JPH0853387A

JPH0853387A - 新規化合物ｆ−１１２６３

Info

Publication number: JPH0853387A
Application number: JP6189722A
Authority: JP
Inventors: Yoko Ogura; 陽子小倉; Futoshi Nara; 太奈良; Takeshi Hosoya; 剛細矢
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1994-08-12
Filing date: 1994-08-12
Publication date: 1996-02-27

Abstract

(57)【要約】【構成】本発明は、下記式（Ｉ）で表される新規化合物
Ｆ−１１２６３：【化１】等に関する。【効果】本発明の新規化合物Ｆ−１１２６３は、抗ＨＩ
Ｖ剤、抗糖尿病剤、抗動脈硬化剤、抗骨粗しょう症剤、
抗血栓剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、利尿剤、そして、呼
吸器系疾患、甲状腺疾患、アルツハイマー病、肝炎、腎
炎、白血病、及びカケクシアに対する予防薬、治療薬と
して使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、スフィンゴミエリナー
ゼを阻害し各種医薬として有用な新規化合物Ｆ−１１２
６３及びその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン−１β（以下、「ＩＬ
−１β」という。）の生物作用は多様であり、一般には
生体の恒常性維持に必須な生体物質と考えられている。
ところが、ＩＬ−１βの産生調節機能に異常が発生し、
ＩＬ−１βが過剰に生産されると、種々の疾患の原因と
なる。また、腫瘍壊死因子−α（以下、「ＴＮＦ−α」
という。）はある種の腫瘍細胞やウイルス感染細胞を死
滅させたり、顆粒球の抗細菌性作用を増強させる等の作
用を有するが、ＴＮＦ−αも過剰に生産された場合に
は、幾つかの疾患の主要な病因となる。

【０００３】この二つのサイトカインは全く異なる遺伝
子の産物で、その構造に類似性はなく、各々に対応した
独自の受容体を有するが、それらの標的細胞、生物活性
には重複する点が多い。例えば、両サイトカインは生体
内に入ったエンドトキシン（ＬＰＳ）によって起こる敗
血症性ショックの主要原因であり〔Tracy K.J. et al.
Science, 234, 470 (1986)、Tracey K.J. et al. Natur
e(London), 330, 662(1987)〕、その他、肉芽腫〔Kobay
ashi K. et al. J. Immunol., 134, 358 (1985)〕、髄
膜炎菌髄膜炎やマラリア感染〔Curfs J.H.A. et al. J.
Exp.Med., 172,1287 (1990)〕等、外来性の微生物、寄
生虫及びウイルス等に由来する感染症に密接に関係す
る。この様な急性期炎症反応に於ける主要な各段階、即
ち、局所への炎症細胞の浸潤〔Gamble J.R. et al. Pro
c.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 82, 8667(1985) 、宮坂昌
之ら Annual Review 免疫’91, 57 中外医学社 (199
1) 〕、発熱〔Dinarello C.A. Lymphokines, 14, 1 (1
987) 〕、急性期蛋白の誘導〔Perimutter D.H. et al.
J.Clin.Invest., 78,1349 (1986) 〕、プロスタノイ
ド、特にPGE2 産生の促進に〔Dayer J.-M. et al. J.E
xp.Med., 162, 2163 (1985) 、Turinsky J. et al. Am.
J.Physiol. 262, E476 (1992)、Ballou L.R. et al.
J.Biol.Chem. 267, 20044 (1992)〕、両サイトカイン
は積極的な役割を担っている。

【０００４】また、ＩＬ−１βとＴＮＦ−αは慢性の炎
症疾患、例えば、慢性関節リウマチ（ＲＡ）発症及び進
展に関与し、滑膜組織に於けるリンパ球浸潤の活性化、
滑膜細胞の増殖促進、及び軟骨細胞の破壊、破骨細胞の
活性化による骨吸収の促進作用を示す〔Mizel S.B. et
al. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 78, 2474 (1980) 、Mi
yasaka N. et al. Arthritis Rheum., 31, 480 (198
8)、Arend W.P. and Dayer J.-M. Arthritis Rheumatis
m., 33, 305 (1990)〕。その他、同じリウマチ性疾患で
ある膠原病〔Tanaka Y. et al. J.Immunol., 143, 1584
(1989) 〕、全身性血管炎を主体とする川崎病〔Leung
D.Y.M. et al. J.Exp.Med., 164, 1958 (1986)〕、肉芽
腫とそれに続く線維症に伴う慢性炎症にも関わることが
知られている〔Le J. and Vilcek J. Lab.Invest., 56,
234 (1987) 〕。現在、慢性炎症性疾患の治療剤として
使用されているグルココルチコイドは、その作用一部が
これらサイトカインの産生抑制にあることが知られてい
るが〔Lew W. et al. J.Immunol., 140, 1895 (1988)
〕、グルココルチコイドは、その多様な生理作用によ
り種々の重篤な副作用を誘起する不利を併せ持つ。

【０００５】さらに、ＩＬ−１βとＴＮＦ−αは単球の
血管内皮細胞への接着、内皮下への遊走［Pober J.S. e
t al. J.Immunol., 137, 1893 (1986)、Nelken N.A. et
al.J.Clin.Invest. 88, 1121 (1991) 〕、血管平滑筋
細胞の内膜での異常増殖を促進する等〔Raines E.W. et
al. Science 243, 393 (1989)〕、粥状動脈硬化の発
症、進展に関与する。

【０００６】また、ＩＬ−１βとＴＮＦ−αは、血小板
活性化因子（ＰＡＦ）の産生促進、組織因子の内皮細胞
膜表面への誘導、トロンボモジュリンプロテインＣの減
少、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１の
産生抑制をきたし、全体として血小板凝集と血液凝固を
招来して血栓形成の原因となる〔Bevilacqua M.P. eta
l. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 83, 4533 (1986) 、Le
J. and Vilcek J. Lab.Invest., 56, 234 (1987) 、佐
藤靖史現代医療, 23, 3163 (1991) 〕。

【０００７】インスリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）で
は、その発症に至る過程に潜在的、慢性的、自己免疫的
な炎症が膵島、特に膵β細胞に起こっているが、ＩＬ−
１βやＴＮＦ−αはそれに関与する〔Nerup J. et al.
Diabetes Care., 11, 16 (1988) 。一方、インスリン非
依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）に際しても、ＴＮＦ−αは
脂肪細胞での産生を介して筋肉、肝細胞に作用し、イン
スリン抵抗性を発揮することに関与する〔Spiegelman
B.M. et al. J. Biol.Chem., 268, 6823 (1993)〕。糸
球体腎炎発症の主体を成すメサンギウム細胞の増殖と基
質の増生にＩＬ−１βとＴＮＦ−αは深く関与する〔We
rber H.I. et al. J.Immunol., 138, 3207 (1987) 、Ba
ud L. et al. Kidney Int., 41, 600 (1992)〕。

【０００８】ＩＬ−１βやＴＮＦ−αはＴ細胞からのＩ
Ｌ−２産生やその分泌、その受容体発現を促し、また、
その他の免疫細胞に作用してその働きを高めることで免
疫能を賦活化する〔Gillis S. and Mizel S.B. Proc.Na
tl.Acad.Sci.U.S.A. 78, 1133 (1981)、Scheurich P. e
t al. J.Immunol., 138, 1786 (1987)〕。この作用によ
り両サイトカインは、例えば移植の際に生じる移植片対
宿主病（ＧＶＨＤ）発症の一因となる。

【０００９】ＴＮＦ−αは、慢性の感染症やガン患者に
於いて脂肪細胞のリポプロテインリパーゼ活性を抑制し
て食欲不振を引き起こすことにより、極度の体重減少・
消耗を引き起こし（cachexia）、そのためＴＮＦ−αは
カケクチン（cachectin ）と呼ばれている〔Beutler B.
et al. Nature(London), 316, 552 (1985) 〕。ＴＮＦ
−αは、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）感染細胞にお
いて、染色体内に挿入されたＨＩＶのウイルスゲノム末
端：ＬＴＲからの転写を転写因子ＮＦ−κＢを介して活
性化させ、ＨＩＶの増殖をこう進させる〔Nabel G. et
al. Nature, 326, 711 (1987) 、Schreck R. et al. EM
BO Journal, 10, 2247 (1991) 〕。

【００１０】その他、ＩＬ−１βやＴＮＦ−αの過剰生
産に基づく疾患として、劇症肝炎〔Muto Y. et al. Lan
cet II, 72 (1988) 〕、喘息、特発性肺線維症〔Kelley
J.Am.Rev.Respir.Dis., 141(3), 765 (1990)〕、ＡＲ
ＤＳ（adult respiratory distress syndrome ）〔Mill
ar A. et al. Lancet II, 712 (1989)〕等の呼吸器系疾
患、自己免疫性甲状腺疾患〔江口勝美ら最新医学か
らのアプローチ１サイトカインから, メジカルレビュ
ー社, 38 (1991) 〕、ライム病〔Habicht G.S.et al.
J.Immunol., 134, 3147 (1985) 〕、アルツハイマー病
〔Griffin W.S.T.at al. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,
86, 7611 (1989)〕、クローン病〔八木田旭邦医学の
あゆみ, 147, 375 (1988) 〕、中毒ショック症候群〔Ik
ejima T. et al. J.Clin.Invest., 73, 1312 (1984)
〕、骨粗しょう症〔Pacifici R. et al. Proc.Natl.Ac
ad.Sci.U.S.A., 86, 2398 (1989) 〕、痛風〔Di Giovin
e F.S.et al. J.Immunol., 138, 3213 (1987) 〕、急性
骨髄性白血病〔Sakai K. et al. J.Exp.Med., 166, 158
7 (1987)〕、子宮内膜炎〔Romero R., et al. Am.J.Obs
tet.Gynecol. 160, 1117 (1989) 〕などが挙げられる。

【００１１】スフィンゴミエリナーゼは、生体内の細胞
膜系および核内に含まれるコリン含有脂質の一つである
スフィンゴミエリンを基質として、このものをセラミド
とホスホリルコリンに分解する酵素である。本酵素は、
当初は酸性域に至適ｐＨを有するリソソームの水解酵素
の一つとして見い出されたが、最近では中性域に至適ｐ
Ｈを有する同酵素活性がミクロソーム画分、形質膜にも
見い出されており〔Allan D. et al． Biochim.Biophy
s.Acta., 693, 53 (1982)、T-Koizumi K. and Kojima
K. J.Biochem., 99, 1803 (1986)〕、これらの諸酵素が
生体内のスフィンゴミエリンの代謝に実際的に関与して
いるものと考えられる。

【００１２】上記反応の生成物の一つセラミドは更にセ
ラミダーゼにより加水分解され、脂肪酸とスフィンゴシ
ンを生じる。そして、スフィンゴミエリンが哺乳動物体
内で代謝されて、セラミドさらにスフィンゴシンとなる
ことは in vivo の実験で確かめられている〔Schneide
r P.B. and Kennedy E.P. J.Lipid Res., 9, 58 (196
8)〕。スフィンゴミエリンの分解産物であるこのセラミ
ドやスフィンゴシンは、細胞の増殖・分化、及び、それ
らに密接に関連をもつ情報伝達の制御機構に関与してい
ることが示され〔小島清秀と小泉恵子蛋白質核酸
酵素, 36, 629 (1991)〕、この反応経路はスフィンゴミ
エリン経路と呼ばれている。

【００１３】ＩＬ−１βやＴＮＦ−αが標的細胞の受容
体に結合し、その後、細胞内にてシグナル伝達がされる
ときに、このスフィンゴミエリン経路が関与しているこ
とが示されている〔Dressler K.A. et al. Science, 25
5, 1715 (1992)、Mathias etal. Science, 259, 519 (1
993) 〕。

【００１４】従って、スフィンゴミエリナーゼ活性の阻
害物質によりこれらＴＮＦ−αやＩＬ−１βのシグナル
伝達を遮断することができ、これらサイトカインが関与
する病態を改善することができる。

【００１５】一方、スフィンゴミエリナーゼの反応物が
シクロオキシゲナーゼを活性化し、これを介してPGE2産
生を促進していることが示されている（Ballou L.R. et
al.J. Biol. Chem. 267, 20044, (1992)）。

【００１６】また、スフィンゴミエリナーゼ反応そのも
のが、粥状動脈硬化の発症に関わるＬＤＬや変性ＬＤＬ
の末梢細胞内への取り込みを促進し、コレステロール・
エステル合成及びその細胞内蓄積を増加させ〔Stein O.
et al. Biochim. Biochim. Ata., 1126, 291（1992）、
Chatterjee S. J.Biol.Chem., 268, 3401 （1993）〕、
本病態の進展に関わることが予想されている。

【００１７】さらに、スフィンゴミエリナーゼの活性化
は腎臓の近位尿細管に於いてジヌソイド側の頂端膜内に
あるスフィンゴミエリン含量を減らし、Ｎａ依存性に機
能するリン酸や糖の取り込みを減少させる〔Vrtovsnik
F. et al. Kidney International., 41, 983（199
2）〕。

【００１８】また、ＨＩＶに感染したＣＥＭ細胞でセラ
ミドの量が亢進していることが示され[Veldhoven P.P.
V. et al. Biochem. Biophys. Res. Comm., 187, 209
(1992)] 、生体内のＨＩＶ感染細胞でスフィンゴミエリ
ナーゼが活性化していることが示されている。

【００１９】以上の事実から、スフィンゴミエリナーゼ
に対する特異的な阻害物質は、抗ＨＩＶ剤、抗糖尿病
剤、抗動脈硬化剤、抗骨粗しょう症剤、抗血栓剤、抗炎
症剤、免疫抑制剤、利尿剤、そして、呼吸器系疾患、甲
状腺疾患、アルツハイマー病、肝炎、腎炎、白血病、及
びカケクシアに対する予防薬、治療薬として使用でき
る。

【００２０】しかしながら、スフィンゴミエリナーゼに
対して特異的かつ強力な阻害物質は現在まで見い出され
ていない。

【００２１】従来、ＩＬ−１β作用を特異的に阻害する
物質としては、可溶性ＩＬ−１レセプターやＩＬ−１レ
セプターアンタゴニストが見いだされ、これらを用いて
の敗血症性ショック患者やＲＡ患者での症状改善がみら
れている。

【００２２】また、ＴＮＦ−α作用を特異的に阻害する
可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＴＮＦ抗体を用いての、エンド
トキシンショックや急性ＧＶＨＤなどを対象とした臨床
試験が実施され、その有効性が観察されている〔Vincen
t J.-L. et al. Chest, 101,810 (1992) 、Herve P. et
al. Blood, 79, 3362 (1992)〕。

【００２３】しかし、これらは何れもペプチド性もしく
は高分子量の物質であるため、薬剤としての体内への吸
収性や血中での安定性等に於いて欠点を有する。かかる
観点より、スフィンゴミエリナーゼに対して特異的な阻
害活性を有する、低分子生理活性物質が望まれていた。

【００２４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは微生物二
次代謝産物中よりスフィンゴミエリナーゼ阻害作用を持
つ物質を検索し、土壌より分離したアクレモニウム属
に属するＳＡＮＫ１１８９４株（ＦＥＲＭＢＰ−４６
８３）株の培養液中に、スフィンゴミエリナーゼ阻害作
用を有する新規化合物、Ｆ−１１２６３が生産されるこ
とを見出して本発明を完成した。

【００２５】

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、
（１）下記式（Ｉ）で表される新規化合物Ｆ−１１２６
３：

【００２６】

【化２】

【００２７】（２）アクレモニウム（Acremonium）属に
属するＦ−１１２６３生産菌を培養し、その培養物より
Ｆ−１１２６３を採取することを特徴とするＦ−１１２
６３の製造法、（３）アクレモニウム（Acremonium）属
に属するＦ−１１２６３生産菌が、アクレモニウム（Aa
cremonium ）sp．ＳＡＮＫ１１８９４株である、（２）
記載の製造法、（４）アクレモニウム（Acremonium）s
p．ＳＡＮＫ１１８９４株に関する。

【００２８】本発明のＦ−１１２６３は下記の物理化学
的性状を有する。

【００２９】1) 性質；黄色針状結晶。 2) 溶解性；メタノール、酢酸エチルなどの有機溶媒に
可溶。

【００３０】3) 呈色試験；５０％硫酸、ヨウ素に陽
性。

【００３１】4) 融点；８３〜８６℃ 5) 分子式；Ｃ₁₁Ｈ₁₂Ｏ₃ （高分解能質量分析法によ
り測定） 6) 分子量；１９２（高分解能ＦＡＢ−ＭＳ法により
[Ｍ＋Ｎａ]⁺ 215.0663 (測定値) ）（計算値：215.0684） 7)元素分析値；実測値Ｃ：68.58 ％Ｈ：6.18％計算値Ｃ：68.73 ％Ｈ：6.29％ 8) 紫外線吸収スペクトル（メタノール）； 230nm (
ε7400), 372 nm ( ε1200) 9) 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）； 3324, 3052, 2
973, 1659, 1634, 1585, 1302, 1138 cm^-1 10) ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル；( 重クロロホルム
中: δPPM, TMS基準) 6.77(d, J=16.2Hz, 1H), 6.76(s, 1H), 6.76(d, J=1.8H
z, 1H), 6.75(d, J=1.8Hz,1H), 6.60(d, J=16.2Hz, 1
H), 1.42(s, 6H) 11) ¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル；( 重クロロホルム
中: δPPM, TMS基準) 187.9(s), 187.1(s), 147.9(d), 142.1(s), 136.8(d),
136.7(d), 129.2(d), 118.3(d), 71.5(s), 29.8(q) 12) 高速液体クロマトグラフグラフィー保持時間: ６．５分カラム:Senshu Pak ODS-H-2151, ６φ×１５０ｍｍ（セ
ンシュー科学製）溶媒: アセトニトリル−水（３５：６５）流速: １ｍｌ／ｍｉｎ検出: UV 220nm 生産菌本発明において用いられる Acremonium 属に属する菌
株としては、例えばAcremonium sp. ＳＡＮＫ１１８９
４株（ＦＥＲＭＢＰ−４６８３）を挙げることがで
き、この菌株の菌学的性状は次のとおりである。

【００３２】ＳＡＮＫ１１８９４は土壌から希釈平板法
によって分離されたものである。そのＰＤＡおよびＷＳ
Ｈ寒天平板上での菌学的特徴は次の通りである。

【００３３】ＰＤＡ培地上での生育は２３℃、８日間で
３０ｍｍに達し、最初は白色の綿毛状だが、さらに培養
を継続することによって、分生子の形成に伴ない、中央
部から黒色の粉状となる。裏面に赤褐色の色素を浸出す
る。やや中央部が盛り上がり、放射線状のしわを形成す
る。

【００３４】ＷＳＨ培地上での生育は２３℃、８日間で
３０ｍｍに達し、全体に平坦である。分生子形成はＷＳ
Ｈ培地上で良好である。裏面はほぼ白色で、色素の浸出
はみられない。

【００３５】ＰＤＡおよびＷＳＨ培地上の生育で、栄養
菌糸は無色であり、数本の菌糸が束となり、その上に多
数の分生子形成細胞を生ずる。分生子形成様式はフィア
ロ型。フィアライドはきり型であり、先端へ向かって細
まり、その大きさは１４〜４２×２μｍである。一部に
粒子を付着し、部分的に表面は粗である。カラーは不明
瞭である。分生子はフィアライド上に集合し、擬頭状の
粘塊となる。分生子は楕円形で、単細胞で、暗褐色であ
り、その大きさは４〜６×２〜４μｍである。以上の形
態は、Gams(1971)（Gams,W. (1971) Cephalosporium-ar
tige Schimmelpilze, 262p. G.Fischer, Stuttgart. ）
の体系でいうGliomastix節に所属するAcremonium属菌に
一致する。しかしながら、Acremoniumは非常に多数の種
を含む大きな属であり、分類学的再検討を要する種も多
数含まれているため、現時点では種レベルの同定を行う
のは不適当であろう。よってＳＡＮＫ１１８９４をAcre
monium sp. と同定した。なお、本菌は、１９９４年５
月３１日に、通商産業省工業技術研究院生命工学工業技
術研究所に寄託され、寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−４６８
３を付された。

【００３６】培養法及び精製法について本発明の新菌株を分離するに際し使用される分離培地と
しては炭素源、窒素源、無機イオンおよび有機栄養源等
より選択されたものを適宜含有する培地であれば合成ま
たは天然培地の何れでも使用可能である。Ｆ−１１２６
３はＳＡＮＫ１１８９４株を適当な培地で培養し、それ
から採取することによって得られる。栄養源としては、
従来真菌類の菌株の培養に利用されている公知のものが
使用できる。例えば、炭素源としてはグルコース、シュ
ークロース、澱粉、グリセリン、水飴、糖蜜、大豆油な
どが使用できる。また、窒素源としては大豆粉、コーン
スチープリカー、生イースト、ジャガイモ、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ナトリウム等を使用しうる。このほか必要
に応じて炭酸カルシウム、リン酸塩等の無機塩類を添加
するほか、菌株の発育を助け、Ｆ−１１２６３の生産を
促進するような有機および無機物を適当に添加すること
ができる。培養法としては、一般の抗生物質を生産する
方法と同じく液体培養法、特に深部培養法が最も適して
いる。培養は、好気的条件下で行なわれ、培養に適当な
温度は２０〜３０℃であるが、多くの場合２３℃付近で
培養する。Ｆ−１１２６３の生産は、振盪培養で通常５
〜８日で最高値に達する。

【００３７】培養終了後、培養液中の菌体あるいはろ液
に存在するＦ−１１２６３を培養液の容量程度のアセト
ン、アセトニトリルのような有機溶媒を添加し混合する
ことにより抽出する。抽出物中に存在する固形部分を珪
藻土をろ過操作助剤とするろ過操作または遠心分離によ
って分別し、そのろ液または上清中に存在するＦ−１１
２６３を、スフィンゴミエリナーゼ阻害活性を指標にし
て、その物理化学的性状を利用し抽出精製する。例え
ば、この抽出液中に存在するＦ−１１２６３は、まず濃
縮操作で混在する有機溶媒を除去した後に水と混和しな
い有機溶剤、例えばｎーブタノール、メチルエチルケト
ン、酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メ
チレンなどの単独または、それらの組み合わせにより抽
出精製することができる。あるいは吸着剤として、例え
ば活性炭または吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ
−２、ＸＡＤ−４（ローム・アンド・ハース社製）等
や、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２
０Ｐ、ＨＰ−５０（三菱化成（株）製）等を使用する事
ができる。Ｆ−１１２６３を含む液を上記のごとき吸着
剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、ま
たはＦ−１１２６３を吸着させた後、メタノール水、ア
セトン水、ｎ−ブタノール水などを用いて溶出させるこ
とにより得られる。このようにして得られたＦ−１１２
６３は、更にシリカゲル、フロリジルのような担体を用
いた吸着カラムクロマトグラフィー、セファデックスＬ
Ｈ−２０（ファルマシア社製）などを用いた分配カラム
クロマトグラフィー、セファデックスＧ−２５（ファル
マシア製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー、
および順相、逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラ
フィー等で精製することが出来る。

【００３８】スフィンゴミエリナーゼ阻害活性は以下の
方法で測定できる。

【００３９】即ち、先ず、基質溶液として１０μｌの
［Ｎ−メチル−¹⁴Ｃ］スフィンゴミエリン（牛、５２ｍ
Ｃｉ／ｍｍｏｌ、２５μＣｉ／ｍｌ；アマシャム社）と
２００μｌのスフィンゴミエリン（牛、２０ｍＭ、シグ
マ社）を窒素ガスで乾固させた後、２００μｌの１Ｍ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）、４０μｌの１０％
（ｖ／ｖ）トリトンＸ−１００、２０μｌの０．５Ｍ
ＭｇＣｌ₂ 、及び１．２４ｍｌのＨ₂ Ｏを加えて４８
℃、３０分のインキュベーションを行い、プローブ型超
音波破砕装置で、２０Ｗの出力条件下、１５秒、２回の
超音波処理を施し、［¹⁴Ｃ］スフィンゴミエリンを含む
混合ミセル系を作成した。

【００４０】スフィンゴミエリナーゼ反応は、この様に
して用意した基質溶液１５０μｌに検体溶液１０μｌを
混合し、ウイスターイマミチ系雄性ラット脳のミクロソ
ーム画分（２５，０００×ｇ〜１００，０００×ｇ、蛋
白質濃度３〜４ｍｇ／ｍｌ）４０μｌを酵素溶液として
加えて３７℃、４０分インキュベーションすることによ
り行った。反応終了後、クロロホルム：メタノール
（２：１、ｖ／ｖ）を５００μｌ加えて抽出操作を施
し、得られた水層１５０μｌを３ｍｌのピコフローTM４
０と混合して、反応物である［¹⁴Ｃ］ホスフォリルコリ
ン量を液体シンチレーションカウンターで測定した。ス
フィンゴミエリナーゼ活性は、この測定値からスフィン
ゴミエリナーゼ反応に必要なＭｇＣｌ₂ を除いた場合で
の測定値を差し引いた値として計算される。

【００４１】本発明のＦ−１１２６３を抗ＨＩＶ剤、抗
糖尿病剤、抗動脈硬化剤、抗骨粗鬆症剤、抗血栓症剤、
抗炎症剤、免疫抑制剤、利尿剤、そして、呼吸器系疾
患、甲状腺疾患、アルツハイマー病、肝炎、腎炎、白血
病、およびカケクシアに対する予防薬、治療薬として用
いる場合、種々の形態で投与される。その投与形態とし
ては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、等
による経口投与、また注射剤（静脈内、筋肉内、皮
下）、点眼剤、坐薬等による非経口投与を挙げることが
できる。

【００４２】これらの各種製剤は、常法に従って主薬に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、矯味矯臭剤、溶解補
助剤、縣濁剤、コーティング剤等既知の医薬製剤技術分
野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化
することができる。その使用量は症状、年齢、体重、投
与方法および剤形等によって異なるが通常は成人に対し
て１日５０ｍｇ〜１０００ｍｇを投与することができ
る。

【００４３】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれに限定されない。

【００４４】実施例１. Ｆ−１１２６３物質の精製 (1) 培養 Acremonium sp. ＳＡＮＫ１１８９４株を無菌的に、滅
菌した後述の組成の培養培地１００ｍｌを含むバッフル
の付いた５００ｍｌの三角フラスコ（種フラスコ）に接
種した。次いでこれを２３℃で７日間、２００rpm のロ
ータリー振とう機で前培養を行った。

【００４５】培地組成グリセロール 50gジャガイモ 50g イースト・エキストラクト 5g マルト・エキストラクト 5g 水道水 1000ml ｐＨ無調整本培養は次のように行った。滅菌した上述の組成の培養
培地１００ｍｌを含むバッフルの付いた５００ｍｌの三
角フラスコ３０本に種培養液をそれぞれ５ｍｌ入れ、２
３℃で７日間、２００rpm のロータリー振とう機で培養
を行った。

【００４６】(2) 単離三角フラスコ３０本分の培養液に濾過助剤セライト５４
５を加えて吸引ろ過を行った。次にこれを等量の酢酸エ
チルで３回抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄
後、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮して黄褐色
粉末を４．５ｇ得た。この粉末を少量のメタノールに溶
解し、２０％含水アセトニトリル溶媒で平衡化した１２
０ｍｌのコスモシール１４０Ｃ₁₈−ＯＰＮカラム（ナカ
ライテスク社製）にチャージした。このカラムを５００
ｍｌの２０％含水アセトニトリル溶媒で溶出し分画し
た。以下の(3) に記載する、スフィンゴミエリナーゼ阻
害活性の認められた分画を濃縮したところ、７５８ｍｇ
の黄色物質を得た。このうち２９６ｍｇを少量のヘキサ
ン−酢酸エチル＝２：１に溶解し、同じ溶媒で平衡化し
た逆相液体クロマトグラフィー（ローバーＳｉ−６０、
２５φ×３１０ｍｍ、メルク社製）にチャージし、同じ
溶媒で１０ｍｌ／分の流速で展開した。２２０ｎｍの吸
収を検出し１３〜１５分に溶出されるピークを分取し、
減圧留去により溶媒を除去したところ、１９９．９ｍｇ
の黄色物質を得た。

【００４７】 (3) スフィンゴミエリナーゼ阻害活性の測定法スフィンゴミエリナーゼの酵素源としてラット脳を用
い、先ず、以下の様にそのミクロソーム画分を調製し
た。１０匹のウイスターイマミチ系雄性ラット（９週
齢）を頚動脈放血後、全脳を摘出した。迅速に、小脳を
除去後、予め４℃に冷却したバッファーＡ（０．２５Ｍ
シュークロース、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭＰＭＳ
Ｆ、０．１ｍＭロイペプチン、５ｍＭトリス−塩酸
緩衝液、ｐＨ７．４）１３０ｍｌを加え、４℃条件下、
ポッターのホモジナイザーを用いて脳細胞の破砕を行っ
た。次に、得られた細胞破砕液を４℃条件下、７００×
ｇ、１０分間の遠心分離を行い、その上清を更に、４℃
条件下、２５，０００×ｇで１０分間の遠心分離を行っ
た。最後に、得られた上清を４℃条件下、１００，００
０×ｇで６０分間の超遠心分離を行い、その沈澱物をミ
クロソーム画分とした。尚、この画分はスフィンゴミエ
リナーゼの活性測定時まで液体窒素下で凍結保存し、使
用時にバッファーＡで蛋白質濃度３〜４ｍｇ／ｍｌ程度
になる様に調製した。

【００４８】スフィンゴミエリナーゼ活性は混合ミセル
系を使って以下の様に測定した。即ち、先ず、混合した
１０μｌの［Ｎ−メチル−¹⁴Ｃ］スフィンゴミエリン
（牛、５２ｍＣｉ／ｍｍｏｌ、２５μＣｉ／ｍｌ；アマ
シャム社）と２００μｌのスフィンゴミエリン（牛、２
０ｍＭ、シグマ社）を窒素ガスで乾固させた後、２００
μｌの１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）、４０
μｌの１０％（ｖ／ｖ）トリトンＸ−１００、２０μｌ
の０．５ＭＭｇＣｌ₂ 、及び１．２４ｍｌのＨ₂ Ｏを
加えて４８℃、３０分のインキュベーションを行った。
そして、プローブ型超音波破砕装置で、２０Ｗの出力条
件下、１５秒、２回の超音波処理を施し、［¹⁴Ｃ］スフ
ィンゴミエリンを含む混合ミセル系を作成した。

【００４９】スフィンゴミエリナーゼ反応は、この様に
して用意した基質溶液１５０μl に検体溶液１０μｌを
混合し、先に供述した酵素溶液４０μｌを加えて３７
℃、４０分インキュベーションすることにより行った。
反応終了後、クロロホルム：メタノール（２：１、ｖ／
ｖ）を５００μｌ加えて抽出操作を施し、得られた水層
１５０μｌを３ｍｌのピコフローTM４０と混合して、反
応物である［¹⁴Ｃ］ホスフォリルコリン量を液体シンチ
レーションカウンターで測定した。スフィンゴミエリナ
ーゼ活性は、この測定値からスフィンゴミエリナーゼ反
応に必要なＭｇＣｌ₂ を除いた場合での測定値を差し引
いた値として計算される。

【００５０】この方法で測定した、スフィンゴミエリナ
ーゼ反応を５０％阻害するのに必要なＦ−１１２６３の
濃度は０．８μｇ／ｍｌであった。

【００５１】

【発明の効果】本発明の新規化合物Ｆ−１１２６３は、
抗ＨＩＶ剤、抗糖尿病剤、抗動脈硬化剤、抗骨粗しょう
症剤、抗血栓剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、利尿剤、そし
て、呼吸器系疾患、甲状腺疾患、アルツハイマー病、肝
炎、腎炎、白血病、及びカケクシアに対する予防薬、治
療薬として使用できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＢＪ 9455−4ＣＡＢＸ 9455−4ＣＡＣＢ 9455−4ＣＡＣＤ 9455−4ＣＡＣＳ 9455−4ＣＡＣＶ 9455−4ＣＡＤＶ 9455−4Ｃ 35/74 ＡＢＡＧ 7431−4ＣＡＥＤＤ 7431−4ＣＣ１２Ｎ 9/99 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 7/66 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式（Ｉ）で表される新規化合物Ｆ−１
１２６３。：【化１】
【請求項２】アクレモニウム（Acremonium）属に属する
Ｆ−１１２６３生産菌を培養し、その培養物よりＦ−１
１２６３を採取することを特徴とするＦ−１１２６３の
製造法。
【請求項３】アクレモニウム（Acremonium）属に属する
Ｆ−１１２６３生産菌が、アクレモニウム（Acremoniu
m）sp．ＳＡＮＫ１１８９４株である、請求項２に記載
の製造法。
【請求項４】アクレモニウム（Acremonium）sp．ＳＡＮ
Ｋ１１８９４株。