JPH11515022A

JPH11515022A - 成長促進物質

Info

Publication number: JPH11515022A
Application number: JP9517148A
Authority: JP
Inventors: スミス，ジョン・アーサー; ウィルキンソン，マーク・チャールズ; リウ，キン−ミン
Original assignee: ペプシン・リミテッド
Priority date: 1995-10-31
Filing date: 1996-10-31
Publication date: 1999-12-21
Also published as: WO1997016460A1; DE69623803T2; ATE224403T1; GB9522302D0; DE69623803D1; EP0861265A1; EP0861265B1

Abstract

(57)【要約】 α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一なアミノ酸配列が成長促進剤として働くことが示されている。９個のＣ末端のアミノ酸

Description

【発明の詳細な説明】成長促進物質本願発明は、成長促進物質(growth promoter)に関する。乳汁には、その栄養成分に加えて、細胞の成長・増殖促進活性が含まれていることが長い間知られてきた。たとえば、上皮増殖因子(Epidermal Growth Factor ；ＥＧＦ)が、ヒト(Shing and Klagsbrun，1984，Petrides，1985)、ラット(Raa berg et al，1990)、ブタ(Tan et al，1990)、ヤギ(Brown and Blakeley，1983) の乳汁で同定されている。さらに、ラット乳汁中に存在するＥＧＦは、仔の正常な発生に重要であると知られている(Oka et al，1983)。ＥＧＦは、しかしながら、ウシの乳汁中では見つかっていない。血小板由来増殖因子(Platelet-derived Growth Factor; ＰＤＧＦ)(Shing and Klagsbrun，1984，Brown and Blakeley，1984)に構造的に関係のある、インスリン様成長因子(insulin-like growth factor; ＩＧＦ)Ｉ及びII (Francis et al，1986)及びウシ初乳成長因子（Bovine colostrum growth facto r; ＢＣＧＦ）が、同定されている。発明者は、驚くべきことに、ウシの乳汁が、ラットの乳線維芽細胞系（Rana 2 7）に対する成長促進活性を含むことを発見をした。このRana 2は、ＩＧＦ又はＰＤＧＦによってはあまり刺激されない。さらに、発明者は、この成長促進活性を引き起こすペプチド配列を同定した。本発明は、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩に関する。本発明の第一の様態では、成長促進のための薬剤又は食料の製造のための、α −Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用が提供される。カゼインタンパク質全体では、成長促進活性はみられないが、発明者はウシα −Ｓ２カゼインのＣ末端から得られ、成長促進活性を引き起こす多くのペプチドを同定した。さらに、発明者は、この成長促進活性がウシα−Ｓ２カゼインのＣ末端から得られるアミノ酸９〜３１個の長さのペプチドに少なくとも存在することを示した。成長促進活性の働きを有する天然の配列は、Ｃ末端の少なくとも９個のアミノ酸、又は、その９個のアミノ酸配列中のより短い配列、おそらく８個又は７個のアミノ酸配列を含む配列であると仮説を立てるのは当然である。さらに、３個のアミノ酸配列のような短い配列であるかもしれない。ウシα−Ｓ２カゼイン前駆体は、以下のアミノ酸配列を有すると特徴付けられている。［CAS2 ウシ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列３文字表記ではこれは以下のように表される。「CAS2 ウシ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列発明者は、Ｃ末端配列である、LysValIleProTyrValArgTyrLeuを含む短いペプチド配列が成長促進活性を示すことを発見した。本発明の第２の様態によれば、アミノ酸配列、LysValIleProTyrValArgTyrLeu を含む成長因子が提供される。さらに、例えば、ウシα−Ｓ２カゼインのＣ末端の最後の２０個のアミノ酸を、ヤギ及びヒツジの当該アミノ酸と比較すると、ウサギやブタのα−Ｓ２カゼインのＣ末端アミノ酸配列は少し落ちるが、相同性の度合いが高い。これらの配列を以下に示す。［CAS_CAPHP］α−Ｓ２カゼイン前駆体（α−Ｓ２−ＣＮ）配列＞pir｜S33881｜S33881 α２−カゼインＥ−ヤギ＞gp｜S74171｜S74171_1 αｓ２−カゼインＣ［ヤギ(Capra hircus)］＞pir｜S39776｜S39776 α−Ｓ２−カゼインｂ型前駆体−ウサギ＞gp｜X76909｜OCPAS2BCS_1 プレαS2bカゼイン(アミノ酸15〜1 67)［カイウサギ(Oryctolagus cuniculus)］［CAS2 ヒツジ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列［CAS2 ブタ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列３文字表記では、以下のように表される。［CAS2 CAPH1］α−Ｓ２カゼイン前駆体（α−Ｓ２−ＣＮ）配列＞pir/S33881/S33881 αＳ２−カゼインＥヤギ＞pir/S74171/S74171 1 αＳ２−カゼインＣ［ヤギ(Capra hircus)］＞pir/S39776/S39776 α−Ｓ２−カゼインｂ型前駆体−ウサギ＞gp/X76909/OCPAS2BCS 1 プレαＳ”ｂカゼイン（アミノ酸１５〜１６７）［カイウサギ(Oryctolagus cuniculus)］［CAS2 ヒツジ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列［CAS2 ブタ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列Ｃ末端配列は種間で変化していて、その結果、好ましい配列はウシα−Ｓ２カゼインのＣ末端から得られるものを含むが、他の種のものでも使用することができるということが、上記から明らかである。さらに、あるアミノ酸の類似した性質のため、わずかな置換は配列の機能にほとんど影響を与えないだろう。それゆえ、例えば、ロイシン、イソロイシン及びバリンは、相互に交換可能である。トリプシンとフェニルアラニンは、相互に交換可能であり、アルギニンとリジンは相互に交換可能である。この発見の重大性は、ヒト又は動物試料のため、成長を促進しうるペプチド補充物が食物や飲料に添加しうることである。本発明のさらなる様態では、本発明のペプチド又はその塩を含む食物又は飲料を提供することである。好ましくは、食物又は飲料は、児童の薬剤処方や動物飼料である。それは、液体であっても、粉末であっても良い。本発明によるペプチドを合成的に製造することも可能であるが、牛乳からin s ituでペプチドを製造するのが望ましい。本発明のさらなる様態によれば、乳汁を酵素処理し、乳汁中のカゼインを分解して、本発明の活性ペプチド又はその塩を含む、より小さい断片にする。好ましくは、酵素はプロテアーゼであり、より好ましくは、リジン交差結合(c ross-bond)を切断するものである。さらに好ましくは、プラスミン又はトリプシンである。本発明は、以下の実施例に関してのみ例としてさらに説明される。例１異なる種類の乳汁の成長・増殖促進活性を、カゼインを沈殿させ、公知技術である、［３Ｈ］チミジンのRama27細胞のＤＮＡへの取り込みを刺激する能力による上清の解析により決定した(Smith et al，1984)。このテストの結果を図１に示す。これは、異なる種の乳汁の成長・増殖促進活性を示している。これらの３種類の市販乳を酸性にし、カゼインを沈殿させ、その成長促進活性を解析した。最も大きな活性は、セミスキムミルクにみられた。ＳＤＭ(step down medium)は、ネガティブコントロールを示し、ＦＣＳ(胎児ウシ血清; foetal calf serum)は、ポジティブコントロールを示している。例２５リットルのセミスキムミルクをＨＣｌでｐＨ３．０に調整して作成し、２時間４℃に放置した。Sorvall RC5B遠心分離器でGS3ローターを用いて9000rpmで４０分間遠心分離し、上清（約３．６リットル）をガラスウールによって注ぎ、脂肪分を除去した。固体の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄を２２％（Ｗ／Ｖ）の濃度になるまで４℃で攪拌しながら上清にゆっくり加え、攪拌せずに２時間４℃で放置した。沈殿したタンパク質は、上述のように遠心分離して取り除いた。上清にさらに（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄を３５％（Ｗ／Ｖ）になるまで加え、沈殿を上述のように回収した。沈殿を１６００ｍｌの蒸留水に再溶解し、流水中で一晩透析し、さらに２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ６．０）で８時間透析した。活性のある画分は、以下の（ｉ）〜（iv）に概略を示した一連のクロマトグラフィー技術によって得られた。（ｉ）上述のように調製した活性のある画分をＣＭセファロースクロマトグラフィーに供した。２０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で前もって平衡化したＣＭセファロースカラム（１０ｃｍ×５ｃｍ、内径、Pharmacia）に、その画分を加えた。ロードした後、カラムは、５０ｍＭのＮａＣｌを含む上述の緩衝液５０ｍＬで洗浄された。タンパク質は、０．１〜０．７ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）１５００ｍＬの直線的な勾配で溶出された。生物的に活性のある画分は、０．２８ＭのＮａＣｌと０．４ＭのＮａＣｌで溶出された。図２参照。図２では、上部のパネルは、２８０ｎｍのタンパク質の吸光度を示し、下部のパネルは活性（³ＨチミジンのＤＮＡへの取り込み）を示す。試料は、２２〜３５％の（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄で沈殿した材料から得たものである。試料を再溶解して、透析した後、０．０５ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ６．０）とともに、カラム（１０ｃｍ×５ｃｍ）にロードした。溶出勾配は、０．１〜０．７ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ６）あった。流速は、５ｍＬ／分であり、分画サイズは各２５ｍＬであった。２つの活性は、０．２８ＭのＮａＣｌと０．３４〜０．４５ＭのＮａＣｌでそれぞれ溶出された。トレースの開始時における２８０ｎｍの高い吸光度は、非吸着タンパク質の量を示している。０．２８ＭのＮａＣｌで溶出された画分は、さらに精製された。（ii）上述の分離により得られた活性画分は、疎水性相互作用クロマトグラフィーに供された。活性画分は、３．７ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ６．５）で調製され、４ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄ で前もって平衡化したブチルセファロースカラム（８．６ｃｍ×２．５ｃｍ、内径）に供された。タンパク質は、図３に示されるＮａＣｌの濃度の減少する勾配で溶出された。図３では、上部のパネルは２８０ｎｍのタンパク質の吸光度を示し、下部のパネルは活性（³ＨチミジンのＤＮＡへの取り込み）を示す。試料は、ＣＭセファロースクロマトグラフィーの後の最初に溶出した活性から得られたものである。カラム（２．５ｃｍ×８．６ｃｍ、ブチル結合セファロース）は、４ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ６．５）で平衡化された。流速は３．５ｍＬ／分であり、分画サイズは３．５ｍＬであった。活性は、ほとんどのタンパク質のピークの直前である１．６ＭのＮａＣｌで溶出された。（iii）疎水性相互作用カラムからの活性画分は、逆相ＨＰＬＣ−１クロマトグラフィーに供された。画分は、０．１％のＴＦＡで前もって平衡化したブチル逆相カラムに８バッチで供された。０．１％のＴＦＡでカラムを洗浄した後、タンパク質は、図４に示すように、アセトニトリル（遠紫外線グレード、Rathburns, Walkerburn，Scotland）の勾配で溶出された。図４では、上部のパネルは２１４ｎｍのタンパク質の吸光度を示し、下部のパネルは活性（³ＨチミジンのＤＮＡへの取り込み）を示す。試料は、疎水性相互作用クロマトグラフィーの後の活性から得られた。カラム（２５０ｃｍ×４．６ｍｍ、Ｃ４）は、０．１％のＴＦＡで平衡化された。流速は０．７ｍＬ／分であり、分画サイズは０．７ｍＬであった。溶出勾配は３０分間に１０〜３０％のアセトニトリルを含む０．１％のＴＦＡであった。活性は、２３％のアセトニトリルで溶出された。（iv）活性分画は、つづいて逆相ＨＰＬＣ−２クロマトグラフィーに供された。上記逆相クロマトグラフィーの８バッチ全てから得られた分裂促進活性のある分画は、集められ、遠心乾燥器で全容量１００μＬまで濃縮された。この濃縮された材料は、０．１％のＴＦＡで前もって平衡化したＣ１８逆相カラム（ＯＤＳ ultrasphere，Beckman）にロードされ、流速０．２ｍＬ／分の２０〜４０％のアセトニトリルを含む０．１％のＴＦＡによる浅い勾配で４５分間溶出された。吸光度は２１４ｎｍでモニターされ、吸光度の各ピークから得られた材料は、それぞれ別に、手作業で集められた。図５参照。図５の上部のパネルは２１４ｎｍのタンパク質の吸光度であり、下部のパネルは活性（³ＨチミジンのＤＮＡへの取り込み）を示す。試料は逆相ＨＰＬＣ−１の後の活性から得られた。カラム（ＯＤＳ）は０．１％ＴＦＡで平衡化された。流速は０．２ｍＬ／分であった。２１４ｎｍにおける吸光度の各ピークは、手作業で集められた。溶出勾配は、４５分間で２０〜４０％のアセトニトリルを含む０．１％のＴＦＡであった。ピークＡ、Ｂ、Ｃ（矢印）は、全て活性を有していた。ステップ（iv）で得られた精製タンパク質（ピークＡ、Ｂ、Ｃ）は、その後解析された。タンパク質含量は、標準としてウシγグロブリンを用いた、Bio-Radによるクマーシーブルーの結合によって測定した。ＨＰＬＣにより分離された画分のペプチド定量は、標準としてチトクロムｃとリゾチームを用いた２１４ｎｍの吸光度より行った。カゼイン分解物のタンパク質画分Ａ、Ｂ、Ｃは、上述したようにRana27細胞の［３Ｈ］チミジンのＤＮＡへの取り込みを刺激する能力により解析された。その結果は、Ｏ−Ｓ２カゼインの各段階の精製画分の成長促進活性を表した表１に示されている。表１では、＊は、Ｒ２７に添加したとき、１％のＦＣＳと比較して、その最高刺激の１／２を生じるのに要求されるタンパク質の量として決められた、活性の１ユニットを示す。逆相ＨＰＬＣ−２のピークＢ、Ｃからのペプチドは、配列決定された。それらは、５つのペプチドの配列のネストしたシリーズであることがわかった。それらは、ウシＯ−Ｓ２カゼインのＣ末端と対応している。ピークＣは、ThrLysValIle ProTyrValArgTyrLeuのみであり、他の配列はピークＢからのものである。ピークの配列を以下に記す。配列１ LysValIleProTyrValArgTyrLeu（ピークＢ）配列２ ThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu（ピークＣ）配列３ LysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu（ピークＢ）配列４ AlaMetLysProTrpIleGlnProLysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu（ピークＢ）配列５ ProGlnTyrLeuLysThrValTyrGlnHisGlnLysAlaMetLysProTrpIleGlnProLysThrLysVal IleProTyrValArgTyrLeu（ピークＢ）活性が不純物によるものでないことを確認するために、同定されたペプチド配列をFmoc化学及びペンタフルオロフェニルエステルを用いて、標準的なプロトコルによりMilligen/Bioseach 9050ペプチド合成機(Millipore，Watford)で合成した。これらのうち、最初は、LysValIleProTyrValArgTryLeuのみが、生物的活性を示したが、ＰＢＳで保存した後、全てのペプチドが低レベルの細胞分裂促進能を獲得した。LysValIleProTyrValArgTyrLeuの活性は、アルカリ側のｐＨに維持したとき、実質的に増加した。αカゼインは、逆に、細胞分裂促進解析において非活性だった。トリプシンによる消化では、解析における活性は増加し、その活性は、逆相ＨＰＬＣによりトリプシン自体によるものとは分離できた。本明細書において記載された例は、乳汁の成長・増殖因子活性が主にα−Ｓ２カゼインのＣ末端断片によることを示している。ペプチドの活性により、０．１〜１０μｇの添加、より好ましくは約１μｇのペプチドを２５０ｇの食物又は飲料に添加することにより、良好な成長・増殖促進活性が提供される。しかしながら、活性を維持するために、合成ペプチドはアルカリ条件で、好ましくは約ｐＨ１３で保存する必要がある。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１１月１０日【補正内容】明細書成長促進物質本願発明は、成長促進物質(growth promoter)に関する。乳汁には、その栄養成分に加えて、細胞の成長・増殖促進活性が含まれていることが長い間知られてきた。たとえば、上皮増殖因子(Epidermal Growth Factor ；ＥＧＦ)が、ヒト(Shing and Klagsbrun，1984，Petrides，1985)、ラット(Raa berg et al，1990)、ブタ(Tan et al，1990)、ヤギ(Brown and Blakeley，1983) の乳汁で同定されている。さらに、ラット乳汁中に存在するＥＧＦは、仔の正常な発生に重要であると知られている(Oka et al，1983)。ＥＧＦは、しかしながら、ウシの乳汁中では見つかっていない。血小板由来増殖因子(Platelet-derived Growth Factor; ＰＤＧＦ)(Shing and Klagsbrun，1984，Brown and Blakeley，1984)に構造的に関係のある、インスリン様成長因子(insulin-like growth factor; ＩＧＦ)Ｉ及びII (Francis et al，1986)及びウシ初乳成長因子（Bovine colostrum growth facto r; ＢＣＧＦ）が、同定されている。欧州特許出願0457565号には、乳汁タンパク質の加水分解物及び髪及び皮膚の状態に効果がある組成物が開示されている。発明者は、驚くべきことに、ウシの乳汁が、ラットの乳線維芽細胞系（Rana 2 7）に対する成長促進活性を含むことを発見をした。このRana 2は、ＩＧＦ又はＰＤＧＦによってはあまり刺激されない。さらに、発明者は、この成長促進活性を引き起こすペプチド配列を同定した。本発明は、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩に関する。本発明の第一の様態では、成長促進のための薬剤又は食料の製造のための、９〜３１個のアミノ酸の長さのアミノ酸配列であって、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列、又は、ｉ）１以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している、 ii）１以上のアミノ酸Tyr及びPheが互いに置換している、及び又は、 iii）１以上のアミノ酸Arg及びLysが互いに置換しているその相同物をを含むペプチド又はその塩の使用が提供される。カゼインタンパク質全体では、成長促進活性はみられないが、発明者はウシα −Ｓ２カゼインのＣ末端から得られ、成長促進活性を引き起こす多くのペプチドを同定した。さらに、発明者は、この成長促進活性がウシα−Ｓ２カゼインのＣ末端から得られるアミノ酸９〜３１個の長さのペプチドに少なくとも存在することを示した。成長促進活性の働きを有する天然の配列は、Ｃ末端の少なくとも９個のアミノ酸、又は、その９個のアミノ酸配列中のより短い配列、おそらく８個又は７個のアミノ酸配列を含む配列であると仮説を立てるのは当然である。さらに、３個のアミノ酸配列のような短い配列であるかもしれない。ウシα−Ｓ２カゼイン前駆体は、以下のアミノ酸配列を有すると特徴付けられている。［CAS2 ウシ］α−Ｓ２カゼイン前駆体配列請求の範囲１．成長を促進するための薬剤又は食料を製造するための、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一である、９〜３１個のアミノ酸の長さのアミノ酸配列、又は、ｉ）１以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している、 ii）１以上のアミノ酸Tyr及びPheが互いに置換している、及び／又は、 iii）１以上のアミノ酸Arg及びLysが互いに置換しているその相同物を含んでなるペプチド又はその塩の使用。２．ペプチドが、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、若しくはブタのα−Ｓ２カゼインから得られるものであるか、又は、ｉ）１以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している、 ii）１以上のアミノ酸Tyr及びPheが互いに置換している、及び／又は、 iii）１以上のアミノ酸Arg及びLysが互いに置換している合成されたその同等物若しくはその相同物である請求項１に記載のペプチド又はその塩の使用。３．ペプチドが、ウシのα−Ｓ２カゼインから得られるものであるものであるか、又は、ｉ）１以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している、 ii）１以上のアミノ酸Tyr及びPheが互いに置換している、及び／又は、 iii）１以上のアミノ酸Arg及びLysが互いに置換している合成されたその同等物若しくはその相同物である請求項２のペプチド又はその塩の使用。４．ペプチドが９個のアミノ酸を含む請求項１〜３のいずれか一に記載のペプチド又はその塩の使用。５．アミノ酸配列 LysValIleProTyrValArgTyrLeu 又はｉ）１以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している、 ii）１以上のアミノ酸Tyr及びPheが互いに置換している、及び／又は、 iii）１以上のアミノ酸Arg及びLysが互いに置換しているその相同物を含んでなる請求項１〜４のいずれか一に記載のペプチド又はその塩の使用。６．ペプチドがアミノ酸配列 LysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜５のいずれか一に記載のペプチドの使用。７．ペプチドが下記の配列 ThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜５のいずれか一に記載のペプチドの使用。８．ペプチドが下記の配列 LysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜５のいずれか一に記載のペプチドの使用。９．ペプチドが下記の配列 AlaMetLysProTrpIleGlnProLysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜５のいずれか一に記載のペプチドの使用。１０．ペプチドが下記の配列 ProGlnTyrLeuLysThrValTyrGlnHisGlnLysAlaMetLysProTrpIleGlnProLys ThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜５のいずれか一に記載のペプチドの使用。１１．食料が、児童の薬剤処方又は動物飼料である請求項１〜１０のいずれか一に記載のペプチドの使用。１２．薬剤又は食料が、液体又は粉末である請求項１〜１１のいずれか一に記載のペプチドの使用。１３．薬剤又は食料が、全乳又はセミスキムミルクを含む請求項１〜１２に記載のペプチドの使用。１４．薬剤又は食料がアルカリ側のｐＨを有する請求項１〜１３に記載のペプチドの使用。１５．ペプチドが効果的な量存在する請求項１〜１４に記載のペプチドの使用。１６．効果的な量が、２５０ｇの薬剤又は食料に対し、０．１〜１０μｇである請求項１５に記載のペプチドの使用。１７．α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一である、９〜３１個のアミノ酸の長さのアミノ酸配列、又は、ｉ）１以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している、 ii）１以上のアミノ酸Tyr及びPheが互いに置換している、及び／又は、 iii）１以上のアミノ酸Arg及びLysが互いに置換しているその相同物を含むペプチド又はその塩を含んでなる食料又は飲料。１８．酵素で乳汁を処理して、乳汁中に存在する乳カゼインを、９〜３１個のアミノ酸の長さのアミノ酸配列であって、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む１以上のペプチドに分解することを含む、成長促進ペプチドを含んでなる薬剤又は食料の製造方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 7/06 Ｃ０７Ｋ 7/08 7/08 Ａ６１Ｋ 37/36 (72)発明者リウ，キン−ミンイギリス国、エル14 ２イーエルリヴァプール、ノッティー・アッシュ、カウルポート・クローズ 67

Claims

【特許請求の範囲】１．成長を促進するための薬剤又は食料の製造のための、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列を含んでなるペプチド又はその塩の使用。２．ペプチドが、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、若しくはブタのα−Ｓ２カゼインから得られるものであるか、又は、合成されたその同等物若しくはその相同物である請求項１に記載のペプチドの使用。３．ペプチドが、ウシのα−Ｓ２カゼインから得られるものであるものであるか、又は、合成されたその同等物若しくはその相同物である請求項２のペプチドの使用。４．ペプチドが９〜３１個のアミノ酸を含む請求項１〜３のいずれか一に記載のペプチドの使用。５．ペプチドが９個のアミノ酸を含む請求項１〜４のいずれか一に記載のペプチドの使用。６．アミノ酸配列 LysValIleProTyrValArgTyrLeu 又はその相同物を含んでなる請求項１〜５のいずれか一に記載のペプチドの使用。７．相同物が、ｉ）一以上のアミノ酸Leu、Ile、及びValが互いに置換している ii）一以上のアミノ酸Tyr及びPhe互いに置換している、及び／又は iii）一以上のアミノ酸Arg、Lysが互いに置換しているペプチドを含む請求項２〜６のいずれか一に記載のペプチドの使用。８．ペプチドが下記の配列 LysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜７のいずれか一に記載のペプチドの使用。９．ペプチドが下記の配列 ThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜７のいずれか一に記載のペプチドの使用。１０．ペプチドが下記の配列 LysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜７のいずれか一に記載のペプチドの使用。１１．ペプチドが下記の配列 AlaMetLysProTrpIleGlnProLysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜７のいずれか一に記載のペプチドの使用。１２．ペプチドが下記の配列 ProGlnTyrLeuLysThrValTyrGlnHisGlnLysAlaMetLysProTrpIleGlnProLys ThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu を有する請求項１〜７のいずれか一に記載のペプチドの使用。１３．食料が、児童の薬剤処方又は動物飼料である請求項１〜１２のいずれか一に記載のペプチドの使用。１４．薬剤又は食料が、液体又は粉末である請求項１〜１３のいずれか一に記載のペプチドの使用。１５．薬剤又は食料が、全乳又はセミスキムミルクを含む請求項１〜１４に記載のペプチドの使用。１６．薬剤又は食料がアルカリ側のｐＨを有する請求項１〜１５に記載のペプチドの使用。１７．ペプチドが効果的な量存在する請求項１〜１６に記載のペプチドの使用。１８．効果的な量が、２５０ｇの薬剤又は食料に対し、０．１〜１０μｇである請求項１７に記載のペプチドの使用。１９．α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一であるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を含んでなる食料又は飲料。２０．酵素で乳汁を処理して、乳汁中に存在する乳カゼインを、α−Ｓ２カゼイン前駆体のＣ末端と実質的に同一のアミノ酸配列を含む１以上のペプチドに分解することを含むことを特徴とする成長促進ペプチドを含む薬剤又は食料の製造方法。