KR100597500B1

KR100597500B1 - 안정한 인슐린 제제

Info

Publication number: KR100597500B1
Application number: KR1019997011715A
Authority: KR
Inventors: 마이클 로사리오 디펠리피스; 마이클 알렌 도빈스; 브루스 힐 프랭크; 순 리; 돈 마리 리번
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 1997-06-13
Filing date: 1998-06-11
Publication date: 2006-07-10
Anticipated expiration: 2018-06-11
Also published as: EA200000014A1; AR012894A1; CN1266371A; EP0884053A1; AU734781B2; PE79099A1; CZ299637B6; PL337324A1; HUP0002877A2; BR9810116A; IL133348A0; DE69808695T2; KR20010013700A; ES2185113T3; US6551992B1; SV1998000065A; DE69834956T2; JP2002504908A; CA2295140C; HUP0002877A3

Abstract

본 발명은 응집에 대해 안정하며, 완충제가 트리스 또는 아르기닌 중 어느 하나인 단량체성 인슐린 동족체 제제를 제공한다. 본 발명의 안정한 제제는 당뇨병의 치료에 유용하며, 연속 주입 시스템과 같이 장기 화학적 및 물리적 안정성을 요하는 치료 섭생에 있어서 특히 유리하다.

인슐린, 단량체, 동족체, 6량체, 연속 주입 시스템

Description

안정한 인슐린 제제{Stable Insulin Formulations}

본 발명은 사람 의약 분야, 특히 단량체성 인슐린 동족체를 투여하여 당뇨병 및 고혈당증을 치료하는 것에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 많은 기계적 에너지 투입량 및 고온에 노출되는 경우에도 장기 물리적 안정성이 우수한 단량체성 인슐린 동족체 제제에 관한 것이다.

치료제의 안정한 제제는 이 치료제가 높은 온도 및(또는) 기계적 스트레스에 노출되는 전달 장치 내에 사용하는 데에 특히 요구된다. 예를 들어, 안정한 인슐린 제제는 연속 주입 시스템 및 펜(pen) 전달 장치 내에 사용하는 데에 요구된다. 현재 사용되는 제제는 상기 유형의 전달 장치에 제한된 안정성만을 제공한다.

연속 주입 시스템에 있어서, 치료제를 함유하는 유체는 저장기로부터 통상 피하, 정맥 내 또는 복강 내 저장소로 분출된다. 주기적으로 재충전되어야 하는 저장기는 환자의 신체에 부착되거나, 환자의 신체에 이식된다. 어느 경우이든지, 환자의 체열 및 신체 움직임, 또한 튜브 및 펌프에서의 와류는 비교적 많은 양의 열기계적 에너지를 제제에 부여한다. 저장기가 재충전되는 빈도 및 저장기의 크기를 최소화하기 위해, 비교적 고농도의 치료제를 함유하는 제제가 매우 유리하다.

매씨 및 쉘리가(Massey and Sheliga)의 미국 특허 제4,839,341호(Eli Lilly and Company, 1989)에서는 연속 주입용 안정한 인슐린 제제를 제공하는 것과 관련 된 시도가 논의되어 있고, 1984년 경부터의 선행기술에 대한 철저한 검토가 제공되어 있다. 이 시도는 현재 더 증대되었는데, 그 이유는 이제는 1 내지 3 개월 동안 안정한 인슐린 제제가 필요하기 때문이다.

당뇨병 치료를 돕기 위해 정확하고 조절된 투여량의 인슐린을 측정 및 투여하기 위한 주입용 펜도 개발되었다. 일반적으로, 이 펜은 그 안에 특정량의 액체 약물이 밀봉되어 있는 카트리지 위에 고정된다. 카트리지는 플런저(plunger), 및 약물을 분배하는 방식으로 카트리지 내의 플런저를 촉진시키는 메카니즘을 포함한다. 주입용 펜은 재사용 가능하거나 일회용일 수 있다. 사용자는 재사용 가능한 펜의 다 써버린 카트리지를 교환하여 펜 뒤쪽의 엄지나사를 처음 위치에 다시 설치할 수 있다. 일회용 펜의 카트리지는 카트리지의 내용물이 다 소비된 후 처분되는 펜 내에 영구히 끼어져 있게 된다. 이 펜 내에 사용되는 인슐린 제제는 물리적 스트레스에 노출되면 통상 제한된 안정성이 관찰된다.

당뇨병 치료를 위해 신규 단량체성 인슐린 동족체를 도입하면 제제 본래의 안정성을 손상시킬 수 있는 치료 섭생 시에 이 화합물을 사용해야 할 필요가 있게 된다. 단량체성 인슐린 동족체로 공지된 신속 작용(Rapid-acting) 인슐린은 당업계에 잘 공지되어 있고 찬스(Chance) 등의 미국 특허 제5,514,646호(1996년 5월 7일 허여); 브렘스(Brems) 등의 문헌[Protein Engineering, 6:527-533 (1992)]; 브레인지(Brange) 등의 문헌[EPO publication No. 214, 826 (1987년 3월 18일 발간)]; 및 브레인지 등의 문헌[Current Opinion in Structural Biology 1:934-940 (1991)]에 개시되어 있다. 단량체성 인슐린 동족체는 인슐린 보다 훨씬 더 빨리 흡수되어 그 치료가 필요한 환자의 혈당 농도의 식후 조절에 있어 이상적으로 적합하다. 이들은 투여 부위로부터 빨리 흡수되기 때문에, 혈당 농도의 식사에 의한 조절 및 기초 조절 둘 다를 하기 위해 연속 주입으로 투여하는 데에도 특히 상당히 적합하다.

불행하게도, 단량체성 인슐린 동족체 제제는 응집되는 경향이 있어 열기계적 스트레스에 노출되는 경우 불안정해진다[1995년 12월 12일에 허여된 베케이사(Bakaysa) 등의 미국 특허 제5,474,978호]. 응집은 더 고도한 인슐린 종의 침전으로서 한층 더 분명해질 수 있다. 응집은 이런 방식으로 치료적 유효 투여량의 단량체성 인슐린 동족체의 재현 가능한 전달을 막을 수 있고, 투여 부위에서의 자극 또는 하나 이상의 전신성 면역 반응을 초래할 수도 있다. 응집에 대해 안정화된 인슐린 동족체 제제가 바람직하다.

연속 주입 시스템용 단량체성 인슐린 동족체 제제는 환자의 체열 및 수 일 내지 수 개월 기간 동안의 움직임 하에 영향을 받을지라도 가용성이고 실질적으로 응집이 없는 상태로 있어야 한다. 불안정성은 연속 주입 시스템에 바람직한 더 높은 단백질 농도 및 연속 주입 시스템 내의 제제가 노출되는 열기계적 스트레스에 의해 촉진된다. 따라서, 농축된 인슐린 동족체 제제의 물리적 및 화학적 안정성에서의 향상은 이들이 연속 주입 시스템 내에 성공적으로 사용될 수 있게 하는데 절박하게 요구된다. 연속 주입 시스템 이외로 사용하기 위한 단량체성 인슐린 제제의 안정성에 있어서의 향상도 유익하다.

신속 작용 단량체성 인슐린 동족체의 안정화된 제제는 공지되어 있다. 베케 이사 등의 미국 특허 제5,474,978호에는 6 개 분자인 사람 인슐린 동족체(6량체 착물), 2 개의 아연 원자 및 3 개 이상의 분자인 페놀성 방부제를 포함하는 사람 인슐린 동족체 착물, 6량체 착물을 포함하는 제제 및 이 제제를 투여하여 진성 당뇨병을 치료하는 방법이 개시 및 청구되어 있다. 베이카사 등은 등장화제 및 생리학적으로 허용되는 완충제를 더 포함하는 6량체 착물의 제제도 청구하고 있다.

미국 특허 제5,474,978호의 명세서에는 단량체성 인슐린 동족체의 아연 착물이 "생리학적으로 허용되는 완충제" 존재하에서 제형화될 수 있는 것으로 개시되어 있다. 제제 내에 사용하는 것으로 언급된 완충제 중에는 인산나트륨, 아세트산나트륨, 시트르산나트륨 및 트리스(TRIS)가 있다. 미국 특허 제5,474,978호의 실시예에는 완충제가 인산나트륨인 제제만이 기재되어 있고 인산나트륨 완충제만이 청구범위(청구항 5)에서 요구된다. 미국 특허 제5,474,978호의 실시예 중 어느 것도 아연-단량체성 인슐린 동족체 착물의 제제 내에 트리스를 사용하는 것을 구체적으로 개시한 것은 없다.

프로타민을 함유하는 단량체성 인슐린 동족체 제제는 또한 사용 시 중간 정도의 작용 지속 기간을 일으키도록 개발되었다. 단량체성 인슐린 동족체 프로타민 제제는 미국 특허 제5,461,031호에 기재되어 있다. 염기성 펩티드 프로타민으로 단량체성 인슐린 동족체를 결정화하여 중성 프로타민 현탁액을 생성하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 또한, 단량체성 인슐린 동족체 용액 및 단량체성 인슐린 동족체 프로타민 현탁액을 함유하는 2상 혼합물이 제조될 수 있다. 이 혼합물은 기본 활성 및 동족체의 최적 시간 작용 특성을 가진다. 단량체성 인슐린 동족체 혼합물은 미국 특허 제5,461,031호에도 기재되어 있다.

단량체성 인슐린 동족체-프로타민 현탁액 및 2상 혼합물은 카트리지 용기 내에 사용하기에 적합하다. 그러나, 이 장치는 환자의 빈번한 조작을 필요로 하기 때문에 제제에 대한 스트레스가 증가한다. 특히, 프로타민염 제제는 열기계적 스트레스에 노출되는 경우 안정성이 제한된다. 따라서, 단량체성 인슐린 동족체 프로타민 제제는 물론 2상 혼합물 제제로 작용하는 안정한 중간체를 개발할 필요성이 있게 된다.

이제 본 발명자들은 인산염 이외의 생리학적으로 허용되는 특정한 완충제가 아연-단량체성 인슐린 동족체 착물 제제, 프로타민염 제제 또는 단량체성 인슐린 동족체의 2상 혼합물의 제제에 사용될 경우, 인산염 완충제가 사용되는 경우보다 이 제제의 물리적 안정성이 뜻밖에도 상당히 더 증가한다는 것을 발견해 내었다. 본 발명자들이 발견한 가장 유리한 점은, 미국 특허 제5,474,978호에서 구체적으로 예를 든 것과 같은 아연-단량체성 인슐린 동족체 착물과 인산염 완충제와의 가용성 제제는 연속 주입 분출 시스템을 사용하여 장시간 투여되기에 충분할 정도로 물리적으로 안정하지 않지만, 본 발명에 따라 얻은 가용성 제제는 장시간 동안의 인슐린 주입 시에 안전하게 사용될 정도로 충분히 안정하다는 것이다. 본 발명자들은 단량체성 인슐린 동족체의 프로타민염 제제에 아르기닌을 가하면 제제의 화학적 및 물리적 안정성이 극적으로 향상된다는 것도 발견해 내었다.

따라서, 본 발명은 트리스 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리학적으로 허용되는 완충제, 단량체성 인슐린 동족체, 아연 및 페놀성 방부제를 포함하는(comprising) 용액 제제를 제공한다.

본 발명은 단량체성 인슐린 동족체, 아연, 페놀성 방부제, 프로타민, 및 트리스 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함하는 인슐린 동족체 제제도 포함한다.

본 발명은 추가로 본 발명의 안정한 제제를 그 치료를 필요로 하는 당뇨병 및 고혈당증 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 인슐린 동족체 제제를 사용하여 당뇨병 및 고혈당증을 치료하는 방법을 제공한다.

본 명세서에 개시되고 청구된 바와 같은 본 발명에 있어서, 하기 용어 및 약어의 의미는 다음과 같다.

"투여"라 함은 질병 또는 질환을 치료하기 위해 그 치료를 필요로 하는 환자의 신체에 본 발명의 제제를 도입하는 것을 의미한다.

여러 유형의 "응집하다"라는 동사는 개별 분자 또는 착물이 결합되어 응집물을 형성하는 과정을 가리키는 것이다. 응집물은 단량체성 인슐린 동족체의 분자 또는 그의 착물을 포함하는 중합체 결합물이다. 본 발명을 위해 단량체성 인슐린 동족체 6량체는 응집물이 아닌 착물이다. 단량체성 인슐린 동족체 및 그의 6량체 착물은 열기계적 스트레스에 노출되는 경우 응집하는 경향이 있다. 응집은 육안으로 확인할 수 있는 침전물이 형성되는 정도로 진행될 수 있다.

"아르기닌"이라 함은 아미노산을 가리키고, 그에는 D- 및 L- 거울상 이성질체는 물론 그의 혼합물이 포함된다. 이 용어에는 또한 그의 약리학적으로 허용되는 염이라면 어떠한 것이든지 포함된다. 아르기닌은 당업계에 1-아미노-4-구아니 디노발레르산으로도 공지되어 있다. 아르기닌은 염산염 등의 염을 쉽게 형성한다.

"착물"이라 함은 전이 금속이 1 종 이상의 리간드에 배위결합된 화합물을 의미한다. 리간드로는 여러 많은 다른 화합물 중에서 질소 함유 분자, 예를 들어 단백질, 펩티드, 아미노산 및 트리스가 있다. 단량체성 인슐린 동족체는 2가 아연 이온의 리간드일 수 있다.

"연속 주입 시스템"이라 함은 유체를 장시간 동안 환자에게 비경구적으로 연속으로 투여하거나, 유체가 투여되는 매 시간 마다 새로운 투여 부위를 설정하지 않고 장시간에 걸쳐 비경구적으로 환자에서 간헐적으로 투여하기 위한 장치를 가리킨다. 유체는 치료제(들)을 함유한다. 장치는 유체가 주입되기 전에 저장되는 저장기, 펌프, 카테테르, 또는 펌프를 거쳐 투여 부위에 저장기를 연결하기 위한 다른 튜브 및 펌프를 조절하는 조절 소자를 포함한다. 이 장치는 이식, 통상 피하용으로 구성될 수 있다. 이러한 경우, 인슐린 저장기는 통상 경피적 재충전용으로 적합할 것이다. 장치가 이식되는 경우 저장기의 함량은 체온 및 환자의 신체 움직임에 따라 좌우될 것이 분명하다.

"등장화제"는 생리학적으로 허용되는 화합물이며, 제제에 적합한 삼투성을 부여하여 제제와 접촉하고 있는 세포막을 통과하는 물의 순유출을 막는다. 글리세린 등의 화합물은 흔히 이러한 목적을 위해 알려진 농도로 사용된다. 가능한 다른 등장화제로는 염화나트륨 등의 염, 덱스트로스 및 락토스가 있다.

"단량체성 사람 인슐린 동족체", "단량체성 인슐린 동족체" 및 "사람 인슐린 동족체"라 함은 당업계에 잘 공지되어 있고, 일반적으로 사람 인슐린의 신속 작용 동족체를 가리키는데, 예로 들 수 있는 것으로는 B28 위치의 Pro가 Asp, Lys, Leu, Val 또는 Ala로 치환되고 B29 위치가 Lys이거나 Pro로 치환된 사람 인슐린; AlaB26-사람 인슐린, (B28-B30) 무함유 사람 인슐린 및 (B27) 무함유 사람 인슐린이 있다.

이러한 단량체성 인슐린 동족체는 찬스 등의 1996년 5월 7일에 허여된 미국 특허 제5,514,646호; 찬스 등의 미국 출원 번호 제08/255,297호; 브렘스 등의 문헌[Protein Engineering, 6:527-533 (1992)]; 브레인지 등의 문헌[EPO publication No. 214, 826 (1987년 5월 18일 발간)]; 및 브레인지 등의 문헌[Current Opinion in Structural Biology 1:934-940 (1991)]에 개시되어 있다. 본 발명에 따른 제제에 사용되는 단량체성 인슐린 동족체는 적절하게 가교결합된다. 적절히 가교결합된 인슐린 동족체는 3 개의 이황화물 브리지를 갖는데, 첫 번째는 A 사슬의 7 위치와 B 사슬의 7 위치 사이에, 두 번째는 A 사슬의 20 위치와 B 사슬의 19 위치에, 세 번째는 A 사슬의 6 및 11 위치에 있다.

본 명세서에서 사용된 "페놀성 방부제"라 함은 클로로크레졸, m-크레졸, 페놀 또는 이들의 혼합물을 가리킨다.

본 명세서에서 사용된 "안정성"이라 함은 단량체성 인슐린 동족체 제제의 물리적 안정성을 가리킨다. 단백질 제제의 물리적 안정성은 더 고도한 중합체 또는 심지어 침전물을 형성하는 단백질 분자의 응집에 의해 초래될 수 있다. "안정한" 제제는 그 안의 응집도가 만족스럽게 조절되며, 시간이 지남에 따라 허용될 수 없는 정도로 증가하지 않는 것이다. 단량체성 인슐린 동족체 제제는 열기계적 스트 레스에 노출되는 경우 응집되는 경향이 있다. 물리적 안정성은 샘플의 광의 겉보기 감쇠(흡광도 또는 광학 밀도)를 측정하는 것을 비롯하여 당업계에 잘 공지된 방법으로 평가할 수 있다. 이러한 광 감쇠의 측정은 제제의 혼탁도와 관련되어 있다. 혼탁도는 제제 내의 단백질 또는 착물의 응집 또는 침전에 의해 초래된다. 물리적 안정성을 평가하는 다른 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다.

"치료"라 함은 당뇨병 또는 고혈당증, 또는 인슐린 투여가 지시된 다른 질환 환자의 증상 및 이들 질병의 합병증을 억제 또는 경감시키기 위해 환자를 관리 및 보호하는 것을 가리킨다. 치료는 증상 또는 합병증의 발병을 예방하고, 증상 또는 합병증을 경감시키거나, 질병, 질환 또는 장애를 제거하기 위해 본 발명에 따른 제제를 투여하는 것을 포함한다.

"트리스"라 함은 2-아미노-2-히드록시메틸-1,3-프로판디올 및 그의 제약학적으로 허용 가능한 모든 염을 가리킨다. 유리 염기 및 염산염 형태는 트리스의 통상적인 두 형태이다. 트리스는 당업계에 트리메틸올 아미노메탄, 트로메타민 및 트리스(히드록시메틸)아미노메탄으로도 공지되어 있다.

본 발명은 하기 데이타로부터 쉽게 인식할 수 있는 바와 같이 당업계에 공지된 것에 비해 물리적 안정성이 매우 증가된 단량체성 인슐린 동족체 제제를 제공한다.

근본적으로 본 명세서의 실시예 3에 기재된 바와 같이 제조된 단량체성 인슐린 동족체, Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 및 트리스를 함유하는 제제는 하기와 같 이 촉진된 안정성 시험을 수행하였다. 제조된 제제의 샘플은 미리 세정한 2 mL 용량의 유리 HPLC 오토샘플러 바이알에 넣었다. 각 바이알에는 직경이 3/16 inch(4.77 mm)인 약 3 개의 테플론 공이 들어있다. 바이알의 공기는 제제 샘플로 완전히 바꾸었다. 밀봉한 후, 바이알을 37 ℃에서, 정점에서 정점까지의 진폭 12 mm로, 40 Hz(20 x g, 평균 선형 가속도)로 계속 진탕하여 응집 및 물리적 불안정성이 잘 일어나는 온도에서 비교적 높은 수준의 기계적 에너지 투입량을 제제에 공급하였다. 바이알은 길이 치수(즉, 상부에서 하부까지)가 선형 가속도 방향에 대해 평행한 방향이 되도록 진탕기에 놓았다. 즉, 진탕기 표면 위의 양쪽에 놓았다. 인슐린 제제에 있어 상기와 같은 촉진된 조건 하에서 증가된 안정성은 크게 증가된 사용중 안정성과 관련된 것으로 밝혀졌다.

450 nm에서 샘플 제제 및 대조용 제제의 광학 밀도는 쉬마쭈(Shimadzu) 1201 분광광도계를 사용하여 주기적으로 측정하였다. 대조용 제제는 샘플 제제와 동일한 방법으로 제조하지만 교반하지 않고 4 ℃에서 저장하였다. 샘플의 광학 밀도에서 대조용의 광학 밀도를 뺌으로써 샘플에 대한 순수 광학 밀도를 계산하였다. 표 1의 값은 주어진 수의 샘플 n 개에 대한 순수 광학 밀도의 평균 및 표준 오차이다. 완충제로서 인산염(pH 7.4 ±0.1)을 함유하는 샘플 및 대조용 제제는 본질적으로는 실시예 4에 기재된 바와 같이 제조하였다.

37 ℃에서, Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 제제의 혼탁도(450 nm에서의 광학 밀도)에 대한 완충제 및 많은 기계적 에너지 투입양에 대한 노출 시간의 영향

	450 nm에서의 광학 밀도
	16 시간	70 시간	100 시간	500 시간
실시예 3 (트리스)	0.02 ±0.01 n = 5	0.03 ±0.02 n = 5	0.02 ±0.01 n = 5	0.04 ±0.01 n = 4
실시예 4 (인산염)	0.81 ±0.71 n = 5	N.D.	N.D.	N.D.
N.D.는 무검출을 의미함

상기 조건하에서, 인산염 완충제를 함유하는 제제의 혼탁도는 교반하지 않고 4 ℃에서 저장한 인산염을 함유하는 대조용 제제에 비해 16 시간만에 매우 높은 허용할 수 없는 수준에 도달했다(표 1, 실시예 4). 한편, 완충제로서 트리스를 함유하는 제제의 광학 밀도는 500 시간 동안 대조군의 광학 밀도와 실질적으로 동일하게 유지되었다(실시예 3). 표 1의 데이타는 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 제제 내의 인산염 완충제를 트리스 완충제로 바꾸면 제제의 안정성이 극적으로 증가하다는 것을 분명하게 입증해준다. 다른 인슐린 제제에 대한 관찰을 기초로 할 때, 촉진 시험 시의 트리스 완충제 중 단량체성 인슐린 동족체 제제의 놀랍고 현저한 안정성은, 촉진 시험 시의 에너지 투입량이 예상되는 사용 기간 동안보다 더 많기 때문에, 500 시간보다 훨씬 더 큰 사용중 안정성으로 바뀔것으로 여겨진다.

단량체성 인슐린 동족체, Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체, 및 완충제로서 트리스 또는 L-아르기닌 중 어느 하나를 포함하는 제제는 본질적으로 실시예 3, 4 및 5에 기재된 바와 같이 제조하였다. 제제를 제조하기 위해 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체의 3 개의 로트를 사용하였다. 동족체 로트 및 완충제의 각 조합의 6 개 샘플에 대해 상기와 같이 안정성 시험을 하였다. 바이알에 기계적 에너지를 부여 하기 위해 4 개의 서로 다른 진탕기를 이용하였다. 각 진탕기에는 각 로트 및 완충제 조합 중 적어도 하나의 샘플이 들어 있다. 제제의 안정성은 상기와 같이 샘플 및 대조군의 광학 밀도를 주기적으로 측정하여 평가하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다. 표 2의 값은 각 로트 및 완충제에 대한 6 개 샘플의 순수 광학 밀도 의 평균 및 표준 오차이다.

37 ℃에서 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 제제의 혼탁도(450 nm에서의 광학 밀도)에 대한 완충제, 동족체의 로트 및 많은 기계적 에너지 투입량에 대한 노출 시간의 영향

완충제	동족체 로트	450 nm에서의 광학 밀도
완충제	동족체 로트	23 시간	47 시간	87 시간	139 시간
트리스	로트 1	0.02 ±0.02	0.06 ±0.02	0.05 ±0.02	0.00 ±0.02
	로트 2	0.00 ±0.01	0.04 ±0.02	0.03 ±0.01	0.00 ±0.02
	로트 3	0.02 ±0.02	0.05 ±0.03	0.04 ±0.03	0.01 ±0.02
아르기닌	로트 1	0.01 ±0.02	0.04 ±0.02	0.04 ±0.02	2.12 ±1.03
	로트 2	0.01 ±0.02	0.04 ±0.02	0.06 ±0.08	1.80 ±0.60
	로트 3	0.00 ±0.02	0.03 ±0.02	1.84 ±0.66	N.D.
인산염	로트 1	0.13 ±0.06	2.68 ±0.17	2.61 ±0.11	N.D.
	로트 2	0.21 ±0.24	2.14 ±0.75	2.75 ±0.14	N.D.
	로트 3	0.29 ±0.23	2.75 ±0.14	2.79 ±0.11	N.D.

상기 조건하에서, 인산염 완충제를 함유하는 제제의 혼탁도는 사용된 인슐린 동족체 로트와는 상관없이 23 시간만에 허용할 수 없는 매우 높은 수준에 이르렀다(표 2). 이와 대조적으로, 완충제로서 트리스를 함유하는 제제의 혼탁도는 사용된 인슐린 로트와는 상관없이 139 시간 동안 근본적으로 변하지 않았다. L-아르기닌 완충제를 함유하는 제제는 인산염을 함유하는 제제에 비해 물리적 안정성이 더 양호하고 이 안정성의 지속 기간은 사용된 인슐린 동족체 로트에 다소 좌우되는 것으로 입증되었다. 표 2의 데이타는 pH 7.4의 트리스 완충제 또는 L-아르기닌 완충제를 포함하는 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 제제가 인산염 완충제를 포함하는 제제 보다 더 현저히 더 긴 시간 동안 응집에 대해 안정한 상태로 있다는 것을 분명하게 입증해준다. 또 다시, 트리스 및 L-아르기닌 완충제 중 단량체성 인슐린 동족체 제제의 놀랍고 현저한 안정성은, 촉진 시험 시의 에너지 투입량이 예상되는 사용 기간 동안보다 더 많기 때문에, 촉진 시험 시 관찰되는 것보다 훨씬 더 큰 사용중 안정성으로 바뀔것으로 여겨진다.

Lys^B28Pro^B29현탁액 제제에 대한 형태 및 외관의 변화에 대한 감수성은 물리적 안정성 스트레스 시험(PSST)로 평가하였다. 이 열기계적 시험에서, 제제는 유리 비드가 들어 있는 체적이 고정된 용기 내에 상부 공간이 없도록 밀봉하였다. 용기를 높은 온도(약 37 ℃)의 쳄버에 두고, 제한된 시간(약 24 시간) 동안 고정 속도로 회전시킨 후 나머지는 24 시간 동안 무활성으로 유지시켰다. 용기를 변화에 대해 평가하고 응집(클럼핑)이 일어나는 것을 평가하는 경우에는 시험에서 제외하였다. 실패 없는 장시간 동안의 사용은 물론 시험 시에 남아 있는 더 많은 수의 용기는 물리적 안정성이 증가한 것에 해당하였다.

Lys^B28Pro^B29및 Lys^B28Pro^B29-프로타민 결정체를 함유하는 2 종의 서로 다른 혼합물을 시험하였다. 저함량 혼합물에 있어서 Lys^B28Pro^B29-프로타민에 대한 Lys^B28Pro^B29의 비율은 25:75이고 고함량 혼합물에 있어서는 75:25이었다. 저함량 혼합물은 실시예 6 및 7에 기재된 바와 같이 제조하였다. 저함량 혼합물은 PSST법 으로 시험하고 아르기닌을 함유하는 제제만 18일 이후에 용기에 남겨두었다. 2 종의 시험 샘플을 44 일 동안 용기에 남겨두었다. 고함량에서의 PSST는 시험한지 36일 이후에 용기의 약 50%로 남아있는 아르기닌을 함유하는 제제와 유사한 결과를 나타내지만, 인산염 완충제를 함유하는 대조용 제제는 36일 이후에 용기의 0 내지 5%로 남아있었다.

본 발명에 따른 제제에 사용하기 위한 바람직한 단량체성 인슐린 동족체는 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린, Asp^B28-사람 인슐린 및 Ala^B26-사람 인슐린이다.

본 발명에 따른 제제 중 단량체성 인슐린 동족체의 농도는 1.2 ㎎/mL 내지 50 ㎎/mL 범위이다. 동족체 농도의 바람직한 범위는 약 3.0 ㎎/mL 내지 약 35 ㎎/mL이다. 더 바람직한 농도는 mL 당 인슐린 활성 약 100 유니트, 약 200 유니트, 약 400 유니트, 약 500 유니트 및 약 1000 유니트, 각각을 함유하는 제제와 거의 동일한 것으로서, 약 3.5 ㎎/mL, 약 7 ㎎/mL, 약 14 ㎎/mL, 약 17.5 ㎎/mL 및 약 35 ㎎/mL이다.

제제 중 아연의 농도는 약 4.5 ㎎/mL 내지 약 370 ㎎/mL 범위이고, 2 개 이상의 아연 원자가 각 6량체 내의 6 개 인슐린 분자와 착화될 수 있는 정도이어야 한다. 인슐린 동족체 6량체에 대한 전체 아연(착화된 아연과 착화되지 않은 아연의 합)의 비율은 2 내지 4이어야 한다. 인슐린 동족체 6량체 착물 당 약 3 내지 4 개의 전체 아연 원자의 비율이 바람직하다.

본 발명에 따른 단량체성 인슐린 동족체 6량체를 형성하는 데에 페놀성 방부 제의 최소 농도가 요구된다. 다중 용도 제제를 위한 개략적인 방부 유효성 요구조건을 충족시키기 위한 몇 몇 목적을 위해서, 본 발명의 제제 중 페놀성 방부제의 농도는 방부 유효성을 유지하는데 필요한 양으로 6량체를 형성하는데 요구되는 것 이상으로 증가시킬 수 있다. 효과적인 방부에 필요한 방부제의 농도는 사용되는 방부제, 제제의 pH 및 방부제를 결합시키거나 격리시키는 물질의 존재 여부에도 좌우된다. 일반적으로, 필요량은 예를 들어 문헌[WALLHAUSER, K.DH., DEVELOP. BIOL. STANDARD. 24, pp. 9-28(Basel, S. Krager, 1974)]에서 찾아볼 수 있다. 제형화하는 경우 본 발명에 따른 제제에 사용되는 인슐린 동족체 6량체 착물은 7 개의 페놀성 화합물에 결합하지만, 일반적으로는 6 개의 페놀성 화합물만이 6량체에 결합하는 것으로 여겨진다. 최소한 약 3 개의 페놀성 화합물이 6량체를 형성하는데 요구된다. 항균 효과를 위해 방부제가 요구되는 경우, 바람직한 페놀성 화합물의 농도는 약 23 mM 내지 약 35 mM이다. 개별적이거나 또는 혼합물 중의 m-크레졸 및 페놀이 바람직한 방부제이다.

제제는 임의로 등장화제를 함유할 수 있다. 제제는 등장화제를 함유하는 것이 바람직하지만, 글리세린이 가장 바람직한 등장화제이다. 글리세린이 사용되는 경우 그 농도는 인슐린 제제 업계에 공지된 범위 내이고, 바람직하게는 약 16 ㎎/mL이다.

제제의 pH는 완충제, 예를 들어 트리스 또는 L-아르기닌에 의해 조절된다. 완충제의 농도는 본 발명의 목적을 달성하는데 있어 결정적으로 중요한 역할을 하는 것으로 여겨지지는 않지만, 저장하는 동안 pH가 목표 pH ±0.1 pH 단위로 유지 되도록 pH의 적합한 완충작용을 제공하여야 한다. 바람직한 pH는 약 22 ℃의 온도에서 측정하였을 때 약 7 내지 약 8이다.

다른 첨가제, 예를 들어 트윈(Tween) 20[등록상표, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트], 트윈 40[등록상표, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트), 트윈 80[등록상표, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노모노올리에이트], 플루로닉(Pluronic) F68[등록상표, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체] 및 PEG(폴리에틸렌 글리콜) 등의 제약학적으로 허용되는 가용화제가 임의로 제제에 가해질 수 있다. 이들 첨가제는 본 발명의 상당한 장점을 달성하는 데에는 요구되지 않지만, 제제가 플라스틱 물질과 접촉하게 될 경우에는 유용할 수 있다.

본 발명은 단량체성 인슐린 동족체의 가용성 분획의 비율이 다양한 프로타민염 제제도 포함한다. (상기된 바와 같이) 인슐린 제제에 통상 가해지는 아연 등의 부형제 및 방부제가 아르기닌과 함께 안정화를 형성시킬 수 있지만, 아르기닌을 사용하여 제제를 안정화할 수 있지만 제제를 안정화하는 데에 인슐린 분자의 특정한 배좌 요구조건은 필요하지 않다. 아르기닌 농도는 프로타민을 함유하는 제제 중에서 1 내지 100 mM이다. 가장 바람직한 아르기닌 농도는 5 내지 25 mM이다. 아르기닌은 사전에 아연 이온 및 페놀성 방부제를 함유하는 용액 또는 침전된 현탁액에 보충제로서 가해질 수 있다.

투여는 당업계 의사에 의해 효과적인 것으로 알려진 어떠한 경로를 통해서든지 이루어질 수 있다. 비경구 투여가 바람직하다. 비경구 투여는 흔히 위장 경로 이외에 의한 투여로 이해된다. 본 발명에 따른 제제를 투여하는데 있어 바람직한 비경구 경로로는 정맥 내, 근육 내, 피하, 복강 내, 비 내, 폐 및 비강 경로가 있다. 본 발명에 사용되는 화합물의 정맥 내, 복강 내, 근육 내 및 피하 투여 경로는 더 바람직한 비경구 투여 경로이다. 본 발명에 따른 제제의 정맥 내, 복강 내 및 피하 투여 경로는 훨씬 더 바람직하다.

특정 비경구 경로를 통한 투여는 멸균 주사기 또는 몇 몇 다른 장치, 예를 들어 연속 주입 시스템에 의해 추진되는 바늘 또는 카테테르를 거쳐 환자의 신체로 본 발명에 따른 제제를 도입하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명에 의해 제공되는 제제는 주사기, 주입기, 펌프, 또는 당업계에서 비경구 투여용으로 인식된 다른 임의의 장치를 사용하여 투여할 수 있다. 본 발명에 따른 제제는 폐 또는 비강에서흡수되게 하기 위해 에어로졸로서 투여할 수도 있다. 제제는 구강 투여와 같이 점막으로 흡수되도록 투여할 수도 있다.

당뇨병 또는 고혈당증을 치료하기 위해 투여하는 본 발명에 따른 제제의 양은 이에 제한되지 않으나 환자의 성별, 체중 및 연령, 치료할 질환 또는 질병의 근본적 원인, 투여 경로 및 생체내이용률, 투여된 단량체성 인슐린 동족체의 체내 잔존률, 제제 및 단량체성 인슐린 동족체의 효능을 비롯한 다수 요인에 좌우된다. 간헐적으로 투여되는 경우, 투여량은 투여 간격 및 제제로부터의 단량체성 인슐린 동족체의 생체내이용률도 고려해야 한다. 본 발명에 따른 제제의 투여는 연속적일 수 있다. 목적하는 임상 결과를 달성하기 위해 본 발명에 따른 제제의 투여량 및 주입 속도 또는 투여 회수를 적절히 결정하는 것은 담당 의사의 기술에 속한 것이 다.

본 발명에 사용되는 단량체성 인슐린 동족체는 전형적인 용액 방법, 고상 방법, 반합성 방법 및 재조합 DNA 방법을 비롯한 여러 인식되어 있는 펩티드 합성법 중 어떠한 것으로든지 제조할 수 있다. 찬스 등의 1996년 5월 7일 허여된 미국 특허 제5,514,646호에는 당업자가 본 발명에 사용되는 임의의 단량체성 인슐린 동족체 중 어떠한 것이든지 제조될 수 있도록 충분하게 상세히 여러 단량체성 인슐린 동족체를 제조하는 방법이 개시되어 있다.

아연 및 페놀성 방부제는 안정하며 신속한 해리 및 작용의 개시가 이루어질 수 있는 착물을 얻는 데에 필수적이다. 6량체 착물은 사람 인슐린 동족체의 6량체 당 2 개의 아연 이온, 및 클로로크레졸, m-크레졸, 페놀 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 3 분자 이상의 페놀성 방부제로 이루어져 있다.

적합한 단량체성 인슐린 동족체는 pH 약 7 내지 약 8에서 적합한 양의 페놀성 방부제를 함유하는 희석제 중에 단량체성 인슐린 동족체를 용해한 후 아연을 가하여 6량체 착물로 전환시킨다. 아연은 아연염, 예를 들어 (이에 제한되지 않으나) 아세트산아연, 브롬화아연, 염화아연, 플루오르화아연, 요오드화아연 및 황산아연으로서 가하는 것이 바람직하다. 당업자는 본 발명의 일부인 단량체성 인슐린 동족체 착물을 형성하는 데에도 사용할 수 있는 많은 다른 아연염이 있다는 것을 인식할 것이다. 아세트산아연, 산화아연 또는 염화아연을 사용하는 것이 바람직한데, 그 이유는 이들 화합물이 통상적으로 허용되는 공정에 새로운 화학 이온을 가하지 않기 때문이다.

단량체성 인슐린 동족체의 용해는 흔히 "산 용해"로서 공지된 것에 의해 촉진될 수 있다. 산 용해에 있어서, 단량체성 동족체의 용해를 촉진하기 위해 수성 용매의 pH는 생리학적으로 허용되는 산, 바람직하게는 HCl을 사용하여 약 3.0 내지 3.5로 저하시킨다. 생리학적으로 허용되는 다른 산으로는 아세트산, 시트르산 및 황산이 있으나 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 따른 제제의 제조 시 pH를 조절하기 위해 인산을 사용하는 것은 바람직하지 않다. 이어서, 생리학적으로 허용되는 염기, 바람직하게는 수산화염기를 사용하여 pH를 약 pH 7.3 내지 7.5로 조절한다. 생리학적으로 허용되는 다른 염기로는 수산화칼륨 및 수산화암모늄이 있으나 이에 제한되지 않는다. 그 후, 페놀성 방부제 및 아연을 가한다.

본 발명에 따른 비경구용 제제는 통상적 용해 및 혼합 공정을 이용하여 제조할 수 있다. 적합한 제제를 제조하기 위해서, 예를 들어 충분량의 물에서 계량된 양의 단량체성 인슐린 동족체를 목적하는 방부제, 아연 화합물 및 완충제와 합하여 6량체 착물을 제조한다. 제제는 일반적으로 멸균 여과한 후 투여한다. 당업자는 이 공정의 변형이 이루어질 수 있다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 성분을 가하는 순서, pH를 조절하는 순서, 있다면 온도, 및 제제가 제조되는 이온 강도는 농도 및 사용되는 투여 수단에 대해 최적화할 수 있다.

하기 실시예 및 제조예는 본 발명에 따른 제제의 제조 방법을 더 예시한 것 에 불과하다. 본 발명의 범위는 하기 실시예에 의해 제한되지 않는다.

<실시예 1>

Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 및 트리스를 함유하는 U100 가용성 제제의 제조

최종 제형 밀리리터 당 인슐린 활성 100 유니트가 얻어지도록 계산된 임의의 양의 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체-아연 결정체를 페놀 0.715 ㎎/mL, m-크레졸 1.76 ㎎/mL, 글리세린 16 ㎎/mL 및 산화아연을 함유하는 수용액 중에 현탁시켰다. 인슐린 동족체-아연 결정체에는 중량 기준으로 약 0.36%의 아연이 함유되어 있었다. 수성 희석제 중 산화아연의 농도는 제제 중 최종 아연 이온의 농도를 인슐린 활성 100 유니트 당 약 0.025 ㎎로 보충할 정도이었다. 임의의 부피의 10% 염산을 가하여 pH를 2.8 내지 3.0으로 조절하였다. 결정체가 용해되도록 교반한 후, 10% 수산화나트륨의 분획을 조심스럽게 가하여 pH를 7.4 내지 7.7로 조절하였다. 최종 제제 중 트리스의 농도가 2 ㎎/mL이도록 계산된 임의의 부피의 트리스 원액(50 ㎎/mL, 실온, 즉 약 22 ℃에서 측정 시 pH 7.4)를 인슐린 동족체 용액에 가하였다. 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다. 0.2 마이크론 필터를 이용하여 제제를 멸균 여과하였다.

<실시예 2>

Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 및 L-아르기닌을 함유하는 U100 가용성 제제의 제조

완충제가 가해질 때까지 실시예 1에 기재된 공정을 수행하였다. 이어서, 임의의 부피의 트리스 원액을 가하는 대신, 최종 제제 중 L-아르기닌의 농도가 20 mM이 되도록 계산된 임의의 부피의 L-아르기닌 원액(200 mM, pH 7.4)을 인슐린 동족체 용액에 가하였다. 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다. 0.2 마 이크론 필터를 이용하여 제제를 멸균 여과하였다.

<실시예 3>

Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 및 트리스를 함유하는 U400 가용성 제제의 제조

최종 제형 밀리리터 당 인슐린 활성 400 유니트가 얻어지도록 계산된 임의의 양의 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체-아연 결정체를 페놀 0.715 ㎎/mL, m-크레졸 1.76 ㎎/mL, 글리세린 16 ㎎/mL 및 산화아연을 함유하는 수용액 중에 현탁시켰다. 인슐린 동족체-아연 결정체에는 중량 기준으로 약 0.36%의 아연이 함유되어 있다. 수성 희석제 중 산화아연의 농도는 제제 중 최종 아연 이온 농도를 인슐린 활성 100 유니트 당 약 0.025 ㎎로 보충할 정도이었다. 임의의 부피의 10% 염산을 가하여 pH를 2.8 내지 3.0으로 조절하였다. 결정체가 용해되도록 교반한 후, 10% 수산화나트륨의 분획을 조심스럽게 가하여 pH를 7.4 내지 7.7로 조절하였다. 최종 제제 중 트리스의 농도가 2 ㎎/mL이 되도록 계산된 임의의 부피의 트리스 원액(50 ㎎/mL, 실온, 즉 약 22 ℃에서 측정 시 pH 7.4)을 인슐린 동족체 용액에 가하였다. 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다. 0.2 마이크론 필터를 이용하여 제제를 멸균 여과하였다.

<실시예 4>

Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 및 인산염을 함유하는 U400 가용성 제제의 제조

최종 제형 밀리리터 당 인슐린 활성 400 유니트가 얻어지도록 계산된 임의의 양의 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체-아연 결정체를 페놀 0.715 ㎎/mL, m-크레졸 1.76 ㎎/mL, 글리세린 16 ㎎/mL 및 산화아연을 함유하는 수용액 중에 현탁시켰다. 인슐린 동족체-아연 결정체에는 중량 기준으로 약 0.36%의 아연이 함유되어 있었다. 수성 희석제 중 산화아연의 농도는 제제의 최종 아연 이온 농도를 인슐린 활성 100 유니트 당 약 0.025 ㎎로 보충할 정도이었다. 임의의 부피의 10% 염산을 가하여 pH를 2.8 내지 3.0으로 조절하였다. 결정체가 용해되도록 교반한 후, 10% 수산화나트륨의 분획을 조심스럽게 가하여 pH를 7.4 내지 7.7로 조절하였다. 최종 제제 중 이염기성 나트륨 인산염의 농도가 3.78 ㎎/mL(pH 7.4 ±0.1)이 되도록 계산된 임의의 부피의 이염기성 나트륨 인산염을 인슐린 동족체 용액에 가하였다. 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다. 0.2 마이크론 필터를 이용하여 제제를 멸균 여과하였다.

<실시예 5>

Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 및 L-아르기닌를 함유하는 U400 가용성 제제의 제조

완충제가 가해질 때까지 실시예 3에 기재된 공정을 수행하였다. 이어서, 임의의 부피의 트리스 원액을 가하는 대신, 최종 제제 중 L-아르기닌의 농도가 20 mM이되도록 계산된 임의의 부피의 L-아르기닌 원액(200 mM, pH 7.4)을 인슐린 동족체 용액에 가하였다. 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다. 0.2 마이크론 필터를 이용하여 제제를 멸균 여과하였다.

<실시예 6>

L-아르기닌을 함유하는 U100 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 고함량 혼합물 제제(75% v/v 가용성, 25% v/v 중성 프로타민 Lys^B28Pro^B29)의 제조

A. 중성 프로타민 Lys^B28Pro^B29의 제조

200 U/mL의 Lys^B28Pro^B29아연 인슐린 결정체를 페놀 0.715 ㎎/mL, m-크레졸 1.76 ㎎/mL, 글리세린 16 ㎎/mL, 및 0.025 ㎎/100 U로 최종 아연 이온 농도를 보충하도록 염산으로 산성화된 산화아연을 함유하는 수용액 중에 현탁시켰다. 임의의 부피의 10% 염산을 가하여 pH를 2.8 내지 3.0으로 조절하였다. 용해되도록 교반한 후, 10% 수산화나트륨 용액을 가하여 pH 7.4 내지 7.7로 조절하였다. pH 7.2에서 이염기성 나트륨 인산염 75.6 ㎎/mL의 최종 제제 농도 3.78 ㎎/mL이 되도록 하는 당량 부피를 가하였다. 침전된 고체를 용해하고, 적정하여 pH 7.4로 유지하고, 용액을 여과한 후 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다.

프로타민 염기 0.6 ㎎/100 U을 함유하도록 계산된 고상 프로타민 황산염을 페놀 0.715 ㎎/mL, m-크레졸 1.76 ㎎/mL 및 글리세린 16 ㎎/mL을 함유하는 수성 용액에 현탁시켰다. 고상 이염기성 인산나트륨을 가하여 제제 농도가 3.78 ㎎/mL이 되도록 하였다. 10% 염산을 사용하여 용액을 pH 7.4로 조절하고, 물을 사용하여 최종 부피로 희석하고 여과하였다.

200 유니트의 Lys^B28Pro^B29 용액 및 프로타민 용액 모두를 15 ℃에서 평형화하 였다. 프로타민 용액을 Lys^B28Pro^B29 용액에 가하고 생성된 현탁액을 15 ℃에서 24 시간 동안 교반하지 않으면서 배양하였다.

B. Lys^B28Pro^B29고함량 혼합물의 제조

최종 부피의 75%에 상응하는 실시예 2에서 제조된 L-아르기닌을 함유하는 임의의 양의 Lys^B28Pro^B29100 유니트 용액을 계산된 부피의 100 U/mL 중성 프로타민 Lys^B28Pro^B29에 가하였다. 현탁액을 주위 온도에서 교반하였다.

<실시예 7>

L-아르기닌을 함유하는 U100 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린 동족체 고함량 혼합물 제제(25% v/v 가용성, 75% v/v 중성 프로타민 Lys^B28Pro^B29)의 제조

A. 중성 프로타민 Lys^B28Pro^B29의 제조

200 U/mL의 Lys^B28Pro^B29아연 인슐린 결정체를 페놀 0.715 ㎎/mL, m-크레졸 1.76 ㎎/mL, 글리세린 16 ㎎/mL, 및 0.025 ㎎/100 U로 최종 아연 이온 농도를 보충하도록 염산으로 산성화된 산화아연을 함유하는 수용액 중에 현탁시켰다. 임의의 부피의 10% 염산을 가하여 pH를 2.8 내지 3.0으로 조절하였다. 용해되도록 교반한 후, 10% 수산화나트륨 용액을 가하여 pH 7.4 내지 7.7로 조절하였다. pH 7.2에서 이염기성 나트륨 인산염 75.6 ㎎/mL의 최종 제제 농도 3.78 ㎎/mL이 되도록 하는 당량 부피를 가하였다. 침전된 고체를 용해하고, 적정하여 pH 7.4로 유지하고, 용 액을 여과한 후 제제를 최종 부피로 희석하기 위해 물을 가하였다.

200 유니트의 Lys^B28Pro^B29 용액 및 프로타민 용액 모두를 15 ℃에서 평형화하였다. 프로타민 용액을 Lys^B28Pro^B29 용액에 가하고 생성된 현탁액을 15 ℃에서 24 시간 동안 교반하지 않으면서 배양하였다.

B. Lys^B28Pro^B29고함량 혼합물의 제조

최종 부피의 25%에 상응하는 실시예 2에서 제조된 L-아르기닌을 함유하는 임의의 양의 Lys^B28Pro^B29100 유니트 용액을 계산된 부피의 100 U/mL 중성 프로타민 Lys^B28Pro^B29에 가하였다. 현탁액을 주위 온도에서 교반하였다.

Claims

트리스 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리학적으로 허용되는 완충제, 단량체성 인슐린 동족체, 아연 및 페놀성 방부제를 포함하는 용액 제제.
제1항에 있어서, 단량체성 인슐린 동족체가 Lys^B28Pro^B29-사람 인슐린이고, 완충제가 트리스인 제제.
제1항에 있어서, 단량체성 인슐린 동족체가 Asp^B28-사람 인슐린이고, 완충제가 트리스인 제제.
제1항에 있어서, 등장화제를 더 포함하고, 22 ℃의 온도에서 측정하였을 때 pH가 7.0 내지 8.0인 제제.
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제1항에 있어서, 트리스가 약 2 ㎎/mL의 농도로 존재하고, 등장화제인 글리세롤이 약 16 ㎎/mL의 농도로 존재하고, m-크레졸이 약 1.76 ㎎/mL의 농도로 존재하고, 페놀이 약 0.715 ㎎/mL의 농도로 존재하는 것인 제제.
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