JPH10160734A - イムノアッセイ用較正／対照用配合物 - Google Patents
イムノアッセイ用較正／対照用配合物Info
- Publication number
- JPH10160734A JPH10160734A JP9312949A JP31294997A JPH10160734A JP H10160734 A JPH10160734 A JP H10160734A JP 9312949 A JP9312949 A JP 9312949A JP 31294997 A JP31294997 A JP 31294997A JP H10160734 A JPH10160734 A JP H10160734A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- troponin
- calibration
- homogenate
- formulation
- control
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract 2
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 claims description 19
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 claims description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 13
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 claims description 13
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 101710128251 Troponin I, cardiac muscle Proteins 0.000 claims description 2
- 102100036859 Troponin I, cardiac muscle Human genes 0.000 claims description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 4
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000851334 Homo sapiens Troponin I, cardiac muscle Proteins 0.000 description 2
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 2
- 102000013534 Troponin C Human genes 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N bissulfosuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- WQQBUTMELIQJNY-UHFFFAOYSA-N 1-[4-(2,5-dioxo-3-sulfopyrrolidin-1-yl)oxy-2,3-dihydroxy-4-oxobutanoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1CC(S(O)(=O)=O)C(=O)N1OC(=O)C(O)C(O)C(=O)ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O WQQBUTMELIQJNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABFYEILPZWAIBN-UHFFFAOYSA-N 3-(iminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;hydrochloride Chemical compound Cl.CN(C)CCCN=C=N ABFYEILPZWAIBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000011243 crosslinked material Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003936 denaturing gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- -1 sulfo disuccinimidyl tartrate Chemical compound 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4712—Muscle proteins, e.g. myosin, actin, protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/965—Chemistry: molecular biology and microbiology involving idiotype or anti-idiotype antibody
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/967—Standards, controls, materials, e.g. validation studies, buffer systems
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/972—Modified antibody, e.g. hybrid, bifunctional
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/807—Hapten conjugated with peptide or protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/102499—Blood gas standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/103332—Bilirubin or uric acid standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/104165—Lipid, cholesterol, or triglyceride standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/105831—Protein or peptide standard or control [e.g., hemoglobin, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 イムノアッセイに使用するための、４℃以上
の温度で非常に高い安定性を有する較正物質の提供。 【解決手段】 哺乳動物心筋の粗抽出物のホモジネート
を含むことを特徴とする、心筋損傷の指標を検出するイ
ムノアッセイに用いるための安定な較正／対照用配合
物。
の温度で非常に高い安定性を有する較正物質の提供。 【解決手段】 哺乳動物心筋の粗抽出物のホモジネート
を含むことを特徴とする、心筋損傷の指標を検出するイ
ムノアッセイに用いるための安定な較正／対照用配合
物。
Description
【０００１】
【従来の技術】イムノアッセイは、その特に高い特異性
及び感度のおかげで、医療診断目的で血清又は尿試料中
のタンパク質を検出するのにしばしば使用される。その
ようなイムノアッセイには、１種又は２種の特異性抗体
が必要であるだけでなく、患者試料を定量化するための
参照標準として使用される較正物質が必要である。大き
な分析研究室での自動化検定の場合には、ときには較正
物質を数か月から２年間４℃で貯蔵する必要がある。分
析対象物に依存して、較正物質配合物の安定性に対する
これらの要求は、たとえば生理的塩及びpHの条件下での
較正物質配合物の溶解性が保証されないならば、問題と
なるおそれがある。これに関して挙げることができる例
は、変性溶液（６M 尿素、０．０１M ジチオトレイトー
ル）中でのみ十分な安定性及び可溶性を有するトロポニ
ンＩ及びトロポニンＴである。しかし、この変性剤を使
用してイムノアッセイを実施することはできない。理由
は、変性条件が、抗体の二次構造を変化させることによ
って抗体に影響して、抗体がトロポニン分析対象物に結
合することができないようにするからである。トロポニ
ンの場合の他の要因は、ガラスのような表面に付着する
その傾向及び安定な較正物質の調製を困難にする化学的
不安定性であるかもしれない。
及び感度のおかげで、医療診断目的で血清又は尿試料中
のタンパク質を検出するのにしばしば使用される。その
ようなイムノアッセイには、１種又は２種の特異性抗体
が必要であるだけでなく、患者試料を定量化するための
参照標準として使用される較正物質が必要である。大き
な分析研究室での自動化検定の場合には、ときには較正
物質を数か月から２年間４℃で貯蔵する必要がある。分
析対象物に依存して、較正物質配合物の安定性に対する
これらの要求は、たとえば生理的塩及びpHの条件下での
較正物質配合物の溶解性が保証されないならば、問題と
なるおそれがある。これに関して挙げることができる例
は、変性溶液（６M 尿素、０．０１M ジチオトレイトー
ル）中でのみ十分な安定性及び可溶性を有するトロポニ
ンＩ及びトロポニンＴである。しかし、この変性剤を使
用してイムノアッセイを実施することはできない。理由
は、変性条件が、抗体の二次構造を変化させることによ
って抗体に影響して、抗体がトロポニン分析対象物に結
合することができないようにするからである。トロポニ
ンの場合の他の要因は、ガラスのような表面に付着する
その傾向及び安定な較正物質の調製を困難にする化学的
不安定性であるかもしれない。
【０００２】タンパク質は溶液中で比較的不安定であ
り、タンパク質を含む試薬はしばしば、使用者による適
用に先立ちそのような試薬を溶解させるのに適した組成
物の溶剤とともに、凍結乾燥形態で販売されることが既
知である。この方法で得られる溶液を４℃で貯蔵するな
らば、そのような溶液は、毎日の検出過程で試薬濃度に
ある程度の変化が見られるとしても、数日間は使用する
ことができる。したがって、凍結乾燥物質から得られる
基準溶液をより長期間貯蔵しなければならないならば、
それらは一般に、トロポニンＩ及びトロポニンＴの場合
に推奨されるように、標準的剤形で凍結される。
り、タンパク質を含む試薬はしばしば、使用者による適
用に先立ちそのような試薬を溶解させるのに適した組成
物の溶剤とともに、凍結乾燥形態で販売されることが既
知である。この方法で得られる溶液を４℃で貯蔵するな
らば、そのような溶液は、毎日の検出過程で試薬濃度に
ある程度の変化が見られるとしても、数日間は使用する
ことができる。したがって、凍結乾燥物質から得られる
基準溶液をより長期間貯蔵しなければならないならば、
それらは一般に、トロポニンＩ及びトロポニンＴの場合
に推奨されるように、標準的剤形で凍結される。
【０００３】
【発明の概要】本発明は、イムノアッセイに使用するた
めの、４℃以上の温度で非常に高い安定性を有する較正
物質に関する。較正物質は、トロポニンがその天然形態
で保持される心筋の入念に製造された調製物を含む。
めの、４℃以上の温度で非常に高い安定性を有する較正
物質に関する。較正物質は、トロポニンがその天然形態
で保持される心筋の入念に製造された調製物を含む。
【０００４】心筋調製物はまた、研究室の品質管理体制
に統合することができる対照として使用することができ
る。対照は、それらの安定性要件がそれほど厳格ではな
いという考えられる例外をもって製造される方法におい
て較正物質とは異ならない。しかし、較正物質は検定を
準備するのに使用されるが、対照は、検定が十分な性能
を発揮し続けることを保証するために毎日のベースで使
用されるため、それらが使用される方法に違いがある。
以下の説明は、較正物質としての心筋ホモジネートの使
用を強調するが、この説明はまた、対照として使用され
る心筋ホモジネートの調製にも当てはまることを理解す
べきである。
に統合することができる対照として使用することができ
る。対照は、それらの安定性要件がそれほど厳格ではな
いという考えられる例外をもって製造される方法におい
て較正物質とは異ならない。しかし、較正物質は検定を
準備するのに使用されるが、対照は、検定が十分な性能
を発揮し続けることを保証するために毎日のベースで使
用されるため、それらが使用される方法に違いがある。
以下の説明は、較正物質としての心筋ホモジネートの使
用を強調するが、この説明はまた、対照として使用され
る心筋ホモジネートの調製にも当てはまることを理解す
べきである。
【０００５】
【発明の実施の形態】トロポニンを分離し、精製する標
準的な方法は、有機溶剤及び／又は高い塩濃度を使用す
る。本明細書に記載する実施例はトロポニンＩに関する
が、開示する手法は、トロポニンＣ及びＴだけでなく、
心組織中に存在する、心筋損傷の指標である他いくつか
の分子にも同等に応用することができる。
準的な方法は、有機溶剤及び／又は高い塩濃度を使用す
る。本明細書に記載する実施例はトロポニンＩに関する
が、開示する手法は、トロポニンＣ及びＴだけでなく、
心組織中に存在する、心筋損傷の指標である他いくつか
の分子にも同等に応用することができる。
【０００６】この新規な方法は、新鮮な哺乳動物の心筋
を均質に粉砕することからなり、粉砕した心筋は、生理
緩衝液を用いて凍結状態で貯蔵することができる。ヒト
又はウシの心組織が好ましい。ヒト及びウシの物質中に
存在するアミノ酸配列に類似したアミノ酸配列を含むも
のであるならば、他の哺乳動物の心組織を使用すること
もできる。好適な均質化媒体は、分子を天然の形状に維
持するためにイオン強度を生理的範囲に維持する塩を含
む、中性、弱酸性又は弱アルカリ性範囲のpH値、好まし
くは約５．５〜８．５のpH値を有する緩衝液、たとえば
ＰＢＳ（リン酸水素二カリウム／リン酸二水素ナトリウ
ム）、ＴＲＩＳ（トリス〔ヒドロキシメチル〕アミノメ
タン）、イミダゾール、ＭＥＳ（２−〔Ｎ−モルホリ
ノ〕エタンスルホン酸）及びＨＥＰＥＳ（Ｎ−〔２−ヒ
ドロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ′−〔２−エタンス
ルホン酸〕）である。塩濃度は生理的濃度範囲であり、
たとえば１０〜８８０mM ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ2 、ＫＣ
ｌ又はＣａＣｌ2 である。好ましくは、洗浄剤、たとえ
ばTriton X 100又はTween 20、プロテアーゼインヒビ
タ、たとえばトリプシンインヒビタ、フッ化フェニルメ
チルスルホニル（ＰＢＳＦ）、ロイペプチン及び／又は
ペプスタチンならびに酸化防止剤、たとえばＤＴＩ又は
β−メルカプトエタノールが添加物として使用される。
洗浄剤は一般に、較正物質がガラス及びプラスチックの
面に付着することを防ぎ、酸化防止剤は、ジスルフィド
架橋の形成を阻害することにより、分析対象物をモノマ
ー状態に維持するのに役立つ。プロテアーゼインヒビタ
（タンパク質分解酵素阻害剤）は、組織抽出物中に存在
する非特異性プロテアーゼによるトロポニン分子の分解
を防ぐ。
を均質に粉砕することからなり、粉砕した心筋は、生理
緩衝液を用いて凍結状態で貯蔵することができる。ヒト
又はウシの心組織が好ましい。ヒト及びウシの物質中に
存在するアミノ酸配列に類似したアミノ酸配列を含むも
のであるならば、他の哺乳動物の心組織を使用すること
もできる。好適な均質化媒体は、分子を天然の形状に維
持するためにイオン強度を生理的範囲に維持する塩を含
む、中性、弱酸性又は弱アルカリ性範囲のpH値、好まし
くは約５．５〜８．５のpH値を有する緩衝液、たとえば
ＰＢＳ（リン酸水素二カリウム／リン酸二水素ナトリウ
ム）、ＴＲＩＳ（トリス〔ヒドロキシメチル〕アミノメ
タン）、イミダゾール、ＭＥＳ（２−〔Ｎ−モルホリ
ノ〕エタンスルホン酸）及びＨＥＰＥＳ（Ｎ−〔２−ヒ
ドロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ′−〔２−エタンス
ルホン酸〕）である。塩濃度は生理的濃度範囲であり、
たとえば１０〜８８０mM ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ2 、ＫＣ
ｌ又はＣａＣｌ2 である。好ましくは、洗浄剤、たとえ
ばTriton X 100又はTween 20、プロテアーゼインヒビ
タ、たとえばトリプシンインヒビタ、フッ化フェニルメ
チルスルホニル（ＰＢＳＦ）、ロイペプチン及び／又は
ペプスタチンならびに酸化防止剤、たとえばＤＴＩ又は
β−メルカプトエタノールが添加物として使用される。
洗浄剤は一般に、較正物質がガラス及びプラスチックの
面に付着することを防ぎ、酸化防止剤は、ジスルフィド
架橋の形成を阻害することにより、分析対象物をモノマ
ー状態に維持するのに役立つ。プロテアーゼインヒビタ
（タンパク質分解酵素阻害剤）は、組織抽出物中に存在
する非特異性プロテアーゼによるトロポニン分子の分解
を防ぐ。
【０００７】ホモジネートは、遠心分離に付し、低温が
貯蔵時のタンパク質溶液を安定化させるため、好ましく
は−２０℃〜−８０℃の温度で貯蔵する。この調製物の
希釈物は、心トロポニン、特にトロポニンＩに特異的で
ある、イムノアッセイに使用される抗体との反応性を示
す。較正物質を調製する際、通常はウシ心組織である心
臓ホモジネートを希釈マトリックスに希釈する。上述の
心筋調製物中のトロポニンＩ活性は、同様に処理した骨
格筋調製物中には存在しないことがわかった。また、心
筋調製物中でのみ、前述の抗体が、分離した心筋トロポ
ニンＩと同じ泳動特性を変性ゲル電気泳動で示すタンパ
ク質を認識するということが見いだされた。
貯蔵時のタンパク質溶液を安定化させるため、好ましく
は−２０℃〜−８０℃の温度で貯蔵する。この調製物の
希釈物は、心トロポニン、特にトロポニンＩに特異的で
ある、イムノアッセイに使用される抗体との反応性を示
す。較正物質を調製する際、通常はウシ心組織である心
臓ホモジネートを希釈マトリックスに希釈する。上述の
心筋調製物中のトロポニンＩ活性は、同様に処理した骨
格筋調製物中には存在しないことがわかった。また、心
筋調製物中でのみ、前述の抗体が、分離した心筋トロポ
ニンＩと同じ泳動特性を変性ゲル電気泳動で示すタンパ
ク質を認識するということが見いだされた。
【０００８】上述の調製物はまた、種々の生理緩衝液中
２０℃及び４℃で数日間は安定である。好適な希釈マト
リックスは、処理済み又は未処理のヒト又は動物の血清
又は血漿であるか、分離媒体として述べた緩衝液であ
る。加えて、防腐剤、たとえばアジ化ナトリウム及びPr
oclin 150 ならびに安定化タンパク質、たとえばウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）又はγ−グロブリンが使用され
る。心臓ホモジネートを上述の種々の添加物とともに６
％ＢＳＡ水溶液に希釈する方法が、較正物質マトリック
スを調製するのに好ましい方法である。通常、イムノア
ッセイに用いるための較正物質は、測定される分析対象
物を正常なヒト血清に溶解することによって調製する。
これは、較正物質が臨床血清試料にできるだけ近く一致
することを保証するために実施される。しかし、本発明
の心臓ホモジネートは、正常なヒト血清中に組み込まれ
ているときには、あまり安定ではない。したがって、正
常なヒト血清の人工マトリックスは、ヒト血清の平均タ
ンパク質濃度を近似するのに十分な量のＢＳＡ又は他の
タンパク質、たとえばヒト血清アルブミン、ウシ胎児血
清、ウシγ−グロブリンもしくはオボアルブミン（ＢＳ
Ａの場合で６％）を、安定化剤ならびに血清のイオン強
度を近似するための緩衝剤及び塩と組み合わせて使用す
ることによって調製する。再現性を改善するため、上述
の調製は以下の工程、すなわち、通例の方法、たとえば
不溶性成分のゲルろ過、遠心高速除去及び／又は無菌フ
ィルタに通すろ過によって分別する工程を含むことがで
きる。この方法で、心筋梗塞の診断のための上述のイム
ノアッセイに用いる安定な較正液を非常に簡単かつ低廉
な方法で調製することが可能である。さらには、トロポ
ニン配合物は、患者試料中で優勢に見られる形態で検出
される分子を含む。健康な心筋中のトロポニンは、トロ
ポニンＩ、Ｔ及びＣの複合体として存在し、本発明の心
臓ホモジネートの中ではトロポニンは天然のＩＴＣ複合
形態で存在すると考えられる。したがって、本発明の方
法を使用して、トロポニンのＴ及びＣ形態の較正物質だ
けでなくＩ形態の較正物質をも調製することができる。
したがって、これは、診断試験に関して、分離されたト
ロポニンＩ、Ｔ又はＣを含む配合物よりも忠実な制御を
提供する。トロポニンはその天然形態では複合体として
存在し、この複合体はより安定な形態を表すため、上述
のウシ心筋ホモジネートを架橋剤で処理して、複合体の
３成分の間に共有結合を得ることができる。架橋剤によ
って導入される複合体の部分の間の共有結合が複合体の
分裂を防ぐため、この結合は、トロポニン複合体の中で
自然に起こる分子の相互作用よりも安定である。好適な
架橋剤は、ホモ二官能分子、たとえば１−エチル−３−
３〔ジメチルアミノプロピル〕カルボジイミドヒドロク
ロリド（ＥＤＣ）、（ビス〔スルホスクシンイミジル〕
−スベレート）（ＢＳ3)又はスルホジスクシンイミジル
タルトレート（スルホ−ＤＳＴ）である。較正物質の安
定性の増大が望まれるときには、トロポニン架橋剤複合
体の形成が望ましい。非架橋物質は非常に良好な安定性
を示すが、いくつかの市販の検定は１年以上の安定性を
要し、その場合には架橋が有利であろう。以下の実施例
によって本発明をさらに説明する。
２０℃及び４℃で数日間は安定である。好適な希釈マト
リックスは、処理済み又は未処理のヒト又は動物の血清
又は血漿であるか、分離媒体として述べた緩衝液であ
る。加えて、防腐剤、たとえばアジ化ナトリウム及びPr
oclin 150 ならびに安定化タンパク質、たとえばウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）又はγ−グロブリンが使用され
る。心臓ホモジネートを上述の種々の添加物とともに６
％ＢＳＡ水溶液に希釈する方法が、較正物質マトリック
スを調製するのに好ましい方法である。通常、イムノア
ッセイに用いるための較正物質は、測定される分析対象
物を正常なヒト血清に溶解することによって調製する。
これは、較正物質が臨床血清試料にできるだけ近く一致
することを保証するために実施される。しかし、本発明
の心臓ホモジネートは、正常なヒト血清中に組み込まれ
ているときには、あまり安定ではない。したがって、正
常なヒト血清の人工マトリックスは、ヒト血清の平均タ
ンパク質濃度を近似するのに十分な量のＢＳＡ又は他の
タンパク質、たとえばヒト血清アルブミン、ウシ胎児血
清、ウシγ−グロブリンもしくはオボアルブミン（ＢＳ
Ａの場合で６％）を、安定化剤ならびに血清のイオン強
度を近似するための緩衝剤及び塩と組み合わせて使用す
ることによって調製する。再現性を改善するため、上述
の調製は以下の工程、すなわち、通例の方法、たとえば
不溶性成分のゲルろ過、遠心高速除去及び／又は無菌フ
ィルタに通すろ過によって分別する工程を含むことがで
きる。この方法で、心筋梗塞の診断のための上述のイム
ノアッセイに用いる安定な較正液を非常に簡単かつ低廉
な方法で調製することが可能である。さらには、トロポ
ニン配合物は、患者試料中で優勢に見られる形態で検出
される分子を含む。健康な心筋中のトロポニンは、トロ
ポニンＩ、Ｔ及びＣの複合体として存在し、本発明の心
臓ホモジネートの中ではトロポニンは天然のＩＴＣ複合
形態で存在すると考えられる。したがって、本発明の方
法を使用して、トロポニンのＴ及びＣ形態の較正物質だ
けでなくＩ形態の較正物質をも調製することができる。
したがって、これは、診断試験に関して、分離されたト
ロポニンＩ、Ｔ又はＣを含む配合物よりも忠実な制御を
提供する。トロポニンはその天然形態では複合体として
存在し、この複合体はより安定な形態を表すため、上述
のウシ心筋ホモジネートを架橋剤で処理して、複合体の
３成分の間に共有結合を得ることができる。架橋剤によ
って導入される複合体の部分の間の共有結合が複合体の
分裂を防ぐため、この結合は、トロポニン複合体の中で
自然に起こる分子の相互作用よりも安定である。好適な
架橋剤は、ホモ二官能分子、たとえば１−エチル−３−
３〔ジメチルアミノプロピル〕カルボジイミドヒドロク
ロリド（ＥＤＣ）、（ビス〔スルホスクシンイミジル〕
−スベレート）（ＢＳ3)又はスルホジスクシンイミジル
タルトレート（スルホ−ＤＳＴ）である。較正物質の安
定性の増大が望まれるときには、トロポニン架橋剤複合
体の形成が望ましい。非架橋物質は非常に良好な安定性
を示すが、いくつかの市販の検定は１年以上の安定性を
要し、その場合には架橋が有利であろう。以下の実施例
によって本発明をさらに説明する。
【０００９】
【実施例】実施例１ 衝撃凍結したウシ心筋３１ｇを、冷却した均質化緩衝液
（１．３９g/l Ｋ2ＨＰＯ4 、pH７．３、８．７７g/l
ＮａＣｌ、０．３１２g/l Ｎａ（ＨＰＯ4)2 ・２
Ｈ2 Ｏ、０．１％Tween 20、０．１mMジチオトレイトー
ル）３０mlで均質化した。このホモジネートを１，００
０G で２０分間遠心分離し、等分し、凍結した。通常、
イムノアッセイの較正物質は、測定する分析対象物を正
常なヒト血清に溶解することによって調製する。これ
は、較正物質が臨床血清試料にできるだけ一致すること
を保証するために実施される。しかし、本発明の心臓ホ
モジネートは、正常なヒト血清中に組み込まれていると
きには、あまり安定ではない。種々のマトリックスで、
このホモジネートの希釈物が以下の安定性値を示した
（表１）。
（１．３９g/l Ｋ2ＨＰＯ4 、pH７．３、８．７７g/l
ＮａＣｌ、０．３１２g/l Ｎａ（ＨＰＯ4)2 ・２
Ｈ2 Ｏ、０．１％Tween 20、０．１mMジチオトレイトー
ル）３０mlで均質化した。このホモジネートを１，００
０G で２０分間遠心分離し、等分し、凍結した。通常、
イムノアッセイの較正物質は、測定する分析対象物を正
常なヒト血清に溶解することによって調製する。これ
は、較正物質が臨床血清試料にできるだけ一致すること
を保証するために実施される。しかし、本発明の心臓ホ
モジネートは、正常なヒト血清中に組み込まれていると
きには、あまり安定ではない。種々のマトリックスで、
このホモジネートの希釈物が以下の安定性値を示した
（表１）。
【００１０】
【表１】
【００１１】安定性は、希釈したホモジネートを、業者
から購入した純粋なトロポニンＩＴＣ複合体の同様に調
製した希釈物（有効トロポニンＩ含量は標準的方法によ
って測定剤）と比較することによって測定した。純粋な
ＩＴＣ複合体を使用して、較正物質の研究ロットを重量
法によって調製した。この較正物質の基準ロット（−８
０℃で貯蔵）を、実験用トロポニンＩ（ウシ心臓ホモジ
ネートから得たもの）検定試薬とともに使用して、トロ
ポニンＩ濃度を測定するための標準曲線を構成した。ウ
シ心臓ホモジネートに基づく較正物質を種々の条件下で
ストレスに付し、基準ロット較正物質に対する未知試料
として測定して、活性の減衰を検出した。この調製物を
Bayer Immuno 1（商標）分析装置（Bayer Diagnostics)
で分析した。検定形式は、以下の抗体を使用するサンド
イッチ方式であった。１）ヒト心臓トロポニンＩの配列
から得たペプチドを使用してアフィニティー精製してお
いた多クローン性ヤギ抗体。２）ヒト心臓トロポニンＩ
に対する単クローン性抗体。サンドイッチの第一の抗体
をＦＩＴＣで標識し、抗ＦＩＴＣによって磁気粒子上で
固定化した。サンドイッチの第二の抗体は、アルカリホ
スファターゼを含み、色形成反応を触媒し、この反応に
よって抗原の量が測定される。この分析装置は、実験結
果を臨床単位に変換する前に、実験結果をＡＵ、すなわ
ち吸光度単位／分に換算して報告する。ヒト心臓トロポ
ニンＩのアミノ酸配列とウシ心臓トロポニンＩのアミノ
酸配列とは非常に類似しており、これが、抗体交差反応
性を説明する。したがって、ウシ心筋は、較正物質調製
に使用することができる。原則的に、ヒト及び他の哺乳
動物の組織をも調製に用いることができる。表１を参照
すると、「較正物質緩衝液」とは、ウシ心筋を下記に加
えた調製物をいう。
から購入した純粋なトロポニンＩＴＣ複合体の同様に調
製した希釈物（有効トロポニンＩ含量は標準的方法によ
って測定剤）と比較することによって測定した。純粋な
ＩＴＣ複合体を使用して、較正物質の研究ロットを重量
法によって調製した。この較正物質の基準ロット（−８
０℃で貯蔵）を、実験用トロポニンＩ（ウシ心臓ホモジ
ネートから得たもの）検定試薬とともに使用して、トロ
ポニンＩ濃度を測定するための標準曲線を構成した。ウ
シ心臓ホモジネートに基づく較正物質を種々の条件下で
ストレスに付し、基準ロット較正物質に対する未知試料
として測定して、活性の減衰を検出した。この調製物を
Bayer Immuno 1（商標）分析装置（Bayer Diagnostics)
で分析した。検定形式は、以下の抗体を使用するサンド
イッチ方式であった。１）ヒト心臓トロポニンＩの配列
から得たペプチドを使用してアフィニティー精製してお
いた多クローン性ヤギ抗体。２）ヒト心臓トロポニンＩ
に対する単クローン性抗体。サンドイッチの第一の抗体
をＦＩＴＣで標識し、抗ＦＩＴＣによって磁気粒子上で
固定化した。サンドイッチの第二の抗体は、アルカリホ
スファターゼを含み、色形成反応を触媒し、この反応に
よって抗原の量が測定される。この分析装置は、実験結
果を臨床単位に変換する前に、実験結果をＡＵ、すなわ
ち吸光度単位／分に換算して報告する。ヒト心臓トロポ
ニンＩのアミノ酸配列とウシ心臓トロポニンＩのアミノ
酸配列とは非常に類似しており、これが、抗体交差反応
性を説明する。したがって、ウシ心筋は、較正物質調製
に使用することができる。原則的に、ヒト及び他の哺乳
動物の組織をも調製に用いることができる。表１を参照
すると、「較正物質緩衝液」とは、ウシ心筋を下記に加
えた調製物をいう。
【００１２】 ６．８１g/l イミダゾール ５．８４g/l 塩化ナトリウム ０．９g/l アジ化ナトリウム ２．０g/l Triton X 100 １ml/l Proclin 150 ６０g/l ＢＳＡ
【００１３】「未処理の血清」とは、脂質化されていな
い、又は有機溶剤で処理されていない血清をいう。
い、又は有機溶剤で処理されていない血清をいう。
【００１４】表１に提示したデータを参照すると、ホモ
ジネートの安定性データは、緩衝液中と血清中とで有意
な差はない。実際に、より長期の実験では、緩衝液が血
清マトリックスよりも全体に優れていることが証明され
た。表に提示したデータには、数週間にわたって実施さ
れる実験に予想することができる一定のばらつきがあ
る。
ジネートの安定性データは、緩衝液中と血清中とで有意
な差はない。実際に、より長期の実験では、緩衝液が血
清マトリックスよりも全体に優れていることが証明され
た。表に提示したデータには、数週間にわたって実施さ
れる実験に予想することができる一定のばらつきがあ
る。
【００１５】実施例２ 実施例１に記載のようにして心筋ホモジネートを調製し
た。全タンパク質濃度を２mg／mlに調節し、見かけトロ
ポニンＩ濃度に対して２．５〜２５０倍過剰モルの量で
以下の架橋剤を加えた。１−エチル−３−３〔ジ−メチ
ルアミノプロピル〕カルボジイミドヒドロクロリド（Ｅ
ＤＣ）、（ビス〔スルホスクシンイミジル〕）スベレー
ト（ＢＳ3)又はスルホジスクシンイミジルタルトレート
（スルホ−ＤＳＴ）。室温での反応時間は３時間であっ
た。それから、調製物をさらに希釈し、実施例１に記載
のようにして分析した。
た。全タンパク質濃度を２mg／mlに調節し、見かけトロ
ポニンＩ濃度に対して２．５〜２５０倍過剰モルの量で
以下の架橋剤を加えた。１−エチル−３−３〔ジ−メチ
ルアミノプロピル〕カルボジイミドヒドロクロリド（Ｅ
ＤＣ）、（ビス〔スルホスクシンイミジル〕）スベレー
ト（ＢＳ3)又はスルホジスクシンイミジルタルトレート
（スルホ−ＤＳＴ）。室温での反応時間は３時間であっ
た。それから、調製物をさらに希釈し、実施例１に記載
のようにして分析した。
Claims (12)
- 【請求項１】 哺乳動物心筋の粗抽出物のホモジネート
を含むことを特徴とする、心筋損傷の指標を検出するイ
ムノアッセイに用いるための安定な較正／対照用配合
物。 - 【請求項２】 ウシ心筋がその調製に用いられている、
請求項１記載の較正／対照用配合物。 - 【請求項３】 心トロポニンの検出に適した、請求項１
記載の較正／対照用配合物。 - 【請求項４】 心トロポニンＩの検出に適した、請求項
１記載の較正／対照用配合物。 - 【請求項５】 心筋ホモジネートが架橋剤で架橋された
ものである、請求項１記載の較正／対照用配合物。 - 【請求項６】 ヒト血清中のトロポニンを検出するイム
ノアッセイにおいて、較正又は対照用として用いるのに
適した配合物を調製する方法において、 ｉ）新鮮な哺乳動物心筋組織を生理的塩／緩衝溶液とと
もに均質に粉砕して筋組織のホモジネートを得る工程
と、 ii）ホモジネートを希釈して、較正用配合物としての希
釈マトリックスを得る工程と、を含むことを特徴とする
方法。 - 【請求項７】 哺乳動物心筋組織がウシ又はヒトの組織
である、請求項６記載の方法。 - 【請求項８】 生理溶液が約５．５〜８．５のpHを有
し、塩濃度が生理的範囲にある、請求項６記載の方法。 - 【請求項９】 生理溶液の中に洗浄剤、プロテアーゼイ
ンヒビタ及び酸化防止剤が含まれる、請求項６記載の方
法。 - 【請求項１０】 希釈マトリックスが、ヒト血清中のタ
ンパク質濃度を近似するのに十分な量のタンパク質を、
血清のイオン強度を近似する緩衝剤及び塩とともに含
む、請求項６記載の方法。 - 【請求項１１】 トロポニンがトロポニンＩである、請
求項６記載の方法。 - 【請求項１２】 請求項６〜１１のいずれか１項記載の
方法によって調製される、ヒト血清中のトロポニンを検
出するイムノアッセイにおいて較正用又は対照用として
用いるのに適した配合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19647927A DE19647927A1 (de) | 1996-11-20 | 1996-11-20 | Verfahren zur Herstellung einer stabilen Troponin I Präparation und dessen Verwendung als Kalibrator in Immunoassays |
| DE19647927.4 | 1996-11-20 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10160734A true JPH10160734A (ja) | 1998-06-19 |
| JP4106111B2 JP4106111B2 (ja) | 2008-06-25 |
Family
ID=7812177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31294997A Expired - Fee Related JP4106111B2 (ja) | 1996-11-20 | 1997-11-14 | イムノアッセイ用較正／対照用配合物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6482648B2 (ja) |
| EP (1) | EP0844484B1 (ja) |
| JP (1) | JP4106111B2 (ja) |
| AT (1) | ATE243322T1 (ja) |
| DE (2) | DE19647927A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008501724A (ja) * | 2004-06-11 | 2008-01-24 | ヴィクトリアン ティッシュ エンジニアリング センター プロプライアトリー リミテッド | 組織材料およびマトリックス |
| JP2014526708A (ja) * | 2011-09-20 | 2014-10-06 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 分析アッセイのためのカスタマイズされた品質対照 |
| WO2021039492A1 (ja) * | 2019-08-30 | 2021-03-04 | コニカミノルタ株式会社 | 検体希釈液、標識化抗体分散液、サンドイッチ法 |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020197741A1 (en) * | 2001-05-11 | 2002-12-26 | Sabucedo Albert J. | Method of determining time of death |
| US20070141710A1 (en) * | 2005-12-20 | 2007-06-21 | Beckman Coulter, Inc. | Stable calibrators for immunoassays |
| US7838250B1 (en) | 2006-04-04 | 2010-11-23 | Singulex, Inc. | Highly sensitive system and methods for analysis of troponin |
| CA2648385C (en) | 2006-04-04 | 2020-09-01 | Singulex, Inc. | Highly sensitive system and methods for analysis of troponin |
| MY145349A (en) * | 2006-07-11 | 2012-01-31 | Janssen Pharmaceutica Nv | Benzofuro- and benzothienopyrimidine modulators of the histamine h4 receptor |
| WO2009126380A2 (en) * | 2008-03-05 | 2009-10-15 | Singulex, Inc. | Methods and compositions for highly sensitive detection of molecules |
| GB2464183A (en) * | 2008-09-19 | 2010-04-14 | Singulex Inc | Sandwich assay |
| WO2010144358A1 (en) * | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Singulex, Inc. | Highly sensitive biomarker panels |
| WO2011140484A1 (en) | 2010-05-06 | 2011-11-10 | Singulex, Inc | Methods for diagnosing, staging, predicting risk for developing and identifying treatment responders for rheumatoid arthritis |
| US20110306148A1 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-15 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Composition for use as an assay reagent |
| CN112881716A (zh) * | 2021-01-18 | 2021-06-01 | 北京贝尔生物工程股份有限公司 | 一种阳性组合质控品，其制备方法及应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8504099D0 (en) * | 1985-02-18 | 1985-03-20 | Wellcome Found | Physiologically active substances |
| US5547873A (en) * | 1994-02-22 | 1996-08-20 | Genzyme Corporation | Compositions for stabilizing proteins for long term dry storage and methods of making and using the compositions |
| FR2701954B1 (fr) * | 1993-02-23 | 1995-07-07 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Composition stabilisée de troponine pour immunoessais et procédé de stabilisation de troponine pour immunoessais. |
| WO1994027156A1 (en) * | 1993-05-17 | 1994-11-24 | Fortron Bioscience, Inc. | Assay for cardiac troponin i |
| CA2130280C (en) * | 1993-08-24 | 1999-08-31 | Lilian Lee | Method for purification of cardiac troponin i |
| FR2734267B1 (fr) * | 1995-05-16 | 1997-08-01 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Composition stabilisee de troponine pour immunoessais et procede de preparation d'une telle composition stabilisee |
| DE19524572A1 (de) * | 1995-07-06 | 1997-01-09 | Bayer Ag | Verfahren zur Herstellung eines synthetischen Kalibrators für den Einsatz in Immunoassays, bestehend aus den Analyten oder Teilsequenzen davon, die an inerten Trägermoleküle konjugiert sind |
| DE19548029A1 (de) * | 1995-12-21 | 1997-06-26 | Bayer Ag | Verfahren zur Durchführung eines Immunoassays, bei dem die Kalibratorsubstanz in denaturierender Lösung vorliegt |
-
1996
- 1996-11-20 DE DE19647927A patent/DE19647927A1/de not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-10-14 US US08/950,240 patent/US6482648B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-10 EP EP97119617A patent/EP0844484B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-10 AT AT97119617T patent/ATE243322T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-11-10 DE DE69722900T patent/DE69722900T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-14 JP JP31294997A patent/JP4106111B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008501724A (ja) * | 2004-06-11 | 2008-01-24 | ヴィクトリアン ティッシュ エンジニアリング センター プロプライアトリー リミテッド | 組織材料およびマトリックス |
| JP2014526708A (ja) * | 2011-09-20 | 2014-10-06 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 分析アッセイのためのカスタマイズされた品質対照 |
| WO2021039492A1 (ja) * | 2019-08-30 | 2021-03-04 | コニカミノルタ株式会社 | 検体希釈液、標識化抗体分散液、サンドイッチ法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0844484A1 (en) | 1998-05-27 |
| EP0844484B1 (en) | 2003-06-18 |
| JP4106111B2 (ja) | 2008-06-25 |
| US6482648B2 (en) | 2002-11-19 |
| DE19647927A1 (de) | 1998-05-28 |
| ATE243322T1 (de) | 2003-07-15 |
| DE69722900D1 (de) | 2003-07-24 |
| DE69722900T2 (de) | 2004-05-19 |
| US20020012956A1 (en) | 2002-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gosslau et al. | Enzyme-linked immunosorbent microassay for quantification of specific antibodies to collagen type I, II, III | |
| JP3357163B2 (ja) | 免疫学的測定用トロポニン安定化組成物および安定化法 | |
| US6114180A (en) | Synthetic calibrators for use in immunoassays, comprising the analytes or partial sequences thereof which are conjugated to inert carrier molecules | |
| JP4106111B2 (ja) | イムノアッセイ用較正／対照用配合物 | |
| US8481274B2 (en) | Methods and kits for separation and detection of proteins in biological samples | |
| CN102608325B (zh) | 心型脂肪酸结合蛋白(h-fabp)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) | |
| CS257757B2 (en) | Method of reaction determination between antigen and antibody and reaction agent for realization of this process | |
| US20050136542A1 (en) | Stabilized liquid reference solutions | |
| CN107533053A (zh) | L‑fabp的免疫测定方法以及用于所述方法的测定试剂 | |
| Edelstein et al. | Identification of a 33-kilodalton cytoskeletal protein with high affinity for the sodium channel | |
| US20010006683A1 (en) | Stabilized composition of troponin for immunoassays and method of preparation of such a stabilized composition | |
| AU2001287423A1 (en) | Methods and kits for separation and detection of proteins in biological samples | |
| JP3490715B2 (ja) | ヘモグロビン前進性グルコシル化終末産物の検出方法 | |
| EP0354954B1 (en) | Reagent and method for detecting rheumatoid factor | |
| JP4033534B2 (ja) | ヒトヘモグロビンの安定化方法 | |
| EP3264084A1 (en) | Immunoassay method and assay reagent used in said method | |
| JP4532731B2 (ja) | 長期に安定で即時使用可能なリストセチン補因子試験試薬 | |
| EP2557423B1 (en) | Immunoassay of carboxymethylarginine | |
| JP2000180446A (ja) | 干渉作用を回避する方法及び試薬 | |
| JPH09224942A (ja) | ヒトヘモグロビンの安定化方法 | |
| JP3481015B2 (ja) | 免疫比濁測定法 | |
| JPH0236353A (ja) | 免疫測定方法 | |
| Wu | PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF PLATELET FACTORS 3 AND 4. | |
| JPH1019894A (ja) | 血漿中物質の高感度酵素免疫測定法 | |
| BROWN | EXAMINATION OF PROTEINS FROM BLOOD PLATELET CYTOSOL BY TWO DIMENSIONAL ANTIGEN-ANTIBODY CROSSED ELECTROPHORESIS. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041105 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20060706 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060711 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20061011 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20061018 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080304 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080331 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110404 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120404 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120404 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130404 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130404 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140404 Year of fee payment: 6 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |