JPS62501505A - ビタミンｄ誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ビタミンＤ誘導体およびその製造方法 技術分デフ 本発明は新規なビタミンＤ誘導体導体に関する。

より詳しくは１本発明は２６−ホモビタミン類に関する。

さらにより詳しくは、本発明はヒドロキシル化された２６−ホモビタミン類に関 する。

ビタミンＤは動物および人間のカルシウムとリンの代謝を調整するものであるこ とが知られており、現在ではビタミンＤの生物学的効力はそれの生体内でのヒド ロキシル化された誘導体への代謝転化に依存することが確認されている。すなわ ち、ビタミンＤ３は肝臓において、２５−ヒドロキシビタミンＤ３に生体内ヒド ロキシル化＆れ５次に腎臓において１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３に変 えられる。現在ビタミンＤの循環ホルモン形であると認められているのは後者の 化合物である。

これらの形のビタミンＤは内臓におけるカルシウムとリンの輸送および骨の流通 （ｍｏｂ　ｉ　ｌ　１ｚａｔ　ｉｏｎ　）とミネラル化を促進するという生物学 的活性のために１種種の骨の疾患の治療用として著しく適した重要な製薬製品と なっている。

１且狭嶌 ビタミンＤ誘導体、それらの製造方法およびその用途については特許および他の 文献において多くの川魚により議論されている０例えば、米国特許第３，５６５ ，９２４号では２５−ヒドロキシコレカルシフェロールを、米国特許第３．６９ ７，５５９号では１゜２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールを７米国特許第 ３．７４１．９９６号では１α−ヒドロキシコレカルシフェロールを、米国特許 第３，７８６，０６２号では２２−デヒドロ−２５−ヒドロキシコレカルシフェ ロールを、米国特許第３，８８０，８９４号では１．２５−ジヒドロキシエルゴ カルシフェロールを、米国特許第４．２０１，８８１号では２４．２４−ジフル オロ−１α、２５−ジヒドロキシコｌ／カルシフエロールを、米国特許第４，１ ９６，１３３号では２４．２４−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシコレカ ルシフェロールをそれぞれとりあげている。

発明の開不 すぐれたビタミンＤ様の活性を示１ノ、そのためビタミンＤ３ならびにその種々 の誘導体の代替品として容易に既知の用途１例えば」−皮小体機能減退症、骨異 栄養症、骨軟化症および１１・粗しよう症などカルシウムおよびリンの不均衡を 表わす社種の病状の治療用に使用することが可能な新しいビタミンＤ、Ｊ導体が 見いだされた。

これらの誘導体は２６−ホモビタミン類であり、特に１α−２５−ジヒドロキシ −２２Ｅ−デヒドロ−２６−ホモビタミンＤ３および１α、２５−ジヒドロキシ −２６−ホモビタミンＤ３である。

（式中、ＲＲおよびＲ３はそれぞれ水素原子２）父素原子数カイ１から約４のア シル基およびベンゾイル基力）らなる群力）ら選（ｆれ。

ＲおよびＲはそれぞれ水素原子を表わす力）またはり（に結合して炭素と炭素の 二重結合を形成する。） 発明を実施するための最良の形態 本発明の化合物は以下に図式で示す工程およびその工程説明に従って調製するこ とができる。製造工程の図式およびその３１細な説明においては、同じ番号で同 じ化合物を識別する。

工程式 以下に本発明の工程に従って説明する。

１α、３β−ジメトキシメトキシ−２３，２４−ジノルコル−５−エン−２２− アールをビニルマグネシウムブロミトと反応させてアリルアルコール（１）にし た。このアルコールをトリメチルオルソ−ｎ−ブチレーＩ−および触媒量のプロ ピオン酸との反応によってクライゼン（Ｃｌａｉｒ＋５ｅｎ）転位させて好収率 （９７％）てエステル（ス）を得た。化合物（ス）をｎ−ブチルリチウムとＴＨ Ｆを用いる処理によりエノラート形に変え、次いて酸素処理した後、トリエヂル 亜すン耐エステルを用いる量尤により分子内のＣ−２５位ｔにヒトロキシルス（ を導入した。次に、この２７−エステル（且）を順次対応のジオールな得るため の水素化リチウムアルミニウムを用いる処理、メシレートにするためのメタンス ルホニルクロリドとピリジンを用いる処理および水素化リチウムアルミニウムを 用いる処理酸を用いる処理によるＭＯＭ基の除去で（２２Ｅ、２５ξ）−１α− ，３β、２５−トリヒドロキシ−２６−ホモ−コレスタ−５，２２−ジエン（旦 ）を得て、そのアセチル化によりジアセテート（旦）を得た。（旦）のＮ−ブロ モスクシンイミド、次いでテトラ−ｎ−プチルアンモニウムフルオリドを用いる アリルブロム化により５，７．２２−）ジエン（′Ｌ）を得て、これを照射およ び加熱異性化処理して（２２Ｅ）−デヒドロキシ−ホモビタミンＤ３（旦）を得 た。

（２５ξ）−１０，２５−ジヒドロキシ−２６−ホモビタミンＤ３　（１１）は ５，２２−ジエン（旦）を選択的水素化によって５〜エン（旦）とし、これを５ ．７−ジエン（１旦）に変え、次いて上述のように２６−ボ千ビタミン（エユ） にすることにより得た。

工程の詳細な説明 下記の本発明の工程の詳細な説明においで融点は熱−スアージ顕微鏡を用いて測 定し、未補正のままで示し・た、１１４−ＮＭＲスペクトルは特にことわらない 限り１１立Ｒ−２４Ａ　（６０ＭＨｚ　）により内部規準と１７てＭｅ４Ｓｉを 用いＣＤＣｆＬ３中でめた。質量スペクトルは島汁０Ｐ−１０００質量分光計に より７０ｅＶで東めた。

ＵＶスペクトルは島津ＵＶ−２００ダブルビーム分光光度計によりエタノール溶 液中でめた。カラムクロマトグラフィーはシリカゲル（Ｅ、メルク社、キーセル ゲル６０．フ０−２３０メツシユ）を用いて行った８分取薄層クロマトグラフィ ーはシリカゲル（Ｅ、メルク社、キーゼルゲル６０Ｆ　、厚さ０．２５ｍｍ）を ブレコートしたプレート上で行った。常法による仕上げとは水を用いる６釈、カ ッコ内て示した有機溶媒を用いる抽出、中性になるまでの抽出物の洗浄、無水硫 酸マグネシウムを用いる転帰、ろ過および減圧下での溶媒の除去を指す、略語と して、ＴＨＰ−テトラヒドロピラニル、ＴＨＦ−テトラヒドロフラン５エーテル −ジメチルエーテル、ＭｅＯＨ−メタノール、ＭＯＭ−メトキシメチル、ＬＤＡ −リチウムジイソプロピルアミドを用いた。温度は℃である。

（２２Ｅ、２５）−１α、３β−ジメトキシメチルオキシ−２６−先ｉユ乞丞又 二ｉユ又主二２玉之二盈ユニオイヱ２厘メｆ盈王スΣ贋ヱ） ｍｇ、０．８４４ミリモル）、トリメチルオルソ−ｎ−ブチレート（０，７ｍ！ ｌ）およびプロピオン酸（３滴）をアルゴン雰囲気中で２時間還流処理した。溶 媒の減圧下での除去により得た粗生成物をシリカゲル（２０ｇ）のカラムにかけ 、ヘキサン−酢酸エチル（５：１）を用いる溶離によりエステル（２）（４４６ ｍｇ、９７％）ヲ油状物としテｆＧだ、’ＩＩ−ＮＭＲｃｒ：０．６８（３８， Ｓ、　１８−Ｌ）、　０．８８（３１１，ｔ、Ｊ＝７１１ｚ、　−ＣＨｔＣｌｊ ｚ）、　０．９８（３ｔｌ、　ｄ、　Ｊ−６Ｈｚ、　２ｌ−ｈ）β、０３（３１ １，ｓ、　１９−Ｈ３）、３．３８（３１１，ｓ、　−０ＣＨｚ）、　３．４： １（３Ｈ，ｓ、　−０ＣＩ１．）。

３．５８　（３１１，ｓ、　−ＣＯ＊ＣＩ＋＋）、３．７６（ＩＩＩ、　ｍ、　 １　β−１１）、　４．６８（２Ｌｓ、３β　−０−Ｃ１ｌｚ−０−）、　４． ６９（２Ｈ，ＡＢｑ、Ｊ＝７１１ｚ、△へＢ＝１１１１ｚ。

ｌα−０−Ｃ１１２−０）　、　５−２７（２１１，−、２２−および２３−１ １）、および５．５６（Ｉｌｌ。

ｒｓ、６−Ｈ）。

（２２Ｅ、２５ξ）−１α、３β−ジメトキシメチルオキシ−２５−ヒドロキシ −２６−ホモコレスタ−５，２２−ジエン−２７−オイック酸メチルエステル（ 旦） ＬＤＡの溶液（ジイソプロピルアミンを用いて調製、０．１３ｍ文、０．９２９ ミリモル）、１．５６モルのｎ−ブチルリチウム（０−５９ｍｆＬ）およびＴＨ Ｆ　（２ｍＪＬ）へＴ）ＩＦ（５ｍＪＬ）に溶解したエステル（ス）（４３７ｍ ｇ、０．８００ミリモル）を添加し、その混合物をアルゴン雰囲気下、−７８° Ｃで３０分間攪拌した。この溶液中へ酸素を気泡で吹きこみ、次いでトリエチレ ン亜リン酸エステル（０，１４ｍ１．０．８１７ミリモル）を添加した。

常法による仕上げ（抽出はエーテル）により得た相生Ｉｌｌ物をシリカゲル（２ ５ｇ）のカラムにかけた。ヘキサン−酢酸エチル（５：１）を用いる溶離により ヒドロキシエステル（３）（３０３ｍｇ、６７％）を油状物として得た。　”Ｉ ｔ−ＮＭＲｃｒ：０．６８（３１１，ｓ、　１８−１１３）。

０．８５（３１１，ｔ、　Ｊ−７Ｈｚ、　−ＣＨｚ（ｌｊｔ）、　０．９８（： Ｉｆｆ、　ｄ、　Ｊ−６１１ｚ’、２ｌ−１１ｉ）　。

１．０２（３Ｈ，ｓ、　１９−１ｔｓ）、　３．０８（ＩＮ、　ｂｓ、　Ｗ１７ ２−３１１ｚ、　−０Ｈ）、３．３８（３１１゜Ｓ、　−０ＣＨ３）、　３．４ ２（３１，Ｓ、　−０ＣＩ１．）、　３．７６（３１１，Ｓ、　−ＣＯ２ＣＩ（ 、）、　４．６８（２１１，ｓ、　３β−０−ＣＨｚ−０−）、　４．６８（２ ）１．　ＡＢｑ、　Ｊ−７１１ｚ、ΔＡＨ−１１＋１ｚ。

１　α−０−ＣＨ，−０−）、　５．３２（２１１，鳳、　２２−１１および　 ２３−Ｈ）、　５．５５（Ｉｌｌ、　ｍ。

６−１１）。

（２２Ｅ、２５ξ）−１α、３β−ジメトキシメチルオキシ−２５−ヒドロキシ −２６−ホモコレスタ−５，２２二Ｑｓ−２（４）ヒドロキシエステル（互）（ ２９４ｍｇ、０．５３９ミリモル）のＴＨＦ（５ｍ旦）溶液中へ水素化リチウム アルミニウム（２０ｍｇ、０．５２６ミリモル）を添加し、混合物を室温で３０ 分間攪拌した。常法による仕上げ（抽出はエーテル）により粗ジオールを得た。

これをメタンスルホニルクロリド（０，０４ｍ１．０．５１７ミリモル）および ピリジン（１５ｍｊＬ）を用い室温で３０分間処理した。常法による仕上げ（抽 出はエーテル）により粗メジラードを得た。ａメジラードのＴＨＦ（５ｍ、Ｑ） 溶液へ水素化リチウムアルミニウム（２０ｍｇ、０．５２６ミリモル）を添加し 、混合物を３０分間還流処理した。常法による仕上げ（抽出はエーテル）により 得た粗生成物をシリカゲル（２０ｇ）カラムにかけた。ヘキサン−酢酸エチル（ ５：１）を用いる溶離によりアルコール（４）（１９０ｍｇ、７０％）を油状物 として得た。　’ＩＩ−ＮＭＲｃｒ：０．７１（３Ｈ。

ｓ、１８−ｔｌ：＋）、　０．９０（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７１１ｚ、−Ｃ１１ｚＣＱ ：ｉ）、　１．０３（３１ｉ、ｄ、Ｊ＝６１１ｚ。

２１−１１：＋）、１．０３（３１ｆ、　ｓ、１９−ＩＩ：ｌ）、１．１２（３ １１，ｓ、２７−Ｈ：ｌ）、３．３６（３１１゜ｓ、−０ＣＩＩ：＋）　３．４ ０（３１１，Ｓ、−０Ｃ１１３）、：１．７４（ｉｌｌ、ＩＩ、１　β−Ｈ）、 ４．６６（２Ｈ，ｓ、３β−０−ＣＨ２−０−）、４．６７（２）１．　ＡＢＱ 、Ｊ＝７１１ｚ、ΔＡＢ＝１１１　ｆｉｚ。

１α−０−ＣＩｌ２−０−）、　５．：１５（２１１，ｓ、２２−ｔｌおよび２ ３−ＩＩ）　および５．５４（Ｉ　１１　、諺、６−１１）。

（２２Ｅ、２５ξ）−１α、３β、２５−）−リヒトロキシー２ローモル）のＴ ＨＦ　（５ｍＭ）溶液を６Ｎ−ＨＣＪＪ　（１ｍＪｌ）を用い５０′Ｃで１．５ 時間処理した。常法による仕上げ（抽出は酢酸エチル）により得た粗生成物をシ リカゲル（１５ｇ）のカラムにかけた。ヘキサン−酢酸エチル（１：　２）を用 いる溶離によりトリオール（５）（１４７ｇ、９８％）を得た。融点８５〜８７ °Ｃ（ヘキサン−ジクロロメタン）。’Ｈ−ＮＭＲσ：０．６９（３ｔｌ、　ｓ 、　１８−Ｈい、　０．８９（３１１゜ｔ、　Ｊ”７１１ｚ、　−ＣＩｌ、Ｃｊ ｊ、）、　１．０２（３１１，ｓ、　１９−Ｈ：ｉ）、　１．１：１（３１１， ｓ、　２７−Ｈｒ）B ３．８５（ＩＩＩ、扉、１β−１１）、　３．９８（ＩＩＩ、　ｍ、　３α−Ｈ ）、　５．４０（２１１，■、　２２−ＩＩおよび２３−ＩＩ）、および５．６ ０（１１１、露、　６−１１）。

（２２Ｅ、２５ξ）−１α、３β−ジアセトキシ−２５−ヒドロキシ（１ｍ　ｌ 　）溶液を無水酢酸（１ｍｆＬｌを用いて室温で１５時間処理した。常法による 仕上げ（抽出は酢酸エチル）により得た粗生成物をシリカゲル（Ｌｏｇ）のカラ ムにかけた。ヘキサン−酢酸エチル（５：１）を用いる溶離によりジアセトキシ −（６）（１０１ｍｇ、８５％）を無定形固体として得た。　’Ｈ−ＮＯＲｃｒ ：ｏ、６８（３１１゜ｓ、　１８−Ｈ，）０．８８（：ＩＨ，ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、 　−ＣＨ２Ｃト）、　０．９８（３）１．　ｄ、　Ｊ”６Ｈｚ。

２１−Ｈ，）、　１．０８（３Ｈ，Ｓ、　１９＝ｌ！３）、　１．１２（３１１ ，Ｓ、　２７−Ｈ，）、　２．０３（３１１゜Ｓ、アセチル）、　２．０６（３ １１，ｓ、アセチル）、　４．９８（ＩＩＩ、　ｍ、　３β−１１）。

５．０６　（ＩＨ，ｍ、　１β−ＩＩ）、　５．３７（２Ｈ，＋ｓ、　２２−ｔ ｌおよび２：ｌ−１１）および５．５３（ＩＩＩ、　ｍ、　６−１１）、−Ｎ− ブロモスクシンイミド（１９ｍｇ、０．１０７ミリモル）の四塩化炭素（３ｍＭ ）溶液をアルゴン雰囲気下て２０分間還波処理した。０°Ｃに冷却した後、得ら れた沈殿物をろ別した。ろ液を４０°Ｃ以下て濃縮し、残留物を得た。この残留 物のＴＨＦ（５ｍ文）溶液を触媒量のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムプロミド を用いて室温で５０分間処理した。次に、混合物をテトラ−ｎ−ブヂルアンモニ ウムフルオライドのＴＨＦ　（０，３ｍＭ、０．３ミリモル）溶液を用いて室温 て３０分間処理した。常法による仕上げ（抽出は酢酸エチル）により粗トリエン を得た。このトリエンのＴＨＥ（５ｍ！；Ｌ）溶液を５％ＫＯＨ−ＭｅＯＨ（４ ｍ文）を用いて室温で１４時間処理した。常法による仕上げ（抽出は酢酸エチル ）により得た粗生成物を分取１ＪｉＰ９クロマトグラフイー（ベンゼン−酢酸エ チル、１：１．６回展開）にかけた、Ｒｆ値０．４５のバンド部分をかきとり酢 酸エチルを用い溶離した。溶媒除去により、５，７．２２−トリエン（ヱ）（８ ，７ｍｇ、４０％）を得た。ＵＶ入二：Ｏｌｌ、２９３゜２８２、２７１ｎｍ　 。

（２２Ｅ、２５ξ）−１α、２５−ジヒドロキシ−２２−デヒトロン（９０ｍ１ ）、エタノール（４０ｍｉ）溶液をアルゴン雰囲気下、０℃においてビコール（ Ｖｙｅｏｒ）フィルターを通して中圧水銀ランプを照射した０反応生成物をアル ゴン雰囲気下で１時間還流処理した。減圧下ての溶媒除去により得た粗生成物を 分取薄層クロマトグラフィー（ベンゼン−酢酸エチル、１：１．６回展開）にか けた、Ｒｆ値０．４９のバンド部分をかきとり、酢酸エチルを用いて溶離した。

溶媒除去によりビタミンＤ３類似体（旦）（０，９１ｍｇ、２１％）を得た。ｕ ｖλＥｔＯ１ｌ　：２６５　ｎｍ、λＥｔＯ’　：２８２　ｎｍ、　ＭＳｌｌａ ｘ　Ｉｌａｘ ｍ／ｚ：４２Ｂ（Ｍつ、　４］口、３９２．　３１４．　３：１８．　３２０， ２８７，２６９，２５１．　１４１゜１３４、　１２３．　７３．　’Ｉｆ−Ｎ ＭＲ（４００ＭＨｚ）　ｃｒ：　０．５５（３１−１，ｓ、１８−Ｈｘ）、０． ９１（３＋１．　ｔ、　Ｊ−７，６１１ｚ、　−ＣＩＩ２Ｃｊｊ３）、　１．０ ４（：ＩＩＩ、　ｄ、　Ｊ＝６．８１１ｚ、　２１−１１．＋）A　１．１３ （３１１，ｓ、　２７−Ｈ３）、　４．２３（ｌｔｌ、　ｍ、　Ｊｚｚ”１８． ４Ｈｚ、　３ａ−１１）、　４．４３（ＩＨ。

ｍ、　Ｗ＋７ｚ”１６．９１１Ｚ、１β−Ｈ）、　５．００（ｌｔｌ、　ｂｓ、 　Ｗ＋７ｇ−：１．２Ｈ２，１９−Ｈ）、　５．：１２（ＩＬ　ｂｓ、　Ｗｌｉ ｚ−３，２１１ｚ、　１９−ＩＩ　）、　５．３７（２１１，ｊ　２２−ＩＩお よび２３−＋１）。

６．０２（ｌｔｌ、　Ｊ−１１，５ｔｌｚ、　７−Ｈ）、および６．３８（ＩＨ ，ｄ、　Ｊ＝１１．５Ｉｌｚ、　６−８）。

（２５ξ）−１α、３β・−ジアセトキシ−２５−ヒドロキシ−２６−ホモコレ ター５−エン（２） ５．２２−ジエン（６）（３５ｍｇ、０．０６８Ｘミリモル）と１０％Ｐｄ−Ｃ （４ｍｇ）の酢酸エチル（４ｍ文）中混合物を水素雰囲気下、室温において３時 間攪拌した。Ｐｄ触媒をろ別し、ろ液を残留物が得られるまで濃縮し、残留物を 分取薄層クロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、２：１．１回展開）にか けた。

Ｒｆ値０．４６のバンド部分をかきとった。酢酸エチルを用いる溶離により５− エン（９）（３０ｍｇ、８５％）を無定形固体として得た。　’Ｈ−ＮＭＲｃｒ ：０．６６（３１１，ｓ、　１８−１１ｚ）、０．８８（：ｌｌｌ、　ｔ、　Ｊ −７１１ｚ。

−ＣＩＬｔＣ４！３）、　１．０８（３１１，ｓ、　１９−１１３）、　１．１ ２（３１１，ｓ、　２７−Ｈ３）、　２．０２（３１１゜Ｓ、アセデル）、　２ ．０４（３１１，ｓ、アセチル）、　４．９７（ＩＩＩ、露、３α−１１）。

５．０４（＋、１１．　ｍ、　１β−１１）、および５．５１（ｉｌｌ、璽、　 ６−１１）。

に転化させた。ｕｖλＥｔ”’２９３．２８２．２７１ｎ璽。

■ａｘ に記載したのと同様にしてビタミンＤ３類似体くよユ）（１，３ｍｇ、２７％） に転化させた。Ｕ　Ｖ　λ：２６５ｎ＋ｓ、入ＥｔＯ”：２２８ｎｍ。

ｔＯ１１ ｗａｘ　ｗａｘ Ｍ　Ｓｓ／ｚ：４３０（Ｍ”）　、　４１２　、３９４　、３７９　、３７６　 、２８７　、２６ｇ、　２５１゜１５２　．１３４　．１１６　．７３．５５゜ 所望により１本発明の化合物は当業名周知の適切な溶媒１例えばヘキサン、エー テル、アルコールまたはそれらの混合物を用いる結晶化により結晶形として容易 に得ることができる。

生物学的活性 ｌα、２５−　（Ｏ）（）２−二ｌごＬ二±３Ｄ３化合物の骨のカル費鑑近Ｗ丘 乳ばなれした雄のラットをホルッマン社（ウィスコンシン州マディソン）から購 入し、これらにスダら（ジャーナル・オブ・ニュートリジＢ：／Ｚｏｏ、１０４ ９．１９７０）（７）記載と同じ低カルシウム、ビタミンＤ欠乏食ＮＴおよび水 を無制限に３週間与えた。次に、これらのラットを各６匹からなる４群に分け、 それぞれに０．０５ｍＪ２の９５％エタノールに溶解したｌα。

２５−　（ＯＨ）　２−２６−＊−ｆニーＤ３．１　ｃｘ、　２５　（ＯＨ）２ −（２２Ｅ）Δ　−２６−＄千−Ｉ）３！たはｌα、２５−（０Ｈ）２Ｄ３を犠 牲にする７時間前に頚静簾注射により与えた。コントロールのラットに０．０５ ｍｕの９５％エタノールビヒクルを犠牲にする７時間前同様にして与えた。これ らのラットは斬首により殺害し、血液を集めて遠心分離により血清を得た。血清 中のカルシウム濃度を原子吸光分光光度計（パーキン・ニルマー社、２１４型） により０．１％の塩化ランタン存在下で測定した。結果を下表に示す。

上記のデーターから、ビタミンＤ欠乏動物のビタミンＤ応答系にα−ヒドロキシ ビタミンＤ化合物、すなわち１α−ヒトロキシビタおいて本発明の化合物はビタ ミンの循環ホルモン形であるｌα。

２５−ヒドロキシビタミンＤ３と同じ活性を示したと結論することがてきる。

本発明の化合物はそのカルセミツク活性（Ｃａｌｃｅｍｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ ）（血中カルシウム流通活性）発揮な目的として無菌非経口溶液の形にして注射 または静脈注射により、経口薬の形にして消化器管に、さらに生薬または経皮薬 として容易に投与することができる。投与量としてはビタミンＤ様の活性の生理 学的カルシウム平衡応答特性を得るには１０あたり０．１ルｇから約２．５ルｇ が有効であり。

維持量としてはｏ、ｉ、ｇ〜約０．５＃Ｌｇが適している。

最近、１α、２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３　（１α、２５−（０Ｈ）２Ｄ ３）およびその構造類似体であるｌα−ヒドロキシビタミンＤ　（１α−０Ｈ− Ｄ３）が上記のよく知られたカルセミッり活性に加えて強力な抗ガン活性を示す ことが発見された。特に、上記の化合物は培養液中の白血病細胞のような悪性人 体細胞の非悪性大食細胞への分化を：Ａ発するのに有効であることおよびこれら 化合物の投与により白血病マウスの寿命が（コントロールに比較して）延び、か つ人間の白血病患者の状態が顕著に改善されたことが示されて生体外の細胞への 抗ガン活性を生体内における有益な効果と関係すけ得ることが明らかにされた。

これらの１１ｉ！察に基いて１α一ヒドロキシル化ビタミンＤ化合物を白血病の 治療薬とすることが提示されている（スダら米国特許第４，３９１，８０２号） 。

しかし、スダら（同上特許）によって試験されたこれら既知の１ミンＤ３　（１ α−０Ｈ−Ｄ３）およびｌα、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３　（１α、２５ −　（ＯＨ）２Ｄ３）は白血病細胞の分化を誘発するのに実に高度に有効である けれども、これらを抗白血病薬剤として使用するのに重大な欠点となるのはその 固有の従って不可避の性質である高度のカルセミツク活性である。すなわち、現 在までに知られている最も強力なビタミン誘導体抗白血病剤である１α、２５− 　（ＯＨ）　２Ｄ３はまた最も強力なカルセミツク剤であり、かつｌα−０Ｈ− Ｄ３の抗白血病活性は同様にその高カルセミツク活性に相関している。これらの 化合物を抗白血病剤として有効な投薬水準（例えば、スダらの特許の例において 特定されているｌ　ｇｇ／Ｅ＞で投与することは必然的に高度の大いに過剰のカ ルシウム水準をまねき、それに伴って重大な医薬併発症が特に既に衰弱病にかか った患者に生じるであろう。既知のｌα−ヒドロキシビタミンＤ化合物はカルシ ウム水準を」二げるのに高度の潜在的能力をもっているので、その抗白血病剤と し・ての使用は阻止すべきである。

悪性の病状の処置として好ましい方法はカルセミツク活性度に対する抗白血病活 性度の比率の高いことを特徴とする化合物、すなわち血清カルシウム水準を高め る能力に比べて白血病細胞の分化を誘発させる能力が高い化合物を投与すること であることは明らかである。

本発明の化合物もまた悪性細胞の非悪性細胞への分化を誘発する点、すなわち、 白血病細胞の分化として測定される抗新生細胞活性の点において好ましく活性で あるが、カルシウム流通効果においては１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３ はと活性てはない。本発明の新規な側鎖ホモビタミンＤは、その独特かつ予期さ れなかった特性の組合せの故に白血病および他の新生細胞病の治療用としてすぐ れた好ましい薬剤となるものである。

培養液中で成育した人間の前骨髄白血病細胞（ＨＬ−６０！［１１胞）に投与す ると本発明の側鎖ホモビタミンＤはこれら細胞の大食細胞（単球細胞）への分化 を誘発する０分化活性を測定する数種の標準効力検定においてこれらの化合物は 現在まてに知られている最も活性なビタミンＤ：Ａ導体である１α、２５−　（ ＯＨ）２Ｄ３よりも効果的であることが示された。これらの検定は下記のように して行った。

世」ｊ匹夕膿擾戸り活性効力検亙 人間の前骨髄白血病細胞線（ＨＬ−６０）を１０％（容量比）熱不活性化子牛脂 児血清、ｌ　ＯＯｐ、　ｇ　／　ｍ　ｌペニシリン、１１００ｐ／　ｍ　ｌスト レプトマイシンおよびｏ、ｚ５ａｇ／ｍｌ５αンジゾーンを追加したＲＰＭ１１ ６’４０培ｊｌ！！（ギブコ社、ニューヨーク州グランドアイランド）からなる 懸濁培養液中に保持した。細胞は５％ＣＯ２を有する加湿気中でｊ８養した。細 胞の生育性（Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）はは標準検定法、すなわちトリバンブルー染 色排除により検定した。

形態学的な評価はライト（Ｗｒｉｇｈｔ）着色スライドプレパラート上て行った 。

細胞の種つけは組織培養血中の培ｊ１！！１０　ｍ見に１．５〜２×１０５細胞 数／　ｍ　ｌになるように行った。２０時間後、２枚ずつの皿な下記の表に示す 種々のＣ度の各試験化合物を用いて処理した。化合物は１００％エタノールの溶 液として添加したか、各培養皿の全エタノ・−＝ル濃度か０．２％以上にならな いようにした。コントロールの培養には同しに度のエタノール処理を行った。試 験化合物を用いる培養４日（９６時間）後に、細胞をそれぞれのＪ８五皿から取 り出し、細胞数および生育性な測定１ノｉ：、　、試験し・たビタミンＤ誘導体 ）、゛より誘発された分化のｒｌ　ｉｎｙは単核細胞のファンコナル（Ｆｕｎｃ ｈｎｎａ　Ｉ　）および酵素マ・−カー特性苓゛不す細胞の１￥て示した。検定 に用いた２種のマーカーはａ）細１抱の死亡酵母をＯ菌１−　Ｚｌ　ｉｂ力およ びｂ）ホルボールニスデルに、１−り刺激された峙の細胞のスーパーオキシトを 作る（ニドＶ〕テｌ−ラゾリウムフルーな還元する）能力であった。

由逃楔性ｐ鷹泗九通、カー傍ア：取り出した細胞はブレバラ−１〜中に２ＸＩＯ ６細胞数／細胞数側胞を含むように２０％のＡＢ血清と２０％の子牛胎児血清を 含有するＲＰＭＩ培地中に再懸濁させた。

次に、この懸濁液０．５ｍ、Ｑ（細胞数ｉｏＪにトリパンプル〜で着色した加熱 殺菌、サッカロミケス、セレビシア菌（ビール酵母菌）細胞の懸濁液（リン酸塩 緩衡塩木中）０．５ｒｎ見（細胞数ｌ×１０８）を添加し・た、この混合液を３ ７°Ｃて１時間培養後食細胞の数を（細胞内で明らかなトリバンブルーて染色さ れた酵母により）数え、これを可視全細胞に対する％で表わした。この「食細胞 ％」が試験化合物により誘発された分化な％て示すものである。結果は第２表に まとめて示す。

元の指標であるホルマザンブルー沈殿を示す細胞）を血球計により計数し、可視 の全細胞に対する％て示した３この分析結果を第３表第３表に示す結果もまた。

試験したホモ化合物が生体外て人間の骨髄白血病細胞の正常細胞への分化を誘発 する点でｌα、２５−（０Ｈ）２Ｄ３よりも活性であることを確証している。こ のＮＢＴ還元検定により測定される白血病細胞の６０％分化を得るにはホモ化合 物では２ｘｌＯ’モルのＣ度が必要であるのに対して１α。

２５−　（ＯＨ）　２Ｄ３に＋り同じ分化度を得ルニは３．５Ｘ１０モルが必要 てあり１両者の能力には１７倍の差がある。

以上のように、上記２種の効力検定法はともにホモビタミン化合物の白血病細胞 の分化を：Ａ発する能力が高いことを確認させるものである。その上、上記の試 験結果はこれらホモビタミンＤ化合物はこの分化活性度においてｌα、２５−　 （ＯＨ）　２Ｄ３よりも強力であること示し′Ｃいる。

この分化活性度は人間の白血病細胞（ＨＬ−６０）の場合について示されている から、これらの新規化合物を人間を対象とした白血病に対して有効に使用し得る ことは明らかである。同時に、これらの化合物は高いカルセミツク活性を示さず 、その活性度はｌα。

２５−　（ＯＨ）　２Ｄ３とほぼ同じである。このように、これらホモビタミン Ｄ化合物はカルセミツク活性に対する抗新生細胞力の比率が高いことで特徴づけ られる。この新規かつ望ましい生物学的性質という長所によってこれら側鎖ホモ 化合物は悲性の病気のすぐれた治療剤としてｎｆｍするてあろう。

人間の白血病の治療には、本発明のホモビタミンＤ化合物は白血病細胞の大食細 胞への分化を誘発するのに十分な投与量で人体に投与される。適切な投与量は１ 日あたり０．２１Ｌｇから５ｇｇであるか、投与量は当業者周知のように病状も しくは応答性または人体の状態によりＷ整することができると理解すべきである 。

治療を目的とした化合物の投与薬形態は当業者周知の無毒性で製薬上許容される 担体と組合わゼて調整することかできる。それらの担体は固体でも液体でもよく 、例えば、コーンスターチ、乳糖。

しょ糖、落果牛油、オリーブ油、ごま油および水をあげることができる。固体の 担体を使用する場合、本発明の化合物は錠剤、カプセル、粉末、トローチまたは ロレンジの形にすることができる。もし液体の担体を使用する場合は軟ゼラチン カプセル、シロップまたは懸濁液、乳濁液または溶液を投グー薬の形ｊ！にとす ることがてきる。また、投午薬形態として保恒剤、安定剤、加湿剤、乳化剤、溶 解促進剤などの補助剤を含有させることもできる。また、治療上有効な他の物質 を含有することもてきる。

投与琵−範囲を示したけれども、それぞれの患者に投与、すべき投与量そのもの は治療すべきそれぞれの病状、それぞれ［１標とされる最終結果、患者の肉体的 サイズならびにこの種薬剤を治療に用いる際当業者周知のその他の因子に応じて 変えられると理解すべきである。

未発ｌＪ１の化合物は適切な無菌溶液の注射、静脈注射または消火管を経る経口 投薬の形で４１利に投与することができる。

国際調を報告

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は水素原子、炭素原子数１から約４のアシル基およ びベンゾイル基からなる群から選ばれ、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ水素原子を表 わすか互に結合して炭素原子と炭素原子の二重結合を形成する。） を有する化合物。
2. ２．Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素原子であり、Ｒ４およびＲ５が水素原子である 請求の範囲第１項記載の化合物。
3. ３．結晶形である請求の範囲第２項記載の化合物。
4. ４．医薬的に許容し得る付形剤を伴なう請求の範囲第２項記載の化合物。
5. ５．Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素原子であり、Ｒ４およびＲ５が互に結合して炭 素原子と炭素原子の二重結合を表わす請求の範囲第１項記載の化合物。
6. ６．結晶形である請求の範囲第５項記載の化合物。
7. ７．医薬的に許容し得る付形剤を伴なう請求の範囲第４項記載の化合物。
8. ８．Δ２２結合がＥ配置中にある請求の範囲第４項記載の化合物。
9. ９．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは水素原子、炭素原子数１から約４のアシル基、ベンゾイル基および メトキシメチル基からなる群から選ばれる。）を有する化合物。
10. １０．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は水素原子、炭素原子数１から約４のアシル基お よびベンゾイル基からなる群から選ばれ、Ｒ４およびＲ５は水素原子を表わすか 互に結合して炭素原子と炭素原子の二重結合を形成する。） 有する化合物。