[go: up one dir, main page]

KR20160078946A - 트롬빈을 이용한 줄기세포 효능강화방법 - Google Patents

트롬빈을 이용한 줄기세포 효능강화방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20160078946A
KR20160078946A KR1020160080788A KR20160080788A KR20160078946A KR 20160078946 A KR20160078946 A KR 20160078946A KR 1020160080788 A KR1020160080788 A KR 1020160080788A KR 20160080788 A KR20160080788 A KR 20160080788A KR 20160078946 A KR20160078946 A KR 20160078946A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
growth factor
medium
stem cells
thrombin
stem cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020160080788A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101661448B1 (ko
Inventor
장윤실
박원순
성동경
안소윤
Original Assignee
사회복지법인 삼성생명공익재단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 사회복지법인 삼성생명공익재단 filed Critical 사회복지법인 삼성생명공익재단
Publication of KR20160078946A publication Critical patent/KR20160078946A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101661448B1 publication Critical patent/KR101661448B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0665—Blood-borne mesenchymal stem cells, e.g. from umbilical cord blood
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/067—Hepatocytes
    • C12N5/0671—Three-dimensional culture, tissue culture or organ culture; Encapsulated cells
    • C12N5/0673—
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/70—Enzymes
    • C12N2501/73—Hydrolases (EC 3.)
    • C12N2501/734—Proteases (EC 3.4.)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 트롬빈을 이용한 줄기세포의 효능 강화 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 방법은 줄기세포 유래 엑소좀의 생성을 촉진시키고 줄기세포의 효능을 강화하는 우수한 효과를 가지고 있어, 이를 통해 종래 알려진 방법에 비해 효율적으로 줄기세포 및 엑소좀을 수득할 수 있으며, 관련 연구에 유용하게 이용할 수 있다.

Description

트롬빈을 이용한 줄기세포 효능강화방법{Method for enhancing efficacy of stem cell using thrombin}
본 발명은 트롬빈을 이용한 줄기세포의 효능 강화 방법에 관한 것이다.
엑소좀(exosome)은 여러 종류의 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭이다. 엑소좀의 직경은 대략 30-100 nm인 것으로 보고되어 있다. 엑소좀은 전자 현미경을 통한 연구에서 원형질막으로부터 직접 떨어져 나가는 것이 아니라 다낭체(multivesicular bodies, MVBs)라고 불리는 세포 내 특정 구획에서 기원하며 세포 밖으로 방출, 분비되는 것으로 관찰되었다. 즉, 다낭체와 원형질막의 융합이 일어나면, 소낭들은 세포 밖 환경으로 방출되는데, 이것을 엑소좀이라고 부른다.
이러한 엑소좀이 어떤 분자적 기작에 의해 만들어지는지 확실히 밝혀진 바가 없으나, 적혈구 세포뿐만 아니라, B-림프구, T-림프구, 수지상 세포, 혈소판, 대식 세포 등을 포함한 다양한 종류의 면역 세포들과 종양 세포, 줄기세포 등도 살아 있는 상태에서 엑소좀을 생산하여 분비한다고 알려져있다.
특히, 줄기세포에서 유래된 엑소좀은 수용체 및 단백질뿐 아니라 핵 성분을 함유하고 있어 세포 간 커뮤니케이션에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 엑소좀은 줄기세포에 비해 동물혈청을 상대적으로 적게 함유하고 있어 동물 혈청 감염에 의한 증상(zoonosis)의 위험성 역시 배재할 수 있다. 이러한 엑소좀의 특성을 고려할 때 엑소좀를 이용한 세포치료법은 기존의 줄기세포 치료법의 한계를 극복할 수 있는 새로운 패러다임이 될 것으로 기대된다.
이에 본 발명자들은 상기와 같이 이용 가능성이 우수한 엑소좀의 생산 효율을 높이기 위한 방법에 대한 연구를 계속한 결과, 트롬빈을 이용할 경우 줄기세포 유래 엑소좀의 생성이 촉진됨을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 트롬빈을 이용한 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 촉진 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 트롬빈을 포함하는 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 촉진용 배지 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 트롬빈을 이용한 줄기세포 유래 엑소좀 내 성장인자 발현 증진 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 트롬빈을 이용한 줄기세포의 효능을 강화시키는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은, 줄기세포를 트롬빈을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 줄기세포 효능강화방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 효능강화는 줄기세포내 성장인자의 발현이 증진되는 것임을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 성장인자는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 및 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 줄기세포는 배아 줄기세포 또는 성체 줄기세포인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 인간 조직 유래 중간엽 기질세포, 인간 조직 유래 중간엽 줄기세포, 및 다분화능 줄기세포로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 성체 줄기세포인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 중간엽 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 조직으로부터 유래된 중간엽 줄기세포인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 배지는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), MEM (Minimal Essential Medium), BME (Basal Medium Eagle), RPMI 1640, DMEM/F-10 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F-10), DMEM/F-12 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F-12), α-MEM(α-Minimal essential Medium), G-MEM(Glasgow's Minimal Essential Medium), IMDM(Isocove's Modified Dulbecco's Medium), 및 KnockOut DMEM으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 배지인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 트롬빈은 배지 내에 1 내지 1000 U/ml의 농도로 포함되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 배양은 12시간 내지 48시간 동안 수행되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은, 트롬빈을 포함하는, 줄기세포 효능강화용 배지 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 효능강화는 줄기세포내 성장인자의 발현이 증진되는 것임을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 성장인자는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 및 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은, 줄기세포를 트롬빈을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 줄기세포내 성장인자 발현 증진 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 성장인자는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 및 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 방법은 줄기세포 유래 엑소좀의 생성을 촉진시킬 뿐만 아니라, 줄기세포 자체 또는 엑소좀의 효능을 강화시킬 수 있는 우수한 효과를 가지고 있어, 이를 통해 종래 알려진 방법에 비해 효율적으로 줄기세포/엑소좀을 수득할 수 있으며, 관련 연구에 유용하게 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 방법을 이용하여 수득한 줄기세포 유래 엑소좀의 형태를 SEM 이미지를 통해 관찰한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에 따른 방법을 이용하여 수득한 줄기세포 유래 엑소좀에서 엑소좀 마커인 CD63 및 CD9의 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명에 따른 방법을 이용하여 수득한 줄기세포 유래 엑소좀에서 성장인자인 VEGF 및 HGF의 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 트롬빈 처리 농도에 따른 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 정도를 나타낸 도이다.
도 5는 LPS, H2O2 또는 트롬빈의 처리 농도에 따른 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 정도를 나타낸 도이다.
도 6은 트롬빈 처리에 의한 줄기세포 내 소포체의 형성 정도를 관찰한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 트롬빈 처리에 의한 엑소좀 내 성장인자의 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명은 줄기세포를 트롬빈을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 줄기세포 효능강화 방법을 제공한다.
상기 트롬빈은 배지 내에 1 내지 1000 U/ml의 농도로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 10 내지 200 U/ml의 농도로 포함될 수 있다.
상기 배양 시간은 제한이 없으나, 바람직하게는 12시간 내지 48시간 동안 수행될 수 있다.
본 발명에서 "줄기세포"란 미분화된 세포로서 자기 복제 능력을 가지면서 두 개 이상의 서로 다른 종류의 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 말한다.
본 발명의 줄기세포는 자가 또는 동종 유래 줄기세포일 수 있으며, 인간 및 비인간 포유류를 포함한 임의 유형의 동물 유래일 수 있고, 상기 줄기세포가 성체로부터 유래된 것이든 배아로부터 유래된 것이든 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 줄기세포는 배아 줄기세포 또는 성체 줄기세포를 포함하며, 바람직하게는 성체 줄기세포이다. 상기 성체 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 인간 조직 유래 중간엽 기질세포(mesenchymal stromal cell), 인간 조직 유래 중간엽 줄기세포, 다분화능 줄기세포일 수 있으며, 바람직하게는 중간엽 줄기세포이나, 이에 한정되지 않는다. 상기 중간엽 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 또는 태반 등으로부터 유래된 중간엽 줄기세포일 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에서 "배지"는 생체 외(in vitro)에서 세포의 성장과 증식에 필요한 필수성분을 포함하는 조성물을 의미하는 것으로, 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 줄기세포 배양용 배지를 모두 포함하며, 예를 들어 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), MEM (Minimal Essential Medium), BME (Basal Medium Eagle), RPMI 1640, DMEM/F-10 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F-10), DMEM/F-12 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F-12), α-MEM(α-Minimal essential Medium), G-MEM(Glasgow's Minimal Essential Medium), IMDM(Isocove's Modified Dulbecco's Medium), KnockOut DMEM 등의 상업적으로 제조된 배지 또는 인위적으로 합성한 배지를 이용할 수 있고, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 배지는 일반적으로 탄소원, 질소원 및 미량원소 성분을 포함하며, 아미노산, 항생제 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 중간엽 줄기세포에 10 내지 100 U/ml의 트롬빈을 포함한 혈청프리-배양배지(MEM alpha media)를 처리한 후 24시간 동안 배양하였다.
또한, 본 발명은 트롬빈을 포함하는 줄기세포 효능강화용 배지 조성물을 제공한다.
상기 트롬빈은 배지 내에 1 내지 1000 U/ml의 농도로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 10 내지 200 U/ml의 농도로 포함될 수 있다.
본 발명의 배지 조성물은 트롬빈 외에 공지된 줄기세포 효능강화 물질을 1종 이상 더 포함할 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명은 줄기세포를 트롬빈을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 줄기세포내 성장인자 발현 증진 방법을 제공한다.
본 발명에서 "성장인자"는 세포 분열이나 생장, 분화를 촉진하는 단백질성의 생리활성물질을 의미하는 것으로, 예를 들어, 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF), 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF), 유사인슐린 성장 인자(insulin-like growth factor, IGF), 형질전환 성장 인자(transforming growth factor, TGF), 혈소판 유래성장인자(platelet-derived growth factor, PDGF), 뼈 유래 성장인자(bone-derived growth factor, BDF), 콜로니 자극 인자(colony stimulation factor, CSF), 표피 성장 인자(epidermal growth factor, EGF), 각질세포 성장인자(Keratinocyte growth factor, KGF) 등을 포함한다.
상기 성장인자는 바람직하게는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 또는 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)를 포함하며, 이에 한정되지 않는다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 줄기세포 유래 엑소좀의 분리
줄기세포 유래 엑소좀을 분리하기 위하여, 트롬빈 및 초원심분리기(Ultracentrifuge)를 이용하였다. 보다 구체적으로, 1×106개의 제대혈(umbilical cord blood) 유래 중간엽 줄기세포를 60 mm 배양접시(orange scientific cat# 4450200)에 분주 후 1주일간 배양하였다. 배양접시에 세포가 가득 증식된 것을 확인한 후, 농도별(10, 20, 50, 100 U/ml) 트롬빈(thrombin)이 희석되어있는 혈청프리-배양배지(MEM alpha media)로 교체하고, 다시 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 배양액을 원심 분리 튜브에 나누어 담아 4°C, 10000 rpm에서 30분간 원심분리하였으며, 상층액을 새 튜브에 옮겨 세포 부스러기(debris)를 제거하였다. 상기 상층액을 다시 4°C, 100,000 rpm에서 2시간 동안 초원심분리한 후, 상층액을 제거하고 엑소좀을 분리하였다(최종 농도: 15 μg/ml).
실시예 2. 줄기세포 유래 엑소좀의 확인
상기 실시예 1의 과정을 통해 분리한 엑소좀이 종래 공지된 엑소좀 고유의 특성을 가지고 있는지를 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저, 분리된 엑소좀을 SEM 이미지를 통해 관찰하였으며, 웨스턴 블랏을 이용하여 알려진 엑소좀 마커인 CD63 및 CD9(System Bioscience, Mountain View, CA, USA)의 발현을 확인하였다. 또한, 용해 완충액(lysis buffer)을 이용하여 엑소좀 막을 용해한 후, 엑소좀 내의 단백질을 분리하고, Procarta immunoassay kit(affymatrix, Santa Clara, CA, USA)를 이용하여 엑소좀 내 성장인자인 HGF와 VEGF의 양을 측정하였다. 그 결과를 각각 도 1 내지 도 3에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1과 같은 방법을 통해 분리된 엑소좀은 약 100nm 지름의 구형을 나타내는 정상적인 형태를 보임을 확인하였다.
또한, 도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1과 같은 방법을 통해 분리된 엑소좀은 정상적으로 엑소좀 마커인 CD63 및 CD9을 발현하고 있으며, 엑소좀 내에 성장인자인 VEGF 및 HGF가 존재함을 확인하였다.
실시예 3. 트롬빈 처리에 따른 엑소좀 생성 촉진 효과
3-1. 트롬빈 처리 농도에 따른 엑소좀 생성 정도 검증
트롬빈 처리 농도에 따른 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 정도를 확인하기 위하여, 줄기세포 배양 시 트롬빈의 농도를 달리하여 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 엑소좀을 분리하고 이를 정량하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 트롬빈의 처리 농도가 높아짐에 따라 줄기세포 유래 엑소좀의 생성이 유의하게 촉진됨을 확인하였다.
3-2. 트롬빈을 이용한 엑소좀 생성 촉진 방법의 효율성 검증
트롬빈을 이용한 엑소좀 생성 촉진 방법의 효율성을 검증하기 위하여, 트롬빈 대신 배양배지에 LPS 또는 H2O2를 처리한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 엑소좀을 분리하고 이를 정량하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 줄기세포 배양시 트롬빈을 처리할 경우, 다른 물질을 처리한 군에 비해 줄기세포 유래 엑소좀의 생성이 현저하게 증가함을 확인하였다.
3-3. 트롬빈 처리에 의한 줄기세포 내 소포체 형성 관찰
트롬빈 처리가 줄기세포 내 소포체의 형성에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 제대혈 유래 중간엽 줄기세포를 50 U/ml의 트롬빈이 희석되어있는 혈청프리-배양배지(MEM alpha media)에서 6 시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 엑소좀을 분리하고 이를 전자현미경으로 관찰하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 트롬빈 처리에 의해 줄기세포 내 소포체의 형성이 증가되며, 엑소좀의 분비가 유도됨을 확인하였다.
3-4. 트롬빈 처리에 의한 엑소좀 내 성장인자 발현 관찰
트롬빈 처리가 엑소좀 내 성장인자의 발현에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 제대혈 유래 중간엽 줄기세포를 50 U/ml의 트롬빈이 희석되어있는 혈청프리-배양배지(MEM alpha media)에서 6 시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 엑소좀을 분리하였다. 용해 완충액(lysis buffer)을 이용하여 엑소좀 막을 용해한 후, 엑소좀 내의 단백질을 분리하고, Procarta immunoassay kit(affymatrix, Santa Clara, CA, USA)를 이용하여 엑소좀 내 성장인자인 BDNF, FGF, HGF, NGF, IL-6 및 VEGF의 양을 측정하였다. 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 트롬빈 처리에 의해 엑소좀 내 성장인자인 BDNF, FGF, HGF, NGF, IL-6 및 VEGF의 발현이 증가됨을 확인하였다.
이상의 실험 결과를 통하여, 트롬빈을 이용하여 줄기세포 유래 엑소좀의 생성을 촉진시킬 수 있으며 엑소좀 내 성장인자의 발현을 증가시킬 수 있음을 확인하였다.

Claims (14)

  1. 줄기세포를 트롬빈을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 줄기세포 효능강화방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 효능강화는 줄기세포내 성장인자의 발현이 증진되는 것임을 특징으로 하는, 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 성장인자는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 및 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 줄기세포는 배아 줄기세포 또는 성체 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 인간 조직 유래 중간엽 기질세포, 인간 조직 유래 중간엽 줄기세포, 및 다분화능 줄기세포로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 성체 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 중간엽 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 조직으로부터 유래된 중간엽 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 배지는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), MEM (Minimal Essential Medium), BME (Basal Medium Eagle), RPMI 1640, DMEM/F-10 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F-10), DMEM/F-12 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F-12), α-MEM(α-Minimal essential Medium), G-MEM(Glasgow's Minimal Essential Medium), IMDM(Isocove's Modified Dulbecco's Medium), 및 KnockOut DMEM으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 배지인 것을 특징으로 하는, 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 트롬빈은 배지 내에 1 내지 1000 U/ml의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  9. 제1항에 있어서, 상기 배양은 12시간 내지 48시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  10. 트롬빈을 포함하는, 줄기세포 효능강화용 배지 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 효능강화는 줄기세포내 성장인자의 발현이 증진되는 것임을 특징으로 하는, 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 성장인자는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 및 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  13. 줄기세포를 트롬빈을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 줄기세포내 성장인자 발현 증진 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 성장인자는 뇌 유래 신경 성장인자(brain-derived neurotropic factor, BDNF), 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, FGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 신경 성장인자(nerve growth factor, NGF) 및 혈관상피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 방법.
KR1020160080788A 2013-12-12 2016-06-28 트롬빈을 이용한 줄기세포 효능강화방법 Active KR101661448B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130154891 2013-12-12
KR1020130154891 2013-12-12

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140179560A Division KR101643825B1 (ko) 2013-12-12 2014-12-12 트롬빈을 이용한 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 촉진 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160078946A true KR20160078946A (ko) 2016-07-05
KR101661448B1 KR101661448B1 (ko) 2016-09-30

Family

ID=53371507

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140179560A Active KR101643825B1 (ko) 2013-12-12 2014-12-12 트롬빈을 이용한 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 촉진 방법
KR1020140179541A Active KR101662405B1 (ko) 2013-12-12 2014-12-12 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 뇌혈관 질환 치료용 약학적 조성물
KR1020160080788A Active KR101661448B1 (ko) 2013-12-12 2016-06-28 트롬빈을 이용한 줄기세포 효능강화방법

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140179560A Active KR101643825B1 (ko) 2013-12-12 2014-12-12 트롬빈을 이용한 줄기세포 유래 엑소좀의 생성 촉진 방법
KR1020140179541A Active KR101662405B1 (ko) 2013-12-12 2014-12-12 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 뇌혈관 질환 치료용 약학적 조성물

Country Status (5)

Country Link
US (2) US10167448B2 (ko)
EP (2) EP3081223B1 (ko)
JP (2) JP6190536B2 (ko)
KR (3) KR101643825B1 (ko)
WO (2) WO2015088286A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018131779A1 (ko) * 2017-01-16 2018-07-19 사회복지법인 삼성생명공익재단 신생아 ｈｉｅ 치료용 조성물

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6295341B2 (ja) * 2014-03-18 2018-03-14 サムソン ライフ パブリック ウェルフェア ファウンデーション 幹細胞由来エキソソームを有効成分として含む脳炎症性疾患の治療用組成物
HK1252568A1 (zh) * 2015-06-12 2019-05-31 Hudson Institute of Medical Research 一種治療方法
KR20170085010A (ko) * 2016-01-12 2017-07-21 주식회사 강스템바이오텍 고함량의 성장인자를 함유한 줄기세포 유래 엑소좀
KR101843634B1 (ko) * 2016-04-15 2018-03-30 사회복지법인 삼성생명공익재단 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 만성폐질환 치료용 조성물
WO2017188614A1 (ko) * 2016-04-27 2017-11-02 사회복지법인 삼성생명공익재단 미숙아 뇌실내 출혈 치료를 위한 고효능 줄기세포 선별법
KR101860266B1 (ko) * 2016-07-01 2018-05-24 사회복지법인 삼성생명공익재단 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 피부상처 치료용 조성물
WO2018004237A1 (ko) * 2016-07-01 2018-01-04 사회복지법인 삼성생명공익재단 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 피부상처 치료용 조성물
TWI601741B (zh) * 2016-07-11 2017-10-11 財團法人國家衛生研究院 利用前列腺素受體ｅｐ４－拮抗劑誘導幹細胞製造含有高囊泡含物之外泌體囊泡的方法及其應用
US20210283183A1 (en) * 2016-08-05 2021-09-16 Exostemtech Co., Ltd. Composition for preventing or treating pulmonary fibrosis containing exosome isolated from adipose-derived stem cell as active ingredient
CN106676064A (zh) * 2017-01-20 2017-05-17 深圳中健生物技术有限公司 一种脐带血间充质干细胞培养液
KR102144593B1 (ko) * 2017-06-07 2020-08-13 주식회사 엑소스템텍 인간줄기세포 유래 엑소좀을 포함하는 세포 배양용 무혈청 배지 조성물
CN107349220A (zh) * 2017-07-26 2017-11-17 深圳市泰华细胞工程有限公司 一种包含成纤维细胞外泌体的制剂及其用途
WO2019040790A1 (en) 2017-08-23 2019-02-28 Merakris Therapeutics, Llc COMPOSITIONS CONTAINING AMNIOTIC COMPONENTS AND METHODS FOR THEIR PREPARATION AND USE
KR101980453B1 (ko) * 2017-11-29 2019-08-30 재단법인 아산사회복지재단 줄기세포 유래 엑소좀 생성 촉진용 조성물
WO2019118817A1 (en) * 2017-12-14 2019-06-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Purified exosome products, method of making, and methods of using
CN108823159B (zh) * 2018-07-13 2022-08-09 上海齐昔生物科技集团有限公司 Pdgf-bb对间充质干细胞释放的外泌体的影响
KR20190063453A (ko) 2019-01-15 2019-06-07 재단법인 아산사회복지재단 줄기세포 유래 엑소좀 생성 촉진용 조성물
EP3950060A4 (en) 2019-04-04 2023-04-19 Nissan Chemical Corporation Composition for promoting secretion of extracellular vesicles
KR102268589B1 (ko) 2019-04-29 2021-06-24 사회복지법인 삼성생명공익재단 단백질분해효소 활성 수용체 매개 신호전달 경로의 활성을 이용한 세포외 소포의 고효율 생성능을 갖는 줄기세포의 선별방법
WO2020222503A1 (ko) * 2019-04-29 2020-11-05 사회복지법인 삼성생명공익재단 단백질분해효소 활성 수용체 매개 신호전달 경로의 활성을 이용한 세포외 소포의 고효율 생성능을 갖는 줄기세포의 선별방법
US20230000920A1 (en) 2019-11-28 2023-01-05 Korea Institute Of Science And Technology Novel use of milk exosomes
KR20210127510A (ko) * 2020-04-14 2021-10-22 사회복지법인 삼성생명공익재단 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 당뇨병성 피부질환 예방 또는 치료용 조성물
JP6967308B1 (ja) * 2020-06-30 2021-11-17 国立大学法人高知大学 胎児付属物由来組織細胞培養上清を含む脳神経障害治療剤
WO2022218443A1 (zh) * 2021-04-16 2022-10-20 卓越细胞工程(香港)有限公司 间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法和组合物
WO2023080413A1 (ko) * 2021-11-02 2023-05-11 주식회사 디자인셀 줄기세포 배양액 및 이로부터 분리된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안구 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN114904043B (zh) * 2022-04-28 2023-07-21 深圳市儿童医院 复合水凝胶及其制备方法和应用
KR20240019971A (ko) 2022-08-05 2024-02-14 주식회사 엠제이바이오젠 엑소좀 농도 향상을 위한 조성물 및 방법
KR20240058028A (ko) * 2022-10-24 2024-05-03 주식회사 디자인셀 줄기세포 배양액 및 상기로부터 분리된 세포외소포를 유효성분으로 포함하는 뇌신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN118772245B (zh) * 2024-08-06 2024-12-27 广州飞来爱生命科技有限公司 一种治疗脑梗的脐带间充质干细胞及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090013425A (ko) * 2007-08-01 2009-02-05 리젠프라임 주식회사 알지네이트로 코팅된 피브린／ｈａ 혼합체 스캐폴드를이용한 중간엽줄기세포의 분화방법 및 연골세포의 배양방법

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060084082A1 (en) * 1997-03-07 2006-04-20 Human Genome Sciences, Inc. 186 human secreted proteins
FR2788780B1 (fr) 1999-01-27 2001-03-30 Ap Cells Inc Procede de preparation de vesicules membranaires
CA2403508A1 (en) * 2000-04-18 2001-10-25 Human Genome Sciences, Inc. Extracellular matrix polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US8537656B2 (en) 2000-07-19 2013-09-17 Ipr Licensing, Inc. Method for compensating for multi-path of a CDMA reverse link utilizing an orthogonal channel structure
PL378334A1 (pl) 2002-12-13 2006-03-20 Celogos Kompozycja podłoża hodowlanego, sposób hodowli i sposób produkcji mioblastów, oraz ich zastosowanie
US8518390B2 (en) * 2003-06-27 2013-08-27 Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc Treatment of stroke and other acute neural degenerative disorders via intranasal administration of umbilical cord-derived cells
EP1758987A4 (en) 2004-05-03 2009-12-16 Peter Maccallum Cancer Inst METHODS FOR EXPANSION AND DIFFERENTIATION OF STEM CELLS
US8034762B2 (en) * 2004-09-02 2011-10-11 Cognosci, Inc. Treatment of subarachnoid hemorrhage with Apo E analogs
CA2623950C (en) 2005-09-30 2016-01-26 Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd. Activating agent of stem cells and/or progenitor cells
WO2007049096A1 (en) * 2005-10-25 2007-05-03 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) A method of expansion of endothelial progenitor cells
KR20180108887A (ko) * 2008-08-20 2018-10-04 안트로제네시스 코포레이션 단리된 태반 세포를 사용한 뇌졸중 치료
JP5869342B2 (ja) * 2008-11-19 2016-02-24 アンスロジェネシス コーポレーション 羊膜由来接着細胞
KR20100116812A (ko) 2009-04-23 2010-11-02 서울대학교산학협력단 세포응집을 이용한 심장줄기세포의 유도, 배양 방법 및 이 방법에 의해 제조된 줄기세포
CN103648509B (zh) 2011-03-11 2019-02-22 儿童医学中心公司 与间充质干细胞外来体相关的方法和组合物
EP2745840B1 (en) * 2011-08-16 2017-07-12 Samsung Life Public Welfare Foundation Composition including stem cell-derived microvesicles for use in promoting neurogenesis
US20140341882A1 (en) 2011-09-13 2014-11-20 Takahiro Ochiya Pharmaceutical product for preventing or treating alzheimer's disease
JP6548897B2 (ja) 2011-12-30 2019-07-24 パテル、アミット 同種異系細胞の医療用途の誘導のための方法及び組成物並びに治療的利用
CA2868506C (en) 2012-04-03 2023-10-24 Reneuron Limited Stem cell microparticles
US20130273011A1 (en) 2012-04-17 2013-10-17 Medistem, Inc. Stem cells and stem cell generated nanoparticles for treatment of inflammatory conditions and acute radiation syndrome
KR20150059168A (ko) * 2012-07-19 2015-05-29 레뉴런 리미티드 줄기 세포 마이크로입자
US20140056842A1 (en) * 2012-08-21 2014-02-27 Jonathan Sackner-Bernstein Cellular therapeutic approaches to traumatic brain and spinal cord injury

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090013425A (ko) * 2007-08-01 2009-02-05 리젠프라임 주식회사 알지네이트로 코팅된 피브린／ｈａ 혼합체 스캐폴드를이용한 중간엽줄기세포의 분화방법 및 연골세포의 배양방법

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018131779A1 (ko) * 2017-01-16 2018-07-19 사회복지법인 삼성생명공익재단 신생아 ｈｉｅ 치료용 조성물
KR20180084610A (ko) * 2017-01-16 2018-07-25 사회복지법인 삼성생명공익재단 신생아 ｈｉｅ 치료용 조성물
US11833176B2 (en) 2017-01-16 2023-12-05 Medinno Inc. Composition for treating neonatal HIE

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015088286A1 (ko) 2015-06-18
EP3081222A4 (en) 2017-08-09
EP3081222A1 (en) 2016-10-19
KR101662405B1 (ko) 2016-10-05
WO2015088288A1 (ko) 2015-06-18
EP3081222B1 (en) 2020-04-15
JP6343671B2 (ja) 2018-06-13
KR20150069554A (ko) 2015-06-23
US9982233B2 (en) 2018-05-29
KR20150069555A (ko) 2015-06-23
EP3081223A1 (en) 2016-10-19
KR101643825B1 (ko) 2016-07-29
US10167448B2 (en) 2019-01-01
EP3081223A4 (en) 2017-05-17
KR101661448B1 (ko) 2016-09-30
JP6190536B2 (ja) 2017-08-30
US20160333317A1 (en) 2016-11-17
JP2016540014A (ja) 2016-12-22
EP3081223B1 (en) 2020-02-19
JP2017500033A (ja) 2017-01-05
US20160310534A1 (en) 2016-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101661448B1 (ko) 트롬빈을 이용한 줄기세포 효능강화방법
Teixeira et al. Secretome of mesenchymal progenitors from the umbilical cord acts as modulator of neural/glial proliferation and differentiation
Qi et al. Exosomes secreted by human-induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells repair critical-sized bone defects through enhanced angiogenesis and osteogenesis in osteoporotic rats
AU2015343845B2 (en) Composition for differentiation induction of adipocyte containing stem cell-derived exosome, regeneration of adipose tissue, and skin whitening or wrinkle improvement
CN101801396B (zh) 治疗神经变性的方法和组合物
KR20180086440A (ko) 신경 세포 세포외 소포체
ES2914692T3 (es) Células madre adhesivas derivadas de cordón umbilical mejoradas, método de preparación para las mismas, y uso de las mismas
Kakkar et al. Adipose tissue derived mesenchymal stem cells are better respondents to TGFβ1 for in vitro generation of cardiomyocyte-like cells
Guo et al. Promoting potential of adipose derived stem cells on peripheral nerve regeneration
Hu et al. Wharton's jelly mesenchymal stem cells differentiate into retinal progenitor cells
EP1099754A1 (en) Mesenchymal stem cells and/or progenitor cells, their isolation and use
JP2016537022A (ja) 間葉系幹細胞から誘導された万能幹細胞を利用して肝細胞に分化させる方法
Salemi et al. Adult stem cell sources for skeletal and smooth muscle tissue engineering
Resca et al. Enrichment in c-Kit improved differentiation potential of amniotic membrane progenitor/stem cells
US20230181647A1 (en) Treatment of ovarian failure using regenerative cells
WO2020130038A1 (ja) 再生治療用組成物及び再生治療用組成物の製造方法
US20220340868A1 (en) Method for preparing skin-derived pluripotent precursor cells
CN102021143B (zh) 一种提高间充质干细胞迁移能力的预处理方法
CN107384862B (zh) MSCs来源的雪旺细胞的制备方法及试剂盒
Wu et al. Neuronal-like cell differentiation of non-adherent bone marrow cell-derived mesenchymal stem cells
CN113667635A (zh) 无异源培养基及使用其扩增间充质干细胞的方法
RU2652902C1 (ru) Способ стимуляции сперматогенеза
KR101538969B1 (ko) 감태 추출물을 포함하는 중간엽 줄기세포 배양용 배지 조성물
WO2022092169A1 (ja) 骨形成組成物およびその用途
KR20240019971A (ko) 엑소좀 농도 향상을 위한 조성물 및 방법

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination
PA0107 Divisional application

Comment text: Divisional Application of Patent

Patent event date: 20160628

Patent event code: PA01071R01D

Filing date: 20141212

Application number text: 1020140179560

PA0201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20160705

Patent event code: PE09021S01D

PG1501 Laying open of application
E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20160808

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20160921

GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20160924

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20160924

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190813

Year of fee payment: 4

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20190813

Start annual number: 4

End annual number: 4

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20210901

Start annual number: 6

End annual number: 6

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20220825

Start annual number: 7

End annual number: 7

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20230821

Start annual number: 8

End annual number: 8

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20240819

Start annual number: 9

End annual number: 9