JPS58213791A - 置換テオフイリン塩類 - Google Patents
置換テオフイリン塩類Info
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- JPS58213791A JPS58213791A JP58090113A JP9011383A JPS58213791A JP S58213791 A JPS58213791 A JP S58213791A JP 58090113 A JP58090113 A JP 58090113A JP 9011383 A JP9011383 A JP 9011383A JP S58213791 A JPS58213791 A JP S58213791A
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- C07D473/04—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms
- C07D473/06—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two oxygen atoms with radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached in position 1 or 3
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- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
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- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
- C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はテオフィリンの非可逆的酵素抑制剤免疫分析の
反応試剤として有用な新種の８−置換テオフィリン塩に
関する。
反応試剤として有用な新種の８−置換テオフィリン塩に
関する。
米国特許第４，２７３．８６６号には非可逆的酵素抑制
剤免疫分析法ならびにテオフィリン測定の反応試剤とし
て有用な種々のリガンド類似体の非可逆的酵素抑制剤共
役体、特に次式％式％） ドロー７Ｈ−３−ヘキサナミドが記載されている。。
剤免疫分析法ならびにテオフィリン測定の反応試剤とし
て有用な種々のリガンド類似体の非可逆的酵素抑制剤共
役体、特に次式％式％） ドロー７Ｈ−３−ヘキサナミドが記載されている。。
０ ０−ＣＨ２−ＣＨ３試
料中のリガンドを測定するための非可逆的酵素抑制剤免
疫分析法は測定すべきリガンドを含む試剤、リガンド類
似体の非可逆的酵素抑制剤共役体、および該リガンドと
りガント類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体とに結合し
うる結合用蛋白を相互に混合することから成る。リガン
ド類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体とリガンドとは結
合用蛋白の結合の場に対して競合する。それ故、結合用
蛋白によって結合されたリガンド類似体の非可逆的酵素
抑制剤共役体は試験中のりガントの量と相関関係をもつ
１．結合用蛋白は該共役体のリガンド類似部分ＶＣ結合
したとき該非ｔｊｌ逆的酵素抑制剤を不活性化する。酵
素が反応混合物に相互混合されると、結合用蛋白によっ
て結合されていない該共役体の非可逆的酵素抑制部分は
酵素と反応して共有結＠全形成し、それによって酵素を
不活性化する。従って、酵素に基質をひきつづいて添加
すると、試料中のリガンドの鼠の指標として酵素−基實
反に；に検査することができる。
料中のリガンドを測定するための非可逆的酵素抑制剤免
疫分析法は測定すべきリガンドを含む試剤、リガンド類
似体の非可逆的酵素抑制剤共役体、および該リガンドと
りガント類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体とに結合し
うる結合用蛋白を相互に混合することから成る。リガン
ド類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体とリガンドとは結
合用蛋白の結合の場に対して競合する。それ故、結合用
蛋白によって結合されたリガンド類似体の非可逆的酵素
抑制剤共役体は試験中のりガントの量と相関関係をもつ
１．結合用蛋白は該共役体のリガンド類似部分ＶＣ結合
したとき該非ｔｊｌ逆的酵素抑制剤を不活性化する。酵
素が反応混合物に相互混合されると、結合用蛋白によっ
て結合されていない該共役体の非可逆的酵素抑制部分は
酵素と反応して共有結＠全形成し、それによって酵素を
不活性化する。従って、酵素に基質をひきつづいて添加
すると、試料中のリガンドの鼠の指標として酵素−基實
反に；に検査することができる。
この免疫分析は次の反応＋ｌ＆構によって説明［７うる
。
。
１（
（１） Ｚ、＋＞−え酊し Ｌ＋Ｄ−（２） Ｌ
ＡＩ手〉−一（二４象土 ＬＡＩ ＋ＬＡＸトー（３）
ＬＡＩ＋Ｅｎｚ −−ｙＥｎｚ−１＋Ｘｋ′ （４） ＬＡＩ〉＋ Ｅｎｚ −−−フｈ）ｒｔｚ−
１＋Ｘ反応式（１）および（２）Ｋ示すように、リガン
ドσ】とりカント類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体（
ＬＡＩ）とｔｉｔ結台用缶白（〉−）について競合する
。リガンド類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体に結合＋
、ｆＣ結合用蛋白（ＬＡＩ＞’−’）は該抑制剤’Ｔｈ
不活性化するが、ニア１（Ｈｌｌｌｆ（のリガンド頌
似体非用逆的酵素抑制剤共役体は酵素（Ｆｈｔｚ ）ｆ
非可逆的に抑制するのに利用される。試験試料中に存在
するりガツトの１％が多いほど結合用蛋白に結合フるリ
ガンド類似体非可逆的酵素抑制剤共役体のｍｔま少なく
、従ってエリ多くの酵素が遊＾１ｔのリガンド類似体非
可逆的酵素抑制剤共役体によって抑制される（ Ｅｎ
ｚ −Ｉ ’）。
ＡＩ手〉−一（二４象土 ＬＡＩ ＋ＬＡＸトー（３）
ＬＡＩ＋Ｅｎｚ −−ｙＥｎｚ−１＋Ｘｋ′ （４） ＬＡＩ〉＋ Ｅｎｚ −−−フｈ）ｒｔｚ−
１＋Ｘ反応式（１）および（２）Ｋ示すように、リガン
ドσ】とりカント類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体（
ＬＡＩ）とｔｉｔ結台用缶白（〉−）について競合する
。リガンド類似体の非可逆的酵素抑制剤共役体に結合＋
、ｆＣ結合用蛋白（ＬＡＩ＞’−’）は該抑制剤’Ｔｈ
不活性化するが、ニア１（Ｈｌｌｌｆ（のリガンド頌
似体非用逆的酵素抑制剤共役体は酵素（Ｆｈｔｚ ）ｆ
非可逆的に抑制するのに利用される。試験試料中に存在
するりガツトの１％が多いほど結合用蛋白に結合フるリ
ガンド類似体非可逆的酵素抑制剤共役体のｍｔま少なく
、従ってエリ多くの酵素が遊＾１ｔのリガンド類似体非
可逆的酵素抑制剤共役体によって抑制される（ Ｅｎ
ｚ −Ｉ ’）。
抑制されていない酵素は適当な基゛Ｕ１と反応せしめら
れ、そして醇ぶり（、ｈ反応が検査さ）する。大部分の
場合、ｋ≦は行とんどセロに減少する；すなわち結合用
蛋白はりガント類似体非可逆的酵素抑制剤共役体を不活
性化する、。
れ、そして醇ぶり（、ｈ反応が検査さ）する。大部分の
場合、ｋ≦は行とんどセロに減少する；すなわち結合用
蛋白はりガント類似体非可逆的酵素抑制剤共役体を不活
性化する、。
この尺Ｌｒ、は動力学的技術まｔ（＆：を終点技術に１
って検査される１、すなわち、この反応は動力学的技術
を使用するとき次式に従って行なわれる。
って検査される１、すなわち、この反応は動力学的技術
を使用するとき次式に従って行なわれる。
過剰の酵素盆使用し、この反羅、ｒ実ｔ１的に９９悌光
了させ−る時間性なうことによって、この糸はホ終点技
術に好４ｉＳ汀ｅ（適用される３、 上記の反応機構によって説明するように、酵素抑制は第
２次速度常数（ｋ２）に依存する。それ故、この第２次
速度常数の値を増大させると分析感度は増大する。それ
は分析時間の減少、必歎とする反応試剤箪の減少が可能
になり、そして／または試料の更なる昭１釈を許し、そ
れによって背量の妨害現象が顕著に減少するためである
。
了させ−る時間性なうことによって、この糸はホ終点技
術に好４ｉＳ汀ｅ（適用される３、 上記の反応機構によって説明するように、酵素抑制は第
２次速度常数（ｋ２）に依存する。それ故、この第２次
速度常数の値を増大させると分析感度は増大する。それ
は分析時間の減少、必歎とする反応試剤箪の減少が可能
になり、そして／または試料の更なる昭１釈を許し、そ
れによって背量の妨害現象が顕著に減少するためである
。
本発明は次式（ＩＩ）の種類の化合物に関する。
（１１）
ただし、上記の式中において、ｎは２〜６の整数であり
；ＲおよびＲ′は独立にＣ□〜Ｃ，アルキルであシ；Ｚ
は生物学的に適合する逆イオンである。
；ＲおよびＲ′は独立にＣ□〜Ｃ，アルキルであシ；Ｚ
は生物学的に適合する逆イオンである。
上記式（ＩＩ）の化合物はテオフィリンの非可逆的酵素
抑制剤免疫分析の反応試剤としてＭ用である。このよう
な方法ｒ（使用するとき、式（ｌｌ）の化合物は第２次
反応速度を増大させ、それによって分析感度の顕著な増
大をもたらす。
抑制剤免疫分析の反応試剤としてＭ用である。このよう
な方法ｒ（使用するとき、式（ｌｌ）の化合物は第２次
反応速度を増大させ、それによって分析感度の顕著な増
大をもたらす。
ここに便用フ゛る”生物学的に適合する逆イオン”とは
Ｚに１って示されるアニオンをいい、たどえばｉａ Ｈ
ｇ 、ヨー）゛、メプルツルフエー ト、テトラフロロ
ボＬ／−）などを銀色する。
Ｚに１って示されるアニオンをいい、たどえばｉａ Ｈ
ｇ 、ヨー）゛、メプルツルフエー ト、テトラフロロ
ボＬ／−）などを銀色する。
ＲおよびＲ′によって表わさＩする基は１〜４個の炭素
原子をもつ一γルギル４．Ｌ、ｆことえばメチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチルなどを包さする。
原子をもつ一γルギル４．Ｌ、ｆことえばメチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチルなどを包さする。
本発明の化も物は次の方法に従って製造することができ
る。
る。
５．６−ジγミノ−１，３−ジメチルウラシル水和物を
シアノ用＝酸と反応させて次式（ＩＩＩ）の５−シアノ
アセトアミド−６−アＨ３ この５−シアノアセトアミド−６−アミノ−１，３−ジ
メチルウラシルを１４５〜１５５℃の温度範囲内で水酸
化す） ＩＪウムで処理して次式帖の８−カルボキシメ
チルテオフィリンをうる。
シアノ用＝酸と反応させて次式（ＩＩＩ）の５−シアノ
アセトアミド−６−アＨ３ この５−シアノアセトアミド−６−アミノ−１，３−ジ
メチルウラシルを１４５〜１５５℃の温度範囲内で水酸
化す） ＩＪウムで処理して次式帖の８−カルボキシメ
チルテオフィリンをうる。
ＲＣＨ３
当業者に本発明のよりよき良解を与えるために、次の１
０示的な非制限的実施例を述べる。
０示的な非制限的実施例を述べる。
実施例 １゜
アルキル化された抑制剤の製造
３−のメチレンクロライドに溶解して０′ｃに冷却した
０−エチル−８−ＣＭ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−
アミノ−３−チアノイル）メチルホスホノチオエートＣ
２５ＮＱ、ＯＢ２Ｂ２上ル）に３ｍｇのヨードメタン分
加え、次いで銀テトラフロロボレー） （１３４＋＃
、 ０．６９ ミリモル）を加えた。この反応゛混合物
を室温に加温して３０分間かくはんした。反応混合物音
濾過して洒空下で濃縮し、〇−エチルー８−ＣＮ−１−
ブトキシカルボニル−９−アミノ−３−メチルチアノイ
ル）−メチルホスホノチオエートを油状物質としてえｆ
ｃ（２５０＋＋ｙ。
０−エチル−８−ＣＭ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−
アミノ−３−チアノイル）メチルホスホノチオエートＣ
２５ＮＱ、ＯＢ２Ｂ２上ル）に３ｍｇのヨードメタン分
加え、次いで銀テトラフロロボレー） （１３４＋＃
、 ０．６９ ミリモル）を加えた。この反応゛混合物
を室温に加温して３０分間かくはんした。反応混合物音
濾過して洒空下で濃縮し、〇−エチルー８−ＣＮ−１−
ブトキシカルボニル−９−アミノ−３−メチルチアノイ
ル）−メチルホスホノチオエートを油状物質としてえｆ
ｃ（２５０＋＋ｙ。
９０％収率）。
３−のメチレンクロライドに溶解してＯＣに冷却した０
−エチル−３−ＣＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−ア
ミノ−３−メチルチアノイル）ノチルホスボノチオエー
） （２５０■。
−エチル−３−ＣＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−ア
ミノ−３−メチルチアノイル）ノチルホスボノチオエー
） （２５０■。
０．５０ミリモル）に、１ｆｆ＋７！のトリフロロ酢酸
會加え、えられｆＣ反ＩＩ、ＪｔＬ省物會Ｏｃで４５分
間かくはんした。反応・混合物金賞中下で濃縮して〇−
エチルー８−（９−アミノ−３−メチルチアノイル）メ
チルホスホノチオエート・トリフロロ酢酸塩を油状物質
としてえた。
會加え、えられｆＣ反ＩＩ、ＪｔＬ省物會Ｏｃで４５分
間かくはんした。反応・混合物金賞中下で濃縮して〇−
エチルー８−（９−アミノ−３−メチルチアノイル）メ
チルホスホノチオエート・トリフロロ酢酸塩を油状物質
としてえた。
実施例 ２゜
５．６−ジアミツー１，３−ジメチルウラシル水和物（
１９，Ｏｆ。
１９，Ｏｆ。
０１１モル）とシアン酢ＶＣ１０，０？ 、 ０．２２
モル）との混合物を窒素雰囲気下で１２０〜１３０ｃに
加熱しｆｃ。混合物は溶融し、そして３０分以内に再び
固化した。再固化した残渣を室温に冷却し、アセトン中
にとり入れた９、この残渣會フィルタ上に集め、脱色用
炭素を使用して水中で再結晶させ、乾燥し、真空下です
りつぶして５−シアノアセトアミド−６−アミノ−１，
３−ジメチルウラシルを固体としてえた（１４．２Ｆ。
モル）との混合物を窒素雰囲気下で１２０〜１３０ｃに
加熱しｆｃ。混合物は溶融し、そして３０分以内に再び
固化した。再固化した残渣を室温に冷却し、アセトン中
にとり入れた９、この残渣會フィルタ上に集め、脱色用
炭素を使用して水中で再結晶させ、乾燥し、真空下です
りつぶして５−シアノアセトアミド−６−アミノ−１，
３−ジメチルウラシルを固体としてえた（１４．２Ｆ。
５４Ｆ）。
１４０−の２Ｎ水酸化ナトリウムに５−シアツアーヒト
アミド−６−アミノ−１，３−ジメチルウラシル（１４
゜（１，０，０５９モル）を加え、えられた混合物を、
液相のほとんどすべてが除かれ暗色の残渣が残る壕で、
１４５〜１５５℃に加熱した。残渣を室温に冷却して２
００ｍｅの絶対アルコールを加えた。残渣を粉砕してフ
ィルタ上に集めた。集めた固体を水にとかした。
アミド−６−アミノ−１，３−ジメチルウラシル（１４
゜（１，０，０５９モル）を加え、えられた混合物を、
液相のほとんどすべてが除かれ暗色の残渣が残る壕で、
１４５〜１５５℃に加熱した。残渣を室温に冷却して２
００ｍｅの絶対アルコールを加えた。残渣を粉砕してフ
ィルタ上に集めた。集めた固体を水にとかした。
この水溶液に、かくはんしなから濃塩酸を濃い沈澱が生
成する゛まで滴下状に加えた１、沈澱物をフィルタ上に
集め、脱色用炭素を使用ｌ−てＩＮ塩酸中で基結晶させ
、真空下で乾燥して８−カルボキシメチルテオフィリン
を固体としてえた（３５ｖ、２５％）３゜ この８−カルボキシメチルテオフィリン（１２０〜、ミ
リモル）會ジメチルホルムγミドにとかして００に冷却
シ２、この混合物に１．１−カルボニルジイミダゾール
（ｔｏａ＋＋ｙ 、 ０．６５ミ’）モル）ｆｃ加え、
ル応物を−１１）Ｃにおいて１５分間かくはんしｔｃＣ
Ｉ Ｑ−エチル−８−（９−アミノ−３−メチルナアノ
１ル）メチノ叩トスホノ≠オエート・トリフロロ酢酸ｔ
Ｍ （実ＡｍＮ１で製糸したもの）をジメチルボルムア
ミドにとかして、上記反応混合物に加え、次いで１〜２
当址のトリエチルアミンを混合物がｐＨ９をもつまで加
えた。この反ｒｒ−，＋ ２０分間進行させ、次いで反
応混合物ｉ ２００ ｍｊのエーテル中に入れて室温に
おいて十分量保持した。エーテルをデカンデージョンに
よって除き、油状物をえてから、これを最少量のメタノ
ールにとかした。このメタノール溶液をエーテルに加え
て、粗生成物を沈澱させた。粗生成物を含むエーテル溶
液を遠心分離し、デカンテーションし、そして乾燥して
生成物奮えた。
成する゛まで滴下状に加えた１、沈澱物をフィルタ上に
集め、脱色用炭素を使用ｌ−てＩＮ塩酸中で基結晶させ
、真空下で乾燥して８−カルボキシメチルテオフィリン
を固体としてえた（３５ｖ、２５％）３゜ この８−カルボキシメチルテオフィリン（１２０〜、ミ
リモル）會ジメチルホルムγミドにとかして００に冷却
シ２、この混合物に１．１−カルボニルジイミダゾール
（ｔｏａ＋＋ｙ 、 ０．６５ミ’）モル）ｆｃ加え、
ル応物を−１１）Ｃにおいて１５分間かくはんしｔｃＣ
Ｉ Ｑ−エチル−８−（９−アミノ−３−メチルナアノ
１ル）メチノ叩トスホノ≠オエート・トリフロロ酢酸ｔ
Ｍ （実ＡｍＮ１で製糸したもの）をジメチルボルムア
ミドにとかして、上記反応混合物に加え、次いで１〜２
当址のトリエチルアミンを混合物がｐＨ９をもつまで加
えた。この反ｒｒ−，＋ ２０分間進行させ、次いで反
応混合物ｉ ２００ ｍｊのエーテル中に入れて室温に
おいて十分量保持した。エーテルをデカンデージョンに
よって除き、油状物をえてから、これを最少量のメタノ
ールにとかした。このメタノール溶液をエーテルに加え
て、粗生成物を沈澱させた。粗生成物を含むエーテル溶
液を遠心分離し、デカンテーションし、そして乾燥して
生成物奮えた。
溶出液として、０．０１Ａ／のトリフロロ酢酸を含む水
−・アセト［有］ ニトリルの６５／３５混合物を使用して２個のＥ ！Ｉ
ｙｆ ＬｏｂａｒＲＰ−８プレパレーテ・「ブシリカゲ
ルを用い、上耐！生成物をクロマトグラフにより精製し
た。生成物を含む溶出液をメタノール中にとり、エーテ
ルから沈澱させて次式（Ｖｌ）の９−（エトキシメチル
ホスフィニルチオ）−メチルチアノイル−Ｎ−カルボキ
シメチルテオフィリンを固体（１０４ｆｌｆ、３３％）
とし実す山例 ３゜ 本発明の化合物に↓るアセテルコリンエステラーゼノ抑
制速度當数を次のようにしで測定しん。
−・アセト［有］ ニトリルの６５／３５混合物を使用して２個のＥ ！Ｉ
ｙｆ ＬｏｂａｒＲＰ−８プレパレーテ・「ブシリカゲ
ルを用い、上耐！生成物をクロマトグラフにより精製し
た。生成物を含む溶出液をメタノール中にとり、エーテ
ルから沈澱させて次式（Ｖｌ）の９−（エトキシメチル
ホスフィニルチオ）−メチルチアノイル−Ｎ−カルボキ
シメチルテオフィリンを固体（１０４ｆｌｆ、３３％）
とし実す山例 ３゜ 本発明の化合物に↓るアセテルコリンエステラーゼノ抑
制速度當数を次のようにしで測定しん。
反応試剤：
緩衝液： ずべての反１ｒ、、’試剤の１１業溶液を０
．１≠の牛のα−グロブリンを含む０．１Ｍのリン酸ナ
トリウム（ｐＨ’７．０）中で１ｔｌＩ製１７た（フォ
スフ−ｒ−−−ト−ＢＧＧ ）。
．１≠の牛のα−グロブリンを含む０．１Ｍのリン酸ナ
トリウム（ｐＨ’７．０）中で１ｔｌＩ製１７た（フォ
スフ−ｒ−−−ト−ＢＧＧ ）。
リガンド類似体−非可逆性
抑制共役体溶？１に： フォスフニー）−ＢＧＧ緩衝
液中の化合物（ロ）の５．０ ｘ １０−６ＡＩ溶液の
作業溶液を、メタノ−′ル中の１ヒ＠物（ロ）の０．０
０５ Ａ／のストック溶液からの蒸留によって調製した
。
液中の化合物（ロ）の５．０ ｘ １０−６ＡＩ溶液の
作業溶液を、メタノ−′ル中の１ヒ＠物（ロ）の０．０
０５ Ａ／のストック溶液からの蒸留によって調製した
。
アセチルコリンエステラーゼ＝ １−当９０．６単位の
アセチルコリンエステラーゼの作業溶液をフォスフェー
ト−ＢＧＧ緩衝液中で製造した。１単位の酵素活性を、
２５℃において毎分１マイクロモルのアセチルコリンの
加水分解を触媒的に行なう酵素蓋と定めた。５ＸＩＯ５
／分の反覆数を仮定すると、この溶液中の酵素濃度は１
．７ ｘ １０−８Ａｆである。
アセチルコリンエステラーゼの作業溶液をフォスフェー
ト−ＢＧＧ緩衝液中で製造した。１単位の酵素活性を、
２５℃において毎分１マイクロモルのアセチルコリンの
加水分解を触媒的に行なう酵素蓋と定めた。５ＸＩＯ５
／分の反覆数を仮定すると、この溶液中の酵素濃度は１
．７ ｘ １０−８Ａｆである。
基 質： ７．４ Ｘ １０−’Ａ／のアセチル−Ｂ
−Ｃメチルチ詞）−コリンコダイドおよび２．４Ｘ１０
ＭのＤＴＮＢを含むフォスフェート−ＢＧＧ緩衝液
を使用して酵素活性を測定した、１ 抑制反応の凝似第１次速度常数を、２５μｌの共役体作
業溶液と２５μｌ（０，０１５単位）のアセチルコリン
エステラーゼ溶液とを混合することによって測定した。
−Ｃメチルチ詞）−コリンコダイドおよび２．４Ｘ１０
ＭのＤＴＮＢを含むフォスフェート−ＢＧＧ緩衝液
を使用して酵素活性を測定した、１ 抑制反応の凝似第１次速度常数を、２５μｌの共役体作
業溶液と２５μｌ（０，０１５単位）のアセチルコリン
エステラーゼ溶液とを混合することによって測定した。
この溶液をときどき５分間かくはんしで至温で培養（ま
た。この溶液の５μｌの分別電音０．２５−のフォスフ
ェート−ＢＧＧおよび０．１５ｍ／の基質溶液に加える
ことによって残存酵素活性鼠を測定した。
た。この溶液の５μｌの分別電音０．２５−のフォスフ
ェート−ＢＧＧおよび０．１５ｍ／の基質溶液に加える
ことによって残存酵素活性鼠を測定した。
４１５１５５０ｎｔｒｉ フィルタ付きの７４ｉ！Ｉ
ｂｏｔｔ Ｂｉｃｈｒｏｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ
（ＡＢＡ−１００）中で吸収増加率を測定した。第２久
遠度常数（ｋ２）を下記の方程式により計算した。
ｂｏｔｔ Ｂｉｃｈｒｏｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ
（ＡＢＡ−１００）中で吸収増加率を測定した。第２久
遠度常数（ｋ２）を下記の方程式により計算した。
たたし、上呂１シ方程式中のＡｄｌは化合物■の存在に
おいて発生する吸収増加率であり： Ａｄｃは化合物Ｍ
）の不存在下での吸収増加率であり；ｔは酵素と化合物
Ｍの培養時間←単位二分）〔たとえば５分〕であり：〔
Ｉ〕は始めの酵素／化合物培養溶液の化合物（ロ）の濃
度（モル／ｉである。
おいて発生する吸収増加率であり： Ａｄｃは化合物Ｍ
）の不存在下での吸収増加率であり；ｔは酵素と化合物
Ｍの培養時間←単位二分）〔たとえば５分〕であり：〔
Ｉ〕は始めの酵素／化合物培養溶液の化合物（ロ）の濃
度（モル／ｉである。
式（ロ）の化合物についてえられた第２久遠度常数（ｋ
２）は３．２ Ｘ １０１１モル／分であった。このよ
うにしてえられた８＄４２次速度常数の値１式（１）の
従来技術の化合物についてえられた第２久遠度常数（式
（１）の化合物についてのｋ は３ Ｘ １０６１１モ
ル／分）よりも約１００倍太きい。この工うに、本発明
の化合物を使用するテオフィリンの非ｉＪ逆的酵素抑制
剤免疫分析の感度は顕著に且つ予想外に増大する。
２）は３．２ Ｘ １０１１モル／分であった。このよ
うにしてえられた８＄４２次速度常数の値１式（１）の
従来技術の化合物についてえられた第２久遠度常数（式
（１）の化合物についてのｋ は３ Ｘ １０６１１モ
ル／分）よりも約１００倍太きい。この工うに、本発明
の化合物を使用するテオフィリンの非ｉＪ逆的酵素抑制
剤免疫分析の感度は顕著に且つ予想外に増大する。
本発明ケ特定の貝１体例について述べたけれども、その
詳細は限定として解釈されるべきではなく、本発明の範
囲から逸脱することなしＶＣ種々の均等物、変化および
変性が行ないうることは当業者にとって明らかであり、
このような均等な具体例も本発明に自まれるものである
こと？理解すべきである。
詳細は限定として解釈されるべきではなく、本発明の範
囲から逸脱することなしＶＣ種々の均等物、変化および
変性が行ないうることは当業者にとって明らかであり、
このような均等な具体例も本発明に自まれるものである
こと？理解すべきである。
特許出願人 アボット ラボラトリーズ代理人 弁理
士 用瀬良治（・ 同 蒼藤武彦 （′ 又−一１．！
士 用瀬良治（・ 同 蒼藤武彦 （′ 又−一１．！
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 〔式中のｎは２〜６の整数であり：ＲおよびＲ′は独立
にＣ□〜Ｃ４アルキルであり；そしてＺは生物学的に適
合する逆イオンである〕をもつ化合物。 ２、Ｚが塩素、ヨード、メチルサルフェートまたはテト
ラフロロボレートである特許請求の範囲第１項記載の化
合物。 ３、 Ｚがテトラフロロボレートである特許請求の範
囲第２項記載の化合物。 ４、 Ｒがメチルであり、Ｒ′がエチルである特許請
求の範囲第１］Ｊｔ記載の化合物。 ５、 Ｚがテトラフロロボレートである特許請求の範
囲第４項記載の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US380981 | 1982-05-24 | ||
| US06/380,981 US4451652A (en) | 1982-05-24 | 1982-05-24 | Substituted theophylline salts |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58213791A true JPS58213791A (ja) | 1983-12-12 |
| JPH0134228B2 JPH0134228B2 (ja) | 1989-07-18 |
Family
ID=23503202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58090113A Granted JPS58213791A (ja) | 1982-05-24 | 1983-05-24 | 置換テオフイリン塩類 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4451652A (ja) |
| JP (1) | JPS58213791A (ja) |
| BE (1) | BE896802A (ja) |
| CA (1) | CA1215051A (ja) |
| DE (1) | DE3318809C2 (ja) |
| ES (1) | ES522679A0 (ja) |
| FR (1) | FR2527211A1 (ja) |
| GB (1) | GB2121803B (ja) |
| IT (1) | IT1164234B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4543412A (en) * | 1983-11-04 | 1985-09-24 | Abbott Laboratories | Phenobarbital enzyme inhibitors |
| JP3737968B2 (ja) * | 1999-06-25 | 2006-01-25 | ロシュ ダイアグノスティックス コーポレーション | 酵素阻害イムノアッセイ |
| US6962209B2 (en) * | 2001-10-17 | 2005-11-08 | Turfco Manufacturing Inc. | Simple, durable and easy-to-use earthworking machine |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4273866A (en) * | 1979-02-05 | 1981-06-16 | Abbott Laboratories | Ligand analog-irreversible enzyme inhibitor conjugates and methods for use |
-
1982
- 1982-05-24 US US06/380,981 patent/US4451652A/en not_active Expired - Fee Related
-
1983
- 1983-04-29 GB GB08311847A patent/GB2121803B/en not_active Expired
- 1983-05-20 CA CA000428612A patent/CA1215051A/en not_active Expired
- 1983-05-20 FR FR8308412A patent/FR2527211A1/fr active Granted
- 1983-05-20 BE BE0/210816A patent/BE896802A/fr not_active IP Right Cessation
- 1983-05-24 JP JP58090113A patent/JPS58213791A/ja active Granted
- 1983-05-24 DE DE3318809A patent/DE3318809C2/de not_active Expired
- 1983-05-24 ES ES522679A patent/ES522679A0/es active Granted
- 1983-05-24 IT IT21257/83A patent/IT1164234B/it active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT8321257A0 (it) | 1983-05-24 |
| DE3318809A1 (de) | 1983-11-24 |
| GB8311847D0 (en) | 1983-06-02 |
| FR2527211B1 (ja) | 1985-05-17 |
| US4451652A (en) | 1984-05-29 |
| CA1215051A (en) | 1986-12-09 |
| BE896802A (fr) | 1983-11-21 |
| IT1164234B (it) | 1987-04-08 |
| ES8406480A1 (es) | 1984-08-01 |
| ES522679A0 (es) | 1984-08-01 |
| GB2121803A (en) | 1984-01-04 |
| GB2121803B (en) | 1985-10-23 |
| DE3318809C2 (de) | 1985-01-03 |
| IT8321257A1 (it) | 1984-11-24 |
| JPH0134228B2 (ja) | 1989-07-18 |
| FR2527211A1 (fr) | 1983-11-25 |
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