KR101496374B1

KR101496374B1 - 항종양 활성을 갖는 캄프토테신 유도체

Info

Publication number: KR101496374B1
Application number: KR1020097001596A
Authority: KR
Inventors: 가브리엘레 폰타나; 에지오 봄바르델리; 카를라 만조티; 아르투로 바타글리아; 크리스티안 사모리
Original assignee: 인데나 에스.피.아
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2007-07-16
Publication date: 2015-03-04
Anticipated expiration: 2027-07-16
Also published as: RU2009102241A; ES2628022T3; AU2007278509A1; PL2044080T3; PT2044080T; BRPI0714672A2; US8193210B2; CN101495485A; CN101495485B; NO342506B1; IL196652A0; ITMI20061474A1; BRPI0714672B8; EP2044080A1; NO20090252L; RU2450007C2; JP5313895B2; EP2044080B1; JP2010500971A; CA2658902C

Abstract

항종양 활성을 갖는 5-치환된 티오-캄프토테신 유도체, 이들의 제조 방법, 항종양 약물로서 이들의 용도, 및 이들을 포함하는 약제학적 조성물.

항종양, 캄프토테신

Description

항종양 활성을 갖는 캄프토테신 유도체{Camptothecin derivatives with antitumor activity}

본 발명은 항종양 활성을 갖는 신규한 캄프토테신(camptothecin) 유도체들, 이들을 제조하는 방법, 항종양 약물로서 이들의 용도 및 이들을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

캄프토테신은 희수(Camptotheca acuminata)(희수나무과, Nyssaceae)로부터 추출되는 알칼로이드이고, 이는 1966년에 Wall과 Wani에 의해(J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890) 최초로 기술되었다. 캄프토테신은 비록 광범위한 스펙트럼의 항종양 활성, 특히 결장 종양과 그 밖의 다른 고형 종양 및 백혈병에 대해 항종양 활성을 타고났지만, 캄프토테신은 출혈성 방광염, 위장관 독성 및 골수억제의 형태로 나타나는 높은 독성 때문에 치료에 사용되지 못한다.

낮은 독성과 높은 용해도를 갖는 화합물을 얻기 위하여 수많은 캄프토테신 유사체들이 합성되고 있다. 현재, 두 개의 약물 즉 CPT-11과 토포테칸(topotecan)이 임상 실시에서 사용되고 있다. 벨로테칸(belotecan), 루비테칸(rubitecan), 엑사테칸(exatecan), 지마테칸(gimatecan), 페가모테칸(pegamotecan), 루르토테칸(lurtotecan), 카레니테신(karenitecin), 아펠레테칸(afeletecan), 호모캄프토테 신(homocamptothecin), 디플로모테칸(diflomotecan)과 같은 다른 유도체들, 및 많은 다른 유도체들이 임상 실험 중에 있다. 화합물 CPT-11은 10-히드록시-7-에틸캄프토테신(통상적으로 SN-38로 알려져 있음)으로 매우 가용성인 전구-약물로서, 많은 고형 종양과 복수(ascite)(직장결장, 피부, 위, 폐, 자궁경부, 난소, 비호지킨 림프종)의 치료를 위해 승인을 받았다.

토포테칸은 생리 용액 중에서 가용성인 화합물로, 폐 종양, 위 종양, 간 종양, 난소 종양, 유방 종양, 전립선 종양, 식도 종양, 직장 종양, 연 조직의 육종(soft tissues sarcoma), 두경부 종양, 교모세포종, 만성 및 급성 골수구성 백혈병에 대해 활성이 있다. 그러나, 토포테칸은 호중성백혈구감소증(neutropenia)과 저혈소판증(thrombocytopenia)과 같은 중요한 부작용을 나타낸다.

루르토테칸은 목, 난소, 유방, 직장-결장의 종양 및 폐 미세세포종(pulmonary microcytoma)에서 활성을 갖는, 더 가용성인 유도체이다. 그러나, 루르토테칸은 또한 혈액에 작용하는 독성(hematic toxicity)을 갖고 있다.

루비테칸은 췌장, 난소 및 유방의 종양에 대해 효과가 있는 경구 사용을 위한 전구 약물이다.

캄프토테신과 그의 유사체는 모든 토포이소머라제 I 억제제 경우와 마찬가지로, 토포이소머라제 II 억제제를 포함하는 통상의 약물에 대해 내성이 있는 종양에 대해 효과가 있고; 전체 세포 주기 동안 토포이소머라제의 높은 수준을 유지하고; 다중-약물 내성(multi-drug resistance)(Pgo 또는 MRP) 또는 상기 효소에 의해 매개되는 독성을 제거하는 대사 과정을 유발시키지 않는다.

현재 연구는 현재 사용되는 약물보다 더 낮은 독성을 갖는 토포이소머라제 I의 신규한 억제제에 집중되어 있다.

열린-고리형의 캄프토테신 유도체들은 높은 단백질 결합(특히 알부민에 대해)과 종양 조직에서 낮은 분포를 보여준다. 그 결과, 생성 물질은 체내에 축적되고 종양은 덜 영향을 받게 된다.

역으로, 락톤 형태의 높은 친유성은 세포 막 특히 적혈구에 대한 캄프토테신 유도체의 흡착을 촉진시켜, 조직/혈장 분포 비율에 영향을 주게 된다. 이러한 이유로, 연구는 두 개의 택일적인 접근 방법에 집중되고 있다: a) 여전히 좋은 용해도를 가지면서 단백질 결합이 낮은 생성 물질의 설계; b) 극도로 낮은 투여량에서 조차도 치료 효과를 갖는 매우 강력한 생성 물질의 설계.

7번, 9번, 10번, 및 11번 위치에서의 변형은 화합물의 항종양 활성의 원인이 되는 DNA-토포이소머라제 I-캄프토테신의 3원 복합체의 형성의 안정성에는 영향을 주지 않는 반면에, 일반적으로 매우 내인성이 있는(well tolerated) 것으로 입증되었다.

2OR 배열(configuration)을 갖는 생성 물질은 활성이 없거나 또는 자연 상태의 배열과 일치하는 2OS 배열을 갖는 생성 물질보다는 매우 활성이 낮은 것으로 입증되었다.

일반적으로, 5번 위치에서의 변형은 상기 3원 복합체의 형성에 좋지 않을 것이라 생각되고 있는 반면에, 피리돈 고리 D 및 E에서의 변형은 생성물의 활성에 해롭다고 보고되고 있다.

제1 실시 형태에서, 본 발명은 하기 일반식 I의 캄프토테신 유도체, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 그의 이성질체, 그의 거울상 이성질체(enantiomer), 그의 부분 입체이성질체(diastereomer) 및 상응하는 혼합물에 관한 것이다:

상기에서:

R은 F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R", -COOR', -CONR'R", -NHR"', -NR'R"이고, 상기 R', R" 및 R"'은 H, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아실, 알콕시카르보닐, 아릴옥시카르보닐일 수 있고;

R1은 알킬, 아미노알킬, 히드록시알킬, 니트릴, 알콕시미노(alkoxymino), 아릴옥시미노(aryloxymino), 실릴알킬이고;

R2는 수소, 히드록시, 알콕시, 아미노알킬이고;

R3은 수소, 선택적으로 보호된 히드록시, 알콕시, 아미노알킬이고,

상기에서 알킬, 아실, 알콕시, 아미노알킬 또는 알콕시미노기는 선형 사슬 또는 분지형 사슬로 1개 내지 8개, 바람직하게는 1개 내지 4개의 탄소 원자를 포함할 수 있고, 및 상기 아릴과 아릴옥시기는 5개 내지 10개의 탄소 원자를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물은 낮은 단백질 결합을 보여주고, 좋은 용해도를 갖고 있고, 및 매우 낮은 투여량에서 조차도 높은 역가(potency)를 갖고 있다.

본 발명의 화합물의 제조를 위한 바람직한 합성 경로는 하기 반응식에서 설명되어 있고,

a) 전구체의 히드록시기의 보호;

b) 카르바니온(carbanion)의 생성 및 친전자성 시약(electrophilic reagent)과의 반응을 통한 5번에서의 유도체화;

c) 히드록시기의 탈보호를 포함한다.

상기 반응식에서, R, R1, R2 및 R3은 상기에서 기술된 의미를 갖고, PG는 히드록시-보호기이다.

전구체는 상업적으로 입수가능할 수 있거나 또는 문헌에서 기술된 바와 같이 얻어질 수 있다.

5번 위치에서 카르바니온의 생성은 전구체를 강 유기 염기, 바람직하게는 LiHMDS로 처리함으로써 얻어질 수 있다.

카르바니온은 할로겐 공급원, 아자디카르복실레이트, 이소시아네이트, 클로로카르보닐 유도체, 토실아지드와 같은 친전자성 시약과 인 시투(in situ)로 반응하게 된다.

히드록시-보호기로는 실릴과 카바메이트 또는 이들의 조합이 바람직하다.

본 발명의 화합물을 광범위한 스펙트럼의 종양 세포에 대하여 세포 독성 분석법에서 테스트하였다. 예를 들면, 기준 물질로 캄프토테신 및 약물 토포테칸과 SN-38을 사용하고, 식 (I)의 화합물 두 개에 대하여, NCI-H460 세포주(NSCL 암)에 대한 세포 독성 데이타가 보고되어 있다:

가장 활성이 있는 화합물을 활성 농도와 손상 지속성(damage persistence)을 측정하는 DNA 절단 분석법에서 평가하였다('실시예' 부분을 참조함). 놀랍게도, 식 (I)의 유도체는 유효한 세포 독성 활성을 유지하는 동안에도, 기준 표준 물질(특히 토포테칸과 캄프토테신)보다 DNA 복제 차단에서 더 높은 지속성을 보여준다.

추가적인 실시 형태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 담체 및 부형제와 함께 식 (I)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 화합물 (I)의 경구 또는 비경구 투여에 적절한 약제학적 제형은 고체형, 바람직하게는 캡슐, 정제 및 과립, 또는 액체형, 바람직하게는 주사가능하거나 또는 주입가능한 용액일 수 있다.

본 발명의 적절하게 제제화된 화합물은 고형 종양과 백혈병의 치료를 위해 사용될 수 있고, 특히 폐 종양, 난소 종양, 유방 종양, 위 종양, 간 종양, 전립선 종양, 연 조직의 육종, 두경부 종양, 식도 종양, 췌장 종양, 결장 종양, 직장 종양, 교모세포종, 만성 및 급성 골수구성 백혈병의 치료에 사용될 수 있다.

실시예 I - 20- OTES - 캄프토테신

캄프토테신(0.100 g, 0.287 mmol)을 비활성 분위기 하에서, 무수 디메틸포름아미드(3 mL)에 현탁시키고, 그 결과 생성된 현탁액에 이미다졸(0.980 g, 1.44 mmol)을 첨가한다. 얻은 혼합물을 10분 동안 교반하고, 뒤이어 트리에틸실릴 클로라이드(TES-Cl)(0.193 mL, 1.15 mmol)를 적가하고, 뒤이어 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)(0.040 g 0.287 mmol)을 첨가한다. 46시간 후에, 얻은 반응 혼합물을 진공 하에서 용매를 증발시킨다(반응 시약의 완벽한 소멸을 TLC로 조절, 용리액 CH₂C l₂/MeOH = 30/1). 뒤이어 얻은 고형물을 CH₂Cl₂에서 다시 현탁시키고 H₂O 및 포화된 NH₄Cl로 세척하였다. 수용액 층을 CH₂Cl₂(2 X 10 ml)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켜, 목표로 하는 생성물(0.133 g, 0.287 mmol)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.37 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.92 (d, 1 H, J = 8.0 Hz, Ar), 7.82 (t, 1 H, J= 8.0 Hz, Ar), 7.65 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.57 (s, 1 H, H-14), 5.67 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.29 (s, 2H, H-5), 5.25 (d, 1 H, J= 16.4 Hz, H-17), 2.00-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03-0.93 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.7, 157.6, 152.5, 151.5, 149.0. 145.9, 130.9, 130.4, 130.0. 128.4, 128.1, 128.0, 127.9, 118.9, 94.4, 75.3, 66.0. 50.0. 33.2, 7.9, 7.2, 6.4.

실시예 II - 20- OTES SN -38

SN-38(0.100 g, 0.255 mmol)을 비활성 분위기 하에서 무수 디메틸포름아미드(5 mL)에 현탁시켰고, 그 결과 얻은 현탁액에 이미다졸(0.087 g, 1.28 mmol)을 첨가한다. 얻은 혼합물을 10분 동안 교반하였고, 뒤이어 트리에틸실릴 클로라이드(TES-Cl)(0.171 mL, 1.02 mmol)를 적가하였고, 뒤이어 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP)(0.031 g, 0.255 mmol)을 첨가하였다. 52시간 후에, TLC(CH₂Cl₂/MeOH = 10/1)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 얻은 반응 혼합물을 진공 하에서 용매를 증발시켰다. 뒤이어, 얻은 고체를 CH₂Cl₂에 다시 용해시켰고, H₂O 및 포화된 NH₄Cl로 세척하였다. 수용액 층을 CH₂Cl₂(2 X 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켜, 목표로 하는 생성물(0.121 g, 0.240 mmol, 94%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 9.26 (br s, 1 H, OH), 8.14 (d, 1 H, J = 9.2 Hz, Ar, H-12), 7.58 (s, 1 H, H-14), 7.49 (dd, 1 H, J₁ = 9.2 Hz J₂ = 2.2 Hz, H- 11), 7.46 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H-9), 5.70 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.28 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.23 (s, 2H, H-5), 3.05 (q, 2H, J= 7.5 Hz), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 1.32 (t, 3 H, J = 7.5 Hz, Me), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 172.1, 157.9, 156.6, 152.1 , 149.0. 146.7, 144.6, 143.6, 131.9, 128.7, 126.9, 122.8, 117.9, 105.5, 98.5, 75.4, 65.9, 49.5, 32.9, 23.2, 13.5, 7.8, 7.2, 6.4.

실시예 III - 10- OTBDMS -20- OTES SN -38

20-OTES SN-38(0.121 g, 0.240 mmol)을 비활성 분위기 하에서 CH₂Cl₂/THF = 1:1 (8 ml) 무수 혼합물에 용해시켰다. 이미다졸(0.081 g, 1.20 mmol)을 첨가하였고, 10분 후에 터트-부틸디메틸실릴 클로라이드(TBDMS-Cl)(0.144 mg, 0.957 mmol), 그런 다음 4-디메틸아미노 피리딘(DMAP)(0.029 g 0.240 mmol)을 첨가하였다. 18시간 후에, TLC(헥산/AcOEt = 1/1)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 얻은 반응 혼합물을 진공 하에서 용매 증발시켰다. 뒤이어, 얻은 고체를 CH₂Cl₂에 다시 용해시켰고, H₂O 및 포화된 NH₄Cl로 세척하였다. 수용액 층을 CH₂Cl₂ (2 X 10 mL)로 추출하였고, 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켰다. 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1), 목표로 하는 생성물(0.127 g, 0.205 mmol, 85%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.14 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.49 (s, 1 H, H-14), 7.40 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H-9), 7.38 (dd, 1 H, J₁ = 8.8 Hz J₂ = 2.5 Hz, H-11), 5.67 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.25 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.23 (s, 2H, H-5), 3.11 (q, 2H, J= 7.6 Hz), 1.99-1.82 (m, 2H, H-19), 1.38 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me), 1.04 (s, 9 H), 1.00-0.92 (m, 12 H), 0.78-0.69 (m, 6 H), 0.30 (s, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.9, 157.7, 155.1, 151.5, 150.1, 146.8, 145.6, 143.5, 132.2, 128.2, 126.9, 125.9, 118.0. 110.5, 97.7, 75.4, 66.0. 49.3, 33.2, 25.6, 23.1 , 18.3, 13.7, 7.9, 7.2, 6.4, -4.3.

실시예 IV - 20- OTES 토포테칸

토포테칸(0.100 g, 0.238 mmol)을 비활성 분위기 하에서 무수 디메틸포름아미드(5 mL)에 현탁시켰고, 그 결과 얻은 현탁액에 이미다졸(0.081 g, 1.19 mmol)을 첨가하였다. 얻은 혼합물을 10분 동안 교반하였고, 뒤이어 트리에틸 실릴 클로라이드(TES-Cl)(0.160 mL, 0.952 mmol)를 적가하였고, 뒤이어 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)(0.029 g 0.238 mmol)을 첨가하였다. 52시간 후에, TLC(CH₂Cl₂/MeOH = 10/1)로 시약의 완벽한 소멸을 모니터하면서, 반응 혼합물을 진공 하에서 용매를 증발시켰다. 뒤이어, 얻은 고체를 CHCl₃, H₂O 및 포화된 NH₄Cl에 다시 용해시켰고, 수용액 층을 CHCl₃(2 X 15 ml)로 추출하였다. 유기층을 합하였고 Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켜, 목표로 하는 생성물(0.120 g, 0.224 mmol, 94%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 9.65 (br s, 1 H), 8.26 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.14 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.80 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, Ar, H-11), 7.58 (s, 1 H, H-14), 5.67 (d, 1 H, J= 16.5 Hz, H-17), 5.25 (d, 1 H, J= 16.5 Hz, H-17), 5.20 (s, 2H, H-5), 4.71 (s, 2 H), 2.81 (s, 6H, 2 Me), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 172.1, 157.9, 156.6, 152.1, 150.8, 146.8, 144.3, 134.3, 131.2 129.9, 127.9, 123.0, 118.9, 110.1, 98.5, 75.4, 65.9, 51.1, 50.0, 43.1, 32.9, 7.8, 7.2, 6.4.

실시예 V - 10- OTBDMS 20- OTES 토포테칸

20-OTES 토포테칸(0.120 g, 0.224 mmmol)을 비활성 분위기 하에서 CH₂Cl₂/THF = 1:1 무수 혼합물(8 mL)에 용해시켰다. 이미다졸(0.076 g, 1 ,12 mmol)을 첨가하였고, 뒤이어 10분 후에, 터트-부틸디메틸실릴 클로라이드(TBDMS-Cl), (0.135 mg, 0.896 mmol)를 첨가하였고, 그런 다음 4-디메틸아미노 피리딘(DMAP) (0.027 g 0.224 mmol)을 첨가하였다. 21시간 후에, TLC(헥산/AcOEt = 1/1)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 얻은 반응 혼합물을 진공 하에서 용매를 증발시켰다. 뒤이어 얻은 고체를 CHCl₃, H₂O 및 포화된 NH₄Cl에 다시 용해시켰고, 수용액 층을 CHCl₃(2 X 15 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켰다. 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1), 목표로 하는 생성물(0.116 g, 0.179 mmol, 80%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.14 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, Ar, H-12), 7.81 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, Ar, H-11), 7.59 (s, 1 H, H-14), 5.64 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.22 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 5.19 (s, 2H, H-5), 4.71 (s, 2 H), 2.81 (s, 6H, 2 Me), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 1.04 (s, 9 H), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.77-0.68 (m, 6 H), 0.30 (s, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.7, 157.7, 155.1, 151.5, 150.0, 146.8, 144.3, 134.3, 131.2 129.9, 127.9, 123.0, 118.9, 110.1, 98.5, 75.4, 65.9, 51.1, 50.0. 43.9, 32.9, 25.6, 18.3, 7.8, 7.2, 6.4, -4.3.

실시예 VI - 20- OTES 10- 히드록시캄프토테신의 제조

10-히드록시캄프토테신(0.100 g, 0.275 mmol)을 비활성 분위기 하에서 무수 디메틸포름아미드(5 ml)에 현탁시켰고, 그 결과 얻은 현탁액에 이미다졸(0.225 g, 3.31 mmol)을 첨가하였다. 얻은 혼합물을 10분 동안 교반하였고, 뒤이어 트리에틸실릴 클로라이드(TES-Cl)(0.460 mL, 2,75 mmol)를 적가하였고, 뒤이어 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)(0.068 g, 0.550 mmol)을 첨가하였다. 24시간 후에, 반응 혼합물을 TLC(CH₂Cl₂/MeOH = 20/1)로 시약의 완벽한 소멸을 모니터하면서, 진공 하에서 용 매를 증발시켰다. 뒤이어 얻은 고체를 CH₂Cl₂에 다시 용해시켰고, H₂O 및 포화된 NH₄Cl로 세척하였다. 수용액 층을 CH₂Cl₂ (2 X 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켜, 목표로 하는 생성물(0.124 g, 0.259 mmol, 94%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃ + 5% CD₃OD, 400 MHz) δ 8.10 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.05 (d, 1 H, J = 9.2 Hz, Ar), 7.50 (s, 1 H, H-14), 7.39 (dd, 1 H, J₁ = 9.2 Hz J₂ = 2.4 Hz, H-11), 7.11 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H-9), 5.60 (d, 1 H, J= 16.4 Hz, H-17), 5.21 (d, 1 H, J= 16.4 Hz, H-17), 5.15 (s, 2H, H-5), 1.97-1.81 (m, 2H, H-19), 0.98-0.88 (m, 12 H), 0.76-0.68 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃ + 5% CD₃OD, 100 MHz) δ 172.2, 157.8, 156.7, 151.8, 149.2, 146.1, 144.1, 130.9, 129.8, 129.0, 128.6, 123.2, 117.8, 108.8, 98.1, 75.4, 65.8, 50.0. 32.9, 7.7, 7.1, 6.3.

실시예 VII - 10- OTBDMS -20- OTES 캄프토테신

10-히드록시-20-OTES-캄프토테신(0.105 g, 0.219 mmol)을 비활성 분위기에서 CH₂Cl₂/THF = 1:1 무수 혼합물(4 mL)에서 용해시켰다. 이미다졸(0.097 g, 1.42 mmol)을 첨가하였고, 10분 후에, 터트-부틸디메틸실릴 클로라이드(TBDMS-Cl), (0.164 mg, 1.10 mmol)를 첨가하였고, 그 다음에 4-디메틸아미노 피리딘(DMAP) (0.040 g, 0.329 mmol)을 첨가하였다. 18시간 후에, 얻은 반응 혼합물을 TLC(시클 로헥산/AcOEt = 1/3)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 진공 하에서 용매를 증발시켰다. 뒤이어 얻은 고체를 CH₂Cl₂에서 다시 용해시켰고, H₂O 및 포화된 NH₄Cl로 세척하였고, 수용액 층을 CH₂Cl₂(2 X 10 ml)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켰다. 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 시클로헥산/AcOEt = 1/3), 목표로 하는 생성물(0.117 g, 0.197 mmol, 90%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.22 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.13 (d, 1 H, J = 9.2 Hz, Ar, H-12), 7.51 (s, 1 H, H-14), 7.39 (dd, 1 H, J₁ = 9.2 Hz J₂ = 2.8 Hz, H-11), 7.22 (d, 1 H, J= 2.8 Hz, H-9), 5.66 (d, 1H, J= 16.5 Hz, H-17), 5.25 (s, 2H, H-5), 5.24 (d, 1 H, J = 16.5 Hz, H-17), 1.99-1.82 (m, 2H, H-19), 1.03 (s, 9 H), 1.00-0.92 (m, 12 H), 0.78-0.69 (m, 6 H), 0.29 (s, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 172.0. 157.7, 155.1, 151.5, 150.6, 146.1, 145.1 , 131.4, 129.4, 129.3, 128.7, 126.7, 118.3, 114.5, 97.7, 75.3, 66.0. 49.9, 33.1, 25.6, 18.3, 7.9, 7.2, 6.4, -4.3.

실시예 VIII - 5-F-20- OTES - 캄프토테신

캄프토테신 20-OTES(0.100 g, 0.216 mmol)을 비활성 분위기에서 교반하면서 무수 THF (6 ml)에 용해시켰고, 그런 다음 -78℃의 농도까지 냉각시켰고, THF 중 1.0 M LiHMDS 용액(0.260 mL, 0.260 mmol)을 적가하였다. 20분 후에, 무수 THF (2 mL) 중 NFSI(0.089 g, 0.281 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 2시간 후에, 온도를 25℃까지 높여 유지시켰고, 시약의 소멸을 TLC(헥산/AcOEt = 1/2)로 모니터하였다. 두 개의 부분 입체이성질체의 생성을 관찰하였다. 실온에서 3시간 후에, 포화된 NH₄Cl을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 수용액 층을 CH₂Cl₂(3 x 15 mL)로 추출하였고, 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켰다. 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 3/1, 그런 다음 2/1 및 최종적으로 1/1), 이성질체 두 개의 혼합물(0.101 g, 0.210 mmol, 97%,)(1:1 이성질체 비율)을 연한 노란색 고체로 얻었다. 이성질체 두 개를 추가적인 크로마토그래피로 분리하였다. 용리되는 순서에 따름:

첫 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.87 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.69 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.47 (d, 1 H, ¹J_HF = 61.2 Hz, H-5), 7.45 (s, 1 H, H-14), 5.62 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.22 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.02-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03-0.93 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.4, 157.5, 152.3, 151.1, 150.2 (d, J = 1.5 Hz), 150.3 (d, J = 1.5 Hz), 143.6 (d, J = 5.3 Hz), 133.7, 131.7, 130.2, 128.9, 128.4, 127.9 (d, J = 15.0 Hz), 126.3 (d, J = 15.0 Hz), 121.8, 98.9, 93.8 (d, ¹J_CF = 213.2 Hz, C-5), 75.1, 65.7, 33.1, 7.8, 7.2, 6.4.

두 번째 부분 입체 이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.51 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.87 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.51 (d, 1 H, ¹J_HF = 60.8 Hz, H-5), 7.42 (s, 1 H, H-14), 5.62 (d, 1 H, J = 17.2 Hz, H-17), 5.20 (d, 1 H, J = 17.2 Hz, H-17), 2.02-1.82 (m, 2H, H-19), 1.04-0.93 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.2, 157.8, 152.5, 151.2, 150.3, 143.7, 133.7 (d, J= 2.4 Hz), 131.7, 130.2, 128.9, 128.3, 127.9 (d, J = 2.3 Hz), 126.3 (d, J = 16.7 Hz), 121.8 (d, J = 1.5 Hz), 99.0, 93.8 (d, ¹J_CF = 214.8 Hz, C-5), 75.0, 65.8, 33.3, 7.9, 7.1, 6.4.

실시예 IX - 5-F-캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-F-20-OTES-캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체(0.025 g, 0.052 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(5 ml)에 용해시켰다. 뒤이어 Et₃N·3HF(0.060 ml, 0.368 mmol)를 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 1/2)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 28시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 크로마토그래피하여(SiO₂, 헥산/ AcOEt = 1/1), 목표로 하는 생성 물질(0.019 g, 0.051 mmol, 98%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.87 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.69 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.59 (s, 1 H, H-14), 7.46 (d, 1 H, ¹J_HF= 61.2 Hz, H-5), 5.69 (d, 1 H, J= 16.8 Hz, H-17), 5.26 (d, 1 H, J= 16.8 Hz, H-17), 3.87 (br s, 1 H, OH), 2.01-1.81 (m, 2H, H-19), 1.05 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.5, 157.6, 151.1, 151.0. 150.2, 144.1 , 133.9, 131.9, 130.0. 129.0. 128.5, 127.8, 126.4, 121.7, 98.8, 93.8 (d, ¹J_CF = 214.0 Hz, C-5), 72.5, 66.0, 31.5, 7.8.

실시예 X - 5-F- 캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-F-20-OTES-캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체(0.025 g, 0.052 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF (5 mL)에서 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF (0.060 mL, 0.368 mmol)을 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 1/2)로 시약의 소멸을 모니터하면서 실온에서 28시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 크로마토그래피하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1), 목표로 하는 생성물(0.018 g, 0.050 mmol, 97%)을 연한 노란색 고 체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1H, Ar, H-7), 8.24 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.96 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.88 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.69 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.56 (s, 1 H, H-14), 7.51 (d, 1 H, ¹J_HF = 60.4 Hz, H-5), 5.69 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.25 (d, 1 H, J= 16.4 Hz, H-17), 3.87 (br s, 1 H, OH), 1.98-1.78 (m, 2 H, H-19), 1.04 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.3, 157.7, 151.2, 151.2, 150.2, 144.2, 133.8, 131.9, 130.0, 129.0, 128.5, 127.8, 126.4, 121.6, 98.9, 93.7 (d, ¹J_CF = 214.0 Hz, C-5), 72.5, 66.1, 31.6, 7.8.

실시예 XI - 5-N3-20-OTES-캄프토테신의 제조

캄프토테신 20-OTES(0.100 g, 0.216 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(6 ml)에 용해시켰고, 그런 다음 -78℃의 온도까지 냉각시켰고, THF 중 1.0 M LiHMDS 용액(0.260 mL, 0.260 mmol)을 적가하였다. 20분 후에, 무수 THF (2 mL) 중 토실 아지드(TsN₃) (0.055 g, 0.281 mmol)를 첨가하였다. -78℃에서 2시간 후에, 온도를 25℃까지 높여 유지하였고, 시약의 소멸을 TLC(헥산/AcOEt = 2/1)로 모니터하였다. 부분 입체이성질체 두 개의 생성이 관찰되었다. 실온에서 2시간 30분 후에, 포화된 NH₄Cl을 첨가하여, 반응을 중지시켰다. 수용액 층을 CH₂Cl₂ (3 x 15 mL)로 추출하였고, 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 진공 하에서 농축시켰다. 부분 입체이성질체 두 개로 구성되는 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 3/1, 그런 다음 2/1 및 최종으로 1/1), 이성질체 두 개의 혼합물(0.106 g, 0.210 mmol, 97%)(이성질체 비율 1:1)을 연한 노란색 고체로 얻었다. 이성질체 두 개를 추가적인 크로마토그래피로 분리하였다. 용리 순서에 따름:

첫 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.45 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.25 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.95 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.86 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.49 (s, 1 H, H-14), 6.97 (s, 1H, H-5), 5.65 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.26 (d, 1H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.01-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03-0.94 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.6, 158.3, 152.2, 150.8, 150.0. 144.0. 132.9, 131.4, 130.1, 128.6, 128.3, 128.2, 128.1, 120.8, 98.7, 75.4, 75.2, 65.7, 33.1, 7.9, 7.2, 6.4.

두 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.45 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.24 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.95 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.86 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.46 (s, 1 H, H-14), 6.99 (s, 1 H, H-5), 5.66 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.22 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.02-1.84 (m, 2H, H-19), 1.03-0.94 (m, 12 H), 0.80-0.71 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.4, 158.4. 152.3, 150.9, 150.0, 144.0, 132.9, 131.4, 130.1, 128.6, 128.3, 128.2, 128.1, 120.8, 98.7, 75.3, 75.1, 65.8, 33.3, 7.9, 7.2, 6.4.

실시예 XII - 5- N3 - 캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-N3-20-OTES-캄프토테신(0.070 g, 0.139 mmol)의 부분 입체이성질체 1을 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF (6 mL)에 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF (0.170 mL, 1,016 mmol)을 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt =1/1)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 26시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1), 목표로 하는 화합물(0.053 g, 0.136 mmol, 98%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.44 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.24 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.93 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.85 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.67 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.63 (s, 1 H, H-14), 6.97 (s, 1 H, H-5), 5.70 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.29 (d, 1 H, J= 16.8 Hz, H-17), 3.99 (br s, 1 H, OH), 2.00-1.84 (m, 2H, H-19), 1.04 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.6, 158.3, 150.8, 150.7, 149.8, 144.4, 133.1, 131.5, 129.9, 128.6, 128.3, 128.3, 128.1, 120.6, 98.6, 75.4, 72.7, 66.0, 31.5, 7.8.

실시예 XIII - 5- N3 - 캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-N3-20-OTES-캄프토테신의 부분 입체이성질체 2(0.055 g, 0.109 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF (6 ml)에 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF (0.135 ml, 0.820 mmol)를 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 1/1)로 출발 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 26시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1), 목표로 하는 생성물(0.042 g, 0.107 mmol, 98%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.45 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.23 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.95 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.85 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.68 (t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.60 (s, 1 H, H-14), 7.00 (s, 1 H, H-5), 5.74 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.28 (d, 1 H, J= 16.8 Hz, H-17), 3.86 (br s, 1 H, OH), 1.98-1.82 (m, 2H, H-19), 1.04 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.4, 158.4, 150.9, 150.7, 149.8, 144.5, 133.0, 131.5, 129.9, 128.6, 128.4, 128.3, 128.1, 120.6, 98.6, 75.3, 72.6, 66.1, 31.6, 7.8.

실시예 XIV - 5- NH2 - 캄프토테신의 제조

5-N3-20-OH-캄프토테신의 부분 입체이성질체 2를 비활성 분위기 하에서 무수 THF (1.5 mL)와 무수 MeOH (6 mL)의 혼합물에 용해시켰고, 뒤이어 Pd/C (14 mg ~ 10%)를 첨가하였고, 진공/H₂ (H₂ 압력 풍선)의 두 번의 사이클을 수행하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 1/3)로 시약의 소멸을 모니터하면서 실온에서 3시간 동안 반응시켰고, 그런 다음 셀라이트를 통해 여과하였고 CH₂Cl₂ (2 x 15 mL)로 세척하였다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였다. 미정제된 반응물의 ¹H NMR 분광 결과는 5번 위치에서 두 개의 에피머의 1:1 혼합물로 목표로 하는 생성물의 존재를 보여준다. 플래쉬 크로마토그래피(SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH = 35/1 그런 다음 25/1)는 두 개의 부분 입체이성질체의 혼합물(0.046 g, 0.126 mmol, 98%)의 회수를 가능하게 한다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.48 (s, 1 H, Ar, H-7), 8.22-8.17 (m, 1 H, Ar), 7.95-7.90 (m, 1 H, Ar), 7.85-7.78 (m, 1 H, Ar), 7.68-7.60 (m, 1 H, Ar), 7.58 (s, 0.5 H, H-14), 7.54 (s, 0.5 H, H-14) 6.50 (s, 0.5 H, H-5), 6.47 (s, 0.5 H, H-5), 5.74-5.64 (m, 1 H, H-17), 5.28-5.22 (m, 1 H, H-17), 4.00-2.40 (br s, 3 H, OH + NH₂), 1.98-1.82 (m, 2H, H-19), 1.07-1.01 (m, 3 H, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.8 (2 C), 158.5 (2 C), 151.2 (2 C), 150.4 (2 C), 149.7 (2 C), 144.5 (2 C), 132.7 (2 C), 131.0 (2 C), 129.8 (2 C), 128.5 (2 C), 128.3 (2 C), 128.0 (2 C), 127.8 (2 C), 120.2 (2 C), 113.8 (2 C), 97.7 (2 C), 72.7 (2 C), 66.3, 66.0, 31.5 (2 C), 7.8, 7.8.

실시예 XV - 5-디-t- 부톡시카르보닐히드라지노 -20- OTES - 캄프토테신

캄프토테신 20-OTES(0.100 g, 0.216 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF (6 mL)에 용해시켰고, 그런 다음 -78℃의 온도까지 냉각시켰고, THF 중 1.0 M LiHMDS 용액(0.281 mL, 0.281 mmol)을 적가하였다. 20분 후에, 무수 THF (2 mL) 중 디-터트-부틸아조 디카르복실레이트(DTBAC) (0.075 g, 0.324 mmol)를 첨가하였다. -78℃에서 4시간 후에, 시약의 소멸을 TLC (헥산/AcOEt = 3/1)로 모니터하였다. 부분 입체이성질체 두 개의 생성을 관찰하였다. 포화된 NH₄Cl을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 수용액 층을 CH₂Cl₂ (3 x 15 mL)로 추출하였고, 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 건조시켰다. 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 3/1), 이성질체 두 개의 혼합물(0.145 g, 0.210 mmol, 97%)을 얻었다. 이성질체 두 개를 추가적인 크로마토그래피로 분리하였다. 용리되는 순서에 따름:

첫 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.80 (br s, 1 H, Ar), 8.23 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 8.01 (br d, 1 H, Ar), 7.90-7.71 (m, 2 H, Ar), 7.70-7.45 (m, 2H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1 H, H-5), 5.61 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.23 (d, 1 H, J= 16.8 Hz, H-17), 2.03-1.81 (m, 2H, H-19), 1.79-1.08 (br s, 18 H), 1.06-0.92 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.7, 157.8, 155.5, 155.5, 152.0, 152.0, 151.2, 149.4, 145.0, 132.1, 130.6, 130.0, 128.7, 128.4, 127.9, 119.9, 98.2, 82.7, 81.5, 79.7, 75.2, 65.7, 33.2, 28.3, 27.6, 7.7, 7.2, 6.4.

두 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.79 (br s, 1 H, Ar), 8.23 (d, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 8.01 (br d, 1 H, Ar), 7.85-7.76 (m, 2H, Ar), 7.65 (br t, 1 H, J= 8.4 Hz, Ar), 7.52 (s, 1 H, H-14), 6.54 (br s, 1 H, H-5), 5.61 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.22 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 2.03-1.82 (m, 2H, H-19), 1.76-1.08 (br s, 18 H), 1.04-0.92 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.5, 157.9, 155.5, 155.5, 152.3, 152.0, 151.2, 149.4, 145.1, 132.1, 130.6, 130.0, 128.7, 128.4, 127.9, 119.9, 98.2, 82.9, 81.5, 79.6, 75.2, 65.8, 33.3, 28.3, 27.4, 7.8, 7.2, 6.4.

실시예 XVI - 5-디-t- 부톡시카르보닐히드라지노 - 캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-디-t-부톡시카르보닐히드라지노-20-OTES-캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체(0.050 g, 0.072 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(4 mL)에 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF(0.088 mL, 0.542 mmol)을 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 3/2)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 35시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 3/2), 목표로 하는 화합물(0.041 g, 0.071 mmol, 98%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

얻은 생성물을 CH₂Cl₂/펜탄 = 1/50으로부터의 결정화에 의해 추가적으로 정제하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.77 (br s, 1 H, Ar), 8.16 (br d, 1 H, J = 8.0 Hz, Ar), 7.97 (br s, 1 H, Ar), 7.86-7.50 (m, 4 H, Ar), 6.51 (br s, 1 H, H-5), 5.66 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.24 (d, 1 H, J= 16.4 Hz, H-17), 3.86 (br s, 1 H, OH), 2.00-1.80 (m, 2H, H-19), 1.79-1.13 (br s, 18 H), 1.03 (t, 3 H, J = 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.7, 157.9, 155.5, 155.5, 152.1, 151.3, 150.7, 149.6, 145.7, 132.3, 130.7, 129.9, 128.7, 127.9, 127.6, 120.0, 97.9, 82.8, 81.6, 79.7, 72.7, 66.1, 31.8, 28.3, 27.7, 7.7.

실시예 XVII - 5-디-t- 부톡시카르보닐히드라지노 - 캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-디-t-부톡시카르보닐히드라지노-20-OTES-캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체(0.050 g, 0.072 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(4,5 ml)에 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF(0.088 ml, 0.542 mmol)를 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 3/2)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 35시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 3/2), 목표로 하는 화합물(0.040 g, 0.069 mmol, 96%)을 연한 노란색 고체로 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.79 (br s, 1H, Ar), 8.22 (br d, 1 H, J = 8.4 Hz, Ar), 7.99 (br s, 1 H, Ar), 7.88-7.50 (m, 4 H, Ar), 6.53 (br s, 1 H, H-5), 5.65 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.26 (d, 1H, J = 16.4 Hz, H-17), 3.80 (br s, 1 H, OH), 2.00-1.80 (m, 2H, H-19), 1.79-1.13 (br s, 18 H), 1.03 (t, 3 H, J = 7.2 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.6, 157.9, 155.4, 155.4, 152.1, 151.3, 150.8, 149.5, 145.6, 132.3, 130.8, 129.8, 128.7, 127.9, 127.8, 119.8, 98.0, 83.0, 81.5, 79.7, 72.7, 66.3, 31.8, 28.3, 27.7, 7.8.

실시예 XVIII - 5- 디벤질옥시카르보닐히드라지노 -20- OTES - 캄프토테신의 제조

캄프토테신 20-OTES(0.100 g, 0.216 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(6 mL)에 용해시켰고, 그런 다음 -78℃의 온도까지 냉각시켰고, THF 중 1.0 M LiHMDS 용액(0.281 mL, 0.281 mmol)을 적가하였다. 20분 후에, 무수 THF (2 mL) 중 디벤질 아조디카르복실레이트(0.097 g, 0.324 mmol)를 첨가하였다. -78℃에서 3시간 후에, 온도를 25℃까지 높여 유지하였고, 시약의 소멸을 TLC(헥산/AcOEt = 3/1)로 모니터하였다. 부분 입체이성질체 두 개의 생성이 관찰되었다. 실온에서 90분 후에, 포화된 NH₄Cl을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 수용액 층을 CH₂Cl₂ (3 x 15 mL)로 추출하였고, 유기층을 합하였고, Na₂SO₄로 물을 제거하였고, 여과하였고, 진공 하에서 농축시켰다. 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 4/1 그런 다음 7/2), 연한 노란색 고체(0.161 g, 0.212 mmol, 98%)를 얻었다. 이성질체 두 개를 추가적인 크로마토그래피로 분리하였다. 용리되는 순서에 따름:

첫 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.70 (br s, 1 H, Ar), 8.39 (br s 1 H, Ar), 8.22 (br d, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.95 (br d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.83 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.65 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.64-7.00 (m, 11 H, Ar + H-14), 6.49 (br s, 1 H, H-5), 5.57 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.47-4.44 (m, 5 H), 1.98-1.82 (m, 2H, H-19), 1.02-0.89 (m, 12 H), 0.80-0.70 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.6, 158.0, 156.3, 156.3, 153.0, 152.2, 151.0, 149.6, 144.8, 135.3, 132.1, 130.6, 130.0, 128.6-127.8 (11 C), 119.9, 98.4, 79.5, 75.2, 68.4, 67.9, 65.6, 33.0, 7.9, 7.2, 6.4.

두 번째 부분 입체이성질체: ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.85 (br s, 1 H, Ar), 8.58 (br s 1 H, Ar)1 8.20 (br s, 1 H, Ar), 7.93 (br s, Ar), 7.81 (br t, 1 H, J= 7.6 Hz, Ar), 7.63 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.56-6.90 (m, 11 H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1 H, H-5), 5.55 (d, 1 H, J = 16.8 Hz, H-17), 5.44-4.71 (m, 5 H), 1.98-1.80 (m, 2H, H-19), 1.05-0.90 (m, 12 H), 0.81-0.70 (m, 6 H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.5, 157.9, 156.4, 156.4, 152.9, 152.4, 150.9, 149.4, 144.8, 135.3, 132.1, 130.6, 129.9, 128.6-127.8 (11 C), 119.9, 98.5, 79.3, 75.2, 68.4, 67.8, 65.6, 32.9, 7.8, 7.2, 6.4.

실시예 XIX - 5- 디벤질옥시카르보닐히드라지노 - 캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-디벤질옥시카르보닐히드라지노-20-OTES-캄프토테신의 첫 번째 부분 입체이성질체(0.140 g, 0.184 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(6 ml)에 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF(0.225 ml, 1,380 mmol)을 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 1/3)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 52시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1 그런 다음 2/3), 연한 노란색 고체(0.113 g, 0.175 mmol, 95%)를 얻었다. 얻은 생성물을 CH₂Cl₂/펜탄 = 1/50으로부터의 결정화에 의해 추가적으로 정제하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.67 (br s, 1 H, Ar), 8.39 (br s 1 H, Ar), 8.12 (br d, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.95 (br s, 1 H, Ar), 7.74 (br t, 1 H, J = 7.6 Hz, Ar), 7.65-6.66 (m, 12H, Ar + H-14), 6.48 (br s, 1 H, H-5), 5.55 (d, 1 H, J= 16.0 Hz, H-17), 5.42-4.44 (m, 5 H), 3.86 (br s, 1 H, OH), 1.92-1.72 (m, 2H, H-19), 0.95 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.5, 158.0, 156.2, 156.0, 153.0, 150.9, 150.9, 149.5, 145.3, 135.4, 132.2, 130.7, 129.8, 128.7-127.8 (11 C), 119.9, 98.2, 79.6, 72.7, 68.5, 68.0, 65.9, 31.6, 7.8.

실시예 XX - 5- 디벤질옥시카르보닐히드라지노 - 캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체의 제조

5-디벤질옥시카르보닐히드라지노-20-OTES-캄프토테신의 두 번째 부분 입체이성질체(0.140 g, 0.184 mmol)를 비활성 분위기 하에서 교반하면서 무수 THF(6 ml)에 용해시켰고, 뒤이어 Et₃N·3HF(0.150 mL, 0.921 mmol)을 적가하였다. 얻은 반응 혼합물을 TLC(헥산/AcOEt = 3/2)로 시약의 소멸을 모니터하면서, 실온에서 55시간 동안 반응시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 제거하였고, 얻은 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(SiO₂, 헥산/AcOEt = 1/1), 목표로 하는 화합물(0.113 g, 0.175 mmol, 95%)을 연한 노란색 고체로 얻었다. 생성물을 CH₂Cl₂/펜탄 = 1/50으로부터의 결정화에 의해 추가적으로 정제하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.71 (br s, 1H, Ar), 8.34 (br s 1 H, Ar), 8.18 (br s, 1 H, Ar), 7.94 (br s, 1 H, Ar), 7.79 (br t, 1 H, J= 7.6 Hz, Ar), 7.70-6.70 (m, 12H, Ar + H-14), 6.52 (br s, 1H, H-5), 5.53 (d, 1 H, J = 16.4 Hz, H-17), 5.44-4.48 (m, 5 H), 3.87 (br s, 1 H, OH), 1.90-1.70 (m, 2H, H-19), 0.99 (t, 3 H, J= 7.6 Hz, Me). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 173.4, 158.0, 156.3, 156.1, 153.0. 151.0. 150.9, 149.6, 145.3, 135.5, 132.3, 130.8, 129.8, 128.7, 127.8 (11 C), 119.8, 98.4, 79.5, 72.7, 68.5, 67.8, 66.0. 31.6, 7.7.

실시예 XXI - 세포 성장 억제 분석

인간 거대 세포 폐 종양으로부터의 H460 세포를 소 태아 혈청 10%를 포함하는 RPMI-1640 배지에서 배양시켰다. 1시간 또는 72시간 약물 노출 이후에 세포 성장 억제 분석법에 의해 세포 민감도(cell sensitivity)를 결정하였다. 지수 성장을 보이는 세포들을 수집하였고, 6-웰 플레이트에서 2회 시딩(seeding)하였다. 시딩하고 24시간 후에, 세포를 약물에 노출시켰고, 약물에 노출하고 72시간 후에 카오울터 카운터(Coulter conter)로 세포를 계수하여, IC₅₀들을 결정하였다. IC₅₀은 미처리된 대조군 성장에 비해 50%로 세포 성장을 억제하는 농도로 정의된다.

실시예 XXII - 토포이소머라제 -I-의존성 DNA 파괴 분석

751-bp BamHI-EcoRI DNA SV40 정제된 겔 (Beretta GL1 Binaschi M, Zagni AND, Capuani L, Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain. Cancer Res 1999; 59:3689-97)을 사용하여 DNA 파괴를 결정하였다. DNA 단편을 3'에서만 라벨링하였다. DNA 파괴 반응(20,000 cpm/시료)을 10 mM Tris-HCl(pH 7.6), 150 mM KCl, 5 mM MgCl₂, 15 ㎍/mL BSA, 0.1 mM 티오트레이톨, 및 인간 재조합 효소(전장 top1)의 20 ml에서 37℃에서 30분 동안 수행하였다. 반응을 0.5% SDS 및 0.3 mg/mL K 프로테인아제를 사용하여 45분 동안 42℃에서 차단하였다. 30분 후에 0.6 M NaCl을 첨가하고 약물 10 μM과 함께 배양하면서 서로 다른 시간에 DNA 손상 지속성을 테스트하였다. 침전 이후에, DNA를 변성 겔(TBE 버퍼 중 7% 폴리아크릴아미드)에서 시딩하기 전에, 변성 버퍼(denaturation buffer)(80% 포름아미드, 10 mM NaOH, 0.01 M EDTA 및 1 mg/mL 염료)에서 다시 현탁시켰다. 모든 DNA 파괴 수준을 Phospholmager 모델 425(Molecular Dynamics)(Dallavalle S, Ferrari A, Biasotti B, et al. Novel 7-oxyiminomethyl camptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity. J Med Chem 2001 ; 44:3264-74)로 측정하였다.

DNA 손상의 지속성 (%)

Claims

하기 일반식 (I)의 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 그의 이성질체, 그의 거울상 이성질체, 그의 부분 입체이성질체 또는 이들의 혼합물:

상기에서:

R은 F이고;

R1은 수소, 알킬, 아미노알킬, 히드록시알킬, 니트릴, 알콕시아미노, 아릴옥시아미노, 실릴알킬이고;

R2는 수소, 히드록시, 알콕시, 아미노알킬이고;

R3은 수소, 선택적으로 보호기에 의해 보호된 히드록시, 알콕시, 아미노알킬이고, 상기 보호기는 실릴, 카바메이트 또는 이들의 조합이고,

상기 알킬기 알콕시기, 아미노알킬기 또는 알콕시아미노기는 선형 사슬 또는 분지형 사슬로 1개 내지 8개의 탄소 원자를 포함하고, 및 상기 아릴기와 아릴옥시기는 5개 내지 10개의 탄소 원자를 포함한다.
제1항에 있어서, 5-F-캄프토테신(camptothecin)인 것인 식 (I)의 화합물.
제1항 또는 제2항에 청구된 바와 같은 식 (I)의 화합물을 제조하는 방법으로서,

하기 반응식에서 보여지는 바와 같은

a) 전구체의 히드록시기의 보호 단계;

b) 카르바니온(carbanion)의 생성 및 친전자성 시약(electrophilic reagent)과의 반응을 통한 5번에서의 유도체화 단계;

c) 상기 히드록시기의 탈보호 단계를 포함하고, 상기에서 R, R1, R2 및 R3은 제1항에서 기술된 의미를 갖고 PG는 OH-보호기인 것인 방법.
약제학적으로 허용가능한 담체 및 부형제와 함께 제1항 또는 제2항에 청구된 바와 같은 식 (I)의 화합물을 포함하는, 종양 치료를 위한 약제학적 조성물.
제4항에 있어서, 경구 또는 비경구 투여에 적절한 제형인 것인 약제학적 조성물.
삭제
제4항에 있어서, 상기 조성물은 고형 종양 또는 백혈병의 치료를 위해 사용되는 것인 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 고형 종양은 폐 종양, 난소 종양, 유방 종양, 위 종양, 간 종양, 전립선 종양, 연 조직의 육종(soft tissues sarcoma), 식도 종양, 췌장 종양, 두경부 종양, 및 교모세포종으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 백혈병은 만성 골수구성 백별형 또는 급성 골수구성 백혈병인 것인 약제학적 조성물.