KR20090063240A

KR20090063240A - 단백질 키나제 억제제 및 그의 사용 방법

Info

Publication number: KR20090063240A
Application number: KR1020097006953A
Authority: KR
Inventors: 유안 미; 파멜라 에이. 앨보
Original assignee: 아이알엠 엘엘씨
Priority date: 2006-10-06
Filing date: 2007-08-27
Publication date: 2009-06-17
Also published as: WO2008045627A3; AU2007308045A1; BRPI0717805A2; EP2076128A2; WO2008045627A2; RU2009116818A; CA2664147A1; MX2009003649A; JP2010505859A; US20100087464A1; CN101522026A; EP2076128A4

Abstract

본 발명은 단백질 키나제 억제제로서 유용한 화합물 및 그의 제약 조성물, 및 비정상적이거나 탈조절된 키나제 활성과 관련된 질병을 치료하거나, 완화하거나 또는 예방하기 위한 상기 화합물의 사용 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 및 SGK 키나제, 또는 이들의 조합의 비정상적 활성화가 관련된 질환 또는 장애를 치료하거나, 완화하거나 또는 예방하기 위한 상기 화합물의 사용 방법을 제공한다.

키나제, 증식성 질환, 백혈병, 신경모세포종

Description

단백질 키나제 억제제 및 그의 사용 방법 {PROTEIN KINASE INHIBITORS AND METHODS FOR USING THEREOF}

<관련 출원에 대한 상호-참조>

본 출원은 2006년 10월 6일에 출원된 미국 가특허 출원 제60/850,361호에 대한 이익을 주장하며, 상기 출원은 그 전문이 본원에 포함된다.

본 발명은 단백질 키나제 억제제 및 상기 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.

단백질 키나제는 다양한 세포 과정을 조절하고 세포 기능에 대한 제어를 유지함에 있어 중추적인 역할을 하는 큰 규모의 단백질 족(family)이다. 상기 키나제의 부분적이고 비제한적인 목록에는 수용체 티로신 키나제, 예컨대 혈소판-유래 성장 인자 수용체 키나제 (PDGFR), 신경 성장 인자 수용체인 TrkB, Met 및 섬유아세포 성장 인자 수용체인 FGFR-3; 비-수용체 티로신 키나제, 예컨대 Abl 및 융합 키나제 Bcr-Abl, Lck, Csk, Fes, Bmx 및 Src; 및 세린/트레오닌 키나제, 예컨대 B-Raf, C-Raf, Sgk, MAP 키나제 (예를 들어, MKK4, MKK6 등), 및 SAPK2α, SAPK2β 및 SAPK3가 포함된다. 키나제의 이상 활성은 양성 및 악성 증식성 장애뿐만 아니 라 면역계 및 신경계의 부적절한 활성화에 기인한 질환을 비롯한 다수의 질환 상태에서 관찰되어 왔다.

본 발명은 단백질 키나제 억제제로서 유용할 수 있는 화합물 및 그의 제약 조성물을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 호변이성질체를 제공한다.

상기 식에서,

W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰은 독립적으로 C 또는 N이고; 단, L, Y, R¹ 및 R²에 부착된 경우, W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 각각은 C이고;

Q는 N, NNR, NO 또는 CR⁰이고;

L은 결합, -O-, -NRC(O)-, -NRC(O)NR-, -C(O)NR-, -NR- 또는 S이고;

R⁰, R¹ 및 R²는 독립적으로 할로; C₁ _- ₆알킬, C₂ _-6알케닐 또는 C₃ _-6알키닐 (이들 각각은 임의로 할로겐화되거나, 또는 N, O 또는 S에 의해 임의로 치환될 수 있음); 또는 임의로 치환된 아릴, 헤테로아릴, 카르보시클릭 고리 또는 헤테로시클릭 고리일 수 있거나; 또는 R⁰은 H이고;

각 R은 H 또는 C₁ _- ₆알킬이고;

X 및 Z는 독립적으로, 임의로 치환된 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릭 고리 또는 카르보시클릭 고리이고;

Y는 임의로 치환된 헤테로아릴이며;

다르게는, 고리 A는 Y와 함께 융합 헤테로아릴을 형성할 수 있거나; 또는 Y와 Z는 함께 융합 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

m은 0 내지 4이고;

n은 0 내지 3이며;

단, 상기 화합물은 3-(1H-피롤-2-일메틸렌)-6-{3-[3-(3-트리플루오로메틸-페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-5-일]-페닐아미노}-1,3-디히드로-인돌-2-온이 아니다.

상기 화학식 1에서, W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 각각은 C일 수 있다. 일부 예에서, W¹, W², W³ 및 W⁴는 각각 C이고, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 중 적어도 하나는 N이다. 다른 예에서, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 중 2개는 N이다. 구체적인 예에서, R¹ 및 R²는 독립적으로 할로이거나, 또는 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C₁ _-6 알콕시이다. 일부 예에서, m은 1이고, n은 0이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 2의 화합물을 제공한다.

상기 식에서,

R¹ 및 R²는 독립적으로 할로이거나, 또는 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C_1-6 알콕시이고;

W⁵ 및 W⁹는 독립적으로 C 또는 N이며; 단, R¹에 부착된 경우, W⁵ 및 W⁹ 각각은 C이고;

X 및 Y는 독립적으로, 임의로 치환된 헤테로아릴이고;

Z는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;

m 및 n은 독립적으로 0 내지 2이다.

상기 화학식 1 및 2에서, X 및 Y는 독립적으로, N, O 또는 S를 갖는 임의로 치환된 5- 내지 6-원 헤테로아릴일 수 있다. 예를 들어, X 및 Y는 독립적으로, 임의로 치환된 피롤릴, 이미다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 피라졸릴, 푸라닐 또는 옥사디아졸릴일 수 있다. 구체적인 예에서, X는 임의로 치환된 피롤릴 또는 이미다졸릴이다. 다른 예에서, Y는 이미다졸릴, 트리아졸릴, 피라졸 또는 옥사디아졸릴이다. 또 다른 예에서, 고리 A는 Y와 함께 벤즈이미다졸릴을 형성한다.

상기 화학식 1 및 2에서, Z는 임의로 치환된 5- 내지 7-원 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다. 예를 들어, Z는 임의로 치환된 페닐, 피리딜 또는 푸라닐일 수 있다. 다른 예에서, Y 및 Z는 함께 벤즈이미다졸릴을 형성한다.

상기 화학식 1 및 2에서, L은 결합 또는 NH일 수 있다. 일부 예에서, Q는 CR⁰이고, R⁰는 H 또는 C₁ _- ₆알킬이다.

상기 화학식 1 및 2에서, 각 X, Y 및 Z는 할로, 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C₁ _-6 알콕시에 의해 임의로 치환될 수 있고, 여기서 탄소는 N, O 또는 S로부터 선택된 헤테로원자에 의해 치환되거나; 또는 -C(O)NR³R⁴, -C(O)NR(CR₂)_kNR³R⁴, (CR₂)_kCO₂R³, (CR₂)_kCN, -NRS(O)_0-2R³, -S(O)_0-2NR³R⁴, -NRS(O)_0-2NR³R⁴, C(O)NR(CR₂)_kOR³ 또는 R⁵에 의해 치환될 수 있고;

R³ 및 R⁴는 독립적으로 H, C₁ _-6알킬, C₃ _-7시클로알킬, 또는 5- 내지 10-원 헤테로시클릭 고리, 아릴, 또는 헤테로아릴 고리이거나; 또는 R³ 및 R⁴는 N과 함께 NR³R⁴로서 임의로 치환된 고리를 형성하고;

R⁵는 C₃ _-7시클로알킬, 5- 내지 10-원 헤테로시클릭 고리, 아릴, 또는 헤테로아릴 고리이고;

k는 0 내지 4이고;

각 R은 H 또는 C₁ _-6알킬이다.

일부 예에서, X는 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C₁ _-6 알콕시, -C(O)NR³R⁴, -C(O)NR(CR₂)_kNR³R⁴, (CR₂)_kCO₂R³ 또는 (CR₂)_kCN에 의해 임의로 치환될 수 있고, 여기서 R, R³ 및 R⁴는 독립적으로 H 또는 C₁ _-6알킬이거나; 또는 R³ 및 R⁴는 N과 함께 NR³R⁴로서 임의로 치환된 고리, 예컨대 피페리디닐을 형성할 수 있다. 다른 예에서, Z는 C₁ _-6알킬, 할로겐화된 C₁ _-6알킬 (예를 들어, CF₃) 또는 할로에 의해 임의로 치환될 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 치료상 유효량의 화학식 1 또는 2의 화합물, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 키나제의 억제가 필요한 계(system) 또는 대상체에게 치료상 유효량의 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물을 투여함으로써 상기 키나제를 억제하는 것을 포함하는, 상기 키나제를 억 제하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라(Aurora), Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 또는 SGK 키나제, 또는 이들의 조합을 억제하는 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 Trk 키나제, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, 또는 이들의 조합을 억제하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은, 비정상적이거나 탈조절된 키나제 활성과 관련된 질병을 치료하거나, 완화하거나 또는 예방하기 위한 화학식 1 또는 2의 화합물의 사용 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 또는 SGK 키나제, 또는 이들의 조합에 의해 매개되는 질병의 치료가 필요한 계 또는 대상체에게 유효량의 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물을 투여함으로써 상기 키나제-매개 질병을 치료하는 것을 포함하는, 상기 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 Trk 키나제, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, 또는 이들의 조합에 의해 매개되는 질병을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 질병의 예로는, 세포 증식성 장애, 예컨대 신경모세포종, 또는 유방, 전립선 또는 췌장의 종양 또는 암이 포함되나, 이에 한정되지는 않는다. 구체적인 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 전립선암 또는 췌장암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 만 성 통증, 골 통증, 비정상적 맥관형성(angiogenesis), 관절염, 당뇨병, 당뇨병성 망막병증, 황반 변성 또는 건선을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은, 키나제, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 또는 SGK 키나제, 또는 이들의 조합을 억제하기 위한 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은, Trk 키나제, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, 또는 이들의 조합을 억제하기 위한 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 이들의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 키나제, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 또는 SGK 키나제, 또는 이들의 조합에 의해 매개되는 질병의 치료용 의약의 제조에 있어서, 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 이들의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 Trk 키나제, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, 또는 이들의 조합에 의해 매개되는 질병의 치료용 의약의 제조에 있어서 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 이들의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명의 화합물을 사용하는 상기 방법에서, 화학식 1 또는 2의 화합물은 세포 또는 조직을 포함하는 계에 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 화학식 1 또는 2의 화합물은 인간 또는 동물 대상체에게 투여될 수 있다.

본 발명의 수행 방식

<화학식 1>

W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰은 독립적으로 C 또는 N이며; 단, L, Y, R¹ 및 R²에 부착되는 경우, W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 각각은 C이고;

Q는 N, NNR, NO 또는 CR⁰이고;

L은 결합, -O-, -NRC(O)-, -NRC(O)NR-, -C(O)NR-, -NR- 또는 S이고;

R⁰, R¹ 및 R²는 독립적으로 할로; C₁ _- ₆알킬, C₂ _-6알케닐 또는 C₃ _-6알키닐 (이들 각각은 임의로 할로겐화되거나, 또는 N, O 또는 S에 의해 임의로 치환될 수 있음); 또는 임의로 치환된 아릴, 헤테로아릴, 카르보시클릭 고리 또는 헤테로시클릭 고리이거나; 또는 R⁰은 H이고;

각 R은 H 또는 C₁ _- ₆알킬이고;

Y는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;

m는 0 내지 4이고;

n는 0 내지 3이며;

<화학식 2>

상기 식에서,

R¹ 및 R²은 독립적으로 할로이거나, 또는 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C_1-6 알콕시이고;

W⁵ 및 W⁹는 독립적으로 C 또는 N이며; 단, R¹에 부착된 경우 W⁵ 및 W⁹ 각각은C이고;

X 및 Y는 독립적으로, 임의로 치환된 헤테로아릴이고;

Z는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;

m 및 n은 독립적으로 0 내지 2이다.

상기 화학식 1 및 2에서 R⁰, R¹ 및 R²에 대해, OR, 시아노, 아미노, 아미도, 구아니디노, 우레아일, 니트로 및 다른 무기 치환기 등 (여기에 한정되지는 않음)을 비롯하여 당업자의 지식 범위 내에 있는 다른 잔기가 사용될 수 있다.

화학식 1 및 2의 화합물은 단백질 키나제 억제제로서 유용할 수 있다. 예를 들어, 화학식 1 또는 2의 화합물, 및 이들의 제약상 허용되는 염, 용매화물, N-옥시드, 전구약물 및 이성질체는, 키나제-매개 질병 또는 질환, 예컨대 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 또는 SGK 키나제, 또는 이들의 조합에 의해 매개되는 질환을 치료하는데 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은, 단백질 키나제에 의해 매개되는 질병, 예컨대 Trk-매개 질병을 완화하기 위해 제2 치료제와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은, 신경모세포종, 또는 유방, 전립선 또는 췌장의 종양 또는 암(여기에 한정되지는 않음)을 비롯한 세포 증식성 장애를 치료하기 위해 화학요법제와 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 화학요법제의 예로는 안트라사이클린, 알킬화제 (예를 들어, 미토마이신 C), 알킬 술포네이트, 아지리딘, 에틸렌이민, 메틸멜라민, 질소 머스타드, 니트로소우레아, 항생제, 항대사물질, 엽산 유사체 (예를 들어, 디히드로폴레이트 환원효소 억제제, 예컨대 메토트렉세이트), 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 효소, 포도필로톡신, 백금-함유 제제, 인터페론 및 인터류킨이 포함되나, 이에 한정되지는 않는다. 본 발명의 조성물 및 방법에 사용될 수 있는 공지된 화학요법제의 구체적인 예로는, 부설판, 임프로설판, 피포설판, 벤조데파, 카르보쿠온, 메트우레데파, 우레데파, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드, 트리메틸올로멜라민, 클로람부실, 클로르나파진, 시클로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드, 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴, 다카바진, 만노무스틴, 미토브로니톨, 미토락톨, 피포브로만, 아클라시노마이신, 악티노마이신 F(1), 안트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카루비신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 다우노마이신, 6-디아조-5-옥소-1-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 플리카마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘, 플루오로우라실, 테가푸르, L-아스파라기나제, 풀모자임, 아세글라톤, 알도포스파미드 글리코시드, 아미노레불린산, 암사크린, 베스트라부실, 비스안트렌, 카르보플라틴, 시스플라틴, 데포파미드, 데메콜신, 디아지쿠온, 엘포르니틴, 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드, 에토포시드, 플루타미드, 질산갈륨, 히드록시우레아, 인터페론-알파, 인터페론-베타, 인터페론-감마, 인터류킨-2, 렌티난, 로니다민, 미토구아존, 미톡산트론, 모피다몰, 니트라크린, 펜토스타틴, 페나메트, 피라루비신, 포도필린산, 2-에틸히드라지드, 프로카르바진, 라족산, 시조피란, 스피로게르마늄, 파클리탁셀, 타목시펜, 테니포시드, 테누아존산, 트리아지쿠온, 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민, 우레탄, 빈블라스틴, 빈크리스틴 및 빈데신이 포함되나, 이에 한정되지는 않는다.

정의

"알킬"은 소정의 잔기 및 다른 기 (예를 들어, 할로-치환된 알킬 및 알콕시)의 구조적 요소로서의 잔기를 지칭하며, 직쇄 또는 분지쇄일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "임의로 치환된 알킬, 알케닐 또는 알키닐"은 임의로 할로겐화된 것 (예를 들어, CF₃), 또는 그 중 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자, 예컨대 NR, O 또는 S에 의해 치환되거나 대체된 것 (예를 들어, -OCH₂CH₂O-, 알킬티올, 티오알콕시, 알킬아민 등)일 수 있다.

"아릴"은 탄소 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 융합 비시클릭 방향족 고리를 지칭한다. 예를 들어, 아릴은 페닐 또는 나프틸일 수 있다. "아릴렌"은 아릴 기로부터 유도된 2가 라디칼을 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "헤테로아릴"은 상기 아릴에 대해 정의된 바와 같으며, 여기서 고리원 중 하나 이상이 헤테로원자이다. 헤테로아릴의 예로는 피리딜, 인돌릴, 인다졸릴, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 벤조푸라닐, 벤조피라닐, 벤조티오피라닐, 벤조[1,3]디옥솔, 이미다졸릴, 벤조-이미다졸릴, 피리미디닐, 푸라닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피라졸릴, 티에닐 등이 포함되나, 이에 한정되지는 않는다.

본원에서 사용된 용어 "카르보시클릭 고리"는, 예를 들어 =O에 의해 임의로 치환될 수 있는 탄소 원자를 함유하는, 포화 또는 부분 불포화된 모노시클릭, 융합 비시클릭 또는 가교 폴리시클릭 고리를 지칭한다. 카르보시클릭 고리의 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로프로필렌, 시클로헥산온 등이 포함되나, 이에 한정되지는 않는다.

본원에서 사용된 용어 "헤테로시클릭 고리"는 상기 카르보시클릭 고리에 대해 정의된 바와 같으며, 여기서 하나 이상의 고리 탄소가 헤테로원자로 대체된다. 예를 들어, 헤테로시클릭 고리는 N, O, S, -N=, -S-, -S(O), -S(O)₂- 또는 -NR- (여 기서, R은 수소, C₁ _- ₄알킬 또는 보호기일 수 있음)을 함유할 수 있다. 헤테로시클릭 고리의 예로는 모르폴리노, 피롤리디닐, 피롤리디닐-2-온, 피페라지닐, 피페리디닐, 피페리디닐론, 1,4-디옥사-8-아자-스피로[4.5]데스-8-일 등이 포함되나, 이에 한정되지는 않는다.

달리 나타내지 않는 한, 치환기는 "임의로 치환된" 것으로 간주되며, 이는 상기 치환기가, 예를 들어 임의로 할로겐화된 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬아민, 알킬티오, 알키닐, 아미드, 아미노 (일치환- 및 이치환된 아미노 기 포함), 아릴, 아릴옥시, 아릴티오, 카르보닐, 카르보시클릭, 시아노, 시클로알킬, 할로겐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 히드록시, 이소시아네이토, 이소티오시아네이토, 머캅토, 니트로, O-카르바밀, N-카르바밀, O-티오카르바밀, N-티오카르바밀, C-아미도, N-아미도, S-술폰아미도, N-술폰아미도, C-카르복시, O-카르복시, 퍼할로알킬, 퍼플루오로알킬, 실릴, 술포닐, 티오카르보닐, 티오시아네이토, 트리할로메탄술포닐, 및 이들의 보호된 화합물로부터 개별적으로 및 독립적으로 선택된 하나 이상의 기(들)에 의해 치환될 수 있는 기임을 의미한다. 상기 치환기의 보호된 화합물을 형성할 수 있는 상기 보호기는 당업자에게 공지되어 있으며, 문헌 [Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley ＆ Sons, New York, NY, 1999] 및 [Kocienski, Protective Groups, Thieme Verlag, New York, NY, 1994] (이들의 전문이 본원에 포함됨)와 같은 참고문헌에서 찾을 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "공동-투여" 또는 "병용 투여" 등은 단일 환자에게 선택된 치료제들을 투여하는 것을 포함하는 의미이며, 제제들을 반드시 동일 경로 또는 동일 시간에 투여할 필요는 없는 치료 처방계획(regimen)을 포함하는 것으로 의도된다.

본원에서 사용되는 용어 "제약 조합물"은 활성 성분들을 혼합하거나 조합하는 것으로부터 수득한 생성물을 지칭하는 것으로, 활성 성분의 고정 및 비고정 조합물 둘 모두를 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 1의 화합물 및 공동-제제가 단일체 형태 또는 단일 투여 형태로 동시에 환자에게 투여된다는 것을 의미한다. 용어 "비고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 1의 화합물 및 공동-제제가 동시에, 공동으로, 또는 특정 시간 제한 없이 순차적으로 개별체로서 환자에게 투여되는 것을 의미하며, 여기서 상기 투여는 환자의 신체에 활성 성분들의 치료상 유효한 수준을 제공한다. 비고정 조합물은 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3개 이상의 활성 성분의 투여에도 적용된다.

"Bcr-Abl의 돌연변이 형태"는 야생형 서열로부터의 단일 또는 복수의 아미노산 변이를 의미한다. 현재까지 22종이 넘는 돌연변이가 보고되었으며, G250E, E255V, T315I, F317L 및 M351T가 가장 흔하다.

"NTKR1"은 TrkA 단백질에 상응하는 유전자 이름이고; "NTKR2"는 TrkB 단백질에 상응하는 유전자 이름이며; "NTKR3"은 TrkC 단백질에 상응하는 유전자 이름이다.

용어 "치료상 유효량"은, 세포, 조직, 기관, 시스템, 동물 또는 인간에 있어 서 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의가 추구하는 생물학적 또는 의학적 반응을 일으킬 대상 화합물의 양을 의미한다.

용어 대상 화합물의 "투여" 및/또는 대상 화합물을 "투여하는 것"은, 치료가 필요한 개체에게 본 발명의 화합물 (본 발명의 화합물의 전구약물 포함)을 제공하는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.

약리학 및 효용성

본 발명의 화합물은 키나제 활성을 조절할 수 있으므로, 키나제가 질환의 병리상태 및/또는 증상의 원인이 되는 질환 또는 장애의 치료에 유용하다. 본원에 기재된 화합물 및 조성물에 의해 억제될 수 있고, 본원에 기재된 방법이 유용할 수 있는 키나제의 예에는 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 및 SGK 키나제가 포함되나, 이에 한정되지는 않는다.

뉴로트로핀(neurotrophin) 수용체의 Trk 족 (TrkA 또는 "NTKR1"; TrkB 또는 "NTKR2"; TrkC 또는 "NTKR3")은 종양 세포 증식 및 생존 뿐만 아니라 분화, 이동 및 전이를 제어할 수 있다. Trk 수용체 하류의 신호전달 경로는 Shc, 활성화된 Ras, ERK-1 및 ERK-2 유전자를 통한 MAPK 활성화의 캐스케이드, 및 PLC-감마 신호전달 경로를 포함한다 (문헌 [Sugimoto et al., Jpn J Cancer Res. 2001, 92: 152-60]).

Trk 티로신 키나제가 유방암 및 전립선암과 같은 여러 암의 발현에 있어 소 정의 역할을 한다는 증거가 있다 (문헌 [Guate et al., Expression of p75LNGFR and Trk Neurotrophin Receptors in Normal and Neoplastic Human Prostate, BJU Int. 1999, 84:495 502]; [Tagliabue et al., J. Biol Chem. 2000, 275:5388 5394]). 또한, Trk 키나제 신호전달의 매개가 유익한 생물학적 효과를 제공할 것이라는 증거가 있다 (문헌 [LeSauteur et al., Adv. Behav. Biol. 1998, 49:615 625; Zhu et al., (1999) J. Clin. Oncology, 1999, 17:2419 28]; [Friess et al., Annals of Surgery 1999, 230:615-24]).

NTRK3 (TrkC) 및 그와 밀접하게 관련된 족 구성원인 NTRK1 (TrkA) 및 NTRK2 (TrkB)는 암의 발현 및 진행에 관련되는데, 이는 아마도 수용체, 그의 리간드 (신경 성장 인자, 뇌 유래 신경영향 인자, 뉴로트로핀)의 상향조절 또는 둘 모두의 상향조절에 의한 것으로 보인다 (문헌 [Rubin et al., Cancer Treat. Res. 2003, 115:1-18]; [Nakagawara, Cancer Lett. 2001, 169:107-14]). NTRK2 및/또는 그의 리간드 BDNF는 췌장 암종 및 전립선 암종, 윌름 종양(Wilm's tumor) 및 신경모세포종에서 다량 발현되는 것으로 나타났다. 또한, NTRK3이 다량 발현되는 것은 흑색종 (특히, 뇌 전이가 있는 경우)의 특징이다. 다수의 경우에, Trk가 다량 발현되는 것은 침습성 종양 거동, 불량한 예후 및 전이와 관련이 있다.

NTKR2 (TrkB) 단백질은 소장 및 결장의 신경내분비-유형 세포에서, 췌장의 알파 세포에서, 림프절 및 비장의 단핵구 및 대식세포에서, 그리고 상피의 과립층에서 발현된다. TrkB 단백질의 발현은 윌름 종양 및 신경모세포종의 비우호적인 진행과 관련이 있었다. 게다가, TrkB는 암성 전립선 세포에서는 발현되지만, 정상 세포에서는 발현되지 않는다.

NTRK2는 세포가 매트릭스에 부착되지 못하게 함으로써 유도되는 아팝토시스(apoptosis)로 정의되는 아노이키스(anoikis)의 강력한 억제제이다. 포스파티딜이노시톨-3-키나제/단백질 키나제 B 신호전달 축(axis)을 활성화시킴으로써, NTRK2는 3-차원 배양에서 형질전환되지 않은 상피 세포의 생존을 촉진하고, 면역-손상 마우스에서 상기 세포의 종양 형성 및 전이를 유도하는 것으로 밝혀져 있다.

유전적 이상, 즉 NTRK2 및 NTRK3 둘 모두가 관련된 점 돌연변이 및 염색체 재배열이 여러 암 유형에서 발견되었다. 티로신 키나제의 점 돌연변이를 동정하기 위한 키놈-수준의 접근법에서, NTRK2 및 NTRK3 둘 모두의 돌연변이가 결장직장암을 앓는 환자로부터 얻은 세포주 및 1차 샘플에서 발견되었으며 (문헌 [ Bardelli et al., Science 2003, 300:949]), 이는 Trk 족 구성원이 전이를 조절하는데 관련되었음을 나타내고, 결장직장암에서의 이들의 기능적 관련성을 시사한다.

또한, 여러 유형의 종양에서 NTRK1 및 NTRK3 둘 모두가 관련된 염색체 전좌(chromosome translocation)가 발견되었다. NTRK1 및 여러 융합 파트너 (TPM3, TPR, TFG)의 세트가 관련된 유전자 재배열은 유두갑상선암 (PTC)의 하위집단의 특징이다 (문헌 [Tallini, Endocr. Pathol. 2002, 13:271-88]). 게다가, 분비성 유방암, 소아 섬유육종 및 선천성 간아세포성 신종(congenital mesoblastic nephroma)이, 구성적 키나제 활성 및 여러 세포주 (섬유아세포, 조혈세포 및 유방 상피세포 포함)에서의 형질전환 가능성을 갖는 것으로 밝혀진 ETV6-NTRK3 융합 유전자를 생성하는 염색체 재배열 t(12;15)과 관련이 있는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Euhus et al., Cancer Cell 2002, 2:347-8]; [Tognon et al., Cancer Cell 2002, 2:367-76]; [Knezevich et al., Cancer Res. 1998, 58:5046-8]; [Knezevich et al., Nat. Genet. 1998, 18:184-7]).

아벨슨 티로신 키나제 (즉, Abl, c-Abl)는 세포 주기의 조절, 유전자독성 스트레스에 대한 세포 반응, 및 인테그린 신호전달을 통한 세포 환경에 관한 정보의 전달에 관여한다. Abl 단백질은 다양한 세포외 및 세포내 출처로부터의 신호를 통합하고, 세포 주기 및 아팝토시스에 관한 결정에 영향을 미치는 세포 모듈로서의 복잡한 역할을 수행하는 것으로 보인다. 아벨슨 티로신 키나제는 아형 유도체, 예컨대 탈조절된 티로신 키나제 활성을 갖는 키메라 융합체 (종양단백질) Bcr-Abl, 또는 v-Abl을 포함한다. Bcr-Abl은 만성 골수성 백혈병 (CML)의 95％ 및 급성 림프구성 백혈병의 10％의 발병에 있어서 중요하다. STI-571 (글리벡)은 발암성 Bcr-Abl 티로신 키나제의 억제제이고, 만성 골수성 백혈병 (CML)의 치료에 사용된다. 그러나, CML의 모구성 발증 단계에 있는 일부 환자는 Bcr-Abl 키나제에서의 돌연변이 때문에 STI-571에 내성이 있다. 현재까지 22종이 넘는 돌연변이가 보고되었으며, 예컨대 G250E, E255V, T315I, F317L 및 M351T가 있다.

본 발명의 화합물은 abl 키나제, 예를 들어 v-abl 키나제를 억제할 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 야생형 Bcr-Abl 키나제 및 Bcr-Abl 키나제의 돌연변이도 억제할 수 있으므로, Bcr-abl-양성 암 및 종양 질환, 예컨대 백혈병 (특히, 아팝토시스성 작용 기작이 발견되는 만성 골수성 백혈병 및 급성 림프모구성 백혈병)의 치료에 적합할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 백혈병 줄기 세포에 대해 효과 적일 수 있고, 상기 세포를 제거 (예를 들어, 골수 제거)한 후에 시험관내에서 이들 세포를 정제하고, 일단 이들 세포로부터 암세포를 제거한 후의 재이식 (예를 들어, 정제된 골수 세포의 재이식)에 대해 잠재적으로 유용할 수 있다.

PDGF (혈소판-유래 성장 인자)는 정상적인 성장, 및 발암현상 및 혈관 평활근 세포의 질환 (예를 들어, 아테롬성 동맥경화증 및 혈전증)과 같은 병리학적 세포 증식에서 중요한 역할을 하는, 흔하게 나타나는 성장 인자이다. 본 발명의 화합물은 PDGF 수용체 (PDGFR) 활성을 억제할 수 있고, 따라서 종양 질환, 예컨대 신경아교종, 육종, 전립선 종양, 결장 종양, 유방 종양 및 난소 종양의 치료에 적합할 수 있다.

본 발명의 화합물은, 예를 들어 소세포 폐암에서 종양-억제 물질로서 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 비-악성 증식성 장애, 예컨대 아테롬성 동맥경화증, 혈전증, 건선, 경피증 및 섬유증의 치료를 위한 제제로서 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은, 예를 들어 화학요법제 (예컨대, 5-플루오로우라실)의 혈액독성 효과에 대항하기 위한 줄기 세포의 보호를 위해 유용할 수 있고, 천식에 있어서 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 특히 PDGF 수용체 키나제의 억제에 반응하는 질환의 치료에 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 이식, 예를 들어 동종 이식의 결과로 발생하는 장애, 특히 조직 거부반응, 예컨대 폐쇄성 기관지염 (OB), 즉 동종 폐 이식물의 만성 거부반응의 치료에 유용한 효과를 나타낼 수 있다. OB가 없는 환자와 달리, OB를 갖는 환자들은 종종 기관지 폐포액의 PDGF 농도가 상승된다.

본 발명의 화합물은 또한 혈관 평활근 세포 이동 및 증식 (여기서, PDGF 및 PDGF-R 역시 소정의 역할을 함)과 관련된 질환, 예컨대 재협착증 및 아테롬성 동맥경화증에 대해 효과적일 수 있다. 시험관내 및 생체내 혈관 평활근 세포의 증식 또는 이동에 대한 상기 효과 및 그로부터의 결과는 본 발명의 화합물의 투여에 의해, 그리고 생체내의 물리적 손상에 따른 혈관 내막의 비후에 대한 그의 효과를 조사함으로써 입증될 수 있다.

비-수용체 단백질-티로신 키나제인 Tec 족 키나제 Bmx는 포유류 상피 암세포의 증식을 제어한다.

혈청 및 글루코코르티코이드-조절된 키나제 (SGK)의 활성은 교란된 이온-채널 활성, 특히 나트륨 및/또는 칼륨 채널의 교란된 이온-채널 활성과 상호관련되어 있으며, 본 발명의 화합물은 고혈압의 치료에 유용할 수 있다.

특정한 비정상적 증식성 질병은 raf 발현과 관련된 것으로 여겨지며, 따라서 raf 발현의 억제에 반응할 것으로 여겨진다. 비정상적으로 높은 수준의 raf 단백질 발현은 또한 형질전환 및 비정상적 세포 증식에 관련되어 있다. 이러한 비정상적 증식성 질병은 또한 raf 발현의 억제에 반응할 것으로 여겨진다. 예를 들어, c-raf 단백질의 발현은, 모든 폐 암종 세포주의 60％가 현저하게 높은 수준의 c-raf mRNA 및 단백질을 발현한다고 보고되었기 때문에, 비정상적 세포 증식에 소정의 역할을 할 것으로 여겨진다. 비정상적 증식성 질병의 추가 예로는 과다증식성 장애, 예컨대 암, 종양, 과다형성증, 폐 섬유증, 맥관형성, 건선, 아테롬성 동맥경화증 및 혈관에서의 평활근 세포 증식, 예컨대 협착증 또는 혈관성형술 후의 재협 착증이 있다. raf가 관여하는 세포성 신호전달 경로는 또한, 예를 들어 조직 이식편 거부반응, 내독소 쇼크 및 사구체 신염과 같이 T-세포 증식 (T-세포 활성화 및 성장)을 특징으로 하는 염증성 장애에 관련되어 있다.

인간 리보솜 S6 단백질 키나제 족은 적어도 8개의 구성원 (RSK1, RSK2, RSK3, RSK4, MSK1, MSK2, p70S6K 및 p70S56 Kb)으로 이루어진다. 리보솜 단백질 S6 단백질 키나제는 중요한 다면발현성 기능을 하며, 그 중에서 단백질 생합성 도중 mRNA 번역의 조절이 핵심적인 역할이다 (문헌 [Eur J. Biochem 2000, 267(21): 6321-30], [Exp Cell Res. 1999, 253 (1):100-9], [Mol Cell Endocrinol. 1999; 151(1-2):65-77]). p70S6에 의한 S6 리보솜 단백질의 인산화는 또한 세포 운동성 (문헌 [Immunol. Cell Biol. 2000, 78(4):447-51]) 및 세포 성장 (문헌 [Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000; 65:101-27])의 조절에 관련되어 있고, 따라서 종양 전이, 면역 반응 및 조직 회복뿐만 아니라 여타 질환 상태에 있어서 중요할 수 있다.

FLk-2 (태아 간 키나제 2)로도 공지된 Flt3 (fms-유사 티로신 키나제)은 유형 III 수용체 티로신 키나제 (RTK) 족의 구성원이다. 급성 골수성 백혈병 (AML), 삼계열 골수이형성증을 동반한 AML (AML/TMDS), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 및 골수이형성 증후군 (MDS)을 비롯한 성인 백혈병 및 소아 백혈병 모두에서 Flt3 유전자의 이상 발현이 보고되어 있다. Flt3 수용체의 활성화 돌연변이가 급성 골수성 백혈병 (AML)을 앓는 환자의 약 35％에서 발견되었으며, 이는 불량한 예후와 관련이 있다. 가장 흔한 돌연변이는 막근접(juxtamembrane) 도메인 내의 인-프레 임(in-frame) 복제와 관련되어 있으며, 추가적인 5 내지 10％의 환자가 아스파라긴 835에서 점 돌연변이를 갖는다. 상기 두 돌연변이는 Flt3 티로신 키나제 활성의 구성적 활성화와 관련되어 있으며, 리간드 부재하의 증식 및 생존 신호를 초래한다. 수용체의 돌연변이 형태를 발현하는 환자는 치유 기회가 감소됨이 밝혀졌다. 이에 따라, 인간 백혈병 및 골수이형성 증후군에서의 과다-활성화 (돌연변이화) Flt3 키나제 활성에 대한 증거들이 축적되어 있다.

본 발명의 화합물은 줄기-세포 인자 (SCF, c-kit 리간드 또는 스틸(steel) 인자로도 공지됨)와 관련된 세포적 과정, 예컨대 SCF 수용체 (kit) 자가인산화 및 MAPK 키나제 (미토겐-활성화 단백질 키나제)의 SCF-자극 활성화를 억제할 수 있다. MO7e 세포는 인간 전골수거핵구성 백혈병 세포주이며, 이는 증식을 위해 SCF에 의존한다. 또한, 본 발명의 화합물은 SCF 수용체의 자가인산화를 억제할 수 있다.

오로라-2는 인간 암, 예컨대 결장암, 유방암 및 기타 고형 종양에 관련된 세린/트레오닌 단백질 키나제이다. 상기 키나제는 세포 주기를 조절하는 단백질 인산화 사건에 관련된 것으로 여겨진다. 특히, 오로라-2는 유사분열 동안 염색체의 정확한 분리를 제어하는 데 있어서 소정의 역할을 할 수 있다. 세포 주기의 오조절(misregulation)은 세포 증식 및 기타 이상을 초래할 수 있다. 인간 결장 암 조직에서, 오로라-2 단백질이 과발현되는 것으로 밝혀졌다.

세린/트레오닌 키나제의 오로라 족 [오로라-A ("1"), B ("2") 및 C ("3")]은 세포 증식에 있어서 중요한 역할을 한다. 상기 단백질은 염색체 분리, 유사분열 방추체 기능 및 세포질 분열을 담당하며, 종양형성과 연관된다. 광범위한 종양 세 포주에서 모든 오로라 족 구성원의 수준 상승이 관찰된다. 오로라 키나제는, 유방 종양에서 염색체 불안정성이 관련된 것으로 보고된 다수의 인간 종양에서 과-발현된다. 예를 들어, 오로라 A 키나제의 이상 활성은 결장직장암, 위암, 인간 방광암 및 난소암과 관련되어 있다. 또한, 신장 종양, 자궁경부 종양, 신경모세포종, 흑색종, 림프종, 췌장 종양 및 전립선 종양 세포주에서 높은 수준의 오로라-A가 보고되었다.

또한, 오로라-B는 다수의 인간 종양 세포주, 예를 들어 백혈병 세포 및 결장직장암에서 다량 발현된다. 보통, 생식 세포에서만 발견되는 오로라-C 또한 1차 결장직장암 및 다양한 종양 세포주 (자궁경부 선암 세포 및 유방 암종 세포 포함)에서 높은 비율로 과-발현된다. 오로라 키나제의 공지된 기능에 기초하여, 이들 활성의 억제는 유사분열을 중지시켜 세포 주기 정지(cell cycle arrest)를 초래할 수 있다. 따라서, 생체내에서 오로라 억제제는 종양 증식을 늦추고, 종양 퇴행을 유도한다.

Chk1 및 Chk2의 불활성화는 손상된 DNA에 의해 유도된 G2/M 정지를 폐기하고, 생성된 체크포인트 결함 세포를 감작화시켜 DNA 손상 사건에 의해 사멸에 이르게 한다. 암 세포가 정상 세포에 비해 G2/M 체크포인트의 폐기에 보다 민감하므로, Chk1, Chk2 또는 둘 모두를 억제하고, G2/M 체크포인트를 폐기하고, DNA 손상 사건에 의한 암 세포 사멸을 개선하는 화합물이 큰 관심의 대상이다.

광범위한 질환 상태 및 질병이 포유류 스터라일(Mammalian Sterile) 20-유사 키나제인 Mst 1 및 Mst 2, 또는 이들의 조합의 활성 조절에 의해 매개되어, 골다공 증, 골감소증, 파제트병(Paget's disease), 혈관 재협착, 당뇨병성 망막병증, 황반 변성, 맥관형성, 아테롬성 동맥경화증, 염증 및 종양 증식을 비롯한 질환을 치료하거나 예방할 수 있다고 여겨진다.

PKA 또는 시클릭 AMP-의존성 단백질 키나제, PKB 또는 Akt, 및 PKC로 공지된 키나제는 모두, 종양발생을 담당하는 신호전달 경로에 있어서 핵심적인 역할을 한다. 상기 키나제의 활성을 억제할 수 있는 화합물은 비정상적 세포 증식을 특징으로 하는 질환, 예컨대 암의 치료에 있어서 유용할 수 있다.

Rho 키나제 (Rock-II)는 혈관수축, 혈소판 응집, 기관지 평활근 수축, 혈관 평활근 증식, 상피세포 증식, 스트레스 섬유 형성, 심장 비대, Na/H 교환 수송계 활성화, 어듀신(adducin) 활성화, 고안압증, 발기부전, 조산, 망막병증, 염증, 면역 질환, AIDS, 수정 및 수정된 난자의 착상, 골다공증, 뇌 기능 장애, 소화관 박테리아 감염 등에 참여한다.

Axl은 다수의 질환 상태, 예컨대 백혈병 및 위암을 비롯한 여러 기타 암과 관련된 수용체 티로신 키나제이다.

브루톤(Bruton) 티로신 키나제 (Btk)는 B 림프구 발생에 있어 중요하다. 비-수용체 티로신 키나제의 Btk 족에는 Btk/Atk, Itk/Emt/Tsk, Bmx/Etk 및 Tec가 포함된다. Btk 족 키나제는 여러 세포적 과정에 있어서 중심적이나 다양한 조절 역할을 한다. 이는 세포외 자극에 반응하여 신호전달에 참여함으로써 세포 성장, 분화 및 아팝토시스를 야기한다. 상기 키나제 족의 이상 활성은 면역결핍 질환 및 여러 암과 관련되어 있다.

섬유아세포 성장 인자 수용체 3은 골 증식에 대해 음성 조절 효과를 나타내며, 연골 세포 증식을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 치사성 이형성증은 섬유아세포 성장 인자 수용체 3에서의 여러 돌연변이에 의해 야기되며, 한 돌연변이인 TDII FGFR3은 전사 인자 Stat1을 활성화시켜 세포-주기 억제제의 발현, 증식 정지 및 비정상적 골 발생을 야기하는 구성적 티로신 키나제 활성을 갖는다 (문헌 [Su et al., Nature 1997, 386:288-292]). 또한, FGFR3은 대체로 다발성 골수종-유형의 암에서 발현된다.

유방 종양 및 흑색종 이종이식 모델에서, 아데노바이러스 감염 도중 또는 Tie2 (Tek)의 세포외 도메인의 주사 동안에, 종양 증식 및 혈관형성(vascularization)의 억제, 및 폐 전이의 감소가 나타났다 (문헌 [Lin et al., J. Clin. Invest. 1997, 100:2072-2078]; [Lin et al., Proc Natl. Acad. Sci. 1998, 95:8829-8834]). Tie2 억제제는 신혈관형성(neovascularization)이 부적합하게 일어나는 상황 (즉, 당뇨병성 망막병증, 만성 염증, 건선, 카포시(Kaposi) 육종, 황반 변성으로 인한 만성 신혈관형성, 류마티스 관절염, 영아성 혈관종 및 암)에 사용될 수 있다.

c-Src 키나제는 다수의 수용체의 종양형성 신호를 전달한다. 예를 들어, 종양에서 EGFR 또는 HER2/neu의 과-발현은 c-src의 구성적 활성화를 야기하는데, 이는 정상 세포에는 존재하지 않는 악성 세포의 특징이다. 한편, c-src의 발현이 결핍된 마우스는 골화석증 표현형을 나타내며, 이는 파골세포 기능에서의 c-src의 핵심적인 참여 및 관련 장애에서의 가능한 관련성을 의미한다.

상기 내용에 따라, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 상기 기재된 임의의 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 상기 임의의 용도에 있어서, 요구되는 투여량은 투여 방식, 치료할 특정 질병 및 원하는 효과에 따라 달라질 것이다 (하기 "투여 및 제약 조성물" 참조).

투여 및 제약 조성물

일반적으로, 본 발명의 화합물은 당업계에 공지된 임의의 일반적이고 허용되는 방식을 통해 단독으로 또는 1종 이상의 치료제와 함께 치료 유효량으로 투여될 것이다. 치료 유효량은 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적 건강 상태, 사용되는 화합물의 효능 및 여타 인자에 따라 광범위하게 달라질 수 있다. 일반적으로, 전신적으로 체중 1 kg 당 약 0.03 내지 2.5 mg의 1일 투여량에서 만족스러운 결과가 얻어지는 것으로 나타난다. 보다 큰 포유동물, 예를 들어 인간에서 지정된 1일 투여량은 약 0.5 mg 내지 약 100 mg의 범위로, 예를 들어 1일 4회 이하의 분할 투여 또는 지연형 투여로 편리하게 투여된다. 경구 투여용으로 적합한 단위 투여 형태는 약 1 내지 50 mg의 활성 성분을 포함한다.

본 발명의 화합물은 제약 조성물로서 임의의 통상적인 경로, 특히 장내로, 예를 들어 경구적으로 (예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로), 또는 비경구적으로 (예를 들어, 주사용 용액제 또는 현탁액제 형태로), 국소적으로 (예를 들어, 로션, 겔, 연고 또는 크림의 형태로), 또는 비내 또는 좌제 형태로 투여될 수 있다.

유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 본 발명의 화합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 제약 조성물은 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 종래 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 조성물은 활성 성분을 a) 희석제, 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신; b) 윤활제, 예를 들어 실리카, 활석, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘 염, 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 정제의 경우 c) 결합제, 예를 들어 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈과 함께; 및 필요한 경우 d) 붕해제, 예를 들어 전분, 아가, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 거품성 혼합물; 및/또는 e) 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제와 함께 포함하는, 정제 또는 젤라틴 캡슐제일 수 있다. 주사용 조성물은 등장성 수용액제 또는 수현탁액제일 수 있고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 제조될 수 있다.

조성물은 멸균되고/되거나, 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 에멀젼화제와 같은 아쥬반트, 용해 촉진제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 추가로, 이들은 또한 치료적으로 가치있는 다른 성분을 함유할 수도 있다. 경피 도포용으로 적합한 제제는 유효량의 본 발명의 화합물을 담체와 함께 포함한다. 담체는 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함하여 숙주의 피부를 통한 통과를 보조할 수 있다. 예를 들어, 경피 장치는 후면 부재, 임의로는 담체와 함께 화합물을 함유한 저장소, 임의로 화합물이 숙주의 피부에 지연된 기간에 걸쳐 제어된 예정 속도로 전달되도록 하는 속도 제어 장벽(barrier), 및 피부에 장치를 고정하 는 수단을 포함하는 붕대의 형태이다. 매트릭스 경피 제제가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 피부 및 눈에 국소 도포용으로 적합한 제제는 당업계에 공지되어 있는 수용액제, 연고, 크림 또는 겔일 수 있다. 이는 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물은 치료 유효량으로 1종 이상의 치료제와 함께 투여될 수 있다 (제약 조합물). 예를 들어, 다른 면역조절성 또는 소염성 물질과 조합하는 경우, 예를 들어 시클로스포린, 라파마이신 또는 아스코마이신, 또는 그의 면역억제성 유사체, 예컨대 시클로스포린 A (CsA), 시클로스포린 G, FK-506, 라파마이신, 또는 그에 필적하는 화합물, 코르티코스테로이드, 시클로포스파미드, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 브레퀴나르, 레플루노미드, 미조리빈, 마이코페놀산, 마이코페놀레이트 모페틸, 15-데옥시스페르구알린, 면역억제성 항체, 특히 백혈구 수용체, 예를 들어 MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58 또는 이들의 리간드에 대한 모노클로날 항체, 또는 CTLA4Ig와 같은 여타 면역조절성 화합물과 조합하여 사용할 때 상승 효과가 발생할 수 있다. 본 발명의 화합물이 다른 치료제와 함께 투여되는 경우, 공동-투여되는 화합물의 투여량은 사용된 공동-약물의 유형, 사용된 특정 약물, 치료하고자 하는 질병 등에 따라 달라질 것이다.

본 발명은 또한 a) 본원에 기재된 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 본 발명의 화합물인 제1 제제, 및 b) 1종 이상의 공동-제제를 포함하는 제약 조합물, 예를 들어 키트를 제공한다. 상기 키트는 그의 투여를 위한 지침서를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조 방법

본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 제조 방법을 포함한다. 기재된 반응에서, 최종 생성물에서 필요한 반응성 관능기 (예를 들어, 히드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카르복시 기)를 당업계에 공지된 보호기를 이용하여 보호함으로써 이들의 원치않는 반응 참여를 피할 수 있다. 통상의 보호기는 표준 실무에 따라 사용될 수 있으며, 예를 들어 문헌 [T.W. Greene and P. G. M. Wuts in "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991]를 참조한다.

한 측면에서, =Q-X가 2-비닐-1H-피롤릴 유도체인 화학식 I의 화합물은 하기 반응식 1에서와 같은 절차에 의해 제조될 수 있다.

상기 식에서, W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹, W¹⁰, Y, Z, L, R, R¹, R², m 및 n은 상기 정의된 바와 같고;

R⁵는 H, 알킬, 또는 당업자에게 공지된 범위내의 임의의 적합한 기일 수 있다.

반응식 1에 도시한 바와 같이, 화학식 I의 화합물은, 적합한 염기 (예컨대, 피페리딘 등) 및 적합한 용매 (예컨대, 에탄올 등)의 존재 하에 화학식 3의 화합물을 카르보닐 화합물 (4)과 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 상기 반응은 약 50℃ 내지 약 120℃의 온도 범위에서 진행되며, 반응 완결을 위해 수 시간이 소요될 수 있다. 상기 반응식 1에서, 피롤릴은 상기 기재된 것과 같은 임의의 치환기에 의해 추가로 치환될 수 있다.

화학식 1의 화합물 합성의 상세한 예는 하기 실시예에서 발견할 수 있다.

본 발명 화합물의 추가적 제조 방법

본 발명의 화합물은 화합물의 유리 염기 형태를 제약상 허용되는 무기산 또는 유기산과 반응시킴으로써 제약상 허용되는 산 부가염으로서 제조될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염기 부가염은 화합물의 유리 산 형태를 제약상 허용되는 무기 염기 또는 유기 염기와 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 화합물의 염 형태는 출발 물질 또는 중간체의 염을 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 유리 산 또는 유리 염기 형태는 각각 상응하는 염기 부가염 또는 산 부가염 형태로부터 제조될 수 있다. 예를 들어, 산 부가염 형태의 본 발명의 화합물은 적합한 염기 (예컨대, 수산화암모늄 용액, 수산화나트륨 등)로 처리함으로써 상응하는 유리 염기로 전환될 수 있다. 염기 부가염 형태의 본 발명의 화합물은 적합한 산 (예컨대, 염산 등)으로 처리함으로써 상응하는 유리 산으로 전환될 수 있다.

산화되지 않은 형태의 본 발명의 화합물은 0 내지 80℃에서 적합한 불활성 유기 용매 (예를 들어, 아세토니트릴, 에탄올, 수성 디옥산 등) 중 환원제 (예를 들어, 황, 이산화황, 트리페닐 포스핀, 수소화붕소리튬, 수소화붕소나트륨, 삼염화인, 삼브롬화인 등)로 처리함으로써 본 발명의 화합물의 N-옥시드로부터 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 전구약물 유도체는 당업자들에게 공지된 방법으로 제조될 수 있다 (예를 들어, 추가 상세사항은 문헌 [Saulnier et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1994, 4:1985-90] 참조). 예를 들어, 적절한 전구약물은 유도체화되지 않은 본 발명의 화합물을 적합한 카르바밀화제 (예를 들어, 1,1-아실옥시알킬카바노클로리데이트, 파라-니트로페닐 카르보네이트 등)와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 보호된 유도체는 당업자들에게 공지된 수단으로 제조될 수 있다. 보호기의 생성 및 제거에 적용할 수 있는 기술에 대한 상세한 설명은 문헌 [T. W. Greene, "Protecting groups in Organic Chemistry", 3^rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999]에서 발견할 수 있다.

본 발명의 화합물은 용매화물 (예를 들어, 수화물)로서 편리하게 제조되거나, 또는 본 발명의 과정 동안 용매화물 (예를 들어, 수화물)로서 형성될 수 있다. 본 발명의 화합물의 수화물은 디옥신, 테트라히드로푸란 또는 메탄올과 같은 유기 용매를 사용하여 수성/유기 용매 혼합물로부터의 재결정화에 의해 편리하게 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 화합물의 라세미 혼합물을 광학 활성 분할제와 반응시켜 1쌍의 부분입체이성질체 화합물을 형성하고, 부분입체이성질체를 분리하고, 광학적으로 순수한 거울상이성질체를 회수함으로써, 이들의 개별 입체이성질체로서 제조될 수 있다. 거울상이성질체의 분할이 본 발명의 화합물의 공유 부분입체이성질체 유도체를 사용하여 수행될 수 있기는 하지만, 해리가능한 복합체가 바람직하다 (예를 들어, 결정질 부분입체이성질체 염). 부분입체이성질체는 독특한 물성 (예를 들어, 융점, 비점, 용해도, 반응성 등)을 갖고, 이러한 차이점을 이용함으로써 용이하게 분리될 수 있다. 부분입체이성질체는 크로마토그래피에 의해, 또는 용해도의 차이에 기초한 분리/분할 기술에 의해 분리될 수 있다. 이어서, 광학적으로 순수한 거울상이성질체는, 라세미화를 일으키지 않는 임의의 실시 수단에 의해 분할제와 함께 회수된다. 화합물의 라세미 혼합물로부터 화합물의 입체이성질체를 분할하기 위해 적용가능한 기술의 보다 상세한 설명은 문헌 [Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981]에서 발견할 수 있다.

요컨대, 화학식 1의 화합물은

(a) 반응식 1의 단계; 및

(b) 임의로는 본 발명의 화합물을 제약상 허용되는 염으로 전환시키는 단계;

(c) 임의로는 본 발명의 화합물의 염 형태를 염이 아닌 형태로 전환시키는 단계;

(d) 임의로는 본 발명의 화합물의 산화되지 않은 형태를 제약상 허용되는 N-옥시드로 전환시키는 단계;

(e) 임의로는 본 발명의 화합물의 N-옥시드 형태를 이의 산화되지 않은 형태로 전환시키는 단계;

(f) 임의로는 이성질체 혼합물로부터 본 발명의 화합물의 개별 이성질체를 분할하는 단계;

(g) 임의로는 유도체화되지 않은 본 발명의 화합물을 제약상 허용되는 전구약물 유도체로 전환시키는 단계; 및

(h) 임의로는 본 발명의 화합물의 전구약물 유도체를 이의 유도체화되지 않은 형태로 전환시키는 단계

를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위해 제공되나, 본 발명이 여기에 한정되지는 않는다. 출발 물질의 제법이 구체적으로 기재되어 있지 않는다면, 그 화합물은 공지된 것이거나, 당업계에 공지된 방법과 유사하게 또는 하기 실시예에 개시된 바와 같이 제조될 수 있다. 당업자는 하기 실시예가 단지 본 발명의 화합물의 제 조 방법 중 대표적인 것일 뿐이고, 다른 공지된 방법도 유사하게 이용될 수 있음을 인지할 것이다.

실시예 1

3-(1H-피롤-2- 일메틸렌 )-6-{3-[5-(3- 트리플루오로메톡시 - 페닐 )-4H-[1,2,4] 트리아졸 -3-일]- 페닐아미노 }-1,3- 디히드로 -인돌-2-온

3-(3-니트로- 페닐 )-5-(3- 트리플루오로메톡시 - 페닐 )-4H-[1,2,4]- 트리아졸 (1)의 합성

3-트리플루오로메톡시벤조산 히드라지드 (60 mg, 0.27 mmol) 및 3-니트로-벤즈이미드산 메틸 에스테르 (0.35 mmol)를 1,2-디클로로에탄 (0.5 ㎖) 중에서 혼합하고, 115℃에서 2일 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LC-MS (m/z) [M⁺+1] 351.2.

(2-니트로-4-{3-[5-(3- 트리플루오로메톡시페닐 )-4-(2- 트리메틸실라닐 - 에톡시메틸 )-4H-[1,2,4] 트리아졸 -3-일]- 페닐아미노 }- 페닐 )-아세트산 에틸 에스테르 (2)의 합성

DMF (2 ㎖) 중 화합물 (1) (40 mg, 0.11 mmol)의 용액에 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 (SEM-Cl, 26 ㎕) 및 탄산세슘 (74 mg)을 이어서 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 용액을 농축하고, 컬럼 크로마트그래피에 의해 정제하여 3-(3-니트로-페닐)-5-(3-트리플루오로메톡시페닐)-4-(2-트리메틸실라닐에톡시메틸)-4H-[1,2,4]트리아졸을 수득하였다. LC-MS (m/z) [M⁺+1] 481.2.

메탄올 (4 ㎖) 중 3-(3-니트로-페닐)-5-(3-트리플루오로메톡시-페닐)-4-(2-트리메틸실라닐-에톡시메틸)-4H-[1,2,4]트리아졸 (45 mg, 0.09 mmol)의 용액에 Pa/C (10 wt％, 10 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 풍선하에 밤새 교반하였다. 이를 셀라이트(Celite)를 통해 여과하고, 농축하였다. LC-MS (m/z) [M⁺+1] 451.2.

3-[5-(3-트리플루오로메톡시-페닐)-4-(2-트리메틸실라닐-에톡시메틸)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]-페닐아민 (38 mg, 0.084 mmol)을 1,4-디옥산 (1 ㎖) 중 (4-브로모-2-니트로-페닐)-아세트산 에틸 에스테르 (24 mg), 잔타포스(xantaphos) (3 mg), 팔라듐(II) 아세테이트 (0.8 mg) 및 탄산세슘 (38 mg)과 혼합하였다. 혼합물을 115℃에서 2일 동안 가열한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축하고, 컬럼 크로마토그래피에 의해 여과하여 (2-니트로-4-{3-[5-(3-트리플루오로메 톡시-페닐)-4-(2-트리메틸실라닐-에톡시메틸)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]-페닐아미노}-페닐)-아세트산 에틸 에스테르를 수득하였다. LC-MS (m/z) [M⁺+1] 658.2.

6-{3-[5-(3- 트리플루오로메톡시 - 페닐 )-4-(2-트리메틸 실라닐 - 에톡시메틸 )-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]- 페닐아미노 }-1,3- 디히드로 -인돌-2-온 (3)의 합성

아세트산 (4 ㎖) 중 (2-니트로-4-{3-[5-(3-트리플루오로메톡시-페닐)-4-(2-트리메틸실라닐-에톡시메틸)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]-페닐아미노}-페닐)-아세트산 에틸 에스테르 (42 mg)의 용액에 탄소상 팔라듐 (10 wt％, 8 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 수소 풍선하에 밤새 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축하고, 조물질을 추가로 정제하지 않고 사용하였다. LC-MS (m/z) [M⁺+1] 582.2.

6-{3-[5-(3- 트리플루오로메톡시 - 페닐 )-4H-[1,2,4] 트리아졸 -3-일]- 페닐아미 노}-1,3- 디히드로 -인돌-2-온 (4)의 합성

무수 메탄올 (1 ㎖) 중 6-{3-[5-(3-트리플루오로메톡시-페닐)-4-(2-트리메틸실라닐-에톡시메틸)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]-페닐아미노}-1,3-디히드로-인돌-2-온 (41 mg)의 용액에 p-톨루엔술폰산 1수화물 (15 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파로 100℃에서 30분 동안 조사하였다. 혼합물을 농축하고, 컬럼 크로마토그래피에 의해 여과하여 표제 화합물을 수득하였다. LC-MS (m/z) [M⁺+1] 452.2.

3-(1H-피롤-2- 일메틸렌 )-6-{3-[5-(3- 트리플루오로메톡시 - 페닐 )-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]- 페닐아미노 }-1,3- 디히드로 -인돌-2-온 (5)의 합성

EtOH (2 ㎖) 중 6-{3-[5-(3-트리플루오로메톡시-페닐)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일]-페닐아미노}-1,3-디히드로-인돌-2-온 (14 mg, 0.03 mmol)의 현탁액에 피롤-2-카르복스알데히드 (3.5 mg) 및 피페리딘 (12 ㎕)을 첨가하였다. 혼합물을 환류온도에서 2시간 동안 가열한 다음, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용-LC/MS에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

적합한 출발 물질을 사용하여 상기 실시예에서 기재된 절차를 반복함으로써, 표 1에서 확인되는 바와 같은 하기 화합물을 수득하였다.

분석법

본 발명의 화합물을, 모 32D 세포에 비하여 Bcr-Abl을 발현하는 32D 세포 (32D-p210)의 세포 증식을 선택적으로 억제하는 그들의 능력을 측정하기 위하여 분석할 수 있었다. 이러한 Bcr-Abl 형질전환된 세포의 증식을 선택적으로 억제하는 화합물을 야생형 또는 돌연변이 형태의 Bcr-abl을 발현하는 Ba/F3 세포에 대한 항증식 활성에 대해 시험하였다.

또한, 본 발명의 화합물을, 모 Ba/F3 세포에 비해 ETV6-NTRK3을 발현하는 Ba/F3 세포 (Ba/F3 EN)의 세포 증식을 선택적으로 억제하는 그들의 능력을 측정하기 위해 분석할 수 있었다. 이러한 ETV6-NTRK3 형질전환된 세포의 증식을 선택적으로 억제하는 화합물을 Trk 족 구성원, 구체적으로 NTRK1 및 NTRK2의 Tel 융합을 발현하는 Ba/F3 세포에 대한 항증식 활성에 대해 시험하였다. 또한, 상기 화합물을 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 및 SGK 키나제를 억제하는 그들의 능력을 측정하기 위해 분석할 수 있었다.

세포성 Bcr - Abl 의존성 증식의 억제 ( 고처리량 방법)

뮤린(murine) 세포주인 32D 조혈 선조 세포주를 Bcr-Abl cDNA로 형질전환시킬 수 있었다 (32D-p210). 이 세포를 페니실린 50 ㎍/㎖, 스트렙토마이신 50 ㎍/㎖ 및 L-글루타민 200 mM가 보충된 RPMI/10％ 송아지 태아 혈청 (RPMI/FCS)에서 유지하였다. 형질전환되지 않은 32D 세포는 IL3의 공급원으로서 15％의 WEHI 조건화 배지를 첨가하여 유사하게 유지하였다.

50 ㎕의 32D 또는 32D-p210 세포 현탁액을 그라이너(Greiner) 384 웰 마이크로플레이트 (블랙)에 1웰 당 5000개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 50 nL의 시험 화합물 (DMSO 원액 중 1 mM)을 각 웰에 첨가하였다 (STI571은 양성 대조군으로서 포함됨). 세포를 72시간 동안 37℃, 5％ CO₂에서 인큐베이션시켰다. 10 ㎕의 60％ 알라마르 블루(Alamar Blue) 용액 (텍 다이아그노스틱스(Tek diagnostics))을 각 웰에 첨가하고, 세포를 추가로 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 형광 강도 (여기 파장 530 ㎚, 방출 파장 580 ㎚)를 액퀘스트(Acquest)(상표명) 시스템 (몰리큘러 디바이시즈(Molecular Devices))을 사용하여 정량하였다.

세포성 Bcr - Abl 의존성 증식의 억제

32D-p210 세포를 96 웰 TC 플레이트에 1웰 당 15,000개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 시험 화합물 (C_max는 40 μM)의 2배 연속 희석액 50 ㎕를 각 웰에 첨가하였다 (STI571은 양성 대조군으로서 포함됨). 세포를 48시간 동안 37℃, 5％ CO₂에서 인큐베이션시킨 후, MTT (프로메가(Promega)) 15 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 세포를 추가 5시간 동안 인큐베이션시켰다. 570 ㎚에서의 광학 밀도를 분광광도계로 정량하고, 용량 반응 곡선으로부터, 50％ 억제에 필요한 화합물의 농도인 IC₅₀ 값을 결정하였다.

세포 주기 분포에 대한 효과

32D 및 32D-p210 세포를 6 웰 TC 플레이트에, 배지 5 ㎖ 중 1웰 당 2.5×10⁶개 세포로 플레이팅하고, 1 또는 10 μM의 시험 화합물을 첨가하였다 (STI571은 대조군으로서 포함됨). 이어서, 세포를 24 또는 48시간 동안 37℃, 5％ CO₂에서 인큐베이션시켰다. 세포 현탁액 2 ㎖를 PBS로 세척하고, 70％ EtOH 중에서 1시간 동안 고정시키고, PBS/EDTA/RNase A로 30분 동안 처리하였다. 요오드화프로피듐 (Cf = 10 ㎍/㎖)을 첨가하고, 형광 강도를 팩스칼리버(FACScalibur)(상표명) 시스템 (비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences))에서 유세포 분석법으로 정량하였다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 시험 화합물은 32D-p210 세포에 대한 아팝토시스성 효과를 나타내는 것으로 입증될 수 있었으나, 32D 모세포에서는 아팝토시스를 유도할 수 없었다.

세포성 Bcr - Abl 자가인산화에 대한 효과

Bcr-Abl 자가인산화를 c-abl 특이적 포획 항체 및 항포스포티로신 항체를 사용하는 포획 엘리자(Elisa)로 정량하였다. 32D-p210 세포를 96 웰 TC 플레이트에 배지 50 ㎕ 중 1웰 당 2×10⁵개 세포로 플레이팅하였다. 시험 화합물 (C_max는 10 μM)의 2배 연속 희석액 50 ㎕를 각 웰에 첨가하였다 (STI571은 양성 대조군으로서 포함됨). 세포를 90분 동안 37℃, 5％ CO₂에서 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포를 1시간 동안 얼음에서 프로테아제 및 포스파타제 억제제를 함유하는 용해 완충액 (50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1 mM EGTA 및 1％ NP-40) 150 ㎕로 처리하였다. 세포 용해물 50 ㎕를, 항-abl 특이적 항체로 사전에 코팅시키고 블로킹한 96 웰 옵티플레이트(optiplate)에 첨가하였다. 플레이트를 4시간 동안 4℃에서 인큐베이션시켰다. TBS-Tween 20 완충액으로 세척한 후, 알칼리-포스파타제가 접합된 항-포스포티로신 항체 50 ㎕를 첨가하고, 플레이트를 밤새 4℃에서 추가로 인큐베이션시켰다. TBS-Tween 20 완충액으로 세척한 후, 발광성 기질 90 ㎕를 첨가하고, 발광을 액퀘스트(상표명) 시스템 (몰리큘러 디바이시즈)을 이용하여 정량하였다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 시험 화합물은 Bcr-Abl 발현 세포의 증식을 억제하며, 세포성 Bcr-Abl 자가인산화를 용량-의존적 방식으로 억제할 수 있었다.

Bcr - abl 의 돌연변이 형태를 발현하는 세포의 증식에 대한 효과

본 발명의 화합물을 야생형 Bcr-Abl, 또는 STI571에 대해 내성이 부여되거나 민감성이 감소된 돌연변이 형태 (G250E, E255V, T315I, F317L, M351T)의 Bcr-Abl을 발현하는 Ba/F3 세포에 대한 그들의 항증식성 효과에 대해 시험할 수 있었다. 돌연변이-Bcr-Abl 발현 세포 및 형질전환되지 않은 세포에 대한 상기 화합물의 항증식성 효과를 (IL3 결핍 배지 중에서) 상기 기재된 바와 같이 10, 3.3, 1.1 및 0.37 μM에서 시험할 수 있었다. 형질전환되지 않은 세포에 대해 독성이 없는 화합물의 IC₅₀ 값을 상기 기재된 바와 같이 수득한 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.

FLT3 및 PDGFR β

FLT3 및 PDGFRβ의 세포 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 하기 방법을 이용하여 수행할 수 있었다. FLT3 및 PDGFRβ에 대해, 각각 Ba/F3-FLT3-ITD 및 Ba/F3-Tel-PDGFRβ를 사용하였다.

본 발명의 화합물을, FLT3 또는 PDGFRβ 세포 키나제 활성에 의존적인, 형질전환된 Ba/F3-FLT3-ITD 또는 Ba/F3-Tel-PDGFRβ 세포 증식을 억제하는 그들의 능력에 대해 시험할 수 있었다. Ba/F3-FLT3-ITD 또는 Ba/F3-Tel-PDGFRβ를, 배양 배지로서 10％ 소 태아 혈청이 보충된 RPMI 1640을 사용하여, 1 ㎖ 당 800,000개 이하의 세포로 현탁 배양하였다. 세포를 384-웰 포맷 플레이트에 1웰 당 50 ㎕ 배양 배지 중 5000개 세포로 분배하였다. 본 발명의 화합물을 디메틸술폭시드 (DMSO)에 용해 및 희석시켰다. 12가지 1:3 연속 희석액을 DMSO 중에서 제조하여, 전형적으로 10 mM 내지 0.05 μM 범위의 농도 구배를 생성하였다. 세포에 희석 화합물 50 nL를 첨가하고, 세포 배양 인큐베이터에서 48시간 동안 인큐베이션시켰다. 증식하는 세포에 의해 생성되는 환원 환경을 모니터링하는데 사용될 수 있는 알라마르블루(등록상표) (트렉 다이아그노스틱 시스템즈(TREK Diagnostic Systems))를 세포에 최종 농도 10％로 첨가하였다. 37℃ 세포 배양 인큐베이터에서 추가로 4시간 인큐베이션시킨 후, 환원된 알라마르블루(등록상표) (여기 파장 530 ㎚, 방출 파장 580 ㎚)로부터의 형광 신호를 애널리스트 지티(Analyst GT) (몰리큘러 디바이시즈 코퍼레이션)로 정량하였다. 12가지 농도에서 각 화합물의 억제율의 선형 회귀 분석에 의해 IC₅₀ 값을 계산하였다.

세포성 ETV6 - NTRK3 의존성 증식의 억제 ( 고처리량 방법)

뮤린 세포주인 Ba/F3 조혈 선조 세포주를 ETV6-NTRK3 cDNA로 형질전환시킬 수 있었다 (Ba/F3 EN). 이 세포를 페니실린 50 ㎍/㎖, 스트렙토마이신 50 ㎍/㎖ 및 L-글루타민 200 mM가 보충된 RPMI/10％ 송아지 태아 혈청 (RPMI/FCS)에서 유지하였다. 형질전환되지 않은 Ba/F3 세포는 IL3의 공급원으로서 10％의 WEHI 조건화 배지를 첨가하여 유사하게 유지하였다.

50 ㎕의 Ba/F3 또는 Ba/F3 EN 세포 현탁액을 그라이너 384 웰 마이크로플레이트 (블랙)에 1웰 당 2000개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 50 nL의 시험 화합물 (DMSO 원액 중 1 mM)을 각 웰에 첨가하였다. 세포를 72시간 동안 37℃, 5％ CO₂에서 인큐베이션시켰다. 10 ㎕의 60％ 알라마르 블루 용액 (텍 다이아그노스틱스)을 각 웰에 첨가하고, 세포를 추가로 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 형광 강도 (여기 파장 530 ㎚, 방출 파장 580 ㎚)를 액퀘스트(상표명) 시스템 (몰리큘러 디바이시즈)을 사용하여 정량하였다.

세포성 ETV6 - NTRK3 의존성 증식의 억제

Ba/F3 EN 세포를 96 웰 TC 플레이트에 1웰 당 배지 90 ㎕ 중 10,000개의 세포로 플레이팅하였다. 시험 화합물 (Cmax는 10 μM)의 3배 연속 희석액 10 ㎕를 각 웰에 첨가하였다 (STI571은 양성 대조군으로서 포함됨). 세포를 72시간 동안 37℃, 5％ CO₂에서 인큐베이션시킨 후, MTT (프로메가) 15 ㎕를 각 웰에 첨가하고, 세포를 추가 5시간 동안 인큐베이션시켰다. 570 ㎚에서의 광학 밀도를 분광광도계로 정량하고, 용량 반응 곡선으로부터 IC₅₀ 값을 결정하였다.

세포의 증식에 대한 효과

본 발명의 화합물을 ETV6-NTRK3 또는 ETV6-NTRK1, ETV6-NTRK2, Bcr-Abl, FLT3, FGFR3, NPM-Alk, FIG-Ros 및 Ror1을 발현하는 Ba/F3 세포에 대한 그들의 항증식성 효과에 대해 시험할 수 있었다. 여러 세포주 및 형질전환되지 않은 세포에 대한 상기 화합물의 항증식성 효과를 상기 기재된 바와 같이 384 웰 플레이트에서 3배 연속 희석액으로 (IL3 결핍 배지 중에서) 시험하였다. 여러 세포주에서 화합물의 IC₅₀ 값을 상기 기재된 바와 같이 수득한 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.

업스테이트 키나제 프로파일러 ( Upstate Kinase Profiler )(상표명) - 방사성-효소 필터 결합 분석

본 발명의 화합물을 키나제 패널 (키나제의 부분적이고 비제한적인 목록에는 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 및 SGK 키나제가 포함됨)의 개별 구성원을 억제하는 그들의 능력에 대해 평가할 수 있었다. 이러한 전반적인 프로토콜에 따라, 최종 농도 10 μM에서 화합물을 이중으로 시험하였다. 키나제 완충액의 조성 및 기질은 업스테이트 키나제 프로파일러(상표명) 패널에 포함된 여러 키나제마다 달라진다는 것을 주의한다. 키나제 완충액 (2.5 ㎕, 10× - 필요한 경우 MnCl₂ 함유), 활성 키나제 (0.001-0.01 유닛; 2.5 ㎕), 키나제 완충액 중의 특이적 또는 폴리(Glu4-Tyr) 펩티드 (5-500 μM 또는 0.01 ㎎/㎖) 및 키나제 완충액 (50 μM; 5 ㎕)을 얼음 상의 에펜도르프 내에서 혼합하였다. Mg/ATP 믹스 (10 ㎕; 67.5 (또는 33.75) mM MgCl₂, 450 (또는 225) μM ATP 및 1 μCi/㎕[γ-³²P]-ATP (3000 Ci/mmol))를 첨가하고, 반응물을 약 30℃에서 약 10분 동안 인큐베이션시켰다. 2 ㎝ × 2 ㎝의 P81 (포스포셀룰로스, (+)로 하전된 펩티드 기질용) 또는 와트만 1호(Whatman No.1) (폴리(Glu4-Tyr) 펩티드 기질용) 페이퍼 스퀘어 위에 반응 혼합물을 스포팅 (20 ㎕)하였다. 분석용 스퀘어를 0.75％ 인산으로 각 5분씩 4회 세척하고, 아세톤으로 5분 동안 1회 세척하였다. 분석용 스퀘어를 섬광 바이알로 옮기고, 섬광 칵테일 5 ㎖를 첨가하고, 펩티드 기질에 대한 ³²P 혼입 (cpm)을 베크만(Beckman) 섬광 계수기로 정량하였다. 억제율을 각 반응에 대해 계산하였다.

유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 1 또는 2의 화합물은, 예를 들어 본 출원에 기재된 시험관내 시험에 의해 나타난 바와 같이 가치있는 약리학적 특성을 나타낼 수 있었다. 상기 실험에서 IC₅₀ 값은, 억제제를 사용하지 않은 대조군을 이용하여 수득한 세포수보다 50％ 적은 세포수를 야기하는 해당 시험 화합물의 농도로 주어진다. 대체적으로, 본 발명의 화합물은 1 nM 내지 10μM의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 일부 예에서, 본 발명의 화합물은 0.01 μM 내지 5 μM의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 다른 예에서, 본 발명의 화합물은 0.01 μM 내지 1 μM, 보다 구체적으로 1 nM 내지 1 μM의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 또 다른 예에서, 본 발명의 화합물은 1 nM 미만 또는 10 μM 초과의 IC₅₀ 값을 나타내었다. 화학식 1 또는 2의 화합물은 10 μM 농도에서 TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라, Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 및 SGK 키나제 중 하나 이상에 대해 50％ 초과의 억제율을 나타낼 수 있거나, 또는 다른 실시양태에서는, 약 70％ 초과의 억제율을 나타낼 수 있었다.

본원에 기재된 실시예 및 실시양태가 단지 설명 목적을 위한 것이고, 이러한 측면에서 다양한 변형 및 변경이 당업자들에게 시사될 것이며, 상기 변형 및 변경이 본 출원의 취지 및 범위, 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함된 것임을 이해해야 한다. 본원에 인용된 모든 문헌, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 본원에 포함된다.

Claims

하기 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 호변이성질체.

<화학식 1>

상기 식에서,

W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰은 독립적으로 C 또는 N이며; 단, L, Y, R¹ 및 R²에 부착된 경우 W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 각각은 C이고;

Q는 N, NNR, NO 또는 CR⁰이고;

L은 결합, -O-, -NRC(O)-, -NRC(O)NR-, -C(O)NR-, -NR- 또는 S이고;

R⁰, R¹ 및 R²는 독립적으로 할로; C₁ _- ₆알킬, C₂ _-6알케닐 또는 C₃ _-6알키닐 (이들 각각은 임의로 할로겐화되거나, 또는 N, O 또는 S에 의해 임의로 치환될 수 있음); 또는 임의로 치환된 아릴, 헤테로아릴, 카르보시클릭 고리 또는 헤테로시클릭 고리이거나; 또는 R⁰은 H이고;

각 R은 H 또는 C₁ _- ₆알킬이고;

X 및 Z는 독립적으로, 임의로 치환된 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릭 고리 또는 카르보시클릭 고리이고;

Y는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;

다르게는, 고리 A는 Y와 함께 융합 헤테로아릴을 형성할 수 있거나; 또는 Y와 Z는 함께 융합 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

m은 0 내지 4이고;

n은 0 내지 3이며;

단, 상기 화합물은 3-(1H-피롤-2-일메틸렌)-6-{3-[3-(3-트리플루오로메틸-페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-5-일]-페닐아미노}-1,3-디히드로-인돌-2-온이 아니다.
제1항에 있어서, X, Y 및 Z가 독립적으로, N, O 또는 S를 갖는 임의로 치환된 5- 내지 7-원 헤테로아릴이거나; 또는 Z가 임의로 치환된 5- 내지 7-원 아릴인 화합물.
제1항에 있어서, X 및 Y가 독립적으로, 임의로 치환된 피롤릴, 이미다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 피라졸릴, 푸라닐 또는 옥사디아졸릴이거나; 또는 고리 A가 Y와 함께 벤즈이미다졸릴을 형성하는 것인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Z가 임의로 치환된 페닐, 피리딜 또는 푸라닐이거나; 또는 Y 및 Z가 함께 벤즈이미다졸릴을 형성하는 것인 화합물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R¹ 및 R²가 독립적으로 할로이거나, 또는 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C₁ _-6 알콕시인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, L이 결합 또는 NH인 화합물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, Q가 CR⁰이고, R⁰이 H 또는 C₁ _- ₆알킬인 화합물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 각 W¹, W², W³, W⁴, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰이 C인 화합물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, W⁵, W⁶, W⁷, W⁸, W⁹ 및 W¹⁰ 중 2개가 N이고, 나머지가 C인 화합물.
제1항에 있어서, 하기 화학식 2의 화합물.

<화학식 2>

상기 식에서,

R¹ 및 R²는 독립적으로 할로이거나, 또는 임의로 할로겐화된 C₁ _-6알킬 또는 C_1-6 알콕시이고;

W⁵ 및 W⁹는 독립적으로 C 또는 N이며; 단, R¹에 부착된 경우 W⁵ 및 W⁹ 각각은 C이고;

X 및 Y는 독립적으로, 임의로 치환된 헤테로아릴이고;

Z는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;

다르게는, 고리 A는 Y와 함께 융합 헤테로아릴을 형성할 수 있거나; 또는 Y와 Z는 함께 융합 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

m 및 n은 독립적으로 0 내지 2이다.
제10항에 있어서, X가 임의로 치환된 피롤릴 또는 이미다졸릴인 화합물.
제10항 또는 제11항에 있어서, Y가 이미다졸릴, 트리아졸릴, 피라졸 또는 옥 사디아졸릴이거나; 또는 고리 A가 Y와 함께 벤즈이미다졸릴을 형성하는 것인 화합물.
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Z가 임의로 치환된 페닐, 피리딜 또는 푸라닐이거나; 또는 Y 및 Z가 함께 벤즈이미다졸릴을 형성하는 것인 화합물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,

로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
치료상 유효량의 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
TrkA, TrkB, TrkC, Abl, Bcr-Abl, cSrc, TPR-Met, Tie2, MET, FGFR3, 오로라(Aurora), Axl, Bmx, BTK, c-kit, CHK2, Flt3, MST2, p70S6K, PDGFR, PKB, PKCα, Raf, ROCK-II, Rsk1 및 SGK 키나제, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부 터 선택된 키나제에 의해 매개되는 질병의 치료용 의약의 제조에 있어서, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물의 용도.
제16항에 있어서, 상기 키나제가 Trk 키나제인 용도.
제16항에 있어서, 상기 질병이 세포 증식성 장애, 만성 통증, 골 통증, 비정상적 맥관형성(angiogenesis), 관절염, 당뇨병, 당뇨병성 망막병증, 황반 변성 또는 건선인 용도.
제18항에 있어서, 상기 세포 증식성 장애가 신경모세포종, 또는 유방, 전립선 또는 췌장의 종양 또는 암인 용도.
제19항에 있어서, 상기 세포 증식성 장애가 전립선 또는 췌장의 종양 또는 암인 용도.