA를 얻는다.
바람직한 구현예에서, RNA 인비트로 전사에 사용되는 뉴클레오티드 혼합물은 본원에 정의된 바와 같은 변형된 뉴클레오티드를 포함하지 않는다. 바람직한 구현예에서, RNA 인비트로 전사에 사용되는 뉴클레오티드 혼합물은 단지 G, C, A 및 U 뉴클레오티드, 및 선택적으로 본원에 정의된 바와 같은 캡 유사체를 포함한다.
바람직한 구현예에서, RNA 인비트로 전사 반응에 사용되는 뉴클레오티드 혼합물(즉, 혼합물에서 각 뉴클레오티드의 분획)은 주어진 RNA 서열, 바람직하게 바람직하게는 WO2015188933에 기재된 주어진 RNA 서열에 대해 최적화될 수 있다.
이와 관련하여, 인비트로 전사는 서열 최적화된 뉴클레오티드 혼합물 및 선택적으로 캡 유사체의 존재하에 수행되었으며, 바람직하게는 서열 최적화된 뉴클레오티드 혼합물은 화학적으로 변형된 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
이와 관련하여 서열 최적화 뉴클레오사이드 삼인산(NTP) 믹스는 4개의 뉴클레오사이드 삼인산(NTP) GTP, ATP, CTP 및 UTP를 포함하는 주어진 서열의 RNA 분자의 인비트로 전사 반응에 사용하기 위한 뉴클레오시드 삼인산(NTP)의 혼합물이며, 여기서 서열 최적화된 뉴클레오사이드 삼인산(NTP) 혼합물 내 네 개의 뉴클레오사이드 삼인산(NTP)의 각각의 분획은 상기 RNA 분자 내 각 뉴클레오티드의 분획에 상응한다. 리보뉴클레오티드가 RNA 분자에 존재하지 않으면 해당 뉴클레오사이드 삼인산도 서열 최적화된 뉴클레오사이드 삼인산(NTP) 혼합물에 존재하지 않는다.
본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 상이한 RNA가 생성되어야 하는 구현예에서, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 RNA가 생산되어야 하는 경우, WO2017109134에 기재된 바와 같은 절차가 적합하게 사용될 수 있다.
핵산 기반 백신 생산과 관련하여 GMP 등급 핵산, 예를 들어 GMP 등급 RNA 또는 DNA를 제공하는 것이 필요할 수 있다. GMP 등급 RNA 또는 DNA는 규제 당국이 승인한 제조 공정을 사용하여 생산할 수 있다. 따라서, 특히 바람직한 구현예에서, RNA 생산은 DNA 및 RNA 수준에 대한 다양한 품질 관리 단계를 구현하는 현행 GMP(Good Manufacturing Practice) 하에서 수행되며, 바람직하게는 WO2016180430에 따라 수행된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 RNA는 GMP-등급 RNA, 특히 GMP-등급 mRNA이다. 따라서, 백신용 RNA는 바람직하게는 GMP 등급 RNA이다.
얻어진 RNA 생성물은 바람직하게는 PureMessenger®(CureVac, Tubingen, Germany; WO2008077592에 따른 RP-HPLC) 및/또는 접선 흐름 여과(tangential flow filtration)(WO2016193206에 설명된 바와 같음) 및/또는 올리고 d(T) 정제(WO2016180430 참조)를 사용하여 정제된다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 RNA는 RP-HPLC를 사용하여, 바람직하게는 거대다공성 스티렌/디비닐벤젠 컬럼(예: 입자 크기 30㎛, 기공 크기 4000Å)을 갖는 역상 고압 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)를 사용하고, 추가로 컷오프 분자량이 약 100kDa인 셀룰로오스 기반 멤브레인이 있는 필터 카세트를 사용하여 정제된다.
보다 바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 RNA는 동결건조되어(예를 들어 WO2016165831 또는 WO2011069586에 따라) 본원에 정의된 바와 같은 온도 안정 건조 핵산(분말)(예를 들어 RNA 또는 DNA)를 생산한다. 본 발명의 핵산, 특히 RNA는 또한 분무 건조 또는 분무 동결 건조(예를 들어 WO2016184575 또는 WO2016184576에 따름)를 사용하여 건조되어 본원에 정의된 온도 안정 RNA(분말)를 생성할 수 있다. 따라서, 핵산, 특히 RNA를 제조 및 정제하는 맥락에서, WO2017109161, WO2015188933, WO2016180430, WO2008077592, WO2016193206, WO2016165831, WO2011069586, WO2016184575, 및 WO2016184576의 개시 내용은 참조로 본원에 포함된다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 건조된 핵산, 특히 건조된 RNA이다.
본원에 사용된 "건조된 RNA"라는 용어는 온도 안정한 건조된 RNA(분말)을 얻기 위해 상기 정의된 동결건조, 또는 분무 건조된, 또는 분부-동결 건조된 RNA로 이해되어야 한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 정제된 핵산, 특히 정제된 RNA이다.
본원에서 사용되는 "정제된 핵산"이라는 용어는 출발 물질보다 특정 정제 단계 후에 더 높은 순도를 갖는 핵산으로 이해되어야 한다. 본질적으로 정제된 핵산에 존재하지 않는 전형적인 불순물은 펩타이드 또는 단백질, 스페르미딘, BSA, 불능(abortive) 핵산 서열, 핵산 단편, 유리 뉴클레오티드, 박테리아 불순물 또는 정제 절차에서 파생된 불순물을 포함한다. 따라서, 이와 관련하여 "핵산 순도"는 가능한 한 100%에 근접하는 것이 바람직하다. 전장 핵산의 양이 가능한 한 100%에 가까운 것이 핵산 순도에 있어서도 바람직하다. 따라서 본원에 사용된 "정제된 핵산"은 75%, 80%, 85% 이상, 보다 특정하게 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 및 가장 바람직하게 99% 또는 그 이상의 순도를 갖는다. 순도는 예를 들어 분석 HPLC에 의해 결정될 수 있으며, 여기서 위에 제공된 백분율은 표적 핵산에 대한 피크 면적과 부산물을 나타내는 모든 피크의 총 면적 사이의 비율에 해당한다. 대안적으로, 순도는 예를 들어 분석용 아가로스 겔 전기영동 또는 모세관 겔 전기영동에 의해 결정될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 정제된 RNA, 바람직하게는 정제된 mRNA이다.
본원에서 사용되는 "정제된 RNA" 또는 "정제된 mRNA"라는 용어는 출발 물질(예를 들어, HPLC, TFF, Oligo d(T) 정제, 침전 단계)에 비해 특정 정제 단계 이후에 더 높은 순도를 갖는 RNA로 이해되어야 한다(예를 들어 인비트로에서 전사된 RNA). 정제된 RNA에 본질적으로 존재하지 않는 전형적인 불순물은 펩타이드 또는 단백질(예를 들어 DNA 의존적 RNA 인비트로 전사에서 유래된 효소, 예를 들어 RNA 중합효소, RNase, 피로포스파타아제, 제한 엔도뉴클레아제, DNase), 스페르미딘, BSA, 불능 RNA 서열, RNA 단편(짧은 이중 가닥 RNA 절편, 불능 서열 등), 자유 뉴클레오티드(변형 뉴클레오티드, 기존 NTP, 캡 유사체), 주형 DNA 단편, 완충 성분(HEPES, TRIS, MgCl2) 등을 포함한다. 예를 들어 발효 절차로부터 파생될 수 있는 기타 잠재적 불순물은 박테리아 불순물(바이오버든, 박테리아 DNA) 또는 정제 절차에서 파생된 불순물(유기 용매 등)을 포함한다. 따라서, 이와 관련하여 "RNA 순도"는 가능한 한 100%에 근접하는 것이 바람직하다. 전장 RNA 전사물의 양이 가능한 한 100%에 가까운 것이 RNA 순도에 대해서도 바람직하다. 따라서, 본원에서 사용되는 "정제된 RNA"는 75%, 80%, 85%, 매우 특히 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 가장 바람직하게는 99% 이상의 순도를 갖는다. 상기 순도는 예를 들어 분석 HPLC에 의해 결정될 수 있으며, 여기서 상기 제공된 백분율은 표적 RNA에 대한 피크 면적과 부산물을 나타내는 모든 피크의 총 면적 사이의 비율에 해당한다. 대안적으로, 순도는 예를 들어 분석용 아가로스 겔 전기영동 또는 모세관 겔 전기영동에 의해 결정될 수 있다. 본원에 정의된 바와 같은 "건조된 RNA" 및 본원에 정의된 바와 같은 "정제된 RNA" 또는 본원에 정의된 바와 같은 "GMP-등급 RNA"는 우수한 안정성 특성(인비트로, 인비보) 및 개선된 효율(예를 들어, 인비보에서 mRNA의 더 나은 번역 가능성)을 가져, 따라서 의료 목적, 예를 들어 조합 백신에 특히 적합한 것으로 이해되어야 한다.
구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산이 RNA인 특히 바람직한 구현예에서, RNA는 RP-HPLC 및/또는 TFF에 의해 정제되어 이중 가닥 RNA, 캡핑되지 않은 RNA 및/또는 RNA 단편을 제거한다.
예를 들어 RNA 인비트로 전사 동안 부산물로서 이중 가닥 RNA의 형성은 백신 접종 개체에서 선천적 면역 반응, 특히 열을 유발하는 주요 인자인 IFNalpha의 유도를 유발할 수 있으며, 이는 물론 원치 않는 부작용이다. dsRNA의 면역블롯팅을 위한 현재 기술(예를 들어 도트 블롯, 혈청학적 특정 전자 현미경(SSEM) 또는 ELISA를 통해)은 핵산 혼합물에서 dsRNA 종을 검출하고 크기를 결정하는 데 사용된다.
적합하게는, RNA는 dsRNA의 양을 감소시키기 위해 본원에 기재된 바와 같이 RP-HPLC 및/또는 TFF에 의해 정제되었다.
바람직한 구현예에서, RNA는 RP-HPLC 및/또는 TFF로 정제되지 않은 RNA로서 이중 가닥 RNA 부산물을 약 5%, 10% 또는 20% 덜 포함한다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RP-HPLC 및/또는 TFF 정제된 RNA는 Oligo dT 정제, 침전, 여과 및/또는 AEX로 정제된 RNA로서 이중 가닥 RNA 부산물을 약 5%, 10% 또는 20% 더 적게 포함한다.
구현예에서, 조성물의 RNA는 약 40% 내지 약 100% 범위의 RNA 무결성을 갖는다.
"RNA 무결성"이라는 용어는 일반적으로 완전한 RNA 서열이 조성물에 존재하는지 여부를 설명한다. 낮은 RNA 무결성은 무엇보다도 RNA 분해, RNA 절단, RNA의 부정확하거나 불완전한 화학적 합성, 잘못된 염기쌍, 변형된 뉴클레오티드의 통합 또는 이미 통합된 뉴클레오티드의 변형, 캡핑 부족 또는 불완전한 캡핑, 폴리아데닐화의 부족 또는 불완전한 폴리아데닐화, 또는 불완전한 RNA 인비트로 전사에 기인할 수 있다. RNA는 예를 들어 온도, 리보뉴클레아제, pH 또는 기타 요인(예: 친핵성 공격, 가수분해 등)에 의해 쉽게 분해될 수 있는 깨지기 쉬운 분자이며, RNA 무결성 및 결과적으로 RNA의 기능을 감소시킬 수 있다.
당업자는 RNA 무결성을 결정하기 위한 다양한 상이한 크로마토그래피 또는 전기영동 방법 중에서 선택할 수 있다. 크로마토그래피 및 전기영동 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 크로마토그래피가 사용되는 경우(예: RP-HPLC) RNA의 무결성 분석은 해당 크로마토그램에서 전체 길이 RNA의 피크 영역(또는 "피크 아래 영역")을 측정하는 것을 기반으로 할 수 있다. 피크 영역은 검출기 시스템의 신호를 평가하는 적절한 소프트웨어에 의해 측정될 수 있다. 피크 면적을 측정하는 과정을 통합(integration)이라고도 한다. 전체 길이 RNA를 나타내는 피크 영역은 일반적으로 각 샘플에서 총 RNA의 피크 영역과 관련하여 설정된다. RNA 무결성은 % RNA 무결성으로 표현될 수 있다.
본 발명의 측면과 관련하여, RNA 무결성은 분석적 (RP)HPLC를 사용하여 결정될 수 있다. 일반적으로, RNA를 캡슐화하는 지질 기반 담체를 포함하는 조성물의 테스트 샘플은 세제(예를 들어, 약 2% Triton X100)로 처리되어 지질 기반 담체를 해리시키고 캡슐화된 RNA를 방출할 수 있다. 방출된 RNA는 적합한 결합 화합물, 예를 들어 본질적으로 제조업체의 지침에 따라 Agencourt AMPure XP 비드(Beckman Coulter, Brea, CA, USA)를 사용하여 포획될 수 있다. RNA 샘플 준비 후, 분석적 (RP)HPLC를 수행하여 RNA의 무결성을 측정할 수 있다. 일반적으로, RNA 무결성을 측정하기 위해, RNA 샘플은 예를 들어 주사용수(WFI)를 사용하여 0.1g/l의 농도로 희석될 수 있다. 희석된 RNA 시료 약 10μl를 HPLC 컬럼(예를 들어 모놀리틱 폴리(스티렌-디비닐벤젠) 기질)에 주입할 수 있다. 분석(RP)HPLC는 표준 조건, 예를 들어: 구배 1: 버퍼 A(0.1M TEAA(pH 7.0)); 버퍼 B(25% 아세토니트릴을 포함하는 0.1M TEAA(pH 7.0))를 사용하여 수행될 수 있다. 30% 버퍼 B에서 시작하여 구배는 2분 안에 32% 버퍼 B로 확장된 다음, 1ml/분의 유속으로 15분에 걸쳐 55% 버퍼 B로 확장되었다. HPLC 크로마토그램은 일반적으로 260nm의 파장에서 기록된다. 획득된 크로마토그램은 소프트웨어를 사용하여 평가될 수 있고 상대 피크 면적은 당업계에 일반적으로 알려진 바와 같이 퍼센트(%)로 측정될 수 있다. 상대 피크 면적은 RNA 무결성이 100%인 RNA의 양을 나타낸다. HPLC에 주입된 RNA의 양은 일반적으로 알려져 있기 때문에 상대 피크 면적의 분석은 RNA의 무결성에 대한 정보를 제공한다. 따라서 예를 들어 총 100ng의 RNA가 주입되었으며, 100ng이 상대 피크 면적으로 측정되면 RNA 무결성은 100%가 된다. 예를 들어 상대 피크 면적이 80ng에 해당하는 경우 RNA 무결성은 80%가 된다. 따라서, 본 발명의 맥락에서 RNA 무결성은 분석 HPLC, 바람직하게는 분석 RP-HPLC를 사용하여 측정된다.
구현예에서, 조성물의 RNA는 약 40% 내지 약 100% 범위의 RNA 무결성을 갖는다. 구현예에서, RNA는 약 50% 내지 약 100% 범위의 RNA 무결성을 갖는다. 구현예에서, RNA는 약 60% 내지 약 100% 범위의 RNA 무결성을 갖는다. 구현예에서, RNA는 약 70% 내지 약 100% 범위의 RNA 무결성을 갖는다. 구현예에서, RNA 무결성은 예를 들어 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%이다. RNA는 분석용 HPLC, 바람직하게는 분석용 RP-HPLC를 사용하여 적합하게 결정된다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 RNA는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 보다 바람직하게는 적어도 약 70%, 가장 바람직하게는 적어도 약 80% 또는 약 90%의 RNA 무결성을 갖는다. RNA는 분석용 HPLC, 바람직하게는 분석용 RP-HPLC를 사용하여 적합하게 측정된다.
본원에 정의된 바와 같은 공동-전사 캡핑 및 본원에 정의된 바와 같은 정제 후, 획득된 RNA의 캡핑 정도는 공개된 PCT 출원 WO2015101416에 기재된 바, 특히 공개된 PCT 출원 WO2015101416의 청구항 27 내지 46에 기재된 바와 같은 캡핑 분석을 사용하여 측정될 수 있다. 그렇지 않으면, PCT/EP2018/08667에 기술된 캡핑 분석을 사용할 수 있다.
구현예에서, RNA 인비트로 전사를 수행하기 위한 자동화 장치를 사용하여 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산을 생산하고 정제할 수 있다. 이러한 장치는 또한 조성물 또는 백신을 생산하는 데 사용될 수 있다(측면 2 및 3 참조). 바람직하게는 WO2020002598에 기재된 장치, 특히 WO2020002598의 청구항 1 내지 59 및/또는 68 내지 76(및 도 1-18)에 기재된 장치가 적합하게 사용될 수 있다.
본원에 기재된 방법은 바람직하게는 하기에 더 상세히 기재된 바와 같은 약학적 조성물 또는 조합 백신을 생산하는 방법에 적용될 수 있다.
다양한 구현예에서 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및 구성요소 B의 mRNA는 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함한다:
A) 5'-캡 구조, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 5'-캡 구조;
B) 5'-말단 시작 요소, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 5'-말단 시작 요소;
C) 임의로, 5'-UTR, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 5'-UTR;
D) 리보솜 결합 부위, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 리보솜 결합 부위;
E) 적어도 하나의 코딩 서열, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 적어도 하나의 코딩 서열;
F) 3'-UTR, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 3'-UTR;
G) 임의로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 폴리(A) 서열;
H) 임의로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 폴리(C) 서열;
I) 임의로(optionally), 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 히스톤 스템-루프;
J) 임의로, 3'-말단 서열 요소, 바람직하게는 본 명세서에 명시된 바와 같은 3'-말단 서열 요소.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 바람직하게는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2'OMeA) 또는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)에서 선택된 5'-캡 구조;
B) 서열 번호: 176 또는 177 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 선택된 5'-말단 시작 요소;
C) 임의로, HSD17B4 유전자로부터 유래된 5'-UTR;
D) 서열 번호: 180, 181, 22845-22847 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 선택된 리보솜 결합 부위;
E) 본 명세서에 명시된 적어도 하나의 코딩 서열, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
F) PSMB3 유전자 또는 알파-글로빈 유전자("muag")로부터 유래한 3'-UTR;
G) 임의로, 약 30 내지 약 500개의 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
H) 임의로, 약 10 내지 약 100개의 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열;
I) 임의로, 서열 번호: 178 또는 179로부터 선택된 히스톤 스템-루프;
J) 임의로, 서열 번호: 182-230에서 선택된 3'-말단 서열 요소.
특히 바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 바람직하게는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) 본 명세서에서 정의된 바와 같은 cap1 구조;
B) 본 명세서에 명시된 적어도 하나의 코딩 서열, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
C) 본 명세서에 정의된 muag 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 3'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 267, 268, 22896-22901, 22906-22911에 따른 3'-UTR;
D) 약 64개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열;
E) 약 10 내지 약 100개의 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열;
F) 서열 번호: 178 또는 179로부터 선택된 히스톤 스템-루프.
바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) 본 명세서에서 정의된 바와 같은 cap1 구조, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
B) 본 명세서에 정의된 HSD17B4 유전자로부터 유래한 5'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 231 또는 232에 따른 5'-UTR;
C) 본 명세서에 정의된 바와 같은 코딩 서열;
D) 본 명세서에 정의된 PSMB3 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 3'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 253 또는 254에 따른 3'-UTR;
E) 약 64개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열;
F) 임의로 약 10 내지 약 100개의 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열;
G) 서열 번호: 178 또는 179로부터 선택된 히스톤 스템-루프;
H) 임의로, 서열 번호: 182-230의 3'-말단 서열 요소.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) 본 명세서에서 정의된 바와 같은 cap1 구조;
B) 본 명세서에 정의된 HSD17B4 유전자로부터 유래한 5'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 231 또는 232에 따른 5'-UTR;
C) 본 명세서에 명시된 코딩 서열, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
D) 본 명세서에 정의된 PSMB3 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 3'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 253 또는 254에 따른 3'-UTR;
E) 서열 번호: 178 또는 179로부터 선택된 히스톤 스템-루프;
F) 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열, 바람직하게는 3' 말단을 나타내는 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열.
더욱 더 특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) 본 명세서에서 정의된 바와 같은 cap1 구조;
B) 본 명세서에 정의된 HSD17B4 유전자로부터 유래한 5'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 231 또는 232에 따른 5'-UTR;
C) 본 명세서에 명시된 것에서 선택된 코딩 서열, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
D) 본 명세서에 정의된 PSMB3 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 3'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 253 또는 254에 따른 3'-UTR;
E) 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열, 바람직하게는 3' 말단을 나타내는 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) 본 명세서에서 정의된 바와 같은 cap1 구조;
B) 본 명세서에 정의된 SLC7A3 유전자로부터 유래한 5'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 245 또는 246에 따른 5'-UTR;
C) 본 명세서에 명시된 것에서 선택된 코딩 서열, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
D) 본 명세서에 정의된 PSMB3 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 3'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 253 또는 254에 따른 3'-UTR;
E) 임의로, 서열 번호: 178 또는 179로부터 선택된 히스톤 스템-루프;
F) 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열, 바람직하게는 3' 말단을 나타내는 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 mRNA는 5'-에서 3'-방향으로 하기 요소를 포함한다:
A) 본 명세서에서 정의된 바와 같은 cap1 구조;
B) 본 명세서에 정의된 RPL31 유전자로부터 유래한 5'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 243 또는 243에 따른 5'-UTR;
C) 본 명세서에 명시된 것에서 선택된 코딩 서열, 바람직하게는 코돈 최적화 코딩 서열;
D) 본 명세서에 정의된 RPS9 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 3'-UTR, 바람직하게는 서열 번호: 263 또는 264에 따른 3'-UTR;
E) 임의로, 서열 번호: 178 또는 179로부터 선택된 히스톤 스템-루프;
F) 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열, 바람직하게는 3' 말단을 나타내는 약 100개의 A 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열.
제형화 및 복합체화:
다음에서, 약학적 조성물의 제형화 및/또는 복합체화에 관한 적합한 특징 및 구현예가 추가로 명시된다. 특히, 구성요소 A(특히, 구성요소 A-1, A-2, A-3)의 제형화 및/또는 복합체화, 및/또는 구성요소 B(특히, 구성요소 B, B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)의 제형화 및/또는 복합체화에 관한 적합한 특징 및 구현예가 추가로 명시된다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "약학적으로 허용되는 담체" 또는 "약학적으로 허용되는 첨가제"는 바람직하게는 투여용 조성물의 액체 또는 비-액체 기반(basis)을 포함한다. 조성물이 액체 형태로 제공되는 경우, 담체는 물, 예를 들어, 파이로젠 없는 물; 등장 식염수 또는 완충 (수용성) 용액, 예를 들어, 인산염, 구연산염 등 완충 용액일 수 있다. 물 또는 바람직하게 완충액, 더욱 바람직하게 수용성 완충액은 나트륨 염, 바람직하게는 50mM 이상의 나트륨 염, 칼슘 염, 바람직하게는 0.01mM 이상의 칼슘 염, 및 임의로 칼륨 염, 바람직하게는 적어도 3mM의 칼륨 염을 포함하는 형태로 사용된다. 바람직한 양태예에 따르면, 나트륨, 칼슘 및 선택적으로 칼륨 염은 예를 들어 염화물, 요오드화물 또는 브롬화물와 같은 이들의 할로겐화물, 그들의 수산화물, 탄산염, 탄산수소염 또는 황산염 등의 형태로 이용된다. 나트륨 염의 예들은 NaCl, NaI, NaBr, Na2CO3, NaHCO3, Na2SO4을 포함하며, 임의의 칼륨 염의 예들은 KCl, KI, KBr, K2CO3, KHCO3, K2SO4을 포함하고, 칼슘 염의 예들은 CaCl2, CaI2, CaBr2, CaCO3, CaSO4, Ca(OH)2을 포함한다.
게다가, 상기 양이온의 유기 음이온은 완충액에 존재할 수 있다. 따라서, 양태들에서, 약학 조성물은 예를 들어, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제를 사용하여 예를 들어, 안정성 증가, 세포 형질감염 증가, 지속 또는 지연 허용, 생체내 암호화된 항원 펩티드 또는 단백질 번역 증가 및/또는 생체내 암호화된 항원 펩티드 또는 단백질의 방출 프로파일 변경을 위하여 약학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제를 포함할 수 있다. 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 희석제 또는 기타 액체 비히클, 분산 또는 현탁 보조제, 계면 활성제, 등장화제, 증점제 또는 유화제, 보존제와 같은 전통적인 첨가제에 추가하여, 본 발명의 첨가제는, 어떠한 제한 없이, 리피도이드, 리포솜, 지질 나노입자, 중합체, 리포플렉스, 코어-쉘 나노입자, 펩티드, 단백질, 폴리뉴클레오티드로 형질감염된 세포, 히알루로니다제, 나노입자 모방체 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 양태들에서, 하나 이상의 상용성(compatible) 고체 또는 액체 충전제 또는 희석제 또는 캡슐화 화합물도 사용될 수 있으며, 이는 대상체에 투여하기에 적합하다. 본 명세서에 사용된 용어 "상용성"은 조성물의 구성성분이 상호작용이 발생하지 않는 방식으로 조성물의 하나 이상의 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산 및 임의로 복수의 핵산과 혼합될 수 있음을 의미하며, 상호작용은 전형적인 사용 조건(예를 들어, 근육내 또는 피내 투여)하에서 조성물의 생물학적 활성 또는 약학적 유효성을 실질적으로 감소시킬 것이다. 약학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제는 치료 대상에 투여하기에 적합하도록 충분히 높은 순도 및 충분히 낮은 독성을 가져야 한다. 약학적으로 허용가능한 담체 또는 첨가제로서 사용될 수 있는 화합물은 예를 들어, 락토스, 글루코스, 트레할로스, 만노스 및 수크로스와 같은 당; 예를 들어 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 전분; 덱스트로스; 셀룰로오스 및 이의 유도체, 예를 들어 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트; 분말 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 수지(tallow); 예를 들어, 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트와 같은 고체 활택제; 황산칼슘; 예를 들어, 땅콩 오일, 면실유, 참기름, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 테오브로마 오일과 같은 식물성 오일; 예를 들어, 폴리프로필렌 글리콜, 글리세롤, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올; 알긴산이다.
약학 조성물의 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 첨가제는 바람직하게는 상기 약학 조성물의 근육내 또는 피내 전달/투여에 적합하도록 선택될 수 있다. 약학 조성물은 바람직하게는 개체에게 근육내 투여하기에 적합한 조성물이다.
약학적 조성물의 투여가 고려되는 대상은 인간 및/또는 다른 영장류; 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 개, 생쥐 및/또는 쥐와 같은 상업적으로 관련된 포유동물을 포함하는 포유동물; 및/또는 가금류, 닭, 오리, 거위 및/또는 칠면조와 같은 상업적으로 관련된 조류를 포함하는 조류이다.
본 발명의 약학적 조성물은 적합하게는 멸균 및/또는 파이로젠-프리이다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 제형화된 조성물을 얻기 위해 추가 화합물과 복합체화되거나 회합된다. 그 맥락에서 제형은 형질감염제의 기능을 가질 수 있다. 그 맥락에서 제형은 또한 분해로부터 핵산을 보호하는 기능을 가질 수 있다.
구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산과 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 별도로 제형화된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 공동 제형화된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 RNA는 하나 이상의 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 복합체화 또는 회합되거나, 또는 적어도 부분적으로 복합체화 또는 부분적으로 회합된다. 바람직하게는, 구성요소 A 및 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 하나 이상의 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 복합체화되거나 회합되거나 또는 적어도 부분적으로 복합체화되거나 부분적으로 회합되며, 여기서 구성요소 A 및 구성요소 B는 별도로 제형화되거나, 구성요소 A 및 구성요소 B는 공동 제형화된다.
바람직한 구현예에서, 하나 이상의 양이온성 또는 다중양이온성 화합물은 양이온성 또는 다중양이온성 중합체, 양이온성 또는 다중양이온성 다당류, 양이온성 또는 다중양이온성 지질, 양이온성 또는 다중양이온성 단백질, 양이온성 또는 다중양이온성 펩타이드, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
본 명세서에 사용된 용어 "양이온성 또는 다가양이온성 화합물"은 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 약 1 내지 9 범위의 pH 값에서, 약 3 내지 8 범위의 pH 값에서, 약 4 내지 8 범위의 pH 값에서, 약 5 내지 8 범위의 pH 값에서, 더욱 바람직하게 약 6 내지 8 범위의 pH 값에서, 더욱 더 바람직하게는 약 7 내지 8 범위의 pH 값에서, 가장 바람직하게는 생리학적 pH, 예를 들어, 약 7.2 내지 약 7.5 범위에서 양으로 하전된, 하전된 분자를 지칭하도록 의도된다. 따라서 양이온 성분, 예를 들어 양이온성 펩티드, 양이온성 단백질, 양이온성 폴리머, 양이온성 다당류, 양이온성 지질(lipidoid를 포함)은 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 임의의 양으로 하전된 화합물 또는 중합체일 수 있다. "양이온성 또는 다가양이온성 펩티드 또는 단백질"은 적어도 하나의 양으로 하전된 아미노산, 또는 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, Arg, His, Lys 또는 Orn에서 선택된 것을 포함한다. 따라서, "다양이온성" 성분은 또한 주어진 조건에서 하나 이상의 양전하를 나타내는 범위 내에 있다.
양이온성 또는 다가양이온성 화합물, 본 발명의 맥락에서 특히 바람직한 양이온성 또는 다가양이온성 화합물은 다음의 양이온성 또는 다가양이온성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 단편의 목록으로부터 선택될 수 있다: 프로타민, 뉴클레오린, 스페르민 또는 스페르미딘, 또는 폴리-L-라이신(PLL)과 같은 다른 양이온성 펩타이드 또는 단백질, 폴리-아르기닌, 염기성 폴리펩타이드, HIV-결합 펩타이드를 포함한 세포 투과 펩타이드(CPP), HIV-1 Tat(HIV), Tat 유래 펩타이드, 페네트라틴(Penetratin), VP22 유래 또는 유사 펩타이드, HSV VP22(Herpes simplex), MAP, KALA 또는 단백질 전달 도메인(protein transduction domain, PTD), PpT620, 프롤린-풍부 펩티드, 아르기닌-풍부 펩티드, 리신-풍부 펩티드, MPG-펩티드, Pep-1, L-올리고머, 칼시토닌 펩티드(들), Antennapedia 유래 펩타이드, pAntp, pIsl, FGF, 락토페린(Lactoferrin), Transportan, 부포린(Buforin)-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, hCT 유래 펩타이드, SAP 또는 히스톤. 보다 바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 예를 들어, 코딩 RNA, 바람직하게는 mRNA는 하나 이상의 다가양이온, 바람직하게는 프로타민 또는 올리고펙타민, 가장 바람직하게는 프로타민과 복합체를 형성한다. 바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 적어도 하나의 RNA는 프로타민과 복합체를 형성한다.
형질감염 또는 착화 성분으로서 사용될 수 있는 추가의 바람직한 양이온성 또는 다가양이온성 화합물은 양이온성 다당류, 예를 들어, 키토산, 폴리브렌 등; 양이온성 지질, 예를 들어 DOTMA, DMRIE, 디-C14-아미딘, DOTIM, SAINT, DC-Chol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE: 디올레일 포스파티딜에탄올-아민, DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS, DIMRI, DOTAP, DC-6-14, CLIP1, CLIP6, CLIP9, 올리고펙타민; 또는 양이온성 또는 다가양이온성 중합체, 예를 들어, 베타-아미노산-폴리머 또는 역(reversed) 폴리아미드 등과 같은 변형된 폴리아미노산, PVP 등과 같은 변형된 폴리에틸렌, pDMAEMA 등과 같은 변형된 아크릴레이트, pAMAM 등과 같은 변형된 아미도아민, 디아민 말단 개질된 1,4 부탄디올 디아크릴레이트-co-5-아미노-1-펜탄올 중합체 등과 같은 변형된 폴리베타아미노에스테르(PBAE), 폴리프로필아민 덴드리머 또는 pAMAM 기반 덴드리머 등과 같은 덴드리머, PEI, 폴리(프로필렌이민) 등과 같은 폴리이민(들), 폴리알릴아민, 예를 들어 시클로덱스트린계 중합체, 덱스트란계 중합체 등과 같은 당(sugar) 백본 기반 중합체, PMOXA-PDMS 공중합체 등과 같은 실란 백본 중합체, 하나 이상의 양이온성 블럭(예를 들어, 상기 언급된 양이온성 중합체로부터 선택됨) 및 하나 이상의 친수성 또는 소수성 블록(예: 폴리에틸렌글리콜)의 조합으로 이루어진 블록 공중합체; 등을 포함한다.
이러한 맥락에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 적어도 하나의 RNA가 양이온성 또는 다가양이온성 화합물 및/또는 중합체 담체, 바람직하게는 양이온성 단백질 또는 펩티드와 복합체화되거나 적어도 부분적으로 복합체화되는 것이 특히 바람직하다. 또는 펩티드. 이러한 맥락에서, WO2010037539 및 WO2012113513의 개시 내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 부분적으로는 핵산의 일부만 양이온성 화합물과 복합체화되고 나머지 핵산은 복합체화되지 않은 형태("유리")임을 의미한다.
양태들에서, 약학 조성물은 하나 이상의 양이온성 또는 다가양이온성 화합물, 바람직하게는 프로타민과 복합체화된, 하나 이상의 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산(예: DNA 또는 RNA), 바람직하게는 하나 이상의 RNA, 및 하나 이상의 유리(비복합체) 핵산을 포함한다.
이러한 맥락에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 적어도 하나의 RNA가 프로타민과 복합체를 형성하거나 적어도 부분적으로 복합체를 형성하는 것이 특히 바람직하다. 바람직하게는, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 특히 프로타민-복합체 RNA의 RNA 대 유리 RNA의 몰비는 약 1:1의 비를 포함하여 약 0.001:1 내지 약 1:0.001의 몰비로부터 선택될 수 있다. 적합하게는, 복합체화된 RNA는 2:1의 RNA:프로타민 중량 대 중량비(w/w)로 RNA 샘플에 프로타민-트레할로스 용액을 첨가함으로써 프로타민과 복합체화된다.
구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 복합체화에 사용될 수 있는 추가의 바람직한 양이온성 또는 다가양이온성 단백질 또는 펩티드는 특허 출원 WO2009030481 또는 WO2011026641의 화학식 (Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x로부터 유도될 수 있다. 이에 관한 WO2009030481 또는 WO2011026641의 개시 내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 적어도 하나의 RNA는 바람직하게는 서열 번호: 269-273로부터 선택되는 적어도 하나의 양이온성 또는 다가양이온성 단백질 또는 펩티드, 또는 이들의 임의의 조합과 복합체를 형성하거나 적어도 부분적으로 복합체를 형성한다.
다양한 양태들에 따르면, 본 발명의 조성물은 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 본 명세서에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 RNA, 및 중합체 담체를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "중합체 담체"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 다른 화합물(예: 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 화물 핵산)의 수송 및/또는 복합화를 촉진하는 화합물을 의미하는 것으로 의도된다. 중합체 담체는 전형적으로 중합체로 형성된 담체이다. 고분자 담체는 공유 또는 비공유 상호작용에 의해 화물(예: 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 DNA 또는 RNA)에 결합될 수 있다. 중합체는 공중합체와 같은 상이한 서브유닛을 기반으로 할 수 있다.
본 발명의 맥락에서 적합한 중합체 담체는, 예를 들어, 폴리아크릴레이트, 폴리알킬시아노아크릴레이트, 폴리락타이드, 폴리락타이드-폴리글리콜리드 공중합체, 폴리카프로락톤, 덱스트란, 알부민, 젤라틴, 알기네이트, 콜라겐, 키토산, 시클로덱스트린, 프로타민, PEG화 프로타민, PEG화 PLL 및 폴리에틸렌이민(PEI), 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)(DSP), 디메틸-3,3'-디티오비스프로피온이미데이트(DTBP), 폴리(에틸렌 이민) 비스카르바메이트(PEIC), 폴리(L-리신)(PLL), 히스티딘 변형 PLL, 폴리(N-비닐피롤리돈)(PVP), 폴리(프로필렌이민(PPI) , 폴리(아미도아민)(PAMAM), 폴리(아미도 에틸렌이민)(SS-PAEI), 트리에틸렌테트라민(TETA), 폴리(β-아미노에스테르), 폴리(4-하이드록시-L-프로인 에스테르)(PHP), 폴리(알릴아민), 폴리(α-[4-아미노부틸]-L-글리콜산(PAGA), 폴리(D,L-락트산-코-글리콜리드산(PLGA), 폴리(N-에틸-4-비닐피리디늄 브로마이드), 폴리(포스파젠)(PPZ), 폴리(포스포에스테르)(PPE), 폴리(포스포르아미데이트)(PPA), 폴리(N-2-히드록시프로필메타크릴아미드)(pHPMA), 폴리(2-(디메틸아미노)에틸 메타크릴레이트)(pDMAEMA), 폴리(2-아미노에틸 프로필렌 포스페이트) PPE_EA), 갈락토실화 키토산, N-도데실화 키토산, 히스톤, 콜라겐 및 덱스트란-스페민을 포함한다. 한 실시양태에서, 중합체는 PEG와 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 불활성 중합체일 수 있다. 한 실시양태에서, 중합체는 PEI, PLL, TETA, 폴리(알릴아민), 폴리(N-에틸-4-비닐피리디늄 브로마이드), pHPMA 및 pDMAEMA와 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 양이온성 중합체일 수 있다. 한 실시양태에서, 중합체는 DSP, DTBP 및 PEIC와 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 생분해성 PEI일 수 있다. 한 실시양태에서, 중합체는 히스틴 변형 PLL, SS-PAEI, 폴리(β-아미노에스테르), PHP, PAGA, PLGA, PPZ, PPE, PPA 및 PPE-EA와 같은, 하지만 이에 제한되지 않는 생분해성일 수 있다.
적합한 중합체 담체는 이황화물-가교된 양이온성 화합물에 의해 형성된 중합체 담체일 수 있다. 이황화 가교결합된 양이온성 화합물은 서로 동일하거나 상이할 수 있다. 중합체 담체는 또한 추가 성분을 함유할 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 중합체 담체는 (-SH 기를 통해) 이황화 결합에 의해 가교된, 양이온성 펩티드, 단백질 또는 중합체 및 임의로 본 명세서에 정의된 추가 성분의 혼합물을 포함할 수 있다.
이와 관련하여, 특허 출원 WO2012/013326의 화학식 {(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x(Cys)y} 및 화학식 Cys,{(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x}Cys2에 따른 중합체 담체가 바람직하며, 이에 관한 WO2012/013326의 개시 내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
양태들에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 RNA를 복합체화하는데 사용되는 중합체성 담체는 특허 출원 WO2011026641의 화학식 (L-P1-S-[S-P2-S]n-S-P3-L)에 따른 중합체 담체 분자로부터 유래되며, 이에 관한 WO2011026641의 개시 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
양태들에서, 중합체 담체 화합물은 펩티드 요소 CysArg12Cys (서열 번호: 269) 또는 CysArg12(서열 번호: 270) 또는 TrpArg12Cys(서열 번호: 271)에 의해 형성되거나 이를 포함하거나 이로 이루어진다. 특히 바람직한 실시양태에서, 중합체성 담체 화합물은 (R12C)-(R12C) 이량체, (WR12C)-(WR12C) 이량체, 또는 (CR12)-(CR12C)-(CR12) 삼량체로 이루어지며, 여기서 이량체 (예를 들어 (WR12C)), 또는 삼량체 (예를 들어, (CR12)) 내 개별 펩티드 요소는 -SH 그룹을 통해 연결된다.
양태들에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산(예: DNA 또는 RNA), 바람직하게는 하나 이상의 RNA는 HO-PEG5000-S-(S-CHHHHHHRRRRHHHHHHC-S-)7-S-PEG5000-OH (펩티드 모노머로서 서열 번호: 272), HO-PEG5000-S-(S-CHHHHHHRRRRHHHHHHC-S-)4-S-PEG5000-OH (펩티드 모노머로서 서열 번호: 272), HO-PEG5000-S-(S-CGHHHHHRRRRHHHHHGC-S-)7-S-PEG5000-OH (펩티드 모노머로서 서열 번호: 273)를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜/펩티드 중합체 및/또는 HO-PEG5000-S-(S-CGHHHHHRRRRHHHHHGC-S-)4-S-PEG5000-OH (펩티드 모노머의 서열 번호: 273)을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜/펩티드 중합체와 복합체화되거나 회합(associated)된다.
다른 실시양태에서, 조성물은 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 포함하고, 여기서 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 적어도 하나의 RNA는 중합체성 담체 및 선택적으로 적어도 WO2017212008A1, WO2017212006A1, WO2017212007A1, 및 WO2017212009A1에 개시된 것과 같은 적어도 하나의 지질 성분과 복합체화되거나 회합된다. 이러한 맥락에서, WO2017212008A1, WO2017212006A1, WO2017212007A1, 및 WO2017212009A1의 개시내용은 인용에 의해 본 발명에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 중합체성 담체(제1 및/또는 제2 성분의)는 펩티드 중합체, 바람직하게는 상기 정의된 바와 같은 폴리에틸렌 글리콜/펩티드 중합체, 및 지질 성분, 바람직하게는 리피도이드 성분이다.
리피도이드(lipidoid)(또는 리피도이트(lipidoit))는 지질 유사 화합물, 즉 지질 유사 물리적 특성을 갖는 양친매성 화합물이다. 리피도이드는 바람직하게는 2개 이상의 양이온성 질소 원자 및 2개 이상의 친유성 꼬리를 포함하는 화합물이다. 많은 통상적인 양이온성 지질과 대조적으로, 리피도이드는 가수분해성 연결기, 특히 가수분해성 에스테르, 아미드 또는 카바메이트기를 포함하는 연결기가 없을 수 있다. 리피도이드의 양이온성 질소 원자는 양이온화 가능하거나 영구적으로 양이온성일 수 있거나, 두 유형의 양이온성 질소가 화합물에 존재할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 용어 지질은 또한 리피도이드를 포함하는 것으로 간주된다.
본 발명의 일부 양태에서, 리피도이드는 PEG 모이어티를 포함할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산(예: DNA 또는 RNA), 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 RNA는 중합체 담체, 바람직하게는 상기 정의된 폴리에틸렌 글리콜/펩티드 중합체 및 리피도이드 성분과 복합체를 형성하거나 회합된다.
구현예에서, 구성요소 A 및 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 상기 정의된 폴리머 및 상기 정의된 지질 또는 리피도이드 구성요소와 복합체화 또는 회합되거나 또는 적어도 부분적으로 복합체화되거나 부분적으로 회합되며, 구성요소 A 및 구성요소 B는 별도로 제형화되거나 구성요소 A 및 구성요소 B는 공동 제형화된다.
적합하게는, 리피도이드는 양이온성이며, 이는 이것이 양이온화가능하거나 영구적으로 양이온성임을 의미한다. 한 실시양태에서, 리피도이드는 양이온화가능하고, 즉 이는 하나 이상의 양이온화가능한 질소 원자를 포함하지만 영구적인 양이온성 질소 원자는 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 리피도이드의 양이온성 질소 원자 중 적어도 하나는 영구적으로 양이온성이다. 선택적으로, 리피도이드는 2개의 영구적인 양이온성 질소 원자, 3개의 영구적인 양이온성 질소 원자, 또는 심지어 4개 이상의 영구적인 양이온성 질소 원자를 포함한다.
바람직한 양태에서, 리피도이드 성분은 공개된 PCT 특허 출원 WO2017212009A1의 50-54페이지의 표에 제공된 리피도이드의 리피도이드부터 선택되며, 상기 표에 제공된 특정 리피도이드, 및 이와 관련된 구체적 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
바람직한 양태에서, 리피도이드 성분은 3-C12-OH, 3-C12-OH-cat, 3-C12-아미드, 3-C12-아미드 모노메틸, 3-C12-아미드 디메틸, RevPEG(10)-3-C12-OH, RevPEG(10)-DLin-pAbenzoic, 3C12amide-TMA cat., 3C12amide-DMA, 3C12amide-NH2, 3C12amide-OH, 3C12Ester-OH, 3C12 Ester-amin, 3C12Ester-DMA, 2C12Amid-DMA, 3C12-lin-amid-DMA, 2C12-sperm-amid-DMA, 또는 3C12-sperm-amid-DMA (공개된 PCT 특허 출원 WO2017212009A1 (페이지 50-54)의 표 참조)로부터 선택된 어느 하나일 수 있다. 특히 바람직한 것은 3-C12-OH 또는 3-C12-OH-cat이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 명시된 바와 같은 리피도이드(예: 3-C12-OH 또는 3-C12-OH-cat)를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜/펩티드 중합체는 N/P 비가 약 0.1 내지 약 20, 또는 약 0.2 내지 약 15, 또는 약 2 내지 약 15, 또는 약 2 내지 약 12인 복합체를 형성하기 위해 적어도 하나의 핵산과 복합체화되기 위해 사용되고, 여기서 N/P 비는 상기 핵산의 포스페이트 그룹에 대한 양이온성 펩타이드 또는 중합체의 염기성 그룹의 질소 원자의 몰비로서 정의된다. 이러한 맥락에서, 공개된 PCT 특허 출원 WO2017212009A1, 특히 WO2017212009A1의 청구항 1 내지 10의 개시, 및 이와 관련된 특정 개시내용들은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
추가의 적합한 리피도이드는 공개된 PCT 특허 출원 WO2010053572로부터 유래될 수 있다. 특히, 공개된 PCT 특허 출원 WO2010053572의 청구항 1 내지 297로부터 유래할 수 있는 리피도이드가 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있으며, 본 명세서에 기재된 바와 같은 펩티드 중합체 내로 통합되거나, 또는 예를 들어, 지질 나노입자(아래에 설명됨)에 통합된다. 따라서, 공개된 PCT 특허 출원 WO2010053572의 청구항 1 내지 297, 및 이와 관련된 특정 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
리포솜 또는 LNP 내 캡슐화/복합체화:
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 구성요소 A의 적어도 하나의 RNA 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 RNA가 하나 이상의 지질 (예: 양이온성 지질 및/또는 중성 지질)과 복합체화되거나, 캡슐화되거나, 부분적으로 캡슐화되거나, 회합되며, 이것에 의해 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜, 바람직하게는 지질 나노입자와 같은 지질 기반 담체를 형성한다.
구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 하나 이상의 지질(예를 들어, 양이온성 지질 및/또는 중성 지질)과 복합체화되거나, 캡슐화되거나, 부분적으로 캡슐화되거나, 또는 회합되어, 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀, 바람직하게는 지질 나노입자를 형성한다.
구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 별도로 제형화되고(본원에 정의된 임의의 제형 또는 복합체화 제제로), 바람직하게는 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및 /또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 별도의 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포좀으로 제형화된다.
구현예에서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산과 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 (본원에 정의된 임의의 제제 또는 복합체화 제제로) 공동 제형화되며, 바람직하게는 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산과 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 별도의 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포좀으로 제형화된다.
리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜 - 혼입 핵산(예: DNA 또는 RNA)은 완전히 또는 부분적으로 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포좀의 내부 공간에, 지질층/막 내, 또는 지질층/막의 외부 표면과 결합되어 위치한다. 리포솜/LNP로의 핵산의 혼입은 또한 본 명세서에서 "캡슐화"로 지칭되며, 여기서 핵산, 예를 들어, RNA는 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜의 내부 공간 내에 완전히 포함되어 있다. 핵산을 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜에 통합하는 목적은 핵산을 분해하는 효소 또는 화학물질 또는 조건 및/또는 핵산의 빠른 배설을 일으키는 시스템 또는 수용체를 포함할 수 있는 환경으로부터 핵산, 바람직하게는 RNA를 보호하는 것이다. 더욱이, 핵산, 바람직하게는 RNA를 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜에 혼입하면 핵산의 흡수를 촉진할 수 있고, 따라서 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산, 예를 들어, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 핵산의 치료 효과를 향상시킬 수 있다. 따라서, 구성요소 A 또는 B의 핵산, 예를 들어, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 RNA 또는 DNA를 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜으로 봉입하는 것은 본 발명의 조합 백신, 예를 들어, 근육내 및/또는 피내 투여용 백신에 특히 적합할 수 있다. 이러한 맥락에서, 용어 "복합체화된" 또는 "회합된(associated)"은 공유 결합 없이 더 큰 복합체 또는 어셈블리로의 (구성요소 A 및/또는 구성요소 B의) 핵산과 하나 이상의 지질의 본질적으로 안정한 조합을 지칭한다.
"LNP"로도 지칭되는 용어 "지질 나노입자"는 임의의 특정 형태로 제한되지 않으며, 양이온성 지질 및 임의로 하나 이상의 추가 지질이 조합될 때, 예를 들어 수성 환경 및/또는 핵산, 예를 들어, RNA의 존재 하에 조합될 때 생성되는 임의의 형태를 포함한다. 예를 들어, 리포솜, 지질 복합체, 리포플렉스 등은 지질 나노 입자(LNP)의 범위 내에 있다.
리포솜, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포솜은 직경이 수백 나노미터일 수 있고, 좁은 수성 구획(aqueous compartment), 직경이 50nm보다 작을 수 있는 작은 단세포 소포(small unicellular vesicle, SUV) 및 직경이 50nm에서 500nm 사이일 수 있는 큰 단층 소포(large unilamellar vesicle, LUV)에 의해 분리된 일련의 동심 이중층을 함유할 수 있는 다중층 소포(multilamellar vesicle, MLV)와 같은 다양한 크기일 수 있지만 이에 국한되지 않는다.
본 발명의 LNP는 하나 이상의 이중층의 막에 의해 외부 매질로부터 격리된 내부 물 공간을 갖는 미세한 소포로서 적합하게 특징지어진다. LNP의 이중층 막은 일반적으로 공간적으로 분리된 친수성 및 소수성 도메인을 포함하는 합성 또는 천연 기원의 지질과 같은 양친매성 분자에 의해 형성된다. 리포솜의 이중층 막은 또한 양쪽성 폴리머 및 계면활성제(예: 폴리머로솜, 니오솜 등)에 의해 형성될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, LNP는 전형적으로 적어도 하나의 구성요소 A의 핵산 및/또는 적어도 하나의 구성요소 B의 핵산, 바람직하게는 적어도 하나의 RNA를 표적 조직으로 수송하는 역할을 한다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 하나 이상의 핵산 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 하나 이상의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 지질 나노입자(LNP), 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스, 바람직하게는 LNP를 형성한다. 바람직하게는, 상기 LNP (리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 근육내 및/또는 피내 투여에 특히 적합하다.
양태에서, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%의 지질 기반 담체, 바람직하게는 LNP는 바람직하게는 고체 코어 또는 부분적으로 고체 코어를 포함하는 구형 형태를 갖는다.
LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 일반적으로 양이온성 지질, 및 중성 지질, 하전 지질, 스테로이드 및 폴리머 접합 지질(예: PEG화 지질)에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 포함한다. 핵산(예: RNA, DNA)은 LNP의 지질 부분 또는 LNP의 일부 또는 전체 지질 부분에 의해 둘러싸인 수성 공간에 캡슐화될 수 있다. 핵산(예: RNA, DNA) 또는 이의 일부는 또한 LNP와 회합 및 복합화될 수 있다. LNP는 핵산이 부착되거나 하나 이상의 핵산이 캡슐화된 입자를 형성할 수 있는 임의의 지질을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 핵산을 포함하는 LNP는 하나 이상의 양이온성 지질, 및 하나 이상의 안정화 지질을 포함한다. 안정화 지질에는 중성 지질 및 PEG화 지질이 포함된다.
바람직하게는, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는
(i) 하나 이상의 양이온성 지질;
(ii) 하나 이상의 중성 지질;
(iii) 적어도 하나의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체, 바람직하게는 콜레스테롤; 및
(iv) 하나 이상의 중합체 접합 지질, 바람직하게는 PEG-지질을 포함하고,
여기서 (i) 대 (iv)는 약 20-60% 양이온성 지질, 5-25% 중성 지질, 25-55% 스테롤, 및 0.5-15% 폴리머 접합 지질의 몰비로 존재한다.
LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)의 양이온성 지질은 양이온화될 수 있다. 즉, pH가 지질의 이온화 가능한 기의 pK 미만으로 낮아짐에 따라 양성자화되지만 더 높은 pH 값에서 점진적으로 더 중성이 된다. pK 미만의 pH 값에서 지질은 음전하를 띤 핵산과 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 양이온성 지질은 pH 감소에 대해 양전하를 띠는 쯔비터이온성 지질을 포함한다.
리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포좀 용도의 이러한 지질에는 DSDMA, N,N-디올레일-N,N-디메틸암모늄 클로라이드(DODAC), N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄 브로마이드(DDAB), 1,2-디올레오일트리메틸 암모늄 염화프로판(DOTAP)(N-(2,3-디올레오일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드 및 1,2-디올레일옥시-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염으로도 알려짐), N-(1-(2,3-디올레일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTMA), N,N-디메틸-2,3-디올레일옥시)프로필아민(DODMA), ckk-E12, ckk, 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLinDMA), 1,2-디리놀레닐옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLenDMA), 1,2-디-y-리놀레닐옥시-N,N-디메틸아미노프로판(γ-DLenDMA), 98N12-5, 1,2-디리놀레일카르바모일옥시-3-디메틸아미노프로판(DLin-C-DAP), 1,2-디리놀레옥시-3-(디메틸아미노)아세톡시프로판(DLin-DAC), 1,2-디리놀레옥시-3-모르폴리노프로판(DLin-MA), 1,2-디리놀레오일-3-디메틸아미노프로판(DLinDAP), 1,2-디리놀레오일티오-3-디메틸아미노프로판(DLin-S-DMA), 1-리놀레오일-2-리놀레일옥시-3-디메틸아미노프로판(DLin-2-DMAP), 1,2-디리놀레일옥시-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염(DLin-TMA.Cl), ICE(이미다졸 기반), HGT5000, HGT5001, DMDMA, CLinDMA, CpLinDMA, DMOBA, DOcarbDAP, DLincarbDAP, DLinCDAP, KLin-K-DMA, DLin-K-XTC2-DMA, XTC (2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란) HGT4003, 1,2-디리놀레오일-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염(DLin-TAP.Cl), 1,2-디리놀레일옥시-3-(N-메틸피페라지노)프로판(DLin-MPZ), 또는 3-(N,N-디리놀레일아미노)-1,2-프로판디올(DLinAP), 3-(N,N-디올레일아미노)-1,2-프로판디오(DOAP), 1,2-디리놀레일옥소-3-(2-N,N-디메틸아미노)에톡시프로판(DLin-EG-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA) 또는 이의 유사체, (3aR,5s,6aS)-N,N-디메틸-2,2-디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐)테트라히드로-3aH-시클로펜타[d][1,3]디옥솔-5-아민, (6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일-4-(디메틸아미노)부타노에이트(MC3), ALNY-100 ((3aR,5s,6aS)-N,N-디메틸-2,2-디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐)테트라히드로-3aH-시클로펜타[d] [1 ,3]디옥솔-5-아민)), 1,1'-(2-(4-(2-((2)-(비스(2-히드록시도데실)아미노)에틸)(2-히드록시도데실)아미노)에틸)피페라진-1-일)에틸아잔디일)디도데칸-2-올 (C12-200), 2,2-디리놀레일-4-(2-디메틸아미노에틸)-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-C2-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA), NC98-5 (4,7, 13-트리스(3-옥소-3-(운데실아미노)프로필)-N ,N 16-디운데실-4,7,10,13-테트라아자헥사데칸-1,16-디아미드), (6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(디메틸아미노) 부타노에이트(DLin-M-C3-DMA), 3-((6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타- 6,9,28,31-테트라엔-19-일옥시)-N,N-디메틸프로판-1-아민(MC3 에테르), 4-((6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일옥시)-N,N-디메틸부탄-1-아민(MC4 에테르), LIPOFECTIN® (GIBCO/BRL, Grand Island, N.Y.로부터 상업적으로 이용 가능한, DOTMA 및 1,2-디올레오일-sn-3포스포에탄올아민(DOPE)을 포함하는 양이온성 리포솜); LIPOFECTAMINE® (GIBCO/BRL로부터 상업적으로 이용 가능한, N-(1-(2,3디올레일옥시)프로필)-N-(2-(스페르민카르복스아미도)에틸)-N,N-디메틸암모늄 트리플루오로아세테이트(DOSPA) 및 (DOPE)를 포함하는 양이온성 리포솜); 및 TRANSFECTAM® (Promega Corp., Madison, Wis.로부터 상업적으로 이용 가능한, 에탄올 중 디옥타데실아미도글리실 카르복시스페민(DOGS)을 포함하는 양이온성 지질) 또는 상기 중 임의의 것의 임의의 조합을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 추가의 적합한 양이온성 지질은 국제 특허 공개 WO2010053572 (및 특히, 단락 [00225]에 기재된 CI 2-200) 및 WO2012170930에 기재된 것들을 포함하며, 이들 둘 모두는 인용에 의해 본 명세서에 포함되며, HGT4003, HGT5000, HGTS001, HGT5001, HGT5002 (US20150140070A1 참조)을 포함한다.
양태들에서, 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포좀의 양이온성 지질은 아미노 지질일 수 있다.
대표적인 아미노 지질은 1,2-디리놀레옥시-3-(디메틸아미노)아세톡시프로판(DLin-DAC), 1,2-디리놀레옥시-3모르폴리노프로판(DLin-MA), 1,2-디리놀레오일-3-디메틸아미노프로판(DLinDAP), 1,2-디리놀레일티오-3-디메틸아미노프로판(DLin-S-DMA), 1-리놀레오일-2-리놀레일옥시-3디메틸아미노프로판(DLin-2-DMAP), 1,2-디리놀레일옥시-3-트리메틸아미노프로판 염화물 염 (DLin-TMA.Cl), 1,2-디리놀레오일-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염(DLin-TAP.Cl), 1,2-디리놀레일옥시-3-(N-메틸피페라지노)프로판(DLin-MPZ), 3-(N,N,디리놀레일아미노)-1,2-프로판디올(DLinAP), 3-(N,N-디올레일아미노)-1,2-프로판디올(DOAP), 1,2-디리놀레일옥소-3-(2-N,N-디메틸아미노)에톡시프로판(DLin-EG-DMA), 및 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA), 2,2-디리놀레일-4-(2-디메틸아미노에틸)-[ 1,3]-디옥솔란(DLin-KC2-DMA); 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트(DLin-MC3-DMA); MC3(US20100324120)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 양태들에서, 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스 및/또는 나노리포좀의 양이온성 지질은 아미노알코올 리피도이드일 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 아미노알코올 리피도이드는 미국 특허 제8,450,298호에 기술된 방법에 의해 제조될 수 있으며, 이는 전문이 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 적합한 (이온화 가능한) 지질은 또한 표 1, 2 및 3에 개시되고 본 명세서에 인용에 의해 포함되는 WO2017075531A1의 청구항 1-24에 정의된 바와 같은 화합물일 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 적합한 지질은 또한 WO2015074085A1 (즉, ATX-001 내지 ATX-032 또는 청구범위 1-26에 명시된 화합물), 미국 출원 제61/905,724호 및 15/614,499호 또는 미국 특허 제9,593,077호 및 9,567,296호에 개시된 화합물일 수 있으며, 이들 문헌들은 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
다른 실시양태에서, 적합한 양이온성 지질은 또한 WO2017117530A1에 개시된 바와 같은 화합물(즉, 지질 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 청구범위에 명시된 바와 같은 화합물)일 수 있으며, 이는 인용에 의해 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 이온성 또는 양이온성 지질은 또한 WO2018078053A1에 개시된 지질(즉, WO2018078053A1의 화학식 I, II 및 III로부터 유래된 지질, 또는 WO2018078053A1의 청구항 1 내지 12에 명시된 바와 같은 지질)로부터 선택될 수 있으며, WO2018078053A1의 개시 내용은 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 이러한 맥락에서, WO2018078053A1의 표 7에 개시된 지질(예를 들어, 화학식 I-1 내지 I-41로부터 유래된 지질) 및 WO2018078053A1의 표 8에 개시된 지질(예를 들어, 화학식 II-1 내지 II-36에서 유래된 지질 )는 본 발명의 맥락에서 적절하게 사용될 수 있다. 따라서, WO2018078053A1의 화학식 I-1 내지 화학식 I-41 및 화학식 II-1 내지 화학식 II-36, 및 이와 관련된 특정 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 양이온성 지질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018078053A1의 화학식 III으로부터 유래될 수 있다. 따라서, WO2018078053A1의 화학식 III, 및 이와 관련된 특정 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산(예: DNA 또는 RNA), 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)를 형성하고, 여기서 LNP의 양이온성 지질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018078053A1의 표 9의 구조 III-1 내지 III-36으로부터 선택된다. 따라서, WO2018078053A1의 화학식 III-1 내지 III-36, 및 이와 관련된 구체적인 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 하나 이상의 핵산 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산(예: DNA 또는 RNA), 바람직하게는 구성요소 A의 하나 이상의 RNA 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 RNA가 하나 이상의 지질과 복합체를 형성함으로써 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀, 바람직하게는 LNP를 형성하고, 여기서 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀, 바람직하게는 LNP는 화학식 III-3에 따른 양이온성 지질을 포함한다:
Figure pct00011
본 명세서에 적합하게 사용된 화학식 III-3의 지질은 화학 용어 ((4-히드록시부틸)아잔디일)비스(헥산-6,1-디일)비스(2-헥실데카노에이트)이며, 이는 ALC-0315로도 지칭된다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 정의된 양이온성 지질, 더욱 바람직하게는 양이온성 지질 화합물 III-3은 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)의 총 지질 함량에 대해 약 30 내지 약 95몰%의 양으로 LNP에 존재한다. LNP 내에 하나 이상의 양이온성 지질이 포함된 경우, 이러한 비율은 합쳐진 양이온성 지질에 적용된다.
양태들에서, 양이온성 지질은 약 30 내지 약 70몰%의 양으로 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)에 존재한다. 한 실시양태에서, 양이온성 지질은 약 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60몰%과 같은 약 40 내지 약 60몰%의 양으로 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)에 존재한다. 양태들에서, 양이온성 지질은 약 47 내지 약 48몰%, 예를 들어 약 47.0, 47.1, 47.2, 47.3, 47.4, 47.5, 47.6, 47.7, 47.8, 47.09, 50몰%의 양으로 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)에 존재하며, 여기에서 47.7몰%가 특히 바람직하다.
일부 실시양태에서, 양이온성 지질은 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)에 존재하는 총 지질의 약 20mol% 내지 약 70 또는 75mol% 또는 약 45 내지 약 65mol% 또는 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 또는 약 70mol%의 비율로 존재한다. 추가 실시양태에서, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 양이온성 지질의 몰 기준으로 약 25% 내지 약 75%, 예를 들어 약 20 내지 약 70%, 약 35 내지 약 65%, 약 45 내지 약 65%, 몰 기준으로 60%, 약 57.5%, 약 57.1%, 약 50% 또는 약 40%(지질 나노입자 내 지질의 100% 총 몰을 기준으로 함) 포함한다. 일부 실시양태에서, 양이온성 지질 대 핵산(예를 들어, 코딩 RNA 또는 DNA)의 비는 약 3 내지 약 15, 예컨대 약 5 내지 약 13 또는 약 7 내지 약 11이다.
다른 적합한(양이온성 또는 이온화 가능한) 지질은 WO2009086558, WO2009127060, WO2010048536, WO2010054406, WO2010088537, WO2010129709, WO2011153493, WO 2013063468, US20110256175, US20120128760, US20120027803, US8158601, WO2016118724, WO2016118725, WO2017070613, WO2017070620, WO2017099823, WO2012040184, WO2011153120, WO2011149733, WO2011090965, WO2011043913, WO2011022460, WO2012061259, WO2012054365, WO2012044638, WO2010080724, WO201021865, WO2008103276, WO2013086373, WO2013086354, US 특허 번호 7,893,302, 7,404,969, 8,283,333, 8,466,122 및 8,569,256 및 미국 특허 공개 번호 US20100036115, US20120202871, US20130064894, US20130129785, US20130150625, US20130178541, US20130225836, US20140039032 및 WO2017112865에 개시되어 있다. 이러한 맥락에서, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)에 사용하기에 적합한 (양이온성) 지질들과 관련된 WO2009086558, WO2009127060, WO2010048536, WO2010054406, WO2010088537, WO2010129709, WO2011153493, WO 2013063468, US20110256175, US20120128760, US20120027803, US8158601, WO2016118724, WO2016118725, WO2017070613, WO2017070620, WO2017099823, WO2012040184, WO2011153120, WO2011149733, WO2011090965, WO2011043913, WO2011022460, WO2012061259, WO2012054365, WO2012044638, WO2010080724, WO201021865, WO2008103276, WO2013086373, WO2013086354, 미국 특허 번호 7,893,302, 7,404,969, 8,283,333, 8,466,122 및 8,569,256 및 미국 특허 공개 번호 US20100036115, US20120202871, US20130064894, US20130129785, US20130150625, US20130178541, US20130225836 및 US20140039032 및 WO2017112865의 개시내용들은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
양태들에서, 본 명세서에 정의된 바와 같은 아미노 또는 양이온성 지질은 지질이 생리학적 pH(예를 들어, pH 7.4) 이하의 pH에서 양전하를 띠고 제2 pH, 바람직하게는 생리적 pH 이상에서 중성이 되도록 적어도 하나의 양성자화 가능한 또는 탈양성자화 가능한 기를 갖는다. 물론 pH의 함수로서 양성자의 추가 또는 제거는 평형 과정이며, 하전 또는 중성 지질에 대한 언급은 우세한 종의 성질을 의미하며, 모든 지질이 하전된 형태 또는 중성 형태로 존재해야 함을 필요로 하는 것은 아니다. 하나 이상의 양성자화 가능 또는 탈양성자화 가능한 기를 가지거나 쯔비터이온성인 지질은 배제되지 않고 마찬가지로 본 발명의 맥락에서 적합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 양성자화가능한 지질은 약 4 내지 약 11 범위의 양성자화가능한 기의 pKa, 예를 들어, 약 5 내지 약 7의 pKa를 갖는다.
LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 본 명세서에 정의된 2개 이상의 (상이한) 양이온성 지질을 포함할 수 있다. 양이온성 지질은 상이한 유리한 특성에 기여하도록 선택될 수 있다. 예를 들어, 아민 pKa, 화학적 안정성, 순환 반감기, 조직 내 반감기, 조직 내 순 축적 또는 독성과 같은 특성이 다른 양이온성 지질을 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)에 사용할 수 있다. 특히, 양이온성 지질은 혼합-LNP의 특성이 개별 지질의 단일-LNP의 특성보다 더 바람직하도록 선택될 수 있다.
영구적인 양이온성 지질 또는 리피도이드의 양은 핵산 화물(cargo)의 양을 고려하여 선택될 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 양은 나노입자(들) 또는 조성물의 N/P 비가 약 0.1 내지 약 20 범위가 되도록 선택된다. 이와 관련하여, N/P 비는 화물로 사용되는 핵산의 인산기("P")에 대한 지질 또는 리피도이드의 염기성 질소 함유 기의 질소 원자("N")의 몰비로 정의된다. N/P 비율은, RNA가 염기의 통계적 분포를 나타내는 경우, 예를 들어, 1ug RNA가 일반적으로 약 3nmol 포스페이트 잔기를 함유한다는 것을 기준으로 계산할 수 있다. 지질 또는 리피도이드의 "N"-값은 분자량 및 영구적인 양이온성 및 - 존재하는 경우 - 양이온성 기의 상대적 함량을 기준으로 계산할 수 있다.
LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)의 생체 내 특성 및 거동은 입체 안정화 부여를 위해 LNP 표면에 친수성 고분자 코팅, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 추가하여 수정할 수 있다. 또한, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 리간드(예: 항체, 펩티드 및 탄수화물)를 부착된 PEG 사슬의 말단 또는 표면에 부착함으로써(예: PEG화된 지질 또는 PEG화된 콜레스테롤을 통해) 특정 표적화에 사용할 수 있다.
일부 실시양태에서, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 중합체 접합 지질을 포함한다. 용어 "고분자 접합 지질"은 지질 부분과 고분자 부분을 모두 포함하는 분자를 의미한다. 중합체 접합 지질의 예는 PEG화 지질이다. 용어 "PEG화된 지질"은 지질 부분 및 폴리에틸렌 글리콜 부분 둘 다를 포함하는 분자를 지칭한다. PEG화된 지질은 당업계에 공지되어 있으며, 1-(모노메톡시-폴리에틸렌글리콜)-2,3-디미리스토일글리세롤(PEG-s-DMG) 및 이와 유사한 것을 포함한다.
본 명세서에 정의된 바와 같은 중합체 접합 지질, 예를 들어. PEG-지질은 응집 감소 지질의 역할을 할 수 있다.
특정 실시양태에서, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 폴리에틸렌 글리콜-지질(PEG화된 지질)인 안정화-지질을 포함한다. 적합한 폴리에틸렌 글리콜-지질에는 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형 포스파티드산, PEG-변형 세라마이드(예: PEG-CerC14 또는 PEG-CerC20), PEG-변형 디알킬아민, PEG-변형 디아실글리세롤, PEG-변형 디알킬글리세롤이 포함된다. 대표적인 폴리에틸렌 글리콜-지질에는 PEG-c-DOMG, PEG-c-DMA 및 PEG-s-DMG가 포함된다. 한 실시양태에서, 폴리에틸렌 글리콜-지질은 N-[(메톡시 폴리(에틸렌 글리콜)2000)카르바밀]-1,2-디미리스틸옥실프로필-3-아민 (PEG-c-DMA)이다. 바람직한 실시양태에서, 폴리에틸렌 글리콜-지질은 PEG-2000-DMG이다. 한 실시양태에서, 폴리에틸렌 글리콜-지질은 PEG-c-DOMG)이다. 다른 실시양태에서, LNP는 PEG화 디아실글리세롤(PEG-DAG), 예를 들어 1-(모노메톡시-폴리에틸렌글리콜)-2,3-디미리스토일글리세롤(PEG-DMG), PEG화 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE), PEG 숙시네이트 디아실글리세롤(PEG-S-DAG), 예를 들어 4-O-(2',3'-디(테트라데카노일옥시)프로필-1-O-(ω-메톡시(폴리에톡시)에틸)부탄디오에이트(PEG-S-DMG), PEG화 세라마이드 (PEG-cer), 또는 PEG 디알콕시프로필카바메이트, 예를 들어, ω-메톡시(폴리에톡시)에틸-N-(2,3-디(테트라데카녹시)프로필)카바메이트 또는 2,3-디(테트라데카녹시)프로필-N-(ω-메톡시( 폴리에톡시)에틸)카바메이트를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, PEG화된 지질은 바람직하게는 공개된 PCT 특허 출원 WO2018078053A1의 화학식 IV로부터 유래된다. 따라서, 공개된 PCT 특허 출원 WO2018078053A1의 화학식 IV로부터 유도된 PEG화된 지질, 및 이와 관련된 각각의 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 약학 조성물의 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산(예: RNA 또는 DNA)은 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)를 형성하고, 여기서 LNP는 고분자 접합 지질(polymer conjugated lipid), 바람직하게는 PEG화된 지질을 포함하고, 여기서 PEG 지질은 바람직하게는 공개된 PCT 특허 출원 WO2018078053A1의 화학식 (IVa)에서 유래한다. 따라서, 공개된 PCT 특허 출원 WO2018078053A1의 화학식 (IVa)로부터 유래된 PEG화된 지질, 및 이에 관련된 각각의 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 하나 이상의 핵산 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성함으로써 지질 나노입자 (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)를 형성하고, 여기서 LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스) 는 고분자 접합 지질, 바람직하게는 PEG화 지질/PEG 지질을 포함한다. 바람직한 양태에서, 상기 PEG 지질은 하기 화학식 IVa이다:
Figure pct00012
여기서 n은 약 30±2, 32±2, 34±2, 36±2, 38±2, 40±2, 42±2, 44±2, 46±2, 48±2, 50±2, 52±2, 54±2, 56±2, 58±2, 또는 60±2와 같은 30 내지 60 범위의 평균값을 갖는다. 가장 바람직한 실시양태에서 n은 약 49이다. 다른 바람직한 양태에서, n은 약 45이다. 추가의 바람직한 양태에서, 상기 PEG 지질은 화학식 IVa의 것이고, 여기서 n은 PEG 지질의 평균 분자량이 약 2000g/mol 내지 약 3000g/mol 또는 약 2300g/mol 내지 약 2700g/mol, 훨씬 더 바람직하게는 약 2500g/mol이 되도록 선택된 정수이다.
본 명세서에 적합하게 사용된 화학식 IVa의 지질은 ALC-0159로도 지칭되는 화학 용어 2[(폴리에틸렌 글리콜)-2000]-N,N-디테트라데실아세트아미드를 갖는다.
이러한 맥락에서 적합한 PEG-지질의 추가 예는 US20150376115A1 및 WO2015199952에 제공되며, 이들 각각은 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
일부 실시양태에서, LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스) 는 LNP 내의 지질의 총 몰을 기준으로 약 3, 2, 또는 1 몰% 미만의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 포함한다. 추가 실시양태에서, LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스) 는 몰 기준으로 약 0.1% 내지 약 20%의 PEG-변형된 지질, 예를 들어, 몰 기준으로 약 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 5%, 약 10%, 약 5%, 3.5%, 약 3%, 약 2.5%, 약 2%, 약 1.5%, 약 1%, 약 0.5%, 또는 약 0.3%(LNP에서 지질의 100% 총 몰을 기준으로 함) 포함한다. 바람직한 실시양태에서, LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스) 는 몰 기준으로 약 1.0% 내지 약 2.0%의 PEG-변형된 지질, 예를 들어, 약 1.2 내지 약 1.9%, 약 1.2 내지 약 1.8%, 약 1.3 내지 약 1.8%, 약 1.4% 내지 약 1.8%, 약 1.5 내지 약 1.8%, 약 1.6 내지 약 1.8%, 특히 약 1.4%, 약 1.5%, 약 1.6%, 약 1.7%, 약 1.8%, 약 1.9%, 가장 바람직하게는 1.7% 를 포함한다 (LNP에서 지질의 100% 총 몰을 기준으로 함). 다양한 양태에서, 양이온성 지질 대 PEG화된 지질의 몰비는 약 100:1 내지 약 25:1의 범위이다.
바람직한 실시양태에서, LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스) 는 입자의 제제화 동안 또는 제조 공정 동안 입자의 형성을 안정화시키는 하나 이상의 추가 지질(예를 들어, 중성 지질 및/또는 하나 이상의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체)을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 구성요소 A의 하나 이상의 핵산 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 하나 이상의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 지질 나노입자 (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)를 형성하고, 여기서 LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스) 는 하나 이상의 중성 지질 및/또는 하나 이상의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체를 포함한다.
적합한 안정화 지질은 중성 지질 및 음이온성 지질을 포함한다. 용어 "중성 지질"은 생리학적 pH에서 전하를 띠지 않거나 중성 쯔비터이온 형태로 존재하는 다수의 지질 종 중 임의의 하나를 지칭한다. 대표적인 중성 지질은 디아실포스파티딜콜린, 디아실포스파티딜에탄올아민, 세라마이드, 스핑고미엘린, 디히드로 스핑고미엘린, 세팔린 및 세레브로사이드를 포함한다.
실시양태에서, LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 하나 이상의 중성 지질을 포함하며, 여기서 중성 지질은 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤(DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민(DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일올레오일-포스파티딜에탄올아민(POPE) 및 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1카르복실레이트(DOPE-mal), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민(DMPE), 디스테아로일-포스파티딜에탄올아민(DSPE), 16-O-모노메틸 PE, 16-O-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 1-스테아리오일-2-올레오일포스파티디에탄올 아민(SOPE), 및 1,2-디엘라이도일-sn-글리세로-3-포포에탄올아민(transDOPE), 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE 및 SM으로부터 선택된 중성 지질을 포함한다. 다양한 양태에서, 양이온성 지질 대 중성 지질의 몰비는 약 2:1 내지 약 8:1의 범위이다.
바람직한 양태에서, 중성 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)이다. 적합하게는, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰비는 약 2:1 내지 약 8:1 범위일 수 있다.
바람직한 양태들에서, 스테로이드는 콜레스테롤이다. 적합하게는, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰비는 약 2:1 내지 약 1:1 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 콜레스테롤은 PEG화될 수 있다.
스테롤은 지질 입자의 약 10mol% 내지 약 60mol% 또는 약 25mol% 내지 약 40mol%일 수 있다. 한 실시양태에서, 스테롤은 지질 입자에 존재하는 총 지질의 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 또는 약 60mol%이다. 또 다른 실시양태에서, LNP는 스테롤의 몰 기준으로 약 5% 내지 약 50%, 예를 들어, 약 15% 내지 약 45%, 약 20% 내지 약 40%, 몰 기준으로 약 48%, 약 40%, 약 38.5%, 약 35%, 약 34.4%, 약 31.5% 또는 약 31%(지질 나노입자 내 지질의 100% 총 몰을 기준으로 함)의 스테롤을 포함한다.
바람직하게는, 지질 LNP (또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 (a) 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 RNA, (b) 양이온성 지질, (c) 응집 감소제(예: 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 지질 또는 PEG-변형된 지질), (d) 선택적으로 비-양이온성 지질(예: 중성 지질), 및 (e) 선택적으로, 스테롤을 포함한다.
일부 실시양태에서, 양이온성 지질(상기 정의된 바와 같음), 비-양이온성 지질(상기 정의된 바와 같음), 콜레스테롤(상기 정의된 바와 같음), 및/또는 PEG-변형된 지질(상기 정의된 바와 같음)은 다양한 상대 몰비로 조합될 수 있다. 예를 들어, 양이온성 지질 대 비-양이온성 지질 대 콜레스테롤-기반 지질 대 PEG화된 지질의 비는 약 30-60:20-35:20-30:1-15, 또는 약 40:30:25:5, 50:25:20:5, 50:27:20:3, 40:30:20:10, 40:32:20:8, 40:32:25:3 또는 40:33:25:2의 비율일 수 있으며, 또는 각각 약 50:25:20:5, 50:20:25:5, 50:27:20:3 40:30:20: 10,40:30:25:5 또는 40:32:20:8, 40:32:25:3 또는 40:33:25:2의 비율일 수 있다.
일부 실시양태에서, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 화학식 III의 지질, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 RNA, 중성 지질, 스테로이드 및 PEG화된 지질을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 화학식 III의 지질은 지질 화합물 III-3 (ALC-0315)이고, 중성 지질은 DSPC이고, 스테로이드는 콜레스테롤이고, PEG화된 지질은 화학식 (Iva ALC-0159)의 화합물이다.
바람직한 실시양태에서, LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 (i) 하나 이상의 양이온성 지질; (ii) 중성 지질; (iii) 스테롤, 예를 들어 , 콜레스테롤; 및 (iv) PEG-지질, 예를 들어 PEG-DMG 또는 PEG-cDMA를, 약 20-60% 양이온성 지질: 5-25% 중성 지질: 25-55% 스테롤; 0.5-15% PEG-지질의 몰비로 본질적으로(essentially) 이루어진다.
특히 바람직한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 지질 나노입자(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)를 형성하고, 여기서 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 다음을 포함한다:
(i) 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 양이온성 지질, 바람직하게는 화학식 III의 지질, 더욱 바람직하게는 지질 III-3 (ALC-0315);
(ii) 본 명세서에 정의된 하나 이상의 중성 지질, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC);
(iii) 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체, 바람직하게는 콜레스테롤; 및
(iv) 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 고분자 접합 지질, 바람직하게는 PEG-지질, 예를 들어, PEG-DMG 또는 PEG-cDMA, 바람직하게는 화학식 (Iva ALC-0159)이거나 그로부터 유래된 PEG화된 지질.
특히 바람직한 양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 지질 나노입자(LNP)를 형성하고, 여기서 LNP는 약 20-60% 양이온성 지질: 5-25% 중성 지질: 25-55% 스테롤; 0.5-15% 고분자 접합 지질, 바람직하게는 PEG-지질의 몰 비율로 상기 (i) 내지 (iv)를 포함한다.
한 바람직한 실시양태에서, 지질 나노입자(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 화학식 III의 양이온성 지질 및/또는 화학식 IV의 PEG 지질, 임의로 중성 지질, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC) 및 임의로 스테로이드, 바람직하게는 콜레스테롤을 포함하고, 여기서 양이온성 지질 대 DSPC의 몰비는 임의로 약 2:1 내지 8:1 범위이고, 여기서 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰비는 임의로 약 2:1 내지 1:1이다.
특히 바람직한 실시양태에서, 조성물은 구성요소 A의 하나 이상의 핵산 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵사, 바람직하게는 하나 이상의 RNA를 포함하고, 약 50:10:38.5:1.5, 바람직하게는 약 47.5:10:40.8:1.7 또는 보다 바람직하게는 47.4:10:40.9:1.7 (즉, 양이온성 지질(바람직하게는 지질 III-3 (ALC-0315)), DSPC, 콜레스테롤 및 고분자 접합 지질, 바람직하게는 PEG-지질 (바람직하게는 n = 49인 화학식 IVa의 PEG-지질, 훨씬 더 바람직하게는 n = 45인 화학식 IVa의 PEG-지질; ALC-0159); 에탄올에 용해됨)의 몰비를 갖는 지질 나노입자(LNP)를 포함한다.
지질 나노입자 내 핵산의 총량은 다양할 수 있으며 예를 들어 핵산 대 총 지질 w/w 비율에 따라 정의된다. 본 발명의 한 실시양태에서, 핵산, 특히 RNA 대 총 지질 비는 0.06 w/w 미만, 바람직하게는 0.03 w/w 내지 0.04 w/w이다.
바람직한 구현예에서, 지질 대 핵산의 중량/중량(wt/wt)비는 약 10:1 내지 약 60:1, 바람직하게는 약 20:1 내지 약 30:1, 예를 들어 약 25:1이다.
바람직한 구현예에서, 핵산을 캡슐화하는 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀의 n/p 비율은 약 1 내지 약 10 범위, 바람직하게는 약 5 내지 약 7 범위이며, 보다 바람직하게는 약 6이다.
일부 실시양태에서, 지질 나노입자(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 단지 3개의 지질 성분, 즉 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DOPE), 및 1,2-디미리스토일-sn-글리세롤, 메톡시폴리에틸렌 글리콜(DMG-PEG-2K)로 구성된다.
한 실시양태에서, 조성물의 지질 나노입자(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 양이온성 지질, 스테로이드; 중성 지질; 및 중합체 접합 지질, 바람직하게는 페길화 지질을 포함한다. 바람직하게는, 중합체 접합 지질은 페길화된 지질 또는 PEG-지질이다. 특정 실시양태에서, 지질 나노입자는 하기 화학식에 따른 양이온성 지질 COATSOME® SS-EC(이전 명칭: SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tokyo, Japan)와 유사한 양이온성 지질을 포함한다:
Figure pct00013
하기에 추가로 설명되는 바와 같이, 이러한 지질 나노입자는 "GN01"로 지칭된다.
또한, 특정 실시양태에서, GN01 지질 나노입자는 1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DPhyPE) 구조와 유사한 중성 지질을 포함한다:
Figure pct00014
또한, 특정 실시양태에서, GN01 지질 나노입자는 하기 구조를 갖는 1,2-디미리스토일-rac-글리세로-3-메톡시폴리에틸렌 글리콜 2000(DMG-PEG 2000)인 중합체 접합 지질, 바람직하게는 페길화된 지질을 포함한다:
Figure pct00015
당업계에 사용된 "DMG-PEG 2000"은 ~ 97:3 비율의 1,2-DMG PEG2000 및 1,3-DMG PEG2000의 혼합물로 간주된다.
따라서, 바람직한 실시양태 중 하나에 따른 GN01 지질 나노입자(GN01-LNP)는 SS-EC 양이온성 지질, 중성 지질 DPhyPE, 콜레스테롤, 및 중합체 접합 지질(페길화된 지질) 1,2-디미리스토일-rac-글리세로- 3-메톡시폴리에틸렌 글리콜(PEG-DMG)를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, GN01 LNP는 다음을 포함한다:
(a) 45-65 mol%의 양이온성 지질 SS-EC (이전 명칭: SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tokyo, Japan);
(b) 25-45 mol%의 콜레스테롤;
(c) 8-12 mol%의 DPhyPE; 및
(d) 1-3 mol%의 PEG-DMG 2000;
각 양은 GN01 지질 나노입자의 모든 지질 첨가제의 총 몰량에 대한 값임.
추가의 바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 GN01 지질 나노입자는 59mol% 양이온성 지질, 10mol% 중성 지질, 29.3mol% 스테로이드 및 1.7mol% 중합체 접합 지질, 바람직하게는 페길화된 지질을 포함한다. 가장 바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 GN01 지질 나노입자는 59mol% 양이온성 지질 SS-EC, 10mol% DPhyPE, 29.3mol% 콜레스테롤 및 1.7mol% DMG-PEG 2000을 포함한다.
GN01 지질 나노입자 내 핵산의 양에 대한 양이온성 지질의 양은 또한 중량비(즉, 예를 들어, "m/m"로 축약됨)로 표현될 수 있다. 예를 들어, GN01 지질 나노입자는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 적어도 하나의 RNA를 약 20 내지 약 60, 또는 약 10 내지 약 50 범위의 지질 대 RNA 중량비를 달성하기 위한 양으로 포함한다. 다른 실시양태에서, 양이온성 지질 대 핵산 또는 RNA의 비는 약 3 내지 약 15, 예컨대 약 5 내지 약 13, 약 4 내지 약 8 또는 약 7 내지 약 11이다. 본 발명의 매우 바람직한 양태에서, 총 지질/RNA 질량비는 RNA 캡슐화를 보장하기 위해 약 40 또는 40, 즉 약 40 또는 40배 질량 초과이다. 또 다른 바람직한 RNA/지질 비는 약 1 내지 약 10, 약 2 내지 약 5, 약 2 내지 약 4, 또는 바람직하게는 약 3이다.
또한, 양이온성 지질의 양은 RNA 화합물과 같은 핵산 카고의 양을 고려하여 선택될 수 있다. 한 실시양태에서, N/P 비는 약 1 내지 약 50의 범위일 수 있다. 다른 실시양태에서, 범위는 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 5이다. 바람직한 일 실시양태에서, 이들 양은 GN01 지질 나노입자 또는 조성물의 N/P 비율이 약 10 내지 약 20 범위가 되도록 선택된다. 추가의 매우 바람직한 실시양태에서, N/P는 14(즉, 핵산 캡슐화를 보장하기 위해 양전하의 14배 몰 과량)이다.
바람직한 실시양태에서, GN01 지질 나노입자는 59mol% 양이온성 지질 COATSOME® SS-EC (실시예 섹션에서 명백한 바와 같이 이전 명칭: SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tokyo, Japan), 스테로이드로서 29.3mol% 콜레스테롤, 중성 지질/인지질로서 10mol% DPhyPE 및 중합체 접합 지질로서 1.7mol% DMG-PEG 2000을 포함한다. DPhyPE의 사용과 관련된 추가의 독창적인 이점은 부피가 큰 꼬리로 인한 융합 생성(fusogenicity)에 대한 높은 용량이며, 이것에 의해 엔도솜 지질과 높은 수준에서 융합할 수 있다. "GN01"의 경우, N/P (지질 대 핵산, 예를 들어 RNA mol 비)는 바람직하게는 14이고, 총 지질/RNA 질량비는 바람직하게는 40 (m/m)이다.
다른 실시양태에서, 구성요소 A의 하나 이상의 핵산 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 하나 이상의 RNA는 하나 이상의 지질과 복합체를 형성하여 지질 나노입자(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)를 형성하고, 여기서 LNP(또는 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)는 다음을 포함한다:
I 적어도 하나의 양이온성 지질;
Ii 적어도 하나의 중성 지질;
Iii 적어도 하나의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체; 및
Iiii 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 PEG-지질,
여기서 양이온성 지질은 DLin-KC2-DMA (50mol%) 또는 DLin-MC3-DMA (50mol%)이고, 중성 지질은 DSPC (10mol%)이고, PEG 지질은 PEG-DOMG (1.5mol%)이고, 구조적 지질은 콜레스테롤 (38.5mol%)임.
다른 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA), 바람직하게는 하나 이상의 RNA가 하나 이상의 지질과 복합체를 형성함으로써 지질 나노입자(LNP)를 형성하고, 여기서 LNP는 SS15 / Chol / DOPE (또는 DOPC) / DSG-5000을 50/38.5/10/1.5 mol%로 포함한다.
다른 구체예에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 리포솜, 예를 들어, WO2019222424, WO2019226925, WO2019232095, WO2019232097, 또는 WO20192322208에 개시된 리포솜으로 제형화될 수 있으며, 리포솜 또는 지질-기반 담체 분자와 관련된 WO2019222424, WO2019226925, WO2019232095, WO2019232097, 또는 WO2019232208의 개시는 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
다양한 실시양태에서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 하나 이상의 핵산을 적합하게 캡슐화하는 LNP는 평균 직경이 약 50nm 내지 약 200nm, 약 60nm 내지 약 200nm, 약 70nm 내지 약 200nm, 약 80nm 내지 약 200nm, 약 90nm 내지 약 200nm, 약 90nm 내지 약 190nm, 약 90nm 내지 약 180nm, 약 90nm 내지 약 170nm, 약 90nm 내지 약 160nm, 약 90nm 내지 약 150nm, 약 90nm 내지 약 140nm 약 90nm 내지 약 130nm, 약 90nm 내지 약 120nm, 약 90nm 내지 약 100nm, 약 70nm 내지 약 90nm, 약 80nm 내지 약 90nm, 약 70nm 내지 약 80nm, 또는 약 30nm, 35nm, 40nm, 45nm, 50nm, 55nm, 60nm, 65nm, 70nm, 75nm, 80nm, 85nm, 90nm, 95nm, 100nm, 105nm, 110nm, 115nm, 120nm, 125nm, 130nm, 135nm, 140nm, 145nm, 150nm, 160nm, 170nm, 180nm, 190nm, 또는 200nm이며 실질적으로 무독성이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 평균 직경은 당업계에 일반적으로 공지된 동적 광산란에 의해 결정된 z-평균 사이즈로 나타낼 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 지질 나노입자는 각각 약 50nm 내지 약 300nm, 또는 약 60nm 내지 약 250nm, 약 60nm 내지 약 150nm, 또는 약 60nm 내지 약 120nm 범위의 유체역학적(hydrodynamic) 직경을 갖는다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 지질 나노입자는 각각 약 50nm 내지 약 300nm, 또는 약 60nm 내지 약 250nm, 약 60nm 내지 약 150nm, 또는 약 60nm 내지 약 120nm 범위의 유체역학적 직경을 갖는다.
다른 바람직한 구현예에서, 지질 나노입자는 약 60nm 내지 약 120nm의 범위, 바람직하게는 약 120nm 미만, 보다 바람직하게는 약 100nm 미만, 가장 바람직하게는 약 80nm 미만의 Z-평균 크기를 갖는다.
적합하게는, LNP는 약 500nm를 초과하는 입자 크기를 갖는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만의 LNP를 포함한다. 적합하게는, LNP는 약 20nm보다 작은 입자 크기를 갖는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만의 LNP를 포함한다.
나노입자(예: LNP)의 다분산 지수(PDI)는 일반적으로 0.1~0.5 범위이다. 특정 구현예에서, PDI는 0.2 미만이다. 일반적으로 PDI는 동적 광산란에 의해 측정된다.
바람직한 구현예에서, 조성물은 약 0.4 미만, 바람직하게는 약 0.3 미만, 더 바람직하게는 약 0.2 미만, 가장 바람직하게는 약 0.1 미만의 다분산 지수(PDI) 값을 갖는다.
다양한 구현예에서, 핵산, 예를 들어 약학적 조성물의 RNA는 자유 RNA의 특정 비율을 초과하지 않는다.
이러한 맥락에서, "유리 RNA" 또는 "복합체화되지 않은 RNA" 또는 "비캡슐화 RNA"라는 용어는 본원에 정의된 바와 같은 지질 기반 담체에 캡슐화되지 않은 RNA 분자를 포함한다. 조성물의 제형화 동안(예를 들어 RNA를 지질 기반 담체로 캡슐화하는 동안), 유리 RNA는 오염 또는 불순물을 나타낼 수 있다.
당업자는 조성물에서 유리 RNA의 유리 핵산의 양 및/또는 비율을 결정하기 위한 다양한 상이한 방법 중에서 선택할 수 있다. 조성물 중 자유 RNA는 크로마토그래피 방법(예: AEX, SEC)에 의해 또는 조성물 중 자유 RNA에 결합하는 프로브(예: 염료)를 사용하여 측정될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 유리 RNA 또는 캡슐화되지 않은 RNA의 양은 염료 기반 검정을 사용하여 측정될 수 있다. 유리 RNA의 양 및/또는 비율을 측정하는데 사용될 수 있는 적합한 염료는 RiboGreen®, PicoGreen® 염료, OliGreen® 염료, QuantiFluor® RNA 염료, Qubit® RNA 염료, Quant-iT?? RNA 염료, TOTO®-1 dye, YOYO®-1 염료를 포함한다. 이러한 염료는 자유 RNA와 캡슐화된 RNA를 구별하는 데 적합하다. 정의된 양의 자유 RNA 또는 캡슐화된 RNA로 구성된 참조 표준을 사용하고 공급자의 지침에서 권장하는 대로 각 시약(예: RiboGreen® 시약(여기 500nm/방출 525nm))과 혼합할 수 있다. 일반적으로 조성물의 자유 RNA는 제조업체의 지침에 따라 Quant-iT RiboGreen RNA 시약을 사용하여 정량화된다. 본 발명의 맥락에서 자유 RNA의 비율은 일반적으로 RiboGreen 분석을 사용하여 측정된다.
구현예에서, 조성물은 유리 핵산, 예를 들어 약 30% 내지 약 0% 범위의 유리 RNA를 포함한다. 구현예에서, 조성물은 약 20% 유리 RNA(및 약 80% 캡슐화된 RNA), 약 15% 유리 RNA(및 약 85% 캡슐화된 RNA), 약 10% 유리 RNA(및 약 90% 캡슐화된 RNA), 또는 약 5% 유리 RNA (및 약 95% 캡슐화된 RNA)를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 조성물은 약 20% 미만의 유리 RNA, 바람직하게는 약 15% 미만의 유리 RNA, 보다 바람직하게는 약 10% 미만의 유리 RNA, 가장 바람직하게는 약 5% 미만의 유리 RNA를 포함한다.
RNA 핵산을 포함하는 측면에서, "캡슐화된 RNA"라는 용어는 본원에 정의된 바와 같은 지질 기반 담체에 캡슐화된 RNA 분자를 포함한다. 본 발명의 맥락에서 캡슐화된 RNA의 비율은 일반적으로 RiboGreen 분석을 사용하여 측정된다.
따라서, 구현예에서, 조성물 내 RNA의 약 70% 내지 약 100%는 지질 기반 담체에 캡슐화된다. 구현예에서, 조성물은 약 80% 캡슐화된 RNA(및 약 20% 유리 RNA), 약 85% 캡슐화된 RNA(및 약 15% 유리 RNA), 약 90% 캡슐화된 RNA(및 약 10% 유리 RNA), 또는 약 95% 캡슐화된 RNA(및 5% dir 유리 RNA)를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물에 포함된 핵산(예를 들어, RNA)의 80%가 캡슐화되고, 바람직하게는 조성물에 포함된 RNA의 85%가 캡슐화되며, 보다 바람직하게는 조성물에 포함된 RNA의 90%가 캡슐화되며, 가장 바람직하게는 조성물에 포함된 RNA의 95%가 캡슐화된다.
구현예에서, RNA를 캡슐화하는 지질 기반 담체는 적어도 하나의 정제 단계, 바람직하게는 적어도 하나의 TFF 단계 및/또는 적어도 하나의 정화 단계 및/또는 적어도 하나의 여과 단계에 의해 정제되었다. 적합하게는, 정제된 조성물 w은 약 500ppM 미만의 에탄올, 바람직하게는 약 50ppM 미만의 에탄올, 보다 바람직하게는 약 5ppM 미만의 에탄올을 포함한다.
다양한 구현예에서, 첫번째 측면의 약학적 조성물은 약 50mM 내지 약 300mM 농도의 수크로스, 바람직하게는 약 150mM 농도의 수크로스를 포함한다.
하나 이상 또는 복수의 구현예에서, 예를 들어, 본 발명의 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산 종의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개가 조성물에 포함되며, 상기 하나 이상 또는 상기 복수의 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개의 핵산 종은 하나 이상의 지질 내에서 복합체화되어 하나 이상 또는 복수의, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개의 다른 핵산 종을 포함하는 LNP를 형성할 수 있다.
구현예에서, 본 명세서에 기재된 핵산 제형(예를 들어, 폴리머, LNP, 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)은 제형 및/또는 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산의 저장 안정성을 개선하기 위해 동결건조될 수 있다. 구현예에서 본원에 기술된 핵산 제형(예를 들어, 중합체, LNP, 리포좀, 나노리포좀, 리포플렉스)은 제형 및/또는 구성요소 A 및/또는 B의 핵산의 저장 안정성을 개선하기 위해 분무 건조될 수 있다. 동결건조 및/또는 분무 건조를 위한 동결보호제는 트레할로스, 수크로스, 만노스, 덱스트란 및 이눌린으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 동결보호제는 추가의 동결보호제를 임의로 포함하는 수크로스이다. 추가의 바람직한 동결보호제는 선택적으로 추가의 동결보호제를 포함하는 트레할로스이다.
적합하게는, 상기 약학 조성물, 예를 들어, LNP를 포함하는 조성물은 동결건조되어(예를 들어, WO2016165831 또는 WO2011069586에 따라) 본 명세서에 정의된 바와 같은 온도 안정한 건조된 핵산 (예를 들어, RNA 또는 DNA) (분말) 조성물을 생성한다. 조성물, 예를 들어, LNP를 포함하는 조성물은 또한 분무-건조 또는 분무-동결 건조(예를 들어, WO2016184575 또는 WO2016184576에 따름)를 사용하여 건조되어 본 명세서에 정의된 바와 같은 온도 안정한 조성물(분말)을 생성할 수 있다.
따라서, 바람직한 양태에서, 약학 조성물은 건조된 조성물이다.
본 명세서에 사용된 용어 "건조된 조성물"은 온도 안정한 건조된 조성물(분말), 예를 들어, LNP 복합 RNA (상기 정의된 바와 같음)를 포함하는 안정한 건조된 조성물을 얻기 위하여 상기 정의된 바와 같이 동결건조되거나, 분무-건조되거나, 분무-동결 건조된 조성물로서 이해되어야 한다.
구현예에서, 동결건조 또는 분무 건조 조성물은 수분 함량이 약 10% 미만이다.
바람직한 구현예에서, 동결건조 또는 분무 건조 조성물은 약 0.5% 내지 5%의 물 함량을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 동결건조 또는 분무 건조 조성물은 약 5℃에서 저장 후 적어도 2개월 동안, 바람직하게는 적어도 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 동안 안정하다.
추가 실시양태에 따르면, 약학 조성물은 하나 이상의 어쥬번트를 포함할 수 있다.
적합하게는, 어쥬번트는 바람직하게는 조성물의 면역자극 특성을 향상시키기 위해 첨가된다.
본 명세서에 사용된 용어 "어쥬번트"는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 다른 성분의 효과를 변형, 예를 들어, 향상시키거나 조성물의 투여 및 전달을 지원하는 데 적합할 수 있는 약리학적 및/또는 면역학적 성분을 지칭하도록 의도된다. 용어 "어쥬번트"라는 광범위한 물질을 의미한다. 일반적으로 이러한 물질은 항원의 면역원성을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 어쥬번트는 선천 면역계에 의해 인식될 수 있고, 예를 들어 선천 면역 반응(즉, 비특이적 면역 반응)을 유발할 수 있다. "어쥬번트"는 일반적으로 적응 면역 반응을 이끌어내지 않는다. 본 발명의 맥락에서, 어쥬번트는 핵산에 의해 제공되는 항원성 펩티드 또는 단백질의 효과를 향상시킬 수 있다. 이러한 맥락에서, 적어도 하나의 어쥬번트는 당업자에게 공지되어 있고, 본 경우에 적합한, 즉 대상체, 예를 들어, 인간에게서 면역 반응의 유도를 지원하는 임의의 애쥬번트로부터 선택될 수 있다.
따라서, 약학 조성물은 하나 이상의 어쥬번트를 포함할 수 있고, 여기서 하나 이상의 어쥬번트는 WO2016203025에 제공된 임의의 어쥬번트로부터 적합하게 선택될 수 있다. WO2016203025의 제2항 내지 제17항 중 어느 한 항에 개시된 어쥬번트, 바람직하게는 WO2016203025의 제17항에 개시된 어쥬번트가 특히 적합하며, 이에 관한 특정 내용은 인용에 의해 여기에 포함된다. 어쥬번트는 예를 들어, 암호화된 단백질에 대한 충분한 면역 반응에 필요한 (구성요소 A 및/또는 구성요소 B의) 핵산의 양을 감소시키고/시키거나 개체의, 특히 노인의 치료/백신 접종을 위한 조성물/백신의 효능을 개선하기 위하여 제 1측면의 조성물, 또는 제 2측면의 조합 백신 내에 적합하게 사용 및 포함될 수 있다. 코로나바이러스 조성물 또는 백신(특히 제3 측면의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물의 경우)과 관련하여 적합한 어쥬번트는 톨-유사 수용체 9(TLR9) 작용제 어쥬번트, CpG 1018TM일 수 있다.
약학 조성물은 본 명세서에 명시된 성분 외에, 추가 항원(예를 들어, 펩티드 또는 단백질의 형태, 바람직하게는 본 명세서에 규정된 바와 같은 코로나바이러스 및/또는 본 명세서에 규정된 바와 같은 추가적인 바이러스로부터 유래된 펩티드 또는 단백질의 형태) 또는 추가의 항원-암호화 핵산; 추가 면역치료제; 하나 이상의 보조 물질 (사이토카인, 예를 들어 모노카인, 림포카인, 인터루킨 또는 케모카인); 또는 인간 Toll-유사 수용체에 대한 결합 친화성(리간드로서)으로 인해 면역 자극하는 것으로 알려진 임의의 추가 화합물; 및/또는 애주반트 핵산, 바람직하게는 면역자극 RNA (isRNA), 예를 들어, CpG-RNA 등으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 적어도 하나의 추가 성분을 포함할 수 있다.
양태들에서, 약학 조성물은 하나 이상의 RNA 감지 패턴 인식 수용체(RNA sensing pattern recognition receptor)의 하나 이상의 길항제를 포함한다. 이러한 길항제는 바람직하게는 본원에 정의된 지질 기반 담체로 공동-제형화될 수 있다.
적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 적합한 길항제는 PCT 특허 출원 PCT/EP2020/072516에 개시되어 있으며, 전체 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 특히, PCT/EP2020/072516의 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 하나 이상의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 적합한 길항제에 관한 개시내용이 포함된다.
바람직한 실시양태에서, 조성물은 Toll-유사 수용체, 바람직하게는 TLR7 및/또는 TLR8로부터 선택되는 하나 이상의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 하나 이상의 길항제를 포함한다.
양태들에서, 적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 적어도 하나의 길항제는 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 핵산, 펩티드, 단백질, 소분자, 지질, 또는 이들 중 어느 하나의 단편, 변이체 또는 유도체로부터 선택된다.
바람직한 양태에서, 적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 적어도 하나의 길항제는 단일 가닥 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 단일 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드이다.
양태들에서, 적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 길항제는 PCT/EP2020/072516의 서열 번호: 85-212 또는 이들 서열의 어느 것의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 단일 가닥 올리고뉴클레오티드이다.
바람직한 양태들에서, 적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 길항제는 PCT/EP2020/072516의 서열 번호: 85-87, 149-212 또는 이들 서열의 어느 것의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 단일 가닥 올리고뉴클레오티드이다.
본 발명의 맥락에서 적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 특히 바람직한 길항제는 5'-GAG CGmG CCA-3' (PCT/EP2020/072516의 서열 번호: 85), 또는 이의 단편이다.
양태들에서, 본 명세서에 정의된 하나 이상의 핵산, 바람직하게는 본 명세서에 정의된 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 RNA에 대한 본 명세서에 정의된 하나 이상의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 하나 이상의 길항제의 몰비는 적절하게 약 1:1 내지 약 100:1, 또는 약 20:1 내지 약 80:1의 범위이다.
양태들에서, 여기서 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 항원성 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 RNA에 대한 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 RNA 감지 패턴 인식 수용체의 적어도 하나의 길항제의 중량 대 중량비는 적절하게는 약 1:1 내지 약 1:30의 범위, 또는 약 1:2 내지 약 1:10의 범위이다.
구성요소 A 및 구성요소 B의 조합:
다음에서, 약학적 조성물(및 조합 백신)의 구성요소 A(특히 구성요소 A-1, A-2, A-3) 및 구성요소 B(특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)의 적합한 조합에 관한 적합한 특징 및 구현예가 추가로 명시된다.
본원에 약술된 바와 같이, 본 발명은 적어도 하나의 구성요소 A 및 적어도 하나의 구성요소 B를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이며, 여기서 구성요소 A는 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함한다.
적절하게는, 구성요소 A는 아래 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택된다
A-1 적어도 하나의 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/ 또는
A-2 적어도 하나의 SARS-관련 바이러스(예를 들어 SARS-CoV-1)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/ 또는
A-3 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산.
구성요소 A-1은 "구성요소 A-1: SARS-CoV-2" 단락에 정의된 적어도 하나의 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 A-1의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 A-2는 "구성요소 A-2: SARS 관련 바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 SARS 관련 바이러스(예를 들어 SARS-CoV-1)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 A-2의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 SARS 관련 바이러스 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, SARS 관련 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 SARS 관련 바이러스 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 A-3은 "구성요소 A-3: MESR-CoV" 단락에 정의된 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 A-3의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구현예에서, 구성요소 A는 A-1 및 A-2; A-1 및 A-3; A-2 및 A-3; 또는 A-1 및 A-2 및 A-3으로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 A는 구성요소 A-1 (SARS-CoV-2)로부터 선택된다.
본원에 요약된 바와 같이, 본 발명은 적어도 하나의 구성요소 A 및 적어도 하나의 구성요소 B를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이며, 여기서 구성요소 B는 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함한다.
적합하게, 구성요소 B는 다음 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택된다
B-1 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/ 또는
B-2 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/ 또는
B-3 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/ 또는
B-4 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산.
구성요소 B-1은 "구성요소 B-1: 상이한 코로나바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-1의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상이한 코로나바이러스의 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 상이한 코로나바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 상이한 코로나바이러스 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 B-2는 "구성요소 B-2: 인플루엔자 바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 상이한 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-2의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스의 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 B-3은 "구성요소 B-3: 뉴모비리데 바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스(예를 들어 RSV 및/또는 hMPV)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-3의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스(예를 들어 RSV 및/또는 hMPV) 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 뉴모비리데 바이러스(예를 들어 RSV 및/또는 hMPV)를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 뉴모비리데 바이러스(예를 들어 RSV 및/또는 hMPV) 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 B-4는 "구성요소 B-4: 파라믹소비리데 바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스(예를 들어 PIV 및/또는 헤니파바이러스)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-4의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스(예를 들어 PIV 및/또는 헤니파바이러스) 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스(예를 들어 PIV 및/또는 헤니파바이러스)를 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스(예를 들어 PIV 및/또는 헤니파바이러스) 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-1 및 구성요소 B-2로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-1 및 구성요소 B-3으로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3을 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-1 및 구성요소 B-4로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-2 및 구성요소 B-3으로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3을 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-2 및 구성요소 B-4로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-3 및 구성요소 B-4로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-1 및 구성요소 B-2 및 구성요소 B-3으로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3을 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-1 및 구성요소 B-2 및 구성요소 B-4로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-1 및 구성요소 B-3 및 구성요소 B-4로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-1 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물의 구성요소 B는 구성요소 B-2 및 구성요소 B-3 및 구성요소 B-4로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-3 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 B-4 및 본원에 정의된 하나 이상의 구성요소 A-1을 포함한다.
적합하게는, 구성요소 B-3은 다음 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택된다
B-3a 적어도 하나의 RSV 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/또는
B-3b 적어도 하나의 hMPV 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산.
구성요소 B-3a는 "구성요소 B-3a: 호흡기 세포융합 바이러스(RSV)" 단락에 정의된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-3a의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 RSV 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 RSV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 RSV 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 B-3b는 "구성요소 B-3b: 인간 메타뉴모바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-3a의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 hMPV 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 hMPV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 hMPV 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-3은 구성요소 B-3a로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 구성요소 B-3a를 포함한다.
적절하게는, 구성요소 B-4는 다음 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택된다
B-4a 적어도 하나의 PIV 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산, 및/또는
B-4b 적어도 하나의 헤니파바이러스 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 본원에 정의된 핵산.
구성요소 B-4a는 "구성요소 B-4a: 파라인플루엔자바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 hPIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-4a의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 PIV 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 PIV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 PIV 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
구성요소 B-4b는 "구성요소 B-4b: 헤니파바이러스" 단락에 정의된 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는, 바람직하게 구성요소 B-4b의 맥락에서 정의된 바와 같은 핵산 서열, 바람직하게 mRNA 서열을 갖는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 적어도 하나의 헤니파바이러스 항원을 인코딩하는 상기 핵산 서열의 적합한 특징은 "핵산 특징 및 구현예" 단락에 제공된다. 추가로, 적어도 하나의 헤니파바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산이 제형화되거나 및/또는 복합체화되는 것이 바람직하다. 적어도 하나의 헤니파바이러스 항원을 인코딩하는 상기 핵산의 적합한 제형 또는 복합체화는 "제형 및 복합체화" 단락에 제공된다.
바람직한 구현예에서, 구성요소 B-4는 구성요소 B-4a로부터 선택된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 구성요소 B-4a를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 구성요소 A-1 및 본원에 정의된 구성요소 B-3a를 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 구성요소 A-1 및 본원에 정의된 구성요소 B-2를 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 구성요소 A-1 및 본원에 정의된 구성요소 B-2 및 본원에 정의된 구성요소 B-3a를 포함하거나 이로 구성된다.
약학적 조성물 또는 백신의 바람직한 구현예에서, 구성요소 A(특히 구성요소 A-1, A-2, A-3)의 적어도 하나의 핵산 및 구성요소 B(특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)의 적어도 하나의 핵산은 개체에 투여될 때 항원성 펩타이드 또는 단백질로 번역된다.
개체에 투여될 때, 상기 개체에서 약학적 조성물 또는 백신은 구성요소 A(특히 구성요소 A-1, A-2, A-3)에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 체액성 면역 반응, 및 구성요소 B(특히 구성요소, B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 체액성 면역 반응을 유도하는 것이 바람직하다.
개체에 투여될 때, 상기 개체에서 약학적 조성물 또는 백신은 구성요소 A(특히 구성요소 A-1, A-2, A-3)에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 T-세포 반응, 및 구성요소 B(특히 구성요소, B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 T-세포 반응을 유도하는 것이 바람직하다.
개체에 투여될 때, 상기 개체에서 약학적 조성물 또는 백신은 구성요소 A(특히 구성요소 A-1, A-2, A-3)에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 B-세포 기억, 및 구성요소 B(특히 구성요소, B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 B-세포 기억을 유도/달성하는 것이 바람직하다.
조합 백신:
두번째 측면에서, 본 발명은 조합 백신 또는 다중병원체(multipathogen) 백신에 관한 것이다.
구성요소 A 및 구성요소 B를 포함하는 본 발명의 약학적 조성물인 본 발명의 첫번째 측면의 맥락에서 기술된 특정한 특징 및 구현예는 마찬가지로 두번째 측면(조합 백신), 세번째 측면(본 발명의 키트 또는 부품 키트), 또는 예를 들어 의약 용도(제1 및 제2 의약 용도) 및 예를 들어 치료 방법을 포함하는 추가적 측면에도 마찬가지로 적용 가능한 점에 유의해야 한다.
두번째 측면의 바람직한 실시양태에서, 조합 백신은 첫번째 측면의 맥락에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 구성요소 A(특히, 구성요소 A-1, A-2, A-3) 및 첫번째 측면의 맥락에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 구성요소 B(특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)를 포함한다.
"조합 백신" 또는 "다중병원체 백신" 또는 "다가 백신"이라는 용어는 당업자에 의해 인식되고 이해될 것이며, 예를 들어 적어도 2개의 에피토프 또는 항원, 바람직하게 면역원을 제공하는 예방 또는 치료 물질인 것으로 의도된다. 본 발명의 맥락에서 적어도 2개의 항원 또는 항원 기능은 본원에 정의된 바와 같이 구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 적절하게 제공되고, 적어도 2개의 상이한 바이러스 (예를 들어, (구성요소 A의) SARS-CoV-2 및 (구성요소 B의) 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 두번째 측면의 조합 백신은 첫번째 측면의 맥락에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 구성요소 A(특히, 구성요소 A-1, A-2, A-3) 및 첫번째 측면의 맥락에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 구성요소 B(특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본원에 정의된 조합 백신은 첫번째 측면의 맥락에서 명시된 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제 및 선택적으로 적어도 하나의 어쥬번트를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 맥락에서 적합한 어쥬번트는 Wo2016203025의 청구항 17에 기재된 어쥬번트로부터 선택될 수 있다.
조합 백신은 일반적으로 첫번째 측면의 안전하고 유효한 양의 핵산(예: DNA 또는 RNA), 바람직하게는 RNA(구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 제공됨)를 포함한다. 본원에 사용된 "안전하고 효과적인 양"은 본원에 명시된 바와 같은 바이러스 감염과 관련된 질환 또는 장애의 양성 변형을 유의하게 유도하기에 충분한 핵산 구성요소의 양을 의미한다. 동시에 "안전하고 효과적인 양"은 심각한 부작용을 피할 수 있을 만큼 충분히 적다. 본 발명의 핵산, 조성물 또는 백신과 관련하여, "안전하고 효과적인 양"이라는 표현은 바람직하게는 과도하거나 해로운 면역 반응(예를 들어 선천적 면역 반응)이 달성되지 않는 방식으로, 본원에 특정된 바이러스에 대한 적응 면역 시스템을 자극하기에 적합한 핵산, 조성물 또는 백신의 양을 의미한다.
본 명세서에서 정의된 핵산, 조성물 또는 백신의 "안전하고 유효한 양"은 치료할 특정 상태 및 치료할 환자의 연령 및 신체 상태, 상태의 중증도, 치료 기간, 수반되는 치료요법의 특성, 사용된 특정 약학적으로 허용되는 담체, 및 유사한 인자들에 따라 당업자의 지식 및 경험 내에서 달라질 것이다. 또한, 핵산, 조성물 또는 백신의 "안전하고 효과적인 양"은 적용/전달 경로(피내, 근육내, 비강내), 적용 장치(제트 주사, 바늘 주사, 미세바늘 패치, 전기천공 장치) 및 /또는 복합체화/제형(프로타민 복합체화 또는 LNP 캡슐화, DNA 또는 RNA)에 의존한다. 더욱이, 핵산, 조성물 또는 백신의 "안전하고 효과적인 양"은 치료 대상(유아, 임산부, 면역 저하 인간 대상 등)의 신체 상태에 따라 달라질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 약학적으로 허용되는 담체는 바람직하게는 본 발명의 코로나바이러스 백신의 액체 또는 비액체 기반을 포함한다. 본 발명의 백신이 액체 형태로 제공되는 경우, 담체는 물, 일반적으로 발열원이 없는 물; 등장 식염수 또는 완충(수용성) 용액, 예를 들어, 인산염, 구연산염 등 완충 용액일 것이다. 바람직하게는, 링거-락테이트 용액은 WO2006122828에 기술된 바와 같이 본 발명에 따른 백신 또는 조성물을 위한 액체 기반으로서 사용되며, 적합한 완충 용액에 관한 그것의 개시내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 백신 또는 조성물, 특히 LNP를 포함하는 조성물/백신에 대한 액체 기반으로서 사용되는 다른 바람직한 용액은 수크로스 및/또는 트레할로스를 포함한다.
본 명세서에 정의된 약학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제의 선택은 원칙적으로 본 발명에 따른 약학 조성물(들) 또는 백신이 투여되는 방식에 의해 결정된다. 코로나바이러스 백신은 바람직하게는 국소적으로(locally) 투여된다. 일반적으로 국소 투여를 위한 경로는 예를 들어 토피칼(topical) 투여 경로 뿐만 아니라 피내, 경피, 피하 또는 근육내 주사 또는 병변내, 두개내, 폐내, 심장내, 관절내 및 설하 주사를 포함한다. 보다 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물 또는 백신은 피내, 피하 또는 근육내 경로, 바람직하게는 주사에 의해 투여될 수 있으며, 이는 무바늘 및/또는 주사바늘 주사일 수 있다. 본 발명의 맥락에서 근육내 주사가 바람직하다. 따라서, 조성물/백신은 바람직하게는 액체 또는 고체 형태로 제형화된다. 투여될 본 발명에 따른 백신 또는 조성물의 적합한 양은 일상적인 실험, 예를 들어 동물 모델을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 모델에는 토끼, 양, 마우스, 쥐, 개 및 인간이 아닌 영장류 모델이 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 주사용으로 바람직한 단위 투여 형태는 물, 생리 식염수 또는 이들의 혼합물의 멸균 용액을 포함한다. 이러한 용액의 pH는 약 7.4로 조정되어야 한다.
구현예에서, 조합 백신은 동결건조 또는 분무 건조 형태로 제공된다. 이러한 동결건조 또는 분무 건조 백신은 트레할로스 및/또는 수크로스를 포함할 수 있고 개체에게 투여하기 전에 적합한 액체 완충액에서 재구성될 수 있다. 일부 구현예에서, 동결건조 백신은 LNP와 복합체화된 RNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결건조된 조성물은 약 10% 미만의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 동결건조된 조성물은 약 0.1% 내지 10%, 0.1% 내지 7.5%, 또는 0.5% 내지 7.5%의 수분 함량을 가질 수 있고, 바람직하게는 동결건조된 조성물은 약 0.5% 내지 약 5.0%의 수분 함량을 갖는다.
조합 백신은 본 발명에 따라 인간 의료 목적 및 수의학 목적(포유류, 척추동물 또는 조류 종)을 위해 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게는 범유행성 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2, SARS-CoV-1 또는 MERS-CoV에 대해 적응 면역 반응을 유도한다. 바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 바람직하게는 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스 및/또는 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스에 대해 적응 면역 반응을 유도한다. 바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 바람직하게는 적어도 하나의 RSV 및/또는 적어도 하나의 hMPV에 대해 적응 면역 반응을 유도한다. 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스에 대한, 바람직하게는 적어도 하나의 PIV 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스에 대해 적응 면역 반응을 유도한다.
바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게는 범유행성 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2, SARS-CoV-1 또는 MERS-CoV에 대해 중화 항체 역가를 유도한다. 바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 바람직하게는 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스 및/또는 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스에 대해 중화 항체 역가를 유도한다. 바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 바람직하게는 적어도 하나의 RSV 및/또는 적어도 하나의 hMPV에 대해 중화 항체 역가를 유도한다. 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스에 대한, 바람직하게는 적어도 하나의 PIV 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스에 대해 중화 항체 역가를 유도한다.
일부 실시양태에서, 중화 항체 역가는 밀리리터당 적어도 100 중화 단위(NU/mL), 적어도 500NU/mL, 또는 적어도 1000NU/mL이다.
일부 실시양태에서, 검출가능한 수준의 각각의 항원은 조성물 또는 조합 백신의 투여 후 약 1 내지 약 72시간에 대상체에서 생성된다.
일부 실시양태에서, 적어도 100NU/ml, 적어도 500NU/ml, 또는 적어도 1000NU/ml의 중화 항체 역가(코로나바이러스에 대한)가 조성물 또는 조합 백신의 투여 후 약 1일 내지 약 72일에 대상체의 혈청에서 생성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 조합 백신 또는 조성물은 각각의 바이러스(예를 들어, SARS-CoV-2 코로나바이러스 및 적어도 하나의 추가 바이러스)를 효과적으로 중화할 수 있는 기능적 항체를 유도한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 조합 백신 또는 조성물은 점막 IgA 항체를 유도함으로써 점막 IgA 면역성을 유도한다.
특히 바람직한 구현예에서, 조합 백신 또는 조성물은 각각의 바이러스(예를 들어, SARS-CoV-2 코로나바이러스 및 적어도 하나의 추가 바이러스)를 효과적으로 중화할 수 있는 기능적 항체를 유도한다.
추가의 특히 바람직한 구현예에서, 조합 백신 또는 조성물은 각각의 바이러스에 대해(예를 들어, SARS-CoV-2 코로나바이러스 및 적어도 하나의 추가 바이러스에 대해) 광범위하고 기능적인 세포 T-세포 반응을 유도한다.
추가의 특히 바람직한 구현예에서, 조합 백신 또는 조성물은 각각의 바이러스에 대해(예를 들어, SARS-CoV-2 코로나바이러스 및 적어도 하나의 추가 바이러스에 대해) 균형 잡힌 B 세포 및 T 세포 반응을 유도한다.
일부 실시양태에서, 중화 항체 역가는 백신 접종되지 않은 대조군 대상체의 중화 항체 역가에 비해 또는 약독화 생백신, 불활성화 바이러스 백신 또는 단백질 하위 단위 바이러스 백신(protein sub unit viral vaccine)으로 백신 접종된 대상체의 중화 항체 역가에 비해 적어도 50%만큼 바이러스 감염을 더 감소시키기에 충분하다.
일부 실시양태에서, 중화 항체 역가 및/또는 T 세포 면역 반응은 백신접종되지 않은 대조군 대상체의 중화 항체 역가에 비해 무증상 바이러스 감염의 비율을 감소시키기에 충분하다.
일부 실시양태에서, 중화 항체 역가 및/또는 T 세포 면역 반응은 대상체에서 바이러스 잠복기를 예방하기에 충분하다.
일부 실시양태에서, 중화 항체 역가는 대상체의 상피 세포와 바이러스의 융합을 차단하기에 충분하다.
바람직한 실시양태에서, 중화 항체 역가는 조성물 또는 조합 백신의 단일 1ug-100ug 투여 후에 유도된다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 중화 항체 역가는 조성물 또는 조합 백신의 단일 2ug-20ug 투여 후에 유도된다.
일부 실시양태에서, 중화 항체 역가는 조성물 또는 조합 백신의 단일 1ug-100ug 용량 후 20일 이내에, 또는 조성물 또는 조합 백신의 두 번째 1ug-100μg 용량 후 40일 이내에 유도된다.
바람직한 실시양태에서, 치료 유효량의조성물 또는 조합 백신을 대상체에 투여하면 대상체에서 코로나바이러스에 대한 T 세포 면역 반응이 유도된다. 바람직한 실시양태에서, T 세포 면역 반응은 CD4+ T 세포 면역 반응 및/또는 CD8+ T 세포 면역 반응을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 두번째 측면의 조합 백신은 구성요소 A(특히 구성요소 A-1, A-2, A-3)의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공된 모든 인코딩된 항원에 대한 T 세포 반응 및/또는 B세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도하며, 추가적으로 구성요소 B(특히 구성요소 B-1, B-2, B-3, B-3a, B-3b, B-4, B-4a, B-4b)의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공된 모든 인코딩된 항원에 대한 T 세포 반응 및/또는 B 세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도한다.
바람직한 양태에서, 두번째 측면의 조합 백신은 낮은 용량의 조합 백신 투여 시 모든 인코딩된 항원에 대한 T 세포 반응 및/또는 B 세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도한다. 바람직한 구현예에서, 낮은 용량은 약 100㎍ 미만, 바람직하게는 약 50㎍ 미만, 보다 바람직하게는 약 20㎍ 미만, 훨씬 더 바람직하게는 약 10㎍ 미만의 핵산을 포함한다.
바람직한 양태에서, 두번째 측면의 조합 백신은 낮은 용량의 조합 백신 투여 시 모든 인코딩된 항원에 대한 T 세포 반응 및/또는 B 세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도한다. 바람직한 구현예에서, 낮은 용량은 약 100㎍ 미만, 바람직하게는 약 50㎍ 미만, 보다 바람직하게는 약 20㎍ 미만, 훨씬 더 바람직하게는 약 10㎍ 미만의 핵산을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 두번째 측면의 조합 백신은 약 5세 이하의 연령을 갖는 개체에서 항원-특이적 면역 반응을 유도한다. 따라서 핵산 기반 조합 백신은 유아에게 특히 적합하다.
바람직한 구현예에서, 두번째 측면의 조합 백신은 약 60세 이상의 연령을 갖는 개체에서 항원-특이적 면역 반응을 유도한다. 따라서 핵산 기반 조합 백신은 특히 고령자에게 적합하다.
다양한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스에 대한 것이고, 추가로 적어도 하나의 추가적인 코로나바이러스, 및/또는 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 및/또는 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스에 대한 것이다. 따라서 조합백신은 다중 호흡기 바이러스에 대한 조합 백신이다.
바람직한 구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2 및 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 및/또는 RSV 바이러스에 대한 것이다. 따라서, 조합 백신은 코로나바이러스-인플루엔자 백신, 코로나바이러스-RSV 백신 또는 코로나바이러스-인플루엔자-RSV 백신이다.
구현예에서, 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2, 및 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 및/또는 RSV 바이러스에 대한 것이며, 선택적으로 적어도 하나의 PIV 및/또는 적어도 하나의 hMPV에 대한 것이다. 따라서, 조합 백신은 코로나바이러스 - 인플루엔자 - PIV 백신, 코로나바이러스 - RSV - PIV 백신, 코로나바이러스 - 인플루엔자 - RSV - PIV 백신, 코로나바이러스 - 인플루엔자 - hMPV 백신, 코로나바이러스 - RSV - hMPV 백신, 코로나바이러스 - 인플루엔자 - RSV- hMPV 백신, 코로나바이러스 - 인플루엔자 - PIV - hMPV 백신, 코로나바이러스 - RSV - PIV - hMPV 백신, 또는 코로나바이러스 - 인플루엔자 - RSV - PIV - hMPV 백신이다.
키트 또는 부품 키트, 적용, 의료 용도, 치료 방법:
세번째 측면에서, 본 발명은 바이러스 감염을 치료하거나 예방하는데 적합한 키트 또는 부품 키트를 제공한다. 바람직하게는, 상기 키트 또는 부품 키트는 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2 감염 및 추가로 추가 감염을 치료하거나 예방하는 데 적합하다.
특히, 첫번째 측면의 약학적 조성물 및 두번째 측면의 조합 백신에 관한 구현예는 마찬가지로 본 발명의 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트의 적합한 구현예로 읽을 수 있고 이해될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 키트 또는 부품 키트는 첫번째 측면의 적어도 하나의 약학적 조성물, 및/또는 두번째 측면의 적어도 하나의 조합 백신을 포함한다.
또한, 키트 또는 부품 키트는 가용화를 위한 액체 비히클 및/또는 구성요소의 투여 및 용량에 대한 정보를 제공하는 기술 지침을 포함할 수 있다.
상기 키트의 기술 지침은 투여 및 용량 및 환자 그룹에 대한 정보를 포함할 수 있다. 이러한 키트, 바람직하게는 부품 키트는 예를 들어 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2 코로나바이러스에 의해 유발되는 감염 또는 질병, 및 추가 바이러스 감염(예를 들어 인플루엔자 바이러스 및/또는 RSV, 및/또는 PIV 및/또는 hMPV에 의해 유발된)의 치료 또는 예방을 위한 본원에 언급된 임의의 적용 또는 용도, 바람직하게는 첫번째 측면의 약학적 조성물 또는 두번째 측면의 조합 백신의 용도를 위해 적용될 수 있다.
바람직하게는, 약학적 조성물 또는 백신은 키트의 별도 부분으로 제공되며, 여기서 약학적 조성물 또는 조합 백신은 바람직하게는 동결건조되거나 분무 건조되거나 분무 동결 건조된다.
키트는 건조되거나 동결건조된 핵산 조성물 또는 백신을 가용화하기 위한 비히클(예를 들어, 버퍼 용액)의 일부로서 추가로 함유할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본원에 정의된 키트 또는 부품 키트는 링거 락테이트 용액을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본원에 정의된 바와 같은 키트 또는 부품 키트는 조성물/백신의 투여를 위한 다중 용량 용기 및/또는 투여 장치(예를 들어, 피내 주사를 위한 주사기)를 포함한다.
임의의 상기 키트는 본원에 정의된 바와 같은 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
제1 및 제2/추가 의학적 용도:
추가 측면은 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 및 세번째 측면의 키트 또는부품 키트의 제1 의학적 용도에 관한 것이다.
특히, 첫번째 측면의 조성물, 두번째 측면의 백신, 또는 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트에 관한 구현예는 마찬가지로 본 발명의 의학적 용도의 적합한 실시예로 읽어지고 이해될 수 있다.
따라서, 본 발명은 의약으로 사용하기 위한 첫번째 측면에서 정의된 약학적 조성물, 의약으로 사용하기 위한 두번째 측면에서 정의된 조합 백신, 및 의약으로 사용하기 위한 세번째 측면에서 정의된 키트 또는 부품 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 조성물, 백신 또는 키트의 여러 적용 및 용도를 제공한다.
특히, 약학적 조성물, 폴리펩타이드, 백신 또는 키트는 인간 의료 목적 및 또한 수의학 목적을 위해 사용될 수 있으며, 바람직하게는 인간 의료 목적을 위해 사용될 수 있다.
특히, 약학적 조성물, 조합 백신, 또는 키트 또는 부품 키트는 인간 의료 목적을 위한 약제로 사용하기 위한 것이며, 여기서 상기 조성물, 백신 또는 키트 또는 부품 키트는 어린 유아, 신생아, 면역저하된 환자(immunocompromised recipients)뿐만 아니라 임산부 및 모유 수유 여성 및 노인에게 적합할 수 있다. 특히, 약학적 조성물, 조합 백신, 키트 또는 부품 키트는 인간 의료 목적을 위한 약제로 사용하기 위한 것이며, 여기서 상기 조성물, 백신, 키트 또는 부품 키트는 노인 대상에게 특히 적합하다.
상기 약학적 조성물, 조합 백신 또는 키트는 인간 의료 목적을 위한 약제로 사용하기 위한 것이며, 여기서 상기 조성물, 백신 또는 키트 또는 부품 키트는 특히 근육내 주사 또는 피내 주사에 적합하다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 제공된 약학적 조성물, 조합 백신 또는 키트의 두번째 의학적 용도에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 발명은 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방 및 적어도 하나의 추가 바이러스에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트에 관한 것이며, 바람직하게 상기 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택된다.
한 양태에서, 본 발명은 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방 및 적어도 하나의 추가 바이러스에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방, 및 선택적으로 적어도 하나의 PIV 및/또는 hMPV에 의한 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 발명은 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방 및 적어도 하나의 RSV에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방, 및 선택적으로 적어도 하나의 PIV 및/또는 hMPV에 의한 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 발명은 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방 및 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애) 및 적어도 하나의 RSV에 의한 감염(또는 이러한 감염과 관련된 장애)의 치료 또는 예방, 및 선택적으로 적어도 하나의 PIV 및/또는 hMPV에 의한 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트에 관한 것이다.
특히, 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 또는 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트는 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2 코로나바이러스, 및 적어도 하나의 추가 바이러스(예를 들어 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스)에 의해 유발된 감염의 예방 방법(노출 전 예방 또는 노출 후 예방) 및/또는 치료학적(therapeutic) 치료에 사용될 수 있다.
약학적 조성물 또는 조합 백신은 바람직하게는 국소적으로 투여될 수 있다. 특히, 조성물 또는 백신은 피내, 피하, 비강내 또는 근육내 경로에 의해 투여될 수 있다. 구현예에서, 본 발명의 핵산, 조성물, 폴리펩타이드, 백신은 통상적인 니들 주사 또는 니들 없는 제트 주사에 의해 투여될 수 있다. 그 맥락에서 근육내 주사가 바람직하다.
플라스미드 DNA가 사용되고 약학적 조성물 또는 백신에 포함되는 구현예에서, 조성물/백신은 장치, 예를 들어, 전기천공 장치, 바람직하게는 피내 또는 근육내 전달을 위한 전기천공 장치에 의해 투여될 수 있다. 적합하게는, US7245963B2에 기재된 장치, 특히 US7245963B2의 청구항 1 내지 68에 의해 정의된 장치가 사용될 수 있다.
아데노바이러스 DNA가 사용되고 약학적 조성물 또는 조합 백신에 포함되는 구현예에서, 조성물/백신은 비강내 투여에 의해 투여될 수 있다.
구현예에서, 본원에 정의된 조성물 또는 백신에 포함되는 핵산은 약 100ng 내지 약 500ug의 함량, 약 1ug 내지 약 200ug의 함량, 약 1ug 내지 약 100ug의 함량, 약 5ug 내지 약 100ug의 함량, 바람직하게 약 10ug 내지 약 50ug의 함량, 구체적으로 약 1ug, 2ug, 3ug, 4ug, 5ug, 6ug, 7ug, 8ug, 9ug, 10ug, 11ug, 12ug, 13ug, 14ug, 15ug, 20ug, 25ug, 30ug, 35ug, 40ug, 45ug, 50ug, 55ug, 60ug, 65ug, 70ug, 75ug, 80ug, 85ug, 90ug, 95ug 또는 100ug의 함량으로 제공된다.
특히, 함량은 적어도 하나의 구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 제공되는 핵산의 총량에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 핵산을 포함하는 백신, 또는 핵산을 포함하는 조성물은 개체에서 항원 특이적 면역 반응을 일으키기에 효과적인 양으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 유효량은 1㎍ 내지 200㎍, 1㎍ 내지 100㎍, 또는 5㎍ 내지 100㎍의 총 용량이다.
특히, 유효량은 적어도 하나의 구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 제공되는 핵산의 총량에 관한 것이다.
핵산이 지질 기반 담체, 예를 들어, LNP에서, 내에서 제공되는 실시양태에서, 1회 용량에 포함된 본 명세서에 정의된 PEG-지질의 양은 약 50㎍ PEG 지질 미만, 바람직하게는 약 45㎍ PEG 지질 미만, 더욱 바람직하게는 약 40㎍ PEG 지질 미만이다.
1회 용량에 적은 양의 PEG 지질이 있으면 부작용(예: 알레르기)의 위험을 줄일 수 있다.
특히 바람직한 실시양태에서, 1회 용량에 포함된 PEG-지질의 양은 약 3.5㎍ 내지 약 35㎍ PEG 지질의 범위이다.
핵산이 지질 기반 담체, 예를 들어, LNP 내에서 제공되는 실시양태에서, 1회 용량에 포함된 본 명세서에 정의된 양이온성 지질의 양은 약 400㎍ 양이온성 지질 미만, 바람직하게는 약 350㎍ 양이온성 지질 미만, 더욱 바람직하게는 약 300㎍ 양이온성 지질 미만이다.
1회 용량에 낮은 양의 양이온성 지질이 있으면 부작용의 위험(예: 더 적음)을 줄일 수 있다.
특히 바람직한 실시양태에서, 1회 용량에 포함된 양이온성 지질의 양은 약 30㎍ PEG 지질 내지 약 300㎍ PEG 지질 범위이다.
한 실시양태에서, 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2 및 적어도 하나의 추가 바이러스에 대한 개체의 치료 또는 예방을 위한 면역화 프로토콜은 약학적 조성물 또는 조합 백신의 1회 용량을 포함한다.
일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 1 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 2 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 3 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 4 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 5 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 6 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 7 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 8 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 9 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 10 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 11 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 12 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 13 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 14 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 15 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 20 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 25 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 30 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 40 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 50 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 100 ug의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 1회 백신 접종에서 개체에 투여되는 200 ug의 용량이다. 특히, 투여량은 적어도 하나의 구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 제공되는 핵산의 총 투여량에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 코로나바이러스 감염 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 면역화 프로토콜은 약학적 조성물 또는 조합 백신의 일련의 단일 용량 또는 용량을 포함한다. 본원에 사용된 단일 용량은 바람직하게는 면역 반응을 "부스팅"하기 위해 투여되는 초기/제1 용량, 제2 용량 또는 임의의 추가 용량을 각각 지칭한다.
일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 1ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 2ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 3ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 4ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 5ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 6ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 7ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 8ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 9ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 10ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 11ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 12ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 13ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 14ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 15ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 20ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 25ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 30ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 40ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 50ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 100ug의 용량이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 대상체에게 총 2회 투여되는 200ug의 용량이다. 특히, 투여량은 적어도 하나의 구성요소 A 및 구성요소 B에 의해 제공되는 핵산의 총 투여량에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 백신/조성물은 적어도 1년, 바람직하게는 적어도 2년 동안 코로나바이러스 감염 및 하나의 추가적인 바이러스 감염(본 명세서에 정의된 투여 시)에 대해 대상체를 면역화시킨다. 바람직한 양태들에서, 백신/조성물은 코로나바이러스 감염 및 하나의 추가적인 바이러스 감염에 대해 2년 초과, 더욱 바람직하게는 3년 초과, 훨씬 더 바람직하게는 4년 초과, 심지어 보다 바람직하게는 5-10년 이상 동안 대상체를 면역화시킨다.
치료 방법 및 용도, 진단 방법 및 용도:
또 다른 측면에서, 본 발명은 장애를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
특히, 제1 측면의 약학 조성물, 제2 측면의 조합 백신, 제3 측면의 키트 또는 부품 키트, 또는 의학적 용도에 관한 양태들은 마찬가지로 본 명세서에 제공된 바와 같은 치료 방법의 적합한 실시양태로 읽고 이해될 수 있다. 또한, 본 명세서에 제공된 바와 같은 치료 방법과 관련된 특정 특징 및 양태들은 또한 본 발명의 의학적 용도에 적용될 수 있다.
질병, 특히 바이러스 감염을 예방(억제)하거나 치료하는 것은 질병 또는 상태, 예를 들어 바이러스 감염과 같은 질병에 대한 위험이 있는 대상체에서 질병 또는 상태의 완전한 발달을 억제하는 것에 관한 것이다. "치료"는 발병하기 시작한 질병 또는 병리학적 상태의 징후 또는 증상을 개선하는 치료적 개입을 의미한다. 질병 또는 병리학적 상태와 관련하여 용어 "개선(ameliorating)"은 치료의 관찰 가능한 유익한 효과를 의미한다. 질병을 억제하는 것은 바이러스 감염의 위험을 예방하거나 줄이는 것과 같이 질병의 위험을 예방하거나 줄이는 것을 포함할 수 있다. 유익한 효과는 예를 들어 감수성 대상체에서 질병의 임상 증상의 지연된 발병, 질병의 일부 또는 모든 임상 증상의 중증도 감소, 질병의 더 느린 진행, 바이러스 부하(load)의 감소, 대상체의 전반적인 건강 또는 웰빙의 개선, 또는 특정 질병에 특정한 다른 파라미터에 의해 증명될 수 있다. "예방적" 치료는 병리 발생 위험을 감소시킬 목적으로, 질병의 징후를 나타내지 않거나 초기 징후만 나타내는 대상체에게 투여되는 치료이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 적어도 하나의 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 또는 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트를 이를 필요로 하는 개체에 적용 또는 투여하는 단계를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 상기 질환은 코로나바이러스에 의한 감염, 또는 이러한 감염에 관한 질환, 특히 SARS-CoV-2에 의한 감염, 또는 이러한 감염에 관한 질환(예를 들어 COVID-19), 및 추가 바이러스 감염 또는 이들 감염 중 어느 것에 관한 질환이며, 선택적으로 상기 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 상기 정의된 바와 같은 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 적어도 첫번째 측면의 약학적 조성물, 두번째 측면의 조합 백신, 또는 세번째 측면의 키트 또는 부품 키트를 필요한 개체에게 적용하거나 투여하는 것을 포함하며, 상기 필요한 개체는 바람직하게 포유동물 개체이다.
특히 바람직한 구현예에서, 필요한 개체는 포유동물 개체, 바람직하게는 인간 대상, 예를 들어 신생아, 임신, 면역력 저하 및/또는 노인이다.
특히 바람직한 구현예에서, 인간 대상은 노인 인간 대상이다.
특정 실시양태에서, 질병의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 적어도 하나의 제1 측면의 약학 조성물, 제2 측면의 조합 백신, 또는 제3 측면의 키트 또는 부품 키트을 적용하거나 투여함으로써 질병을 치료하거나 예방하는 방법은 대상체에서 질병 부담을 감소시키는 방법으로서 추가로 정의된다. 예를 들어, 방법은 바람직하게는 COVID-19 질병의 하나 이상의 증상의 중증도 및/또는 지속기간을 감소시킨다. 일부 측면에서, 방법은 대상이 입원, 중환자실 입원, 보충 산소 치료 및/또는 인공 호흡기 치료를 필요로 할 확률을 감소시킨다. 추가 측면에서, 방법은 대상체가 열, 호흡 곤란; 후각 상실 및/또는 미각 상실을 겪을 확률을 감소시킨다. 바람직한 측면에서, 방법은 대상체가 중증 또는 중등도의 COVID-19 질병에 걸릴 확률을 감소시킨다. 특정 측면에서, 방법의 양태들은 대상체가 양태들의 조성물을 투여받은 후 약 2주 내지 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 1년 또는 2년 사이에 대상체에서 중증 또는 중등도의 COVID-19 질병을 예방한다. 바람직한 측면에서, 방법의 양태들은 증상이 있는 COVID-19 질병을 예방한다. 추가 측면에서, 양태의 방법은 대상체가 양태들의 조성물을 투여받은 후 약 2주 내지 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 1년 또는 2년 사이에 대상체에서 SARS CoV-2 핵산의 검출가능한 수준을 예방한다. 추가 측면에서, 실시양태의 방법은 대상체에서 코로나바이러스 감염(예를 들어, SARS CoV-2 감염)에 대한 보호 면역을 제공하기 위한 방법으로 정의된다. 또 다른 측면에서, 양태의 방법은 치료 대상의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병을 예방한다. 또 다른 측면에서, 실시양태의 방법은 제2 또는 후속 면역원성 조성물 (예를 들어, 부스터 투여) 투여 후 약 2주 내지 약 1년에 치료 대상의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병을 예방한다. 또 다른 측면에서, 양태의 방법은 제2 또는 후속 조성물 투여 후 약 2주 내지 약 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 1.5년, 2년 또는 3년 동안 치료 대상의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병을 예방한다.
본 명세서에서 사용된 중증 COVID-19 질병은 다음 중 하나 이상을 경험하는 대상으로 정의된다:
ㆍ 휴식 시 심각한 전신 질환을 나타내는 임상 징후 (호흡수 ≥ 분당 30회, 심박수 ≥ 125/분, 해수면에서 실내 공기에서 SpO2 ≤ 93% 또는 PaO2/FIO2 < 300mm Hg (고도에 따라 조정))
ㆍ 호흡 부전 (고유량 산소, 비침습적 환기, 기계적 환기 또는 ECMO가 필요한 것으로 정의됨)
ㆍ 쇼크의 증거 (SBP < 90mmHg, DBP < 60mmHg, 또는 승압제가 필요한 경우)
ㆍ 심각한 신장, 간 또는 신경학적 기능 장애
ㆍ ICU 입원
ㆍ 사망
본 명세서에서 사용된 중등도 COVID-19 질병은 다음 중 하나 이상을 경험하는 대상으로 정의된다:
ㆍ 숨가쁨 또는 호흡 곤란
ㆍ 호흡수 ≥ 분당 20회 호흡
ㆍ SpO2가 비정상적이지만 여전히 해수면의 실내 공기에서 > 93% (고도에 따라 조정됨)
ㆍ 하기도 질환의 임상적 또는 방사선학적 증거
ㆍ 심부 정맥 혈전증(DVT)의 방사선학적 증거
본 명세서에서 사용된 경증 COVID-19 질병은 다음을 모두 경험하는 대상으로 정의된다:
ㆍ 증상이 있고, 및
ㆍ 숨가쁨이나 호흡 곤란이 없고, 및
ㆍ 저산소혈증 없고 (고도에 따라 조정), 및
ㆍ 중등도 또는 중증 COVID-19 질병의 사례 정의를 충족하지 않음
추가 측면에서, 실시양태의 방법은 (i) 실시양태의 조성물 (예를 들어, 백신 조성물)을 수득하는 단계, 여기서 조성물은 동결건조된 것인 단계; (ii) 동결건조된 조성물을 약학적으로 허용되는 액체 담체에 용해시켜 액체 조성물을 생성하는 단계; 및 (iii) 유효량의 액체 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 동결건조된 조성물은 약 10% 미만의 물 함량을 포함한다. 예를 들어, 동결건조된 조성물은 바람직하게는 약 0.1% 내지 약 10%, 0.5% 내지 7.5% 또는 0.5% 내지 5.0%의 물을 포함할 수 있다.
특히, 이러한 치료 방법은 다음 단계를 포함할 수 있다:
a) 제1 측면의 하나 이상의 약학 조성물, 제2 측면의 하나 이상의 조합 백신, 또는 제3 측면의 하나 이상의 키트 또는 부품 키트를 제공하는 단계;
b) 상기 조성물, 백신, 또는 키트 또는 부품 키트를 대상체에게 제1 용량으로 적용 또는 투여하는 단계
c) 선택적으로, 상기 조성물, 백신, 또는 키트 또는 부품 키트를 대상체에게 제2 용량 또는 추가 용량으로, 바람직하게는 첫 번째 접종 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개월 후 적용하거나 투여하는 단계.
본 명세서에 사용된 제1 용량은 각각 초기/제1 용량, 제2 용량 또는 임의의 추가 용량을 나타내며, 이는 바람직하게는 면역 반응을 "부스트"하기 위해 투여된다.
특정 측면에서, 백신/조성물은 1회, 2회 3회, 4회 또는 그 이상 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, 백신/조성물은 적어도 1회 및 2회(예를 들어, 프라임 및 부스트) 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, 2차 투여는 제1 투여 후 적어도 10일, 14일, 21일, 28일, 35일, 42일, 49일 또는 56일이다. 일부 측면에서, 제1 투여와 제2 투여 사이의 시간은 약 7일 내지 약 56일이고; 약 14일 내지 약 56일; 약 21일 내지 약 56일; 또는 약 28일 내지 약 56일이다. 추가 측면에서, 백신/조성물은 대상체에게 3회 이상 투여된다. 특정 측면에서, 백신/조성물의 각각의 투여 사이에는 적어도 10일, 14일, 21일, 28일, 35일, 42일, 49일 또는 56일이 있다.
일부 측면에서, 구현예에 따른 치료를 위한 개체는 이전에 SARS CoV-2에 감염되었거나 이전에 적어도 제1 SARS CoV-2 백신 조성물로 치료받았다. 일부 측면에서, 개체는 제1 SARS CoV-2 백신 조성물의 1회, 2회, 3회 또는 그 이상의 용량으로 치료받았다. 일부 측면에서, 개체를 치료하기 위해 사용되는 구현예의 조성물은 개체를 치료하기 위해 이전에 사용된 조성물과는 상이한 유형의 백신 조성물이다. 일부 측면에서, 개체는 이전에 BNT162 또는 mRNA-1273과 같은 mRNA 백신으로 치료받았다. 추가 측면에서, 개체는 스파이크 단백질 기반 백신, 예를 들어 NVX-CoV2373 또는 COVAX와 같은 단백질 서브유닛 백신으로 이전에 치료를 받았다. 추가 측면에서, 개체는 이전에 바이러스 벡터 백신, 예컨대 아데노바이러스 벡터 기반 백신, 예를 들어 ADZ1222 또는 Ad26.COV-2.S로 치료받았다. 추가 측면에서, 이전에 백신 조성물로 치료받은 개체는 SARS CoV-2 S 단백질-결합 항체 또는 SARS CoV-2 N 단백질-결합 항체와 같은 검출가능한 SARS CoV-2 결합 항체를 갖는다. 추가 측면에서, 구현예에 따른 치료 개체는 적어도 약 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 1.5년, 2년 또는 3년 전에 제1 SARS CoV-2 백신 조성물로 치료받았다. 다른 추가 측면에서, 구현예에 따른 치료 개체는 약 3개월 내지 2년 전 또는 약 6개월 내지 2년 전에 제1 SARS CoV-2 백신 조성물로 치료받았다. 일부 측면에서, 구현예의 추가 백신 조성물로 치료된 개체는 치료된 개체의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병으로부터 보호된다. 예를 들어, 치료된 개체는 추가 조성물의 투여 후 약 2주 내지 약 1년 동안 치료된 대상체의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병으로부터 보호될 수 있다. 다른 추가 측면에서, 구현예의 추가 백신 조성물을 투여하는 것은 상기 투여 이후 약 2주 내지 약 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 1.5년, 2년 또는 3년 이후 치료된 개체의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병을 예방한다.
특정 측면에서, 실시양태의 방법은 대상체에서 항체 또는 CD8+ T-세포 반응을 자극하는 방법으로 추가로 정의된다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에서 중화 항체 반응을 자극하는 방법으로 정의된다. 추가 측면에서, 방법은 대상체에서 보호 면역 반응을 자극하는 방법으로 정의된다. 또 다른 측면에서, 방법은 대상체에서 TH2 유도 면역 반응을 자극하는 방법으로 정의된다.
추가 측면에서, 실시양태의 백신/조성물의 투여는 대상체에서 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대해 약 10 내지 약 500개의 코로나바이러스 스파이크 단백질-결합 항체를 생성하는 항체 반응을 자극한다. 예를 들어, 투여는 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대해 약 200개 이하의 스파이크 단백질 결합 항체를 생성하는 항체 반응을 자극할 수 있다. 추가 측면에서, 투여는 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대해 약 10 내지 약 300; 약 20 내지 약 300; 약 20 내지 약 200; 약 30 내지 약 100; 또는 약 30개 내지 약 80개 코로나바이러스 스파이크 단백질-결합 항체를 생성하는 항체 반응을 자극한다. 또 다른 측면에서, 실시양태의 조성물의 투여는 평균 회복기 환자 혈청(코로나바이러스 감염에서 회복된 피험자로부터)에서 발견되는 코로나바이러스 중화 항체에 대한 스파이크 단백질 결합 항체의 비율이 20%, 15%, 10% 또는 5%의 비율인 코로나바이러스 중화 항체에 대한 스파이크 단백질-결합 항체의 비율을 포함하는 대상체에서 항체 반응을 자극한다.
또 다른 측면에서, 실시양태의 조성물의 투여는 대상체의 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대해 약 1 내지 약 500개의 코로나바이러스 스파이크 단백질 수용체 결합 도메인(RBD)-결합 항체를 생성하는 항체 반응을 자극한다. 추가 측면에서, 투여는 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대해 약 50개 이하의 스파이크 단백질 RBD-결합 항체를 생성하는 항체 반응을 자극한다. 또 다른 측면에서, 투여는 모든 코로나바이러스 중화 항체에 대해 약 1 내지 약 200; 약 2 내지 약 100; 약 3 내지 약 200; 약 5 내지 약 100; 약 5 내지 약 50; 또는 약 5 내지 약 20개의 스파이크 단백질 RBD-결합 항체을 생성하는 항체 반응을 자극한다. 또 다른 측면에서, 실시양태의 조성물의 투여는 평균 회복기 환자 혈청에서 발견되는 (코로나바이러스 감염에서 회복된 대상체로부터) 코로나바이러스 중화 항체에 대한 스파이크 단백질 RBD 결합 항체의 비율이 20%, 15%, 10% 또는 5%인 스파이크 단백질 RBD-결합 항체 대 코로나바이러스 중화 항체의 비율을 포함하는 대상체에서 항체 반응을 자극한다.
또 다른 측면에서, 실시양태의 백신/조성물의 투여는 대상체에서 IL-4, IL-13, TNF 및/또는 IL-1β의 증가를 본질적으로 유도하지 않는다. 추가 측면에서, 실시양태의 백신/조성물의 투여는 대상체에서 혈청 IL-4, IL-13, TNF 및/또는 IL-1β의 증가를 본질적으로 유도하지 않는다. 일부 측면에서, 실시양태의 백신/조성물의 투여는 대상체의 주사 부위(예를 들어, 근육내 주사 부위)에서 IL-4, IL-13, TNF 및/또는 IL-1β의 증가를 본질적으로 유도하지 않는다.
또 다른 측면에서, 실시양태의 방법은 질병이 있는 인간 대상체에게 양태들의 백신/조성물을 투여하는 것을 포함한다. 특정 측면에서, 대상체는 심혈관 질환, 신장 질환, 폐 질환 또는 자가면역 질환이 있다. 일부 측면에서, 실시양태의 백신/조성물은 항응고 요법을 받고 있는 대상체에게 투여된다.
추가 측면에 따르면, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 조성물 또는 백신의 제조 방법을 제공한다:
a) 선택적으로, WO2019092153A1 (청구항 1 내지 70)에 따른 구성요소 A 및 B의 각각의 서열의 AU 카운트의 적응, 이에 따른 HPLC에서 핵산 구성요소의 체류 시간을 변형하여, c) 단계에서 핵산 조성물의 공동-정제를 허용하는 단계;
b) 캡핑된 mRNA, 바람직하게 표 17에 제공된 핵산 서열을 갖는 것을 얻기 위해 캡 유사체의 존재 하에 DNA 주형을 사용하여 (구성요소 A 및 B의) RNA 인비트로 전사 단계, 선택적으로 여기서 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 상이한 RNA는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의 상이한 DNA 주형을 사용하여 RNA 인비트로 전사 단계에서 동시에 생산되는 단계
c) RP-HPLC, 및/또는 TFF, 및/또는 올리고(dT) 정제 및/또는 AEX, 바람직하게는 RP-HPLC 및 TFF를 사용하여 단계 a)의 획득된 캡핑된 RNA를 정제하는 단계;
d) 단계 b)의 정제된 캡핑된 (구성요소 A 및 B의) RNA를 포함하는 제1 액체 조성물을 제공하는 단계;
e) 본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 양이온성 지질, 본 명세서에에 정의된 바와 같은 중성 지질, 본 명세서에 정의된 바와 같은 스테로이드 또는 스테로이드 유사체, 및 본 명세서에 정의된 바와 같은 PEG-지질을 포함하는 제2 액체 조성물을 제공하는 단계;
f) 캡핑된 RNA를 포함하는 LNP의 형성을 허용하기 위해 제1 액체 조성물 및 제2 액체 조성물을 하나 이상의 혼합 수단에 도입하는 단계;
g) 캡핑된 RNA를 포함하는 수득된 LNP를 정제하는 단계;
h) 선택적으로, 캡핑된 RNA를 포함하는 정제된 LNP를 동결건조하는 단계.
바람직하게는, 단계 e)의 혼합 수단은 T-피스 커넥터 또는 미세유체 혼합 장치이다. 바람직하게는, 정제 단계 f)는 침전 단계, 투석 단계, 여과 단계, TFF 단계로부터 선택되는 하나 이상의 단계를 포함한다. 선택적으로, 효소적 폴리아데닐화 단계는 단계 a) 또는 b) 후에 수행될 수 있다. 선택적으로, 추가 정제 단계는 예를 들어 잔류 DNA, 완충액, 작은 RNA 부산물 등을 제거한다. 선택적으로, RNA 시험관내 전사는 cap 유사체 없이 수행되고, 효소적 캡핑 단계는 RNA 시험관 전사 후에 수행된다. 임의로, RNA 시험관내 전사는 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드의 존재 하에 수행된다.
양태들에서, 단계 a, 바람직하게는 단계 a-c, 더욱 바람직하게는 위에서 요약된 모든 단계(a-g)는 RNA 시험관내 전사를 위한 자동화 장치에서 수행된다. 이러한 장치는 또한 조성물 또는 백신을 생산하는 데 사용될 수 있다. 바람직하게는, WO2020002598에 기재된 장치, 특히 WO2020002598 (및 도 1-18)의 청구항 1 내지 59 및/또는 68 내지 76에 기재된 장치가 적합하게 사용될 수 있다.
추가 측면에서, 본 발명은 조성물 또는 백신을 동결건조 또는 분무 건조하여 안정화된 조성물 또는 백신을 생성하는 것을 포함하는 약학적 조성물 또는 조합 백신의 안정화 방법을 제공한다. 바람직하게는, 안정화된 조성물 또는 백신은 약 10% 미만의 수분 함량, 바람직하게는 약 0.5% 내지 5.0%의 수분 함량을 갖는다. 따라서, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 안정화 방법에 의해 생산된 안정화되고 동결건조된 조성물 또는 백신을 제공한다.
목록 및 표의 간단한 설명
목록 A: 예시적인 SARS-CoV-2 코로나바이러스 분리물 (EPI/GISAID)
목록 B: 상이한 SARS-CoV-2 분리물의 GenBank 접근 번호
목록 1: 예시적인 적합한 SARS-CoV-2 항원 설계
표 1: 바람직한 SARS-CoV-2 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열)
표 3A: SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 3B: SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 4: SARS-CoV-1 및 SARS 관련 구조(아미노산 서열, 핵산 코딩 서열)
표 5: SARS-관련 또는 SARS-CoV-1 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 6: 바람직한 MERS-CoV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열)
표 7: MERS-CoV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 8: 바람직한 인플루엔자 바이러스 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열)
표 9: 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 10: 바람직한 인플루엔자 바이러스 RNA 서열
표 11: 바람직한 RSV 구조(아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열)
표 12: RSV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 13: 바람직한 hMPV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열)
표 14: hMPV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 15: 바람직한 hPIV 구조 (아미노산 서열 및 핵산 코딩 서열)
표 16: hPIV 항원을 인코딩하는 핵산, 바람직하게 mRNA 구조
표 17: 실시예에 사용된 mRNA 구조의 개요
표 18: 핵산 기반 조합 백신 및 백신 접종 체계의 개요
표 A: 실시예의 지질 기반 담체 조성물
표 19: 핵산 기반 조합 백신 및 백신 접종 체계의 개요
표 20: 핵산 기반 조합 백신 및 백신 접종 체계의 개요
본원에서 제공되는 약학적 조성물은 적어도 하나의 코로나바이러스 감염 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기에 적합하며, 따라서 조합 백신에 포함될 수 있다.
도 1 구성요소 A-1을 포함하는 조합 백신은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 첫 번째 백신 접종 후 21일째 ELISA(도1A) 및 두 번째 백신 접종 후 42일째 VNT-분석(도 1B)에 의해 보여진다. 추가 세부사항은 실시예 3 및 표 19에 제공된다.
도 2 구성요소 B-3a를 포함하는 조합 백신은 RSV F 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 첫 번째 백신접종 후 21일(도 2A) 및 두 번째 백신접종 후 42일(도 2B)에 ELISA에 의해 보여진다. 추가 세부사항은 실시예 3 및 표 19에 제공된다.
도 3 구성요소 B-2를 포함하는 조합 백신은 인플루엔자 HA(A1 California/07/09)에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 첫 번째 백신 접종 후 21일(도 3A) 및 두 번째 백신 접종 후 42일(도 3B)에 ELISA에 의해 보여진다. 추가 세부사항은 실시예 3 및 표 19에 제공된다.
도 4 구성요소 A-1을 포함하는 조합 백신은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 인느 첫 번째 백신 접종 후 21일에 ELISA(도 4A) 및 두 번째 백신 접종 후 42일에 VNT-분석(도 4B)에 의해 보여진다. 추가 세부 사항은 실시예 4 및 표 20에 제공된다.
도 5 구성요소 B-3a를 포함하는 조합 백신은 RSV F 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 첫 번째 백신접종 후 21일(도 5A) 및 두 번째 백신접종 후 42일(도 5B)에 ELISA에 의해 보여진다. 추가 세부 사항은 실시예 4 및 표 20에 제공된다.
도 6 구성요소 B-3b를 포함하는 조합 백신은 hMPV F 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 hMPV-A1(도 6A) 및 hMPV-B1(도 6B)에 대한 2차 백신접종 후 42일째에 FACS 기반 면역분석에 의해 보여진다. 추가 세부 사항은 실시예 4 및 표 20에 제공된다.
도 7 구성요소 B-4a를 포함하는 조합 백신은 PIV3 F 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 두 번째 백신 접종 후 42일째에 FACS 기반 면역분석법에 의해 보여진다. 추가 세부 사항은 실시예 4 및 표 20에 제공된다.
도 8 구성요소 B-2를 포함하는 조합 백신은 인플루엔자 HA(A1 California/07/09)에 대한 체액성 면역 반응을 유도하며, 이는 두 번째 백신 접종 후 42일째에 ELISA에 의해 나타난다. 추가 세부 사항은 실시예 4 및 표 20에 제공된다.
약어
FLUAV: 인플루엔자 A 바이러스
FLUBV: 인플루엔자 B 바이러스
RSV: 인간 호흡기 세포융합 바이러스
HRSV-A, RSV-A: 인간 호흡기 세포융합 바이러스 A
HPIV, hPIV: 인간 레스피로바이러스 (인간 파라인플루엔자바이러스)
HPIV3: 인간 레스피로바이러스 3
HMPV, hMPV: 인간 메타뉴모바이러스
MERS-CoV: 중동호흡기증후군 관련 코로나바이러스
SARS-CoV: 중증급성호흡기증후군 관련 코로나바이러스
HCoV: 인간 코로나바이러스
Bat SARS-like CoV: 박쥐 SARS 유사 코로나바이러스
BatCoV: Rousettus 박쥐 코로나바이러스
PDCoV: 돼지 델타코로나바이러스
PEDV: 돼지 유행성 설사 바이러스
MHV: 뮤린 간염 바이러스
실시예
하기에서, 본 발명의 다양한 실시양태 및 측면을 예시하는 특정 실시예가 제시된다. 그러나, 본 발명은 여기에 설명된 특정 실시양태들에 의해 범위가 제한되어서는 안 된다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 보다 명확하게 이해하고 실시할 수 있도록 하기의 제조예 및 실시예를 제시한다. 그러나, 본 발명은 단지 본 발명의 단일 측면의 예시로서 의도된 예시된 실시양태에 의해 범위가 제한되지 않으며, 기능적으로 동등한 방법은 본 발명의 범위 내에 있다. 실제로, 본 명세서에 기술된 것 이외에 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명, 및 하기 실시예로부터 통상의 기술자에게 용이하게 명백해질 것이다. 이러한 모든 변형은 첨부된 청구항의 범위에 속한다.
실시예 1: DNA 및 RNA 컨스트럭트, 조성물 및 백신의 제조
본 실시예는 본 발명의 RNA를 수득하는 방법뿐만 아니라 본 발명의 조성물 또는 백신을 생성하는 방법을 제공한다.
1.1. DNA 및 RNA 컨스트럭트의 제조:
다양한 바이러스 항원 디자인을 코딩하는 DNA 서열을 준비하고 후속 RNA 시험관 내 전사 반응에 사용했다. 상기 DNA 서열은 안정화 및 발현 최적화를 위해 G/C 최적화 또는 변형된 코딩 서열(예를 들어, "cds opt1")을 도입함으로써 DNA 서열을 암호화하는 참조 또는 야생형을 변형함으로써 제조되었다. 서열은 안정화 3'-UTR 서열 및 5'-UTR 서열을 포함하도록 pUC 유래 DNA 벡터 내로 도입되었으며, 추가로 아데노신의 스트레치(예: A64 또는 A100), 및 임의로 히스톤-스템-루프(hSL) 구조를 포함하고, 및 선택적으로 30개의 시토신의 스트레치(예: C30)를 포함한다 (표 17 참조). 수득된 플라스미드 DNA 컨스트럭트는 당업계에 공지된 통상적인 프로토콜을 사용하여 박테리아에서 형질전환 및 증식시켰다. 결국, 플라스미드 DNA 컨스트럭트를 추출, 정제하고 후속 RNA 시험관 내 전사에 사용했다.
1.2. 플라스미드 DNA 주형으로부터의 RNA 시험관내 전사:
섹션 1.1에 따라 제조된 DNA 플라스미드를 제한 효소를 사용하여 효소적으로 선형화하고, 적당한 완충제 조건하 뉴클레오티드 혼합물(ATP/GTP/CTP/UTP) 및 캡 유사체(예: m7GpppG, m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG, 또는 m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG)의 존재 하에서 T7 RNA 중합효소를 사용한 DNA 의존성 RNA 시험관내 전사에 사용되었다. 얻어진 RNA 컨스트럭트를 RP-HPLC (PureMessenger®, CureVac AG, T
Figure pct00016
bingen, Germany; WO2008077592)를 사용하여 정제하고, 시험관내 및 생체내 실험에 사용하였다. 생성된 RNA 서열/컨스트럭트는 표 17에 나타내었으며, 그 안에 코딩된 항원 단백질 및 각각의 UTR 요소가 표시되어 있다.
표 17: 실시예에 사용된 mRNA 구조의 개요
RNA ID 명칭 서열번호: 단백질 서열번호: CDS (gc) 서열번호: RNA
R1 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 헤마글루티닌 (HA) 14178 14230 14438
R2 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 헤마글루티닌 (HA) 14181 14233 14441
R3 FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 헤마글루티닌 (HA) 14182 14234 14442
R4 FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 헤마글루티닌 (HA) 14183 14235 14443
R5 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 뉴라미니다제 (NA) 14210 14262 14470
R6 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 뉴라미니다제 (NA) 14213 14265 14473
R7 FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 뉴라미니다제 (NA) 14214 14266 14474
R8 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1_mut5) 14550 14560 14600
R9 HPIV3/Homo sapiens/PER/FLA4571/2008 융합 당단백질 (F0) 14612 14614 14622
R10 HPIV3/BJ/001/08 헤마글루티닌-뉴라미니다제 (HN) 14613 14615 14623
R11 HMPV/TN/92-4 융합 당단백질 (F0) 14626 14650 14746
R12 MERS-CoV/MERS-CoV-Jeddah-human-1 스파이크 단백질 (1-1353)(V1060P_L1061P) 14795 14811 14875
R13 SARS-CoV/Tor2 spike protein (1-1255)(K968P_V969P) 14910 14955 15135
R14 SARS-CoV-2/Wuhan/WIV05/2019 스파이크 단백질 (1-1273)(K986P_V987P); R9515 10 137 163
R15 SARS-CoV-2/Wuhan/WIV05/2019 스파이크 단백질 (1-1273)(K986P_V987P); R9709 10 137 149
R16 SARS-CoV-2/Wuhan/WIV05/2019 스파이크 단백질 (1-1273)(K986P_V987P_L18F_D80A_D215G_L242del_A243del_L244del_R246I_K417N_E484K_N501Y_D614G_A701V); R10384 22961 23091 23531
R17 SARS-CoV-2/Wuhan/WIV05/2019 스파이크 단백질 (1-1273)(K986P_V987P_H69del_V70del_Y144del_N501Y_A570D_D614G_P681H_T716I_S982A_D1118H); R10357 22959 23089 23529
R18 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 헤마글루티닌 (HA); R8849 14178 14230 26949
R19 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 헤마글루티닌 (HA); R8853 14181 26946 26950
R20 FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 헤마글루티닌 (HA); R8852 14182 14234 26951
R21 FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013 헤마글루티닌 (HA); R8854 14183 14235 26952
R22 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009 뉴라미니다제 (NA); R8858 14210 14262 26953
R23 FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014 뉴라미니다제 (NA); R8856 14213 14265 26954
R24 FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008 뉴라미니다제 (NA); R8860 14214 14266 26955
R25 HRSV-A/A2 융합 당단백질 (F-del_DSCav1_mut5); R8898 14550 14560 14580
R26 HPIV3/USA/629-D01959/2007 융합 당단백질 (변이체); R10331 26957 26959 26962
R27 HMPV/00-1 융합 당단백질 (변이체); R10326 26971 26977 26984
R28 HMPV/NL/1/99 융합 당단백질 (변이체); R10329 26968 26974 26981
1.4. LNP 제형화된 mRNA 조성물의 제조:
LNP는 양이온성 지질, 구조 지질, PEG-지질 및 콜레스테롤을 사용하여 제조되었다. 지질 용액(에탄올 중)을 아래에서 설명되는 T-piece formulation을 사용하여 RNA 용액(수성 완충액)과 혼합하였다. 얻은 LNP를 투석을 통해 탄수화물 완충액에서 재완충하고, 선택적으로 초원심분리 튜브를 사용하여 목표 농도로 상향 농축하였다. LNP 제제화 mRNA는 시험관내 또는 생체내 실험에서 사용하기 전에 -80 ℃에서 저장되었다.
간단하게, 지질 나노입자는 PCT 공개 WO 2015199952, WO 2017004143 및 WO 2017075531에 기술되어 있는 일반적인 절차에 따라 제조되고 시험되었으며, 이들 문헌들의 전체 내용은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 이온화 가능한 아미노 지질(양이온성 지질), 인지질, 콜레스테롤 및 PEG화 지질(지질 표 A 참조)을 사용하여 지질 나노입자(LNP)로 제형화된 mRNA를 제조하였다. LNP는 다음과 같이 준비되었다. 화학식 III-3에 따른 양이온성 지질(ALC-0315), DSPC, 콜레스테롤 및 화학식 IVa에 따른 PEG-지질 (ALC-0159)을 약 47.5:10:40.8:1.7의 몰비로 에탄올에 용해시켰다. 화합물 III-3(ALC-0315)을 포함하는 지질 나노입자(LNP)는 0.03-0.04 w/w의 mRNA 대 총 지질의 비율의 비율로 제조하였다. 간단히 말해서, mRNA는 10 내지 50mM 시트레이트 완충액, pH 4에서 0.05 내지 0.2mg/mL이 되도록 희석되었다. 주사기 펌프를 사용하여 총 유속이 15ml/min 이상으로, 에탄올성 지질 용액을 mRNA 수용액과 약 1:5 내지 1:3의 비율(vol/vol)로 혼합하였다. 그런 다음 에탄올을 제거하고 외부 완충액을 투석에 의해 PBS로 교체했다. 마지막으로 지질 나노입자를 0.2μm 공극 멸균 필터를 통해 여과하였다. Malvern Zetasizer Nano(Malvern, UK)를 사용한 준탄성 광 산란(quasi-elastic light scattering)에 의해 결정된 지질 나노입자 입자 직경 크기는 60-90nm였다.
표 A: 실시예의 지질계 담체 조성
Figure pct00017
1.5. 조합 mRNA 백신의 제조:
조합 mRNA 백신은 별도의 방식 또는 공동 제형화된 방식으로 LNP와 함께 제형화되었다. 개별적으로 혼합되거나 제형화된 mRNA 백신의 경우, 실시예 1.4에 기술된 바와 같이 각각의 mRNA 성분을 제조하고 개별적으로 LNP 제형화한 후, 상이한 LNP-제형화된 구성요소를 혼합하였다. 동시 제형화된 mRNA 백신의 경우, 실시예 1.4에 기술된 바와 같이 상이한 mRNA 성분을 먼저 함께 혼합한 후 LNP에서 공동 제형화하였다.
실시예 2: 조합 백신 기반의 핵산으로 마우스의 백신 접종
LNP 제형화된 mRNA 백신의 제조:
조합 백신용 mRNA 구축물은 실시예 1(RNA 인비트로 전사)에 기술된 바와 같이 제조된다. HPLC 정제된 mRNA는 인비보 백신접종 실험에 사용하기 전에 실시예 1.4 및 실시예 1.5에 따라 LNP와 함께 제형화된다.
면역화(Immunization):
암컷 BALB/c 마우스(생후 6 내지 8주)에 mRNA 조합 백신(각각의 RNA 식별자는 표 17 참조)을 표 18에 나타낸 용량으로 근육내(i.m.) 주사했다. 음성 대조군으로서, 한 그룹의 마우스에 버퍼로 백신 접종했다. 모든 동물은 0일 및 21일에 백신 접종되었다. 항체 역가의 결정을 위해 혈액 샘플을 21일(프라임(prime) 후) 및 42일(부스트 후)에 수집한다. 백신 접종 실험 후 조합 백신의 효율성이 측정되었다.
표 18: 핵산 기반의 조합 백신 및 백신 접종 체계의 개요
구성요소 A (mRNA) 구성요소 B (mRNA) 제형 용량
1 조합 백신:SARS-CoV-2 - Influenza R14 R1-R7 LNP
공동 제형화		 5μg
2 조합 백신:SARS-CoV-2 - Influenza - RSV R14 R1-R7
R8		 LNP
공동 제형화		 5μg
3 조합 백신:SARS-CoV-2 - RSV R14 R8 LNP
공동 제형화		 5μg
4 조합 백신:SARS-CoV-2 - MERS - SARS-CoV-1 R14 R12
R13		 LNP
공동 제형화		 5μg
5 조합 백신:SARS-CoV-2 - PIV - hMPV R14 R9-10,
R11		 LNP
공동 제형화		 5μg
6 버퍼
ELISA를 사용한 IgG1 및 IgG2 항체 역가 측정:
ELISA는 코팅을 위해 재조합 항원 단백질을 사용하여 수행된다. 코팅된 플레이트는 각각의 혈청 희석액을 사용하여 인큐베이션되고 코팅된 단백질에 대한 특이적 항체의 결합은 기질로 Amplex와 함께 스트렙타비딘-HRP(horse radish peroxidase)가 뒤따르는 비오틴화된 이소타입 특이적 항-마우스 항체를 사용하여 검출된다. 항체(IgG1, IgG2a)의 종점 역가는 백신 접종 후 21일 및 42일에 ELISA에 의해 측정된다.
스파이크 단백질 특이적 면역 반응의 검출 (SARS-CoV-1, SARS-CoV-2, MERS-CoV):
Hela 세포는 리포펙타민을 사용하여 스파이크 단백질을 코딩하는 2μg의 mRNA로 형질감염된다. 세포를 형질감염 20시간 후에 수확하고 96웰 플레이트에 웰당 1×105로 시딩한다. 세포를 백신 접종된 마우스의 혈청 샘플(1:50로 희석)과 함께 인큐베이션한 다음 FITC-접합된 항-마우스 IgG 항체와 함께 인큐베이션한다. DIVA 소프트웨어를 사용한 BD FACS Canto II에서 세포를 획득하고 FlowJo로 분석했다.
세포내 사이토카인 염색:
백신접종된 마우스로부터의 비장세포는 당업계에 공지된 표준 프로토콜에 따라 단리된다. 간단히 말해서, 분리된 비장은 세포 스트레이너(strainer)를 통해 갈고 PBS/1%FBS로 세척한 다음 적혈구 용해를 수행한다. PBS/1%FBS로 광범위한 세척 단계 후, 비장세포를 96웰 플레이트에 접종한다(웰당 2 × 106세포). 세포는 단백질 수송 억제제의 존재 하에서 37 ℃에서 6시간 동안 2.5μg/ml의 항-CD28 항체(BD Biosciences)의 존재 하에 단백질 특이적 펩티드 에피토프(각 펩티드의 5μg/ml)의 혼합물로 자극된다. 자극 후, 세포는 제조업체의 지침에 따라 Cytofix/Cytoperm 시약(BD Biosciences)을 사용하여 세포내 사이토카인에 대해 세척되고 염색된다. 항체 Thy1.2-FITC (1:200), CD8-APC-H7 (1:100), TNF-PE (1:100), IFNγ-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences)가 염색에 사용되고, 1:100으로 희석된 Fcγ-블록과 함께 인큐베이션된다. Aqua Dye(Invitrogen)는 살아있는 세포와 죽은 세포를 구별하는데 사용된다. 세포는 Canto II 유세포 분석기(Beckton Dickinson)를 사용하여 획득된다. FlowJo 소프트웨어 패키지(Tree Star, Inc.)를 사용하여 유세포 분석 데이터를 분석한다.
바이러스 중화 역가의 결정:
CPE(cytopathic effect, 세포변성 효과) 또는 유사형 입자 기반 분석을 통해 검출된 중화 역가(VNT)의 결정을 위해 혈청을 수집한다.
HA 특이적 면역 반응의 결정
HA 특이적 면역 반응(B 세포 면역 반응)의 검출은 특정 인플루엔자 바이러스에 대한 IgG2a 항체를 검출함으로써 수행된다. 따라서, 백신 접종 3주 후 백신 접종 마우스로부터 혈액 샘플을 채취하여 혈청을 준비한다. MaxiSorb 플레이트(Nalgene Nunc International)는 특정 재조합 HA 단백질로 코팅된다. 0.05% Tween-20 및 1% BSA를 함유하는 1xPBS로 차단한 후 플레이트를 희석된 마우스 혈청(표시된 바와 같이)과 함께 배양했다. 이어서 비오틴 결합 2차 항체(항-마우스-IgG2a, Pharmingen)를 첨가했다. 세척 후, 플레이트를 호스래디쉬 퍼옥시다제-스트렙타비딘과 함께 배양한 다음, Amplex UltraRed Reagent(Invitrogen)를 첨가한 후 형광 생성물을 정량화했다.
바이러스 중화 RSV 역가의 결정:
RSV 바이러스 중화 역가(VNT)는 플라크 감소 중화 시험(PRNT)을 사용하여 혈청 샘플에서 측정되었다. 희석된 혈청 샘플을 실온에서 1시간 동안 RSV/A2와 함께 배양하고 24웰 플레이트의 융합성(confluent) HEp-2 단층에 이중으로 접종했다. 5% CO2 인큐베이터에서 37°C로 1시간 배양한 후, 웰을 0.75% 메틸셀룰로오스 배지로 오버레이하였다. 배양 4일 후 오버레이를 제거하고 세포를 고정하고 염색했다. 상응하는 상호 중화 항체 역가는 바이러스 대조군의 60% 감소 종점에서 결정된다.
실시예 3 : 핵산 기반 조합 백신(SARS-CoV-2, RSV 및/또는 인플루엔자에 대한 mRNA 백신)으로 마우스의 백신 접종
본 실시예는 조합 mRNA 백신이 조합 백신의 모든 구성요소(구성요소 A 및/또는 구성요소 B로부터 선택되는 적어도 하나의 항원 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 mRNA)에 대해 강력하고 항원-특이적인 면역 반응을 유도함을 보여준다. .
LNP 제형화된 mRNA 백신 조성물/조합의 제조:
조합 백신용 mRNA 구조는 실시예 1(RNA 인비트로 전사)에 기재된 바와 같이 제조하였다. HPLC 정제된 mRNA는 인비보 백신접종 실험에 사용하기 전에 실시예 1.4 및/또는 실시예 1.5에 따라 LNP와 함께 제형화되었다.
면역화:
암컷 BALB/c 마우스(생후 6 내지 8주)에 mRNA 조합 백신(각각의 RNA 식별자는 표 17 참조)을 표 19에 나타낸 용량으로 근육내(i.m.) 주사하였다. 음성 대조군으로 마우스의 한 그룹은 버퍼(0.9% NaCl)로 백신 접종되었다. 모든 동물은 25μl의 주사 부피를 받았고 0일과 21일에 백신을 접종했다. 항체 역가를 측정하기 위해 혈액 샘플을 21일(첫 번째 백신 접종 후)과 42일(두 번째 백신 접종 후)에 수집했다.
표 19 : 핵산 기반 복합백신 및 백신 접종 체계 개요
그룹 백신 조성물:
 구성요소 A-1 (mRNA) 구성요소 B-2 (mRNA) 구성요소 B-3a (mRNA) 제형 총 용량
1 SARS-CoV-2 mRNA 백신 R15 - - 별개로 제형화 0.5μg
2 RSV mRNA 백신 - R25 별개로 제형화 0.5μg
3 조합 백신:SARS-CoV-2 mRNA 백신 + RSV mRNA 백신 R15 - R25 별개로 제형화 1μg (0.5μg each)
4 7가 인플루엔자 mRNA 백신 - R18-R24 - 공동 제형화 3.5μg (0.5μg each)
5 조합 백신:SARS-CoV-2 mRNA 백신 + 7가 인플루엔자 mRNA 백신 R15 R18-R24 - A-1 및 B-2 별개로 제형화 4μg (0.5μg each)
6 조합 백신:SARS-CoV-2 mRNA 백신 + RSV mRNA 백신 + 7가 인플루엔자 mRNA 백신 R15 R18-R24 R25 별개로 제형화 4.5μg (0.5μg each)
7 대조군 0.9% NaCl - - - - -
ELISA를 사용한 SARS-CoV-2 및 RSV에 대한 총 IgG 항체 역가 결정:
SRBD 또는 RSV-F 단백질 특이적 전체 IgG 결합 항체는 Amplex ELISA를 사용하여 정량화되었다. 샘플을 1:5로 사전 희석하고 연속 1:10 희석을 테스트했다(8 희석). SARS-CoV-2(2019-nCoV) Spike RBD-His는 코팅(1μg/ml) 또는 2.5μg/mL rec. RSV-F GP A2(SinoBiological, Cat: 11049-V08B)에 사용되었다. 각 인큐베이션 단계 후에 플레이트를 철저히 세척했다. 코팅은 37°C에서 4-5시간 동안 수행되었다. 이후 4°C에서 밤새 차단했다. 혈청 샘플을 별도의 코팅되지 않은 플레이트의 차단 완충액에 1:5로 미리 희석했다. 적정된 혈청 샘플을 사전 코팅된 플레이트에 첨가하고 RT에서 2-4시간 동안 배양했다. 검출 항체를 각 웰에 첨가하고(1:300) 실온에서 1-1.5시간 동안 배양했다. 멸균 차단 버퍼 (NaN3 없는 1% BSA)에서 HRP-스트렙타비딘(1:1000)과의 배양을 30분 동안 수행했다. Amplex® UltraRed 시약(DMSO에 용해됨; 1:200, 기질 버퍼에 30% 과산화수소 H2O2 1:2000)을 각 웰에 첨가했다. 형광은 최소 45분 및 최대 24시간 후에 측정되었다. 항체의 종점 역가는 SARS-CoV-2에 대한 프라임 백신 접종 후 21일째, RSV에 대해 21일 및 42일째에 ELISA로 측정했다.
SARS-CoV-2에 대한 바이러스 중화 역가의 결정:
CPE(세포변성 효과)를 통해 검출된 SARS-CoV-2 중화 역가(VNT)의 결정을 위해 혈청을 수집했다. 1:10의 시작 희석액에 이어 1:2의 연속 희석으로 이중으로 테스트된 열-비활성화 혈청(30분 동안 56 ℃)의 연속 희석물을 야생형 SARS-CoV-2(strain 2019-nCov/Italy-INMI1)와 함께 1시간 동안 37 ℃에서 배양했다. 모든 플레이트에는 세포와 배지만 포함하는 세포 제어 전용 열(8개 웰)과 세포와 바이러스만 포함하는 바이러스 제어 전용 열이 포함되었다. 감염성 바이러스는 Vero E6 세포(ATCC, Cat.1586)의 합류층(confluent layer)과 함께 100μl의 바이러스-혈청 혼합물의 배양 후 정량화되었으며, 이어서 37 ℃에서 3일 동안 배양되고, CPE 형성에 대한 현미경적 점수가 매겨졌다. 작동하는 바이러스 용액의 TCID50의 정확한 범위를 확인하기 위해 각 실행에 대해 역적정(back titration)을 수행했다. VN 역가는 Reed & Muench에 의해 기술된 방법에 따라 계산되었다. 중화가 관찰되지 않은 경우(MNt <10), 임의의 값 5가 보고되었다. VisMederi srl(Siena, Italy)에서 분석을 수행했다. 바이러스 중화 역가는 42일에 채취한 혈청으로 측정하였다.
인플루엔자 HA 특이적 면역 반응의 측정(헤마글루티닌 억제 분석을 통해)
기능적 항-HA 항체 역가를 혈구응집 억제(HI) 검정으로 분석하였다. 혈청을 수용체 파괴 효소(RDEII, Denka Seiken)와 함께 밤새 37°C에서 불활성화(56°C, 60분)하여 배양했다. 전처리된 혈청의 희석물을 비활성화된 A형 인플루엔자 H1N1 California/07/09(NIBSC Material 09/174)의 4 HAU와 함께 45분 동안 배양하고 50μl 0.5% 적혈구 용액을 첨가했다. 플레이트를 45-60분 동안 배양하고 HI 역가를 응집의 완전한 억제를 유도하는 혈청의 가장 높은 희석에 의해 결정하였다.
결과:
도 1A에 나타낸 바와 같이, 전장 S 안정화 단백질(S_stab)을 인코딩하는 mRNA로 백신 접종 또는 전장 S 안정화 단백질(S_stab)을 인코딩하는 mRNA를 포함하는 조합 백신은 단일 백신접종(21일) 후에 스파이크 특이적 결합 항체의 높은 역가를 유도하였다(도 1A: 총 IgG). 도 1B는 2차 백신접종 후(42일) 기능성 항체의 유도를 보여준다(도 1B: 바이러스 중화 항체 VNTs). 구성요소 A-1과 구성요소 B-2(7가 인플루엔자 mRNA 백신(그룹 5)) 및/또는 B-3a(RSV mRNA 백신(그룹 3), (그룹 6))의 조합은 부정적인 방식으로 체액성 항체 반응의 유도에 영향을 미치지 않는다. 데이터는 전장 S 안정화 단백질을 인코딩하는 mRNA를 포함하는 각각의 조합 백신의 관찰된 면역 반응이 1가 백신 그룹(그룹 1)에 대해 관찰된 것과 비슷하다는 것을 보여준다.
RSV F 단백질(구성요소 B-3a)에 대해 유도된 항체 반응은 도 2A(1차 백신 접종 후 21일) 및 B(2차 백신 접종 후 42일)에 제시되어 있다. RSV F 단백질을 인코딩하는 mRNA를 포함하는 모든 조합 백신은 높은 역가의 IgG 항체를 유도하였다(그룹 3 및 그룹 6). 데이터는 RSV F 단백질 단백질을 인코딩하는 mRNA를 포함하는 각각의 조합 백신의 관찰된 면역 반응이 1가 백신(그룹 2)에 대해 관찰된 것과 비슷하다는 것을 보여준다.
도 3A 및 B에 나타낸 바와 같이, 헤마글루티닌 억제 분석에 의해 측정된 인플루엔자 바이러스에 대한 기능적 항체의 유도는 7가 인플루엔자 백신 구성요소 B-2를 포함하는 백신 조합에 의해 유도되었다. HI 역가는 1회 백신 접종 후 21일(도 3A) 및 2회 백신접종 후 42일(도 3B)에 결정되었다. 데이터는 인플루엔자 항원을 인코딩하는 mRNA를 포함하는 조합 백신(그룹 5 및 그룹 6)의 관찰된 면역 반응이 7가 인플루엔자 백신(그룹 4)에 대해 관찰된 것과 비슷하다는 것을 보여준다.
본 실시예에서 입증된 바와 같이, 시험된 조합 백신은 상이한 mRNA 구성요소를 숙주 세포로 전달하여 mRNA 구성요소를 항원 단백질 또는 항원 펩타이드로 번역하는데 적합하며, 이는 모든 인코딩된 단백질에 대해 항원 특이적 면역 반응을 유도한다.
상기 내용을 종합하면, 상기 데이터는 SARS CoV-2, 인플루엔자 바이러스 및 RSV 항원의 조합이 가능하고, 조합 백신이 인코딩된 각각의 인코딩된 항원에 대해 강력한 면역반응을 유도함을 보여주는 것을 설명한다. 그 외에도 시험된 조합 백신의 모든 구성요소는 단일 구성요소가 면역우세하지 않거나 조합 백신의 구성요소가 면역 간섭을 나타내지 않음을 나타내는 효율적인 면역 반응을 유도한다.
실시예 4: 핵산 기반 조합 백신으로 마우스의 백신 접종(SARS-CoV-2, RSV, 인플루엔자, hMPV, 및/또는 PIV3에 대한 mRNA 백신)
본 실시예는 조합 mRNA 백신이 조합 백신의 모든 구성요소(구성요소 A 및/또는 구성요소 B로부터 선택되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 mRNA)에 대해 강력하고 항원-특이적인 면역 반응을 유도함을 보여준다. 조합 백신은 LNP 제형 후에 공동 제형화되거나 별도로 혼합되는 경우 독립적으로 모든 인코딩된 단백질에 대해 높은 항체 반응을 유도했다. 본 실시예는 또한 5개의 상이한 mRNA 백신 구성요소의 조합을 보여준다(구성요소 A-1: SARS-CoV-2, 구성요소 B-3a: RSV, 구성요소 B-2: 인플루엔자, 7가; 구성요소 B-3b: hMPV(2가) , 및 구성요소 B-4a: PIV). 이 조합 백신에는 12가지 항원(12가)이 포함되어 있다.
LNP 제형화된 mRNA 백신의 제조:
조합 백신용 mRNA 구조는 실시예 1(RNA 인비트로 전사)에 기재된 바와 같이 제조하였다. HPLC 정제된 mRNA는 인비보 백신접종 실험에 사용하기 전에 실시예 1.4 및/또는 실시예 1.5에 따라 LNP로 제형화되었다.
공동 제형화된 12가 조합 백신(그룹 7, 표 20 참조)은 몰 농도로 혼합하여 준비되었으므로 동일한 수의 RNA 분자가 혼합되었다(등몰). 별도로 제형화된 12가 조합 백신(그룹 6, 표 20 참조)은 RNA 총량을 사용하였으며 몰농도에 따른 조정은 하지 않았다(동일 질량).
면역화(Immunization):
암컷 BALB/c 마우스(생후 6 내지 8주)에 mRNA 조합 백신(각각의 RNA 식별자는 표 17 참조)을 표 20에 나타낸 용량으로 근육내(i.m.) 주사하였다. 음성 대조군으로는 마우스의 한 그룹을 버퍼(0.9% NaCl)로 백신 접종하였다. 모든 동물은 25μl를 받았고 0일과 21일에 백신 접종했다. 항체 역가를 측정하기 위해 혈액 샘플을 7일과 21일(첫 번째 백신 접종 후) 및 42일(두 번째 백신 접종 후)에 수집했다.
표 20 : 핵산 기반 조합 백신 및 백신 접종 체계 개요
백신 조성물: 구성요소A (mRNA) 구성요소B-2 (mRNA) 구성요소B-3a (mRNA) 구성요소B-3b (mRNA) 구성요소B-4a (mRNA) LNP 제형 총 용량
1 SARS-CoV-2 mRNA 백신 R15 - - - - 별도로 제형화 0.5μg
2 Bivalent hMPV mRNA 백신 - - - R27+R28 - 공동 제형화 1μg
3 조합 백신:SARS-CoV-2 mRNA 백신 + 2가 hMPV mRNA 백신 R15 - - R27+R28 - 별도로 제형화 1.5μg (0.5μg each)
4 PIV3 mRNA 백신 - - - - R26 0.5μg
5 조합 백산:SARS-CoV-2 mRNA 백신 PIV3 mRNA 백신 R15 - - - R26 별도로 제형화 1μg (0.5μg each)
6 조합 백신:12-가 칵테일 mRNA 백신 R15 R18-R24 R25 R27+R28 R26 별도로 제형화; 동일 질량. 6μg (0.5μg each)
7 조합 백신:12-가 칵테일 mRNA 백신L R15 R18-R24 R25 R27+R28 R26 공동 제형화;
동일 몰		 6μg
8 대조군 0.9% NaCl - - - - - - -
SARS-CoV-2, 인플루엔자 및 RSV 특이적 면역 반응(VNT, 총 IgG 및 HI 역가)을 실시예 3에 설명된 대로 분석했다.
PIV-3 또는 hMPV-A1 및 hMPV-B1 특이적 면역 반응 측정을 위한 FACS 기반 ELISA
HeLa 세포는 Lipofectamine 2000를 사용하여 R27의 T75 플라스크 당 17μg mRNA (R10326 (hMPV-A1 푸린(furin) 절단을 갖는 안정화된 융합 단백질 - F(19-539)PFs_GCv3.1)), R28 (R10329 (hMPV-B1 푸린 절단을 갖는 안정화된 융합단백질 - F(19-539)_PFs_GCv3.1)), R26 (R10331 (PIV-3 안정화된 융합 단백질 - F(19-539)DS2-Cav_GCv3.1))로 형질감염되었다. 형질감염된 세포를 리포펙션 18-24시간 후에 수확하고 96 V-바닥 플레이트에 2x105개 세포/웰로 시딩하였다. 42일째에 수집된 마우스 혈청 샘플을 1차 항체로 사용한 다음 항-마우스 FITC-접합된 2차 항체로 사용하였다.
결과
도 4A에 나타낸 바와 같이, 전장 S 안정화 단백질(S_stab)을 인코딩하는 mRNA 단독 또는 전장 S 안정화 단백질(S_stab)을 코딩하는 mRNA를 포함하는 조합 백신으로 백신 접종은 단일 백신접종 후(21일째) 스파이크 특이적 결합 항체의 높은 역가를 유도하였다 (도 4A: 총 IgG, ELISA). 도 4B는 2차 백신 접종(d42) 후 기능성 항체의 유도를 나타낸다(도 4B: 바이러스 중화 항체 VNTs). 구성요소 B-3b(hMPV, 2가 mRNA 백신(A+D)) 또는 B-4a(PIV-3 mRNA 백신(A+E))와의 조합은 체액성 항체 반응의 유도에 부정적인 방식으로 영향을 미치지 않는다. 데이터는 전장 S 안정화 단백질을 인코딩하는 mRNA를 포함하는 각각의 조합 백신의 관찰된 면역 반응이 1가 백신 그룹(그룹 1)에 대해 관찰된 것과 비슷하다는 것을 보여준다.
12가 백신 조합(그룹 6 및 그룹 7)조차도 높은 SARS-CoV-2 특이 면역 반응(결합 항체 및 VNT)을 유도했다. LNP 공동 제형화 백신 조합(그룹 7)의 반응은 별도로 LNP 제형화 및 혼합 mRNA 조합(그룹 6)에 비해 약간 더 높았다.
ELISA를 통해 측정된 RSV-F 특이적 면역 반응은 도 5A(21일) 및 B(42일)에 제시되어 있다. 12가 조합 백신(그룹 6 및 그룹 7) 모두 높은 역가의 총 IgG를 유도했다. 두 그룹에 대한 42일(도 5B)의 역가는 훨씬 더 높을 수 있다(분석 조건으로 인해 화살표로 표시됨). 구성요소 B-3b(hMPV 항원을 인코딩하는 mRNA 포함)를 포함하는 조합 백신에 대한 항체 역가는 또한 약간의 IgG 역가(그룹 2 및 4)를 상승시켰다. 이는 관련 바이러스 변종의 F 단백질 간의 교차 면역 때문일 수 있다. RSV와 hMPV는 둘 다 뉴모비리데 바이러스과에 속한다.
도 6A 및 B에 나타낸 바와 같이, 구성요소 B3-b(2가 hMPV 항원(그룹 2, 3, 6 및 7)을 인코딩하는 mRNA 포함)을 포함하는 모든 백신 조합은 hMPV A1 및 B1 균주의 F 단백질에 대해 강한 체액성 면역 반응을 유도하였다(도 6A: hMPV A1, 6B: hMPV B1, 42일째). 도 7은 최초 백신 접종 후 42일째에 PIV3 F 단백질에 대해 유발된 면역 반응을 설명한다. 구성요소 B-4a를 포함하는 모든 백신 조합(PIV3 F 단백질(그룹 4, 5, 6 및 7)을 인코딩하는 mRNA 포함)은 PIV3 F 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도했다.
도 8에 나타낸 바와 같이 헤마글루티닌 억제 분석에 의해 측정된 인플루엔자 바이러스에 대한 기능적 항체의 유도는 7가 인플루엔자 백신 구성요소 B-2(그룹 6 및 그룹 7)를 포함하는 백신 조합에 의해 유도되었다. HI 역가는 2회 백신 접종 후 42일째에 결정되었다.
본 실시예에서 입증된 바와 같이, 시험된 조합 백신은 상이한 mRNA 구성요소를 숙주 세포로 전달하여 mRNA 구성요소를 항원 단백질 또는 항원 펩타이드로 번역하는데 적합하며, 이는 모든 인코딩된 단백질에 대해 항원 특이적 면역 반응을 유도한다.
위의 내용을 종합하면, 상기 데이터는 SARS CoV-2, 인플루엔자, hMPV, PIV, 및 RSV 항원의 조합이 가능하며, 조합 백신은 인코딩된 각각의 항원에 대해 강력한 면역 반응을 유도함을 설명한다. 그 외에도 시험된 조합 백신의 모든 구성요소는 단일 구성요소가 면역우세하지 않거나 조합 백신의 구성요소가 면역 간섭을 나타내지 않음을 나타내는 효율적인 면역 반응을 유도한다.
실험예 5: 핵산 기반 조합 백신의 임상 개발
핵산 기반 조합 백신의 안전성과 효능을 입증하기 위해 임상 시험(1상)을 시작한다. 임상 시험에서, 인간 지원자의 코호트는 적어도 2회 동안(예를 들어, 0일 및 28일에 2㎍, 6㎍ 또는 18㎍ 핵산 기반 조합 백신(본 발명에 따른 LNP로 제형화됨)) 근육내 주사한다. 백신의 안전성 프로파일을 평가하기 위해, 투여 후 피험자를 모니터링한다(활력 징후, 백신 접종 부위 내약성 평가, 혈액학적 분석). 면역화(immunization) 효능은 백신 접종된 피험자의 혈청에서 바이러스 중화 역가(VNT)를 측정하여 분석한다. 혈액 샘플은 베이스라인으로 0일과 백신 접종 완료 후 수집된다. 혈청은 바이러스 중화 항체에 대해 분석된다.

Claims (170)

  1. - 적어도 하나의 코로나바이러스로부터 선택되거나 또는 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 구성요소 A, 및
    - 적어도 하나의 추가 바이러스로부터 선택되거나 또는 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 구성요소 B
    를 포함하거나 이로 구성된 약학적 조성물
  2. 제1항에 있어서, 상기 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데(Pneumoviridae) 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데(Paramyxoviridae) 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스는 적어도 하나의 호흡기 세포융합 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 메타뉴모바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스는 적어도 하나의 파라인플루엔자 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스(Henipavirus)로부터 선택되는 약학적 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 적어도 하나의 범유행성 코로나바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 적어도 하나의 알파코로나바이러스, 적어도 하나의 베타코로나바이러스, 적어도 하나의 감마코로나바이러스, 및/또는 적어도 하나의 델타코로나바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 베타코로나바이러스는 적어도 하나의 사르베코바이러스(Sarbecovirus), 적어도 하나의 메르베코바이러스(Merbecovirus), 적어도 하나의 엠베코바이러스(Embecovirus), 적어도 하나의 노베코바이러스(Nobecovirus), 및/또는 적어도 하나의 하이베코바이러스(Hibecovirus)로부터 선택되는 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 적어도 하나의 사르베코바이러스는 SARS-CoV-1 바이러스 및/또는 SARS-CoV-2 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 적어도 하나의 메르베코바이러스는 MERS-CoV 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코로나바이러스는 SARS-CoV-2 바이러스인 약학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S, S1, S2, 또는 S1 및 S2)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)로부터 선택되거나 유래된 약학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음 아미노산 치환: K986P 및 V987P를 포함하는 약학적 조성물.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 공동 충전 돌연변이, 바람직하게 T887W; A1020W; T887W 및 A1020W; 또는 P1069F을 포함하는 목록으로부터 선택된 공동 충전 돌연변이를 포함하는 약학적 조성물.
  15. 제12항 내지 제14항에 있어서, 상기 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 돌연변이된 양성자화(protonation) 부위, 바람직하게 H1048Q 및 H1064N; H1083N 및 H1101N; 또는 H1048Q 및 H1064N 및 H1083N 및 H1101N을 포함하는 목록으로부터 선택된 돌연변이된 양성자화 부위를 포함하는 약학적 조성물.
  16. 제12항 내지 제15항에 있어서, 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 적어도 하나의 인공 분자내 이황화 결합, 바람직하게 I712C 및 T1077C; I714C 및 Y1110C; P715C 및 P1069C; G889C 및 L1034C; I909C 및 Y1047C; Q965C 및 S1003C; F970C 및 G999C; A972C 및 R995C; A890C 및 V1040C; T874C 및 S1055C; N914C 및 S1123C; 또는 N914C 및 S1123C를 포함하는 목록으로부터 선택된 인공 분자내 이황화 결합을 포함하는 약학적 조성물
  17. 제10항 내지 제16항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산은 단일 펩타이드, 링커, 헬퍼 에피토프, 항원 클러스터링 요소, 삼량체화 요소, 막관통 요소, 및/또는 VLP-형성 서열로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 이종 펩타이드 또는 단백질 요소를 추가적으로 인코딩하는 약학적 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 적어도 하나의 이종 항원 클러스터링 요소는 페리틴 요소, 또는 루마진 신타제 요소, B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg), 또는 인캡슐린(encapsulin)으로부터 선택되거나 유래되며, 및/또는 적어도 하나의 이종 삼량체화 요소는 폴드온 요소, 바람직하게 피브리틴 폴드온 요소로부터 선택되거나 유래되며, 및/또는 적어도 하나의 VLP-형성 서열은 우드척(Woodchuck) 간염 코어 항원 요소(WhcAg)로부터 선택되거나 유래된 약학적 조성물.
  19. 제10항 내지 제18항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 1-111, 274-11663, 13176-13510, 13521-14123, 22732-22758, 22917, 22923, 22929-22964, 26938, 또는 26939 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  20. 제10항 내지 제19항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 10-26, 40-48, 85-111, 341-1278, 1681-2618, 2686-3623, 3691-4628, 4696-5633, 5701-6638, 6706-7643, 7711-8648, 8716-9653, 9721-10658, 10726-11663, 13377-13510, 13521-14123, 22732, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22947-22964 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  21. 제10항 내지 제20항에 있어서, 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 10, 341, 22960, 22961, 22963 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 융합전 안정화 K986P 및 V987P 돌연변이를 포함하는 S 단백질인 약학적 조성물.
  22. 제10항 내지 제21항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 116-132, 134-138, 140-143, 145-147, 148-175, 11664-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-13147, 13514, 13515, 13519, 13520, 14124-14177, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23184, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  23. 제10항 내지 제22항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 136-138, 140-143, 145-147, 148-175, 11731-11813, 11815, 11817-12050, 12052, 12054-13147, 14142-14177, 22759, 22764-22786, 22791-22813, 22818-22839, 22969-23184, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 코돈 변형된 코딩 서열인 약학적 조성물.
  24. 제10항 내지 제23항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 148-175, 12204-13147, 14142-14177, 22786-22839, 23189-23404, 23409-23624, 23629-23844, 23849-24064, 24069-24284, 24289-24504, 24509-24724, 24729-24944, 24949-25164, 25169-25384, 25389-25604, 25609-25824, 25829-26044, 26049-26264, 26269-26484, 26489-26704, 26709-26937 로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  25. 제10항 내지 제24항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 149, 163, 24837, 26633, 26907로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  26. 제10항 내지 제24항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 23311, 23531, 24851, 23310, 23530, 24850, 23313, 23533, 24853, 23314, 23534, 24854로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 또는 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS-CoV-2 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 코로나바이러스는 SARS-관련 바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-1 바이러스인 약학적 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 스파이크 단백질(S, S1, S2, 또는 S1 및 S2) 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  29. 제28항에 있어서, 상기 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화된 스파이크 단백질(S_stab)로부터 선택되거나 유래된 약학적 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 상기 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음 아미노산 치환: K968P 및 V969P를 포함하는 약학적 조성물.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 적어도 하나의 공동 충전 돌연변이, 적어도 하나의 돌연변이된 양성자화 부위, 및/또는 적어도 하나의 인공 분자내 이황화 결합으로부터 선택된 적어도 하나를 포함하는 약학적 조성물.
  32. 제27항 내지 제31항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 SARS 관련 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14906-14950 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  33. 제27항 내지 제32항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14951-15220로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS 관련 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  34. 제27항 내지 제33항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 15041-15220로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 SARS 관련 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 코로나바이러스는 MERS-CoV 바이러스인 약학적 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 MERS-CoV 코로나바이러스 스파이크 단백질(S, S1, S2, 또는 S1 및 S2)로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  37. 제36항에 있어서, 상기 스파이크 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화 스파이크 단백질(S_stab)로부터 선택되거나 유래되는 약학적 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 상기 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 다음 아미노산 치환: V1060P 및 L1061P를 포함하는 약학적 조성물.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이는 적어도 하나의 공동 충전 돌연변이, 적어도 하나의 돌연변이된 양성자화 부위, 및/또는 적어도 하나의 인공 분자내 이황화 결합으로부터 선택되는 적어도 하나를 포함하는 약학적 조성물.
  40. 제35항 내지 제39항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 MERS-CoV의 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14794-14809 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  41. 제35항 내지 제40항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14810-14905로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  42. 제35항 내지 제41항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14842-14905로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 MERS-CoV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스로부터 선택되며, 상기 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 구성요소 A의 코로나바이러스가 아니며, 바람직하게 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스는 SARS-CoV-2가 아닌 약학적 조성물.
  44. 제43항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산이 제5항 내지 제42항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 코로나바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스가 A형 인플루엔자, B형 인플루엔자 또는 C형 인플루엔자로부터 선택되고, 바람직하게는 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스가 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스 및/또는 적어도 하나상의 B형 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스는 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, H10N7 및 H10N8을 포함하는 목록 중 적어도 하나로부터, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1, H5N8 중 적어도 하나로부터 선택되는 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  48. 제45항 내지 제47항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  49. 제45항 내지 제48항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14178-14229 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  50. 제45항 내지 제49항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14230-14333, 14334-14541, 26946, 26947-26955로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  51. 제45항 내지 제50항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14230-14233, 14236-14256, 14282-14285, 14288-14308, 14334-14337, 14340-14360, 14386-14389, 14392-14412, 14438-14441, 14444-14464, 14490-14493, 14496-14516, 26946-26950로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 A형 인플루엔자 HA 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  52. 제45항 내지 제51항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14366-14369, 14372-14383, 14418-14421, 14424-14435, 14470-14473, 14476-14487, 14522-14525, 14528-14539, 26953, 26954로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 A형 인플루엔자 NA 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  53. 제45항 내지 제52항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14234, 14235, 14257-14261, 14266, 14267, 14280, 14281, 14286, 14287, 14309-14313, 14318, 14319, 14332, 14333, 14338, 14339, 14361-14365, 14370, 14371, 14384, 14385, 14390, 14391, 14413-14417, 14422, 14423, 14436, 14437, 14442, 14443, 14465-14469, 14474, 14475, 14488, 14489, 14494, 14495, 14517-14521, 14526, 14527, 14540, 14541, 26951, 26952, 26955로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 B형 인플루엔자 항원을 인코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  54. 제45항 내지 제53항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14334-14541, 26947-26955로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  55. 제45항 내지 제54항에 있어서, 구성요소 B는 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 복수의 핵산 서열, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 또는 100개의 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하며, 바람직하게 상기 복수의 각각은 제45항 내지 제54항에 정의된 핵산 서열로부터 선택되는 약학적 조성물.
  56. 제55항에 있어서, 상기 복수의 핵산 서열이 HA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하거나, 적어도 하나의 A형 인플루엔자 바이러스의 NA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 약학적 조성물.
  57. 제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 복수의 핵산 서열이 HA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하거나, 적어도 하나의 B형 인플루엔자 바이러스의 NA로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6개의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 약학적 조성물.
  58. 제45항 내지 제57항에 있어서, 상기 구성요소 B는 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 복수의 핵산 서열을 포함하며, 여기서 상기 인플루엔자 바이러스는 FLUAV/H1N1/A/California/7/2009, FLUAV/H1N1/A/Michigan/45/2015, FLUAV/H1N1/A/Netherlands/602/2009, FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014, FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008, FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013를 포함하는 목록으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  59. 제45항 내지 제57항에 있어서, 구성요소 B는 복수의 인플루엔자 바이러스 항원, 바람직하게 7개 인플루엔자 바이러스 항원을 인코딩하는 복수의 핵산 서열, 바람직하게 7개 핵산 서열을 포함하며, 상기 인플루엔자 바이러스 항원은
    - FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 HA 단백질,
    - FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 HA 단백질,
    - FLUBV/H0N0/B/Phuket/3073/2013의 HA 단백질,
    - FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 HA 단백질,
    - FLUAV/H3N2/A/Hong Kong/4801/2014의 NA 단백질,
    - FLUAV/H1N1/A/California/7/2009의 NA 단백질, 및
    - FLUBV/H0N0/B/Brisbane/60/2008의 NA 단백질
    로부터 선택되는 약학적 조성물.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 뉴모비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 호흡기 세포융합 바이러스(RSV)로부터 선택되는 약학적 조성물.
  61. 제60항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 RSV 융합 단백질 F, 기질 단백질 M, 핵단백질 N, M2-1 단백질, 및/또는 인단백질 P로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체, 바람직하게는 RSV 융합 단백질 F로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  62. 제61항에 있어서, 상기 RSV F 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 전장 F 단백질(F0) 또는 결실된 C-말단을 갖는 F 단백질(F-del), 또는 이들의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체인 약학적 조성물.
  63. 제61항 또는 62항에 있어서, 상기 RSV F 단백질은 적어도 하나의 융합전 안정화 돌연변이를 포함하는 융합전 안정화된 F 단백질(F_stab)으로부터 선택되거나 유래된 약학적 조성물.
  64. 제61항 내지 제63항에 있어서, 상기 RSV F 단백질은 단일 폴리펩타이드 사슬에 2개의 서브유닛 F2 및 F1을 포함하며, 상기 F2 및 F1은 링커 요소, 바람직하게 안정한 F2-링커-F1 단백질을 생성하는 GS 링커를 통해 연결되며, 선택적으로 상기 F2-링커-F1 단백질은 aa104-aa144가 결여된 약학적 조성물.
  65. 제60항 내지 제64항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14542-14551 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  66. 제60항 내지 제65항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14552-14571, 14572-14611로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  67. 제60항 내지 제66항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14572-14611로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  68. 제60항 내지 제67항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 RSV 기질 단백질 M, 핵단백질 N, M2-1 단백질, 및/또는 인단백질 P 또는 이의 조합으로부터 선택되거나 유래된, 바람직하게 M2-1로부터 선택된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질을 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 추가 핵산 서열을 포함하는 약학적 조성물.
  69. 제68항에 있어서, 상기 적어도 하나의 추가 인공 핵산 서열의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 9684, 10053-10133, 10134, 10503-10636, 10637, 11006-11182, 11183, 11552-11725, 19844, 20213, 20582, 20951 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 인코딩하는 약학적 조성물.
  70. 제68항 또는 제69항에 있어서, 상기 적어도 하나의 추가 핵산 서열의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 9685-9692, 10135-10142, 10638-10645, 11184-11119, 19845-19852, 20214-20221, 20583-20590, 20952-20959, 21385-21388, 21411-21414로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  71. 제68항 내지 제70항에 있어서, 상기 적어도 하나의 추가 핵산 서열은 공개된 PCT 출원 WO2019202035의 서열번호: 9693-10052, 10143-10502, 10646-11005, 11192-11551, 19853-20212, 20222-20581, 20591-20950, 20960-21319, 21481-21488, 21627-21634, 21553-21560, 21699-21706 로부터 선택된 핵산 서열, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RSV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 메타뉴모바이러스, 바람직하게는 뉴모비리데 바이러스 과의 인간 메타뉴모바이러스(hMPV)로부터 선택되는 약학적 조성물.
  73. 제72항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 hMPV F 단백질, G 단백질, M 단백질, P 단백질, N 단백질 및 SH 단백질로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  74. 제72항 또는 제73항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14626-14649, 26966-26971 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  75. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14650-14697, 14698-14793, 26972-26978, 26979-26991로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 hMPV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  76. 제72항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14698-14793, 26979-26991로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 hMPV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  77. 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 적어도 하나의 파라인플루엔자 바이러스(PIV), 바람직하게 파라믹소비리데 바이러스 과의 인간 파라인플루엔자바이러스(hPIV)로부터 선택되는 약학적 조성물.
  78. 제77항에 있어서, 적어도 하나의 PIV는 hPIV-1, hPIV-2, 또는 hPIV-3 혈청형으로부터 선택되며, 바람직하게 hPIV-3 혈청형인 약학적 조성물.
  79. 제77항 또는 제78항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 PIV 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN), PIV 융합(F) 당단백질, PIV 기질 단백질(M), PIV 뉴클레오캡시드 단백질(N), PIV 바이러스 복제효소(L), PIV 비구조 V 단백질, 또는 이의 면역원성 단편으로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  80. 제77항 내지 제79항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 PIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 서열번호: 14612, 14613, 26956, 26957 중 어느 하나, 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  81. 제77항 내지 제80항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 서열번호: 14614-14617, 14618-14625, 26958-26965로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 PIV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  82. 제77항 내지 제81항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 서열번호: 14618-14625, 26961-26965로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 PIV 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  83. 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 추가 바이러스는 파라믹소비리데 바이러스 과의 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  84. 제83항에 있어서, 적어도 하나의 헤니파바이러스는 적어도 하나의 헨드라 바이러스 및/또는 적어도 하나의 니파 바이러스로부터 선택되는 약학적 조성물.
  85. 제83항 또는 제84항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 헤니파바이러스 당단백질 및/또는 적어도 하나의 헤니파바이러스 융합 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  86. 제83항 내지 제85항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 인코딩된 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1-26, 573-598, 807-832, 1041-1066, 1513-1515 중 어느 하나 또는 이들 중 임의의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  87. 제83항 내지 제86항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 27-234, 599-806, 833-1040, 1067-1274, 1275-1508, 1516-1539, 1540-1548로부터 선택된 핵산 서열 중 어느 하나 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 헤니파바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  88. 제83항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 공개된 PCT 특허 출원 WO2018115507의 서열번호: 1275-1508, 1540-1548로부터 선택된 핵산 서열 또는 이들 서열 중 임의의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 헤니파바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A는 아래 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택되는 약학적 조성물
    A-1 적어도 하나의 SARS-CoV-2로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 제10항 내지 제26항에 정의된 것, 및/또는
    A-2 적어도 하나의 SARS 관련 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 제27항 내지 제34항에 정의된 것, 및/또는
    A-3 적어도 하나의 MERS-CoV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게는 제35항 내지 제42항에 정의된 것.
  90. 제89항에 있어서, 구성요소 A는 A-1 및 A-2; A-1 및 A-3; A-2 및 A-3; 또는 A-1 및 A-2 및 A-3으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  91. 제89항에 있어서, 구성요소 A는 구성요소 A-1로부터 선택되는 약학적 조성물.
  92. 제1항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 B는 다음 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택되는 약학적 조성물
    B-1 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제43항 또는 제44항에 정의된 것, 및/또는
    B-2 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제45항 내지 제59항에 정의된 것, 및/또는
    B-3 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제60항 내지 제76항에 정의된 것, 및/또는
    B-4 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제77항 내지 제88항에 정의된 것.
  93. 제92항에 있어서, 구성요소 B는 B-1 및 B-2; B-1 및 B-3; B-1 및 B-4; B-2 및 B-3; B-2 및 B-4; 또는 B-3 및 B-4로부터 선택되는 약학적 조성물.
  94. 제92항에 있어서, 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 B-1 및 B-2 및 B-3; B-1 및 B-2 및 B-4; B-1 및 B-3 및 B-4; B-2 및 B-3 및 B-4로부터 선택되는 약학적 조성물.
  95. 제92항 내지 94항에 있어서, 구성요소 B-3은 다음 구성요소 중 적어도 하나로부터 선택되는 약학적 조성물
    B-3a 적어도 하나의 RSV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제60항 내지 제71항에 정의된 것, 및/또는
    B-3b 적어도 하나의 hMPV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제72항 내지 제76항에 정의된 것.
  96. 제95항에 있어서, 구성요소 B-3은 B-3a로부터 선택되는 약학적 조성물.
  97. 제92항 내지 제96항에 있어서, 구성요소 B-4는 다음으로부터 선택되는 약학적 조성물
    B-4a 적어도 하나의 PIV로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제77항 내지 제82항에 정의된 것, 및/또는
    B-4b 적어도 하나의 헤니파바이러스로부터 선택되거나 유래된 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 면역원성 변이체를 인코딩하는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산, 바람직하게 제83항 내지 제88항에 정의된 것.
  98. 제97항에 있어서, 구성요소 B4는 구성요소 B-4a로부터 선택되는 약학적 조성물.
  99. 제1항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 구성요소 A-1 및 구성요소 B-3a를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  100. 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 구성요소 A-1 및 구성요소 B-2를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  101. 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 구성요소 A-1 및 구성요소 B-2 및 구성요소 B-3a를 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  102. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열 및/또는 구성요소 B의 핵산의 적어도 하나의 코딩 서열은 코돈 변형된 코딩 서열이며, 바람직하게 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열은 상응하는 야생형 또는 참조 코딩 서열에 의해 인코딩된 아미노산 서열에 비해 변형되지 않은 약학적 조성물.
  103. 제102항에 있어서, 상기 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열은 C 최대화된 코딩 서열, CAI 최대화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용 적응된 코딩 서열, G/C 함량 변형된 코딩 서열, 및 G/C 최적화된 코딩 서열, 또는 이의 임의의 조합으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  104. 제102항 또는 제103항에 있어서, 적어도 하나의 코돈 변형된 코딩 서열은 G/C 최적화된 코딩 서열, 인간 코돈 사용 적응된 코딩 서열, 또는 G/C 함량 변형된 코딩 서열인 약학적 조성물.
  105. 제1항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 코딩 서열 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 약 50%, 55%, 또는 60%의 G/C 함량을 갖는 약학적 조성물.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 하나의 이종 5'-UTR 및/또는 적어도 하나의 이종 3'-UTR로부터 선택되는 적어도 하나의 이종 비번역된 영역을 포함하는 약학적 조성물.
  107. 제106항에 있어서, 적어도 하나의 이종 3'-UTR은 PSMB3, ALB7, 알파-글로빈, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 및 RPS9로부터 선택되는 유전자의 3'-UTR로부터 유래된, 또는 이들 유전자 중 어느 하나의 상동체, 단편 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  108. 제106항 또는 제107항에 있어서, 적어도 하나의 이종 5'-UTR은 HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B 및 UBQLN2로부터 선택되는 유전자의 5'-UTR로부터 유래된, 또는 이들 유전자 중 어느 하나의 상동체, 단편 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  109. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은
    - 알파-글로빈 3'-UTR; 또는
    - HSD17B4 5'-UTR 및 PSMB3 3'-UTR (HSD17B4/PSMB3); 또는
    - SLC7A3 5'-UTR 및 PSMB3 3'-UTR (SLC7A3/PSMB3); 또는
    - RPL31 5'-UTR 및 RPS9 3'-UTR (RPL31/RPS9)
    에 작동 가능하게 연결된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 약학적 조성물.
  110. 제1항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A 및/또는 구성요소 B의 핵산은 HSD17B4 5'-UTR 및 PSMB3 3'-UTR (HSD17B4/PSMB3)에 작동 가능하게 연결된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 약학적 조성물.
  111. 제1항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 하나의 폴리(A) 서열, 바람직하게는 30 내지 200개의 아데노신 뉴클레오티드를 포함하는 적어도 하나의 폴리(A) 서열을 포함하며, 선택적으로
    상기 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 하나의 폴리(C) 서열, 바람직하게는 10 내지 40개의 시토신 뉴클레오티드를 포함하는 적어도 하나의 폴리(C) 서열을 포함하는 약학적 조성물.
  112. 제1항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 또는 히스톤 스템-루프 구조를 포함하는 약학적 조성물.
  113. 제1항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 DNA 또는 RNA인 약학적 조성물.
  114. 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 코딩 RNA, 바람직하게 mRNA, 자가 복제 RNA, 원형 RNA, 또는 레플리콘 RNA인 약학적 조성물.
  115. 제1항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 mRNA, 바람직하게 정제된 mRNA인 약학적 조성물.
  116. 제1항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 RNA이며, 상기 RNA는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 보다 바람직하게는 적어도 약 70%, 가장 바람직하게는 적어도 약 80%의 RNA 무결성을 갖는 약학적 조성물.
  117. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 5'-캡 구조, 바람직하게 m7G, cap0, cap1, cap2, 변형된 cap0 또는 변형된 cap1 구조를 포함하는 약학적 조성물.
  118. 제1항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 약학적 조성물.
  119. 제1항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 슈도우리딘(Ψ) 및 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ)로부터 선택된 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드를 포함하며, 선택적으로 모든 우라실 뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ) 뉴클레오티드 및/또는 N1-메틸슈도우리딘(m1Ψ) 뉴클레오티드에 의해 대체되는 약학적 조성물.
  120. 제1항 내지 제117항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 화학적으로 변형된 뉴클레오티드를 포함하지 않는 RNA인 약학적 조성물.
  121. 제1항 내지 제117항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 G, C, A 및 U 뉴클레오티드로만 구성된 코딩 서열을 포함하는 약학적 조성물.
  122. 제1항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  123. 제1항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 하나 이상의 양이온성 또는 다가양이온성 화합물, 바람직하게 양이온성 또는 다가양이온성 폴리머, 양이온성 또는 다가양이온성 폴리사카라이드, 양이온성 또는 다가양이온성 지질, 양이온성 또는 다가양이온성 단백질, 양이온성 또는 다가양이온성 펩타이드, 또는 이의 임의의 조합과 복합체화되거나 회합되거나 적어도 부분적으로 복합체화되거나 부분적으로 회합되는 약학적 조성물.
  124. 제1항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 하나 이상의 지질과 복합체화되거나 회합되어, 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀을 형성하는 약학적 조성물.
  125. 제1항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 하나 이상의 지질과 복합체화되거나 회합되어 지질 나노입자(LNP)를 형성하는 약학적 조성물.
  126. 제1항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 별도로 제형화되며, 바람직하게 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 별도의 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀으로 제형화되는 약학적 조성물.
  127. 제1항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 공동 제형화되며, 바람직하게 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및/또는 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀으로 공동 제형화되는 약학적 조성물.
  128. 제124항 내지 제127항에 있어서, 상기 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀은 적어도 하나의 양이온성 지질, 바람직하게 화학식 III-3에 따른 양이온성 지질을 포함하는 약학적 조성물:
    Figure pct00018
    (III-3)
  129. 제124항 내지 제128항에 있어서, 상기 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀은 적어도 하나의 폴리머 접합된 지질, 바람직하게 PEG 지질, 바람직하게 화학식(IVa)에 따른 PEG-지질을 포함하는 약학적 조성물:

    Figure pct00019
    (IVa)
    여기서 n은 30 내지 60 범위의 평균 값을 가지며, 바람직하게 n은 약 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54의 평균 값을 가지며, 가장 바람직하게 n은 49 또는 45의 평균 값을 가짐.
  130. 제124항 내지 제128항에 있어서, 상기 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀은 적어도 하나의 폴리머 접합된 지질, 바람직하게 PEG 지질, 바람직하게 화학식(IVa)에 따른 PEG-지질을 포함하는 약학적 조성물:

    Figure pct00020
    (IVa)
    여기서 n은 PEG 지질의 평균 분자량이 약 2000g/mol 내지 약 3000g/mol 또는 약 2300g/mol 내지 약 2700g/mol, 바람직하게 약 2500g/mol이 되도록 선택된 정수임.
  131. 제124항 내지 제130항에 있어서, 상기 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀은 하나 이상의 중성 지질 및/또는 하나 이상의 스테로이드 또는 스테로이드 유사체를 포함하는 약학적 조성물.
  132. 제131항에 있어서, 중성 지질은 1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)이며, 바람직하게 양이온성 지질 대 DSPC의 몰비는 약 2:1 내지 약 8:1의 범위인 약학적 조성물.
  133. 제131항 또는 제132항에 있어서, 스테로이드는 콜레스테롤이며, 바람직하게 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰비는 약 2:1 내지 약 1:1의 범위인 약학적 조성물.
  134. 제124항 내지 제133항에 있어서, 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀, 바람직하게 LNP는
    (i) 적어도 하나의 양이온성 지질, 바람직하게 제128항에 정의된 적어도 하나의 양이온성 지질;
    (ii) 중성 지질, 바람직하게 제132항에 정의된 중성 지질;
    (iii) 스테로이드 또는 스테로이드 유사체, 바람직하게 제133항에 정의된 스테로이드 또는 스테로이드 유사체; 및
    (iv) 폴리머 접합된 지질, 바람직하게 PEG-지질, 예를 들어 PEG-DMG 또는 PEG-cDMA, 바람직하게 제129항 또는 제130항에 정의된 PEG-지질
    을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조성물.
  135. 제134항에 있어서, 상기 (i) 내지 (iv)는 약 20~60% 양이온성 지질, 5~25% 중성 지질, 25~55% 스테롤, 및 0.5~15% 폴리머-접합된 지질, 바람직하게 PEG-지질의 몰비인 약학적 조성물.
  136. 제134항 또는 제135항에 있어서, 상기 (i) 내지 (iv)는 약 50:10:38.5:1.5, 바람직하게 47.5:10:40.8:1.7 또는 더욱 바람직하게 47.4:10:40.9:1.7의 몰비인 약학적 조성물.
  137. 제124항 내지 제136항에 있어서, 지질 대 핵산의 wt/wt 비율이 약 10:1 내지 약 60:1, 바람직하게는 약 20:1 내지 약 30:1, 예를 들어 약 25: 1인 약학적 조성물.
  138. 제124항 내지 제137항에 있어서, 핵산을 캡슐화하는(encapsulating) 리포좀, 지질 나노입자(LNP), 리포플렉스, 및/또는 나노리포좀의 n/p 비율은 약 1 내지 약 10의 범위, 바람직하게 약 5 내지 약 7의 범위, 보다 바람직하게 약 6인 약학적 조성물.
  139. 제124항 내지 제138항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.4 미만, 바람직하게 약 0.3 미만, 더욱 바람직하게 약 0.2 미만, 가장 바람직하게 약 0.1 미만의 다분산 지수(PDI) 값을 갖는 약학적 조성물.
  140. 제124항 내지 제139항에 있어서, LNP는 약 60nm 내지 약 120nm, 바람직하게 약 120nm 미만 범위의 Z-평균 크기를 갖는 약학적 조성물.
  141. 제124항 내지 제140항에 있어서, 상기 조성물은 약 20% 미만의 유리 (비복합체화된) RNA, 바람직하게 약 15% 미만의 유리 (비복합체화된) RNA, 보다 바람직하게 약 10% 미만의 유리 (비복합체화된) RNA를 포함하는 약학적 조성물.
  142. 제1항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 동결 건조된 조성물, 분무 건조된 조성물, 또는 분무 동결 건조된 조성물이며, 선택적으로 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 동결보호제를 포함하는 약학적 조성물.
  143. 제142항에 있어서, 상기 동결 건조된 조성물 또는 분무 건조된 조성물은 약 10% 미만의 수분 함량, 바람직하게 약 0.5% 내지 5% 사이의 수분 함량을 갖는 약학적 조성물.
  144. 제1항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에 투여될 때, 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산 및 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산은 면역 반응을 유도하는데 적합한 항원성 펩타이드 또는 단백질로 번역되는 약학적 조성물.
  145. 제1항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에 투여될 때, 구성요소 A에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 체액성 면역 반응 및 구성요소 B에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 체액성 면역 반응이 상기 개체에서 유도되는 약학적 조성물.
  146. 제1항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에 투여될 때, 구성요소 A에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 T세포 반응 및 구성요소 B에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 T세포 반응이 상기 개체에서 유도되는 약학적 조성물.
  147. 제1항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에 투여될 때, 구성요소 A에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 B세포 기억 및 구성요소 B에 의해 인코딩된 펩타이드 또는 단백질에 대한 항원 특이적 B세포 기억이 상기 개체에서 달성되는 약학적 조성물.
  148. 제1항 내지 제147항에 정의된 적어도 하나의 구성요소 A 및 적어도 하나의 구성요소 B를 포함하는 조합 백신.
  149. 제148항에 있어서, 상기 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2, 및 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 및/또는 RSV 바이러스에 대한 것인 조합 백신.
  150. 제148항 내지 149항에 있어서, 상기 조합 백신은 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 RSV 바이러스에 대한 것인, 및 선택적으로, 적어도 하나의 PIV 및/또는 적어도 하나의 hMPV에 대한 것인 조합 백신.
  151. 제148항 내지 제150항에 있어서, 상기 조합 백신은 구성요소 A의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공된 모든 인코딩된 항원에 대한 T세포 반응 및/또는 B세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도하며 추가적으로 구성요소 B의 적어도 하나의 핵산에 의해 제공된 모든 인코딩된 항원에 대한 T세포 반응 및/또는 B세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도하는 조합 백신.
  152. 제148항 내지 제151항에 있어서, 상기 백신은 저용량의 백신 투여시 모든 인코딩된 항원에 대한 T-세포 반응 및/또는 B-세포 반응을 포함하는 항원 특이적 면역 반응을 유도하며, 바람직하게는 상기 저용량은 약 20㎍ 미만의 핵산을 포함하는 조합 백신.
  153. 제148항 내지 152항에 있어서, 상기 조합 백신은 약 5세 이하의 연령을 갖는 대상체에서 항원 특이적 면역 반응을 유도하는 조합 백신.
  154. 제148항 내지 153항에 있어서, 상기 조합 백신은 약 60세 이상의 연령을 갖는 대상체에서 항원 특이적 면역 반응을 유도하는 조합 백신.
  155. 제1항 내지 제147항의 적어도 하나의 약학적 조성물 및/또는 제148항 내지 제153항의 적어도 하나의 조합 백신을 포함하고, 선택적으로 가용화를 위한 적어도 하나의 액체 비히클을 포함하고, 및 선택적으로 키트 구성요소의 투여 및 용량에 대한 정보를 제공하는 기술 지침서를 포함하는 키트 또는 부품 키트.
  156. 약제 용도를 위한 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물, 제148항 내지 제153항의 조합 백신, 제155항의 키트 또는 부품 키트.
  157. 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2, 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염의 치료 또는 예방 용도이며, 바람직하게 상기 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택되는 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물, 제148항 내지 제153항의 조합 백신, 제155항의 키트 또는 부품 키트.
  158. 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2, 및 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이러한 감염과 관련된 질환의 치료 또는 예방용 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물, 제148항 내지 제153항의 조합 백신, 제155항의 키트 또는 부품 키트.
  159. 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2, 및 적어도 하나의 RSV 감염, 또는 이러한 감염과 관련된 질환의 치료 또는 예방용 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물, 제148항 내지 제153항의 조합 백신, 제155항의 키트 또는 부품 키트.
  160. 적어도 하나의 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2, 적어도 하나의 RSV, 및 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 또는 이러한 감염에 관한 질환의 치료 또는 예방용 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물, 제148항 내지 제153항의 조합 백신, 제155항의 키트 또는 부품 키트.
  161. 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물, 제148항 내지 제153항의 조합 백신, 또는 제155항의 키트 또는 부품 키트를 이를 필요로 하는 개체에게 적용 또는 투여하는 단계를 포함하는 질환의 치료 또는 예방 방법.
  162. 제161항에 있어서, 상기 질환은 코로나바이러스, 바람직하게 SARS-CoV-2 감염, 및 적어도 하나의 추가 바이러스 감염 또는 이러한 감염과 관련된 질환이며, 선택적으로 상기 추가 바이러스는 적어도 하나의 상이한 코로나바이러스, 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스, 적어도 하나의 뉴모비리데 바이러스, 및/또는 적어도 하나의 파라믹소비리데 바이러스로부터 선택되는 질환의 치료 또는 예방 방법.
  163. 제161항 또는 제162항에 있어서, 필요로 하는 개체는 포유동물 개체, 바람직하게 인간 대상체인 질환의 치료 또는 예방 방법.
  164. 제161항 또는 제163항에 있어서, 필요로 하는 개체는 인간 대상체, 바람직하게 노인 인간 대상체인 질환의 치료 또는 예방 방법.
  165. 제161항 또는 제164항에 있어서, 상기 방법은 상기 투여 약 2주 내지 약 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 1.5년, 2년 또는 3년 이후 치료된 개체에서 중등도 및 중증 COVID-19 질병을 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95% 예방하며, 코로나바이러스 감염, 인플루엔자 바이러스 감염, 뉴모비리데 바이러스 감염, 및/또는 파라믹소비리데 바이러스 감염과 관련된 적어도 하나의 추가 질병을 예방하는 질환의 치료 또는 예방 방법.
  166. 제161항 또는 제165항에 있어서, 개체는 약 5μg 내지 약 50μg 사이의 RNA를 포함하는 단일 용량으로 투여되는 질환의 치료 또는 예방 방법.
  167. 제161항 또는 제165항에 있어서, 개체는 약 5㎍ 내지 약 50㎍ 사이의 RNA를 포함하는 2회 용량으로 투여되는 질환의 치료 또는 예방 방법.
  168. 조성물 또는 백신을 동결건조하여 안정화된 조성물 또는 백신을 생산하는 것을 포함하는, 제1항 내지 제147항의 약학적 조성물 또는 제148항 내지 제153항의 조합 백신의 안정화 방법.
  169. 제168항에 있어서, 상기 안정화된 조성물 또는 백신은 약 10% 미만의 수분 함량, 바람직하게 약 0.5% 내지 5.0%의 수분 함량을 갖는 안정화 방법.
  170. 제168항 또는 제169항의 방법에 의해 생산된 안정화되고 동결건조된 조성물 또는 백신.
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