JPH10513438A - 新規な抗血栓症剤、その製造法およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 トロンビン阻害剤HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabを１種以上の吸収促進剤と組み合わせて含有する新規な薬剤、このような薬剤の製造法、血栓塞栓症の治療におけるこのような薬剤の使用、および前記薬剤を使用して抗血栓治療の必要な患者や血栓塞栓症の患者を治療する方法が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】 新規な抗血栓症剤、その製造法およびその使用 本発明の技術分野 本発明はトロンビン阻害剤HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabを１種以上の吸収促進剤 と組み合わせて含有する新規な薬剤、このような薬剤の製造法、血栓塞栓症の治 療におけるこのような薬剤の使用、および前記薬剤を使用してこのような治療の 必要な患者を治療する方法に関する。 技術背景 血液凝固は止血（すなわち、損傷血管からの血液の損失の防止）および血栓症 （すなわち、凝固塊による血管の病的な閉塞）の両方に関与するキープロセスで ある。 凝固は複雑な一連の酵素反応の結果として起こり、最終工程の１つはプロ酵素 プロトロンビンの活性酵素トロンビンへの変換である。 トロンビンは凝固において中心的な役割を果たす。それは血小板を活性化し、 フィブリノーゲンをフィブリンモノマーに変換し、これは自然に重合してフィラ メントになる；またそれはＸIII因子を活性化し、次にこれがポリマーと架橋し て不溶性フィブリンになる。さらに、トロンビンは正のフィードバック反応にお いて因子Ｖおよび因子VIIIを活性化する。したがって、トロンビンの阻害剤は血 小板の活性化、フィブリンの生成およびフィブリンの安定化を阻害するため有効 な抗凝固剤であると予想される。正のフィードバック機構を阻害するため、この ような阻害剤は凝固および血栓症を引き起こす過程の初期に阻害効果を与えると 予想される。 ペプチド系またはペプチド様トロンビン阻害剤は他の多くのペプチド様物質と 同様に、投与時の吸収が制限されたり、ばらついたりする。こ れは種々のバリヤーの代謝および物理的特性の影響、例えば酵素分解、製剤化ま たは生物学的環境による成分との複合体生成の傾向、輸送能力の限度などのため である。本発明の薬剤の目的の１つは活性剤がこのようなバリヤーを克服できる ようにし、そして活性剤の吸収を促進し、再現可能なものにすることである。こ のような効果を有し、それにより活性剤を補助することのできる配合成分は吸収 促進剤（absorption enhancer）と呼ばれる。 従来の技術 薬剤における吸収促進剤の使用に関して、文献に幾つか報告および論文が載っ ている。界面活性剤、脂質、キレート化剤およびポリマーのような様々なタイプ の物質の促進性が報告されている。包括的な論文はE．J．Van HoogdalemらのPha rmac．Theor．第44巻，407〜443(1989年)，S．MuranishiのCrit．Rev．Ther．Dr ug Carrier Syst．第7巻，1〜33(1990年)，E．S．SwensonおよびW．J．Curatolo のAdv．Drug Deliv Rev．第8巻，39〜92(1992年)，および「薬剤の吸収促進」（ Ａ Ｂ Ｇ de Boer編)，Harwood Academic出版（1994年）に記載されている。 発明の開示 治療的に活性なトロンビン阻害剤HOOC-CH₂-(R)-Cgl-Aze-Pabの吸収はこの治療 的に活性な化合物を含有する薬剤に促進剤を加えることにより改善されうること を見い出した。 したがって、本発明の目的はトロンビン阻害剤HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabを１ 種以上の吸収促進剤、および場合により薬学的に許容しうる担体と組み合わせて 含有する新規な薬剤、およびこのような薬剤の製造法を提供することである。 この治療的に活性な薬剤の改善された製剤を得る手段は治療的活性剤 を様々な投与経路、例えば経口、経腸、経頬、経鼻、肺、吸入経路などにより投 与した時、この活性剤の吸収を促進し、そして／またはそのばらつきを少なくす る正の効果を達成するために界面活性剤、脂質、他の薬剤およびポリマーのよう な（しかしこれらに限定されない）吸収促進剤を使用すること、およびさらによ り高い吸収促進をもたらす正の相乗効果を達成するためにこのような促進剤を組 み合わせて使用することに基づく。 本発明の吸収促進効果は製剤中の１種以上の添加剤、例えばこれらに限定され ないが、非ステロイド系抗炎症剤およびその誘導体、例えばサリチル酸ナトリウ ム、５−メトキシサリチル酸ナトリウム、インドメタシンおよびジクロフェナク ；界面活性剤、例えば非イオン界面活性剤、例えばソルビタンエステル（スパン 系）、ポリソルベート（ツィーン系）、ポリオキシエチル化グリコールモノエー テル（ブリジ系のような）、ポリオキシエチル化アルキルエステル（ミリジ系） 、ポリオキシエチル化アルキルフェノール（トリトン系のような）、糖グリコシ ドのようなアルキルグルコシド、例えばドデシルマルトシド、糖脂肪酸エステル 、例えばスクロースラウレート、スクロースモノステアレートなど、およびサポ ニン；両性界面活性剤、例えばベタイン；アニオン界面活性剤、例えば硫酸化脂 肪アルコール、硫酸化ポリオキシエチル化アルコール、ジオクチルスルホスクシ ネートなど；カチオン界面活性剤、例えばアンモニウム化合物、胆汁酸塩、例え ばデオキシコール酸ナトリウムのようなジヒドロキシ胆汁酸塩、グリココール酸 ナトリウムのようなトリヒドロキシ胆汁酸塩、およびフシジン酸塩、例えばジヒ ドロフシジン酸ナトリウム；石鹸、脂肪酸およびそれらの塩、例えばオクタン酸 、デカン酸およびデカン酸ナトリウム；脂質、例えばグリセリド、例えばグリセ リル モノオクタノエートおよびグリセリルモノオレイン；リン脂質、例えばDPPCおよ びDMPC；油、例えば大豆油およびヒマワリ油；エナミン、例えばDL−フェニルア ナリンおよびエチルアセトアセテートエナミン；キレート化剤、例えばEDTA、EG TAおよびクエン酸；フェノチアジン、例えばクロルプロマジン；カルニチンおよ びペプチドの脂肪酸誘導体、例えばパルミトイル−DL−カルニチンおよびＮ−ミ リストイル−Ｌ−プロピル−Ｌ−プロリル−グリシネート；他の物質、例えばア ゾン、コンカナバリンＡ、ホスフェートおよびホスホネート誘導体、例えばDL− α−グリセロホスフェートおよび３−アミノ−１−ヒドロキシプロピリデン−1, 1−ジホスホネート、ジエチルマレエートおよびジエチルエトキシメチレンマロ ネート：マイラード（Maillard）反応の生成物、例えばグルコセリシン反応から の化合物；ポリマー、例えばポリアクリル酸、例えばカルボポル（登録商標）、 ポリカルボフィル；キトサンおよびキトサン誘導体；並びにブロックコポリマー 、例えばポロキサマー、ポロキサミンおよびメロキサポルにより達成される。 適当な促進剤の組み合わせは脂質および胆汁酸塩、例えばモノオレインおよび タウロコール酸ナトリウム；脂質およびリン脂質、例えば中鎖グリセリドおよび レシチン；界面活性剤および油、例えばスクロース脂肪酸エステルおよび大豆油 ；並びにポリマーおよび脂質、例えばポリカルボフィルおよびモノオレインであ るが、これらに限定されない。 使用される投与形態は知られている方法により製造される固体、半固体または 液体の製剤である。通常、活性物質は製剤の0.1〜99重量％を構成し、さらに詳 しくは非経口投与用製剤の場合、0.1〜50重量％であり、そして経口投与に適し た製剤の場合、0.2〜90重量％である。 人間の治療において治療的に活性な薬剤の適当な１日量は経口投与 の場合、約0.001〜100mg／kg体重であり、そして非経口投与の場合、0.001〜50m g／kg体重である。 促進剤または促進剤の組み合わせは製剤の0.1〜99重量％を構成する。このよ うにして得られる製剤は吸収を増加し、そして／または異なる機構による治療的 に活性な薬剤の吸収のばらつきを最小限にする。 修飾ジペプチドHOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabおよび吸収促進剤を含有する本発明 の薬剤は動脈や静脈の血栓塞栓症の予防および治療に適している。 本発明の別の目的は吸収促進剤を治療的に活性な化合物HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze- Pabの溶液に加え、場合によりpHを緩衝剤で治療的に許容しうるpH、例えば５〜 ９、好ましくは７〜８、例えば7.4に調整し、そしてすべての成分を混合するこ とからなる前記薬剤の製造法を提供することである。緩衝剤はK₂HPO₄：Na₂HPO₄ のようなリン酸塩緩衝液であってよい。製薬において慣用的に使用される他の成 分、例えば当業者に知られている担体、等張剤、例えばNaClもまた本発明の薬剤 に加えることができる。 図１はHOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabについての腸膜の透過性における２種の吸収 促進剤の効果を示す。 次の実施例により、本発明をさらに詳しく説明する。 実施例 一般実験手順 質量スペクトルはエレクトロスプレーインターフェースを備えたFinnigan MAT TSQ 700トリプル四重極質量分析計で記録した。 ¹H NMRおよび¹³C NMR測定はBRUKER AC-P 300およびBRUKER AM 500分光計で行 い、前者は500.14 MHzの¹H周波数および125.76 MHzの¹³C周波 数で、後者はそれぞれ300.13 MHzおよび75.46 MHzの¹Hおよび¹³C周波数で操作し た。 約10〜50mgの試料を0.6mlの次の溶媒の何れかに溶解した；CDCl₃(同位体純度 ＞99.8％)、CD₃OD（同位体純度＞99.95％）またはD₂O（同位体純度＞99.98％） 。すべての溶媒をDr．Glaser AGから購入した。 CDCl₃およびCD₃OD中における¹Hおよび¹³C化学シフト値は外部基準としてのテ トラメチルシランと相関している。D₂O中の¹H化学シフトは外部基準としての３ −（トリメチルシリル）−d₄−プロパン酸のナトリウム塩と相関しており、D₂O 中の¹³C化学シフトは外部基準としての1,4−ジオキサン(67.3ppm)と相関してい る。外部基準を用いた較正は内部基準と比較して小さなシフト差を生じる場合が あるが、その差は¹H化学シフトで0.02ppm未満であり、¹³Cで0.1ppm未満である。 プロリンまたは“プロリン様”残基を含有するペプチド配列の¹H NMRスペクト ルはしばしば２組の共鳴を示す。これはプロリンがアミド結合のＮ−部分を含有 し、アミド結合の周りの回転に関して２つの寄与する配座異性体が存在するため である。これらの配座異性体はシスおよびトランスと呼ばれる。このような配列 を含有する化合物において、配列(R)Cha-Aze-および(R)Cha-Pic-はしばしば優勢 な配座異性体（＞90％）として一方の配座異性体を有するシス−トランス平衡を 起こす。これらの場合、主要な回転異性体(rotamer)の¹H化学シフトだけ報告す る。少量の回転異性体のシグナルは明確に分割された場合だけ、NMRデータとし て報告する。同様に、CDCl₃中のNH−シグナルについても、そのシグナルが明確 に分割された場合だけ、NMRデータとして報告する。このことは、幾つかの中間 体について報告したプロトンの数が化学式から予想されるプロトンの数より少な いことを意味する。 フラッシュクロマトグラフィーは空気圧下、メルクシリカゲル60（40〜63mm、 230〜400メッシュ）を用いて行った。 凍結乾燥はLeybold-Heraeus Lyovac GT２型装置を用いて行った。 出発物質の製造 ４−アミノメチル−１−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミジノ）−ベンゼン （H-Pab(Z)） （ｉ）４−シアノベンジルアジド 50mlの水中における20.23g（0.31モル）のアジ化ナトリウムの溶液を200mlのD MF中における49.15g（251ミリモル）の４−シアノベンジルブロミドに周囲温度 で加えた。発熱反応が起こり、1.5時間後、反応混合物を200mlのトルエンおよび 500mlの水で希釈した（注：潜在的に爆発性のアジド化合物の分離を回避するた め、反応混合物にトルエンを加えてから水を加えることが望ましい）。水相をさ らに２×50mlのトルエンで抽出した。合一した有機抽出物を２×50mlの水および ブラインで洗浄し、最後に乾燥（MgSO₄）し、濾過した。溶液をそのまま次の工 程に使用した。 1H-NMR（300 MHz，CDCl₃）：δ4.4(s，2H)，7.4(d，2H)，7.7(d，2H) （ii）４−アミジノベンジルアジド 塩化水素を−５℃で250mlの無水エタノールおよび上記工程(ｉ)からの溶液(約 200ml)の混合物中で飽和するまで泡立たせた。８℃で24時間保持し、殆どの溶媒 を蒸発させた後、無水エーテルを加えることにより沈殿させて白色の結晶を得、 それを濾過により単離し、1.8lのアルコール性アンモニアに溶解した。48時間後 、殆どの溶媒を除去し、200mlの3.75Ｍ NaOH溶液を加えると、４−アミジノベン ジルアジドが無色の結 晶として沈殿した。結晶を濾過により単離した。この時点で４−アミジノベンジ ルアジドの収量は22.5g（全収率51％）であった。 エチルイミダトベンジルアジド塩酸塩： ¹H-NMR（500 MHz，CD₃OD）：δ1.6(t，3H)，4.5(s，2H)，4.65(q，2H)，4.8(b r s，2H)，7.6(d，2H)，8.1(d，2H) ４−アミジノベンジルアジド： ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃）：δ4.3(s，2H)，5.7(br s，3H)，7.3(d，2H)，7.6 (d，2H) ¹³C-NMR（125 MHz，CDCl₃）：アミジン炭素：δ165.5 （iii）４−（ベンジルオキシカルボニルアミジノ）ベンジルアジド 上記（ii）からの結晶を500mlの塩化メチレンに溶解し、得られる溶液を乾燥 （K₂CO₃）し、濾過し、27ml（194ミリモル）のトリエチルアミンを加えた。反応 混合物を氷浴中で冷却しながら、25mlのベンジルクロロホルメートを撹拌溶液に ゆっくりと加えた。30分後、さらに２mlのベンジルクロロホルメートを加え、撹 拌をさらに30分間続けた。次に、水を加え、水相を２Ｍ HClでpH７に調整した。 有機相を乾燥（MgSO₄）し、溶媒を真空下で除去した。最後に、４−（ベンジル オキシカルボニルアミジノ）ベンジルアジドをエーテル／塩化メチレン／ヘキサ ンから無色の結晶として単離した。 ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃）：δ4.4(s，2H)，5.3(s，2H)，6.3-7.0(br s，1H) ，7.3-7.4(m，5H)，7.5(d，2H)，7.9(d，2H)，9.3-9.6(br s，1H) ¹³C-NMR（125 MHz，CDCl₃）：アミジン炭素：δ167.5 （iv）４−アミノメチル−１−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミジノ）ベン ゼン（H-Pab(Z)） 26.3g（100ミリモル）のトリフェニルホスフィンを160mlのTHFに溶解した上記 (iii)からの４−（ベンジルオキシカルボニルアミジノ）ベンジルアジドに室温 で加えた。16時間後、さらに6.6g（25ミリモル）のトリフェニルホスフィンを加 え、溶液を４時間放置し、溶媒を真空下で除去した。残留物を塩化メチレンに溶 解し、２Ｍ HClで抽出した。水相を塩化メチレンおよびエーテルで洗浄し、3.75 Ｍ水酸化ナトリウム溶液でアルカリ性にした。塩化メチレンで抽出し、乾燥（K₂ CO₃）し、溶媒を真空下で除去して20g（シアノベンジルブロミドから出発する全 収率は28％であった）の黄色の油状物を得、それは放置により固化した。 ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃)：δ1.2-2.2(br s，2H)，3.8(s，2H)，5.2(s，2H)， 7.2-7.35(m，5H)，7.4(d，2H)，7.8(d，2H)，9.1-9.6(br s，1H) ¹³C-NMR（125 MHz，CDCl₃）：アミジンおよびカルボニル炭素：δ164.6および 168.17 H-Aze-OMe×HCl Seebach D.らのLiebigs Ann．Chem.，687頁(1990年)に記載の方法に従って製 造した。 Boc-(R)Cgl-OH 32.6g（0.13モル）のBoc-(R)-Pgl-OHを300mlのメタノールに溶解し、５gのRh ／Al₂O₃を加えた。溶液を5.2〜2.8MPaで３日間水素化した。濾過し、溶媒を蒸発 させた後、NMRは約25％の表題化合物のメチルエステルが存在することを示した 。粗製物質を500mlののTHFおよび300mlの水に溶解し、20gのLiOHを加えた。混合 物を一晩撹拌し、THFを蒸発させた。残留する水相をKHSO₄で酸性にし、酢酸エチ ルで３回抽出した。合一した有機相を水で洗浄し、乾燥（Na₂SO₄）し、蒸発させ て28.3g（83％） の所望の生成物を得た。 ¹H-NMR（300 MHz，CDCl₃）：δ0.9-1.7(m，20H)，4.0-4.2(m，1H)，5.2(d，1H ) Boc-(R)Cgl-Aze-OH （ｉ）Boc-(R)Cgl-Aze-OMe 40mlのCH₃CN中における3.86g（15ミリモル）のBoc-(R)Cgl-OH、2.27g（15ミリ モル）のH-Aze-OMe×HClおよび2.75g(22.5ミリモル)のDMAPの撹拌混合物に、５ ℃で3.16g（16.5ミリモル）のEDCを加えた。反応混合物を室温で48時間撹拌した 。溶媒を蒸発させ、残留物を150mlのEtOAcおよび20mlの水に溶解した。分離した 有機相を２×20mlの0.5Ｍ KHSO₄、２×10mlのNaHCO₃（飽和）、１×10mlの水、 １×10mlのブラインで洗浄し、乾燥(MgSO₄)した。溶媒を蒸発させて4.91g（92％ ）の表題化合物を得、それをさらに精製することなく次の工程に使用した。 ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃，0.1g／ml）：主要な回転異性体，0.83-1.35(m，5H) ，1.38(s，9H)，1.47-1.84(m，6H)，2.18-2.27(m，1H)，2.50-2.62(m，1H)，3.7 2(s，3H)，3.94-4.06(m，1H)，4.07-4.15(m，1H)，4.39-4.47(m，1H)，4.68(dd ，J=9.1，J=5.1，1H)，5.09(d，J=9.2，1H) 少量の回転異性体の分割ピーク，2.27-2.35(m，1H)，3.77(s，3H)，3.80-3.87 (m，1H)，3.88-3.95(m，1H)，4.92(d，J=9.2，1H)，5.21(dd，J=9.1，J=5，1H) (ii) Boc-(R)Cgl-Aze-OH Boc-(R)Cgl-Aze-OMeの加水分解をBoc-(R)Cha-Pic-OEt（下記参照）について記 載した手順に従って行った。生成物をEtOH／アセトン／水（１／１／3.95）から 結晶させた。収率80％。 ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃）：δ0.85-1.3(m，5H)，1.40(s，9H)，1.5-1.9(m，6 H)，1.95-2.2(m，2H)，3.92(m，1H)，4.09(m，1H)，4.35(m，1H)，4.95(m，IH) ，5.16(bd，1H) 化合物HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabの製造 （ｉ）Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 120mlのCH₃CN中における3.40g（10ミリモル）のBoc-(R)Cgl-Aze-OH（出発物質 の製造を参照）および5.13gのDMAP（42ミリモル）の撹拌混合物に、3.18gのH-Pa b(Z)×HCl（出発物質の製造を参照）を加えた。室温で２時間撹拌した後、混合 物を−８℃に冷却し、2.01g（10.5ミリモル）のEDCを加えた。反応混合物を室温 にし、撹拌をさらに47時間続けた。溶媒を蒸発させ、残留物を200mlのEtOAcに溶 解した。有機相を１×50mlの水、１×50mlおよび２×25mlの0.5Ｍ KHSO₄、２×2 5mlのNaHCO₃（飽和）、１×50mlの水で洗浄し、乾燥した。溶媒を蒸発させて5.2 1g（86％）の表題化合物を得た。 ¹H-NMR（500MHz，CDCl₃）：δ0.8-1.9(m，20H；そのうち1.30(s，9H))，2.35- 2.6(m，2H)，3.74(bt，1H)，4.10(m，1H)，4.25-4.4(m，2H)，4.45-4.6(m，1H， 回転異性体)，4.75-5.0(m，１H，回転異性体)，5.08(bd，2H)，5.15(s，2H)，7. 15-7.35(m，5H)，7.41(d，2H)，7.77(d，2H)，8.21(m，1H) （ii）H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 195mlのEtOAc中における18.8gのHCl_(g)の冷却（氷浴温度）溶液に、4.69g（7. 743ミリモル）のBoc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)を40mlのEtOAcと一緒に加えた。反応混 合物を室温にし、30分間撹拌した。140mlのEt₂Oを透明な溶液に加えると沈殿が 生成した。反応混合物を室温でさらに１時間40分間放置した。沈殿物を濾過し、 150mlのEt₂Oで素早く洗浄し、真空 下で乾燥した。沈殿物を50mlの水に溶解し、15mlの２Ｍ NaOHでアルカリ性にし た。アルカリ性の水相を１×100mlおよび１×50mlのCH₂Cl₂で抽出した。合一し た有機相を１×20mlの水、１×20mlのブラインで洗浄し、乾燥（MgSO₄）した。 溶媒を蒸発させて3.44g（88％）の表題化合物を得た。 ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃）：δ0.8-2.0(m，11H)，2.51(m，1H)，2.67(m，1H) ，3.07(d，1H)，4.11(m，1H)，4.18(m，1H)，4.43(dd，1H)，4.53(dd，1H)，4.9 1(m，1H)，5.22(s，2H)，7.2-7.4(m，7H)，7.45(d，2H)，8.51(d，2H) （iii）BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) 1.13g（2.2ミリモル）のH-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)、0.9g（2.6ミリモル）のベンジ ル−２−（オルト−ニトロベンゼンスルホニルオキシ）アセテート（(2-NO₂)Ph- SO₂-OCH₂-COOBn）（出発物質の製造を参照）、0.99g（5.6ミリモル）のK₂CO₃お よび113mlのCH₃CNを混合し、60℃の油浴中で３時間加熱した。溶媒を真空下で蒸 発させた。EtOAcを加え、混合物を水で洗浄し、有機相を１Ｍ KHSO₄で抽出し、 この水相をEtOAcで洗浄した。酸性の水相を１Ｎ NaOHでアルカリ性にしてpH＞８ とし、EtOAcで抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥（Na₂SO₄）し、濾過し、真 空下で蒸発させて1.17gの残留物を得、それを２回、溶離剤として最初にCH₂Cl₂ ／MeOH（NH₃−飽和）＝95／５、次にジエチルエーテル／MeOH（NH₃−飽和）＝９ ／１を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより処理して0.525g（36％）の 表題化合物を得た。 ベンジル−２−（パラ−ニトロベンゼンスルホニルオキシ）アセテート((4-NO₂ )Ph-SO₂-OCH₂-COOBn)（出発物質の製造を参照）を使用し、上記と同様の手順に よりアルキル化を行って表題化合物を52％の収率で得 た。 ¹H-NMR（300 MHz，CDCl₃）：δ0.85-2.15(m，11H)，2.48(m，1H)，2.63(m，1H )，2.88(d，1H)，3.24(d，1H)，3.27(d，1H)，3.95(m，1H)，4.05(m，1H)，4.44 (m，1H)，4.55(m，1H)，4.91(m，1H)，5.07(s，2H)，5.22(s，2H)，7.2-7.4(m， 10H)，7.45(d，2H)，7.79(d，2H)，8.42(m，1H) （iv a）HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab×2HCl 20mg（0.031ミリモル）のBnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)を５mlのメタノールに 溶解した。数滴のクロロホルムおよび５％Pd／Ｃを加え、混合物を大気圧で１時 間水素化した。濾過し、蒸発させた後、生成物を水から凍結乾燥して11mg（72％ ）の表題化合物を得た。 ¹H-NMR（500 MHz，D₂O）：δ1.0-2.0(m，11H)，2.10(m，1H)，2.44(m，1H)，2 .82(m，1H)，3.90(s，2H)，4.09(d，1H)，4.4-4.55(m，2H)，4.66(s，2H)，5.08 (m，1H)，7.65(d，2H)，7.89(d，2H) ¹³C-NMR（75.5 MHz，D₂O）：アミジンおよびカルボニル炭素：δ167.3，167.9 ，169.9および172.4 （iv b）HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab BnOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)をEtOH(99％)に溶解し、大気圧で５時間、５％P d／Ｃ上で水素化した。セライトを通して触媒を濾去し、溶媒を蒸発させて表題 化合物を97％の収率で得た。 ¹H-NMR（500 MHz，CD₃OD，２つの回転異性体の混合物）：主要な回転異性体： δ1.00-1.12(m，1H)，1.13-1.34(m，4H)，1.55-1.70(m，3H)，1.73-1.85(m，2H) ，1.94-2.02(bd，1H)，2.32-2.42(m，1H)，2.54-2.64(m，1H)，2.95-3.10(AB-系 およびd，3H)，4.18-4.25(bq，1H)，4.28-4.32(bq，1H)，4.43-4.60(AB-系，2H) ，4.80-4.85(dd， 1H)，7.48-7.54(d，2H)，7.66-7.71(d，2H) 少量の回転異性体の分割ピーク，δ0.95(m)，1.43(m)，2.24(m)，2.84(d)，3. 96(m)，4.03(m)，7.57(bd)，7.78(bd) ¹³C-NMR（125 MHz，CD₃OD）：アミジンおよびカルボニル炭素：δ168.0，173. 0，176.3および179.0 製剤例 製剤Ａ：HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab（基剤）1.1mg／10ml：モノステアリン酸ス クロース（S-1570）1.1mg／10ml；リン酸緩衝液（KH₂PO₄：Na₂HPO₄）0.1Ｍ pH7. 4 10mlになるまで加える。 製剤Ｂ：HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab（基剤）1.1mg／10ml：モノパルミチン酸ス クロース（P-1570）1.1mg／10ml；リン酸緩衝液（KH₂PO₄：Na₂HPO₄）0.1Ｍ pH 7 .4 10mlになるまで加える。 製剤ＡおよびＢを（ArturssonらのPharm．Research，第10巻No.81123-29頁（1 993年）に記載されている）Ussing-chambersに載せたラットの結腸のセグメント で試験した。膜の両側の溶液の試料を異なる時間間隔で採取し、HOOC-CH₂-(R)Cg l-Aze-Pabの濃度について分析した。腸膜を横断する能力を透過性の尺度として 試験した。表面積Ａのセグメントの漿膜側の化合物の定常状態の出現率dQ／dtお よび粘膜側の初期濃度C₀を使用して式Papp＝dQ／dt＊1／AC₀から透過率を計算し た。 結果を図１に示す。図中のＮは使用したラットの数を示す。結果は腸膜を横断 して循環に入るトロンビン阻害剤HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabの透過性が両方のス クロースエステル、つまりモノステアリン酸エステルおよびモノパルミチン酸エ ステルを加えると、コントロールと比較して２〜３倍増加することを示した。こ れらの結果から、このような吸収促進剤の存在は治療的活性剤の生物学的利用可 能性を増加するという結論 が得られる。 略語表 Aze＝(Ｓ)−アゼチジン−２−カルボン酸 Cgl＝(Ｓ)−シクロヘキシルグリシン Pab＝１−アミジノ−４−アミノメチルベンゼン

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，Ｂ Ｙ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，Ｖ Ｎ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．治療的に活性な化合物HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab、その立体異性体またはそ の生理学的に許容しうる塩、１種以上の吸収促進剤、および場合により薬用担体 を含有する薬剤。 ２．吸収促進剤は界面活性剤である請求項１記載の薬剤。 ３．界面活性剤は糖グリコシドのようなアルキルグリコシドである請求項２記載 の薬剤。 ４．界面活性剤は糖脂肪酸エステルである請求項２記載の薬剤。 ５．糖脂肪酸エステルはモノステアリン酸スクロースまたはモノパルミチン酸ス クロースである請求項４記載の薬剤。 ６．吸収促進剤は非ステロイド系抗炎症剤またはその誘導体である請求項１記載 の薬剤。 ７．吸収促進剤は胆汁酸塩である請求項１記載の薬剤。 ８．吸収促進剤は脂質である請求項１記載の薬剤。 ９．吸収促進剤は石鹸、カルニチンの脂肪酸または脂肪酸誘導体、またはペプチ ドである請求項１記載の薬剤。 10．吸収促進剤は油である請求項１記載の薬剤。 11．吸収促進剤はエナミンである請求項１記載の薬剤。 12．吸収促進剤はキレート化剤である請求項１記載の薬剤。 13．吸収促進剤はフェノチアジンである請求項１記載の薬剤。 14．吸収促進剤はマイラード反応の生成物である請求項１記載の薬剤。 15．吸収促進剤はポリマーである請求項１記載の薬剤。 16．吸収促進剤はアゾン、コンカナバリンＡ、ホスフェートまたはホスホネート 誘導体、ジエチルマレエートまたはジエチルエトキシメチレンマロネートである 請求項１記載の薬剤。 17．吸収促進剤は脂質（複数）、脂質およびリン脂質、脂質および胆汁酸塩、脂 質および油、脂質および界面活性剤、または脂質およびポリマーの組み合わせで ある請求項１記載の薬剤。 18．吸収促進剤は界面活性剤および油の組み合わせである請求項１記載の薬剤。 19．活性化合物HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabは遊離塩基の形態である請求項１〜18 の何れかの項記載の薬剤。 20．吸収促進剤を化合物HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabの溶液に加え、緩衝剤によりp Hを治療的に許容しうるpHに調整し、すべての成分を混合することを特徴とする 、請求項１〜19の何れかの項記載の薬剤の製造法。 21．血栓塞栓症の治療における請求項１〜19の何れかの項記載の薬剤の使用。 22．抗血栓治療を必要とする患者に、有効量の請求項１〜19の何れかの項記載の 薬剤を投与することからなる、前記患者を治療する方法。 23．血栓塞栓症の治療を必要とする患者に、有効量の請求項１〜19の何れかの項 記載の薬剤を投与することからなる、血栓塞栓症の治療法。 24．治療的に活性な化合物HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pabの吸収を促進する方法であ って、前記活性化合物の溶液に界面活性剤、アルキルグリコシド、糖脂肪酸エス テル、胆汁酸塩、脂質、石鹸、カルニチンの脂肪酸または脂肪酸誘導体、ペプチ ド、非ステロイド系抗炎症剤、油、エナミン、キレート化剤、フェノチアジン、 ポリマー、マイラード反応の生成物、アゾン、コンカナバリンＡ、ホスフェート またはホスホネート誘導体、ジエチルマレエート、ジエチルエトキシメチレンマ ロネートまたはこれらの組み合わせから選択される吸収促進剤を加え、場 合により緩衝剤でpHを治療的に許容しうるpHに調整し、すべての成分を混合する ことからなる前記方法。 25．吸収促進剤はモノステアリン酸スクロースまたはモノパルミチン酸スクロー スから選択される請求項24記載の方法。