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KR102763347B1 - FcRH5에 대한 인간화 및 친화도 성숙 항체 및 사용방법 - Google Patents

FcRH5에 대한 인간화 및 친화도 성숙 항체 및 사용방법 Download PDF

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KR102763347B1
KR102763347B1 KR1020187000941A KR20187000941A KR102763347B1 KR 102763347 B1 KR102763347 B1 KR 102763347B1 KR 1020187000941 A KR1020187000941 A KR 1020187000941A KR 20187000941 A KR20187000941 A KR 20187000941A KR 102763347 B1 KR102763347 B1 KR 102763347B1
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티무 티. 준틸라
지 리
저스틴 쉐어
다니엘 디카라
디에고 앨러만
크리스토프 스피스
폴 카터
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Abstract

본 발명은, FcRH5 결합 도메인 및 CD3 결합 도메인 (예컨대, FcRH5 T 세포-의존 이중특이적 (TDB) 항체)을 포함하는 항-FcRH5 항체를 포함하는 항-FcRH5 항체, 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

FcRH5에 대한 인간화 및 친화도 성숙 항체 및 사용방법
서열 목록
본원은 ASCII 포맷으로 전자 형식으로 제출되어, 그 전체가 참조로 본원에 편입된 서열 목록을 포함한다. 2016년 6월 14일 화요일에 작성된 상기의 ASCII 사본은 파일명을 "50474-134WO2_Sequence_Listing_6_14_16_ST25"라고 하고, 크기는 133,004 바이트이다.
기술분야
본 발명은 항-FcRH5 항체 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.
세포 증식성 장애, 예컨대 암은 세포 하위집단의 조절되지 않는 성장을 특징으로 한다. 이들은 선진국에서 사망의 주된 원인이고 개발도상국가에서 사망의 제2 주된 원인이며, 1천4백만 건의 신규 암 사례가 진단되고 8백만 건의 암 사망이 매년 발생한다. 국립 암 연구소는 0.5 백만 훨씬 초과의 미국인이 2016년에 암으로 사망할 것이고, 미국에서 매 4건 사망 중에 거의 하나를 차지한다고 추정하였다. 노인 집단이 성장함에 따라, 암의 발생빈도는 동반하여 상승하였고, 암 발생의 개연성은 70세 이후 2-배 초과 더 높다. 암 치료는 따라서 유의미한 및 계속 증가하는 사회적 부담을 도시한다.
Fc 수용체 유사 5(FcRH5, 또는 FcRL5 또는 IRTA2로도 공지됨) 유전자는 면역글로불린 슈퍼패밀리(IgSF)의 최근 식별된 6개의 유전자 계열에 속한다. 이러한 유전자 계열은 보존된 게놈 구조, 세포외 Ig 도메인 조성 및 신호전달 모티프와 같은 면역 수용체 티로신계 억제성 (ITIM) 및 면역수용체 티로신계 활성화(ITAM)를 갖는 Fc 수용체에 밀접하게 관련된다 (Davis et al. Eur . J. Immunol . 35:674-80, 2005). FcRH/IRTA 수용체 패밀리의 하기의 6개의 구성원이 기재되었다: FcRH1/IRTA5, FcRH2/IRTA4, FcRH3/IRTA3, FcRH4/IRTA1, FcRH5/IRTA2, 및 FcRH6 (Polson et al. Int . Immunol . 18(9):1363-1373, 2006. FcRH cDNA는 다중 Ig-유사 세포외 도메인 및 공통 면역수용체 티로신계 활성화 및/또는 억제성 신호전달 모티프를 함유하는 세포질 도메인을 갖는 유형 I 막투과성 당단백질을 암호화한다. FcRH 유전자는 구조적으로 관련이 있으며, 이들의 단백질 생성물은 서로 28-60%의 세포외 동일성을 공유한다. 그들은 또한 가장 가까운 FcR 친척과 15-31%의 동일성을 공유한다. 상이한 FcRH 사이에는 고도의 상동성이 있다.
FcRH5에 대한 리간드(들)는 공지되지 않았지만, FcRH5는 항원 프라이밍된 B 세포의 발생 동안 증진된 증식 및 다운스트림 이소형 발현에 관여한다 (Dement-Brown et al. J. Leukoc . Biol . 91:59-67, 2012). FcRH5 유전자좌는 3개의 주요한 mRNA 동형체(FcRH5a, FcRH5b 및 FcRH5c)을 갖는다. 이러한 전사체에 의해 암호화된 주요 FcRH5 단백질 동형체는 잔기 560까지 공통 아미노산 서열을 공유하여 공통 신호 펩티드와 6개의 세포외 Ig-유사 도메인을 특징으로 한다. FcRH5a는 8개의 Ig-유사 도메인을 갖고, 이의 C-말단에 13개의 독특하고 주로 극성 아미노산이 뒤따르는 759-아미노산 분비된 당단백질을 도시한다. FcRH5b는 아미노산 잔기 560에서 FcRH5a로부터 발산하고, 소수성이 GPI 앵커를 통해 원형질막에의 도킹에 적합한 32개의 추가의 잔기의 짧은 연신을 위해 연장된다. FcRH5c는 서열이 아미노산 746에서 FcRH5a로부터 벗어나는 가장 긴 동형체이다. FcRH5c는 8개의 잠재적 N 결합된 글리코실화 부위, 23-아미노산 막투과성 도메인 및 ITIM 공통을 갖는 3개의 공통 SH2 결합 모티프를 갖는 104-아미노산 세포질 도메인이 잠복하는 9개의 세포외 Ig-유사 도메인을 갖는 977-아미노산 유형 I 막투과성 당단백질을 암호화한다.
FcRH 유전자는 염색체 1의 1q21-23 영역 중의 고전적인 FcR 유전자(FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및 FcεRI)의 중간에서 함께 클러스터링된다. 이 영역은 조혈 종양, 특히 다발성 골수종에서 악성 표현형과 관련된 가장 빈번한 2차 염색체 이상 중 하나를 함유한다 (Hatzivassiliou et al. Immunity. 14:277-89, 2001). FcRH5는 초기에 B 세포 전에 개시하여 B 세포 계통에서만 발현되지만, 성숙한 B 세포 단계까지 완전한 발현을 달성하지 않는다. 대부분의 공지된 다른 B 세포 특이적 표면 단백질(예: CD20, CD19 및 CD22)과 달리, FcRH5는 형질 세포에서 계속 발현되는 반면 다른 B 세포 특이적 마커는 하향 조절된다 (Polson et al. Int. Immunol. 18:1363-73, 2006). 또한, FcRH5 mRNA는 올리고뉴클레오티드 어레이에 의해 검출된 1q21 이상을 갖는 다발성 골수종 세포주에서 과발현된다 (Inoue Am. J. Pathol . 165:71-81, 2004). 발현 패턴은, FcRH5가 다발성 골수종의 치료를 위한 항체 기반 요법의 표적일 수 있음을 도시한다. 다발성 골수종은 골격 병변, 신부전, 빈혈 및 고칼슘혈증을 특징으로 하는 형질 세포의 악성 종양이며, 이는 현재의 치료법으로는 본질적으로 치료 불가능하다. 현재 다발성 골수종에 대한 약물 치료에는 프로테오좀 억제제 보르테조밉(VELCADE®), 면역조절물질 레날리도미드(REVLIMID®) 및 스테로이드 덱사메타손이 포함된다.
단클론성 항체 (mAb)-기반 요법이 암에 대한 중요한 치료 양식으로 되었다. FcRH5c 특이적 항체 기반 요법 및 검출 방법은 FcRH5의 가용성 및 막 동형체 모두를 인식하는 항체보다는 표적 세포, 막 관련 FcRH5를 특이적으로 인식하기 때문에, 특히 효과적일 수 있다. 그러나, FcRH5의 최종 Ig-유사 도메인(Ig-유사 도메인 9)만이 FcRH5의 3가지 주요 동형체(예: FcRH5a, FcRH5b 및 FcRH5c)을 구별하는 고유의 세포외 영역이며, FcRH5 내의 Ig-유사 도메인 사이에 유의한 상동성이 존재한다. 또한, 최종 Ig-유사 도메인은 FcRH1, FcRH2, FcRH3 및 FcRH5 사이에서 고도로 보존된다. FcRH5를 특이적으로 표적화하는 항체 기반 요법은 불리한 표적외 효과(예: FcRH3은 정상 NK 세포에서 발현된다)를 피하기 위해 다른 FcRH와의 최소 교차 반응성을 가져야 한다.
상기를 고려하여, 세포 증식성 장애(예: 암, FcRH5-양성 암, 예를 들면, 다발성 골수종)의 치료에 사용하기에 안전하고 효과적인 제제에 대한 분야에서 충족되지 않은 요구가 있다.
본 발명은 항-FcRH5 항체(예: 이중특이적 항체, 예를 들면, FcRH5 T 세포 의존성 이중특이적(TDB) 항체), 조성물 및 이를 세포 증식성 장애(예: 암, 예를 들면, FcRH5-양성 암, 예를 들면, 다발성 골수종)를 치료하는데 사용하는 방법을 제공한다.
제1 양태에서, 본 발명은, 하기 6 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 항-Fc 수용체-유사 5 (FcRH5) 항체를 특징으로 한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 104의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인, (b) 서열 번호: 105의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 프레임워크 영역 (FR) 을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 106의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 107의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 82의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 83의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 84의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 85의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 86의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 87의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 88의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 89의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 90의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 91의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 92의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 93의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함하는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 94의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 95의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 96의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 97의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 98의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 99의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 100의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 101의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 102의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 103의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 한다: (a) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 110의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 111의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 67의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 68의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 111의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 111의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 한다: (a) 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 기타 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 112의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 113의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 기타 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 기타 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함한다. 기타 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 기타 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함한다. 기타 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 한다: (a) 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 108의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 109의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기 중쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
선행 양태 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5의 Ig-유사 도메인 9 중의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 서열 번호: 114의 아미노산 743-850의 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 인간 FcRH5, 시노몰구스 원숭이 (cyno) FcRH5, 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 FcRH1, FcRH2, FcRH3 및/또는 FcRH4에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 100nM 이하의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 10 pM 내지 약 100 nM의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 100 pM 내지 약 100 nM의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 1 nM 내지 약 20 nM의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 1 nM 내지 약 10 nM의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 100nM 이하의 KD 로 시노몰구스(cyno) FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 10 pM 내지 약 100 nM의 KD 로 시노몰구스(cyno) FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 100 pM 내지 약 100 nM의 KD 로 시노몰구스(cyno) FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 1 nM 내지 약 50 nM의 KD 로 시노몰구스(cyno) FcRH5에 결합한다.
다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 탈글리코실화 부위 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 탈글리코실화 부위 돌연변이는 치환 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 탈글리코실화 부위 돌연변이는 항-FcRH5 항체의 효과기 기능을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 N297, L234, L235, D265, 및/또는 P329 (EU 넘버링)에서의 것이다. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: N297G, N297A, L234A, L235A, D265A, 및 P329G. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 N297G 돌연변이이다.
기타 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 IgG 항체이다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5에 결합하는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 비스-Fab, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 비스-Fab 단편이다.
기타 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 단일특이적 항체이다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 다중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 분화 3의 클러스터(CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 CD3의 아미노산 잔기 Glu6을 포함하는 CD3 상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 CD3의 Met7, Gln1, 및 Asp2로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가 아미노산 잔기를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2 및 Glu6을 포함한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기Gln1, Asp2, Glu6, 및 Met7을 포함한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Glu5를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Gly3 및 Glu5를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2, Glu6, 및 Met7로 구성된다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 인간 CD3 폴리펩티드 또는 시노몰구스 CD3 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 CD3 폴리펩티드 또는 시노몰구스(cyno) CD3 폴리펩티드는 각각, 인간 CD3ε 폴리펩티드 또는 시노몰구스 CD3ε 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 인간 CD3 폴리펩티드 또는 시노몰구스(cyno) CD3 폴리펩티드는 각각, 인간 CD3γ 폴리펩티드 또는 시노몰구스 CD3γ 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은, 인간 CD3ε 폴리펩티드에, 약 100 nM 이하의 KD 로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은, 인간 CD3ε 폴리펩티드에, 약 10 pM 내지 약 100 nM의 KD 로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은, 인간 CD3ε 폴리펩티드에, 약 100 pM 내지 약 50 nM의 KD 로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은, 인간 CD3ε 폴리펩티드에, 약 1 nM 내지 약 10 nM의 KD 로 결합한다.
일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 133의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 134의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 중쇄 가변 영역 FR을 포함한다: (a) 서열 번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 128의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 129의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 130의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 132의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
기타 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 137의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 138의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 중쇄 가변 영역 FR을 포함한다: (a) 서열 번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 128의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 129의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 130의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 132의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
기타 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 153의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 154의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 중쇄 가변 영역 FR을 포함한다: (a) 서열 번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 146의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 147의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 148의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 149의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 150의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 151의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 152의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
기타 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 172의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, (b) 서열 번호: 173의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 중쇄 가변 영역 FR을 포함한다: (a) 서열 번호: 164의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1, (b) 서열 번호: 165의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2, (c) 서열 번호: 166의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3, 및 (d) 서열 번호: 167의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 경쇄 가변 영역 FR을 추가로 포함한다: (a) 서열 번호: 168의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1, (b) 서열 번호: 169의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2, (c) 서열 번호: 170의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3, 및 (d) 서열 번호: 171의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 173의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 173의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, FcRH5에 결합하는 결합 도메인은 하전된 영역(CR 1 )을 포함하는 VH 도메인(VH 1 ) 및 하전된 영역(CR 2 )을 포함하는 VL 도메인(VL 1 )을 포함하고, 이때 VH 1 중의 CR 1 은 VL 1 중의 CR 2 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR 1 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 2 는 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 1 은 Q39K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 1 은 Q39K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 2 은 Q38E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 2 은 Q38E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 하전된 영역(CR 3 )을 포함하는 VH 도메인(VH 2 ) 및 하전된 영역(CR 4 )을 포함하는 VL 도메인(VL 2 )을 포함하고, 이때 VL 2 중의 CR 4 는 VH 2 중의 CR 3 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR 4 는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 3 은 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 4 은 Q38K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 4 은 Q38K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 3 은 Q39E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 3 은 Q39E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, VL 1 도메인은 경쇄 불변(CL) 도메인(CL 1 )에 연결되고, VH 1 은 제1 중쇄 불변 (CH1) 도메인(CH1 1 )에 연결되며, 이때 CL 1 은 하전된 영역(CR 5 )을 포함하고, CH1 1 은 하전된 영역(CR 6 )을 포함하고, CL 1 중의 CR 5 는 CH1 1 중의 CR 6 과 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR 5 는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 6 은 산성 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 5 은 V133K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 5 은 V133K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 6 은 S183E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 6 은 S183E 치환 돌연변이로 구성된다.
기타 구현예에서, VL 2 도메인은 CL 도메인(CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인(CH1 2 )에 연결되며, 이때 CL 2 는 하전된 영역(CR 7 )을 포함하고, CH1 2 는 하전된 영역(CR 8 )을 포함하고, CH1 2 중의 CR 8 은 CL 2 중의 CR 7 과 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR 8 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 7 은 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 8 은 S183K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 8 은 S183K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 7 은 V133E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 7 은 V133E 치환 돌연변이로 구성된다.
다른 구현예에서, VL 2 도메인은 CL 도메인(CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인(CH1 2 )에 연결되며, 여기서 (a) CL 2 는 아미노산 잔기 F116, L135, S174, S176 및/또는 T178(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, (b) CH1 2 는 아미노산 잔기 A141, F170, S181, S183 및/또는 V185(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, CL 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및/또는 T178V. 일부 구현예에서, CL 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V. 일부 구현예에서, CH1 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및/또는 V185A. 일부 구현예에서, CH1 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및 V185A.
일부 구현예에서, FcRH5에 결합하는 결합 도메인은 하전된 영역(CR 1 )을 포함하는 VH 도메인(VH 1 ) 및 하전된 영역(CR2)을 포함하는 VL 도메인(VL 1 )을 포함하고, 이때 VL 1 중의 CR 2 는 VH 1 중의 CR 1 과 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR2 는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 1 은 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 2 은 Q38K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 2 은 Q38K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 1 은 Q39E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 1 은 Q39E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 하전된 영역(CR 3 )을 포함하는 VH 도메인(VH 2 ) 및 하전된 영역(CR 4 )을 포함하는 VL 도메인(VL 2 )을 포함하고, 이때 VH 2 중의 CR3 는 VL 2 중의 CR 4 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR 3 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 4 는 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 3 은 Q39K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 3 은 Q39K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 4 은 Q38E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 4 은 Q38E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, VL 1 도메인은 경쇄 불변(CL) 도메인(CL 1 )에 연결되고, VH 1 은 제1 중쇄 불변 (CH1) 도메인(CH1 1 )에 연결되며, 이때 CL 1 은 하전된 영역(CR 5 )을 포함하고, CH1 1 은 하전된 영역(CR 6 )을 포함하고, CH1 1 중의 CR 6 은 CL 1 중의 CR 5 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR 6 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR5 는 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 6 은 S183K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 6 은 S183K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 5 은 V133E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 5 은 V133E 치환 돌연변이로 구성된다.
기타 구현예에서, VL 2 도메인은 CL 도메인(CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인(CH1 2 )에 연결되며, 이때 CL 2 는 하전된 영역(CR 7 )을 포함하고, CH1 2 는 하전된 영역(CR 8 )을 포함하고, CL 2 중의 CR 7 은 CH1 2 . 중의 CR 8 과 하전된 쌍을 형성한다. 일부 구현예에서, CR7 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 8 은 산성 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, CR7 은 V133K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 7 은 V133K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 구현예에서, CR 8 은 S183E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, CR 8 은 S183E 치환 돌연변이로 구성된다.
다른 구현예에서, VL 2 도메인은 CL 도메인(CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인(CH1 2 )에 연결되며, 여기서 (a) CL 2 는 아미노산 잔기 F116, L135, S174, S176 및/또는 T178(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, (b) CH1 2 는 아미노산 잔기 A141, F170, S181, S183 및/또는 V185(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, CL 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및/또는 T178V. 일부 구현예에서, CL 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V. 일부 구현예에서, CH1 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및/또는 V185A. 일부 구현예에서, CH1 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및 V185A. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 하나 이상의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서 하나 이상의 중쇄 불변 도메인은 제1 CH2 도메인(CH2 1 ), 제1 CH3 도메인(CH3 1 ), 제2 CH2 도메인(CH2 2 ) 및 제2 CH3 도메인(CH3 2 )으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 중쇄 불변 도메인 중 적어도 하나는 또 다른 중쇄 불변 도메인과 쌍형성한다. 일부 구현예에서, CH3 1 및 CH3 2 는 각각 돌출부(P 1 ) 또는 공동(C 1 )을 포함하고, CH3 1 중의 P 1 또는 C 1 은 CH3 2 중의 각각 C 1 또는 P 1 에 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, CH3 1 및 CH3 2 는 P 1 과 C 1 사이의 계면에서 만난다. 일부 구현예에서, CH2 1 및 CH2 2 는 각각 (P 2 ) 또는 공동(C 2 )을 포함하고, CH2 1 중의 P 2 또는 C 2 는 CH2 2 중의 각각 C 2 또는 P 2 에 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, CH2 1 및 CH2 2 는 P 2 과 C 2 사이의 계면에서 만난다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암을 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 제1 결합 도메인: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 HVR을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 여기서 항-FcRH5 아암 및 항-CD3 아암은 각각 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)을 포함하고, 항-FcRH5 아암은 T366W 치환 돌연변이를 포함하고, 그리고 항-CD3 아암 포함 T366S, L368A, 및 Y407V 치환 돌연변이를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암을 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 제1 결합 도메인: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 HVR을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암을 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 제1 결합 도메인: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 HVR을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암을 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 제1 결합 도메인: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 HVR을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암을 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 제1 결합 도메인: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 HVR을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 특징으로 하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
본 발명의 양태 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 10ml/kg/일 내지 약 35ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 마우스에서 약 10ml/kg/일 내지 약 20ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 마우스에서 약 12 ml/kg/일 내지 약 16 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 시노몰구스에서 약 20 ml/kg/일 내지 약 40 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 시노몰구스에서 약 25 ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 시노몰구스에서 약 30 ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체 또는 FcRH5에 결합하는 이의 결합 도메인을 포함하는 이의 부분을 암호화하는 단리된 핵산을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 선행 양태의 단리된 핵산을 포함하는 벡터를 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 선행 양태의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 포유동물 세포이다. 일부 구현예에서, 포유동물 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포이다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 원핵 세포이다. 일부 구현예에서, 원핵 세포는 이. 콜라이 세포이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 선행 양태의 임의의 것의 항-FcRH5 항체를 생산하는 방법을 특징으로 하며, 상기 방법은 배양 배지에서 선행 양태의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 항-FcRH5 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 CD3에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 항체를 암호화하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 공동 배양된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 이중특이적 항-FcRH5 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체 및 세포독성제를 포함하는 면역콘주게이트를 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 양태 중 어느 하나의 항-FcRH5 항체를 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 일부 구현예에서,조성물은 추가로, 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 부형제는 완충제, 담체, 안정화제 또는 보존제가다. 일부 구현예에서, 조성물은 약제학적 조성물이다. 일부 구현예에서, 조성물은 PD-1 축 결합 길항제 또는 추가 치료제를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은, 약제로서 사용하기 위한, 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체를 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은, 이를 필요로 하는 대상체에게 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한, 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체를 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기를 특징으로 한다: FcRH5-양성 암을 갖는 대상체에서 면역 기능을 증진시키는데 사용하기 위한, 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 B 세포 암이다. 또 다른 양태에서, B 세포 암은 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 외투 세포 림프종(MCL), 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 및 여포성 림프종(FL)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 또 다른 구현예에서, B 세포 암은 MM이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은, 대상체에게 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위한 약제의 제조에서의, 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체 또는 조성물의 용도를 특징으로 한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은, FcRH5-양성 암을 갖는 대상체에서 면역 기능을 증진시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체 또는 조성물의 용도를 특징으로 한다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 B 세포 암이다. 일부 구현예에서, B 세포 암은 MM, CLL, MCL, DLBCL 및 FL로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, B 세포 암은 MM이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은, 이를 필요로 하는 대상체에서 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법을 특징으로 하며, 상기 방법은 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체를 대상체에 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5-양성 암을 갖는 대상체에서 면역 기능을 증진시키는 방법을 특징으로 하며, 상기 방법은 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체의 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 B 세포 암이다. 일부 구현예에서, B 세포 암은 MM, CLL, MCL, DLBCL 및 FL로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, B 세포 암은 MM이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 (a) 표적 세포 상에 위치된 FcRH5 분자 및 (b) 면역 효과기 세포 상에 위치된 CD3 분자에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5 분자 및 CD3 분자에 결합한 후 면역 효과기 세포를 활성화시킨다. 일부 구현예에서, 활성화된 면역 효과기 세포는 표적 세포 상에서 세포독성 효과 및 또는 세포사멸 효과를 행사할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 형질 세포이다. 일부 구현예에서, 형질 세포는 짧은 수명의 형질 세포이다. 일부 구현예에서, 형질 세포는 긴 수명의 형질 세포이다. 일부 구현예에서, 형질 세포는 골수종 세포이다. 일부 구현예에서, 방법은 약 0.01mg/kg/wk 내지 약 50mg/kg/wk의 용량으로 항-FcRH5 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 약 0.1 mg/kg/wk 내지 약 10 mg/kg/wk의 용량으로 항-FcRH5 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 약 1 mg/kg/wk의 용량으로 항-FcRH5 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
기타 구현예에서, 본 방법은 추가로 대상체에게 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 추가 치료제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PD-1 축 결합 길항제 또는 추가 치료제가 상기 항-FcRH5 항체 투여 이전 또는 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 축 결합 길항제 또는 추가 치료제는 항-FcRH5 항체와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L1 결합 길항제, PD-1 결합 길항제, 및 PD-L2 결합 길항제로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L1 결합 길항제이다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: MPDL3280A (아테조리주맙), YW243.55.S70, MDX-1105, MEDI4736 (두르발루맙), 및 MSB0010718C (아벨루맙). 일부 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 MPDL3280A (아테조리주맙)이다. 일부 구현예에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제이다. 일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: MDX 1106 (니볼루맙), MK-3475 (펨브로리주맙), CT-011 (피딜리주맙), MEDI-0680 (AMP-514), PDR001, REGN2810, 및 BGB-108. 일부 구현예에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L2 결합 길항제이다. 일부 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 항체 또는 면역접합체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 스테로이드, 면역조절물질(IMiD), 프로테오좀 억제제(PI) 또는 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 글루코코르티코이드이다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다. 일부 구현예에서, IMiD는 레날리도미드이다. 일부 구현예에서, PI은 보르테조밉이다.
기타 구현예에서, 상기 방법은, 선행 양태 중 임의의 하나의, 항-FcRH5 항체, PD-1 축 결합 길항제, 스테로이드, IMiD, PI, 또는 이의 조합물을, 정맥내로, 피하로, 근육내로, 국소로, 경구로, 경피로, 복강내로, 안와내로, 이식에 의해, 흡입에 의해, 척추강내로, 심실내로, 또는 비강내로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 항-FcRH5 항체, PD-1 축 결합 길항제, 스테로이드, IMiD, PI 또는 이들의 조합을 정맥내로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 항-FcRH5 항체, PD-1 축 결합 길항제, 스테로이드, IMiD, PI 또는 이들의 조합을 피하로 투여하는 단계를 포함한다. 선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체 유래의 생물학적 샘플에서 FcRH5를 검출하는 방법을 특징으로 하며, 상기 방법은 하기를 포함한다: (a) 생물학적 샘플에서 천연 발생 FcRH5에 대한 항-FcRH5 항체의 결합을 허용하는 조건 하에서 생물학적 샘플을 본 발명의 양태 중 어느 하나의 항-FcRH5 항체와 접촉시키는 단계 및 (b) 복합체가 생물학적 샘플에서 항-FcRH5 항체와 천연 발생 FcRH5 사이에서 형성되는지의 여부를 검출하는 단계. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액 샘플이다. 이러한 양태의 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기를 포함하는 키트를 특징으로 한다: 대상체에서 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위한, 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체, 및 상기 항-FcRH5 항체를 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물. 또 다른 양태에서, 본 발명은 하기를 포함하는 키트를 특징으로 한다: FcRH5-양성 암을 갖는 대상체에서 면역 기능을 증진시키기 위한, 본 발명의 선행 양태 중 임의의 것의 항-FcRH5 항체, 및 상기 항-FcRH5 항체를 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물. 이러한 양태의 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
도 1a는 하나 이상의 하전된 영역을 포함하는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 FcRH5 TDB의 예시적인 합리적 설계 입체배치(입체배치 1)을 나타내는 개략도이다. 입체배치 1의 경우, VH 1 , CL 1 , VL 2 , 및 CH1 2 도메인은 염기성 하전 영역을 함유하고, VL 1 , CH1 1 , VH 2 , 및 CL 2 도메인은 산성 하전 영역을 함유한다.
도 1b는 하나 이상의 하전된 영역을 포함하는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 FcRH5 TDB의 예시적인 합리적 설계 입체배치(입체배치 2)을 나타내는 개략도이다. 입체배치 2의 경우, VH 1 , CL 1 , VL 2 , 및 CH1 2 도메인은 산성 하전 영역을 함유하고, VL 1 , CH1 1 , VH 2 , 및 CL 2 도메인은 염기성 하전 영역을 함유한다.
도 1c는 하나 이상의 하전된 영역을 포함하는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 FcRH5 TDB의 예시적인 로제타(Rosetta) 설계 입체배치(입체배치 1)을 나타내는 개략도이다. 입체배치 1의 경우, VH 1 , CL 1 , 및 VL 2 도메인은 염기성 하전 영역을 함유하고, VL 1 , CH1 1 , 및 VH 2 도메인은 산성 하전 영역을 함유한다. 또한, CH1 2 도메인은 공동을 함유하고, CL 2 도메인은 돌출부를 함유한다. 공동 및 돌출부는 CH1 2 /CL 2 계면에서 검은색 박스로 표시된다.
도 1d는 하나 이상의 하전된 영역을 포함하는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 FcRH5 TDB의 예시적인 로제타(Rosetta) 설계 입체배치(입체배치 2)을 나타내는 개략도이다. 입체배치 2의 경우, VH 1 , CL 1 , 및 VL 2 도메인은 산성 하전 영역을 함유하고, VL 1 , CH1 1 , 및 VH 2 도메인은 염기성 하전 영역을 함유한다. 또한, CH1 2 도메인은 공동을 함유하고, CL 2 도메인은 돌출부를 함유한다. 공동 및 돌출부는 CH1 2 /CL 2 계면에서 검은색 박스로 표시된다.
도 1e는 하나 이상의 하전된 영역을 포함하는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 FcRH5 TDB의 예시적인 대안적 로제타(Rosetta) 설계 입체배치(대안적 입체배치 1)을 나타내는 개략도이다. 대안적 입체배치 1의 경우, VL 1 , VH 2 , 및 CL 2 도메인은 산성 하전 영역을 함유하고, VH 1 , CH1 2 , 및 VL 2 도메인은 염기성 하전 영역을 함유한다. 또한, CH1 1 도메인은 공동을 함유하고, CL 1 도메인은 돌출부를 함유한다. 공동 및 돌출부는 CH1 1 /CL 1 계면에서 검은색 박스로 표시된다.
도 1f는 하나 이상의 하전된 영역을 포함하는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 FcRH5 TDB의 예시적인 대안적 로제타(Rosetta) 설계 입체배치(대안적 입체배치 2)을 나타내는 개략도이다. 대안적 입체배치 2의 경우, VL 1 , VH 2 , 및 CL 2 도메인은 염기성 하전 영역을 함유하고, VH 1 , CH1 2 , 및 VL 2 도메인은 산성 하전 영역을 함유한다. 또한, CH1 1 도메인은 공동을 함유하고, CL 1 도메인은 돌출부를 함유한다. 공동 및 돌출부는 CH1 1 /CL 1 계면에서 검은색 박스로 표시된다.
도 2는 선별된 항-FcRH5 항체의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열의 정렬이다. 1G7로부터의 변화 (참고: 미국 공보 번호 2015-0098900, 이의 전체는 본원에 참조로 편입됨)는 어두운 색 박스로 나타낸다. 초가변 영역(HVR)은 정렬 위에서의, 그리고/또는 아래에서의 선으로 표지된다. 이러한 VL 도메인의 서열은 서열 번호: 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 및 101로서 또한 개시되어 있다.
도 3는 선별된 항-FcRH5 항체의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열의 정렬이다. 1G7 클론으로부터의 변화 (참고: 미국 공보 번호 2015-0098900)는 어두운 색 박스로 나타낸다. 초가변 영역(HVR)은 정렬 위에서의, 그리고/또는 아래에서의 선으로 표지된다. 이러한 VH 도메인의 서열은 서열 번호: 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 및 100로서 또한 개시되어 있다.
도 4는 지시된 항-FcRH5 항체의 위치 52에서의 아미노산 치환의 결합 친화도에 대한 영향을 보여주는 표이다.
도 5a는 hu1G7.v85 및 hu1G7.v93의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열의 정렬이다. 인간 생식계열 서열 hIGHV4-59*01의 변화는 음영 처리된 박스에 표시된다. 초가변 영역(HVR)은 정렬 위의 표지로 지시된다. 이러한 VH 도메인의 서열은 서열 번호: 104 (hu1G7.v85) 및106 (hu1G7.v93)로서 또한 개시되어 있다.
도 5b는 hu1G7.v85 및 hu1G7.v93의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열의 정렬이다. 인간 생식계열 서열 hIGKV1-16*01의 변화는 음영 처리된 박스에 표시된다. 초가변 영역(HVR)은 정렬 위의 표지로 지시된다. 이러한 VL 도메인의 서열은 서열 번호: 105 (hu1G7.v85) 및107 (hu1G7.v93)로서 또한 개시되어 있다.
도 6a는 하기의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열의 정렬이다: hu1G7.v85. 1G7, 및 공통 H4. 인간화된 친화도 성숙되고 연마된 클론 1G7의 변화 (참고: 미국 공보 번호 2015-0098900, 이의 전체는 본원에 참조로 편입됨)는 음영 처리된 박스로 나타낸다. 초가변 영역(HVR)은 정렬 위의 표지로 지시된다. hu1G7.v85의 VH 도메인 서열은 서열 번호: 104로 개시되어 있다.
도 6b는 hu1G7.v85, 1G7, 및 공통 KI의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열의 정렬이다. 인간화된 친화도 성숙되고 연마된 클론 1G7의 변화는 음영 처리된 박스에 표시된다. hu1G7.v85의 VL 도메인 서열은 서열 번호: 105로 개시되어 있다.
도 7a는 항-FcRH5 항체 hu1G7.v93의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열을 포함한다 (서열 번호: 106).
도 7b는 항-FcRH5 항체 hu1G7.v93의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열을 도시한다 (서열 번호: 107).
도 8은 1G7.v85 및 1G7.v87 항체의 항체 역가를 도시하는 그래프이다.
도 9a는 상이한 항-FcRH5 아암(즉, m1G7("1G7 TDB"), 1G7.v85("1G7.v85 TDB") 및 1G7.v1("1G7.v1.4 TDB"))을 갖는 FcRH5/38E4.v1 TDB의 FcRH3-과발현 세포에 대한 결합을 비교하는 히스토그램의 오버레이이다.
도 9b는 1G7.v85 TDB가 20㎍/mL 이하(≤)의 농도에서 자연 살해 세포(NK)를 고갈시키지 않고 1G7.v85 TDB가 형질 세포(PC)에서 25ng/mL의 중앙값 EC50을 갖는다는 것을 도시하는 그래프이다.
도 10a는 FcRH3, 인간 FcRH5, 및 시노몰구스 FcRH5에 결합하는 FcRH5 TDB 1G7.v1.4/38E4.v1 ("1G7.v1.4 TDB")의 능력을 비교하는 일련의 그래프이다.
도 10b는 FcRH3, 인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5에 결합하는 1G7.v85 TDB의 능력을 비교하는 일련의 그래프이다.
도 10c는 FcRH3, 인간 FcRH5, 및 시노몰구스 FcRH5에 결합하는 FcRH5 TDB 1G7/38E4.v1 ("1G7 TDB")의 능력을 비교하는 일련의 그래프이다.
도 10d는 FcRH3, 인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5에 결합하는 대조군 항체의 능력을 비교하는 일련의 그래프이다.
도 11a는 인간화, 토끼-유도된 항-FcRH5 항체 hu7D8.L1H2의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열의 서열을 도시한다. hu7D8.L1H2의 VH 도메인 서열은 서열 번호: 108로 개시되어 있다.
도 11b는 인간화, 토끼-유도된 항-FcRH5 항체 hu7D8.L1H2의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열의 서열을 도시한다. hu7D8.L1H2의 VL 도메인 서열은 서열 번호: 109로 개시되어 있다.
도 12a는 마우스-유도된 항-FcRH5 항체 17B1의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열의 서열을 도시한다. 17B1의 VH 도메인 서열은 서열 번호: 110으로 개시되어 있다.
도 12b는 마우스-유도된 항-FcRH5 항체 17B1의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열의 서열을 도시한다. 17B1의 VL 도메인 서열은 서열 번호: 111로 개시되어 있다.
도 13a는 마우스-유도된 항-FcRH5 항체 15G8의 중쇄 가변(VH) 도메인 서열의 서열을 도시한다. 15G8의 VH 도메인 서열은 서열 번호: 112로 개시되어 있다.
도 13b는 마우스-유도된 항-FcRH5 항체 15G8의 경쇄 가변(VL) 도메인 서열의 서열을 도시한다. 15G8의 VL 도메인 서열은 서열 번호: 113로 개시되어 있다.
도 14는 토끼 유래 항-FcRH5 항체 7D8.Rb 및 h7D8.L1H2의 인간화 변이체의 인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5에 대한 결합 친화도를 보여주는 일련의 그래프이다.
도 15는 FcRH5 TDB 1G7.v85 TDB 및 hu1G7.v93/38E4.v1("1G7.v93 TDB")이 인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5 둘 다에 필적할 만한 친화도로 결합함을 보여주는 일련의 그래프이다.
도 16a-16b는 1가 친화도의 1:1 결합 모델을 사용하는 hIgG 포획 포맷으로 BIACORE®에 의해 측정된 바와 같이, 각각 2.35nM 및 6.76nM의 해리 상수(KD)로 인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5에 결합하는 1G7.v85 TDB의 동역학 분석을 도시하는 그래프이다.
도 17a-17b는 38E4.v1의 CD3-결합 아암을 갖는 T 세포 의존성 이중특이적(TDB) 항체로 포맷화된 1G7의 인간화된 친화도 성숙 변이체를 사용하여 MOLP-2 세포(즉, FcRH5를 내생적으로 발현하는 인간 다발성 골수종 세포)의 증가된 FcRH5 유도 세포 독성을 입증하는 그래프이다(참조: PCT 공보 번호 WO 2015-095392 A1, 이의 전문이 본원에 참조로서 인용됨). 도 17a에서, 1G7 TDB, hu1G7.v1.1/38E4.v1("1G7.v1.1 TDB"), hu1G7.v1.2/38E4.v1("1G7.v1.2 TDB"), hu1G7.v1.3/38E4.v1("1G7.v1.3 TDB") 및 1G7.v1.4 TDB가 평가되었다. 도 17b에서, 1G7.v1.4 TDB, hu1G7.v1.5/38E4.v1("1G7.v1.5" TDB), hu1G7.v1.13/38E4.v1("1G7.v1.13 TDB"), hu1G7.v1.7/38E4.v1("1G7.v1.7 TDB") 및 hu1G7.v1.13.1/38E4.v1("1G7.v1.13.1")이 평가되었다. 1G7.v.1.4 TDB는 표적 세포 사멸(EC50)을 뮤린 1G7 TDB(n = 10)보다 5 내지 13배 증진시켰다.
도 18a 내지 18d는, T 세포 활성화 (도 18a), 표적 MOLP-2 세포 사멸 (도 18b), 표적 시노몰구스 형질 세포 사멸 (도 18c), 및 표적 시노몰구스 B 세포 사멸 (도 18d)을 위한 1G7.v1.4 TDB 및 1G7.v85 TDB의 능력을 비교하는 그래프이다.
도 19a는 마우스 SVT2 세포 발현 인간 FcRH5 (패널 1), 시노몰구스 FcRH5 (패널 2), 및 인간 FcRH3 (패널 3)과 교차-반응하고, 이에 결합하는 1G7.v85 TDB 및 hu1G7.v87/38E4.v1 TDB ("1G7.v87 TDB")의 능력을 비교하는 일련의 히스토그램이다.
도 19b 내지 19d는 표적 MOLP-2 세포(도 19b), 인간 B 세포(도 19c) 및 시노몰구스 B 세포(도 19d)를 사멸시키기 위한 1G7.v85 TDB 및 1G7.v87 TDB의 능력을 비교하는 그래프이다.
도 20a-20d는 스트레스화되지 않은 각각의 대조군(도 20a 및 20c)과 비교하여, 2,2'-아조비스(2-아미도프로판)디하이드로 클로라이드(AAPH) 응력 테스트(도 20b) 또는 경증 응력 테스트(도 20d)를 거친 후 FcRH5에 결합하는 1G7.v85 TDB의 감소된 능력을 도시하는 그래프이다 (도 20a 및 20c).
도 21a는 1G7.v85 TDB의 크기 분포 분석을 도시하는 그래프이다. 1G7.v85 TDB는 pH 5.5의 his-아세테이트 용액에서 2주 응력 후에 단량체 피크의 0.1%를 손실했다.
도 21b는 1G7.v85 TDB의 전하 이종성을 도시하는 그래프이다. 1G7.v85 TDB는 pH 5.5의 his-아세테이트 용액에서 2주 응력 후에 단량체 피크의 7.7%를 손실했다.
도 22a는 1G7.v85 TDB가 pH 5.5에서 his-아세테이트 용액에서 2주 응력 후에 경쇄 질량의 감소된 질량 프로파일에서 관찰 가능한 변화를 갖지 않음을 도시하는 그래프이다.
도 22b는 1G7.v85 TDB가 pH 5.5에서 his-아세테이트 용액에서 2주 응력 후에 중쇄 질량의 감소된 질량 프로파일에서 관찰 가능한 변화를 갖지 않음을 도시하는 그래프이다.
도 23a는 1G7/UCHT1.v9 TDB, 10A8/UCHT1.v9 TDB("10A8 TDB") 및 항-gD/UCHT1.v9 TDB("항-gD TDB") 및 N 말단 gD 발현 태그를 갖는 인간 FcRH5를 발현하는 세포 1㎍/ml로 자극된 건강한 공여자 말초 CD8 세포의 포스포-SLP76 웨스턴 블롯이다. TCR 신호전달의 지표인 총 SLP76에 대한 블롯팅을 사용하여 동일한 샘플 부하량을 식별하였다.
도 23b는 1G7/UCHT1.v9 TDB 또는 항-gD TDB 및 CD8+ T 세포에 의한 FcRH5 표적 세포의 사멸을 도시하는 그래프이다.
도 23c는 막-근위(membrane-proximal)의 gD 에피토프를 갖는 절단된 FcRH5 작제물의 개략도이다.
도 23d는 1G7 TDB 또는 항-gD TDB를 갖는 절단된 FcRH5 작제물을 사용하는 표적 세포 사멸을 도시하는 그래프이다. 근위부 1G7/UCHT1.v9 TDB의 활성은 25배 증가되었고(EC50 = 20pM), 항-gD TDB는 ECD에 의해 유발된 간섭이 제거될 때 세포의 사멸을 효과적으로 매개할 수 있었다(EC50 = 0.19nM). 절단된 작제물은 293 세포에서 발현되었다.
도 23e는 막-근위 에피토프(점선)를 인식하는 5개의 교번의 FcRH5 TDB에 대한 표적 세포 사멸이 1G7/UCHT1.v9 TDB에 의해 매개되는 사멸과 동등하고 10A8 TDB보다 상당히 양호함을 도시하는 그래프이다.
도 24a는 SVT2-친계, gD-FcRH5 전장 및 gD-FcRH5-도메인 9 세포의 유동 세포 계측법 분석의 히스토그램 오버레이이다.
도 24b는 1G7/UCHT1.v9 TDB, 2H7/UCHT1.v9 TDB("2H7 TDB"), 3G7/UCHT1.v9 TDB("3G7 TDB"), 10A8 TDB 및 항-gD TDB에 의한 표적 세포 사멸 %를 도시하는 그래프이다.
도 25a는 1G7.v85 TDB가 FcRH5에 결합하지만, 다른 패밀리 구성원에는 결합하지 않음을 보여주는 6개의 세포주(SVT2-벡터, SVT2-FcRH1, SVT2-FCRH2, SVT2-FcRH3, SVT2-FcRH4 및 SVT2-FcRH5)의 오버레이 히스토그램이다.
도 25b는 1G7.v85 TDB가 FcRH5의 막 근위 도메인에 결합함을 보여주는 3개의 세포주(293 친계, 293-FcRH5 전장 및 293-FcRH5-D9-결실)의 히스토그램 오버레이이다.
도 25c는 1G7.v85 TDB가 시노몰구스 FcRH5 및 인간 FcRH5에 결합함을 나타내는 3개의 세포주(SVT2-벡터, SVT2-huFcRH5 및 SVT2-시노몰구스 FcRH5)의 오버레이 히스토그램이다.
도 26a 내지 26d는 1G7/38E4.v1 TDB("1G7 TDB")의 다발성 골수종(MM) 세포주 및 1차 세포에 대한 결합을 나타내는 3개의 세포주(SVT2-벡터, SVT2-huFcRH5 및 SVT2-시노몰구스 FcRH5)의 오버레이 히스토그램이다. MOLP-2 세포(도 26a), 인간 CD20+ B 세포(도 26b), 인간 CD38+CD138+ 형질 세포(도 26c) 및 MM 골수 흡인으로부터 CD38+CD138+MM 종양 세포(도 26d)에 대한 이소형-PE 및 1G7 TDB에 대한 오버레이 히스토그램이 도시되어 있다.
도 27a는 유동 세포 계측법 분석에 의해 검출된 표적 세포(MOLP-2) 및 1G7 TDB로 자극시 CD8+ 세포의 용량 의존적 활성화를 도시하는 그래프이다.
도 27b는 1G7 TDB에 의한 표적 세포 의존적 사멸을 도시하는 그래프이다. 삽입물은 친계 Fox-NY 세포주 및 낮은 또는 높은 수준의 인간 FcRH5를 발현하도록 형질감염된 클론의 유동 세포 계측법 오버레이를 보여준다. 오차 막대는 삼중 반복의 표준 편차이다.
도 27c-27e는 1G7 TDB가, 유동 세포 계측법에 의해 CSFE 형광 강도 희석을 측정함으로써 검출된 바와 같이, CD8 증식 반응(5일)을 유도함을 도시하는 그래프이다. CFSE-표지된 인간 CD8+ 세포 단독(도 27c), MOLP-2와 공배양(도 27d) 또는 MOLP-2 및 1000ng/ml의 1G7.v85 TDB와 공배양(도 27e).
도 27f는 상이한 항-CD3 아암(예: UCHT1.v9, 38E4.v1 및 40G5c)을 함유하는 FcRH5 TDB에 의한 표적-의존성 세포 사멸을 도시하는 그래프이다(참조: PCT 공보 번호 WO 2015/095392 A1, 이의 전문이 본원에 참조로서 인용됨). 항-CD3 아암 38E4.v1(1가 KD 0.5nM, BIACORE®), UCHT1.v9(1가 KD = 2.5nM, BIACORE® 및 스캐챠드) 및 40G5c(1가 KD = 51nM, BIACORE®)는 각각 m1G7의 항-FcRH5 아암(KD = 11nm, BIACORE®)과 쌍형성되고, 정제된 인간 CD8+ 세포에 대한 결합을 시험하였다.
도 27g는 1G7 TDB 및 1G7/38E4.v1 비스-Fab("1G7 비스-Fab")에 의한 표적 의존성 세포 사멸을 도시하는 그래프이다.
도 28a는 원발성 다발성 골수종 종양 세포, 건강한 공여자 말초 B 세포 및 골수 형질 세포에서 FcRH5 발현을 도시하는 그래프이다. FcRH5 발현은 유동 세포 계측법으로 분석하고 MOLP-2 내부 및 검정 대조군에서의 발현으로 정규화하였다. FcRH5의 상대적 수준은 다음과 같이 산출되었다: ("X"의 FcRH5의 기하 평균/"X"의 이소형 대조군의 기하 평균)/(MOLP-2의 FcRH5의 기하 평균/MOLP-2의 이소형 대조군의 기하 평균).
도 28b는 인간 형질 세포상의 1G7.v85 TDB의 세포독성 활성을 도시하는 그래프이다. 인간 골수 단핵 세포(BMMC)를 1G7.v85 TDB로 배양하고, 살아 있는 CD38+CD138+의 세포수를 유동 세포 계측법으로 분석하였다.
도 28c는 상이한 환자-유도된 원발성 골수종 세포 상에서의 1G7.v85 TDB의 세포독성 활성을 도시하는 그래프이다. 인간 골수종 BMMC를 건강한 공여자로부터 단리된 CD8+ T 세포 및 및 1G7.v85 TBD와 함께 배양하였다.
도 28d는 표적 세포에서 매우 낮은 FcRH5 발현이 강력한 사멸 활성에 충분하다는 것을 도시하는 그래프이다. 세포 당 FcRH5 사본 수는 스케챠드(Scatchard) 검정에 의해 계측되었다.
도 28e(상단)는 1q21 증가가 있는 고위험 골수종 환자의 골수 생검에서 FcRH5 mRNA 수준의 qRT-PCR 분석을 도시하는 그래프이다. mRNA 발현 수준은 델타 Ct(dCt) 방법으로 산출되었다. 통계 분석은 맨-휘트니 U 테스트(Mann-Whitney U test)를 사용하여 수행되었다. (하단) 원발성 다발성 골수종 생검에 대한 FISH 분석 이미지는 1q21의 정상적인 이배체(왼쪽)와 1q21의 약 3 내지 6개의 사본의 혼합물(오른쪽)을 도시한다. 득점된 종양 샘플의 20% 초과가 1q21.3 유전자좌의 3개 이상 사본을 가질 때 종양 샘플은 1q21 증가로 식별되었다.
도 29a는 시노몰구스 CD20+ B 세포에서 FcRH5의 발현을 도시하는 이소형-PE 및 항-FcRH5 클론 1G7-PE의 히스토그램 오버레이이다.
도 29b는 시노몰구스 CD45-CD20-CD38+PC+ 형질 세포에서 FcRH5의 발현을 도시하는 이소형-PE 및 항-FcRH5 클론 1G7-PE의 히스토그램 오버레이이다.
도 29c-29d는 SVT2-시노몰구스(cyno)-FcRH5(도 29c) 및 MOLP-2(도 29d)를 인간 CD8+ T 세포 또는 시노몰구스 CD8+ T 세포와 함께 사용하는 시험관내 사멸 검정에서 시노몰구스 CD8+ T 세포와 인간 CD8+ T 세포 사이의 필적할 만한 용량 의존성 세포독성 활성을 도시하는 그래프이다.
도 29e는 시노몰구스 CD20+ B 세포(n = 14) 상의 1G7.v85 TDB의 시험관내 사멸 활성을 도시하는 그래프이다.
도 29f는 8명의 상이한 공여자(n = 8)의 시노몰구스 골수로부터 CD45-CD20-CD38+ PC+ 형질 세포에 대한 1G7.v85 TDB의 시험관내 사멸 활성을 도시하는 그래프이다.
도 30a는 인간화된 NOD/SCID 감마 마우스(NSG)의 비장으로부터 단리된 비장 인간 T 세포가 건강한 공여자로부터의 말초 인간 T 세포와 필적할 만한 활성을 갖는다는 것을 도시하는 그래프이다.
도 30b는 1G7 TDB 처리가 인간화된 NSG 마우스에서 피하 MOLP-2 이종 이식 종양의 퇴행을 유도한다는 것을 도시하는 그래프이다. 마우스를 0.5mg/kg의 비히클 또는 1G7.v85 TDB의 단일 정맥내 투여로 처리하였다. 평균 종양 용적(검은 굵은 선), 개별 종양 용적(얇은 선) 및 대조군의 평균(점선)이 표시된다. 　
도 31a는 3마리 동물/그룹까지, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 또는 4 mg/kg에서 1G7.v85 TDB의 단일-용량 투여 후 연구 기간에 걸쳐 도식화된 FcRH5 TDB의 혈청 농도를 도시하는 그래프이다. 약동학적 파라미터를 보여주는 표가 아래에 제시된다.
도 31b는 3마리 동물/그룹까지, 3 mg/kg에서의 항-gD TDB 또는 0.3 mg/kg 또는 3 mg/kg에서의 FcRH5 TDB의 단일-용량 투여 후 연구 기간에 걸쳐 도식화된 FcRH5 TDBs (1G7.v85 TDB 및 1G7.v87/38E4.v1 TDB ("1G7.v87 TDB"))의 혈청 농도를 도시하는 그래프이다. 약동학적 파라미터를 보여주는 표가 아래에 제시된다.
도 31c-31d는 비히클 또는 1G7.v85 TDB(1mg/kg, 2mg/kg 또는 4mg/kg)의 그룹당 3마리 동물에게 단일 용량 정맥내 투여 후, 시노몰구스 말초 혈액에서 1G7.v85 TDB- 유도 일과성 T 세포 활성화를 도시하는 그래프이다.
도 31e-31h는, 3마리 동물/그룹 까지, 비히클 또는 1G7.v85 TDB (1 mg/kg, 2 mg/kg, 또는 4 mg/kg)의 단일-용량 정맥내 투여 후, 시노몰구스 내 말초 혈액 (도 31e), 비장 (도 31f), 하악골 림프절 (도 31g), 및 골수 (도 31h) 내 CD20+ B 세포의 절대 수를 도시한 그래프이다. 도 31f-31h는 그룹 평균 및 평균의 표준 오차(SEM)로 도식화된다.
도 31i는 1G7.v85 TDB가 시노몰구스에서 골수 형질 세포를 고갈시키고 그룹 측정된 SEM이 도식화된 것을 도시하는 그래프이다.
도 31j는 식 {(투여전 IgG 수준) - (연구 종료 IgG 수준)}/(투여전 IgG 수준) × 100을 사용하여 산출된 치료에 대한 시노몰구스 IgG 수준 반응의 변화를 도시하는 그래프이다. 투여 전과 치료 후의 차이는 비쌍체 t-테스트(unpaired t-test)로 분석한다. 데이터는 그룹 평균 및 평균의 표준 오차(SEM)로 도식화된다.
도 32a-32b는 비히클, 1G7.v85 TDB(1mg/kg), 1G7.v85 TDB(2mg/kg) 또는 1G7.v85 TDB(4mg/kg)의 단일 용량 정맥내 투여 후 4그룹의 동물에서 말초 혈액(도 32a) 및 CD8+ T 세포(도 32b)의 CD4+ T 세포의 절대 수를 도시하는 그래프이다.
도 32c는 1G7.v85 TDB 처리 후 장간막 림프절에서 CD20+ B 세포의 절대 수의 감소를 도시하는 그래프이다. 플롯은 개별 동물 및 SEM과 함께 평균 그룹으로 그래프화한다.
도 32d는 1mg/kg, 2mg/kg 또는 4mg/kg으로 1G7.v85 TDB의 단일 용량 정맥내 투여 후 FcRH5 점유율을 도시하는 그래프이다.
도 33a-33f는 비히클, 1G7.v85 TDB(1mg/kg), 1G7.v85 TDB(2mg/kg) 및 1G7.v85 TDB(4mg/kg)의 단일 용량 정맥내 투여 후 4 그룹의 동물에서 사이토카인 IL-6(도 33a), IL-2(도 33b), IFN-γ(도 33c), IL-1Rα(도 33d), IL-5(도 33e) 및MCP-1(도 33f)의 농도 변화를 도시하는 그래프이다.
도 34는 1G7.v85 TDB 처리가 인간 T 세포에서 PD1 발현을 유도함을 보여주는 일련의 플롯이다. CD8+ T 세포는 1G7.v85 TDB 및 MOLP-2 표적 세포로 48시간 동안 자극한 다음 유동 세포 계측법으로 분석하였다.
도 35a는 비히클, 1mg/kg, 2mg/kg 및 4mg/kg의 1G7.v85 TDB의 단일 용량 정맥내 투여 후, 시노몰구스에서 CD8+ T 세포 중 PD1+의 백분율을 도시하는 그래프이다. 1G7.v85 TDB 처리는 생체내에서 시노몰구스 T 세포 중의 PD1을 유도한다.
도 35b는 비히클, 1mg/kg, 2mg/kg 및 4mg/kg의 1G7.v85 TDB의 단일 용량 정맥내 투여 후, 시노몰구스에서 CD4+ T 세포 중 PD1+의 백분율을 도시하는 그래프이다.
도 36d-36d는 1G7.v85 TDB 또는 비히클을 투여 한 지 7일 후 FACS에 의해 분석된 바와 같이, 혈액으로부터의 CD4+ T 세포(도 36a), 비장으로부터의 CD8+T 세포(도 36b), 림프절로부터의 CD8+T 세포 (도 36c) 및 골수로부터의 CD8+ T 세포(도 36d)에서의 PD-1 발현을 나타내는 플롯이다.
도 37a-37b는 항-PD-L1 또는 항-PD-1 항체의 존재 또는 부재하에 FcRH5 및 PD-1을 발현하는 HEK-293T 세포("293-FcRH5-PD-L1 세포")를 사멸하기 위해 예비-자극된 CD8+ T 세포의 활성을 재지시하는 1G7.v85 TDB의 능력을 도시하는 그래프이다. 도 37a의 곡선은 삼중 반복의 평균 및 표준 오차(SD)로 그래프화한다.
도 38a는 덱사메타손(Dex)의 존재 및 부재하에 1G7.v85 TDB에 의한 SVT2-FcRH5의 표적 세포 사멸을 도시하는 그래프이다.
도 38b는 1μM Dex의 존재 및 부재하에 1G7.v85 TDB로 처리한 후 사이토카인(즉, IL-2, IL-6, TNF-α 및 IFN-γ) 방출을 나타내는 일련의 그래프이다.
도 39는 인간 IgG1로부터 비스-Fabs의 생산을 나타내는 개략도이다.
도 40a는 ELISA 검정에 의해 계측된 바와 같이 비스-Fabs AD 및 F(ab')2 A에 의한 FcRH5의 결합을 도시하는 그래프이다.
도 40b는 ELISA 검정에 의해 계측된 바와 같이 비스-Fabs AD 및 F(ab')2 A에 의한 CD3의 결합을 도시하는 그래프이다.
도 41은 비스-Fabs A-D 및 F(ab')2 A에 의한 표적 매개된 T 세포 활성화의 양을 도시하는 그래프이다 .
I. 정의
본원에 사용된 바와 같이 용어 "약"은 본 기술 분야의 숙련가에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본원에서 "약(about)" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 상기 값 또는 파라미터 그 자체에 관한 구현예를 포함한다 (그리고 기술한다).
본원의 목적을 위해 "수용체 인간 프레임워크"는 아래에 정의된 바와 같은 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크로부터 유도된 경쇄 가변 도메인(VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인(VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크"로부터 유도된" 수용체 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 이것은 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 구현예에서, VL 수용체 인간 프레임워크는 서열에 있어서 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공통 프레임워크 서열과 상동하다.
"친화도"는 분자(예컨대, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 상대(예컨대, 항원) 간의 비공유 상호작용의 총 합의 강도를 나타낸다. 다르게 지시되지 않으면, 본원에서 사용된 바와 같이 "결합 친화도"는 결합 쌍 멤버(예를 들면, 항체 및 항원) 간 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 나타낸다. 그 상대 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수 (KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에서 기재된 것을 포함하여 당해분야에서 공지된 공통의 방법으로 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 특정의 구체적이고 예시적인 구현예들이 아래에 기재되어 있다.
"친화도 성숙" 항체는 항원에 대한 항체의 친화도에 있어서의 개선을 야기하는 변경을 갖지 않는 친계 항체와 비교하여, 하나 이상의 초가변 영역(HVR)에 하나 이상의 변경을 갖는 항체를 나타내며, 상기 변경은 항원에 대한 항체의 친화도에 있어서의 개선을 야기한다.
용어 "항-FcRH5 항체" 또는 "FcRH5에 결합하는 항체"는 항체가 FcRH5의 표적화에서 진단제 및/또는 치료제로 유용하도록 충분한 친화도로 FcRH5에 결합할 수 있는 항체를 나타낸다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-FcRH5 단백질에 항-FcRH5 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사면역검정 (RIA)에 의해 측정 시 FcRH5에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, FcRH5에 결합하는 항체는 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤0.001 nM (예컨대, 10-8 M 이하, 예를 들면 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 상이한 종으로부터 FcRH5 중에 보존된 FcRH5의 에피토프에 결합한다.
용어 "항-CD3 항체" 및 "CD3에 결합하는 항체"는 항체가 CD3를 표적화하는데 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 하기에 충분한 친화도로 CD3에 결합할 수 있는 항체를 나타낸다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-CD3 단백질에 항-CD3 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사면역검정 (RIA)에 의해 측정 시 CD3에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, CD3에 결합하는 항체는 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤0.001 nM (예컨대, 10-8 M 이하, 예를 들면 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-CD3 항체는 상이한 종으로부터 CD3 중에 보존된 CD3의 에피토프에 결합한다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은의미로 사용되고 이들이 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 동안, 비제한적으로 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이적 항체 (예를 들면, 이중특이적 항체)를 포함하여, 다양한 항체 구조, 및 항체 단편(예컨대, 비스-Fab)을 포함한다.
"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원과 결합하는 무손상 항체의 일부분을 포함하는 무손상 항체가 아닌 분자를 가리킨다. 항체 단편들의 예시들은 비제한적으로 비스-Fab; Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 ; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자 (예컨대, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
"결합 도메인"은, 표적 에피토프, 항원, 리간드, 또는 수용체에 특이적으로 결합하는 분자 또는 화합물의 부분을 지칭한다. 결합 도메인은 항체(예를 들면, 단클론성, 다클론성, 재조합, 인간화 및 키메라 항체), 항체 단편 또는 이의 부분(예를 들면, 비스-Fab 단편, Fab 단편, F(ab')2, scFv 항체, SMIP, 도메인 항체, 디아바디, 미니바디, scFv-Fc, 애피바디, 나노바디 및 항체의 VH 및/또는 VL 도메인), 수용체, 리간드, 앱타머 및 식별된 결합 상대를 갖는 다른 분자를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "하전된 영역"은 하전된 영역 및 그의 동족의 하전된 영역이 반대의 전체 상대 전하를 가질 때, 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 염기성 또는 산성 아미노산을 갖는 동족의 하전된 영역과 전하 쌍을 형성할 수 있는 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 염기성 또는 산성 아미노산을 포함하는 폴리펩티드(예: 항체)의 위치를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "전하 쌍"은 반대의 전체 전하의 두 하전된 영역 사이에 형성된 결합을 지칭한다.
"화학치료제"는 암의 치료에 유용한 화합물이다. 화학치료제의 예시는 하기를 포함한다: 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이클로포스파마이드(CYTOXAN®); 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸롤로멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀(드로나비놀, MARINOL®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸(HYCAMTIN® 포함); CPT-11 (이리노테칸, CAMPTOSAR®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(그 아도젤레신, 카르젤레신 및 바이젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포사이드; 크립토파이신(특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로르암부실, 클로르나파진, 콜로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 펜에스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라신 머스타드; 나이트로스우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대 엔디인 항생제(예를 들면, 칼리키아마이신, 특히 칼리키아마이신 감마1I 및 칼리키아마이신 오메가I1 (예를 들어, 참고: Nicolaou et al. Angew. Chem Intl. Ed. Engl. 33: 183-186, 1994); CDP323, 경구 알파-4 인테그린 억제제; 다이네마이신, 다이네마이신 A 포함; 에스페라마이신뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 엔디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신(ADRIAMYCIN®, 모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주사(DOXIL®) 리포좀 독소루비신 TLC D-99 (MYOCET®), 페길화된 리포좀l 독소루비신 (CAELYX®) 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 아이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물질, 예컨대 메토트렉세이트, 젬시타빈(GEMZAR®), 테가푸르(UFTORAL®), 카페시타빈(XELODA®), 에포틸론, 및 5-플루오로우라실(5-FU); 콤브레타스타틴; 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신물질, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코사이드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK® 다당류 착물(JHS Natural Products, Eugene, Oreg); 라족산; 라이족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아진산; 트리아지쿠온; 2,2',2’-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신(ELDISINE®, FILDESIN®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라바이노사이드("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀(TAXOL®), 파클리탁셀의 알부민-가공된 나노입자 제형(ABRAXANE™), 및 도세탁셀(TAXOTERE®); 클로란부실; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 제제 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 (예컨대, ELOXATIN®), 및 카르보플라틴; 빈카 (튜불린 중합이 빈블라스틴을 포함하는 미세소관을 형성하는 것을 방지 (VELBAN®)), 빈크리스틴 (ONCOVIN®), 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®), 및 비노렐빈 (NAVELBINE®); 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 류코보린; 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 레티노산 유도체 (벡사로텐 (TARGRETIN®) 포함); 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트 (예를 들어, BONEFOS® 또는 OSTAC®), 에티드로네이트 (DIDROCAL®), NE-58095, 졸레드론 산/졸레드로네이트 (ZOMETA®), 알렌드로네이트 (FOSAMAX®), 파미드로네이트 (AREDIA®), 티루드로네이트 (SKELID®), 또는 리세드로네이트 (ACTONEL®); 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상 세포 증식과 관련된 신호전달 경로 내의 유전자의 발현을 억제하는 것들, 예컨대, 예를 들면, PKC-알파, Raf 및 H-Ras, 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R) (예컨대, 에를로티닙 (TarcevaTM)); 및 세포 증식을 감소시키는 VEGF-A; 백신 예컨대 THERATOPE® 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN® 백신, 및 VAXID® 백신; 토포이소머라제 1 억제제 (예를 들면, LURTOTECAN®); rmRH (예컨대, ABARELIX®); BAY439006 (소라페닙; Bayer); SU-11248 (수니티닙, SUTENT®, Pfizer); 페리포신, COX-2 억제제 (예컨대, 세레콕시브 또는 에토리콕시브), 프로테오좀 억제제 (예컨대, PS341); 보르테조밉 (VELCADE®); CCI-779; 티피파닙 (R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 억제제 예컨대 오블리머센 나트륨 (GENASENSE®); 픽산트론; EGFR 억제제 (하기 정의 참고); 티로신 키나제 억제제; 세린-트레오닌 키나제 억제제 예컨대 라파마이신 (시롤리무스, RAPAMUNE®); 파르네실트랜스퍼라아제 억제제 예컨대 로나파닙 (SCH 6636, SARASARTM); 및 상기 중 임의의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2개 이상의 조합, 예컨대, CHOP (사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어); 및 FOLFOX (5-FU 및 류코보린과 조합된 옥살리플라틴 (ELOXATINTM)으로의 치료 레지멘에 대한 약어).
본 명세서에서 정의된 바와 같이 화학치료제는 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬의 영향을 조절, 감소, 차단 또는 억제하는 작용을 하는 "항-호르몬제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다. 이들은 호르몬 자체일 수 있고, 하기를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다: 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERMS), 예를 들면, 타목시펜(NOLVADEX® 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 파레스톤(FARESTON).cndot.토레미펜(toremifene); 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세(MEGASE®) 메게스트롤 아세테이트, 아로마신(AROMASIN®) 엑세메스탄, 포르메스타니에(formestanie), 파드로졸, 리비소르(RIVISOR®) 보로졸, 페마라(FEMARA®) 레트로졸, 및 아리미덱스(ARIMIDEX®) 아나스트로졸; 항-안드로겐, 예를 들면, 플루타미드, 닐루타미드, 바이칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 또한 트록사시타빈(1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 부착 세포 증식에 연루된 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것들, 예를 들면, PKC-알파, Raf 및 H-Ras; 리보자임, 예를 들면, VEGF 발현 억제제(예: 안지오자임(ANGIOZYME®) 리보자임) 및 HER2 발현 억제제; 백신, 예를 들면, 유전자 치료 백신, 예를 들면, 알로벡틴(ALLOVECTIN®) 백신, 류벡틴(LEUVECTIN®) 백신 및 박시드(VAXID®) 백신; 프로류킨(PROLEUKIN®) rIL-2; 루트로테칸(LURTOTECAN®) 토포이소머라제 1 억제제; 아바렐릭스(ABARELIX®) rmRH; 비노렐빈 및 에스페라미신(Esperamicins)(참고: 미국 특허 번호 4,675,187), 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2 이상의 조합.
용어 "면역조절 약물" 또는 "IMiD"는 항체 형성의 자극 및/또는 말초혈 세포 활성의 억제와 같은 면역계 반응 또는 면역계의 기능을 변형시키는 약물의 부류를 지칭하며, 탈리도미드(α-N-프탈이미도-글루타르미드) 및 그의 유사체, REVLIMID®(레날리도미드), ACTI-MID™(포말리도미드), OTEZLA®(아프레밀라스트) 및 이들의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 산을 포함하지만, 이에 국한되지 않는다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분은 특정 공급원 또는 종들로부터 유도되며, 상기 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종들로부터 유도된 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "FcRH5"는, 세포 내 FcRH5 단백질의 생성으로부터 유발된 임의의 천연 발생 FcRH5를 지칭한다. 상기 용어는, 달리 표지되지 않는다면, 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간 및 시노몰구스 원숭이) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 랫트)를 포함한 척추동물 공급원 유래의 FcRH5를 포함한다. 상기 용어는 또한 FcRH5의 천연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 예시적인 인간 FcRH5 아미노산 서열은 서열 번호: 114에 나타난다. 예시적인 시노몰구스 원숭이 FcRH5 단백질의 아미노산 서열은 서열 번호: 215에 나타난다.
본원에서 사용되는 용어 "분화 클러스터 3" 또는 "CD3"은, 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어, CD3ε, CD3γ, CD3α, 및 CD3β 쇄를 포함하는, 영장류 (예컨대, 인간) 및 설치류 (예컨대, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원 유래의 임의의 천연 CD3을 지칭한다. 상기 용어는 "전장" 비가공된 CD3 (예컨대, 비가공된 또는 비변형된 CD3ε 또는 CD3γ), 뿐만 아니라 세포 내 가공으로부터 유발되는 CD3의 임의의 형태를 포괄한다. 용어는 또한 CD3의 천연 발생 변이체, 예컨대, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다. CD3은, 예를 들어, 하기를 포함한다: 인간 CD3ε 단백질 (NCBI RefSeq 번호 NP_000724) (길이가 207 아미노산), 및 인간 CD3γ 단백질 (NCBI RefSeq 번호 NP_000064) (길이가 182 아미노산).
항체의 "부류"는 이의 중쇄가 소유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5개 주요 부류의 항체가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있으며, 이들 중 몇몇은 하위부류(이소형), 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2 로 추가 구분될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 불린다.
본원에 기재된 발명의 양태 및 구현예는 "포함하는(comprising)", "구성되는(consisting) 및 "~로 본질적으로 구성되는"의 양태 및 구현예를 포함하는 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "세포독성제"는 세포성 기능을 억제 또는 예방하고/하거나 세포사 또는 파괴를 일으키는 물질을 지칭한다. 세포독성제는, 비제한적으로, 방사성 동위원소 (예를 들면, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학치료제 또는 약물 (예를 들면, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알카로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로르암부실, 다우노루비신 또는 다른 개재 약물); 성장 억제성 제제; 효소 및 그 단편 예컨대 핵산분해 효소; 항생제; 독소 예컨대 소분자 독소 또는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성 독소, 단편 및/또는 그 변이체 포함; 및 아래 개시된 다양한 항종양 또는 항암제를 포함한다.
"장애"는 하기를 비제한적으로 포함하는 치료로부터 이점을 얻을 임의의 병태이다: 포유동물이 문제 장애를 갖기 용이하게 만드는 병리적 상태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질환.
용어 "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"는 일정 정도의 비정상 세포 증식과 연관된 장애를 지칭한다. 일 구현예에서, 세포 증식성 장애는 암이다. 일 구현예에서, 세포 증식성 장애는 종양이다.
용어들 "암" 및 "암성"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장/증식을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리적 상태를 나타내거나 설명한다. 암의 예는 골수종, 암종, 림프종 (예를 들어, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 아세포종, 육종 및 백혈병을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일부 구현예에서, 암은 FcRH5-양성 암이다. 이러한 암의 보다 특정 예에는 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 외투 세포 림프종(MCL), 확산성 큰 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종(FL), 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 골수단핵구 백혈병, 급성 전 골수성 백혈병(APL), 만성 골수 증식성 장애, 혈소판성 백혈병, 전구체 B 세포 급성 림프구성 백혈병(전-B-ALL), 전구체 T 세포 급성 림프구성 백혈병(전-T-ALL), 비만 세포 질환, 비만 세포 백혈병, 비만 세포 육종, 골수 육종, 림프성 백혈병 및 미분화 백혈병이 있다. 일부 구현예에서, 암은 B 세포 암이다. 특히, 암은 단클론성 감마글로불린병증, 경쇄 아밀로이드증, 미결정된 유의성의 단클론성 감마글로불린혈증 및 독립성 혈질 세포종, 단리된 형질 세포종 및 골수외형성 형질 세포종과 같은 과량의 항체 생산을 포함하는 상태를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 "종양"은 악성이든 양성이든, 모든 신생물성 세포 성장 및 증식, 그리고 모든 전-암성 및 암성 세포 및 조직을 도시한다. 용어들 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에서 상호 배타적인 것이 아니다.
"효과기 기능"은 항체의 Fc 영역에 기인할 수 있는 생물학적 활성을 나타내며, 이것은 항체 이소형에 따라 변한다. 항체 효과기 기능의 예는 하기를 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개된 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체의 하향 조절 (예를 들면, B 세포 수용체); 및 B 세포 활성화.
화합물, 예를 들면, 본 발명의 항-FcRH5 항체 또는 이의 조성물(예를 들면, 약제학적 조성물)의 "유효량"은 적어도 치료적 또는 예방적 결과, 예를 들면, 특정 질환(예, 암과 같은 세포 증식성 장애)의 측정 가능한 개선 또는 예방을 달성하는데 필요한 적어도의 양이다. 본원의 유효량은 개체의 질환 단계, 연령, 성별 및 체중과 같은 요인, 및 환자에서의 목적 반응을 일으키는 항체의 능력에 따라 가변될 수 있다. 유효량은 또한, 치료의 임의의 독성 또는 유해 효과가 치료적 유익 효과를 능가하는 것이다. 예방 용도에 대하여, 유익한 또는 원하는 결과는 결과 예컨대 위험 제거 또는 감소, 중증도 약화, 또는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동 증상, 질환의 발달 동안 나타나는 그 합병증 및 중간체 병리적 표현형을 포함하여, 질환의 개시 지연을 포함한다. 치료 용도에 대하여, 유익한 또는 원하는 결과는 임상 결과 예컨대 질환에서 비롯되는 1종 이상의 증상 감소, 질환을 앓는 군의 삶의 질 증가, 질환을 치료하는데 필요한 다른 약제의 용량 감소, 예컨대 질환의 표적화, 및 질환 진행의 지연을 통한 기타 약제의 효과 증진, 및/또는 생존 연장을 포함한다. 암 또는 종양의 경우, 치료학적 유효량의 약물은 암 세포수를 감소시키고/시키거나; 종양 크기를 감소시키고/시키거나; 말초 장기로의 암 세포 침윤을 억제(즉, 어느 정도 느리게 하거나 정지)하고/하거나; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 느리게 하거나 바람직하게는 정지)하고/하거나; 종양 성장을 어느 정도로 억제하고/하거나; 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도로 완화시키는 것에 대한 효과를 가질 수 있다. 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물의 유효량은 직접적으로 또는 간접적으로 예방적 또는 치료적 처치를 달성하는데 충분한 양이다. 임상 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제 투여의 맥락에서 고려될 수 있고, 그리고 만일 하나 이상의 다른 제제와 함께 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성되면 단일 제제는 효과적인 양으로 제공되는 것으로 고려될 수 있다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 적어도 불변 영역의 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다.　 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 중쇄의 Cys226 또는 Pro230으로부터 카르복실-말단까지 연장된다.　　그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신 (Lys447)은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 특정되지 않는 경우, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 또한EU 지수로 불리우는 EU 넘버링 시스템에 따르고 이는 하기 문헌에 기재된 바와 같다: Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4가지 FR 도메인으로 구성된다: FR1, FR2, FR3, 및 FR4. 따라서 HVR과 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 하기 순서로 출현한다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 "FcRH5-양성 암 세포"는 이들 표면 상에 FcRH5를 발현하는 세포를 지칭한다. 일부 구현예에 있어서, FcRH5는 FcRH5a, FcRH5b, FcRH5c, UniProt 식별자 Q96RD9-2 및/또는 FcRH5d 중의 하나 이상이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5c이다.
용어 "FcRH5-양성 암"은 이들 표면 상에 FcRH5를 발현하는 세포를 포함하는 암을 지칭한다. 세포가 표면 상의 FcRH5를 발현하는지 여부를 결정하기 위한 목적을 위하여, FcRH5 mRNA 발현은 세포 표면 상에서의 FcRH5 발현과 연관되는 것으로 고려된다. 일부 구현예에서, FcRH5 mRNA의 발현은 동일계내 혼성화 및 RT-PCR (정량적 RT-PCR 포함)로부터 선택된 방법에 의하여 계측된다. 대안적으로, 세포 표면상의 FcRH5의 발현은, 예를 들면, 면역 조직화학법, FACS 등과 같은 방법에서 FcRH5에 대한 항체를 사용하여 계측될 수 있다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5a, FcRH5b, FcRH5c, UniProt 식별자 Q96RD9-2 및/또는 FcRH5d 중의 하나 이상이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5c이다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 나타내기 위해 상호교환 가능하게 본원에서 사용된다.
용어 "FcRH5의 글리코실화된 형태"는, 탄수화물 잔기의 부가에 의하여 후-번역 변형된 FcRH5의 천연 발생 형태를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "성장 억제성 제제"는 시험관내 또는 생체내 세포의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 일 구현예에서, 성장 억제성 제제는 항원이 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 예방 또는 감소시키는 성장 억제성 항체이다. 또 다른 구현예에서, 성장 억제성 제제는 S 상에서 세포의 백분율을 유의미하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제성 제제의 예는 (S 상 이외의 위치에서) 세포 주기 진행을 차단하는 제제, 예컨대 G1 상 및 M-상 정지를 유도하는 제제를 포함한다. 고전적 M-상 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산 및 토포이소머라제 II 억제제 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드, 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 제제, 예를 들면, DNA 알킬화제, 예컨대 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로르에타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 및 아라-C도 S-상 정지로 번진다. 추가 정보는 하기에서 발견될 수 있다: Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), 예컨대, p. 13. 탁산(파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 다 주목(yew tree)에서 유도된 항암 약물이다. 유럽 주목에서 유도된 도세탁셀(TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer)은 파클리탁셀의 반합성 유사체(TAXOL®, Bristol-Myers Squibb)이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은 튜불린 이량체로부터 미세소관의 어셈블리를 촉진하고, 탈중합 방지에 의해 미세소관을 안정화하여 세포에서 유사분열의 억제를 야기한다.
용어 "숙주 세포," "숙주 세포주," 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되고 외인성 핵산이 도입되는 세포를 언급하고 상기 세포의 자손을 포함한다. 숙주 세포는 1차 변형된 세포 및 계대 횟수와 상관없이 이로부터 유래된 후손을 포함하는 "변형체" 및 "변형된 세포"를 포함한다. 자손은 핵산 함량에 있어서 친계 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 변형된 세포에 대해 선별되거나 선택된 바와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나 인간 항체 레퍼토리 또는 기타의 인간 항체-암호화 서열을 사용하는 비-인간 공급원으로부터 유도되는 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 특이적으로 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다. 인간 항체는 파아지-디스플레이 라이브러리를 포함하는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용해서 생성될 수 있다. Hoogenboom and Winter. J. Mol. Biol. 227:381,1991; Marks et al. J. Mol. Biol. 222:581,1991. 또한 인간 단클론성 항체의 제조를 위해 하기에 기재된 방법이 이용 가능하다: Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al. J. Immunol., 147(1):86-95,1991. 또한 하기를 참고한다: van Dijk and van de Winkel. Curr . Opin . Pharmacol . 5:368-74, 2001. 인간 항체는 항원 유발에 반응하여 상기 항체를 생성하기 위해 변형되었지만, 이의 내인성 유전자위가 비활성화된 형질전환(transgenic) 동물, 예를 들면 면역화된 제노마우스에 상기 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다 (예를 들면, 참고: XENOMOUSE™ 기술에 관한 미국 특허 6,075,181 및 6,150,584). 또한 예를 들어, 하기를 참고한다: Li et al., Proc . Natl . Acad . Sci. USA. 103:3557-3562, 2006 (인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관함).
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 통상적으로 존재하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위그룹으로부터이다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 하기에서의 것과 같다: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. 일 구현예에서, VL에 대해, 하위그룹은 Kabat et al, 상기에서와 같이 하위그룹 카파 I이다. 일 구현예에서, VH에 대해, 하위그룹은 Kabat et al., 상기에서와 같이 하위그룹 III이다.
"인간화" 항체는 비인간 HVR로부터 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 구현예에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 여기에서 HVR (예를 들면, CDR)의 실질적으로 모두는 비인간 항체의 것에 일치하고, 그리고 FR의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 항체의 것에 일치한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유도된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들면, 비인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화처리되는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열(상보성 결정 영역 또는 "CDR")에서 초가변이고/이거나 구조적으로 정의된 루프("초가변 루프")를 형성하고/하거나 항원-접촉 잔기("항원 접촉")을 함유하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 도시한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR: VH에 3 개(H1, H2, H3), 및 VL에 3 개(L1, L2, L3)를 포함한다. 본원에서 예시적인 HVR은 하기를 포함한다:
(a) 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2), 및 96-101 (H3)에서 발생하는 초가변 루프 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987);
(b) 아미노산 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2), 및 95-102 (H3)에서 발생되는 CDR (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
(c) 아미노산 잔기 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2), 및 93-101 (H3)에서 발생하는 항원 접촉부 (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745, 1996); 및
(d) HVR 아미노산 잔기 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3), 및 94-102 (H3)을 포함하는, (a), (b), 및/또는 (c)의 조합.
다르게 명시되지 않으면, 가변 도메인 (예를 들면, FR 잔기)에서 HVR 잔기 및 다른 잔기는 Kabat et al., 상기에 따라 본원에서 넘버링된다.
"면역콘주게이트"는 세포독성제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 이종성 분자(들)에 콘주게이트된 항체이다.
"대상체" 또는 "개체"는 포유동물이다. 포유동물은 가축(예컨대, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류(예컨대, 인간 및 비-인간 영장류, 예를 들면, 원숭이), 토끼, 및 설치류(예컨대, 마우스 및 랫트)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 대상체 또는 개체는 인간이다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 구현예에서, 항체는 다음 기술에 의하여 계측시 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다: 예를 들어, 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC). 항체 순도의 평가를 위한 방법의 검토를 위해, 예를 들면, 참고: Flatman et al. J. Chromatogr. B 848:79-87, 2007.
"단리된" 핵산은 이의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 핵산 분자를 원래 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외에 또는 이의 자연 염색체 위치와는 다른 염색체 위치에 존재한다.
"항-FcRH5 항체를 암호화하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 이의 단편)를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 이러한 핵산 분자(들)를 단일 벡터 또는 별도의 벡터로 포함하여 나타내며, 이러한 핵산 분자(들)는 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재한다.
"항-CD3 항체를 암호화하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 이의 단편)를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 이러한 핵산 분자(들)를 단일 벡터 또는 별도의 벡터로 포함하여 나타내며, 이러한 핵산 분자(들)는 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재한다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는, 예를 들면, 천연 발생 돌연변이를 함유하거나 또는 단클론성 항체 제제의 생산 동안 발생하는 가능한 변이체 항체 (상기 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다)를 제외하고, 동일하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정인자 (에피토프)에 대하여 지향된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체와 대조로, 단클론성 항체 제제의 각각의 단클론성 항체는 항원에서 단일 결정인자에 대하여 지향된다. 따라서, 수식어 "단클론성"은 항체가 실질적으로 균일한 항체 집단에서 수득된 것이라는 속성을 명시하고, 어떤 특정한 방법에 의한 상기 항체의 생산을 요구하는 것으로 간주되지 않는다.　 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 단클론성 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파아지-디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 형질전환 동물을 사용하는 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 각종 기술들에 의해 제조될 수 있으며, 이러한 방법 및 단클론성 항체를 제조하기 위한 기타의 예시적인 방법들이 본원에 기재되어 있다.　
"누출된 항체"는 이종성 모이어티 (예를 들어, 세포독성 모이어티) 또는 방사능표지에 콘주게이트되지 않는 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 약제학적 제제에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 다양한 구조를 갖는 천연 발생 면역글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들면, 천연 IgG 항체는 디설파이드 결합된 두 개의 동일한 경쇄 및 두 개의 동일한 중쇄로 이루어진, 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로, 각 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VH)에 이어 세 개의 불변 도메인(CH1, CH2, 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VL)에 이어 불변(CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는, 이의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파(κ) 및 람다 (λ)라고 불리는 두 가지 유형 중의 하나에 할당될 수 있다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료학적 제품의 상업 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서를 지칭하기 위해 사용되고 이는 상기 치료학적 제품의 사용에 관한 적응증, 용도, 투여량, 투여, 병용 요법, 사용금지 사항 및/또는 경고에 관한 정보를 함유한다.
용어 "PD-1 축 결합 길항제"는, T-세포 작용 (예컨대, 증식, 시토카인 생산, 표적 세포 사멸)을 복구하거나 증진하는 결과를 갖는, PD-1 신호전달 축 상의 신호전달로부터 유발된, T-세포 기능이상을 제거하기 위하여, 이의 결합 상대 중 하나 또는 그 이상과의 PD-1 축 결합 상대의 상호작용을 억제하는 분자를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제, 및 PD-L2 결합 길항제를 포함한다.
용어 "PD-1 결합 길항제"는, PD-1 의, 이의 결합 상대 예컨대 PD-L1, PD-L2 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 이의 결합 상대 중 하나 이상으로의 PD-1 결합을 억제하는 분자이다. 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L1 및/또는 PD-L2로의 PD-1 결합을 억제한다. 예를 들어, PD-1 결합 길항제는 하기를 포함한다: PD-L1 및/또는 PD-L2 와의 PD-1 의 상호작용으로 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는, 항-PD-1 항체, 이의 항원-결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 기타 분자. 일 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1을 통한 T 림프구 매개된 신호전달에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 통해 매개된 음성 공통자극 신호를 감소시켜서 기능이상 T-세포에 기능이상을 덜게 한다 (예를 들면, 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증진함). 일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체이다. 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 MDX-1106 (니볼루맙)이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 MK-3475 (펨브로리주맙)이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 CT-011 (피딜리주맙)이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 AMP-224 이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 MED1-0680 이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 PDR001 이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 REGN2810 이다. 또 다른 특정 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 BGB-108 이다.
용어 "PD-L1 결합 길항제"는, PD-L1 의, 이의 결합 상대 예컨대 PD-1, B7-1 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 이의 결합 상대로의 PD-L1 결합을 억제하는 분자이다. 특정 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-1 및/또는 B7-1로의 PD-L1 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 하기를 포함한다: PD-L1 의, 이의 결합 상대 예컨대 PD-1 및/또는 B7-1 중 하나 또는 그 이상과의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는, 항-PD-L1 항체, 이의 항원-결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 기타 분자. 일 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1을 통한 T 림프구 매개된 신호전달에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 통해 매개된 음성 공통자극 신호를 감소시켜서 기능이상 T-세포에 기능이상을 덜게 한다 (예를 들면, 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증진함). 일부 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 추가의 특정 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MPDL3280A이다(아테조리주맙, WHO 약물 정보(International Nonproprietary Names for Pharmaceutical Substances)에 의한 TECENTRIQ™ 로 시판됨, 권장 INN: List 74, Vol. 29, No.3, 2015(387 페이지 참조)). 특정 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 YW243.55.S70이다. 또 다른 특정 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MDX-1105이다. 또 다른 특정 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MSB0015718C이다. 또한 또 다른 특정 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736이다.
용어 "PD-L2 결합 길항제"는, PD-L2 의, 이의 결합 상대 예컨대 PD-1 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 이의 결합 상대 중 하나 이상으로의 PD-L2 결합을 억제하는 분자이다. 특정 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-1로의 PD-L2 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, PD-L2 길항제는 하기를 포함한다: PD-L2 의, 이의 결합 상대 예컨대 PD-1 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는, 항-PD-L2 항체, 이의 항원-결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 기타 분자. 일 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2을 통한 T 림프구 매개된 신호전달에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 통해 매개된 음성 공통자극 신호를 감소시켜서 기능이상 T-세포에 기능이상을 덜게 한다 (예를 들면, 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증진함). 일부 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 면역접합체이다.
본원에서 사용되는 용어 "단백질"은, 달리 나타내지 않는 한, 영장류 (예컨대, 인간) 및 설치류 (예컨대, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 소스로부터의 임의의 천연 단백질을 도시한다. 상기 용어는 세포내 처리로 유발된 임의의 형태의 단백질 뿐만 아니라 "전장"의 비처리된 단백질을 포괄한다. 상기 용어는 또한, 단백질의 천연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다.
표준 폴리펩티드 서열과 관련하여 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"은 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후, 필요하다면 최대 퍼센트 서열 동일성을 성취하기 위해 정렬한 후 표준 폴리펩티드 서열에서 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되고 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존성 치환을 고려하지 않는다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 계측하기 위한 목적으로의 정렬은, 예를 들면, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 재량 내에 있는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당업계의 숙련가들은 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대의 정렬을 달성하는데 필요한 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적합한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제조사 (Genentech, Inc.)에 의해 개발되었고, 소스 코드는 사용자 기록문서와 함께 하기와 같이 제출되었다: 미국 저작권 청, 워싱턴 D.C., 20559, 하기 하에서 등록됨: 미국 저작권 등록 번호 TXU510087. ALIGN-2 프로그램은 캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코에 소재하는 Genentech, Inc.로부터 공개적으로 이용 가능하거나, 또는 소스 코드로부터 편집될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운영 체제, 예컨대 디지털 UNIX V4.0D 상에서 사용하기 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되어 바뀌지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교에 사용되는 상황에서, 소정의 아미노산 서열 A 내지, 및, 또는 소정의 아미노산 서열 B(이것은 대안적으로 소정의 아미노산 서열 B에 대해 특정의 아미노산 서열 동일성 %를 갖거나 포함하는 소정의 아미노산 서열 A로서 표현될 수 있음)의 아미노산 서열 동일성 %는 다음과 같이 산출된다:
분수 X/Y의 100배
여기서, X는 A 및 B의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의한 동일한 매치로서 스코어링되는 아미노산 잔기의 수이고 Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, A 대 B의 % 아미노산서열 동일성은 B 대 A의 % 아미노산 서열 동일성은 동일하지 않음을 인식할 것이다. 달리 구체적으로 기재하지 않은 경우, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 직전의 문단에 기재된 바와 같이 수득한다.
용어 "약제학적 제제"은 그안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하기 위한 형태인, 그리고 제형이 투여되는 대상체에 허용불가능하게 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약제학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분을 제외한, 대상체에 비독성인, 약제학적 제제 중 성분을 가리킨다. 약제학적으로 허용가능한 담체에는 비제한적으로, 완충제, 부형제, 안정제 또는 보존제가 포함된다.
본원에서 사용되는 "치료"(및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 이의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적인 과정을 변경하려는 임상적 중재술을 나타내며, 예방을 위해 또는 임상 병리학의 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발병 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 질환의 발병을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 느리게 하는데 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "질환의 진행 지연"은 질환 또는 장애 (예컨대, 세포 증식성 장애, 예컨대, 암)의 진행을 보류, 방해, 지체, 저지, 안정화, 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 질환의 이력 및/또는 치료받는 개체에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 당해분야의 숙련가에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 유의미한 지연은, 사실상, 개체에서 질환이 발병하지 않는다는 점에서, 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들어, 말기 암, 예컨대 전이의 발병이 지연될 수 있다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 분자 상의 부위를 가리킨다. 일부 구현예에서, 항체가 결합하는 항원 분자 상의 특정한 부위는 하이드록실 라디칼 풋프린팅 (예컨대, FcRH5 결합 도메인)에 의해 계측된다. 일부 구현예에서, 항체가 결합하는 항원 분자 상의 특정한 부위는 결정학에 의해 계측된다.
"감소 또는 억제"는 예를 들어, 20% 이상, 50% 이상, 또는 of 75%, 85%, 90%, 95%, 이상의 전체적 감소를 유발하는 능력을 의미한다. 특정 구현예에서, 감소 또는 억제는, 항체 Fc 영역에 의하여 매개된 항체의 효과기 작용에 대한 것을 지칭하며, 상기 효과기 작용은 특히 보체 의존적 세포독성 (CDC), 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC), 및 항체 의존적 세포성 식세포작용 (ADCP)을 특히 포함한다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 항원으로의 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각, VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다. (참고, 예를 들면, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007).) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 추가로, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체 기원의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 참고: 예를 들면, Portolano et al. J. Immunol. 150:880-887, 1993; Clarkson et al. Nature 352:624-628, 1991.
"변이체 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들)로 인하여 천연 서열 Fc 영역의 그것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역에 또는 친계 폴리펩티드의 Fc 영역에 비교된 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들면 천연 서열 Fc 영역에서 또는 친계 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1 내지 약 10 아미노산 치환, 및 바람직하게는 약 1 내지 약 5 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 친계 폴리펩티드의 Fc 영역 및/또는 천연 서열 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성을 가질 것이고, 가장 바람직하게는 이들과 적어도 약 90%의 상동성을, 더욱 바람직하게는 이들과 적어도 약 95%의 상동성을 가질 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 이것이 연결된 또 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라 이것이 도입되는 숙주 세포의 게놈에 삽입되는 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동가능하게 연결되는 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로서 지칭된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "투여"란 화합물(예를 들면, 본 발명의 항-FcRH5 항체 또는 본 발명의 항-FcRH5 항체를 암호화하는 핵산) 또는 조성물(예를 들면, 약제학적 조성물, 예를 들면, 본 발명의 항-FcRH5 항체를 포함하는 약제학적 조성물)의 투여량을 대상체에 제공하는 방법을 의미한다. 본원에 기재된 방법에 사용되는 조성물은, 예를 들면, 근육내, 정맥내, 피내, 경피, 동맥내, 복강내, 병변내, 두개골내, 관절내, 전립선내, 흉막내, 기관내, 비강내, 유리체내, 질내, 직장내, 국소, 종양내, 복강내, 피하, 결막하, 방광내, 점막, 심낭내, 탯줄내, 안구내, 경구, 국소적으로, 국소, 흡입, 주사, 주입에 의해, 연속 주입에 의해, 직접 국부 관류욕 표적 세포에 의해, 카테터에 의해, 세정에 의해, 크림으로 또는 지질 조성물로 투여할 수 있다. 투여 방법은 다양한 인자 (예를 들면, 투여될 화합물 또는 조성물 및 치료될 병태, 질환, 또는 장애의 중증도)에 따라 가변될 수 있다.
II. 조성물 및 방법
일 양태에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체에, 부분적으로, 기반한다. 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 다중특이적(예: 이중특이적)이고, FcRH5 또는 이의 단편 이외에, 제2 생물학적 분자(예: 세포 표면 항원, 예를 들면, CD3(예: CD3ε 및/또는 CD3γ)와 같은 T 세포 마커)에 결합한다. 본 발명의 항체는, 예를 들면, 대상체에서 세포 증식성 장애(예: 암, 예를 들면, FcRH5-양성 암, 예를 들면, 다발성 골수종)의 진행을 진단하고/하거나 치료하거나 이의 진행을 지연시키는데 유용하다.
A. 예시적인 항- FcRH5 항체
일 양태에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 104의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인, 및/또는 서열 번호: 105의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v85, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 106의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 107의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 53, 54, 46, 및 47, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v93, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 82의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 83의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 84의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 85의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47, 각각의 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4를 추가로 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.1, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 86의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 87의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4를 추가로 포함한다 추가로 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.2, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 88의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 89의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47, 각각의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4를 추가로 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.3, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 가질 수 있다: 서열 번호: 90의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 91의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4를 추가로 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.4, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 92의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 93의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.5, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 94의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 95의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47, 각각의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4를 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.6, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 96의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 97의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 53, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.7, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 98의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 99의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 55, 46, 및 47, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.13, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함할 수 있다: 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 100의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 101의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,. 일부 경우에서, 청구항 79 내지 82 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체가 개시되며, 상기 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 57, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1.13.1, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 102의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 (b) 서열 번호: 103의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 추가로 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v87, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 가질 수 있다: (a) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5는 하기를 포함한다: 서열 번호: 110의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 111의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 66, 67, 68, 및 69, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 청구항 95의 항-FcRH5 항체가 개시되며, 상기 VH 도메인은 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 70, 71, 72, 및 73의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 111의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 17B1, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 111의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는다: (a) 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5는 하기를 포함한다: 서열 번호: 112의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 113의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5는 하기를 포함한다: 서열 번호: 74, 75, 76, 및 77, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 78, 79, 80, 및 81의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 15G8, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 108의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 109의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 58, 59, 60, 및 61, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 62, 63, 64, 및 65의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 7D8, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 185의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 186의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 179, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 185의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 186의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1A, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 185의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 186의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 187의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 188의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 180, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 187의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 188의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1B, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 187의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 188의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 189의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 190의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 181, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 189의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1C, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 189의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 191의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 192의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 23, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 191의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 192의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1D, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 191의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 192의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 193의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 194의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 182, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 194의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1E, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 194의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 175의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 195의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 196의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 195의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 196의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1F, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 195의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 196의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 176의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 197의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 198의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 197의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 198의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1G, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 197의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 198의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 177의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 199의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 200의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 200의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1H, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 200의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 178의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 201의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 202의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 201의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 202의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1I, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 201의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 202의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 203의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 204의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 183, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 203의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 204의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1J, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 203의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 204의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 205의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 206의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 184, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 205의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 206의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1K, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 205의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 206의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 207의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 208의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 207의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v1L, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 207의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 209의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 210의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 209의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 210의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v86, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 209의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 210의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 211의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 212의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 53, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 211의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v191, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 211의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 경우에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 청구된 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 213의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 214의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 52, 54, 46, 및 47의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 48, 56, 50, 및 51의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 가질 수 있다: 서열 번호: 214의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 특정 경우에서, 항 FcRH5 항체는 1G7.v92, 또는 이의 유도체, 또는 이의 클론성 연관물일 수 있다. 일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 하기를 포함하는 결합 도메인을 갖는 항-FcRH5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 214의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 단클론성, 인간, 인간화, 또는 키메라 항체이다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 IgG 항체이다. 항-FcRH5는 전장 항체 및/또는 단일특이적 항체일 수 있다. 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5의 Ig-유사 도메인 9의 에피토프에 결합할 수 있다. 예를 들어, 에피토프는 서열 번호: 114의 아미노산 743-850의 일부를 포함할 수 있다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 인간 FcRH5 또는 시노몰구스 원숭이(시노) FcRH5 또는 이들 모두에 결합한다. 기타 경우에서, 결합 도메인은 FcRH1, FcRH2, FcRH3 및/또는 FcRH4에 특이적으로 결합하지 않는다.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 정맥내 주입 후 청소율을 갖는다: 약 10 ml/kg/일 내지 약 45 ml/kg/일 (예컨대, 약 1 ml/kg/일, 5 ml/kg/일, 10 ml/kg/일, 11 ml/kg/일, 12 ml/kg/일, 13 ml/kg/일, 14 ml/kg/일, 15 ml/kg/일, 16 ml/kg/일, 17 ml/kg/일, 18 ml/kg/일, 19 ml/kg/일, 20 ml/kg/일, 21 ml/kg/일, 22 ml/kg/일, 23 ml/kg/일, 24 ml/kg/일, 25 ml/kg/일, 26 ml/kg/일, 27 ml/kg/일, 28 ml/kg/일, 29 ml/kg/일, 30 ml/kg/일, 31 ml/kg/일, 32 ml/kg/일, 33 ml/kg/일, 34 ml/kg/일, 35 ml/kg/일, 36 ml/kg/일, 37 ml/kg/일, 38 ml/kg/일, 39 ml/kg/일, 40 ml/kg/일, 41 ml/kg/일, 42 ml/kg/일, 43 ml/kg/일, 또는 44 ml/kg/일).
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 정맥내 주입 후 청소율을 갖는다: 마우스 내에서의, 약 1 ml/kg/일 내지 약 5 ml/kg/일, 약 6 ml/kg/일 내지 약 10 ml/kg/일, 약 11 ml/kg/일 내지 약 15 ml/kg/일, 약 16 ml/kg/일 내지 약 20 ml/kg/일, 약 21 ml/kg/일 내지 약 25 ml/kg/일, 약 26 ml/kg/일 내지 약 30 ml/kg/일, 약 31 ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일, 약 36 ml/kg/일 내지 약 40 ml/kg/일, 약 41 ml/kg/일 내지 약 45 ml/kg/일. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 마우스에서 약 10ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 마우스에서 약 10ml/kg/일 내지 약 20 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 마우스에서 약 12 ml/kg/일 내지 약 16 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 정맥내 주입 후 청소율을 갖는다: 시노몰구스 내에서의, 약 1 ml/kg/일 내지 약 5 ml/kg/일, 약 6 ml/kg/일 내지 약 10 ml/kg/일, 약 11 ml/kg/일 내지 약 15 ml/kg/일, 약 16 ml/kg/일 내지 약 20 ml/kg/일, 약 21 ml/kg/일 내지 약 25 ml/kg/일, 약 26 ml/kg/일 내지 약 30 ml/kg/일, 약 31 ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일, 약 36 ml/kg/일 내지 약 40 ml/kg/일, 약 41 ml/kg/일 내지 약 45 ml/kg/일. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 시노몰구스에서 약 20 ml/kg/일 내지 약 40 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 시노몰구스에서 약 25 ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 시노몰구스에서 약 30 ml/kg/일 내지 약 35 ml/kg/일의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 구현예에 따른 항-FcRH5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다.
1.항체 친화도
특정 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 해리 상수 (KD)로 인간 및/또는 시노몰구스 FcRH5에 결합한다: ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예컨대, 10-8 M 이하, 예컨대, 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-10 내지 10-13 M, 예컨대, 10-11 내지 10-13 M, 예컨대, 10-12 내지 10-13 M). 예를 들어, 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다: ≤100 nM (예컨대, ≤ 90 nM, ≤80 nM, ≤ 70 nM, ≤60 nM, ≤50 nM, ≤40 nM, ≤30 nM, ≤20 nM, ≤10 nM, ≤5 nM, ≤ 1 nM, ≤ 750 pM, ≤500 pM, ≤250 pM, ≤100 pM, ≤50 pM, ≤25pM, ≤10 pM, ≤5 pM, 또는 ≤ 1pM) 이하.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 약 1pM 내지 약 500nM(예를 들면, 약 1pM 내지 200pM, 100pM 내지 300pM, 200pM 내지 400pM, 300pM 내지 500pM, 400pM 내지 600pm, 500pM 내지 700pM, 600pM 내지 800pM, 700pM 내지 900pM, 800pM 내지 1nM, 900pM 내지 100nM, 1nM 내지 200nM, 100nM 내지 300nM, 200nM 내지 400nM, 또는 300nM 내지 500nM)의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예컨대, 약 1 pM 내지 100 pM, 50 pM 내지 150 pM, 100 pM 내지 200 pM, 150 pM 내지 250 pM, 200 pM 내지 300 pM, 250 pM 내지 350 pM, 300 pM 내지 400 pM, 350 pM 내지 450 pM, 400 pM 내지 500 pM, 450 pM 내지 550 pM, 500 pM 내지 600 pM, 550 pM 내지 650 pM, 600 pM 내지 700 pM, 650 pM 내지 750 pM, 700 pM 내지 800 pM, 750 pM 내지 850 pM, 800 pM 내지 900 pM, 850 pM 내지 950 pM, 또는 900 pM 내지 1 nM)의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다: 약 100 pM 내지 약 500 pM (예컨대, 약 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, 400 pM, 425 pM, 450 pM, 475 pM, 또는 500 pM). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다: 약 100 pM 내지 약 160 pM (예컨대, 약 100 pM, 105 pM, 110 pM, 115 pM, 120 pM, 125 pM, 130 pM, 135 pM, 140 pM, 145 pM, 150 pM, 155 pM, 또는 160 pM). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 약 1nM 내지 약 150nM(예: 약 1nM, 2nM, 3nM, 4nM, 5nM, 6nM, 7nM, 8nM, 9nM, 10nM, 11nM, 12nM, 13nM, 14nM, 15nM, 16nM, 17nM, 18nM, 19nM, 20nM, 21nM, 22nM, 23nM, 24nM, 25nM, 26nM, 27nM, 28nM, 29nM, 30nM, 31nM, 32nM, 33nM, 34nM, 35nM, 36nM, 37nM, 38nM, 39nM, 40nM, 41nM, 42nM, 43nM, 44nM, 45nM, 46nM, 47nM, 48nM, 49nM, 50nM, 55nM, 60nM, 65nM, 70nM, 75nM, 80nM, 85nM, 90nM, 95nM, 100nM, 105nM, 110nM, 115nM, 120nM, 125nM, 130nM, 135nM, 140nM, 145nM, 또는 150nM)의 KD 로 인간 FcRH5에 결합한다.
일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 KD 로 시노몰구스 FcRH5에 결합한다: ≤100 nM (예컨대, ≤ 90 nM, ≤80 nM, ≤ 70 nM, ≤60 nM, ≤50 nM, ≤40 nM, ≤30 nM, ≤20 nM, ≤10 nM, ≤5 nM, ≤ 1 nM, ≤ 750 pM, ≤500 pM, ≤250 pM, ≤100 pM, ≤50 pM, ≤25 pM, ≤10 pM, ≤5 pM, 또는 ≤ 1pM, 예컨대, 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-10 내지 10-13 M, 예컨대, 10-11 내지 10-13 M, 예컨대, 10-12 내지 10-13 M) 이하. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 약 1pM 내지 약 500nM(예를 들면, 약 1pM 내지 200pM, 100pM 내지 300pM, 200pM 내지 400pM, 300pM 내지 500pM, 400pM 내지 600pm, 500pM 내지 700pM, 600pM 내지 800pM, 700pM 내지 900pM, 800pM 내지 1nM, 900pM 내지 100nM, 1nM 내지 200nM, 100nM 내지 300nM, 200nM 내지 400nM, 또는 300nM 내지 500nM)의 KD 로 시노몰구스 FcRH5에 결합한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예컨대, 약 1 pM 내지 100 pM, 50 pM 내지 150 pM, 100 pM 내지 200 pM, 150 pM 내지 250 pM, 200 pM 내지 300 pM, 250 pM 내지 350 pM, 300 pM 내지 400 pM, 350 pM 내지 450 pM, 400 pM 내지 500 pM, 450 pM 내지 550 pM, 500 pM 내지 600 pM, 550 pM 내지 650 pM, 600 pM 내지 700 pM, 650 pM 내지 750 pM, 700 pM 내지 800 pM, 750 pM 내지 850 pM, 800 pM 내지 900 pM, 850 pM 내지 950 pM, 또는 900 pM 내지 1 nM)의 KD 로 시노몰구스 FcRH5에 결합한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 KD 로 시노몰구스 FcRH5에 결합한다: 약 100 pM 내지 약 500 pM (예컨대, 약 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, 400 pM, 425 pM, 450 pM, 475 pM, 또는 500 pM). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기의 KD 로 시노몰구스 FcRH5에 결합한다: 약 100 pM 내지 약 160 pM (예컨대, 약 100 pM, 105 pM, 110 pM, 115 pM, 120 pM, 125 pM, 130 pM, 135 pM, 140 pM, 145 pM, 150 pM, 155 pM, 또는 160 pM). 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 약 1nM 내지 약 150nM(예: 약 1nM, 2nM, 3nM, 4nM, 5nM, 6nM, 7nM, 8nM, 9nM, 10nM, 11nM, 12nM, 13nM, 14nM, 15nM, 16nM, 17nM, 18nM, 19nM, 20nM, 21nM, 22nM, 23nM, 24nM, 25nM, 26nM, 27nM, 28nM, 29nM, 30nM, 31nM, 32nM, 33nM, 34nM, 35nM, 36nM, 37nM, 38nM, 39nM, 40nM, 41nM, 42nM, 43nM, 44nM, 45nM, 46nM, 47nM, 48nM, 49nM, 50nM, 55nM, 60nM, 65nM, 70nM, 75nM, 80nM, 85nM, 90nM, 95nM, 100nM, 105nM, 110nM, 115nM, 120nM, 125nM, 130nM, 135nM, 140nM, 145nM, 또는 150nM)의 KD 로 시노몰구스 FcRH5에 결합한다.
일 구현예에서, KD 는 방사표지된 항원 결합 검정(RIA)에 의해 측정된다. 일 구현예에서, RIA는 관심의 대상인 항체의 Fab 버젼 및 이의 항원으로 수행된다. 예를 들어, 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화성은 일련의 적정된 비표지된 항원의 존재하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시키고 이어서 결합된 항원을 항-Fab 항체 코팅된 플레이트로 포획함에 의해 측정된다 (예를 들어, 참고: Chen .et al. J. Mol. Biol. 293:865-881, 1999). 검정용 조건을 수립하기 위해, MICROTITER® 다중-웰 플레이트 (Thermo Scientific)는 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6)에서 포획 항-Fab 항체 (Cappel Labs)의 5 μg/ml로 밤새 코팅되고, 그리고 그 뒤에 2 내지 5 시간동안 실온 (대략 23℃)에서 PBS내 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 차단된다. 비-흡착제 플레이트 (Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원은 해당 Fab의 연속 희석으로 혼합된다 (예를 들면, 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치, Presta et al. Cancer Res. 57:4593-4599, 1997). 그 다음 해당 Fab는 밤새 항온처리되지만; 그러나, 항온처리는 평형이 달성됨을 식별하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들면, 약 65 시간)동안 계속할 수 있다. 그 후에, 혼합물은 실온에서 (예를 들면, 1 시간 동안) 항온처리를 위해 포획 플레이트로 이동된다. 이어서, 상기 용액을 제거하고 플레이트는 PBS 중에서 0.1% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20®)으로 8회 세정하였다. 플레이트를 건조시키는 경우, 150 μl/웰의 섬광제 (MICROSCINT-20 TM; Packard)를 첨가하고 플레이트는 10분 동안 TOPCOUNT TM 감마 카운터 (Packard) 상에서 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각각의 Fab의 농도는 경쟁 결합 검정에 사용하기 위해 선택한다.
또 다른 구현예에 따르면, KD 는 BIACORE® 표면 플라스몬 공명 검정을 이용하여 측정된다. 예를 들면, BIACORE®-2000 또는 BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)을 이용한 검정은 ~10 반응 유니트 (RU)에서 고정된 항원 CM5 칩으로 25 ℃에서 수행된다. 한 구현예에서, 카르복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, BIACORE, Inc.)은 공급자의 설명서에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 하이드로클로라이드 (EDC) 및 N-하이드록시석신이미드 (NHS)로 활성화된다. 항원은 pH 4.8, 10 mM 아세트산나트륨으로 5 μg/ml (~0.2 μM)까지 희석되고, 그 다음 5 μl/분의 유속으로 주입되어 커플링된 단백질의 대략 10 반응 유니트 (RU)를 달성한다. 항원 주사 후, 1 M 에탄올아민을 주사하여 미반응된 그룹을 차단시킨다. 역학적 측정을 위해, 2배 연속 희석된 Fab (0.78 nM 내지 500 nM)를 대략 25 μl/min의 유속으로 25℃ 에서 PBS 중에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20TM) 계면활성제 (PBST)와 함께 사용한다. 결합율 (kon) 및 해리율 (koff)은 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅함에 의해 단순한 1 대 1 랑무이르 결합 모델 (BIACORE® 평가 소프트웨어 버젼 3.2)을 사용하여 산출한다. 평형 해리 상수(KD)는 koff/kon 비율로서 산출된다. 예를 들어, 하기를 참고한다: Chen et al., J. Mol . Biol. 293:865-881, 1999. 만일 가역속도(on-rate)가 상기 표면 플라스몬 공명 검정에 의해 106M-1s-1 를 초과하면, 분광기, 예컨대 정지-유동 구비된 분광광도계 (Aviv Instruments) 또는 교반된 큐벳을 갖춘 8000-시리즈 SLM-AMINCOTM 분광광도계 (ThermoSpectronic)에서 측정된 바와 같이 항원의 증가 농도의 존재하에 25 ℃에서 pH 7.2, PBS내 20 nM 항-항원 항체 (Fab 형태)의 형광 방출 세기 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역통과)에서의 증가 또는 감소를 측정하는 형광성 켄칭 기술을 이용함으로써 가역 속도는 측정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 비스-Fab, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기된 다른 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 다음을 참고한다: Hudson et al. Nat. Med . 9:129-134, 2003. scFv 단편의 검토를 위하여, 예를 들면, 다음을 참고하며:
Figure 112018013792847-pct00001
, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315, 1994; 또한 다음을 참고한다: WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458. 에피토프 잔기에 결합하는 구제 수용체를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의를 위해, 하기를 참고한다: 미국 특허 번호 5,869,046.
2개의 Fab가 비스-말레이미드를 통해 연결되는 항체 단편은 본원에서 비스말레이미도-(티오-Fab)2 또는 비스-Fab로서 지칭된다.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들면, 하기를 참조한다: EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al. Nat. Med . 9:129-134, 2003; 및 Hollinger et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90:6444-6448, 1993. 트리아바디 및 테트라바디가 또한 하기에 기술된다: Hudson et al., Nat. Med . 9:129-134, 2003.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체 (Domantis, Inc., Waltham, MA; 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 6,248,516 B1)이다.
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 무손상 항체의 단백질 가수분해 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포(예컨대, 이. 콜라이 또는 파아지)에 의한 생산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술들로 제조될 수 있다.
3. 키메라성 및 인간화 항체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 키메라성 항체이다. 특정 키메라성 항체는, 예를 들면 하기에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 4,816,567 및 Morrison et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855, 1984. 일 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역(예컨대, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이에서 유도된 가변 영역)과 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 친계 항체의 부류로부터 변화된 "부류 스위칭된" 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라 항체는 인간화된 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간화되어 인간에 대한 면역원성이 감소되어 있고 친계 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 보유한다. 일반적으로, 인간화 항체는, HVR, 예를 들면, CDR, (또는 그 일부)가 비인간 항체로부터 유도되고, FR (또는 그 일부)가 인간 항체 서열로부터 유도되는 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 임의로 또한 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체에서 일부 FR 잔기는 비인간 항체 (예를 들면, HVR 잔기가 유도되는 항체)로부터 상응하는 잔기로 치환되어, 예를 들면, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선한다.
인간화 항체 및 이들의 제조방법은, 예를 들면, 하기에 고찰된다: Almagro et al. Front. Biosci . 13:1619-1633, 2008, 그리고 추가로 하기에 기재된다: 예를 들면, Riechmann et al., Nature 332:323-329, 1988; Queen et al. Proc . Natl Acad . Sci . USA 86:10029-10033, 1989; 미국 특허 번호 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; Kashmiri et al. Methods 36:25-34, 2005 (특이성 결정 영역 (SDR) 그라프팅 기재); Padlan Mol . Immunol . 28:489-498, 1991 ("재표면화" 기재); Dall’Acqua et al. Methods 36:43-60, 2005 ("FR 셔플링" 기재); 및 Osbourn et al. Methods 36:61-68, 2005; 및 Klimka et al. Br. J. Cancer, 83:252-260, 2000 (FR 셔플링에 대한 "유도된 선택" 접근법을 기재함).
인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 하기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다: "베스트-피트" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (문헌참조: 예를 들어, Sims et al. J. Immunol . 151:2296, 1993); 특정 하위그룹의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Carter et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:4285, 1992; 및 Presta et al. J . Immunol . 151:2623, 1993); 인간 성숙(체세포적으로 돌연변이화된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역(참고: 예컨대, Almagro et al. Front. Biosci . 13:1619-1633, 2008); 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Baca et al. J. Biol . Chem . 272:10678-10684, 1997 및 Rosok et al. J. Biol. Chem. 271:22611-22618, 1996).
4. 인간 항체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 다음 문헌에 기재되어 있다: van Dijk and van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol . 5: 368-74, 2001 및 Lonberg, Curr . Opin . Immunol . 20:450-459, 2008.
인간 항체는 항원 유발(antigenic challenge)에 응답하여 무손상 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 무손상 항체를 제조하도록 변형된 형질전환 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 상기 동물은 전형적으로 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나 염색체외적으로 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 통합된 인간 면역글로불린 유전자좌 모두 또는 일부를 함유한다. 상기 형질전환 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 비활성화되어 있다. 형질전환 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 하기를 참조한다: Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125, 2005. 또한 참고: 예를 들면, XENOMOUSETM 기술을 기재하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; HuMab® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M MOUSE® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 VelociMouse® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900). 상기 동물에 의해 발생된 무손상 항체로부터 인간 가변 영역은, 예를 들면, 상이한 인간 불변 영역과의 조합에 의해, 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마 기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단클론성 항체의 제조를 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종성골수종 세포주가 기재되었다. (참고: 예를 들어, Kozbor J. Immunol ., 133: 3001, 1984; Brodeur et al. Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al. J. Immunol., 147: 86, 1991). 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체가 또한 다음 문헌에 기재되어 있다: Li et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 103:3557-3562, 2006. 추가의 방법은, 예를 들면, 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터 단클론성 인간 IgM 항체의 생산 기재) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268, 2006 (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (Trioma technology)은 다음 문헌에 기재되어 있다: Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937, 2005 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91, 2005.
인간 항체는 또한 인간 유래된 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인서열을 단리시킴에 의해 제조될 수 있다. 상기 가변 도메인 서열은 이어서 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 하기에 기재되어 있다.
5. 라이브러리-유래 항체
본 발명의 항체는 목적하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들면, 파아지 디스플레이 라이브러리를 생산하고 목적하는 결합 특징을 갖는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하기 위한 각종 방법들이 당업계에 공지되어 있다. 그러한 방법은 하기에 검토되며: Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al. ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001), 추가로 하기에 검토된다: 예를 들어, the McCafferty et al. Nature 348:552-554; Clackson et al. Nature 352: 624-628, 1991; Marks et al. J. Mol . Biol . 222: 581-597, 1992; Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al. J. Mol . Biol . 338(2): 299-310, 2004; Lee et al. J. Mol . Biol . 340(5):1073-1093, 2004; Fellouse, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 101(34): 12467-12472, 2004; 및 Lee et al. J. Immunol . Methods 284(1-2):119-132, 2004.
특정 파아지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 별도로 클로닝되고 파아지 라이브러리에서 무작위로 재조합되며, 이후 하기에 기술된 바와 같이 항원-결합 파아지에 대해 스크리닝될 수 있다: Winter et al., Ann. Rev. Immunol ., 12: 433-455, 1994. 파아지는 전형적으로 단일쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 작제할 필요 없이 면역원에 대한 고친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 단순 레퍼토리는 (예를 들면, 인간으로부터) 클로닝되어 하기 에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비자가 및 또한 자가 항원에 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다: Griffiths et al. EMBO J, 12: 725-734, 1993. 최종적으로, 순수 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터 비재배열된 V-유전자 분절을 클로닝하고 고도의 가변성 CDR3 영역을 암호화하고 시 험관내 재배열을 성취하기 위해 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함에 의해 합성적으로 제조될 수 있고, 이는 다음 문헌에 기재된 바와 같다: Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol ., 227: 381-388, 1992. 인간 항체 파아지 라이브러리를 기재하는 특허 공보는 예를 들어, 다음의 문헌을 포함한다: 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360. 인간 항체 라이브러리에서 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원의 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
6. FcRH5 T 세포 의존성 이중특이적 ( TDB ) 항체를 포함하는 다중특이적 항체
상기 양태 중 임의의 것에서, 본원에 제공된 항-FcRH5 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어, 이중특이적 항체일 수 있다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대하여 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 FcRH5 의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다.
특정 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 FcRH5에 대한 것이고, 다른 하나는 CD3 (예컨대, CD3ε 또는 CD3γ)에 대한 것이다. 이러한 이중특이적 항-FcRH5 항체는 또한 FcRH5 T 세포 의존성 이중특이적(TDB) 항체 또는 FcRH5 TDB로 지칭된다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 CD3의 아미노산 잔기 Glu6을 포함하는 CD3 상의 에피토프에 결합한다. 일부 경우에서, 에피토프는 CD3의 Met7, Gln1, 및 Asp2로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가 아미노산 잔기를 추가로 포함한다. 일부 경우에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2 및 Glu6을 포함한다. 일부 경우에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기Gln1, Asp2, Glu6, 및 Met7을 포함한다. 일부 경우에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Glu5를 포함하지 않는다. 일부 경우에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Gly3 및 Glu5를 포함하지 않는다. 일부 경우에서, 에피토프는 CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2, Glu6, 및 Met7로 구성된다.
다른 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 인간 CD3 폴리펩티드 또는 시노몰구스 CD3 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 경우에서, 인간 CD3 폴리펩티드 또는 시노몰구스(cyno) CD3 폴리펩티드는 각각, 인간 CD3ε 폴리펩티드 또는 시노몰구스 CD3ε 폴리펩티드이다. 일부 경우에서, 인간 CD3 폴리펩티드 또는 시노몰구스(cyno) CD3 폴리펩티드는 각각, 인간 CD3γ 폴리펩티드 또는 시노몰구스 CD3γ 폴리펩티드이다.
특정 경우에서, 인간 CD3ε 폴리펩티드에 결합하는 제2 결합 도메인는 하기의 해리 상수 (KD)로 결합한다: ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10- 8 M 이하, 예를 들면, 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면, 10-9 M 내지 10-13 M). 예를 들어, 일부 경우에서, 인간 CD3ε 폴리펩티드에 결합하는 제2 결합 도메인은 하기의 KD 로 결합한다: ≤100 nM (예컨대, ≤ 90 nM, ≤80 nM, ≤ 70 nM, ≤60 nM, ≤50 nM, ≤40 nM, ≤30 nM, ≤20 nM, ≤10 nM, ≤5 nM, ≤ 1 nM, ≤ 750 pM, ≤500 pM, ≤250 pM, ≤100 pM, ≤50 pM, ≤25 pM, ≤10 pM, ≤5 pM, 또는 ≤ 1 pM) 이하.
일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 상기 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 133의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 134의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 제2 결합 도메인을 포함한다: 서열 번호: 125, 126, 127, 및 128, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 129, 130, 131, 및 132, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 따라서, 일부 경우에, 본 발명의 항-FcRH5 항체의 절반 항체 변이체는 FcRH5 TDB(즉, 항-FcRH5/38E4.v1 TDB)를 형성하기 위해 항-CD3 항체 38E4.v1의 절반 항체 변이체와 쌍형성될 수 있다.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 122의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 상기 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 135의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 136의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 제2 결합 도메인을 포함한다: 서열 번호: 125, 126, 127, 및 128, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 129, 130, 131, 및 132, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 따라서, 일부 경우에, 본 발명의 항-FcRH5 항체의 절반 항체 변이체는 FcRH5 TDB(즉, 항-FcRH5/38E4.v1 TDB)를 형성하기 위해 항-CD3 항체 38E4.v1의 절반 항체 변이체와 쌍형성될 수 있다.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 상기 제2 결합 도메인은 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다: 서열 번호: 137의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 138의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 제2 결합 도메인을 포함한다: 서열 번호: 125, 126, 127, 및 128, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 129, 130, 131, 및 132, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 따라서, 일부 경우에, 본 발명의 항-FcRH5 항체의 절반 항체 변이체는 FcRH5 TDB(즉, 항-FcRH5/38E4.v11 TDB)를 형성하기 위해 항-CD3 항체 38E4.v11의 절반 항체 변이체와 쌍형성될 수 있다.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 상기 제2 결합 도메인은 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다: 서열 번호: 153의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 154의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 제2 결합 도메인을 포함한다: 서열 번호: 145, 146, 147, 및 148, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 149, 150, 151, 및 152, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 따라서, 일부 경우에, 본 발명의 항-FcRH5 항체의 절반 항체 변이체는 FcRH5 TDB(즉, 항-FcRH5/hu40G5c TDB)를 형성하기 위해 항-CD3 항체 hu40G5c의 절반 항체 변이체와 쌍형성될 수 있다.
일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다: (a) 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 경우에서, 예를 들어, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 172의 서열 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및/또는 서열 번호: 173의 서열, 또는 이와 적어도 80% (예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 경우에서, 예를 들어, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함하는 제2 결합 도메인을 포함한다: 서열 번호: 164, 165, 166, 및 167, 각각의 서열을 포함하는 중쇄 프레임워크 영역 FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 추가로 하기를 포함한다: 서열 번호: 168, 169, 170, 및 171, 각각의 서열을 포함하는 경쇄 프레임워크 영역 FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 또는 4개). 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 서열 번호: 173의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (b) 서열 번호: 173의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 따라서, 일부 경우에, 본 발명의 항-FcRH5 항체의 절반 항체 변이체는 FcRH5 TDB(즉, 항-FcRH5/huUCHT1.v9 TDB)를 형성하기 위해 항-CD3 항체 huUCHT1.v9의 절반 항체 변이체와 쌍형성될 수 있다.
일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하고, 여기서 FcRH5에 결합하는 결합 도메인은 하전된 영역(CR 1 )을 포함하는 VH 도메인(VH 1 ) 및 하전된 영역(CR 2 )을 포함하는 VL 도메인(VL 1 )을 포함하고, 이때 VH 1 중의 CR 1 은 VL 1 중의 CR 2 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR 1 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 2 는 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 1 은 Q39K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 1 은 Q39K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 2 은 Q38E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 2 은 Q38E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 하전된 영역(CR 3 )을 포함하는 VH 도메인(VH 2 ) 및 하전된 영역(CR 4 )을 포함하는 VL 도메인(VL 2 )을 포함하고, 이때 VL 2 중의 CR 4 는 VH 2 중의 CR 3 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR 4 는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 3 은 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 4 은 Q38K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 4 은 Q38K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 3 은 Q39E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 3 은 Q39E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, VL 1 도메인은 경쇄 불변(CL) 도메인(CL 1 )에 연결되고, VH1은 제1 중쇄 불변 (CH1) 도메인(CH1 1 )에 연결되며, 이때 CL 1 은 하전된 영역(CR 5 )을 포함하고, CH1 1 은 하전된 영역(CR 6 )을 포함하고, CL 1 중의 CR 5 는 CH1 1 중의 CR 6 과 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR 5 는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 6 은 산성 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 5 은 V133K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 5 은 V133K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 6 은 S183E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 6 은 S183E 치환 돌연변이로 구성된다.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 VL 2 도메인은 CL 도메인 (CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인 (CH1 2 )에 연결되며, 상기 CL 2 는 하전 영역 (CR 7 )을 포함하고, CH1 2 는 하전 영역 (CR 8 )을 포함하고, 그리고 CH1 2 중의 CR 8 은 CL 2 중의 CR 7 과 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR 8 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 7 은 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 8 은 S183K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 8 은 S183K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 7 은 V133E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 7 은 V133E 치환 돌연변이로 구성된다.
일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 VL 2 도메인은 CL 도메인(CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인(CH1 2 )에 연결되며, 여기서 CL 2 는 아미노산 잔기 F116, L135, S174, S176 및/또는 T178(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, CH1 2 는 아미노산 잔기 A141, F170, S181, S183 및/또는 V185(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 경우에서, CL 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및/또는 T178V. 일부 경우에서, CL 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V. 일부 경우에서, CH1 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및/또는 V185A. 일부 경우에서, CH1 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및 V185A.
일부 경우에서, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하고, 여기서 FcRH5에 결합하는 결합 도메인은 하전된 영역(CR 1 )을 포함하는 VH 도메인(VH 1 ) 및 하전된 영역(CR2)을 포함하는 VL 도메인(VL 1 )을 포함하고, 이때 VL 1 중의 CR 2 는 VH 1 중의 CR 1 과 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR2 는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 1 은 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 2 은 Q38K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 2 은 Q38K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 1 은 Q39E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 1 은 Q39E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 하전된 영역(CR 3 )을 포함하는 VH 도메인(VH 2 ) 및 하전된 영역(CR 4 )을 포함하는 VL 도메인(VL 2 )을 포함하고, 이때 VH 2 중의 CR3 는 VL 2 중의 CR 4 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR 3 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 4 는 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 3 은 Q39K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 3 은 Q39K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 4 은 Q38E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 4 은 Q38E 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, VL 1 도메인은 경쇄 불변(CL) 도메인(CL 1 )에 연결되고, VH 1 은 제1 중쇄 불변 (CH1) 도메인(CH1 1 )에 연결되며, 이때 CL 1 은 하전된 영역(CR 5 )을 포함하고, CH1 1 은 하전된 영역(CR 6 )을 포함하고, CH1 1 중의 CR 6 은 CL 1 중의 CR 5 와 전하 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR 6 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR5 는 산성 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 6 은 S183K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 6 은 S183K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 5 은 V133E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 5 은 V133E 치환 돌연변이로 구성된다.
일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 VL 2 도메인은 CL 도메인 (CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인 (CH1 2 )에 연결되며, 상기 CL 2 는 하전 영역 (CR 7 )을 포함하고, CH1 2 는 하전 영역 (CR 8 )을 포함하고, 그리고 CL 2 중의 CR 7 은 CH1 2 중의 CR 8 과 하전된 쌍을 형성한다. 일부 경우에서, CR7 은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, CR 8 은 산성 잔기를 포함한다. 일부 경우에서, CR 7 은 V133K 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 7 은 V133K 치환 돌연변이로 구성된다. 일부 경우에서, CR 8 은 S183E 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 경우에서, CR 8 은 S183E 치환 돌연변이로 구성된다.
일부 경우에서, 예를 들어, 본 발명은 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 VL 2 도메인은 CL 도메인(CL 2 )에 연결되고, VH 2 는 CH1 도메인(CH1 2 )에 연결되며, 여기서 CL 2 는 아미노산 잔기 F116, L135, S174, S176 및/또는 T178(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, CH1 2 는 아미노산 잔기 A141, F170, S181, S183 및/또는 V185(EU 넘버링)에서 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 경우에서, CL 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및/또는 T178V. 일부 경우에서, CL 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V. 일부 경우에서, CH1 2 는 하기의 치환 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및/또는 V185A. 일부 경우에서, CH1 2 는 하기 치환 돌연변이를 포함한다: A141I, F170S, S181M, S183A, 및 V185A. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하나 이상의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 여기서 하나 이상의 중쇄 불변 도메인은 제1 CH2 도메인(CH2 1 ), 제1 CH3 도메인(CH3 1 ), 제2 CH2 도메인(CH2 2 ) 및 제2 CH3 도메인(CH3 2 )을 포함한다. 일부 경우에서, 하나 이상의 중쇄 불변 도메인 중 적어도 하나는 또 다른 중쇄 불변 도메인과 쌍형성한다. 일부 경우에서, CH3 1 및 CH3 2 는 각각 돌출부(P 1 ) 또는 공동(C 1 )을 포함하고, CH3 1 중의 P 1 또는 C 1 은 CH3 2 중의 각각 C 1 또는 P 1 에 위치할 수 있다. 일부 경우에서, CH3 1 및 CH3 2 는 P 1 과 C 1 사이의 계면에서 만난다. 일부 경우에서, CH2 1 및 CH2 2 는 각각 (P 2 ) 또는 공동(C 2 )을 포함하고, CH2 1 중의 P 2 또는 C 1 은 CH2 2 중의 각각 C 2 또는 P 2 에 위치할 수 있다. 일부 경우에서, CH2 1 및 CH2 2 는 P 2 과 C 2 사이의 계면에서 만난다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암 및 항-CD3 아암은 각각 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)을 포함하고, 항-FcRH5 아암은 T366W 치환 돌연변이를 포함하고, 그리고 항-CD3 아암 포함 T366S, L368A, 및 Y407V 치환 돌연변이를 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암 및 항-CD3 아암은 각각 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)을 포함하고, 항-FcRH5 아암은 T366W 치환 돌연변이를 포함하고, 그리고 항-CD3 아암 포함 T366S, L368A, 및 Y407V 치환 돌연변이를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 104의 서열 또는 이와 적어도 90% (예컨대, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및 서열 번호: 105에 대해 적어도 90% (예: 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖거나 상기 서열 번호의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% (예컨대, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%)의 서열 동일성을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134에 대해 적어도 90% (예: 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖거나 이의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링). 일부 경우에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 104의 서열 또는 이와 적어도 90% (예컨대, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및 서열 번호: 105에 대해 적어도 90% (예: 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖거나 상기 서열 번호의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링). 일부 경우에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 104의 서열 또는 이와 적어도 90% (예컨대, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및 서열 번호: 105에 대해 적어도 90% (예: 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖거나 상기 서열 번호의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링). 일부 경우에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 경우에서, 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암: (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기 6개 초가변 영역 (HVR)을 포함하는 제2 결합 도메인: (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함하고, 항-CD3 아암은 Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 104의 서열 또는 이와 적어도 90% (예컨대, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및 서열 번호: 105에 대해 적어도 90% (예: 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖거나 상기 서열 번호의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제2 결합 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링). 일부 경우에서, 본 발명은 FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체를 제공하며, 여기서 항-FcRH5 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 항-FcRH5 아암: 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 제1 결합 도메인, 여기서 항-FcRH5 아암은 Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄, 및 (b) 하기를 포함하는 항-CD3 아암: 하기를 포함하는 제2 결합 도메인: 서열 번호:133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 여기서 항-CD3 아암은 Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및 Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이를 포함하는 중쇄를 포함한다 (EU 넘버링).
7. 항체 변이체
특정 구현예에서, 본 발명의 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체 또는 이의 변이체에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 상기 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성들을 증진시키는 것이 바람직한 일일 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 적당한 변형을 도입하거나 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열내 잔기들로부터의 결실 및/또는 이들로의 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합은 최종 작제물이 원하는 특징, 예를 들어, 항원-결합을 보유하는 경우, 최종 작제물에 도달하도록 이뤄질 수 있다.
a. 치환, 삽입 및 결실 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환적 돌연변이생성을 위한 목적하는 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "바람직한 치환."의 제목하에 표 1에서 보여준다. 보다 실질적 변화는 "예시적 치환"의 표제하에 표 1에 제공되고, 추가로 아미노산 측쇄 부류를 참조로 하기에 기재된 바와 같다. 아미노산 치환이 관심 항체 내로 도입될 수 있고, 원하는 활성, 예를 들어, 유지된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대하여 스크리닝될 수 있다.
예시적이고 바람직한 아미노산 치환
본래
잔기 		예시적
치환 		바람직한
치환
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; 노르류신 Leu
Leu (L) 노르류신; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 노르류신 Leu
아미노산은 통상의 측쇄 성질에 따라 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 일 유형은 친계 항체 (예컨대, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환함을 포함한다. 일반적으로, 추가의 연구를 위해 선택되는 생성된 변이체(들)는 친계 항체에 비해 특정 생물학적 특성(예컨대, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)에 있어서 변형(예컨대, 개선)을 갖고/갖거나 친계 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 보유할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화도 성숙 항체이며, 이것은, 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 파아지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하여 통상적으로 생성될 수 있다. 간단히, 하나 이상의 HVR 잔기는 돌연변이화되고 파아지에서 변이체 항체 표시되고 특정한 생물학적 활성 (예를 들면, 결합 친화도)을 위해 스크리닝된다.
변경(예컨대, 치환)은 HVR에서, 예컨대, 항체 친화도를 개선시키기 위해 이루어질 수 있다. 상기 변경은 HVR "핫스팟," 즉, 체세포 성숙 공정 동안 높은 빈도로 돌연변이하는 코돈에 의해 암호화된 잔기 (참고: 예를 들면, Chowdhury, Methods Mol . Biol . 207:179-196, 2008), 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에서 이루어질 수 있으며, 이때 생성된 변이체 VH 또는 VL가 결합 친화도에 대하여 시험된다. 2차 라이브러리로부터 작제하고 재선택함에 의한 친화성 성숙화가 예를 들어, 다음 문헌에 기재되어 있다: Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al. ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). 친화도 성숙화의 일부 구현예에서, 다양성이 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류 발생 경향 PCR, 쇄 셔플링 또는 올리고뉴클레오티드 지시된 돌연변이생성)에 의한 성숙화를 위해 선택되는 가변 유전자에 도입된다. 이후 2차 라이브러리가 형성된다. 이후 라이브러리를 스크리닝하여 목적하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 식별한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 HVR-지시된 접근법을 포함하며, 여기서 몇몇 HVR 잔기(예컨대, 한번에 4-6개 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합에 관련된 HVR 잔기는 특히, 예컨대, 알라닌 주사 돌연변이생성(alanine scanning mutagenesis) 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 식별할 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 흔히 표적화된다.
특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 이러한 변경이 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한 하나 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들면, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예컨대, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)은 HVR에서 이루어질 수 있다. 상기 변경은, 예를 들면, HVR에서 항원 접촉 잔기의 외부일 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 구현예에서, 각각의 HVR는 변경되지 않거나, 또는 하나 이상, 두 개 또는 세 개의 아미노산 치환을 함유하지 않는다.
돌연변이생성을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기들 또는 영역들의 식별을 위해 유용한 방법은 다음 문헌에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이생성"로 불리운다: Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. 상기 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기들 그룹 (예를 들어, Arg, Asp, His, Lys, 및 Glu와 같은 하전된 잔기들)은 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 식별되고 대체되어 항체와 항원의 상호작용이 영향받는지를 계측한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감도를 입증하는 아미노산 위치에서 도입될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 항체와 항원 간의 접촉 지점을 식별하기 위한 항원-항체 복합체의 결정 구조. 상기 접촉 잔기 및 인접 잔기가 치환을 위한 후보물질로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 이들이 목적하는 특성을 함유하는지 계측하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1 잔기 내지 100 이상 잔기를 함유하는 폴리펩티드 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열간 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 또 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드 또는 효소(예컨대, ADEPT에 대한)에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 융합을 포함한다.
b. 글리코실화 변이체
특정 구현예에서, 본 발명의 항-FcRH5 항체는 항체가 글리코실화된 정도를 증가시키거나 감소시키기 위해 변경될 수 있다. 본 발명의 항-FcRH5 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 간편하게 달성될 수 있다. 글리코실화 부위의 추가 또는 제거는 항체, 예를 들면, 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)의 효과기 기능을 변경할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체 (예컨대, FcRH5 TDB)는 탈글리코실화 부위 돌연변이를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 탈글리코실화 부위 돌연변이는 치환 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 탈글리코실화 부위 돌연변이는 항-FcRH5 항체의 효과기 작용을 하기 만큼 감소시킨다: 적어도 1% 이상 (예컨대, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 이상). 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 N297, L234, L235, D265, 및/또는 P329 (EU 넘버링)에서의 것이다. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: N297G, N297A, L234A, L235A, D265A, 및 P329G. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 N297G 돌연변이이다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변형될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결부에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 2분지형 올리고당을 포함한다. 예를 들면, 참고: Wright et al. TIBTECH 15:26-32, 1997. 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들면, 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라 2분지형 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체에서 올리고당의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 제조하기 위해 실시될 수 있다.
일 구현예에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 부족한 탄수화물 구조를 갖는 항-FcRH5 항체 변이체가 제공된다. 예를 들면, 이러한 항체 중의 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들면, WO 2008/077546에 기재된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분광분석법에 의해 계측된 바와 같은 Asn297 (예를 들면, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조)에 부착된 모든 당구조의 합에 비해, Asn297에서 당 쇄내에 푸코스의 평균 양을 산출함으로써 측정된다. Asn297은 Fc 영역에서의 대략 위치 297 (Fc 영역 잔기의 EU 넘버링)에 배치된 아스파라긴 잔기를 지칭하지만; 그러나, Asn297은, 항체내 작은 서열 변이로 인해, 위치 297의 약 ± 3 아미노산 업스트림 또는 다운스트림, 즉, 위치 294 와 300 사이에 또한 배치될 수 있다. 상기 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 작용을 가질 수 있다. 예컨대, 미국 특허 공보 번호 US 2003/0157108(Presta, L.); US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)를 참조한다. "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 공보의 예는 하기를 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol . Biol . 336:1239-1249, 2004; Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614, 2004. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 하기를 포함한다: 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포(Ripka et al. Arch. Biochem . Biophys . 249:533-545, 1986; 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (참고: 예를 들면, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87:614, 2004; Kanda, Y. et al. Biotechnol . Bioeng., 94(4):680-688, 2006; 및 WO2003/085107).
항-FcRH5 항체 변이체는, 예를 들어 항체의 Fc 영역에 부착된 2분지 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된, 이등분된 올리고당으로 추가적으로 제공된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 작용을 가질 수 있다. 상기 항체 변이체의 예는, 예를 들면, WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재된다. Fc 영역에 부착된 올리고당에서 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 상기 항체 변이체는 CDC 기능을 개선시킬 수 있다. 상기 항체 변이체는, 예를 들면, WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재된다.
c. VH , VL , CH1, 및 CL 도메인 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 하기로 도입될 수 있다: 본 발명의 항-FcRH5 항체의, 중쇄 가변 (VH, 예컨대, VH 1 및/또는 VH 2 ) 도메인, 경쇄 가변 (VL, 예컨대, VL 1 및/또는 VL 2 ) 도메인, 중쇄 불변 (CH1, 예컨대, CH1 1 및/또는 CH1 2 ) 도메인, 및/또는 경쇄 불변 (CL, 예컨대, CL 1 및/또는 CL 2 ) 도메인 (예컨대, FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예컨대, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체 또는 이의 변이체에 결합하는, 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체). VH, VL, CH1, 및/또는 CL 도메인은 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예: 치환)을 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 산성 및/또는 염기성 아미노산 잔기를 포함한다. 아미노산 변형은 VH, VL, CH1 및/또는 CL 도메인(예: 산성 및/또는 염기성 아미노산 잔기를 포함하는 영역) 내에 하전된 영역을 형성할 수 있다. VH, VL, CH1 및/또는 CL 도메인 내의 하전된 영역은 전하 쌍을 형성하는 반대의 전체 전하의 제2 하전된 영역과 상호작용할 수 있다. 예를 들면, 아미노산 변형은 TDB의 FcRH5 아암의 VL 1 및 VH 1 도메인 내에 존재하는 하전된 영역 사이의 전하 쌍의 형성을 매개할 수 있다. 일부 경우에서, 아미노산 변형은 TDB의 FcRH5 아암의 CL 1 및 CH1 1 도메인 내에 존재하는 하전된 영역 사이의 전하 쌍의 형성을 매개할 수 있다. 일부 경우에서, 아미노산 변형은 TDB의 제2 아암 (예컨대, TDB의 CD3 아암)의 VL 2 및 VH 2 도메인 내에 존재하는 하전된 영역 사이의 전하 쌍의 형성을 매개할 수 있다. 일부 경우에서, 아미노산 변형은 TDB의 제2 아암 (예컨대, TDB의 CD3 아암)의 CL 2 및 CH1 2 도메인 내에 존재하는 하전된 영역 사이의 전하 쌍의 형성을 매개할 수 있다. VH, VL, CH1, 및/또는 CL 도메인 변이체를 함유하는 FcRH5 TDB의 예시적 입체배치는 도 1a-1d에 제시된다.
특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)는 정확한 중량/경쇄 쌍형성을 촉진시키기 위해 VH, VL, CH1, 및/또는 CL 영역에 하나 이상의 비대칭 변형을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)의 2개의 아암(예: 항-FcRH5 아암 및 항-CD3 아암)의 이종이량체화를 촉진시키기 위해 Fc 영역에 하나 이상의 변형을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, CH1 1 도메인은 S183(EU 넘버링)에서의 아미노산 치환을 포함하고, CL 1 도메인은 V133(EU 넘버링)에서의 아미노산 치환을 포함한다. 기타 구현예에서, 항-FcRH5 항체의 제1 아암(예: FcRH5 결합 아암)의 경쇄는 카파 쇄이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체의 제2 아암(예: 항-CD3 결합 아암)의 경쇄는 카파 쇄이다. 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체의 두 아암(예: FcRH5 결합 아암 및 CD3 결합 아암) 중의 경쇄는 카파 쇄이다.
일부 구현예에서, CH1 1 도메인은 S183E 돌연변이를 포함하고, CL 1 도메인은 V133K 돌연변이를 포함한다. 기타 구현예에서, CH1 1 도메인은 S183K 돌연변이를 포함하고, CL 1 도메인은 V133E 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, CH1 1 도메인은 S183K 돌연변이를 포함하고, CL 1 도메인은 V133E 돌연변이를 포함하고, CH1 2 도메인은 S183E 돌연변이를 포함하고, 그리고 CL 2 도메인은 V133K 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 VH 1 도메인 중의 Q39E 돌연변이, VL 1 도메인 중의 Q38K 돌연변이, VH 2 도메인 중의 Q39K 돌연변이 및 VL2 도메인 중의 Q38E 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 CH3 1 도메인 중의 크놉(예: 돌출부) 돌연변이 및 CH3 2 도메인 중의 홀(예: 공동) 돌연변이를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 크놉 돌연변이는 T366W 돌연변이(EU 넘버링)를 포함한다. 특정 구현예에서, 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이(EU 넘버링) 중 적어도 1개, 적어도 2개 또는 3개 모두를 포함한다. 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 제1 중쇄 중의 T366W 돌연변이 및 제2 중쇄 중의 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, CH1 1 도메인은 A141I, F170S, S181M, S183A 및 V185A 돌연변이를 포함하고, CL 1 도메인은 F116A, L135V, S174A, S176F, T178V 및 돌연변이를 포함한다. 특정 기타 구현예에서, CH1 1 도메인은 A141I, F170S, S181M, S183A 및 V185A 돌연변이를 포함하고, CL 1 도메인은 F116A, L135V, S174A, S176F, T178V 및 돌연변이를 포함하며; CH1 2 도메인은 S183E 돌연변이를 포함하고; 그리고 CL 2 도메인은 V133K 돌연변이를 포함한다.
d. Fc 영역 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 본 발명의 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 항체 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, 본 발명의 TDB 항체 또는 이의 변이체에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)의 Fc 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체를 생성한다 (참고: 예컨대, 미국 공보 번호 2012/0251531, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 편입됨). 특정 기타 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)의 2개의 아암(예: 항-FcRH5 아암 및 항-CD3 아암)의 이종이량체화를 촉진시키기 위해 Fc 영역에 하나 이상의 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 Fc 변형을 갖는 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)는 또한, 상기한 바와 같이, VH, VL, CH1, 및/또는 CL 도메인에 하나 이상의 변형을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, Fc, VH, VL, CH1 및/또는 CL 변형을 함유하는 FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)는, 본원에 기재된 바와 같이, 1-세포 항체 생산 접근법에 의해 생산될 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들면 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들면, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 모든 효과기 작용은 아니지만 일부 효과기 작용을 지니는 항-FcRH5 항체 변이체를 고려하며, 이 작용은 상기 항체 변이체를 생체 내 항체 반감기가 중요하지만 특정 효과기 작용(예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 해로운 용도에 바람직한 후보로 만든다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 경감/고갈을 식별하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체 (FcR) 결합 검정은 항체가 FcγR 결합이 부족하지만 (따라서 유사하게 ADCC 활성 부족), FcRn 결합 능력을 보유하는 것을 확보하기 위해 수행될 수 있다. ADCC, NK 세포 매개용 1차 세포는 FcγRIII 만을 발현하고, 반면에 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포상의 FcR 발현은 다음 문헌의 464 페이지 상의 표 3에 요약되어 있다: Ravetch et al. Annu . Rev. Immunol . 9:457-492, 1991. 해당 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비-제한적인 예는 하기에 기재된다: 미국 특허 번호 5,500,362 (참고: 예를 들면, Hellstrom et al. Proc . Natl Acad . Sci . USA 83:7059-7063, 1986) 및 Hellstrom et al. Proc . Natl Acad . Sci . USA 82:1499-1502, 1985; 5,821,337 (참고: Bruggemann, et al. J. Exp . Med . 166:1351-1361, 1987). 대안적으로, 하기와 같은 비-방사능활성 검정 방법이 사용될 수 있다: 예를 들어, 유동 세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사능활성 세포독성 검정 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CYTOTOX 96® 비-방사성 세포독성 검정 (Promega, Madison, WI). 이러한 검정을 위한 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 하기에서 생체내 평가된다: 예를 들면, 하기에 기술된 바와 같은 동물 모델: Clynes et al. Proc. Natl Acad . Sci . USA 95:652-656, 1998. C1q 결합 검정은 또한 항체가 C1q에 결합할 수 없음에 따라서 CDC 활성이 부재임을 식별하기 위해 수행될 수 있다. 참고, 예를 들면, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정이 수행될 수 있다 (참고: 예를 들면, Gazzano-Santoro et al. J. Immunol . Methods 202:163, 1996; Cragg, M.S. et al. Blood. 101:1045-1052, 2003; 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie Blood. 103:2738-2743, 2004). FcRn 결합 및 생체내 청소율/반감기 측정은 또한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다 (참고: 예를 들어, Petkova, S.B. et al. Int’l. Immunol . 18(12):1759-1769, 2006).
감소된 효과기 기능을 가진 항체는 하나 이상의 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329의 치환을 갖는 것들을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056 및 8,219,149). 상기 Fc 돌연변이체는, 알라닌에 대해 잔기 265 및 297의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하여, 2 이상의 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581 및 8,219,149).
특정 구현예에서, 항체에서의 야생형 인간 Fc 영역의 위치 329에서 프롤린은, Fc의 프롤린 329와 FcgRIII의 트립토판 잔기 Trp87 및 Trp110 사이에서 형성된, Fc/Fc감마 수용체 계면 내에서 프롤린 샌드위치를 파괴하기에 충분히 큰 글리신 또는 아르기닌 또는 아미노산 잔기로 치환된다 (Sondermann et al. Nature. 406:267-273, 2000). 특정 구현예에서, 항체는 적어도 하나의 추가 아미노산 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, 추가 아미노산 치환은 S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D 또는 P331S이고, 또 다른 구현예에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환은 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 또는 L235E(예: US 2012/0251531 참조)이고, 또 다른 구현예에서 하나 이상의 추가의 아미노산 치환은 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A 및 P329G이다.
FcR로의 개선되거나 감쇠된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 하기 참고: 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields et al. J. Biol . Chem . 9(2):6591-6604, 2001).
특정 구현예에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334에서의 치환(잔기들의 EU 넘버링)을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 변경은 예를 들어, 하기에 기술된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선되거나 감쇠된) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 유발하는 Fc 영역 내에서 제조된다: 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 Idusogie et al. J. Immunol . 164: 4178-4184, 2000.
증가된 반감기 및 태아로의 모체 IgG의 이동에 원인으로 작용하는, 신생아 Fc 수용체 (FcRn)로의 개선된 결합을 갖는 항체 (Guyer et al., J. Immunol . 117:587, 1976; Kim et al. J. Immunol . 24:249, 1994)는, US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재된다.　 상기 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 그안에 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 상기 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434의 하나 이상에서 치환, 예를 들면, Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826).
또한, 참고: Duncan et al. Nature 322:738-40, 1988; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351 (Fc 영역 변이체의 기타 예에 관하여).
특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 탈글리코실화 부위 돌연변이를 포함한다. 탈글리코실화 부위 돌연변이는 치환 돌연변이일 수 있다. 탈글리코실화 부위 돌연변이는 비돌연변이화된 버젼과 비교하여, 항-FcRH5 항체의 효과기 작용을 하기 만큼 감소시킬 수 있다: 적어도 1% (예컨대, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%) 이상. 일부 경우에서, 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 N297, L234, L235, D265, 및/또는 P329 (EU 넘버링)에서의 것이다. 또한, 치환 돌연변이는 N297G, N297A, L234A, L235A, D265A 및 P329G로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 경우에서, 치환 돌연변이는 N297G 돌연변이이다.
e. 크놉 및 홀 변이체
하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산 잔기의 아미노산 변형(예: 치환)이 돌출부(크놉) 또는 공동(홀)을 생성하는 항체의 크놉 및 홀 변이체가 또한 생성될 수 있다. 일부 경우에, 항체의 하나의 폴리펩티드 상에 위치된 돌출부는 항체의 2개의 성분 폴리펩티드가 돌출부와 공동 사이의 계면에서 만날 수 있도록 항체의 제2 폴리펩티드 상에 위치된 공동 내에 위치될 수 있다. 크놉은 하나 이상의 아미노산 잔기가 더 큰 크기의 하나 이상의 아미노산 잔기로의 치환에 의해 형성될 수 있다. 공동은 하나 이상의 아미노산 잔기가 더 작은 크기의 하나 이상의 아미노산 잔기로의 치환에 의해 형성될 수 있다. 돌출부 또는 공동은 항-FcRH5 항체의 어느 하나의 아암(예: FcRH5 TDB(예: 항-FcRH5 아암 또는 항-CD3 아암 중 하나)으로 도입될 수 있다. 크놉 및 홀 변형(예: Fc 도메인)은 전체 수율, 균질성 및 이중특이적 항체(예: TDB)의 안정성을 증가시키는 데 특히 유용하다. 일부의 경우(예를 들면, 돌출부-공동 쌍이 LC/HC 계면(예: VH 및 VL 또는 CL 및 CH1)에 위치될 때)에, 크놉 및 홀 변형을 도입하는 아미노산 변형은 경쇄 교환을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 돌출부는, 항-FcRH5 항체 중 하나 (예컨대, 항-FcRH5 아암 또는 항-CD3 아암 중 하나)로의 T366W 돌연변이의 도입에 의하여 형성된다. 일부 구현예에서, T366W 돌연변이는 항-FcRH5 아암에 존재한다. 일부 구현예에서, T366W 돌연변이는 항-CD3 아암에 존재한다. 일부 구현예에서, 공동은, 항-FcRH5 항체 중 하나 (예컨대, 항-FcRH5 아암 또는 항-CD3 아암 중 하나)로의 T366W, L368A, 및/또는 Y407V 돌연변이의 도입에 의하여 형성된다. 일부 구현예에서, T366W, L368A, 및/또는 Y407V 돌연변이는 항-FcRH5 아암에 존재한다. 일부 구현예에서, T366W, L368A, 및/또는 Y407V 돌연변이는 항-CD3 아암에 존재한다.
다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은 비제한적으로 하기를 포함한다: 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (참고: Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), 및 "크놉-인-홀" 가공 (참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168). 다중특이적 항체의 "크놉-인-홀" 가공은, 크놉을 함유하는 제1 아암, 및 제1 아암의 크놉이 결합할 수 있는 홀을 함유하는 제2 아암을 생성하기 위해 사용할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 TDB 항체는 이의 항-CD3 아암 상에 위치된 크놉 및 이의 종양 표적화 아암 상에 위치된 홀을 함유할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 TDB 항체는 이의 종양-표적화 아암 상에 위치된 크놉 및 이의 항-CD3 아암 상에 위치된 홀을 함유할 수 있다. 다중특이적 항체는 면역글로불린 크로스오버(또한 Fab 도메인 교환 또는 크로스맵(CrossMab) 포맷으로 공지됨) 기술을 사용하여 가공할 수 있다 (참고: 예컨대, WO2009/080253; Schaefer et al., Proc . Natl. Acad . Sci . USA, 108:11187-11192 (2011)). 다중특이적 항체는 또한 다음과 같이 제조될 수 있다: 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기 스티어링 효과를 가공함에 의해 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교 결합시킴에 의해 (참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); 이중특이적 항체를 생산하기 위하여 류신 지퍼(leucine zipper)를 사용함으로써 (참고: 예를 들어, Kostelny et al., J. Immunol ., 148(5):1547-1553 (1992)); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용함으로써 (참고: 예를 들어, Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993)); 및 단일쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용함에 의해(참고: 예를 들어, Gruber et al., J. Immunol ., 152:5368 (1994)); 및 다음 문헌에 기재된 바와 같이 3특이적 항체를 제조함에 의해: 예를 들어, Tutt et al. J. Immunol . 147: 60 (1991).
f. 시스테인 가공된 항체 변이체
특정 구현예에서, 시스테인이 가공된 항체, 예컨대, "thioMAbs"(항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 것임)를 형성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 상기 잔기를 시스테인으로 치환시킴으로써, 반응성 티올기는 그렇게 함으로써 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 항체를 콘주게이트하는데 사용되어, 본원에서 추가로 기재된 바와 같이, 면역콘주게이트를 제조할 수 있다. 특정 구현예에서, 하기의 잔기들 중 임의의 하나 이상은 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카밧 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 가공된 항체는, 예를 들면, 미국 특허 제7,521,541호(이의 전체 내용은 본원에 참조로 편입됨)에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
g. 기타 항체 유도체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 본 발명의 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, 본 발명의 TDB 항체 또는 이의 변이체에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)가 당업계에 공지되어 있고 용이하게 이용가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화를 위해 적합한 모이어티는 수용성 폴리머를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 수용성 폴리머의 비제한적 예에는, 비제한적으로, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1, 3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 코폴리머, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 호모폴리머, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코폴리머, 폴리옥시에틸화된 폴리올(예컨대, 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물이 포함된다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에서 그 안정성 때문에 제조시 이점을 가질 수 있다. 폴리머는 임의의 분자량일 수 있고, 그리고 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 폴리머의 수는 다양할 수 있고, 만일 1 초과 폴리머가 부착되면, 이들은 동일 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용된 폴리머의 수 및/또는 유형은, 만일 항체 유도체가 한정된 조건하에서의 요법 등에서 사용된다면, 비제한적으로, 개선되는 항체의 특정한 특성 또는 기능을 포함하는 고려사항에 기반하여 결정될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 방사선에 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티 및 항체의 콘주게이트가 제공된다. 일 구현예에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (Kam et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA 102:11600-11605, 2005). 방사선은 임의의 파장일 수 있으며, 보통의 세포에는 유해하지 않지만 비단백질성 모이어티를 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포가 사멸하는 온도로 가열시키는 파장을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
B. 재조합 방법 및 조성물
본 발명의 항-FcRH5 항체 (예컨대, FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예컨대, CD3, 예컨대 본 발명의 TDB 항체 또는 이의 변이체)에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)는, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567에 개시된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산될 수 있다. 일 구현예에서, 본원에서 기재된 항-FcRH5 항체를 암호화하는 단리된 핵산이 제공된다. 일 구현예에서, 숙주 세포는 진핵 세포, 예컨대, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다. 일 구현예에서, 숙주 세포는 원핵 세포, 예컨대, 이. 콜라이 세포이다. 일 구현예에서, 항-FcRH5 항체를 제조하는 방법이 제공되고, 여기서, 상기 방법은 항체의 발현을 위해 적합한 조건 하에서 상기 제공된 바와 같이 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 임의로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체를 회수하는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 CD3에 결합하는 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 항체를 암호화하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 공동 배양된다. 추가의 구현예에서, 숙주 세포 또는 배양 배지에서 이중특이적 항-FcRH5 항체를 회수하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 및 항-CD3 항체는 동일 숙주 세포(예: 1-세포 접근법)에서 생성된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 및 항-CD3 항체는 개별 숙주 세포(예: 2-세포 접근법)에서 생성된다.
1-세포 및 2-세포 접근법에서, FcRH5 TDB(예: FcRH5 절반 항체 및 CD3 절반 항체)를 암호화하는 하나 이상의 플라스미드는 TDB의 배양 및 발현을 위한 하나 이상의 숙주 세포 내로 도입된다. 하나의 예에서, 단일 플라스미드는 FcRH5 절반 항체 및 CD3 절반 항체를 모두 암호화할 수 있다. 대안적으로, 절반 항체는 별도의 플라스미드에 의해 암호화될 수 있다. 또 다른 경우에서, 각 절반 항체의 중쇄는 제1 플라스미드 상에서 암호화되는 반면, 각 절반 항체의 경쇄는 제2 플라스미드 상에서 암호화된다. 1-세포 접근법에서, FcRH5 TDB는 단일 숙주에서 생성된다. 2-세포 접근법에서, FcRH5 TDB는 개별적 숙주(예: 동일한 숙주 세포의 갸별적 배양물, 또는 상이한 숙주 세포의 개별적 배양물)에서 절반 항체를 발현시킴으로써 생성된다. 2-세포 접근법에서, 2개의 숙주는 동일한 용기 또는 상이한 용기에서 배양될 수 있다. 2개의 숙주 배양물은 FcRH5 TDB의 용해 및 정제 전에 조합될 수 있거나, 2개의 절반 항체는 개별적으로 정제될 수 있다.
일부 구현예에서, 비대칭 변형(상기 기술된 VH, VL, CH1, CL 및/또는 Fc 도메인의 돌연변이)을 포함하도록 변형된, 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)는 1-세포 접근법을 사용하여 생산되며, 이는, 비대칭 변형을 포함하도록 변형되지 않는 항-FcRH5 항체와 비교하여, 상기 항-FcRH5 항체의 개선된 교정 중쇄/경쇄 쌍형성 및/또는 개선된 수율을 유발한다.
항체-암호화 벡터의 클로닝 및 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들면, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아 중의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현을 위해, 예를 들면, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호를 참조한다 (참고: 예컨대, Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, (이. 콜라이에서의 항체 단편의 발현을 기술)). 발현 이후, 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물 이외에, 글리코실화 경로가 "인간화"되어 일부 또는 전부 인간 글리코실화된 패턴을 갖는 항체를 생성할 수 있는 진균 및 효모 균주를 포함한 사상균 또는 효모균과 같은 진핵 미생물이 항체-암호화 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 참고: Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414, 2004, 및 Li et al. Nat. Biotech. 24:210-215, 2006.
글리코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다중세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유도된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루지페르다 세포의 형질감염에 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 식별된다.
식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (형질전환 식물에서 항체 생산용 PLANTIBODIESTM 기술 기재).
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 서스펜션에서 성장하도록 적응되는 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 기타 예시는 하기이다: SV40 (COS-7)에 의하여 변형된 원숭이 신장 CV1 세포주; 인간 배아 신장 세포주 (예를 들면 하기에 기술된 바와 같은 293 또는 293 세포: Graham et al. J. Gen Virol . 36:59, 1977); 베이비 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들면, 하기에 기술된 바와 같은 TM4 세포: Mather Biol . Reprod . 23:243-251, 1980); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리칸 그린 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 다음 문헌에 기재된 바와 같은 TRI 세포: 예를 들면, Mather et al. Annals N.Y . Acad . Sci. 383:44-68, 1982; MRC-5 세포; 및 FS4 세포. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 포함하고, 이는 하기를 포함한다: DHFR- CHO 세포 (참고: Urlaub et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216, 1980); 및 골수종 세포주 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0. 항체 생산을 위해 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 다음 문헌을 참조한다: 예를 들어, Yazaki et al. Methods in Molecular Biology, 248:255-268, 2003.
C. 검정
본원에 제공된 본 발명의 항-FcRH5 항체 (예컨대, FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예컨대, CD3, 예컨대 본 발명의 TDB 항체 또는 이의 변이체)에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)는, 본 분야에 공지된 다양한 검정에 의하여 이들의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성을 식별하거나, 이에 대해 스크리닝하거나, 또는 이에 대해 특성화될 수 있다.
1. 결합 검정 및 기타 검정
일 양태에서, 본 발명의 항-FcRH5 항체는, 예를 들면, 공지된 방법 예컨대 ELISA, 웨스턴 블롯 등에 의해 그 항원 결합 활성에 대해 시험된다.
또 다른 양태에서, 경쟁 검정을 사용하여 FcRH5에 결합하는 것에 대해 본 발명의 항-FcRH5 항체와 경쟁하는 항체를 식별하는데 사용될 수 있다.
예시적인 경쟁 검정에서, 고정화된 FcRH5는 FcRH5에 결합하는 제1 표지된 항체 및 FcRH5에 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 그 능력에 대해 시험되는 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정화된 FcRH5는 제2 비표지된 항체가 아닌 제1 표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. FcRH5로의 제1 항체의 결합에 허용된 조건 하에서 항온처리 이후, 과잉의 미결합된 항체는 제거되고, 고정된 FcRH5에 관련된 표지의 양이 측정된다. 만일 고정된 FcRH5에 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비하여 시험 샘플에서 실질적으로 감소되면, 그러면 그것은 제2 항체가 FcRH5에 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 것을 도시한다. 참고: 예컨대, Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual. Ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
2. 활성 검정
일 양태에서, 검정은 생물학적 활성을 갖는 항-FcRH5 항체를 식별하기 위해 제공된다. 생물학적 활성은, 예를 들면, 생체내, 시험관내 또는 생체외에서 FcRH5 또는 이의 펩티드 단편에 대한 결합을 포함할 수 있다. 본 발명의 다중특이적(예: 이중특이적) 항-FcRH5 항체(예: 하나의 항-FcRH5 아암, 및 제2 생물학적 분자, 예컨대, CD3)를 인식하는 하나의 아암을 갖는 TDB 항체)의 경우, 생물학적 활성은 또한, 예를 들면, 효과기 세포 활성화(예를 들면, T 세포(예: CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포) 활성화), 효과기 세포 집단 증식(즉, T 세포 계수의 증가), 표적 세포 집단 감소(즉, 이들의 세포 표면 상에서 제2 생물학적 분자를 발현하는 세포 집단의 감소), 및/또는 표적 세포 사멸을 포함할 수 있다. 생체내 및/또는 시험관내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 하기의 실시예에 상세히 기재된 바와 같이 이러한 생물학적 활성에 대해 시험된다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체 (예컨대, FcRH5 TDB) 활성은 B 세포 사멸 및/또는 세포독성 T 세포의 활성화를 지지하는 능력을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체는 본원에서, 특히 실시예에서 기술된 임의의 방법에 의하여, B 세포 사멸 및/또는 T 세포 생물학적 활성의 세포독성 효과의 활성화에 대해 시험된다. 이들 활성 검정 중 임의의 일부 구현예에서, PBMC는 피콜 분리에 의해 건강한 공여자의 전체의 혈액으로부터 단리될 수 있다. 특히, 인간 혈액은 헤파린처리된 주사기에서 수집될 수 있고, PBMC는, Leucosep 및 Ficoll Paque Plus를 이용하여 단리되었다. 필요하면 CD4+T 및 CD8+T 세포는 제조자의 설명서에 따라 Miltenyi 키트로 분리될 수 있다.
추가로, 세포는 GlutaMax, 페니실린 & 스트렙토마이신으로 보강된, 10% FBS를 함유한 RPMI 배지에서 세정되었고, ~0.2 백만 현탁된 세포는 96-웰 U-최하부 플레이트에 부가될 수 있다. 세포는 가습된 표준 세포 배양 인큐베이터에 37℃에서 10% FBS로 보강된 RPMI1640에서 배양될 수 있다. BJAB 세포 사멸 검정을 위하여, 20,000 BJAB 세포는, 24 시간 동안, TDB 항체의 다양한 농도의 존재하에, 지시된 검정 당 비율대로 huPBMC 또는 정제된 T 세포로서 효과기 세포로 항온처리될 수 있다. 내인성 B 세포 사멸 검정을 위하여, 200,000 huPBMC는, 24 시간 동안 TDB 항체의 다양한 농도로 항온처리될 수 있다.
배양 이후, 세포는 FACS 완충제 (PBS내 0.5% BSA, 0.05% Na 아자이드)로 세정될 수 있다. 세포는 이후 FACS 완충제에서 염색되고, FACS 완충제로 세정되고 1μg/ml 프로피듐 아이오다이드를 함유한 FACS 완충제의 100μl에 현탁될 수 있다. 데이터는 FACSCalibur 유동 세포측정기에서 수집되고 FlowJo를 이용하여 분석될 수 있다. 살아있는 B 세포는 FACS에 의해 PI-음성 CD19+ 또는 PI-음성 CD20+ B 세포로서 개폐될 수 있고, 절대적인 세포 계수는 내부 계수 대조군으로서 반응 믹스에 부가된 FITC 비드로 수득될 수 있다. 세포 사멸의 퍼센트(%)는 비-TDB 치료된 대조군에 기반하여 산출될 수 있다. 활성화된 T 세포는 항-CD69-FITC 및 항-CD25-PE를 이용한 CD69 및 CD25 표면 발현에 의해 검출될 수 있다.
D. 면역콘주게이트
본 발명은 또한 하나 이상의 세포독성제, 예컨대 화학치료제 또는 약물, 성장 억제성 제제, 독소 (예를 들면, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사성 동위원소에 콘주게이트되는, 항-FcRH5 항체, 예를 들어 항-FcRH5 다중특이적 항체, 예를 들어 본원에 기술된 FcRH5 TDB를 포함하는 면역콘주게이트를 제공한다.
일 구현예에서, 면역콘주게이트는 항체가 비제한적으로 하기를 포함하는 하나 이상 상의 약물에 콘주게이트되는 항체-약물 콘주게이트 (ADC)이다: 메이탄시노이드(미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,064호 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1); 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(미국 특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호, 및 제7,498,298호 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 이것의 유도체(미국 특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호, 및 제5,877,296호 참조; Hinman et al. Cancer Res. 53:3336-3342, 1993; 및 Lode et al. Cancer Res. 58:2925-2928, 1998); 안트라사이클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신(참고: Kratz et al. Current Med . Chem . 13:477-523, 2006; Jeffrey et al. Bioorganic & Med . Chem . Letters 16:358-362, 2006; Torgov et al. Bioconj . Chem. 16:717-721, 2005; Nagy et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA 97:829-834, 2000; Dubowchik et al. Bioorg . & Med . Chem . Letters 12:1529-1532, 2002; King et al. J. Med . Chem . 45:4336-4343, 2002; 및 미국 특허 번호 6,630,579); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065.
또 다른 구현예에서, 면역콘주게이트는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, (슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래) 외독소 A 쇄, 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 유동(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 미국 자리공(phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 젤로닌, 미토젤린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센을 포함하지만 이에 제한되지 않는 효소 활성 독소 또는 이의 단편에 콘주게이트된 본원에 기술된 항-FcRH5 항체 (예를 들어, 항-FcRH5 다중특이적 항체, 예를 들어 FcRH5 TDB)를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 면역콘주게이트는 방사콘주게이트를 형성하기 위해 방사성 원자에 콘주게이트된 본원에 기재된 항-FcRH5 항체(예를 들면, 항-FcRH5 다중특이적 항체, 예를 들면, FcRH5 TDB)를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사콘주게이트의 생산을 위해 사용가능하다. 예시는 하기를 포함한다: At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소. 방사콘주게이트가 검출을 위해 사용되는 경우, 이것은 신티그래프 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들면 tc99m 또는 I123, 또는 핵자기 공명(NMR) 이미지화(자기 공명 이미지화, mri로도 공지됨)를 위한 스핀 표지, 예를 들면, 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이작용성 단백질 커플링제, 예를 들면, N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예를 들면, 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르(예를 들면, 디석신이미딜 수베레이트), 알데히드(예를 들면, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들면, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예를 들면, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들면, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예를 들면, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 하기에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다: Vitetta et al. Science 238:1098, 1987. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에의 방사성 뉴클레오티드의 콘주게이션을 위한 예시적인 킬레이트제이다. 참고: WO94/11026. 상기 링커는 상기 세포에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "쪼개질 수 있는 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 이황화물-함유 링커가 사용될 수 있다 (Chari et al. Cancer Res. 52:127-131, 1992; 미국 특허 번호 5,208,020).
본원의 면역콘주게이트 또는 ADC는 본원에서 명백히 고안되는데, 비제한적으로 이와 같은 콘주게이트는 가교결합 시약, 비제한적으로, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC 및 설포-SMPB 및 SVSB(숙신이미딜-(4-비닐술폰)벤조에이트)(예컨대, Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A에서 상업적으로 확보 가능함)으로 제조된다.
E. 약제학적 제제
본 발명의 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, FcRH5 TDB에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)의 약제학적 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체를 하나 이상의 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 완충제, 안정화제 및/또는 보존제와 혼합함으로써 제조된다 (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)) (동결건조된 제형 또는 수용액 형태로). 약제학적으로 허용가능한 담체는 이용된 투여량 및 농도에서 수령체에 일반적으로 비독성이고, 비제한적으로 하기를 포함한다: 완충제 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10 미만 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트제 예컨대 EDTA; 당류 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온 예컨대 나트륨; 금속 복합체 (예컨대, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG). 본원에서 예시적 약제학적으로 허용가능한 담체는 간질 약물 분산제, 예를 들어, 가용성 중성-활성 하이알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어, 인간 가용성 PH-20 하이알루로니다제 당단백질, 예를 들어, rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다.　 rHuPH20을 포함하는, 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법이 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재된다.　 일 양태에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제 (예: 콘드로이티나제)와 조합된다.
예시적인 동결건조된 항체 제형은 US 특허 제6,267,958호에 기재되어 있다. 수성 항체 제형은 US 특허 제6,171,586호 및 제WO2006/044908호에 기재된 것들을 포함하며, 후자 제형은 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본원에서 상기 제형은 또한 치료될 특정 적응증에 필요한 하나 이상의 활성 성분, 바람직하게 서로에 역으로 영향을 주지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다. 예를 들면, 추가 치료제(예: 화학치료제, 세포독성제, 성장 억제제 및/또는 상술한 바와 같은 항-호르몬 제제)를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적을 위해 효과적인 양으로 조합하여 적절하게 존재한다.
활성 성분들은 예를 들어, 코나세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 나노입자 및 나노캡슐) 중에 또는 마크로에멀젼 중에 하이드록시메틸셀룰로스 또는 겔라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 중에 포집될 수 있다. 상기 기술은 하기에서 개시되어 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).
일부 경우에, 상기 조성물은 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 추가 치료제를 포함할 수 있다. 예를 들면, PD-1 축 결합 길항제는 MPDL3280A (아테조리주맙), YW243.55.S70, MDX-1105, MEDI473 (두르발루맙) 및 MSB0010718C (아벨루맙), MDX 1106 (니볼루맙), MK-3475 (펨브로리주맙), CT-011 (피딜리주맙), MEDI-0680 (AMP-514), PDR001, REGN2810 및 BGB-108로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)를 포함하는 조성물은 스테로이드, 면역조절물질(IMiD), 프로테오좀 억제제(PI) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
서방형 제제가 제조될 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투성 매트릭스를 포함하며, 당해 매트릭스는 성형품, 예컨대, 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여용으로 사용될 제형은 일반적으로 멸균성이다. 멸균은, 예를 들면, 멸균된 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
F. 치료 방법 및 조성물
본 발명의 임의의 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, CD3, 예를 들면, FcRH5 TDB에 결합하는 본 발명의 이중특이적 항-FcRH5 항체)는 치료 방법에 사용될 수 있다.
일 양태에서, 약제로서 사용을 위한 항-FcRH5 항체가 제공된다. 추가의 양태에서, 세포 증식성 장애의 진행(예: 암, 예를 들면, FcRH5-양성 암, 예를 들면, 다발성 골수종(MM))을 치료하거나 이의 진행을 지연시키고/시키거나 개체에서 면역 기능을 증진하는데 사용하기 위한 항-FcRH5 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 치료 방법에서 사용을 위한 항-FcRH5 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은, 항-FcRH5 항체의 유효량을 하기 개체에 투여하는 것을 포함하는, 세포 증식성 장애(예컨대, 암, 예컨대, FcRH5-양성 암, 예컨대, MM))를 갖는 개체의 치료 방법에서 사용을 위한 항-FcRH5 항체를 제공한다. 상기 일 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 하나의 부가 치료제를 유효량으로 개체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가의 구현예에서, 본 발명은 세포 증식성 장애, 예를 들면, FcRH5-양성 암(예: MM)를 갖는 개체에서 면역 기능을 증진하는데 사용하기 위한 항-FcRH5 항체를 제공한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 세포 증식성 장애를 갖는 개체에서 면역 기능을 증진하는 방법에서 사용하기 위한 항-FcRH5 항체를 제공하며, 이는 하기를 포함한다: 개체에서 표적 세포 (예컨대, 본 발명의 항-FcRH5 항체, 예컨대 본 발명의 FcRH5 TDB 항체에 의하여 인식된 제2 생물학적 분자를 발현하는 세포) 상에서의 세포독성 및/또는 세포사멸 효과를 행사할 수 있는 효과기 세포 (예컨대, T 세포, 예컨대, CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포)를 활성화하기 위한, 유효량의 항-FcRH5 항체를 상기 개체에 투여하는 단계. 항-FcRH5 항체는 표적 세포 상에 위치된 FcRH5 분자 및 면역 효과기 세포 상에 위치된 CD3 분자 둘 다에 결합할 수 있다. 표적 세포는 길거나 짧은 수명의 형질 세포와 같은 형질 세포일 수 있다. 또한, 표적 세포는 골수종 세포일 수 있다. 상기 구현예 중의 임의의 것에 따라 "개체"는 인간일 수 있다.
추가 양태에서, 본 발명은 약제의 제작 또는 제조에서의, 항-FcRH5 항체의 용도를 제공한다. 하나의 구현예에서, 약제는 세포 증식성 장애(예: 암, 예를 들면, FcRH5-양성 암, 예를 들면, MM))의 치료를 위한 것이다. 추가 구현예에서, 약제는 세포 증식성 장애를 갖는 개체에게 유효량의 약제를 투여하는 단계를 포함하는, 세포 증식성 장애를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이다. 상기 일 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 하나의 부가 치료제를 유효량으로 개체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가의 구현예에서, 약제는 개체에서 표적 세포(예: 본 발명의 항-FcRH5 항체, 예를 들면, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체에 의해 인식되는 제2 생물학적 분자를 발현시키는 세포) 상의 세포독성 및/또는 세포사멸 효과를 발휘할 수 있는 효과기 세포(예: T 세포, 예를 들면, CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포)를 활성화시키는 효과기 세포를 활성화하기 위한 것이다. 추가 구현예에서, 상기 약제는 하기 단계를 포함하는, 세포 증식성 장애를 갖는 개체에서 면역 기능을 증진하는 방법에 사용하기 위한 것이다: 효과기 세포(예: T 세포, 예를 들면, CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포)를 활성화시키고 효과기 세포 집단을 확대(증가)시키고 표적 세포(예: 본 발명의 항-FcRH5 항체, 예를 들면, 본 발명의 FcRH5 TDB 항체에 의해 인식된 제2 생물학적 분자를 발현하는 세포) 집단을 감소시키고/시키거나 개체에서 표적 세포(예를 들면, 표적 종양 세포)를 사멸시키기 위하여, 유효량의 상기 약제를 상기 개체에게 투여하는 단계. 상기 구현예 중의 임의의 것에 따라 "개체"는 인간일 수 있다.
추가 양태에서, 본 발명은 세포 증식성 장애 (예컨대, 암)의 치료 방법을 제공한다. FcRH5-양성 암은 B 세포 암일 수 있다. 일부 경우에서, B 세포 암은 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 외투 세포 림프종(MCL), 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 및/또는 여포성 림프종(FL)일 수 있다. 특별한 경우에, B 세포 암은 MM이다. 다른 예에서, FcRH5-양성 암은 B 세포 암이다. 하나의 구현예에서, 방법은 이러한 세포 증식성 장애(예: 암, 예를 들면, FcRH5-양성 암, 예를 들면 다발성 골수종(MM))를 갖는 개체에게 항-FcRH5 항체의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 상기 일 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 하나의 부가 치료제를 유효량으로 개체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 구현예 중의 임의의 것에 따라 "개체"는 인간일 수 있다.
본 발명의 항체는 요법에서 단독으로 또는 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체는 적어도 하나의 추가 치료제와 공-투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 PD-1 축 결합 길항제, 예를 들면, MPDL3280A (아테조리주맙), YW243.55.S70, MDX-1105 MEDI473 (두르발루맙) 및 MSB0010718C (아벨루맙), MDX 1106 (니볼루맙), MK-3475 (펨브로리주맙), CT-011 (피딜리주맙), MEDI-0680 (AMP-514), PDR001, REGN2810 및/또는 BGB-108이다. 추가로, 스테로이드, 면역조절물질(IMiD), 프로테오좀 억제제(PI) 또는 이들의 조합도 또한 대상체에게 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다. 일부 구현예에서, IMiD는 레날리도미드이다. 일부 구현예에서, PI은 보르테조밉이다.
상기 주지된 이러한 병용 요법은 병용 투여(둘 이상의 치료제가 동일한 또는 별도의 제형에 포함되어 있는 경우), 및 별도의 투여를 포함하며, 이 경우, 본 발명의 항체의 투여는 추가 치료제 또는 치료제들의 투여 전, 투여와 동시에 및/또는 투여 후에 일어날 수 있다. 일 구현예에서, 항-FcRH5 항체의 투여 및 추가 치료제의 투여는 약 1달 내, 또는 약 1주, 2주 또는 3주 내, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 내에 발생한다.
본 발명의 항체 (및/또는 임의의 추가 치료제)는 정맥내, 피하, 근육내, 국소, 경구, 경피, 복강내, 안와내, 이식에 의하여, 흡입에 의하여, 척추강내, 심실내 또는 비강내를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 투약은, 투여가 잠시 또는 만성인지를 부분적으로 의존하여, 임의의 적합한 경로, 예를 들면, 주사로, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사로 될 수 있다. 이로써 제한되는 것은 아니지만, 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼러스 투여 및 펄스 주입을 포함한 다양한 투약 스케쥴이 본원에서 시도된다.
본 발명의 항체는 양호한 의료 실시와 일치된 방식으로 제형화되고, 복용되고, 그리고 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려되는 요인은 치료할 특별한 장애, 치료할 특별한 포유동물, 개개 환자의 임상적 상태, 장애 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케쥴, 및의료 행위자에게 공지된 다른 요인을 포함한다. 항체는 문제의 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 제제와 임의로 제형화될 필요는 없지만, 제형화된다. 상기 다른 제제의 유효량은 제형 중에 존재하는 항체의 양, 장애의 유형 또는 치료 및 상기 논의된 다른 인자들에 좌우된다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 바와 동일한 용량으로 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 용량의 약 1 내지 99%, 또는 적절하다고 경험적/임상적으로 결정된 임의 용량으로 및 임의 경로에 의해 사용된다.
질환 (예컨대, 증식성 세포 장애, 예컨대, 암, 예컨대, FcRH5-양성 암, 예컨대, MM))의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 항체의 적절한 용량(단독으로 사용될 때 또는 하나 이상의 다른 추가적인 치료 제제와 병용하여 사용될 때)은 치료대상 질환의 유형, 항체 유형, 질환의 중증도 및 경과, 상기 항체의 투여가 예방 목적인지 아니면 치료 목적인지 여부, 이전 치료, 상기 환자의 임상 병력 및 상기 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 것이다. 상기 항체는 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 상기 환자에게 적절히 투여된다.
일반적인 경우에서, 인간에게 투여된 항-FcRH5 항체의 치료적 유효량은, 1회 이상의 투여에 의해 환자 체중당 약 0.01 내지 약 100 mg/kg의 범위일 것이다. 일부 구현예에서, 사용된 항체는, 예를 들어, 매일 하기로 투여된다: 약 0.01 내지 약 0.01 내지 약 55 mg/kg, 50 mg/kg, 0.01 내지 약 45 mg/kg, 약 0.01 내지 약 40 mg/kg, 약 0.01 내지 약 35 mg/kg, 약 0.01 내지 약 30 mg/kg, 약 0.01 내지 약 25 mg/kg, 약 0.01 내지 약 20 mg/kg, 약 0.01 내지 약 15 mg/kg, 약 0.01 내지 약 10 mg/kg, 약 0.01 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 0.01 내지 약 1 mg/kg. 일 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-FcRH5 항체는 21-일 주기의 1일에 약 100mg, 약 200mg, 약 300mg, 약 400mg, 약 500mg, 약 600mg, 약 700mg, 약 800mg, 약 900mg, 약 1000mg, 약 1100mg, 약 1200mg, 약 1300mg 또는 약 1400mg의 용량으로 인간에게 투여된다. 투여는 단회 용량 또는 다중 용량(예를 들면, 2 또는 3회 용량)으로, 예컨대 주입(infusion)으로 투여될 수 있다. 상태에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸친 반복 투여를 위해, 치료는 일반적으로 원하는 질환 증상의 억제가 일어날 때까지 유지한다. 항체의 하나의 예시적 용량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 범위이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 또는 10 mg/kg 중 하나 이상의 용량(또는 이들의 임의의 조합)이 환자에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 0.01㎎/㎏/wk 내지 약 10mg/kg/wk의 용량으로 투여된다. 다른 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 0.1㎎/㎏/wk 내지 약 10mg/kg/wk의 용량으로 투여된다. 기타 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 약 1 mg/kg/wk의 용량으로 투여된다.
상기 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주마다 또는 3주마다 투여될 수 있다 (예컨대, 따라서 환자가 약 2 회 내지 약 20 회, 또는 예컨대 약 6 회 용량의 항-FcRH5 항체를 투여받는다). 초기 더 높은 부하 용량에 이어서, 1회 이상의 저용량이 투여될 수 있다. 이 치료법의 과정은 통상적인 기술 및 분석법으로 용이하게 모니터링할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 방법은 추가의 요법을 더 포함할 수 있다. 본 추가의 요법은 방사선 요법, 수술, 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 면역요법, 골수 이식, 나노요법, 단클론성 항체 요법, 또는 전술한 것의 조합일 수 있다. 추가 요법은 아쥬반트 또는 네오아쥬반트(neoadjuvant) 요법의 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 추가의 요법은 소분자 효소 억제제 또는 항-전이성 제제의 투여이다. 일부 구현예에서, 부가적인 요법은 부작용 제한 제제 (예컨대, 치료의 부작용의 발생 및/또는 중증도를 줄이고자 하는 제제, 예컨대 항-메스꺼움 제제 등)의 투여이다. 일부 구현예에서, 추가의 요법은 방사선 요법이다. 일부 구현예에서, 추가의 요법은 수술이다. 일부 구현예에서, 본 추가의 요법은 방사선 요법 및 수술의 조합이다. 일부 구현예에서, 본 추가의 요법은 감마 조사이다. 일부 구현예에서, 본 추가의 요법은 상기 기재된 치료제 중 하나 이상의 개별의 투여일 수 있다.
G. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 임의의 항-FcRH5 항체는 생물학적 샘플에서 FcRH5의 존재 검출에 유용하다. 본원에서 사용되는 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 특정 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다.
일 구현예에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항-FcRH5 항체가 제공된다. 추가의 양태에서, 생물학적 샘플 중의 천연 발생 FcRH5의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 항-FcRH5 항체의 천연 발생 FcRH5로의 결합을 허용하는 조건하에서 상기 생물학적 샘플을 본원에 기재된 항-FcRH5 항체와 접촉시키고 복합체가 항-FcRH5 항체와 천연 발생 FcRH5 간에 형성되는지를 검출하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 일부 경우에서, 생물학적 샘플은 혈액 샘플이다. 일부 경우에서, 대상체는 인간이다.
특정 구현예에서, 표지된 항-FcRH5 항체가 제공된다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티(예를 들면, 형광성, 발색성, 전자-밀도, 화학발광성, 및 방사성 표지), 뿐만 아니라 예를 들면, 효소 반응 또는 분자 상호작용을 통해 간접적으로 검출되는 모이어티, 예를 들면, 효소 또는 리간드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예시적인 표지는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 방사성동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단 예컨대 희토류 킬레이트 또는 플루오레신 및 그 유도체, 로다민 및 그 유도체, 단실, 엄벨리페론, 루세리페라제, 예를 들면, 반딧불 루시퍼라제 및 박테리아 루시퍼라제 (미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 호스래디쉬 퍼옥시다제 (HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라아제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들면, 글루코오스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소, 염료 전구체 예컨대 HRP를 산화하기 위해 과산화수소를 사용하는 효소로 커플링된, 헤테로사이클릭 옥시다제 예컨대 우리카제 및 잔틴 옥시다제, 락토퍼옥시다제, 또는 마이크로퍼옥시다제, 바이오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파아지 표지, 무변성 유리 라디칼, 등.
H. 제조물품
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체(예: 인간)에서 증식성 세포 장애(예: 암, 예를 들면, FcRH5-양성 암, 예를 들면, 다발성 골수종(MM))를 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 제조품을 특징으로 한다. 제조 물품은 용기 및 그 용기에 또는 관련된 표지 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적절한 용기에는 예로서, 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등이 포함된다. 상기 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 그것만으로 있거나 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 또 다른 조성물과 조합되고 그리고 멸균된 접근 포트를 가질 수 있는 조성물을 수용한다 (예를 들면 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖춘 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물 중에 적어도 하나의 활성제는 본 발명의 항체이다. 표지 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택되는 병태의 치료에 사용됨을 도시한다. 게다가, 제조 물품은 (a) 그 내부에 함유된 조성물을 갖는 제1 용기 (여기서 상기 조성물은 본 발명의 항체를 포함한다); 및 (b) 그 내부에 함유된 조성물을 갖는 제2 용기 (여기서 상기 조성물은 추가 세포독성 또는 달리 치료제를 포함한다)를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 구현예에서 제품은 조성물이 특정 병태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 제조물품은 약제학적으로 허용가능한 완충제, 예컨대 정균 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 및 주사기를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 일부 경우에서, 키트는 대상체에서 FcRH5-양성 암 (예컨대, MM)을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위한 항체를 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함한다. 다른 예에서, 키트는 FcRH5-양성 암(예: MM)을 갖는 대상체에서 면역 기능을 증진하기 위한 항체를 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함한다.
III. 실시예
본 발명의 방법 및 조성물의 예가 하기되어 있다. 상기 제공된 일반적인 설명이 주어지면, 다양한 다른 구현예가 실시될 수 있다.
실시예 1. 항- FcRH5 항체의 발생
면역화 및 스크리닝
BALB/c 마우스(찰스 리버, 홀리스터, CA)를 마우스당 2㎍, 10㎍ 또는 100㎍/주입으로 면역화했다. 항원은 모노포스포릴 지질 A(MPL)/트레할로스 디코리노미콜레이트(TDM)(Ribi) 아쥬반트 또는 프로인트 아쥬반트에 현탁시키고, 각 면역화된 동물의 발바닥, 복막, 꼬리의 기저부에 주입하였다. 마우스는 융합 2 내지 4일 전에 발바닥, 복강내(IP), 및/또는 비절 경로를 통해 PBS 단독으로 총 9 내지 18회 용량 및 1 내지 2 선융합 부스트를 수용했다. 미국 공보 제2015/0098900호에 기술된, 면역화 캠페인(Immunization Campaign) A는, 본원에서 최적화되고 추가로 특성화된 친계 항-FcRH5 1G7 항체를 생성했다.
A. 면역화 캠페인 B
FcRH5의 막 근위 Ig-도메인에 대한 동형체 특이적 항체를 생성하기 위해, 마우스는 CHO 세포에서 발현된 N-말단 His-발현 태그를 갖는 E11 단백질(서열 번호: 114의 아미노산 745-850)로 면역화하였다. 5마리 마우스는 IP 경로를 통해 Ribi 아쥬반트 중의 His-태그된 E11 단백질 10㎍으로 면역화했다. 마우스는 융합 7일 및 4일 전에 IP 경로를 통해 PBS 단독으로 2회 선융합 부스트 후 18회 용량을 수용했다. 재조합 E11 단백질의 18회 투여 후, FACS를 사용하여 FcRH5-결합 항체에 대해 항원으로서 E11을 사용하여 ELISA에서 적정에 의해 혈청을 분석하였다. 유의한 반응성은 전장 인간 FcRH5, 전장 시노몰구스 FcRH5, 또는 E11 단백질을 발현시킨 SVT2 세포를 검출시켰지만 벡터 형질감염된 SVT2 세포는 검출하지 않아 FcRH5 결합 항체가 모두 5마리의 면역화된 마우스의 혈청에 존재하였음을 나타내었다. 20회 투여 후, 면역화된 마우스로부터의 림프구를 P3X63Ag8U.1.22 마우스 골수종 세포와 전기융합시켰다.
클론을 ELISA에 의하여 재조합 인간 및 시노몰구스 E11 단백질에 대한 결합에 대해 시험하였다. ELISA에서 인간 및 시노몰구스 FcRH5 둘 다에 교차 반응성인 8개의 클론을 FACS에 의해 전장 인간 FcRH5, 전장 시노몰구스 FcRH5, 또는 E11 단백질을 발현시킨 SVT2 세포에 대한 결합에 대해 시험하였다. 모두 8개의 클론은 인간 E11 도메인, 막투과성 도메인 및 세포질 도메인을 발현시키는 SVT2 세포에 결합된다.
FcRH5를 내생적으로 발현시키거나 FcRH5로 형질감염된 암 세포에 대한 결합을 시험하기 위해, 세포를 EDTA/PBS를 이용하여 상승시키고, 1x105 세포를 100㎕에 현탁시키고, 1차 항체(1용적의 비-IgG 정량화 서브클론 상청액, 4㎍/ml의 IgG 정량화 서브클론 상청액 또는 2㎍/㎕ 정제된 단클론성 항체)와 함께 항온처리했다. 세포를 FACS 완충제(PBS, 1% BSA, 2mM EDTA)로 2회 세정하고, PE로 2차 표지된 염소 항-마우스의 1:1000 희석액 또는 염소 항-마우스 APC의 1:100으로 항온처리했다. 세포를 FACS 완충제로 2회 세정하고, 유동 세포 계측법을 FACSCalibur 상에서 수행했다. 항체의 직접 크세논-표지는 지시될 경우, 제조업자의 프로토콜(Invitrogen)에 따라 수행되었다. 그러나, 클론 중 3개만이 전장 인간 FcRH5를 발현시킨 세포에 결합되고, 전장 시노몰구스 FcRH5를 발현시킨 세포에는 어떤 것도 결합되지 않았다(표 2).
표 2. 인간 FcRH1 , 2, 3, 4 및 5, 인간 E11 도메인 및 시노몰구스 FcRH5를 과발현시키는 세포에 대한 FACS에서 면역화 캠페인 B로부터의 mAb의 결합
Figure 112018013792847-pct00002
* 인간 FcRH5의 E11 도메인, 막투과성 도메인, 및 세포질 도메인
B. 면역화 및 mAb 특성화 캠페인 C
면역화 캠페인 C의 경우, N-말단 His-태그된 E11 단백질이 CHO 세포에서 생성되었다. 마우스는 꼬리의 기저부에 완전 프로인트 아쥬반트 중의 E11 단백질 100㎍의 초기 주입으로 면역화했다. 마우스는 총 17회 용량을 수용하였고, 이후 융합으로부터 2일 전 IP 및 비절 경로를 통하여 PBS 단독으로 1회 주입 부스팅(prefusion boost)하였다.
면역화 캠페인 C를 위한 면역화 일정
주입 수 아쥬반트 경로 부위당 용적 동물당 용적 단백질 양 항원
1 CFA 꼬리의 기저부 100 μl 100 μl 100 μg 인간 E11
2 IFA 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 비절(Hock) 50 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
3 IFA 꼬리의 기저부 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 피하 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
4 IFA 비절(Hock) 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
5 IFA 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 피하 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 꼬리의 기저부 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
6 IFA 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 비절(Hock) 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
7 IFA 꼬리의 기저부 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 피하 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
IFA 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
8 무균 PBS 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
9 무균 PBS 복강내 100 μl 100 μl 50 μg 인간 E11
10 Ribi 복강내 100 μl 100 μl 10 μg 인간 E11
11 Ribi 복강내 100 μl 100 μl 10 μg 인간 E11
12 Ribi 복강내 100 μl 100 μl 10 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
13 Ribi 복강내 100 μl 100 μl 10 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
14 Ribi 복강내 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
Ribi 비절(Hock) 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
15 Ribi 꼬리의 기저부 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
Ribi 피하 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
Ribi 복강내 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
16 Ribi 복강내 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
Ribi 비절(Hock) 100 μl 200 μl 6.6 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
17 Ribi 꼬리의 기저부 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
Ribi 피하 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
Ribi 복강내 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
선융합 부스트 무균 PBS 복강내 100 μl 100 μl 3.3 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
무균 PBS 비절(Hock) 100 μl 200 μl 6.6 μg 시노몰구스 E11 및 인간 E11
재조합 E11 단백질의 15회 투여, 이후 재조합 인간 및 시노몰구스 E11 단백질의 공동 주입 후, FACS를 사용하여 FcRH5-결합 항체에 대해 항원으로서 E11 단백질을 사용하여 ELISA에서 적정에 의해 혈청을 분석하였다. 유의한 반응성은 전장 인간 FcRH5, 전장 시노몰구스 FcRH5, 또는 the 인간 E11 도메인, 막투과성 도메인, 및 세포질 도메인을 발현시킨 SVT2 세포를 검출시켰지만 벡터 형질감염된 SVT2 세포는 검출하지 않아 FcRH5 결합 항체가 모두 5마리의 면역화된 마우스의 혈청에 존재하였음을 나타내었다. PBS 중에서 최종 부스팅 후, 면역화된 마우스로부터의 림프구를 P3X63Ag8U.1.22 마우스 골수종 세포와 전기융합시켰다.
클론을 재조합 인간 및 시노몰구스 E11 단백질에 대한 결합 및 전장 인간 FcRH5; 전장 시노몰구스 FcRH5; 전장 인간 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 또는 FcRH4; 인간 E11 도메인, 막투과성 도메인 및 FcRH5의 세포질 도메인을 발현시킨 SVT2 세포에 대한 결합에 대해 FACS에 의해 시험하였다. ELISA 내 44개 인간 E11 단백질-양성 클론 및 32개 시노몰구스 E11 단백질-양성 클론이 있었다. 그 중에서, 인간 FcRH5를 발현시킨 세포 및 시노몰구스 FcRH5를 발현시킨 세포에는 결합되지만, 특이적 FcRH5 교차종 반응성의 지표인 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 또는 FcRH4를 발현시킨 세포에는 결합되지 않은 총 16개의 클론이 식별되었다(표 4).
표 4. 면역화 캠페인 C로부터 수득된 단클론성 항체의 결합 특성
Figure 112018013792847-pct00003
*인간 FcRH5의 E11 도메인, 막투과성 도메인, 및 세포질 도메인
§ 표면 플라스몬 공명 BIACORE® KD, 1가 친화도. 인간 E11 실험이 1 내지 3회 수행되고 평균산출되었다. 시노몰구스 E11 도메인 실험이 각 항체에 대하여 1회 수행되었다.
¶ 항체 23E2에 대하여 수득된 재조합 클론은 없었다.
16개의 선택된 단클론성 항체(mAb) 클론으로부터 정제된 IgG는 내생적으로 인간 FcRH5를 발현하는 세포(MOLP-2 세포)에 대한 결합을 추가로 특징으로하였다. 총 8개의 mAb 클론이 MOLP-2 골수종 세포에 결합하는 것으로 나타났다. 이들 8개 mAb 클론 중 2개는 서열분석에 기초하여 중복되는 것으로 밝혀졌고, 하나는 분자로 클론화되지 않았다. 6개의 분자로 클론화된 MOLP-2-양성 mAb 클론은 뮤린 IgG2a로서 재조합적으로 발현되고, IgG 포획 포맷으로 BIACORE® T200 장치에서 표면 플라스몬 공명에 의해 친화도에 대해 시험하였다.
간단히, 시험 항체를 단백질 A 시리즈(Series) S CM5 칩 (GE Life Sciences, Piscataway, NJ) 상에서의 참조로서 유동 세포 1로 유동 세포 2, 3 또는 4 상에서 포획하였다. FcRH5 단백질 단편은 30㎕/분의 유속으로 피분석물로서 사용되었다. 주입 사이에, 포획 표면은 10 ㎕/분의 유속으로 pH 1.5 10mM 글리신의 30초 주입에 의해 재생되었다. 상호작용은 10mM HEPES pH 7.4, 150mM NaCl, 0.05% 트윈 20(HBSP)에서 25℃에서 평가하였다. 참조 유동 세포 및 완충제 단독 주입으로부터의 참조 데이터를 동역학 분석에 전에 차감했다. 역학적 정보는 데이터를 1:1 결합 모델에 피팅하여 산출하였다. 참조 차감 및 데이터 피팅은 BIAevaluation 소프트웨어(GE Life Science, Poscataway, NJ)를 사용하여 수행하였다.
인간 E11 도메인에 대한 이러한 항체의 1가 친화도는 0.5nM 내지 68nM의 범위인 반면, 시노몰구스 E11 도메인에 대한 친화도는 9.1nM 내지 338nM의 범위였다 (표 4). 하나의 클론만이 항체 1G7, mAb 15G8보다 높은 인간 E11 도메인에 대한 친화도를 가졌다. 그러나, 인간 및 시노몰구스 E11 도메인 간의 KD 차이는 약 20배였고, 이는 이 클론이 추가의 임상 개발에 부적합하게 했다. 또한, 단리된 인간 도메인 E11에 대한 이 항체 클론의 고친화도에도 불구하고, MOLP-2 세포에 대한 이 항체 클론의 결합은 매우 약했고, 이는 단리된 인간 E11 도메인에 대해 더 낮은 친화도를 갖는 클로보다 더 약해서 이 클론이 천연 인간 FcRH5 단백질에 충분히 결합하지 않았음을 도시한다.
실시예 2. 면역화 캠페인 A 및 C로부터 항- FcRH5 항체 변이체의 생성 및 특성화
A. 면역화 캠페인 A로부터 항- FcRH5 단클론성 항체의 인간화
미국 공보 제2015/0098900호에 기술된, 면역화 캠페인(Immunization Campaign) A 유래의 항-FcRH5 항체 1G7은, 공통 VH4 및 Vκ1 프레임워크(Dennis, Current Trends in Monoclonal Ant. Develop. and Manufac . 9-28, 2010)가 수용체 프레임워크로서 사용된 것 이외에는 이전에 기재된 바와 같이(Presta et al. Cancer Res. 57:4593-4599,1997) HVR 이식(graft) 방법에 의해 인간화되었다. 중쇄 이식편은 또한 프레임워크 카밧(Kabat) 위치 37, 48, 67, 71, 73, 78, 93 및 94에서 뮤린 잔기를 포함하고, 경쇄 이식편은 또한 적절한 HVR 제시 및 VH/VL 도메인 접촉을 위해 프레임워크 위치 36 및 43에 뮤린 잔기를 포함했다. 잔기 숫자는 하기에 따른다: Kabat et al., (Sequences of proteins of immunological interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). 본원에서 hu1G7.v1 또는 1G7.v1이라 지칭된, 인간화된 1G7의 서열은 도 2 및 3에 도시되어 있다.
B. hu1G7.v1 변이체의 친화도 성숙 및 특성화
효능을 증진하기 위해, 인간화 항체 hu1G7.v1은 파아지 디스플레이를 이용하여 친화도 성숙시켰다. 간단히, M13 박테리오파아지의 표면 상의 Fab 항체 단편의 무작위 라이브러리를 표시하고, 비오틴일화 FcRH5 단백질 단편에 대한 결합제를 위해 패닝하였다. 선호되는 돌연변이는 개별 클론의 DNA 서열분석에 의해 식별되었다. 이러한 선호되는 돌연변이는 친화도가 개선된 변이체를 유도할 것으로 가정되었다(Li et al. MAbs. 6:437-445, 2014). 선택된 돌연변이를 갖는 항체 클론은 표면 플라스몬 공명에 의해 치환도에 대해 시험하였다(표 5a 및 5b).
간단히, 인간 IgG 포획 표면은 아민 커플링 및 인간 IgG 포획 키트(GE Life Sciences, Piscataway, NJ)를 사용하여 시리즈 S CM5 칩 상에서 생성시켰다. 이어서, 시험 항체는 참조로 사용된 유동 세포 1과 함께 유동 세포 2, 3 또는 4에서 포획되었다. FcRH5 단백질 단편은 30㎕/분 초과(>)의 유속으로 피분석물로서 사용되었다. 주입 사이에, 포획 표면은 3M 염화마그네슘 또는 10mM의 글리신, pH 1.5의 30초 제2 주입으로 재생시켰다. 상호작용은 10mM HEPES pH7.4, 150mM NaC1, 및 0.05% 트윈(Tween) 20 (HBSP)에서 25℃에서 평가하였다. 참조 유동 세포 및 완충제 단독 주입으로부터의 참조 데이터를 동역학 분석에 전에 차감했다. 역학적 정보는 데이터를 1:1 결합 모델에 피팅하여 산출하였다. 참조 차감 및 데이터 피팅은 BIAevaluation 소프트웨어(GE Life Sciences, Poscataway, NJ)를 사용하여 수행하였다.
초기 친화도 스크리닝 실험을 위해, 항체는 Expi293 세포(Invitrogen)의 일시적 형질감염 후 수집된 정제된 배양 배지로부터 직접 포획하였다(표 5A-5B). FcRH5 단백질 단편에 결합하는 각 항체의 능력은 100nM 내지 500nM에서 평가하였다 (실험 1, 표 5A-5B) 또는 0 nM, 20 nM, 100 nM, 및 500 nM (실험 2, 표 5A-5B). 회합 및 해리는 각각 180초 및 600초 동안, 30 μl/min의 유속에서 모니터링했다. 표 5A 내에 존재하는 모든 서열은 서열 번호: 내에 개시되어 있다, 4-6 (즉, FcRH5 L1, L2, L3 범위 공통(broad consensus)). 표 5B 내에 존재하는 모든 서열은 서열 번호: 내에 개시되어 있다, 1-3 (즉, FcRH5 H1, H2, H3 범위 공통(broad consensus)). 최대 5.2배의 친화도 증진이 관찰되었다(표 5A). 각각의 개별적 돌연변이가 추구되는 증진을 제공하지 않았기 때문에, VL 돌연변이 S30R, I32L, A51G, S52Y, Y53N, T56S, H91Q, Y92F, S93Q 및 S94P 및 VH 돌연변이 S28K, L29T 및 S56T에 초점을 갖는 다양한 돌연변이를 조합하기로 결정했다.
표 5A. 선택된 항체의 친화도 스크리닝
Figure 112018013792847-pct00004
표 5B. 선택된 항체의 친화도 스크리닝
Figure 112018013792847-pct00005
항체 파아지 디스플레이 라이브러리는 경질 및 연질 부위 지시된 돌연변이생성 둘 다를 사용하여 설계되었다. 라이브러리 L188 및 L189는 VL 잔기 27-34, 50-56, 91-94 및 96(L188) 또는 VH 잔기 28-35, 50-58 및 95-100d(L189)를 돌연변이시키기 위해 연질 돌연변이생성을 사용했다. 돌연변이생성 위치에서, 연질 돌연변이생성 올리고뉴클레오티드는 91% 친계 암호화 뉴클레오티드 및 3%의 각각 서로 뉴클레오티드를 사용했다. 라이브러리 L190 및 L191은 경질 돌연변이생성(NNK 코돈)을 사용하여 동시에 돌연변이화된 최대 3개의 HVR로, VL 잔기 27-34, 50-56, 및 89-96 (L190) 또는 VH 잔기 28-35, 50-58 및 95-100d(L191)를 한 번에 한 코돈 돌연변이시켰다 (Li et al. MAbs. 6:437-445, 2014).
FcRH5 단백질 단편에의 결합을 위한 선택의 최대 4회 순회가 수행되었다. 선택은 고체 상(마이크로플레이트 상에 직접 흡착된 표적 단백질) 및 용액 둘 다에서 수행하였다. 용액 선택을 위해, 비오틴일화 표적 단백질이 파아지-항체-표적 복합체의 포획을 가능하게 하기 위해 사용되었다. 선택된 돌연변이를 갖는 클론은 Expi293 세포(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)에서 발현되었고, 상청액은 표면 플라스몬 공명에 의해 스크리닝되었다.
항체 파아지 디스플레이 라이브러리는 주형으로서 CJ236 박테리아에서 생성된 단일-가닥 DNA를 사용하여 쿤켈(Kunkel) 돌연변이생성(Kunkel et al. Methods in Enzymology, 154:367-382, 1987)에 의해 생성되었고, Qiagen QIAprep Spin M13 키트(QIAGEN Inc., Valencia, CA)를 사용하여 정제했다. 초기 친화도 성숙 라이브러리를 위한 주형 DNA는 돌연변이생성을 위해 선택된 HVR에 정지 코돈을 함유하고; 이하 기재된 후속적인 "집중" 파아지 라이브러리를 위한 주형 DNA는 주형 HVR 정지 코돈을 사용하지 않았다. 달리 언급되지 않는 한, 항체 가변 영역의 잔기는 카밧 시스템에 넘버링된다. 효소는 New England Biolabs (Ipswich, MA)으로부터 구입하였다. 쿤켈 돌연변이생성 반응은 QIAprep 미니 스핀 칼럼(QIAGEN Inc., Valencia, CA)를 사용하여 정리하고, 전기천공에 의해 XLI 블루 이. 콜라이(E. Coli)(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)로 변형시켰다. 37℃에서 SOC 배지에서 회수 후, 배양물을 헬퍼 파아지로 감염시키고, 항생제 카베니실린 및 카나마이신을 첨가하기 전에 추가의 0.5 내지 2시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 이어서, 배양물을 추가의 4-5시간 동안 37℃에서 항온처리한 후 30℃에서 밤새 추가로 항온처리했다. 박테리오파아지는 침전 시약(20% PEG, 2.5M 염화 나트륨)의 약 1/6 용적에 의한 침전에 의해 정제된 배양 배지로부터 정제했다. 침전된 파아지는 원심분리에 의해 펠렛화하고, 인산염 완충 식염수(PBS)에 용해시켰다. 용액을 14,000g에서 원심분리로 추가로 정제하였다. 정제된 파아지는 -20℃ 냉동고에서 50% 글리세롤에 저장하고, 사용 전에 PBS에 재용해시켰다.
합리적인 설계 접근법에서, 파아지 실험으로부터 식별된 6개의 VL 돌연변이(S30R, I32L, A51G, T56S, H91Q 및 S94P)를 추가의 VL 인간화 돌연변이 S43A와 조합하고, 적합성을 평가하기 위해 쌍으로 평가했다(표 6). 선택된 VL 돌연변이의 적합성 평가를 위해(표 6), 항체는 Expi293 세포의 일시적인 형질감염 후 수집된 정제된 배양 배지에서 직접 포획하였다. FcRH5 단백질 단편의 결합은 6nM, 19nM, 56nM, 167nM 및 500nM에서 30㎕/분의 유속으로 평가하였다. 회합 및 해리는 각각 300초 및 600초 동안 모니터링했다. 표 6에 개시된 서열은 개별적 아미노산이다(즉, 칼럼의 상단에 있는 수는 항체 서열 내의 아미노산 수이다). 결과는, VL 돌연변이 I32L 및 H91Q가 개별적으로 친화도를 증진시키면서, 조합될 때, 친화도에 도움이 되지 않는다는 것을 나타냈다. 그러나, 시험된 다른 서열은 hu1G7.v1 대조군에 비해 4배까지의 증분 친화도 증진을 제공했다. 이러한 결과에 기초하여, 항체 hu1G7.v1.1, hu1G7.v1.2, hu1G7.v1.3 및 hu1G7.v1.4(도 2 및 3)가 설계되었다. 항체 hu1G7.v1.1은 6개의 VL 돌연변이 S30R, I32L, A51G, T56S, H91Q 및 S94P를 통합하도록 설계되었다. 항체 hu1G7.v1.2는 10개 VL 돌연변이 S30R, I32L, A51G, S52Y, Y53N, T56S, H91Q, Y92F, S93Q, 및 S94P를 포함하도록 설계되었다. 항체 hu1G7.v1.3 및 hu1G7.v1.4는 hu1G7.v1.1을 기반으로 하고, I32L(hu1G7.v1.3) 또는 H91Q(hu1G7.v1.4)를 생략하도록 설계되었다.
표 6. 항체 파아지 디스플레이를 통해 식별된 돌연변이의 조합 분석
Figure 112018013792847-pct00006
많은 상이한 조합에서 관심 있는 돌연변이(VL 돌연변이 S30R, I32L, A51G, S52Y, Y53N, T56S, H91Q, Y92F, S93Q, S94P; VH 돌연변이 S28K, L29T, S56T)를 조사하기 위한 집중된 파아지 라이브러리도 또한 설계되었다. 인간 항체 서열에 대한 유사성을 추가로 증가시키기 위한 노력에서, 집중된 파아지 라이브러리도 또한 다음과 같이 프레임워크 위치에서 제한된 변동을 허용했다: LC 중의 S43A, HC 중의 L48I, 및/또는 HC 중의 N73T. 약 108 개의 변형체가 수득되었다. 선택은 "미끼"로 FcRH5 단백질 단편을 이용하여 수행하였다. 선택은 이후 순회에 사용되는 용액 상 선택과 함께 고체 상 고정된 표적 단백질로 초기에 수행하였다. 항체 hu1G7.v1.5, hu1G7.v1.7, hu1G7.v1.13, 및 hu1G7.v1.13.1 (도 2 및 3)은 이러한 라이브러리로부터 유도되었다.
집중된 파아지 라이브러리에 의한 실험으로부터 서열분석 데이터도 또한 I32L과 H91Q VL 돌연변이 간의 음성 상호작용의 개념(표 5A-5B)을 지지했다. 파아지 상의 선택의 5회 순회 및 163회 VL 서열의 후속적 분석 후, VL 위치 91에서 글루타민의 주파수는 Leu32(5/93클론)의 존재하에서보다 IIe32(49/70클론)의 존재하에서 훨씬 더 높은 것으로 밝혀졌다. 이 효과는 Gln91 위치 32에서 류신을 함유한 분석된 클론의 50%(9/18)에서 관찰되는 비선택된 라이브러리에서 관찰되지 않았다. 이러한 결과는 다른 맥락에서 이러한 돌연변이의 각각의 양성 농축화에도 불구하고, I32L 및 H91Q 모두 함유된 클론의 음성적 선택을 시사했다.
산화에 대한 감수성은 항체를 1mM 2,2'-아조비스(2-메틸프로피온아미딘)디하이드로클로라이드(AAPH)로 16시간 동안 배양한 후, 트립신으로 소화시켜 액체 크로마토그래피(LC)-질량 분광법(MS) 분석을 사용하여 분석될 수 있는 펩티드를 생성함으로써 조사했다. 샘플 체류 시간에서 각 펩티드에 대하여, LC 및 고해상도 정확한 질량 및 펩티드 이온 단편화로부터 정보 (아미노산 서열 정보)는 MS에서 획득되었다. 추출된 이온 크로마토그램 (XIC)은 ±10 ppm의 윈도우에서 데이터 세트로부터 당해 펩티드 (천연 및 변형된 펩티드 이온)으로 취해졌고 피크는 구역을 결정하기 위해 통합되었다. 변형의 상대적 백분율을 다음과 같이 각 샘플에 대해 산출하였다: (변형된 펩티드의 면적)/(변형된 펩티드의 면적 + 천연 펩티드의 면적) × 100. 이들 상대 백분율은 그 다음 대조군과 AAPH-처리된 샘플 사이에서 비교되었다.
1mM AAPH의 존재하에 40℃에서 16시간 항온처리 후, HVR-H2 Trp52 및 Met64(각각 44.5% 및 52.7%)의 산화의 증가가 관찰되었다. 추가로, Trp52 산화 광 스트레스 후 2%로부터 62%로 증가하였고, Trp-52HC의 돌연변이는, BIACORE®에 의해 측정된 바와 같이, 1G7.v1.4 변이체에 대한 친화도 손실을 유발했다(도 4). 페닐알라닌, 티로신, 류신 또는 히스티딘에 의한 Trp52의 치환 및 페닐알라닌, 이소류신, 발린, 류신에 의한 Met64의 치환은 항체 hu1G7.v1, hu1G7.v1.3, hu1G7.v1.4, hu1G7.v1.5, hu1G7.v1.6 및 hu1G7.v1.7로부터 경쇄의 맥락에서 조사하였다(도 2 및 3). 특히, W52의 F, Y, L, 또는 H로의 돌연변이는 각각 119nM, 131nM, 92nM 및 60.4nM의 KD 값을 유발했다. 1G7.v85에서 M64의 V로의 돌연변이는 2.5nM의 KD 를 유발했다. HVR-H2 Trp52 및 Met64 변이체의 친화도 스크리닝(표 7)을 위해, 항체는 Expi293 세포의 일시적인 형질감염에 의해 발현시키고, 친화도 수지 MabSelect SuRe(Glygen Corp., Columbia, MD & GE Life Sciences, Piscataway, NJ)로 맞춤 포장된 팁 칼럼을 사용하여 정제하였다. 대조군 항체 hu1G7.v1 및 hu1G7.v1.5는 293T 세포의 일시적 형질감염에 의해 발현시키고, MabSelect SuRe로 정제하였다. 포획 항체에 대한 FcRH5 단백질 단편의 결합은 100nM 및 500nM에서 모니터링했다. 회합 및 해리는 각각 180초 및 300초 동안, 40 μl/min의 유속에서 모니터링했다. 표 7에 나타낸 결과는 HVR-H2 Met64가 FcRH5에 대한 높은 친화도를 유지하면서 발린으로 돌연변이화될 수 있음을 입증했다.
항체 hu1G7.v1.4는 다른 FcRH 패밀리 구성원에 비해 FcRH5에 대한 친화도 및 선택성에 기초하여 선택되었다. 산화에 대한 이 항체의 내성을 증진시키기 위해, 표 7에 기재된 M64V 돌연변이도 또한 VH 영역에 도입하였다. 생성되는 항체 hu1G7.v1.4.M64V는 hu1G7.v85(도 5a-5b)를 설계하였고, 2가 IgG 및 T 세포 의존성 이중특이적 항체(TDB)로서 제조되었다. hu1G7.v85의 서열은 하기에 제시된다: 도 6a-6b, 및 도 5a-5b. hu1G7.v85의 역학적 분석은 표 8에 제시된다. hu1G7.v1.4의 분석은 비교용으로 제시된다. hu1G7.v1.4의 KD 에서 관찰된 차이(표 7 및 8)는 이러한 분자에 대해 예상된 실험적 변동 내에 있다.
hu1G7.v.1의 비친화도 성숙된 버전인 hu1G7.v87이 또한 생성되었고, 이는 상기한 인간화 프레임워크에 내산화성을 증진시키는 M64V 돌연변이와 함께 마우스 1G7 HVR를 포함한다.
hu1G7.v1 HVR-H2의 위치 52 및 54의 친화도 스크리닝



스크리닝 KD (M)		 항체 유래의 경쇄:
hu1G7.v1 hu1G7.v1.3 hu1G7.v1.4 hu1G7.v1.5 hu1G7.v1.6 hu1G7.v1.7






중쇄 돌연변이		 없음 2.7 x 10-8 - - 2.0 x 10-9 - -
W52F 2.5 x 10-7 1.8 x 10-7 1.2 x 10-7 4.8 x 10-8 8.1 x 10-8 7.7 x 10-8
W52Y 1.5 x 10-7 6.4 x 10-7 1.3 x 10-7 1.8 x 10-7 5.3 x 10-7 1.4 x 10-7
W52L 1.0 x 10-7 2.4 x 10-7 9.2 x 10-8 1.3 x 10-7 2.5 x 10-7 1.3 x 10-7
W52H 1.2 x 10-7 6.6 x 10-8 6.0 x 10-8 6.7 x 10-8 1.1 x 10-7 9.0 x 10-8
M64I 3.0 x 10-8 2.1 x 10-9 2.5 x 10-9 2.7 x 10-9 2.7 x 10-9 2.6 x 10-9
M64V 2.7 x 10-8 2.5 x 10-9 2.5 x 10-9 2.5 x 10-9 2.7 x 10-9 2.5 x 10-9
M64L 2.7 x 10-8 2.4 x 10-9 2.5 x 10-9 2.3 x 10-9 2.6 x 10-9 2.0 x 10-9
M64F 2.6 x 10-8 2.2 x 10-9 2.5 x 10-9 1.4 x 10-9 2.6 x 10-9 2.4 x 10-9
hIgG1 및 TDB 포맷으로 hu1G7.v1.4 및 hu1G7.v85의 역학적 분석


항체

형식		 인간 FcRH5 시노몰구스(Cyno) FcRH5
KD (nM) Ka (1/Ms) Kd (1/s) KD (nM) Ka (1/Ms) Kd (1/s)

1G7.v1.4		 hIgG1 2.6 7 x 105 2 x 10-3 7.7 1 x 105 1 x 10-3
TDB 2.4 5 x 105 1 x 10-3 6.3 1 x 105 8 x 10-4

1G7.v85		 hIgG1 2.5 6 x 105 2 x 10-3 7.2 1 x 105 1 x 10-3
TDB 2.4 4 x 105 1 x 10-3 6.8 1 x 105 8 x 10-4
추가의 친화도 성숙 방법은 중쇄 HVR의 위치를 무작위화하기 위해 생거(Snager) 서열분석을 이용하지만; 이 방법에 의해 바람직한 돌연변이는 식별되지 않았다. 따라서, 변이체에 대해 시험된 위치의 수 및 차세대 서열분석(Illumina 서열분석)을 사용하는 스크리닝의 깊이가 증식되었다. 중쇄 가변 영역의 선택된 위치가 임의의 아미노산 또는 호백색 정지 코돈을 암호화하는 NNK 코돈으로 무작위화된 라이브러리가 설계되었다. 설계는 클론 당 항체 가변 영역에서 단지 하나의 아미노산 변경을 허용한다. 위치는 HVR 및 HVR과 직접 접촉하거나 근위에 있는 프레임워크 위치로부터 선택되었다. 카밧 위치 1, 2, 24 내지 40, 43, 45 내지 78, 80 내지 83, 85, 86, 91, 및93 내지 102는 무작위화되었다. 라이브러리는 DNA 합성(GeneWiz)에 의해 생성되었고, NNK 코돈으로 무작위화된 각 단편 중의 한 위치를 갖는 75개의 독립적인 선형 DNA 단편을 생성한다. 선형 DNA 단편을 풀링시키고, 친화도 성숙 돌연변이 없이 경쇄 가변 영역을 함유하는 1가 Fab 단편 파아지 디스플레이 벡터(Lee et al. J. Immunol. Methods 284:119-132, 2004)로 클로닝되었다. 결찰 제품은 이. 콜라이 XL-1로 전기천공되고, M13 KO7 헬퍼 파아지(New England Biolabs)로 중복감염시키고, 상기한 바와 같이 성장시켰다. 결합제는 병렬 트랙에서 인간 또는 시노몰구스 FcRH5를 사용하는 3회 순회의 정렬로 선택하였다. 이러한 선택을 위해, 뉴트라비딘(Pierce)으로 코팅된 ELISA 플레이트를 사용하여 비오틴일화 인간 또는 시노몰구스 FcRH5 도메인 8을 PBS에서 50ng/㎖로 포획했다. 파아지(1 OD268/㎖)를 실온에서 2시간 동안 고정된 FcRH5로 배양하고, 결합되지 않은 파아지는 PBS로 10회 세정하여 제거했다. 라이브러리 및 선택된 파아지를 사용하여 이. 콜라이 XL-1을 감염시켰고, 플라스미드 DNA를 추출하고, 삽입물은 Phusion DNA 폴리머라제(New England Biolabs)를 사용하는 15-주기 PCR 증폭에 이어, 증폭산물의 아가로스 겔 정제에 의해 증폭시켰다. 원래 라이브러리(2 OD268)로부터의 파아지의 DNA는 M13 DNA 정제 키트(Qiagen)를 사용하여 추출하고, 200ng의 DNA를 주형으로 사용하여 상기와 동일한 조건을 사용하여 삽입물을 증폭시켰다. 증폭산물은 이전에 기재된 바와 같이 일루미나 서열분석에 의해 서열분석했다(Koenig et al. J. Biol. Chem. 290:21773-21786, 2015). 서열을 여과하고, 이전에 기재된 바와 같이 분석하여(Koenig et al. J. Biol. Chem. 290:21773-21786, 2015) 가변 영역에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 서열, NNK 퇴화성 코돈 사용을 따르지 않는 돌연변이를 갖는 서열 및 정지 코돈을 갖는 서열 모두를 제거했다. 농축은 다음 식:
Figure 112018013792847-pct00007
을 사용하여 이전에 기재된 바와 같이(하기 참고), 분류된 샘플 중의 소정의 위치에서 소정의 돌연변이의 빈도를 분류되지 않은 (초기 라이브러리) 샘플 중의 매우 동일한 돌연변이의 빈도로 나눔으로써 산출되었다: Fowler et al. Nat. Methods 7:741-746, 2010, 여기서, Ev 는 돌연변이체의 농축이고, Rv,s 는 분류된 집단에서 위치 s 에서 돌연변이 v 를 갖는 판독치의 수이고, Rx,s 는 변이체 Rv,s 와 동일한 위치에서 돌연변이를 갖는 분류된 집단에서 판독치의 수이고, Rv,i 는 입력된 분류되지 않은 집단에서 Rv,s 와 동일한 돌연변이체의 판독치의 수이고, Rx,i 는 변이체 Rv,i 와 동일한 위치에 돌연변이를 갖는 입력된 분류되지 않은 집단에서 모든 변이체의 합이다. 인간 및 시노몰구스 FcRH5를 사용한 선택에 대한 Ev 스코어는 각각 표 9 및 10에 제시되고, 회색 박스는 선택된 샘플 또는 라이브러리에서 식별되지 않은 돌연변이를 나타낸다.
표 11은 인간 FcRH5를 사용한 선택에서 적어도 0.5의 스코어 및 시노몰구스 FcRH5를 사용하는 선택에서 적어도 0의 스코어를 갖는 돌연변이를 나타낸다. 표 11에서, 추가의 분석을 위해 선택된 돌연변이(즉, 인간 는 추가적인 분석을 위해 선택되는 흑색 또는 회색으로 표시된다 인간 FcRH5에 대한 결합에 대해 적어도 약간은 유리하고, 시노몰구스 FcRH5 결합에 대해서는 중립적이거나 보다 양호한 돌연변이)는 검은색 또는 회색으로 강조되고, 생거 서열분석으로 식별된 L29T 돌연변이는 회색으로 강조된다. 총 11개의 위치가 이러한 기준을 충족시키는 돌연변이를 갖고, 일부 위치에는 여러 변이체가 있었다. 한 위치는 글리코실화 부위(G54N)를 도입한 돌연변이가 있었고, 추가의 특성화를 위해서는 선택되지 않았다. 또 다른 변이체, L29T는 생거 서열분석에 의한 스크리닝에 의해 식별되었지만, S56T 돌연변이를 갖는 클론에서만 식별되었다. 그 변이체는 평균 1.2배만의 친화도 증진을 나타냈다. S56T 돌연변이체는 -2.1의 강한 음성 농축 스코어를 가져서(표 9), L29T 돌연변이가 이중 돌연변이체의 제2 S56T 돌연변이의 존재에 의해 불명확한 유익한 효과를 나타낼 수 있음을 시사한다. 다른 9개의 위치 중, 가장 높은 스코어를 갖는 돌연변이가, 두 개의 돌연변이가 선택된 위치 1 및 65를 제외하고, 선택되었다. 이러한 변이체는 DNA 합성(GenWiz)에 의해 제조되고, 1ml의 배양물 중의 Expi293 세포에서 (친화도 성숙 돌연변이 없는) hu1G7.v1의 경쇄와 함께 인간 IgG1로서 발현되었다. 인간 IgG1 변이체는 단백질 A 크로마토그래피로 정제하고, 친화도에 대해 BIACORE®에서 시험했다. 시험된 두 돌연변이 중에서, 단지 2개, L29T 및 S100P가 가용성 인간 FcRH5로 BIACORE®에서 시험했을 때 친화도에 중요한 영향을 미쳤다. L29T 돌연변이는 단독으로 그 맥락에서 친화도를 2.2배 개선시킨 한편, S100P 돌연변이는 친화도를 3배까지 개선시켰다. 이러한 돌연변이는 단리되어, 또는 hu1G7.v86에 존재하는 I32L, A51G, T56S 및 S94P 돌연변이를 갖는 친화도 성숙 경쇄의 맥락에서 조합하여 시험하였다. 중쇄 L29T는 돌연변이 없는 경쇄의 맥락에서 효과와 유사하게 hu1G7.v86의 친화도를 약 2배까지 개선시켰다. 대조적으로, 돌연변이 없는 경쇄의 맥락에서 친화도를 3배까지 개선시킨 S100P는 hu1G7.v86의 친화도를 1.5배까지 개선시켰다. 조합된 L29T 및 S100P 돌연변이는 hu1G7.v86의 친화도를 2.5배까지 개선시켰다. 따라서, 차세대 서열분석을 사용하는 깊은 마이닝(mining)을 사용하고 중쇄에서 선호되는 돌연변이에 대한 CDR 위치 이외에 많은 프레임워크 위치를 시험하는 경우에도, 단지 2.5배의 친화도 증진이 달성될 수 있었다. 결과는, 개별적으로 시험될 때 친화도에 크게 기여한 돌연변이가 이미 다른 돌연변이를 갖는 분자에 훨씬 덜 영향을 미쳤다는 것을 나타냈다. 이는 특히 중쇄 내 S100P 돌연변이에서 사실이었으며, 개별적으로, 경쇄 돌연변이 I32L, A51G, T56S, 및 S94P를 갖는 분자의 맥락에서 약 3-배 만큼 hu1G7.v1의 친화도를 개선시켰고, 그리고 중쇄 돌연변이 L29T는 친화도 상에서의 추가 영향은 거의 없었다 (표 12, hu1G7.v91 및 hu1G7.v93 비교; 도 7a-7b에 제시된 hu1G7.v93 서열). 따라서, 경쇄에 다수의 돌연변이를 첨가함으로써 상당한 친화도 증진이 달성될 수 있었지만, 중쇄에 돌연변이를 도입함으로써 비교적 적은 증진이 달성될 수 있었다.
표 9. 인간 FcRH5로 선택된 hu1G7.v1에서 돌연변이의 농축 스코어
Figure 112018013792847-pct00008
표 10. 시노몰구스 FcRH5로 선택된 hu1G7.v1에서 돌연변이의 농축 스코어
Figure 112018013792847-pct00009
표 11. 인간 FcRH5를 사용한 선택에서 적어도 0.5의 농축 스코어 (표 9) 및 시노몰구스 FcRH5를 사용한 선택에서 적어도 0의 농축 스코어 (표 10)를 갖는 돌연변이
Figure 112018013792847-pct00010
FcRH5로 선택된 파아지 디스플레이 라이브러리의 깊은 서열분석에 의해 식별된 돌연변이를 갖는 hu1G7 변이체의 친화도
　 돌연변이(카밧 위치) 　 하기에 대한 배수 개선:
변이체 중쇄 경쇄 KD (nM) hu1G7.v1 hu1G7.v86
hu1G7.v1 - - 14.6 -
A E1S - 14.6 1.0
B E1F - 19.1 0.8
C S28P - 13.3 1.1
D L29T - 6.7 2.2
E V37Y - 11.0 1.3
F A61P - 11.7 1.2
G M64G - 14.4 1.0
H S65D - 15.0 1.0
I S65P - 16.2 0.9
J K81M - 15.3 1.0
K S82bD - 15.0 1.0
L S100P - 4.8 3.0
hu1G7.v85 M64V S30R, I32L, A51G, T56S, S94P 0.8 17.0
hu1G7.v86 M64V I32L, A51G, T56S, S94P 1.4 10.3
hu1G7.v91 M64V, L29T I32L, A51G, T56S, S94P 0.7 20.9 2.0
hu1G7.v92 M64V, S100P I32L, A51G, T56S, S94P 0.9 15.9 1.5
hu1G7.v93 M64V, L29T, S100P I32L, A51G, T56S, S94P 0.6 25.3 2.5
실시예 3. 예시적인 FcRH5 TDB의 생성 및 시험관내 특성화
본원에 기재된 항-FcRH5 항체를 사용하여 하나의 아암 상에 항-인간 FcRH5의 결합 결정 인자를, 다른 아암 상에 항-인간 CD3ε를 포함하는 T 세포 의존성 이중특이적(TDB) 항체를 생성하였다. FcRH5 결합 결정 인자는 인간화된 및 친화도 성숙된 단클론성 항체 클론 1G7, 1 G7.v85 및 1G7.v87을 포함하였다. 항-CD3ε에 대한 인간화된 결합 결정 인자는 고친화도 항체 클론 38E4.v1, 고친화도 클론 38E4.v11, 및 저친화도 클론 40G5(hCD3ε에 대한 EC50 = 각각, 1.0nM, 50pM 및 13nM)를 포함하였다. 항-CD3 클론 38E4.v1, 38E4.v11 및 40G5c는 인간 CD3ε 폴리펩티드(아미노산 1-26 또는 1-27(서열 번호: 174)로 이루어진 인간 CD3ε 폴리펩티드의 단편)에 결합하고, CD3ε의 아미노산 잔기 Glu5는 결합에 필요하지 않다(또한 참고: PCT 공보 번호 WO 2015/095392 및 미국 공보 No. 2015-0166661, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 편입됨).
예시적인 FcRH5 TDB는 그들의 치료 가능성을 평가하기 위해 특성화되었다. 인간화 전장 FcRH5 TDB 분자는, 극도로 낮은 (pM) 용량에서인간 형질 세포 및 환자-유도된 원발성 골수종 종양 세포를 사멸하고, 그리고 T 세포의 활발한 증식을 야기하는 것이 발견되었다. FcRH5 TDB는 생체 내에서 골수종 이종 이식편의 성장을 억제하는데 효과적이었고, 표적을 포화시킬 것으로 예상된 충분히 허용되는 용량 수준에서 영장류에서 B 세포 및 형질 세포의 완전한 고갈을 유발하였다. 완전한 형질 세포 고갈은 골수 미세 환경에서 효능의 확실한 증거를 제공했다. FcRH5 TDB의 활성은 표적 발현(예: FcRH5 발현) 수준과 상관 관계가 있어 염색체 1q 사본 증가를 갖는 고위험 골수종 환자가 이 면역요법에 독특하게 민감할 수 있음을 시사한다.
물질 및 방법
A. 항체
a. TDB의 생산
1. 합리적인 설계 접근법
발현을 최적화하고 TDB의 수율을 증가시키기 위해, 돌연변이를 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)의 Fc, VH, VL, CH1 및 CL 도메인으로 가공하여 적절한 항체 단량체 형성을 유도했다. 특히, 하전된 영역을 VH, VL, CH1 및/또는 CL 도메인으로 도입시킨 아미노산 변형은 중쇄 및 경쇄 쌍형성 오류를 감소시키는 기전을 제공했다. 반대의 전체적인 전하를 갖는 동족 하전된 영역을 함께 구동시키고, 적절한 중쇄 및 경쇄 쌍형성을 도와 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)의 전체 생산 수율을 증가시킨다. Fc, VH, VL, CH1 및 CL 도메인의 아미노산 변형을 포함하여 예시적인 합리적 설계 입체배치는 도 1a-1b에 제시되어 있다.
2. 로제타 (Rosetta) 설계 접근법
추가로, 그리도 대안적으로, 발현을 최적화하고 TDB의 수율을 증가시키기 위해, 돌연변이를 항-FcRH5 항체(예: FcRH5 TDB)의 Fc, VH, VL, CH1 및 CL 도메인으로 가공하여 적절한 항체 단량체 형성을 유도했다. 로제타 설계 접근법은 CH1 및 CL 도메인 중의 크놉 및 홀 돌연변이 형태로, 하전된 영역 돌연변이 이외에, 적절한 중쇄 및 경쇄 쌍형성을 구동하는 추가의 기전을 제공했다. Fc, VH, VL, CH1 및 CL 도메인의 아미노산 변형을 포함하여 예시적인 로제타 설계 입체배치는 도 1c-1f에 제시되어 있다.
3. FcRH5 TDB 생산을 위한 1-세포 접근법
하나의 접근법에서, FcRH5 TDB는 각각 FcRH5 TDB의 두 개의 아암(예: 항-FcRH5 절반 항체를 암호화하는 제1 플라스미드 및 항-CD3 절반 항체를 암호화하는 제2 플라스) 중 하나를 암호화하는 두 개의 플라스미드로 공동-형질감염된 숙주 세포를 배양함으로써 제조될 수 있다. 숙주 세포(예컨대, 박테리아, 포유동물, 또는 곤충 세포)의 형질감염은 96-웰 플레이트 포맷으로 수행하였다. FcRH5 TDB 생산을 스크리닝하기 위해, 약 2,000 내지 3,000개의 클론을 포획하고, 표적 항원인 FcRH5에 결합하는 능력에 대해 ELISA 및 손상되지 않은 IgG 균질한 시간 분해 형광(HTRF)으로 평가할 수 있다. FcRH5 또는 이의 단편에 결합할 수 있는 FcRH5 TDB를 생산하는 클론은 확장 및 추가의 스크리닝(예: CD3에 대한 결합을 위해)을 위해 선택되었다. 상위 클론은 이후, 생산된 퍼센트 이중특이적 항체(bsAbs), 역가 및 PQ에 기초하는 추가의 분석을 위해 선택될 수 있다.
본 발명의 FcRH5 TBD를 제조하는데 사용될 수 있는 예시적인 1-세포 접근법은 전문이 본원에 참고로 인용된 국제 특허 출원 제PCT/US16/28850호에 기재되어 있다.
4. FcRH5 TDB 생산을 위한 2-세포 접근법
대안적으로, FcRH5 TDB는 항체 헤미머(hemimer)(예: 절반 항체)를 고세포 밀도 발효를 사용하여 별도로(즉, 두 개의 상이한 세포주에서) 배양한 다음, 단백질 A 크로마토그래피로 각각의 절반 항체를 독립적으로 단리시킴으로써 생성될 수 있다. 이어서, 정제된 절반 항체를, 예를 들면, 1:1 몰 비로 조합할 수 있고, 4시간 동안 2mM의 DTT의 존재하에 50mM 트리스, pH 8.5에서 항온처리하여 힌지 영역에서 어닐링 및 디설파이드의 환원을 가능하게하였다. 24 내지 48시간 동안 DTT 없는 동일한 완충제에 대한 투석은 쇄간 디설파이드 결합의 형성을 유발했다.
TDB는 각각 TDB의 별개의 아암을 개별적인 숙주 세포로 암호화하는 두 개의 플라스미드의 형질감염에 의해 대안적으로 생산될 수 있다. 숙주 세포는 공배양되거나 별도로 배양될 수 있다. 숙주 세포의 형질감염은 96-웰 플레이트 포맷으로 수행될 수 있다. TDB 생산을 스크리닝하기 위해, 2,000 내지 3,000개의 클론을 포획하고, 선택된 항원(예: FcRH5)에 결합하는 능력에 대해 ELISA 및 손상되지 않은 IgG 균질 시간 분해 형광(HTRF)에 의해 평가하였다. FcRH5 또는 이의 단편에 결합할 수 있는 TDB를 생산하는 클론은 증식 및 추가의 스크리닝을 위해 선택되었다. 상위 클론은 생산된 퍼센트 이중특이적 항체(bsAbs), 역가 및 PQ에 기초하는 추가의 분석을 위해 선택된다.
5. 예시적 생산 방법
하나의 예에서, 이 전략을 사용하여, FcRH5 TDB는 유사한 양의 각 절반 항체를 생산하도록 소정의 비로 진탕 플라스크에서 함께 성장된 하나의 절반 항체(홀)을 발현시키는 이. 콜라이 세포 및 제2 절반 항체(크놉)를 발현시키는 이. 콜라이 세포를 사용하는 공배양 저전략에 의해 생성되었다 (참고: Spiess et al. Nat. Biotechnol. 31(8):753-8, 2013; PCT 공보 번호 WO 2011/069104, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 편입됨). 이어서, 공동 배양된 세균 발효액을 수거하고, 세포를 미세유동화기로 교란시키고, 항체를 단백질 A 친화도로 정제했다. 미세유동화 및 단백질 A 포획 동안 두 개의 아암은 어닐링되고 힌지 쇄간 디설파이드 가교를 형성했다는 것이 관찰되었다.
다른 예에서, 전장 이중특이적 항체는 이전에 기재된 바와 같이 제조되었다 (Junttila et al. Cancer Res. 74:5561-5571, 2014; Sun et al. Science Trans. Med. 7:287ra270, 2015). 요약하면, CH3 도메인에 "크놉" 또는 "홀" 돌연변이를 함유하는 2개의 절반 항체(예: 항-FcRH5(예: 1G7의 최적화된 변이체) 및 항-CD3(예: 38E4.v1))는 CHO 세포의 일시적인 형질감염로 발현시킨 다음, 단백질 A에 의해 친화도 정제했다. 두 개의 절반-항체의 동량을 32℃에서 밤새 pH 8.5에서 200mol 과량의 감소된 글루타티온으로 배양하여 크놉-홀 디설파이드 결합의 형성을 구동시켰다. 조립된 이중특이적 항체(예: FcRH5 TDB)는 소수성 상호작용 크로마토그래피를 통해 오염물질로부터 정제하였다. 정제 FcRH5 TDB는 질량 분석법, 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 및 겔 전기 영동에 의해 순도에 대해 특성화하였다.
b. FcRH5 TDB의 정제
FcRH5 TDB는 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC)에 의해 오염물질로부터 정제하였다. 생성되는 물질은 Endosafe 휴대용 테스트 시스템을 이용하여 내독소 수준을 분석하고, 필요한 경우, 내독소 함량은 0.1% 트리톤 X-114로 단백질을 세정하여 감소시켰다. TDB의 분자량은 이전에 기재된 바와 같이 질량 분석법(LC-ESI/TCF)에 의해 분석했다 (Jackman et al. The Journal of Biological Chemistry. 285:20850-9, 2010). FcRH5 TDB는 또한 아질런트 1:100 HPLC 시스템을 사용하여 Zenix SEC-300 칼럼 (Sepax Technologies USA) 상의 분석적 크기 배제 크로마토그래피로 분석하였다. 잔류 항체 단편의 존재는 2100 Bioanalyzer 및 단백질 230 칩을 사용하여 전기영동으로 정량화했다.
c. 표지화된 항체
다르게 언급된 것을 제외하고, 유동 세포 계측법을 위해 직접 표지된 모든 항체는 BD Bioscience에서 구입했다. 항-인간 PD-1은 Affymetrix에서 구입했다. 염소 항-인간 IgG와 염소 항-마우스 IgG는 Jackson Immunoresearch에서 구입했다. 항-PC-FITC(클론 Vs38c)는 DAKO에서 구입했다. 웨스턴 블롯을 위한 SLP-76 항체는 Cell Signaling Technology에서 구입했다. p-SLP76(Ser376)은 Genentech, Inc.에서 생성되었다.
FACS에 의한 다발성 골수종(MM) 샘플과 건강한 공여자 혈장 및 B 세포로부터 FcRH5를 검출하기 위해, 항-FcRH5 항체 1G7은 Southern Biotec에 의해 PE로 표지화했다. 현미경의 경우, TDB는 제조업자의 설명서에 따라 적절한 단백질 표지화 키트(ThermoFisher)를 사용하여 알렉사 플루오르 647로 표지화했다. TDB를 표지화 전에 PBS, pH 7.2에서 투석하고, ~4의 염료/단백질 비를 통상적으로 달성했다.
B. 분자 안정성 검정
FcRH5 TDB의 열 분자 안정성을 평가하기 위해, 열 응력 테스트를 4주 동안 30℃ 내지 40℃에서 수행하였다. FcRH5 TDB는 20mM His-아세테이트, 240mM 수크로스, pH 5.5에서 1mg/ml로 항온처리하고, 2주 후에 평가하였다. TDB는 N 탈아민화/D 이성질화에서 5% 미만 변화, SEC에 의한 단량체 손실에서 2.5% 미만 변화 및 2주에 IEC에 의한 주요 피크 손실에서 16% 미만에 대해 평가했다. 사용된 SEC 완충제는 0.25M KCl, 0.2M K3PO4, pH6.3이었다. LC-MS는 10분 동안 60℃에서 TCEP를 이용하여 환원된 조건에서 수행하였다. LC-MS/MS 분석은 DTT 환원, IAA 캡핑 및 pH 8.2 소화로 RCM 트립신 펩티드 맵핑으로 수행하였다.
AAPH 산화 검정은 <35% Trp 산화 및 <1.1 Met Ox/Met256을 평가하기 위해 수행하였다. FcRH5 TDB는 1.0㎎/㎖의 농도에서 항온처리하고, 16시간 동안 1mM의 AAPH에서 스트레스화했다. 광 산화 검정도 또한 수행하여 Trp OX/TrpOX_ApoMabW53 >0.5를 평가하였다. 광 산화 검정을 위해, TDB는 48시간 동안 1.0㎎/㎖의 농도에서 항온처리하고, 240만 룩스 시간 동안 빛에 노출시켰다. DTT 환원, IAA 캡핑 및 pH 8.2 소화로의 RCM 트립신 펩티드 맵핑을 이용한, LC-MS/MS 분석에 의하여 산화를 평가하였다.
C. 세포 배양 및 무변성 세포주 생성
1G4 TCR 복합체 및 주요 TCR 신호전달 성분(James et al. Nature 487:64-69, 2012)을 발현시키는 HEK-293T 및 HEK-T 세포는 DMEM(Sigma Aldrich)에서 배양하였다. 다른 모든 세포주는 RPMI에서 배양하였다. 모든 배지는 10% 열 비활성화 FBS(Life Technologies), 1mM의 HEPES(Lonza), 2mM의 글루타민, 100U/㎖ 페니실린 및 100㎍/ml의 스트렙토마이신(Sigma Aldrich)을 보충하였다.
면역학적 시냅스 형성을 평가하기 위해, SVT2 세포는 N-말단 gD 태그를 갖는 전장 FcRH5를 암호화하는 레트로바이러스 또는 N-말단 gD 태그를 갖는 절단된 FcRH5(즉, 아미노산 1-744의 결실을 포함하는 FcRH5)를 암호화하는 바이러스로 감염되었다. FcRH5 TDB 사멸의 표적 의존성을 평가하기 위해, FOX-NY 세포는 전장 FcRH5를 암호화하는 렌티바이러스로 감염시켰다. 이어서, FcRH5의 차별 발현 수준을 갖는 단일 세포 유래 클론은 2㎍/ml의 퓨로마이신으로 선택하였다.
FcRH5 TDB 활성에 대한 PD-1/PD-L1의 신호전달의 효과를 평가하기 위해, 293개 세포를 FcRH5를 암호화하는 렌티바이러스로 감염시킨 후 리포펙타민(Invitrogen)을 사용하여 인간 PD-L1을 암호화하는 플라스미드를 형질감염시켰다.
D. 방사성리간드 세포 결합 검정
항-FcRH5 1G7.v85 항체는 아이오도겐(Iodogen) 방법을 사용하여 20μCi/㎍의 특이적 활성으로 아이오딘화했다. 아이오딘화된 항체의 고정된 농도 및 연속으로 희석된 비표지된 항체의 감소하는 농도를 함유하는 경쟁 반응 혼합물을 96-웰 플레이트 내에 위치시킨다. 내인성 인간 FcRH5(예: MOLP-2, RI-1, KARPAS 620 및 KMS21-BM)를 발현시키는 세포주는 2% 태아 소 혈청(FBS), 50mM HEPES(pH 7.2) 및 0.1% 아지드화나트륨을 갖는 둘베코 변형 이글 배지(DMEM)로 구성된 결합 완충제로 세정한 다음, 96-웰 플레이트에 첨가했다. 세포와의 경쟁 반응은 표지되지 않은 항체의 각각의 농도에 대해 3회 검정하고, 실온에서 2시간 동안 항온처리했다. 2-시간 항온처리 이후, 경쟁 반응은 밀리포어 멀티스크린 필터 플레이트 (Billerica, MA)로 이동되고 결합 완충제로 4회 세정하여 결합된 아이오딘화된 항체로부터 유리물을 분리하였다. 공기 건조된 필터를 왈락 위자드(Wallac Wizard) 2470 감마 카운터(PerkinElmer Life and Analytical Sciences Inc., Wellesley, MA)에서 계수하고, 결합 데이터는 항체의 결합 친화도를 계측하기 위해 Munson 및 Robard의 피팅 알고리즘을 사용하는 NewLigand 소프트웨어(Genentech)를 사용하여 평가하였다 (Munson et al. Anal. Biochem. 107:22-39, 1980).
E. 현미경관찰법을 위한 벡터 및 일시적 형질감염
N-말단 gD 태그를 갖는 FcRH5는 이 벡터에 mRuby2 DNA 서열을 결찰시키기 전에 FcRH5를 pHR-SIN의 렌티바이러스 벡터 내로 먼저 삽입함으로써 형광성 단백질 mRuby2에 융합시켜 pHR-FcRH5-mRuby2를 생성했다. 이 벡터에서 SFFV 프로모터는 후속적으로 mHSP 프로모터로 교체하여 pHRI-FcRH5-mRuby2를 생성하고, 이는 pHR보다 약한 프로모터를 이용하여 FcRH5-Ruby의 더 생리학적 발현 수준을 가능하게 한다. LCK, ZAP70, CSK/CBP 및 CD45를 발현시키는 벡터는 이전에 기재되었다 (James et al. Nature. 487:64-69, 2012). 사용되는 CD45 작제물은 RO 동형체 또는 CD45의 기능을 모방하는 것으로 공지되어 있는 CD43의 막투과성 및 세포외 도메인과 함께 CD45의 세포질 도메인을 함유하는 작제물이었다. 작제물을 형질감염시키기 전에, HEK 세포를 6-웰 플레이트에서 약 60% 컨플루언시(confluency)로 시딩(seeding)했다. 이어서, 벡터는 제조업자의 설명서에 따라 GeneJuice(Novagen)를 사용하여 적절한 비율로 일시적으로 형질감염시켰다. 세포는 형질감염 후 24 내지 48시간 실험에 사용하였다.
F. 현미경 이미지화 및 분석
세포 콘주게이트를 이미지화하기 위해, 이미지화되는 각 세포 유형의 3x105 세포를 배양물로부터 수거하고, RPMI-1640(페놀-레드 부재) 중의 100㎕의 20nM TDB 재현탁시켰다. 20 내지 30분 동안 항온처리하여 세포 콘주게이션을 허용한 후, 세포를 PBS로 세정하고, DMEMgfp2 이미지화 배지(Evrogen)에 재현탁시키고, 35mm 이미지화 접시(Mattek)에 첨가했다. Andor의 회전 디스크 공 초점 현미경 시스템은 37℃에서 세포를 이미지화하기 위해 사용하였다. 모든 이미지를 분석하고, 모든 제시된 이미지는 ImageJ를 사용하여 동등한 방식으로 가공되었다. 제시된 이미지는 백그라운드 차감된 후, 한 쌍의 세포에 초점을 맞추기 위해 절단한 다음, 콘트라스트를 최적화하였다. 단백질 클러스터링 및 분리의 정도는 원형질막에서 형광 표지된 단백질의 강도를 사용하여 결정하였다. 원형질막은 클러스터링 또는 분리의 정도를 산출하기 위해 세포-세포의 계면 외부의 원형질막의 평균 형광 강도로 나누어진 세포-세포 계면 내의 원형질막의 라인 및 평균 형광 강도를 수동으로 그려서 선택하였다. z-스택으로부터 TDB에 의해 콘주게이트된 세포 쌍의 계면의 이미지를 생성하기 위해, 이미지 스택을 먼저 분리시킨 후, 호이겐스(Huygens) 소프트웨어를 사용하여 계면 영역을 강조하기 위해 절단했다.
G. 시험관내 세포독성 및 T 세포 활성화 검정
표적 세포는 제조업자의 프로토콜(Life Technology, #C34554)에 따라서 카르복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지화했다. CFSE 표지된 표적 세포 및 정제된 CD8+ 세포를 3:1 효과기 세포 대 표적 세포(E:T) 비율로 혼합하고, TDB와 함께 48시간 동안 항온처리했다. 항온처리의 종료 후 세포를 자동화 포맷으로 FACSCalibur 상에서 유동 세포 계측법으로 분석하였다. 살아 있는 표적 세포의 수는 CFSE+/PI-음성 세포 상에서 게이팅하여 계수하였다. 세포 독성의 백분율은 다음과 같이 산출하였다: % 세포 독성(TDB 부재하에 살아 있는 표적 세포 수 - TDB 존재하에 살아 있는 표적 세포 수)/(TDB 부재하에 살아 있는 표적 세포 수) X 100.
a. 시험관내 세포 독성 검정 세포주
말초혈 단핵 세포(PBMC) 및 CD8+ 분리, 세포 역가 Glo(Promega) 및 세포 유동 계측법 기반 생존력 검정(48시간)을 문헌(참조: Junttila et al.)에 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다. Cancer Res. 74:5561-5571, 2014. CD8+ 세포는 3:1 효과기:표적 비에서 효과기로서 사용하였다.
b. 인간 형질 세포 및 원발성 다발성 골수종 샘플
건강한 공여자의 인간 골수 흡인물(ALLCELLS)을 PBS로 희석하고, 골수 단핵 세포(BMMC)는 종래의 구배 분리(Lymphoprep, STEMCELL)에 의해 단리시켰다. 유동 세포 계측법 생존율 검정은 BMMC 형질 세포 상의 72시간 FcRH5 TDB 처리의 효과를 시험하는데 사용하였다. MM 환자로부터 동결된 인간 BMMC는 Conversant Bio에서 구입하였다. 골수종 BMMC는 새로 단리된 건강한 공여자 CD8+ T 세포와 혼합하고, 공배양물은 72시간 동안 FcRH5 TDB로 처리하였다. PI-음성 CD38+CD138+ 세포를 유동 세포 계측법으로 계수하였다.
H. T 세포 활성화 및 증식 검정
T 세포 활성화 검정은 문헌에 이전에 기재되었다 (참조: Junttila et al. Cancer Res. 74:5561-5571, 2014. 새로 단리된 CD8+ T 세포는 CFSE로 표지화하고, 표적 세포(예: MOLP-2 세포)와 1:1 비로 혼합하고, 48시간 또는 5일 동안 1㎍/㎖의 TDB와 함께 공배양했다. 세포를 항-CD8-APC (BD Bioscience, #555634), 항-CD69-PE(BD Bioscience, #555531), 및/또는 항-CD25-APC(BD Bioscience, #555434)로 염색하고, CFSE의 형광 강도의 희석은 유동 세포 계측법으로 분석하였다.
I. 시노몰구스 형질 세포에 대한 유동 세포 계측법 분석
시노몰구스 골수 흡인물을 ACK 용해 완충제(Life Technology, #Al 0492)에서 2회 희석시켰다(1:10). 시노몰구스 골수 세포를 항-CD45, 항-CD20 및 항-CD38로 염색하였다. 세정 후, 세포를 고정시키고 IntraStain 키트(DAKO)로 투과화하였다. 세포를 항-PC(클론 Vs38c)로 염색하였다. 시노몰구스 형질 세포는 유동 세포 계측법에 의해 CD45-CD20-CD38+PC+로서 분류되었다.
J. 시노몰구스 IgG 수준에 대한 ELISA 분석
전체 시노몰구스 혈청 IgG는 표준 비색계 샌드위치된 ELISA를 사용하여 정량화하였다. 염소 항-원숭이 IgG(Bethyl A140-202A) 및 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRP) 콘주게이트된 염소 항-원숭이 IgG(Bethyl A140-202P)를 각각 포획 및 검출 항체로서 사용하였다.　　시노몰구스 IgG(Cell Sciences CSI20163A)는 단백질 정량화 표준으로서 사용되었다.
K. 웨스턴 블롯 분석
새로 단리된 인간 CD8+ T 세포 및 293T-FcRH5 세포(2:1 비율)는 1㎍/ml의 1G7.v85/38E4.v1("1G7.v85 TDB"), 10A8/38E4.v1("10A8 TDB) 또는 항-gD/38E4.v1("항-gD TDB") TDB로 처리하고, 4℃에서 인산염 완충 생리 식염수(PBS)로 세정하고, RIPA 용해 완충제(Cell Signaling Technology)로 용해시켰다. pSLP76(Ser376) 및 SLP76은 표준 웨스턴 블롯 방법 및 항체를 사용하여 검출하였다.
결과
A. FcRH5 TDB의 결합 친화도
생성된 FcRH5 TDB 중에는 38E4.v1, 40G5c 및 38.E4.v11을 포함하여, FcRH5 결합 도메인으로서 클론 1G7을, CD3 결합 도메인으로서 선택된 클론을 포함하는 분자들이 있었다. 항체 hu1G7.v1.1("1G7.v1.1 TDB"), hu1G7.v1.2("1G7.v1.2 TDB"), hu1G7.v1.3(1G7.v1.3 TDB"), hu1G7.v1.4("1G7.v1.4 TDB"), hu1G7.v1.5("1G7.v1.5 TDB"), hu1G7.v1.7("1G7.v1.7 TDB"), hu1G7.v1.13("1G7.v1.13 TDB") 및 hu1G7.v1.13.1("1G7.v1.13.1 TDB")는 항-CD3 38E4.v1 아암을 갖는 FcRH5 TDB로서 생성되고, 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이, 가용성 FcRH5 단백질 단편예 대해 높은 친화도를 갖는 것으로 BIACORE®에 의해 계측되었다(표 13). "크놉" 돌연변이체를 포함한 절반 항체 포맷으로 1G7.v85 및 1G7.v87의 발현 테스트는 재해 바 이상의 역가를 제공했다(도 8).
8개의 선택된 친화도 성숙된 변이체의 TDB 포맷으로의 친화도 평가
가변 영역 카테고리 항체 K D
친계(뮤린 가변 영역) 1G7 TDB(평균, n = 3) 5.4 nM

1G7.v1의 부위 지시된 돌연변이생성		 1G7.v1.1 TDB 2.7 nM
1G7.v1.2 TDB 2.6 nM
1G7.v1.3 TDB 1.5 nM
1G7.v1.4 TDB 1.4 nM

집중 파아지 항체 라이브러리(라이브러리 주형 = 1G7.v1)		 1G7.v1.5 TDB 1.1 nM
1G7.v1.7 TDB 0.6 nM
1G7.v1.13 TDB 1.2 nM
1G7.v1.13.1 TDB 0.9 nM
B. FcRH5 TDB의 결합 및 교차 반응성
인간 FcRH5, 시노몰구스 FcRH5, 인간 FcRH1, FcRH2, FcRH3, FcRH4 형질감염된 마우스 SVT2 세포를 FcRH5 TDBS의 결합 및 교차-반응성을 시험하기 위해 사용하였다. 방법을 하기와 같이 수행하였다. 배양된 SVT2 세포를 비-효소 세포 해리 완충제(Sigma, #C5914)를 사용하여 상승시켰다. 1x105 세포를 100μL에 현탁시키고, FcRH5 TDB와 함께 3㎍/㎖에서 항온처리하였다. 이어서, 세포를 FACS 완충제(PBS, 1% BSA, 2mM의 EDTA)로 세정하고, 염소-항-인간 Fc PE(Jackson Immunoresearch, #109-116-170)와 함께 1:100 희석으로 항온처리하였다. 유동 세포측정 분석을 FACSCalibur 상에서 수행하기 이전에, 세포를 FACS 완충제로 2회 세정했다.
뮤린 1G7의 인간화 및 친화도 성숙 후, 8마리의 친화도 성숙된 변이체가 TDB 포맷으로 생성되었다. 최적화된 1G7 TDB는 항-CD3 아암으로서 38E4.v1을 갖는 "크놉-인투-홀" 포맷으로 생성되었다. 모두 8개의 변이체는 TDB 포맷으로 BIACORE®에 의해 뮤린 1G7 TDB에 비해 5 내지 15배 증가된 친화도를 나타냈다(표 13). 모든 변이체는 FcRH2 또는 FcRH3에 대한 상이한 정도의 양성 결합과 함께, FcRH1 또는 FcRH4에 대해 음성 결합을 입증하였다. 1G7.v1.4 TDB는 FcRH2 및 FcRH3 표 14)에 대한 적어도의 교차-반응성을 나타냈다. 상이한 항-FcRH5 아암(즉, 1G7, 1G7.v85 또는 1G7.v1.4)을 함유하는 FcRH5 TDB의 FcRH3에의 결합도 또한 FACS에 의해 평가하였다(도 9a).
FcRH5 TDB 결합 및 교차-반응성
TDB SVT2-
FcRH1		 SVT2-
FcRH2		 SVT2-
FcRH3		 SVT2-
FcRH4		 SVT2-
FcRH5		 SVT2-시노몰구스(Cyno)FcRH5
1G7 - - - - + +
1G7.v1.1 - + + - ++ ++
1G7.v1.2 - +/- + - ++ ++
1G7.v1.3 - + + - ++ ++
1G7.v1.4 - +/- +/- - ++ ++
1G7.v1.5 - + + - ++ ++
1G7.v1.13 - + + - ++ ++
1G7.v1.7 - + + - ++ ++
1G7.v1.13.1 - +/- + - ++ ++
huFcRH5 및 huFcRH3에 결합하는 1G7.v1.4, 1G7.v85 및 1G7 TDB의 능력을 BIACORE® 분석에 의해 평가하였다(도 10a-10d). 1G7.v85 TDB 및 1G7.v1.4 TDB의 친화도는 필적할 만했다. 1G7.v1.4 TDB는 각각 2.4nM 및 ~80nM의 KD 로 인간 FcRH5 및 인간 FcRH3에 결합되고, 1G7.v85 TDB는 각각 2.4nM 및 ~90nM의 KD 로 인간 FcRH5 및 인간 FcRH3에 결합된다(도 10a-10d). 추가의 항-FcRH5 변이체인 hu7D8.L1H2, 17B1-VH66, 17B1 및 15G8(도 11a 내지 13b에 제시된 서열)도 또한 항-CD3 아암 38E4.v1을 갖는 TDB 포맷으로 생성되었다. hu7D8.L1H2, 17B1 및 15G8 TDB는 인간 및 시노몰구스 FcRH5에 대한 결합을 시험하였다. 결과는 도 14 및 표 4에 제시된다.
인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5에 대한 1G7.v85 TDB 및 1G7.v93 TDB 결합의 비교는 BIACORE® 분석에 의해 수행되었다(도 15). 1G7.v85 TDB는 인간 FcRH5에 대한 결합에 대해 2.1 nM의 KD 를, 시노몰구스 FcRH5에 대한 결합에 대해 7.8 nm의 KD 를 나타냈다. 1G7.v93 TDB는 인간 FcRH5에 대해 1.1nM, 시노몰구스 FcRH5에 대해 8.1nm의 KD 를 나타냈다.
역학적 특성화 실험을 수행하였다(참조: 표 8). 이러한 실험에서, 인간 TDB 항체 포맷에서 정제된 항체에 대한 가용성 FcRH5 단백질 단편의 결합은 6개의 상이한 비-제로 농도로 분석했다(1:3 희석 시리즈, 하나의 농도는 복제로서 2회 주입했다). 유속은 40㎕/분으로 설정하고, 회합 및 해리를 600초 동안 모니터링했다. hIgG 포획 포멧을 사용한 1가 1G7.v85 TDB 친화도의 동력학적 분석 및 1:1 결합 모델은 각각 하기를 산출하였다: 인간 FcRH5 및 시노몰구스 FcRH5에 대하여, 각각 2.4 nM 및 6.8 nM의 KD (도 16a-16b). 1G7.v85 TDB에서 Val로 산화 경향이 있는 Met-64HC 의 돌연변이는 결합 친화도에 영향을 미치지 않았다.
C. 시험관내 세포 독성 검정
인간화 FcRH5 TDB 변이체의 기능을 평가하기 위해, 내생적으로 FcRH5를 발현하는 FcRH5 MOLP-2 세포에 대한 세포 세포독성을 시험하였다. 모든 변이체는 유사한 표적 세포 사멸 활성을 나타냈지만, 뮤린 1G7에 비해 활성이 유의하게 증가되었다(도 17a-17b). 변이체 1G7.v1.4 TDB의 경우, EC50은 뮤린 1G7 TDB(n = 10)에 비해 5 내지 13배 개선되었다.
다른 패밀리 구성원에 대한 높은 세포독성 활성 및 낮은 교차 반응성에 기초하여, 1G7.v1.4 TDB는 추가 분석을 위해 선택하였다. TDB 분자의 안정성을 증가시키기 위해, 1G7.v1.4 아암은 잠재적 산화 부위에서 돌연변이화되어 연마된 버전의 1G7.v85를 생성하였다. 두 버전 1G7.v1.4 및 1G7.v85는 T 세포 활성화, MOLP-2 표적 세포 사멸 활성, 시노몰구스 B 세포 시험관내 고갈 및 시노몰구스 형질 세포 고갈을 포함하는 다양한 검정에서 TDB 포맷으로 평가했다(도 18a-18d). 모든 시험된 검정에서, 1G7.v85 TDB는 1G7.v1.4 TDB와 구별되지 않게 거동했다.
인간화된 및 연마된 1G7.v87 TDB도 또한 1G7.v85 TDB와 비교했다. 더 낮은 친화도와 일치하여, 1G7.v87 TDB는 유동 세포 계측법 분석에 의해 지시된 바와 같은 1G7.v85 TDB에 비해 인간 FcRH5에 대해 감소된 결합을 나타냈다 (도 19a). 1G7.v87은 또한 FcRH3에 대한 음성 교차-반응성을 나타냈다.
1G7.v87 TDB 및 1G7.v85 TDB의 표적 세포 세포독성은 4명의 건강한 공여자로부터 MOLP-2 CD8+ 세포 상(도 19b) 및 PBMC 상에서 평가하였다 (도 19c). 모든 공여자에서, 1G7.v87 TDB는 인간 B 세포 사멸에 대해 음성인 반면, 1G7.v85 TDB는 어느 정도의 양성 사멸 활성을 나타냈다. 4명의 건강한 공여자로부터 시노몰구스 PBMC도 또한 시험하였다(도 19d). 1G7 TDB의 세 가지 버전의 EC50의 순위는 세 공여자 모두에서 일치한다. 1G7.v87 TDB는 뮤린 1G7 TDB에 필적할 만하지만, 1G7.v85 TDB보다 훨씬 낮은 활성을 갖는다. 1G7.v87 TDB는 시험관내에서 시노몰구스 B 세포 상의 1G7.v85 TDB보다 훨씬 약한 사멸 활성을 나타냈다. 1G7.v85 TDB는 또한 인간의 NK 세포 활성에 대해 평가하고, 20㎍/㎖ 이하(≤)의 사멸 활성을 갖지 않는 것으로 밝혀졌다(도 9b). 1G7.v85 TDB의 EC50은 1G7.v87 TDB보다 5 내지 8배 더 높았다.
D. FcRH5 TDB의 안정성의 분자 평가
친화도 성숙 이전에 hu1G7.v1의 화학적 안정성은 Met-64HC 및 Trp-52HC에서 산화 민감성을 나타내었다. 1G7.v85 TDB 샘플은 AAPH 및 광 응력 테스트를 통해 스트레스화하고, BIACORE®에 의해 FcRH5 결합에 대해 평가하였다. 1G7.v85 TDB는 무-스트레스 대조군과 비교하여 AAPH 및 광 스트레스 테스트 둘 다 후에 FcRH5에 대해 감소된 결합을 입증했다(도 20a-20d). 1G7.v85 TDB의 단량체 안정성 및 전하 뷸균일성은 2주 동안 낮은 pH 완충제(his-아세테이트, pH 5.5)에서 스트레스화된 후, 각각 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 및 이미지화된 모세관 등전점 포커싱(icIEF)에 의해 평가했다(도 21a-21b). 단량체 피크 손실의 관찰 가능한 변화는 단량체 안정성(0.1%) 및 전하 불균일성(7.7%) 모두에 대해 작았다(도 21a-21b). 또한, 낮은 pH 응력 2주 후에 1G7.v85 TDB의 경쇄 또는 중쇄의 질량 변화는 관찰되지 않았다(도 22a-22b). 30℃에서 2주 동안 열 응력 후, 단량체 피크 손실은 SEC에 의해 0.1%, icIEF에 의해 8%였다.
E. 막 근위 에피토프는 FcRH5 TDB의 효율적인 TCR 신호전달 및 사멸 활성에 필요하다
FcRH5 TDB에 의한 자극시 T 세포 수용체(TCR)의 포획을 유도하는 분자 이벤트를 특성화하기 위해, 초기 이벤트가 수용체 활성화가 조절된 방식으로 조사되도록 유도하도록 하는 재구성된 시스템을 사용하였다(James et. al. Nature. 487:64-69, 2012). 건강한 공여자 CD8 세포를 사용하여, 1G7/UCHT1.v9 TDB는 TCR 신호전달의 지표인 매우 강력한 SLP76 인산화를 유발하고, 표적 세포의 효율적인 사멸을 매개했다(도 23a-23b; EC50 = 0.5 nM). 대조적으로, 막-원위 에피토프를 표적화하는 항-gD TDB는 검출 가능한 TCR 신호전달을 유발하지 않았고, T 세포 사멸을 매개할 수 없었다(도 23a-23b). 이는 또한 TDB 활성이 1G7 및 gD 에피토프를 보유한 심하게 절단된 표적을 발현시킨 세포를 표적화함으로써 에피토프의 위치 및 세포외 도메인의 크기에 의해 지시되었다(도 23c)는 것을 식별하였다. 근위부 1G7/UCHT1.v9 TDB의 활성은 25배 증가되었고(도 23d; EC50 = 20pM), gD TDB는 ECD에 의해 유발된 간섭이 제거될 때 세포의 사멸을 효과적으로 매개할 수 있었다(EC50 = 0.19nM). 세포주의 활성 차이의 원인이 되는 차등 표적 발현 수준의 가능성은 FACS 분석에 의해 제외되었다(도 24a).
사멸 활성의 차이가 특정 항체 클론의 특성보다 에피토프에 관련되었음을 입증하기 위해, TDB 포맷에서 FcRH5에 대한 막 근위 도메인을 표적화하는 총 5개의 고유의 항체 클론을 시험하고, 각 클론의 활성이 10A8에 비해 ~20배 더 높았다는 것을 입증했다(도 23e). 다발성 골수종에서 FcRH5의 내인성 발현 수준은 낮고(예: ~100 내지 ~2000 사본/세포), MOLP-2 골수종 세포주(예: ~2,200 사본/세포)에 필적할 만하다. T 세포가 MOLP-2 세포를 사멸하도록 재표적화된 경우, 막 근위 TDB만이 MOLP-2 세포의 사멸을 유도했다. 10A8 TDB를 사용하는 FcRH5의 중간 영역의 표적화는 골수종 세포의 사멸에 필요한 충분히 높은 TCR 포획을 유도하지 않았다(도 24b).
F. FcRH5 TDB는 표적 의존성 세포 사멸 및 T 세포 증식을 유도한다
도 18a에서, 1G7.v1.4 TDB 및 1G7.v85 TDB는 구별가능하지 않은 T 세포 활성화 능력을 갖는 것으로 밝혀졌다. 1G7.v85 TDB는 1G7 에피토프 특이성 및 시노몰구스 교차-반응성에 대해 평가했다(도 25a-25c). 1G7/38E4.v1 TDB("1G7 TDB")는 예상된 바와 같이 MOLP-2 세포, 건강한 공여자 B 세포, 골수 형질 세포 및 원발성 골수종 종양 세포에 결합된다(도 26a-26d). 1G7 TDB 활성의 전임상 분석은 건강한 공여자 CD8 세포를 이용하여 작용 기전의 특성화에 의해 개시되었다. 표적 발현 세포의 1G7 TDB 처리는 용량 의존성 T 세포 활성화를 유발했다(도 27a). 1G7 TDB의 세포독성 활성은 양성 표적 세포에 대해 독점적이었고, FcRH5 발현 수준과 상관 관계가 있었다(도 27b). TDB 1G7 및 표적 세포를 사용하는 자극에 의한 T 세포의 활성화는 T 세포의 강력한 증식을 유발했다. 5일 동안, CD8 세포의 95%는 형광 염료 CSFE의 희석에 의해 입증된 바와 같이 최대 6개의 세포 분열을 경험했다(도 27c-27e). TDB의 세포독성 활성에 대한 항-CD3 아암 및 Fc 도메인의 기여도를 추가로 평가하였고, 세포독성 활성을 달성하기 위해 고친화도 항-CD3 아암이 필요한 한편, Fc 도메인은 필요하지 않았음이 밝혀졌다(도 27f-27g).
G. FcRH5 TDB는 정상 형질 세포 및 환자 유래 원발성 골수종 세포의 강력한 사멸을 매개한다
CD38+CD138+ 다발성 골수종 세포 및 정상 골수 형질 세포에서 FcRH5의 발현은 1G7.v85 TDB 및 FACS를 이용하여 연구하였다. 모든 환자 유래 종양 세포 및 모든 정상 형질 세포는 모든 샘플에서 FcRH5를 발현시켰으며, 이는 골수종에서 100% 유병률을 시사한다(도 28a). 상당한 환자 간 발현 수준의 가변성이 골수종에서 검출되었다. 일반적으로, 종양 세포에서의 발현 수준은 정상 형질 세포에 비해 유의하게 상승되지 않아서 종양 세포 특이적 정상 형질 세포 보존성 FcRH5 TDB를 개발할 가능성은 실현 불가능했던 것을 시사한다. 정상 B 세포에서의 발현 수준은 정상 형질 세포 및 다발성 골수종 종양 세포에 비해 지속적이고 상당히 낮다.
FcRH5 유전자는 1q21에서 염색체 중단점에 위치되어 있다(참조: Hatzivassiliou et al. Immunity. 14:277-289, 2001). ~20회의 원발성 다발성 골수종 생검의 분석은 FcRH5의 RNA 발현과 1q21 증가 사이의 중요한 연관성을 입증하였고(도 28e), 염색체 전좌가 고위험 골수종 환자에서 FcRH5 과발현을 유도할 수 있음을 입증하였다.
형질 세포를 사멸하는 1G7.v85 TDB의 능력은 건강한 공여자의 골수 흡인물로부터 단리된 골수 단핵 세포(BMMC)를 표적화하여 분석하였다(도 28b). 1G7.v85 TDB는 형질 세포의 용량 의존적이고, 매우 효과적이며 강력한(EC50 = 85-180pM) 사멸을 유도했다. 　다발성 골수종 환자의 BMMC가 1G7.v85 TDB 처리에 적용될 때(도 28c), 유사한 강력한 활성이 검출되었다. 생애 치료 이력과 상관 없이 골수종 세포의 거의 100% 사멸이 높은 효능(EC50 = 60 내지 1200pM)으로 검출되었다.
FcRH5 발현이 골수종에서 가변적이고(도 28a) 1G7.v85 TDB 활성이 발현 수준과 상관되기 때문에(도 28d), 발현 스펙트럼의 하한 말단의 환자가 FcRH5 TDB에 반응하는지가 예측될 것인지의 여부도 또한 조사되었다. MOLP-2 골수종 세포주는 형질 세포 및 원발성 MM 세포에서의 평균 발현과 유사한 FcRH5의 발현 수준을 갖는 기준 세포주인 것으로 식별되었다(도 28a). 본 발명자들은 또한 매우 낮은 수준의 표적을 발현하는 여러 암 세포주를 식별하였고, 스캐챠드 분석을 사용하여 세포당 FcRH5의 수를 계측하였다. 이들 세포주 중의 FcRH5 결합 부위의 범위는 세포당 2200으로부터 160만큼 낮게 가변적이었다. 매우 낮은 표적 사본 수에도 불구하고, 1G7.v85 TDB는 모든 시험 세포주의 강력한 사멸을 유도했다(EC50 = 2 내지 230pM). 점유도 산출은, ~50개 정도의 TDB 분자(MOLP-2에서 2% 점유도; EC50 = 58pM)가 T 세포 활성화 및 표적 세포 세포사멸을 유도하는데 충분하였음을 나타냈다.
요약하면, FcRH5는 모든 골수종 환자에서 발현된다. FcRH5 TDB는 pM 용량에서 인간 형질 세포 및 환자 유래 원발성 골수종 종양 세포를 사멸할 수 있다. 매우 적은 TDB가 T 세포 활성을 재지시하는데 필요하기 때문에, 분자는 매우 낮은 표적 발현으로 세포를 강력하게 사멸한다. 결과는, FcRH5 TDB가 골수종 환자에서 광범위하게 활성일 잠재력을 갖고 FcRH5 발현 수준에 기초한 치료에서 환자를 제외하는 것을 지지하지 않는다는 것을 시사한다.
H. 시노몰구스 원숭이(시노)는 FcRH5 TDB에 대한 적절한 안전성 및 효능 모델이다
말초 B 세포 및 골수 세포 형질 세포의 FACS 분석은, FcRH5가 인간과 유사한 시노몰구스에서 B 세포 계통 전반에 걸쳐 발현된다는 것을 식별했다(도 29a-29b; Polson et al. Int . Immunol . 18:1363-1373, 2006). 인간 및 시노몰구스 FcRH5의 아미노산 서열은 89% 동일하고, 1G7.v85 TDB는 필적할 만한 친화도로 시노몰구스 FcRH5 및 CD3에 결합한다. 시노몰구스 FcRH5를 발현하는 표적 세포 또는 인간 FcRH5를 발현하는 MOLP-2 세포의 시험관내 처리는 필적할 만한 효율로 인간 또는 시노로부터의 말초 T 세포를 사용하여 강력한 사멸을 유발했다(도 29c-29d). 시노로부터의 PBMC/BMMC 샘플에 1G7.v85 TDB를 첨가하면 시노몰구스 B 세포(도 29e) 및 골수 형질 세포(도 29f)의 용량 의존적이 강력한 사멸을 유발했다. 도 18c에서, 1G7.v1.4 TDB 및 1G7.v85 TDB는 구별가능하지 않은 시노몰구스 형질 세포 사멸 능력을 갖는 것으로 밝혀졌다. 이러한 결과는 시노몰구스가 항-FcRH5/CD3에 대한 적절한 안전성 및 효능 모델임을 입증한다.
실시예 4. 예시적인 FcRH5 TDB의 생체내 특성화
물질 및 방법
A. 뮤린 모델에서의 생체내 효능 연구
a. huNSG / MOLP -2 마우스 이종 이식 모델
암컷 인간화된 NOD.Cg-Prkdcscid II2rgtm1Wjl/SzJ(NOD/scid 감마; NSG) 마우스를 잭슨 실험실에서 입수하였다. 세포 접종일에 5마리 동물을 HBSS/마트리겔에서 오른쪽 옆구리에 피하로 0.2mL의 MOLP-2 종양 세포를 100,000,000개 세포/mL의 농도로 접종했다. 종양 용적이 100-250 mm3 의 용적 범위에 도달하자마자, 동물을 비히클 및 치료 그룹의 두 그룹으로 무작위화하고, 그 때(0일) 제1 치료를 투여하였다. 모든 치료는 총 4개 용량에 대해 정맥내(i.v.) 꼬리 정맥내 주사로 1주일에 한 번 투여하였다. 비히클 그룹은 0.1ml의 20mM 히스티딘 아세테이트, pH 5.5, 240mM 수크로스, 0.02% TW-20 완충제로 처리하였다. 치료 그룹은 0.5㎎/㎏의 농도로 0.1ml의 1G7.v85 TDB로 처리하였다. 종양은 연구 기간 동안 캘리퍼스로 주당 1 내지 2회 측정하고, 동물의 체중은 1주일에 적어도 한 번 측정했다. 본 연구 기간 동안, 임상 관찰은 동물의 건강을 모니터링하기 위해 1주일에 2회 실시하였다.
B. 시노몰구스 원숭이의 독성 연구
항-FcRH5 TDB의 내성, 독성 프로파일, 약동학(PK), 및 약물 동력학(PD)을 Charles River Laboratories(CRL)의 나이브 수컷 시노몰구스 원숭이(시노)로 평가하였다. 시노몰구스를 비히클, 1, 2, 또는 4 mg/kg 1G7.v85 TDB의 단일 용량, 정맥내 주입 (1h)으로 처리하였고, 처리로부터 7일 후 검시하였다. 동물은 처음 다섯 시간 동안 및 종료시 상세한 임상 관찰, 호흡 수 및 체온을 면밀히 모니터링했다. 케이지 측면 임상 관찰 및 체중은 매일 수집했다. 혈액 샘플은 대퇴 정맥 사전 연구를 통해 정맥 천자에 의해 혈액학, 혈청 화학, 응고, 및 PK 전체 항체 수준) 및 PD 종점의 분석을 위한 연구 전반에 걸쳐 선택된 시점에서 수집하였다 . PD는, 사이토 카인(IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-12/23, IL-13, IL-17, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, TNF-α 및 MCP-1)의 측정, T 림프구, B 림프구, NK 세포, 활성화 T 림프구, PD-1의 유동 세포 계측법 및 시노몰구스 IgG의 순환으로 이루어진다. 골수는 상완골 사전 연구에서 유동 세포 계측법에 의한 B-림프구 및 형질 세포의 평가를 위해 8일째 부검 이전에 흡인에 의해 마취된 동물에서 수집되었다. 부검시, 기관 중량을 측정하고, 선택 기관 및 조직을 육안 및 현미경 검사에 의해 철저히 검사했다. 비장, 장간막 및 하악골 림프절은 T 림프구, B 림프구 및 NK 세포에 대해 평가하였다. 모든 절차는 동물 복지법, 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 가이드 및 실험 동물 복지 사무실에 따라 수행되었다.
C. 시노몰구스 원숭이 및 마우스 내 PKPD 연구
혈청 중의 FcRH5 TDB의 농도는 일반적인 ELISA에 의해 계측되었다. 양 항-인간 IgG 항체를 포획 시약으로서 사용하고, 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRP)에 콘주게이트된 양(sheep) 항-인간 IgG를 검출 시약으로 사용했다. 　이용 가능한 샘플에서 경시적 혈청 농도의 분석은 IV 볼러스 입력 모델(Phoenix™ WinNonlin®, Version 6.3; Pharsight Corporation; Mountain View, CA)로 비-구획에 의해 분석하였다. 　공칭 샘플 수집 시간과 공칭 용량 농도는 데이터 분석에 사용하였다. 　모든 TK 분석은 개별 동물 데이터에 근거했다.
결과
A. FcRH5 TDB는 인간 면역 세포로 재구성된 마우스에서 확립된 MOLP -2 종양의 성장을 억제한다
항-CD3 항체가 마우스 CD3과 교차 반응하지 않고, FcRH5 상동유전자가 마우스에 존재하지 않기 때문에 마우스의 FcRH5 TDB의 항-골수종 활성을 모델링하는 것은 도전적이다. 따라서, 재구성된 인간 면역 시스템을 갖는 마우스 모델은 조사된 마우스(huNSG 마우스)로 CD34+ 선택된 인간 조혈 줄기 세포를 이식시킴으로써 확립되었다. huNSG 마우스의 비장으로부터 수거된 인간 CD8+ 세포는 건강한 공여자로부터의 인간 말초 CD8+ 세포에 필적할 만한 효율로 MOLP2 세포를 시험관내에서 사멸할 수 있었다(도 30a). 이식 후 20주에 huNSG 마우스에 500만개의 MOLP-2 세포를 피하 접종하였다. 확립된 100-200 mm3 의 종양을 갖는 마우스를 비히클 또는 0.5mg/kg의 FcRH5 TDB의 단일 IV 용량으로 처리하였다. FcRH5 TDB 치료는 모든 동물에서 종양 퇴화를 유발하였고(도 30b), FcRH5 TDB 치료가 생체내 종양 성장을 억제한다는 것을 도시한다.
B. FcRH5 TDB는 긴 혈청 반감기를 갖는다
단일 용량 연구는 비인간 영장류에서 1G7.v85 TDB의 안전성, 효능, 약물 동력학(PK) 및 약력학(PD) 특성을 평가하기 위해 설계되었다. 시노는 비히클 또는 1 내지 4㎎/㎏의 1G7.v85 TDB의 단일 느린 주입 정맥내 투여로 처리하였다. 동물은 부작용에 대해 면밀히 모니터링하였다. 혈액 샘플을 사이토카인 분석, 임상 병리 분석 및 PK/PD 반응을 위해 0, 2, 6 및 24시간에 수집하였다. 연구는 치료를 투여한 후 7일째에 종료되었다. FcRH5 TDB는 1 내지 4mg/kg 사이에서 용량 비례 노출(Cmax 및 AUC)을 입증하고, 모든 코호트(도 31a)에서 29 내지 33ml/일/kg을 제거하고, 4mg/kg 용량 수준에서 Cmax는 129㎍/ml이었다. 이는 인간 형질 세포 및 MOLP-2의 시험관내 사멸 EC50에 도달하는 데 필요한것보다 ~2,000배 더 높다. PK 연구는 비결합성인 SCID.bg 마우스에서 수행되었고, 1G7.v85 TDB는 항-gD TDB와 필적할 만한 청소율 비율을 갖는 것으로 밝혀졌다(도 31b). 수용체 점유율 산출은 모든 투여량 수준에서 Cmax에서 말초 혈액 B 세포에서 거의 포화된 FcRH5 결합을 시사했다(도 32d). 이러한 결과는, 1G7.v85 TDB가 긴 생체내 반감기를 가지며, 매주 또는 덜 빈전한 투약 일정을 지지함을 입증하였다.
C. FcRH5 TDB는 시노몰구스에서 B 세포 및 골수 형질 세포를 고갈시킨다
말초 혈액의 FACS 분석은 모든 용량 수준에 대한 강력한 약리학적 효과를 입증하였다. 1G7.v85 TDB 치료는 24시간 이내에 T 세포 활성화 및 일시적인 림프구 감소증(변연화 반응)을 유발했다 (도 31c-31d). B 세포는 투여 후 7일 동안 혈액에서 검출되지 않았고, 그들이 1G7.v85 TDB에 의해 고갈되었음을 시사한다(도 31e). 대조적으로, CD4+ 및 CD8+ 세포는 연구 종료까지 회수되었다 (도 32a-32b). 모든 용량 수준은 비장 및 골수에서 B 세포의 완전한 고갈을 유발하였다 (도 31f 및 31h). FcRH5 치료는 림프절로부터 또한 B 세포의 강력한 용량 의존적 고갈을 유도했다(도 31g 및 32c).
생체 내에서 시노몰구스 골수 형질 세포의 고갈은 항-FcRH5/CD3의 전임상 개발에서 중요한 효능 종점이다. 형질 세포의 완전한 고갈은 2 내지 4㎎/㎏ 용량으로 처리된 동물에서 검출되었다(도 31i). 1G7.v85 TDB 치료는 형질 세포 고갈로부터 생성되는 예상된 2차 결과인 시노몰구스 IgG의 용량 의존적 감소를 또한 유발하였다. 이론적으로, 형질 세포의 완전한 고갈은 IgG 수준을 7일째까지 ~30 내지 40% 감소시켜야 한다. 시노몰구스 IgG에서 측정된 감소는 2mg/kg 그룹에서 37%였고, 4mg/kg 그룹에서 44%였다(도 31j). 　요약하면, 1G7.v85 TDB는 시노몰구스에서 강력한 PD 반응을 유도했고, 작용 기전과 일치한다. 완전한 형질 세포 고갈은 골수 미세 환경에서 효능의 확실한 증거를 제공한다.
D. FcRH5 TDB는 시노몰구스에서 충분히 내성이다
1G7.v85 TDB는 ≤ 4mg/kg 용량 수준에서 시노몰구스에서 충분히 내성이었다. 검출된 경도/중등도 부작용은 모든 용량 수준에서 유사했고, 본 발명자들은 명확한 용량 반응을 관찰하지 못했다. 임상 관찰은 투여 후 4시간 이내에 체온의 가역적 증가를 0.4 내지 1.6℃ 범위로 제한하였다. 혈액에 미치는 영향은 변연화(margination)에 기인한 예상된 급성 및 가역적 림프구 감소증으로 구성되었다. 예상된 바와 같이, 급성 및 가역적 전염증 상태의 증거(증가된 CRP, 피브리노겐, 프로트롬빈 시간 및 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간)가 검출되었다. 치료는 ALT, AST 및 총 빌리루빈의 가역적 증가를 일으켰다.
작용 기전과 일치하게도, 1G7.v85 TDB는 빠른 일반적으로 경도/중등도 사이토카인의 방출을 유도했다 (도 33a-33f). 모든 용량 수준은 2 내지 6시간에 이러한 카운터(counter) (IL1R) 피크에 대응하는 전염증 반응(IL-6, IL-5, IFN-g, IL-2, IL-13, G-CSF 및 MCP-1 포함) 및 항-염증성 반응을 유도했다. 모든 사이토카인은 24시간 이내에 정상 수준으로 반전되었다. 광범위한 또는 연장된 사이토카인 방출의 어떤 징후도 나타나지 않았다. 중추 신경계(CNS)의 상세한 분석을 포함한 광범위한 조직병리학적 분석은 중요한 기관 독성을 나타내지 않았다. 　요약하면, 최대 허용 용량은 연구에서 도달되지 않았다. 1G7.v85 TDB는 표적을 포화시키고 B 세포 및 형질 세포의 완전한 고갈에 충분할 것으로 예상되는 용량 수준에서 충분히 내성이었다. 어떤 용량 반응도 부작용에서 검출되지 않았다.
실시예 5. FcRH5 병용 요법
가능한 FcRH5 병용 요법을 조사하기 위해, FcRH5 TDB는 두 개의 예시적 PD-1 축 결합 길항제 각각을 조합하여 시험하였다. 이러한 실험은, PD-1/PD-L1 피드백 신호전달이 FcRH5 TDB 매개된 사멸을 감소시키는 반면, PD-L1 차단은 이러한 억제를 극복하여 개선된 치료 효능을 유도한다는 것을 입증하였다.
물질 및 방법
A.항체
다르게 언급된 것을 제외하고, 유동 세포 계측법을 위해 표지된 모든 항체는 BD Bioscience에서 구입했다. 사용된 항-PD-1 항체는 KEYTRUDA®(펨브로리주맙)이고, 항-PD-L1 항체는 Genentech, Inc.에서 생성되었다. 염소 항-인간 IgG와 염소 항-마우스 IgG는 Jackson Immunoresearch에서 구입했다. 항-PC-FITC(클론 Vs38c)는 DAKO에서 구입했다.
B.항-PD-L1에 의한 PD-1 유도 및 세포독성 검정
새로 단리된 인간 CD8+ T 세포를 MOLP-2 세포와 1:1 비율로 혼합하고, 1000ng/ml의 1G7.v85 TDB의 존재하에 48시간 동안 공배양했다. 세포를 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC) 표지된 항-CD8 항체("항-CD8-FITC"), 피코에리트린(PE) 콘주게이트된 항-CD69 항체("항-CD69-PE") 및 알로피코시아닌(APC) 콘주게이트된 항-PD-1 항체("항-PD-1-APC")로 염색하고, 유동 세포 계측법으로 분석했다. FcRH5 및 PD-L1를 발현하는 HEK-293T 세포("293-FcRH5-PD-L1 세포")의 세포독성 검정은 10mg/ml의 항-PD-L1 또는 항-PD-1 항체의 존재 또는 부재하에, 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 설정하고, 유동 세포 계측법으로 분석했다.
C. 세포 배양 및 무변성 세포주 생성
1G7.v85 TDB 활성에 대한 PD-1/PD-L1 신호전달의 효과를, FcRH5를 암호화하는 렌티바이러스로 HEK-293T 세포를 감염시키고, 이후 리포펙타민(Invitrogen)을 사용하여 인간 PD-L1 암호화 플라스미드의 형질감염시킴에 의하여 평가하였다.
D. 시험관내 세포독성 및 T 세포 활성화 검정
표적 세포는 제조업자의 프로토콜(Life Technology, #C34554)에 따라서 카르복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지화했다. CFSE 표지된 표적 세포 및 정제된 CD8+ 세포를 3:1 효과기 세포 대 표적 세포(E:T) 비율로 혼합하고, 1G7.v85 TDB와 함께 24 내지 48시간 동안 항온처리했다. 항온처리의 종료 후 세포를 자동화 포맷으로 FACSCalibur 상에서 유동 세포 계측법으로 분석하였다. 살아 있는 표적 세포의 수는 CFSE+/PI-음성 세포 상에서 게이팅하여 계수하였다. 세포 독성의 백분율은 다음과 같이 산출하였다: % 세포 독성(TDB 부재하에 살아 있는 표적 세포 수 - TDB 존재하에 살아 있는 표적 세포 수)/(TDB 부재하에 살아 있는 표적 세포 수) X 100.
결과
A. PD-1/PD-L1 차단은 FcRH5 TDB의 활성을 증진시킨다
강한 TCR 자극 신호는 T 세포 활성을 제한하는 면역억제성 피드백을 유발할 수 있다. PD-1/PD-L1 경로는 이러한 피드백의 중요한 구성요소이며, 그리고 몇몇 종양 징후에서 치료적으로 검증된 면역 회피 기전이다. PD-L1은 자주 골수종 종양 세포에 의해 발현되고(참조: Gorgun et al. Amer . Assoc . for Cancer Res. 21:4607-4618, 2015), 이의 신호전달은 골수종 환자에서 T 세포 활성을 제한할 수 있다. PD-1은 T 세포 활성화시 유도된 휴지 T 세포에서 부재하고, 만성 감염에서 T 세포 활성을 제한한다 (Zou et al. Science Tran . Med. 8:328rv324, 2016). FcRH5 발현 세포의 존재하에 건강한 인간 공여자 CD8+ 세포의 1G7.v85 TDB 자극(48시간)은 T 세포에서 유의한 PD-1 유도를 유발했다(도 34). 피드백 신호는 또한 생체내에서 활성화된다. PD-1 양성 T 세포에서의 상당한 증가가 모든 용량 수준에서 시노몰구스 T 세포에서 관찰되었다. PD-1 유도는 혈액, 비장, 림프절 및 골수 중 CD8+ 및 CD4+ 세포 모두에서 검출되었다 (도 35a-35b 및 36a-36d).
프라이밍된 CD8+ 세포에 의한 1G7.v85 TDB 매개된 표적 세포 사멸은 PD-1/PD-L1 길항제의 존재 및 부재하에서 평가하였다. PD-L1 발현 표적 세포를 사멸하는 CD8+ T 세포를 프라이밍하는 1G7.v85 TDB의 효율은 완만했다(도 37a). 항-PD-L1 항체를 사용하여 PD-1/PD-L1 신호전달을 차단하면 1G7.v85 TDB 매개된 사멸의 효율을 유의하게 증가시켰다(도 37a). 특정 실험에서, 프라이밍 CD8+ 세포는 293-FcRH5-PD-L1 세포와 혼합하고, 1G7.v85 TDB 단독으로 또는 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체(펨브로리주맙)와 조합하여 처리했다(도 37b). 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체(펨브로리주맙)와 조합 치료는 1G7.v85 TDB의 효능을 유의하게 증진시켰다. 두 조합 치료 방법의 EC50은 0.4ng/mL인 반면, 1G7.v85 TDB 단독 치료에 대한 EC50은 0.63mg/mL였다(도 37b).
이러한 결과는, T 세포의 1G7.v85 TDB 매개된 활성화가 시험관내 및 생체내에서 T 세포에서 PD-1의 유도를 유발한다는 것을 입증한다. 이러한 결과는, PD-1/PD-L1 신호전달이 FcRH5 TDB 매개된 사멸을 제한할 수 있고, PD-L1 차단은 이 억제를 극복하고 개선된 효능을 유발할 수 있는 있다는 것을 추가로 입증한다. 이러한 데이터는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 같은 PD-1 축 결합 길항제와 함께 FcRH5 TDB의 사용을 지지한다.
B. 덱사메타손은 FcRH5 TDB 활성에 영향을 미치지 않고 제1 용량 사이토카인 반응을 감소시킨다
표적 세포 사멸은 또한 항염증 및 면역억제 효과를 갖는 골수종 치료의 돌봄 표준(standard of care) 성분인 덱사메타손(Dex)의 존재 및 부재하에 평가하였다(도 38a). 완충제 또는 DMSO 중의 1G7.v85 TDB의 IC50은 각각 7pM 및 6pM이었다. 0.1μM 또는 1μM Dex의 존재하에, 1G7.v85 TDB에 대한 IC50은 각각 16pM 및 25pM이었다. Dex 조합 치료는 1G7.v85 TDB 효능에 대한 완만한 효과만을 갖고, IL-2, IL-6, TNF-α 및 IFN-γ 수준을 유의하게 감소시켰다. 이러한 결과는, 덱사메타손이 환자에서 제1 용량 사이토카인 반응을 완화시키기 위해 FcRH5 TDB 요법과 함께 사용될 수 있다는 것을 입증한다(도 38b).
실시예 6. FcRH5 비스 - Fab의 생산 및 시험
A. 티오 - Fab 및 힌지 - cys - Fab의 제조 및 단백질 생산
하기에 이미 기재된 바와 같이, 유리 설프하이드릴 그룹을 갖는 항체 단편을 제조하기 위해, 시스테인(Cys) 치환을 티오-mAb를 생성하기 위해 부위 지시된 돌연변이생성에 의해 경쇄 또는 중쇄의 가변 또는 불변 도메인 중의 다양한 위치에서 항체 작제물에 도입했다: Junutula et al. J. Immunol Methods 332(1-2):41-52, 2008. 티오-Fab은 티오-mAb를 25mM 트리스, pH 8.0에서 1㎎/mL로 희석시킨 후, 효소 대 항체의 1:1000(wt:wt) 비에서 Lys-C(Wako Chemicals USA, Inc., Richmond, VA)를 사용하여 37℃에서 1시간 동안 효소 소화에 의해 티오-mAb로부터 효소적으로 생성하였다. Lys-C 소화는 5μM의 프로테아제 억제제 토실-L-리신 클로로메틸 케톤(TLCK)(Bachem, Torrence, CA)으로 정지시키고, 50-mM 아세트산나트륨 완충제 및 0 내지 300-mM NaCl 10 칼럼 용적(CV) 구배를 사용하여 5mL Hi-Trap SP FF 칼럼(GE Healthcare, Piscataway, NJ) 상에서 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 이 방법에 의해 생성된 티오-Fab은 때때로 본원에서 "효소 티오-Fab"이라고 지칭된다. 또 다른 접근법에서, 가공된 Cys 잔기를 갖는 Fab를 암호화하는 DNA 작제물 또는 힌지 영역에 하나의 천연 Cys 잔기를 함유하는 중쇄 단편을 암호화하는 DNA 작제물을 플라스미드 발현 벡터에 서브클로닝하고, CHO 세포에서 직접 발현시켰다. 이 방법에 의해 생성된 티오-Fab은 때때로 본원에서 "재조합 티오-Fab"이라고 지칭된다. 세 번째 접근법은 가공된 Cys 잔기가 결여된 항체에 사용하고, IgG의 힌지 영역에 존재하는 천연 Cys 잔기(들)에 의존하였다. 이 방법은 "힌지-cys-Fab"을 생성하는데 사용되며, 이하 추가로 상세히 기재된다.
합성 반응에서 사용하기 위한 가공된 시스테인을 함유하지 않는 천연 항체로부터 힌지-cys-Fab의 제조를 위해, 도 39의 패널 1에 도시된 바와 같이, 하기와 같은 효소적 절차를 사용했다. FcRH5 및 CD3 친계 항체 모두를 pH 4.5에서 아세트산나트륨 완충제에서 펩신(1% w/w) 처리로 소화시켰다. 1시간 소화 후, F(ab')2 를 SP-HP 양이온 교환 수지 상의 포획에 의해 소화 혼합물로부터 단리시키고, 0 내지 1M NaCl의 10 CV 염 구배로 정제하였다. 이어서, F(ab')2 는 25mm MES, pH 5.8, 2mM EDTA 및 300mM NaCl을 함유하는 완충제에서 환원시켰다. 1mM TCEP로 환원 후, Fab는 도 39의 패널 2에 도시된 바와 같이, 5mM DHAA의 첨가에 의해 산화시켜 중쇄와 경쇄 사이에 디설파이드를 다시형성시켰다. 통상적으로, 이러한 반응 조건 하에서, 중쇄와 경쇄 사이에 디설파이드만이 다시 형성되고, 힌지 영역에서 두 개의 시스테인 잔기는 산화되지 않고 잔류했다는 것이 관찰되었다.
이어서, 도 39의 패널 2에 도시된 바와 같이, 힌지에서 2개의 유리 티올(Cys 잔기)을 1M 당량의 N-에틸말레이미드(NEM)(Sigma Aldrich, St. Louis, MO)와 반응시켰다. 이어서, 단일 변형된, 이중 변형된 및 변형되지 않은 Fab를 함유하는 생성되는 혼합물을, 도 39의 패널 3에 도시된 바와 같이, 과량의 비스-말레이미드 가교결합제와 반응시켰다.
이러한 반응 조건은 세 가지 생성물: 하나의 가교결합제 및 하나의 NEM을 갖는 Fab, 두 개의 NEM을 갖는 Fab 및 하나의 가교결합제만을 함유하는 Fab를 생성하였다. 하나의 가교결합제만을 함유하는 Fab은 유리 시스테인을 갖지 않는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 이러한 반응 조건 하에서, 단일 가교결합제는 두 시스테인과 매우 효율적으로 반응하여 시스테인이 가교결합제에 의해 환화된 분자를 생성했다. 상기 3개의 반응 생성물을 포함하는 물질은 겔 여과에 의해 (불필요한 반응 성분을 제거하기 위해) 반응 혼합물로부터 정제하고, 도 39의 패널 4에 도시된 바와 같이, 유사한 방식으로 제조된 다른 힌지-cys-Fab 또는 티오-Fab에의 커플링에 사용하였다. 기재된 바와 같이 제조되고 하나의 가교결합제, 하나의 유리 말레이미드 및 하나의 유리 설프하이드릴을 함유하는 힌지 cys-Fab 또는 티오-Fab만이 이하 상세히 기재되는 비스-Fab 합성 반응에서 반응할 수 있었다.
B. 단백질 발현 및 정제
정제를 촉진시키기 위해, Fab은 플래그- 또는 His-태그 중 하나로 발현시켰다. CHO 세포에서의 발현은 표준 방법으로 수행하였다. 세포 배양 후 친화도 정제는 항-플래그 mAb 수지 또는 니켈 비드 수지를 사용하여 수행하였다. 정제된 티오-Fab은 SDS-PAGE 및 질량 분광법에 의해 특성화되었다. 이러한 특성화는 종종 275Da 및 306Da의 질량 증가를 보였다. 이러한 질량 증가는 비스-말레이미드와의 가교결합을 위한 티오-Fab을 제조하기 위해 환원 및 산화에 의해 제거된 쌍을 이루지 않은 시스테인 상의 디설파이드 부가물인 것으로 밝혀졌다. 티오-Fab의 환원 및 산화는 다음과 같이 수행하였다. 우선, 티오-Fab를 25mM MES, pH 5.8, 300mL NaCl 및 5mM EDTA를 함유하는 완충제에서 2mM 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 HCl(TCEP-HCl; TCEP라 지칭되기도 함)(Pierce [Thermo Fisher Scientific], Rockford, IL)를 첨가하여 24시간 동안 환원시켰다. 환원 후, 단백질은 5mM의 데하이드로아스코르브산(DHAA)(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)을 첨가하여 산화시켰다. 단리된 티오-Fab은 단백질이 적절하게 환원되고 산화됨을 보장하기 위해 SDS-PAGE 및 질량 분석법에 의해 분석하였다.
C. 비스 - Fab 합성
두 개의 상이한 가교결합제를 사용하여 두 개의 Fab: 비스-말레이미드 및 아댑터 DBCO-PEG-말레미드(malemide)/브로모아세트아미드-PEG-아지드의 쌍을 공유 결합시킬 수 있었다.
비스 - 말레이미드 가교결합제를 사용하는 콘주게이션
비스-Fab 합성의 제1 단계에서, 쌍을 이루지 않은 시스테인을 갖는 티오-Fab또는 힌지-cys-Fab을 사용하였다. 일반적으로, 티오-Fab 또는 힌지-cys-Fab은 환원(도 39, 패널 1) 및 산화(도 39, 패널 2)가 1mg/mL의 단백질 농도에서 수행된 동일한 완충제(MES, pH 5.8, 2mM EDTA, 및 300mM NaCl)에 존재했다. 이 단계에서 두 개의 잠재적인 목적하지 않은 반응 생성물: 디설파이드 이량체 및 가교결합된 이량체가 존재했다. 이 단계의 합성에서 1mg/mL의 단백질 농도를 갖는 것은, 이량체화가 그 단백질 농도에서 최소화되었기 때문에 반응의 중요한 특징이었다. 또한, EDTA와 함께 낮은 pH 완충제를 사용하여 반응을 제어하는 단계는 이량체화를 최소화하는 것을 도왔다.
5배 과량의 비스-말레이미드 가교결합제(Quanta BioDesign, Powell, OH)를 도 39의 패널 3에 도시된 바와 같이, 반응 혼합물에 첨가하였다. 5배 과량의 가교결합제는 또한 바람직하지 않은 이량체화를 최소화하는데 도움이 되었다. 반응물은 완결될 때까지 실온(RT) 또는 37℃에서 4시간 동안 항온처리했다. 이어서, 혼합물을 겔 여과에 적합한 용적으로 농축시켰다. ㎍ 내지 mg 양의 합성을 위한 22mL S-200 트리콤 칼럼(GE Healthcare, Piscataway, NJ)을 사용하였다. 사용되지 않은 가교결합제의 제거를 가능하게 한 이러한 제1 겔 여과 단계는 가교결합제에 콘주게이트된 정제된 티오-Fab 또는 힌지-cys-Fab을 생성하였다. 상기한 조건은 전형적으로 목적하는 생성물의 적어도 90% 이상을 유발했다. 모두 가교결합제에 콘주게이트되었거나 디설파이드에 의해 쌍을 이루지 않은 시스테인을 통해 다른 티오-Fab 또는 힌지-cys-Fab에 결합되었기 때문에 어떠한 티오-Fab 또는 힌지-cys-Fab도 유리 티올로서 잔류되지 않았다. 이어서, 단리된 및 정제된 티오-Fab (또는 힌지-cys-Fab) + 가교결합제 종을 제2 티오-Fab (또는 힌지-cys-Fab)에 첨가하고, 5㎎/mL 이상으로, 일반적으로 도 39의 패널 4에 도시된 바와 같이, 겔 여과에 적합한 용적으로 농축시켰다. 이러한 합성 단계 동안 적어도 5mg/mL의 단백질 농도는 반응 완료를 구동시키기 위해 중요했다. 낮은 단백질 농도는 단지 소량의 가교결합된 비스-Fab 이량체의 형성을 유도했다. 이론에 결부시키지 않고, 가교결합된 비스-Fab 이량체의 형성을 방해하였던 입체 효과 또는 점도-관련 변수가 반응물의 농도를 증가시킴으로써 극복되었다는 것이 가정되었다. 또한, 65mg/mL 이하의 단백질 농도의 범위를 시험하였다. 단백질 농도와 반응 시간의 상관 관계는 단백질 농도가 높을수록 반응이 더 빨리 완료되는 것으로 밝혀졌다. 실온 또는 37℃에서 2 내지 24시간 후, 반응은 질량 분석법에 의해 계측된 바와 같이 완료되었다. 일반적으로, 하나의 시약은 과량이었고, 최종 혼합물에서 커플링되지 않고 잔류했다.
DBCO -PEG- 말레미드 / 브로모아세트아미드 -PEG-아지드를 사용하는 콘주게이션
정제되고 차단되지 않은 Fab 중의 하나를 50mM HEPES pH 8 중의 5mol 과량의 DBCO-PEG-말레미드(#760676, Sigma)에서 반응시키는 반면, 다른 Fab은 50mM HEPES pH 8 중의 5mol 과량의 아지드-PEG-말레이미드(#21097 BroadPharm)와 반응시켰다. 37℃에서 1시간 항온처리 후, 반응은 반응의 완료를 식별하기 위해 질량 분석법으로 체크하였다. 콘주게이트된 Fab은 SEC에 의해 과량의 가교결합제로부터 정제하고, 후속적으로 1:1 비율로 혼합하고, 5mg/ml 이상의 농도로 조정하고, 실온에서 밤새 항온처리하였다.
사용된 가교결합제와 무관하게, 완료된 반응물을 다시 겔 여과로 정제하고; 이 때 이량체성 피크를 수집하였고, 이는 유리 시스테인 아미노산을 통해(티오-Fab의 경우) 또는 힌지 영역에 위치된 쌍을 이루지 않은 시스테인을 통해(가공되지 않은 힌지-cys-Fab의 경우) 비가역적으로 가교결합된 100kD 비스-Fab를 함유했다. 두 단계 동안 반응 진행은 종종 명확하게 두 반응물의 존재 및 비스-Fab 생성물의 형성을 나타내는 질량 분석법으로 모니터링하였다. 제2 겔 여과 후 목적하는 생성물의 순도는 질량 분석법 및 SDS-PAGE에 의해 계측하였다. 환원 및 SDS-PAGE 분석시, 비가역적 가교결합은 비환원성 가교결합된 쇄를 나타내는 50-kD 대역의 존재로 관찰되었다. 소규모에서 상기한 과정을 사용하여, 마이크로그램 양의 출발 물질을 갖는 마이그로그램 수율이 전형적으로 달성되었다. 또한, 대규모로, 밀리그램 양의 출발 물질로부터 밀리그램 수율이 전형적으로 달성되었다.
D. CD3 및 FcRH5을 표적화하는 비스 - Fab의 합성
CD3 및 FcRH5를 표적화하는 두 개의 상이한 항체로부터 수득된 이중특이적 비스-Fab가 생성되었다. 사용된 항-CD3 친계 항체는 38E4v.1, 38E4.v11 또는 40G5와 같은 임의의 항-CD3 항체일 수 있었다. 일 구현예에서, 비스-Fab은 하기와 함께 항-CD3 성분으로서 38E4.v1을 이용한다: 서열 번호: 134의 경쇄 서열, 및 서열 번호: 133의 중쇄 서열. 사용된 항-FcRH5 항체 친계 항체는 또한 임의의 항-FcRH5, 예를 들면, hu1G7.v85 및 hu1G7.v87과 같은 본원에 기재된 항체일 수 있다. 구체적으로, 하나의 예시적 비스-Fab은 하기를 포함한다: 서열 번호: 105의 가변 경쇄 서열, 및 서열 번호: 104의 가변 중쇄 서열.
이러한 항체 각각의 경우, 재조합 티오-Fab은 상기한 바와 같이 CHO 세포에서 생성되었다. 이어서, 비스 Fab는 각 티오-Fab 약 2mg으로 시작하여, 합성 매트릭스를 이용하는 조합 포맷으로 티오-Fab로부터 합성되었다. 상이한 티오-Fab은 4개의 고유의 비스-Fab 분자를 합성하기 위해 조합되었다. 각각의 비스-Fab 약 1mg은 제시된 예의 합성으로부터 회수되었지만, 수율은 상이한 티오-Fab에 따라 다양할 것으로 예상되었다. 비스-Fab 각각은 고유한 식별자가 부여되었다. 각 비스 Fab의 순도는 당업계에 익히 공지된 표준 방법을 사용하여 SDS-PAGE 및 질량 분석법에 의해 분석하였다.
상기한 매트릭스 재조합 접근법을 사용하여 일련의 CD3- 및 FcRH5 유래 비스-Fab 구조적 변이체를 합성하였다. 4개의 상이한 티오-부착점을 비스-Fab을 합성하기 위해 선택하였고; 위치 중 하나는 항-CD3 티오-Fab 아암의 중쇄(예: 위치 76(Cys76HC))에 존재하였고, 하나의 위치는 항-CD3 티오-Fab 아암의 경쇄(예: 위치 22(Cys22LC))에 존재하였고, 위치 중 하나는 항-FcRH5 티오-Fab 아암의 중쇄(예: 위치 114(Cys114HC))에 존재하였고, 하나의 위치는 항-FcRH5 티오-Fab 아암의 경쇄(예: 위치 149((Cys149LC))에 존재하였다. 다른 위치들은 필요한 시스테인의 삽입을 위해 이용될 수 있다. 티오-부착점을 함유하는 Fab은 3개의 상이한 공급원으로부터 유래되었다: (1) 항체로부터 티오-Fab를 유리시키는 리신-C로 소화된 시스테인 치환을 갖는 티오-mAb, (2) CHO 세포에서 직접 발현되고 이로부터 정제된 시스테인 치환을 갖는 티오-Fab 및 (3) 펩신에 의한 소화 후 가공되지 않은 항체의 힌지 영역에 단일 가교결합제를 부착시키기 위한 상기 효소 방법에 의해 생성된 힌지-cys-Fab. 이러한 접근법은 다른 티오-Fab와의 재조합을 위해 티오-Fab에 상이한 치환점을 유도하여 구조적 변이체를 생성하였다(참조: 표 15).
각 Fab 중의 가공된 Cys의 위치 및 상응하는 비스 - Fab 수
FcRH5 Fab ( 1G7.v85 )
HC A114C LC A149C 힌지 Cys
CD3 Fab ( 38E4.v1 ) HC S76C 비스-Fab A 비스-Fab C
LC N22C 비스-Fab B 비스-Fab D
힌지 Cys F(ab')2 A
E. FcRH5 비스 - Fab의 생물학적 활성
다음에, 비스-Fab 구조적 변이체 각각을 ELISA에 의해 항원(즉, CD3 및 FcRH5) 각각에 대한 그들의 결합능에 대해 시험하였다. 힌지 영역에서 Cys를 연결함으로써 생성된 비스-Fab는 천연 항체의 구조와 유사하고 대조군으로 작용하였다. 모든 비스-Fab 작제물이 FcRH5에 대한 유사한 결합능을 갖지만(도 40a), 대부분의 비스-Fab은 참조 비스-Fab와 비교하여 CD3에 대한 결합을 감소시켰다(도 40b). 생물학적 활성은 T 세포 사멸 활성에 대한 대용물로서 작용하는 시험관내 T 세포 활성 검정으로 평가하였다(도 41). 이 검정은 전사 인자 NF-kB의 조절하에 루시퍼라제 리포터로 안정하게 형질감염된 저캇(Jurkat) 세포주(Jurkat-Dual, Invivogen)를 사용하였고, T 세포 사멸 검정에 비해 이 검정을 사용하는 이점은 사용될 수 있는 세포의 수가 무제한이었다는 점이었다. PBMC 세포 사멸 검정에서, 시험의 수는 단일 공여자로부터 수득될 수 있는 세포의 수에 의해 제한되었다. 검정을 하기와 같이 수행하였다. MOLP-2와 같은 적절한 세포주를 표적 세포로서 선택하였고, 저캇 세포와 함께 공배양했다. 비스-Fab의 존재 또는 부재하에 웰당 10,000개 세포주 표적 세포 및 50,000개 효과기 세포(저캇)를 첨가하였다(웰당 10,000개 표적 세포, 200μL 총 용적, 표적:효과기의 비율 = 1:5). 밤새 배양 후, 다른 웰의 상청액 10㎕를 50μL의 QUANTI-LUC(Invivogen)를 사용하여 루시퍼라제 활성에 대해 검정하고, 발광은 Envision(Perkin Elmer) 광도계 기기로 정량화하였다.
흥미롭게도, 항-CD3 또는 항-FcRH5 대해 생성된 각각의 비스-Fab 변이체의 HVR 서열은 비스-Fab의 생성 자체에서 변경되지 않았지만, 각 비스-Fab에 대해 관찰된 T-세포 자극의 최대 양이 간단하게 시스테인 가공된 교차 결합의 위치에 기초하여 다른 것으로부터 일 비스-Fab의 분산도를 도시하였다. 이론에 결부되지 않고, 이는 비스-Fab의 독성 및/또는 효능이 특정 치료 또는 진단적 필요성에 맞게 조절될 수 있는 방법에 영향을 미칠 수 있다. 또 다른 관찰은, 일부 비스-Fab(예: 비스-Fab C)이 CD3에 대한 유의하게 감소된 친화도를 갖지만, 참조 F(ab')2A에 필적할 만한 T 세포 활성화 활성을 가졌다는 것이었다 (도 40b 및 41, 표 15).
F. 내인성 인간 B 세포를 사용한 FcRH5 비스 - Fab의 생물학적 활성
각 비스-Fab 변이체는 다음과 같이 말초 내인성 B 세포 사멸에 대한 T 세포 의존성 비스-Fab 사멸에서의 생물학적 효능에 대해 시험하였다: 웰당 3명의 건강한 공여자 각각으로부터 단리된 200,000개의 hPBMC를 비스-Fab의 존재 또는 부재하에 첨가하였다. 48시간 배양 후, 세포는 세포 생존율 평가를 위한 표적 세포주(B 세포 = CD20)(5㎕/웰)의 적합한 세포 표면 항원 및 아이오딘화프로피듐으로 염색한 다음, FACS로 분석하였다. 비스-Fab 의존적 사멸 활성은 다음 식에 따라 산출하였다: % 사멸 = (1 - 비스-Fab을 갖는 살아 있는 세포의 수/비스-Fab를 갖지 않는 살아 있는 세포의 수) x 100. 양성 대조군으로서, 각각의 Fab의 항-CD3 및 항-FcRH5 아암이 시험된 비스-Fab에 대해 사용된 것과 동일한 서열(시스테인-가공된 점 돌연변이를 갖지 않는 것 이외에)을 갖는 "크놉 인투 홀" FcRH5 TDB로부터 유래된 F(ab')2 를 사용했다 (참고, 예컨대, Ridgway et al. Protein Eng ., 9:617-621, 1996). 일반적으로, 결과는 다른 공여자 세포를 사용함에도 불구하고, 재현성을 입증하였다.
말초 내인성 인간 B 세포의 절반 최대 용해에 필요한 본원에서 시험된 FcRH5 비스-Fab의 양 또는 ng/ml로 표현된 EC50 효능 값이 상기 시험된 각각의 비스-Fab에 대해 산출되었다. 전반적으로, 내인성 인간 B 세포 검정에서 시험된 각 비스-Fab에 대한 효능의 추세가 상기한 ELISA 검정에서 결정된 결과를 추적할 것으로 예상되었다 (도 40a-40b).
SEQUENCE LISTING <110> Genentech, Inc. F. Hoffmann-La Roche AG <120> HUMANIZED AND AFFINITY MATURED ANTIBODIES TO FcRH5 AND METHODS OF USE <130> 50474-134WO2 <150> US 62/180,459 <151> 2015-06-16 <160> 215 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 1 Arg Phe Gly Val His 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Met, Gly, or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Ser, Asp, or Pro <400> 2 Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Xaa Ala Phe Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ser or Pro <400> 3 His Tyr Tyr Gly Ser Xaa Asp Tyr Ala Leu Asp Asn 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> 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120 <210> 214 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 214 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Leu 20 25 30 Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 215 <211> 975 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 215 Met Leu Leu Trp Val Ile Leu Leu Val Leu Ala Pro Val Ser Gly Gln 1 5 10 15 Phe Val Arg Thr Tyr Lys Ser His Phe Leu Gln Pro Pro Trp Thr Thr 20 25 30 Val Phe Arg Gly Glu Arg Val Asn Leu Thr Cys Lys Gly Phe Gly Phe 35 40 45 Tyr Ser Ser Gln Lys Thr Lys Trp Tyr Tyr Arg His Leu Gly Lys Glu 50 55 60 Ile Ser Arg Glu Thr Gln Lys Asn Thr Leu Glu Val Gln Glu Ser Gly 65 70 75 80 Glu Tyr Arg Cys Gln Ala Gln Gly Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val Ser 85 90 95 Leu Asp Phe Ser Ser Ala Ser Leu Ile Leu Gln Ala Pro Leu Ser Val 100 105 110 Phe Glu Gly Asp Ser Val Val Leu Arg Cys Arg Ala Lys Ala Glu Val 115 120 125 Thr Leu Lys Thr Thr Ile Tyr Lys Asn Glu Asn Val Leu Ala Phe Leu 130 135 140 Asn Lys Ser Thr Asp Phe His Ile Ser His Ala Ser Leu Lys Asp Asn 145 150 155 160 Gly Ala Tyr Arg Cys Thr Gly Tyr Lys Glu Thr Cys Cys Leu Val Ser 165 170 175 Ser Asn Thr Val Lys Ile Gln Val Gln Glu Ser Phe Thr Arg Pro Val 180 185 190 Leu Arg Val Ser Ser Phe Gln Pro Ile Ser Gly Ser Pro Val Thr Leu 195 200 205 Thr Cys Glu Thr Gln Leu Ser Leu Glu Arg Ser Asp Val Pro Leu Gln 210 215 220 Phe Cys Phe Phe Arg Asn Asp Gln Met Leu Gly Ser Gly Cys Ser Leu 225 230 235 240 Ser Pro Lys Phe Arg Ile Thr Ala Met Trp Ser Lys Asp Ser Gly Ser 245 250 255 Tyr Trp Cys Lys Ala Ala Thr Met Cys Tyr Asp Thr Thr Ser Asn Ser 260 265 270 Leu Arg Ser Trp Ile Gln Val Leu Ile Pro Ala Ser His Pro Val Leu 275 280 285 Thr Leu Ser Pro Glu Lys Ala Leu Asn Phe Glu Gly Thr Lys Val Lys 290 295 300 Leu His Cys Glu Thr Gln Glu Asp Ser Leu Arg Thr Leu Tyr Lys Phe 305 310 315 320 Tyr His Asp Gly Val Pro Leu Arg Tyr Lys Ser Val Arg Cys Glu Lys 325 330 335 Gly Ala Ser Ile Ser Phe Ser Leu Thr Thr Glu His Ser Gly Asn Tyr 340 345 350 Tyr Cys Thr Ala Asp Asn Gly His Gly Ala Lys Pro Ser Glu Ala Val 355 360 365 Ser Leu Ser Val Thr Val Pro Val Ser Arg Pro Val Leu Thr Leu Ser 370 375 380 Ser Ala Glu Asp Leu Ile Ser Glu Gly Ala Lys Leu Thr Leu His Cys 385 390 395 400 Glu Ala Gln Arg Gly Ser Leu Pro Ile Val Tyr Gln Phe His His Glu 405 410 415 Asn Ala Ser Leu Gly Asn Arg Ser Ala His Ser Ala Gly Gly Val Ala 420 425 430 Ile Ser Phe Ser Leu Thr Ala Asp His Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Thr 435 440 445 Ala Asn Asn Gly Phe Gly Pro Gln Arg Ser Glu Ala Val Ser Leu Ser 450 455 460 Ile Thr Val Pro Val Ser Arg Pro Val Leu Thr Leu Ser Ser Ala Glu 465 470 475 480 Ala Leu Thr Phe Glu Gly Ala Thr Val Thr Leu Tyr Cys Glu Val Gln 485 490 495 Arg Gly Ser Pro Arg Ile Leu Tyr Gln Phe Tyr His Glu Asp Val Pro 500 505 510 Leu Gly Ser Asn Ser Thr Pro Ser Val Gly Lys Val Ser Phe Ser Phe 515 520 525 Ser Leu Thr Ala Ala His Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Thr Ala Asp Asn 530 535 540 Gly Phe Gly Pro Gln Arg Ser Glu Ala Val Ser Leu Phe Val Thr Val 545 550 555 560 Pro Val Ser Arg Pro Ile Leu Thr Leu Arg Val Pro Arg Ala Gln Ala 565 570 575 Val Val Gly Asp Leu Leu Glu Leu Arg Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser 580 585 590 Pro Pro Ile Met Tyr Trp Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Ser 595 600 605 Ser Ser Val Pro Ser Gly Gly Glu Ala Ser Phe Asn Leu Ser Leu Thr 610 615 620 Ala Glu His Ser Gly Asn Tyr Ser Cys Glu Ala Asn Asn Gly Leu Val 625 630 635 640 Ala Gln His Ser Asp Thr Ile Ser Leu Ser Val Ile Val Pro Val Ser 645 650 655 Arg Pro Ile Leu Thr Phe Arg Ala Pro Arg Ala Gln Ala Val Val Gly 660 665 670 Asp Leu Leu Glu Leu His Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser Ser Pro Ile 675 680 685 Leu Tyr Trp Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Lys Ile Ser Ala 690 695 700 Pro Ser Gly Gly Gly Ala Tyr Phe Asn Leu Ser Leu Thr Thr Glu His 705 710 715 720 Ser Gly Ile Tyr Ser Cys Glu Ala Asp Asn Gly Leu Glu Ala Gln Arg 725 730 735 Ser Glu Met Val Thr Leu Lys Val Ala Val Pro Val Ser Arg Pro Val 740 745 750 Leu Thr Leu Arg Ala Pro Arg Ala Gln Val Ala Val Gly Asp Leu Leu 755 760 765 Glu Leu His Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser Pro Leu Ile Leu Tyr Gln 770 775 780 Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Asn Ser Ser Ala Leu Ser Gly 785 790 795 800 Gly Ala Phe Phe Asn Leu Ser Leu Thr Ala Glu His Gly Asn Tyr Ser 805 810 815 Cys Glu Ala Asp Asn Gly Leu Gly Ala Gln Arg Ser Glu Thr Val Thr 820 825 830 Leu Tyr Leu Thr Gly Leu Thr Glu Asn Arg Ser Gly Pro Val Ala Thr 835 840 845 Gly Val Thr Gly Gly Leu Leu Ser Leu Ala Gly Leu Ala Ala Val Ala 850 855 860 Leu Leu Leu Tyr Cys Trp Leu Ser Arg Lys Ala Gly Arg Glu Pro Ala 865 870 875 880 Ser Asp Pro Cys Arg Ser Pro Ser Asp Leu Asp Ser Gln Glu Pro Thr 885 890 895 Tyr His Asn Val Pro Ala Trp Glu Glu Leu Gln Pro Val Tyr Ser Asn 900 905 910 Val Asn Pro Arg Gly Glu Asn Val Val Tyr Ser Glu Val Arg Ile Ile 915 920 925 Arg Glu Lys Lys Lys His Ala Val Ala Ser Asn Pro Arg His Leu Arg 930 935 940 Asn Lys Gly Ser Cys Ile Ile Tyr Ser Glu Val Lys Val Ala Ser Thr 945 950 955 960 Pro Ala Ser Arg Cys Leu Phe Leu Ala Ser Ser Ala Pro His Arg 965 970 975

Claims (335)

  1. (i) 하기 6개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (ii) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (iii) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (iv) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (v) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (vi) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (vii) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (viii) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (ix) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3,
    (x) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 또는
    (xi) 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 항-Fc 수용체 유사 5(FcRH5) 항체.
  2. 청구항 1에 있어서,
    (i)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 104의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인,
    (b) 서열 번호: 105의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  3. 청구항 1에 있어서,
    (ii)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 106의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 107의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  4. 청구항 1에 있어서,
    (iii)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 82의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 83의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  5. 청구항 1에 있어서,
    (iv)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 84의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 85의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  6. 청구항 1에 있어서,
    (v)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 86의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 87의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  7. 청구항 1에 있어서,
    (vi)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 88의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 89의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  8. 청구항 1에 있어서,
    (vii)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 90의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 91의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  9. 청구항 1에 있어서,
    (viii)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 92의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 93의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  10. 청구항 1에 있어서,
    (ix)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 94의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 95의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  11. 청구항 1에 있어서,
    (x)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 96의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 97의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  12. 청구항 1에 있어서,
    (x)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 98의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 99의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  13. 청구항 1에 있어서,
    (x)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 100의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 101의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  14. 청구항 1에 있어서,
    (xi)의 결합 도메인을 포함하고,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 102의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 103의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  15. 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체.
  16. 청구항 15에 있어서,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 110의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 111의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  17. 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체.
  18. 청구항 17에 있어서,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 112의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 113의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  19. 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 항체.
  20. 청구항 19에 있어서,
    상기 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 108의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 109의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  21. (i) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (ii) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (iii) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (iv) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (v) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (vi) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (vii) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (viii) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (ix) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (x) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (xi) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (xii) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (xiii) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (xiv) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인,
    (xv) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 111의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (xvi) 하기를 포함하는 결합 도메인:
    (a) 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및
    (b) 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인
    을 포함하는 항-FcRH5 항체.
  22. 청구항 1에 있어서,
    FcRH5의 Ig-유사 도메인 9 내의 에피토프에 결합하는 항-FcRH5 항체.
  23. 청구항 22에 있어서,
    (a) 상기 에피토프는 서열 번호: 114의 아미노산 745-850의 부분을 포함하거나, 또는
    (b) 상기 결합 도메인은 인간 FcRH5 또는 시노몰구스 원숭이 (cyno) FcRH5 또는 둘 모두에 결합하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  24. 청구항 23에 있어서,
    (a) 100 nM 이하,
    (b) 10 pM 내지 100 nM,
    (c) 100 pM 내지 100 nM,
    (d) 1 nM 내지 20 nM, 또는
    (e) 1 nM 내지 10 nM
    의 KD로 인간 FcRH5에 결합하는 항-FcRH5 항체.
  25. 청구항 23에 있어서,
    (a) 100 nM 이하,
    (b) 10 pM 내지 100 nM,
    (c) 100 pM 내지 100 nM, 또는
    (d) 1 nM 내지 50 nM
    의 KD로 cyno FcRH5에 결합하는 항-FcRH5 항체.
  26. 청구항 1에 있어서,
    상기 항-FcRH5 항체의 효과기 기능을 감소시키는 치환 돌연변이를 포함하는 항-FcRH5 항체.
  27. 청구항 26에 있어서,
    상기 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 N297, L234, L235, D265, 및/또는 P329 (EU 넘버링)에서의 것인 항-FcRH5 항체.
  28. 청구항 27에 있어서,
    상기 치환 돌연변이는 N297G, N297A, L234A, L235A, D265A, 및 P329G (EU 넘버링)로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 항-FcRH5 항체.
  29. 청구항 1에 있어서,
    (a) 단클론성, 인간, 인간화된, 또는 키메라 항체,
    (b) IgG 항체,
    (c) FcRH5에 결합하는 항체 단편, 또는
    (d) 전장 항체
    인 항-FcRH5 항체.
  30. 청구항 29에 있어서,
    FcRH5에 결합하는 항체 단편이고, 상기 항체 단편은 비스-Fab, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  31. 청구항 1에 있어서,
    (a) 단일특이적 항체, 또는
    (b) 다중특이적 항체인
    항-FcRH5 항체.
  32. 청구항 31에 있어서,
    다중특이적 항체이고, 상기 다중특이적 항체는 분화 3의 클러스터(cluster of differentiation 3) (CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 항체인
    항-FcRH5 항체.
  33. 청구항 32에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은 CD3의 아미노산 잔기 Glu6을 포함하는 CD3 상의 에피토프에 결합하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 에피토프는
    (a) CD3의 Gln1, Asp2, 및 Met7로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가 아미노산 잔기를 포함하거나,
    (b) CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2, 및 Glu6을 포함하거나,
    (c) CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2, Glu6 및 Met7을 포함하거나,
    (d) CD3의 아미노산 잔기 Glu5를 포함하지 않거나,
    (e) CD3의 아미노산 잔기 Gly3 및 Glu5를 포함하지 않거나, 또는
    (f) CD3의 아미노산 잔기 Gln1, Asp2, Glu6 및 Met7로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  35. 청구항 32에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은 인간 CD3 폴리펩티드 또는 cyno CD3 폴리펩티드에 결합할 수 있고,
    상기 인간 CD3 폴리펩티드 또는 상기 cyno CD3 폴리펩티드가
    (a) 각각 인간 CD3ε 폴리펩티드 또는 cyno CD3ε 폴리펩티드, 또는
    (b) 각각 인간 CD3γ 폴리펩티드 또는 cyno CD3γ 폴리펩티드인
    항-FcRH5 항체.
  36. 청구항 35에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은
    (a) 100 nM 이하,
    (b) 10 pM 내지 100 nM,
    (c) 100 pM 내지 50 nM, 또는
    (d) 1 nM 내지 10 nM
    의 KD로 인간 CD3ε 폴리펩티드에 결합하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  37. 청구항 32에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  38. 청구항 37에 있어서,
    (i) 상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하거나, 또는
    (ii) 상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  39. 청구항 38에 있어서,
    상기 (i)의 제2 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 133의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 134의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  40. 청구항 38에 있어서,
    상기 (ii)의 제2 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 137의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 138의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  41. 청구항 32에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  42. 청구항 41에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 153의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 154의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  43. 청구항 32에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  44. 청구항 43에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  45. 청구항 44에 있어서,
    상기 제2 결합 도메인은
    (a) 서열 번호: 172의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인,
    (b) 서열 번호: 173의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 또는
    (c) 상기 (a)에서와 같은 VH 도메인 및 상기 (b)에서와 같은 VL 도메인
    을 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  46. 청구항 32에 있어서,
    FcRH5에 결합하는 상기 결합 도메인은
    (a) 하전된 영역(CR1)을 포함하는 VH 도메인(VH1), 및
    (b) 하전된 영역(CR2)을 포함하는 VL 도메인(VL1)
    을 포함하고,
    상기 VH1 내의 상기 CR1는 상기 VL1 내의 상기 CR2와 전하 쌍을 형성하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  47. 청구항 46에 있어서,
    상기 CR1은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 CR2는 산성 아미노산 잔기를 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  48. 청구항 47에 있어서,
    (a) 상기 CR1은 Q39K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고,
    (b) 상기 CR2은 Q38E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  49. 청구항 32에 있어서,
    CD3에 결합하는 상기 제2 결합 도메인은
    (a) 하전된 영역(CR3)을 포함하는 VH 도메인(VH2), 및
    (b) 하전된 영역(CR4)을 포함하는 VL 도메인(VL2)
    을 포함하고,
    상기 VL2 내의 상기 CR4는 상기 VH2 내의 상기 CR3와 전하 쌍을 형성하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  50. 청구항 49에 있어서,
    상기 CR4는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 CR3은 산성 아미노산 잔기를 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  51. 청구항 50에 있어서,
    (a) 상기 CR4는 Q38K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고,
    (b) 상기 CR3은 Q39E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  52. 청구항 46에 있어서,
    상기 VL1은 경쇄 불변(CL) 도메인(CL1)에 연결되고, 상기 VH1은 제1 중쇄 불변(CH1) 도메인(CH11)에 연결되는 것인 항-FcRH5 항체.
  53. 청구항 52에 있어서,
    상기 CL1은 하전된 영역(CR5)을 포함하고, 상기 CH11은 하전된 영역(CR6)을 포함하고, 상기 CL1 내의 상기 CR5는 상기 CH11 내의 상기 CR6과 전하 쌍을 형성하는 것인 항-FcRH5 항체.
  54. 청구항 53에 있어서,
    상기 CR5은 V133K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고/되거나, 상기 CR6은 S183E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인 항-FcRH5 항체.
  55. 청구항 49에 있어서,
    VL2는 CL 도메인 (CL2)에 연결되고, VH2는 CH1 도메인 (CH12)에 연결되는 것인 항-FcRH5 항체.
  56. 청구항 55에 있어서,
    상기 CL2는 하전된 영역 (CR7)을 포함하고, 상기 CH12는 하전된 영역 (CR8)을 포함하고, 상기 CH12 내의 상기 CR8은 상기 CL2 내의 상기 CR7과 전하 쌍을 형성하는 것인 항-FcRH5 항체.
  57. 청구항 56에 있어서,
    상기 CR8은 S183K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고/되거나, 상기 CR7은 V133E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인 항-FcRH5 항체.
  58. 청구항 57에 있어서,
    (a) 상기 CL2는 하기 치환 돌연변이: F116A, L135V, S174A, S176F 및/또는 T178V (EU 넘버링) 중 하나 이상을 포함하고,
    (b) 상기 CH12는 하기 치환 돌연변이: A141I, F170S, S181M, S183A 및/또는 V185A (EU 넘버링) 중 하나 이상을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  59. 청구항 46에 있어서,
    상기 CR2는 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 CR1은 산성 아미노산 잔기를 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  60. 청구항 59에 있어서,
    (a) 상기 CR2는 Q38K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고,
    (b) 상기 CR1은 Q39E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  61. 청구항 49에 있어서,
    상기 CR3은 염기성 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 CR4는 산성 아미노산 잔기를 포함하는 것인 항-FcRH5 항체.
  62. 청구항 61에 있어서,
    (a) 상기 CR3은 Q39K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고,
    (b) 상기 CR4는 Q38E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  63. 청구항 53에 있어서,
    (a) 상기 CR6은 S183K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고/되거나,
    (b) 상기 CR5는 V133E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  64. 청구항 56에 있어서,
    (a) 상기 CR7은 V133K 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되고/되거나,
    (b) 상기 CR8은 S183E 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하거나 그로 구성되는 것인
    항-FcRH5 항체.
  65. 청구항 64에 있어서,
    (a) 상기 CL2는 하기 치환 돌연변이: F116A, L135V, S174A, S176F, 및/또는 T178V (EU 넘버링) 중 하나 이상을 포함하고,
    (b) 상기 CH12는 하기 치환 돌연변이: A141I, F170S, S181M, S183A, 및/또는 V185A (EU 넘버링) 중 하나 이상을 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  66. 청구항 46에 있어서,
    하나 이상의 중쇄 불변 도메인을 포함하고,
    여기서 상기 하나 이상의 중쇄 불변 도메인은 제1 CH2 도메인(CH21), 제1 CH3 도메인(CH31), 제2 CH2 도메인(CH22) 및 제2 CH3 도메인(CH32)으로부터 선택되고,
    상기 하나 이상의 중쇄 불변 도메인 중 적어도 하나가 또 다른 중쇄 불변 도메인과 쌍을 이루고,
    상기 CH31 및 상기 CH32는 각각 돌출부(P1) 또는 공동(C1)을 포함하고,
    상기 CH31 내의 상기 P1 또는 상기 C1은 각각 상기 CH32 내의 상기 C1 또는 상기 P1에 위치할 수 있고,
    상기 CH31 및 상기 CH32는 상기 P1과 상기 C1 사이의 계면에서 만나는 것인
    항-FcRH5 항체.
  67. 청구항 66에 있어서,
    P1은 T366W 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하고/하거나,
    C1은 T366S, L368A, 및 Y407 치환 돌연변이 (EU 넘버링)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  68. 청구항 66에 있어서,
    상기 CH21 및 상기 CH22는 각각 돌출부(P2) 또는 공동(C2)을 포함하고,
    상기 CH21 내의 상기 P2 또는 상기 C2는 각각 상기 CH22 내의 상기 C2 또는 상기 P2에 위치할 수 있고,
    상기 CH21 및 상기 CH22는 상기 P2과 상기 C2 사이의 계면에서 만나는 것인
    항-FcRH5 항체.
  69. FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체이며,
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암
    을 포함하고,
    상기 항-FcRH5 아암 및 상기 항-CD3 아암은 각각 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하고,
    상기 항-FcRH5 아암은 T366W 치환 돌연변이를 포함하고, 상기 항-CD3 아암은 T366S, L368A, 및 Y407V 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  70. FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체이며,
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암
    을 포함하고,
    상기 항-FcRH5 아암은
    Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하고,
    상기 항-CD3 아암은
    Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  71. FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체이며,
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암
    을 포함하고,
    상기 항-FcRH5 아암은
    Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하고,
    상기 항-CD3 아암은
    Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  72. FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체이며,
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암
    을 포함하고,
    상기 항-FcRH5 아암은
    Q38E 및 V133K 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39K, S183E, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하고,
    상기 항-CD3 아암은
    Q38K, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39E, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  73. FcRH5 및 CD3에 결합하는 항-FcRH5 항체이며,
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함하는 항-FcRH5 아암, 및
    하기 6개의 HVR:
    (a) 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    (b) 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2,
    (c) 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3,
    (d) 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    (e) 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    (f) 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하는 항-CD3 아암
    을 포함하고,
    상기 항-FcRH5 아암은
    Q38K 및 V133E 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39E, S183K, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하고,
    상기 항-CD3 아암은
    Q38E, F116A, L135V, S174A, S176F, 및 T178V 치환 돌연변이를 포함하는 경쇄 및
    Q39K, A141I, F170S, S181M, S183A, V185A, 및 N297G 치환 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함하는 중쇄
    를 포함하는 것인
    항-FcRH5 항체.
  74. 청구항 1에 있어서,
    (a) 마우스에서 10 ml/kg/일 내지 35 ml/kg/일,
    (b) 마우스에서 10 ml/kg/일 내지 20 ml/kg/일, 또는
    (c) 마우스에서 12 ml/kg/일 내지 16 ml/kg/일
    의 정맥내 주사 후 청소율(clearance)을 갖는
    항-FcRH5 항체.
  75. 청구항 1에 있어서,
    (a) cyno에서 20 ml/kg/일 내지 40 ml/kg/일,
    (b) cyno에서 25 ml/kg/일 내지 35 ml/kg/일, 또는
    (c) cyno에서 30 ml/kg/일 내지 35 ml/kg/일
    의 정맥내 주사 후 청소율을 갖는
    항-FcRH5 항체.
  76. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체, 또는 FcRH5에 결합하는 이의 결합 도메인을 포함하는 이의 부분을 암호화하는 하나 이상의 단리된 핵산.
  77. 청구항 76의 하나 이상의 단리된 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터.
  78. 청구항 77의 하나 이상의 벡터를 포함하는 하나 이상의 단리된 숙주 세포.
  79. 청구항 78에 있어서,
    (a) 하나 이상의 포유동물 숙주 세포, 또는
    (b) 하나 이상의 원핵생물성 숙주 세포
    를 포함하는 하나 이상의 단리된 숙주 세포.
  80. 청구항 79에 있어서, 상기 하나 이상의 포유동물 숙주 세포가 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 숙주 세포이거나 또는 상기 하나 이상의 원핵생물성 숙주 세포가 이. 콜라이(E. coli) 숙주 세포인 하나 이상의 단리된 숙주 세포.
  81. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체를 생산하는 방법이며,
    상기 항-FcRH5 항체 또는 FcRH5에 결합하는 이의 결합 도메인을 포함하는 이의 부분을 암호화하는 하나 이상의 단리된 핵산
    을 포함하는 하나 이상의 벡터
    를 포함하는 하나 이상의 단리된 숙주 세포를
    배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하고,
    상기 하나 이상의 단리된 숙주 세포는
    (i) 하나 이상의 포유동물 숙주 세포일 수 있으며;
    상기 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 숙주 세포일 수 있거나; 또는
    (ii) 하나 이상의 원핵생물성 숙주 세포일 수 있으며;
    상기 원핵생물성 숙주 세포는 이. 콜라이 숙주 세포일 수 있고,
    상기 배양 배지의 상기 하나 이상의 단리된 숙주 세포로부터 상기 항-FcRH5 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  82. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체 및 세포독성제를 포함하는 면역콘주게이트.
  83. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체를 포함하는, FcRH5-양성 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 필요로 하는 대상체에서 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위한 조성물이며,
    약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 조성물.
  84. 청구항 83에 있어서,
    상기 약제학적으로 허용가능한 부형제가 완충제, 담체, 안정화제 또는 보존제인 조성물.
  85. 청구항 83에 있어서,
    약제학적 조성물인 조성물.
  86. 청구항 83에 있어서, PD-1 축 결합 길항제 또는 추가 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
  87. (a) FcRH5-양성 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 필요로 하는 인간 대상체에서 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키거나, 또는
    (b) FcRH5-양성 암을 갖는 인간 대상체에서 면역 기능을 증진시키기 위한,
    청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체를 포함하는 약제.
  88. 청구항 87에 있어서,
    상기 FcRH5-양성 암은 B 세포 암인 약제.
  89. 청구항 88에 있어서,
    상기 B 세포 암은 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 외투 세포 림프종(MCL), 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 및 여포성 림프종(FL)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  90. 청구항 87에 있어서,
    상기 항-FcRH5 항체는
    (a) 표적 세포 상에 위치된 FcRH5 분자, 및
    (b) 면역 효과기 세포 상에 위치된 CD3 분자
    에 결합하는 것인 약제.
  91. 청구항 90에 있어서,
    (a) 상기 항-FcRH5 항체는 상기 FcRH5 분자 및 상기 CD3 분자에 결합한 후 상기 면역 효과기 세포를 활성화시키거나, 또는
    (b) 상기 활성화된 면역 효과기 세포는 상기 표적 세포에 대해 세포독성 효과 및/또는 세포사멸 효과를 행사할 수 있는 것인
    약제.
  92. 청구항 90에 있어서,
    상기 표적 세포는
    (a) 형질 세포,
    (b) 짧은 수명의 형질 세포,
    (c) 긴 수명의 형질 세포, 또는
    (d) 골수종 세포인
    약제.
  93. 청구항 87에 있어서,
    (a) 0.01 mg/kg/wk 내지 50 mg/kg/wk,
    (b) 0.1 mg/kg/wk 내지 10 mg/kg/wk, 또는
    (c) 1 mg/kg/wk
    의 용량으로 상기 항-FcRH5 항체를 포함하는 약제.
  94. 청구항 87에 있어서,
    PD-1 축 결합 길항제, 추가 치료제, 또는 PD-1 축 결합 길항제 및 추가 치료제 둘 다와의 투여를 위해 제제화되는 약제.
  95. 청구항 94에 있어서,
    상기 PD-1 축 결합 길항제 또는 상기 추가 치료제는 상기 항-FcRH5 항체 투여 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 투여될 것인 약제.
  96. 청구항 94에 있어서, 상기 PD-1 축 결합 길항제가 PD-L1 결합 길항제, PD-1 결합 길항제, 및 PD-L2 결합 길항제로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  97. 청구항 96에 있어서,
    (a) 상기 PD-L1 결합 길항제는 MPDL3280A (아테조리주맙), MDX-1105, MEDI4736 (두르발루맙), 및 MSB0010718C (아벨루맙)로 구성된 군으로부터 선택되거나,
    (b) 상기 PD-1 결합 길항제는 MDX 1106 (니볼루맙), MK-3475 (펨브로리주맙), MEDI-0680 (AMP-514), PDR001, REGN2810, 및 BGB-108로 구성된 군으로부터 선택되거나, 또는
    (c) 상기 PD-L2 결합 길항제는 항체 또는 면역접합체인
    약제.
  98. 청구항 87에 있어서,
    스테로이드, 면역조절물질 (IMiD), 프로테오좀 억제제 (PI), 또는 이의 조합물과의 투여를 위해 제제화되는 약제.
  99. 청구항 98에 있어서,
    (a) 상기 스테로이드는 글루코코르티코이드이거나,
    (b) 상기 IMiD는 레날리도미드이거나, 또는
    (c) 상기 PI는 보르테조밉인
    약제.
  100. 청구항 99에 있어서, 상기 글루코코르티코이드는 덱사메타손인 약제.
  101. 청구항 98에 있어서, 항-FcRH5 항체, PD-1 축 결합 길항제, 스테로이드, IMiD, PI, 또는 이의 조합물은, 정맥내로, 피하로, 근육내로, 국소로, 경구로, 경피로, 복강내로, 안와내로, 이식에 의해, 흡입에 의해, 척수강내로(intrathecally), 뇌실내로(intraventricularly), 또는 비강내로 투여될 것인 약제.
  102. 인간 대상체 유래의 생물학적 샘플에서 FcRH5를 검출하는 방법이며,
    (a) 상기 생물학적 샘플 중 천연 발생 FcRH5에 대한 항-FcRH5 항체의 결합을 허용하는 조건 하에서, 상기 생물학적 샘플을 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체와 접촉시키는 단계, 및
    (b) 상기 생물학적 샘플에서 상기 항-FcRH5 항체와 천연 발생 FcRH5 사이에서 복합체가 형성되는지의 여부를 검출하는 단계
    를 포함하는 방법.
  103. 청구항 102에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 혈액 샘플인 방법.
  104. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체 및
    상기 항체를
    (a) 인간 대상체에서 FcRH5-양성 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키거나, 또는
    (b) FcRH5-양성 암을 갖는 인간 대상체에서 면역 기능을 증진시키는 데 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물
    을 포함하는 키트.
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